[go: up one dir, main page]

RS58981B1 - Kompozicije i postupci za modulisanje ekspresije hbv i ttr - Google Patents

Kompozicije i postupci za modulisanje ekspresije hbv i ttr

Info

Publication number
RS58981B1
RS58981B1 RS20190682A RSP20190682A RS58981B1 RS 58981 B1 RS58981 B1 RS 58981B1 RS 20190682 A RS20190682 A RS 20190682A RS P20190682 A RSP20190682 A RS P20190682A RS 58981 B1 RS58981 B1 RS 58981B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
certain embodiments
wing
segment
sugar
nucleoside
Prior art date
Application number
RS20190682A
Other languages
English (en)
Inventor
Thazha P Prakash
Punit P Seth
Eric E Swayze
Original Assignee
Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=51843959&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS58981(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ionis Pharmaceuticals Inc filed Critical Ionis Pharmaceuticals Inc
Publication of RS58981B1 publication Critical patent/RS58981B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03048—Protein-tyrosine-phosphatase (3.1.3.48)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3511—Conjugate intercalating or cleaving agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Liquid Crystal Substances (AREA)

Description

Opis pronalaska
POZNATO STANJE TEHNIKE
[0001] Princip u osnovi antisens tehnologije je da antisens jedinjenje hibridizuje sa cilјnom nukleinskom kiselinom i moduliše količinu, aktivnost i/ili funkciju cilјne nukleinske kiseline. Na primer, u određenim slučajevima, antisens jedinjenja rezultuju izmenjenom transkripcijom ili translacijom ciljnog molekula. Ovakva modulacija ekspresije se može postići, na primer, degradacijom cilјne iRNK ili inhibicijom zasnovanom na zauzimanju ciljnog mesta. Primer modulacije cilјne funkcije RNK degradacijom je degradacija ciljne RNK zasnovana na dejstvu RNaze H, nakon hibridizacije sa antisens jedinjenjem sličnim DNK. Drugi primer modulacije genske ekspresije cilјanom degradacijom je RNK interferencija (RNKi). RNKi se odnosi na utišavanje gena posredovano antisens jedinjenjem, mehanizmima koji koriste utišavajući kompleks indukovan sa RNK (RISC od engl. RNA-induced siliencing complex). Dodatni primer modulacije cilјne funkcije RNK je mehanizam zasnovan na zauzimanju ciljnih mesta, kao što to u prirodi čini mikroRNK. MikroRNK su male nekodirajuće RNK koje regulišu ekspresiju RNK koje kodiraju proteine. Vezivanje antisens jedinjenja za mikroRNK sprečava da se ta mikroRNK veže za svoja ciljna mesta u informacionoj RNK i time interferira sa funkcijom mikroRNK. MikroRNK mimetici mogu pobolјšati nativnu funkciju mikroRNK. Određena antisens jedinjenja menjaju obradu pre-iRNK. Bez obzira na određeni mehanizam, specifičnost sekvence čini antisens jedinjenja atraktivnim kao sredstvima za validaciju ciljne sekvence i funkcionalizaciju gena, kao i terapeuticima za selektivnu modulaciju ekspresije gena uklјučenih u patogenezu oboljenja.
[0002] Antisens tehnologija je efikasan način za modulisanje ekspresije jednog ili više specifičnih genskih proizvoda i stoga se može pokazati jedinstveno korisnom u brojnim terapijskim, dijagnostičkim i istraživačkim primenama. Hemijski modifikovani nukleozidi mogu biti ugrađeni u antisens jedinjenja da bi se poboljšala jedna ili više osobina, kao što su rezistencija na nukleaze, farmakokinetika ili afinitet za cilјnu nukleinsku kiselinu. Antisens jedinjenje, Vitravene® (fomivirsen, razvijen od strane Isis Pharmaceuticals Inc. Carlsbad, CA), je 1998. godine bilo prvi antisensni lek za koga je podnet zahtev za dobijanje komercijalne dozvole od američke Uprave za hranu i lekove (FDA) i trenutno je tretman za renitis indukovan citomegalovirusom (CMV), kod pacijenata obolelih od side.
[0003] Nove hemijske modifikacije su pobolјšale potentnost i efikasnost antisens jedinjenja, otkrivajući njihov potencijal za oralnu isporuku, kao i pojačanje subkutane primene, smanjenje potencijala za sporedne efekte, vodeći tako poboljšanjima u pogodnostima za pacijenta. Hemijske modifikacije koje povećavaju potentnost antisens jedinjenja dozvoljavaju primenu nižih doza, što smanjuje potencijal toksičnosti, kao i smanjenje ukupnih troškova terapije. Modifikacije koje povećavaju otpornost na degradaciju, rezultuju sporijim klirensom iz tela, omogućavajući manje učestalo doziranje. Različiti tipovi hemijskih modifikacija se mogu kombinovati u jednom jedinjenju, da bi se dodatno optimizovala efikasnost jedinjenja.
IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0004] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid i konjugatnu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima sekvencu nukleobaza najmanje 85% komplementarnu sa SEQ ID NO: 1 koja kodira virus hepatitisa B (HBV) i gde konjugatna grupa sadrži:
[0005] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i farmaceutski prihvatlјiv nosač ili razblaživač.
Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju pronalaska za upotrebu u lečenju bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa HBV.
Predmetni pronalazak obezbeđuje i jedinjenje ili kompoziciju pronalaska za upotrebu u proizvodnji medikamenta za lečenje bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa HBV, pri čemu bolest, poremećaj ili stanje je žutica, upala jetre, fibroza jetre, inflamacija, ciroza jetre, otkazivanje jetre, kancer jetre, difuzna hepatocelularna inflamatorna bolest, hemofagocitni sindrom, serumski hepatitis, HBV viremija ili bolest jetre povezana sa transplantacijom.
[0006] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju pronalaska za upotrebu u proizvodnji medikamenta za smanjenje nivoa HBV antigena kod subjekta inficiranog sa HBV.
IZLAGANJE SUŠTINE OPISA
[0007] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje konjugovana antisens jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje konjugovana antisens jedinjenja koja sadrže antisens oligonukleotid komplementaran transkriptu nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje postupke koji obuhvataju kontakt ćelije sa konjugovanim antisens jedinjenjem koje sadrži antisens oligonukleotid komplementaran transkriptu nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje postupke koji obuhvataju kontakt ćelije sa konjugovanim antisens jedinjenjem koje sadrži antisens oligonukleotid i smanjivanje količine ili aktivnosti transkripta nukleinske kiseline u ćeliji.
[0008] Asijaloglikoproteinski receptor (ASGP-R) je prethodno opisan. Pogledati npr. Park i saradnici, PNAS vol.102, br.47, str.17125-17129 (2005). Ovi receptori se eksprimiraju na ćelijama jetre, naročito hepatocitima. Pokazano je da su jedinjenja koja sadrže klastere tri N-acetilgalaktozaminska (GalNAc) liganda sposobna da se vežu za ASGP-R, što rezultuje preuzimanjem jedinjenja u ćeliju. Pogledati npr. Khorev i saradnici, Bioorganic and Medicinal Chemistry, 16, 9, str. 5216-5231 (maj 2008). Shodno navedenom, konjugati koji sadrže ovakve GalNAc klastere su upotrebljavani da se olakša preuzimanje određenih jedinjenja u ćelije jetre, naročito hepatocite. Na primer, pokazano je da određeni konjugati koji sadrže GalNAc povećavaju aktivnost dupleksnih siRNK jedinjenja u ćelijama jetre in vivo. U takvim slučajevima, konjugat koji sadrži GalNAc je obično vezan za sens lanac (lanac sa smislom) siRNK dupleksa. Pošto se sens lanac odbacuje pre krajnje hibridizacije antisens lanca sa cilјnom nukleinskom kiselinom, postoji blaga zabrinutost da će konjugat interferirati sa aktivnošću. Konjugat je obično vezan za 3’ kraj sens lanca siRNK. Pogledati npr. U.S. Patent 8,106,022. Određene konjugatne grupe koje su ovde opisane su aktivnije i/ili lakše za sintezu od prethodno opisanih konjugatnih grupa.
[0009] U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugati su vezani za jednolančana antisens jedinjenja, uklјučujući, ali ne ograničavajući se na, antisens jedinjenja zasnovana na RNazi H i antisens jedinjenja koja dovode do izmene obrade pre-iRNK cilјne nukleinske kiseline. U ovakvim primerima izvođenja, konjugat treba da ostane vezan za antisens jedinjenje dovolјno dugo da obezbedi korist (pobolјšano preuzimanje u ćelije), ali onda treba ili da bude isečen ili da na drugi način ne interferira sa narednim koracima neophodnim za aktivnost kao što su hibridizacija sa cilјnim nukleinom kiselina i interakcija sa Rnazom H ili enzimima koji učestvuju u obradi ili modulaciji obrade. Navedena ravnoteža osobina je važnija u postavci jednolančanih antisens jedinjenja nego za siRNK jedinjenja, gde konjugat može jednostavno biti vezan za sens lanac. Ovde su opisana konjugovana jednolančana antisens jedinjenja sa pobolјšananom potentnošću u ćelijama jetre in vivo u poređenju sa istim antisens jedinjenjem kome nedostaje konjugat. Imajući u vidu neophodnu ravnotežu u osobinama ovih jedinjenja, tako pobolјšana potentnost je iznenađujuća.
[0010] U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe ovde sadrže strukturu podložnu cepanju. Kao što je navedeno, bez želјe da se vezuje mehanizmom, logično je da konjugat treba da ostane na jedinjenju dovolјno dugo da obezbedi pojačano preuzimanje, ali nakon toga, poželjno je da se isecanjem uklone neki delovi ili, idealno, sve od konjugata, da bi se oslobodilo osnovno jedinjenje (npr. antisens jedinjenje) u svom najaktivnijem obliku. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je nukleozid podložan cepanju. Takvi primeri izvođenja koriste prednosti endogenih nukleaza u ćeliji, vezivanjem ostatka konjugata (klastera) za antisens oligonukleotid preko nukleozida putem jedne ili više raskidivih veza, kao što su one tipa fosfodiestarske veze. U određenim primerima izvođenja, klaster je vezan za nukleozid podložan cepanju preko fosfodiestarske veze. U određenim primerima izvođenja, nukleozid podložan cepanju je vezan za antisens oligonukleotid (antisens jedinjenje) fosfodiestarskom vezom. U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa može sadržavati dva ili tri nukleozida podložna cepanju. U takvim primerima izvođenja, navedeni nukleozidi koji su podložni cepanju su povezani: međusobno, sa antisens jedinjenjem i/ili sa klasterom preko raskidivih veza (kao što su one tipa fosfodiestarske veze). Određeni konjugati ovde ne sadrže nukleozid podložan cepanju i umesto toga sadrže raskidivu vezu. Pokazano je da se isecanje konjugata iz oligonukleotida koje je dovolјno, obezbeđuje najmanje jednom vezom koja je osetlјiva na cepanje u ćeliji (raskidiva veza).
[0011] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja su prolekovi. Ovakvi prolekovi se daju životinji i na kraju se metabolišu u aktivan oblik. Na primer, konjugovana antisens jedinjenja se cepaju da bi se uklonio sav ili deo konjugata što rezultuje aktivnim (ili aktivnijim) oblikom antisens jedinjenja kome nedostaju svi ili pojedini od konjugata.
[0012] U određenim primerima izvođenja, konjugati su vezani na 5’ kraj oligonukleotida. Određeni ovakvi 5'-konjugati se isecaju efikasnije nego njihovi parnjaci sa sličnom konjugatnom grupom vezanom na 3’ kraj. U određenim primerima izvođenja, pobolјšana aktivnost može korelisati sa pobolјšanim isecanjem. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi koji sadrže konjugat na 5’ kraju imaju veću efikasnost od oligonukleotida koji sadrže konjugat na 3' kraju (pogledati, na primer, Primere 56, 81, 83 i 84). Pored toga, vezivanje na 5' kraju dozvoljava jednostavniju sintezu oligonukleotida. Uobičajeno je da se oligonukleotidi sintetišu na čvrstom nosaču u 3’-5' pravcu. Da bi se pripremio 3'-konjugovani oligonukleotid, obično se na čvrsti nosač najpre vezuje prethodno konjugovani 3’ nukleozid, a potom se oligonukleotid gradi kao i obično. Međutim, vezivanje tog konjugovanog nukleozida za čvrsti nosač dodatno komplikuje sintezu. Dalјe, upotrebom ovog pristupa, konjugat je potom prisutan tokom sinteze oligonukleotida i može biti razgrađen tokom narednih koraka ili može ograničiti vrste reakcija i reagenasa koji se mogu upotrebiti. Upotrebom struktura i tehnika koje su ovde opisane za 5'-konjugovane oligonukleotide, može se sintetisati oligonukleotid upotrebom standardnih automatizovanih tehnika i zatim uvesti konjugat ili na završeni (većinom 5') nukleozid ili nakon što je oligonukleotid cepanjem uklonjen sa čvrstog nosača.
[0013] Imajući u vidu stanje tehnike i predmetni opis, prosečno iskusan stručnjak može lako napraviti bilo koji od konjugata i konjugovanih oligonukleotida koji su ovde opisani. Štaviše, sinteza određenih takvih, ovde opisanih konjugata i konjugovanih oligonukleotida je lakša i/ili zahteva nekolicinu koraka i stoga je jeftinija od sinteze konjugata koja je prethodno opisana, obezbeđujući prednosti u proizvodnji. Na primer, sinteza određenih konjugatnih grupa se sastoji od manje sintetskih koraka i rezultuje povećanim prinosom u odnosu na prethodno opisane sinteze konjugatne grupe. Konjugatne grupe kao što su GalNAc3-10 u Primeru 46 i GalNAc3-7 u Primeru 48 su mnogo jednostavnije od prethodno opisanih konjugata, kao što su oni opisani u U.S.8,106,022 ili U.S.7,262,177, koji zahtevaju udruživanje više hemijskih intermedijera. Prema tome, ovi i drugi konjugati koji su ovde opisani imaju prednosti nad prethodno opisanim jedinjenjima za upotrebu sa bilo kojim oligonukleotidima, uklјučujući jednolančane oligonukleotide i bilo koji lanac dvolančanih oligonukleotida (npr. siRNK).
[0014] Slično navedenom, ovde su opisane konjugatne grupe sa samo jedim ili dva GalNAc liganda. Kao što je pokazano, ovakve konjugatne grupe pobolјšavaju aktivnost antisens jedinjenja. Takva jedinjenja se mnogo lakše pripremaju nego konjugati koji sadrže tri GalNAc liganda. Konjugatne grupe koje sadrže jedan ili dva GalNAc liganda mogu biti vezane za bilo koja antisens jedinjenja, uklјučujući jednolančane oligonukleotide i bilo koji lanac dvolančanih oligonukleotida (npr. siRNK).
[0015] U određenim primerima izvođenja, ovde opisani konjugati ne menjaju bitno određene parametre tolerabilnosti. Na primer, ovde je pokazano da konjugovana antisens jedinjenja nisu više imunogena od nekonjugovanih matičnih jedinjenja. Pošto je potentnost pobolјšana, primeri izvođenja u kojima tolerabilnost ostaje ista (ili čak i ukoliko se tolerabilnost samo neznatno pogoršava u odnosu na sticanje potentnosti) imaju pobolјšana svojstva za terapiju.
[0016] U određenim primerima izvođenja, konjugacija dozvolјava da se antisens jedinjenja izmene na načine koji su sa posledicama manje privlačnim nego u odsustvu konjugacije. Na primer, u određenim primerima izvođenja, zamena jedne ili više fosforotioatnih veza fosfodiestarskim vezama u antisens jedinjenju sa isključivo fosfotioatnim vezama, dovodi do pobolјšanja nekih parametara tolerabilnosti. Na primer, u određenim slučajevima, takva antisens jedinjenja sa jednim ili sa više fosfodiestara su manje imunogena od istog jedinjenja u kome su sve veza fosforotioatne. Ipak, u određenim slučajevima, kao što je prikazano u Primeru 26, ta ista zamena jedne ili više fosforotioatnih veza sa fosfodiestarskim vezama takođe rezultuje smanjenjem u ćelijskom preuzimanju i/ili gubitku potentnosti. U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja koja su ovde opisana podnose takvu promenu u vezama sa malim ili bez ikakvog gubitka u preuzimanju i potentnosti u poređenju sa konjugovanim parnjacima koji su u potpunosti sa fosfotioatnim vezama. U stvari, u određenim primerima izvođenja, na primer, u Primerima 44, 57, 59 i 86, oligonukleotide koji sadrže konjugat i najmanje jednu fosfodiestarsku internukleozidnu vezu zapravo karakteriše povećana potentnost in vivo, čak i u odnosu na konjugovane parnjake isključivo sa fosfotioatnim vezama koji takođe sadrže isti konjugat. Štaviše, pošto konjugacija rezultuje značanim povećanjima u preuzimanju/potentnosti, mali gubitak u okviru tog značajnog dobitka može biti prihvatlјiv da bi se postigla pobolјšana tolerabilnost. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja sadrže najmanje jednu fosfodiestarsku vezu.
[0017] U određenim primerima izvođenja, konjugacija antisens jedinjenja ovde rezultuje povećanom isporukom, preuzimanjem i aktivnošću u hepatocitima. Prema tome, više jedinjenja se isporučuje do tkiva jetre. Ipak, u određenim primerima izvođenja, tako povećana isporuka samostalno ne objašnjava celokupan porast u aktivnosti. U određenim takvim primerima izvođenja, više jedinjenja ulazi u hepatocite. U određenim primerima izvođenja, čak i tako povećano preuzimanje od strane hepatocita ne objašnjava celokupan porast u aktivnosti. U takvim primerima izvođenja, povećava se produktivno preuzimanje konjugovanog jedinjenja. Na primer, kao što je prikazano u Primeru 102, određeni primeri izvođenja konjugata koji sadrže GalNAc, povećavaju obogaćivanje antisens oligonukleotida u hepatocitima u odnosu na ćelije koje nisu parenhimske. Ovakvo obogaćivanje je korisno za oligonukleotide koji cilјano deluju na gene koji se eksprimiraju u hepatocitima.
[0018] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja ovde rezultuju u smanjenoj izloženosti bubrega. Na primer, kao što je prikazano u Primeru 20, koncentracije antisens oligonukleotida koji sadrže određene primeri izvođenja konjugata sa GalNAc, niže su u bubregu nego za antisens oligonukleotide kojima nedostaje konjugat koji sadrži GalNAc. Navedeno ima nekoliko korisnih terapijskih implikacija. Za terapijske indikacije kod kojih se ne traži aktivnost u bubregu, izlaganje bubregu rizikuje toksičnost za bubreg bez odgovarajuće koristi. Štaviše, visoka koncentracija u bubregu obično rezultuje gubitkom jedinjenja u urinu, što dovodi do bržeg klirensa. Prema tome, za cilјna mesta van bubrega, nepoželjna je akumulacija u bubregu.
[0019] U određenim primerima izvođenja, obezbeđena su konjugovana antisens jedinjenja koja imaju strukturu:
Ostatak za ciljano dejstvo
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0020] Podrazumeva se da su i prethodni opšti opis i detalјani opis koji sledi navedeni samo kao primeri i objašnjenja, kao i da nisu ograničavajući za opis. U tekstu, upotreba jednine podrazumeva množinu, osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Kako se ovde koristi, upotreba "ili" označava "i/ili", osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Dodatno, upotreba termina "uklјučujući", kao i drugih oblika, kao što su "uklјučuje" i "uklјučen", nije ograničavajuća. Takođe, termini kao što su "element" ili "komponenta" obuhvataju i elemente i komponente koji sadrže jednu jedinicu i elemente i komponente koji sadrže više od jedne subjedinice, osim ukoliko nije drugačije naznačeno.
[0021] Naslovi poglavlјa koji su ovde upotrebljeni su navedni samo u organizacione svrhe i ne treba ih tumačiti kao ograničenja opisanog glavnog predmeta pronalaska.
A. Definicije
[0022] Ukoliko nisu obezbeđene specifične definicije, nomenklatura upotrebljena u vezi sa, kao i procedure i tehnike analitičke hemije, sintetske organske hemije i medicinske i farmaceutske hemije koje se ovde opisane su one koje su dobro poznate i uobičajeno se upotrebljavaju u stanju tehnike. Standardne tehnike se mogu koristiti za hemijsku sintezu i hemijsku analizu. Određene takve tehnike i procedure se mogu pronaći, na primer, u "Carbohydrate Modifications in Antisense Research", ur. Sangvi i Cook, American Chemical Society, Washington D. C. 1994; "Remington’s Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co. Easton, Pa.21. izdanje, 2005; i "Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications", ur. Stanley T. Crooke, CRC Press, Boca Raton, Florida; i Sambrook i saradnici, "Molecular Cloning, A laboratory Manual", 2. izdanje, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.
[0023] Ukoliko nije drugačije naznačeno, termini koji slede su sa sledećim značenjima:
Kako se ovde upotrebljava, "nukleozid" označava jedinjenje koje sadrži nukleobazni ostatak i ostatak šećera. Nukleozidi uklјučuju, ali nisu ograničeni na, nukleozide koji se javljaju u prirodi (kao što se nalaze u DNK i RNK) i modifikovane nukleozide.
Nukleozidi mogu biti povezani sa fosfatnim ostatkom.
[0024] Kako se ovde upotrebljava, "hemijska modifikacija" označava hemijsku razliku u jedinjenju kada se ono poredi sa parnjakom koji se javlja u prirodi. Hemijske modifikacije oligonukleotida uključuju nukleozidne modifikacije (uklјučujući modifikacije ostataka šećera i modifikacije nukleobaza) i modifikacije internukleozidnih veza. U kontekstu oligonukleotida, hemijska modifikacija ne uklјučuje razlike samo u nukleobaznoj sekvenci.
[0025] Kako se ovde upotrebljava, "furanozil" označava strukturu koja sadrži 5-člani prsten koji se sastoji od četiri atoma uglјenika i jednog atom kiseonika.
[0026] Kako se ovde upotrebljava, "ostatak šećera koji se javlјa u prirodi" označava ribofuranozil koji se nalazi u RNK koja se javlja u prirodi ili dezoksiribofuranozil koji se nalazi u DNK koja se javlja u prirodi.
[0027] Kako se ovde upotrebljava, "ostatak šećera" označava ostatak šećera koji se javlјa u prirodi ili modifikovani ostatak šećera nukleozida.
[0028] Kako se ovde upotrebljava, "modifikovani ostatak šećera" označava supstituisani ostatak šećera ili surogat šećera.
[0029] Kako se ovde upotrebljava, "supstituisani ostatak šećera" označava furanozil koji nije ostatak šećera koji se javlja u prirodi. Supstituisani ostaci šećera uklјučuju, ali nisu ograničeni na furanozile koji sadrže supstituente na 2' poziciji, 3' poziciji, 5' poziciji i/ili 4' poziciji. Određeni supstituisani ostaci šećera su biciklični ostatci šećera.
[0030] Kako se ovde upotrebljava, "2'-supstituisan ostatak šećera" označava furanozil koji sadrži supstituenta na 2' poziciji različitog od H ili OH. Ukoliko nije drugačije naznačeno, 2'-supstituisani ostatak šećera nije biciklični ostatak šećera (tj. 2'-supstituent 2'-supstituisanog ostatka šećera ne obrazuje hemijski most do drugog atoma furanoznog prstena.
[0031] Kako se ovde upotrebljava, "MOE" označava -OCH2CH2OCH3.
[0032] Kako se ovde upotrebljava, "2'-F nukleozid" se odnosi na nukleozid koji sadrži šećer koji sadrži fluor na poziciji 2'. Ukoliko nije drugačije naznačeno, fluor u 2'-F nukleozidu je u ribo poziciji (zamenjuje OH prirodne riboze).
[0033] Kako se ovde upotrebljava, termin "surogat šećera" označava strukturu koja ne sadrži furanozil i koja je sposobna da zameni ostatak šećera nukleozida koji se javlja u prirodi, tako da su rezultujuće nukleozidne subjedinice sposobne da se vezuju međusobno i/ili za druge nukleozide da bi se obrazovalo oligomerno jedinjenje sposobno za hibridizaciju sa komplementarnim oligomernim jedinjenjem. Navedene strukture uklјučuju prstenove koji: sadrže različit broj atoma od furanozila (npr. 4, 6 ili 7-član prstenovi); zamenjen kiseonik furanozila sa atomom koji nije kiseonik (npr. uglјenikom, sumporom ili azotom); ili i promenu broja atoma i zamenu kiseonika. Ovakve strukture mogu takođe sadržavati supstitucije koje odgovaraju onima opisanim za supstituisane ostatke šećera (npr. 6-člane karbociklične biciklične surogate šećera koji opciono sadrže dodatne supstituente).
Surogati šećera takođe uklјučuju kompleksnije zamene za šećer (npr. sisteme peptidnih nukleinskih kiselina bez prstenova). Surogati šećera uklјučuju, bez ograničenja, morfoline, cikloheksenile i cikloheksitole.
[0034] Kako se ovde upotrebljava, "biciklični ostatak šećera" označava modifikovan ostatak šećera koji sadrži 4- do 7-člani prsten (uklјučujući, ali ne ograničavajući se na, furanozil) koji sadrži hemijski most koji povezuje dva atoma 4- do 7-članog prstena tako da se obrazuje drugi prsten, što rezultuje u bicikličnoj strukturi. U određenim primerima izvođenja, prsten sa od 4 do 7 članova je prsten šećera. U određenim primerima izvođenja, prsten sa 4 do 7 članova je furanozil. U određenim takvim primerima izvođenja, most povezuje 2'-uglјenik i 4'-uglјenik furanozila.
[0035] Kako se ovde upotrebljava, "nukleotid" označava nukleozid koji dalje sadrži fosfatnu vezujuću grupu. Kao što se ovde koristi, "povezani nukleozidi" mogu ili ne moraju biti povezani fosfatnim vezama i stoga obuhvataju, ali nisu ograničeni na, "povezane nukleotide". Kao što se ovde upotrebljava, "povezani nukleozidi" su nukleozidi koji su povezani u kontinuiranu sekvencu (tj. nije prisutan dodatni nukleozid između onih koji su povezani).
[0036] Kako se ovde upotrebljava, "nukleobaza" označava grupu atoma koja može biti povezana sa ostatkom šećera da bi se stvorio nukleozid sposoban za ugradnju u oligonukleotid, a gde je grupa atoma sposobna da se veže sa komplementarnom nukleobazom drugog oligonukleotida ili nukleinske kiseline koji se javljaju u prirodi. Nukleobaze mogu biti one koje se javljaju u prirodi ili mogu biti modifikovane.
[0037] Ovde korišćeni termini "nemodifikovana nukleobaza" ili "nukleobaza koja se javlja u prirodi" označavaju heterociklične nukleobaze RNK ili DNK koje se javlјaju u prirodi: purinske baze adenin (A) i guanin (G) i pirimidinske baze timin (T), citozin (C) (uklјučujući 5-metil C) i uracil (U).
[0038] Kako se ovde upotrebljava, "modifikovana nukleobaza" označava bilo koju nukleobazu koja nije nukleobaza koja se javlja u prirodi.
[0039] Kako se ovde upotrebljava, "modifikovani nukleozid" označava nukleozid koji sadrži najmanje jednu hemijsku modifikaciju u poređenju sa nukleozidima RNK ili DNK koji se javljaju u prirodi. Modifikovani nukleozidi sadrže modifikovani ostatak šećera i/ili modifikovanu nukleobazu.
[0040] Kako se ovde upotrebljava, "bicikličan nukleozid" ili "BNA" označava nukleozid koji sadrži biciklični ostatak šećera.
[0041] Kako se ovde upotrebljava, "kruti etil-nukleozid" ili "cEt" označava nukleozid koji sadrži biciklični ostatak šećera koji dalje sadrži 4'-CH(CH3)-O-2' most.
[0042] Kako se ovde upotrebljava, "zaklјučani nukleozid nukleinske kiseline" ili "LNA" označava nukleozid koji sadrži biciklični ostatak šećera koji dalje sadrži 4'-CH2-O-2' most.
[0043] Kako se ovde upotrebljava, "2'-supstituisani nukleozid" označava nukleozid koji sadrži supstituent na 2' poziciji različit od H ili OH. Ukoliko nije drugačije naznačeno, 2'-supstituisani nukleozid nije bicikličan nukleozid.
[0044] Kako se ovde upotrebljava, "dezoksinukleozid" označava nukleozid koji sadrži 2'-H furanozni ostatak šećera, poput onog koji se nalazi u dezoksiribonukleozidima (DNK) koji se javljaju u prirodi. U određenim primerima izvođenja, 2'-dezoksinukleozid može sadržavati modifikovanu nukleobazu ili može sadržavati nukleobazu RNK (npr. uracil).
[0045] Kako se ovde upotrebljava, "oligonukleotid" označava jedinjenje koje sadrži mnoštvo povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži jedan ili više nemodifikovanih ribonukleozida (RNK) i/ili nemodifikovanih dezoksiribonukleozida (DNK) i/ili jedan ili više modifikovanih nukleozida.
[0046] Kako se ovde upotrebljava, "oligonukleozid" označava oligonukleotid u kome nijedna od internukleozidnih veza ne sadrži atom fosfora. Kako se ovde upotrebljava, oligonukleotidi uklјučuju oligonukleozide.
[0047] Kako se ovde upotrebljava, "modifikovani oligonukleotid" označava oligonukleotid koji sadrži najmanje jedan modifikovani nukleozid i/ili najmanje jednu modifikovanu internukleozidnu vezu.
[0048] Kako se ovde upotrebljava, "veza" ili "grupa povezivanja" označavaju grupu atoma koja povezuje dve ili više drugih grupa atoma.
[0049] Kako se ovde upotrebljava, "internukleozidna veza" označava kovalentnu vezu između susednih nukleozida u oligonukleotidu.
[0050] Kako se ovde upotrebljava, "internukleozidna veza koja se javlja u prirodi" označava 3’-5' fosfodiestarsku vezu.
[0051] Kako se ovde upotrebljava, "modifikovana internukleozidna veza" označava bilo koju internukleozidnu vezu drugačiju od internukleozidne veze koja se javlja u prirodi.
[0052] Kako se ovde upotrebljava, "terminalna internukleozidna veza" označava vezu između poslednja dva nukleozida oligonukleotida ili njegovog definisanog regiona.
[0053] Kako se ovde upotrebljava, "fosforna vezujuća grupa" označava vezujuću grupu koja sadrži atom fosfora. Fosforne vezujuće grupe uključuju, bez ograničenja, grupe sa formulom:
gde:
svaki od Rai Rdje nezavisno O, S, CH2, NH ili NJ1gde J1je C1-C6alkil ili supstituisani C1-C6alkil;
Rbje O ili S;
Rcje OH, SH, C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, supstituisani C1-C6alkoksi, amino ili supstituisani amino; i
J1je Rbje O ili S.
Fosforne vezujuće grupe uklјučuju, bez ograničenja, fosfodiestarske, fosforotioatne, fosforoditioatne, fosfonatne, fosforamidatne, fosforotioamidatne, tionoalkilfosfonatne, fosfotriestarske, tionoalkilfosfotriestarske i boranofosfatne grupe.
[0054] Kako se ovde upotrebljava, "internukleozidna fosforna vezujuća grupa" označava fosfornu vezujuću grupu koja direktno povezuje dva nukleozida.
[0055] Kako se ovde upotrebljava, "neinternukleozidna fosforna vezujuća grupa" označava fosfornu vezujuću grupu koja ne povezuje direktno dva nukleozida. U određenim primerima izvođenja, neinternukleozidna fosforna vezujuća grupa povezuje nukleozid sa grupom drugačijom od nukleozida. U određenim primerima izvođenja, neinternukleozidna fosforna vezujuća grupa povezuje dve grupe od kojih nijedna nije nukleozidna.
[0056] Kako se ovde upotrebljava, "neutralna vezujuća grupa" označava vezujuću grupu koja nije naelektrisana. Neutralne vezujuće grupe uklјučuju, bez ograničenja, fosfotriestere, metilfosfonate, MMI (-CH2-N(CH3)-O-), amid-3 (-CH2-C(=O)-N(H)-), amid-4 (-CH2-N(H)-C(=O)-), formacetal (-O-CH2-O-) i tioformacetal (-S-CH2-O-). Dodatne neutralne vezujuće grupe uklјučuju nejonske veze koje sadrže siloksan (dialkilsiloksan), karboksilatni estar, karboksamid, sulfid, sulfonat estar i amide (pogledati na primer: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y. S. Sanghvi i P. D. Cook izd. ACS Symposium Series 580; Poglavlja 3 i 4 (str.40-65)). Druge neutralne vezujuće grupe uklјučuju nejonske veze koje sadrže pomešane N, O, S i CH2sastavne delove.
[0057] Kako se ovde upotrebljava, "internukleozidna neutralna vezujuća grupa" označava neutralnu vezujuću grupu koja direktno vezuje dva nukleozida.
[0058] Kako se ovde upotrebljava, "neinternukleozidna neutralna vezujuća grupa" označava neutralnu vezujuću grupu koja ne povezuje direktno dva nukleozida. U određenim primerima izvođenja, neinternukleozidna neutralna vezujuća grupa povezuje nukleozid sa grupom drugačijom od nukleozida. U određenim primerima izvođenja, neinternukleozidna neutralna vezujuća grupa povezuje dve grupe od kojih nijedna nije nukleozidna.
[0059] Kako se ovde upotrebljava, "oligomerno jedinjenje" označava polimernu strukturu koja sadrži dve ili više substruktura. U određenim primerima izvođenja, oligomerno jedinjenje sadrži oligonukleotid. U određenim primerima izvođenja, oligomerno jedinjenje sadrži jednu ili više konjugatnih grupa i/ili terminalnih grupa. U određenim primerima izvođenja, oligomerno jedinjenje se sastoji od oligonukleotida. Oligomerna jedinjenja takođe uklјučuju nukleinske kiseline koje se javljaju u prirodi. U određenim primerima izvođenja, oligomerno jedinjenje sadrži okosnicu jedne ili više povezanih monomernih sudjedinica gde je svaka povezana monomerna subjedinica direktno ili indirektno vezana za ostatak heterociklične baze. U određenim primerima izvođenja, oligomerna jedinjenja mogu takođe uklјučivati monomerne subjedinice koje nisu vezane za ostatak heterociklične baze, čime se obezbeđuju abazična mesta. U određenim primerima izvođenja, veze koje spajaju monomerne subjedinice, ostatke šećera ili surogate i heterociklične bazne ostatke mogu biti nezavisno modifikovane. U određenim primerima izvođenja, jedinica za povezivanje šećera, koja može ili ne mora sadržavati heterocikličnu bazu, može biti supstituisana mimetikom kao što su monomeri u peptidnim nukleinskim kiselinama.
[0060] Kako se ovde upotrebljava, "terminalna grupa" označava jedan ili više atoma vezanih za bilo koji ili oba od 3’ kraja ili 5' kraja oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, terminalna grupa je konjugatna grupa. U određenim primerima izvođenja, terminalna grupa sadrži jedan ili više nukleozida terminalne grupe.
[0061] Kako se ovde upotrebljava, "konjugat" ili "konjugatna grupa" označava atom ili grupu atoma vezane za oligonukleotid ili oligomerno jedinjenje. U principu, konjugatne grupe modifikuju jednu ili više osobina jedinjenja na koje su vezane, uklјučujući, ali ne ograničavajući se na, farmakodinamičke, farmakokinetičke, vezujuće, apsorpcione, osobine ćelijske distribucije, ćelijskog preuzimanja, naelektrisanja i/ili klirensa.
[0062] Kako se ovde upotrebljava, "konjugatni linker" ili "linker" u kontekstu konjugatne grupe označava deo konjugatne grupe koji sadrži bilo koji atom ili grupu atoma koji kovalentno vezuju (1) oligonukleotid sa drugim delom konjugatne grupe ili (2) sa dva ili sa više od delova konjugatne grupe.
[0063] Konjugatne grupe su ovde prikazane kao radikali, obezbeđujući vezu za obrazovanje kovalentne veze sa oligomernim jedinjenjem kao što je antisens oligonukleotid. U određenim primerima izvođenja, tačka vezivanja na oligomernom jedinjenju je 3'-atom kiseonika 3'-hidroksine grupe u okviru 3’ terminalnog nukleozida oligomernog jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, tačka vezivanja na oligomerno jedinjenje je 5'-atom kiseonika 5'-hidroksilne grupe u okviru 5’ terminalnog nukleozida oligomernog jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, hemijska veza za obrazovanje veze sa oligomernim jedinjenjem je raskidiva veza. U određenim takvim primerima izvođenja, navedena raskidiva veza čini celokupnu ili deo strukture podložne cepanju.
[0064] U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe sadrže ostatak podložnu cepanju (npr. raskidivu vezu ili nukleozid podložan cepanju) i deo ugljenohidratnog klastera, kao što je GalNAc klasterski deo. Takav ugljenohidratni klasterski deo sadrži: cilјanu grupu i, opciono, konjugatni linker. U određenim primerima izvođenja, deo ugljenohidratnog klastera je identifikovan brojem i identitetom liganda. Na primer, u određenim primerima izvođenja, deo ugljenohidratnog klastera sadrži 3 GalNAc grupe i označen je kao "GalNAc3". U određenim primerima izvođenja, deo ugljenohidratnog klastera sadrži 4 GalNAc grupe i označen je kao "GalNAc4". Specifični delovi ugljenohidratnih klastera (sa specifičnim premošćujućim, grupama grananja i konjugatnim linkerskim grupama) su opisani ovde i označeni rimskim brojem praćenim indeksom "a". Shodno navedenom, "GalNac3-1a" se odnosi na specifičan deo ugljenohidratnog klastera konjugatne grupe koji ima 3 GalNac grupe i specifično identifikovane premošćujuće, grupe grananja i linkerske grupe. Ovakav fragment ugljenohidratnog klastera je vezan za oligomerno jedinjenje preko strukture podložne cepanju, kao što su raskidiva veza ili nukleozid podložan cepanju.
[0065] Kako se ovde upotrebljava, "hemijska struktura podložna cepanju" označava vezu ili grupu koja je sposobna da se razloži pod fiziološkim uslovima. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju se cepa unutar ćelije ili subćelijske strukture kao što je lizozom. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju se cepa endogenim enzimima, kao što su nukleaze. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju sadrži grupu atoma koji imaju jednu, dve, tri, četiri ili više od četiri raskidivih veza.
[0066] Kako se ovde upotrebljava, "raskidiva veza" označava bilo koju hemijsku vezu koja se može raskinuti. U određenim primerima izvođenja, raskidiva veza je izabrana između: amidne, poliamidne, estarske, etarske, jedne ili oba estarske veze fosfodiestra, fosfatne estarske, karbamatne, di-sulfidne ili peptidne veze.
[0067] Kako se ovde upotrebljava, "uglјenohidratni klaster" označava jedinjenje sa jednim ili sa više ugljenohidratnih ostataka vezanih za okosnicu ili linkersku grupu. (pogledati, npr. Maier i saradnici, "Synthesis of Antisense Oligonukleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting", Bioconjugate Chemistry, 2003, (14): 18-29, ili Rensen i saradnici, "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor", J. Med. Chem. 2004, (47): 5798-5808, za primere ugljenohidratnih konjugovatnih klastera).
[0068] Kako se ovde upotrebljava, "derivat uglјenih hidrata" označava bilo koje jedinjenje koje se može sintetisati upotrebom uglјenih hidrata kao polaznog materijala ili intermedijera.
[0069] Kako se ovde upotrebljava, "uglјeni hidrat" označava uglјeni hidrat koji se javlja u prirodi, modifikovani uglјeni hidrat ili derivat uglјenih hidrata.
[0070] Kako se ovde upotrebljava, "zaštitna grupa" označava bilo koje jedinjenje ili zaštitnu grupu poznatu onima sa iskustvom u stanju tehnike Neograničavajući primeri zaštitnih grupa se mogu naći u "Protective Groups in Organic Chemistry", T. W. Greene, P. G. M. Wuts, ISBN 0-471-62301-6, John Wiley & Sons, Inc, New York.
[0071] Kako se ovde upotrebljava, "jednolančano jedinjenje" označava oligomerno jedinjenje koje nije hibridizovano sa svojim komplementom i kome nedostaje autokomplementarnost koja je dovoljna da obrazuje stabilan dupleks samo sa sobom.
[0072] Kako se ovde upotrebljava, "dvolančano jedinjenje" označava par oligomernih jedinjenja koja su hibridizovana međusobno ili samostalno oligomerno jedinjenje koje je komplementarno samo sebi i obrazuje strukturu ukosnice. U određenim primerima izvođenja, dvolančano oligomerno jedinjenje sadrži prvo i drugo oligomerno jedinjenje.
[0073] Kako se ovde upotrebljava, "antisens jedinjenje" označava jedinjenje koje sadrži ili se sastoji od oligonukleotida čiji je najmanje jedan deo komplementaran cilјnoj nukleinskoj kiselini sa kojom je sposoban da hibridizuje, što rezultuje najmanje jednom antisensnom aktivnošću.
[0074] Kako se ovde upotrebljava, "antisensna aktivnost" označava bilo koju detektabilnu i/ili merlјivu promenu koja se može pripisati hibridizaciji antisens jedinjenja sa njegovom cilјnom nukleinskom kiselinom. U određenim primerima izvođenja, antisensna aktivnost obuhvata modulaciju količine ili aktivnosti transkripta cilјne nukleinske kiseline (npr. iRNK). U određenim primerima izvođenja, antisensna aktivnost uklјučuje modulaciju obrade pre-iRNK.
[0075] Kako se ovde upotrebljava, "antisens jedinjenje zasnovano na RNazi H" označava antisens jedinjenje u kome se barem deo antisensne aktivnosti antisens jedinjenja može pripisati hibridizaciji antisens jedinjenja sa cilјnom nukleinskom kiselinom i naknadnom cepanju cilјne nukleinske kiseline sa RNazom H.
[0076] Kako se ovde upotrebljava, "antisens jedinjenje zasnovano na RISC" označava antisens jedinjenje gde se barem deo antisensne aktivnosti antisens jedinjenja može pripisati dejstvu utišavajućeg kompleksa indukovanog sa RNK (RISC).
[0077] Kako se ovde upotrebljava, "detekcija" ili "merenje" označavaju da je urađen test ili esej za detekciju ili merenje. Navedena detekcija i/ili merenje mogu rezultovati vrednostima nula. Prema tome, ukoliko test za detekciju ili merenje rezultuje nalazom da nema aktivnosti (aktivnost nula), ipak je urađen korak detekcije ili merenja aktivnosti.
[0078] Kako se ovde upotrebljava, "detektabilna i/ili merlјiva aktivnost" označava statistički značajnu aktivnost koja nema vrednost nula.
[0079] Kako se ovde upotrebljava, "suštinski nepromenjeno" označava malu ili nikakvu promenu u određenom parametru, naročito u odnosu na drugi parametar koji se mnogo više menja. U određenim primerima izvođenja, parametar je suštinski nepromenjen kada se menja manje od 5%. U određenim primerima izvođenja, parametar je suštinski nepromenjen ukoliko se menja manje od dva puta, dok se drugi parametar menja najmanje deset puta. Na primer, u određenim primerima izvođenja, antisensna aktivnost je promena količine cilјne nukleinske kiseline. U određenim takvim primerima izvođenja, količina nukleinske kiseline koja nije ciljna je suštinski nepromenjena ukoliko se menja mnogo manje od cilјne nukleinske kiseline, ali promena ne mora biti nula.
[0080] Kako se ovde upotrebljava, "ekspresija" označava proces kojime gen konačno rezultuje u proteinu. Ekspresija obuhvata, ali nije ograničena na, transkripciju, post-transkripcionu modifikaciju (npr. obradu, poliadenilaciju, dodavanje 5'-kape) i translaciju.
[0081] Kako se ovde upotrebljava, "cilјna nukleinska kiselina" označava molekul nukleinske kiseline sa kojim se predviđa hibridizacija, da bi se dobila želјena antisensna aktivnost. Antisens oligonukleotidi su sa komplementarnošću sa svojim cilјnim nukleinskim kiselinama koja je dovoljna da se omogući hibridizacija pod fiziološkim uslovima.
[0082] Kako se ovde upotrebljava, "komplementarnost nukleobaza" ili "komplementarnost" u kontekstu nukleobaza označava nukleobazu koja je sposobna da se upari sa drugom nukleobazom. Na primer, u DNK, adenin (A) je komplementaran timinu (T). Na primer, u RNK, adenin (A) je komplementaran uracilu (U). U određenim primerima izvođenja, komplementarna nukleobaza označava nukleobazu antisens jedinjenja koja je sposobna da se spari sa nukleobazom svoje cilјne nukleinske kiseline. Na primer, ukoliko je nukleobaza na određenoj poziciji antisens jedinjenja sposobna da obrazuje vodoničnu vezu sa nukleobazom na određenoj poziciji cilјne nukleinske kiseline, onda se pozicija vodonične veze između oligonukleotida i cilјne nukleinske kiseline smatra komplementarnom na tom nukleobaznom paru. Nukleobaze koje sadrže određene modifikacije mogu zadržati sposobnost sparivanja sa nukleobazom parnjakom i stoga su još uvek sposobne za nukleobaznu komplementarnost.
[0083] Kako se ovde upotrebljava, "nekomplementarno", u kontekstu nukleobaza, označava par nukleobaza koje ne obrazuju vodonične veze jedna sa drugom.
[0084] Kako se ovde upotrebljava, "komplementarno", u kontekstu oligomernih jedinjenja (npr. povezanih nukleozida, oligonukleotida ili nukleinskih kiselina), označava sposobnost takvih oligomernih jedinjenja ili njihovih regiona da hibridizuju sa drugim oligomernim jedinjenjem ili njegovim regionom, komplementarnošću nukleobazna. Komplementarna oligomerna jedinjenja ne moraju imati komplementarnost nukleobaza na svakom nukleozidu. Tolerišu se zapravo pojedina pogrešna sparivanja. U određenim primerima izvođenja, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su sa komplementarnošću od 70% nukleobaza (70% komplementarni). U određenim primerima izvođenja, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 80% komplementarni. U određenim primerima izvođenja, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 90% komplementarni. U određenim primerima izvođenja, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 95% komplementarni. U određenim primerima izvođenja, komplementarna oligomerna jedinjenja ili regioni su 100% komplementarni.
[0085] Kako se ovde upotrebljava, "pogrešno sparivanje" označava nukleobazu prvog oligomernog jedinjenja koja nije sposobna da se spari sa nukleobazom na odgovarajućoj poziciji drugog oligomernog jedinjenja, kada se prvo i drugo oligomerno jedinjenje poravnaju. Bilo koje, ili oba od prvog i drugog oligomerenog jedinjenja mogu biti oligonukleotidi.
[0086] Kako se ovde upotrebljava, "hibridizacija" označava sparivanje komplementarnih oligomernih jedinjenja (npr. antisens jedinjenja i njegove cilјne nukleinske kiseline). Iako nije ograničen na određeni mehanizam, najčešći mehanizam sparivanja uključuje uspostavljanje vodonične veze, koja može biti tipa Watson-Crick-ove, Hoogsteen-ove ili obrnute Hoogsteen-ove vodonične veze između komplementarnih nukleobaza.
[0087] Kako se ovde upotrebljava, "specifično hibridizuje" označava sposobnost oligomernog jedinjenja da hibridizuje sa jednim mestom u nukleinskoj kiselini sa većim afinitetom nego što može da hibridizuje sa drugim mestom u nukleinskoj kiselini.
[0088] Kako se ovde upotrebljava, "potpuno komplementarni", u kontekstu oligonukleotida ili njegovog dela, označava da je svaka nukleobaza oligonukleotida ili njegovog dela sposobna da se spari sa nukleobazom komplementarne nukleinske kiseline ili njenog susednog dela. Prema tome, potpuno komplementarni region ne sadrži pogrešno sparene ili nehibridizovane nukleobaze bilo kog lanca.
[0089] Kako se ovde upotrebljava, "procenat komplementarnosti" označava procenat nukleobaza oligomernog jedinjenja koji je komplementaran delu ciljne nukleinske kiseline jednake dužine. Procenat komplementarnosti se izračunava delјenjem broja nukleobaza oligomernog jedinjenja koje su komplementarne nukleobazama na odgovarajućim pozicijama u cilјnoj nukleinskoj kiselini sa ukupnom dužinom oligomernog jedinjenja.
[0090] Kako se ovde upotrebljava, "procenat identiteta" označava broj nukleobaza u prvoj nukleinskoj kiselini koje su istog tipa (nezavisno od hemijske modifikacije) kao nukleobaze na odgovarajućim pozicijama u drugoj nukleinskoj kiselini, podelјen sa ukupnim brojem nukleobaza u prvoj nukleinskoj kiselini.
[0091] Kako se ovde upotrebljava, "modulacija" označava promenu količine ili kvaliteta molekula, funkcije ili aktivnosti u poređenju sa količinom ili kvalitetom molekula, funkcijom ili aktivnošću pre modulacije. Na primer, modulacija obuhvata promenu, bilo povećanja (stimulaciju ili indukciju) ili smanjenja (inhibiciju ili redukciju) u genskoj ekspresiji. Kao dodatni primer, modulacija ekspresije može uklјučivati promenu u selekciji mesta obrade tokom procesovanja pre-iRNK, što rezultuje promenom u apsolutnoj ili relativnoj količini određene varijacije obrade u poređenju sa količinom u odsustvu modulacije.
[0092] Kako se ovde upotrebljava, "hemijski motiv" označava obrazac hemijskih modifikacija u oligonukleotidu ili njegovom regionu. Motivi se mogu definisati modifikacijama određenih nukleozida i/ili određenih vezujućih grupa oligonukleotida.
[0093] Kako se ovde upotrebljava, "nukleozidni motiv" označava obrazac nukleozidnih modifikacija u oligonukleotidu ili njegovom regionu. Veze takvog oligonukleotida mogu biti modifikovane ili nemodifikovane. Ukoliko nije drugačije naznačeno, za motive za koje su ovde opisani samo nukleozidi, predviđeno je da budu nukleozidni motivi. Dakle, u takvim slučajevima, veze nisu ograničavajuće.
[0094] Kako se ovde upotrebljava, "motiv šećera" označava obrazac modifikacija šećera u oligonukleotidu ili njegovom regionu.
[0095] Kako se ovde upotrebljava, "motiv veza" označava obrazac modifikacija veza u oligonukleotidu ili njegovom regionu. Nukleozidi takvog oligonukleotida mogu biti modifikovani ili nemodifikovani. Ukoliko nije drugačije naznačeno, za motive za koje su ovde opisane samo veze, predviđeno je da budu motivi veza. Dakle, u takvim slučajevima, nukleozidi nisu ograničavajući.
[0096] Kako se ovde upotrebljava, "motiv modifikacija nukleobaze" označava obrazac modifikacije nukleobaza duž oligonukleotida. Ukoliko nije drugačije naznačeno, motiv modifikacije nukleobaze je nezavisan od nukleobazne sekvence.
[0097] Kako se ovde upotrebljava, "motiv sekvence" označava obrazac nukleobaza raspoređenih duž oligonukleotida ili njegovog dela. Ukoliko nije drugačije naznačeno, motiv sekvence je nezavisan od hemijskih modifikacija i stoga može podrazumevati bilo koju kombinaciju hemijskih modifikacija, uklјučujući i odsustvo hemijskih modifikacija.
[0098] Kako se ovde upotrebljava, "tip modifikacije", u kontekstu nukleozida ili nukleozida određenog "tipa", označava hemijsku modifikaciju nukleozida i uklјučuje modifikovane i nemodifikovane nukleozide. Shodno navedenom, ukoliko nije drugačije naznačeno, "nukleozid sa modifikacijom prvog tipa" može biti nemodifikovani nukleozid.
[0099] Kao što se ovde upotrebljava, "različito modifikovani" označava hemijske modifikacije ili hemijske supstituente koji se razlikuju jedan od drugog, uklјučujući i odsustvo modifikacija. Tako, na primer, MOE nukleozid i nemodifikovani nukleozid DNK su "različito modifikovani", čak iako je nukleozid DNK nemodifikovan. Slično tome, DNK i RNK su "različito modifikovane", čak iako su obe nemodifikovani nukleozidi koji se javljaju u prirodi. Nukleozidi koji su isti, ali koji sadrže različite nukleobaze, nisu različito modifikovani. Na primer, nukleozid koji sadrži 2'-OMe modifikovani šećer i nemodifikovanu adeninsku nukleobazu i nukleozid koji sadrži 2'-OMe modifikovani šećer i nemodifikovanu timinsku nukleobazu nisu različito modifikovani.
[0100] Kako se ovde upotrebljava, "isti tip modifikacija" se odnosi na modifikacije koje su iste jedne sa drugima, uklјučujući i odsustvo modifikacija. Tako, na primer, dva nemodifikovana nukleozida DNK imaju "isti tip modifikacije", čak iako je DNK nukleozid nemodifikovan. Takvi nukleozidi koji imaju isti tip modifikacije mogu sadržavati različite nukleobaze.
[0101] Kao što se ovde koristi, "razdvojeni regioni" označavaju delove oligonukleotida gde hemijske modifikacije ili motiv hemijskih modifikacija bilo kojih susednih delova uključuju najmanje jednu razliku koja omogućava da se razdvojeni regioni jasno razlikuju jedan od drugoga.
[0102] Kako se ovde upotrebljava, "farmaceutski prihvatlјiv nosač ili razblaživač" označava bilo koju supstancu koja je pogodna za upotrebu prilikom primene životinji. U određenim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatlјiv nosač ili razblaživač je sterilni fiziološki rastvor. U određenim primerima izvođenja, takav sterilni fiziološki rastvor je fiziološki rastvor farmaceutskog stepena čistoće.
[0103] Kako se ovde upotrebljava, termin "metabolički poremećaj" označava bolest ili stanje koje uglavnom karakteriše poremećena regulacija metabolizma, složenog seta hemijskih reakcija udruženih sa razgradnjom hrane da bi se proizvela energija.
[0104] Kako se ovde upotrebljava, termin "kardiovaskularni poremećaj" označava bolest ili stanje koje se uglavnom karakteriše oslablјenom funkcijom srca ili krvnih sudova.
[0105] Kako se ovde upotrebljava, termin "mono ili policiklični sistem prstena" podrazumeva sve sisteme prstena izabrane od pojedinačnih ili policikličnih radikala sistema prstena gde su prstenovi fuzionisani ili povezani, a podrazumeva se i da uklјučuje pojedinačne i mešane sisteme prstena pojedinačno izabrane od alifatičnih, alicikličnih, arilnih, heteroarilnih, aralkilnih, arilalkilnih, heterocikličnih, heteroarilnih, heteroaromatičnih i heteroarilalkilnih. Navedene mono i policiklične strukture mogu sadržavati prstenove od kojih svaki ima isti nivo zasićenja ili svaki, nezavisno, ima različite stepene zasićenja uklјučujući potpuno zasićene, delimično zasićene ili potpuno nezasićene prstenove. Svaki prsten može sadržavati atome prstena odabrane od C, N, O i S da bi se dobili heterociklični prstenovi, kao i prstenovi koji sadrže samo C atome u okviru prstena, a koji mogu biti prisutni u mešovitom motivu kao što je na primer benzimidazol gde jedan prsten ima samo ugljenikove atome prstena, dok fuzioisani prsten ima dva atoma azota. Mono ili policiklični sistem prstena može dodatno biti supstituisan sa supstituentskim grupama kao što je na primer ftalimid sa dve=0 grupe vezane za jedan od prstenova. Mono ili policiklični sistemi prstena mogu biti vezani za matične molekule upotrebom raznih strategija kao što su direktno vezivanje preko atoma prstena, fuzionisanje preko više atoma prstena, preko supstitucione grupe ili preko bifunkcionalne vezujuće grupe.
[0106] Kako se ovde upotrebljava, "prolek" označava neaktivan ili manje aktivan oblik jedinjenja koji se, kada se primeni subjektu, metaboliše da bi se obrazovalo aktivno ili aktivnije jedinjenje (npr. lek).
[0107] Kako se ovde upotrebljava, "supstituent" i "supstituciona grupa" označavaju atom ili grupu koja zamenjuje atom ili grupu imenovanog matičnog jedinjenja. Na primer, supstituent modifikovanog nukleozida je bilo koji atom ili grupa koji se razlikuje od atoma ili grupe koja se nalazi u nukleozidu koji se javlja u prirodi (npr. modifikovani 2'-substent je bilo koji atom ili grupa na poziciji 2' nukleozida drugačiji od H ili OH). Supstitucione grupe mogu biti zaštićene ili nezaštićene. U određenim primerima izvođenja, jedinjenja predmetnog opisa imaju supstituente na jednoj ili na više od jedne pozicije matičnog jedinjenja. Supstituenti mogu takođe biti dodatno supstituisani sa drugim supstitucionim grupama i mogu biti vezani za matično jedinjenje direktno ili preko vezujuće grupe kao što je alkilna ili hidrokarbilna grupa.
[0108] Slično navedenom, kako se ovde upotrebljava, "supstituent" u kontekstu hemijske funkcionalne grupe označava atom ili grupu atoma koji se razlikuje od atoma ili grupe atoma normalno prisutnih u datoj funkcionalnoj grupi. U određenim primerima izvođenja, supstituent zamenjuje atom vodonika funkcionalne grupe (npr. u određenim primerima izvođenja, supstituent supstituisane metil grupe je atom ili grupa drugačija od vodonika, koja zamenjuje jedan od vodonikovih atoma nesupstituisane metil grupe). Ukoliko nije drugačije naznačeno, grupe koje se mogu koristiti kao supstituenti obuhvataju, bez ograničenja, halogene, hidroksi, alkil, alkenil, alkinil, acil (-C(O)Raa), karboksil (-C(O)O-R)aa), alifatične grupe, aliciklične grupe, alkoksi, supstituisane oksi (-O-Raa), aril, aralkil, heterociklični radikal, heteroaril, heteroarilalkil, amino (-N(Rbb)(Rcc)), imino (=NRbb), amido (-C(O)N(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)C(O)Raa), azido (-N3), nitro (-NO2), cijano (-CN), karbamido (-OC(O)N(R)bb)(Rcc) ili -N(Rbb)C(O)ORaa), ureido (-N(Rbb)C(O)N(Rbb)(Rcc)), tioureido (-N(Rbb)C(S)N(Rbb)-(Rcc)), guanidinil (-N(Rbb)C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc)), amidinil (-C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)C(=NRbb)(Raa)), tiol (-SRbb), sulfinil (-S(O)Rbb), sulfonil (-S(O))2Rbb) i sulfonamidil (-S(O))2N(Rbb)(Rcc) ili -N(Rbb)S-(O)2Rbb) grupe. Gde svaki Raa, Rbbi Rccje, nezavisno, H, opciono vezana hemijska funkcionalna grupa ili dodatna supstituciona grupa pri čemu poželjna lista uključuje, bez ograničavanja, alkil, alkenil, alkinil, alifatičnu, alkoksi, acil, aril, aralkil, heteroaril, alicikličnu, heterocikličnu i heteroarilalkil grupu. Izabrani supstituenti u okviru ovde opisanih jedinjenja su prisutni u rekurzivnom stepenu.
[0109] Kako se ovde upotrebljava, "alkil," kao što je ovde upotrebljeno, označava zasićeni prav ili razgranat uglјovodonični radikal koji sadrži do dvadeset četiri atoma uglјenika. Primeri alkil grupa uklјučuju, bez ograničenja, metil, etil, propil, butil, izopropil, n-heksil, oktil, decil, dodecil i slične. Alkilne grupe obično sadrže od 1 do oko 24 atoma uglјenika, uobičajenije od 1 do oko 12 atoma uglјenika (C1-C12alkil), a najpoželjnije su sa od 1 do oko 6 atoma uglјenika.
[0110] Kako se ovde upotrebljava, "alkenil" označava prav ili razgranat lanac uglјovodoničnog radikala koji sadrži do dvadeset četiri atoma uglјenika i sadrži najmanje jednu dvostruku vezu tipa uglјenikuglјenik. Primeri alkenil grupa uklјučuju, bez ograničenja, etenil, propenil, butenil, 1-metil-2-buten-1-il, diene kao što su 1,3-butadien i slične. Alkenilne grupe obično sadrže od 2 do oko 24 atoma uglјenika, uobičajenije od 2 do oko 12 atoma uglјenika, a najpoželjnije su sa od 2 do oko 6 atoma uglјenika. Alkenilne grupe koje se ovde upotrebljavaju, opciono mogu uključivati jednu ili više dodatnih supstitucionih grupa.
[0111] Kako se ovde upotrebljava, "alkinil" označava prav ili razgranat uglјovodonični radikal koji sadrži do dvadeset četiri atoma uglјenika i najmanje jednu trostruku vezu tipa uglјenik-uglјenik. Primeri alkinil grupa uklјučuju, bez ograničenja, etinil, 1-propinil, 1-butinil i slične. Alkinil grupe obično sadrže od 2 do oko 24 atoma uglјenika, uobičajenije od 2 do oko 12 atoma uglјenika, a najpoželjnije su sa od 2 do oko 6 atoma uglјenika. Alkinilne grupe koje se ovde upotrebljavaju, opciono mogu uključivati jednu ili više dodatnih supstitucionih grupa.
[0112] Kako se ovde upotrebljava, "acil" označava radikal formiran uklanjanjem hidroksilne grupe iz organske kiseline i opšte je formule -C(O)-X gde je X obično alifatična, aliciklična ili aromatična grupa. Primeri uklјučuju alifatične karbonile, aromatične karbonile, alifatične sulfonile, aromatične sulfinile, alifatične sulfinile, aromatične fosfate, alifatične fosfate i slične grupe. Acilne grupe koje se ovde upotrebljavaju mogu opciono uklјučivati dodatne supstitucione grupe.
[0113] Kako se ovde upotrebljava, "aliciklični" označava cikličan sistem prstenova gde je prsten alifatičan. Sistem prstena može sadržavati jedan ili više prstenova gde je najmanje jedan prsten alifatičan. Poželјni aliciklini uklјučuju prstenove sa od oko 5 do oko 9 atoma uglјenika u prstenu. Aliciklini koji se ovde upotrebljavaju mogu opciono uključivati dodatne supstitucione grupe.
[0114] Kako se ovde upotrebljava, "alifatični" označava prav ili razgranat uglјovodonični radikal koji sadrži do dvadeset četiri atoma uglјenika, pri čemu je stepen zasićenja između bilo kojih dva atoma uglјenika tipa jednostruke, dvostruke ili trostruke veze. Poželјno je da alifatična grupa sadrži od 1 do oko 24 atoma uglјenika, obično od 1 do oko 12 atoma uglјenika, a najpoželjnije je da su sa od 1 do oko 6 atoma uglјenika. Prav ili razgranat lanac alifatične grupe može biti prekinut sa jednim ili sa više heteroatoma koji uključuju azot, kiseonik, sumpor i fosfor. Takve alifatične grupe prekinute heteroatomima obuhvataju, bez ograničenja, polialkoksi jedinjenja kao što su polialkilen glikoli, poliamini i poliimini. Alifatične grupe koje se ovde upotrebljavaju mogu opciono uključivati dodatne supstitucione grupe.
[0115] Kako se ovde upotrebljava, "alkoksi" označava radikal obrazovan između alkil grupe i atoma kiseonika, pri čemu se atom kiseonika koristi za povezivanje alkoksi grupe sa matičnim molekulom. Primeri alkoksi grupa uklјučuju, bez ograničenja, metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, n-butoksi, sekbutoksi, terc-butoksi, n-pentoksi, neopentoksi, n-heksoksi i slične grupe. Alkoksi grupe koje se ovde upotrebljavaju mogu opciono uključivati dodatne supstitucione grupe.
[0116] Kako se ovde upotrebljava, "aminoalkil" označava amino supstituisani C1-C12alkil radikal. Alkilni deo radikala obrazuje kovalentnu vezu sa matičnim molekulom. Amino grupa može biti locirana na bilo kojoj poziciji i aminoalkil grupa može biti supstituisana dodatnom supstitucionom grupom na alkilnim i/ili amino delovima.
[0117] Kako se ovde upotrebljava, "aralkil" i "arilalkil" označavaju aromatičnu grupu koja je kovalentno vezana za C1-C12alkil radikal. Deo alkil radikala rezultujuće aralkil (ili arilalkil) grupe obrazuje kovalentnu vezu sa matičnim molekulom. Primeri uklјučuju, bez ograničenja, benzil, fenetil i slične grupe. Aralkilne grupe koje se ovde upotrebljavaju mogu opciono uključivati dodatne supstitucione grupe vezane za alkil, aril ili obe grupe koje obrazuju grupu radikala.
[0118] Kako se ovde upotrebljava, "aril" i "aromatični" označavaju radikale mono- ili policikličnih radikala sistema prestena sa jednim ili sa više aromatičnih prstenova. Primeri aril grupa uklјučuju, bez ograničenja, fenil, naftil, tetrahidronaftil, indanil, idenil i slične. Poželјni arilni sistemi prstena imaju od oko 5 do oko 20 atoma uglјenika u jednom ili više prstenova. Arilne grupe koje se ovde upotrebljavaju mogu opciono uključivati dodatne supstitucione grupe.
[0119] Kako se ovde upotrebljava, "halo" i "halogen" označavaju atom izabran od fluora, hlora, broma i joda.
[0120] Kako se ovde upotrebljava, "heteroaril" i "heteroaromatični" označavaju radikal koji sadrži mono- ili policiklični aromatični prsten, sistem prstenova ili fuzionisani sistem prstenova u kome je najmanje jedan od prstenova aromatičan i uklјučuje jedan ili više heteroatoma. Heteroaril takođe podrazumeva fuzionisane sisteme prstenova uklјučujući sisteme gde jedan ili više fuzionisanih prstenova ne sadrži heteroatome. Heteroarilne grupe obično uklјučuju jedan atom prstena izabran od sumpora, azota ili kiseonika. Primeri heteroaril grupa uklјučuju, bez ograničenja, piridinil, pirazinil, pirimidinil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, tiadiazolil, oksadiazolil, tiofenil, furanil, hinolinil, izohinolinil, benzimidazolil, benzooksazolil, hinoksalinil i slične grupe. Heteroarilni radikali mogu biti vezani za matični molekul direktno ili preko vezujućeg ostatka kao što je alifatična grupa ili heteroatom. Heteroarilne grupe koje se ovde upotrebljavaju mogu opciono uključivati dodatne supstitucione grupe.
[0121] Kako se ovde upotrebljava, "konjugatno jedinjenje" označava bilo koji atom, grupu atoma ili grupu povezanih atoma pogodnih za upotrebu u vidu konjugatne grupe. U određenim primerima izvođenja, konjugatna jedinjenja mogu posedovati ili dodeljivati jedno ili više svojstava, uklјučujući, ali ne ograničavajući se na, farmakodinamičke, farmakokinetičke, vezujuće, apsorpcione, osobine ćelijske distribucije, ćelijskog preuzimanja, naelektrisanja i/ili klirensa.
[0122] Kako se ovde upotrebljava, osim ukoliko nije drugačije naznačeno ili modifikovano, termin "dvolančani" se odnosi na dva odvojena oligomerna jedinjenja koja su hibridizovana jedno sa drugim. Takva dvolančana jedinjenja mogu imati jedan ili više ili nehibridizovane nukleozide na jednom ili na oba kraja jednog ili oba lanca (ispusti), kao i/ili jedan ili više nehibridizovanih nukleozida unutar lanca (pogrešno sparenih), pod uslovom da postoji dovolјna komplementarnost da se hibridizacija održi u fiziološki relevantnim uslovima.
B. Određena jedinjenja
[0123] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje konjugovana antisens jedinjenja koja sadrže antisens oligonukleoitde i konjugat.
a. Određeni antisens oligonukleotidi
[0124] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje antisens oligonukleotide. Takvi antisens oligonukleotidi sadrže povezane nukleozide, a svaki nukleozid sadrži ostatak šećera i nukleobazu. Struktura takvih antisens oligonukleotida se može razmatrati u pogledu hemijskih karakteristika (npr. modifikacija i obrazaca modifikacija) i sekvence nukleobaza (npr. sekvence antisens oligonukleotida, ideniteta i sekvence cilјne nukleinske kiseline).
i. Određene hemijske karakteristike
[0125] Antisens oligonukleotid sadrži jednu ili više modifikacija. U određenim takvim primerima izvođenja, antisens oligonukleotidi sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida i/ili modifikovanih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, modifikovani nukleozidi sadrže modifikovani ostatak šećera i/ili modifikovanu nukleobazu.
1. Određeni ostaci šećera
[0126] U određenim primerima izvođenja, jedinjenja opisa sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida koji sadrže modifikovani ostatak šećera. Takva jedinjenja koja sadrže jedan ili više nukleozida sa modifikovanim šećerom mogu imati poželјne osobine, kao što je povećana stabilnost u odnosu na nukleaze ili povećan afinitet vezivanja sa cilјnom nukleinskom kiselinom u odnosu na oligonukleotid koji sadrži samo nukleozide koji sadrže ostatke šećera koji se javljaju u prirodi. U određenim primerima izvođenja, modifikovani ostaci šećera su supstituisani ostaci šećera. U određenim primerima izvođenja, modifikovani ostaci šećera su surogati šećera. Takvi surogati šećera mogu sadržavati jednu ili više supstitucija koje odgovaraju onima u supstituisanim ostacima šećera.
[0127] U određenim primerima izvođenja, modifikovani ostaci šećera su supstituisani ostaci šećera koje sadrže jedan ili više supstituenata šećera koji ne grade hemijske mostove, uklјučujući ali ne ograničavajući se na, supstituente na pozicijama 2’ i/ili 5'. Primeri supstituenata šećera pogodni za poziciju 2', uklјučuju, ali nisu ograničeni na: 2'-F, 2'-OCH3("OMe" ili "O-metil") i 2'-O(CH2)2OCH3("MOE"). U određenim primerima izvođenja, supstituenti šećera na poziciji 2’ su izabrani od alil, amino, azido, tio, O-alil, O-C1-C10alkil, O-C1-C10supstituisane alkil; OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) i O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) grupe, gde je svaki Rm i Rn, nezavisno, H ili supstituisani ili nesupstituisani C1-C10alkil. Primeri supstituenata šećera na poziciji 5', uklјučuju, ali nisu ograničeni na: 5'-metil (R ili S); 5'-vinil i 5'-metoksi. U određenim primerima izvođenja, supstituisani šećeri sadrže više od jednog supstituenta šećera koji ne obrazuje hemijske mostove, na primer, 2'-F-5'-metil ostatke šećera (pogledati, npr. PCT International Application WO 2008/101157 za dodatne 5’, 2'-bis supstituisane ostatke šećera i nukleozide).
[0128] Nukleozidi koji sadrže 2'-supstituisane ostatke šećera su označeni kao 2'-supstituisani nukleozidi. U određenim primerima izvođenja, 2'-supstituisani nukleozid sadrži 2'-supstitucionu grupu izabranu od halo, alil, amino, azido, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O, S ili N(Rm)-alkil; O, S ili N(Rm)-alkenil; O, S ili N(Rm)-alkinil; O-alkilenil-O-alkil, alkinil, alkaril, aralkil, O-alkaril, O-aralkil, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-ON(Rm)(Rn) ili O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), gde je svaki Rmi Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa ili supstituisana ili nesupstituisana C1-C10alkil grupa. Navedene 2'-supstitucione grupe mogu biti dodatno supstituisane sa jednom ili sa više supstitucionih grupa nezavisno izabranih od hidroksi, amino, alkoksi, karboksi, benzil, fenil, nitro (NO2), tiol, tioalkoksi (S-alkil), halogene, alkil, aril, alkenil i alkinil grupe.
[0129] U određenim primerima izvođenja, 2'-supstituisani nukleozid sadrži 2'-supstitucionu grupu izabranu od F, NH2, N3, OCF3, O-CH3, O(CH2)3NH2, CH2-CH=CH2, O-CH2-CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2i N-supstituisanog acetamida (O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) gde je svaki Rmi Rn, nezavisno, H, amino zaštitna grupa ili supstituisana ili nesupstituisana C1-C10alkil grupa.
[0130] U određenim primerima izvođenja, 2'-supstituisani nukleozid sadrži ostatak šećera koji sadrži 2'-supstitucionu grupu izabranu od F, OCF3, O-CH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-ON(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2i O-CH2-C(=O)-N(H)CH3.
[0131] U određenim primerima izvođenja, 2'-supstituisani nukleozid sadrži ostatak šećera koji sadrži 2'-supstitucionu grupu izabranu od F, O-CH3i OCH2CH2OCH3.
[0132] Određeni modifikovani ostaci šećera sadrže premošavajući supstituent šećera koji obrazuje drugi prsten što rezultuje u bicikličnom ostatku šećera. U određenim takvim primerima izvođenja, biciklični ostatak šećera sadrži most između 4’ i 2' atoma furanoznog prstena. Primeri takvih 4’-2' supstituenata šećera uklјučuju, ali nisu ograničeni na: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- ili -C(RaRb)-O-N(R)-; 4'-CH2-2’, 4'-(CH2)2-2’, 4'-(CH2)3-2’, 4’-(CH2)-O-2’ (LNA); 4’-(CH2-S-2’; 4’-(CH2)2-O-2’ (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2’ (cEt) i 4'-CH(CH2OCH3)-O-2’, kao i njihove analoge (pogledati, npr. U.S. Patent 7,399,845, izdat 15. jula 2008); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2’ i njegove analoge (pogledati, npr. WO2009/006478, objavljen 8. januara 2009); 4'-CH2-N(OCH3)-2’ i njegove analoge (pogledati, npr. WO2008/150729, objavljen 11. decembra 2008); 4'-CH2-ON(CH3)-2' (pogledati, npr. US2004/0171570, objavljen 2. septembra 2004); 4'-CH2-O-N(R)-2’ i 4'-CH2-N(R)-0-2’-, gde je svaki R, nezavisno, H, zaštitna grupa ili C1-C12alkil; 4'-CH2-N(R)-O-2’, gde R je H, C1-C12alkil ili zaštitna grupa (pogledati, U.S. Patent 7,427,672, izdat 23. septembra 2008); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (pogledati, npr. Chattopadhyaia i saradnici, J. Org. Chem. 2009, 74, 118-134); i 4'-CH2-C(=CH2)-2’ i njegove analoge (pogledati, objavlјenu PCT International Application WO 2008/154401, publikovanu 8. decembra 2008).
[0133] U određenim primerima izvođenja, navedeni 4’ - 2' mostovi nezavisno sadrže od 1 do 4 vezane grupe nezavisno izabrane od -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- i -N(Ra)-;
gde:
x je 0, 1 ili 2;
n je 1, 2, 3 ili 4;
svaki Rai Rbje, nezavisno, H, zaštitna grupa, hidroksi, C1-C12alkil, supstituisana C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisana C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisana C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisana C5-C20aril grupa, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, heteroaril, supstituisani heteroaril, C5-C7aliciklični radikal, supstituisani C5-C7aliciklični radikal, halogen, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), supstituisana acil, CN, sulfonil (S(=O)2-J1) ili sulfoksil grupa (S(=O)-J1); i
svaki J1i J2je, nezavisno, H, C1-C12alkil, supstituisana C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisana C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisana C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisana C5-C20aril, acil (C(=O)-H), supstituisana acil grupa, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, C1-C12aminoalkil, supstituisana C1-C12aminoalkil ili zaštitna grupa.
[0134] Nukleozidi koji sadrže biciklične ostatke šećera se nazivaju bicikličnim nukleozidima ili BNA. Biciklični nukleozidi obuhvataju, ali nisu ograničeni na, (A) α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2’) BNA, (B) β-D-metilenoksi (4'-CH2-O-2’) BNA (označen i kao zaklјučana nukleinska kiselina ili LNA), (C) etilenoksi (4'-(CH)2)2-O-2’) BNA, (D) aminooksi (4'-CH2-O-N(R)-2’) BNA, (E) oksiamino (4'-CH2-N(R)-O-2’) BNA, (F) metil(metilenoksi) (4'-CH(CH3)-O-2’) BNA (označen i kao kruti etil ili cEt), (G) metilen-tio (4'-CH)2-S-2’) BNA, (H) metilen-amino (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) metil karbociklični (4'-CH)2-CH(CH3)-2’) BNA i (J) propilen karbociklični (4'-(CH2)3-2’) BNA, kao što je prikazano ispod.
gde je Bx nukleobazni ostatak i R je, nezavisno, H, zaštitna grupa ili C1-C12alkil grupa.
[0135] Dodatni biciklični ostaci šećera su poznati u stanju tehnike, na primer: Singh i saradnici, Chem. Commun. 1998, 4, 455-456; Koshkin i saradnici, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt i saradnici, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. A. 2000, 97, 5633-5638; Kumar i saradnici, Bioorg. Med. Chem. Lett.1998, 8, 2219-2222; Singh i saradnici, J. Org. Chem.1998, 63, 10035-10039; Srivastava i saradnici, J. Am. Chem. Soc. 129(26) 8362-8379 (4. jul 2007); Elayadi i saradnici, Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch i saradnici, Chem. Biol.2001, 8, 1-7; Orum i saradnici, Curr. Opinion Mol. Ther. 2001, 3, 239-243; U.S. Patent No. 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 6,670,461 i 7,399,845; WO 2004/106356, WO 1994/14226, WO 2005/021570 i WO 2007/134181; U.S. Patent Publication No. US2004/0171570, US2007/0287831 i US2008/0039618; U.S. Patent Serial No. 12/129,154, 60/989,574, 61/026,995, 61/026,998, 61/056,564, 61/086,231, 61/097,787 i 61/099,844; i PCT International Applications No. PCT/US2008/064591, PCT/US2008/066154 i PCT/US2008/068922.
[0136] U određenim primerima izvođenja, biciklični ostaci šećera i nukleozidi u koje su ugrađeni navedeni biciklični ostaci šećera su dodatno definisani izomernom konfiguracijom. Na primer, nukleozid koji sadrži 4'-2’ metilen-oksi most, može biti u α-L konfiguraciji ili u β-D konfiguraciji. Prethodno, α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2’) biciklični nukleozidi su bili ugrađivani u antisens oligonukleotide koji su pokazali antisensnu aktivnost (Frieden i saradnici, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
[0137] U određenim primerima izvođenja, supstituisani ostaci šećera sadrže jedan ili više supstituenta šećera koji ne mogu obrazovati hemijske mostove i jedan ili više premošćujućih supstituenata šećera (npr. 5'-supstituisani i 4'-2’ premošteni šećeri). (pogledati, PCT International Application WO 2007/134181, objavlјenu 11/22/07, gde je LNA supstituisana sa, na primer, 5'-metil ili 5'-vinil grupom).
[0138] U određenim primerima izvođenja, modifikovani ostaci šećera su surogati šećera. U određenim takvim primerima izvođenja, atom kiseonika šećera koji se javlja u prirodi je supstituisan, npr. atomom sumpora, uglјenika ili azota. U određenim takvim primerima izvođenja, takav modifikovani ostatak šećera takođe sadrži premošćavajuće i/ili nepremošćavajuće supstituente kao što je prethodno opisano. Na primer, određeni surogati šećera sadrže 4'-sulfer atom i supstituciju na poziciji 2' (pogledati, npr. objavlјenu U.S. Patent Application US2005/0130923, objavljenu 16. juna 2005) i/ili poziciji 5’. Kao dodatni primer, opisani su i karbociklični biciklični nukleozidi sa 4'-2’ hemijskim mostom (pogledati, npr. Freier i saradnici, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 i Albaek i saradnici, J. Org. Chem.2006, 71, 7731-7740).
[0139] U određenim primerima izvođenja, surogati šećera sadrže prstenove koji imaju druge od 5 atoma. Na primer, u određenim primerima izvođenja, surogat šećera sadrži morfolino radikal. Morfolino jedinjenja i njihova upotreba u oligomernim jedinjenjima je prijavljena u brojnim patentima i objavlјenim člancima (pogledati na primer: Braasch i saradnici, Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; i U.S. Patent 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; i 5,034,506). Kako se ovde upotrebljava, izraz "morfolino" označava surogat šećer sledeće strukture:
U određenim primerima izvođenja, morfolini mogu biti modifikovani, na primer dodavanjem ili izmenom raznih supstitucionih grupa iz prethodno navedene morfolino strukture. Ovakvi surogati šećera se ovde označavaju "modifikovanim morfolinima".
[0140] Za drugi primer, u određenim primerima izvođenja, surogat šećera sadrži šestočlani tetrahidropiran. Ovakvi tetrahidropirani mogu biti dodatno modifikovani ili supstituisani. Nukleozidi koji sadrže takve modifikovane tetrahidropirane uklјučuju, ali nisu ograničeni na, heksitolsku nukleinsku kiselinu (HNA), anitolsku nukleinsku kiselinu (ANA), manitolsku nukleinsku kiselinu (MNA) (pogledati Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10:841-854), fluoro HNA (F-HNA) i jedinjenja Formule VI:
gde nezavisno za svaki od navedenih, a najmanje za jedan tetrahidropiranski nukleozidni analog formule VI:
Bx je ostatak nukleobaze;
T3i T4su svaki, nezavisno, internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje tetrahidropiranski nukleozidni analog sa antisens jedinjenjem ili jedna od T3i T4je internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje tetrahidropiranski nukleozidni analog sa antisens jedinjenjem, dok drugi od T3i T4je H, hidroksilna zaštitna grupa, vezana konjugatna grupa ili 5’ ili 3'-terminalna grupa;
svaki od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je, nezavisno, H, C1-C6alkil, supstituisana C1-C6alkil, C2-C6alkenil, supstituisana C2-C6alkenil, C2-C6alkinil ili supstituisana C2-C6alkinil grupa; i
svaki od R1i R2R3 je nezavisno izabran iz grupe koju čine: vodonik, halogen, supstituisana ili nesupstituisana alkoksi grupa, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2i CN, gde X je O, S ili NJ1i svaki J1, J2i J3je, nezavisno, H ili C1-C6alkil.
[0141] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su modifikovani THP nukleozidi Formule VI gde svaki od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je H. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je drugačiji od H. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je metil. U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su THP nukleozidi Formule VI gde jedan od R1i R2je F. U određenim primerima izvođenja, R1je fluoro i R2je H, R1je metoksi i R2je H i R1je metoksietoksi i R2je H.
[0142] Mnogi drugi biciklični i triciklični sistemi prstena surogata šećera su takođe poznati u stanju tehnike i mogu biti upotrebljeni za modifikaciju nukleozida zarad ugradnje u antisens jedinjenja (pogledati, npr. pregledni članak: Leumann, J. C. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854).
[0143] Kombinacije modifikacija su takođe obezbeđene bez ograničenja, kao što su 2'-F-5'-metil supstituisani nukleozidi (pogledati PCT International Application WO 2008/101157 objavlјenu 8/21/08 za druge opisane 5’, 2'-bis supstituisane nukleozide) i zamena atoma kiseonika ribozil prstena sa S, kao i dodatna supstitucija na poziciji 2' (pogledati objavlјenu U.S. Patent Application US2005-0130923, objavljenu 16. juna 2005) ili alternativno 5'-supstitucija biciklične nukleinske kiseline (pogledati PCT International Application WO 2007/134181, objavlјenu 11/22/07, gde je 4'-CH2-O-2’ bicikličan nukleozid dodatno supstituisan na 5' poziciji sa 5'-metil ili 5'-vinil grupom). Sinteza i priprema karbocikličnih bicikličnih nukleozida, zajedno sa njihovim oligomerizacijama i biohemijskim ispitivanjima, takođe su opisani (pogledati, npr. Srivastava i saradnici, J. Am. Chem. Soc.2007, 129(26), 8362-8379).
U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje oligonukleotide koji sadrže modifikovane nukleozide. Ovakvi modifikovani nukleotidi mogu uključivati modifikovane šećere, modifikovane nukleobaze i/ili modifikovane veze. Specifične modifikacije su izabrane tako da dobijeni oligonukleotidi imaju želјene karakteristike. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže jedan ili više nukleozida sličnih RNK. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže jedan ili više nukleotida sličnih DNK.
2. Određene modifikacije nukleobaza
[0144] U određenim primerima izvođenja, nukleozidi predmetnog opisa sadrže jednu ili više nemodifikovanih nukleobaza. U određenim primerima izvođenja, nukleozidi predmetnog opisa sadrže jednu ili više modifikovanih nukleobaza.
[0145] U određenim primerima izvođenja, modifikovane nukleobaze su izabrane od: univerzalnih baza, hidrofobnih baza, raznovrsno vezujućih baza, baza povećanih veličina i fluorisanih baza, kao što je ovde definisano. 5-supstituisani pirimidini, 6-azapirimidini i N-2, N-6 i 0-6 supstituisani purini, uklјučujući 2-aminopropiladenin, 5-propiniluracil; 5-propinilcitozin; 5-hidroksimetil citozin, ksantin, hipoksantin, 2-aminoadenin, 6-metil i drugi alkilni derivati adenina i guanina, 2-propil i drugih alkilni derivati adenina i guanina, 2-tiouracil, 2-tiotimin i 2-tiocitozin, 5-halouracil i citozin, 5-propinil (-C=C-CH3) uracil i citozin i drugi alkinilni derivati pirimidinskih baza, 6-azo uracil, citozin i timin, 5-uracil (pseudouracil), 4-tiouracil, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalkil, 8- hidroksi i drugi 8-supstituisani adenini i guanini, 5-halo naročito 5-bromo, 5-trifluorometil i drugi 5-supstituisani uracili i citozini, 7-metilguanin i 7-metiladenin, 2-F-adenin, 2-amino-adenin, 8-azaguanin i 8-azaadenin, 7-deazaguanin i 7-deazaadenin, 3-deazaguanin i 3-deazaadenin, univerzalne baze, hidrofobne baze, raznovrsno vezujuće baze, baze povećane veličine i fluorisane baze, kao što je ovde definisano. Dodatne modifikovane nukleobaze uklјučuju triciklične pirimidine kao što su fenoksazin citidin ([5,4-b][1,4]benzoksazin-2(3H)-on), fenotiazin citidin (1H-pirimido[5,4-b][1,4]]benzotiazin-2(3H)-on), G-spojnice kao što je supstituisani fenoksazin citidin (npr. 9-(2-aminoetoksi)-H-pirimido[5,4-b][1,4]benzoksazin-2(3H))-on), karbazol citidin (2H-pirimido[4,5-b]indol-2-on), piridoindol citidin (H-pirido[3’,2':4,5]pirolo[2,3-d]pirimidin-2-on). Modifikovane nukleobaze mogu takođe obuhvatati one u kojima je purinska ili pirimidinska baza zamenjena drugim heterociklinima, na primer 7-deazaadeninom, 7-deazaguanozinom, 2-aminopiridinom i 2-piridonom. Dodatne nukleobaze uklјučuju one prijavljene u United States Patent No. 3,687,808, one prijavljene u The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., izd., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; one prijavljene od strane Englisch-a i saradnika, Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; i one prijavljene od strane Sanghvi, Y.S., poglavlje 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. i Lebleu, B., izd., CRC Press, 1993, 273-288.
[0146] Reprezentativni patenti Sjedinjenih Američkih Država koji opisuju pripremu određenih prethodno navedenih modifikovanih nukleobaza kao i drugih modifikovanih nukleobaza uklјučuju, bez ograničenja U.S. 3,687,808; 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121; 5,596,091; 5,614,617; 5,645,985; 5,681,941; 5,750,692; 5,763,588; 5,830,653 i 6,005,096, od kojih su neki obično u vlasništvu sa trenutnom prijavom.
3. Određene internukleozidne veze
[0147] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje oligonukleotide koji sadrže povezane nukleozide. U takvim primerima izvođenja, nukleozidi mogu biti povezani zajedno, upotrebom bilo koje internukleozidne veze. Dve glavne klase internukleozidnih vezujućih grupa su definisane prisustvom ili odsustvom atoma fosfora. Reprezentativni internukleozidne veze koje sadrže fosfor uklјučuju, ali nisu ograničeni na, fosfodiestarske (PO), fosfotriestarske, metilfosfonatne, fosforamidatne i fosforotioatne (PS). Reprezentativne internukleozidne veze koje ne sadrže fosfor uklјučuju, ali nisu ograničene na, metilenmetilimino (-CH)2-N(CH3-O-CH2-), tiodiestarske (-O-C(O)-S-), tionokarbamatne (-0-C(O)(NH)-S-); siloksanske (-O-Si(H)2-O-); i N,N'-dimetilhidrazinske (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-). Modifikovane veze, u poređenju sa prirodnim fosfodiestarskim vezama, mogu biti upotrebljene za izmenu, obično povećanje, otpornosti oligonukleotida na nukleazu. U određenim primerima izvođenja, internukleozidne veze koje sadrže hiralni atom, mogu biti pripremlјene kao racemska smeša ili kao razdvojeni enantiomeri. Reprezentativne hiralne veze uklјučuju, ali nisu ograničene na, alkilfosfonatne i fosforotioatne. Postupci pripreme internukleozidnih veza koje sadrže i ne sadrže fosfor su dobro poznati stručnjacima iz oblasti.
[0148] Oligonukleotidi koji su ovde opisani sadrže jedan ili više asimetričnih centara i tako daju enantiomere, dijastereomere i druge stereoizomerne konfiguracije koje se mogu definisati, u kontekstu apsolutne stereohemije, kao (R) ili (S), α ili β, kao što je slučaj za anomere šećera, ili kao (D) ili (L) kao što je slučaj za aminokiseline itd. Obuhvaćeni anitsens jedinjenjima koja su ovde obezbeđena su tako svi takvi mogući izomeri, kao i njihovi racemski i optički čisti oblici.
[0149] Neutralne internukleozidne veze uklјučuju, bez ograničenja, fosfotriestarske, metilfosfonatne, MMI (3'-CH)2-N(CH3)-O-5’), amid-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5’), amid-4 (3'-CH2-N(H)-C(=O)-5’), formacetalne (3'-O-CH2-O-5’) i tioformacetalne (3'-S-CH2-O-5’). Dodatne neutralne internukleozidne veze uklјučuju nejonske veze koje sadrže siloksan (dialkilsiloksan), karboksilat estar, karboksamid, sulfid, sulfonat estar i amide (pogledati na primer: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi i P. D. Cook, ur. ACS Simposium Series 580; poglavlјa 3 i 4, 40-65). Dodatne neutralne internukleozidne veze uključuju nejonske veze koje sadrže mešane N, O, S i CH2komponente.
4. Određeni motivi
[0150] U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotidi sadrže jedan ili više modifikovanih nukleozida (npr. nukleozid koji sadrži modifikovani šećer i/ili modifikovanu nukleobazu) i/ili jednu ili više modifikovanih internukleozidnih veza. Obrazac navedenih modifikacija na oligonukleotidu se ovde označava kao motiv. U određenim primerima izvođenja, motivi šećera, nukleobaza i vezivanja su nezavisni jedan od drugog.
a. Određeni motivi šećera
[0151] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže jedan ili više tipova modifikovanih ostataka šećera i/ili ostataka šećera koji se javljaju u prirodi, raspoređenih duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom obrascu ili motivu modifikacija šećera. Ovakvi motivi mogu uključivati bilo koju od ovde diskutovanih modifikacija šećera i/ili druge poznate modifikacije šećera.
[0152] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže ili se sastoje od regiona sa gapmer motivom šećera, koji sadrži dva spolјašnja regiona ili segmenta tipa "krila" i centralni ili unutrašnji region ili tzv. "razmak" (engl. gap). Tri regiona gapmer motiva šećera (5'-”krilo”, centralni deo i 3'-”krilo” ) obrazuju kontinualnu sekvencu nukleozida u kojoj se bar neki od ostataka šećera nukleozida svakog od “krila” razlikuju od najmanje nekih ostataka šećera nukleozida regiona razmaka. Specifičnije, barem ostaci šećera nukleozida svakog “krila” koji su najbliži segmentu razmaka (nukleozidi najbliži 3' kraju 5'-”krila” i nukleozidi najbliži 5' kraju 3'-”krila”) se razlikuju od ostataka šećera nukleozida koji su susedni segmentu razmaka, čime se definiše granica između “krila” i regiona razmaka. U određenim primerima izvođenja, ostaci šećera unutar regiona razmaka su isti jedan drugome. U određenim primerima izvođenja, region razmaka uklјučuje jedan ili više nukleozida sa ostatkom šećera koji se razlikuje od ostataka šećera jednog ili više drugih nukleozida regiona razmaka. U određenim primerima izvođenja, motivi šećera dva “krila” su isti jedan drugome (simetrični šećeri gapmer-a). U određenim primerima izvođenja, motivi šećera 5'-“krila” se razlikuju od motiva šećera 3'-“krila” (asimetrični šećeri gapmer-a).
i. Određene 5' strukture ”krila”
[0153] U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 8 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 7 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 6 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 do 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 3 do 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 4 ili 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 3 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 ili 2 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 do 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 ili 3 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 3 ili 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od jednog nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 3 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 6 povezanih nukleozida.
[0154] U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje dva biciklična nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje tri biciklična nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje četiri biciklična nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etilnukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je bicikličan nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je kruti etilnukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je LNA nukleozid.
[0155] U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je 2'-OMe nukleozid.
[0156] U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan ribonukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 5'-”krila” gapmer-a je ribonukleozid. U određenim primerima izvođenja, jedan, više od jednog ili svaki od nukleozida 5'-”krila” je nukleozid sličan nukleozidu RNK.
[0157] U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0158] U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etilnukleozid i najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 5'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
ii. Određena 3'-”krila”
[0159] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 8 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 7 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 6 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 do 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 3 do 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 4 ili 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 do 3 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 1 ili 2 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 do 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 ili 3 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 3 ili 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od jednog nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 2 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 3 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 4 povezana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 5 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a se sastoji od 6 povezanih nukleozida.
[0160] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etilnukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid iz 3'-”krila” gapmer-a je bicikličan nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je kruti etilnukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je LNA nukleozid.
[0161] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje dva modifikovana nukleozida koji nisu biciklični. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmera sadrži najmanje tri modifikovana nukleozida koji nisu biciklični. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje četiri modifikovana nukleozida koji nisu biciklični. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je 2'-OMe nukleozid.
[0162] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan ribonukleozid. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid 3'-”krila” gapmer-a je ribonukleozid. U određenim primerima izvođenja, jedan, više od jednog ili svaki od nukleozida 5'-”krila” je nukleozid sličan nukleozidu RNK.
[0163] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0164] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etilnukleozid i najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0165] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-MOE nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3’- krilo gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-OMe nukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0166] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid, najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid, najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan modifikovani nukleozid koji nije bicikličan i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0167] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid, najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid, najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan 2'-supstituisani nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0168] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid, najmanje jedan 2'-MOE nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid, najmanje jedan 2'-MOE nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan 2'-MOE nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
[0169] U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan bicikličan nukleozid, najmanje jedan 2'-OMe nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan kruti etil-nukleozid, najmanje jedan 2'-OMe nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, 3'-”krilo” gapmer-a sadrži najmanje jedan LNA nukleozid, najmanje jedan 2'-OMe nukleozid i najmanje jedan 2'-dezoksinukleozid.
iii. Određeni centralni regioni (razmaka, engl. gap)
[0170] U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 do 20 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 do 15 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 do 12 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 do 10 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 do 9 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 do 8 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 ili 7 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmera se sastoji od 7 do 10 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 7 do 9 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 7 ili 8 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 8 do 10 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 8 ili 9 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 6 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 7 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 8 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 9 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 10 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 11 povezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka gapmer-a se sastoji od 12 povezanih nukleozida.
[0171] U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid regiona razmaka gapmer-a je 2'-dezoksinukleozid. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, svaki nukleozid regiona razmaka gapmer-a je 2'-dezoksinukleozid ili je modifikovani nukleozid "sličan DNK". U takvim primerima izvođenja, "sličan DNK" označava da nukleozid ima karakteristike slične DNK, tako da je dupleks koji sadrži gapmer i RNK molekul sposoban da aktivira RNazu H. Na primer, pod određenim uslovima, za 2’-(ara)-F je pokazano da podržava aktivaciju RNaze H i da je time sličan DNK. U određenim primerima izvođenja, jedan ili više nukleozida regiona razmaka gapmer-a nije 2'-dezoksinukleozid i nije sličan DNK. U određenim takvim primerima izvođenja, gapmer ipak podržava aktivaciju RNaze H (npr. zahvaljujući broju ili pozicijama nukleozida koji nisu slični DNK).
[0172] U određenim primerima izvođenja, regioni razmaka sadrže nizove nemodifikovanog 2'-dezoksinukleozida prekinute sa jednim ili sa više modifikovanih nukleozida, što rezultuje u tri podregiona (dva niza jednog ili više 2'-dezoksinukleozida i niz jednog ili više prekidajućih, modifikovanih nukleozida). U određenim primerima izvođenja, nijedan niz nemodifikovanog 2'-dezoksinukleozida nije duži od 5, 6 ili 7 nukleozida. U određenim primerima izvođenja, takvi kratki nizovi se postižu upotrebom kratkih regiona regiona razmaka. U određenim primerima izvođenja, kratki nizovi se postižu prekidima sa dužim regionima razmaka.
[0173] U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jedan ili više modifikovanih nukleozida izabranih između cEt, FHNA, LNA i 2-tio-timidina. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jedan modifikovani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži 5'-supstituisanu šećernu grupu izabranu između 5'-Me i 5'-(R)-Me. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži dva modifikovana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži tri modifikovana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži četiri modifikovana nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži dva ili više modifikovanih nukleozida i svaki modifikovani nukleozid je isti. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži dva ili više modifikovanih nukleozida i svaki modifikovani nukleozid je različit.
[0174] U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jednu ili više modifikovanih veza. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jednu ili više metilfosfonatnih veza. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži dve ili više modifikovanih veza. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jednu ili više modifikovanih veza i jedan ili više modifikovanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži jednu modifikovanu vezu i jedan modifikovani nukleozid. U određenim primerima izvođenja, region razmaka sadrži dve modifikovane veze i dva ili više modifikovanih nukleozida.
b. Određeni motivi internukleozidnih veza
[0175] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže modifikovane internukleozidne veze raspoređene duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom obrasu ili motive modifikovanih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže region koji ima naizmeničan motiv internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi predmetnog pronalaska sadrže region jednoobrazno modifikovanih internukleozidnih veza. U određenim takvim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži region koji je na jednoobrazan način povezan fosforotioatnim internukleozidnim vezama. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid je na jednoobrazan način povezan fosforotioatnim internukleozidnim vezama. U određenim primerima izvođenja, svaka internukleozidna veza oligonukleotida je izabrana između fosfodiestarske i fosforotioatne. U određenim primerima izvođenja, svaka internukleozidna veza oligonukleotida je izabrana između fosfodiestarske i fosforotioatne i najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna.
[0176] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 6 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 7 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 8 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 9 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 10 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 11 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 12 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 13 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje 14 fosforotioatnih internukleozidnih veza.
[0177] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 6 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 7 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 8 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 9 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje jedan blok od najmanje 10 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži najmanje blok od najmanje jedne 12 uzastopnih fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim takvim primerima izvođenja, najmanje jedan takav blok se nalazi na 3’ kraju oligonukleotida. U određenim takvim primerima izvođenja, najmanje jedan takav blok se nalazi unutar 3 nukleozida 3’ kraja oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 15 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 14 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 13 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 12 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 11 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 10 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 9 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 8 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 7 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 6 fosforotioatnih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži manje od 5 fosforotioatnih internukleozidnih veza.
c. Određeni motivi modifikacija nukleobaza
[0178] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže hemijske modifikacije nukleobaza raspoređene duž oligonukleotida ili njegovog regiona u definisanom obrasu ili motivu modifikacije nukleobaza. U određenim takvim primerima izvođenja, modifikacije nukleobaze su raspoređene u motivu segmenta razmaka. U određenim primerima izvođenja, modifikacije nukleobaze su raspoređene u naizmeničnim motivima. U određenim primerima izvođenja, svaka nukleobaza je modifikovana. U određenim primerima izvođenja, nijedna od nukleobaza nije hemijski modifikovana.
[0179] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže blok modifikovanih nukleobaza. U određenim takvim primerima izvođenja, blok je na 3'-kraju oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, blok je unutar 3 nukleotida 3'-kraja oligonukleotida. U određenim takvim primerima izvođenja, blok je na 5'-kraju oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, blok je unutar 3 nukleotida 5'-kraja oligonukleotida.
[0180] U određenim primerima izvođenja, modifikacije nukleobaze obezbeđuju funkciju prirodne baze na određenoj poziciji oligonukleotida. Na primer, u određenim primerima izvođenja, svaki purin ili svaki pirimidin u oligonukleotidu je modifikovan. U određenim primerima izvođenja, svaki adenin je modifikovan. U određenim primerima izvođenja, svaki guanin je modifikovan. U određenim primerima izvođenja, svaki timin je modifikovan. U određenim primerima izvođenja, svaki citozin je modifikovan. U određenim primerima izvođenja, svaki uracil je modifikovan.
[0181] U određenim primerima izvođenja, neki, svi ili nijedan od citozinskih ostataka u oligonukleotidu su 5-metil citozinske grupe. U ovom slučaju, 5-metil citozin nije "modifikovana nukleobaza". Stoga, ukoliko nije drugačije naznačeno, nemodifikovane nukleobaze obuhvataju i ostatke citozina sa 5-metil i one kojima nedostaje 5 metil. U određenim primerima izvođenja, navedeno je metilaciono stanje svih ili nekih citozinskih nukleobaza.
[0182] U određenim primerima izvođenja, hemijske modifikacije nukleobaza obuhvataju vezivanje određenih konjugatnih grupa za nukleobaze. U određenim primerima izvođenja, svaki purin ili svaki pirimidin u oligonukleotidu može biti opciono modifikovan tako da sadrži konjugatnu grupu.
d. Određene ukupne dužine
[0183] U određenim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje oligonukleotide bilo kog različitog opsega dužina. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi se sastoje od nukleozida povezanih od X do Y, gde X predstavlјa najmanji broj nukleozida u opsegu, a Y predstavlјa najveći broj nukleozida u opsegu. U određenim takvim primerima izvođenja, X i Y su svaki nezavisno izabrani od 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 i 50; pod uslovom da je X≤Y. Na primer, u određenim primerima izvođenja, oligonukleotid može da se sastoji od 8 do 9, 8 do 10, 8 do 11, 8 do 12, 8 do 13, 8 do 14, 8 do 15, 8 do 16, 8 do 17, 8 do 18, 8 do 19, 8 do 20, 8 do 21, 8 do 22, 8 do 23, 8 do 24, 8 do 25, 8 do 26, 8 do 27, 8 do 28, 8 do 29, 8 do 30, 9 do 10, 9 do 11, 9 do 12, 9 do 13, 9 do 14, 9 do 15, 9 do 16, 9 do 17, 9 do 18, 9 do 19, 9 do 20, 9 do 21, 9 do 22, 9 do 23, 9 do 24, 9 do 25, 9 do 26, 9 do 27, 9 do 28, 9 do 29, 9 do 30, 10 do 11, 10 do 12, 10 do 13, 10 do 14, 10 do 15, 10 do 16, 10 do 17, 10 do 18, 10 do 19, 10 do 20, 10 do 21, 10 do 22, 10 do 23, 10 do 24, 10 do 25, 10 do 26, 10 do 27, 10 do 28, 10 do 29, 10 do 30, 11 do 12, 11 do 13, 11 do 14, 11 do 15, 11 do 16, 11 do 17, 11 do 18, 11 do 19, 11 do 20, 11 do 21, 11 do 22, 11 do 23, 11 do 24, 11 do 25, 11 do 26, 11 do 27, 11 do 28, 11 do 29, 11 do 30, 12 do 13, 12 do 14, 12 do 15, 12 do 16, 12 do 17, 12 do 18, 12 do 19, 12 do 20, 12 do 21, 12 do 22, 12 do 23, 12 do 24, 12 do 25, 12 do 26, 12 do 27, 12 do 28, 12 do 29, 12 do 30, 13 do 14, 13 do 15, 13 do 16, 13 do 17, 13 do 18, 13 do 19, 13 do 20, 13 do 21, 13 do 22, 13 do 23, 13 do 24, 13 do 25, 13 do 26, 13 do 27, 13 do 28, 13 do 29, 13 do 30, 14 do 15, 14 do 16, 14 do 17, 14 do 18, 14 do 19, 14 do 20, 14 do 21, 14 do 22, 14 do 23, 14 do 24, 14 do 25, 14 do 26, 14 do 27, 14 do 28, 14 do 29, 14 do 30, 15 do 16, 15 do 17, 15 do 18, 15 do 19, 15 do 20, 15 do 21, 15 do 22, 15 do 23, 15 do 24, 15 do 25, 15 do 26, 15 do 27, 15 do 28, 15 do 29, 15 do 30, 16 do 17, 16 do 18, 16 do 19, 16 do 20, 16 do 21, 16 do 22, 16 do 23, 16 do 24, 16 do 25, 16 do 26, 16 do 27, 16 do 28, 16 do 29, 16 do 30, 17 do 18, 17 do 19, 17 do 20, 17 do 21, 17 do 22, 17 do 23, 17 do 24, 17 do 25, 17 do 26, 17 do 27, 17 do 28, 17 do 29, 17 do 30, 18 do 19, 18 do 20, 18 do 21, 18 do 22, 18 do 23, 18 do 24, 18 do 25, 18 do 26, 18 do 27, 18 do 28, 18 do 29, 18 do 30, 19 do 20, 19 do 21, 19 do 22, 19 do 23, 19 do 24, 19 do 25, 19 do 26, 19 do 29, 19 do 28, 19 do 29, 19 do 30, 20 do 21, 20 do 22, 20 do 23, 20 do 24, 20 do 25, 20 do 26, 20 do 27, 20 do 28, 20 do 29, 20 do 30, 21 do 22, 21 do 23, 21 do 24, 21 do 25, 21 do 26, 21 do 27, 21 do 28, 21 do 29, 21 do 30, 22 do 23, 22 do 24, 22 do 25, 22 do 26, 22 do 27, 22 do 28, 22 do 29, 22 do 30, 23 do 24, 23 do 25, 23 do 26, 23 do 27, 23 do 28, 23 do 29, 23 do 30, 24 do 25, 24 do 26, 24 do 27, 24 do 28, 24 do 29, 24 do 30, 25 do 26, 25 do 27, 25 do 28, 25 do 29, 25 do 30, 26 do 27, 26 do 28, 26 do 29, 26 do 30, 27 do 28, 27 do 29, 27 do 30, 28 do 29, 28 do 30 ili 29 do 30 povezanih nukleozida. U primerima izvođenja gde je broj nukleozida oligonukleotida jedinjenja ograničen, bilo u opsegu ili na određeni broj, jedinjenje može, bez obzira, dalјe sadržavati dodatne druge supstituente. Na primer, oligonukleotid koji sadrži 8-30 nukleozida isklјučuje oligonukleotide koji imaju 31 nukleozid, ali, ukoliko nije drugačije naznačeno, ovaj oligonukleotid može dalјe da sadrži, na primer, jednu ili više konjugatnih grupa, terminalnih grupa ili drugih supstituenata.
[0184] Dodatno, kada je oligonukleotid opisan ukupnim opsegom dužine i regionima sa definisanom dužinom, pri čemu je suma definisanih dužina regiona manja od gornje granice ukupnog opsega dužine, oligonukleotid može imati dodatne nukleozide, osim onih u definisanim regionima, pod uslovom da ukupan broj nukleozida ne prelazi gornju granicu ukupnog opsega dužine.
5. Određeni hemijski motivi antisens oligonukleotida
[0185] U određenim primerima izvođenja, hemijske strukturne osobine antisens oligonukleotida su okarakterisane njihovim motivom šećera, motivom internukleozidne veze, motivom nukleobazne modifikacije i ukupnom dužinom. U određenim primerima izvođenja, svaki od ovih parametara je nezavisan jedan od drugog. Prema tome, svaka internukleozidna veza oligonukleotida sa motivom šećera gapmer-a može biti modifikovana ili nemodifikovana i može ili ne mora da prati obrazac modifikacije ostataka šećera u okviru gapmer-a. Shodno navedenom, internukleozidne veze šećergapmer unutar regiona “krila” mogu biti iste ili različite jedna od druge i mogu biti iste ili različite od internukleozidnih veza unutar segmenta razmaka. Slično tome, takvi šećer-gapmer oligonukleotidi mogu sadržavati jednu ili više modifikovanih nukleobaza nezavisno od obrasca modifikacija šećera u gapmer-u. Stručnjak iz oblasti će razumeti da se takvi motivi mogu kombinovati da bi se stvorili razni oligonukleotidi.
[0186] U određenim primerima izvođenja, izbor internukleozidne veze i modifikacije nukleozida nije nezavisan jedan od drugog.
i. Određene sekvence i cilјna mesta
[0187] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje antisens oligonukleotide sa sekvencom komplementarnom cilјnoj nukleinskoj kiselini. Takva antisens jedinjenja su sposobna da hibridizuju sa cilјnom nukleinskom kiselinom, što rezultuje u najmanje jednoj antisensnoj aktivnosti. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja specifično hibridizuju sa jednom ili sa više cilјnih nukleinskih kiselina. U određenim primerima izvođenja, specifično hibridizujuće antisens jedinjenje ima sekvencu nukleobaza koja sadrži region sa komplementarnošću sa cilјnom nukleinskom kiselinom dovoljnom da omogući hibridizaciju i rezultuje u antisensnoj aktivnosti, kao i komplementarnost koja je nedovolјna za hibridizaciju sa bilo kojim sekvencom koja nije ciljna, tako da se izbegne ili smanji nespecifična hibridizacija za sekvence nukleinskih kiselina koje nisu ciljne u uslovima u kojima je specifična hibridizacija poželјna (npr. pod fiziološkim uslovima za in vivo ili terapijske upotrebe i pod uslovima u kojima se izvode testovi, u slučaju in vitro testova). U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi su selektivni između cilјne i sekvence koja nije ciljna, čak iako cilјna i sekvenca koja nije ciljna sadrže cilјnu sekvencu. U takvim primerima izvođenja, selektivnost može biti rezultat relativne pristupačnosti cilјnog regiona jednog molekula nukleinske kiseline u poređenju sa drugim.
[0188] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje antisens jedinjenja koja sadrže oligonukleotide koji su potpuno komplementarni cilјnoj nukleinskoj kiselini, celom dužinom oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi su 99% komplementarni cilјnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi su 95% komplementarni cilјnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, takvi oligonukleotidi su 90% komplementarni cilјnoj nukleinskoj kiselini.
[0189] U određenim primerima izvođenja, takvi oligonukleotidi su 85% komplementarni cilјnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, takvi oligonukleotidi su 80% komplementarni cilјnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenje sadrži region koji je potpuno komplementaran cilјnoj nukleinskoj kiselini i najmanje 80% je komplementaran cilјnoj nukleinskoj kiselini celom dužinom oligonukleotida. U određenim takvim primerima izvođenja, region potpune komplementarnosti je dužine od 6 do 14 nukleobaza.
[0190] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sadrže region hibridizacije i terminalni region. U određenim takvim primerima izvođenja, region hibridizacije se sastoji od 12-30 povezanih nukleozida i potpuno je komplementaran cilјnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, region hibridizacije uklјučuje jedno pogrešno sparivanje sa cilјnom nukleinskom kiselinom. U određenim primerima izvođenja, region hibridizacije uključuje dva pogrešna sparivanja sa cilјnom nukleinskom kiselinom. U određenim primerima izvođenja, region hibridizacije uklјučuje tri pogrešna sparivanja sa cilјnom nukleinskom kiselinom. U određenim primerima izvođenja, terminalni region se sastoji od 1-4 terminalnih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, terminalni nukleozidi su na 3’ kraju. U određenim primerima izvođenja, jedan ili više terminalnih nukleozida nisu komplementarni sa cilјnom nukleinskom kiselinom.
[0191] Antisens mehanizmi uklјučuju bilo koji mehanizam koji podrazumeva hibridizaciju oligonukleotida sa cilјnom nukleinskom kiselinom, pri čemu hibridizacija rezultuje biološkim efektom. U određenim primerima izvođenja, takva hibridizacija dovodi bilo do degradacije cilјne nukleinske kiseline ili njenog zauzeća praćenog inhibicijom ili stimulacijom ćelijske mašinerije koja uklјučuje, na primer, translaciju, transkripciju ili obradu cilјne nukleinske kiseline.
[0192] Jedan tip antisens mehanizma koji uklјučuje degradaciju cilјne RNK je antisens dejstvo posredstvom RNaze H. RNaza H je ćelijska endonukleaza koja cepa RNK lanac RNK:DNK dupleksa. U stanju tehnike je poznato da jednolančana antisens jedinjenja koja su "slična DNK" izazivaju aktivnost RNaze H u ćelijama sisara. Aktivacija RNaze H, prema tome, dovodi do cepanja ciljne RNK, čime se značajno povećava efikasnost inhibicije genske ekspresije posredovane oligonukleotidom sličnim DNK.
[0193] U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa sadrži strukturu podložnu cepanju. U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa sadrži jednu ili više raskidivih veza. U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa sadrži linker. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži ostatak koji vezuje proteine. U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa sadrži grupu koji cilјano deluje na ćelije (označenu i kao grupa za ciljano dejstvo na ćelije). U određenim primerima izvođenja, grupa koja cilјano deluje na ćelije sadrži grupu grananja. U određenim primerima izvođenja, grupa koja cilјano deluje na ćelije sadrži jednu ili više premošćujućih grupa (engl. tether). U određenim primerima izvođenja, grupa koja cilјano deluje na ćelije sadrži ugljeni hidrat ili ugljenohidratni klaster.
ii. Određene hemijske strukture podložne cepanju
[0194] U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je raskidiva veza. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju sadrži raskidivu vezu. U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa sadrži strukturu podložnu cepanju. U određenim takvim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju se vezuje za antisens oligonukleotid. U određenim takvim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju se direktno vezuje za strukturu koji cilјano deluje na ćelije. U određenim takvim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju se vezuje za konjugatni linker. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju sadrži fosfat ili fosfodiestar. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je nukleozid ili nukleozidni analog podložan cepanju. U određenim primerima izvođenja, nukleozidni ili nukleozidni analog sadrži opciono zaštićenu heterocikličnu bazu izabranu od purina, supstituisanog purina, pirimidina ili supstituisanog pirimidina. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je nukleozid koji sadrži opciono zaštićenu heterocikličnu bazu izabranu od uracila, timina, citozina, 4-N-benzoilcitozina, 5-metilcitozina, 4-N-benzoil-5-metilcitozina, adenina, 6-N-benzoladenina, guanina i 2-Nizobutirilguanina. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je 2'-dezoksinukleozid koji je vezan za poziciju 3’ antisens oligonukleotida fosfodiestarskom vezom i vezan je za linkersku sekvencu fosfodiestarskom ili fosforotioatnom vezom. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je 2'-dezoksi adenozin koji je vezan za 3’ poziciju antisens oligonukleotida fosfodiestarskom vezom i vezan je za linkersku sekvencu fosfodiestarskom ili fosforotioatnom vezom. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je 2'-dezoksi adenozin vezan za 3’ poziciju antisens oligonukleotida fosfodiestarskom vezom i za linkersku sekvencu fosfodiestarskom vezom.
[0195] U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je vezana za 3’ poziciju antisens oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je vezana za 5’ poziciju antisens oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je vezana za 2’ poziciju antisens oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je vezana za antisens oligonukleotid fosfodiestarskom vezom. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je vezana za linkersku sekvencu bilo fosfodiestarskom ili fosforotioatnom vezom. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je vezana za linkersku sekvencu fosfodiestarskom vezom. U određenim primerima izvođenja, konjugatna grupa ne uklјučuje strukturu podložnu cepanju.
[0196] U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju se cepa nakon što je kompleks primenjen životinji i samo nakon internaclizacije od strane cilјne ćelije. Unutar ćelije, struktura podložna cepanju se cepa i time se oslobađa aktivan antisens oligonukleotid. Bez želje da bude vezano za teoriju, smatra se da se struktura podložna cepanju cepa dejstvom jedne ili više nukleaza unutar ćelije. U određenim primerima izvođenja, jedna ili više nukleaza cepaju fosfodiestarsku vezu između strukture podložne cepanju i linkerske sekvence.
iii. Određene linkerske sekvence
[0197] Konjugatna grupa jedinjenja pronalaska sadrži linker. U određenim takvim primerima izvođenja, linker je kovalentno vezan za strukturu podložnu cepanju. U određenim takvim primerima izvođenja, linker je kovalentno vezan za antisens oligonukleotid. Linker je kovalentno vezan za ostatak koji cilјano deluje na ćelije.
[0198] Linker je linearna grupa koja sadrži alkil, amid i etarske grupe. U određenim primerima izvođenja, linearna grupa je kovalentno vezana za ostatak koji cilјano deluje na ćelije i strukturu podložnu cepanju. U određenim primerima izvođenja, linearna grupa je kovalentno vezana za ostatak koji cilјano deluje na ćelije i antisens oligonukleotid.
[0199] Konjugatni linker u jedinjenju pronalaska ima strukturu:
iv. Određene grupe koje ciljano deluju na ćelije
[0200] Konjugatna grupa jedinjenja pronalaska sadrži grupe koje ciljano deluju na ćelije. Određene takve grupe koje ciljano deluju na ćelije, povećavaju ćelijsko preuzimanje antisens jedinjenja. Grupe koje ciljano deluju na ćelije obuhvataju grupu granjanja, tri premošćujuće grupe i tri liganda.
1. Određene grupe grananja
[0201] Konjugatna grupa jedinjenja pronalaska sadrži cilјanu grupu koja sadrži grupu grananja i tri premošćujuća liganda. Grupa grananja vezuje konjugovani linker. Grupa grananja je kovalentno vezana za linker i svaki od premošćujućih liganada.
[0202] Grupa grananja jedinjenja pronalaska ima strukturu:
2. Određene premošćujuće grupe
[0203] Konjugatna grupa jedinjenja pronalaska sadrži tri premošćujuće grupe (engl. tether) kovalentno vezane za grupu grananja.
[0204] Premošćujuća grupa je vezana za grupu grananja preko etarske grupe. Premošćujuća grupa se vezuje za ligand preko etarske grupe.
[0205] Premošćujuća grupa pronalaska ima strukturu:
3. Određeni ligandi
[0206] Svaki ligand jedinjenja pronalaska je kovalentno vezan za premošćujuću grupu. U određenim primerima izvođenja, svaki ligand je izabran tako da ima afinitet za najmanje jedan tip receptora na cilјnoj ćeliji. U određenim primerima izvođenja, izabrani su ligandi sa afinitetom za najmanje jedan tip receptora na površini ćelije jetre sisara. U određenim primerima izvođenja, izabrani su ligandi sa afinitetom za hepatični asijaloglikoproteinski receptor (ASGP-R). U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, svaki ligand je ugljeni hidrat. Svaki ligand jedinjenja pronalaska je N-acetil galaktozamin (GalNAc). U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, ostatak ciljanog dejstva sadrži 3 liganda. Ostatak ciljanog dejstva jedinjenja pronalaska sadrži 3 N-acetil galaktozaminska liganda.
[0207] U određenim primerima izvođenja, "GalNac" ili "Gal-NAc" se odnosi na 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranozu, koja se u literaturi obično označava kao N-acetil galaktozamin. U određenim primerima izvođenja, "N-acetil galaktozamin" se odnosi na 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranozu. "GalNac" ili "Gal-NAc" jedinjenja pronalaska se odnosi na 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranozu, koja je u β-obliku: 2-(acetilamino)-2-dezoksi-β-D-galaktopiranoza. Kao dodatak predmetnom pronalasku, ovde je opisan α-oblik: 2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranoza, koja je prikazana ispod.
2-(acetilamino)-2-dezoksi-D-galaktopiranoza
2-(acetilamino)-2-dezoksi-β-D-galaktopiranoza
2-(acetilamino)-2-dezoksi-α-D-galaktopiranoza
i. Određeni konjugati
[0208] U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe sadrže prethodno navedene strukturne karakteristike u skladu sa patentnim zahtevima.
[0209] U određenim takvim primerima izvođenja, konjugatne grupe imaju sledeću strukturu:
[0210] U određenim takvim primerima izvođenja, konjugatne grupe imaju sledeću strukturu:
b. Određena konjugovana antisens jedinjenja
[0211] U određenim primerima izvođenja, konjugati su vezani za nukleozid antisens oligonukleotida na 2’, 3’ od 5’ poziciji nukleozida. Konjugovano antisens jedinjenje može imati sledeću strukturu:
A B C D(E F)q
gde
A je antisens oligonukleotid;
B je struktura podložna cepanju
C je konjugatni linker
D je grupa grananja
svaki E je premošćujuća grupa;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovano antisens jedinjenje ima sledeću strukturu:
A-C-D(E-F)q
gde
A je antisens oligonukleotid;
C je konjugatni linker
D je grupa grananja
svaki E je premošćujuća grupa;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
[0212] U određenim takvim primerima izvođenja, konjugatni linker sadrži najmanje jednu raskidivu vezu.
[0213] U određenim takvim primerima izvođenja, grupa grananja sadrži najmanje jednu raskidivu vezu.
[0214] U određenim primerima izvođenja, svaka premošćujuća grupa sadrži najmanje jednu raskidivu vezu.
U određenim primerima izvođenja, konjugati su vezani za nukleozid antisens oligonukleotida na 2’, 3’ od 5’ poziciji nukleozida.
[0215] U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovano antisens jedinjenje ima sledeću strukturu:
A-B-C(E-F)q
gde
A je antisens oligonukleotid;
B je struktura podložna cepanju
C je konjugatni linker
svaki E je premošćujuća grupa;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
U određenim primerima izvođenja, konjugati su vezani za nukleozid antisens oligonukleotida na 2’, 3' od 5’ poziciji nukleozida. U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovano antisens jedinjenje ima sledeću strukturu:
A-C(E-F)q
gde
A je antisens oligonukleotid;
C je konjugatni linker
svaki E je premošćujuća grupa;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovano antisens jedinjenje ima sledeću strukturu:
A-B-D(E-F)q
gde
A je antisens oligonukleotid;
B je struktura podložna cepanju
D je grupa grananja
svaki E je premošćujuća grupa;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovano antisens jedinjenje ima sledeću strukturu:
A-D(E-F)q
gde
A je antisens oligonukleotid;
D je grupa grananja
svaki E je premošćujuća grupa;
svaki F je ligand; i
q je ceo broj između 1 i 5.
[0216] Reprezentativni patenti Sjedinjenih Država, publikacije patentnih prijava Sjedinjenih Američkih Država i publikacije međunarodnih patentnih prijava koje opisuju pripremu određenih prethodno navedenih konjugata, konjugovanih antisens jedinjenja, premošćujućih grupa, linkera, grupa grananja, liganada, struktura podložnih cepanju, kao i drugih modifikacija obuhvataju, bez ograničavanja, US 5,994,517, US 6,300,319, US 6,660,720, US 6,906,182, US 7,262,177, US 7,491,805, US 8,106,022, US 7,723,509, US 2006/0148740, US 2011/0123520, WO 2013/033230 i WO 2012/037254. Reprezentativne publikacije koje opisuju pripremu određenih prethodno navedenih konjugata, konjugovanih antisens jedinjenja, premošćujućih grupa, linkera, grupa grananja, liganada, struktura podložnih isecanju, kao i drugih modifikacija obuhvataju, bez ograničenja, BIESSEN i saradnici, "The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor: a Potent Cholesterol Lowering Agent" J. Med. Chem. (1995) 38:1846-1852; BIESSEN i saradnici, "Synthesis of Cluster Galactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1995) 38:1538-1546; LEE i saradnici, "New and more efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes" Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011) 19:2494-2500; RENSEN i saradnici, "Determination of the Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor on Hepatocytes in Vitro and in Vivo" J. Biol. Chem. (2001) 276(40):37577-37584; RENSEN i saradnici, "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (2004) 47:5798-5808; SLIEDREGT i saradnici, "Design and Synthesis of Novel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomes to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1999) 42:609-618 i Valentijn i saradnici, "Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides with high affinity for the Asialoglycoprotein Receptor" Tetrahedron, 1997, 53(2), 759-770.
[0217] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja sadrže oligonukleotid zasnovan na RNazi H (kao što je gapmer) ili oligonukleotid koji moduliše obradu (kao što je potpuno modifikovani oligonukleotid) i bilo koju konjugatnu grupu koja sadrži najmanje jednu, dve ili tri GalNAc grupe. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sadrži bilo koju konjugatnu grupu koja se nalazi u bilo kojoj od sledećih referenci: Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514; Connolly i saradnici, J Biol Chem, 1982, 257, 939-945; Pavia i saradnici, Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548; Lee i saradnici, Biochem, 1984, 23, 4255-4261; Lee i saradnici, Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328; Toyokuni i saradnici, Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676; Biessen i saradnici, J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546; Valentijn i saradnici, Tetrahedron, 1997, 53, 759-770; Kim i saradnici, Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490; Lee i saradnici, Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765; Kato i saradnici, Glycobiol, 2001, 11, 821-829; Rensen i saradnici, J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584; Lee i saradnici, Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43; Westerlind i saradnici, Glycoconj J, 2004, 21, 227-241; Lee i saradnici, Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135; Maierhofer i saradnici, Bioorg Med Chem, 2007, 15, 7661-7676; Khorev i saradnici, Bioorg Med Chem, 2008, 16, 5216-5231; Lee i saradnici, Bioorg Med Chem, 2011, 19, 2494-2500; Kornilova i saradnici, Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46; Pujol i saradnici, Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448; Biessen i saradnici, J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852; Sliedregt i saradnici, J Med Chem, 1999, 42, 609-618; Rensen i saradnici, J Med Chem, 2004, 47, 5798-5808; Rensen i saradnici, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26, 169-175; van Rossenberg i saradnici, Gene Ther, 2004, 11, 457-464; Sato i saradnici, J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022; Lee i saradnici, J Org Chem, 2012, 77, 7564-7571; Biessen i saradnici, FASEB J, 2000, 14, 1784-1792; Rajur i saradnici, Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940; Duff i saradnici, Methods Enzymol, 2000, 313, 297-321; Maier i saradnici, Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29; Jayaprakash i saradnici, Org Lett, 2010, 12, 5410-5413; Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128; Merwin i saradnici, Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620; Tomiya i saradnici, Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281; Međunardonim prijavama WO1998/013381; WO2011/038356; WO1997/046098; WO2008/098788; WO2004/101619; WO2012/037254; WO2011/120053; WO2011/100131; WO2011/163121; WO2012/177947; WO2013/033230; WO2013/075035; WO2012/083185; WO2012/083046; WO2009/082607; WO2009/134487; WO2010/144740; WO2010/148013; WO1997/020563; WO2010/088537; WO2002/043771; WO2010/129709; WO2012/068187; WO2009/126933; WO2004/024757; WO2010/054406; WO2012/089352; WO2012/089602; WO2013/166121; WO2013/165816; U.S. Patentima 4,751,219; 8,552,163; 6,908,903; 7,262,177; 5,994,517; 6,300,319; 8,106,022; 7,491,805; 7,491,805; 7,582,744; 8,137,695; 6,383,812; 6,525,031; 6,660,720; 7,723,509; 8,541,548; 8,344,125; 8,313,772; 8,349,308; 8,450,467; 8,501,930; 8,158,601; 7,262,177; 6,906,182; 6,620,916; 8,435,491; 8,404,862; 7,851,615; Published U.S. Patentnim prijavama US2011/0097264; US2011/0097265; US2013/0004427; US2005/0164235; US2006/0148740; US2008/0281044; US2010/0240730; US2003/0119724; US2006/0183886; US2008/0206869; US2011/0269814; US2009/0286973; US2011/0207799; US2012/0136042; US2012/0165393; US2008/0281041; US2009/0203135; US2012/0035115; US2012/0095075; US2012/0101148; US2012/0128760; US2012/0157509; US2012/0230938; US2013/0109817; US2013/0121954; US2013/0178512; US2013/0236968; US2011/0123520; US2003/0077829; US2008/0108801 i US2009/0203132.
C. Određene upotrebe i osobine
[0218] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja ispoljavaju snažnu redukciju HBV RNK in vivo. U određenim primerima izvođenja, nekonjugovana antisens jedinjenja se akumuliraju u bubregu. U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja se nakupljaju u jetri. U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja se dobro podnose. Navedene osobine čine konjugovana antisens jedinjenja naročito korisnim za inhibiciju mnogih cilјnih RNK, uklјučujući, ali ne ograničavajući se na one koji su uklјučene u metaboličke, kardiovaskularne i druge bolesti, poremećaje ili stanja. Shodno navedenom, ovde su obezbeđeni postupci lečenja takvih bolesti, poremećaja ili stanja, kontaktom tkiva jetre sa konjugovanim antisens jedinjenjima koja ciljano deluju na RNK udružene sa navedenim oboljenjima, poremećajima ili stanjima. Stoga, takođe su opisani postupci za ublažavanje bilo kojih od raznih metaboličkih, kardiovaskularnih i drugih oboljenja, poremećaja ili stanja sa konjugovanim antisens jedinjenjima predmetnog opisa.
[0219] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja su potentnija od nekonjugovanog parnjaka u određenoj tkivnoj koncentraciji. Bez želјe da bude vezano za bilo koju teoriju ili mehanizam, u određenim primerima izvođenja, konjugat može dozvoliti konjugovanom antisens jedinjenju da efikasnije uđe u ćeliju ili da produktivnije uđe u ćeliju. Na primer, u određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja mogu ispoljiti veću cilјanu redukciju u poređenju sa svojim nekonjugovanim parnjakom, pri čemu su i konjugovano antisens jedinjenje i njegov nekonjugovani parnjak prisutni u tkivu u istim koncentracijama. Na primer, u određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja mogu ispoljiti veće cilјano smanjenje u poređenju sa svojim nekonjugovanim parnjakom, pri čemu su i konjugovano antisens jedinjenje i njegov nekonjugovani parnjak prisutni u jetri u istim koncentracijama.
[0220] Prethodno je diskutovano produktivno i neproduktivno preuzimanje oligonukleotida (pogledati npr. Geary, R. S., E. Wancewicz i saradnici (2009). "Effect of Dose and Plasma Concentration on Liver Uptake and Pharmacologic Activity of a 2’-Methoxyethyl Modified Chimeric Antisense Oligonucleotide Targeting PTEN". Biochem. Pharmacol. 78(3):284-91; i Koller, E., T. M. Vincent i saradnici (2011). "Mechanisms of single-stranded phosphorothioate modified antisense oligonucleotide accumulation in hepatocytes". Nucleic Acids Res.39(11):4795-807). Konjugatne grupe koje su ovde opisane mogu pobolјšati produktivno preuzimanje.
[0221] U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe koje su ovde opisane mogu dodatno pobolјšati potentnost, povećanjem afiniteta konjugovanog antisens jedinjenja za određeni tip ćelije ili tkiva. U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe koje su ovde opisane mogu dodatno pobolјšati potentnost, povećanjem prepoznavanja konjugovanog antisens jedinjenja od strane jednog ili više receptora na površini ćelije. U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe koje su ovde opisane mogu dodatno pobolјšati potentnost, olakšavanjem endocitoze konjugovanog antisens jedinjenja.
[0222] U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju može dalјe pobolјšati potentnost dopuštanjem da se konjugat otcepi sa antisens oligonukleotida nakon što je konjugovano antisens jedinjenje ušlo u ćeliju. Shodno navedenom, u određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja se mogu primenjivati u dozama nižim nego što bi to bilo neophodno za nekonjugovane antisens oligonukleotide.
[0223] Fosforotioatne veze su prethodno bile ugrađivane u antisens oligonukleotide. Takve fosforotioatne veze su otporne na nukleaze i tako pobolјšavaju stabilnost oligonukleotida. Dodatno, fosforotioatne veze takođe vezuju određene proteine, što rezultuje nakupljanjem antisens oligonukleotida u jetri. Oligonukleotidi sa manje fosforotioatnih veza se nakuplјaju manje u jetri i više u bubrezima (pogledati, na primer, Geary, R. "Pharmacokinetic Properties of 2’-O-(2-Methoxyethyl)-Modified Oligonucleotide Analogs in Rats" Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, vol.296, br.3, 890-897; i Pharmacological Properties of 2’-O-Methoxyethyl Modified Oligonucleotides in Antisense a Drug Technology, poglavlje 10, Crooke, S.T., izd, 2008). U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi sa manje fosforotioatnih interkleozidnih veza i više fosfodiestarskih internukleozidnih veza se manje nakuplјaju u jetri i više u bubrezima. Kada se leče obolјenja u jetri, to je nepoželјno iz više razloga (1) manje leka dolazi do mesta želјenog dejstva (jetre); (2) lek lako prelazi u urin; i (3) bubreg je izložen relativno visokoj koncentraciji leka, što može dovesti do toksičnosti u bubregu. Stoga, za oboljenja jetre, fosforotioatne veze obezbeđuju važne prednosti.
[0224] U određenim primerima izvođenja, međutim, primena oligonukleotida koji su uniformno povezani fosforotioatnim internukleozidnim vezama izaziva jednu ili više proinflamatornih reakcija. (pogledati na primer: J Lab Clin Med.1996. Sep;128(3):329-38. "Amplification of antibody production by phosphorothioate oligodeoxynucleotides". Branda i saradnici.; takođe pogledati npr.: Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology, poglavlje 12, str. 342-351, Crooke, S.T., izd., 2008). U određenim primerima izvođenja, primena oligonukleotida u kojima većina internukleozidnih veza podrazumeva fosforotioatne internukleozidne veze indukuje jednu ili više proinflamatornih reakcija.
[0225] U određenim primerima izvođenja, stepen proinflamatornog efekta može zavisiti od nekoliko varijabli (npr. modifikacija okosnice, efekata van cilјnog mesta, modifikacija nukleobaza i/ili modifikacija nukleozida) pogledati, na primer: Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology, poglavlje 12, str. 342-351, Crooke, S.T., ur., 2008). U određenim primerima izvođenja, stepen proinflamatornog dejstva može biti ublažen podešavanjem jedne ili više varijabli. Na primer, stepen proinflamatornog efekta datog oligonukleotida se može ublažiti zamenom bilo kog broja fosforotioatnih internukleozidnih veza sa fosfodiestarskim internukleozidnim vezama i time smanjenjem ukupnog broja fosforotioatnih internukleozidnih veza.
[0226] U određenim primerima izvođenja, bilo bi poželјno da se smanji broj fosforotioatnih veza, ukoliko bi se to moglo uraditi bez gubitka stabilnosti i bez prebacivanja distribucije iz jetre u bubreg. Na primer, u određenim primerima izvođenja, broj fosforotioatnih veza može biti smanjen zamenom fosforotioatnih veza sa fosfodiestarskim vezama. U takvom primeru izvođenja, antisens jedinjenje sa manje fosforotioatnih veza i više fosfodiestarskih veza može izazvati manje proinflamatornih reakcija ili biti bez proinflamatorne reakcije. Iako antisens jedinjenje sa manje fosforotioatnih veza i više fosfodiestarskih veza može izazvati manje proinflamatornih reakcija, antisens jedinjenje sa manje fosforotioatnih veza i više fosfodiestarskih veza ne mora da se akumulira u jetri i može biti manje efikasno u istoj ili sličnoj dozi u poređenju sa antisens jedinjenjem koje ima više fosforotioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, poželјno je stoga dizajnirati antisens jedinjenje koje ima mnoštvo fosfodiestarskih veza i mnoštvo fosforotioatnih veza, ali koje takođe karakterišu stabilnost i dobra distribucija u jetri.
[0227] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja se više nakupljaju u jetri, a manje u bubrezima od nekonjugovanih parnjaka, čak i kada su neke od fosforotioatnih veza zamenjene manje proinflamatornim fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja se više nakupljaju u jetri i ne izlučuju se toliko u urinu u poređenju sa njegovim nekonjugovanim parnjacima, čak i kada su neke od fosforotioatnih veza zamenjene manje proinflamatornim fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim primerima izvođenja, upotreba konjugata dozvoljava dizajniranje potentnijih i antisens lekova koji se bolje podnose. Zaista, u određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja imaju veće terapijske indekse od nekonjugovanih parnjaka. Navedeno dozvoljava da se konjugovano antisens jedinjenje primenjuje u većoj apsolutnoj dozi, zbog manjeg rizika od proinflamatornog odgovora i manjeg rizika od toksičnosti bubrega. Ovakva veća doza dozvolјava da se doza primenjuje ređe, pošto se očekuje da će klirens (metabolizam) biti sličan. Nadalje, pošto je jedinjenje potentnije, kao što je prethodno opisano, može se dozvoliti da se koncentracija spusti niže pre sledeće primene doze, bez gubitka terapijske aktivnosti, što dalje dozvoljava čak i produženje perioda između doziranja.
[0228] U određenim primerima izvođenja, uklјučivanje pojedinih fosforotioatnih veza ostaje poželјno. Na primer, terminalne veze su osetlјive na egzonukleaze i tako u određenim primerima izvođenja, ove veze su fosforotioatna ili drugačije modifikovana veza. Interukleozidne veze koje povezuju dva dezoksinukleozida su osetlјive na endonukleaze i tako su, u određenim primerima izvođenja, ove veze fosforotioatna ili drugačije modifikovana veza. Internukleozidne veze između modifikovanog nukleozida i dezoksinukleozida, pri čemu je dezoksinukleozid na 5’ strani veze dezoksinukleozida, osetlјive su na endonukleaze i tako, u određenim primerima izvođenja, ove veze su fosforotioatna ili drugačije modifikovana veza. Internukleozidne veze između dva modifikovana nukleozida određenih tipova i između dezoksinukleozida i modifikovanog nukleozida određenog tipa, gde je modifikovani nukleozid na 5’ strani veze, dovolјno su otporne na nukleaznu digestiju, tako da veze mogu biti fosfodiestarske.
[0229] U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 16 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 15 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 14 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 13 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 12 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 11 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 10 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 9 fosforioatnih veza. U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid konjugovanog antisens jedinjenja sadrži manje od 8 fosforioatnih veza.
[0230] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja koja sadrže jednu ili više konjugatnih grupa koje su ovde opisane, imaju povećanu aktivnost i/ili potentnost i/ili tolerabilnost u poređenju sa matičnim antisens jedinjenjem koje nema jednu ili više takvih konjugatnih grupa. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, poželјno je vezivanje takvih konjugatnih grupa za oligonukleotid. Navedene konjugatne grupe mogu biti vezane na 5'- i/ili 3'-kraj oligonukleotida. U određenim slučajevima, vezivanje na 5’ kraj je sintetski poželјno. Uobičajeno je da se oligonukleotidi sintetišu vezivanjem 3’ terminalnog nukleozida za čvrsti nosač i sekvencijalnim kuplovanjem nukleozida od 3' ka 5’ kraju, upotrebom tehnika koje su dobro poznate u oblasti. Prema tome, ukoliko je potrebno da konjugatna grupa bude na 3'-kraju, može se (1) vezati konjugatna grupa na 3'-terminalni nukleozid i potom takav konjugovani nukleozid vezati na čvrsti nosač za potonju pripremu oligonukleotida ili (2) vezati konjugatna grupa na 3'-terminalni nukleozid završenog oligonukleotida nakon sinteze. Nijedan od navedenih pristupa nije veoma efikasan i i stoga su oba skupa. Preciznije, vezivanje konjugovanog nukleozida za čvrsti nosač, iako je prikazano ovde u Primerima, je neefikasan proces. U određenim primerima izvođenja, vezivanje konjugatne grupe za 5'-terminalni nukleozid je sintetski lakše od vezivanja na 3'-kraju. Može se vezati nekonjugovani 3’ terminalni nukleozid na čvrsti nosač i pripremiti oligonukleotid upotrebom standardnih i dobro okarakterisanih reakcija. Zatim je, u konačnom koraku kuplovanja, potrebno samo vezati 5’ nukleozid koji sadrži konjugtnu grupu. U određenim primerima izvođenja, ovo je efikasnije od vezivanja konjugovanog nukleozida direktno na čvrsti nosač, kao što se obično radi pri pripremi 3'-konjugovanog oligonukleotida. Primeri ovde prikazuju vezivanje na 5'-kraju. Dodatno, određene konjugatne grupe imaju sintetske prednosti. Na primer, određene konjugatne grupe koje sadrže fosforne grupe za vezivanje, sintetski su jednostavnije i efikasnije se pripremaju od drugih konjugatnih grupa, uklјučujući konjugatne grupe koje su prethodno prijavljene (npr. WO/2012/037254).
[0231] U određenim primerima izvođenja, konjugovana antisens jedinjenja se primenjuju subjektu. U takvim primerima izvođenja, antisens jedinjenja koja sadrže jednu ili više ovde opisanih konjugatnih grupa imaju povećanu aktivnost i/ili potentnost i/ili tolerabilnost u poređenju sa matičnim antisens jedinjenjem kome nedostaje jedna ili više takvih konjugatnih grupa. Bez vezivanja za mehanizam, veruje se da konjugatna grupa pomaže u distribuciji, isporuci i/ili preuzimanju u cilјnu ćeliju ili tkivo. U određenim primerima izvođenja, jednom kada je unutar cilјne ćelije ili tkiva, poželјno je da se sve od ili deo konjugatne grupe ukloni da bi se oslobodio aktivan oligonukleitd. U određenim primerima izvođenja, nije neophodno da se celokupna konjugatna grupa ukloni sa oligonukleotida. Na primer, u Primeru 20, miševima je dat konjugovani oligonukleotid i detektovane su brojne različite hemijske vrste, od kojih je svaka sadržavala različit deo konjugatne grupe koji je ostao na oligonukleotidu (Tabela 10a). Navedeno konjugovano antisens jedinjenje je pokazalo dobru potentnost (Tabela 10).
Prema tome, u određenim primerima izvođenja, takav metabolički profil višestrukih, parcijalnih cepanja konjugatne grupe ne interferira sa aktivnošću/potentnošću. Ipak, u određenim primerima izvođenja, poželјno je da prolek (konjugovani oligonukleotid) daje jedno aktivno jedinjenje. U određenim slučajevima, ukoliko se utvrdi više oblika aktivnog jedinjenja, može biti neophodno da se odrede relativne količine i aktivnosti svakog od njih. U određenim primerima izvođenja, gde je regulatorni pregled neophodan (npr. USFDA ili pandan) poželјno je da oni imaju jednu (ili pretežno jednu) aktivnu vrstu. U određenim takvim primerima izvođenja, poželјno je da takve pojedinačne aktivne vrste budu antisens oligonukleotidi kojima nedostaje bilo koji deo konjugatne grupe. U određenim primerima izvođenja, konjugatne grupe na 5'-kraju će verovatnije rezultovati potpunim metabolizmom konjugatne grupe. Bez vezivanja za mehanizam, može biti da su endogeni enzimi odgovorni za metabolizam na 5’ kraju (npr.5' nukleaze) aktivniji/efikasniji od 3’ parnjaka. U određenim primerima izvođenja, specifične konjugatne grupe su podložnije metabolizmu do jedne aktivne vrste. U određenim primerima izvođenja, određene konjugatne grupe su podložnije metabolizmu do oligonukleotida.
D. Antisens jedinjenja
[0232] U određenim primerima izvođenja, oligomerna jedinjenja predmetnog opisa su antisens jedinjenja. U takvim primerima izvođenja, oligomerno jedinjenje je komplementarno cilјnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, cilјna nukleinska kiselina je RNK. U određenim primerima izvođenja, cilјna nukleinska kiselina je nekodirajuća RNK. U određenim primerima izvođenja, cilјna nukleinska kiselina kodira protein. U određenim primerima izvođenja, cilјna nukleinska kiselina je izabrana od iRNK, pre-iRNK, mikroRNK, nekodirajuće RNK, uklјučujući malu nekodirajuću RNK i RNK usmerenu na promotor. U određenim primerima izvođenja, oligomerna jedinjenja su bar delimično komplementarna sa više od jednom cilјnom nukleinskom kiselinom. Na primer, oligomerna jedinjenja mogu biti mimetici mikroRNK koji se obično vezuju za mnostvo ciljnih mesta.
[0233] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže deo sa sekvencom nukleobaza koja je najmanje 70% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže deo sa nukleobaznom sekvencom koja je najmanje 80% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže deo sa nukleobaznom sekvencom koja je najmanje 90% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže deo sa nukleobaznom sekvencom koja je najmanje 95% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže deo sa nukleobaznom sekvencom koja je najmanje 98% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže deo sa nukleobaznom sekvencom koja je najmanje 100% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su najmanje 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ili 100% komplementarna nukleobaznoj sekvenci cilјne nukleinske kiseline, celokupnom dužinom antisens jedinjenja.
[0234] Antisens mehanizmi obuhvataju bilo koji mehanizam koji uklјučuje hibridizaciju oligomernog jedinjenja sa cilјnom nukleinskom kiselinom, pri čemu hibridizacija rezultuje biološkim efektom. U određenim primerima izvođenja, takva hibridizacija dovodi bilo do degradacije cilјne nukleinske kiseline ili zauzeća mesta vezivanja praćenog inhibicijom ili pak do stimulacije ćelijske mašinereije koja uklјučuje, na primer, translaciju, transkripciju ili poliadenilaciju cilјne nukleinske kiseline ili nukleinske kiseline sa kojom je cilјna nukleinska kiselina na neki drugi način može interagovati.
[0235] Jedan tip antisens mehanizma koji uklјučuje degradaciju cilјne RNK je antisens mehanizam posredovan RNazom H. RNaza H je ćelijska endonukleaza koja cepa RNK lanac u RNK:DNK dupleksu. U stanju tehnike je poznato da jednolančana antisens jedinjenja koja su "slična DNK" izazivaju aktivnost RNaze H u ćelijama sisara. Aktivacija RNaze H, stoga, rezultuje isecanjem ciljneRNK, čime se značajno povećava efikasnost inhibicije genske ekspresije posredovana oligonukleotidom koji je sličan DNK.
[0236] Antisens mehanizmi takođe uklјučuju, bez ograničenja, RNKi mehanizme, koji upotrebljavaju RISC put. Takvi RNKi mehanizmi uklјučuju, bez ograničenja siRNK, ssRNK i mikroRNK mehanizme. Navedeni mehanizmi uklјučuju stvaranje mikroRNK mimika i/ili anti-mikroRNK.
[0237] Antisens mehanizmi takođe uklјučuju, bez ograničenja, mehanizme koji hibridizuju ili oponašaju nekodirajuću RNK drugačiju od mikroRNK ili iRNK. Ovakva nekodirajuća RNK podrazumeva, ali nije ograničena na, RNK usmerenu na promotor, kao i kratku i dugu RNK koje utiču na transkripciju ili translaciju jedne ili više nukleinskih kiselina.
[0238] U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su RNKi jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, oligomerni oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su ssRNK jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate su upareni sa drugim oligomernim jedinjenjem da bi se obrazovala siRNK. U određenim takvim primerima izvođenja, drugo oligomerno jedinjenje takođe sadrži konjugat. U određenim primerima izvođenja, drugo oligomerno jedinjenje je bilo koja modifikovana ili nemodifikovana nukleinska kiselina. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi koji sadrže ovde opisane konjugate je antisens lanac u siRNK jedinjenju. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotidi koji sadrže konjugate koji su ovde opisani je sens lanac u siRNK jedinjenju. U primerima izvođenja u kojima je konjugovano oligomerno jedinjenje tipa dvolančane siRnA, konjugat može biti na sens lancu, antisens lancu ili na oba, i sens i antisens lancu.
D. Cilјne nukleinske kiseline, regioni i segmenti
[0239] U određenim primerima izvođenja opisa, konjugovana antisens jedinjenja ciljano deluju na bilo koju nukleinsku kiselinu. U određenim primerima izvođenja, cilјna nukleinska kiselina kodira cilјni protein koji je klinički relevantan. U takvim primerima izvođenja, modulacija cilјne nukleinske kiseline dovodi do kliničke koristi. Cilјna nukleinska kiselina predmetnog pronalaska je ilustrovana u Tabeli 1.
Tabela 1: Određene cilјne nukleinske kiseline
[0240] Proces cilјanog dejstva obično uklјučuje određivanje najmanje jednog cilјnog regiona, segmenta ili mesta unutar cilјne nukleinske kiseleline da bi došlo do antisensne interakcije i tako postigao želјeni efekat.
[0241] U određenim primerima izvođenja, cilјni region je strukturno definisan region nukleinske kiseline. Na primer, u određenim takvim primerima izvođenja, cilјni region može podrazumevati 3’ UTR, 5' UTR, egzon, intron, kodirajući region, region inicijacije translacije, region terminacije translacije ili drugi definisani region ili cilјni segment nukleinske kiseline.
[0242] U određenim primerima izvođenja, cilјni segment je deo cilјnog regiona od najmanje oko 8-nukleobaza na koji cilјano deluje konjugovano antisens jedinjenje. Ciljni segmenti mogu uklјučivati DNK ili RNK sekvence koje sadrže najmanje 8 uzastopnih nukleobaza od 5'-kraja jednog od cilјnih segmenata (preostale nukleobaze su uzastopni niz iste DNK ili RNK koji počinje neposredno uzvodno od 5'-kraja cilјnog segmenta i nastavlјa se sve dok DNK ili RNK ne sadrži od oko 8 do oko 30 nukleobaza). Cilјni segmenti su takođe predstavlјeni sekvencama DNK ili RNK koje sadrže najmanje 8 uzastopnih nukleobaza od 3'-kraja jednog od cilјnih segmenata (preostale nukleobaze su uzastopni niz iste DNK ili RNK koji počinju odmah nizvodno od 3’-kraja cilјnog segmenta i nastavlјa se sve dok DNK ili RNK ne sadrži od oko 8 do oko 30 nukleobaza). Cilјni segmenti mogu takođe predstavljati sekvence DNK ili RNK koje sadrže najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz unutrašnjeg dela sekvence cilјnog segmenta i mogu se protezati u bilo kom ili oba smera dok konjugovano antisens jedinjenje ne sadrži od oko 8 do oko 30 nukleobaza.
[0243] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja koja ciljano deluju na nukleinsku kiselinu navedenu u Tabeli 1, mogu biti modifikovana kao što je ovde opisano. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja mogu imati modifikovani ostatak šećera, nemodifikovani ostatak šećera ili smešu modifikovanih i nemodifikovanih ostataka šećera, kao što je ovde opisano. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja mogu imati modifikovanu internukleozidnu vezu, nemodifikovanu internukleozidnu vezu ili mešavinu modifikovanih i nemodifikovanih internukleozidnih veza, kao što je ovde opisano. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja mogu imati modifikovanu nukleobazu, nemodifikovanu nukleobazu ili smešu modifikovanih i nemodifikovanih nukleobaza, kao što je ovde opisano. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja mogu imati motiv kao što je ovde opisano.
[0244] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja koja ciljano deluju na nukleinsku kiselinu navedenu u Tabeli 1 mogu biti konjugovana kao što je ovde opisano.
1. Hepatitis B (HBV)
[0245] Hepatitis B je virusna bolest koja se prenosi parenteralno, kontaminiranim materijalom kao što su krv i krvni proizvodi, kontaminirane igle, seksualnim putem i vertikalno, sa zaraženih ili majki nosilaca na njihovo potomstvo. Svetska zdravstvena organizacija procenjuje da je više od 2 milijarde lјudi zaraženo širom sveta, sa oko 4 miliona akutnih slučajeva godišnje, 1 milionom smrtnih slučajeva godišnje i 350-400 miliona hroničnih nosilaca (World Health Organization: Geographic Prevalence of Hepatitis B Prevalence, 2004. http://www.who.int/vaccinessurveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm).
[0246] Virus, HBV, je hepatotropni virus sa dvolančanom nukleinskom kiselinom koji inficira samo lјude i primate različite od čoveka. Replikacija virusa se odvija pretežno u jetri i, u manjoj meri, u bubrezima, pankreasu, kosnoj srži i slezini (Hepatitis B virus biology. Microbiol Mol Biol Rev.64: 2000; 51-68.). Virusni i imunski markeri se mogu detektovati u krvi, a karakteristični obrasci antigen-antitelo se razvijaju tokom vremena. Prvi virusni marker koji se može detektovati je HBsAg, a zatim antigen hepatitisa B e (HBeAg) i HBV DNK. Titri mogu biti visoki tokom perioda inkubacije, ali nivoi HBV DNK i HBeAg počinju da opadaju na početku bolesti i mogu biti nedetektabilni u vreme kulminacije kliničke bolesti (Hepatitis B virus infection-natural history and clinical consequences. N Engl J Med..350: 2004; 1118-1129). HBeAg je virusni marker koji se može detektovati u krvi i koji korelira sa aktivnom replikacijom virusa i time visokim opterećenjem virusom i infektivnošću (Hepatitis B e antigen-the dangerous end game of hepatitis B. N Engl J Med. 347: 2002; 208-210). Prisustvo anti-HBsAb i anti-HBcAb (IgG) ukazuje na oporavak i imunitet kod prethodno inficirane osobe.
[0247] Trenutno preporučene terapije za hroničnu HBV infekciju od strane Američke asocijacije za ispitivanja bolesti jetre (AASLD) i Evropske asocijacije za proučavanje jetre (EASL) uklјučuju interferon alfa (INFα), pegilovani interferon alfa-2a (Peg-IFN2a), entekavir i tenofovir. Nukleozidne i nukleobazne terapije, entekavir i tenofovir, su uspešne u smanjenju virusnog opterećenja, ali su stope serokonverzije HBeAg i gubitka HBsAg čak niže od onih dobijenih primenom IFNα terapije. Upotrebljavaju se i druge slične terapije, uklјučujući lamivudin (3TC), telbivudin (LdT) i adefovir, ali za nukleozidne/nukleobazne terapije uopšte, pojava rezistencije ograničava terapijsku efikasnost.
[0248] Shodno navedenom, postoji potreba u stanju tehnike da se otkriju i razviju nove antivirusne terapije. Dodatno, postoji potreba za novim anti-HBV terapijama sposobnim da povećaju stope serokonverzije HBeAg i HBsAg. Skorašnja klinička istraživanja su utvrdila korelaciju između serokonverzije i smanjenja HBeAg (Fried i saradnici (2008) Hepatology 47:428), kao i smanjenja u HBsAg (Moucari i saradnici (2009) Hepatology 49:1151). Smanjenje nivoa antigena može omogućiti imunološku kontrolu HBV infekcije pošto se smatra da visoki nivoi antigena izazivaju imunološku toleranciju. Aktuelne nukleozidne terapije za HBV su sposobne da dramatično smanje serumske nivoe HBV, ali imaju mali uticaj na nivoe HBeAg i HBsAg.
[0249] Antisens jedinjenja koja cilјano deluju na HBV su prethodno opisana u WO2011/047312, WO2012/145674 i WO2012/145697. Planirane su i kliničke studije za procenu efekta antisens jedinjenja koja cilјano deluju na HBV kod pacijenata. Međutim, još uvek postoji potreba da se pacijentima pruže dodatne i potentnije mogućnosti lečenja.
Određena konjugovana antisens jedinjenja koja ciljano deluju na nukleinsku kiselinu HBV-a
[0250] U određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovana antisens jedinjenja ciljano deluju na HBV nukleinsku kiselinu sa sekvencom prijavljenom u GENBANK® bazi podataka pod pristupnim br. U95551.1, prikazanu ovde kao SEQ ID NO: 1. U određenim takvim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 je najmanje 90%, najmanje 95% ili 100% komplementarno SEQ ID NO: 1.
[0251] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 3. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 3.
[0252] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 4. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 4.
[0253] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 5. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 5.
[0254] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 6. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 6.
[0255] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 7. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 7.
[0256] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 8. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 8.
[0257] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 9. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 9.
[0258] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 10. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 10.
[0259] U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza iz SEQ ID NO: 11. U određenim primerima izvođenja, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 sadrži nukleobaznu sekvencu SEQ ID NO: 11.
Tabela 2: Antisens jedinjenja sa ciljanim dejstvom na HBV SEQ ID NO: 1
[0260] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 505358 i konjugatne grupe. ISIS 505358 je modifikovani oligonukleotid formule: Ges mCes Aes Ges Aes Gds Gds Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Ads Aes Ges Tes Ges mCe, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0261] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 509934 i konjugatne grupe. ISIS 509934 je modifikovani oligonukleotid formule: mCes mCes Aes Aes Tes Tds Tds Ads Tds Gds mCds mCds Tds Ads mCds Aes Ges mCes mCes Te, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0262] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 510100 i konjugatne grupe. ISIS 510100 je modifikovani oligonukleotid formule: Ges Ges mCes Ads Tds Ads Gds mCds Ads Gds mCds Ads Gds Ges Aes Tes Ge, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0263] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 552023 i konjugatne grupe. ISIS 552023 je modifikovani oligonukleotid formule: Aes Ges Ges Aes Ges Tes Tds mCds mCds Gds mCds Ads Gds Tds Ads Tds Ges Ges Aes Te, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0264] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 552024 i konjugatne grupe. ISIS 552024 je modifikovani oligonukleotid formule: Ges Tes Ges Aes Aes Ges mCds Gds Ads Ads Gds Tds Gds mCds Ads mCds Aes mCes Ges Ge, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0265] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 552032 i konjugatne grupe. ISIS 552032 je modifikovani oligonukleotid formule: Ges Tes Ges mCes Aes Ges Ads Gds Gds Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Aes Aes Ges Te, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0266] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 552859 i konjugatne grupe. ISIS 552859 je modifikovani oligonukleotid formule: Aes Gks Gks Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Ads Ads Gds Tks Gks mCe, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
k = nukleozid modifikovan sa cEt,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0267] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 552925 i konjugatne grupe. ISIS 552925 je modifikovani oligonukleotid formule: Tes mCks mCds Gds mCds Ads Gds Tds Ads Tds Gds Gds Aks Tes mCks Ge, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
k = nukleozid modifikovan sa cEt,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0268] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 577119 i konjugatne grupe. ISIS 577119 je modifikovani oligonukleotid formule: Aks Ads Tks Tds Tks Ads Tds Gds mCds mCds Tds Ads mCds Aes Ges mCes mCes Te, gde,
A = adenin,
mC = 5’-metilcitozin
G = guanin,
T = timin,
e = 2’-O-metoksietilom modifikovani nukleozid,
k = nukleozid modifikovan sa cEt,
d = 2’-dezoksinukleozid, i
s = fosforotioatna internukleozidna veza.
[0269] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje, hemijske strukture koja sledi, sadrži ili se sastoji od ISIS 505358 sa 5'-X, gde je X konjugatna grupa kao što je definisano u patentnim zahtevima:
[0270] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 712408 hemijske strukture koja sledi:
[0271] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od ISIS 695324, hemijske strukture koja sledi:
[0272] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje sadrži ili se sastoji od SEQ ID NO: 3, 5'-GalNAc i hemijske modifikacije predstavlјene sledećom hemijskom strukturom:
gde ili R<1>je -OCH2CH2OCH3(MOE) i R<2>je H; ili R<1>i R<2>zajedno obrazuju most, pri čemu R<1>je -O- i R<2>je -CH2-, -CH(CH3)- ili -CH2CH2-, a R<1>i R<2>su direktno povezani tako da je rezultujući most izabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-;
i za svaki par R<3>i R<4>na istom prstenu, nezavisno za svaki prsten: ili R<3>je izabran od H i -OCH2CH2OCH3i R<4>je H; ili R<3>i R<4>zajedno obrazuju most, gde R<3>je -O-, a R<4>je -CH2-,-CH(CH3)- ili -CH2CH2-, a R<3>i R<4>su direktno povezani tako da je rezultujući most izabran od: -O-CH2-, -O-CH(CH3)- i -O-CH2CH2-; i R<5>je izabran od H i -CH3;
i Z je izabran od S<->i O-.
Terapijske indikacije HBV
[0273] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje postupke za upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja sa ciljanim dejstvom na HBV nukleinsku kiselinu, za modulisanje ekspresije HBV-a kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, ekspresija HBV je smanjena.
[0274] U određenim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupke upotrebe konjugovanog antisens jedinjenja sa ciljanim dejstvom na HBV nukleinsku kiselinu u farmaceutskoj kompoziciji, za lečenje subjekta. U određenim primerima izvođenja, subjekt ima stanje povezano sa HBV. U određenim primerima izvođenja, stanje povezano sa HBV uklјučuje, ali nije ograničeno na, hroničnu HBV infekciju, inflamaciju, fibrozu, cirozu, kancer jetre, serumski hepatitis, žuticu, kancer jetre, upalu jetre, fibrozu jetre, cirozu jetre, otkazivanje jetre, difuznu hepatocelularnu inflamatornu bolest, hemofagocitni sindrom, serumski hepatitis i HBV viremiju. U određenim primerima izvođenja, stanje povezano sa HBV može imati simptome koji mogu uklјučivati bilo koji ili sve od slijedećih: bolest nalik gripu, slabost, bolove, glavobolјu, groznicu, gubitak apetita, dijareju, žuticu, mučninu i povraćanje, bol tela u područje jetre, stolicu boje gline ili sive boje, sveprisutan svrab i tamno obojen urin, udružene sa pozitivnim testom na prisustvo virusa hepatitisa B, virusnog antigena hepatitisa B ili sa pozitivnim testom na prisustvo antitela specifičnog za virusni antigen hepatitisa B. U određenim primerima izvođenja, subjekt je izložen riziku za stanje povezano sa HBV. Navedeno uklјučuje subjekte sa jednim ili sa više faktora rizika za razvoj stanja povezanog sa HBV, uklјučujući seksualno izlaganje osobi inficiranoj virusom hepatitisa B, život u istoj kući kao osoba sa doživotnom infekcijom virusom hepatitisa B, izloženost lјudskoj krvi zaraženoj sa virusom hepatitisa B, ubrizgavanje nedozvolјenih droga, činjenicu da je osoba sa hemofilijom, kao i poseta području gde je hepatitis B uobičajen. U određenim primerima izvođenja, subjekt je identifikovan kao onaj kome je potrebno lečenje stanja povezanog sa HBV.
[0275] Određeni primeri izvođenja predmetnog opisa obezbeđuju postupak smanjenja nivoa HBV DNK i/ili HBV antigena kod životinje inficirane sa HBV-om, postupak koji uključuje primenu konjugovanog antisens jedinjenja sa ciljanim dejstvom na HBV nukleinsku kiselinu životinji. U određenim primerima izvođenja, antigen je HBsAG ili HBeAG. U određenim primerima izvođenja, količina HBV antigena može biti dovolјno smanjena da rezultuje u serokonverziji.
[0276] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje postupke za upotrebu konjugovanog antisens jedinjenja sa ciljanim dejstvom na nukleinsku kiselinu HBV-a u preparatu medikamenta.
[0277] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na nukleinsku kiselinu HBV-a, ili njegovu farmaceutski prihvatlјivu so, za upotrebu u terapiji.
[0278] Određeni primeri izvođenja predmetnog opisa obezbeđuju konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na nukleinsku kiselinu HBV-a, za upotrebu u lečenju stanja povezanog sa HBV. Stanje povezano sa HBV uklјučuje, ali nije ograničeno na, hroničnu HBV infekciju, inflamaciju, fibrozu, cirozu, kancer jetre, serumski hepatitis, žuticu, kancer jetre, upalu jetre, fibrozu jetre, cirozu jetre, otkazivanje jetre, difuznu hepatocelularnu inflamatornu bolest, hemofagocitni sindrom, serumski hepatitis i HBV viremiju.
[0279] Određeni primeri izvođenja predmetnog opisa obezbeđuju konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na nukleinsku kiselinu HBV-a, za upotrebu u smanjenju nivoa HBV DNK i/ili nivoa HBV antigena, kod životinje inficirane sa HBV, što uključuje primenu konjugovanog antisens jedinjenja sa ciljanim dejstvom na HBV nukleinsku kiselinu životinji. U određenim primerima izvođenja, antigen je HBsAG ili HBeAG. U određenim primerima izvođenja, količina HBV antigena može biti dovolјno smanjena da rezultuje u serokonverziji.
[0280] Podrazumeva se da bilo koje od jedinjenja koja su ovde opisana može biti upotrebljeno u prethodno navedenim postupcima i upotrebama. Na primer, u određenim primerima izvođenja predmetnog opisa, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na nukleinsku kiselinu HBVa koje je navedeno u prethodno pomenutim postupcima i upotrebama, može obuhvatati, ali nije ograničeno na, konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 koje sadrži sekvencu od najmanje 8 uzastopnih nukleobaza bilo koje od SEQ ID NO: 3-11; konjugovano antisens jedinjenje sa ciljanim dejstvom na SEQ ID NO: 1 koje sadrži nukleobaznu sekvencu bilo koje od SEQ ID NO: 3-11; jedinjenje koje sadrži ili se sastoji od ISIS 505358, ISIS 509934, ISIS 510100, ISIS 552023, ISIS 552024, ISIS 552032, ISIS 552859, ISIS 552925 ili ISIS 577119 i konjugatne grupe.
E. Određene farmaceutske kompozicije
[0281] U određenim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedno ili više antisens jedinjenja prema pronalasku. U određenim primerima izvođenja, takva farmaceutska kompozicija sadrži pogodan farmaceutski prihvatlјiv razblaživač ili nosač. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži sterilan fiziološki rastvor i jedno ili više antisens jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, navedena farmaceutska kompozicija se sastoji od sterilnog fiziološkog rastvora i jednog ili više antisens jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, sterilan fiziološki rastvor je fiziološki rastvor farmaceutskog stepena čistoće. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više antisens jedinjenja i sterilnu vodu. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija se sastoji od jednog ili više antisens jedinjenja i sterilne vode. U određenim primerima izvođenja, sterilni fiziološki rastvor je voda farmaceutskog stepena čistoće. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više antisens jedinjenja i fosfatom puferisan fiziološki rastvor (PBS). U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija se sastoji od jednog ili više antisens jedinjenja i sterilnog fiziološkog rastvora puferisanog fosfatom (PBS-a). U određenim primerima izvođenja, sterilni fiziološki rastvor je PBS farmaceutskog stepena čistoće.
[0282] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja mogu biti pomešana sa farmaceutski prihvatlјivim aktivnim i/ili inertnim supstancama za pripremu farmaceutskih kompozicija ili formulacija. Kompozicije i postupci za formulaciju farmaceutskih kompozicija zavise od brojnih kriterijuma, uklјučujući, ali ne ograničavajući se na, način primene, obim bolesti ili dozu koja će se primenjivati.
[0283] Farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenja obuhvataju bilo koje farmaceutski prihvatlјive soli, estre ili soli takvih estara. U određenim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenja, sadrže jedan ili više oligonukleotida koji su, nakon primene životinji, uklјučujući čoveka, sposobni da obezbede (direktno ili indirektno) biološki aktivan metabolit ili njegov ostatak. U skladu sa navedenim, na primer, predmetni opis se takođe odnosi na farmaceutski prihvatlјive soli antisens jedinjenja, prolekove, farmaceutski prihvatlјivih soli takvih prolekova i druge bioekvivalenete. Pogodne farmaceutski prihvatlјive soli uklјučuju, ali nisu ograničene na, soli natrijuma i kalijuma.
[0284] Prolek može podrazumevati ugradnju dodatnih nukleozida na jedan ili na oba kraja oligonukleotida, a koji se u telu cepaju endogenim nukleazama da bi se obrazovao aktivan antisens oligonukleotid.
[0285] Lipidne grupe su upotrebljavane u raznim postupcima terapija nukleinskim kiselinama. U određenim takvim postupcima, nukleinska kiselina se uvodi u prethodno obrazovane lipozome ili lipoplekse napravlјene od smeša katjonskih lipida i neutralnih lipida. U određenim postupcima, DNK kompleksi sa mono- ili poliokatjonskim lipidima se obrazuju bez prisustva neutralnog lipida. U određenim primerima izvođenja, lipidna grupa je izabrana da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u određenu ćeliju ili tkivo. U određenim primerima izvođenja, lipidna grupa je izabrana da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u masno tkivo. U određenim primerima izvođenja, lipidna grupa je izabrana da poveća distribuciju farmaceutskog agensa u mišićno tkivo.
[0286] U određenim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene, sadrže jedan ili više modifikovanih oligonukleotida i jedan ili više ekscipijenasa. U određenim takvim primerima izvođenja, ekscipijensi su izabrani od vode, rastvora soli, alkohola, polietilen glikola, želatina, laktoze, amilaze, magnezijum stearata, talka, silicijumske kiseline, viskoznog parafina, hidroksimetilceluloze i polivinilpirolidona.
[0287] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija koja je ovde obezbeđena, sadrži sistem isporuke. Primeri sistema isporuke uklјučuju, ali nisu ograničeni na, lipozome i emulzije. Određeni sistemi isporuke su korisni za pripremu određenih farmaceutskih kompozicija, uklјučujući one koje sadrže hidrofobna jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, koriste se određeni organski rastvarači, kao što je dimetilsulfoksid.
[0288] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija koja je ovde obezbeđena, sadrži jedan ili više molekula specifičnih za isporuku u određeno tkivo, dizajniranih tako da dostave jedan ili više farmaceutskih agenasa predmetnog pronalaska u specifična tkiva ili tipove ćelija. Na primer, u određenim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije uklјučuju lipozome obložene antitelom specifičnim za određeno tkivo.
[0289] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija koja je ovde obezbeđena, sadrži sistem ko-rastvarača. Određeni od takvih sistema ko-rastvarača sadrže, na primer, benzil alkohol, nepolarni surfaktant, organski polimer koji se može mešati sa vodom i vodenu fazu. U određenim primerima izvođenja, takvi sistemi ko-rastvarača se upotrebljavaju za hidrofobna jedinjenja. Neograničavajući primer takvog sistema ko-rastvarača je VPD sistem ko-rastvarača koji je rastvor apsolutnog etanola koji sadrži 3% benzil alkohola, 8% nepolarnog surfaktanta Polisorbat 80™ i 65% polietilen glikola 300. Proporcije takvih sistema ko-rastvarača mogu značajno varirati bez značajnih izmena u njihovim karakteristikama rastvorlјivosti i toksičnosti. Štaviše, identitet komponenti korastvarača može varirati: na primer, mogu se koristiti drugi surfaktanti umesto Polisorbata 80™; veličina frakcije polietilen glikola može takođe varirati; drugi biokompatibilni polimeri mogu zameniti polietilen glikol, npr. polivinil pirolidon; i drugi šećeri ili polisaharidi mogu zameniti dekstrozu.
[0290] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija koja je ovde obezbeđena, pripremlјena je za oralnu primenu. U određenim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije se pripremaju za bukalnu primenu.
[0291] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija je pripremlјena za primenu injekcijom (npr. intravenski, subkutano, intramuskularno itd.). U određenim takvim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži nosač i formulisana je u vodenom rastvoru poput vode ili fiziološki kompatibilnih pufera kao što su Hankov rastvor, Ringerov rastvor ili fiziološki rastvor. U određenim primerima izvođenja, uklјučeni su i drugi sastojci (npr. sastojci koji potpomažu rastvorlјivost ili služe kao konzervansi). U određenim primerima izvođenja, suspenzije za injeciranje se pripremaju upotrebom odgovarajućih tečnih nosača, agensa za resuspendovanje i slično. Određene farmaceutske kompozicije za injekcije su u jediničnom doznom obliku, npr. u ampulama ili u višedoznim spremištima. Određene farmaceutske kompozicije za injekcije su suspenzije, rastvori ili emulzije u ulјanim ili vodenim nosačima, a mogu sadržavati i agense za formulisanje kao što su agensi za resuspendovanje, stabilizaciju i/ili dispergovanje. Određeni rastvarači koji su pogodni za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama za injekcije uklјučuju, ali nisu ograničeni na, lipofilne rastvarače i masna ulјa kao što su susamovo ulјe, sintetski estri masnih kiselina, poput etil oleata ili triglicerida i lipozoma. Vodene suspenzije za injekcije mogu sadržavati supstance koje povećavaju viskoznost suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol ili dekstran. Opciono, takve suspenzije mogu takođe sadržavati pogodne stabilizatore ili agense koji povećavaju rastvorlјivost farmaceutskih agenasa da bi se omogućila priprema visoko koncentrovanih rastvora.
[0292] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija je pripremlјena za transmukozalnu primenu. U određenim takvim primerima izvođenja, u formulaciji se upotrebljavaju penetranti tipa onih koji su odgovarajući za barijeru koju treba učiniti propustljivom. Navedeni penetranti su opšte poznati u stanju tehnike.
[0293] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija koja je ovde obezbeđena sadrži oligonukleotid u terapijski efektivnoj količini. U određenim primerima izvođenja, terapijski efektivna količina je dovolјna da spreči, ublaži ili umanji simptome oboljenja ili da produži preživlјavanje subjekta koji se leči. Određivanje terapijski efektivne količine se oslanja na sposobnosti stručnjaka iz oblasti.
[0294] U određenim primerima izvođenja, jedan ili više modifikovanih oligonukleotida koji su ovde obezbeđeni su formulisani kao prolek. U određenim primerima izvođenja, nakon in vivo primene, prolek se hemijski prevodi u biološki, farmaceutski ili terapijski aktivniji oblik oligonukleotida. U određenim primerima izvođenja, prolekovi su korisni zbog lakše primene u odnosu na odgovarajući aktivan oblik. Na primer, u određenim slučajevima, prolek može biti sa većom biodostupnošću (npr. prilikom oralne primene) u odnosu na odgovarajući aktivan oblik. U određenim slučajevima, prolek može imati pobolјšanu rastvorlјivost u odnosu na odgovarajući aktivan oblik. U određenim primerima izvođenja, prolekovi su manje rastvorlјivi u vodi od odgovarajućeg aktivnog oblika. U određenim slučajevima, takve prolekove karkateriše superiorniji prenos preko ćelijskih membrana, npr. gde je rastvorlјivost u vodi štetna za mobilnost supstance. U određenim primerima izvođenja, prolek je estar. U određenim takvim primerima izvođenja, estar se metabolički hidrolizuje u karboksilnu kiselinu nakon primene. U određenim slučajevima, jedinjenje koje sadrži karboksilnu kiselinu je odgovarajući aktivan oblik. U određenim primerima izvođenja, prolek sadrži kratak peptid (poliaminokiselinu) vezan za kiselu grupu. U određenim takvim primerima izvođenja, peptid se cepa nakon primene, da bi se obrazovao odgovarajući aktivan oblik.
[0295] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje kompozicije i postupke za smanjenje količine ili aktivnosti cilјne nukleinske kiseline u ćeliji. U određenim primerima izvođenja, ćelija je u životinji. U određenim primerima izvođenja, životinja je sisar. U određenim primerima izvođenja, životinja je glodar. U određenim primerima izvođenja, životinja je primat. U određenim primerima izvođenja, životinja je primat koji nije čovek. U određenim primerima izvođenja, životinja je čovek.
[0296] U određenim primerima izvođenja, predmetni opis obezbeđuje postupke primene farmaceutske kompozicije koja sadrži oligonukleotid predmetnog pronalaska životinji. Pogodni načini primene uklјučuju, ali nisu ograničeni na, oralni, rektalni, transmukozalni, intestinalni, enterički, topikalni, u vidu supozitorija, putem inhalacije, intratekalni, intracerebroventrikularni, intraperitonealni, intranazalni, intraokularni, intratumorski i parenteralni (npr. intravenski, intramuskularni, intramedularni i subkutani). U određenim primerima izvođenja, farmaceutski intratekalni oblici se primenjuju da bi se ostvarilo najpre lokalno, a ne sistemsko izlaganje. Na primer, farmaceutske kompozicije mogu biti injecirane direktno u područje u kome je potrebno postići želјeni efekat (npr. u jetru).
PRIMERI
[0297] Primeri koji slede ilustruju određene primere izvođenja predmetnog pronalaska i nisu ograničavajući. Štaviše, kada su obezbeđeni specifični primeri izvođenja, pronalazači su razmatrali generičku primenu takvih specifičnih primera izvođenja. Na primer, opis oligonukleotida koji ima određeni motiv obezbeđuje razuman osnov za razmatranje dodatnih oligonukleotida koji imaju isti ili sličan motiv. Takođe, kada se, na primer, određena modifikacija visokog afiniteta javlja na određenoj poziciji, druge modifikacije visokog afiniteta na istoj poziciji se smatraju pogodnima, osim ukoliko nije drugačije naznačeno.
Primer 1: Opšti postupak pripreme fosforamidita, Jedinjenja 1, 1a i 2
[0298]
Bx je heterociklična baza;
[0299] Jedinjenja 1, 1a i 2 su pripremlјena procedurama koje su dobro poznate u stanju tehike, kao što je opisano ovde u specifikaciji (pogledati Seth i saradnici, Bioorg. Med. Chem.2011, 21(4), 1122-1125, J. Org. Chem.2010, 75(5), 1569-1581, Nucleic Acids Simposium Series, 2008, 52(1), 553-554); i takođe pogledati objavlјene PCT međunarodne aplikacije (WO 2011/115818, WO 2010/077578, WO2010/036698, WO2009/143369, WO 2009/006478 i WO 2007/090071) i US patent 7,569,686).
Primer 2: Priprema Jedinjenja 7
[0300]
[0301] Jedinjenja 3 (2-acetamido-1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-dezoksi-β-Dgalaktopiranoza ili galaktozamin pentaacetat) je komercijalno dostupno. Jedinjenje 5 je pripremlјeno prema publikovanim procedurama (Weber i saradnici, J. Med. Chem.1991, 34, 2692).
Primer 3: Priprema Jedinjenja 11
[0302]
[0303] Jedinjenja 8 i 9 su komercijalno dostupna.
Primer 4: Priprema Jedinjenja 18
[0304]
[0305] Jedinjenje 11 je pripremlјeno praćenjem procedura ilustrovanih u Primeru 3. Jedinjenje 14 je komercijalno dostupno. Jedinjenje 17 je pripremlјeno upotrebom postupaka sličnih postupcima prijavljenim od strane Rensen i saradnika, J. Med. Chem.2004, 47, 5798-5808.
Primer 39: Opšti postupak pripreme oligomernog jedinjenja 83h koje sadrži GalNAc3-3 konjugat na 5’ kraju (GalNAc3-1 modifikovan za vezivanje na 5’ kraj) na čvrstoj podlozi
[0306]
[0307] Jedinjenje 18 je pripremlјeno praćenjem procedura ilustrovanih u Primeru 4. Jedinjenja 83a i 83b su komercijalno dostupna. Oligomerno Jedinjenje 83e koje sadrži fosfodiestarski vezani heksilamin je pripremlјeno upotrebom standardnih postupaka sinteze oligonukleotida. Tretman zaštićenog oligomernog jedinjenja sa vodenim amonijakom je obezbedio 5'-GalNAc3-3 konjugovano oligomerno jedinjenje (83h).
[0308] Gde je GalNAc3-3 strukture:
[0309] GalNAc3klasterski deo konjugatne grupe GalNAc3-3 (GalNAc3-3a) se može kombinovati sa bilo kojom grupom podložnom cepanju da bi se obezbedile razne konjugatne grupe. Pri čemu je GalNAc3-3aformule:
Primer 44: Efekat PO/PS veza na antisensnu inhibiciju ASO jedinjenja koja sadrže GalNAc3-1 konjugat (pogledati Primer 9) na 3’ kraju i cilјano deluju na SRB-1
[0310] ISIS 655861 i 655862 koji sadrže GalNAc3-1 konjugat na 3’ kraju, pri čemu svaki od njih ciljano deluje na SRB-1, ispitivani su u studiji jednokratne primene i određena je njihova sposobnost da inhibiraju SRB-1 kod miševa. Matično nekonjugovano jedinjenje, ISIS 353382 je uklјučeno u studiju radi poređenja.
[0311] ASO jedinjenja su 5-10-5 MOE gapmer-i u kojima region razmaka sadrži deset 2'-dezoksiribonukleozida, a svaki region “krila” sadrži pet nukleozida modifikovanih sa 2’-MOE. ASO jedinjenja su pripremlјena upotrebom postupaka sličnih postupcima koji su prethodno ilustrovani u Primeru 19 i opisana su u Tabeli 23 ispod.
Tabela 23
[0312] Indeksi: "e" označava nukleozid modifikovan sa 2’-MOE; "d" označava β-D-2'-dezoksiribonukleozid; "s" označava fosforotioatne internukleozidne veze (PS); "o" označava fosfodiestarske internukleozidne veze (PO); i "o" označava -O-P(=O)(OH)-. Eksponent "m" označava 5-metilcitozine. Struktura "GalNAc3-1" je prikazana u Primeru 9.
Tretman
[0313] Šest nedelјa stari mužjaci Balb/c miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) su jednokratno subkutano injecirani sa ISIS 353382, 655861, 655862, u dozama prikazanim u nastavku teksta, dok su kontrolne životinje tretirane PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Pre tretmana, kao i nakon poslednje doze, iz svakog miša je uzeta krv i analizirani su uzorci plazme. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon primene poslednje doze, da bi se odredili nivoi SRB-1 iRNK u jetri, upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR), standardnim protokolima. Nivoi SRB-1 iRNK su određeni u odnosu na ukupnu RNK (upotrebom Ribogreen), pre normalizacije u odnosu na kontrolu tretiranu PBS-om. Rezultati ispod su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa SRB-1 iRNK za svaku tretiranu grupu, normalizovanog na kontrolu tretiranu PBS-om, i označeni su kao "% PBS". ED50su određeni upotrebom postupaka sličnih postupcima koji su prethodno opisani i prijavljeni u nastavku teksta.
[0314] Kao što je prikazano u Tabeli 24, tretman antisens oligonukleotidima je snizio nivoe SRB-1 iRNK na dozno-zavisan način u poređenju sa kontrolom tretiranom PBS-om. Zaista, antisens oligonukleotidi koji sadrže GalNAc3-1 konjugat na 3’ kraju (ISIS 655861 i 655862) su pokazali značajno pobolјšanje potentnosti u poređenju sa nekonjugovanim antisens oligonukleotidom (ISIS 353382). Osim toga, ISIS 655862 sa mešovitim PS/PO vezama je pokazao pobolјšanje u potentnosti u odnosu na jedinjenja u kojima su prisutne isključivo PS (ISIS 655861).
Tabela 24
[0315] Nivoi transaminaza jetre, alanin aminotransferaze (ALT) i aspartat aminotransferaze (AST), u serumu, određeni su u odnosu na miševe kojima je injeciran fiziološki rastvor, upotrebom standardnih protokola. Određene su i težine organa. Rezultati su pokazali da nije bilo povećanja nivoa transaminaza (Tabela 25) ili težine organa (podaci nisu prikazani) kod miševa tretiranih sa ASO jedinjenjima u poređenju sa kontrolom (PBS). Dodatno, ASO sa mešovitim PS/PO vezama (ISIS 655862) je pokazao slične nivoe transaminaza kao jedinjenje u kome su prisutne samo PS (ISIS 655861).
Tabela 25
Primer 45: Priprema PFP estra, Jedinjenje 110a
[0316]
[0317] Jedinjenje 4 (9,5 g; 28,8 mmol) je tretirano sa jedinjenjem 103a ili 103b (38 mmol), samostalno, i sa TMSOTf (0,5 ekv.) i molekulskim sitima u dihlorometanu (200 mL), pa je mešano 16 sati na sobnoj temperaturi. Nakon toga, organski sloj je profiltriran kroz celit i dalje ispran natrijum bikarbonatom, vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj je izdvojen i osušen upotrebom natrijum sulfata, pa je profiltriran i redukovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulјe je prečišćeno hromatografijom na silika gelu (2%-->10% metanol/dihlorometan) da bi se dobila jedinjenja 104a i 104b u prinosu >80%. LCMS i protonski NMR su bili konzistentni sa strukturom.
[0318] Jedinjenja 104a i 104b su tretirana pod istim uslovima kao jedinjenja 100a-d (Primer 47), da bi se dobila jedinjenja 105a i 105b u prinosu >90%. LCMS i protonski NMR su bili konzistentni sa strukturom.
[0319] Jedinjenja 105a i 105b su tretirana, pojedinačno, sa jedinjenjem 90 pod istim uslovima kao jedinjenja 901a-d, da bi se dobila jedinjenja 106a (80%) i 106b (20%). LCMS i protonski NMR su bili konzistentni sa strukturom.
[0320] Jedinjenja 106a i 106b su tretirana pod istim uslovima kao jedinjenja 96a-d (Primer 47), da bi se dobili 107a (60%) i 107b (20%). LCMS i protonski NMR su bili konzistentni sa strukturom.
[0321] Jedinjenja 107a i 107b su tretirana pod istim uslovima kao jedinjenja 97a-d (Primer 47), da bi se dobila jedinjenja 108a i 108b u prinosu od 40-60%. LCMS i protonski NMR su bili konzistentni sa strukturom.
[0322] Jedinjenja 108a (60%) i 108b (40%) su tretirana pod istim uslovima kao jedinjenja 100a-d (Primer 47), da bi se dobila jedinjenja 109a i 109b u prinosu >80%. LCMS i protonski NMR su bili konzistentni sa strukturom.
[0323] Jedinjenje 109a je tretirano pod istim uslovima kao jedinjenja 101a-d (Primer 47), da bi se dobilo Jedinjenje 110a u prinosu od 30-60%. LCMS i protonski NMR analize su bili konzistentni sa strukturom. Alternativno, Jedinjenje 110b može biti pripremlјeno na sličan način, polazeći od Jedinjenja 109b.
Primer 48: Priprema oligonukleotida 119 koji sadrži GalNAc3-7
[0324]
[0325] Jedinjenje 112 je sintetisano prema proceduri opisanoj u literaturi (J. Med. Chem. 2004, 47, 5798-5808).
[0326] Jedinjenje 112 (5 g; 8,6 mmol) je rastvoreno u 1:1 metanol/etil acetatu (22 mL/22 mL), pa je dodat paladijum hidroksid na uglјeniku (0,5 g). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod vodonikom tokom 12 h. Reakciona smeša je dalje profiltrirana kroz sloj celita i isprana sa 1:1 metanol/etil acetatom. Filtrat i rastvori dobijeni ispiranjem su spojeni i koncentrovani do suva da bi se dobilo Jedinjenje 105a (kvantitativno). Struktura je potvrđena LCMS analizom.
[0327] Jedinjenje 113 (1,25 g; 2,7 mmol), HBTU (3,2 g; 8,4 mmol) i DIEA (2,8 mL; 16,2 mmol) su rastvoreni u anhidrovanom DMF-u (17 mL), pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. U ovaj rastvor je zatim dodat rastvor jedinjenja 105a (3,77 g; 8,4 mmol) u anhidrovanom DMF-u (20 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ulјe. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2(100 mL) i ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(100 mL) i slanim rastvorom (100 mL). Organska faza je izdvojena, osušena (Na2SO4), profiltrirana i uparena. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom i eluiran sa 10 - 20% MeOH u dihlorometanu da bi se dobilo Jedinjenje 114 (1,45 g; 30%). Struktura je potvrđena LCMS i<1>H NMR analizama.
[0328] Jedinjenje 114 (1,43 g; 0,8 mmol) je rastvoreno u 1:1 metanol/etil acetatu (4 mL/4 mL). Zatim je dodat paladijum na uglјeniku (vlažan, 0,14 g). Reakciona smeša je produvana vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi pod vodonikom tokom 12 h. Reakciona smeša je dalje profiltrirana kroz sloj celita. Sloj celita je ispran metanol/etil acetatom (1:1). Filtrat i ratvor dobijen ispiranjem su spojeni zajedno i upareni pod sniženim pritiskom da bi se dobilo Jedinjenje 115 (kvantitativno). Struktura je potvrđena LCMS i<1>H NMR analizama.
[0329] Jedinjenje 83a (0,17 g; 0,75 mmol), HBTU (0,31 g; 0,83 mmol) i DIEA (0,26 mL; 1,5 mmol) su rastvoreni u anhidrovanom DMF-u (5 mL) i reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. U ovaj rastvor je zatim dodat rastvor Jedinjenja 115 (1,22 g; 0,75 mmol) u anhidrovanom DMF-u, pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Rastvarač je potom uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u CH2Cl2. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i slanim rastvorom, nakon čega je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i profiltriran. Organski sloj je koncentrovan do suva, a dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom i eluiran sa 3 - 15% MeOH u dihlorometanu da bi se dobilo Jedinjenje 116 (0,84 g; 61%). Struktura je potvrđena LC MS i<1>H NMR analizama.
[0330] Jedinjenje 116 (0,74 g; 0,4 mmol) je rastvoreno u 1:1 metanol/etil acetatu (5 mL/5 mL). Zatim je dodat paladijum na uglјeniku (vlažan, 0,074 g). Reakciona smeša je potom produvana vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi pod vodonikom tokom 12 h. Reakciona smeša je dalje profiltrirana kroz sloj celita. Sloj celita je ispran metanol/etil acetatom (1:1). Filtrat i rastvori dobijeni ispiranjima su spojeni zajedno i upareni pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 117 (0,73 g; 98%). Struktura je potvrđena LCMS i<1>H NMR analizama.
[0331] Jedinjenje 117 (0,63 g; 0,36 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (3 mL). U ovaj rastvor su zatim dodati N,N-diizopropiletilamin (70 µL; 0,4 mmol) i pentafluorofenil trifluoroacetat (72 µL; 0,42 mmol). Reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h, pa je presuta u zasićen vodeni rastvor NaHCO3. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom, isprana slanim rastvorom i osušena preko anhidrovanog Na2SO4. Rastvor dihlorometana je koncentrovan do suva i prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom, pa eluiran sa 5 - 10% MeOH u dihlorometanu da bi se dobilo jedinjenje 118 (0,51 g; 79%). Struktura je potvrđena LCMS i<1>H i<1>H i<19>F NMR analizama.
[0332] Oligomerno Jedinjenje 119, koje sadrži GalNAc3-7 konjugatnu grupu, pripremlјeno je upotrebom opštih procedura ilustrovanih u Primeru 46. GalNAc3klasterski deo konjugatne grupe GalNAc3-7 (GalNAc3-7a) se može kombinovati sa bilo kojom strukturom podložnom cepanju da bi se dobile raznovrsne konjugatne grupe. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
[0333] Struktura GalNAc3-7 (GalNAc3-7a-CM-) je prikazano ispod:
Primer 51: Priprema oligonukleotida 155 koji sadrži GalNAc3-6
[0334]
[0335] Jedinjenje 146 je sintetisano kao što je opisano u literaturi (Analitical Biochemistry 1995, 229, 54-60).
[0336] Jedinjenje 4 (15 g; 45,55 mmol) i jedinjenje 35b (14,3 grama; 57 mmol) su rastvoreni u CH2Cl2(200 ml). Dodata su aktivirana molekulska sita (4 Å.2 g; u prahu) i reakciona smeša je ostavljena da se meša 30 minuta u atmosferi azota. Zatim je dodat TMS-OTf (4,1 ml; 22,77 mmol) i reakcija je ponovo ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku, reakcija je zaustavljena presipanjem u rastvor zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(500 ml) i droblјenog leda (~ 150 g). Organski sloj je izdvojen, ispran slanim rastvorom, osušen preko MgSO4i profiltriran, pa koncentrovan do narandžastog ulјa pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom i eluiran sa 2-10% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo Jedinjenje 112 (16,53 g; 63%). LCMS i<1>H NMR analize su bile konsizentne očekivanom jedinjenju.
[0337] Jedinjenje 112 (4,27 g; 7,35 mmol) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (40 ml). Reakciona smeša je produvana propuštanjem struje argona kroz rastvor tokom 15 minuta. Zatim je dodat Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na uglјeniku, 400 mg)i kroz rastvor je uduvavan gasoviti vodonik tokom 30 minuta. Po završetku (TLC, 10% MeOH u CH2Cl2i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan rotacionim uparavanjem i brzo osušen pod visokim vakuumom da bi se dobilo Jedinjenje 105a (3,28 g). LCMS i 1H NMR su bili konzistentni sa želјenim proizvodom.
[0338] Jedinjenje 147 (2,31 g; 11 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (100 mL). Zatim je dodat N,N-diizopropiletilamin (DIEA, 3,9 mL; 22 mmol), a zatim HBTU (4 g; 10,5 mmol). Reakciona smeša je ostavlјena da se meša tokom 15 minuta pod azotom. Zatim je dodat rastvor jedinjenja 105a (3.3 g; 7,4 mmol) u suvom DMF-u i mešano je 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim NaHCO3i koncentrovanim slanim rastvorom. Organska faza je izdvojena, osušena (MgSO4), profiltrirana i koncentrovana do narandžastog sirupa. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni sa 2-5% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo Jedinjenje 148 (3.44 g; 73%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa očekivanim proizvodom.
[0339] Jedinjenje 148 (3,3 g; 5,2 mmol) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (75 ml). Reakciona smeša je produvana propuštanjem struje argona kroz rastvor tokom 15 minuta. Zatim je dodat Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na uglјeniku)(350 mg). Gasoviti vodonik je uduvavan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC, 10% MeOH u DCM-u i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan rotacionim uparavanjem i brzo osušen pod visokim vakuumom da bi se dobilo Jedinjenje 149 (2,6 g). LCMS je bio konzistentan sa želјenim proizvodom. Ostatak je rastvoren u suvom DMF-u (10 ml) i odmah je upotrebljen u sledećem koraku.
[0340] Jedinjenje 146 (0,68 g; 1,73 mmol) je rastvoreno u suvom DMF-u (20 ml). Zatim su dodati DIEA (450 µL; 2,6 mmol; 1,5 ekv.) i HBTU (1,96 g; 0,5.2 mmol). Reakciona smeša je dalje ostavlјena da se meša 15 minuta na sobnoj temperaturi pod azotom. Dalje je dodat rastvor jedinjenja 149 (2,6 g) u anhidrovanom DMF-u (10 mL). Podešen je pH reakcije na pH=9-10, dodavanjem DIEA (ukoliko je potrebno). Reakciona smeša je opet ostavlјena da se meša na sobnoj temperaturi pod azotom tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, a zatim slanim rastvorom. Organska faza je izdvojena, osušena upotrebom MgSO4, profiltrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom i eluiran sa 2-10% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo Jedinjenje 150 (0,62 g; 20%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa želјenim proizvodom.
[0341] Jedinjenje 150 (0,62 g) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (5 L). Reakciona smeša je produvana propuštanjem struje argona kroz rastvor tokom 15 minuta. Zatim je dodat Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na uglјeniku; 60 mg). Gasoviti vodonik je uduvavan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC, 10% MeOH u DCM-u i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom (Teflonski filter na špricu; 0,45 µm). Filtrat je koncentrovan rotacionim uparavanjem i brzo osušen pod visokim vakuumom da bi se dobilo Jedinjenje 151 (0,57 g). LCMS je bio konzistentan sa želјenim proizvodom. Proizvod je rastvoren u 4 mL suvog DMF-a i odmah je upotrebljen u sledećem koraku.
[0342] Jedinjenje 83a (0,11 g; 0,33 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (5 mL), pa su dodati N,N-diizopropiletilamin (75 µL; 1 mmol) i PFP-TFA (90 µL; 0,76 mmol). Reakciona smeša je nakon kontakta postala magenta boje i postepeno je postajala narandžasta tokom narednih 30 minuta. Napredovanje reakcije je praćeno TLC i LCMS analizama. Po završetku (obrazovanje PFP estera), dodat je rastvor jedinjenja 151 (0,57 g; 0,33 mmol) u DMF-u. Podešen je pH reakcije na pH=9-10, dodavanjem N,N-diizopropiletilamina (ukoliko je bilo potrebno). Reakciona smeša je dalje mešana pod azotom tokom 30 minuta. Po završetku, većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa CH2Cl2i ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, a zatim i rastvorom soli. Organska faza je izdvojena, osušena upotrebom MgSO4Fil, profiltirana i koncentrovana u narandžasti sirup. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom (2-10% MeOH u CH2Cl2) da bi se dobilo Jedinjenje 152 (0,35 g; 55%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa želјenim proizvodom.
[0343] Jedinjenje 152 (0,35 g; 0,182 mmol) je rastvoreno u 1:1 MeOH/EtOAc (10 mL). Reakciona smeša je produvana propuštanjem struje argona kroz rastvor tokom 15 minuta. Zatim je dodat Perlmanov katalizator (paladijum hidroksid na uglјeniku; 35 mg). Gasoviti vodonik je uduvavan kroz rastvor tokom 30 minuta. Po završetku (TLC, 10% MeOH u DCM-u i LCMS), katalizator je uklonjen filtracijom (Teflonski filter na špricu; 0,45 µm). Filtrat je koncentrovan rotacionim uparavanjem i brzo osušen pod visokim vakuumom da bi se dobilo Jedinjenje 153 (0,33 g; kvantitativno). LCMS analiza je bila konzistentna sa želјenim proizvodom.
[0344] Jedinjenje 153 (0,33 g; 0,18 mmol) je rastvoreno u anhidrovanom DMF-u (5 mL) uz mešanje pod azotom. Zatim su dodati N,N-diizopropiletilamin (65 µL; 0,37 mmol) i PFP-TFA (35 µL; 0,28 mmol). Reakciona smeša je dalje mešana pod azotom tokom ~30 minuta. Reakciona smeša je nakon kontakta postala magenta boje i dalje je postepeno postajala narandžasta tokom narednih 30 minuta. Podešen je pH reakcije na pH=9-10, dodavanjem N,N-diizopropiletilamina. Napredovanje reakcije je praćeno TLC i LCMS analizama. Po završetku, većina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa CH2Cl2(50 mL) i ispran zasićenim vodenim NaHCO3i dalje rastvorom soli. Organski sloj je osušen upotrebom MgSO4, profiltiran i koncentrovan u narandžasti sirup. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni i eluiran sa 2-10% MeOH u CH2Cl2da bi se dobilo Jedinjenje 154 (0,29 g; 79%). LCMS i<1>H NMR su bili konzistentni sa želјenim proizvodom.
[0345] Oligomerno jedinjenje 155, koje sadrži GalNAc3-6 konjugatnu grupu, pripremlјeno je upotrebom opštih procedura ilustrovanih u Primeru 46. GalNAc3klasterski deo konjugatne grupe GalNAc3-6 (GalNAc3-6a) se može kombinovati sa bilo kojim ostatkom podložnim cepanju da bi se dobile različite konjugatne grupe. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
[0346] Struktura GalNAc3-6 (GalNAc3-6a-CM-) je prikazano ispod:
Primer 56: In vivo studija zavisnosti od doze za oligonukleotide koji sadrže 3’ ili 5'-konjugatnu grupu (poređenje GalNAc3-1, 2, 3, 5, 6, 7 i 10) i cilјano deluju na SRB-1
[0347] Oligonukleotidi koji su navedeni u nastavku teksta, ispitani su u studiji zavisnosti od doze i određena je antisensna inhibicija SRB-1 kod miševa. Kao standard je uklјučen nekonjugovani ISIS 353382. Svaka od raznih GalNAc3konjugatnih grupa je bila vezana za 5’ kraj odgovarajućeg oligonukleotida preko fosfodiestarski vezanog 2'-dezoksiadenozinskog nukleozida (struktura podložna cepanju), osim kod ISIS 655861, kod koga je GalNAc3konjugatna grupa bila vezana na 3’ kraju.
Tabela 29
[0348] Velika slova označavaju nukleobazu za svaki nukleozid i<m>C označava 5-metil citozin. Indeksi: "e" označava nukleozid modifikovan sa 2'-MOE; "d" označava β-D-2'-dezoksiribonukleozid; "s" označava fosforotioatnu internukleozidnu vezu (PS); "o" označava fosfodiestarsku internukleozidnu vezu (PO); i "o" označava -O-P(=O)(OH)-. Konjugatne grupe su obeležene podeblјanim slovima.
[0349] Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9. Struktura GalNAc3-2aje prikazana prethodno u Primeru 37. Struktura GalNAc3-3aje prikazana prethodno u Primeru 39. Struktura GalNAc3-5aje prikazana prethodno u Primeru 49. Struktura GalNAc3-6aje prikazana prethodno u Primeru 51. Struktura GalNAc3-7aje prikazana prethodno u Primeru 48. Struktura GalNAc3-10aje prikazana prethodno u Primeru 46.
Tretman
[0350] Šest nedelјa stari mužjaci Balb/c miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) su jednokratno subkutano injecirani sa ISIS 353382, 655861, 664507, 661161, 666224, 666961, 666981, 666881, u dozama prikazanim u nastavku teksta, ili je primenjen fiziološki rastvor. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene, da bi se odredili nivoi SRB-1 iRNK u jetri, upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR), praćenjem standardnih protokola. Rezultati ispod su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa SRB-1 iRNK za svaku tretiranu grupu, normalizovanog u odnosu na kontrolu sa fiziološkim rastvorom.
[0351] Kao što je ilustrovano u Tabeli 30, tretman sa antisens oligonukleotidima je snizio nivoe SRB-1 iRNK na dozno-zavisan način. Zaista, konjugovani antisens oligonukleotidi su pokazali značajno pobolјšanje potentnosti u poređenju sa nekonjugovanim antisens oligonukleotidom (ISIS 353382).5’ konjugovani antisens oligonukleotidi pokazuju blago povećanje u potentnosti u poređenju sa 3' konjugovanim antisens oligonukleotidom.
Tabela 30
[0352] Nivoi transaminaza jetre, alanin aminotransferaze (ALT) i aspartat aminotransferaze (AST), u serumu, izmereni su u odnosu na miševe kojima je injeciran fiziološki rastvor, upotrebom standardnih protokola. Određeni su takođe ukupan bilirubin i BUN. Za promenu u telesnim težinama je utvrđeno da je bez značajne promene u odnosu na grupu tretiranu fiziološkim rastvorom. Vrednosti ALT, AST, ukupnog bilirubina i BUN su prikazane u Tabeli 31 ispod.
Tabela 31
Primer 60: Efekti konjugovanih ASO koji cilјano deluju na SRB-1 in vitro
[0353] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli ispod, ispitani su u studiji višestrukih doza i određena je antisensna inhibicija SRB-1 u primarnim mišjim hepatocitima. ISIS 353382 je uklјučen kao nekonjugovni standard. Svaka od konjugatnih grupa je vezana na 3’ ili 5' kraj odgovarajućeg oligonukleotida sa fosfodiestarski vezanim 2'-dezoksiadenozinskim nukleozidnim ostatkom koji je podložan cepanju.
Tabela 39
[0354] Velika slova označavaju nukleobazu za svaki nukleozid i<m>C označava 5-metil citozin. Indeksi: "e" označava nukleozid modifikovan sa 2'-MOE; "d" označava β-D-2'-dezoksiribonukleozid; "s" označava fosforotioatnu internukleozidnu vezu (PS); "o" označava fosfodiestarsku internukleozidnu vezu (PO); i "o" označava -O-P(=O)(OH)-. Konjugatne grupe su obeležene podeblјanim slovima.
[0355] Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9. Struktura GalNAc3-3aje prikazana prethodno u Primeru 39. Struktura GalNAc3-8a je prikazana prethodno u Primeru 47. Struktura GalNAc3-9a je prikazana prethodno u Primeru 52. Struktura GalNAc3-6a je prikazana prethodno u Primeru 51. Struktura GalNAc3-2a je prikazana prethodno u Primeru 37. Struktura GalNAc3-10a je prikazana prethodno u Primeru 46. Struktura GalNAc3-5a je prikazana prethodno u Primeru 49. Struktura GalNAc3-7a je prikazana prethodno u Primeru 48.
Tretman
[0356] Prethodno opisani oligonukleotidi su ispitani in vitro, u primarnim ćelijama mišjih hepatocita zasejanih u gustini od 25,000 ćelija po bunariću i tretiranih sa 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 ili 20 nM modifikovanog oligonukleotida. Nakon perioda tretmana od približno 16 sati, RNK je izolovana iz ćelija i iRNK nivoi su izmereni kvantitativnim PCR-om u realnom vremenu, nakon čega su nivoi SRB-1 iRNK normalizovani na ukupan sadržaj RNK, određen upotrebom RIBOGREEN®.
[0357] Upotrebom standardnih postupaka je izračunat IC50i rezultati su prikazani u Tabeli 40. Rezultati pokazuju da, pod uslovima slobodnog preuzimanja u kojima se ne koriste reagensi ili tehnike elektroporacije za veštačko poboljšanje ulaska oligonukleotida u ćelije, oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat su značajno veće potentnosti u hepatocitima u odnosu na matični oligonukleotid (ISIS 353382) koji ne sadrži GalNAc konjugat.
Tabela 40
Primer 79: Trajanje in vivo dejstva oligonukleotida koji cilјano deluju na APOC-III i sadrže GalNAc3konjugat
[0358] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 57 u nastavku, ispitani su u studiji primene jednokratne doze, da bi se utvrdilo trajanje dejstva kod miševa.
Tabela 57
Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-7a je prikazan u Primeru 48, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46 i GalNAc3-13aje prikazan u primeru 62.
Tretman
[0359] Šest do osam nedelja stari transgenic miševi koji eksprimiraju humani APOC-III, injecirani su subkutano, jednokratno, sa svakim od oligonukleotida navedenih u Tabeli 57 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 3 životinje. Krv je uzorkovana pre primene doze (za utvrđivanje bazalnog nivoa) i 72 sata, 1 nedelјu, 2 nedelјe, 3 nedelјe, 4 nedelјe, 5 nedelјa i 6 nedelјa nakon primenjene doze. Nivoi triglicerida i APOC-III u plazmi su izmereni kao što je opisano u Primeru 20. Rezultati ispod su prikazani kao srednja vrednost procenta nivoa triglicerida i APOC-III u plazmi za svaku tretiranu grupu, normalizovanog u odnosu na bazalne nivoe, što pokazuje da oligonukleotide koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu karakteriše duže trajanje dejstva u odnosu na matičan oligonukleotid bez konjugatne grupe (ISIS 304801), iako je doza matičnog oligonukleotida bila tri puta veća od doze oligonukleotida koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu.
Tabela 58
Primer 80: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na alfa-1 antitripsin (A1AT) i sadrže GalNAc3konjugat
[0360] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 59 u nastavku, ispitani su u studiji dozno-zavisne inhibicije A1AT kod miševa.
Tabela 59
Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-7aje prikazan u Primeru 48, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46 i GalNAc3-13aje prikazan u primeru 62.
Tretman
[0361] Šest nedelјa stari mužjaci C57BL/6 miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) su subkutano injecirani, jednom nedelјno, sa svakom od doza koje su navedene ispod i ukupno sa po tri doze oligonukleotida koji su prikazani u Tabeli 59 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene. Nivoi iRNK za A1AT u jetri su određeni upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR), standardnim protokolima. Nivoi proteina A1AT u plazmi su određeni upotrebom ELISA testa za mišiji alfa 1- antitripsin (kataloški br. 41-A1AMS-E01, Alpco, Salem, NH). Rezultati prikazani ispod su predstavlјeni za svaku tretiranu grupu kao srednje vrednosti procenta A1AT iRNK u jetri i nivoa proteina u plazmi, normalizovanog u odnosu na PBS kontrolu.
[0362] Kao što je ilustrovano u Tabeli 60, tretman sa antisens oligonukleotidima je snizio nivoe iRNK za A1AT u jetri, kao i nivoe A1AT proteina u plazmi, na dozno-zavisan način. Oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat su bili sa značajno većom potentnošću u odnosu na matični oligonukleotid (ISIS 476366).
Tabela 60
[0363] Nivoi transaminaze jetre i BUN u plazmi su izmereni u vreme žrtvovanja, upotrebom standardnih protokola. Određene su i telesne težine i težine organa. Rezultati su prikazani u tabeli 61 ispod. Telesna težina je prikazana kao % u odnosu na kontrolnu vrednost. Težine organa su prikazane kao % telesne težine u odnosu na PBS kontrolnu grupu.
Tabela 61
Primer 81: Trajanje in vivo dejstva oligonukleotida koji cilјano deluju na A1AT i sadrže GalNAc3klaster
[0364] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 59 su ispitani u studiji jednokratne primene doze da bi se odredilo trajanje dejstva kod miševa.
Tretman
[0365] Šest nedelјa stari mužjaci C57BL/6 miševa su jednokratno subkutano injecirani svakim od oligonukleotida navedenih u Tabeli 59 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Krv je uzorkovana jedan dan pre primene doze (za utvrđivanje bazalnog nivoa) i 5, 12, 19 i 25 dana nakon primene doze. Nivoi proteina A1AT u plazmi su izmereni upotrebom ELISA testa (pogledati Primer 80). Rezultati ispod su predstavlјeni kao srednje vrednosti procenata nivoa A1AT proteina u plazmi za svaku tretiranu grupu, normalizovanih u odnosu na bazalne nivoe. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat potentniji i da imaju duže trajanje dejstva nego matični oligonukleotid kome nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 476366). Dodatno, oligonukleotidi koji sadrže 5'-GalNAc konjugat (ISIS 678381, 678382, 678383 i 678384) su generalno još potentniji i sa još dužim trajanjem dejstva od oligonukleotida koji sadrži 3'-GalNAc konjugat (ISIS 656326).
Tabela 62
Primer 82: In vitro antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na SRB-1 i sadrže GalNAc3konjugat
[0366] Primarni hepatociti mišje jetre su zasejani u ploče sa 96 bunarića u gustini od 15,000 ćelija/bunariću, 2 sata pre tretmana. Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 63 su dodati u koncentraciji od 2, 10, 50 ili 250 nM u Williams E medijumu i ćelije su inkubirane preko noći na 37°C u 5% CO2. Ćelije su lizirane 16 sati nakon dodavanja oligonukleotida i ukupna RNK je prečišćena upotrebom RNease 3000 BioRobot (Qiagen). Nivoi SRB-1 iRNK su određeni upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR), praćenjem standardnih protokola. Vrednosti IC50su određene upotrebom Prism 4 kompjuterskog programa (GraphPad). Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže razne različite GalNAc konjugatne grupe i mnoštvo različitih struktura podložnih cepanju značajno veće potentnosti u in vitro eksperimentu slobodnog preuzimanja od matičnih oligonukleotida kojima nedostaje GalNAc konjugatna grupa (ISIS 353382 i 666841).
Tabela 63
Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-5aje prikazan u Primeru 49, GalNAc3-6aje prikazan u Primeru 51, GalNAc3-7aje prikazan u Primeru 48, GalNAc3-8aje prikazan u Primeru 47, GalNAc3-9aje prikazan u Primeru 52, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46, GalNAc3-12aje prikazan u Primeru 61, GalNAc3-13aje prikazan u Primeru 62, GalNAc3-14aje prikazan u Primeru 63, GalNAc3-15aje prikazan u Primeru 64, GalNAc3-17aje prikazan u Primeru 68, GalNAc3-18aje prikazan u Primeru 69, GalNAc3-19aje prikazan u Primeru 70, GalNAc3-20aje prikazan u Primeru 71 i GalNAc3-23aje prikazan u Primeru 76.
Primer 83: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na faktor XI koji sadrži GalNAc3klaster
[0367] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 64 ispod su ispitani u studiji dozno-zavisne inhibicije Faktora XI kod miševa.
Tabela 64
Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-7aje prikazan u Primeru 48, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46 i GalNAc3-13aje prikazan u primeru 62.
Tretman
[0368] Šest do osam nedelјa stari miševi su subkutano injecirani, jednom nedeljno, dozama koje su prikazane u nastavku teksta, a ukupno sa tri doze, svakog od oligonukleotida navedenog ispod ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje doze. Nivoi iRNK za faktora XI u jetri su određeni upotrebom PCR-a u realnom vremenu i potom normalizovani na ciklofilin, praćenjem standardnih protokola. Takođe su izmerene transaminaze jetre, BUN i bilirubin. Rezultati su predstavlјeni ispod u vidu srednjih vrednosti za svaku tretiranu grupu, normalizovanih u odnosu na PBS kontrolu.
[0369] Kao što je prikazano u Tabeli 65, tretman sa antisens oligonukleotidima je snizio iRNK Faktora XI u jetri na dozno-zavisan način. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat sa većom potentnošću u odnosu na matični oligonukleotid kome nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 404071). Dodatno, oligonukleotidi koji sadrže 5'-GalNAc konjugat (ISIS 663086, 678347, 678348 i 678349) su čak bili veće potentnosti od oligonukleotida koji sadrži 3'-GalNAc konjugat (ISIS 656173).
Tabela 65
Primer 84: In vivo trajanje dejstva oligonukleotida koji cilјano deluju na faktor XI koji sadrži GalNAc3konjugat
[0370] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 64 su ispitani u studiji trajanje dejstva kod miševa nakon jednokratne doze.
Tretman
[0371] Šest do osam nedelјa stari miševi su jednokratno subkutano injecirani sa svakim od oligonukleotida navedenim u Tabeli 64 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Krv je uzorkovana krvarenjem iz repa, jedan dan pre primene doze da bi se utvrdio bazalni nivo, kao i 3, 10 i 17 dana nakon primene doze. Nivoi proteina faktora XI u plazmi su izmereni upotrebom ELISA testa za Faktor XI sa specifičnim i biotiniziranim antitelom za detekciju firme R&D Systems, Minneapolis, MN (kataloški br. AF2460 i BAF2460, tim redom) i OptEIA Reagent Set B (kataloški br.
550534, BD Biosciences, San Jose, CA). Rezultati ispod su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa proteina faktora XI u plazmi za svaku tretiranu grupu, normalizovanog na bazalne nivoe. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat veće potentnosti sa dužim trajanjem dejstva od onih kojima nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 404071). Dodatno, oligonukleotidi koji sadrže 5'-GalNAc konjugat (ISIS 663086, 678347, 678348 i 678349) su bili još veće potentnosti sa još dužim trajanjem dejstva od oligonukleotida koji sadrži 3'-GalNAc konjugat (ISIS 656173).
Tabela 66
Primer 85: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na SRB-1 i sadrži GalNAc3konjugat
[0372] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 63 su ispitani u studiji antisensne inhibicije SRB-1 u zavisnosti od doze kod miševa.
Tretman
[0373] Šest do osam nedelјa stari C57BL/6 miševi su subkutano injecirani, jednom nedelјno, svakom od doza koje su prikazane ispod, a ukupno sa tri doze oligonukleotida navedenih u Tabeli 63 ili sa fiziološkim rastvorom. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 48 sati nakon poslednje primene doze da bi se odredili nivoi SRB-1 iRNK, upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR), praćenjem standardnih protokola. Rezultati ispod su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa SRB-1 iRNK u jetri za svaku tretiranu grupu, normalizovanog na kontrolu tretiranu fiziološkim rastvorom.
[0374] Kao što je ilustrovano u tabelama 67 i 68, tretman antisens oligonukleotidima je snizio nivoe SRB-1 iRNK na dozno-zavisan način.
Tabela 67
Tabela 68
[0375] Nivoi transaminaza u jetri, ukupan bilirubin, BUN i telesne težine su takođe izmereni upotrebom standardnih protokola. Srednje vrednosti za svaku tretiranu grupu su prikazane u Tabeli 69 ispod.
Tabela 69
Primer 86: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na TTR i sadrže GalNAc3klaster
[0376] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 70 ispod su ispitani u studiji antisensne inhibicije humanog transtiretina (TTR) u zavisnosti od doze u transgenim miševima koji eksprimiraju humani TTR gen.
Tretman
[0377] Osam nedelja starim TTR transgenim miševima je subkutano injecirano, jednom nedeljno, tokom tri nedelje, ukupno tri doze svakog od oligonukleotida u dozama navedenim u Tabelama ispod ili PBS-a. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene. Krvarenje repa je rađeno u različitim vremenskim tačkama tokom eksperimenta, a nivoi TTR proteina, ALT i AST u plazmi su određeni i prikazani u tabelama 72-74. Nakon što su životinje žrtvovane, izmereni su nivoi ALT, AST i humanog TTR u plazmi, kao i telesne težine, težine organa i nivoi TTR iRNK u jetri. Nivoi TTR proteina su izmereni upotrebom kliničkog analizatora (AU480, Beckman Coulter, CA). PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacioni reagens (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) su upotrebljeni u skladu sa standardnim protokolima za određivanje nivoa humane TTR iRNK u jetri. Rezultati su prikazani u tabelama 71-74 u vidu srednjih vrednosti za svaku tretiranu grupu. Nivoi iRNK su srednje vrednosti u odnosu na srednju vrednost za PBS grupu. Nivoi proteina u plazmi su srednje vrednosti u odnosu na srednju vrednost dobijenu kao bazalni nivou za grupu tretiranu PBS-om. Telesne težine su srednje vrednosti promena u težini u odnosu početnu težinu do do žrtvovanja za svaku pojedinačnu grupu tretmana. Prikazane težine organa su normalizovane na telesnu težinu životinje, a prosečna normalizovana težina organa za svaku tretiranu grupu je zatim predstavlјena u odnosu na prosečnu normalizovanu težinu organa u PBS grupi.
[0378] U tabelama 71-74, "BL" označava bazalni nivo, merenja koja su uzeta neposredno pre primene prve doze. Kao što je ilustrovano u Tabelama 71 i 72, tretman sa antisens oligonukleotidima je snizio nivoe ekspresije TTR na dozno-zavisan način. Oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat su bili veće potentnosti od matičnog nukleotida kome nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 420915). Dodatno, oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat i mešane PS/PO internukleozidne veze su čak bili veće potentnosti od oligonukleotida koji sadrži GalNAc konjugat i isključivo PS veze.
Tabela 70
[0379] Legenda za Tabelu 72 se može naći u Primeru 74. Struktura GalNAcs-1 je prikazana u Primeru 9. Struktura GalNAc3-3aje prikazana u Primeru 39. Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48. Struktura GalNAc3-10aje prikazana u Primeru 46. Struktura GalNAc3-13aje prikazana u Primeru 62. Struktura GalNAc3-19aje prikazana u Primeru 70.
Tabela 71
Tabela 72
Tabela 73
Tabela 74
Primer 88: In vivo modulacija obrade oligonukleotidima koji cilјano deluju na SMN i sadrže GalNAc3 konjugat
[0380] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 77 su ispitani na modulaciju obrade humanog proteina preživlјavanja motornih neurona (SMN) kod miševa.
Tabela 77
Modifikovani ASO koji ciljano
Struktura GalNAc3-7aje prikazana prethodno u Primeru 48. "X" označava 5’ primarni amin proizveden od strane firme Gene Tools (Philomath, OR), a GalNAc3-7boznačava strukturu GalNAc3-7akojoj nedostaje -NH-C6-O deo linkera kao što je prikazano ispod:
ISIS brojevi 703421 i 703422 su morfolino oligonukleotidi, pri čemu je svaki nukleotid od dva oligonukleotida morfolino nukleotid.
Tretman
[0381] Šest nedelјa stari transgeni miševi koji eksprimiraju humani SMN su jednokratno subkutano injecirani oligonukleotidom navedenim u Tabeli 78 ili sa fiziološkim rastvorom. Svaka tretirana grupa se sastojala od 2 mužjaka i 2 ženke. Miševi su žrtvovani 3 dana nakon primene doze da bi se odredili nivoi humane SMN iRNK u jetri, bilo sa ili bez egzona 7, upotrebom PCR-a u realnom vremenu, standardnim protokolima. Ukupna RNK je izmerena upotrebom Ribogreen reagensa. Nivoi SMN iRNK su normalizovani na ukupnu iRNK i dalјe su normalizovani na srednje vrednosti grupe tretirane fiziološkim rastvorom. Dobijene srednje vrednosti odnosa SMN iRNK koja sadrži egzon 7 sa SMN iRNK kojoj nedostaje egzon 7, prikazani su u Tabeli 78. Rezultati pokazuju da je potpuno modifikovani oligonukleotidi koji moduliše obradu i sadrži GalNAc konjugat značajno veće potentnosti u izmeni obrade u jetri od matičnog jedinjenja kome nedostaje GlaNAc konjugat. Dodatno, ovaj trend se održava za višestruke hemijske modifikacije, uklјučujući 2'-MOE i morfolino modifikovane oligonukleotide.
Tabela 78
Primer 89: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na Apolipoprotein A (Apo(a)) i sadrže GalNAc3konjugat
[0382] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 79 ispod su ispitani u studiji dozno-zavisne inhibicije Apo(a) kod transgenih miševa.
Tabela 79
[0383] Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Tretman
[0384] Osam nedelјa stare ženke C57BL/6 miševa (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) su jedan put nedelјno subkutano injecirane u dozama koje su prikazane ispod, a ukupno sa 6 doza, sa svakim od oligonukleotida navedenih u Tabeli 79 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 3-4 životinje. Krvarenje iz repa je rađeno jedan dan pre primene prve doze i nedelјno nakon svake primene doze da bi se odredio nivo Apo(a) proteina u plazmi. Miševi su žrtvovani dva dana nakon poslednje primene. Nivoi Apo(a) iRNK u jetri su određeni upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR), praćenjem standardnih protokola.
Nivo proteina Apo(a) u plazmi je određen upotrebom ELISA testa, a određeni su i nivoi transaminaza u jetri. Rezultati za iRNK i protein u plazmi, u Tabeli 80, prikazani su kao srednja vrednost procenta tretirane grupe u odnosu na grupu tretiranu PBS-om. Nivoi proteina u plazmi su dalјe normalizovani na bazalnu vrednost (BL) PBS grupe. Prosečni apsolutni nivoi transaminaza i telesne težine (% u odnosu na bazalne vrednosti) su prikazani u Tabeli 81.
[0385] Kao što je prikazano u Tabeli 80, tretman oligonukleotidima je snizio nivoe iRNK Apo(a) u jetri i proteina u plazmi na dozno-zavisan način. Štaviše, oligonukleotid koji sadrži GalNAc konjugat je bio značajno veće potentnosti i sa dužim trajanjem dejstva u odnosu na matičan oligonukleotid kome nedostaje GalNAc konjugat. Kao što je ilustrovano u tabeli 81, nivoi transaminaza i telesne težine nisu bili izmenjeni dejstvom oligonukleotida, što ukazuje da su oligonukleotidi bili dobro tolerisani.
Tabela 80
Tabela 81
Primer 90: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na TTR i sadrže GalNAc3klaster
[0386] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 82 ispod su ispitani u dozno-zavisnoj studiji antisensne inhibicije humanog transtiretina (TTR) u transgenim miševima koji eksprimiraju humani TTR gen.
Tretman
[0387] TTR transgeni miševi su subkutano injecirani, jedan put nedelјno tokom tri nedelјe, u ukupno tri doze, sa svakim od oligonukleotida i u dozama navedenim u Tabeli 83 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Pre prve doze, izazivano je krvarenje iz repa da bi se odredili nivoi TTR proteina u plazmi na bazalnom nivou (BL). Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene. Nivoi TTR proteina su izmereni upotrebom kliničkog analizatora (AU480, Beckman Coulter, CA). PCR u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacioni reagens (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR) su korišćeni u skladu sa standardnim protokolima za određivanje nivoa iRNK humanog TTR u jetri. Rezultati prikazani u Tabeli 83 su srednje vrednosti za svaku tretiranu grupu. Nivoi iRNK su srednje vrednosti u odnosu na srednje vrednosti za PBS grupu. Nivoi proteina u plazmi su srednje vrednosti u odnosu na srednju vrednost kod PBS grupe na početku. "BL" označava bazalnu vrednost, merenja koja su rađenja neposredno pre prve doze. Kao što je ilustrovano u Tabeli 83, tretman antisens oligonukleotidima je snizio nivoe ekspresije TTR na dozno-zavisan način. Oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat su bili veće potentnosti od matičnog oligonukleotida kome nedostaje GalNAc konjugat (ISIS 420915), dok su oligonukleotidi koji sadrže fosfodiestarsku ili dezoksiadenozinsku strukturu podložnu cepanju pokazali značajna pobolјšanja u potentnosti u odnosu na matičan oligonukleod kome nedostaje konjugat (pogledati ISIS brojeve 682883 i 666943 nasuprot 420915 i pogledati primere 86 i 87).
Tabela 82
Legenda za Tabelu 82 se može naći u Primeru 74. Struktura GalNAc3-3aje prikazana u Primeru 39. Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48. Struktura GalNAc3-10aje prikazana u Primeru 46. Struktura GalNAc3-13aje prikazana u Primeru 62.
Tabela 83
Primer 92: Antisensna inhibicija u primarnim hepatocitima, antisens oligonukleotidima koji cilјano deluju na Apo-CIII i sadrže GalNAc3konjugat
[0388] Primarni mišji hepatociti su zasejani u pločama sa 96 bunarića u gustini od 15,000 ćelija po bunariću, a oligonukleotidi navedeni u Tabeli 86 sa ciljanim dejstvom na mišji ApoC-III su dodati u koncentracijoma od 0,46, 1,37, 4,12 ili 12,35, 37,04, 111,11 ili 333,33 nM ili 1,00 µM. Nakon inkubacije sa oligonukleotidima tokom 24 sata, ćelije su lizirane i ukupna RNK je prečišćena upotrebom RNeasy reagensa (Qiagen). Nivoi ApoC-III iRNK su određeni upotrebom PCR-a u realnom vremenu i RIBOGREEN® RNK kvantifikacionog reagensa (Molecular Probes, Inc.), standardnim protokolima. Vrednosti IC50su određene upotrebom Prism 4 kompjuterskog programa (GraphPad). Rezultati pokazuju da bez obzira da li je struktura podložna cepanju bila tipa fosfodiestra ili fosfodiestarski vezanog deziksiadenozina, oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat su značajno veće potentnosti od matičnog oligonukleotida kome nedostaje konjugat.
Tabela 86
Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9, GalNAc3-3aje prikazan u Primeru 39, GalNAc3-7aje prikazan u Primeru 48, GalNAc3-10aje prikazan u Primeru 46, GalNAc3-13aje prikazan u Primeru 62 i GalNAc3-19aje prikazan u Primeru 70.
Primer 93: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na SRB-1 i sadrže mešavinu “krila” i 5'-GalNAc3konjugat
[0389] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 87 su ispitani u studiji antisensne inhibicije SRB-1 u zavisnosti od doze kod miševa.
Tabela 87
Struktura GalNAc3-3a je prikazana prethodno u Primeru 39 i struktura GalNAc3-7a je prikazana prethodno u Primeru 48. Indeksi: "e" označava nukleozid modifikovan sa 2’-MOE; "d" označava β-D-2'-dezoksiribonukleozid; "k" označava 6'-(S)-CH3bicikličan nukleozid (cEt); "s" označava fosforotioatne internukleozidne veze (PS); "o" označava fosfodiestarske internukleozidne veze (PO). Eksponent "m" označava 5-metilcitozine.
Tretman
[0390] Šest do osam nedelјa stari C57BL/6 miševi (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) su jednokratno subkutano injecirani u dozi koja je prikazana ispod, sa oligonukleotidom navedenim u Tabeli 87 ili sa fiziološkim rastvorom. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Miševi su žrtvovani 72 sata nakon poslednje primene doze. Nivoi SRB-1 iRNK u jetri su određeni upotrebom PCR-a u realnom vremenu. Nivoi SRB-1 iRNK su normalizovani na nivoe iRNK ciklofilina, standardnim protokolima. Rezultati su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa SRB-1 iRNK za svaku tretiranu grupu u odnosu na kontrolnu grupu tretiranu fiziološkim rastvorom. Kao što je ilustrovano u Tabeli 88, tretman sa antisens oligonukleotidima je snizio nivoe SRB-1 iRNK na dozno-zavisan način, a gapmer oligonukleotidi koji su sadržavali GalNAc konjugat i bili sa strukturama “krila” koja su bila ili u potpunosti cEt ili u mešavine modifikacija šećera, bili su značajno veće potentnosti od matičnog oligonukleotida kome nedostaje konjugat i koji sadrži samo strukture “krila” modifikovane sa cEt.
[0391] Određene su i telesne težine, transaminaze jetre, ukupni bilirubin i BUN, a srednje vrednosti za svaku tretiranu grupu su prikazane u Tabeli 88. Telesna težina je prikazana kao srednja vrednost procenta telesne težine u odnosu na bazalnu telesnu težinu (% BL) izmerenu neposredno pre primene doze oligonukleotida.
Tabela 88
Primer 94: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na SRB-1 i sadrže 2'-modifikacije šećera i 5'-GalNAc3konjugat
[0392] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 89 su ispitani u dozno-zavisnoj studiji antisensne inhibicije SRB-1 kod miševa.
Tabela 89
Indeks "m" označava 2'-O-metil modifikovani nukleozid. Pogledati primer 74 za kompletnu legendu tabele. Struktura GalNAc3-3aje prikazana prethodno u Primeru 39 i struktura GalNAc3-7a je prikazana prethodno u Primeru 48.
Tretman
[0393] Studija je završena upotrebom protokola opisanog u Primeru 93. Rezultati su prikazani u Tabeli 90 ispod i pokazuju da su oligonukleotidi modifikovani i sa 2'-MOE i sa 2'-OMe koji sadrže GalNAc konjugat bili značajno veće potentnosti u odnosu na odgovarajuće matične oligonukleotide kojima nedostaje konjugat. Rezultati merenja telesnih težina, transaminaza jetre, ukupnog bilirubina i BUN su pokazali da su sva jedinjenja dobro podnošena.
Tabela 90
Primer 95: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji cilјano deluju na SRB-1 i sadrže biciklične nukleozide i 5'-GalNAc3konjugat
[0394] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 91 su ispitani u dozno-zavisnoj studiji antisensne inhibicije SRB-1 kod miševa.
Tabela 91
Indeks "g" označava fluoro-HNA nukleozid, indeks "1" označava zaklјučani nukleozid koji sadrži 2'-O-CH2-4’ hemijski most. Pogledati legendu tabele u Primeru 74 za druge skraćenice. Struktura GalNAc3-1aje prikazana prethodno u Primeru 9, struktura GalNAc3-3aje prikazana prethodno u Primeru 39, a struktura GalNAc3-7a je prikazana prethodno u Primeru 48.
Tretman
[0395] Studija je završena upotrebom protokola opisanog u Primeru 93. Rezultati su prikazani u Tabeli 92 ispod i pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugat i različite biciklične nukleozidne modifikacije bili značajno veće potentnosti od matičnog oligonukleotida kome nedostaje konjugat i koji su sadržavali biciklične modifikacije nukleozida. Pored toga, oligonukleotid koji sadrži GalNAc konjugat i fluoro-HNA modifikacije je bio značajno veće potentnosti od matičnog oligonukleotida kome nedostaje konjugat i koji je sadržavao fluoro-HNA modifikacije. Rezultati merenja telesnih težina, transaminaza jetre, ukupnog bilirubina i BUN su pokazali da su sva jedinjenja dobro podnošena.
Tabela 92
Primer 96: Vezivanje antisens oligonukleotida koji sadrži GalNAc3konjugatnu grupu za proteine plazme
[0396] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 57 koji cilјano deluju na ApoC-III i oligonukleotidi iz Tabele 93 koji cilјano deluju na Apo(a), ispitani su u ultra-filtracionom testu da bi se procenilo vezivanje za proteine plazme.
Tabela 93
Pogledati primer 74 za legendu tabele. Struktura GalNAc3-7a je prikazana prethodno u Primeru 48.
[0397] Filteri za ultrafiltraciju tipa Ultrafree-MC (30,000 NMWL, regenerisana celuloza niskog vezivanja, Millipore, Bedford, MA) su najpre kondicionirani sa 300 µL 0,5% Tween 80 i centrifugiranjem na 2000 g tokom 10 minuta, a zatim sa 300 µL rastvora kontrolnog oligonukleotida u H2O, koncentracije 300 µg/mLm i centrifugiranjem na 2000 g tokom 16 minuta. Da bi se odredilo nespecifično vezivanje za filtere svakog ispitivanog oligonukleotida iz Tabela 57 i 93 koji će biti upotrebljeni u studijama, po 300 µL rastvora oligonukleotida u H2O, na pH 7,4, koncentracije 250 ng/mL, je naneto na prekondicionirane filtere i isti su centrifugirani na 2000 g tokom 16 minuta. Nefiltrirani i filtrirani uzorci su analizirani ELISA testom da bi se odredile koncentracije oligonukleotida. Tri replikata su upotrebljena da se dobiju srednje koncentracije za svaki uzorak. Prosečna koncentracija filtriranog uzorka u odnosu na nefiltrirani uzorak je upotrebljena za određivanje procenta oligonukleotida koji je prošao kroz filter u odsustvu plazme (% regeneracije).
[0398] Zamrznuti uzorci ukupne plazme, prikuplјeni u K3-EDTA, od normalnih, humanih dobrovolјaca koji nisu pod lekovima, cinomolgus majmuna i CD-1 miševa, nabavljene su od firme Bioreclamation LLC (Westbury, NY). Ispitivani oligonukleotidi su dodati u alikvote od 1,2 mL plazme u dve koncentracije (5 i 150 µg/mL). Alikvot (300 µL) svakog obogaćenog (spajkovanog) uzorka plazme je stavlјen u prethodno pripremlјenu filtersku jedinicu i inkubiran na 37°C u trajanju od 30 minuta, odmah nakon čega je usledilo centrifugovanje na 2000 g tokom 16 minuta. Alikvoti filtriranih i nefiltriranih spajkovanih uzoraka plazme su analizirani ELISA testom da bi se odredila koncentracija oligonukleotida u svakom uzorku. Tri replikata po koncentraciji su upotrebljena za određivanje srednje vrednosti procenta vezanog i nevezanog oligonukleotida u svakom uzorku. Prosečna koncentracija filtriranog uzorka u odnosu na koncentraciju nefiltriranog uzorka je upotrebljena za određivanje procenta oligonukleotida u plazmi koji nije vezan za proteine plazme (% nevezanog). Konačne vrednosti nevezanog oligonukleotida su korigovane za nespecifično vezivanje delјenjem % nevezanog sa % regenerisanog, za svaki oligonukleotid. Konačne vrednosti vezanih oligonukleotida u % su određene oduzimanjem konačnih vrednosti % nevezanog oligonukleotida od 100. Rezultati su prikazani u Tabeli 94, za dve ispitivane koncentracije oligonukleotida (5 i 150 ug/mL) u svakom uzorku plazme. Rezultati pokazuju da GalNAc konjugatne grupe nemaju značajan uticaj na vezivanje proteina plazme. Štaviše, i oligonukleotidi sa isključivo PS internukleozidnim vezama i mešovitim PO/PS vezama, vezuju proteine plazme, dok oni sa isključivo PS vezama vezuju proteine plazme u nešto većoj meri od onih sa mešovitim PO/PS vezama.
Tabela 94
Primer 98: Utvrđivanje proinflamatornih efekata oligonukleotida koji sadrže GalNAc konjugat, hPMBC analizom
[0399] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 96 su ispitani za proinflamatorne efekte u hPMBC testu kao što je opisano u Primerima 23 i 24. (Pogledati Tabele 17, 70, 82 i 95 za opise oligonukleotida.) ISIS 353512 je sa visokom reaktivnošću i upotrebljen je kao pozitivna kontrola, dok su ostali oligonukleotidi opisani u Tabelama 70, 82 i 95. Rezultati prikazani u Tabeli 96 su dobijeni upotrebom krvi jednog dobrovolјnog donora. Rezultati pokazuju da oligonukleotidi koji sadrže mešane PO/PS internukleozidne veze proizvode značajno niže proinflamatorne odgovore u poređenju sa istim oligonukleotidima koji su isključivo sa PS vezama. Štaviše, GalNAc konjugovana grupa nije imala značajan efekat u ovom testu.
Tabela 96
Primer 99: Afiniteti vezivanja oligonukleotida koji sadrže GalNAc konjugat za asijaloglikoproteinski receptor
[0400] Afiniteti vezivanja oligonukleotida navedenih u tabeli 97 (pogledati tabelu 63 za opise oligonukleotida) za asijaloglikoproteinski receptor su ispitani u testu kompetitivnog vezivanja receptora. Konkurentni ligand, α1-kiseli glikoprotein (AGP), inkubiran je u 50 mM natrijum-acetatnom puferu (pH 5) sa 1 U neuraminidaza-agaroze tokom 16 sati na 37°C, a desijalilacija > 90% je potvrđena bilo sijaličnom kiselinom ili ekskluzionom hromatografijom (SEC). Jod monoklorid je upotrebljen za jodiranje AGP u skladu sa procedurom prijavljenom od stane Atsma i saradnika (pogledati J Lipid Res.
1991 Jan; 32(1):173-81). U ovom postupku, desijalilizovan α1-kiseli glikoprotein (de-AGP) je dodat u 10 mM jod hlorid, Na<125>J i 1 M glicin u 0,25 M NaOH. Nakon 10 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, de-AGP obeležen sa<125>J je razdvojen od slobodnog<125>J koncentrovanjem smeše dva puta, upotrebom 3 KDMWCO kolone za centrifugiranje. Protein je ispitan na efikasnost obeležavanja i čistoću upotrebom HPLC sistema opremlјenog Agilent SEC-3 kolonom (7,8x300mm) i β-RAM brojačem. Eksperimenti kompeticije upotrebom de-AGP obeleženog sa<125>J i različitih ASO koji su sadržavali GalNAc klastere su izvedeni na način koji sledi. Humane HepG2 ćelije (10<6>ćelija/ml) su zasejane na ploče sa 6 bunarića, u 2 ml odgovarajućeg medijuma za rast. Upotreblјen je MEM medijum sa 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 2 mM L-glutamina i 10 mM HEPES-a. Ćelije su inkubirane 16-20 sati na 37°C sa 5% i 10% CO2redom. Ćelije su isprane medijumom bez FBS-a pre eksperimenta. Ćelije su dalje inkubirane tokom 30 min na 37°C sa 1 ml kompetitivne smeše koja je sadržavala odgovarajući medijum za rast sa 2% FBS-om, 10<-8>M de-AGP obeležen sa<125>J i ASO koji su sadržavala GalNAc klastere u koncentracijama u rasponu od 10<-11>do 10<-5>M. Nespecifično vezivanje je određeno u prisustvu 10<-2>M GalNAc šećera. Ćelije su dva puta isprane medijumom bez FBS da bi se uklonio nevezani de-AGP obeležen sa<125>J i kompetirajući GalNAc ASO. Ćelije su lizirane upotrebom RLT pufera firme Qiagen koji je sadržavao 1% β-merkaptoetanola. Lizati su nakon kratkog ciklusa smrzavanja/odmrzavanja od 10 minuta, prebačeni u epruvete za analizu sa okruglim dnom i analizirani na γ-brojaču. Nespecifično vezivanje je oduzeto od dobijenih vrednosti, pre podele intenziteta dobijenog za protein obeležen sa<125>J sa vrednošću intenziteta signala dobijenog za najnižu koncentraciju GalNAc-ASO. Krive inhibicije su ekstrapolisane u skladu sa jednačinom za kompetitivno veivanje za jedno mesto, upotrebom algoritma nelinearne regresije, da bi se izračunli afiniteti vezivanja (KD).
[0401] Rezultati u Tabeli 97 su dobijeni iz eksperimenata urađenih u pet različitih dana. Rezultati za oligonukleotide obeleženi eksponentom "a" predstavljaju srednju vrednost eksperimenata urađenih u dva različita dana. Rezultati pokazuju da oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu na 5'-kraju vezuju asijaloglikoproteinski receptor na humanim HepG2 ćelijama sa 1,5 do 16 puta većim afinitetom od oligonukleotida koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu na 3'-kraju.
Tabela 97
Primer 100: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu koja cilјano deluje na Apo(a) in vivo
[0402] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 98a ispod su ispitani u studiji trajanje dejstva nakon jednokratne primene doze kod miševa.
Tabela 98a
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Tretman
[0403] Ženke transgenih miševa koji eksprimiraju humani Apo(a) su subkutano injecirane, jedan put nedljeno, a ukupno u 6 doza, sa svakim od oligonukleotida, u dozama navedenim u Tabeli 98b, ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 3 životinje. Krv je uzorkovana jedan dan pre primene doze da bi se odredili bazalni nivoi Apo(a) proteina u plazmi, kao i 72 sata, 1 nedelјu i 2 nedelјe nakon primene prve doze. Dodatna uzorkovanja krvi su rađena 3 nedelјe, 4 nedelјe, 5 nedelјa i 6 nedelјa nakon primene prve doze. Nivoi Apo(a) proteina u plazmi su izmereni upotrebom ELISA testa. Rezultati u Tabeli 98b su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa Apo(a) u plazmi za svaku tretiranu grupu, normalizovanog na bazalne nivoe (% BL). Rezultati pokazuju da oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu ispoljavaju snažnu redukciju Apo(a) ekspresije. Ovakav snažan efekat je primećen za oligonukleotid koji sadrži isključivo PS internukleozidne veze i oligonukleotid koji sadrži mešovite PO i PS veze.
Tabela 98b
Primer 101: Antisensna inhibicija oligonukleotidima koji sadrže GalNAc klaster povezan preko stabilne grupe
[0404] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 99 su ispitani na inhibiciju ekspresije mišjeg APOC-III in vivo. C57B1/6 miševi su jednokratno subkutano injecirani sa svakim do oligonukleotida navedenih u Tabeli 99 ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Svaki miš tretiran sa ISIS 440670 je primio dozu od 2, 6, 20 ili 60 mg/kg. Svaki miš tretiran sa ISIS 680772 ili 696847 je primio 0,6, 2, 6 ili 20 mg/kg. GalNAc konjugatna grupa ISIS 696847 je povezana preko stabilne grupe, fosforotioatnom vezom umesto preko lako raskidive veze koja sadrži fofodiestar. Životinje su žrtvovane 72 sata nakon primene doze. Nivoi APOC-III iRNK u jetri su izmereni upotrebom PCR-a u realnom vremenu. Nivoi APOC-III iRNK su normalizovani na nivoe iRNK ciklofilina prema standardnim protokolima. Rezultati su prikazani u Tabeli 99 kao srednja vrednost procenta nivoa APOC-III iRNK za svaku tretiranu grupu u odnosu na kontrolnu grupu tretiranu fiziološkim rastvorom. Rezultati pokazuju da su oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu značajno veće potentnosti od oligonukleotida kojima nedostaje konjugatna grupa. Dodatno, oligonukleotid koji sadrži GalNAc konjugatnu grupu vezanu za oligonukleotid preko raskidive grupe (ISIS 680772) je čak bio veće potentnosti od oligonukleotida koji sadrži GalNAc konjugatnu grupu vezanu za oligonukleotid preko stabilne grupe (ISIS 696847).
Tabela 99
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Primer 108: In vivo antisensna inhibicija oligonukleotidima koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu i cilјano deluju na Apo(a) in vivo
[0405] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 105 ispod su ispitani u studiji efekata jednokratne doze kod miševa.
Tabela 105
Struktura GalNAc3-7aje prikazana u Primeru 48.
Tretman
[0406] Mužjaci transgenih miševa koji eksprimiraju humani Apo(a) su jednokratno subkutano injecirani oligonukleotidom, u dozama navedenim u Tabeli 106, ili sa PBS-om. Svaka tretirana grupa se sastojala od 4 životinje. Krv je uzorkovana dan pre primene doze da bi se odredili bazalni nivoi Apo(a) proteina u plazmi, kao i 1 nedelјu nakon primene prve doze. Dodatno uzorkovanje krvi će biti rađeno svake nedelje tokom približno 8 nedelјa. Nivoi Apo(a) proteina u plazmi su izmereni upotrebom ELISA testa. Rezultati u Tabeli 106 su predstavlјeni kao srednja vrednost procenta nivoa Apo(a) proteina u plazmi za svaku tretiranu grupu, normalizovanog na bazalne nivoe (% BL). Rezultati pokazuju da antisens oligonukleotidi redukuju ekspresiju Apo(a) proteina. Dodatno, oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu pokazuju još veću potentnost u smanjenju ekspresije Apo(a) od oligonukleotida koji ne sadrži konjugatnu grupu.
Tabela 106
Primer 113: Modifikovani oligonukleotidi koji sadrže GalNAc konjugatnu grupu i cilјano deluju na virus hepatitisa B (HBV)
[0407] Oligonukleotidi navedeni u Tabeli 108 u nastavku, dizajnirani su da cilјano deluju na HBV. U određenim primerima izvođenja, struktura podložna cepanju je fosfodiestarska veza.
Tabela 108

Claims (14)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid i konjugatnu grupu, pri čemu se modifikovani oligonukleotid sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima sekvencu nukleobaza najmanje 85% komplementarnu SEQ ID NO: 1 koja kodira virus hepatitisa B (HBV) i pri čemu konjugatna grupa sadrži:
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje jedan modifikovani šećer, opciono gde a. najmanje jedan modifikovani šećer: i. je biciklični šećer; i/ili ii. sadrži 2’-O-metoksietil, kruti etil ili 4’-(CH2)nO-2’ most, gde je n 1 ili 2; b. najmanje jedan nukleozid sadrži modifikovanu nukleobazu, opciono gde je modifikovana nukleobaza 5-metilcitozin; c. konjugatna grupa je povezana sa modifikovanim oligonukleotidom na: i. 5’ kraju modifikovanog oligonukleotida; ili ii. 3’ kraju modifikovanog oligonukleotida; d. svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je izabrana od fosfodiestarske internukleozidne veze i fosforotioatne internukleozidne veze, opciono gde modifikovani oligonukleotid sadrži: i. najmanje 5 fosfodiestarskih internukleozidnih veza; ili ii. najmanje šest fosforotioatnih internukleozidnih veza; e. modifikovani oligonukleotid je: i. jednolančani; ili ii. dvolančani; f. modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment tipa “krila” koji se sastoji od povezanih nukleozida; 3’ segment tipa “krila” koji se sastoji od povezanih nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila” i pri čemu svaki nukleozid svakog segmenta “krila” sadrži 2'-O-metoksietil-šećer ili kruti etilšećer, gde je svaka internukleozidna veza fosforotioatna veza; i gde je svaki citozin 5-metilcitozin; g. sekvenca nukleobaza modifikovanog oligonukleotida je: i. najmanje 90% komplementarna sa SEQ ID NO: 1; ii. najmanje 95% komplementarna sa SEQ ID NO: 1; ili iii. 100% komplementarna sa SEQ ID NO: 1; h. modifikovani oligonukleotid: i. sadrži sekvencu nukleobaza bilo koje od SEQ ID NO: 3-11; ili ii. se sastoji od povezanih nukleozida koji čine sekvencu nukleobaza bilo koje od SEQ ID NO: 3-11; i. konjugatna grupa sadrži:
    gde struktura podložna cepanju (CM, engl. cleavable moiety) predstavlja vezu ili grupu koja se može razložiti pod fiziološkim uslovima; i/ili j. konjugatna grupa sadrži:
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini SEQ ID NO: 3 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; 3’ segment “krila” koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”, gde svaki nukleozid svakog segmenta “krila” sadrži 2'-O-metoksietil-šećer i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin;
  4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini SEQ ID NO: 4 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od deset povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; 3’ segment “krila” koji se sastoji od pet povezanih nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”, gde svaki nukleozid svakog segmenta “krila” sadrži 2'-O-metoksietil-šećer i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin.
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 20 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini bilo koju od SEQ ID NO: 7, 6 ili 8 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od 10 povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida; i 3’ segment “krila” koji se sastoji od 4 povezana nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”, gde svaki nukleozid svakog segmenta “krila” sadrži 2'-O-metoksietil-šećer i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin.
  6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 17 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini SEQ ID NO: 5 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od 10 povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od 3 povezana nukleozida; i 3’ segment “krila” koji se sastoji od 4 povezana nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”, gde svaki nukleozid svakog segmenta “krila” sadrži 2'-O-metoksietil-šećer i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin.
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 16 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini SEQ ID NO: 10 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od 10 povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od 2 povezana nukleozida; i 3’ segment “krila” koji se sastoji od 4 povezana nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”; gde 2 povezana nukleozida 5’ segmenta “krila” sadrže 2'-O-metoksietil-šećer i kruti etil-šećer u smeru 5’ - 3’; gde 4 povezana nukleozida 3' segmenta “krila” sadrže kruti etil-šećer, 2'-O-metoksietil-šećer, kruti etil-šećer i 2'-O-metoksietil-šećer u smeru 5’ - 3’; i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin.
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 16 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini SEQ ID NO: 9 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od 10 povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od 3 povezana nukleozida; i 3’ segment “krila” koji se sastoji od 3 povezana nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”; gde 3 povezana nukleozida 5’ segmenta “krila” sadrže 2'-O-metoksietil-šećer, kruti etil-šećer i kruti etil-šećer u smeru 5’ - 3’; gde 3 vezana nukleozida 3’ segmenta “krila” sadrže kruti etil-šećer, kruti etil-šećer i 2'-O-metoksietil-šećer u smeru 5’ - 3’; i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin.
  9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se modifikovani oligonukleotid sastoji od 18 povezanih nukleozida sa sekvencom nukleobaza koja čini SEQ ID NO: 11 i gde modifikovani oligonukleotid sadrži: segment “razmaka” koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida; 5’ segment “krila” koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i 3’ segment “krila” koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; pri čemu je segment “razmaka” smešten između 5’ segmenta “krila” i 3' segmenta “krila”; gde 5 vezanih nukleozida 5’ segmenta “krila” sadrži kruti etil-šećer, dezoksi-šećer, kruti etil-šećer, dezoksi-šećer i kruti etil-šećer u smeru 5’ - 3’; pri čemu svaki od 5 povezanih nukleozida 3’ segmenta “krila” sadrži 2'-O-metoksietil-šećer; i gde je svaki ostatak citozina 5-metilcitozin.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 3-9, gde a. svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je fosforotioatna veza; b. svaka internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je izabrana od fosfodiestarske internukleozidne veze i fosforotioatne internukleozidne veze; c. modifikovani oligonukleotid sadrži najmanje 2 fosfodiestarske internukleozidne veze; d. modifikovani oligonukleotid sadrži manje od 14 fosforotioatnih veza, opciono gde modifikovani oligonukleotid sadrži manje od 13 fosforotioatnih veza; ili e. modifikovani oligonukleotid je jednolančani.
  11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje čini formula:
    Ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
  12. 12. Kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11 i farmaceutski prihvatlјiv nosač ili razblaživač.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 12, za upotrebu u lečenju bolesti, poremećaja ili stanja povezanog sa HBV, opciono gde je bolest, poremećaj ili stanje žutica, upala jetre, fibroza jetre, inflamacija, ciroza jetre, otkazivanje jetre, kancer jetre, difuzna hepatocelularna inflamatorna bolest, hemofagocitni sindrom, serumski hepatitis, HBV viremija ili oboljenje jetre povezano sa transplantacijom.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 12, za upotrebu u smanjenju nivoa HBV antigena kod subjekta inficiranog sa HBV, opciono gde je HBV antigen HBsAG ili HBeAG. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20190682A 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulisanje ekspresije hbv i ttr RS58981B1 (sr)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361818442P 2013-05-01 2013-05-01
US201361823826P 2013-05-15 2013-05-15
US201361843887P 2013-07-08 2013-07-08
US201361871673P 2013-08-29 2013-08-29
US201361880790P 2013-09-20 2013-09-20
US201461976991P 2014-04-08 2014-04-08
US201461986867P 2014-04-30 2014-04-30
EP14791344.6A EP2992098B1 (en) 2013-05-01 2014-05-01 Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression
PCT/US2014/036463 WO2014179627A2 (en) 2013-05-01 2014-05-01 Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58981B1 true RS58981B1 (sr) 2019-08-30

Family

ID=51843959

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190682A RS58981B1 (sr) 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulisanje ekspresije hbv i ttr
RS20201052A RS60796B1 (sr) 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a)

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201052A RS60796B1 (sr) 2013-05-01 2014-05-01 Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a)

Country Status (40)

Country Link
US (28) US9127276B2 (sr)
EP (13) EP3546579A1 (sr)
JP (23) JP6769866B2 (sr)
KR (17) KR20160002977A (sr)
CN (13) CN105378085B (sr)
AU (20) AU2014259759B2 (sr)
BR (6) BR112015027322A8 (sr)
CA (5) CA2921518A1 (sr)
CL (2) CL2015003217A1 (sr)
CR (2) CR20190269A (sr)
CY (2) CY1121879T1 (sr)
DK (4) DK2992009T3 (sr)
DO (3) DOP2015000268A (sr)
EA (2) EA036584B1 (sr)
ES (4) ES2885174T3 (sr)
FI (2) FIC20250028I1 (sr)
FR (1) FR25C1033I1 (sr)
HR (2) HRP20201378T1 (sr)
HU (2) HUE043697T2 (sr)
IL (19) IL296543B2 (sr)
LT (2) LT2992009T (sr)
MA (1) MA60161B1 (sr)
ME (1) ME03390B (sr)
MX (12) MX2015015264A (sr)
MY (2) MY198359A (sr)
NL (1) NL301341I2 (sr)
NO (2) NO2025037I1 (sr)
NZ (5) NZ740338A (sr)
PE (2) PE20152002A1 (sr)
PH (3) PH12015502493B1 (sr)
PL (2) PL2992098T3 (sr)
PT (3) PT3524680T (sr)
RS (2) RS58981B1 (sr)
RU (8) RU2019110030A (sr)
SG (5) SG11201508800WA (sr)
SI (2) SI2992009T1 (sr)
SM (1) SMT201900316T1 (sr)
UA (2) UA121017C2 (sr)
WO (5) WO2014179626A2 (sr)
ZA (2) ZA201507216B (sr)

Families Citing this family (516)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2535964C2 (ru) 2008-10-15 2014-12-20 АйЭсАйЭс ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. Модуляция экспрессии фактора 11
JP5645840B2 (ja) 2008-12-02 2014-12-24 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ リン原子修飾核酸の合成方法
EP2451461A4 (en) 2009-07-06 2013-05-29 Ontorii Inc NOVEL NUCLEIC ACID PRODRUGS AND METHOD OF USE THEREOF
US11083444B2 (en) 2010-03-11 2021-08-10 Globus Medical, Inc. Tissue retractor and methods of use
US10428019B2 (en) 2010-09-24 2019-10-01 Wave Life Sciences Ltd. Chiral auxiliaries
AU2011329777B2 (en) 2010-11-17 2016-06-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of alpha synuclein expression
WO2013012758A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Ontorii, Inc. Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
EP3453761A1 (en) * 2011-08-29 2019-03-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
AU2013202595B2 (en) 2012-03-30 2016-04-21 Biogen Ma Inc. Methods for modulating Tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
WO2013159108A2 (en) * 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
ES2820548T3 (es) * 2012-05-24 2021-04-21 Ionis Pharmaceuticals Inc Métodos y composiciones para modular la expresión de la apolipoproteína (a)
RU2693381C2 (ru) 2012-07-13 2019-07-02 Уэйв Лайф Сайенсес Лтд. Асимметричная вспомогательная группа
SG11201500232UA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Wave Life Sciences Pte Ltd Chiral control
SG11201500243WA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Shin Nippon Biomedical Lab Ltd Chiral nucleic acid adjuvant
DK2920307T3 (en) * 2012-11-15 2018-07-16 Roche Innovation Ct Copenhagen As ANTI-APOB, ANTISENSE CONJUGATE RELATIONSHIPS
DK2951305T3 (en) * 2013-01-30 2018-10-29 Hoffmann La Roche LNA oligonucleotide KULHYDRATKONJUGATER
WO2014127268A2 (en) * 2013-02-14 2014-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii (apociii) expression in lipoprotein lipase deficient (lpld) populations
JP6649248B2 (ja) 2013-05-01 2020-02-19 レグルス セラピューティクス インコーポレイテッド 細胞取り込みの向上のための化合物および方法
EP2992095B1 (en) 2013-05-01 2019-01-09 Regulus Therapeutics Inc. Microrna compounds and methods for modulating mir-122
KR20160002977A (ko) 2013-05-01 2016-01-08 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 조성물 및 방법
HUE048738T2 (hu) 2013-06-27 2020-08-28 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antiszensz oligomerek és konjugátumok, amelyek a PCK9-t célozzák meg
CA3177846A1 (en) * 2013-07-11 2015-01-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation
US10077236B2 (en) 2013-07-15 2018-09-18 The Regents Of The University Of California Azacyclic constrained analogs of FTY720
TWI772856B (zh) 2013-07-19 2022-08-01 美商百健Ｍａ公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
WO2015042447A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
EP3052626A1 (en) * 2013-10-02 2016-08-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
US11162096B2 (en) 2013-10-14 2021-11-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc Methods for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript
WO2015061536A1 (en) * 2013-10-25 2015-04-30 Regulus Therapeutics Inc. Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
CN105722980A (zh) * 2013-11-14 2016-06-29 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 Apob反义缀合物化合物
WO2015105083A1 (ja) * 2014-01-07 2015-07-16 塩野義製薬株式会社 アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド
WO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
JPWO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
ES2917473T3 (es) 2014-01-16 2022-07-08 Wave Life Sciences Ltd Diseño quiral
CN118845818A (zh) 2014-02-11 2024-10-29 阿尔尼拉姆医药品有限公司 己酮糖激酶（KHK）iRNA组合物及其使用方法
EP3978610A3 (en) 2014-03-19 2022-08-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating ataxin 2 expression
WO2015143245A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating ataxin 2 expression
SI3126499T1 (sl) 2014-04-01 2020-09-30 Biogen Ma Inc. Sestave za moduliranje izražanja SOD-1
CN110724687B (zh) 2014-05-01 2023-10-13 Ionis制药公司 用于调节补体因子b表达的组合物和方法
JP2017521045A (ja) 2014-05-01 2017-08-03 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． アンジオポエチン様因子３発現を調節するための組成物及び方法
RU2724527C2 (ru) 2014-05-01 2020-06-23 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы модулирования экспрессии рецептора гормона роста
EP3811977B1 (en) * 2014-05-01 2025-12-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
AU2015252917B2 (en) 2014-05-01 2019-09-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating PKK expression
GB201408623D0 (en) * 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
CN112852809A (zh) 2014-05-22 2021-05-28 阿尔尼拉姆医药品有限公司 血管紧张素原(AGT)iRNA组合物及其使用方法
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
TW201613949A (en) 2014-08-07 2016-04-16 Regulus Therapeutics Inc Targeting microRNAs for metabolic disorders
WO2016040748A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for detection of smn protein in a subject and treatment of a subject
KR102620328B1 (ko) 2014-10-03 2024-01-02 콜드스프링하버러보러토리 핵 유전자 산출량의 표적화 증강
BR112017005938A2 (pt) 2014-10-10 2017-12-12 Hoffmann La Roche compostos, processo de preparação de composto, processo de preparação de conjugado de galnac e ácido nucleico e usos de composto
WO2016061487A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotide agents targeting aminolevulinic acid synthase-1 (alas1) and uses thereof
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
JP2017535552A (ja) 2014-11-17 2017-11-30 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
AU2015364508A1 (en) 2014-12-18 2017-07-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. ReversirTM compounds
WO2016112132A1 (en) 2015-01-06 2016-07-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript
US10538763B2 (en) 2015-01-16 2020-01-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of DUX4
CA2976445A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof
JP6826984B2 (ja) 2015-02-15 2021-02-10 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アシル−アミノ−ｌｎａオリゴヌクレオチドおよび／またはヒドロカルビル−アミノ−ｌｎａオリゴヌクレオチド
US11129844B2 (en) 2015-03-03 2021-09-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating MECP2 expression
CA2978100C (en) * 2015-04-03 2023-10-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating tmprss6 expression
WO2016161388A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 University Of Massachusetts Fully stabilized asymmetric sirna
WO2016164746A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
WO2016167780A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript
EP3286310A4 (en) 2015-04-24 2019-01-09 California Institute of Technology REACTIVATION OF X-CHROMOSOME GENES
WO2016205323A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotde agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof
WO2016209862A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof
JP2018519811A (ja) 2015-06-29 2018-07-26 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 修飾ｃｒｉｓｐｒ ｒｎａ及び修飾単一ｃｒｉｓｐｒ ｒｎａならびにその使用
US10494632B2 (en) 2015-07-10 2019-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (IGFALS) compositions and methods of use thereof
US20180312845A1 (en) 2015-07-10 2018-11-01 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2)
JPWO2017010575A1 (ja) * 2015-07-16 2018-04-26 協和発酵キリン株式会社 β２ＧＰＩ遺伝子発現抑制核酸複合体
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
CN107709342B (zh) 2015-08-06 2021-09-03 豪夫迈·罗氏有限公司 制备乙酰半乳糖胺酸衍生物的方法
WO2017030973A1 (en) 2015-08-14 2017-02-23 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
CN105111118B (zh) * 2015-08-14 2017-04-12 天津小新医药科技有限公司 L‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂、制备方法及其用途
CN105111119B (zh) * 2015-08-14 2017-04-12 天津小新医药科技有限公司 一类卤代苯l‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂及其用途
EP3341479B1 (en) 2015-08-24 2019-12-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Lna-g process
CN114525280A (zh) 2015-09-02 2022-05-24 阿尔尼拉姆医药品有限公司 程序性细胞死亡1配体1（PD-L1）的iRNA组合物及其使用方法
MX394367B (es) 2015-09-24 2025-03-24 Univ California Moléculas tipo esfingolípidos sintéticas, fármacos, métodos de su síntesis y usos de los mismos.
KR20180051626A (ko) 2015-09-24 2018-05-16 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Kras 발현의 조절제
US20210052631A1 (en) * 2015-09-25 2021-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
WO2017053781A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating ataxin 3 expression
US11116843B2 (en) 2015-09-25 2021-09-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
WO2017053720A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Tarveda Therapeutics, Inc. RNAi CONJUGATES, PARTICLES AND FORMULATIONS THEREOF
JOP20210043A1 (ar) * 2015-10-01 2017-06-16 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
CN108136041B (zh) 2015-10-02 2022-12-30 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 寡核苷酸缀合方法
IL295971A (en) 2015-10-08 2022-10-01 Ionis Pharmaceuticals Inc Compounds and methods for modulating the expression of angiotensinogen
AU2016334804B2 (en) 2015-10-09 2022-03-31 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
WO2017067970A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S In vitro toxicity screening assay
WO2017068087A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide detection method
CA2999341A1 (en) * 2015-11-06 2017-05-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression
US20190046555A1 (en) 2015-11-06 2019-02-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
BR112018003910B1 (pt) * 2015-11-16 2022-03-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Derivado de fosforamidita galnac, processo para a preparação de um derivado de fosforamidita galnac de fórmula i e uso dos derivados de fosforamidita galnac de fórmula i
US11058709B1 (en) 2015-12-04 2021-07-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating breast cancer
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
CA3005256A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of autosomal dominant mental retardation-5 and dravet syndrome
WO2017117496A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing ataxin-2 expression
EP3400300A4 (en) 2016-01-05 2019-08-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. PROCESS FOR REDUCING LRRK2 EXPRESSION
AU2017207341A1 (en) 2016-01-12 2018-08-02 Interleukin Genetics, Inc. Methods for predicting response to treatment
US11530409B2 (en) 2016-01-26 2022-12-20 Nissan Chemical Corporation Single-stranded oligonucleotide
ES2858090T3 (es) 2016-01-29 2021-09-29 Kyowa Kirin Co Ltd Complejo de ácidos nucleicos
EP3408391A4 (en) 2016-01-31 2019-08-28 University of Massachusetts BRANCHED OLIGONUCLEOTIDES
CN109069529B (zh) 2016-03-07 2021-08-20 箭头药业股份有限公司 用于治疗性化合物的靶向配体
AU2017229778A1 (en) 2016-03-09 2018-08-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhibiting PMP22 expression
CN108779465B (zh) 2016-03-14 2022-05-13 豪夫迈·罗氏有限公司 用于减少pd-l1表达的寡核苷酸
US10577607B2 (en) 2016-03-16 2020-03-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of DYRK1B expression
US10961271B2 (en) 2016-03-16 2021-03-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods of modulating KEAP1
EP3228326A1 (en) 2016-04-05 2017-10-11 Silence Therapeutics GmbH Nucleic acid linked to a trivalent glycoconjugate
MA45478A (fr) * 2016-04-11 2019-02-20 Arbutus Biopharma Corp Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés
ES2933435T3 (es) 2016-04-13 2023-02-08 Ionis Pharmaceuticals Inc Métodos para reducir la expresión de C9ORF72
EP3442983A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag TRITYL-MONO-Ga1NAc COMPOUNDS AND THEIR USE
MA45295A (fr) 2016-04-19 2019-02-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser
US11390867B2 (en) 2016-04-29 2022-07-19 Nanyang Technological University G-quadruplex-containing antisense oligonucleotides
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
WO2017192820A1 (en) 2016-05-06 2017-11-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Glp-1 receptor ligand moiety conjugated oligonucleotides and uses thereof
WO2017216340A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 F. Hoffmann-La Roche Ag In vitro nephrotoxicity screening assay
AU2017286811A1 (en) 2016-06-17 2018-11-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of gys1 expression
CN109312403B (zh) 2016-06-17 2023-06-27 豪夫迈·罗氏有限公司 体外肾毒性筛选测定法
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
KR102418185B1 (ko) 2016-06-22 2022-07-06 프로큐알 테라퓨틱스 Ⅱ 비.브이. 단일 가닥 rna-편집 올리고뉴클레오타이드
ES2952757T3 (es) 2016-06-30 2023-11-03 Kyowa Kirin Co Ltd Complejo de ácidos nucleicos
US11253601B2 (en) 2016-07-11 2022-02-22 Translate Bio Ma, Inc. Nucleic acid conjugates and uses thereof
HUE060831T2 (hu) 2016-07-15 2023-04-28 Ionis Pharmaceuticals Inc Vegyületek és eljárások SMN2 modulálására
US10781175B2 (en) 2016-07-15 2020-09-22 Am Chemicals Llc Solid supports and phosphoramidite building blocks for oligonucleotide conjugates
EP3496758A4 (en) 2016-08-12 2020-11-11 University of Massachusetts CONJUGATE OLIGONUCLEOTIDES
CN110023321A (zh) 2016-08-17 2019-07-16 索尔斯蒂斯生物有限公司 多核苷酸构建体
WO2018041973A1 (en) 2016-09-01 2018-03-08 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified single-stranded rna-editing oligonucleotides
JOP20170056B1 (ar) * 2016-09-02 2021-08-17 Arrowhead Pharmaceuticals Inc مركبات ترابطية مستهدفة
US20190275171A1 (en) * 2016-09-23 2019-09-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Gene therapy and targeted delivery of conjugated compounds
JOP20190065A1 (ar) 2016-09-29 2019-03-28 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau
WO2018067900A1 (en) * 2016-10-06 2018-04-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method of conjugating oligomeric compounds
JP2019537427A (ja) 2016-10-27 2019-12-26 カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー Ｘ染色体の再活性化のためのｈｄａｃ阻害剤組成物
JOP20190104A1 (ar) 2016-11-10 2019-05-07 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3
KR20190076050A (ko) * 2016-11-11 2019-07-01 얀센 바이오파마, 인크. Hbv cccdna용 올리고뉴클레오티드 표적화 방법
TW202313978A (zh) 2016-11-23 2023-04-01 美商阿尼拉製藥公司 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
WO2018102397A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
EP3548620A4 (en) 2016-12-02 2020-07-22 Cold Spring Harbor Laboratory MODULATION OF THE EXPRESSION OF LNC05
KR101954130B1 (ko) * 2016-12-13 2019-03-05 (주)에이엠사이언스 B형 간염 예방 또는 치료용 의약 조성물
TWI790217B (zh) 2016-12-16 2023-01-21 美商阿尼拉製藥公司 使用甲狀腺素運載蛋白（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物於治療或預防ＴＴＲ相關疾病之方法
CN108239644B (zh) * 2016-12-23 2021-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种小干扰核酸和药物组合物及其用途
US10337070B2 (en) 2017-01-12 2019-07-02 Cardioforecast Ltd. Methods and kits for treating cardiovascular disease
EP3568479A1 (en) 2017-01-13 2019-11-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating nfkb1 expression
US20190338286A1 (en) 2017-01-13 2019-11-07 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating rel expression
US20190345495A1 (en) 2017-01-13 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating nfkb2 expression
EP3568477A1 (en) 2017-01-13 2019-11-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating rela expression
US20190345496A1 (en) 2017-01-13 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating relb expression
US11572558B2 (en) 2017-02-06 2023-02-07 Nissan Chemical Corporation Single-stranded oligonucleotide
WO2018165564A1 (en) * 2017-03-09 2018-09-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Morpholino modified oligomeric compounds
JP7048574B2 (ja) 2017-03-10 2022-04-05 国立研究開発法人国立成育医療研究センター アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび糖原病Ｉａ型予防または治療用組成物
JOP20190215A1 (ar) 2017-03-24 2019-09-19 Ionis Pharmaceuticals Inc مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9
EP3385272A1 (en) 2017-04-05 2018-10-10 Silence Therapeutics GmbH Further novel oligonucleotide-ligand conjugates
HUE061247T2 (hu) * 2017-04-05 2023-06-28 Silence Therapeutics Gmbh Termékek és készítmények
JP2020516296A (ja) 2017-04-11 2020-06-11 アルブータス・バイオファーマー・コーポレイション 標的化組成物
KR102720270B1 (ko) 2017-04-18 2024-10-23 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 B형 간염 바이러스 (hbv)에 감염된 대상체의 치료 방법
WO2018215049A1 (en) 2017-05-23 2018-11-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for galnac oligonucleotide conjugates
EP3633036A4 (en) * 2017-05-26 2021-03-17 National Cerebral and Cardiovascular Center ANTISENSE NUCLEIC ACID AGAINST PCSK9
CN111164091B (zh) * 2017-06-02 2025-01-07 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其使用方法
EP3630199A4 (en) * 2017-06-02 2021-11-10 Wave Life Sciences Ltd. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND METHODS FOR THEIR USE
US11401519B2 (en) 2017-06-07 2022-08-02 University Of Massachusetts Anti-ADAM33 oligonucleotides and related methods
JP7406793B2 (ja) 2017-06-23 2023-12-28 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ ２テイル自己デリバリー型ｓｉＲＮＡおよび関連方法
WO2019006455A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Solstice Biologics, Ltd. AUXILIARIES OF CHIRAL PHOSPHORAMIDITIS AND METHODS OF USE THEREOF
CA3069868A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Lactate dehydrogenase a (ldha) irna compositions and methods of use thereof
US11555188B2 (en) 2017-07-26 2023-01-17 Nissan Chemical Corporation Single-stranded oligonucleotide
TW201909925A (zh) * 2017-08-02 2019-03-16 日商協和醱酵麒麟有限公司 核酸複合體
WO2019027009A1 (ja) * 2017-08-02 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸複合体
WO2019030313A2 (en) 2017-08-11 2019-02-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF UBE3C EXPRESSION
AU2018318230B2 (en) 2017-08-17 2024-10-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Tunable REVERSIRTM compounds
US11197884B2 (en) 2017-08-18 2021-12-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of the notch signaling pathway for treatment of respiratory disorders
WO2019038228A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Roche Innovation Center Copenhagen A/S OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF TOM1 EXPRESSION
GB2599884B (en) 2017-08-25 2022-08-31 Stoke Therapeutics Inc Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
WO2019051173A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. MODULATORS OF SMAD7 EXPRESSION
CA3075598A1 (en) * 2017-09-14 2019-03-21 Janssen Biopharma, Inc. Galnac derivatives
ES2962277T3 (es) 2017-09-29 2024-03-18 Regeneron Pharma Roedores que comprenden un locus Ttr humanizado y métodos de uso
KR20200058509A (ko) 2017-09-29 2020-05-27 인텔리아 테라퓨틱스, 인크. Attr 아밀로이드증의 ttr 유전자 편집 및 치료를 위한 조성물 및 방법
JP2021502059A (ja) 2017-10-13 2021-01-28 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス 部分的に立体定義されたオリゴヌクレオチドのサブライブラリーを使用することによる、アンチセンスオリゴヌクレオチドの、改良された立体定義されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチド変異体を同定するための方法
IL310631A (en) 2017-10-16 2024-04-01 Hoffmann La Roche Nucleic acid molecule to reduce papd5 and papd7 mRNA to treat hepatitis b infection
EP3704252A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof
TWI809004B (zh) 2017-11-09 2023-07-21 美商Ionis製藥公司 用於降低snca表現之化合物及方法
US20200385719A1 (en) 2017-11-16 2020-12-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof
WO2019100039A1 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof
CN118291456A (zh) 2017-12-01 2024-07-05 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
WO2019105403A1 (zh) * 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
WO2019105404A1 (zh) * 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
JP7273417B2 (ja) 2017-12-01 2023-05-15 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用
EP3719128B1 (en) * 2017-12-01 2025-01-15 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Double-stranded oligonucleotide, composition and conjugate comprising double-stranded oligonucleotide, preparation method therefor and use thereof
JP7261494B2 (ja) 2017-12-01 2023-04-20 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
KR20250107294A (ko) 2017-12-01 2025-07-11 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 핵산, 이를 포함하는 조성물과 컨쥬게이트, 및 그의 제조 방법과 용도
EP3724333A2 (en) 2017-12-11 2020-10-21 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating fndc3b expression
WO2019115417A2 (en) 2017-12-12 2019-06-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating rb1 expression
EP3724206B1 (en) 2017-12-14 2023-06-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
MX2020006012A (es) 2017-12-18 2020-09-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de arni de la caja 1 del grupo de alta movilidad (hmgb1) y métodos de uso de las mismas.
WO2019126641A2 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of frataxin expression
AU2018390167A1 (en) 2017-12-21 2020-06-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Companion diagnostic for HTRA1 RNA antagonists
US20200332289A1 (en) 2017-12-22 2020-10-22 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Gapmer oligonucleotides comprising a phosphorodithioate internucleoside linkage
CN111757936B (zh) 2017-12-22 2025-07-04 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 包含二硫代磷酸酯核苷间连接的寡核苷酸
WO2019122277A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Novel thiophosphoramidites
JP7011080B2 (ja) * 2017-12-26 2022-02-10 クワンチョウ リボバイオ カンパニー リミテッド 修飾オリゴヌクレオチドおよび修飾オリゴヌクレオチドの合成に使用可能な化合物
CN109957566B (zh) * 2017-12-26 2023-08-25 广州市锐博生物科技有限公司 修饰的寡核苷酸和可用于合成修饰的寡核苷酸的化合物
US11633482B2 (en) * 2017-12-29 2023-04-25 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Conjugates and preparation and use thereof
US12178855B2 (en) 2018-01-10 2024-12-31 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for facilitating delivery of synthetic nucleic acids to cells
EP3737758A1 (en) 2018-01-10 2020-11-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating pias4 expression
KR20200109338A (ko) 2018-01-12 2020-09-22 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 알파-시누클레인 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 이의 용도
WO2019137974A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating gsk3b expression
CN111819283A (zh) 2018-01-12 2020-10-23 百时美施贵宝公司 靶向α-突触核蛋白的反义寡核苷酸及其用途
SG11202006526YA (en) 2018-01-12 2020-08-28 Bristol Myers Squibb Co Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof
KR20200113214A (ko) 2018-01-15 2020-10-06 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Dnm2 발현의 조절제
EP3740574A1 (en) 2018-01-17 2020-11-25 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating erc1 expression
US20210095277A1 (en) 2018-01-18 2021-04-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting srebp1
WO2019145386A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating csnk1d expression
AU2019218987B2 (en) 2018-02-12 2025-04-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified compounds and uses thereof
EP3752614A4 (en) 2018-02-14 2021-11-10 Deep Genomics Incorporated OLIGONUCLEOTIDE THERAPY FOR WILSON'S DISEASE
TWI840345B (zh) 2018-03-02 2024-05-01 美商Ionis製藥公司 Irf4表現之調節劑
EP3759127A4 (en) 2018-03-02 2022-03-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING AMYLOID BETA PRECURSOR PROTEIN
JP6884268B2 (ja) 2018-03-09 2021-06-09 第一三共株式会社 糖原病Ｉａ型治療薬
US11661601B2 (en) 2018-03-22 2023-05-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating FMR1 expression
EP3775208A1 (en) 2018-04-05 2021-02-17 F. Hoffmann-La Roche AG Use of fubp1 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
EP3775204A4 (en) 2018-04-11 2021-12-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of ezh2 expression
WO2019213016A1 (en) 2018-04-30 2019-11-07 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods of improving anemias by combining agents
EP3788169A4 (en) 2018-05-04 2022-08-10 Stoke Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treatment of cholesteryl ester storage disease
US20220002796A1 (en) 2018-05-07 2022-01-06 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Quality control of lna oligonucleotide therapeutics using massively parallel sequencing
JP7279081B2 (ja) 2018-05-08 2023-05-22 レグルス セラピューティクス インコーポレイテッド Ｍｉｒ－１２２を調節するためのマイクロｒｎａ化合物及び方法
BR112020020957B1 (pt) * 2018-05-09 2022-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc Compostos oligoméricos, população e composição farmacêutica dos mesmos e seus usos
JOP20200283A1 (ar) 2018-05-09 2020-11-08 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير الوراثي عن atxn3
WO2019217784A1 (en) 2018-05-11 2019-11-14 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
TWI851574B (zh) 2018-05-14 2024-08-11 美商阿尼拉製藥公司 血管收縮素原（ＡＧＴ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
GB201808146D0 (en) 2018-05-18 2018-07-11 Proqr Therapeutics Ii Bv Stereospecific Linkages in RNA Editing Oligonucleotides
JP7557378B2 (ja) 2018-06-14 2024-09-27 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｓｔｍｎ２発現を増加させるための化合物及び方法
TWI833770B (zh) 2018-06-27 2024-03-01 美商Ionis製藥公司 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法
TWI862501B (zh) 2018-07-03 2024-11-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於調制 Tau 表現之寡核苷酸
WO2020007826A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting mbtps1
WO2020011745A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting cers6
WO2020011744A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting cers5
JP7616987B2 (ja) 2018-07-13 2025-01-17 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｒｔｅｌ１発現の調節用のオリゴヌクレオチド
EP3823725A4 (en) 2018-07-17 2023-05-10 Aronora, Inc. METHODS FOR SAFELY REDUCING THROMBOPOIETIN
AU2019310097A1 (en) 2018-07-25 2021-02-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing ATXN2 expression
MX2020013270A (es) 2018-07-31 2021-02-18 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligonucleotidos que comprenden enlace internucleosidico de fosforotritioato.
PL3830102T3 (pl) 2018-07-31 2022-10-03 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonukleotydy zawierające tritiofosforanowe wiązanie międzynukleozydowe
EP3833397A4 (en) 2018-08-08 2023-06-14 Arcturus Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND AGENTS AGAINST NON-ALCOHOLIC STEATOHEPATITIS
CA3109133A1 (en) 2018-08-10 2020-02-13 University Of Massachusetts Modified oligonucleotides targeting snps
WO2020036862A1 (en) 2018-08-13 2020-02-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. HEPATITIS B VIRUS (HBV) dsRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
CN111655849B (zh) * 2018-08-21 2024-05-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的药物组合物和缀合物及其用途
EP3840759A4 (en) 2018-08-23 2022-06-01 University Of Massachusetts O-METHYL RICH FULLY STABILIZED OLIGONUCLEOTIDES
JP2021536239A (ja) 2018-08-28 2021-12-27 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス スプライス調節化合物を使用したネオアンチゲン操作
CA3105385A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
TWI856973B (zh) 2018-09-19 2024-10-01 美商Ionis製藥公司 Pnpla3表現之調節劑
JP7376952B2 (ja) * 2018-09-30 2023-11-09 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド ｓｉＲＮＡ複合体及びその調製方法と使用
CN113383076B (zh) * 2018-10-18 2025-11-18 普罗吉尼斯私人有限公司 用于ptp1b相关病症的反义疗法
US10913951B2 (en) 2018-10-31 2021-02-09 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure
CA3111382A1 (en) 2018-11-09 2020-05-14 Novartis Ag Method for reducing the risk of a cardiovascular event with conjugated antisense compounds targeting apo(a)
TW202028222A (zh) 2018-11-14 2020-08-01 美商Ionis製藥公司 Foxp3表現之調節劑
AR117094A1 (es) 2018-11-15 2021-07-07 Ionis Pharmaceuticals Inc Moduladores de expresión irf5
JP7455831B2 (ja) 2018-11-21 2024-03-26 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド プリオン発現を低減するための化合物及び方法
CN113166760A (zh) 2018-11-23 2021-07-23 赛诺菲 用于抑制angptl8的新型rna组合物和方法
EP3888663A1 (en) 2018-11-30 2021-10-06 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid complex
EP3894559A4 (en) 2018-12-03 2023-04-05 Triplet Therapeutics, Inc. METHODS OF TREATMENT OF TRINUCLEOTIDE REPEAT EXPANSION DISORDERS RELATED TO MLH3 ACTIVITY
JP2022515744A (ja) 2018-12-20 2022-02-22 プラクシス プレシジョン メディシンズ， インコーポレイテッド Ｋｃｎｔ１関連障害の治療のための組成物及び方法
AU2019403447B2 (en) 2018-12-21 2023-07-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of HSD17B13 expression
GB201821269D0 (en) 2018-12-28 2019-02-13 Nippon Shinyaku Co Ltd Myostatin signal inhibitor
JP7507495B2 (ja) * 2018-12-28 2024-06-28 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
CN111377985B (zh) * 2018-12-29 2023-11-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 化合物和缀合物及其制备方法和用途
CA3125441A1 (en) 2019-01-18 2020-07-23 University Of Massachusetts Dynamic pharmacokinetic-modifying anchors
WO2020147847A1 (zh) * 2019-01-18 2020-07-23 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
BR112021013369A2 (pt) 2019-01-31 2021-09-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Moduladores de expressão de yap1
AU2020225336A1 (en) 2019-02-20 2021-08-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Novel phosphoramidites
TW202102516A (zh) 2019-02-20 2021-01-16 丹麥商羅氏創新中心哥本哈根有限公司 膦醯基乙酸酯間隙子寡核苷酸
CN109799330B (zh) * 2019-02-22 2021-03-02 华中科技大学同济医学院附属同济医院 神经氨酸及神经氨酸酶抑制剂在慢性心力衰竭中的应用
WO2020173845A1 (en) 2019-02-26 2020-09-03 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide formulation method
WO2020176771A1 (en) 2019-02-27 2020-09-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of malat1 expression
US20220145292A1 (en) * 2019-02-28 2022-05-12 Deep Genomics Incorporated Ligand clusters and methods of their use and preparation
CN114206389A (zh) * 2019-03-21 2022-03-18 有丝分裂疗法有限责任公司 用于靶向递送治疗剂的多价配体簇
CA3135180A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating ube3a-ats
US20220177894A1 (en) 2019-04-02 2022-06-09 Proqr Therapeutics Ii B.V. Antisense oligonucleotides for immunotherapy
KR20210149107A (ko) 2019-04-03 2021-12-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Angptl2 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 그의 용도
US20220251128A1 (en) * 2019-05-17 2022-08-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligomeric compounds comprising phosphorothioate diester and phosphodiester linkages
JP7610848B2 (ja) 2019-05-22 2025-01-09 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、薬物組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
CN113227376B (zh) * 2019-05-22 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
WO2020233651A1 (zh) 2019-05-22 2020-11-26 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
US12540323B2 (en) 2019-05-22 2026-02-03 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition, conjugate, preparation method, and use
US20220315929A1 (en) 2019-05-24 2022-10-06 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition and conjugate, preparation method therefor and use thereof
JP7610849B2 (ja) 2019-05-24 2025-01-09 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、薬物組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
EP3978029A4 (en) 2019-05-24 2023-07-19 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. NUCLEIC ACID, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND CONJUGATE, METHOD OF MANUFACTURE AND USE
SI3976791T1 (sl) 2019-05-28 2025-06-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Spojine in postopki za zmanjševanje izražanja fus
AU2020282828A1 (en) 2019-05-31 2022-01-27 Aligos Therapeutics, Inc. Modified gapmer oligonucleotides and methods of use
EP3801011A1 (en) 2019-06-04 2021-04-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use
JP7720788B2 (ja) 2019-06-25 2025-08-08 アムジエン・インコーポレーテツド 炭水化物に連結されたオリゴヌクレオチドのための精製方法
EP3956450B1 (en) 2019-07-26 2025-08-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gfap
WO2021022108A2 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
WO2021022109A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SERPIN FAMILY F MEMBER 2 (SERPINF2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
EP4010476A4 (en) 2019-08-09 2023-12-27 University Of Massachusetts Chemically modified oligonucleotides targeting snps
EP4013870A1 (en) 2019-08-13 2022-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Small ribosomal protein subunit 25 (rps25) irna agent compositions and methods of use thereof
CN114555621B (zh) * 2019-08-15 2025-10-28 Ionis制药公司 键修饰的寡聚化合物及其用途
US20220290156A1 (en) 2019-08-27 2022-09-15 Sanofi Compositions and methods for inhibiting pcsk9
EP4023659A4 (en) 2019-08-29 2024-02-28 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. COMPOUND AND DRUG CONJUGATE, PRODUCTION METHOD AND USE THEREOF
WO2021041884A1 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy
US12290567B2 (en) 2019-09-03 2025-05-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Asialoglycoprotein Receptor mediated delivery of therapeutically active conjugates
BR112022004461A2 (pt) 2019-09-10 2022-07-19 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de galnac-oligonucleotídeo para entrega ao fígado e método de fabricação do mesmo
US12365894B2 (en) 2019-09-16 2025-07-22 University Of Massachusetts Branched lipid conjugates of siRNA for specific tissue delivery
JP2022548652A (ja) 2019-09-20 2022-11-21 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー コアタンパク質アロステリックモジュレータを使用してｈｂｖ感染を処置する方法
US12503699B2 (en) 2019-10-04 2025-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing UGT1a1 gene expression
EP4045062A1 (en) 2019-10-14 2022-08-24 Astrazeneca AB Modulators of pnpla3 expression
EP4045652A1 (en) 2019-10-18 2022-08-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof
BR112022007540A2 (pt) 2019-10-22 2022-07-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de irna de componente complementar c3 e métodos de uso das mesmas
AR120341A1 (es) 2019-11-01 2022-02-09 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSICIONES DE AGENTES DE ARNi CONTRA LA HUNTINGTINA (HTT) Y SUS MÉTODOS DE USO
TW202526019A (zh) 2019-11-13 2025-07-01 美商阿尼拉製藥公司 用於治療血管收縮素原相關病症之方法及組成物
EP4061945A1 (en) 2019-11-22 2022-09-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof
CN112876534B (zh) * 2019-11-29 2024-02-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 肝靶向化合物及缀合物
BR112022011417A2 (pt) 2019-12-13 2022-08-30 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições do agente de irna da fase de leitura aberta 72 do cromossomo humano 9 (c9orf72) e métodos de uso das mesmas
WO2021126734A1 (en) 2019-12-16 2021-06-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof
CN111041025B (zh) * 2019-12-17 2021-06-18 深圳市瑞吉生物科技有限公司 基于结合N-乙酰半乳糖胺多肽的mRNA靶向分子及其制备方法
CN114829599A (zh) 2019-12-19 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 Scamp3抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
JP7634542B2 (ja) 2019-12-19 2025-02-21 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するためのｓｅｐｔ９阻害剤の使用
WO2021122910A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of sbds inhibitors for treating hepatitis b virus infection
JP7653997B2 (ja) 2019-12-19 2025-03-31 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置するためのｃｏｐｓ３阻害剤の使用
EP4077671A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of saraf inhibitors for treating hepatitis b virus infection
CN115103674A (zh) 2019-12-24 2022-09-23 豪夫迈·罗氏有限公司 使用tlr7激动剂治疗病毒感染的方法
WO2021130270A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical combination of antiviral agents targeting hbv and/or an immune modulator for treatment of hbv
MX2022007908A (es) 2019-12-24 2022-07-21 Hoffmann La Roche Combinacion farmaceutica de un oligonucleotido terapeutico que actua sobre hbv y un agonista de tlr7 para el tratamiento de hbv.
US20230151360A1 (en) * 2020-01-30 2023-05-18 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nucleic acid complex and pharmaceutical composition containing same
WO2021163066A1 (en) 2020-02-10 2021-08-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing vegf-a expression
WO2021167841A1 (en) 2020-02-18 2021-08-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof
AR121446A1 (es) 2020-02-28 2022-06-08 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para modular smn2
GB2629329B (en) 2020-03-04 2025-02-26 Verve Therapeutics Inc Formulation comprising GalNAc-lipid nanoparticle
EP4114947A1 (en) 2020-03-05 2023-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases
IL296106A (en) 2020-03-06 2022-11-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (ttr)
WO2021178736A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. KETOHEXOKINASE (KHK) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
WO2021188611A1 (en) 2020-03-18 2021-09-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant
US20230314417A1 (en) 2020-03-23 2023-10-05 Amgen Inc. Monoclonal antibodies to chemically-modified nucleic acids and uses thereof
WO2021193965A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 国立研究開発法人国立循環器病研究センター Ａｐｏｃ３を標的としたアンチセンス核酸
JP2023519274A (ja) 2020-03-26 2023-05-10 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド コロナウイルスｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
WO2021202902A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. ALPHA-2A ADRENERGIC RECEPTOR (ADRA2A) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
AU2021252545A1 (en) 2020-04-06 2022-11-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing myoc expression
KR20230008078A (ko) 2020-04-07 2023-01-13 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 Scn9a 발현을 사일런싱하기 위한 조성물 및 방법
EP4133077A1 (en) 2020-04-07 2023-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof
WO2021206917A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
IL297483A (en) 2020-04-21 2022-12-01 Flagship Pioneering Inc Bifunctional compounds and their uses
BR112022021813A2 (pt) 2020-04-27 2023-01-17 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de agente de apolipoproteína e (apoe) irna e métodos de uso das mesmas
CN111575279A (zh) * 2020-04-27 2020-08-25 江苏为真生物医药技术股份有限公司 利用asgpr小分子配体特异性捕获肝细胞外囊泡或循环肿瘤细胞的方法
JP2023523790A (ja) 2020-04-30 2023-06-07 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体因子Ｂ（ＣＦＢ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
AU2021264010A1 (en) 2020-05-01 2022-12-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating ATXN1
BR112022022889A2 (pt) 2020-05-11 2023-04-04 Stoke Therapeutics Inc Oligômeros antissentido de opa1 para tratamento de condições e doenças
CA3162416C (en) 2020-05-15 2023-07-04 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate synthetase (ass1)
EP4150086A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of leucine rich repeat kinase 2 (lrrk2)
WO2021231691A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of retinoschisin 1 (rsi)
WO2021231679A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of gap junction protein beta 2 (gjb2)
EP4150076A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
EP4150078A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate lyase (asl)
WO2021231685A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1)
WO2021231692A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof)
CN113683651A (zh) * 2020-05-19 2021-11-23 上海京新生物医药有限公司 一种GalNAc中间体的制备方法
EP4157289A4 (en) 2020-05-26 2024-06-26 University Of Massachusetts Synthetic oligonucleotides having regions of block and cluster modifications
AR122534A1 (es) 2020-06-03 2022-09-21 Triplet Therapeutics Inc Métodos para el tratamiento de los trastornos de expansión por repetición de nucleótidos asociados con la actividad de msh3
EP4162050A1 (en) 2020-06-09 2023-04-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation
EP4649951A2 (en) 2020-06-09 2025-11-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sirna compositions and methods for silencing gpam (glycerol-3-phosphate acyltransferase 1, mitochondrial) expression
CN115702006B (zh) * 2020-06-10 2025-12-23 南京明德新药研发有限公司 缀合基团及其缀合物
CN116209760A (zh) 2020-06-18 2023-06-02 阿尔尼拉姆医药品有限公司 黄嘌呤脱氢酶(XDH)iRNA组合物及其使用方法
EP4438125A3 (en) * 2020-06-24 2024-12-25 Sapreme Technologies B.V. Conjugate of galnac and saponin, therapeutic composition comprising said conjugate and a galnac oligonucleotide conjugate
AR122731A1 (es) 2020-06-26 2022-10-05 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos mejorados para modular la expresión de fubp1
AU2021299290A1 (en) 2020-06-29 2023-01-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating PLP1
CN111744019B (zh) 2020-07-01 2023-08-04 深圳瑞吉生物科技有限公司 基于甘露糖的mRNA靶向递送系统及其应用
CA3177613A1 (en) 2020-07-10 2022-04-13 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating epilepsy
KR20230043914A (ko) 2020-07-28 2023-03-31 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 App 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법
CN116322707B (zh) 2020-08-07 2026-02-03 艾欧尼斯制药公司 用于调节scn2a的化合物和方法
US20220047621A1 (en) * 2020-08-13 2022-02-17 Amgen Inc. RNAi CONSTRUCTS AND METHODS FOR INHIBITING MARC1 EXPRESSION
EP4200419A2 (en) 2020-08-21 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Use of a1cf inhibitors for treating hepatitis b virus infection
EP4217489A1 (en) 2020-09-24 2023-08-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof
TW202229552A (zh) 2020-10-05 2022-08-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 Ｇ蛋白－偶合受體７５（ＧＰＲ７５）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
US20240035029A1 (en) 2020-10-16 2024-02-01 Sanofi Rna compositions and methods for inhibiting lipoprotein(a)
US20230383294A1 (en) 2020-10-16 2023-11-30 Sanofi Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl3
EP4232582A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof
KR20230107625A (ko) 2020-11-13 2023-07-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 응고 인자 V(F5) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
EP4488371A3 (en) 2020-11-18 2025-04-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating angiotensinogen expression
WO2022106695A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 Alpha Anomeric Sas Nucleic acid duplexes
EP4259795A1 (en) 2020-12-08 2023-10-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
MX2023007257A (es) 2020-12-18 2023-07-03 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y metodos para modular el factor xii.
JP2024500035A (ja) 2020-12-23 2024-01-04 アルゴノート アールエヌエー リミテッド 心血管疾患の治療
WO2022143531A1 (zh) 2020-12-29 2022-07-07 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的药物组合物与siRNA缀合物及制备方法和用途
WO2022150260A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
CN117355534A (zh) * 2021-01-30 2024-01-05 e-生物有限公司 缀合寡核苷酸化合物、其制备方法和用途
WO2022162157A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
CA3204317A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 Ahmad Ali MORTAZAVI Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
JP2024504505A (ja) * 2021-01-30 2024-01-31 イー セラピューティクス パブリック リミテッド カンパニー コンジュゲートオリゴヌクレオチド化合物、その作製方法及び使用
CN116848127A (zh) * 2021-01-30 2023-10-03 e-生物有限公司 缀合寡核苷酸化合物、其制备方法和用途
WO2022162161A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
TW202246500A (zh) 2021-02-02 2022-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於抑制 ｒｔｅｌ１ 表現之增強型寡核苷酸
CA3210763A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Superoxide dismutase 1 (sod1) irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing superoxide dismutase 1- (sod1-) associated neurodegenerative diseases
US20250034561A1 (en) * 2021-02-18 2025-01-30 Oneglobe Holdings Limited Novel Compositions for Conjugating Oligonucleotides and Carbohydrates
WO2022182864A1 (en) 2021-02-25 2022-09-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Prion protein (prnp) irna compositions and methods and methods of use thereof
BR112023016645A2 (pt) 2021-02-26 2023-11-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de irna de ceto-hexoquinase (khk) e métodos de uso das mesmas
AU2022231003A1 (en) 2021-03-04 2023-09-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
WO2022189861A1 (en) 2021-03-08 2022-09-15 Tollys Carbohydrate conjugates of tlr3 ligands and uses thereof
EP4305168A1 (en) 2021-03-08 2024-01-17 Les Laboratoires Servier Antisense oligonucleotides for inhibiting alpha-synuclein expression
EP4305169A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof
CN117203336A (zh) 2021-03-29 2023-12-08 阿尔尼拉姆医药品有限公司 亨廷顿蛋白(HTT)iRNA药剂组合物以及其使用方法
WO2022212153A1 (en) 2021-04-01 2022-10-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof
BR112023021109A2 (pt) 2021-04-14 2023-12-12 Dicerna Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para modular a expressão de pnpla3
WO2022231999A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transmembrane protease, serine 6 (tmprss6) irna compositions and methods of use thereof
EP4330396A1 (en) 2021-04-29 2024-03-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof
WO2022232650A1 (en) * 2021-04-30 2022-11-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing agt expression
JP2024522068A (ja) 2021-05-18 2024-06-11 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ナトリウム－グルコース共輸送体２（ｓｇｌｔ２）ｉｒｎａ組成物およびその使用方法
EP4341405A1 (en) 2021-05-20 2024-03-27 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for adar-mediated editing
WO2022256283A2 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Korro Bio, Inc. Methods for restoring protein function using adar
JP2024522996A (ja) 2021-06-02 2024-06-25 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
CN117561334A (zh) 2021-06-04 2024-02-13 阿尔尼拉姆医药品有限公司 人染色体9开放阅读框72（C9ORF72）iRNA药剂组合物和其使用方法
JP2024523000A (ja) 2021-06-08 2024-06-25 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド シュタルガルト病及び／又は網膜結合タンパク質４（ｒｂｐ４）関連障害を治療又は予防するための組成物及び方法
EP4355759A1 (en) 2021-06-18 2024-04-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing ifnar1 expression
US11702659B2 (en) 2021-06-23 2023-07-18 University Of Massachusetts Optimized anti-FLT1 oligonucleotide compounds for treatment of preeclampsia and other angiogenic disorders
CA3224145A1 (en) * 2021-06-24 2022-12-29 Melissa Ann Bellinger Novel rna therapeutics and uses thereof
CA3224134A1 (en) * 2021-06-24 2022-12-29 Patrick Joseph ANTONELLIS Novel therapeutic delivery moieties and uses thereof
US20230194709A9 (en) 2021-06-29 2023-06-22 Seagate Technology Llc Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics
US20250034564A1 (en) 2021-06-29 2025-01-30 Korro Bio, Inc. Methods and Compositions for ADAR-Mediated Editing
JP2024527304A (ja) 2021-06-30 2024-07-24 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド アンジオテンシノーゲン（ａｇｔ）関連障害を治療するための方法および組成物
MX2023015423A (es) * 2021-07-02 2024-02-20 Tuojie Biotech Shanghai Co Ltd Ligando de acido nucleico y conjugado, metodo de preparacion y uso del mismo.
US20240285770A1 (en) 2021-07-08 2024-08-29 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Precipitation suppressing agent
CN118201606A (zh) 2021-07-08 2024-06-14 日本新药株式会社 肾毒性减轻剂
CA3225454A1 (en) 2021-07-08 2023-01-12 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Nephrotoxicity reducing agent
TW202333748A (zh) 2021-07-19 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 用於處置具有或有風險發展非原發性高草酸鹽尿疾病或病症的個體的方法及組成物
TW202325312A (zh) 2021-07-23 2023-07-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 β－鏈蛋白（ＣＴＮＮＢ１）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
WO2023009687A1 (en) 2021-07-29 2023-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof
JP2024530647A (ja) * 2021-08-03 2024-08-23 ヴァーヴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 標的ｒｎａ送達のための組成物および方法
JP2024530018A (ja) 2021-08-03 2024-08-14 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド トランスサイレチン（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
WO2023014765A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. iRNA COMPOSITIONS AND METHODS FOR SILENCING ANGIOTENSINOGEN (AGT)
BR112024001923A2 (pt) 2021-08-13 2024-04-30 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de irna de fator xii (f12) e métodos de usos das mesmas
IL311030A (en) 2021-08-31 2024-04-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc DFFA-like Cell Death Inducer B (CIDEB) IRNA compositions and methods of using them
EP4402263A2 (en) 2021-09-14 2024-07-24 Argonaute Rna Limited Treatment of cardiovascular disease
WO2023044370A2 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3)
AU2022348141A1 (en) * 2021-09-18 2024-04-04 Chengdu Xinzhenghe Pharmaceutical Technology Co. Ltd Lpa inhibitor and use thereof
CA3232420A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof
JP2024535374A (ja) * 2021-09-23 2024-09-30 シャンハイ アルゴ バイオファーマシューティカル カンパニー，リミテッド 治療薬を標的化送達するためのジアミンスキャフォールドを含む多価リガンドクラスター
KR20240067943A (ko) 2021-09-24 2024-05-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 미소관 연관 단백질 타우(MAPT) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법
AU2022357561A1 (en) 2021-10-01 2024-04-18 Adarx Pharmaceuticals, Inc. Prekallikrein-modulating compositions and methods of use thereof
EP4419683A1 (en) 2021-10-22 2024-08-28 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing
KR20240095325A (ko) 2021-10-29 2024-06-25 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 보체 인자 b (cfb) irna 조성물 및 이의 사용 방법
TW202334418A (zh) 2021-10-29 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 杭丁頓（ＨＴＴ）ｉＲＮＡ劑組成物及其使用方法
EP4430184A2 (en) 2021-11-11 2024-09-18 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
MX2024005862A (es) 2021-11-16 2024-07-10 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co Ltd Composiciones y metodos para inhibir la expresion de la proteina angiotensinogeno (agt).
EP4441224A1 (en) 2021-12-03 2024-10-09 Quralis Corporation Gapmer antisense oligonucleotides with modified backbone chemistries
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN118076738A (zh) * 2021-12-16 2024-05-24 上海拓界生物医药科技有限公司 靶向LPA的siRNA及缀合物
TW202340466A (zh) * 2021-12-16 2023-10-16 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 一種ｄｓｒｎａ、其製備方法及應用
JP2024546993A (ja) 2021-12-17 2024-12-26 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｒｔｅｌ１及びｆｕｂｐ１を調節するためのオリゴヌクレオチドの組み合わせ
EP4467645A4 (en) * 2022-01-20 2026-01-21 Tuojie Biotech Shanghai Co Ltd DOUBLE-STRANDED RNA, ITS USES AND PREPARATION PROCESS
WO2023141314A2 (en) 2022-01-24 2023-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof
TW202345865A (zh) * 2022-01-24 2023-12-01 大陸商上海舶望製藥有限公司 抑制LPA(Apo(a))蛋白表達的組合物和方法
AU2023211407A1 (en) * 2022-01-30 2024-08-15 Rona Bioscience, Limited Targeting ligand containing n-acetylgalactosamine
AR128558A1 (es) 2022-02-21 2024-05-22 Hoffmann La Roche Oligonucleótido antisentido
EP4491728A1 (en) 2022-03-10 2025-01-15 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antiviral antisense oligomer
CN114703184B (zh) * 2022-03-11 2024-06-18 厦门甘宝利生物医药有限公司 Lpa抑制剂及其用途
TW202400786A (zh) 2022-03-16 2024-01-01 日商第一三共股份有限公司 具有RNAi活性的化學修飾寡核苷酸
AU2023234536A1 (en) 2022-03-16 2024-09-26 Empirico Inc. Galnac compositions for improving sirna bioavailability
AU2023234185A1 (en) 2022-03-16 2024-10-03 Daiichi Sankyo Company, Limited siRNA FOR SUPPRESSING EXPRESSION OF TRANSFERRIN RECEPTOR-2
KR20240163743A (ko) 2022-03-28 2024-11-19 엠피리코 인크. 변형된 올리고뉴클레오티드
CN115028670B (zh) * 2022-06-24 2023-07-28 四川大学华西医院 一种n-乙酰基-d-半乳糖胺三聚体前体的制备方法
CN119654412A (zh) * 2022-06-27 2025-03-18 中美瑞康核酸技术(南通)研究院有限公司 激活补体因子h表达的寡核苷酸调节剂
EP4555085A1 (en) 2022-07-15 2025-05-21 ProQR Therapeutics II B.V. Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing
CA3262119A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 The Regents Of The University Of California OLIGONUCLEOTIDES FOR ADAR-MEDIATED RNA EDITING AND THEIR USE
CN116814621B (zh) * 2022-08-05 2025-09-09 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种抑制apoc3基因表达的rna抑制剂及其应用
EP4573198A2 (en) 2022-08-18 2025-06-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof
MA71735A (fr) 2022-09-15 2025-05-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions d'arni de 17b-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 13 (hsd17b13) et leurs procédés d'utilisation
WO2024064858A2 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing mecp2 expression
WO2024098061A2 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Genkardia Inc. Oligonucleotide-based therapeutics targeting cyclin d2 for the treatment of heart failure
WO2024106539A1 (ja) * 2022-11-18 2024-05-23 株式会社ボナック リガンドコンジュゲート物質及びそれを含む核酸並びにその用途
AU2023383571A1 (en) 2022-11-18 2025-07-03 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
EP4622652A2 (en) * 2022-11-23 2025-10-01 Pretzel Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treatment of cancer and metabolic disease
JP2025539467A (ja) 2022-12-02 2025-12-05 シャンハイ アルゴ バイオファーマシューティカル カンパニー，リミテッド 二環式脱塩基核酸類似体及びそれらによって製造されるオリゴマー化合物
US20250388901A1 (en) 2022-12-19 2025-12-25 Arnatar Therapeutics, Inc. Advanced rna targeting (arnatar)
EP4444357B1 (en) 2022-12-19 2025-05-21 Arnatar Therapeutics, Inc Arnatar compounds and methods for enhanced cellular uptake
TW202438088A (zh) * 2022-12-21 2024-10-01 美商美國禮來大藥廠 新穎FAS RNAi治療劑及其用途
JP2026501809A (ja) * 2023-01-10 2026-01-16 オースパーバイオ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 使用のための修飾マルチセグメントアンチセンスオリゴヌクレオチド
WO2024168010A2 (en) 2023-02-09 2024-08-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Reversir molecules and methods of use thereof
CN120752340A (zh) * 2023-02-24 2025-10-03 重庆药友制药有限责任公司 包合R和E的双链siRNA类似物及其缀合物
CN121285630A (zh) 2023-04-20 2026-01-06 阿达尔克斯制药有限公司 Mapt调节组合物及其使用方法
WO2024220746A2 (en) 2023-04-21 2024-10-24 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Rnai agents targeting fatty acid synthase and related methods
WO2024221135A1 (en) * 2023-04-23 2024-10-31 Ausper Biopharma Co., Ltd. Oligonucleotides for use in modulating immune responses against hepatitis b viral infection
US20240374741A1 (en) * 2023-05-11 2024-11-14 Synerk Biotech Limited Compound, a conjugate and uses thereof
AU2024273075A1 (en) 2023-05-12 2025-11-20 Adarx Pharmaceuticals, Inc. Nmda ligand conjugated compounds and uses thereof
UY40743A (es) * 2023-05-19 2024-12-13 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co Ltd COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA INHIBIR LA EXPRESIÓN DEL factor de coagulación XI (FXI)
WO2024249328A2 (en) 2023-05-26 2024-12-05 Adarx Pharmaceuticals, Inc. Sod1-modulating compositions and methods of use thereof
TW202513798A (zh) * 2023-05-31 2025-04-01 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 一種靶向ＬＰＡ的ｄｓＲＮＡ及其應用
WO2024255761A1 (zh) * 2023-06-12 2024-12-19 大睿生物 包含糖的寡核苷酸递送配体
EP4562158A1 (en) 2023-06-13 2025-06-04 Arnatar Therapeutics, Inc Advanced rna targeting (arnatar) for angiotensinogen
AU2024313301A1 (en) 2023-06-20 2025-12-11 Adarx Pharmaceuticals, Inc. Lrrk2-modulating compositions and methods of use thereof
CN119219716A (zh) * 2023-06-30 2024-12-31 上海维申医药有限公司 新型GalNAc的靶向递送片段及其制备和应用
WO2025015335A1 (en) 2023-07-13 2025-01-16 Korro Bio, Inc. Rna-editing oligonucleotides and uses thereof
WO2025015338A1 (en) 2023-07-13 2025-01-16 Korro Bio, Inc. Rna-editing oligonucleotides and uses thereof
GB202311334D0 (en) 2023-07-24 2023-09-06 Astrazeneca Ab Multivalent cargo-carrying complexes and uses thereof
GB202311324D0 (en) 2023-07-24 2023-09-06 Astrazeneca Ab Multivalent cargo-carrying complexes and uses thereof
US20250051771A1 (en) * 2023-07-24 2025-02-13 Astrazeneca Ab Multivalent cargo-carrying complexes and uses thereof
WO2025034422A1 (en) 2023-08-04 2025-02-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating ctnnb1-associated disorders
WO2025036916A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Les Laboratoires Servier Oligonucleotides for modulating kcnt1 expression
WO2025045194A1 (zh) * 2023-08-31 2025-03-06 正大天晴药业集团股份有限公司 靶向凝血因子xi的双链核糖核酸
WO2025059466A1 (en) * 2023-09-14 2025-03-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing apociii expression
CN116925160B (zh) * 2023-09-15 2023-12-08 天津全和诚科技有限责任公司 一种GalNAc含糖环中间体及其制备方法
WO2025064819A1 (en) * 2023-09-21 2025-03-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for inhibiting lpa
US20250215044A1 (en) 2023-09-21 2025-07-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and Methods for Inhibiting LPA
GB202314724D0 (en) 2023-09-26 2023-11-08 Astrazeneca Ab compounds and methods for reducing psd3 expression
WO2025072748A2 (en) * 2023-09-29 2025-04-03 Insitro, Inc. Compositions and methods for treating nonalcoholic fatty liver disease
CN118680948B (zh) * 2023-10-20 2025-08-22 思合基因(北京)生物科技有限公司 寡核苷酸及其在抗乙型肝炎病毒中的应用
WO2025096809A1 (en) 2023-10-31 2025-05-08 Korro Bio, Inc. Oligonucleotides comprising phosphoramidate internucleotide linkages
TW202521133A (zh) * 2023-11-27 2025-06-01 大陸商上海舶望製藥有限公司 抑制甲狀腺素運載蛋白(ttr)表達的組合物和方法
CN120098993A (zh) * 2023-12-05 2025-06-06 广东东阳光药业股份有限公司 一种新型的双链siRNA、其缀合物及其用途
CN117568313B (zh) * 2024-01-15 2024-04-26 上海贝斯昂科生物科技有限公司 基因编辑组合物及其用途
CN120309684A (zh) * 2024-01-15 2025-07-15 武汉人福创新药物研发中心有限公司 靶向化合物及其用途
WO2025155911A1 (en) 2024-01-18 2025-07-24 Proqr Therapeutics Ii B.V. Antisense oligonucleotides for the treatment of hurler syndrome
WO2025165891A1 (en) 2024-01-29 2025-08-07 Arnatar Therapeutics, Inc Translation enhancing nucleic acid compounds: aso coupled translation - upregulation 1 (act-up1) and uses thereof
EP4665854A1 (en) 2024-01-29 2025-12-24 Arnatar Therapeutics, Inc Translation enhancing nucleic acid compounds: aso coupled translation - upregulation 1 (act-up1) and uses thereof
WO2025196505A2 (en) 2024-03-22 2025-09-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions and methods for inhibiting cytochrome p450 family 7 subfamily a member 1 (cyp7a1) expression
WO2025201156A1 (zh) * 2024-03-28 2025-10-02 施能康生物医药（苏州）有限公司 靶向凝血因子xi的核酸及其用途
GB202404661D0 (en) 2024-04-02 2024-05-15 Proqr Therapeutics Ii Bv Antisense oligoncleotides for the treatment of liver disease
WO2025224230A1 (en) 2024-04-25 2025-10-30 Proqr Therapeutics Ii B.V. Antisense oligonucleotides for the treatment of fatty liver disease
CN118146284B (zh) * 2024-05-08 2024-07-26 北京悦康科创医药科技股份有限公司 一种GalNAc化合物、其与寡核苷酸缀合物及制备方法
WO2025242702A1 (en) * 2024-05-23 2025-11-27 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Enzymatic process for producing n-acetyl galactosamine clusters
WO2026006436A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of tar dna binding protein 43 kda (tdp43)
GB202410081D0 (en) 2024-07-11 2024-08-28 Proqr Therapeutics Ii Bv Antisense oligonucleotides for the treatment of cardiovascular disease
US20260015617A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 Novartis Ag DOUBLE STRANDED RNAi AGENTS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE

Family Cites Families (384)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
DE3788914T2 (de) 1986-09-08 1994-08-25 Ajinomoto Kk Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere.
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
GB8712540D0 (en) * 1987-05-28 1987-07-01 Ucb Sa Expression of human proapolipoprotein a-i
EP0366685B1 (en) 1987-06-24 1994-10-19 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
ATE151467T1 (de) 1987-11-30 1997-04-15 Univ Iowa Res Found Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
CA2071510C (en) 1989-10-24 2004-07-06 Chris A. Buhr 2' modified oligonucleotides
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
EP0745689A3 (en) 1990-05-11 1996-12-11 Microprobe Corporation A dipstick for a nucleic acid hybridization assay
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
IL113519A (en) 1990-08-03 1997-11-20 Sterling Winthrop Inc Oligonucleoside sequences of from about 6 to about 200 bases having a three atom internucleoside linkage, their preparation and pharmaceutical compositions for inhibiting gene expression containing said oligonucleosides
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
WO1992005186A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 Gilead Sciences Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
JP3739785B2 (ja) 1991-11-26 2006-01-25 アイシス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
DE69232032T3 (de) * 1991-12-24 2012-09-13 Isis Pharmaceutical, Inc. Antisense oligonukleotide
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
AU678769B2 (en) 1992-07-27 1997-06-12 Hybridon, Inc. Oligonucleotide alkylphosphonothioates
WO1994014226A1 (en) 1992-12-14 1994-06-23 Honeywell Inc. Motor system with individually controlled redundant windings
JPH08508714A (ja) 1993-01-25 1996-09-17 ハイブライドン インコーポレイテッド オリゴヌクレオチド・アルキルホスホネートおよびアルキルホスホノチオエート
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
WO1994022864A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
NZ278490A (en) 1993-12-09 1998-03-25 Univ Jefferson Chimeric polynucleotide with both ribo- and deoxyribonucleotides in one strand and deoxyribonucleotides in a second strand
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5728518A (en) 1994-01-12 1998-03-17 The Immune Response Corporation Antiviral poly-and oligonucleotides
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5599706A (en) 1994-09-23 1997-02-04 Stinchcomb; Dan T. Ribozymes targeted to apo(a) mRNA
US5681940A (en) 1994-11-02 1997-10-28 Icn Pharmaceuticals Sugar modified nucleosides and oligonucleotides
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
WO1997020563A1 (en) 1995-11-22 1997-06-12 The Johns-Hopkins University Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
CN1231675A (zh) 1996-09-26 1999-10-13 味之素株式会社 修饰的生理活性蛋白及含有该蛋白的药物组合物
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
DE69829760T3 (de) 1997-09-12 2016-04-14 Exiqon A/S Bi- und tri-zyklische - nukleosid, nukleotid und oligonukleotid-analoga
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20040171564A1 (en) 1997-11-20 2004-09-02 Honkanen Richard E. Antisense oligonucleotide modulation of human serine/threonine protein phosphatase gene expression
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
NZ509986A (en) 1998-08-19 2003-10-31 Baxter Healthcare S Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide and oligosaccharide protein conjugates as vaccines
RU2249463C2 (ru) * 1998-08-19 2005-04-10 Бакстер Хелфкэа С.А. Иммуногенный конъюгат бета-пропионамид-связанного полисахарида с белком, использующийся в качестве вакцины
US6166239A (en) 1998-09-04 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide protecting groups
WO2000047599A1 (en) 1999-02-12 2000-08-17 Sankyo Company, Limited Novel nucleosides and oligonucleotide analogues
US20030170249A1 (en) 1999-02-19 2003-09-11 Hakomori Sen-Itiroh Vaccines directed to cancer-associated carbohydrate antigens
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US7098192B2 (en) 1999-04-08 2006-08-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression
US6159694A (en) 1999-04-08 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of stat3 expression
JP2002542263A (ja) 1999-04-21 2002-12-10 ワイス ポリヌクレオチド配列の機能を阻害するための方法および組成物
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
WO2001005825A2 (en) 1999-07-16 2001-01-25 Hyseq, Inc. Nucleic acid sequences encoding putative angiopoietin proteins
JP4151751B2 (ja) 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
DE19935303A1 (de) 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5
US20020082227A1 (en) 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
US20050112118A1 (en) 1999-12-02 2005-05-26 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating inflammatory disorders
KR20020062652A (ko) 1999-12-09 2002-07-26 상꾜 가부시키가이샤 고지혈증의 치료 또는 예방제의 시험방법
JP2003519231A (ja) 1999-12-30 2003-06-17 カー・ユ・ルーベン・リサーチ・アンド・ディベロップメント シクロヘキセン核酸
US20020055479A1 (en) 2000-01-18 2002-05-09 Cowsert Lex M. Antisense modulation of PTP1B expression
US7179796B2 (en) 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US6261840B1 (en) 2000-01-18 2001-07-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US6602857B1 (en) 2000-01-18 2003-08-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
WO2001060860A2 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Millennium Predictive Medicine, Inc. Genes differentially expressed in human prostate cancer and their use
WO2002018388A1 (fr) 2000-08-29 2002-03-07 Takeshi Imanishi Analogues de nucleosides et derives d'oligonucleotides renfermant ces analogues
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
WO2002043771A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
WO2002101039A1 (fr) 2001-06-08 2002-12-19 Sankyo Company, Limited Procede de test de medicament destine a traiter ou a prevenir des maladies telles que l'hyperlipemie
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
EP1499627A2 (en) 2001-07-03 2005-01-26 ISIS Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US6964950B2 (en) 2001-07-25 2005-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of C-reactive protein expression
US7425545B2 (en) 2001-07-25 2008-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of C-reactive protein expression
US7227014B2 (en) 2001-08-07 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression
US7259150B2 (en) 2001-08-07 2007-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
WO2003014397A1 (en) 2001-08-09 2003-02-20 Biomedlab Corporation Probe for detection of enteric virus detection kit and method for enteric virus with the same
WO2003020739A2 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
US7439043B2 (en) 2001-10-10 2008-10-21 Neose Technologies, Inc. Galactosyl nucleotide sugars
JP5105696B2 (ja) 2001-11-16 2012-12-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド アンジオポエチン様タンパク質３Ａｎｇｐｔｌ３含有組成物とその使用方法
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
JP2006500012A (ja) 2002-07-31 2006-01-05 ヌクレオニクス インコーポレーティッド 二本鎖ｒｎａの構造および構築物、並びにその作製法および使用法
US8729036B2 (en) 2002-08-07 2014-05-20 University Of Massachusetts Compositions for RNA interference and methods of use thereof
EP1543019A2 (en) 2002-09-11 2005-06-22 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
AU2003284323A1 (en) 2002-10-18 2004-05-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
AU2003295387A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Parmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
EP1562971B1 (en) 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
CA2505801A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Rosanne Crooke Antisense modulation of apolipoprotein b expression
US20060009410A1 (en) 2002-11-13 2006-01-12 Crooke Rosanne M Effects of apolipoprotein B inhibition on gene expression profiles in animals
US7511131B2 (en) 2002-11-13 2009-03-31 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression
AU2003295600A1 (en) 2002-11-14 2004-06-15 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
EP1583771B1 (en) 2002-12-20 2013-04-03 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with myocardial infarction, methods of detection and uses thereof
US6673661B1 (en) 2002-12-20 2004-01-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device
JP4152955B2 (ja) 2003-01-09 2008-09-17 ポステック・ファウンデーション 新規フォスフォアミダイト化合物
WO2004072046A2 (en) 2003-02-12 2004-08-26 Carex S.A. Quinoline derivatives and their use for modulation of lxr activity
US7803781B2 (en) 2003-02-28 2010-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression
WO2004080406A2 (en) * 2003-03-07 2004-09-23 Alnylam Pharmaceuticals Therapeutic compositions
CA2488224A1 (en) * 2003-04-03 2004-10-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna conjugates
US7598227B2 (en) 2003-04-16 2009-10-06 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of apolipoprotein C-III expression
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
CA2522637C (en) 2003-04-17 2014-01-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified irna agents
US7750142B2 (en) 2003-04-28 2010-07-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucagon receptor expression
US7399853B2 (en) 2003-04-28 2008-07-15 Isis Pharmaceuticals Modulation of glucagon receptor expression
WO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2004-11-25 Shionogi Co., Ltd. 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
AU2004274021B2 (en) 2003-09-18 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
BRPI0413930A (pt) * 2003-09-18 2006-10-24 Isis Pharmaceuticals Inc composto oligomérico ou sal farmaceuticamente aceitável deste, composição farmacêutica ou veterinária, métodos para inibir a expressão de eif4e em uma célula, tecido ou órgão, para diminuir a proliferação de uma célula em que eif4e é expressado, e para prevenir ou tratar uma condição ou doença métodos para prevenir ou diminuir a angiogênese, e o crescimento de tumor em um paciente, oligonucleotìdeo de anti-sentido, composição farmacêutica ou veterinária, e, uso de um composto oligomérico ou sal farmaceuticamente aceitável deste
EP1687410A4 (en) * 2003-10-07 2008-04-09 Isis Pharmaceuticals Inc ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE OPTIMIZED FOR KIDNEY TARGETING
US7959919B2 (en) 2003-11-19 2011-06-14 Novelmed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting factor B-mediated complement activation
WO2005065686A1 (en) 2004-01-07 2005-07-21 Adipogen Pharmaceuticals Pty Limited Differentiation modulating agents and uses therefor
JP2007520222A (ja) 2004-01-20 2007-07-26 アイシス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド グルココルチコイドレセプター発現の調節
WO2005075453A1 (ja) * 2004-02-05 2005-08-18 Japan Science And Technology Agency リンカー化合物及びリガンド複合体、並びにそれらの製造方法
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
WO2005097155A1 (ja) 2004-04-08 2005-10-20 Takara Bio Inc. 神経突起伸長誘導剤
CN101052717A (zh) 2004-05-11 2007-10-10 α基因株式会社 诱发rna干扰的多核苷酸以及使用该多核苷酸的基因表达抑制方法
AU2005252663B2 (en) 2004-06-03 2011-07-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
DK1771474T3 (da) 2004-07-20 2010-05-31 Genentech Inc Inhibitorer af angiopoitin-like 4 protein, kombinationer og anvendelser deraf
NZ552957A (en) 2004-07-20 2011-06-30 Genentech Inc Compositions and methods of using angiopoietin-like 4 protein
PT1786472E (pt) * 2004-08-10 2013-03-06 Genzyme Corp Modulação anti-sentido de expressão de apolipoproteína
CA2576233C (en) 2004-08-10 2016-03-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conjugate comprising an antagomir and a ligand
WO2006031461A2 (en) 2004-09-09 2006-03-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
US20060089325A1 (en) 2004-10-13 2006-04-27 Sanjay Bhanot Antisense modulation of PTP1B expression
EP1812569A2 (en) 2004-11-08 2007-08-01 K.U. Leuven Research and Development Modified nucleosides for rna interference
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
EP1841867A1 (en) 2005-01-24 2007-10-10 Avaris AB COMPLEX CONTAINING SiRNA, ShRNA OR ANTISENSE MOLECULE AND FUNCTIONAL ENTITY, FOR IMPROVED SPECIFICITY AND DELIVERY
EP1931778A2 (en) * 2005-09-15 2008-06-18 Santaris Pharma A/S RNA ANTAGONIST COMPOUNDS FOR THE INHIBITION OF APO-Bl00 EXPRESSION
US20070087987A1 (en) 2005-09-19 2007-04-19 Monia Brett P Modulation of glucagon receptor expression
US20070066557A1 (en) 2005-09-19 2007-03-22 Monia Brett P Modulation of glucocorticoid receptor expression
PT2161038E (pt) * 2006-01-26 2014-03-10 Isis Pharmaceuticals Inc Composições e suas utilizações dirigidas à huntingtina
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US8143230B2 (en) 2006-05-05 2012-03-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of PCSK9
CN101489565A (zh) * 2006-05-05 2009-07-22 Isis药物公司 调节pcsk9表达的化合物和方法
US7547684B2 (en) 2006-05-11 2009-06-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2008017081A1 (en) 2006-08-04 2008-02-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the modulation of jnk proteins
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
BRPI0715375A2 (pt) 2006-08-18 2013-06-18 Hoffmann La Roche policonjugados para distribuiÇço in vivo de polinucleotÍdeos
US8809514B2 (en) 2006-09-22 2014-08-19 Ge Healthcare Dharmacon, Inc. Tripartite oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference
EP2410054B2 (en) 2006-10-18 2019-12-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
TW200838551A (en) 2006-11-27 2008-10-01 Isis Pharmaceuticals Inc Methods for treating hypercholesterolemia
MX2009006082A (es) 2006-12-08 2009-08-18 Lexicon Pharmaceuticals Inc Anticuerpos monoclonales contra la proteina 3 similar a angiopoyetina (angptl3).
CA2839162A1 (en) * 2006-12-20 2008-06-26 Xoma Technology Ltd. Methods for the treatment of il-1-.beta. related diseases
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
EP2604284A1 (en) 2007-02-16 2013-06-19 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
EP2134173A4 (en) 2007-03-01 2010-11-10 Wellstat Ophthalmics Corp TREATMENT OF DISEASES SIGNED BY IGNITION
US20100055782A1 (en) 2007-03-02 2010-03-04 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting myc gene expression and uses thereof
US8877917B2 (en) 2007-04-23 2014-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of RNA interference agents
AU2008260277C1 (en) 2007-05-30 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
US20090004140A1 (en) 2007-06-26 2009-01-01 Yao-Ling Qiu 4-substituted pyrrolidine as anti-infectives
EP2176280B2 (en) 2007-07-05 2015-06-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
JP5572090B2 (ja) 2007-08-15 2014-08-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド テトラヒドロピラン核酸類似体
CA2696699A1 (en) * 2007-08-20 2009-02-26 Protalix Ltd. Saccharide-containing protein conjugates and uses thereof
AU2008308691B2 (en) * 2007-10-01 2013-11-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression
EP2227545A2 (en) 2007-11-09 2010-09-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of factor 7 expression
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
CA2930393C (en) 2007-12-04 2022-11-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
KR20160007671A (ko) 2007-12-27 2016-01-20 가부시끼가이샤 스텔릭 사이세이 이카가꾸 겐뀨쇼 당쇄 관련 유전자, 및 그의 이용
AU2009241591A1 (en) 2008-01-31 2009-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Optimized methods for delivery of DSRNA targeting the PCSK9 gene
WO2009100320A2 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
WO2009120878A2 (en) 2008-03-26 2009-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
AU2009234266B2 (en) 2008-04-11 2015-08-06 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
WO2009143369A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method of preparing nucleosides and analogs thereof without using chromatography
WO2009148605A2 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
WO2010006215A1 (en) 2008-07-09 2010-01-14 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular diseases, methods of detection and uses thereof
EP2323667A4 (en) 2008-08-07 2012-07-25 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF TRANSTHYRETIN EXPRESSION BY TREATMENT OF CNS DISEASES
CA2737661C (en) 2008-09-23 2019-08-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
EP2356129B1 (en) 2008-09-24 2013-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
US8604192B2 (en) 2008-09-24 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cyclohexenyl nucleic acids analogs
RU2535964C2 (ru) 2008-10-15 2014-12-20 АйЭсАйЭс ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. Модуляция экспрессии фактора 11
IL302142B2 (en) * 2008-10-20 2024-07-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Compounds and methods for inhibiting transthyretin expression
US8987435B2 (en) 2008-10-24 2015-03-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and methods
CA2741294C (en) 2008-10-24 2018-04-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5' and 2' bis-substituted nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CA3033577A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
EP2405921A4 (en) 2009-01-26 2013-05-22 Protiva Biotherapeutics Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INACTIVATION OF APOLIPOPROTEIN C-III EXPRESSION
WO2010088537A2 (en) 2009-01-29 2010-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improved lipid formulation
AU2010221419B2 (en) 2009-03-02 2015-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid chemical modifications
FR2943060B1 (fr) 2009-03-13 2013-01-04 Commissariat Energie Atomique Agents chelatants d'ions metalliques, leurs procedes de preparation et leurs applications
CN102458480A (zh) 2009-04-15 2012-05-16 Isis制药公司 因子xi对炎症反应的调节
WO2010129709A1 (en) 2009-05-05 2010-11-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid compositions
JP5875976B2 (ja) 2009-06-01 2016-03-02 ヘイロー−バイオ アールエヌエーアイ セラピューティクス， インコーポレイテッド 多価ｒｎａ干渉のためのポリヌクレオチド、組成物およびそれらの使用方法
SMT201800499T1 (it) 2009-06-10 2018-11-09 Arbutus Biopharma Corp Formulazione lipidica migliorata
NZ597504A (en) 2009-06-15 2013-10-25 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
JP2014501097A (ja) 2009-07-06 2014-01-20 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 生物由来物質の産生を高めるための組成物及び方法
US9512164B2 (en) 2009-07-07 2016-12-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
WO2011005860A2 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5' phosphate mimics
WO2011008995A1 (en) 2009-07-16 2011-01-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of factor 7 expression
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011019839A2 (en) * 2009-08-12 2011-02-17 The Medicines Company Glycopeptide and lipoglycopeptide antibiotics with improved solubility
EP2480667A4 (en) 2009-09-25 2013-07-03 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF TTC39 EXPRESSION FOR HDL INCREASE
US8552163B2 (en) 2009-09-25 2013-10-08 Johns Hopkins University Liver-targeting agents and their synthesis
WO2011047312A1 (en) 2009-10-16 2011-04-21 Glaxo Group Limited Hbv antisense inhibitors
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
WO2011056883A1 (en) * 2009-11-03 2011-05-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (ttr)
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
EP3421040A1 (en) 2010-01-08 2019-01-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of angiopoietin-like 3 expression
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
AU2011219941C1 (en) 2010-02-24 2015-05-07 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Compositions for targeted delivery of siRNA
US9193752B2 (en) 2010-03-17 2015-11-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US8349308B2 (en) 2010-03-26 2013-01-08 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
CN102834099B (zh) 2010-03-30 2015-05-27 诺华有限公司 Dgat1抑制剂的用途
US9102938B2 (en) 2010-04-01 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
WO2011133871A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
EP2625186B1 (en) 2010-04-28 2016-07-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CN103154014B (zh) 2010-04-28 2015-03-25 Isis制药公司 修饰核苷、其类似物以及由它们制备的寡聚化合物
LT2563920T (lt) 2010-04-29 2017-05-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Transtiretino raiškos moduliavimas
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
CA2812046A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified irna agents
WO2012067970A2 (en) 2010-11-11 2012-05-24 Ted M Dawson Transcriptional repression leading to parkinson's disease
US8987377B2 (en) 2010-11-19 2015-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
AU2011343664B2 (en) 2010-12-17 2015-10-08 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Galactose cluster-pharmacokinetic modulator targeting moiety for siRNA
BR122020024388B1 (pt) 2010-12-29 2021-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Oligonucleotídeo e composição farmacêutica
EP3467109A1 (en) 2011-02-08 2019-04-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
EA029317B1 (ru) 2011-04-01 2018-03-30 Айонис Фармасьютикалз, Инк. Одноцепочечный антисмысловой модифицированный олигонуклеотид для ингибирования экспрессии трансдуктора сигнала и активатора транскрипции 3 (stat3) и его применение для лечения гиперпролиферативного заболевания
US8658783B2 (en) * 2011-04-13 2014-02-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
UA118951C2 (uk) * 2011-04-21 2019-04-10 Айоніс Фармасьютікалз, Інк. Модулювання експресії вірусу гепатиту b (hbv)
WO2012145674A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
CN107714715A (zh) 2011-04-27 2018-02-23 Ionis制药公司 载脂蛋白ciii（apociii）表达的调节
WO2012174154A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of inflammatory responses by factor vii
CA2839437A1 (en) * 2011-06-16 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression
US9315813B2 (en) 2011-06-21 2016-04-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein C-III (APOC3) genes
EP4092120A1 (en) 2011-06-21 2022-11-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (anglptl3) irna compositions and methods of use thereof
WO2012177639A2 (en) 2011-06-22 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines
US20130017250A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods For High Density Lipoprotein Cholesterol Regulation
BR112014004585A2 (pt) 2011-08-26 2017-06-13 Arrowhead Res Corp polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo
EP3453761A1 (en) 2011-08-29 2019-03-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
CN103814132B (zh) * 2011-09-20 2018-06-05 苏州瑞博生物技术有限公司 Gcgr表达的反义调节
IN2014CN03749A (sr) 2011-10-25 2015-09-25 Isis Pharmaceuticals Inc
WO2013075035A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Alnylam Pharmaceuticals Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
AU2013216852A1 (en) 2012-02-08 2014-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating Factor VII expression
US9340784B2 (en) 2012-03-19 2016-05-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating alpha-1-antitrypsin expression
WO2013142571A2 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Cornell University Assays for the identification of compounds that modulate lipid homeostasis
US9133461B2 (en) * 2012-04-10 2015-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene
WO2013159108A2 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2013159109A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
TWI595885B (zh) 2012-05-02 2017-08-21 喜納製藥公司 包含四ｇａｌｎａｃ之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法
EP2844261B1 (en) 2012-05-02 2018-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
ES2820548T3 (es) 2012-05-24 2021-04-21 Ionis Pharmaceuticals Inc Métodos y composiciones para modular la expresión de la apolipoproteína (a)
WO2013192233A1 (en) 2012-06-18 2013-12-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and method for improved cellular uptake of antisense compounds
ES2947520T3 (es) 2012-08-06 2023-08-10 Alnylam Pharmaceuticals Inc Proceso para la preparación de agentes de ARN conjugados con carbohidratos
WO2014059353A2 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof
DK2920307T3 (en) 2012-11-15 2018-07-16 Roche Innovation Ct Copenhagen As ANTI-APOB, ANTISENSE CONJUGATE RELATIONSHIPS
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
DK2951305T3 (en) 2013-01-30 2018-10-29 Hoffmann La Roche LNA oligonucleotide KULHYDRATKONJUGATER
WO2014127268A2 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii (apociii) expression in lipoprotein lipase deficient (lpld) populations
KR20160002977A (ko) 2013-05-01 2016-01-08 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 조성물 및 방법
CA3088270C (en) 2013-05-16 2023-06-27 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Transplantation adjuvant in cell therapy using neural progenitor cells
ES2778462T3 (es) 2013-06-21 2020-08-10 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para modular expresión de C-III de apolipoproteína para mejorar un perfil diabético
WO2014205451A2 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of target nucleic acids
HUE048738T2 (hu) 2013-06-27 2020-08-28 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antiszensz oligomerek és konjugátumok, amelyek a PCK9-t célozzák meg
EP3730614A3 (en) 2013-07-02 2020-12-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of growth hormone receptor
CA3177846A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation
SG10201806787VA (en) 2013-09-13 2018-09-27 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulators of complement factor b
WO2015042447A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
CN105722980A (zh) 2013-11-14 2016-06-29 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 Apob反义缀合物化合物
EP3077511A4 (en) 2013-12-06 2017-07-05 Dicerna Pharmaceuticals Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (ttr) by double-stranded rna
WO2015105083A1 (ja) * 2014-01-07 2015-07-16 塩野義製薬株式会社 アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド
EP3811977B1 (en) 2014-05-01 2025-12-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
RU2724527C2 (ru) 2014-05-01 2020-06-23 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы модулирования экспрессии рецептора гормона роста
CN110724687B (zh) 2014-05-01 2023-10-13 Ionis制药公司 用于调节补体因子b表达的组合物和方法
AU2015252917B2 (en) 2014-05-01 2019-09-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating PKK expression
JP2017521045A (ja) 2014-05-01 2017-08-03 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． アンジオポエチン様因子３発現を調節するための組成物及び方法
US10570169B2 (en) 2014-05-22 2020-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
EP3151839A4 (en) 2014-06-06 2018-02-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhanced intestinal absorption of conjugated oligomeric compounds
US20190046555A1 (en) * 2015-11-06 2019-02-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
CA2999341A1 (en) * 2015-11-06 2017-05-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression

Also Published As

Publication number Publication date
MA60161A1 (fr) 2024-09-30
JP6639629B2 (ja) 2020-02-05
HK1221486A1 (en) 2017-06-02
RU2015151200A (ru) 2019-01-14
EP4529927A3 (en) 2025-06-18
EA031393B1 (ru) 2018-12-28
JP2018183184A (ja) 2018-11-22
FIC20260001I1 (fi) 2026-01-15
KR20160002974A (ko) 2016-01-08
RU2015151203A (ru) 2017-06-02
EP3524680B1 (en) 2020-11-11
NZ740338A (en) 2022-04-29
IL264580A (en) 2019-02-28
US9127276B2 (en) 2015-09-08
AU2014259759A1 (en) 2015-10-22
US20180273952A1 (en) 2018-09-27
AU2019200820B2 (en) 2020-04-30
RU2015151199A (ru) 2017-06-05
AU2024266799A1 (en) 2024-12-12
CA2921518A1 (en) 2014-11-06
IL272617A (en) 2020-03-31
IL242126B (en) 2019-01-31
RU2015151199A3 (sr) 2018-03-27
EP2991656A4 (en) 2017-02-22
JP2023113843A (ja) 2023-08-16
RU2018136140A (ru) 2018-12-17
MX384824B (es) 2025-04-01
SMT201900316T1 (it) 2019-07-11
DK2992009T3 (da) 2020-09-14
US20150126718A1 (en) 2015-05-07
MX2015015264A (es) 2016-08-12
RU2697152C2 (ru) 2019-08-12
CA2921167A1 (en) 2014-11-06
CN105378085A (zh) 2016-03-02
US20140343123A1 (en) 2014-11-20
CA2921162A1 (en) 2014-11-06
IL263843A (en) 2019-01-31
EP3524680A1 (en) 2019-08-14
JP2025072530A (ja) 2025-05-09
KR20210129257A (ko) 2021-10-27
KR20230006933A (ko) 2023-01-11
MX373306B (es) 2020-05-20
AU2020233603A1 (en) 2020-10-01
CA2921514C (en) 2023-10-24
SG11201508800WA (en) 2015-11-27
WO2014179629A3 (en) 2015-01-22
AU2014259757A1 (en) 2015-10-22
IL261901A (en) 2018-10-31
JP6216444B2 (ja) 2017-10-18
JP7429103B2 (ja) 2024-02-07
MX2019010443A (es) 2019-10-17
KR20180051678A (ko) 2018-05-16
ME03390B (me) 2020-01-20
ES2730015T3 (es) 2019-11-07
PH12018501963A1 (en) 2020-07-20
BR112015027369A2 (pt) 2017-09-26
WO2014179627A3 (en) 2015-04-16
CY1121879T1 (el) 2020-10-14
RU2015151202A (ru) 2017-06-06
KR102424855B1 (ko) 2022-07-26
CL2016002262A1 (es) 2017-06-09
AU2019204784A1 (en) 2019-07-25
RU2019110030A (ru) 2019-05-06
US20190055554A1 (en) 2019-02-21
AU2022202770A1 (en) 2022-05-19
EP2991661A1 (en) 2016-03-09
JP2024116224A (ja) 2024-08-27
KR20210037752A (ko) 2021-04-06
WO2014179626A3 (en) 2015-02-26
US20210395734A1 (en) 2021-12-23
NZ753018A (en) 2022-01-28
JP7633311B2 (ja) 2025-02-19
JP2023012548A (ja) 2023-01-25
WO2014179627A9 (en) 2015-02-26
CN110079524A (zh) 2019-08-02
EP2992098A2 (en) 2016-03-09
DOP2015000268A (es) 2015-11-30
CN113293163A (zh) 2021-08-24
JP2016523515A (ja) 2016-08-12
MX2020004209A (es) 2020-08-13
MX381034B (es) 2025-04-01
RU2015151204A (ru) 2017-06-02
US9957504B2 (en) 2018-05-01
CN105378085B (zh) 2019-02-15
AU2019203674B2 (en) 2021-03-25
ZA201507216B (en) 2017-08-30
BR112015027377A2 (pt) 2017-08-29
CL2015003217A1 (es) 2016-07-08
CN108064162B (zh) 2021-12-03
MA60161B1 (fr) 2025-02-28
US20150176007A1 (en) 2015-06-25
LT2992098T (lt) 2019-07-10
AU2018267625B2 (en) 2020-09-10
BR122018009831B1 (pt) 2021-12-21
CN108064162A (zh) 2018-05-22
EP2992009A4 (en) 2016-12-28
US20160090596A1 (en) 2016-03-31
IL274064A (en) 2020-06-30
AU2014259755B2 (en) 2018-08-30
IL284593B2 (en) 2023-02-01
IL284593B (en) 2022-10-01
IL315582A (en) 2024-11-01
JP2021020901A (ja) 2021-02-18
MX2015015239A (es) 2016-10-03
US20210024923A1 (en) 2021-01-28
NZ712737A (en) 2021-08-27
PT2992009T (pt) 2020-09-21
US9181550B2 (en) 2015-11-10
US20240247260A1 (en) 2024-07-25
AU2019200820A1 (en) 2019-02-28
EP2991661A4 (en) 2017-02-15
BR112015027377B1 (pt) 2023-01-10
AU2019203674A1 (en) 2019-06-27
JP6456362B2 (ja) 2019-01-23
IL242132B (en) 2018-10-31
JP7339294B2 (ja) 2023-09-05
EP2991656A2 (en) 2016-03-09
JP2016526874A (ja) 2016-09-08
PH12015502493B1 (en) 2019-09-25
CN111593051A (zh) 2020-08-28
MX2020002184A (es) 2020-07-14
AU2017200365C1 (en) 2019-04-18
US20160076030A1 (en) 2016-03-17
US10844379B2 (en) 2020-11-24
SI2992009T1 (sl) 2020-10-30
EA201592093A1 (ru) 2016-06-30
PH12015502493A1 (en) 2016-02-22
CN105377887B (zh) 2020-11-03
JP6387084B2 (ja) 2018-09-05
WO2014179629A8 (en) 2016-06-02
AU2019202598A1 (en) 2019-05-02
BR112015027319A2 (pt) 2017-09-26
AU2020207820A1 (en) 2020-08-06
CA2921514A1 (en) 2014-11-06
DK2991656T3 (da) 2020-03-23
IL273312A (en) 2020-04-30
KR20160002975A (ko) 2016-01-08
RU2015151200A3 (sr) 2019-01-14
US20160090595A1 (en) 2016-03-31
CN110042098A (zh) 2019-07-23
KR102651423B1 (ko) 2024-03-27
JP2020039355A (ja) 2020-03-19
BR112015027321A2 (pt) 2017-09-26
AU2014259750A1 (en) 2015-10-22
US20240401038A1 (en) 2024-12-05
IL264241B (en) 2020-04-30
US20180273953A1 (en) 2018-09-27
CN105392488B (zh) 2021-04-30
PH12019501191A1 (en) 2021-03-01
AU2014259750B2 (en) 2019-02-28
NL301341I2 (nl) 2025-10-02
PL2992009T3 (pl) 2020-11-30
RU2018112167A (ru) 2019-03-07
HK1221404A1 (en) 2017-06-02
US20240352455A1 (en) 2024-10-24
BR112015027322A2 (pt) 2017-09-26
IL283660A (en) 2021-07-29
US10883104B2 (en) 2021-01-05
WO2014179626A2 (en) 2014-11-06
AU2017200950A1 (en) 2017-03-02
AU2018267625A1 (en) 2018-12-13
KR20220108195A (ko) 2022-08-02
IL284593A (en) 2021-08-31
CA2921509A1 (en) 2014-11-06
EP2992009B1 (en) 2020-06-24
PT2992098T (pt) 2019-07-05
CN112921036B (zh) 2025-08-19
KR20160002976A (ko) 2016-01-08
CY1123369T1 (el) 2021-12-31
US20250346899A1 (en) 2025-11-13
MX373334B (es) 2020-05-04
US20180002693A1 (en) 2018-01-04
JP2020039354A (ja) 2020-03-19
UA120287C2 (uk) 2019-11-11
CR20150612A (es) 2016-03-03
US11299736B1 (en) 2022-04-12
CN105378082B (zh) 2020-06-09
US20160017323A1 (en) 2016-01-21
JP2016526018A (ja) 2016-09-01
JP2018027091A (ja) 2018-02-22
JP6995478B2 (ja) 2022-01-14
SG10201801813YA (en) 2018-04-27
NZ725538A (en) 2021-02-26
CN110042098B (zh) 2023-02-24
US20150126719A1 (en) 2015-05-07
KR102558571B1 (ko) 2023-07-21
KR20230113835A (ko) 2023-08-01
EP4155403A1 (en) 2023-03-29
KR102315836B1 (ko) 2021-10-22
AU2021204244B2 (en) 2023-10-19
AU2019204784B2 (en) 2022-01-27
KR102482890B1 (ko) 2022-12-30
JP2020007361A (ja) 2020-01-16
WO2014179620A1 (en) 2014-11-06
AU2017200950B2 (en) 2019-01-17
BR112015027322A8 (pt) 2018-01-02
US20210130823A1 (en) 2021-05-06
PT3524680T (pt) 2021-01-04
KR20160003723A (ko) 2016-01-11
RU2015151204A3 (sr) 2018-03-27
US20190367914A1 (en) 2019-12-05
RU2699985C2 (ru) 2019-09-11
AU2017200365A1 (en) 2017-02-23
KR101857707B1 (ko) 2018-05-14
EA036584B1 (ru) 2020-11-26
KR20190084138A (ko) 2019-07-15
JP2020058370A (ja) 2020-04-16
US9714421B2 (en) 2017-07-25
KR20210014758A (ko) 2021-02-09
CN105377887A (zh) 2016-03-02
AU2014259756A1 (en) 2015-10-22
KR102919162B1 (ko) 2026-01-29
RU2670614C9 (ru) 2018-11-23
IL273205A (en) 2020-04-30
IL284000A (en) 2021-07-29
IL273184A (en) 2020-04-30
JP6769866B2 (ja) 2020-10-14
RU2015151202A3 (sr) 2018-03-27
HK1221485A1 (en) 2017-06-02
UA121017C2 (uk) 2020-03-25
CR20190269A (es) 2019-09-13
SG11201508870VA (en) 2015-11-27
AU2021204244A1 (en) 2021-07-22
IL261901B (en) 2020-05-31
US12516319B2 (en) 2026-01-06
EP2991661B1 (en) 2019-03-13
BR112015027369A8 (pt) 2018-01-02
CN112921036A (zh) 2021-06-08
IL274064B (en) 2021-06-30
KR20240147701A (ko) 2024-10-08
US20160076032A1 (en) 2016-03-17
MX2015015263A (es) 2016-12-16
SG10201906382QA (en) 2019-08-27
AU2017203436B2 (en) 2018-10-18
KR20240042220A (ko) 2024-04-01
WO2014179627A2 (en) 2014-11-06
AU2022202770B2 (en) 2024-10-03
EP4438129A3 (en) 2025-01-15
CN105392488A (zh) 2016-03-09
US11851655B2 (en) 2023-12-26
FIC20250028I1 (fi) 2025-08-18
CN110079524B (zh) 2024-09-24
KR102212275B1 (ko) 2021-02-05
US10927372B2 (en) 2021-02-23
DK3524680T3 (da) 2020-12-14
NO2025037I1 (no) 2025-08-13
CN105378082A (zh) 2016-03-02
KR20210151260A (ko) 2021-12-13
FR25C1033I1 (fr) 2025-11-21
CN110066795A (zh) 2019-07-30
BR112015027369B1 (pt) 2021-06-08
AU2024200296A1 (en) 2024-02-08
EP2992097A2 (en) 2016-03-09
EP3633039A1 (en) 2020-04-08
RU2686080C2 (ru) 2019-04-24
AU2019204784C1 (en) 2022-11-03
HUE050394T2 (hu) 2020-11-30
US20150126720A1 (en) 2015-05-07
IL296543B1 (en) 2024-10-01
RS60796B1 (sr) 2020-10-30
EP3828275A1 (en) 2021-06-02
EP4438129A2 (en) 2024-10-02
LT2992009T (lt) 2020-11-10
EP2992097B1 (en) 2019-11-06
AU2014259759B2 (en) 2020-06-18
IL296543A (en) 2022-11-01
MY178929A (en) 2020-10-23
AU2014259757B2 (en) 2017-03-02
EP3690049A1 (en) 2020-08-05
BR112015027321A8 (pt) 2018-01-02
NZ631537A (en) 2017-05-26
US9932580B2 (en) 2018-04-03
EP2992098A4 (en) 2017-01-11
JP2022017514A (ja) 2022-01-25
US20210087566A1 (en) 2021-03-25
MX2015015220A (es) 2016-01-12
MY198359A (en) 2023-08-28
EP2992098B1 (en) 2019-03-27
CA2921509C (en) 2025-10-07
SI2992098T1 (sl) 2019-06-28
EP2992097A4 (en) 2017-01-04
JP2021107408A (ja) 2021-07-29
KR20160002977A (ko) 2016-01-08
MX2021008899A (es) 2021-08-19
IL264241A (en) 2019-02-28
CA2921167C (en) 2025-05-20
ES2885174T3 (es) 2021-12-13
AU2014259756B2 (en) 2017-02-23
DK2992098T3 (da) 2019-06-17
HK1221403A1 (en) 2017-06-02
IL242125B (en) 2019-02-28
AU2014259755A1 (en) 2015-10-22
RU2018136140A3 (sr) 2022-04-27
US20200224198A1 (en) 2020-07-16
JP7799103B2 (ja) 2026-01-14
CN114058617A (zh) 2022-02-18
PL2992098T3 (pl) 2019-09-30
US9181549B2 (en) 2015-11-10
JP6592486B2 (ja) 2019-10-16
US12291709B2 (en) 2025-05-06
AU2017200365B2 (en) 2018-11-08
MX2021008901A (es) 2021-08-19
JP2016522683A (ja) 2016-08-04
JP2021074021A (ja) 2021-05-20
HRP20201378T1 (hr) 2020-11-27
JP7177127B2 (ja) 2022-11-22
JP6652602B2 (ja) 2020-02-26
MX2015015234A (es) 2016-10-03
BR112015027377A8 (pt) 2017-10-03
KR20200090966A (ko) 2020-07-29
BR112015027319A8 (pt) 2018-01-02
NZ631512A (en) 2016-10-28
EP2992009A1 (en) 2016-03-09
PE20161430A1 (es) 2017-01-06
PE20152002A1 (es) 2016-01-21
NZ728517A (en) 2021-12-24
CN119913147A (zh) 2025-05-02
SG10201801507RA (en) 2018-03-28
IL242124B (en) 2019-02-28
US9932581B2 (en) 2018-04-03
JP6866459B2 (ja) 2021-04-28
IL270464B (en) 2021-07-29
AU2020217347A1 (en) 2020-08-27
JP2025174962A (ja) 2025-11-28
AU2017203436A1 (en) 2017-06-08
JP2020074787A (ja) 2020-05-21
WO2014179625A1 (en) 2014-11-06
EA201891479A1 (ru) 2018-11-30
ES2778442T3 (es) 2020-08-10
JP2024010070A (ja) 2024-01-23
EP2991656B1 (en) 2019-12-18
EP3546579A1 (en) 2019-10-02
US20260035695A1 (en) 2026-02-05
RU2650510C2 (ru) 2018-04-16
US20230151365A1 (en) 2023-05-18
IL296543B2 (en) 2025-02-01
DOP2021000095A (es) 2021-09-15
RU2019124314A (ru) 2019-08-21
EP4529927A2 (en) 2025-04-02
HRP20190987T1 (hr) 2019-09-20
MX2019010441A (es) 2019-10-17
KR102235678B1 (ko) 2021-04-05
US10683499B2 (en) 2020-06-16
KR102138781B1 (ko) 2020-07-28
US20220275365A9 (en) 2022-09-01
RU2670614C2 (ru) 2018-10-24
US20180044676A1 (en) 2018-02-15
NZ631552A (en) 2017-02-24
JP2019056001A (ja) 2019-04-11
NO2026003I1 (no) 2026-01-15
US9163239B2 (en) 2015-10-20
KR102712053B1 (ko) 2024-10-02
US12509684B2 (en) 2025-12-30
DOP2016000287A (es) 2017-02-15
HK1221475A1 (en) 2017-06-02
IL273184B (en) 2021-07-29
HUE043697T2 (hu) 2019-09-30
ES2819213T3 (es) 2021-04-15
WO2014179629A2 (en) 2014-11-06
IL264580B (en) 2020-04-30
ZA201507218B (en) 2023-09-27
IL263843B (en) 2020-03-31
US9145558B2 (en) 2015-09-29
JP2016522817A (ja) 2016-08-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12516319B2 (en) Compositions and methods for modulating TTR expression
HK40053557A (en) Compositions and methods for modulating ttr expression
HK1221485B (en) Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression
HK40011555A (en) Compositions and methods for modulating ttr expression
HK40011555B (en) Compositions and methods for modulating ttr expression
HK1221403B (en) Compositions and methods for modulating apolipoprotein c-iii expression
HK1221475B (en) COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING APOLIPOPROTEIN (a) EXPRESSION
HK1221486B (en) Compositions and methods