CN114703184B - Lpa抑制剂及其用途 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及一种抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含反义链的互补区，所述互补区包括至少12个连续核苷酸，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.414‑418中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。本申请的RNA抑制剂直接降解LPA mRNA，持续高效地抑制LPA基因表达，可用于治疗或/和预防LPA基因介导的相关的心脑血管疾病。
Description
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体涉及一种抑制LPA基因表达的RNA抑制剂及其应用。
背景技术
RNAi
RNAi(RNA干扰)于1998年，由安德鲁·法厄(Andrew Z.Fire)等在秀丽隐杆线虫中进行反义RNA抑制实验时发现，并将这一过程称为RNAi。这一发现被《Science》杂志评为2001年的十大科学进展之一，并名列2002年十大科学进展之首。自此以后，以RNAi为作用机理的siRNA作为潜在的基因治疗药物得到人们广泛的关注，2006年，安德鲁·法厄与克雷格·梅洛(Craig C.Mello)由于在RNAi机制研究中的贡献获得诺贝尔生理或医学奖。RNAi是在许多生物中，包括动物、植物和真菌，都可由双链RNA(dsRNA)触发的，在RNAi过程中，一种称为“Dicer”的核酸内切酶将长链dsRNA切割或“切丁”成21～25个核苷酸长的小片段。这些小片段，被称为小干扰RNA(siRNA)，其中的反义链(Guide strand)被加载到Argonaute蛋白(AGO2)上。AGO2加载发生在RISC-loading复合物中，这是一个三元复合物，由Argonaute蛋白、Dicer和dsRNA结合蛋白(简称为TRBP)组成。在装载过程中，正义链(Passengerstrand)链被AGO2裂解并排出。然后，AGO2使用反义链与包含完全互补序列的mRNA结合，然后催化这些mRNA的切割，致使mRNA分裂丧失翻译模板的作用，进而阻止相关蛋白质的合成。切割后，被切割的mRNA被释放，加载着反义链的RISC-loading复合物被循环用于另一轮的切割。
据统计，在人体内的疾病相关蛋白中，大约超过80％的蛋白质不能被目前常规的小分子药物以及生物大分子制剂所靶向，属于不可成药蛋白。旨在通过基因的表达、沉默等功能治疗疾病的基因治疗被业界认为是继化学小分子药物、生物大分子药物之后的第三代治疗药物，这种疗法在基因水平上实现对疾病的治疗，不受不可成药蛋白的制约。作为基因治疗中RNAi技术最主流的类型，RNAi技术是从mRNA的水平对疾病进行治疗，相比化学小分子药物及生物大分子药物在蛋白质水平的治疗具有更高的效率。利用RNAi技术，可以根据特定基因序列，设计出特异性高、抑制效果好的siRNA的正义链和反义链序列，通过固相合成这些单链序列，然后正义链与反义链在特定的退火缓冲液中按照碱基配对原则配对成siRNA，最后通过载体系统输送到体内相应靶点，降解目标mRNA，破坏目标mRNA作为翻译模板的功能，从而阻止相关蛋白的合成。
siRNA的递送系统
siRNA在血液和组织中不稳定，容易被核酸酶降解，为了提高siRNA的稳定性，可以通过对siRNA的正义链和反义链修饰，但这些化学修饰只提供有限的免受核酸酶降解的保护作用并且可能最终影响siRNA的活性。因此，还需要相应的传递系统来保障siRNA安全高效的穿过细胞膜。由于siRNA分子质量较大，且带有大量负电荷，而且具有高水溶解性，所以自身无法顺利穿越细胞膜到达细胞内。
脂质体基本结构是由亲水核和磷脂双分子层构成，具备类似生物膜的磷脂双分子层，拥有很高的生物相容性，所以脂质体一度成为最受欢迎、应用最广泛的siRNA载体。脂质体介导的siRNA递送主要将siRNA包裹到脂质体内，保护siRNA不被核酸酶降解，提高siRNA的通过细胞膜障碍的效率，从而促进细胞的吸收。例如阴离子脂质体、pH敏感性脂质体、免疫脂质体、膜融合脂质体(fusogenic liposome)和阳离子脂质等等，尽管取得了一定的进展，但脂质体本身容易引发炎症反应，给药前必须使用多种抗组胺和激素类如西利替嗪和地塞米松类等药物，以减少可能发生的急性炎症反应，因此在实际临床应用中并不适合所有治疗领域，尤其像慢性乙肝这一类治疗周期长的疾病，长期使用可能产生的积蓄毒性是潜在的安全隐患，因此需要一种更安全有效的载体系统来递送siRNA。
肝脏中去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，是肝细胞特异性表达的受体，是一种高效的内吞型受体。由于体内生理情况下各种糖蛋白在酶或酸水解唾液酸后，暴露出的次末端是半乳糖残基，所以ASGPR特异性结合的糖为半乳糖基，故又称半乳糖特异性受体。半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺等单糖和多糖分子都对ASGPR有高亲和性。ASGPR主要生理功能是介导血液中去唾液酸糖蛋白、脂蛋白等物质的清除，且与病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等肝脏疾病的发生发展有着密切联系。ASGPR这一特性的发现，对肝源性疾病的诊断及治疗起着重要作用(Ashwell G、Harford J，Carbohydrate specific Receptors of the Liver，AnnRev Biochem 1982 51:531-554)。结构中含有半乳糖或半乳糖胺及其衍生物的肝源性疾病治疗药物可以特异性地与ASGPR亲和，从而具有主动肝靶向性，不需要其它的载体系统来输送。
LPA、apo(a)和Lp(a)
LPA是编码载脂蛋白(a)(apo(a))的基因的名称，主要表达在肝脏，其表达仅限于人类和非灵长类动物。载脂蛋白(a)通过二硫键附接至apo(B)-100，与脂质核心一起组合成脂蛋白(a)(Lp(a))颗粒。Lp(a)颗粒是一种富含胆固醇的特殊大分子脂蛋白，表面由胆固醇及磷脂包裹，嵌有亲水性载脂蛋白组分载脂蛋白(a)和apo(B)-100。Lp(a)可以进入并沉积在血管壁上，有促进动脉粥样硬化的作用。Lp(a)并与纤溶酶原(PLG)结构同源，可以与纤维酶原竞争结合纤维蛋白位点，从而抑制纤维蛋白原水解作用，促进血栓形成。因此，LP(a)与动脉粥样硬化和血栓形成有着密切的相关性。研究显示血液中Lp(a)水平是心血管疾病、卒中和动脉粥样硬化性狭窄的独立风险因子。
Lp(a)水平偏高主要跟遗传有关，不随着饮食、运动和其他生活方式改变而显著改变。人类体内的Lp(a)水平大于300毫克每升属于Lp(a)偏高。Lp(a)水平偏高常常预示患动脉粥样硬化和血栓形成的风险明显增加，检测Lp(a)对于早期识别动脉粥样硬化的风险，具有比较重要的意义。在中国大约有现患心血管疾病人数大约3.3.亿，但普通大众对血脂异常的知晓率、治疗率和控制率总体处于较低的水平，对Lp(a)的风险认识更低，绝大多数医院常规的血脂检查也没有纳入这一项，目前国内外临床上也没有针对性的治疗药物。因此，本领域中急需一种有效治疗药物。
发明内容
本申请的目的在于提供了一种LPARNA抑制剂通过干扰LPAmRNA，破坏其作为翻译模板的功能，阻止apo(a)的合成，从而也阻止了Lp(a)颗粒的形成。所述的RNA抑制剂可以由正义链和反义链通过碱基配对形成，正义链和反义链彼此之间至少80％碱基互补，且部分或全部核苷酸糖基2’位的-OH可以被氟或甲氧基取代，末端可以至少有连续3个核苷酸之间的磷酸酯被硫代。本发明的RNA抑制剂的结构中还可以含有使所述RNA抑制剂具有肝靶向特异性的结构5’MVIP和3'MVIP，其中5’MVIP可以偶联在所述RNA抑制剂正义链和/或反义链5’末端，3’MVIP可以偶联在所述RNA抑制剂反义链和/或正义链3’末端，5’MVIP和3’MVIP都可以包含有(肝靶向特异性)靶向单元X、支链L、分支单元B和连接链D，5’MVIP还可以包含与所述RNA抑制剂正义链或反义链5’末端连接的转接点R1，3’MVIP还可以包含与所述RNA抑制剂正义链或反义链3’末端连接的转接点R2，所述靶向单元X、支链L或分支单元B在5’MVIP与3’MVIP各自的内部或5’MVIP与3’MVIP之间可以相同，也可以不同。通过体内外药效实验证明，这种RNA抑制剂直接降解LPAmRNA，持续高效地抑制LPA基因表达，可用于治疗或/和预防LPA基因介导的心脑血管疾病。
一方面，本申请提供一种抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含反义链的互补区，所述互补区包括至少12个连续核苷酸，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.414-418中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
在某些实施方式中，其中所述互补区包含12-25个连续核苷酸碱基对。
在某些实施方式中，其包含反义链，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQID NO.414-418中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
在某些实施方式中，其还包含正义链，其中所述正义链和反义链之间至少有约80％的碱基互补。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链各自独立地为15-30个核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链各自独立地为17-25个核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链各自独立地为19-23个核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述正义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.396-400中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链选自以下组合中的任意一种或多种：
1)正义链：ugguaauggacagaguuauuu(SEQ ID NO.396)，反义链：auaacucuguccauuaccauu(SEQ ID NO.414)；
2)正义链：acagaguuaucgaggcucatt(SEQ ID NO.397)，反义链：ugagccucgauaacucuguuu(SEQ ID NO.415)；
3)正义链：guaauggacagaguuaucgau(SEQ ID NO.398)，反义链：cgauaacucuguccauuacca(SEQ ID NO.416)；
4)正义链：gccccuugguguuauacaa(SEQ ID NO.399)，反义链：uuguauaacaccaaggggcug(SEQ ID NO.417)；和
5)正义链：gcuccuuauuguuauacga(SEQ ID NO.400)，反义链：ucguauaacaauaaggagcug(SEQ ID NO.418)。
在某些实施方式中，其中所述正义链和/或反义链上的一个或多个核苷酸被修饰以形成修饰的核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述修饰的核苷酸选自：脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、脱碱基核苷酸、2’-修饰核苷酸、3’至3’连接(倒置)核苷酸、含非天然碱基的核苷酸、桥接核苷酸、肽核酸(PNA)、解锁的核碱基类似物、锁定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷间连接)核苷酸、2’-F-阿拉伯糖核苷酸、5’-Me/2’-氟带核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯脱氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含环丙基磷酸酯的核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述2’-修饰核苷酸包括：2’-O-甲基核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核苷酸、2’-脱氧核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基核苷酸和/或2’-烷基核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链的部分或全部核苷酸糖基2’位的-OH被取代，其中，所述取代基团为氟或甲氧基。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
在某些实施方式中，其中所述反义链除了5’末端开始的第7、12、14位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH中的至少一个被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
在某些实施方式中，其中所述正义链除了5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH至少一个被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
在某些实施方式中，其中所述反义链除了5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH至少一个被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
在某些实施方式中，其中所述正义链除了5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH中的至少一个被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
在某些实施方式中，其中所述正义链和/或反义链的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
在某些实施方式中，其中所述正义链末端和/或反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
在某些实施方式中，其中所述正义链5’端和反义链3’端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
在某些实施方式中，其中所述正义链末端和反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，反义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，且所述反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，正义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；且所述正义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
在某些实施方式中，其中所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，反义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，且所述反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，正义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；且所述正义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
在某些实施方式中，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.492，493，496，499，501中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
在某些实施方式中，其中所述正义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.456，457，460，463，465中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链选自选自以下组合中的任意一种或多种：
1)正义链：UsGsGUfAAfUfGfGACAGAGUUAUsUsU(SEQ ID NO.456)，反义链：AsUsAACUfCUGUCfCAfUUACCAsUsU(SEQ ID NO.492)；
2)正义链：AsCsAGfAGfUfUfAUCGAGGCUCAsTsT(SEQ ID NO.457)，反义链：UsGsAGCCfUCGAUfAAfCUCUGUsUsU(SEQ ID NO.493)；
3)正义链：GsUsAAfUGfGfAfCAGAGUUAUCGsAsU(SEQ ID NO.460)，反义链：CsGsAUAAfCUCUGfUCfCAUUACsCsA(SEQ ID NO.496)；
4)正义链：GsCsfCCfCUfUfGfGUfGUfUAfUACsAsA(SEQ ID NO.463)，反义链：UsfUsGfUAfUAfACACCAfAGfGGGCsUsG(SEQ ID NO.499)；和
5)正义链：GsCsfUCfCUfUfAfUUfGUfUAfUACsGsA(SEQ ID NO.465)，反义链：UsfCsGfUAfUAfACAAUAfAGfGAGCsUsG(SEQ ID NO.501)；
其中，G＝2’-O-甲基鸟苷酸，A＝2’-O-甲基腺苷酸，U＝2’-O-甲基尿苷酸，C＝2’-O-甲基胞苷酸；Gs＝2’-O-甲基-3’-硫代鸟苷酸，As＝2’-O-甲基-3’-硫代腺苷酸，Us＝2’-O-甲基-3’-硫代尿苷酸，Cs＝2’-O-甲基-3’-硫代胞苷酸；fG＝2’-氟鸟苷酸，fA＝2’-氟腺苷酸，fU＝2’-氟尿苷酸，fC＝2’-氟胞苷酸；fGs＝2’-氟-3’-硫代鸟苷酸，fAs＝2’-氟-3’-硫代腺苷酸，fUs＝2’-氟-3’-硫代尿苷酸，fCs＝2’-氟-3’-硫代胞苷酸。
在某些实施方式中，还包含配体，其中所述配体缀合于正义链和/或反义链。
在某些实施方式中，其中所述配体缀合于反义链的5’末端和/或3’末端。
在某些实施方式中，其中所述配体缀合于正义链的5’末端和/或3’末端。
在某些实施方式中，其中所述配体缀合于反义链的5’末端，且所述配体缀合于正义链的3’末端。
在某些实施方式中，其中所述配体缀合于反义链的3’末端，且所述配体缀合于正义链的5’末端。
在某些实施方式中，其中所述配体缀合于正义链的5’末端和3’末端。
在某些实施方式中，其中所述配体包括5’MVIP(5’MultiValent ImportPlatform)和3’MVIP(3’MultiValent Import Platform)，其中，所述5’MVIP偶联在所述正义链和/或反义链5’末端，所述3’MVIP偶联在所述反义链和/或正义链3’末端，所述5’MVIP的结构如式I所示，所述3’MVIP结构如式II所示，
(X-L)n-B-D-R1-，
I
(X-L)m-B-D-R2-，
II
其中，
n和m各自独立地为0-4的任意整数，优选为1-3的任意整数，
X为靶向单元；
L为支链；
B为分支单元；
D为连接链；
R1和R2为桥接单元，与所述正义链或反义链通过磷酸酯或经修饰的磷酸酯，优选地通过磷酸酯或硫代磷酸酯相连接。
在某些实施方式中，所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐的结构如式IIIa、IIIb或IIIc所示：
其中n和m各自独立地为0-4的任意整数。
在某些实施方式中，其中所述且n+m＝2-6的整数，优选n+m＝2、3或4，更优选为4。
在某些实施方式中，所述桥接单元R1和R2结构中带有-NH-、硫原子和/或氧原子，R1和R2通过结构中-NH-、硫原子或氧原子分别与连接链D以及正义链和/或反义链5’末端和3’末端相连，R1和R2相同或不相同。
在某些实施方式中，所述桥接单元R1和R2是任选直链，或带有酰胺基、羧基或烷基类支链的直链或者环状结构，所述环状结构包括饱和或不饱和的脂肪族碳环基，或者含有硫、氧或氮原子的五元或六元杂环基或芳香烃基。
在某些实施方式中，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)xCH2E2-，其中x为3-12的任意整数，基团E1和E2可以分别为-NH-、硫原子或氧原子。
在某些实施方式中，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)x1CH(OH)(CH2)X2E2-，其中x1或x2各自独立地为3-10的任意整数，E1和E2可以分别为-NH-、硫原子或氧原子。
在某些实施方式中，所述桥接单元R1为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
在某些实施方式中，所述桥接单元R1为-NH(CH2)xCH2O-，其中x为3-12的任意整数，优选为4-6的任意整数。
在某些实施方式中，所述桥接单元R2为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
在某些实施方式中，所述桥接单元R2为-NH(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2CH2O-，其中x1为1-4的任意整数，x2为0-4的任意整数。
在某些实施方式中，所述靶向单元X选自用于增强肝细胞对RNA抑制剂的摄取的结构。
在某些实施方式中，所述靶向单元X选自单糖及其衍生物。
在某些实施方式中，所述单糖选自以下结构中的一种或多种：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、葡糖胺、核糖。
在某些实施方式中，所述单糖衍生物选自甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、葡萄糖衍生物、核糖衍生物以及其他衍生物。
在某些实施方式中，所述靶向单元X选自半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺及其衍生物。
在某些实施方式中，所述靶向单元X为N-乙酰半乳糖胺及其衍生物。
在某些实施方式中，所述靶向单元X选自以下结构：
其中，W选自-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH2)qCH3中的一种或两种，其中q为0-4的整数。
在某些实施方式中，所述支链L是含有-NH-、-C(＝O)-、-O-、-S-、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、C4-C10脂肪族碳环基、苯基或者这些基团的组合的C4-C18直链。
在某些实施方式中，所述支链L还带有羟乙基或羧酸类的侧链。
在某些实施方式中，所述支链L为含酰胺基或六元脂肪族碳环基的C7-C18直链。
在某些实施方式中，所述支链L选自如下结构中的一种或多种：
其中，r1是1-12的任意整数，r2为0-20的任意整数，Z为H、烷基或酰胺基。
在某些实施方式中，所述分支单元B的结构与能引入的靶向单元X的数量有关，分支单元B中含-NH-、C、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基，当n或m为1时，其为一条直链，当n或m为2、3或4时，其分叉的次数分别为2、3或4。
在某些实施方式中，所述分支单元B选自以下结构：
其中，A1和A2各自独立地是C、O、S、-NH-、羰基、酰胺基、磷酰基或硫代磷酰基，r为0-4的整数。
在某些实施方式中，所述分支单元B选自以下结构：
其中，r为0-4的任意整数。
在某些实施方式中，所述分支单元B选自以下结构：
在某些实施方式中，所述分支单元B选自以下结构：
在某些实施方式中，所述连接链D是含有-NH-、C＝O、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、芳香烃基、C4-C10脂肪族碳环基、含1-3个氮的五元或六元杂环基或者这些基团的组合的C3-C18直链。
在某些实施方式中，所述连接链D还带有羟甲基、甲基叔丁基、甲基苯酚基、C5-C6脂肪环基的侧链。
在某些实施方式中，所述连接链D为含两个C＝O、六元脂肪族碳环基或苯基的C3-C10直链。
在某些实施方式中，所述连接链D为含两个C＝O的C3-C10直链。
在某些实施方式中，所述连接链D选自以下结构：
其中，每个p各自独立地为1-20的任意整数；s为2-13的整数；Z1和Z2为相同或者不同的取代基团。
在某些实施方式中，所述连接链D选自以下结构：
在某些实施方式中，所述连接链D选自以下结构：
在某些实施方式中，所述5’MVIP结构中的(X-L)n-B-D-和3’MVIP结构中的(X-L)m-B-D-选自以下结构中的一种或多种：
在某些实施方式中，所述靶向单元X、支链L、连接链D、及分支单元B在5’MVIP与3’MVIP各自的内部或5’MVIP与3’MVIP之间相同或不同。
在某些实施方式中，所述5’MVIP选自5’MVIP01至5’MVIP22中的任一个。
在某些实施方式中，所述3’MVIP选自3’MVIP01至3’MVIP27的任一个。
在某些实施方式中，所述正义链5’MVIP和反义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09；或者所述反义链5’MVIP和正义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01。
在某些实施方式中，所述反义链选自表15中的任一种或多种。
在某些实施方式中，所述反义链选自：AS283，AS291，AS292，AS341-AS350中的任一种或多种。
在某些实施方式中，所述正义链选自表14中的任一种或多种。
在某些实施方式中，所述正义链选自：S265，S276，S282-S283中的任一种或多种。
在某些实施方式中，所述反义链和正义链的组合选自：Ky11-DS71，Ky11-DS7101～Ky11-DS7109中的一种或多种。
在某些实施方式中，所述反义链和正义链的组合选自：Ky11-DS71，Ky11-DS7101，Ky11-DS7102，Ky11-DS7104，Ky11-DS7106和Ky11-DS7108。
另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含前述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂，并且还包含递送媒介物，和/或生理上可接受的赋形剂和/或载体和/或稀释剂。
在某些实施方式中，其中所述递送媒介物包括脂质体。
在某些实施方式中，其中所述递送媒介物包括纳米脂质。
在某些实施方式中，其中所述递送媒介物包括大环脂类化合物M10C1。
另一方面，本申请提供前述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐与前述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗疾病或病理或者降低疾病或病理的风险。
在某些实施方式中，其中所述疾病或病理包括与血液中含apo(a)和或Lp(a)的水平升高相关的疾病或病理。
在某些实施方式中，其中所述疾病或病理包括肝源性疾病。
在某些实施方式中，其中所述疾病或病理包括炎性、心脑血管或代谢疾病。
在某些实施方式中，其中所述心脑血管疾病包括高脂血症、中风、动脉粥样硬化、血栓形成、冠心病或主动脉瓣狭窄。
另一方面，本申请提供一种预防或治疗疾病、病症或综合征的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的包含前述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或前述的药物组合物。
在某些实施方式中，其中所述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或所述药物组合物以皮下方式、静脉内方式、口服、经直肠或腹膜内施加途径向受试者施用。
另一方面，本申请提供一种用于抑制细胞、组织或受试者中LPA mRNA或蛋白质表达的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的包含前述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或前述的药物组合物。
在某些实施方式中，其中所述细胞是肝细胞。
在某些实施方式中，其中所述组织是肝脏组织。
在某些实施方式中，其中所述细胞和组织是离体的。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是本申请实施例2中RNA抑制剂在HepG2细胞中LPA mRNA抑制效果(％)；
图2显示的是本申请实施例3中RNA抑制剂在HepG2细胞中LPA mRNA抑制效果(％)；
图3显示的是本申请实施例4 1.1.5中合成的ERCd-01-c2的高分辨质谱图；
图4显示的是本申请实施例4 1.2.6中合成的3’MVIP17-c1的高分辨质谱图；
图5显示的是本申请实施例4 2.1.2中合成的5’MVIP09-ERCd-PFP-c2的高分辨质谱图；
图6显示的是本申请实施例6中RNA抑制剂在PCH细胞中LPA mRNA抑制效果(％)；
图7显示的是本申请实施例7中食蟹猴体内LP(a)蛋白水平(％)；
图8显示的是本申请实施例7中食蟹猴体内LDL-C蛋白水平(％)；
图9显示的是本申请实施例9中不同的5'MVIP/3'MVIP组合的RNA抑制剂食蟹猴体内LP(a)蛋白水平(％)。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“iRNA”、“RNAi剂”、“iRNA剂”、“RNA干扰剂”、“RNA抑制剂”可交换使用，通常指包含如本文术语所定义的RNA的药剂，且其可通过RNA诱导沉默复合物(RISC)途径介导RNA转录物的靶向切割。iRNA经由称为RNA干扰(RNAi)的过程指导mRNA的序列特异性降解。iRNA调控(例如，抑制)LPA基因在细胞(例如，受试者如哺乳动物受试者中的细胞)中的表达。
在某些实施方式中，RNAi剂可为引入细胞或生物体中来抑制靶mRNA的单链siRNA(ssRNAi)。单链RNAi剂结合RISC内切核酸酶Argonaute 2，其然后切割靶mRNA。单链siRNA一般为15至30个核苷酸且经化学修饰。单链siRNA的设计和测试说明于美国专利号8,101,348及Lima等人(2012)Cell 150：883-894中，其各自的完整内容以引用的方式并入本文中。本文所述的任何反义核苷酸序列均可用作本文所述的或通过Lima等人(2012)Cell 150：883-894中说明的方法进行化学修饰的单链siRNA。
在某些实施方式中，本申请所使用的“iRNA”是双链RNA，且本文中称为“双链RNAi剂”、“双链RNA(dsRNA)分子”、“dsRNA剂”或“dsRNA”。术语“dsRNA”指核糖核酸分子的复合物，其具有包含两个反向平行且基本上互补的核酸链的双链体结构，称为具有相对于靶RNA(即LPA基因)的“正义”和“反义”取向。在本申请的一些实施方式中，双链RNA(dsRNA)通过转录后基因沉默机制(本文中称为RNA干扰或RNAi)触发靶RNA(例如，mRNA)的降解。
双链体结构可为容许所需的靶RNA通过RISC途径的特异性降解的任何长度，且可在约19至36碱基对的长度范围内，例如，约19-30碱基对的长度，例如，约19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36碱基对的长度。上述范围与长度中间的范围与长度也包括为本申请的部分。在某些实施方式中，本申请的iRNA剂为各链包含15-23个核苷酸的dsRNA，其与靶RNA序列(例如，LPA基因)相互作用以指导靶RNA的切割。在某些实施方式中，本申请的iRNA为24-30个核苷酸的dsRNA，其与靶RNA序列(例如，LPA靶mRNA序列)相互作用以指导靶RNA的切割。
通常，dsRNA分子的各链的大多数核苷酸为核糖核苷酸，但如本文详细说明的，各链或两条链也可包括一个或多个非核糖核苷酸，例如，脱氧核糖核苷酸或修饰的核苷酸。此外，本说明书所用“iRNA”可包括具有化学修饰的核糖核苷酸；iRNA可在多个核苷酸处包括实质修饰。本文所用术语“修饰的核苷酸”意指独立地具有修饰的糖部分、修饰的核苷酸间连接或修饰的核碱基，或其任何组合的核苷酸。因此，术语“修饰的核苷酸”涵盖对核苷酸间连接、糖部分或核碱基的例如官能团或原子的置换、添加或移除。适用于本申请药剂的修饰包括本文所公开或本领域已知的所有类型的修饰。
在本申请中，术语“核酸”和“多核苷酸”可互换使用，并指任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸或者其类似物)的聚合形式。多核苷酸可以具有任何三维结构并且可以执行任何功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段(例如探针、引物、EST或SAGE标签)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支的多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针、siRNA、miRNA、shRNA、RNAi试剂和引物。多核苷酸可以在一个或多个碱基、糖和/或磷酸酯处以本申请所述或本领域已知的任何各种修饰或取代进行修饰或取代。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在聚合物组装之前或之后对核苷酸结构进行修饰。核苷酸序列可以被非核苷酸组分阻断。多聚核苷酸可以在聚合后修饰，例如通过与标记组分偶联。该术语可以是双链和单链分子。除非另有说明或要求，否则本申请作为多核苷酸的任何实施方式包括双链形式和已知或据预测构成双链形式的两种互补单链形式中的每一种。
在本申请中，术语“靶核酸”或“靶序列”通常指在LPA基因转录期间所形成mRNA分子的核苷酸序列的连续部分，包括作为主要转录产物的RNA加工产物的mRNA。序列的靶部分应至少足够长以作为在LPA基因转录期间形成的mRNA分子的核苷酸序列的该部分位置处或附近iRNA指导的切割的底物。在一个实施方式中，该靶序列在LPA的蛋白质编码区内。靶序列可为约19-36个核苷酸的长度，例如，优选约19-30个核苷酸的长度。上述范围和长度中间的范围和长度也包括为本申请的部分。
在本申请中，术语“核苷酸序列”通常是指一连串或一定顺序的核碱基、核苷酸和/或核苷，无论是经修饰还是未修饰，使用标准核苷酸命名和本申请所述的经修饰的核苷酸的符号表用一连串字母描述。
在本申请中，术语“寡核苷酸”通常是指由多个核苷酸残基(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其相关的结构变体或合成类似物)通过磷酸二酯键(或其相关的结构变体或合成类似物)连接组成的聚合物。因此，虽然术语“寡核苷酸”一般指其中核苷酸残基和它们之间的连接是天然产生的核苷酸聚合物，但应理解，该术语的范围也包括各种类似物，包括但不限于：肽核酸(PNA)、氨基磷酸酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、2-O-甲基核糖核酸等。该分子的确切大小可取决于具体应用。寡核苷酸一般长度较短，通常约有10-30个核苷酸残基，但该术语也可指任何长度的分子，尽管术语“多核苷酸”或“核酸”一般用于较大的寡核苷酸。
在某些实施方式中，寡核苷酸包含一个或多个未修饰的核糖核苷(RNA)和/或未修饰的脱氧核糖核苷(DNA)和/或一个或多个修饰核苷。术语“修饰寡核苷酸”通常意指包含至少一个修饰核苷和/或至少一个修饰的核苷间键联的寡核苷酸。
在本申请中，术语“修饰的核苷”通常意指与天然存在的RNA或DNA核苷相比包含至少一个化学修饰的核苷。修饰的核苷包含修饰的糖部分和/或修饰的核碱基。
在本申请中，术语“核碱基”通常意指杂环嘧啶或嘌呤化合物，它是所有核酸的组分且包括腺嘌呤(a)、鸟嘌呤(g)、胞嘧啶(c)、胸腺嘧啶(t)和尿嘧啶(u)。核苷酸可包括经修饰的核苷酸或核苷酸模拟物、无碱基位点(Ab或X)或替代物替代部分。如本申请所使用，“核碱基序列”通常意指不依赖于任何糖、键联或核碱基修饰的连续核碱基的顺序。术语“未修饰的核碱基”或“天然存在的核碱基”通常意指RNA或DNA的天然存在的杂环核碱基：嘌呤碱基腺嘌呤(a)和鸟嘌呤(g)；以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(t、胞嘧啶(c)(包括5-甲基c)和尿嘧啶(u)。“修饰的核碱基”通常意指并非天然存在的核碱基的任何核碱基。
在本申请中，术语“糖部分”通常意指核苷的天然存在的糖部分或修饰的糖部分。术语“天然存在的糖部分”通常意指如在天然存在的RNA中发现的呋喃核糖基或如在天然存在的DNA中发现的脱氧呋喃核糖基。“修饰的糖部分”意指取代的糖部分或糖替代物。
在本申请中，术语“核苷间键联”通常意指寡核苷酸中相邻核苷之间的共价键联。“天然存在的核苷间键联”意指3’至5’磷酸二酯键联。“修饰的核苷间键联”意指除了天然存在的核苷间键联之外的任何核苷间键联。
在本申请中，术语“反义寡核苷酸”是指单链寡核苷酸分子，其具有与靶核酸(例如，目标基因组序列，mRNA前体，或mRNA分子)的相应片段互补的核碱基序列。在某些实施方案中，反义寡核苷酸的长度为12至30个核碱基。在某些实施方案中，反义寡核苷酸是具有与靶核酸(如LPA多核苷酸)序列互补的核苷酸序列的未经修饰或经修饰的核酸。
在本申请中，术语“反义链”通常是指RNA抑制剂(例如dsRNA)的包括与靶序列实质上互补的区域的链。在本文中使用时，术语“互补性区域”通常指反义链上与本申请定义的序列(例如靶序列)实质上互补的区域。当互补性区域与靶序列不完全互补时，错配可以在分子的内部或末端区域。通常，最被容许的错配在末端区域，例如，在5’末端和/或3’末端的5、4、3或2个核苷酸内。
在本申请中，术语“正义链”(S)通常是指RNA抑制剂的这样一条链，所述链包括与作为在此定义的术语反义链的区域基本互补的区域。“正义”链有时被称为“有义”链，“过客”链或“反引导”链。借助它们的序列，反义链靶向所希望的mRNA，同时正义链靶向不同靶标。因此，如果反义链被掺入RISC中，则正确的靶标被靶向。正义链的掺入可以导致脱靶效应。这些脱靶效应可以通过在正义链上使用修饰或使用5’端帽加以限制。
在本申请中，术语“互补”当用于描述就第二核苷酸序列(如RNAi剂反义链)而言的第一核苷酸序列(如RNAi剂正义链或LPAmRNA)时是指包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在一定条件下与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸杂交(形成碱基对氢键)并形成双链体或双螺旋结构的能力。互补序列包括沃森-克里克碱基对(Watson-Crickbase pairs)或非沃森-克里克碱基对，并且包括天然或经修饰的核苷酸或核苷酸模拟物，只要以上关于它们的杂交能力而言的需求得以实现。“互补”不必需在每个核苷上均具有核碱基互补性。相反，可以容忍一些错配。
在本申请中，术语“完全互补”通常意指第一多核苷酸的连续序列中的全部(100％)碱基将与第二多核苷酸的连续序列中的相同数目的碱基杂交。连续序列可以包含第一或第二核苷酸序列的全部或一部分。如本申请所用，“部分互补”通常意指在杂交的核碱基序列对中，第一多核苷酸的连续序列中至少约70％的碱基将与第二多核苷酸的连续序列中相同数目的碱基杂交。如本申请所用，“基本上互补”通常意指在杂交的核碱基序列对中，第一多核苷酸的连续序列中至少约90％的碱基将与第二多核苷酸的连续序列中相同数目的碱基杂交。如本申请所用的术语“互补”、“完全互补”和“基本上互补”可以就在RNA抑制剂的正义链与反义链之间或者在RNA抑制剂的反义链与LPA mRNA的序列之间的碱基匹配而言使用。序列同一性或互补性不依赖于修饰。为了测定同一性或互补性的目的，例如，a和Af与U(或T)互补并且与A同一。
在本申请中，术语“同源的”或“同源性”通常是指已经与参考核酸序列的相同核苷酸匹配的主题核酸序列的核苷酸的数量，通常通过序列分析程序(例如，Karlin和Altschul,1990,PNAS87:2264-2268；Karlin和Altschul,1993,PNAS 90:5873-5877)，或通过目视检查确定。如本文所使用的，术语“完全同源性”或“完全同源的”一般是指在参考序列和主题核酸序列之间的完全(100％)同源性或“同一性”。如本文所使用的，术语“基本上同源的”或“基本上同源性”一般是指主题序列与参考序列中相同核苷酸位置的核苷酸共有至少50％(例如，至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％)的同源的核苷酸。
在本申请中，术语“配体”通常是指能够共价地或以其它化学方式与生物活性物质(如寡核苷酸)结合的任何化合物或分子。在某些实施方式中，配体能够与另一种化合物例如受体直接或间接地相互作用，与配体相互作用的受体可以存在于细胞表面上，或可替代地可以是细胞内和/或细胞间受体，配体与受体的相互作用可以导致生化反应，或可以仅仅是物理相互作用或结合。
在本申请中，术语“诱导”、“抑制”、“加强”、“升高”、“增加”、“减少”、“降低”等通常表示两个状态之间的定量差异。例如，“有效抑制LPA的活性或表达的量”意指处理样品中LPA的活性或表达的水平将低于未处理样品中LPA活性或表达的水平。所述术语例如适用于表达水平和活性水平。术语“减少”和“降低”可互换使用并且通常表示小于原来的任何变化。“减少”和“降低”是相对的术语，需要在测量前和测量后间进行比较。“减少”和“降低”包括完全耗竭。
在某些实施方式中，术语“降低”可以通过本领域已知标准方法(诸如本申请中描述的那些)检测的，基因、基因产物例如蛋白质或生物标志物在第一样品中的表达水平/量与相应基因、基因产品例如蛋白质或生物标志物在第二样品中的表达水平/量相比约5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、或100％的总体降低。在某些实施方式中，术语“降低”指第一样品中基因或生物标志物的表达水平/量的降低，其中该降低是第二样品中相应基因或生物标志物的表达水平/量的至少约0.9倍、0.8倍、0.7倍、0.6倍、0.5倍、0.4倍、0.3倍、0.2倍、0.1倍、0.05倍、或0.01倍。在某些实施方式中，第一样品是自受试者获得的样品，而第二样品是参照样品。
在本申请中，术语“表达”通常意指基因最终产生蛋白质的过程。表达包括但不限于转录、转录后修饰(例如，剪接、聚腺苷酸化、添加5’-帽)以及翻译。
在本申请中，术语“药学上可接受的”通常是指不干扰活性成分生物学活性的有效性的一种或多种无毒物质。这类制剂通常可含有盐、赋形剂、缓冲剂、防腐剂、相容性载体和任选的其它治疗剂。这类药学上可接受的制剂通常也可包含适合给予人的相容性固体或液体填料、稀释剂或包囊材料。用于医药时，盐应该是药学上可接受的盐，但可方便地使用非药学上可接受的盐来制备药学上可接受的盐，不能将它们排除在本申请范围以外。这类药理学和药学上可接受的盐包括但不限于由以下酸制备的盐：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、硼酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。药学上可接受的盐也可制备成碱金属盐或碱土金属盐，如钠盐、钾盐或钙盐。
在本申请中，术语“脂质纳米颗粒”或“LNP”通常指包含包封药理活性分子(如核酸分子，例如，iRNA或iRNA从其转录的质粒)的脂质层的囊泡。LNP描述于例如，中国专利号CN103189057B中，其完整内容以引用方式并入本文中。
在本申请中，术语“预防和/或治疗”不仅包括预防和/或治疗疾病，还通常包括预防疾病的发作，减缓或逆转疾病的进展，预防或减缓与疾病相关的一种或多种症状的发作，减少和/或减轻与疾病相关的一种或多种症状，降低疾病和/或与其相关的任何症状的严重程度和/或持续时间和/或预防疾病和/或与其相关的任何症状的严重程度的进一步增加，预防、减少或逆转由疾病引起的任何生理损伤，以及通常对正在治疗的患者有益的任何药理学作用。本申请的RNAi剂或药物组合物形成可行的治疗剂不需要实现完全治愈或根除疾病的任何症状或表现。如在相关领域中所认识到的，用作治疗剂的药物可降低给定疾病状态的严重程度，但不需要消除疾病的每种表现才能被认为是有用治疗剂。类似地，预防性施用的治疗构成可行的预防剂不需要完全有效地预防病症的发作。简单地在受试者中减少疾病的影响(例如，通过减少其症状的数量或严重程度，或通过提高另一种治疗的有效性，或通过产生另一种有益效果)，或减少疾病发生或恶化的可能性就足够了。
在本申请中，术语“疾病”或“病症”可以互换使用，通常是指受试者与正常状态的任意偏离，例如身体或某些器官的状态的任何变化，妨碍或扰乱了功能的履行，和/或在患病或与其接触的人中引起症状例如不适、机能障碍、痛苦或甚至死亡。疾病或病症还可以称为失调(distemper)、不适(ailing)、小病(ailment)、疾病(malady)、紊乱(disorder)、疾病(sickness)、生病(illness)、身体不适(complaint)、inderdisposion或affectation。
本申请中，术语“施用”通常是指通过任意引入或递送途径将本申请药物制剂引入受试者的身体中。可以采用本领域技术人员已知的用于使细胞、器官或组织与所述药物接触的任何方法。所述施用可以包括而不限于静脉内、动脉内、鼻内、腹内、肌内、皮下透皮或口服。每日剂量可以划分成一个、两个或更多个合适形式的剂量以在某个时间段期间的一个、两个或更多个时间施用。
在本申请中，术语“接触”通常是指两种两个或更多个不同类型的物质以任何顺序、任何方式以及任何时长接触在一起。接触可以发生在体内(in vivo)、间接体内(exvivo)或体外(in vitro)。在某些实施方式中，可以是指使本申请的RNAi剂或组合物直接接触细胞或组织。在另一些实施方式中，该术语是指使本申请的RNA抑制剂或组合物间接接触细胞或组织。例如，本申请的方法包括其中受试者接触本申请的RNA抑制剂或组合物，然后RNA抑制剂或组合物通过扩散或本领域已知的任何其他主动运输或被动运输过程(化合物通过该过程在体内循环)接触细胞或组织的方法。
在本申请中，术语“有效量”或“有效剂量”通常是指足以实现或至少部分实现所需效果的量。药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”通常是当单独使用或与另一种治疗剂组合使用时促进疾病消退(这通过疾病症状严重程度的降低、疾病无症状期的频度和持续时间的增加、或者由于罹患疾病而引起的损害或残疾的预防来证明)的任何药物量。药物的“预防有效量”或“预防有效剂量”通常是指当单独或与另一种治疗剂组合给有疾病发展或疾病复发的风险的受试者施用时抑制疾病的发展或复发的药物量。可以使用本领域技术人员已知的多种方法对治疗剂或预防剂促进疾病消退或抑制疾病发展或复发的能力进行评估，比如在处于临床试验期间的人类受试者中、在动物模型系统中预测对人类的功效、或者通过在体外测定中测定药剂的活性。在某些实施方式中，“有效量”是指产生预期药理学、治疗性或预防性结果的RNA抑制剂的量。
在本申请中，术语“受试者”通常是指需要诊断、预后、改善、预防和/或治疗疾病的人或非人动物(包括哺乳动物)，诸如人、非人灵长类动物(猿、长臂猿、大猩猩、黑猩猩、猩猩、猕猴)、家畜(狗和猫)、农场动物(家禽如鸡和鸭、马、牛、山羊、绵羊、猪)和实验动物(小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。人受试者包括胎儿、新生儿、婴儿、青少年和成人受试者。受试者包括动物疾病模型。
在本申请中，术语“包括”、“包含”、“具有”、“可以”、“含有”及其变体通常旨在是开放式过渡性短语、术语或词语，其不排除额外行为或结构的可能性。术语“由……组成”通常表示不能存在别的组分(或同样地，特征、整数、步骤、等)。除非上下文另有明确规定，单数形式如英文的“a”，“an”，“the”，中文的“一个”、“一种”和“所述/该”一般包括所指代事物的复数形式。
在本申请中，术语“约”通常意指大约(approximately)、在......的附近(intheregionof)、粗略地(roughly)、或左右(around)。当术语“约”当用于指涉数值范围时，截值或特定数值用于指示所载明的数值可与该列举数值有多达10％的差异。因此，术语“约”可用于涵盖自特定值±10％或更少的变异、±5％或更少的变异、±1％或更少的变异、±0.5％或更少的变异、或±0.1％或更少的变异。
应理解，数字或一系列数字之前的术语“至少”包括与该术语“至少”相邻的数字，及逻辑上包括在内的所有后续数字或整数，如从上下文中明确的。例如，核酸分子中的核苷酸数目必需为整数。例如，“21个核苷酸的核酸分子中的至少19个核苷酸”意指19、20或21个核苷酸具有所指示的性质。当“至少”出现在一系列数字或范围之前时，应理解“至少”可修饰该系列或范围中每一个数字。
应理解本文中采用的“不超过”或“低于”指与该短语相邻且逻辑上较低的值或整数，如从上下文逻辑而言，至零。例如，具有“不超过3个核苷酸”的突出端的双链体具有3、2、1或0个核苷酸的突出端。当“不超过”出现在一系列数字或范围之前时，应理解，“不超过”可修饰该系列或范围内每个数字。本文所采用范围同时包括上限与下限。
发明详述
反义链与正义链
一方面，本申请提供抑制LPA基因表达的RNA抑制剂。
在某些的实施方式中，RNA抑制剂包括用于抑制在细胞中，如受试者(例如，哺乳动物)的细胞中，LPA基因基因的表达的单链寡核苷酸或双链核糖核酸(dsRNA)分子。其中，该dsRNA包括反义链，其具有与在LPA基因的表达中所形成mRNA的至少一部分互补的互补区。该互补区为约12-30个核苷酸长度(例如，约30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13或12个核苷酸长度)。
dsRNA包括两个RNA链，其可在dsRNA使用的条件下互补并杂交形成双链体结构(互补区)。dsRNA的一条链(反义链)包括与靶序列基本上互补且通常完全互补的互补区。靶序列可源自LPA基因表达期间形成mRNA的序列。另一条链(正义链)包括与反义链互补的区域，使得在合适条件下组合时，两条链可杂交并形成双链体结构。通常，双链体结构的长度为12至30个碱基对。类似地，与靶序列的互补区的长度为12至30个核苷酸。
在某些实施方式中，dsRNA为约19至约23个核苷酸长度，或约24至约30个核苷酸长度。通常，dsRNA的长度足以用作Dicer酶的底物。例如，本领域公知，长度大于约21-23个核苷酸的dsRNA可用作Dicer的底物。本领域技术人员也了解，被靶向切割的RNA的区域通常为较大RNA分子(通常mRNA分子)的部分。靶的“一部分”为mRNA靶的连续核苷酸，其长度足以允许其为RNAi指导切割(即经由RISC途径的切割)的底物。
本领域技术人员也应理解，双链体区为dsRNA的主要功能部分，例如，约19至约30碱基对的双链体区，例如，约19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20碱基对。因此在一个实施方式中，为了达到成为靶向所需RNA进行切割的功能性双链体(例如，15-30碱基对)的程度，具有超过30碱基对的双链体区的RNA分子或RNA分子的复合物为dsRNA。
在一些实施方案中，所述RNA抑制剂的正义链选自下表1或与表1中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸的序列。
表1 RNA抑制剂的正义链
其中，g＝鸟苷酸，a＝腺苷酸，t＝胸腺嘧啶脱氧核苷酸，c＝胞苷酸。
在一些实施方案中，所述RNA抑制剂的反义链选自下表2或与表2中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸。
表2 RNA抑制剂的反义链
其中，g＝鸟苷酸，a＝腺苷酸，u＝尿苷酸，c＝胞苷酸，n＝鸟苷酸、腺苷酸、尿苷酸或胞苷酸
在某些实施方式中，其还包含正义链，其中所述正义链和反义链之间至少有约80％的碱基互补。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链各自独立地为15-30个核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链各自独立地为17-25个核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述正义链和反义链各自独立地为19-23个核苷酸。
在一些筛选实施方案中，所述的RNA抑制剂的正义链和反义链选自表3中序列或与表3中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸。
表3筛选RNA抑制剂序列
其中，g＝鸟苷酸，a＝腺苷酸，u＝尿苷酸，c＝胞苷酸。
例如，所述正义链可以为SEQ ID NO.396-400或与其相差一个、两个或三个核苷酸的序列；所述反义链可以为SEQ ID NO.414-418或与其相差一个、两个或三个核苷酸的序列：
1)正义链：ugguaauggacagaguuauuu(SEQ ID NO.396)，反义链：auaacucuguccauuaccauu(SEQ ID NO.414)；
2)正义链：acagaguuaucgaggcucatt(SEQ ID NO.397)，反义链：ugagccucgauaacucuguuu(SEQ ID NO.415)；
3)正义链：guaauggacagaguuaucgau(SEQ ID NO.398)，反义链：cgauaacucuguccauuacca(SEQ ID NO.416)；
4)正义链：gccccuugguguuauacaa(SEQ ID NO.399)，反义链：uuguauaacaccaaggggcug(SEQ ID NO.417)；和
5)正义链：gcuccuuauuguuauacga(SEQ ID NO.400)，反义链：ucguauaacaauaaggagcug(SEQ ID NO.418)。
修饰的核苷酸
为了增强上述RNA抑制剂在体内的稳定性，在不影响其活性甚至增强其活性的情况下，可以对上述RNA抑制剂的正义链和反义链进行修饰，其中的核苷酸可以有修饰基团，可以整条链或者部分修饰。在某些实施方式中，其中所述正义链和/或反义链上的一个或多个核苷酸被修饰以形成修饰的核苷酸。
本发明提供的RNA抑制剂结构中的正义链和反义链链长为15-30，优选19-23，彼此之间至少85％碱基互补。为了增强正义链和反义链在体内的稳定性，RNA抑制剂的正义链和反义链可以在没有影响活性甚至增强活性的情况下进行修饰，其中的核苷酸可以有修饰基团，可以整条链或者部分修饰，优选全部修饰。所述修饰为本领域的研究者易于理解的技术，可以在糖基部分，选至如下任一种或多种：脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、脱碱基核苷酸、2’-修饰核苷酸、3’至3’连接(倒置)核苷酸、含非天然碱基的核苷酸、桥接核苷酸、肽核酸(PNA)、解锁的核碱基类似物、锁定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷间连接)核苷酸、2’-F-阿拉伯糖核苷酸、5’-Me/2’-氟带核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯脱氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含环丙基磷酸酯的核苷酸。其中，2’-修饰核苷酸包括但不限于：2’-O-甲基核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核苷酸、2’-脱氧核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基核苷酸和2’-烷基核苷酸。在本发明提供的RNA抑制剂中，所述RNA抑制剂的正义链和反义链均不需要均匀修饰，可在其单个核苷酸中掺入一种以上的修饰。所述的修饰也可在碱基部分发生，经修饰的核碱基包括合成和天然的核碱基，诸如5-取代嘧啶，6-氮杂嘧啶和N-2/N-6和O-6取代嘌呤，5-甲基胞嘧啶，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-烷基，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-烷基和其他烷基衍生物，2-硫代尿嘧啶，2-硫代胸腺嘧啶，2-硫代胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶，胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶，5-丙炔基胞嘧啶，6-偶氮尿嘧啶，6-偶氮胞嘧啶，6-偶氮胸腺嘧啶，5-尿嘧啶，4-硫尿嘧啶，8-卤素、8-氨基、8-巯基、8-硫代烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮鸟嘌呤，7-脱氮腺嘌呤，3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。
本发明所述的RNA抑制剂的正义链和反义链的部分或全部是2’-O-甲基核苷酸和/或2’-脱氧-2’-氟核苷酸，且至少连续两个硫代磷酸酯键存在其正义链5’端和反义链3’端的核苷酸之间，优选末端3个连续的核苷酸之间磷酸酯键被硫代。
在某些实施方式中，其中所述修饰的核苷酸选自：脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、脱碱基核苷酸、2’-修饰核苷酸、3’至3’连接(倒置)核苷酸、含非天然碱基的核苷酸、桥接核苷酸、肽核酸(PNA)、解锁的核碱基类似物、锁定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷间连接)核苷酸、2’-F-阿拉伯糖核苷酸、5’-Me/2’-氟带核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯脱氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含环丙基磷酸酯的核苷酸。
在某些实施方式中，其中所述2’-修饰核苷酸包括：2’-O-甲基核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核苷酸、2’-脱氧核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基核苷酸和/或2’-烷基核苷酸。
在一些筛选实施方案中，所述的RNAi剂的正义链和反义链选自表4中序列或与表4中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸。
表4甲氧基化的RNA抑制剂
其中，G＝2’-甲氧基鸟苷酸，A＝2’-甲氧基腺苷酸，U＝2’-甲氧基尿苷酸，C＝2’-甲氧基胞苷酸；u＝尿苷酸，c＝胞苷酸。
在一些实施例方案中，所述反义链5’末端开始的第2、4、6、7、8、12、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，或所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
所述反义链除了5’末端开始的第7、12、14位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH中的至少一个被甲氧基取代；或所述反义链除了5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH至少一个被甲氧基取代。
所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；或所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，或所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
所述正义链除了5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH至少一个被甲氧基取代；或所述正义链除了5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH中的至少一个被甲氧基取代。
所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；或所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
所述正义链和/或反义链的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，反义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，且所述反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，正义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；且所述正义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；或
所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，反义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，且所述反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，正义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；且所述正义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
所述RNA抑制剂中的正义链选自下列表5中的序列或与表5中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸。
表5修饰的正义链
其中，G＝2’-O-甲基鸟苷酸，A＝2’-O-甲基腺苷酸，U＝2’-O-甲基尿苷酸，C＝2’-O-甲基胞苷酸；fG＝2’-氟鸟苷酸，fA＝2’-氟腺苷酸，fU＝2’-氟尿苷酸，fC＝2’-氟胞苷酸；Gs＝2'-O-甲基-3’-硫代鸟苷酸、As＝2'-O-甲基-3'-硫代腺甘酸、Us＝2'-O-甲基-3'-硫代尿甘酸、Cs＝2'-O-甲基-3'-硫代胞苷酸。
在一些实施例方案中，在所述RNA抑制剂中的反义链选自下列表6中的序列或与表6中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸的序列。
表6筛选的反义链
其中，G＝2’-O-甲基鸟苷酸，A＝2’-O-甲基腺苷酸，U＝2’-O-甲基尿苷酸，C＝2’-O-甲基胞苷酸；fG＝2’-氟鸟苷酸，fA＝2’-氟腺苷酸，fU＝2’-氟尿苷酸，fC＝2’-氟胞苷酸；Gs＝2'-O-甲基-3’-硫代鸟苷酸、As＝2'-O-甲基-3'-硫代腺甘酸、Us＝2'-O-甲基-3'-硫代尿甘酸、Cs＝2'-O-甲基-3'-硫代胞苷酸。
在一些实施例方案中，在一些实施例方案中，在所述RNA抑制剂选自下列表7中的序列。
表7修饰的RNA抑制剂
与配体偶联的RNA抑制剂
本申请RNA抑制剂的另方面涉及将干扰核酸与配体偶联的方式，以增强RNAi剂的稳定性、活性、细胞分布或细胞摄取。
在某些实施方式中，通过引入靶组织受体的配体，以改变RNA抑制剂的分布、靶向或稳定性。例如，与不存在配体的物种相比，专属性的配体可以提供针对所选靶(例如分子、细胞或细胞类型、区室(例如细胞或器官区室、身体组织、器官或区域))的增强的亲和力。
配体可以包括天然存在的物质，如蛋白质(例如人血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)或球蛋白)；碳水化合物(例如葡聚糖、茁霉多糖、壳多糖、壳聚糖、菊糖、环糊精、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺或透明质酸)；或脂质。配体也可以是重组或合成分子，如合成聚合物，例如合成的聚氨基酸。
配体也可以包括靶向基团，例如与指定的细胞类型如肾细胞结合的细胞或组织靶向剂，例如凝集素、糖蛋白、脂质或蛋白质，例如抗体。靶向基团可以是促甲状腺激素、促黑素、凝集素、糖蛋白、表面活性蛋白质A、黏蛋白碳水化合物、多价乳糖、多价半乳糖、N-乙酰基-半乳糖胺、N-乙酰基-葡糖胺多价甘露糖、多价岩藻糖、糖基化聚氨基酸、多价半乳糖、转铁蛋白、双磷酸盐、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、脂质、胆固醇、类固醇、胆酸、叶酸、维生素B12、维生素A、生物素、或RGD肽或RGD肽模拟物。在某些实施方式中，该配体为多价半乳糖，例如，N-乙酰基-半乳糖胺。
本申请RNA抑制剂所包含的正义链和反义链可以通过固相合成的公知技术方便且常规地制备。可另外地或替代地使用本领域中已知的用于这类合成的任何其他方法，如液相合成或发酵。使用相似的技术来制备其他寡核苷酸(如硫代磷酸酯和烷基化衍生物)也是已知的。
在某些实施方式中，除了可商购以及寡核苷酸合成中常规使用的标准核苷亚磷酰胺单体以及非标准核苷亚磷酰胺单体之外，本申请的寡核苷酸或连接的核苷酸可以通过自动合成仪使用衍生自配体-核苷亚磷酰胺单体的亚磷酰胺法合成。
在某些实施方式中，本发明所述配体缀合的方式通过配体结构偶联于反义链的5’末端和/或3’末端，和/或正义链的5’末端和/或3’末端。
例如，所述配体结构可以偶联于正义链的5’末端和/或3’末端；或所述配体结构可以偶联于反义链的5’末端且所述配体结构偶联于正义链的3’末端；或所述配体结构可以偶联于反义链的3’末端，且所述配体偶联于正义链的5’末端；或所述配体结构偶联于正义链的5’末端和3’末端。
在某些实施方式中，其中所述配体结构包括5’MVIP和3’MVIP，其中，所述5’MVIP偶联在所述正义链和/或反义链5’末端，所述3’MVIP偶联在所述反义链和/或正义链3’末端，所述5’MVIP的结构如式I所示，所述3’MVIP结构如式II所示，
(X-L)n-B-D-R1-，
I
(X-L)m-B-D-R2-，
II
其中，
X为靶向特异性配体；
L为支链；
B为接头；
D为连接链；
R1和R2为转接点；
所述5’MVIP通过转接点R1与正义链5’端或反义链5’端连接，所述3’MVIP通过转接点R2与正义链3’端或反义链3’端连接，n和m各自独立地为0-4的任意整数。
在某些实施方式中，其中所述X为组织的特异性靶向配体
在某些实施方式中，其中所述的X肝靶向特异性配体。
在某些实施方式中，其中所述R1或R2与所述正义链或反义链的连接通过磷酸酯或经修饰的磷酸酯，优选地通过磷酸酯或硫代磷酸酯相连接。
在某些实施方式中，其中所述且n+m＝2-6的整数，优选n+m＝2、3或4，更优选为4。
在某些实施方式中，m或n可以为0，即不存在3’MVIP或5’MVIP。
在某些实施方案中，当n＝0(即不存在5’MVIP)时，所述3’MVIP的结构可以为：
在某些实施方案中，当n＝1时，所述3’MVIP的结构可以为：
在某些实施方案中，当n＝2时，所述3’MVIP的结构可以为：
在某些实施方案中，当n＝3时，所述3’MVIP的结构可以为：
在某些实施方案中，当n＝4时，所述3’MVIP的结构可以为：
在某些实施方案中，所述的n是指同时放在所述RNAi剂的正义链和反义链5’末端5'MVIP中n之和，所述的m是指同时放在所述RNAi剂的正义链和反义链3’末端3'MVIP中m之和。
在某些实施方案中，所述R1和R2结构中带有-NH-、-S-和/或-O-，R1和R2通过结构中-NH-、-S-或-O-分别与连接链D以及正义链和/或反义链5’末端和3’末端相连，R1和R2相同或不相同。
在某些实施方案中，所述R1和R2是任选直链，或带有酰胺基、羧基或烷基类支链的直链或者环状结构，所述环状结构包括饱和或不饱和的脂肪族碳环基，或者含有硫、氧或氮原子的五元或六元杂环基或芳香烃基。
在某些实施方案中，所述R1和/或R2为-E1(CH2)xCH2E2-，其中x为3-12的任意整数，基团E1和E2可以分别为-NH-、-S-或-O-。
在某些实施方案中，所述R1和/或R2为-E1(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2E2-，其中x1或x2各自独立地为3-10的任意整数，E1和E2可以分别为-NH-、-S-或-O-。
在某些实施方案中，所述R1为含有N、S或O的杂环或碳环结构：
在某些实施方式中，所述转接点R1为-NH(CH2)xCH2O-，其中x为3-12的任意整数，优选为4-6的任意整数，可以通过以下两种亚磷酰胺单体引入：
i.其中的一个-O-或-S-用于R1亚磷酰胺单体的合成，通过固相合成的方法接入RNA抑制剂正义链或反义链的5’端。结构中-NH-、-S-或-O-用于与5'MVIP中的连接链D连接，从而在RNA抑制剂正义链或反义链的5’端引入肝靶向特异性配体X。引入到RNA抑制剂正义链或反义链5’端的单体示例性结构如下：
在某些实施方案中，优选以下结构：
ii.R1结构中-NH-、-S-或-O-先与连接链D连接，另外一个-NH-、-S-或-O-用于5'MVIP亚磷酰胺单体的合成中与亚磷酰胺成酯，正义链或反义链5’MVIP亚磷酰胺单体结构示例如下：
在某些实施方案中，正义链或反义链5’MVIP亚磷酰胺单体优选以下结构：
当通式中n为1-4时，上述的单体中接头B部分分别支化1至4次，以获得对应的单体化合物，借助上述的单体化合物，肝靶向特异性配体X通过固相合成被引入到正义链或反义链5’末端。
在某些实施方案中，转接点R1为-NH(CH2)xCH2O-，其中x可以是3-12的整数，优选为4-6的整数。
在某些实施方案中，5'MVIP亚磷酰胺单体结构选自如下结构中：
在某些实施方式中，所述R2为含有N、S或O的杂环或碳环结构：
在某些实施方式，所述R2为-NH(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2CH2O-，其中x1为1-4的任意整数，x2为0-4的任意整数。
本申请所述的R2是通过丁二酸酐与R2结构中-NH-、-S-或-O-成酯或酰胺的同时，又与空白Solid Support中-NH-进行偶联，形成3'MVIP solid spport，再通过亚磷酰胺固相合成法，将3’MVIP引入到正义链或反义链的3’末端。
在某些实施方案中，R2结构中的杂环为吡咯环或哌啶环，其通过环中的氮杂原子与3'MVIP的连接链D连接，3'MVIP solid spport示例性结构如下：
当通式中m为1-4时，上述的单体中接头B部分分别支化1至4次，以获得对应的Solid Support。
在某些实施方案中，R2为-B4(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2CH2B5-，其中x1为1-4的整数，x2为0-4的整数，B4和B5分别为-NH-、-S-或-O-,引入3’MVIP solid spport示例性通式如下：
当通式中m为1-4时，上述的单体中接头B部分分别支化1至4次，以获得对应的Solid Support。
在某些实施方案中，R2为-NHCH2CH(OH)CH2O-。引入3’MVIP solid spport示例性结构如下：
当通式中m为1-4时，上述的单体中接头B部分分别支化1至4次，以获得对应的Solid Support。
在某些实施方案中，3’MVIP solid support结构如下：
在某些实施方式中，所述肝靶向特异性配体X选自用于增强肝细胞对RNAi剂的摄取的结构，可以是脂质、类固醇、维生素、糖、蛋白质、肽、多胺及肽模拟结构。在本申请提供的RNAi剂中，引入所述RNAi剂正义链或反义链末端的肝靶向特异性配体X可以相同，也可以不同，例如在特性上，有些可以是增强肝靶向性，有些可以是所述RNAi剂在体内药代动力学的调节结构，有些可以是具有体内溶解活性的结构。在某些实施方案中，所述肝靶向特异性配体X选自以下结构中的一种或多种单糖及其衍生物。
在某些实施方式中，所述单糖选自以下结构中的一种或多种：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、葡糖胺、核糖。所述单糖衍生物选自甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、葡萄糖衍生物、核糖衍生物以及其他衍生物。
在某些实施方式中，所述靶向单元X选自半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺及其衍生物，其结构通式如下：
其中，W1为氢或羟基保护基，可以相同也可以不同；W为-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH2)qCH3，其中q为0-4的整数；W2为-NH-、O、S或C。
在某些实施方式中，所述靶向单元X为N-乙酰半乳糖胺及其衍生物。
在某些实施方式中，所述靶向单元X选自以下结构：
其中，W选自-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH2)qCH3中的一种或两种，其中q为0-4的整数。
在某些实施方案中，所述肝靶向特异性配体X在同一个5'MVIP或3'MVIP结构中可以相同，也可以不同。
在某些实施方案中，5'MVIP与3'MVIP彼此之间的X可以相同，也可以不同。
在某些实施方式中，所述L是含有-NH-、-C(＝O)-、-O-、-S-、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、C4-C10脂肪族碳环基、苯基或者这些基团的组合的C4-C18直链。
在某些实施方式中，所述L还带有羟乙基或羧酸类的侧链。
在某些实施方式中，所述L为含酰胺基或六元脂肪族碳环基的C7-C18直链。
在某些实施方式中，所述L选自如下结构中的一种或多种：
其中，r1是1-12的任意整数，r2为0-20的任意整数，Z为H、烷基或酰胺基。
在某些实施方式中，所述B的结构与能引入的X的数量有关，所述B中含-NH-、C、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基，当n或m为1时，其为一条直链，当n或m为2、3或4时，其分叉的次数分别为2、3或4。
在某些实施方式中，所述B选自以下结构：
其中，A1和A2各自独立地是C、O、S、-NH-、羰基、酰胺基、磷酰基或硫代磷酰基，r为0-4的整数。
在某些实施方式中，所述B选自以下结构：
其中，r为0-4的任意整数。
在某些实施方式中，所述B选自以下结构：
在某些实施方式中，所述B选自以下结构：
在某些实施方式中，所述D是含有-NH-、C＝O、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、芳香烃基、C4-C10脂肪族碳环基、含1-3个氮的五元或六元杂环基或者这些基团的组合的C3-C18直链。
在某些实施方式中，所述D还带有羟甲基、甲基叔丁基、甲基苯酚基、C5-C6脂肪环基的侧链。
在某些实施方式中，，所述D为含两个C＝O、六元脂肪族碳环基或苯基的C3-C10直链。
在某些实施方式中，所述D为含两个C＝O的C3-C10直链。
在某些实施方式中，所述D选自以下结构：
其中，每个p各自独立地为1-20的任意整数；s为2-13的整数；Z1和Z2为相同或者不同的取代基团。
在某些实施方式中，所述D选自以下结构：
在某些实施方式中，所述D选自以下结构：
在某些实施方式中，所述5’MVIP结构中的(X-L)n-B-D-和3’MVIP结构中的(X-L)m-B-D-选自以下结构中的一种或多种：
在某些实施方式中，所述X、L、D及B在5’MVIP与3’MVIP各自的内部或5’MVIP与3’MVIP之间相同或不同。
在某些实施方案中，所述5’MVIP结构中的(X-L)n-B-D-选自表8中所示的结构：
表8 5’MVI7P的(X-L)n-B-D-结构
在某些实施方案中，5’MVIP也可以不存在，这时候m可以为2-4的整数。
在某些实施方案中，所述3’MVIP结构中的(X-L)m-B-D-选自表9中所示的结构：
表9 3’MVIP的(X-L)m-B-D-结构
在某些实施方案中，5’MVIP配体结构中的(X-L)n-B-D-与R1的组合如表10所示。
表10 5’MVIP中(X-L)n-B-D-与R1的组合
在某些实施方案中，3’MVIP可以不存在，这时候n可以是2-4。
在某些实施方案中，3’MVIP配体结构中的(X-L)m-B-D-与R2组合如表11所示。
表11 3’MVIP的(X-L)m-B-D-与R2组合
在某些实施方式中，所述5’MVIP选自表10中5’MVIP01至5’MVIP22中的任一个。
在某些实施方式中，所述3’MVIP选自表11中3’MVIP01至3’MVIP27的任一个。
在本申请的RNAi剂中，当其一条单链上有3’MVIP时，与这条单链相互补的另外一条单链相应的有5’MVIP或3’MVIP或者没有；当所述RNA抑制剂的一条单链上有5’MVIP时，与其相互补的另外一条单链相应的有3’MVIP或5’MVIP或者没有。5’MVIP和3’MVIP也可以同时连接在正义链或反义链的对应末端，即正义链的5’末端有5’MVIP时，其3'末端也可以有3'MVIP；反义链的5’末端有5’MVIP时，其3'末端也可以有3'MVIP。或者，5’MVIP同时放在正义链和反义链的5’末端。或者，3’MVIP同时放在正义链和反义链的3’末端。
在某些实施方案中，选择表12中不同5'MVIP和3'MVIP组合接入RNAi剂的正义链和或反义链的不同位置，包括末端或将(X-L)n-B-D-事先通过化学反应引入到A,U,G和或C糖基的2’位置或碱基合适的位置，形成相应的亚磷酰胺单体，引入到正义链和或反义链的中间，所述中间是指除末端外的任何位置。
表12 5'MVIP与3'MVIP的组合
在一些实施方案中，本发明所述的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐可以羧酸盐、钠盐、三乙胺盐或其它可药用盐的形式制备或合成。
在某些实施方案中，所述RNA抑制剂选自表13。
表13含5’MVIP09/3’MVIP09组合的RNA抑制剂
在一些实施方案中，所述RNA抑制剂的正义链UsGsGUfAAfUfGfGACAGAGUUAUsUsU(SEQ ID NO.456)的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP连接，所述正义链选自下表14：
表14正义链的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP连接
在一些实施方案中，本发明所述的RNA抑制剂的正义链与表14中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸。
在一些实施方案中，所述RNA抑制剂的反义链AsUsAACUfCUGUCfCAfUUACCAsUsU(SEQ ID NO.492)的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP连接，所述反义链选自下表15。
表15反义链的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP连接
在一些实施方案中，本发明所述的RNA抑制剂的反义链与表15中的各序列相差一个、两个或三个核苷酸。
在某些实施方案中，本申请所述的RNA抑制剂是由表14的正义链或与这些正义链相差一个、两个或三个核苷酸的序列和表15中的反义链或与这些反义链一个、两个或三个核苷酸的序列随机配对形成的。
在一些实施方案中，本申请所述的RNA抑制剂的正义链和反义链的末端核苷酸形成一对(即不形成突出端)但不互补(即形成非互补对)。
在一些实施方案中，本申请所述的RNA抑制剂正义链和/或反义链的端部处的1个，2个或3个未配对核苷酸形成突出端，未配对的核苷酸可位于正义链或反义链上，从而产生3'或5'突出端。
在一些实施方案中，本申请所述的RNA抑制剂的正义链和反义链含有相同数目的核苷酸。
在一些实施方案中，本文所述的RNA抑制剂的正义链和反义链含有不同数目的核苷酸。
在一些实施方案中，本文所述的RNA抑制剂的正义链5'端和反义链3'端平齐。
在一些实施方案中，本文所述的RNA抑制剂的正义链3'端和反义链5'端平齐。
在一些实施方案中，本文所述的RNA抑制剂的正义链和反义链的两端均平齐。
在一些实施方案中，本文所述的RNA抑制剂的正义链和反义链的两端均不是平齐。如本文所用，平齐是指其中正义链和反义链的末端核苷酸为互补(形成互补碱基对)。
在一些实施方案中，所述RNA抑制剂的正义链UsGsGUfAAfUfGfGACAGAGUUAUsUsU(SEQ ID NO.456)的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP偶联。
在一些实施方案中，本申请所述的RNA抑制剂的正义链和反义链序列长度为21，正义链和反义链的3’端部处的2个未配对核苷酸形成突出端或正义链序列长度为19，反义链序列长度为21，正义链3’端与反义链5’端平齐，反义链的3’端部处的2个未配对核苷酸形成突出端，所述RNA抑制剂选自表16，考察序列差异1至3个核苷酸对RNA抑制剂活性的影响。
表16RNA抑制剂代码、所含的单链及其序列号
专利CN113171371B中详细考察了5'MVIP和/或3'MVIP结构中X、L、B、D、R1和R2不同对RNA抑制剂活性效果影响研究全文引入本发明书，当X、L、B、D、R1和R2之一不同时，相应的5'MVIP和/或3'MVIP中其它部分与5’MVIP09/3’MVIP09的相同，所偶联的干扰核酸相同。
当X分别为半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺及其衍生物时，所得RNA抑制剂优选N-乙酰半乳糖胺及其衍生物作为配体：
L的长短对RNA抑制剂的作用效果影响较大。当含有-NH-、C＝O、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、脂肪族碳环基如环己烷或者这些基团的组合时，或者在同一个5'MVIP、3'MVIP结构中或5'MVIP与3'MVIP彼此L结构不同、在链长为C7-C18这个范围，所得RNA抑制剂的活性相差不大。
除接头B结构改变外，而X、L、D及R1/R2与组合5’MVIP09/3’MVIP09中的一致时，接头B中通式中的A1和A2各自独立地是C、O、S、-NH-、羰基、酰胺基、磷酰基或硫代磷酰基，r为0-4的整数，并且接头B在5’MVIP与3’MVIP之间相同或不同时，所得RNA抑制活性相差不大。
除连接链D结构改变外，X、L、D及R1/R2与组合5’MVIP09/3’MVIP09中的一致时，不同的连接链D会对RNA抑制剂活性有影响，其中D1、D2、D4的效果接近且优于D3。
不同的转接点R1会对RNA抑制剂活性有影响，其中R1-1作为转接点的所得的RNA抑剂活性最好。
| R1代码 | R1结构 |
| R1-1 | -NH(CH2)6O- |
| R1-2 | -O(CH2)6O- |
| R1-3 | -S(CH2)6O- |
| R1-4 | -NH(CH2)8O- |
| R1-5 | -NH(CH2)5CH(CH2CH3)O- |
| R1-6 | -S(CH2)4CH(CH3)O- |
不同的转接点R2会对RNA抑制剂活性有影响，其中R2-1作为转接点时RNA抑制剂最佳。
在某些实施方案中，所述的RNA抑制剂中的n+m分别为2，3，4，5和6。5’MVIP和/或3’MVIP偶联的位置包括反义链的5’末端和/或3’末端、正义链的5’末端和/或3’末端、反义链的5’末端和正义链的3’末端、正义链的5’末端和3’末端。由表15中反义链和表14中正义链碱基随机配对退火，其中n+m＝2,3,4,5和6，所述RNA抑制剂见表17。
表17含有5’MVIP和3’MVIP组合的RNA抑制剂
药物组合物
本申请也包括包含本申请的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一个实施方式中，本文提供包含本文所述的RNA抑制剂和药学上可接受的药用辅料的药物组合物。包含RNA抑制剂的药物组合物可用于预防和/或治疗LPA相关障碍，例如，高血压。这类药物组合物依据递送模式配制。一个实例方案为配制用于以肠胃外递送全身性施用的组合物，例如，皮下(SC)、肌内(IM)或静脉内(IV)递送。本申请的药物组合物可以足以抑制LPA基因表达的剂量施用。
药学上可接受的“辅料”或“赋形剂”是用于递送一种或多种核酸至动物的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或任何其他药学上惰性的媒介物。赋形剂可为液体或固体，并考虑计划的施用方式进行选择，以在与核酸及给定药物组合物中的其他组分组合时提供所需的体积、稠度等。RNA抑制剂可以靶向特定组织(例如，肝细胞)的方式递送。
在某些实施方式中，所述的药物组合物，其还包含递送媒介物(如纳米颗粒、树状聚合物、聚合物、脂质体或阳离子递送系统)，
在某些实施方式中，其中所述递送媒介物包括脂质体。
在某些实施方式中，其中所述递送媒介物包括纳米脂质，其能够与核酸分子形成脂质体-核酸纳米颗粒。
在某些实施方式中，所述递送媒介物包括两性脂质化合物M10C1。
用途
另一方面，本申请提供前述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐与前述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗疾病或病理或者降低疾病或病理的风险。
在某些实施方式中，其中所述疾病或病理包括与含Lp(a)和或apo(a)的水平升高相关的疾病或病理。
在某些实施方式中，其中所述疾病或病理包括肝源性疾病。
在某些实施方式中，其中所述疾病或病理包括炎性、心脑血管或代谢疾病。
在某些实施方式中，其中所述心脑血管疾病包括高脂血症、中风、动脉粥样硬化、血栓形成、冠心病或主动脉瓣狭窄。
另一方面，本申请提供一种预防或治疗疾病、病症或综合征的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的包含前述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或前述的药物组合物。
在某些实施方式中，其中所述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或所述药物组合物以皮下方式、静脉内方式、口服、经直肠或腹膜内施加途径向受试者施用。
另一方面，本申请提供一种用于抑制细胞、组织或受试者中LPA mRNA或蛋白质表达的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的包含前述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或前述的药物组合物。
在某些实施方式中，其中所述细胞是肝细胞。
在某些实施方式中，其中所述组织是肝脏组织。
在某些实施方式中，其中所述细胞和组织是离体的。
适合使用本申请方法处理的细胞可为任何表达LPA基因的细胞，例如，肝脏细胞、脑细胞、胆囊细胞、心脏细胞或肾脏细胞，但优选为肝脏细胞。适合用于本申请方法的细胞可为哺乳动物细胞，当与表达LPA基因的细胞接触时，RNAi剂抑制LPA基因(例如，人类、灵长类、非灵长类或大鼠LPA基因)的表达至少约50％，例如可通过PCR或基于分支DNA(bDNA)的方法，或由基于蛋白质的方法，如免疫荧光分析法，蛋白质印迹法或流式细胞分析技术测定的。
本文所用术语“抑制”可与“减少”、“降低”、“沉默”、“下调”、“压制”及其他类似术语交换使用，且包括任何抑制水平。LPA基因的表达可依据与LPA基因表达相关的任何变量的水平或水平变化来评价，例如，LPA mRNA水平或LPA蛋白水平。这一水平可在单个细胞中或细胞群中(包括例如，源自受试者的样品)中分析。可通过与LPA表达相关的一种或多种变量与对照水平比较的绝对或相对水平的下降来评价抑制。对照水平可为本领域上采用的任何类型的对照水平，例如，给药前基线水平或从未处理或接受对照(如例如，仅缓冲剂对照或无活性剂对照)处理的类似受试者、细胞或样本测得的水平。
LPA基因表达的抑制可通过其中LPA基因被转录且已处理(例如，通过一个或多个细胞与本申请的RNA抑制剂接触，或通过施用本申请的RNA抑制剂于其中存在该细胞的受试者)使得抑制LPA基因表达的第一细胞或细胞群(这类细胞可例如存在于源自受试者的样品中)表达的mRNA量与基本上与该第一细胞或细胞群相同但未如此处理的第二细胞或细胞群(未用RNA抑制剂处理或未用靶向目的基因的RNA抑制剂处理的对照细胞)相比的降低来表现。在优选的实施方式中，抑制通过实施例2提供的方法使用siRNA合适的浓度在高表达LPA的细胞系中评价，并将被干预细胞中的mRNA水平表示为非干预对照细胞中mRNA水平的百分比。
在其他实施方式中，LPA基因表达的抑制可通过功能上与LPA基因表达相关的参数的降低来评价，例如，受试者血液或血清中的LPA蛋白水平。LPA基因沉默可在任何表达LPA的细胞(内源性或来自表达构建体的外源性)中且通过本领域已知的任何分析法测定。
LPA蛋白质表达的抑制可由细胞或细胞群或受试者样品表达的LPA蛋白水平(例如，源自受试者的血液样品中的蛋白质水平)的降低来表现。如上所述，对于mRNA抑制的评价，处理细胞或细胞群的蛋白质表达水平的抑制可类似地表示为对照细胞或细胞群的蛋白质水平的百分比，或受试者样品(例如，血液或其衍生的血清)中的蛋白质水平的变化。
可用于评价LPA基因抑制的对照组细胞、细胞群或受试者样品包括未与本申请RNAi剂接触的细胞、细胞群或受试者样品。例如，对照细胞、细胞群或受试者样品可源自于用RNAi剂治疗前的单个受试者(例如，人类或动物受试者)或适当匹配的群体对照。
细胞或细胞群表达的LPA mRNA水平可采用本领域已知用于评价mRNA表达的任何方法测定。例如，qRT-PCR，评价基因表达的降低。可通过本领域中已知的任何方法，例如，ELISA，评价蛋白质产生的降低。在某些实施方式中，穿刺肝脏活检样品用作监测LPA基因或蛋白质表达降低的组织材料。其他实施方式中，血液样品用作监测LPA蛋白质表达降低的受试者样品。
具体地，本申请还公开了一下具体实施方式：
1.一种抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含反义链的互补区，所述互补区包括至少12个连续核苷酸，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQID NO.414-418中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
2.根据实施方式1所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述互补区包含12-25个连续核苷酸碱基对。
3.根据实施方式1所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含反义链，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.414-418中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
4.根据实施方式1所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其还包含正义链，其中所述正义链和反义链之间至少有约80％的碱基互补。
5.根据实施方式4所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和反义链各自独立地为15-30个核苷酸。
6.根据实施方式5所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和反义链各自独立地为17-25个核苷酸。
7.根据实施方式6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和反义链各自独立地为19-23个核苷酸。
8.根据实施方式1-7中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.396-400中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
9.根据实施方式1-8中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和反义链选自以下组合中的任意一种或多种：
1)正义链：ugguaauggacagaguuauuu(SEQ ID NO.396)，反义链：auaacucuguccauuaccauu(SEQ ID NO.414)；
2)正义链：acagaguuaucgaggcucatt(SEQ ID NO.397)，反义链：ugagccucgauaacucuguuu(SEQ ID NO.415)；
3)正义链：guaauggacagaguuaucgau(SEQ ID NO.398)，反义链：cgauaacucuguccauuacca(SEQ ID NO.416)；
4)正义链：gccccuugguguuauacaa(SEQ ID NO.399)，反义链：uuguauaacaccaaggggcug(SEQ ID NO.417)；和
5)正义链：gcuccuuauuguuauacga(SEQ ID NO.400)，反义链：ucguauaacaauaaggagcug(SEQ ID NO.418)。
10.根据实施方式1-9中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和/或反义链上的一个或多个核苷酸被修饰以形成修饰的核苷酸。
11.根据实施方式10所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述修饰的核苷酸选自：脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、脱碱基核苷酸、2’-修饰核苷酸、3’至3’连接(倒置)核苷酸、含非天然碱基的核苷酸、桥接核苷酸、肽核酸(PNA)、解锁的核碱基类似物、锁定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷间连接)核苷酸、2’-F-阿拉伯糖核苷酸、5’-Me/2’-氟带核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯脱氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含环丙基磷酸酯的核苷酸。
12.根据实施方式11所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述2’-修饰核苷酸包括：2’-O-甲基核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核苷酸、2’-脱氧核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基核苷酸和/或2’-烷基核苷酸。
13.根据实施方式1-12中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和反义链的部分或全部核苷酸糖基2’位的-OH被取代，其中，所述取代基团为氟或甲氧基。
14.根据实施方式1-13中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述反义链5’末端开始的第2、4、6、7、8、12、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
15.根据实施方式1-14中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，或所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
16.根据实施方式1-15中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述反义链除了5’末端开始的第7、12、14位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH中的至少一个被甲氧基取代；或所述反义链除了5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH至少一个被甲氧基取代。
17.根据实施方式1-16中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；或所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
18.根据实施方式1-17中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH中的至少一个被氟代。
19.根据实施方式1-18中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，或所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
20.根据实施方式1-19中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链除了5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH至少一个被甲氧基取代；或所述正义链除了5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸之外，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH中的至少一个被甲氧基取代。
21.根据实施方式1-20中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；或所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代。
22.根据实施方式1-21中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和/或反义链的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
23.根据实施方式1-22中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链末端和/或反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
24.根据实施方式1-23中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链5’端和反义链3’端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
25.根据实施方式1-24中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链末端和反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
26.根据实施方式1-25中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，反义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，且所述反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；所述正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，正义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；且所述正义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；或
所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，反义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，且所述反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；所述正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，正义链其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代；且所述正义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
27.根据实施方式1-26中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.492，493，496，499和501中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
28.根据实施方式1-27中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO.456，457，460，463和465中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列。
29.根据实施方式1-28中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链和反义链选自以下组合中的任意一种或多种：
1)正义链：UsGsGUfAAfUfGfGACAGAGUUAUsUsU(SEQ ID NO.456)，反义链：AsUsAACUfCUGUCfCAfUUACCAsUsU(SEQ ID NO.492)；
2)正义链：AsCsAGfAGfUfUfAUCGAGGCUCAsTsT(SEQ ID NO.457)，反义链：UsGsAGCCfUCGAUfAAfCUCUGUsUsU(SEQ ID NO.493)；
3)正义链：GsUsAAfUGfGfAfCAGAGUUAUCGsAsU(SEQ ID NO.460)，反义链：CsGsAUAAfCUCUGfUCfCAUUACsCsA(SEQ ID NO.496)；
4)正义链：GsCsfCCfCUfUfGfGUfGUfUAfUACsAsA(SEQ ID NO.463)，反义链：UsfUsGfUAfUAfACACCAfAGfGGGCsUsG(SEQ ID NO.499)；和
5)正义链：GsCsfUCfCUfUfAfUUfGUfUAfUACsGsA(SEQ ID NO.465)，反义链：UsfCsGfUAfUAfACAAUAfAGfGAGCsUsG(SEQ ID NO.501)；
其中，G＝2’-O-甲基鸟苷酸，A＝2’-O-甲基腺苷酸，U＝2’-O-甲基尿苷酸，C＝2’-O-甲基胞苷酸；Gs＝2’-O-甲基-3’-硫代鸟苷酸，As＝2’-O-甲基-3’-硫代腺苷酸，Us＝2’-O-甲基-3’-硫代尿苷酸，Cs＝2’-O-甲基-3’-硫代胞苷酸；fG＝2’-氟鸟苷酸，fA＝2’-氟腺苷酸，fU＝2’-氟尿苷酸，fC＝2’-氟胞苷酸；fGs＝2’-氟-3’-硫代鸟苷酸，fAs＝2’-氟-3’-硫代腺苷酸，fUs＝2’-氟-3’-硫代尿苷酸，fCs＝2’-氟-3’-硫代胞苷酸。
30.根据实施方式1-29中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，包括Ky11-DS38，Ky11-DS39，Ky11-DS42，Ky11-DS45和Ky11-DS47。
31.根据实施方式1-30中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，还包含配体，其中所述配体缀合于正义链和/或反义链。
32.根据实施方式31所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述配体缀合于反义链的5’末端和/或3’末端。
33.根据实施方式31-32中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述配体缀合于正义链的5’末端和/或3’末端。
34.根据实施方式31-33中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述配体缀合于反义链的5’末端，且所述配体缀合于正义链的3’末端。
35.根据实施方式31-34中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述配体缀合于反义链的3’末端，且所述配体缀合于正义链的5’末端。
36.根据实施方式31-35中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述配体缀合于正义链的5’末端和3’末端。
37.根据实施方式31-36中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述配体包括5’MVIP(5’MultiValent Import Platform)和3’MVIP(3’MultiValent Import Platform)，其中，所述5’MVIP偶联在所述正义链和/或反义链5’末端，所述3’MVIP偶联在所述反义链和/或正义链3’末端，所述5’MVIP的结构如式I所示，所述3’MVIP结构如式II所示，
(X-L)n-B-D-R1-，
I
(X-L)m-B-D-R2-，
II
其中，
n和m各自独立地为0-4的任意整数，优选为1-3的任意整数，
X为靶向单元；
L为支链；
B为分支单元；
D为连接链；
R1和R2为桥接单元，与所述正义链或反义链通过磷酸酯或经修饰的磷酸酯，优选地通过磷酸酯或硫代磷酸酯相连接。
38.根据实施方式1-37中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其结构如式IIIa、IIIb或IIIc所示：
n和m各自独立地为0-4的任意整数。
39.根据实施方式1-38中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述且n+m＝2-6的整数，优选n+m＝2、3或4，更优选为4。
40.根据实施方式37-39中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1和R2结构中带有-NH-、硫原子和/或氧原子，R1和R2通过结构中-NH-、硫原子或氧原子分别与连接链D以及正义链和/或反义链5’末端和3’末端相连，R1和R2相同或不相同。
41.根据实施方式37-40中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1和R2是任选直链，或带有酰胺基、羧基或烷基类支链的直链或者环状结构，所述环状结构包括饱和或不饱和的脂肪族碳环基，或者含有硫、氧或氮原子的五元或六元杂环基或芳香烃基。
42.根据实施方式37-41中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)xCH2E2-，其中x为3-12的任意整数，基团E1和E2可以分别为-NH-、硫原子或氧原子。
43.根据实施方式37-42中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)x1CH(OH)(CH2)X2E2-，其中x1或x2各自独立地为3-10的任意整数，E1和E2可以分别为-NH-、硫原子或氧原子。
44.根据实施方式37-43中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
45.根据实施方式37-44中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1为-NH(CH2)xCH2O-，其中x为3-12的任意整数，优选为4-6的任意整数。
46.根据实施方式37-45中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R2为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
47.根据实施方式37-46中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R2为-NH(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2CH2O-，其中x1为1-4的任意整数，x2为0-4的任意整数。
48.根据实施方式37-47中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述靶向单元X选自用于增强肝细胞对RNA抑制剂的摄取的结构。
49.根据实施方式37-48中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述靶向单元X选自单糖及其衍生物。
50.根据实施方式49所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述单糖选自以下结构中的一种或多种：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、葡糖胺、核糖。
51.根据实施方式49-50中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述单糖衍生物选自甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、葡萄糖衍生物、核糖衍生物以及其他衍生物。
52.根据实施方式37-51中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述靶向单元X选自半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺及其衍生物。
53.根据实施方式37-52中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述靶向单元X为N-乙酰半乳糖胺及其衍生物。
54.根据实施方式37-53中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述靶向单元X选自以下结构：
其中，W选自-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH2)qCH3中的一种或两种，其中q为0-4的整数。
55.根据实施方式37-54中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L是含有-NH-、-C(＝O)-、-O-、-S-、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、C4-C10脂肪族碳环基、苯基或者这些基团的组合的C4-C18直链。
56.根据实施方式37-55中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L还带有羟乙基或羧酸类的侧链。
57.根据实施方式37-56中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L为含酰胺基或六元脂肪族碳环基的C7-C18直链。
58.根据实施方式37-57中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L选自如下结构中的一种或多种：
其中，r1是1-12的任意整数，r2为0-20的任意整数，Z为H、烷基或酰胺基。
59.根据实施方式37-58中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述分支单元B的结构与能引入的靶向单元X的数量有关，分支单元B中含-NH-、C、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基，当n或m为1时，其为一条直链，当n或m为2、3或4时，其分叉的次数分别为2、3或4。
60.根据实施方式37-59中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述分支单元B选自以下结构：
其中，A1和A2各自独立地是C、O、S、-NH-、羰基、酰胺基、磷酰基或硫代磷酰基，r为0-4的整数。
61.根据实施方式37-60中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述分支单元B选自以下结构：
其中，r为0-4的任意整数。
62.根据实施方式37-61中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述分支单元B选自以下结构：
63.根据实施方式37-62中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述分支单元B选自以下结构：
64.根据实施方式37-63中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D是含有-NH-、C＝O、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、芳香烃基、C4-C10脂肪族碳环基、含1-3个氮的五元或六元杂环基或者这些基团的组合的C3-C18直链。
65.根据实施方式37-64中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D还带有羟甲基、甲基叔丁基、甲基苯酚基、C5-C6脂肪环基的侧链。
66.根据实施方式37-65中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D为含两个C＝O、六元脂肪族碳环基或苯基的C3-C10直链。
67.根据实施方式37-66中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D为含两个C＝O的C3-C10直链。
68.根据实施方式37-67中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D选自以下结构：
其中，每个p各自独立地为1-20的任意整数；s为2-13的整数；Z1和Z2为相同或者不同的取代基团。
69.根据实施方式37-68中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D选自以下结构：
70.根据实施方式37-69中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述连接链D选自以下结构：
71.根据实施方式37-70中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述5’MVIP结构中的(X-L)n-B-D-和3’MVIP结构中的(X-L)m-B-D-选自以下结构中的一种或多种：
72.根据实施方式37-71中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述靶向单元X、支链L、连接链D、及分支单元B在5’MVIP与3’MVIP各自的内部或5’MVIP与3’MVIP之间相同或不同。
73.根据实施方式37-72中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述5’MVIP选自5’MVIP01至5’MVIP22中的任一个。
74.根据实施方式37-73中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述3’MVIP选自3’MVIP01至3’MVIP27的任一个。
75.根据实施方式37-74中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述正义链5’MVIP和反义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09；或者所述反义链5’MVIP和正义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01。
76.根据实施方式1-75中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含表13中Ky11-DS67至Ky11-DS77中的一种或多种。
77.根据实施方式1-76中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述反义链选自表15中的任一种或多种。
78.根据实施方式77所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述正义链选自表14中的任一种或多种。
79.根据实施方式1-78中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述RNA抑制剂选自：Ky11-DS71和Ky11-DS7101～Ky11-DS7109中的一种或多种。
80.药物组合物，其包含实施方式1-79中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂，并且还包含递送媒介物，和/或生理上可接受的赋形剂和/或载体和/或稀释剂。
81.根据权要求80所述的药物组合物，其中所述递送媒介物包括脂质体。
82.根据权要求80所述的药物组合物，其中所述递送媒介物包括纳米脂质。
83.实施方式1-79中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐与实施方式80-82中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗疾病或病理或者降低疾病或病理的风险。
84.根据实施方式83所述的用途，其中所述疾病或病理包括与含Lp(a)或apo(a)的水平升高相关的疾病或病理。
85.根据实施方式83所述的用途，其中所述疾病或病理包括肝源性疾病。
86.根据实施方式83所述的用途，其中所述疾病或病理包括炎性、心脑血管或代谢疾病。
87.根据实施方式83所述的用途，其中所述心脑血管疾病包括高脂血症、中风、动脉粥样硬化、血栓形成、冠心病或主动脉瓣狭窄。
88.一种预防或治疗疾病、病症或综合征的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的实施方式1-79中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或实施方式80-82中任一项所述的药物组合物。
89.根据实施方式88所述的方法，其中所述抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或所述药物组合物以皮下方式、静脉内方式、口服、经直肠或腹膜内施加途径向受试者施用。
90.一种用于抑制细胞、组织或受试者中LPA mRNA和/或Lp(a)表达的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的实施方式1-79中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂、其药学上可接受的盐或实施方式80-82中任一项所述的药物组合物。
91.根据实施方式90所述的方法，其中所述细胞是肝细胞。
92.根据实施方式90所述的方法，其中所述组织是肝脏组织。
93.根据实施方式90所述的方法，其中所述细胞和组织是离体的。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的RNA抑制剂、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
说明：
DMSO的中文名称为二甲基亚砜；
DMF的中文名称为N,N-二甲基甲酰胺；
HOBt的中文名称为1-羟基苯并三氮唑；
HBTU的中文名称为O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯；
DIPEA(DIEA)的中文名称为N,N-二异丙基乙胺；
DCM的中文名称为二氯甲烷；
DMAP的中文名称为4-二甲氨基吡啶；
DMT-CL的中文名称为4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷；
MEOH的中文名称为甲醇；
TBTU的中文名称为O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸；
的名称为固相载体，如大孔氨甲基树脂(Resin)。
实施例1 RNA抑制剂的合成
正义链和反义链是通过本领域公知的固相亚磷酰胺法合成的，正义链与对应的反义链互补退火得到对应的RNA抑制剂。
固相亚磷酰胺法基本步骤包括：
1)脱保护：脱掉起始单体Solid Support羟基保护基(DMTr)；
2)偶联：加上第一个亚磷酰胺单体，通过3’至5’方向发生偶联反应；
3)氧化：将所得的核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯(即三价磷氧化成五价磷)；
4)封闭：将没有反应的前一步核苷酸单体5’-OH加冒封死，使其不再进一步参与反应；重复上述步骤，直至最后一个亚磷酰胺单体的接入；然后用甲胺水溶液和氨水裂解Solid Support与起始单体之间酯键，并将所得寡聚核苷酸上的各个碱基与磷酸上的保护基氰乙基(P)、苯甲酰基(mA、fA)、乙酰基(mC)等脱掉；经HPLC分离纯化后，过滤除菌，冻干得到相应的正义链或反义链。
退火：精确测定正义链和反义链复溶溶液的浓度，按等摩尔浓度进行混合后，加入该体积1/20体积的1M PBS溶液再次混匀，将混合体系加热至95℃，持续5min，然后自然降温3h至40℃或者室温时，进行HPLC检测，若单链残余＜5％即可认为反应完成。
实施例2脂质体递送的RNA抑制剂体外抑制LPA基因表达试验
取按实施例1所述的方法制备得到的RNA抑制剂(表3中的Ky11-DS01～Ky11-DS18)。将RNA抑制剂水溶液和DOTMA的有机溶液混合形成不溶于水的沉淀，沉淀分离干燥后溶于氯仿，进一步和其他脂质氯仿溶液混合，其他脂质包括M10C1和PEG600-胆固醇。混合物真空离心蒸发干燥过夜，得到纳米脂质包裹的RNAi剂，其中DOTMA、M10C1和PEG600-胆固醇与RNA抑制剂的重量配比为1～1.6，1.5～2.5和2.5～3.5。
用含10％胎牛血清的DMEM配制相应浓度的纳米脂质包裹的RNA抑制剂样品溶液。以105细胞密度和接种HepG 2细胞，10％胎牛血清DMEM培养基，37℃，5％CO2，培养24h后，加10nM，1nM和0.1nM)的样品干预，孵育72h后，收集细胞样品，往收集完毕的细胞样品中加入1ml Ezol裂解液，漩涡震荡混匀。加入0.2ml三氯甲烷，剧烈摇动10s，室温放置1分钟。4℃，12,000x g离心15min。将上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中，并加入等体积的100％乙醇。吸取全部样品，加入带有2ml收集管的mini-spin离心柱。8,000x g，室温离心15s，弃尽流穿液。将剩余的样品转移至离心柱，重复上一步骤。往离心柱中加入700μl WB，轻盖盖子，8,000×g，室温离心15秒，弃尽流穿液，重复上一步骤，用500μlWB洗涤离心柱两次。通过qRT-PCR测定LPA mRNA水平。与未干预的HepG 2细胞上清对比，标定样品干预组的LPA mRNA相对百分率。试验结果如图1所示。
试验结果：在加药量为10nM时，其中Ky11-DS08～Ky11-DS12对HepG 2细胞株中LPAmRNA的表达水平的抑制有显著效果。
实施例3使用HepG2细胞考察RNA抑制剂体外抑制效果
本实施例考察RNA抑制剂中序列修饰后的体外活性，所述修饰方式包括：反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；正义链5’末端开始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；
或者反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键；正义链5’末端开始的第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2’位的-OH被甲氧基取代，末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
取按实施例1所述的方法制备得到的表7中RNA抑制剂。配制含10％胎牛血清的DMEM培养基。细胞(HepG2)分别在10cm培养皿中培养至80-90％融合时，接种6孔板。倾去培养液，用2ml PBS洗涤细胞两次。加入2ml Trypsin-EDTA solution,混匀后，37℃放置3-5分钟。小心吸去胰酶溶液，加入2ml含10％FBS的DMEM培养液，吹打使细胞形成单细胞悬液。血球计数板计数，将细胞稀释至1.5×107细胞/ml。按1.5×106细胞/孔的浓度接种6孔板，混匀后于37℃5％CO2培养24小时。每1OD260 siRNA oligo用120μl DEPC-H2O溶解，终浓度约为20μM。以转染6孔板其中1个孔为例，在1.5ml EP管中加入250μl无血清DMEM培养基，加入30ul siRNA oligo，混匀；取另一1.5ml EP管，加入250μl无血清DMEM，加入5μl GP-Transfect-Mate，混匀，室温放置5分钟后将两管混合，室温放置20分钟。吸去6孔板中的培养液，将转染混合物逐滴加入6孔板中，混匀后，在培养箱中温育5小时。吸弃转染液，加入1ml含10％FBS的DMEM培养液。37℃5％CO2继续培养24或48小时，分别收样，所得细胞用于PCR检测LPA基因的mRNA表达水平。
试验结果：如图2所示，在加药量为1nM或10nM时，其中Ky11-DS38、Ky11-DS39、Ky11-DS41、Ky11-DS42、Ky11-DS45、Ky11-DS47、Ky11-DS54、Ky11-DS62、Ky11-DS64对HepG 2细胞株中LPA mRNA的表达水平的抑制有显著效果。
实施例4 5’MVIP和3’MVIP化合物的合成
当本发明的RNA抑制剂的正义链或反义链的3'端有3'MVIP时，3'MVIP的solidsupport作为固相合成的起始单体，3’MVIP的solid spport通式如下：
m为1-4时，通式中接头B部分分别支化1至4次，以获得对应的3’MVIP的SolidSupport。
当m为1时，所得的Solid Support作为RNA抑制剂Ky11-DS7102、Ky11-DS7103的正义链和Ky11-DS7106、Ky11-DS7107反义链固相合成的起始单体；当m为2时，所得的SolidSupport作为RNA抑制剂Ky11-DS7104、Ky11-DS7105的正义链和Ky11-DS71、Ky11-DS7101的反义链的固相合成起始单体；
当m为3时，所得的Solid Support作为RNA抑制剂Ky11-DS7108、Ky11-DS7109的反义链固相合成起始单体。
当本发明的RNA抑制剂的正义链或反义链的5'端有5’MVIP时，5’MVIP亚磷酰胺单体是作为正义链或反义链固相合成的最后一个亚磷酰胺单体。5’MVIP亚磷酰胺单体通式如下：
n为1-4时，通式中接头B部分分别支化1至4次，以获得对应的5’MVIP亚磷酰胺单体。
当n为1时，所得的5’MVIP亚磷酰胺单体作为RNA抑制剂Ky11-DS7104、Ky11-DS7105、Ky11-DS7106、Ky11-DS7107、Ky11-DS7108、Ky11-DS7109以的正义链固相合成的最后一个单体；当n等于2时，所得的5’MVIP亚磷酰胺单体作为Ky11-DS71、Ky11-DS7101、Ky11-DS7102、Ky11-DS7103的正义链固相合成的最后一个单体。
当n等于3时，所得的带3个配体X的5’MVIP亚磷酰胺单体可作为正义链或反义链固相合成的最后一个单体。
本发明所述的这些RNA抑制剂的正义链和反义链在进行亚磷酰胺固相合成之前，需要先化学合成相应的3’MVIP Solid Support和5’MVIP亚磷酰胺单体。化学合成过程叙述如下：
1. 3’MVIP的Solid Support的合成
1.1 RNA抑制剂Ky11-DS71、Ky11-DS7101的正义链和Ky11-DS7104、Ky11-DS7105的反义链的3'MVIP09的Solid Support的合成
合成过程描述：
1.1.1 ERC-01-c1的合成
称取2-氨基-1,3-丙二醇(5.0g，54.9mmol)加入DMSO 50mL，氢氧化钠溶液(1g/mL)5mL，降温到0℃，滴加丙烯酸叔丁酯(20mL，137.8mol)2小时加完，室温反应48h，加石油醚(100mL)，饱和食盐水洗2次，有机层干燥。过层析柱(食蟹液：乙酸乙酯:石油醚＝25％-75％)，上柱加0.05％的三乙胺，得无色油状物6.2g。
1.1.2 ERC-01-c2的合成
称取ERC-01-c1(6.2g，17.9mmol)，加二氯甲烷50mL，碳酸钠溶液(25％)23mL，室温滴加氯甲酸苄酯(8.2mL，57.4mmol)，2小时滴加完，室温反应过夜，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，过层析柱(乙酸乙酯:石油醚＝5％-30％)得油状物4.0g。
1.1.3 ERC-01-c3的合成
取ERC-01-c2(4.0g，8.3mmol)加甲酸12mL，室温反应过夜，减压蒸干溶剂，得产品2.8g。
1.1.4 ERCd-01-c1的合成
将化合物ERC-01-c3(1.11g，3.0mmol)和dlSANC-c4(3.6g，8.04mmol)加到DMF(60mL)中，然后加入HOBt(2.24g)和HBTU(3.36g)，然后缓慢加入DIEA(4.16mL)。反应液室温下搅拌反应3小时。然后加入水，水层用二氯甲烷萃取(2x10mL)。合并有机层，然后依次用饱和碳酸氢钠(80mL)、水(2x60mL)、饱和食盐水(60mL)洗。用无水硫酸钠干燥，减压蒸干，用硅胶柱层析纯化(食蟹液：3-15％MeOH in DCM)。得淡黄色固3.24g。
1.1.5 ERCd-01-c2的合成
ERCd-01-c1(3.24g，2.6mmol)用甲醇(60mL)溶解，加入10％钯碳(0.3g)，乙酸(2.0mL)。然后常压下加氢，反应过夜。反应液用硅藻土过滤，滤液减压蒸干，得油状物ERCd-01-c2 2.9g，其高分辨质谱图见图3。
1.1.6 3’MVIP09-c1的合成
向反应瓶内依次加入SANCd-01-c0(0.824g，1.5mmol)和ERCd-01-c2(1.09g，1.0mmol)，再加入10mL的DCM，搅拌溶解，再依次加入TBTU(0.963g)和DIPEA(0.517g)，反应过夜，加水，用DCM萃取，有机相再用饱和食盐水洗涤，干燥、过滤、浓缩，最后过硅胶柱进行纯化，得产品1.3g。
1.1.7 3’MVIP09-c2的合成
向反应瓶内依次加入3’MVIP09-c1(1.62g，1μmol)和10mL的DCM，室温搅拌溶解，再依次加入DMAP(0.366g)和丁二酸酐(0.2g，3μmol)，室温搅拌反应，TLC分析，反应合格浓缩掉DCM，加水，用DCM萃取，有机相再用饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，最后过硅胶柱进行纯化，得到产品为1.55g。
1.1.8 3’MVIP09的Solid Support合成
向反应瓶内依次加入3’MVIP09-c2(0.86g，0.5μmol)和10mL DMF，溶解，再依次加入HBTU(0.19g)、DIPEA(0.194g)和大孔氨甲基树脂(2.0g)，摇床24h，过滤，树脂用10％甲醇/DCM洗涤，再用25％醋酸/吡啶进行封端，取代度150μmol/g。
1.2 RNA抑制剂Ky11-DS7108、Ky11-DS7109的反义链的3'MVIP17的Solid Support的合成
1.2.1 SANC-01-c1的合成
合成步骤参照1.1.1.ERC-01-c1的合成。
1.2.2 SANC-01-c2的合成
合成步骤参照1.1.2.ERC-01-c2的合成。
1.2.3 SANC-01-c3的合成
合成步骤参照1.1.3.ERC-01-c3的合成。
1.2.4 SANCd-01-c1的合成
合成步骤参照1.1.4.ERCd-01-c1的合成。
1.2.5 SANCd-01-c2的合成
合成步骤参照1.1.5.ERCd-01-c2的合成。
1.2.6 3’MVIP17-c1的合成
合成步骤参照1.1.6.3’MVIP09-c1的合成，合成所得3’MVIP17-c1的高分辨质谱图见图4。
1.2.7 3’MVIP17-c2的合成
合成步骤参照1.1.7.3’MVIP09-c2的合成。
1.2.8 3’MVIP17的Solid Support合成
合成步骤参照1.1.8 3’MVIP09的Solid Support合成。
1.3 RNA抑制剂Ky11-DS7106、Ky11-DS7107的反义链和Ky11-DS7102、Ky11-DS7103正义链的3'MVIP01的Solid Support的合成：
3'MVIP01 Solid Support
合成过程描述：
1.3.1 3’MVIP01-c1的合成
合成步骤参照1.1.6.3’MVIP09-c1的合成。
1.3.2 3’MVIP01-c2的合成
合成步骤参照1.1.7.3’MVIP09-c2的合成。
1.3.3 3’MVIP01的Solid Support合成
合成步骤参照1.1.8.3’MVIP09的Solid Support合成。
2. 5’MVIP亚磷酰胺单体的合成
2.1当n为2时，所得的5’MVIP亚磷酰胺单体作为Ky11-DS71、Ky11-DS7101、Ky11-DS7102、Ky11-DS7103正义链固相合成的最后一个单体5’MVIP09亚磷酰胺单体的合成：
2.1.1 5’MVIP09-ERCd-PFP-c1的合成
称量ERCd-01-c2(2.18g，2.0mmol)溶于DMF(50mL)，加戊二酸单苄酯(0.53g，2.4mmol)、DIPEA(0.78g)与TBTU(0.84g)，室温搅拌过夜，加水淬灭(50mL)，DCM(30mL*3)萃取，10％柠檬酸(50mL*3)、饱和碳酸氢钠50mL和吡啶100mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸，过柱纯化得产品5’MVIP09-ERCd-PFP-c1(2.15g)。
2.1.2 5’MVIP09-ERCd-PFP-c2的合成
称量5’MVIP09-ERCd-PFP-c1(2.15g，1.66mmol)和10％钯碳(0.21g)，加甲醇(50mL)，室温搅拌加氢过夜，反应结束后硅藻土过滤钯碳，旋蒸得5’MVIP09-ERCd-PFP-c2粗品(1.9g)，其高分辨率质谱图如图5所示。
2.1.3 5’MVIP09-ERCd-PFP的合成
称量5’MVIP09-ERCd-PFP-c2粗品(1.9g，1.58mmol)溶于DCM(60mL)，加DIPEA(1.33g)，冷却，加三氟乙酸五氟苯酚酯(2.21g，7.9mmol)，室温搅拌反应2h后旋蒸，再溶于DCM(60mL)，饱和碳酸氢钠(30mL*3)、10％柠檬酸(30mL*1)、饱和食盐水(50mL*1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸得5’MVIP09-ERCd-PFP粗品(2.35g)，抽干后无纯化直接用于下一步反应。
2.1.4 5’MVIP09亚磷酰胺单体-c1的合成
5’MVIP09-ERCd-PFP粗品(2.35g，1.58mmol)溶于DCM(60mL)，加DIPEA(0.82g，6.32mmol)、6-氨基-1-己醇(0.37g，3.16mmol)，室温搅拌反应过夜。加10％柠檬酸(30mL)，DCM(30mL*3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、旋蒸，过柱纯化得产品5’MVIP09单体-c1(1.73g)。
2.1.5 5’MVIP09亚磷酰胺单体
称量5’MVIP09亚磷酰胺单体-c1(1.3g、1.0mmol)溶于乙腈(30mL)，加入二异丙胺三氮唑(0.22g)，冰浴下滴加双-(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)磷(0.36g，1.2mmol)，室温反应4h，HPLC中控，反应合格后，浓缩过柱纯化得到产品5’MVIP09单体(1.2g)。
2.2当n为1时，所得的5’MVIP亚磷酰胺单体作为Ky11-DS7104、Ky11-DS7105、Ky11-DS7106、Ky11-DS7107、Ky11-DS7108、Ky11-DS7109的正义链固相合成的最后一个单体5'MVIP01的亚磷酰胺单体的合成：
5'MVIP01的亚磷酰胺单体称量YICd-01-c2(1.12g，2.0mmol)，剩余操作参照2.1.1.～2.1.5.。
实施例5 5’MVIP09/3’MVIP 09偶联不同的siRNA的RNAi剂的合成
表13中与配体偶联的反义链合成描述：用氩气吹扫试剂瓶至少2min。向试剂瓶中依次加入亚磷酰胺单体和乙腈，拧紧瓶盖后，震荡直至目测固体全溶。然后加入3A分子筛，静置8h以上待用。用氩气吹扫试剂瓶至少2min。向试剂瓶中依次加入氢化黄原素和干燥的吡啶，拧紧瓶盖后，震荡直至目测固体全溶，暂存待用。确认在室温20～30℃环境条件下进行以下操作:称取3’MVIP配体,加入到试剂瓶中，再加入乙腈，震荡混合均匀。将配体转移至合成柱内，并用乙腈将试剂瓶中残余的配体淋洗转移至合成柱内。淋洗完毕后加乙腈充满合成柱，记录使用乙腈的用量。按仪器操作安装固定合成柱。
将上述配制的单体溶液、CAP A、CAP B、氧化剂、硫代试剂、活化剂、脱帽剂以及乙腈，连接至AKTA PILOT100对应的管路，确保管路插入试剂瓶底。
合成方法设置完毕后，仪器各项工作准备就绪，点击运行，开始合成。在线观察记录每个detritylation峰面积。在合成过程中根据脱保护试剂实际使用量，进行补加操作。
合成结束后，氩气吹扫合成柱≥2h，按操作规程卸载合成柱。向合成柱内固相载体转移至反应瓶，加入甲胺水溶液和氨水，将反应瓶放入摇床中，35℃，2-3小时。将溶液过滤至圆底烧瓶中，再使用50％乙醇水溶液洗涤残留固相，再次过滤与之前滤液合并，将圆底烧瓶连接旋转蒸发仪，设置水温50℃蒸至无馏出，向圆底烧瓶内加入乙醇，混匀，再次蒸至无馏出，重复操作至瓶底出现白色粉末。将得到的白色粉末配制成溶液，使用反向层析柱进行纯化，取样检测OD260、纯度。将纯化的反义链溶液分装于西林瓶中冻干备用，并将产品密封储存于-20℃冰箱中。
表13中与配体偶联的正义链的合成操作同反义链，其中装柱的载体为Universal载体。所得中间体加DIPEA配制成溶液，加入5’MVIP亚磷酰胺单体，混匀，将反应瓶放入摇床中，35℃，2-3小时。
表13中RNA抑制剂的合成退火工艺描述：
取表13中正义链和反义链，1:1等摩尔混合在反应瓶中，水浴95℃5分钟后，关闭水浴锅电源，使其自然降温至40℃以下。向双链溶液中加入3M醋酸钠水溶液，混合均匀后，再加入适量体积的无水乙醇，混合均匀，将反应液放入-20℃冰箱内45min。冷冻高速离心机设置4℃预制冷，温度达到后，放入双链溶液，启动离心机。取出离心后的双链溶液，去除上清液，加入超纯水使固体完全溶解，取样检测OD260、纯度，可得到表14中的RNAi剂，将纯化的成品溶液分装于西林瓶中冻干备用，并将产品密封储存于-20℃冰箱中。
实施例6应用PCH评价含有5’MVIP09/3’MVIP09结构的RNA抑制剂活性
应用原代食蟹猴肝细胞(Primary Cynomolgus Monkey Hepatocytes简称PCH)评价组合载体结构5’MVIP09/3’MVIP09偶联在RNA抑制剂的正义链和/或反义链的末端，对修饰后序列体外活性影响。
第0天，将PCH铺种到48孔板中，种细胞的同时将RNAi剂自由摄取(free uptake)进入细胞；第1天，加入PCH；第2天，更换新鲜的培养液。每隔2天更换一次含RNA抑制剂的新鲜培养基，测试化合物均3个浓度(500nM,100nM和10nM)和各3个复孔。第8天，收集上清，将收集的细胞上清用qPCR法检测LPA mRNA水平。试验结果如图6所示。Ky11-DS67-Ky11-DS72、Ky11-DS74-Ky11-DS76对PCH细胞中LPA mRNA的表达水平的抑制有显著效果。证实组合载体结构5’MVIP09/3’MVIP09能够使本发明所述LPA干扰核酸被自由摄取进入到PCH中，发挥序列修饰后的RNA抑制剂的体外抑制活性。
实施例7 RNA抑制剂在食蟹猴体内的药效研究
组合载体结构5’MVIP09/3’MVIP09偶联在RNA抑制剂的正义链和/或反义链的末端，对修饰后序列体内活性影响。按实施例5所述的方法制备相应的RNA抑制剂Ky11-DS67、Ky11-DS68、Ky11-DS71、Ky11-DS73、Ky11-DS74。
选取12只4～7岁雄性食蟹猴适应性饲养结束后根据体重随机分为对照组以及给药组，每组两只。给药剂量为3mg/kg。分组给药当天定义为d0，给药时间为当天上午。将每个RNA抑制剂加生理盐水配制成溶液。在首次给药后7天、14天、21天、28天、和35天采集血液，分离血浆后，检测LP(a)水平和LDL-C。
归一化至d0和对照组，RNA抑制剂干预后食蟹猴血液中LP(a)水平和LDL-C变化率见图7和图8。
实验结果显示，Ky11-DS67、Ky11-DS68、Ky11-DS71、Ky11-DS73、Ky11-DS74都对食蟹猴体内LP(a)和LDL-C水平的抑制都呈现了显著的效果且持续性好。载体组合结构5’MVIP09/3’MVIP09能够对本发明所述LPA干扰核酸进行有效递送，不影响序列修饰后的RNA抑制剂在体内的活性的发挥。
实施例8 5'MVIP/3'MVIP组合对RNA抑制剂在食蟹猴体内药效影响研究
本实施例考察正义链的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP偶联，反义链的5'末端和/或3'端与不同结构的5'MVIP和/或3'MVIP偶联，序列差异在1至3个核苷酸时，对RNA抑制剂活性的影响。RNA抑制剂选自表16和表17，其中，Ky11-DS7102(n+m＝3)和Ky11-DS7104(n+m＝3)、Ky11-DS7106(n+m＝2)和Ky11-DS7108(n+m＝4)正义链和反义链序列长度为21，正义链和反义链的3’端部处的都有2个未配对核苷酸形成突出端；Ky11-DS7101(n+m＝4)正义链序列长度为19，反义链序列长度为21，正义链3’端与反义链5’端平齐，反义链的3’端部处的2个未配对核苷酸形成突出端。
按实施例5所述的方法制备相应的RNA抑制剂。选取12只4～7岁雄性食蟹猴适应性饲养结束后根据体重随机分为对照组(n＝2)以及给药组(n＝2)。给药剂量为3mg/kg。分组给药当天定义为d0，给药时间为当天上午。将每个RNA抑制剂加生理盐水配制成溶液。在首次给药后第7天、14天、21天、28天、35天和42天采集血液，分离血浆后，检测LP(a)水平。
归一化至d0和对照组，RNA抑制剂干预后食蟹猴血液中LP(a)水平见图9。
实验结果显示，所述的这些RNA抑制剂在整个给药干预期间，实验猴体内的LP(a)水平都呈现不同程度的降低趋势。其中Kylo-ds7101在给药后第7天至给药后第42天，降低LP(a)的水平都稍优于其它的RNA抑制剂，在第7天达到89.79％抑制率，持续性也优于其它RNA抑制剂，在第42天仍维持在77.49％的抑制效果。Ky11-DS7102和Ky11-DS7104、Ky11-DS7106和Ky11-DS7108正义链和反义链序列长度为21，正义链和反义链的3’端部处的都有2个未配对，其中n+m分别等于2，3和4，n+m等于4的Ky11-DS7108在整个给药期间的抑制率和持续性优于其它三个抑制剂，但稍低于正义链长为19个序列的Kylo-DS7101。本实施例所用的化合物为表17中所述的化合物的示例性化合物，证实表17中所述的5’MVIP/3’MVIP载体组合都可以不同程度的递送修饰后的RNA抑制剂，但在递送效果方面与n+m的大小有关，其中n+m等于4的载体组合在抑制率和持续性上都较优，正义链上的n+m等于3的效果和持续性为其次，n+m等于2的相对靠后，但也呈现一定效果。Kylo-DS7101和Kylo-DS7108序列差异为2个核苷酸，给药后至第42天，Kylo-DS7101和Kylo-DS7108对LP(a)的抑制率分别在77.49％和74.33％，二者活性没有明显差异。本发明所述的LP(a)抑制剂的干扰核酸的序列可以承受至少2个核苷酸的差异，对LP(a)的抑制效果没有明显差异。
序列表
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<210> 70
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S70
<400> 70
tccatcactg gacattgcgt c 21
<210> 71
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S71
<400> 71
ttccatcact ggacattgcg t 21
<210> 72
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S72
<400> 72
attccatcac tggacattgc g 21
<210> 73
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S73
<400> 73
agagttgatt ccatcactgg a 21
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S74
<400> 74
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<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S75
<400> 75
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S76
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S77
<400> 77
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S80
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S81
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S94
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S99
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 102
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 103
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 104
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 105
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 106
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 107
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 108
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 109
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 110
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S113
<400> 113
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 114
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 115
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 116
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S117
<400> 117
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 118
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S119
<400> 119
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<210> 120
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S120
<400> 120
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<210> 121
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 121
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<210> 122
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S122
<400> 122
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 123
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S124
<400> 124
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 125
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S126
<400> 126
aaaaagtttt cttggattca t 21
<210> 127
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S127
<400> 127
agtcaaaaag ttttcttgga t 21
<210> 128
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S128
<400> 128
tagtcaaaaa gttttcttgg a 21
<210> 129
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S129
<400> 129
tatcacagta gtcaaaaagt t 21
<210> 130
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S130
<400> 130
acagagaggg atatcacagt a 21
<210> 131
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S131
<400> 131
aaatgaagag gatgcacaga g 21
<210> 132
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S132
<400> 132
aatgcttcca ggacatttct t 21
<210> 133
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S133
<400> 133
ttcaagcagt gagcagcagt c 21
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S134
<400> 134
tcttcaagca gtgagcagca g 21
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S135
<400> 135
ttcttcaagc agtgagcagc a 21
<210> 136
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S136
<400> 136
acttcttcaa gcagtgagca g 21
<210> 137
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S137
<400> 137
aggacttctt caagcagtga g 21
<210> 138
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S138
<400> 138
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S139
<400> 139
ttcctgaaca tgagattcga g 21
<210> 140
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S140
<400> 140
tttcctgaac atgagattcg a 21
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S141
<400> 141
tctatttcct gaacatgaga t 21
<210> 142
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S142
<400> 142
tgcttgtgtg ggctccaaga a 21
<210> 143
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S143
<400> 143
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S144
<400> 144
tatctgcttg tgtgggctcc a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S145
<400> 145
aatatctgct tgtgtgggct c 21
<210> 146
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S146
<400> 146
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<210> 147
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S147
<400> 147
ttagcaaggc aatatctgct t 21
<210> 148
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S148
<400> 148
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<210> 149
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S149
<400> 149
tgtagtctgg ggatggcaga c 21
<210> 150
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S150
<400> 150
accatgtagt ctggggatgg c 21
<210> 151
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S151
<400> 151
ttcagtcctg gcggtgacca t 21
<210> 152
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S152
<400> 152
attcagtcct ggcggtgacc a 21
<210> 153
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S153
<400> 153
acattcagtc ctggcggtga c 21
<210> 154
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S154
<400> 154
taacattcag tcctggcggt g 21
<210> 155
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S155
<400> 155
tgtaacattc agtcctggcg g 21
<210> 156
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S156
<400> 156
atgtaacatt cagtcctggc g 21
<210> 157
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S157
<400> 157
taacaaggag ctgggcttcc t 21
<210> 158
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S158
<400> 158
tcaataacaa ggagctgggc t 21
<210> 159
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S159
<400> 159
tctcaataac aaggagctgg g 21
<210> 160
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S160
<400> 160
attctcaata acaaggagct g 21
<210> 161
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S161
<400> 161
ttcattctca ataacaagga g 21
<210> 162
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S162
<400> 162
acacttcatt ctcaataaca a 21
<210> 163
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S163
<400> 163
tatagtgatt gcacacttca t 21
<210> 164
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S164
<400> 164
acttatagtg attgcacact t 21
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S165
<400> 165
atacttatag tgattgcaca c 21
<210> 166
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S166
<400> 166
atatacttat agtgattgca c 21
<210> 167
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S167
<400> 167
aatatactta tagtgattgc a 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<211> 21
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<211> 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 172
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S173
<400> 173
tcagcttcta agtaggttga t 21
<210> 174
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S174
<400> 174
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S184
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S185
<400> 185
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 186
accttaaaag cttatacaca a 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S187
<400> 187
agaccttaaa agcttataca c 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S188
<400> 188
tcagtcagac cttaaaagct t 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 190
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S193
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S194
<400> 194
aatcaaaata agtgcagagt t 21
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<210> 196
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<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
<223> AS3
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<210> 198
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS4
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<210> 199
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<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<211> 21
<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
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<211> 21
<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<211> 21
<212> RNA
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<220>
<223> AS10
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 204
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<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS12
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 206
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS13
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS14
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 208
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<210> 209
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS15
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 209
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<210> 210
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS16
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 210
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS17
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<210> 212
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS18
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 212
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<210> 213
<211> 21
<212> RNA
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<220>
<223> AS19
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 213
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<210> 214
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS20
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 214
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<210> 215
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS21
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 215
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<210> 216
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS22
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 216
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<210> 217
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS23
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 217
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<210> 218
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS24
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<210> 220
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<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<400> 220
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<210> 221
<211> 21
<212> RNA
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<220>
<223> AS27
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<210> 222
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS28
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 222
cuuuuuuuga acaagcacug n 21
<210> 223
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS29
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<400> 223
caagcacuga cugaggaaac n 21
<210> 224
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS30
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 224
ccgggguaca ggacugcuac n 21
<210> 225
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS31
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 225
gggguacagg acugcuacua n 21
<210> 226
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS32
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 226
ggguacagga cugcuacuac n 21
<210> 227
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS33
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 227
caggacugcu acuaccauua n 21
<210> 228
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS34
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 228
ggacugcuac uaccauuaug n 21
<210> 229
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS35
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 229
cugcuacuac cauuauggac n 21
<210> 230
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS36
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 230
gcuacuacca uuauggacag n 21
<210> 231
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS37
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 231
cuaccauuau ggacagaguu n 21
<210> 232
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS38
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 232
cacaaugccu ggugacagaa n 21
<210> 233
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS39
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 233
caaugccugg ugacagaauc n 21
<210> 234
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS40
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 234
ccuggugaca gaaucaagug n 21
<210> 235
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS41
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 235
caaguguccu ugcaacucuc n 21
<210> 236
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS42
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 236
cacggugguc ccagauccaa n 21
<210> 237
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS43
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 237
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<210> 238
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS44
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
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<212> RNA
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<220>
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<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
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<221> misc_feature
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<221> misc_feature
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
<221> misc_feature
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<210> 251
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<212> RNA
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<220>
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<221> misc_feature
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gauuaguccu ugguguuaua n 21
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
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<220>
<221> misc_feature
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<212> RNA
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
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<221> misc_feature
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<221> misc_feature
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<212> RNA
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<212> RNA
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<210> 266
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<212> RNA
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
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<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<212> RNA
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
<223> AS84
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<212> RNA
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<220>
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<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
<223> AS88
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<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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cgaggugaug gacagaguua n 21
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS89
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<221> misc_feature
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS90
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS91
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 285
ggcaucggag gaucccauua n 21
<210> 286
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS92
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 286
gcaucggagg aucccauuau n 21
<210> 287
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS93
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 287
caucggagga ucccauuaua n 21
<210> 288
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS94
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 288
cggaggaucc cauuauacua n 21
<210> 289
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS95
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<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS96
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
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<210> 291
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS97
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 291
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<210> 292
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS98
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 292
cccauuauac uauccaaaug n 21
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS99
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<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 293
gaaucgagug uccucacaac n 21
<210> 294
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS100
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS101
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 295
caagcaccac cugagaaaag n 21
<210> 296
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS102
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
<400> 296
cggaguuauc gaggcauauc n 21
<210> 297
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS103
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n = 任意种类核苷酸
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<220>
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<222> (21)..(21)
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<400> 385
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<212> RNA
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<212> RNA
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<222> (1)..(19)
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<211> 19
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S220
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> g代表2'-甲氧基鸟苷酸，a代表2'-甲氧基腺苷酸
<400> 432
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<210> 433
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S221
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
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<400> 433
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<210> 434
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S222
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> g代表2'-甲氧基鸟苷酸，a代表2'-甲氧基腺苷酸
<400> 434
cguucauucc agggacaaa 19
<210> 435
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S223
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> g代表2'-甲氧基鸟苷酸，a代表2'-甲氧基腺苷酸
<400> 435
gcuccuuauu guuauacga 19
<210> 436
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S224
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> g代表2'-甲氧基鸟苷酸，a代表2'-甲氧基腺苷酸
<400> 436
cguguuucaa gguuuguua 19
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS213
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
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<222> (5)..(8)
<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
<222> (18)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<220>
<221> misc_feature
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<212> RNA
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<220>
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<220>
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<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (1)..(21)
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<212> RNA
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<220>
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<220>
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<222> (18)..(18)
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<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (1)..(21)
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uaaaagaagu agaagaacca c 21
<210> 441
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
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<222> (1)..(1)
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<222> (13)..(14)
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<222> (16)..(21)
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<212> RNA
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<220>
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<222> (1)..(21)
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<222> (14)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> a代表2'-甲氧基腺苷酸，g代表2'-甲氧基鸟苷酸
<222> (7)..(7)
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<222> (15)..(15)
<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (1)..(8)
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS220
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> a代表2'-甲氧基腺苷酸，g代表2'-甲氧基鸟苷酸
<222> (7)..(7)
<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (15)..(15)
<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (10)..(11)
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<222> (14)..(21)
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uaaaauguau uuguccuucu c 21
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<220>
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<220>
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<222> (1)..(1)
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<400> 445
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<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS222
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> a代表2'-甲氧基腺苷酸，g代表2'-甲氧基鸟苷酸， c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (1)..(2)
<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
<222> (5)..(5)
<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
<222> (14)..(14)
<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
<400> 446
uuugucccug gaaugaacgu g 21
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS223
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> a代表2'-甲氧基腺苷酸，g代表2'-甲氧基鸟苷酸， c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (1)..(1)
<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
<222> (5)..(5)
<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
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<223> u代表2'-甲氧基尿苷酸
<400> 447
ucguauaaca auaaggagcu g 21
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AS224
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> a代表2'-甲氧基腺苷酸，g代表2'-甲氧基鸟苷酸
<222> (8)..(9)
<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (18)..(18)
<223> c代表2'-甲氧基胞苷酸
<222> (10)..(10)
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uaacaaaccu ugaaacacga g 21
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<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
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<223> S225
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、12、13位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的
2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S226
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、11位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
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<210> 451
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S227
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸
糖基的2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存
在两个硫代磷酸酯键
<400> 451
ugguaaugga cagaguuauu u 21
<210> 452
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S228
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、13、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的
2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键
<400> 452
acagaguuau cgaggcucat t 21
<210> 453
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S229
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、11、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的
2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键
<400> 453
ugguaaugga cagaguuauu u 21
<210> 454
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S230
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 454
acagaguuau cgaggcucat t 21
<210> 455
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S231
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 455
ugguaaugga cagaguuauu u 21
<210> 456
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S232
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键
<400> 456
ugguaaugga cagaguuauu u 21
<210> 457
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S233
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键
<400> 457
acagaguuau cgaggcucat t 21
<210> 458
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S234
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸
糖基的2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存
在两个硫代磷酸酯键
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guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 459
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S235
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 459
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 460
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S236
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键
<400> 460
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 461
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S237
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键
<400> 461
gccccuuggu guuauacaa 19
<210> 462
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S238
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第5、7、9、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 462
gccccuuggu guuauacaa 19
<210> 463
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S239
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸
糖基的2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存
在两个硫代磷酸酯键
<400> 463
gccccuuggu guuauacaa 19
<210> 464
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S240
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键
<400> 464
gcuccuuauu guuauacga 19
<210> 465
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S241
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸
糖基的2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存
在两个硫代磷酸酯键
<400> 465
gcuccuuauu guuauacga 19
<210> 466
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S242
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 466
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 467
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S243
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-OH被
甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸酯
键
<400> 467
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 468
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S244
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、19位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 468
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 469
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S245
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第3、5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 469
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 470
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S246
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 470
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 471
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S247
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 471
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 472
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S248
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、10位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 472
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 473
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S249
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、9、10、11位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 473
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 474
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S250
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、10、11、12位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 474
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 475
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S251
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键
<400> 475
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 476
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S252
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、8、9、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 476
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 477
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S253
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第1、3、5、7、8、9、12、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核
苷酸糖基的2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之
间存在两个硫代磷酸酯键
<400> 477
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 478
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S254
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 478
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 479
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S255
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-OH被
甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸酯
键
<400> 479
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 480
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S256
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的-OH被
甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸酯
键
<400> 480
gcuccuuauu guuauacga 19
<210> 481
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S257
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第7、10、11、12位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键
<400> 481
gcuccuuauu guuauacga 19
<210> 482
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S258
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第3、5、7、8、9、11、13、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸
糖基的2'位的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存
在两个硫代磷酸酯键
<400> 482
acagaguuau cgaggcucat t 21
<210> 483
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S259
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 483
guaauggaca gaguuaucga u 21
<210> 484
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> S260
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> 第5、7、8、9、10位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代；5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键
<400> 484
gcuccuuauu guuauacga 19
<210> 485
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS225
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、14、15、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核
苷酸糖基的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之
间存在两个硫代磷酸酯键；
<400> 485
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 486
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS226
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、15、15、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核
苷酸糖基的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之
间存在两个硫代磷酸酯键；
<400> 486
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 487
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS227
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 487
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 488
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS228
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、7、17、19位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 488
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 489
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS229
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、7、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 489
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 490
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS230
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'
位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫
代磷酸酯键；
<400> 490
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 491
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS231
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'
位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫
代磷酸酯键；
<400> 491
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 492
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS232
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 482
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 493
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS233
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 493
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 494
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS234
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 494
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 495
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS235
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 495
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 496
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS236
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 496
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 497
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS237
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 497
uuguauaaca ccaaggggcu g 21
<210> 498
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS238
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 498
uuguauaaca ccaaggggcu g 21
<210> 499
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS239
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 499
uuguauaaca ccaaggggcu g 21
<210> 500
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS240
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 500
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 501
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS241
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 501
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 502
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS242
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、15位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'
位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫
代磷酸酯键；
<400> 502
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 503
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS243
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-OH
被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键；
<400> 503
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 504
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS244
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第5、7、8、9、19位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'
位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫
代磷酸酯键；
<400> 504
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 505
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS245
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 505
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 506
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS246
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、5、7、8、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的
2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键；
<400> 506
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 507
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS247
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、5、7、9位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 507
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 508
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS248
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 508
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 509
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS249
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 509
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 510
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS250
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、10、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 510
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 511
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS251
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、10、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 511
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 512
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS252
<220>
<221> misc_feature
<223> 第2、6、10、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的
2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键；
<400> 512
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 513
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS253
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2
'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键；
<400> 513
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 514
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS254
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2
'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键；
<400> 514
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 515
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS255
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、14、15、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核
苷酸糖基的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之
间存在两个硫代磷酸酯键；
<400> 515
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 516
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS256
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第8、9、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-O
H被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷酸
酯键；
<400> 516
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 517
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS257
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 517
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 518
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS258
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 518
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 519
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS259
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、7、8、9、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'
位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫
代磷酸酯键；
<400> 519
cgauaacucu guccauuacc a 21
<210> 520
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS260
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 520
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 521
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS261
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 521
uuguauaaca ccaaggggcu g 21
<210> 522
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS262
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 522
uuguauaaca ccaaggggcu g 21
<210> 523
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS263
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、12、14、15、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余
的核苷酸糖基的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷
酸之间存在两个硫代磷酸酯键；
<400> 523
uuguauaaca ccaaggggcu g 21
<210> 524
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS264
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第4、12、14位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 524
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 525
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS265
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、9、10、14、15、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核
苷酸糖基的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之
间存在两个硫代磷酸酯键；
<400> 525
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 526
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS266
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、10、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 526
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 527
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS267
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的-
OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 527
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 528
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS268
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 528
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 529
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS269
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、8、14、16、18位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 529
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 530
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS270
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2
'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键；
<400> 530
ucguauaaca auaaggagcu g 21
<210> 531
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS271
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、10、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 531
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 532
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS272
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、14、164位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位的
-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代磷
酸酯键；
<400> 532
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 533
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS273
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 533
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 534
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS274
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、8、14、16、18位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 534
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 535
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS275
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2
'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个
硫代磷酸酯键；
<400> 535
auaacucugu ccauuaccau u 21
<210> 536
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS276
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基的2'位
的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两个硫代
磷酸酯键；
<400> 536
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 537
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS277
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、4、8、14、16、18位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 537
ugagccucga uaacucuguu u 21
<210> 538
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AS278
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 第2、6、8、10、14、16位核苷酸糖基2'位的-OH被氟代，其余的核苷酸糖基
的2'位的-OH被甲氧基取代，5'末端和3'末端的3个连续的核苷酸之间存在两
个硫代磷酸酯键；
<400> 538
ugagccucga uaacucuguu u 21
Claims (99)
1.一种抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含正义链和反义链，所述正义链和反义链为以下组合：
正义链：gccccuugguguuauacaa(SEQ ID NO.399)，反义链：uuguauaacaccaaggggcug(SEQ ID NO.417)。
2.根据权利要求1所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述正义链和反义链的部分或全部核苷酸糖基2’位的-OH被取代，其中，所述取代基团为氟或甲氧基，并且所述正义链末端和/或反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键。
3.根据权利要求2所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代，或所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2’位的-OH被氟代。
4.根据权利要求3所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述正义链和反义链选自以下组合中的任意一种或多种：
1)正义链：GsCsCCfCUfUfGfGUGUUAUACsAsA(SEQ ID NO.461)，反义链：UsUsGUAUfAACACfCAfAGGGGCsUsG(SEQ ID NO.497)；和
2)正义链：GsCsfCCfCUfUfGfGUfGUfUAfUACsAsA(SEQ ID NO.463)，反义链：UsfUsGfUAfUAfACACCAfAGfGGGCsUsG(SEQ ID NO.499)；
其中，G＝2’-O-甲基鸟苷酸，A＝2’-O-甲基腺苷酸，U＝2’-O-甲基尿苷酸，C＝2’-O-甲基胞苷酸；Gs＝2’-O-甲基-3’-硫代鸟苷酸，As＝2’-O-甲基-3’-硫代腺苷酸，Us＝2’-O-甲基-3’-硫代尿苷酸，Cs＝2’-O-甲基-3’-硫代胞苷酸；fG＝2’-氟鸟苷酸，fA＝2’-氟腺苷酸，fU＝2’-氟尿苷酸，fC＝2’-氟胞苷酸；fGs＝2’-氟-3’-硫代鸟苷酸，fAs＝2’-氟-3’-硫代腺苷酸，fUs＝2’-氟-3’-硫代尿苷酸，fCs＝2’-氟-3’-硫代胞苷酸。
5.根据权利要求4所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其为双链代码Ky11-DS45，其中，所述双链代码Ky11-DS45为以下正义链和反义链的组合：
6.根据权利要求2所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其还包含配体，其中，所述配体缀合于正义链和/或反义链。
7.根据权利要求6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于反义链的5’末端和/或3’末端。
8.根据权利要求6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于正义链的5’末端或3’末端。
9.根据权利要求6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于反义链的5’末端，且所述配体缀合于正义链的3’末端。
10.根据权利要求6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于反义链的3’末端，且所述配体缀合于正义链的5’末端。
11.根据权利要求6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于正义链的5’末端和3’末端。
12.根据权利要求6所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体包括5’MVIP和3’MVIP，其中，所述5’MVIP偶联在所述正义链和/或反义链5’末端，所述3’MVIP偶联在所述反义链和/或正义链3’末端，所述5’MVIP的结构如式I所示，所述3’MVIP结构如式II所示，
(X-L)n-B-D-R1-，
I
(X-L)m-B-D-R2-，
II
其中，
n和m各自独立地为0-4的任意整数，
X为靶向单元；
L为支链；
B为分支单元；
D为连接链；
R1和R2为桥接单元，与所述正义链或反义链通过磷酸酯或经修饰的磷酸酯相连接。
13.根据权利要求12所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其结构如式IIIa、IIIb或IIIc所示：
n和m各自独立地为0-4的任意整数。
14.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，n+m＝2-6的整数。
15.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和R2结构中带有-NH-、硫原子和/或氧原子，R1和R2通过结构中-NH-、硫原子或氧原子分别与连接链D以及正义链和/或反义链5’末端和3’末端相连，R1和R2相同或不相同。
16.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和/或R2是任选直链，或带有酰胺基、羧基或烷基类支链的直链或者环状结构，所述环状结构包括饱和或不饱和的脂肪族碳环基，或者含有硫、氧或氮原子的五元或六元杂环基或芳香烃基。
17.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)xCH2E2-，其中x为3-12的任意整数，基团E1和E2分别为-NH-、硫原子或氧原子。
18.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)x1CH(OH)(CH2)X2E2-，其中x1或x2各自独立地为3-10的任意整数，E1和E2分别为-NH-、硫原子或氧原子。
19.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
20.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1为-NH(CH2)xCH2O-，其中x为3-12的任意整数。
21.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R2为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
22.根据权利要求15所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R2为-NH(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2CH2O-，其中x1为1-4的任意整数，x2为0-4的任意整数。
23.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自用于增强肝细胞对RNA抑制剂的摄取的结构。
24.根据权利要求23所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自单糖。
25.根据权利要求24所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述单糖选自以下结构中的一种或多种：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、核糖。
26.根据权利要求23所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺。
27.根据权利要求23所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自以下结构：
其中，W选自-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH2)qCH3中的一种或两种，其中q为0-4的整数。
28.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述支链L是含有-NH-、-C(＝O)-、-O-、-S-、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、C4-C10脂肪族碳环基、苯基或者这些基团的组合的C4-C18直链。
29.根据权利要求28所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L还带有羟乙基或羧酸类的侧链。
30.根据权利要求28所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L为含酰胺基或六元脂肪族碳环基的C7-C18直链。
31.根据权利要求28所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述支链L选自如下结构中的一种或多种：
其中，r1是1-12的任意整数，r2为0-20的任意整数，Z为H、烷基或酰胺基。
32.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B的结构与能引入的靶向单元X的数量有关，分支单元B中含-NH-、C、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基，当n或m为1时，其为一条直链，当n或m为2、3或4时，其分叉的次数分别为2、3或4。
33.根据权利要求32所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
其中，A1和A2各自独立地是C、O、S、-NH-、羰基、酰胺基、磷酰基或硫代磷酰基，r为0-4的整数。
34.根据权利要求32所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
其中，r为0-4的任意整数。
35.根据权利要求33所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
36.根据权利要求33所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
37.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D是含有-NH-、C＝O、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、芳香烃基、C4-C10脂肪族碳环基、含1-3个氮的五元或六元杂环基或者这些基团的组合的C3-C18直链。
38.根据权利要求37所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D还带有羟甲基、甲基叔丁基、甲基苯酚基、C5-C6脂肪环基的侧链。
39.根据权利要求37所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D为含两个C＝O、六元脂肪族碳环基或苯基的C3-C10直链。
40.根据权利要求39所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D为含两个C＝O的C3-C10直链。
41.根据权利要求37所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D选自以下结构：
其中，每个p各自独立地为1-20的任意整数；s为2-13的整数；Z1和Z2为相同或者不同的取代基团。
42.根据权利要求41所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D选自以下结构：
43.根据权利要求41所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D选自以下结构：
44.根据权利要求13所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述5’MVIP结构中的(X-L)n-B-D-和3’MVIP结构中的(X-L)m-B-D-选自以下结构中的一种或多种：
45.根据权利要求44所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X、支链L、连接链D、及分支单元B在5’MVIP与3’MVIP各自的内部或5’MVIP与3’MVIP之间相同或不同。
46.根据权利要求45所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述5’MVIP选自5’MVIP01至5’MVIP22中的任一个，其中，所述5’MVIP中(X-L)n-B-D-与R1选自以下组合：
其中，所述5’MVIP中的(X-L)n-B-D-选自以下结构式：
47.根据权利要求46所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述3’MVIP选自3’MVIP01至3’MVIP27的任一个，其中，所述3’MVIP的(X-L)m-B-D-与R2选自以下组合：
其中，所述3’MVIP中的(X-L)m-B-D-选自以下结构式：
48.根据权利要求47所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述正义链5’MVIP和反义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09；或者所述反义链5’MVIP和正义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01。
49.根据权利要求48所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述抑制剂选自RNA抑制剂Ky11-DS72和Ky11-DS74中的一种或多种，所述RNA抑制剂为以下组合：
50.一种抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其包含正义链和反义链，所述正义链和反义链为以下组合：
正义链：gcuccuuauuguuauacga(SEQ ID NO.400)，反义链：ucguauaacaauaaggagcug(SEQ ID NO.418)，
其中，所述正义链和反义链的部分或全部核苷酸糖基2’位的-OH被取代，其中，所述取代基团为氟或甲氧基，并且所述正义链末端和/或反义链末端的3个连续的核苷酸之间存在至少连续两个硫代磷酸酯键，所述反义链5’末端开始的第7、12、14位核苷酸糖基2核位的-OH被氟代，或所述反义链5’末端开始的第2、4、6、8、14、16位核苷酸糖基2核位的-OH被氟代。
51.根据权利要求50所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述正义链和反义链为以下组合：
正义链：GsCsfUCfCUfUfAfUUfGUfUAfUACsGsA(SEQ ID NO.465)，反义链：UsfCsGfUAfUAfACAAUAfAGfGAGCsUsG(SEQ ID NO.501)；
其中，G＝2’-O-甲基鸟苷酸，A＝2’-O-甲基腺苷酸，U＝2’-O-甲基尿苷酸，C＝2’-O-甲基胞苷酸；Gs＝2’-O-甲基-3’-硫代鸟苷酸，As＝2’-O-甲基-3’-硫代腺苷酸，Us＝2’-O-甲基-3’-硫代尿苷酸，Cs＝2’-O-甲基-3’-硫代胞苷酸；fG＝2’-氟鸟苷酸，fA＝2’-氟腺苷酸，fU＝2’-氟尿苷酸，fC＝2’-氟胞苷酸；fGs＝2’-氟-3’-硫代鸟苷酸，fAs＝2’-氟-3’-硫代腺苷酸，fUs＝2’-氟-3’-硫代尿苷酸，fCs＝2’-氟-3’-硫代胞苷酸。
52.根据权利要求50所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其还包含配体，其中，所述配体缀合于正义链和/或反义链。
53.根据权利要求52所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于反义链的5’末端和/或3’末端。
54.根据权利要求52所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于正义链的5’末端或3’末端。
55.根据权利要求52所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于反义链的5’末端，且所述配体缀合于正义链的3’末端。
56.根据权利要求52所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于反义链的3’末端，且所述配体缀合于正义链的5’末端。
57.根据权利要求52所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体缀合于正义链的5’末端和3’末端。
58.根据权利要求52所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述配体包括5’MVIP和3’MVIP，其中，所述5’MVIP偶联在所述正义链和/或反义链5’末端，所述3’MVIP偶联在所述反义链和/或正义链3’末端，所述5’MVIP的结构如式I所示，所述3’MVIP结构如式II所示，
(X-L)n-B-D-R1-，
I
(X-L)m-B-D-R2-，
II
其中，
n和m各自独立地为0-4的任意整数，
X为靶向单元；
L为支链；
B为分支单元；
D为连接链；
R1和R2为桥接单元，与所述正义链或反义链通过磷酸酯或经修饰的磷酸酯相连接。
59.根据权利要求58所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其结构如式IIIa、IIIb或IIIc所示：
n和m各自独立地为0-4的任意整数。
60.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，n+m＝2-6的整数。
61.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和R2结构中带有-NH-、硫原子和/或氧原子，R1和R2通过结构中-NH-、硫原子或氧原子分别与连接链D以及正义链和/或反义链5’末端和3’末端相连，R1和R2相同或不相同。
62.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和/或R2是任选直链，或带有酰胺基、羧基或烷基类支链的直链或者环状结构，所述环状结构包括饱和或不饱和的脂肪族碳环基，或者含有硫、氧或氮原子的五元或六元杂环基或芳香烃基。
63.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)xCH2E2-，其中x为3-12的任意整数，基团E1和E2分别为-NH-、硫原子或氧原子。
64.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1和/或R2为-E1(CH2)x1CH(OH)(CH2)X2E2-，其中x1或x2各自独立地为3-10的任意整数，E1和E2分别为-NH-、硫原子或氧原子。
65.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述桥接单元R1为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
66.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R1为-NH(CH2)xCH2O-，其中x为3-12的任意整数。
67.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R2为含有氮、硫或氧原子的杂环或碳环结构：
68.根据权利要求61所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述桥接单元R2为-NH(CH2)x1CH(OH)(CH2)x2CH2O-，其中x1为1-4的任意整数，x2为0-4的任意整数。
69.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自用于增强肝细胞对RNA抑制剂的摄取的结构。
70.根据权利要求69所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自单糖。
71.根据权利要求70所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述单糖选自以下结构中的一种或多种：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、核糖。
72.根据权利要求69所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺。
73.根据权利要求69所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X选自以下结构：
其中，W选自-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH2)qCH3中的一种或两种，其中q为0-4的整数。
74.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述支链L是含有-NH-、-C(＝O)-、-O-、-S-、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、C4-C10脂肪族碳环基、苯基或者这些基团的组合的C4-C18直链。
75.根据权利要求74所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L还带有羟乙基或羧酸类的侧链。
76.根据权利要求74所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，所述支链L为含酰胺基或六元脂肪族碳环基的C7-C18直链。
77.根据权利要求74所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述支链L选自如下结构中的一种或多种：
其中，r1是1-12的任意整数，r2为0-20的任意整数，Z为H、烷基或酰胺基。
78.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B的结构与能引入的靶向单元X的数量有关，分支单元B中含-NH-、C、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基，当n或m为1时，其为一条直链，当n或m为2、3或4时，其分叉的次数分别为2、3或4。
79.根据权利要求78所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
其中，A1和A2各自独立地是C、O、S、-NH-、羰基、酰胺基、磷酰基或硫代磷酰基，r为0-4的整数。
80.根据权利要求78所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
其中，r为0-4的任意整数。
81.根据权利要求79所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
82.根据权利要求79所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述分支单元B选自以下结构：
83.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D是含有-NH-、C＝O、O、S、酰胺基、磷酰基、硫代磷酰基、芳香烃基、C4-C10脂肪族碳环基、含1-3个氮的五元或六元杂环基或者这些基团的组合的C3-C18直链。
84.根据权利要求83所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D还带有羟甲基、甲基叔丁基、甲基苯酚基、C5-C6脂肪环基的侧链。
85.根据权利要求83所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D为含两个C＝O、六元脂肪族碳环基或苯基的C3-C10直链。
86.根据权利要求85所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D为含两个C＝O的C3-C10直链。
87.根据权利要求83所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D选自以下结构：
其中，每个p各自独立地为1-20的任意整数；s为2-13的整数；Z1和Z2为相同或者不同的取代基团。
88.根据权利要求87所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D选自以下结构：
89.根据权利要求87所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述连接链D选自以下结构：
90.根据权利要求59所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述5’MVIP结构中的(X-L)n-B-D-和3’MVIP结构中的(X-L)m-B-D-选自以下结构中的一种或多种：
91.根据权利要求90所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述靶向单元X、支链L、连接链D、及分支单元B在5’MVIP与3’MVIP各自的内部或5’MVIP与3’MVIP之间相同或不同。
92.根据权利要求91所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述5’MVIP选自5’MVIP01至5’MVIP22中的任一个，其中，所述5’MVIP中(X-L)n-B-D-与R1选自以下组合：
其中，所述5’MVIP中的(X-L)n-B-D-选自以下结构式：
93.根据权利要求92所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述3’MVIP选自3’MVIP01至3’MVIP27的任一个，其中，所述3’MVIP的(X-L)m-B-D-与R2选自以下组合：
其中，所述3’MVIP中的(X-L)m-B-D-选自以下结构式：
94.根据权利要求93所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述正义链5’MVIP和反义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09；或者所述反义链5’MVIP和正义链3’MVIP的组合为5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01。
95.根据权利要求94所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐，其中，所述抑制剂为RNA抑制剂Ky11-DS76，所述抑制剂为以下组合：
96.一种药物组合物，其包含权利要求1-95中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂，并且还包含递送媒介物，和/或生理上可接受的赋形剂。
97.根据权要求96所述的药物组合物，其中，所述递送媒介物包括脂质体。
98.根据权要求96所述的药物组合物，其中，所述递送媒介物包括纳米脂质。
99.权利要求1-95中任一项所述的抑制LPA基因表达的RNA抑制剂或其药学上可接受的盐与权利要求96-98中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗疾病，其中，所述疾病为与含LP(a)或apo(a)的水平升高相关的疾病，所述与LP(a)的水平升高相关的疾病为心脑血管疾病，其中，所述心脑血管疾病为高脂血症、中风、动脉粥样硬化、血栓形成、冠心病或主动脉瓣狭窄。
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| Development of lipoprotein(a) siRNAs for mechanism of action studies in non-human primate models of atherosclerosis;Marija Tadin-Strapps等;《J Cardiovasc Transl Res》;第8卷(第1期);摘要、第45-49页 * |
| Marija Tadin-Strapps等.Development of lipoprotein(a) siRNAs for mechanism of action studies in non-human primate models of atherosclerosis.《J Cardiovasc Transl Res》.2015,第8卷(第1期),摘要、第45-49页. * |
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