HU228810B1

HU228810B1 - Eljárás kollagén szivacs elõállítására, eszköz kollagén hab egy részének kivonására és nyújtott kollagén szivacs

Info

Publication number: HU228810B1
Application number: HU0303893A
Authority: HU
Inventors: Alfred Schaufler
Original assignee: Nycomed Pharma As
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2002-01-25
Publication date: 2013-05-28
Also published as: HU227987B1; CA2434964C; CA2434964A1; HUP0400768A3; IL157097A; EE200300349A; DE60203364D1; WO2002058749A8; BG66439B1; NO20033297D0; CZ20032198A3; CA2435159A1; NZ527166A; NO332462B1; IL157095A0; IS6885A; DE60203364T2; EE200300341A; JP2004520124A; KR100830294B1

Description

ELJÁRÁS KOLLAGÉN SH1VACS ELŐÁLLÍTÁSÁRA, ESHKÖS KOLLAGÉN HAB BGY RÉSEÉKRK KIVONÁSÁRA ÉS NYÚJTOTT KOLLAGÉN SSIVACS

A találmány kollagén szivacs előállítására szolgáló eljárásra vonatkozik. A találmány sserlnt előállított kollagén szivacs különösen hasznos műtéteknél, elsősorban kapilláris vérzés elállítására. A kollagén szivacs hordozóként is alkalmazható, bevonható valamely íibrinragasztő készítménnyel< A találmány olyan készülékre is kiterjed, amellyel valamely kollagén hab egy része kivonható. A találmány nyújtott kollagén szivacsra is vonatkozik, amely fűként a gyomor-bél csatornában alkalmazható.

Kollagént vérzéscsillapító szerként a hatvanas évek végétől alkalmaznak. A kollagén minden emlősben a leggyakoribb strukturális fehérje. A hozzávetőleg 3ÖÖ kba tömegű monomer fehérje (tropokollagén) kovalens módon kereszt kötéssel kötődik specifikus helyeken. As érett fehérje tehát oldhatatlan és jellegzetes, nagy szakitószilárdságú szálakat képez. A kollagének számos alosztályát írták le, melyek közül az X típusú kollagén a leggyakoribb, a legfontosabb kollagén-típus a bőrben, az inakban, a csontokban és a szaruhártyában. A kollagén egy szálas fehérje, amely három egymás φ φφ φ φφ ς φ χ

Χφφ φ φ « Φ * * * « φ φ * $ ί * *

Λ φ φφφ köré csavarodott, kb, 2S0 nm hosszúságú láncból áll, Öt ilyen tripla csavarlánc (tropokollagén molekula) lépcsőzetesen elhelyezkedve alkot egy mikroszálacskát, melynek átmérője hozzávetőleg 3,6 nm. Ezeknek a mikros2álacskáknak poláros és nempoláros szegmensei vannak, amelyek igen hajlamosak specifikus inter- és intrafibrilláris kölcsönhatásokra, A mikroszélacskák négyzetrácsba tömörülve kb< 30 nm átmérőjű szubfibriliákat alkotnak. Erek a szubfibr1llák állnak aztán össze kollegán szállá, ami a kötőszövet alapegysége, és amelynek átmérője több száz nm, tehát fénymikrosrkúppal vékony vonalként észlelhető, lásd as 1. hivatkozást. Mikroszkópiás vizsgálat bizonyltja, hogy a gyártó eljárás során keletkeze kollagén cél és kollagén szivacs legkisebb egységei az ilyen száluk.

A kollagén - esetleg egy fibrinragasztót tartalmazó bevonattal ellátva - sebek lezárásához használható. Fiforinragasztőkat, azaz fibrinogén, trombin és aprotinin kombinációit, már évek óta sikeresen alkalmaznak szövetek és idegek összetapasztásához és felületek összezárásához, ha a vérzés csekély, A íiferlnragas2tők hátránya, hogy erős vérzés esetén a ragasztó -áltatában kimosódik, még mielőtt a fibrín megfelelő polimerizáciőja végbement

X?·	Ina. önnek a	problémának leküzdése c<	áljából a
se:	fo é <5 2' ló 1c	kézzel	visznek fel folyékony	fi lórimra-
ga	S32t	-ξ· >Φ x	védő hordozókra, például	kollagén

»φ * * X Φ ΐ»'* gyap jűra.

Bár esek a kombinált alkalmazások Igen sikernek, ezt a módszert nem alkalmazzák elterjedtem, mivel van néhány hátránya, As elkészítés viszonylag nehézkes, az eljárás gyakorlatot és gyakorlott személyzetet igényel, és veszélyhelyzetben a készítmény nem áll azonnal rendelkezésre, mivel elkészítési ideje 10-15 perc. Ezek a tényezők tették szükségessé egy javított termék kifejlesztését, aminek eredménye egy rögzített kombináció, azaz egy szilárd fibrinogént, szilárd trombint és szilárd aprotinint tartalmazd bevonattal ellátott kollagén hordozó, amelyet at 59 265 Isz, európai szabadalmi bejelentés ismertet, Az 59 265 Isz. európai szabadalmi, be jelentésben leirt terméket, melyet TsohoComb® védjegynévvel forgalmaznak, közvetlenül a sebre lehet alkalmazni. Ha a bevonat testnedvekkel, például vérrel, egyéb testnedvekkel vagy sóoldattal érintkezik, a komponensek kioldódnak, és fibrin keletkezik. A terméket enyhe nyomással kell a sebre helyezni, és a sérült felülethez a kollagén szorosan hozzákötödík (ragadd. Véralvadás jón létre,· és a seb összeforr,

Amellett, hogy van alvadást elősegítő hatása ís, a Tao'hoComb® termékben lévő kollagénnek főként ar a szerepe, hogy magába szívja azt a koagulációé készítményt, amellyel bevonták, és mechanikai stabí; $ í* * * ♦*s* sV $

* * ♦ ** >

S·# ütést biztosítson számára. 8 kollagén - különösen a kollagén szivacs - további előnye, hogy biológiailag lebomlik, szakítószilárdsága még nsáves állapotban ís viszonylag magas, folyadékok én levegő behatolásának jói ellenáll, én nedves állapotban igen rugalmas.

Találmányunk elsősorban kollagén szivacs előállítására vonatkozik, ejti fibrinogén, trombin és/vagy aprotinin. hordozójaként használható, például úgy, mint a TachoCombé* készítményben. A kollagén szivacs közvetlenül, vagyis bevonat nélkül is felhasználható kötszerként helyi sérülésekre, vérzéscsillapítás fenntartásához, például újbóli vérzés megakadályozására, parenchimás szervekből történő diffúz, gyenge vérzés, égések, bőrátültetések, felfekvések vagy bőrhiány esetén történő alkalmazás céljára,

A szakirodalomból számos eljárás ismeretes kollagén hordozó előállítására. A bO űő/05811 sz. nemzetközi szabadalmi bejelentés indító- bioreaktorrendszerekben bioaktlv anyagok immobil!záiásához alkalmazható, megnövelt tömegű mikroszivaosot ismertet. A mikroszivacs egy erősen térhálós kollagén mátrixból áll. Az erősen térhálós kollagén mátrixot úgy állítják elő, hogy valamely X, 11 vagy 111 típusú kollagén-forrást megőrölve 1 - Sö l&m átmérőjű és 200 μ-m-nél nem hosszabb szálakat

- ί nyernek. A megőrölt kollagént oldható kollagénné alakítják, egy oldószerben feloldják, vagy egy oldhatatlan kollagént valamely oldószer, például ecetsav#· tejsav, propionsav vagy vaj sav hozzákevs» résével diszpergálnak. Kollagén diszperzió esetén a keverést erőteljesen, keverő alkalmazásával végeik, hogy a kollagénből mikroszálakat kapjanak. Ezután sűlynövelő adalékot kevernek el a kollagénfolyadék eleggyei, az összetett keveréket kis cseppecskékké alakítják# és fagyasztással megszilárdítják. Számos módszert Ismertetnek, kis részecskék előállítására. A fagyasztott keveréket vákuumban fagyasztva szárítják, a fagyasztás és szárítás kombinációját liofilezésnek nevezik. A fagyasztva szárított kollagén mátrix keveréket a kollagén térhálősitása céljából kezelik. A kollagén kémiai térhálósltó szarok alkalmazásával, magas hőmérsékleten végrehajtott erőteljes dehldratálással vagy ezek kombinálásával térhálós!tható. A kollagén mátrix arra szolgál, hogy ellenálló legyen a kollagénézzal és egyéb enzimatlkus lebomlással szómban# és ezáltal ezek az anyagok külőnösen a1ka1masak lógyοnek organizmnsok tanyésztésére. A térhálós kollagén mátrix mosása után a mikroszivacsok steriXizálhatók és sterilen csomagol™ hatók. A megnövelt tömegű mikroszlvacsban a kollagén mátrixnak a felhlet falé nyitott pőrusszerkezeto van, és ar átlagos pcrusátmérő hozzávetőleg 1 - ISO pm. A mátrix pórusai a mikroszivacs térfoga£ ♦ φ «· * * * * Λ

Φ Φ Φ ν Φ * ψ φ χ ««« χ φ φ χ * φ Φ φ φ φ # φ χ χ Φ ΦΦΦ ΦΦ iának kb. 70 - 98 %-át foglalják el. A mikroszivacs átlagos részecskemérete kb. 100 - kb. 1000 pm, fajsúlya kb, 1,05 feletti, A sűlynövelő anyag lehet fém vagy fémőtvőzet, fémoxid vagy kerámia.

Az 5 660 857 laz. USA-beli szabadalom egy oldhatatlan fehérja-mátrixból es egy olajos anyagból ál.lő, műtéti kötözésekhez és biomedíkálié implantátumokhoz# valamint kozmetikumként a bőrre alkalmazható készítmény előállítási eljárását ismerteti. Az eljárás abból állj. hogy egy fehérjét, az olajos anyagot és vizet összekeverve a fehérje vizes diszperziójában az olajos anyag emulzióját állítják aló. Ezután az emulziót szárítják vagy fagyasztva szárítják# és igy filmet vagy szivacsot kapnak. Az oldhatatlan szálas fehérjét túlnyomóan oldhatatlan kollagén tartalmazza# ami szarvasmarha bőréből nyerhető. Az egyik megvalósítási mód szerint a kollagént felhasználás előtt tejsavban duzzaszthatják.

A WO 99/13802 sz. nemzetközi szabadalmi bejelentés agyburokszövet növekedési mátrix előállítására szolgáló eljárást ismertet. Ennek egyik lépésében fiziológiásán kompatíbilis kollagént állítanak elő, amely lényegében mentes aktív vírusoktól és prionoktól, A kollagént filmmé# szivaccsá, nemszövött kollagénné vagy filccé alakítják·, A koiia7 > «<

* 'Φ ¢- * * Φ «{ί > * gént úgy állítják elő, hogy bőrt; inakat, ligamentumokat, csontot vagy zsírt megtisztítanak.. Az anyagot ezután enzimmel kezelik, amikor is a kollagén anyag magduzzad, A kollagén anyagot agy savas oldattal tovább duzzasztják, majd a kollagén elegyet homogenizálják> A kapott termák lehet egy kollagén szivacs, nem-szövött mátrix, filc vagy film formájában kapott mátrix, vagy az előbb felsorolt formákból kettőnek vagy többnek a keveréke. Kollagén szivacs előállítható az 5 019 08? Isz. OSA-beli szabadalmi bejelentésben kollagén szivacsok előállítására ismertetett eljárások adaptálásával. A szivacs elkészíthető egy kollagén diszperzió lio.filizálásával, melyet a WO 99/13902 sz. nemzetközi szabadalmi bejelentés szerint állítottak elő. Azt Írják, hogy sz elért szivacs-sűrűség hozzávetőleg 0,1 mg/cm^J és 120 mg/cm⁵ között van. A WO 99/13902 sz. nemzetközi bejelentés szerint a pő~ rusméret kb. 10 pm és kb. 500 pm közé eshet. Laminát-típusú kollagén szivacsot és kollagén filmet említenek.

Az 5 618 551 isz. üSA-beli szabadalom egy nem térhálóé és potenciálisan térhálősitható, pepszinnei kezelt kollagén vagy zselatin porra vonatkozik, melyet vizes óidéiban oxidatív hasítással módosítottak. A por savas pH-értéknél oldható, és tároláskor 0 °C alatti hőmérsékleten legalább egy hó«,χ«ί « « χ « * >

«c

ΦΦΦ napig stabil, A szabadalom a por előállítási eljárására Is kiterjed. Eszerint elkészítik a pepszínnel kezelt kollagén savas oldatát, a savas vizes oldatot szobahőmérsékleten szabályozott oxidációnak teszik ki, az oxidált és nem térhálós, pepszinnel kezelt kollagént, egy savas pH-értéknél iecsapatják, izolálják, koncentrálj ák és dekádratálják, és igy reaktív savas por formájában kapják, amit aztán .fagyasztanak ás 0 alatt tárolnak.

Az 1 291 326 lsz« nagy-hritanniaí szabadalmi bejelentés egy eljárást és egy készüléket ismertet .kollagén diszperziók előállítására. Az eljárás során kollagén szálak diszperzióját készítik el, amit ezt követően keverőeszközzel felszerelt, kamrában kezelnek. A kezelőkamrában, melyben csökkentett nyomás van, a szuszpenziót keveréssel és ásványi vagy szerves sav hozzáadásával történő szabályozott savanyítással diszperzióvá alakítják. Az 1 292 326 Isz. szabadalom leírása szerint szivacsos kollagén termékek hozhatók létre a kollagén gélek diszperzíőjából. Ezzel kapcsolatban a dokumentumok liof ilé-zésre és légbuborékokban. igen gazdag diszperzióra vagy gélekre hivatkoznak. A szóban forgó szabadalom, megemlíti,, hogy problémát jelent a légbuborékok kielégítő módon történő bejuttatásának vagy kiküszöbölésének szabályozása. A szabadalom két példájában ismertetnek agy légbubo%-os kollagén-tartalmú koilaegy levegővel kevert kollagén kollagén-koncentrációja szinfcfcfc fc fc fcfc fc fc W fc fc fc fc X fc fc fcfc «fcfc fc * fcfcfc fc rákoktól ssentes, 2,5 gén diszperziót, és diszperziót, melynek tén 2,5%-os.

A Chemical Abstracts, No. 24 Columbus Ohio, US, Vol, 98 (1S33. június 13,) egy elleti szövetekből, például bőrből, inból vagy csontból nyert kollagént említ, amit savas kezelésnek vetettek alá, A kollagént dialízissel újra összetömörítik, és e folyamat során erősen kettős törésű kristályszálak képződnek. A kollagén 0,5 m - 2 cm közötti lapokká formálható, vagy levegővel keverve szivacsokká alakítható, vagy krémmé diszpergálható.

Tapasztalataink szerint az, hogy egy kollagén szivacs milyen sikeresen vonható be egy fibrinragasztő készítménnyel, függ a kollagén szivacs szövetszerkezetétől. A találmány tárgya tehát eljárás egy adott szövetszerkerettel rendelkező kollagén szivacs előállítására, különösen abból a célból, hegy olyan kollagén szivacsot állítsunk elő, ame ly alkalmas egy fibrinragasztó készítménnyel történő bevonásra, vagyis hogy egy sebek gyógyítására és lezárására szolgáló anyagot kapjunk. A találmány további tárgya eljárás olyan kollagén szivacs előállítására, amely az irodalomból ismert szivacsoknál jobb fizikai tulajdcnságokkal rendelkezik, vagyis kedvezőbb a nedvességtartalma, rugalmassága, sűrű10 φφφ* φφφ cége és rugalmassági modulusa, A találmány még további tárgya eljárás olyan kollagén szivacs előállítására, amely levegő- és folyadékzáró abban az értelemben, hogy amint a kollagén szivacsot a sérülésre helyezzük, nem. szivároghat át rajta levegő és nedvesség, Λ találmány még további tárgya egy olyan sebráró anyag előállítása, amely a gyomorbél csatornában vagy a légcsőben alkalmazható.

A találmány az első szemszögből nézve kollagén szivacs előállítási eljárására vonatkozik, amely az alábbi lépéseket tartalmazza:

- kollagén gél előállítása,

- levegő bekeverése a kollagén gélbe kollagén hab előállítása céljából,

- a kollagén hab szárítása olyan száraz, háromdimenziós struktúrájú kollagén szivacstömb előállítása céljából, amelyben egymás mellett, alatt és felett kamrák vannak, amelyek egymástól ei vannak választva, és lényegében teljesen kollagén anyagú falakkal vannak körülvéve;

- a kollagén szivacstömbből olyan szivacs-részek elkülönítése, amelyekben a kamra-átmérő Ö,7S mm-néi nagyobb és a mm-nél kisebb, vagy amelyekben a kamrák átmérőjének átlagos mérete legfeljebb 3 ma.

A leírásban alkalmazott szóhasználat szerint a „kamra-átmérő¹’ kifejezés a legnagyobb egyenes ve11 ♦ X ί» * ν' X

X « * X XXS *Φ*Ψ *ΧΦΧ « χ χ ν' «χχ χ* nalü, £altől.-falig távolság egy üregen belül, például átlós irányban, egyenes vonalban a legnagyabb távolság. A kamrák sokszög alakúak lehetnek, például nyο1c s2ö g alakúak♦

Azt találtuk, hogy 0,75 mm-nél nagyobb és 4 mm-nél kisebb kamra-átmérő# vagy az átlagosan legfeljebb 3 mm-es kamra-átmérő különösen alkalmassá teszi a kollagén szivacsot egy f ibrinragaszt é készítménynyel történő bevonás céljára, A kollagén gél száras tömege előnyösen 2 - 20 mg/1 g gél, például 4 - 18 mg, például 5-13 mg, mint például 6 - 11 mg/1 g gél. A kollagén gél dinamikai viszkozitása előnyösen 2-20 Nca, például 4-10 Ica,, mint például 6 - 8 Kern. A kollagén szivacs víztartalma előnyösen nem haladja meg a 20 %-ot, például 10 15 %-os, mint például IS %-os. A kollagén szivacs rugalmassági modulusa előnyösen 5-100 d/cm², például 10-50 N/cm², és a szivacs sűrűsége előnyösen 1 - lö mg/cmS például 2-7 mg/cm³.

Azt találtuk továbbá, hogy egy, a fenti eljárással készült, bevonattal ellátott kollagén szivacs légzáró és folyadékzáré abban. sz. értelemben, hogy mihelyt a bevonattal ellátott kollagén szivacsot egy sebre helyezzük, folyadék vagy levegő nem tud átszivárogni a kollagén szivacson. A folyadékokat a szivacs elnyeli. Br a hatás főleg annak tudható ha, hogy amikor levegőt keverünk a kollagén gélbe,

1.2 ·* V ίίΐΧύ 4« * * Ψ * * * * * * «** * * #?ί,«ί ** olyan kollagén szivacs jön létre, amelynek háromdimenziós szerkezetében a kamrák elkülönülnek, és lényegében teljesen körül vannak véve kollagén anyagból éllé falakkal,, ellentétben azokkal az ismert kollagén szivacsokkal, melyek szálas szerkezetűek.

A kollagén gél különböző típusú anyagokat tartalmazhat, például emlős, transzgenikus vagy rekomblnáns forrásból származó I, II vagy Ili típusú anyagokat, da használható sandán egyéb típusú kollagén is, A kollagén inakból származó anyagot, éspedig ló, humán vagy szarvasmarha eredetű inakból származó anyagot tartalmazhat. Szón kívül vagy ehelyett a kollagén gél tartalmazhat rekombináns kollagén anyagot is.

A szivacs elkülönített részeinek kollagén-tartalma a. szivacs száraz tömegéhez viszonyítva előnyösen 50-100%, például 75-100%, például 50-100%, például 85-100%, például 00-100%, például 92-100%, például 52-58%, például 93-57%, például 94-98%.

A kollagén gél előállítása előnyösen a következő lépéseket tartalmazza;

- az inak tárolása -10 és -30 ^ÖC közötti hőmérsékleten, és az inak „hámozáaa*' (a bőr lefejtése) , * > V * ·>·>* *** «««« 6 * φ' *Λ» «Φ idegen fehérjék eltávolítása at inakból az inak baktériumtarhalnának csökkentése

- az inak duzzasztása a megduzzadt inak homogenizálása.

A tárolás, a hámosár, a fehér j e-eltávolítás , a baktéríumtartalom-osőkkentés és a duzzasztás célja az, hogy a nyersanyagot megt isztitsuk, a homogenisáláéi lépés célja pedig a kollagén gél forrnájában történő kinyerése.

A foektériumtartalmat úgy csökkentjük# hogy előnyösen valamely savat# például sservés savat, például tejsavat adunk az inakhoz. Továbbá, előnyösen egy szerves oldószert# például alkoholt, például etanolt adunk az inakhoz. Ar ínak duzzasztását előnyösen úgy végezzük, hogy lejsavat adunk az inakhoz, áz alkalmazott tej sav 0,40 - 0,50%-os, például ö#45%-os tejsav lehet.

A duzzasztás során az inakat 4 *C és 25 közötti hőmérsékleten, például 10 *C és 20 ^öC között tárolhatjuk 40 - 200 órán# például XGö - 200 órán át.

A megduzzadt inak homogenízálását előnyösen ágy végezzük, hogy a kapott kollagén gél-fragmentumok, vagyis szálcsomók részecskeméretének átmérője 0#ΟΙ, 2 cm között legyen, például megközelítőleg 1 cm ·*·» st * * * «. >y legyen. A kollagén gél fizikai jellemzői előnyösen megfelelnek a fent leírtaknak. A megfelelő tulajdonságok elérhetők például ágy, hogy a megduzzadt n a k . h o mo g e n i z á 1 á s á t f o g a ζ o 1t 1 e m e z e s a p r 11 ó v a 1, vagy megfelelő homogenizáló eszközzel végezzük.

Az a lépés, melynek során a kollagén gélhez levegőt keverünk, előnyösen az alábbi lépéseket tartalmazza :

- keverő berendezéssel környezeti levegőt keverünk a gélhez kollagén hab előállítása céljából,

- a kevert gél-habot frakoionáló csatornába helyezzük, a frakoionáló csatornában a kollagén gélt és a kollagén habot elkülönítjük,

A kollagén habtól a frakoionáló csatornában, elkülönített kollagén gélnek legalább agy része viszszavezethető a keverő berendezésbe. Ebben az esetben a frakoionáló csatornából a keverőbe viszszavezetett kollagén gél és a keverő,be. vezetett friss kollagén gél mennyiségének aránya előnyösen 0,1 és 0,5 között van. A kollagén gél és kollagén hab elkülönítése előnyősén az alábbi lépéseket tartalmazza:

- a frakoionáló csatornában lévő kollagén hab egy kiválasztott részének elkülönítése, a kollagén hab kiválasztott részének kivezetése

IS «* a írakcionáló csatornából szárításhoz.

Az eljárás egy előnyös megvalósítás 1 módja szerint a írakcionáló csatornában IS ^ÖC ér 40 ®C közötti# például 20 °C - 25 °C közötti hőmérsékletet tartunk fenn,

Miután a kollagén gélhez levegőt kevertünk# a kollagén hab 2-4 percig homogenizálható,

Mielőtt a kollagén habot megszárítjuk, és miután a kollagén gélhez levegőt kevertünk# egy semlegesítő azért adhatunk a kollagén habhoz# és a kollagén habot előnyösen semlegesítjük# hogy pK-ját egy általában. 2,5 és 3,5 közötti értékről 6#5 és 3,5 közé növeljük, Ammóníaoidatot tartalmazó semlegesítő szert alkalmazhatunk, és a kollagén habot előnyösen 5-30 óráig, például 10-20 óráig, például megközelítőleg 24 óráig semlegesítjük,

A szárítást megelőzően a kollagén babot előnyösen egy szárító tartályba töltjük oly módon, hogy a hab betöltés közben lényegében egyáltalán ne nyeljen al levegőt,

A szárítási lépést előnyösen. 15 és 00 ⁴C közötti, például 20 *C és 40 *C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre, és 50 - .200 órán át, például 100 ISO érán át végezzük, Így száraz kollagén szíva• fc·*

X S * * fcfc fc fc ' fc fc fcfc fcfc fcfcfc fcfcfc fcfcfcfc fcfcfcfc fc fc * ·* Xfcfc fcfc csőt kapunk. A szárítást végezhetjük a légköri nyomásnál kicsit, alacsonyabb nyomáson, például 7 bka és 9 hha. között, például hozzávetőleg 8 hPa nyomáson♦

A fenti eljárással készült kollagén szivacs előnyösen megfelel az alábbi kritériumok közül legalább egynek;

- pH-értéke 5,0 és €,0 között van,

- tejsav-tartaima legfeljebb 5%-os,

- ammónium-tartalma legfeljebb ö»Sé~oa,

- elbumiu-tartalomként számított oldható fehérjetartalma legfeljebb 0,5%-oe,

- szulfáthamu-tartalma legfeljebb 1,01-os,

- nehézfém-tartalma legfeljebb 20 ppm,

- mikrobiológiai tisztasága legfeljebb ÍÖ^;’ CFü/g,

- kollagén-tartalma ?S - 100%,

- sűrűsége 1-10 mg/cm³, pl. z - 7 mg/cm⁴,

- rugalmassági modulusa az 5 és 100 h/csó közötti tartományban van, például 10-50 N/cm²,

Azt a lépést, melynek során a kollegán szivacs részecskéit izoláljuk, úgy hajtjuk végre, hogy a kollagén szivacsot vágásáéi sok részre osztjuk.. A kapott részeket bármely kívánt formára - például kúpos, henger alakú (beleértve az olyan henger alakot is, aminek gyűrűs keresztmetszete van) , négyszögletes, sokszög alakú, kocka alakú, lapos lemez alakú - alakíthatjuk, vagy egy megfelelő φ χ « φ ΦΦΧΦ *ΦΦΦ φ » φφ« φ

φ» granulálási eljárással granulátummá alakíthatjuk, stb.

Egy második szemszögből nézve a találmány egy kollagén szivacs előállítására szolgáló eljárásra von a t k ο z i k, a m e 1 y a z a 1 á b b i 1 é p é s e k e t t a r t a 1. ma ζ z a;

- kollagén gél előállítása, ~ a kollagén gélbe levegő bekeverése kollagén hab előállítása céljából, ~ a kollagén hab szárítása olyan száraz kollagén szivacstömb előállítása céljából, amelyben kamrák vannak,

- a kollagén szivacstömbből olyan szivacs-részek elkülönítése, melyek az alábbi tulajdonságokkal rendelkeznek;

- rugalmassági modulusuk az 5 - 100 N/czb tartományban van,

- sűrűségük 1 és 10 mg/crő között van, kamra-átmérőjük 0,75 mm-néi nagyobb és 4 sünnél kisebb, vagy az üreg-átmérő átlagosan legfeljebb 3 mm.

Valamennyi -eljárási lépés, melyet lentebb a találmány e-lső aspektusa szerinti, eljárással kapcsolatban ismertettünk, végrehajtható a találmány második. aspektusa szerinti eljárás során is. Továbbá, a találmány első aspektusa szerint előállított kollagén szivacs, valamennyi jellemzője elérhető a találmány második aspektusa szerinti eljárással «Φ.ΦΦ φφ * Φ * Φ ΧΦΦ **Φ

ΦφφφΦΦΦΧ φ * φ * φφφ φφ

XS Φ

Sgy harmadik szemszögből nézve a találmány egy olyan készülékre vonatkozik, amellyel egy kollagén szivacs egy része kivonható, és a kollagén szivacs egy másik része kollagén géllé dsgeneráihaté. A k é s z ü1ékbe n v a n

- egy frakciónál© csatorna, amelynek van egy bemenete, amelyen a kollagén hab befolyik, egy kimenete, amelyen a kollagén hab egy része kifolyik, és egy alsó része, amely lefelé, a kollagén hab folyási irányában lejt, legalább egy kimenet a kollagén gél számára a frakcionálő csatorna alsó részén, és a kimenet helyzete függőleges irányban mozgatható a frakcionálő csatorna egyik végén.

Egy negyedik szemszögből nézve a találmány nyújtott kollagén szivacsra vonatkozik, melyben van egy keresztülsenő lyuk vagy furat és egy rugalmas fal. Egy előnyös megvalósítási mód szerint egy ilyen kollagén szivacs felhasználható sebek zárásához vagy emlősökben a gyomor-bél csatorna vagy a légcső falának helyreállításához. A kollagén szivacs keresztmetszete kör vagy ellipszis alakú. A kollagén szivacs alkalmazható tömőanyagként, például a gyomor-bél csatornában, vagy külső hüvelyként, amelyet a gyomor-bél csatorna külső felülő$ * Χ.ΦΦΦ Φ«·

Φ « φ Φ φ

Φ Φ Φ Φ«« Φφφ

Φφ#κ*ΛΦΦ ν ψ φ * ΚΦΦ Φχ tén lehet alkalmazni,

A kérész túlmenő lyuk vagy furat belső átmérője a humán gyomor-bél csatorna különböző egységeiben és a légcsőben történő alkalmazás céljára például az

alábbi lehet:
Balok:	0 # 5	-	δ om
Végbélí	1 -	4	cm
Vastagbél:	2 -	5	cm
Vékonybél.:	0,5	---	3 cm
Nyelőcső:	0,5	-	2 cm
Légcső:	1 -	4	om
A kollagén	szivacs felhasználható például sebek
zárasához a	gyomor	-bél csatorna falain lévő kinő-

vések műtéti eltávolítása# például végbélműtétek# mint például aranyerek, műtéti eltávolítása után visszamaradó sebek zárásához. A találmány szerinti kollagén szivacs felhasználására néhány példa:

sebkötözés

- vérzéscsillapítón, például

- gyenge# diffúz vérzés parenohimás szervekből#

- sebészeti eljárások olyan műtéti helyeken# ahol ektoműtétet vagy lekötést végeztek a kollagén szivacs alkalmazása előtt# újbóli vérzés megakadályozása (varratok megerősítése) égési sérüléseken történő alkalmazás# helyi sérülések kötözése# gyógyszerek# például antibiotikumofc bejuttatása a s z e r v e z e t fo e .

A RAJZOK RÖVID LEÍRÁSA

Az í. és 2. ábra egy folyamatábra, amely a találmány szerinti eljárás egy előnyös megvalósítási módját szemlélteti.

A 3- ábra egy találmány szerint előállított kollagén szivacs felületének fényképe (köszönet, ör. Román Garbón professzornak, Chirurgische üniv. Klinik Erlangen# Sármány),

A 4. ábra egy keverő eszközt mutat, be kollagén gél viszkozitás! mértékének meghatározásához.

A RAJEOK LEÍRÁSA

Egy előnyös megvalósítási mód szerint a találmány az alábbi, az 1. és 3, ábrán szemléltetett lépéseket tartalmazza:

1. lépés; Mélyhűtött_ló---inak szállítása

A ló-inakat -18 ^ÖC és -25 °C közötti hőmérsékleten szállítjuk és tároljuk.

Τφφφχ φφφ φ

XX

2. lépés: Lő-1 nak .^hámozása^

Félig fagyott állapotban agy késsel az inakról a bőrt kézzel vagy gépi úton eltávolítjuk. Ezután az ínakat ismét -18 és -2S ^eC közúti hőmérsékletre mélyhűtj ük,

3. lépés: Hámozott₇₇₇₇léglunk gépiszeletelése Kívánt esetben a fagyott, hámozott Inakat 30 percig ?0%-os etanolban fertőtlenítjük, és etanolban az előállítási helyiségekbe visszük. Ezután az inakat megmossuk, tömbökké préseljük, és -18 és 25 közötti hőmérsékletre fagyasztjuk. A fagyott ín-tömböket forgó késes vágógéppel hozzávetőleg 1 mm vastagságú szeletekre vágjuk,

4. lépés: Az 1 n - a ze 1 e t e k mo sá sa és ~ f e r1 d 11 a π 11é aa Az oldható fehérjék eltávolítása céljából az inszeleteket először injekcióhoz való vízben 3 - ő ötéig áztatjuk, majd injekcióhoz valő vízzel vagy ásványmentes vízzel vagy Ca* és/vagy ^g^a*-ionokat 1 - lí) mM mennyiségben tartalmazó söoldattal mossuk, amíg a felülúszó hemoglobinmentes nem lasz. Ekkor az ín-szeleteket 20 %-os etanolial IS percig fertőtlenítjük, majd az etanol eltávolítása céljából kétszer tejsav ivóvízzel (steril, szűrt és pirogénmentes) készült, 0,45 %-os oldatával mossuk, ,______lépé s ; Ko1lagéu gé l a Idái111ága

A mosott ín-szeleteket 0,4S%-oa tejsavban áztatjuk * * *<·«> -x*

- S napig, előnyösen 4 napig, majd kollagén géllé homogenizáljuk. A G,45t~os tejeav hatásának történő kitétel az egyik legfontosabb vírusinaktiválási lépésnek tekinthető.

ú. lépés: Habosítás

A kollagén gélbe oldó keverékkel steril, szőrt levegőt keverünk. A keletkező habot frakcíonáijuk# és az 1 - 3 mm buborék-méretű frakciót összegyűjtjük. A habot az acéltartályból hordóba töltjük, amit kb. 3 percig enyhén forgatunk, hogy homogén habot kapjunk. A habot száritő tartályokba töltjük. A tartályok alja textil-szövetből áll# amelyen a folyadékok átjutnak, így lehetőség ven a hab drénezésére. 5-24 óra múlva a drénezett habot ammóniagáz hatásának tesszük ki, amit például DAB minőségű# 2é %-os ammónia oldatból állítottunk elő. Azalatt as ammónia feleslege a hab pH-ját bázikusra változtatja. Az ezt kővető szárítási lépőé során az ammóniát eltávolítjuk, és igy semleges terméket kapunk.

?. lépés: A „habszárítása,

A habot jő minőségű acél száritokamrában meleg levegővel éé - 150 óráig, előnyösen 120 - ISO óráig szárítjuk. Így tömbökbe tömörült kollagén szivacsot kapunk.

2(3

Φ **Φ

Φ «*Χ

8,lépésj A kollagéntömbökelvágása

A kollagén tömbök vagy lapok használhatók például bevonatok hordozóiként, A vágást függőlegesen vágó géppel végezzük, Előszűr a tömbök oldalait vágjuk le, igy olyan tömböket kapunk, amelyeknek függőleges oldalai 50 ca hosszúságúak. Eat a tömböt ezután függőlegesen négy, íl cm szélességű táblává vágjuk. A táblák felső és alsó oldalait ismét levágjuk, majd 50 x 11 x 0,4 -0,7 cm méretű csikókká szeleteljük. A kollagén szivacs-csikók tömege előnyösen bármely elérni kívánt végtermék, például TachoCombéJ H, Tacboüomb® és Tachotop© kollagén specifikációjának megfelel,

9, iépésg A kollagén azlvacs-csíkok.....szétválogatása

A kollagén csikókat ezután megszemléljük. Azokat a csikókat, amelyeken az alábbi hibák közül egyet vagy többet felfedezünk, eldobjuk;

átlagos kamra-átmérő 1 mm-nél kisebb vagy 3 mmnél nagyobb, nem homogén kamra-szerkezet lyukas csíkok (egyedülálló kamrák, melyeknek mélysége nagyobb, mint a szivacs vastagsága).

A szétválogatott csikókat legfeljebb 1 évig tároljuk fertőtlenített könnyűfém-tartályokban, 15 és 25 °C közötti hőmérsékleten.

φ * φ « φ * * φ φ * φφφ* * φ

Α 3. ábra egy találmány szerint előállított kollagén szivacs felületének fényképe, amit hozzávetőleg 20 OOö-szeres nagyítással vettünk fel ({köszönet Dr , Román Garbón professzornak, Chirurgische Univ. Klínik Erlangen, Germany). A 3. ábra szerinti fényképen látható felület egy olyan kollagén szivacs keresztmetszeti felülete# amelyet a találmány szerinti eljárással állítottunk elő, A fényképen a sötét területek a kamrákat# a világos területek a kollagén anyagot és a kamrákat elválasztó kollagén anyagból álló falakat képviselik.

A 4. ábra egy olyan keverő berendezést mutat fce, amellyel egy folyadék viszkozitás! mértéke meghatározható. A berendezés agy folyadék tárolására alkalmas tartályból és az említett folyadék keverésére alkalmas eszközből áll. A keverőeszköz egy villa alakú elemhez csatolt pálcából áll. A tartályban lévő folyadékot ügy keverjük.# hogy a pálcára forgatónyomatokot fejtünk ki, aminek következtében a villa alakú elem forgó mozgást végez. A villa alakú elem áll egy 41 primer részből# amelyhez a pálca kapcsolódik# és agy első és második 42 szekunder részből. A szekunder részek a primer rész végeihez vannak csatlakoztatva. Ahogy a villa alakú rész forog, a felületek elmozdítják a folyadékot# és igy keverik art.

At egyik megvalósítási mód szerint a berendezés fc fc fc* fcfcfc «fcfc fc fc fc fc fc fc x « $ « « fc * * ♦ «« alábbiak: A tároló 1IÖ mm magas és 14 δ

A pálca 220 mm magas és átmérője 10 nm, primer része 90 mm hosszú és 30 mm maszekunder részek 90 mm magasak és 30 mm

A távolság a 42 szekunder részek külső tartály egy belső felületéig 28 mm.

fc fc méretei az mm széles.

A villa 41 g a s . A 4 2 s 2 é I e s e k.

szélétől a

X.Példa

Az alábbi I. Táblázat a találmány szerinti eljárás három különböző ciklusának paramétereit mutatja.

X. Táblázat

	1, ciklus	2. ci ki us	3» ciklus
Inak hámozása: veszteség (%)	24	40	3s
Biotarhelés hámozás előtt CFü/g ín	7xlÖ*		5*XÖ⁵
Bioterhelés hámoráé után CFü/g in		2χΧ0²	Sxlö*
Az in tömege bemérésenként	12,00 kg	10,5 kg	10,5 kg
Hámozott ínak mosása ásványt nem tartalmazó vízzel	30 perc	30 perc	30 perc
Oldható fehérje eltávolítása: szeletelt inak mosása ásványt nem tartalmazó vízzel, amíg a mosóoldat hemoglobinmentes nem lesz	5 óra	5 óra	1,S óra
Fertőtlenítés '70 t-os éta- no Hal	15 perc	15 perc	15 perc
Mosás 0,45 %-os tej savban	21 perc	21 pérc	21 perc
Aztatás 0,43 %-os tejsavban	144 óra	120 óra	120 óra

* ·ί * <ί $ ·>'

Homogén!zálás	Condws fogazott aprító	Condux fogazott aprító	Ceadaa fogadott aprító
Gél-viszkozitás {forgató- nyomaték)	6,5-7,8 Mcm	6,5-7,8 Hcm	7,1-5,5 Hem
A kollagén gél száraz törne- ga	6,3-8,3 mg/g	8,9-9,4 osg/g	7,8-5,4 mg/g
Habosítási idő tömbönként	37-4? perc	51-55 perc	54-82 perc
^leterhelés (CFÜ/ml nedves hab)		2	1
Drénezés! időszak	17,5 óra	22 óra	10 óra
Semlegesítési időszak	24 óra	24 óra	24,5 óra
Szárítási időszak	14? őrá	142,5 éra	144,5 óra
Tömbönkénti tömeg	200-256 g	185-228 g	177-257 g
Kollagén szivacs-csíkok bioterheláse (CW/g)	14-1050	< 18-124	< 11-33
Kollagén ssivaes-czlkok hozama : Hosszúság: 110 mm Szélesség: S00 mn. Magasság: 4-7 mm Tömeg: 770-1500 mg/csík	405	378	433

Az alábbi XX. Táblázat a találmány szerinti eljárással előállított bárom különböző kollagén szivacs paramétereit mutatja be.

XX. Táblázat

Φ χ Φ φ * Φ ΦΦΧ ΦΦφ

X * Φ Φ φ χ φ φ ΦΦΦ φφ * ·>

* φ φ φ

	X. szivacs	XX, szivacs	i 111. szivacs
pH-érték (spec: 4-6)	5,4	5,1.	5,4
Tej savfa x't alom	2, 6 %	2, 3%	2%
Ammónium- tart. alom.	0,2%	0,2%	0,1%
01 d h a fc c £ e h é r j e-tartalom	0,1%	0,0 5 %	0,0 8 %
S ζ υ 1 £ á fc h amu ·· tartalom	0, 4%	0,3%	0, 3%
Mikrobiológiai t i s z t as á g (CFU/g)	14-1000	< 18-124	< 11-35
Κ ο 11 a g é n -1 a r talom a a zár a.z tömeghez viszony! 'tv a	95%	95%	9 >3%
Víztartalom	14%	15%	16%
HugaImaasági modulus	10-45 N/czd	15 - 5 0 N / cs*	12,3-41,0 K/czt
Kamra -méret (á 11 a g o s á t m é - ró)	2,3 mm	2,1 mm	.2,9 mm
Sűrűség	2,5-6,1 mg/ cad	2,9-5,9 mg /cm³	2, 4 - 5, 0 mg / cm/

$

Φ X * « X « Φ Φ * ίφψ χαφ

ΧΧΦ» φψ»ψ * φ

$. X Φ 4 X X Φ Φ

	XV. szivacs	V. szivacs
pH érték	5,3	5, 7
Tejsav- tartalom	2,3%	1,1%
Ammőnium- t art a1om	0,1%	0,1%
Oldható fehérje-tartalom	0,04%	0,11%
Szulfáthamu- tartalom	0,3%	0,2%
Nehézfém- tártalom	< 2 0 ppm	< 20 ppm
Mikrobiológiai tisztaság (CFü/g)	< 12-345 CFüZg	< 15-40 CFUZg
Κ ο 11 a g é n -1 a r - t a 1 o m a s z á r a z tömeghez viszonyítva	35%	06%
Víztartalom	14%	12%
Rugalmassági modulus	10,4-42,1 d Z ózd	20-47 d/cs?
Kamra-méret (átlagos átmérő)	2,3 mm	2,5 mm
Sűrűség	2,9-5,3 mg Z ca^J	2-6, § mg Z cm³

XX'Példa

A példa a kollagén gél viszkozitásénak közvetett mérésére vonatkozik forgatönyomaték-méréssel,

A forgatényómaték-méréshez alkalmazott berendezés; - Keverőgép: EüROSTAK POWER kontrol1-visak.

~ Windows-Ssoftver; IK&SOST de

- Forgatónyomaték-jelző: VISCOK1ICK VEI •™ Dataloggar DC2

- Speciális keverőszerkezet („villa) meghatározott átmérőkkel, ld. 4. ábra

- 14,6 cm belső átmérőjű és 20,5 cm magas tölcsér

- Hőmérő

Mérleg

1500 g kollagén gélt a tölcsérbe töltünk, A minta hőmérséklete 23 ^SC, A „villás kövéret a tölcsér közepéhez rögzítjük, Megkezdjük a mérést, A forgatónyomaték-jelző átalakítja a keverő ellenállását egy értékké (Sem) ,· ami a dinamikus gél-viszkozitást képviseli.

A forgatónyomatéfc-mérés ellenőrzése céljából 59%~ os standard polietilén-glikol-oldatot készítünk. Ennek az oldatnak a viszkozitását Haake-féle viszkoziméterrel (EV 20 Rotovisko) mérjük. Az oldat dinamikus viszkozitása Cg) 23 ’C-on a §25 1 25 mPas tartományban van, As oldat viszkozitását a £an t i g é1-mér ő beren dezé sse1 mérj ük, é s a ζ í g y mért £orgatónyomaték-érték 23 ‘C-on a 3,66 ken ± 5% tartományban van.

Claims

Szabadalmi igénypontok:

1, Eljárás kollagén szivacs előállítására, amely az alábbi lépéseket tartalmazza:

~ kollagén gél előállítása,

- levegő bekeverése a kollagén gélbe kollagén hab előállítása céljából,

- a kollagén hab szárítása olyan száraz, háromdimenziós struktúrájú kollagén szivacstömb előállítása céljából, amelyben egymás mellett, alatt és felett kamrák vannak, amelyek egymásfél el vannak választva, ás lényegében teljesen kollagén anyagú falakkal vannak körülvéve;

- a kollagén szivacstömfoből olyan szivacs-részek elkülönítése, amelyekben a kamra-átmérő 0,75 mm~nél nagyobb és 4 mm-nél kisebb, vagy amelyekben a kamrák átmérőjének átlagos mérete legfeljebb 3 mm<
2, Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szivacs elkülönített részeinek kollagén-tartalma 50 - 100%.
3, A 2. vagy 3, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén gél különféle típusú kollagén, anyagokat tartalmaz, amelyek az alábbi források közül legalább egyből származnak; emlős, transzgenikus vagy rekombináns.

·* X X Χ'ΧΧΧ XX

X * X X X χ χ χ χ ΧΧχ χχχ ΧΧΧΧ XX** X X

X X XSX XX
4. Α 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve# hogy a kollagén gél inakból, éspedig lóinakból# szarvasmarha-inakból vagy humán inakból származó anyagot tartalmaz.
5, A 3« vagy 4. igénypont szerinti eljárás# azzal jellemezve, hogy a kollagén gél előállítása az alábbi lépéseket tartalmazza:;

- az inak tárolása -lö ^ÖC és -30 *C közötti hőmérsékleten, és az inak „hámozása** ís bőr lefejtése) ,

- idegen fehérjék eltávolítása az inakból,

- az inak baktéríumtarfalmának csökkentése,

- az inak duzzasztása, a megduzzadt inak homogén!zálása>
6., Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve# hogy a baktériumtartalom csökkentését savnak és szerves oldószernek az inakhoz történő hozzáadásával végezzük.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sav egy szerves sav, például tejsav.
8. A 6. vagy 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szerves oldószer egy alkohol, például etanol.

***** * X ΦΨ«» Φ* fli « * * * * « Φ Φ Φ'·*·» W# «»»« «♦#« Φ Λ

Φ Φ ΦΦ* ΦΦ
9. Az 5. - 8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inak duzzasztását tejsavnak az inakhoz történő hozzáadásával végezzük.
10, Az 5. - 9, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jelleaezve, hogy a sav pH-ja 1 és 4 között, például 1,5 és 3,5 között, például 2,5 és 3,0 között van.
11. Az 5. - 10, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tejsav 0,45 %o s.
12, Az S, - Ii. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inak duzzasztását az inak 4 ^fíC és 25 °C közötti hőmérsékleten 48 - 200 óráig történő tárolásával végezzük.
13. A 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inakat 100 ~ 120 óráig tároljuk.
14, Az 5. - 13, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megduzzadt inak homogenizálása során olyan anyagot kapunk, amely 0,8 - 1,2 cs hosszúságú vagy átmérőjű inrészecskéket tartalmaz.
15, Az

14. Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megduzzadt inak homogenizálása során olyan anyagot kapunk, melynek viszkozitása 2 és 20 bem között van,
16. Ar 5. - IS. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megduzzadt inak homogenizálását fogazott lemezes apxítóval vagy egy ahhoz hasonló berendezéssel végezzük.
17. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén gél dina?nikas viszkozitása 2 és 20 bca között van.
18. Az 1-17. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a levegő bekeverése a kollagén gélbe az alábbi lépéseket tartalmazza;

- keverd berendezéssel környezeti levegőt keverünk a gélhez kollagén bab előállítása céljából,

- a kevert gél-habot frakcionáló csatornába helyezzük,

- a frakcionáló csatornában a kollagén gélt és a kollagén habot elkülönítjük,
19. A 18, igénypont ezerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén habtól a frakciónáló csatornában elkülönített kollagén gélnek legalább egy résrét visszavezetjük a tevéidbe.

, $ * , r** *

25. A 19, Igénypont szerinti eljárás# azzal jellemezve, hogy a frakcionálő csatornából a keveréke visszavezetett kollagén gél ée a keveröbe vezetett frlse kollagén gél mennyiségének arányé ö,l és 8,5 között ven,
21, A 18» - 20. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén gél és a kollagén hab elkülönítése az alábbi lépéseket tartalmazza:

-- a frakcionálő csatornában lévő kollagén hab egy kiválasztott részének elkülönítése, a kollagén bab kiválasztott, részének kivezetése a frakcionálő eseteméből szárításhoz,
22. A 18. - 21, Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a frakcionálő csatornában 15 ^?ÍC ás 40 *C közötti hőmérsékletet tartunk fenn.
23» Az 1-22» igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy miután a kollagén gélhez levegőt kevertünk, a kollagén habot 2-4 percig homogenizáljak,
24. Az 1-23» igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, begy mielőtt a kollagén ha35 φφφ bot megszorítjuk és miután, a kollagén gélhez levegőt kevertünk, egy semlegesítő szert adunk a kollagén habhoz, és annak pH-ját 6,5 és 8,5 közötti értékre állítjuk be.
25, A 24. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a semlegesítő szer ammónia-oldatot tartalmaz.
26. A 24, vagy 25, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén habot 5-30 óráig semlegesítjük,
27, A 26, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén, habot 20 - 30 óráig semlegesítjük,
28. Az 1-27. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szárítást 15 °C és 60 közötti hőmérsékleten, 48 - 200 órán át végezzük, hogy száraz kollagén szivacsot kapjunk.
29. A 28. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szárítást 7-3 HPa nyomáson hajtjuk végre.
30, Az 1-29. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szárítást 15 °C és 40 °C közötti hőmérsékleten végezzük 100 - 200

X φφφ φ

φφφ órán át.
31. Αζ 1-30. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén szivacs 82 alábbi kritériumok körül legalább egynek megfelel:

- pH-értéke 5,0 és 6,0 körött van,

- tejsav-tartalma legfeljebb 5%-oa,

- ammbnium-tartaima legfeljebb 0,5%-os,

- albumin--tartalomként számított oldható fehérjetartalma legfeljebb 0,51-os,

- szulfáthamu-tartalma legfeljebb 1,0%-os,

- nehézfém-tartalma legfeljebb 20 ppm,

- mikrobiológiai tisztasága legfeljebb 10^# CFU/g,

- kollagén-tartalma 75 - 100%,

- sűrűsége 1-10 mg/cm⁸,

- rugalmassági modulusa az 5 és 100 M/c®² közötti tartományban van.
32. Ar 1-31 rás, azzal víztartalma igénypontok bármelyike a torinti eljájellemezve, hogy a kollagén szivacs ne® több mint 20%.
33. Az 1-32. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagén szivacs részeinek elkülönítése során a kollagén szivacsot vágással sok részre osztjuk.

Eljárás kollagén szivacs előállítására, amely az alábbi lépéseket tartalmazza:

kollagén gél előállítása#

- levegő bekeverése a kollagén gélbe kollagén hab előállítása céljából#

- a kollagén, hab szárítása olyan, száraz, háromdimenziós struktúrájú kollagén szivacstőmb előállítása céljából# amelyben, egymás mellett# alatt és felett kamrák vannak, amelyek egymástól el vannak választva és lényegében teljesen kollagén anyagú falakkal vannak körülzárva,

- a kollagén szivacstömbből olyan szivacs-részek elkülönítése# melyek az alábbi tulajdonságokkal r e n d e I k e ζ n e k;

rugalmassági modulusuk az S - 100 N/cn? közötti tartományban van, sűrűségűk 1 és 10 mg/cm* között van,

- kamra-átmérőjük Ö#75 mm-nél nagyobb és 4 mm™ nél kisebb, vagy a kamra-átmérő átlagosan legfeljebb 3 mm.
35. A 31. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemerve, hogy az 1. - 33. Igénypontok bármelyike szerinti lépéseket tartalmazza.