DE69330547T2

DE69330547T2 - Präparat mit verzörgerter Wirkstoffabgabe

Info

Publication number: DE69330547T2
Application number: DE69330547T
Authority: DE
Inventors: Yasutaka Igari; Shigeru Kamei; Yasuaki Ogawa
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-12-07
Filing date: 1993-12-03
Publication date: 2001-11-22
Anticipated expiration: 2013-12-04
Also published as: PT601799E; ATE203910T1; DE69333817D1; US5668111A; GEP19991600B; GR3037085T3; FI116196B; WO1994013317A1; NO934423D0; ES2238247T3; LV10927B; PT1088555E; HK1037519A1; NO934423L; KR20010016379A; CN100488560C; US20030039698A1; JPH0797334A; KR940013530A; DE69330547D1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Retard-Präparat, das ein physiologisch aktives Peptid enthält, sowie in Verfahren zu dessen Herstellung.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Zum Stand der Technik zählt, wie in der EP-A-481.732 geoffenbart, ein Retard-Präparat, das ein Arzneimittel, eine Polymilchsäure und ein Glykolsäure-Hydroxycarbonsäure- [HOCH(C&sub2;&submin;&sub8;-Alkyl)COOH]-Copolymer umfasst. Das geoffenbarte Verfahren umfasst die Herstellung einer VWasser-in-Öl-Emulsion, die aus einer inneren Wasserphase, die eine wässrige Lösung eines physiologisch aktiven Peptids umfasst, und einer äußeren Ölphase besteht, die eine Lösung eines biologisch abbaubaren Polymers in einem organischen Lösungsmittel umfasst, die Zugabe der Wasser-in-Öl-Emulsion zu VWasser oder einem vässrigen tyiedium, und das Verarbeiten der resultierenden VWasser-in-Öl-in-Wasser- Emulsion zu Mikrokapseln mit verzögerter Freisetzung (In-VWasser-Trocknungs-Verfahren).
Die EP-A-52.510 beschreibt eine Mikrokapsel, die ein hormonell aktives Polypeptid, ein biologisch abbaubares Polymer und ein Polymerhydrolyse-Regulierungsmittel umfasst. Das geoffenbarte Verfahren für ihre Herstellung ist ein Koazervierungsverfahren, welches die Zugabe eines Koazervierungsmittels zu einer Wasser-in-Öl-Emulsion umfasst, die aus einer wässrigen Lösung des Polypeptids als innere VWasserphase und einem halogenierten organischen Lösungsmittel als Ölphase besteht, um Mikrokapseln bereitzustellen.
Die GB-A-2.209.937 beschreibt eine pharmazeutische Zusammensetzung, die ein Polylactid, ein Polyglykolid, ein Milchsäure-Glykolsäure-Copolymer oder ein Gemisch aus diesen Polymeren und ein wasserunlösliches Peptid umfasst. Ebenfalls geoffenbart wird ein Herstellungsverfahren, welches das Dispergieren eines Salzes des wasserunlöslichen Peptids in einer Lösung des Polylactids, des Polyglykolids, eines Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers oder eines Gemischs dieser Polymere, das Abdampfen des Lösungsmittels und das Formen des resultierenden Gemischs zu festen Teilchen umfasst.
Die EP-A-58.481 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die ein Polylactid und ein säurestabiles Polypeptid umfasst, weiches beispielsweise das Lösen von Tetragastrin-hvdrochlorid und eines Polylactids in wässrigem Dioxan, das Gießen der Lösung zu einem Film und das Abdampfen des Lösungsmittels umfasst.
Die EP-0.467.389 lehrt eine Technik zum Bereitstellen eines Arzneimittel-Abgabesystems für Proteine und Polypeptide durch eine Polymerfällungstechnik oder eine Mikrokugeltechnik. Diese Literatur enthält jedoch keine spezifische Offenbarung bezüglich eines Systems, das ein LH-RH-Derivat enthält.
Das "luteinisierendes Hormon freisetzende Hormon", das als LH-RH (oder GnRH) bekannt ist, wird vom Hypothalamus ausgeschieden und bindet sich an Rezeptoren auf der Hypophyse. Das LH (luteinisierende Hormon) und das FSH (follikelstimulierende Hormon), die darauf freigesetzt werden, wirken auf die Keimdrüse, wodurch Steroidhormone synthetisiert werden. Als Derivate von LH-RH sind sowohl agonistische als auch antagonistische Peptide bekannt. Wenn ein stark agonistisches Peptid wiederholt verabreicht wird, wird die Anzahl der verfügbaren Rezeptoren verringert, so dass die Bildung von aus der Keimdrüse stammenden Steroidhormonen unterdrückt vird. Daher ist zu erwarten, dass LH-RH-Derviate als Therapiemittel für Hormon-abhängige Erkrankungen, wie z. B. Prostatakrebs, gutartige Prostatahypertrophie, Endometriose, Hysteromyom, Metrofibrom, frühzeitige Pubertät, Brustdrüsenkrebs usw., oder als Empfängnisverhütungsmittel von Wert sind. Insbesondere wurde für LH-RH-Antagonisten der so genannten ersten und zweiten Generation auf das Problem der Histamin-freisetzenden Aktivität hingewiesen (The Pharmaceuticals Monthly 32, 1599-1605 (1990)), aber seither sind eine Reihe von Verbindungen synthetisiert worden und vor kurzem sind LH-RH-antagonisierende Peptide, die keine nennenswerte Histamin-Freisetzung zeigen, entwickelt worden (vergl. beispielsweise US-Patent Nr. 5110904). Damit ein solches LH-RH-antagonisierendes Peprid seine pharmakologische Wirkung manifestieren kann, ist ein Retard-Svstem erforderlich, damit die kompetitive Hemmung von endogenem LH-RH anhalten kann. Darüber hinaus besteht aufgrund der Histamin-Freisetzungsaktivität, die bei solchen Peptiden niedrig sein kann, aber nicht vollkommen fehlt, Bedarf an einem Retard-Präparat mit einem gehemmten Anfangsschub unmittelbar nach der Verabreichung.
Die EP-A-0.302.582 stellt eine Zusammensetzung zur Freisetzung eines Wirkstoffs an ein Tier über einen vorbestimmten längeren Zeitraum bereit, welche ein Gemisch aus wirksamen Mengen eines Wirkstoffs, eingekapselt in zumindest zwei biologisch abbaubare und biologisch verträgliche Copolymer-Exzipienten umfasst, um erste und zweite Mikrokapseln zu bilden. Jeder Exzipient ist zu einer anderen Freisetzungsrate des Wirkstoffs fähig. Die Zusammensetzung weist ein solches Abgabeprofil auf, dass die Freisetzung des Wirkstoffs aus der zweiten Mikrokapsel beginnt, wenn die Freisetzung des Wirkstoffs aus der ersten Mikrokapsel nachlässt. Die Erfindung betrifft insbesondere ein Mikrokapsel-Abgabesystem für den Peptidagonisten [D-Trip&sup6;, des-Gly¹&sup0;]-LHRH-Ethylamid und den Peptidantagonisten [D-N-Ac-4-Cl-Phe², D-Trp&sup6;, D-Ala¹&sup0;]-LHRH. Das bevorzugte Polymer ist Poly-(D-L-lactid-co-glykolid).
Die EP-A-0.481.732 beschreibt ein Polymer für ein Präparat zur verlängerten Freisetzung, welches eine Polymilchsäure und ein Copolymer von Glykolsäure mit einer Hydroxvcarbonsäure der Formel (1)
umfasst, worin R eine Alkylgruppe ist, die 2 bis 8 Kohlenstoffatome enthält, vermischt in einem Gewichtsverhältnis von 10/90 bis 90/10.
Insbesondere ist es im Fall des Präparats zur verzögerten Freisetzung (z. B. über 1 bis 3 Monate) wichtig, eine deutlichere und konstantere Freisetzung des Peptids zu gewährleisten, damit die gewünschte Wirksamkeit mit größerer Gewissheit und Sicherheit erzielt werden kann.
Gleichzeitig besteht seit langem Bedarf an einem Verfahren zur Herstellung eines Retard-Präparats mit hoher Peptid-Festsetzungsrate für ein physiologisch aktives Peptid, insbesondere LH-RH-antagonisierende Peptide.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Gemäß vorlegender Erfindung wird Folgendes bereitgestellt:
1) ein Retard-Präparat, welches ein physiologisch aktives Peptid der allgemein Formel
worin:
X für eine Acylgruppe steht;
R&sub1;, R&sub2; und R&sub4; jeweils für eine aromatische zyklische Gruppe stehen;
R&sub3; für einen D-Aminosäurerest oder eine Gruppe der Formel
steht, worin R&sub3;' eine heterozyklische Gruppe ist;
R&sub5; für eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)n-R&sub5;' steht, worin n = 2 oder 3 ist und R&sub5;' eine gegebenenfalls substituierte Aminogruppe, eine aromatische zyklische Gruppe oder eine O-Glykosylgruppe ist;
R&sub6; eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)n-R&sub6;' ist, worin n = 2 oder 3 ist und R&sub6;' eine gegebenenfalls substituierte Aminogruppe ist;
R&sub7; für einen D-Aminosäurerest oder einen Azoglycylrest steht; und
Q für Wasserstoff oder eine Niederalkylgruppe steht;
oder ein Salz davon sowie ein biologisch abbaubares Polymer umrasst, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxylendgruppen aufweist, wobei im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels Endgruppen-Bestimmung herrscht;
2) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin X eine C&sub2;&submin;&sub7;-Alkanoylgruppe ist, die egebenenfalls mit einer 5- oder 6-gliedrigen heterozvklischen Carboxamido-Gruppe substituiert ist;
3) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 2, worin X eine C&sub2;&submin;&sub7;-Alkanovlgruppe ist, die gegebenenfalls mit einer Tetrahydrofurylcarboxamido-Gruppe substituiert isü
4) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin X Acetyl ist;
5) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin das Copolymer ein mittels GPC bestimmtes gewichtsmittleres Molekulargewicht von etwa 5.000 bis 2.000 aufweist;
6) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin das Copolymer einen Dispersitätswert von etwa 1, 2 bis 4,0 aufweist;
7) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin der Anteil des nhvsiologisch aktiven Peptids im Bereich von etwa 0,01 bis 50 Gew.-%, bezogen auf das biologisch abbaubare Polymer, liegt;
8) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin das phviologisch aktive Peptid ein LH-RH-Antagonist ist;
9) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin das physiologisch aktive Peptid
oder dessen Acetat ist;
10) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1 worin das pllysiolotzisch aktive Peptid NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH&sub2; oder dessen Acetat ist;
11) ein Retard-Präparat gemäß obigem Absatz 1, worin das physiologisch aktive Peptid NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et&sub2;)-Leu-hArg(Et&sub2;)-Pro-DAlaNH&sub2; oder dessen Acetat ist;
12) ein Verfahren zur Herstellung eines Retard-Präparats, welches das Lösen eines physiologisch aktiven Peptids der allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon und eines biologisch abbaubaren Polymers, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxvlendgruppen aufweist, wobei im Wesentlichen Ubereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels GPC- Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels Endgruppen-Bestimmung herrscht, in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und das anschließende Entfernen des Lösungsmittels umfasst;
13) ein Verfahren gemäß obigem Absatz 12, welches das Lösen des biologisch abbaubaren Polymers und des physiologisch aktiven Peptids in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und die Zugabe der resultierenden Lösung zu einem wässrigen Medium, uni eine Öl-in-Wasser-Emulsion bereitzustellen, umfasst;
14) ein Verfahren zur Herstellung eines Retard-Präparats, welches das Lösen eines biologisch abbaubaren Polymers, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxylendgruppen aufweist, wobei im Wesentlichen Ubereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels Endgruppenbestimmung herrscht, und eines im wesentlichen vasserunlöslichen physiologisch aktiven Peptids oder eines Salzes davon in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und das anschließende Entfernen des Lösungsmittels umfasst, sowie
13) ein Verfahren gemäß obigem Absatz 14, welches weiters nach dem Lösen des biologisch abbaubaren Polymers und des im Wesentlichen wasserunlöslichen Peptids oder Salzes davon im Lösungsmittel die Zugabe der resultierenden Lösung zu einem wässri- Gen Medium umfasst, um eine Öl-in-Wasser-Emulsion bereitzustellen.

DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die in der vorliegenden Beschreibung verwendeten Abkürzungen haben folgende Bedeutung:
NAcD2Nal: N-Acetyl-D-3-(2-naphthyl)alanyl
D4C1Phe: D-3-(4-Chlorphenyl)alanyl
D3Pal: D-3-(3-Pyridyl)alanyl
NMeTyr: N-Methyltyrosy;
DLys(Nic): D-(&epsi;-N-Nicotinoyl)Ivsyl
Lys(Nisp): (&epsi;-N-Isopropyl)lysyl
DLys(AzaglyNlc): D-[1-Aza-(N-nicotinoyl)glycyl]lysyl
DLys(AzaglyFur): D-[1-Aza-(N-2-furoyl)glycyl]lysyl
Wenn irgendwelche anderen Aminosäuren in Form von Abkürzungen angegeben sind, werden die von der IUPAC-IUB Kommission für Biochemische Nomenklatur (European Journal of Biochemistry 138, 9-37 (1984)) empfohlenen Abkürzungen oder die von Fachleuten üblicherweise verwendeten Abkürzungen gebraucht. Falls optische Isomere für irgendeine Verbindung existieren, ist, sofern nicht anders angegeben, das L-Isomer gemeint.
Gemäß vorliegender Erfindung zeigt das Peptid [I] LH-RH-Antagonistenvirkung und ist bei der Behandlung von Hormon-abhängigen Erkrankungen wie z. B. Prostatakrebs, Prostatamegalie, Endometriose, Hysteromyom, Metrorihrom, vorzeitiger Pubertät, Milchdrüsenkrebs usw., oder für die Empfängnisverhütung wirksam.
in der allgemeinen Formel [I] ist die Acylgruppe X vorzugsweise eine von einer Carbonsäure stammende Acylgruppe. Beispiele für die Acylgruppe sind C&sub2;&submin;&sub7;-Alkanoyl, C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Cycloalkenoyl (z. B. Cyclohexenoyl), C&sub1;&sub6;-Alkylcarbamoyl (z. B. Ethylcarbamoyl), 5- oder 6- gliedriges heterozyklisches Carbonyl (z. B. Piperidinocarbonvl) und gegebenenfalls substituierte Carbamoylgruppen. Die Acylgruppe ist vorzugsweise eine gegebenenfalls substituierte C&sub2;&submin;&sub7;-Alkanoylgruppe (z. B. Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl, Pentanoyl, Hexanovl oder Heptanoyl), mehr bevorzugt eine gegebenenfalls substituierte C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoylgruppe (z. B. Acetyl, Propionyl, Butyryl, lsobutyryl). Die Substituenten sind beispielsweise C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylam inogruppen (z. B. Methylamino, Ethylamino, Diethylamino, Propylaminoi, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkanoylaminogruppen (z. B. Formylamino, Acetylamino, Propionylamino), C&sub7;&submin;&sub5;-Cycloalkenoylaminogruppen (z. B. Cyclohexenovlamino), C-&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Arylcarbonylaminogruppen (z. B. Benzoylamino), 5- oder 6-gliedrige heterozyklische Carboxamidogruppen (z. B. Tetrahydrofurylcarboxamido, Pyridylcarboxamido, Furylcarboxymido), Hydroxylgruppen, Carbamoylgruppen, Formylgruppen, Carboxylgruppen, 5- oder 6-gliedrige heterozyklische Gruppen (z. B. Pyridyl, Morpholino). Die Substituenten sind vorzugsweise 5- oder 6-gliedrige heterozyklische Carboxamidogruppen (z. B. Tetrahydrofurylcarboxamido, Tetrahydrofurylcarboxamid, Pyridylcarboxamido, Furylcarboxamido).
X ist vorzugsweise eine C&sub2;&submin;&sub7;-Alkanoylgruppe, die gegebenenfalls mit einer 5- oder 6- gliedrigen heterozyklischen Carboxamidogruppe substituiert ist.
- X ist mehr bevorzugt eine C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Tetrahydrofurylcarboxamidogruppe substituiert ist.
Spezifische Beispiele für X sind Acetyl,
(Tetrahydrofurylcarboxamidoacetyl)
usw.
Die aromatische zyklische Gruppe R&sub1;, R&sub2; oder R&sub3; kann beispielsweise eine aromatische zyklische Gruppe mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen sein. Beispiele für die aromatische zyklische Gruppe sind Phenyl, Naphthyl, Anthryl usw. Bevorzugt werden aromatische zyklische Gruppen mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen, wie z. B. Phenyl und Naphthyl. Diese aromatischen zyklischen Gruppen können jeweils 1 bis 3, vorzugsweise 1 bis 3, geeignete Substituenten in geeigneten Positionen auf dem Ring aufweisen. Derartige Substituenten sind Hydroxyl, Halogen, Aminotriazolyl-substituiertes Amino, Alkoxy usw. Bevorzugt werden Hydroxy, Halogen und Aminotriazolyl-suhstituiertes Amino.
Die obengenannten Halogene sind Fluor, Chlor, Brom und Iod.
Die Aminotriazolylgruppe des Aminotriazolyl-substituierten Amins umfasst, unter anderem, 3-Amino-1H-1,2,4-triazol-5-yl, 5-Amino-1H-1,3,4-triazol-2-yl, 3-Amino-1H-1,3,4- triazol-3-yl, 3-Amino-2H-1,2,4-triazol-5-yl, 4-Amino-1H-1,2,3-triazol-3-yl, 4-Amino-2H- 1,2,3-triazol-5-yl usw.
Die Alkoxygruppe ist vorzugsweise eine Alkoxygruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen (z. B. Viethoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy, Isobutoxy usw.).
Mehr bevorzugt ist R&sub1; Naphthyl oder Halophenyl. Mehr bevorzugt ist R&sub1; Halophenyl. Mehr bevorzugt ist R&sub4; Hydroxyphenyl oder Aminotriazolylamin-substituiertes Phenyl.
Der D-Aminosäurerest R&sub3; ist vorzugsweise ein α-D-Aminosäurerest mit 3 bis 12 Kohlenstoffatomen. Beispiele für die Aminosäure sind Leucin, Isoleucin, Norleucin, Valin, Norvalin, 2-Aminobuttersä ure, Phenylalanin, Serin, Threonin, Methionin, Alanin, Tryptophan und Aminosoisobuttersäure. Diese Aminosäuren können geeignete Schutzgruppen nuiweisen die üblicherweise nach dem Stand der Technik verwendeten Schutzgruppen, Wie z. B. t-Butyl, t-Butoxy, t-Butoxvcarbonyl usw.
Die heterozvklische Gruppe R&sub3;' umfasst 5- oder 6-gliedrige heterozvklische Gruppen, die jeweils 1 bis 2 Stickstoff- oder Schwefelatome enthalten, wie z. B. Heteroatome, die gegebenenfalls an einen Benzolring fusioniert sein können -Spezifisch können Thienyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, isothiazolyl, Imidazolyl, Pyrazolyl, Pyridvl, 3-Pyridvl, Pyradiazinyl, Pyrimidinvl, Pyraziuvl, 3-Benzo[b]thienyl, 3-Benzo[b]-3-thienyl, Indolyl, 2-Indolyl, lsoindolyl, 1H-Indazoivl, Benzoimidazolyl, Benzothiazolyl, Chinolyl, lsochinolyl usw. genannt werden. Die besonders bevorzugte Spezies von R&sub3;' ist Pyridyl oder 3-Benzo[b]- thienyl.
Die aromatische zyklische Gruppe R&sub5; kann dieselbe sein wie die aromatische zyklische Gruppe für R&sub1;, R&sub2; oder R&sub4;. Die aromatische zyklische Gruppe kann 1 bis 5, vorzugsweise 1 bis 3, geeignete Substituenten in entsprechenden Positionen auf dem Ring aufweisen. Die Substituenten können ebenfalls ähnlich den für R&sub1;, R&sub2; oder R&sub4; erwähnten Substituenten sein. Der besonders bevorzugte Substituent ist Aminotriazolyl-substituiertes Amino.
Die Glykosylgruppe für O-Glykosyl R&sub5; ist vorzugsweise eine Hexose oder ein Derivat davon. Die Hexose umfasst D-Glucose, D-Fruktose, D-Mannose, D-Galactose, L- Galactose usw. Als Derivat können Desoxyzucker (L- und D-Fucose, D-Chinovose, L- Rhamnose usw.) und Aminozucker (D-Glukosamin, D-Gafactosamin usw.) erwähnt werden. Mehr bevorzugt werden Desoxyzucker (L- und D-Fucose, D-Chinovose, L- Rhamnose usw.). Besonders bevorzugt wird L-Rhamnose.
Der Substituent auf der gegebenenfalls substituierten Aminogruppe, R&sub5;', umfasst unter anderem Acyl, Carbamoyl, Carbazoyl, das gegebenenfalls mit Acyl oder Amidin substituiert ist, das mit Alkvl mono- oder disubstituiert sein kann.
Das obengenannte Acyl und das Acyl für das obengenannte Carbazolyl, das gegebenenralls mit Acyl substituiert ist, ist Nicotinoyl, Furovl, Thienoyl usw.
Die Alkylgruppe des obengenannten Mono- oder Dialkylamidino umfasst unverzweigte oder verzweigte Alkvlgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und umfasst somit Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, BuLl, Isobutyl, s-Butyl und t-Butyl usw. Die bevorzugte Alkyl- gruppe ist Methyl oder Ethyl.
Der Substituent für die gegebenenfalls substituierte Aminogruppe, R , umfasst Alkvl und Amidino, das mit Alkyl mono- oderdisubstituiert sein hann.
Das obengenannte Alkyl und das Alkyl des obengenannten Mono- oder Dialkylamidino umfasst die für R&sub5;' erwähnten Alkylgruppen.
Der D-Aminosäurerest R&sub7; ist vorzugsweise ein D-Aminosäurerest mit 3 bis 9 Kohlenstottatomen, wie z. B. D-Alanvl, D-Leucyf, D-Valyl, D-Isoleucvl, D-Phenyialanyl usw. Mehr bevorzugt werden D-Aminosäurereste mit 3 bis 6 Koblenstoffatomen, wie z. B. D- Alanyl, D-Valyl usw. Die besonders bevorzugte Spezies von R- ist D-Alanyl.
Die Niederalkylgruppe Q kann eine der für R&sub5;' definierten Alkylgruppen sein. Die am meisten bevorzugte Spezies von Q ist Methyl.
Spezifische Beispiele für R&sub1; sind
usw.
Spezifische Beispiele für R&sub2; sind
usw.
Spezifische Beispiele für R&sub3; sind
Spezifische Beispiele für R&sub4; sind
usw.
Spezifische Beispiele für R&sub5; sind

usw.

Spezifische Beispiele für R&sub6; sind
usw.
Spezifische Beispiele für R- sind
usw.
Wenn das Peptid [I] ein oder mehrere asymimetrische Kohlenstoffatome enthält, gibt es zwei oder mehr Stereoisomere. Jedes derartige Stereoisomer sowie Gemische davon fallen in den Schutzumfang der vorliegenden Erfindung.
Das Peptid der allgemeinen Formel [I] wird nach an sich bekannten Verfahren hergestellt. Typische spezifische Verfahren werden in US-Patent Nr. 3110904 beschrieben.
Das Peptid [I] kann in Form eines Salzes, vorzugsweise eines pharmakologisch annehmbaren Salzes, eingesetzt werden. Wenn das Peptid basische Gruppen, wie z. B. Amino, aufweist, umfasst das Salz Salze mit anorganischen Säuren z. B. Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure usw.) oder organische Säuren (z. B. Kohlensaure (Carbonat, Hydrogencarbonat), Bernsteinsäure, Essigsäure, Propionsäure, Trifluoressigsäure usw.), und wenn das Peptid saure Gruppen, wie z. B. Carboxyl, aufweist, Salze mit anorganischen Basen (beispielsweise Alkalimetallen, wie z. B. Natrium Kalium usw., und Erdalkalimetallen, wie z. B. Kalzium, Magnesium usw.) oder organischen Basen (z. B. organischen Aminen, wie z. B. Triethylamin, und basischen Aminosäuren wie z. B. Arginin). Das Peptid [I] kann in Form einer Metallkomplexverbindung vorliegen (z. B. Kupferkomplex, Zinkkomplex usw.). Die bevorzugten Salze von Peptid [I] sind Salze mit organischen Säuren (z. B. Kohlensäure (Carbonat, Hydrogencarbonat), Bernsteinsäure, Essigsäure, Propionsäure, Trifluoressigsäure usw.) Am meisten bevorzugt wird das Acetat.
Besonders bevorzugre Spezies von Peptid [I] oder dessen Salz sind folgende:
(1) NacD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH&sub2;, oder dessen Acetat
(2) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro- DAlaNH&sub2; oder dessen Acetat
(3) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro- DAlaNH oder dessen Acetat
(4)
oder dessen Acetat
(5) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et)-Leu-hArg(EL)-Pro-DAlaNH&sub2; oder dessen Acetat.
Im Retard-Präparat kann der Anteil an Peptid [I] neben anderen Faktoren je nach Peptid- Typ, der erwarteten pharmakologischen Wirkung und der Wirkungsdauer variieren und kann im Bereich von etwa 0,01 bis 50 Gew.-%, bezogen auf das biologisch abbaubare Polymer, liegen. Der bevorzugte Bereich beträgt etwa 1 bis etwa 30 Gew.-%.
Es wird nun das biologisch abbaubare Polymer mit Carboxylendgruppen beschrieben.
Ein biologisch abbaubares Polymer (etwa 1 bis 3 g), wurde in einem Gemisch aus Aceton (25 ml) und Methanol (5 ml) gelöst, und unter Einsatz von Phenolphthalein als Indikator wurden die Carboxylgruppen in der Lösung rasch unter Rühren bei Raumtemperatur (20ºC) mit 0,05 N alkoholischer Kaliumhydroxidfösune titriert. Das zahlenmittlere Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung wurde dann anhand der folgenden Gleichung berechnet:
Zahlmittleres Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung = 20.000 · A/B
worin A die Masse an biologisch abbaubarem Polymer (g) ist und B die Menge an 0,05 N alkoholischer Kaliumhydroxidlösung (ml) ist, die bis zum Titrationsendpunkt zuzusetzen ist.
Das Ergebnis der obigen Berechnung wird als zahlenmittleres Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung bezeichnet.
Zur Veranschaulichung ist bei einem Polymer mit Carboxylengruppen, wie beispielsweise nach einem nicht-katalysierten Polykondensationsverfahren unter Wasserabspaltung aus einer oder mehreren α-Hydroxysäuren synthetisiert, das zahlenmittlere Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung etwa gleich dem mittels GPC ermittelten zahlenmittleren Molekulargewicht. Im Gegensatz dazu ist im Fall eines Polymers, das im Wesentlichen keine freien Carboxylendgruppen enthält, wie beispielsweise aus einem zyklischen Dimer nach einem Ringöffnungspolymerisationsverfahren und unter Einsatz eines Katalysators synthetisiert, das zahlenmittlere Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung weitaus größer als das zahlenmittlere Molekulargewicht mittels GPC-Bestimmung. Durch diese Differenz kann ein Polymer mit Carboxylendgruppe deutlich von einem Polymer ohne Carboxylendgruppe unterschieden werden. Somit wird der Begriff "biologisch abbaubares Polymer mit Carboxylendgruppe" hierin so gebraucht, dass damit ein biologisch abbaubares Polymer gemeint ist, bei dem im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht mittels GPC- Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung herrscht.
Wahrend das zahlenmittlere Molekulargewicht mittels Endgruppen-Bestimmung ein absoluter Wert ist, ist das zahlenmittlere Molekulargewicht mittels GPC-Bestimmung ein relativer Wert, der je nach Analyse- und Verfahrensbedingungen (wie z. B. der Art der mobilen Phase und der Säule, der Bezugssubstanz, der gewählten Scheibenbreite, der gewählten Grundlinie usw.) variiert. Daher können die beiden Werte nicht generell numerisch in Korrelation gesetzt werden. Allerdings bedeutet der Begriff "im Wesentlichen Übereinstimmung" zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht durch GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht durch Endgruppen-Bestimmung, dass das bei der Endgruppen-Bestimmung festgestellte zahlenmittlere Molekulargewicht etwa das 0,4- bis 2fache, mehr bevorzugt etwa 0,5- bis 2fache, am meisten bevorzugt etwa 0,8- bis 1,5fache des zahlenmittleren Molekulargewichts durch GPC-Bestimmung ist. Der Begriff "weitaus größer", wie oben gebraucht, bedeutet, dass das zahlenmittlere Molekulargewicht durch GPC-Bestimmung etwa doppelt so groß wie das zahlenmittlere Molekulargewicht durch GPC-Bestimmung oder größer ist.
Das bevorzugte Polymer für die Zwecke der vorliegenden Erfindung ist ein Polymer, bei dem im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht durch GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht durch Endgruppen-Bestimmung herrscht.
Das biologisch abbaubare Polymer gemäß vorliegender Erfindung ist ein Copolymer aus Milchsäure und Glykolsäure.
Die Art der Polymerisation kann Zufalls-, Block- oder Pfropfpolymerisation sein. Wenn eine der obengenannten α-Hydroxysäuren ein optisches Aktivitätszentrum innerhalb des Moleküls aufweist, kann jede beliebige D-, L- und DL-Form eingesetzt werden.
Das Glykolsäure-Copolymer (A) kann nach bekannten Techniken synthetisiert werden, beispielsweise nach dem in der Beschreibung der offengelegten japanischen Patentanmeldung 28521/1986 beschriebenen Verfahren.
Polymilchsäure zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung kann jede beliebige der L- und D-Verbindungen und ein beliebiges Gemisch davon sein. Bevorzugt wird eine Spezies mit einem D-/L-Verhältnis (Mol-%) im Bereich von etwa 75/25 bis etwa 20/80. Das bevorzugtere D-/L-Verhältnis (Mol-%) der Polymilchsäure beträgt etwa 60/40 bis etwa 25/75. Das vorteilhafteste D/L-Verhältnis (Mol-%) der Polymilchsäure beträgt etwa 55/45 bis etwa 25/75. Das gewichtsmittlere Molekulargewicht der Polymilchsäure liegt vorzugsweise im Bereich von etwa 1.500 bis etwa 30.000, mehr bevorzugt etwa 2.000 bis etwa 20.000, insbesondere etwa 3.000 bis etwa 15.000. Der Dispersitätswert der Polymilchsäure beträgt vorzugsweise etwa 1,2 bis etwa 4,0 und mehr bevorzugt etwa 1,5 bis etwa 3,5.
Polymilchsäure kann nach zwei bekannten alternativen Verfahren synthetisiert werden, nämlich einem Verfahren, das Ringöffnungspolymerisation von Lactid, einem Milchsäure-Dimer, umfasst, und einem Verfahren, das Polykondensation unter Wasserabspaltung von Milchsäure umfasst. Für die Herstellung von Polymilchsäure mit relativ niedrigem Molekulargewicht zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung wird das Verfahren bevorzugt, das direkte Polykondensation von Milchsäure unter Wasserabspaltung umfasst. Das Verfahren wird beispielsweise in der offengelegten japanischen Patentanmeldung Nr. 28521/1986 beschrieben.
Das Polymerisationsverhältnis (Milchsäure/Glykolsäure) (in Mol-%) des Copolymers von Milchsäure mit Glykolsäure beträgt vorzugsweise etwa 100/0 bis etwa 40/60. Das bevorzugtere Verhältnis beträgt etwa 90/10 bis etwa 50/50.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht des Copolymers beträgt vorzugsweise etwa 5.000 bis etwa 25.000. Der bevorzugtere Bereich beträgt etwa 7.000 bis etwa 20.000.
Der Dispersitätsgrad (gewichtsmittleres Molekulargewicht / zahlenmittleres Molekulargewicht) des Copolymers beträgt vorzugsweise etwa 1,2 bis etwa 4,0. Der bevorzugtere Bereich beträgt etwa 1,5 bis etwa 3,5.
Das obengenannte Copolymer aus Milchsäure und Glykolsäure kann nach einem bekannten Verfahren synthetisiert werden, beispielsweise nach dem in der offengelegten japanischen Patentanmeldung 28521/1986 beschriebenen Verfahren.
Der Grad von Zersetzung und Verschwinden eines Copolymers von Milchsäure mit Glykolsäure variiert stark mit der Zusammensetzung und dem Molekulargewicht, allgemein gesprochen ist jedoch der Grad von Zersetzung und Verschwinden um so niedriger, je geringer der Glykolsäure-Anteil ist. Daher kann die Dauer der Arzneimittelfreisetzung verlängert werden, indem der Glykolsäureanteil verringert oder das Molekulargewicht erhöht wird. Umgekehrt kann die Dauer der Freisetzung verringert werden, indem der Glykolsäure-Anteil erhöht oder das Molekulargewicht verringert wird. Um ein Präparat mit langfristig (z. B. 1 bis 4 Monate) verzögerter Freisetzung bereitzustellen, ist es vorzuziehen, ein Copolymer aus Milchsäure und Glykolsäure mit einem Polymerisationsverhältnis im oben genannten Bereich und einem gewichtsmittleren Molekulargewicht im oben genannten Bereich zu verwenden. Bei einem Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure mit einer höheren Zersetzungsrate als jener für die obigen Bereiche für Polymerisationsverhältnis und gewichtsmittleres Molekulargewicht ist es schwierig, den Anfangsschub zu regulieren. Im Gegensatz dazu besteht bei einem Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure, das eine niedrigere Zersetzungsrate aufweist als jene innerhalb der genannten Bereiche für Polymerisationsverhältnis und gewichtsmittleres Molekulargewicht, die Tendenz zum Auftreten von Zeitspannen, in denen das Arzneimittel nicht in einer wirksamen Dosis freigesetzt wird.
In der vorliegenden Beschreibung sind mit dem gewichtsmittleren Molekulargewicht und dem Dispersitätsgrad das Molekulargewicht als Polystyrol ausgedrückt, wie durch Gelpermeationschromatographie (GPC) unter Einsatz von 9 Polystyrolen mit einem ge- wichtsmittleren Molekulargewicht von 120.000, 52.000, 22.000, 9.200, 5.050, 2.950, 1.050, 580 und 162 als Bezugswerte bzw. der unter Verwendung dieser Molekulargewichtswerte berechnete Dispersitätswert gemeint. Die obige Bestimmung wurde unter Einsatz von GPC-Säule KF804 L · 2 (Showa Denko), RI Monitor L-3300 (Hitachi) und Chloroform als mobile Phase durchgeführt.
Das Retard-Präparat gemäß vorliegender Erfindung wird hergestellt, indem das Peptid [I] und ein biologisch abbaubares Polymer mit Carboxylendgruppe in einem Lösungsmittel gelöst werden, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und dann das Lösungsmittel entfernt wird.
Das Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, ist ein Lösungsmittel, das nicht nur im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist und das biologisch abbaubare Polymer lösen kann, sondern auch eines, das der resultierenden Polymerlösung ermöglicht, das Peptid [I] zu lösen. Vorzugsweise handelt es sich um ein Lösungsmittel mit einer Löslichkeit in Wasser von nicht mehr als 3 Gew.-% bei Umgebungstemperatur (20ºC). Der Siedepunkt eines solchen Lösungsmittels liegt vorzugsweise nicht höher als 120ºC. Das Lösungsmittel umfasst somit halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Dichlormethan, Chloroform, Chlorethan, Trichlorethan, Tetrachlorkohlenstoff usw.), Alkylether mit 3 oder mehr Kohlenstoffatomen (z. B. Isupropvlether usw.), Fettsäurealkylester (mit 4 oder mehr Kohlenstoffatomen; z. B. Butylacetat usw.) aromatische Kohlenwasserstoffe (z. B. Benzol, Toluol, Xylol usw.) usw. Diese Lösungsmittel können in geeigneten Kombinationen zweier oder mehrerer Spezies eingesetzt werden. Die besonders bevorzugten Lösungsmittel sind halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Dichlormethan, Chloroform, Chlorethan, Trichlorethan, Tetrachlorkohlenstoff usw.). Das am meisten bevorzugte ist Dichlormethan.
Das Entfernen des Lösungsmittels kann nach an sich bekannten Verfahren durchgeführt werden. Beispielsweise kann ein Verfahren eingesetzt werden, welches das Abdampfen des Lösungsmittel bei Atmosphärendruck oder unter allmählicher Druckverminderung unter konstantem Rühren mit einen Propellermischer oder einen Magnetruhrer umfasst, oder ein Verfahren, welches das Abdampfen des Lösungsmittels unter reguliertem Vakuum in einem Rotationsverdampfer umfasst, eingesetzt werden.
Bezug nehmend auf das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung des Retard-Präparats bedeutet Lösen des Peptids [I] und eines biologisch abbaubaren Polymers mit Carboxylendgruppe das Erreichen eines solchen Zustands, dass die resultierende Lösung bei Normaltemperatur (20ºC) leinen visuell sichtbaren Rest an ungelöstem Peptid enthält. In diesem ternären System, das aus dem Peptid [I], biologisch abbaubarem Polymer und Lösungsmittel besteht, hängt die Peptidmenge, die gelöst werden kann, von der Anzahl an Carboxylendgruppen pro Gewichtseinheit des biologisch abbaubaren Polymers ab. Für den Fall, dass das Peptid und die Carboxylendgruppen in einem Verhältnis von 1 : 1 wechselwirken, kann theoretisch die gleiche Molmenge an Peptid wie jene der Carboxylendgruppen gelöst werden. Daher sind Verallgemeinerungen je nach der Kombination von Lösungsmittel und Molekulargewicht des Peptids und des biologisch abbaubaren Polymers schwierig. Bei der Herstellung von Retard-Präparaten kann das Peptid jedoch in einem Bereich von etwa 0,1 bis etwa 100 Gew.-%, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 70 Gew.-%, insbesondere etwa 2 bis etwa 50 Gew.-%, bezogen auf das biologisch abbaubare Polymer, das im Lösungsmittel gelöst ist, gelöst werden.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiters ein Verfahren zur Herstellung eines Retard- Präparats, welches das Lösen eines biologisch abbaubaren Polymers, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxylendgruppen aufweist, worin im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers durch GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers durch Endgruppenbestimmung herrscht, und einem im Wesentlichen wasserunlöslichen phyiologisch aktiven Peptid oder einem Salz davon in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Nasser mischbar ist, und das anschließende Entfernen des Lösungsmittels umfasst.
Das im Wesentlichen wasserunlosliche physiologisch aktive Peptid unterliegt keiner Einschränkung und umfasst natürlich vorkommende, synthetische und halbsynthetische Peptide. Bevorzugt werden physiologisch aktive Peptide, die in ihren Seitenketten eine oder mehrere aromatische Gruppen enthalten (z. B. Gruppen, die von Benzol, Naphtha-1 in, Phenanthren, Anthracen, Pyridin, Pyrrol, Indol usw. stammen). Bevorzugtere physiologisch aktive Peptide sind jene mit 2 oder mehr aromatischen Gruppen in ihren Seitenketten. Besonders bevorzugte physiologisch aktive Peptide sind jene mit 3 oder mehr aromatischen Gruppen in ihren Seitenketten. Diese aromatischen Gruppen können weiters substituiert sein.
Das im Wesentlichen wasserunlösliche physiologisch aktive Peptid zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung ist vorzugsweise ein Peptid, das eine Löslichkeit in Wasser von nicht mehr als 1% aufweist, aus zwei oder mehr Aminosäuren besteht und ein Molekulargewicht von etwa 200 bis 30.000 aufweist. Der Molekulargewichtsbereich beträgt mehr bevorzugt etwa 300 bis 20.000 und noch mehr bevorzugt etwa 500 bis 10.000.
Als Beispiele für das physiologisch aktive Peptid können Antagonisten für luteinisierendes Hormon freisetzendes Hormon (LH-RH) (vergl. Die US-A-4.086.219, 4.124.577, 4.23.997 und 4.31%.815 usw.) Insulin, Somatostatin, Somatostatin-Derivate (vergl. US- A-4.087.390, 4.093.574, 4.100.117, 4.253.998 usw.) Wachstumshormon, Prolactin, Adrenocorticotropes Hormon (ACTH), Melanocyten-stimulierendes Hormon (MSH), Salze und Derivate von Thyroidhormon freisetzendem Hormon (vergl. JP-Kokai S-50- 121273 und S-52-116465), Thyroid-stimulierendes Hormon (TSH), luteinisierendes Hormon (LH), Follikel-stimulierendes Hormon (FSH), Vasopressin, Vasopressinderivate, Oxytocin, Calcitonin, Gastrin, Secretin, Pancreozymin, Cholecystokinin, Angiotensin, Human-Plazenta-Lactogen, Human, Choriones Gonadotropin (HCG), Enkepharin, Enkephalin-Derivate (vergl. US-A-4.277.394, EP-A-31.567), Endorphin, Kytrophin, Tustin, Thymopoietin, Thymosin, Thymostimulin, Thymus-Humor-Faktor (THF), Facteur Thymique Serique (FTS) und dessen Derivate (vergl. US-A-4.229.438), andere Thymus-Faktoren, Tumornekrosefaktor (TNF), Kolonien-stimulierender Faktor (CSF), Motilin, Dynorphin, Bombesin, Neurotensin, Cerulein, Bradykinin, atrialer naturetischer Faktor, Nervenwachstumsfaktor, Zellwachstumfaktor, neurotropher Faktor, Peptide mit Endothelinantagonistischer Aktivität (vergl. EP-A-436.189, 457.195 und 496.452, JP-Kokai H-3- 94692 und 03-130299) sowie Fragmente und Derivate dieser physiologisch aktiven Peptide genannt werden.
Spezifische Beispiele für das physiologisch aktive Peptid sind physiologisch aktive Peptide und Salze, die Antagonisten von luteinisierendes Hormon freisetzendem Hormon (LH-RH) sind und zur Behandlung von Hormon-abhängigen Erkrankungen, wie z. B. Prostatakrebs, Prostata-Hypertrophie, Endometriose, Gebärmuttermyon, vorzeitige Pubertät, Brustkrebs usw. und für die Empfängnisverhütung nützlich sind.
Das physiologisch aktive Peptid zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung kann in Form eines Salzes, vorzugsweise einer pharmakologisch annehmbaren Salzes, vorliegen. Wenn das Peptid eine basische Gruppe, wie z. B. Amino, aufweist, kann das oben genannte Salz beispielsweise das Salz sein, das mit anorganischer Säure (z. B. Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure usw.) oder einer organischen Säure (z. B. Kohlensäure (Carbonat, Hydrogencarbonat), Bernsteinsäure, Essigsäure, Propionsäure, Trifluoressigsäure usw.) gebildet wird. Wenn das Peptid eine saure Gruppe, wie z. B. Carboxyl, aufweist, kann das Salz beispielsweise ein mit einer Base (beispielsweise Alkalimetallen, wie z. B. Natrium, Kalium usw., und Erdalkalimetallen, wie z. B. Kalzium, Magnesium usw.) oder organischer Base (beispielsweise organischen Aminen, wie z. B. Triethylamin usw., und basischen Aminosäuren, wie z. B. Arginin usw.) gebildetes Salz sein. Das Peptid kann weiters in Form eine Metallkomplexverbindung (z. B. Kupferkomplex, Zinkkomplex usw.) vorliegen.
Spezifische Beispiele für das physiologisch aktive Peptid oder Salz davon finden sich in US-Patent Nr. 511.904, Journal of Medicinal Chemistry 34, 2395-2402 (1991), Recent Results in Cancer Research 124, 113-136 (1992), und anderer Literatur.
Weiters können unter anderem auch die physiologisch aktiven Peptide der allgemeinen Formel [I] und Salze davon genannt werden.
Darüber hinaus kann das physiologisch aktive Peptid, auch wenn es wasserlöslich ist, in eine Derivatyerbindung umgewandelt werden, die unlöslich ist, oder in ein unlösliches Salz mit einer wasserunlöslichen Säure (z. B. Pamoasäure, Gerbsäure, Stearinsäure, Palmitinsäure usw.) übergeführt und im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt werden.
Die Menge des physiologisch aktiven Peptids im Präparat gemäß vorliegender Erfindung hängt von der Peptidspezies, der erwarteten pharmakologischen Wirkung, der gewünschten Wirkungsdauer usw. ab. Im Allgemeinen wird es jedoch in einem Anteil von etwa 0,001 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise etwa 0,01 bis 40 Gew.-%, insbesondere etwa 0,1 bis 30 Gew.-%, in Bezug auf die biologisch abbaubare Polymerbasis, eingesetzt.
Das im Verfahren eingesetzte Lösungsmittel ist das gleiche wie oben beschrieben.
Das Entfernen des Lösungsmittels kann auch die gleiche Weise wie oben beschrieben erfolgen.
Das bevorzugte Verfahren zur Herstellung des Retard-Präparats gemäß vorliegender Erfindung ist ein Mikroverkapselungsverfahren unter Einsatz von In-Wasser-Trocknungs- Techniken oder einer Phasentrennungstechnik, was nachstehend beschrieben wird, oder jedes beliebige dazu analoge Verfahren.
Das nachstehend beschriebene Verfahren kann mit Peptid [I] oder mit einem im Wesentlichen wasserunlöslichen physiologisch aktiven Peptid durchgeführt werden, das Peptid [I] umfasst.
So wird Peptid [I] einer Losung des biologisch abbaubaren Polymers in einem organischen Lösungsmittel im für ein solches Peptid bereits erwähnten End-Gewichtsverhältnis zugegeben, um eine Lösung in organischem Lösungsmittel herzustellen, die das Peptid [I] und biologisch abbaubares Polymer enthält. In dieser Zusammensetzung variiert die Konzentration des biologisch abbaubaren Polymers im organischen Lösungsmittel je nach dem Molekulargewicht des biologisch abbaubaren Polymers und dem Typ des organischen Lösungsmittels, wird aber im Allgemeinen aus einem Bereich von etwa 0,01 bis etwa 80 Gew.-% gewählt. Der bevorzugte Bereich beträgt etwa 0,1 bis etwa 70 Gew.-%. Der besonders bevorzugte Bereich beträgt etwa 1 bis etwa 60 Gew.-%.
Dann wird diese Lösung in organischem Lösungsmittel, die das Peptid [I] und biologisch abbaubares Polymer (Ölphase) enthält, einer Wasserphase zugegeben, um eine O(Ölphase)/W(Wasserphase)-Emulsion herzustellen. Das Lösungsmittel der Ölphase wird dann abgedampft, um Mikrokapseln bereitzustellen. Das Volumen der Wasserphase für dieses Verfahren wird im Allgemeinen aus einem Bereich vom etwa ein- bis etwa zum 10.000fachen des Volumens der Ölphase gewählt. Der bevorzugte Bereich beträgt etwa das 2- bis etwa das 5.000fache, und der besonders bevorzugte Bereich beträgt etwa das 5- bis etwa das 2.000fache.
Der obigen Wasserphase kann ein Emulgator zugesetzt werden. Der Emulgator kann allgemein jede beliebige Substanz sein, die zur Bildung einer stabilen O/W-Emulsion beiträgt. So können anionische Tenside (Natriumoleat, Natriumstearat, Natriumlaurylsulfat usw.) nichtionogene Tenside (Polyoxyethylensorbit-Fettsäureester [Tween 80 und Tween 60, Atlas Powder], Polyoxyethylen-Rizinusöl-Derivate [HCO-60 und HCO-50, Nikko Chemicals], usw.), Polyvinylpyrrolidon, Polyvinylalkohol, Carboxymethylcellulose, Lecithin, Gelatine, Hyaluronsäure usw. genannt werden. Diese Emulgatoren können unabhängig voneinander oder in Kombination eingesetzt werden. Die Konzentration kann aus einem Bereich von etwa 0,001 bis etwa 20 Gew.-% gewählt werden. Der bevorzugte Bereich beträgt etwa 0,01 bis etwa 10 Gew.-%, und der besonders bevorzugte Bereich beträgt etwa 0,05 bis 5 Gew.-%.
Die resultierenden Mikrokapseln werden durch Zentrifugation und Filtration gewonnen und mit mehreren Teilmengen von destilliertem Wasser gewaschen, um das freie Peptid, Vehikel und Emulgator von der Oberfläche zu entfernen, dann in destilliertem Wasser oder dergleichen redispergiert und lyophilisiert. Dann werden die Mikrokapseln, falls notwendig, unter reduziertem Druck erhitzt, um das verbleibende Wasser und organische Lösungsmittel weiter aus den Mikrokapseln zu entfernen. Vorzugsweise wird dieses Verfahren durchgeführt, indem die Mikrokapseln in Temperaturschritten von 10 bis 20ºC/min. im Allgemeinen für nicht mehr als 1 Woche oder 2 bis 3 Tage, vorzugsweise nicht mehr als 24 h, nachdem die Mikrokapseln die Zieltemperatur erreicht haben, auf eine Temperatur etwas (5ºC oder mehr) über der mittleren Glastemperatur des biologisch abbaubaren Polymers, wie mittels Differentialscanningkalorimeter ermittelt, erhitzt werden.
Bei der Herstellung von Mikrokapseln durch die Phasentrennungstechnik wird der Lösung von Peptid [I] und des biologisch abbaubaren Polymers in einem organischen Lösungsmittel unter konstantem Rühren allgemein ein Koazervationsmittel zugegeben werden, so dass sich das biologisch abbaubare Polymer abtrennen und verfestigen kann. Dieses Koazervationsmittel wird in einem Volumen des etwa 0,01- bis etwa 100fachen des Volumens der Lösung in organischem Lösungsmittel von Peptid [I] und des biologisch abbaubaren Polymers zugegeben. Der bevorzugte Bereich ist das etwa 0,05- bis etwa 500fache und der besonders bevorzugte Bereich ist das 0,1- bis etwa 200fache.
Das Koazervationsmittel sollte eine Verbindung vom Polymer-, Mineralöl- oder Pflanzenöltyp sein, die mit dem Lösungsmittel für das biologisch abbaubare Polymer mischbar ist, das Polymer jedoch nicht löst. Spezifisch können Silikonöl, Sesamöl, Sojabohnenöl, Maisöl, Baumwollsamenöl, Kokosöl, Leinöl, Mineralöl, n-Hexan, n-Heptan usw. gennant werden. Diese Substanzen können auch in Kombination eingesetzt werden.
Die resultierenden Mikrokapseln werden durch Filtration gewonnen und wiederholt mit Heptan oder dergleichen gewaschen, um das Koazervationsmittel zu entfernen. Dann werden das freie Peptid und das Lösungsmittel nach dem gleichen Verfahren entfernt, wie für die In-Wasser-Trocknungs-Technik beschrieben.
Bei der In-Wasser-Trocknungs-Technik oder der Koazervationstechnik kann ein Aggregationsinhibitor zugegeben werden, um Aggregation von Teilchen zu verhindern. Der Aggregationsinhibitor umfasst wasserlösliche Polysaccharide, wie z. B. Mannit, Lactose, Glucose, Stärke (z. B. Maisstärke) usw., Glycin, Proteine, wie z. B. Fibrin, Kollagen usw., sowie anorganische Salze, wie z. B. Natriumchlorid, Natriumhvdrogenphosphat usw.
Bei der Herstellung von Mikrokapseln durch die Sprühtrocknungstechnik wird die Lösung in organischem Lösungsmittel von Peptid [I] und biologisch abbaubarem Polymer in Form eines Nebels durch eine Düse in die 1 rocknuiigskammer eines Sprühtrockners eingespritzt, um das organische Lösungsmittel rasch aus den feinverteilten flüssigen Tröpfchen zu verdampfen, um feine Mikroteilchen bereitzustellen. Die Düse kann eine Zweistrom-Düse, eine Druckdüse, eine Rotationsscheibendüse usw. sein. Für das Verfahren ist es vorteilhaft, eine wässrige Lösung des Aggregationsinhibitors aus einer anderen Düse einzuspritzen, um die Aggregation zwischen den Kapseln während des Sprühens der Lösung in organischem Lösungsmittel von Peptid [I] und biologisch abbaubarem Polymer zu verhindern.
Falls notwendig werden die Reste an Wasser und organischem Lösungsmittel durch Erhitzen der resultierenden Mikrokapseln unter reduziertem Druck auf die gleiche Weise wie oben beschrieben entfernt. Die Mikrokapseln können unverändert oder zu verschiedenen pharmazeutischen Präparaten zur Verabreichung auf anderen Wegen als peroral (z. B. intramuskuläre, subkutane und Intraorgan-lnjektionen oder -Implantate, nasale, rektale oder uterustransmukosale Abgabesysteme usw.) oder zur oralen Verabreichung (z. B. festen Präparaten, wie z. B. Kapseln (z. B. Hartkapseln, Weichkapseln usw.), Granulat, Pulver usw., und flüssigen Präparaten, wie z. B. Sirupen, Emulsionen, Suspensionen usw.) formuliert verabreicht werden.
Um die Mikrokapseln beispielsweise zur Injektion zu verarbeiten, können die Mikrokapseln mit einem Dispergiermittel (z. B. einem Tensid, wie Tween 80, HCO-60 usw., Carboxymethylcellulose, einem Polysaccharid, wie z. B. Natriunialginat usw.) einem Konservierungsmittel (z. B. Methylparaben, Propylparaben usw.) oder einem Isotonisierungsmittel (z. B. Natriumchlorid, Mannit, Sorbit, Glucose usw.) formuliert werden, um eine wässrige Suspension herzustellen, oder sie können in einem Pflanzenöl, wie z. B. Sesaniöl, Maisöl oder dergleichen, dispergiert werden, um eine Ölsuspension für eine solche Retard-Injektion bereitzustellen.
Die Teilchengröße der Mikrokapseln zur Verwendung als injizierbare Suspensionen braucht nur in jenem Bereich zu liegen, der den Anforderungen bezüglich Dispergierbarkeit und die Möglichkeit des Hindurchgehens durch Nadeln entspricht und kann beispielsweise im Bereich von etwa 0,1 bis etwa 500 um liegen. Der bevorzugte Teilchengrößenbereich liegt bei etwa 1 bis etwa 300 um und liegt noch mehr bevorzugt im Bereich von etwa 2 bis etwa 200 um.
Um die Mikrokapseln als steriles Produkt bereitzustellen, wird das gesamte Herstellungsverfahren einer Sterilitätskontrolle unterzogen, die Mikrokapseln werden durch Gammastrahlen-Einstrahlung sterilisiert oder ein Konservierungsmittel zugegeben, was jedoch nicht die einzigen Verfahren sind.
Neben den obengenannten Mikrokapseln kann eine biologisch abbaubare Polymerzusammensetzung, die das Wirkstoff-Peptid durch eine geeignete Technik gut dispergiert enthält, geschmolzen und in die Form von Kugeln, Barren, Nadeln, Pellets oder Filmen gebracht werden, um ein Retard-Präparat gemäß vorliegender Erfindung bereitzustellen. Die obige biologisch abbaubare Polymerzusammensetzung kann nach dem Verfahren hergestellt werden, das in der JP-Veröffentlichung S-50-17525 geoffenbart wird. Genauer gesagt werden das Peptidarzneimittel und das Polymer in einem Lösungsmittel gelöst, und das Lösungsmittel wird dann durch ein geeignetes Verfahren (z. B. Sprühtrocknen, Flashverdampfung usw.) entfernt, um die gewünschte biologisch abbaubare Polymerzusammensetzung bereitzustellen.
Das Retard-Präparat gemäß vorliegender Erfindung kann als intramuskuläre, subkutane oder Intraorgan-Injektion oder -Implantat, als transmukosales Abgabesystem zur Anwendung in der Nasenhöhle, im Rektum oder Uterus, oder als orales Präparat (z. B. als festes Präparat, wie z. B. als Kapsel (z. B. hart oder weich), Granulat, Pulyer usw., oder als flüssiges Präparat, wie 7 B als Sirup, Emulsion, Suspension usw.) verabreicht werden.
Das Retard-Präparat gemäß vorliegender Erfindung weist geringe Toxizität auf und kann sicher bei Säugetieren (z. B. Menschen, Rindern, Schweinen, Hunden, Katzen, Mäusen, Ratten und Kaninchen) eingesetzt werden.
Die Dosierung des Retard-Präparats hängt vom Typ und Gehalt des aktiven Arzneimittelpeptids, der fertigen Dosisform, der Dauer der Freisetzung des Peptids, dem Ziel der Behandlung (wie z. B. Hormon-abhängige Erkrankungen, z. B. Prostatakrebs, Prostatomegalie, Endometriose, Metrofibrom, vorzeitige Pubertät, Brustdrüsenkrebs usw., oder zur Empfängnisverhütung) und der behandelten Tierspezies ab, in jedem Fall ist es aber notwendig, dass eine wirksame Peptidmenge erfolgreich abgegeben wird. Die Dosiseinheit des aktiven Arzneimittelpeptids, am Beispiel eines Ein-Monats-Abgabesystems, kann vorteilhaftenveise aus einem Bereich von etwa 0,01 bis 100 mg/kg Körpergewicht für einen erwachsenen Menschen gewählt werden. Der bevorzugte Bereich beträgt etwa 0,05 bis etwa 50 mg/kg Körpergewicht. Der besonders bevorzugte Bereich liegt bei etwa 0,1 bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht.
Die Dosiseinheit des Retard-Präparats pro erwachsenem Menschen kann daher aus dem Bereich von etwa 0,1 bis etwa 500 mg/kg Körpergewicht gewählt werden. Der bevorzugte Bereich beträgt etwa 0,2 bis etwa 300 mg/kg Körpergewicht. Die Verabreichungshäufigkeit kann beispielsweise einmal in mehreren Wochen, monatlich oder einmal in mehreren Monaten sein, und kann nach dem Typ und Gehalt des aktiven Arzneimittelpeptids, der fertigen Dosisform, der beabsichtigten Ereisetzungsdauer des Peptids, der zu behandelnden Krankheit und dem behandelten Lebewesen gewählt werden.
Die folgenden Bezugs- und Arbeitsbeispiele sollen die Erfindung im Detail näher beschreiben und sollten keineswegs als den Schutzumfang der Erfindung definierend aufgefasst werden. (Sofern nicht anders angegeben, sind mit "%" Gew.-% gemeint).
Die in der Folge verwendeten Abkürzungen sind wie folgt definiert:
BOC: t-Butoxycarbonyl
FMOC: 9-Fluorenylmethoxycarbonyl
Cbz: Benzyloxycarbonyl

Bezugsbeispiel 1

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 300 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure und 100 g einer 90%igen wässrigen Lösung von L-Milchsäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 4 h von 100 ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduzierten Druck von 3-5 mmHg/ 150-180ºC 7 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was bernsteinfarbene Polymilchsäure ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, der obigen Polymilchsäure betrugen 3.000; 1.790; bzw. 1.297.
Diese Daten zeigten, dass das Polymer Carboxylendgruppen aufwies.

Bezugsbeispiel 2

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 500 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 4 h von 100ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduzierten Druck von 3-5 mmHg/150-180ºC 12 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was bernsteinfarbene Polymilchsäure ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, der obigen Polymilchsäure betrugen 5.000; 2.561; bzw. 1.830.
Diese Daten zeigten, dass das Polymer Carboxylendgruppen aufwies.

Bezugsbeispiel 3

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 300 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure und 100 g einer 90%igen wässrigen Lösung von L-Milchsäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 5 h von 100 ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduziertem Druck von 5-7 mmHg/150-180ºC 18 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was bernsteinfarbene Polymilchsäure ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, der obigen Polymilchsäure betrugen 7.500; 3.563; bzw. 2.301.
Diese Daten zeigten, dass das Polymer Carboxylendgruppen aufwies.

Bezugsbeispiel 4

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 300 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure und 100 g einer 90º/eigen wässrigen Lösung von L-Milchsäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 5 h von 100 ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduziertem Druck von 5-7 mmHg/150-180ºC 26 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was bernsteinfarbene Polymilchsäure ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
e Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, der obigen Polymilchsäure betrugen 9.000; 3.803; bzw. 2.800.
Diese Daten zeigten, dass das Polymer Carboxylendgruppen aufwies.

Bezugsbeispiel 5

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 182,5 g Glykolsäure und 166,6 g D,L-2-Hydroxybuttersäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrorn über einen Zeitraum von 3,5 h von 100ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduziertem Druck von 5-7 mmHg/150-180ºC 26 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was ein bernsteinfarbenes Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymer ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 25ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht, wie durch GPC ermittelt, des resultierenden Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymers betrug 13.000.

Bezugsbeispiel 6

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 197,7 g Glykolsäure und 15,8 g D,L-2-Hydroxybuttersäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 4 h von 100ºC/500 mmHg auf 155ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduzierten Druck von 3-6 mmHg/150-180ºC 27 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was ein bernsteinfarbenes Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymer ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 25ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht, wie durch GPC ermittelt, des resultierenden Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymers betrug 13.000.

Bezugsbeispiel 7

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 212,9 g Glykolsäure und 124,9 g D,L-2-Hydroxybuttersäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 3,5 h von 100ºC/500 mmHg auf 160ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduzierten Druck von 3-6 mmHg/160-180ºC 27 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was ein bernsteinfarbenes Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymer ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 25ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht, wie durch GPC ermittelt, des resultierenden Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymers betrug 11.000.

Bezugsbeispiel 8

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 300 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure und 100 g einer 90%igen wässrigen Lösung von L-Milchsäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 4 h von 100ºC/ 500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduziertem Druck von 3-5 mmHg/150-180ºC 10 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was bernsteinfarbene Polymilchsäure ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, der obigen Polymilchsäure betrugen 4.200; 2.192; bzw. 1.572.
Diese Daten zeigten, dass das Polymer Carboxylendgruppen aufwies.

Bezugsbeispiel 9

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 182,5 g Glykolsäure und 166,6 g D,L-2-Hydroxybuttersäure befüllt, und die Charge wurde unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 3,5 h von 100ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduziertem Druck von 5-7 mmHg/150-180ºC 32 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was ein bernsteinfarbenes Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymer ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 25ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargevicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, der obigen Polymilchsäure betrugen 16.300; 5.620; bzw. 2.904.
Diese Daten zeigten, dass das Polymer Carboxylendgruppen aufwies.

Bezugsbeispiel 10

Synthese von NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)- Pro-DAlaNH&sub2;

Die Bezugsbeispiele 10 und 11 wurden gemäß der Beschreibung von US-Patent Nr. 5.1 10.904 und US-Patentanmeldung Nr. 07/987.921 durchgeführt.
In einen Reaktor eines Peptid-Synthesizers wurde 1 g D-Ala-NH-Harz (4-Methylbenzhydrylamin-Harz) gefüllt, gefolgt von sequentiellen Zugaben von Aminosäuren nach dem folgenden Syntheseverfahren, um das Titel-Peptid zu synthetisieren.

1. Entfernung der Schutzgruppe

Um die BOC-Schutzgruppe von der α-Aminosäure des Peptids zu entfernen, wurde eine Lösung eingesetzt, die aus 45% Trfiluoressigsäure (in der Folge auch als TFA bezeichnet), 2,5% Anisol, 2,0% Dimethylphosphit und 50,5% Dichlormethan bestand. Nachdem das Harz 1 min lang mit der Lösung vorgewaschen worden war, wurde 20 min lang die Reaktion zur Entfernung der Schutzgruppe durchgeführt.

2. Waschen mit basischer Lösung

Um die zum Entfernen der Schutzgruppe eingesetzte Trifluoressigsäure zu entfernen und zu neutralisieren, wurde eine Dichlormethanlösung eingesetzt, die 10% N,N'-Diisopropylethylamin enthielt. Das Harz wurde bei jeder Schutzgruppen-Entfernungsreaktion dreimal 1 min lang gewaschen.

3. Kopplungsreaktion

Eine Kopplungsreaktion wurde durchgeführt, indem als Aktivatoren die 3fache Molmenge an 0,3 M Diisopropylcarbodiimid/Dichlormethan-Lösung und die 3fache Molmenge an 0,3 M BOC-Aminosäurederivat/DMF (N,N'-Dimethyiformamid)-Lösung zugegeben wurde. Die aktivierte Aminosäure wurde an die freie α-Aminogruppe des Peptids auf dem Harz gebunden. Die Reaktionszeiten sind nachstehend angegeben.

4. Waschen

Nach dem Abschluss jedes Reaktionsverfahrens wurde das Harz jeweils 1 min lang mit Dichlormethan, Dichlormethan/DMF und DMF gewaschen.

Synthesevorschrift

Aminogruppen-geschützte Aminosäuren wurden mit der Reihenfolge, der Anzahl an Wiederholungen und für die Zeiten wie nachstehend angegeben an das Harz gebunden.
Nach Beendigung der Synthesereaktion wurde das Harz 4 bis 24 h lang lang mit einer 30 %igen Piperidinlösung in DMF behandelt, um die FMOC-Schutzgruppe zu entfernen. Das Harz wurde mehrmals mit Dichlormethan gewaschen und dann mit Carhonyldiimidazol (0,9 g), gelöst in DMF (18 ml), 15 min lang umgesetzt und dreimal mit Dichlormethan gewaschen, woraufhin es über Nacht mit 2-Furoesäurehydrazid (0,53 g), gelöst in DMF (18 ml), umgesetzt wurde. Das resultierende Peptid-Harz wurde dreinial mit Dichlormethan gewaschen und dann über Nacht in Gegenwart von Phosphorp entoxid getrocknet, woraufhin es mit trockenem Fluorwasserstoff bei 0ºC 1 h lang in Gegenwart von Anisol behandelt wurde, um das Peptid vom Harz abzuspalten. Das überschüssige Reaktionsreagens wurde im Vakuum entfernt. Das so erhaltene Harz wurde zunächst mit Ether gewaschen, dann bei Raumtemperatur für 15 min in 50 ml eines Wasser/Acetonitril/Essigsäure-Gemischs (1 : 1 : 0,1) gerührt und filtriert. Das Filtrat wurde lyophilisiert, was ein ungereinigtes Peptid als flockiges Pulyer ergab. Dieses Peptid wurde mittels Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) unter folgenden Bedingungen gereinigt.
(1) Säule: Dynamax C-18 (25 · 2,5 cm, 8 um)
(2) Lösungsmittel: Acetonitril, über einen Zeitraum von 20 nun abnehmender Gradient von 89% Waser / 11% Acetonitril / 0,1% TFA
(3) Detektionswellenlänge: 260 nm (UV-Verfahren)
Das als eiüzelner Peak bei 25,7 min Retentionszeit detektierte Peptid wurde gesammelt und lyophilisiert, was NcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys- (Nisp)-Pro-DAlaNH&sub2; als Trifluoracetat als gereinigtes Produkt ergab. Die Daten der physikalischen Eigenschaften des gereinigten Produkts waren folgende:
FAB MS ("fast atom bombardment"-Massenspektroskopie; auch in der Folge):
m/e 1591 (M + H)&spplus;

Aminosäureanalyse:

0,98 Ala, 1,02 Pro, 1,58 Lys, 1,00 Leu, 1,12 MNeTyr, 0,52 Ser
Das obige Trifluoracetat des Peptids wurde in das Acetat übergeführt, wobei eine Gelfiltrationssäule eingesetzt wurde, die zuvor mit 1N Essigsäure äquilibriert worden war. Die Gelfiltrationsbedingungen waren die folgenden:
(1) Packung: Sephadex G-25 (Säulen-Innendurchmesser: 16 mm, Packungsbetthöhe: 40 mm)
(2) Lösungsmittel: 1N Essigsäure
(3) Detektionswellenlänge: 254 nm (UV-Verfahren)
Die Fraktion des ersten eluierten Peaks wurde gesammelt und lyophilisiert, was NAcD2- Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH-, als Acetat als gereinigtes Produkt ergab.

Bezugsbeispiel 11

Synthese von NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)- Pro-DAlaNH&sub2;

Das Titel-Peptid wurde auf die gleiche Weise wie in Bezugsbeispiel 10 synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 2-Furoesäurehydrazid durch 2-Nicotinsäurehydrazid (0,575 g) ersetzt wurde. Die HPLC-Retentionszeit des so erhaltenen gereinigten Produktes betrug 16,0 min. Die Daten der physikalischen Eigenschaften des gereinigten Produktes sind folgende:
FAB-MS:
m/e 1592 (M + H)&spplus;

Aminosaureanalyse:

1,02 Ala, 1,01 Pro, 1,61 Lys, 0,99 Leu, 1,12 NMeTyr, 0,48 Ser
Das obige Trifluoracetat des Peptids wurde auf die gleiche Weise wie in Bezugsbeispiel 10 in das Acetat übergeführt.

Bezugsbeispiel 12

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 322 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure und 133 g einer 90%igen wässrigen Lösung von Glykolsäure befüllt, und unter Einsatz eines Heizmantels (So-go Rikagaku Glass Co.) wurde die Charge unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 4 h von 100ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduzierten Druck mit 3-30 mmHg/150-185ºC 23 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was ein Milchsäure-Glykolsäure-Copolymer ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, des obigen Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers betrugen 10.000; 4.000; bzw. 4.000. Diese Daten zeigten, dass das Copolymer ein Polymer mit Carboxylendgruppen war.

Bezugsbeispiel 13

Ein 1.000 ml-Vierhalskolben, der mit Stickstoff-Einleitrohr und Rückflusskühler ausgestattet war, wurde mit 347 g einer 90%igen wässrigen Lösung von D,L-Milchsäure und 226 g Glykolsäure befüllt, und die Charge wurde unter Einsatz eines Herzmantels (So-go Rikagaku Glass Co.) unter reduziertem Druck im Stickstoffgasstrom über einen Zeitraum von 5 h von 100ºC/500 mmHg auf 150ºC/30 mmHg erhitzt, wobei das Destillatwasser kontinuierlich entfernt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem reduzierten Druck von 3-30 mmHg/150-185ºC 23 h lang weiter erhitzt, woraufhin es abgekühlt wurde, was ein Milchsäure-Glykolsäure-Copolymer ergab.
Dieses Polymer wurde in 1.000 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wurde unter stetigem Rühren in warmes Wasser mit 60ºC gegossen. Der resultierende pastöse Polymerniederschlag wurde gesammelt und im Vakuum bei 30ºC getrocknet.
Das gewichtsmittlere Molekulargewicht und das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie mittels GPC ermittelt, sowie das zahlenmittlere Molekulargewicht, wie durch Endgruppen-Bestimmung festgestellt, des resultierenden Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers betrugen 10.000; 3.700; bzw. 3.900. Diese Daten zeigten, dass das Copolymer ein Pol< mer mit Carboxylendgruppen war.

Beispiel 1 (Zu Bezugszwecken)

NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH&sub2; (hergestellt von TAP; in der Folge kurz als physiologisch aktives Peptid A bezeichnet)-Acetat (200 mg) wurde in einer Lösung eines 50 : 50-Gemischs (3,8 g) des in Bezugsbeispiel 5 erhaltenen Glykolsäure-2-Hydroxybuttersäure-Copolymers und der in Beispiel 1 erhaltenen Polymilchsäure in 5,3 g (4,0 ml) Dichlormethan gelöst. Die resultierende Lösung wurde auf 17ºC abgekühlt, in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol (EG-40, Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.) mit 0,1 Gew.-% gegossen, die zuvor auf 10ºC eingestellt worden war, und das Gemisch wurde unter Einsatz eines Turbinen-Homomischers mit 7.000 U/min emulgiert, um eine Öl-in-Wasser-Emulsion herzustellen. Diese O/W-Emulsion wurde bei Raumtemperatur 3 h lang gerührt, um das Dichlormethan zu entfernen. Die Ölphase wurde verfestigt und mit einer Zentrifuge (05PR-22, Hitachi, Ltd.) mit 2.000 U/min gesammelt. Dieser Feststoff wurde in destilliertem Wasser erneut dispergiert und weiter zentrifugiert, um das freie Arzneimittel usw. wegzuwaschen. Die gesammelten Mikrokapseln wurden in einer gerungen Menge an destilliertem Wasser redispergiert, gefolgt von der Zugabe von 0,3 g D-Mannit und Gefriertrocknen, um ein Pulyer bereitzustellen. Die Teilchengrößenverteilung und der Gehalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 5 bis 60 um bzw. 4,7 Gew.-%.
Präparate der foglenden physiologisch aktiven Peptide (1) und (2) wurden auf die gleiche Weise wie oben hergestellt.
(1) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro- DAlaNH&sub2;
(2) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro- DAlaNH&sub2;

Beispiel 1

200 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde einer Lösung eines Milchsäure- Glykolsäure-Copolymers (Milchsäure/Glykolsäure = 75/25 (Mol-%), gewichtsmittleres Molekulargewicht laut GPC = 5.000, zahlenmittlere Molekulargewicht laut GPC = 2.000, zahlenmittleres Molekulargewicht laut Endgruppen-Bestimmung 2.200; Hersteller Wako Pure Chemical (Chargen-Nr. 920729)) in 5,3 g (4,0 ml) Dichlormethan zugegeben und darin gelöst. Die resultierende Lösung wurde auf 17ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol (EG-40, Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.) mit 0,1% gegossen, die zuvor auf 16ºC eingestellt worden war, und das Gemisch wurde unter Einsatz eines Turbinenmischers mit 7.000 U/min eniulgiert, um eine O/W-Emulsion herzustellen. Diese O/W-Emulsion wurde bei Raumtemperatur 3 h lang gerührt, um das Dichlormethan abzudampfen. Die Ölphase wurde verfestigt und mit einer Zentrifuge (05PR-22, Hitachi) bei 2.000 U/min gesammelt. Dieser Feststoff wurde in destilliertem Wasser erneut dispergiert und weiter zentrifugiert, um das freie Arzneimittel usw. wegzuwaschen. Die gesammelten Mikrokapseln wurden in einer geringen Menge an destilliertem Wasser erneut dispergiert, gefolgt von der Zugabe von 0,3 g D-Mannit und Gefriertrocknung, um ein Pulver bereitzustellen. Die Teilchengrößenverteilung und der Gehalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 5 bis 60 um bzw. 4,7 Gew.-%.
Retard-Präparate der folgenden Peptide (1) und (2) wurden auf die gleiche Weise wie oben hergestellt.
(1) Physiologisch aktives Peptid B-Acetat
(2) Physiologisch aktives Peptid C-Acetat

Beispiel 2

200 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde einer Lösung von 3,8 g eines Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers (Milchsäure/Glykolsäure = 75/25 (Mol-%), gewichtsmittleres Molekulargewicht laut GPC = 10.000, zahlenmittleres Molekulargewicht laut GPC = 4.400, zahlenmittleres Molekulargewicht laut Endgruppen-Bestimmung = 4.300; Hersteller Wako Pure Chemical (Chargen-Nr. 880550)) in 6,7 g (5,0 ml) Dichlormethan zugegeben und darin gelöst. Die resultierende Lösung wurde auf 17ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylakohol mit 0,1% gegossen, die zuvor auf 11ºC eingestellt worden war. Daraufhin wurde das Verfahren aus Beispiel 1 wiederholt, um Mikrokapseln bereitzustellen. Die Teilchengrößenverteilung und der Gehalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 5 bis 65 um bzw. 4,5 Gew.-%.

Beispiel 3

400 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde in einer Lösung des in Bezugsbeispiel 12 erhaltenen Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers (3,6 g) in 8,0 g (6,0 ml) Dichlormethan gelöst. Die resultierende Lösung wurde auf 15ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol mit 0,1%, die zuvor auf 14ºC eingestellt worden war, gegossen. Daraufhin wurde das Verfahren aus Beispiel 1 wiederholt, um Mikrokapseln bereitzustellen. Die Teilchengroßenverteilung und der Genalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 5 bis 65 um bzw. 8,2 Gew.-%.

Beispiel 4

400 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde in einer Lösung des in Bezugsbeispiel 13 erhaltenen Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers (3,6 g) in 8,0 g (6,0 ml) Dichlormethan gelöst. Die resultierende Lösung wurde auf 15ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol mit 0,1 52, die zuvor auf 15ºC eingestellt worden war, gegossen. Daraufhin wurde das Verfahren aus Beispiel 1 wiederholt, um Mikrokapseln bereitzustellen. Die Teilchengrößenverteilung und der Gehalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 5 bis 65 um bzw. 8,4 Gew.-%.

Beispiel 5

Leuprorelinacetat (Hersteller: Takeda Chemical Industries; 400 mg) wurde zu einer Lösung desselben Milchsäure-Glykolsäure-Copolymers wie in Beispiel 2 eingesetzt (3,6 g) in 8,0 g (60 ml) Dichlormethan zugegeben, um eine klare homogene Lösung herzustellen. Die resultierende Lösung wurde auf 15ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol mit 0,1% gegossen, die zuvor auf 15ºC eingestellt worden war. Daraufhin wurde das Verfahren aus Beispiel 1 wiederholt, um Mikrokapseln bereitzustellen.

Versuchsbeispiel 1

Etwa 30 mg der in Beispiel 1 erhaltenen Mikrokapseln wurden in 0,5 ml eines Dispersionsmediums (hergestellt durch Lösen von Carboxymethylcellulose (2,5 mg), Polysorbat 80 (0,5 mg) und Mannit (25 mg) in destilliertem Wasser) dispergiert, und die Dispersion wurde unter Einsatz einer 22 G-Nadel subkutan in den Rücken von 10 Wochen alten männlichen SD-Ratten injiziert (die Dosis als Mikrokapseln betrug 60 mg/kg). Nach der Verabreichung wurden die Ratten nacheinander getötet, die Reste an Mikrokapseln wurden aus der Verabreichungsstelle entnommen, und die Menge des physiologisch aktiven Peptids A in den Mikrokapseln wurde ermittelt. Die Ergebnisse sind Tabelle 1 angegeben.

Versuchsbeispiel 2

Unter Einsatz der in Beispiel 2 erhaltenen Mikrokapseln wurde das Verfahren aus Versuchsbeispiel 1 ansonsten wiederholt, und der Rest an physiologisch aktivem Peptid A wurde ermittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben.

Versuchsbeispiel 3

Unter Einsatz der in Beispiel 3 erhaltenen Mikrokapseln wurde das Verfahren aus Versuchsbeispiel 1 ansonsten iwderholt, und der Rest an physiologisch aktivem Peptid A wurde ermittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben.

Versuchsbeispiel 4

Unter Einsatz der in Beispiel 4 erhaltenen Mikrokapseln wurde das Verfahren aus Vers suchsbeispiel 1 ansonsten wiederholt, und der Rest an physiologisch aktivem Peptid A wurde ermittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1
("-": nicht bestimmt)
Tabelle 2 zeigt die linearen Regressionsmodelle, Korrelationskoeffizienten und Freisetzungszeiträume als X-Achsenabschnitte, die aus den Daten in Tabelle 1 ermittelt wurden, welche nach den in Methods of Bioassay (Autor. Akira Sakuma, Tokyo University Press, 5. Juni 1978, S. 111) beschriebenen Verfahren ermittelt wurden. Tabelle 2
Aus den Tabellen 1 und 2 ist ersichtlich, dass das Retard-Präparat gemäß vorliegender Erfindung immer eine im Wesentlichen konstante Freisetzung des Peptids über verschiedene Zeitabschnitte gewährleisten.

Vergleichsbeispiel 1

400 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde zu einer Lösung eines Milchsäure- Glykolsäure-Copolymers (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol-%), gevichtsmittleres Molekulargewicht laut GPC = 14.000, zahlenmittleres Molekulargewicht laut Endgruppen-Bestimmung = 45.000; Hersteller Boehringer-Ingelheim (Chargen-Nr. RG505- 05077); 3,6 g) in 33,2 g (25,0 ml) Dichlormethan zugegeben, aber das physiologisch aktive Peptid A-Acetat konnte nicht erfolgreich gelöst werden.

Vergleichsbeispiel 2

400 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde zu einer Lösung von Milchsäure- Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure 75/25 (Mol-%), gewichtsmittleres Molekulargewicht laut GPC = 18.000, zahlenmittleres Molekulargewicht leut GPC = 8.400, zahlenmittleres Molekulargewicht laut Endgruppen-Bestimmung = 30.000; Hersteller Boehringer-Ingelheim (Chargen-Nr. RG752-15057); 3,6 g) in 8,0 g (6,0 ml) Dichlormethan zugegeben, aber das physiologisch aktive Peptid A konnte nicht erfolgreich gelöst werden. Diese Dispersion wurde auf 17ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol mit 0,1% gegossen, die zuvor auf 15ºC eingestellt worden war, um Mikrokapseln auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 l herzustellen. Die Teilchengrößenvereilung und der Gehalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 10 bis 90 um bzw. 2,5 Gew.-%.

Vergleichsbeispiel 3

400 mg physiologisch aktives Peptid A-Acetat wurde zu einer Lösung von Milchsäure- Glykoisäure-Copolynier (Milchsäure/Glykolsäure = 75/25 (Mol-%), gewichtsmittleres Molekulargewicht laut GPC = 58.000, zahlenmittleres Molekulargewicht laut GPC = 15.000, zahlenmittleres Molekulargewicht laut Endgruppen-Bestimniung = 53.000; Hersteller Boehringer-Ingelheim (Chargen-Nr. RG755-05019); 3,6 g) in 21,2 g (16,0 ml) Dichlormethan zugegeben, aber das physiologisch aktive Peplid A konnte nicht erfolgreich gelöst werden. Diese Dispersion wurde auf 17ºC abgekühlt und in 1.000 ml einer wässrigen Lösung von Polyvinylalkohol mit 0,1% gegossen, die zuvor auf 16ºC abgekühlt worden war, um Mikrokapseln auf die gleiche Weise wie in Beispiel 11 herzustellen. Die Teilchengrößenverteilung und der Gehalt an physiologisch aktivem Peptid A der Mikrokapseln waren 10 bis 90 um bzw. 3,6 Gew.-%.
Wie in den Vergleichsbeispielen 1 bis 3 gezeigt, konnte mit einem Milchsäure-Glykolsäure-Copolymer im Wesentlichen ohne Carboxylendgruppen das Peptid [I] gemäß vorliegender Erfindung nicht erfolgreich gelöst werden.

Vergleichsbeispiel 4

Leuprorelinacetat (Hersteller: Takeda Chemical Industries: 400 mg) wurde zu einer Lösung desselben MilchsäureGlykolsäure-Copolymers wie in Vergleichsbeispiel 2 eingesetzt (3,6 g) in 8,0 g (6,0 ml) Dichlormethan zugegeben, aber das Leuprolerinacetat konnte nicht erfolgreich gelöst werden.
Das Retard-Präparat gemäß vorliegender Erfindung weist eine konstante Freisetzung des Arzneimittels, insbesondere von Peptid [I], über einen langen Zeitraum auf, so dass es zu einer lang anhaltenden und stabilen Wirkung führt. Weiters kann die Dauer der Freisetzung des Arzneimittels leicht reguliert werden, und übermäßige Freisetzung unmittelbar nach der Verabreichung kann gehemmt werden. Genauer gesagt wird die Histamin- Freisetzungsaktivität in Peptid [I] nach der Verabreichung des Retard-Präparats gehemmt. Das Retard-Präparat weist hervorragende Dispergierbarkeit auf. Darüber hinaus ist das Präparat stabil z. B. gegenüber Licht, Wärme, Feuchtigkeit, Verfärbung), weist geringe Toxizität auf und kann daher sicher verabreicht werden.
Nach dem Herstellungsverfahren gemäß vorliegender Erfindung kann leicht in guter Ausbeute ein Retard-Präparat erhalten werden, das ein physiologisch aktives Peptid enthält. Das so erhaltene Retard-Präparat weist eine glatte Oberfläche auf und verfügt über hervorragende Mobilität.

Claims

1. Retard-Präparat, das ein physiologisch aktives Peptid der allgemeinen Formel

worin:

X für eine Acylgruppe steht;

R&sub1;, R&sub2; und R&sub2; jeweils für eine aromatische zyklische Gruppe stehen;

R&sub3; für einen D-Aminosäurerest oder eine Gruppe der Formel

steht, worin R&sub3; eine heterozyklische Gruppe ist;

R&sub5; für eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)a-R&sub5;' steht, worin n = 2 oder 3 ist und R&sub5;' eine gegebenenfalls substituierte Aminogruppe, eine aromatische zyklische Gruppe oder eine O-Glykosylgruppe ist;

R&sub6; eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)n-R&sub6;' ist, worin n = 2 oder 3 ist und R&sub6; eine gegebenenfalls substituierte Aminogruppe ist;

R&sub7; für einen D-Aminosäurerest oder einen Azoglycylrest steht; und

Q für Wasserstoff oder eine Niederalkylgruppe steht;

oder ein Salz davon sowie ein biologisch abbaubares Polymer umfasst, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxylendgruppen aufweist, wobei im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels Endgruppen-Bestimmung herrscht.

2. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin X eine C&sub2;&submin;&sub7;-Alkanoylgruppe ist, die gegebenenfalls mit einer 5- oder 6-gliedrigen heterozyklischen Carboxarnido-Gruppe substituiert ist.

3. Retard-Präparat nach Anspruch 2, worin X eine C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoylgruppe ist, die gegebenenfalls mit einer Tetrahvdrofurylcarboxamido-Gruppe substituiert ist.

Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin X Acetyl ist.

5. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin das Copolymer ein mittels GPC bestimmtes gewichtsmittleres Molekulargewicht von etwa 5.000 bis 25.000 aufweist.

6. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin das Copolymer einen Dispersitätswert von etwa 1, 2 bis 4,0 aufweist.

7. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin der Anteil des physiologisch aktiven Peptids im Bereich von etwa 0,01 bis 50 Gew.-%, bezogen auf das biologisch abbaubare Polymer, liegt.

8. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin das phviologisch aktive Peptid ein LH- RH-Antagonist ist.

9. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin das physiologisch aktive Peptid

Chlorphenyl)alanyl-D-3-(3-Pyridyl)alanyl-Serin-N-Methyltyrosyl-D-(&epsi;-N-Nicotinoyl)lysyl- Leucin-(&epsi;-N-Isopropyl)lysyl-Prolin-D-AlaninNH&sub2; oder dessen Acetat ist.

10. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin das physiologisch aktive Peptid N-Acetyl-D-3-(2-naphthyl)alanyl-D-3-(4-Chlorphenyl)alanyl-D-3-(3-Pyridyl)alanyl-Serin-N- Methyltyrosyl-D-(s-N-Isopropyl)lysyl-Leucin-(&epsi;-N-Isopropyl)lysyl-Prolin-D-Alanin-NH&sub2; oder dessen Acetat ist.

11. Retard-Präparat nach Anspruch 1, worin das physiologisch aktive Peptid N-Acetyl-D-3-(2-Naphthyl)alanvl-D-3-(4-Chlorphenyl)alanvl-D-3-(3-Pyridyl)alanyl-Serin-Tyrosin-Dh-Arginin(Et&sub2;)-Leucin-h-Arginin(Et&sub2;)-Prolin-D-AlaninNH&sub2; oder dessen Acetat ist.

12. Verfahren zur Herstellung eines Retard-Präparats, weiches das Lösen eines physiologisch aktiven Peptids der allgemeinen Formel

worin:

X für eine Acylgruppe steht;

R&sub1;, R&sub2;, und R&sub4; jeweils für eine aromatische zyklische Gruppe stehen;

R&sub3; für einen D-Aminosäurerest oder eine Gruppe der Formel

steht, worin R&sub3;' eine heterozyklische Gruppe ist;

R&sub5; für eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)n-R&sub5;' steht, worin n = 2 oder 3 ist und R&sub5;' eine gegebenenfalls substituierte Aminogruppe, eine aromatische zyklische Gruppe oder eine O-Glykosylgruppe ist;

R&sub6; eine Gruppe der Formel -(CH&sub2;)n-R&sub6;' ist, worin n = 2 oder 3 ist und R&sub6;' eine gegebenenfalls substituierte Aminogruppe ist;

R&sub7; für einen D-Aminosäurerest oder einen Azoglycylrest steht; und

Q für Wasserstoff oder eine Niederalkylgruppe steht;

oder eines Salzes davon sowie eines biologisch abbaubaren Polymers, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxylendgruppen aufweist, wobei im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels Endgruppen-Bestimmung herrscht, in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und das anschließende Entfernen des Lösungsmittels umfasst.

13. Verfahren nach Anspruch 12, welches das Lösen des biologisch abbaubaren Polymers und des physiologisch aktiven Peptids in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und die Zugabe der resultierenden Lösung zu einem wässrigen Medium, um eine O/W-Emulsion bereitzustellen, umfasst.

14. Verfahren zur Herstellung eines Retard-Präparats, welches das Lösen eines biologisch abbaubaren Polymers, das ein Copolymer von Milchsäure mit Glykolsäure ist, worin das Polymer Carboxylendgruppen aufweist, wobei im Wesentlichen Übereinstimmung zwischen dem zahlenmittleren Molekulargewicht des Polymers mittels GPC-Bestimmung und dem zahlenmittleren Molekulargevvicht des Polymers mittels Endgruppenbestimmung herrscht, und eines im Wesentlichen wasserunlöslichen physiologisch aktiven Peptids oder eines Salzes davon in einem Lösungsmittel, das im Wesentlichen nicht mit Wasser mischbar ist, und das anschließende Entfernen des Lösungsmittels umfasst.

15. Verfahren nach Anspruch 14, welches weiters nach dem Lösen des biologisch abbaubaren Polymers und des im Wesentlichen wasserunlöslichen Peptids oder Salzes davon im Lösungsmittel die Zugabe der resultierenden Lösung zu einem wässrigen Medium umfasst, um eine O/W-Emulsion bereitzustellen.