CZ331797A3 - Produkty rezistentní na herbicidy vyvíjené na struktuře založeným způsobem - Google Patents
Produkty rezistentní na herbicidy vyvíjené na struktuře založeným způsobem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ331797A3 CZ331797A3 CZ973317A CZ331797A CZ331797A3 CZ 331797 A3 CZ331797 A3 CZ 331797A3 CZ 973317 A CZ973317 A CZ 973317A CZ 331797 A CZ331797 A CZ 331797A CZ 331797 A3 CZ331797 A3 CZ 331797A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- ahas
- herbicide
- protein
- amino acid
- variant
- Prior art date
Links
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 title claims abstract description 271
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims abstract description 195
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 74
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 72
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 39
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 234
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 168
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 99
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 96
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 84
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 60
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 55
- CAAMSDWKXXPUJR-UHFFFAOYSA-N 3,5-dihydro-4H-imidazol-4-one Chemical compound O=C1CNC=N1 CAAMSDWKXXPUJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 108010042687 Pyruvate Oxidase Proteins 0.000 claims description 38
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 34
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 27
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 26
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 26
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 21
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 21
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 21
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 claims description 19
- -1 sulfonylureas Chemical class 0.000 claims description 16
- WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)OC(C)=O WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 claims description 12
- 239000000626 magnesium lactate Substances 0.000 claims description 12
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-M 2-oxobutanoate Chemical compound CCC(=O)C([O-])=O TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- 239000000555 dodecyl gallate Substances 0.000 claims description 11
- VUQLHQFKACOHNZ-UHFFFAOYSA-N 2-Aceto-2-hydroxybutanoate Chemical compound CCC(O)(C(C)=O)C(O)=O VUQLHQFKACOHNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 102220465585 Insulin-like growth factor II_R128A_mutation Human genes 0.000 claims description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 6
- 102220547673 Sperm acrosome-associated protein 5_R128E_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 claims description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 claims description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 2
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 claims description 2
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 claims 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims 5
- BEXMOORQHNTVJZ-UHFFFAOYSA-N amino(oxo)methanesulfonic acid Chemical class NC(=O)S(O)(=O)=O BEXMOORQHNTVJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 108010000700 Acetolactate synthase Proteins 0.000 abstract description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 abstract 1
- MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N imidazoline Chemical compound C1CN=CN1 MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 101
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 46
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 38
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 36
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 30
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 30
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 30
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 28
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 27
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 27
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 27
- VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N flavin adenine dinucleotide Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@H]([C@H](O)[C@@H]1O)O[C@@H]1CO[P@](O)(=O)O[P@@](O)(=O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C2=NC(=O)NC(=O)C2=NC2=C1C=C(C)C(C)=C2 VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N 0.000 description 25
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 25
- 239000011714 flavin adenine dinucleotide Substances 0.000 description 25
- 229940093632 flavin-adenine dinucleotide Drugs 0.000 description 25
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 22
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 22
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 22
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 22
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000011161 development Methods 0.000 description 21
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 19
- XVOKUMIPKHGGTN-UHFFFAOYSA-N Imazethapyr Chemical compound OC(=O)C1=CC(CC)=CN=C1C1=NC(C)(C(C)C)C(=O)N1 XVOKUMIPKHGGTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 18
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 10
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 10
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 10
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 10
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 10
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 10
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 9
- 241001330029 Pooideae Species 0.000 description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 8
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 8
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 8
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 8
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 7
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 7
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 7
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 7
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 7
- 240000003889 Piper guineense Species 0.000 description 7
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 7
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 7
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 7
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 7
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 7
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Natural products OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 6
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 6
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 6
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 6
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 5
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102220534870 Importin subunit alpha-6_M124E_mutation Human genes 0.000 description 5
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 5
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 5
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 5
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- NUPJIGQFXCQJBK-UHFFFAOYSA-N 2-(4-isopropyl-4-methyl-5-oxo-4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yl)-5-(methoxymethyl)nicotinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(COC)=CN=C1C1=NC(C)(C(C)C)C(=O)N1 NUPJIGQFXCQJBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 description 4
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 102220534911 Importin subunit alpha-6_R199E_mutation Human genes 0.000 description 4
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 4
- 229960004275 glycolic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- ZDXMLEQEMNLCQG-UHFFFAOYSA-N sulfometuron methyl Chemical group COC(=O)C1=CC=CC=C1S(=O)(=O)NC(=O)NC1=NC(C)=CC(C)=N1 ZDXMLEQEMNLCQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YNAGLKOBLOKHEO-VGRMVHKJSA-N (4r,5s,6s,7r)-4,5,6,7,8-pentahydroxy-2-methyloctane-3-thione Chemical compound CC(C)C(=S)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO YNAGLKOBLOKHEO-VGRMVHKJSA-N 0.000 description 3
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 235000002764 Apium graveolens Nutrition 0.000 description 3
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 3
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 3
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 3
- 102220534862 Importin subunit alpha-6_M124I_mutation Human genes 0.000 description 3
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 3
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 3
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 3
- 102220625502 Zinc finger protein SNAI1_R191E_mutation Human genes 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 239000001387 apium graveolens Substances 0.000 description 3
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 2
- 235000005781 Avena Nutrition 0.000 description 2
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 2
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 2
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 240000000047 Gossypium barbadense Species 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 2
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 2
- 239000005566 Imazamox Substances 0.000 description 2
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 240000004628 Lactuca perennis Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 2
- 241000218982 Populus nigra Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 240000000300 Zizania aquatica Species 0.000 description 2
- 235000002636 Zizania aquatica Nutrition 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 2
- GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N cefotaxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)/C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 2
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005971 1-naphthylacetic acid Substances 0.000 description 1
- BECBAQIAXDDXIE-UHFFFAOYSA-M 2-[3-[(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl)methyl]-2-(2-hydroxyethyl)-4-methyl-1,3-thiazol-3-ium-5-yl]ethanol;chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCO)SC(CCO)=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N BECBAQIAXDDXIE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710122462 65 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 241000985517 Abroma <cicada> Species 0.000 description 1
- 240000002460 Abroma augustum Species 0.000 description 1
- 208000033316 Acquired hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000599805 Apium graveolens Secalinum Group Species 0.000 description 1
- 244000153885 Appio Species 0.000 description 1
- 101000852723 Arabidopsis thaliana Acetolactate synthase small subunit 1, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 101000852721 Arabidopsis thaliana Acetolactate synthase small subunit 2, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 244000208946 Arenga pinnata Species 0.000 description 1
- 241000245589 Argyrolobium zanonii Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005340 Asparagus officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000012905 Brassica oleracea var viridis Nutrition 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000002567 Capsicum annuum Nutrition 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241001310890 Ceratina <genus> Species 0.000 description 1
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 description 1
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000015844 Citrullus colocynthis Nutrition 0.000 description 1
- 240000000885 Citrullus colocynthis Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 235000010071 Cucumis prophetarum Nutrition 0.000 description 1
- 244000024469 Cucumis prophetarum Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000000784 Cyclanthera pedata Nutrition 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-LLEIAEIESA-N D-glucaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-LLEIAEIESA-N 0.000 description 1
- 230000026774 DNA mediated transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 235000008496 Drimys aromatica Nutrition 0.000 description 1
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 240000006337 Ecballium elaterium Species 0.000 description 1
- 102000036112 FAD binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091000329 FAD binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000510678 Falcaria vulgaris Species 0.000 description 1
- RXCPQSJAVKGONC-UHFFFAOYSA-N Flumetsulam Chemical compound N1=C2N=C(C)C=CN2N=C1S(=O)(=O)NC1=C(F)C=CC=C1F RXCPQSJAVKGONC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017261 Fritillaria camtschatcensis Nutrition 0.000 description 1
- 101150066516 GST gene Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 235000014751 Gossypium arboreum Nutrition 0.000 description 1
- 240000001814 Gossypium arboreum Species 0.000 description 1
- 241000760637 Gossypium barbadense var. brasiliense Species 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 235000017335 Hordeum vulgare subsp spontaneum Nutrition 0.000 description 1
- 241001299819 Hordeum vulgare subsp. spontaneum Species 0.000 description 1
- 241000282313 Hyaenidae Species 0.000 description 1
- 206010065042 Immune reconstitution inflammatory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102220534916 Importin subunit alpha-6_S653N_mutation Human genes 0.000 description 1
- 235000000177 Indigofera tinctoria Nutrition 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 241000218069 Kokia Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 241000208822 Lactuca Species 0.000 description 1
- 235000007661 Lactuca perennis Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012854 Litsea cubeba Nutrition 0.000 description 1
- 240000002262 Litsea cubeba Species 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 1
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100442582 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) spe-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 1
- 240000008346 Oryza glaberrima Species 0.000 description 1
- 235000007189 Oryza longistaminata Nutrition 0.000 description 1
- 235000005044 Oryza sativa Indica Group Nutrition 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000219098 Parthenocissus Species 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000168036 Populus alba Species 0.000 description 1
- 241001600128 Populus tremula x Populus alba Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 235000014465 Psophocarpus palustris Nutrition 0.000 description 1
- 244000279064 Psophocarpus palustris Species 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 235000001537 Ribes X gardonianum Nutrition 0.000 description 1
- 235000001535 Ribes X utile Nutrition 0.000 description 1
- 235000016919 Ribes petraeum Nutrition 0.000 description 1
- 244000281247 Ribes rubrum Species 0.000 description 1
- 235000002355 Ribes spicatum Nutrition 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000013559 Schnittsellerie Nutrition 0.000 description 1
- 244000110218 Secale montanum Species 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000001231 Streptopus amplexifolius Nutrition 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000492514 Tetragonolobus Species 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- 235000007264 Triticum durum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209143 Triticum turgidum subsp. durum Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010749 Vicia faba Nutrition 0.000 description 1
- 240000006677 Vicia faba Species 0.000 description 1
- 235000002098 Vicia faba var. major Nutrition 0.000 description 1
- 241000219977 Vigna Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 244000193174 agave Species 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000003508 chemical denaturation Methods 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 208000018999 crinkle Diseases 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical class 0.000 description 1
- 238000005213 imbibition Methods 0.000 description 1
- 150000002462 imidazolines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 1
- COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N indigo powder Natural products N1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=C1C(=O)C2=CC=CC=C2N1 COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical class [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- YKNYRRVISWJDSR-UHFFFAOYSA-N methyl oxirane-2-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1CO1 YKNYRRVISWJDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000012900 molecular simulation Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 1
- SGCKSDJIMSBTFY-UHFFFAOYSA-N n-sulfonylformamide Chemical class O=CN=S(=O)=O SGCKSDJIMSBTFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008654 plant damage Effects 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical group OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 102200006403 rs104894095 Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- FZMKKCQHDROFNI-UHFFFAOYSA-N sulfometuron Chemical compound CC1=CC(C)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=N1 FZMKKCQHDROFNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
- C12N15/8278—Sulfonylurea
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B15/00—ICT specially adapted for analysing two-dimensional or three-dimensional molecular structures, e.g. structural or functional relations or structure alignment
- G16B15/20—Protein or domain folding
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B15/00—ICT specially adapted for analysing two-dimensional or three-dimensional molecular structures, e.g. structural or functional relations or structure alignment
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Evolutionary Biology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fertilizers (AREA)
Description
Oblast techniky
Tento vynález se týká na struktuře založeného modelování a vývoje variant kyselina hydroxyoctová syntetasy (AHAS), které jsou rezistentní na imidazoliny a jiné herbicidy, AHAS inhibující herbicidy, jejich AHAS variant, DNA kódující tyto varianty, rostlin, které expr)$ují tyto varianty a metody pro zvládání plevele.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hydroxyoctová syntetasa (AHAS) je enzym, který katalyzuje počáteční krok v biosyntese isoleucinu, leucinu a valinu u bakterií, kvasinek a rostlin. Například, zralá AHAS od Zea Mays je přibližně 599-aminokyselinový protein, který je lokalizován na chloroplastech (viz obrázek 1). Enzym využívá thiamin pyrofosfát (TPP) a flavin adenin dinukleotid (FAD) jako kofaktory a pyruvát jako kofaktory pro vytvoření acetolaktátu. Enzym také katalyzuje kondenzaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu. AHAS je také známá jako acetolaktát syntetasa nebo acetolaktát pyruvát lyasa (karboxylační) a je označen jako EC 4.1.3.18. Aktivní enzym je pravděpodobně alespoň homodimer. Ibdah et al., (Protein Science 3: 479 - S, 1994), v abstraktech, popisuje jeden model pro aktivní místo AHAS.
Mnoho herbicidů včetně imidazolinonových sloučenin jako je imazethapyr (PUPSUITR - Američan Cyanamid Company - Wayne, NJ), na sulfonylmočovině založených sloučenin jako je sulfometuron • · · ··· ·
·· ···· ·· t • · · · · ·· • · ··· · ·t * ♦ · · · ·· • · · · ·· ·· *·* ·· ··· methyl (OUSTR - E.I. du Pont de Nemours and Company
- Wilmington, DE), triazolopyrimidinových sulfonamidů (Broadstrike tm - Dow Elanco; viz Gerwick et al., Pestic. 29: 357 - 364, 1990), sulfamoylmočovin (Rodaway et al., Mechanisms of Selectively of Ac 322, 140 v Paddy Rice, Wheat and Barley, Proceedings of the Brighton Crop Protection Conference
- Weeds, 1993), pyrimidy1-oxy-benzoových kyselin (StableR
- Kumiai Chemical Industry Company, E.I. du Pont de Nemours and Company; viz The Pesticide Manual 10. vydání, str. 888 - 889, Clive Tomlin, vyd., British Crop Protection Council, 49 Downing Street, Parmham, Surrey G49 7PH, United Kingdom), a sulfonyIkarboxamidy (Alvaro et al., U.S. patent č. 4883914) účinkují inhibicí AHAS enzymatické aktivity, (viz Cheleff et al., Science 224: 1443, 1984; LaRossa et al., J. Biol. Chem. 259: 8753, 1984; Ray, Plant Physiol. 75: 827, 11984; Shaner et al., Plant Physiol., 76: 545, 1984). Tyto herbicidy jsou vysoce účinné a neškodné pro prostředí. Jejich použití je v zemědělství nicméně omezeno nedostatkem jejich selektivity, protože plodiny, stejně jako nežádoucí plevel, jsou senzitivní na fytofoxický účinek těchto herbicidů.
Beďbrook et al., U.S: patent č. 5013659, 5141870 a 5378824, popsal několik sulfonylmočovin rezistentních na AHAS varianty. Nicméně, tyto varianty byly získány bud mutagenizováním rostlin, semen nebo buněk a selekcí mutantů rezistentních na herbicidy, nebo byly odvozeny od takových mutantů. Tento přístup je nepředvídatelný v tom, že spoléhá (alespoň z počátku) na náhodnou šanci zavedení relevantní mutace, spíše než na racionální přístup ve vývoji založený na strukturálním modelu cílového proteinu.
• · • · ·· a kompozice, «· • ·· ··· · · • · · ·· ·€ ·
Tak zde stále ještě existuje potřeba pro metody které poskytují selektivní širokospektrou a/nebo specifickou rezistenci na herbicidy u kultivovaných plodin. Vynálezci objevily, že variantní formy AHAS selektivně rezistentní na herbicidy a rostliny, které je obsahují, mohou být připraveny na struktuře založeným modelováním AHAS proti pyruvát oxidase (POX), identifikováním herbicid vazebných míst na AHAS modelech a projektováním specifických mutací, které mění afinitu herbicidu pro vazbu na vazebné místo. Tyto varianty a rostliny nejsou inhibovány nebo zabíjeny jednou nebo více třídami herbicidů a zachovávají dostatečnou AHAS enzymatickou aktivitu pro podporu růstu plodiny.
Popis obrázků na připojených výkresech
Obrázek 1 je ilustrací sekvence 600 aminokyselin korespondujících přibližně 599 aminokyselinové sekvenci kyselina hydroxyoctová syntetasy (AHAS) z Zea Mays, která je dána jako příklad AHAS enzymu. Sekvence nezahrnuje transitní sekvenci a zvláštní glycin je pozůstatek ze štěpícího místa pro trombin. Zbytky Met53, Argl28 a Phel35 jsou uvedeny tučně.
Obrázek 2 je ilustrací sestavení sekvence kukuřičné AHAS a pyruvát oxidasy (POX) z Lactobaci1lus planarum.
Obrázek 3 je schematickou representací sekundární struktury AHAS podjednotky. Rádné elementy sekundární struktury, α-šroubovice a β-listu, jsou znázorněny jako kroužky a elipsy, v příslušném pořadí, a jsou počítány separátně pro každou ze tří domén podjednotky. Regiony smyček a závitů jsou reprezentovány černou linkou, s čísly reprezentujícími přibližné začátky a ······ φ φ · φ« ·· • · · φφφφ φφφφ • φφφφ φ · · · φφφ • · φφφ φ φ φ φφφφ φ •φ φφφφ φφφ • Φ ·♦· φφ φφφ «φ φφ konce elementů. Umístění vazebných míst pro kofaktor a známých mutačních míst je ukázáno oktahedrony a hvězdičkami, v příslušném pořadí.
Obrázek 4 ilustruje počítačem generovaný model aktivního místa kukuřičné AHAS s imazethapyrem (PURRSUITR herbicid) modelovaným do vazebného místa.
Obrázek 5 je ilustrací homologie mezi AHAS aminokyselinovou sekvencí odvozenou z různých druhů rostlin. pAC 751 je kukuřičný ais 2 AHAS izonezym jak je exprivován z pAC 751 E. coli expresního vektoru jak je uvedeno na obrázku 1; kukuřičný ais 2 je kukuřičný ais 2 AHAS izoenzym; kukuřičný ais 1 je kukuřičný ais 1 AHAS izoenzym; Tabák 1 je tabákový AHAS SurB izoenzym; Athcsr 12 je Arabinopsis thaliana Csr 1.2. AHAS gen; Bnaal 3 je Brassica napus AHAS III izoenzym; a Bnaal 2 je Brassica napus AHAS II izoenzym.
pAC 751 a kukuřičný ais 2 jsou identické geny s tou výjimkou, Že kukuřičný ais 2 začíná v počátku transitní sekvence a pAC 751 začíná v putativním zralém N-terminálním místě a dalším glycinem na N-konci v důsledku sekvence rozpoznávající trombin v pGEX-2T expresním vektoru. N-terminální glycin není zralou aminokyselinou v této pozici.
Sestavení aminokyselinové sekvence AHAS proteinů bylo generováno PILEUP (GCG Package - Genetics Computer Group, lne., - University Research Park - Madison-WI). Konsensuální sekvence byla generována PRETTY GCG Package).
Obrázek 6 je fotografickou ilustrací SDS-polyakrylamidového
• ·· ·· • · · · · · • · · · · • · · · · · · • · 9 ·
99· « · ·· gelu barveného na proteiny ukazující purifikaci kukuřičné AHAS. Linie obsahují (zleva doprava): A, markey molekulové hmotnosti; B, surový extrakt z E. coli; C, glutathion agarosa afinitně purifikovaný přípravek; D: trombinové trávení afinitně purifikovaného přípravku; E: druhý běh přes glutathion-agarosovou kolonu a Sephacryl S-100 gelovou filtraci.
Obrázek 7 je grafickým znázorněním výsledků in vitro testů na enzymatickou aktivitu přirozených a mutantních AHAS proteinů za absence a za přítomnosti zvýšených koncentrací imazethapyru (PURRSUITR herbicid). Osa Y representuje % aktivity mutantního enzymu, kde 100% hodnota je měřena za absence inhibitoru.
Obrázek 8 je grafickou ilustrací výsledků in vitro testů na enzymatickou aktivitu přirozených a mutantních AHAS proteinů za absence a za přítomnosti zvýšených koncentrací sulfometuron methylu (OUSTR herbicid). Osa Y representuje % aktivity mutantního enzymu, kde 100% hodnota je měřena za absence inhibitoru.
Obrázek 9 je grafickou ilustrací výsledků in vitro testů na enzymatickou aktivitu přirozených a mutantních AHAS proteinů od Arabidopsis za absence a za přítomnosti zvýšených koncentrací imazethapyru (PURSUITR herbicide) a sulfometuron methylu (OUSTR herbicid). Osa Y reprezentuje % aktivity mutantního enzymu, kde 100% hodnota je měřena za absence inhibitoru.
Obrázek 10 je grafickou ilustrací výsledků in vitro testů na enzymatickou aktivitu přirozeného AHAS proteinu a Metl24His mutantního AHAS proteinu od Arabidopsis za absence a za přítomnosti zvýšených koncentrací imazethapyru (PURSUITR herbicid) a sulfometuron methylu (OUSTR herbicid). Osa
Y representuje % aktivity mutantního enzymu, kde 100% hodnota je měřena za absence inhibitoru.
Obrázek 11 je grafickou ilustrací výsledků in vitro testů na enzymatickou aktivitu přirozeného AHAS proteinu a Argl99Glu mutantního AHAS proteinu od Arabinopsis za absence a za přítomnosti zvýšených koncentrací imazethapyru (PURSUITR herbicid) a sulfometuron methylu (OUST® herbicid). Osa Y representuje % aktivity mutantního enzymu, kde 100% hodnota je měřena za absence inhibitoru.
Obrázek 12 je schematickou ilustarcí DNA vektoru použitého pro transformaci rostlin, kde tento vektor obsahuje nptll gen (kódující rezistenci na kanamycin) pod kontrolou 35S promotoru a AHAS gen (přirozený nebo variantní) pod kontrolou Arabidopsis AHAS promotoru.
Obrázek 13 je fotografie ukazující vývoj výhonků tabákových rostlin transformovaných Arabidopsis AHAS genem obsahujícím bud Metl24Ile nebo Argl99Glu mutaci a netransformovaných kontrol. Rostliny byly kultivovány po 18 dnů po přenesení do media obsahujícího 0,25 μΜ imazethapyru.
Obrázek 14 je fotografie ukazující tabákové rostliny transformované Arabidopsis AHAS genem obsahujícím bud Metl24Ile, Metl24His nebo Argl99Glu mutaci a netransformovaných kontrol, které byly postřikovány dvakrát dávkou (100 g/ha) imazethapyru.
Obrázek 15 je fotografie ukazující výsledky germinačních testů provedených za přítomnosti herbicidu CL 299,263
Ί
• · · ··· · » • · · · · • · · · · e· * · · » ·· • · · ·· * · · · · «· (imazamox), které byly provedeny na semenech získaných primárních transformantú tabákových rostlin, které byly transformovány Arabidopsis AHAS genem obsahujícím jednu z Metl24Ile, Metl24His nebo Argl99Glu mutací.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje na struktuře založenou modelační metodu pro produkci AHAS variantních proteinů rezistentních na herbicidy. Metoda obsahuje:
(a) sestavení cílového AHAS proteinu na pyruvát oxidasovém templátu nebo tomuto ekvivalentní AHAS modelování pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) modelování jednoho nebo více herbicidů do trojrozměrné struktury pro lokalizaci vazebného místa pro herbicid v cílovém AHAS proteinu;
(c) selekci alespoň jedné aminokyselinové pozice v cílovém AHAS proteinu jako cíle pro mutaci, kde mutace pozměňuje afinitu alespoň jednoho herbicidu k vazebnému místu;
(d) mutaci DNA kódující cílový AHAS protein pro produkci mutantní DNA kódující variantní AHAS obsahující mutaci, jako je, například, alespoň jedna odlišná aminokyselina v pozici; a (e) expresi mutované DNA v jedné buňce, za podmínek, za kterých je produkován variantní AHAS obsahující mutaci, jako je, například, odlišná aminokyselina(y) v pozici.
• · · · · · • · · * · · · « • · · * • · · ♦ ♦ kt·
• ·« ·· • · · · · · • · · · · • · · · · · · • · · · ··· ·· ··
Metoda může dále obsahovat:
(f) expresi DNA kódující přirozený AHAS protein paralelně ve druhé buňce;
(g) purifikaci přirozených a variantních AHAS proteinů z buněk;
(h) testování přirozených a variantních AHAS proteinů na katalytickou aktivitu v konversi pyruvátu na acetolaktát nebo v kondenzaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, za absence a za přítomnosti herbicidu, a (i) opakování kroků (c) - (h), kde je DNA kódující AHAS variantu v kroku (e) použita jako AHAS kódující DNA v kroku (c) , dokud není identifikován první AHAS variantní protein rezistentní na herbicid, který má vlastnosti:
(i) za absence alespoň jednoho herbicidu (a) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, která je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a ·· ·· •· « ♦ •· «· • · · · ·· • *· • ·· 4 (ii) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než přirozená AHAS.
Je také poskytnuta alternativní na struktuře založená modelační metoda pro produkci AHAS variantních proteinů rezistentních na herbicidy. Tato metoda obsahuje:
(a) sestavení cílového AHAS proteinu na prvním AHAS templátu odvozeném od polypeptidů majícím sekvenci podle obrázku 1 nebo jeho funkčního kvivalentu pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) modelování jednoho nebo více herbicidu do trojrozměrné struktury pro lokalizaci vazebného místa pro herbicid v cílovém AHAS proteinu;
(c) selekci alespoň jedné aminokyselinové pozice v cílovém AHAS proteinu jako cíle pro mutaci, kde mutace pozměňuje afinitu alespoň jednoho herbicidu k vazebnému místu;
(d) mutaci DNA kódující cílový AHAS protein pro produkci mutantni DNA kódující variantní AHAS obsahující mutaci v pozici; a (e) expresi mutované DNA v jedné buňce, za podmínek, za kterých je produkován variantní AHAS obsahující mutaci v pozici.
Tato metoda může dále obsahovat:
(f) expresi DNA kódující přirozený AHAS protein paralelně ve druhé buňce;
• · · · · · • · · • · · · · • v · • · · ♦ · * · »
·· 9
9999 •· · · • ·· 9 • · · · 99
99
9999 (g) purifikaci přirozených a variantních AHAS proteinů z buněk;
(h) testování přirozených a variantních AHAS proteinů na katalytickou aktivitu v konverzi pyruvátu na acetolaktát nebo v kondensaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, za absence a za přítomnosti herbicidu; a (i) opakování kroků (c) - (h), kde je DNA kódující AHAS variantu v kroku (e) použita jako AHAS kódující DNA v kroku (c), dokud není identifikován první AHAS variantní protein rezistentní na herbicid, který má vlastnosti:
(i) za absence alespoň jednoho herbicidu (a) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid také exprivovaným v buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, která je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a (ii) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než přirozená AHAS.
V jiném alternativním provedení metoda obsahuje:
1 • · ♦
templátu a majícím ··
AHAS ·· ·· • · · • · ·· ··· · • · ·· ·· • · · · · · * · · * · · · · * · · • · · «· *·· (a) sestavení cílového AHAS proteinu na prvním majícím identifikované vazebné místo pro herbicid sekvenci podle obrázku 1 nebo jeho funkčním ekvivalentu pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) selekci alespoň jedné aminokyselinové pozice v cílovém
AHAS proteinu jako cíle pro mutaci, kde mutace pozměňuje afinitu alespoň jednoho herbicidu k vazebnému místu;
(c) mutaci DNA kódující cílový AHAS protein pro produkci mutantní DNA kódující variantní AHAS obsahující mutaci v pozici; a (d) expresi mutované DNA v jedné buňce, za podmínek, za kterých je produkován variantní AHAS obsahující mutaci v pozici.
Tato metoda může dále obsahovat:
(e) expresi DNA kódující přirozený AHAS protein paralelně ve druhé buňce;
(f) purifikaci přirozených a variantních AHAS proteinů z buněk;
(g) testování přirozených a variantních AHAS proteinů na katalytickou aktivitu v konverzi pvruvátu na acetolaktát nebo v kondensaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, za absence a za přítomnosti herbicidu; a (h) opakování kroků (b) - (g), kde je DNA kódující AHAS variantu v kroku (d) použita jako AHAS kódující DNA v kroku (b), ·» 9 9 9 9
4 4 ···
4444 •4 •99 •9 · 9 •9 •· · · dokud není identifikován první AHAS variantní protein rezistentní na herbicid, který má vlastnosti:
(i) za absence alespoň jednoho herbicidu (a) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid také exprivovaným v buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, která je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a (ii) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než přirozená AHAS.
V preferovaném provedení výše uvedených metod je katalytická aktivita za absence herbicidu alespoň okolo 5 % a lépe více než asi 20 % katalytické aktivity přirozené AHAS. Pokud je herbicid imidazo1 inonový herbicid, pak AHAS variantní protein rezistentní na herbicid preferovaně má:
(i) katalytickou aktivitu za absence herbicidu vyšší než asi 20 % katalytické aktivity přirozené AHAS;
(ii) katalytickou aktivitu, které je relativně více rezistentní na přítomnost imidazolinonových herbicidů ve · 0 0 0 0 0 0 0 · · 0 0 • 00 0 * · · 0 0 0 0 • 0 0 0 0 · · 0 0 ·«· • 9 0 0 0 · · 0 · 0 · · 0 «· 0 0 0 0 · 0 » ♦ · ··· 00 000 0 0 <0 srovnání s přirozenou AHAS; a ( i i i ) katalytickou aktivitu, která je relativné více citlivá na přítomnost sulfonylmočovinových herbicidů ve srovnání s imidazolinonovými herbicidy.
Předkládaný vynález dále poskytuje izolovanou DNA kódující variantní proteiny kyselina hydroxyoctová syntetasy (AHAS), kde variantní proteiny obsahují AHAS proteiny modifikované:
(i) substitucí alespoň jednoho různého aminokyselinového zbytku v aminokyselinovém zbytku sekvence podle obrázku 1
| vybraného ze | ! skupiny, která se | skládá z P48, G49, S52, | M53 , | |||||
| A84, A95, T96, S97, G98, | P99, | G100, | A10 1 , | V125, | R127, | R128, | ||
| M129, 1130, | G131 , | T132, | D1 33 , | F135, | Q136 , | D186, | 1187, | T259, |
| T260, L261, | M262, | G263 , | R267, | M277, | L278 , | G279, | H281 , | G282 , |
| T283, V284, | G300, | V301 , | R302, | F303 , | D304, | R306, | V307, | T308, |
| G309, K310, | 1311 , | E312, | A313, | F31 4, | A31 o, | S316, | R317, | A318, |
| K319, 1320, | E329, | 1330, | K332, | N333 , | K334 , | 0335, | T404 , | G413 , |
| V414, G415, | Q416, | H417, | Q418, | M419, | W420, | A421 , | A42 2, | L434, |
| S435, A437, | G438, | L439 , | G440, | A441 , | M442 , | G443, | D467, | S468 , |
| S469, L471, | N473, | L477, | M479 , | Q495 , | H496, | L497, | G498, | M499 , |
| V501, Q502, | Q504, | D505 , | R506, | Y508, | K509, | A510, | N511 , | R512, |
| A513, H514, | T515, | S524 , | H572, | Q573 , | E574 , | H575, | V576, | L577, |
| P578. M579, | 1580, | P581 , | G583, | G584, | funkč | nich ekvivalentů |
kteréhokoliv z výše uvedených a jakékoliv kombinace kteréhokoliv z výše uvedených.
(ii) delecí více než 5 aminokyselinových zbytků předcházejících, nebo více než 5 aminokyselinových zbytků následujících alespoň jednomu aminokyselinovému zbytku • · ····
sekvence podle obrázku 1 vybraného ze skupiny, která se skládá
| z P48 | . G49, | S52, | M53, E54, A84, A95 | , T96, | S97, | G98, P99, G100, | |||
| A1 0 1 , | V125, | R127, | R128, | M129, | 1130, | G131 , | TI32, | D133 , | F135, |
| Q13 6 , | D186, | 1187, | T259, | T260, | L261 , | M262, | G263 , | R267, | M277, |
| L278 , | G279 , | H281 , | G282 , | T283, | V284 , | G300, | V301 , | R302, | F303, |
| D304, | R306, | V307, | T308, | G309, | K310, | 1311 , | E312, | A313 , | F314, |
| A3 1 5 , | S3 1 6, | R317, | A318, | K319, | 1320, | E329, | 1330, | K332, | N333 , |
| K334, | 0335, | T404, | G413 , | V414, | G4 1 5, | Q416 , | H417, | Q41 8, | M419, |
| W420 , | A421 , | A422, | L434, | S435, | A437, | G438, | L439, | G440, | A441 , |
| M442 , | G443 , | D467, | S468, | S469, | L471 , | N473 , | L477, | M479, | Q495, |
| H496, | L497, | G498, | M499, | V501 , | Q502, | Q504, | D505, | R506, | Y508, |
| K509, | A510, | N51 1 , | R512, | A513, | H514, | T515, | S524, | H572, | Q573, |
| E574, | H575, | V576, | L577, | P578, | M579, | 1580, | P581 , | G583, | G584, |
| funkčních ekvivalentů kteréhokoliv | z výše | uvedených a | j akéko1 iv |
kombinace kteréhokoliv z výše uvedených;
(iií) delecí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(iv) adicí alespoň funkčního ekvivalentu (v) delecí alespoň funkčního ekvivalentu jednoho aminokyselinového mezi Q124 a H150 sekvence jednoho aminokyselinového mezi G300 a D324 sekvence zbytku nebo jeho podle obrázku 1;
zbytku nebo jeho podle obrázku 1;
(vi) adicí alespoň funkčního ekvivalentu nebo jednoho aminokyselinového mezi G300 a D324 sekvence zbytku nebo jeho podle obrázku 1:
(vi i) jakoukoliv kombinací kteréhokoliv z výše uvedených.
V tomto systému počítání koresponduje zbytek č. 2 putativnímu aminokyselinovému konci zralého proteinu, t.j. po odstranění chloroplast zaměřujícího peptidu.
Výše uvedené modifikace jsou zaměřeny na změnění schopnosti herbicidu, a preferovaně imidazolinonového herbicidu, Ínhibovat enzymatickou aktivitu proteinu. V preferovaném provedení kóduje izolovaná DNA na herbicidy rezistentní variantu AHAS. Také jsou poskytnuty DNA vektory obsahující DNA kódující tyto AHAS varianty, varianty AHAS proteinů samotné, a buňky, kultivované in vivo nebo v buněčné kultuře, které exprivují AHAS varianty nebo obsahují tyto vektory.
V jiném aspektu poskytuje předkládaný vynález metodu pro udělení rezistence na herbicidy buňkám nebo buňce a zejména rostlině buňce nebo buňkám jako jsou například semena. AHAS gen, preferovaně Arabidopsis thaliana AHAS gen, je mutován pro pozměnění schopnosti herbicidu ínhibovat enzymatickou aktivitu AHAS. Mutantní gen je klonován do kompatibilního expresního vektoru a gen je transformován do buňky citlivé na herbicidy za podmínek, za kterých je exprivován v dostatečné hladině pro udělení rezistence na herbicidy buňce.
Také jsou poskytovány metody pro kontrolu plevele, kde plodina obsahující AHAS gen rezistentní na herbicidy podle předkládaného vynálezu je kultivována a ošetřována plevel kontrolujícím účinným množstvím herbicidu.
Také je popsána na struktuře založená modelační metoda pro přípravu prvního herbicidu, který inhibuje AHAS aktivitu. Metoda obsahu j e:
·· ···· ·· • · ·· • · · • · · · • · • · · · (a) sestavení cílového AHAS proteinu na pyruvát oxidasový templát nebo AHAS modelování jeho funkčního ekvivalentu pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) modelování druhého herbicidu majícího AHAS inhibiční aktivitu do trojrozměrné struktury pro odvození umístění, struktury vazebného místa pro herbicid nebo jejich kombinace v cílovém AHAS proteinu; a (c) vývoj non-peptidového prvního herbicidu, který bude interagovat s, a preferovaně se bude vázat na, AHAS aktivitu inhibující účinnou část vazebného místa, kde první herbicid inhibuje AHAS aktivitu dostatečně pro porušení životaschopnosti buněk, které vyžadují AHAS aktivitu pro svou životaschopnost.
Alternativní na struktuře založená modelační metoda pro přípravu prvního herbicidu, který inhibuje AHAS aktivitu, je také popsána. Metoda obsahuje:
(a) sestavení cílového AHAS proteinu na první AHAS templát odvozený od polypeptidů majícího sekvenci podle obrázku 1 nebo jeho funkčního ekvivalentu, pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) modelování druhého herbicidu majícího AHAS inhibiční aktivitu do trojrozměrné struktury pro odvození umístění, struktury vazebného místa pro herbicid nebo jejich kombinace v cílovém AHAS proteinu; a (c) vývoj non-peptidového prvního herbicidu, který bude interagovat s, a preferovaně se bude vázat na, AHAS aktivitu
Γ7
inhibující účinnou část vazebného místa, kde první herbicid inhibuje AHAS aktivitu dostatečně pro porušení životaschopnosti buněk, které vyžadují AHAS aktivitu pro svou životaschopnost.
Preferovaně v každé metodě obsahuje první herbicid alespoň jednu funkční skupinu, která interaguje s funkční skupinou vazebného místa.
zahrnuje racionální vývoj nebo na
Předkládaný vynález struktuře založené modelování modifikovaných verzí enzymu AHAS a AHAS inhibujících herbicidů. Tyto modifikované enzymy (AHAS) variantní proteiny) jsou Předkládaný vynález také varianty, vektory proteiny a buňky, poskytnuty metody pro produkci rezistence na herbicidy u rostlin které rez i s tentní zahrnuj e obsahuj í které exprivují
DNA, tyto tyto na účinek herbicidů, které kóduj í tyto DNA, AHAS variantní varianty. Dále jsou exprivováním těchto variant a metody pro kontrolu plevele. DNA a AHAS varianty podle předkládaného vynálezu byly objeveny ve studiích, které byly založeny na molekulárním modelování struktury AHAS.
Racionální na struktuře založený vývoj AHAS variant a AHAS inhibujících herbicidů
Na herbicidy rezistentní varianty AHAS podle předkládaného vynálezu jsou použitelné v udílení rezistence na herbicidy rostlinám, a mohou být projektovány s POX modelem, AHAS modelem nebo jejich funkčními ekvivalenty, jako jsou například transketolasy, karboligasy, pyruvát dekarboxylasy, proteiny, které váží FAD a/nebo TPP jako kofaktor, nebo jakékoliv proteiny, které mají strukturální vlastnosti podobné k POX ·· • · · ·· · · • · • · · · aúnebo AHAS; s AHAS modelem jako je model mající sekvenci podle obrázku 1; nebo s funkčním ekvivaletem sekvence podle obrázku 1 včetně varianty modelované z předchozího modelu. Proteiny, které mohou být použity, obsahují jakékoliv proteiny mající méně než kořenovou průměrnou čtvercovou odchylku menší než 3,5 angstromů ve svých Ca uhlících ve vztahu k jakékoliv z výše uvedených molekul. Na AHAS zaměřené herbicidy mohou být podobně modelovány z těchto templátů. Funkční ekvivalent AHAS aminokyselinové sekvence je sekvence mající významnou, t.j. 60 - 70% homologii, zejména v konzervovaných regionech jako je, například, putativní vazebné místo. Stupeň homologie může být určen jednoduchým sestavením baží na programu známém v oboru, jako je, například, GAP a PILEUP s GCG. Homologie znamená identické aminokyseliny nebo konzervativní substituce. Funkční ekvivalent určitého aminokyselinového zbytku v AHAS proteinu podle obrázku 1 je aminokyselinový zbytek jiného AHAS proteinu, který, když je seřazen se sekvencí podle obrázku 1 programem v oboru známým, jako je například GAP a PILEUP s GCG, je ve stejné pozici jako aminokyselinový zbytek podle obrázku 1.
Kroky racionálního vývoje typicky obsahují: (1) sestavení cílového AHAS proteinu s POX pozadím nebo strukturou nebo s AHAS pozadím nebo strukturou; (2) volitelně, a pokud má AHAS pozadí identifikované vazebné místo pro herbicid, modelování jednoho nebo více herbicidů do trojrozměrné struktury pro lokalizaci vazebného místa pro herbicid do cílového proteinu; (3) selekci mutace na základě modelu; (4) místně řízenou mutagenesi; a (5) expresi a purifikaci variant. Další kroky mohou zahrnovat (6) testování enzymatických vlastností a (7) hodnocení vhodných variant srovnáním s vlastnostmi přirozeného typu AHAS. Každý krok je diskutován odděleně dále.
• · ···· ·· • · · · · • · · · · · · • · · · · · • · · · · • · · · · 4 4 • 4 4 • 4 4 Φ
1. Molekulární modelování
Techniky molekulárního modelování (a zejména modelování proteinové homologie) mohou dát pochopení struktury a aktivity daného proteinu. Strukturální model proteinu může být určen přímo z pokusných dat jako je rentgenová krystalografie, nepřímo pomocí modelování homologie a podobně, nebo kombinací těchto metod (viz White et al., Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 23, 349, 1994). Výklad trojrozměrné struktury AHAS poskytuje základ pro vývoj racionálního schématu pro mutaci určitého aminokyselinového zbytku v AHAS, která udělí polypeptidu rezistenci na herbicid.
Molekulární modelování struktury Zea Mays AHAS, za použití templátu známé rentgenové krystalové struktury příbuzné pyruvát oxidasy (POX) od Lactobaci 1lus plantarum, poskytuje trojrozměrný model AHAS struktury, který je použitelný pro vývoj AHAS variant rezistentních na herbicidy nebo AHAS inhibujících herbicidů. Tento modelační postup má výhodu toho, že AHAS a POX sdílí mnoho biochemických charakteristik a mohou být odvozeny od společného genu (Chang et al., J. Bacteriol. 170: 3937, 1988).
Vzhledem k vysokému stupni mezidruhové homologie v AHAS mohou být modelované AHAs zde popsané nebo jejich funkční ekvivalenty použity jako templáty pro vývoj AHAS variantních proteinů.
Odvození jednoho modelu za použití interaktivní molekulární grafiky a seskupení je podrobně popsáno dále. Trojrozměrná AHAS struktura, která vznikla z tohoto postupu, určuje přibližnou prostorovou orientaci aktivního místa enzymu a vazebného místa nebo kapsy inhibitoru jako je herbicid včetně, ale nejenom, • · ···· · * • · · · · • · · · · · · • · · · · · • · · · · ·· ·*· ·· imidazo1 inonových herbicidů. Model je potom upraven a reinterpretován na základě biochemických studií, které jsou také popsány dále.
Modelování proteinové homologie vyžaduje sestavení primární sekvence studovaného proteinu s druhým proteinem, jehož krystalová strukrura je známa. Pyruvát oxidasa (FOX) byla vybrána pro modelování AHAS homologie, protože POX a AHAS sdílejí mnoho biochemických charakteristik. Například, jak POX, tak AHAS mají stejné aspekty enzymového reakčního mechanismu, stejně jako kofaktoru a potřeby kovů. V obou enzymech jsou pro enzymatickou aktivitu požadovány thiamin pyrofosfát (TPP), flavin adenin dinukleotid (FAD) a divalentní kationt. FAD zprostředkuje redukční reakci během katalýzy v POX, ale předpokládané má pouze strukturální funkci v AHAS, což je možná pozůstatek z evoluce AHAS z POX. Oba enzymy utilizují pyruvát jako substrát a tvoří hydroxyethyl thiamin pyrofosfát jako stabilní intermediát reakce (Schloss, J.V. et al. , v Biosynthesis of branched chain amino acids, Barak, Z.J.M., Chipman, D.M., Schloss, J.V. (eds) VCH Publishers, Weinheim, Germany, 1990).
Dále. AHAS aktivita je přítomna v chimérických POX-AHAS proteinech skládajících se z N-terminální poloviny POX a C-terminální poloviny AHAS a je zde malý stupeň AHAS aktivity vykazovaný POX samotnou. AHAS a POX také vykazují podobné vlastnosti v roztoku (Risse, B. et al., Protein Sci. 1: 1699 a
1710, 1992; Singh, B.K., a Schmitt, G.K. (1989), FEBS Letters, 258: 113; Singh, B.K. et al., (1989) v: Prospects for Amino Acid Biosynthesis Inhibitors in Crop Protection and Pharmaceutical Chemistry, (Lopping, L.G., et al., vyd., BCP Monograph str. 87).
• · · · 4 · • · • · • · • 444 • 4 · ··
4· • ·4 4
Se zvýšenou koncentrací proteinu podléhají jak POX, tak AHAS postupné přeměně z monomerů na dimery a tetramery. Zvýšení v koncentraci FAD také indukuje vyšší řády sestavení podjednotek. V tetramerické formě jsou oba proteiny nejvíce stabilní k teplu a chemické denaturaci.
Dále, krystalová struktura POX z Lactobaci1lus planarum byla popsána Mullerem et al., Science 259: 965, 1993. Vynálezci tohoto vynálezu zjistili, že na základě stupně fyzikální, biochemické a genetické homologie mezi AHAS a POX může být rentgenová krystalická POX použita jako strukturální počáteční bod pro modelování homologie AHAS struktury.
Nicméně, AHAS a L. planarum POX sekvence nejsou dostatečně podobné pro úplné počítačové sestavení. Celkem je pouze asi 20% aminokyselin identických, zatímco asi 50% reziduí je stejné třídy (t.j. acidické, bazické, aromatické, a podobně). Nicméně, pokud je sekvence srovnána s ohledem na klasifikace hydrofobních a hydrofilních zbytků, potom odpovídá 500 ze 600 aminokyselin. Určení sekundární struktury pro AHAS (Holley et al., Proč. Nati. Acad. Sci USA 86: 152, 1989) ukázalo silnou podobnost k aktuální sekundární struktuře POX. Pro téměř 70% zbytků odpovídá předpokládaná sekundární struktura struktuře POX.
POX monoomery se skládají ze tří domén, kde všechny mají centrální, paralelní β-list se zkřížením skládajícím se z α-šroubovic a dlouhých smyček. (Muller et al., Science 259: 965, 1993). Topologie listů se liší mezi doménami, t.j. v první a ve třetí doméně jsou řetězce sestaveny do β-listu v sekvenci
2- 1-3-4-6-5, zatímco v β-listu druhé domény se sekvence čte
3- 2-1-4-5-6.
Počítačové generované sestavení bylo založeno na určení sekundární struktury a na homologii sekvence. Byla použit běžná metoda párového sestavení sekvence, kterou popsal Needleman and Wunch, J. Mol. Biol., 48: 443, 1970. Dvě sekvence byly seřazeny pro maximalizaci skoré seřazení. Skoré seřazení (skoré homologie) je sumou skoré pro všechny páry seřazených zbytků, plus volitelných pokut za vložení mezer do seřazení. Skoré pro seřazení párů zbytků je tabelovaná číselná hodnota. Systém skorování homologie je založen na pozorování frekvence divergence mezi danými páry zbytků. (MO Dayhoff, RM Schwartz and BC Orcutt Atlas of Protein Sequence and Structure, sv. 5. suppl. 3 str. 345 - 362, 1978).
Seřazení bylo dále vylepšeno přemístěním mezer tak, aby sekonzervovaly kontinuální řádné sekundární struktury. Aminokyselinové substituce generováné hodnocením pravděpodobných schémat seřazení byly srovnávány prostředky interaktivní molekulární grafiky. Bylo vybráno seřazení s nejvíce konzervativními substitucemi s ohledem na určitou funkčnost aminokyselin v daném místě. Konečné seřazení POX a AHAS je ukázáno na obrázku 2. Byla identifikována konzervativní seskupení zbytků, zejména pro TPP vazebné místo a pro části FAD vazebného místa. Seřazení odhalilo vysoký stupeň podobnosti mezi AHAS a POX pro první doménu, pro většinu částí druhé domény a pro asi polovinu třetí domény. Většina regionů, které byloy špatně seřazeny a mohly se různě skládat v POX a AHAS byla očekávána na povrchu proteinu a nebyly zahrnuty ve vazbě kofaktoru nebo inhibiční vazbě. Určení mutačních míst není významně ovlivněno malými posuny v seřazení.
Většina TPP vazebných zbytků je vysoce konzervována v POX a ·· ···· ·· · ·· ·· • · · ···· · Λ ·· • ···· · · 9 ···· • · ··· · · · ···· · • · ···· ···
4»· ♦ · · ·* ··· «···
AHAS (např. P48 - G49 - G50). V některých případech se zbytky těsné k TPP liší mezi POX a AHAS, ale zůstávají v regionu, který je vysoce konzervován (například, zbytky 90 - 110). Na druhou stranu, FAD vazebné místo se zdá být méně konzervované. Ačkoliv byly některá FAD vazebná místa vysoce konzervována (například D325-I326-D327-P328), jiná se jasně lišila mezi POX a AHAS (napříkad zbytky ve smyčce v pozici 278 - 285 nejsou homologní). Podrobná analýza ukázala, že, alespoň pro některá z méně konzervovaných kontaktních míst, byly interakce zprostředkovány spíše polypeptidovou kostrou než postranními řetězci. Proto, konzervace byla vyžadována pouze pro složení polypeptidu a nikoliv pro aminokyselinovou sekvenci (například kostra ze zbytků 258 - 263 se váže na ribitol řetězec FAD). Polovina vazebných míst pro adenin a izoalloxazin se jasně liší.
Po sestavení primární struktury byl postaven model homologie transpozicí AHAS aminokyselinové sekvence na POX templátovou strukturu. Chybějící koordináty byly vytvořeny postupně za použití templátů aminokyselinových zbytků pro kompletování nedefinovaných postraních řetězců. Prohledávání data bank a minimalizace energie malých částí molekuly byly použity pro kompletování konformace nedefinovaných smyčkových regionů. Kofaktory TPP a FAD byly modelovány do jejich vazebných míst, tento model byl potom podroben kompletní, 500 cyklové minimalizaci energie. Veškeré počítačové modelování bylo provedeno na IRIS Indigo Elán R4000 Workstation od Silicon Graphics Co. Interaktivní molekulové modelování a minimalizace energie byly provedeny za použití Quanta/CHARMm 4.0 od Molecular Simulations lne. Během tohoto kroku byla konformace stabilní, což ukazuje, že žádné silné nežádoucí interakce, jako jsou ·· ···· • · » • · ··· • · · · • · · · ···
| • | ·· | ·· |
| ·· | • · · | • |
| • | • · | • Φ |
| • | • ··· · | • |
| • | * · | • |
| ··· | ·· | ·· |
například těsné van der Waalsovi kontakty, se nevyskytly.
Výsledky jsou schematicky ukázány na obrázku 3.
Charakteristiky předpokládané AHAS struktury
Prohlídka modelované AHAS struktury popsané výše ukázala, že většina proteinu se skládá s kostrou, které je energeticky přiměřená, s většinou hydrofilních postraních řetězců přístupných rozpouštědlu. Povrchy (3—listů jsou hladké a mají na sobě místo pro překřížené regiony, které jsou na ně připojeny.
Model pro dimerické AHAS byl generován duplikováním koordinátů energeticky minimalizovaných monemerických AHAS supervložením dvou kopií na dvě POX podjednotky za použití párů Ca koordinátů jak je definováno ve schématu sestavení.
Polypeptidový řetězec AHAS se skládá do tří podobně složených domén složených z šestiřetězcového paraleního β-listu jádra obklopeného dlouhými smyčkami a α-šroubovicemi. Dvě podjednotky jsou seřazeny tak, že první doména jedné podjednotky je v těsné blízkosti kofaktorových vazebných domén 2 a 3 jiné podjednotky. Rozpouštědlem vyplněný prostor zůstává mezi podjednotkami v tomto místě. Tato kapsa, která je definována vlivem tří domén, je předpokládaným vstupním místem pro substrát. Je také předpokládáno, že to je vazebné místo pro herbi c i dy.
Vnitřní povrch vazebné kapsy je nastíněn kofaktory. Thiazol TPP je umístěn na dně kapsy. Doména 3 dává vnitřnímu povrchu kapsy krátkou α-šroubovici, která umísťuje svou osu směrem k pyrofosfátu na TPP, což kompenzuje fosfátový náboj svým dipolárním momentem. Tato kritická šroubovice, která začíná
99
99
G498, otočkovým zbytkem v těsném kontaktu s TPP, a která končí v F507, obsahuje tři známá mutační místa pro rezistenci na sulfonylureu: V500, W503 a F507 (viz U.S.Patenty č. 5.013.659; 5.141.870; a 5.378.824). V doméně 1 je zmyčka definována jako P48 - S52 (mezi β-řetězcem 2 a a-šroubovicí 2) je W503, mutace, ve které vzniká rezistence na imidazolinony. Zbytky Y47 až G50 jsou také v kontaktu s TPP. Tato smyčka je sousedící s P184
- Q189, jinak otočené, která spojuje poslední řetězec β-listu domény 1 s β-řetězcem, který spojuje s doménou 2. Uvnitř kapsy, poblíž jejího vchodu, je dlouhý region domény 1, který interaguje s komplementárním řetězcem domény 2. Residua 125
- 129 a 133 - 137 domény 1 a residua 304 - 313 domény 2 jsou na povrchu kapsy. Záhyb skládající se z T96 - G100 je mezi smyčkou 125 - 129 a TPP. Další řetězec domény 3 a dva regiony domény 2, které ohraničují vazebnou kapsu, jsou na opačném rohu kapsy. Zbytky 572, 575, 582 a 583 domény 3 definují povrch kapsy na jedné straně. Zbývající část vnitřního povrchu kapsy je definována FAD a smyčkou L278 - G282, která kontaktuje izoa11oxazinový kruh FAD.
Strukturální modely AHAS proteinu mohou být také použity pro racionální vývoj herbicidů nebo AHAS inhibitorů.
2. Modelování herbicidů do vazebných míst
Imazethapyr, aktivní imidazolinon v PURSUITR byl umístěn do svého předpokládaného vazebného místa za použití intraktivní molekulární grafiky (obr. 4) a softwaru popsaného výše (obr.4). K185 byl vybrán jako kotva pro interakci s nábojem karboxylové skupinyNH-CO jednotka imidazo1inonu byla umístěna pro tvorbu vodíkových můstků na G50 a A51. Toto umístilo methylový ······ · · · 4 4 · • · · · · · · ·· · · e · · · · · · · ·· · · • · · ♦ · · · · ···· · • · · » · ···· • · 9·9 · 4 · · · · · 9Í substituent imazethapyru těsně k V500 kostry malé α-šroubovice. Tato isopropylová skupina je pravděpodobně vázána hydrofobními zbytky aminokyselin v regionu zbytků 125 - 135, které vytvářejí vnitřní povrch kapsy. Pyridinový kruh je nejpravděpodobněji sandwichován mezi A134 nebo F135, F507 a W503. W503 také interaguje se systémem imidazolinonového kruhu.
Podobným způsobem byly modelovány sulfonylmočovinové herbicidy do místa, které částečně přesahuje popsané vazebné místo pro imidazo1inon. Překrytí sulfonylmočovinových a imidazo1 inonových vazebných míst byl v souladu s pokusy kompetiční vazby a se stanovenými mutantními daty, která ukazují, že stejná mutace u kukuřice, W503L, může vytvářet rezistenci na oba herbicidy. V těchto modelech je většina známých mutačních míst, která udílejí rezistenci na sulfonylmočovinové herbicidy, t.j. G50, A51, K185, V500, W503, F507, v těsném kontaktu s navázanými herbicidy. P126 a A51 jsou vyžadovány pro udržení K185 postranního řetězce v místě generováním hydrofobního póru. S582, místo pro specifickou imidazolinonovou rezistenci, je dále od vazebného regionu a je umístěno v regionu, kde je homologie tak slabá, že je očekávána změna ve složení. FAD vazebné místo má zjevně nízkou homologii mezi AHAS a POX v tomto regionu; S582 je zbytek, který udílí rezistenci u kukuřice a tento S582 a s ním sousedící zbytky jsou v těsném kontaktu s aktivním místem kapsy. Je předpokládáno, že FAD a region smyčky obsahující zbytky 278 až 285 je posunut mírně od třetí domény, (dole na obrázku 4) a že smyčka, která obsahuje S582 se skládá do prostoru mezi šroubovicí v pozici 499 až 507 a smyčkou v pozicích 278 až 285. D305, jiné známé místo mutace, je těsně u FAD a moduluje interakce mezi doménami 1 a 2. M280 může být bud obsažen v umístění šroubovice do pozice • · · · · · · · · · · · · ·«· ···· ···« • · · · · · · · · ··· • · · · · 9 9 9 9999 9
9 9 9 9 9 9 9 9
99 9 99 999 99 99
498 až 507, nebo přímo v inhibični vazbě. M280 a D305 mohou být také přímo obsaženy v inhibični vazbě, pokud se domény l a 2 posunou o něco blíže k sobě.
3. Selekce mutací
Specifické aminokyselinové zbytky jsou zjištěny jako místa pro zavedení mutací do primární sekvence AHAS. Tyto aminokyseliny jsou vybrány na základě jejich umístění tak, že pokud je pozice aminokyselinového zbytku modifikována, pak bude výsledkem alterace (t.j. snížení) v afinitě herbicidu pro vazebné místo. Není nutné, aby pozice mutace byla ve vazebném místu, protože aminokyselinové zbytky mimo kapsu mohou samy o sobě alterovat náboj nebo konfiguraci vazebného místa. Selekce cílových míst pro mutace je dosažena za použití molekulárních modelů jak jsou popsány výše. Například podle modelu uvedeného výše, arginin v pozici 128 (označený jako R128 na obrázku 1 za použití jednopísměného kódu pro aminokyseliny) je umístěn poblíž vchodu do vazebného místa pro substrát a herbicid a má velký stupeň konformační volnosti, který dovoluje, aby se účastnil transportu nabitých herbicidů do vazebného místa. Proto je tento zbytek substituován alaninem pro odstranění jak jeho náboje, tak jeho dlouhého hydrofobního řetězce (vzniklá mutace je označena R128A).
Mutace mohou obsahovat jednoduché substituce, které nahrazují přirozenou sekvenci jakoukoliv jinou aminokyselinou.
Alternativně mohou mutace obsahovat delece nebo adice jedné nebo více aminokyselin, preferovaně více než 5, v daném místě. Přidané sekvence mohou obsahovat aminokyselinovou sekvenci, o které je známo, že existuje v jiném proteinu, nebo mohou
4 ···· 4 4 · · ·4 4 ♦ · 4 4 · · · 4 4 44 • · · · · · · 4 1« 4 44 • · · · · · 4 f> 4 4 4 4· ♦ · · 4 ♦ · 4 4·
4 · 4 44 444 a·4 4 obsahovat zcela syntetickou sekvenci. Dále, více než jedna mutace a/nebo více než jeden typ mutace mohou být zavedeny do jednoho polypeptidů.
4. Místně řízená mutagenese
DNA kódující AHAS může být manipulována tak, aby byly zavedeny požadované mutace. Mutagenese je provedena za použití metod, které jsou standartní v oboru, jak je popsáno, například, v Higuchi, R., Rekombinant PCR, v M.A. Innis, et al., vvd., PCR Protocols: A Guide to Methods and App1 ications, Academics Press, str. 177 - 183, 1990.
5. Exprese a purifikace variant
Mutovaná a variantní AHAS sekvence je klonována do DNA expresního vektoru (viz např. příklad 3) a je expri^bvána ve vhodné buňce, jako je například E. coli. Preferovaně je DNA kódující AHAS navázána na transkripční regulační element a variantní AHAS je exprivována jako část fúzního proteinu, například, gluthation-S-transferasy, pro usnadnění purifikace (viz příklad 3, dále). Variantní AHAS je potom purifikována za použití afinitní chromatografie nebo jakékoliv jiné vhodné metody v oboru známé. Purifikace” AHAS polypeptidů označuje izolaci AHAS polypeptidů ve formě, která umožňuje měření jeho enzymatické aktivity bez interference s jinými složkami buňky, ve které je polypeptid exprivován.
6. Testování enzymatických vlastností
Purifikované varianty AHAS mohou být testovány na jednu nebo • a a · a · ·· • · a a· a a a a a a* • · a a aa • · · ·· » a a a »· · více následujících vlastností:
a) specifickou nebo katalytickou aktivitu pro konverzi pyruvátu na acetolaktát (vyjádřenou jako jednotky/mg čisté AHAS, kde jednotka aktivity je definována jako 1 pmol acetolaktátu produkovaný/hodinu), nebo na kondenzaci pyruvátu a
2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu (vyjádřenou jako jednotky/mg čisté AHAS, kde jednotka aktivity je definována jako 1 pmol acetohydroxybutyrátu produkovaný/hodinu);
b) úroveň inhibice herbicidu, jako je například, imidazolinon (vyjádřenou jako IC50, koncentrací, při které je 50 % aktivity enzymu inhibováno); a
c) selektivitu rezistence na vybraný herbicid vs. jiné herbicidy. Index selektivity je def inována j ako násobek rezistence mutantu k imidazo1inonům ve vztahu k přirozenému enzymu, dělený násobkem rezistence stejného mutantu k jinému herbicidu také ve vztahu k přirozenému typu). Násobek rezistence k herbicidu ve vztahu k přirozenému typu enzymu je vyjádřen jako IC50 varianty dělený IC50 přirozeného typu.Index selektivity je tak reprezentován následující rovnicí:
IC50 varianty pro herb.A/ICgo přirozeného typu pro herb. A
S.I. = -----------------------------------------------------------------
ICso varianty pro herb.B/ICso přirozeného typu pro herb. B
Vhodné testovací systémy pro tato určení zahrnují, ale nejsou omezeny na, ty, které jsou popsány v příkladu 4, dále.
······ 9 9 · 9 9 99
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 < · 9 9 9 9 9
9 9 9 9 · 9 · ···· · ·· 9 9 9 9 9 9 9
999 99 999 99 99
7.a. Hodnocení vhodných variant
Enzymatické vlastnosti variant AHAS polypeptidů jsou srovnávány s přirozeným typem AHAS. Preferovaně, dané mutace vedoucí k AHAS variantnímu polypeptidu, který si zachovává in vitro enzymatickou aktivitu k pyruvátu a nebo pyruvátu a 2-ketobutyrátu, t.j. konverzi pyruvátu na acetolaktát nebo kondenzaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, (a tak se očekává jeho biologická aktivita in vivo), zatímco vykazuje katalytickou aktivitu, která je o něco více rezistentní k vybranému herbicidu, než je aktivita přirozeného typu AHAS. Preferovaně variantní AHAS vykazuje:
(i) za absence alespoň jednoho herbicidu (a) katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, která je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a (ii) katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než přirozená AHAS;
a která je relativně více rezistentní k herbicidu než je • · · · • · přirozená AHAS.
Proto, jakýkoliv specifický AHAS variantní protein nemusí nezbytně mít úplnou katalytickou aktivitu pro udržení životaschopnosti buněk, ale musí mít nějakou katalytickou aktivitu, samostatnou nebo v kombinaci s katalytickou aktivitou dalších kopií stejné AHAS varianty a/nebo v kombinaci s katalytickou aktivitou jiných AHAS variantních proteinů, v množství dostatečném pro udržení životaschopnosti buněk, které vyžadují AHAS aktivitu pro životaschopnost. Například, katalytická aktivita může být zvýšena na minimální akceptovatelné hladiny zavedením mnoha kopií varianty kódujících genů do buňky nebo zavedením genu, který dále obsahuje relativně silný promotor pro zvýšení produkce varianty.
Více rezistentní znamená, že katalytická aktivita varianty je zmenšena herbicidy, pokud vůbec, o menší stupeň než je herbicidem zmenšena katalytická aktivita přirozeného typu AHAS. Preferované více rezistentní varianty AHAS si uchovávají dostatečnou katalytickou aktivitu pro udržení životaschopnosti buněk, rostlin nebo organismů tam, kde si při stejné koncetraci herbicidu přirozený typ AHAS nezachovává dostatečnou katalytickou aktivitu pro udržení životaschopnosti buněk, rostlin nebo organismů.
Preferovaně je katalytická aktivita za absence herbicidů alespoň okolo 5 %, a lépe je více než 20 % vzhledem ke katalytické aktivitě přirozeného typu AHAS za absence herbicidů. Nejvíce preferované AHAS varianty jsou více rezistentní k imidazolinonovým herbicidům než k jiným herbicidům jako jsou herbicidy založené na sulfonyImočovině, s tím, že v některých • · · · · · · · · ·· · · • · · ···· ···· • ···· · · · · ··· • · · · · · · · · · · · · • · · · · · ··· • · · · · ·· ··· «· aplikacích není selektivita ani potřebná, ani preferovaná.
U imidazolinon rezistentních variant AHAS je preferováno, aby AHAS variantní protein měl:
(i) katalytickou aktivitu za absence uvedeného herbicidu vyšší než asi 20% katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS;
(ii) katalytickou aktivitu, které je relativně více rezistentní na přítomnost imidazolinonových herbicidů ve srovnání s přirozenou AHAS; a (ii i) katalytickou aktivitu, která je relativně více citlivá na přítomnost sulfonylmočovinových herbicidů ve srovnání s imidazolinonovými herbicidy. Nejvíce preferované herbicid-rezistentní AHAS varianty vykazují minimální specifickou aktivitu okolo 20 jednotek/mg, minimální nebo žádnou inhibici imidazo1inonem a index selektivity od asi 1,3 do asi 3000 ve vztahu k jiným herbicidům.
Bez vazby na teorii se soudí, že systematické a interaktivní aplikace této metody na přirozený typ nebo na jiný cílový AHAS protein budou vést k produkci AHAS variant majících požadované vlastnosti vysoké enzymatické aktivity jak byla popsána výše a rezistence na jednu nebo na více tříd herbicidů. Například, mutace přirozené AHAS sekvence v určité pozici na danou aminokyselinu mohou vést k mutantu, který vykazuje vysoký stupeň rezistence na herbicidy, ale signifikantní ztrátu enzymatické aktivity k pyruvátu nebo pyruvátu a 2-ketobutyrátu. Ve druhé aplikaci výše uvedené metody bude potom počáteční nebo cílový AHAS polypeptid touto variantou (místo přirozeného typu AHAS).
·· ···· · · · · ♦ ·· • · · · · «· ···· • · · · · · · » · · «· • · · · · · · « »· · · • · · · · · ··· • Φ ··* ·· ··· 4· ··
Racionální vývoj potom obsahuje substituování jiných aminokyselin v původně mutovaných pozicích a/nebo přidání nebo deletování aminokyselin ve vybraných místech nebo rozsazích s očekáváním zachování rezistence na herbicidy, ale také se zachováním vyšší hladiny enzymatické aktivity.
Na struktuře založený racionální vývoj na herbicidy rezistentních AHAS proteinů nabízí mnoho výhod proti konvenčním přístupům, které spočívají v náhodné mutagenesy a selekci. Například, pokud substituce určité aminokyseliny za jinou vyžaduje substituci více než jednoho nukleotidu v kodonu, pak je pravděpodobnost, že se toto vyskytne náhodně tak nízká,, že není prakticky použitelná. Oproti tomu, dvojité i trojité změny v nukleotidové sekvenci v kodonu mohou být snadno provedeny, pokud jsou naznačeny přístupem racionálního vývoje. Například, jedna racionálně vyvinutá mutace pro udělení selektivní rezistence na imidazolinon vyžaduje změnu z argininu na glutamat. Arginin je kódovaný CGT, CGC, CGA, CGG, AGA, AGG, zatímco glutamát je kódovaný GAA a GAG. Protože žádný z kodonu pro arginin nezačíná GA, bude tato mutace vyžadovat dvojitou substituci sousedních nukletoidů, která se při náhodné mutagenezi vyskytuje tak vzácně, že je to nepředvídatelné a neopakovatelné s jakoukoliv jistotou úspěchu. Ačkoliv mutační frekvence může být zvýšena během náhodné mutageneze, alterace nukleotidové sekvence budou mít stejnou pravděpodobnost výskytu v celém AHAS genu, za absence předchozího zaměření mutací. Toto zvyšuje šanci na získání irelevantních mutací, které interferují s enzymatickou aktivitou. Obdobně, bude vzácné, za použití náhodné mutageneze, najít mnohotné aminokyselinové substituce, delece, nebo mutace substituce/de1ece, které dávají rezistenci na herbicidy a zároveň udržují katalytickou aktivitu. Deleční mutace, které • · · · udílejí rezistenci na herbicidy, jsou také nepravděpodobné za použití přístupu náhodné mutagenese. Delece by měly být omezeny na malý region a měly by se vyskytovat v tripletech tak, aby se zachoval AHAS čtecí rámeček pro zachování enzymatické aktivity.
Nicméně, při použití racionální na struktuře založeného přístupu jsou dvojité aminokyselinové substituce a/nebo deleční mutace relativně snadno dosažitelné a přesně zaměřené. Dále, různé mutageny použité v náhodné mutagenesy vytvářejí specifické typy mutací. Například, azid sodný vytváří bodové substituční mutace u rostlin, zatímco radiace vytváří spíše delece. V souladu s tím by musely být použity dva protokoly mutageneze pro získání mnohotné kombinace substitucí/delecí.
Konečně, předkládaná na struktuře založená metoda pro racionální vývoj na herbicidy rezistentních AHAS umožňuje opakovaná vylepšení mutací rezistence na herbicidy, kterýžto krok není usnadněn náhodnou mutagenezí. Identifikace mutačního místa pro rezistenci na herbicidy náhodnou mutagenezí může dát malou, pokud nějakou, prediktivní hodnotu pro zlepšení charakteristik mutantu. Předkládaný na struktuře založený přístup, na druhé straně, umožňuje určení vylepšení na základě pozice, prostředí a funkce aminokyselinové pozice ve strukturálním modelu.
Metoda opakovaného vylepšení také umožňuje nezávislou manipulaci se třemi důležitými vlastnostmi AHAS: úrovní rezistence, selektivitou rezistence a katalytickou účinností. Například mohou být vyvinuty kompenzatorní mutace prediktivním způsobem. Pokud má určitá mutace škodlivý účinek na aktivitu enzymu, pak může být druhá kompenzatorní mutace použita • · · · · · · · • · · ·· • · · · · ·· • · · · ·· • · · ·· • · · · · · · • · · · · • · ·· · · • ·· · · • 4 · · · ·· *· · · • · · · · · · pro znovuobnovení aktivity. Například, změna v náboji uvnitř domény, když je zbytek s nábojem vložen nebo ztracen díky mutaci může být kompenzována zavedením druhé mutace. Předpovězení pozice a typu zbytku pro zavedení, deletování nebo substituci ve druhém místě pro nahrazení enzymatické aktivity vyžaduje znalost strukturálné-funkčních vztahů odvozených z modelu jako je ten, který je zde popsán.
7.b. Vývoj nepeptidových herbicidů nebo AHAS inhibitorů
Chemická entita, která alteruje a může být vhodná do aktivního místa cílového proteinu nebo se váže na jakoukoliv pozici, kde může inhibovat aktivitu, může být vyvinuta metodami v oboru známými, jako je například, počítačový vývojový program, který se uplatňuje ve vývoji sloučenin, které specificky interagují s receptorovým místem.
Příkladem takového programu je LUDI (Biosym Technologies San Diego, CA) (viz také Lam et al., Science 263: 380, 1994: Thompson et al., J. Med. Chem., 37: 3100, 1994).
Vazebná kapsa, a zejména ty zbytky, u kterých bylo identifikováno, že jsou zahrnuty v inhibiční vazbě, mohou být použity jako kotevní body pro vývoj inhibitoru.
Vývoj místně specifických herbicidů je výhodný při kontrole druhů plevele, u kterých se může spontálně vyvinout rezistence na herbicidy v této oblasti, zejména díky mutacím AHAS genu.
vektory • · · • » · · 9
Na herbicidy rezistentní AHAS varianty: DNA, polypeptidy
Předkládaný vynález také obsahuje izolované DNA molekuly kódující varianty AHAS polypeptidů rezistentních na herbicidy. Geny kódující AHAS polypeptidy podle předkládaného vynálezu mohou být odvozeny od jakéhokoliv druhu, a preferovaně od rostliných druhů, a mutace udílející rezistenci na herbicidy mohou být zavedeny do ekvivalentních pozic v jakémkoliv z těchto AHAS genů. Ekvivalence pozic daných kodonů v různých AHAS genech je funkcí konzervace primární aminokyselinové sekvence a jeho proteinu a retence podobné trojrozměrné struktury. Například, obrázek 5 ilustruje vysoký stupeň sekvenční homologie mezi AHAS polypeptidy odvozenými od různých rostliných druhů. Tyto AHAS polypeptidy vykazují alespoň 60 - 70% celkovou homologii. Bez vazby na teorii se soudí, že v regionech polypeptidu majících vysoce konzervovanou sekvenci bude také zachována konformace polypeptidového řetězce. Tak je možné použít AHAS-kodující sekvenci od jednoho druhu pro molekulární modelování, pro předem určené zavedení mutací do AHAS genu od druhého druhu pro iniciální testování a opakovaná vylepšení, a konečně, zavedení optimalizovaných mutací do AHAS odvozených od ještě třetích rostliných druhů pro expresi v transgenních rostlinách.
V jedné sérii provedení kódují tyto AHAS DNA varianty AHAS polypeptidu a preferovaně AHAS polypeptidu z kukuřice podle obrázku 1, kterýžto polypeptid je modifikován substitucí v nebo delecí před nebo za jedním nebo více aminokyselinových zbytků podle obrázku 1, P48, G49, S52, M53, E54, A84, A95, T96, S97, G98, P99, G100, A101, V125, R127, K128, M129, 1130, G131, T132, D133, F135, Q136, D186, 1187, T2S9, T260, L261, M262,
7
| G263, | R267, | M277, | L278, | G279, | H281 , | G282, | T283, | V284, | G300 , |
| V301 , | R302, | F303 , | D304, | R306, | V307, | T308, | G309, | K310, | 1311, |
| E312, | A313 , | F314, | A315, | S316, | R317, | A3 1 8 , | K319, | 1320, | E329, |
| 1330, | K332, | N333, | K334, | 0335, | T404, | G413 , | V414, | G415, | Q416, |
| H417, | Q418, | M419 , | W420, | A421 , | A422 , | L434, | S435 , | A437, | G438 , |
| L439, | G440, | A441 , | M442 , | G443 , | D467, | S468 , | S469, | L471 , | N473 , |
| L477, | M479, | Q495, | H496, | L497, | G498, | M499, | V501 , | Q502, | Q504, |
| D505, | R506, | Y508 , | K509, | A510, | N51 1 , | R512 , | A513 , | H514, | T515, |
| S524, | H572 , | Q573, | E574, | H575, | V576, | L577, | P578, | M579, | 1580 , |
| P581 , | G583 , | G584, | funkčních ekvivalentů kteréhokoliv | z výše | |||||
| uvedených; | inzercí | nebo | delecí | mezi | Q124 | a H150 | podl e | obráz |
nebo jejich funkčních ekvivalentů; inzercí nebo delecí mezi
G300 a D324 podle obrázku 1 nebo jejich funkčních ekvivalentů; a jakékoliv kterýchkoliv z výše uvedených.
Mutace, ať zavedené do polypeptidu podle obrázku 1 nebo do ekvivalentních pozic v jiném rostlině AHAS genu, mohou obsahovat alterace v DNA sekvenci, které vedou k prosté substituci jakékoliv jedné nebo více aminokyselin nebo delecím více než 5 aminokyselinových zbytků předcházejících nebo více než 5 aminokyselinových zbytků následujících jakémukoliv místu výše uvedenému. Vhodné aminokyselinové substituenty zahrnují, ale nejsou omezeny na, přirozeně se vyskytující aminokyseliny.
Alternativně mohou mutace obsahovat alterace v DNA sekvenci takové, že je jedna nebo více aminokyselin přidáno nebo deletováno v rámečku ve výše uvedených pozicích. Preferovaně obsahují adice okolo 3 až do asi 30 nukleotidů a delece obsahují asi od 3 do 30 nukleotidů. Kromě toho, jednotlivý mutantní polypeptid může obsahovat více než jednu podobnou nebo různou mutaci .
• ·
• 4 ··
Předkládaný vynález obsahuje DNA a korespondující RNA sekvence, stejně jako sense a antisense sekvence. Sekvence nukleové kyseliny kódující AHAS polypeptidy mohou být obklopeny přirozenými AHAS regulačními sekvencemi, včetně promotoru, enhancerů, odpovídajících elementů, signálních sekvencí, polyadeny1ačních sekvencí, intronů, 5’- a 3'- nekódujících regionů, a podobně. Dále, nukleové kyseliny mohou být modifikovány pro změnu stability, rozpustnosti, vazebné afinity a specificity. Například, kódující sekvence pro variantní AHAS může být selektivně methylována. Sekvence nukleové kyseliny podle předkládaného vynálezu může být také modifikována značkou schopnou poskytnutí detegovatelného signálu, bud přímo nebo nepřímo. Příkladné značky zahrnují radioizotopy, fluorescentní molekuly, biotin a podobně.
Vynález také poskytuje vektory obsahující nukleové kyseliny kódující AHAS varianty. Velké množství vektorů, včetně plasmidů a houbových vektorů, bylo popsáno pro expresi v mnoha eukaryotických a prokaryotických hostitelích. Výhodně mohou vektory také obsahovat promotor operativně navázaný na AHAS kódující část. Kódovaná AHAS může být exprivována za použití jakéhokoliv vhodného vektoru a hostitelské buňky, za použití metod zde popsaných nebo citovaných nebo jinak známých odborníkům v patřičném oboru. Příklady vhodných vektorů zahrnují bez omezení na pBIN založené vektory, pBluescript vektory a pGEM vektory.
Předkládaný vynález také obsahuje jak variantní na herbicid rezistentní polypeptidy, tak jejich peptidové fragmenty. Jak bylo vysvětleno výše, variantní AHAS polypeptidy mohou být odvozeny od polypeptidu kukuřice ukázaného na obrázku 1 nebo od
9
jakéhokoliv rostliného nebo mikrobiálního AHAS polypeptidu, preferovaně od rostliného AHAS polypeptidu. Polypeptidy mohou být dále modifikovány, například, fosforylací, sulfatací, acylací, glykosylací, a jinými modifikacemi proteinů. Polypeptidy mohou být izolovány od rostlin, nebo od hetero 1ogních organismů nebo buněk (včetně, ale bez omezení, bakterií, kvasinek, hmyzích, rostliných a savčích buněk) do kterého byl gen kódující variantní AHAS polypeptid zaveden a exprivován. Kromě toho, AHAS polypeptidy mohou být modifikovány značkou schopnou poskytnutí detegovatelného signálu, bud přímo nebo nepřímo, včetně radioizotopů, fluorescentních sloučenin, a podobně.
Chemicky rezistentní rostliny a rostliny obsahující variantní AHAS geny
Předkládaný vynález obsahuje transgenní buňky, včetně, ale nejen, semen, organismů a rostlin, do kterých byly zavedeny geny kódující AHAS varianty rezistentní na herbicidy. Neomezující příklady vhodných rostlin, do kterých mohou být zavedeny, jsou uvedeny v tabulce 1 dále:
·· • · · · · • · · · · · • · · ·· • · · · · · · • · · · ··· ·· ··
Tabulka 1
Rostliny, které mohou být příjemci
| Běžné jméno | Rod | Latinské jméno | |
| Kukuři c e | Gramineae | Zea mays | |
| Kukuři ce, | Dent | Gramineae | Zea mays |
| dent i f ormi s | |||
| Kukuř i ce, | flint | Gramineae | Zea mays vulgaris |
| Kukuři ce, | pop | Gramineae | Zea mays |
| mi crosperma | |||
| Kukuř i ce, | j emná | Gramineae | Zea mays amylacea |
| Kukuři ce, | s1adká | Gramineae | Zea mays |
| amy1easaccharate | |||
| Kukuři ce, | sladká | Gramineae | Zea mays saccharate |
| Kukuř i ce, | Waxy | Gramineae | Zea mays ceratina |
| Pšenice, | Dinke1 | Poo ideae | Tri t i cum | spěl ta |
| Pšenice, | durum | Poo ideae | Tri t i cum | durum |
| Pšenice, | ang1 i cká | Pooideae | Tr i t i cum | turg idum |
| Pšenice, | velká špalda | Poo i deae | Tr i t i cum | spe1 ta |
| Pšenice, | po 1 i sh | Pooideae | Tr i t i cum | po 1 onium |
| Pšenice, | poulard | Pooideae | Tr i t i cum | monococcum |
| Pšenice, | j ednozrnná | Pooideae | Tri t i cum | monococcum |
| Pšenice, | j emná | Pooideae | Tri t i cum | aes t ivum |
Rýže
Oryza sativa americká divoká Gramineae
Zizania aquatica
Rýže, australská
Gramineae
Oryza aus trali ens i s ·· • · • · · · · ··
| Rýže, indická Rýže, červená Rýže, tuscarora Rýže, západoafrická | Grami neae Gramineae Gramineae Gramineae | Zizania aquatica Oryza glaberrima Zizania aquatica Oryza glaberrima |
| J ečmen | Poo ideae | Hordeum vulgare |
| Ječmen | Poo ideae | Hordeum irregulare |
| Abys s ini an intermediate také iregular | ||
| Ječmen, Ancestarl | Poo i deae | Hordeum spontaneum |
| twor | ||
| Ječmen, bezvousý | Poo ideae | Hordeum trifurcatum |
| Ječmen, egyptský | Poo ideae | Hordeum trifurcatum |
| Ječmen, fourrrowed | Poo ideae | Hordeum vulgare |
| Ječmen, sixrowed | Poo ideae | polys t i chon Hordeum vulgare |
| Ječmen, tworowed | Pooideae | hexast i chon Hordeum distichon |
| Bavlna, Abroma | Di cotyledonaea | Abroma augusta |
| Bavlna, Američan | Malvaceae | Gossypium hirsutum |
| Upland | ||
| Bavlna, Asiatic Tree | Malvaceae | Gossypium arboreum |
| též Indián Tree | ||
| Bavlna, Brazilian, | Malvaceae | Gossypium barbadense |
| též Kidney, a | brasiliense | |
| Pernambuco | ||
| Bavlna, Levant | Malvaceae | Gossypium herbaceum |
| Bavlna, Long Silk | Malvaceae | Gossypium barbadense |
také Long Staple, • · · · • · • · • ·
• · · · ·
Sea Island
| Bavlna, mexican, | Malvaceae | Gossypium hirsutum |
| též Short Staple | ||
| Sojové boby, Sója | Leguminosae | Glycine max |
| Cukrová řepa | Chenopodi aceae | Beta vulgaris alt i s s ima |
| Cukrová třtina | dřeviny | Arenga pinnata |
| R a j č e | Solanaceae | Lycopers i con esculentum |
| Rajče, Cherry | Solanaceae | Lycopers i con esculentum ceras i f ořme |
| Rajče, Common | Solanaceae | Lycopers i con esculentum communae |
| Rajče, Currant | Solanaceae | Lycopers i con pimpinellifoli um |
| Rajče, Husk | Solanaceae | Physalis ixocarpa |
| Rajče, Hyenas | Solanaceae | Solanum incanum |
| Rajče, Pear | Solanaceae | Lycopers i con |
esculentum pyr i f ořme
| Rajče, Tree | Solanaceae | Cyphomandra betacea |
| Lilek brambor Lilek brambor španě1ský, | Solanaceae Convolvulaceae | Solanum tuberosum Ipomoea batatas |
sladký brambor • · ···· ♦· · · · ·· • · · ···· ···· • · ··· · · · · · ·· • · ··· · · · ···· · • · ···· ··· • a · · · « · a a a a a a a
| Zito, common | Poo ideae Poo ideae | Secale cereale Secale montanum |
| Zito, Mountain | ||
| Pepř, Bell | Solanaceae | Capsicum annuum gros sum |
| Pepř, Bird | Solanaceae | Capsicum annuum |
| též kayenský, | minimum | |
| guine j ský | ||
| Pepř, Bonnet | Solanaceae | Capsicum sinense |
| Pepř, Bullnose | Solanaceae | Capsicum annuum |
| též sladký | gros sum | |
| Pepř, Cherry | Solanaceae | Capsicum annuum ceras i formě |
| Pepř, Cluster, | Solanaceae | Capsicum annuum |
| též Red Cluster | fasciculatum | |
| Pepř, Cone | Solanaceae | Capsicum annuum cono ides |
| Pepř, Goat | Solanaceae | Capsicum frutescens |
| též Spur | ||
| Pepř, Long | Solanaceae | Capsicum frutescens 1ongum |
| Pepř , | Solanaceae | Capsicum annuum |
| Oranamental Red | abreviatum | |
| též Wrinkled | ||
| Pepř, Tabasco | Solanaceae | Capsicum annuum |
| Red | cono ides | |
| Locika, zahradní | Compos i tae | Lactuca sativa |
| Locika, Asparagus | Compos i tae | Lactuca sativa |
| též celer | asparagina | |
| Locika, modrá | Compos i tae | Lactuca perennis |
| Locika, modrá | Compos i tae | Lactuca pulchella |
• · ···· ·· · · · · · « · · ···· ···· • ···· · · · · ··· • · · · · · · · · · · · · ·· · · · · ··· ·· ··· · · · · · ·· ··
| též Chicory Locika, kapusta | Compos i tae | Lactuca sativa |
| též hlávková | cápi tata | |
| Locika, Cos | Composi tae | Lactuca sativa |
| též Longleaf, | 1ong i f o 1 i a | |
| Romaine | ||
| Locika, Crinkle | Compos i tae | Lactuca sativa |
| též Curled | cr i spa | |
| Cutting Leaf | ||
| Celer | Umbel1iferae | Apium graveolens dul ce |
| Celer, bělený, | Umbe11 i f erae | Apium graveolens |
| též zahradní | dul ce | |
| Celer, kořenový, též | Umbe11 i f erae | Apium graveolens |
| Turniprooted | rapaceum | |
| Lilek jedlý | Solanaceae | Solanum melongena |
| Cirok obecný | Sorghum | všechny druhy |
| To 1 i ce vo j t ěška | Leguminosae | Medicago sativum |
| Mrkev | Umbel1iferae | Daucus carota sativa |
| Fazole, pnoucí | Leguminosae | Phaseolus vulgaris vulgari s |
| Fazole, Sprouts | Leguminosae | Phaseolus aureus |
| Fazole, Brazilian | Leguminosae | Canavali a |
| Broad | ens i f ormi s |
·· · ··· ·· • · · · « • ♦ ··· ·· • · · · ·· • · · ·· • · · · · · · • ·· ·♦ ·· · ·· · • ·· · · • · ··· · · • · · · ··· ·· ··
| Fazole, Broad Fazole, Common, | Leguminosae Leguminosae | Vicia faba Phaseolus vulgaris |
| též Francouzská bílá, Kidney Fazole, egyptská | Leguminosae | Dolichos lablab |
| Fazole, dlouhá, | Leguminosae | Vigna |
| též Yardlong | sesquipedali s | |
| Fazole, Winged | Leguminosae | Psophocarpus |
| Oves setý, též | Avena | tetragono1obus Sat iva |
| Common, Side Tr ee Oves černý, též | Ave na | Strigosa |
| Br i s 11e Lops i ded Oves, Br i s 11e | Avena | |
| Hrách, také zahradní | Leguminosae | Pisum sativum |
| zelený, Shelling | sat ivum | |
| Hrách, Blackeyed | Leguminosae | Vigna sinensis |
| Hrách, Edible | Leguminosae | Pisum sativum |
| Podded | axiphium | |
| Hrách, Grey | Leguminosae | Pisum sativum |
| Hrách, křídlatý | Leguminosae | s p e c i o s um Tetragonolobus |
| Hrách, Wrinkled | Leguminosae | purpureus Pisum sativum |
| Slunečnice | Compos i tae | medullare Helianthus annuus |
| Tykev, podzimní, | Di cotyledoneae | Cucurbita maxima |
| ·♦ | • | • · | ·· | |||||
| • | • | • | • | ·· | • · | • | • | |
| • | • | ··· | • | • | • | • · | ·· | |
| • | • | • · | • | • | • | • · · · | • | • |
| • | • | • | • | • | • | • | • | • |
| ·· | ··· | ·♦ | »·· | « · | • · |
zimní
| Tykev, liánovitá též letní | Dicotyledoneae | Cucurbita pepo melopepo |
| Tykev, Turban | Dicotyledoneae | Cucurbita maxima turbani f ormi s |
| Okurka | Di cotyledoneae | Cucumis sativus |
| Okurka, africká | Dicotyledoneae | Mamordica charantia |
| též hořká | ||
| Okurka, Squirting | D i coty1edoneae | Ecballium elaterium |
| též divoká | ||
| Okurka, divoká | Dicotyledoneae | Cucumis anguria |
| Topol kalifornský | dřeviny | Populus trichocarpa |
| Topol, evropský | Populus nigra | |
| černý | ||
| Topol, š edý | Populus canescens | |
| Topol, lombardy | Populus italica | |
| Bříza, Silverleaf | Populus alba |
též bílá
| Tabák | Solanaceae | Nicot iana |
| Arabidops i s | Cruci f erae | Arabidops i s |
| thaliana | thaliana |
| Trávy | Lolium |
| Trávy | Agros t i s Jiné rodiny trav |
| Jetel | Leguminosae |
Exprese variant AHAS polypeptidů v transgenních rostlinách ··· · • · ·· ·· uděluje vysokou hladinu rezistence na herbicidy, vcetne, ale nejenom, imidazolinonových herbicidů jako je, například, imazethapyr (PURSUITR), která umožňuje použití těchto herbicidu v průběhu kultivace transgenních rostlin.
Metody pro zavedení cizorodých genů do rostlin jsou v oboru známé. Neomezující příklady takovýchto metod zahrnují infekci Agrobacterium, bombardování částicemi, ošetření protoplastů polyethy1englyko1em (PEG), elektroporaci protoplastů, mikroinjekci, makroinjekci, injekci odnoží, dráhu pollen tube , imbibici sušených semen, perforaci laserem, a elektroforesu. Tyto metodu jsou popsány v, například, B. Jenes et al., a S.W: Ritchie et al., v Transgenic Plants, sv. 1, Engeneering and Utilization, vyd. S. D. Kung, R. WU, Academics Press, lne., Harcourt Brace Jovanovich 1993; a L. Mannonen et al., Criticals Rewiews in Biotechno1ogy, 14: 287 - 310, 1994.
V preferovaném provedení je DNA kódující variantní AHAS klonována do DNA vektoru, obsahujícího markerový gen pro antibiotickou rezistenci a rekombinantní AHAS DNA, obsahující plasmid je potom zaveden do Agrobacterium tumefaciens obsahujícího Ti plasmid. Tento binární vektorový systém je popsán například v U.S. patentu č. 4.490838 a v An et al., Plant Mol. Biol. Manual A3: 1 - 19 (1988). Transformované Agrobacterium je potom ko-kultivováno s listovými disky od recipientní rostliny pro umožnění infekce a transformace rostliných buněk. Transformované rostlině buňky jsou potom kultivovány v regeneračním mediu, které navozuje tvorbu výhonků, nejprve za přítomnosti vhodného antibiotika pro selekci transformovaných buněk, potom za přítomnosti herbicidu. V rostliných buňkách, které byly úspěšně transformovány DNA
I 'š -ť o kódující AHAS rezistentní na herbicidy se tvorba výhonků vyskytuje i za přítomnosti herbicidu, který inhibuje tvorbu výhonků z netransformovaných buněk. Po potvrzení přítomnosti variantní AHAS DNA za použití, například, polymerasové řetězové reakce (PCH) analýzy, jsou transformované buňky testovány na svou schopnost odolávat postřiku herbicidem a na svou schopnost germinace semen a iniciace kořenů a proliferace za přítomnosti herbicidu.
Jiné aplikace
Metody a kompozice podle předkládaného vynálezu mohou být použity při na struktuře založeném racionálním vývoji AHAS variant rezistentních na herbicidy, které mohou být inkorporovány do rostlin pro navození selektivní rezistence na herbicidy u rostlin. Intermediální varianty AHAS (například, varianty, které vykazují suboptimální specifickou aktivitu, ale vysokou rezistenci a selektivitu, nebo naopak) jsou užitečné jako templáty pro vývoj druhé generace AHAS variant, která si uchovává specifickou aktivitu a vysokou rezistenci a selektivitu.
Geny pro AHAS rezistentní na herbicidy mohou být transformovány do různých druhů plodin v jedné nebo v mnoha kopiích pro navození rezistence na herbicidy. Genetické zpracování plodin s redukovanou sensitivitou na herbicidy může:
1) zvýšit spektrum a flexibilitu aplikace specificky účinných a pro prostředí neškodných herbicidů jako jsou imidazolinonové herbicidy;
9· ····· · • · · ·· • · ··· ·· • · · · ·· • · · ·· ·· ··· ·«
2) zvýšit komerční hodnotu těchto herbicidů;
3) redukovat tlak plevelu na polích zemědělských účinným použitím herbicidů na herbicidy rezistentních zemědělských plodinách a v souladu s tím zvýšit výnos;
4) zvýšit prodej semen pro rostliny rezistentní na herbicidy;
5) zvýšit rezistenci na poškození rostlin z předávkování herbicidů aplikovaných při dřívějším pěstění;
6) snížit citlivost na změny v charakteristikách herbicidů vzniklých v důsledku vedlejších klimatických podmínek; a
7) zvýšit toleranci k nesprávně nebo chybně aplikovaným herb i c i dům.
Například, mohou být kultivovány transgenní plodiny obsahující AHAS variantní protein. Plodina může být ošetřena plevel kontrolujícím účinným množstvím herbicidu, na který je AHAS variantní transgenní rostlina rezistentní, což vede ke kontrole plevele bez škodlivého ovlivnění kultivované plodiny.
DNA vektory popsané výše, které kódují AHAS varianty rezistentní na herbicidy mohou být dále využity tak, že exprese AHAS variant poskytuje selektovatelný markér pro transformaci buněk vektorem. Zamýšlená recipientní buňka může být v kultuře nebo in šitu, a AHAS variantní gen může být použit samostatně nebo v kombinaci s jinými selektovatelnými markéry. Jediným požadavkem je, aby byla recipientní buňka citlivá na cytotoxický účinek příbuzného herbicidu. Toto provedení má výhodu relativně • · · · · · ·· • · · ·· • · · · · ·· • · · · ·· • · · ·· ·· ····β *· ·· • · · · • · · · • · · · · • · · • · · · nízké ceny a chybění toxicity, například, na imidazo1inonu založených herbicidů, a může být použito v jakémkoliv systému, který vyžaduje DNA mediovanou transformaci.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady jsou míněny jako ilustrace vynálezu bez j eho omezení.
Příklad 1: Vývoj AHAS variant rezistentních na herbicidy
Zbytky, které jsou umístěny těsně u navrhovaného vazebného místa pro herbicid podle modelu, který byl popsán výše, byly vybrány pro mutagenesy pro vývoj aktivního AHAS polypeptidu se sníženou vazebnou kapacitou pro herbicid. Každé místo na povrchu vazebné kapsy bylo uvažováno ve smyslu potenciálních interakcí s jinými zbytky v kapse, stejně jako s kofaktory a herbicidy. Například, při adici pozitivně nabitého zbytku je uvažováno, že bude interferovat s distribucí náboje uvnitř vazebného místa, což povede ke ztrátě afinity vazby negativně nabitého herbicidu.
Byly identifikovány tři zbytky jako nejvíce užitečné pro mutagenesi:
1) O F135 se soudilo, že interaguje jak s isoa11oxazi novým kruhem FAD, tak s aromatickou skupinou herbicidů. V souladu se strategií zavedení více nabitých zbytků do vazebné kapsy byl tento zbytek změněn na arginin.
2) M53 kontaktuje šroubovici 498 - 507. Tato šroubovice obsahuje známá mutační místa rezistence na herbicidy a je také
♦ · <· • · · • ·· • · · · · • · · ·· ·· předpokládána ve vazbě TPP. Dále, o substituci kyseliny glutamové v pozici 53 se soudí, že usnadňuje interakci s K185, což redukuje afinitu K185 ke karoxylatové skupině imazethapyru.
3) R128 je umístěn poblíž vchodu do kapsy, kde se soudí, že se účastní počátečního transportu nabitých herbicidů do vazebné kapsy. Tento zbytek byl změněn na alanin pro odstranění jeho náboje a jeho dlouhého hydrofobního postranního řetězce.
Příklad 2: Místně řízená mutageneze AHAS pro produkci variant rezistentních na herbicidy
Arabidopsis AHAS gen byl insertován v rámečku na 3' konec kódujícího regionu genu pro glutathion-S-transferasu v pGEX-2T vektoru (Pharmacia). Konstrukce vektoru tímto způsobem uchovává šesti aminokyselinovou thrombin rozpoznávající sekvenci ve spojení exprivovaného glutathion-S-transferasa/AHAS fúzního proteinu.Trávení thrombinem exprivovaného fúzního proteinu vede k AHAS proteinu s N-koncovou počáteční pozicí na konci přechodného peptidu v putativním místě pro zpracování přechodného peptidu, s reziduálním N-koncovým glycinem odvozeným od rozpoznávacího místa pro thrombin. Konečný amino-konec štěpeného AHAS proteinu se skládá z Gly-Ser-Ser-I1e-Ser. Místně řízené mutace byly zavedeny do AHAS genu v tomto vektoru.
Místně řízené mutace byly konstruovány podle PCR metody podle Higuchi (Recombinant PCR, v MA Innis, et al., PCR protocols: A Guide to Methods and Applications, Academics Press, San Diego, str. 177 - 183, 1990). Dva PCR produkty, každý přesahující mutační místo, byly amp1 ifikovány. Primery v přesahujjícím regionu obsahovaly mutace. Přesahující PCR amplifikované • · fragmenty byly kombinovány, denaturovány a tepelně zpracovány dohromady, za produkce dvou možných heteroduplexních produktů se zkrácenými 3' konci. Zkrácené 3'-konce byly rozšířeny Taq DNA polymerasou za produkce fragmentu, který byl sumou dvou přesahujících PCR produktů obsahujících požadovanou mutaci. Následující reamplifikace tohoto fragmentu s pouze dvěma zevními primery vedla k obohacení produktu kompletní délky. Produkt obsahující mutaci byl potom znovu zaveden do Arabidopsis AHAS genu v pGEX-2T vektoru.
Příklad 3: Exprese a purifikace AHAS variant
A. Metody
E. coli (DH5a) buňky transformované pGEX~2T vektorem obsahujícím bud přirozený typ AHAS genu kukuřice (vektor označený pAC751), Arabidopsis Ser653Asn mutant, nebo Arabidopsis Ile401Phe mutant, byly kultivovány přes noc v LB bujónu obsahujícím 50 pg/ml ampicilinu. Kultura E. coli kultivovaná přes noc byla ředěna 1:10 v 1 1 LB, 50 pg/ml ampicilinu, a 0,1% objem/objem protipěnivého přípravku A. Kultura byla inkubována při 37 °C s třepáním, dokud ODeoo nedosáhlo přibližně 0,8. Byla přidána isopropylthiogalaktosa (IPTG) do konečné koncentrace 1 mM a kultura byla inkubována po další tři hodiny.
Buňky byly sklízeny centrifugací při 8670 x g po 10 minut na JA-10 rotoru a byly resuspendovány v 1/100 původního objemu kultury v MTPBS (16 mM Na2HPO4, 4 mM NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7,3). Byly přidány Triton X-100 a lysozym v konečné koncentraci 1% objem/objem a 100 pg/ml, v příslušném pořadí. Buňky byly inkubovány při 30 °C po 15 minut, ochlazeny na 4 °C na ledu a
* · · · · • · · · · · • · · · · • · · · · · · • · · · ··· ·· ·· • · · · · byly lysovány sonikací po 10 sekund stupněm 7 s Branson Sonifier Cell Disrupter vybaveném mikrotip sondou. Buněk prostý extrakt byl centrifugován při 35000 x g po 10 minut při 4 °C. Supernatant byl slit a krok centrifugace byl opakován.
Purifikace exprivovaných fúzních proteinů byla provedena modifikovaným způsobem podle Smith a Johnson (Gene 67: 31 40, 1988). Supernatant byl ohřát na pokojovou teplotu a byl zaveden do 2 ml kolony glutathion-agarosových korálků (sírová vazba, Sigma) ekvi1ibrovaných v MTPBS. Kolona byla následně promyta MTPBS při pokojové teplotě, dokud A28O eluátu neodpovídal této hodnotě pro MTPBS. Fúzní protein byl potom eluován za použití roztoku obsahujícího 5 mM redukovaného glutathionu v 50 mM Tris HCI, pH 8,0. Eluovaný fúzní protein byl ošetřen přibližně 30 NIH jednotkami thrombinu a byl dialyzován proti 50 mM citrátu pH 6,5 a 150 mM NaCl.
Fúzní protein byl tráven při pokojové teplotě přes noc. Trávené vzorky byly dialyzovány proti MTPBS a pasážovány dvakrát přes glutathion agarosovou kolonu ekvi1ibrovanou v MTPBS pro odstranění glutathion transferasového proteinu. Proteinová frakce, která se nenavázala na kolonu, byla odebrána a byla koncentrována ultrafi 1trací na YM10 filtru (Amicon). Koncentrované vzorky byly zavedeny na 1,5 x 95 cm Sephacryl S-100 gelovou filtrační kolonu ekvi1ibrovanou v gelovém fitračním pufru (50 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7,0). Dvou ml frakce byly odebrány při průtoku 0,14 ml/min. Stabilita enzymu byla testována uskladněním enzymu při 4 °C v gelovém filtračním pufru s přidáním 0,02% azidu sodného a za přítomnosti nebo za absence 2 mM thiamin pyrofosfátu a 100 μΜ flavin adenin dinukleotidu (FAD).
• · *
·· ···· ·· • · · ·· • · ··· ·· • · · · ·· • · · ·· • · · · · · · • · • · • ♦ · · · • · · • · · ·
B. Výsledky
E. coli transformovaná pAC751 plasmidem obsahujícím přirozený AHAS gen downstream a v rámečku s GST genem exprivovala při indukci IPTG 91 kDa protein. 91 kDa protein vykazoval předpokládanou molekulovou hmotnost GST/AHAS fúzního proteinu (součet 26 a 65 kDa, v příslušném pořadí). Při pasážování buněk prostého extraktu DH5ct/pAC751 přes glutathion-agarosový afinitní gel, promytí a eluování volného glutathionu byl získán přípravek bohatý na 91 kDa protein (obrázek 6, linie C). Šesti aminokyselinové rozpoznávací místo pro thrombin zapracované do spojení GST a AHAS bylo úspěšně štěpeno thrombinem (obrázek 6, linie D). Přípravek štěpeného fúzního proteinu se skládal z očekávaného 26 kDa GST proteinu a 65 kDa kukuřičného AHAS proteinu. Kukuřičný AHAS protein byl purifikován do homogenity druhou pasáží přes glutathion-agarosovou kolonu pro afinitní vyloučení GST a byl podroben konečnému kroku Sephacryl S—100 gelové filtrace pro eliminaci thrombinu (Obrázek 6, linie E). 65 kDa protein je rozpoznán na western blotech monoklonální protilátkou namířenou proti kukuřičnému AHAS peptidu.
Purifikovaný přirozený kukuřičný AHAS byl analyzován elektrospreyovou hmotovou spektrometrií a bylo určeno, že má molekulovou hmotnost 64996 daltonů (data nejsou ukázána). Předpokádaná hmotnost, jak je vypočítána z určené aminokyse1onové sekvence genu inzertovaného do pGEX-2T vektoru, je 65058. 0,096% diskrepance mezi empiricky určenou a předpokládanou hmotností byla v mezích variability hmotového spektrometru. Blízkost dvou určení hmotnosti naznačuje, že zde nejsou chybně inkorporované nukleotidy během konstrukce expresního vektoru, ani jakékoliv posttranslační modifikace • · · · · ·
proteinu, které by mohly způsobit velké změny v molekulové hmotnosti. Kromě toho, chybění nepravých peaků v přípravku purifi kovaného enzymu ukazuje, že vzorek byl prostý kontaminace.
Příklad 4: Enzymatické vlastnosti AHAS variant
Enzymatické vlastnosti přirozených a variantních AHAS produkovaných E. coli byly měřeny modifikací metody podle Sing et al., (Anal. Biochem., 171: 173 - 179, 1988) následovně:
Reakční směs obsahující 1 x AHAS testovací pufr (50 mM HEPES, pH 7,0, 100 mM pyruvát, 10 mM MgC12, 1 mM thiamin pyrofosfát (TPP) a 50 μΜ flavin adenin dinukleotid (FAD)) byla získána bud ředěním enzymu v 2x testovacím pufru nebo přídavkem koncentrovaného enzymu do lx AHAS testovacího pufru. Všechny testy obsahující imazethapyr a asociované kontroly obsahovaly konečnou koncentraci 5% DMSO díky adici imazethapyru do testovací směsi jako 50% DMSO roztoku. Testy byly provedeny v konečném objemu 250 μΐ při 37 °C na mikrotitračních plotnách. Po umožnění vývoje reakce po 60 minut byla akumulace acetolaktátu měřena kolorimetricky jak popsal Singh et al., Anal. Biochem. 171: 173 - 179, 1988.
Kukuřičná AHAS exprivovaná a purifikovaná z pAC751 jak je popsáno v příkladu 3, výše, je aktivní v konverzi pyruvátu na acetolaktát. Celá aktivita AHAS je závislá na přítomnosti kofaktorů FAD a TPP v testovacím mediu. Žádná aktivita nebyla detegována, pokud byla přidána pouze FAD do testovacího media. Aktivita purifikovaného enzymu s pouze TPP, nebo bez kofaktorů, byla menší než 1 % aktivity detekované za přítomnosti jak TPP, tak FAD. Normálně je AHAS přítomná v surových rostliných • · · · · · • · • · ·· ·· • · · • *· • · · · · ·· ··· extraktech velmi labilní, zejména za absence substrátu a kofaktorů. Oproti tomu, purifikovaná AHAS z bakteriálních expresních systémů nevykazovala žádnou ztrátu katalytické aktivity, pokud byla skladována jeden měsíc při 4 °C v 50 mM HE/ES pH 7,0, 150 mM NaCl, 0,02% NaN3 za přítomnosti nebo za absence FAD a TPP. Kromě toho, žádné degradační produkty nebyly viditelné v těchto přípravcích, pokud byly vyšetřovány na SDS-PAGE gelech.
Specifické aktivity přirozené AHAS a M124E, R199A a F206R variant jsou ukázány v tabulce 2, níže. Jak je určeno ze sestavení na obrázku 5, M124E mutace v Arabidopsis AHAS je ekvivalentní M53E mutaci kukuřice, R199A mutace v Arabidopsis AHAS je ekvivalentní R128A mutaci kukuřice, a F206R mutace v Arabidopsis AHAS je ekvivalentní F135R mutaci kukuřice. Mutace vyvinuté ve strukturálním modelu kukuřičné AHAS byly použity pro identifikaci ekvivalentních aminokyselin v dvojděložním Arabidopsis AHAS genu a byly inkorporovány do a testovány v Arabidopsis AHAS genu. Tato translace a inkorporace racionálně vyvinutých herbicidových mutací do dvojděložního Arabidopsis AHAS genu mohou usnadnit hodnocení rezistence na herbicidy u dvojdě1ožních rostlinných druhů.
·· ···· • · · • · ··· • · · · • * · ·· ···
• ·· ·· ·· · ·« « • · · · ·
Specifická aktivita
Tabulka 2
| 1 1 1 1 | specifická aktivita | 1 % katalytické | aktivity ve srovnání| s přirozeným typem | I |
| 1 |přirozený typ | 99,8 | 1 100 | |
| |Met124G1U | 9, 15 | 9,16 | |
| |Arg199A1a | 86,3 | 86,5 | |
| |Phe206Arg 1 | 5,07 | 5,1 | 1 |
R199A mutace udržuje vysokou hladinu katalytické aktivity (tabulka 2), zatímco vykazuje signifikantní hladinu rezistence na imazethapyr (obr. 7). Důležité je, že tato varianta si zachovává úplnou citlivost na sulfonylmočoviny (obr. 8). Tak tato varianta splňuje kriteria vysoké specifické aktivity a selektivní rezistence na herbicidy. Oproti tomu, M124E substituce vede k téměř úplné rezistenci na imazethapyr (obr. 7), ale také vykazuje vážně redukovanou katalytickou aktivitu (tabulka 2). Ve vztahu k rezistenci na imidazolinon vykazuje tato varianta vyšší citlivoxt na sulfonylmočovinu (obr. 8), což naznačuje, že tento zbytek je dobrým kandidátem pro vytvoření mutací, které udílejí selektivně rezistenci. Substituce aminokyseliny jiné než kyseliny glutamové může napomoci uchování katalytické aktivity. F206R substituce dává podobné výsledky jako jsou ty, které jsou pozorovány u M124E varianty, ale chybí ji selektivita rezistence.
99 99
9 9 9 9
9 9 99 · 99 9 9 9
9 9 9
999 99 99
999999
9 9 99
9 999 99
9 9 « ·· • · · ··
99999
Příklad 5: Opakovaná vylepšení AHAS variant rezistentních na herbicidy za použití přístupu racionálního vývoje
Změna zbytku 124 v AHAS z Met na Glu jak je popsáno v příkladu 4 výše uděluje rezistenci na imidazolinony, ale také redukuje enzymatickou aktivitu na 9,2% hodnoty přirozeného typu. Model kukuřičné AHAS struktury popsaný výše naznačuje, že Met53 (ekvivalentní Arabidopsis Metl24 zbytku) interaguje se sérií hydrofobních zbytků na straně α-šroubovice, která je odvozena od separátní podjednotky, ale jsou v těsné blízkosti Met53. Tak, hydrofobní interakce mezi Met53 a zbytky na šroubovici mohou stabilizovat jak asociaci podjednotka/podjednotka, tak konformaci aktivního místa. Soudilo se, že substituce hydrofobního Met zbytku s nabitým glutamatovým zbytkem s největší pravděpodobností destabilizuje inter-podjednotkové hydrofobní interakce a vede ke ztrátě katalytické aktivity.
Na základě analýz struktura/funkce byla potom aktivita původního Arabidopsis Metl24Glu (ekvivalentního ke kukuřičnému Met53Glu) mutantního enzymu opakovaně vylepšena substitucí více hydrofobní aminokyseliny (Ile) v této pozici. Hydrofobní charakter Ile postraního řetězce vedl k znovunavození aktivity na úroveň přirozeného typu (specifická aktivita 102, ekvivalentní 102% aktivity přirozeného typu), ale s větší objem Ile postraního řetězce byl stále schopen udržet signifikantní hladinu rezistence na imidazolinon (obr. 9).
Při srovnání, substituce histidinového zbytku do této pozice vedla k AHAS variantě vykazující specifickou aktivitu 42,5, ekvivalentní 42,6% aktivity přirozeného typu. Tento mutant, nicméně, vykazoval vysoký stupeň rezistence na PURSUITR.
• · · · · · • ·
• · • · · · · • · · · · · · • · · · • · · · · · a
Příklad 6: Opakovaná vylepšení AHAS variant rezistentních na herbicidy za použití přístupu racionálního vývoje
Jiným příkladem opakované vylepšení za použití metod podle předkládaného vynálezu je Argl28Ala varianta. Strukturální model kukuřičné AHAS naznačuje, že Arg 128 zbytek, který je umístěn na okraj vazebného místa pro herbicid, se účastní zavádění nabitých substrátů a herbicidů do vazebného místa pro herbicid a do aktivního místa. Arg 128 je daleko od TPP skupiny, která váže iniciální molekulu pyruvátu v reakčním mechanismu AHAS, což vysvětluje, proč substituce Arabidopsis AHAS Arg 199 (ekvivalentní k kukužičnému Argl28) za alanin má malý účinek na katalytickou aktivitu enzymu. Strukturální model dále ukazuje, že v této pozici může být provedena více radikální změna pro dosažení hladiny rezistence za udržení vysoké hladiny katalytické aktivity. Na tomto základě bylo provedeno opakované vylepšení mutace pro substituci pozitivně nabitého argininového zbytku za negativně nabitý glutamatový zbytek. Takto mutovaný enzym měl vylepšené hladiny rezistence na PURSUITR za zachování vysoké úrovně aktivity (specifická aktivita 114, ekvivalentní 114% aktivity přirozeného typu) (obr. 11).
Příklad 7: Zaměnitelnost AHAS odvozených od různých druhů v na struktuře založeném racionálním vývoji AHAS variant rezistentních na herbicidy
Strukturální model trojrozměrné struktury AHAS je sestaven s jednoděložnou AHAS sekvencí jako je například ta, která je odvozena od kukuřice, jak bylo popsáno výše. Pro zavedení mutací do AHAS odvozených od dvojdě1ožných druhů jako je Arabidopsis byly sekvence AHAS odvozené od jednodě1ožných a dvojdě1 ožných • · · · · · 9 9 · 9 99 9
9 9 9 9 99 9 9 99
9 9 99 9 9 9 9 9 99
9 999 9 9 9 99999
9 9 9 9 9 9 99
999 99 999 9999 druhů sestaveny za použití GAP a PILEUP programů (Genetics Computer Group, 575, Sequence Drive, Madison, WI 53711). Ekvivalentní pozice jsou určeny z počítačově generovaného sestavení. Mutace jsou potom zavedeny do dvojdě1ožného AHAS genu jak bylo popsáno výše. Po expresi mutantniho AHAS proteinu v E. coli a hodnocení jeho biochemických vlastnosstí (t.j. specifické aktivity a rezistence na herbicidy) je mutantni gen zaveden do dvojděložné rostliny rostlinou transformační metodou jak byla popsána výše.
Příklad 8: Produkce rostlin rezistentních na herbicidy transformací racionálně vyvinutými AHAS geny
DNA konstrukty:
Racionálně vyvinuté AHAS variantní geny obsažené v expresních vektorech E. coli byly použity jako zdroj DNA restrikčních fragmentů pro nahrazení ekvivalentních restrikčních fragmetnů v Arabidopsis AHAS genu. Tento gen je přítomen v 5,5 kb fragmentu genomové DNA, který také obsahuje Arabidopsis AHAS promotor, Arabidopsis AHAS terminační sekvenci a 5'- a 3'- sousedící DNA. Po provedení DNA sekvencování přes mutační místa pro potvrzení přítomnosti správných mutací byl celý 5,5 kb fragment z každého plasmidu insertován do na pBIN založeného rostliného transformačního vektoru (Mogen, Leiden, Netherlands). Rostlinný transformační vektor také obsahoval neomycin fosfotransferasa II (nptll) gen pro rezistenci na kanamycin řízený 35S promotorem viru květákové mozaiky. Konečný vektorový konstrukt je ukázán na obrázku 12. Vektory obsahující Arabidopsis AHAS geny s Metl24Ile, Metl24His, a Argl99Glu mutace (korespondující Met53Ile, Met53His a Argl28Glu mutacím AHAS sekvence u kukuřice
Φ © φφφφ φ φ φ φ φ φ φ φ ♦ · · · «· φφφφ · · · · · φ Φ Φ ΦΦΦ • Φ φφφ Φ φ ř φφφφ φ
Φ Φ φφφφ φφφ
ΦΦ ΦΦΦ Φ Φ ΦΦΦ «Φ ΦΦ jak je ukázáno na obr. 1) byly označeny pJK002, pJK003, a pJK004, v příslušném pořadí.
Každý z těchto vektorů byl transformován do Agrobacterium tumefaciens kmene LBA4404 (R&D Life Technologies, Gaithersburg, MD) za použití transformační metody popsané v An et al., Plant. Mol. Biol. Manual., A3: 1 - 19 (1988).
Transformace rostlin
Transformace listových disků Nicotiana tabacum cv. Wisconsin 38 byla provedena podle Horshc et al., (Science, 227: 1229 1231, 1985) s drobnými modifikacemi. Listové disky byly odebrány od rostliny kultivované za sterilních podmínek a byly ko-kultivovány horní stranou dolů v Murashige Skoog mediu (Sigma Chemicals Co., St. Louis, MO) po 2-3 dny při 25 °C ve tmě se kmeny Agrobacterium tumefaciens obsahujícími plasmidy pJK002, pJK003, nebo pJK004. Disky byly blotovány za sucha a přeneseny do regeneračního Murashige Skoog media s B5 vitaminy obsahujícími 1 mg/1 benzyladeninu a 0,1 mg/1 1-naftyloctové kyseliny, 100 mg/1 kanamycinu a 500 mg/1 cefotaximu (vše získáno od S i gma) .
Nejprve byly transformanty selektovány rezistencí na kanamycin udílenou nptll genem přítomným ve transformačních vektorech. Výhonky odvozené z listových disků byly excidovány a umístěny na čerstvém Murashige Skoog hormonů prostém mediu obsahujícím cefotaxim a kanamycin.
• · · · · · • ·· • ·· · · • ·· • ·· «· · ·· • · · · « · · · · · • · · • · « ·
In vivo rezistence na herbicidy přeneseny do koncentraci
Tabákové výhonky rezistentní na kanamycin media obsahujícího 0,25 μΜ imazethapyru. Při imidazo1inonového herbicidu nebyly schopné netransformované tabákové výhonky (obsahující endogenní přirozený typ AHAS) iniciace tvorby byly pozorovány mutantních AHAS byly této kořínků. Oproti tomu, iniciace kořínků a růst u tabákových výhonků transformovaných každým z genů. Kořínky vyvíjené z výhonků transformovaných Metl24Ile a Argl99Glu mutantními přirozeným typem jsou ukázány na obrázku 1. Kromě transformované Metl24Ile nebo Argl99Glu mutantními g/ha) geny spolu s toho, rostliny geny byly rezistentní na postřik dvojnásobnou dávkou (100
13). Charakter růstu kořínků . netransformovaných rostlin herbicidem naznačují, rezistenci na herbicidy udílí rezistenci na imazethapyru (obr. transformovaných vs chování po postřiku vyvíjených genů pro herbicidy in vivo.
stejně jako že exprese racionálně
Detekce racionálně vyvíjených genů u tabáku rezistentního na herbi cidy
Genomová DNA byla izolována od AHAS transformovaných rostlin tabáku a přítomnost Arabidopsis AHAS variantních genů byla potvrzena PCR analýzou. Rozdíly mezi nukleotidovými sekvencemi Arabidopsis AHAS genu a dvěma AHAS geny tabáku byly využity pro vývoj PCR primerů, které amplifikují pouze Arabidopsis gen na pozadí genomové DNA tabáku. Racionálně vyvinuté geny rezistence na herbicidy byly detegovány, jak je ukázáno, amplifikací DNA fragmentu správné velikosti, ve většině rostlin rezistentních na herbicidy. Žádný PCR signál nebyl pozorován u netransformovaných
Φ · · · · • · · · · · • · · · · • · · · · · · • · · ·
tabákových rostlin.
Segregace transformovaných AHAS genů
Pro monitorování segregace racionálně vyvinutých AHAS genů u transformovaných rostlin byly provedeny germinační testy. Semena byla umístěna v hormonů prostém Murashige Skoog mediu obsahujícím více než 2,5 μΜ PURSUITR a 100 μΜ kanamycinu. Vzniklé semenáčky byly vizuálně odečítány na rezistenci nebo na citlivost na herbicid.
Protože rostliny tabáku jsou diploidní, bylo očekáváno, že potomstvo samoopy1ených rostlin by mělo segregovat 3:1 rezistentní:ci11 ivé, což odráží existenci 1 semenáčku homozygotního pro rezistentní AHAS gen, 2 semenáčků heterozygotních pro rezistentní AHAS gen a 1 semenáčku postrádajícího rezistentní AHAS gen.
Výsledky ukazují, že rezistentní AHAS geny jsou segregující v očekávaném poměru 3:1, což podporuje závěr, že rezistence na herbicidy je udílena jednou, dominantní kopií racionálně vyvíjeného AHAS genu.
Tyto výsledky ukazují, že racionální vývoj genů AHAS rezistentní na herbicidy může být použit pro produkci rostlin, které vykazují na herbicidy rezistentní růst in vivo.
Příklad 9: Produkce rostlin zkříženě rezistentních na různé herbicidy transformací racionálně vyvinutými AHAS geny
Tabákové rostliny transformované racionálně vyvinutými AHAS geny jak bylo popsáno v příkladu 8, výše, byly také testovány na zkříženou rezistenci na jiný herbicid, CL 299263 (také známý jako imazamox). Germinační testy byly provedeny na semenech získaných od primárních transformantů obsahujících Metl24Ile, Metl24His a Argl99Glu Arabidopsis AHAS variantní geny, za přítomnosti nebo za absence 2,5 μΜ CL 299263 (obr. 15). Tato koncentrace herbicidu způsobuje těžkou zakrslost a odbarvení přirozených rostlin tabáku. Tabákové rostliny transformované Metl24His genem vykazovaly vyšší hladinu rezistence (obr. 15). Argl99Glu transformanty vykazovaly střední hladinu rezistence, zatímco Metl24Ile vykazovaly slabou rezistenci (obr.15).
Všechny patenty, aplikace, články, publikace a testovací metody jsou zde uvedeny jako odkazy.
Mnoho variací předkládaného vynálezu bude odborníkům v oboru zřejmých ve světle výše uvedeného podrobného popisu. Takové variace spadají plně do rozsahu připojených patentových nároků.
Claims (9)
1. Způsob modelování založený na struktuře pro produkci AHAS variantního proteinu rezistentního na herbicidy vyznačující se t í m, že obsahuje:
(a) sestavení cílového AHAS proteinu na pyruvát oxidasovém templátu nebo ekvivalentu AHAS modelování pro odvození trojrozměrné struktury uvedeného cílového AHAS proteinu;
(b) modelování jednoho nebo více herbicidů do uvedené trojrozměrné struktury pro lokalizaci vazebného místa pro herbicid v uvedeném cílovém AHAS proteinu;
(c) selekci alespoň jedné aminokyselinové pozice v uvedeném cílovém AHAS proteinu jako cíle pro mutaci, kde uvedená mutace pozměňuje afinitu alespoň jednoho herbicidu k uvedenému vazebnému místu;
(d) mutaci DNA kódující uvedený cílový AHAS protein pro produkci mutantni DNA kódující variantní AHAS obsahující uvedenou mutaci v uvedené pozici; a (e) expresi mutované DNA v jedné buňce, za podmínek, za kterých je produkován uvedený variantní AHAS obsahující mutaci uvedené pozici.
2. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 1 vyznačující se tím, že dále obsahuje:
(f) expresi DNA kódující přirozený AHAS protein paralelně ve druhé buňce;
(s) purifikaci uvedených přirozených a uvedených variantních AHAS proteinů z uvedených buněk;
(h) testování uvedených přirozených a uvedených variantních
AHAS proteinů na katalytickou aktivitu v konverzi pyruvátu na acetolaktát nebo v kondenzaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, za absence a za přítomnosti uvedeného alespoň jednoho herbicidu; a (i) opakování kroků (c) - (h), kde je uvedená DNA kódující uvedenou variantu v kroku (e) použita jako AHAS kódující DNA v kroku (c), dokud není identifikován první AHAS variantní protein rezistentní na herbicid, který má vlastnosti:
(i) za absence alespoň jednoho herbicidu (a) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být také exprivován v uvedené buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, kde tato aktivita je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
• · ···· ·· * · ··· • · · ········ • · ··· · · ·· ··· • · · · · · · · ···· · • · · · · ···· ·· ··· ·· ··· ···· kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežíváni; a (ii) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než je aktivita přirozené AHAS.
3. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 1 vyznačující se tím, že uvedený ekvivalent AHAS modelování je vybrán ze skupiny skládající se z transketo 1 as, karboligas a pyruvát dekarboxy1asy.
4. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 2 vyznačující se tím, že uvedená katalytická aktivita za absence uvedeného více než jednoho herbicidu je větší než asi 20 % katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS za absence uvedeného alespoň jednoho herbicidu.
5. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 4 vyznačující se tím, že uvedený herbicid je imidazolinonový herbicid a uvedený první AHAS variantní protein rezistentní na herbicidy má:
(i) katalytickou aktivitu za absence uvedeného herbicidu vyšší než asi 20% katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS;
(ii) katalytickou aktivitu, které je relativně více rezistentní na přítomnost imidazolinonových herbicidů ve srovnání s přirozenou AHAS; a (iii) katalytickou aktivitu, která je relativně více citlivá na přítomnost sulfonylmočovinových herbicidů ve srovnání s imidazolinonovými herbicidy.
4 4 4 4
4 4 4 4
4 4 4 4 * 4 4 4 4 4
4 4 · sou
4 4 4444 • 4 4
6. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku vyznačující se tím, že uvedené herbicidy j vybrány ze skupiny skládající se z imidazolinonů, sulfonylmočovin, triazolopyrimidinových sulfonamidů, pyrimydy1-oxy-benzoových kyselin, sulfamoylmočovin, sulfokarboxamidů, a jejich kombinací.
7. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku vyznačující se tím, že uvedený cílový AHAS protein je odvozen od Arabidopsis thaliana.
8.
je E.
Způsob modelování n a č u j ící co 1 i .
založený na se tím, struktuře podle nároku 1 že uvedenou první buňkou
Způsob modelování n a č u j ící v y z druhými buňkami jsou E.
založený na se tím, co 1 i .
struktuře podle nároku 2 že uvedenými prvními a
10. Způsob modelování vyznačuj ící založený na se tím, struktuře podle nároku 1 že uvedený cílový AHAS protein obsahuje protein mající sekvenci podle obrázku 1 nebo jeho funkční ekvivalent.
11. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 1 c í se t í vyznačuj í ze skupiny, která se skládá z:
(i) substituce aminokyselinový zbytek sekvence skupiny skládající se z P48, alespoň jedné m, že uvedená mutace je vybrána jiné aminokyseliny za podle obrázku 1 vybraný ze
G49, S52, M53, E54, A84, A95, T96,
funkčních ekvivalentů kteréhokoliv uvedených a z výše a
j akéko1 iv • · · • · kombinace kteréhokoliv z výše uvedených;
(iii) delece alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(iv) adice alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(v) delece alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1;
(vi) adice alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1; nebo (vii) jakoukoliv kombinací kteréhokoliv z výše uvedených.
12. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 11 vyznačující se tím, že uvedená substituce je vybrána ze skupiny skládající se z Met53Trp, Met53Glu, Met53Ila, Met53His, Argl28Ala, Argl28Glu, Phel53Arg, Ile330Phe, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených nebo kombinace kterýchkoliv z výše uvedených.
13. Způsob modelování založený na struktuře pro produkci AHAS variantního proteinu rezistentního na herbicidy vyznačující se tím, že uvedený způsob obsahuje:
(a) sestavení cílového AHAS proteinu na prvním AHAS templátu odvozeném od polypeptidu majícího sekvenci podle obrázku 1 nebo • ·· • · · · jeho funkčním ekvivalentu pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) modelování jednoho nebo více herbicidů do uvedené trojrozměrné struktury pro lokalizaci vazebného místa pro herbicid v uvedeném cílovém AHAS proteinu;
(c) selekci alespoň jedné aminokyselinové pozice v uvedeném cílovém AHAS proteinu jako cíle pro mutaci, kde uvedená mutace pozměňuje afinitu alespoň jednoho herbicidu k uvedenému vazebnému místu;
(d) mutaci DNA kódující uvedený cílový AHAS protein pro produkci mutantní DNA kódující variantní AHAS obsahující uvedenou mutaci v uvedené pozici; a (e) expresi mutované DNA v jedné buňce, za podmínek, za kterých je produkován uvedený variantní AHAS obsahující mutaci v uvedené pozici.
14. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 13 vyznačující se t í m, že dále obsahuje:
(f) expresi DNA kódující přirozený AHAS protein paralelně ve druhé buňce;
(g) purifikaci uvedených přirozených a uvedených variantních AHAS proteinů z uvedených buněk;
(h) testování uvedených přirozených a uvedených variantních AHAS proteinů na katalytickou aktivitu v konversi pyruvátu na • ·· ·· • · · · · · • · · · · • · · · · · · • · · · • · · ♦ · · · acetolaktát nebo v kondensaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, za absence a za přítomnosti uvedeného alespoň jednoho herbicidu; a (i) opakování kroků (c) - (h), kde je uvedená DNA kódující uvedenou variantu v kroku (e) použita jako AHAS kódující DNA v kroku (c), dokud není identifikován první AHAS variantní protein rezistentní na herbicid, který má vlastnosti:
(i) za absence alespoň jednoho herbicidu (a) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být také exprivován v uvedené buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, kde tato aktivita je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a (ii) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než je aktivita přirozené AHAS.
15. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 14 vyznačující se tím, že uvedená katalytická aktivita za absence uvedeného více než jednoho herbicidu je větší než asi 20 % katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS.
······ ·· · ·· ·· ··· ···· ···· • ···· · · · · ··· • · · · · · · · ···· · • · ···· ··· ·· ··· ·· ··« ·· ··
16. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 15 vyznačující se t í m, že uvedený herbicid je imidazo1inonový herbicid a uvedený první AHAS variantní protein rezistentní na herbicidy má:
(i) katalytickou aktivitu za absence uvedeného herbicidu vyšší než asi 20% katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS;
(ii) katalytickou aktivitu, které je relativně více rezistentní na přítomnost imidazo1inonových herbicidů ve srovnání s přirozenou AHAS; a (iii) katalytickou aktivitu, která je relativně více citlivá na přítomnost sulfonylmočovinových herbicidů ve srovnání s imidazolinonovými herbicidy.
17. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 13 vyznačující se tím, že uvedené herbicidy jsou vybrány ze skupiny skládající se z imidazolinonů, sulfonylmočovin, triazolopyrimidinových sulfonamidů, pyrimydy1-oxy-benzoových kyselin, sulfamoylmočovin, sulfokarboxamidů, a jejich kombinací.
18. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 13 vyznačující se t í m, že uvedený cílový AHAS protein je odvozen od Arabidopsis thaliana.
19. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 13 vyznačující se tím, že uvedenou první buňkou je E. coli.
·· ···
20. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 19 vyznačující se tím, že uvedenými prvními a druhými buňkami jsou E. coli.
21. Způsob modelování vyznačuj í c založený na struktuře podle nároku 13 se t í m, že uvedená mutace je vybrána ze skupiny, která se skládá z:
(i) substituce alespoň jedné jiné aminokyseliny za aminokyselinový zbytek sekvence podle obrázku 1 vybraný ze skupiny skládající se z P48, G49, S52, M53, E54, A84, A95, T96,
S97, G98, P99, G100, A101,
T132, D133, F135, Q136,D186,
G263, R267, M277, L278,G279,
V301, R302, F303, D304,R306,
E312, A313, F314, A315,S316,
1330, K332, N333, K334,0335,
H417, Q418, M419, W420,A421,
L439, G440, A441, M442,G443,
L477, M479, Q495, H496,L497,
D505, R506, Y508, K509,A510,
S524, H572, Q573, E574,H575,
P581 ,
V125, R127, R128, M129, 1130, G131 ,
G583 a G584, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených a jakékoliv kombinace kteréhokoliv z výše uvedených.
(ii) delece více než 5 aminokyselinových zbytků předcházejících, nebo více než 5 aminokyselinových zbytků následujících alespoň jednomu aminokyselinovému zbytku sekvence podle obrázku 1 vybraného ze skupiny, která se skládá z P48, G49, S52, M53, E54, A84, A95, T96, S97, G98, P99, G100, A101, V125, R127, R128, M129, 1130, G131, T132, D133, F135, • · ···· ·· • · · ·· • · · · · ·· • · · · ·· • · · ·· ·· ··· ··
kombinace kteréhokoliv z výše uvedených;
(iii) delece alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(iv) adice alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(v) delece alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1;
(vi) adice alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1; nebo (vii) jakoukoliv kombinací kteréhokoliv z výše uvedených.
22. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 21 vyznačující se tím, že uvedená substituce je ·· ···· · · • · · ·· • · ··· ·· • · · · ·· • · · ·· ·· ··· ·· • ·· ·· • · · ® · · • · · · · • · · · · · · • · · · ··· ·· ·· vybrána ze skupiny skládající se z Met53Trp, Met53Glu, Met53Ila, Met53His, Argl28Ala, Argl28Glu, Phel53Arg, Ile330Phe, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených nebo kombinace kterýchkoliv z výše uvedených.
23. Způsob modelování založený na struktuře pro produkci
AHAS variantního proteinu rezistentního na herbicidy vyznačující se tím, že uvedený způsob obsahuje:
(a) sestavení cílového AHAS proteinu na prvním AHAS templátu majícím identifikované vazebné místo pro herbicid a majícím sekvenci podle obrázku 1 nebo jeho funkčním ekvivalentu pro odvození trojrozměrné struktury cílového AHAS proteinu;
(b) selekci alespoň jedné aminokyselinové pozice v uvedeném cílovém AHAS proteinu jako cíle pro mutaci, kde uvedená mutace pozměňuje afinitu alespoň jednoho herbicidu k uvedenému vazebnému místu;
(c) mutaci DNA kódující uvedený cílový AHAS protein pro produkci mutantní DNA kódující variantní AHAS obsahující uvedenou mutaci v uvedené pozici; a (d) expresi mutované DNA v jedné buňce, za podmínek, za kterých je produkován uvedený variantní AHAS obsahující mutaci v uvedené pozici.
24. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 23 vyznačující se tím, že dále obsahuje:
(e) expresi DNA kódující přirozený AHAS protein paralelně ve φ φφ φφ φφ φ · φ φ φ · · · · φ φ ··· · φ φ · φ φ φφφ φφ φφ ·· φφφφ·» φφφφ · • ·φφφ ·· φ φ · · ·· φ · φφφ <*· Φ·· φφ druhé buňce;
(f) purifikaci uvedených přirozených a uvedených variantních AHAS proteinů z uvedených buněk;
(g) testování uvedených přirozených a uvedených variantních AHAS proteinů na katalytickou aktivitu v konverzi pyruvátu na acetolaktát nebo v kondenzaci pyruvátu a 2-ketobutyrátu za tvorby acetohydroxybutyrátu, za absence a za přítomnosti uvedeného alespoň jednoho herbicidu; a (h) opakování kroků (b) - (g), kde je uvedená DNA kódující uvedenou variantu v kroku (d) použita jako AHAS kódující DNA v kroku (b), dokud není identifikován první AHAS variantní protein rezistentní na herbicid, který má vlastnosti:
(i) za absence alespoň j ednoho herbicidu (a) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (b) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být také exprivován v uvedené buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, kde tato aktivita je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a • · (ii) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než je aktivita přirozené AHAS.
25. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 24 vyznačující se t í m, že uvedená katalytická aktivita za absence uvedeného více než jednoho herbicidu je větší než asi 20 % katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS.
26. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 25 vyznačující se tím, že uvedený herbicid je imidazolinonový herbicid a uvedený první AHAS variantní protein rezistentní na herbicidy má:
(i) katalytickou aktivitu za absence uvedeného herb i c i du vy š š í než asi 20 % katalytické aktivity uvedené přirozené AHAS;
(ii) katalytickou aktivitu, které je relativně více rezistentní na přítomnost imidazolinonových herbicidů ve srovnání s přirozenou AHAS; a (iii) katalytickou aktivitu, která je relativně více citlivá na přítomnost sulfonylmočovinových herbicidů ve srovnání s imidazolinonovými herbicidy.
27. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 23 v y z n a č u j í c í s e t í m, že uvedené herbicidy jsou vybrány ze skupiny skládající se z imidazolinonů, sulfonylmočovin, triazolopyrimidinových sulfonamidů, pyrimydyl-oxy-benzoových kyselin, sulfamoylmočovin, sulfokarboxamidů, a jejich kombinací.
• · « · • ·
28. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 23 vyznačující se tím, že uvedený cílový AHAS protein je odvozen od Arabidopsis thaliana.
29. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 23 vyznačující se tím, že uvedenou první buňkou je E. co 1 i.
30. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 24 vyznačující se tím, že uvedenými prvními a druhými buňkami jsou E. coli.
31. Způsob modelování založený na struktuře podle nároku 23 vyznačující se tím, že uvedená mutace je vybrána ze skupiny, která se skládá ze:
(i) substituce alespoň jedné jiné aminokyseliny za aminokyselinový zbytek sekvence podle obrázku 1 vybraný ze
• · • · · · • · • · ··» · · • · · * β e • · · · · ·· ··· ·· uvedených a jakékoliv kombinace kteréhokoliv z výše uvedených.
(ii) delece více než 5 aminokyselinových zbytků předcházejících, nebo více než 5 aminokyselinových zbytků následujících alespoň jednomu aminokyse1 i novému zbytku sekvence podle obrázku 1 vybraného ze skupiny, která se skládá
kombinace kteréhokoliv z výše uvedených;
(iii) delece alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(iv) adice alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(v) delece alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1;
······ · · · ·· · ·
9 9 9 9 · · · ···· • · · · · « · · · ·· 9 • · · · 9 · · · ·····
V* 9 9 9 9 9 99
9 9 999 99 999 9 99 9 (vi) adice alespoň jednoho aminokyse funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324
1 lnového sekvence zbytku nebo jeho pod 1e obrázku 1;
nebo (vi i) jakoukoliv kombinaci kteréhokoliv z výše uvedených.
na struktuře podle nároku 31 í m, že uvedená substituce je z Met53Trp, Met53Glu, Met53Ila Phel53Arg, Ile330Phe, funkčních uvedených nebo kombinace
32. Způsob modelování založený vyznačující se t vybrána ze skupiny skládající se Met53His, Argl28Ala, Argl28Glu, ekvivalentů kteréhokoliv z výše kterýchkoliv z výše uvedených.
33. Izolovaná DNA kódující kyselina protein syntetasy (AHAS), kde uvedený AHAS protein modifikovaný:
hydroxyoctová variantní variantní protein obsahuje (i) substitucí alespoň jedné jiné aminokyseliny za aminokyselinový zbytek sekvence podle obrázku 1 vybraný ze skupiny skládající se z P48, G49, S52, M53, E54, A84, A95, T96, S97, G98, P99, G100, A101, V125, R127, R128, M129, 1130, G131,
výše
P581, G583 a G584, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z uvedených a jakékoliv kombinace kteréhokoliv z výše uvedených.
(ii) delecí více než 5 aminokyselinových zbytků předcházejících, nebo více než 5 aminokyselinových zbytků následujících alespoň jednomu aminokyselinovému zbytku sekvence podle obrázku 1 vybraného ze skupiny, která se skládá z P48, G49, S52, M53, ES4, A84, A95, T96, S97, G98, P99, GIGO, A101, V125, R127, R128, M129, 1130, G131, ΊΊ32, D133, F135,
Q136, D186, 1187, T259, T260, L261, M262, G263, R267,M277,
L278, G279, H281, G282, T283, V284, G300, V301, R302,F303,
D304, R306, V307, T308, G309, K310, 1311, E312, A313,F314,
A315, S316, R317, A318, K319, 1320, E329, 1330, K332,N333,
K334, 0335, T404, G413, V414, G415, Q416, H417, Q418,M419,
W420, A421, A422, L434, S435, A437, G438, L439, G440,A441,
M442, G443, D467, S468, S469, L471, N473, L477, M479,Q495,
H496, L497, G498, M499, V501, Q502, Q504, D505, R506,Y508,
K509, A510, N511, R512, A513, H514, T515, S524, H572,Q573,
E574, H575, V576, L577, P578, M579, 1580, P581, G583,G584, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených a jakékoliv kombinace kteréhokoliv z výše uvedených;
(iii) delecí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(iv) adicí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(v) delecí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1;
• · · · ··· nebo j eho obrázku 1‘, okyselinového zbytku
D324 sekvence podle (vi) adicí alespoň jednoho amin funkčního ekvivalentu mezi G300 a nebo (vii) jakoukoliv kombinací kteréhokol i v z výše uvedených.
34. DNA podle nároku 33, kde uvedené modifikace pozměňují schopnost herbicidu inhibovat enzymatickou aktivitu uvedeného proteinu.
35. DNA podle nároku 34, kde uvedený herbicid je vybrán ze skupiny skládající se z imidazolinonú, sulfonylmočovin, triazolopyrimidinových sulfonamidu, pyrimydyl-oxy-benzoových kyselin, sulfamoylmočovin, sulfokarboxamidů, a jejich kombinací
36. DNA podle nároku 33, kde uvedený cílový AHAS protein je odvozen od Arabidopsis thaliana.
37. DNA podle nároku 33, kde uvedená substituce je vybrána ze skupiny skládající se z Met53Trp, Met53Glu, Met53Ila, Met53His, Argl28Ala, Argl28Glu, Phel53Arg, Ile330Phe, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených nebo kombinace kterýchkoliv z výše uvedených.
38. DNA podle nároku 37, kde uvedený variantní AHAS protein má (a) za absence alespoň jednoho herbicidu (i) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo • · · a · (ii) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být také exprivován v uvedené buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, kde tato aktivita je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
kde buňky vyžadují AHAS aktivitu pro přežívání; a (b) má katalytickou aktivitu, která je více rezistentní k alespoň jednomu herbicidu než je aktivita přirozené AHAS.
39. DNA podle nároku 33, kde uvedená variantní AHAS má více než asi 20 % katalytické aktivity přirozeného typu AHAS.
40. DNA podle nároku 39, kde uvedená variantní AHAS je alespoň 2-krát více rezistentní na na imidazolinonech-založené herbicidy než na na sulfonylmočovině založené herbicidy.
41. DNA vektor obsahující DNA sekvenci podle nároku 33 operativně navázanou na transkripční regulační element.
42. Buňka obsahující DNA sekvenci kódující AHAS odvozenou od DNA vektoru podle nároku 41, kde uvedená buňka je vybrána ze skupiny skládající se z bakteriálních, houbových, rostlinných, hmyzích a savčích buněk.
43. Buňka podle nároku 42, která je rostlinou buňkou.
44. Semeno obsahující buňku podle nároku 43.
♦ · · · · · • · · ♦ · 4 · 9
9 9 9 • · · • · · · 9
DNA
45. podle
46.
Variantní AHAS nároku 33.
protein obsahující protein kódovaný
Variantní AHAS protein obsahující
AHAS protein modifikovaný (i) substitucí alespoň jedné jiné aminokyseliny za aminokyselinový zbytek sekvence podle obrázku 1 vybraný ze skupiny skládající se z P48, G49, S52, M53 , E54, A84, A95, T96 S97, G98, P99, G100, A101, V125, R127, R128, M129, 1130, G131, T132, D133, F135, Q136, D186, 1187, T259, T260, L261, M262,
G263, R267, M277, L278, G279, H281, G282, T283, V284,G300,
V301, R302, F303, D304, R306, V307, T308, G309, K310,1311,
E312, A313, F314, A315, S316, R317, A318, K319, 1320,E329,
1330, K332, N333, K334, 0335, T404, G413, V414, G415,Q416,
H417, Q418, M419, W420, A421, A422, L434, S435, A437,G438,
L439, G440, A441, M442, G443, D467, S468, S469, L471,N473,
L477, M479, Q495, H496, L497, G498, M499, V501, Q502,Q504,
D505, R506, Y508, K509, A510, N511, R512, A513, H514,T515,
S524, H572, Q573, E574. H575, V576, L577, P578, M579,1580.
P581, G583 a G584, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených a jakékoliv kombinace kteréhokoliv z výše uvedeních.
(ii) delecí více než 5 aminokyselinových zbytků předcházejících, nebo více než 5 aminokyselinových zbytků následujících alespoň jednomu aminokyselinovému zbytku sekvence podle obrázku 1 vybraného ze skupiny, která se skládá
·· · · · · « -> · • · ·· ·· • · · • * · · « · · · · • · ·♦ «· kombinace kteréhokoliv z výše uvedených;
(ii i) delecí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1;
(iv) adicí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi Q124 a H150 sekvence podle obrázku 1:
(v) delecí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1;
(vi) adicí alespoň jednoho aminokyselinového zbytku nebo jeho funkčního ekvivalentu mezi G300 a D324 sekvence podle obrázku 1; nebo (vii) jakoukoliv kombinací kteréhokoliv z výše uvedených.
47. Variantní AHAS protein podle nároku 46, kde uvedené modifikace pozměňují schopnost herbicidu inhibovat enzymatickou aktivitu uvedeného proteinu.
48. Variantní AHAS protein podle nároku 46, kde uvedený herbicid je vybrán ze skupiny skládající se z imidazolinonú, sulfonylmočovin, triazolopyrimidinových sulfonamidů, pyrimydy1-oxy-benzoových kyselin, sulfamoylmočovin, sulfokarboxamidů, a jejich kombinací.
49. Variantní AHAS protein podle nároku 46, kde uvedený AHAS protein je odvozen od Arabidopsis thaliana.
50. Variantní AHAS protein podle nároku 46, kde uvedená substituce je vybrána ze skupiny skládající se z Met53Trp, Met53Glu, Met53Ila, Met53His, Argl28Ala, Argl28Glu, Phel53Arg, Ile330Phe, funkčních ekvivalentů kteréhokoliv z výše uvedených nebo kombinace kterýchkoliv z výše uvedených.
51. Variantní AHAS protein podle nároku 46, kde uvedený variantní AHAS protein má (a) za absence alespoň jednoho herbicidu (i) má katalytickou aktivitu, která je sama dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován; nebo (ii) má katalytickou aktivitu v kombinaci s nějakým jiným AHAS variantním proteinem rezistentním na herbicid, který může být také exprivován v uvedené buňce, který může být stejný nebo jiný než první AHAS variantní protein, kde tato aktivita je dostatečná k tomu, aby udržela životaschopnost buněk, ve kterých je exprivován;
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/426,125 US5853973A (en) | 1995-04-20 | 1995-04-20 | Structure based designed herbicide resistant products |
| US08/455,355 US5928937A (en) | 1995-04-20 | 1995-05-31 | Structure-based designed herbicide resistant products |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ331797A3 true CZ331797A3 (cs) | 1998-06-17 |
Family
ID=27026922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ973317A CZ331797A3 (cs) | 1995-04-20 | 1996-04-19 | Produkty rezistentní na herbicidy vyvíjené na struktuře založeným způsobem |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6576455B1 (cs) |
| EP (1) | EP0821729B1 (cs) |
| JP (2) | JP4469422B2 (cs) |
| AT (1) | ATE342968T1 (cs) |
| AU (1) | AU5575896A (cs) |
| BR (1) | BR9604993B1 (cs) |
| CA (1) | CA2218526C (cs) |
| CZ (1) | CZ331797A3 (cs) |
| DE (1) | DE69636637T2 (cs) |
| DK (1) | DK0821729T3 (cs) |
| ES (1) | ES2275275T3 (cs) |
| HU (1) | HU226259B1 (cs) |
| MX (1) | MX9708079A (cs) |
| NO (1) | NO326115B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ307012A (cs) |
| PL (1) | PL186091B1 (cs) |
| WO (1) | WO1996033270A1 (cs) |
Families Citing this family (565)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0821729B1 (en) * | 1995-04-20 | 2006-10-18 | Basf Aktiengesellschaft | Structure-based designed herbicide resistant products |
| NZ335101A (en) * | 1996-11-07 | 2000-11-24 | Zeneca Ltd | Herbicide resistant plants comprising more that one resistence gene |
| US6348643B1 (en) | 1998-10-29 | 2002-02-19 | American Cyanamid Company | DNA sequences encoding the arabidopsis acetohydroxy-acid synthase small subunit and methods of use |
| US7019196B1 (en) | 1998-11-05 | 2006-03-28 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Herbicide resistant rice |
| US6809232B1 (en) | 1999-11-29 | 2004-10-26 | Midwest Oilseeds, Inc. | Methods and compositions for the introduction of molecules into cells |
| US7314969B2 (en) | 1999-11-29 | 2008-01-01 | Midwest Oilseeds, Inc. | Methods and compositions for the introduction of molecules into cells |
| PT1280928T (pt) | 2000-05-10 | 2017-01-30 | Univ Louisiana State | Resistência a herbicidas inibidores de aceto-hidroxiácido sintase |
| US20030028919A1 (en) * | 2001-01-25 | 2003-02-06 | Karnosky David F. | Transgenic trees having increased resistance to imidazolinone herbicides |
| TWI377253B (en) * | 2001-04-16 | 2012-11-21 | Martek Biosciences Corp | Product and process for transformation of thraustochytriales microorganisms |
| AU2003249939A1 (en) * | 2002-07-09 | 2004-01-23 | Basf Plant Science Gmbh | Use of ahas mutant genes as selection marker in potato transformation |
| SG155063A1 (en) | 2003-04-29 | 2009-09-30 | Pioneer Hi Bred Int | Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes |
| EP1659855B1 (en) * | 2003-08-29 | 2011-11-02 | Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria | Rice plants having increased tolerance to imidazolinone herbicides |
| US7393922B2 (en) * | 2003-08-29 | 2008-07-01 | The Ohio State University Research Foundation | Insecticidal Cry4Ba proteins with enhanced toxicity |
| DK1740039T3 (da) | 2004-04-30 | 2012-08-20 | Dow Agrosciences Llc | Hidtil ukendte herbicidresistensgener |
| AU2005279457C1 (en) * | 2004-07-30 | 2012-05-17 | Advanta Seeds, B.V. | Herbicide-resistant sunflower plants, plynucleotides encoding herbicide-resistant acetohydroxy acid synthase large subunit proteins, and methods of use |
| ES2692594T1 (es) * | 2005-03-02 | 2018-12-04 | Instituto Nacional De Tecnologia Agropecuaria | Plantas de arroz resistentes a herbicidas, polinucleótidos que codifican proteínas de la subunidad grande de la acetohidroxiácido sintasa resistentes a herbicidas y métodos para su uso |
| US8017400B2 (en) | 2005-05-09 | 2011-09-13 | Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. | Method for transformation using mutant acetolactate synthase gene |
| EA020462B1 (ru) * | 2005-07-01 | 2014-11-28 | Басф Се | Резистентные к гербицидам растения подсолнечника, полинуклеотиды, кодирующие резистентные к гербицидам большие субъединицы белков ацетогидроксикислотной синтазы, и применение растений и полинуклеотидов |
| ES2528914T3 (es) | 2005-10-28 | 2015-02-13 | Dow Agrosciences Llc | Nuevos genes de resistencia a herbicidas |
| US20070118920A1 (en) * | 2005-11-09 | 2007-05-24 | Basf Agrochemical Products B.V. | Herbicide-resistant sunflower plants, polynucleotides encoding herbicide-resistant acetohydroxyacid synthase large subunit proteins, and methods of use |
| AU2007223364B2 (en) | 2006-03-02 | 2014-02-13 | Athenix Corporation | Methods and compositions for improved enzyme activity in transgenic plant |
| US7951995B2 (en) | 2006-06-28 | 2011-05-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof |
| UA108733C2 (uk) | 2006-12-12 | 2015-06-10 | Толерантна до гербіциду рослина соняшника | |
| CL2007003743A1 (es) | 2006-12-22 | 2008-07-11 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos. |
| CL2007003744A1 (es) | 2006-12-22 | 2008-07-11 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende un derivado 2-piridilmetilbenzamida y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos. |
| EP1969930A1 (de) | 2007-03-12 | 2008-09-17 | Bayer CropScience AG | Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| EP1969934A1 (de) | 2007-03-12 | 2008-09-17 | Bayer CropScience AG | 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| EP1969929A1 (de) | 2007-03-12 | 2008-09-17 | Bayer CropScience AG | Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| EP1969931A1 (de) * | 2007-03-12 | 2008-09-17 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Fluoalkylphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| WO2008110279A1 (de) | 2007-03-12 | 2008-09-18 | Bayer Cropscience Ag | Dihalogenphenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide |
| EP2120558B1 (de) | 2007-03-12 | 2016-02-10 | Bayer Intellectual Property GmbH | 3,4-Disubstituierte Phenoxyphenylamidin-Derivate und deren Verwendung als Fungizide |
| US10017827B2 (en) | 2007-04-04 | 2018-07-10 | Nidera S.A. | Herbicide-resistant sunflower plants with multiple herbicide resistant alleles of AHASL1 and methods of use |
| EP2574233A1 (en) | 2007-04-04 | 2013-04-03 | BASF Plant Science GmbH | AHAS mutants |
| WO2008128639A1 (de) | 2007-04-19 | 2008-10-30 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide |
| DE102007045920B4 (de) | 2007-09-26 | 2018-07-05 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Synergistische Wirkstoffkombinationen |
| DE102007045957A1 (de) | 2007-09-26 | 2009-04-09 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akarziden Eigenschaften |
| DE102007045953B4 (de) | 2007-09-26 | 2018-07-05 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| DE102007045922A1 (de) | 2007-09-26 | 2009-04-02 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| DE102007045956A1 (de) | 2007-09-26 | 2009-04-09 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| DE102007045919B4 (de) | 2007-09-26 | 2018-07-05 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| EP2090168A1 (de) | 2008-02-12 | 2009-08-19 | Bayer CropScience AG | Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums |
| BRPI0818295B1 (pt) * | 2007-10-05 | 2022-10-11 | Cibus Europe B.V. | Método para produção de planta resistente à herbicida |
| US8097712B2 (en) | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
| EP2072506A1 (de) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | Bayer CropScience AG | Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| EP2092824A1 (de) | 2008-02-25 | 2009-08-26 | Bayer CropScience AG | Heterocyclyl-Pyrimidine |
| EP2103615A1 (de) | 2008-03-19 | 2009-09-23 | Bayer CropScience AG | 4'4'-Dioxaspiro-spirocyclisch substituierte Tetramate |
| KR20100135952A (ko) | 2008-04-30 | 2010-12-27 | 바이엘 크롭사이언스 아게 | 식물 보호제로서의 티아졸-4-카복실산 에스테르 및 티오에스테르 |
| CA2729426A1 (en) | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Bayer Cropscience Ag | Thiadiazolyloxyphenylamidines and use thereof as fungicides |
| US8697941B2 (en) | 2008-07-23 | 2014-04-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Molecular markers linked to PPO inhibitor tolerance in soybeans |
| US8748695B2 (en) | 2008-07-23 | 2014-06-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Molecular markers linked to PPO inhibitor tolerance in soybeans |
| EP2168434A1 (de) | 2008-08-02 | 2010-03-31 | Bayer CropScience AG | Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress |
| US9371564B2 (en) | 2008-08-08 | 2016-06-21 | Bayer Bioscience N.V. | Methods for plant fiber characterization and identification |
| WO2010017902A1 (de) | 2008-08-14 | 2010-02-18 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Insektizide 4-phenyl-1h-pyrazole |
| DE102008041695A1 (de) | 2008-08-29 | 2010-03-04 | Bayer Cropscience Ag | Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums |
| EP2161259A1 (de) | 2008-09-03 | 2010-03-10 | Bayer CropScience AG | 4-Halogenalkylsubstituierte Diaminopyrimidine als Fungizide |
| BRPI0919380A2 (pt) | 2008-09-26 | 2015-08-18 | Basf Agrochemical Products Bv | Moléculas de ácido nucleico, vetores de expressão, bom como métodos para controlar ervas daninhas e para produzir uma planta brassica |
| CN102216296B (zh) * | 2008-10-01 | 2015-03-18 | 拜耳作物科学公司 | 作为作物保护剂的杂环取代的噻唑类 |
| WO2010037482A2 (de) * | 2008-10-02 | 2010-04-08 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Verwendung von schwefelhaltigen, heteroaromatischen säureanaloga |
| SI2386203T1 (sl) | 2008-10-15 | 2014-03-31 | Bayer Cropscience Ag | Uporaba ditiin tetrakarboksimidov za zatiranje fitopatogenih gljiv |
| EP2184273A1 (de) | 2008-11-05 | 2010-05-12 | Bayer CropScience AG | Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide |
| TW201031327A (en) | 2008-11-14 | 2010-09-01 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations having insecticidal and acaricidal properties |
| EP2201838A1 (de) | 2008-12-05 | 2010-06-30 | Bayer CropScience AG | Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| EP2376487B1 (de) | 2008-12-11 | 2016-01-06 | Bayer Intellectual Property GmbH | Thiazolyoximether und -hydrazone als pflanzenschutzmittel |
| WO2010069495A1 (de) * | 2008-12-18 | 2010-06-24 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Atpenine |
| EP2198710A1 (de) | 2008-12-19 | 2010-06-23 | Bayer CropScience AG | Verwendung von 5-Pyridin-4yl-(1,3)Thiazole zur Bekämpfung phytopathogener Pilze |
| EP2198709A1 (de) | 2008-12-19 | 2010-06-23 | Bayer CropScience AG | Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge |
| CN102333445B (zh) | 2008-12-29 | 2014-09-03 | 拜尔农作物科学股份公司 | 改善利用转基因植物生产潜力的方法 |
| EP2204094A1 (en) | 2008-12-29 | 2010-07-07 | Bayer CropScience AG | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction |
| EP2223602A1 (de) | 2009-02-23 | 2010-09-01 | Bayer CropScience AG | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials genetisch modifizierter Pflanzen |
| EP2039772A2 (en) | 2009-01-06 | 2009-03-25 | Bayer CropScience AG | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction |
| EP2039770A2 (en) | 2009-01-06 | 2009-03-25 | Bayer CropScience AG | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| EP2039771A2 (en) | 2009-01-06 | 2009-03-25 | Bayer CropScience AG | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| WO2010081645A2 (de) | 2009-01-15 | 2010-07-22 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Fungizide wirkstoffkombinationen |
| WO2010081646A2 (de) | 2009-01-15 | 2010-07-22 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Fungizide wirkstoffkombinationen |
| US8487118B2 (en) | 2009-01-19 | 2013-07-16 | Bayer Cropscience Ag | Cyclic diones and their use as insecticides, acaricides and/or fungicides |
| EP2227951A1 (de) | 2009-01-23 | 2010-09-15 | Bayer CropScience AG | Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren |
| BRPI1004930B1 (pt) | 2009-01-28 | 2017-10-17 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Compounds, fungicidal composition and method for controlling phytopathogenic fungi of crops. |
| AR075126A1 (es) | 2009-01-29 | 2011-03-09 | Bayer Cropscience Ag | Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas |
| EP2223917A1 (de) | 2009-02-02 | 2010-09-01 | Bayer CropScience AG | Isothiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| JP6121649B2 (ja) | 2009-02-03 | 2017-04-26 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 殺細菌剤としての硫黄含有複素芳香族酸類似体の使用 |
| EP2218717A1 (en) | 2009-02-17 | 2010-08-18 | Bayer CropScience AG | Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives |
| WO2010094666A2 (en) | 2009-02-17 | 2010-08-26 | Bayer Cropscience Ag | Fungicidal n-(phenylcycloalkyl)carboxamide, n-(benzylcycloalkyl)carboxamide and thiocarboxamide derivatives |
| TW201031331A (en) | 2009-02-19 | 2010-09-01 | Bayer Cropscience Ag | Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance |
| KR101703633B1 (ko) | 2009-03-11 | 2017-02-07 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 할로겐알킬메틸렌옥시페닐-치환된 케토에놀 |
| DE102009001469A1 (de) | 2009-03-11 | 2009-09-24 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| DE102010000662A1 (de) | 2009-03-18 | 2010-10-21 | Bayer Cropscience Ag | Aminopropylthiazol-Derivate als Fungizide |
| DE102009001681A1 (de) | 2009-03-20 | 2010-09-23 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| DE102009001730A1 (de) | 2009-03-23 | 2010-09-30 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| DE102009001732A1 (de) | 2009-03-23 | 2010-09-30 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| DE102009001728A1 (de) | 2009-03-23 | 2010-09-30 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| MX2011009830A (es) | 2009-03-25 | 2011-10-06 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de principios activos con propiedades insecticidas y acaricidas. |
| US8828907B2 (en) | 2009-03-25 | 2014-09-09 | Bayer Cropscience Ag | Active ingredient combinations having insecticidal and acaricidal properties |
| AU2009342807B2 (en) | 2009-03-25 | 2015-04-02 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Synergistic combinations of active ingredients |
| EP2410848A1 (de) | 2009-03-25 | 2012-02-01 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften |
| WO2010108504A1 (de) | 2009-03-25 | 2010-09-30 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften |
| EP2232995A1 (de) | 2009-03-25 | 2010-09-29 | Bayer CropScience AG | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| EP2239331A1 (en) | 2009-04-07 | 2010-10-13 | Bayer CropScience AG | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| WO2010127797A2 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-11 | Bayer Cropscience Ag | Cyclopentanedione compounds and their use as insecticides, acaricides and/or fungicides |
| EP2251331A1 (en) | 2009-05-15 | 2010-11-17 | Bayer CropScience AG | Fungicide pyrazole carboxamides derivatives |
| AR076839A1 (es) | 2009-05-15 | 2011-07-13 | Bayer Cropscience Ag | Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas |
| WO2010133337A1 (de) | 2009-05-19 | 2010-11-25 | Bayer Cropscience Ag | Herbizide spiroheterocyclische tetronsäurederivate |
| EP2253617A1 (de) | 2009-05-20 | 2010-11-24 | Bayer CropScience AG | Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide |
| EP2255626A1 (de) | 2009-05-27 | 2010-12-01 | Bayer CropScience AG | Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress |
| EP2437595B1 (de) | 2009-06-02 | 2018-10-31 | Bayer CropScience AG | Verwendung von fluopyram zur kontrolle von sclerotinia ssp |
| EP2264012A1 (de) | 2009-06-03 | 2010-12-22 | Bayer CropScience AG | Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| EP2264010A1 (de) | 2009-06-03 | 2010-12-22 | Bayer CropScience AG | Hetarylamidine |
| EP2264011A1 (de) | 2009-06-03 | 2010-12-22 | Bayer CropScience AG | Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide |
| EP2440663A1 (en) | 2009-06-09 | 2012-04-18 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Early endosperm promoter and methods of use |
| WO2010145789A1 (en) | 2009-06-18 | 2010-12-23 | Bayer Cropscience Ag | Propargyloxybenzamide derivatives |
| EP2272846A1 (de) | 2009-06-23 | 2011-01-12 | Bayer CropScience AG | Thiazolylpiperidin Derivate als Fungizide |
| EP2277868A1 (de) | 2009-06-24 | 2011-01-26 | Bayer CropScience AG | Phenyloxy(thio)phenylamidbenzoxa(thia)zole |
| EP2277870A1 (de) | 2009-06-24 | 2011-01-26 | Bayer CropScience AG | Substituierte Benzoxa(thia)zole |
| EP2277869A1 (de) | 2009-06-24 | 2011-01-26 | Bayer CropScience AG | Cycloalkylamidbenzoxa(thia)zole als Fungizide |
| EP2451784A1 (de) | 2009-07-08 | 2012-05-16 | Bayer CropScience AG | Phenyl(oxy/thio)alkanol-derivate |
| JP5792164B2 (ja) | 2009-07-08 | 2015-10-07 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 置換フェニル（オキシ／チオ）アルカノール誘導体 |
| CN104430378A (zh) | 2009-07-16 | 2015-03-25 | 拜尔农作物科学股份公司 | 含苯基三唑的协同活性物质结合物 |
| WO2011006604A1 (de) | 2009-07-17 | 2011-01-20 | Bayer Cropscience Ag | Substituierte aminothiazole und deren verwendung als fungizide |
| WO2011015524A2 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | Bayer Cropscience Ag | Fungicide heterocycles derivatives |
| EP2292094A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-09 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| AR077956A1 (es) | 2009-09-14 | 2011-10-05 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos |
| WO2011032656A1 (de) | 2009-09-18 | 2011-03-24 | Bayer Cropscience Ag | 5-fluor-2-thio-substituierte pyrimidin-derivate |
| EP2308866A1 (de) | 2009-10-09 | 2011-04-13 | Bayer CropScience AG | Phenylpyri(mi)dinylpyrazole und ihre Verwendung als Fungizide |
| US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
| EP2488496A1 (en) | 2009-10-16 | 2012-08-22 | Bayer CropScience AG | Aminopropenoates as fungicides |
| WO2011056544A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Somatic ovule specific promoter and methods of use |
| WO2011051243A1 (en) | 2009-10-29 | 2011-05-05 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations |
| CN102712634B (zh) | 2009-10-30 | 2016-04-06 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杂芳基哌啶和杂芳基哌嗪衍生物 |
| WO2011051198A2 (de) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Bayer Cropscience Ag | Pyridin-derivate als pflanzenschutzmittel |
| PH12012500972A1 (en) | 2009-11-17 | 2013-01-07 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations |
| EP2343280A1 (en) | 2009-12-10 | 2011-07-13 | Bayer CropScience AG | Fungicide quinoline derivatives |
| WO2011082941A1 (de) | 2009-12-16 | 2011-07-14 | Bayer Cropscience Ag | Benzylsubstituierte thiadiazolyloxyphenylamidiniumsalze als fungizide |
| PE20130187A1 (es) | 2009-12-21 | 2013-02-28 | Bayer Cropscience Ag | Bis(difluorometil) pirazoles como fungicidas |
| JP2013514970A (ja) | 2009-12-21 | 2013-05-02 | バイエル・クロップサイエンス・アーゲー | チエニルピリ（ミ）ジニルアゾール及び植物病原性菌類を防除するためのそれらの使用 |
| CN102906252A (zh) | 2009-12-23 | 2013-01-30 | 拜尔知识产权有限公司 | 对hppd抑制剂型除草剂耐受的植物 |
| AR079883A1 (es) | 2009-12-23 | 2012-02-29 | Bayer Cropscience Ag | Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd |
| WO2011076892A1 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Bayer Cropscience Ag | Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides |
| WO2011076885A1 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Bayer Cropscience Ag | Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides |
| ES2668198T3 (es) | 2009-12-23 | 2018-05-17 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de HPPD |
| WO2011080255A2 (en) | 2009-12-28 | 2011-07-07 | Bayer Cropscience Ag | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| TWI483679B (zh) | 2009-12-28 | 2015-05-11 | Bayer Ip Gmbh | 殺真菌劑肟醯基（ｈｙｄｒｏｘｉｍｏｙｌ）－雜環衍生物 |
| CN102724879B (zh) | 2009-12-28 | 2015-10-21 | 拜尔农科股份公司 | 杀真菌剂肟基-四唑衍生物 |
| BR112012018108A2 (pt) | 2010-01-22 | 2015-10-20 | Bayer Ip Gmbh | combinações acaricidas e/ou inseticidas de ingredientes ativos |
| WO2011094205A1 (en) | 2010-01-26 | 2011-08-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Hppd-inhibitor herbicide tolerance |
| ES2700996T3 (es) | 2010-02-10 | 2019-02-20 | Bayer Cropscience Ag | Cetoenoles cíclicos sustituidos con bifenilo |
| WO2011098443A1 (de) | 2010-02-10 | 2011-08-18 | Bayer Cropscience Ag | Spiroheterocyclisch-substituierte tetramsäure-derivate |
| UA108638C2 (uk) | 2010-03-04 | 2015-05-25 | Застосування солей імідів малеїнової кислоти для боротьби з фітопатогенними грибами | |
| JP2013521255A (ja) | 2010-03-04 | 2013-06-10 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | フルオロアルキル置換２−アミドベンズイミダゾールおよび植物中のストレス耐性を強化するためのその使用 |
| ES2641642T3 (es) | 2010-03-08 | 2017-11-10 | Monsanto Technology Llc | Moléculas de polinucleótido para regulación génica en plantas |
| BR112012023551A2 (pt) | 2010-03-18 | 2015-09-15 | Bayer Ip Gmbh | aril e hetaril sulfonamidas como agentes ativos contra estresse abiótico em plantas |
| WO2011117184A1 (de) | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Bayer Cropscience Ag | Fludioxonil-derivate |
| WO2011124554A2 (de) | 2010-04-06 | 2011-10-13 | Bayer Cropscience Ag | Verwendung der 4-phenylbuttersäure und/oder ihrer salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen |
| AR081810A1 (es) | 2010-04-07 | 2012-10-24 | Bayer Cropscience Ag | Piridinilpirazoles biciclicos |
| CA2795838A1 (en) | 2010-04-09 | 2011-10-13 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of derivatives of the(1-cyanocyclopropyl)phenylphosphinic acid, the esters thereof and/or the salts thereof for enhancing the tolerance of plants to abiotic stress |
| PT2706058E (pt) | 2010-04-14 | 2015-11-25 | Bayer Ip Gmbh | Derivados de ditiina como fungicidas |
| EP2557930A2 (en) | 2010-04-14 | 2013-02-20 | Bayer CropScience AG | Fungicidal combinations of dithiino-tetracarboxamide derivatives and inorganic salts |
| WO2011128294A1 (de) | 2010-04-14 | 2011-10-20 | Bayer Cropscience Ag | Dithiinopyridazindion-derivate |
| AU2011240063B2 (en) | 2010-04-14 | 2015-01-15 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations |
| EP2377867A1 (de) | 2010-04-14 | 2011-10-19 | Bayer CropScience AG | Dithiinopyridazinon-Derivate |
| CA2796156A1 (en) | 2010-04-14 | 2011-10-20 | Bayer Cropscience Ag | Thienodithiin derivatives as fungicides |
| WO2011134912A1 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-03 | Bayer Cropscience Ag | Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives |
| US20130116287A1 (en) | 2010-04-28 | 2013-05-09 | Christian Beier | Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives |
| BR112012027762B1 (pt) | 2010-04-28 | 2018-06-05 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Derivados de cetoheteroarilpiperidina e - piperazina como fungicidas |
| WO2011134911A2 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-03 | Bayer Cropscience Ag | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| US8815775B2 (en) | 2010-05-18 | 2014-08-26 | Bayer Cropscience Ag | Bis(difluoromethyl)pyrazoles as fungicides |
| CN103025723A (zh) | 2010-05-27 | 2013-04-03 | 拜尔农作物科学股份公司 | 作为杀真菌剂的吡啶基羧酸衍生物 |
| CA2800712A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Carl Friedrich Nising | Heterocyclic alkanol derivatives as fungicides |
| EA021116B1 (ru) | 2010-05-27 | 2015-04-30 | Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх | Гетероциклические производные алканолов в качестве фунгицидов |
| PL2576529T3 (pl) | 2010-05-27 | 2017-10-31 | Bayer Ip Gmbh | Heterocykliczne pochodne alkanolu jako fungicydy |
| KR20130082100A (ko) | 2010-05-27 | 2013-07-18 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 살진균제로서의 헤테로사이클릭 알칸올 유도체 |
| WO2011147813A1 (de) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Bayer Cropscience Ag | Heterocyclische thiosubstituierte alkanolderivate als fungizide |
| PL2576516T3 (pl) | 2010-06-03 | 2015-06-30 | Bayer Ip Gmbh | N-[(het)aryloetylo)]pirazolo(tio)karboksyamidy i ich analogi heteropodstawione |
| UA110703C2 (uk) | 2010-06-03 | 2016-02-10 | Байєр Кропсайнс Аг | Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду |
| JP5730993B2 (ja) | 2010-06-03 | 2015-06-10 | バイエル・クロップサイエンス・アーゲーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ａｇ | Ｎ−［（ヘタ）アリールアルキル）］ピラゾール（チオ）カルボキサミド類及びそれらのヘテロ置換された類似体 |
| US9593317B2 (en) | 2010-06-09 | 2017-03-14 | Bayer Cropscience Nv | Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering |
| CN109504700A (zh) | 2010-06-09 | 2019-03-22 | 拜尔作物科学公司 | 植物基因组改造中常用的在核苷酸序列上修饰植物基因组的方法和工具 |
| WO2011161035A1 (de) | 2010-06-22 | 2011-12-29 | Bayer Cropscience Ag | 3-aryl-4-(2-thienylmethylen)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide |
| WO2011161034A1 (de) | 2010-06-22 | 2011-12-29 | Bayer Cropscience Ag | 3-aryl-4-(2,6-dimethylbenzyliden)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide |
| AR083431A1 (es) | 2010-06-28 | 2013-02-27 | Bayer Cropscience Ag | Compuestos heterociclicos como pesticidas |
| ES2638519T3 (es) | 2010-07-20 | 2017-10-23 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Benzocicloalquenos como agentes antifúngicos |
| EP3058823A1 (en) | 2010-08-05 | 2016-08-24 | Bayer Intellectual Property GmbH | Active compound combinations comprising prothioconazole and fluxapyroxad for controlling oil seed rape diseases |
| US20120122928A1 (en) | 2010-08-11 | 2012-05-17 | Bayer Cropscience Ag | Heteroarylpiperidine and -Piperazine Derivatives as Fungicides |
| CN103237894A (zh) | 2010-08-13 | 2013-08-07 | 先锋国际良种公司 | 包含具有羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)活性的序列的组合物和方法 |
| US8759527B2 (en) | 2010-08-25 | 2014-06-24 | Bayer Cropscience Ag | Heteroarylpiperidine and -piperazine derivatives as fungicides |
| EP2423210A1 (de) | 2010-08-25 | 2012-02-29 | Bayer CropScience AG | Heteroarylpiperidin- und -piperazinderivate als Fungizide |
| AU2011295083A1 (en) | 2010-08-26 | 2013-03-21 | Bayer Intellectual Property Gmbh | 5-iodo-triazole derivatives |
| AU2011298423B2 (en) | 2010-09-03 | 2015-11-05 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Substituted fused pyrimidinones and dihydropyrimidinones |
| WO2012038476A1 (en) | 2010-09-22 | 2012-03-29 | Bayer Cropscience Ag | Use of active ingredients for controlling nematodes in nematode-resistant crops |
| EP2460406A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-06 | Bayer CropScience AG | Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops |
| PE20131399A1 (es) | 2010-10-07 | 2013-12-16 | Bayer Cropscience Ag | Composicion fungicida que comprende un derivado de tetrazoliloxima y un derivado de tiazolilpiperidina |
| WO2012045726A2 (en) | 2010-10-07 | 2012-04-12 | Bayer Cropscience Ag | 5-heteroarylimino-1,2,3-dithiazoles |
| PL2627168T3 (pl) * | 2010-10-15 | 2021-11-02 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Mutanty Beta vulgaris tolerujące herbicydy będące inhibitorami ALS |
| MX2013004286A (es) | 2010-10-21 | 2013-06-05 | Bayer Ip Gmbh | 1(heterociclico carbonil) piperidinas. |
| CA2815105A1 (en) | 2010-10-21 | 2012-04-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | N-benzyl heterocyclic carboxamides |
| CN107033139B (zh) | 2010-10-27 | 2019-11-19 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 作为杀真菌剂的杂芳基哌啶和杂芳基哌嗪衍生物 |
| CN103298802B (zh) | 2010-11-02 | 2016-06-08 | 拜耳知识产权有限责任公司 | N-杂芳基甲基吡唑基羧酰胺 |
| EP2669373B1 (en) | 2010-11-10 | 2016-06-01 | Bayer CropScience AG | HPPD variants and methods of use |
| EP2640706B1 (en) | 2010-11-15 | 2017-03-01 | Bayer Intellectual Property GmbH | N-aryl pyrazole(thio)carboxamides |
| CN103369962A (zh) | 2010-11-15 | 2013-10-23 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 5-卤代吡唑(硫代)甲酰胺 |
| AR083876A1 (es) | 2010-11-15 | 2013-03-27 | Bayer Cropscience Ag | 5-halogenopirazolcarboxamidas |
| CA2818918A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Brassica gat event dp-061061-7 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
| CA2810180C (en) | 2010-11-24 | 2015-07-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Brassica gat event dp-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
| EP3372081A3 (en) | 2010-12-01 | 2018-10-24 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Use of fluopyram for controlling nematodes in crops |
| EP2460407A1 (de) | 2010-12-01 | 2012-06-06 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe |
| TWI667347B (zh) | 2010-12-15 | 2019-08-01 | 瑞士商先正達合夥公司 | 大豆品種ｓｙｈｔ０ｈ２及偵測其之組合物及方法 |
| US20130289077A1 (en) | 2010-12-29 | 2013-10-31 | Juergen Benting | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| EP2474542A1 (en) | 2010-12-29 | 2012-07-11 | Bayer CropScience AG | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| EP2471363A1 (de) | 2010-12-30 | 2012-07-04 | Bayer CropScience AG | Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen |
| CN104987330B (zh) | 2011-02-01 | 2019-04-05 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 作为杀真菌剂的杂芳基哌啶和杂芳基哌嗪衍生物 |
| WO2012110519A1 (de) | 2011-02-17 | 2012-08-23 | Bayer Cropscience Ag | Substituierte 3-(biphenyl-3-yl)-8,8-difluor-4-hydroxy-1-azaspiro[4.5]dec-3-en-2-one zur therapie und halogensubstituierte spirocyclische ketoenole |
| EP2494867A1 (de) | 2011-03-01 | 2012-09-05 | Bayer CropScience AG | Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden |
| CN103415504B (zh) | 2011-03-01 | 2016-04-20 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 2-酰氧基吡咯啉-4-酮类化合物 |
| EP2683239A1 (en) | 2011-03-10 | 2014-01-15 | Bayer Intellectual Property GmbH | Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds |
| EP2499911A1 (en) | 2011-03-11 | 2012-09-19 | Bayer Cropscience AG | Active compound combinations comprising fenhexamid |
| BR112013023502A2 (pt) | 2011-03-14 | 2016-08-02 | Bayer Ip Gmbh | composto fórmula (i), composição fungicida, método para o controle de fungos fitopatogênicos de culturas, utilização dos compostos de fórmula (i) e processo para a produção das composições |
| AU2012230503B2 (en) | 2011-03-18 | 2016-07-07 | Bayer Intellectual Property Gmbh | N-(3-carbamoylphenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamide derivatives and the use thereof for controlling animal pests |
| WO2012126938A2 (en) | 2011-03-23 | 2012-09-27 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations |
| UA111193C2 (uk) | 2011-03-25 | 2016-04-11 | Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх | Застосування n-(тетразол-4-іл)- або n-(триазол-3-іл)арилкарбоксамідів або їх солей для контролю небажаних рослин на площах трансгенних культур, що толерантні до гербіцидів, що є інгібіторами hppd |
| CA2830790A1 (en) | 2011-03-25 | 2012-10-04 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations |
| MX2013010821A (es) | 2011-03-25 | 2013-10-17 | Bayer Ip Gmbh | Uso de n-(1,2,5-oxadiazol-3-il)benzamidas para combatir plantas no deseadas en areas en plantas de cultivo transgenicas tolerantes a los herbicidas inhibidores de la hppd. |
| EP2694494A1 (en) | 2011-04-08 | 2014-02-12 | Bayer Intellectual Property GmbH | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| AR085587A1 (es) | 2011-04-13 | 2013-10-09 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos |
| AR085588A1 (es) | 2011-04-13 | 2013-10-09 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos |
| AR085568A1 (es) | 2011-04-15 | 2013-10-09 | Bayer Cropscience Ag | 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas |
| AR085585A1 (es) | 2011-04-15 | 2013-10-09 | Bayer Cropscience Ag | Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas |
| AR090010A1 (es) | 2011-04-15 | 2014-10-15 | Bayer Cropscience Ag | 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento |
| EP2510787A1 (en) | 2011-04-15 | 2012-10-17 | Bayer Cropscience AG | Propenoates as fungicides |
| EP2511255A1 (de) | 2011-04-15 | 2012-10-17 | Bayer CropScience AG | Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate |
| JP5870186B2 (ja) | 2011-04-22 | 2016-02-24 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | （チオ）カルボキサミド誘導体と殺菌活性化合物を含んでいる活性化合物組合せ |
| UA113408C2 (xx) | 2011-05-17 | 2017-01-25 | Комбінації активних сполук, що містить протіоконазол та іпродіон | |
| EP2524598A1 (en) | 2011-05-17 | 2012-11-21 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations comprising dithianon |
| EP2524599A1 (en) | 2011-05-17 | 2012-11-21 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| EP2524600A1 (en) | 2011-05-17 | 2012-11-21 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations comprising phosphorous acid or a derivative thereof and Tebuconazole or Myclobutanil |
| EP2524601A1 (en) | 2011-05-17 | 2012-11-21 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations comprising a phosphorous acid derivative and cyazofamid |
| EP2718443B1 (en) | 2011-06-06 | 2017-11-29 | Bayer CropScience NV | Methods and means to modify a plant genome at a preselected site |
| EP2532233A1 (en) | 2011-06-07 | 2012-12-12 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| US9241493B2 (en) | 2011-06-14 | 2016-01-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent |
| AR086992A1 (es) | 2011-06-20 | 2014-02-05 | Bayer Ip Gmbh | Tienilpiri(mi)dinilpirazoles |
| EP2540165A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-02 | Bayer CropScience AG | Use of a halogenated pesticide in combination with a biological pest control agent |
| US9173395B2 (en) | 2011-07-04 | 2015-11-03 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of substituted isoquinolinones, isoquinolindiones, isoquinolintriones and dihydroisoquinolinones or in each case salts thereof as active agents against abiotic stress in plants |
| IN2014DN00156A (cs) | 2011-08-10 | 2015-05-22 | Bayer Ip Gmbh | |
| AU2012293611B2 (en) | 2011-08-11 | 2017-02-09 | Bayer Cropscience Ag | 1,2,4-triazolyl-substituted keto-enols |
| MX2014001689A (es) | 2011-08-12 | 2014-05-27 | Bayer Cropscience Nv | Expresion especifica de celula guardiana de transgenes en algodon. |
| US20140206726A1 (en) | 2011-08-22 | 2014-07-24 | Juergen Benting | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| AU2012299691B2 (en) | 2011-08-22 | 2015-01-29 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Methods and means to modify a plant genome |
| EP2561759A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-02-27 | Bayer Cropscience AG | Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth |
| CN103781353B (zh) | 2011-09-09 | 2016-10-19 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 用于改良植物产量的酰基高丝氨酸内酯衍生物 |
| MX347562B (es) | 2011-09-12 | 2017-05-03 | Bayer Ip Gmbh | Derivados fungicidas de 3-fenil[(heterociclilmetoxi)imino]metil}-1 ,2,4-oxadiazol-5(4h)-ona sustituidos en 4. |
| US9840715B1 (en) | 2011-09-13 | 2017-12-12 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants |
| WO2013040005A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| BR112014005975A8 (pt) | 2011-09-13 | 2017-09-12 | Monsanto Technology Llc | Método de controle de planta, método de redução de expressão de um gene pds em uma planta, cassete de expressão microbiana, método de fazer um polinucleotídeo, método de identificação de polinucleotídeos, e composições para controle de erva daninha |
| UA115535C2 (uk) | 2011-09-13 | 2017-11-27 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
| BR112014005958A2 (pt) | 2011-09-13 | 2020-10-13 | Monsanto Technology Llc | métodos e composições químicas agrícolas para controle de planta, método de redução de expressão de um gene accase em uma planta, cassete de expressão microbiana, método para fazer um polinucleotídeo, método de identificação de polinucleotídeos úteis na modulação de expressão do gene accase e composição herbicida |
| BR112014005795A2 (pt) | 2011-09-13 | 2020-12-08 | Monsanto Technology Llc | métodos de controle de plantas, de redução da expressão de um gene de hppd de uma planta, de preparação de um nucleotídeo, e de identificação de polinucleotídeos úteis na modulação da expressão do gene de hppd no tratamento externo de uma planta, composições e cassete de expressão microbiana |
| EP2755987B1 (en) | 2011-09-13 | 2018-06-06 | Monsanto Technology LLC | Methods and compositions for weed control |
| UY34328A (es) | 2011-09-13 | 2013-04-30 | Monsanto Technology Llc | ?composiciones y métodos para controlar malezas comprendiendo un polinucleótido y agente de transferencia, y que modulan protoporfirinógeno ix oxidasa?. |
| US10806146B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-10-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| US10760086B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-09-01 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| US10829828B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-11-10 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| MX350775B (es) | 2011-09-13 | 2017-09-15 | Monsanto Technology Llc | Métodos y composiciones para el control de malezas. |
| US9920326B1 (en) | 2011-09-14 | 2018-03-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for increasing invertase activity in plants |
| EP2755471A1 (en) | 2011-09-16 | 2014-07-23 | Bayer Intellectual Property GmbH | Use of phenylpyrazolin-3-carboxylates for improving plant yield |
| JP6100264B2 (ja) | 2011-09-16 | 2017-03-22 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 植物の収量を向上させるための５−フェニル−２−イソオキサゾリン−３−カルボキシレート又は５−ベンジル−２−イソオキサゾリン−３−カルボキシレートの使用 |
| PH12014500562A1 (en) | 2011-09-16 | 2014-04-14 | Bayer Ip Gmbh | Use of acylsulfonamides for improving plant yield |
| EP2757886A1 (de) | 2011-09-23 | 2014-07-30 | Bayer Intellectual Property GmbH | Verwendung 4-substituierter 1-phenyl-pyrazol-3-carbonsäurederivate als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress |
| JP6255344B2 (ja) | 2011-10-04 | 2017-12-27 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | サッカロピンデヒドロゲナーゼ遺伝子を阻害することによって真菌類及び卵菌類を防除するためのＲＮＡｉ |
| KR20140080522A (ko) | 2011-10-06 | 2014-06-30 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 살진균제로서의 헤테로시클릴피리(미)디닐피라졸 |
| ES2632584T3 (es) | 2011-10-06 | 2017-09-14 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Heterociclilpiri(mi)dinilpirazol |
| WO2013050324A1 (de) | 2011-10-06 | 2013-04-11 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b) |
| CN103958531B (zh) | 2011-11-21 | 2016-12-28 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀真菌剂n‑[(三取代的甲硅烷基)甲基]‑羧酰胺衍生物 |
| CN105906567B (zh) | 2011-11-30 | 2019-01-22 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀真菌的n-二环烷基和n-三环烷基(硫代)羧酰胺衍生物 |
| CN104270946B (zh) | 2011-12-19 | 2017-05-10 | 拜耳农作物科学股份公司 | 邻氨基苯甲酸二酰胺衍生物用于防治转基因作物中的害虫的用途 |
| EP2606732A1 (en) | 2011-12-19 | 2013-06-26 | Bayer CropScience AG | Use of an anthranilic diamide derivatives with heteroaromatic and heterocyclic substituents in combination with a biological control agent |
| ES2649403T3 (es) | 2011-12-20 | 2018-01-11 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Nuevas amidas aromáticas insecticidas |
| WO2013096818A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | The Curators Of The University Of Missouri | Soybean variety s05-11268 |
| WO2013096810A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | The Curators Of The University Of Missouri | Soybean variety s05-11482 |
| KR102015968B1 (ko) | 2011-12-27 | 2019-08-29 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 살진균제로서의 헤테로아릴피페리딘 및 피페라진 유도체 |
| WO2013098146A1 (en) | 2011-12-29 | 2013-07-04 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal 3-[(1,3-thiazol-4-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-one derivatives |
| JP6002242B2 (ja) | 2011-12-29 | 2016-10-05 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 殺菌性３−［（ピリジン−２−イルメトキシイミノ）（フェニル）メチル］−２−置換−１，２，４−オキサジアゾール−５（２ｈ）−オン誘導体 |
| EP2800816A1 (en) | 2012-01-06 | 2014-11-12 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Ovule specific promoter and methods of use |
| WO2013103365A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Pollen preferred promoters and methods of use |
| RU2615834C2 (ru) | 2012-01-25 | 2017-04-11 | Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх | Комбинация активных соединений, а также содержащая комбинацию композиция и их применение, семя, обработанное комбинацией или композицией, и способ борьбы для защиты сельскохозяйственных культур |
| EP2806739A1 (en) | 2012-01-25 | 2014-12-03 | Bayer Intellectual Property GmbH | Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent |
| EP2622961A1 (en) | 2012-02-02 | 2013-08-07 | Bayer CropScience AG | Acive compound combinations |
| NZ722692A (en) | 2012-02-22 | 2018-02-23 | Bayer Ip Gmbh | Use of succinate dehydrogenase inhibitors (sdhis) for controlling wood diseases in grape |
| BR122019010638B1 (pt) | 2012-02-27 | 2020-12-29 | Bayer Intellectual Property Gmbh | combinação, método para controle de fungos fitopatogênicos prejudiciais e uso da referida combinação |
| WO2013139949A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield |
| CN104245687B (zh) | 2012-04-12 | 2016-12-14 | 拜尔农科股份公司 | 作为杀真菌剂的n-酰基-2-(环)烷基吡咯烷和哌啶 |
| BR112014025976B1 (pt) | 2012-04-20 | 2019-10-29 | Bayer Cropscience Ag | composto, processo para preparar um composto, composição fungicida, método para controlar fungos, uso de compostos e processo para produzir composições para controlar fungos |
| EP2838363A1 (en) | 2012-04-20 | 2015-02-25 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| WO2013160230A1 (en) | 2012-04-23 | 2013-10-31 | Bayer Cropscience Nv | Targeted genome engineering in plants |
| EP2662360A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2847171A1 (en) | 2012-05-09 | 2015-03-18 | Bayer CropScience AG | 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662362A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole indanyl carboxamides |
| CN104768934B (zh) | 2012-05-09 | 2017-11-28 | 拜耳农作物科学股份公司 | 吡唑茚满基甲酰胺 |
| EP2662363A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides |
| EP2662361A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazol indanyl carboxamides |
| EP2662364A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides |
| EP2662370A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides |
| AR091104A1 (es) | 2012-05-22 | 2015-01-14 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida |
| EP2855680B8 (en) | 2012-05-24 | 2020-04-15 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for silencing gene expression |
| TR201816247T4 (tr) | 2012-05-30 | 2018-11-21 | Bayer Cropscience Ag | Metalaksil ve metalaksil-m'den seçilen bir fungisit ve bir biyolojik kontrol ajanı içeren bileşim. |
| CN104837350B (zh) | 2012-05-30 | 2018-08-03 | 拜尔农作物科学股份公司 | 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物作为杀真菌剂的用途 |
| IN2014DN08912A (cs) | 2012-05-30 | 2015-05-22 | Bayer Cropscience Ag | |
| CN104507317B (zh) | 2012-05-30 | 2019-11-15 | 拜尔农作物科学股份公司 | 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物、及其用途、试剂盒 |
| EP3205210A1 (en) | 2012-05-30 | 2017-08-16 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the succinate dehydrogenase |
| US9585399B2 (en) | 2012-05-30 | 2017-03-07 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
| NZ702162A (en) | 2012-05-30 | 2016-11-25 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
| PT2854547T (pt) | 2012-05-30 | 2018-11-16 | Bayer Cropscience Ag | Composição que compreende um agente de controlo biológico e trifloxistrobina |
| EP2871958A1 (en) | 2012-07-11 | 2015-05-20 | Bayer CropScience AG | Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress |
| CN104602520A (zh) | 2012-07-31 | 2015-05-06 | 拜尔农作物科学股份公司 | 包括杀虫萜烯混合物和杀虫剂的组合物 |
| JP2015532650A (ja) | 2012-09-05 | 2015-11-12 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | 非生物的植物ストレスに対する活性物質としての置換された２−アミドベンズイミダゾール類、２−アミドベンゾオキサゾール類および２−アミドベンゾチアゾール類またはそれらの塩の使用 |
| CA2884895C (en) | 2012-09-14 | 2024-05-14 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| CA2887571A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Guard cell promoters and uses thereof |
| AR093058A1 (es) | 2012-10-18 | 2015-05-13 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para el control de pestes en plantas |
| DE102012219029A1 (de) | 2012-10-18 | 2014-04-24 | Bayer Cropscience Ag | Verwendung von Dithiin-tetracarboximiden zum Bekämpfen von neuer Blattfallkrankheit Marssonia coronaria |
| MX2015004773A (es) | 2012-10-19 | 2015-08-14 | Bayer Cropscience Ag | Metodo de promocion de crecimiento de planta usando derivados de carboxamida. |
| JP6184502B2 (ja) | 2012-10-19 | 2017-08-23 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | カルボキサミドまたはチオカルボキサミド誘導体を用いる植物における非生物的ストレスに対する耐性の強化方法 |
| PT2908641T (pt) | 2012-10-19 | 2018-04-16 | Bayer Cropscience Ag | Método para o tratamento de plantas contra fungos resistentes a fungicidas utilizando derivados de carboxamida ou tiocarboxamida |
| US9801374B2 (en) | 2012-10-19 | 2017-10-31 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations comprising carboxamide derivatives |
| EP2735231A1 (en) | 2012-11-23 | 2014-05-28 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| WO2014079957A1 (de) | 2012-11-23 | 2014-05-30 | Bayer Cropscience Ag | Selektive inhibition der ethylensignaltransduktion |
| CA2892693C (en) | 2012-11-30 | 2021-08-10 | Bayer Cropscience Ag | Binary fungicidal mixtures |
| WO2014082950A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Bayer Cropscience Ag | Ternary fungicidal mixtures |
| CA2892702A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Bayer Cropscience Ag | Binary fungicidal or pesticidal mixture |
| BR112015012519A2 (pt) | 2012-11-30 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | misturas ternárias fungicidas e pesticidas |
| US9510596B2 (en) | 2012-11-30 | 2016-12-06 | Bayer Cropscience Ag | Binary pesticidal and fungicidal mixtures |
| WO2014086758A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| CA2893027A1 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| EP2925146A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| EP2925141A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| WO2014086750A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| WO2014086753A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| EP2925140A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| BR112015012763B1 (pt) | 2012-12-03 | 2020-05-12 | Bayer Cropscience Ag | Composição, semente revestida com uma composição, uso da composição, kit de componentes e método para reduzir danos globais em plantas e controlar nematodes e insetos |
| EP2740720A1 (de) | 2012-12-05 | 2014-06-11 | Bayer CropScience AG | Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen |
| EP2740356A1 (de) | 2012-12-05 | 2014-06-11 | Bayer CropScience AG | Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate |
| BR112015012926A2 (pt) | 2012-12-05 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | uso de 1-(aril etinil)-, 1-(heteroaril etinil)-, 1-(heterociclil etinil)- substituído e 1-(cicloalquenil etinil)-ciclohexanóis como agentes ativos contra o estresse abiótico da planta |
| AR093909A1 (es) | 2012-12-12 | 2015-06-24 | Bayer Cropscience Ag | Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos |
| US20140173775A1 (en) | 2012-12-13 | 2014-06-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for producing and selecting transgenic plants |
| AR093996A1 (es) | 2012-12-18 | 2015-07-01 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias |
| BR112015014307A2 (pt) | 2012-12-19 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | difluorometil-nicotínico- tetrahidronaftil carboxamidas |
| CA2894213A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for auxin-analog conjugation |
| UY35252A (es) | 2013-01-01 | 2014-07-31 | Seeds Ltd Ab | MÉTODOS PARA INTRODUCIR dsRNA EN SEMILLAS DE PLANTAS PARA MODULAR LA EXPRESIÓN GENÉTICA |
| US10683505B2 (en) | 2013-01-01 | 2020-06-16 | Monsanto Technology Llc | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
| US10000767B2 (en) | 2013-01-28 | 2018-06-19 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for plant pest control |
| EP2953942B1 (de) | 2013-02-06 | 2017-10-25 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Halogensubstituierte pyrazolderivate als schädlingsbekämpfungsmittel |
| MX2015010306A (es) | 2013-02-11 | 2015-11-18 | Bayer Cropscience Lp | Composicion que comprende una gougerotina aislada y un fungicida. |
| KR20150119031A (ko) | 2013-02-11 | 2015-10-23 | 바이엘 크롭사이언스 엘피 | 스트렙토미세스-기반 생물학적 방제제 및 살곤충제를 포함하는 조성물 |
| KR20150119022A (ko) | 2013-02-11 | 2015-10-23 | 바이엘 크롭사이언스 엘피 | 고제로틴 및 생물학적 방제제를 포함하는 조성물 |
| JP2016515100A (ja) | 2013-03-07 | 2016-05-26 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | 殺菌性３−｛フェニル［（ヘテロシクリルメトキシ）イミノ］メチル｝−ヘテロ環誘導体 |
| PL2964767T3 (pl) | 2013-03-07 | 2020-08-24 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Geny kodujące toksyny i sposoby ich zastosowania |
| CA2905377A1 (en) | 2013-03-11 | 2014-10-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions to improve the spread of chemical signals in plants |
| US20160326540A1 (en) | 2013-03-11 | 2016-11-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and Compositions Employing a Sulfonylurea-Dependent Stabilization Domain |
| WO2014159306A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate application for weed control in brassica |
| CA2905027A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-09 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| CA2905104A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-09 | Monsanto Technology Llc | Control of lolium species by topical application of herbicidal composition comprising dsrna |
| EP3744727A1 (en) | 2013-03-14 | 2020-12-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| US20140289906A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions Having Dicamba Decarboxylase Activity and Methods of Use |
| US20140283211A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Monsanto Technology Llc | Methods and Compositions for Plant Pest Control |
| AU2014236162A1 (en) | 2013-03-14 | 2015-09-17 | Arzeda Corp. | Compositions having dicamba decarboxylase activity and methods of use |
| WO2014150914A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Phi-4 polypeptides and methods for their use |
| US10568328B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-25 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| WO2014161821A1 (en) | 2013-04-02 | 2014-10-09 | Bayer Cropscience Nv | Targeted genome engineering in eukaryotes |
| CN105308032B (zh) | 2013-04-12 | 2017-05-24 | 拜耳作物科学股份公司 | 新的三唑衍生物 |
| US9550752B2 (en) | 2013-04-12 | 2017-01-24 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Triazolinthione derivatives |
| KR20150144779A (ko) | 2013-04-19 | 2015-12-28 | 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 | 살충성 또는 농약성 2성분 혼합물 |
| CA2909725A1 (en) | 2013-04-19 | 2014-10-23 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| TW201507722A (zh) | 2013-04-30 | 2015-03-01 | Bayer Cropscience Ag | 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類 |
| WO2014177514A1 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Bayer Cropscience Ag | Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides |
| EP2801575A1 (en) | 2013-05-07 | 2014-11-12 | Bayer CropScience AG | Heteroaryldihydropyridine derivatives as fungicides |
| WO2014206953A1 (en) | 2013-06-26 | 2014-12-31 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| EP3019012A1 (de) | 2013-07-09 | 2016-05-18 | Bayer CropScience AG | Verwendung ausgewählter pyridoncarboxamide oder deren salzen als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress |
| US9850496B2 (en) | 2013-07-19 | 2017-12-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
| PL3030663T3 (pl) | 2013-07-19 | 2020-04-30 | Monsanto Technology Llc | Kompozycje i sposoby kontroli leptinotarsa |
| US20160219812A1 (en) | 2013-07-25 | 2016-08-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method for producing hybrid brassica seed |
| EP2837287A1 (en) | 2013-08-15 | 2015-02-18 | Bayer CropScience AG | Use of prothioconazole for increasing root growth of Brassicaceae |
| EP3032942B1 (en) | 2013-08-16 | 2020-03-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| ES2937045T3 (es) | 2013-09-13 | 2023-03-23 | Pioneer Hi Bred Int | Proteínas insecticidas y métodos para su uso |
| EP3049517B1 (en) | 2013-09-24 | 2018-04-11 | Bayer CropScience NV | Hetero-transglycosylase and uses thereof |
| AU2014334590A1 (en) | 2013-10-18 | 2016-04-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate-N-acetyltransferase (GLYAT) sequences and methods of use |
| CN105849266A (zh) | 2013-11-04 | 2016-08-10 | 孟山都技术公司 | 控制节肢动物寄生物和害虫侵染的组合物和方法 |
| WO2015082587A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| RU2685723C1 (ru) | 2013-12-05 | 2019-04-23 | Байер Кропсайенс Акциенгезелльшафт | Производные n-циклоалкил-n-{ [2-(1-замещенный циклоалкил)фенил]метилен} -(тио)карбоксамида |
| UA119253C2 (uk) | 2013-12-10 | 2019-05-27 | Біолоджикс, Інк. | Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл |
| CN103710328A (zh) * | 2013-12-27 | 2014-04-09 | 西北大学 | 大肠杆菌乙酰乳酸合酶的制备及保存方法 |
| MX368629B (es) | 2014-01-15 | 2019-10-08 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para el control de malezas utilizando polinucleotidos de 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa (epsps). |
| US10480007B2 (en) | 2014-02-07 | 2019-11-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants |
| BR112016018287A2 (pt) | 2014-02-07 | 2017-10-10 | Du Pont | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
| MX2016011745A (es) | 2014-03-11 | 2017-09-01 | Bayer Cropscience Lp | Variantes de hppd y metodos de uso. |
| WO2015153339A2 (en) | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
| WO2015160620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide |
| WO2015160619A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide |
| WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
| EP3158067B1 (en) | 2014-06-23 | 2020-08-12 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for regulating gene expression via rna interference |
| WO2015200539A1 (en) | 2014-06-25 | 2015-12-30 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression |
| AR101214A1 (es) | 2014-07-22 | 2016-11-30 | Bayer Cropscience Ag | Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas |
| CN114009454A (zh) | 2014-07-29 | 2022-02-08 | 孟山都技术公司 | 用于控制昆虫害虫的组合物和方法 |
| CA2955828A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ubiquitin promoters and introns and methods of use |
| CA2961733A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| BR112017007932A2 (pt) | 2014-10-16 | 2018-01-23 | Du Pont | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
| AR103024A1 (es) | 2014-12-18 | 2017-04-12 | Bayer Cropscience Ag | Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas |
| US20170359965A1 (en) | 2014-12-19 | 2017-12-21 | E I Du Pont De Nemours And Company | Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability |
| AU2016207026B2 (en) | 2015-01-15 | 2021-12-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| MX2017009521A (es) | 2015-01-22 | 2018-11-09 | Monsanto Technology Llc | Composiciones y métodos para controlar leptinotarsa. |
| CN108064303A (zh) * | 2015-03-11 | 2018-05-22 | 先锋国际良种公司 | 基于结构的用于修饰pip-72多肽及由其衍生的pip-72多肽的方法 |
| US10214510B2 (en) | 2015-04-13 | 2019-02-26 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | N-cycloalkyl-N-(biheterocyclylethylene)-(thio)carboxamide derivatives |
| US20190119334A1 (en) | 2015-05-19 | 2019-04-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| WO2016196738A1 (en) | 2015-06-02 | 2016-12-08 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for delivery of a polynucleotide into a plant |
| CN108024517A (zh) | 2015-06-03 | 2018-05-11 | 孟山都技术公司 | 用于将核酸引入到植物中的方法和组合物 |
| CN107771181A (zh) | 2015-06-16 | 2018-03-06 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫有害生物的组合物和方法 |
| CA2994676A1 (en) | 2015-08-06 | 2017-02-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| EA201890696A1 (ru) | 2015-09-11 | 2018-09-28 | Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт | Варианты гфпд и способы применения |
| PE20240803A1 (es) | 2015-09-30 | 2024-04-18 | Bayer Cropscience Ag | Uso de isotianilo para control de enfermedad de patata manchada |
| AU2016341041A1 (en) | 2015-10-20 | 2018-03-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for marker-free genome modification |
| US20180325119A1 (en) | 2015-12-18 | 2018-11-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| BR112018012887B1 (pt) | 2015-12-22 | 2024-02-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Cassete de expressão, vetor, métodos de obtenção de célula vegetal e planta transgênica, métodos para expressar um polinucleotídeo |
| WO2017192560A1 (en) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| BR112018076047A2 (pt) | 2016-06-16 | 2019-03-26 | Pioneer Hi Bred Int | elemento de silenciamento, construto de dna, cassete de expressão, célula hospedeira, composição, célula vegetal, planta ou parte de planta, semente transgênica, método para controlar um inseto-praga de planta e kit |
| WO2017222821A2 (en) | 2016-06-24 | 2017-12-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| RU2019102714A (ru) | 2016-07-01 | 2020-08-03 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Инсектицидные белки из растений и способы их применения |
| US20210292778A1 (en) | 2016-07-12 | 2021-09-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| CN109688816A (zh) | 2016-07-29 | 2019-04-26 | 拜耳作物科学股份公司 | 活性化合物结合物和保护植物的繁殖材料的方法 |
| BR112019005668A2 (pt) | 2016-09-22 | 2019-06-04 | Bayer Ag | novos derivados de triazol |
| US20190281828A1 (en) | 2016-09-22 | 2019-09-19 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Novel triazole derivatives |
| US20190225974A1 (en) | 2016-09-23 | 2019-07-25 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Targeted genome optimization in plants |
| AU2017351474A1 (en) | 2016-10-26 | 2019-04-18 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Use of pyraziflumid for controlling Sclerotinia spp in seed treatment applications |
| BR112019008800A2 (pt) | 2016-11-01 | 2019-07-16 | Pioneer Hi Bred Int | polipeptídeo inseticida, composição inseticida, polinucleotídeo recombinante, construto de dna, célula de planta ou planta transgênica, método para inibir o crescimento ou exterminar uma população de praga de inseto agrícola, método para inibir o crescimento ou exterminar uma praga de inseto, método para controlar infestação de inseto lepidoptera e/ou coleoptera em uma planta transgênica e fornecer gerenciamento de resistência de inseto e uso de pelo menos um polipeptídeo inseticida |
| WO2018098214A1 (en) | 2016-11-23 | 2018-05-31 | Bayer Cropscience Lp | Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use |
| CN110248547A (zh) | 2016-12-08 | 2019-09-17 | 拜耳农作物科学股份公司 | 杀虫剂用于控制金针虫的用途 |
| EP3332645A1 (de) | 2016-12-12 | 2018-06-13 | Bayer Cropscience AG | Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress |
| WO2018108627A1 (de) | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen |
| EA201991547A1 (ru) | 2016-12-22 | 2020-01-17 | БАСФ АГРИКУЛЬЧУРАЛ СОЛЮШНС СИД УС ЛЛСи | Применение cry14 для борьбы с вредителями нематодами |
| UY37570A (es) | 2017-01-18 | 2018-08-31 | Bayer Cropscience Lp | Uso de bp005 para el control de patógenos de planta |
| US11279946B2 (en) | 2017-01-18 | 2022-03-22 | Basf Argicultural Solutions Seed Us Llc | BP005 toxin gene and methods for its use |
| CA3055317A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Hppd variants and methods of use |
| KR101996129B1 (ko) * | 2017-07-11 | 2019-07-04 | 씨제이제일제당 (주) | 아세토하이드록시산 신타아제 변이체, 이를 포함하는 미생물 또는 이를 이용하는 l-분지쇄 아미노산 생산 방법 |
| WO2019025153A1 (de) | 2017-07-31 | 2019-02-07 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen |
| CN111263587B (zh) | 2017-09-19 | 2022-07-08 | 拜耳公司 | 异噻菌胺对抗巴拿马病的用途 |
| CA3076831A1 (en) | 2017-09-25 | 2019-03-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Tissue-preferred promoters and methods of use |
| BR112020008096A2 (pt) | 2017-10-24 | 2020-11-03 | Basf Se | método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica |
| WO2019083810A1 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Basf Se | IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE FOR 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE DIOXYGENASE (HPPD) INHIBITORS BY NEGATIVE REGULATION OF HPPD EXPRESSION IN SOYBEANS |
| GB2569562A (en) * | 2017-12-19 | 2019-06-26 | Wave Optics Ltd | Virtual reality or augmented reality headset |
| CN116410286A (zh) | 2018-03-14 | 2023-07-11 | 先锋国际良种公司 | 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CN115850420A (zh) | 2018-03-14 | 2023-03-28 | 先锋国际良种公司 | 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| BR112020023800A2 (pt) | 2018-05-22 | 2021-02-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | elementos reguladores de planta e métodos de uso dos mesmos |
| BR112020024615A2 (pt) | 2018-06-04 | 2021-03-02 | Bayer Aktiengesellschaft | benzoilpirazóis bicíclicos de ação herbicida |
| US20210277409A1 (en) | 2018-06-28 | 2021-09-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for selecting transformed plants |
| CA3107382A1 (en) | 2018-07-26 | 2020-01-30 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of the succinate dehydrogenase inhibitor fluopyram for controlling root rot complex and/or seedling disease complex caused by rhizoctonia solani, fusarium species and pythium species in brassicaceae species |
| BR112021004933A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-01 | Bayer Aktiengesellschaft | uso do inibidor de succinato desidrogenase fluopiram para controlar claviceps purpurea e reduzir esclerócio em cereais |
| AU2019343273A1 (en) | 2018-09-17 | 2021-05-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of the fungicide Isoflucypram for controlling Claviceps purpurea and reducing sclerotia in cereals |
| WO2020092487A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for ochrobactrum-mediated plant transformation |
| MX2022000950A (es) | 2019-07-22 | 2022-02-14 | Bayer Ag | 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas. |
| AU2020318590A1 (en) | 2019-07-23 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| MX2022000951A (es) | 2019-07-23 | 2022-02-14 | Bayer Ag | Novedosos compuestos de heteroaril-triazol como plaguicidas. |
| EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
| US20220403410A1 (en) | 2019-09-26 | 2022-12-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Rnai-mediated pest control |
| EP4037485A1 (en) | 2019-10-02 | 2022-08-10 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| BR112022006774A2 (pt) | 2019-10-09 | 2022-06-28 | Bayer Ag | Compostos de heteroaril-triazol inovadores como pesticidas |
| KR20220081359A (ko) | 2019-10-09 | 2022-06-15 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 살충제로서의 신규 헤테로아릴-트리아졸 화합물 |
| MX2022004552A (es) | 2019-10-14 | 2022-10-10 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Nuevos genes de resistencia a insectos y métodos de uso. |
| CA3157808A1 (en) | 2019-10-14 | 2021-04-22 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Novel insect resistant genes and methods of use |
| US20220380318A1 (en) | 2019-11-07 | 2022-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted sulfonyl amides for controlling animal pests |
| WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
| TW202134226A (zh) | 2019-11-18 | 2021-09-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| EP4061131A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-09-28 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| KR102147381B1 (ko) * | 2019-11-22 | 2020-08-24 | 씨제이제일제당 주식회사 | 아세토하이드록시산 신타제 신규 변이체 및 이를 포함하는 미생물 |
| TW202136248A (zh) | 2019-11-25 | 2021-10-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| AR121242A1 (es) | 2020-01-31 | 2022-05-04 | Pairwise Plants Services Inc | Supresión de la respuesta de escape a la sombra en plantas |
| MX2022010059A (es) | 2020-02-18 | 2022-08-25 | Bayer Ag | Nuevos compuestos de heteroaril-triazol como pesticidas. |
| EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
| CN119431532A (zh) | 2020-04-16 | 2025-02-14 | 成对植物服务股份有限公司 | 控制分生组织大小以改良作物的方法 |
| WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
| EP4139304A1 (de) | 2020-04-21 | 2023-03-01 | Bayer Aktiengesellschaft | 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel |
| TW202208347A (zh) | 2020-05-06 | 2022-03-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物 |
| WO2021224220A1 (en) | 2020-05-06 | 2021-11-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds |
| JP2023525349A (ja) | 2020-05-12 | 2023-06-15 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 殺真菌性化合物としてのトリアジンおよびピリミジン（チオ）アミド化合物 |
| WO2021233861A1 (en) | 2020-05-19 | 2021-11-25 | Bayer Aktiengesellschaft | Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds |
| BR112022024489A2 (pt) | 2020-06-02 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para o controle do tamanho do meristema para melhora da cultura agrícola |
| BR112022024394A2 (pt) | 2020-06-04 | 2023-01-31 | Bayer Ag | Heterociclil pirimidinas e triazinas como novos fungicidas |
| US20230234945A1 (en) | 2020-06-10 | 2023-07-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides |
| US20210395767A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| JP2023532224A (ja) | 2020-06-18 | 2023-07-27 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 新規殺菌剤としてのオキサジアジニルピリダジン |
| US20230292747A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-09-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
| BR112022025692A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-02-28 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas |
| UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
| WO2021255089A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides |
| EP3929189A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-29 | Bayer Animal Health GmbH | Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides |
| CN116033828A (zh) | 2020-07-02 | 2023-04-28 | 拜耳公司 | 作为害虫防治剂的杂环衍生物 |
| WO2022015619A2 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| WO2022033991A1 (de) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022040510A1 (en) | 2020-08-21 | 2022-02-24 | Bayer Cropscience Lp | Combinations of trichoderma and bradyrhizobium |
| WO2022053453A1 (de) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
| EP3974414A1 (de) | 2020-09-25 | 2022-03-30 | Bayer AG | 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
| WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
| CA3205419A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops |
| WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| EP4036083A1 (de) | 2021-02-02 | 2022-08-03 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022173885A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-18 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants |
| US20220380792A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-12-01 | Pairwise Plants Services, Inc | Methods and compositions for modifying root architecture in plants |
| BR112023019788A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-11-07 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| BR112023019400A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-12-05 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| EP4334315A1 (en) | 2021-05-06 | 2024-03-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Alkylamide substituted, annulated imidazoles and use thereof as insecticides |
| WO2022238391A1 (de) | 2021-05-12 | 2022-11-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel |
| CA3223995A1 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| MX2023014883A (es) | 2021-07-01 | 2024-02-12 | Pairwise Plants Services Inc | Metodos y composiciones para mejorar el desarrollo del sistema radicular. |
| CA3229056A1 (en) | 2021-08-12 | 2023-02-16 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| KR20240039209A (ko) | 2021-08-13 | 2024-03-26 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 활성 화합물 조합물 및 이를 포함하는 살진균제 조성물 |
| US20230063927A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-03-02 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| IL310966A (en) | 2021-08-25 | 2024-04-01 | Bayer Ag | Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides |
| US20230074699A1 (en) | 2021-08-30 | 2023-03-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement |
| EP4144739A1 (de) | 2021-09-02 | 2023-03-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| AR126938A1 (es) | 2021-09-02 | 2023-11-29 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento |
| US20230087522A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for reducing pod shatter in canola |
| AR127236A1 (es) | 2021-10-04 | 2024-01-03 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas |
| US20250064060A1 (en) | 2021-11-03 | 2025-02-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
| JP2024543953A (ja) | 2021-11-30 | 2024-11-26 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 抗真菌化合物としてのビス（ヘテロ）アリールチオエーテルオキサジアジン |
| AR127904A1 (es) | 2021-12-09 | 2024-03-06 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas |
| AR128372A1 (es) | 2022-01-31 | 2024-04-24 | Pairwise Plants Services Inc | Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas |
| CN119072236A (zh) | 2022-02-01 | 2024-12-03 | 环球化学股份有限公司 | 控制油菜上害虫的方法和组合物 |
| WO2023148035A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in rice |
| AU2023216389A1 (en) | 2022-02-01 | 2024-08-08 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in cotton |
| WO2023148029A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in cereals |
| EP4472420A1 (en) | 2022-02-01 | 2024-12-11 | Globachem NV | Methods and compositions for controlling pests in soybean |
| WO2023148030A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in corn |
| WO2023148028A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests |
| WO2023168217A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| WO2023192838A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Early flowering rosaceae plants with improved characteristics |
| AU2023251095A1 (en) | 2022-04-07 | 2024-10-17 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight |
| WO2023205714A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20230348922A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-02 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| CN119110684A (zh) | 2022-05-03 | 2024-12-10 | 拜耳公司 | (5s)-3-[3-(3-氯-2-氟苯氧基)-6-甲基哒嗪-4-基]-5-(2-氯-4-甲基苄基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪用于防治不想要的微生物的用途 |
| CN119522219A (zh) | 2022-05-03 | 2025-02-25 | 拜耳公司 | (5s)-3-[3-(3-氯-2-氟苯氧基)-6-甲基哒嗪-4-基]-5-(2-氯-4-甲基苄基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪的晶型 |
| WO2023215809A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| AR129709A1 (es) | 2022-06-27 | 2024-09-18 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas |
| AR129748A1 (es) | 2022-06-29 | 2024-09-25 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos |
| WO2024006791A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024015781A2 (en) * | 2022-07-12 | 2024-01-18 | Inari Agriculture Technology, Inc. | Compositions and methods for soybean plant transformation |
| US20240043857A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20240060081A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| US20240090466A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-21 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
| WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4385326A1 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-19 | Kimitec Biogorup | Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants |
| WO2024137438A2 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Insect toxin genes and methods for their use |
| WO2024173622A1 (en) | 2023-02-16 | 2024-08-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| US20240294933A1 (en) | 2023-03-02 | 2024-09-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| WO2024186950A1 (en) | 2023-03-09 | 2024-09-12 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid signaling pathway genes for improving yield traits in plants |
| US20240384280A1 (en) | 2023-05-18 | 2024-11-21 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| WO2025008447A1 (en) | 2023-07-05 | 2025-01-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| WO2025008446A1 (en) | 2023-07-05 | 2025-01-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| WO2025019522A1 (en) | 2023-07-18 | 2025-01-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture in plants |
| WO2025024617A1 (en) | 2023-07-27 | 2025-01-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying plant yield traits |
| WO2025026738A1 (en) | 2023-07-31 | 2025-02-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 6-[5-(ethylsulfonyl)-1-methyl-1h-imidazol-4-yl]-7-methyl-3-(pentafluoroethyl)-7h-imidazo[4,5-c]pyridazine derivatives as pesticides |
| EP4501112A1 (en) | 2023-08-01 | 2025-02-05 | Globachem NV | Plant defense elicitors |
| WO2025026815A1 (en) | 2023-08-01 | 2025-02-06 | Globachem Nv | Insecticidal mixtures |
| WO2025032038A1 (en) | 2023-08-09 | 2025-02-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Pyridazin-4-yloxadiazines as novel fungicides |
| WO2025031668A1 (en) | 2023-08-09 | 2025-02-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Azaheterobiaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5013659A (en) * | 1987-07-27 | 1991-05-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
| US5378824A (en) | 1986-08-26 | 1995-01-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
| US4883914A (en) | 1987-08-17 | 1989-11-28 | American Cyanamid Company | Benzenesulfonyl carboxamide compounds useful as herbicidal agents |
| TW208716B (cs) * | 1990-12-27 | 1993-07-01 | American Cyanamid Co | |
| US5731180A (en) * | 1991-07-31 | 1998-03-24 | American Cyanamid Company | Imidazolinone resistant AHAS mutants |
| US5853973A (en) * | 1995-04-20 | 1998-12-29 | American Cyanamid Company | Structure based designed herbicide resistant products |
| EP0821729B1 (en) * | 1995-04-20 | 2006-10-18 | Basf Aktiengesellschaft | Structure-based designed herbicide resistant products |
| US6265215B1 (en) * | 1996-09-13 | 2001-07-24 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated peptides which complex with HLA-Cw16 and uses thereof |
-
1996
- 1996-04-19 EP EP96913160A patent/EP0821729B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-19 ES ES96913160T patent/ES2275275T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-19 AU AU55758/96A patent/AU5575896A/en not_active Abandoned
- 1996-04-19 DK DK96913160T patent/DK0821729T3/da active
- 1996-04-19 AT AT96913160T patent/ATE342968T1/de active
- 1996-04-19 CA CA2218526A patent/CA2218526C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-04-19 NZ NZ307012A patent/NZ307012A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-04-19 CZ CZ973317A patent/CZ331797A3/cs unknown
- 1996-04-19 PL PL96322899A patent/PL186091B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-04-19 DE DE69636637T patent/DE69636637T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-19 HU HU9900852A patent/HU226259B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-04-19 BR BRPI9604993-6A patent/BR9604993B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-04-19 WO PCT/US1996/005782 patent/WO1996033270A1/en active IP Right Grant
- 1996-04-19 JP JP53200296A patent/JP4469422B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-04-19 US US09/367,512 patent/US6576455B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-10-17 NO NO19974803A patent/NO326115B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-10-20 MX MX9708079A patent/MX9708079A/es unknown
-
2003
- 2003-04-04 US US10/407,339 patent/US6855533B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-01-12 US US11/033,687 patent/US20060156427A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-12-05 JP JP2006328154A patent/JP4469833B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0821729T3 (da) | 2007-02-05 |
| NO326115B1 (no) | 2008-09-29 |
| US6576455B1 (en) | 2003-06-10 |
| BR9604993B1 (pt) | 2009-05-05 |
| BR9604993A (pt) | 1999-11-30 |
| DE69636637D1 (de) | 2006-11-30 |
| HU226259B1 (en) | 2008-07-28 |
| EP0821729A1 (en) | 1998-02-04 |
| AU5575896A (en) | 1996-11-07 |
| DE69636637T2 (de) | 2007-08-23 |
| US6855533B2 (en) | 2005-02-15 |
| JP4469422B2 (ja) | 2010-05-26 |
| NZ307012A (en) | 2000-01-28 |
| EP0821729A4 (en) | 1999-12-08 |
| US20030180929A1 (en) | 2003-09-25 |
| CA2218526A1 (en) | 1996-10-24 |
| ES2275275T3 (es) | 2007-06-01 |
| EP0821729B1 (en) | 2006-10-18 |
| MX9708079A (es) | 1998-07-31 |
| CA2218526C (en) | 2012-06-12 |
| US20060156427A1 (en) | 2006-07-13 |
| ATE342968T1 (de) | 2006-11-15 |
| JPH11504213A (ja) | 1999-04-20 |
| NO974803D0 (no) | 1997-10-17 |
| NO974803L (no) | 1997-12-19 |
| HUP9900852A2 (hu) | 1999-07-28 |
| PL186091B1 (pl) | 2003-10-31 |
| HUP9900852A3 (en) | 2001-11-28 |
| WO1996033270A1 (en) | 1996-10-24 |
| JP4469833B2 (ja) | 2010-06-02 |
| JP2007159577A (ja) | 2007-06-28 |
| PL322899A1 (en) | 1998-03-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ331797A3 (cs) | Produkty rezistentní na herbicidy vyvíjené na struktuře založeným způsobem | |
| US5853973A (en) | Structure based designed herbicide resistant products | |
| Liu et al. | An atypical thioredoxin imparts early resistance to sugarcane mosaic virus in maize | |
| US6483011B1 (en) | Modified ADP-glucose pyrophosphorylase for improvement and optimization of plant phenotypes | |
| CN101688219B (zh) | 新除草剂抗性基因 | |
| Tuteja et al. | O s SUV 3 dual helicase functions in salinity stress tolerance by maintaining photosynthesis and antioxidant machinery in rice (O ryza sativa L. cv. IR 64) | |
| des Francs‐Small et al. | A PORR domain protein required for rpl2 and ccmFC intron splicing and for the biogenesis of c‐type cytochromes in Arabidopsis mitochondria | |
| DK1947926T3 (en) | new herbicide resistant genes | |
| IL233858A (en) | Glyphosate-resistant plants and related methods | |
| JP7295163B2 (ja) | 除草剤耐性遺伝子及びその使用方法 | |
| JPS62296882A (ja) | グルタチオンｓ−トランスフェラ−ゼ遺伝子及び該遺伝子を含有する除草剤耐性植物 | |
| Zhang et al. | Ascorbate peroxidase 1 confers resistance to southern corn leaf blight in maize | |
| US20030097692A1 (en) | Plants with imidazolinone-resistant ALS | |
| AU2013271455B2 (en) | Methods of improving the yield of 2,4-D resistant crop plants | |
| JP2004532631A (ja) | 遺伝子組換え生物の核酸中の情報をコードする方法 | |
| WO2000028017A1 (en) | Modified phosphoenolpyruvate carboxylase for improvement and optimization of plant phenotypes | |
| Yao | Assessing herbicide tolerance potential of the rice HIS1 protein in Nicotiana benthamiana and soybean | |
| Kölzsch | Approaches to generate herbicide resistant Taraxacum koksaghyz by directed and undirected mutagenesis of the acetohydroxyacid synthase | |
| Roth | Developing base-editing for the improvement of agronomic traits in field peas (Pisum sativum) using glyphosate resistance as a target | |
| Zhao | Regulation of the first enzyme of the shikimate pathway in plants | |
| Wong et al. | Defensins in Legumes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |