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KR100573231B1 - 신규 뉴클레오시드 및 올리고뉴클레오티드 유사체 - Google Patents

신규 뉴클레오시드 및 올리고뉴클레오티드 유사체 Download PDF

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KR100573231B1
KR100573231B1 KR1020017009992A KR20017009992A KR100573231B1 KR 100573231 B1 KR100573231 B1 KR 100573231B1 KR 1020017009992 A KR1020017009992 A KR 1020017009992A KR 20017009992 A KR20017009992 A KR 20017009992A KR 100573231 B1 KR100573231 B1 KR 100573231B1
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모리따고지
이마니시다께시
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상꾜 라이프테크 가부시키가이샤
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Abstract

하기 화학식 1:
[화학식 1]
Figure 112001019802072-pct00028
[R1 및 R2 는 동일 또는 상이하며, 수소원자, 히드록실기의 보호기, 인산기, -P(R3)R4 [식 중, R3 및 R4 는 동일 또는 상이하며, 탄소수 1 내지 5 개의 시아노알콕시기, 탄소수 1 내지 4 개의 알킬기로 치환된 아미노기 등을 나타냄] 를 나타내고, A 는 탄소수 1 내지 4 개의 알킬렌기를 나타내고, B 는 치환기를 갖고 있어도 되는 푸린-9-일 또는 2-옥소-피리미딘-1-일 기를 나타냄] 으로 표시되는 화합물 및 그의 염, 및 이것을 제조중간체로 하여 얻어지는 안정하며 우수한 안티센스 활성 등을 갖는 신규 올리고뉴클레오티드 유사체.

Description

신규 뉴클레오시드 및 올리고뉴클레오티드 유사체{NOVEL NUCLEOSIDES AND OLIGONUCLEOTIDE ANALOGUES}
본 발명은 안정하며 우수한 안티센스 (antisense) 또는 안티진 (antigene) 활성, 또는 특정 유전자의 검출약 (프로브) 또는 증폭개시를 위한 프라이머로서 우수한 활성을 갖는, 신규 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 제조중간체인 신규 뉴클레오시드 유사체에 관한 것이다.
우수한 안티센스 또는 안티진 활성을 가지며, 또한 생체내에서 안정된, 올리고뉴클레오티드 유사체는 유용한 의약으로서 기대되며, 또 DNA 또는 mRNA 와의 안정된 상보사슬 형성능이 높은 올리고뉴클레오티드 유사체는 특정 유전자의 검출약 또는 증폭개시를 위한 프라이머로서 유용하다.
이에 대하여, 천연형 올리고뉴클레오티드는 혈액중이나 세포내에 존재하는 각종 뉴클레아제에 의해 빠르게 분해되는 것이 알려져 있다. 또, 천연형 올리고뉴클레오티드는 상보적 염기서열과의 친화성에 의한 제한으로, 특정 유전자의 검출약 또는 증폭개시를 위한 프라이머로서는 충분한 감도를 갖지 않는 경우도 있었다.
이들 결점을 극복하기 위해, 여러 가지의 비천연형 올리고뉴클레오티드 유사 체가 제조되고, 그들을 의약 또는 특정 유전자의 검출약 등으로서 개발하는 시도가 이루어지고 있다. 즉, 예컨대 올리고뉴클레오티드의 포스포디에스테르 결합내의 인원자와 결합하는 산소원자를 황원자로 치환한 것, 이 산소원자를 메틸기로 치환한 것, 이 산소원자를 붕소원자로 치환한 것, 올리고뉴클레오티드의 당 부분이나 염기부분을 화학변형한 것 등이 알려져 있다. 예컨대, ISIS 사는 인간 사이토메갈로 바이러스성 망막염의 치료약으로서 티오에이트형 올리고뉴클레오티드인 ISIS2922 (Vitravene) 를 개발하여 미국에서 판매하고 있다.
그러나, 상기 비천연형 올리고뉴클레오티드 유사체에서의 안티센스 또는 안티진 활성의 강도, 즉 DNA 또는 mRNA 와의 안정된 상보사슬 형성능이나, 각종 뉴클레아제에 대한 안정성, 생체내의 각종 단백질과 비특이적으로 결합함에 의한 부작용의 발현 등을 고려하면, 더욱 우수한 생체내에서의 안정성을 가지며, 부작용의 발현이 적고, 또한 상보사슬 형성능이 높은 비천연형 올리고뉴클레오티드 유사체가 요구되고 있었다.
발명의 개시
본 발명자들은 우수한 안티센스 또는 안티진 활성을 가지며, 생체내에서 안정하며, 부작용의 발현이 적은 비천연형 올리고뉴클레오티드 유사체에 대하여 오랜기간에 걸쳐 예의연구하였다. 그 결과, 분자내 에테르 결합을 갖는 올리고뉴클레오티드 유사체 및 뉴클레오시드 유사체가 안정하며 우수한 안티센스 또는 안티진 의약, 특정 유전자의 검출약 (프로브) 또는 증폭개시를 위한 프라이머 및 그의 제 조중간체로서 유용한 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
이하에 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 신규 뉴클레오시드 유사체는 하기 화학식 1:
Figure 112001019802072-pct00001
[식 중, R1 및 R2 는 동일 또는 상이하며, 수소원자, 히드록실기의 보호기, 인산기, 보호된 인산기 또는 -P(R3)R4 [식 중, R3 및 R4 는 동일 또는 상이하며, 히드록실기, 보호된 히드록실기, 메르캅토기, 보호된 메르캅토기, 아미노기, 탄소수 1 내지 4 개의 알콕시기, 탄소수 1 내지 4 개의 알킬티오기, 탄소수 1 내지 5 개의 시아노알콕시기 또는 탄소수 1 내지 4 개의 알킬기로 치환된 아미노기를 나타냄] 를 나타내고,
A 는 탄소수 1 내지 4 개의 알킬렌기를 나타내고,
B 는 푸린-9-일기, 2-옥소-피리미딘-1-일기 또는 하기 α군에서 선택되는 치환기를 갖는 치환 푸린-9-일기 또는 치환 2-옥소-피리미딘-1-일기를 나타냄] 로 표시되는 화합물 및 그의 염이고,
본 발명의 뉴클레오티드 유사체는 하기 화학식 2:
Figure 112001019802072-pct00002
[식 중, A 는 탄소수 1 내지 4 개의 알킬렌기를 나타내고,
B 는 푸린-9-일기, 2-옥소-피리미딘-1-일기 또는 하기 α군에서 선택되는 치환기를 갖는 치환 푸린-9-일기 또는 치환 2-옥소-피리미딘-1-일기를 나타냄] 로 표시되는 구조를 1 또는 2 이상 갖는 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 약리학상 허용되는 염이다.
(α군)
히드록실기,
보호된 히드록실기,
탄소수 1 내지 4 개의 알콕시기,
메르캅토기,
보호된 메르캅토기,
탄소수 1 내지 4 개의 알킬티오기,
아미노기,
보호된 아미노기,
탄소수 1 내지 4 개의 알킬기로 치환된 아미노기,
탄소수 1 내지 4 개의 알킬기, 및
할로겐원자.
상기 화학식 1 또는 2 중, A 의 「탄소수 1 내지 4 개의 알킬렌기」로서는, 예컨대 메틸렌, 에틸렌, 트리메틸렌, 테트라메틸렌기를 들 수 있고, 바람직하게는 메틸렌기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, R1 및 R2 의 「히드록실기의 보호기」, 및 R3 및 R4 또는 α군의 「보호된 히드록실기」의 보호기란, 가수소분해, 가수분해, 전기분해 및 광분해와 같은 화학적 방법 또는 인체내에서 가수분해 등의 생물학적 방법에 의해 개열(開裂)할 수 있는 보호기를 말하며, 그와 같은 보호기로서는, 예컨대 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 이소부티릴, 펜타노일, 피발로일, 발레릴, 이소발레릴, 옥타노일, 노나노일, 데카노일, 3-메틸노나노일, 8-메틸노나노일, 3-에틸옥타노일, 3,7-디메틸옥타노일, 운데카노일, 도데카노일, 트리데카노일, 테트라데카노일, 펜타데카노일, 헥사데카노일, 1-메틸펜타데카노일, 14-메틸펜타데카노일, 13,13-디메틸테트라데카노일, 헵타데카노일, 15-메틸헥사데카노일, 옥타데카노일, 1-메틸헵타데카노일, 노나데카노일, 에이코사노일 및 헤네이코사노일과 같은 알킬카르보닐기, 숙시노일, 글루타로일, 아디포일과 같은 카르복실화 알킬카르보닐기, 클로로아세틸, 디클로로아세틸, 트리클로로아세틸, 트리플루오로아세틸과 같은 할로게노 저급 알킬카르보닐기, 메톡시아세틸과 같은 저급 알콕시 저급 알킬카르보 닐기, 및 (E)-2-메틸-2-부테노일과 같은 불포화 알킬카르보닐기와 같은 「지방족 아실기」;
벤조일, α-나프토일, β-나프토일과 같은 아릴카르보닐기, 2-브로모벤조일, 4-클로로벤조일과 같은 할로게노아릴카르보닐기, 2,4,6-트리메틸벤조일, 4-톨루오일과 같은 저급 알킬화 아릴카르보닐기, 4-아니소일과 같은 저급 알콕시화 아릴카르보닐기, 2-카르복시벤조일, 3-카르복시벤조일, 4-카르복시벤조일과 같은 카르복실화 아릴카르보닐기, 4-니트로벤조일, 2-니트로벤조일과 같은 니트로화 아릴카르보닐기 ; 2-(메톡시카르보닐)벤조일과 같은 저급 알콕시카르보닐화 아릴카르보닐기, 4-페닐벤조일과 같은 아릴화 아릴카르보닐기와 같은 「방향족 아실기」;
테트라히드로피란-2-일, 3-브로모테트라히드로피란-2-일, 4-메톡시테트라히드로피란-4-일, 테트라히드로티오피란-2-일, 4-메톡시테트라히드로티오피란-4-일과 같은 「테트라히드로피라닐 또는 테트라히드로티오피라닐기」; 테트라히드로푸란-2-일, 테트라히드로티오푸란-2-일과 같은 「테트라히드로푸라닐 또는 테트라히드로티오푸라닐기」;
트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 이소프로필디메틸실릴, t-부틸디메틸실릴, 메틸디이소프로필실릴, 메틸디-t-부틸실릴, 트리이소프로필실릴과 같은 트리 저급 알킬실릴기, 디페닐메틸실릴, 디페닐부틸실릴, 디페닐이소프로필실릴, 페닐디이소프로필실릴과 같은 1 내지 2 개의 아릴기로 치환된 트리 저급 알킬실릴기와 같은 「실릴기」;
메톡시메틸, 1,1-디메틸-1-메톡시메틸, 에톡시메틸, 프로폭시메틸, 이소프로 폭시메틸, 부톡시메틸, t-부톡시메틸과 같은 「저급 알콕시메틸기」;
2-메톡시에톡시메틸과 같은 「저급 알콕시화 저급 알콕시메틸기」;
2,2,2-트리클로로에톡시메틸, 비스(2-클로로에톡시)메틸과 같은 「할로게노 저급 알콕시메틸」;
1-에톡시에틸, 1-(이소프로폭시)에틸과 같은 「저급 알콕시화 에틸기」;
2,2,2-트리클로로에틸과 같은 「할로겐화 에틸기」;
벤질, α-나프틸메틸, β-나프틸메틸, 디페닐메틸, 트리페닐메틸, α-나프틸디페닐메틸, 9-안트릴메틸과 같은 「1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」;
4-메틸벤질, 2,4,6-트리메틸벤질, 3,4,5-트리메틸벤질, 4-메톡시벤질, 4-메톡시페닐디페닐메틸, 4,4'-디메톡시트리페닐메틸, 2-니트로벤질, 4-니트로벤질, 4-클로로벤질, 4-브로모벤질, 4-시아노벤질과 같은 「저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐, 시아노기로 아릴환이 치환된 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」;
메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, t-부톡시카르보닐, 이소부톡시카르보닐과 같은 「저급 알콕시카르보닐기」;
2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 2-트리메틸실릴에톡시카르보닐과 같은 「할로겐 또는 트리 저급 알킬실릴기로 치환된 저급 알콕시카르보닐기」;
비닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐과 같은 「알케닐옥시카르보닐기」;
벤질옥시카르보닐, 4-메톡시벤질옥시카르보닐, 3,4-디메톡시벤질옥시카르보닐, 2-니트로벤질옥시카르보닐, 4-니트로벤질옥시카르보닐과 같은 1 내지 2 개의 「저급 알콕시 또는 니트로기로 아릴환이 치환되어 있어도 되는 아랄킬옥시카르보 닐기」를 들 수 있고,
R1 및 R2 의 「히드록실기의 보호기」에서는, 바람직하게는 「지방족 아실기」, 「방향족 아실기」, 「1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」, 「저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐, 시아노기로 아릴환이 치환된 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」또는 「실릴기」이고, 더욱 바람직하게는 아세틸기, 벤조일기, 벤질기, p-메톡시벤조일기, 디메톡시트리틸기, 모노메톡시트리틸기 또는 tert-부틸디페닐실릴기이고,
R3 및 R4 또는 α군의 「보호된 히드록실기」에서는, 바람직하게는 「지방족 아실기」또는 「방향족 아실기」이고, 더욱 바람직하게는 벤조일기이다.
상기 화학식 1 중, R1 및 R2 의 「보호된 인산기」의 보호기란, 가수소분해, 가수분해, 전기분해 및 광분해와 같은 화학적 방법 또는 인체내에서 가수분해 등의 생물학적 방법에 의해 개열할 수 있는 보호기를 말하며, 그와 같은 보호기로서는, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, s-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 2-메틸부틸, 네오펜틸, 1-에틸프로필, n-헥실, 이소헥실, 4-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸, 1-메틸펜틸, 3,3-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸과 같은 「저급 알킬기」;
2-시아노에틸, 2-시아노-1,1-디메틸에틸과 같은 「시아노화 저급 알킬기」;
2-메틸디페닐실릴에틸, 2-트리메틸실릴에틸, 2-트리페닐실릴에틸과 같은 「 실릴기로 치환된 에틸기」;
2,2,2-트리클로로에틸, 2,2,2-트리브로모에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 2,2,2-트리클로로-1,1-디메틸에틸과 같은 「할로겐화 저급 알킬기」;
에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-메틸-2-프로페닐, 1-메틸-1-프로페닐, 2-메틸-1-프로페닐, 2-메틸-2-프로페닐, 2-에틸-2-프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 1-메틸-2-부테닐, 1-메틸-1-부테닐, 3-메틸-2-부테닐, 1-에틸-2-부테닐, 3-부테닐, 1-메틸-3-부테닐, 2-메틸-3-부테닐, 1-에틸-3-부테닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 1-메틸-2-펜테닐, 2-메틸-2-펜테닐, 3-펜테닐, 1-메틸-3-펜테닐, 2-메틸-3-펜테닐, 4-펜테닐, 1-메틸-4-펜테닐, 2-메틸-4-펜테닐, 1-헥세닐, 2-헥세닐, 3-헥세닐, 4-헥세닐, 5-헥세닐과 같은 「저급 알케닐기」;
시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 노르보르닐, 아다만틸과 같은 「시클로알킬기」;
2-시아노부테닐과 같은 「시아노화 저급 알케닐기」;
벤질, α-나프틸메틸, β-나프틸메틸, 인데닐메틸, 페난트레닐메틸, 안트라세닐메틸, 디페닐메틸, 트리페닐메틸, 1-펜에틸, 2-펜에틸, 1-나프틸에틸, 2-나프틸에틸, 1-페닐프로필, 2-페닐프로필, 3-페닐프로필, 1-나프틸프로필, 2-나프틸프로필, 3-나프틸프로필, 1-페닐부틸, 2-페닐부틸, 3-페닐부틸, 4-페닐부틸, 1-나프틸부틸, 2-나프틸부틸, 3-나프틸부틸, 4-나프틸부틸, 1-페닐펜틸, 2-페닐펜틸, 3-페닐펜틸, 4-페닐펜틸, 5-페닐펜틸, 1-나프틸펜틸, 2-나프틸펜틸, 3-나프틸펜틸, 4-나프틸펜틸, 5-나프틸펜틸, 1-페닐헥실, 2-페닐헥실, 3-페닐헥실, 4-페닐헥실, 5-페닐헥실, 6-페닐헥실, 1-나프틸헥실, 2-나프틸헥실, 3-나프틸헥실, 4-나프틸헥실, 5-나프틸헥실, 6-나프틸헥실과 같은 「아랄킬기」;
4-클로로벤질, 2-(4-니트로페닐)에틸, o-니트로벤질, 4-니트로벤질, 2,4-디니트로벤질, 4-클로로-2-니트로벤질과 같은 「니트로기, 할로겐원자로 아릴환이 치환된 아랄킬기」;
페닐, 인데닐, 나프틸, 페난트레닐, 안트라세닐과 같은 「아릴기」;
2-메틸페닐, 2,6-디메틸페닐, 2-클로로페닐, 4-클로로페닐, 2,4-디클로로페닐, 2,5-디클로로페닐, 2-브로모페닐, 4-니트로페닐, 4-클로로-2-니트로페닐과 같은 「저급 알킬기, 할로겐원자, 니트로기로 치환된 아릴기」를 들 수 있고, 바람직하게는 「저급 알킬기」, 「시아노기로 치환된 저급 알킬기」, 「아랄킬기」또는 「니트로기, 할로겐원자로 아릴환이 치환된 아랄킬기」이고, 더욱 바람직하게는 2-시아노에틸기, 2,2,2-트리클로로에틸기 또는 벤질기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, R3 및 R4 또는 α군의 「탄소수 1 내지 4 개의 알콕시기」로서는, 예컨대 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, s-부톡시 또는 tert-부톡시를 들 수 있고, 바람직하게는 메톡시 또는 에톡시기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, R3 및 R4 또는 α군의 「보호된 메르캅토기」의 보호기로서는, 예컨대 상기 히드록실기의 보호기로서 든 것 외에, 메틸티오, 에틸티오, tert-부틸티오와 같은 알킬티오기, 벤질티오와 같은 아르알킬티오기 등의 「디술피드를 형성하는 기」를 들 수 있고, 바람직하게는 「지방족 아실기」또는 「방향족 아실기」이고, 더욱 바람직하게는 벤조일기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중의 α군의 「탄소수 1 내지 4 개의 알킬티오기」로서는, 예컨대 메틸티오, 에틸티오, 프로필티오, 이소프로필티오, 부틸티오, 이소부틸티오, s-부틸티오, tert-부틸티오를 들 수 있고, 바람직하게는 메틸티오 또는 에틸티오기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, R3 및 R4 또는 α군의 「보호된 아미노기」의 보호기로서는, 예컨대 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 이소부티릴, 펜타노일, 피발로일, 발레릴, 이소발레릴, 옥타노일, 노나노일, 데카노일, 3-메틸노나노일, 8-메틸노나노일, 3-에틸옥타노일, 3,7-디메틸옥타노일, 운데카노일, 도데카노일, 트리데카노일, 테트라데카노일, 펜타데카노일, 헥사데카노일, 1-메틸펜타데카노일, 14-메틸펜타데카노일, 13,13-디메틸테트라데카노일, 헵타데카노일, 15-메틸헥사데카노일, 옥타데카노일, 1-메틸헵타데카노일, 노나데카노일, 에이코사노일 및 헤네이코사노일과 같은 알킬카르보닐기, 숙시노일, 글루타로일, 아디포일과 같은 카르복실화 알킬카르보닐기, 클로로아세틸, 디클로로아세틸, 트리클로로아세틸, 트리플루오로아세틸과 같은 할로게노 저급 알킬카르보닐기, 메톡시아세틸과 같은 저급 알콕시 저급 알킬카르보닐기, (E)-2-메틸-2-부테노일과 같은 불포화 알킬카르보닐기 등의 「지방족 아실기」;
벤조일, α-나프토일, β-나프토일과 같은 아릴카르보닐기, 2-브로모벤조일, 4-클로로벤조일과 같은 할로게노아릴카르보닐기, 2,4,6-트리메틸벤조일, 4-톨루오일과 같은 저급 알킬화 아릴카르보닐기, 4-아니소일과 같은 저급 알콕시화 아릴카르보닐기, 2-카르복시벤조일, 3-카르복시벤조일, 4-카르복시벤조일과 같은 카르복실화 아릴카르보닐기, 4-니트로벤조일, 2-니트로벤조일과 같은 니트로화 아릴카르보닐기 ; 2-(메톡시카르보닐)벤조일과 같은 저급 알콕시카르보닐화 아릴카르보닐기, 4-페닐벤조일과 같은 아릴화 아릴카르보닐기 등의 「방향족 아실기」;
메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, t-부톡시카르보닐, 이소부톡시카르보닐과 같은 「저급 알콕시카르보닐기」;
2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, 2-트리메틸실릴에톡시카르보닐과 같은 「할로겐 또는 트리 저급 알킬실릴기로 치환된 저급 알콕시카르보닐기」;
비닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐과 같은 「알케닐옥시카르보닐기」;
벤질옥시카르보닐, 4-메톡시벤질옥시카르보닐, 3,4-디메톡시벤질옥시카르보닐, 2-니트로벤질옥시카르보닐, 4-니트로벤질옥시카르보닐과 같은 1 내지 2 개의 「저급 알콕시 또는 니트로기로 아릴환이 치환되어 있어도 되는 아랄킬옥시카르보닐기」를 들 수 있고, 바람직하게는 「지방족 아실기」 또는 「방향족 아실기」이고, 더욱 바람직하게는 벤조일기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, R3 및 R4 또는 α군의 「탄소수 1 내지 4 개의 알킬기로 치환된 아미노기」로서는, 예컨대 메틸아미노, 에틸아미노, 프로필아미노, 이소프로필아미노, 부틸아미노, 이소부틸아미노, s-부틸아미노, tert-부틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 디프로필아미노, 디이소프로필아미노, 디부틸아미노, 디이소부틸아미노, 디(s-부틸)아미노, 디(tert-부틸)아미노를 들 수 있고, 바람직하게는 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노 또는 디이소프로필아미노기이다.
상기 화학식 1 중, R3 및 R4 의 「탄소수 1 내지 5 개의 시아노알콕시기」란, 상기 「탄소수 1 내지 4 개의 알콕시기」로 시아노기가 치환한 기를 말하며, 그와 같은 기로서는, 예컨대 시아노메톡시, 2-시아노에톡시, 3-시아노프로폭시, 4-시아노부톡시, 3-시아노-2메틸프로폭시, 또는 1-시아노메틸-1,1-디메틸메톡시를 들 수 있고, 바람직하게는 2-시아노에톡시기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, α군의 「탄소수 1 내지 4 개의 알킬기」로서는, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, s-부틸, tert-부틸을 들 수 있고, 바람직하게는 메틸 또는 에틸기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, α군의 「할로겐원자」로서는, 예컨대 불소원자, 염소원자, 브롬원자 또는 요오드원자를 들 수 있고, 바람직하게는 불소원자 또는 염소원자이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, B 의 「푸린-9-일기」및 「치환 푸린-9-일기」전체에서, 바람직한 기는 6-아미노푸린-9-일 (즉, 아데니닐), 아미노기가 보호된 6-아미노푸린-9-일, 2,6-디아미노푸린-9-일, 2-아미노-6-클로로푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-클로로푸린-9-일, 2-아미노-6-플루오로푸린-9-일, 아미노기 가 보호된 2-아미노-6-플루오로푸린-9-일, 2-아미노-6-브로모푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-브로모푸린-9-일, 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일 (즉, 구아니닐), 아미노기가 보호된 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일, 아미노기 및 히드록실기가 보호된 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일, 6-아미노-2-메톡시푸린-9-일, 6-아미노-2-클로로푸린-9-일, 6-아미노-2-플루오로푸린-9-일, 2,6-디메톡시푸린-9-일, 2,6-디클로로푸린-9-일 또는 6-메르캅토푸린-9-일기이고, 더욱 바람직하게는 6-벤조일아미노푸린-9-일, 아데니닐, 2-이소부티릴아미노-6-히드록시푸린-9-일 또는 구아니닐기이다.
상기 화학식 1 또는 2 중, B 의 「2-옥소-피리미딘-1-일기」및 「치환 2-옥소-피리미딘-1-일기」전체에서, 바람직한 기는 2-옥소-4-아미노-피리미딘-1-일 (즉, 시토시닐), 아미노기가 보호된 2-옥소-4-아미노-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-아미노-5-플루오로-피리미딘-1-일, 아미노기가 보호된 2-옥소-4-아미노-5-플루오로-피리미딘-1-일, 4-아미노-2-옥소-5-클로로-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-메톡시-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-메르캅토-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-히드록시-피리미딘-1-일 (즉, 우라시닐), 2-옥소-4-히드록시-5-메틸피리미딘-1-일 (즉, 티미닐) 또는 4-아미노-5-메틸-2-옥소-피리미딘-1-일 (즉, 5-메틸시토시닐) 기이고, 더욱 바람직하게는 2-옥소-4-벤조일아미노-피리미딘-1-일, 시토시닐, 티미닐, 우라시닐, 2-옥소-4-벤조일아미노-5-메틸-피리미딘-1-일, 또는 5-메틸시토시닐기이다.
「뉴클레오시드 유사체」란, 푸린 또는 피리미딘 염기와 당이 결합한 「뉴클 레오시드」중 비천연형의 것을 말한다.
「올리고뉴클레오티드 유사체」란, 동일 또는 상이한 상기 「뉴클레오시드」가 인산 디에스테르 결합으로 2 내지 50 개 결합한 「올리고뉴클레오티드」의 비천연형 유도체를 말하며, 그와 같은 유사체로서는, 바람직하게는 당 부분이 수식된 당 유도체 ; 인산 디에스테르 결합부분이 티오에이트화된 티오에이트 유도체 ; 말단의 인산부분이 에스테르화된 에스테르체 ; 푸린염기상의 아미노기가 아미드화된 아미드체를 들 수 있고, 더욱 바람직하게는 당 부분이 수식된 당 유도체 및 인산 디에스테르 결합부분이 티오에이트화된 티오에이트 유도체를 들 수 있다.
「그의 염」이란, 본 발명의 화합물 (1) 은 염으로 할 수 있으므로 그의 염을 말하며, 그와 같은 염으로서는, 바람직하게는 나트륨염, 칼륨염, 리튬염과 같은 알칼리 금속염, 칼슘염, 마그네슘염과 같은 알칼리 토류금속염, 알루미늄염, 철염, 아연염, 구리염, 니켈염, 코발트염 등의 금속염 ;
암모늄염과 같은 무기염, t-옥틸아민염, 디벤질아민염, 모르폴린염, 글루코사민염, 페닐글리신알킬에스테르염, 에틸렌디아민염, N-메틸글루카민염, 구아니딘염, 디에틸아민염, 트리에틸아민염, 디시클로헥실아민염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염, 클로로프로카인염, 프로카인염, 디에탄올아민염, N-벤질-펜에틸아민염, 피페라진염, 테트라메틸암모늄염, 트리스(히드록시메틸)아미노메탄염과 같은 유기염 등의 아민염 ; 불소화 수소산염, 염산염, 브롬화 수소산염, 요오드화 수소산염과 같은 할로겐원자화 수소산염, 질산염, 과염소산염, 황산염, 인산염 등의 무기산염 ; 메탄술폰산염, 트리플루오로메탄술폰산염, 에탄술폰산염과 같은 저급 알칸술폰산염, 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염과 같은 아릴술폰산염, 아세트산염, 말산염, 푸말산염, 숙신산염, 시트르산염, 타르타르산염, 옥살산염, 말레인산염 등의 유기산염 ; 및 글리신염, 리신염, 아르기닌염, 오르니틴염, 글루타민산염, 아스파르트산염과 같은 아미노산염을 들 수 있다.
「그의 약리상 허용되는 염」이란, 본 발명의 수식 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 유사체는 염으로 할 수 있으므로 그의 염을 말하며, 그와 같은 염으로서는, 바람직하게는 나트륨염, 칼륨염, 리튬염과 같은 알칼리 금속염, 칼슘염, 마그네슘염과 같은 알칼리 토류금속염, 알루미늄염, 철염, 아연염, 구리염, 니켈염, 코발트염 등의 금속염 ; 암모늄염과 같은 무기염, t-옥틸아민염, 디벤질아민염, 모르폴린염, 글루코사민염, 페닐글리신알킬에스테르염, 에틸렌디아민염, N-메틸글루카민염, 구아니딘염, 디에틸아민염, 트리에틸아민염, 디시클로헥실아민염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염, 클로로프로카인염, 프로카인염, 디에탄올아민염, N-벤질-펜에틸아민염, 피페라진염, 테트라메틸암모늄염, 트리스(히드록시메틸)아미노메탄염과 같은 유기염 등의 아민염 ; 불소화 수소산염, 염산염, 브롬화 수소산염, 요오드화 수소산염과 같은 할로겐원자화 수소산염, 질산염, 과염소산염, 황산염, 인산염 등의 무기산염 ; 메탄술폰산염, 트리플루오로메탄술폰산염, 에탄술폰산염과 같은 저급 알칸술폰산염, 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염과 같은 아릴술폰산염, 아세트산염, 말산염, 푸말산염, 숙신산염, 시트르산염, 타르타르산염, 옥살산염, 말레인산염 등의 유기산염 ; 및 글리신염, 리신염, 아르기닌염, 오르니틴염, 글루타민산염, 아스파르트산염과 같은 아미노산염을 들 수 있다.
본 발명의 화합물 (1) 및 그의 염 중 바람직한 화합물로서는
(1) R1 이 수소원자, 지방족 아실기, 방향족 아실기, 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기, 저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐 또는 시아노기로 아릴환이 치환된 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기, 또는 실릴기인 화합물 및 그의 염,
(2) R1 이 수소원자, 아세틸기, 벤조일기, 벤질기, p-메톡시벤질기, 디메톡시트리틸기, 모노메톡시트리틸기 또는 tert-부틸디페닐실릴기인 화합물 및 그의 염,
(3) R2 가 수소원자, 지방족 아실기, 방향족 아실기, 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기, 저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐 또는 시아노기로 아릴환이 치환된 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기, 실릴기, 포스포르아미다이트기, 포스포닐기, 인산기 또는 보호된 인산기인 화합물 및 그의 염,
(4) R2 가 수소원자, 아세틸기, 벤조일기, 벤질기, p-메톡시벤질기, tert-부틸디페닐실릴기, -P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2), -P(OCH3)(NCH(CH 3)2), 포스포닐기, 또는 2-클로로페닐 또는 4-클로로페닐인산기인 화합물 및 그의 염,
(5) A 가 메틸렌기인 화합물 및 그의 염,
(6) B 가 6-아미노푸린-9-일 (즉, 아데니닐), 아미노기가 보호된 6-아미노푸린-9-일, 2,6-디아미노푸린-9-일, 2-아미노-6-클로로푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-클로로푸린-9-일, 2-아미노-6-플루오로푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-플루오로푸린-9-일, 2-아미노-6-브로모푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-브로모푸린-9-일, 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일 (즉, 구아니닐), 아미노기가 보호된 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일, 아미노기 및 히드록실기가 보호된 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일, 6-아미노-2-메톡시푸린-9-일, 6-아미노-2-클로로푸린-9-일, 6-아미노-2-플루오로푸린-9-일, 2,6-디메톡시푸린-9-일, 2,6-디클로로푸린-9-일, 6-메르캅토푸린-9-일, 2-옥소-4-아미노-피리미딘-1-일 (즉, 시토시닐), 아미노기가 보호된 2-옥소-4-아미노-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-아미노-5-플루오로-피리미딘-1-일, 아미노기가 보호된 2-옥소-4-아미노-5-플루오로-피리미딘-1-일, 4-아미노-2-옥소-5-클로로-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-메톡시-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-메르캅토-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-히드록시-피리미딘-1-일 (즉, 우라시닐), 2-옥소-4-히드록시-5-메틸피리미딘-1-일 (즉, 티미닐), 4-아미노-5-메틸-2-옥소-피리미딘-1-일 (즉, 5-메틸시토시닐) 기 또는 아미노기가 보호된 4-아미노-5-메틸-2-옥소-피리미딘-1-일기인 화합물 및 그의 염,
(7) B 가 6-벤조일아미노푸린-9-일, 아데니닐, 2-이소부티릴아미노-6-히드록시푸린-9-일, 구아니닐, 2-옥소-4-벤조일아미노-피리미딘-1-일, 시토시닐, 2-옥소-5-메틸-4-벤조일아미노-피리미딘-1-일, 5-메틸시토시닐, 우라시닐 또는 티미닐기인 화합물 및 그의 염을 들 수 있다.
또, 상기 (1) 내지 (2), (3) 내지 (4) 또는 (6) 내지 (7) 은 번호가 커짐에 따라 보다 바람직한 화합물을 나타내며, 화학식 1 에 있어서, R1 을 (1) 내지 (2) 에서 임의로 선택하고, R2 를 (3) 내지 (4) 에서 임의로 선택하고, A 를 (5) 에서 임의로 선택하고, B 를 (6) 내지 (7) 에서 임의로 선택하고, 또 이들을 임의로 조합하여 얻어진 화합물 및 그의 염도 바람직하고, 특히 바람직하게는 하기 군에서 선택되는 화합물 및 그의 염이다.
(화합물군)
2'-O,4'-C-에틸렌구아노신,
2'-O,4'-C-에틸렌아데노신,
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신,
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신,
2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신,
2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
2'-O,4'-C-에틸렌우리딘,
2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘,
2'-O,4'-C-에틸렌시티딘,
2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸시티딘,
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘,
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘,
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘,
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘,
2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘,
2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트,
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트, 및
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트.
본 발명의 화학식 2 로 표시되는 구조를 1 또는 2 이상 함유하는 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 약리학상 허용되는 염 중 바람직한 것으로서는
(8) A 가 메틸렌기인 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 약리학상 허용되는 염,
(9) B 가 6-아미노푸린-9-일 (즉, 아데니닐), 아미노기가 보호된 6-아미노푸린-9-일, 2,6-디아미노푸린-9-일, 2-아미노-6-클로로푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-클로로푸린-9-일, 2-아미노-6-플루오로푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-플루오로푸린-9-일, 2-아미노-6-브로모푸린-9-일, 아미노기가 보호된 2-아미노-6-브로모푸린-9-일, 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일 (즉, 구아니닐), 아미노기가 보호된 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일, 아미노기 및 히드록실기가 보호된 2-아미노-6-히드록시푸린-9-일, 6-아미노-2-메톡시푸린-9-일, 6-아미노-2-클로로푸린-9-일, 6-아미노-2-플루오로푸린-9-일, 2,6-디메톡시푸린-9-일, 2,6-디클로로푸린-9-일, 6-메르캅토푸린-9-일, 2-옥소-4-아미노-피리미딘-1-일 (즉, 시토시닐), 아미노기가 보호된 2-옥소-4-아미노-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-아미노-5-플루오로-피리미딘-1-일, 아미노기가 보호된 2-옥소-4-아미노-5-플루오로-피리미딘-1-일, 4-아미노-2-옥소-5-클로로-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-메톡시-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-메르캅토-피리미딘-1-일, 2-옥소-4-히드록시-피리미딘-1-일 (즉, 우라시닐), 2-옥소-4-히드록시-5-메틸피리미딘-1-일 (즉, 티미닐), 4-아미노-5-메틸-2-옥소-피리미딘-1-일 (즉, 5-메틸시토시닐) 기 또는 아미노기가 보호된 4-아미노-5-메틸-2-옥소-피리미딘-1-일기인 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 약리학상 허용되는 염,
(10) B 가 6-벤조일아미노푸린-9-일, 아데니닐, 2-이소부티릴아미노-6-히드록시푸린-9-일, 구아니닐, 2-옥소-4-벤조일아미노-피리미딘-1-일, 시토시닐, 2-옥소-5-메틸-4-벤조일아미노-피리미딘-1-일, 5-메틸시토시닐, 우라시닐 또는 티미닐기인 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 약리학상 허용되는 염을 들 수 있다.
또, 상기 (9) 내지 (10) 은 번호가 커짐에 따라 보다 바람직한 올리고뉴클레오티드 유사체를 나타내며, 화학식 2 에 있어서, A 를 (8) 에서 임의로 선택하고, B 를 (9) 내지 (10) 에서 임의로 선택하고, 또 이들을 임의로 조합하여 얻어진 올리고뉴클레오티드 유사체 및 그의 약리학상 허용되는 염도 바람직하다.
본 발명의 상기식 (1) 의 화합물에 포함되는 구체적인 화합물을 표 1 및 표 2 에 예시한다. 단, 본 발명의 화합물은 이들에 한정되는 것은 아니다.
표 1 및 표 2 에 있어서, Me 는 메틸기를 나타내고, Bn 은 벤질기를 나타내고, Bz 는 벤조일기를 나타내고, PMB 는 p-메톡시벤질기를 나타내고, Tr 은 트리페닐메틸기를 나타내고, MMTr 은 4-메톡시트리페닐메틸(모노메톡시트리틸)기를 나타내고, DMTr 은 4,4'-디메톡시트리페닐메틸(디메톡시트리틸)기를 나타내고, TMTr 은 4,4',4''-트리메톡시트리페닐메틸(트리메톡시트리틸)기를 나타내고, TMS 는 트리메틸실릴기를 나타내고, TBDMS 는 tert-부틸디메틸실릴기를 나타내고, TBDPS 는 tert-부틸디페닐실릴기를 나타내고, TIPS 는 트리이소프로필실릴기를 나타낸다.
Figure 112003047608923-pct00029
Figure 112003047608923-pct00004
Figure 112003047608923-pct00005
Figure 112003047608923-pct00006
Figure 112003047608923-pct00007
Figure 112003047608923-pct00008
Figure 112003047608923-pct00009
Figure 112003047608923-pct00010
[화학식 1]
Figure 112003047608923-pct00011
Figure 112003047608923-pct00012
Figure 112003047608923-pct00013
Figure 112003047608923-pct00014
Figure 112003047608923-pct00015
Figure 112003047608923-pct00016
Figure 112003047608923-pct00017
Figure 112003047608923-pct00018
Figure 112003047608923-pct00019
Figure 112003047608923-pct00020
상기 표 1 내지 2 중, 바람직한 화합물은 (1-5), (1-7), (1-23), (1-24), (1-31), (1-35), (1-39), (1-43), (1-49), (1-51), (1-67), (1-68), (1-75), (1-79), (1-83), (1-87), (1-93), (1-95), (1-111), (1-112), (1-119), (1-123), (1-127), (1-131), (1-137), (1-139), (1-155), (1-156), (1-163), (1-167), (1-171), (1-175), (1-177), (1-178), (1-185), (1-186), (1-193), (1-194), (1-201), (1-202), (2-1), (2-2), (2-3), (2-4), (2-10), (2-15), (2-19), (2-22), (2-27), (2-31), (2-34), (2-39), (2-43), (2-46), (2-51), (2-55), (2-57), (2-58), (2-59), (2-60), (2-66), (2-71), (2-75), (2-78), (2-83), (2-87), (2-90), (2-95), (2-99), (2-102), (2-107), (2-111), (2-113), (2-114), (2-115), (2-116), (2-122), (2-127), (2-131), (2-134), (2-139), (2-143), (2-146), (2-151), (2-155), (2-158), (2-163), (2-167), (2-169), (2-170), (2-171), (2-172), (2-178), (2-183), (2-187), (2-190), (2-195), (2-199), (2-202), (2-207), (2-211), (2-214), (2-219), (2-223), (2-225), (2-226), (2-233), (2-234), (2-235) 또는 (2-236) 이고, 더욱 바람직하게는
2'-O,4'-C-에틸렌구아노신 (1-5),
2'-O,4'-C-에틸렌아데노신 (1-7),
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신 (1-23),
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신 (1-24),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신 (1-31),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신 (1-35),
2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신 (1-177),
2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신 (1-178),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트 (1-185),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트 (1-186),
2'-O,4'-C-에틸렌우리딘 (2-1),
2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘 (2-2),
2'-O,4'-C-에틸렌시티딘 (2-3),
2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸시티딘 (2-4),
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘 (2-10),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘 (2-15),
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘 (2-22),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘 (2-27),
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘 (2-34),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘 (2-39),
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘 (2-46),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘 (2-51),
2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘 (2-225),
2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘 (2-226),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트 (2-233),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트 (2-234),
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트 (2-235), 또는
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘-3'-O-(2-시 아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트 (2-236) 이다.
본 발명의 화합물 (1) 은 이하에 서술하는 방법 A 에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112001019802072-pct00021
방법 A 중, X 는 보호기를 나타내고, Y 는 보호기를 나타내고, A 는 상술한 것과 동의미를 나타내고, B1 은 푸린-9-일기, 상술한 치환기 α에서 선택되는 치환 푸린-9-일기 또는 2-옥소-피리미딘-1-일기를 나타내는데, 「보호될 수 있는 아미노기」 중, 무보호의 아미노기는 제거되고, B2 는 푸린-9-일기, 상술한 치환기 α에서 선택되는 치환 푸린-9-일기 또는 2-옥소-피리미딘-1-일기를 나타내는데, 「보호될 수 있는 아미노기」 중, 보호된 아미노기는 제거되고, R7 은 탈리기를 형성하는 기이다. R8 은 탄소수 1 내지 4 개의 지방족 아실기이다.
X 의 보호기는 상술한 R1 에서의 「히드록실기의 보호기」와 동일한 것이다.
Y 의 보호기는 상술한 R2 에서의 「히드록실기의 보호기」와 동일한 것이다.
R7 의 「탈리기를 형성하는 기」로서는, 예컨대 메탄술포닐, 에탄술포닐과 같은 저급 알킬술포닐기, 트리플루오로메탄술포닐과 같은 할로겐 치환 저급 알킬술포닐기, p-톨루엔술포닐과 같은 아릴술포닐기를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄술포닐기 또는 p-톨루엔술포닐기이다.
R8 의 「탄소수 2 내지 4 개의 지방족 아실기」로서는, 예컨대 아세틸프로피오닐, 부티릴기 등을 들 수 있고, 바람직하게는 아세틸기이다.
이하, 방법 A 의 각 공정에 대하여 상세하게 설명한다.
(A-1 공정)
본 공정은 불활성 용제중, 염기촉매의 존재하, 후술하는 방법 B 내지 D 에 의해 제조할 수 있는 화합물 (3) 에 탈리기 도입 시약을 반응시켜 화합물 (4) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 헥산, 헵탄, 리그로인, 석유 에테르와 같은 지방족 탄화수소류 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 포름산 에틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 아세트산 부틸, 탄산 디에틸과 같은 에스테르류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트 라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케톤류 ; 니트로에탄, 니트로벤젠과 같은 니트로화합물류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, N-메틸피롤리디논, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 술폴란과 같은 술폭시드류 ; 피리딘류를 들 수 있는데, 바람직하게는 피리딘이다.
사용되는 염기촉매로서는, 바람직하게는 트리에틸아민, 피리딘, 디메틸아미노피리딘과 같은 염기이다.
사용되는 탈리기 도입 시약으로서는, 예컨대 메탄술포닐클로리드, 에탄술포닐브로미드와 같은 알킬술포닐할라이드류 ; p-톨루엔술포닐클로리드와 같은 아릴술포닐할라이드류를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄술포닐클로리드 및 p-톨루엔술포닐클로리드이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 탈리기 도입 시약, 염기촉매에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 탈리기 도입 시약, 염기촉매, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 10 분 내지 24 시간이고, 바람직하게는 1 내지 10 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (4) 는, 예컨대 반응액을 중화하고, 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하 여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(A-2 공정)
본 공정은 용제중, 산촉매의 존재하, A-1 공정에서 제조되는 화합물 (4) 에 산무수물을 반응시켜 화합물 (5) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 디에틸에테르, 디옥산, 테트라히드로푸란과 같은 에테르류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, N-메틸피롤리디논, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 아세트산과 같은 유기산 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 아세트산이다.
사용되는 산촉매로서는, 예컨대 염산, 황산, 질산 등의 무기산을 들 수 있는데, 바람직하게는 황산 (특히 진한 황산) 이다.
사용되는 산무수물로서는, 예컨대 무수 아세트산, 무수 프로피온산 등의 저급 지방족 카르복실산의 무수물을 들 수 있는데, 바람직하게는 무수 아세트산이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매, 산무수물에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매, 산무수물, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 10 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 30 분 내지 3 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (5) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(A-3 공정)
본 공정은 불활성 용제중, 산촉매의 존재하, A-2 공정에서 제조되는 화합물 (5) 에 문헌 (H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B, Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제하였다. 원하는 치환기를 갖고 있어도 되는 푸린 또는 피리미딘에 대응하는 트리메틸실릴화체를 반응시켜 화합물 (6) 을 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 1,2-디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, N-메틸피롤리디논, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 황화 탄소 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 1,2-디클로로에탄이다.
사용되는 산촉매로서는, 예컨대 AlCl3, SnCl4, TiCl4, ZnCl2, BF3, 트리플루오 로메탄술폰산 트리메틸실릴과 같은 루이스산 촉매 등을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 100 ℃ 이고, 바람직하게는 50 ℃ 내지 80 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 1 시간 내지 24 시간이고, 바람직하게는 1 시간 내지 8 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (6) 은, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(A-4 공정)
본 공정은 불활성 용제중, 염기촉매의 존재하, A-3 공정에서 제조되는 화합물 (6) 을 고리화하여 본 발명의 화합물 (1a) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는 물 ; 피리딘류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, N-메틸피롤리디논, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 또는 그들의 혼합용제이고, 바람직하게는 물 및 피리딘의 혼합용제이다.
사용되는 염기촉매로서는, 예컨대 수산화나트륨, 수산화칼륨과 같은 알칼리 금속 수산화물 ; 탄산나트륨, 탄산칼륨과 같은 알칼리 금속탄산염 ; 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드와 같은 알칼리 금속 알콕시드 ; 암모니아수 등을 들 수 있고, 바람직하게는 알칼리 금속 수산화물 (특히 수산화나트륨) 이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 ℃ 내지 30 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 1 분 내지 5 시간이고, 바람직하게는 1 분 내지 30 분이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (1a) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(A-5 공정)
본 공정은 불활성 용제중, A-4 공정에서 얻어지는 화합물 (1a) 에 탈보호 시약을 반응시켜 화합물 (1b) 를 제조하는 공정이다.
탈보호의 방법은 보호기의 종류에 따라 다르지만, 다른 부반응을 발생시키지 않는 방법이면 특별히 한정은 없고, 예컨대 "Protective Groups in Organic Synthesis" (Theodora W. Greene, Peter G. M.Wuts 저, 1999 년, A Wiley-Interscience Publication 발행) 에 기재된 방법에 의해 행할 수 있다.
특히 보호기가 (1) 「지방족 아실기 또는 방향족 아실기」, (2) 「1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」또는 「저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐, 시아노기로 아릴환이 치환된 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」, (3) 「실릴기」의 경우에는 이하의 방법에 의해 행할 수 있다.
(1) 지방족 아실기 및 방향족 아실기의 경우에는 통상 불활성 용제중, 염기를 반응시켜 행한다.
사용되는 용제는 물과 잘 혼합하고, 반응을 저해하지 않으며, 출발물질을 어느 정도 이상 용해하는 것이면 특별히 한정은 없고, 예컨대 함수 또는 무수 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드와 같은 아미드류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 또는 사염화탄소와 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 디옥산과 같은 에테르류를 들 수 있고, 바람직하게는 에테르류이고, 더욱 바람직하게는 테트라히드로푸란이다.
사용되는 염기로서는 수산화리튬, 수산화칼륨, 수산화나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물 ; 탄산나트륨, 탄산칼륨과 같은 알칼리 금속 탄산염 ; 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드와 같은 알칼리 금속 알콕시드 ; 암모니아수, 암모니아/메탄올 용액과 같은 암모니아 용액을 들 수 있다.
반응온도는 0 ℃ 내지 60 ℃ 이고, 바람직하게는 20 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 10 분 내지 24 시간이고, 바람직하게는 1 내지 3 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (1b) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적 화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정 또는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(2) 보호기가 「1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」또는 「저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐, 시아노기로 아릴환이 치환된 1 내지 3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」의 경우에는 불활성 용제중, 환원제를 사용하여 행한다.
사용되는 용제로서는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올과 같은 알콜류 ; 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산과 같은 에테르류 ; 톨루엔, 벤젠, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 헥산, 시클로헥산과 같은 지방족 탄화수소류 ; 아세트산 에틸, 아세트산 프로필과 같은 에스테르류 ; 아세트산과 같은 유기산류 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매가 바람직하다.
사용되는 환원제로서는 통상 접촉환원반응에 사용되는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 파라듐탄소, 라니-니켈, 산화백금, 백금흑, 로듐-산화알루미늄, 트리페닐포스핀-염화로듐, 파라듐-황산바륨이 사용된다.
압력은 특별히 한정은 없지만, 통상 1 내지 10 기압으로 행해진다.
반응온도는 0 ℃ 내지 60 ℃ 이고, 바람직하게는 20 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 10 분 내지 24 시간이고, 바람직하게는 1 내지 3 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (1b) 는, 예컨대 반응혼합물로부터 환원제를 제거하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물 세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
「3 개의 아릴기로 치환된 메틸기」, 즉 트리틸기의 경우에는 산을 사용하여 행할 수도 있다.
그 경우, 사용하는 용제로서는 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 1,2-디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, tert-부탄올과 같은 알콜류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, N-메틸피롤리디논, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 아세트산과 같은 유기산류를 들 수 있고, 바람직하게는 유기산 (특히 아세트산) 또는 알콜류 (특히 tert-부탄올) 이다.
사용하는 산으로서는, 바람직하게는 아세트산 또는 트리플루오로아세트산이다.
반응온도는 0 ℃ 내지 60 ℃ 이고, 바람직하게는 20 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 10 분 내지 24 시간이고, 바람직하게는 1 내지 3 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (1b) 는, 예컨대 반응혼합물을 중화하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적 화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(3) 보호기가 「실릴기」의 경우에는 통상 불소화 테트라부틸암모늄, 불소화 수소산, 불소화 수소산-피리딘, 불소화 칼륨과 같은 불소 음이온을 생성하는 화합물로 처리하거나, 또는 아세트산, 메탄술폰산, 파라톨루엔술폰산, 트리플루오로아세트산, 트리플루오로메탄술폰산과 같은 유기산 또는 염산과 같은 무기산으로 처리함으로써 제거할 수 있다.
그리고, 불소 음이온에 의해 제거하는 경우, 포름산, 아세트산, 프로피온산과 같은 유기산을 첨가함으로써 반응이 촉진되는 경우가 있다.
사용되는 용매로서는 반응을 저해하지 않으며, 출발물질을 어느 정도 용해하는 것이면 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 물 ; 아세트산과 같은 유기산 및 이들의 혼합용매를 들 수 있다.
반응온도는 0 ℃ 내지 100 ℃ 이고, 바람직하게는 20 내지 70 ℃ 이다.
반응시간은 5 분 내지 48 시간이고, 바람직하게는 1 내지 24 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (1b) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적 화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정 또는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(A-6 공정)
본 공정은 불활성 용제중, A-5 공정에서 얻어지는 화합물 (1b) 에 탈보호 시약을 반응시켜 본 발명의 화합물 (1c) 를 제조하는 공정이다.
탈보호의 방법은 보호기의 종류에 따라 다르지만, 다른 부반응을 발생시키지 않는 방법이면 특별히 한정은 없고, 예컨대 "Protective Groups in Organic Synthesis" (Theodora W. Greene 저, 1981 년, A Wiley-Interscience Publication 발행) 에 기재된 방법에 의해 행할 수 있다.
특히 보호기가 지방족 아실기 또는 방향족 아실기의 경우에는 이하의 방법에 의해 행할 수 있다.
즉, 보호기가 지방족 아실기 및 방향족 아실기의 경우에는 통상 불활성 용제중, 염기를 반응시켜 행한다.
사용되는 용제는 물과 잘 혼합하고, 반응을 저해하지 않으며, 출발물질을 어느 정도 이상 용해하는 것이면 특별히 한정은 없고, 예컨대 함수 또는 무수 메탄올, 에탄올과 같은 알콜류 ; 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드와 같은 아미드류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 또는 사염화탄소와 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 디옥산과 같은 에테르류를 들 수 있고, 바람직하게는 알콜류이고, 더욱 바람직하게는 메탄올이다.
사용되는 염기로서는 수산화리튬, 수산화칼륨, 수산화나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물 ; 탄산나트륨, 탄산칼륨과 같은 알칼리 금속 탄산염 ; 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드와 같은 알칼리 금속 알콕시드 ; 암모니아를 들 수 있고, 바람직하게는 암모니아이다.
반응온도는 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 10 분 내지 24 시간이고, 바람직하게는 10 내지 15 시간이다.
반응종료후, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
상술한 중간체 (3) 은 이하에 서술하는 방법 B 내지 D 에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112001019802072-pct00022
Figure 112001019802072-pct00023
Figure 112001019802072-pct00024
방법 B 내지 D 중, X 및 Y 는 상술한 것과 동의미를 나타내고, R9 는 탈리기를 형성하는 기를 나타내고, E 는 에틸렌, 트리메틸렌 또는 테트라메틸렌기를 나타 내고, Z 는 단결합, 메틸렌 또는 에틸렌기를 나타낸다.
R9 의 탈리기를 형성하는 기로서는 상술한 R7 로 들 수 있는 것과 동일한 것을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술포닐기이다.
R11 및 R12 는 동일하게 수소원자를 나타내거나, 하나가 되어 산소원자를 나타낸다.
R10 은 R11 및 R12 가 하나가 되어 산소원자를 나타내는 경우에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, s-부틸, tert-부틸과 같은 탄소수 1 내지 4 개의 알킬기이고, 바람직하게는 메틸기이고, R11 및 R12 가 동일하게 수소원자인 경우에는 벤질기와 같은 아랄킬기 ; 메톡시메틸기와 같은 알콕시알킬기 ; 벤조일옥시메틸기와 같은 아릴카르보닐옥시메틸기 또는 벤질옥시메틸기와 같은 아랄킬옥시메틸기 ; 메톡시에톡시메틸기와 같은 알콕시알콕시알킬기 ; 트리메틸실릴, t-부틸디메틸실릴, 디페닐메틸실릴, 디페닐부틸실릴, 디페닐이소프로필실릴, 페닐디이소프로필실릴과 같은 실릴기를 들 수 있다.
방법 B 또는 방법 C 에서 사용되는 원료화합물인 화합물 (7) 은 이하의 방법으로 제조할 수 있다.
즉, 시판되는 1,2,5,6-디이소프로필리덴 D-글루코오스를 출발원료로 하고, 문헌 (R.D.Youssefyeh, J.P.H.Verheyden, J.G.Moffatt. J.Org.Chem., 44, 1301-1309 (1979)) 의 방법에 준하여 화합물 (6) 의 「X」부분이 수소원자에 상당하는 화합물을 제조하고, 이어서 문헌 (T.Waga, T.Nishizaki, I.Miyakawa, H.Ohrui, H.Meguro, Biosci. Biotechnol. Biochem., 57, 1433-1438 (1993)) (X = Bn 의 경우) 의 방법에 준하여 화합물 (6) 을 제조할 수 있다.
이하, 방법 B 내지 D 의 각 공정에 대하여 상세하게 설명한다.
(방법 B)
(B-1 공정)
본 공정은 불활성 용제중, 염기촉매의 존재하, 상술한 방법으로 제조되는 화합물 (7) 에 탈리기 도입 시약을 반응시켜 화합물 (8) 을 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드와 같은 아미드류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 또는 사염화탄소와 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 디옥산과 같은 에테르류를 들 수 있는데, 바람직하게는 메틸렌클로리드이다.
사용되는 염기촉매로서는, 바람직하게는 트리에틸아민, 피리딘, 디메틸아미노피리딘과 같은 염기이다.
사용되는 탈리기 도입 시약으로서는, 바람직하게는 염화 트리플루오로메탄술폰산 또는 무수 트리플루오로메탄술폰산이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매에 따라 다르지만, 통상 -100 ℃ 내지 -50 ℃ 이고, 바람직하게는 -100 ℃ 내지 -70 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 30 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 30 분 내지 3 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (8) 은, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(B-2 공정)
본 공정은 불활성 용제중, B-1 공정에서 제조되는 화합물 (8) 에 시아노화 시약을 반응시켜 화합물 (9) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드와 같은 아미드류, 메틸렌클로리드, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 또는 사염화탄소와 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 디옥산과 같은 에테르류 ; 아세토니트릴 ; 디메틸술폭시드 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 아미드류 (디메틸포름아미드) 이다.
사용되는 시아노화 시약으로서는, 예컨대 KCN, NaCN, 시안화 트리메틸실란 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 NaCN 이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 시아노화 시약에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 100 ℃ 이고, 바람직하게는 30 ℃ 내지 70 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 시아노화 시약, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 30 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 1 내지 3 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (9) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(B-3 공정)
본 공정은 불활성 용제중, B-2 공정에서 제조되는 화합물 (9) 에 환원제를 반응시켜 화합물 (10) 을 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 메틸렌클로리드, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 또는 사염화탄소와 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 헥산, 헵탄, 리그로인, 석유 에테르와 같은 지방족 탄화수소류 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케톤류 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 할로겐화 탄화수소류 (특히 메틸렌클로리드) 이다.
사용되는 환원제로서는 디이소부틸알루미늄 수소, 트리에톡시알루미늄 수소 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 디이소부틸알루미늄하이드라이드이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제에 따라 다르지만, -100 ℃ 내지 -50 ℃ 이고, 바람직하게는 -90 ℃ 내지 -70 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 30 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 1 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (10) 은, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(B-4 공정)
본 공정은 불활성 용제중, B-3 공정에서 제조되는 화합물 (10) 에 환원제를 반응시켜 방법 A 의 원료화합물의 하나인 화합물 (3a) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, t-부탄올, 이소아밀알콜, 디에틸렌글리콜, 글리세린, 옥탄올, 시클로헥산올, 메틸셀로솔브와 같은 알콜류 ; 아세트산 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 알콜류 (특히 에탄올) 이다.
사용되는 환원제로서는, 예컨대 수소화 붕소나트륨, 수소화 붕소리튬과 같은 수소화 붕소 알칼리 금속 ; 수소화 알루미늄리튬, 수소화 리튬트리에톡시드알루미늄과 같은 수소화 알루미늄 화합물 ; 보란 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 수소화 붕소나트륨이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 10 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 30 분 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (3a) 는, 예컨대 환원제를 분해하고, 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(방법 C)
(C-1 공정)
본 공정은 불활성 용제중, 상술한 방법으로 제조되는 화합물 (7) 에 산화제를 반응시켜 화합물 (11) 을 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 헥산, 헵탄, 리그로인, 석유 에테르와 같은 지방족 탄화수소류 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 포름산 에틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 아세트산 부틸, 탄산 디에틸과 같은 에스테르류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케 톤류 ; 를 들 수 있는데, 바람직하게는 할로겐화 탄화수소류 (특히 메틸렌클로리드) 이다.
사용되는 산화제로서는 Swern 산화용 시약, Dess-Martin 산화용 시약, 피리딘 염산염ㆍ삼산화 크롬 착체 (피리디늄클로로클로메이트, 피리디늄디클로메이트) 와 같은 삼산화 크롬 착체 등을 들 수 있는데, 바람직한 시약으로서는 Swern 산화용 시약 (즉, 디메틸술폭시드-옥자릴클로리드) 이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제에 따라 다르지만, 통상 -100 ℃ 내지 -50 ℃ 이고, 바람직하게는 -100 내지 -70 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 산화제, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 30 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 1 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (11) 은, 예컨대 산화제를 분해하고, 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(C-2 공정)
본 공정은 불활성 용제중, C-1 공정에서 제조되는 화합물 (11) 에 증탄소 시약을 반응시켜 화합물 (12) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 헥산, 헵탄, 리그로인, 석유 에테르와 같은 지 방족 탄화수소류 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 포름산 에틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 아세트산 부틸, 탄산 디에틸과 같은 에스테르류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케톤류 ; 를 들 수 있는데, 바람직하게는 할로겐화 탄화수소류 (특히 메틸렌클로리드) 이다.
사용되는 시약으로서는 Wittig 시약, Horner-Emmons 시약, Peterson 반응시약, TiCl4-CH2Cl2-Zn 계 반응제, Tebbe 시약 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 Wittig 시약, Horner-Emmons 시약 및 Tebbe 시약이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 증탄소 시약에 따라 다르지만, 통상 -20 ℃ 내지 20 ℃ 이고, 바람직하게는 0 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 증탄소 시약, 반응온도에 따라 다르지만, 30 분 내지 12 시간, 바람직하게는 1 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (12) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(C-3 공정)
본 공정은 불활성 용제중, C-2 공정에서 제조되는 화합물 (12) 의 올레핀의 말단 탄소에 선택적으로 히드록실기를 도입하여 화합물 (3a) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 헥산, 헵탄, 리그로인, 석유 에테르와 같은 지방족 탄화수소류 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 포름산 에틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 아세트산 부틸, 탄산 디에틸과 같은 에스테르류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케톤류를 들 수 있는데, 바람직하게는 에테르류 (특히 테트라히드로푸란) 이다.
사용되는 반응시약으로서는 보란, 디시아밀보란, 텍실보란, 9-BBN(9-보라비시클로[3.3.1]노난) 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 9-BBN 이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 시약에 따라 다르지만, 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 시약, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 6 내지 48 시간이고, 바람직하게는 12 내지 24 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (3a) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(방법 D)
(D-1 공정)
본 공정은 불활성 용제중, C-1 공정에서 제조되는 화합물 (11) 에 증탄소 시약을 반응시켜 화합물 (13) 을 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 헥산, 헵탄, 리그로인, 석유 에테르와 같은 지방족 탄화수소류 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 포름산 에틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 아세트산 부틸, 탄산 디에틸과 같은 에스테르류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케톤류를 들 수 있는데, 바람직하게는 에테르류 (특히 테트라히드로푸란) 등을 들 수 있는데, 더욱 바람직하게는 할로겐화 탄화수소류 (특히 메틸렌클로리드) 이다.
사용되는 증탄소 시약으로서는 Wittig 시약, Horner-Emmons 시약 등을 들 수 있다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 시약에 따라 다르지만, 통상 -20 ℃ 내지 40 ℃ 이고, 바람직하게는 0 내지 20 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 시약, 반응온도에 따라 다르지만, 30 분 내지 12 시간, 바람직하게는 1 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (13) 은, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정 또는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(D-2 공정)
본 공정은 불활성 용제중, D-1 공정에서 제조되는 화합물 (13) 에 환원제를 반응시켜 화합물 (14) 를 제조하는 공정이다.
본 공정은 A-5 공정의 (2) 에 준하여 실시할 수 있다. 단, R10 이 치환기를 갖고 있어도 되는 벤질기이고, 또한 R11 및 R12 가 수소원자인 경우에는 이 공정에 의해 화합물 (3b) 를 직접 제조할 수 있다.
(D-3 공정)
본 공정은 불활성 용제중, D-2 공정에서 제조되는 화합물 (14) 에 환원제를 반응시켜 방법 A 의 원료화합물의 하나인 화합물 (3b) 를 제조하는 공정이다.
(a) R11 과 R12 가 하나가 되어 산소원자인 경우
사용되는 용제로서는, 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올, t-부탄올, 이소아밀알콜, 디에틸렌글리콜, 글리세린, 옥탄올, 시클로헥산올, 메틸셀로솔브와 같은 알콜류 ; 아세트산 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 알콜류 (특히 에탄올) 이다.
사용되는 환원제로서는, 예컨대 수소화 붕소리튬과 같은 수소화 붕소 알칼리 금속 ; 수소화 알루미늄리튬, 수소화 리튬트리에톡시드알루미늄과 같은 수소화 알루미늄 화합물 ; 보란 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 보란 또는 수소화 알루미늄리튬이다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 환원제, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 10 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 30 분 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (3b) 는, 예컨대 환원제를 분해하고, 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마 토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(b) R11 과 R12 가 수소인 경우, R10 이 벤질기 이외인 경우
R10 이 실릴기인 경우에는 A-5 공정의 (3) 방법에 준하여 실시할 수 있다.
R10 이 벤질기와 같은 아랄킬기 ; 메톡시메틸기와 같은 알콕시알킬기 ; 벤조일옥시메틸기와 같은 아닐카르보닐옥시메틸기 또는 벤질옥시메틸기와 같은 아랄킬옥시메틸기 ; 메톡시에톡시메틸기와 같은 알콕시알콕시알킬기 등의 경우에는 산촉매를 사용하고, 그 경우에 사용되는 산촉매로서는 p-톨루엔술폰산, 트리플루오로아세트산, 디클로로아세트산과 같은 유기산, BF3, AlCl3 과 같은 루이스산을 들 수 있다.
사용되는 용제로서는, 예컨대 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 1,2-디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, N-메틸피롤리디논, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 황화 탄소 등을 들 수 있다.
반응온도는 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매에 따라 다르지만, 통상 0 ℃ 내지 50 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용되는 원료화합물, 용제, 산촉매, 반응온도에 따라 다르지만, 통상 10 분 내지 12 시간이고, 바람직하게는 30 분 내지 5 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (3b) 는, 예컨대 반응혼합물을 중화하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
본 발명의 화합물 (1) 을 사용하고, 이하에 서술하는 E 법에 의해 수식 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 그의 티오에이트 유도체를 제조할 수 있다.
Figure 112001019802072-pct00025
방법 E 중, A 및 B 는 상술한 것과 동의미를 나타내고, R13 은 히드록실기의 보호기 (특히 메톡시기로 치환되어 있어도 되는 트리틸기) 를 나타내고, R14 는 포스포닐기, 후술하는 모노 치환-클로로(알콕시)포스핀류 또는 디 치환-알콕시포스핀류를 반응시킴으로써 형성되는 기를 나타낸다.
(방법 E)
(E-1 공정)
본 공정은 불활성 용제중, 방법 A 로 제조되는 화합물 (1) 에 보호화 시약을 반응시켜 화합물 (15) 를 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는, 바람직하게는 벤젠, 톨루엔, 크실렌과 같은 방향족 탄화수소류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류 ; 포름산 에틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 아세트산 부틸, 탄산 디에틸과 같은 에스테르류 ; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에틸렌글리콜디메틸에테르와 같은 에테르류 ; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 이소포론, 시클로헥사논과 같은 케톤류 ; 니트로에탄, 니트로벤젠과 같은 니트로화합물류 ; 아세토니트릴, 이소부틸로니트릴과 같은 니트릴류 ; 포름아미드, 디메틸포름아미드 (DMF), 디메틸아세트아미드, 헥사메틸포스포르트리아미드와 같은 아미드류 ; 디메틸술폭시드, 술폴란과 같은 술폭시드류 ; 트리메틸아민, 트리에틸아민, N-메틸모르폴린 등의 지방족 삼급 아민류 ; 피리딘, 피콜린과 같은 방향족 아민 등을 들 수 있고, 더욱 바람직하게는 할로겐화 탄화수소류 (특히 메틸렌클로리드), 방향족 아민 (특히 피리딘) 이다.
사용되는 보호화 시약으로서는 5' 위치만을 선택적으로 보호할 수 있고, 산성, 중성의 조건하 제거할 수 있는 것이면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는 트 리틸클로리드, 모노메톡시트리틸클로리드, 디메톡시트리틸클로리드와 같은 트리아릴메틸할라이드류이다.
보호화 시약으로서 트리아릴메틸할라이드류를 사용하는 경우에는 통상 염기를 사용한다.
그 경우에 있어서, 사용되는 염기로서는 피리딘, 디메틸아미노피리딘, 피롤리디노피리딘 등의 복소환 아민류, 트리메틸아민, 트리에틸아민 등의 지방족 삼급 아민류를 들 수 있고, 바람직하게는 피리딘, 디메틸아미노피리딘, 피롤리디노피리딘이다.
용제로서 액상의 염기를 사용하는 경우에는 이 염기 자체가 탈산제로서 작용하므로, 다시 염기를 첨가할 필요는 없다.
반응온도는 사용되는 원료, 시약, 용제 등에 따라 다르지만, 통상 0 내지 150 ℃ 이고, 바람직하게는 20 내지 100 ℃ 이다. 또, 반응시간은 사용되는 원료, 용제, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 1 내지 100 시간이고, 바람직하게는 2 내지 24 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (15) 는, 예컨대 반응혼합물을 농축하고, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(E-2 공정)
본 공정은 불활성 용제중, E-1 공정에서 제조되는 화합물 (15) 에 아미다이트화에 통상 사용하는 모노 치환-클로로(알콕시)포스핀류 또는 디 치환-알콕시포스핀류를 반응시켜 화합물 (16) 을 제조하는 공정이다.
사용되는 용제로서는 반응에 영향을 미치지 않는 것이면 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 디옥산과 같은 에테르류 ; 메틸렌클로리드, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 할로겐화 탄화수소류를 들 수 있다.
사용되는 모노 치환-클로로(알콕시)포스핀류로서는, 예컨대 클로로(모르폴리노)메톡시포스핀, 클로로(모르폴리노)시아노에톡시포스핀, 클로로(디메틸아미노)메톡시포스핀, 클로로(디메틸아미노)시아노에톡시포스핀, 클로로(디이소프로필아미노)메톡시포스핀, 클로로(디이소프로필아미노)시아노에톡시포스핀과 같은 포스핀류를 들 수 있고, 바람직하게는 클로로(모르폴리노)메톡시포스핀, 클로로(모르폴리노)시아노에톡시포스핀, 클로로(디이소프로필아미노)메톡시포스핀, 클로로(디이소프로필아미노)시아노에톡시포스핀이다.
모노 치환-클로로(알콕시)포스핀류를 사용하는 경우에는 탈산제가 사용되며, 그 경우에 사용되는 탈산제로서는 피리딘, 디메틸아미노피리딘과 같은 복소환 아민류, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디이소프로필아민과 같은 지방족 아민류를 들 수 있는데, 바람직하게는 지방족 아민류 (특히 디이소프로필아민) 이다.
사용되는 디 치환-알콕시포스핀류로서는, 예컨대 비스(디이소프로필아미노) 시아노에톡시포스핀, 비스(디에틸아미노)메탄술포닐에톡시포스핀, 비스(디이소프로필아미노)(2,2,2-트리클로로에톡시)포스핀, 비스(디이소프로필아미노)(4-클로로페닐메톡시)포스핀과 같은 포스핀류를 들 수 있고, 바람직하게는 비스(디이소프로필아미노)시아노에톡시포스핀이다.
디 치환-알콕시포스핀류를 사용하는 경우에는 산이 사용되며, 그 경우에 사용되는 산으로서는, 바람직하게는 테트라졸, 아세트산 또는 p-톨루엔술폰산이다.
반응온도는 특별히 한정은 없지만, 통상 0 내지 80 ℃ 이고, 바람직하게는 실온이다.
반응시간은 사용하는 원료, 시약, 온도 등에 따라 다르지만, 통상 5 분 내지 30 시간이고, 바람직하게는 실온에서 반응한 경우, 30 분 내지 10 시간이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (16) 은, 예컨대 반응혼합물을 적당히 중화하고, 또 불용물이 존재하는 경우에는 여과에 의해 제거한 후, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 목적화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 재침전 또는 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
또는, 본 공정은 불활성 용제중 (바람직하게는 메틸렌클로리드와 같은 할로겐화 탄화수소류), E-1 에서 제조되는 화합물 (15) 에 트리스-(1,2,4-트리아졸릴)포스파이트를 반응시킨 후, 물을 첨가하여 H-포스포네이트화하여 화합물 (16) 을 제조하는 공정이다.
반응온도는 특별히 한정은 없지만, 통상 -20 내지 100 ℃ 이고, 바람직하게는 10 내지 40 ℃ 이다.
반응시간은 사용하는 원료, 시약, 온도 등에 따라 다르지만, 통상 5 분 내지 30 시간이고, 바람직하게는 실온에서 반응한 경우 30 분이다.
반응종료후, 본 반응의 목적화합물 (16) 은, 예컨대 반응혼합물을 적당히 중화하고, 또 불용물이 존재하는 경우에는 여과에 의해 제거한 후, 물과 아세트산 에틸과 같은 혼화되지 않는 유기용매를 첨가하여 물세정한 후, 목적화합물을 포함하는 유기층을 분리하여 무수 황산마그네슘 등으로 건조시킨 후, 용제를 증류제거함으로써 얻어진다.
얻어진 목적화합물은 필요하다면 통상법, 예컨대 재결정, 재침전 또는 크로마토그래피 등에 의해 추가로 정제할 수 있다.
(E-3 공정)
본 공정은 적어도 1 개 이상의 E-2 에서 제조되는 화합물 (16), 및 원하는 뉴클레오티드 서열의 올리고뉴클레오티드 유사체를 제조하는데 필요한 시판되는 포스포르아미다이트 시약 등을 사용하여 통상의 방법에 의해 DNA 자동합성기상, 목적하는 올리고뉴클레오티드 유사체를 제조하는 공정이다.
원하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 유사체는 DNA 합성기, 예컨대 파킨엘마사의 포스포르아미다이트법에 의한 모델 392 등을 사용하여 문헌 (Nucleic Acids Research, 12, 4539 (1984)) 에 기재된 방법에 준하여 합성할 수 있다.
또, 원하는 바에 따라, 티오에이트화되는 경우에는 황 외에 테트라에틸티우람디술피드 (TETD, 어플라이드바이오시스템즈사), Beaucage 시약 (밀리포어사) 등의 3 가의 인산에 반응시켜 티오에이트를 형성하는 시약을 사용하고, 문헌 (Tetarhedron Letters, 32, 3005 (1991), J.Am.Chem.Soc., 112, 1253 (1990)) 에 기재된 방법에 준하여 티오에이트 유도체를 얻을 수 있다.
얻어지는 조제(粗製)의 올리고뉴클레오티드 유사체는 올리고팩 (역상 크로마토칼럼) 을 사용하여 정제하고, 정제물의 순도를 HPLC 로 분석함으로써 확인할 수 있다.
얻어지는 올리고뉴클레오티드 유사체의 사슬길이는 뉴클레오시드 단위로서 통상 2 내지 50 개이고, 바람직하게는 10 내지 30 개이다.
얻어진 올리고뉴클레오티드 유사체의 상보사슬 형성능 및 뉴클레아제 효소 내성은 이하의 방법에 따라 조사할 수 있다.
(시험방법 1)
얻어진 여러 가지의 올리고뉴클레오티드 유사체와, 상보적인 서열을 갖는 천연의 DNA 또는 RNA 로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 어닐링처리하고, 융해온도 (Tm 값) 를 측정함으로써 본 발명의 올리고뉴클레오티드 유사체의 상보 DNA 및 RNA 에 대한 하이브리드 형성능을 조사한다.
인산나트륨 완충액 올리고뉴클레오티드 유사체와 천연형 상보 올리고뉴클레오티드를 동량 첨가한 샘플 용액을 비등수중에 용해시키고, 시간을 들여 천천히 실 온까지 냉각시킨다 (어닐링). 분광광도계 (예컨대, 시마즈 UV-2100PC) 의 셀실 내에서 샘플용액을 20 ℃ 에서 90 ℃ 까지 온도를 조금씩 상승시켜 260 ㎚ 에서의 자외선 흡수를 측정한다.
(시험방법 2) 뉴클레아제 효소 내성의 측정
올리고뉴클레오티드를 완충액중에서 뉴클레아제를 첨가하여 가온한다. 뉴클레아제로서는 사독(蛇毒) 포스포디에스테라아제, 엔도뉴클레아제 P1, 엔도뉴클레아제 S1 등이 사용된다. 완충액으로서는 효소에 적합한 완충액이면 제한은 없지만, 사독 포스포디에스테라아제의 경우 트리스-염산 완충액, 엔도뉴클레아제 P1 의 경우 아세트산나트륨 버퍼 등이 사용된다. 또, 필요에 따라 완충액에 금속이온을 첨가한다. 금속이온으로서는 사독 포스포디에스테라아제의 경우 Mg2+, 엔도뉴클레아제의 경우 Zn2+ 등이 사용된다. 반응온도는 0 ∼ 100 ℃ 가 바람직하고, 더욱 바람직하게는 30 ∼ 50 ℃ 이다.
일정시간후, 에틸렌디아민 사아세트산 (EDTA) 을 첨가하고, 100 ℃ 에서 2 분간 가열함으로써 반응을 정지시킨다.
올리고뉴클레오티드 잔량의 정량에는 올리고뉴클레오티드를 라디오아이소토프 등으로 표지하고 절단반응생성물을 이미지 애널라이저 등으로 정량하는 방법, 절단반응생성물을 역상 고속액체 크로마토그래피 (HPLC) 로 정량하는 방법, 절단반응생성물을 색소 (에티듐브로마이드 등) 로 염색하고, 컴퓨터를 사용한 화상처리에 의해 정량하는 방법 등이 사용된다.
본 발명의 화학식 2 로 표시되는 구조를 1 또는 2 이상 함유하는 올리고뉴클레오티드 유사체의 투여형태로서는, 예컨대 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 또는 시럽제 등에 의한 경구투여 또는 주사제 또는 좌제 등에 의한 비경구투여를 나타내고, 이들 제제는 부형제 (예컨대, 젖당, 백당, 포도당, 만니톨, 솔비톨과 같은 당 유도체 ; 옥수수전분, 감자전분, α전분, 덱스트린과 같은 전분 유도체 ; 결정 셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체 ; 아라비아고무 ; 덱스트란 ; 풀루란과 같은 유기계 부형제 : 및 경질 무수규산, 합성 규산알루미늄, 규산칼슘, 메타규산알루민산 마그네슘과 같은 규산염 유도체 ; 인산 수소칼슘과 같은 인산염 ; 탄산칼슘과 같은 탄산염 ; 황산칼슘과 같은 황산염 등의 무기계 부형제를 들 수 있음), 활택제 (예컨대, 스테아르산, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 마그네슘과 같은 스테아르산 금속염 ; 탈크 ; 콜로이드실리카 ; 비검, 경랍과 같은 왁스류 ; 붕산 ; 아디핀산 ; 황산나트륨과 같은 황산염 ; 글리콜 ; 푸말산 ; 벤조산나트륨 ; DL 로이신 ; 지방산 나트륨염 ; 라우릴황산나트륨, 라우릴황산마그네슘과 같은 라우릴황산염 ; 무수규산, 규산수화물과 같은 규산류 ; 및 상기 전분유도체를 들 수 있음), 결합제 (예컨대, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 마크로골, 및 상기 부형제와 동일한 화합물을 들 수 있음), 붕괴제 (예컨대, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복실기 메틸셀룰로오스, 카르복실기 메틸셀룰로오스칼슘, 내부 가교 카르복실기 메틸셀룰로오스나트륨과 같은 셀룰로오스 유도체 ; 카르복실기 메틸스타치, 카르복실기 메틸스타치나트륨, 가교 폴리비닐피롤리돈과 같은 화학변형된 전분ㆍ셀룰로오스류를 들 수 있음), 안정제 (메틸파라벤, 프 로필파라벤과 같은 파라옥시벤조산 에스테르류 ; 클로로부탄올, 벤질알콜, 페닐에틸알콜과 같은 알콜류 ; 염화 벤잘코늄 ; 페놀, 크레졸과 같은 페놀류 ; 티멜로살 ; 데히드로아세트산 ; 및 소르빈산을 들 수 있음), 교미교취제 (예컨대, 통상 사용되는 감미료, 산미료, 항료 등을 들 수 있음), 희석제 등의 첨가제를 사용하여 주지된 방법으로 제조된다.
그 사용량은 증상, 연령, 투여방법 등에 따라 다르지만, 예컨대 경구투여의 경우에는 1 회당 하한으로서 0.01 ㎎/㎏ 체중 (바람직하게는 0.1 ㎎/㎏ 체중), 상한으로서 1000 ㎎/㎏ 체중 (바람직하게는 100 ㎎/㎏ 체중) 을, 정맥내 투여의 경우에는 1 회당 하한으로서 0.001 ㎎/㎏ 체중 (바람직하게는 0.01 ㎎/㎏ 체중), 상한으로서 100 ㎎/㎏ 체중 (바람직하게는 10 ㎎/㎏ 체중) 을 1 일당 1 내지 수회 증상에 따라 투여하는 것이 바람직하다.
이하, 실시예, 참고예 및 시험예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
(실시예 1)
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘
(예시화합물 번호 2-34)
참고예 11 에서 얻어진 화합물 (6.80 g, 8.86 mmol) 을 피리딘 (136 ㎖) 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 2N 수산화나트륨 수용액 (68 ㎖) 을 첨가하여 실온에서 1 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 20 % 아세트산수를 적가하여 반응액을 중화한 후, 클 로로포름으로 추출하고, 포화식염수로 세정하였다. 용매를 감압하 증류제거한 후, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:3), 목적화합물 (3.33 g, 6.02 mmol, 68 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) : 8.64(2H, brs), 7.89(2H, d, 7.6Hz), 7.64-7.60(1H, m), 7.54-7.51(2H, m), 7.48-7.37(3H, m), 7.36-7.26(8H, m), 6.18(1H, s), 4.70(1H, d, 11Hz), 4.60(1H, d, 11Hz), 4.55(1H, d, 11Hz), 4.46(1H, d, 2.9Hz), 4.42(1H, d, 11Hz), 4.10-4.02(2H, m), 3.89(1H, d, 2.9Hz), 3.75(1H, d, 11Hz), 3.62(1H, d, 11Hz), 2.34-2.26(1H, m), 1.39-1.36(1H, m). FAB-MAS(mNBA):554(M+H)+
(실시예 2)
2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘
(예시화합물 번호 2-225)
실시예 1 에서 얻어진 화합물 (2.06 g, 3.72 mmol) 을 무수 디클로로메탄 (317 ㎖) 에 용해시키고, -78 ℃ 로 냉각시킨 시점에서 트리클로로보란 (1.0 M in 디클로로메탄) (31.7 ㎖) 을 적가하였다. -78 ℃ 에서 1 시간 동안 교반한 후, -20 ℃ 까지 천천히 승온시키고, 반응용기를 얼음-식염의 배스에 넣어 -20 ℃ 내지 -10 ℃ 사이에서 2 시간 동안 교반하였다. 메탄올 (12 ㎖) 을 천천히 적가하여 10 분간 교반한 후, 탄산수소나트륨 포화수용액을 소량씩 첨가하여 pH 7 ∼ 8 로 조정하고, 실온으로 되돌렸다. 이 혼합용액을 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:5), 백색 고체의 목적물 (1.21 g, 3.24 mmol, 87 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(500MHz, DMSO-d6) : 11.23(1H, brs), 8.70(1H, d, 7.2Hz), 8.00(2H, d, 7.5Hz), 7.3-6(4H, m), 5.97(1H, s), 5.35(1H, dd, 5 and 10Hz), 4.10(1H, dd, 5 and 10Hz), 4.03(1H, d, 3.2Hz), 3.95-3.85(2H, m) 3.83(1H, d, 3.2Hz), 3.65-3.51(2H, m), 2.06-1.98(1H, m), 1.26(1). FAB-MAS(mNBA):374(M+H)+
(실시예 3)
2'-O,4'-C-에틸렌-시티딘
(예시화합물 번호 2-3)
실시예 2 에서 얻어진 화합물 (0.1 g, 0.268 mmol) 을 포화 암모니아-메탄올 용액 (12 ㎖) 에 용해시켜 하룻밤 방치하였다. 용매를 증류제거하여 백색 고체의 목적물 (0.054 g, 75 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(500MHz, DMSO-d6) : 8.18(1H, d, 7.4Hz), 7.10(2H, br), 5.84(1H, s), 5.69(1H, d, 7.6Hz), 5.27-5.24(2H, m), 3.86(1H, d, 3.2Hz), 3.90-3.78(2H, m), 3.76(1H, d, 3.2Hz), 3.56(1H, dd, 5.5 및 12Hz), 3.49(1H, dd, 5.5 및 12Hz), 2.01-1.93(1H, dt, 7.5 및 12Hz), 1.22(1H, dd, 3.6 및 13Hz). FAB-MAS(mNBA):270(M+H)+
(실시예 4)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘
(예시화합물 번호 2-39)
실시예 2 에서 얻어진 화합물 (1.29 g, 3.46 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 피리딘 (26 ㎖) 에 용해시켰다. 이것에 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (1.76 g, 5.18 mmol) 를 첨가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다.
반응용액에 소량의 메탄올을 첨가한 후, 용매를 감압하 농축하고, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:5), 무색 비정질상의 목적물 (2.10 g, 3.11 mmol, 90 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(270MHz, DMSO-d6) : 11.27(1H, brs), 8.59(1H, m), 6.92-8.01(19H, m), 6.03(1H, s), 5.56(1H, m), 4.17(1H, m), 4.08(1H, m), 3.86(2H, m), 3.77(6H, s), 3.24(2H, m), 1.98(1H, m), 1.24(1H, m). FAB-MAS(mNBA):676(M+H)+
(실시예 5)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
(예시화합물 번호 2-235)
실시예 4 에서 얻어진 화합물 (6.53 g, 9.66 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 디클로로메탄 (142 ㎖) 에 용해시키고, N,N-디이소프로필아민 (2.80 ㎖, 16.1 mmol) 을 첨가하였다. 빙냉하, 2-시아노에틸 N,N-디이소프로필클로로포스포르아미다이트 (2.16 ㎖, 9.66 mmol) 를 적가하여 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응용액을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:트리에틸아민 = 50:1 ∼ 디클로로메탄:아세트산 에틸:트리에틸아민 = 60:30:1), 엷은 백색상의 목적물 (7.10 g, 8.11 mmol, 84 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) : 1.1-1.2(12H, m), 1.35(1H, m), 2.11(1H, m), 2.3(2H, m), 3.35-3.7(6H, m), 3.8(6H, m), 3.9-4.1(2H, m), 4.33(1H, m), 4.45(1H, m), 6.23(1H, s), 6.9(4H, m), 7.3-7.9(15H, m), 8.7-8.8(1H, m).
(실시예 6)
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘
(예시화합물 번호 2-22)
참고예 10 에서 얻어진 화합물 (418 ㎎, 0.62 mmol) 을 피리딘:메탄올:물 = 65:30:5 의 혼합용액 (5 ㎖) 에 용해시켰다. 거기에 2N 수산화나트륨/동 혼합용액 (5 ㎖) 을 0 ℃ 에서 첨가하고, 실온에서 15 분 교반하였다.
반응종료후, 1N 염산으로 반응액을 중화하고, 아세트산 에틸 (약 30 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 30 ㎖), 포화식염수 (약 30 ㎖) 로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다.
감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 1:1), 비정질상 무색 물질 (228 ㎎, 0.49 mmol, 79 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.35(1H, d, 13Hz), 1.41(3H, s), 2.28(1H, dt, 9.4 및 13Hz), 3.60(1H, d, 11Hz), 3.76(1H, d, 11Hz), 3.94(1H, d, 3.0Hz), 4.10(1H, d, 7.0Hz), 4.14(1H, d, 7.0Hz), 4.31(1H, d, 3.0Hz), 4.51(1H, d, 12Hz), 4.54(1H, d, 12Hz), 4.58(1H, d, 12Hz), 4.75(1H, d, 12Hz), 6.06(1H, s), 7.3(10H, m), 7.91(1H, s), 8.42(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):465(M+H)+
(실시예 7)
2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘
(예시화합물 번호 2-2)
실시예 6 에서 얻어진 화합물 (195 ㎎, 0.42 mmol) 을 메탄올 (10 ㎖) 에 용해시키고, 얻어진 반응액을 수소기류하 상압에서 5 시간 동안 수소화 촉매의 존재에서 교반하였다.
반응종료후, 촉매를 여과하여 여과액의 용매를 감압하 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 10:1), 백색 분말 (76 ㎎, 0.268 mmol, 64 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CD3OD) : 1.33(1H, dd, 3.8 및 13Hz), 1.86(3H, d, 0.9Hz), 1.94(1H, ddd, 7.5, 11.7 및 13Hz), 3.68(1H, d, 12Hz), 3.75(1H, d, 12Hz), 3.9-4.0(2H, m), 4.05(1H, d, 3.2Hz), 4.09(1H, d, 3.2Hz), 6.00(1H, s), 8.28(1H, d, 1.1Hz). FAB-MAS(mNBA):285(M+H)+
(실시예 8)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘
(예시화합물 번호 2-27)
실시예 7 에서 얻어진 화합물 (1.45 g, 5.10 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 피리딘 (44 ㎖) 에 용해시켰다. 이것에 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (2.59 g, 7.65 mmol) 를 첨가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다.
반응용액에 소량의 메탄올을 첨가한 후, 용매를 감압하 농축하고, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:10), 무색 비정질상의 목적물 (2.42 g, 4.13 mmol, 81 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(270MHz, DMSO-d6) : 11.36(1H, s), 7.68(1H, s), 6.90-7.44(13H, m), 5.89(1H, s), 5.55(1H, d), 4.09(1H, m), 4.04(1H, d), 3.82(2H, m), 3.74(6H, s), 3.19(2H, m), 1.99(1H, m), 1.36(1H, m), 1.17(3H, s). FAB-MAS(mNBA):587(M+H)+
(실시예 9)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
(예시화합물 번호 2-234)
실시예 8 에서 얻어진 화합물 (4.72 g, 8.05 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 디클로로메탄 (142 ㎖) 에 용해시키고, N,N-디이소프로필아민 (2.80 ㎖, 16.1 mmol) 을 첨가하였다. 빙냉하, 2-시아노에틸 N,N-디이소프로필클로로포스포르아미다이트 (2.16 ㎖, 9.66 mmol) 를 적가하여 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응용액을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (헥산:아세트산 에틸:트리에틸아민 = 50:50:1 ∼ 헥산:아세트산 에틸:트리에틸아민 = 30:60:1), 무색 비정질상의 목적물 (5.64 g, 7.17 mmol, 89 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) :1.1-1.2(15H, m), 1.4(1H, m), 2.08(1H, m), 2.4(2H, m), 3.2-4.0(14H, m), 4.38(2H, m), 4.47(1H, m), 6.06(1H, s), 6.8-6.9(4H, m), 7.2-7.5(9H, m), 7.91(1H, m). FAB-MAS(mNBA):787(M+H)+
(실시예 10)
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신
(예시화합물 번호 1-23)
참고예 12 에서 얻어진 화합물 (238 ㎎, 0.30 mmol) 을 피리딘:메탄올:물 = 65:30:5 의 혼합용액 (5 ㎖) 에 용해시켰다. 거기에 2N 수산화나트륨/동 혼합용액 (5 ㎖) 을 0 ℃ 에서 첨가하고, 실온에서 15 분 교반하였다.
반응종료후, 1N 염산으로 반응액을 중화하고, 아세트산 에틸 (약 30 ㎖) 로 추출하고, 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 30 ㎖), 포화식염수 (약 30 ㎖) 로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 50:1), 비정질상 무색 물질 (133 ㎎, 0.23 mmol, 78 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.44(1H, d, 13Hz), 2.31(1H, dd, 13 및 19Hz), 3.56(1H, d, 11Hz), 3.70(1H, d, 11Hz), 4.10(2H, m), 4.24(1H, s), 4.45(1H, d, 12Hz), 4.53-4.67(4H, m), 6.52(1H, s), 7.3(10H, m), 7.53(2H, m), 7.62(1H, m), 8.03(2H, d, 7.6Hz), 8.66(1H, s), 8.78(1H, s), 9.00(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):578(M+H)+
(실시예 11)
2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신
(예시화합물 번호 1-178)
질소기류하, 실시예 10 에서 얻어진 화합물 (116 ㎎, 0.20 mmol) 을 무수 디클로로메탄 5 ㎖ 에 용해시키고, -78 ℃ 로 냉각시켰다. 거기에 1M-삼염화 붕소/디클로로메탄 용액 (1.5 ㎖, 1.5 mmol) 을 천천히 적가하고, -78 ℃ 에서 3 시간 동안 교반하였다. 또한, 1M-삼염화 붕소/디클로로메탄 용액 (1.5 ㎖, 1.5 mmol) 을 첨가하여 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 실온으로 천천히 승온시키고, 다시 -78 ℃ 로 급냉한 후, 메탄올 (5 ㎖) 을 첨가하여 다시 실온으로 천천히 승온시켰다.
반응종료후, 용매를 감압하 증류제거하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 9:1), 백색 분말 (49 ㎎, 0.17 mmol, 84 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CD3OD) : 1.45(1H, dd, 4.3 및 13Hz), 2.12(1H, m), 3.72(1H, d, 12Hz), 3.79(1H, d, 12Hz), 4.04(1H, dd, 7.3 및 12Hz), 4.15(1H, dt, 4.3 및 9.4Hz), 4.36(1H, d, 3.2Hz), 4.43(1H, d, 3.2Hz), 6.57(1H, s), 7.57(2H, m), 7.66(1H, m), 8.09(2H, d, 8.0Hz), 8.72(1H, s), 8.85(1H, s). FAB-MAS(mNBA):398(M+H)+
(실시예 12)
2'-O,4'-C-에틸렌아데노신
(예시화합물 번호 1-7)
실시예 11 에서 얻어진 화합물 (14 ㎎, 0.035 mmol) 을 포화 암모니아/메탄올 용액 (1 ㎖) 에 용해시켜 하룻밤 방치하였다.
반응종료후, 용매를 감압하 증류제거하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 10:1), 백색 분말 (10 ㎎, 0.034 mmol, 98 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CD3OD) : 1.32(1H, dd, 4 및 13Hz), 2.04(1H, dt, 7.4 및 12Hz), 3.53(1H, dd, 5 및 12Hz), 3.61(1H, dd, 5.2 및 12Hz), 3.90(1H, dd, 7.4 및 12Hz), 3.97(1H, dt, 4 및 12Hz), 4.15(1H, d, 3.1Hz), 4.21(1H, d, 3.1Hz), 5.27(1H, t, 5.2Hz), 5.39(1H, d, 3.1Hz), 6.33(1H, s), 7.29(2H, s), 7.66(1H, m), 8.14(1H, s), 8.42(1H, s). FAB-MAS(mNBA):294(M+H)+ UV(lmax) : 260(pH7), 260(pH1), 258(pH13)
(실시예 13)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신
(예시화합물 번호 1-31)
실시예 11 에서 얻어진 화합물 (14 ㎎, 0.035 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 피리딘 (1 ㎖) 에 용해시켰다. 이것에 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (18 ㎎, 0.053 mmol) 를 첨가하여 40 ℃, 5 시간 동안 교반하였다.
반응용액에 소량의 메탄올을 첨가한 후, 용매를 감압하 농축하고, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:5), 무색 비정질상의 목적 물 (18 ㎎, 0.026 mmol, 73 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) :1.63(1H, m), 2.14(1H, 7.5, 12, 및 13Hz), 3.37(1H, d, 11Hz), 3.41(1H, d, 11Hz), 3.79(6H, s), 4.10(2H, m), 4.48(1H, d, 3.3Hz), 4.59(1H, d, 3.3Hz), 6.54(1H, s), 6.85(4H, m), 7.2-7.6(12H, m), 8.02(2H, m), 8.45(1H, s), 8.82(1H, s), 9.02(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):700(M+H)+
(실시예 14)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
(예시화합물 번호 1-186)
실시예 13 에서 얻어진 화합물 (16 ㎎, 0.023 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 디클로로메탄 (0.5 ㎖) 에 용해시키고, 테트라졸 N,N-디이소프로필아민염 (10 ㎎) 을 첨가하였다. 빙냉하, 2-시아노에틸 N,N,'N,'N-테트라이소프로필포스포르아미다이트 (약 20 ㎕) 를 적가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응용액을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:아세트산 에틸 = 2:1), 백색 고체의 목적물 (20 ㎎, 0.022 mmol, 97 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) :1.0-1.2(12H, m), 1.54(1H, m), 2.15(1H, m), 2.33(2H, m), 3.3-3.6(6H, m), 3.80(6H, s), 4.08(2H, m), 4.65(1H, m), 4.75(1H, m), 6.53(1H, s), 6.84(4H, m), 7.2-7.6(12H, m), 8.01(2H, m), 8.53(1H, s), 8.83(1H, s), 9.01(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):900(M+H)+
(실시예 15)
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘
(예시화합물 번호 2-10)
참고예 13 에서 얻어진 화합물 (194 ㎎, 0.292 mmol) 을 피리딘 (3 ㎖) 에 용해시켰다. 거기에 1N 수산화나트륨 (2 ㎖) 을 0 ℃ 에서 첨가하고, 실온에서 30 분 교반하였다.
반응종료후, 1N 염산으로 반응액을 중화하고, 아세트산 에틸 (10 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:3), 오일상 무색 물질 (105 ㎎, 0.233 mmol, 80 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.36(1H, m), 2.29(1H, m), 3.63(1H, d, 11Hz), 3.74(1H, d, 11Hz), 3.87(1H, d, 2.9Hz), 4.03(2H, m), 4.29(1H, d, 2.9Hz), 4.49(1H, d, 12Hz), 4.50(1H, d, 11Hz), 4.53(1H, d, 11Hz), 4.73(1H, d, 12Hz), 5.20(1H, dd, 2 및 8Hz), 6.04(1H, s), 7.2-7.4(10H, m), 8.13(1H, d, 8.2Hz), 8.57(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):451(M+H)+
(실시예 16)
2'-O,4'-C-에틸렌우리딘
(예시화합물 번호 2-1)
실시예 15 에서 얻어진 화합물 (100 ㎎, 0.222 mmol) 을 메탄올 (4 ㎖) 에 용해시키고, 얻어진 반응액을 수소기류하 상압에서 5 시간 동안 수소화 촉매의 존재에서 교반하였다.
반응종료후, 촉매를 여과하여 여과액의 용매를 감압하 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 10:1), 무색 오일상 물질 (45 ㎎, 0.167 mmol, 75 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CD3OD) : 1.35(1H, dd, 4 및 13Hz), 2.13(1H, ddd, 7, 11 및 13Hz), 3.66(1H, d, 12Hz), 3.73(1H, d, 12Hz), 3.91-4.08(2H, m),4.01(1H, d, 3.2Hz), 4.12(1H, d, 3.2Hz), 5.66(1H, d, 8.2Hz), 6.00(1H, s), 8.37(1H, d, 8.2Hz). FAB-MAS(mNBA):271(M+H)+
(실시예 17)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘
(예시화합물 번호 2-15)
실시예 16 에서 얻어진 화합물 (28 ㎎, 0.104 mmol) 을 무수 피리딘으로 공 비탈수한 후, 질소기류하 무수 피리딘 (3 ㎖) 에 용해시켰다. 이것에 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (50 ㎎, 0.15 mmol) 를 첨가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다.
반응용액에 소량의 메탄올을 첨가한 후, 용매를 감압하 농축하고, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:3), 무색 오일상의 목적물 (25 ㎎, 0.044 mmol, 42 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CD3OD) : 1.35(1H,dd, 3 및 14Hz), 2.03(1H, ddd, 8, 11 및 14Hz), 2.46(1H, d, 8Hz), 3.36(1H, d, 11Hz), 3.41(1H, d, 11Hz), 3.80(3H, s), 3.81(3H, s), 3.97(2H, m), 4.21(1), 4.33(1H, brm), 5.31(1H, m), 6.10(1H, s), 6.86(4H, m), 7.2-7.5(9H, m), 8.27(1H, d, 8.2Hz), 8.43(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):573(M+H)+
(실시예 18)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
(예시화합물 번호 2-233)
실시예 17 에서 얻어진 화합물 (6 ㎎, 0.0105 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 디클로로메탄 (0.5 ㎖) 에 용해시키고, 테트라졸 N,N-디이소프로필아민염 (3 ㎎) 을 첨가하였다. 빙냉하, 2-시아노에틸 N,N,'N,'N-테트라이소프로필포스포르아미다이트 (약 5 ㎕) 를 적가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응용액을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:아세트산 에틸 = 2:1), 백색 고체의 목적물 (8 ㎎) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) : 1.1-1.2(13H, m), 2.09(1H, m), 2.4 (2H, m), 3.3-3.6(6H, m), 3.81(6H, m), 3.94(2H, m), 4.35(1H, m), 4.47(1H, m), 5.18(1H, d, 8.2Hz), 6.08(1H, s), 6.86(4H, m), 7.2-7.4(9H, m), 8.31(1H, d, 8.2Hz). FAB-MAS(mNBA):773(M+H)+
(실시예 19)
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘
(예시화합물 번호 2-46)
참고예 14 에서 얻어진 화합물 (310 ㎎, 0.396 mmol) 을 피리딘 (5 ㎖) 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 1N 수산화나트륨 수용액 (5 ㎖) 을 첨가하여 실온에서 20 분간 교반하였다.
반응후, 반응액에 20 % 아세트산수를 적가하여 반응액을 중화한 후, 디클로로메탄으로 추출하고, 포화식염수로 세정하였다. 용매를 감압하 증류제거한 후, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:2), 목적화합물 (190 ㎎, 0.334 mmol, 84 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) : 1.37(1H, m), 1.58(3H, s), 2.30(1H, dt, 10 및 13Hz), 3.64(1H, d, 11Hz), 3.79(1H, d, 11Hz), 3.95(1H, d, 3.0Hz), 4.04(2H, dd, 2.3 및 10Hz), 4.37(1H, d, 3.0Hz), 4.50(1H, d, 12Hz), 4.56(1H, d, 11Hz), 4.61(1H, d, 11Hz), 4.76(1H, d, 12Hz), 6.11(1H, s), 7.2-7.5(13H, m), 8.09(1H, s), 8.29(2H, m). FAB-MAS(mNBA):568(M+H)+
(실시예 20)
2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘
(예시화합물 번호 2-226)
실시예 19 에서 얻어진 화합물 (120 ㎎, 0.211 mmol) 을 무수 디클로로메탄 (5 ㎖) 에 용해시키고, -78 ℃ 로 냉각시킨 시점에서 트리클로로보란 (1.0 M in 디클로로메탄) (1.6 ㎖) 을 적가하였다. -78 ℃ 에서 4 시간 동안 교반한 후, 메탄올 (1 ㎖) 을 천천히 적가하여 10 분간 교반한 후, 탄산수소나트륨 포화수용액을 소량씩 첨가하여 pH 7 ∼ 8 로 조정하고, 실온으로 되돌렸다. 이 혼합용액을 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:6), 백색 고체의 목적물 (29 ㎎, 0.075 mmol, 36 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, d-DMSO) : 1.24(1H, m), 2.01(3H, s), 2.0(1H, m), 3.54(1H, dd, 5.4 및 12Hz), 3.64(1H, dd, 5.4 및 12Hz), 3.88(3H, m), 4.10(1H, m), 5.36(1H, d, 5.4Hz), 5.49(1H, t, 5.0Hz), 5.95(1H, s), 7.4-7.6(3H, m), 8.21(2H, m), 8.49(1H, s), 13.17(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):388(M+H)+
(실시예 21)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘
(예시화합물 번호 2-51)
실시예 20 에서 얻어진 화합물 (44 ㎎, 0.114 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 피리딘 (1 ㎖) 에 용해시켰다. 이것에 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (60 ㎎, 0.177 mmol) 를 첨가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응용액에 소량의 메탄올을 첨가한 후, 용매를 감압하 농축하고, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:4), 무색 오일상의 목적물 (73 ㎎, 0.106 mmol, 93 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) : 1.46(1H, m), 1.49(3H, s), 2.06(1H, m), 2.59(1H, d, 8.6Hz), 3.36(1H, d, 11Hz), 3.39(1H, d, 11Hz), 3.80(3H, s), 3.81(3H, s), 3.99(2H, m), 4.30(1H, d, 3.3Hz), 4.39(1H, m), 6.12(1H, s), 6.85(4H, m), 7.2-7.5(12H, m), 8.03(1H, s), 8.28(2H, m). FAB-MAS(mNBA):573(M+H)+
(실시예 22)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
(예시화합물 번호 2-236)
실시예 21 에서 얻어진 화합물 (35 ㎎, 0.0507 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 디클로로메탄 (1 ㎖) 에 용해시키고, 테트라졸 N,N-디이소프로필아민염 (17 ㎎) 을 첨가하였다. 빙냉하, 2-시아노에틸 N,N,'N,'N-테트라이소프로필포스포르아미다이트 (32 ㎕, 0.1 mmol) 를 적가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응용액을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:아세트산 에틸 = 2:1), 백색 고체의 목적물 (40 ㎎, 0.0445 mmol, 89 %) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, CDCl3) :1.1-1.2(12H, m), 1.36(3H, s), 1.37(1H, m), 2.10(1H, m), 2.36(2H, m), 3.3-3.6(6H, m), 3.81(6H, m), 3.98(2H, m), 4.42(1H, m), 4.49(1H, m), 6.11(1H, s), 6.88(4H, m), 7.2-7.5(12H, m), 8.14(1H, s), 8.28(2H, m). FAB-MAS(mNBA):890(M+H)+
(실시예 23)
2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸시티딘
(예시화합물 번호 2-4)
실시예 20 에서 얻어진 화합물 (11.6 ㎎, 0.030 mmol) 을 포화 암모니아-메탄올 용액 (2 ㎖) 에 용해시키고, 하룻밤 방치하였다. 용매를 증류제거하여 백색 고체의 목적물 (8.5 ㎎, 0.03 mmol) 을 얻었다.
1 H-NMR(400MHz, d-DMSO) : 1.20(1H, m), 1.82(3H, s), 1.97(1H, m), 3.49(1H, dd, 5 및 12Hz), 3.58(1H, dd, 5 및 12Hz), 3.85(2H, m), 5.23(1H, d, 5Hz), 5.32(1H, t, 5Hz), 5.84(1H, s), 6.7(1H, brs), 7.2(1H, brs), 8.08(1H, s). FAB-MAS(mNBA):284(M+H)+ UV(lmax) : 279(pH7), 289(pH1), 279(pH13)
(실시예 24)
3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신
(예시화합물 번호 1-24)
참고예 15 에서 얻어진 화합물 (약 200 ㎎) 을 피리딘 (2 ㎖) 에 용해시켰다. 거기에 1N 수산화나트륨 (2 ㎖) 을 첨가하여 실온에서 15 분 교반하였다.
반응종료후, 1N 염산으로 반응액을 중화하고, 아세트산 에틸로 추출하고, 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 50:1), 비정질상 무색 물질 (20 ㎎, 0.036 mmol, 6 % (2 공정)) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.27(3H, s), 1.29(3H, s), 1.43(1H, dd, 3 및 13Hz), 2.28(1H, m), 2.59(1H, qui, 6.9Hz), 3.54(1H, d, 11Hz), 3.68(1H, d, 11Hz), 4.03(2H, m), 4.15(1H, d, 3.0Hz), 4.31(1H, d, 3.0Hz), 4.45(1H, d, 12), 4.56(1H, d, 12Hz), 4.61(1H, d, 12Hz), 4.63(1H, d, 12Hz), 6.18(1H, s), 7.2-7.4(10H, m), 8.19(1H, s), 11.93(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):560(M+H)+
(실시예 25)
2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신
(예시화합물 번호 1-177)
실시예 24 에서 얻어진 화합물 (10 ㎎, 0.018 mmol) 을 메탄올 (2 ㎖) 에 용해시키고, 얻어진 반응액을 수소기류하 상압에서 5 시간 동안 수소화 촉매의 존재에서 교반하였다.
반응종료후, 촉매를 여과하여 여과액의 용매를 감압하 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 10:2), 무색 오일상 물질 (5 ㎎, 0.013 mmol, 72 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CD3OD) :1.21(3H, s), 1.22(3H, s), 1.41(1H, dd, 4 및 13Hz), 2.18(1H, m), 2.69(1H, qui, 6.9Hz), 3.69(1H, d, 12Hz), 3.76(1H, d, 12Hz), 4.0(2H, m), 4.26(1H, d, 3.2Hz), 4.30(1H, d, 3.2Hz), 6.30(1H, s), 8.40(1H, s). FAB-MAS(mNBA):380(M+H)+
(실시예 26)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신
(예시화합물 번호 1-35)
실시예 25 에서 얻어진 화합물 (5 ㎎, 0.013 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 피리딘 (1 ㎖) 에 용해시켰다. 이것에 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드 (14 ㎎, 0.04 mmol) 를 첨가하여 40 ℃ 에서 3 시간 동안 교반하였다.
반응용액에 소량의 메탄올을 첨가한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:6), 무색 고체상의 목적물 (4 ㎎, 0.0059 mmol, 45 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) :1.26(3H, d, 1.4Hz), 1.28(3H, d, 1.4Hz), 1.66(1H, m), 2.15(1H, m), 2.59(1H, qui, 6.9Hz), 3.65(1H, m), 3.78(1H, m), 4.06(2H, m), 4.35(1H, m), 4.38(1H, d, 3.2Hz), 6.23(1H, s), 6.8(4H, m), 7.2-7.5(9H, m), 8.01(1H, s), 8.19(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):682(M+H)+
(실시예 27)
5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
(예시화합물 번호 1-185)
실시예 26 에서 얻어진 화합물 (4 ㎎, 0.0058 mmol) 을 무수 피리딘으로 공비탈수한 후, 질소기류하 무수 디클로로메탄 (0.5 ㎖) 에 용해시키고, 테트라졸 N,N-디이소프로필아민염 (5 ㎎) 을 첨가하였다. 빙냉하, 2-시아노에틸 N,N,'N,'N-테트라이소프로필포스포르아미다이트 (9 ㎕, 0.03 mmol) 를 적가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응용액을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 용매를 감압하 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하고 (디클로로메탄:아세트산 에틸 = 2:1), 백색 고체의 목적물 (4 ㎎) 을 얻었다.
1H-NMR(400MHz, CDCl3) :1.1-1.4(19H, m), 2.1(1H, m), 2.4(2H, m), 2.6(1H, m), 3.3-3.6(6H, m), 3.8(6H, s), 4.0-4.6(4H, m), 6.2(1H, s), 6.8(4H, m), 7.2-7.5(9H, m), 8.1(1H, s).
(실시예 28)
2'-O,4'-C-에틸렌구아노신
(예시화합물 번호 1-5)
실시예 25 에서 얻어진 화합물 (0.5 ㎎) 을 포화 암모니아/메탄올 용액 (0.5 ㎖) 에 용해시키고, 60 ℃ 에서 5 시간 반응시켰다.
반응종료후, 용매를 감압하 증류제거하고, 백색 분말 (0.4 ㎎) 을 얻었다.
FAB-MAS(mNBA):310(M+H)+ UV(lmax) : 255(pH7), 256(pH1), 258-266(pH13)
(실시예 29)
(올리고뉴클레오티드 유사체의 합성)
핵산합성기 (파킨엘마사 제조 ABI model 392 DNA/RNA synthesiser) 를 사용하여 1.0 μmol 스케일로 행하였다. 각 합성 사이클에서의 용매, 시약, 포스포 르아미다이트의 농도는 천연 올리고뉴클레오티드 합성의 경우와 동일하며, 용매, 시약, 천연형 뉴클레오시드의 포스포르아미다이트는 모두 PE Biosystems 사 제조의 것을 사용하였다. 3'-히드록실기가 CPG 지지체에 결합한 5'-O-DMTr-티미딘 (1.0 μmol) 의 DMTr 기를 트리클로로아세트산에 의해 탈보호하고, 그 5'-히드록실기에 천연 뉴클레오티드 합성용 4 종의 핵산염기로 이루어지는 아미다이트 및 실시예 9 의 화합물을 사용하여 축합반응을 반복하여 행하고, 각각의 서열의 수식 올리고뉴클레오티드 유사체를 합성하였다. 합성 사이클은 이하와 같다.
합성 사이클
1) detritylation 트리클로로아세트산/디클로로메탄 ; 35 sec
2) coupling 포스포르아미다이트 (약 20 eq), 테트라졸/아세토니트릴 ; 25 sec 또는 10 min
3) capping 1-메틸이미다졸/테트라히드로푸란, 무수 아세트산/피리딘/테트라히드로푸란 ; 15 sec
4) oxidation 요오드/물/피리딘/테트라히드로푸란 ; 15 sec
상기에 있어서, 사이클 2) 는 실시예 9 의 화합물을 사용하여 반응하는 경우에는 10 분간 반응을 행하고, 그 외의 포스포르아미다이트를 사용하는 경우에는 25 초간 반응하였다.
목적 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 유사체를 합성하고, 합성 사이클의 1) 까지 행하여 5'-DMTr 기를 탈보호한 후에는 통상법에 따라 농암모니아수 처리에 의해 올리고머를 지지체로부터 잘라냄과 동시에, 인산기상의 보호기의 시아노에틸기 를 떼어내고, 또한 아데닌, 구아닌, 시토신의 아미노기 보호기의 탈보호를 행하였다.
얻어진 올리고뉴클레오티드 유사체는 역상 HPLC (HPLC : 시마즈세이사꾸쇼 제조 LC-VP, 칼럼 : 와꼬준야꾸 제조 Wakopak WS-DNA) 로 정제하여 목적하는 올리고뉴클레오티드를 얻었다.
본 합성법에 따라 이하의 서열 :
5'-gcgttttttgct-3' (서열표의 서열번호 2)
로 나타나는 서열을 가지며, 염기번호 4 내지 9 의 티미딘의 당 부분이 2'-O,4'-C-에틸렌인 올리고뉴클레오티드 유사체 (이하, 「올리고뉴클레오티드 (1)」로 함) 를 얻었다 (수량 0.23 μmol (23 % yield)).
(참고예 1)
3,5-디-O-벤질-4-트리플루오로메탄술포닐옥시메틸-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
질소기류하, 3,5-디-O-벤질-4-히드록시메틸-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스 (2000 ㎎, 5.0 mmol) 를 무수 디클로로메탄 50 ㎖ 에 용해시키고, -78 ℃ 로 냉각시켰다. 거기에 무수 피리딘 (0.60 ㎖, 7.5 mmol) 및 트리플루오로메탄술폰산 무수물 (1010 ㎎, 6.0 mmol) 을 첨가하여 40 분간 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 100 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 100 ㎖), 포화식염수 (약 100 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거 하고, 백색 분말 (2520 ㎎, 4.73 mmol, 95 %) 을 얻어 이것을 그대로 다음의 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.34(3H, s), 1.63(3H, s), 3.48(1H, d, 10Hz), 3.53(1H, d, 10Hz), 4.21(1H, d, 5.0Hz), 4.5(4H, m), 4.74(1H, d, 12Hz), 4.80(1H, d, 12Hz), 5.01(1H, d, 12Hz), 5.73(1H, d, 4.6Hz), 7.3(10H, m).
(참고예 2)
3,5-디-O-벤질-4-시아노메틸-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
참고예 1 에서 얻어진 화합물 (2520 ㎎, 4.73 mmol) 에 디메틸술폭시드 (50 ㎖) 를 첨가하여 90 ℃ 에서 용해시켰다. 실온으로 되돌린 후, 시안화 나트륨 (463 ㎎, 9.46 mmol) 을 첨가하여 50 ℃ 에서 3 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 물 (약 100 ㎖) 및 아세트산 에틸 (약 100 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 포화식염수 (약 100 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다.
감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 4:1), 무색 오일상 물질 (1590 ㎎, 3.89 mmol, 82 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.34(3H, s), 1.62(3H, s), 2.88(1H, d, 17Hz), 3.15(1H, d, 17Hz), 3.50(1H, d, 10Hz), 3.58(1H, d, 10Hz), 4.08(1H, d, 5.1Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.56(1H, d, 12Hz), 4.57(1H, m), 4.58(1H, d, 12Hz), 4.76(1H, d, 12Hz), 5.73(1H, d, 3.7Hz), 7.3(10H, m).
(참고예 3)
3,5-디-O-벤질-4-포르밀메틸-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
질소기류하, 참고예 2 에서 얻어진 화합물 (610 ㎎, 1.49 mmol) 을 디클로로메탄 (10 ㎖) 에 용해시키고, -78 ℃ 로 냉각시켰다. 거기에 1.5 M 디이소부틸알루미늄하이드라이드/톨루엔 용액 (2 ㎖, 3.0 mmol) 을 천천히 적가하여 -78 ℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다. 그 후, 실온으로 되돌리고, 반응액에 메탄올 (5 ㎖) 을 첨가하였다. 또한, 포화 염화 암모늄 수용액 (약 20 ㎖) 을 첨가하여 30 분 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 아세트산 에틸 (약 30 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 30 ㎖), 이어서 포화식염수 (약 30 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 이것을 그대로 다음의 반응에 사용하였다.
(참고예 4)
3,5-디-O-벤질-4-히드록시에틸-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
참고예 3 에서 얻어진 화합물 (154 ㎎, 0.377 mmol) 을 에탄올 5 ㎖ 에 용해시키고, NaBH4 (7.6 ㎎, 0.2 mmol) 를 첨가하여 실온에서 1 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 아세트산 에틸 (약 10 ㎖) 및 물 (약 10 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 포화식염수 (약 10 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다.
감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 2:1), 무색 오일상 물질 (117 ㎎, 0.284 mmol, 75 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.33(3H, s), 1.66(3H, s), 1.78(1H, ddd, 4.0, 8.5, 15Hz), 2.51(1H, ddd, 3.4, 6.4, 15Hz), 3.31(1H, d, 10Hz), 3.54(1H, d, 10Hz), 3.80(2H, m), 4.13(1H, d, 5.3Hz), 4.43(1H, d, 12Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.55(1H, d, 12Hz), 4.65(1H, dd, 4.0, 5.3Hz), 4.77(1H, d, 12Hz), 5.77(1H, d, 4.0 Hz), 7.3 (10H, m). FABMS(mNBA):415(M+H)+, [a]D +57.4°(0.91, 메탄올).
(참고예 5)
3,5-디-O-벤질-4-포르밀-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
질소기류하, -78 ℃ 로 냉각시킨 무수 디클로로메탄 (200 ㎖) 에 염화 옥사릴 (6.02 ㎖, 69.0 mmol) 을 첨가하고, 거기에 무수 디클로로메탄 (100 ㎖) 에 용해시킨 디메틸술폭시드 (7.87 ㎖, 110 mmol) 를 적가하였다. 20 분 교반후, 반응시약액에 무수 디클로로메탄 (100 ㎖) 에 용해시킨 3,5-디-O-벤질-1,2-O-이소프 로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스 (9210 ㎎, 23.02 mmol) 를 적가하고, 추가로 30 분 교반하였다. 또한, 트리에틸아민 (28 ㎖, 200 mmol) 을 첨가하여 천천히 실온으로 되돌렸다. 반응액에 물 (약 300 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 물 (약 300 ㎖), 포화식염수 (약 300 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다.
감압하 용매를 증류제거한 후, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 5:1), 무색 오일상 물질 (8310 ㎎, 20.88 mmol, 91 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.35(3H, s), 1.60(3H, s), 3.61(1H, d, 11Hz), 3.68(1H, d, 11Hz), 4.37(1H, d, 4.4Hz), 4.46(1H, d, 12Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.59(1H, d, 12Hz), 4.59(1H, dd, 3.4, 4.4Hz), 4.71(1H, d, 12Hz), 5.84(1H, d, 3.4Hz), 7.3 (10H, m), 9.91(1H, s). FABMS(mNBA):397(M-H)+, 421(M+Na)+, [a]D +27.4°(0.51, 메탄올).
(참고예 6)
3,5-디-O-벤질-4-비닐-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
질소기류하, 참고예 5 에서 얻어진 화합물 (8310 ㎎, 20.88 mmol) 을 무수 테트라히드로푸란 (300 ㎖) 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시켰다. 거기에 0.5 M-Tebbe 시약/톨루엔 용액 (44 ㎖, 22 mmol) 을 적가한 후, 0 ℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 디에틸에테르 (300 ㎖) 를 첨가한 후, 0.1 N 수산화나트륨 수용액 (20 ml) 을 천천히 첨가하였다. 얻어진 석출물을 세라이트를 사용하여 여과하고, 여과물을 디에틸에테르 (약 100 ㎖) 로 세정하여 분액하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 알루미나 (염기성) 크로마토그래피에 의해 조(粗)정제하고 (디클로로메탄), 또한 얻어진 조정제물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 8:1, 그 후 5:1), 무색 오일상 물질 (5600 ㎎, 14.14 mmol, 68 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.28(3H, s), 1.52(3H, s), 3.31(1H, d, 11Hz), 3.34(1H, d, 11Hz), 4.25(1H, d, 4.9Hz), 4.40(1H, d, 12Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.57(1H, dd, 3.9, 4.9Hz), 4.59(1H, d, 12Hz), 4.76(1H, d, 12Hz), 5.25(1H, dd, 1.8, 11Hz), 5.52(1H, dd, 1.8, 18Hz), 5.76(1H, d, 3.9Hz), 6.20(1H, dd, 11, 18Hz), 7.3 (10H, m). FABMS(mNBA):419(M+Na)+.
(참고예 7)
3,5-디-O-벤질-4-히드록시에틸-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리트로펜트프라노오스
질소기류하, 참고예 6 에서 얻어진 화합물 (5500 ㎎, 13.89 mmol) 을 무수 테트라히드로푸란 (200 ㎖) 에 용해시키고, 거기에 0.5 M 의 9-BBN (9-보라비시클 로[3.3.1]노난)/테트라히드로푸란 용액 (80 ㎖, 40 mmol) 을 적가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다.
반응액에 거품이 나오지 않게 될때까지 물을 첨가한 후, 3N 수산화나트륨 수용액 (30 ㎖) 을 첨가하였다. 또한, 30 % 과산화수소수 (30 ㎖) 를 반응액이 30 내지 50 ℃ 가 되도록 천천히 첨가하고, 그 후 30 분 교반하였다.
반응종료후, 반응혼합물에 포화식염수 (약 200 ㎖) 및 아세트산 에틸 (약 200 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 중성 인산 버퍼 (약 200 ㎖), 이어서 포화식염수 (약 200 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 2:1, 그 후 1:1), 무색 오일상 물질 (5370 ㎎, 12.97 mmol, 93 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.33(3H, s), 1.66(3H, s), 1.78(1H, ddd, 4.0, 8.5, 15Hz), 2.51(1H, ddd, 3.4, 6.4, 15Hz), 3.31(1H, d, 10Hz), 3.54(1H, d, 10Hz), 3.80(2H, m), 4.13(1H, d, 5.3Hz), 4.43(1H, d, 12Hz), 4.52(1H, d, 12Hz), 4.55(1H, d, 12Hz), 4.65(1H, dd, 4.0, 5.3Hz), 4.77(1H, d, 12Hz), 5.77(1H, d, 4.0 Hz), 7.3 (10H, m). FABMS(mNBA):415(M+H)+, [a]D +57.4°(0.91, 메탄올).
(참고예 8)
3,5-디-O-벤질-4-(p-톨루엔술포닐옥시에틸)-1,2-O-이소프로필리덴-α-D-에리 트로펜트프라노오스
질소기류하, 톨루엔 공비한 참고예 4 에서 얻어진 화합물 (1035 ㎎, 2.5 mmol) 을 무수 디클로로메탄 (35 ㎖) 에 용해시키고, 0 ℃ 로 냉각시켰다. 거기에 트리에틸아민 (1.8 ㎖, 13 mmol), 디메틸아미노피리딘 (30 ㎎, 0.25 mmol), 염화 p-톨루엔술포닐 (858 ㎎, 4.5 mmol) 을 첨가하여 실온에서 하룻밤 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 100 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 100 ㎖), 포화식염수 (약 100 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다.
감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 3:1), 무색 오일상 물질 (1340 ㎎, 2.6 mmol, 94 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.33(3H, s), 1.49(3H, s), 1.99(1H, dt, 7.6 및 15 Hz), 2.47(3H, s), 2.60(1H, ddd, 5.7, 7.6, 15Hz), 3.28(1H, d, 10Hz), 3.45(1H, d, 10Hz), 4.11(1H, d, 5.3Hz), 4.32(2H, m), 4.42(1H, d, 12Hz), 4.50(1H, d, 12Hz), 4.54(1H, d, 12Hz), 4.62(1H, dd, 4.0, 5.2Hz), 4.76(1H, d, 12Hz), 5.74(1H, d, 4.0 Hz), 7.3 (12H, m), 7.78(2H, d, 8.3Hz). FAB-MAS(mNBA):569(M+H)+
(참고예 9)
1,2-디-O-아세틸-3,5-디-O-벤질-4-(p-톨루엔술포닐옥시에틸)-α-D-에리트로펜트프루노오스
참고예 8 에서 얻어진 화합물 1340 ㎎ (2.36 mmol) 을 아세트산 15 ㎖ 에 용해시키고, 무수 아세트산 1.88 ㎖ (20 mmol), 농황산 0.01 ㎖ 를 첨가하여 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응액을 빙냉수 60 ㎖ 에 넣어 추가로 30 분 교반하였다. 포화식염수 (약 100 ㎖), 아세트산 에틸 (약 100 ㎖) 을 첨가하고, 유기층을 중성 인산 버퍼, 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정하고, 황산마그네슘 무수물로 건조시켰다. 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 2:1), 무색 오일상 물질 1290 ㎎ (2.11 mmol, 89 %, α:β= 1:5) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : (b 유도체) 1.86(3H, s), 2.05(3H, s), 2.08(1H, m), 2.18(1H, m), 2.42(3H, s), 3.30(1H, d, 10Hz), 3.33(1H, d, 10Hz), 4.23(1H, d, 5.1Hz), 4.24(2H, m), 4.42(2H, s), 4.45(1H, d, 12Hz), 4.55(1H, d, 12Hz), 5.28(1H, d, 5.1Hz), 6.01(1H, s), 7.3 (12H, m), 7.73(2H, d, 8.3Hz). FAB-MAS(mNBA):613(M+H)+
(참고예 10)
2'-O-아세틸-3',5'-디-O-벤질-4'-p-톨루엔술포닐옥시에틸-5-메틸우리딘
질소기류하, 실온에서 참고예 9 에서 얻어진 화합물 (650 ㎎, 1.06 mmol) 을 무수 1,2-디클로로에탄 (15 ㎖) 에 용해시키고, 거기에 상기 문헌 (H. Vorbrggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제한 트리메틸실릴화 티민 (500 ㎎, 약 2 mmol) 을 첨가하였다. 또한, 거기에 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 (0.36 ㎖, 2 mmol) 을 적가하여 50 ℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 50 ㎖) 을 첨가하고, 세라이트를 사용하여 여과하고, 여과액에 디클로로메탄 (약 50 ㎖) 을 첨가하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 50 ㎖), 포화식염수 (약 50 ㎖) 로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (헥산:아세트산 에틸 = 1.2:1), 비정질상 무색 물질 (432 ㎎, 0.64 mmol, 60 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.52(3H, d, 0.9Hz), 1.94(1H, dt, 7.5 및 15Hz), 2.06(3H, s), 2.23(1H, dt, 6.0 및 15Hz), 2.42(3H, s), 3.38(1H, d, 10Hz), 3.67(1H, d, 10Hz), 4.17(2H, m), 4.36(1H, d, 6.0Hz), 4.41(1H, d, 12Hz), 4.44(1H, d, 12Hz), 4.48(1H, d, 12Hz), 4.58(1H, d, 12Hz), 5.39(1H, dd, 5.1 및 6.0Hz), 6.04(1H, d, 5.1Hz), 7.3 (12H, m), 7.73(2H, dt, 1.8 및 8.3Hz), 8.18(1H, s). FAB-MAS(mNBA):679(M+H)+
(참고예 11)
2'-O-아세틸-3',5'-디-O-벤질-4'-p-톨루엔술포닐옥시에틸-4-N-벤조일시티딘
참고예 9 에서 얻어진 화합물 (383 ㎎, 0.626 mmol) 을 무수 1,2-디클로로에탄 (4 ㎖) 에 용해시켰다. 거기에 상기 문헌 (H. Vorbrggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제한 트리메틸실릴화 벤조일시토신 (300 ㎎, 약 1.0 mmol) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각시키고, 또한 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 (0.18 ㎖, 0.995 mmol) 을 첨가하고, 그 후 50 ℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응액을 실온으로 되돌리고, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (약 10 ㎖) 을 첨가하였다.
반응종료후, 반응혼합물에 염화 메틸렌 (약 20 ㎖) 을 첨가하여 교반하고, 석출된 백색 불용물을 세라이트를 사용하여 여과하였다. 얻어진 여과액으로부터 유기층을 분리하고, 유기층을 포화식염수 (약 20 ㎖) 로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거하고, 무색 비정질상 물질 (397 ㎎, 83 %) 을 얻었다.
1H-NMR(400MHz, CDCl3) : 8.70(1H, br), 8.18(1H, d, 7.4Hz), 7.87(2H, d, 7.5Hz), 7.72(2H, d, 8.3Hz), 7.61-7.57(1H, m), 7.51-7.48(2H, m), 7.43-7.21(13H,m), 6.02(1H, d, 2.9Hz), 5.40(1H, dd, 5.8, 2.9Hz), 4.57(1H, d, 11Hz), 4.39(1H, d, 11Hz), 4.32-4.28(3H, m), 4.19-4.16(2H,m), 3.69(1H, d,11Hz), 3.31(1H, d, 11Hz), 2.40(3H, s), 2.30-2.23(1H, m), 2.06(3H, s), 1.95-1.89(1H, m) FAB-MAS(mNBA):768(M+H)+
(참고예 12)
2'-O-아세틸-3',5'-디-O-벤질-4'-p-톨루엔술포닐옥시에틸-6-N-벤조일아데노 신
질소기류하, 실온에서 참고예 9 에서 얻어진 화합물 (600 ㎎, 0.98 mmol) 을 무수 1,2-디클로로에탄 (15 ㎖) 에 용해시키고, 거기에 상기 문헌 (H. Vorbrggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제한 트리메틸실릴화 벤조일아데닌 (500 ㎎, 약 2 mmol) 을 첨가하였다. 얻어진 반응액에 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 (0.36 ㎖, 2 mmol) 을 적가한 후, 50 ℃ 에서 4 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 50 ㎖) 을 첨가하고, 또한 디클로로메탄 (약 50 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 50 ㎖), 이어서 포화식염수 (약 50 ㎖) 로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 50:1), 비정질상 무색 물질 (405 ㎎, 0.51 mmol, 52 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 2.0(1H, m), 2.06(3H, s), 2.32(1H, dt, 6.0 및 15Hz), 2.40(3H, s), 3.36(1H, d, 10Hz), 3.58(1H, d, 10Hz), 4.22(2H, m), 4.39(1H, d, 12Hz), 4.45(1H, d, 12Hz), 4.47(1H, d, 12Hz), 4.59(1H, d, 12Hz), 4.62(1H, d, 5.6Hz), 5.94(1H, dd, 4.5 및 5.6Hz), 6.21(1H, d, 4.5Hz), 7.2-7.3 (12H, m), 7.54(2H, m), 7.62(1H, dt, 1.2 및 6.2Hz), 7.72(2H, d, 8.3Hz), 8.02(2H, m), 8.21(1H, s), 8.75(1H, s), 8.97(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):792(M+H)+
(참고예 13)
2'-O-아세틸-3',5'-디-O-벤질-4'-p-톨루엔술포닐옥시에틸-우리딘
질소기류하, 실온에서 참고예 9 에서 얻어진 화합물 (200 ㎎, 0.327 mmol) 을 무수 1,2-디클로로에탄 (8 ㎖) 에 용해시키고, 거기에 상기 문헌 (H. Vorbrggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제한 트리메틸실릴화 우라실 (200 ㎎, 약 0.8 mmol) 을 첨가하였다. 또한, 거기에 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 (0.145 ㎖, 0.8 mmol) 을 적가하여 70 ℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 10 ㎖) 을 첨가하고, 세라이트를 사용하여 여과하고, 여과액에 디클로로메탄 (약 10 ㎖) 을 첨가하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거한 후, 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고 (디클로로메탄:메탄올 = 100:2), 오일상 무색 물질 (199 ㎎, 0.299 mmol, 92 %) 을 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3) : 1.94(1H, dt, 7.4 및 15Hz), 2.07(3H, s), 2.23(1H, dt, 5.9 및 15Hz), 2.43(3H, s), 3.36(1H, d, 10Hz), 3.65(1H, d, 10Hz), 4.17(2H, dd, 6 및 7Hz), 4.31(1H, d, 5.9Hz), 4.38(1H, d, 11Hz), 4.39(1H, d, 11Hz), 4.40(1H, d, 11Hz), 4.58(1H, d, 11Hz), 5.29(1H, dd, 2.4 및 8.2Hz), 5.33(1H, dd, 4.5 및 6Hz), 6.00(1H, d, 4.5Hz), 7.2-7.4(12H, m), 7.61(1H, d, 8.2Hz), 7.74(1H, d, 8.3Hz), 8.14(1H, brs). FAB-MAS(mNBA):665(M+H)+
(참고예 14)
2'-O-아세틸-3',5'-디-O-벤질-4'-p-톨루엔술포닐옥시에틸-4-N-벤조일-5-메틸시티딘
참고예 9 에서 얻어진 화합물 (400 ㎎, 0.653 mmol) 을 무수 1,2-디클로로에탄 (6 ㎖) 에 용해시켰다. 거기에 상기 문헌 (H. Vorbrggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제한 트리메틸실릴화 벤조일 5-메틸시토신 (약 400 ㎎, 약 1.2 mmol) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각시키고, 또한 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 (180 ㎕, 1.0 mmol) 을 첨가하고, 그 후 50 ℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응액을 실온으로 되돌리고, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (약 5 ㎖) 을 첨가하였다.
반응종료후, 반응혼합물에 염화 메틸렌 (약 10 ㎖) 을 첨가하여 교반하고, 석출된 백색 불용물을 세라이트를 사용하여 여과하였다. 얻어진 여과액으로부터 유기층을 분리하고, 유기층을 포화식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하 용매를 증류제거하고, 무색 비정질상 물질 (320 ㎎, 0.409 mmol, 63 %) 을 얻었다.
1H-NMR(400MHz, CDCl3) : 1.68(3H, s), 1.95(1H, dt, 7.3 및 15Hz), 2.07(3H, s), 2.25(1H, dt, 6 및 15Hz), 2.43(3H, s), 3.40(1H, d, 10Hz), 3.71(1H, d, 10Hz), 4.18(2H, m), 4.37(1H, d, 5.8Hz), 4.42(1H, d, 12Hz), 4.46(1H, d, 12Hz), 4.51(1H, d, 12Hz), 4.61(1H, d, 12Hz), 5.42(1H, dd, 4.9 및 5.8Hz), 6.07(1H, d, 4.9Hz), 7.2-7.6(17H, m), 7.74(2H, d, 8.3Hz), 8.28(2H, d, 7.0Hz). FAB-MAS(mNBA):782(M+H)+
(참고예 15)
2'-O-아세틸-3',5'-디-O-벤질-4'-p-톨루엔술포닐옥시에틸-2-N-이소부티릴구아노신
질소기류하, 실온에서 참고예 9 에서 얻어진 화합물 (400 ㎎, 0.65 mmol) 을 무수 1,2-디클로로에탄 (10 ㎖) 에 용해시키고, 거기에 상기 문헌 (H. Vorbrggen,K.Krolikiewicz and B,Bennua, Chem.Ber., 114, 1234-1255 (1981)) 에 따라 조제한 트리메틸실릴화 이소부티릴구아노신 (약 650 ㎎, 약 1.5 mmol) 을 첨가하였다. 얻어진 반응액에 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 (0.2 ㎖, 1.2 mmol) 을 적가한 후, 50 ℃ 에서 4 시간 동안 교반하였다.
반응종료후, 반응액에 탄산수소나트륨 포화수용액 (약 5 ㎖) 을 첨가하여 분액하고, 유기층을 탄산수소나트륨 포화수용액, 이어서 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류제거한 후, 그대로 이것을 다음의 반응에 사용하였다.
(시험예 1)
(Tm 측정시험)
최종농도를 각각 NaCl 100 mM, 인산나트륨 완충액 (pH 7.2) 10 mM, 올리고뉴클레오티드 (1) 4 μM, 그 상보사슬 (서열 :
5'-agcaaaaaacgc-3' (서열표의 서열번호 1)
로 나타나는 서열을 갖는 상보형 DNA (이하, 「올리고뉴클레오티드 (2)」로 함) 또는 서열 :
5'-agcaaaaaacgc-3' (서열표의 서열번호 1)
로 나타나는 서열을 갖는 상보형 RNA (이하, 「올리고뉴클레오티드 (3)」으로 함) 4 μM 으로 한 샘플용액 (1000 ㎕) 을 비등수중에 용해시키고, 약 2 시간에 걸쳐 천천히 실온까지 냉각시켰다. 샘플용액을 분광광도계 (시마즈 UV-3100PC) 를 사용하여 가온측정하였다. 샘플은 인큐베이터 (EKO 사 제조, Haake FE2) 로 가온한 순환수에 의해 셀 (셀두께 1.0 ㎝, 원통 재킷형) 내를 가온하고, 온도는 디지털 온도계 (SATO SK1250MC) 를 사용하여 모니터하였다. 온도는 20 ℃ 에서 95 ℃ 까지 상승시키고, 1 ℃ 간격으로 260 ㎚ 부근의 흡수극대파장에서의 자외흡수강도를 측정하였다. 컨트롤로서 올리고뉴클레오티드 (1) (실시예 29 의 화합물) 과 동일 서열 :
5'-gcgttttttgct-3' (서열표의 서열번호 2)
로 나타나는 서열을 갖는 천연형 DNA (이하, 「올리고뉴클레오티드 (4)」로 함) 를 사용하여 동일한 조작을 행하였다.
1 ℃ 당 변화량이 최대가 되는 온도를 Tm (융해온도) 으로 하고, 이 온도에서 올리고뉴클레오티드 유사체의 상보사슬 형성능을 평가하였다.
이하에, 올리고뉴클레오티드 (4) (천연형 DNA) 및 올리고뉴클레오티드 (1) (실시예 29 의 화합물) 의 올리고뉴클레오티드 (2) (상보형 DNA) 및 올리고뉴클레오티드 (3) (상보형 RNA) 에 대한 Tm 측정결과를 나타낸다.
Tm (℃)
화합물 올리고뉴클레오티드 (2) 올리고뉴클레오티드 (3)
올리고뉴클레오티드 (4) 48 44
올리고뉴클레오티드 (1) 61 75
상기로부터 명확한 바와 같이, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 유사체는 천연형 DNA 에 비해 현저하게 Tm 이 높고, 높은 상보사슬 형성능을 나타냈다.
(시험예 2)
(뉴클레아제 효소 내성의 측정)
15 분간 37 ℃ 로 유지한 올리고뉴클레오티드의 버퍼용액에 엑소뉴클레아제 또는 엔도뉴클레아제를 혼합한다. 혼합액을 37 ℃ 로 유지하고, 일정시간후, 혼합액의 일부를 취하여 에틸렌디아민 사아세트산 (EDTA) 을 첨가하고, 100 ℃ 에서 2 분간 가열함으로써 반응을 정지시킨다. 혼합액중의 올리고뉴클레오티드의 잔량을 역상 고속액체 칼럼 크로마토그래피로 정량하고, 뉴클레아제 존재하에서의 올리고뉴클레오티드량의 시간경과에 따른 변화를 측정한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 유사체는 현저한 뉴클레아제 내성을 나타낸다.
본 발명의 신규 뉴클레오티드 유사체 및 뉴클레오시드 유사체는 안정하며 우수한 안티센스 또는 안티진 의약, 특정 유전자의 검출약 (프로브) 또는 증폭개시를 위한 프라이머 및 그의 제조중간체로서 유용하다.
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Claims (41)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 염:
    [화학식 1]
    Figure 112005067483018-pct00026
    (식 중, R1 및 R2 는 동일 또는 상이하며, 수소원자, 벤질기, 4,4'-디메톡시트리틸기 또는 -P(R3)R4 [식 중, R3 및 R4 는 동일 또는 상이하며, 디이소프로필아미노기 또는 2-시아노-에틸옥시기를 나타냄] 를 나타내고,
    A 는 메틸렌기를 나타내고,
    B 는 히드록시기, 아미노기, 벤조일아미노기, 이소부티릴아미노기 및 메틸기로 이루어진 군에서 선택되는 치환기로 치환된 푸린-9-일기 또는 2-옥소-피리미딘-1-일기를 나타낸다).
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 하기 군에서 선택되는 화합물 및 그의 염 ;
    2'-O,4'-C-에틸렌구아노신,
    2'-O,4'-C-에틸렌아데노신,
    3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신,
    3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신,
    2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신,
    2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-6-N-벤조일아데노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-2-N-이소부티릴구아노신-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트
    2'-O,4'-C-에틸렌우리딘,
    2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘,
    2'-O,4'-C-에틸렌시티딘,
    2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸시티딘,
    3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌우리딘,
    3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘,
    3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘,
    3',5'-디-O-벤질-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘,
    2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘,
    2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-5-메틸우리딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트,
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트, 및
    5'-O-디메톡시트리틸-2'-O,4'-C-에틸렌-4-N-벤조일-5-메틸시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 N,N-디이소프로필)포스포르아미다이트.
  10. 하기 화학식 2의 구조를 1 또는 2 이상 갖는 올리고뉴클레오티드 유사체 또는 그의 약리학상 허용되는 염:
    [화학식 2]
    Figure 112005067483018-pct00027
    (식 중, A 는 메틸렌기를 나타내고,
    B 는 히드록시기, 아미노기, 벤조일아미노기, 이소부티릴아미노기 및 메틸기로 이루어진 군에서 선택되는 치환기로 치환된 푸린-9-일기 또는 2-옥소-피리미딘-1-일기를 나타낸다).
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 유효량의 약리학상 활성 화합물을 그의 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 의약 조성물에 있어서, 약리학상 활성 화합물이 제 10 항에 따른 올리고뉴클레오티드 유사체 또는 그의 약리학상 허용되는 염인 의약 조성물.
  15. 제 10 항에 따른 올리고뉴클레오티드 유사체를 포함하는 유전자에 대한 프로브.
  16. 제 10 항에 따른 올리고뉴클레오티드 유사체를 포함하는 증폭 개시를 위한 프라이머.
  17. 의약으로서 사용하기 위한, 제 10 항에 따른 올리고뉴클레오티드 유사체 또는 그의 약리학상 허용되는 염.
  18. 제 10 항에 따른 올리고뉴클레오티드 유사체 또는 그의 약리학상 허용되는 염을 함유하는 안티센스 (antisense) 제제.
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 제 10 항에 따른 올리고뉴클레오티드 유사체 또는 그의 약리학상 허용되는 염을 함유하는 안티진 (antigene) 제제.
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
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