PT1699782E

PT1699782E - Sais de maleato de um derivado de quinazolina útil como um agente anti-angiogénico

Info

Publication number: PT1699782E
Application number: PT04806159T
Authority: PT
Inventors: James Mccabe
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2003-12-24
Filing date: 2004-12-18
Publication date: 2010-08-04
Also published as: US20170000791A1; GB0330002D0; AU2004303590A1; JP5009628B2; US20190375730A1; ZA200605225B; US9556151B2; NZ547547A; US20100298357A1; AR046993A1; BRPI0417958B8; CN1898232B; HK1095325A1; UA91332C2; SI1699782T1; PL1699782T3; MY145143A; DE602004027833D1; RU2425043C2; SA05250464B1

Description

DESCRIÇÃO "SAIS DE MALEATO DE UM DERIVADO DE QUINAZOLINA ÚTIL COMO UM AGENTE ANTI-ANGIOGÉNICO" A presente invenção refere-se a formas cristalinas particulares de sal de maleato AZD2171, a processos para a sua preparação, a composições farmacêuticas que as contêm como ingrediente activo e à sua utilização na preparação de medicamentos para utilização na produção de efeitos anti-angiogénicos e/ou de permeabilidade vascular em animais de sangue quente, tal como humanos, para o tratamento de estados de doença associados com angiogénese e/ou permeabilidade vascular aumentada. A angiogénese normal desempenha um importante papel numa variedade de processos incluindo desenvolvimento embrionário, cicatrização de feridas e vários componentes da função reprodutiva feminina. A angiogénese indesejável ou patológica tem sido associada com estados de doença incluindo retinopatia diabética, psoriase, cancro, artrite reumatóide, ateroma, sarcoma de Kaposi e hemangioma (Fan et al., 1995, Trends Pharmacol. Sei. 16: 57-66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27-31). Pensa-se que a alteração da permeabilidade vascular desempenha um papel nos processos normais e patológicos (Cullinan-Bove et al., 1993, Endocrinology 133: 829-837; Senger et al., 1993, Câncer and Metastasis Reviews, 12: 303-324). Foram identificados vários polipéptidos com actividade de promoção de crescimento de células endoteliais in vitro incluindo, factores 1 de crescimento de fibroblastos acídicos e básicos (aFGF & bFGF) e factor de crescimento endotelial vascular (VEGF). Em virtude da expressão restrita dos seus receptores, a actividade de factor de crescimento de VEGF, em contraste com a dos FGF, é relativamente especifica para as células endoteliais. Resultados recentes indicam que VEGF é um importante estimulador da angiogénese normal e patológica (Jakeman et al., 1993,

Endocrlnology, 133: 848-859; Kolch et al., 1995, Breast Câncer

Research and Treatment, 36:139-155) e permeabilidade vascular (Connolly et al., 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024). O antagonismo da acção de VEGF através do sequestro de VEGF com anticorpo pode resultar na inibição de crescimento de tumor (Kim et al., 1993, Nature 362: 841-844).

Os receptores cinases de tirosina (RTK) são importantes na transmissão de sinais bioquímicos ao longo da membrana plasmática das células. Estas membranas transmembranares consistem, caracteristicamente, num domínio extracelular de ligação ao ligando ligado através de um segmento na membrana plasmática a um domínio intracelular de cinase de tirosina. A ligação de um ligando ao receptor resulta na estimulação da actividade da cinase de tirosina associada ao receptor que leva a fosforilação dos resíduos de tirosina em moléculas do receptor e outras intracelulares. Estas alterações na fosforilação da tirosina iniciam uma cascada de sinalização que leva a uma variedade de respostas celulares. Até à data, foram identificadas, pelo menos, dezanove famílias distintas de RTK,

definidas pela homologia de sequência de sequência de aminoácidos. Uma destas subfamilias é, presentemente, constituída pelo receptor cinase de tirosina do tipo fms, Flt-1, o receptor que contém o domínio de inserção de cinase, KDR (também referido como Flk-1) e outro receptor cinase de tirosina 2 do tipo fms, Flt-4. Foi demonstrado que dois destes RTK relacionados, Flt-1 e KDR, se ligavam a VEGF com afinidade elevada (De Vries et al., 1992, Science 255: 989-991; Terman et al., 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586). A ligação de VEGF a estes receptores expressos em células heterólogas tem sido associada com alterações no estado de fosforilação da tirosina de proteínas celulares e fluxos de cálcio. 0 VEGF é um estímulo chave para a vasculogénese e angiogénese. Esta citocina induz um fenótipo de proliferação vascular através da indução da proliferação das células endoteliais, expressão de proteases e migração e subsequente organização de células para formar um tubo capilar (Keck, P.J., Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., e Connolly, D.T., Science (Washington DC) , 246: 1309-1312, 1989;

Lamoreaux, W.J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., e Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S.,

Montesano, R., Mandroita, S.J., Orei, L. e Vassalli, J.D., Enzyme Proteín, 49: 138-162, 1996.). Adicionalmente, o VEGF induz significativa permeabilidade vascular (Dvorak, H.F., Detmar, M., Claffey, K.P., Nagy, J.A., van de Water, L., e Senger, D.R., (Int. Arch. Allergy Immunol. , 107: 233-235, 1995;

Bates, D.O., Heald, R.I., Curry, F.E. e Williams, B. J. Physiol. (Lond.), 533: 263-272, 2001), promovendo a formação de uma rede hiper-permeável vascular imatura que é característica de angiogénese patológica.

Foi demonstrado que a activação de KDR isolado é suficiente para promover todas as principais respostas fenotípicas a VEGF, incluindo proliferação das células endoteliais, migração e sobrevivência e a indução de permeabilidade vascular (Meyer, M., 3

Clauss, M., Lepple-Wienhues, A., Waltenberger, J., Augustin, H.G., Ziche, M., Lanz, C., Biittner, M., Rziha, H-J., e Dehio, C., EMBO J., 18: 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal., S. e Mukhopadhyay, D., J. Biol. Chem., 276: 32714-32719, 2001; Gille, H., Kowalski, J., Li, B., LeCouter, J., Moffat, B, Zioncheck, T.F., Pelletier, N. e Ferrara, N., J. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 2001) .

Os compostos que inibem os efeitos de VEGF são valiosos no tratamento de estados de doença associados com angiogénese e/ou permeabilidade vascular aumentada, tais como cancro (incluindo leucemia, mieloma múltiplo e linfoma), diabetes, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, neuropatias agudas e crónicas, ateroma, restenose arterial., doenças autoimunitárias, inflamação aguda, formação de cicatrizes excessiva e adesões, endometriose, linfoedema, hemorragia uterina disfuncional e doenças oculares com proliferação de vasos retinais incluindo degeneração muscular.

Os derivados de quinazolina que são inibidores do receptor cinase de tirosina de VEGF são descritas no documento WO 00/47212. O composto AZD2171 é exemplificado no documento WO 00/47212, (ver Exemplo 240), e é 4-( (4-fluoro-2-metil-lií-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina da fórmula I: 4

0 AZD2171 apresenta uma excelente actividade nos ensaios in vitro de (a) enzima e (b) HUVEC que são descritos no documento WO 00/47212 e daqui em diante. Os valores de IC50 de AZD2171 para a inibição das actividades de KDR (VEGFR-2) e cinase de tirosina Flt-1 (VEGFR-1) isoladas no ensaio enzimático foram <2 nM e 5 ± 2 nM respectivamente. O AZD2171 inibe proliferação estimulada por VEGF das células endoteliais potentemente (valor IC50 de 0,4 ± 0,2 nM no ensaio HUVEC), mas não inibe a proliferação das células endoteliais basal de forma apreciável a uma concentração mais elevada > 1250 vezes (valor IC5o é > 500 nM). O crescimento de um xenoenxerto de tumor Calu-6 no modelo in vivo (c) de tumor sólido descrito aqui em diante foi inibido por 49%**, 69%*** e 91%*** após 28 dias de tratamento oral, uma vez por dia, com 1,5, 3 e 6 mg/kq/dia de AZD2171 respectivamente (P**<0,01, P***<0,0001; teste t de uma cauda) .

Formas mais estáveis de um composto farmaceuticamente activo, por exemplo, formas cristalinas mais estáveis, são preferidas para formulação e processamento numa escala comercial. Isto é porque quanto maior for a estabilidade da forma utilizada, menos elevado é o risco de conversão em outra forma durante os processos da formulação, tais como compressão. Isto proporciona, por sua vez, a previsibilidade das 5 propriedades da formulação finai., tais como a taxa de dissolução de comprimidos e bioadisponibilidade do ingrediente activo. A utilização de uma forma mais estável de um ingrediente activo permite um maior controlo das propriedades físicas da formulação. A base livre AZD2171 (4-((4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina) é um mono-hidrato cristalino sob condições ambiente. A análise de Calorimetria Diferencial de Varrimento (DSC) foi efectuada de acordo com o método aqui a seguir descrito e apresenta uma endotérmica larga vasta entre 95° e 170 °C devido a perda de água e fusão (Figura 1). A análise termogravimétrica (TGA) (detalhes dados a seguir) apresenta uma perda de peso de 4,02% entre 80 °C e 115 °C (Figura 1) . A análise de água de Karl Fischer (detalhes dados a seguir) produz um número de 3,9% sugerindo que toda a perda de peso é devida a perda de água.

Deve ser entendido que o dos valores de temperatura programado/pico do DSC podem variar muito ligeiramente de uma máquina para outra ou de uma amostra para outra e deste modo, os valores cotados não devem ser entendidos como absolutos. A base livre AZD2171 é caracterizada por proporcionar, pelo menos, um dos seguintes valores de 2Θ medidos utilizando radiação CuKa: 18,3 e 20,8. A base livre AAZD2171 é caracterizada por proporcionar um pó padrão de difracção de raios X, como na Figura 2. Os dez picos mais proeminentes são apresentados na Tabela 1.

Tabela 1: 10 picos mais Proeminentes de Difracção de Raios X de Pó para a base livre AZD2171 6 Ângulo 2-Teta (2Θ) Contagem da Intensidade Intensidade Relativa 18,287 100 vs 20,807 66, 7 vs 27,277 48,9 vs 23,370 42,8 vs 14,684 39,8 vs 25,070 37,6 vs 13,966 32,2 vs 21,711 26,6 vs 22,898 23,1 vs 26,790 22,9 vs vs = muito forte

Verificou-se que quando uma amostra da base livre AZD2171 é desidratada, por exemplo, por aquecimento a 100 °C, a amostra torna-se amorfa (Figura 3) e não re-hidrata então, mas mantém-se amorfa posteriormente. Isto pode ser problemático se a base livre AZD2171 tiver que ser formulada como uma composição farmacêutica porque a base livre AZD2171 pode desidratar durante certos processos, e. g., redução do tamanho de partícula (tal como moagem), secagem do fármaco em grosso, formulação, fabrico. De modo a formular a base livre AZD2171 como uma composição farmacêutica, deve ser necessário reduzir o tamanho de partícula em algum momento e isto comportaria um risco de desidratação e, desse modo, o risco da formação de material amorfo. Isto foi investigado sujeitando uma amostra de base livre AZD2171 mono-hidratada a redução de tamanho de partícula através da micronização e, depois, a sua análise para procurar material amorfo. A Figura 4 demonstra que o material amorfo forma-se, na 7 verdade, durante a redução do tamanho de partícula da base livre AZD2171. Isto é demonstrado por um alargamento dos picos e pela formação de um alto amorfo - ver Figura 4. Uma forma amorfa ou semi-amorfa de base livre AZD2171 pode dar origem a problemas de fabrico e uma biodisponibilidade não reprodutível. A identificação de formas alternativas de AZD2171, formas que são diferentes da base livre e que melhoraram as propriedades de estado sólido, é o objectivo da presente invenção.

Um exemplo de uma forma diferente é um sal de AZD2171. No documento WO 00/47212 é referido que os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção aí referidos podem incluir sais de adição ácida dos compostos da invenção que são suficientemente básicos para formar esses sais. Esses sais de adição ácida são referidos como incluindo sais com ácidos inorgânicos ou orgânicos que produzem aniões farmaceuticamente aceitáveis, tais como com halogenetos de hidrogénio, especialmente ácido clorídrico ou bromídrico, ou com ácido sulfúrico ou fosfórico, ou com ácido trifluoroacético, cítrico ou maleico. Adicionalmente, o documento WO 00/47212 continua, referindo que quando os compostos da invenção aí referidos são suficientemente acídicos, os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com uma base inorgânica ou orgânica que produz um catião farmaceuticamente aceitável. Esses sais com bases inorgânicas ou orgânicas são referidos como incluindo um sal de metal alcalino, tais como um sal de sódio ou potássio, um sal de metal alcalino-terroso, tais como um sal de cálcio ou magnésio, um sal de amónio ou, por exemplo, um sal com metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

Sais preferidos no documento WO 00/47212 são cloridratos e bromidratos, especialmente cloridratos.

Em nenhum local do documento WO 00/47212 se refere um sal particular de um composto particular ai referido que possua propriedades benéficas surpreendentes.

Inesperadamente e surpreendentemente, foi agora observado pela requerente que o sal de maleato de AZD2171 é uma forma vantajosamente estável de AZD2171 com propriedades em estado sólido melhoradas em relação à base livre e em relação a outros sais que foram testados. O maleato de AZD2171 é rapidamente cristalizado, é altamente cristalino, não higroscópico e possui uma proporção estequiométrica reprodutível de fármaco para contraiões de 1:1.

Foram preparados vários sais de AZD2171 e verificou-se que sete eram cristalinos: malonato, succinato, fumarato, maleato, tartarato, adipato e malato. As propriedades de estado sólido destes 7 sais foram testadas e os resultados são apresentados na Tabela 2: 9

Tabela 2: Propriedades de Sais AZD2171

Sal Cristalino Esteguiometria Teor de Evidência Ns de (Sim/Não) Fármaco:Contraião1 Humidade da Formação Polimorfosc a 80% RHb de Hidratob (Sim/Não) Malonato Sim - - Sim >3 Succinato Sim 1:0,63 11, 4 Não >2 Fumarato Sim 1:0,5 3, 5 Não >3 Maleato Sim 1:1 0,4 Não >2 Tartarato Sim 1:0,75 9,3 Não >1 Adipato Sim 1:0,75 - Não >3 Malato Sim - 7, 7 Sim - "Estequioraetria fármaco:contraião de resultados de Espectro de RMN de iH bTeor de humidade a 80% de humidade relativa (RH) Evidência de hidratação de estudos de Absorção de Vapor (histerese e absorção de água observados) ou Análise Termogravimétrica (TGA) “Evidência de polimorfismo de termogramas de Calorimimetria de Varrimento Diferencial (DSC). 0 termo não higroscópico significa absorver < 1% de humidade a 80% de RH. 0 sal de maleato de AZD2171 foi surpreendentemente melhor do que os outros devido aos 7 sais que foi possível cristalizar, foi verificado ser o único sal não higroscópico, para ser altamente cristalino e possuir uma proporção estequiométrica reprodutível de fármaco para contra-ião de 1:1. 0 sal de maleato AZD2171 é substancialmente isento de material amorfo e é expectável que seja mais fácil de formular do que a base livre AZD2171 e proporcionar resultados de dosagem mais reprodutíveis. Por "substancialmente isento de material amorfo" entende-se que a quantidade de material amorfo é inferior a 10%, de um modo preferido, inferior a 5%, de um modo mais preferido, inferior a 2%. O sal de maleato de AZD2171 é não higroscópico que deve prevenir ou reduzir quaisquer problemas associados a alterações 10 de peso do ingrediente activo durante processos tal como micronização. 0 maleato de AZD2171 possui duas formas cristalinas A e B.

De acordo com presente invenção é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A. A Forma A de maleato de AZD2171 é caracterizada por proporcionar, pelo menos, um dos seguintes valores 2Θ medidos utilizando radiação CuKa: 21,5 e 16,4. A Forma A do Maleato de AZD2171 é caracterizada por proporcionar um padrão de difracção de raios X substancialmente como apresentado na Figura 5. Os dez picos mais proeminentes são apresentados na Tabela 3:

Tabela 3

Dez picos de Difracção em Raios X de Pó mais Proeminentes para a Forma A de Maleato de AZD2171 Ângulo 2-Teta (2Θ) Contagem de Intensidade Intensidade Relativa 21,522 100 vs 16,366 78,3 vs 24,381 73, 7 vs 20,721 71, 7 vs 25,025 71,5 vs 16,921 55, 5 vs 12,085 44, 1 vs 22,177 42,2 vs 17, 444 40, 7 vs 17, 627 39,1 vs vs = nuito forte 11

De acordo com presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó substancialmente igual ao padrão de difracção de raios X apresentado na Figura 5.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, um pico especifico a 2-teta = 21,5° mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, um pico específico a 2-teta = 16,4° mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, dois picos específicos a 2-teta = 21,5° e 16,4° em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com picos específicos a 2-teta = 21,5, 16,4, 24,4, 20,7, 25,0, 16,9, 12,1, 22,2, 17,4 e 17.6° em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta. 12

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com picos específicos a 2-teta = 21,5, 16,4, 24,4, 20,7, 25,0, 16,9, 12,1, 22,2, 17,4 e 17,6°.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa primeira forma cristalina, Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó como apresentado na Figura 5. A análise de DSC demonstra que a Forma A de maleato de AZD2171 é um solido de fusão elevada com um inicio de fusão a 198,3 °C e um piso a 200,08 °C (Figura 6).

Assim, a análise de DSC demonstra que a Forma A do maleato de AZD2171 é um sólido de fusão elevada com um inicio de fusão a cerca de 198,3 °C e um pico a cerca de 200,08 °C.

De acordo com a presente invenção é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B. A Forma B de Maleato de AZD2171 é caracterizada por proporcionar, pelo menos, um dos seguintes valores de 2Θ medidos utilizando radiação CuKa: 24,2 e 22,7. A Forma B do Maleato de AZD2171 é caracterizada por proporcionar um padrão de difracção de raios X de pó substancialmente como apresentado na Figura 8. Os dez picos mais proeminentes são apresentados na Tabela 4: 13

Tabela 4. Dez picos de Difracção de raios X de pó mais Proeminentes para a Forma B de Maleato de AZD271 Ângulo 2-Teta (2Θ) Contagem de Intensidade Intensidade Relativa 24,156 100 vs 22,740 84,3 vs 15,705 64, 0 vs 11,995 63, 7 vs 27, 087 60,9 vs 25,032 56,8 vs 17,724 37,7 vs 15,044 35, 4 vs 23,102 34,5 vs 12.625 34,2 vs vs = muito forte

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó substancialmente igual ao padrão de difracção de raios X de pó apresentado na Figura 8.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, um pico especifico a 2-teta = 24m2° mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de 14 pó com, pelo menos, um pico específico a 2-teta = 22,7° mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado a sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, dois picos específicos a 2-teta = 24,2° e 22,7° em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com picos específicos a 2-teta = 24,2, 22,7, 15,7, 12,0, 27,1, 25,0, 17,7, 15,0, 23,1 e 12,6°, em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado a sal de maleato de AZD2171 numa segunda forma cristalina, Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó como apresentado na Figura 8. A análise de DSC demonstra que a Forma B do maleato de AZD2171 é um sólido de fusão elevada com um inicio de fusão a 194,43 °C e um pico a 195,97 °C (Figura 9).

Deste modo, a análise de DSC demonstra que a Forma B do maleato de AZD2171 é a sólido de fusão elevada com um início de fusão a cerca de 194,43 °C e um pico a cerca de 195,97 °C. A Forma B é meta-estável em relação à Forma A (o ponto de fusão e o calor de fusão da Forma B são inferiores aos da 15

Forma A). A Forma A é a forma mais termodinamicamente estável. Uma mistura das Formas A e B converte-se para a Forma A após misturar em pasta em metanol a 40 °C durante 4 dias (Figura 10). A Forma A é preferida em relação à Forma B. O maleato de AZD2171 é não higroscópico, absorve < 1% de humidade a 80% de humidade relativa (Figura 7).

Os detalhes de RMN são fornecidos após a preparação do sal de maleato no Exemplo 1 e apresentam, para os resultados estequiométricos, uma proporção de 1:1.

Quando está estabelecido que a presente invenção se refere a uma forma cristalina de base livre AZD2171 ou maleato de AZD2171 Forma A ou maleato de AZD2171 Forma B, o grau de cristalinidade é, convenientemente, superior a cerca de 60%, mais convenientemente, superior a cerca de 80%, de um modo preferido, superior a cerca de 90% e, de um modo mais preferido, superior a cerca de 95%. De um modo muito preferido, o grau de cristalinidade é superior a cerca de 98%.

As Formas A e B do sal de maleato de AZD2171 proporcionam padrões de difracção de raios X de pó substancialmente iguais a aos padrões de difracção de raios X de pó apresentados nas Figuras 5 e 8, respectivamente e possuem, substancialmente, os mesmos dez picos mais proeminentes (valores de ângulo 2-teta) apresentados nas Tabelas 3 e 4, respectivamente. Deve ser entendido que os valores de 2-teta do padrão de difracção de raios X de pó pode variar ligeiramente de uma máquina para outra ou de uma amostra para outra, e desse modo, os valores obtidos não devem ser encarados como absolutos. 16 É conhecido que pode ser obtido um padrão de difracção de raios X de pó que possua um ou mais erros de medição, dependendo das condições de medição (tais como o equipamento ou máquina utilizados). Em particular, é qeralmente conhecido que as intensidades num padrão de difracção de raios X de pó podem flutuar dependendo das condições da medição. Por isso, deve ser entendido que as formas de sal de maleato de AZD2171 da presente invenção não estão limitadas aos cristais que proporcionam padrões de difracção de raios X de pó idênticos aos padrões de difracção de raios X de pó apresentados nas Figuras 5 e 8 e quaisquer cristais que produzam padrões de difracção de raios X de pó substancialmente iguais aos apresentados nas Figuras 5 e 8 caem dentro do âmbito da presente invenção. Um especialista na técnica de difracção de raios X de pó é capaz de avaliar a identidade substancial de padrões de difracção de raios X de pó.

Os especialistas na técnica da difracção de raios X em pó irão entender que a intensidade relativa dos picos pode ser afectada através de, por exemplo, grãos acima de 30 micron de tamanho e proporções de aspecto não unitário, que podem afectar a análise das amostras. O especialista na técnica também entenderá que a posição dos reflexos pode ser afectada pela altura precisa a que a amostra se posiciona no difractómetro e o zero de calibração do difractómetro. A planaridade da superfície da amostra pode também ter um efeito pequeno. Assim, os resultados do padrão de difracção apresentados não devem ser encarados como valores absolutos. (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, Η. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures). 17

Geralmente, um erro de medição de um ângulo de difracção num difractograma de raios X, em pó, é de cerca de 5% ou inferior, em particular mais ou menos 0,5° 2-teta e esse grau de um erro de medição deve ser tomado em conta quando se consideram os padrões de difracção de raios X de pó nas Figuras 2, 3, 4, 5, 8 e 10 e quando se interpretam as Tabelas 1, 3 e 4. Além disso, deve ser entendido que as intensidades podem flutuar dependendo das condições experimentais e da preparação da amostra (orientação preferida).

Para evitar a dúvida, termos tais como 'sal de maleato de AZD2171' e 'um sal de maleato de AZD2171' referem-se a cada e todas as formas de sal de maleato de AZD2171, enquanto que ' a Forma A de maleato de AZD2171' refere-se à forma cristalina particular conhecida como Forma A e 'Forma B de maleato de AZD2171' refere-se à forma cristalina particular conhecida como Forma B.

De acordo com um outro aspecto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica que compreende um sal de maleato de AZD2171 como aqui definido anteriormente em associação com um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitáveis. A composição pode estar numa forma adequada para administração oral., (por exemplo, como comprimidos, pastilhas, cápsulas duras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós ou grânulos dispersos, xaropes ou elixires), para administração por inalação (por exemplo como um pó dividido finamente ou um aerossol liquido), para administração por insuflação (por exemplo, como um pó dividido finamente), para injecção parentérica (por exemplo como uma solução, suspensão ou 18 emulsão estéril, para dosagem intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão), para administração tópica (por exemplo, como cremes, unguentos, géis, ou soluções ou suspensões aquosas ou oleosas), ou para administração rectal (por exemplo, como um supositório) . De um modo preferido, o sal de maleato de AZD2171 é administrado oralmente. Em geral., as composições acima podem ser preparadas de um modo convencional utilizando excipientes convencionais.

As composições da presente invenção são apresentadas vantajosamente, na forma de dosagem unitária. 0 maleato de AZD2171 será, normalmente, administrado a um animal de sangue quente numa dose unitária no intervalo de 1-50 mg por metro quadrado de área corporal do animal, por exemplo, aproximadamente, 0,03-1,5 mg/kg num humano. Uma dose unitária no intervalo de, por exemplo, 0,01-1,5 mg/kg, por exemplo 0,05-0,75 mg/kg, de um modo preferido, 0,03-0,5 mg/kg está prevista e esta é, normalmente, uma dose terapeuticamente eficaz. Uma forma de dosagem unitária, tal como um comprimido ou cápsula irá conter normalmente, por exemplo, 1-50 mg de ingrediente activo. De um modo preferido, é empregue uma dose diária no intervalo de 0,03-0,5 mg/kg. O tamanho da dose necessária para tratamento terapêutico ou profiláctico de um estado de doença particular será necessariamente variado dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração e da gravidade da doença a ser tratada. Consequentemente, a dosagem óptima pode ser determinada pelo médico que está a tratar qualquer doente particular.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente para utilização num método de tratamento deste corpo humano ou animal por terapia. 19

Uma outra característica da presente invenção é um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente para utilização como um medicamento, convenientemente um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente para utilização como um medicamento para produzir um efeito anti-angiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num animal de sangue quente, tal como um humano.

Assim, de acordo com um outro aspecto da invenção, é proporcionada a utilização de um sal de maleato de AZD2171 como aqui definido anteriormente na preparação de um medicamento para utilização na produção de um efeito anti-angiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num animal de sangue quente, tal como um ser humano. 0 sal de maleato de AZD2171 é um agente anti-angiogénico e/ou de redução de permeabilidade vascular e pode ser aplicado como uma terapia isolada ou pode envolver, adicionalmente ao maleato de AZD2171, uma ou mais outras substâncias e/ou tratamentos. Esse tratamento conjunto pode ser alcançado através da administração simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. No campo da oncologia médica é normal praticar a utilização de uma combinação de diferentes formas de tratamento, para tratar cada doente com cancro. Na oncologia médica, o(s) outro (s) componente(s) desse tratamento conjunto adicionais ao sal de maleato de AZD2171 podem ser: cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Essa quimioterapia pode cobrir três categorias principais de agente terapêutico: 20 (i) outros agentes anti-angiogénicos, tais como agueles gue inibem os efeitos do factor de crescimento vascular endotelial., (por exemplo, o anticorpo do factor de crescimento celular endotelial anti-vascular bevacizumab [Avastin™] e aqueles que trabalham através de mecanismos diferentes daqueles aqui definidos acima (por exemplo, linomida, inibidores da função da integrina ανβ3, angiostatina, razoxina, talidomida) e incluindo agentes de direccionamento vascular (por exemplo fosfato de combretastatina e compostos revelados nos Pedidos de Patente Internacional WO00/40529, WO 00/41669, WOOl/92224, W002/04434 e W002/08213 e os agentes de lesão vascular descritos na Publicação do Pedido de Patente Internacional N° WO 99/02166 cuja divulgação inteira do documento é aqui incorporada por referência, (por exemplo, N-acetilcolchinol-O-fosfato)); (ii) agentes citostáticos, tais como antioestrogénios (por exemplo, tamoxifen, toremifene, raloxifene, droloxifene, iodoxifene), reguladores negativos do receptor do estrogénio (por exemplo, fulvestrante), progestogénios (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores de aromatase (por exemplo, anastrozole, letrazole, vorazole, exemestane), antiprogestogénios, antiandrogénios (por exemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas e antagonistas de LHRH (por exemplo, acetato de goserelina, luprolida, buserelina), inibidores de 5a-redutase (por exemplo, finasteride), agentes anti-invasão (por exemplo, inibidores de metaloproteinase, como marimastato e inibidores da função do receptor do activador de plasminogénio uroquinase) e inibidores da função do factor de crescimento, (esses factores de crescimento incluem, por exemplo, factor de 21 crescimento derivado de plaquetas e factor de crescimento de hepatócitos), esses inibidores incluem anticorpos do factor de crescimento, anticorpos do receptor do factor de crescimento, (por exemplo, o anticorpo anti-erbb2 trastuzumab [Herceptin™] e o anticorpo anti-erbbl cetuximab [C225]), inibidores de farnesil transferase, inibidores da cinase de tirosina, por exemplo, inibidores da família do factor de crescimento da epiderme (por exemplo, inibidores da cinase de tirosina da família das EGFR, tais como N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-(3-morfolino-propoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, AZD1839), N-(3-etinil-fenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI-774) e 6-acrilamido-N-(3-cloro-4- fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (Cl 1033)) e inibidores de serina/treonina cinase inibidores); e (iii) fármacos antiproliferativos/antineoplásicos e suas combinações, como utilizado em oncologia médica, tais como antimetabolitos (por exemplo, antifolatos, como o metotrexato, fluoropirimidinas como 5-fluorouracilo, tegafur, análogos da purina e adenosina, arabinósido de citosina); antibióticos anti-tumor (por exemplo, antraciclinas como a adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina e idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina); derivados de platina (por exemplo, cisplatina, carboplatina); agentes alquilantes (por exemplo, mostarda de azoto, melfalan, clorambucil, busulfan, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureias, tiotepa); agentes antimitóticos (por exemplo, alcaloides vinca como vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina e taxóides como taxol, taxotere); inibidores da topoisomerase (por exemplo, 22 epipodofilotoxinas como etopósido e tenipósido, amsacrina, topotecano, camptotecina e também irinotecano); também enzimas (por exemplo, asparaginase); inibidores da etimidilato sintase (por exemplo raltitrexed); e tipos adicionais de agentes quimioterapêuticos incluem: (iv) modificadores de resposta biológica (por exemplo, interferão); (v) anticorpos (por exemplo edrecolomab); (vi) terapias anti-sentido, por exemplo os que são dirigidos aos alvos listados acima, tais como ISIS 2503, um anti-ras anti-sentido; (vii) abordagens de genoterapia, incluindo por exemplo abordagens para substituir genes aberrantes, p53 aberrante ou BRCA1 aberrante ou BRCA2, GDEPT (terapia de pró-fármaco de enzima dirigida ao gene) abordagens, tais como aquelas que utilizam desaminase de citosina, cinase de timidina ou uma enzima de nitro-redutase bacteriana e abordagens para aumentar a tolerância do doente a quimioterapia ou radioterapia, tais como genoterapia de resistência a multi-fármaco; e (viii) abordagens de imunoterapia, incluindo, por exemplo, abordagens ex vivo e in vivo para aumentar a imunogenicidade das células tumorais do doente, tais como transfecção com citocinas, tais como interleucina 2, interleucina 4 ou factor de estimulação de colónias de granulocitomacrófago, abordagens para diminuir a energia de células T, abordagens utilizando células imunitárias transfectadas, tais como células dendríticas transfectadas por citocina, abordagens utilizando linhas celulares de tumor transfectadas com citocina e abordagens utilizando anticorpos anti-idiotipicos. 23

Por exemplo, cada tratamento conjunto pode ser alcançado através de administração simultânea, sequencial ou separada de um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente, e um agente de direccionamento vascular descrito no documento WO 99/02166, tal como N-acetilcolchinol-O-fosfato (Exemplo 1 do documento WO 99/02166). É conhecido a partir do documento WO 01174360 que os anti-angiogénicos podem ser combinados com anti-hipertensivos. Também pode ser administrado um sal da presente invenção em combinação com um anti-hipertensivo. Um anti-hipertensivo é um agente que baixa a pressão sanguínea, ver documento WO 01174360 que é aqui incorporado por referência.

De acordo com uma outra caracteristica da presente invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente, e um agente anti-hipertensivo para o tratamento de um estado de doença associado a angiogénese num mamífero de sangue quente, tal como um humano.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é proporcionada a utilização de uma combinação de um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente e um agente anti-hipertensivo para a preparação de um medicamento para produzir um efeito anti-angiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num mamífero de sangue quente, tal como um humano.

Agentes anti-hipertensivos preferidos são os bloqueadores de canal de cálcio, inibidores de enzima de conversão de angiotensina (inibidores ACE), antagonistas do receptor da 24 angiotensina II (antagonistas A-II), diuréticos, bloqueadores do receptor beta-adrenérgico (blogueadores β), vasodilatadores e bloqueadores do receptor alfa-adrenérgico (bloqueadores a). Agentes anti-hipertensivos particulares são os bloqueadores do canal de cálcio, inibidores da enzima que converte a angiotensina (inibidores ACE), antagonistas do receptor da angiotensina II (antagonistas A-II) e bloqueadores do receptor beta-adrenérgico (bloqueadores β), especialmente bloqueadores do canal de cálcio.

Como referido acima, o sal de maleato de AZD2171 é de interesse devido aos seus efeitos anti-angiogénicos e/ou de permeabilidade vascular. É expectável que o sal de maleato de AZD2171 seja útil numa vasta gama de estados de doença incluindo cancro, diabetes, psoriase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, linfoedema, nefropatias agudas e crónicas, ateroma, restenose arterial., doenças autoimunitárias, inflamação aguda, formação de cicatrizes excessiva e adesões, endometriose, hemorragia uterina disfuncional e doenças oculares com proliferação de vasos retinais incluindo degeneração muscular relacionada com a idade. 0 cancro pode afectar qualquer tecido e inclui leucemia, mieloma múltiplo e linfoma. Em particular, é expectável que esses compostos da invenção abrandem vantajosamente o crescimento de tumores primários e recorrentes de, por exemplo, o cólon, mama, próstata, pulmões e pele. Mais particularmente, é expectável que esses compostos da invenção inibam qualquer forma de cancro associados com VEGF incluindo leucemia, mieloma múltiplo e linfoma e também, por exemplo, o crescimento dos tumores sólidos primários e recorrentes que são associados com VEGF, especialmente aqueles tumores que estão significativamente dependentes de VEGF para o 25 seu crescimento e disseminação, incluindo por exemplo, certos tumores do cólon, mama, próstata, pulmão, cérebro, vulva e pele.

Adicionalmente à sua utilização em medicina terapêutica, os sais de maleato de AZD2171 aqui definidos acima são também úteis como ferramentas farmacológicas no desenvolvimento e padronização de sistemas de teste in vitro e in vivo para a avaliação dos efeitos de inibidores da actividade do receptor da cinase de tirosina de VEGF em animais de laboratório, tais como gatos, cães, coelhos, macacos, ratos e murganhos, como parte da investigação para novos agentes terapêuticos.

Os ensaios escritos no documento WO 00/47212 e utilizados para testar AZD2171 são os seguintes: (a) Teste de Inibição da Cinase da Tirosina do Receptor

In Vitro

Este ensaio determina a capacidade de um composto de teste para inibir a actividade da cinase de tirosina. O ADN que codifica os domínios citoplásmicos do receptor de VEGF, FGF ou EGF pode ser obtido através da síntese do gene total (Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19-25, 1987) ou por clonagem. Estes podem ser, então, expressos num sistema de expressão adequado para obter o polipéptido com actividade de cinase de tirosina. Por exemplo, verificou-se que os domínios citoplásmicos do receptor VEGF, FGF e EGF, que foram obtidos através da expressão da proteína recombinante em células de insecto, apresentam actividade intrínseca da cinase de tirosina. No caso do receptor de VEGF Flt-1 (número de acesso no Genbank X51602), um fragmento de ADN de 1,7 kb que codifica a maior 26 parte do domínio citoplásmico, começando com metionina 783 e incluindo o códão de terminação, descrito por Shibuya et al., (Oncogene, 1990, 5: 519-524), foi isolado a partir do ADNc e clonado num vector de translocação de baculovírus (por exemplo pAcYMl (ver The Baculovírus Expression System: A Laboratory Guide, L.A. King e R. D. Possee, Chapman e Hall, 1992) ou pAc360 ou pBlueBacHis (disponível em Invitrogen Corporation)). Esta construção recombinante foi cotransfectada para células de insecto (por exemplo, Spodoptera frugiperda 21(Sf21)) com ADN virai (e. g., Pharmingen BaculoGold) para preparar baculovírus recombinante. (Detalhes dos métodos para a montagem de moléculas de ADN recombinante e a preparação e utilização de baculovírus recombinante podem ser encontrados em textos padrão, por exemplo Sambrook et al., 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual., 2a edição, Cold Spring Harbour Laboratory Press e 0'Reilly et al., 1992, Baculovírus Expression Vectors - A Laboratory

Manual., W. H. Freeman e Co, New York) . Para KDR (Número d acesso ao Genbank L04947), foi clonado um fragmento citoplásmico começando a partir da metionina 806 e expresso de um modo semelhante.

Para a expressão da actividade da cinase de tirosina de cFlt-1, foram infectadas células Sf21 com vírus recombinante cFlt-1 purificado a partir de placas a uma multiplicidade de infecção de 3 e recolhidos 48 horas mais tarde. As células recolhidas foram lavadas com solução salina gelada tamponada com fosfato (PBS) (fosfato de sódio a 10 mM, pH 7,4, cloreto de sódio a 138 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM) depois ressuspenso em HNTG/PMSF gelado (Hepes a 20 mM, pH 7,5, cloreto de sódio a 150 mM, glicerol a 10% v/v, Triton X100 a 1% v/v, cloreto de magnésio a 1,5 mM, ácido etilenoglicol-bis(β-aminoetil éter) N,N,N',N'-tetra acético (EGTA) a 1 mM, PMSF a 1 mM (fluoreto de 27 fenilmetilsulfonil) ; o PMSF é adicionado imediatamente antes da utilização a partir de uma solução a 100 mM preparada de fresco em metanol) utilizando 1 mL de HNTG/PMSF por 10 milhões de células. A suspensão foi centrifugada, durante 10 minutos, a 13000 rpm, a 4 °C, o sobrenadante (stock enzimático) foi removido e armazenado em fracções a -70 °C. Cada novo lote de stock enzimático foi titulado no ensaio por diluição com diluente enzimático (Hepes a 100 mM, pH 7,4, ortovanadato de sódio a 0,2 mM, Triton X100 a 0,1% v/v, ditiotreitol a 0,2 mM) . Para um lote típico, a enzima do stock é diluída 1 em 2000 com diluente de enzima e é utilizado 50 pL de enzima diluída para cada poço de ensaio.

Foi preparado um stock de solução de substrato a partir de um copolímero aleatório contendo tirosina, por exemplo Poli (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), armazenada como stock de 1 mg/mL de stock em PBS a -20 °C e diluído 1 em 500 com PBS para revestir as placas.

No dia antes do ensaio, foi dispensado 100 pL de solução de substrato diluída em todos os poços das placas de ensaio (imunoplacas de 96 poços Nunc maxisorp) que foram selados e deixados durante a noite, a 4 °C.

No dia do ensaio, a solução de substrato foi eliminada e os poços das placas de ensaio foram lavados uma vez com PBST (PBS contendo 0,05% v/v Tween 20) e uma vez com Hepes a 50 mM, pH 7,4.

Os compostos de teste foram diluídos com dimetilsulfóxido a 10% (DMSO) e 25 pL de composto diluído foram transferidos para poços nas placas de ensaio lavadas. Os poços de controlo "total" 28 continham DMSO a 10% em vez do composto. Vinte e cinco microlitros de cloreto de manganês(II) a 40 mM contendo adenosina-5'-trifosfato (ATP) a 8 μΜ foram adicionados a todos os poços de teste, excepto os poços de controlo "brancos" que continham cloreto de manganês(II) sem ATP. Para começar as reacções foram adicionados 50 pL de enzima diluída de fresco a cada poço e as placas foram incubadas è temperatura ambiente durante 20 minutos. O líquido foi então eliminado e os poços foram lavados duas vezes com PBST. Foram adicionados cem microlitros de anticorpo anti-fosfotirosina IgG de murganho (Upstate Biotechnology Inc. product 05-321), diluído 1 em 6000 com PBST contendo 0,5% p/v de albumina do soro bovino (BSA) , a cada poço e as placas foram incubadas, durante 1 hora, à temperatura ambiente antes de desprezar o líquido e lavar os poços duas vezes com PBST. Foram adicionados cem microlitros de anticorpo anti-Ig de murganho de ovelha ligado a peroxidase de rábanos (HRP) (produto Amersham NXA 931), diluído 1 em 500 com PBST contendo 0,5% p/v de BSA, e as placas foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente antes de desprezar o líquido e lavar as células duas vezes com PBST. Foram adicionados, a cada poço, cem microlitros de solução de ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) (ABTS), preparado de fresco utilizando um comprimido de 50 mg de ABTS (Boehringer 1204 521) em 50 mL preparado de fresco 50 mM de tampão f osf ato-citrato pH 5,0 + 0,03% de perborato de sódio (produzido com 1 tampão de citrato de fosfato com cápsula de perborato de sódio (PCSB) (Sigma P4922) por 100 mL de água destilada). As placas foram, então, incubadas durante 20-60 minutos à temperatura ambiente, até o valor da densidade óptica dos poços de controlo "total", medida a 405 nm utilizando um espectrofotómetro de leitura de placas, serem aproximadamente de 1,0. "Branco" (sem ATP) e "total" (sem composto), os valores 29 de controlo foram utilizados para determinar o intervalo de diluição do composto de teste que produziu 50% de inibição da actividade enzimática. (b) Ensaio de Proliferação HUVEC In Vitro

Este ensaio determina a capacidade de um composto de teste inibir a proliferação de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) estimulada pelo factor de crescimento.

Foram isoladas células HWEC em MCDB 131 (Gibco BRL) + 7,5% v/v de soro de vitela fetal (FCS) e foram plaqueadas (na passagem 2 para 8), em MCDB 131 + 2% v/v FCS + 3 pg/mL heparina + 1 pg/mL de hidrocortisona, a uma concentração de 1000 células/poço em placas de 96 poços. Após um mínimo de 4 horas elas foram doseadas com VEGF (3 ng/mL) e composto. As culturas foram, então, incubadas durante 4 dias, a 37 °C com 7,5% de CO2. No dia 4, as culturas foram pulsadas com 1 pCi/poço de timidina tritiada (produto Amersham TRA 61) e incubadas durante 4 horas. As células foram recolhidas utilizando um sistema de recolha de placas de 96 poços (Tomtek) e depois ensaiadas para a incorporação de trítio com um contador de placas Beta. A incorporação de radioactividade nas células, expressa como cpm, foi utilizada para medir a inibição da proliferação celular estimulada pelo factor de crescimento, pelos compostos. Esta metodologia foi também utilizada para avaliar os efeitos do composto versus o crescimento de HLJVEC basais (i. e., proliferação das células endoteliais em MCDB 131 + 2% v/v FCS + 3 pg/mL de heparina + 1 pg/mL de hidrocortisona sem a adição de VEGF exógeno). 30 (c) Modelo de Doença de Tumor Sólido In Vivo

Este teste mede a capacidade dos compostos para inibirem o crescimento de tumor sólido.

Foram estabelecidos xenoenxertos de tumor CaLu-6 no flanco de murganhos Swiss nu/nu fêmeas atímicos, através de injecção subcutânea de lxlO6 células Calu-6/murganho em 100 pL de uma solução de 50% (v/v) de Matrigel em meio de cultura sem soro.

Dez dias após o implante celular, os murganhos foram divididos em grupos de 8-10, de modo a alcançar volumes médios de grupo comparáveis. Foram medidos os tumores utilizando compassos de calibre vernier e os volumes foram calculados como: (1 x w) x V(1 x w) x (n/6) , em que lê o diâmetro mais longo e w é o diâmetro perpendicular ao mais longo. Os compostos de teste foram administrados oralmente, uma vez por dia, durante um mínimo de 21 dias e os animais de controlo receberam diluente de composto. Os tumores foram medidos duas vezes por semana. O nível de inibição do crescimento foi calculado por comparação do volume médio do tumor do grupo de controlo versus o grupo de tratamento utilizando um teste T de Student e/ou um Teste de Soma de Mann-Whitney Rank. O efeito inibidor do tratamento com o composto foi considerado significativo quando p<0,05.

Um sal de maleato de AZD2171, como aqui definido anteriormente, pode ser preparado através de qualquer processo conhecido para ser aplicável para a preparação de compostos quimicamente relacionados. Esses processos incluem, por exemplo, os ilustrados no Pedido de Patente Internacional N° WO 00/47212 todos os quais são aqui incorporados por referência. Esses processos também incluem, por exemplo, síntese de fase sólida. 31

Materiais de partida necessários podem ser obtidos através de processos convencionais de química orgânica. Pode ser preparado AZD2171 de base livre de acordo com qualquer um dos processos descritos no documento WO 00/47212, ver, em particular, o Exemplo 240 do documento WO 00/47212. Alternativamente, materiais de partida necessários podem ser obtidos através de processos análogos aqueles ilustrados que estão dentro dos conhecimentos de um especialista em química orgânica.

Os seguintes processos (a) (b) e (c) constituem outras características da presente invenção. Síntese da Forma A de Sal de Maleato de AZD2171 (a) Um tal processo proporciona um outro aspecto da presente invenção e compreende, por exemplo, os passos de: (i) dissolver base livre de AZD2171 num solvente orgânico para formar uma solução; (ii) adicionar uma solução aquosa de ácido maleico ou adicionar uma solução de ácido maleico num solvente orgânico; (iii) permitir que ocorra enucleação espontânea; (iv) isolar, opcionalmente, a mistura cristalina das Formas A e B de AZD2171 assim formadas; (v) misturar a mistura num solvente, por exemplo, metanol, até que todo o maleato de AZD2171 esteja na Forma A, (como pode ser determinado por Difracção, em pó, de raios X), por exemplo isto pode demorar 4 dias; e (vi) isolar o sólido cristalino assim formado. 32 (b) Outro desses processos proporciona um outro aspecto da presente invenção e compreende, por exemplo, os passos de: (i) dissolver a base livre AZD2171 num solvente orgânico para formar uma solução; (ii) adicionar uma solução aquosa de ácido maleico ou adicionar uma solução de ácido maleico num solvente orgânico; (iii) obter uma solução, por exemplo, por aquecimento ou adicionando mais solvente e adicionando uma semente de Forma A de maleato de AZD2171 para iniciar a cristalização de Forma A de maleato de AZD2171; e (iv) isolar o sólido cristalino assim formado.

Para a parte (i) de (a) e (b) a mistura pode, se necessário, ser aquecida até ao refluxo até que tenha ocorrido a dissolução. Alternativamente, a mistura pode, por exemplo, ser aquecida até uma temperatura inferior à temperatura de refluxo do solvente desde que a dissolução de mais ou menos a totalidade do material sólido tenha ocorrido. Será entendido que podem ser removidas quantidades de material insolúvel por filtração da mistura aquecida.

Para a parte (i) de (a) e (b) , o solvente orgânico é, de um modo preferido, um álcool, por exemplo, metanol ou isopropanol.

Para a parte (ii) de (a) e (b) o solvente orgânico é, de um modo preferido, um álcool, por exemplo metanol. 33 (c) Síntese da Forma B de Sal de Maleato de AZD2171

Esse processo proporciona um outro aspecto da presente invenção e compreende, por exemplo, os passos de: (i) dissolver maleato de AZD2171 num solvente orgânico para formar uma solução; (ii) adicionar a solução a um solvente em que o maleato de AZD2171 possui uma solubilidade mais baixa do que a que tem em NMP, por exemplo, tolueno ou acetato de etilo; (iii) a cristalização da Forma B de maleato de AZD2171 ocorre, então; e (iv) isolar o sólido cristalino assim formado.

Em (c) um solvente orgânico preferido é um solvente de elevada solubilização, tal como l-metil-2-pirrolidinona.

Para a parte (i) de (c) a mistura pode, se necessário, ser aquecida até ao refluxo até que ocorra a dissolução. Alternativamente, a mistura pode, por exemplo, ser aquecida até uma temperatura inferior à temperatura do refluxo do solvente desde que a dissolução de mais ou menos a totalidade do material tenha ocorrido. Será entendido que pequenas quantidades de material insolúvel podem ser removidas por filtração da mistura aquecida.

Em (a) , (b) e (c) acima, o sólido cristalino assim formado pode ser isolado através de qualquer método convencional., por exemplo por filtração. 34 A invenção é ilustrada de aqui em diante através dos seguintes Exemplos não limitantes, nos quais os resultados e as

Figuras, salvo referência em contrário (i) as evaporações foram realizadas por evaporação de rotação sob vácuo e os processos de trabalho foram realizados após a remoção de sólidos residuais, tais como agentes de secagem por filtração; (ii) são apresentados rendimentos apenas para ilustração e não são, necessariamente, o máximo atingível; (iii) os pontos de fusão são não corrigidos e foram determinados utilizando um Mettler DSC820e; (iv) as estruturas dos produtos finais da fórmula I foram confirmadas por ressonância magnética nuclear (geralmente protão) (RMN) e técnicas de espectro de massa; os valores de desvio químico de ressonância magnética de protão foram medidos na escala delta e as multiplicidades do pico são apresentados como se segue: s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; m, multipleto; br, largo; q, quarteto, quino, quinteto; todas as amostras correram num Bruker DPX 400 MHz a 300K em dg-DMSO, 16 rastreios, tempo de repetição de pulso 10 segundos; (v) os intermediários não foram geralmente totalmente caracterizados e a pureza foi avaliada por análise de RMN; e (vi) Foram utilizadas as seguintes abreviaturas:- DMSO dimetilsulfóxido NMP l-metil-2-pirrolidinona 35

Exemplo 1: Forma A de Maleato de AZD2171

Numa atmosfera inerte de base livre bruta de azoto AZD2171 (4,52 g), (preparada, por exemplo, como descrita no Exemplo 240 do documento WO 00/47212) foi misturado com isopropanol (58,8 mL) . A mistura foi aquecida ao refluxo, durante 15 minutos, para produzir uma solução límpida, escura. A mistura foi arrefecida para 75 °C e foi adicionado carvão (0,226 g) . A mistura foi reaquecida até ao refluxo e mantida sob refluxo durante uma hora. A mistura foi depois filtrada a quente. O bolo do filtro de carvão foi lavado com isopropanol quente (9 mL) . A temperatura do filtrado combinado e a lavagem foram ajustados para 55 °C e uma solução pré-filtrada de ácido maleico (1,173 g) em água (2,71 mL) foi adicionada, gota a gota, durante 5 minutos. A base livre bruta que cristalizou previamente foi dissolvida durante a adição. Foi adicionada uma lavagem de água em linha (0,9 mL) . A mistura foi mantida, a 55 °C, durante 15 minutos e foi adicionada uma semente de Forma A de maleato de AZD2171 (0,023 g) . A mistura foi aquecida a 55 °C, durante 4 horas. Durante as 4 horas a cristalização ficou estabilizada. A mistura foi arrefecida até 0 °C, durante 8 horas. A mistura foi mantida a 0 °C durante um mínimo de 8 horas. A mistura foi filtrada. O bolo foi lavado com isopropanol (9 mL). O sólido foi seco num forno de vácuo a 50 °C para produzir Forma A de maleato de 4- ([4-fluoro-2-metil-l/í-indol-5-il] oxi) -6-metoxi-7- (3- (pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina.

Espectro de RMN de 1H: (400 MHz, DMSO): 1 1,36 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,01 (d, 1H) , 6,25 (s, 1H), 6,04 (s, 2H) , 4,33 (t, 2H) , 4,02 (s, 3H) , 3,26- 36

3.3.70 (b, 4H), 2,44, (s, 3H), 2,24 (m, 2H) , 2,02 (m, 4H) . p.f.: Análise de DSC: início de fusão a 198,3 °C e um pico a 200,08 °C

Exemplo 2: Forma A de Maleato de AZD2171

Sob uma atmosfera de azoto inerte, base livre AZD2171 bruto (23,0 g) (preparado, por exemplo, como descrito no Exemplo 240 do documento WO 00/47212) foi misturado em pasta em metanol (223 mL) no recipiente 1. A mistura foi desgaseada mantendo sob vácuo e depois libertando o vácuo com azoto. Isto foi repetido cinco vezes. A pasta foi, então, aguecida até ao refluxo e mantida aí durante 15 minutos para produzir uma solução límpida, castanha escura. A solução foi arrefecida para 60°C e, depois, filtrada através de uma pilha de Celite® (4,00 g) no recipiente 2. A pilha de Celite® foi lavada com metanol (78 mL) guente (60 °C), o filtrado foi novamente para o recipiente 2. O recipiente 1 foi, então, carregado com metanol (111 mL) , que foi arrefecido para 0 °C. O recipiente 1 foi, então, carregado com ácido maleico (5,50 g) e a mistura foi agitada, a 0 °C, durante 15 minutos até que todo o ácido maleico estivesse dissolvido.

Os conteúdos do recipiente 1 foram, então, carregados para o recipiente 2 através de um filtro em linha enquanto se mantinha a temperatura acima dos 52 °C. Foi adicionada uma semente Forma A de maleato de AZD2171 (0,0454 g) ao recipiente 2 55 o O (D 0) mistura foi mantida, a 55 °C, durante 3 horas mistura foi, depois, arrefecida até 40 °C, durante 7 horas, depois arrefecida ainda mais até -5 °C durante 6 horas. O sólido foi filtrado e lavado com metanol (100 mL) a -5 °C. O produto 37 foi seco num forno de vácuo durante 24 horas para produzir Forma A de maleato de 4-([4-fluoro-2-metil-lJí-indol-5-il] oxi)-6-metoxi—7—(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina.

Exemplo 3: Forma B de Maleato de AZD2171

Foi dissolvida Forma B de maleato de AZD2171 (2,31 g) em NMP quente ( — 50 °C) . Esta solução foi adicionada, gota a gota, a

tolueno (23 mL), durante 2 minutos, à temperatura ambiente. O material originalmente precipitado como um sólido tornou-se então um óleo, depois, novamente, um sólido. Após agitação, durante 10 minutos, à temperatura ambiente, o sólido foi filtrado e lavado com tolueno (10 mL) . O sólido foi seco num forno de vácuo à temperatura ambiente durante a noite para produzir Forma B de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lJí-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina. p.f.: Análise DSC: início de fusão a 194, 43 °C e um pico a 195,97 °C

Breve Descrição dos Desenhos

Figura 1: Termogramas de DSC e TGA para base Livre AZD2171 Mono-hidrato - com temperatura em °C representada graficamente no eixo horizontal e fluxo de calor/% perda de peso no eixo vertical

Figura 2: Padrão de Difracção de Raios X de Pó para base Livre AZD2171 - com os valores de 2Θ representados no gráfico no eixo horizontal e a intensidade da linha relativa (contagem) representada no eixo vertical. 38

Figura 3: Padrão de Difracção de Raios X de Pó para base livre AZD2171 Mono-hidrato Aquecido a 100 °C - com os valores de 2Θ representados no gráfico no eixo horizontal e a intensidade da linha relativa (contagem) representada no eixo vertical.

Figura 4: Padrão de Difracção de Raios X de Pó para base livre AZD2171 Micronizada - com os valores de 2Θ representados no gráfico no eixo horizontal e a intensidade da linha relativa (contagem) representada no eixo vertical. Figura 5: Padrão de Difracção de Raios X de Pó para Sal de maleato de AZD2171 Forma A - com os valores de 2Θ representados no gráfico no eixo horizontal e a intensidade da linha relativa (contagem) representada no eixo vertical. Figura 6: Termograma de DSC para Maleato de AZD2171 Forma A - com a temperatura em °C representada no eixo horizontal e o fluxo de calor endotérmico (milliWatts (mW)) representado no eixo vertical.

Figura 7: Forma A de Maleato de AZD2171 Sorção de Vapor Isotérmico a 25 °C - com humidade relativa alvo (RH) (%) representada no eixo horizontal e alteração na massa seca (%) representada no eixo vertical.

Figura 8: Padrão de Difracçao de Raios X de Pó sal de maleato de AZD2171 Forma B com os valores de 2Θ representados no gráfico no eixo horizontal e a intensidade da linha relativa (contagem) representada no eixo vertical. Figura 9: Termograma DSC para Maleato de AZD2171 Forma B -com a temperatura em °C representada no eixo horizontal e o fluxos de calor endotérmico (milliWatts (mW)) representado no eixo vertical.

Figura 10: padrões de Difracção de Raios X de Pó para Maleato de AZD2171 Experiência de Pasta com os valores de 2Θ 39 representados no gráfico no eixo horizontal e a intensidade da linha relativa (contagem) representada no eixo vertical.

Detalhes das Técnicas Utilizadas

Difracção de Raios X de Pó

Tabela 5 % de Intensidade Relativa* Definição 25 - 100 vs (muito forte) 10 - 25 s (forte) 3 - 10 m (médio) 1 - 3 w (fraco) * As intensidades relativas sao derivadas de difractogramas medidos com fendas fixas.

Instrumento Analítico: Siemens D5000

Os espectros de difracção de raios X de pó foram determinados por montagem da amostra de sal cristalino numa montagem de hóstia num cristal de silício único Siemens (SSC) e espalhamento da amostra numa camada fina com o auxílio de uma lâmina de microscópio. A amostra foi centrifugada a 30 revoluções por minuto (para melhorar a estatística da contagem) e irradiada com raios X produzidos por um tubo de foco longo fino de cobre e operado a 40kV e 40mA com um comprimento de onda de 1,5406 angstroms. A fonte raios X colimada foi passada através de um conjunto de fendas automático de divergência variável a V20 e a radiação reflectida dirigida através de uma fenda anti-varrimento de 2 mm e uma fenda de detector de 0,2 mm. A amostra foi exposta durante 1 segundo, por 0,02 graus de incremento 2-teta (modo de varrimento contínuo) ao longo de 2 graus a 40 graus 2-teta no modo teta-teta. O tempo de 40 migração foi de 31 minutos e 41 segundos. 0 instrumento foi equipado com um contador de cintilações como detector. A captura do controlo e dados foi através de um Dell Optiplex 686 NT 4.0 Workstation a funcionar com o programa de computador Diffract+. Os especialistas na técnica de difracção de raios X de pó entenderão que a intensidade relativa dos picos pode ser afectada por, por exemplo, grãos acima dos 30 micron de tamanho e proporções de aspecto não unitário que podem afectar a análise de amostras. O especialista entenderá também que a posição das reflexões pode ser afectada pela altura precisa a que a amostra se coloca no dif ractómetro e o zero de calibração do difractómetro. A planaridade da superfície da amostra pode também ter um pequeno efeito. Deste modo os dados do padrão de difracção apresentados não são para ser considerados como valores absolutos.

Peneira/Micronização A base livre AZD2171 foi peneirada antes da Micronização utilizando uma peneira de aço inoxidável de 1 mm, sendo a base utilizada para recolha do produto e para alimentação manual directamente no micronizador. Foram peneirados, aproximadamente, 7,5 g de base livre AZD2171.

Foi utilizado um S/S lined 2" Microniser limpo.

Taxa de alimentação manual: aproximadamente 2/3 g por minuto.

Intervalo de pressão de ar de moagem 10/20 psi (0,67/1,33 atmosferas). 41

Intervalo de pressão de ar de Venturi 20/25 psi (1,33/1,67 atmosferas).

Sorção de Vapor Dinâmico

Instrumento Analítico: Surface Measurements Systems Dynamic Vapour Sorption Analyser. Cerca de 5 mg de material contido num suporte de quartzo a 25 °C, foram sujeitos a azoto humidificado nas seguintes humidades relativas (RH) : 0, 20, 40, 60, 80, 95, 80, 60, 40, 20, 0% de RH em duplicado.

Calorimetria Diferencial de Varrimento

Instrumento Analítico: Mettler DSC820e.

Tipicamente, menos do que 5 mg de material, contido num cadinho de alumínio de 40 pL, equipado com uma tampa furada, foram aquecidos ao longo do intervalo de temperatura de 25 °C a 325 °C a uma taxa de aquecimento constante de 10 °C por minuto. Foi utilizada uma purga de gás com azoto - taxa de fluxo de 100 mL por minuto.

Análise Termoqxavimétrica

Instrumento Analítico: Mettler TG851.

Tipicamente, entre 3 e 12 mg de material, contido num cadinho de alox (óxido de alumínio) de 70 pL, foram aquecidos ao 42 longo do intervalo de temperatura de 25 °C a 325 °C, a uma taxa de aquecimento constante de 10 °C por minuto. Foi utilizada uma purga com gás hélio - taxa de fluxo de 50 mL por minuto.

Conteúdo de Água de Karl Fischer

Instrumento Analítico: Mitsubishi Moisture Meter CA-05. Tipicamente foi utilizado aproximadamente 50 mg de material.

Lisboa, 28 de Julho de 2010 43

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Sal de maleato de 4-( ( 4-f luoro-2-metil-lff-indol-5-il) oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma A, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, um pico específico a 2-teta = 21,5° mais ou menos 0,5° 2-teta ou a 2-teta = 16,4° mais ou menos 0,5° 2-teta.
2. Sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma A, de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, dois picos específicos a 2-teta = 21,5° e 16,4° em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.
3. Sal de maleato de 4-( (4-f luoro-2-metil-lií-indol-S-il) oxi)-6- metoxi-7-(3-(pirrolidan-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma A, de acordo com reivindicação 1, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com picos específicos a 2-teta -21,5, 16,4, 24,4, 20,7, 25, 0, 16, 9, 12,1, 22,2, 17, 4 e 17,6° em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.
4. Sal de maleato de 4-( (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma A, de acordo com reivindicação 1, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó, substancialmente o mesmo padrão de difracção de raios X de pó apresentado na Figura 5. 1
5. Sal de maleato de 4-( (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma B, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, um pico específico a 2-teta = 24,2° mais ou menos 0,5° 2-teta ou a 2-teta = 22,7° mais ou menos 0,5° 2-teta.
6. Sal de maleato de 4-( ( 4-f luoro-2-metil-li7-indol-5-il) oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma B, de acordo com a reivindicação 5, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com, pelo menos, dois picos específicos a 2-teta = 24,2° e 22,1°, em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.
7. Sal de maleato de 4-( ( 4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi)-6- metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma B, de acordo com a reivindicação 5, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó com picos específicos a 2-teta = 24,2, 22,7, 15,7, 12,0, 27, 1, 25, 0, 17, 7, 15, 0, 23,1 e 12,6° em que os referidos valores podem ser mais ou menos 0,5° 2-teta.
8. Sal de maleato de 4-( (4-fluoro-2-metil-lií-indol-5-il) oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina, na forma cristalina Forma B, de acordo com a reivindicação 5, em que o referido sal possui um padrão de difracção de raios X de pó, substancialmente o mesmo padrão de difracção de raios X de pó apresentado na Figura 8.
9. Composição farmacêutica compreendendo um sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina na forma cristalina 2 Forma A, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em associação com um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
10. Composição farmacêutica compreendendo um sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina na forma cristalina Forma B, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, em associação com um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
11. Processo para a preparação de um sal de maleato de 4-((4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi) -6-metoxi-7- (3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina na forma cristalina Forma A, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, que compreende: (i) dissolver a base livre 4-( ( 4-f luoro-2-metil-lií-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1- il)ptopoxi)quinazolina num solvente orqânico para formar uma solução; (ii) adicionar uma solução aquosa de ácido maleico ou adicionar uma solução de ácido maleico num solvente orgânico; (iii) permitir que ocorra a enucleação espontânea; (iv) sedimentar a mistura num solvente, até que todo o maleato de 4-( (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi) -6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina esteja na Forma A; e (v) isolar o sólido cristalino assim formado.
12. Processo para a preparação de um sal de maleato de 4-((4-f luoro-2-metil-lif-indol-5-il) oxi) -6-metoxi-7- (3- 3 (pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina na forma cristalina Forma A, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, que compreende: (i) dissolver a base livre 4- ( (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l- il )propoxi)quinazolina num solvente orgânico para formar uma solução; (ii) adicionar uma solução aquosa de ácido maleico ou adicionar uma solução de ácido maleico num solvente orgânico; (iii) obter uma solução e adicionar uma semente de maleato de 4-( (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi) -6-metoxi-7-(3-(pirrolidin- 1-il)propoxi)quinazolina Forma A, para iniciar a cristalização de maleato de 4-( ( 4-f luoro-2-metil-lií-indol-5-il) oxi) -6-metoxi-7 - (3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina Forma A; e (iv) isolar o sólido cristalino assim formado.
13. Processo para a preparação de um sal de maleato de 4-((4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi) - 6-metoxi-7 - (3 - (pirrolidin -1-il)propoxi)quinazolina na forma cristalina Forma B, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 5 a 8, que compreende: (i) dissolver maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi) quinazolina em NMP; (ii) adicionar a solução a um solvente em que o maleato de 4-((4-fluro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina possui uma solubilidade mais baixa do que em NMP; 4 (iii) ocorre, então, a cristalização de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi)quinazolina Forma B; e (iv) isolar o sólido cristalino assim formado.
14. Utilização de um sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-lB-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-l-il)propoxi) quinazolina, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, na preparação de um medicamento para utilização na produção de um efeito anti-angiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num animal de sangue quente, tal como um humano. Lisboa, 28 de Julho de 2010 5 1/10 Aexo

Figura 1: DSC e Termograma TGA da Base Livre AZD2171 Mono-hidratado 2/10

Figura 2: Padrao de Difracçao de Raios X de Pó da Base Livre AZD2171 3/10 L em (contagens)

Figura 3: Padrao de Difracçao de Raios X de de Pó de Mono-hidrato da Base Livre AZD217 1 h aquecido a 100 °C. 4/10 L em (contagens)

Figura 4: Padrao de Difracçao de Raios X de Pó da Base Livre AZD2171 Micronizada 5/10 L em (contagens)

Figura 5: Padrao de Difracçao de Raios X de de Sal Maleato de AZD2171 Forma A 6/10 Aexo

Figura 6: Termograma DSC de Maleato de AZD2171 Forma A 7/10 Curva Isotérmica DVS

0 20 40 60 80 100 DVS-A Solução de Sorção_RH Alvo (%) ©SurfaceMeasurementSysten Figura 7: Isotérmica de Vapor de Sorçao a 25 °C de Maleato de AZD2171 Forma A 8/10 L em (contagens)

Figura 8: Padrao de Difracçao de Raios X de Pó da Maleato de AZD2171 Forma B 9/10 Aexo

Figura 9: Termograma DSC de Maleato de AZD2171 Forma B 10/10 L em (contagens)

Figura 10: Padrões de Difracçao de Raios X de Pó da Experiência de Sedimentação de Maleato de AZD2171