TW201322995A

TW201322995A - 含有抗－ｐｃｓｋ９抗體之穩定化調配物

Info

Publication number: TW201322995A
Application number: TW101127108A
Authority: TW
Inventors: Scott M Walsh; Daniel B Dix
Original assignee: Regeneron Pharma
Priority date: 2011-07-28
Filing date: 2012-07-27
Publication date: 2013-06-16
Also published as: EP4218814A2; MX2014000771A; EA201791185A1; KR20140061360A; MX352529B; US9193801B2; AU2017200811B2; WO2013016648A3; CL2014000183A1; US11673967B2; MY165156A; JP6045583B2; MX375672B; EA028227B1; CA2841588A1; AU2012286663B2; JP6456470B2; WO2013016648A2; US20160032015A1; MX2020010470A

Abstract

本發明提供包含特異結合至人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(proprotein convertase subtilisin/kixin type 9,PCSK9)之人類抗體的醫藥調配物。除了抗-PCSK9抗體以外，該等調配物可含有至少一種胺基酸、至少一種糖或至少一種非離子性界面活性劑。本發明之醫藥調配物在儲存數個月之後展現出充分程度的抗體穩定性。

Description

含有抗-PCSK9抗體之穩定化調配物

本發明是有關於治療性抗體調配物之領域。更具體地，本發明是有關於包含特異結合至人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(proprotein convertase subtilisin/kixin type 9,PCSK9)之人類抗體的醫藥調配物的領域。

序列表

一份序列表的ST.25適用文字檔與本說明書同時提申。文字檔的內容併入本文做為參考資料。序列表的紙本副本與ST.25適用文字檔的內容相同，其包括於本說明書的一部分。

治療性大分子(例如抗體)必須以不但可以製造適於投藥給患者，還可以在儲存及後續使用期間維持其穩定性的方式來調配。舉例而言，除非溶液經過適當調配，否則治療性抗體在液體溶液中容易分解、聚集或經非所欲的化學修飾。抗體在液體調配物中的穩定性不僅取決於調配物中所用賦形劑種類，亦取決於賦形劑相對於彼此的量及比例。另外，除了穩定性，在製備液體抗體調配物時必須將其他考量納入考慮。此等其他考量的實例包括溶液黏度以及在預定調配物中可容納的抗體濃度，與調配物的視覺品質和訴求。因此，在調配治療性抗體時，必須十分注重達成調配物維持穩定、含有足夠濃度的抗體，以及具有適當黏度和其他使得調配物方便投藥給患者的特性。

抗體對於人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(proprotein convertase subtilisin/kixin type 9,PCSK9)來說是治療性相關大分子需要適當調配的一個實例。抗PCSK9抗體在臨床上用於治療或預防諸如高膽固醇血症與其他血脂異常的疾病，與其他病況。例示性抗PCSK9抗體尤其描述於WO 2008/057457、WO 2008/057458、WO 2008/057459、WO 2008/063382、WO 2008/125623、U.S.Pat.No.7,572,618、WO 2010/077854、US 2010/0166768及US 2011/0065902中。

儘管抗PCSK9抗體為已知的，但在關於含有足夠穩定且適於投藥給患者的抗-PCSK9抗體之新穎醫藥調配物的領域中仍存在著需求。

發明摘要

本發明是藉由提供包含特異結合至人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(PCSK9)之人類抗體的醫藥調配物而滿足上述需求。

在一個態樣中，提供一種液體醫藥調配物，其包含：(i)特異結合至人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(PCSK9)之人類抗體；(ii)緩衝劑；(iii)有機共溶劑；(iv)穩定劑；以及視情況選用(v)減黏劑(viscosity reducer)。

在一個具體例中，以約50±7.5 mg/mL至約200±30 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約50 mg/ml±7.5 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約100 mg/mL±15 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約150 mg/mL±22.5 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約175 mg/mL±26.25 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約200 mg/mL±30 mg/mL的濃度提供抗體。

在一個具體例中，該抗體包含胺基酸序列SEQ ID NO：1-8中的任一者或多者。在一個具體例中，該抗體包含(a)一具有重鏈互補決定區1、2及3(HCDR1-HCDR2-HCDR3)之重鏈可變區(HCVR)，各重鏈互補決定區1、2及3分別包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3及SEQ ID NO：4的序列；以及(b)一具有輕鏈互補決定區1、2及3(LCDR1-LCDR2-LCDR3)之輕鏈可變區(LCVR)，各輕鏈互補決定區1、2及3分別包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7及SEQ ID NO：8的序列。在一個特定具體例中，該抗體包含一HCVR以及一LCVR，其各自分別包含SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：5的胺基酸序列。

在一個具體例中，該液體調配物的pH為約pH 6.0±0.5、pH 6.0±0.4、pH 6.0±0.3、pH 6.0±0.2、pH 6.0±0.1、pH 6.0±0.05、pH 6.0±0.01或pH 6.0。在一個特定具體例中，該液體調配物的pH為約pH 6.0±0.3。在一個特定具體例中，該液體醫藥緩衝劑包含一或多種緩衝劑，其具有約pH 5.5至約pH 7.4，或pKa為約6.0的有效緩衝範圍。

在一個具體例中，該緩衝劑為組胺酸。在一個具體例中，組胺酸濃度為5 mM±0.75 mM至50 mM±7.5 mM。在一個具體例中，組胺酸濃度為10 mM±1.5 mM或約10 mM。在一個具體例中，組胺酸濃度為20 mM±3 mM或約20 mM。在一個具體例中，組胺酸濃度為40 nM±6 mM或約40 nM。

在一個具體例中，該有機共溶劑為具有聚氧乙烯部分的非離子性聚合物。在一些具體例中，該有機共溶劑為聚山梨醇酯20、帕洛沙姆188及聚乙二醇3350中的任一者或多者。在一個特定具體例中，該有機共溶劑為聚山梨醇酯20。

在一個具體例中，該有機共溶劑濃度為約0.005%±0.00075%至約1%±0.15%“重量對體積”或“w/v”，其中，例如0.1 g/ml=10%而0.01 g/ml=1%。在一個具體例中，有機共溶劑為聚山梨醇酯20，其濃度為約0.2%±0.03% w/v。在另一個具體例中，該有機共溶劑為聚山梨醇酯20，其濃度為0.01%±0.0015% w/v或約0.01% w/v。

在一個具體例中，該穩定劑為糖。在一個具體例中，該糖是選自於由蔗糖、甘露醇以及海藻糖組成之群。在一個特定具體例中，該穩定劑為蔗糖。

在一個具體例中，該穩定劑濃度為1%±0.15% w/v至20%±3% w/v。在一個特定具體例中，該穩定劑為濃度5%±0.75% w/v或約5% w/v的蔗糖。在另一個特定具體例中，該穩定劑為濃度10%±1.5% w/v或約10% w/v的蔗糖。在另一個特定具體例中，該穩定劑為濃度12%±1.8% w/v或約12% w/v的蔗糖。

在一個具體例中，該減黏劑為選自由精胺酸鹽酸鹽、硫代氰酸鈉、硫代氰酸銨、硫酸銨、氯化銨、氯化鈣、氯化鋅及乙酸鈉組成之群的鹽。在一個具體例中，該減黏劑為L-精胺酸鹽酸鹽。

在一個具體例中，該減黏劑濃度為10 mM±1.5 mM至150 mM±22.5 mM。在一個具體例中，該減黏劑為濃度50 mM±7.5 mM或約50 mM的L-精胺酸鹽酸鹽。在一個具體例中，該減黏劑為濃度40 mM±6 mM或40 mM的L-精胺酸鹽酸鹽。

在一個具體例中，該液體或經還原的凍乾醫藥調配物在25℃下的黏度少於或等於約15厘泊±10%。在一個具體例中，在25℃下的黏度介於1.0厘泊±10%與18厘泊±10%。在一個具體例中，在25℃下的黏度為1.6厘泊±10%、1.7厘泊±10%、3.3厘泊±10%、3.5厘泊±10%、4.8厘泊±10%、6.0厘泊±10%、7.0厘泊±10%、7.1厘泊±10%、7.2厘泊±10%、7.9厘泊±10%、8.9厘泊±10%、10.0厘泊±10%、10.6厘泊±10%、11.4厘泊±10%、11.6厘泊±10%、11.8厘泊±10%、12.4厘泊± 10%、13.9厘泊±10%、14.0厘泊±10%、15.5厘泊±10%或17.9厘泊±10%。

在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性介於100±15 mOsm/kg與460±69 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為103±15 mOsm/kg或約103 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為195±29 mOsm/kg或約195 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為220±33 mOsm/kg或約220 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為330±50 mOsm/kg或約330 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為435±65 mOsm/kg或約435 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為440±66 mOsm/kg或約440 mOsm/kg。在一個具體例中，該液體醫藥調配物的滲透性為458±69 mOsm/kg或約458 mOsm/kg。

在一個具體例中，至少96%或至少97%的非聚集及非分解形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於-80℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少56%的非鹼性及非酸性形式(亦即，主峰或主要電荷形式)的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於-80℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由離子交換層析所測定。

在一個具體例中，至少96%或至少97%的非聚集及非分解形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於-30℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少56%的主要電荷形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於-30℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由離子交換層析所測定。

在一個具體例中，至少96%或至少97%的非聚集及非分解形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於-20℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少56%的主要電荷形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於-20℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由離子交換層析所測定。

在一個具體例中，至少96%的非聚集及非分解形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於5℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少58%或59%的主要電荷形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於5℃下儲存3個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由離子交換層析所測定。

在一個具體例中，至少94%的非聚集及非分解形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於25℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少45%或47%的非鹼性及非酸性形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於25℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由離子交換層析所測定。

在一個具體例中，至少91%或92%的非聚集及非分解形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於45℃下儲存28天後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少35%或37%的非鹼性及非酸性形式的抗-PCSK9抗體是在該液體醫藥調配物於45℃下儲存28天後由該液體醫藥調配物還原而來，如藉由離子交換層析所測定。

在一個態樣中，提供一種液體醫藥調配物，其包含：(i)50±7.5 mg/ml至175±26 mg/ml特異結合至人類PCSK9之人類抗體；(ii)0 mM至40±6 mM組胺酸；(iii)0%至0.2%±0.03%(w/v)聚山梨醇酯20；(iv)0%至12%±1.8%(w/v)蔗糖；以及(v)0 mM至50±7.5 mM精胺酸，pH為約5.3至約6.7。此態樣的抗-PCSK9抗體含有一重鏈可變區(HCVR)以及一輕鏈可變區(LCVR)，以使得HCVR/LCVR組合含有重鏈與輕鏈互補決定區(HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其分別包含SEQ ID NO：2-3-4/SEQ ID NO：6-7-8的胺基酸序列。在一個特定具體例中，該抗-PCSK9抗體包含一重鏈可變區(HCVR)以及輕鏈可變區(LCVR)，其分別包含SEQ ID NO：1與SEQ ID NO：5的胺基酸序列(下文“mAb-316P”)。

在此態樣的一個具體例中，該液體調配物包含(i)50±7.5 mg/mL的mAb-316P；(ii)10±1.5 mM組胺酸；(iii)0.1%±0.015%(w/v)聚山梨醇酯20；及(iv)6%±0.9%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3。在此特定調配物的一個具體例中，黏度為約1.7厘泊。在此特定調配物的一個具體例中，滲透性為220±44 mOsm/kg。

在另一個具體例中，該液體調配物包含(i)100±20 mg/mL的mAb-316P；(ii)20±4 mM組胺酸；(iii)0.2%±0.04%(w/v)聚山梨醇酯20；及(iv)12%±2.4%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3。在此特定調配物的一個具體例中，黏度為約3.5厘泊。在此特定調配物的一個具體例中，滲透性為440±88 mOsm/kg。

在另一個具體例中，該液體調配物包含(i)150±22.5 mg/mL的mAb-316P；(ii)10±1.5 mM組胺酸；(iii)0.2%±0.03%或0.01%±0.0015%(w/v)聚山梨醇酯20；及(iv)10%±1.5%(w/v)蔗糖，pH為6.0±0.3。在此特定調配物的一個具體例中，黏度為約6厘泊。在此特定調配物的一個具體例中，滲透性為435±65.25 mOsm/kg。在此特定調配物的一個具體例中，調配物於45°下儲存28天後，92%的抗體為天然的且35%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，調配物於25°下儲存6個月後，94%的抗體為天然的且45%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，調配物於5°下儲存6個月後，96%的抗體為天然的且58%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，調配物於-20°下儲存12個月後，97%的抗體為天然的且56%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，調配物於-30°下儲存12個月後，97%的抗體為天然的且56%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，調配物於-80°下儲存12個月後，97%的抗體為天然的且56%的抗體為主要電荷形式。

在此特定調配物的一些具體例中，85%的抗體在45℃下儲存28天後仍保有其生物效力，82%在37℃下28天後仍保有其生物效力，及/或98%在25℃下28天後仍保有其生物效力。在此特定調配物的一些具體例中，85%的抗體在-20℃下6個月後仍保有其生物效力，70%在-30℃下6個月後仍保有其生物效力，及/或79%在-80℃下6個月後仍保有其生物效力。在此特定調配物的一些具體例中，81%的抗體在8個冷凍-解凍循環後仍保有其生物效力，及/或84%的抗體在震盪120分鐘後仍保有其生物活力。

在此態樣的另一具體例中，該液體調配物包含(i)175±26.25 mg/mL的mAb-316P；(ii)10±1.5 mM組胺酸；(iii)0.01%±0.0015%(w/v)聚山梨醇酯20；(iv)5%±0.75%(w/v)蔗糖；及(v)50±7.5 mM精胺酸，pH為6.0±0.3。在此特定調配物的一個具體例中，黏度為約10.6厘泊。在此特定調配物的一個具體例中，滲透性為 330±50 mOsm/kg。在此特定調配物的一個具體例中，該調配物在45°下儲存28天後，91%的抗體為天然的且38%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，該調配物在25°下儲存6個月後，94%的抗體為天然的且47%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，該調配物在5°下儲存6個月後，96%的抗體為天然的且59%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，該調配物在-20°下儲存3個月後，96%的抗體為天然的且56%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，該調配物在-30°下儲存3個月後，96%的抗體為天然的且56%的抗體為主要電荷形式。在此特定調配物的一個具體例中，該調配物在-80°下儲存3個月後，96%的抗體為天然的且56%的抗體為主要電荷形式。

在一個態樣中，在一容器中提供任一前述態樣的液體醫藥調配物。在一個具體例中，該容器為聚碳酸酯小瓶。在另一個具體例中，該容器為玻璃小瓶。在一個具體例中，該玻璃小瓶為第1型硼矽酸玻璃小瓶，具有塗覆氟碳化物的丁基橡膠瓶塞。在另一個具體例中，該容器為微浸出器。在另一個具體例中，該容器為注射器。在一個特定具體例中，該注射器含有一個塗覆氟碳化物的塞蓋。在一個特定具體例中，該注射器為1 mL長玻璃注射器，含有少於約500 ppb鎢的27G針頭、塗覆氟碳化物的丁基橡膠瓶塞，以及無乳膠、非細胞毒性橡膠頂蓋。在一個更特定的具體例中，該注射器為NUOVA OMPI 1 mL長玻璃注射器，配有27-G薄壁針頭、一塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠瓶塞，以及一FM 27橡膠頂蓋。在另一個更特定的具體例中，該注射器為I mL或3 mL塑膠注射器，裝有27-G針頭。在一個更特定的具體例中，該塑膠注射器是由BECTON DICKINSON所分發。

在一個態樣中，提供一種包含下列之醫藥調配物：(a)175 mg/mL±26.25 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；(d)5% w/v±0.75%蔗糖；及(e)50 mM±7.5 mM精胺酸，其中(a)該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)調配物中超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(c)調配物中超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(d)調配物中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個具體例中，該醫藥調配物在水中是由下列組成：(a)175 mg/mL±26.25 mg/mL的前一段的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；(d)5% w/v±0.75%蔗糖；及(e)50 mM±7.5 mM精胺酸。

在一個態樣中，提供一種包含下列之醫藥調配物：(a)150 mg/mL mL±22.5 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.2% w/v± 0.03%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖，其中(i)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(ii)調配物中超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(iii)調配物中超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(iv)調配物中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個具體例中，該醫藥調配物在水中是由下列組成：(a)150 mg/mL±22.5 mg/mL的前一段的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖。

在一個態樣中，提供一種包含下列之醫藥調配物：(a)150 mg/mL mL±22.5 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖，其中(i)該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(ii)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(iii)調配物中超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(iv)調配物中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個具體例中，該醫藥調配物在水中是由下列組成：(a)150 mg/mL mL±22.5 mg/mL的前一段的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖。

在一個態樣中，提供一種包含下列之醫藥調配物：(a)100 mg/mL mL±15 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)20 mM±3 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)12% w/v±1.8%蔗糖，其中(i)該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(ii)調配物中超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(iii)調配物中超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(iv)調配物中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個具體例中，該醫藥調配物在水中是由下列組成：(a)100 mg/mL mL±15 mg/mL的前一段的抗-PCSK9抗體；(b)20 mM±3 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)12% w/v±1.8%蔗糖。

在一個態樣中，提供一種包含下列之醫藥調配物：(a)50 mg/mL mL±7.5 mg/mL的抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.1% w/v±0.015%聚山梨醇酯20；及(d)6% w/v±0.9%蔗糖，其中(i)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(ii)調配物中超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(iii)調配物中超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(iv)調配物中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個具體例中，該醫藥調配物在水中是由下列組成：(a)50 mg/mL mL±7.5 mg/mL的前一段的抗-PCSK9 抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.1% w/v±0.015%聚山梨醇酯20；及(d)6% w/v±0.9%蔗糖。

在一個態樣中，提供一種製備冷凍乾燥組成物的方法，該組成物含有抗-PCSK9抗體以及少於0.3%的水。該方法包含下列步驟：(a)在玻璃小瓶中將水、抗-PCSK9抗體、組胺酸、蔗糖及聚山梨醇酯20組合；(b)接著將該組合物維持在約5℃下約60分鐘；(c)然後以每分鐘約0.5℃的速率降低溫度；(d)接著將該組合維持在約-45℃下約120分鐘；(e)接而將大氣壓力降低至約100 mTorr；(f)接著以每分鐘約0.5℃的速率增加溫度；(g)接著將該組合物維持在約-25℃下約78小時；(h)然後以每分鐘0.2℃的速率增加溫度；(i)接而將該組合物維持在約35℃下約6小時；(j)然後以約0.5℃的速率降低溫度；(k)以及然後在儲存之前，將該組合物維持在約25℃下約60分鐘。

在一個具體例中，該方法進一步包含下列步驟：(l)將含有步驟(k)之組合物的玻璃小瓶回填氮氣；以及(m)在約80%大氣壓力下封塞該小瓶。在一個具體例中，於步驟(i)、(j)或(k)之後以及在封塞小瓶的步驟之前使該組成物為2-8℃。

在一些具體例中，於步驟(a)時，該抗-PCSK9抗體為50 mg/mL±7.5 mg/mL、組胺酸為10 mM±1.5 mM(pH 6.0)、聚山梨醇酯20為0.1%±0.015%，以及蔗糖為6%±0.9%。在一個具體例中，該抗-PCSK9抗體包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2，以及SEQ ID NO：8之LCDR3 mAb-316P。在一個具體例中，該抗-PCSK9抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD與SEQ ID NO：5之LCVD。在一個具體例中，(i)該抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD以及SEQ ID NO：5之LCVD，(ii)組合中超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量，(iii)組合中超過50%的抗體具有約8.5的等電點，及(iv)組合中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個態樣中，提供一種冷凍乾燥醫藥組成物，其包含抗-PCSK9抗體以及少於0.3%的水，其是依據前一個態樣的方法所製造。

在一個態樣中，提供一種醫藥組成物，其包含再懸浮於水中之前一態樣之冷凍乾燥醫藥組成物。在一個具體例中，該醫藥組成物在水中由50 mg/mL±7.5 mg/mL的抗-PCSK9抗體、10 mM±1.5 mM組胺酸(pH 6.0)、0.1%±0.015%聚山梨醇酯20，以及6%±0.9%蔗糖所組成。在一個具體例中，該醫藥組成物在水中由100 mg/mL±15 mg/mL抗-PCSK9抗體、20 mM±3 mM組胺酸(pH 6.0)、0.2%±0.03%聚山梨醇酯20，以及12%±1.8%蔗糖所組成。在另一個具體例中，該醫藥組成物在水中由150 mg/mL±22.5 mg/mL抗-PCSK9抗體、30 mM ±4.5 mM組胺酸(pH 6.0)、0.3%±0.045%聚山梨醇酯20，以及18%±2.7%蔗糖所組成。在又一個具體例中，該醫藥組成物在水中由175 mg/mL±26.25 mg/mL抗-PCSK9抗體、35 mM±5.25 mM組胺酸(pH 6.0)、0.35%±0.0525%聚山梨醇酯20，以及21%±3.15%蔗糖所組成。

在一些具體例中，該抗-PCSK9抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD以及SEQ ID NO：5之LCVD，且(b)組成物中超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量，(c)組成物中超過50%的抗體具有約8.5的等電點，及(d)組成物中75%至90%的抗體經岩藻糖基化。

在一個態樣中，提供一種前述態樣中任一者的醫藥組成物，其中該組成物容納在一容器內。在一個具體例中，該容器為小瓶，其在一些具體例中為玻璃小瓶。在另一個具體例中，該容器為注射器。在一些具體例中，該注射器為低鎢玻璃注射器。在一個具體例中，該注射器為NUOVA OMPI 1 mL長玻璃注射器，配備有27-G薄壁針頭、塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠瓶塞，以及FM 27橡膠頂蓋。

在一個態樣中，提供一種套組，其包含前述態樣中任一者之醫藥組成物、容器以及使用說明。在一個具體例中，該容器為預充填注射器。在一個特定具體例中，該注射器為NUOVA OMPI 1 mL長玻璃注射器，配備有27-G薄壁針頭、塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠瓶塞，以及FM 27橡膠頂蓋。

本發明的其他具體例將透過參閱之後的詳細說明而清楚明瞭。

詳細說明

在說明本發明前，應了解，本發明不受限於所描述的特定方法或實驗條件，因為該等方法以及條件是可能改變的。亦應了解，本文所用術語僅是供說明特定具體例之用，而不意欲為限制性的，因為本發明的範圍將僅受到隨附申請專利範圍所囿限。

除非另有定義，否則本文所用全部技術與科學術語和本發明所屬技藝中具有通常技藝者一搬所理解的意思相同。如本文所用，術語"約"，當提及特定引用的數值或數值範圍時，表示該數值可相對於引用的數值改變不超過1%。例如，如本文所用，詞句"約100"包括99與101，以及其間的所有數值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。

儘管任何與本文所述方法和材料類似或等效者可用於實施或測試本發明，現將說明較佳方法與材料。本文提及的全部公開文獻以其全文併入本文做為參考文獻。

醫藥調配物

如本文所用，詞句"醫藥調配物"意指至少一種活性成分(例如，小分子、大分子、化合物等，其能夠在人類或非人類動物體內展現生物效用)以及至少一種非活性成分(其與活性成分或一或多種其他非活性成分組合時，適於治療性投藥給人類或非人類動物)的組合。除非另有指明，否則術語"調配物"，如本文所用，表示"醫藥調配物"。本發明提供包含至少一種治療性多肽的醫藥調配物。依據本發明的某些具體例，該治療性多肽為抗體或其抗原結合片段，其特異結合至人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(PCSK9)蛋白。更特別地，本發明包括含有下列的醫藥調配物：(i)特異結合至人類PCSK9的人類抗體；(ii)組胺酸緩衝劑；(iii)為非離子性界面活性劑之有機共溶劑；(iv)為碳水化合物之熱穩定劑；以及視情況選用(v)為鹽的減黏劑。本發明所包括的特定例示性組分與調配物詳述於下文。

特異結合至PCSK9之抗體

本發明之醫藥調配物可包含人類抗體或其抗原結合片段，其特異結合至人類PCSK9。如本文所用，術語"PCSK9"表示屬於分泌型枯草溶菌素家族的蛋白酶K次家族的人類前蛋白轉化酶。證據暗示，PCSK9藉由結合至低密度脂蛋白粒子受體並促進其分解而增加血漿LDL濃度。例示性人類PCSK9胺基酸序列描述於SEQ ID NO：9中。針對人類PCSK9的抗體描述於專利申請公開案US 2010/0166768、US 2011/0065902與WO 2010/077854中。

術語"抗體"，如本文所用，通常欲意指免疫球蛋白分子，其包含4個多肽鏈，藉由雙硫鍵交互連結的2個重(H)鏈以及2個輕(L)鏈，及其多聚體(例如IgM)；然而，僅由單獨重鏈所構成的免疫球蛋白分子(亦即缺乏輕鏈)亦含括在術語"抗體"的定義內。各個重鏈包含1個重鏈可變區(此處縮寫為HCVR或V_H)以及1個重鏈恆定區。重鏈恆定區包含3個結構域，CH1、CH2以及CH3。各個輕鏈包含1個輕鏈可變區(此處縮寫為LCVR或V_L)以及1個輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含1個結構域(CL1)。V_H與V_L區可進一步分為具有超變異性的區域(命名為互補決定區(complementarity determining regions,CDR))，散佈有較為守恆的區域(命名為骨架區(FR))。各個V_H與V_L由3個CDR以及4個FR所構成，以下列順序從胺基端往羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

除非另有特別指明，否則術語"抗體"，如本文所用，應理解為含括完整抗體分子以及其抗原結合片段。術語抗體之"抗原結合部分"或"抗原結合片段"(或單單"抗體部分"或"抗體片段")，如本文所用，意指抗體的一或多個片段，其保有抗體特異結合至人類PCSK9或其抗原決定基的能力。

術語"經分離抗體"，如本文所用，欲意指基本上不含具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如，一個特異結合人類PCSK9的經分離抗體基本上不含特異結合人類PCSK9以外之抗原的抗體)。

術語"特異結合"或類似術語，意指抗體或其抗原結合片段與抗原形成在生理條件下相對穩定的複合物。特異結合的特徵在於解離常數為至少約1x10^-6 M或更高。用於測定兩個分子是否特異結合的方法為技藝中已知的，且包括例如平衡透析、表面電漿共振及類似方法。但是，特異結合人類PCSK9的經分離抗體與其他抗原(諸如其他物種的PCSK9分子(同源物))具有交叉反應性。在本發明的上下文中，結合至人類PCSK9以及一或多種其他抗原的多特異性(例如雙特異性)抗體被視為"特異結合"人類PCSK9。此外，經分離抗體可能基本上不含其他細胞物質或化學品。

可含括在本發明醫藥調配物中的例示性抗-人類PCSK9抗體述於專利申請公開案US 2010/0166768、US 2011/0065902及WO 2010/077854中，其揭示內容以其全文併入本文做為參考文獻。

依據本發明的某些具體例，該抗-人類PCSK9 mAb-316P抗體為人類IgG1，其包含重鏈可變區(為IGHV3-23亞型)以及輕鏈可變區(為IGKV4-1亞型)(參見Barbie and Lefranc,The Human Immunoglobulin Kappa Variable(IGKV)Genes and Joining(IGKJ)Segments,Exp.Clin.Immunogenet.1998；15：171-183，與Scaviner,D.et al.,Protein Displays of the Human Immunoglobulin Heavy,Kappa and Lambda Variable and Joining Regions,Exp.Clin.Immunogenet.,1999；16：234-240)。

在一些具體例中，該抗-人類PCSK9 mAb-316P包含至少一個胺基酸置換，其使得在抗體的暴露表面處相對於生殖細胞系IGKV4-1序列有一個電荷改變。本文所示之生殖細胞系IGKV4-1序列及胺基酸位置分派號碼與國際免疫遺傳學(IMGT)資訊系統一致，如Lefranc,M.-P.,et al.,IMGT®,the international ImMunoGeneTics information system®,Nucl.Acids Res,37,D1006-D1012(2009)中所述。在一些具體例中，暴露表面包含一個互補決定區(CDR)。在一些具體例中，胺基酸置換(等)是選自由下列所組成之群：在IGKV4-1的CDR1中(例如在位置32處)鹼性胺基酸置換成無電荷極性胺基酸。在抗體電荷分布中的獨特交換排列，尤其在環境交界處(諸如，例如CDR中)，對於維持或增進抗體在溶液中的穩定性來說預期會產生無法預測的條件。

在一些具體例中，該抗-人類PCSK9 mAb-316P抗體包含至少一個胺基酸置換，其在抗體之可變區的骨架區內相對於生殖細胞系IGHV3-23序列或生殖細胞系IGKV4-1序列產生一個電荷改變。在一些具體例中，胺基酸置換(等)是選自由下列所組成之群：(a)在IGHV3-23之骨架區3(FR3)中(例如在位置77處)疏水性胺基酸置換成極性胺基酸，及(b)在IGKV4-1之骨架區2(FR2)中(例如位置51處)極性胺基酸置換成鹼性胺基酸。肽鏈摺疊能力改變(特別是在骨架區中)會影響CDR與溶劑的交界處，對於維持或增進抗體在溶液中的穩定性來說預期會產生無法預測的條件。

依據本發明的某些具體例，該抗-人類PCSK9抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：2之重鏈互補決定區(HCDR)1、SEQ ID NO：3之HCDR2，及SEQ ID NO：4之HCDR3。在某些具體例中，該抗-人類PCSK9抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：1之HCVD。

依據本發明的某些具體例，該抗-人類PCSK9或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：6之輕(κ)鏈互補決定區(LCDR)1、SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3。在某些具體例中，該抗-人類PCSK9抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：5之LCVD。

本文實施例中所用非限制性例示性抗體意指"mAb-316P"。此抗體在US 7,608,693中亦意指為H4H098P。mAb-316P(H4H098P)包含HCVR/LCVR胺基酸序列對，其具有SEQ ID NO：1/5，及由SEQ ID NO：2-3-4/SEQ ID NO：6-7-8所表示的HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3結構域。

本發明醫藥調配物中所包含的抗體或其抗原結合片段之量可隨著調配物所要的特定特性以及特定環境與要使用調配物之目的而改變。在某些具體例中，該醫藥調配物為液體調配物，其可含有50±7.5 mg/mL至250±37.5 mg/mL抗體、60±9 mg/mL至240±36 mg/mL抗體、70±10.5 mg/mL至230±34.5 mg/mL抗體、80±12 mg/mL至220±33 mg/mL抗體、90±13.5 mg/mL至210±31.5 mg/mL抗體、100±15 mg/mL至200±30 mg/mL抗體、110±16.5 mg/mL至190±28.5 mg/mL抗體、120±18 mg/mL至180±27 mg/mL抗體、130±19.5 mg/mL至170±25.5 mg/mL抗體、140±21 mg/mL至160±24 mg/mL抗體、150±22.5 mg/mL抗體，或175±26.25 mg/ml。例如，本發明調配物可含有約50 mg/mL、約60 mg/mL、約65 mg/mL、約70 mg/mL、約75 mg/mL、約80 mg/mL、約85 mg/mL、約90 mg/mL、約95 mg/mL、約100 mg/mL、約105 mg/mL、約110 mg/mL、約115 mg/mL、約120 mg/mL、約125 mg/mL、約130 mg/mL、約135 mg/mL、約140 mg/mL、約145 mg/mL、約150 mg/mL、約155 mg/mL、約160 mg/mL、約165 mg/mL、約170 mg/mL、約175 mg/mL、約180 mg/mL、約185 mg/mL、約190 mg/mL、約195 mg/mL、約200 mg/mL、約205 mg/mL、約210 mg/mL、約215 mg/mL、約220 mg/mL、約225 mg/mL、約230 mg/mL、約235 mg/mL、約240 mg/mL、約245 mg/mL，或約250 mg/mL抗體或其抗原結合片段，其特異結合至人類PCSK9。

賦形劑與pH

本發明醫藥調配物包含一或多種賦形劑。術語"賦形劑"，如本文所用，意指任一種被添加至調配物以提供所要硬度、黏度或穩定效用的非治療性藥劑。

在某些具體例中，本發明醫藥調配物包含至少一種在粗略操作或震盪的條件下(諸如渦捲)呈穩定人類PCSK9抗體之類型與量的有機共溶劑。在一些具體例中，"穩定"表示在粗略操作程序中預防抗體總數(以莫耳濃度為基準)之超過3%聚集抗體形成。在一些具體例中，粗略操作為渦捲含有抗體及有機共溶劑的溶液約60分鐘或約120分鐘。

在某些具體例中，該共溶劑為非離子性界面活性劑，諸如烷基聚(氧化乙烯)。可包括在本發明調配物中的特定非離子性界面活性劑包括，例如聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81及聚山梨醇酯85；帕洛沙姆，諸如帕洛沙姆181、帕洛沙姆188、帕洛沙姆407或聚乙二醇(PEG)。聚山梨醇酯20亦已知為TWEEN 20、山梨醇單月桂酸酯及聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯。帕洛沙姆亦已知為普朗尼克(PLURONIC)F68。

本發明醫藥調配物中所含之非離子性界面活性劑之量可隨著調配物所需的特定特性，以及特定環境與要使用調配物之目的而改變。在某些具體例中，調配物可含有0.01%±0.0015%至0.2%±0.03%界面活性劑。例如，本發明調配物可含有約0.0085%、約0.01%、約0.02%、約0.03%、約0.04%、約0.05%、約0.06%、約0.07%、約0.08%、約0.09%、約0.1%、約0.11%、約0.12%、約0.13%、約0.14%、約0.15%、約0.16%、約 0.17%、約0.18%、約0.19%、約0.20%、約0.21%、約0.22%，或約0.23%聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188。

本發明之醫藥調配物亦可包含一或多種呈在熱壓力條件下穩定人類PCSK9抗體之類型及量的穩定劑。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及熱穩定劑之溶液在約45℃下持續至高約28天時，超過約91%的抗體維持其天然構形。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及熱穩定劑之溶液在約45℃下持續至高約28天時，其中少於約6%的抗體聚集。如本文所用，"天然"表示依據尺寸排除的主抗體要形式，其通常為抗體的完整單體。

在某些具體例中，熱穩定劑為糖或糖醇，選自於蔗糖、海藻糖及甘露醇或其任何組合，調配物中所含量可隨著特定環境及要使用調配物之目的而改變。在某些具體例中，調配物可含有約3%至約14%糖或糖醇、約4%至約13%糖或糖醇、約5%至約12%糖或糖醇、約6%至約11%糖或糖醇、約7%至約10%糖或糖醇、約8%至約9%糖或糖醇、約4%至約6%糖或糖醇、約5%至約7%糖或糖醇、約9%至約11%糖或糖醇，或約11%至約13%糖或糖醇。例如，本發明醫藥調配物可包含4%±0.6%、5%±0.75%、6%±0.9%、7%±1.05%、8%±1.2%、9%±1.35%、10%±1.5%、11%±1.65%、12%±1.8%、13%±1.95%，或約14%±2.1%糖或糖醇(例如，蔗糖、海藻糖或甘露醇)。

本發明之醫藥調配物亦可包含緩衝劑或緩衝系統，其作為維持穩定pH並有助於穩定人類PCSK9抗體。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在45℃下維持多達約28天時，少於4.5%±0.5%或少於6.0±0.5%抗體聚集。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在37℃下維持多達約28天時，少於3%±0.5%或少於2.6±0.5%抗體聚集。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在45℃下維持多達約28天時，至少91%±0.5%或至少92±0.5%抗體呈其天然構形，如同藉由尺寸排除層析所測定。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在37℃下維持多達約28天時，至少94%±0.5%或至少95±0.5%抗體呈其天然構形，如同藉由尺寸排除層析所測定。"天然"或"天然構形"表示未聚集或分解的抗體部分。這通常是藉由測量抗體實體的相對大小之分析(諸如尺寸排除層析分析)來決定。非聚集及非分解抗體在與天然抗體相同的溶離份洗提出來，且通常是主要溶離份。聚集抗體在表示尺寸大於天然抗體的溶離份洗提出來。分解抗體在表示尺寸小於天然抗體的溶離份洗提出來。

在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在45℃下維持多達約28天時，至少38%±0.5%或至少29%±0.5%抗體呈其主要電荷形式，如同藉由陽離子交換層析所測定。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在37℃下維持多達約28天時，至少46%±0.5%或至少39±0.5%抗體呈其主要電荷形式，如同藉由陽離子交換層析所測定。"主要電荷"或"主要電荷形式"表示抗體在主峰中從離子交換樹脂洗提出來的溶離份，其通常一側為更"鹼性"峰而另一側為更"酸性"峰。

本發明醫藥調配物可具有約5.2至約6.4的pH。例如，本發明調配物具有約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4或約6.5的pH。在一些具體例中，pH為6.0±0.4、6.0±0.3、6.0±0.2、6.0±0.1、約6.0或6.0。

在一些具體例中，該緩衝劑或緩衝系統包含至少一種具有完全含括pH 5.5-7.4或pH 5.5-7.4之一部分的緩衝範圍。在一個具體例中，緩衝劑具有約6.0±0.5的pKa。在某些具體例中，緩衝劑具有組胺酸緩衝劑。在某些具體例中，組胺酸以5 mM±0.75 mM至15 mM±2.25 mM、6 mM±0.9 mM至14 mM±2.1 mM、7 mM±1.05 mM至13 mM±1.95 mM、8 mM±1.2 mM至12 mM±1.8 mM、9 mM±1.35 mM至11 mM±1.65 mM、10 mM±1.5 mM，或約10 mM的濃度存在。在某些具體例中，緩衝系統包含10 mM±1.5 mM、pH為6.0±0.3的組胺酸。

本發明醫藥調配物亦可包含一或多種賦形劑，其用於維持含有高濃度抗-PCSK9抗體藥物(例如，一般>150 mg/ml抗體)之調配物的低黏度或降低該調配物的黏度。在一些具體例中，該調配物含有量足以將液體調配物黏度維持在少於20±3厘泊、少於15±2.25厘泊，或少於11±1.65厘泊的精胺酸。在一些具體例中，調配物包含量足以將黏度維持在或低於10.6±1.59厘泊的精胺酸。在某些具體例中，本發明醫藥調配物含有精胺酸，較佳為L-精胺酸鹽酸鹽，濃度為10 mM±1.5 mM至90 mM±13.5 mM、20 mM±3 mM至80 mM±12 mM、30 mM±4.5 mM至70 mM±10.5、40 mM±6 mM至60±9 mM或50 mM±7.5 mM。

例示性調配物

依據本發明的一個態樣，醫藥調配物為低黏度，大體上生理等張的液體調配物，其包含：(i)特異結合至人類PCSK9(例如mAb-316P)的人類抗體，濃度為50 mg/mL±7.5 mg/mL、100 mg/ml±15 mgmL、150 mg/mL±22.5 mg/mL，或175 mg/mL±26.25 mg/mL；(ii)緩衝系統，在pH 6.0±0.3下提供充分緩衝；(iii)糖，尤其做為熱穩定劑；(iv)有機共溶劑，其保護結構完整性，若抗體；及(v)胺基酸之鹽類，其作為將黏度維持可操控用於以皮下投藥所習知之體積注射。

依據一個具體例，該醫藥組成物包含：(i)人類IgG1抗體，特異結合至人類PCSK9，且其包含經取代IGHV3-23型重鏈可變區及經取代IGLV4-1型輕鏈可變區(例如，mAb-316P)，濃度為50±7.5 mg/mL至約175 ±26.25 mg/mL；(ii)包含組胺酸之緩衝系統，其在約pH 6.0±0.3有效地緩衝；(iii)蔗糖；(iv)非離子性清潔劑，諸如聚山梨醇酯20；及視情況選用(v)精胺酸鹽類。

依據一個具體例，該調配物包含：(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK，且其包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2及SEQ ID NO：8之LCDR3，濃度為175 mg/ml±26.25 mg/mL；(ii)10 mM±1.5 mM的組胺酸，其在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)5% w/v±0.75% w/v的蔗糖；(iv)0.01% w/v±0.0015% w/v的聚山梨醇酯20；及(v)50 mM±7.5 mM的精胺酸鹽酸鹽。

依據一個具體例，該醫藥調配物包含：(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2及SEQ ID NO：8之LCDR3，濃度為約150 mg/ml±22.5 mg/mL；(ii)10 mM±1.5 mM之組胺酸，其在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)10% w/v±1.5% w/v的蔗糖；及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v或0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，該醫藥組成物包含：(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3，濃度約100 mg/mL±15 mg/mL；(ii)約20 mM±3 mM之組胺酸，在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)12% w/v±1.8% w/v蔗糖；以及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v或0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，該醫藥組成物包含：(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2，及SEQ ID NO：8之LCDR3，濃度約50 mg/mL±7.5 mg/mL；(ii)約10 mM±1.5 mM組胺酸，在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)6% w/v±0.9% w/v蔗糖；以及(iv)0.1% w/v±0.015% w/v或0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，該醫藥組成物包含：(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：1之重鏈可變域與SEQ ID NO：5之輕鏈可變域，濃度約175 mg/ml±26.25 mg/mL；(ii)10 mM±1.5 mM之組胺酸，其在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)5% w/v±0.75% w/v蔗糖；以及(iv)0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20；以及(v)50 mM±7.5 mM的L-精胺酸鹽酸鹽。

依據一個具體例，該醫藥調配物包含：(i)人類IgG1 抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：1之重鏈可變域及SEQ ID NO：5之輕鏈可變域，濃度為約150 mg/ml±22.5 mg/mL；(ii)10 mM±1.5 mM之組胺酸，其在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)10% w/v±1.5% w/v蔗糖；及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v或0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，該醫藥調配物包含(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：1之重鏈可變域，及SEQ ID NO：5之輕鏈可變域，濃度為約100 mg/mL±15 mg/mL；(ii)約20 mM±3 mM之組胺酸，其在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)12% w/v±1.8% w/v蔗糖；及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v或0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，該醫藥調配物包含(i)人類IgG1抗體，其特異結合至人類PCSK9，且其包含SEQ ID NO：1之重鏈可變域，及SEQ ID NO：5之輕鏈可變域，濃度為約50 mg/mL±7.5 mg/mL；(ii)10 mM±1.5 mM之組胺酸，其在pH 6.0±0.3下進行緩衝；(iii)6% w/v±0.9% w/v蔗糖；及(iv)0.1% w/v±0.015% w/v或0.01% w/v±0.0015% w/v聚山梨醇酯20。

本發明所含括的醫藥調配物之其他非限制性實例在本文他處說明，包括工作例及如下所示。

醫藥調配物的穩定性與黏度

本發明醫藥調配物通常表現出高度穩定性。術語" 穩定"，如本文所用，在提及醫藥調配物時，表示醫藥調配物中的抗體在儲存於特定條件下之後保有可接受程度之化學結構或生物功能。調配物可以是穩定的，儘管其中所含抗體在儲存特定時間總數之後並未100%維持其化學結構或生物功能。在某些情況下，在儲存特定時間總數之後維持約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%的抗體結構或功能被認為是"穩定"。

穩定性尤其可於特定溫度下儲存特定時間總數之後藉由測定調配物中維持之天然抗體百分比來決定。天然抗體的百分比尤其可以藉由尺寸排除層析(例如尺寸排除高效液相層析[SE-HPLC])來測定諸如天然平均非聚集者及非分解者。"可接受程度的穩定性"，當這個片語用於本文中時，表示至少90%的天然形式抗體可於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到。在某些具體例中，至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的天然形式抗體可於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到。在其後測量穩定性之特定時間總數可為至少14天、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。當評估穩定性時，醫藥調配物儲存的特定溫度可為下列的任一溫度：約-80℃至約45℃，例如儲存於約 -80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃或約45℃下。例如，若在儲存於5℃下6個月之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約95%、96%、97%或98%天然抗體，則醫藥調配物可被視為是穩定的。若在儲存於25℃下6個月之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約94%、95%、96%、97%或98%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於45℃下28天之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於-20℃下3個月之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約96%、97%或98%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於-30℃下3個月之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約96%、97%或98%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於-80℃下3個月之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約96%、97%或98%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。

穩定性尤其可藉由測定在特定溫度下儲存特定時間總數之後，調配物中抗體形成聚集的百分比，其中穩定性與形成聚集的百分比呈反比。聚集抗體百分比尤其可藉由尺寸排除層析(例如，尺寸排除高效液相層析[SE-HPLC])來測定。"可接受程度的穩定性"，當這個片語用於本文中時，表示至多6%的抗體於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到為聚集形式。在某些具體例中，可接受程度的穩定性表示至多約6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到為聚集形式。在其後測得穩定性之特定時間總數可為至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。當評估穩定性時，醫藥調配物儲存的特定溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃或約45℃下。例如，若在儲存於5℃下6個月之後，偵測到少於約3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈聚集形式，則醫藥調配物可被視為是穩定的。若在儲存於25℃下6個月之後，偵測到少於約4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈聚集形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於45℃下28天之後，偵測到少於約6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈聚集形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於-20℃、-30℃或-80℃下3個月之後，偵測到少於約3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈聚集形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。

穩定性尤其可藉由測定抗體在離子交換("酸性形式")期間移至比抗體主要溶離份("主要電荷部分)更為酸性溶離份的百分比，其中穩定性與呈酸性形式之抗體溶離份呈反比。儘管不希望受到理論所囿限，抗體之去醯胺化可使得抗體變為更加帶負電荷並因而相對於非去醯胺化抗體更為酸性(參見，例如Robinson,N.,Protein Deamidation,PNAS,April 16,2002,99(8)：5283-5288)。"酸化"抗體百分比尤其可藉由離子交換層析(例如，陽離子交換高效液相層析[CEX-HPLC])測定。"可接受程度的穩定性"，當這個片語用於本文中時，表示於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中至多49%抗體呈更為酸性的形式。在某些具體例中，可接受程度的穩定性表示於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中至多約49%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈酸性形式。其後測量穩定性之特定時間總數可為至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。當評估穩定性時，儲存醫藥調配物的溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4-8℃、約5℃、約25℃或約45℃下。例如，若在儲存於-80℃、-30℃或-20℃下3個月之後，少於約30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、 18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則醫藥調配物可被視為是穩定的。若在儲存於5℃下6個月之後，少於約32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於25℃下6個月之後，少於約43%、42%、41%、40%、39%、38%、37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於45℃下28天之後，偵測到少於約49%、48%、47%、46%、45%、44%、43%、42%、41%、40%、39%、38%、37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。

其他方法可用於評估本發明調配物的穩定性，例如示差掃描測熱法(DSC)以測定熱穩定性、控制震盪以測定機械穩定性，以及在約350 nm或約405 nm下之吸光度以測定溶液混濁度。例如，若在儲存於約5℃至約25℃下6個月或更久之後，調配物的OD₄₀₅相對於調配物在時間0時的OD₄₀₅變化少於約0.05(例如0.04、0.03、0.02、0.01或更少)，則醫藥調配物可被視為是穩定的。

測量抗體之生物活性或對其目標之結合親和力亦可用於評估穩定性。例如，若在儲存於約5℃、25℃、45℃等溫度下特定時間總數(例如1至12個月)之後，調配物中所含抗-PCSK9抗體以儲存前該抗體結合親和力的至少90%、95%或更高結合至PCSK9，本發明調配物可被視為是穩定的。結合親和力可藉由，例如ELISA或電漿共振來測定。生物活性可藉由PCSK9活性分析(諸如，例如使表現PCSK9的細胞與包含抗PCSK9抗體之調配物接觸)來測定。抗體結合至此一細胞可直接藉由諸如，例如經由FACS分析來測定。或者，PCSK9系統的下游活性可在抗體存在時測量，並且與抗體不存在時PCSK9系統之活性相比較。在一些具體例中，PCSK9對細胞來說是內生性的。在其他具體例中，PCSK9在細胞中異位地表現。

用於評估調配物中的抗體穩定性的其他方法在下面所示實例中證實。

在某些具體例中，本發明液體醫藥調配物可表現出低度至中度黏度。"黏度"，如本文中所用，可以是"動黏度"或"絕對黏度"。"動黏度"是液體受重力影響下的抗流動性的測量值。若兩個體積相同的流體置放在相同的毛細管黏度計中並容許依據重力而流動時，黏性流體要比較不黏的流體花更久的時間流過整個毛細管。例如，若一種流體花200秒完成其流動，而另一種流體花400秒，則第二種流體的黏度就動黏度量度來說比第一者黏兩倍。"絕對黏度"有時稱為動力或簡單黏度，其為動黏度與流體密度的乘積(絕對黏度=動黏度×密度)。動黏度的容積為L²/T，其中L為長度，而T為時間。通常，動黏度表示為厘司(cSt)。動黏度的SI單位為mm²/s，其為1 cSt。絕對黏度表示為厘泊(cP)單位。絕對黏度的SI單位為毫帕-秒(mPa-s)，其中1 cP=1 mPa-s。

如本文所用，在提及本發明液體調配物時，低黏度表現出少於約15厘泊(cP)的絕對黏度。例如，若使用標準黏度測量技術來測量時，調配物的絕對黏度為約15 cP、約14 cP、約13 cP、約12 cP、約11 cP、約10 cP、約9 cP、約8 cP或更低，則本發明液體調配物被視為具有"低黏度"。如本文所用，在提及本發明液體調配物時，中等黏度表現出介於約35 cP與約15 cP的絕對黏度。例如，若使用標準黏度測量技術來測量時，調配物的絕對黏度為約34 cP、約33 cP、約32 cP、約31 cP、約30 cP、約29 cP、約28 cP、約27 cP、約26 cP、約25 cP、約24 cP、約23 cP、約22 cP、約21 cP、約20 cP、約19 cP、18 cP、約17 cP、約16 cP，或約15.1 cP，則本發明液體調配物被視為具有"中等黏度"。

如以下實施例中所述，發明人出乎意料地發現，包含高濃度抗-人類PCSK9抗體(例如，約100 mg/ml至高到至少200 mg/mL)之中等黏度液體調配物可藉由將該抗體與精胺酸(約25 mM至約100 mM)一起調配而獲得。另外，進一步發現調配物的黏度可以藉由將蔗糖含量調整至低於約10%而降低更大幅度。

容器及投藥方法

本發明醫藥調配物可包含在任一種適於儲存藥品及其他治療性組成物的容器中。例如，醫藥調配物可包含在密封與滅菌之具有預定體積的塑膠或玻璃容器中，例如小瓶、安瓿、注射器、藥匣或瓶中。不同類型的小瓶可用於容納本發明調配物，包括，例如透明與不透明(例如琥珀色)玻璃或塑膠小瓶。同樣地，任何類型的注射器可用於容納或投與本發明醫藥調配物。

本發明醫藥調配物可包含在"標準鎢"注射器或"低鎢"注射器中。如習於本技藝者所知，製造玻璃注射器的製程通常涉及使用高鎢桿(其作用為刺穿玻璃)，從而由其產生一個液體可被抽出並排出注射器的孔洞。此製程使微量鎢沉積在注射器的內表面。之後的洗滌與其他處理步驟可用於降低鎢在注射器中的量。如本文所用，術語"標準鎢"表示注射器含有超過或等於500 ppb的鎢。術語"低鎢"表示注射器含有少於500 ppb的鎢。例如，依據本發明，低鎢注射器可含有少於約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10或更低ppb的鎢。

注射器中所使用的橡膠塞蓋，以及用於密封小瓶開口的橡膠瓶蓋可經塗層以防止注射器或小瓶的醫藥內容物汙染，或維持其穩定性。因此，依據某些具體例，本發明醫藥調配物可包含在具有經塗覆塞蓋之注射器內，或在以經塗覆橡膠瓶蓋密封之小瓶內。例如，塞蓋或瓶蓋可塗覆有氟碳化物膜。適用於與含有本發明醫藥調配物之小瓶及注射器一起使用的經塗覆塞蓋或瓶蓋的實例述於，例如美國專利第4,997,423號、第5,908,686號、第6,286,699號、第6,645,635號及第7,226,554號，其內容以其整體併入本文做為參考文獻。可用於本發明上下文內的特定例示性經塗覆橡膠瓶蓋與塞蓋可在商業上以商標名"FluroTec®"由West Pharmaceutical Services,Inc.(Lionville,PA)取得。FluroTec®是一種用於使藥品盡可能不附著於橡膠表面或防止藥品附著於橡膠表面的氟碳化物塗層。

依據本發明的某些具體例，醫藥調配物可包含於具有經氟碳化物塗覆之塞蓋之低鎢注射器內。

醫藥調配物可以藉由非經腸途徑投藥給患者，諸如注射(例如皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內等)，或經皮、黏膜、鼻、肺或口服投藥。許多可重複使用筆型或自動注射遞送裝置可用於皮下遞送本發明之醫藥調配物。實例包括，但不限於AUTOPEN^TM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONIC^TM pen(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25^TM pen、HUMALOG^TM pen、HUMALIN 70/30^TM pen(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPEN^TM I、II與III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIOR^TM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BD^TM pen(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPEN^TM、OPTIPEN PRO^TM、OPTIPEN STARLET^TM及OPTICLIK^TM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)。應用在皮下遞送本發明醫藥調配物之拋棄式筆型或自動注射遞送裝置的實例包括，但不限於SOLOSTAR^TM pen(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)以及KWIKPEN^TM(Eli Lilly)、SURECLICK^TM Autoinjector(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLET^TM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)與HUMIRA^TM Pen(Abbott Labs,Abbott Park,IL)。

在本文中亦預期使用微輸注器遞送本發明醫藥調配物。如本文所用，術語"微輸注器"表示被設計成在一段長時間內(例如約10、15、20、25、30或更多分鐘)緩慢地投與大量(例如多達約2.5 mL或更多)治療調配物的皮下遞送裝置。參見，例如U.S.6,629,949、US 6,659,982以及Meehan et al.,J.Controlled Release 46：107-116(1996)。微輸注器尤其可用於遞送大劑量的治療性蛋白(具有高濃度)(例如，約100、125、150、175、200或更多mg/mL)或黏性溶液。

在一個具體例中，含有約175 mg/mL±26.25 mg/mL抗-PCSK9抗體的液體醫藥調配物以約1.14 mL±0.17 ml的體積在預充填注射器中被皮下投與。在一個具體例中，該注射器為1 mL長玻璃注射器，填充有27規薄壁針頭、經氟碳化物塗覆之橡膠塞蓋與橡膠針套。在一個具體例中，該注射器為OMPI 1 mL長玻璃注射器，填充有27規薄壁針頭、FM27橡膠針套，以及經FLUROTEC®塗覆之4023/50橡膠塞蓋。

在一個具體例中，含有約150 mg/mL±22.5 mg/mL抗-PCSK9抗體的液體醫藥調配物以約1 mL±0.15 ml的體積在預充填注射器中被皮下投與。在一個具體例中，該注射器為1 mL長玻璃注射器，填充有27規薄壁針頭、經氟碳化物塗覆之橡膠塞蓋與橡膠針套。在一個具體例中，該注射器為OMPI 1 mL長玻璃注射器，填充有27規薄壁針頭、FM27橡膠針套，以及經FLUROTEC®塗覆之4023/50橡膠塞蓋。

醫藥調配物的治療用途

本發明之醫藥調配物尤其可用於治療、預防或改善與PCSK9活性有關的任何疾病或病症，包括由PCSK9所媒介的疾病或病症。可經由投與本發明醫藥調配物而治療或預防的例示性、非限制性疾病與病症包括各種血脂異常，諸如(例如)高膽固醇血症、家族性高膽固醇血症、高血脂症、家族性高血脂症、異常β-脂蛋白血症、家族性異常β-脂蛋白血症、高三酸甘油酯血症以及家族性高三酸甘油酯血症。

實例

提出下列實例俾以將如何製造與使用本發明方法和組成物之完整揭示內容以及發明說明提供給技藝中具有通常技術者，且不欲限制發明人就其發明所視為的範疇。已盡力確保所用數字的正確性(例如量、溫度等)，但可能產生某些實驗誤差與偏差。除非另有指明，否則份為以莫耳計的份，分子量為平均分子量，溫度為攝氏度，而壓力為大氣壓或近乎大氣壓。

初始調配物發展活性涉及篩選mAb-319P(本發明抗-PCSK9抗體)之液體與凍乾調配物中的有機共溶劑、熱穩定劑與緩衝劑，以鑑別與蛋白質相容且增強其穩定性，同時維持相近的生理滲透性與低黏度供靜脈內和皮下注射用的賦形劑。亦檢驗緩衝條件以測定最大蛋白質穩定性的最佳pH。

實例1：發展抗-PCSK1 MAB-316調配物

篩選各種緩衝劑、有機共溶劑與熱穩定劑以鑑別會增強PCSK9抗體之穩定性的賦形劑。亦檢驗緩衝條件以決定最大蛋白質穩定性的最佳pH。由此等研究所產生的結果用於發展穩定的液體調配物，以及穩定的凍乾調配物適於供臨床之用(靜脈內(IV)或皮下(SC)投藥)。關於凍乾藥品，發展可使用注射用無菌水(WFI)還原成濃度50 mg/mL(用於IV投與)或100 mg/mL(用於SC投與)的單一用途、雙重用途調配物。在還原成50 mg/mL之後，藥品可進一步稀釋於含有0.9%氯化鈉的IV袋中供IV遞送之用。關於液體調配物，mAb-316P被調配成175±27 mg/ml與150±23 mg/ml。在一個具體例中，175±27 mg/mL mAb-316P被調配於10±1.5 mM組胺酸(pH 6.0±0.3)、0.01%±0.0015%聚山梨醇酯20、5%±0.75%蔗糖中。在一個具體例中，150±23 mg/mL mAb-316P被調配於10±1.5 mM組胺酸(pH 6.0±0.3)、0.2%±0.03%或0.01%±0.0015%聚山梨醇酯20、10%±1.5%蔗糖中。

實例2：抗-PCSK1 MAB-316P緩衝劑與pH

在液體調配物中檢驗pH與緩衝劑類型對於PCSK9抗體之穩定性的影響。在45℃下將2 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P培育於10 mM之乙酸鹽(pH 5.0-5.5)、檸檬酸鹽(pH 5.5-6.0)、琥珀酸鹽(pH 6.0)、組胺酸(pH 6.0)、磷酸鹽(pH 6.0-7.5)或Tris(pH 8.0)緩衝劑中，以評估緩衝劑與pH對於蛋白質之熱穩定性的影響(表1)。關於這個實驗，液體調配物各自被維持在0.35 mL於2 mL容量第1型硼矽酸玻璃小瓶，其具有經FluroTec®塗覆之4432/50丁基橡膠檔塞。還原的mAb-316P總量是使用逆相層析來測定。mAb-316P之天然形式相對於聚集形式的百分比是使用尺寸排除層析來測定。mAb-316P之酸性形式與鹼性形式的百分比是使用陽離子交換層析來測定。當抗-PCSK9 mAb-316P以pH 6.0調配於10 mM組胺酸緩衝劑中時，觀察最大蛋白質穩定性，如同藉由尺寸排除層析(SE)以及陽離子交換層析(CEX)所測得者。

接著，藉由在45℃下將10 mg/mL的mAb-316P以pH 5.5及pH 6.5培育於組胺酸緩衝劑中來測定mAb-316P的最佳pH。當mAb-316P以pH 6.0調配於緩衝組胺酸中時，觀察最大蛋白質穩定性，如同藉由SE以及CEX所測得者(表2)。這些分析亦揭示，主要蛋白質分解途徑為形成聚集、分解產物及電荷變體。根據這些結果，選定在pH 6.0下的10 mM組胺酸緩衝劑來發展液體與凍乾mAb-316P調配物。

調配物發展研究結果指出，在鹼性條件下(pH6.5)，溶液中的抗-PCSK9 mAb-316P可能經歷去醯胺化反應。相反地，在pH5.5下，觀察到mAb-316P的分子量變體形成率增加。依據這些數據，用於mAb-316P調配物的緩衝pH維持在pH 5.7與pH 6.3。在這個pH範圍內促進mAb-316P穩定性是類似的。

實例3：篩選對抗震盪壓力之保護劑

單獨測試不同共溶劑將含有mAb-316P之混合物中因為震盪壓力而形成顆粒降至最低的能力。震盪藥物的混濁度分析證實，當含有mAb-316P(0.35 mL的25 mg/mL mAb-316P、10 mM組胺酸、pH 6.0±0.2於2 mL容量具有FluroTec®塗覆之4432/50丁基橡膠瓶蓋之第1型硼矽酸玻璃小瓶)渦卷120分鐘，會增加在405 mm下的光學密度(OD)(表3)。具有任何增加共溶劑的調配物似乎預防震盪引起的混濁度增加。但是，20% PEG 300、10% PEG 300與20%丙二醇能明顯降低mAb-316P的熱穩定性，如同藉由SE所測定(表4，與上面渦卷研究中相同的mAb-316P濃度、緩衝劑與容器條件)。具有聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、普朗尼克F68與PEG 3350的調配物對於mAb-316P的熱穩定性不具顯著影響，如同藉由SE與CEX所測定，使這些共溶劑適用於調配抗-PCSK9 mAb-316P。選定聚山梨醇酯20作為發展mAb-316P之凍乾和液體調配物的有機共溶劑，因為證實它在mAb-316P的震盪與熱研究中有助於良好的穩定性。

實例4：篩選對抗熱壓力的保護劑

單獨測試不同賦形劑以將mAb-316P之熱穩定性提高至最佳，賦形劑是選自於其不同含有糖、胺基酸與無機鹽的目錄。所檢驗的一些熱穩定劑的歸納呈現於表5中。關於這些實驗，"熱穩定劑"賦形劑包含在有10 mM組胺酸中之20 mg/mL mAb-316P溶液中(0.35 mL於2 mL容量具有塗覆FluroTec®之4432/50丁基橡膠瓶蓋之第1型硼矽酸玻璃小瓶)。含有蔗糖、山梨醇、甘露醇與海藻糖的調配物具有最低量的mAb-316P分解，如藉由SE分析所測得。但是，那些含有山梨醇的調配物顯示相較於含有蔗糖、海藻糖與甘露糖之調配物對於混濁度有令人驚訝的增高。而蔗糖、海藻糖與甘露醇觀察到對於抗-PCSK9 mAb-316P的電荷變體形成沒有影響，觀察到山梨醇在多次冷凍-解凍循環期間使蛋白質不穩定。因此，當與蔗糖或海藻糖一起調配時，mAb-316P具有類似的穩定性。

實例5：凍乾調配物

發展凍乾調配物以增加抗-PCSK9 mAb-316P的穩定性，特別是關於電荷變體，以及增加mAb-316P的最大可遞送濃度。將各種冷凍保護劑與0.7 mL的50 mg/mL mAb-316P、10 mM組胺酸(於2 mL容量具有塗覆FluroTec®之4432/50丁基橡膠瓶蓋之第1型硼矽酸玻璃小瓶中)混合、凍乾，並當於50℃下培育時檢驗其穩定凍乾mAb-316P的能力。在分析之前，將凍乾餅還原成100 mg/mL mAb-316P。如SE與CEX所測定，具有最大穩定性的兩種凍乾調配物包含1)6%蔗糖或2)2%蔗糖加2%精胺酸。針對mAb-316P藥品調配物選定6%蔗糖。因此，藉由在最佳化、水性緩衝調配物(含有10 mM組胺酸、pH 6.0±0.1、0.1%(w/v)聚山梨醇酯20、6%(w/v)蔗糖與50 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P)中凍乾而製得抗-PCSK9 mAb-316P凍乾藥品。此凍乾調配物的儲存與壓力穩定性呈現於表7中。

根據測量調配物的Tg’(冷凍玻璃轉移溫度)來發展抗-pPCSK9 mAb-316P凍乾循環，其是使用低於環境調節示差掃描測熱法(mDSC)來測量。在第一次乾燥期間，產物溫度不可超過Tg’，其被測定為-27.9℃。

經凍乾mAb-316P是藉由將5.3 mL的50 mg/mL mAb-316P、10 mM組胺酸(pH 6.0)、0.1%聚山梨醇酯20、6%蔗糖填充到20 mL第1型玻璃小瓶並且依據下列步驟凍乾而製得：

1.裝料期間所需的儲存溫度：5-25℃

2.起始維持在：5℃下60分鐘

3.冷凍的斜率(時間)：0.5℃/分(100分)

4.維持在：-45℃下120分鐘

5.真空測定點：100 mTorr

6.加熱至第1次乾燥的斜率(時間)：0.5℃/分(40分)

7.第1次乾燥的儲存時間：-25℃

8.第1次乾燥的長度：78小時

9.加熱至第2次乾燥的斜率(時間)：0.2℃/分(300分)

10.第2次乾燥的儲存溫度：35℃

11.第2次乾燥的長度：6小時

12.冷卻的斜率(時間)：0.5℃/分(20分)

13.維持在：25℃下60分*

14.使用氮氣回填

15.在真空下封塞：80%大氣壓(608,000 mTorr)

當在第2次乾燥之後以及在封塞步驟之前需要大量儲存時，凍乾機的儲存溫度在2-8℃。使用上述最終循環製得的凍乾藥品具有良好的餅狀外觀、低含水量(0.3%)、還原時間少於4分鐘以及還原溶液不混濁。

當mAb-316P藥品(mAb-316P DP)在50℃下培育2個月或在5℃下儲存3個月時，凍乾餅的外觀不受影響。對於pH、外觀或還原mAb-316P藥品的混濁度沒有影響，且在mAb-316P的還原量方面沒有顯著差異。在50℃下培育2個月後，凍乾的mAb-316P藥品有超過1.1%分解(如藉由SE-HPLC所測定)而超過8.3%分解(如藉由CEX-HPLC測定)。當凍乾mAb-316P藥品儲存在5℃下3個月時，沒有觀察到有顯著分解。關於任何受壓力樣品，未觀察到有明顯喪失效力，如同使用抗-PCSK9生物分析所測得。

實例6：液體與還原的MAB-316P

取決於投藥途徑，有兩種還原(reconstitute)凍乾mAb-316P藥品的方法。關於IV投藥，使用5.0 mL無菌WFI還原mAb-316P藥品得到5.3 mL溶液，含有50 mg/mL mAb-316P、10 mM組胺酸、pH 6.0、0.1%(w/v)聚山梨醇酯20及6%(w/v)蔗糖。關於SC投藥，使用 2.3 mL無菌WFI還原mAb-316P藥品得到2.7 mL溶液，含有100 mg/mL REGN727、20 mM組胺酸、pH 6.0、0.2%(w/v)聚山梨醇酯20及12%(w/v)蔗糖。可抽出的體積為4.8 mL(IV)及2.0 mL(SC注射)，SC小瓶中含有剩餘的0.7 mL還原溶液。

或者，液體mAb-316P調配為液體調配物，而沒有凍乾的干擾步驟。液體mAb-316P調配物以150 mg/mL(±15%)或175 mg/mL(±15%)抗-PCSK9 mAb-316P於10±1.5 mM組胺酸(pH 6.0±0.3)、0.01%±0.0015%或0.2%±0.03%之聚山梨醇酯20、5%±0.75%或10%±1.5%蔗糖，以及在175 mg/mL調配物的情況下，50±7.5 mM的精胺酸中。

抗-PCSK9 mAb-316P被發現在經無菌過濾時是穩定的。Millipore Millipak過濾套組用於製造臨床供品，而相同組成物的過濾器用於研究(Millipore Millex Durapore)。相較於儲存在玻璃小瓶中，mAb-316P調配藥物(mAb-316P FDS)的穩定性當儲存在聚丙烯管、聚苯乙烯管、聚碳酸酯管或玻璃小瓶(含有不鏽鋼滾珠軸承)中未受到明顯影響(表8)。

實例7：預充填注射器中的液體調配物

以發展出高濃度mAb-316P液體調配物為目標來進行調配物發展研究，該高濃度mAb-316P液體調配物可用於預充填注射器(PFS)中供SC遞送之用。來自凍乾REGN727調配物的發展階段的結果證實，最佳緩衝劑、pH、有機共溶劑及熱穩定性分別為組胺酸、pH 6.0、聚山梨醇酯20以及蔗糖(上文)。這些相同的賦形劑被用來發展150 mg/mL與175 mg/mL mAb-316P藥品調配物。將精胺酸添加至175 mg/mL的mAb-316P藥品以降低調配物的黏度。在1 mL長玻璃Nuova Ompi預充填注射器(PFS)中檢驗150與175 mg/mL mAb-316P藥品的壓力穩定性並與對照組的150和175 mg/mL藥品(玻璃小瓶)穩定性相比較。於150或175 mg/mL mAb-316P藥品在45℃下培育之後，OMPI PFS和玻璃對照小瓶之間在物理或化學分解數量方面沒有觀察到顯著差異。這些數據表示，150和175 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P藥品調配物在使用於PFS之時相當穩定。

實例8：MAP-316P調配藥物的穩定性

進行穩定性研究以測定150和175 mg/mL mAb-316P調配物的儲存與壓力穩定性。混濁度與RP-HPLC分析用來評估mAb-316P的物理穩定性。物理穩定性定義為抗-PCSK9 mAb-316P在溶液中的可溶形式的還原率。蛋白質損失可能是因為蛋白質沉澱或表面吸收。在溶液中存在顆粒可藉由視覺審視或藉由光學密度(OD)在405 nm下測量(混濁度測量)來偵測。在混濁度測量分析中，OD增加表示混濁度因為形成顆粒而增加。如同藉由OD測量所測定的顆粒存在表示樣品無法維持穩定性。mAb-316P的還原率是藉由RP-HPLC來測量。在RP-HPLC分析中，抗-PCSK9 mAb-316P抗體從逆相管柱中以單峰被洗提出。各測試樣品的濃度是由洗提mAb-316P抗體峰面積相較於使用限定蛋白質數量之mAb-316P標準品產生之校正曲線而測定。

化學穩定性意指抗-PCSK9抗體(mAb-316P)在樣品中的化學結構完整性。大多數化學不穩定性可能是因為形成蛋白質的共價修飾形式(例如，共價聚集物、切割產品或電荷變體)，以及蛋白質的非共價修飾形式(例如非共價聚集物)。迄今，mAb-316P已被偵測到的唯一分解產物是一種分子量或電荷皆有所不同的形式。較高與較低分子量分解產物可藉由SE-HPLC從天然mAb-316P被分離。天然mAb-316P在尺寸排除層析法中的百分率是藉由天然峰面積相對於所有mAb-316P抗體峰之總面積的比例。

mAb-316P的電荷變體形式是使用陽離子交換層析從天然mAb-316P被解析。以比主峰還早的滯留時間從CEX-HPLC管柱洗提出的峰被標記為"酸性峰"，而那些以比主峰還晚的滯留時間從CEX-HPLC管柱洗提出的峰被標記為"鹼性峰"。在陽離子交換層析法中的分解mAb-316P百分比是藉由主峰、酸性峰與鹼性峰面積與所有mAb-316P峰的總面積相比對的相對百分比變化而測定。

在促進條件下藉由將抗體進行各種壓力測試來評估mAb-316P。此等測試表示調配藥物在藥品製造期間可能遭遇到的極端操作條件。mAb-316P調配藥物被充填至5 mL聚碳酸酯小瓶用於震盪、冷凍/解凍循環，以及冷凍儲存條件。mAb-316P調配藥物被充填至玻璃小瓶中以檢驗在高溫下的壓力穩定性。

實施例9：調配藥物(FDS)的儲存穩定性研究

當儲存在-20℃下12個月時，150 mg/mL mAb-316P調配藥物(FDS；0.5 mL於5 mL聚碳酸酯小瓶中；150 mg/mL mAb-316P抗體、10 mM組胺酸(pH 6.0)、0.2%聚山梨醇酯20及10%蔗糖)被發現到在物理與化學上是穩定的。藉由尺寸排除或離子交換層析，沒有發現mAb-316P有顯著損失，且沒有偵測到顯著化學分解。超過97%的還原mAb-316P為"天然"結構，如藉由尺寸排除所測定，而超過56%的還原mAb-316P為"主要電荷變形"，如藉由陽離子交換所測定。結果歸納於表9中。

當儲存在-20℃下3個月時，175 mg/mL mAb-316P調配藥物(FDS；0.75 mL於5 mL聚碳酸酯小瓶中；175 mg/mL mAb-316P抗體、10 mM組胺酸(pH 6.0)、0.01%聚山梨醇酯20、5%蔗糖及50 mM精胺酸)被發現到在物理與化學上是穩定的。藉由尺寸排除或離子交換層析，沒有發現mAb-316P有顯著損失，且沒有偵測到顯著化學分解。超過96%的還原mAb-316P為"天然"結構，如藉由尺寸排除所測定，而超過56%的還原mAb-316P為"主要電荷變體"，如藉由陽離子交換所測定。結果歸納於表10中。

實施例10：調配藥物的壓力穩定性研究

對150 mg/mL mAb-316P調配藥物(FDS)(0.35 mL-0.5 mL的150 mg/mL mAb-316P、10 mM組胺酸(pH 6.0)、0.2%聚山梨醇酯20、10%蔗糖)與175 mg/mL mAb-316P調配藥物(0.5 mL-1.7 mL的175 mg/mL mAb-316P、10 mM組胺酸(pH 6.0)、0.01%聚山梨醇酯20、5%蔗糖、50 mM精胺酸)進行壓力穩定性研究。在2 mL容量第1型硼矽酸玻璃(經FLUROTEC®塗覆4432/50丁基橡膠瓶蓋)中進行高溫研究；其餘研究在5 mL聚碳酸酯小瓶中進行。當震盪(渦卷)2小時，150 mg/mL與175 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P調配藥物被發現到在物理與化學上是穩定的。溶液在視覺上維持澄清，沒有發生蛋白質損失，且未形成分子量形式或電荷變體(表11 & 12)。當進行冷凍至-80℃並解凍至室溫的8個循環，mAb-319P亦被觀察到在物理與化學上皆是穩定的。在8個冷凍/解凍循環後，蛋白質溶液在視覺上維持澄清且未觀察到蛋白質損失。分別藉由SE或CEX分析，未偵測到分子量(可溶聚集物或分解產物)或電荷變體形式。

當在37℃或45℃下培育28天，儘管150與175 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P調配藥物在物理上為穩定的，但觀察到一些化學分解(表11 & 12)。這些壓力測試表示，主要分解途徑為形成聚集物、分解產物與電荷變體。一如預期，抗-PCSK9 mAb-316P抗體在37℃下的分解速率低於在45℃下的分解速率。當在25℃下培育28天，150或175 mg/mL mAb-316P調配物品的物理或化學穩定性沒有顯著改變。

實例11：藥品(DP)的儲存穩定性

150 mg/mL mAb-316P藥品是由10 mM組胺酸、pH 6.0、0.01%聚山梨醇酯20、10%蔗糖及150 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P抗體所構成。175 mg/mL mAb-316P藥品是由10 mM組胺酸、pH 6.0、0.01%聚山梨醇酯20、5%蔗糖、50 mM精胺酸與175 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P抗體所構成。當於預充填注射器(PFS；OMPI 1 mL長玻璃注射器，具有27規薄壁針頭以及FM27橡膠針蓋，密封以FLUROTEC®塗覆之4023/50橡膠塞蓋)中在5℃下儲存6個月，在物理與化學穩定性上沒有改變(表13與表14)。溶液維持澄清，未觀察到蛋白質損失，而且在這些壓力後沒有發生pH改變。另外，分別藉由SE與CEX偵測，在分子量形式或電荷變體方面沒有顯著改變。

實例12：藥品(DP)的壓力穩定性

150 mg/mL mAb-316P藥品與175 mg/ml mAb-316P藥品的壓力穩定性是藉由在25℃與45℃下培育預充填注射器來檢驗。當在45℃下培育28天或在25℃下培育6個月，各個藥品在物理上是穩定的(表13 & 14)。溶液在視覺上維持澄清，未觀察到蛋白質損失，而且在這些壓力後沒有發生pH改變。但是，當在45℃與25℃下培育蛋白質時，偵測到聚集物以及電荷變體。這個壓力測試指出，這些是藥品的主要分解途徑。在150 mg/mL藥品中，在45℃下培育28天後，mAb-316P聚集增加1.9%，而酸性形式增加19.1%。當在25℃下培育蛋白質，偵測到化學分解程度降低。在25℃下培育6個月後，聚集相對量增加0.8%，而酸性形式增加10.3%。在175 mg/mL藥品中，在45℃下培育28天後，mAb-316P聚集增加1.8%，而酸性形式增加17.0%。當在25℃下培育蛋白質，偵測到化學分解程度降低。在25℃下培育6個月後，聚集增加0.7%，而酸性形式增加9.4%。關於150及175 mg/mL藥品，於25℃下培育1個月後，mAb-316P穩定性沒有顯著改變。

實例13：充填體積

預充填注射器(PFS)(含有150 mg/mL REGN727藥品)的可注射體積為1.0 mL。PFS(含有175 mg/mL REGN727藥品)的可注射體積為1.14 mL。在PFS中無剩餘，因為忽略注射器中的失效體積(0.005至0.01 mL)。

實例14：MAB-316P在儲存材料中的穩定性

當無菌過濾時，抗-PCSK9 mAb-316P被發現是穩定的。將Millipore Millipak過濾套組用於研究中以及製造臨床供品。當儲存於聚丙烯管、聚苯乙烯管或聚碳酸酯管，或含有不銹鋼襯墊之玻璃小瓶中時，相較於儲存於玻璃小瓶中，150與175 mg/mL mAb-316P調配藥物的穩定性未明顯受到影響(表15與表16)。儘管當在40℃ 下培育調配藥物14天時觀察到分解，在對照、玻璃小瓶與暴露至塑膠容器與不銹鋼之間的mAb-316P分解量觀察到沒有顯著差異。

實例15：抗-PCSK9抗體mAb-316P的特徵鑑定

藉由尺寸排除層析以及多角雷射光散射(SEC-MALLS)來分析至少2批mAb-316P(第1批與第2批)，分析方法會提供蛋白質或醣蛋白的莫耳質量估算值。第1批與第2批具有154.5和154.6 kDa的個別莫耳質量。關於從SE基質洗提出之主要形式峰，其他批具有154.4至154.8 kDa的莫耳質量(平均約155 kDa)。主峰表示約96.7-99.2%的總蛋白質峰面積並對應於完整mAb-316P單體(亦即如本文所用"天然")。

藉由毛細管等電聚焦(cIEF)來分析mAb-316P，以測定主要構成同型的等電點。藉由cIEF所測定之mAb-316P樣品的pI與平均峰面積(%總峰面積)歸納於表17。各批表現出具有經計算為約8.5之pI的主要形式(峰5)，第1批與第2批分別表示為66.4%和68.0%。主要形式(峰5)最可能表示缺乏C端離胺酸的完整完全糖基化抗體(亦即如本文所用"主要電荷形式")。

第1批與第2批之還原型mAb-316P胰酶肽圖的質譜(MS)分析確認單一糖基化位點Asn298，在兩批的Fc結構域中。形成此醣基化位點的大多數共價連結聚醣歸納於表18中。總言之，測定兩批具有複合雙觸聚醣，其中大多數在Asn298處經岩藻糖基化。但是，在第2 批中含有岩藻糖基化非半乳糖基(G0)糖鏈形式的相對數量略高於第1批中的此糖型。相反地，在第2批中含岩藻糖基化雙半乳糖基(G2)以及岩藻糖基化單半乳糖基(G1)之糖鏈形式的相對數量比第1批中彼等糖鏈結構的相對數量還低。兩種藥物樣品的LC/MS結果分析(峰16)亦識別第1批與第2批分別有2.9%與8.4%重鏈肽在Asn298缺少聚醣。

在從兩批mAb-316P的每一者釋出寡糖後，藉由HPLC分析所產生的聚醣型態。在各個層析圖中，衍生的寡糖分成兩個主要類別：非岩藻糖基化雙觸類以及岩藻糖基化雙觸類。在各類別(岩藻糖基化對非岩藻糖基化)中，寡糖進一步分成雙半乳糖基(G2)、單半乳糖基(G1)以及非半乳糖基(G0)形式。寡糖結構分配是經由MALDI-TOF質譜分析而得到。在兩個層析圖中，各峰的積分揭示兩批mAb-316P的岩藻糖基化程度大體上為高，在第1批與第2批中觀察到分別為80.0%與86.9%岩藻糖基化。

儘管兩批的岩藻糖基化總百分比相似，但存在於兩批中糖型之每一者的相對豐度在定量上有差異(表19)。就第1批，GO、G1與G2岩藻糖基化聚醣結構的峰面積百分比分別測定為34.4%、39.6%與11.7%。相對地，就第2批，G0、G1與G2岩藻糖基化聚醣結構的峰面積百分比分別為45.8%、33.3%與7.1%，表示兩批間的半乳糖基化程度有差異。相對於在兩批中所觀察到的糖鏈總量，高甘露糖聚醣(man5 glycan)峰(峰2)偵測相對豐度為1.8-2.9%(表19)。總計9個未被識別的峰具有0.5%至1.5%的峰面積百分比亦在本方法所檢驗的兩批中偵測到，並代表在各批中偵測到3%總聚醣峰面積。兩批的等莫耳共混合物的分析未產生新的峰，且在共混合物中的所有峰的峰面積百分比與根據各批之單獨分析所預期數值充分相關(表19)。

²接受標準：50-200%參考標準品。

表10：175 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P在-80℃下3個月的穩定性

¹10 mM組胺酸、pH 6.0、0.2%聚山梨醇酯20、10%蔗糖、150 mg/mL抗-PCSK9 mAb-316P。

^2"無壓力"的數值為兩個穩定性研究的平均值。

³混濁度報導為在405 nm下相較於起始材料的相對OD變化。

⁴百分比相對效力；接受標準：50-200%參考標準品。

<110> Regeneron Pharmaceuticals,Inc.

<120> 含有抗-PCSK9抗體之穩定化調配物

<130> 7050

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 1

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 2

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 3

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 4

<210> 5

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 5

<210> 6

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 6

<210> 7

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 7

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 8

<210> 9

<211> 692

<212> PRT

<213> 智慧人

<400> 9

Claims

一種醫藥調配物，其包含：(i)特異結合至人類第9型前蛋白轉化酶枯草溶菌素(人類PCSK9)之人類抗體；(ii)緩衝劑，pH為6.0±0.3；(iii)非離子性清潔劑；以及(iv)穩定劑。
如申請專利範圍第1項之醫藥調配物，其中該抗體包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2，以及SEQ ID NO：8之LCDR3。
如申請專利範圍第1及2項中任一項之醫藥調配物，其中該抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD與SEQ ID NO：5之LCVD。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之醫藥調配物，其中(a)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(b)超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(c)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第1至4項中任一項之醫藥調配物，其中抗體濃度為50 mg/mL±7.5 mg/mL至175 mg/mL±26.25 mg/mL。
如申請專利範圍第1至4項中任一項之醫藥調配物，其中該緩衝劑為組胺酸。
如申請專利範圍第6項之醫藥調配物，其中該組胺酸濃度為10 mM±1.5 mM。
如申請專利範圍第1至7項中任一項之醫藥調配物，其中該非離子性清潔劑為聚山梨醇酯20。
如申請專利範圍第8項之醫藥調配物，其中該聚山梨醇酯20濃度為0.01% w/v±0.0015%至0.2% w/v±0.03%。
如申請專利範圍第1至9項中任一項之醫藥調配物，其中該穩定劑為蔗糖。
如申請專利範圍第10項之醫藥調配物，其中該蔗糖濃度為5%±0.75%至12%±1.8%(w/v)。
如申請專利範圍第1至11項中任一項之醫藥調配物，其中該抗體濃度為175 mg/mL±26.25 mg/mL、緩衝劑為10 mM±1.5 mM組胺酸、pH 6±0.3、非離子性清潔劑為0.01% w/v±0.0015%、穩定劑為5% w/v±0.75%蔗糖，並進一步包含50 mM±7.5 mM精胺酸。
如申請專利範圍第1至11項中任一項之醫藥調配物，其中該抗體濃度為150 mg/mL±22.5 mg/mL、緩衝劑為10 mM±1.5 mM組胺酸、pH 6±0.3、非離子性清潔劑為0.2% w/v±0.03%，且穩定劑為10% w/v±1.5%蔗糖。
如申請專利範圍第1至11項中任一項之醫藥調配物，其中該抗體濃度為150 mg/mL±22.5 mg/mL、緩衝劑為10 mM±1.5 mM組胺酸、pH 6±0.3、非離子性清潔劑為0.01% w/v±0.0015%，且穩定劑為10% w/v±1.5%蔗糖。
如申請專利範圍第1至11項中任一項之醫藥調配物，其中該抗體濃度為100 mg/mL±15 mg/mL、緩衝劑為20 mM±3 mM組胺酸、pH 6±0.3、非離子性清潔劑為0.2% w/v±0.03%，且穩定劑為12% w/v±1.8%蔗糖。
如申請專利範圍第1至11項中任一項之醫藥調配物，其中該抗體濃度為50 mg/mL±7.5 mg/mL、緩衝劑為10 mM±1.5 mM組胺酸、pH 6±0.3、非離子性清潔劑為0.1% w/v±0.015%，穩定劑為6% w/v±0.9%蔗糖。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在45℃下28天後，至少91%的抗體具有天然構形。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在45℃下28天後，至少35%的抗體為抗體的主要電荷變體。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在25℃下6個月後，至少94%的抗體具有天然構形。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在25℃下6個月後，至少45%的抗體為抗體的主要電荷變體。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在5℃下6個月後，至少96%的抗體具有天然構形。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在5℃下6個月後，至少58%的抗體為抗體的主要電荷變體。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在-20℃、-30℃或-80℃下3個月後，至少96%的抗體為抗體的主要電荷變體。
如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中在-20℃、-30℃或-80℃下3個月後，至少56%的抗體為抗體的主要電荷變體。
一種醫藥調配物，其包含(a)175±26.25 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6.0±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；(d)5% w/v±0.75%蔗糖；及(e)50 mM±7.5 mM精胺酸，其中：(a)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(c)超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第25項之醫藥調配物，其於水中由下列所組成：(a)175 mg/mL±26.25 mg/mL的抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；(d)5% w/v±0.75%蔗糖；及(e)50 mM±7.5 mM精胺酸。
一種醫藥調配物，其包含(a)150 mg/mL mL±22.5 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖，其中：(a)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(c)超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第27項之醫藥調配物，其於水中由下列所組成：(a)150 mg/mL±22.5 mg/mL的抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖。
一種醫藥調配物，其包含(a)150 mg/mL mL±22.5 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖，其中：(a)該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(c)超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第29項之醫藥調配物，其於水中由下列所組成：(a)150 mg/mL mL±22.5 mg/mL的抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.01% w/v±0.0015%聚山梨醇酯20；及(d)10% w/v±1.5%蔗糖。
一種醫藥調配物，其包含(a)100 mg/mL mL±15 mg/mL的抗-PCSK9抗體；(b)20 mM±3 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)12% w/v±1.8%蔗糖，其中：(a)該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(c)超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第31項之醫藥調配物，其於水中由下列所組成：(a)100 mg/mL mL±15 mg/mL的抗體；(b)20 mM±3 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20；及(d)12% w/v±1.8%蔗糖。
一種醫藥調配物，其包含(a)50 mg/mL mL±7.5 mg/mL的抗體，該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH 為6±0.3；(c)0.1% w/v±0.015%聚山梨醇酯20；及(d)6% w/v±0.9%蔗糖，其中：(a)該抗體包含SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD； (b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量；(c)超過50%的抗體具有約8.5的等電點；及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第33項之醫藥調配物，其於水中由下列所組成：(a)50 mg/mL mL±7.5 mg/mL的抗體；(b)10 mM±1.5 mM組胺酸，pH為6±0.3；(c)0.1% w/v±0.015%聚山梨醇酯20；及(d)6% w/v±0.9%蔗糖。
一種製備包含抗-PCSK9抗體以及少於0.3%的水之組成物的方法，該方法包含下列步驟：a)在玻璃小瓶中將水、抗-PCSK9抗體、組胺酸、蔗糖及聚山梨醇酯20組合；b)將步驟(a)的該組合物維持在5℃下約60分鐘；接著c)然後以約每分鐘約0.5℃的速率降低溫度；然後d)維持在約-45℃約120分鐘；接著e)將大氣壓力降低至約100 mTorr；接而f)以每分鐘約0.5℃的速率增加溫度；接著g)維持在約-25℃下約78小時；接著h)以每分鐘0.2℃的速率增加溫度；然後i)維持在約35℃下約6小時；接而j)以約0.5℃的速率降低溫度；然後k)在儲存之前，維持在約25℃下約60分鐘。
如申請專利範圍第35項之方法，其進一步包含下列步驟：l)將含有步驟(k)之組合物的玻璃小瓶回填氮氣；以及m)在約80%大氣壓力下封塞該小瓶。
如申請專利範圍第35或36項之方法，其中於步驟(i)、(j)或(k)之後及在封塞小瓶的步驟之前使該組成物為2-8℃。
如申請專利範圍第35至37項中任一項之方法，其中在步驟(a)時將50 mg/mL±7.5 mg/mL的抗-PCSK9抗體、10 mM±1.5 mM組胺酸(pH 6.0)、0.1%±0.015%的聚山梨醇酯20、以及6%±0.9%蔗糖組合，且其中該抗-PCSK9抗體包含SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2，以及SEQ ID NO：8之LCDR3 mAb-316P。
如申請專利範圍第35至38項中任一項之方法，其中該抗-PCSK9抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD與SEQ ID NO：5之LCVD。
如申請專利範圍第35至39項中任一項之方法，其中(a)該抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD以及SEQ ID NO：5之LCVD，(b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量，(c)超過50%的抗體具有約8.5的等電點，及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
一種醫藥組成物，其包含抗-PCSK9抗體以及少於0.3% 的水，其係根據申請專利範圍第35至40項中任一項之方法所製造。
一種醫藥組成物，其包含再懸浮於水中之如申請專利範圍第41項之醫藥組成物。
如申請專利範圍第42項之醫藥組成物，其在水中由50 mg/mL±7.5 mg/mL抗體、10 mM±1.5 mM組胺酸(pH 6.0)、0.1%±0.015%聚山梨醇酯20，以及6%±0.9%蔗糖所組成。
如申請專利範圍第42項之醫藥組成物，其在水中由100 mg/mL±15 mg/mL抗體、20 mM±3 mM組胺酸(pH 6.0)、0.2%±0.03%聚山梨醇酯20，以及12%±1.8%蔗糖所組成。
如申請專利範圍第42項之醫藥組成物，其在水中由150 mg/mL±22.5 mg/mL抗體、30 mM±4.5 mM組胺酸(pH 6.0)、0.3%±0.045%聚山梨醇酯20，以及18%±2.7%蔗糖所組成。
如申請專利範圍第42項之醫藥組成物，其在水中由175 mg/mL±26.25 mg/mL抗體、35 mM±5.25 mM組胺酸(pH 6.0)、0.35%±0.0525%聚山梨醇酯20，以及21%±3.15%蔗糖所組成。
如申請專利範圍第41至46項中任一項之醫藥組成物，其中(a)該抗體包含SEQ ID NO：1之HCVD以及SEQ ID NO：5之LCVD，(b)超過90%的抗體具有155 kDa±1 kDa的分子量，(c)超過50%的抗體具有約8.5 的等電點，及(d)75%至90%的抗體經岩藻糖基化。
如申請專利範圍第1至34及41至47項中任一項之醫藥組成物，其中該組成物容納於一容器中。
如申請專利範圍第48項之醫藥組成物，其中該容器為小瓶。
如申請專利範圍第49項之醫藥組成物，其中該小瓶為玻璃。
如申請專利範圍第48項之醫藥組成物，其中該容器為注射器。
如申請專利範圍第51項之醫藥組成物，其中該注射器為低鎢玻璃。
如申請專利範圍第51項之醫藥組成物，其中該注射器為NUOVA OMPI 1 mL長玻璃注射器，其配備有27-G薄壁針頭、塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠瓶塞，以及FM 27橡膠頂蓋。
一種套組，其包含如申請專利範圍第1至34及41至47項中任一項之醫藥組成物、容器以及使用說明。
如申請專利範圍第54項之套組，其中該容器為預充填注射器。
如申請專利範圍第55項之套組，其中該注射器為NUOVA OMPI 1 mL長玻璃注射器，其配備有27-G薄壁針頭、塗覆FLUROTEC的4023/50橡膠瓶塞，以及FM 27橡膠頂蓋。