KR20140061360A

KR20140061360A - 항-ｐｃｓｋ９ 항체를 포함하는 안정화된 제제

Info

Publication number: KR20140061360A
Application number: KR1020147001990A
Authority: KR
Inventors: 스코트 월시; 다니엘 딕스
Original assignee: 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2011-07-28
Filing date: 2012-07-27
Publication date: 2014-05-21
Anticipated expiration: 2032-07-27
Also published as: WO2013016648A3; EA201490370A1; MX2014000771A; JP2014525915A; CN103717237A; MA35355B1; EP2736529A2; EA202091373A1; US20190284301A1; NZ619379A; AR087305A1; US8795669B2; PH12013502602A1; BR112014001712A2; MX375672B; JP2017071620A; IL230282B; TWI586366B; MX2020010470A; AU2017200811B2

Abstract

본 발명은 사람 전단백질 전환효소 서브틸리신/케신 유형 9(PCSK9)에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 포함하는 약제학적 제제를 제공한다. 상기의 제제는 항-PCSK9 항체에 추가하여, 적어도 하나의 아미노산, 적어도 하나의 당, 또는 적어도 하나의 비이온 계면활성제를 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 제제는 수개월간 보관 후에도 상당한 정도의 항체 안정성을 보인다.

Description

항-ＰＣＳＫ９ 항체를 포함하는 안정화된 제제{STABILIZED FORMULATIONS CONTAINING ANTI-PCSK9 ANTIBODIES}

본 발명은 치료용 항체 제제 분야에 관련된다. 보다 구체적으로 본 발명은 사람 전단백질 전환효소 서브틸리신/케신 유형 9(PCSK9)에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 포함하는 약제학적 제제 분야에 관련된다.

서열 목록

서열 목록에 대한 ST.25 준수 텍스트 파일은 본 명세서와 동시에 제출된다. 텍스트 파일의 내용은 참고자료로 본 명세서에 통합되어 있다. 상기의 ST.25 준수 텍스트 파일과 내용이 동일한 서열 목록의 사본은 본 명세서의 일부로 포함된다.

치료용 거대 분자(예를 들면, 항체)는 환자에 대한 투여가 적절한 분자로 만들어져야 할 뿐만 아니라, 보관 기간과 추후 사용시 안정성을 유지하도록 제제화되어야 한다. 예를 들면, 액상 용액 내의 치료용 항체는 상기 용액이 적절히 제제화되지 않는 한 쉽게 분해, 응집되거나 또는 바람직하지 않은 화학적 변화가 일어나기 쉽다. 액상 제제 내 항체의 안정성은 상기의 제제에 사용된 부형제의 종류뿐만 아니라 부형제 간의 상대 비율에 따라서도 달라진다. 더욱이, 안정성과 다른 고려 사항들도 액상 항체 제제를 제조할 때 염두에 두어야 한다. 이러한 추가 고려 사항의 예로는 용액의 점도와 특정 제제가 수용할 수 있는 항체의 농도, 그리고 제제의 외관적 품질이나 호감도가 포함된다. 따라서, 치료용 항체를 제제화할 때는 안정성을 유지하며 충분한 농도의 항체를 함유하고, 적절한 점도를 지녔는지 뿐만 아니라 이러한 제제가 환자에게 간편하게 투여되는 등의 기타 특성까지 갖춘 제제를 만들도록 세심한 주의를 기울여야 한다.

사람 전단백질 전환효소 서브틸리신/케신 유형 9 단백질(PCSK9)에 대한 항체는 적절한 제제를 필요로 하는 약학적으로 비교적 큰 분자의 한 예이다. 항-PCSK9 항체는 고콜레스테롤혈증과 기타 이상 지질혈증, 그리고 기타 질환의 치료와 예방에 임상적으로 유용하다. 예시적 항-PCSK9 항체는 특히 WO 2008/057457, WO 2008/057458, WO 2008/057459, WO 2008/063382, WO 2008/125623, U.S. Pat. No. 7,572,618, WO 2010/077854, US 2010/0166768, 그리고 US 2011/0065902에 기술되어 있다.

여러 항-PCSK9 항체가 알려져 있지만, 안정성이 충분하고 환자에게 투여하기 수월한 항-PCSK9 항체를 포함하는 신규 약제학적 제제에 대한 요구가 당 업계에 지속되어 왔다.

요약

본 발명은 사람 전단백질 전환효소 서브틸리신/케신 유형 9 단백질(PCSK9)에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 포함하는 약제학적 제제를 제공함으로써 상기의 요구를 만족시킨다.

한 양상으로, 액상의 약제학적 제제는 다음을 포함하여 제공된다: (i) 사람 전단백질 전환효소 서브틸리신/케신 유형 9 단백질(PCSK9)에 특이적으로 결합하는 사람 항체; (ii) 완충액; (iii) 유기 혼합 용매; (iv) 안정화제; 그리고 선택적으로 (v) 점도 완화제.

한 실시예로, 상기의 항체는 약 50 ± 7.5 mg/mL 내지 약 200 ± 30 mg/mL의 농도로 제공된다. 또 다른 실시예로, 상기의 항체는 약 50 mg/ml ± 7.5 mg/mL의 농도로 제공된다. 또 다른 실시예로, 상기의 항체는 약 100 mg/mL ± 15 mg/mL의 농도로 제공된다. 또 다른 실시예로, 상기의 항체는 약 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 농도로 제공된다. 또 다른 실시예로, 상기의 항체는 약 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 농도로 제공된다. 또 다른 실시예로, 상기의 항체는 약 200 mg/mL ± 30 mg/mL의 농도로 제공된다.

한 실시예로, 상기의 항체는 하나 또는 그 이상의 SEQ ID NO:1-8 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시예로, 상기의 항체는 (a) 각각 SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 및 SEQ ID NO:4의 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1, 2 및 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변부(HCVR); 그리고 (b) 각각 SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:8의 서열을 포함하는 경쇄 상보성 영역 1, 2 및 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변부(LCVR)로 구성된다. 특정 실시예로, 상기의 항체는 각각 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:5의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 LCVR로 구성된다.

한 실시예로, 상기의 액상 제제의 pH는 약 pH 6.0 ± 0.5, pH 6.0 ± 0.4, pH 6.0 ± 0.3, pH 6.0 ± 0.2, pH 6.0 ± 0.1, pH 6.0 ± 0.05, pH 6.0 ± 0.01, 또는 pH 6.0이다. 특정 실시예로, 상기의 액상 제제의 pH는 약 pH 6.0 ± 0.3이다. 한 실시예로, 상기의 액상 약제학적 완충액은 약 pH 5.5 내지 약 pH 7.4, 또는 약 6.0의 pKa 유효 완충 범위를 갖는 하나 또는 그 이상의 완충액으로 구성된다.

한 실시예로, 상기의 완충액은 히스티딘이다. 한 실시예로, 상기의 히스티딘은 5 mM ± 0.75 mM 내지 50 mM ± 7.5 mM의 농도이다. 한 실시예로, 상기의 히스티딘은 10 mM ± 1.5 mM 또는 약 10 mM의 농도이다. 한 실시예로 상기의 히스티딘은 20 mM ± 3 mM 또는 약 20 mM의 농도이다. 한 실시예로, 상기의 히스티딘은 40 nM ± 6 mM 또는 약 40 nM의 농도이다.

한 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 폴리옥시에틸렌 반족(moiety)을 함유하는 비이온 중합체이다. 어떤 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 어느 하나 또는 그 이상의 폴리소르베이트 20, 폴록사머 188 및 폴리에틸렌 글리콜 3350이다. 특정 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 폴리소르베이트 20이다.

한 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 약 0.005% ± 0.00075% 내지 약 1% ± 0.15%의 “용적에 대한 무게” 즉 “w/v”의 농도로, 예를 들어 0.1 g/ml = 10% 및 0.01 g/ml = 1%인 경우이다. 한 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 농도가 약 0.2% ± 0.03% w/v인 폴리소르베이트 20이다. 또 다른 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 농도가 0.01% ± 0.0015% w/v 또는 약 0.01% w/v인 폴리소르베이트 20이다.

한 실시예로, 상기의 안정화제는 당이다. 한 실시예로, 상기의 당은 수쿠로오스, 만니톨 및 트레할로오스로 이루어지는 군에서 선택된다. 특정 실시예로, 상기의 안정화제는 수쿠로오스이다.

한 실시예로, 상기의 안정화제는 1% ± 0.15% w/v 내지 20% ± 3% w/v의 농도이다. 특정 실시예로, 상기의 안정화제는 농도가 5% ± 0.75% w/v 또는 약 5% w/v인 수쿠로오스이다. 또 다른 특정 실시예로, 상기의 안정화제는 농도가 10% ± 1.5% w/v 또는 약 10% w/v인 수쿠로오스이다. 또 다른 특정 실시예로, 상기의 안정화제는 농도가 12% ± 1.8% w/v 또는 약 12% w/v인 수쿠로오스이다.

한 실시예로, 상기의 점도 완화제는 염산 아르기닌, 티오시안산 나트륨, 티오시안산 암모늄, 황산 암모늄, 염화 암모늄, 염화 칼슘, 염화 아연 및 아세트산 나트륨으로 구성된 군에서 선택된 염이다. 한 실시예로, 상기의 점도 완화제는 L-아르기닌 염산염이다.

한 실시예로, 상기의 점도 완화제는 10 mM ± 1.5 mM 내지 150 mM ± 22.5 mM의 농도이다. 한 실시예로, 상기의 점도 완화제는 농도가 50 mM± 7.5 mM 또는 약 50 mM인 염산 L-아르기닌이다. 한 실시예로, 상기의 점도 완화제는 농도가 40 mM± 6 mM또는 약 40 mM인 염산 L-아르기닌이다.

한 실시예로, 25℃에서 액상 또는 재구성된 동결 건조된 상기의 약제학적 제제의 점도는 약 15 cPoise ± 10% 미만이거나 이와 같다. 한 실시예로, 25℃에서 상기의 점도는 1.0 cPoise ± 10%와 18 cPoise ± 10% 사이이다. 한 실시예로, 25℃에서 상기의 점도는 1.6 cPoise ± 10%, 1.7 cPoise ± 10%, 3.3 cPoise ± 10%, 3.5 cPoise ± 10%, 4.8 cPoise ± 10%, 6.0 cPoise ± 10%, 7.0 cPoise ± 10%, 7.1 cPoise ± 10%, 7.2 cPoise ± 10%, 7.9 cPoise ± 10%, 8.9 cPoise ± 10%, 10.0 cPoise ± 10%, 10.6 cPoise ± 10%, 11.4 cPoise ± 10%, 11.6 cPoise ± 10%, 11.8 cPoise ± 10%, 12.4 cPoise ± 10%, 13.9 cPoise ± 10%, 14.0 cPoise ± 10%, 15.5 cPoise ± 10%, 또는 17.9 cPoise ± 10%이다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 100 ± 15 mOsm/kg와 460 ± 69 mOsm/kg 사이이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 103 ± 15 mOsm/kg 또는 약 103 mOsm/kg이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 195 ± 29 mOsm/kg 또는 약 195 mOsm/kg이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 220 ± 33 mOsm/kg 또는 약 220 mOsm/kg이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 330 ± 50 mOsm/kg 또는 약 330 mOsm/kg이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 435 ± 65 mOsm/kg 또는 약 435 mOsm/kg이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 440 ± 66 mOsm/kg 또는 약 440 mOsm/kg이다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제의 삼투압 농도는 458 ± 69 mOsm/kg 또는 약 458 mOsm/kg이다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 -80℃에서 3개월 동안 보관 후 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비응집(non-aggregated) 및 비분해(non-degraded) 형태의 최소 96% 또는 최소 97%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 -80℃에서 3개월 동안 보관 후 이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비염기성(non-basic) 및 비산성(non-acidic) 형태(즉, 메인 피크(main peak: 주첨두) 또는 주 전하 형태)의 최소 56%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 -30℃에서 3개월 동안 보관 후 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비응집(non-aggregated) 및 비분해(non-degraded) 형태의 최소 96% 또는 최소 97%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 -30℃에서 3개월 동안 보관 후 이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 주 전하 형태의 최소 56%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 -20℃에서 3개월 동안 보관 후 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비응집(non-aggregated) 및 비분해(non-degraded) 형태의 최소 96% 또는 최소 97%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 -20℃에서 3개월 동안 보관 후 이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 주 전하 형태의 최소 56%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 5℃에서 6개월 동안 보관 후 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비응집(non-aggregated) 및 비분해(non-degraded) 형태의 최소 96%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 5℃에서 3개월 동안 보관 후 이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 주 전하 형태의 최소 58% 또는 59%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 25℃에서 6개월 동안 보관 후 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비응집(non-aggregated) 및 비분해(non-degraded) 형태의 최소 94%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 25℃에서 6개월 동안 보관 후 이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비염기성(non-basic) 및 비산성(non-acidic) 형태의 최소 45% 또는 47%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다.

한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 45℃에서 28일 동안 보관 후 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비응집(non-aggregated) 및 비분해(non-degraded) 형태의 최소 91% 또는 92%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다. 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 약제학적 제제를 45℃에서 28일 동안 보관 후 이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기의 항-PCSK9 항체의 비염기성(non-basic) 및 비산성(non-acidic) 형태의 최소 35% 또는 37%가 액상으로 된 상기의 약제학적 제제에서 복구된다.

한 양상으로, 액상으로 된 약제학적 제제는 다음을 포함하여 제공된다: (i) 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 50 ± 7.5 mg/ml 내지 175 ± 26 mg/ml의 사람 항체; (ii) 0 mM 내지 40 ± 6 mM의 히스티딘; (iii) 0% 내지 0.2% ± 0.03% (w/v)의 폴리소르베이트 20; (iv) 0% 내지 12% ± 1.8% (w/v)의 수쿠로오스; 그리고 (v) 약 5.3 내지 약 6.7의 pH에서 0 mM 내지 50 ± 7.5 mM 아르기닌. 이러한 양상의 상기 항-PCSK9 항체는 HCVR / LCVR 조합이 각각 아미노산 서열 SEQ ID 번호:2 - 3 - 4 / SEQ ID 번호:6 - 7 - 8을 포함하는 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역(HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3)을 포함하도록 중쇄 가변부(HCVR) 및 경쇄 가변부(LCVR)를 포함한다. 특정 실시예로, 상기의 항-PCSK9 항체는 각각 아미노산 서열 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:5를 포함하는 중쇄 가변부(HCVR) 및 경쇄 가변부(LCVR)로 구성된다 (이하 “mAb-316P”라 함).

이러한 양상의 한 실시예로, 액상으로 된 상기의 제제는 6.0 ± 0.3의 pH에서 (i) 50 ± 7.5 mg/mL의 mAb-316P; (ii) 10 ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 0.1% ± 0.015% (w/v) 폴리소르베이트 20; 그리고 (iv) 6% ± 0.9% (w/v) 수크로오스를 포함한다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 점도는 약 1.7 cPoise이다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 삼투압 농도는 220 ± 44 mOsm/kg이다.

또 다른 실시예로, 액상으로 된 상기의 제제는 6.0 ± 0.3 pH에서 (i) 100 ± 20 mg/mL의 mAb-316P; (ii) 20 ± 4 mM의 히스티딘; (iii) 0.2% ± 0.04% (w/v)의 폴리소르베이트 20; 그리고 (iv) 12% ± 2.4% (w/v) 수크로오스를 포함한다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 점도는 약 3.5 cPoise이다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 삼투압 농도는 440 ± 88 mOsm/kg이다.

또 다른 실시예로, 액상으로 된 상기의 제제는 6.0 ± 0.3의 pH에서 (i) 150 ± 22.5 mg/mL의 mAb-316P; (ii) 10 ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 0.2% ± 0.03% 또는 0.01% ± 0.0015%(w/v)의 폴리소르베이트 20; 그리고 (iv) 10% ± 1.5% (w/v) 수크로오스를 포함한다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 점도는 약 6 cPoise이다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 삼투압 농도는 435 ± 65.25 mOsm/kg이다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 45℃에서 28일간 보관 후, 상기 항체의 92% 이상이 원상태이고 상기 항체의 35% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 25℃에서 6개월간 보관 후, 상기 항체의 94% 이상이 원상태이고 상기 항체의 45% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 5℃에서 6개월간 보관 후, 상기 항체의 96% 이상이 원상태이고 상기 항체의 58% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 -20℃에서 12개월간 보관 후, 상기 항체의 97% 이상이 원상태이고 상기 항체의 56% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 -30℃에서 12개월간 보관 후, 상기 항체의 97% 이상이 원상태이고 상기 항체의 56% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 -80℃에서 12개월간 보관 후, 상기 항체의 97% 이상이 원상태이고 상기 항체의 56% 이상이 주 전하 형태다.

이러한 특정 제제의 어떤 실시예로, 45℃에서 28일 후에 상기 항체의 85% 이상이 이의 생물학적 역가를 유지하고, 37℃에서 28일 후에는 82% 이상이, 그리고/또는 25℃에서 28일 후에는 98% 이상이 생물학적 역가를 유지한다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, -20℃에서 6개월 후에 상기 항체의 85% 이상이 이의 생물학적 역가를 유지하고, -30℃에서 6개월 후에는 70% 이상이, 그리고/또는 -80℃에서 6개월 후에는 79% 이상이 이의 생물학적 역가를 유지한다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 8회의 냉동-해동 반복 후에 상기 항체의 81% 이상이 이의 생물학적 역가를 유지하고, 그리고/또는 120분의 교반 후에 상기 항체의 84% 이상이 이의 생물학적 활성도를 유지한다.

이러한 양상의 또 다른 실시예로, 액상으로 된 상기의 제제는 6.0 ± 0.3의 pH에서 (i) 175 ± 26.25 mg/mL의 mAb-316P; (ii) 10 ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 0.01% ± 0.0015% (w/v)의 폴리소르베이드 20; (iv) 5% ± 0.75% (w/v) 수크로오스; 그리고 (v) 50 ± 7.5 mM의 아르기닌을 포함한다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 점도는 약 10.6 cPoise이다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기 삼투압 농도는 330 ± 50 mOsm/kg이다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 45℃에서 28일간 보관 후, 상기 항체의 91% 이상이 원상태이고 상기 항체의 38% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 25℃에서 6개월간 보관 후, 상기 항체의 94% 이상이 원상태이고 상기 항체의 47% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 5℃에서 6개월간 보관 후, 상기 항체의 96% 이상이 원상태이고 상기 항체의 59% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 -20℃에서 3개월간 보관 후, 상기 항체의 96% 이상이 원상태이고 상기 항체의 56% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 -30℃에서 3개월간 보관 후, 상기 항체의 96% 이상이 원상태이고 상기 항체의 56% 이상이 주 전하 형태다. 이러한 특정 제제의 한 실시예로, 상기의 제제를 -80℃에서 3개월간 보관 후, 상기 항체의 96% 이상이 원상태이고 상기 항체의 56% 이상이 주 전하 형태다.

한 양상으로, 상기 양상의 액상으로 된 약제학적 제제는 용기에 담겨 제공된다. 한 실시예로, 상기의 용기는 폴리카보네이트 바이알이다. 또 다른 실시예로, 상기의 용기는 유리 바이알이다. 한 실시예로, 상기의 유리 바이알은 플루오르카본(FC) 코팅 부틸 고무 스톱퍼가 달린 Type 1 붕규산(borosilicate) 유리 바이알이다. 또 다른 실시예로, 상기의 용기는 미세주입기(microinfuser)이다. 또 다른 실시예로, 상기 용기는 시린지이다. 특정 실시예로, 상기의 시린지는 플루오르카본(FC) 코팅 플런저를 포함한다. 특정 실시예로, 상기의 시린지는 약 500 ppb(10억 분율) 이하의 텅스텐 27-G 바늘, FC 코팅 부틸 고무 스톱퍼, 그리고 무라텍스, 비세포독성 고무 팁 캡(tip cap)을 포함하는 1 mL의 긴 유리 시린지이다. 더 구체적인 실시예로, 상기의 시린지는 27-G 박벽(thin wall) 바늘, FLUROTEC 코팅 4023/50 고무 스톱퍼, 그리고 FM 27 고무 팁 캡이 장착된 NUOVA OMPI 1 mL 기다란 유리 시린지이다. 또 다른 구체적인 실시예로, 상기 시린지는 27-G 바늘이 부착된 I mL 또는 3 mL 플라스틱 시린지이다. 보다 구체적인 실시예로, 상기 플라스틱 시린지는 BECTON DICKINSON에 의해 유통되는 것이다.

한 양상으로, (a) 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, (d) 5% w/v ± 0.75% 수크로오스, 그리고 (e) 50 mM ± 7.5 mM 아르기닌을 포함하는 약제학적 제제가 제공되며, 이 때 (a) 상기의 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD 및 SEQ ID NO:5의 LCVD로 구성되고, (b) 상기 제제 내 항체의 90% 이상이 분자량 155 kDa ± 1 kDa을 가지며, (c) 상기 제제 내 항체의 50% 이상이 등전점 8.5를 가지고 (d) 상기 제제 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된 경우이다.

한 실시예로, 상기의 약제학적 제제는 수중의 (a) 바로 전 항의 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, (d) 5% w/v ± 0.75% 수크로오스, 그리고 (e) 50 mM ± 7.5 mM 아르기닌으로 구성된다.

한 양상으로, (a) 150 mg/mL mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제가 제공되며, 이때 (i) 상기의 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하며, (ii) 상기 제제 내 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (iii) 상기 제제 내 항체의 50% 이상이 8.5의 등전점을 가지고 (iv) 상기 제제 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된다.

한 실시예로, 상기의 약제학적 제제는 수중의 (a) 바로 전 항의 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함한다.

한 양상으로, (a) 150 mg/mL mL ± 22.5 mg/mL 의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제가 제공되며, 이때 (i) 상기 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하며, (ii) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (iii) 상기 제제 내 항체의 50% 이상이 8.5의 등전점을 가지고 (iv) 상기 제제 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된다.

한 실시예로, 상기의 약제학적 제제는 수중의 (a) 바로 전 항의 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스로 구성된다.

한 양상으로, (a) 100 mg/mL mL ± 15 mg/mL 의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 12% w/v ± 1.8% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제가 제공되며, 이때 (i) 상기의 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하며, (ii) 상기 제제 내 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (iii) 상기 제제 내 항체의 50% 이상이 8.5의 등전점을 가지고 (iv) 상기 제제 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된다.

한 실시예로, 상기의 약제학적 제제는 수중의 (a) 바로 전 항의 100 mg/mL ± 15 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 20 mM ± 3 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 12% w/v ± 1.8% 수크로오스로 구성된다.

한 양상으로, (a) 50 mg/mL mL ± 7.5 mg/mL 의 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.1% w/v ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 6% w/v ± 0.9% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제가 제공되며, 이때 (i) 상기의 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하며, (ii) 상기 제제 내 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (iii) 상기 제제 내 항체의 50% 이상이 8.5의 등전점을 가지고 (iv) 상기 제제 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된다.

한 실시예로, 상기의 약제학적 제제는 수중의 (a) 바로 전 항의 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.1% w/v ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 6% w/v ± 0.9% 수크로오스로 구성된다.

한 양상으로, 항-PCSK9 항체 및 0.3%이하의 수분을 포함하는 동결 건조된 조성물을 조제하기 위한 방법이 제공된다. 상기의 방법은 (a) 유리 바이알에 물, 항-PCSK9 항체, 히스티딘, 수크로오스, 그리고 폴리소르베이트 20을 혼합하고, (b) 그 다음 상기 혼합물을 약 5℃에서 약 60분간 유지하고, (c) 그 다음 상기 온도를 1분에 약 0.5℃의 비율로 낮추고, (d) 그 다음 상기 혼합물을 약 -45℃에서 약 120분간 유지하고, (e) 그 다음 대기압을 약 100 mTorr로 낮추고, (f) 그 다음 상기 온도를 1분에 약 0.5℃의 비율로 올리고, (g) 그 다음 상기 혼합물을 약 -25℃에서 약 78시간 동안 유지하고, (h) 그 다음 상기 온도를 1분당 0.2℃의 비율로 올리고, (i) 그 다음 상기 혼합물을 약 35℃에서 약 6시간 동안 유지하고, (j) 그 다음 상기 온도를 1분당 약 0.5℃의 비율로 낮추고, (k) 그리고 그 다음 상기 혼합물을 보관하기 전에 약 25℃에서 약 60분간 유지하는 단계로 구성된다.

한 실시예로, 상기의 방법은 더 나아가 (l) (k)의 혼합물이 담긴 유리 바이알을 질소 가스로 다시 채우는 단계와 (m) 상기 바이알을 대기압의 약 80%에서 마개로 막는 단계로 이루어진다. 한 실시예로, 상기 조성물을 단계 (i), (j) 또는 (k) 후와 바이알을 스톱퍼로 막는 단계 전에 2-8℃에 이르게 한다.

어떤 실시예로, 단계 (a)에서 항-PCSK9 항체는 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL이고, 히스티딘은 10 mM ± 1.5 mM (pH 6.0), 폴리소르베이트 20은 0.1% ± 0.015%이며, 그리고 수크로오스는 6% ± 0.9%이다. 한 실시예로, 상기의 항-PCSK9 항체는 SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3인 mAb-316P로 구성된다. 한 실시예로, 상기의 항-PCSK9 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD로 구성된다. 한 실시예로, (i) 상기의 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD로 구성되며, (ii) 상기 혼합물 내 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (iii) 상기 혼합물 내 항체의 50% 이상이 8.5의 등전점을 가지고 (iv) 상기 혼합물 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된다.

한 양상으로, 상기 양상의 방법에 따라 제조된 항-PCSK9 항체와 0.3% 미만의 수분으로 이루어진 동결 건조된 약학적 조성물이 제공된다.

한 양상으로, 물에 재부유된 상기 양상의 동결 건조된 약학적 조성물로 이루어진 약학적 조성물이 제공된다. 한 실시예로, 상기의 약학적 조성물은 수중 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.1% ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 6% ± 0.9% 수크로오스로 구성된다. 한 실시예로, 상기의 약학적 조성물은 수중 100 mg/mL ± 15 mg/mL의 항-PCSK9 항체, 20 mM ± 3 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.2% ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 12% ± 1.8% 수크로오스로 구성된다. 또 다른 실시예로, 상기의 약학적 조성물은 수중 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, 30 mM ± 4.5 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.3% ± 0.045% 폴리소르베이트 20, 그리고 18% ± 2.7% 수크로오스로 구성된다. 또 다른 실시예로, 상기의 약학적 조성물은 수중 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 항-PCSK9 항체, 35 mM ± 5.25 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.35% ± 0.0525% 폴리소르베이트 20, 그리고 21% ± 3.15% 수크로오스로 구성된다.

어떤 실시예로, 상기의 항-PCSK9 항체는 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD로 구성되며, 그리고 (b) 상기 조성물 내 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (c) 상기 조성물 내 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 가지고 (d) 상기 조성물 내 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화된다.

한 양상으로, 상기 양상 중 하나의 약학적 조성물이 제공되며, 이때 상기의 조성물은 용기에 담긴다. 한 실시예로, 상기의 용기는 바이알이며, 다른 실시예에서는 유리 바이알이다. 또 다른 실시예로, 상기 용기는 시린지이다. 어떤 실시예로, 상기 시린지는 저함량 텅스텐 유리 시린지이다. 한 실시예로, 상기의 시린지는 27-G 박벽(thin wall) 바늘, FLUROTEC 코팅 4023/50 고무 스톱퍼, 그리고 FM 27 고무 팁 캡이 장착된 NUOVA OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지이다.

한 양상으로, 상기 양상 중 하나의 약학적 조성물, 용기, 그리고 설명서로 이루어진 키트가 제공된다. 한 실시예로, 상기 용기는 사전에 충진된 시린지이다. 특정 실시예로, 상기의 시린지는 27-G 박벽(thin wall) 바늘, FLUROTEC 코팅 4023/50 고무 스톱퍼, 그리고 FM 27 고무 팁 캡이 장착된 NUOVA OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지이다.

본 발명의 기타 실시예들은 다음의 상세 설명을 통해 명확해질 것이다.

본 발명을 설명하기 전에, 본 발명의 방법 및 조건은 다양할 수 있기 때문에 본 발명은 기술된 특정 방법 및 실험 조건에 국한되지 않는다는 것을 이해할 필요가 있다. 또한 본 명세서에서 사용된 용어는 부록의 청구범위에 의해서만 본 발명의 범위가 한정될 것이기 때문에 특정 실시예예만 설명하기 위한 목적이며 제한적인 용도가 아님을 이해해야 한다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당 업계의 일반적인 기술자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 사용된 "약”이라는 용어는, 특정 수치 또는 수치의 범위와 관련하여 사용될 때, 그 수치가 인용된 수치의 1% 이상을 벗어나지 않음을 뜻한다. 예를 들면, 본 명세서에서 사용될 때 "약 100"이라는 표현은 99 및 101과 그 사이의 모든 수치(예를 들면 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)를 포함한다.

본 명세서에 설명된 방법 및 물질과 유사하거나 동일한 모든 것들이 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 선호되는 방법 및 물질이 이제 설명된다. 본 명세서에서 언급된 모든 출판물은 그 전체가 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.

약제학적 제제

본 명세서에서 사용된 "약제학적 제제"라는 표현은 적어도 하나의 활성 성분(예를 들면, 사람 또는 사람이 아닌 동물에 생물학적 영향을 미칠 수 있는 작은 분자, 거대 분자, 화합물 등), 그리고 상기의 활성 성분 또는 하나 이상의 추가 비활성 성분과 병합되었을 때, 사람 또는 사람이 아닌 동물에 대해 치료용 투여가 적절한 적어도 하나의 비활성 성분의 조합을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "제제”란 달리 명시되지 않는 한 "약제학적 제제"를 뜻한다. 본 발명은 적어도 하나의 치료용 폴리펩티드로 이루어진 약제학적 제제를 제공한다. 본 발명의 특정 실시예에 따르면, 상기의 치료용 폴리펩티드는 사람 전단백질 전환효소 스브틸리신/케신 유형 9 (PCSK9) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 분절이다. 보다 구체적으로 본 발명은 다음으로 이루어지는 약제학적 제제를 포함한다: (i)사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 사람 항체; (ii) 히스티딘 완충액; (iii) 비이온 계면활성제인 유기 혼합 용매; (iv) 탄수화물인 열 안정화제; 그리고 선택적으로 (v) 염인 점도 완화제. 본 발명 내에 포함된 특정 예시적 성분과 제제는 아래에 구체적으로 기술되어 있다.

PCSK9에 특이적으로 결합하는 항체

본 발명의 약제학적 제제는 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 사람 항체, 또는 이의 항원-결합 분절을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "PCSK9”는 분비형 서브틸라제(subtilase) 계열의 단백분해효소 K 하위 계열에 속하는 사람 전단백질 전환효소를 뜻한다. PCSK9는 저밀도 지단백질 입자 수용체에 결합하여 이의 분해를 촉진시킴으로써 혈장 LDL 수준을 증가시킨다는 증거가 있다. 한 예시적인 사람 PCSK9 아미노산 서열은 SEQ ID NO:9로 기술된다. 사람 PCSK9에 대한 항체는 특허 출원 공개 번호 US 2010/0166768, US 2011/0065902, 그리고 WO 2010/077854에 기술되어 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "항체"란 일반적으로 네 개의 폴리펩티드 사슬, 즉 이황화 결합에 의해 상호 연결된 두 개의 중쇄(H)와 두 개의 경쇄(L)뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들면, IgM)를 포함하는 면역글로불린 분자를 지칭하는 용도이다; 그러나 중쇄만으로 이루어진 면역글로불린 분자(즉, 경쇄가 없는) 역시 용어 "항체”의 정의 내에 포함된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변부(이하 HCVR 또는 V_H로 약칭) 및 중쇄 불변부로 구성된다. 중쇄 불변부는 세 개의 도메인인 CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변부(이하 LCVR 또는 V_L로 약칭)와 경쇄 불변부로 구성된다. 경쇄 불변부는 하나의 도메인(CL1)으로 구성된다. V_H 및 V_L 영역은 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 과변이 부위로 다시 나누어지며 골격 부위(FR)로 불리는 좀더 보존적인 부위와 교차 배치될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 다음과 같은 순서로 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 배열된 세 개의 CDR과 네 개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 용어 "항체”는 완전한 항체 분자뿐만 아니라 이의 항원-결합 분절도 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용된 용어 항체의 "항원-결합 부위" 또는 "항원-결합 분절"(또는 간략히 "항체 부위" 또는 "항체 분절")은 사람 PCSK9 또는 이의 에피톱에 특이적으로 결합하는 능력을 지닌 항체의 하나 또는 그 이상의 분절을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 "분리된 항체"란 다른 항원 특이성을 갖는 기타 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하기 위한 것이다(예를 들면, 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 사람 PCSK9 외의 항원을 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다).

용어 "특이적으로 결합한다" 또는 이와 유사한 표현은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 생리적 상태가 비교적 안정적인 항원 복합체를 형성한다는 의미이다. 특이적 결합은 적어도 약 1x10^-6 M 또는 그 이상의 해리 상수로 특징될 수 있다. 두 개의 분자가 특이적으로 결합하는지를 판정하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들면 평형 투석, 표면 플라즈몬 공명 등을 포함한다. 그러나 사람 PCSK9을 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 다른 종의 PCSK9 분자(오솔로그, orthologs)와 같은 기타 항원에 교차 반응성을 보일 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 사람 PCSK9뿐만 아니라 하나 또는 그 이상의 추가 항원에 결합하는 다중 특이적(예를 들면, 이중 특이적) 항체는 사람 PCSK9을 "특이적으로 결합하는" 것으로 간주된다. 더욱이 분리된 항체는 기타 세포 물질이나 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.

본 발명의 약제학적 제제에 포함될 수 있는 예시적 항-사람 PCSK9 항체는 특허 출원 번호 US 2010/0166768, US 2011/0065902, 그리고 WO 2010/077854에 명시되어 있으며, 상기의 공개 내용은 그 전체가 참조에 의해 포함된다.

본 발명의 특정 실시예에 따르면, 항-사람 PCSK9 mAb-316P 항체는 IGHV3-23 아형인 중쇄 가변 영역과 IGKV4-1 아형인 경쇄 가변 영역으로 이루어진 사람 IgG1이다 (참고 자료: Barbie and Lefranc, The Human Immunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ) Segments, Exp. Clin. Immunogenet. 1998; 15:171-183; and Scaviner, D. et al., Protein Displays of the Human Immunoglobulin Heavy, Kappa and Lambda Variable and Joining Regions, Exp. Clin. Immunogenet., 1999; 16:234-240).

어떤 실시예로, 항-사람 PCSK9 mAb-316P는 생식선 IGKV4-1 서열과 관련하여 항체의 노출된 표면에서 전하의 변화가 일어나는 적어도 하나의 아미노산 치환물을 포함한다. 상기의 생식선 IGKV4-1 서열, 그리고 본 명세서에 제시된 아미노산 위치 지정 숫자들은 Lefranc, M.-P., et al., IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system®, Nucl.에서 설명된 국제 Immunogenetics (IMGT) 정보 시스템에 따라 기술된다. 어떤 실시예로, 상기의 노출된 표면은 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 어떤 실시예로, 상기의 아미노산 치환물 또는 치환물들은 IGKV4-1의 CDR1(예를 들면, 위치 32에서) 무전하 극성 아미노산 대신 치환된 염기성 아미노산으로 이루어진 군에서 선택된다. 항체의 전하 분포에서 특히 환경 인터페이스(예를 들면, CDR에서와 같은)에서의 고유 치환은 용액 내 항체의 안정성을 유지하거나 진전시키기 위한 조건을 예측 불가능하게 할 것으로 예상된다.

어떤 실시예로, 상기의 항-사람 PCSK9 mAb-316P 항체는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하며, 이는 생식선 IGHV3-23 서열 또는 생식선 IGKV4-1 서열과 관련하여 상기 항체 가변 영역의 골격 영역 내에 전하의 변동을 야기한다. 어떤 실시예로, 상기의 아미노산 치환물 또는 치환물들은 (a) IGHV3-23의 골격 영역 3 (FR3) (예를 들면, 위치 77)에서 극성 아미노산 대용으로 치환된 소수성 아미노산, 그리고 (b) IGKV4-1의 골격 영역 2 (FR2) (예를 들면, 위치 51)에서 염기성 아미노산 대용으로 치환된 극성 아미노산으로 구성된 군에서 선택된다. 특히 골격 영역 내에서, 용매와의 CDR 인터페이스에 영향을 미치는 펩티드 사슬의 접힘능의 변화는 용액 내 항체의 안정성을 유지하거나 진전시키기 위한 조건을 예측 불가능하게 할 것으로 예상된다.

본 발명의 특정 실시예에 따르면, 상기의 항-사람 PCSK9 항체, 또는 이의 항원-결합 분절은 SEQ ID NO:2의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, 그리고 SEQ ID NO:4의 HCDR3을 포함한다. 특정 실시예로, 상기의 항-사람 PCSK9 항체, 또는 이의 항원-결합 분절은 SEQ ID NO:1의 HCVD를 포함한다.

본 발명의 특정 실시예에 따르면, 상기의 항-사람 PCSK9, 또는 이의 항원-결합 분절은 SEQ ID NO:6의 가벼운(kappa) 사슬 상보성 결정 영역(LCDR) 1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3을 포함한다. 특정 실시예로, 상기의 항-사람 PCSK9 항체, 또는 이의 항원-결합 분절은 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함한다.

본 명세서의 예시에서 사용된 비제한적 예시 항체는 "mAb-316P”라 지칭한다. 이 항체는 또한 US 7,608,693에서 H4H098P로 지칭된다. mAb-316P (H4H098P)는 SEQ ID NOs:1/5을 갖는 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍, 그리고 SEQ ID NOs:2 - 3 - 4 / SEQ ID NOs:6 - 7 - 8에 의해 대표되는 HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 도메인을 포함한다.

본 발명의 약제학적 제제에 포함된 항체, 또는 이의 항원-결합 분절의 양은 상기의 제제에 대해 바라는 특이 특성뿐만 아니라 상기의 제제가 사용될 특정 환경 및 목적에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시예로, 상기의 약제학적 제제는 50 ± 7.5 mg/mL 내지 250 ± 37.5 mg/mL의 항체; 60 ± 9 mg/mL 내지 240 ± 36 mg/mL의 항체; 70 ± 10.5 mg/mL 내지 230 ± 34.5 mg/mL의 항체; 80 ± 12 mg/mL 내지 220 ± 33 mg/mL의 항체; 90 ± 13.5 mg/mL 내지 210 ± 31.5 mg/mL의 항체; 100 ± 15 mg/mL 내지 200 ± 30 mg/mL의 항체; 110 ± 16.5 mg/mL 내지 190 ± 28.5 mg/mL의 항체; 120 ± 18 mg/mL 내지 180 ± 27 mg/mL의 항체; 130 ± 19.5 mg/mL 내지 170 ± 25.5 mg/mL의 항체; 140 ± 21 mg/mL 내지 160 ± 24 mg/mL의 항체; 150 ± 22.5 mg/mL의 항체; 또는 175 ± 26.25 mg/ml의 항체를 포함할 수 있는 액상의 제제이다. 예를 들면, 본 발명의 제제는 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 분절의 약 50 mg/mL; 약 60 mg/mL; 약 65 mg/mL; 약 70 mg/mL; 약 75 mg/mL; 약 80 mg/mL; 약 85 mg/mL; 약 90 mg/mL; 약 95 mg/mL; 약 100 mg/mL; 약 105 mg/mL; 약 110 mg/mL; 약 115 mg/mL; 약 120 mg/mL; 약 125 mg/mL; 약 130 mg/mL; 약 135 mg/mL; 약 140 mg/mL; 약 145 mg/mL; 약 150 mg/mL; 약 155 mg/mL; 약 160 mg/mL; 약 165 mg/mL; 약 170 mg/mL; 약 175 mg/mL; 약 180 mg/mL; 약 185 mg/mL; 약 190 mg/mL; 약 195 mg/mL; 약 200 mg/mL; 약 205 mg/mL; 약 210 mg/mL; 약 215 mg/mL; 약 220 mg/mL; 약 225 mg/mL; 약 230 mg/mL; 약 235 mg/mL; 약 240 mg/mL; 약 245 mg/mL; 또는 약 250 mg/mL를 포함할 수 있다.

부형제 및 pH

본 발명의 약제학적 제제는 하나 또는 그 이상의 부형제를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "부형제”란 원하는 일관성, 점도 또는 안정화 효과를 제공하기 위해 상기의 제제에 첨가되는모든 비치료적 물질을 의미한다.

특정 실시예로 본 발명의 약제학적 제제는 적어도 하나의 유기 혼합 용매, 예를 들면 보르텍싱(vortexing)과 같은 거친 취급이나 교반 상태에서도 사람 PCSK9 항체를 안정화시키는 유형과 용량을 포함한다. 어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 거친 취급 과정 중에 응집 항체가 총 항체 양(몰량에 근거하여) 중 3%이상 형성되지 않도록 하는 것이다. 어떤 실시예로, 거친 취급(rough handling)이란 항체 및 유기 혼합 용매가 들어있는 용액을 약 60분간 또는 약 120분간 보르텍싱 하는 것이다.

특정 실시예로, 상기의 유기 혼합 용매는 알킬 폴리(alkyl poly)(에틸렌 옥사이드)와 같은 비이온 계면활성제이다. 본 발명의 제제에 포함될 수 있는 특정 비이온 계면활성제는, 예를 들면 폴리소르베이트류로는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 28, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81 및 폴리소르베이트 85 등이 있으며; 폴록사머류로는 폴록사머 181, 폴록사머 188, 폴록사머 407 등이 있으며; 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 있다. 폴리소르베이트 20은 TWEEN 20, 소르비탄 모노로레인산(sorbitan monolaurate) 및 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노로레인산(polyoxyethylenesorbitan monolaurate)으로도 알려져 있다. 폴록사머 188은 PLURONIC F68로도 알려져 있다.

본 발명의 약제학적 제제에 포함된 비이온 계면활성제의 양은 상기의 제제에 대해 바라는 특이 특성뿐만 아니라 상기의 제제가 사용될 특정 환경 및 목적에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시예로, 상기의 제제는 0.01% ± 0.0015% 내지 0.2% ± 0.03%의 계면활성제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의의 제제는 약 0.0085%; 약 0.01%; 약 0.02%; 약 0.03%; 약 0.04%; 약 0.05%; 약 0.06%; 약 0.07%; 약 0.08%; 약 0.09%; 약 0.1%; 약 0.11%; 약 0.12%; 약 0.13%; 약 0.14%; 약 0.15%; 약 0.16%; 약 0.17%; 약 0.18%; 약 0.19%; 약 0.20%; 약 0.21%; 약 0.22%; 또는 약 0.23%의 폴리소르베이트 20이나 폴록사머 188을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 제제는 열 스트레스 조건에서도 사람 PCSK9 항체를 안정화시키는 하나 또는 그 이상의 안정화제의 유형 및 양을 포함할 수 있다. 어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 열 안정화제를 포함하는 용액을 약 45℃에서 최장 약 28일 동안 보관할 때 상기 항체의 약 91% 이상을 원상태 입체형태로 유지시키는 것이다. 어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 열 안정화제를 포함하는 용액을 약 45℃에서 최장 약 28일 동안 보관할 때 상기 항체의 약 6% 미만이 응집되는 것이다. 본 명세서에서 사용된 용어 “원상태”란 크기 배제법에 의한 상기의 주 형태로, 일반적으로 상기 항체의 미접촉 단량체이다.

특정 실시예로, 상기 열 안정화제는 수크로오스, 트레할로오스(trehalose) 및 만니톨, 또는 이의 모든 조합에서 선택된 당 또는 당 알코올이며, 상기의 제제에 포함된 이의 양은 상기의 제제가 사용될 특정 환경 및 용도 목적에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시예로, 상기의 제제는 약 3% 내지 약 14%의 당 또는 당 알코올; 약 4% 내지 약 13%의 당 또는 당 알코올; 약 5 % 내지 약 12%의 당 또는 당 알코올; 약 6% 내지 약 11%의 당 또는 당 알코올; 약 7% 내지 약 10%의 당 또는 당 알코올; 약 8% 내지 약 9%의 당 또는 당 알코올; 약 4% 내지 약 6%의 당 또는 당 알코올; 약 5% 내지 약 7%의 당 또는 당 알코올; 약 9% 내지 약 11%의 당 또는 당 알코올; 또는 약 11% 내지 약 13%의 당 또는 당 알코올을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약제학적 제제는 4%± 0.6%; 5% ± 0.75%; 6% ± 0.9%; 7% ± 1.05%; 8% ± 1.2%; 9% ± 1.35%; 10% ± 1.5%; 11% ± 1.65%; 12% ± 1.8%; 13% ± 1.95%; 또는 약 14% ± 2.1% 당 또는 당 알코올(예를 들면, 수크로오스, 트레할로오스 또는 만니톨)을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 제제는 안정된 pH를 유지하는 작용과 사람 PCSK9 항체를 안정화시키는데 도움이 되는 완충액 또는 완충계도 포함할 수 있다. 어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 완충액을 포함하는 용액을 약 45℃에서 약 28일까지 보관할 때 상기 항체의 4.5% ± 0.5% 미만 또는 6.0 ± 0.5% 미만이 응집되는 것이다. 어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 완충액을 포함하는 용액을 약 37℃에서 약 28일 동안 보관할 때 상기 항체의 3% ± 0.5% 미만 또는 2.6% ± 0.5% 미만이 응집되는 것이다. 어떤 실시예로,“안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 완충액을 포함하는 용액을 약 45℃에서 약 28일까지 보관하는 경우, 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기 항체의 최소 91% ± 0.5% 또는 최소 92% ± 0.5%가 이의 원상태 입체형태로 있는 것이다. 어떤 실시예로,”안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 완충액을 포함하는 용액을 약 37℃에서 최장 28일 동안 보관하는 경우, 크기 배제 크로마토그래피로 측정했을 때 상기 항체의 최소 94% ± 0.5% 또는 최소 95% ± 0.5%가 이의 원상태의 입체형태로 있는 것이다. 용어 “원상태” 또는 “원상태의 입체형태”가 뜻하는 것은 응집되거나 분해되지 않는 항체이다. 이것은 일반적으로 항체 물질의 상대적 크기를 측정하는 분석법(예를 들면 크기 배제 크로마토그래피)에 의해 결정된다. 상기의 비응집 및 비분해 항체는 원상태 항체와 동등한 분율로 분리되며 일반적으로 주 용리 분율이다. 응집된 항체는 원상태 항체보다 크기가 큰 분율로 용리된다. 분해된 항체는 원상태 항체보다 크기가 작은 분율로 용리된다.

어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 완충액을 포함하는 용액을 약 45℃에서 최장 약 28일 동안 보관하는 경우, 양이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기 항체의 적어도 38% ± 0.5% 또는 적어도 29% ± 0.5%가 주 전하 형태로 있는 것이다. 어떤 실시예로, “안정화시킨다”가 의미하는 것은 상기 항체 및 상기 완충액을 포함하는 용액을 약 37℃에서 최장 약 28일 동안 보관하는 경우, 양이온 교환 크로마토그래피로 측정했을 때 상기 항체의 적어도 46% ± 0.5% 또는 적어도 39% ± 0.5%가 주 전하 형태로 있는 것이다. 용어 “주 전하(main charge)” 또는 “주 전하 형태(main charge form)”가 뜻하는 것은 메인 피크의 이온 교화 수지로부터 용리되는 항체이며, 이는 일반적으로 한 쪽에서는 보다 “염기성” 피크에 의해, 그리고 다른 쪽에서는 보다 “산성” 피크에 의해 플랭크된다.

본 발명의 약제학적 제제는 약 5.2 내지 약 6.4의 pH를 가질 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 제제는 약 5.5; 약 5.6; 약 5.7; 약 5.8; 약 5.9; 약 6.0; 약 6.1; 약 6.2; 약 6.3; 약 6.4; 또는 약 6.5의 pH를 가질 수 있다. 어떤 실시예로, 상기 pH는 6.0 ± 0.4; 6.0 ± 0.3; 6.0 ±0.2; 6.0± 0.1; 약 6.0; 또는 6.0이다.

어떤 실시예로, 상기 완충액 또는 완충계는 pH 5.5 - 7.4의 범위를 완전히 또는 일부 중첩하는 완충 범위를 갖는 최소 하나의 완충액을 포함한다. 한 실시예로, 상기 완충액은 약 6.0 ± 0.5의 pKa를 갖는다. 특정 실시예로, 상기 완충액은 히스티딘 완충액을 포함한다. 특정 실시예로, 상기 히스티딘은 5 mM ± 0.75 mM 내지 15 mM ± 2.25 mM; 6 mM ± 0.9 mM 내지 14 mM ± 2.1 mM; 7 mM ± 1.05 mM 내지 13 mM ± 1.95 mM; 8 mM ± 1.2 mM 내지 12 mM ± 1.8 mM; 9 mM ± 1.35 mM 내지 11 mM ± 1.65 mM; 10 mM ± 1.5 mM; 또는 약 10 mM의 농도로 존재한다. 특정 실시예로, 상기 완충계는 6.0 ± 0.3의 pH에서 10 mM ± 1.5 mM의 히스티딘으로 구성된다.

본 발명의 약제학적 제제는 고농도의 항-PCSK9 항체 원료 의약품(예를 들면, 일반적으로 항체의 150 mg/ml 이상)을 함유하는 제제의 점도를 낮게 유지하거나 또는 점도를 낮추는 작용을 하는 하나 또는 그 이상의 부형제도 포함할 수 있다. 어떤 실시예로, 상기의 제제는 상기의 액상 제제의 점도를 20 ± 3 cPoise 이하, 15 ± 2.25 cPoise 이하, 또는 11 ± 1.65 cPoise 이하로 유지하는데 충분한 양의 아르기닌을 포함한다. 어떤 실시예로, 상기의 제제는 상기의 농도를 10.6 ± 1.59 cPoise로 유지하는데 충분한 양의 아르기닌을 포함한다. 특정 실시예로, 본 발명의 약제학적 제제는 10 mM ± 1.5 mM 내지 90 mM ± 13.5 mM, 20 mM ± 3 mM 내지 80 mM ± 12 mM, 30 mM ± 4.5 mM 내지 70 mM ± 10.5, 40 mM ± 6 mM 내지 60 ± 9 mM 또는 50 mM ± 7.5 mM의 농도의 아르기닌(바람직하게는 염산 L-아르기닌)을 포함한다.

예시적 제제

본 발명의 한 양상에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 점도가 낮으며, 일반적으로 생리학적으로 등장 용액 제제로 다음을 포함한다: (i) 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL, 100 mg/ml ± 15 mgmL, 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL, 또는 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9(예를 들면, mAb-316P)에 특이적으로 결합하는 사람 항체; (ii) 약 pH 6.0 ± 0.3에서 충분한 완충능을 제공하는 완충계; (iii) 특히 열 안정화제 역할을 하는 당; (iv) 상기 항체인 경우 구조적 무결성으로 보호하는 유기 혼합 용매; 그리고 (v) 상기 점도를 피하 투여에 편리한 용량으로 관리 가능하게 유지시키는 아미노산 염.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 50 ± 7.5 mg/mL 내지 약 175 ± 26.25 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하고, 치환된 IGHV3-23 타입 중쇄 가변 영역과 치환된 IGLV4-1 타입 경쇄 가변 영역(예를 들면, mAb-316P)을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) 약 pH 6.0 ± 0.3에서 효과적으로 완충작용을 하는 히스티딘을 포함하는 완충계; (iii) 수크로오스; (iv) 폴리소르베이트와 같은 비이온 세제; 그리고 선택적으로는 (v) 아르기닌 염.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 175 mg/ml ± 26.25 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3를 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 10 mM ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 5% w/v ± 0.75% w/v 수크로오스; (iv) 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20; 그리고 (v) 50 mM ± 7.5 mM의 염산 L-아르기닌.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 약 150 mg/ml ± 22.5 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 10 mM ± 1.5 mM히스티딘; (iii) 10% w/v ± 1.5% w/v의 수크로오스; 그리고 (iv) 0.2% w/v ± 0.03% w/v 또는 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 약 100 mg ± 15 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 약 20 mM ± 3 mM의 히스티딘; (iii) 12% w/v ± 1.8% w/v의 수크로오스; 그리고 (iv) 0.2% w/v ± 0.03% w/v 또는 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 약 50 mg ± 7.5 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 10 mM ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 6% w/v ± 0.9% w/v의 수크로오스; 그리고 (iv) 0.1% w/v ± 0.015% w/v 또는 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 175 mg/ml ± 26.25 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:1의 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:5의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 10 mM ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 5% w/v ± 0.75% w/v의 수크로오스; (iv) 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20; 그리고 (v) 50 mM ± 7.5 mM의 염산 L-아르기닌.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 약 150 mg/ml ± 22.5 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:1의 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:5의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 10 mM ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 10% w/v ± 1.5% w/v의 수크로오스; 그리고 (iv) 0.2% w/v ± 0.03% w/v 또는 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 약 100 mg ± 15 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:1의 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:5의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 약 20 mM ± 3 mM의 히스티딘; (iii) 12% w/v ± 1.8% w/v의 수크로오스; 그리고 (iv) 0.2% w/v ± 0.03% w/v 또는 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20.

한 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 다음을 포함한다: (i) 약 50 mg ± 7.5 mg/mL의 농도에서 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하며, SEQ ID NO:1의 중쇄 가변 도메인과 SEQ ID NO:5의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 사람 IgG1 항체; (ii) pH 6.0 ± 0.3에서 완충 작용을 하는 10 mM ± 1.5 mM의 히스티딘; (iii) 6% w/v ± 0.9% w/v의 수크로오스; 그리고 (iv) 0.1% w/v ± 0.015% w/v 또는 0.01% w/v ± 0.0015% w/v의 폴리소르베이트 20.

본 발명에 포함된 약제학적 제제의 추가적인 비제한적 예시는 아래에 제시된 예시를 포함하여 본 명세서의 다른 부분에 명시되어 있다.

상기 약제학적 제제의 안정성과 점도

본 발명의 약제학적 제제는 일반적으로 높은 수준의 안정성을 보인다. 상기의 약제학적 제제와 관련하여 본 명세서에서 사용된 용어 "안정적”의 의미는 상기의 약제학적 제제 내의 항체가 규정된 조건에서 보관 후에 허용 가능한 정도의 화학적 구조와 생물학적 기능을 유지한다는 의미이다. 제제는 이에 포함된 항체가 정해진 기간 동안 보관 후에 화학적 또는 생물학적 기능의 100%를 유지하지 않는다 할지라도 안정적일 수 있다. 특정 상황에서는 정해진 기간 동안 보관 후 항체의 구조나 기능의 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%를 유지하는 것이 "안정적”인 것으로 간주될 수 있다.

안정성은 특히 정해진 기간 동안 정해진 온도에서 보관 후 제제에 남아 있는 원래 항체의 백분율을 측정함으로써 측정된다. 원래 항체의 백분율은 “원래”가 비응집 및 비분해를 뜻할 수 있도록, 특히 크기 배제 크로마토그래피(예를 들면, 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피 [SE-HPLC])에 의해 측정될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "허용 가능한 정도의 안정성”이란 상기 항체의 원래 형태의 적어도 90%가 주어진 온도에서 정해진 기간동안 보관 후에 상기의 제제에서 검출될 수 있다는 의미이다. 특정 실시예로, 상기 항체의 원상태 형태의 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%가 정해진 온도에서 정해진 기간 동안 보관 후에 상기의 제제에서 검출될 수 있다. 안정성의 측정을 위해 정의된 시간의 길이는 적어도 14일, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 그 이상일 수 있다. 상기 약제학적 제제의 안정성을 평가할 때 보관될 수 있는 정의된 온도는 약 -80℃ 내지 약 45℃ 사이의 모든 온도, 예를 들면 약 -80℃, 약 -30℃, 약 -20℃, 약 0℃, 약 4°-8℃, 약 5℃, 약 25℃, 약 35℃, 약 37℃, 또는 약 45℃일 수 있다. 예를 들면, 5℃에서 6개월간 보관 후에 원상태 항체의 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상이 SE-HPLC에 의해 검출되는 경우 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 예를 들면, 25℃에서 6개월간 보관 후에 원상태 항체의 약 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상이 SE-HPLC에 의해 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 예를 들면, 45℃에서 28일간 보관 후에 원상태 항체의 약 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상이 SE-HPLC에 의해 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 예를 들면, -20℃에서 3개월간 보관 후에 원상태 항체의 약 96%, 97% 또는 98% 이상이 SE-HPLC에 의해 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 예를 들면, -30℃에서 3개월간 보관 후에 원상태 항체의 약 96%, 97% 또는 98% 이상이 SE-HPLC에 의해 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 예를 들면, -80℃에서 3개월간 보관 후에 원상태 항체의 약 96%, 97% 또는 98% 이상이 SE-HPLC에 의해 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다.

안정성은, 특히 정해진 온도에서 정해진 시간 동안 보관 후에 상기의 제제 내에 응집 형태를 형성하는 항체의 백분율을 측정한 것으로, 안정성은 형성되는 응집물의 퍼센트에 반비례하여 나타난다. 응집된 항체의 백분율은 특히 크기 배제 크로마토그래피(예를 들면, 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피 [SE-HPLC])에 의해 측정될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "허용 가능한 정도의 안정성”이란 주어진 온도에서 정해진 기간동안 보관 후에 상기 항체의 최대 6% 미만이 상기의 제제에서 응집된 형태로 검출된다는 의미이다. 특정 실시예로 허용 가능한 정도의 안정성이란 주어진 온도에서 정해진 기간 동안 보관 후에 상기 항체의 최대 약 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% 미만이 상기의 제제에서 응집물로 검출될 수 있다는 것을 뜻한다. 안정성의 측정을 위해 정의된 시간의 길이는 적어도 2주, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 그 이상일 수 있다. 상기 약제학적 제제의 안정성을 평가할 때 보관될 수 있는 온도는 약 -80℃ 내지 약 45℃ 사이의 모든 온도, 예를 들면 약 -80℃, 약 -30℃, 약 -20℃, 약 0℃, 약 4°-8℃, 약 5℃, 약 25℃, 약 35℃, 약 37℃ 또는 약 45℃일 수 있다. 예를 들면, 5℃에서 6개월간 보관 후에 상기 항체의 약 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% 미만이 응집된 형태로 검출되는 경우 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 25℃에서 6개월간 보관 후에 상기 항체의 약 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% 미만이 응집된 형태로 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 45℃에서 28일간 보관 후에 상기 항체의 약 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% 미만이 응집된 형태로 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. -20℃, -30℃, 또는 -80℃에서 3개월간 보관 후에 상기 항체의 약 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% 미만이 응집된 형태로 검출되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다.

안정성은, 특히 이온 교환(“산성 형태”) 동안 항체의 메인 분율(“주 전하 형태”)에서 보다 더 산성인 분율로 이동하는 항체의 백분율을 구함으로써 측정될 수 있으며, 이때 안정성은 산성 형태의 항체의 분율에 반비례한다. 이론에 의해 국한되지 않기를 바라면서, 상기 항체의 탈아미드화는 상기 항체에게 보다 음 전하를 띄게하여 탈아미드화 되지 않은 항체에 비해 더 산성이 되게 할 수도 있다 (참고 자료의 예: Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16, 2002, 99(8):5283-5288). “산성화된” 항체의 백분율은, 특히 이온 교화 크로마토그래피(예를 들면, 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피[CEX-HPLC])에 의해 측정될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "허용 가능한 정도의 안정성”이란 정해진 온도에서 정해진 기간동안 보관 후에 상기 항체의 최대 49%가 상기의 제제에서 더 산성인 형태로 검출된다는 의미이다. 특정 실시예로, 허용 가능한 정도의 안정성이란 주어진 온도에서 정해진 기간 동안 보관 후에 상기 항체의 최대 약 49%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1%가 상기의 제제에서 산성인 형태로 검출될 수 있다는 것을 뜻한다. 안정성의 측정을 위해 정의된 시간의 길이는 적어도 2주, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 그 이상일 수 있다. 상기 약제학적 제제의 안정성을 평가할 때 보관될 수 있는 온도는 약 -80℃ 내지 약 45℃ 사이의 모든 온도, 예를 들면 약 -80℃, 약 -30℃, 약 -20℃, 약 0℃, 약 4°- 8℃, 약 5℃, 약 25℃, 또는 약 45℃일 수 있다. 예를 들면, -80℃, -30℃, 또는 -20℃에서 3개월간 보관 후에 상기 항체의 약 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만이 더 산성 형태가 되는 경우 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 5℃에서 6개월간 보관 후에 상기 항체의 약 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만이 더 산성 형태가 되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 25℃에서 6개월간 보관 후에 상기 항체의 약 43%, 42%, 41%, 40%, 39%, 38%, 37%, 36%, 35%, 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만이 더 산성 형태가 되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 45℃에서 28일간 보관 후에 상기 항체의 약 49%, 48%, 47%, 46%, 45%, 44%, 43%, 42%, 41%, 40%, 39%, 38%, 37%, 36%, 35%, 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만이 더 산성 형태가 되는 경우에도 약제학적 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다.

본 발명의 제제의 안정성을 산정하기 위한 기타 방법들, 예를 들면 열 안정성을 측정하기 위한 감별 스캐닝 열량 측정법(DSC), 기계적 안정성을 측정하기 위한 제어 교반법, 그리고 용액 탁도를 측정하기 위한 약 350 nm 또는 약 405 nm에서의 흡광도 측정법 등이 사용될 수 있다. 예를 들면, 약 5℃ 내지 약 25℃에서 6개월 이상의 기간 후에, 측정 시작 시점의 상기 제제의 OD₄₀₅로부터 상기 제제의 OD₄₀₅변화가 약 0.05(예를 들면, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01, 또는 그 이하) 미만인 경우 본 발명의 제제는 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다.

상기 항체의 표적에 대한 생물학적 활성도 또는 결합 친화도를 측정하는 것도 안정성 산정에 사용될 수 있다. 일례로 본 발명의 제제는, 예를 들면 5℃, 25℃, 45℃ 등의 온도에서 정해진 기간(예를 들면, 1 내지 12개월) 동안 보관 후에 상기의 제제에 포함된 항-PCSK9 항체가 상기 항체의 보관 전 결합 친화도의 적어도 90%, 95%, 또는 그 이상으로 PCSK9에 결합하는 경우 안정성이 있는 것으로 간주될 수 있다. 결합 친화도는 예를 들면 ELISA 또는 플라즈몬 공명법으로 측정할 수 있다. 생물학적 활성도는 PCSK9 활성도 분석법(예를 들면 항 PCSK9 항체를 포함하는 상기의 제제로 PCSK9를 발현하는 세포를 접촉하는 것)에 의해 측정될 수 있다. 이러한 세포에 대한 상기 항체의 결합은 예를 들면 FACS 분석을 통해 측정할 수 있다. 대안으로, PCSK9 시스템의 다운스트림은 상기 항체의 존재로 측정하여, 상기 항체 부재 시의 PCSK9 시스템과 비교할 수 있다. 어떤 실시예로, 상기 PCSK9는 상기 세포에 내생할 수 있다. 다른 실시예로, 상기 PCSK9는 상기 세포에서 이소적으로 발현될 수 있다.

제제 내 항체의 안정성을 산정하기 위한 추가 방법들은 아래에 제시된 예시에 나와 있다.

본 발명의 약제학적 제제는 특정 실시예에서 저등급 내지 중간 등급의 점도를 보일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "점도"는 "동점도(kinematic viscosity)" 또는 "절대점도(absolute viscosity)”일 수 있다. "동점도"는 중력의 영향 하의 용액의 흐름 저항 측정값이다. 동일한 양의 두 액체를 동일한 모세관 점도계에 담은 다음 중력에 의해 흘러 내리도록 하는 경우, 점도가 높은 액체가 점도가 낮은 액체보다 모세관을 흘러 내리는 시간이 더 걸린다. 예를 들면, 한 액체는 흘러 내리는데 200초가 걸리고 또 다른 액체는 400초가 걸린다면, 두 번째 액체가 첫 번째 액체보다 동점도계 값이 두 배가 된다. "절대점도"는 때때로 역학 또는 단순 점도라 불리며, 동점도 및 액체 밀도의 곱(절대점도 = 동점도 x 밀도)이다. 역학 점도의 단위는 L²/T이며, 여기서 L은 길이, 그리고 T는 시간이다. 일반적으로, 동점도는 센트스토그(cSt)로 표시된다. 동점도의 SI 단위는 mm²/s로 이것이 1 cSt이다. 절대점도는 센티포아즈(cP)의 단위로 표시된다. 절대점도의 SI 단위는 밀리파스칼-초(mPa-s)로, 여기에서 1 cP = 1 mPa-s이다.

본 발명의 액상 제제와 관련하여 명세서에서 사용된 저등급 점도는 약 15 cPoise (cP) 미만의 절대점도를 나타낸다. 예를 들면, 표준 점도 측정 기법으로 사용하여 측정했을 때, 상기의 제제가 약 15 cP, 약 14 cP, 약 13 cP, 약 12 cP, 약 11 cP, 약 10 cP, 약 9 cP, 약 8 cP, 또는 그 이하의 절대점도를 보이는 경우 본 발명의 제제는 "낮은 점도”를 갖는 것으로 간주된다. 본 발명의 액상 제제와 관련하여 본 명세서에서 사용된 중간 등급의 점도는 약 35 cP와 약 15 cP 사이의 절대점도를 나타낸다. 예를 들면 표준 점도 측정 기법으로 사용하여 측정했을 때, 상기의 제제가 약 34 cP, 약 33 cP, 약 32 cP, 약 31 cP, 약 30 cP, 약 29 cP, 약 28 cP, 약 27 cP, 약 26 cP, 약 25 cP, 약 24 cP, 약 23 cP, 약 22 cP, 약 21 cP, 약 20 cP, 약 19 cP, 18 cP, 약 17 cP, 약 16 cP, 또는 약 15.1 cP의 절대점도를 보이는 경우, 본 발명의 제제는 "중간 점도”를 갖는 것으로 간주된다.

아래의 예시에서 설명된 바와 같이, 본 발명자들은 고농도의 항-사람 PCSK9 항체(예를 들어 약 100 mg/ml에서부터 적어도 200 mg/mL)를 포함하는 저등급 내지 중간 등급 액상 제제는 상기 항체를 약 25 mM 내지 약 100 mM의 아르기닌으로 제제함으로써 얻을 수 있다는 놀라운 발견을 하였다. 또한 더욱이 상기의 제제의 점도는 수크로오스 함량을 약 10% 미만으로 줄임으로써 더 크게 감소시킬 수 있다는 것도 발견하였다.

용기와 투여 방법

본 발명의 약제학적 제제는 의약품 및 기타 치료용 조성물의 보관에 적합한 모든 용기에 담을 수 있다. 예를 들면, 상기의 약제학적 제제는 정해진 용량의 밀봉 및 살균된 플라스틱 또는 유리 용기(바이알, 앰풀, 시린지, 카트리지 또는 병 등)에 담을 수 있다. 본 발명의 제제를 담는데에는 여러 형식의 바이알(예를 들면, 투명 및 불투명(예, 호박) 유리 또는 플라스틱 바이알)을 사용할 수 있다. 마찬가지로, 시린지도 모든 형태의 것을 본 발명의 약제학적 제제를 담거나 투여하는데 사용할 수 있다.

본 발명의 약제학적 제제는 "일반 텅스텐" 시린지 또는 "저함량 텅스텐" 시린지에 담을 수 있다. 당 업계의 일반적인 기술자라면 알 수 있겠지만, 유리 시린지를 만드는 과정에는 일반적으로 유리에 구멍을 내어 액체가 끌어들여 시린지에서 배출하도록 해 주는 뜨거운 텅스텐 막대가 필요한다. 이 과정에서 시린지 내부 표면에 텅스텐의 잔유물이 쌓이게 된다. 이후 시린지 내의 텅스텐 잔유량을 줄이기 위해 세척과 기타 가공 단계를 사용할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "일반 텅스텐"은 시린지에 텅스텐의 함량이 500십억 분율(ppb) 이상인 것을 뜻한다. 용어 "저함량 텅스텐"은 시린지의 텅스텐 함량이 500 ppb 미만인 것을 의미한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 저함량 텅스텐 시린지는 텅스텐 함량이 약 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 이보다 낮은 ppb일 수 있다.

시린지에 사용된 고무 플런저 및 바이알의 개구부를 닫기 위해 사용된 고무 스톱퍼는, 시린지 또는 바이알의 약물 내용물의 오염을 방지하거나 의약품의 안정성을 보존하기 위해 코팅할 수 있다. 따라서, 특정 실시예에 따른 본 발명의 약제학적 제제는, 코팅된 플런저를 포함하는 시린지 내에 또는 코팅된 고무 스톱퍼로 밀봉된 바이알 내에 담길 수 있다. 예를 들면, 상기의 플런저 또는 스톱퍼는 플루오르카본 필름으로 코팅될 수 있다. 본 발명의 약제학적 제제를 담는 바이알 및 시린지와 함께 사용하기에 적합한 코팅된 스톱퍼나 플런저의 예시는, 예를 들면 U.S. Patent Nos. 4,997,423; 5,908,686; 6,286,699; 6,645,635; 및 7,226,554에 언급되어 있으며, 그 내용은 전체가 참고자료로 본 명세서에 통합되어 있다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 특정 예시적인 코팅된 고무 스톱퍼 및 플런저는 West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA)에서 출시한 "FluroTec®” 상표로 시중에서 구할 수 있다. FluroTec®는 완제 의약품이 고무 표면에 들러붙는 것을 최소화 하거나 방지하기 위해 사용되는 플루오르카본 코팅의 예시이다.

본 발명의 특정 실시예에 따르면, 상기의 약제학적 제제는 플루오르카본 코팅 플런저를 포함하는 저함량 텅스텐 시린지에 담길 수 있다.

상기의 약제학적 제제는 주사(예를 들면 피하, 정맥, 근내, 복강내 등) 또는 경피, 점막, 비강, 폐 또는 구강 투여 등과 같은 비경구적 경로로 환자에게 투여될 수 있다. 여러가지 재사용 가능한 펜 또는 자동주입 전달 장치가 본 발명의 약제학적 제제를 피하 경로로 전달하는데 사용될 수 있다. 예를 몇 개만 든다면 AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ pen (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ pen, HUMALOG™ pen, HUMALIN 70/30™ pen (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II 및 III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ 그리고 OPTICLIK™(sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 본 발명의 약학적 조성물의 피하 경로 전달에 사용되는 일회용 펜 또는 자동 주입 전달 장치의 예로는 SOLOSTAR™ pen (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk), 그리고 KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.), 그리고 HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL)이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.

본 발명의 약제학적 제제를 전달하기 위한 미세 주입기(microinfusor)의 사용도 본 명세서에서 고려된다. 본 명세서에서 사용된 용어 "미세 주입기"는 치료용 제제의 대용량(예를 들면, 최대 약 2.5 mL 또는 그 이상)을 장시간(예를 들면, 약 10, 15, 20, 25, 30분 또는그 이상)에 걸쳐 천천히 투여하도록 설계된 피하 전달 장치를 뜻한다. 참고자료의 예: U.S. 6,629,949; US 6,659,982; 그리고 Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996). 미세 주입기는 특히 고농도(예를 들면, 약 100, 125, 150, 175, 200 mg/mL 또는 그 이상)로 함유된 치료용 단백질 또는 점성 용액의 대용량 전달에 유용하다.

한 실시예로, 약 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 항-PCSK9 항체를 함유한 상기의 액상 약제학적 제제는 미리 충진된 시린지에 약 1.14 mL ± 0.17 ml의 용량을 담아 피하 경로로 투여된다. 한 실시예로, 상기 시린지는 27-게이지 두께의 바늘, 플루오르카본 코팅 고무 플런저 및 고무 바늘 보호부로 채워진 1 mL의 기다란 유리 시린지이다. 한 실시예로, 상기의 시린지는 27-게이지 바늘, FM27 고무 바늘 보호부, 그리고 FLUROTEC® 코팅된 4023/50 고무 플런저가 장착된 OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지이다.

한 실시예로, 약 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체를 함유한 상기의 액상 약제학적 제제는 미리 충진된 시린지에 약 1 mL ± 0.15 ml의 용량을 담아 피하 경로로 투여된다. 한 실시예로, 상기 시린지는 27-게이지 두께의 바늘, 플루오르카본 코팅 고무 플런저 및 고무 바늘 보호부로 채워진 1 mL의 장방형 유리 시린지이다. 한 실시예로, 상기의 시린지는 27-게이지 바늘, FM27 고무 바늘 보호부, 그리고 FLUROTEC® 코팅된 4023/50 고무 플런저가 장착된 OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지이다.

상기 약제학적 제제의 치료적 사용

본 발명의 약제학적 제제는 특히 PCSK9에 의해 매개되는 질환이나 장애를 포함하는 모든 PCSK9 관련 질환이나 장애의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 본 발명의 약제학적 제제의 투여에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 질환 및 장애의 예로는 고콜레스테롤혈증, 가족성 고콜레스테롤혈증, 고지혈증, 가족성 고지혈증, 이상베타지질단백혈증, 가족성 이상베타지질단백혈증, 고중성지질혈증, 그리고 가족성 고중성지질혈증과 등과 같은 다양한 이상지질혈증을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다.

예시

다음의 예시는 당 업계의 일반적인 기술자에게 본 발명의 방법과 조성물의 제조법과 사용 방법에 대한 완전한 공개와 설명을 제공하기 위해 제시된 것으로, 본 발명자가 자신의 발명의 범위를 제한하는 용도가 아니다. 사용된 수치(예를 들면, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 기하려고 하였지만 약간의 실험적 오류와 편차를 고려해야 한다. 달리 표시되지 않는 한 파트(parts)는 몰당 파트이며, 분자량은 평균 분자량, 온도는 섭씨, 그리고 압력은 대기압 또는 대기압 근방이다.

상기 단백질과 호환 가능하고 정맥 및 피하 주사에 근접한 생리적 삼투압 농도 및 저 점도를 유지시키면서 이의 안정성을 강화시키는 부형제를 파악하기 위해 초기 제제 개발 활동에는 mAb-316P(본 발명의 항-PCSK9 항체)의 액상 및 동결 건조된 제제 내의 유기 혼합 용매, 열 안정화제 및 완충액의 선별검사를 포함하였다. 완충제 조건 역시 최대 단백질 안정성을 위한 최적의 pH를 정하기 위해 검사되었다.

예시 1: 항-PCSK1 MAB-316P 제제의 개발

PCSK9 항체의 안정성을 강화시키는 부형제를 파악하기 위해 다양한 완충액, 유기 혼합용매 및 열 안정화제를 선별검사 하였다. 완충액 조건 역시 최대 항체 안정성을 위한 최적의 pH를 정하기 위해 검사되었다. 상기의 연구에서 생성된 결과들은 안정적인 액상 제제뿐만 아니라, 정맥(IV) 또는 피하 투여(SC)를 위해 임상적 사용에 적합한 안정적인 동결 건조된 제제를 개발하기 위해 사용되었다. 동결 건조된 완제 의약품의 경우, IV용의 50 mg/mL 또는 SC 투여용의 100 mg/mL의 농도로 주사용 멸균수(WFI)로 재구성된 단일 또는 이중 용도 제제가 개발되었다. 50 mg/mL로 재구성한 후, 상기 완제 의약품을 더 희석하여 0.9% 염화나트륨이 들어있는 IV 전달용의 IV 백에 담는다. 상기 액상 제제의 경우, mAb-316P는 175 ± 27 mg/ml 및 150 ± 23 mg/ml로 제제화되었다. 한 실시예로, 상기 175 ± 27 mg/mL의 mAb-316P는 10 ± 1.5 mM의 히스티딘 (pH 6.0 ± 0.3), 0.01% ± 0.0015%의 폴리소르베이트 20, 5% ± 0.75% 수크로오스에서 제제화되었다. 한 실시예로, 상기 150 ± 23 mg/mL의 mAb-316P는 10 ± 1.5 mM 히스티딘 (pH 6.0 ± 0.3), 0.2% ± 0.03% 또는 0.01% ± 0.0015%의 폴리소르베이트 20, 10% ± 1.5%의 수크로오스에서 제제화되었다.

예시 2: 항-PCSK1 MAB-316P 완충액 및 pH

상기 PCSK9 항체의 안정성에 대한 pH 및 완충액 종류의 영향이 액상 제제에서 검사되었다. 상기 단백질의 열 안정성에 대한 완충액 및 pH의 영향을 산정하기 위해 2 mg/mL의 항-PCSK9 mAb-316P가 45℃에서 각각 10 mM의 아세트산염(pH 5.0-5.5), 구연산염(pH 5.5-6.0), 숙신산염 (pH 6.0), 히스티딘 (pH 6.0), 인산염(pH 6.0-7.5), 또는 Tris (pH 8.0) 완충액에서 배양되었다 (표 1). 이 실험의 경우, 상기의 액상 제제는 FLUROTEC® 코팅된 4432/50 부틸 고무 스톱퍼가 포함된 2 mL 용량의 Type 1 규산염 유리 바이알에 각각 0.35 mL씩 보관되었다. 복구된 mAb-316P의 총량은 역상 크로마토그래피를 사용하여 측정되었다. 원상태 대 응집된 형태의 mAb-316P의 백분율은 크기-배제 크로마토그래피를 사용하여 측정되었다. mAb-316P의 산성 종과 염기성 종의 백분율은 양이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 측정되었다. 최대 단백질 안정성은 항-PCSK9 mAb-316P가 pH 6.0의 10 mM 히스티딘 완충액에서 제제화되었을 때, 크기 배제 크로마토그래피(SE) 및 양이온 교환 크로마토그래피(CEX) 모두에 의한 측정으로 관찰되었다.

그 다음 mAb-316P에 대한 최적의 pH는 10 mg/mL의 mAb-316P를 45℃에서 pH 5.5와 pH 6.5 사이의 히스티딘에서 배양함으로서 측정되었다. 최대 단백질 안정성은 SE 및 CEX에 의한 측정으로, mAb-316P가 pH 6.0에서 완충 작용을 하는 히스티딘에서 제제화되었을 때 관찰되었다 (표 2). 이러한 분석을 통해 메인 단백질 분해 경로는 응집물, 절단된 산물(cleavage product), 그리고 전하 변이물(charge variant)의 형성이었다는 것도 드러났다. 이러한 결과에 근거해서, pH 6.0의 10 mM 히스티딘 완충액이 액상 및 동결 건조된 mAb-316P 제제의 개발용으로 선택되었다.

제제 개발 연구에서 얻은 결과는 염기 조건(pH ≥ 6.5)에서 용액 상태의 항-PCSK9 mAb-316P는 탈아미노 반응을 거칠 수 있다는 것을 나타낸다. 역으로, pH ≤ 5.5에서는 mAb-316P의 분자량 변이물이 더 빠른 속도로 형성되는 것이 관찰되었다. 이러한 데이터에 근거하여, mAb-316P의 제제에 사용되는 완충액 pH는 pH 5.7와 pH 6.3 사이에서 유지된다. mAb-316P의 가속 안정성은 이러한 pH 범위에서는 유사하다.

예시 3: 교반 스트레스 방지물의 선택

여러가지 혼합용매를 개별적으로 시험하여 mAb-316P를 함유하는 혼합물에서 교반 스트레스로 인해 입자가 형성되는 것을 최소화하는 능력에 대해 알아보았다. 교반된 원료 의약품의 탁도 분석은 mAb-316P를 함유하는 용액(FLUROTEC® 코팅된 4432/50 부틸 고무 스톱퍼가 포함된 2 mL 용량의 Type 1 규산염 유리 바이알에 담긴 0.35 mL의 25 mg/mL mAb-316P, 10 mM 히스티딘, pH 6.0 ± 0.2)을 120분간 보르텍스 했을 때 405 nm에서 광밀도(OD)를 증가시키는 것으로 나타났다 (표 3). 평가된 혼합용매를 포함하는 모든 제제에서 교반으로 인한 탁도의 증가가 방지된 것으로 나타난다. 그러나 20% PEG 300, 10% PEG 300, 그리고 20% 프로필렌 글리콜은 SE로 측정했을 때 mAb-316P의 열 안정성을 유의하게 감소시켰다 (표 4; 상기 보르텍스 연구와 동일한 mAb-316P 농도, 완충액, 그리고 용기 조건). 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, Pluronic F68, 그리고 PEG 3350을 포함하는 제제는 SE 및 CEX으로 측정했을 때 mAb-316P의 열 안정성에 어떠한 유의한 영향도 미치지 않았으므로, 이들 혼합 용매는 항-PCSK9 mAb-316P 제제에 적합한 것으로 판단된다. 폴리소르베이트 20은 mAb-316P의 교반 및 열 연구 모두에서 좋은 안정성 특성을 시연하였으므로 mAb-316P의 동결 건조된 제제 및 액상 제제 모두의 개발을 위한 유기 혼합용매로 선택되었다.

예시 4: 열 스트레스 방지물의 선택

당, 아미노산, 그리고 무기염을 포함하는 다양한 목록에서 선택된 다양한 부형제가 개별적으로 mAb-316P의 열 안정성을 최적으로 증가시키는 시험을 거쳤다. 검사된 열 안정화제의 일부에 대한 요약이 표 5에 제시되어 있다. 이러한 실험의 경우, 상기의 “열 안정화제” 부형제는 10 mM 히스티딘에 용해된 20 mg/mL의 mAb-316P(FLUROTEC® 코팅된 4432/50 부틸 고무 스톱퍼가 포함된 2 mL 용량의 Type 1 규산염 유리 바이알에 담긴 0.35 mL)에 포함되었다. 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 그리고 트레할로오스를 함유하는 제제는 SE 분석으로 측정했을 때 mAb-316P 분해량이 최소였다. 그러나 소르비톨을 함유하는 제제는 수크로오스, 트레할로오스, 그리고 만니톨을 함유하는 제제에 비해 탁도가 놀랄 정도로 증가함을 보여 주었다 (표 5). 수크로오스, 트레할로오스, 그리고 만니톨은 항-PCSK9 mAb-316P의 전하 변이물의 형성에 아무런 영향을 미치지 않는 것으로 관찰된 반면, 만니톨은 동결-해동을 여러 번 하는 경우 상기 단백질의 안정성을 떨어뜨리는 것으로 관찰되었다. 따라서, mAb-316P는 수크로오스 또는 트레할로오스와 함께 제제될 때 유사한 안정성을 보였다.

예시 5: 동결 건조된 제제

동결 건조된 제제, 특히 전하 변이물과 관련하여 항-PCSK9 mAb-316P의 안정성을 증가시키고 mAb-316P의 최대 전달 가능 농도를 증가시키기 위해 개발되었다. 다양한 동결 건조 보호제가 FLUROTEC® 코팅된 4432/50 부틸 고무 스톱퍼를 포함된 2 mL 용량의 Type 1 규산염 유리 바이알에서 0.7 mL의 50 mg/mL mAb-316P, 10 mM 히스티딘과 함께 조합되며, 동결 건조되고, 50℃에서 배양될 때 동결 건조된 mAb-316P를 안정화시키는 능력에 대해 검사된다. 분석에 앞서, 상기의 동결 건조된 케이크는 100 mg/mL mAb-316P로 재구성된다. SE 및 CEX로 측정했을 때 안정성이 가장 큰 두 가지 동결 건조 제제는 다음 물질이 들어있었다: 1) 6% 수크로오스 또는 2) 2% 수크로오스 및 2% 아르기닌. 6% 수크로오스가 mAb-316P 완제 의약품 제제를 위해 선택되었다. 따라서, 항-PCSK9 mAb-316P 동결 건조된 완제 의약품은 10 mM 히스티딘, pH 6.0 ± 0.1, 0.1% (w/v) 폴리소르베이트 20, 6% (w/v) 수크로오스, 그리고 50 mg/mL 항-PCSK9 mAb-316P을 포함하는 최적화된 액상 완충된 제제에서 동결 건조로 생산되었다. 이러한 동결 건조된 제제의 보관과 스트레스 안정성은 표 7에 제시되어 있다.

항-pPCSK9 mAb-316P 동결 건조 주기는 상기 제제의 측정된 Tg’ (동결 유리 전이 온도)를 바탕으로 개발되었으며, 이것은 저온/저습(subambient) 변조 시차 주사 열량법(mDSC)을 사용하여 측정되었다. 상기 제품 온도는 1차 건조 과정 동안 -27.9℃로 측정된 Tg’ 이상으로 올라가서는 안된다.

동결 건조된 mAb-316P는 5.3 mL의 50 mg/mL mAb-316P, 10 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.1% 폴리소르베이트 20, 6% 수크로오스 제제를 20 mL Type 1 유리 바이알에 충진한 다음, 다음의 단계에 따라 동결 건조시킴으로써 제조된다:

1. 적재 과정 중에 요구되는 선반 온도(Shelf temperature): 5-25℃

2. 초기 유지 온도: 5℃에서 60분간

3. 동결을 위한 온도 변화율 (시간): 0.5℃/분 (100분)

4. 유지 온도: -45℃에서 120분간

5. 진공 설정점: 100 mTorr

6. 1차 건조를 위한 가열의 변화율 (시간): 0.5℃/분 (40분)

7. 1차 건조의 선반 온도: -25℃

8. 1차 건조의 시간: 78시간

9. 2차 건조를 위한 가열의 변화율 (시간): 0.2℃/분 (300분)

10. 2차 건조의 선반 온도: 35℃

11. 2차 건조의 시간: 6시간

12. 냉각을 위한 온도 변화율 (시간): 0.5℃/분 (20분)

13. 유지 조건: 25℃에서 60분*

14. 질소 가스로 재충진

15. 다음과 같은 진공 상태에서 스톱퍼로 막기: 대기압의 80 % (608,000 mTorr )

2차 건조 후와 스톱퍼링 단계 전에 보관 기간이 길어지는 경우, 동결 건조기의 선반 온도는 2-8℃가 되어야 한다. 위에서 설명된 최종 사이클을 사용하여 생산된 동결 건조된 완제 의약품은 케이크 성상이 우수했고, 수분 함량이 낮았으며(0.3%), 재구성 시간이 4분 미만이었고, 그리고 재구성된 용액이 혼탁하지 않았다.

동결 건조된 케이크 성상은 mAb-316P 완제 의약품(mAb-316P DP)이 50℃에서 2개월간 배양되거나 5℃에서 3개월간 보관될 때에도 영향을 받지 않았다. 재구성된 mAb-316P 완제 의약품의 pH, 성상, 또는 탁도도 아무 영향이 없었으며 복구된 mAb-316P의 양에도 유의한 차이가 없었다. 50℃에서 2개월간 배양 후에 동결 건조된 mAb-316P 완제 의약품은 SE-HPLC로 측정했을 때 1.1%가 더 분해되었으며, CEX-HPLC로 측정했을 때는 8.3%가 더 분해되었다. 동결 건조된 mAb-316P 완제 의약품을 5℃에서 3개월간 보관했을 때 유의한 분해는 관찰되지 않았다. 항-PCSK9 생물 검정법으로 측정했을 때 스트레스를 받은 어느 표본에서도 역가의 유의한 손실이 관찰되지 않았다.

예시 6: 액상 및 재구성된 MAB-316P

동결 건조된 mAb-316P 완제 의약품을 재구성하는 방법은 투여 경로에 따라 2가지가 있다. IV 투여의 경우, mAb-316P 완제 의약품은 5.0 mL의 무균 WFI로 재구성하여 5.3 mL의 용액(50 mg/mL mAb-316P, 10 mM 히스티딘, pH 6.0, 0.1% (w/v) 폴리소르베이트 20 및 6% (w/v) 수크로오스)으로 만든다. SC 투여의 경우, mAb-316P 완제 의약품은 2.3 mL의 무균 WFI로 재구성하여 2.7 mL의 용액(100 mg/mL REGN727, 20 mM 히스티딘, pH 6.0, 0.2% (w/v) 폴리소르베이트 20 및 12% (w/v) 수크로오스)으로 만든다. 인출 가능한 용량은 IV 주사의 경우 4.8 mL, SC 주사의 경우 2.0 mL이다; 평균 0.7 mL의 재구성된 용액이 SC 바이알에 담긴다.

대체 방법으로, 액상 mAb-316P는 동결 건조의 개입 단계 없이 액상 제제로 제제된다. 액상 mAb-316P 제제는 150 mg/mL (± 15%) 또는 175 mg/mL (± 15%)의 항-PCSK9 mAb-316P로, 10 ± 1.5 mM의 히스티딘 (pH 6.0 ± 0.3), 0.01% ± 0.0015% 또는 0.2% ± 0.03%의 폴리소르베이트 20, 5% ± 0.75% 또는 10% ± 1.5%의 수크로오스에 용해되며, 175 mg/mL 제제의 경우에는 50 ± 7.5 mM의 아르기닌이다.

항-PCSK9 mAb-316P는 무균 여과된 경우 안정성이 있는 것으로 밝혀졌다. 임상용 공급제품의 제조에는 Millipore MILLIPAK 여과 장치가 사용된 반면 동일한 조성물의 필터는 임상 연구에도 사용되었다 (Millipore MILLEX DURAPORE). 유리 바이알 보관에 비해, mAb-316P의 제제된 원료 의약품(mAb-316P FDS)의 안정성은 폴리프로필렌 튜브, 폴리스티렌 튜브, 폴리카보네이트 튜브, 또는 스테인레스강 볼 베어링이 들어있는 유리 바이알에 보관했을 때 유의하게 영향을 받지 않았다 (표 8).

예시 7: 사전 충진된 시린지 내의 액상 제제

제제 개발 연구는 경로용으로 사전 충진된 시린지(PFS)에 사용될 수 있는 mAb-316P의 고농도 액상 제제를 개발할 목적으로 이루어졌다. 동결 건조된 REGN727 제제의 개발 단계의 결과는 최적의 완충액, pH, 유기 혼합용매, 그리고 열 안정화제가 각각 히스티딘, pH 6.0, 폴리소르베이트 20, 그리고 수크로오스였다는 것을 보여주었다 (전술). 이와 동일한 부형제가 150 mg/mL 및 175 mg/mL 모두의 mAb-316P 완제 의약품 제제 개발에 사용되었다. 상기의 제제의 점도를 낮추기 위해 mAb-316P 완제 의약품의 175 mg/mL 버전에는 아르기닌이 첨가되었다. 150 및 175 mg/mL mAb-316P 완제 의약품의 스트레스 안정성은 1 mL의 기다란 유리 Nuova OMPI Pre-filled Syringes (PFS) 내에서 검사하여 대조 유리 바이알 내의 150 및 175 mg/mL 완제 의약품과 비교하였다. 150 또는 175 mg/mL mAb-316P 완제 의약품을 45℃에서 배양한 후에 OMPI PFS와 유리 대조 바이알 간에 물리적 또는 화학적 분해량에서 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 이러한 데이터는 150 및 175 mg/mL 항-PCSK9 mAb-316P 완제 의약품 제제는 PFS 내에서 사용해도 충분히 안정성이 있다는 것을 나타낸다.

예시 8: MAB-316P 제제된 원료 의약품의 안정성

150 및 175 mg/mL 모두의 mAb-316P 제제의 보관 및 스트레스 안정성을 측정하기 위해 여러가지 안정성 연구가 수행되었다. mAb-316P의 물리적 안정성을 평가하기 위해 탁도 및 RP-HPLC 분석법이 사용되었다. 물리적 안정성은 용액 내 용해 가능한 형태의 항-PCSK9 mAb-316P의 복구율로 정의된다. 단백질 손실은 단백질 침전이나 표면 흡수에 기인할 수 있다. 용액 내 입자의 존재는 육안 검사나 405 nm에서 광밀도(OD) 측정(탁도 측정값)으로 발견할 수 있다. 상기의 분석법 중 후자의 경우, OD의 증가는 입자 형성으로 인한 탁도의 증가를 나타낸다. OD 측정에 의해 입자의 존재가 확인되면 표본은 안정성을 유지하지 못했음을 나타낸다. mAb-316P의 복구율은 RP-HPLC로 측정된다. RP-HPLC 분석법에서, 상기의 항-PCSK9 mAb-316P 항체는 역상 칼럼에서 단일 피크로 용출된다. 각 시험 표본의 농도는 정의된 단백질 탑재물에 대한 mAb-316P 표준을 사용하여 생성된 칼리브레이션 곡선과 용출된 mAb-316P 항체 피크의 영역을 비교하여 결정된다.

화학적 안정성은 표본 내 항-PCSK9 항체(mAb-316P)의 화학적 구조의 무결성(integrity)을 지칭한다. 대부분의 화학적 안정성은 단백질의 공유결합적 변형물(예를 들면 공유결합적 응집물, 절단된 산물, 또는 전하 변이물) 및 단백질의 비공유결합적 변형물(예를 들면, 비공유결합적 응집물)의 형성에 기인할 수 있다. 지금까지 발견된 mAb-316P의 유일한 분해 산물은 분자량과 전하에서 차이가 있는 종들이다. 더 높거나 더 낮은 분자량 분해 산물은 SE-HPLC에 의해 원상태의 mAb-316P로부터 분리될 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피 방법에서 원상태의 mAb-316P의 백분율은 모든 mAb-316P 항체 피크의 전체 영역에 대한 원상태 피크의 영역의 비율에 의해 결정된다.

mAb-316P의 전하 변이물 형태는 양이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 원상태의 mAb-316P로부터 용해된다. 메인 피크의 머무름 시간보다 빨리 CEX-HPLC 칼럼에서 용출되는 피크는 “산성 피크”로 정의되는 반면, 메인 피크의 머무름 시간보다 늦게 CEX-HPLC 칼럼에서 용리되는 피크는 “염기성 피크”로 정의된다. 양이온 교환 크로마토그래피 방법에서 분해된 mAb-316P의 백분율은 모든 mAb-316P 피크의 총 영역과 비교한 메인, 산성 및 염기성 피크의 상대 백분율 변화로 측정된다.

가속 조건에서 mAb-316P의 평가는 상기 항체를 다양한 스트레스 시험에서 시험함으로써 수행되었다. 이러한 시험들은 완제 의약품이 제조되는 동안 제제된 원료 의약품이 처해질 수 있는 극한 취급 조건을 대표한다. mAb-316P 제제된 원료 의약품은 교반, 동결/해동의 반복, 그리고 동결 보관 조건을 위한 5 mL 폴리카보네이트 바이알에 충진되었다. mAb-316P 제제된 원료 의약품은 고온에서의 스트레스 안정성을 검사하기 위해 유리 바이알에 충진되었다.

예시 9: 제제된 원료 의약품(FDS)에 대한 보관 안정성 연구

150 mg/mL mAb-316P 제제된 원료 의약품(FDS; 5 mL 폴리카보네이트 바이알에 담긴 0.5 mL; 150 mg/mL mAb-316P 항체, 10 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.2% 폴리소르베이트 20, 그리고 10% 수크로오스)은 ≤-20℃에서 12개월간 보관했을 때 물리적 및 화학적으로 안정성이 있는 것으로 나타났다. 크기 배제 또는 이온 교환 크로마토그래피로 분석했을 때 mAb-316P의 유의한 손실이 관찰되지 않았으며 유의한 화학적 분해도 탐지되지 않았다. 크기 배제법으로 측정했을 때 복구된 mAb-316P의 97% 이상이 “원상태” 구조였으며, 양이온 교환법으로 측정했을 때 복구된 mAb-316P의 56% 이상이 “주 전하 변이물”이었다. 상기의 결과는 표 9에 요약되어 있다.

175 mg/mL mAb-316P 제제된 원료 의약품(FDS; 5 mL 폴리카보네이트에 담긴 0.75 mL; 175 mg/mL mAb-316P 항체, 10 mM 히스티딘 (pHs 6.0), 0.01% 폴리소르베이트 20, 5% 수크로오스, 그리고 50 mM 아르기닌)은 ≤-20℃에서 3개월간 보관했을 때 물리적 및 화학적으로 안정성이 있는 것으로 나타났다. 크기 배제 또는 이온 교환 크로마토그래피로 분석했을 때 mAb-316P의 유의한 손실이 관찰되지 않았으며 유의한 화학적 분해도 탐지되지 않았다. 크기 배제법으로 측정했을 때 복구된 mAb-316P의 96% 이상이 “원상태” 구조였으며, 양이온 교환법으로 측정했을 때 복구된 mAb-316P의 56% 이상이 “주 전하 변이물”이었다. 결과는 표 10에 요약되어 있다.

예시 10: 제제된 원료 의약품에 대한 스트레스 안정성 연구

스트레스 안정성 연구가 150 mg/mL mAb-316P 제제된 원료 의약품(FDS) (0.35 mL - 0.5 mL의 150 mg/mL mAb-316P, 10 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.2% 폴리소르베이트 20, 10% 수크로오스) 및 175 mg/mL mAb-316P 제제된 원료 의약품(0.5 mL - 1.7 mL의 175 mg/mL mAb-316P, 10 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.01% 폴리카보네이트 20, 5% 수크로오스, 50 mM 아르기닌)에 대해 수행되었다. 고온 연구는 2 mL 용량 Type 1 규산염 유리, FLUROTEC® 코팅된 4432/50 부틸 고무 스톱퍼에서 수행되었다; 나머지 연구들은 5 mL 폴리카보네이트 바이알에서 수행되었다. 2시간 동안 교반(보르텍스)했을 때 150 mg/mL 및 175 mg/mL 항-PCSK9 mAb-316P 제제된 원료 의약품은 물리적 및 화학적으로 안정성이 있는 것으로 나타났다. 상기의 용액은 육안으로 투명한 상태를 유지했으며, 단백질의 손실이 없었고, 분자량 종(molecular weight species) 또는 전하 변이물이 형성되지 않았다 (표 11 및 12). MAb-316P은 -80℃에서의 동결과 상온으로의 해동을 8회 반복했을 때에도 물리적 및 화학적으로 안정적인 것으로 관찰되었다. 8회의 냉동/해동 반복 후에, 상기의 단백질 용액은 육안적으로 투명한 상태를 유지했으며 단백질의 손실이 관찰되지 않았다. 분자량(가용성 응집물 또는 절단된 산물) 또는 전하 변이물 형태는 각각 SE 또는 CEX 분석법에서 관찰된 것이 없었다.

150 및 175 mg/mL 항-PCSK9 mAb-316P 제제된 원료 의약품은 37℃ 또는 45℃에서 28일간 배양했을 때 물리적으로 안정적이었지만, 그럼에도 불구하고 몇몇 화학적 분해가 관찰되었다 (표 11 및 12). 이러한 스트레스 시험들을 통해 주 분해 경로는 응집물, 절단된 산물(cleavage product), 그리고 전하 변이물(charge variant)의 형성이었다는 것이 드러났다. 예상했던 대로, 항-PCSK9 mAb-316P 항체의 분해율은 45℃에서보다 37℃에서 더 더뎠다. 25℃에서 28일간 배양했을 때 150 또는 175 mg/mL mAb-316P 제제된 원료 의약품의 물리적 및 화학적 안정성에는 유의한 변화가 없었다.

예시 11: 완제 의약품(DP)의 보관 안정성

150 mg/mL mAb-316P 완제 의약품은 10 mM 히스티딘, pH 6.0, 0.01% 폴리소르베이트 20, 10% 수크로오스, 그리고 150 mg/mL 항-PCSK9 mAb-316P 항체로 구성된다. 175 mg/mL mAb-316P 완제 의약품은 10 mM 히스티딘, pH 6.0, 0.01% 폴리소르베이트 20, 5% 수크로오스, 50 mM 아르기닌, 그리고 175 mg/mL 항-PCSK9 mAb-316P 항체로 구성된다. 미리 충진된 시린지(PFS; 27 게이지 박벽 바늘이 포함되고 FM27 고무 바늘 보호대가 FLUROTEC® 코팅된 4023/50 고무 플런저로 닫힌 OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지)에서 5℃에서 6개월간 보관했을 때 150 mg/mL 또는 175 mg/mL mAb-316P 완제 의약품(DP)의 물리적 및 화학적 안정성에 변화가 없었다 (표 13 및 표 14). 이러한 여러 스트레스 후에도 상기 용액은 육안으로 투명한 상태를 유지했으며, 단백질의 손실이 관찰되지 않았고, pH의 변화가 없었다. 또한, 각각 SE 및 CEX에 의해 탐지된 분자량 종 또는 전하 변이물의 유의한 변화가 없었다.

예시 12: 완제 의약품(DP)의 스트레스 안정성

150 mg/mL mAb-316P 완제 의약품 및 175 mg/ml mAb-316P 완제 의약품의 스트레스 안정성은 미리 충진된 시린지를 25℃ 및 45℃에서 배양함으로써 검사되었다. 45℃에서 28일간 배양하거나 25℃에서 6개월간 배양했을 때 각각의 완제 의약품은 물리적으로 안정성이 있었다 (표 13 및 14). 이러한 여러 스트레스 후에도 상기 용액은 육안으로 투명한 상태를 유지했으며, 단백질의 손실이 관찰되지 않았고, pH의 변화가 없었다. 그러나 단백질을 45℃ 및 25℃에서 배양했을 때 응집물 및 전하 변이물이 발견되었다. 이러한 스트레스 테스트를 통해 상기의 환경이 완제 의약품의 주 분해 경로라는 사실이 드러난다. 상기의 150 mg/mL 완제 의약품을 45℃에서 28일간 배양 후에 mAb-316P의 응집물은 1.9% 증가하였고 산성 종(acidic species)은 19.1% 증가하였다. 상기 단백질을 25℃에서 배양했을 때 화학적 분해의 환원 수준이 탐지되었다. 25℃에서 6개월간 배양 후에 응집물의 상대적 양은 0.8% 증가했고 산성 종은 10.3% 증가하였다. 상기의 175 mg/mL 완제 의약품을 45℃에서 28일간 배양 후에 mAb-316P의 응집물은 1.8% 증가하였고 산성 종은 17.0% 증가하였다. 상기 단백질을 25℃에서 배양했을 때 화학적 분해의 환원 수준이 탐지되었다. 25℃에서 6개월간 배양 후에 응집물은 0.7% 증가했고 산성 종은 9.4% 증가하였다. 상기의 150 및 175 mg/mL 완제 의약품을 25℃에서 1개월간 배양 후에, mAb-316P의 안정성에는 유의한 변화가 없었다.

예시 13: 충진 용량

150 mg/mL REGN727 완제 의약품이 들어있는 미리 충진된 시린지(PFS)의 주사 가능 용량은 1.0 mL이다. 175 mg/mL REGN727 완제 의약품이 들어있는 PFS의 주사 가능한 용량은 1.14 mL이다. 시린지 내의 빈 공간(dead volume)이 미미하기 때문에(0.005 내지 0.01 mL) 두 PFS 어느 쪽에도 과다투입량은 포함되지 않는다.

예시 14: 보관 물질에 담긴 MAB-316P의 안정성

항-PCSK9 mAb-316P는 무균 여과된 경우 안정성이 있는 것으로 밝혀졌다. MILLIPORE MILLIPAK 여과 장치가 임상 연구(research studies) 및 임상용 제품의 제조에 사용되었다. 유리 바이알 보관에 비해, 150 및 175 mg/mL mAb-316P의 제제된 원료 의약품(mAb-316P FDS)의 안정성은 폴리프로필렌 튜브, 폴리스티렌 튜브, 폴리카보네이트 튜브, 또는 스테인레스강 가스켓이 들어있는 유리 바이알에 보관했을 때 유의하게 영향을 받지 않았다 (표 15 및 표 16). 상기의 제제된 원료 의약품을 40℃에서 14일간 배양했을 때 분해가 관찰되었지만, 대조군, 유리 바이알 및 플라스틱 용기 및 스테인레스강 노출 간에mAb-316P 분해량의 유의한 차이는 관찰되지 않았다.

예시 15: 항-PCSK9 항체 MAB-316P의 특징

적어도 2개 로트의 mAb-316P (로트 1 및 로트 2)가 크기 배제 크로마토그래피와 단백질 또는 당단백질의 몰 질량의 추정치를 가능케 하는 분석 방법인 다중-각 레이저 광 산란법(SEC-MALLS)에 의해 분석되었다. 로트 1과 2의 몰 질량은 각각 154.5 및 154.6 kDa이었다. 기타 로트들의 몰 질량의 범위는 SE 매트릭스에서 용리된 메인 종 피크의 경우 154.4 내지 154.8 kDa (평균 약 155 kDa)였다. 이러한 메인 피크는 총 단백질 피크 영역의 약 96.7 - 99.2%를 나타냈으며 미접촉 mAb-316P 모노머(즉, 본 명세서에서 사용된 “원상태”)에 해당한다.

mAb-316P는 주 구성 동형 단백질(major constituent isoform)에 대한 등전점을 측정하기 위해 모세관 등전 집중법(cIEF)에 의해 분석되었다. cIEF에 의해 측정된 mAb-316P 표본의 pI 및 평균 피크 영역(% 총 피크 영역)은 표 17에 요약되어 있다. 각 로트는 pI이 약 8.5로 계산된 메인 종(피크 5)을 보였으며, 이것은 로트 1 및 2에서 각각 66.4% 및 68.0%가 존재하였다. 우성 종(피크 5)은 C-말단 라이신이 결여된 미접촉이며 완전히 글리코실화 된 항체(즉, 본 명세서에서 사용된 “주 전하 형태”)를 나타낼 가능성이 크다.

로트 1 및 로트 2로부터 환원된 mAb-316P 트립신 지도(tryptic map)의 질량 분관 측정(MS) 분석 결과 양 로트의 Fc 도메인 내에서 단일 글리코실화 부위, Asn298이 확인되었다. 이 글리코실화 부위의 주 공유 결합 글리칸 형태가 표 18에 요약되어 있다. 전체적으로, 양 로트를 측정한 결과 복합 바이안테너리(bi-anntennary) 글리칸을 가지며, 이의 대다수는 Asn298에서 글리코실화 된다. 그러나 로트 2에서 당 사슬 종을 함유하는 푸코실화된 무갈락토실(agalactosyl) (G0)의 상대적인 양은 로트 1의 이러한 글리코형에 비해 약간 더 높다. 이와는 반대로, 로트 2에서 당 사슬 종을 함유하는 푸코실화된 다이갈락토실(digalactosyl) (G2) 및 푸코실화된 모노갈락토실(monogalactosyl) (G1)의 상대적인 양은 로트 1의 이러한 당 사슬 구조의 상대적인 양에 비해 감소하였다. 두 원료 의약품 표본의 LC/MS 결과(피크 16) 분석은 로트 1과 로트 2의 Asn298에서 글리칸 점유가 없는 중쇄 펩티드가 각각 2.9% 및 8.4%인 것으로 확인하였다.

두 가지 mAb-316P 로트의 각각에서 올리고당의 방출 후에 HPLC에 의해 생성된 글리칸 프로파일이 분석되었다. 각각의 크로마토그램에서, 유도체화 된 올리고당은 다음의 두 가지 메인 그룹으로 분리되었다: 비푸코실화된 바이안테너리(bi-antennary) 종과 푸코실화된 바이안테너리 종이다. 각각의 그룹(푸코실화 대 비푸코실화) 내에서, 상기의 올리고당은 디갈락토신(digalactosyl) (G2), 모노갈락토실(monogalactosyl) (G1), 및 무갈락토실(agalactosyl) (G0) 형태로 세분화 된다. 올리고당 구조 지정은 MALDI-TOF 질량 분광계를 통해 이루어진다. 두 크로마토그램에서 각각의 피크의 통합은 두 mAb-316P 로트의 푸코실화 수준이 로트 1 및 2에 대해 각각 80.0% 및 86.9%로 일반적으로 높았다.

두 로트의 총 퍼센트 푸코실화는 유사했지만, 두 로트에 존재하는 각각의 글리칸 형태의 상대적 풍부함에서 정량적인 차이가 있었다 (표 19). 로트 1의 경우, 피크 영역 백분율 34.4%, 39.6% 및 11.7%는 각각 G0, G1 및 G2 푸코실화된 글리칸 구조에 대해 측정되었다. 이에 비해, 로트 2에 대한 피크 영역 백분율은 G0, G1 및 G2 푸코실화된 글리코형 구조에 대해 각각 45.8%, 33.3% 및 7.1%로, 두 로트 간의 갈락토실화 정도에 차이가 있음을 보여준다. 높은 만노오스 글리칸(만5 글리칸) 피크(피크 2)가 양 로트에서 관찰된 당 사슬의 총량에 비해 1.8 - 2.9%으로 상대적으로 풍족하게 검출되었다 (표 19). 피크 영역 백분율 범위가 0.5% 내지 1.5%인 총 아홉 개의 비동정 피크는 이 방법에 의해 검사된 양 로트에서 검출되었고 각 로트에서 검출된 총 글리칸 피크 영역의 ≤ 3%를 나타낸다. 두 로트의 등몰 혼합물의 분석은 새로운 피크를 산출하지 않았고 상기 혼합물의 모든 피크의 피크 영역 백분율은 각 로트의 개별 분석에 근거한 기대 수치와 관련이 깊었다 (표 19).

SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> STABILIZED FORMULATIONS CONTAINING ANTI-PCSK9 ANTIBODIES <130> 7050A <150> US 61/512,666 <151> 2011-07-28 <160> 9 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys His Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Ala 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 5 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg 20 25 30 Ser Asn Asn Arg Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Arg Asn Phe 1 5 10 <210> 7 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 Trp Ala Ser 1 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 9 <211> 692 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Gly Thr Val Ser Ser Arg Arg Ser Trp Trp Pro Leu Pro Leu Pro 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Ala Gly Ala Arg Ala Gln Glu 20 25 30 Asp Glu Asp Gly Asp Tyr Glu Glu Leu Val Leu Ala Leu Arg Ser Glu 35 40 45 Glu Asp Gly Leu Ala Asp Ala Pro Glu His Gly Ala Thr Ala Thr Phe 50 55 60 His Arg Cys Ala Lys Asp Pro Trp Arg Leu Pro Gly Thr Tyr Val Val 65 70 75 80 Val Leu Lys Glu Glu Thr His Arg Ser Gln Ser Glu Arg Thr Ala Arg 85 90 95 Arg Leu Gln Ala Gln Ala Ala Arg Arg Gly Tyr Leu Thr Lys Ile Leu 100 105 110 His Val Phe His His Leu Leu Pro Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Gly 115 120 125 Asp Leu Leu Glu Leu Ala Leu Lys Leu Pro His Val Asp Tyr Ile Glu 130 135 140 Glu Asp Ser Ser Val Phe Ala Gln Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg 145 150 155 160 Ile Thr Pro Ala Arg Tyr Arg Ala Asp Glu Tyr Gln Pro Pro Lys Gly 165 170 175 Gly Ser Leu Val Glu Val Tyr Leu Leu Asp Thr Ser Ile Gln Ser Asp 180 185 190 His Arg Glu Ile Glu Gly Arg Val Met Val Thr Asp Phe Glu Ser Val 195 200 205 Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg Phe His Arg Gln Ala Ser Lys Cys Asp 210 215 220 Ser His Gly Thr His Leu Ala Gly Val Val Ser Gly Arg Asp Ala Gly 225 230 235 240 Val Ala Lys Gly Ala Gly Leu Arg Ser Leu Arg Val Leu Asn Cys Gln 245 250 255 Gly Lys Gly Thr Val Ser Gly Thr Leu Ile Gly Leu Glu Phe Ile Arg 260 265 270 Lys Ser Gln Leu Val Gln Pro Val Gly Pro Leu Val Val Leu Leu Pro 275 280 285 Leu Ala Gly Gly Tyr Ser Arg Val Phe Asn Ala Ala Cys Gln Arg Leu 290 295 300 Ala Arg Ala Gly Val Val Leu Val Thr Ala Ala Gly Asn Phe Arg Asp 305 310 315 320 Asp Ala Cys Leu Tyr Ser Pro Ala Ser Ala Pro Glu Val Ile Thr Val 325 330 335 Gly Ala Thr Asn Ala Gln Asp Gln Pro Val Thr Leu Gly Thr Leu Gly 340 345 350 Thr Asn Phe Gly Arg Cys Val Asp Leu Phe Ala Pro Gly Glu Asp Ile 355 360 365 Ile Gly Ala Ser Ser Asp Cys Ser Thr Cys Phe Val Ser Arg Ser Gly 370 375 380 Thr Ser Gln Ala Ala Ala His Val Ala Gly Ile Ala Ala Met Met Leu 385 390 395 400 Ser Ala Glu Pro Glu Leu Thr Leu Ala Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ile 405 410 415 His Phe Ser Ala Lys Asp Val Ile Asn Glu Ala Trp Phe Pro Glu Asp 420 425 430 Gln Arg Val Leu Thr Pro Asn Leu Val Ala Ala Leu Pro Pro Ser Thr 435 440 445 His Arg Ala Gly Trp Gln Leu Phe Cys Arg Thr Val Trp Ser Ala His 450 455 460 Ser Gly Pro Thr Arg Met Ala Thr Ala Val Ala Arg Cys Ala Gln Asp 465 470 475 480 Glu Glu Leu Leu Ser Cys Ser Ser Phe Ser Arg Ser Gly Lys Arg Arg 485 490 495 Gly Glu Arg Ile Glu Ala Gln Gly Gly Lys Arg Val Cys Arg Ala His 500 505 510 Asn Ala Phe Gly Gly Glu Gly Val Tyr Ala Ile Ala Arg Cys Cys Leu 515 520 525 Leu Pro Gln Val Asn Cys Ser Val His Thr Ala Pro Pro Ala Gly Ala 530 535 540 Ser Met Gly Thr Arg Val His Cys His Gln Gln Gly His Val Leu Thr 545 550 555 560 Gly Cys Ser Ser His Trp Glu Val Glu Asp Leu Gly Thr His Lys Pro 565 570 575 Pro Val Leu Arg Pro Arg Gly Gln Pro Asn Gln Cys Val Gly His Arg 580 585 590 Glu Ala Ser Ile His Ala Ser Cys Cys His Ala Pro Gly Leu Glu Cys 595 600 605 Lys Val Lys Glu His Gly Ile Pro Ala Pro Gln Glu Gln Val Ile Val 610 615 620 Ala Cys Glu Asp Gly Trp Thr Leu Thr Gly Cys Ser Pro Leu Pro Gly 625 630 635 640 Thr Ser His Val Leu Gly Ala Tyr Ala Val Asp Asn Thr Cys Val Val 645 650 655 Arg Ser Arg Asp Val Ser Thr Thr Gly Ser Thr Ser Lys Glu Ala Val 660 665 670 Ala Ala Val Ala Ile Cys Cys Arg Ser Arg His Leu Val Gln Ala Ser 675 680 685 Gln Glu Leu Gln 690

Claims

(i) 사람 전단백질 전환효소 서브틸리신/케신 유형 9(PCSK9)에 특이적으로 결합하는 사람 항체; (ii) pH 6.0±0.3의 완충액; (iii) 비이온성 세제; 그리고 (iv) 안정화제를 포함하는, 약제학적 제제.
제1항에 있어서, 상기의 항체가 SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3을 포함하는, 약제학적 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기의 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하는, 약제학적 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 갖고;
(b) 상기 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 갖고; 그리고
(c) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약제학적 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체 농도가 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL 내지 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 완충액이 히스티딘인, 약제학적 제제.
제6항에 있어서, 상기의 히스티딘 농도가 10 mM ± 1.5 mM인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 비이온성 세제가 폴리소르베이트 20인, 약제학적 제제.
제8항에 있어서, 상기의 폴리소르베이트 20 농도가 0.01% w/v ± 0.0015% 내지 0.2% w/v ± 0.03%인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제가 수크로오스인, 약제학적 제제.
제10항에 있어서, 상기의 수크로오스 농도가 5% ± 0.75% 내지 12% ± 1.8% (w/v)인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체 농도가 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL이고, 상기의 완충액이 10mM ± 1.5mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3이며, 상기의 비이온성 세제가 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20이고, 상기의 안정화제가 5% w/v ± 0.75% 수크로오스이고, 50mM ± 7.5mM 아르기닌도 포함하는, 약제학적 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체 농도가 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL이고, 상기의 완충액이 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3이며, 상기의 비-이온성 세제가 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20이고, 그리고 상기의 안정화제가 10% w/v ± 1.5% 수크로오스인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체 농도가 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL이고, 상기의 완충액이 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3이며, 상기의 비이온성 세제가 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20이고, 상기의 안정화제가 10% w/v ± 1.5% 수크로오스인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체 농도가 100 mg/mL ± 15 mg/mL이고, 상기의 완충액이 20 mM ± 3 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3이며, 상기의 비이온성 세제가 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20이고, 상기의 안정화제가 12% w/v ± 1.8% 수크로오스인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체 농도가 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL이고, 상기의 완충액이 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3이며, 상기의 비이온성 세제가 0.1% w/v ± 0.015% 폴리소르베이트 20이고, 상기의 안정화제가 6% w/v ± 0.9% 수크로오스인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 91%가 45℃에서 28일 후에 원상태 입체형태를 갖는, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 35%가 45℃에서 28일 후에 상기 항체의 주 전하 변이물인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 94%가 25℃에서 6개월 후에 원상태 입체형태를 갖는, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 45%가 25℃에서 6개월 후에 상기 항체의 주 전하 변이물인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 96%가 5℃에서 6개월 후에 원상태 입체형태를 갖는, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 58%가 5℃에서 6개월 후에 상기 항체의 주 전하 변이물인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 96%가 -20℃, -30℃, 또는 -80℃에서 3개월 후에 상기 항체의 주 전하 변이물인, 약제학적 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 적어도 56%가 -20℃, -30℃, 또는 -80℃에서 3개월 후에 상기 항체의 주 전하 변이물인, 약제학적 제제.
(a) 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, (d) 5% w/v ± 0.75% 수크로오스, 그리고 (e) 50 mM ± 7.5 mM 아르기닌으로 구성되는 약제학적 제제로서,
(a) 상기 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD 및 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하고;
(b) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 갖고;
(c) 상기 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 갖고; 그리고
(d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약제학적 제제.
제25항에 있어서, 수중의 (a) 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, (d) 5% w/v ± 0.75% 수크로오스, 그리고 (e) 50 mM ± 7.5 mM 아르기닌으로 구성되는, 약제학적 제제.
(a) 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제로서,
(a) 상기 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD 및 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하고;
(b) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 갖고;
(c) 상기 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 갖고; 그리고
(d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약제학적 제제.
제27항에 있어서, 수중의 (a) 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함하는, 약제학적 제제.
(a) 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제로서,
(a) 상기 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD 및 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하고;
(b) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 갖고;
(c) 상기 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 갖고; 그리고
(d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약제학적 제제.
제29항에 있어서, 수중의 (a) 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL의 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.01% w/v ± 0.0015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 10% w/v ± 1.5% 수크로오스를 포함하는, 약제학적 제제.
(a) 100 mg/mL ± 15 mg/mL의 항-PCSK9 항체, (b) 20 mM ± 3 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 12% w/v ± 1.8% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제로서,
(a) 상기 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD 및 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하고;
(b) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 갖고;
(c) 상기 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 갖고; 그리고
(d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약제학적 제제.
제31항에 있어서, 약제학적 제제로서 수중의 (a) 100 mg/mL ± 15 mg/mL의 항체, (b) 20 mM ± 3 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.2% w/v ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 12% w/v ± 1.8% 수크로오스를 포함하는, 약제학적 제제.
(a) SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하는 항체의 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.1% w/v ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 6% w/v ± 0.9% 수크로오스를 포함하는 약제학적 제제로서,
(a) 상기 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD 및 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하고;
(b) 상기 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 갖고;
(c) 상기 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 갖고; 그리고
(d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약제학적 제제.
제33항에 있어서, 수중의 (a) 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL의 항체, (b) 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘, pH 6 ± 0.3, (c) 0.1% w/v ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 (d) 6% w/v ± 0.9% 수크로오스를 포함하는, 약제학적 제제.
항-PCSK9 항체와 0.3% 미만의 수분을 포함하는 조성물을 조제하는 방법으로서, 다음의 단계를 포함하는, 방법:
a) 물, 항-PCSK9 항체, 히스티딘, 수크로오스, 그리고 폴리소르베이트 20이 들어있는 유리 바이알에서;
b) (a) 단계의 혼합물을 약 5℃에서 약 60분간 유지한 다음;
c) 상기의 온도를 분당 약 0.5℃의 비율로 낮추고; 그 다음
d) 약 -45℃에서 약 120분간 유지하고; 그 다음
e) 상기의 대기 압력을 약 100 mTorr로 낮추고;
f) 상기의 온도는 분당 약 0.5℃의 비율로 올리고; 그 다음
g) 약 -25℃에서 약 78시간 동안 유지하고; 그 다음
h) 상기 온도를 분당 0.2℃의 비율로 올리고; 그 다음
i) 약 35℃에서 약 6시간 동안 유지하고; 그 다음
j) 상기의 온도를 분당 약 0.5℃의 비율로 낮추고; 그 다음
k) 보관 전 약 25℃에서 약 60분간 유지한다.
제35항에 있어서, 다음의 단계도 포함하는, 방법:
l) (k) 단계의 혼합물이 들어 있는 유리 바이알을 질소 기체로 다시 채우고; 그리고
m) 대기 압력의 약 80%에서 상기의 바이알을 스톱퍼로 막는다.
제35항 또는 제36항에 있어서, 이때 상기의 조성물을 단계 (i), (j) 또는 (k) 후와 바이알을 스톱퍼로 막는 단계 전에 2-8℃에 이르게 하는, 방법.
제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 이때 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL의 항-PCSK9 항체, 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.1% ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 6% ± 0.9% 수크로오스가 단계 (a)에서 혼합되고, 항-PCSK9 항체가 SEQ ID NO:2의 HCDR1, SEQ ID NO:3의 HCDR2, SEQ ID NO:4의 HCDR3, SEQ ID NO:6의 LCDR1, SEQ ID NO:7의 LCDR2, 그리고 SEQ ID NO:8의 LCDR3를 포함하는 mAb-316P인, 방법.
제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항-PCSK9 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD를 포함하는, 방법.
제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD로 구성되며, (b) 상기의 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (c) 상기의 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 가지고 (d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 방법.
항-PCSK9 항체 및 0.3% 미만의 수분으로 이루어진 약학적 조성물로서, 제35항 내지 제40항 중 어느 한 항의 방법에 따라 생산된 항-PCSK9 항체 및 0.3% 미만의 수분으로 이루어진 약학적 조성물.
제41항의 약학적 조성물을 포함하는 약학적 조성물로서 물에 현탁된, 약학적 조성물.
제42항에 있어서, 수중의 50 mg/mL ± 7.5 mg/mL 항체, 10 mM ± 1.5 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.1% ± 0.015% 폴리소르베이트 20, 그리고 6% ± 0.9% 수크로오스를 포함하는, 약학적 조성물.
제42항에 있어서, 수중의 100 mg/mL ± 15 mg/mL 항체, 20 mM ± 3 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.2% ± 0.03% 폴리소르베이트 20, 그리고 12% ± 1.8% 수크로오스를 포함하는, 약학적 조성물.
제42항에 있어서, 수중의 150 mg/mL ± 22.5 mg/mL 항체, 30 mM ± 4.5 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.3% ± 0.045% 폴리소르베이트 20, 그리고 18% ± 2.7% 수크로오스를 포함하는, 약학적 조성물.
제42항에 있어서, 수중의 175 mg/mL ± 26.25 mg/mL 항체, 35 mM ± 5.25 mM 히스티딘 (pH 6.0), 0.35% ± 0.0525% 폴리소르베이트 20, 그리고 21% ± 3.15% 수크로오스를 포함하는, 약학적 조성물.
제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, (a) 상기의 항체가 SEQ ID NO:1의 HCVD와 SEQ ID NO:5의 LCVD로 구성되며, (b) 상기의 항체의 90% 이상이 155 kDa ± 1 kDa의 분자량을 가지며, (c) 상기의 항체의 50% 이상이 약 8.5의 등전점을 가지고 (d) 상기 항체의 75% 내지 90%가 푸코실화되는, 약학적 조성물.
제1항 내지 제34항 및 제41항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 조성물이 용기에 담기는, 약학적 조성물.
제48항에 있어서, 상기의 용기가 바이알인, 약학적 조성물.
제49항에 있어서, 상기의 바이알이 유리인, 약학적 조성물.
제48항에 있어서, 상기의 용기가 시린지인, 약학적 조성물.
제51항에 있어서, 상기의 시린지가 저함량 텅스텐 유리인, 약학적 조성물.
제51항에 있어서, 상기 시린지가 27-G 박벽(thin wall) 바늘, FLUROTEC 코팅된 4023/50 고무 스톱퍼, 그리고 FM 27 고무 팁 캡이 장착된 NUOVA OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지인, 약학적 조성물.
제1항 내지 제34항 및 제41항 내지 제47항 중 어느 한 항의 약학적 조성물, 용기 및 설명서로 구성된 키트.
제54항에 있어서, 상기의 용기가 미리 충진된 시린지인, 키트.
제55항에 있어서, 상기의 시린지가 27-G 박벽(thin wall) 바늘, FLUROTEC 코팅된 4023/50 고무 스톱퍼, 그리고 FM 27 고무 팁 캡이 장착된 NUOVA OMPI 1 mL의 기다란 유리 시린지인, 키트.