RS20060259A - Makrociklične karboksilne kiseline i acilsulfonamidi kao inhibitori replikacije hcv - Google Patents

Abstract

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja opštih formula I-IX kao i kompozicije, uključujući farmaceutske kompozicije, koje sadrže ova jedinjenja. Prikazani pronalazak dalje obebeđuje postupke lečenja, uključujući postupke lečenja infekcije virusa hepatitisa C i postupaka lečenja fibroze jetre, postupci generalno uključuju davanje pojedincima kojima je potrebno efikasne količine ovih jedinjenja ili kompozicija.

Description

MAKROCIKLIČNE KARBOKSILNE KISELINE I

ACILSULFONAMIDI KAO INHIBITORI REPLIKACIJE HCV

Prikazani pronalazak se odnosi na jedinjenja, postupke za njihovu sintezu, kompozicije i postupke za lečenje infekcije virusa hepatitisa C (HCV). Naročito, prikazani pronalazak obezbeđuje nove peptidne analoge i postupke za korišćenje ovih analoga u lečenju HCV infekcija.

Virus hepatitisa C (HCV) je najuobičajenija hronična infekcija krvi u Sjedinjenim Državama. Mada su brojne nove infekcije u padu, teret hroničnih infekcija je suštinski, a Centri za kontrolu bolesti procenjuju daje u Sjedinjenim Državama 3.9 miliona (1.8%) zaraženih osoba. Hronične bolesti jetre su deseti vodeći uzrok smrti među odraslima u Sjedinjenim Državama što iznosi približno 25 000 smrti godišnje ili približno 1% svih smrti. Ispitivanja ukazuju da 40% hroničnih bolesti jetre je u vezi sa HCV, što dovodi do procene od 8 000-10 000 smrti svake godine. Krajnji stadijum bolesti jetre u vezi sa HCV među odraslima je najčešća indikacija za transplantaciju jetre.

Antivirusne terapije hroničnog hepatitisa C su se brzo razvile u toku poslednje dekade, sa značajnim poboljšanjem viđenim u efikasnosti lečenja. Međutim, čak i kombinovana terapija sa pegilovanim IFN-oc i ribavirinom, kod 40% do 50% pacijenata terapija ne uspe, tj. to su oni koji ne odgovaraju na terapiju ili oni kod kojih se bolest vraća. Trenutno, ovi pacijenti nemaju uspešnu terapijsku alternativu. Naročito, pacijenti koji imaju poodmakli stadijum fibroze ili ciroze na osnovu biopsije jetre su u znatnoj opasnosti od razvoja komplikacija poodmaklih bolesti jetre, uključujući ascite, žuticu, varikozno krvarenje, encefalopatiju i progresivan prestanak rada jetre, kao i primetno povećan rizik od hepatocelularnog karcinoma.

Veliko preovlađivanje hroničnih HCV infekcija ima važne zdravstvene implikacije za buduću opterećenost hroničnim bolestima jetre u Sjedinjenim Državama. Podaci potiču iz Pregleda nacionalnog zdravstvenog i nutricionog ispitivanja (NHANES III) koji ukazuje na veliki porast stope novih HCV infekcija koje su se javile u kasnim 1960 do ranih 1980, naročito među osobama između 20 do 40 godina. Procnjeno je da se broj osoba sa duotrajnom HCV infekcijom od 20 godina ili dužom može učetvorostručiti od 1990 do 2015, od 750 000 do preko 3 miliona. Proporcijalni porast osoba inficiranih u toku 30 do 40 godina bi bio čak i veći. S obzirom da je rizik hroničnih bolesti koje su u vezi sa HCV u vezi sa trajanjem infekcije, za osobu inficiranu duže od 20 godina rizik ciroze progresivno raste, što će dovesti do suštinskog porasta u morbiditeta i smrtnosti u vezi sa cirozom kod pacijenata inficiranih između 1965-1985 godine.

HCV je virus u obliku koverta ('envelop') sa pozitivnom nizom RNK familije Falviviridae. Jednostruka HCV RNK genoma ima približno dužinu 9500 nukleotida i ima jednostruki otvoreni okvir za čitanje (open reading frame-OPF) koji kodira jedan veliki poliprotein od oko 3000 aminokiselina. U inficiranim ćelijama, ovaj poliprotein je isečen na više mesta ćelijskim ili virusnim proteazama da bi se dobili strukturni i ne-strukturni (NS) proteini virusa. U ovom slučaju, HCV, generacija zrelih nestrukturnih proteina (NS2, NS3, NS4, NS4A, NS4B, NS5A i NS5B) je napadnuta sa dve virusne proteaze. Prva virusna proteaza seče na spoju NS2-NS3 poliproteina. Druga virusna proteaza je serin proteaza sadržana između N-terminalnog regiona NS3 (ovde se poziva kao na 'NS3 proteazu'). NS3 proteaza posreduje u svim sledećim slučajevima cepanja na mestima koja su niz u odnosu na položaj NS3 u poliproteinu (tj. mestima lociranim između C-kraja NS-3 i C-kraja poliproteina). NS3 proteaza pokazuje aktivnost i na cis, mestu cepanja NS3-NS4 i na trans, za preostala NS4A-NS4B, NS4B-NS5A i NS5A-NS5B mesta. NS4A protein se veruje da ima višestruke funkcije, da deluje kao kofaktor za NS3 proteaze i verovatno pomaže u lociranju položaja NS3 u membrani i drugih virusnih replikacionih komponenti. Očigledno, obrazovane kompleksa između NS3 i NS4 je neophodno za slučajeve obrade u kojima posreduje NS-3 i unapređivanja proteolitičke efikasnosti na svim mestima koja prepoznaje NS3. NS3 proteaze takođe pokazuju aktivnost nukleozidne trifosfataze i RNA helikaze. NS5B je RNA-zavisna RNA polimeraza uključena u replikaciju HCV RNA.

Literatura

METAVIR (1994)Hepatoloy20:15-20; Brunt (2000)Hepatol.31:241-246; Alpini (1997)J.Hepatol. 27:371-380; Baroni et al. (1996)Hepatol.23:1189-1199; Czaja et al. (1989)Hepatol.10:795-800; Grossman et al.

(1998) J. Gastroenterol. Hepatol.13:1058-1060; Rocky and Chung (1994)J. Invest. Med.42:660-670; Sakaida et al. (1998)J. Hepatol.28:471-479; Shi et al (1997)Proc. Natl. Acad. Sci. USA94:10663-10668; Baroni et al.

(1999)Liver19:212-219; Lortat-Jacob et al,(1997) J. Hepatol.26:894-903; Llorent et al (1996)J. Hepatol.24:555-563; US Patent br. 5,082,659; Evropska patentna prijava EP 294 160; US patent br. 4,806,347; Balish et al.

(1992)J. Infect. Diseases166:1401-1403; Katavama et al. (2001)J. Viral Hepatitis8:180-185; US patent br. 5,082,659; US patent br. 5,190,751; US patent br. 4,806,347; Wandl et al. (1992)Br. J. Haematol.81:516-519; Evropska patenta prijava br. 294,160; Kanadska patenta prijava br. 1,321,348; Evropska patentna prijava br.276,120; Wandl et al. (1992)Sem. Oncol.19:88-94; Balish et al. (1992)J. Infectious Diseases166:1401-1403; Van Dijk et al. (1994)Int J. Cancer56:262-268; Sundmacher et al (1987)Current eye Res.6:273-276; US patent br. 6,172,046; 6,245,740; 5,824,748; 5,372,808; 5,980,884; objavljene međunarodne patentne prijave WO 96/21468; WO 96/11953; WO 00/59929; WO 00/66623; WO2003/064416; WO2003/064455; WO2003/064456; WO 97/06804; WO 98/17679; WO 98/22496; WO 97/43310; WO 98/46597; WO 98/46630; WO 99/07733; WO 99/07734, WO 00/09543; WO 00/09558; WO 99/38888; WO 99/64442; WO 99/50230; WO 95/33764; Torre et al. (2001)J. Med. Virol.64:455-459; Bekkering et al. (2001)J. Hepatol.34:435-440; Zeuzem et al .(2001)Gastroenterol.120:1438-1447; Zeuzem (1999)J. Hepatol.31:61-64; Keeffe and Hollinger (1997)Hepatol.26:101S-107S; Wills (1990)Clin. Pharmacokinet.19:390-399; Heathcote et al. (2000)New Engl. J. Med.343:1673-1680; Husa and Husova (2001)Bratisl. Let Listy102:248-252; Glue et al. (2000)Clin. Pharmacol.68:556-567; Bailon et al. (2001)Bioconj. Chem.12:195-202; i Neumann et al. (2001)Science282:103; Zalipsky (1995) Adv. Drug Deliverv Reviews S. 16, 157-182; Mann et al.

(2001)Lancet358:958-965; Zeuzem et al. (2000)New Engl. J. Med.343:1666-1672; US patent br. 5,633,388; 5,866,684; 6,018,020; 5,869,253; 6,608,027;5,985,265; 5,908,121; 6,177,074; 5,985,263; 5,711,944; 5,382,657 i 5,908,121; Osborn et al. (2002)J. Pharmacol. Exp. Therap.303:540-548; Sheppard et al. (2003)Nat. Immunol.4:63-68; Chang et al.

(1999)Nat. Biotechnol.17:793-797; Adolf (1995)Multiple Sclerosis1

Suppl. 1:S44-S47; Chu et al.,Tet. lett.(1996), 7229-7232; Ninth Conference on Antiviral Research, Urabandai, Fukyshima, Japan (1996)( Antiviral Research,(1996), 30:1, A23(abstract 19)); Steinkuhler et al.Biochem.,37:8899-8905; Ingallinella et al.,Biochem.,37:8906-8914.

U obim ovog pronalaska su uključena jedinjenja formule I:

gde

(a) R<1>je nezavisno svaki H, halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7

cikloalkil, d-ioalkilcikloalkil, d-6 alkenil, d-6 alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, d-6 alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C6mioaril, piridal, pirimidal, tienil, furanil, tiazolil, oksazolil, fenoksi, tiofenoksi, S02NR<5>R<6>, NHC(0)R<5>, NHC(0)NR<5>R<6>, NHC(S)NR<5>R<6>, NR<5>R<6>, C(0)R<5>, C(0)OR<5>, C(0)NR<5>R<6>, SOmR<5>, NHS02R<5>; pomenuti tienil, pirimidal, furanil, tiazolil i oksazolil u definiciji Rla i RIb su opciono supstituisani sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, d-ioalkilcikloalkil, d-6 alkenil, d-6 alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenutiCsmioaril, piridal, fenoksi i tiofenoksi u definiciji R<1>su opciono supstituisani sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, d-6alkil, C3_7cikloalkil, Q_i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, d-6 alkoksi, hidroksi-Cj^alkil, d-6alkil

opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C].6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (b) R<2>je H, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil ili fenil, pomenuti fenil opciono je supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, C^alkil, C3_7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, C2_6 alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi C,.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (c) R<3>je H, Ci.6alkil, C(0)R<5>, C(0)OR<5>, C(0)NR<5>R<6>, C(S)NR<5>R<6>, S(0)2R<5>; (d)R<5>i R<6>susvaki nezavisno H, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil ili fenil, pomenuti fenil je supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2_6alkenil, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (e) Y je sulfonamid formule -C(0)NHS(0)2R<4>, gde je R<4>C^alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani sa jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, Ci_6alkoksi, amido ili fenil, ili R4 je Cć iH io aril koji je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, C2_6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi-Ci^alkil, Ci .6 alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili Y je karboksilna kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so ili estar; (f) m=0, lili2;

(g) X=0, NH ili NR; i

(h) Z=0 ili S.

U obim ovog pronalsaka uključena je farmaceutska kompozicija koja sadrži NS3 inhibitor koji je jedinjenje formule I (npr. formule I-VIII) ili njegova terapeutski prihvatljva so ili estar, u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Takođe, obuhvaćen je bilo koji njegov farmaceutski prihvatljiv derivat proleka formule I (npr. formule I-VIII), gde je prolek sposoban da obezbedi povećanu gastrointestinalnu apsorpciju ili apsorpciju jetre.

Takođe je obezbeđen postupak lečenja pacijenta koji je inficiran virusom hepatitisa C, koji obuhvata davanje pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja formule I ili njegove terapeutski prihvatljive soli ili estra ili farmaceutske kompozicije kao što je gore opisano.

Dalje obezbeđen je postupak lečenja pacijenta koji je inficiran virusom hepatitisa C, koji se sastoji iz davanja pacijentu količine jedinjenja formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili estra, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje formule I u kombinaciji sa količinom jednog ili više dodatnih antivirusnih sredstava, efikasnom u postizanju održanog virusnog odgovora kod pacijenta.

Definicije

Ovde korišćeni izraz 'hepatička fibroza' koristi se kao sinonim za 'fibrozu jetre', i odnosi se na rast ožiljnog tkiva u jetri koji je nastalo u kontekstu hronične infekcije jetre.

Izrazi 'pojedinac', 'domaćin', 'subjekt' i 'pacijent' su ovde korišćeni kao sinonimi i odnose se na sisare, uključujući ali bez ograničenja primate, majmune i ljude.

Ovde korišćeni izraz 'funkcija jetre' odnosi se na normalnu funkciju jetre, uključujući ali bez ograničenja, sintetičku funkciju, uključujući ali bez ograničenja sintezu proteina kao što su serumski proteini (npr. albumin, faktori zgrušavanja, alkalne fosfataze, aminotransferaze (npr. alanin transaminazu, aspartat transaminazu), 5'-nukleozidaze, y-glutaminiltranspeptitaze, itd.), sintezu bilirubina, sintezu holesterola i sintezu žučnih kiselina; metaboličke funkcije jetre, uključujući na primer ali bez ograničenja metabolizam ugljenih hidrata, aminokiselina i amonijaka, metabolizam hormona i metabolizam lipida; deotoksifikaciju egzogenih lekova; hemodinamičke funkcije, uključujući utrobnu i portalnu hemodinamiku, i slično.

Izraz 'održani virusni odgovor' (SVR-'sustained viral response'; takođe na koji se poziva kao na 'održani odgovor' ili 'dugotrajni odgovor'), koji se ovde koristi, odnosi se na odgovor pojedinca na režim lečenja virusne HCV infekcije, u smislu serusmskom HCV titra. Generalno 'održani virusni odgovor' odnosi se na detektabilnu HCV RNK (npr. manju od 500, manju od oko 200 ili manju od 100 kopija genoma po mililitru seruma) nađenu u pacijentovom serumu u toku perioda od bar oko jednog meseca, bar oko dva meseca, bar oko tri meseca, bar oko četiri meseca, bar oko pet meseci ili bar oko šest meseci posle prestanka lečenja.

Izraz 'pacijenti koji ne reaguju na lečenje' se ovde koristi za pacijente koji su inficirani sa HCV i koji ne reaguju na raniju terapiju za HCV (na koje se poziva kao na 'pacijente koji ne odgovaraju') ili koji na početki odgovaraju na prethodnu terapuju, ali kod kojih terapijski odgovor nije održan (na koje se poziva kao na'pacijente kod kojih se bolest vraća'). Prethodna terapija generalno uključuje lečenje IFN-a monoterapijom ili IFN-a kombinovanom terapijom, gde kombinovana terapija može uključivati davanje IFN-a i antivirusnog sredstva kao stoje ribavirin.

Ovde korišćeni izrazi Tečenje', 'tretiranje' i slično odnose se na dobijanje željenih farmakoloških i/ili fizioloških efekata. Efekat može biti profilaktički u smislu kompletnog ili delimičnog savlađivanja bolesti ili njenih simptoma i/ili može biti terapeutsko u smislu delimičnog ili kompletnog lečenja bolesti i/ili neželjenih efekata u vezi sa bolešću. 'Lečenje' je ovde korišćeno tako da se odnosi na bilo koje lečenje sisara, a naročito ljudi i uključuje: (a) sprečavanje javljanja bolesti kod subjekta koji može biti predisponiran za bolest, a kod koga još nije dijagnostifikovana bolest; (b) sprečavanje bolesti, tj. zaustavljanje njenog razvoja; i (c) ublažavanje bolesti tj. izazivanje regresije bolesti.

Izrazi 'pojedinac', 'domaćin', 'subjekt' i 'pacijent' su ovde korišćeni kao sinonimi i odnose se na sisare, uključujući ali bez ograničenja miševe, primate, majmune, ljude, životinje sisare sa farme, sportske životinje sisare i ljubimce sisare.

'Specifični pirfenidonski analog' i sve njegove varijacije odnose se i ograničene su na, na svaki pirfenidonski analog prikazan u Tabeli 1.

Ovde korišćen izraz 'agonist receptora interferona tipa F odnosi se na bilo koji ligand koji je prirodni ili nije prirodni, receptora interferona tipa I koji se veže i izaziva signalnu transdukciju preko receptora. Antagonisti receptora interferona tipa 1 uključuju interferone, koji uključuju interferone koji se javljaju u priodi, modifikovane interferone, sintetičke interferone,pegilovane interferone, fuzione proteine koji sadrže interferon i heterologne proteine, mešovite interferone; antitela specifična za receptor interferona; nepeptidne hemijske agoniste i slično.

Ovde korišćen izraz 'agonist receptora interferona tipa II' odnosi se na bilo koji ligand koji je prirodni ili nije prirodni, receptora interferona tipa II koji kada se vežu izazivaju transdukciju signala preko receptora. Agonisti receptora interferona tipa II uključuju prirodne humane y-interferone, rekombinantne IFN-y-vrste, glikozilovane IFN-y-vrste, pegilovane IFN-y-vrste, modifikovane ili varijantne IFN-y-vrste, IFN-y-fuzione proteine, antitela agoniste specifične za receptor, nepeptidne agoniste i slično.

Ovde korišćen izraz 'agonist receptora interferona tipa III' odnosi se na bilo koji ligand koji je prirodni ili nije prirodni, humanog IL-28 receptora, čija aminokiselinska sekvenca je opisana kod Sheppard et al., infra, koji kada se vežu i izazivaju transdukciju signala preko receptora.

Ovde korišćen izraz 'agonist receptora interferona' odnosi se na bilo koji tip agonista receptora interferona tipa I, agonista receptora interferona tipa II, agonista receptora interferona tipa III.

Izraz 'slučaj doziranja' koji se ovde koristi odnosi se na davanje antivirusnog sredstva pacijentu kome je potreno, koji može uključivati jedan ili više oslobađanja antivirusnog sredstva iz uređaja za davanje leka. Prema tome, 'slučaj doziranja' kako se ovde koristi, uključuje, ali bez ograničenja, instaliranje kontinualnog uređaja za davanje (npr. pumpe ili drugog injektibilnog sistema za kontrolisano oslobađanje); i pojedinačnu subkutanoznu injekciju praćenu instalacijom kontinualnog sistema za davanje.

'Kontinualno davanje' kako je ovde korišćeno (npr. u kontekstu

'kontinualno davanje supstance u tkivo') odnosi se na kretanje leka ka mestu davanja, npr. u tkivo na način koji obezbeđuje davanje željene količine supstance u tkivo u toku odabranog vremenskog perioda, gde je približno ista količina leka primeljna od strane pacijetna svakog minuta u toku odabranog vremenskog perioda.

'Kontinualno oslobađanje' koje je ovde korišćeno (npr. u kontekstu

'kontrolisanog oslobađanja leka') ima nameru da obuhvati oslobađanje supstance (npr. agonist receptora interferona tipa I i tipa III , npr. IFN-a) pri izabranim ili na drugi načim kontrolisanim brzinama, intervalima i/ili količinama, koje nisu sušinski pod uticajem okolne u kojoj se koristi. 'Kontrolisano oslobađanje' prema tome obuhvata, ali nije neophodno ograničeno na, suštinsko kontinualno davanje, i davanje prema uzoru (npr. prekidno davanje u toku vremenskog peioda koji je prekidan u pravilnim ili nepravilnim vremenskim intervalima).

'Prema uzoru' ili 'vremenski' se koristi u kontekstu davanja leka i ima označava davanje leka prema uzoru, generalno suštinski pravilnom uzoru, u toku prethodno određenog vremenskog perioda (npr. drugačijem nego što je period koji je u vezi sa na primer injekcijom bolusa). 'Prema uzoru' ili 'vremenski' davanje leka ima nameru da obuhvati davanje leka sa povećanom, smanjenom, suštinski konstantnom ili pulsnom brzinom ili opsegom brzina (npr. količina leka po vremenskoj jedinici ili zapremina formulacije leka po vremsnkoj jedinici) i dalje obuhvata davanje koje je kontinualno ili suštinski kontinualno ili hronično.

Izraz 'uređaj za kontrolisano davanje leka' ima nameru da obuhvati bilo koji uređaj u kome oslobađanje (npr. brzina, tajming oslobađanja) leka ili druge željene supstance koju sadrži, je kontrolisana ili određena samim uređajem i nije pod uticajem okoline u kojoj se upotrebljava, ili oslobađanje brzinom koja je ponovljiva u okolini upotrebe.

Pod 'suštinski kontinualno' kao što je ovde korišćeno, na primer, u kontekstu 'suštinski kontinualna infuzija' ili 'suštinski kontinulano davanje' ima nameru da se odnosi na davanje leka na način koji je suštinski neprekidan za prethodno određeni vremenski period davanja leka, gde količina primljenog leka od strane pacijenta u toku svakog intervala od 8 sati u prethodno određenom periodu nikada ne pada na nulu. Pored toga, 'suštinski kontinualno' davanje leka može takođe obuhvatiti davanje leka suštinski konstantnom, predhodno određenom brzinom ili opsegom brzina (npr. količinom leka u jedinici vremena, ili zapreminom formulacije leka u toku jedinice vremena) koje je suštinski neprekidno za prethodno određeni period davanja leka.

'Suštinski ravnotežno stanje' koje je ovde krišćeno u kontekstu biološkog parametra koji može varirati u funkciji vremena, misli se da biološki parametar može pokazivati suštinski konstantnu vrednost u toku vremenskog perioda, tako da površina koja je ispod krive definisane vrednošću biološkog parametara kao funkcije vremena u toku perioda od svakih 8 sati u toku vremena (AUC8sat) koja nije više od 20% iznad ili oko 20% ispod i poželjno ne više od 15% iznad ili oko 15% ispod, i poželjnije ne više od 10% iznad ili oko 10% ispod, prosečna površine ispod krive biološkog parametra u toku perioda od 8 sati u toku vremena (prosečna vrednost AUC8sat). Procečna vrednost AUC8sat je definisana kao koeficijent (q) površine ispod krive biološkog parametra u toku celokupnog vremena

(ukupan AUC) podeljen sa brojem od 8 - časovnim intervalima u toku vremena (tukupno 1/3 dana) tj q= (ukupanAUC)/(tukupno 1/3dana). Na primer, u kontekstu koncentracije leka u serumu, koncentracija leka u serumu je održavana u suštinski ravnotežnom stanju u toku vremena kada površina pod krivnom koncentracije leka u serumu u toku vremena za svaki period od 8 sati u toku vremena (AUC8sat) nije veća od 20% iznad ili oko 20% ispod prosečne vrednosti površine ispod krive koncentracije leka u serumu u toku perioda od 8 sati u toku vremena (prosečna vrednost AUC8sat), tj. AUC8sat nije veća od 20% iznad ili 20% ispod prosečne vrednosti AUC8sat. za koncentraciju leka u serumu u toku vremena.

Pre nego što ovaj pronalazak dalje opišemo, razume se da ovaj pronalazak nije ograničen na određena opisana izvođenja, koja mogu kao takva naravno varirati. Takođe treba razumeti da ovde korišćena terminologija je samo za svrhe opisivanja odgovarajućeg izvođenja, i nema nameru da bude ograničavajuća, s obzirom daje obim prikazanog pronalaska ograničen samo sa zahtevima u prilogu.

Gde je obezbeđen opseg vrednosti, razume se da svaka vrednost, do desetine jedinice najniže granice, osim ukoliko kontekst jasno ne ukazuje na suprotno, između gornje i donje granice opsega i druga izneta vrednost u navedenom opsegu je obuhvaćena ovim pronalaskom. Gornje i donje granice ovih manjih opsega mogu biti nezavisno obuhvaćene obimom pronalska, podložne bilo kakvom isključenu u pomenutom opsegu. Gde pomenuti opseg uključuje jednu ili dve granice, opsezi koji isključuju obe ove uključujuće vrednosti su takođe uključeni u ovaj pronalazak.

Osim ukliko nije drugačije opisano, tehnički i naučni termini koji su ovde korišćeni imaju ista značenja kao stoje uobičajeno u struci. Mada bilo koji postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima ovde opisanim takođe mogu biti korišćeni u praksi ili testiranju prikazanog pronalaska, ovde su opisani poželjni postupci i materijali. Sve ovde pomenute publikacije su ovde uključene referencom da opišu postupke i/ili materijale u vezi sa citiranim publikacijama.

Mora se primetiti da ovde korišćeni oblici jednine kao i u priloženim zahtevima, uključuju njihove referentne množine osim ako jasno nije drugačije ukazano. Prema tome, na primer, pozivanje na 'postupak' uključuje množinu takvih postupaka i pozivanje na 'dozu' uključuje pozivanje na jednu ili više doza i njenih ekvivalenata poznatih ljudima iz struke i tako dalje.

Publikacije koje su ovde diskutovane su obezbeđene jedino zbog njihovog opisa u oblasti tehnike pre datuma podnošenja ove prijave. Ništa ovde nije konstruisano kao priznanje da prikazani pronalazak prethodi takvoj publikaciji kao prethodni pronalazak. Dalje, dati datumi publikacija mogu biti različiti od stvarnih datuma objave što može biti potrebno nezavisno potvrditi.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule I, kao i farmaceutske kompozicije i formulacije koje sadrže bilo koje jedinjenje formule I. Ovo jedinjenje je korisno u lečenju HCV infekcija i drugih poremećaja kao što je dole diskutovano.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu I:

u kojoj:

(a) R i R su svaki nezavisno H, halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil,

C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-C1.6alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C6m10aril, piridal, pirimidal, tienil, furanil, tiazolil, oksazolil, fenoksi, tiofenoksi, S(0)2NR6R7, NHC(0)NR<6>R<7>, NHC(S)NR<6>R<7>, C(0)NR<6>R<7>, NR<6>R<7>, C(0)R<8>,

C(0)OR<8>, NHC(0)R<8>, NHC(0)OR<8>, SOmR<8>, NHS(0)2R<8>;

OCHnNR<6>R<7>ili OCHnR<16>, gde R<16>je imidazolil ili pirazolil;

pomenuti tienil, pirimidal, furanil, tiazolil i oksazolil u definiciji R<1>i R<2>su opciono supstituisani sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci_6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Q.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenuti C6m10aril, piridal, fenoksi i tiofenoksi u definiciji R<1>i R<2>su opciono supstituisani sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, C2-6alkenil, C\. e alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C1.6alkoksi

opciono supstituisan sa do 5 fluoro;

(b) m=0, 1 ili 2; (c) R<4>je H, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil fenil ili benzil, pomenuti fenil ili benzil opciono su supstituisani sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci_6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, C1.6alkil opciono supstituisan do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (d) R<5>je C,.6alkil, C(0)NR<6>R<7>, C(S)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>,

S(0)2R<8>, ili (CO)CHR<2l>NH(CO)R<22>;

(e) R° i R' su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4_ioalkilcikloalkil ili fenil, pomenuti fenil je supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, C2.6alkenil, hidroksi-Ci.6alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R i R uzeti zajedno sa azotovim atomom za koji su vezani obrazuju

indolinil, pirolidinil, piperidinil, piperazinil ili morfolinil;

(f) R je Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani sa jednim do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi ili fenil; ili R je C6 m10aril koji je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi-Ci_6alkil, Ci^alkil opciono supstituisani sa do 5 fluoro, Q ^alkoksi opciono suspstituisan sa do 5 fluoro; ili R8 je Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro grupa; ili R je tetrahidrofuranski prsten koji je povezan preko C3ili C4položaja prstena tetrahidrofurana; ili R<8>je tetrapiranilni prsten

povezan preko C4položaja prstena tetrapiranila;

(g) Y je sulfonamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde je R<9>C,.6alkil, C3.7

cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom

do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkoksi, ili fenil, ili R<9>je Ceiii10aril koji je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci_6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R<9>je Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro grupa, NR<6>R<7>ili (CO)OH ili R<9>je heteroaromatični prsten opciono supstituisan sa do dva puta sa halo, cijano, nitro, hidroksil ili Ci.6alkoksi; ili Y je karboksilna

kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek;

(h) R<10>i R<11>su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4_

ioalkilcikloalki 1,Cemioaril, hidroksi-Ci.6alkil, C\_ 6 alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nR<6>R<7>, (CH2)nC(0)OR<14>gde R<14>je H, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4_10alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, ili fenil; ili R<14>je C6mioaril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4_loalkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi- Ci_6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenutiCe mioaril, u definiciji R<10>i R<11>je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R10iR<11>uzeti zajedno sa ugljenikovim atomom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil ili R<10>i R11sukombinovani kao

O; (i) p= 0 ili 1;

(j) R<12>i R<13>su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.

loalkilcikloalkil,Cemioaril, hidroksi-Ci.6alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nR<6>R<7>, (CH2)nC(0)OR<14>gde R<14>je H, C].6alkil, C3.7cikloalkil, C4_,oalkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, ili fenil; ili R14 jeCemioaril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.loalkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci_6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenuti C6 mioaril, u definiciji R i R je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci_6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi

opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R 12 i R 13 uzeti zaj<e>dno sa ugljenikovim atomom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil ili R<12>i R<13>su svaki nezavisno Ci_6alkil opciono supstituisan sa (CH2)nOR ;

(k) R<20>je H, C^alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C6m10aril,

hidroksi-C].6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nNR<6>R<7>, (CH2)nC(0)OR<14>gde R<14>je H, d.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, d.6alkoksi, ili fenil; ili R<14>je d iii10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, d.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, d.6alkoksi, hidroksi- d_6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, d.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro;

pomenuti d iii10aril, u definiciji R<12>iR13je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, d_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.]0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, d_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, d^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (1) n = 0-4; (m) V je izabran od O, S ili NH;

(n) kada V je O ili S, W je izabran od O, NR<15>ili CR<15>; kada V je NH,

W je izabran od NR<15>ili CR<15>, gde R15 je H, d_6alkil, d_7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkli ili d^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro;

(o) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu;

(p) R<21>je d.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil koji su opciono supstituisani sa jedan do tri sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, ili fenil; ili R je d iii10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3_7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, C ^alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R je piridal, pirimidal, pirazinil, tienil, furanil, tiazolil, oksazolil, fenoksi, tiofenoksi; i

(q) R 22 je d_6alkil, C3.7cikloalkil, C4_t0alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro ili fenil.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu II:

gde:

(a) R1 i R<2>su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci.

3alkoksi.

(b) R5 je C(0)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>; (c) R° i R' su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4. loalkilcikloalkil ili fenil; (d) R8 je Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.loalkilcikloalkil ili 3-tetrahidofuril. (e) Y je sulfonamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde je R<9>C^alkil, C3.7cikloalkil ili fenil koji su opciono supstituisani sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.3alkil, C3.7cikloalkil, Ci.3alkoksi ili Y je karboksilna kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek;(f)R1<0>i R<11>su svaki nezavisno H, Ci_3alkil ili R10iR<11>uzeti zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil;

(g) W je izabran od O ili NH; i

(h) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu III:

gde:

(a) R 1 i R " J su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci.

3alkoksi

(b) R4 jeH

(c) R5 je C(0)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>; (d) R8 je Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil ili 3-tetrahidroiuril. (e) Y je sulfonilamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde R<9>je Ci.3alkil, C3. 7cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.3alkil, C3.7cikloalkil, Ci_3alkoksi ili Y je karbociklična kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek; (f) W je izabran od O ili NH;

(g) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu IV:

gde:

12 ■ • (a)<R>i R su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci^alkil, Ci. 3alkoksi; (b) R5 je C(0)OR<8>ili C(0)NHR<8>; (c) R Qje Ci^alkil, C5.6cikloalkil ili 3-tetrahidofuril; (d) R9 je C].3alkil, C3^cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci_3alkoksi; (e) R10 i R<11>su svaki nezavisno H, Ci.3alkil ili R10 i R<11>uzeti zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil;

(f) W je izabran od O ili NH; i

(g) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu V:

gde:

(a)<R>i R su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci.

3alkoksi

(b) R5je C(0)OR<8>ili C(0)NHR<8>

(c) R je Ci-galkil, C5_6cikloalkil, ili 3-tetrahidofuril.

(d) R9 je Ci.3alkil, C3.5cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do

dva halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci.3alkoksi

(e) R<10>i R<11>su svaki nezavisno H, Ci.3alkil ili C4.5cikloalkil.

(f) W je izabran od O ili NH;

(g) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu VI:

gde:

(a) R i R su svaki nezavisno H, hloro, fluoro, cijano, hidroksi, Ci.3alkil,

C^alkoksi

(b) R5 je C(0)OR<8>C(0)NHR<8>

(c) R8 je C!.6alkil, C5.6cikloalkil,

(d) R9 je Ci^alkil, C3_4cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do

dva halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci^alkoksi

(e) R<10>i R<11>s<u>svaki nezavisno H, Ci^alkil ili R<10>i R<11>uzeti zajedno sa

ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil;

(f) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu VII:

gde:

(a) R<1>i R<2>su svaki nezavisno H, hloro, fluoro, cijano, hidroksi, Ci_3alkil,

Ci^alkoksi

(b) R5 je C(0)OR<8>ili C(0)NHR<8>

(c) R8 je Ci.6alkil, C5.6cikloalkil

(d) R9 je Ci^alkil, C3^cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do

dva halo, cijano, hidroksi, Ci^alkil, Ci^alkoksi

(e) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu VIII:

gde: (a) R1 i R<2>su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci.

3 alkoksi

(b) R4 jeH

(c) R5 je C(0)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>; (d) R gje Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.loalkilcikloalkil ili 3-tetrahidrofuril. (e) Y je sulfonilamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gdeR<9>je d^alkil, C3. 7cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_3alkil, C3_7cikloalkil, C^alkoksi ili Y je karbociklična kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek;(f)R10 i R<11>su svaki nezavisno H, Ci_3alkil ili R10 i R<11>uzeti zaj<e>dno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil; (g) R20 je H, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4-i0alkilcikloalkil, C6iii10aril, hidroksi-Ci_6alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nNR<6>R<7>, (CH2)nC(0)OR<14>gde R14 je H, C,.6alkil, C3.7cikloalkil, C4-10alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, ili fenil; ili R<14>je C6u;10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci^alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenutiCf, m10ari• l, u definiciji " R 12 i * R 13 j•e opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi-Ci^alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (h) W je izabran od O ili NH;

(i) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

Prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju opštu formulu IX:

gde:

(a) R1 i R<2>su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci.

3alkoksi

(b) R4jeH; (c) R5 je C(0)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>; (d) R8 je Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4_ioalkilcikloalkil ili 3-tetrahidofuril. (e) Y je sulfonilamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde R9 je Ci.3alkil, C3. 7cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_3alkil, C3.7cikloalkil, Ci_3alkoksi ili Y je karbociklična kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek; (f)R10i R<11>su svaki nezavisno H, Ci_3alkil ili R<10>i R11uzeti zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil; (g) R20 je H, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil,Ce m10aril, hidroksi-Ci^alkil, Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nNR<6>R<7>, (CH2)nC(0)OR<14>gde R14 je H, C^alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkoksi, ili fenil; ili R<14>jeCem10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, C^alkil, C3.7cikloalkil, C4_ioalkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci_6alkoksi, hidroksi-C^alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenuti C6in10aril, u defini• ciji R 12 i R 13 j* e opciono supstitui• san sa do tri • halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, C2. 236alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi-Ci^alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (h) W je izabran od O ili NH; (i) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu i (j) gde je Z spojen ili dodati aril ili heteroarilni sistem prstenova.

Prikazani pronalazak dalje obezbeđuje kompozicije, uključujući farmaceutske kompozicije, koje sadrže jedinjenja opšte formule I-VII i njihove soli, estre i druge derivate. Ova farmaceutska kompozicija sadrži pomenuto jedinjenje; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. Raznovrsni farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti su poznati u stanju tehnike i nije potrebno da budu ovde razmatrani do detalja. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti su obimno opisani u različitim publikacijama, uključujući na primer, A. Gennaro (2000) 'Remington: the Science and Pracice of Pharmacv', 20th edition, Lippincott, Williams & Wilkins; Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Deliverv Svstems (1999) H.C. Ansel et al., eds. 7th ed., Lippincott, Williams & Wilkins; and Handbook of Phramaceutical Excipients (2000) A.H. Kibbe et al., eds., 3rd ed. Amer. Pharmaceutical Assoc.

Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti, kao što su sredstva, adjuvanti, nosači ili razblaživači su lako dostupni. Povrh toga, farmaceutski prihvatljive, pomoćne supstance, kao što su sredstva za prilagođavanje pH i puferovanje, sredstva za podešavanje napetosti, stabilizatori, sredstva za kvašenje i slično, su svima lako dostupna.

U mnogo izvođenja, ova jedinjenja inhibiraju enzimsku aktivnost proteaze NS3 virusa hepatitisa C (HCV). Da li predmetno jedinjenje inhibira HCV NS3, može biti lako određeno korišćenjem poznatih postupaka. Tipični postupci uključuju određivanje da li HCV poliprotein ili drugi polupeptid koji sadrži mesto koje prepoznaje NS3 se čepa sa NS3 u prisutvu sredstva. U mnogim izođenjima, predmetno jedinjenje inhibira enzimsku aktivnost NS3 sa bar oko 10%, bar oko 15%, bar oko 20%, bar oko 25%, bar oko 30%, bar oko 40%, bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80%, ili bar oko 90% ili više u poređenju sa enzimskom aktivnošću NS3 bez jedinjenja.

U mnogim izvođenjima, predmetno jedinjenje inhibira enzimsku aktivnost NS3 proteaze HCV sa IC50manjim od oko 50 uM, npr. predmetno jedinjenje inhibira NS3 proteazu HCV sa IC50manjim od oko 40 uM, manjim od oko 25 uM, manjim od oko 10 uM, manjim od oko 1 uM, manjim od oko 100 nM, manjim od oko 80 nM, manjim od oko 60 nM, manjim od oko 50 nM, manjim od oko 25 nM, manjim od oko 10 nM ili manjim od oko 1 nM ili još manjim vrednostima.

U mnogim izvođenjima, predmetno jedinjenje inhibira replikaciju HCV virusa. Na primer, ovo jedinjenje inhibira replikaciju HCV virusa bar oko 10%, bar oko 15%, bar oko 20%, bar oko 25%, bar oko 30%, bar oko 40%, bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80% ili bar oko 90% ili više, u poređenju sa replikacijom HCV virusa bez jedinjenja. Da li predmetno jedinjenje inhibira replikaciju HCV virusa može biti određeno korišćenjem postupaka poznatih u tehnici, uključujući in vitro test replikacije virusa.

LEČENJE VIRUSNIH INFEKCIJA JETRE

Ovde opisani postupci i kompozicije su generalno korisni u lečenju HCV infekcija.

Da li je postupak efikasan u lečenju HCV infekcije može biti određeno smanjenjem broja virusa, smanjenjem vremena serokonverzije (virus se ne može detektovati u pacijentovom serumu), porastom brzine održanog virusnog odgovora u odnosu na terapiju, smanjenju morbiditeta ili smrtnosti u kliničkim ishodima ili drugim indikatorom kao odgovorom na bolest.

Generalno efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedno ili više antivirusnih sredstava, je količina koja je efikasna u smenjenu broja virusa ili u postizanju održanog virusnog odgovora na terapiju.

Da li je postupak efikasan u lečenju HCV infekcija može biti određeno merenjem broja virusa, ili merenjem parametara u vezi sa HCV infekcijama, uključujući ali bez odgraničenja, fibrozu jetre, povećanje nivoa transaminaza u serumu i nekroinflamatorna aktivnost u jetri. Dole su do detalja diskutovani indikatori fibroze jetre.

Postupak uključuje davanje efikasna količine jedinej nj a formule I, opciono u kombinaciji sa efikasnom količinom jednog ili dva dodatna antivirusna sredstva. U nekim izvođenjima efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedno ili više dodatnih antivirusnih sredstava je u količini koja je efiksana da smanji virusni titar do nivoa koji se ne mogu detektovati, npr. do oko 1000 do oko 5000, do oko 500 do oko 1000, ili do oko 100 do oko 500 kopija genoma/ml seruma. U nekim izođenjima, efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedan ili više dodatnih antivirusnih sredstava je u količini koja je efiksana u smanjenu broja virusa na manje od 100 kopija genoma/ml seruma.

U nekim izvođenjima, efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedan ili više antivirusnih sredstava je u količini koja je efikasna da postigne 1.5-log, 2-log, 2.5-log, 3-log, 3.5-log, 4-log, 4.5-log ili 5-log smanjenja titra virusa u serumu pojedinca.

U mnogim izvođenjima, efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedan ili više dodatnih antivirusnih sredstava, je količina koja je efikasna u postizanju održanog virusnog odgovora, npr. nije detektovana RNK HCV (npr. manje od oko 500, manje od oko 400, manje od oko 200 ili manje od oko 100 kopija genoma po mililitru seruma) u serumu pacijenta u toku perioda od bar oko jedan mesec, bar oko dva meseca, bar oko tri meseca, bar oko četiri meseca, bar oko pet meseci, ili bar oko šest meseci posle prekida terapije.

Kao što je gore primećeno, da li je predmetni postupak efikasan u lečenju HCV infekcija može se odrediti merenjem parametara u vezi sa HCV infekcijom, kao što je fibroza jetre. Dole su do detalja diskutovani postupci određivanja stepena fibroze jetre. U nekim izvođenjima, nivo markera fibroze jetre u serumu ukazuje na stepen fibroze jetre.

Kao jedan neograničavajući primer, mereni su nivoi alanin aminotransferaze (ALT) u serumu, korišćenjem standardnih testova. Generalno, smatraju se normalnim nivoi ALT manji od oko 45 međunarodnih jedinica. U nekim izvođenjima, efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedan ili više dodatnih antivirusnih sredstava je količina efiksanoj da smanji nivoe ALT na manje od oko 45 IU/ml seruma.

Terapeutski efikasna količina jedinjenja formule I i optički jednog ili više antivirusnih sredstava je količina koja je efiksana u smanjenju nivoa markera fibroze jetre u serumu bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 25%, bar oko 30%, bar oko 35%, bar oko 40% bar oko 45%, bar oko 50%, bar oko 55%, bar oko 60%, bar oko 65%, bar oko 70%, bar oko 75%, bar oko 80% ili više u poređenju sa nivoom markera kod nelečenog pojedinca ili pojedinca koji je tretiran sa placebom. Postupci merenja markera u serumu uključuju postupke koji su zasnovani na imunologiji, npr. testovi imunosorpcije sa vezanim enzimom (ELISA-enzyme-linked immunosorbent assavs), radioimuno testovi i slično korišćenjem antitela specifičnog za dati marker u serumu.

U mnogim izvođenjima, efikasna količina jedinjenja formule I i dodatnog antivirusnog sredstva je sinergijska količina. Ovde korišćena 'sinergijska kombinacija' ili 'sinergijska količina' jedinjenja formule I i dodatnog antivirusnog sredstva je kombinovana doza koja je efiksanija u terapeutkom ili profilaktičkom lečenju HCV infekcija nego povećanje ishoda lečenja koje bi se moglo predvideti ili očekivati samo sabiranjem kombinacije (i) terapeutskog ili profilaktičkog dejstva jedinjenja formule I kada se daje u istoj dozi u monoterapiji i (ii) terapuetskog ili profilaktičkog dejstva dodatnog antivirusnog sredstva kada se daje u istoj dozi u monoterapiji.

U nekim izvođenjima pronalaska, izabrana količina jedinjenja formule I i izabrana količina dodatnog antivirusnog jedinjenja su efikasne kada se koriste u kombinovanoj terapiji bolesti, ali izabrana količina jedinjenja formule I i/ili izabrana količina dodatnog antivirusnog sredstva je neefikasna kada se koristi u monoterapiji bolesti. Prema tome, pronalazak obuhvata (1) režime u kojima je izabrana količina dodatnog antivirusnog sredstva poboljšava terepeutski učinak izabrane količine jedinjenja formule I kada se koristi u kombinovanoj terapiji bolesti, gde izabrana količina dodatnog antivirusnog sredstva obezbeđuje tereputski učinak kada se koristi u monoterapiji bolesti (2) režime u kojima izabrana količina jedinjenja formule I poboljšava terapuetski učinak izabranog jedinjenja dodatnog antivirusnog sredstva kada se koristi u kombinovanoj terapiji bolesti, gde izabrana količina jedinjenja formule I ne obezbeđuje terapeutski učinak kada se koristi u monoterapiji bolesti i (3) režime u kome izabrana količina jedinjenja formule I i izabrana količina dodatnog antivirusnog sredstva obezbeđuje terapeutski učinak kada se koristi u kombinovanoj terapiji bolesti, gde svaka od izabranih količina, jedinjenja formule I i dodatnog antivirusnog sredstva, respektivno ne obezbeđuje terapeutski učinak kada se koristi u monoterapiji bolesti. Ovde korišćen izraz 'sinergijska efikasna količina' jedinjenja formule I i dodatnog antivirusnog sredstva i njen gramatički ekvivalent treba razumeti da uključuje bilo koji od gornji režima 0)-(3).

Fibroza

Ovaj pronalazak obezbeđuje postupke za lečenje fibroze jetre (uključujući oblike fibroze jetre koji su posledica ili u vezi sa HCV infekcijom), koji generalno uključuju davanje terapeutske količine jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnih antivirusnih sredstava. Dole su diskutovane efikasne količine jedinjenja formule I sa i bez jednog ili više dodatnih antivirusnih sredstava, kao i dozni režimi.

Da li je lečenje sa jedinjenjem formule I i opciono jedinim ili više dodatnih antivirusnih sredstava efikasno u smanjenju fibroze jetre određeno je bilo kojim od brojnih dobro ustanovljenih tehnika merenja fibroze jetre i funkcije jetre. Smanjenje fibroze jetre je određivano analiziranjem uzorka biopsije jetre. Analiza jetre biopsijom sastoji se od procenjivanja dve glavne komponente: nekroinfalmacije procenjene 'stupnjem' kao merom ozbiljnosti i aktivnosti toka bolesti, i lezija fibroze i parenhimalnih ili vaskularnih promenjivih struktura procenjenih kao 'stadijum', koje odražavaju progresiju dugotrajne bolesti. Videti npr. Brunt (2000) Hepatol. 31:241-246; i META VIR (1994) Hepatologv 20:15-20. Na osnovu analiza biopsije jetre dodeljivana je ocena. Postoje brojni standardizovani sistemi ocenjivanja koji obezbeđuje kvantitativnu procenu stepena i ozbiljnosti fibroze. Ovo uključuje META VIR, Knodell, Scheuer, Ludwig i Ishak sisteme ocenjivanja.

METAVIR-ov sistem ocenjivanja je zasnovan na analizama različitih karakteristika biopsije jetre, uključujući fibrozu (portalnu fibrozu, centrilobularnu fibrzu i cirozu); nekrozu (piecemalnu i lobularnu nekrozu, acidofilnu retrakciju i cistične degeneracije); infalamacije (inflamacija portalnog trakta, portalni limfoidni agregati i rasprostranjenost poratalne inflamacije); promene žučnog kanala; i Knodell-ov indeks (ocenjivanje periportalne nekroze, lobularna nekroza, portalne infalamacije, fibroze i celokupna aktivnost bolesti). Definicije svakog stanja METAVIR-ovog sistema su kao što sledi: ocena 0, bez fibroze; ocena 1, zvezdasta uvećanja portalnog trakta ali bez formiranih pregrada; ocena 2, uvećanja portalnog trakta sa retkim formiranim pregradama; ocena 3: brojne pregrade bez ciroze i ocena 4, ciroza.

Knodell-ov sistem ocenjivanja takođe nazvan Indeks aktivnosti jetre, klasifikuje uzorak na osnovu ocena u četiri kategorije histoloških karakteristika: I periportalna i/ili premošćena nekroza, II. Intralobularna degeneracija i fokalna nekroza; III. Portalna infalamacija ; i IV. Fibroza. U Knodell-ovom sistemu stanja, ocene su kao što sledi: ocena 0, bez fibroze; ocena .1, blaga fibroza (fibrozna portalna ekspanzija); ocena: 2, umerena fibrzoa; ocena 3, ozbiljna fibroza (premošćena fibroza) i ocena: 4, ciroze. Što je viša ocena to je veće oštećenje tkiva jetre. Knodell (1981) Hepatol 1:431.

U Scheuer-ovom sistemu ocenjivanja, ocene su kao što sledi: ocena 0, bez fibroze; ocena 1, uvećani, fibrotički portalni trakt; ocena 2, periportalna ili portal-portalna pregrada, ali intaktne strukture; ocena 3, fibroza sa strukturnom distorzijom, bez očigledne ciroze; ocena 4, verovatna ili definitivna ciroza, Scheuer (1991) J. Hepatol. 13:372.

Ishak-ov sistem za ocenivanje je opisan kod Isak (1995) J. Hepatol. 22:696-699. stupanj 0, bez fibroze; stupanj 1, ekspanzija fibroze u nekim portalnim oblastima, sa ili bez kratkih fibroznih pregrada; stupanj 2, ekspanzija fibroze u većini poratalnih oblasti sa ili bez kratkih fibroznih pregrada; stupanj 3, ekspanzija fibroze u većini portalnih oblasti sa povremenim portalno-portalnim premošćavanjem (P-P); stupanj 4, ekspanzija fibroze u portalnoj oblasti sa obeleženim premošćenjima (P-P) kao i portalno-centralnim (P-C); stupanj 5, obeležna premošćenja (P-P i/ili P-C) sa povremenim nodulama (nekompletna ciroza); stupanj 6, ciroza, verovatna ili nedvosmislena.

Učinak anti-fibrotičke terapije takođe može biti meren i procenjivan korišćenjem Child-Pugh-ovog sistema ocenjivanja koji se sastoji od multikomponentog sistema tačaka zasnovanih na abnormalnostima u nivou bilirubina u serumu, nivoa albumina u serumu, protrombinskom vremenu, prisustvu i ozbiljnosti ascita i prisustvu i ozbiljnosti encefalopatije. Na osnovu prisustva i ozbiljnosti abnormalnosti kod ovih parametara, pacijenti mogu biti smešetni u jednu od tri kategorije sa povećavanjem ozbiljnosti kliničke bolesti: A, B ili C.

U nekim izvođenjima, terapeutski efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnih antivirusnih sredstava je količina koja dovodi do promene jedne veličine ili više njih u stadijum fibroze na osnovu biopsije jetre pre- i post- terapije. U određenim izvođenjima, terapeutski efiksana količina jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnih antivirusnih sredstava, smanjuje fibrozu jetre bar za jednu jedinicu u META VIR, Knodell, Scheuer, Ludwig ili Ishak ovom sistemu ocenjivanja. Sekundarno, ili indirektno, indeksi funkcije jetre mogu takođe biti korišćeni za procenjivanje efiksanosti lečenja sa jedinjenjima formule I. Morfometrična kompijuterizovana semi-automatizovana procena kvatitativnog stepena fibroze jetre je zasnovana na specifičnim mrljama kolagenskih i/ili serumskih markera fibroze jetre koje mogu takođe biti merene kao indikacija efikasnosti postupka lečenja subjekta. Sekundarni indeksi funkcije jetre uključuju ali bez ograničenja, nivoe transaminaza u serumu, protrombinsko veme, bilirubin, broj krvnih pločica, portalni pritisak, nivo albumina i procenjivanje Child-Pugh-ove ocene.

Efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedan ili više dodatnih antivirusnih sredstava je količina koja efiksano povećava indeks funkcije jetre bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 25%, bar oko 30%, bar oko 35%, bar oko 40%, bar oko 45%, bar oko 50%, bar oko 55%, bar oko 60%, bar oko 65%, bar oko 70%, bar oko 75%, bar oko 80% ili više u poređenju sa indeksom funkcije jetre kod nelečenog pojedinaca ili pojedinca tretiranog sa placebom. Ljudi iz struke mogu lako izmeriti takve indekse funkcije jetre, korišćenjem standardnih postupaka testiranja, od kojih su mnogu komercijalno dostupni i rutinski korišćeni u kliničkim uslovima.

Markeri fibroze jetre u serumu mogu biti mereni kao pokazatelji efikasnosti postupka lečenja. Markeri fibroze jetre u serumu uključuju, ali bez ograničenja, hialuronat, N-terminalni prokolagen III peptid, 7S domen kolagena tipa IV, C-terminalni prokolagen I peptida i laminin. Dodatni biohemijski markeri fibroze jetre uključuju a-2-makroglobulin, haptoglobin, gama globulin, apolipoprotein A i gama glutamil transpeptidazu.

Terapuetski efiksana količina jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnih jedinjenja antivirusnog sredstva je količina koja je efiksana u smanjenju nivoa markera fibroze jetre u serumu bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 25%, bar oko 30%, bar oko 35%, bar oko 40%, bar oko 45%, bar oko 50%, bar oko 55%, bar oko 60%, bar oko 65%, bar oko 70%, bar oko 75%, bar oko 80% ili više u poređenju sa nivoom markera kod nelečenog pojedinaca ili pojedinca tretiranog sa placebom. Ljudi iz struke mogu lako meriti takve markere fibroze jetere u serumu, korišćenjem standardnih postupaka testiranja, od kojih su mnogi komercijalno dostupni i rutinski se koriste u kliničkim uslovima. Postupci merenja markera u serumu uključuju imunobiološki zasnovane postupke, npr. testove imunosorbcije sa vezanim enzimom (ELISA), radioimuno testove i slično korišćenjem antitela specifičnih za dati marker u serumu.

Kvantitativni. testovi funkcionalnih ograničenja jetre takođe mogu biti korišćeni za procenivanje efikasnosti lečenja sa agonistima interferon receptora i pirfenidona (ili pirfenidonskog analoga). Ovo uključuje: klirans indocianin zelenog (ICG), kapacitet eliminacije galaktoze (GEC), aminopirinski test iz daha (ABT), antipirinski klirans, klirans monoetilglicin-ksilidid i klirans kofeina.

Ovde korišćeni izraz 'komplikacija u vezi sa cirozom jetre' odnosi se na poremećaj koji se javlja kao posledica dekompenzovane bolesti jetre, tj. ili se javlja posle kao rezultat razvitka fibroze jetre i uključuje ali bez ograničenja razvijanje ascita, varicealnog krvarenja, portalne hipertenzije, žutice, progresivne insuficijencije jetre, encefalopatije, hepatocelularnog karcinoma, prestanak rada jetre koji zahteva transplantaciju i srmrtnost u vezi sa jetrom.

Terapeutski efiksana količina jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnih jedinjenja antivirusnog sredstva je količina koja je efiksana u smanjenju učestalosti (npr. verovatnoće da će se kod pojedinca razviti) poremećaja koji su u vezi sa cirozom jetre od bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 25%, bar oko 30%, bar oko 35%, bar oko 40%, bar oko 45%, bar oko 50%, bar oko 55%, bar oko 60%, bar oko 65%, bar oko 70%, bar oko 75%, bar oko 80% ili više u poređenju sa nelečenim pojedincem ili pojedincem tretiranim sa placebom.

Ljudi iz štuke mogu lako odrediti da li lečenje sa jedinjenjem formule I i opciono jednim ili više dodatnih antivirusnih sredstava je efiksano u smanjenju slučajeva poremećaja koji su u vezi sa cirozom jetre.

Smanjenje fibroze jetre povećava funkciju jetre. Prema tome, pronalazak obezbeđuje postupak za povećavanje funkcije jetre, generalno uključivanjem davanja terapuetski efiksane količine jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnoh antivirusnih sredstava. Funkcija jetre uključuje, ali bez ograničenja, sintezu proteina kao što su proteini seruma (npr. albumin, faktori zgrušnjavanja, alkalne fosfataze, aminotransferaze (npr. alanin transaminaze, aspartat transaminaze), 5'-nukleozidaze, y-glutaminiltranspeptidaze itd.), sintezu bilirubina, sitezu holesterola i sintezu žučnih kiselina; metabolička funkcija jetre uključujući ali bez ograničenja metabolizam ugljenih hidrata, metabolizam aminokiselina i amonijaka, metabolizam hormona i metabolizam lipida; detoksifikaciju egzogenih lekova i hemodinamičku funkciju, uključujući utrobnu i portalnu hemodinamiku i slično.

Ljudi iz struke će lako utvrditi da li je funkcija jetre povećana, korišćenjem dobro ustanovljenih testova funkcije jetre. Prema tome, sinteza markera funkcije jetre kao što je albumin, alkalna fosfataza, alanin transaminaza, aspartat transaminaza, bilirubin i slično mogu biti procenejne merenjem nivoa ovih markera u serumu, korišćenjem standardnih imunoloških i enzimskih testova. Utrobna cirkulacija i portalna hemodinamika mogu biti merene portalnim probojnim pritiskom i/ili rezistencom korišćenjem standardnih postupaka. Metaboličke funkcije mogu biti merene nivoom amonijaka u serumu.

Da li su proteini seruma koje jetra luču u normalnom opsegu, može biti određeno merenjem nivoa takvih proteina, korišćenjem standardnih imunoloških i enzimskih testova. Ljudi iz štuke znaju normalne opsege za takve proteine seruma. Primeri koji slede nisu ograničavajući. Normalni nivo alanin transaminaza je oko 45 IU po mililitru seruma. Normalni opseg za aspartat transaminazu je od oko 5 do oko 40 jedinica po litri seruma. Bilirubin je meren korišćenjem standardnih testova. Normalni nivoi bilirubina su uglavnom manji od oko 1.2 mg/dl. Nivoi albumina u serumu su mereni korišćenjem standardnih testova. Normalni nivoi albumina u serumu su u opsegu od oko 35 do oko 55 g/l. Produženje protrombinskog vremena je mereno korišćenjem standardnih testova. Normalno protrombinsko vreme je manje od oko 4 sekunde duže od kontrole.

Terapeutski efikasna količina jedinjenja formule I i opciono jedno ili više antivirusnih sredstava je ona koja je efiksana u povećavanju funckije jetre bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 30%, bar oko 40%, bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80% ili više. Na primer, terapeutski efiksana količina jedinjenja formule I i opciono jednog ili više antivirusnih sredstava je količina koja je efiksana u smanjenju povećanog nivoa markera funkcije jetre u serumu bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 30%, bar oko 40%, bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80% ili više , ili smanjenje nivoa markera funckije jetre u serumu na normalni nivo. Terapeutski efiksana količina jedinjenja formule I i opciono jednog ili više dodatnih antivirusnih sredstava je takođe količina koja je efikasna u povećanju smanjenog nivoa markera funkcije jetre u serumu bar oko 10%, bar oko 20%, bar oko 30%, bar oko 40%, bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80% ili više ili da poveća nivo markera funkcije jetre u serumu do normalnog nivoa.

Agonisti receptora interferona tipa I

U bilo kojim gore opisanim postupcima, u nekim izvođenjima davan je agonist receptora interferona tipa I. Agonist receptora interferona tipa I uključuje IFN-a; IFN-(3; IFN-tau; IFN-co; i bilo koje druge agoniste receptora interferona tipa I, uključujući nepeptidne agoniste.

Interferon- alfa

Bilo koji poznati IFN-a može biti korišćen u ovom pronalasku. Ovde korišćen izraz 'interferon-alfa' odnosi se na familiju povezanih polipeptida koji inhibiraju virusnu replikaciju i ćelijsku proliferaciju i menjaju imuni odgovor. Izraz TFN-a' uključuje IFN-a koji se javlja u priorodi; sintetički IFN-a; derivatizovan IFN-a (npr. PEGilovan IFN-a, glikozilovan IFN-a i slično) i analoge prirodnih i sintetičkih IFN-a; suštinski bilo koji IFN-a koji ima antivirusne osobine kao što je opisano za priordne IFN-a.

Pogodni alfa interferoni uključuju ali bez ograničenja, prirodne IFN-a (uključujući ali bez ograničenja prirodne IFN-a2a, IFN-a2b); rekombinantne interferone alfa-2b kao što je Intron-A interferon koji se može nabaviti od Schering Corporation, Kenilworth, NJ; rekombinantni interferon alfa-2a kao što je Roferon interferon koji se može nabaviti od Hoffmann-La Roche, Nutlev, NJ; rekombinantni interferon alfa-2C kao što je Berofar alfa 2 interferon koji se može nabaviti od Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc. Ridgefield, Conn; interferon alpha-n 1, prečišćena mešavina prirodnih alfa interferona kao što je Sumiferon koji se može nabaviti od Sumitomo, Japan ili Wellferon interferon alfa-nl (INS) koji se može nabaviti od Glaxo-Wellcome Ltd., London, Great Britain; i smeše interferon alfa-n3 prirodnih alfa interferona napravljenih od Interferon Sciences i koji se mogu nabaviti u Purdue Frederick Co., Nonvalk, Conn., pod trgovačkim imenom Alferon.

Izraz 'IFN-a' takođe obuhvata konsezusni IFN-a. Konsezusni IFN-a (takođe na koji se poziva kao na 'CIFN' i TFN-con' i 'konsezusni interferon') obuhvata ali bez ograničenja aminokiselinsku sekvencu koja je pripisana IFN-conl, IFN-con2 i IFN-con3 i koje su opisane u US patentu br. 4,695,623 i 4,897,471; i konsezusni interferon definisan određivanjem konsezusne sekvence interferona alfa koji se javlja u prirodi (npr. Infergen®, InterMune, Inc., Brisbane, Calif.). IFN-conl je konsezusno intereronsko sredstvo u Infergen® alfacon-1 proizvodu. Konsezusni interferonski proizvod Infergen® na koji se ove poziva kao na njegovo trgovačko ime (Infergen®) ili njegovo generičko ime (interferon alfacon-1). DNK sekvenca koja kodira IFN-kon može biti sintetizovana kao što je opisano u gore pomenutim patentima ili drugim standardnim postupcima. Od naročitog je interesa upotreba CIFN.

Takođe pogodni za upotrebu u prikazanom pronalasku su fuzioni polipetpidi koji sadrže IFN-a i heterologni polipeptid. Pogodni IFN-a fuzioni polipeptid uključuje ali bez ograničenja, Albuferon-alfa™ (fuzioni proizvod humanog albumina i IFN-a; Human Genome Sciences; videti npr. Osborn et al. (2002) J. Pharmacol. Exp. Therap. 303:540-548). Takođe pogodni za upotrebu prema prikazanom pronalasku su promešani genski oblici IFN-a . Videti, npr. Masci et al. (2003) Curr. Oncol. Rep. 5:108-113.

PEGilovani interferon alfa

Izraz TFN-a' takođe obuhvata derivate IFN-a koji su derivatizovani (npr. hemijski modifikovani) tako da menjaju izvesne osobine kao što su polu život u serumu. Kao takav, izraz TFN-a' uključuje glikozilovani IFN-a; IFN-a derivatizovan sa polietilen glikolom ('PEGilovani IFN-a'); i slično. PEGilovani IFN-a i postupci za prirpemanje istog su diskutovani u npr. US Patentu br. 5,382,657; 5,981,709 i 5,951,974. Pegilovani IFN-a obuhvata konjugovane PEG i bilo koji od gore opisanih IFN-a molekula uključujući ali bez ograničenja PEG konjugovani za interferon- alfa2a (Roferon, Hoffman La-Roche, Nutlev, NJ), interferon alfa 2b (Intron, Schering-Plough, Madison, NJ), interferon alfa-2c (Berofor Alpha, Boehringer Inglheim, Ingelheim, Germanv); i konsezusni interferon kao što je definisano određivanjem konsezusne sekvence interferona alfa koji se javljaju u prirodi (Infergen®, InterMune, Inc., Brisbane, Calif).

Bilo koji od gore pomenutih IFN-a polipeptida može biti modifikovan sa jednim ili više polietilen glikolnih ostataka, tj. PEGilovan. PEG molekul PEGilovanog IFN-a polipeptida je konjugovan sa jednim ili više aminokiselinskih bočnih lanaca IFN-a polipeptida. U nekim izvođenjima, PEGilovani IFN-a sadrži PEG ostatak sa na samo jednoj aminokiselini. U drugim izvođenjima, PEGilovani IFN-a sadrži PEG ostatak na dve ili više aminokiseline, npr. IFN-a sadrži PEG ostatak vezan za dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet ili deset različitih aminokiselinskih ostataka.

IFN-a može biti kuplovan direktno sa PEG (tj., bez vezujuće grupe) preko amino grupe, sulfhidril grupe, hidroksilne grupe ili karboksilne grupe.

U nekim izvođenjima, PEGilovani IFN-a je PEGilovan na ili blizu amino kraja (N-terminala) ili IFN-a polipeptida, npr. PEG ostatak je konjugovan sa IFN-a polipeptidom na jednom ili više ostataka aminokiseline 1 do aminokiseline 4, ili od aminokiseline 5 do oko 10.

U drugim izvođenjima PEGilovani IFN-a je PEGilovan na jednom ili više aminokiselinskih ostataka od oko 10 do plp 28.

U drugim izvođenjima, PEGilovani IFN-a je PEGilovan na ili blizu karbonil kraja (C-terminala) IFN-a polipeptida, npr. na jednom ili više ostataka od aminokiselina 156-166 ili od aminokisleina 150 do 155.

U drugom izvođenju PEGilovani IFN-a je PEGilovan na jednom ili više ostataka aminokiselina, najednom ili više ostataka aminokiselina 100-114.

Polietilen glikolna derivatizacija aminokiselinskih ostataka na ili blizu vezivanja receptora i/ili aktivnog mesta domena IFN-a proteina može poremetiti funkcionisanje ovih domena. U izvesnim izvođenjima pronalaska, aminokiselina na kojima PEGilaciju treba izbeći uključuju aminokiselinske ostatke od aminokiseline 30 do aminokiseline 40; i aminokiselinskih ostataka od aminokiseline 113 do aminokiseline 149.

U nekim izvođenjima, PEG je vezan za IFN-a preko vezujuće grupe. Vezujuća grupa je bilo koja biokompatibilna vezujuća grupa, gde 'biokompatibilan' ukazuje da jedinjenje ili grupa je netoksična i može biti korišćena in vitro bez izazivanja povreda, muke, bolesti ili smrti. PEG može biti vezan za vezujuću grupu, na primer, preko etarske veze, estarske veze, tiolne veze ili amidne veze. Pogodne biokompatibilne vezujuće grupe uključuju ali bez ograničenja estarsku grupu, amidnu grupu, imidnu grupu, karbamatnu grupu, karboksilnu grupu, hidroksilnu grupu, karbohidrat, sukcinamidnu grupu (uključujući, na primer, sukcinimidil sukcinat (SS), sukcinimidil propionat (SPA), sukcinimidil butanoat (SBA), sukcinimidil'karboksimetilat (SCM), sukcinimidil sukcinamid (SSA) ili N-hidroksi sukcinamid (NGS)), epoksidnu grupu, oksikarbonilimidazolnu grupu (uključujući na primer, karbonildiimidazol (CDI), nitro fenil grupu (uključujući, na primer, nitrofenil karbonat (NPC) ili trihlorofenil karbonat (TPC)), trisilatnu grupu, aldehidnu grupu, izocijanatnu grupu, vinilsulfonatnu grupu, tirozinsku grupu, cisteinsku grupu, histidinsku grupu ili primarni amin.

Postupci za pripremanje PEG estar aktiviranih sukcinimidil propionata (SPA) i sukcinimidil butanoata (SBA) su opisani u US pat, br. 5,672,662 (Harris et al.) i WO 97/03106.

Postupaci za vezivanje PEG za IFN-a polipeptid je poznato u tehnici i može biti korišćen bilo koji poznati postupak. Videti na priemr, Park et al., Anticancer Res., 1:373-376 (1981), Zaplipskv and Lee, Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications, J.M. Harris ed. Plenum Press, NY, Chapter 21 (1992); US Patent br. 5,985,265; US pat. br. 5,672,662 (Harris et al) i WO 97/03106.

PEGilovani IFN-a i postupci pripremanja istih su diskutovani na primer u US patentu br. 5,382,657; 5,981,709; 5,985,265 i 5,951,974. Pegilovani IFN-a obuhvata konjugate PEG i bilo kog od gore navedenih IFN-a molekula, uključujući ali bez ograničenja PEG konjugovan sa interferon alfa-2a (Roferon, Hoffmann LaRoche, Nutley, NJ), gde PEGilovani Roferon je poznat kao Pegasys (Hoffman LaROche), interferon alfa 2b (Intron, Schering-Plough, Madison , NJ.) gde PEGilovani Intron je poznat kao PEG-intron (Schering-Plough); interferon alfa-2c (Berofor Alpha, Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Germany) i konsenzusni interferon (CIFN) kao što je definisano određivanjem konsezusne sekvence interferona alfa koji se javljaju u prirodi (Infergen®, InterMune, Inc., Brisbane, Calif.) gde PEGilovani infergen je PEG-Infergen.

U mnogo izvođenja, PEG je monometoksiPEG molekul koji reaguje sa primarnom amino grupom na IFN-a polipeptidu. Postupci modifikovanja polipeptida sa monometoksi PEG preko reduktivne alkilacije su poznati u tehnici. Videti npr. Chamow et al. (1994) Bioconj. Chem. 5:133-140.

U neograničavajucem primeru, PEG je vezan za IFN-a preko SPA vezujuće grupe. SPA estri PEG i postupci za pripremanje istih su opisani u US patentu br. 5,672,662. SPA vezujuća grupa obezbeđuje vezu sa slobodnim amino grupama na IFN-a polipeptidu.

Na primer, PEG molekul je kovalentno vezan preko vezujuće grupe koja se sastoji od amidne veze između propionil grupe PEG ostatka i epsilon amino grupe površinski izloženih lizinskih ostataka na IFN-a polipeptidu. Takva veza može biti obrazovana npr. kondenzovanjem aktiviranog PEG estra a-metoksi, omega propanske kiseline (mPEGspa).

Kao neograničavaj ući primer, jedan monopegilovani CIFN konjugat ovde poželjan za upotrebu je linearni PEG ostatak od oko 30kD vezan preko kovalentne veze za CIFN polipeptid, gde kovalenta veza je amidna veza između propionil grupe PEG ostatka i epsilon amino grupe površinski izloženih lizinskih ostataka u CIFN polipeptidu, gde površinski izloženi lizinski ostatci su izabrani od lys<31>, lys<50>, lys<71>, lys84,lys<121>, lys<122>, lys<134>,lys13<5>i lys<165>i amidne veze su obrazovane kondenzovanjem PEG aktiviranih estara a-metoksi, omega propanske kiseline.

Polietilen glikol

Polietilen glikol pogodan za konjugaciju sa IFN-a polipeptidom je rastvoran u vodi na sobnoj temperaturi i ima opštu formulu R(OCH2-CH2)nO-R, gde R je vodonik ili zaštitna grupa kao što je alkil ili alkanoil grupa i gde nje celi broj od 1 do 1000. Gde R je zaštitna grupa, generalno ima od 1 do 8 uglljenika.

U mnogim izvođenjima, PEG ima bar jednu hidroksi Inu grupu, npr. terminalnu hidroksilnu grupu, ta hidroksilna grupa je modifikovana da bi se dobila funkcionalna grupa koja je reaktivna sa amino grupom, npr. epsilon amino grupa lizinskog ostatka, slobodna amino grupa N-kraja polipeptida ili bilo koje druge amino grupe kao što je amino grupa asparagina, glutamina, arginina ili histidina.

U drugim izvođenjima, PEG je derivatizovan tako da je reaktivan sa slobodnom krabonilnom grupom u IFN-a polipeptidu, npr. slobodnom karboksilnom grupom karbonilnog terminala IFN-a polipeptida. Pogodni derivati PEG koji su reaktivni sa slobodnom karboksilnom grupom na karbonilnom kraju IFN-a uključuju, ali bez ograničenja PEG-amin i PEG hidrazin derivate (npr. PEG-NH-NH2).

U drugim izvođenjima, PEG je derivatizovan tako da sadrži terminalnu tiokarboksilnu kiselinsku grupu, -COSH, koja selektivno reaguje sa amino grupama da bi se stvorili amidni derivati. Zbog reaktivnosti prirodnih tio ksielina, postignuta je selektivnost izvesnih amino grupa u odnosu na ostale. Na primer, -SH pokazuje osobine dovoljne za odlazeću grupu u reakcij sa N-terminalnom amino grupom pri odgovarajućim pH iuslovima takvim da e-amino grupe kod lizinskih ostataka su protonovane i postaju nenukleofilne. Sa druge strane, reakcije pod pogodnim pH uslovima mogu učiniti neke od pristupačnih lizinskih ostataka da selektivno reaguju.

U drugom izvođenju, PEG sadrži reaktivni estar kao što je N-hidroski sukcinimid na kraju PEG lanca. Takva N-hidroksisukcinimidat koji sadrži PEG molekul reaguje sa selektivnim amino grupama pri određenim pH uslovima kao što su neutralni 6.5-7.5 uslovi. Međutim, ukoliko je reaktivnost reagensa ekstremna, pristupačnost-NH2grupa lizina može takođe reagovati.

PEG može biti konj ugovan direktno sa IFN-a polipeptidom ili preko linkera. U nekim izvođenjima, linker je dodat na IFN-a polipeptid, obrazujući linker-modifikovan IFN-a polipeptid. Takvi linkeri obezbeđuju različite funkcionalnosti, npr. reaktivne grupe kao što su sulfhidril, amino ili karbonilna grupa koja je kupiovana sa PEG reagensom do linker-mopdifikovanog IFN-a polipeptida.

U nekim izvođenjima, PEG konjugovan za IFN-a polipeptid je linearni. U drugim izvođenjima, PEG konjugovani za IFN-a polipeptid je razgranat. Razgranati PEG derivati kao što su oni opisani u US patentu br. 5,643,575, 'zvezdasti-PEG' i razgranati (multi-armed) PEG kao što su oni opisani u Shearvvater Polvmers, Inc.katalog 'Polyethylene Glycol Derivatives 1997-1998'. Zvezdasti PEG su opisani u tehnici uključujući npr. u US patent br. 6,046,305.

PEG ima molekulsku težinu koja je u opsegu od oko 2kDa do oko 100 Kda je uglavnom korišćena gde izraz oko u kontekstu PEG ukazuje da preparati polietilen glikola, neki molekuli će imati veću težinu, neki manju, nego što je navedena molekulska težina. Na primer, PEG pogodni za konjugovanje sa IFN-a ima molekulsku težinu od oko 2kDa do oko 5kDa od oko 10 kDa, od oko 10 kDa do oko 15 kDa,od oko 15 kDa do oko 20 kDa, od oko 20 kDa do oko 25 kDa, od oko 25 kDa do oko 30 kDa, od oko 30 kDa do oko 40 kDa, do oko 40 kDa do oko 50 kDa, od oko 50 kDa do oko 60 kDa, od oko 60 kDa do oko 70 kDa, od oko 70 kDa do oko 80 kDa, od oko 80 kDa do oko 90 kDa, od oko 90 kDa do oko 100 kDa.

Pripermanje PEG- IFN- a konjugata

Kao što je gore diskutovano, PEG ostatak može biti vezan direktno ili preko linkera za ostatak aminokiseline za ili blizu N-kraja, interno, ili za ili blizu C-kraja IFN-a polipeptida. Konjugacija može biti izvedena u rastvoru ili u čvrstoj fazi.

N- terminalno vezivanje

Postupci vezivanja PEG ostatka za ostatak aminokiseline za ili u blizini N-kraja IFN-a polipeptida su poznati u tehnici. Videti npr. US patent br. 5,985,265.

U nekim izvođenjima, korišćeni su poznati postupci za selektivno dobijanje hemijski modifikovanog IFN-a na N-kraju. Na primer, može biti korišćen postupak proteinske modifikacije reduktivnom alkilacijom koji koristi različitu reaktivnost različitih tipova primarnih amino grupa (lizin naspram N-kraja) dostupnih za derivatizaciju na određenom proteinu. Pod odgovarajućim reakcionim uslovima postignuta je, suštinski selektivna derivatizacija proteina na N-kraju sa polimerom koji sadrži karboni 1 grupu. Reakcija je izvedena na pH koji omogućava da se iskoriste pKa razlike između e-amino grupa lizinskih ostataka i onih a-amino grupa N-terminalnog ostatka proteina. Takvom selektivnom derivatizacijom kontrolisano je vezivanje PEG ostatka za IFN-a: konjugacija sa polimerom se pretežno odvija na N-kraju IFN-a i bez značajnih modifikacija drugih reaktivnih grupa, kao što su lizinski bočni lanci amino grupa.

C- terminalno vezivanje

Postupak N-terminalnog specifičnog kuplovanja kao što je onaj opisan u US patentu br. 5,985,265 obezbeđuje pretežno monoPEGilovane proizvode. Međutim postupak prečišćavanja omogućava uklanjanje viška reagensa i manje višestruko PEGilovanih proizvoda uklanja N-terminalno blokirane polipeptide. U smislu terapije, takav postupak vodi značajnom porastu proizvodne cene. Na primer, ispitivanjem strukture aminokiselinske sekvence dobro karakterizovanih Infergen® Alfacon-1 CIFN polipeptida otkriva da je isečak približno 5% na karboksilnom kraju i da prema tome postoji samo jedna glavna C terminalna sekvenca. Prema tome, u nekim izvođenjima, nije korišćen N-terminalni PEGilovani IFN-a, umesto toga, IFN-a polipeptid je PEGilovan na C-kraju.

Efikasna sinteza kao i terapeutski prilaz za dobij anje mono PEGilovanih Infergen proizvoda je prema tome predviđen kao što sledi: PEG reagens koji je selektivan za C-kraj može biti pripremljen sa ili bez spejsera. Na primer, polietilen glikol modifikovan kao metil estar najednom kraju i koji ima amino funkciju na drugom može biti korišćen kao polazni materijal.

Može biti izvedeno pripremanje ili dobij anje vodo-rastvornih karbodiimida kao kondenzujućih sredstava. Kuplovanje IFN-a (npr. Intergen® Alfacon-1 CIFN ili konsezusnog interferona) sa vodo-rastvornim karbodiimidom kao kondenzujućim sredstvom je generalno izvedeno u vodenom medijumu sa pogonim puferskim sistemom na optimalnoj pH da bi se postigla amidna veza. Veća molekulska težina PEG može biti dodata u protein kovalentno da poveća molekulsku težinu.

Izabrani reagensi će zavisiti od studija optimizacije postupka. Neograničavajući primeri pogodnih reagenasa su EDAC ili l-etil-3-(3-dimetilaminoprolil)karbodiimid. Rastvorljivst u vodi EDCA omogućava direktno dodavanje u reakciju bez potrebe za prethodnim rastvaranjem u organskom rastvaraču. Višak reagensa i izourea obrazovana kao sporedni proizvod reakcije unakrnsog vezivanja, su oba vodo-rastvorni i mogu lako biti uklonjeni dijalizom ili gel filtracijom. Koncentrovani rastvor EDAC u vodi je pripremljen da olakša dodavanje male molarne količine u reakciju. Pripremljen je štok rastvor i odmah je korišćen zbog labilnosti reagensa u vodni. Većina sintetskih postupaka u literaturi sugeriše da optimalni reakcioni medijum bude u pH opsegu između 4.7 i 6.0. Međutim kondenzacione reakcije nastavljaju bez značajnog gubitka u prinosima do pH 7.5. Voda može biti korišćena kao rastvarač. U pogledu razmatrane upotrebe Infergena medijum će biti poželjno 2-(N-morfolino)etan sulfonska kiselina puferisana prethnodno titriranjem do pH 4.7 i 6.0. Međutim 0.1 M fosfat u pH 7-7.5 može takođe biti korišćen s obzirom na činjenicu da je proizvod u istom puferu. Odnosi PEG amina prema IFN-a molekulu je optimiziran tako sa C-terminalni karboksilni ostatak je selektivno PEGilovan i dobijeni su monoPEGilovani derivati.

Mada je upotreba PEG amina gore pomenuta po imenu ili strukturi, takvi derivati su samo primeri i takođe mogu biti korišćene i druge grupe kao što su hidrazinski derivati kao PEG-NH-NH2koje će takođe kondenzovati sa karbonilnom grupom IFN-a proteina. Pored vodene faze, reakcija može takođe biri izvedena na čvrstoj fazi. Polietilen glikol može biti izabran iz liste jedinjenja molekulske težine u opsegu od 300-40000. Izbor različitih polietilen glikola će takođe biti diktiran efikasnošću kuplovanja i bioloških osobina prečišćenih derivata in vitro i in vivo, tj. cirkulacionim vremenima , antivirusnom aktivnošću itd.

Dodatno, pogodni spejseri mogu biti dodati na C-terminal proteina. Spejseri mogu biti reaktivne grupe kao što su SH, NH2ili COOH koje se kupluju sa odgovarajućim PEG reagensom da bi se obezbedili derivati IFN-a veće molekulske težine. Kombinovane metodologije čvrsta faza/rastvor mogu biti smišljena za pripremanje C-pegilovanih interferona. Na primer C-kraj IFN-a je proširen na čvrstu fazu korišćenjem Gly-Gly-Cys-NH2spejsera i zatim je monopegilovan u rastvoru korišćenjem aktiviranih ditiopiridil-PEG reagensa odgovarajuće molekulske težine. S obzirom da kuplovanje na C-terminalu je nezavisno od blokiranja N-terminala, predviđeni procesi i proizvodi će biti od koristi u pogledu cene (treći protein nije otpadni kao u N-terminalnim PEGilacionim postupcima) i doprinose ekonomičnosti terapije lečenja virusne infekcije.

Može biti više reaktivnih karboksilnih grupa aminokiselinskih ostataka na drugim mestima u molekulu koje reaguju sa PEG reagensom i vode monoPEGilaciji na mestu ili dovode do višestruke PEGilacije pored -COOH grupe na C-terminalu IFN-a. Predviđeno je da će ove reakcije biti minimalne najviše zahvaljujući sternoj slobodi na C-terminalnom kraju molekula i sternoj smetnji usled karbodiimida i PEG reagenasa kao što su razgranati lanci molekula. Zbog toga je poželjni način PEG modifikacija za Infergen i slične takve proteine, prirodne ili eksprimovane od sistema domaćina, koji mogu blokirati N-kraj do različitog stepena da se poboljša i održi viša in vivo biološka aktivnost.

Drugi postupak postizanja PEGilacije C-kraja je kao što sledi. Selektivnost PEGlacije C-terminala je postignuta sa reagensima sa sternom smetnjom koja isključuje reakcije na karboksilnom ostatku ili na heliksu ili unutrašnjosti IFN-a. Na primer, jedan takav reagens može biti PEG razgranatog lanca molekulske težine —40kd i ovo sredstvo može biti sintetizovano kao što sledi: OH3C-(CH2CH20)n-CH2CH2NH2+ glutaminska kiselina tj. HOCO-CH2CH2CH(NH2)COOH je kondenzovana sa pogodnim reagensom npr. dicikloheksil karbodiimidom ili vodo-rastvornim EDC da bi se obezbedilo PEG sredstvo sa razgranatim lancom OHsC-CC^C^OVCF^Cr^NHCO CH(NH2)CH20CH3-(CH2CH20)n-CH2CH2NHCOCH2

Ovaj reagens u višku može biti korišćen za kuplovanje amino grupe sa slobodnom i fleksibilnom karboksilnom grupom IFN-a da bi se obrazovala peptidna veza.

Ukoliko je poželno PEGilovani IFN-a je odvojen od nePEGilovanog IFN-a korišćenjem poznatih postupaka uključujući, ali bez ograničenja jonoizmenjivačku hromatografiju, hromatografiju eksluzije po veličini i njihove kombinacije. Na primer, gde PEG-IFN-a konjugat je mono PEGilovan IFN-a, proizvodi su prvo odvojeni jonoizmenjivačkom hromatografijom da bi se dobio materijal koji ima naelektrisanje karakteristično za monoPEGilovan materijal (mogu biti prisutni drugi višestrukko PEGilovani materijali koji imaju isto naelektrisanja) i zatim monoPEGilovani materijal je odvojen korišćenjem ekskluzione hromatografije prema veličini.

IFN- P

Izraz interferon-beta (TFN-(3') uključuje IFN-P polipetide koji se javljaju u prirodi; IFN-P polipeptide koji se ne javljaju u prirodi; i analoge IFN-P koji se javljaju u prirodi i koji se ne javljaju u prirodi i koji zadržavaju antivirusnu aktivnost prvobitnih IFN-P koji se javljaju u prirodi i koji se ne javljaju u prirodi.

Bilo koji od različitih beta interferona može biti dat kontinualnim postupkom davanja prema prikazanom pronalasku. Pogodni beta interferoni uključuju, ali bez ograničenja, IFN-P koji se javlja u prirodu; IFN-P 1 a, npr. Avonex® (Biogen, Ine) i Rebif® (Serono, SA); IFN-plb (Betaseron®; Berlex); i slično.

IFN-P formulacija može sadržati N-blokirane vrste, u kojima N-terminalna aminokiselina je acilovana sa acil grupom, kao što je formil grupa, acetil grupa i malonil grupa i slično. Takođe pogodan za upotrebu je konsezusni

IFN-P.

IFN-P polipeptidi mogu biti proizvedeni bilo kojim poznatim postupkom. DNK sekvence koje kodiraju IFN-P mogu biti sintetizovane korišćenjem standardnih postupaka. U bilo kom od izvođenja, IFN-P polipeptidi su proizvodi ekspresije proizvedenih DNK sekvenci transformisanih ili trasfektovanih u bakterijskog domaćina, npr.E. coli,ili u eukariotskim ćelijama domaćina (npr. kvasac; ćelije sisara, kao što su CHO ćelije i slično). U ovim izvođenjima, IFN-P je 'rekombinantni IFN-P'. Kada je ćelija domaćina bakterijska ćelija, IFN-P je modifikovan da sadrži N-terminalni metionin.

Razume se da IFN-P kao što je opisano može sadržati jedan ili više modifikovanih aminokiselinskih ostataka, npr. glikozilovanih, hemijski modifikovanih i slično.

IFN- tau

Izraz interferon alfa uključuje IFN-tau polipeptide koji se javljaju u prirodi; IFN-tau polipeptide koji se ne javljaju u prirodi; i analoge IFN-tau koji se javljaju u prirodi i koji se ne javljaju u prirodi i koji zadržavaju antivirusnu aktivnost prvobitnih IFN-tau koji se javljaju u prirodi i koji se ne javljaju u prirodi.

Pogodni tau interferoni uključuju, ali bez ograničenja IFN-tau koji se javljaju u prirodi; Tauferon® (Pepgen Corp); i slično.

IFN-tau mogu sadržati aminokiselinsku sekvencu koja je izneta u bilo kom pristupu GenBanke pod br. P15696, P56828; P56832; P56829;P56831; Q29429; Q28595; Q28594; S08072; Q08071; Q08070; Q08053; P56830; P28169; P28172 i P28171. Sekvenca bilo kog poznatog IFN-tau polipeptida može bit menjana na različite načine poznate u stanju stehnike da bi se dobile željene promene u sekvenci. Različiti polipeptidi će uglavnom biti suštinski slični ovde obezbeđenim sekvencama, tj. razlikovaće se bar u jednoj amiokiselini, a mogu se razlikovati u bar dve ali ne u više od deset aminokiselina. Promene u sekvenci mogu biti supstitucije, umetanja ili ispuštanja. Konzervativne aminokiselinske supstitucije tipično uključuju supstituciju koja u okviru sledećih grupa: (glicin, alanin); (valin, izoleucin, leucin); (aspraginska kiselina, glutaminska kiselina); (asparagin, glutamin), (serin, treonin), (lizin, arginin) ili (fenilalanin, tirozin).

Modifikacije od interesa koje mogu ili ne mogu menjati primarnu aminokiselinsku sekvencu uključuju hemijsku derivatizaciju polipeptida, npr. acetilaciju ili karboksilaciju; promene u sekvenci aminokiselina koje uvode ili uklanjaju glikozilaciona mesta; promene u aminokiselinskoj sekvenci koja čini da je protein podložan PEGilaciji i slično. Takođe su uključene modifikacije glikozilacije, npr. one učinjene modifikacijom glikozilacionih uzoraka polipeptida u toku sinteze i obrade ili daljih stupnjeva obrade: npr. izlaganje polipeptida enzimima koji dovode do glikozilacije, kao što su glikozilacioni ili deglikozilacioni enzimi kod sisara. Takođe obuhvaćene su sekvence koje imaju fosforilovane aminokiselinske ostatke, npr. fosfotirozin, fosfoserin i fosfotreonin.

IFN-tau formulacija može sadržati N-blokirane vrste, gde N-terminal aminokiselina je acilovan sa acil grupom, kao što je formil grupa, acetil grupa, malonil grupa i slično. Takođe pogodan za upotrebu je konsezusni IFN-tau.

IFN-tau polipeptidi mogu biti proizvedeni bilo kojim poznatim postupkom. DNA sekvence koje šifruju IFN-tau mogu biti sintetizovane korišćenjem standardnih postupaka. U bilo kom izvođenju IFN-tau polipeptidi su proizvod ekspresije proizvedenih DNK sekvenci transformisanih ili transfektovanih u bakterijske domaćine, npr.E. coliili eukariotske ćelije domaćina (npr. kvasac, ćelije sisara, CHO ćelije i slično). U ovim izvođenjima, IFN-tau je 'rekombinantni IFN-tau'. Gde ćelija domaćina je bakterijska ćelija domaćina, IFN-tau je modifikovan da sadrži N-terminalni metionin.

Razume se da ovde opisan IFN-tau može sadržati jedan ili više modifikovanih aminokiselinskih ostataka, npr. glikozilacijom, hemijskom modifikacijom i slično.

IFN- oo

Izraz interferon omega (<T>FN-co') uključuje IFN-co polipeptide koji se javljaju u prirodi; IFN-co polipeptide koji se ne javljaju u prirodi; i analoge IFN-co koji se javljaju u prirodi i koji se ne javljaju u prirodi i koji zadržavaju antivirusnu aktivnost prvobitnih IFN-co koji se javljaju u prirodi i koji se ne javljaju u prirodi.

Bilo koji poznati omega interferon može biti davan kontinualnim postupkom davanja prema prikazanom pronalasku. Pogodni omega interferoni uključuju, ali bez ograničenja IFN-co koji se javljaju u prirodi; rekombinantni IFN-co, npr. Biomed 510 (BioMedicines); i slično.

IFN-omega može sadržati aminokiselinsku sekvencu koja je izneta u bilo kom pristupu GenBanke pod br. NP 002168 ili AAA70091. Sekvenca bilo kog poznatog IFN-omega polipeptida može biti menjanja na različite načine poznate u tehnici da bi se dobili željene promene u sekvenci. Različiti polipeptidi će uglavnom biti suštinski slični ovde obezbeđenim sekvencama, tj. razlikovaće se u bar jednoj amiokiselini, a mogu se razlikovati u bar dve ali ne više od deset aminokiselina. Promene u sekvenci mogu biti supstitucije, umetanja ili ispuštanja. Konzervativne aminokiselinske supstitucije tipično uključuju supstituciju koja je u okviru sledećih grupa: (glicin, alanin); (valin, izoleucin, leucin); (aspraginska kiselina, glutaminska kiselina); (asparagin, glutamin), (serin, treonin), (lizin, arginin) ili (fenilalanin, tirozin).

Modifikacije od interesa koje mogu ili ne moraju menjati primarnu aminokiselinsku sekvencu uključuju hemijsku derivatizaciju polipeptida, npr. acetilaciju ili karboksilaciju; promene u sekvenci aminokiselina koja unosi ili uklanja glikozilaciona mesta; promene u amino kiselinskoj sekvenci koja čini da je protein podložan PEGilaciji i slično. Takođe uključuju modifikacije glikozilacije, npr. one učinjene modifikacijom glikozilacionih uzoraka polipeptida u toku sinteze i obrade ili daljih stupnjeva obrade: npr. izlaganje polipeptida enzimima koji dovode do glikozilacije, kao što su glikozilacioni ili deglikozilacioni enzimi kod sisara. Takođe obuhvaćene su sekvence koje imaju fosforilovane aminokiselinske ostatke, npr. fosfotirozin, fosfoserin i fosfotreonin.

Ukoliko IFN-co formilacija može sadržati N-blokirane vrste, gde N-terminalna aminokiselina je acilovana sa acil grupom, kao što je formil grupa, acetil grupa, malonil grupa i slično. Takođe za upotrebu je pogodan konsezusni IFN-co.

IFN-co polipeptidi mogu biti proizvedeni bilo kojim poznatim postupkom. DNA sekvence koje šifruju IFN-co mogu biti sintetizovane korišćenjem standardnih postupaka. U bilo kom izvođenju IFN-co polipeptidi su proizvod ekspresije proizvedenih DNK sekvenci transformisanih ili transfektovanih u bakterijske domaćine, npr.E. coliili eukariotske ćelije domaćina (npr. kvasac, ćelije sisara, CHO ćelije i slično). U ovim izvođenjima, IFN-co je 'rekombinantni IFN-co'. Gde ćelija domaćina je bakterijska ćelija domaćina, IFN-co je modifikovan da sadrži N-terminalni metionin.

Razume se da ovde opisan IFN-co može sadržati jednu ili više aminokiselinskih ostataka, npr. glikozilacijom, hemijskom modifikacijom i slično.

Agonistireceptora interferona tipaIII

U bilo kome gore opisanom postupku, agonist receptora interferona je u nekim izvođenjima agonist receptora interferona tipa III (npr 'agonist interferona tipa III'). Agonisti interferona tipa III uključuju IL-28b polipeptid; i IL-28a polipeptid i IL-29 polipeptid; specifična antitela za receptor interferona tipa III i bilo koji drugi agonist receptora interferona tipa III uključujući nepeptidne agoniste. IL-28A, IL-28B i IL-29 (na koje se ovde kolektivno poziva kao na 'interferone tipa III' ili TFNs tipa III') su opisani u Sheppard et al. (2003)Nature4:63-68. Svaki polipeptid vezuje heterodimerni receptor koji se sastoji od IL-10 receptora (3 lanca i IL-28 receptora a. Sheppard et al. (2003) supra. Aminokiselinske sekvence IL-28A, IL-28B i IL-29 su nađene u GenBanci pod pristupnim br. NP_742150, NP_742151 i NP 742152, respektivno.

Aminokiselinska sekvenca polipetida interferona tipa III može biti menjana na različite načine poznate u tehnici da bi se dobile ciljane izmene u sekvenci. Varijantni polipetid će uglavnom biti suštinski sličan sekvencama koje su ovde obezbeđene, tj razlikovaće se bar u jednoj aminokiselini i može se razlikovati u bar dve ali ne više od oko deset aminokiselina. Izmene u sekvenci mogu biti supstitucije, umetanja ili ispuštanja. Praćenje mutacija koje sistematski uvode alanin ili druge ostatke može biti korišćeno da se odrede ključne aminokiseline. Specifična aminokiselinska supstitucija od interesa uključuje konzervativene i nekonzervativne promene. Konzervativne aminokiselinske supstitucije tipično uključuju supstituciju koja je u okviru sledećih grupa: (glicin, alanin); (valin, izoleucin, leucin); (aspraginska kiselina, glutaminska kiselina); (asparagin, glutamin), (serin, treonin), (lizin, arginin) ili (fenilalanin, tirozin).

Modifikacije od interesa koje mogu ili ne moraju menjati primarnu aminokiselinsku sekvencu uključuju hemijsku derivatizaciju polipeptida, npr. acetilaciju ili karboksilaciju; promene u sekvenci aminokiselina koje unose ili uklanjaju glikozilaciona mesta; promene u aminokiselinskoj sekvenci koja čini da je protein podložan PEGilaciji i slično. Takođe uključuju modifikacije glikozilacije, npr. one učinjene modifikacijom glikozilacionih uzoraka polipeptida u toku sinteze i obrade ili daljih stupnjeva obrade: npr. izlaganje polipeptida enzimima koji dovode do glikozilacije, kao što su glikozilacioni ili deglikozilacioni enzimi kod sisara. Takođe obuhvaćene su sekvence koje imaju fosforilovane aminokiselinske ostatke, npr. fosfotirozin, fosfoserin i fosfotreonin.

U predmetni pronalazak uključeni su polipeptidi koji su modifikovani korišćenjem uobičajenih hemijskih tehnika tako da poboljšavaju njihovu otpornost na proteolitičku degradciju, da optimiziraju osobine rastvorljivosti ili da ih čine pogodnijim kao terapeutskim sredstvima. Na primer, osnovi niz peptida može biti ciklizovan da se poveća stabilnost (videti Friedler et al.

(2000) J. Biol. Chem 275:23783-23789). Analozi, koji uključuju ostatke koji su drugačiji od onih L-aminokiselina koje se javljaju u prirodi, mogu biti korišćeni, npr. D-aminokiseline ili sintetske aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi. Protein može biti pegilovan da poveća stabilnost. Polipeptidi mogu biti spojeni sa albuminom.

Polipeptidi mogu biti pripremljeni in vitro sintezom, korišćenjem konvencionalnih postupaka kao što je poznato u stanju tehnike, rekombinantnih postupaka, ili mogu biti izolovani iz ćelija u kojima je indukovan ili prirodno proizvoden protein. Određene sekvence i način pripremanja će biti određeni prema pogodnosti, ekonomičnosti, zahtevima čistoće i slično. Ukolko je potrebno, različite grupe mogu biti unete u polipeptide u toku sinteze ili u toku ekspresije, što omogućava vezivanje za druge molekule ili za površinu. Prema tome, cisteini mogu biti korišćeni da naprave tioestre, histidini za vezivanje za metalni jonski kompleks, karboksilne grupe za obrazovanje amida ili estara, amino grupe za obrazovanje amida i slično.

Agonisti receptora interferona tipaII

Agonisti receptora interferona tipa II uključuju bilo koji ligand koji se javlja u prirodi ili koji se ne javlja u prirodi humanog receptora interferona tipa III koji se vezuje za i izaziva signalnu transdukciju preko receptora. Agonisti receptora interferona tipa II uključuju interferone koji se javljaju u prirodi, modifikovane interferone, sintetičke interferone, pegilovane interferone, fuzione proteine koji sadrže interferon i heterologne proteine, pomešane interferone; antitela sprecifična za receptor interferona; nepeptidne hemijske agoniste i slično.

Specifični primer agonista receptora interferona tipa II je IFN-y i njegove varijante. Dok prikazani pronalazak daje primere upotrebe IFN-y polipeptida očigledno je da bilo koji agonist receptora interferona tipa II može biti korišćen u pomenutom postupku.

Interferon-gama

Sekvencama nukleinskih kiselina koje kodiraju IFN-y polipeptide može se pristupiti preko javne baze podataka, npr. GenBanke, publikacija u žurnalima itd. Dok različiti IFN-y polipeptidi sisara su od interesa za tretiranje humanih bolesti, generalno biti će korišćen humani protein. Humane IFN-y kodirajuće sekvence mogu biti nađene u GenBank, pod pristupnim brojevima X13274; V00543, i NM 000619. Odgovarajuće genomske sekvence mogu se naći u Genbanci pod pristupnim brojem J00219; M37265, i V00536. Videti na primer Gray et al. (1982)Nature295:501 (Genbank XI3274); i Rinderknechtet al.(1984)J. B. C.259:6790.

IFN-ylb (Actimmune®; humani interferon) je jednolančani polipeptid od 140 aminokisleina. Dobija se rekombinantno izE. colii nije glikozilovan. Rinderknecht et al. (1984)J. Biol. Chem.259:6790-6797. Rekombinantni IFN-y kao stoje diskutovano u US patentu br. 6,497,871 je takođe pogodan za upotrebu.

IFN-y koji se koristi u postupcima prema ovom pronalasku može biti bilo koji od prirodnih IFN-ys, rekombinantnih IFN-ys i njihovih derivata sve dok imaju IFN-y aktivnost, naročito humanu IFN-y aktivnost. Humani IFN-y pokazuje antivirusne i antiproliferativne osobine karakteristične za interferone, kao i brojna druga imunomodulatorna dejstva, kao što je poznato u tehnici. Mada IFN-y je zasnovan na sekvencama koje su gore obezbeđene, proizvodnja proteina i proteolitičko obrada mogu dovesti do njihovih obrađenih varijanti. Neobrađene sekvence su obezbeđene od Grey et al, supra, koje se sastoje od 166 aminokiselina (aa). Mada rekombinantni IFN-y proizveden uE. colise prvobitno verovalno da ima 146 aminokiselina (polazeći od aminokiseline 20), ali je zatim nađeno da prirodni humani IFN-y se čepa posle ostatka 23 da bi se dobio 143 aa protein ili 144 aa ukoliko je prisutan terminalni metionin, kao što zahteva ekspresija u bakterijama. U toku prečišćavanja, zreo protein može dodatno biti cepan na C kraju posle ostatka 162 (pozivanje na Gray et al. sekvencu), dovodeći do proteina od 139 amino kiselina ili 140 amino kiselina ukoliko je prisutan početni metionin, npr. ukoliko je potreban za bakterijsku ekspresiju. N-terminalni metionin je artifakt kodiran sa mRNA sa mRNA translacionim 'start' signalom AUG koji u određenom slučaju ekspresije uE. colinije obrađen. U drugim mikrobiološkim sistemima ili eukariostkim ekspresionim sistemima, metion može biti uklonjen.

Za upotrebu u predmetnim postupcima, mogu biti korišćeni bilo koji prirodni IFN-y peptidi, njihove modifikacije i varijante, ili kombinacije jednog ili više peptida. IFN-y peptidi od interesa uključuju fragmente i mogu biti različito skraćenih krajeva na karboksilnom kraju u odnosu na punu sekvencu. Takvi fragmenti nastavljaju da pokazuju karakteristične osobine humanog gama interferona, toliko dugo dok su prisutne aminokiseline 24 do oko 149 (brojanje od ostataka neobrađenog polipeptida). Tuđe sekvence mogu biti zamena za aminokiselinsku sekvencu koja prati aminokiselinu 155 bez gubitka aktivnosti. Videti na primer, US patent br. 5,690,925. Prirodni IFN-y ostatci uključuju molekule različito se prostirujući od amino kiselinske sekvence koja prati amino kisleinu 155 bez gubitka aktivnsoti. Videti na primer, US patent br. 5,690,925. Prirodni IFN-y ostatci uključuju molekule različite dužine sa aminokiselinskim ostatacima 24-150; 24-151, 24-152; 24-153, 24-155 i 24-257. Bilo koja od ovih varijanti i drugih varijanti poznatih u tehnici, a ima IFN-y aktivnost, može biti korišćena u prikazanim postupcima.

Sekvenca bilo kog poznatog IFN-y polipeptida može biti menjanja na različite načine poznate u tehnici da bi se dobili željene promene u sekvenci. Različiti polipeptidi će uglavnom biti suštinski slični ovde obezbeđenim sekvencama, tj. razlikovaće se u bar jednoj amiokiselini, a mogu se razlikovati u bar dve, ali ne više od deset aminokiselina. Promene u sekvenci mogu biti supstitucije, umetanja ili ispuštanja. Praćenje mutacija koje sistematski uvode alanin ili druge ostatke može biti korišćeno da se odrede ključne aminokiseline. Specifična aminokiselinska supstitucija od interesa uključuje konzervativene i nekonzervativne promene. Konzervativne aminokiselinske supstitucije tipično uključuju supstituciju koja je u okviru sledećih grupa: (glicin, alanin); (valin, izoleucin, leucin); (aspraginska kiselina, glutaminska kiselina); (asparagin, glutamin), (serin, treonin), (lizin, arginin) ili (fenilalanin, tirozin).

Modifikacije od interesa koje mogu ili ne moraju menjati primarnu aminokiselinsku sekvencu uključuju hemijsku derivatizaciju polipeptida, npr. acetilaciju ili karboksilaciju; promene u sekvenci aminokiselina koja unosi ili uklanja glikozilaciona mesta; promene u aminokiselinskoj sekvenci koja čini da je protein podložan PEGilaciji i slično. U jednom izvođenju, pronalazak razmatra upotrebu IFN-y varijanti sa jednom ili više glikozilacija koje se ne javljaju u prirodi i/ili mestima pegilacije koja su konstruisana da obezbede glikozil- i/ili PEG-derivatizovane polipeptide sa smanjenim kliransom u serumu, kao što su varijante IFN-y polipeptida opisane u međunarodnoj patentnoj publikaciji br. WO 01/36001. Takođe uključene su modifikacije glikozilacije, npr. one učinjene modifikovanjem glikozilacionih uzoraka polipeptida u toku njegove sinteze i obrade ili daljih stupnjeva obrade: npr. izlaganje polipeptida enzimima koji dovode do glikozilacije, kao što su glikozilacioni ili deglikozilacioni enzimi kod sisara. Takođe obuhvaćene su sekvence koje imaju fosforilovane aminokiselinske ostatke, npr. fosfotirozin, fosfoserin i fosfotreonin.

U predmetni pronalazak uključeni su polipeptidi koji su modifikovani korišćenjem uobičajenih hemijskih tehnika tako da poboljšavaju njihovu otpornost na proteolitičku degradciju, da optimiziraju osobine rastvorljivosti ili da ih učini pogodnijim kao terapeutskim sredstvima. Na primer, osnovi niz peptida može biti ciklizovan da se poveća stabilnost (videti Friedler et al.

(2000) J. Biol. Chem 275:23783-23789). Analozi, koji uključuju ostatke koji su drugačije od onih L-amino kiselina koji se javljaju u prirodi, mogu biti korišeni npr. D-aminokiseline ili sintetičke aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi. Protein može biti pegilovan da poveća stabilnost.

Polipeptidi mogu biti pripremljeni in vitro sintezom, korišćenjem konvencionalnih postupaka kao što je poznato u stanju tehnike, rekombinantnih postupaka, ili mogu biti izolovani iz ćelija u koje je indukovan ili prirodno proizvoden protein. Određene sekvence i način pripremanja će biti određeni i na osnovu pogodnosti, ekonomičnosti, zahtevima čistoće i slično. Ukolko je potrebno, različite grupe mogu biti unetee u polipeptide u toku sinteze ili u toku ekspresije, što omogućava vezivanje za druge molekule ili za površinu. Prema tome cisteini mogu biti korišćeni da naprave tioestre, histidini za vezivanje za metalni jonski kompleks, karboksilne grupe za obrazovanje amida ili estara, amino grupe za obrazovanje amida i slično.

Polipeptidi mogu takođe biti izolovani i prečišćeni u skladu sa konvencionalnim postupcima rekombinantnih sinteza. Lizat može biti pripremljen ekspresijom domaćina i lizat je prečišćen korišćenjem HPLC, ekskluzionm hromatografijom, gel elektroforezom, afinitetnom hromatografijom ili drugim tehnikama prečišćavanja. U većini slučajeva, kompozicije koje su korišćene će sadržati bar 20% težinskih željenog proizvoda, uobičajenije bar oko 75% težinskih, poželjno bar oko 95% težinskih i za terapeutske svrhe uglavnom bar oko 99.5% težinskih u vezi sa nečistoćama koje su u vezi sa postupkom dobijanja proizvoda i njegovim prečišćavanjem. Uglavnom, procenti će biti bazirana na ukupnim proteinima.

Pirfenidoninjegovi analozi

Pirfenidon (5-metil-l-fenil-2(lH)-piridon) i specifični piridonski analozi su opisani za lečenje fibrotičkih stanja. 'Fibrotičko stanje' je ono koje je podložno tretiranju davanjem jedinjenja koja imaju antifibrotičku aktivnost.

Pirfenidon

Pirfenidon analozi

Opisiza supstituente Ri, R2, X

R^ karbocikli (zasićeni i nezasićeni), heterocikli (zasićeni ili nezasićeni), alkili (zasićeni i nezasićeni). Primeri uključuju fenil, benzil, pirimidil, naftil, indolil, pirolil, furil, tienil, imidazolil, cikloheksil, piperidil, pirolidil, morfolinil, cikloheksenil, butadienil i slično.

Rimože dalje uključivati supstitucije na karbocikličnim ili heterocikličnim ostatcima sa supstituentima kao što su halogen, nitro, amino, hidroksil, alkoksi, karboksil, cijano, tio, alkil, aril, heteroalkil, heteroaril i njihove kombinacije, na primer 4-nitrofenil, 3-hlorofenil, 2,5-dinitrofenil, 4-metoksifenil, 5-metil-pirolil, 2,5-dihlorocikloheksil, guanidinil-cikloheksenil i slično.

R2: alkil, karbocikl, aril, heterocikl. Primeri uključuju : metil, etil, propil, izopropil, fenil, 4-nitrofenil, tienil i slično.

X: može bit bilo koji broj (od 1 do 3) supstituenata na karbocikličnom ili heterocikličnom prstenu. Supstituenti mogu biti isti ili različiti. Supstituenti mogu uključivati vodonik, alkil, heteroalkil, aril, heteroaril, halo, nitro, karboksil, hidroksil, cijano, amino, tio, alkilamino, haloaril i slično.

Supstituenti mogu biti opciono dalje supstituisani sa 1-3 supstituenta iz grupe koju čine alkil, aril, nitro, alkoksi, hidroksil i halo grupe. Primeri uključuju: metil, 2,3-dimetil, fenil, p-tolil, 4-hlorofenil, 4-nitrofenil, 2,5-dihlorofenil, furil, tienil i slično.

Specifični Primeri uključuju jedinjenja izlistana u Tabeli 1.

US pat. br. 3,974,281; 3,839,346; 4,042,699; 4,052,509; 5,310,562; 5,518,729; 5,5716, 632 i 6,090,822 opisuju postupke za sintezu i formulacije pirfenidona i specifičnih analoga pirfenidona u farmaceutskim kompozicijama pogodnim za upotrebu u postupcima prema prikazanom pronalasku.

Timozin- g

Timozin-a (Zadaxin™; koji se može nabaviti od SciClone Pharmaceuticals, Inc., San Mateo, CA) je sintetski oblik timozina alfa 1, hormona koji se u prirodi nalazi u krvotoku i proizveden je u timusnoj železdi. Timozin-a povećava aktivnost T-ćelija NK ćelija. Zadaxin™ formulisan za subkutanoznu injekciju je prečišćen sterilnim pripremanjem liofilizacijom hemijski sintetizovanog timozin alfa 1 identičnog humanom timozin alfa 1. Timozin alfa 1 je acetilovani polipeptid sa sledećom sekvencom: Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH i ima molekulsku težinu od 3,108 daltona. Liofilizovani preparat sadrži 1.6 mg sintetičkog timozina-a, 50 mg manitola i natrijum fosfatnog pufera da bi se podesila pH na 6.8.

Ribavirin

Ribavirin, l-J3-D-ribofuranozil-lH-l,2,4-triazol-3-karboksamid je nukleozidni analog koji je dostupan od ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, Calif. i opisan je u Merck-ovom indeksu kao jedinjenje br. 8199, jedanaesto izdanje. Njegova proizvodnja i formulacija je opisana u US pat. br. 4,211,771. Pronalazak takođe razmatra upotrebu derivata ribavirina (videti npr. US pat. Br. 6,277,830). Ribavirin može biti davan oralno u obliku kapsule ili tablete. Naravno, drugi tipovi davanja ribavirina, kada su dostupni su razmatrani, kao što je nazalni sprej, transderamalno, pomoću supozitorija, u doznim oblicima sa održanim oslobađanjem itd. Bilo koji oblik davanja će biti pogodan dokle god su pogodne doze date bez uništavanja aktivnog sastojka.

Ribavirin se generalno daje u količini koja je u opsegu od oko 400 mg do oko 1200 mg, od oko 600 mg do oko 1000 mg, ili od oko 700 do oko 900 mg po danu. U nekim izvođenjima, ribavirin je davan u toku cele terapije sa NS3 inhibitorom.

Levovirin

Levovirin je L-enantiomer ribavirina i pokazuje osobinu povećavanja Thl imunog odgovora u odnosu na Th2 imuni odgovor. Levovirin proizvodi ICN Pharmaceuticals.

Levovirin ima sledeću strukturu:

Viramidin

Viramidin je 3-karboksamidni derivat ribavirina i deluje kao prolek ribavirina. On se efikasno pretvara u ribavirin sa adenozin deaminazom.

Viramidin ima sledeću strukturu:

Nukleozidni analozi

Nukleozidni analozi koji su pogodni za upotrebu u ovoj kombinovanoj terapiji uključuju ali bez ograničenja, ribavirin, levovirin, viramidin, izatoribin, L-ribofuranozil nukleozid opisan u US patentu br. 5,559,101 i obuhvaćen formulom I US patenta br. 5,559,101 (npr. 1-P-L-ribofuranoziluracil, l-P-L-ribofuranozil-5-fluorouracil, l<p->L-ribofuranozilcitozin, 9-p-L-riofuranoziladenin, 9-<p->L-ribofuranozilhipoksantin, 9-(3-L-ribofuranozilguanin, 9-P-L-ribofuranozil-6-tioguanin, 2-amino-a-L-ribomranil[l',2':4,5]oksazolin, O , O -anhidro-l-a-L-ribofuranosiluracil, 1-a-L-ribofuranoziluracil, l-(2,3,5-tri-0-benzoil-a-ribofuranozil)-4-tiouracil, 1 -a-L-ribofuranozilcitozin, 1 -a-L-ribofuranozil-4-tiouracil, l-a-L-ribofuranozil-5-fluorouracil, 2-amino-P-L-arabinofurano[l',2':4,5]oksazolin, O 2 ,0 2-anhidro-P-L-arabinofiiranozil-uracil, 2'-deoksi-P-L-uridin, 3',5'-di-0-benzoil-2'-deoksi-4-tio-pL-uridin, 2'-deoksi-P-L-citidin, 2'-deoksi-P-L-4-tiouridin, 2'-deoksi-P-L-timidin, 2'-deoksi-P-L-5-fluorouridin, 2',3'-dideoksi-P-L-uridin, 2'-deoksi-P-L-5-fluorouridin i 2'-deoksi-P-L-inozin); jedinjenje koje je opisano u US patentu br. 6,423,695 i obuhvaćen je formulom I iz US patenta br. 6,423,695; jedinjenje je opisano u US patentnoj publikaciji br. 2002/0058635 i obuhvaćeno formulom I US patente objave br. 2002/0058635; nukleozidni analog je opisan u WO 01/90121 A2 (Idenix); nukleozidni analog je opisan u WO 02/069903 A2 (Biocrvst Pharmaceuticalls Inc.); nukleozidni analog kao što je opisano u WO 02/057287 A2 ili WO 02/057425 A2 (oba Merck/Isis); i slično.

TNF anatagonisti

U nekim izvođenjima, ovaj postupak se sastoji od davanja efikasne količine NS3 inhibitora i efikasne količine antagonista faktora-a nekroze tumora (TNF-a). Pogodni TNF-a antagonisti koji se ovde upotrebljavaju uključuju sredstva koja povećavaju nivo TNF-a receptora (TNFR) i sredstava koja blokiraju ili inhibiraju TNFR posredovane signalne transdukcije. Ukoliko nije drugačije eksplicitno izneto, svako pozivanje na ' TNF-a antagonist' ili 'TNF antagonist' ovde će se podrazumevati da označava antagonist TNF-a koji je drugačiji od pirfenidona ili analoga pirfenidona.

Ovde korišćeni izrazi 'polipetid TNF receptora' i 'TNF polipeptid' odnose se na polipetide koji potiču od TNFR (iz bilo koje vrste) koji su sposobni da se vežu za TNF. Opisane su dve različite ćelijske površine TNFRs: Tip II TNFR (ili p75 TNFR ili TNFRII) i Tip I TNFR (ili p55 TNFR ili TNFR1). Zreli humani p75 TNFR pune dužine je glikoprotein koji ima molekulsku težinu od oko 75-80 kilodaltona (kD). Zreli humani p-55 TNFR pune dužine je glikoprotein koji ima molekulsku masu od 55-60 kD. Primeri TNFR polipeptida potiču od TNFR tipa I i/ili TNFR tipa II. Rastvorni TNFR uključuju p75 TNFR polipeptide; fuzione p75 TNFR sa heterolognim fuzinim motivima, na pr. Fe deo imunoglobulina.

TNFR polipeptidi mogu biti intaktni TNFR ili pogodni fragmenti TNFR. US patent br. 5,605,690 obezbeđuje primere TNFR polipeptida, uključujući rastvorne TNFR polipeptide, pododne za upotrebu prema ovom pronalasku. U mnogo izvođenja, TNFR polipeptidi sadže ekstracelularne domene TNFR. U nekim izvođenjima, TNFR polipeptid je fuzioni polipeptid koji sadrži ekstracelularni domen TNFR spojen sa konstantnim domenima imunoglobulinskog molekula. U drugim izvođenjima, TNFR polipeptid je fuzioni polipeptid koji sadrži ekstracelularni domen p75 TNFR povezan za konstantni domen IgGl molekula. U nekim izvođenjima, kada je razmatrano davanje ljudima, korišćeni Ig za fuzione proteine je humani, npr. humani IgGl.

Monovalantni i multivalentni oblici TNFR polipetida mogu biti korišćeni u prikazanom pronalasku. Multivalentni oblici TNFR polipeptida poseduju više od jednog TNF mesta vezivanja. U nekim izovđenjima, TNFR je bivalentni ili dimerni oblik TNFR. Na primer, kao što je opisano u US patentnu br. 5,605,690 i u Mohler et al., 1993, J. Immunol., 151:1548-1561, polipeptid himernih antitela sa TNFR ekstracelularnim domenima supstituisanim sa promenjivim domenima ili jednog ili oba imunoglobulinska teška ili laka lanca obezbeđuje TNFR polipeptid za prikazani pronalazak. Generalno, kada je takav himerni polipeptid TNFR:antitelo proizveden u ćelijima, on obrazuje bi valentne molekule preko disulfidnih veza između imunoglobulinskih domena. Na takav himerni polipeptid TNFR:antetelo se poziva kao na TNFR:Fc.

U jednom izvođenju, ovaj postupak uključuje davanje efikasne količine rastvornog TNFR ENBREL®. ENBREL® je dimerni fuzini protein koji se sastoji od ekstracelularnog dela za vezivanje liganda od 75 kilodaltona (p75) humanog TNFR vezanog za Fc deo humanog IgGl. Fc komponenta ENBREL® sadrži CH2 domen, CH3 domen i zavisni region, ali ne CH1 domen IgGl. ENBREL® je proizveden u jajniku kineskog hrčka (CHO) ekspesionom ćelijskom sistemu sisara. Sastoji se od 934 aminokiseline i ima molekulsku težinu od približno 150 kilodaltona. Smith et al. (1990)Science248:1019-1023; Mohler etal (1993)J. Immunol,151:1548-1561; US Pat. br. 5,365,760 i US pat. br. 5,605,690.

Takođe pogodna za upotrebu su monoklonalna antitela koja se vežu za TNF-a. Monoklonalna antitela uključuju 'humanizovana' mišja monoklonalna antitela; himerna antitela; monoklonalna antitela koja su bar oko 80%, bar oko 90%, bar oko 95% ili 100% humana u aminokiselinskoj sekvenci; i slično. Videti npr. WO 90/10077; WO 90/04036; i WO 92/02190. Pogodna monoklonalna antitela uključuju fragmente, kao što su Fv, F(ab')2i Fab; sintetska antitela, veštačka antitela; antitela koje prikazuje fag i slično.

Primerni pogodnih monoklonalnih antitela uključuju Infliximab (REMICADE®, Centor); i Adalimumab (HUMIRA™, Abbott). REMICADE® je himerno monoklonalno anti-TNF-ct-antitelo koje uključuje oko 25% mišijih aminokiselinskih sekvenci i oko 75% humanih aminokiselinskih sekvenci. REMICADE® sadrži promenjivi region mišijih monoklonalnih anti-TNF-a-antitela spojen za konstantni region humanog IgGl. Elliott et al. (1993)Arthritis Rheum.36:1681-1690; Elliott et al.

(1994)Lancet344:1105-1110; Baert et al. (1999)Gastroenterology116:22-28. HUMIRA™ je humano, IgGl monoklonalno antitelo pune dužine koje je identifikovano korišćem tehologije ispoljavanja faga. Piascik(2003). J. Am. Pharm. Assoc.43:327-328.

Takođe uključeni u izraz ' TNF antagonist' i prema tome pogodni za upotrebu u ovom postupku, su protein kinazni inhibitori aktivirani stresom (SAPK-stress-activated protein kinase). SAPK inhibitori su poznati u tehnici i uključuju ali bez ograničenja 2-alkil imidazole opisane u US patentu br. 6,548,520; 1,4,5-supstituisana imidazolna jeidnjenja opisana u US patentu br. 6,489,325; 1,4,5-supstituisana imidazolna jedinjenja opisana u US patentu br. 6,569, 871; heteroaril aminofenil ketonska jedinjenja opisana u objavljenoj US patentnoj prijavi br. 2003/0073832; piridil imidazolna jedinjenja opisana u US patentu br. 6,288,089 i heteroaril aminobenzofenoni opisani u US patentu br. 6,432,962. Takođe od interesa su jedinjenja opisana u US patentnoj prijavi objavljenoj br. 2003/0149041; i US patent br. 6,214,854. Protein kinaze aktivirane stresom su članovi familije protein kinaza aktiviranih mitogenom koje se aktiviraju kao odgovor na stresni stimulans. SAPK uključuju, ali nisu ograničene, p38 (Lee et al. (1994)Nature372:739) i c-jun N-terminalnu kinazu (JNK).

Postupci za procenivanje TNF antagonističke aktivnosti su poznati u stanju tehnike i dati ovde kao primeri. Na primer, TNF antagonistička aktivnost može biti procenjena sa kompetitivnim testom vezivanja zasnovanog na ćelijama. U takvom testu, radioobeleženi TNF su pomešani sa serijski razblaženim TNF antagonistom i ćelije eksprimuju ćelijsku memranu koja se veže za TNFR. Delovi suspenzije su centrifugirani da se odvoji slobodan i vezani TNF i određivana je količina radioaktivnoti u slobodnim i vezanim frakcijama. TNF antagonistička aktivnot je procenjivana inhibiranjem TNF vezivanja za ćelije u prisustvu TNF antagonista.

Kao još jedan primer, TNF antagonsiti mogu biti analizirani za sposobnost neutralizacije TNF aktivnosti in vitro u biotestu korišćenjem ćelija koje su osetljive na citotoksičnu aktivnost TNF kao ciljne ćelije. U takvom testu, ciljne ćelije, kultivisane na TNF, su tretirane sa različitim količinama TNF antagonista i zatim su ispitivana na citolizu. TNF anatagonistička aktivnost je procenjivana padom u TNF-a-indukovanoj citolizi ciljnih ćelija u prisustvu antagonista TNF.

NS5B inhibitori

U nekim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje postupak koji obuhvata davanje HCV pacijentu kome je potrebno efiksane količine ovog NS3 inhibitora i efikasne količine HCV inhibitora nestrukturnih proteina-5 (NS5; RNK-zavinsne RNK polimeraze). Pogodni NSB5 inhibitori uključuju ali bez ograničenja, jedinjenja koja su opisana u US patentu br. 6,479,508 (Boehringer-Ingelheim); jedinjenje koje je opisano u bilo kojoj od međunarodnih patentnih prijava br. PCT/CA02/01127, PCT/CA/01128 i PCT/CA2/01129 sve podnete 18 jula 2002 od Boehringer-Ingelheim; jedinjenje koje je opisano u US patentu br. 6,440,985 (VitroPhrama); jedinjenje opisano u WO 01/47883 npr. JTK-003 (Japan Tobacco); dinukleotidni analog je opisan u Zhong et al. (2003)Antimicrob Agents Chemother.47:2674-2681; benzotiadiazinsko jedinjenje kao što je opisano u Dhanak et al. (2002)J. Biol. Chem.277 (41):38322-7; NS5B inhibitor je opisan u WO 02/100846 Al ili WO 02/100851 A2 (oba Shire); NS5B inhibitori kao što je opisano u WO 01/851172 Al ili WO 02/098424 Al (oba Glaxo SmithKline); NS5B inhibitor opisan u WO03/0003254 (Japan Tobaco); NS5B inhibitor kao što je opisano u EP1 256,628 A2 (Agouron; JTK-002 (japan Tobacco); JTK-109 (japan Tobacco) i slično.

Od naročitog interesa u mnogim izvođenjima su NS5 inhibitori koji su specifični NS5B inhibitori, npr. NS5 inhibitori koji inhibiraju NS5 RNK zavisnu RNK polimerazu i kojima nedostaje značajni inhibitori efekti naspram drugih RNK zavisnih RNK polimeraza i naspram DNK zavisne RNK polimeraze.

Dodatna antivirusna sredstva

Dodatna antivirusna terapeutska sredstva koja mogu biti davana u kombinaciji sa ovim jedinjenjima NS5 inhibitora uključuju, ali bez ograničenja, inhibitore inozin monofosfat dehidrogenaze (IMPDH); ribozome koji su komplementarni virusnim nukleotidnim sekvencama; antisens RNK inhibitore i slično.

IMPDH inhibitori

IMPDH inhibitori koji su pogodni za upotrebu u kombinovanoj terapiji uključuju ali bez ograničenja, VX-497 (tetrahidrofuran-3-il-estar (S)-N-3-[3-(3-metoksi-4-oksazol-5-il-fenil)-ureido]benzil-karbaminske kiseline); Vertex Pharmaceuticals; videti npr. Markland et al. (2000)Antimicrob. Agents Chemother44:859-866); ribavirin; levovirin (Ribapharm; videti npr. Watson

(2002)Curr Opin Investig Drugs3(5):680-3); viramidin (Ribapharm) i slično.

Ribozim i antisens

Ribozim i antisens antivirusna sredstva su pogodna za upotrebu kod ovih kombinovanih terapija koje uključuju ali bez ograničenja ISIS 14803 (ISIS Pharmaceuticals/Elan Corporation; videti npr. Witherell (2001)Curr Opin Investig Drugs2(11): 1523-9); Heptazvme™; i slično.

U nekim izvođenjima, dodatna antivirusna sredstva su davana u toku čitavog tretiranja sa NS3 inhibitornim jedinjenjem. U drugim izvođenjima, dodatno antivirusno sredstvo je davano u toku vremenskog perioda koji se preklapa sa tretiranjem jedinjenjem NS3 inhibitorom, npr. tretiranje dodatnim antivirusnim sredstvima može početi pre nego što se tretiranje sa jedinjenjem inhibitorom NS3 počne i završiti se pre nego što se tretiranje sa jedinjenjem NS3 inhibitorinim završi; dodatni tretmani sa antivirusnim sredstvima mogu početi posle početka tretmana sa jedinjenjem inhibitorim NS3 i završiti posle završetka tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3; dodatna tretiranja antivirusnim sredstvima mogu početi posle početka tretmana sa jedinjenjem inhibitorim NS3 i završtiti se pre nego što se završi tretiranje sa jedinjenjem inhibitorim NS3, ili dodatno tretiranje sa antivirusnim sredstvima može početi pre nego što počne tretiranje sa jedinjenjem inhibitorim NS3 i završava posle završetka tretiranja sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

DOZE, FORMULACIJE I NAČINI DAVANJA

U ovim postupcima, aktivno sredstvo(a) (npr. jedinjenje prema formuli I i opciono jedno ili više dodatnih antivirusnih sredstava) mogu biti davani domaćinu koji koristi bilo koje kovalentno sredstvo sposobno da dovede do želejnog terapeutskog efekta. Prema tome, sredstva mogu biti ugrađena u različite formulacije za terapeutsko davanje. Određenije, sredstva ovog pronalaska mogu biti formulisana u farmaceutske kompozicije kombinacijom sa odgovarajućim, farmaceutski prihvatljivim nosačima ili razblaživačima i mogu biti formulisana u preparate u čvrstog, polu-čvrstog, tečnog ili gasnog oblika, kao što su tablete, kapsule, praško vi, granule, masti, rastvori, supozitorije, injekcije, inhalatori i aerosoli.

Formulacije

Gore diskutovana aktivna sredstvo(a) mogu biti formulisana korišćenjem dobro poznatih reagenasa i postupaka. Kompozicije su obezbeđene u formulaciji sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom(ima). Raznovrsni farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti su poznati u tehnici i nema potrebe da budu diskutovani ovde do detalja. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti su opširno opisani u različitim publikacijama, uključujući na primer, A Gennaro (2000) 'Remington: The Science and Practice of Pharmacv', 20th edition, Lippincott, Williams & Wilkins; Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Deliverv Svstems (1999) H.C. Ansel et al., eds., 7th ed. Lippincott, Williams & Wilkins; and Handbook of Phramaceutical Excipients (2000) A.H. Kibbe et al., eds 3rd ed Amer. Pharmaceutical Assoc.

Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti, kao što su sredstva, adjuvanti, nosači ili razblaživači su lako dostupni javnosti. Povrh toga, farmaceutske pomoćne supstance, kao što su podešivači pH i sredstva za puferovanje, sredstva za podešavanje tonusa, stabilizatori, sredstva za kvašenje i slično su lako dostupni javnosti.

U nekim izvođenjima, sredstvo je formulisano u vodenom puferu. Pogodni vodeni puferi uključuju, ali bez ograničenja acetatne, sukcinatne, citratne i fosfatne pufere koji variraju u jačini od 5mM do 100 mM. U nekim izvođenjima, vodeni puferi uključuju reagense koji obezbeđuju izotonični rastvor. Takvi reagensi uključuju, ali bez ograničenja natrijum hlorid i šećere npr. manitol, dekstrozu, saharazu i slično. U nekim izvođenjim, vodeni pufer dalje uključuje nejonska površinski aktivna sredstva kao što su polisorbat 20 ili 80. Opciono formulacije mogu dalje uključivati sredstva za održavanje, Pogodna sredstva za održavanje uključuju, ali bez ograničenja, benzil alkohol, fenol, hlorobutanol, benzalkonijum hlorid i slično. U mnogo slučajeva, formulacija je čuvana na oko 4°C. Formulacije mogu takođe biti liofilizovane u kojim slučajevima one generalno uključuju krioprotektante kao što su saharzoa, trehaloza, laktoza, maltoza, manitol i slično. Liofilizovane formulacije mogu biti čuvane u toku produženih vremenskih perioda, čak na temperaturi okoline.

Davanje sredstava kao takvih se može postići na različite načine, uključujući oralno, bukalno, rektalno, parenteralo, intraperitonealno, intradermalno, subkutanozno, intramuskularno, transdermalno, intratrahealno itd. davanje. U mnogim izvođenjima davanje je injekcijom bolusa, npr. subkutanoznom injekcijom bolusa, intramuskularnom injekcijom bolusa i slučno.

Farmaceutske kompozicije prema pronalasku mogu biti davane samo, parenteralno ili preko implaniranog rezeorvara. Poželjno je oralno davanje ili davanje injekcijom.

Subkutanozno davanje farmaceutskih kompozicija prema proanalsku je postignuto korišćenjem standardnim postupaka i uređaja, npr. igle i šprica, subkutanoznom injekcijom portalnim sistemom za davanje i slično. Videti npr US patent br. 3,547,119; 4,755,173; 4,351,937; 4,311,137 i 6,017,328. Ove se poziva na kombinacija subkutanoznog injekcionog porta i uređaja za davanje farmaceutske kompozicije prema pronalasku pacijentu preko porta kao na 'subkutanozni portalni injekcioni sistem za davanje' U mnogo izvođenja, subkutanozno davanje je postignuto bolusnim davanjem iglom i špricom.

U farmaceutskim doznim oblicima, sredstva mogu biti davana u obliku ili farmaceutski prihvatljivih soli, ili oni takođe mogu biti korišćeni sami ili u odgovarajućim asocijacijama, kao i kombinacijama, sa drugim farmaceutski aktivnim jedinjenjima. Sledeći postupci i ekscipijenti su samo kao primeri i ni na koji način ne ograničavaju.

Za oralne preparate, sredstva mogu biti korićena sama ili u kombinaciji sa odgovarajućim aditivima da se naprave tablete, praškovi, granule ili kapsule, na primer, sa konvencionalnim aditivima, kao što su laktoza, manitol, kukuruzni škrob ili krompirni škrob; sa sredstvima za vezivanje kao što je kristalna celuloza, celulozni derivati, akacija, kukuruzni škrob ili želatini; sa dezintegratorima kao što su kukuruzni škrob, krompirni škrob ili natrijum karboksimetilceluloza; sa sredstvima za klizanje, kao što su talk ili magnezijum stearat; i ukoliko je poželjno sa razblaživačima, sredstvima za puferovanje, sredstvima za održavanje vlažnosti, sredstvima za održavanje i sredstvima za davanje ukusa.

Sredstva mogu biti formulisana u preparate za injekciju njihovim rastvaranjem, suspendovanjem ili emulgovanjem u vodenim ili nevodenim rastvaračima, kao što su biljna ili druga slična ulja, sintetički gliceridi alifatičnih kiselina, estri viših alifatičnih kiselina ili propilen glikol; i ukoliko je poželjno sa konvencionalnim aditivima kao što su sredstva za rastvaranje, izotonična sredstva, sredstva za suspendovanje, sredstva za emulgovanje, sredstva za stabilizaciju i sredstva za održavanje.

Pored toga, sredstva mogu biti napravljena u supozitorijama mešanjem sa različitim bazama kao što su baze za emulgovanje ili vodorastvorne baze. Jedinjenja prema prikazanom pronalasku mogu biti davana rektalno preko supozitorija. Supozitorije mogu uključivati sredstva kao što su kakao buter, karbo voskove i polietilen glikole, koji se tope na telesnoj temeperaturi, dok su čvrsti na sobnoj temepraturi.

Jedinični dozni oblik za oralno ili rektalno davanje kao što su sirupi, eliksiri i suspenzije mogu biti obezbeđeni tako da svaka dozna jedinica, na primer, kašičica, kašika, tableta ili supozitorija, sadrži prethodno određenu količinu kompozicije koja sadrži jedan ili više inhibitora. Slično, jedinični dozni oblici za injekciju ili intravensko davanje mogu sadržati inhibitor(e) u kompoziciji kao rastvor u sterilnoj vodi, normalnom rastvoru soli ili drugom farmaceutski prihvatljivom nosaču.

Izraz jedinični dozni oblik' koji je ovde korišćen, odnosi se na fizički odvojene jedinice pogodne kao jedinične doze za humane ili životinjske subjekte, od kojih svaka sadrži prethodno određenu količinu jedinjenja prema prikazanom pronalasku sračunatu na količinu dovoljnu da izazove željeni efekat zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem, nosačem ili sredstvom. Specifikacije za nove jedinične dozne oblike prema prikazanom pronalasku zavise od određenog korišćenog jedinjenja i efekta koji se postiže, i farmakodinamike u vezi sa svakim jedinjenjem u domaćinu.

Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti, kao što su sredstva, adjuvanti, nosači ili razblaživači su lako dostupni javnosti. Povrh toga, farmaceutski prihvatljive pomoćne sustance, kao što su sredstva za podešavanje pH i sredstva za puferovanje, sredstva za podešavanje toničnosti, stabilizatori, sredstva za kvašenje i slično su lako dostupna javnosti.

Druga antivirusna sredstva

Kao što je gore diskutovano, ovi postupci će u nekim izvođenjima biti izvedeni davanjem NS3 inhibitora koji je jedinjenje formule I i opciono jednog ili više dodatnog(ih) antivirusnog(ih) sredst(a)va.

U nekim izvođenjima, postupak dalje uključuje davanje jednog ili više agonista receptora interferona. Gore su opisani agonisti receptora interferona.

U drugim izvođenjima, postupak dalje uključuje davanje pirfenidona ili analoga pirfenidona. Gore su opisani pirfenidon i analozi pirfenidona.

Dodatna antivirusna sredstva koja su pogodna za upotrebu u kombinovanoj terapiji uključuju, ali bez ograničenja, nukleotide i nukleotidne analoge. Neograničavaj ući primeri uključuju azidotimidin (AZT) (zidovudin) i njegove analoge i derivate; 2',3'-dideoksiinozin (DDI) (didanozin) i njegove anologe i derivate; 2',3'-dideoksicitidin (DDC) (dideoksicitidin) i njegove analoge i derivate; 2',3'-didehidro-2,'3'-dideoksitimidin (D4T) (stavudin) i njegovu analozi ili derivati; combivir; abacavir; adefovir dipoksil; cidofovir; ribavirin; analozi ribavirina i slično.

U nekim izvođenjeim, postupak dalje uključuje davanje ribavirina, Ribavirin 1-P-D-ribofuranozil-lH-l ,2,4-triazol-3-karboksamid, koji se može dobiti od

ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, Calif. je opisan u Merck-ovom indeksu kao jedinjenje br. 8199, jedanaesto izdanje. Njegova proizvodnja i formulacija je opisana u US pat. br. 4,211,771. Pronalazak takođe razmatra upotrebu derivata ribavirina (videti npr. US pat. Br. 6,277,830). Ribavirin može biti davan oralno u obliku kapsule ili tablete, u istom ili različitom obliku davanja ili istim ili različitim putem davanja kao i agonist receptora interferona. Ribavirin može biti davan oralno u obliku kapsule ili tablete. Naravno, drugi tipovi davanja oba leka, kada su dostupni su razmatrani, kao što je nazalni sprej, transderamalno, intravenski, pomoću supozitorija, u doznim oblicima sa održanim oslobađanjem itd. Bilo koji oblik davanja će biti pogodan dokle god su prave doze davane bez uništavanja aktivnog sastojka.

U nekim izvođenjima, dodatno antivirusno sredstvo je davano u toku celog tretmana jedinjenjem inhibitorom NS3. U drugom izvođenju, dodatno antivirusno sredstvo je davano u vremenskom periodu koje se preklapa sa tretiranjem jedinjenjem inhibitorom NS3, npr. tretman dodatnim antivirusnim sredstvom može početi pre tretiranja jedinjenjem inhibitoriom NS3 i završiti pre nego što se završi tretman jedinjenjem inhibitora NS3; tretiranje dodatnim antivirusnim sredstvom može početi posle početka tretiranja jedinjenjem inhibitora NS3 i završiti posle završetka tretiranja jedinjenjem inhibitora NS3; tretman dodatnim antivirusnim sredstvom može početi posle početka tretmana jedinjenjem inhibitorom NS3 i završiti pre kraja tretmana jedinjenjem inhibitorom NS3; ili tretiranje dodatnim antivirusnim sredstvom može početi pre početka tretiranja jedinjenjem inhibitorom NS3 i završiti posle kraja tratmana jedinjenjem inhibitora NS3.

POSTUPCI TRETIRANJA

Monotera<p>ije

Jedinjenje NS3 inhibitor prema pronalasku može biti korišćen u akutnim i hroničnim terapijama za HCV bolesti. U mnogo izvođenja, jedinjenje inhibitor NS3 je davan u toku perioda od oko 1 dan do oko 7 dana, ili od oko 1 nedelje do oko 2 nedelje, ili oko 2 nedelje do oko 3 nedelje, ili oko 3 nedelje do oko 4 nedelje, ili oko 1 mesec do oko 2 meseca ili oko 3 meseca do oko 4 meseca, ili oko 4 meseca do oko 6 meseci, ili oko 6 meseci do oko 8 meseci, ili oko 8 meseci do oko 12 meseci, ili bar jedne godine, i mogu biti davana u toku dužeg vremenskog perioda. Jedinjenje NS3 inhibitor može biti davano 5 puta dnevno, 4 puta dnevno,tid, bid, qd, god, biw, tiw, qw,qow,tri puta mesečno ili jednom mesečno. U drugim izvođenjima, jedinjenje NS3 inhibitor je davano kao kontinualna infuzija.

U mnogo izvođenja jedinjenja inhibitori NS3 prema pronalasku su davana oralno.

U vezi sa gore opisanim postupcima za tretiranje HCV bolesti kod pacijenta, NS3 inhibitor prema pronalasku može biti davan pacijentu kao dozni oblik od oko 0.01 mg, do oko 100 mg/kg telesne težine pacijenta po danu, u 1 do 5 odvojenih dnevnih doza. U nekim izvođenjima, jedinjenje NS3 inhibitor je davano u dozi oko 0.5 mg do oko 75 mg/kg telesne težine pacijenta po danu, u 1 do 5 odvojenih doza po danu.

Količina aktivnog sastojka koji može biti kombiovan sa materijalima nosača da bi se dobio dozni oblik može varirati u zavisnosti od domaćima koji je tretiran i naročito od načina davanja. Tipični farmaceutski preparati mogu sadržati od oko 5% do oko 95% aktivnog sastojka (t/t). U drugim izvođenjima, farmaceutski preparati mogu sadržati od oko 20% do oko 82% aktivnog sastojka.

Ljudi iz štuke će lako proceniti da dozni nivoi mogu varirati kao specifična funkcija jedinjenja inhibitora NS3, ozbiljnosti simptoma i osetljivosti subjekta na sporedne efekte. Poželjne doze za dato jedinjenje inhibitor NS3 lako mogu odrediti ljudi iz struke različitim sredstvima. Poželjna sredstva su merenje fiziološke aktivnosti datih agonista receptora interferona.

U mnogo izvođenja, davane su višestruke doze jedinjenja inhibitora NS3. Na primer, jedinjenje inhibitor NS3 je davan jednom mesečno, dva puta mesečno, tri puta mesečno, svake druge nedelje (qow), jednom nedeljno (qw), dva puta nedeljno (biw), tri puta nedeljno (tiw), četri puta nedeljno, pet puta nedeljno, šest puta nedeljno, svakog drugog dana (qod), dnevno (qd), dva puta dnevno (qid), ili tri puta dnevno (tid) u toku vremenskog perioda od jednom dnevno do oko jedne nedelje, od oko dve nedelje do oko četiri nedelje, od oko jednog meseca do oko dva meseca, od oko dva meseca do oko četiri meseca, od oko četiri meseca do oko šest meseci, od oko šest meseci do oko osam meseci, od oko osam meseci do oko 1 godine, od oko 1 godine do oko 2 godine ili od oko 2 godine do oko 4 godine ili više.

Kombinovane terapije sa ribavirinom

U nekim izvođenjima, postupci obezbeđuju kombinovanu terapiju koja se sastoji od davanja jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano i efiksane doze ribavirina. Ribavirin može biti davan u dozama od oko 400 mg, oko 800 mg, oko 1000 mg, ili oko 1200 mg dnevno.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovanih da uljučuju zajedničko davanje pacijentu terapeutski efikasne količine ribavirina u toku trajanja željenog tretmana jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji gore opisani postupak modifikovan da uključi zajedničko davanje pacijentu od oko 800 mg do oko 1200 mg ribavirina oralno po danu u toku trajanja željenog tretmana jedinjenja inhibitora NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koje gore opisane postupke modifikovane da uključuju zajedničko davanje pacijentu (a) 1000 mg ribavirina oralno dnevno ukoliko pacijent ima telesnu težinu manju od 75 kg ili (b) 1200 mg ribavirna oralno dnevno ukoliko pacijent ima telesnu težinu veću ili jednaku 75 kg, gde dnevna doza ribavirina je opciono izdeljena u 2 doze u toku trajanja željenog tretiranja sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kombinovane terapije sa levovirinom

U nekim izvođenjima, postupci obezbeđuju kombinovanu terapiju koja se sastoji od davanja jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano i efikasne količine levovorina. Levovirin se generalno daje u količinama koje su u opsegu od oko 30 mg do oko 60 mg, od oko 60 mg do oko 125 mg, od oko 125 mg do oko 200 mg, od oko 200 mg do oko 300 mg, od oko 300 mg do oko 400 mg, od oko 400 mg do oko 1200 mg, od oko 600 mg do oko 1000 mg, od oko 700 do oko 900 mg dnevno, ili oko 10 mg/kg telesne težine po danu. U nekim izvođenjima, levovirin je davan oralno od oko 400, oko 800, oko 1000, ili oko 1200 mg po danu u toku željenog tretiranja sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kombinovane terapije sa viramidinom

U nekim izvođenjima, postupci obezbeđuju kombinovanu terapiju koja se sastoji iz davanja jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano i efikasne količine viramidina. Viramidin se generalno daje u količinama koje su u opsegu od oko 30 mg do oko 60 mg, od oko 60 mg do oko 125 mg, od oko 125 mg do oko 200 mg, od oko 200 mg do oko 300 mg, od oko 300 mg do oko 400 mg, od oko 400 mg do oko 1200 mg, od oko 600 mg do oko 1000 mg, ili od oko 700 do oko 900 mg po danu ili oko 10 mg/kg telesne težine po danu. U nekim izvođenjima, viramidin je davan oralno u dozama od oko 800 ili oko 1600 mg po danu u toku željenog tretiranja sa jedinjenjem inhibitorom NS 3.

Kombinovana terapija sa timozinom- a

U nekim izvođenjima, obezbeđeni su postupci za kombinovanu terapiju koji se sastoje iz davanja jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano i efiksane količine timozina-a. Timozin-a (Zadaxin™) se generalno daje subkutanoznom injekcijom. Timozin-a može biti davan,tid, bid, qd, god, biw, tiw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, suštinski kontinualno ili kontinualno u toku željenog tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. U mnogim izvođenjima, timozinzin-a je davan dva puta nedeljno u toku željenog tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Efikasne doze timozina-a su u opsegu od oko 0.5 mg do oko 5 mg, npr. od oko 0.5 mg do oko 1.0 mg, od oko 1.0 mg do oko 1.5 mg, od oko 1.5 mg do oko 2.0 mg, od oko 2.0 mg do oko 2.5 mg, od oko 2.5 mg do oko 3.0 mg, od oko 3.0 mg do oko 3.5 mg, od oko 3.5 mg do oko 4.0 mg, od oko 4.0 mg do oko 4.5 mg ili od oko 4.5 mg do oko 5.0 mg. U određenim izvođenjima, timozin-a je davan u dozama koje sadrže količinu od 1.0 mg do 1.6 mg.

Timozin-a može biti davan u toku vremenskog perioda koji je od oko jednod dana do oko jedne nedelje, od oko dve nedelje do oko četri nedelje, od oko jednog meseca do oko dva meseca, od oko dva meseca do oko četri meseca, od oko četiri meseca do oko šest meseci, od oko šest meseci do oko osam meseci, od oko osam meseci do oko 1 godine, od oko 1 godine do oko 2 godine, od oko 2 godine do oko 4 godine ili više. U jednom izvođenju, timozin-a je davan u toku željenog tretiranja sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kombinovane terapije sa interferonom( ima)

U mnogim izvođenima, obezbeđeni su postupci za kombinovanu terapiju koja se sastoji od davanja jedinjenja inhibitora NS3 kao stoje gore opisano i eikasne količine agonista receptora interferona. U nekim izvođenjima, jedinjenje formule I i agonist receptora interferona tipa I ili III su zajedno davani prema postupcima lečenja prema pronalasku. Agonisti receptora interferona tipa I su pogodni za upotrebu uključuju bilo koji interferon-a (IFN-a). U izvesnim izvođenjima interferon-a je PEGilovan interferon-a. U izvesnim drugim izvođenjima, interferon-a je konsezusni interferon, kao što je INFERGEN® interferon alfacon-1. U ostalim izvođenjima, interferon-a je monoPEGilovan (30 kD, linearni) konsezusni interferon.

Efikasne doze IFN-a su u opsegu od oko 3 ug do oko 27 ug, od oko 3 MU do oko 10 MU, od oko 90 ug do oko 180 ug ili od oko 18 ug do oko 90 u,g. Efikasne doze Infergen® konsezusnog IFN-a uključuju oko 3 ug, oko 6ug, oko 9 ug, oko 12 ug, oko 15 ug, oko 18 u.g, oko 21 ug, oko 24 ug, oko 27 ug, ili oko 30 ug leka po dozi. Efikasne doze IFN-a2a i IFN-a2b su u opsegu od oko 3 miliona jedinica (MU) do 10 MU po dozi. Efikasne doze PEGASYS®PEGilovani IFN-a sadrže količinu od oko 90 ug do 270 ug, ili oko 180 ug leka po dozi. Efikasne doze PEG-INTRON®PEGilovani IFN-a2b sadrže količinu od oko 0.5 ug do oko 3.0 ug leka po kg telesne težine po dozi. Efikasne doze PEGilovanog konsezusnog interferona (PEG-CIFN) sadrže količinu od oko 18 ug do oko 90 ug, ili od oko 27 ug do oko 60 ug ili oko 45 ug, težine CIFN amino kiselina po dozi PEG-CIFN. Efikasne doze monoPEGilovanog (30 kD, linerani) CIFN sadrže količinu od oko 45 ug do oko 270 ug, ili oko 60 ug do oko 180 ug, ili oko 90 ug do oko 120 ug leka po dozi. IFN-a može biti davan dnevno, svakog drugog dana, jednom nedeljno, tri puta nedeljno, svake druge nedelje, tri puta mesečno, jednom mesečno, suštinski kontinualno ili neprekidno.

U mnogo izvođenja, agonist receptora interferona tipa I ili tipa III i/ili agonist receptora interferona tipa II je davan u toku perioda od oko 1 dana do oko 7 dana, ili oko 1 nedelje do oko 2 nedelje, ili oko 2 nedelje do oko 3 nedelje, ili od oko 3 nedelje do oko 4 nedelje, ili od oko 1 mesec do oko 2 meseca, ili od oko 3 meseca do oko 4 meseca, ili od oko 4 meseca do oko 6 meseci, ili oko 6 meseci do oko 8 meseci, ili oko 8 meseci do oko 12 meseci ili bar jednu godinu, i mogu biti davani i togu dužih vremenskih perioda. Dozni režimi mogu uključivatitid, bid, qd, qod, biw, tiw, qw, qow,tri puta mesečno, ili mesečna davanja. U nekim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje bilo koji gore opisani postupak u kome željena doza IFN-a je davana subkutanozno pacijentu bolusnim davanjemqd, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno ili su davane subkutanozno pacijenti dnevno suštinski kontinualno ili neprekidnim davanjem, u toku željenog trajanja tretiranja. U drugim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje bilo koje gore opisane postupke u kojima željena doza PEGilovanih IFN-a (PEG-IFN-a) je davana subkutanozno pacijentu bolusnim davanjemqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečeno u toku željenog trajanja tretiranja.

U drugim izvođenjima, jedinjenje inhibitor NS3 i agonist interferona tipa II su zajedno davani u postupku lečenja prema ovom pronalasku. Agonisti interferona tipa II pogodni za upotrebu ukjučuju bilo koji interferon-y (IFN-Y).

Efikasne doze IFN-y mogu biti u opsegu od oko 0.5 ug/m<2>do oko 500 ug/m<2>, uglavnom od oko 1.5 ug/m<2>do 200 ug/m<2>, u zavisnosti od veličine pacijenta. Aktivnost je zasnovana na IO<6>internacionalnih jedinica (U) po 50 ug proteina. IFN-y može biti davan dnevno, svaki drugi dan, tri puta nedeljno ili suštinski kontinualno ili neprekidno.

U specifičnim izvođenjima od interesa, IFN-y je davan pojedincu u jediničnoj dozi od oko 25 ug do oko 500 ug, od oko 50 ug do oko 400 ug ili od oko 100 pg do oko 300 pg. U određenim izvođenjima od interesa, doza je oko 200 ug IFN-p. U mnogim izvođenjima od interesa, davanje IFN-ylb.

Gde je doza 200 ug IFN-y po dozi, količina IFN-y po telesnoj težini (predpostavljajući opseg telesne težine od 45 kg do oko 135 kg) je u opsegu od oko 4.4 ug IFN-y po kilogramu telesne težine do oko 1.48 ug IFN-y po kg telesne težine.

Površina tela podvrgnutih pojedinaca generalno je u opsegu od oko 1.33 m do oko 2.50 m . Prema tome, u mnogim izvođenjima, IFN-y dozni opseg je u opsegu od oko 150 u<g>/m2do oko 20 ug/m 2. Na primer, dozni opseg IFN-y j* e od oko 20 ug/m 2 do oko 30 ug/m 2 , od oko 30 ug/m 2 do oko 40 ug/m 2, od oko 40 ug/m 2 do oko 50 ug/m 2 , od oko 50 pg/m 2 do oko 60 pg/m 2, od oko 60 ug/m<2>do oko 70 ug/m<2>, od oko 70ug/m<2>do oko 80 ug/m<2>, od oko 80 pg/m 2 do oko 90 ug/m 2 , od oko 90 ug/m 2 do oko 100 ug/m 2, od oko 100 pg/m2 do oko 110 pg/m2, od oko 110 pg/m<2>dooko 120 pg/m<2>, od oko 120 pg/m<2>do oko 130 pg/m<2>do oko 140 pg/m<2>, ili od oko 140 pg/m<2>do 150 pg/m . U nekim izvođenjima, dozne grupe su u opsegu od 25 pg/m do oko 100 pg/m . U drugom izvođenju dozne grupe su u opsegu od oko 25 pg/m do oko 50 p<g>/m .

U nekim izvođenjima, agonist receptora interferona tipa III ili tipa I je davan u prvom doznom režimu, a zatim u drugom doznom režimu. Prvi dozni režim agonista receptora interferona tipa I ili tipa III (na koji se poziva kao na 'indukcioni režim') generalno uključuje davanje viših doza agonista interferona tipa I ili tipa III. Na primer, u slučaju Infergen® konsezusnog IFN-a (CIFN), prvi dozni režim se sastoji od davanja CIFN od oko 9 pg, oko 15 pg, oko 18 pg ili oko 27 pg. Prvi dozni režim može obuhvatiti pojedinačni dozni slučaj ili bar dva ili više doznih slučajeva. Prvi dozni režim agonista receptora interferona tipa I ili tipa III može bit davan dnevno, svakog drugog dana, tri puta nedeljno, svake druge nedelje, tri puta mesečno, jednom mesečno, suštinski kontinualno ili neprekidno.

Prvi dozni režim agonista receptora interferona tipa I ili tipa III je davan u toku prvog vremenskog perioda, koji može biti bar oko 4 nedelje, bar oko 8 nedelja ili bar oko 12 nedelja.

Drugi dozni režim agonista receptora interferona tipa I ili tipa III (na koji se takođe poziva kao na 'održavanu dozu') generalno uključuje davanje nižih količina agonista receptora interferona tipa I i tipa III. Na primer, u slučaju CIFN, drug dozni režim sastoji se od davanja CIFN u dozi od bar oko 3 pg, bar oko 9 pg, bar oko 15 pg ili bar oko 18 pg. Drugi dozni režim može obuhvatiti pojedinačni dozni slučaj, ili bar dva ili više doznih slučajeva.

Drugi dozni režim agonista receptora interferona tipa I ili tipa III može biti davan dnevno, svakog drugog dana, tri puta nedeljno, svake druge nedelje, tri puta mesečno, jednom mesečno, suštinski kontinualno ili neprekidno.

U nekim izvođenjima, gde je davan agonista receptora interferona tipa I ili tipa III u doznom režimu 'indukcija'/'održavanje', uključena je'početna' doza agonista receptora interferona tipa II (npr. IFN-y). U ovim izvođenjima IFN-y je davan u toku vremenskog perioda od oko 1 dan do oko 14 dana, od oko 2 dana do oko 10 dana, od oko 3 dana do oko 7 dana, pre početka lečenja sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III. Na ovaj vremenski period se poziva kao na 'početnu' fazu.

U nekim izvođenjima, tretiranje agonistom receptora interferona tipa II je nastavljeno u toku čitavog perioda teretiranja sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III. U drugim izvođenjima, tretiranje agonistom receptora interferona tipa II je prekinuto pre kraja tretmana sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III. U ovim izvođenjima, ukupno vreme tretiranja sa agonistom receptora interferona tipa II (uključujući 'početnu' fazu) je od oko 2 dana do oko 30 dana, od oko 4 dana do oko 25 dana, od oko 8 dana do oko 20 dana, od oko 10 dana do oko 18 dana, ili od oko 12 dana do oko 16 dana. U drugim izvođenjima, tretiranje agonistom receptora interferona tpa II je prekinuto kada počne tretiranje agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III.

U drugim izvođenjima, agonist receptora interferona tipa I ili III je davan u pojedinačnom doznom režimu. Na primer, u slučaju CIFN, doza CIFN je generalno u opsegu od oko 3 pg do oko 15 pg, ili od oko 9 pg do oko 15 pg. Doza agonista receptora interferona tipa I ili tipa III je generalno davana dnevno, svakog drugog dana, tri puta nedeljno, svake druge nedelje, tri puta mesečno, jednom mesečno, ili suštinski kontinualno. Doza agonista receptora interferona tipa I ili tipa Ilije davana u vremenskom periodu, koje može biti na primer, od bar oko 24 nedelje do bar oko 48 nedelja ili duže.

U nekim izvođenjima, gde je davan pojedinačni dozni režim agonista receptroa interferona tipa i ili tipa III, uključena je 'početna' doza agonista receptora interferona tipa II (npr. IFN-y). U ovim izvođenjima, IFN-y je davan u vremenskom periodu od oko 1 dana do oko 14 dana, od oko 2 dana do oko 10 dana, ili od oko 3 dana do oko 7 dana, pre početka tretmana sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III. Na ovaj vremenski period se poziva kao na 'početnu' fazu. U nekim izvođenjima, tretiranje agonistom receptora interferona tipa II je nastavljen u toku celog perioda tretiranja sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III. U drugim izvođenjima, tretiranje sa agonistom receptora interferona tipa II je prekinuto pre kraja tretiranja sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III. U ovim izvođenjima, ukupno vreme tretiranja sa agonistom receptora interferona tipa II (uključujući 'početnu' fazu) je od oko 2 dana do oko 30 dana, od oko 4 dana do oko 25 dana, od oko 8 dana do oko 20 dana, od oko 10 dana do oko 18 dana, ili od oko 12 dana do oko 16 dana. U drugim izvođenjima, tretiranje agonistom receptora interferona tipa II je prekinuto kada počne tretiranje sa agonistom receptora interferona tipa I ili tipa III.

U dodatnim izvođenjima, u postupcima prema pronalasku jedinjenje inhibitor NS3, agonist receptora interferona tipa I ili tipa III i agonist receptora interferona tipa II se zajedno daju u željenom trajanju tretmana. U nekim izvođenjima, u postupcima prema pronalasku jedinjenje inhibitor NS3, interferon-a i interferon-y su zajedno davani u željenom trajanju tretmana.

U nekim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje postupke korišćenja količine agonista receptora interferona tipa I ili tipa III, agonista receptora interferona tipa II i jedinjenja inhibitora NS3, efiksanog u lečenju HCV infekcija kod pacijenata. U nekim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje postupke korišćenja efikasne količine IFN-a, IFN-y i jedinjenja inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenata. U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak korišćenja efikasne količine konsezusnog IFN-a, IFN-y i jedinjenja inhibitora NS3 u lečenjeu HCV infekcije kod pacijenta.

Generalno, efikasna količina konsezusnog interferona (CIFN) i IFN-y pogodna za korišćenje u postupcima prema pronalasku je obezbeđena doznim odnosom od 1 pg CIFN: 10 pg IFN-y, gde oba CIFN i IFN-y su nePEGilovane i neglikozilovane vrste.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koje od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN®konsezusnog IFN-a i IFN-y u tretiranju HCV infekcije kod pacijenta koji se sastoji od davanja pacijentu doze INFERGEN® koji sadrži količinu od oko 1 pg do oko 30 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 10 pg do oko 300 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u željenom trajanju tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN®konsezusnog IFN-a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koja se sastoji od davanja pacijentu doze INFERGEN® koji sadrži količinu od oko 1 pg do oko 9 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno kontinualno ? ili neprekidno u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 10 pg do oko 100 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u željenom trajanju tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN® konsezusnog IFN-a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze INFERGEN® koji sadrži količinu od oko 1 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 10 pg do oko 50 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili besprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN® konsezusnog IFN-a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koja se sastoji od davanja pacijentu doze INFERGEN® koja sadrži količinu od oko 9 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 90 pg do oko 100 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili besprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN® konsezusnog IFN-a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze INFERGEN® koja sadrži količinu od oko 30 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 200 pg do oko 300 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, god, tiw, biw, qw,qow,tri puta mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili besprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGilovanog konsezusnog IFN-a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze PEGilovanog konsezusnog IFN-a (PEG-CIFN) koja sadrži količinu od oko 4 pg do oko 60 pg CIFN težinski aminokiseline po dozi PEG-CIFN, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno, u kombinaciji sa ukupnom nedeljnom dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 30 pg do oko 1,000 pg leka po nedelji u izdeljenim dozama davanim subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili davanim suštinski kontinualno ili besprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGilovanog konsezusnog IFN-a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze PEGilovanog konsezusnog IFN-a (PEG-CIFN) koja sadrži količinu od oko 18 pg do oko 24 pg CIFN težinski aminokiseline po dozi PEG-CIFN, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno, u kombinaciji sa ukupnom nedeljnom dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 100 pg do oko 300 pg leka po nedelji u izdeljenim dozama davanim subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili davanim suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Generalno, efikasne količine IFN-a2a ili 2b i IFN-y pogodne za upotrebu u postupcima prema pronalasku su obezbeđene u doznom odnosu od 1 milion jedinica (MU) IFN-a 2a ili 2b ili 2c : 30 pg IFN-a , gde su oba i IFN-y 2a ili 2b ili 2c i IFN-y su nePEGilovane i neglikozilovane vrste.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-a2a ili 2b ili 2c i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze IFN-a2a ili 2b ili 2c koja sadrži količinu od oko 1 MU do oko 20 MU leka po dozi IFN-a2a ili 2b ili 2c, subkutanoznoqd, qow, tiwili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 30 pg do oko 600 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-a2a ili 2b ili 2c i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze IFN-a2a ili 2b ili 2c koja sadrži količinu od oko 3 MU leka po dozi IFN-a2a ili 2b ili 2c, subkutanoznoqd, qow, tiw, biwili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 100 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-a2a ili 2b ili 2c i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze IFN-a2a ili 2b ili 2c koja sadrži količinu od oko 10 MU leka po dozi IFN-ct2a ili 2b ili 2c, subkutanoznoqd, qod, tiw, biwili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u kombinaciji sa dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 300 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGASYS®PEGilovanog IFN-a2a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze PEGASYS® koja sadrži količinu od oko 90 pg do oko 360 pg leka po dozi PEGASYS®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno, u kombinaciji sa ukupnom nedeljnom dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 30 pg do oko 1,000 pg leka za nedeljno davanje u podeljenim dozma subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili davanim suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGASYS®PEGilovanog IFN-a2a i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze PEGASYS® koja sadrži količinu od oko 180 pg leka po dozi PEGASYS®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno, u kombinaciji sa ukupnom nedeljnom dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 100 pg do oko 300 pg leka za nedeljno davanje u podeljenim dozma subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili davanim suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEG-INTRON® PEGilovanog IFN-ot2b i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze PEG-INTRON® koja sadrži količinu od oko 0.75 pg do oko 3.0 pg leka po kilogramu telesne težine po dozi PEG-INTRON®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno, u kombinaciji sa ukupnom nedeljnom dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 30 pg do oko 1,000 pg leka za nedeljno davanje u podeljenim dozma subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili davanim suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEG-INTRON® PEGilovanog IFN-a2b i IFN-y u lečenju virusne infekcije kod pacijenta, koji se sastoji od davanja pacijentu doze PEG-INTRON® koja sadrži količinu od oko 1.5 pg leka po kilogramu telesne težine po dozi PEG-INTRON®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno, u kombinaciji sa ukupnom nedeljnom dozom IFN-y koja sadrži količinu od oko 100 pg do oko 300 pg leka za nedeljno davanje u podeljenim dozma subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,ili davanim suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiwi oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;i 50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9pgINFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanozno tiw, gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;25pgActimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;200 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;25 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 9 pg INFERGEN®konsezusnog IFN-a davanog subkutanoznoqdilitiw;200 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 100 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina

75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 100 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mgzapojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 100 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 100 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 100 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 150 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina

75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 150 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 150 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;100<p>g Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 150 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 150 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 200 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina

75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 200 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 200 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw;i oralno davanje ribavirinaqd,gde je trajanje terapije 48 nedelja. U ovom izvođenju, ribavirin je davan u količini od 1000 mg za pojedince čije težina je manja od 75 kg i 1200 mg za pojedince čija je težina 75 kg ili više.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 200 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;50 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

U jednom izvođenju, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da obuhvati davanje pojedincu koji ima HCV infekciju efikasne količine NS3 inhibitora; i režim od 200 pg mono PEGilovanog (30 kD, linearnog)konsezusnog IFN-a davanog subkutanozno svakih 10 dana iliqw;100 pg Actimmune® humanog IFN-ylb davanog subkutanoznotiw,gde je trajanje terapije 48 nedelja.

Bilo koji od gore opisanih postupaka koji uključuje davanje NS3 inhibitora agonista receptora interferona tipa I (npr. IFN-a), agonista receptora interferona tipa II (npr. IFN-y) može biti povećan davanjem efikasne količine antagonista TNF-a (npr. TNF-a antagonista koji je drugačiji od pirfenidona ili analoga pirfenidona). Primeri neograničavajućih TNF-a antagonista koji su pogodni za upotrebu u takvim kombinovanim terapijama uključuju ENBREL®, REMICADE® i HUMIRA™.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak korišćenja efikasne količine ENBREL®; efikasne količine IFN-a; efikasne količine IFN-y i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koji obuhvata davanje pacijentu doze ENBREL® koja sadrži količinu od oko 0.1<p>g do oko 23 mg po dozi, od oko 0.1 pg do oko 1 pg do oko 10 pg, od oko 10 pg do oko 100 pg, od oko 100 pg do oko 1 mg, od oko 1 mg do oko 5 mg, od oko 5 mg do oko 10 mg, od oko 10 mg do oko 15 mg, od oko 15 mg do oko 20 mg, ili od oko 20 mg do oko 23 mg ENBREL®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili jednom svakog drugog meseca ili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak korišćenja efikasne količine REMICADE®; efikasne količine IFN-a; efikasne količine IFN-y i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koji obuhvata davanje pacijentu doze REMICADE ® koja sadrži količinu od oko 0.1 mg/kg do oko 4.5 mg/kg, od oko 0.1 mg/kg do oko 0.5 mg/kg, od oko 0.5 mg/kg do oko 1.0 mg/kg, od oko 1.0 mg/kg do oko 1.5 mg/kg, od oko 1.5 mg/kg do oko 2.0 mg/kg, od oko 2.0 mg/kg do oko 2.5 mg/kg, od oko 2.5 mg/kg do oko 3.0 mg/kg, od oko 3.0 mg/kg do oko 3.5 mg/kg, od oko 3.5 mg/kg do oko 4.0 mg/kg, ili od oko 4.0 mg/kg do oko 4.5 mg/kg po dozi REMICADE ®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili jednom svakog drugog meseca ili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak korišćenja efikasne količine HUMIRA™; efikasne količine IFN-a; efikasne količine IFN-y i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koji obuhvata davanje pacijentu doze HUMIRA™ koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 35 mg po dozi, od oko 0.1 pg do oko 1 pg, od oko 1 pg do oko 10 pg, od oko 10 pg do oko 100 pg, od oko 100 pg do oko 1 mg, od oko 1 mg do oko 5 mg, od oko 5 mg do oko 10 mg, od oko 10 mg do oko 15 mg, od oko 15 mg do oko 20 mg, od oko 20 mg do oko 25 mg, od oko 25 mg do oko 30 mg ili od oko 30 mg do oko 35 mg po dozi HUMIRA™, subkutanoznoqd, god, tiw, biw, gw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili jednom svakog drugog meseca ili po danu suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana.

Kombinovane terapije sa pirfenidonom

U mnogim izvođenjima, obezbeđeni postupci za kombinovanu terapiju obuhvataju davanje jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano i efikasne količine pirfenidona ili analoga pirfenidona. U nekim izvođenjima, jedinjenje NS3 inhibitor, jedan ili više antagonista receptora interferona i pirfenidon ili analozi pirfenidona su zajedno davani u postupcima tretiranja prema pronalasku. U izvesnim postupcima, jedinjenje inhibitor NS3, agonist receptora interferona tipa I i pirfenidon (ili analog pirfenidona) su zajedno davani. U drugim izvođenjima, jedinjenje NS3 inhibitor, agonist receptora interfereona tipa I, agonist receptora interferona tipa II i pirfenidon (ili analog pirfenidona) su zajedno davani. Agonisti receptora interferona tipa I pogodni za upotrebu uključuju bilo koji IFN-a, kao što je interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon alfacon-1 i PEGilovani IFN-a, kao što je peginterferon alfa-2a, peginterferon alfa-2b i PEGilovani konsezusni interferoni, kao što su monoPEGilovani (30 kD, linearn) konsezusni interferon. Agonisti receptora interferona tipa II koji su ovde pogodni za upotrebu uključuju bilo koji interferon-y.

Pirfenidon ili analog pirefhidona mogu biti davani jednom u mesecu, dva puta u mesecu, tri puta u mesecu, jednom u nedelji, dva puta u nedelji, tri puta u nedelji, četi puta u nedelji, pet puta u nedelji, šest puta u nedelji, dnevno ili u izdeljenim dnevnim dozama koje su u opsegu od jednom dnevno do 5 puta dnevno u toku vremenskog perioda u opsegu od oko jedne nedelje, od oko dve nedelje do oko četiri nedelje, od oko jednog meseca do oko dva meseca, od oko dva meseca do oko četiri meseca, od oko četiri meseca do oko šest meseci, od oko šest meseci do oko osam meseci, od oko osam meseci do oko 1 godine, od oko 1 godine do oko 2 godine, ili od oko 2 godine do oko 4 godine ili više.

Efikasne doze pirfenidona ili specifičnih analoga pirfenidona uključuju doze zasnovane na težini u opsegu od oko 5 mg/kg/dnevno do oko 125 mg/kg/dnevno, ili fiksni dozni opseg od oko 400 mg do oko 3600 mg po danu, ili od oko 800 mg do oko 2400 mg po danu, ili oko 1000 mg do oko 1800 mg po danu, ili oko 1200 mg do oko 1600 mg po danu, davana oralno u jednoj do pet odvojenih doza po danu. Druge doze i formulacije pirfenidona i specifičnih analoga pirfenidona pogodnih za upotrebu u lečenju fibrotičnih bolesti su opisane u US patentu br. 5,310,562; 5,518,729;5,716,632 i 6,090,822.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan da uključi zajedničko davanje pacijentu terapeutski efikasne količine pirfenidona ili analoga pirfenidona u toku trajanja željenog tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kombinovane terapije sa TNF- a antagonistima

U mnogim izvođenjima, obezbeđeni postupci za kombinovanu terapiju se sastoje od davanja efikasne količine jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano, i efikasne količine antagonista TNF-a u kombinovanoj terapiji za lečenje HCV infekcija.

Efektivne doze antagonista TNF-a su u opsegu od 0.1 pg po dozi, na pr.od oko 0.1 pg do oko 0.5 pg po dozi, od oko 0.5 pg do oko 1.0 pg po dozi, od oko 1.0 pg po dozi do oko 5.0 pg po dozi, od oko 5.0 pg do oko 10 pg po dozi, od oko 10 pg do oko 20 pg po dozi, od oko 20 pg po dozi do oko 30 pg po dozi, od oko 30 pg po dozi do oko 40 pg po dozi, od oko 40 pg po dozi do oko 50<p>g po dozi, od oko 50 pg po dozi do oko 60 pg po dozi, od oko 60pgpo dozi do oko 70 pg po dozi, od oko 70 pg do oko 80 pg po dozi, od oko 80 pg po dozi do oko 100 pg po dozi, od oko 100 pg do oko 150 pg po dozi, od oko 150 pg do oko 200 pg po dozi, od oko 200 pg po dozi do oko 250 pg po dozi, od oko 250 pg do oko 300 pg po dozi, od oko 300 pg do oko 400 pg po dozi, od oko 400 pg do oko 500 pg po dozi, od oko 500 pg do oko 600 pg po dozi, od oko 600 pg do oko 700 pg po dozi, od oko 700 pg do oko 800 pg po dozi, od oko 800 pg do oko 900 pg po dozi, od oko 900 pg do oko 1000 pg po dozi, od oko 1 mg do oko 10 mg po dozi, od oko 10 mg do oko 15 mg po dozi, od oko 15 mg do oko 20 mg po dozi, od oko 20 mg do oko 25 mg po dozi, od oko 25 mg do oko 30 mg po dozi, od oko 30 mg do oko 35 mg po dozi, ili od oko 35 mg do oko 40 mg po dozi.

U nekim izvodjenjima, efektivne doze antagonista TNF-a su izražene kao mg/kg telesne težine. U tim izvodjenjima, efektivne doze antagonista TNf-a su od oko 0.1 mg/kg telesne težine do oko 10 mg/kg telesne težine, na pr., od oko 0.1 mg/kg telesne težine do oko 0.5 mg/kg telesne težine, od oko 0.5 mg/kg telesne težine do oko 1.0 mg/kg telesne težine, od oko 1.0 mg/kg telesne težine do oko 2.5 mg/kg telesne težine, od oko 2.5 mg/kg telesne težine do oko 5.0 mg/kg telesne težine, od oko 5.0 mg/kg telesne težine do oko 7.5 mg/kg telesne težine, ili od oko 7.5 mg/kg telesne težine do oko 10 mg/kg telesne težine.

U mnogim izvodjenjima, antagonist TNF-a je davan u periodu od oko 1 dan do oko 7 dana, ili oko jedne nedelje do oko dve nedelje, ili oko dve nedelje do oko 3 nedelje, ili oko 3 nedelje do oko 4 nedelje, ili oko 1 mesec do oko 2 meseca, ili oko 3 meseca do oko 4 meseca, ili oko 4 meseca do oko 6 meseci, ili oko 6 meseci do oko 8 meseci, ili oko 8 meseci do oko 12 meseci, ili bar jedne godine, a može biti davan u dužim vremenskim periodima. Antagonist TNF-a može biti davantid, bid, qd, qod, biw, tiw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, suštinski kontinualno ili neprekidno.

U mnogim izvođenjima, davane su višestruke doze agonista TNF-a. Na primer, antagonist TNF-a je davan jednom mesečno, dva puta mesečno, tri puta mesečno, svake druge nedelje (qow), jednom nedeljno (qw), dva puta nedeljno (biw), tri puta nedeljno (tiw), četri puta nedeljno, pet puta nedeljo, šest puta nedeljno, svakog drugog dana (god), dnevno (qd), dva puta dnevno (bid), ili tri puta dnevno (tid), suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku vremenskog perioda koji je u opsegu od oko jednog dana do oko jedne nedelje, od oko dve nedelje do oko četri nedelje, od oko jednog meseca do oko dva meseca, od oko dva meseca do oko četiri meseca, od oko četri meseca do oko šest meseci, od oko šest meseci do oko osam meseci, od oko osam meseci do oko 1 godine, od oko jedne godine do oko 2 godine, od oko 2 godine do oko 4 godine ili više.

Antagonist TNF-a i inhibitor NS3 su generalno davani u odvojenim formulacijama. Antagonist TNF-a i inhibitor NS3 mogu biti davani suštinski simultano, ili u okviru oko 30 minuta, oko 1 sat, oko 2 sata, oko 4 sata, oko 8 sati, oko 16 sati, oko 24 sata, oko 36 sati, oko 72 sata, oko 4 dana, oko 7 dana ili oko 2 nedelje jedan od drugog.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak za korišćenje efikasne količine agonista TNF-a i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koja se sastoji od davanja pacijentu doze antagonista TNF-a, subkutanoznogd, god, tiwilibiwili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak za korišćenje efikasne količine ENBREL® i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koja se sastoji od davanja pacijentu doze ENBREL® koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 23 mg po dozi, od oko 0.1 pg do oko 1 pg, od oko 1 pg do oko 10 pg, od oko 10 pg do oko 100 pg, od oko 100 pg do oko 1 mg, od oko 1 mg, do oko 5 mg, od oko 5 mg do oko 10 mg, od oko 10 mg, do oko 15 mg, od oko 15 mg do oko 20 mg, ili od oko 20 mg do oko 23 mg ENBREL®, subkutanoznogd, god, tiw, biw, gw, gow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili jednom svakog drugog meseca, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak za korišćenje efikasne količine REMICADE® i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koja se sastoji od davanja pacijentu doze REMICADE ® koja sadrži količinu od oko 0.1 mg/kg do oko 4.5 mg/kg, od oko 0.1 mg/kg do oko 0.5 mg/kg, od oko 0.5 mg/kg do oko 1.0 mg/kg, od oko 1.0 mg/kg do oko 1.5 mg/kg, od oko 1.5 mg/kg do oko 2.0 mg/kg, od oko 2.0 mg/kg do oko 2.5 mg/kg, od oko 2.5 mg/kg do oko 3.0 mg/kg, od oko 3.0 mg/kg do oko 3.5 mg/kg, od oko 3.5 mg/kg do oko 4.0 mg/kg, ili od oko 4.0 mg/kg do 4.5 mg/kg po dozi REMICADE ®, intravenskigd, god, tiw, biw, gw, gow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili jednom svakog drugog meseca, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak za korišćenje efikasne količine HUMIRA® i efikasne količine inhibitora NS3 u lečenju HCV infekcije kod pacijenta, koja se sastoji od davanja pacijentu doze HUMIRA ® koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 35 mg, od oko 0.1 pg do oko 1 pg, od oko 1 pg do oko 10 pg, od oko 10 pg do oko 100 pg, od oko 100 pg do oko 1.0 mg, od oko 1 mg do oko 5 mg, od oko 5 mg do oko 10 mg, od oko 10 mg do oko 15 mg, od oko 15 mg do oko 20 mg, od oko 20 mg do oko 25 mg, od oko 25 mg do oko 30 mg, ili od oko 30 mg do 35 mg po dozi HUMIRA ®, subkutanoznogd, god, tiw, biw, gw, gow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili jednom svakog drugog meseca, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kombinovane terapije sa timozinom- a

U mnogim izvođenjima, obezbeđeni postupci za kombinovanu terapiju sastoje se od davanja efikasne količine jedinjenja inhibitora NS3 kao što je gore opisano i efikasne količine jedinjenja timozina-a u kombinovanoj terapiji za tretiranje HCV infekcije.

Efikasne doze timozina-a su u opsegu od oko 0.5 mg do oko 5 mg, na pr. od oko 0.5 mg do oko 1.0 mg, od oko 1.0 mg do oko 1.5 mg, od oko 1.5 mg do oko 2.0 mg, od oko 2.0 mg do oko 2.5 mg, od oko 2.5 mg do oko 3.0 mg, od oko 3.0 mg do oko 3.5 mg, od oko 3.5 mg do oko 4.0 mg, od oko 4.0 mg do oko 4.5 mg, ili od oko 4.5 mg do oko 5.0 mg. U određenim izvođenjima, timozin-a je davan u dozama koje sadrže količinu od 1.0 mg ili 1.6 mg.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje postupak korišćenja efikasne količine ZADAXIN timozina -a i efikasne količine inhibitora NS3 u tretiranju HCV infekcije kod pacijenta, koja se sastoji od davanja pacijentu doze ZADAXIN™ koja sadrži količinu od oko 1.0 mg do oko 1.6 mg po dozi, subkutanozno dva puta po nedelji u željenom trajanju sa jedinjenjem inhibitromNB3.

Kombinovane terapije sa antagonistom TNF- a i interferonom

U nekim izvođenjima, prikazani pronalazak obezbeđuje postupak lečenja HCV infekcije kod pojedinca koji ima HCV infekciju, postupak se sastoji od davanja efiksane količine inhibitora NS3 i efikasne količine antagonista TNF-a i efikasne količine jednog ili više interferona.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-y i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju HCV infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-y koja sadrži količinu od oko 10 pg do oko 300 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznogd, god, tiw, biw, gw, gow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno, u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-y i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju HCV infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-y koja sadrži količinu od oko 10 pg do oko 100 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-y i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju HCV infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-y koja sadrži količinu od oko 30 pg do oko 1,000 pg leka po dozi IFN-y, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw,davanim suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-y i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju HCV infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-y koja sadrži količinu od oko 100 pg do oko 300 pg leka nedeljno u izdeljenim dozama subkutanoznoqd, qod, tiw, biwili davanim suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN® konsezusnog IFN-a i TNF-a antagonista u lečenju HCV infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze INFERGEN® koja sadrži količinu od oko 1 pg do oko 30 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine INFERGEN® konsezusnog IFN-a i TNF-a antagonista u lečenju HCV infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze INFERGEN® koja sadrži količinu od oko 1 pg do oko 9 pg leka po dozi INFERGEN®, subkutanoznoqd, qod, tiw, biw, qw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGilovanog konsezusnog IFN-a i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze PEGilovanog konsezusnog IFN-a (PEG-CIFN) koja sadrži količinu od oko 4 pg do oko 60 pg težine CIFN aminokiselina po dozi PEG-CIFN, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGilovanog konsezusnog IFN-a i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze PEGilovanog konsezusnog IFN-a (PEG-CIFN) koja sadrži količinu od oko 18 pg do oko 24 pg težine CIFN aminokiselina po dozi PEG-CIFN, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, jednom mesečno, u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-a 2a ili 2b ili 2c i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-a 2a ili 2b ili 2c koja sadrži količinu od oko 1 MU do oko 20 MU leka po dozi IFN-a 2a ili 2b ili 2c, subkutanoznoqd, qod, tiw,ilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-a 2a ili 2b ili 2c i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-a 2a ili 2b ili 2c koja sadrži količinu od oko 3 MU leka po dozi IFN-a 2a ili 2b ili 2c, subkutanoznoqd, qod, tiw,ilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine IFN-a 2a ili 2b ili 2c i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze IFN-a 2a ili 2b ili 2c koja sadrži količinu od oko 10 MU leka po dozi IFN-a 2a ili 2b ili 2c, subkutanoznoqd, qod, tiw,ilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekidno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1pgdo oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGASYS®PEGilovanog IFN-a 2a i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze PEGASYS® koja sadrži količinu od oko 90 pg do oko 360 pg leka po dozi PEGASYS®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEGASYS®PEGilovanog IFN-a 2a i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze PEGASYS® koja sadrži količinu od oko 180 pg leka po dozi PEGASYS®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEG-INTRON®PEGilovanog IFN-a2b i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze PEG-INTRON® koja sadrži količinu od oko 0.75 pg do oko 3.0 pg leka po kilogramu telesne težine po dozi PEG-INTRON®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

U drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka modifikovan za upotrebu efikasne količine PEG-INTRON®PEGilovanog IFN-a2b i efikasne količine TNF-a antagonista u lečenju virusne infekcije kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu doze PEG-INTRON® koja sadrži količinu od oko 1.5 pg leka po kilogramu telesne težine po dozi PEG-INTRON®, subkutanoznoqw, qow,tri puta mesečno, ili mesečno u kombinaciji sa dozom antagonista TNF-a koja sadrži količinu od oko 0.1 pg do oko 40 mg po dozi antagonista TNF-a, subkutanoznoqd, qod, tiwilibiw,ili dnevno suštinski kontinualno ili neprekisno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kombinovane terapije sa drugim antivirusnim sredstvima

Druga sredstva kao što su inhibitori HCV NS3 helikaze su takođe atraktivni lekovi za kobinovanu terapiju i razmatrani su za upotrebu u ovde opisanim kombinovanim terapijama. Ribozimi kao što su Heptazvme™ i fosforotioatni oligonukleotidi, koji su komplementarni sa HCV proteinskom sekvencom i koji inhibiraju ekspresiju proteina virusnog jezgra, su takođe pogodni za upotrebu u kombinovanim terapijama koje su ovde opisane.

U nekim izvođenjima, dodatna antivirusna sredstva su davana u toku celog tretiranja sa jedinjenjem inhibitorom NS3 prema pronalasku, a početak i kraj perioda tretiranja se podudaraju. U drugim izvođenjima, dodatna antivirusna sredstva su davana u toku vremenskog perioda koji se preklapa sa onim tretmana jedinjenjem inhibitorom NS3, npr. tretiranje sa dodatnim antivirusnim sredstvom počinje pre nego što počne tretiranje sa jedinjenjem inhibitorom NS3 i završava se pre nego što se završi tretman sa jedinjenjem inhibitorom NS3; tretiranje sa dodatnim antivirusnim sredsvom počinje posle početka tretmana jedinjenjem inhibitorom NS3 i završava posle kraja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3; tretman sa dodatnim antivirusnim jedinjenjem počinje posle početka tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3 i završava pre nego što se završi tretiranje sa jedinjenjem inhibitorm NS3; ili tretman sa dodatnim antivirusnim jedinjenjem počinje pre početka tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3 i završava se posle kraja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Jedinjenje inhibitor NS3 može biti davano zajedno sa (tj. simultano u odvojenim formulacijama; simultano u istim formulacijama; davano u odvojenim formulacijama i u okviru oko 48 sat, u okviru oko 36 sati, u okviru oko 24 sata, u okviru 16 sati, u okviru oko 12 sati, u okviru oko 8 sati, u okviru oko 4 sata, u okviru oko 2 sata, u okviru oko 1 sata, u okviru oko 30 minuta, ili u okviru oko 15 minuta ili manje) jednim ili više dodatnih antivirusnih sredstava.

Kao neograničavaj ući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-a sa režimom monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koji obuhvata davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži 100 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakog dana, ili jednom u svakih 8 dana, ili jednom svakih 10 dana u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-a sa režimom monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koji obuhvata davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži 150 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakog dana, jednom svakih 8 dana, ili jednom svakih 10 dana u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-a sa režimom monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koji obuhvata davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži 200 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakog dana, jednom svakih 8 dana, ili jednom svakih 10 dana u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-a sa režimom INFERGEN® interferon alfacon-1 koji obuhvata davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno ili tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-a sa režimom INFERGEN® interferon alfacon-1 koji obuhvata davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno ili tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-y režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-y sa režimom IFN-y koji obuhvata davanje doze IFN-y koja sadrži 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-y režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-y sa režimom IFN-y koji obuhvata davanje doze IFN-y koja sadrži 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-y režim može biti modifikovan da se zameni režim IFN-y sa režimom IFN-y koji obuhvata davanje doze IFN-y koja sadrži 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i IFN-y može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana ili jednom svakim 10 dana; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja režim TNF antagonista može biti modifikovan da zameni režim TNF antagonista sa režimom TNF-a antagonista izabranog iz grupe: (a) entanercept u količni od 25 mg leka po dozi subkutanozno dva puta nedeljno (b) influksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine po dozi intravenski nedeljama 0, 2 i 6, i zatim svakih 8 nedelja, ili (c) adalimumab u količini od 40 mg leka po dozi subkutanozno jednom nedljeno ili jednom svake 2 nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS 3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i IFN-y može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana ili jednom svakim 10 dana; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 150 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana ili jednom svakim 10 dana; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 150 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana ili jednom svakim 10 dana; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 200 ug leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana ili jednom svakim 10 dana; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 200 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana ili jednom svakim 10 dana; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja IFN-a i IFN-y kombinovani režim može biti modifikovan da zameni IFN-a i IFN-y kombinovani režim sa IFN-a i IFN-y kombinovanim režimom koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koja sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; i (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearni) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana, jednom svakih 10 dana; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearni) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana, jednom svakih 10 dana; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearni) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 150 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana, jednom svakih 10 dana; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearni) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 150 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana, jednom svakih 10 dana; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii)adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearni) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 200 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana, jednom svakih 10 dana; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearni) konsezusnog IFN-a koji sadrži količinu od 200 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakih 8 dana, jednom svakih 10 dana; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 ug leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25<p>g leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50pgleka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferon alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 25 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od

25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3. Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a, IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a, IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno; (b) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (c) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakim 8 dana, ili jednom svakih 10 dana; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 150 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakim 8 dana, ili jednom svakih 10 dana; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a koja sadrži količinu od 200 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno, jednom svakim 8 dana, ili jednom svakih 10 dana; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 9 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno ili tri puta nedeljno; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-a i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-a i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze INFERGEN® interferona alfacon-1 koji sadrži količinu od 15 pg leka po dozi, subkutanozno jednom dnevno ili tri puta nedeljno; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 50 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji predstavlja kombinovani režim IFN-y i antagonista TNF može biti modifikovan da zameni kombinovani režim IFN-y i antagonista TNF sa kombinovanim režimom IFN-y i antagonista TNF koji obuhvata (a) davanje doze IFN-y koja sadrži količinu od 100 pg leka po dozi, subkutanozno tri puta nedeljno; i (b) davanje doze antagonista TNF izabranog od (i) etanercept u količini od 25 mg subkutanozno dva puta nedeljno, (ii) infliksimab u količini od 3 mg leka po kilogramu telesne težine intravenski nedeljama 0, 2 i 6 i zatim svake 8 nedelje ili (iii) adalimumab u količini od 40 mg subkutanozno jednom nedeljno ili jednom svake druge nedelje; u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji uključuje režim monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a može biti modifikovan da zameni režim monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a sa režimom peginterferona alfa-2a koji obuhvata davanje doze peginterferona alfa-2a koja sadrži količinu od 180 pg leka po dozi, subkutanozno jednom nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji uključuje režim monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a može biti modifikovan da zameni režim monoPEGilovanog (30 kD, linearnog) konsezusnog IFN-a sa režimom peginterferona alfa-2a koji obuhvata davanje doze peginterferona alfa-2a koja sadrži količinu od 1.0 pg do 1.5 pg leka po kilogramu telesne težine po dozi, subkutanozno jednom ili dva puta nedeljno u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka može biti modifikovan da uključuje davanje ribavirina koje obuhvata količine od 400 mg, 800 mg, 1000 mg ili 1200 mg leka oralno po danu, opciono u dve ili više odvojenih doza dnevno, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka može biti modifikovan da uključuje davanje ribavirina koje obuhvata (i) količinu od 1000 mg leka oralno, po danu, za pacijenta koji ime telesnu težinu manju od 75 kg ili (ii) količinu od 1200 mg leka oralno za pacijenta koji ima telesnu težinu veću od ili jednaku 75 kg, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS3 sa režimonm inhibitora

NS3 koji obuhvata davanje doze od 0.01 mg do 0.1 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS3 sa režimonm inhibitora NS3 koji obuhvata davanje doze od 0. 1 mg do 1 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS3 sa režimonm inhibitora NS3 koji obuhvata davanje doze od 1 mg do 10 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS3 sa režimonm inhibitora NS3 koji obuhvata davanje doze od 10 mg do 100 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji prikazuju režim inhibitora NS5B može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS5B sa režimonm inhibitora NS5B koji obuhvata davanje doze od 0.01 mg do 0.1 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji prikazuju režim inhibitora NS5B može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS5B sa režimonm inhibitora NS5B koji obuhvata davanje doze od 0.1 mg do 1 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji prikazuju režim inhibitora NS5B može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS5B sa režimonm inhibitora NS5B koji obuhvata davanje doze od 1 mg do 10 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Kao neograničavajući primeri, bilo koji od gore prikazanih postupaka koji prikazuju režim inhibitora NS5B može biti modifikovan da zameni režim inhibitora NS5B sa režimonm inhibitora NS5B koji obuhvata davanje doze od 10 mg do 100 mg leka po kilogramu telesne težine oralno dnevno, opciono u dve ili više odvojenih doza po danu, u toku željenog trajanja tretmana sa jedinjenjem inhibitorom NS3.

Identifikacija pacijenata

U izvesnim izvođenjima, specifični režim korišćene terapije leka u lečenju HCV pacijenta je izabran prema izvesnim ispoljenim parametrima bolesti kod pacijenta, kao što je inicijalno virusno opterećenje, genotip HCV infekcije kod pacijenta, histologija jetre i/ili stupanj fibroze jetre kod pacijenta.

Prema tome u nekim izvođenjime, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji gore opisani postupak za HCV u kome je postupak modifikovan za tretiranje pacijenta koji ne reaguju, gde pacijent prima terapuju u toku 48 nedelja.

Prema tome u nekim izvođenjime, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji gore opisani postupak za HCV u kome je postupak modifikovan za tretiranje pacijenta kod kojih se bolest vraća, gde pacijent prima terapuju u toku 48 nedelja.

Prema tome u nekim izvođenjime, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji gore opisani postupak za HCV u kome je postupak modifikovan za tretiranje naivnog pacijenta inficiranog sa HCV genotipa 1, gde pacijent prima terapuju u toku 48 nedelja.

Prema tome u nekim izvođenjime, prikazani pronalazak obezbeđuje bilo koji gore opisani postupak za HCV u kome je postupak modifikovan za tretiranje naivnog pacijenta inficiranog sa HCV genotipa 4, gde pacijent prima terapuju u toku 48 nedelja.

U drugim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka lečenja HCV infekcije u kojoj je postupak modifikovan za lečenje naivnog pacijenta inficiranog sa HCV genotpa 1, gde pacijent ima visoko virusno opterećenje (HVL), gde 'HVL' se odnosi na HCV virusno opterećenje veće od 2 x IO<6>HCV kopija genoma po ml/seruma i gde pacijent primaju terapiju u toku 48 nedelja.

U jednom izvođenu, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima uznapredovalo ili ozbilno stanje fibroze jetre mereno Knodell-ovom ocenom 3 ili 4 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje do oko 60 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko jedne godine, ili oko 36 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 40 nedelja do oko 48 nedelja, ili bar oko 24 nedelje, ili bar oko 30 nedelja, ili bar oko 36 nedelja, ili bar oko 40 nedelja ili bar oko 48 nedelja ili var oko 60 nedelja.

U jednom izvođenu, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima uznapredovalo ili ozbilno stanje fibroze jetre mereno Knodell-ovom ocenom 3 ili 4 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 40 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 48 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje veće od 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta i (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje do oko 60 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko jedne godine, ili oko 36 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 40 nedelja do oko 48 nedelja, ili bar oko 24 nedelje, ili bar oko 30 nedelja, ili bar oko 36 nedelja, ili bar oko 40 nedelja ili bar oko 48 nedelja ili bar oko 60 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje veće od 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta i (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 40 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 48 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje veće od 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta ili rani stadijum fibroze jetere meren Knodell-ovim ocenama od 0, 1 ili 2 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje do oko 60 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko jedne godine, ili oko 36 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 40 nedelja do oko 48 nedelja, ili bar oko 24 nedelje, ili bar oko 30 nedelja, ili bar oko 36 nedelja, ili bar oko 40 nedelja ili bar oko 48 nedelja, ili bar oko 60 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje veće od 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta ili rani stadijum fibroze jetere meren Knodell-ovim ocenama od 0, 1 ili 2 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 40 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 48 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje manje ili jednako 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 20 nedelje do oko 50 nedelja, ili oko 24 nedelja do 48 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko 40 nedelja, ili do oko 20 nedelja, ili do oko 24 nedelje, ili bar oko 30 nedelja, ili bar do oko 36 nedelja, ili bar do 48 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje manje ili jednako 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 20 nedelje do oko 24 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 i inicijalno virusno opterećenje manje ili jednako 2 miliona virusnih kopija genoma po ml seruma pacijenta i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje do oko 48 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 2 ili 3 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje do oko 60 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko jedne godine, ili oko 36 nedelja do oko 50 nedelja, ili 40 nedelja do oko 48 nedelja, ili bar oko 24 nedelje, ili bar oko 30 nedelja, ili bar do oko 36 nedelja, ili bar do 40 nedelja, ili bar oko 48 nedelja ili bar oko 60 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 2 ili 3 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 20 nedelja do oko 50 nedelja, ili oko 34 nedelja nedelje do oko 48 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko 40 nedelja, ili do oko 20 nedelja, ili do oko 24 nedelje, ili do oko 30 nedelja, ili do oko 36 nedelja, ili do oko 48 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 2 ili 3 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 20 nedelja do oko 24 nedelje.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 2 ili 3 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 1 ili 4 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelje do oko 60 nedelja, ili oko 30 nedelja do oko jedne godine, ili oko 36 nedelja do oko 50 nedelja, ili 40 nedelja do oko 48 nedelja, ili bar oko 24 nedelje, ili bar oko 30 nedelja, ili bar do oko 36 nedelja, ili bar do 40 nedelja, ili bar oko 48 nedelja ili bar oko 60 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 5, 6, 7, 8 i 9 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 20 nedelja do oko 50 nedelja.

U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje bilo koji od gore opisanih postupaka za tretiranje HCV infekcije, gde pomenuti postupak je modifikovan da uključuje stupnje (1) identefikacije pacijenta koji ima infekciju HCV genotipa 5, 6, 7, 8 i 9 i zatim (2) davanje pacijentu terapije leka prema ovom postupku u vremenskom periodu od oko 24 nedelja do oko 48 nedelja.

SUBJEKTI POGODNI ZA TRETMAN

Bilo koji od gornjih režima tretiranja mogu biti davani pojedincima kod kojih je dijagnostifikovana HCV infekcija. Bilo koji od gornjih režima tretiranja mogu biti davani pojedincima koji nisu reagovali na prethodni tretman HCV infekcije ('pacijenti koji ne reaguju' uključujući pacijente koji ne odgovaraju i kod kojih se bolest vraća).

Pojedinci kod kojih je klinički dijagnostifikovano da su inficirani sa HCV su od naročitog interesa u mnogim izvođenjima. Pojedinci koji su inficirani sa HCV, identifikovano je da imaju HCV RNK u svojoj krvi i/ili imaju anti-HCV antitela u svom serumu. Takvi pojedinci uključuju anti-HCV ELISA pozitivne pojedince i pojedince sa pozitivnim rekombinantnim imunoblot testovima (RIBA). Takvi pojedinci mogu takođe da imaju povećane nivoe ALT u serumu, što nije potrebno.

Pojedinci koji su klinički dijagnostifikovani kao inficirani sa HCV obuhvataju naivne pojedincea (npr. pojedince kod kojih ranije nije lečen HCV, naročito one koji nisu ranije primali terapiju zasnovanu na IFN-a i/ili ribavirinu) i pojedince kod kojih nije useo raniji tretman HCV (pacijenti 'koji ne reaguju na tretman'). Tretirani pacijenti kod kojih nije uspelo lečenje uključuju one koji ne odgovaraju (tj. pojedince čiji HCV titar nije značajno ili dovoljno smanjem prethodnim tretmanom za HCV, npr. IFN-a monoterapijom, prethodnom kombinovanom terapijom IFN-a i ribavirana, ili prethodnom kombinovanom terapijom pegilovanog IFN-a i ribavirina); i pacijenti kod kojih se bolest vraća (tj. pojedinci kod kojih je prethodno lečen HCV, npr. koji su prethodno primili monoterapiju IFN-a, prethodnu kombinovanu terapiju IFN-a i ribavirana, ili prethodnu kombinovanu terapiju pegilovanog IFN-a i ribavirina, čiji HCV titar je pao, a zatim se povećao).

U naročitim izvođenjima od interesa, pojedinci imaju HCV titar bar oko IO<5>, bar oko 5 x IO<5>, ili bar oko IO<6>, ili bar oko 2 x IO<6>, kopija genoma HCV po mililitru seruma. Pacijenti mogu biti inficirani sa bilo kojim HCV genomom (genotip a, uključujući la i lb, 2, 3, 4, 6 itd. i podtipove (npr. 2a, 2b, 3a itd.)), naročito je teško tretirati HCV genotipa 1 i naročito HCV podtipove i kvazi vrste.

Takođe od interesa su HCV pozitivni pojedinci (kao što je gore opisano) koji pokazuju ozbiljnu fibrozu ili ranu cirozu (ne-dekompenzovanu, Child's-Pugh klasa A ili manja) ili uznapredovalu ciroze (dekompenzovanu, Child's-Pugh klasa B ili C) usled hronične HCV infekcije i koji su viremični uprkos lečenju iz stanja tehnike sa terapijama zasnovanim na IFN-a ili koji ne mogu da tolerišu terapije zasnovane na IFN-a, ili koji imaju kontraindikovane terapije. U određenim izvođenjima od interesa, HCV pozitivni pojedinci sa stupnjem 3 ili 4 fibroze jetre prema META VIR sistemu ocenjivanja su pogodni za tretiranje sa postupcima prema prikazanom pronalasku. U drugim izvođenjima, pojedinci pogodni za lečenje sa postupcima prema ovom pronalasku su pacijenti sa dekompenzovanom cirozom sa kliničkim manifestacijama, uključujući pacijente sa sa uznapredovalom cirozom jetre, uključujući one koji čekaju transplantaciju jetre. U drugim izvođenjima, pojedinci pogodni za tretman sa postupcima ovog pronalaska uključuju pacijente sa blažim stupnjem fibroze jetre uključujući one sa ranom fibrozom (stupnjevi 1 i 2 u META VIR, Ludwig i Scheuerovom sitemu ocenjivanja; ili stupnjevi 1, 2 ili 3 u Ishak-ovom sistemu ocenjivanja).

PRIPREMANJE NS3 INHIBITORA

Jedinejnja formule I mogu biti sintetizovana prema dole opisanim postupcima.

Metodologija

Pripremanje jedinjenja opšte strukture I

Dva postupaka su korišćena u pripremanju jedinjenja sa opštom strukturom I. U oba postupka, intermedijeri 1 i 4 su pripremljeni prema postupcima opisanim u međunarodnoj prijavi PCT/CA00/00353 (objava br. WO 00/59929). Intermedijer 4 je takođe nabavljen od RSP Amino Acids.

Primer 1- 1: Sinteza Jedinjenja# 101 (Jedinjenje AR00220042) postupkom

A:

Stupanj 1: Sinteza terc-butil estra IS-^Etoksikarbonil-l-vinil-cikIopropiIkarbamoil)-4/?-hidroksi-piro!idin-l-karboksilne kiseline

U balon koji je napunjen sa etil-(li?,2S)/( IS,2i?)-l-amino-2-vinilciklopropil karboksilatom (1, 1.0 g, 5.2 mmol),trans- N-( terc- Butoksikarboml)- 4-hidroksi-L-prolinom (2, 1.3 g, 1.1 ekv.) i HATU (2.7 g, 1.1 ekv.) polako je dodato 30 ml DMF da bi se napravio rastvor. Ohlađen je na 0°C u led-voda kupatilu, a zatim je sledelo dodavanje rastvora DIEA (4.4 ml, 4 ekv.) u DMF

(15 ml) uz mešanje. Omogućeno je da se reakcija zagreje na st i meša u toku noći.

Polse 16 h, reakcija je završena što je praćeno sa HPLC. Razblažena je sa EtOAc (100 ml), isprana sa vodom (3 x 40 ml), zas. NaHC03(2 x 40 ml) i rastvorom soli (2 x 40 ml), zatim osušena iznad Na2S04i koncentrovana da bi se dobilo tamno ulje bakarne boje. Sirova supstanca je prečišćena na silika gelu (eluent: aceton/heksan 3:7), dajući čist 3 kao tamni penasti prah (770 mg, 32%).

Stupanj 2: Sinteza l-terc-butoksikarboniI-5-(l/?-etoksikarbonil-25'-

vinil-ciklopropilkarbamoil)-pirolidin-32?-il estara 3,4-dihidro-l//-

izohinoIin-2-karboksilne kiseline(5) il-terc-butoksikarbonil-5-(15-

etoksikarbonil-2/?-vinil-ciklopropilkarbamoil)-pirolidin-3/?-il estara 3,4-

dihidro-l//-izohinolin-2-karboksi!ne kiseline(6)

Dipeptid 3 (300 mg, 0.81 mmol) je rastvoren u DCM (8 ml), a zatim je dodat CDI (163 mg, 1.2 ekv.) u jednoj porciji. Reakcija je mešana na st u toku noći. Posle 15 h, reakcija je završena što je praćeno sa TLC (DCM/MeOH 9:1). 1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (0.32 ml, 3 ekv) je dodat u reakciju u porcijama i reakcija je mešana na st u toku noći.

Polse 22 h, TLC je pokazao daje reakcija završena. Reakcija je razblažena sa DCM (15 ml) i isprana sa IM vod. HC1 (15 ml), rastvorom soli (15 ml), osušena (Na2S04) i koncentrovana. Sirova supstanca je prečišćena na silika gelu (eluent: DCM/Et20/aceton 30:10:1). Iz gornje mrlje je izolovan (5) beli penasti prah (169 mg, 40%) a donja mrlja (6) je bila bela čvrsta supstanca (156 mg, 38%). MS m/e 550 (M<+>+Na).

Stupanj 3: Sintezal-(25-terc-butol«ikarbonilaniino-non-8-enoiI)-5-(12?-etoksikarbonil-25-vinil-ciWo<p>ro<p>ilkarbamoil)-piroIidin-3/?-il estar 3,4-dihidro-l//-izohinolin-2-karboksilne kiseline (7)

Gornji izomer 5 (118 mg, 0.22 mmol) je rastvoren u 4M HC1 (dioksanu, 8 ml) i ostavljen na st u toku 90 minuta da se ukloni BOC zaštitna grupa. Zatim je koncentrovan, sakupljen sa acetonitrilom i ponovo koncentrovan dva puta. U ovaj svetio braon ostatak dodat je 4 (66.8 mg, 1.1 ekv.) i HATU (93.5 mg, 1.1 ekv.), a zatim 2 ml DMF pod azotom. Reakcija je ohlađena na led-voda kupatilu u toku 15 minuta, posle čega je dodato 0.5 ml DMF rastvora DIEA (0.13 ml, 4 ekv.) u reakciju u kapima uz mešanje. Ledeno kupatilo je ostavljeno da polako raste do st i reakcija je mešana u toku noći.

Posle 24 h, reakcija je postala tamno braon. TLC njenog alikvota pokazuje daje reakcija završena. Reakcija je razblažana sa EtOAc (30 ml) i isprana sa vodom (3 x 15 ml), zas. NaHCC>3 (2 x 15 ml), rastvorom soli (15 ml), osušena (Na2S04) i koncentrovana i dobijen je 7 kao zaostalo narandžasto ulje (156 mg), Direktno je korišćeno u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja MS m/e 703 (M<*>+Na)

Stupanj 4: Sinteza etil estra (15,4R,65, 145, 18^)-14-terc-butoksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-l/f-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (8)

Sirovi 7 (135 mg, 0.2 mmol) je rastvoren u 20 ml DriSolve DCE da bi se napravio rastvor, a zatim je dodat Nolan-ov katalizator (5 mg, 0.3 ekv.) na st pod azotom. Rastvor je pocrveneo. Reakcija je stavljena na prethodno zagrejano uljano kupatilo (50 C) i mešana u toku noći.

Posle 10 h, reakcija je postala tamno braon. TLC (DCM/EtOAc 1:1) je pokazao jasno pretvaranje u novu mrlju sa nešto nižom Rf. Reakcija je koncentrovana i prečišćena na silika gelu (eluent: DCM/EtOAc gradijent od 5:1 do 2:1), dajući proizvod 8 kao tamni penasti prah (75 mg, 58%). MS m/e 653.1 (MM).

Stupanj 5: Sinteza( 1S, 4R,65", 145, 18i?)-14-terc-butoksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-

tricik!o[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (Jedinjenje#

101)

Makrociklični estar 8 (60 mg, 0.092 mmol) je rastvoren u 0.9 ml mešavine rastvarača (TNF/MeOH/H20 2:1:1), a zatim je sledelo dodavanje LiOH-H20 (23 mg, 6 ekv.). Smeša je mešana na st u toku noći. Polse 18 h, TLC (DCM/MeOH 9:1) je pokazao čistu novu mrlju sa nižom Rf. Reakcija je koncentrovana do skoro suvog i razdeljena između IM vod. HC1 (15 ml) i DCM (20 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x10 ml). Organski slojevi su sakupljeni, osušeni iznad Na2S04i koncentrovani, dajućijedinjenje#101kao svetio braon penasti prah (50 mg, 87%).<l>HNMR (CD3OD, 400 MHz) 5 1.20-1.67 (m 21H), 1.70-1.83 (m, IH), 1.88-2.10 (m, IH), 2.12-2.58 (m, 4H), 2.82 (m, 2H), 3.60-3.80 (m, 2H), 3.86 (m, IH), 4.20 (m, IH), 4.35 (m, IH), 4.54 (s, 7H), 4.58 (m, 3H), 5.29 -5.41 (m, 2H), 5.57 (m, IH), 7.0-7.24 (m, 4H). MS m/e 625.1 (M<+>+1).

Primer 1- 1 a

(15, 45,6R,145, 18^)-14-terc-butoksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]

nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(Jedinjenje AR00220122) je pripremljeno slično postupku opisanom u Primeru 1-1, zamenjujući jedinjenje 5 sa 6 u stupnju 3. MS m/e 625 (M^+l).

Primer 1- 2: Sinteza Jedinjenje #101 (Jedinjenje AR00220042) postupkom

B:

Postupak B:

Jedinjenje# 101 je takođe pripremljeno prema gornjem postupku. Ovde opisana sinteza makrocikličnog intermedijera 10 je je slična onoj opisanoj u međunarodnoj prijavi PCT/CAOO/00353 (Objava br. WO 00/59929).

Stupanj 1: Sinteza terc-butil estra 25,-(l-Etoksikarbonil-2-vinil-

ciklopropilkarbamoiI)-4/?-hidroksi-pirolidon-l-karboksilne kiseline(3)

U balon napunjen sa etil-(17?,2S)/( IS,2i?)-l-amino-2-vinilciklopropil karboksilatom (1, 1.0 g, 5.2 mmol),trans- N-( terc- Butoksikarbom\)- 4-hidroksi-L-prolinom (2, 1.3 g, 1.1 ekv.) i HATU (2.7 g, 1.1 ekv.) dodato je . 30 ml DMF da bi se napravio rastvor. Ohlađen je na 0°C u led-voda kupatilu, a zatim je polako dodat rastvor DIEA (4.4 ml, 4 ekv.) u DMF (15 ml) uz mešanje. Reakcija je omogućeno da se zagreje na st i meša u toku noći.

Posle 16 h, reakcija je završena što je praćeno sa HPLC. Razblažena je sa EtOAc (100 ml), isprana sa vodom (3 x 40 ml), zasić. NaHC03(2 x 40 ml) i rastvorom soli (2 x 40 ml), zatim je osušen iznad Na2S04i koncentrovan da bi se dobilo ulje tamno bakarne boje. Sirova supstanca je prečišćena na silika gelu (eluent:aceton/heksan 3:7), dajući čisti 3 kao tamni penasti prah (770 mg, 32%).

Stupanj 2: Sinteza etil estra lif?-{[l-(25'-terc-butoksikarbonilamino-non-8-enoiI)-4if-hidroksi-piroIidin-25-karbonil]-amino}-2iS'-vinil-ciklopropankarboksilne kiseline

Jedinjenje 3 (2.85 g, 7.7 mmol) je rastvoreno u 10 ml 4M HC1 (dioksan) i ostavljeno je na st u toku 90 min da se ukloni Boe zaština grupa. Zatim je koncentrovano, sakupljeno sa acetonitrilom i ponovo koncentrovano dva puta. U svetio braon ostatak je zatim dodat 4 (2.2 g, 8.1 mmol) i HATU (3.2 g, 8.5 mmol), zatim 80 ml DMF pod azotom. Reakcija je ohlađena na led-voda kupatilu u toku 15 minuta, posle čega 5 ml rastvora DMF rastvora DIEA (5.4 ml, 30.9 mmol) je dodato u reakciju u kapima uz mešanje. Leđno kupatilo je stavljeno da polako dođe na st i reakcija je mešana u toku noći.

Posle 18 h, TLC je pokazao završetak reakcije. Reakcija je razblažena sa EtOAc (300 ml) i isprana sa vodom (3 x 150 ml), zas. NaHC03(2 x 150 ml), rastvorom soli (150 ml), osušena (Na2S04) i uklonjen je rastvarač. Sirovi ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom na silika gelu na Biotage 40M

(eluent = 3% do 5% MeOH u DCM) i dobijen je 9 kao braonskasta penasta čvrsta supstanca (3.5 g, 87%).

Stupanj 3: Sinteza etil estar (15,4R, 65,145, 18/f)-14-terc-

butoksikarbonilamino-18-hidroksi-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (10)

Jedinjenje 9 (2.6 g, 5.0 mmol) je rastvoreno u 500 ml DriSolve DECE u balonu sa okruglim dnom od 11 da bi se napravio rastvor. Degasiran je uvođenjem azota u toku 1 h. Zatim je dodat Hovevda katalizator (0.25 ekv.) na st pod azotom. Reakcija je stavljena na prethodno zagrejano uljano kupatilo (50 ) i mešana u toku noći. Posle 16 h, reakcija je postala tamno braon. TLC (DCM/EtOAC 1:1) je pokazao jasnu konverziju u novu mrlju sa nešto nižom Rf. Reakcija je koncentrovana i prečišćena na silika gelu (Biotage 40 M, eluent=DCM/EtOAc gradijent od 1:1 do 1:2), dajući proizvod 10 kao tamni penasti prah (0.64 g, 52%). 'H NMR (CDC13, 400 MHz) 5 1.21 (t, J=7.0 Hz, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.20-1.50 (m, 6H), 1.53-1.68 (m, 2H), 1.83-1.96 (m, 2H), 1.98-2.28 (m, 4H), 2.60 (m, IH), 3.13 (šir. s, IH), 3.68 (m, IH), 3.94 (m, IH), 4.01-4.19 (m, 2H), 4.48 (m, IH), 4.56 (šir.s, IH), 4.79 (m, IH), 5.26 (t, J=9.4 Hz, IH), 5.36 (d, .7=7.8 Hz, IH), 5.53 (m, IH), 7.19 (šir.s, IH). MS m/e 494.0 (M<+>+1).

Stupanj 4: Sinteza (15,4R, 65,145, 18/f)-14-terc-butoksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksi!ne kiseline

Makrociklični intermedijer 10 (110 mg, 0.22 mmol) je rastvoren u DCM (2.2 ml), a zatim je dodat CDI (45 mg, 0.27 mmol) u jednoj porciji. Reakcija je mešana na st u toku noći. Posle 15h, reakcija je završena što je praćeno sa TLC (DCM/MeOH 9:1). Dodat je 1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (0.14 ml, 1.1 mmol) u reakciju u kapima i reakcija je mešana na st u toku noći. Posle 22 h, TLC je pokazao daje reakcija završena. Reakcija je razblažena sa DCM (6 ml) i isprana sa IM vod. HC1 (2x2 ml), zas. natrijum bikarbonatom (2 ml), rastvorom soli (2 ml), osušen (Na2S04) i koncentrovana. Sirova supstanca je prečišćena na silika gelu (Biotage 40S, eluent: 2 do 4% MeOH u DCM), dala je 11 kao bledo žut penasti prah (131 mg, 90%).

Stupanj 5: Jedinjenje 11 je hidrolizovano na isti način kao što je opisano u stupnju 5 Primera 1-1 da bi se dobilo jedinjenje # 101

Sledeća jedinjenja su takođe pripremljena prema gore opisanom postupku B, uz zamenu 1,2,3,4-tetrahidroizohinolina sa različitim drugim sekundarnim aminima. Većina ovih amina je ili nabavljena iz komercijalnih izvora ili su to poznata jedinjenja u literaturi, pa su prema tome pripremljena korišćenjem ovde datih postupaka (1. Stokker, G.E.Tetrahedron Lett.1996, 37(31), 5453-5456. 2. Chan, N W. Bioorganic & Medicinal Chemistrv 2000, 8, 2085-2094. 3. Vecchietti, V. et al.J. Med. Chem.1991,34,2624-2633). Za one pomenute amine koji nisu direktno pripremljeni prema postupcima u literaturi ili specifične pomenute amine koji nisu ranije zabeleženi u literaturi prema našem znanju, njihove sinteze su date sa svakim primerom.

Primer 1- 3:

(15, 4R,65,145, 18/?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(6,7-dimetoksi-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje

AR00226824) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 6,7-dimetoksi-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 585.2 (M^+l-100).

Primer 1- 4:

(15,4R, 65,145, 18/f)-14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-18-(l,3,4,9-tetrahidro-b-karbolin-2-karboniloksi)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00226825) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 2,3,4,9-tetrahidro-lH-b-karbolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 564.2 (M^+l-100).

Primer 1- 5:

(15, 4R, 65, 145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(l,3-dihidro-

izoindoI-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]

nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(jedinjenje AR00291871) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnju 4.<*>HNMR (CDC13, 500 MHz) 5 1.21-1.44 (m, 8H), 1.32 (s, 9H), 1.54-1.62 (m, 2H), 1.78-1.88 (m, 2H), 2.04-2.13 (m, IH), 2.16-2.23 (m, IH), 2.24-2.36 (m, 2H), 2.66-2.74 (m, IH), 3.87-3.90 (m, IH), 4.15 (d, J=l 1.0 Hz, IH), 4.37-4.43 (m, IH), 4.61-4.77 (m, 5H), 5.18 (t, 7=10.3 Hz,

IH), 5.24-5.31 (m, IH), 5.40-5.45 (m, IH), 5.58-5.66 (m, IH), 7.11-7.30 (m, 4H). MS m/e 611.0 (M<+>+1-100).

Primer 1- 6:

(15, 4R, 65, 145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(2,3-dihidro-

indol-l-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]

nonadek-7-en-4-karboksilna kiselinaGonjenje AR00291875) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 2,3-dihidro-lH-indol korišćen u stupnju 4. MS m/e 610.9 (Nf+1).

Primer 1- 7:

(15, 4R,65,145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-18-(8-trifluorometil-3,4-dihidro-lH-izohinoIin-2-karboniIoksi)-3,16-diaza-

tricik!o[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(jedinjenje AR00294382) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 8-trifluorometil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 693.0 (M<+>).

Primer 1- 8:

(15, 4R, 65, 145,18l?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-18-(6-trifluorometil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboksi!na kiselina (j edinj enj e AR00294383) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 6-trifluorometil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4.<l>HNMR (500 MHz, CDC13) 5 7.46-7.38 (m, 2H), 7.26-7.18 (m, IH), 6.98 (s, IH), 5.62 (q, IH), 5.42 (s, IH), 5.21-5.15 (m, 2H), 4.78-4.60 (m, 3H), 4.40 (s, IH), 4.16-4.00 (m, IH), 3.92-3.81 (m, IH), 3.80-3.60 (m, 2H), 3.00-2.85 (m, 2H), 2.72-2.64 (šir.s, IH), 2.40-1.18 (m, 20H). MS m/e 693.0 (M<4>).

Primer 1- 9:

(15, 4R,65, 145,18/?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(5-fluoro-3,4-dihidro-lH-izohinoIin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00294384) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 5-fluorometil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4.<!>H NMR (500 MHz, CDCI3) 5 7.19-7.11 (m, IH), 7.05 (m, IH), 6.91 (t, 2H), 5.62 (q, IH), 5.40

(s, IH), 5.24 (d, IH), 5.20 (t, IH), 4.78 (s, IH), 4.64-4.56 (m, 2H), 4.42 (s, IH), 4.12-4.02 (m, IH), 4.12-4.02 (m, IH), 3.92-3.81 (m, IH), 3.78-3.61 (m, 2H), 3.84-2.80 (m, 2H), 2.74-2.64 (m, IH), 2.36-2.18 (m, 2H), 1.91-1.81 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 2H), 1.48-1.10 (m, 15 H). MS m/e 643.0 (M<+>).

Primer 1- 10:

(15, 4R, 65,145,18tf)-18-(5-Amino-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-

karboniIoksi)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-

triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksiIna kiselina(jedinjenje AR00301745) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 640.1 (M<4>).

Primer 1- 11:

(15,4R,65, 145, 18/?)-18-(7-Amino-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-

karboniloksi)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilnakiselina(jedinjenje AR00301749) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 7-amino-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 640.1 (M<+>), 641.1 (M<+>+l).

Primer 1- 12:

(15,4R,65, 145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-18-(2-

fenil-amino-6,7-dihidro-lH-tiazolo[5,4-c]-piridin-5-karboniloksi)-3,16-diaza-triciWo[14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(jedinjenje AR00304000) je sintetizovana prema postupku B, osim što je fenil-(4,5,6,7-tetrahidro-tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)amin korišćen u stupnju 4. MS m/e 721.2 (M-l).

Primer 1- 13:

(15, 4R, 65, 145, 18J?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(7-hloro-3,4-

dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(jedinjenje AR00304062) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 7-hloro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 659.0 (M<+>), 661.0 (M<+>+2).

Primer 1- 14:

(15,4R,65, 145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(6-fluoro-3,4-

dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilnakiselina(jedinjenje AR00304063) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 643.0 (M<*>), 644.0 (M<+>+1).

Primer 1- 15:

(15,4R,65, 145, 18JR)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(4,4-spirociklobutiI-3,4-dihidro-lH-izohinoIin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-tricikIo[14.3.0.0<4>'<6>Jnonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00304065) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4,4-spirociklobutil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4.<*>H NMR (400 MHz, d6-aceton) 5 7.99 (d, IH), 7.57-7.66 (m, IH), 7.27 (t, IH), 7.09-7.22 (m, 2H), 5.99 (šir.s, IH), 5.56 (dd, IH), 5.42 (šir.s, IH), 5.19-5.30 (m, IH), 4.52-4.70 (m, IH), 4.27-4.42 (m, IH), 4.17-4.27 (m, IH), 3.91 (dd, IH), 3.63-3.82 (m, 2H), 2.22-2.51 (m, 6H), 1.93-2.20 (m, 3H), 1.79-1.91 (m, IH), 1.52-1.66 (m, IH), 1.16-1.50 (m, 19H). MS m/ z 665.1 (M<+>+1).

Primer 1- 15a:

Pripremanje 4,4-spirociklobutil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinoiina:

A: U rastvor 1-fenil-1-ciklopropan karbonitrila (2.00 g, 12.7 mmol) u 100 ml THF dodat je 1.0 M rastvor LiAlH (19.1 ml, 19.1 mmol) u kapima na st. Reakcija je mešana na st u toku 15 sati, zatim je polako ohlađena na 0°C sa 10 ml H20 i zatim 10 ml 1.0 M NaOH i mešana na st u toku 1.5 sati. Rastvor je proceđen i THF je uklonjen rotacionim uparavanjem. Voda je ekstrahovana sa EtOAc i orgasnki ekstrakt je ispran sa H20 i rastvorom soli, osušen iznad Na2S04 i koncentrovan da bi se dobilo 0.70 g (34%) bistrog ulja koje je korišćeno u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

B: U rastvor C-(l-fenil-ciklobutil)-metilamina (0.70 g, 4.34 mmol) i TEA (0.67 ml, 4.78 mmol) u 40 ml THF na 0°C dodat je metil hloroformijat u kapima. Reakcija je mešana na st u toku 15 sati. Sledećeg dana voda i EtOAc su dodati i organski sloj je odvojen i ispran sa IM HC1 i rastvorom soli, osušen Na2S04, koncentrovan do ulja i korišćen direktno u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

C: Smeša metil estra (l-fenil-ciklobutilmetil)-karbaminske kiseline (0.95 g, 4.34 mmol) i PPA (20 ml) su dodati u peščano kupatilo prethodno zagrejano na 150°C. Posle 30 minuta, reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu (st). Posle hlađenja, dodata je voda u kapima i rastvor je ekstrahovan dva puta sa DCM. Organski ekstrakti su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad Na2S04 i koncentrovani do bistrog ulja koje je korišćeno direktno u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

D: U rastvor 3,4-dihidro-2H-izohinolin-l-ona (0.406 g, 2.17 mmol) u 20 ml THF na 0° dodat je IM rastvor LiAlH (3.26 ml, 3.26 mmol) u kapima. Omogućeno je da se reakcija zagreje na st i zatim je mešana u toku 15 sati, polako ohlađena na 0C sa 5 ml H20 i zatim 5 ml 1.0 M NaOH i mešana je na st u toku 15 sati. Rastvor je proceđen i THF je uklonjen rotacionim uparivačem. Vodeni deo je ekstrahovan sa EtOAc i organski ekstrakt je ispran sa H20 i rastvorom soli, osušen iznad Na2S04i koncentrovan da bi se dobilo 0.21 g (56%) bistrog ulja koje je korišćeno u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

Primer 1- 16:

N—</>

o?

p

Jedinjenje AR00304066

(15,4R, 65,145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(4,4-dimetil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniIoksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksiIna kiselina (jedinjenje AR00304066) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4,4-dimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. ^NMR (400 MHz, aV aceton) 5 7.98 (d, IH), 7.39 (šir.s, IH), 7.09-7.24 (m, 3H), 5.99 (šir.s, IH), 5.57 (dd, IH), 5.37-5.46 (šir.s, IH), 5.24 (dd, IH), 4.55-4.69 (m, IH), 4.26-4.36 (m, IH), 4.16-4.26 (m, IH), 3.90 (dd, IH), 3.40-3.49 (m, IH), 2.28-2.50 (m, 4H), 1.98-2.09 (2H), 1.79-1.92 (m, IH), 1.52-1.65 (m, 3H), 1.16-1.51 (m, 22H). MS m/z 653.0 (M<+>+1).

Primer 1- 16a

?T"1

4,4-dimetil-l,2,3,4-tetrahidroizohinolin je pripremljen prateći eksperimentalne stupnjeve A do D iz Priemra 1-15a, 2-metil-2-fenil-propionitril (pripremljen prema Caron, S; Vazquez, E; J.M.J. Am. Chem. Soc. 2000, 122,712-713) je pretvoreno u naslovno jedinjenje.

Primer 1- 17:

(15,4R, 65, 145, 18/?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(4-metil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00304067) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4-metil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. 'HNMR (400 MHz, oV aceton) 8 7.93-8.03 (m, IH), 7.04-7.28 (m, 4H), 6.02 (šir.s, IH), 5.56 (dd, IH), 5.40 (m, IH), 5.23 (dd, IH), 4.66-4.85 (m, IH), 4.54-4.64 (m, IH), 4.34.4.54 (m>IH), 4.17-4.34 (m, IH), 3.91 (dd, IH), 3.57-3.78 (m, IH), 3.42-3.57 (m, IH), 2.26-2.52 (m, 4H), 1.96-2.09 (m, 2.0), 1.77-1.92 (m, 1.0), 1.50-1.64 (m, 3.0), 1.13-1.50 (m, 17H). MS m/z 639.0 (M<+>+l).

Primer l- 17a

4-metil-l,2,3,4-tetrahidroizohinolinje pripremljen iz 2-fenil-propilamina prema Grunewald, G.L; Sali, D.J.; Monn, J.A.J. Med. Chem. 1988, 31, 433-444.

Primer 1- 18

Jedinjenje AR00304103

(15,4R,65, 145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(2-terc-

butilamino-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-5-karboniloksi)-2,15-

diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna

kiselina(jedinjenje AR00304103) je sintetizovana prema postupku B, osim što je terc-butil-(4,5,6,7-tetrahidro-tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)-amin korišćen u stupnju 4. MS m/e 731.2 (M<+>+1).

Primer 1- 19:

(15,4R,65, 145, 18i?)-18-(2-Amino-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-5-karboniloksi)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00304154) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4,5,6,7-tetrahidro-tiazolo[5,4-c]piridin-2-ilamin korišćen u stupnju 4. MS m/e 675.1 (MT+1).

Primer 1- 20:

(15,4R,65, 145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(2-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-5-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00304158) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 2-metil-4,5,6,7-tetrahidro-tiazolo[5,4-c]piridin korišćen u stupnju 4. MS m/e 546.2 (M<+>+l-100).

Primer 1- 21:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (j edinj enj e AR00304183) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin korišćen u stupnju 4. MS m/e 625.2 (M-l).

Primer 1- 22:

( IS, 4R, 6S, 14S,18JR)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00312023) je sintetizovana prema postupku B, osim što je proizvod premeštanja zatvaranja prstena 10 iz stupnja 3 dalje redukovan sa H2/Rh-Al203pre sledećeg stupnja kuplovanja (WO 0059929, str.76-77) MS m/e 625.3 (M-l).

Primer 1- 23:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-18-(6-Amino-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l 4.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00314578) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin-6-ilamin korišćen u stupnju 4. MS (POS ESI) m/z 540.2 [osnovni (M<+>+l)-100(Boc grupa)].

Primer 1- 24:

( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-18-(2-Acetilamino-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-5-karboniloksi)-14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00314685) je sintetizovana prema postupku B, osim što je N-(4,5,6,7-tetrahidro-tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)-acetamid korišćen u stupnju 4. MS m/e 589.2 (M<+>+l-100).

Primer 1- 25:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(5-dimetilamino-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00315997) je sintetizovana prema postupku B, osim što je dimetil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin-5-il)-amin (Primer l-25a) korišćen u stupnju 4. MS m/e 668.0 (M<+>).

Primer l- 25a

Sinteza dimetil-(l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin-5-il)-amina je opisana u sledećoj šemi:

U rastvor 5-aminotetrahidroizohinolina (3.68 g, 24.8 mmol) u 1,4-dioksanu (100 ml) dodat je 3M NaOH (8.27 ml, 24.8 mmol). Posle hlađenja na 0°C dodat je (Boc)20 (5.42 g, 24.8 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) u kapima i mešan je u toku noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc (2x). Spojeni organski slojevi su isprani sa zas. vod. NaHC03rastvorom, vodom i rastvorom soli, zatim osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni od silika gela i dobijeno je 5.44 g (88%) željenog Boc-zaštićenog proizvoda kao bele čvrste supstance.

U rastvor proizvoda iz gore opisanog prethodnog stupnja (0.2 g, 0.81 mmol) u THF (5 ml) je dodat NaH na 0°C. Posle 15 minuta, dodat je CH3I i mešanje je nastavljeno u toku noći na sobnoj temepraturi. Posle završetka reakciona smeša je ohlađena sa hladnom vodom, ekstrahovana sa EtOAc (25 ml), osušena (Na2S04) i koncentrovana. Boe grupa je uklonjena sa 60% TFA-DCM (2 ml) na 0°C i dobijeno je 110 mg (77.5 %) krajnjeg jedinjenja kao svetio zelene čvrste supstance. MS: 177.1 (MH<1>").

Primer 1- 26:

( IS, 4R, 6S, \ 4S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00315998) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnju 4. 'HNMR (400 MHz, CDC13) 5 7.24-7.02 (m, 3H), 6.82 (s, IH), 5.68-5.51 (m, IH), 5.36 (s, IH), 5.11-4.96 (m, 2H), 4.67-4.44 (m, 5H), 4.29-4.20 (m, IH), 4.20-4.11 (m, IH), 3.82-3.74 (m, IH), 2.69-2.55 (m, IH), 2.31-2.15 (m, IH), 2.14-2.06 (m, IH), 2.03 (s, IH), 2.01-1.86 (m, IH), 1.86-1.24 (m, 11.0), 1.22 (s, 9H). MS m/e 644.9 (M<+>+2).

Primer 1- 27:

( IS,4R,6S,14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbomlamino-18-(5,6-dihloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00315999) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 5,6-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnju 4.<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 5 7.29 (s, IH), 7.22 (s, IH), 7.06 (s, IH), 5.57-5.50 (m, IH), 5.33 (s, IH), 5.23-5.09 (m, 2H), 4.73-4.65 (m, IH), 4.64-4.48 (m, 5H), 4.33-4.29 (m, IH), 4.11-4.02 (m, IH), 3.82-3.74 (m, IH), 2.73-2.61 (m, IH), 2.29-2.08 (m, 3H), 2.01 (s, IH), 1.83-1.65 (m, 2H), 1.63-1.46 (m, 2H), 1.40-1.12 (m, 15H). MS m/e 678.9 (M+),681 (M++2).

Primer 1- 28:

( IS,4R,6S, 14S, 18JR)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(4i?-metil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00320122) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4i?-metil-

1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4. (M<+>+l-100).<!>H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 7.02-7.24 (m, 3H), 5.59 (dd, IH), 5.30-5.44 (m, 2H), 4.66-4.81 (m, IH), 4.14-4.64 (m, 3H), 3.83-3.92 (m, IH), 3.58-3.81 (m, IH), 3.44-3.56 (m, IH), 2.86-3.86 (m, IH), 2.23-2.58 (m, 4H), 1.87-2.13 (m, 2H), 1.70-1.87 (m, IH), 1.50-1.70 (m, 3H), 1.07-1.51 (m, 19H), 0.80-0.96 (m, 2H). MS m/e 639.0 (M++1).

Primer 1- 29:

( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(45'-metil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00320123) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4S-metil-1,2,3,4-tetrahidro-izoindol korišćen u stupnju 4.<*>H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7.01-7.23 (m, 3H), 5.58 (dd, IH), 5.32-5.45 (m, 2H), 4.66-4.82 (m, IH), 4.12-4.64 (m, 3H), 3.86-3.94 (m, IH), 3.52-3.74 (m, IH), 3.43-3.56 (m, IH), 2.88-3.85 (m, IH), 2.24-2.60 (m, 4H), 1.87-2.15 (m, 2H), 1.71-1.87 (m, IH), 1.52-1.70 (m, 3H), 1.07-1.52 (m, 19H), 0.80-0.96 (m, 2H). MS m/z 639.0 (M<+>+1).

Primer 1- 30:

(15,4R, 6S,145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-[4-(2-metoksi-fenil)-piperidin-l -karboniloksi]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00320576) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 4-(2-metoksi-fenil)piperidin korišćen u stupnju 4. MS m/e 583.3 (M<+>+l-100).

Primer 1- 31:

(15, 4R, 65, 145,187?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(6-metoksi-l,3,4,9-tetrahidro-b-karbolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00320577) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 6-metoksi-2,3,4,9-tetrahidro-lH-b-karbolin korišćen u stupnju 4. MS m/e 594.2 (M<+>+l-100).

Primer 1- 32:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-18-(l-piperidin-1 -ilmetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00301383) je sintetizovana prema postupku B, osim što je 1-piperidin-l-ilmetil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4.<[>H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 7.33-7.24 (m, 4H), 7.20 (šir.s, IH), 6.61 (šir.s, IH), 5.75-5.52 (m, 2H), 5.50-5.33 (m, 2H), 4.63-4.43 (m, 2H), 4.42-4.07 (m, 4H), 3.96 (šir.s, IH), 3.67-3.11 (m, 5H), 3.06-2.88 (m, 2H), 2.86-2.74 (m, 2H), 2.56-2.35 (m, 3H), 2.23 (q, IH), 2.04-1.90 (m, 2H), 1.89-1.52 (m, 10H), 1.51-1.32 (m, 12H);. MS (POS APCI) m/z 722.3 (M<+>+l).

Primer 1- 33:

( IS,4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(6-metoksi-l-metoksimetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboks ilna kiselina (j edinj enj e AR00333842) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primeru 1-2, osim što je 6-metoksi-l-metoksimetil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin hlorid

korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI-) m/z 697.2 (M-l).

Primer 1- 34:

( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(5-fluoro-l-metoksimetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (j edinj enj e AR00365349) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je 5-fluoro-l-metoksimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin hlorid korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI-) m/z 685.3 (Ml).

Primer 1- 35:

( IS, 4R, 6S, 14S,<y>18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(l-dimetilaminometil-3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00333224) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je dimetil-(l,2,3,4-tetrahidro-izohinolin-l-ilmetil)-

amin (sintetizovan prema Primeru l-35a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI-) m/z 582.3 (MP<f->Boc).

Primer 1- 3 5 a:

Dimetil-(l,2,3,4-tetrahidro-izohinil-l-ilmetil)-amin je sintetizovan na sličan način kao što je prikazano u Primeru 3-76a, osim što u stupnju 1, fenetilamin korišćen da zameni 2-(3-metoksi-fenil)etilamin, a u prvom delu stupnja 3, dimetilamin je korišćen da zameni natrijum metoksid kao nukleofil. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem stupnju kuplovanja bez daljeg prečišćavanja.

Primer 1- 36:

( I<S>, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(l-morfolin-4-ilmetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [ 14.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (j edinj enj e AR00333225) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je 1-morfolin-4-metil- 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin (sintetizovan prema Primeru l-36a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI-) m/z 722.3 (M-l).

Primer l- 36a:

l-morfolin-4-metil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin je sintetizovan na sličan način kao što je prikazano u Primeru 3-76a, osim što je u stupnju 1, fenetilamin korišćen da zameni 2-(3-metoksi-fenil)etilamin, a u prvom delu stupnja 3, morfolin je korišćen da zameni natrijum metoksid kao nukleofil. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem stupnju kuplovanja bez daljeg prečišćavanja.

Primer 1- 37:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(6-metoksi-l-piperidin-1 -ilmetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00333248) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je 6-metoksi-l-piperidin-l-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin (sintetizovan prema Primeru l-37a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI-) m/z 750.4 (M-l).

Primer 1- 3 7a:

6-Metoksi-1 -piperidin-1 -ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin je sintetizovan na sličan način kao što je prikazano u Primeru 3-76a, osim što je u prvom delu stupnja 3, piperidin korišćen da zameni natrijum metoksid kao nukleofil. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem stupnju kuplovanja bez daljeg prečišćavanja.

Primer 1- 38:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(6-metoksi-l-morfolin-4-ilmetil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00333276) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je 6-metoksi-l-morfolin-4-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin (sintetizovan prema Primeru 1-38a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI-) m/z 750.3 (M-l).

Primer 1- 3 8a:

6-metoksi-1 -morfolin-4-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin je sintetizovan na sličan način kao što je prikazano u Primeru 3-76a, osim što je u prvom delu stupnja 3, morfolin korišćen da zameni natrijum metoksid kao nukleofil. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem stupnju kuplovanja bez daljeg prečišćavanja.

Primer 1- 39:

( IS, 4R, 6S, \ 4S,18^)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(l-dimetilaminometil-6-metoksi-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00333277) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je (6-metoksi-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin- 1-ilmetil)-dimetil-amin (sintetizovan prema Primeru l-39a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI+) m/z 712.3 (MH<+>).

Primer l- 39a:

(6-metoksi-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin-1 -ilmetil)-dimetil-amin je sintetizovan na sličan način kao što je prikazano u Primeru 3-76a, osim što je u prvom delu stupnja 3, dimetilamin korišćen da zameni natrijum metoksid kao nukleofil. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem stupnju kuplovanja bez daljeg prečišćavanja.

Primer 1- 40:

(15,4R, 6S,145, 18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-(4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00365369) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je 4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol (sintetizovan prema Primeru l-55a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4.<!>H NMR (500 MHz, DMSO) 8 12.21 (šir.s, IH), 8.66 (šir.s, IH), 7.35 (q, IH), 7.19 (d, IH), 7.11 (q, 2H), 7.03 (šir.s, IH), 5.51 (q, IH), 5.33-5.21 (m, 2H), 4.66 (s, 4H), 4.22 (q, IH), 4.24 (t, IH), 3.99-3.89 (m, IH), 3.73-3.64 (m, IH), 2.65-2.55 (m, IH), 2.28-2.08 (m, 3H), 1.77-1.61 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, IH), 1.42-1.03 (m, 16 H); MS (APCI-) m/z 627.3 (M-l).

Primer 1- 41:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-[5-(2-morfolin-4-il-etoksi)-1,3 -dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (jedinjenje AR00371946) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je 5-(2-morfolin-4-il-etoksi)-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen prema postupcima opisanim u J. Med. Chem. Lett. 2002, Vol. 45, br. 26, 5771, postupak pripremanja D i Bioorg. Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688. Korišćenje N-Boc zaštićeni amin: 'HNMR (500 MHz, CDC13) 5 7.13 (dd, IH), 6.85-6.74 (m, 2H), 4.61 (t, 4H), 4.10 (t, 2H), 3.73 (t, 4H), 2.81 (t, 2H), 2.61-2.54 (m, 4H), 1.51 (s, 9 H); MS (APCI+) m/z 349.1 (M+l)) da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI+) m/z 640.3

[(M+l)-Boc]

Primer 1- 42:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-Butoksikarbonilamino-18-[5-(2-dimetilamino-etoksi)-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (j edinj enj e AR00371947) je sintetizovana prema postupku opisanom u Primeru 1-2, osim što je [2-(2,3-dihidro-lH-izoindol-5-iloksi)-etil]-dimetil-amin (pripremljen prema postupcima opisanim u J. Med. Chem. Lett. 2002, Vol. 45, br. 26, 5771, postupak pripremanja D i Bioorg. Med. Chem. Lett. 11

(2001) 685-688. Korišćen je N-Boc zaštićeni amin:<*>H NMR (500 MHz, CDC13) 5 7.14 (dd, IH), 6.88-6.76 (m, 2H), 4.61 (t, 4H), 4.04 (t, 2H), 2.72 (t, 2H), 2.34 (s, 6H), 1.50 (s, 9 H); MS (APCI+) m/z 307.1 (M+l)) da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4. MS (APCI+) m/z 698.2 (M+l).

2. Pripremanje jedinjenja sa opštom strukturom III

Jedinjenja sa opštom strukturom II su pripremljna prema gore prikazanoj opštoj šemi. Jedinjenju sa strukturom laje prvo uklonja njena Boe zaštitna grupa, a zatim nukleofilnim napadom na amino grupu elektrofila obrazovan je karbamat, amid ili urea.

Primer 2- 1:

Stupanj 1: Dobijanje etil estra (15,4R, 65,145, 18J?)-14-amino-l8-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline

N-Boc zaštićeni polazni materijal (102 mg, 0.16 mmol) je rastvoren u 6 ml 4M HC1 (dioksana) i ostavljen na st u toku 90 min. HPLC je pokazao kompletno uklanjanje Boe zaštitne grupe. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, sakupljena sa acetonitrilom i koncentrovana ponovo dva puta. Rezultujuća svetio braon penasta supstanca je preneta u sledeći stupanj.

Stupanj 2: Dobijanje etil estra(15, 4R, 65, 145, 18/?)-14-

ciklopentiloksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-lH-izohinoIin-2-

karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-

karboksilne kiseline

U rastvor ciklopentanola (42 mg, 0.48 mmol) u THF (16 ml), dodat je toluenski rastvor fozgena (0.42 ml, 1.9 M, 0.80 mmol) u kapima. Smeša je mešana na st u toku 2 h da bi se obrazovao ciklopentil hloroformijatni reagens. Reakcija je koncentrovana na oko pola zapremine. Zatim je razblažena sa DCM do prvobitne zapremine i koncentrovana ponovo na polovinu zapremine, u cilju kompletnog uklanjanja viška fozgena. Ovaj rastvor ciklopentil hloroformijata je dalje razblažen sa THF (16 ml), ohlađen na 0°C i dodat u čvrsti ostatak (0.16 mmol) iz gornjeg stupnja 1 na 0°C. Zatm je dodat TEA (0.11 ml, 0.81 mmol) u reakcionu smešu i reakciona smeša je mešana na 0°C u toku 2 h. Reakcija je bila završena prema HPLC. Koncentrovana je, sakupljena sa EtOAc (15 ml) i zatim isprana sa vodom, zas. natrijum bikarbonatom, vodom i rastvorom soli (10 ml svaki), osušena iznad Na2S04i koncentrovana. Sirovi žućkast gust uljani ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na Biotage 40S (eluent=heksan/EtOAc 1:1), dajući željeni proizvod kao beo hrskavi penasti prah (65.2 mg, 63%). MS (Mf<f>665.2).

Stupanj 3. Dobijanje(15, 4R, 65, 145, 18J?)-14-

ciklopentiloksikarbonilamino-18-(3,4-dihidro-lH-izohinoIin-2-

karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-

karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00247310)

Praćenje isti postupak hidrolize kao u stupnju 5 Primera 1.1.

Sledeća jedinjenja su takođe pripremljena pomoću istog postupka kao gore pomenuti Primer 2-1, gde je ili ciklopentil hloroformijat supstitisan sa drugim elektrofilima i/ili P2-tetrahidroizohinolin je supstituisan sa drugim ulaznim aminom kao što je prikazano u stupnju 4 Postupka B u Primeru 1-2.

Primer 2- 2:

(15, 4R, 65,145, 18/?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-metoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00294376) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primeru 2-1, osim što je metil hloroformijat korišćen u stupnju 2.

Primer 2- 3:

( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-14-Ciklopentiloksikarbonilamino-18-(5-fluoro-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304074) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerima 1-2 i 2-1, osim što je 5-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 583.2 (M<+>+1).

Primer 2- 4:

( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-14-Ciklopentiloksikarbonilamino-2,15-diokso-18-(8-trifluorometil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304075) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerima 1-2 i 2-1, osim što je 8-trifluorometil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 705.1 (M<+>+l).

Primer 2- 5:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-Ciklopentiloksikarbonilamino-18-(l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek -7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304076) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerima 1-2 i 2-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 623.2 (M^+l).

Primer 2- 6:

( IS,4R, 6S, 14S,18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-(2-fluoro-etoksikarbonilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l 4.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304125) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerima 1-2 i 2-1, osim što je 2-fluoroetanol korišćen da se obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 umesto ciklopentanola. MS m/e 615.1 (M<+>+l).

Primer 2- 7:

(15,4R, 6S,145, 18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3 S-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklof 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304126) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primeru 2-1, osim što je tetrahidro-furan-3S-ol korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 umesto ciklopentanola. MS m/e 639.2 (M'+l).

Primer 2- 8:

(15,4R,65,145,18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3R-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304127) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primeru 2-1, osim što je tetrahidro-furan-3R-ol korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 umesto ciklopentanola. MS m/e 639.2 (M^+l).

Primer 2- 9:

(15,AR, 6S,145, 18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-4-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR.00320002) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primeru 2-1, osim što je tetrahidro-furan-4-ol korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 umesto ciklopentanola. MS m/e 653.2 (M'+l).

Primer 2- 10:

(15,4R,65, 145, 18^)-18-(l,3-Dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3 R-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320074) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerimal-2 i 2-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnja 4 Primera 1-2, i tetrahidro-furan-3R-ol je korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1 umesto ciklopentanola. MS m/e 625.2 (M<+>+l).

Primer 2- 11:

( IS, 4R, 6S, \ 4S,18i?)-18-(l,3-Dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3 S-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320075) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerimal-2 i 2-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnju 4 Primera 1-2, i tetrahidro-furan-3S-ol je korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1 umesto ciklopentanola. MS m/e 625.2 (M^+l).

Primer 2- 12:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-18-(l,3-Dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3 S-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320076) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerimal-2 i 2-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen u stupnju 4 Primera 1-2, i 2-fluoroetanol je korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1 umesto ciklopentanola. MS m/e 601.1 (M<+>+l).

Primer 2- 13:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-18-(l,3-Dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-piran-4-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320077) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerimal-2 i 2-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen umesto stupnja 4 Primera 1-2, i tetrahidro-piran-4-ol je korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1 umesto ciklopentanola. MS m/e 601.1 (M^+l).

Primer 2- 14:

( IS, 4R, 6S, 14S,lS^-lS^S^-Dihloro-l^-dihidro-izoindol^-karboniloksi)-2,15-diokso- 14-(tetrahidro-furan-3R-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320445) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerimal-2 i 2-1, osim što je 5,6-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen umesto stupnja 4 Primera 1-2, i tetrahidro-furan-3R-ol je korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1 umesto ciklopentanola. MS m/e 693.0 (M<+>), 695.1 (M<+>+2).

Primer 2- 15:

( IS, 4R, 6S,14S, 18i?)-18-(5-Hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3i?-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320448) je sintetizovana prema postupcima opisanim u Primerimal-2 i 2-1, osim stoje 5-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen umesto stupnja 4 Primera 1-2, i tetrahidro-furan-3^-ol je korišćen da obrazuje hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1 umesto ciklopentanola.<!>HNMR (500 MHz, CD3OD) 8 7.38 (s, IH), 7.32-7.28 (m, 2H), 7.22 (d, IH), 7.10 (šir.s, IH), 5.56-5.50 (q, IH), 5.42-5.38 (t, IH), 5.35 (šir.s, IH), 4.80-4.48 (m, 6H), 4.44 (m, IH), 4.16 (d, IH), 3.84 (dd, IH), 3.78-3.69 (m, IH), 3.68-3.60 (m, IH), 3.50 (t, IH), 2.55-2.36 (m, 3H), 2.21-2.12 (m, IH), 1.98-1.85 (m, IH), 1.72-1.62 (m, 2H), 1.61-1.51 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 9H); MS m/e 659.1 (M<+>), 661.1 ( h/ f+ 2).

Primer 2- 16:

(\ S, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-(Ciklopentankarbonil-amino)-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00248689)

Ciklopentil karboksilna kiselina je prvo naneta na PS-TFP smolu (nabavljenu od Argonaut Technologies) da bi se obrazovao aktivni estar. Aktivirani estar na smoli (26 mg, 1.16 mmol/g, 0.03 mmol) je prvo nabubrio u 0.5 ml hloroforma, a zatim je dodata MP-karbonatna smola (nabavljena od Argonaut Technologies, 300 mg, 2.5 mmol/g, 0.75 mmol). U ovu smešu smola je zatim dodat 0.5 M hloroformni rastvor makrocikličnog materijala (15 mg, 0.02 mmol) i reakcija je mućkana u toku noći na st. Reakcija je završena prema HPLC posle 16 h. Zatim je proceđena i koncentrovana, dajući čist N-acetilovani proizvod. Zatim je hidrolizovan pomoću istog postupka hidrolize kao stupnju 5 Primera 1-1 dajući željeni proizvod AR248689 kao belu čvrstu supstancu (12.5 mg, 88%). MS (APCI+): m/z 621.3 (MH4).

Primer 2- 17:

(15,4R, 6S,145, 18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-(2,2-dimetil-propilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00248687) je sintetizovana pomoću istih postupaka opisanih u Primeru 2-16, osim što je prvo terc-butil karboksilna kiselina naneta na PS-TFP smolu. MS (APCI+): m/z 609.3 (MH<4>).

Primer 2- 18:

(15,4R, 6S, 145,18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-izobutirilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00248688) je sintetizovana pomoću istih postupaka opisanih u Primeru 2-16, osim što je prvo izopropil karboksilna kiselina naneta na PS-TFP smolu. MS (APCI+): m/z 595.3 (MH4).

Primer 2- 19:

Sinteza(15, 4R, 65,145,18i?)-14-(2-terc-Butoksikarbonilamino-3-metil-butirilamino)-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00298989)

Etil estar 14-amino-18-(3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.04,6]nonadek-7-en-karboksilne kiseline (120 mg, 217 umol) i N-a-?-Boc-L-valin N-hidroksisukcinamidni estar (96 mg, 300 ul) su mešani zajedno u 1.1 ml dihlorometana u toku 14 sati. Rastvarač je uklonjenin vacuoi dodati su po 1 ml vode i etil acetata. Faze su odvojene i vodeni sloj je ispran dva puta sa 500 il etil acetata. Spojeni organski sloj je osušen iznad MgS04i rastvarači su uklonjeniin vacuoi dobijeno je željeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (132 mg, 81%). MS m/z 752.2 (M<+>+l).

Primer 2- 20:

( IS, 4R, 6S, 14S,187?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-{3-metil-2-[(pirazin-2-karbonil)-amino]-butirilamino}-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00301338) je sintetizovana pomoću istih postupaka opisanih u Primeru 2-19, osim što je 2,5-diokso-pirolidin-l-il estar 3-metil-2-[(pirazin-2-karbonil)-amino]buterne kiseline korišćen da zameni N-cc-t-Boc-L-valin-N-hidroksisukcinamidni estar. MS m/e 730.3 (M^+H).

Primer 2- 21:

( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-{2~[(6-dimetilamino-pirazin-3-karbonil)-amino]-3-metil-butirilamino}-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304072) je sintetizovana pomoću istih postupaka opisanih u Primeru 2-19, osim što je 2,5-diokso-pirolidin-l-il estar 2-[(6-dimetilamino-piridin-3-karbonil)-amino]-3-metil-buterne kiseline korišćen

da zameni N-a-t-Boc-L-valin-N-hidroksisukcinamidni estar.<*>H NMR (CD3OD, 500 MHz,) 8 8.69 (s, IH), 8.46 (s, IH), 8.37-8.39 (m, IH), 8.14-8.21 (m, 2H), 7.07-7.18 (m, 5H), 5.63 (q, IH), 5.36-5.42 (m, 2H), 4.49-4.56 (m, 3H), 4.42-4.45 (m, IH), 4.31-4.32 (m, IH), 3.92-3.95 (m, IH), 3.65-3.72 (m, 2H), 2.85-2.91 (m, 2H), 2.33-2.55 (m, 4H), 1.93-2.03 (m, 3H), 1.61-1.68 (m, 3H), 1.27-1.52 (m, 12H), 0.86-0.96 (m, 8H); MS m/e 770.4 (M-H).

Primer 2- 22:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-18-(3,4-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-14-{3-metil-2-[(piridin-3-karbonil)-amino]-butirilamino}-2,15-diokso-3,l 6-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304073) je sintetizovana pomoću istih postupaka opisanih u Primeru 2-19, osim što je 2,5-diokso-pirolidin-l-il estar 3-metil-2-[(piridin-3-karbonil)-amino]buterne kiseline korišćen da zameni N-a-t-Boc-L-valin-N-hidroksisukcinamidni estar. MS m/e 729.23 (M<+>+l).

Primer 2- 23:

(\ S, 4R, 6S, 14S,18^)-14-(2-amino-3-metil-butirilamino)-18-(3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>]

nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00298990) je pripremljeno pomoću istih postupaka opisanih u stupnju 1 Primera 2-1. MS m/e 624.2 (M<+>+l).

Primer 2- 24:

Sinteza(15,4R, 65,145,18/?)-14-(3-Ciklopentil-ureido)-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00294378)

Hidrohloridna so etil estra 14-amino-2,15-diokso-18-(8-trifluorometil-3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboniloksi)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]

nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (49 mg, 74 umol), diizopropiletilamina (29 mg, 222 ul) i ciklopentil izocijanata (25 mg, 222 umol) je sakupljena sa 375 ul dihlorometana i mešana na 19 C u toku 1 sata. Reakcija je naneta direktno na C18 fleš koloni i eluirana sa voda/acetonitril (10 do 100%) koji sadrži 0.1% TFA da bi se dobilo naslovno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (42 mg, 77%). MAm/ z732.2 (MH+).

Primer 2- 25:

( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-14-(3-terc-Butil-ureido)-18-(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04,6] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00294377) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je terc-butil izocijanat korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u postupcima Primera 2-24. MS m/e 624.1 (M'+l).

Primer 2- 26:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-(3-Ciklopentil-ureido)-18-(5-fluoro-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304077) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 5-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 654.2 (M^+l).

Primer 2- 27:

( IS,4R, 6S,14S, 18^)-14-(3-Ciklopentil-ureido)-2,15-diokso-18-(8-trifluorometil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-3,16-diaza-triciklo[l 4.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304078) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 8-trifluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 704.1 (M<+>+l).

Primer 2- 28:

( IS,4R,6S, 14S, 18i?)-14-(3-Ciklopentil-ureido)-18-(l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304079) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 622.2 (M<+>+l).

Primer 2- 29:

(15,4R,65,145,18i?)-14-(3-terc-Butil-ureido)-18-(l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00304078) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i što je terc-butil izocijanat korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u postupcima Primera 2-24. MS m/e 610.1 (M^+l).

Primer 2- 30:

(15,47?,65, 145, 18i?)-18-(l,3-Dihidro-lH-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3 -i l)-ureido-3,16-diaza-triciklo [ 14.3.0.0<4>'<6>] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320221) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 3-izocijanato-tetrahidrofuran korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u postupcima Primera 2-24. MS m/e 638.2 (M<+>+l).

Primer 2- 31:

( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-(3-terc-Butil-ureido)-18-(5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [ 14.3.0.04'6] nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320449) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2, i terc-butil izocijanat je korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u postupcima Primera 2-24.<l>HNMR (500 MHz,CD3OD) 5 7.34 (s, IH), 7.28-7.25 (m, 2H), 7.24 (s, IH), 7.20 (s, IH), 5.51 (m, 2H), 5.40 (s, IH), 4.73-4.60 (m, 3H), 4.53 (t, IH), 4.38 (d, IH), 4.28 (d, IH), 3.98 (dd, IH), 2.43 (m, 2H), 2.38-2.30 (m, IH), 2.12-2.00 (m, 2H), 1.81-1.70 (m, IH), 1.64-1.56 (m, 3H), 1.48-1.20 (m, 8H), 1.18 (s, 9H), MS m/e 644.0 (M<+>), 645.9 (M<+>+2).

Primer 2- 32:

( IS, 4R, 6S, \ 4S,18/?)-14-(3-terc-Butil-ureido)-18-(5,6-dihloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]

nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00320450) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 5,6-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2, i terc-butil izocijanat je korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u postupcima Primera 2-24.<[>H NMR (500 MHz,CD3OD) 5 7.50 (s, IH), 7.38 (s, IH), 5.56 (q, IH), 5.42-5.38 (m, 2H), 4.72-4.61 (m, 4H), 4.55 (t, IH), 4.34 (dd, IH), 4.28 (d, IH), 3.92 (dd, IH), 2.45-2.32 (m, 2H), 2.32-2.18 (m, IH), 2.08-2.00 (m, IH), 1.75-1.68 (m, IH), 1.63-1.54 (m, 3H), 1.50-1.22 (m, 8H), 1.18 (s, 9H), MS m/e 678.0 (M<4>), 680.0 (M<+>+2).

Primer 2- 33:

( IS,4R, 6S, US,18i?)-14-Ciklopentiloksikarbonilamino-18-(5-hloro-l-metoksimetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboniloksi)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje AR00365381) je sintetizovana pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 2-24, osim što je 5-hloro-l-metoksimetil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinoliinijum hlorid korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2, MS (APCI-): m/z 697.4 (M-l). 3. Pobijanje jedinjenja sa opštom strukturom IV

Jedinjenja sa opštom strukturom IV su pripremljena prema gore prikazanoj šemi (1. Khan et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett, 1997, 7 (23), 3017-3022.

2. Međunarodna prijava PCT/US02/39926, WO 03/053349).

Primer 3- 1:

Sinteza 14-terc-butoksikarbonilamino-4-ciklopropansuIfonilamino-karbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R,65, 145, 18i?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline

Jedinjenje #101 makrociklična kiselina (7 mg, 0.11 mmol) je rastvoreno u 0.1 ml DMF, a zatim je dodat CDI (1.8 mg, 0.011 mmol). Smeša je mešana na 40°C na uljanom kupatilu u toku 1 h. Zatim je dodat ciklopropilsulfonamid (2.0 mg, 0.017 mmol) u reakciju, a zatim DBU (1.7 g, 0.011 mmol). Reakcija je mešana na 40 C u toku noći. Posle 14 h, LCMS je pokazao da je reakcija završena. Reakcija je ohlađena na st, razdeljena između 2 ml EA i 2 ml 5% HC1 (vod.). Organski sloj je ispran sa vodom, bikarbom (2 ml, ea), zatim osušen (Na2S04). Sirova supstanca je sprana sa Biotage 12M (eluent=DCM:MeOH 20:1) dajući A00261407 (4.2 mg, 52%).

'HNMR (500 MHz,CDCl3) 5 0.80-2.10 (m, 25H), 2.20-2.27 (m, IH), 2.37-2.59 (m, 3H), 2.84 (m, IH), 3.60-3.70 (m, IH), 3.82-3.90 (m, IH), 4.20-4.30 (m, 2H), 4.45-4.70 (m, 5H), 4.95-5.05 (m, 2H), 5.30-5.48 (m, 2H), 5.74 (m, IH), 6.74 (m, IH), 7.0-7.23 (m, 4H); MS m/e 728 (M<+>+H).

Primer 3- 2:

14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-4-(propan-2-sulfonilamino-karbonil)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S, 14S,18^)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00261407) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 3-1, osim što je izopropil sulfonamid korišćen da zameni ciklopropil sulfonamid u stupnju kuplovanja. MS (APCI-): m/e 728.4 (M-l).

Primer 3- 3:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-metansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 6S, 14S,18i?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00254906) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 3-1, osim što je metil sulfonamid korišćen da zameni ciklopropil sulfonamid u stupnju kuplovanja.<!>HNMR (CDC13, 500 MHz) 5 1.20-1.52 (m, 16H), 1.54-1.98 (m, 5H), 2.20-2.30 (m, IH), 2.38-2.46 (m, IH), 2.47-2.59 (m, 3H), 2.84 (m, IH), 3.18 (s, 3H), 3.56-3.70 (m, IH), 3.82-3.90 (m, IH), 4.22-4.33 (m, 2H), 4.47-4.69 (m, 4H), 4.90-5.10 (m, 2H), 5.47 (šir.s, IH), 5.74 (m, IH), 6.74 (m, IH), 7.03-7.23 (m, 4H); MS m/e 701.9 (M<+>), 602.2 (osnovni, MHT-Boc grupa).

Primer 3- 4:

4-(Butan-1 -sulfonilaminokarbonil)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 6S,145, 18/?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00261409) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 3-1, osim što je n-butil sulfonamid korišćen da zameni ciklopropil sulfonamid u

stupnju kuplovanja. 'H NMR (CDC13, 500 MHz) 5 0.80-1.03 (m, 7H), 1.20-2.10 (m, 22H), 2.20-2.60 (m, 4H), 2.84 (m, IH), 3.20 (m, IH), 3.44 (m, IH), 3.65 (m, IH), 3.80-3.95 (m, IH), 4.20-4.34 (m, 2H), 4.50-4.65 (m, 4H), 4.95-5.05 (m, IH), 5.30-5.39 (m, IH), 5.44-5.49 (m, IH), 5.74 (m, IH), 6.74 (m, IH), 7.0-7.23 (m, 4H); MS m/e 743.3 (M<+>, APCI-).

Primer 3- 5:

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, \ 4S,18R)- 3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00282131) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 2-1 i 3-1; MS m/e 738.4 (M-l).

Primer 3- 6:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00294381) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-5 i 3-1. 'HNMR (CDCI3, 500 MHz) 5 0.89-2.08 (m, 25H), 2.21-2.28 (m, IH), 2.41-2.49 (m, IH), 2.51-2.61 (m, IH), 2.91 (m, IH), 2.83 (m, IH), 4.21 (m,

IH), 4.40 (d, J=l 1.7 Hz, IH), 4.53-4.80 (m, 5H), 4.95-5.04 (m, 2H), 5.47 (šir.s, IH), 5.72 (m, IH), 6.77 (m, IH), 7.16 (m, IH), 7.23-7.31 (m, 3H); MS m/e 712.3 (APCI-, M-H).

Primer 3- 7:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,18i?)-5-fluoro-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00298996) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 5-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2.<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 5 10.05 (s, IH), 8.12 (s, IH), 7.04 (s, IH), 6.84-6.73 (m, 2H), 6.70 (s, IH), 5.65 (q, IH), 5.40 (s, IH), 4.59 (m, 2H), 4.54-4.40 (m, 3H), 4.30-4.10 (m, 2H), 3.82-3.74 (m, IH), 3.72-3.51 (m, 2H), 2.92-2.68 (m, 3H), 2.55-2.30 (m, 3H), 2.21-2.15 (m, IH), 2.00-1.60 (m, 3H), 1.40-0.75(m, 18H); MS m/e 746.0 (M<+>).

Primer 3- 8:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,

1 4S,18i?)-8-trifluorometil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline

(Jedinjenje AR00298997) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 1-2 i 3-1, osim što je 8-trifluorometil- 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2.<l>H NMR (500 MHz, CDC13) 5 7.55 (dd, IH), 7.42 (dd, IH), 7.35 (t, IH), 5.71-5.61 (m, IH), 5.40 (m, IH), 4.60 (m, IH), 4.52 (m, IH), 4.42 (m, IH), 4.15 (m, IH), 3.91 (m, IH), 3.78-3.62 (m, 2H), 3.00-2.82 (m, 3H), 2.58-2.52 (m, 3H), 2.51-2.32 (m, 2H), 1.86-1.56 (m, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.32-1.21 (m, 5H), 1.04-0.98 (m, 14 H); MS m/e 795.9 (M<4>).

Primer 3- 9:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,187?)-7-hloro-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00301746) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 1-2 i 3-1, osim što je 7-hloro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. ^NMR (400 MHz, CDCI3) 5 10.10 (s, IH), 7.08 (d, IH), 7.02-6.96 (m, 2H), 6.60 (d, IH), 5.64 (q, IH), 5.40 (s, IH), 4.92-4.41 (m, 2H), 4.55-4.40 (m, 3H), 4.28-4.12 (m, 2H), 3.82-3.75 (m, IH), 3.65-3.46 (m, 3H), 2.88-2.80 (m, IH), 2.78-2.56 (m, 2H), 2.52-2.42 (m, IH), 2.38-2.30 (m, IH), 2.21-2.12 (q, IH), 1.82-1.74 (m, 2H), 1.45-1.12 (m, 16 H), 1.10-0.98 (m, 2H), 0.90-0.75 (m, 2H);MS m/e 761.9 (M+).

Primer 3- 10:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,18i?)-6-trifluorometil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00301747) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 1-2 i 3-1, osim stoje 6-trifluorometil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2.<!>H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.44 (m, 2H), 7.38-7.30 (m, IH), 7.28-7.24 (m, IH), 5.65 (q, IH), 5.40 (m, IH), 5.08 (m, IH), 4.56 (šir.s, 2H), 4.60-4.50 (m, IH), 4.48 (m, IH), 4.15 (d, IH), 3.88 (d, IH), 3.75-3.67 (m, 2H), 2.93-2.82 (m, 3H), 2.66-2.54 (m, IH), 2.52-2.44 (m, IH), 2.42-2.40 (m, 2H), 1.91-1.76 (m, 2H), 1.74-1.70 (dd, 1 H), 1.64-1.58 (m, IH), 1.54-1.36 (m, 4H), 1.34-1.25 (m, 12H), 1.50-1.20 (m, 2H), 1.00-0.70 (m, IH), 0.52-0.34 (m, IH). MS m/e 795.9 (M<4>).

Primer 3- 11:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-6-fluoro-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline

(Jedinjenje AR00301751) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 1-2 i 3-1, osim stoje 6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. 'H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.21-7.02 (m, IH), 6.92 (m, 2H), 6.92 (m, 2H), 5.68 (q, IH), 5.40 (m, IH), 5.08 (t, IH), 4.58 (m, 2H), 4.45 (m, IH), 4.12 (d, IH), 3.88 (d, IH), 3.78-3.60 (m, 3H), 2.86-2.72 (m, 3H), 2.71-2.61 (m, IH), 2.52-2.42 (m, IH), 2.41-2.34 (m, IH), 1.88-1.76 (m, 2H), 1.74-1.70 (m, IH), 1.64-1.58 (m, 1 H), 1.56-1.38 (m, 2H), 1.37-1.24 (m, 14H), 1.13-1.04 (m, 2H), 1.02-0.89 (m, IH), 0.88-0.82 (m, IH); MS m/e 746.0 (M<4>). MS m/e 757.2 (M<+>+1).

Primer 3- 12:

14-(3-ciklopentil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-fluoro-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00304080) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 5-fluoro- 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2.

Primer 3- 13:

14-(3 -Ciklopentil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(15, 4R, 6S,145, 18i?)-8-trifluorometil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00304081) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 8-trifluoro-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 807.2 (M<+>+l).

Primer 3- 14:

14-(3-Ciklopentil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>l<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 65, 145,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00304082) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/e 725.2 (M<+>+l).

Primer 3- 15:

4-CiWopropansulfonilaminokarbonil-14-(2-fluoro-etoksikarbonilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar ( IS,4R, 6S, 14S,18i?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00304161) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1 -2, 2-1 i 3-1, osim što je 2-fluoroetanol korišćen da zameni hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1, umesto ciklopentanola. MS m/e 718.1 (M<+>+1).

Primer 3- 16:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,lSR)- 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00304162) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je tetrahidro-furan-31S,-ol korišćen da zameni hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1, umesto ciklopentanola. MS m/e 742.1 (M<+>+l).

Primer 3- 17:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3/?-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,\ 8R)- 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00304163) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je tetrahidro-furan-3i?-ol korišćen da zameni hloroformijatni reagens u stupnju 2 Primera 2-1, umesto ciklopentanola.<*>HNMR (d<6->benzen, 500 MHz,) 5 10.53 (s, IH), 6.78-6.96 (m, 4H), 5.83-5.90 (m, IH), 5.66 (q, IH), 5.18-5.21 (m, IH), 5.13 (šir.s, IH), 5.04 (šir.s, IH), 4.41-4.87 (m, 3H), 3.85-4.05 (m, 4H), 3.67-3.74 (m, IH), 3.46-3.53 (m, 3H), 3.23-3.34 (m, IH), 2.80-2.85 (m, IH), 2.34-2.59 (m, 4H), 1.84-1.99 (m, 4H), 0.98-1.60 (m, 14H), 0.42-0.47 (m, IH), 0.27-0.32 (m, 1 H);MS m/e 741.2 (M-l).

Primer 3- 18:

14-terc-Butoksikarbonilamino-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar ( I<S>,4R, 6S, 14S,18i?)-2-fenilamino-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-5-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00311814) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je fenil-(4,5,6,7-tetrahidro-

tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)amin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2; MS m/e 826.2 (M<+>+l).

Primer 3- 19:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S, 14S,18i?)-l-piperidin-l-ilmetil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00311815) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 1 -piperidin- 1-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2;<!>HNMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.94 (d, IH), 7.59 (s, IH), 7.31-7.23 (m, 3H), 7.22-7.15 (m, 2H), 5.74-5.64 (m, 2H), 5.47 (šir.s, IH), 5.06 (t, IH), 4.54 (dt, IH), 4.40-4.17 (m, 4H), 4.11-4.04 (m, IH), 3.96-3.88 (m, IH), 3.75-3.40 (m, 5H), 3.14-2.32 (m, 7H), 2.05 (dd, IH), 1.99-1.68 (m, 5H), 1.65-0.95 (m, 24H); MS (POS ESI) m/z 825.4 (M<*>).

Primer 3- 20:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (IS,4R, 6S, 1 AS,18i?)-4,4-spirociklobutil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00312024) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 4,4-spirociklobutil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2; 'HNMR (400 MHz, CD3OD) 5 7.54-7.60 (m, IH), 7.26 (dd, IH), 6.97-7.21 (m, IH), 5.66 (dd, IH), 5.37-5.48 (m, IH), 5.11 (dd, IH), 4.58 (s, 2H), 4.39 (t, 3H), 4.11-4.26 (m, IH), 3.77-3.96 (m, IH), 3.87 (t, 3H), 3.60-3.70 (m, IH), 2.83-2.93 (m, IH), 2.23-2.68 (m, 6H), 1.70-2.23 (m, 7H), 1.18-1.69 (m, 18H), 0.81-1.12 (m, 3H); MS m/z 767.9 (M<+>+l).

Primer 3- 21:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-4,4-dimetil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00312025) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 4,4-dimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2;<[>H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.31-7.40 (m, IH), 6.97-7.23 (m, 3H), 5.67 (dd, IH), 5.34-5.49 (m, IH), 5.09 (dd, IH), 4.64 (s, IH), 4.50-4.61 (m, IH), 4.33-4.44 (m, 3H), 4.11-4.24 (m, 1.0), 3.82-3.95 (m, 3H), 3.36-3.55 (m, 2H), 2.84-2.94 (m, IH), 2.25-2.69 (m, 411), 1.68-2.24 (m, 4H), 1.15-1.68 (m, 23H), 0.81-1.15 (m, 3H); MS m/z 756.0 (M<+>+1).

Primer 3- 22:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 65,145, 18i?)-4-metil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00312026) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 4-metil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2;<!>H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 7.76 (s, IH), 6.98-7.24 (m, 3H), 5.67 (dd, IH), 5.2-5.51 (m, IH), 5.04-5.15 (dd, IH), 4.28-4.63 (m, 5H), 4.10-4.24 (m, IH), 3.81-3.96 (m, 3H), 3.37-3.78 (m, 2H), 2.83-3.06 (m, 2H), 2.54-2.71 (m, IH), 2.25-2.54 (m, 3H), 1.69-1.94 (m, 3H), 1.16-1.69 (m, 20H), 0.81-1.15 (3H); MS m/z 742.0 (M++l).

Primer 3- 23:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso- 14-(tetrahidro-furan-3-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R,65, 145, 187?)-4,4-spirociklobutil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-

karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00314635) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 4,4-spirociklobutil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i tetrahidro-furan-3Z?-ol da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se obrazovao hloroformijatni reagens. 'HNMR (500 MHz, CD2C12) 8 10.24-10.29 (s, IH), 7.49-7.55 (m, IH), 7.24 (dd, IH), 7.14 (dd, IH), 7.04 (dd, IH), 6.81 (d, IH), 5.71 (dd, IH), 4.95 (dd, IH), 4.90 (šir.s, IH), 4.48-4.59 (m, 3H), 4.17-4.30 (m, 2H), 3.51-3.74 (m, 3H), 3.51-3.72 (m, 6H), 2.80-2.86 (m, IH), 2.36-2.54 (m, 3H), 2.10-2.33 (m, 4H), 1.80-2.10 (m, 6H), 1.24-1.80 (m, 7H), 0.65-1.24 (m, 10 H); MS m/z 741.2 (M<+>+l).

Primer 3- 24:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-35'-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, US,18i?)-4,4-dimetil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00314654) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 4,4-dimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i tetrahidro-furan-35'-ol da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se obrazovao hloroformijatni reagens. 'HNMR (500 MHz, CD2C12) 8 8.51-8.64 (šir.s, IH), 7.26-7.36 (m, IH), 7.09-7.19 (m, 2H), 6.98-7.08 (m, IH), 5.70 (dd, IH), 4.95 (dd, IH), 4.83 (d, IH), 4.44-4.72 (m, 3H), 4.17-4.30 (m, 2H), 3.25-3.91 (m, 9H), 2.80-2.86 (m, IH), 2.35-2.55 (m, 4H), 2.13-2.34 (m, 4H), 1.91-2.07 (m, 2H), 1.80-1.90 (m, 2H), 1.66-1.80 (m, 2H), 1.51-1.63 (m, 2H), 1.30-1.51 (m, 2H), 0.96-1.15 (m, 3 H), 0.65-0.95 (m, 9H); MS m/z 770.1 (M<+>+l).

Primer 3- 25:

14-(3-terc-Butil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar ( IS,4R, 6S, 14S,18i?)-4-metil-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00314656) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 4-metil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i t-butil izocijanat da zameni ciklopentil izocijanat u Primeru 2-24.<!>H NMR (500 MHz, CD2C12) 5 7.60-7.72 (m, IH), 7.06-7.48 (m, 4H), 5.73 (dd, IH), 5.39-5.48 (m, IH), 5.18-5.27 (šir.s, IH), 4.98 (dd, IH), 4.79-4.90 (šir.s, IH), 4.30-4.72 (m, 4H), 3.40-3.77 (m, 5H), 2.97 (d, IH), 2.83-2.90 (m, IH), 2.37-2.58 (m, 3H), 2.17-2.30 (dt, IH), 2.22-2.35 (dt, IH), 1.97-2.07 (m, IH), 1.82-1.95 (m, 2H), 1.68-1.79 (m, IH), 1.55-1.66 (m, 2H), 1.05-1.55 (m, 15 H), 0.83-0.98 (m, 3H); MS m/z 741.2 (M<+>+l).

Primer 3- 26:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S, \ 4S,18/?)-3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje

AR00314719) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primeru 1-22, i 3-1. MS m/e 630.2 (M<+>+l-100).

Primer 3- 27:

14-(3-terc-Butil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 6S,145, 1 8R)- 3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinj enj e AR00320001) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je t-butil izocijanat korišćen da zameni ciklopentil izocjanat u Primeru 2-24. MS m/e 725.7 (M-l).

Primer 3- 28:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-(2-fluoro-etoksikarbonilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(15, 4R, 65, 145,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320073) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i 2-fluoroetanol da zameni

ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi obrazovao hloroformijatni reagens. MS m/e 704 (M<+>+l).

Primer 3- 29:

<9

N—

?O

Jedinjenje AR00320079

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,14S, 187?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320079) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i tetrahidro-furan-3i?-ol da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi obrazovao hloroformijatni reagens. MS m/e 728.1 (M^+l).

Primer 3- 30:

6}

N

?C

??<1

Jedinjenje AR00320080

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso- 14-(tetrahidro-furan-35'-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, \ 4S,187?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320080) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u

Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i tetrahidro-furan-25-ol da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se obrazovao hloroformijatni reagens. MS m/e 728.1 (M^+l).

Primer 3- 31:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-piran-4-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320081) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i tetrahidro-piran-4-ol da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se obrazovao hloroformijatni reagens. MS m/e 742.1 (M^+l).

Primer 3- 32:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-piran-4-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,\ SR)- 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320082) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je tetrahidro-piran-4-ol korišćen da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se obrazovao hloroformijatni reagens. MS m/e 756.1 (M^+l).

Primer 3- 33:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320119) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2.<*>HNMR (500 MHz, CD3OD) 8 7.36 (s, IH), 7.30 (s, IH), 7.28 (s, IH), 7.22 (s, IH), 7.12-7.20 (m, IH), 6.64 (šir.s, IH), 5.72-5.64 (m, IH), 5.41 (s, IH), 5.14-5.04 (m, IH), 4.80-4.62 (m, 2H), 4.61-4.56 (t, IH), 4.54-4.48 (m, IH), 4.10 (d, IH), 3.85 (d, IH), 2.90 (m, IH), 2.65 (šir.s, IH), 2.54-2.48 (m, IH), 2.46-2.32 (m, 2H), 1.91-1.72 (m, 2 H), 1.64-1.56 (m, 2H), 1.56-1.21 (m, 8H), 1.18 (s, 9H), 1.12-1.05 (m, IH), 1.00 (m, IH), 0.94-0.82 (m, 2H); MS m/e 747.9 (M<+>).

Primer 3- 34:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 6S,145, 18i?)-5-dimetilamino-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320120) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je dimetil-( 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin-5-il)amin (Primer l-25a) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. JH NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.08 (s, IH), 7.13-7.05 (m, IH), 6.88-6.81 (d, IH), 6.77 (d, IH), 6.68 (d, IH), 6.61-6.53 (s, IH), 5.71-5.60 (q, IH), 5.40 (s, IH), 5.00-4.88 (m, 2H), 4.55-4.38 (m, 3H), 4.24-4.16 (m, 2H), 3.88-3.77 (d, IH), 3.64-3.41 (m, 3H), 2.91-2.69 (m, 3H), 2.61 (s, 6H), 2.53-2.41 (m, 2H), 2.40-2.39 (m, IH), 2.22-2.11 (m, IH), 1.89-1.72 (m, 1 H), 1.61-1.22 (m, 10H), 1.18 (s, 9H), 1.09-0.97 (m, 2H), 0.91-0.76 (m, 2H); MS m/e 771.1 (M<+>), 772.1 (M<+>+1), 773.1 (M<+>+2).

Primer 3- 35:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar (15,4R,65,

14S,18i?)-5,6-dihloro-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320121) je sintetizovan pomoću postupaka opisanihuPrimerima 1-2 i 3-1, osim što je 5,6-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2.<!>H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.52 (s, IH), 7.38 (s, IH), 6.61 (šir.s, IH), 5.72-5.65 (q, IH), 5.40 (s, IH), 5.08 (t, IH), 4.78-4.62 (m, 3H), 4.63-4.57 (t, IH), 4.50 (d, IH), 4.20 (d, IH), 3.65 (d, IH), 2.90 (m, IH), 2.55 (m, IH), 2.52-2.45 (m, IH), 2.46-2.31 (m, 2H), 1.91-1.75 (m, 3H), 1.67-1.60 (m, IH), 1.58-1.25 (m, 8H), 1.18 (s, 9H), 1.12-1.05 (m, 2 H), 1.04-0.81 (m, 2H); MS m/e 781.9 (M4),.

Primer 3- 36:

14-(3-terc-Butil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18ič)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320220) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i što je t-butil izocijanat korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u Primeru 2-24. MS m/e 713.1 (M<T>+1).

Primer 3- 37:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-[3-(tetrahidro-furan-3-il)-ureido]-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320222) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 3-izocijanato-tetrahidro-furan korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u Primeru 2-24. MS m/e 740.8 (M^+l).

Primer 3- 38:

14-(3-Ciklopentil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,1 8R)- 3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320403) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1. MS m/e 739.2 (M<+>+l).

Primer 3- 39:

14_(34erc-Butil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2J5-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R,65, 145, 18i?)-5-hloro-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320446) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i što je t-butil izocijanat korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u Primer 2-24.<!>HNMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.35 (s, IH), 7.28 (s, IH), 7.26 (s, IH), 7.02 (s, IH), 7.18 (s, IH), 5.65-5.72 (q, IH), 5.45 (s, IH), 5.06 (t, IH), 4.74-4.60 (m, 4H), 4.56 (t, IH), 4.46 (m, IH), 4.22 (d, IH), 3.87-3.91 (dd, IH), 2.86-2.94 (m, IH), 2.65-2.54 (m, IH), 2.52-2.45 (m, IH), 2.42-2.34 (m, 2H), 1.92-1.83 (m, IH), 1.78-1.70 (m, 2 H), 1.62-1.56 (m, IH), 1.54-3.92 (m, 4H), 1.39-1.23 (m, 7H), 1.12 (s, 9H), 1.02-0.98 (m, IH), 0.94-0.86 (m, IH); MS m/e 747.1 (M<4>), 749.1 (M++2).

Primer 3- 40:

14-(3-terc-Butil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5,6-dihloro-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320447) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 5,6-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2 i što je t-butil izocijanat korišćen da zameni ciklopentil izocijanat u Primeru 2-24. MS m/e781.1(M4), 783-1 (1VT+2).

Primer 3- 41:

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S,1 4S,1 SR)-1 -piperidin-1 -ilmetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilnekiseline (Jedinjenje AR00320506) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 1-piperidin-1-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS (POS ESI) m/z 837.4 (M<4>).

Primer 3- 42:

4-Benzensulfonilaminokarbonil- 14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,14S, 1 SR)- 3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320547) je sintetizovan pomoću postupaka .opisanih u Primerima 1-2, i 3-1, osim što je benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropilsulfonamid u stupnju kuplovanja iz Primera 3-1. MS m/e 762.3 (M-l).

Primer 3- 43:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-metoksi-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320548) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 4-metoksi-benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropilsulfonamid u stupnju kuplovanja iz Primera 3-1. MS m/e 792.3 (M-l).

Primer 3- 44:

14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-4-(toluen-4-sulfonilamino-karbonil)-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar ( IS,4R,

6S, 14S,lSR)- 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksiIne kiseline (Jedinjenje AR00320549) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što je 4-metil-benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropilsulfonamid u stupnju kuplovanja iz Primera 3-1. MS m/e 776.3 (M<+>+1).

Primer 3- 45:

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,

1 4S, 1 SR)-1 -piperidin-1 R-ilmetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne

kiseline (Jedinjenje AR00320556) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 1-piperidin-17?-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. }H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.99 (šir.s, IH), 7.34-7.13 (m, 6H), 5.75-5.65 (m, 2H), 5.44 (šir.s, IH), 5.06 (t, IH), 4.60 (t, IH), 4.51 (d, IH), 4.44-4.16 (m, 2H), 4.12-3.97 (m, 2H), 3.86 (d, IH), 3.75-3.38 (m, 2H), 3.07 (t, 2H), 3.07 (t, 2H), 2.96-2.86 (m, IH), 2.78 (d, IH), 2.66 (šir.s, IH), 2.56-2.26 (m, 3H), 2.06 (d, IH), 1.99-1.66 (m, 10 H), 1.65-1.21 (m, 18H), 1.15-0.95 (m, 3H); MS (POS ESI) m/z 837.4

(M<+>).

Primer 3- 46:

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciMopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S,1 4S,1 SR)-1 -piperidin-1 S-ilmetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilnekiseline (Jedinjenje AR00320557) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 1 -piperidin-lS-ilmetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. 'HNMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.32-7.14 (m, 6H), 6.87 (šir.s, IH), 5.72-5.60 (m, 2H), 5.47-5.39 (m, IH), 5.11 (šir.s, IH), 4.58 (t, IH), 4.53-3.86 (m, 8H), 3.67-3.40 (m, 2H), 3.08-2.85 (m, IH), 2.78 (d, IH), 2.65-2.24 (m, 4H), 2.10-1.22 (m, 27H), 1.19 (dt, IH), 1.10-1.02 (m, 2H), 1.01-0.93 (m, IH), 0.89 (q, IH); MS (POS ESI) m/z 837.4 (M<+>).

Primer 3- 47:

14-(3-Ciklopentil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320574) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2,

2-24 i 3-1, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/z 759.1 (M<*>), 761.1 (M<+>+2).

Primer 3- 48:

14-(3-Ciklopentil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (IS,4R, 6S, 14S,18i?)-5,6-dihloro-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320575) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-24 i 3-1, osim što je 5,6-dihloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin u stupnju 4 Primera 1-2. MS m/z 793.1

(M+).

Primer 3- 49:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(2,2,2-trifluoro-etoksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar ( IS,4R,6S, \ 4S, \ 8R)- 3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320574) je sintetizovan pomoću postupaka

opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 2,2,2-trifluoro-etanol korišćen da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se dobio hloroformijatni reagens. MS m/z 754.0 (M'+l).

Primer 3- 50:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-(2,2-difluoro-etoksikarbonilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,lSR)- 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320579) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 2,2-difluoro-etanol korišćen da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se dobio hloroformijatni reagens. MS m/z 736.0 (Tvf+1).

Primer 3- 51:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-(2-fluoro-1 -fluorometil-etoksikarbonilamino)-2,15 -di okso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,l& R)- 3,4-dihidro- lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320580) je sintetizovan pomoću

postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je 1,3-difluoro-propan-2-ol korišćen da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se dobio hloroformijatni reagens. MS m/z 750.1 (M'+l).

Primer 3- 52:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(2,2,2-trifluoro-1 - metil-etoksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,lSR)- 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00320581) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je l,l,l-trifluoro-propan-2-ol korišćen da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se dobio hloroformijatni reagens. MS m/z 768.1 (M^+l).

Primer 3- 53:

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(2,2,2-tri fluoro-1,1-dimetil-etoksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (IS,4R, 6S, 14S,18i?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne

kiseline (Jedinjenje AR00320582) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2, 2-1 i 3-1, osim što je l,l,l-trifluoro-2-metil-propan-2-ol korišćen da zameni ciklopentanol u stupnju 2 Primera 2-1 da bi se dobio hloroformijatni reagens. MS m/z 782.1 (M^+l).

Primer 3- 54:

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00324375) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-22, 2-1 i 3-1. MS m/z 740.5 (M<+>+1).

Primer 3- 55:

14-terc-Butoksikarbonilaraino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza- triciklo[14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS,

4R,6iS,14S,18/?)-4-fIuoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline

(Jedinjenje AR00334191) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što u stupnju 4 Primera 1-2 je korišćen 4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol kao zamena za 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin.<*>H

NMR (500 MHz, ^-aceton) 5 10.70 (šir.s, IH), 8.34 (d, IH), 7.39-7.33 (m, IH), 7.20 (d, IH), 7.10-7.02 (m, 2H), 6.13 (d, IH), 5.70 (q, IH), 5.44 (šir.s, IH), 4.99 (t, IH), 4.78-4.59 (m, 5H), 4.18-4.08 (m, IH), 3.88-3.81 (m, IH), 2.86-2.78 (m, 3H), 2.71-2.60 (m, IH), 2.52-2.35 (m, 3H), 1.92-1.81 (m, 2H), 1.75 (t, IH), 1.61-1.14 (m, 17H), 1.04-0.95 (m, 2H);-APCI MS m/z 730.4 (M-l).

Primer 3- 5 5 a

4-Fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindolkorišćen u primeru 3-55 je pripremljen u sledeća dva stupnja:

Stupanj 1:

Najbolji rezultati su dobijeni kada se polazni materijal u 0.5 M formamidu zagreva na 125°C u toku 1 do 5 h u zavisnosti od količine. Polazni materijal nije rastvoran u foramidu dok temperature nije >60°C. Posle završetka reakcija koja je praćena sa LC/MS ('apcineg'), uklonjeno je zagrevanje i dodata je trostuka zapremina vode u reakciju. Zatim je omogućeno da se reakcija zagreje na sobnu temepraturu i meša do obrazovanja bledo žutog taloga. Proizvod žute čvrste supstance je proceđen i ispran sa vodom pre sušenja u toku noći i dobijen je prinos između 70-77%.

Stupanj 2:

U polazni materijal u balonu sa okruglim dnom dodato je 4 ekvivalenta IM BH3-THF u kapima koristeći kapalicu da bi se obrazovano zlatni rastvor koji je posle zagrevanja i mešanja postao bakarne boje. Reakcija je grejana do refluksa u toku 18 h.

Reakcija je zatim ohlađena na sobnu temperatui (st) a zatim na 0°C u ledenom kupatilu. Dodato je 4 ekvivalenta MeOH u kapima i leđno kupatilo je uklonjeno tako da se reakcija zagrejala do st. U toku zagrevanja reakcija je dobila tamnu boju. U kapima je dodato 6M HC1 na st dok pH papir nije pokazao da je reakcija kisela i reakcija je refluktovana (63°C) u toku 1 h. Reakcija je zatim ohlađena do st. U ovoj tačci reakcija je koncentrovana i isprana sa Et20 (2x) i DCM (2X). Vodeni sloj je zatim doveden do pH=l 1 sa peletama NaOH. Dodato je još vode i vodeni sloj je ekstrahovan sa etrom (4x). Spojeni ekstrakti su osušeni iznad Na2S04i koncentrovani i dobijen je proizvod kao svetio braon obojeno ulje, koje je direktno korišćeno. Povraćaj mase je uvek bio nešto viši nego teoretski, ali je materijal korišćen sirov kao bi se dobio prinos >80% u sledećem stupnju.

Primer 3- 56:

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR0033833) je sintetizovan pomoću postupaka opisanih u Primerima 1-2 i 3-1, osim što u analognim stupnjevima Primera 1-2, korišćen je u stupnju 4 2,3-dihidro-lH-izoindol i proizvod premeštanja zatvaranja prstena 10 iz stupnja 3 Primera 1-2 je dalje redukovan sa H2/Rh-Al203pre sledećeg stupnja kuplovanja prema postupku u literaturi (WO 0059929, str,76-77).<!>H NMR (400 MHz, CD3SOCD3) 5 11.11 (s, IH), 8.89 (s, IH), 7.16-7.29 (m, 4H), 6.95 (d, IH), 5.25 (šir.s, IH), 4.50-4.60 (šir.s, 4H), 4.40 (dd, IH), 4.23 (d, IH), 3.93 (m, IH), 3.68 (d, IH), 2.92 (m, IH), 2.32 (dd, IH), 2.11 (m, IH), 1.40-1.68 (m, 2H), 0.92-1.40 (m, 19H); MS m/z 717.0 (M+l).

Primer 3- 57: 14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-amino-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334286) je sintetizovan pomoću postupaka prikazanih na sledećoj šemi: Stupanj 1: Sinteza etil estra( IS, 4R, 6S, 145*,18i?)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-18-triizopropilsilaniloksi-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline. U rastvor slobodnog hidroksimakrocikličnog intermedijera (jedinjenje 10 Primera 1-2, 5.0 g, 10.1 mmol) u DriSlove DCM (30 ml) dodat je imidazol (827 mg, 1.2 ekv.) i TIPSC1 (2.15 g, 1.1 ekv.). Reakciona smeša je mešana na ST u toku 18 h. TLC (5% MeOH-DCM) je pokazao značajnu količinu zaostalog SM. U ovu reakcionu smešu je dodato još imidazola (410 mg), TIPSCI (1 g) i DMAP (121 mg). Posle mešanja u toku noći, reakciona smeša je pokazala malu količinu preostalog SM. Reakciona smeša je isprana sa vodom (2 x 25 ml). Spojeni vodeni slojevi su ponovo isprani sa DCM (25 ml). Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani i dobijeno je svetio žućkasto ulje. Sirovi materijal je korišćen u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

Stupanj 2. Sinteza( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-14-terc-butoksikarbonilamino-2.15- diokso-18-triizopropilsilaniloksi-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]

nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline. Estar SM iz stupnja 1 je prvo rastvoren u smeši THF (20 ml) i MeOH (20 ml). U ovu smešu je zatim dodat LiOH-H20 (2.1 g, 50 mmol) u vodi (10 ml) i mešan u toku 12 h na ST. LCMS je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je koncentrovana do gotovo suvog. Čvrsti ostatak je zatim rastvoren u 50 ml vode, zakišeljen sa 2M HC1 i ekstrahvoan sa EtOAc (2 x 50 ml). Spojeni organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog Na2S04i koncentrovani. Sirovi materijal je korišćen u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

Stupanj 3. Sinteza terc-butil estra(\ S, 4R, 6S, 14S, 18i?)-(4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-18-triizopropilsilaniloksi-3.16- diaza-triciklo[14.3.0.04'6]nonadek-7-en-4-karbaminske kiseline. Sirovi kiseli SM iz gornjeg stupnja 2 je prvo rastvoren u 25 ml DriSolve 1,2-dihloroetana. U ovaj rastvor dodat je CDI (2.2 g, 13.8 mmol) u jednoj porciji i reakcija je mešana u toku 50°C u toku 3 h. Zatim je u reakciju dodat ciklopropil sulfamid (3.3 g, 27.5 mmol), a zatim DBU (4.2 g, 27.5 mmol) i reakcija je mešana na 50°C u toku 4 h. LCMS je pokazao da je reakcija završena. Za obradu, reakciona smeša je isprana sa vodom (2 x 50 ml) i organski sloj je osušen (anhid. Na2S04) i koncentrovan. Sirovi materijal je korišćen u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

Stupanj 4. Sinteza terc-butil estra( IS, 4R, 6S, 14S, lSR)-( 4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-18-hidroksi-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karbaminske kiseline. Sirovi proizvod iz gornjeg stupnja 3 je prvo rastvoren u THF (40 ml). U ovaj rastvor zatim je dodat TBAF (3.6 g, 13.7 mmol, 1.5 ekv.) i mešan u toku 2 h na ST. TLC je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suvog, ponovo rastvorena u EtOAc i isprana sa vodom. Organski sloj je osušen (anh. Na2S04) i koncentrovan. Za prečišćavanje, sirovi proizvod je rastvoren u DCM (50 ml) i ispran sa 3M NaOH rastvorom. Vod. sloj je neutralizovan sa 2 M HC1 i ekstrahovan sa DCM (2 x 25 ml). Spojeni organski slojevi su osušeni (Na2S04) i koncentrovani da bi se dobila čista supstanca (2.4 g, 46%). MS m/z (APCJ+) 469.1 (M^-Boc).

Stupanj 5. Sinteza 14-terc-butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo

[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il( IS, 4R, 6S, 14S,18£)-5-amino-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline.U DCE rastvor proizvoda iz gornjeg stupnja 4 (19 mg, 33 pmol) dodat je CDI (7 mg, 1.3 ekv.) i reakcija je mešana na ST u toku noći. LCMS je ukazao da je reakcija završena. Zatim je dodat 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-ilamin (18 mg, 4 ekv.). Posle 4 h na ST, LCMS je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je direktno naneta na silika gel i eluirana sa 1 do 5% metanol/DCM. Sirovi proizvod je izolovan kao bela čvrsta supstanca. MS m/z (APCI+): 629.2 (MH^-Boc).

Primer 3- 58

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18J/?)-4-amino-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334385) je sintetizovan na sličan način kao što je opisano u Primeru 3-57, zamenjujući 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-ilamin u stupnju 5 sa 2,3-dihidro-lH-izoindol-4-ilaminom. Takođe, krajnje prečišćavanje proizvoda je izvedeno na hromatografskoj koloni sa reverznom fazom (eluent= 5 do

100% acetonitril u vodi) dajući krajnji proizvod kao bež penastu supstancu. MS m/z (APCI-) 728.1.

Primer 3- 59

14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-4-trifluorometansulfonil-aminokarbonil-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar ( IS,4R, 6S, 14S,18/?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340479) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je trifluoro-metansulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid.<*>H NMR (400 MHz, d6-aceton) 5 7.98 (šir.s, IH), 7.23-7.35 (m, 4H), 6.13 (šir.s, IH), 5.70 (q, IH), 5.44 (šir.s, IH), 4.98-5.02 (m, IH), 4.61-4.72 (m, 5H), 4.49 (d, IH), 4.16-4.18 (m, IH), 3.87-3.90 (m, IH), 2.57-2.59 (m, 2H), 2.38-2.51 (m, 2H), 1.82-1.92 (m, 2H), 1.72-1.79 (m, 2H), 1.21-1.59 (m, 8H), 1.21 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 741.1 (M<4>).

Primer 3- 60

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-karboksi-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S, \ 4S,18^)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365387) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6,

osim što je 4-sulfamoil-benzoeva kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 792.3 (M-l).

Primer 3- 61

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(5-karboksi-2-hloro-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04,6]nonadek-7-en-18-il

estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365388) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4-hloro-3-sulfamoil-benzoeva kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 826.2 (M-2).

Primer 3- 62

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(3-karboksi-4-metoksi-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [ 14.3.0.04,6]nonadek-7-en-18-ilestar ( IS, 4R, 6S, US, 1 SR)- l, 3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline(Jedinjenje AR00365425) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 2-metoksi-5-sulfamoil-benzoeva kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 822.3 (M-2). Primer 3- 63

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(5-karboksi-4-hloro-2-fluoro-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [ 14.3.0.04,6]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365426) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 2-hloro-4-fluoro-5-sulfamoil-benzoeva kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 844.2 (M-2).

Primer 3- 64

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-dimetilamino-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 6S, 14S,18y?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365572) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4-dimetilamino-benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 791.3 (M-l). Primer 3- 65

14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-4-(propan-2-sulfonilamino-karbonil)-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00333801) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je amid propan-sulfonske kiseline korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 748.3 (M-2).

Primer 3- 66

4-Benzensulfonilaminokarbonil-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar ( IS,4R, 6S, 14S,187?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00333802) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 748.3 (M-2). Primer 3- 67

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-metansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R,65, 145, 18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00333803) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je metansulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 686.4 (M-l).

Primer 3- 68

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(5-hloro-tiofen-2-sulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(15, 4R, 65, 145,187?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334188) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je amid 5-hloro-tiofen-2-sulfonske kiseline korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 788.3 (M-2). Primer 3- 69

4-(5-Acetilamino[l,3,4]tiadiazol-2-sulfonilaminokarbonil)-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334247) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je N-(5-sulfamoil-[l,3,4]tiadiazol-2-il)-acetamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. H NMR (400 MHz, d6-aceton) 8 7.24-7.31 (m, 4H), 5.96 (šir.d, IH), 5.42 (šir.s, IH), 5.28 (m, IH), 5.15 (m, IH), 4.68 (m, 6H), 4.49 (m, IH), 4.14 (m, 2H), 2.60 (m, IH), 2.25-2.36 (m, 5H), 1.70-2.19 (m, 8H), 1.19-1.48 (m, 4H), 1.30 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 813.3 (M-l).

Primer 3- 70

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-cijano-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334248) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4-cijano-benzensulfonamid korišćen da zameni

ciklopropansulfonamid. 'HNMR (400 MHz, d6-aceton) 5 11.32 (šir.s, IH), 8.36 (šir.s, IH), 8.04-8.15 (m, 4H), 7.22-7.35 (m, 4H), 6.12 (šir.d, IH), 5.47 (šir.s, IH), 5.28 (q, IH), 4.60-4.72 (m, 5H), 4.48-4.54 (m, 2H), 4.14-4.17 (m, IH), 3.86-3.90 (m, IH), 2.37-2.52 (m, 4H), 1.72-1.85 (m, 2H), 1.59-1.62 (m, IH), 1.20-1.55 (m, 8H), 1.20 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 773.3 (M-l).

Primer 3- 71

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-nitro-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334249) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4-nitro-benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. ^NMR (400 MHz, d<6->aceton) 5 11.39 (šir.s, IH), 8.46 (d, 2H), 8.35 (šir.s, IH), 8.23 (d, 2H), 7.23-7.36 (m, 4H), 6.11 (šir.d, IH), 5.47 (šir.s, IH), 5.23 (q, IH), 4.59-4.72 (m, 5H), 4.49-4.54 (m, 2H), 4.15 (m, IH), 3.86-3.90 (m, IH), 2.40-2.53 (m, 4H), 1.72-1.85 (m, 2H), 1.59-1.62 (m, IH), 1.20-1.56 (m, 8H), 1.20 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 793.3 (M-l).

Primer 3- 72

Jedinjenje AR00334250

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-hloro-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334250) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4-hloro-benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid. 'HNMR (400 MHz, d<6->aceton) 8 11.16 (šir.s, IH), 8.34 (šir.s, IH), 7.96 (d, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.22-7.36 (m, 4H), 6.13 (šir.d, IH), 5.46 (šir.s, IH), 5.27 (q, IH), 4.59-4.71 (m, 5H), 4.48-4.54 (m, 2H), 4.14-4.18 (m, IH), 3.87-3.89 (m, IH), 2.35-2.52 (m, 4H), 1.75-1.85 (m, 2H), 1.58-1.61 (m, IH), 1.20-1.53 (m, 8H), 1.20 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 782.3 (M-2).

Primer 3- 73

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-metoksi-benzensulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334341) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4-metoksi-benzensulfonamid korišćen da zameni ciklopropansulfonamid.<J>H NMR (400 MHz, d6-aceton) 5 8.26 (šir.s, IH), 7.84 (d, 2H), 7.19-7.32 (m, 4H), 7.05 (d, 2H), 6.08 (šir.d, IH), 5.43 (šir.s, IH), 5.25 (q, IH), 4.55-4.67 (m, 5H), 4.48 (q, 2H), 4.10-4.14 (m, IH), 3.87 (s, 3H), 3.82-3.87 (m, IH), 2.29-2.47 (s, 4H), 1.74-1.84 (m, 2H), 1.51-1.55 (m, IH), 1.37-1.47 (m, 4H), 1.20-1.32 (m, 5H), 1.17 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 779.1 (M-l). Primer 3- 74

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(5-karbonil-1 -metil-1 H-pirol-2-sulfonil aminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo [ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, \ 4S,18^)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00364266) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim stoje l-metil-5-sulfamoil-lH-pirol-2-karboksilna kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid. 'HNMR (400 MHz, d<6->aceton) 5 10.84 (šir.s, IH), 8.27 (šir.s, IH), 7.59 (d, IH), 7.24-7.35 (m, 4H), 7.18 (d, IH), 6.10 (šir.d, IH), 5.50 (šir, IH), 5.46 (m, IH), 5.36 (q, IH), 4.59-4.71 (m, 6H), 4.48 (d, IH), 4.13-4.17 (m, IH), 4.00 (s, 3H), 3.85-3.89 (m, IH), 2.35-2.59 (m, 4H), 1.71-1.90 (m, 2H), 1.62-1.65 (m, IH), 1.20-1.51 (m, 8H), 1.20 (s, 9H); MS m/z (APCI-) 795.4 (M-l).

Primer 3- 75

14-terc-Butoksikarbonilamino-2,15-diokso-4-(tiofen-2-sulfonilamino-karbonil)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18^)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365427) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6,

osim što je tiofen-2-sulfonska kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid. MS m/z (APCI-) 754.4 (M-l).

Primer 3- 76

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,18i?)-6-metoksi-1 -metoksimetil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334339) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 6-metoksi-1-metoksimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin (za sintezu videti Primer 3-76a) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS m/z (APCI-) 800.5 (M-l).

Primer 3- 76a

Sinteza 6-metoksi-1 -metoksimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolinijum hlorida je prikazana na sledećoj šemi:

Stupanj1:Sinteza 2-Hloro-N-[2-(3-metoksi-feniI)-etil]-acetamid.Amin, 2-(3-metoksi-fenil)-etilamin je sakupljen sa 0.6 M rastvorom u DCM, a zatim je dodat TEA (2 ekv.). Smeša je zatim ohlađena u kupatilu IPA/suvi led. Kada je reakciona temepratura dostigla -60°C, zatim je u kapima dodat rastvor hloroacetilhlorida u DCM (2.6 M) da bi se održala temperatura ispod -60°C. Posle završenog dodavanja, reakcija je mešana na -60°C u toku 1 h. Reakcija je zatim zagrejana na -20°C i proceđena preko GF filter papira da bi se uklonilo nešto TEA-HC1 soli. Filtrat je zatim zagrejan na st i premešten u levak za odvajanje gde je ispran sa IM HC1 (2 x) i rastvorom soli. Organski sloj je osušen izand MgS04i koncentrovan da bi se dobila tamno purpurna čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećm stupnju bez daljeg prečišćavanja.

Stupanj 2: Sinteza l-HIorometil-6-metoksi-3,4-dihidro-izohinolinijum

hlorida.Dva ekvivalenta P205(12.9 g) su ključala u heksenu (180 ml) kao 0.025 M rastvor. Sirovi proizvod iz gornjeg stupnja 1 je takođe ključao u ksilenu (45 ml) da bi se naparavio 0.5 M rastvor i zatim je dodat u kapima preko kapalice u rastvor P205. Smeša je mešana i zagrejena do refluksa u toku 1 h. Reakcija je zatim ohlađena na ST i ksilen je dekantovan u ovoj tačci. Balon je zatim stavljen u ledeno kupatilo i mešan dok su pažljivo dodavani led, voda, EtOAc i na kraju 4M NaOH do pH>12. Reakcija je održavana na <25°C dok nije dostignut pH=T2. Reakcija je zatim ekstrahovana sa EtOAc (3 x). Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad MgS04i koncentrovani do tamnog rastvora. On je ohlađen u vodenom kupatilu, a polako je dodato 400 ml hladnog Et20 i zatim 100 ml hladnog HCl/Et20. Obrazovan je talog i koji je proceđen, ispiran sa Et20. Čvrsta supstanca je momentalno smeštena u visok vakum u toku 2 h i dobijen je ciljani proizvod kao obojena penasta čvrsta supstanca. Ovaj sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja.

Stupanj 3: Sinteza 6-Metoksi-l-metoksimetil-l,2,3,4-tetrahidro-

izohinolinijum hlorida.Sirovi proizvod iz gornjeg stupnja 2 je dodat u jednoj porciji u TEA (5 ekvival.) i Nal (0.1 ekv.) u MeOH na 0°C. Zatim je dodato 2.2 ekv. NaOMe i homogena reakcija je postala mutna. Reakcija je zatim mešana na 0°C u toku 1 h. LC/MS je pokazao imin potpuno slobodnu bazu.

Reakcija je zatim ponovo ohlađena na 0°C u ledenom kupatilu i pažljivo je dodat NaBFL, (1.5 ekv.). Reakcija je zatim zagrejana na ST ponovo i mešana u toku 2 h. Pošto je reakcija završena, što je praćeno sa LC/MS, koncentrovana je, tretirana sa IM NaOH i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen iznad MgS04i koncentrovan. Rezultujući ostatak je sakupljen sa MeOH i ohlađen na vodenom kupatilu. Uvođenje HC1 gas u toku 10 min. Reakciona smeša je koncentrovana i ponovo rastvorena u MeOH. Posle koncentrovanja drugi put reakcija je stavljena na visok vakum u toku noći. Sirovi materijal je zatim triturisan sa EtOAc (3 x) i dobijen je proizvod kao braonkasta penasta čvrsta suptanca posle stajanja u toku noći na visokom vakumu. Ovaj sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem stupnju bez daljeg prečišćavanja. MS m/z (POSESI): 208.1 (MH<4>).

Primer 3- 77

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-5-fluoro-l-metoksi-3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365193) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-76, osim što je 5-fluoro-l-metoksimetil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolinijum hlorid (za sintezu vidi Primer 3-77a) korišćen da zameni 6-metoksi-1 -metoksimetil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolinijum hlorid.

'HNMR (400 MHz, CD3OD) 5 8.99-8.91 (m, IH), 7.23-7.15 (m, IH), 7.13-6.99 (m, 2H), 6.99-6.90 (m, IH), 5.68 (q, IH), 5.41 (šir.s, IH), 5.35-5.21 (m, IH), 5.06 (t, IH), 4.60-4.31 (m, 3H), 4.30-4.05 (m, 3H), 3.96-3.81 (m, IH), 3.80-3.56 (m, 3H), 3.35 (d, 3H), 2.98-2.30 (m, 9H), 1.91-1.68 (m, 4H), 1.64-0.95 (m, 16H);MS m/z (APCI-) 788.3 (M-l).

Primer 3- 77a

Sinteza 5-fluoro-l-metoksimetil-l,2,3,4-tetrahidro-izohinolinijum hlorid je izveden na sličan način kao što je prikazano u Primeru 3-76a, osim što u stupnju 1, 2-(2-fluoro-fenil)-etilamin je korišćen da zameni 2-(3-metoksi-fenil)-etilamin.

Primer 3- 78

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-(4-karboksi-benzensulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>)<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, AR, 6S, l AS,18i?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365438) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-55, osim što je 4-sulfamoil-benzoeva kiselina korišćena da zameni ciklopropansulfonamid.<*>H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.92 (d, IH), 8.25-8.19 (m, IH), 8.15 (d, 2H), 8.04 (d, 2H), 7.36-7.27 (m, IH), 7.14 (d, IH), 7.05-6.95 (m, 2H), 5.42 (šir. s, IH), 5.26 (q, IH), 4.82-4.50 (m, 8H),

4.10-4.00 (m, IH), 3.85 (d, IH), 3.75-3.69 (m, IH), 2.60-2.39 (m, 4H), 2.26 (p, 2H), 1.89-1.84 (m, IH), 1.81-1.05 (m, 15H); MS m/z (APCI-) 810.2 (M-1).

Primer 3- 79

Sinteza 14-{2-cikloheksil-2-[(pirazin-2-karbonil)-amino]-acetilamino}-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar Gedinjenje AR00340303)

Polazni materijal (AR00334191, Primer 3-55, 10 mg, 13.7 pg) je rastvoren u 1 ml 50% TFA (DCM) i mešan na ST u toku 1 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva, sakupljena sa acetonitrilom i ponovo koncentrovana. Gornji postupak je ponovljen još jednom da bi se uklonio višak TFA. Rezultujuća ostatak, čvrsta suptanca, je zatim rastvoren u DCE (137 pl), ohlađen na 0°C u ledenom kupatilu, a zatim je dodata amino kiselina, cikloheksil-[(piperazin-2-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina (1.05 ekv.), HATU (10 mg) i DIEA (4 kapi). Smeša je ostavljena da se polako zagreje do ST i meša u toku noći. Za prečišćavanje, reakcioan smeša je direktno naneta na C-18 kolonu i prečišćena sa hromatografijom na koloni sa reverznom fazom, dajući ciljano jedinjenje kao belu čvrstu supstancu. MS (APCI-): m/z 876.1 (M-l).

Primer 3- 80

14-(2-Acetilamino-2-cikloheksil-acetilamino)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340122) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-79, osim što je acetilamino-cikloheksil-sirćetna kiselina korišćena da zameni cikloheksil-[(pirazin-2-karbonil)-amino]-sirćetnu kiselinu. MS m/z (APCI-) 811.3 (M-l).

Primer 3- 81

Sinteza 4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-[2-(4-metoksi-fenil)-acetilamino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,14S, 18/?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindoI-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340156)

Polazni materijal (AR00334191, Primer 3-55, 10 mg, 13.7 pg) je rastvoren u 1 ml 50% TFA (DCM) i mešan na ST u toku 1 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva, sakupljena sa acetonitrilom i ponovo koncentrovana. Gornji postupak je ponovljen još jednom da bi se uklonio višak TFA. Rezultujući ostatak, čvrsta supstanca, je zatim rastvoren u DCE (137 pL), a zatim je dodat kiselinski hlorid, (4-metoksi-fenil)-acetil hlorid (2 kapi) i DIEA (4 kapi). Smeša je mešana na ST u toku noći. Posle završetka, reakcija je direktno naneta na C-18 kolonu i prečišćena hromatografijom na koloni sa reverznom fazom. Jedinjenje je dalje prečišćeno hromatografijom na silika gelu sa normalnom fazom (eluent=40% EtOAc/heksan sa 1% mravljom kiselinom) i dobijeno je ciljno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca.<1>TNMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.33 (p, IH), 7.15 (d, IH), 7.05-6.92 (m, 3H), 6.65 (dd, 2H), 5.68 (q, IH), 5.40 (šir.s, IH), 5.09 (t, IH), 4.78-4.46 (m, 7H), 4.43-4.24 (m, 2H), 3.89-3.80 (m, IH), 3.68 (d, 3H), 3.21 (d, IH), 2.69-2.57 (m, IH), 2.52-2.30 (m, 5H), 2.06-0.80 (m, 15H); MS m/z (APCI-) 778.3 (M-l).

Primer 3- 82

Jedinjenje AR00340178

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-[2-(3-metoksi-fenil)-acetilamino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340178) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-81, osim što je (3-metoksi-fenil)-acetil hlorid korišćen da zameni (4-metoksi-fenil)-acetil hlorid. *H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.32 (p, IH), 7.14 (d, IH), 7.05-6.92 (m, 3H), 6.76-6.58 (m, 2H), 5.68 (q, IH), 5.41 (šir.s, IH), 5.09 (t, IH), 4.76-4.46 (m, 7H), 4.43-4.26 (m, 2H), 3.91-3.82 (m, IH), 3.69 (d, 3H), 2.94-2.85 (m, IH), 2.70-2.57 (m, IH), 2.52-2.30 (m, 5H), 2.06-0.80 (m, 15H); MS m/z (APCI-) 778.3 (M-l).

Primer 3- 83

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-f enilacetilamino-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 14S, \& R)- 4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340188) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-81, osim što je fenil-acetil hlorid korišćen da zameni (4-metoksi-fenil)-acetil hlorid. MS m/z(APCI-) 748.4 (M-l). Primer 3- 84

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-metoksi-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334314) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-metoksi-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen na sličan način kao stoje opisano u: JOC, Vol. 53, No.22, 1988, pp. 5381-5383) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS m/z (APCI-) 742.3 (M-l).

Primer 3- 85

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R, 6S, 14S,18i?)-4,7-difluoro-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334399) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 4,7-difluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen

na sličan način kao što je opisano u: JOC, Vol. 53, No.22, 1988, pp. 5381-5383) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol.<*>H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.97 (s, IH), 6.99-6.85 (m, 2H), 5.69 (q, IH), 5.42 (šir.s, IH), 5.07 (t, IH), 4.83-4.57 (m, 6H), 4.51 (d, IH), 4.13-4.02 (m, IH), 3.85 (t, IH), 2.94-2.86 (m, IH), 2.73-2.59 (m, IH), 2.55-2.28 (m, 4H), 1.89-1.70 (m, 3H), 1.65-1.70 (m, 3H), 1.65-1.22 (m, 10H), 1.18-0.96 (m, 10H); MS m/z (APCI-) 746.1 (M-l).

Primer 3- 86

14-(3-terc-Butil-ureido)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 65, 14S,18i?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00338066) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-36, osim što je 4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. !H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7.38-7.28 (m, IH), 7.13 (d, IH), 7.01 (p, IH), 5.69 (q, IH), 5.45 (šir.s, IH), 5.07 (t, IH), 4.83-4.66 (m, 4H), 4.59 (q, IH), 4.49 (d, IH), 4.37-4.17 (m, 2H), 3.94-3.84 (m, IH), 3.72 (t, IH), 2.95-2.87 (m, IH), 1.68-2.29 (m, 5H), 2.09-1.22 (m, 11H), 1.12-0.95 (m, 12H); MS m/z (APCI-) 729.3 (M-l). Primer 3- 87

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-(3,3-dimetil-butirilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00338070) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-81, osim što je 3,3-dimetil-butiril hlorid korišćen da zameni (4-metoksi-fenil)acetil hlorid. MS m/z (APCI-) 728.3 (M-l).

Primer 3- 88

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso- 14-(4,4,4-tri fluoro-butirilamino)-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-4-fluoro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00338071) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-81, osim što je 4,4,4-trifluoro-butiril hlorid korišćen da zameni (4-metoksi-fenil)acetil hlorid. MS m/z (APCI-) 754.3 (M-l). Primer 3- 89 14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S, 1 SR)- 5 -izopropilamino-1,3 -dihidro-izoindol-2-karboksilnekiseline (Jedinjenje AR00341649) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je (2,3-dihidro-lH-izoindol-5-il)-izopropil-amin (pripremljen na sličan način kao što je opisano u: Org. Letters, 2003, Vol.5, Br. 6, 793-796) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. *H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.94 (šir.d, IH), 7.52 (s, IH), 7.48 (d, IH), 7.41-7.32 (m, 2H), 7.32-7.24 (m, 2H), 5.69 (q, IH), 5.41 (šir.s, IH), 5.07 (t, IH), 4.82-4.66 (m, 3H), 4.60 (t, IH), 4.52 (t, IH), 4.08 (d, IH), 3.85 (d, IH), 3.80-3.68 (m, IH), 2.94-2.87 (m, IH), 2.71-2.59 (m, IH), 2.55-2.45 (m, IH), 2.45-2.30 (m, 3H), 1.88-1.69 (m, 3H), 1.61 (t, IH), 1.58-0.94 (m, 25H); MS m/z (APCI-) 770.1 (M-l). Primer 3- 90

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,145, 18i?)-5-hidroksi-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00364936) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim stoje 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-ol (pripremljen na sličan način kao što je opisano u: JOC, Vol. 53, No.22, 1988, pp. 5381-5383) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS m/z (APCI-) 728.2 (M-l).

Primer 3- 91

2-(14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il) estar 5-metil estar (15,4R, 65,145, 187?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365083) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-57, osim što je metil estar 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-karboksilne

kiseline (pripremljen kao što je opisano u primeru 3-91 a) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-ilamin u stupnju 5. MS m/z (APCI-) 672.2 (MF<f->Boc).

Primer 3- 91 a

Metil estar 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-karboksilne kiseline je sintetizovan prema sledećoj šemi

Smeša terc-butil estra 5-bromo-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (200 mg, 0.67 mmol), Pd(OAc)2(30 mg, 0.2 ekv.), DPPP (55 mg, 0.2 ekv.), TEA (0.93 ml, 10 ekv.) i MeOH:DMSO (1:1, 4 ml) je mešan u toku 16 h pod CO (balon) na 80°C. LC-MS i TLC (20% EtOAc-heksan) su pokazali da je reakcija završena. Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni MeOH i razblažena je sa EtOAc (10 ml) i isprana sa vodom (2 x 25 ml). Orgasnki sloj je osušen (Na2S04), koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni od silika gela (eluent = 20% EtOAc-heksan) dajući čisti 2-terc-butil estar 5-metil estar l,3-dihidro-izoindol-2,5-dikarboksilne kiseline (150 mg, 81%). MS (APCI+): m/z 178.1 (MHT-Boc).

Sa gornjeg proizvoda su skinute zaštitne grupe tretiranjem sa 50% TFA-DCM u toku 1 h na 0°C ST. Reakciona smeša je koncentrovana do suvog, ponovo rastvorena u DCM i neutralizovana sa zas. NaHC03rastvorom. Organski sloj je odvojen, osušen i koncentrovan i dobijeno je ciljano jedinjenje kao slobodna baza, koja je direktno korišćena u sledećem stupnju kuplovanja bez daljeg prečišćavanja.

Primer 3- 92

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00333831) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-5, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin. ^NMR (400 MHz, CD3OD) 5 7.36-7.22 (m, 3H), 7.21-7.16 (m, IH), 5.74-5.60 (m, IH), 5.40 (s, IH), 5.20-5.03 (m, IH), 4.80-4.54 (m, 6H), 4.38-4.28 (m, IH), 4.18 (m, IH), 3.90-3.80 (m, IH), 2.96-2.85 (m, IH), 2.70-2.31 (m, 4H), 1.92-0.98 (m, 24H);MS m/z (APCI-) 724.4 (M-l).

Primer 3- 93

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,187?)-5-morfolin-4-il-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340494) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-morfolin-4-il-2,3-dihidro-lH-izoindol

(pripremljen na sličan način kao što je opisano u J. Org. Chem 2000, 65, 1144-1157) korišćen da zameni 2,3-dihidro-izohinolin. 'HNMR (400 MHz,DMSO-d<6>) 5 7.80-7.22 (m, IH), 7.22-7.15 (m, IH), 7.00-6.81 (m, 2H), 5.45-(m, IH), 5.26 (m, IH), 4.62-4.50 (m, 4H), 4.42 (m, IH), 4.28-4.10 (m, 2H), 3.98 (m, IH), 3.76 (m, 4H), 3.12 (m, 4H), 2.71-2.60 (m, IH), 2.40-1.45 (m, 3H), 1.40-1.21 (m, 10 H), 0.98-0.61 (m, 4H); MS m/z (APCI-) 699.2 (MH<4->Boc).

Primer 3- 94

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R, 65,145, 18i?)-5-cijano-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365082) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-karbonitril (pripremljen na sličan način kao što je opisano u J. Org. Chem 1998, 63, 8224-8228) korišćen da zameni 2,3-dihidro-izohinolin. MS m/z (APCI-) 639.1 (Mrf-Boc). Primer 3- 95

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,18i?)-5-etilkarbamoil-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365252) je sintetizovan prema postupcima opisamnim u sledećoj šemi:

Jedinjenje AR00365083

Jedinjenje AR00365083 (70 mg, 91 pmol), čija sinteza je ranije opisana u ovom dokumentu je rastvoreno u smeši THFrMeOH (2:1, 3 ml), a zatim je dodato 1 ml vod. rastvora LiOH-H20. Reakcija je mešana u toku lh na st. LC-MS su pokazali potpunu hidrolizu, omogućeno je da se reakcija nastavi još 30 min pre nego što je bila koncentrovana, neutralizovana sa 0.1M HC1 i ekstrahovana sa 5 ml EtOAc. Organski sloj je osušen (Na2S04), koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni od silika gela

(eluent=5-7% MeOH-DCM) i dobijen je proizvod hidrolize kao bela čvrsta supstanca. MS (APCI+):m/z 658.1 (MET-Boc).

Proizvod iz gornjeg stupnja (23 mg, 30 pmol) je prvo rastvoren u anhidrovanom DMF (2 ml), a zatim dodavanjem etilamina (3 ekv.), HOAT (3 ekv.) i HATU (3 ekv.) i na kraju DIEA (6 ekv.) je dodato u kapima. Reakciona smeša je mešana na ST u toku noći. LC-MS je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (5 ml) i isprana sa vodom (2 x 10 ml). Organski sloj je osušen, koncentrovan i sirovi proizvod je prečišćen preparativnom TLC. MS (APCI+): 685.2 (MF<T->Boc).

Primer 3- 96

14-Ciklopentiloksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (15,4R,65, 145, 18i?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334218) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-5, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin.<T>TNMR (400 MHz, CD3CN) 8 7.55 (šir.s, IH), 7.19-7.33 (m, 3H), 5.63-5.73 (m, 2H), 5.27-5.34 (m, IH), 4.98 (t, IH), 4.52-4.72 (m, 5H), 4.48 (t, IH), 4.34-4.44 (m, IH), 4.06-4.15 (m, IH), 2.77-2.90 (m, 2H), 2.54 (šir.s, IH), 2.24-2.44 (m, 3H), 1.64-1.75 (m, 2H), 1.13-1.57 (m, 18 H), 0.91-1.09 (m, 4H); MS m/z 759.9 (MH<+->Boc). Primer 3- 97

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-14-(tetrahidro-furan-3-iloksikarbonilamino)-3,16-diaza-triciklo[ 14.3.0.04'6]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334220) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-16, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin.<*>H NMR (400 MHz, CD3CN) 8 7.57 (šir.s, IH), 7.20-7.34 (m, 3H), 5.87-5.93 (m, IH), 5.65 (q, IH), 5.31 (šir.s, IH), 5.23-5.29 (m, IH), 4.98 (t, IH), 4.44-4.71 (m, 5H), 4.29-4.39 (m, IH), 4.07-4.18 (m, IH), 3.70-3.87 (m, 4H), 3.61-3.70 (m, IH), 3.44-3.55 (m, 2H), 3.30-3.42 (m, IH), 2.76-2.89 (m, 2H), 2.54 (šir.s, IH), 2.36-2.46 (m, IH), 2.24-2.36 (m, 2H), 1.69-1.76 (m, IH), 1.59-1.69 (m, IH), 1.13-1.56 (m, 8H), 0.90-1.10 (m,4H);MS m/z 762.0 (M+l).

Primer 3- 98

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-14-(2-fluoro-etoksikarbonilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar(\ S, 4R,

6S, 14S,18i?)-5-hloro-l,3-diriidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334222) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-28, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. 'HNMR (400 MHz, CD3CN) 8 7.53 (šir.s, IH), 7.20-7.33 (m, 3H), 5.93 (d, IH), 5.67 (q, IH), 5.32 (šir.s, IH), 4.93-5.05 (m, IH), 4.52-4.72 (m, 5H), 4.47 (t, IH), 4.39 (t, IH), 4.25-4.36 (m, 2H), 4.12-4.25 (m, 2H), 3.65-3.96 (m, 2H), 2.76-2.89 (m, 2H), 2.54 (šir.s, 1 H), 2.22-2.44 (m, 3H), 1.67-1.76 (m, IH), 1.13-1.60 (m, 10H), 0.91-1.13 (m, 4H); MS m/z 737.9 (M+l).

Primer 3- 99

4-Ciklopropansulfonilaminokarbonil-l 4-(3,3-dimetil-butirilamino)-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334225) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-81, osim što je korišćen 3,3-dimetil-butiril hlorid da zameni (4-metoksi-fenil)-acetil hlorid, i daje 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol. 'H NMR (400 MHz, CD3CN) 8 7.60 (šir.s, IH), 7.15-7.33 (m, 3H), 6.54-6.65 (m, IH), 5.63-5.73 (m, IH), 5.33 (šir.s, IH), 4.93-5.02 (m, IH), 4.53-4.65 (m, 3H), 4.39-4.48 (m, 2H), 4.28-4.38 (m, IH), 3.74-3.83 (m, 2H), 2.77-2.89 (m, IH), 2.54 (šir.s, IH), 2.23-2.44 (m, 3H), 1.68-1.91 (m, 4 H), 1.12-1.54 (m, 11H), 0.91-1.11 (m, 4H), 0.76-0.90 (m, 9H); MS m/z 746.2 (M+l). Primer 3- 100

14-(2-Ciklopentil-acetilamino)-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00334226) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-81, osim što je ciklopentil-acetil hlorid korišćen da zameni (4-metoksi-fenil)-acetil hlorid i da 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol. lU NMR (400 MHz, CDC13) 5 10.85 (šir.s, IH), 6.95-7.30 (m, 3H), 5.87-6.02 (m, IH), 5.63-5.79 (m, IH), 5.43-5.52 (m, IH), 4.93-5.08 (m, IH), 4.52-4.85 (m, 5H), 4.31-4.52 (m, IH), 3.79-3.95 (m, IH), 3.60-3.75 (m, 2H), 3.14 (q, IH), 2.90 (šir.s, IH), 2.37-2.63 (m, 3H), 2.14-2.29 (m, 1 H), 1.73-2.12 (m, 6H), 1.16-1.74 (m, 13H), 0.96-1.16 (m, 4H), 0.68-0.96 (m, 9H); MS m/z 758.2 (M+l).

Primer 3- 101

14-terc-butoksikarbonilamino-4-(5-hloro-tiofen-2-sulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18i?)-5-hloro-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340173) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je amid 5-hloro-tiofen-2-sulfonske kiseline korišćen umesto ciklopropansulfonamida i što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 2,3-dihidro-izoindol.<[>H NMR (400 MHz, CD3CN) 5 8.07 (d, IH), 7.50 (d, IH), 7.16-7.32 (m, 3H), 6.98 (d, IH), 5.86 (šir.s, IH), 5.27-5.39 (m, 2H), 4.81-4.92 (m, IH), 4.58-4.64 (m, 2H), 4.51-4.58 (m, 2H), 4.44 (t, IH), 4.33 (d, IH), 4.10-4.20 (m, IH), 3.73-3.81 (m, IH), 2.47 (šir.s, 1 H), 2.16-2.41 (m, 3H), 1.63-1.77 (m, 2H), 1.47-1.57 (m, 2H), 1.07-1.47 (m, 17H); MS m/z 724.1 (M+l-Boe).

Primer 3- 102

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-5-bromo-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340526) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-hloro-2,3-dihidro-lH-izoindol korišćen da zameni 2,3-dihidro-izohinolin. lH NMR (400 MHz, CDC13) 5 10.31 (šir.s, IH), 7.36-7.44 (m, IH), 6.99-7.32 (m, 3H), 5.70 (q, IH), 5.42-5.49 (m, IH), 5.06-5.13 (m, IH), 4.99 (t, IH), 4.52-4.78 (m, 5H), 4.32-4.44 (m, IH), 4.16-4.27 (m, IH), 3.78-3.89 (m, IH), 3.33-3.42 (m, IH), 2.85-2.94 (m, IH), 2.40-2.64 (m, 3 H), 2.20-2.32 (m, IH), 1.68-1.97 (m, 4H), 1.17-1.67 (m, 16 H), 1.01-1.17 (m, 3H), 0.80-0.98 (m, 2H); MS m/z 694.0 (M+l-Boc). Primer 3- 103

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarboriil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S,145", 18i?)-4i?-metil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00333462) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-1, osim što je 4i?-metil- 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin (pripremljen prema sličnim postupcima kao u Primeru 1-17a, osim što je korišćen enantiomerno čist polazni materijal umesto racemskog) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin. MS m/z 642.2 (M+l-Boe).

Primer 3- 104

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,18^)-4S-metil-3,4-dihidro-1 H-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00333463) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-1, osim što je 45-metil-1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin (pripremljen

prema sličnim postupcima kao u Primeru 1-17a, osim što je korišćen enantiomerno čist polazni materijal umesto racemskog) korišćen da zameni 1,2,3,4-tetrahidro-izohinolin. MS m/z 642.2 (M+l-Boc).

Primer 3- 105

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 14S,18/?)-5-[2-(morfolin-4-karboniloksi)-etoksi]-1,3-dihidro- lH-izohinolin-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00345032) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 2-(2,3-dihidro-lH-izoindol-5-iloksi)-etil estar morfolin-4-karboksilne kiseline (pripremljen prema postupcima opisanim u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i u Bioorg Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-) m/z 885.4 (M-l). 14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar (IS<*>,4R, 6S, 1 4S,18i?)-5-(3-morfolin-4-il-propoksi)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00345075) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-(3-morfolin-4-il-propoksi)-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen prema postupcima opisanim i u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i Bioorg Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-) m/z 855.6 (M-l). Primer 3- 107 14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar( IS, 4R, 6S, 1 4S,18i?)-5-(2-morfolin-4-il-etoksi)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00345090) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-(2-morfolin-4-il-propoksi)-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen prema postupcima opisanim u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i u Bioorg Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-) m/z 841.5 (M-l). Primer 3- 108

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, 4R, 6S, 1 AS,18i?)-5-(2-izopropilamino-etoksi)-1,3 -dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00345094) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je [2-(2,3-dihidro-lH-izoindol-5-iloksi)-etil]-izopropil-amin (pripremljen prema postupcima opisanim u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i u Bioorg Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-) m/z 813.5 (M-l).

Primer 3- 109

Jedinjenje AR00345095

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[l4.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-l8-il estar ( IS,AR, 6S, IAS,18i?)-5-(3-dimetilamino-etoksi)-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00345095) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je [2-(2,3-dihidro-lH-izoindol-5-iloksi)-etil]-dimetil amin (pripremljen prema postupcima opisanim u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i u Bioorg Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-) m/z 799.5 (M-l).

Primer 3- 110

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, AR, 6S, \ AS,18i?)-5-(2-imidazol-l-il-etoksi)-l ,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00345096) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-(2-imidazol-l-il-etoksi)-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen prema postupcima opisanim u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i u Bioorg Med. Chem. Lett. 11 (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-)m/z 822.5 (M-l). Primer 3- 111

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, AR, 6S, I AS,18i?)-5 -(2-pirazol-1 -il-etoksi)-1,3 -dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00364924) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-6, osim što je 5-(2-pirazol-l-il-etoksi)-2,3-dihidro-lH-izoindol (pripremljen prema postupcima opisanim u J.Med. Chem. 2002 Vol. 45, br.26, 5771, postupak pripremanja D i u Bioorg Med. Chem. Lett. II (2001) 685-688) korišćen da zameni 2,3-dihidro-lH-izoindol. MS (APCI-) m/z 742.1 [(M-100)+18].

Primer 3- 112

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, AR, 6S, 1 AS,187?)-5-(4-metil-piperazin-1 -il)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00340495) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-57, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol u stupnju 5 zamenj en sa 5 -(4-metil-piperazin-1 -il)-2,3 -dihidro-1 H-izoindolom (pripremljenim na sličan način kao što je opisano u J.Org. Chem. 2000 , 65, 1144-1157). 'HNMR (400 MHz, DMSO-d<6>) 5 7.72-7.40 (m, IH), 7.22-7.05 (m, IH), 6.95-6.70 (m, 2H), 5.55-5.45 (m, IH), 5.35-5.22 (m, 2H), 4.62-4.50 (m, 4H), 4.40 (m, IH), 4.30-4.08 (m, 2H), 4.0-3.89 (m, IH), 3.10 (m, 3 H), 2.65 (m, IH), 2.42 (m, 3H), 2.33-2.20 (m, 6 H), 1.85-1.50 (m, 5H), 1.42-1.0 (m, 14H), 0.82-0.55 (m, AH) ; MS (APCI+) 712.3 (MJf-Boc).

Primer 3- 113

2-(14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il) estar( IS, AR, 6S, \ AS,18i?)-l,3-dihidro-izoindol-2,5-dikarboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365084) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-91, osim što je proizvod AR00365083 iz tog primera dalje hidrolizovan sa LiOH u smeši THF-MeOH-H20 i dobijen je AR00365084. MS 658 (M-Boc). Primer 3- 114

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, AR, 6S, 1 AS,18JR)-5-(2-metil-tiazol-4-il)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00364989) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-57, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol u stupnju 5 zamenjen sa 5-(2-metil-tiazol-4-il)-2,3-dihidro-lH-izoindolom.<!>H NMR (400 MHz, CD3COCD3) 6 10.69 (šir.s, IH), 8.32 (šir.s, IH), 7.94 (d, IH), 7.88 (d, IH), 7.70 (d, IH), 7.34 (dd, IH), 6.08-6.16 (m, IH), 5.69 (q, IH), 5.45 (šir.s, IH), 5.00 (t, IH), 4.58-4.81 (m, 5H), 4.44-4.53 (m, IH), 4.12-4.21 (m, IH), 3.83-3.91 (m, IH), 2.86-2.97 (m, IH), 2.57-2.71 (m, IH), 2.33-2.54 (m, 3H), 1.81-1.96 (m, 2H), 1.75 (dd, IH), 1.17-1.63 (m, 20H), 1.06-1.17 (m, IH), 0.94-1.06 (m, 2H); MS m/z 711.2 (M+l-100).

Primer 3- 114a

Sinteza 5-(2-metil-tiazol-4-il)-2,3-dihidro-lH-izoindola je pripremljena sledeći eksperimetalne stupnjeve A do F Primera 3-115a, koristeći tioacetamid u stupnju E.

Primer 3- 114

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4,6>]nonadek-7-en-18-il estar ( IS,4R, 6S, 14S,18/?)-5-(2-metil-tiazol-4-il)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00364989) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-57, osim što je 2,3-dihidro-lH-izoindol u stupnju 5 zamenjen sa 5-(2-metil-tiazol-4-il)-2,3-dihidro-lH-izoindolom.<*>H NMR (400 MHz, CD3COCD3) 5 10.69 (šir.s, IH), 8.32 (šir.s, IH), 7.94 (d, IH), 7.88 (d, IH), 7.70 (d, IH), 7.34 (dd, IH), 6.08-6.16 (m, IH), 5.69 (q, IH), 5.45 (šir.s, IH), 5.00 (t, IH), 4.58-4.81 (m, 5H), 4.44-4.53 (m, IH), 4.12-4.21 (m, IH), 3.83-3.91 (m, IH), 2.86-2.97 (m, IH), 2.57-2.71 (m, IH), 2.33-2.54 (m, 3H), 1.81-1.96 (m, 2H), 1.75 (dd, IH), 1.17-1.63 (m, 20H), 1.06-1.17 (m, IH), 0.94-1.06 (m, 2H); MS m/z 711.2 (M+l-100).

Primer 3- 114a

Sinteza 5-(2-metil-tiazol-4-il)-2,3-dihidro-lH-izoindola je pripremljena sledeći eksperimetalne stupnjeve A do F Primera 3-115a, koristeći tioacetamid u stupnju E.

Primer 3- 115

14-terc-Butoksikarbonilamino-4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-18-il estar( IS, AR, 6S, l AS,18/?)-5-(2-izopropilamino-tiazol-4-il)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR00365019) je sintetizovan prema postupcima opisanim u Primeru 3-57, osim stoje 2,3-dihidro-lH-izoindol-5-ilamin u stupnju 5 zamenjen sa [4-(2,3-dihidro-lH-izoindol-5-il)-tiazol-2-il]-izopropil-aminom. lH NMR (400 MHz, CD3COCD3) 5 10.69 (šir.s, IH), 8.27-8.36 (m, IH), 7.28-7.50 (m, 2H), 7.01-7.20 (m, IH), 6.08-6.15 (m, IH), 5.70 (q, IH), 4.45 (šir.s, IH), 4.94-5.05 (m, IH), 4.68-4.76 (m, 4H), 4.59-4.64 (m, IH), 4.45-4.53 (m, IH), 4.10-4.20 (m, IH), 3.81-3.90 (m, IH), 3.65-3.76 (m, IH), 2.86-2.98 (m, IH), 2.63 (šir.s, IH), 2.32-2.54 (m, 3H), 1.80-1.94 (m, 2H), 1.70-1.79 (m, IH), 1.05-1.65 (m, 19H), 0.95-1.05 (m, 2H); MS m/z 754.2 (M+l-100).

Primer 3- 115a

Sinteza [4-(2,3-dihidro-lH-izoindol-5-il)-tiazol-2-il]-izopropil-amina je prikazana na sledećeoj šemi:

A. U rastvor 4 ml THF i 1 ml etil vinil etra na -78C, dodat je t-BuLi (0.79 ml, 1.34 mmol) u kapima. Rastvor je zagrejan na st i mešan u toku 30 minuta. Rastvor 0.5 M ZnCl2u THF (3.02 ml, 1.51 mmol) je dodat u kapima i reakcija je mešana na st u toku 30 minuta. Ova smeša je korišćena bez daljeg prečišćavanja.

B. U rastvor aril bromida (0.200 g, 0.67 mmol) i Pd(PPh3)4(39 mg, 0.33 mmol) rastvoren u THF pod N2 je pomoću cevčice dodat sirovi vinil zink iz stupnja A. Reakcija je zagrejana na 50°C u toku 36 sati i zatim je proceđena kroz sloj A1203uz pomoć EtOAc i koncentrovana i dobijeno je ulje koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. C. Sirovo ulje iz stupnja B je rastvoreno u THF (2 ml) i 0.1 M HC1 (2 ml) i mešani su u toku jednog sata. Reakcija je sakupljena sa EtOAc i odvojena i organski sloj je ispran sa zasićenim NaHC03i rastvorom soli i osušen iznad Na2S04i koncentrovan da bi se dobilo narandžasto ulje. Ovo ulje je hromatografisano sa 5:1 heks.: EtOAc i dobijena je bela čvrsta supstanca (95 mg, 54%). D. U rastvor 1.0 M LiHMDS (4.0 ml, 4.0 mmol) pod N2na -78°C, dodat je TMSC1 (3.38 ml, 26.6 mmol) u kapima. U ovaj rastvor dodat je keton iz stupnja C u 3 ml THF. Reakcija je mešana na -78°C u toku 30 minuta na 0°C, koncentrovana do čvrste susptance i sakupljena sa EtOAc i vodom. Organski deo je ispran sa vodom i rastvorom soli, i osušen iznad Na2S04i koncentrovan i ulje je prečišćeno sa 5:1 heks: EtOAc i dobijena je žuta čvrsta supstanca (0.64 g, 71%).

E. Suspenzija bromoketona (75 mg, 0.22 mmol), Na2C03(37 mg, 0.44 mmol) i 1-izopropil tiouree (26 mg, 22 mmol) u EtOH je zagrevana na refluksu u toku 30 minuta. Reakcija je sakupljena sa EtOAc i odvojena i organski sloj je ispran sa zasićenim NaHC03i rastvorom soli i osušen iznad Na2S04i koncentrovan do žutog ulja. Ulje je prečišćeno sa 3:1 heks.: MTBE i dobijeno je bistro ulje (77 mg, 97%).

F. Boc-amin iz stupnja E mešan je u 4M HCl/dioksan (2.0 ml) u toku jednog sata i koncentrovan do bele čvrste supstance. Čvrsta supstanca je sakupljena sa 0.1 M HC1 i isprana sa DCM. Vodeni sloj je zabažen sa 1.0 M NaOH i ekstrahovan sa DCM, osušen i koncentrovan i korišćen bez daljeg prečišćavanja.

4. Pobijanje makrocikličnih aminoprolinskih intermedijera:

Priemr4- 1:

Sinteza etil estra(15, 4R,65, 145,18#)-18-amino-14-te/-c-butoksikarbonilamino-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]

nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline

A. U rastvor (2S, 4R)-4-amino-l-[benziloksikarbonil]pirolidin-2-metilkarboksilat hidrohlorida (2.00 g, 2.34 mmol) u metilen hloridu (25 ml) dodat je 2-(trimetilsilil)etil-p-nitrofenil karbonat (1.98 g, 6.99 mmol) i trietilamin (1.81 ml, 13.34 mmol). Reakcija je mešana u toku 3 dana, smeštena na silika gel i proizvod je eluiran sa 40% EtOAc/heksan i dobijeno je bezbojno ulje. Ulje je rastvoreno u metanolu (20 ml) i mešano sa 10% paladijumom na uljeniku u balonu vodonika. Posle mešanja u toku 4 h, reakcija je proceđena i koncentrovana. Rezultujuća čvrsta supstanca je rastvorena u IM vodenom HC1 (75 ml) i ekstrahovana sa metilen hloridom (75 ml). Vodeni sloj je učinjen baznim dodavanjem natirjum hidroksida i ponovo ekstrahovan sa metilen hloridom (100 ml). Oba organska ekstrakta su spojena, koncentrovana i rezultujući ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/metilen hlorid i dobijena je braonkasta čvrsta supstanca (1.29 g, 70%). LCMS=289(H+).

B. Rastvor etil estra 4(i?)-(2-trimetilsililetil karbonilamino)-pirolidin-2(5j4iarboksilne kiseline (1.29 g, 4.50 mmol),2( S)- terc-butilkarbonilamino-non-8-enonske kiseline (1.22 g, 4.51 mmol), HATU (2.06 g, 5.41 mmol) i diizopropiletilamina (1.18 ml, 6.76 mmol) u dimetilformamidu (10 ml) je mešan u toku noći. Reakcija je razblažena sa etil acetatom (150 ml), isprana sa IM vodenim HC1 (2 x 100 ml), osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Hromatografijom na silika gelu dobijeno je ulje koje je mešano sa litijum hidroksidom (0.28 g, 6.76 mmol) u metanolu (5 ml) u toku 2h. Reakcija je razblažena sa metilen hloridom i isprana sa IM vodenim HC1, osušena iznad magenzijum sulfata i koncentrovana da se dobije 1.2 g (49%) proizvoda. C. U etil estar l(i?)-ferc-butoksikarbonilamino-2(,Sj-vinil-ciklopropankarboksilne kiseline (0.70 g, 2.75 mmol) je dodat 4M HCl/dioan rastvor (2.87 ml, 11.46 mmol). Posle mešanja u toku 2 h, reakcija je koncentrovana i dobijena je čvrsta supstanca. U ovu čvrstu . supstancu dodata je (2(5)-terc-butoksikarbonilamino-non-8-enolil)-4(i?)-(2-trimetilsililetil karbonilamino)-pirolidin-2(iS)-karboksilna kiselina (1.21 g, 2.29 mmol), HATU (1.05 g, 2.75 mmol) i diizopropiletilamin (1.60 ml, 9.17 mmol) i metil hlorid (10 ml) i reakcija je mešana u toku 18 h na sobnoj temepraturi. Reakcija je smeštena na silika gelu i eluirana sa rastvorom 50% etil acetat/heksan i dobijen je proizvod kao bezbojno ulje (1.27 g, 83%). 665 (H+).

D. Rastvor etil estra l-{[l-(2-(.S<r>)-ferc-butoksikarbonilamino-non-8-enoil)-4-(^)-(2-trimetilsililetil karbonilamino)-pirolidin-2(1S)-karbonil]-amino}-2(S)-vinil-ciklopropan-l-(^)-karboksilne kiseline (1.27 g, 1.91 mmol) u metilen hloridu (195 ml) je degasiran u toku 1 h uvođenjem N2 kroz rastvor. Dodat je dihloro(o-izopropilfenil-metilen)(tricikloheksilfosfm)rutenijum (II) (0.057 g, 0.096 mmol) i reakcija je mešana na 40°C u toku 16 h. Reakcija je koncentrovana, naneta na silika gel i eluirana sa 50% etil acetat/heksan. Rezultujuće ulje je tretirano sa TBAF (1.0 M u THF, 2.87 ml) i zagrejana na 50°C u toku 4h. Reakcija je naneta na silika gel i eluirana sa 20% metanol/metilen hlorid i dobijena je tamna čvrsta supstanca (0.65 g, 69%).<!>H NMR (CD3C13400 MHz,) 8 1.06-1.66 (m, 17H), 1.85-1.95 (m, 2H), 2.0-2.1 (m, IH), 2.1-2.2 (m, IH), 2.2-2.3 (m, IH), 2.65-2.75 (M, IH), 3.40 (m, IH), 3.73-3.83 (m, 2H), 4.08-4.19 (m, 2H), 4.56 (m, IH), 4.78 (d, J=5.5 Hz, IH), 5.20 (t, J=8.1 Hz, IH), 5.34 (d, J=8.1 Hz, IH), 5.47 (dt, J=4.5, 10.8 Hz, IH), 7.08 (s, IH); 493 (H+).

5. Pobijanje jedinjenja sa opštom strukturom V

Sinteza (15, 4if, 65, 145, 18i?)-14-terc-butoksikarbonilamino-18-[(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karbonil)-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilne kiseline (Jedinjenje AR287262)

Rastvor 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karbonil hlorida (0.030 g, 0.152 mmol), etil estra (IS, 4R, 6S, 14S, 18 R)-18-amino-14-terc-butoksikarbonilamino-2,15 -diokso-3,16-diaza-triciklo [14.3.0.04 6]nonadek-7-en-4-karboksilne

kiseline (0.025 g, 0.050 mmol), DIEA (0.027 ml, 0.153 mmol) i katalitičke količine DMAP je mešan zajedno u metilen hloridu (0.3 ml) u toku 18 h. Reakcija je naneta na silika gel i proizvod je eluran sa 40% aceton/heksan i izolovna je bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u metanolu i tretirana sa litijum hidroksidom (0.011 g, 0.254 mmol) i 1 kapi vode. Posle mešanja u toku 5h, reakcija je razblažena sa metilen hloridom (30 ml), isprana sa IM vodenim HC1 (30 ml), rastvorom soli (30 ml), osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana i dobijeno je naslovno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. LCMS=:624 (MH+).

Sledeća jedinjenja su takođe pripremljena korišćenjem postupka opisanog u Primeru 5-1, sa l,3-dihidro-izoindol-2-karbonil hlorid kaozamenomza 3,4-dihidro-lH-izohinolin hlorid. LCMS=610 (H+).

Primer 5- 2:

(15,4R, 65,145, 18JR)-14-terc-butoksikarboniIamino-18-[(l,3-dihidro-izoindol-2-karbonil)-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0']

nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(Jedinjenje AR00298980) je pripremljena prema postupcima opisanim u Primeru 5-1, zamenom 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karbonil hlorida sa 1,3-dihidro-izoindol-2-karbonil hloridom. MS m/e 608.2 (M-l).

Primer 5- 3:

"Y??-NH

P o o

Jedinjenje AR00304160

(15, 4R, 65, 145,18i?)-14-terc-ButoksikarboniIamino-18-[(3,4-dihidro-2H-hinoIin-l-karbonil)-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo

[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksilna kiselina(Jedinjenje AR00304160) je pripremljena prema postupcima opisanim u Primeru 5-1, zamenom 3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karbonil hlorida sa 3,4-dihidro-2H-hinolin-l-karbonil hloridom. MS m/e 524.3 (M<+>+l-100).

6. Pobijanje jedinjenja sa opštom strukturom VI

(15,4R,65, 145, 18i?)-14-^rc-Butoksikarbonilamino-18-[(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karbotionil)-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo

[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-karboksiIna kiselina(Jedinjenje AR00304010) je pripremljeno prema postupcima opisanim u stupnju 4,

primera 1-2, osim što je karbonil diimidazol bio zamenjen sa tiokarbonil diimidazolom. MS m/e 640.1 (M<+>+l).

7. Pobijanje jedinjenja opšte strukture VII

Sinteza terc-butil estra (15,4R, 65,145,18/?)-{4-

ciklopropansulfonilaminokarbonil-18-[(3,4-dihidro-2H-izohinolinhinolin-2-karbonil)-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo

[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-il}karbaminske kiseline (Jedinjenje

AR00287266)je pripremljeno prema postupcima opisanim u Primeru 3-1, polazeći od kiseline pripremljene postupcima opisanim u Primeru 5-1. MS m/e 727.0 (M<+>+1).

Primer 7- 2:

Jedinjenje AR003 04008

terc-Butil estar (15,4R, 65, 14S, lHR)-{ 4-

ciklopropansuIfonilaminokarboniI-18-[(l,3-dihidro-izoindol-2-karbonil)

-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-4-

il}karbaminske kiseline (Jedinjenje AR00304008)je pripremljen prema postupcima opisanim u Primeru 3-1, polazeći od kiseline pripremljene postupcima opisanim u Primeru 5-2. MS m/e 613.2 (M^+l-100).

Primer 7- 3:

[14-(3-ciklopentil-ureido)-4-cikIopropansulfonilaminokarbonil-2,15-

diokso-3,16-diaza-triciklo[14.3.0.0<4>,<6>]nonadek-7-en-18-iI]amid (15,4R,

65, 145, 18/?)-l,3-dihidro-izoindol-2-karboksiIne kiseline (Jedinjenje

AR00304014)je pripremljen prema postupcima opisanim u Primeru 2-24, polazeći od acilsulfonamida pripremljenog postupcima opisanim u Primeru 7-4. MS m/e 724.2 (M<+>+1).

Primer 7- 4:

terc-Butilestar (15,4R,65, 145, 18i?)-{4-ciklopropansulfonilaminokarbonil-18-[(3,4-dihidro-lH-izohinolin-2-karbotioil)-amino]-2,15-diokso-3,16-diaza-tricikIo[14.3.0.0<4>'<6>]nonadek-7-en-14-il}karbaminske kiseline (Jedinjenje AR00304012) je pripremljen

prema postupcima opisanim u Primeru 3-1, polazeći od kiseline pripremljene postupcima opisanim u Primeru 6-1. MS m/e 743.0 (M^+l).

Primer 8

BNS3-NS4A proteazni test

Obrazovanje NS3 kompleksa sa NS4A- 2

Rekombinantni NS3 pune dužineE. coliili Baculovirusa je razblažen do 3.33 pM sa puferom za testiranje, materijal je prenet u ependorfovu epruvetu i smešten u vodeno kupatilo ohlađeno na 4°C. Dodata je odgovarajuća količina NS4A-2 do 8.3 mM u puferu za testiranje do jednake zapremine NS3 u stupnju 2.1.1 (konverzioni faktor -3.8 mg/272pg pufera za testiranje). Materijal je premešten u ependorfovu epruvetu i smešten u vodeno kupatilo ohlađeno na 4°C.

Posle uspostavljanja ravnoteže na 4°C, jednake zapremine NS3 i NS4A-2 rastvora su spojene u ependorfovoj epruveti, blago pomešane sa manualnom pipetom i smeša je inkubirana u toku 15 minuta na vodenom kupatilu na 4°C. Krajnja koncentracija u smeši je bila 1.67 pM NS3, 1.15 mM NS4A-2

( 2485- struki molarni višak NS4A- 2).

Posle 15 minuta na 4°C, ependorfova epruveta sa NS3/NS4A-2 je uklonjena i smeštena na vodeno kupatilo na sobnoj temepraturi u toku 10 minuta. NS3/NS4A-2 je razdeljen u alikvote odgovarajuće zapremine koji su čuvani na -80°C( E. coliNS3 korišćena pri 2 nM u testu, alikvot od 25 pl. BV NS3 je korišćen pri 3 nM, alikvot od 30 pl).

Test inhibicije NS3

Stupanj 2. 2. 5. Uzorci jedinjenja su rastvoreni do 10 mM u DMSO i zatim razblaženi do 2.5 mM (1:4) u DMSO. Tipično, jedinjenja su dodata na ploču za testiranje u koncentraciji od 2.5 mM, posle razblaživanja dobijena je početna koncentracija od 50 mikroM na inhibicionoj krvi testa. Jedinjenja su serijski razblažena u puferu za testiranje da se obezbede rastvori za testiranje nižih koncentracija.

Stupanj 2. 2. 6.E coliNS3/NS4A-2 - su razblaženi do 4 nM NS3 (1:417.5 od 1.67 pm štoka -18 pL 1.67 pM štok + 7497 pl pufera za testiranje).

BV NS3/NS4A-2 je razblažen do 6 nM NS3 (1:278.3 1.67 pM štok - 24 ul 1.67 pM štok +6655 pl pufer za testiranje)

Stupanj 2. 2. 7. Korišćenjem manualnih multikanalskih pipeta, pažljivo bez unošenja mehura na ploču, dodato je 50 pl pufera za testiranje u bunarčiće A01-H01 crne ploče Costar sa 96-bunarčića od polipropilena za čuvanje. Stupanj 2. 2. 8. Korišćenjem manualnih multikanalskih pipeta, pažljivo bez unošenja mehura na ploču, 50 pl razblaženog NS3/NS4A-2 iz stupnja 2.26 je dodato u bunarčiće A02-H12 ploče u stupnju 2.2.7.

Stupanj 2. 2. 9. Korišćenjem manualnih multikanalskih pipeta, pažljivo bez unošenja mehura na ploču, bunarčići od 25 pl na ploči sa razblaženim lekovima iz stupnja 2.2.5 su premešteni u odgovarajuće bunarčiće na ploči za testiranje u stupnju 2.2.8: Nastavici na multikanalnoj pipeti su menjani za svaki red prenetih jedinjenja.

Stupanj 2. 2. 10. Korišćenjem manualnih multikanalskih pipeta, pažljivo bez unošenja mehura na ploču, bunarčići iz ploče za testiranje iz stupnja 2.2.9 su mešani aspiracijom i dispergovanjem 35 pl od 75 pl u svakom bunarčiću pet puta. Nastavici na multikanalnoj pipeti su menjani za svaki red mešanih bunarčića.

Stupanj 2. 2. 11. Ploča je pokrivena sa poklopcem polistirenske ploče i ploča iz stupnja 2.2.10 koja sadrži NS3 proteazu i uzorke jedinjenja je prethodno-inkubirana 10 minuta na sobnoj temperaturi.

Dok su ploče iz stupnja 2.2.11 su prethodno inkubirane, RETS1 supstrat je razblažen u 15 ml polipropilenske epruvete za centrifugu. RETS1 substrat je razblažen do 8 pM (1:80.75 646 pM štoka - 65 pl 646 pM štoka + 5184 pl pufera za testiranje).

Pošto su ploče iz stupnja 2.2.11 preinkubirane i korišćenjem manualnih multikanala, dodato je 25 pl substrata u sve bunarčiće na pločama. Sadržaji bunarčića su brzo pomešani, kao u stupnju 2.2.10, ali mešanje 65 pl od 100 pl u bunarčićima.

Ploča je čitana u kinetičkom modu na Molecular Devices SpectraMax Gemini XS čitaču ploča. Uslovi čitanja: Vreme čitanja: 30 minuta, Interval: 36 sekundi, čitanje:51, ekscitacija A,:335 nm, emisijaX:495 nm, 'cuoff: 475 nm, Automix:isključen, kalibrat: jednom, PMT:visok, čitanje/bunarčiću: 6, Vmax pts: 21 ili 28/51 u zavisnosti od dužine linearnosti reakcije.

IC50su određeni korišćenjem četiri parametra krive koji se uklapaju u jednačinu i pretvoreni su u Ki korišćenjem sledićh Km:

NS3 Pune dužineE. coli-2.03 pM

NS3 Pune dužine BV -1.74 pM

gde Ki=IC50/(l+[S]/Km)).

Kvantifikacija ELISA selektibilnih marker proteina, Neomicin

fofotransferaze II fNPTII) u HCV sub genomskom replikonu, GS4. 3

HCV sub-genomski replikon (I377/NS3-3', prisup br. AJ242652), stabilnost održavana u HuH-7 ćelijama hepatoma, su stvorene od Lohmannet al. Scinence285:110-113 (1999). Replikon koji sadrži ćelijsku kulturu, označenu kao GS4.3, je dobijen od Dr. Christopher Seeger Institute for Cancer Research, Fox Chase Cancer Center, Philadelphia, Pennsvlvania.

GS4.3 ćelije su održavane na 37°C, 5% C02u DMEM (Gibco 11965-092) obogaćenim sa L-glutaminom 200 mM (100 X) (Gibco25030-081), neesencijalnim amino kiselinama (NEAA)(Biowhittaker 13-114E), Fetalni goveđi serum (FBS)(Hyclone SH3007.03) inaktiviran toplotom (HI) i 750 pg/ml geneticinom (G418) (Gibco 10131-032). Ćelije su pod podeljene 1:3 ili 4 svaka 2-3 dana. 24 časa pre testa, GS4.3 ćelije su sakupljene, izbrojane i smeštena na ploče sa 96 bunarčića (Costar 3585) pri 7500 ćelija/bunarčiću u 100 pl standardnog medijuma za održavanje (gore) i inkubirane u gornjim uslovima. Da bi se inicirao test, medijum kulture je uklonjen, ćelije su isprane jednom sa PBS (Gibco 10010-023) i 90 pl Medijum za test (DMEM, L-glutamin, NEAA, 10% HI FBS, br. G418). Inhibitori su napravljeni kao 10X štok u medijum za test (3-struko razblaženje od 10 pM do 56 pM krajnje koncentracije, krajnji koncentracije % DMSO), 10 pL je dodato bunarčiće u duplikatu, ploče su ljuljane radi mešanja i inkubirane kao gore u toku 72 h.

NPTII ELISA kit je nabavljen od AGDIA, Ine, (Sistem direktnog ELISA testa jedinjenja za Neomicin fosfotransferazu II, PSP 73000/78000). Proizvođačko uputstvo je praćeno, sa nekoliko modifikacija, 10X PEB-1-lizatni pufer je napravljen da uključuje 500 pM PMSF (Sigma P7626, 50 mM štok u izopropanolu). Posle 72 h inkubacije, ćelije su isprane sa PBS i dodato je 150 jul PEB-1 sa PMSF po bunarčići. Ploče su mućkane intenzivno u toku 15 minuta, na sobnoj temperaturi, zatim su zamrznute na -70°C. Ploče su otopljene, lizati su potpuno izmešani i naneto je 100 pl na NPTII Elisa ploče. Napravljena je standardna kriva. Lizat od kontrolnih ćelija tretiranih sa DMSO je sakupljen, serijski razblažen sa PEB-1 sa PMSF i nanet u duplikatu u bunarčiće ELISA ploče u opsegu od polazne količine lizata do 150 ul-2.5 ul. Dodatno, 100 pl pufera samo je naneto u duplikatu kao šlepa proba. Ploče su zatvorene, blago mućkane na sobnoj temperaturi u toku 2 h. Posle inkubacije dobijanja, ploče su isprane sa 5X 300 pl sa PBS-T (0.5% Tween-20, PBS-T je obezbeđen u ELISA kitu). Za detektovanje, IX razblaženje konjugata enzima razblaženog MRS-2 (5x) je napravljeno u PBS-T u kome 1:100 razblaženja konjugata enzima A i B je dodato prema uputstvu. Ploče su ponovo zatvorene i inkubirane uz mućkanje, pokrivene, na sobnoj temperaturi u toku 2 h. Ispiranje je zatim ponavljano i dodato je 100 pl TMB supsrata na sobnoj temperaturi. Posle približno 30 minuta inkubacije (sobna temepratura, mešanje, pokriveno) reakcija je zaustavljena sa 50 pl 3M sumporne kiseline. Ploče su čitane na 450 m na Molecular Devices Versamax čitaču ploča.

Inhibitorni efekat je izražen kao procenat DMSO-tretiranih kontrolnih signala i inhibicionih krive su izračunate korišćenjem jednačine sa 4 parametra: y=A+((B-A)/(l+((C/x)<A>D))), gde je C polovima maksimalne aktivnosti ili EC50.

PRIMERIAKTIVNOSTI

Gde

A pokazuje IC50 ili EC50, kao stoje navedeno, manji od 50 pM B pokazuje IC50 ili EC50, kao što je navedeno, manji od 10 pM C pokazuje IC50 ili EC50, kao što je navedeno, manji od 1 pM

i D pokazuje IC50 ili EC50, kao što je navedeno, manji od 0.1 pM

Test specifičnosti

Kada su jedinjenja procenjivana u testu specifičnosti, nađeno je da su jedinjenja formule I selektivna u tome da ne pokazuju značajnu inhibiciju kod katepsina B, himotripsina, trombina ili lukocinte elastaze.

Primer 9: Farmakokinetičke analize jedinjenja

Postupci

Jedinjenja su inicijalno sintetizovana i testirana na aktivnost (IC50) u testu fluorogenske NS3/4 proteaze i sistemu HCV replikona zasnovanom na ćelijama kao što je gore opisano u Primeru 8. Farmakokinetičke analize plazme kodRattus sp.koje prate IV davanje su zatim korišćene u konjukciji sain vitroispitivanjima mikrozoma humane jetre i hepatocita da bi se usmerio nacrt metabolički stabilnih jedinjenja od jedinjenja sa dejstvom <20 nM. Ovo vodi dalje kada su optimizirane fizičke osobine leka i davanja u oralnim dozama uRattus sp.ka proceni jetre, srca i koncentracija u plazmi.

Jedinjenja su testirana na klirans jetre u toku vremenskog perioda posle oralnog doziranja od 3 mg/kg kod pacova. Za bilo koje jedinjenje nađeno da pokazuje koncentraciju u jetri 8 sati posle davanja što je bar 100 struko veća koncentracija jedinjenja efikasnog da inhibira 50% maksimalne inhibicije u testu replikona (replikon EC5o), izvedene su dodatne toksikološke procene koda pacova korišćenjem doza do 30 mg/kg oralno BID u toku sedam dana.

Rezultati

Jedinjenja AR294381, AR261408, AR333833 i AR334191 doveo je do EC5ovrednosti replikona približno 2 nM i pokazuju stabilnostin vitrokod pacova i inkubacione testove humanih hepatocita, čiji podaci bi predvideli nizak do umeren odnos kliransa iz jetre. Dodatno, ova jedinjenja pokazuju visok stepen selektivnosti naspram panela drugih serin proteaza i ne značajnu inhibiciju citohroma P450 izooblika ili hERG kanalne aktivnosti čak pri najvišim testiranim koncentracijama (10 pM).

Za jedinjenja AR294381, AR261408, AR333833 i AR334191, jedno oralno doziranje 30 mg/kg kodRatuss sp.dovelo je do koncentracije u jetri 24 sata posle doziranja koje je bilo bar 200 struko veće od njihove odgovarajuće vrednost EC50replikona.

JedinjenjeAR334191je dovelo do nivoa u srcu i plazmi do dva reda magnitude niže, i kinetički su u korelaciji sa koncentracijama u jetri kod istih životinja. Pri klinički razumnijim oralnim dozama (3 mg/kg), jedinjenjeAR334191je dovelo do koncentracije 8 sati posle doziranja koja je bila preko 100 struko veća nego vrednsot EC50replikona jedinjenja. Posle izlaganja jedinjenjuAR334191pri dozi od 30 mg/kg oralno BIG u toku 7 dana, kod tretiranih životinja nije primećen mortalitet, promena u težini ili abnormalnosti u kliničkoj herniji.

Zaključak

Razvijeni su jaki, metabolički stabilni, oralno dostupni mali molekuli inhibitori HCV NS3 proteaze. Umerenim oralnim doziranjem koncentracija (3 mg/kg) ovih jedinjenja su pokazala visoke nivoe kod jetre (100 struko veće nego njihovih odgovarajućih EC50 vrednosti replikona) 8 sati posle doziranja. Izloženost plazme i srca je do dva reda megnitude ispod onog primećenog u jetri i takve niske koncentracije minimiziraju bilo koji potencijalni sistematki toksikološki ishod.

JedinejnjeAR334191ne pokazuje toksičnost kodRattus sp.kada je doziran u toku sedam dana na 30 mg/kg BID, obezbeđujući bar 10-struki sigurnosnu marginu preko predpostavljene efikasne doze (3 mg/kg) što dovodi do koncentracija u jetri od 100 strukog viška u odnosu na EC50 vrednosti replikona jedinjenja.

Claims (29)

1. Jedinjenje koje ima formulu I, VIII ili IX: gde: (a) R i R su svaki nezavisno H, halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4_ioalkilcikloalkil, C2_6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-C\. 6 alkil, Cj.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C6m10aril, piridal, pirimidal, tienil, furanil, tiazolil, oksazolil, fenoksi, tiofenoksi, S(0)2NR<6>R<7>, NHC(0)NR<6>R<7>, NHC(S)NR<6>R<7>, C(0)NR<6>R<7>, NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>, NHC(0)R<8>, NHC(0)OR<8>, SOmR<8>, NHS(0)2R<8>;OCHnNR<6>R<7>ili OCFLR<16>, gde R<16>je imidazolil ili pirazolil; pomenuti tienil, pirimidal, furanil, tiazolil i oksazolil u definiciji R<1>i R<2>su opciono supstituisani sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci^ alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenuti C6ih10aril, • • • ■ • 12 piridal, fenoksi i tiofenoksi u definiciji R i R su opciono supstituisani sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3. 7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci. 6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (b) m=0, 1 ili 2; (c) R<4>je H, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil fenil ili benzil, pomenuti fenil ili benzil opciono su supstituisani sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7 cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (d) R<5>je C,.6alkil, C(0)NR<6>R<7>, C(S)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>, S(0)2R<8>, ili (CO)CHR<21>NH(CO)R<22>; 6 7* • (e) R i R su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil ili fenil, pomenuti fenil je supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R i R uzeti zajedno sa azotovim atomom za koji su vezani obrazuju indolinil, pirolidinil, piperidinil, piperazinil ili morfolinil; (f) R<8>je Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani sa jednim do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi ili fenil; ili R je C6ilii0aril koji je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisani sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R8 je Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro grupa; ili R<8>je tetrahidrofuranski prsten koji je povezan preko C3ili C4položaja prstena tetrahidrofurana; ili R<8>je tetrapiranilni prsten povezan preko C4položaja prstena tetrapiranila; (g) Y je sulfonamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde je R<9>Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.]0alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkoksi, ili fenil, ili R<9>je C6niioaril koji je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, CN6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6 alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, C[.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R<9>je C?6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro grupa, NR<6>R<7>ili (CO)OH ili R<9>je heteroaromatični prsten opciono supstituisan sa do dva puta sa halo, cijano, nitro, hidroksil ili Ci.6alkoksi; ili Y je karboksilna kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek; (h) R<10>i R<n>su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4. i0alkilcikloalkil, C6iHi0aril, hidroksi-C^alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nR<6>R<7>, (CH2)„C(0)OR<14>gde R<14>je H, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, ili fenil; ili R<14>je C6ai10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.loalkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi- Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenutiC6 m10aril, u definiciji R<10>i R<11>je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, C2-6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; iliR10iR<11>uzeti zajedno sa ugljenikovim atomom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil ili R10iR<11>su kombinovani kao O; (i) p=0 ili 1; G) R<12>i R<13>su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4. loalkilcikloalkil, C6in10aril, hidroksi-Ci^alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nR<6>R<7>, (CH2)„C(0)OR14gde R14je H, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, ili fenil; ili R<14>je C6m10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.loalkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan • • ••••12" 13" • sa do 5 fluoro; pomenuti C6 mi0aril, u definiciji R i R je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3_7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-Ci. 6alkil, Ci^alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci.6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R12iR<13>uzeti zajedno sa ugljenikovim atomom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil ili R 12 i R 13 su svaki nezavi•sno Ci.6alkil opciono supstituisan sa (CH2)nOR<8>; (k) R<20>je H, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.10alkilcikloalkil, C6ini0aril, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, (CH2)nNR<6>R<7>, (CH2)nC(0)OR<14>gde R<14>je H, Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil, koji su svi opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkoksi, ili fenil; ili R14 je C6 m10aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.loalkilcikloalkil, C2_6alkenil, Ci^alkoksi, hidroksi- Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; pomenuti C6in i0aril, u definiciji R 12 i R 13 je opciono supstituisan sa do tri halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil, C3_7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, C2.6alkenil, Ci.6alkoksi, hidroksi-C(.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci^alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro;

(1) n = 0-4; (m) V je izabran od O, S ili NH; (n) kada V je O ili S, W je izabran od O, NR<15>ili CR<15>; kada V je NH, W je izabran od NR<15>ili CR<15>, gde R15 je H, C^alkil, C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkli ili Ci_6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro; (o) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu; (p) R<21>je Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil koji su opciono supstituisani sa jedan do tri sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkoksi, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, ili fenil; ili R je C6in io aril koji je opciono supstituisan sa do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci_6alkil, C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, C2_6alkenil, Cj^alkoksi, hidroksi-Ci.6alkil, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro, Ci_6alkoksi opciono supstituisan sa do 5 fluoro; ili R je piridal, pirimidal, pirazinil, tienil, furanil, tiazolil, oksazolil, fenoksi, tiofenoksi; (q) R 22 je Ci-6alkil, C3.7cikloalkil, C4_ioalkilcikloalkil, koji su opciono supstituisani jednom do tri puta sa halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.6alkil opciono supstituisan sa do 5 fluoro ili fenil; i (r) Z je spojen ili dodat aril ili heteroarilni sistem prstenova.

2. Jedinjenje koje ima formulu II: (a)<R>i R su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci. 3alkoksi. (b) R5 je C(0)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>; (c) R6 i R<7>su svaki nezavisno H, Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4. loalkilcikloalkil ili fenil; (d)<R>je Ci^alkil, C3.7cikloalkil, C4.ioalkilcikloalkil ili 3-tetrahidofuril. (e) Y je sulfonamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde je R<9>C^alkil, C3.7cikloalkil ili fenil koji su opciono supstituisani sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.3alkil, C3.7cikloalkil, Ci.3alkoksi ili Y je karboksilna kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek; (f) R10 i R<11>s<u>svaki nezavisno H, Ci.3alkil ili R10 i R11 uzeti zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil; (g) W je izabran od O ili NH; i (h) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

3. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima opštu formulu III: gde (a) R 1 i R 2 su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, C^alkil, Ci. 3alkoksi (b) R5 je C(0)NR<6>R<7>, C(0)R<8>, C(0)OR<8>; (c) R8 je Ci.6alkil, C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil ili 3-tetrahidrofuril. (d) Y je sulfonilamid formule -C(0)NHS(0)2R<9>, gde R9 je Ci.3alkil, C3. 7cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, nitro, hidroksi, Ci.3alkil, C3.7cikloalkil, Ci.3alkoksi ili Y je karbociklična kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek; (e) W je izabran od O ili NH; (f) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

4. Jedinjenje koje ima opštu formulu IV R<1> R<11> lp, N—' W \ /o O o <H>s { ?, u \ /1310 ltIV (a) R1 1 i Rz 2 su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, C^alkil, Ci. 3alkoksi; (b) R5 je C(0)OR<8>ili C(0)NHR<8>; (c) R8 je Ci.6alkil, C5.6cikloalkil ili 3-tetrahidofuril; (d) R9 je Ci.3alkil, C3.4cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, C^alkoksi; (e) R10 i R<11>su svaki nezavisno H, Ci_3alkil ili R10 i R11 uzeti zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil; (f) W je izabran od O ili NH; i (g) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

5. Jedinjenje koje ima oštu formulu V (a) R1i R<2>su svaki nezavisno H, halo, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci. 3alkoksi (b) R5 je C(0)OR<8>ili C(0)NHR<8>(c) R8 je Ci.6alkil, C5.6cikloalkil, ili 3-tetrahidofuril. (d) R9 je Ci.3alkil, C3.5cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci.3alkoksi (e) W je izabran od O ili NH; (f) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

6. Jedinjenje koje ima opštu formulu VI (a) R 1 i R 2 su svaki nezavisno H, hloro, fluoro, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci_3alkoksi (b) R5 je C(0)OR8 C(0)NHR8 (c) R8 je Ci.6alkil, C5.6cikloalkil, (d) R9 je Ci.3alkil, C3.4cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, hidroksi, C^alkil, Ci.3alkoksi (e) R<10>i R<11>su svaki nezavisno H, Ci.3alkil ili R<10>i R11 uzeti zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropil, ciklobutil; (f) isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

7. Jedinjenje koje ima opštu formuluVII R<1> N g \ /o o o9 ( r, 14 <\>12 y \ /1310 n VII (a) R<1>i R<2>su svaki nezavisno H, hloro, fluoro, cijano, hidroksi, Ci_3alkil, Ci^alkoksi(b) R5 jeC(0)OR8ili C(0)NHR<8>(c)R8 jeC^alkil, C5.6cikloalkil(d) R9 jeCi.3alkil, C3.4cikloalkil ili fenil koji je opciono supstituisan sa do dva halo, cijano, hidroksi, Ci.3alkil, Ci.3alkoksi isprekidana linija predstavlja opcionu dvostruku vezu.

8. Farmaceutska kompozicija, koja sadrži: a) jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-7; i b) farmaceutski prihvatljiv nosač.

9. Upotreba jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1-7 u postupku proizvodnje medikamenta za lečenje infekcije virusa hepatitisa C.

10. Upotreba prema zahtevu 9, što se postiže održani virusni odgovor.

11. Upotreba jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1-7 u postupku proizvodnje medikamenta za lečenje fibroze jetre.

12. Upotreba jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1-7 u postupku proizvodnje medikamenta za povećavanje funkcije jetre kod pojedinaca koji imaju virusnu infekciju hepatitisa C.

13. Upotreba prema zahtevu 9, 11 ili 12, što postupak dalje obuhvata i efikasnu količinu nukleozidnog analoga.

14. Upotreba prema zahtevu 13, što je nukleozidni analog izabran od ribavirina, levovirina, viramidina, L-nukleozida i izatoribina.

15. Upotreba prema zahtevu 9, 11 ili 12, što postupak obuhvata oralnu dnevnu količinu od oko 400 mg do oko 3600 mg pirfenidona ili pirfenidinskog analoga.

16. Upotreba prema zahtevima 9, 11 ili 12, što postupak dalje obuhvata efikasnu količinu inhibitora NS5B RNK-zavisne RNK polimeraze.

17. Upotreba prema zahtevu 9, 11 ili 12, što postupak dalje obuhvata efikasne količine antagonista faktora nekroze tumora izabranog iz grupe koju čine etanercept, infliksimab i adalimumab.

18. Upotreba prema zahtevima 9, 11 ili 12, što postupak dalje obuhvata efikasnu količinu timozina-a.

19. Upotreba prema zahtevu 18, što postupak obuhvata subkutanozno timozin-a dva puta nedeljno u količini od oko 1.0 mg do oko 1.6 mg.

20. Upotreba prema zahtevu 9, 11 ili 12, što postupak dalje obuhvata efikasnu količinu interferona gama (IFN-y).

21. Upotreba prema zahtevu 20, što postupak obuhvata subkutanoznu količinu od oko 10 pg do oko 300 pg IFN-y.

22. Upotreba prema zahtevima 9, 11 ili 12, što se postupak obuhvata efikasnu količinu interferona-alfa (IFN-a).

23. Upotreba prema zahtevu 22, što je IFN-a monoPEGilovan (30 kD, linearni)- konsezusni IFN-a davan u doznim intervalima u toku svakih 8 dana do svakih 14 dana.

24. Upotreba prema zahtevu 22, što je IFN-a monoPEGilovan (30 kD, linearni) konsezusni IFNa davan u doznim intervalima od jednom svakih 7 dana.

25. Upotreba prema zahtevu 22, što je IFN-a INFERGEN konsezusni IFN-a.

26. Upotreba prema zahtevima 9, 11 ili 12, što se dalje obuhvata efikasne količine sredstva izabranog iz grupe koju čine 3'-azidotimidin, 2',3'-dideoksiinozin, 2',3'-dideoksicitidin 2-,3-didehidro-2',3'-dideoksitimidin, kombivir, abakavir, adefovir, dipoksil, cidofovir i inozin monofosfat dehidrogenazni inhibitor.

27. Jedinjenje prema zahtevu 1 koje ima formulu:

28.Kompozicija prema zahtevu 8, koja obuhvata jedinjenje koje ima formulu:

29.Upotreba prema zahtevu 9, 11 ili 12, što obuhvata efikasnu količinu j edinj enj a formule: