JPS6023401A

JPS6023401A - 多糖類およびその製造法

Info

Publication number: JPS6023401A
Application number: JP58037486A
Authority: JP
Inventors: Akira Misaki; 三崎　旭; Yoshiaki Sone; 曽根　良昭; Takao Kato; 喬雄加藤
Original assignee: Toyo Soda Manufacturing Co Ltd
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1983-03-09
Filing date: 1983-03-09
Publication date: 1985-02-06
Also published as: JPH0376323B2; EP0121146A2; US4639516A; EP0121146A3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明はフクロタケに由来する多糖類、その製造法およ
びこの多糖類を有効成分として含む抗腫瘍剤に関する。

従来よりある種の多糖類が抗腫瘍性を示すことは知られ
ているがその構造と抗腫瘍性との相関は今だ明確ではな
い。

また或種の菌類由来の多糖を酸化後還元して、ポリオー
ル化を行ない抗腫瘍性のある多糖を得ることも公知であ
る。例えはキクラゲおよびペスクロチア属の産生ずる多
糖からこの様な処理によって得られる多糖が抗腫瘍性を
有することは本発明者等の発明についての特開昭５５−
２５４０．９および特開昭５６−３４７０１により明ら
かとなっている。この場合も原料および得られるポリオ
ール化された多糖の構造等と抗腫瘍性との関係は必ずし
も明らかでない。

本発明者等はフクロタケからアルカリ抽出された多糖に
強い抗腫瘍性があることをすでに見出している。（特願
昭５７−１６２１２１号）しかしこの多糖は乾燥により
中性条件で水に対し難溶化する性質があり、抗腫瘍剤と
して臨床に用いるに充分に使いやすいとは言い難い。

本発明者等は特願昭５７−１６２１２１号記載の多糖の
抗腫瘍性を損なうことなく中性条件で水に対する溶解性
を改良すべく鋭意検討の結果酸化剤、特に過ヨウ素酸ま
たはその水溶性塩による酸化処理についで還元処理によ
り導ひかれた多糖がその処理前の多糖に比較し著しるし
く中性条件で水浴性が改善されると同時にその抗腫瘍性
が増強されることを発見し本発明をなしたものである。

すなわち本発明はフクロタケに含有されるアルカリ可溶
性多糖を酸化剤、特に過ヨウ素酸またはその水浴性塩に
よる酸化処理につぐ還元処理により調整することのでき
る水溶性が改善されかつ抗腫瘍性の増強された多糖を提
供するものである。

本発明の多糖の物理的化学的性質は以下の通りである。

（１）溶解性水、生理食堪水、アルカリ水浴液およびジメチルスルホ
キシドに可俗であり、メタノール、エタノール、’ｎ−
７’タノール、アセトン、ベンゼン、トルエン、［１２
エチル、フロピレンクリコール、ピリジン等に実質的に
不随である。

（２）　旋光度本発明の多糖の（）、５規冗水酸化ナトリウム水溶液（
０，５％）中での比施光度は〔α〕２５：約＋２２，４°　である。

（３）元素分析充分に乾燥された試料の元素分析匝はＣ：４３〜４４．５チＨ：　５．８〜６．３　％でありＮ、Ｓは検出限界以下であった。

（４）分子量所望により用いる低粘度化処理の方法ならびに条件にも
よるが、濃度０．１モル／ｊ、ｐｉ（８，６のトリス塩
酸緩衝液全移動相とするゲル濾過高速液体クロマトグラ
フィにおいて分子量約７万ないし約８０万の分画中に溶
出する。

（５）構成糖本発明の多糖をギ酸および硫酸あるいは硫酸で加水分解
した後、高速液体クロマトグラフィ（移動相：’　ＣＨ
ｓＣＮ／ＬＯ＝　７５／　２５　、カラム：東洋曹達製
ＬＳ−４５０Ｋ）、ならびにペー／ぐ一クロマトグラフ
ィ（展開溶媒：ブタノール／ピリジン／水−６／４／３
　、発色剤：硫酸銀溶液）ならびにアルジトールアセテ
−１・に誘導した後ガスクロマトグラフィ（カラム：　
’ｌ’ｈｅｌ−ｎｌｏｎ−３０００およびＥＣＮ５　Ｓ
−Ｎ　）で同定ならびに定量した。

（イ）　本発明の多糖全完全に加水分解するとり゛ルー
コースとグリセロールトクリコールアルデヒドが生成し
た。

（０）本発明の多糖を箱守法によりメチル化し、加水分
解した後分解物をそのままあるいはアルジトールアセテ
−１・に誘導してガスクロマトグラフィで分析した所、
主成分として２゜４．６−トリー〇−メチルグルコース
が検出され、少量成分として２．．４−０−メチルグル
コースならびに１．３−ジ−ｏ−メチル−グリセリンが
検出され、他にごく少量の２゜３　、４　、６−テトラ
−０−メチル−グルコースと２．３．４−トリー〇−メ
チルーグルコースが認められる場合と認められｙ、（い
場合がある。

（ハ）　本発明のグルカンを酸で緩和加水分解すると白
色の沈殿７生ずる。この水溶性画分全高速液体クロマト
グラフィで分析するとグリセリンの存在が確認される。

一方この白色沈殿をメチル化し加水分解した後分解物を
そのままあるいはアルジトールアセテートに誘導してガ
スクロマトグラフィで分析した所２，４゜６−１−’）
−０−メチル−グルコースのみが主成分として検出され
、他に痕跡量の２．３゜４．６−チトラーＯ−メチルグ
ルコースが検出される。

従って本発明の多糖は主鎖は実質上β−１゜３結合のグ
ルコースのみから成り、β−１゜３−結合のグルコース
結合４〜６個に１個の割合でその６位にβ−結合で主と
して単独のクルコース残基またはグルコース残基の炭素
−炭素結合の一部が切断され、かつポリオール化された
基より成る側鎖を有するが、側鎖約３個のうち１個はβ
−１，６−結合した２コノクルコース残基またはそのグ
ルコース残基の炭素−炭素結合の一部が切断され、かつ
ポリオール化された基より成ると認められる。

これらの結末および後述するフクロタケ由来の多糖の構
造から本発明の多糖は、本質的に式で表わされる第１の
くり返えし単位（式中Ｄ　−ＧｌｕはＤ−グルコピラノ
シル基を表わし、βは結合様式を表わし数字は結合位置
を表わす）、式で表わされる第２のくり返し単位（式中
Ｄ−Ｑ／、ｕ。

β及び数字は前記同様の意味を表わしＸは式％式％（で表わされる基またはＣＩ（，０）１１０）１で表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。

これらの両式中のβも前記同様の意味である）ならびに ↓ で表わされる第３のくり返えし単位（式中り−Ｇｔｕ　
、β、Ｘ及び数字は前記同様の意味を表し、Ｙは式％式％で表わされる基または式ＣＰ）ＩＣＨ。

１　（Ｑ）で表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。

これらの前式中、（Ｐ）全村した炭素にＸが結合し、（
Ｑｌを付した酸素でグルコピラノシル基に結合する意味
である）からなり、前記第２および／または第３のくり
返えし単位中のＸの少なくとも一部は前記Ｈ２０Ｈ ■ ＨＯＣＨ２Ｃ−０−ＣＨ−ｏ−・・・・・・・・・囚ＩＨＣＨ，ＯＨで表わされる基であり、前記第１．第２および第３の各
くり返し単位の個数の和１００個当り、各平均で、第３
のくす返えし単位の個数が約４ないし約１２個であり、
第２のくり返えし単位と第３のくり返えし単位の個数の
和が約１６ないし約２３個である、フクロタケ由来の多
糖類である。

本発明の多糖類の（ＩＩ）式および（ロ）式で表わされ
るくり返えし単位中のＸおよびＹの式（４）で表わされ
る基および式（Ｃ）で表わされる基の合量は、好ましく
はその式（ホ）、　（Ｂ　、　（０および（６）の各基
の合量の１／４以上である。

主鎖のβ−１，３−グルコビラノース単位当りの、式（
５）と式（Ｃ）の和お割合ならびに式（Ｂ）と式（６）
の和の割合は本発明の多糖を過ヨウ素酸によって完全に
酸化した心きの過ヨウ素酸の消費量およびギ酸の生成量
ならびに完全に加水分解した時のグリセリンおよびグル
コースの定量により計算される。

本発明は更にフタロタケをアルカリ水溶液で抽出し、得
られた可溶性画分を酸化したのち還元して、その炭素−
炭素結合の一部を切断して開環させ、本発明の多糖類全
製造する方法を提供するものである。

原料として用いるフクロタケはその子実体及び菌糸体の
いずれであってもよい。そしてこれらは生の状態であっ
ても乾燥品であってもよい。抽出にあたり原料をあらか
じめ細断することは抽出効率をあげるために有効である
。

抽出に用いるアルカリ水溶液としては、例えば水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物を
用いることができる。特ｌと水酸化すｌ−ＩＪウム水溶
液が便利である。

用いるアルカリの濃度は特に限定的ではないが、約０．
１規定ないし約３規定の範囲内で用いるのが好ましい。

抽出に用いるアルカリ水浴液の量は通常１回の抽出あた
り、原料乾燥重量の約５ないし約１００倍量程度である
。この量は少なすぎれば抽出効率が悪＜、多すぎ第１ば
後処理が面倒である。

この抽出工程においては多糖の分解又は過酸化等の変性
を防ぐため、窒素等の不活性カスの雰囲気下で抽出を行
うことが好ましい。才たさらに水素化ホウ素す）　ＩＪ
ウム等の還元剤の存在下で行ってもよい。

抽出温度には格別の限定はないが、約３０℃以下が望ま
しい。さらに高温、例えば通常の熱アルカリ抽出の温度
条件である６０ないし８０℃程度で抽出すると、さらに
多くの分岐を有する多糖類が抽出されるからである。抽
出操作はくり返し行ってもよい。

本発明の方法で、フクロタケをアルカリ水溶液で抽出し
て得られる中間体の多糖類は水、アルコール等の溶媒で
は抽出されないので、アルカリ水溶液で抽出する工程に
先たち、水、熱水、緩衝液、アルコール又はこれらを組
合せた溶媒により、これらの夾雑物を除去しておくこと
が好ましい。なおこの様な操作によりアルカリ水溶液抽
出の際夾雑物となる蛋白質、マンガノラクトン、グリコ
ーゲン様多糖等をあらかじめ可成の程度除去することが
できる。

本発明の方法に従って抽出を行ったアルカリ水溶液は塩
酸、酢酸等の酸で中和する。通常この状態では目的の中
間体多糖は塩溶液中に俗解している。ついでこの浴液に
塩化セチルピリジニウムなどの第４級アンモニウム塩を
加えて夾雑する酸性物質を不溶性沈澱として析出させる
。この沈澱は濾過、遠心分離等の通常の分離手段により
除去する。こうして得た上清減音そのまま又は＠縮後水
で透析し、透析液を乾燥することにより中間体の多糖類
を得ることができる。第四級アンモニウム塩により処理
で得た上清液をそのまま又は濃縮した後、これにアルコ
ール、アセトンなどの沈澱剤を加え、得られた沈澱全所
望により水に対して透析し、乾燥して中間体の多糖類を
固体として得てもよい。その際の乾燥方法としては、減
圧乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段を用い
ることができる。所望によりこれらの調製工程の一部は
省略し、次の酸化処理を行ってもよい。

こうして得られる中間体多糖は本質的に式で表わされる
第１のくり返し単位、式で表わされる第２のくり返し単位及び式で表わされる第
３のくり返し単位（各式中Ｇｔｕはグルコピラノシル基
を、数字は結合位置を表わす）からなり、第１（式（１
））、第２（式（ＩＶ）及び式−３（式（Ｖ）の−各く
り返し単位の個数の和ｌｏｏ当り、平均で第３（式（Ｖ
））のくり返し単位の個数が約４ないし約１２個で、第
２（式（■））及び第３（式（Ｖ））のくり返し単位の
個数の和が同じく約１６ないし約２３個である多糖類で
ある。

この多糖類の物理的、化学的性質は以下の通りである。

（１）溶解性アルカリ水溶液及びジメチルスルホキシドに可溶で、メ
タノール、エタノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ベ
ンゼン、トルエン、６１エチル、プロピレングリコール
、ピリジン等に実質的に不溶である。乾燥した本発明の
多糖類は水に難溶性であるが、超音波処理などの操作を
加えることにより、水に可溶化できる。また塩類水溶液
にはわずかに溶ける。アルカリ水溶液に俗解したのち中
和すると俗解したままで残る。

（２）旋光度この多糖類の０．５規定水酸化ナトリウム水溶液（０，
５チ）中での比旋光度は〔α〕Ｄ　：約−１２゜である。

（３）元素分析１直注意深く充分に乾燥するとＣｎ）１２ｎＱｎ　から計算
される１直に近い圃全与えるが、通常少量の水分全金石
し、Ｃ：４３〜４５チｋＩ：　５．６〜６．４％Ｎ：定量限界以下程度の１直を与える。ハロゲン及び硫黄は検出されない
。

（４）　赤外線吸収分析ＫＢｒ錠剤法による赤タｉ線吸収スペクトルヲ第１１ツ
１に示す。８９６ｃｍ−’における吸収はＤ−グルコー
ス残基のβ−結合に特有なものである。

（５）　Ｃ”　−ＮＭ、Ｒ分析 δ　（直　：　ｌ　０　３．６　、　８　６．８　、　
７　６．９　、　７　５．２　。

７４．２　、　（ｐｐｍ　）　７３．３　、７０．７　
、６９．０及び６１．４にピークを示す。

（６）発色反応アンスロン反応　：陽性ニンヒドリン反応　：陰性ディシュのカルバゾール反応　；陰性（７）分子量濃度０．１モル／ｌ、ｐＨ８，６のトリス塩酸塩緩衝液
を移動相とするゲルヂ過高速液体クロマトグラフィにお
いて分子量約３０万ないし約８０万の分画中に溶出する
。

（８）塩化セチルピリジニウムとの反応水溶液中塩化セ
チルピリジニウムと沈ｓを生成しない。

（９）構成糖類この多糖類を１規定硫酸水溶液中、１００℃で加水分解
した後、ペーパークロマトグラフィ□、により、及びア
ルジトールアセテートに誘導後、ガスクロマトグラフィ
により同定するとグルコースのみが検出される。

ａｌ　結合構成メチル化分析により、モル比で２　、３．４　、６−チトラーＯ−メチルグルコース　
１２．４．６−トリー〇−メチルグルコース約３．７ない
し約５．０２．３．４−トリー〇−メチルグルコース約Ｏ１：う０
ないし約０．３５及び２．４−ジーＯ−メチルグルコース約帆フないし約１．３を与える。

エキソ型のβ−１，３グルカナーゼを用いて酵素分解す
ると、クルコースとゲンチオビオーズを生成する。

マタメタ過ヨウ素ナトリウムで充分に酸化し、水素化ホ
ウ累ナトリウムで還元後、緩和な条件、例えば（）、１
ないし０．２　ｍ定価酸で、８０ないし１００℃、１〜
２時間時間別水分解すると側鎖に相当するグルコース基
の除去された直鎖状β−１゜３−グルカンが得られる。

このものはメ、チル化分析で２．４．６−１−クー０−
メチルグルコースと痕跡量の２．３，４．６−チトラー
Ｏ−メチルグルコースを与える。この直鎖状β−１，３
−グルカンをエキソ型β−１，３−グルカナーゼで酵素
分解するとグルコースのみが生成する。

従ってこの多糖類の主鎖は実質上β−１，３−結合のグ
ルコース残基のみから成る。

このことからこの多糖類は連続したβ−１，３−グルコ
シド結合の主鎖よりなり、β−１，３−結合のグルコー
ス結合４〜６個に１個の割合で、その６位にβ−結合で
主として単独のグルコース残基よりなる側鎖を有するが
、側鎖約３個のうち１個はβ−１，６−結合した２ケの
クルコース残基からなるものと認められる。それ故、こ
の多糖類の基本構造は前述の一般式のくり返し単位から
なるということができる。

こね、らのことから本発明の方法で中間体として経由す
る多糖は公知のスクレログルカン、シゾフイラン及びキ
クラゲ子実体から得られる分枝型β−１，３−グルカン
よりも枝分れの頻度が少なくかつ分枝中にわずかのβ−
１，６−結合で２ケ以上連続したグルコース残基からな
る分枝をもつ多糖類である。

またペスηロチア属の微生物の産生ずる多糖と比べると
枝分れの頻度が著しく小さい。

この多糖類は特願昭５７−１５７０５８　号の明細書中
に開示されている物質である。

こうして得られた中間体多糖は酸化剤、特に過ヨウ素酸
またはその水溶性塩で酸化処理し、ついで還元処理を行
う。所望によりこの任意の段階でたとえば超音波処理等
の低粘度化処理全行なってもよい。

用いる酸化剤は隣接する水酸基を選択的に酸化する酸化
剤が許容される。この例として過ヨウ素酸またはその塩
、特にメタ過ヨウ素酸ナトリウムあるいはメタ過ヨウ累
酸カリウムが好適に用いられる。酸化反応の溶媒として
は’ｐ　Ｈ３〜８の範囲で用いられる緩衝液を用いても
よいが通常蒸留水を用いて充分である。酸化剤の濃度は
特に規定するものではないが、０．（１１−０，２ｍａ
ｔ／、ｔが好ましく、・０．０２〜０．１　ｍｏｊ　／
　ｌがさらに好ましい。

酸化剤の量は所望の開環塵を与えるべく適量を用いるが
通常原料多糖の無水グルコース単位あたり約０．０２〜
約２モルの範囲で用いるのが好ましい。

酸化剤が少なすぎれば水可溶性多糖への変換が不充分で
あり多すぎても適葉以上の効果が得られないためである
。溶媒の量は原料多糖が充分浸漬され充分かくはんされ
る量であればよく、通常原料多糖１部に対し１０部〜５
００部が好適に用いられる。

酸化反応は室温もしくはそれ以下の温度で行なうのが好
ましくさらに不活性ガスの雰囲気下で行なってもよい。

また通常冷暗所で行なう。

上記した酸化処理によって中間体８１ｆ、！ｌの主鎖全
構成するβ−１，３−グルコピラノシル基は酸化されず
式（ＩＩ）および式（ロ）で表わされるくり返し単位中
のＸおよびＹで表わされる位置のグルコピラノシル基の
みが酸化される。

酸化反応終了後、エチレングリコール又はグリセリン等
で残存する酸化剤を分解するのは必ずしも必須ではない
が望ましい工程である。

次いで行なう還元反応において、還元剤は水に可溶な還
元剤が好ましく、この例として水素化ホウ素ナトリウム
（ＮａＢＨ４）あるいは水素化シアノ硼素ナトリウム（
ＮａＢＨ３０Ｎ　）があげられるが、水素化ホウ素ナト
リウムが好適に用いられる。還元反応に先立ち重炭酸す
ｌ−ＩＪウム等で反応液を微アルカリ性にしてもよい。

還元剤の量は酸化反応液の処理方法によっても異なるが
、エチレングリコールで酸化剤を分解し、重炭酸ナトリ
ウムでｐＨ８に調整した場合は理論量の約１．２倍以上
を用いればよい。還元反応の溶媒は水性であることが望
ましくその量は原料多糖に対し１００倍ないし１０００
倍用いることが望ましい。還元反応はかくはん下に室温
で行なって伺ら差し支えない。反応時間は約１日程度で
充分である。

上記した酸化処理ならびに還元処理により、水難溶性の
原料多糖は水可溶性に誉換され反応液中に溶解する。

なお水素化ホウ素す）　＋１ウムを還元剤として用いた
場合、還元反応の後に鉱酸又は有機酸を反応液に加え、
微酸性として残存する水素化ホウ累ナトリウムを分解し
てもよい。又還元後も水不溶性の残置が残る場合は遠心
分離等の」１常の固液分離の方法によって残ｆ’に除去
してもよい。

こうして得られた水可溶性の多糖を含む溶液はそのまま
蒸留水中に透析してもよいし減圧濃縮した後に透析し、
でもよい。

あるいは濃縮前あるいは濃縮後の多糖を含む溶液にメチ
ルアルコール、アセトン等の水に溶解し得る貧溶媒を加
え目的の多糖を沈澱させ、この沈澱を遠心分離等の通常
の方法で集めた後蒸留水中に再たび溶解させて透析して
もよい。もちろんこれらの精製方法ヲ＜す返し行っても
よい。透析は通常２日ないし５日間で充分である。

こうして得られた透析内液は凍結乾燥、ふん霧乾燥等の
通常の方法により固型物として得られる。

充分な透析後に貧溶媒の添加による沈澱操作を行なう場
合その沈澱音用いた溶媒でよく洗浄した後減圧乾燥して
もよい。

上記の処理課程のいずれかの段階でたとえば超音波処理
あるいはβ−１，３グル力ン分解酵素処理等の低粘度化
処理ケ行なうことはなんらさしつかえない。

こうして得られる本発明の多糖類は前述した中間体の多
糖類と比べて中性条件での水溶性が大きく改善されてい
る。また、その抗腫瘍性も増強されている。

本発明の゛フクロタケ由来の多糖より導ひかれる多糖は
前記２種の前述したキクラゲまたはペスタロチア属の微
生物出来のポリオール化された多糖と比べるとβ−１，
３−グルカン金主鎖としている点に同一性があるものの
、フクロタケ多糖は前二者に比較し著しるしく分岐が少
ないという特徴を有する。

以下本発明を実施例によってさらに詳細に説明する。

実施例】風乾したフクロフケ子実＄１００ｐ’１＝ｐＨ７，０の
０．１　Ｍリン酸塩緩衝液１ｔに一夜漬した後、ミキサ
ーおよびホモジナイザーで破砕した。さらにこれに回し
リン酸塩緩衝液２ｔｋ加えて４時間かくはんし遠心分離
した。得られた固形分を同じリン酸塩緩衝液３ｔに入れ
ホモジナイザーで分散させた後、４時間かくはん、遠心
分離し沈澱を得た。

この沈澱ｆ３ｔの水に分散させ、オートクレーブ中、１
２０℃で３０分間加熱した。冷却後遠心分離して沈澱を
得た。この熱水抽出処理をさらに４回くり返し、水溶性
画分をほぼ完全に抽出除去した。

こシル、て得られた水不溶性画分を、水素化ホウ素すｌ
−ＩＪウム５ｇを溶解させた１規定水酸化ナトリウム水
溶液３ｔに分散させた。窒素気流下に２５℃で４時間か
くはんした後遠心分離した。この沈澱に対して１規定水
酸化ナトリウム水浴液による抽出操作をくり返した。雨
水酸化ナトリウム・抽出液を合併し、これ１［塩酸で中
和し、ｐＨ６，５に調整した。

こ“う（して得ＩＩた二抽出液に塩化セチルピリジニウ
ム水浴液（１０％）ｋかくはん下に、その添加によって
あらたに沈澱が生じなくなるまで滴下し、ついで１ｇ、
ｏｏｏ　Ｇで３（）分間遠心分離全行い、生じた沈澱全
除去した。この上清に等容のメタノールを加えてかくは
んし、多糖類を沈澱させた。この沈澱全蒸留水５００−
に加えホモミキサーで分散後流水中に５日間透析した。

透析内液を凍結乾燥し、中間体の多糖１３．０　、！ｉ
Ｉを得た。

元素分析直Ｃ：　４４．０３％Ｈ：　６．０５　ｑｂＮ：定量限界以下比旋光度５〔α〕Ｄ　ニー１２°　（濃度０．５チ、０．５規定水
酸化ナトリウム浴液中）赤外吸収スペクトル第】図にＫＢｒ錠剤法による、フェリエ変換赤外吸収ス
ペクトル全示す、分子量０．１　Ｍ、ｐ　Ｈ８，６のトリス塩酸塩緩衝液を移動
相として、東洋曽達工業（休）製Ｇ５０００ＰＷカラム
を用いたゲルｐ過高速ｉＱＫクロマトグラフィで出した
。

Ｃ１３−ＮＭＲ分析、発色反応及び塩化セチルピリジウ
ムとの反応前述した物理的、化学的性質と同じであった。

ｍ酸糖及び結合様式得られた多糖をメチル化し、さらに加水分解した。得ら
れたメチル化糖をアルジトールアセテートに誘導した。

これをカスクロマトグラフィで分析した。得られたメチ
ル化糖のモル比は２．３Ｌ４，６−テトラ−０−メチル
グルコース２．４．６−トリー〇−メチルグルコース３
．７６２　、３　、４　、−　トリー〇−メチルグルコース０
．３３２．４−ジー０−メチルクルコース１．０１別にこの多糖をエキソ型β−１，３−グルカナーゼで酵
素分解した。ゲルコーストケンチオビオースが得らねた
。そのモル比は前者１モルに対して後者（１、１７７モ
ルであった。

さらに韮たこの多糖をメタ過ヨウ素酸ナトリウムで充分
に酸化し、水素化ホウ素す）　ＩＩウムで還元した。こ
れを更に（）、１規定の硫酸中、１００℃で２時間加水
分解したところ、側鎖に相補するグルコース基の除去さ
れた直鎖状のクルカンの沈澱が得られた。この沈ｆｓヲ
同様にしてメチル化分析を行ったところ２，４．６−ト
リー〇−メチルグルコースと痕跡量の２．３，４．６−
テトラ−０−メチルクルコースを与えた。

またこの沈澱をエキソ型β−１，３−グルカナーゼで酵
素分解したところグルコースのみが生成した。

従って得られた多糖は前述した式（Ｉ）　、　（ＩＶ）
及び（Ｖ）のくり返し単位からなりその個数の比がこれ
らのくり返し単位の合計の個数１００個当り、式（■）
のくり返し単位７個、式（１ｖ）のくり返し単位と式（
Ｖ）のくり返し単位との個数の和は２１個であった。

こうして町整した中間体多糖２．ｌｒ蒸留水３００−に
加えよくかくはんした。メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．
２ｇを加え１０℃で遮光下に１０日間攪拌して反応させ
た。ついでエチレングリコール１ｍ１−加え３時間攪拌
した。この反応液會５ｏｏｏ　ａで３０分遠心分離し、
上滑を除去し固形分を得た。

この固形分＋２留水５０（）−中に移し、ディスパーザ
−で分散させた後水素化ホウ素ナトリウム０．２５９’
ｆＨ加え、室温で１日間攪拌した。この反□応液に少量
の酢酸を加えｐ　Ｈ６，５に調整した後２倍量のメタノ
ールを加え攪拌した。次にこれを遠心分離にかけ上滑を
除去した。得られた沈澱を蒸留水３００−に溶解させ５
日間透析した。透析内液を凍結乾燥し白色の目的多糖１
．７．９　ｋ得た。

本多糖の性状は以下の通りであった。

分析方法は前述した中間体多糖の場合と同じである。

以下の各実施例の分析方法も同様である。

元素分析直Ｃ：　４３．８％Ｈ：　６．１チ赤外吸収スペクトル第２図にＫＢｒ錠剤法による、フェリエ交換赤外吸収ス
ペクトル全示す。

分子量０．１　Ｍ、ｐ　Ｈ８，６のトリス塩酸塩緩衝液全移動
相として、東洋曹達工業（株）製Ｇ　５０００　ＰＷカ
ラムを用いたゲル濾過高速液体クロマトグラフィで分子
祈約６５万のリテンションタイムの位置に溶出した。

構造本多糖は前記した式（Ｉ）の第１のくシ返し単位と同（
１■）の第２のくり返し単位上回（ＩＩｌ）の第３のく
り返し単位から成り、第１．第２．および第３のくり返
し単位の和１００個あたり、第３のく如返し単位約７個
、第２のくり返し単位と第３のくり返し単位との和は２
１個であり、また、式（４）と式（Ｃ）　（ｎ数の和は
約２４個、また弐〇）と弐〇の数の和は約４個であった
。

実施例２実施例１で調製した中間体多糖２ｇを用いメタ過ヨウ素
酸ナトリウム’ｔ　Ｏ，６，９とし、酸化反応温度を４
℃とし、水素化ホウ素ナトリウム’ｅ　０．２　ｇにし
た以外は実施例１と同様にして酸化反応以後の処理をし
た。目的の多糖１．６５９　ｆ得た。

本多糖の性状は以下の通りであった。

元素分析１直Ｃ：　４３．６係ｆ（：　６．０チ分子量実施例１の多糖と同様であった。

構造本多糖は前記した式（Ｉ）の第１のくり返し単位と同（
ＩＩ）の第２のくり返し単位と同（ロ）の第３のくり返
し単位から成り、第１．第２．および第３のくり返し単
位の和１００個あたり、第３のくり返し単位約７個、第
２のくり返し単位と第３のくり返し単位上の和は２１個
であり、また式（５）と式（Ｃ）の数の和は約２１個、
また式（Ｂ）と式（６）の数の和は約７個であった。

実施例３実施例１で調製した中間体多糖２９に蒸留水３００ゴに
加えよくかくはんした。メタ過ヨウ素酸ナトＩＪウム０
．４　、！ｉ！全加え４℃で遮光下に８日間攪拌して反
応させた。ついでエチレングリコール０．５　ｍ／　’
（ｆ加え３時間攪拌した。ついで蒸留水２００ｄ’に加
えた後０．５モル／を濃度の炭酸水素ナトリウム水浴液
を加え、ｐ　ｉ（８，０に調整した。これに水素化ホウ
素ナトリウム（１，２５″ｇを加え１日間攪拌した。こ
の反応液に小量の酢酸音訓えｐ　Ｈ６，０とした。この
浴液を外部液を蒸留水として５日間透析した。透析内液
を凍結乾燥し、目的の多糖１．７０９を併た。

本多糖の性状は以下の通りであった。

元素分析１直Ｃ：　４３．５チＨ：　６．１チ分子量実施例１の多糖と同様であった。

構造本多糖は前記した式（Ｉ）の第１のくり返し単位と式（
ＩＩ）の第２のくり返し単位と式（ＩＩＩ）の第３のく
り返し単位から成り、第１．第２．および第３のくり返
し単位の和１００個あたり、第３のくり返し単位約７個
、第２のくり返し単位と第３のくり返し単位との和は約
２１個であり、また式（５）と式（Ｃ）の数の和は約１
１個、また式（Ｂ）と弐〇の数の和は約１７個であった
。

実施例４原料調製例１と同様にして中間体多糖類全調製した。こ
の多糖１１’を蒸留水４００−に分散させ１．３ｇのメ
タ過ヨウ素酸カリウムを用いて実施例１と同様に酸化反
応を行なった。実施例１と同様にしてその後の処理を行
なったところ目的の多糖１．６ｇを得た。

本多糖の性状は以下の通りであった。

元素分析値Ｃ：　４３．２　％Ｈ：　５．９チ分子量実施例１と同等であった。

構造本多糖は前記した式（Ｉ）の第１のくり返し単位と同（
ＩＩ）の第２のくり返し単位と同（ロ）の第３のくり返
し単位から成り、第１．第２．および第３のくｐ返し単
位の和１００個あたり、第３のくり返し単位約６個、第
２のくり返し単位と第３のくシ返し単位との和は２０個
であり、また式囚と式（Ｃ）の数の和は約２４個、また
式（Ｂ）と式（ハ）の数の利は約２個であった。

実施例５原料調製例１と同様にして中間体多糖類全調製した。こ
の多糖Ｓｌ’を実施例１と同様にして酸化・還元した。

還元反応後小量の酢酸を加えｐＨを６．０に調製し、２
０ＫＨ１１００Ｗの条件で外部より氷冷しながら攪拌下
に３０分超音波処理をした。

ついでこの処理液に２借景のアセトンヲユっくり加えか
くはんし遠心分離を行ない上清を除去した後この沈澱を
蒸留水３００ｔｎｔに゛溶解させ５日間糖１．６０．９
を得た。

本多糖の性状は以下の通りである。

元素分析直Ｃ：　４３．２　ｑ６１（：　６．Ｏｃｆ。

分子量実施例１と同様な条件でのゲルヂ過高速液体クロマトグ
ラフィで分子量約１２万のリテンションタイムの位置に
ｍ出した。

構造本多糖は前記した式（Ｉ）の第１のくり返し単位と同（
ＩＩ）の第２のくり返し単位と同（Ｉｌｌ）の第３のく
り返し単位から成り、第１．第２．および第３のくり返
し単位の和１００個あたり、＠３のくり返し単位約６個
、第２のくり返し単位と第３のくり返し単位との和は１
９個でおり、また、式（４）と式（Ｃ）の数の和は約２
１個、また式（Ｂ）と式Ｕの数の和は約４個でめった。

実権例６アルカリ水浴液抽出の前の工程を実施例１と同様にして
行った後、抽出温度を２０°Ｃに変えた以外は実施例】
と同様にしてアルカリ水溶液抽出を行った。得られた抽
出液の塩酸でｐ　Ｈ６，５を調整した後、実施例１と同
様にして塩化セチルピリジニウム水溶液（１０％）を加
え生ずる沈澱を遠心分離により除去した。上清を２日間
流水中シこ透析した後、透析内液ｆ３ｔにまで４０°Ｃ
で減圧丁に濃縮シた。こ１１１に等容のメクノール音訓
え生じた沈澱を１０，０ＯＯＧで・３０分間遠心分離し
た。この沈澱を３００−のメタノールに加え約１時間か
くはん遠心分離し沈澱を得た。このメタノールによる洗
浄をさらに２度くり返したのち、沈澱を減圧乾慄し中間
体多糖１０．５　ｇを得た。

こうして得た多糖について実権例】と同様にして分析を
行なった。

元素分析匝Ｃ：　４　４．３　１　％ｉｆ　６．１０　％Ｎ；定量限界以下分子量分子量約５５万の位置に溶出した。

メチル化糖のモル比２．３，４．６−テトラ−０−メチルクルコー１　１２．４．６−．１−り一〇−メチルグルコース４．２６２．３．４−１−リー０−メチルグルコース０．３２２．４−ジーＯ−メチルグルコース１、Ｏｌエキソ型β−１，３−グルカナーゼ消化で掬らたグルコ
ースとゲンチオビオーズとのモル比１　：　０．１６０くり返し単位の割合合計個数１００個当り式（ｉ［［）のくり返し単位６個
で、式＜ＩＩ）のくり返し単位と式□□□）のくり返し
単位の個数の和は１９個であった。

その他の結果は実施例１の場合と実η的に同一であった
。

こうして得られた中間体多糖２ｇを用い、実施例１と同
様に酸化反応以後の処置を施した所１．６ｇの目的多糖
を得た。

元累分析匝Ｃ：　４３．９チｉ−ｉ：　６．１チ分子量約５０万の位置に溶出した。

構造本多糖は前記した式（Ｉ）の第１のくり返し単位と同（
ＩＩ）の第２のくり返し単位と同（９）の第３のくり返
し単位から成り、第１　、第２　、および第３のくり返
し単位の和１００個あたり第３のくり返し単位約６細編
２のくり返し単位と第３のくり返し単位との和は１９個
であり、また成因と式（Ｃ）の数の和は２３個、または
式ＣＢ）と式（２）の数の和は２個であった。

実施例７〔水に対する溶解性試験〕実施例１の中間体多糖および目的の多糖を精秤し生理食
塩水（ｐＨ６，３）　５　ｏｍｔ＊加え４０’Ｇで３時
間攪拌した所第１表の結果を得た。生理食塩水のかわり
に精製中（Ｊ）Ｈ６，７）Ｔｈ用いた場合もまた同様の
結果を得た。

第１表より本発明多糖の中性域での溶解性改良が明確に
示される。

第１表実施例８ザルコーマ１８０肉腫・ＩＣＲ系マウスを用いた抗腫瘍
性試験腹腔内移植後７日目のザルコーマ１８０腫瘍細胞約６０
０万個を健常な体重２３ｇ０）６週令ＩＣＲ系マウス（
雌）の布紙径部より背部皮下に移植し、翌日よりｌＯ日
間毎日１回生理食塩水中に溶解した本発明物質および参
考例としてのけんたくした原料多糖を腹腔内に投力した
。対照は無処置群である。

腫瘍を移植してから５週間後に腫瘍を摘出し、その重量
を測定するとともに腫瘍の完全消失数を数えた。

腫瘍抑制率は次式により算出した。

１１’ｌｉ　瘍抑ｆｌｉｉｌ　率＝Ｃ−Ｔｘ”　ＯＯ”
υ ただし　Ｃ：対照群の平均腫瘍重址 ′ｒ：投薬群の結果は第２表に示した。特に低投与量での抗腫瘍性の増
加が明らかである。

実施例９ザルコーマ１８０肉腫・Ｃ３１／ｌ−Ｔｅ　系マウスを
用いた抗ＩＩＩＩ瘍性試験体１に約２３ｇのＣ：’ｌ　ＨＡ−Ｔｅ　系マウス（♀
）を用い抗腫瘍試験ｌ）と同様に行なった結果第３表の
結果を得た。第３表より本発明多糖の有効な抗腫瘍性が
明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１においてフクロタケよりアルカリ抽
出ｌこより調整された中間体の多糖の赤外牧収スペクト
ル金示す図であり、第２図は実施例１　ｉｃおいて調整
さ１．た本発明物質の赤外吸収スペクトルキ示ずし１で
ある。特許出願人　東洋曹達工業株式会社１４手続補正書昭和５９年６月７日特許庁長官若杉和夫　殿１事件の表示昭和５８年特許願第　３７４８６　号２発明の名称多糖類およびその製造法ろ補正をする者電話番号（５８５）ろ６１１４補ＩＥ命令の日刊（１）　明細書の特許請求の範囲の欄（Ｉｔ）　明細書の発明の詳細な説明の欄（助　図面全
体７補正の内容（１）　明細書の特許請求の範囲の欄の補正については
別紙の通シ。（ＩＩ）　明細書の発明の詳細な説明の欄の補正につい
ては以下の通り。（ｒ）１４頁７行１分子量約７万ないし約８０万」を１分子量約７万ないし約２８０万、特に約７万ないし約
８０万１と訂正。（２）１４頁下から７行「硫酸銀」を「硝酸銀」と訂正。（３）　１’５頁７行および８行「２．４−〇−メチルグルコース」を「２．４−ジー０−メチルグルコース」と訂正。（５）１６頁７行および２８頁９行「４〜６個に１個」を［６〜６個、特に４〜６個に１個］とｔ１正。（６）１／）頁１２行ならびに２８頁１１行および１２
行「約５個のうち１個は」を「約３個ないし約１０個のうち１個は」と訂正。（７）１７頁１行、１８頁最終行および１９頁２行「Ｄ−グルコピラノシル基」を「Ｄ−グルコビラノース残基」と訂正。（ｓ）１７頁最終行「これらの両式中のβも前記同様の意味である」を削除
。（９）１９頁１１行および１２行ならびに２４頁４行お
よび５行「約１６ないし約２３個」を「約１６ないし約３３個、特に約１６ないし約２５個」
と訂正。 αゆ　２２頁５行「マンノガクタン」を「マンノガラクタン」と訂正。ａ力　２２頁６行「あらかじめ可成の程度除去する」を「あらかじめ除去する」と訂正。（２）　２２頁８行ないし２５頁２行［本発明の方法に従って・・・固体として得てもよい。」を「本発明の方法に従って抽出を行ったアルカリ水溶液は
塩酸、酢酸等の酸で中和する。ついでこの溶液に塩化セチルピリジニウムなどの第４級
アンモニウム塩を加えて、時に夾雑する酸性物質を不溶
性沈殿として析出させ、この沈殿を濾過、遠心分離等の
通常の分離手段によシ除去する操作を行ってもよい。中
和液をそのまま又は濃縮後水で透析し、透析液を乾燥す
ることにより中間体の多糖類を得ることができる。中和
液をそのまま又は濃縮した後、これにアルコール、アセ
トンなどの沈殿剤を加え、得られた沈殿を所望により水
に対して透析し、乾燥して中間体の多糖類を固体として
得てもよい。」と訂正する。０■　２３頁９行の式（ＩＶ）を β−Ｄ　−Ｇｔｕ。 ↓ ÷３）β−Ｄ　−Ｇｔｕ’　（１→→・・・・・・・・
・・・・・・伽と訂正。 α４２３頁１１行の式（Ｖ）を β−Ｄ　−Ｇｔｕｌ ■ と訂正。 θリ　２５頁下から２行「グルコピラノシル基」を「グルコビラ７−ス残基」と訂正。 αゆ　２４頁下かも６行および同５行「加えることにより、・・・アルカリ水溶液」を「加えることによシ、水に部分的に可溶化できる。また
塩類溶液にはわずかに溶ける。低濃度でアルカリ水溶液」と訂正。 α乃　２６頁８行および９行「分子量約５０万ないし約８０万の」を「分子量約６０
万ないし約２８０万、特に約５０万ないし約８０万」と
訂正。 αｅ　２７頁４行「約３．７ないし約５．０」を「約２．７ないし約５．０、特に約五７ないし約５．０
」と訂正。０１２７頁６行「約０．３０ないし約０．３５Ｊを「約０．１０ないし約０，５５、特に約０．５０ないし
約Ｑ、５５Ｊと訂正。に）　２９頁３行および４行［またペスタロチア属の・・・著しく小さい。］を削除
。（ハ）２９頁１５行「水酸基を選択的に」を［水酸基を有する炭素−炭素結合を選択的に」と訂正。（ロ）　３０頁１２行ないし１６行「上記した酸化処理によって・・・が酸化される。」を［上記した酸化処理によって中間体多糖の主鎖を構成す
るβ−１，５−グルコビラノース残基は酸化されず、式
（Ｉｖｌおよび式（Ｖ）で表わされるくり返し単位中の
分岐したグルコビラノース残基のみが酸化される。」と
訂正。ＯＩ　５２頁下から２行「処理課程」を「処理過程」と訂正。 ■　３６頁下から４行および同３行「７クロタケ子実体１００ｇをｐＨ７，ｏの」を［７クロタケ子実体１００ｇを［１９％の食塩を含むｐ
ｌ（７，０の」と訂正。（ハ）　５５頁下から７行の「以下本発明を実施例によって・・・」の前、同８行の「を有する。」のあとに、行を変えて、１本発明の多糖
ポリオールは高い抗腫瘍性と低い毒性を示す。たとえば
マウス腹腔に投与した場合、ＬＤｓｏは１．’ｏｏｏｍ
ＩｊＡｃ９以上である。本発明の多糖ポリオールは既知の抗腫瘍性多糖類と同様
に生理学的に許容される媒体に溶解又は分散させた後、
静脈内、筋肉内又は皮下注射によシ投与できる。」を加
入する。（至）　５５頁下から６行「フーリエ変換」を「フーリエ変換」と訂正。＠　５８頁８行および９行［この反応液に少量の」を「この反応液を遠心分離し、上清液に少量の」と訂正。＠　３９頁２行「フーリエ変換」を１−フーリエ変換」と訂正。に）４２頁１１行「原料調製例１と同様にして」を杢「塩化セチルピリジウムの添加とそれに続く遠心分離操
作を除いた以外は実施例１と同様にして」と訂正。００４３頁１３行「原料調製例１と同様にして」を「実施例４と同様にして」と訂正。（”１１）４３頁１５行「小量の酢酸を」を「少量の酢酸を」と訂正。（イ）４５頁５行［抽出液の塩酸でｐＨ＆　５を」を「抽出液を塩酸でｐＨ＆　５に」と訂正。（ト）４８頁４行「精製中」を「精製水」と訂正。（ハ）　５３頁３行および５行「調整」を「調製」と訂正。（ＩＩＩ）　図面全体の補正については別紙の通り（第
１図および第２図中の「ｄ」を「ｃｒｎ−１」と訂正）
。８添付書類の目録（１）訂正した特許請求の範囲を記載した書面　１通（２）訂正した図面　１通２特許請求の範囲（１）本質的に式％式％（１で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−ＧＡｕは
Ｄ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式を表
わし、数字は結合位置を表わす）、式％式％（１で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇ７ｕ、
　β及び数字は前記同様の意味を表わし又は式％式％で表わされる基またはＣＨ，ＯＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。）なら
びに ↓ ↓ −〔→３）β−Ｄ　−Ｇｔｕ’（１→→で表わされる第
３のくり返えし単位（式中Ｄ〜Ｇｔｕ　、β、Ｘ及び数
字は前記同様の意味を表し、Ｙは式％式％で表わされる基または式（Ｐ）ＩＨＯＨで表わされるＤ−グルコビラノース残基を表わす。これ
らの前式中、（Ｐ）を付した炭素にＸが結合し、（０を
付した酸素でグルコビラノース残基に結合する意味であ
る）からなり、前記第２および／または第５のくり返え
し単位中のＸの少なくとも一部は前記ＯＨ，ＯＨ「ＨＯＨ，ＯＲで表わされる基であり、前記第１！２および第５の各く
り返えし単位の個数の和１００個当り、各平均で、第５
のくり返えし単位の個数が約４ないし約１２個であり、
第２のくシ返えし単位と第３のぐり返えし単位の個数の
和が約１６ないし約３３個である、フクロタケ由来の多
糖類。（２）濃度１１　モ）Ｖ／　Ｌ、　ｐｎａ　６　（７）
　）リス−塩酸緩衝液を移動相とするゲル濾過高速液体
クロマトグラフィにおいて分子量約７万ないし約２８０
万を与えるものである特許請求の範囲第１項記載の多糖
類。（３）７クロタケの子実体または菌子体をアルカリ水溶
液で抽出して得られる可溶性画分を過ヨウ素酸またはそ
の水溶性塩で酸化し、ついでこれを還元して得られたも
のである特許請求の範囲第１項または第２項記載の多糖
類。（４）７クロタケをアルカリ水溶液で抽出し、得られた
可溶性画分を酸化したのち還元して、その側鎖の炭素炭
素結合の一部を切断して開環させ、本質的に式％式％（１で表わされる第１のくシ返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕは
Ｄ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式を表
わし数字は結合位置を表わす）、式％式％（１３で表わされる第２のくシ返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕ、
β及び数字は前記同様の意味な表わし、Ｘは式％式％で表わされる基またはＯＨ２０ＨＯＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。）なら
びに ÷６）β−Ｄ　−Ｇｔｕ’（１−３−＞で表わされる第
３のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕ　、β、Ｘ及び数
字は前記同様の意味を表し、Ｙは式（）％式％で表わされる基または式（ＰＭ　ＯＨで表わされるＤ−グルコビラノース残基を表わす。これ
らの前式中、（Ｐ）を付した炭素にＸス残基に結合する
意味である）からなり、前記第２および／または第６の
くり返えし単位中のＸの少なくとも一部は前記ＣＨ，ＯＨＨＯＣＨ２Ｃ−０−ＣＢ　−０− １ＨＣＨ，ＯＨで表わされる基であり、前記第１、第２および第６のく
り返えし単位の個数の和１００個当り、各平均で、第３
のくり返えし単位の！数が約４ないし約１２個であり、
第２のくり返えし単位と第５のくシ返えし単位の個数の
和が約１６ないし、約Ｕ個である多糖類を得ることを特
徴とするフクロタケ由来の多糖類の製造法。（５）　酸化を過ヨウ素酸またはその塩で行なう特許請
求の範囲第４項記載の製造法。（６）濃度α１モル／ｌ、ｐＨａ６のトリス塩酸緩衝液
を移動相とするゲル濾過高速液体クロマトグラフィにお
いて分子量約７万ないし約ム！」万を与える多糖類を得
るものである特許請求の範囲第４項または第５項記載の
製造法。（η　有効成分として、本質的に式１式％で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕは
Ｄ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式を表
わし数字は結合位置を表わす）、式％式％（１で表わされる第２のくシ返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕ　
、β及び数字は前記同様の意味を表わしＸは式％式％で表わされる基またはＣＨ２０ＨＣＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。）なら
びに ↓ ↓ ÷６）β−Ｄ−ｏ７ｕ’（１→→ で表わされる第３のくり返えし単位（式中Ｄ−ＯＺＵ、
β、Ｘ及び数字は前記同様の意味を表し、Ｙは式（）で表わされる基または式　ＯＨで表わされるＤ−グルコビラノース残基を表わす。）か
らなり、前記第２および／または第３のくシ返えし単位
中のＸの少なくとも一部は前記ＣＨ２０ＨＨＯＨ，ＯＲで表わされる基であり、前記第１．第２お上び第５の各
くり返えし単位の個数の和１００個当シ、各平均で、第
３のくシ返えし単位の個数が約４ないし約１２個であり
、第２のくり返えし単位と第５のくり返えし単位の個数
の和が約１６ないし約１Ａ個である、フクロタケ由来の
多糖類を含んでなる抗腫瘍剤。（８）　フクロタケ由来の多糖類が濃度α１モル／７．
ｐＨａ６のトリス−塩酸緩衝液を移動相とするゲル沖過
高速液体クロマトグラフィにおいて分子量約７万ないし
約１１」−万を与える多糖類である特許請求の範囲第７
項記載の抗腫瘍剤。手続補正譬）昭和５９年　８月２２日特許庁長官　志　賀　学　殿１事注の表示昭和５８年特許願第　５７４８６　号２発明の名称多糖類およびその製造法ろ補正をする者事件との関係　特許出願人住所　〒７４６　山口県新南陽市大字富［１−１４５６
０番地東洋曹達工業株式会社　Ｑ？ｉ：ｔ’ｌ情報部電
話番号（５８５）３３＋１４補正命令の日イ？ｊ５補正の対象昭和５９年６月７日付提出の手続補正書６補正の内容別紙のとおりＹ　糸ｉｉ・　ｉ′山　！Ｉ：Ｆ’！１１１４和５９年６月７日牛鴇’ｔｌ−１１’ｊ：’ｉ°１符杉和に殿１１ｆｌ’
ｌの表示昭Ａ１１５８年／１！Ｊパ′１にｉＱ第　６７４８６　
吋２発明の＋′１称多糖類およびその製造法３補正をする者事１／１との関係　’ｌ’４ｒ￥１出願人電ｉ１！１番
シｊ（５８５）ろろ１１４補市命名の１」イｊ自発補正５神ＩＥにより増加する発明の数　なしく１）　明ａ書
の特許請求の範囲の欄（Ｕ）　明Ｍｔ（７）発明の詳細な説明ノ欄（至）明細
書の図面の簡単な説明の欄（Ｍ　図面全体２３−

Claims

【特許請求の範囲】

（１）本質的に式で表わさねる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕは
Ｄ−クルコピラノシル基を表わし、βは結合様式を表わ
し、数字は結合位置全表わす）、式で表わされる第２のく９返えし単位（式中Ｄ−Ｑｔｕ、
β及び数字は前記同様の意味全表わしＸは式％式％（（で表わされる基またはＣＨ，ＯＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基金表わす。これら
の両式中のβも前記同様の意味である）ならびに ↓ で表わされる第３のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｌｕ、
β、Ｘ及び数字は前・配回様の意味を表し、Ｙは式％式％で表わされる基または式（Ｐ）１１　ＯＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。これら
の前式中、（Ｐ）を付した炭素にＸが結合し、（Ｑ）を
付した酸素でグルコピラノシル基に結合する意味である
）からなり、前記第２および／または第３のくり返えし
単位中のＸの少なくとも一部は前記ＣＨ２０ｆ（ＨＯＣＩ（２Ｃ−０−ＣＨ，−０− １ＨＣＨ２０Ｈで表わされる基であり、前記第１．第２および第３の各
くり返えし単位の個数の和１００個当り、各平均ア、第
３のくり返えし単位の個数が約４ないし約１２個であり
、第２のくり返えし単位と第３のくり返えし単位の個数
の和が約１６ないし約２３個である、フクロタケ由来の
多糖類。
（２）　濃度０．１モル／４．ｐＨ８，６のトリス−地
酸緩衝液全移動相とするゲル濾過高速液体クロマトグラ
フィにぢいて分子量約７万ないし約８０万を与えるもの
である特許請求の範囲第１項記載の多糖類。
（３）　フクロタケの子実体または菌子体音゛アルカリ
水溶液で抽出して得られる可溶性画分を過ヨウ累酸また
はその水溶性塩で酸化し、ついでこれを還元して得られ
たものである特許請求の範囲第１項または第２項記載の
多糖類。
（４）　フクロタケをアルカリ水溶液で抽出し、得られ
た可溶性画分を酸化したのち還元して、その側鎖の炭素
炭素結合の一部全切断して開環させ、本質的に式で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−ＱＬｕは
Ｄ−グルコピラノシル基１表わし、βは結合様式を表わ
し数字は結合位置を表わす）、式で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｑ／、ｕ
　、β及び数字は前記同様の意味全表わしＸは式％式％で表わさオ］る基またはＣＨ，ＯＨ１ＯＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わす。これら
の両式中のβも前記同様の意味である）ならびに ↓ で表わされる第３のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｑｔｕ、
β、Ｘ及び数字は前記同様の意味全表し、Ｙは式（）％式％で表わされる基または式で表わさｎ、Ｚ、Ｄ−グルコピラノシル基金表わす。こ
ねらの前式中、（Ｐ）’に付した炭素にＸが結合し、（
Ｑｌ　ｅ付した酸素でグルコピラノシル基に結合する意
味である）からなり、前記第２および／または第３のく
り返えし単位中のＸの少なくとも一部は前記Ｃ）１２０）１ＨＯＣＨ２Ｃ＝０−ＣＢ−０− １ＨＣＨ２０Ｈで表わされる基であり、前記第１．、’Ｉｆ、２．およ
び第３のくり返えし単位の個数の和１００個当り、各平
均で、第３のくり返えし単位の個順が約４ないし約１２
個であり、第２のくり返えし単位と第３のくり返えし単
位の個数の和が約１６ないし、約２３イ凶である多糖類
全得ることを％徴とするフクロタケ由来の多糖類の製造
方法。
（５）酸化を過ヨウ累酸またはその塩で行なう特許請求
の範囲第４項記載の製造法。
（６）濃度ｏ、ｉモル／ｌ、ｐＨ８１，６のトリス塩酸
緩衝液を移動相とするゲル濾過高速液体クロマトグラフ
ィにおいて分子量約７万ないし約８０万を与える多糖類
を得るものである特許請求の範囲第４項または第５項記
載の製造法。
（７）有効成分として、本質的に式で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕは
Ｄ−グルコピラノシル基金表わし、βは結合様式を表わ
し数字は結合位置を表わす）、式で表わされる第２の（り返えし単位（式中Ｄ−Ｇｌｕ、
β及び数字は前記同様の意味を表わしＸは式％式％で表わされる基または１２０ＨＯＨで表わされるＤ−グルコピラノシル基金表わす。こ石ら
の両式中のβも前記同様の意味である）ｔらびに ↓ で表わされる第３のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｔｕ、
β、Ｘ及び数字は前記同様の意味を表し、Ｙは式％式％で表わされる基または式１１０Ｈで表わされるＤ−グルコピラノシル基１［わす。）から
なり、前記第２および／または第３のくり返えし単位中
のＸの少なくとも一部は前記ＯＨ２０ＨＨＯＣＨ２Ｃ−０−ＣＨ−０− ＩＨＣＨ，ＯＨで表わされる基であシ、前記第１．第２および第３の各
くり返えし単位の個数の和１００個当り、各平均で、第
３のくり返えし単位の個数が約４ないし約１２個であり
、第２のくり返えし単位と第３のくり返えし単位の個数
の和が約１６ないし約２３個である、フク口タケ由来の
多糖類を含んでなる抗腫瘍剤。
（８）　フクロタケ由来の多糖類が濃度０．１モル／ｌ
、ｐＨ８，６のトリス−塩酸緩衝液を移動相とするゲル
濾過高速液体クロマトグラフィにおいて分子量約７万な
いし約８０万を与える多糖類である特許請求の範囲第７
項記載の抗腫瘍剤。