FR2712304A1 - Procédé de production de gomme xanthanne par fermentation. - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne un procédé de production de la gomme xanthanne qui comprend l'étape de réaliser la culture par la fermentation submergée de micro-organismes producteurs de xanthanne dans un milieu de culture, dans lequel une étape de culture des souches est en premier lieu réalisée en présence d'un milieu de culture des souches contenant une première source d'azote pour augmenter la concentration des micro-organismes et produire une culture de souches, une partie de la culture de souches étant ensuite inoculée dans un milieu de culture de production contenant une seconde source d'azote et une étape de culture du produit étant réalisée pour produire de la gomme xanthanne, caractérisé en ce que la première source d'azote comprend une combinaison d'une source d'azote insoluble dans l'eau et d'une source d'azote soluble dans l'eau et en ce que la seconde source d'azote consiste en une source d'azote soluble dans l'eau.
Description
La présente invention concerne un procédé de production de la gomme
xanthanne par fermentation. Plus particulièrement, elle concerne un procédé pour
produire la gomme xanthanne avec une efficacité et une qualité améliorées.
Les polysaccharides visqueux et solubles dans l'eau tels que la gomme arabique, la gomme xanthanne, la gomme guar et la gomme de rhamsame sont largement utilisés dans l'industrie, notamment l'industrie alimentaire, de la peinture, du papier, l'industrie cosmétique, l'industrie pharmaceutique, de récupération du pétrole et similaires. Depuis plusieurs années, la demande a augmenté pour ces polysaccharides, en particulier pour le plus utilisé d'entre eux: la gomme xanthanne. La gomme xanthanne présente en effet d'excellentes propriétés, parmi lesquelles une fonction épaississante, un effet stabilisant en émulsion, une résistance au sel, une résistance au pH et une stabilité à l'égard d'enzymes variées, qui ont conduit à un emploi croissant de la gomme xanthanne
comme additif.
La gomme xanthanne peut être obtenue en cultivant sous conditions aérobiques des micro-organismes du genre Xanthomonas, par exemple X campestris, dans un milieu de culture aqueux possédant un pH de 5,5 à 9 et contenant au moins une source de carbone, par exemple du glucose, de la molasse, de l'amidon et similaires; une source d'azote soluble dans l'eau, telle qu'une peptone ou un extrait de levure; un sel de magnésium; des ions phosphate et d'autres constituants à l'état de traces. En général, après la culture, le milieu de culture est stérilisé et le constituant désiré est précipité avec un alcool tel que l'éthanol ou l'isopropanol, et est ensuite séché. Des méthodes de préparation de la gomme xanthanne sont décrites dans les brevets U.S. 3 020 206, 3 251 479, 3 391 , 3 433 708, 3 594 280, 4 282 321 et 8 659 026. En plus de X campestris, d'autres bactéries Xanthomonas peuvent être utilisées pour produire la gomme xanthanne, telles que X carotate, X incanae, X begoniae, X paravericola, X
translucens, X vasculorum et X hederae.
Le procédé habituel pour réaliser de telles fermentations implique deux étapes. En premier lieu, l'organisme utilisé est soumis à une étape de culture à relativement petite échelle pour arriver au nombre ou à la concentration voulue en bactéries. Cette étape est souvent désignée comme étape de "fermentation des souches" ou étape de "culture des souches". Ensuite, une partie de cette culture des souches possédant une concentration relativement grande en bactéries est inoculée dans un récipient de plus grande taille contenant un milieu approprié pour la production réelle de xanthanne, désignée ici comme l'étape de "culture pour la production" ou "fermentation pour la production". Ainsi, le milieu utilisé pour la culture des souches est référencé comme "milieu de culture des souches" ou "milieu de fermentation des souches" et celui utilisé pour la culture pour la
production comme "milieu de culture de production".
Il est courant de purifier le bouillon de fermentation contenant la gomme xanthanne en effectuant une séparation par la force centrifuge ou une filtration du gâteau pour éliminer les substances non dissoutes, telles que par exemple les résidus de bactéries et les constituants azote non consommés insolubles dans l'eau. Cependant, l'utilisation d'une séparation par force centrifuge ou d'une filtration du gâteau n'est pas satisfaisante des points de vue coût et mise en oeuvre, le liquide de fermentation étant hautement visqueux et une étape de dilution utilisant de l'eau et une étape de concentration ultérieures étant
par conséquent nécessaires.
D'autres techniques de purification sont connues dans lesquelles les substances non dissoutes dans le liquide de fermentation sont solubilisées par un traitement enzymatique. Par exemple, la demande de brevet U.S. 07/990,758 décrit un procédé de clarification qui comprend un traitement continu avec une protéase alcaline et un lysozyme. Les brevets U.S. 3 966 618 et 4 010 071 décrivent des méthodes de clarification utilisant une protéase alcaline et neutre. Le brevet européen EP 078 621 a suggéré une méthode utilisant une protéase acide et une protéase neutre et le brevet U.S. 4 119 491 a suggéré une technique dans laquelle, après un traitement par protéase, une solution aqueuse polymérique est amenée en contact avec un solide silicate pour éliminer les cellules de la solution polymérique aqueuse. D'autres techniques sont également décrites utilisant des matériaux différents avec une protéase, par exemple, un traitement enzymatique utilisant une polysaccharase et une protéase dans le brevet U.S. 4 431 734, une méthode utilisant une enzyme possédant une activité polygalacturonase et une enzyme possédant une activité protéase dans le brevet U.S. 4 904 568, et une méthode utilisant une enzyme composite possédant une activité [3-1, 3-glucanase et une activité protéase dans le brevet européen EP 039 962. Sont également connues des techniques de purification utilisant d'autres enzymes, notamment une méthode utilisant une enzyme avec une activité nucléase et une méthode de purification utilisant une cellulase comme suggérées dans le brevet U.S. 4 729 958 et le brevet U.S. 4 416 990 respectivement. Toutes ces méthodes utilisant des traitements enzymatiques permettent d'éviter les étapes "à problèmes" telles que celles de dilution et de concentration nécessitées par les techniques conventionnrmelles de purification par séparation centrifuge ou filtration. Ainsi, ces méthodes de purification enzymatique sont avantageuses du point de vue
économique et du point de vue de leur mise en oeuvre.
Les sources d'azote qui sont utilisées pour à la fois la culture des
souches et la culture de production peuvent être solubles ou insolubles dans l'eau.
Les sources d'azote organique insolubles dans l'eau qui peuvent être utilisées dans le milieu de culture comprennent les farines telles que les dépôts de distillation décrits dans le brevet U.S. 3 000 790, la farine de soja décrite dans le brevet U.S. 3 335 447, les brevets anglais 2 012 792 A et 81 15854 et la farine de maiïs décrite
dans les brevets U.S. 3 271 267 et 3 455 786.
Les sources d'azote inorganique solubles dans l'eau comprennent les sels d'ammonium, tels que le nitrate d'ammonium, le bromate d'ammonium, le lactate d'ammonium, le chlorhydrate d'ammonium, le phosphate d'ammonium, l'acétate d'ammonium, le sulfate d'ammonium et l'urée, qui sont décrits dans les brevets U.S. 3 391 060, 4 245 046, 4 282 321 et 4 394 447, les brevet anglais 2 012 792 et 81 15855, le brevet français 76 05 933, le brevet européen EP 066 961 et les demandes de brevet japonais 165 798/1983, 92 591/1986, 173 796/1986 et 9
385/1990.
Quand une substance organique insoluble dans l'eau, non dissoute, telle qu'une farine, est utilisée comme source unique d'azote, le rapport de croissance des bactéries pendant la culture de fermentation des souches et la productivité de la fermentation de la gomme xanthanne pendant la culture de production sont élevés, et le produit gomme xanthanne montre des effets positifs sur la viscosité en solution aqueuse. Cependant, le bouillon de fermentation à la fin de la fermentation contient environ 5 à 10 g / I1 du constituant azote insoluble dans l'eau non consommé, des résidus cellulaires des bactéries et similaires, en plus d'environ 20 à 50 g / 1 du produit gomme xanthanne. Pour produire une gomme xanthanne possédant une haute transparence, il est nécessaire d'éliminer le constituant insoluble dans l'eau dérivé du milieu de culture et les résidus cellulaires des bactéries. Cependant, même si un traitement enzymatique lytique avec une protéase, un lysozyme ou similaire est utilisé, la solution aqueuse de gomme xanthanne et le produit gomme xanthanne qui est séparé et/ou extrait du
liquide de fermentation montre une faible transparence.
D'un autre côté, si une source d'azote inorganique soluble dans l'eau est utilisée pour à la fois la culture des souches et le milieu de culture pour la production, la croissance bactérienne est retardée pendant à la fois la culture de fermentation des souches et la culture de production. Il s'ensuit que la productivité et le niveau de production final de gomme xanthanne dans la culture de production sont de façon insatisfaisante faibles, par exemple 10 g / 1 ou moins. Le terme "productivité" utilisé ici signifie la quantité de gomme xanthanne produite par heure. Si un constituant azote organique insoluble dans l'eau est utilisé dans le milieu de fermentation des souches et un constituant azote inorganique soluble dans l'eau est utilisé dans le milieu de production, le liquide de fermentation à la fin de la fermentation contient d'environ 3 à environ 6 g / I de substances non dissoutes composées de résidus bactériens, de constituant azote non consommé insoluble dans l'eau et similaires. Par conséquent, même si un traitement enzymatique est utilisé pour la purification, la solution aqueuse de gomme
xanthanne obtenue à partir de celui-ci n'est pas suffisamment transparente.
Quand un constituant azote inorganique soluble dans l'eau est utilisé dans le milieu de culture des souches et un constituant azote organique insoluble dans l'eau est utilisé comme source d'azote dans le milieu de production, la vitesse de croissance des bactéries dans le milieu de fermentation des souches est faible, si bien que la croissance bactérienne dans la culture de production est également retardée. Le résultat est que la productivité de la gomme xanthanne est diminuée. De plus, le liquide de fermentation à la fin de la fermentation contient d'environ 4 à environ 8 g / I de substances non dissoutes composées de résidus bactériens, de composé azote insoluble dans l'eau non consommé et une purification suffisante ne peut donc pas être obtenue avec un traitement
enzymatique lytique.
Des sources supplémentaires d'azote comprennent les constituants azote organique aqueux d'extraits biologiques, par exemple l'extrait de levure, la peptone, le bouillon, le tryputon, l'extrait de malt, la caséine dégradée par enzyme, la gélatine et le lait de soja ainsi que les acides aminés protéiques tels que l'acide glutamique, l'acide aspartique, l'alanine, la proline et la thréonine, qui ont été décrits dans les brevets U.S. 3 427 226, 3 433 708, 3 391 060, 4 119 546, 4 263 399 et 4 375 512, le brevet japonais 42 634/1980, les demandes de brevet japonais 798/1983, 58 089/1985, 92 591/1986, 173 795/1986, 86 894/1989 et 218 701/1990. Ils ne contiennent pas de constituants insolubles dans l'eau et peuvent être utilisés par conséquent pour préparer une gomme xanthanne possédant une excellente transparence. Cependant, ils sont difficilement utilisables en raison de
leur coût.
Les compositions des milieux de culture conventionnels qui ont été décrits ci-dessus et leurs caractéristiques sont décrites dans les tableaux I, II et III ci-après.
Tableau I
Compositions de milieux de culture conventionnels pour la production par fermentation de gomme xanthanne. Combinaison Constituant azote dans le Constituant azote dans le milieu de fermentation milieu de production des souches 1 insoluble & organique insoluble & organique 2 insoluble & organique soluble dans l'eau & inorganique 3 insoluble & organique soluble dans l'eau & organique 4 soluble dans l'eau & insoluble & organique inorganique soluble dans l'eau & soluble dans l'eau & inorganique inorganique 6 soluble dans l'eau & soluble dans l'eau & inorganique organique 7 soluble dans l'eau & insoluble & organique organique 8 soluble dans l'eau & soluble dans l'eau & organique inorganique 9 soluble dans l'eau & soluble dans l'eau & organique organique
Tableau II
Combinaison Rapport de Productivité de la Substances non croissance des gomme dissoutes dans le bactéries dans le xanthanne (GX) milieu de milieu de dans le milieu de production fermentation des production souches 1 moyen bon beaucoup 2 moyen moyen beaucoup 3 moyen bon beaucoup 4 mauvais moyen beaucoup mauvais mauvais peu 6 mauvais mauvais peu 7 bon bon beaucoup 8 bon moyen peu 9 bon bon peu
Tableau III
Combinaison effet du Expression des coût du milieu traitement propriétés de de culture enzymatique viscosité 1 mauvais bon bon 2 mauvais bon bon 3 mauvais bon mauvais 4 mauvais moyen bon bon mauvais moyen 6 bon moyen mauvais 7 mauvais bon mauvais 8 bon moyen mauvais 9 bon bon mauvais Comme il est montré, aucune des techniques conventionnelles de fermentation et des combinaisons de compositions de milieux de culture ne donne des niveaux satisfaisants en productivité, en purification et en transparence du traitement enzymatique, en effet de viscosité dans des conditions économiques
acceptables.
Un objet de la présente invention est de fournir un procédé pour la production de gomme xanthanne avec de hauts niveaux de productivité et qui produise une gomme xanthanne possédant une bonne transparence, une haute
pureté et un excellent effet sur la viscosité de solutions aqueuses la contenant.
Un autre objet de la présente invention est de fournir un procédé qui produise la gomme xanthanne de haute qualité ci-dessus dans des conditions
économiques satisfaisantes.
Un autre objet de la présente invention est de fournir une gomme xanthanne de haute qualité possédant une bonne transparence, une grande pureté
et possédant un excellent effet sur la viscosité de solutions aqueuses la contenant.
Le procédé selon l'invention de production de gomme xanthanne par la fermentation de micro-organismes producteurs de xanthanne dans un milieu de culture, dans lequel une étape de culture des souches est en premier lieu réalisée en présence d'un milieu de culture des souches contenant une première source d'azote pour augmenter la concentration des micro-organismes et produire une culture de souches, une partie de la culture de souches étant ensuite inoculée dans un milieu de culture pour la production contenant une seconde source d'azote et une étape de culture du produit étant réalisée pour produire de la gomme xanthanne, est caractérisé en ce que la première source d'azote comprend une combinaison d'une source d'azote insoluble dans l'eau et d'une source d'azote soluble dans l'eau et en ce que la seconde source d'azote consiste en une source
d'azote soluble dans l'eau.
Selon l'invention, les objets mentionnés ci-dessus ainsi que d'autres sont obtenus avantageusement par les étapes consistant à: - préparer une culture par fermentation de souches dans un milieu contenant comme source d'azote, une combinaison d'un constituant azote inorganique soluble dans l'eau et d'un constituant azote organique insoluble dans l'eau; - inoculer une partie aliquote de la culture de souches dans un milieu de culture pour la production contenant comme source d'azote unique, un constituant azote inorganique soluble dans l'eau; - réaliser la culture pour la production ou la fermentation sous des conditions conventionnelles et ensuite soumettre le bouillon de fermentation obtenu à une clarification en utilisant les traitements enzymatiques conventionnels, et ensuite précipiter la gomme xanthanne, de préférence avec de l'alcool, notamment de l'éthanol ou de l'isopropanol, la précipitation étant suivie
par un séchage pour obtenir le produit gomme xanthanne désiré purifié.
Selon l'invention, une vitesse de croissance améliorée des bactéries est obtenue dans la culture par fermentation des souches, ce qui résulte en une accélération de la croissance bactérienne dans la culture de production. Ceci
entraîne une augmentation substantielle de la productivité en gomme xanthanne.
De plus, puisque la quantité du constituant azote organique insoluble dans l'eau contenue dans le milieu de culture est réduite, l'efficacité et les effets du traitement
enzymatique ultérieur sont améliorés.
L'invention permet d'obtenir une haute productivité en gomme xanthanne en utilisant des constituants de milieux de culture peu onéreux et permet également d'avoir un coût réduit pour le procédé de fabrication et le produit gomme xanthanne qui en résulte. De plus, la transparence de la solution aqueuse de produit peut être améliorée facilement aux niveaux désirés, en traitant seulement le liquide de fermentation avec une enzyme possédant une activité lytique, telle qu'une protéase ou un lysozyme. Ainsi, les étapes de purification conventionnelles les plus onéreuses, telles que la dilution, la filtration et la concentration, peuvent être évitées. Les présents inventeurs ont également découvert que la gomme xanthanne obtenue avec la présente invention montre non seulement une transparence améliorée, mais également une excellente capacité à affecter (habituellement en l'augmentant) la viscosité de solutions auxquelles elle est ajoutée. Le nouveau produit selon l'invention trouve donc une large application
dans beaucoup de secteurs industriels en expansion.
Des avantages et caractéristiques supplémentaires de l'invention
apparaîtront encore à la lumière de la description plus détaillée qui suit d'exemples
de réalisation de l'invention, donnés uniquement à titre illustratif et non limitatif, ainsi qu'à la figure 1 unique qui s'y rapporte et qui représente un graphe des rapports de mélange du constituant azote inorganique soluble dans l'eau et du constituant azote organique insoluble dans l'eau dans le milieu de fermentation de souches. Comme bactérie productrice de la gomme xanthanne appropriée pour la mise en oeuvre de la présente invention, les bactéries Xanthomonas classiques (bactéries du genre Xanthomonas) disponibles sous forme de dépôts publics dans des collections bien connues telles que l'American Type Culture Collection (ATCC) et la NRRL, peuvent être utilisées. En plus de la bactérie X campestris, X carotate, X incanae, X begoniae, X paravericola, X translucens, X vasculorum, et X hederae peuvent également être utilisées pour produire la gomme xanthanne. Les lignées préférées sont les lignées de X campestris disponibles pour le public et déposées sous les numéros ATCC 55298, ATCC
55258 etNRRL B-1459.
Une large variété de constituants azote inorganiques solubles dans l'eau peut être utilisée pour la mise en oeuvre de l'invention. Les constituants préférés sont les sels d'ammonium, tels que le nitrate d'ammonium, le bromate d'ammonium, le lactate d'ammonium, le chlorhydrate d'ammonium, le phosphate d'ammonium, l'acétate d'ammonium, le sulfate d'ammonium et l'urée. Le nitrate d'ammonium qui possède une haute teneur en azote est plus particulièrement préféré, il n'existe cependant pas de limitations particulières quant à un constituant
azote soluble dans l'eau spécifique.
De façon similaire, une large variété de constituants azote organique insolubles dans l'eau peut être utilisée selon l'invention. Ces constituants comprennent les produits traités à partir de grains, tels que la farine de soja, la farine d'arachide, l'extrait de maïs et l'extrait de graine de coton. La farine de soja, qui possède une haute teneur en azote, est particulièrement préférée. Cependant, ici également, il n'existe pas de limitations particulières quant au constituant azote
organique insoluble dans l'eau utilisé.
Il a été de plus découvert qu'en contrôlant la quantité totale d'azote dans chacune des cultures de souches et des cultures de production, et également en contrôlant le rapport de la teneur en azote attribuable à la source en azote inorganique soluble dans l'eau et de celle attribuable à la source en azote organique insoluble dans l'eau respectivement, la croissance bactérienne pendant la culture des souches et la production de xanthanne dans la culture de production peuvent être optimisées, l'efficacité de l'étape de clarification enzymatique peut être améliorée et le coût total du procédé peut être réduit. Il est noté que lorsqu'on se réfère à la teneur en azote et/ou au rapport des teneurs en azote du milieu de fermentation des souches ou du milieu de production, la teneur et/ou le rapport est toujours celui existant au début de l'étape de culture des souches ou de l'étape de
production.
En particulier, il a été découvert que les meilleurs résultats sont obtenus lorsque, au début de l'étape de fermentation des souches, le rapport des teneurs en azote du constituant azote organique insoluble dans l'eau et du constituant azote inorganique soluble dans l'eau, qui sont ajoutés comme sources d'azote pour le milieu de fermentation des souches, est compris entre environ 1: 2 et environ 1: 5, et la teneur totale en azote dans le milieu de fermentation des souches est dans la gamme variant d'environ 0,6 à environ 1,5 g / 1 (région
hachurée sur la figure 1).
Si la teneur totale en azote dans le milieu de fermentation des souches est inférieure à environ 0,6 g / 1 (région (1) sur la figure 1), la teneur totale en azote est basse et le rapport de croissance des bactéries peut être indésirablement bas. Les teneurs en azote des constituants azote respectifs décrits dans le brevet
anglais 2 012 792 A référencé ci-dessus sont situées dans cette région.
Si le rapport de la teneur en azote dans le constituant azote inorganique soluble dans l'eau et de celle du constituant azote organique insoluble dans l'eau est inférieur à environ 2 et si la teneur totale en azote dans le milieu de fermentation des souches est supérieure à 0,6 g / 1 (région (2) sur la figure 1), la quantité de constituant azote organique insoluble dans l'eau est excessive, et ceci peut affecter de façon négative la purification enzymatique réalisée après la fin de
la culture de production.
Si le rapport de la teneur en azote dans le constituant azote inorganique soluble dans l'eau et de celle du constituant azote organique insoluble dans l'eau est supérieur à environ 2 et si la teneur totale en azote dans le milieu de fermentation des souches est supérieure à 1,5 g / 1 (région (3) sur la figure 1), la quantité totale de constituant azote organique insoluble dans l'eau est grande, mais le rapport de croissance des bactéries est relativement bas et le coût du milieu est élevé. De plus dans ce cas, puisque les quantités de résidus bactériens non consommés, de constituant azote non consommé et similaires augmentent, l'effet
de purification enzymatique peut être insuffisant.
Si le rapport de la teneur en azote dans le constituant azote inorganique soluble dans l'eau et de celle du constituant azote organique insoluble dans l'eau est supérieur à environ 5 et si la teneur totale en azote dans le milieu de fermentation des souches est dans la gamme variant d'environ 0,6 à environ 1,5 g / 1 (région (4) sur la figure 1), la teneur en azote organique insoluble dans l'eau est
basse et le rapport de croissance des bactéries peu être indésirablement bas.
La teneur en azote du constituant azote inorganique soluble dans l'eau utilisé comme source d'azote pour le milieu de production au début de l'étape de production selon l'invention est dans la gamme variant d'environ 0,2 à environ 1,0 g / 1, de préférence d'environ 0,3 à environ 0,6 g / 1. Si la teneur en azote du constituant azote inorganique soluble dans l'eau est inférieure à environ 0,2 g / 1, la productivité de la gomme xanthanne n'est pas significativement améliorée. Si la teneur en azote du constituant azote inorganique soluble dans l'eau est supérieure à 1,0 g / 1, le résidu cellulaire des bactéries de production augmente, si bien que l'effet de purification enzymatique après la fin de la fermentation est insuffisant. Dans la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, la quantité de milieu de fermentation de souches inoculé dans le milieu de production est dans la gamme d'environ 5 à environ 15 % en volume. Si la quantité de milieu de fermentation de souches devant être inoculé est inférieure à environ 5 %, la quantité initiale de bactéries dans le milieu de production est basse, la croissance des bactéries est retardée, et en conséquence, la productivité en gomme xanthanne tend à décliner de façon indésirable. Si elle est supérieure à environ 15 %, le coût du milieu de culture augmente et les substances insolubles dans l'eau dérivées du milieu de fermentation des souches augmentent également, ce qui peut affecter de
façon indésirable la purification enzymatique.
Selon le procédé de la présente invention, en plus de la source d'azote, des constituants conventionnels des milieux de culture sont utilisés, tels qu'une source de carbone, du phosphate, un sel de magnésium et des éléments à l'état de traces qui sont nécessaires pour fermenter les bactéries productrices de gomme xanthanne. Des exemples de source de carbone comprennent les saccharoses, tels que le glucose, le sucrose, le xylose, la molasse, l'amidon, le maltose et la dextrine ainsi que des alcools polyvalents tels que la glycérine et le sorbitol. Ils peuvent être utilisés seuls ou en combinaison. La quantité de source de carbone à ajouter
est dans la gamme variant d'environ 5 à environ 70 g / 1.
Des exemples de phosphates comprennent le phosphate primaire de potassium, le phosphate secondaire de potassium, le phosphate primaire de sodium et le phosphate secondaire de sodium. Ils peuvent être utilisés seuls ou en combinaison. La quantité de phosphate à ajouter est dans la gamme variant d'environ 1 à environ 5 g /1. Des exemples de sels de magnésium comprennent le phosphate de magnésium, le sulfate de magnésium et le nitrate de magnésium. Ils peuvent être utilisés seuls ou en combinaison. La quantité de sels de magnésium à ajouter est
dans la gamme variant d'environ 0,1 à environ 1 g / 1.
Des exemples d'éléments à l'état de traces comprennent le chlorure ferreux, le chlorure ferrique, le nitrate ferreux, le nitrate ferrique, le phosphate ferreux, le phosphate ferrique, le sulfate de zinc, le chlorure de zinc, le nitrate de zinc et le phosphate de zinc. Ils peuvent être utilisés seuls ou en combinaison. La quantité d'éléments à l'état de traces à ajouter est dans la gamme variant d'environ
0,02 à environ 0,08 g /1.
Dans la présente invention, une variété d'enzymes lytiques peut être utilisée pour l'étape de purification. Des exemples d'enzymes lytiques préférées pour traiter le milieu de culture fermenté de gomme xanthanne comprennent la protéase alcaline, la protéase neutre, la protéase acide et le lysozyme. Parmi
celles-ci, la protéase alcaline et le lysozyme sont préférés.
Les exemples qui suivent illustrent encore la présente invention.
Exemple 1.
Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2,1 g / 1 (teneur en azote: 0,74 g / 1) Farine de soja dégraissée: 5,4 g / 1 (teneur en azote: 0,35 g / 1) Rapport: 0,35/0,74 = 0,47 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,3 1 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / 1 NH4NO3: 0,9 g / 1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1l Eau: 2,7 1 Un échantillon de 2 ml de bactéries (concentration = 101 / ml) (Xanthomonas campestris, ATCC 55298) est inoculé dans un milieu de culture comprenant la composition A ci- dessus, et cultivé dans un flacon d'agitation (culture sous agitation) pendant 24 heures. Le milieu de culture est ensuite ajouté à un second milieu de culture comprenant la composition B ci-dessus dans une cuve de fermentation de 5 litres, et la culture est ensuite poursuivie en condition aérée pendant 2 jours à 30 C et pH 6,5-7,0. Le liquide de fermentation résultant est ensuite soumis à un traitement enzymatique avecune protéase alcaline et un lyzozyme selon la méthode décrite dans la demande de brevet japonais
54898/1992.
En particulier, le liquide de fermentation est traité sous agitation à la chaleur, à une température de 55 C et un pH initial de 11 pendant 90 minutes, et le pH du liquide de fermentation est ensuite ajusté à 8,5 par l'addition goutte à goutte d'une solution de NaOH à 26 % en poids, tout en maintenant la température à C. Une suspension aqueuse contenant 300 ppm de protéase alcaline (BIOPRASE , disponible auprès de la société Nagase Biochemical Co., Ltd.) est filtrée avec un microfiltre de 0,4 ipm. Le filtrat résultant est ajouté au liquide de fermentation ajusté ci-dessus et la solution est ensuite traitée à 55 C pendant 2
heures sous agitation.
Le liquide de fermentation est ensuite refroidi à 35 C et le pH de la solution ajusté à 6,5 en ajoutant goutte à goutte une solution de H2SO4 à 10 % en poids. 3 ppm de lysozyme (LYSOZYME TAIYO , Taiyo Chemical Co., Ltd.) sont ensuite ajoutés à la solution ajustée et la solution est agitée à 35 C pendant 1 heure. Exemple 2 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2,5 g /1 (teneur en azote: 0,88 g /1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g /1 (teneur en azote: 0,22 g / 1) Rapport: 0,22/0,88 = 0,25 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 0,9 g /1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2g/1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g /1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple 3 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2, 5 g /1 (teneur en azote: 0,88 g /1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g /1 (teneur en azote: 0,22 g / 1) Rapport: 0,22/0,88 = 0,25 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,3 1 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / 1 NH4NO3: 7 g /1 (teneur en azote: 0,60 g /1) KH2PO4: 2 g /1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / l Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple 4 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2,5 g /1 (teneur en azote: 0,88 g /1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g /1 (teneur en azote: 0,22 g /1) Rapport: 0,22/0,88 = 0,25 NaCl: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 2,8 g /1 (teneur en azote: 0,98 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple I est utilisé.
Exemple 5 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 1,3 g / 1 (teneur en azote: 0,46 g / 1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g / I1 (teneur en azote: 0,22 g / 1) Rapport: 0,22/0,46 = 0,48 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / I1 NH4NO3: 0,9 g / 1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / I1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple 6 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 1,5 g / 1 (teneur en azote: 0,53 g / 1) Farine de soja dégraissée: 1,7 g / 1 (teneur en azote: 0,11 g / 1) Rapport: 0,11/0,53 = 0,21 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 0,9 g /1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g /1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple 7 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g /1 NH4NO3: 2,7 g /1 (teneur en azote: 0,95 g /1) Farine de soja dégraissée: 6,3 g /1 (teneur en azote: 0,41 g /1) Rapport: 0,41/0,95 = 0,43 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 0,9 g / 1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple 8 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 3,2 g / 1 (teneur en azote: 1, 1 2 g / 1) Farine de soja dégraissée: 3,7 g /1 (teneur en azote: 0,24 g /1) Rapport: 0,24/1,12 = 0,21 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 0,9 g /1 (teneur en azote: 0,32 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4,7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 1 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 3,1 g /1 (teneur en azote: 1,09 g / 1) NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 0,9 g / l (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 2 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 Farine de soja dégraissée: 17 g / 1 (teneur en azote:1,11 g / 1) NaCl: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3: 0,9 g /1 (teneur en azote: 0, 32 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4,7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g /1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 3 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g /1 NH4NO3: 3,1 g /1 (teneur en azote: 1,09 g / 1) NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / 1 Farine de soja dégraissée: 4,6 g /1 (teneur en azote: 0,30 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g /1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 4 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 Farine de soja dégraissée: 17 g /1 (teneur en azote:1,11 g / 1) NaCl: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 Farine de soja dégraissée: 4,6 g /1 (teneur en azote: 0,30 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,S g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 5 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 3,1 g / Il (teneur en azote: 1,09 g /1) NaCl: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3 0,8 g /1 (teneur en azote: 0,28 g /1) Farine de soja dégraissée: 0,3 g /1 (teneur en azote: 0,02 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4,7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 6 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 1,0 g / 1 (teneur en azote: 0,35 g / 1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g /1 (teneur en azote: 0,22 g /1) Rapport: 0,22/0,35 = 0,63 NaCl: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3 0,9 g /1 (teneur en azote: 0,32 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / l Eléments traces: 0,05 g / 1l Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 7 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2,0 g / 1 (teneur en azote: 0,70 g / 1) Farine de soja dégraissée: 7,0 g / 1 (teneur en azote: 0,46 g / 1) Rapport: 0,46/0,70 = 0,66 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / 1 NH4NO3 0,9 g / 1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / I1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 8 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 3,5 g /1 (teneur en azote: 1,23 g / 1) Farine de soja dégraissée: 7,0 g / 1 (teneur en azote: 0,46 g / 1) Rapport: 0,46/1,23 = 0,37 NaCI: 9g/1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3 0,9 g /1 (teneur en azote: 0,32 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 9 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g/l 1 NH4NO3: 2,9 g /1 (teneur en azote: 0,32 g /1) Farine de soja dégraissée: 2,7 g /1 (teneur en azote: 0,18 g / 1) Rapport: 0,18/0,32 = 0,56 NaCl: 9 g / 1 Eau: 0,31 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / 1 NH4NO3 0,9 g / 1 (teneur en azote: 0,32 g / 1) KH2PO4: 2 g /1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g /1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Exemple comparatif 10 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2,5 g /1 (teneur en azote: 0,88 g /1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g /1 (teneur en azote: 0,22 g /1) Rapport: 0,228/0,88 = 0,25 NaCI: 9 g/l Eau: 0,3 1 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g / 1 NH4NO3 3,5 g / 1 (teneur en azote: 1,23 g /1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,71 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé. Exemple comparatif 11 Composition A: Constituants du milieu de fermentation des souches: Glucose: 5 g / 1 NH4NO3: 2,5 g / 1 (teneur en azote: 0,88 g /1) Farine de soja dégraissée: 3,4 g / 1 (teneur en azote: 0,22 g /1) Rapport: 0,228/0,88 = 0,25 NaCI: 9 g / 1 Eau: 0,3 1 Composition B: Constituants du milieu de production: Glucose: 50 g /1 NH4NO3 0,4 g /1 (teneur en azote: 0,14 g / 1) KH2PO4: 2 g / 1 MgSO4, 7 H20: 0,5 g / 1 Eléments traces: 0,05 g / 1 Eau: 2,7 1 La fermentation est réalisée dans les milieux de culture comprenant les compositions A et B ci-dessus de la même façon que dans l'exemple 1, et le même
traitement enzymatique que dans l'exemple 1 est utilisé.
Après achèvement du traitement enzymatique, chaque liquide de fermentation est échantillonné et la gomme xanthanne est extraite et séparée en utilisant de l'isopropanol en une quantité en poids de 1,5 fois supérieure au poids de l'échantillon. Le produit séparé est ensuite séché à l'air. Pour chaque échantillon, le rendement en gomme xanthanne est ensuite mesuré. De plus, une solution aqueuse à 0,3 % de la gomme xanthanne solide obtenue est préparée et la transparence et la viscosité (viscosimètre Brookfield: 30 t/p/min.) sont ensuite mesurées pour chaque échantillon. Les résultats sont présentés dans le tableau IV
figurant en annexe de la présente demande de brevet.
Les procédures particulières utilisées pour ces mesures sont les suivantes: 1. Transparence (a) La transparence est mesurée en utilisant un spectrophotomètre possédant une lampe au tungstène pour les rayons visibles et un tube à décharge à hydrogène lourd pour les rayons ultraviolets. Une cellule à
quartz d'un cm de longueur de couche est utilisée.
(b) La gomme xanthanne sèche (0,90 g) est mesurée avec précision dans un bêcher de 500 ml contenant 299,1 g d'eau. Elle est ensuite dispersée pour éviter l'incorporation de bulles d'air et mélangée par agitation pendant 2 heures jusqu'à ce que les parties non dissoutes et les bulles soient éliminées. La température est ajustée à 20 + 0,5 C. La solution résultante est utilisée comme solution test. Les sources de lumière du spectrophotomètre sont de 486,0 nm et de 656,1 nm pour le tube à décharge à hydrogène lourd. La solution
test est introduite dans une cellule à quartz et l'eau est utilisée comme référence.
La perméabilité à 0 % et 100 % à une longueur d'onde mesurée de 600 nm est ajustée. Ensuite, la solution test est mise dans une cellule à quartz de 10 cm de
façon que la perméabilité à 600 nm puisse être lue et mesurée.
2. Viscosité La viscosité est mesurée en utilisant un viscosimètre rotatif Brookfield avec une rotor n 2 et un nombre d'échange de 10. Pour cette mesure, une quantité correspondant à 0,9 g de gomme xanthanne sèche est mesurée avec précision dans un bêcher de 500 ml contenant 299, 1 g d'eau. Le mélange est agité pendant 2
heures jusqu'à ce que les parties non dissoutes et les bulles d'air soient éliminées.
La température est ajustée à 25 + 0,5 C. Cette solution est utilisée comme solution test. Le test de viscosité est réalisé avec le viscosimètre rotatif Brookfield à une rotation de 60 t/p/min. Après 30 secondes, la rotation est stoppée et la mesure est
lue et multipliée par le nombre d'échange.
Comme montré dans les exemples et exemples comparatifs ci-dessus, un composé économique azote inorganique soluble dans l'eau et un composé azote organique insoluble dans l'eau sont mélangés selon la présente invention et utilisés à un rapport spécifique (le premier seul dans une culture de production), comme sources d'azote d'une culture par fermentation de souches principalement pour faire croître des bactéries, et d'une culture de production principalement pour produire la gomme xanthanne. Ceci fournit un rapport de croissance élevé des bactéries dans la culture de fermentation des souches et une haute productivité en gomme xanthanne dans la culture de production. De plus, quand le liquide de fermentation est traité avec une enzyme lytique et que la gomme xanthanne solide est ensuite extraite / séparée du liquide de fermentation en utilisant un solvant organique, une solution aqueuse à 0, 3 % en poids de cette gomme xanthanne possède une transparence élevée de 80 % et d'excellentes propriétés de viscosité de 300 mN. s / m2 ou plus, ajoutées à une excellente productivité en gomme
xanthanne.
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OSE E8 S'Z 8Z 6'0 ZE'O - E'O 89'0 ZZ-O 91,0 S
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Claims (14)
1. Procédé de production de gomme xanthanne par la fermentation de micro-organismes producteurs de xanthanne dans un milieu de culture, dans lequel une étape de culture des souches est en premier lieu réalisée en présence d'un milieu de culture des souches contenant une première source d'azote pour augmenter la concentration des micro- organismes et produire une culture de souches, une partie de la culture de souches étant ensuite inoculée dans un milieu de culture pour la production contenant une seconde source d'azote et une étape de culture du produit étant réalisée pour produire de la gomme xanthanne, caractérisé en ce que la première source d'azote comprend une combinaison d'une source d'azote insoluble dans l'eau et d'une source d'azote soluble dans l'eau et en ce que la seconde source d'azote consiste en une source
d'azote soluble dans l'eau.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le rapport des teneurs en azote de la source d'azote insoluble à la source d'azote soluble dans le milieu de culture des souches au début de l'étape de culture des
souches varie d'environ 1: 2 à environ 1: 5.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur totale en azote dans le milieu des souches varie d'environ 0,6 à environ 1,5
g /1, au début de l'étape de culture des souches.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur totale en azote dans le milieu de production varie d'environ 0,2 à environ
1,0 g /1, au début de l'étape de culture des souches.
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que la teneur totale en azote dans le milieu de production varie d'environ 0,3 à environ
0,6 g /1, au début de l'étape de culture des souches.
6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la source d'azote soluble est choisie dans le groupe consistant en: le nitrate d'ammonium, le bromate d'ammonium, le lactate d'ammonium, le chlorhydrate d'ammonium, le phosphate d'ammonium, l'acétate d'amnmonium, le sulfate
d'ammonium et l'urée.
7. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la source d'azote insoluble dans l'eau est choisie dans le groupe consistant en: la
farine de soja, la farine d'arachide, l'extrait de maiïs et l'extrait de graine de coton.
8. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la
revendication 1.
9. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la
revendication 2.
10. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la
revendication 3.
11. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la
revendication 4.
12. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la
revendication 5.
13. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la
revendication 6.
14. Gomme xanthanne produite selon le procédé de la revendication 7.
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