JP2000050895A

JP2000050895A - キチナーゼ阻害剤およびキチナーゼ阻害物質の製造方法

Info

Publication number: JP2000050895A
Application number: JP10224497A
Authority: JP
Inventors: Kisai Shin; 希縡慎; Yoshiichi Shizuri; 芳一志津里
Original assignee: Kitasato Institute
Current assignee: Kitasato Institute
Priority date: 1998-08-07
Filing date: 1998-08-07
Publication date: 2000-02-22

Abstract

(57)【要約】【解決手段】下記の式（Ｉ）【化１】で表される化合物を有効成分として含有するキチナーゼ
阻害剤、及キチナーゼ阻害の製造方法。【効果】新規なキチナーゼ阻害剤、及びその阻害剤の
有効成分とする化合物の容易な製造法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、キチナーゼ阻害活
性を有する化合物の新規な製造方法及びその化合物を利
用した新規なキチナーセ阻害剤に関するものである。こ
のキチナーゼ阻害剤は抗菌剤、殺虫剤、農薬、船底塗料
などに利用することができる。

【０００２】

【従来の技術】キチンはN-アセチル-D-グルコスアミン
（N-acetyl-D-glucosamine）がβ-1,4結合で重合した構
造多糖であり、自然界では、昆虫の皮膚、エビやカニの
殻、真菌類の細胞壁などに存在する。昆虫や甲殻類にお
いては、脱皮、成長の過程で、キチンの合成と分解およ
び再利用が行われることが知られている。また、カビ、
酵母などの真菌類は、分裂および増殖の過程でキチンの
合成と分解が制御されている。

【０００３】キチナーゼは、キチンをN-アセチルキトビ
オースにまで分解する酵素であり、キチンの代謝系に関
わる主要な酵素である。キチンは哺乳類には存在しない
ことより、選択性の高い昆虫成育制御物質や抗菌剤を開
発する上での理想的来なターゲットの１つであると考え
られている（日本農芸化学会誌、作田庄平 1995年、6
9、147−153）。従って、キチナーゼに対する阻害剤
は、新しいタイプの抗真菌剤あるいは昆虫成長調節剤と
なり得、更には殺虫剤、殺ダニ剤になることが期待され
る。また、船底に付着する汚損生物であるフジツボなど
の甲殻類の脱皮を妨げることにより、甲殻類の付着阻害
物質として船底塗料などに使用されることも期待され
る。

【０００４】これまでに、キチナーゼ阻害物質として
は、アロサミジンおよびその誘導体（バイオサイエンス
とインダストリー、作田庄平 1993年、51、18−23）、
スティログアニジンおよびその誘導体（特開平8-198877
号公報）などが知られている。しかしながら、キチナー
ゼは生物種において異なるため、より多様なキチナーゼ
阻害物質の開発が望まれている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、抗真菌剤、
殺虫剤、農薬、付着阻害剤などに有用な新規なキチナー
ゼ阻害剤を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、キチナー
ゼに対する阻害活性を指標に天然界より検索した結果、
ハプト藻の一種が産生する糖脂質が非常に強いキチナー
ゼ阻害活性を有することを見出し、本発明を完成するに
至った。即ち、本発明は、下記の式（Ｉ）

【０００７】

【化３】

【０００８】で表される化合物を有効成分として含有す
ることを特徴とするキチナーゼ阻害剤である。また、ハ
プト藻類に属する微細藻を培養することにより下記の式
（Ｉ）

【０００９】

【化４】

【００１０】で表される化合物を採取することを特徴と
する式（Ｉ）で表される化合物の製造方法である。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下本発明を詳細に説明する。本
発明でキチナーゼ阻害剤として使用する化合物（以下、
この化合物を「化合物A」という）は、以下の理化学的
性質を示す。 1.物質の色：白色 2.分子量：512 3.分子式：C₂₇H₄₄O₉ 4.¹H-NMR （重メタノール中で測定、500MHz） * （）内は多重度、結合定数（Hz） δppm 0.98 (3H, t, 7.6), 1.41 (2H, m), 1.63 (2H,
m), 2.09 (2H, m), 2.11(2H, m), 2,36 (2H, m), 2.82
(2H, m), 3.47 (1H, dd, 3.17, 9.66), 3.50 (1H, ddd,
0.98, 5.37, 6.59), 3.52 (1H, dd, 7.57, 9.66), 3.6
9 (1H, m), 3.72(2H, dd, 5.37, 6.59), 3.74 (1H, m),
3.82 (1H,dd, 0.98, 3.17), 3.97 (1H,dd, 14.1, 6.
1), 4.22 (1H, d, 7.57), 5.03 (1H, m), 5.36 (1H,
m). 5.¹³C-NMR （重メタノール中で測定、500MHz） * （）内は多重度 δppm 14.8 (q), 25.8 (t), 26.6 (t), 28.0 (t), 30.
3 (t), 35.2 (t), 61.9(t), 62.7 (t), 69.0 (t), 70.4
(d), 72.6 (d), 74.9 (d), 75.0 (d), 76.9 (d), 105.
5 (d), 128.3 (d), 129.0 (d), 129.1 (d), 129.3 (d),
129.5 (d), 129.6 (d), 130.8 (d), 132.9 (d), 175.2
(s). 6.溶解度：メタノール、エタノール、ブタノール、酢酸
エチル、クロロホルムに易溶、水に難溶。

【００１２】次に、化合物Aの製造法について説明す
る。本発明で用いられる微細藻類は化合物Ａを産生する
ものであれば特に限定されるものではないが、微細藻の
中でも、ハプト藻に属する微細藻を好ましく例示でき
る。ハプト藻に属する微細藻の中では、イソクリシス・
ガルバナ（Isochrysisgalbana）に属する微細藻を使用
するのが特に好ましい。微細藻類からの化合物Aの単離
精製は、天然物から単離精製するために常用される方法
に従って行われる。例えば、微細藻類をアセトン、メタ
ノール、水、含水メタノール、含水エタノール、エタノ
ールなどで抽出し、イオン交換樹脂、活性炭、ゲル濾過
剤、シリカゲルカアラムクロマトグラフィーや高速液体
クロマトグラヒウィーなどを使用することにより化合物
Ａを得ることができる。

【００１３】これまで、化合物Aは、微細藻類の抽出液
からジアシルグリセロ糖脂質である化合物Ｂ〔（２
Ｓ’）−２’−Ｏ−（６，９，１２，１５−オクタデカ
テトラエノイル）−３’−Ｏ−（５，８，１１，１４，
１７−イコサペンタエノイル）グリセリルβ−Ｄ−ガラ
クトピラノシド〕を採取し、しかる後にこれを加水分解
するという２段階の工程で製造されることが報告されて
いるのみである(Chem. Pharm. Bull. 1992, 40, 1404-1
410)。加えて、加水分解反応において位置選択性が乏し
く、グリセロールの２位で加水分解が起きたもの及び３
位で加水分解が起きたものとの混合物となっており、反
応成績体相互の分離の工程が必須となっていた。すなわ
ち、化学的に純粋な化合物Ａを製造するには多工程を要
していた。今回、発明者らが示す方法では容易に採取す
ることができる。

【００１４】化合物Ａは、キチナーゼの酵素活性を阻害
するので、キチナーゼ阻害剤として用いることができ
る。また、そのキチナーゼ阻害活性を利用して抗真菌
剤、抗菌剤、殺虫剤、農薬、船底塗料などとしての用途
も考えられる。以下、実施例により本発明を更に説明す
る。

【００１５】

【実施例】〔実施例１〕硝酸ナトリウム１２０ｍｇ/
Ｌ、りん酸二カリウム５ｍｇ/Ｌ，ビタミンＢ１２１μ
ｇ/Ｌ，ビタミンＢ１１００μｇ/Ｌ，ビオチン１μｇ/
Ｌ，Ｆｅ−ＥＤＴＡ２５９ｍｇ/Ｌ、Ｍｎ−ＥＤＴＡ３
３２ｍｇ/Ｌ、トリス緩衝液１ｇ/Ｌ、土壌抽出液５０ｍ
ｌ/Ｌ、海水１Ｌの組成を有するＥＳＭ培地（ｐＨ８．
０）８Ｌを１０Ｌのプラスチクボトルに加え、イソクリ
シス・ガルバナに属する微細藻株を種菌として植菌し
て、２５℃で、２−３週間培養した。

【００１６】〔実施例２〕８０Ｌの培養液を１００００
ｒｐｍで連続遠心分離し、２０ｇの凍結乾燥藻体を得
た。これに１Ｌのアセトンを加えて抽出し、これを３回
繰り返した。得られた抽出液を減圧濃縮してアセトンを
除去した後、酢酸エチルと水を各１Ｌ加えて分配した。
酢酸エチル層は濃縮後、さらにヘキサンと７０％メタノ
ールで分配を行った。活性のある７０％メタノール画分
をシリカゲルカラムに吸着させ、クロロホルムーメタノ
ール（メタノール：０−１００％）で溶出した。次に、
活性成分を逆相カラム（東ソー社製、ＴＳＫｇｅｌＯＤ
Ｓ−８０Ｔｓ，２×２５ｃｍ）に吸着させ、アセトニト
リルー水で溶出する高速液体クロマトグラフィーによ
り、化合物Ａを８．２ｍｇ得た。

【００１７】〔実施例３〕化合物Ａのキチナーゼ阻害活
性を以下のように測定した。基質溶液として０．４ｍＭ
ｐ−ニトロフェニルージーＮ−アセチルーβ―キトビオ
サイド（P-nitrophenyl-di-N-acetyl-β-chitobiosid
e）（生化学工業社製）の５０ｍＭナトリウムリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を用い、酵素溶液としてバチルス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の微生物由来のキチナーゼ（シ
グマ社製）の１ｍｇ/ｍｌ（水溶液）を用いた。

【００１８】30℃にて通常の紫外可視分光光度計のセル
中に基質溶液９００μｌと、１ｍｇ/ｍｌの化合物Ａの
えたのーる溶液５０μｌを入れた。1分後に酵素溶液５
０μｌを添加し、20秒から80秒までの４０５ｎｍの吸光
度の増加を測定した。ブランク試験は化合物Ａを含まな
いエタノール溶液を用いた。化合物Ａを加えた場合（化
合物Ａの濃度：２５μｇ/ｍｌ）、ブランクと比較して
３０％の吸光度の減少が見られた。

【００１９】

【発明の効果】本発明は、新規なキチナーゼ阻害剤、及
びその阻害剤の有効成分とする化合物の容易な製造法を
提供する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｒ 1:89）Ｆターム(参考） 4B064 AF41 BA06 BE07 BE08 BE09 BE10 BE14 BG01 BH04 BH05 CA08 DA02 DA12 DA16 4C057 AA05 AA09 BB02 DD01 JJ12 4C086 AA03 AA04 EA04 MA04 NA14 ZB35 ZC20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の式（Ｉ）【化１】で表される化合物を有効成分として含有することを特徴
とするキチナーゼ阻害剤。
【請求項２】ハプト藻類に属する微細藻を培養するこ
とにより下記の式（Ｉ）【化２】で表される化合物を採取することを特徴とする式（Ｉ）
で表される化合物の製造方法。
【請求項３】微細藻が、イソクリシス・ガルバナに属
する微細藻であることを特徴とする請求項２記載の化合
物の製造方法。