EA010908B1 - Ингибиторы вич-протеазы на основе замещённых бензизоксазолсульфонамидов широкого спектра действия - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим формы N-оксидов, солей, стереоизомерные формы, формы рацемических смесей и сложных эфиров. Также изобретение относится к использованию таких соединений в качестве ингибиторов ВИЧ-протеазы широкого спектра действия, способам ингибирования протеазы ретровируса у млекопитающего, инфицированного указанным ретровирусом, а также к включающим такие соединения фармацевтическим композициям

Description

Настоящее изобретение относится к замещенным бензизоксазолсульфонамидам, их использованию в качестве ингибиторов аспарагинпротеазы, в частности в качестве ингибиторов ВИЧ-протеазы широкого спектра действия, способам их получения, а также к фармацевтическим композициям и диагностическим наборам, включающим эти соединения. Настоящее изобретение также относится к комбинациям предлагаемых замещенных бензизоксазолсульфонамидов с другими антиретровирусными средствами. Кроме того, изобретение относится к использованию этих соединений в анализах в качестве контрольных соединений или в качестве реагентов.

Вирус, вызывающий синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), известен под разными названиями, включая Т-лимфоцитный вирус III (НТЬУ-ΙΙΙ), или лимфаденопатический вирус (ЬАУ), или родственный СПИД вирус (АКУ), или вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). До настоящего времени было идентифицировано два разных семейства, а именно ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Далее в настоящем изобретении термин ВИЧ будет использоваться для родового обозначения этих вирусов.

Одним из критических путей в жизненном цикле ретровирусов является процессинг полипротеиновых предшественников под действием аспарагинпротеазы. Например, в случае вируса ВИЧ происходит процессинг дад-ροΐ белка под действием ВИЧ-протеазы. Правильный процессинг полипротеиновых предшественников под действием аспарагинпротеазы необходим для сборки структуры инфекционных вирионов и, таким образом, это делает аспарагинпротеазу привлекательной мишенью для антивирусной терапии. В частности, ВИЧ-протеаза является привлекательной мишенью для лечения ВИЧ.

Ингибиторы ВИЧ-протеазы (ΡΙ) обычно вводят пациентам, страдающим СПИД, в сочетании с другими анти-ВИЧ соединениями, такими как, например, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ΝΚΤΙ), ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ΝΝΚΤΙ), нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (ΝίΚΤΊ) или другие ингибиторы протеаз. Несмотря на то что эти антиретровирусные средства весьма полезны, они имеют общее для таких средств ограничение, а именно являющиеся мишенью ферменты в вирусе ВИЧ способны мутировать таким образом, что известные лекарственные средства становятся менее эффективными или даже совсем неэффективными против таких мутированных вирусов ВИЧ. Или, иначе говоря, вирус ВИЧ создает постоянно возрастающую резистентность против существующих лекарственных средств.

Резистентность ретровирусов, и в частности вируса ВИЧ, против ингибиторов является основной причиной неэффективности лечения. Например, половина пациентов, проходящих курс анти-ВИЧ комбинационной терапии, не отвечают в полной мере на лечение в основном из-за резистентности вируса к одному или нескольким применяемым лекарственным средствам. Более того, было показано, что резистентный вирус передается новоинфицированным субъектам, что приводит к сильному ограничению выбора терапевтических средств для таких пациентов, которые не были подвержены действию лекарственных средств. Поэтому в данной области техники существует необходимость в новых соединениях для лечения ретровирусных инфекций, более конкретно для лечения СПИД. В данной области техники особенно остро ощущается необходимость в соединениях, которые активны не только в отношении вируса ВИЧ дикого типа, но также и в отношении резистентных вирусов ВИЧ, которые становятся все более распространенными.

Известные антиретровирусные средства, часто вводимые в режиме комбинационной терапии, в результате вызывают резистентность, как указано выше. Это часто заставляет врачей увеличивать уровни содержания активных веществ в плазме, чтобы указанные антиретровирусные средства могли снова восстановить эффективность против мутированных вирусов ВИЧ. Следствием этого является чрезвычайно нежелаемое увеличение лекарственной нагрузки. Повышение уровней содержания в плазме также может привести к повышенному риску несоответствия предписанной терапии. Таким образом, не только выгодно иметь соединения, проявляющие активность в отношении широкого спектра мутантных ВИЧ, но также интересно то, что существует небольшое или совсем не существует расхождения в отношении между активностью против мутантного вируса ВИЧ и активностью против вируса ВИЧ дикого типа (которое также называется кратностью резистентности в пределах широкого ряда мутантных штаммов ВИЧ). Таким образом, тот же режим комбинационной терапии для пациента может быть продлен на более долгий период времени, поскольку будет повышаться вероятность того, что мутантный вирус ВИЧ будет чувствительным к активным ингредиентам.

Обнаружение соединений с высокой активностью в отношении дикого типа и широкого ряда мутантов также имеет преимущества, поскольку лекарственная нагрузка может быть снижена, если терапевтический уровень достигает минимума. Один путь снижения такой лекарственной нагрузки представляет собой выявление анти-ВИЧ соединений с хорошей биодоступностью, т. е. благоприятным фармакокинетическим и метаболическим профилем, чтобы суточную дозу можно было довести до минимальной, а следовательно, и количество принимаемых таблеток.

Еще одной характеристикой хорошего анти-ВИЧ соединения является то, что связывание ингибитора с белками плазмы оказывает минимальный или не оказывает никакого эффекта на его активность.

Таким образом, в медицине существует настоятельная потребность в ингибиторах протеазы, способных бороться с широким спектром мутантных форм вируса ВИЧ. Другие представляющие интерес характеристики включают незначительные отклонения кратности резистентности, хорошую биодоступ

- 1 010908 ность и незначительный эффект или отсутствие такового на активность соединений из-за связывания с белками плазмы.

До настоящего времени несколько видов ингибиторов протеазы поставлялось на рынок или находилось в стадии разработки. Одна конкретная структура ядра (описана ниже) была раскрыта в ряде ссылочных документов, таких как ^О 95/06030, ^О 96/22287, ^О 96/28418, ^'О 96/28463, ^О 96/28464, ^'О 96/28465 и ^'О 97/18205.

Раскрытые в этих документах соединения описаны как ингибиторы ретровирусной протеазы

^'О 99/67254 раскрывает 4-замещенные-фенилсульфонамиды, обладающие способностью ингиби рования ретровирусных протеаз, резистентных к множеству лекарственных средств

Было обнаружено, что замещенные бензизоксазолсульфонамиды по настоящему изобретению имеют выгодный фармакокинетический профиль. Они активны не только против вируса ВИЧ дикого типа, но также демонстрируют широкий спектр активности против различных мутантных вирусов ВИЧ, проявляющих резистентность против известных ингибиторов протеаз.

Настоящее изобретение относится к ингибиторам протеаз на основе замещенных бензизоксазолов, имеющих формулу

его Ν-оксид, соль, стереоизомерная форма, рацемическая смесь, сложный эфир, где Б представляет собой -С(=О)-, -О-С(=О)-, -О-С₁.₆алкандиил-С(=О)- или -ΝΚ^-СрбалкандиилС(=О)-, К₈ представляет собой водород;

К₁ представляет собой:

(I) насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода, (II) фенильное кольцо, замещенное двумя заместителями, выбранными из С₁.₆алкила и амино, (ίίί) ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С1-6алкилом, (ίν) ароматический моноциклический гетероцикл, определенный в (ίίί), связанный с переменной Б через С1-6алкильную группу;

К₂ представляет собой водород;

К₃ представляет собой арилС₁.₄алкильную группу, где арил представляет собой фенил;

К₄ представляет собой С_1-6алкильную группу;

К₁₂ представляет собой группу -ΝΗ₂;

Основной азот, присутствующий в соединениях по настоящему изобретению, может быть квартенизирован любым агентом, известным специалистам в данной области, включая, например, низшие алкилгалогениды, диалкилсульфаты, длинноцепочечные галогениды и аралкилгалогениды.

Термин замещенный, как он повсеместно используется в настоящем описании для определения соединений формулы (I), означает, что один или несколько атомов водорода при атоме, указанном в выражении, использующем термин замещенный, замещены выбранным вариантом из указанной группы, при условии, что валентность указанного атома не превышается и что замещение приводит к химически стабильному соединению, т. е. соединению, которое достаточно устойчиво для сохранения при его выделении с достаточной степенью чистоты из реакционной смеси и при его формулировании в терапевтическое средство. Может быть и такой вариант, когда количество заместителей в указанной группе определено. Например, моно- или дизамещенный означает один или два заместителя.

Термин галоген, как он используется в настоящем описании, как группа или часть группы являет

- 2 010908 ся родовым обозначением для фтора, хлора, брома и йода.

Термин С_1-4алкил как группа или часть группы означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий 1-4 атома углерода, такой как, например, метил, этил, пропил, бутил и 2-метилпропил и т.п.

Термин С_1-балкил как группа или часть группы означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий 1-6 атомов углерода, такой как группы, определенные для С_1-4алкила, и пентил, гексил, 2-метилбутил, 3-метилпентил и т.п.

Термин С_1-6алкандиил как группа или часть группы означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий 1-6 атомов углерода, такой как, например, метилен, этан-1,2-диил, пропан-1,3-диил, пропан-1,2-диил, бутан-1,4-диил, пентан-1,5-диил, гексан-1,6-диил, 2-метилбутан-1,4-диил, 3-метилпентан-1,5-диил и т.п.

Термин арил как группа или часть группы включает фенил, который может быть необязательно замещенным одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из С_1-6алкила или амино.

Как он использован в данном изобретении, термин (=0) образует карбонильную группу с атомом углерода, с которым он связан. Термин (=0) образует сульфоксид с атомом серы, с которым он связан. Термин (=0)2 образует сульфонил с атомом серы, с которым он связан.

Как использовано выше, термин один или несколько охватывает все существующие атомы Н, где это подходяще, которые могут быть замещены заместителем, предпочтительно одним, двумя или тремя.

Когда одна из переменных (например, галоген или С_1-4алкил) встречается более одного раза в любой составляющей, каждое значение является независимым.

Для терапевтического применения соли соединений формулы (I) являются такими, где противоион является фармацевтически или физиологически приемлемым. Однако соли, содержащие фармацевтически неприемлемый противоион, также могут найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения формулы (I). Все соли, независимо от того, являются они фармацевтически приемлемыми или нет, охватываются настоящим изобретением.

Фармацевтически приемлемые или физиологически переносимые формы аддитивных солей, которые могут образовывать соединения по настоящему изобретению, могут быть легко получены с использованием подходящих кислот, таких как, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например, хлористо-водородная или бромисто-водородная, серная, гемисерная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, аспарагиновая, додецилсерная, гептановая, гексановая, никотиновая, пропановая, оксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламиновая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и подобные кислоты.

И, наоборот, указанные кислотно-аддитивные соли могут быть преобразованы путем обработки подходящим основанием в форму свободного основания.

Соединения формулы (I), содержащие кислотный протон, могут быть также преобразованы в их нетоксичные формы аддитивных солей с металлами или аминами путем обработки подходящими органическими или неорганическими основаниями. Подходящие формы солей с основаниями включают, например, соли аммония, соли щелочных или щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например соли бензатина, Ν-метила, -Ό-глюкамина, гидрабамина, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинином, лизином и т.п.

И, наоборот, указанные основно-аддитивные соли могут быть преобразованы путем обработки подходящей кислотой в форму свободной кислоты.

Термин соли также включает гидраты и формы добавления растворителя, которые могут образовывать соединения по настоящему изобретению. Примерами таких форм являются, например, гидраты, алкоголяты и т. п.

Ν-оксидные формы соединений по настоящему изобретению включают соединения формулы (I), где один или несколько атомов азота являются окисленными до так называемого Ν-оксида.

Соединения по настоящему изобретению могут существовать в их таутомерных формах. Такие формы, хотя они четко не указаны в приведенных выше формулах, охватываются настоящим изобретением.

Термин стереохимически изомерные формы соединений по настоящему изобретению, как он использован выше в настоящем описании, означает все возможные соединения, состоящие из одних и тех же атомов, связанных той же последовательностью связей, но имеющие разные пространственные структуры, не являющиеся взаимозаменяемыми, которые могут иметь соединения по настоящему изобретению. Если не упомянуто или не указано иное, химическое название соединения охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которые может иметь указанное соединение. Указанная смесь может включать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Все стереохимически изомерные формы соединений по настоящему изобретению, как в чистом виде, так и в смеси друг с другом, входят в объем настоящего изобретения.

- 3 010908

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, указанных в настоящем изобретении, определяют как изомеры, по существу, свободные от других энантиомерных или диастереомерных форм этой же основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных соединений. В частности, термин стереоизомерно чистый относится к соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток по меньшей мере 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) вплоть до избытка 100% (т.е. 100% одного изомера и отсутствие какого-либо другого), более конкретно соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток от 90 до 100%, и еще более конкретно имеющим стереоизомерный избыток от 94 до 100%, в частности особенно к тем, которые имеют стереоизомерный избыток от 97 до 100%. Термины энантиомерно чистый и диастереомерно чистый имеют одинаковый смысл, но когда рассматривается энантиомерный избыток, соответственно, имеется в виду и диастереомерный избыток.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений по настоящему изобретению можно получить при использовании известных из уровня техники методов. Например, энантиомеры можно отделить друг от друга методом селективной кристаллизации их диастереомерных солей с использованием оптически активных кислот или оснований. Примеры таких веществ включают винную, дибензоилвинную, дитолуоилвинную и камфорсульфоновую кислоты.

Альтернативно, энантиомеры можно выделить хроматографическими методами с использованием хиральных стационарных фаз. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также можно получить из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных веществ, при условии, что реакция проходит стереоспецифически. Когда желательно получить специфический стереоизомер, предпочтительно осуществление синтеза указанного соединения стереоспецифическими методами получения. В таких методах выгодно использовать энантиомерно чистые исходные вещества.

Диастереомерные рацематы формулы (I) могут быть получены отдельно традиционными методами. Подходящие методы физического разделения, которые можно выгодным образом использовать, представляют собой, например, селективную кристаллизацию и хроматографию, например колоночную хроматографию.

Специалистам в данной области должно быть понятно, что соединения формулы (I) содержат по меньшей мере один асимметрический центр и, таким образом, могут существовать в виде различных стереоизомерных форм. Такой асимметрический центр указан в приведенной ниже формуле звездочкой (*). Также указаны номера атомов бензизоксазольного кольца

Абсолютная конфигурация каждого асимметрического центра, который может присутствовать в соединениях формулы (I) по настоящему изобретению, может быть указана обозначающими стереохимию символами В и 8, при этом такое В- и 8-обозначение соответствует правилу, описанному в Риге Арр1. С11ст. 1976, 45, 11-30. Атом углерода, помеченный звездочкой (*), предпочтительно имеет В-конфигурацию.

Настоящее изобретение также включает все изотопы атомов, присутствующих в соединениях по настоящему изобретению. Изотопы включают те атомы, которые имеют одинаковое атомное число, но разные массовые числа. В качестве общего, но не ограничивающего, примера можно указать изотопы водорода, включающие тритий и дейтерий. Изотопы углерода включают С-13 и С-14.

Используемый далее в настоящем описании термин соединения формулы (I), или соединения по настоящему изобретению, или подобный термин включает соединения общей формулы (I), их Ν-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, а также их содержащие кватернизированный азот аналоги. Представляющий интерес подкласс таких соединений включает соединения формулы (I) или любую подгруппу таких соединений, их Ν-оксиды, соли и стереоизомерные формы.

Особой группой соединений являются такие соединения формулы (I) или их любая подгруппа, где Ь вместе с атомом азота, с которым связана эта группа, образует -Θ-^=Θ)-ΝΗ-4(=Θ)-ΝΗ-, -Ο-С1_-6алкандиил-С(=Ο)-NΗ-, -№₈-С1_-6алкандиил-С(=О)-Ж-.

Следующей особой группой соединений являются такие соединения формулы (I) или их любая подгруппа, где В₂ представляет собой водород.

Следующей особой группой соединений являются такие соединения формулы (I) или их любая подгруппа, где В₃ представляет собой арилС1_-4алкил, в частности, арилметил; более конкретно фенилметил.

Следующей особой группой соединений являются такие соединения формулы (I) или их любая подгруппа, где В₄ представляет собой С1_-6алкил; более конкретно В₄ представляет собой изобутанил.

- 4 010908

Еще одной особой группой соединений являются такие соединения формулы (I) или их любая подгруппа, где сульфонамидная группа связана с бензизоксазольной группой в положении 5, как показано ниже ,Ν

Особый интерес представляют такие соединения формулы (I), которые включают сочетания определений переменных, указанных для одной или нескольких особых групп, которые перечислены непосредственно выше, например:

(ί) группа соединений формулы (I), где К₂ представляет собой водород, К₃ представляет собой арилС1_-4алкил, где арил представляет собой фенил, и К₄ представляет собой С1_-6алкил, или (ίί) группа соединений формулы (I), где К₂ представляет собой водород, К₃ представляет собой арилС_1-4алкил, где арил представляет собой фенил, и К₄ представляет собой С_1-6алкил, и сульфонамидная группа связана с бензизоксазольной группой в положении 5; или (ίίί) группа соединений формулы (I), где К₁ представляет собой арилС_1-6алкил, где арил представляет собой фенил, или насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода, или ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С_1-6алкилом, и Ь вместе с атомом азота, с которым связана эта группа, образует -0Ή(=0)-ΝΗ-, Ή(=0)-ΝΗ-, -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-НН-, -НК⁸-С_1-6алкандиил-С(=О)-НН-; или (ίν) группа соединений формулы (I), где К₁ представляет собой арилС_1-6алкил, где арил представляет собой фенил, или насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода, или ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С_1-6алкилом, и Ь вместе с атомом азота, с которым связана эта группа, образует -0Ή(=0)-ΝΗ-, -ί.’(=0)-ΝΗ-, -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-№-, ^К₈-С_1-6алкандиил-С(=О)^Н-, и сульфонамидная группа связана с бензизоксазольной группой в положении 5; или (ν) группа соединений формулы (I), где К₁₂ представляет собой -ΝΗ₂; или (νί) группа соединений формулы (I), где К₁₂ представляет собой -ΝΗ₂, и сульфонамидная группа связана с бензизоксазольной группой в положении 5; или (νίί) группа соединений формулы (I), где К₁ представляет собой арилС_1-6алкил, где арил представляет собой фенил, или насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода, или ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С_1-6алкилом, и Ь вместе с атомом азота, с которым связана эта группа, образует 0-ί.’(Ό)-ΝΗ-, -ί'.’(=0)-ΝΗ-, -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-NΗ-, -NΚ₈-С_1-6алкандиил-С(=О)-NΗ-; К₂ представляет собой водород; К₃ представляет собой арилС_1-4алкил и К₄ представляет собой С_1-6алкил; или (νίίί) группа соединений формулы (I), где К₁ представляет собой арилС_1-6алкил, где арил представляет собой фенил, или насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода, или ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С_1-6алкилом, и Ь вместе с атомом азота, с которым связана эта группа, образует 0Ή(=0)-ΝΗ-, Ή(=0)-ΝΗ-, -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-№-, -NΚ₈-С_1-6алкандиил-С(=О)-NΗ-; К₂ представляет собой водород; К₃ представляет собой арилС_1-4алкил, где арил представляет собой фенил, и В₄ представляет собой С_1-6алкил; К₁₂ представляет собой -ΝΗ₂, и сульфонамидная группа связана с бензизоксазольной группой в положении 5; или (ίχ) любое другое возможное сочетание.

Соединения, представляющие интерес, включают в себя следующие:

гексагидрофуро[2,3-Ь]фуран-3-иловый эфир {3-[(3-аминобензо[й]изоксазол-5-сульфонил)изобутиламино]-1-бензил-2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

3-амино-№{3-[(3-аминобензо [й]изоксазол-5-сульфонил)изобутиламино]-1-бензил-2-гидроксипропил}-2-метилбензамид;

№{3-[(3-аминобензо[й]изоксазол-5-сульфонил)изобутиламино]-1-бензил-2-гидроксипропил}-2(2,6-диметилфенокси)ацетамид;

тетрагидрофуран-3-иловый эфир {3-[(3-аминобензо[й]изоксазол-5-сульфонил)изобутиламино]-1

- 5 010908 бензил-2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

{3-[(3 -аминобензо [ά] изоксазол-5 -сульфонил)изобутиламино]-1 -бензил-2-гидроксипропил }амид

5-метилизоксазол-4-карбоновой кислоты;

тиазол-5 -илметиловый эфир {3-[(3 -аминобензо [ά] изоксазол-5 -сульфонил)изобутиламино]-1 -бензил2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

Ν-{3-[(3 -аминобензо [б]изоксазол-6-сульфонил)изобутиламино]- 1-бензил-2-гидроксипропил}-2(2,6-диметилфениламино)ацетамид;

их Ν-оксиды, соли или стереоизомерные формы.

Особую группу соединений представляют те соединения формулы (I), в которых:

К₂ представляет собой водород;

Ь представляет собой -С(=О)-, -О-С(=О)-, -О-СН₂-С(=О)-, где в каждом случае группа С(=О) связана с группой ΝΚ₂;

Я₃ представляет собой фенилметил;

К₄ представляет собой С_1-6алкил;

и Κ₁₂ представляет собой -ΝΗ₂.

Еще одну группу соединений, которая представляет интерес, представляют те соединения формулы (I), в которых Ь представляет собой -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-.

Особую группу соединений представляют те соединения формулы (I), в которых К₁-Ь представляет собой Не!¹-ОС(=О)-, Не!²-С_1-6алкандиил-ОС(=О)-, арил-О-С_1-6алкандиил-С(=О) или арил-С(=О), где Не!¹ представляет собой насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода;

Не!² представляет собой ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С_1-6алкилом; арил представляет собой фенил.

Группу соединений, представляющих особый интерес, представляют те соединения формулы (I), в которых Κ₁ представляет собой арилС_1-6алкил, Не!¹, Не!², Не!²С1-6алкил, в частности Κ1 представляет собой арилС1-6алкил, Не!², Не!²С1-6алкил, где Не!¹ представляет собой насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода;

Не!² представляет собой ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов два гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному атому углерода С_1-6алкилом;

арил представляет собой фенил.

Предпочтительную группу соединений представляют те соединения, в которых сульфонамидная группа связана с бензизоксазольной группой в положении 5 или 6, более предпочтительно в положении 5.

Подходящую группу соединений представляют те соединения формулы (I), в которых Κ₁ представляет собой фенил, содержащий по меньшей мере один заместитель, Ь выбран из -С(=О)-, -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-, Κ₁₂ представляет собой -ΝΉ₂.

Подходящую группу соединений представляют те соединения формулы (I), в которых Κ₁ представляет собой Не!¹, где указанная группа Не!¹ является бициклической, включающей 5-8 кольцевых членов, где Не!¹ содержит один или несколько гетероатомов, выбранных из кислорода; в частности Не!¹ содержит 2 или более гетероатомов, выбранных из кислорода; в одном аспекте Κι представляет собой бициклический Не!¹, содержащий по меньшей мере один гетероатом кислорода, Ь выбран из -О-С(=О)- и Κ₁₂ представляет собой -ΝΉ₂.

Представляют интерес те соединения формулы (I), в которых Κ₁ представляет собой О или О-С_1-6алкил, где О выбран из тиазолила, имидазолила, оксазолила, оксадиазолила, диоксазолила, пиразолила, пиразинила, имидазолинонила, хинолинила, изохинолинила, индолила, пиридазинила, пиридинила, пирролила, пиранила, пиримидинила, фуранила, триазолила, тетразолила, бензофуранила, бензоксазолила, изоксазолила, изотиазолила, тиадиазолила, тиофенила, тетрагидрофурофуранила, тетрагидропиранофуранила, бензотиофенила, карбазоила, имидазолонила, оксазолонила, индолизинила, триазинила, хиноксалинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиаморфолинила, пиразинила, тиенила, тетрагидрохинолинила, тетрагидроизохинолинила, β-карболинила, диоксанила, дитианила, оксоланила, диоксоланила, тетрагидротиофенила, тетрагидропиранила; где О необязательно является бензоконденсированным; где О необязательно является дополнительно замещенным на одном или нескольких кольцевых членах; предпочтительно, О выбран из тиазолила, имидазолила, оксазолила, оксадиазолила, пиразолила, пиридинила, необязательно замещенного на одном или нескольких кольцевых членах.

Особый интерес в объеме определения Не!¹ представляют собой гетероциклы, являющиеся незамещенными 5-8-членными насыщенными моноциклическими или бициклическими гетероциклами, содержащими один или два атома кислорода, где остальные кольцевые атомы являются атомами углерода, более конкретно тетрагидрофуран и гексагидрофуро[2,3-Ь] фуран.

- 6 010908

Особый интерес в объеме определения Не!² представляют собой замещенные или незамещенные 5-членные ароматические моноциклические гетероциклы, содержащие один или два гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы, более конкретно, замещенный или незамещенный тиазол, замещенный или незамещенный оксазол и замещенный или незамещенный изоксазол. Подходящими заместителями в указанных гетероциклах в рамках определения Не!² являются С^алкил и ΝΗ2, более предпочтительно С1_-далкил.

Подходящую группу соединений представляют те соединения формулы (I) в форме соли, где соль выбрана из трифторацетата, фумарата, хлорацетата и метансульфоната; представляющей интерес солью является трифторацетат.

Представляют интерес те соединения формулы (I), которые имеют кратную резистентность (£о1б ге818!апсе), определенную в соответствии с описанными в настоящем изобретении способами, как находящуюся в пределах 0,01-100 в отношении видов ВИЧ, имеющих по меньшей мере одну мутацию в ВИЧ-протеазе в сравнении с последовательностью дикого типа (например, М38432, К0345, д1 327742) в положении, выбранном из 10, 71 и 84; в частности в ВИЧ-протеазе присутствуют по меньшей мере две мутации, выбранные из 10, 71 и 84; в частности соединения имеют кратную резистентность в пределах от 0,1 до 100, более предпочтительно в пределах от 0,1 до 50, подходяще в пределах от 0,2 до 35.

Представляют интерес те соединения, которые выбраны из соединений № 1-10. Соединения формулы (I) в основном могут быть получены при помощи процедур, аналогичных описанным в ШО 95/06030, ШО 96/22287, ШО 96/28418, ШО 96/28463, ШО 96/28464, ШО 96/28465 и ШО 97/18205.

Конкретные реакционные процедуры для получения соединений по настоящему изобретению описаны ниже. В получениях, описанных ниже, продукты реакций могут быть выделены из среды и, если это желательно, дополнительно очищены в соответствии с методами, известными из уровня техники, такими как, например, экстракция, кристаллизация, тритурирование и хроматография.

Схема А

Соединение а-2 получали в соответствии со способом, описанным в патенте США № 5488162. Соединение а-4 получали в соответствии со способом, описанным в I. Не!егосус11с Скет., 26, 1293-1298 (1989). Для получения соединения а-5 соединение а-4 (2,1 г, 0,015 моль) добавляли к хлорсульфоновой кислоте (4,1 мл, 0,060 моль) при комнатной температуре (КТ). Эту реакционную смесь перемешивали в течение ночи в инертной атмосфере, такой как азот, при 60°С. Затем смесь выливали в смесь лед/вода. Осадок отфильтровывали и сушили с толуолом в аппарате ВисЫ (2,1 г, выход 60%).

Промежуточные соединения а-4 или а-5, где Κ12 представляет собой аминогруппу, можно подвергнуть дальнейшему взаимодействию в соответствии с известными из уровня техники процедурами с получением аналогичных промежуточных соединений, где Κ12 представляет собой замещенную амино группу.

Аналогичные способы можно применять для получения промежуточных соединений формулы а-5, где хлорсульфонильная группа находится в положении 4, 6 или 7. Однако замещение сульфонильной группы в положении 5 бензизоксазольной группы является предпочтительным.

- 7 010908

Схема В

Схема В представляет собой общую процедуру получения промежуточных соединений формулы Ь-4, которая приводится ниже в качестве примера для получения соединения формулы (I), где К₂ представляет собой водород, К₃ представляет собой фенилметил, К₄ представляет собой изобутил, К₁₂ представляет собой амино. Специалист в данной области сможет применить аналогичные процедуры для получения других промежуточных соединений формулы Ь-4.

Соединение Ь-1 (1,5 г, 0,0064 моль) добавляли к 1 мл триэтиламина (Εΐ₃Ν), используемого в качестве основания (0,0075 моль), и затем к соединению Ь-2 (2,0 г, 0,0060 моль; см. схему Р) в 100 мл органического основания, такого как дихлорметан, при комнатной температуре. Другие подходящие растворители включают этилацетат, тетрагидрофуран. Смесь перемешивали в течение 3 ч и затем промывали водой. Органический слой отделяли, сушили сульфатом магния и удаляли растворитель с получением 3,2 г Ь-3. К раствору соединения Ь-3 (3,2 г, 0,0060 моль) в 50 мл органического растворителя, такого как дихлорметан, добавляли при комнатной температуре кислоту, такую как трифторуксусная кислота (4,6 мл, 0,060 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч затем промывали водой. Органический слой отделяли, сушили сульфатом магния и упаривали. Остаток очищали на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол 96/4) с получением 1,2 г Ь-4 (общий выход: 48%).

Реагенты и растворители, используемые в схеме В, могли быть заменены функциональными альтернативами или функциональными производными этих реагентов и растворителей, известных специалистам в данной области. Также реакционные условия, такие как время перемешивания, способ очистки и температура, можно регулировать для оптимизации реакционных условий.

- 8 010908

Для представляющей интерес группы соединений по настоящему изобретению В_ГО- может быть выбран из

Схема С1 представляет собой общую процедуру получения соединений формулы с-3. Один путь получения соединения с-3 включает взаимодействие промежуточного соединения с-2 с промежуточным соединением формулы К₁-Ь-(удаляемая группа) с-1 в присутствии основания, такого как триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как дихлорметан. В этом конкретном примере Ν-сукцинимидил использовали в качестве удаляемой группы, но можно использовать другие подходящие удаляемые груп пы, известные специалистам.

Специалист в данной области сможет применить аналогичные процедуры для получения других соединений формулы с-3. Например, реагенты и растворители, используемые в схеме С1, можно заменить их функциональными альтернативами или функциональными производными, известными специалистам в данной области. Также реакционные условия, такие как время перемешивания, очистка и температура, можно регулировать для оптимизации реакционных условий.

Схема С2 представляет собой общую процедуру получения соединений формулы с-6. Один путь получения соединения с-6 включает взаимодействие промежуточного соединения с-5 с промежуточным соединением формулы (с-4) в присутствии гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимида (БОС) и 1-гидроксибензотриазола (НОВТ) в подходящем растворителе, таком как дихлорметан.

Специалист в данной области сможет применить процедуры, аналогичные описанным в схемах С1 и С2, для получения соединений формулы I, где -Ь-К₁ имеет значение, отличное от значения в промежуточных соединениях с-1 и с-4. Например, схема О описывает процедуру получения промежуточного соединения д-5, которое затем может вступать во взаимодействие с промежуточным соединением Ь-4.

Схема Э

Синтез соединения 1

<1-1 СНгС!] <Ы

- 9 010908

Промежуточное соединение ά-1 получали, как описано в νθ 01/24240.

500 мг ά-2 перемешивали при комнатной температуре в 50 мл дихлорметана и 0,18 мл (1,30 моль) триэтиламина. Затем добавляли ά-1 и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь промывали раствором бикарбоната натрия, органический слой отделяли, сушили сульфатом магния, фильтровали и выпаривали растворитель. Очистка на силикагеле (дихлорметан/метанол 98/2) давала 300 мг соединения 1 (выход 45%).

Схема Е

Синтез соединения 6

176 мг (1,38 ммоль) 5-метилизоксазол-4-карбоновой кислоты е-1 перемешивали при комнатной температуре в 50 мл дихлорметана; добавляли 270 мг (1,40 ммоль) БИС и смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. е-2 растворяли в 10 мл дихлорметана и добавляли по каплям к полученной смеси, перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем промывали водой. Органический слой отделяли, сушили сульфатом магния, фильтровали и упаривали. Очистка на силикагеле (дихлорметан/метанол 98/2) давала 120 мг соединения 6 (выход 38%).

Схема Е

Промежуточное соединение (ί-2), соответствующее промежуточному соединению Ь-2 на схеме В, можно получить добавлением амина формулы Η₂Ν-Β₄ к промежуточному соединению (ί-1) в подходящем растворителе, таком как изопропанол.

В схеме Р энантиомерно чистые соединения формулы (ί-2) можно получить, когда (ί-1) является энантиомерно чистым. Если (ί-1) представляет собой смесь стереоизомеров, тогда (ί-2) также будет состоять из смеси стереоизомеров.

- 10 010908

Смесь 1 г метоксида натрия и 10 мл толуола перемешивали при 0°С в атмосфере азота. Добавляли по каплям смесь 1,9 г метилхлорацетата д-1 и 1,1 г метилформиата, поддерживая температуру в пределах 5-10°С. Смесь перемешивали в течение 2 ч при 0°С. После промывки водой органический слой сушили и упаривали при пониженном давлении с получением метилового эфира 2-хлор-3-оксопропионовой кислоты д-2.

Смесь 2,4 г д-2, 20 мл воды и 1,75 г тиомочевины кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 0,25 г норита и фильтровали. К фильтрату добавляли 2,5н. раствор гидроксида натрия до получения нейтрального рН. В результате фильтрации получали 1,23 г (44%) метилового эфира 2-аминотиазол-5-карбоновой кислоты д-3. Смесь 2,15 г изоамилнитрита и 10 мл диоксана перемешивали при 80°С в атмосфере азота. Добавляли по каплям раствор 1,23 г д-3 в 20 мл диоксана. Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 30 мл этилацетата. Смесь промывали насыщенным солевым раствором, сушили и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали на силикагеле с получением 0,54 г (48%) метилового эфира тиазол 5-карбоновой кислоты д-4.

Смесь 0,54 г д-4 и 10 мл тетрагидрофурана (ТГФ) перемешивали при 0°С в атмосфере азота. Добавляли по каплям смесь 0,16 г литийалюминийгидрида и 5 мл простого эфира. Через 1 ч при 0°С добавляли воду и 20% гидроксид натрия и перемешивали в течение 30 мин. Смесь фильтровали через декалит и растворитель удаляли азеотропной перегонкой с толуолом с получением 0,3 г (69%) тиазол-5-илметанола д-5.

Схема Н

Схема Н описывает конкретный путь получения ацетамидзамещенных безизоксазолов. Промежуточное соединение (И-1), полученное в соответствии с описанными выше или аналогичными процедурами, можно подвергнуть взаимодействию с хлорацетилхлоридом или его функциональным аналогом в присутствии основания, такого как триэтиламин, и в подходящем растворителе, таком как 1,4-диоксан, для получения амида формулы (И-2). Указанное промежуточное соединение (И-2) может затем взаимодействовать с амином формулы ИКаКЬ, где Ка и КЬ определены как возможные заместители в аминогруппе в К₁₂.

Ряд промежуточных соединений и исходных веществ, используемых в описанных выше получениях, являются известными соединениями, тогда как другие могут быть получены в соответствии со спосо

- 11 010908 бами, известными из уровня техники как способы получения указанных или аналогичных соединений. Соединения по настоящему изобретению также можно получить в соответствии со способом, описанным на схеме 1.

Схема I

Производное бензизоксазола (]-1) можно подвергнуть взаимодействию с хлорсульфоновой кислотой и затем обработать тионилхлоридом с получением промежуточного соединения (]-2). Указанное промежуточное соединение ()-2) может затем взаимодействовать с промежуточным соединением (]-3) с получением промежуточного соединения (]-4), где РО означает подходящую защитную группу, такую как, например, трет-бутоксикарбонил. Указанное взаимодействие можно осуществлять в подходящем растворителе, таком как, например, 2-метилтетрагидрофуран, и необязательно, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин.

Промежуточное соединение ()-4) можно затем подвергнуть взаимодействию с подходящим реагентом, таким как метахлорпероксибензойная кислота (шСРБЛ) или гексагидрат монопероксифталата магния (ММРР), в присутствии подходящего растворителя, такого как 2-метилтетрагидрофуран, в этаноле с получением промежуточных соединений (]-5) и (]-6).

Промежуточные соединения (]-5) и (]-6) затем могут быть дериватизированы при помощи соединения формулы ΗΝ(Κ₅)Α-Κ₆ с получением промежуточного соединения (]-7) после реакции удаления защиты. Затем промежуточное соединение (]-7) можно подвергнуть взаимодействию с промежуточным соединением формулы Κι-Б- (удаляемая группа) в присутствии основания, такого как триэтиламин, и необязательно в присутствии ЕЭС или спирта, такого как трет-бутанол, подходящем растворителе, таком как дихлорметан, с получением соединения (]-8), которое представляет собой соединение формулы (I).

Соединения формулы (I) могут также быть преобразованы в соответствующие Ν-оксидные формы в соответствии с известными из уровня техники методами преобразования трехвалентного азота в его Ν-оксидную форму. Указанную реакцию Ν-окисления, как правило, осуществляют путем взаимодействия исходного вещества формулы (I) с подходящим органическим или неорганическим пероксидом. Подходящие неорганические пероксиды включают, например, перекись водорода, пероксиды щелочных или щелочно-земельных металлов, например пероксид натрия, пероксид калия; подходящие органические пероксиды могут включать пероксикислоты, такие как, например, бензолкарбопероксокислота или галогензамещенная бензолкарбопероксокислота, например 3-хлорбензолкарбопероксокислота, пероксоалкановые кислоты, например пероксоуксусная кислота, алкилгидропероксиды, например третбутилгидропероксид. Подходящими растворителями являются, например, вода, низшие спирты, например этанол и т. п., углеводороды, например толуол, кетоны, например 2-бутанон, галогенированные углеводороды, например дихлорметан, и смеси таких растворителей.

Соединения формулы (I) или любая подгруппа этих соединений являются активными в качестве ингибиторов фермента протеазы ретровируса, такого как ВИЧ-протеаза. В частности, соединения формулы (I) или любая подгруппа этих соединений являются активными в отношении мутантных ВИЧпротеаз, более конкретно резистентных мутантных ВИЧ-протеаз.

Стандарт чувствительности, или альтернативно резистентности, ВИЧ-протеазы к лекарственному средству устанавливается коммерчески доступным ингибиторами ВИЧ-протеазы. Как объясняется выше, существующие коммерческие ингибиторы ВИЧ-протеазы могут со временем утрачивать эффективность против популяции вируса ВИЧ у пациента. Причиной является то, что под давлением присутст

- 12 010908 вия конкретного ингибитора ВИЧ-протеазы существующая популяция вируса ВИЧ, как правило, в основном ВИЧ-протеаза дикого типа, мутирует до различных мутантных форм, которые значительно менее чувствительны к этому ингибитору ВИЧ-протеазы. Если такое происходит, речь идет о резистентных мутантах. Если такие мутанты резистентны не только к одному конкретному ингибитору ВИЧ-протеазы, но также и к разным другим коммерчески доступным ингибиторам ВИЧ-протеазы, речь идет о ВИЧпротеазе, имеющей резистентность к множеству лекарственных средств. Один путь выражения резистентности мутанта к конкретному ингибитору ВИЧ-протеазы включает получение отношения между ЕС₅о указанного ингибитора ВИЧ-протеазы против мутантной ВИЧ-протеазы к ЕС₅₀ указанного ингибитора ВИЧ-протеазы против ВИЧ-протеазы дикого типа. Указанное отношение также называют кратностью резистентности (ЕЕ).

Многие мутанты, встречающиеся в клинике, имеют кратность резистентности 100 или более против коммерчески доступных ингибиторов ВИЧ-протеазы, таких как саквинавир, индинавир, ритонавир и нелфинавир. Клинически релевантные мутанты ВИЧ-протеазы могут быть охарактеризованы мутацией в положении кодона 10, 71 и/или 84. Примеры таких клинически релевантных мутантных ВИЧ-протеаз перечислены в табл. 2.

Соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа этих соединений показывают кратность резистентности в пределах от 0,01 до 100 против по меньшей мере одной, а в некоторых случаях против широкого ряда клинически релевантных мутантных ВИЧ-протеаз. Особую группу соединений формулы (I) представляют те соединения формулы (I), которые показывают кратность резистентности против по меньшей мере одной мутантной ВИЧ-протеазы в пределах от 0,1 до 100, соответственно в пределах от 0,1 до 50 и более соответственно в пределах от 0,1 до 30. Особый интерес представляют те соединения формулы (I), которые показывают кратность резистентности против по меньшей мере одной мутантной ВИЧ-протеазы в пределах от 0,1 до 20, и еще больший интерес представляют те соединения формулы (I), которые показывают кратность резистентности против по меньшей мере одной мутантной ВИЧ-протеазы в пределах от 0,1 до 10.

Благодаря их выгодным фармакологическим свойствам, особенно их активности в отношении широкого ряда мутантных протеаз, например мутантных ВИЧ-протеаз, соединения по настоящему изобретению полезны для лечения субъектов, инфицированных ВИЧ, и для профилактического лечения таких субъектов. В основном соединения по настоящему изобретению могут быть полезными для лечения теплокровных животных, инфицированных вирусами, существование которых опосредовано или зависит от фермента протеазы. Состояния, которые можно предотвратить или лечить соединениями по настоящему изобретению, особенно состояния, связанные с ВИЧ и другими патогенными ретровирусами, включают СПИД, связанный со СПИД комплекс (ЛЕС), прогрессивную генерализованную лимфаденопатию (РСЬ), а также хронические заболевания ЦНС, вызванные ретровирусами, такие как, например, ВИЧопосредованная деменция и рассеянный склероз.

Соединения по настоящему изобретению или любую подгруппу этих соединений можно поэтому применять в качестве лекарственных средств против указанных выше состояний. Указанное применение в качестве лекарственных средств или способ лечения включает системное введение млекопитающему, инфицированному ретровирусом, в частности ВИЧ-инфицированному млекопитающему, количества соединения по настоящему изобретению, эффективного для лечения состояния, связанного с ВИЧ и другими патогенными ретровирусами, особенно ВИЧ-1. Следовательно, соединения по настоящему изобретению можно использовать для получения лекарственного средства, полезного для лечения состояний, связанных с ВИЧ и другими патогенными ретровирусами, в частности лекарственных средств, полезных для лечения пациентов, инфицированных резистентным или другим мутантным вирусом ВИЧ.

В предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к использованию соединений формулы (I) или любой подгруппы этих соединений для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения инфекции или заболевания, связанного с ретровирусной инфекцией, резистентной к множеству лекарственных средств, у млекопитающего, в частности с ВИЧ-1 инфекцией. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с ретровирусной инфекцией, резистентной к множеству лекарственных средств, включающему введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы (I) или подгруппы такого соединения.

В другом предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к использованию соединений формулы (I) или любой подгруппы этих соединений для получения лекарственного средства для ингибирования протеазы ретровируса, включая мутантную протеазу, резистентную мутантную протеазу и резистентную ко многим лекарственным средствам мутантную протеазу, у млекопитающего, инфицированного указанным ретровирусом; в частности ретровирусом ВИЧ-1.

В другом предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к использованию соединений формулы (I) или любой подгруппы этих соединений для получения лекарственного средства для ингибирования репликации ретровируса, включая репликацию мутантного ретровируса, репликацию резистентного мутантного ретровируса и репликацию резистентного ко многим лекарственным средствам мутантного ретровируса, в частности репликации ВИЧ-1.

- 13 010908

Соединения по настоящему изобретению также полезны для ингибирования ех νίνο образцов, содержащих ВИЧ или которые должны быть подвергнуты действию ВИЧ. Следовательно, соединения по настоящему изобретению можно использовать для ингибирования ВИЧ, присутствующего в образце жидкости организма, который содержит или предполагается, что должен содержать или быть подверженным ВИЧ.

Также сочетание антиретровирусного соединения и соединения по настоящему изобретению можно использовать в качестве лекарственного средства. Таким образом, настоящее изобретение относится к продукту, содержащему (а) соединение по настоящему изобретению и (Ь) другое антиретровирусное соединение, в качестве объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения ретровирусных инфекций, в частности для лечения инфекций ретровирусами с резистентностью к многим лекарственным средствам. Так, для предотвращения или лечения ВИЧинфекций или инфекции и заболевания, связанных с ВИЧ-инфекциями, таких как синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) или связанный со СПИД комплекс (АВС), соединения по настоящему изобретению можно вводить совместно в сочетании, например, с ингибиторами связывания, такими как, например, декстрансульфат, сурамин, полианионы, растворимый СИ4, РВО-542, ВМ8-806;

ингибиторами слияния, такими как, например, Т20, Т1249, 5-геликс, И-пептид ΛΌ8-11;

ингибиторами связывания с корецепторами, такими как, например, ЛМИ 3100, АМО-3465, АМО7049, АМО3451 (бицикламы), ТАК 779;

ингибиторами 8НС-С (8СН351125), 8НС-О, РВО-140ВТ, такими как, например, фоскарнет и пролекарства;

нуклеозидными ВТ1, такими как, например, А2Т, 3ТС, ИИС, ИИ1, И4Т, абакавир, РТС, ИАРИ, 6ОТС, ИРС 817;

нуклеотидными ВТ1, такими как, например, РМЕА, РМРА (тенофовир);

ΝΝΒΉ, такими как, например, невирапин, делавирдин, эфавиренц, 8 и 9-С1 Т1ВО (тивирапин), ловирид, ТМС-125, ТМС-120, (дапивирин), МКС-442, ИС 781, ИС 782, каправирин, ИРС 961, ИРС963, ИРС082, ИРС083, каланолид А, 81-1366, Т8АО, 4-деаминированный Т8АО, МУ150, МУ026048;

ингибиторами РНКазы Н, такими как, например, 8Р1093У, РЭ126338;

ингибиторами ТАТ, такими как, например, ВО-5-3335, К12, К37;

ингибиторами интегразы, такими как, например, Ь 708906, Ь 731988, 8-1360;

ингибиторами протеазы, такими как, например, апренавир и пролекарство С\У908. ритонавир, нелфинавир, саквинавир, индинавир, лопинавир, палинавир, ВМ8 186316, атазанавир, ЭРС 681, ЭРС 684, типранавир, А61776, мозенавир, 683333, КМ-413, КМ-272, Ь754394, Ь756425, ЬС-71350, РО161374, РО173606, РО177298, РО178390, РО178392, РБШ 140135, ТМС114, маслиновая кислота, И-140690;

ингибиторами гликозилирования, такими как, например, кастаноспермин, деоксиноджиримицин.

Такая комбинация в некоторых случаях может обеспечивать синергический эффект, посредством чего вирусную инфекцию и связанные с ней симптомы можно предотвратить, существенно уменьшить или полностью устранить.

Соединения по настоящему изобретению также можно вводить в сочетании с иммуномодуляторами (например, бромпиридином, антителом против человеческого альфа-интерферона, 1Ь-2, метионинэнкефалином, интерфероном альфа и налтрексоном), с антибиотиками (например, пентамидин изотиоратом), цитокинами (например, Тй2), модуляторами цитокинов, хемокинов или их рецепторов (например, ССВ5) или гормонами (например, гормоном роста) для уменьшения, предотвращения или устранения ВИЧинфекции или ее симптомов. Такую комбинационную терапию в различных композициях можно вводить одновременно, последовательно или независимо друг от друга. Альтернативно, такую комбинацию можно вводить в виде одной композиции, где активные ингредиенты высвобождаются из композиции одновременно или по отдельности.

Соединения по настоящему изобретению также можно вводить в сочетании с модуляторами метаболизации после применения лекарственного средства для лечения пациента. Такие модуляторы включают соединения, которые вмешиваются в метаболизацию на цитохромах, таких как цитохром Р450. Некоторые модуляторы ингибируют цитохром Р450. Известно, что существуют некоторые изоферменты цитохрома Р450, одним из которых является цитохром Р450 3А4. Ритонавир является примером модулятора метаболизации через цитохром Р450. Такую комбинационную терапию в различных композициях можно вводить одновременно, последовательно или независимо друг от друга. Альтернативно, такую комбинацию можно вводить в виде одной композиции, где активные ингредиенты высвобождаются из композиции одновременно или по отдельности. Такой модулятор можно вводить в таких же количествах, что и соединение по настоящему изобретению или в других количествах. Предпочтительно массовое соотношение такого модулятора и соединения по настоящему изобретению (модулятор: соединение по настоящему изобретению) составляет 1:1 или меньше, более предпочтительно 1:3 или меньше, подходящим является соотношение 1:10 или меньше, более подходящим соотношением является соотношение 1:30 или меньше.

- 14 010908

Таким образом, соединения по настоящему изобретению можно применять для животных, предпочтительно для млекопитающих, и в частности для человека, в качестве фармацевтических средств рег ке, в смесях друг с другом или в форме фармацевтических препаратов.

Настоящее изобретение, таким образом, относится к фармацевтическим препаратам, которые в качестве активного компонента содержат эффективную дозу, по меньшей мере одно из соединений формулы (I) в дополнение к традиционным фармацевтически безвредным эксципиентам и добавкам. Обычно фармацевтические препараты содержат от 0,1 до 90 мас.% соединения формулы (I). Фармацевтические препараты можно получать способами, известными рег ке специалистам в данной области. Для данной цели по меньшей мере одно из соединений формулы (I) вместе с одним или несколькими твердыми или жидкими фармацевтическими эксципиентами и/или добавками и, если это желательно, в сочетании с другими фармацевтически активными соединениями преобразовывают в подходящую для введения форму или лекарственную форму, которую затем можно использовать в качестве фармацевтического средства в медицине или ветеринарии.

Фармацевтические средства, содержащие соединение по настоящему изобретению, можно вводить перорально, парентерально, например внутривенно, ректально, путем ингаляции или местным путем, при этом предпочтительный путь введения зависит от конкретного случая, например конкретного течения заболевания, подлежащего лечению. Предпочтительным является пероральное введение.

Специалистам в данной области, обладающим специальными знаниями, известны добавки, которые являются подходящими для желаемой фармацевтической композиции. Помимо растворителей, можно использовать также гелеобразующие средства, основы для суппозиториев, добавки для таблеток и другие носители для активного соединения, антиоксиданты, диспергирующие средства, эмульгаторы, противопенные средства, отдушки, консерванты, солюбилизаторы, агенты для получения депо эффекта, буферные вещества или красители.

Для получения формы для перорального введения соединения по настоящему изобретению смешивают с подходящими добавками, такими как эксципиенты, стабилизаторы или инертные разбавители, и при помощи традиционных способов придают подходящую для введения форму, такую как таблетки, таблетки с покрытием, твердые капсулы, водный, спиртовой или масляный раствор. Примерами подходящих инертных носителей являются аравийская камедь, магнезия, карбонат магния, фосфат калия, лактоза, глюкоза или крахмал, в частности кукурузный крахмал. В этом случае препарат можно получать как в виде сухих, так и в виде мокрых гранул. Подходящими масляными эксципиентами или растворителями являются растительные или животные масла, такие как подсолнечное масло или масло печени трески. Подходящими растворителями для водных или спиртовых растворов являются вода, этанол, растворы сахаров или их смеси. Дополнительно в качестве добавок для других форм введения можно использовать полиэтиленгликоли и полипропиленгликоли.

Для подкожного или внутривенного введения активные соединения, если это желательно, вместе с веществами, традиционно используемыми для этого, такими как солюбилизаторы, эмульгаторы или другие вспомогательные вещества, можно формулировать в виде раствора, суспензии или эмульсии. Соединения формулы (I) могут быть также лиофилизированы с использованием полученных лиофилизированных форм, например, для получения препаратов для инъекций или инфузий. Подходящими растворителями являются, например, вода, физиологический солевой раствор или спирты, например этанол, пропанол, глицерин, а также растворы сахаров, такие как раствор глюкозы или маннита, или, альтернативно, смеси различных указанных растворителей.

Подходящими фармацевтическими композициями для введения в форме аэрозолей или спрэев являются, например, растворы, суспензии или эмульсии соединений формулы (I) или их физиологически переносимых солей в фармацевтически приемлемом растворителе, таком как этанол или вода, или смесь таких растворителей. Если это желательно, композиция может дополнительно включать другие фармацевтические добавки, такие как поверхностно-активные вещества, эмульгаторы и стабилизаторы, а также пропеллент. Такой препарат обычно содержит активное соединение в концентрации примерно от 0,1 до 50%, в частности примерно от 0,3 до 3 мас.%.

Для повышения растворимости и/или стабильности соединений формулы (I) в фармацевтических композициях выгодно использовать α-, β- или γ-циклодекстрины или их производные. Сорастворители, такие как спирты, также могут улучшить растворимость и/или стабильность соединений формулы (I) в фармацевтических композициях. Для получения водных композиций аддитивные соли соединений по настоящему изобретению типично являются более подходящими благодаря их улучшенной водорастворимости.

Подходящими циклодекстринами являются α-, β- или γ-циклодекстрины (СО) или их эфиры или смешанные эфиры, где одна или несколько гидроксигрупп ангидроглюкозных звеньев циклодекстрина замещены С1_-6алкилом, в частности метилом, этилом или изопропилом, например рандомизированно метилированный β-СО; гидроксиС1_-6алкилом, в частности гидроксиэтилом, гидроксипропилом или гидроксибутилом; карбоксиС1-6алкилом, в частности карбоксиметилом или карбоксиэтилом; С1_-6алкилкарбонилом, в частности ацетилом; С1_-6алкилоксикарбонилС1_-6алкилом или карбоксиС1_-6алкил

- 15 010908 оксиС1-6алкилом, в частности карбоксиметоксипропилом или карбоксиэтоксипропилом; С1-6алкилкарбонилоксиС1_-6алкилом, в частности 2-ацетилоксипропилом. Особый интерес в качестве комплексообразователей и/или солюбилизаторов представляют β-СИ, рандомизированно метилированный β-СИ,

2,6-диметил-в-СИ, 2-гидроксиэтил-в-СИ, 2-гидроксиэтил-у-СИ, 2-гидроксипропил-у-СИ и (2-карбоксиметокси)пропил-в-СИ и особенно 2-гидроксипропил-в-СИ (2-НР-в-СИ).

Термин «смешанный эфир» означает производные циклодекстрина, в которых по меньшей мере две гидроксигруппы циклодекстрина этерифицированы различными группами, такими как, например, гидроксипропил и гидроксиэтил.

Представляющий интерес способ формулирования соединений по настоящему изобретению в сочетании с циклодекстрином или его производным описан в ЕР-А-721331. Хотя описанные в этом документе композиции включают противогрибковые активные ингредиенты, описанный способ равным образом интересен для формулирования соединений по настоящему изобретению. Композиции, описанные в этом документе, особенно подходят для перорального введения и включают противогрибковое средство в качестве активного ингредиента, достаточное количество циклодекстрина или его производного в качестве солюбилизатора, водную кислую среду в качестве основного носителя и спиртовой сорастворитель, который сильно упрощает получение композиции. Указанные композиции также можно делать более приятными на вкус путем добавления подходящих подсластителей и/или отдушек.

Другие удобные пути повышения растворимости соединений по настоящему изобретению в фармацевтических композициях описаны в νθ 94/05263, νθ 98/42318, ЕР-А-499299 и νθ 97/44014, все эти документы включены в настоящее описание в качестве ссылки.

Более конкретно, соединения по настоящему изобретению можно формулировать в фармацевтическую композицию, включающую терапевтически эффективное количество частиц, состоящих из твердой дисперсии, включающей (а) соединение формулы (I) и (Ь) один или несколько фармацевтически приемлемых водорастворимых полимеров.

Термин твердая дисперсия означает систему в твердом состоянии (в отличие от жидкого или газообразного состояния), включающую по меньшей мере два компонента, где один компонент диспергирован более или менее равномерно в другом компоненте или компонентах. Когда указанная дисперсия компонентов является такой, что система в целом химически или физически однородна или гомогенна или состоит из одной фазы, как это определяется в термодинамике, такая система называется твердым раствором. Твердые растворы являются предпочтительными физическими системами, поскольку их компоненты обычно являются легко биодоступными для организмов, в которые их вводят.

Термин твердая дисперсия также включает дисперсии, которые в целом менее гомогенны, чем твердые растворы. Такие дисперсии не являются химически или физически однородными или включают более чем одну фазу.

Водорастворимый полимер в форме частиц предпочтительно представляет собой полимер, который имеет кажущуюся вязкость от 1 до 100 мПа-с при растворении в 2% водном растворе, имеющем температуру 20°С.

Предпочтительными водорастворимыми полимерами являются гидроксипропилметилцеллюлозы или НРМС. НРМС имеют степень метоксизамещения от около 0,8 до около 2,5 и гидроксипропильное молярное замещение от около 0,05 до около 3,0 и обычно являются водорастворимыми. Степень метоксизамещения относится к среднему количеству присутствующих групп метилового эфира в расчете на ангидроглюкозное звено молекулы целлюлозы. Гидроксипропильное молярное замещение относится к среднему количеству молей пропиленоксида, которые прореагировали с каждым ангидроглюкозным звеном молекулы целлюлозы.

Частицы, определенные выше, можно получить приготовлением сначала твердой дисперсии компонентов, а затем необязательно измельчением или перемалыванием этой дисперсии. Существуют различные методы получения твердых дисперсий, включающие экструзию из расплава, сушку распылением и выпаривание растворителя, при этом экструзия из расплава является предпочтительной.

Кроме того, удобно формулировать соединения по настоящему изобретению в форму наночастиц, которые имеют модификатор поверхности, адсорбированный на их поверхности в количестве, достаточном для поддержания эффективного среднего размера частиц менее чем 1000 нм. Полезными модификаторами поверхности считаются те, которые физически прилипают к поверхности антиретровирусного средства, но не связываются с антиретровирусным средством химически.

Подходящие модификаторы поверхности предпочтительно могут быть выбраны из известных органических и неорганических фармацевтических эксципиентов. Такие эксципиенты включают различные полимеры, низкомолекулярные олигомеры, натуральные продукты и поверхностно-активные вещества. Предпочтительные поверхностно-активные модификаторы включают неионные и анионные поверхностно-активные вещества.

И еще один представляющий интерес путь формулирования соединений по настоящему изобретению включает фармацевтическую композицию, в которой соединения по настоящему изобретению включены в гидрофильные полимеры с нанесением этой смеси в виде пленочного покрытия поверх мно

- 16 010908 гих мелких гранул, с получением, таким образом, композиции с хорошей биодоступностью, которую можно легко изготовить и которая является подходящей для получения фармацевтических лекарственных форм для перорального введения.

Указанные гранулы включают (а) центральное ядро круглой или сферической формы, (Ь) пленочное покрытие из гидрофильного полимера и антиретровирусного средства и (с) полимерный слой уплотняющего покрытия.

Вещества, подходящие для использования в качестве ядра в гранулах, являются разнообразными при условии, что указанные вещества являются фармацевтически приемлемыми и имеют подходящие размеры и прочность. Примерами таких веществ являются полимеры, неорганические вещества, органические вещества и сахариды и их производные.

Путь введения может зависеть от состояния субъекта, сопутствующего лечения и т.п.

Другой аспект настоящего изобретения относится к набору или контейнеру, включающему соединение формулы (I) в количестве, эффективном для использования в качестве стандарта или реагента в испытании или анализе, для определения способности потенциального фармацевтического средства ингибировать ВИЧ-протеазу, рост ВИЧ или и то и другое. Этот аспект настоящего изобретения может найти свое применение в программах исследования фармацевтических средств.

Соединения по настоящему изобретению можно использовать в анализах наблюдения фенотипической резистентности, таких как известные рекомбинантные анализы, в клиническом лечении заболеваний с развивающейся резистентностью, таких как ВИЧ. Особенно полезной системой отслеживания резистентности является рекомбинантный анализ, известный как Аийуйодгат™.

Аийуйодгат™ представляет собой высокоавтоматизированный, высокопроизводительный рекомбинантный анализ второго поколения, который может измерять чувствительность, особенно чувствительность вирусов к соединениям по настоящему изобретению. (Нейодк К., бе ВеОшпе ΜΡ, М111ег V. с1 а1. АийткгоЬ ЛдепЕ СйетоШег, 1998; 42(2):269-276, включенный в настоящее описание посредством ссылки).

Интересно то, что соединения по настоящему изобретению могут включать химически реакционноспособные группы, способные к образованию ковалентных связей с локализованными участками, таким образом, указанное соединение имеет повышенную способность удерживаться в тканях и увеличенный период полужизни. Термин химически реакционноспособная группа, как он использован в данном описании, относится к химическим группам, способным образовывать ковалентную связь. Реакционноспособные группы обычно являются стабильными в водной среде и обычно представляют собой карбокси, фосфорил или удобные ацильные группы либо в форме сложного эфира, либо смешанного ангидрида, или имидата, или малеимидата и поэтому способны образовывать ковалентную связь с функциональными группами, такими как аминогруппа, гидрокси или тиол, на мишеневом участке, например на компонентах крови, таких как альбумин. Соединения по настоящему изобретению могут связываться с малеимидом или его производными с образованием конъюгатов.

Доза для введения соединений по настоящему изобретению или их физиологически приемлемой соли(ей) зависит от конкретного случая и, как правило, должна быть адаптирована к условиям конкретного случая для получения оптимального эффекта. Таким образом, она, конечно, зависит от частоты введения и от активности и продолжительности действия соединений, применяемых в каждом случае для лечения или профилактики, но также и от природы и тяжести инфекции и симптомов и от пола, возраста, веса, сопутствующего лечения и индивидуальной ответной реакции подлежащего лечению человека или животного, и от того, является ли лечение терапевтическим или профилактическим. Обычно суточная доза соединения формулы (I) в случае введения пациенту весом примерно 75 кг составляет от 1 мг до 1 г, предпочтительно от 3 мг до 0,5 г. Дозу можно вводить в виде одной дозы или разделенной на несколько доз, т. е. в виде двух, трех или четырех отдельных доз.

В приведенных ниже таблицах перечисляются соединения формулы (I), которые были получены в соответствии с одной из представленных выше схем реакций.

- 17 010908

Таблица 1 Соединения по настоящему изобретению, полученные в соответствии с описанными выше способами. Если не указана никакая стереохимия, соединение присутствует в виде рацемической смеси

№	Па	Синтез	Соль
1	χξν	с.1	-
2	у	с2	Трифторацетат
3	00'	с.2	Трифторацетат
4		с.1	-
5		с.1	Трифторацетат
б		с.2	•
7		с.1	Трифторацетат
8	Р:	с.2	-
9	(А	с.2
10	ον	с.1	-
11	Ρ	с2

Анализ на антивирусную активность.

Соединения по настоящему изобретению исследовали на антивирусную активность в клеточном анализе. Этот анализ показал, что эти соединения проявили сильную анти-ВИЧ активность в отношении лабораторного штамма ВИЧ дикого типа (ВИЧ-1 штамм ЬА1). Клеточный анализ осуществляли в соответствии со следующей процедурой.

Экспериментальный метод клеточного анализа ВИЧ- или ложноинфицированные клетки МТ4 инкубировали в течение пяти дней в присутствии различных концентраций ингибитора. По окончании инкубационного периода все ВИЧ-инфицированные клетки были уничтожены реплицирующим вирусом в контрольных культурах в отсутствие какого-либо ингибитора. Жизнеспособность клеток определяли путем измерения концентрации МТТ, желтого водорастворимого тетразолиевого красителя, который превращался в ярко-розовый нерастворимый в воде формазан только в митохондриях живых клеток. После растворения полученных кристаллов формазана в изопропаноле поглощение раствора отслеживали при 540 нм. Полученные значения непосредственно соотносятся с количеством живых клеток, оставшихся в культуре по завершении пятидневной инкубации. Ингибиторную активность соединения отслеживали на инфицированных вирусом клетках и выражали как ЕС₅о или ЕС₉₀. Эти показатели представляют количество соединения, необходимое для защиты 50 и 90% соответственно клеток от цитопатогенного действия вируса. Токсичность соединения измеряли на ложноинфицированных клетках и выражали как СС₅₀, что представляет концентрацию соединения, необходимую для ингибирования роста клеток на

- 18 010908

50%. Индекс селективности (81) (отношение СС₅₀/ЕС₅₀) является показателем селективности анти-ВИЧ активности ингибитора. Если результаты выражены как, например, рЕС₅₀ или рСС₅₀, в этом случае результат выражается в виде отрицательного логарифма от результата, выраженного как ЕС₅₀ или СС₅₀ соответственно.

для этих соединений находится в пределах от около 400 до более чем 28000.

Антивирусный спектр.

Из-за все большего появления резистентных к лекарственным средствам штаммов ВИЧ соединения по настоящему изобретению были испытаны на их активность в отношении клинически изолированных штаммов ВИЧ, включающих некоторые мутации (табл. 2 и 3). Эти мутации связаны с резистентностью к ингибиторам протеазы и приводят к вирусам, которые демонстрируют различные степени фенотипической перекрестной резистентности к существующим в настоящее время коммерчески доступным лекарственным средствам, таким как, например, саквинавир, ритонавир, нелфинавир, индинавир и ампренавир.

Таблица 2

Перечень мутаций, присутствующих в гене протеазы штаммов ВИЧ (А-Е), которые были использованы

А	Υ003Ι, Б0101, У032Т, БОЗЗМ, Ε035ϋ, 8037Υ, 50370, М0461, К057К/К, О058Е, Б063Р, К070Т, А071У, 1072У, ЮМУ, Б089У
В	У0031, ЬОЮБ К020К, Е035О, Μ0361,8037Ν, О058Е, 1062У, ΙΛ63Ρ, Α07ΙV, Ι072Μ, <30738, У0771, ЮМУ, Ю85У, Б090М
С	У0031, Б01 Μ, 1015У, Б019Б К020М, 8037Ν, К041К, 1054Υ, ОО58Е, Б063Р, А071V, ЮМУ, Б090М, Т093Б
ϋ	Υ0031, Б010БЛ, Ю13У, БОЗЗГ, Ε035ϋ, Μ036Ι, М046Б, К055К, К057К, БОбЗР, Ι066Ρ, А071V, ЮМУ, N0880. Б090М
Е	У0031, БО101, У01П, А022У, Б0241, Б035О, Μ0361,8037Т, П041К, ЮМУ, Ю62У, Б063Р, А071V, ГОМУ
Р	Б010Р, М0461, М07] V, ЮМУ
6	У0031, Б0101, УО32Т, БОЗЗМ, Е035О,5037У, Μ046Ι. Ю47У. К057К/К, О058Е. ЪОбЗР, К070Т, А071У, Ю72У, У0821, ЮМУ, Б089У

Результаты.

В качестве показателя широкого спектра активности соединений по настоящему изобретению определяли кратность резистентности (ЕК), как ЕК=ЕС₅₀ (мутантного штамма)/ЕС₅₀ (штамма БА1 ВИЧ-1). В табл. 3 показаны результаты испытания антивирусного действия, выраженного в виде кратности резистентности. Как можно видеть из этой таблицы, соединения по настоящему изобретению являются эффективными для ингибирования широкого спектра мутантных штаммов:

колонка А: значение ЕК в отношении мутанта А;

колонка В: ЕК в отношении мутанта В;

колонка С: ЕК в отношении мутанта С;

колонка Ώ: ЕК в отношении мутанта Ώ;

колонка Е: ЕК в отношении мутанта Е;

колонка Е: ЕК в отношении мутанта Е.

Токсичность (Тох) выражена в виде значения рСС₅₀, определенного с использованием ложнотрансфицированных клеток. Колонка ^Т показывает значение рЕС₅₀ против штамма БА1 ВИЧ дикого типа.

Таблица 3

Результаты испытания токсичности и испытания резистентности против штаммов А-Е (выраженной как ЕК), основанные на рассчитанных средних значениях

№	А	в	С	ϋ	Е	Е	С	Тох	χντ
1	0,63	0,78	0,49	0,35	0,30	0,85	6,9	<4	8,1
2	7,1	2,4	1,7	1»5	1,4	27	85	4,3	732
3	1,8	V	2,2	2,3	2,4	11	54	435	7,62 ,
4	49	Νϋ	N0	ΝΟ	8,9	Νϋ	ΝΟ	<4	7,84
5	17	4,8	3,2	3,5	з^	95	275	<4,49	8,01
6	16	5,6	5,5	16	7,2	16	16	ΝΟ	63
7	6,3	4,6	4,1	15	5,6	44	257	4,12	8,03
11	13	11	10	ΝΟ	Νϋ	ΝΟ	ΝΟ	<4	..6,64

ΝΌ означает не определяли.

- 19 010908

Анализ проницаемости Сасо-2 для определения кишечной абсорбции.

Проникающую способность различных соединений определяли в соответствии с протоколом испытания Сасо-2, как описано ЛидшЦръ с1 а1. (ЛидиЦщъ с1 а1. (1998). Ιηΐ. 1. о£ РНагш. 166, 45-54), в соответствии с которым клетки Сасо-2 при пассаже клеток между № 32 и 45 выращивали в 24-луночных культуральных планшетах с переносными лунками в течение 21-25 дней. Целостность клеточного монослоя проверяли путем измерения трансэпителиального электросопротивления (ТЕЕК). Испытание осуществляли при рН 7,4 и при концентрации донорного соединения 100 мкМ.

Водорастворимость при различных уровнях рН.

Равновесная растворимость в имитированных желудочно-кишечных растворах при термодинамических условиях является хорошей мерой для профиля растворимости соединения в желудке и различных отделах кишечника. рН имитированной желудочной жидкости (8ОЕ) (без пепсина) доводили до 1,5. рН имитированной кишечной жидкости (8ΙΕ) (без солей желчных кислот) устанавливали на уровне рН 5, рН 6,5, рН 7 и рН 7,5. Протокол эксперимента предусматривал использование 96-луночных плоскодонных микропланшетов, в которых в каждую лунку добавляли 1 мг соединения (исходный раствор в метаноле) и упаривали досуха. Соединения снова растворяли в 8ОЕ и 8ΙΕ и инкубировали в течение ночи на горизонтальном устройстве для встряхивания при 37°С. После фильтрации концентрацию соединений определяли методом УФ-спектрофотометрии.

Пероральная доступность у крыс и собак.

Пероральную доступность выбранного соединения определяли в стандартной серии кинетических экспериментов сначала у самцов и самок крыс, а затем у самцов и самок собак. Соединение формулировали в виде 20 мг/мл раствора или суспензии в ДМСО, ПЭГ400 или 40% растворе циклодекстрина (Сй 40%) в воде. Для эксперимента с крысой было образовано 3 группы дозирования:

1) одна внутрибрюшинная доза при 20 мг/кг с использованием композиции в ДМСО;

2) одна пероральная доза при 20 мг/кг с использованием композиции в ПЭГ400 и

3) одна пероральная доза при 20 мг/кг с использованием композиции с циклодекстрином.

Для собак использовали только пероральный путь введения. Кровь брали через регулярные промежутки времени после введения лекарственного средства и определяли концентрацию лекарственного средства в сыворотке при помощи биоаналитического метода ЬС-М8. Концентрацию в сыворотке выражали в нг/мг после нормализации к 10 мг/кг. Ниже указаны концентрации в сыворотке на время 30 мин и 3 ч, поскольку эти значения отражают степень абсорбции (30') и скорость выведения из организма (180'). Пероральную доступность у крыс исследовали с использованием ДМСО и ПЭГ композиций (см. выше). Концентрация в сыворотке после введения 10 мг/кг соединения 1 составила 10,2 нг/мл на время 30 мин (ДМСО) и 22,2 нг/мл (ПЭГ). Интраперитонеальная абсорбция дозы 10 мг/кг (композиция с ДМСО) составила 2076 нг/мл на время 30 мин после введения и 208 нг/мл на время 180 мин после введения.

Повышение системной биодоступности.

Для описанного выше типа соединений (ингибиторы протеазы) известно, что ингибирование процессов метаболической деградации может заметно улучшить системную биодоступность путем восстановления первичного метаболизма в печени и метаболического выведения из плазмы. Этот принцип усиления можно применять в клинических условиях для фармакологического действия лекарственного средства. Также этот принцип можно использовать в применении как к крысам, так и к собакам путем одновременного введения соединения, которое ингибирует метаболические ферменты Су1-р450. Известными блокаторами являются, например, ритонавир и кетоконазол.

Анализы связывания с белками.

Известно, что белки сыворотки человека, такие как альбумин (НА8) или α-1 кислотный гликопротеин (ААО), связываются со многими лекарственными средствами, что может приводить к снижению эффективности этих соединений. Для определения того, будет ли такое связывание неблагоприятно влиять на соединения по настоящему изобретению, анти-ВИЧ активность соединений измеряли в присутствии сыворотки человека, определяя таким образом эффект связывания ингибиторов протеазы с такими белками.

Клетки МТ4 инфицировали ЬА1 ВИЧ-1 при множественности заражения (ΜΟΙ) 0,001-0,01 ССГО₅₀ (50% культуральная инфекционная доза на клетку, ССШ₅₀). После 1 ч инкубации клетки промывали и высевали в 96-луночный планшет, содержащий серийные разведения соединения в присутствии 10% ЕС8 (фетальная телячья сыворотка), 10% ЕС8+1 мг/мл ААО (α-1 кислотный гликопротеин), 10% ЕС8+45 мг/мл НА8 (сывороточный альбумин человека) или 50% сыворотки человека (Н8). После 5 или 6 дней инкубации ЕС₅₀ (концентрация 50% эффективности в анализе с использованием клеток) рассчитывали путем определения жизнеспособности клеток или путем количественного определения уровня репликации ВИЧ.

Жизнеспособность клеток измеряли при помощи анализа, описанного выше. В 96-луночный планшет, содержащий серийные разведения соединения в присутствии 10% ЕС8 или 10% ЕС8+1 мг/мл ААО, добавляли ВИЧ (дикого типа или резистентный штамм) и клетки МТ4 до конечной концентрации 200-250 ССГЙ5₀/лунка и 30000 клеток/лунка соответственно. После 5 дней инкубации оп

- 20 010908 ределяли жизнеспособность клеток колориметрическим методом с использованием тетразолия (бромида (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия (МТТ)) (Раитек е! а1. I. У1го1. Ме11юЙ5 1988, 20, 309321).

Составление препарата.

Активный ингредиент, в данном случае соединение формулы (I), растворяли в органическом растворителе, таком как этанол, метанол или метиленхлорид, предпочтительно в смеси этанола и метиленхлорида. Полимеры, такие как сополимер поливинипирролидона с винилацетатом (РУР-УА) или гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), типично 5 мПа-с, растворяли в органических растворителях, таких как этанол, метанол или метиленхлорид. Соответствующим образом полимер растворяли в этаноле. Растворы полимера и соединения смешивали и затем сушили распылением. Соотношение соединение/полимер выбирали из соотношений в пределах от 1/1 до 1/6. Промежуточные пределы составили от 1/1,5 до 1/3. Подходящим было соотношение 1/6. Высушенный распылением порошок, твердую дисперсию, затем использовали для заполнения капсул для введения. Лекарственная нагрузка в одной капсуле составила от 50 до 100 мг в зависимости от используемого размера капсулы.

Таблетки с пленочным покрытием.

Получение ядра таблетки.

Смесь 100 г активного ингредиента, в данном случае соединения формулы (I), 570 г лактозы и 200 г крахмала тщательно смешивали и затем увлажняли раствором 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинилпирролидона примерно в 200 мл воды. Мокрую порошковую смесь затем просеивали через сито, сушили и снова просеивали. Затем добавляли 100 г микрокристаллической целлюлозы и 15 г гидрированного растительного масла. Все это тщательно смешивали и прессовали в таблетки с получением 10000 таблеток, каждая из которых содержала 10 мг активного ингредиента.

Покрытие.

К раствору 10 г метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этанола добавляли раствор 5 г этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем добавляли 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола. 10 г полиэтиленгликоля расплавляли и растворяли в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляли к первому и затем добавляли 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной цветной суспензии и все это гомогенизировали. На ядро таблетки наносили покрытие из полученной таким образом смеси в аппарате для нанесения покрытий.

Claims (23)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы его Ν-оксид, соль, стереоизомерная форма, рацемическая смесь, пролекарство, сложный эфир и метаболит, где Κ₁ и Κ₈, каждый независимо, представляют собой водород, С1_-6алкил, С_2-6алкенил, арил С_3-7алкил, С_3-7циклоалкил, С_3-7циклоалкилС1_-6алкил, арил, Не!¹, Не!¹С1-6алкил, Не!², Не!²С1-6алкил;

   Κ₁ также может представлять собой радикал формулы

   к.ць 1Ц где Κ₉, К1_0а и К_10Ь, каждый независимо, представляют собой водород, С1_-4алкилоксикарбонил, карбоксил, аминокарбонил, моно- или ди(С1_-4алкил)аминокарбонил, С_3-7 циклоалкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил или С1_-4алкил, необязательно замещенный арилом, Не!¹, Не!², С3-7циклоалкилом, С1-4алкилоксикарбонилом, карбоксилом, аминокарбонилом, моно- или ди(С1-4алкил)аминокарбонилом, аминосульфонилом, С1-4алкил8(О)!, гидрокси, циано, галогеном или амино, необязательно моно- или дизамещенным, где заместители, каждый независимо, выбраны из С1-4алкила, арила, арилС1-4алкила, С3-7циклоалкила, С3-7циклоалкилС1-4алкила, Не!¹, Не!², Не!¹С1-4алкила и Не!²С_1-4алкила; где Κ₉, К_10а и атомы углерода, с которыми они связаны, могут также образовывать С_3-7циклоалкильный радикал; когда Ь представляет собой -О-С_1-6алкандиил-С(=О)- или -МК₈-С_1-6алкандиил-С(=О)-, тогда К₉ также может представлять собой оксо;

   К_11а представляет собой водород, С_2-6алкенил, С_2-6алкинил, С_3-7 циклоалкил, арил, аминокарбонил,

   - 21 010908 необязательно моно- или дизамещенный, аминоС_1-4алкилкарбонилокси, необязательно моно- или дизамещенный, С_1-4алкилоксикарбонил, арилоксикарбонил, Не!¹ оксикарбонил, Не!²оксикарбонил, арилоксикарбонилС1-4алкил, арилС1-4алкилоксикарбонил, С1-4алкилкарбонил, С3-7циклоалкилкарбонил, С3-7циклоалкилС1-4алкилоксикарбонил, С3-7циклоалкилкарбонилокси, карбоксилС1-4алкилкарбонилокси, С1-4алкилкарбонилокси, арилС1-4алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, арилоксикарбонилокси, Не!¹ карбонил, Не!¹ карбонилокси, Не!¹С1-4алкилоксикарбонил, Не!²карбонилокси, Не!²С1-4алкилкарбонилокси, Не!²С1-4алкилоксикарбонилокси или С_1-4алкил, необязательно замещенный арилом, арилокси, Не!², галогеном или гидрокси; где заместители на аминогруппах, каждый независимо, выбраны из С_1-4алкила, арила, арилС_1-4алкила, С_3-7циклоалкила, С_3-7циклоалкилС_1-4алкила, Не!¹, Не!², Не!¹С1-4алкила, Не!²С1-4алкила;

   Кць представляет собой водород, С_3-7циклоалкил, С_2-6алкенил, С_2-6алкинил, арил, Не!¹, Не!² или С1-4алкил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-4алкил8(=О)!, арилом, С3-7циклоалкилом, Не!¹, Не!², амино, необязательно моно- или дизамещенным, где заместители, каждый независимо, выбраны из С1-4алкила, арила, арилС_1-4алкила, С_3-7циклоалкила, С_3-7циклоалкилС_1-4алкила, Не!¹, Не!², Не!¹С1-4алкила и Не!²С1-4алкила;

   Кць может быть связан с остальной частью молекулы через сульфонильную группу;

   !, каждый независимо, имеет значение 0, 1 или 2;

   К₂ представляет собой водород или С_1-6алкил;

   Ь представляет собой -С(=О)-, -О-С(=О)-, -ΝΚ₈-Ο(=Θ)-, -О-С_1-6алкандиил-С(=О)-, -ХК₈-С_1-6алкандиил-С(=О)-, -8(=Θ)₂-, -Θ-8(=Θ)₂-, -ΝΚ₈-δ(=Θ)₂-, где любая из группы С(=О) или группы 8(=О)г связана с группой ΝΚ₂; где С_1-6алкандиильная группа необязательно замещена заместителем, выбранным из гидрокси, арила, Не!¹ и Не!²;

   К₃ представляет собой С_1-6алкил, арил, С_3-7циклоалкил, С_3-7циклоалкилС_1-4алкил или арилС_1-4алкил;

   К₄ представляет собой водород, С_1-4алкилоксикарбонил, карбоксил, аминокарбонил, моно- или ди(С_1-4алкил)аминокарбонил, С_3-7циклоалкил, С_2-6алкенил, С_2-6алкинил или С_1-6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными, каждый независимо, из арила, Не!¹, Не!², С3-7циклоалкила, С1-4алкилоксикарбонила, карбоксила, аминокарбонила, моно- или ди(С1-4алкил)аминокарбонила, аминосульфонила, С1-4алкил8(=О)!, гидрокси, циано, галогена и амино, необязательно моно- или дизамещенного, где заместители, каждый независимо, выбраны из С1-4алкила, арила, арилС1-4алкила, С3-7циклоалкила, С3-7циклоалкил-С1-4алкила, Не!¹, Не!², Не!¹С1-4алкила и Не!²С1-4алкила;

   К₁₂ представляет собой -ЯН₂ или -Ν(Κ₅)(Α-Κ₆), где А представляет собой С_1-6алкандиил, -С(=О)-, -С(=8)-, -8(=О)₂-, С_1-6алкандиил-С(=О)-, С_1-6алкандиил-С(=8)- или С_1-6алкандиил-8(=О)₂-; где точка присоединения А к функциональной аминогруппе, где происходит его замещение, представляет собой С1-6алкандиильную группу в тех значениях А, которые включают указанную С1-6алкандиильную группу;

   К₅ представляет собой водород, гидрокси, С_1-6алкил, Не!¹С1-6алкил, Не!²С1-6алкил, амино С_1-6алкил, где аминогруппа необязательно может быть моно- или дизамещенной С_1-4алкилом;

   К₆ представляет собой водород, С_1-6алкилокси, Не!¹, Не!¹ окси, Не!², Не!²окси, арил, арилокси, арилоксиС1-4алкил, С1-4алкилоксиарил, С1-4алкилоксиНе!¹, С1-4алкилоксиНе!², С1-4алкилоксикарбониламино, аминоС1-4алкиламино, амино или аминоС1-4алкилокси и в случае, когда А является отличным от С1-6алкандиила, тогда К6 также может представлять собой С1-6алкил, Не!¹С1-4алкил, Не!¹оксиС1-4алкил, Не!²С1-4алкил, Не!²оксиС_1-4алкил, арилС_1-4алкил, арилоксиС_1-4алкил или аминоС_1-4алкил; где каждая аминогруппа может необязательно быть моно- или, где это возможно, дизамещенной С_1-4алкилом;

   -Α-Κ₆ также может представлять собой гидроксиС_1-6алкил;

   Κ5 и -Α-Κ6, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, могут также образовывать Не!¹ или Не!².
2. 2. Соединение по п.1, где соединение формулы (I) имеет следующую структуру:
3. 3. Соединение по п.1 или 2, где К₁ представляет собой арилС_1-6алкил, арил, Не!¹, Не!¹С_1-6алкил, Не!², Не!²С1-6алкил.
4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где К₁ представляет собой арил, Не!¹, Не!², Не!²С_1-6алкил.
5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где К₁ представляет собой:

   (ί) насыщенный моноциклический или бициклический гетероцикл, содержащий 5-8 кольцевых членов, из которых один или два представляют собой атом кислорода;

   (ίί) фенильное кольцо, необязательно замещенное одним или несколькими заместителями, незави

   - 22 010908 симо выбранными из С1_-6алкила, аминоС1_-6алкила, моно- или ди(С1_-6алкил)аминоС1_-6алкила, амино, моноили ди(С_1-6алкил)амино, полигалогенС_1-6алкила;

   (ίίί) ароматический моноциклический гетероцикл, содержащий 5-6 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов один или два гетероатома, выбранных, каждый независимо, из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному или нескольким атомам углерода С_1-6алкилом, аминоС_1-6алкилом, моно- или ди(С_1-6алкил)аминоС_1-6алкилом, амино, моно- или ди(С1-6алкил)амино;

   (ίν) ароматический моноциклический гетероцикл, определенный в (ίίί), связанный с переменной Ь через С_1-6алкильную группу.
6. 6. Соединение по любому из пп.1-5, где Ь вместе с атомом азота, с которым он связан, образует -0-0(=0)-ΝΗ-, -С(=0)-ЫН-, -0-С_1-6алкандиил-С(=0)-кН-, АР₈-С/_-6алкандиил-С(=0)АН-.
7. 7. Соединение по любому из пп.1-6, где Ь представляет собой -0-С_1-6алкандиил-С(=0)-.
8. 8. Соединение по любому из пп.1-7, где К₂ представляет собой водород.
9. 9. Соединение по любому из пп.1-8, где Е₃ представляет собой арилС_1-4алкил.
10. 10. Соединение по любому из пп.1-9, где К₄ представляет собой С_3-7циклоалкил, С_2-6алкенил, С2-6алкинил или С1-6алкил, необязательно замещенный С3-7циклоалкилом.
11. 11. Соединение по любому из пп.1-10, где -Ν(Κ₅)(Α-Κ6) в определении К₁₂ такой, что К₅ представляет собой водород или С_1-6алкил, А представляет собой С_1-6алкандиил и Е₆ представляет собой водород или Не!¹, или К₅ и А-Е₆, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют Не!¹.
12. 12. Соединение по любому из пп.1-11, где К₁₂ представляет собой ΝΗ₂.
13. 13. Соединение по любому из пп.1-12, где Е₁ представляет собой водород, С_1-6алкил, С_2-6алкенил, арилС_1-6алкил, С_3-7циклоалкил, С_3-7циклоалкилС_1-6алкил, арил, Не!¹, Не!¹С1-6алкил, Не!², Не!²С1-6алкил, где Не!¹ представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический гетероцикл, содержащий 5 или 6 кольцевых членов, который содержит в качестве кольцевых членов один или несколько гетероатомов, выбранных, каждый независимо, из азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен по одному или нескольким атомам углерода.
14. 14. Соединение по п.1, где соединение представляет собой гексагидрофуро [2,3-Ъ] фуран-3-иловый эфир {3 -[(3-аминобензо [ά] изоксазол-5 -сульфонил)изобутиламино]-1 -бензил-2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

    3-амино-Ы-{3-[(3-аминобензо [ά] изоксазол-5-сульфонил)изобутиламино ]-1 -бензил-2-гидроксипропил }-2-метилбензамид;

    Ν-{3-[(3 -аминобензо [ά] изоксазол-5-сульфонил)изобутиламино ]- 1-бензил-2-гидроксипропил}-2(2,6 -диметилфенокси)ацетамид;

    тетрагидрофуран-3 -иловый эфир { 3 - [(3 -аминобензо [ά] изоксазол-5 -сульфонил)изобутиламино]-1 бензил-2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

    {3-[(3 -аминобензо [ά] изоксазол-5 -сульфонил)изобутиламино]-1 -бензил-2-гидроксипропил }амид 5-метилизоксазол-4-карбоновой кислоты;

    тиазол-5 -илметиловый эфир {3-[(3 -аминобензо |ά| изоксазол-5 -сульфонил)изобутиламино]-1 -бензил2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

    Ν-{3-[(3 -аминобензо Щизоксазол-6-сульфонил)изобутиламино]- 1-бензил-2-гидроксипропил}-2(2,6-диметилфениламино)ацетамид;

    гексагидрофуро[2,3-Ъ]фуран-3-иловый эфир {1-бензил-2-гидрокси-3-[изобутил-(3-метиламинобензоЩизоксазол-5-сульфонил)амино]пропил}карбаминовой кислоты;

    гексагидрофуро[2,3-Ъ]фуран-3-иловый эфир {1-бензил-3-[(3-диметиламинобензоЩизоксазол-5сульфонил)изобутиламино]-2-гидроксипропил}карбаминовой кислоты;

    гексагидрофуро[2,3-Ъ]фуран-3-иловый эфир {1-бензил-2-гидрокси-3-[изобутил-(3-пирролидин-1илбензоЩизоксазол-5-сульфонил)амино]пропил}карбаминовой кислоты;

    гексагидрофуро [2,3-Ъ]фуран-3-иловый эфир (1-бензил-2-гидрокси-3-{изобутил-[3-(2-пирролидин-1илэтиламино)бензоЩизоксазол-5-сульфонил]амино}пропил)карбаминовой кислоты и их Ν-оксиды, соли или стереоизомерные формы.
15. 15. Фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество по меньшей мере одного соединения по любому из пп.1-14 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
16. 16. Комбинация, включающая (а) по меньшей мере одно соединение по любому из пп.1-14 и (Ъ) другое соединение, обладающее антиретровирусной активностью.
17. 17. Соединение по любому из пп.1-14 в качестве лекарственного средства.
18. 18. Применение соединения по любому из пп.1-14 для получения лекарственного средства для лечения состояний, связанных с ВИЧ и другими патогенными ретровирусами.
19. 19. Применение по п.18, где состояние связано с заражением ретровирусом, резистентным к множеству лекарственных средств.
20. 20. Способ ингибирования протеазы ретровируса у млекопитающего, инфицированного указанным ретровирусом, включающий системное введение указанному млекопитающему количества соединения по любому из пп.1-14, эффективного для ингибирования указанной ретровирусной протеазы.

    - 23 010908
21. 21. Способ по п.20, где ретровирус является резистентным к множеству лекарственных средств.
22. 22. Способ лечения или борьбы с состояниями, связанными с ВИЧ или другими патогенными ретровирусами у млекопитающего, включающий системное введение указанному млекопитающему количества соединения по любому из пп.1-14, эффективного для борьбы с состояниями, связанными с ВИЧ или другими патогенными ретровирусами.
23. 23. Способ по п.22, где ретровирус является резистентным к множеству лекарственных средств.