DE69327309T2

DE69327309T2 - Verwendung eines peptids

Info

Publication number: DE69327309T2
Application number: DE69327309T
Authority: DE
Inventors: Suad Efendic; Mark Gutniak; Ole Kirk
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1992-03-19
Filing date: 1993-03-18
Publication date: 2000-07-13
Anticipated expiration: 2013-03-19
Also published as: US20060247171A1; US20060247174A1; US20030083259A1; WO1993018786A1; DK36392D0; EP0631505B1; CN1072504C; CN1088835A; EP0631505A1; JP2004002448A; AU3888893A; US5631224A; EP0631505B2; DE69327309D1; US20010002394A1; JPH07504670A; DE69327309T3; ATE187647T1; JP3579048B2

Description

Gebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-36)amid oder bestimmter verwandter Verbindungen zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykämischen Mittel umfaßt. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Behandlung von Diabetes mittels Einsatz dieses Medikaments.

Hintergrund der Erfindung

Diabetes ist gekennzeichnet durch einen beeinträchtigten Glucosemetabolismus, welcher sich unter anderem in einem erhöhten Blutglucosespiegel bei den Diabetespatienten manifestiert. Die zugrundeliegenden Defekte führen zu einer Klassifizierung von Diabetes in zwei Hauptgruppen: Diabetes Typ 1 oder insulinabhängige Diabetes mellitus (IDDM), welche entsteht, wenn Patienten einen Mangel an insulinerzeugenden β-Zellen in ihren Bauchspeicheldrüsen aufweisen, und Diabetes Typ 2 oder nicht-insulinabhängige Diabetes mellitus (NIDDM), welcher bei Patienten auftritt, die eine beeinträchtigte β-Zellfunktion neben einem Spektrum anderer Anomalien aufweisen.
Patienten mit Diabetes Typ I werden gegenwärtig mit Insulin behandelt, während der Großteil der Patienten mit Diabetes Typ 2 entweder mit Mitteln behandelt wird, welche die β- Zellfunktion stimulieren, oder mit Mitteln, welche die Gewebesensitivität der Patienten für Insulin erhöhen.
Von den zur Stimulierung der β-Zellfunktion eingesetzten Mitteln werden diejenigen, welche auf den ATP-abhängigen Kaliumkanal von β-Zellen einwirken, bei der derzeitigen Therapie am häufigsten eingesetzt. Die sogenannten Sulfonylharnstoffe, wie z. B. Tolbutamid, Glibenclamid, Glipizid und Gliclazid, werden umfangreich eingesetzt und andere Mittel, wie z. B. AG-EE 623 ZW, die ebenfalls an dieser molekularen Stelle eingreifen, befinden sich in Entwicklung (AG-EE 623 ZW ist ein Firmencode für (S)-(+)-2-Ethoxy-4-[2-[[3-methyl-1-[2- (1-piperidinyl)phenyl]butyl]-amino]-2-oxoethyl]benzoesäure, einer in der europäischen Patentveröffentlichung Nr. 147, 850 (von Dr. Karl Thomae GmbH) beschriebenen Verbindung). Von den zur Erhöhung der Gewebesensitivität für Insulin eingesetzten Mitteln ist Metformin ein repräsentatives Beispiel.
Obwohl Sulfonylharnstoffe zur Behandlung von NIDDM in großem Umfang eingesetzt werden, ist diese Therapie in den meisten Fällen nicht zufriedenstellend: Bei einer großen Anzahl von NIDDM-Patienten reichen Sulfonylharnstoffe nicht aus, um die Blutzuckerspiegel zu normalisieren und die Patienten haben deshalb ein hohes Risiko, sich Diabeteskomplikationen zuzuziehen. Viele Patienten verlieren auch allmählich das Vermögen, auf eine Behandlung mit Sulfonylharnstoffen zu reagieren, und werden so langsam zu einer Insulinbehandlung gezwungen. Diese Umstellung von Patienten von oralen hypoglykämischen Mitteln auf Insulintherapie wird normalerweise einer Erschöpfung der β-Zellen bei NIDDM- Patienten zugeschrieben.
Im Laufe der Jahre wurden deshalb zahlreiche Versuche unternommen, neue Mittel bereitzustellen, welche die β-Zellfunktion stimulieren, um den NIDDM-Patienten eine verbesserte Behandlung zu bieten. Kürzlich wurde eine Reihe von Peptiden, die sich von dem Glucagon-ähnlichen Peptid-1 ableiten, als insulinotrope Mittel für die therapeutische Anwendung in Betracht gezogen.
Glucagon-ähnliches Peptid-1, auch als GLP-1 bezeichnet, ist eine Peptidsequenz, die im C-terminalen Abschnitt von Säuger-Proglucagon gefunden wurde. Vor 1985 wurde über keine bestimmte biologische Aktivität von GLP-1 berichtet. 1985 wurde jedoch demonstriert. daß das Amid eines GLP-1-Fragments, nämlich GLP-1(1-36)amid, die Insulinfreisetzung aus isolierten, vorkultivierten Ratten-Pankreasinseln in Anwesenheit von Glucose in dosisabhängiger Weise stimuliert (Schmidt, W. E., et al., Diabetologia 28 (1985) 704-7). Dieser Befund legt nahe, daß GLP-1(1-36)amid und verwandte Peptide zur Behandlung von Diabetes Typ 2 geeignet sein könnten. Aufgrund seiner wesentlich größeren Sequenzhomologie zu Glucagon und glukoseabhängigem insulinotropen Peptid, auch als GIP bezeichnet, äußerten Schmidt et al. die Ansicht, daß mit GLP-1 (7-36) eine noch stärkere Glucagon- und/oder GIP-ähnliche Aktivität als mit dem intakten Peptid erwartet werden könnte. In den letzten Jahren konzentrierte sich das Interesse besonders auf die GLP-1- Fragmente GLP-1 (7-37) und GLP-1 (7-36)amid und Analoga und funktionelle Derivate davon. Die Bezeichnung GLP-1 (1-36) zeigt an, daß das fragliche Peptidfragment die Amino- Säurereste von (und einschließlich) Nr. 1 bis (und einschließlich) Nr. 36 umfaßt, wenn vom Nterminalen Ende des Stammpeptids GLP-1 aus gezählt wird. Gleichermaßen zeigt die Bezeichnung GLP-1 (7-37) an, daß das fragliche Fragment die Aminosäurereste von (und einschließlich) Nr. 7 bis (und einschließlich) Nr. 37 umfaßt, wenn von dem N-terminaien Ende des Stammpeptids GLP-1 aus gezählt wird. Die Aminosäuresequenz von GLP-1 (7-36)-amid und von GLP-1 (7-37) ist in Formel I angegeben:
welche GLP-1 (7-36)amid darstellt, falls X NH&sub2; ist, und GLP-1 (7-37), falls X Gly-OH ist.
Von Kreymann, B., et al., welche dieses Peptid gesunden Freiwilligen als Infusion verabreichten und eine signifikante Erhöhung des Plasmainsulins beobachteten Lancet 2 (1987) 1300-304), wurde demonstriert, daß GLP-1 (7-36)amid in der Tat ein insulinotropes Mittel beim Menschen ist.
Die insulinotrope Wirkung von GLP-1 (7-37) sowohl bei diabetischen als auch bei nichtdiabetischen Versuchspersonen wurde von Nathan, D. M., et al., Diabetes Care 15 (1992) 270-76, demonstriert.
Die internationale Patentanmeldung Nr. WO 87/06941 (von The General Hospital Corporation) betrifft ein Peptidfragment, welches GLP-1 (7-37) und funktionelle Derivate davon umfaßt, und dessen Verwendung als insulinotropes Mittel.
Die internationale Patentanmeldung Nr. 90/11296 (von The General Hospital Corporation) betrifft ein Peptidfragment, welches GLP-1 (7-36) und funktionelle Derivate davon umfaßt und eine insulinotrope Aktivität aufweist, welche die insulinotrope Aktivität von GLP-1 (1-36) oder GLP-1(1-37) übertrifft, und dessen Verwendung als insulinotropes Mittel.
Die internationale Patentanmeldung Nr. 91/11457 (von Buckley et al.) betrifft effektive Analoga der aktiven GLP-1-Peptide 7-34, 7-35, 7-36 und 7-37.
Die Wirkung von GLP-1 (7-37) in Kombination mit Glibenclamid auf die Insulinsekretion von Ratten-Pankreasinseln wurde in vitro von Parker, J. C., et al. untersucht (Diabetes40 (Suppl. 1) (1991) 237 A). Es wurde nur eine additive Wirkung der beiden Mittel beobachtet.
Jedoch wurde nach bestem Wissen der Erfinder die überraschende synergistische Wirkung in vivo, welche durch den kombinierten Einsatz eines oralen hypoglykämischen Mittels und eines Fragments von GLP-1 oder eines Analogons oder funktionellen Derivats davon erreicht wird, bisher nicht offenbart.

Zusammenfassung der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft den überraschenden Befund, daß bei Verabreichung von GLP-1-verwandten Peptiden in Kombination mit oralen hypoglykämischen Mitteln im allgemeinen und mit Sulfonylharnstoffen im besonderen zur Behandlung von Diabetes Typ 2 eine synergistische Wirkung beobachtet wird. Diese überraschende Beobachtung wurde sogar bei Patienten mit Diabetes Typ 2 gemacht, die bei alleiniger Verabreichung von Sulfonylharnstoffen keine Reaktion zeigen.
Somit betrifft die vorliegende Erfindung in ihrem breitesten Aspekt die Verwendung von GLP- 1(7-37), GLP-1 (7-36)amid oder eines pharmazeutisch annehmbaren Peptids, das ein Fragment der GLP-1 (7-37)-Sequenz enthält, oder eines Analogons oder funktionellen Derivats eines solchen Peptids zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykärnischen Mittel umfaßt, welches ein Blocker des ATP-abhängigen Kaliumkanals auf β-Zellen ist.
In einer ersten bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-36)amid zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykämischen Mittel umfaßt, welches ein Blocker des ATP-abhängigen Kaliumkanals auf β-Zellen ist.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-37) zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykämischen Mittel umfaßt, welches ein Blocker des ATP-abhängigen Kaliumkanals auf β-Zellen ist.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Analogons von GLP-1 (7-37) zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykämischen Mittel umfaßt, welches ein Blocker des ATP-abhängigen Kaliumkanals auf β-Zellen ist.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines funktionellen Derivats von GLP-1 (7-37) zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykämischen Mittel umfaßt, welches ein Blocker des ATP-abhängigen Kaliumkanals auf β-Zellen ist.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-37) oder eines Fragments davon oder eines Analogons oder eines funktionellen Derivats irgendeines von diesen, einschließlich GLP-1 (7-36)amid, zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit Tolbutamid umfaßt.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-37) oder eines Fragments davon oder eines Analogons oder eines funktionellen Derivats irgendeines von diesen, einschließlich GLP-1 (7-36)amid, zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit Glibenclamid umfaßt.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-37) oder eines Fragments davon oder eines Analogons oder eines funktionellen Derivats irgendeines von diesen, einschließlich GLP-1 (7-36)amid, zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit Glipizid umfaßt.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-37) oder eines Fragments davon oder eines Analogons oder eines funktionellen Derivats irgendeines von diesen, einschließlich GLP-1 (7-36)amid, zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit Gliclazid umfaßt.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von GLP-1 (7-37) oder eines Fragments davon oder eines Analogons oder eines funktionellen Derivats irgendeines von diesen, einschließlich GLP-1 (7-36)amid, zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit (S)-(+)-2-Ethoxy-4-[2-[[3- methyl-1-[2-(1-piperidinyl)phenyl] butyl]-amino]-2-oxoethyl]benzoesäure umfaßt.
In dieser Beschreibung bedeuten Analoga von GLP-1(7-37) bzw. von GLP-1(7-36)amid Peptide, welche sich von GLP-1 (7-37) bzw. von GLP-1 (7-36)amid darin unterscheiden, daß mindestens einer der Aminosäurereste von GLP-1(7-37) bzw. von GLP-1(7-36)amid unabhängig gegen einen anderen Aminosäurerest ausgetauscht wurde, vorzugsweise einen, der von dem genetischen Code codiert werden kann. Die Definition umfaßt auch den Fall, daß Aminosäurereste dem Nterminalen und/oder dem C-terminalen Ende des Peptids hinzugefügt oder davon deletiert werden. Vorzugsweise übersteigt die Gesamtzahl solcher Additionen, Deletionen und Austausche nicht fünf, noch bevorzugter übersteigt sie nicht drei.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

Wie oben erwähnt, sind Patienten, welche mit Sulfonylharnstoffen behandelt werden, allmählich nicht mehr in der Lage, auf die Sulfonylharnstoffbehandlung zu reagieren. Es ist unter Fachleuten allgemein anerkannt, daß dieses Unvermögen auf die Erschöpfung von β-Zellen zurückzuführen ist, welche dementsprechend nicht in der Lage sind, Insulin als Reaktion auf Glucosestimulierung zu sekretieren. Es ist auch allgemein anerkannt, daß die Wirksamkeit von Sulfonylharnstoffen durch die Kapazität von β-Zellen zur Produktion und Sekretion von Insulin beschränkt ist. Dementsprechend würde man keinen zusätzlichen therapeutischen Vorteil durch die Behandlung von NIDDM-Patienten mit Sulfonylharnstoffen und anderen Mitteln, welche ebenfalls die β-Zellfunktion stimulieren, erwarten.
Unser Befund, daß NIDDM-Patienten vorteilhaft mit GLP-1-verwandten Peptiden in Kombination mit Sulfonylharnstoffen oder anderen oralen hypoglykämischen Mitteln behandelt werden können, ist deshalb tatsächlich überraschend. In der Tat haben wir festgestellt, daß eine gleichzeitige Behandlung mit oralen hypoglykämischen Mitteln und GLP-1-verwandten Peptiden in einer synergistischen Reaktion der NIDDM-Patienten resultiert: Die Behandlung mit oralen hypoglykämischen Mitteln und GLP-1-verwandten Peptiden führt zu einer stärkeren metabolischen Reaktion als die Summe der Reaktionen von beiden Mitteln, wenn sie allein eingesetzt werden. Sogar in Fällen von Sulfonylharnstoff-Versagen wurde festgestellt, daß die oralen Mittel die Wirksamkeit von GLP-1-verwandten Peptiden signifikant erhöhten.
Eine kombinierte Behandlung mit GLP-1-verwandten Peptiden und oralen hypoglykämischen Mitteln ist somit neuartig, therapeutisch nützlich und überraschend.
Unvorhergesehenermaßen können therapeutische Vorteile erhalten werden, indem die NIDDM-Patienten mit beiden Arzneimittel-Typen behandelt werden.
Unter den GLP-1-verwandten Peptiden, welche so bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 eingesetzt werden können, sind GLP-1 (7-37) und GLP-1 (7-36)amid besonders vorteilhaft, da sie identisch mit den in der Natur vorkommenden Hormonen sind. Kürzere Peptide, die einen Teil der GLP-1 (7-37)-Sequenz umfassen, oder Analoga solcher kürzeren Peptide oder Analoga von GLP-1 (7-37) selbst oder funktionelle Derivate irgendeines von diesen können ebenfalls vorteilhaft eingesetzt werden, da die pharmakodynamischen und pharmakokinetischen Eigenschaften nach dem Bedürfnis der Patienten durch Modifizierung des GLP-1-verwandten Fragments geändert werden können.
Die GLP-1-verwandten Peptide können nach Verfahren verabreicht werden, die gegenwärtig erfindungsgemäß zur Verabreichung von Peptiden zur Verfügung stehen. Eine nasale Applizierung ist unter dem Gesichtspunkt der Mitwirkung des Patienten besonders vorteilhaft. Diesbezügliche Details sind in unserer parallelen dänischen Patentanmeldung Nr. DK 0364/92 zu finden, betreffend die nasale Verabreichung von Medikamenten, die GLP-1- verwandte Peptide umfassen, welche gleichzeitig mit der vorliegenden Anmeldung eingereicht wurde. Der Inhalt dieser Anmeldung ist hier durch die Bezugnahme in seiner Gesamtheit eingeschlossen. Die Verabreichung mittels Injektion oder Infusion wird in Fällen bevorzugt werden, in denen ein spezielles verlängertes Plasmaprofil des aktiven Peptids erforderlich ist, und die orale Verabreichung ist in Fällen bevorzugt, in denen das Ausmaß und die Kinetik der Absorption keinen kritischen Punkt darstellen.
Das erfindungsgemäß eingesetzte orale hypoglykämische Mittel kann jedes orale Mittel sein, das auf den ATP-abhängigen Kaliumkanal der β-Zellen einwirkt. Bevorzugt sind Glibenclamid, Glipizid, Gliclazid und AG-EE 623 ZW.
Die in der vorliegenden Beschreibung, in den Beispielen und Ansprüchen offenbarten Merkmale können, sowohl einzeln als auch in beliebiger Kombination davon, wesentlich für die Umsetzung dieser Erfindung in verschiedenen Formen sein. Die Erfindung wird weiter durch die folgenden Beispiele erläutert, welche nicht als Beschränkung anzusehen sind, sondern lediglich als Illustration einiger bevorzugter Merkmale der Erfindung.

BEISPIEL 1

Synergistische Wirkung von GLP-1(7-36)amid und Glibenclamid bei NIDDM-Patienten Assays

Blutproben wurden in Kunststoffröhrchen, die EDTA (0,048 ml, 0,34 M) und Trasylol® (1000 IE Kallikrein-Inhibitor, erhalten von Bayer, Westdeutschland) enthielten, gesammelt und unmittelbar auf Eis gestellt. Die Proben wurden bei 4ºC zentrifugiert und das Plasma bei -20ºC gelagert. Die Blutglucose wurde mit einem Glucoseoxidase-Verfahren nach A. S. Hugget und D. A. Nixon, Lancet 2 (1957) 368-370, gemessen. Plasma-C-Peptid-Konzentrationen wurden mittels Radioimmunoassay (RIA) unter Verwendung eines im Handel erhältlichen Kits (Novo Research Institute, Dänemark) bestimmt. Plasmaglucagon-Konzentrationen wurden mittels RIA unter Verwendung von Antikörper 30K gemessen, wie von G. R. Faloona und R. H. Unger in B. M. Jaffe und Behrman, Hrsg., Methods of Hormone Radioimmunoassay, Academic Press, New York (1974) 317-330, beschrieben.
Für weitere experimentelle Details (z. B. für die Berechnung der isoglykämischen mahlzeitbezogenen Insulin-Reaktion, IMIR) wird auf M. Gutniak, C. rskov, J. J. Holst, B. Ahren und S. Efendic, The New England Journal of Medicine 326 (29) (1992) 1316-1322, verwiesen, worin ein anderes Experiment, unter ähnlichen Bedingungen durchgeführt, beschrieben ist.

Methoden

An vier verschiedenen Tagen wurde die Wirkung entweder der Injektion von Glibenclamid, 1 mg i.v., oder der Infusion von GLP-1(7-36)amid mit einer Geschwindigkeit von 0,75 pMol pro Kilogramm Körpergewicht pro Minute oder einer Kombination davon bei derselben Gruppe von 6 insulinbehandelten, fettleibigen NIDDM-Patienten (Körpermasseindex: 30,1 ± 2,4 kg/m²) untersucht und mit der Verabreichung von physiologischer Kochsalzlösung als Kontrolle verglichen. Die normale Verabreichung von Insulin wurde 24 Stunden vor Beginn der Verabreichung der Testverbindungen oder der Salzlösung beendet und alle Versuchspersonen fasteten über Nacht. Ein Biostator (Miles, Diagnostic Division, Elkhart, Ind.) wurde für die Insulinverab-reichung in diesem Zeitraum eingesetzt, um die Blutglucosespiegel zu normalisieren, bevor die Verabreichung der Testverbindungen begonnen wurde, und auch um 180 Minuten nach dem Verzehr einer Standardtestmahlzeit, umfassend gekochte Kartoffeln, gekochtes Fleisch, gekochte Karotten, ein Glas Milch mit 0,5 % Butterfett und eine Scheibe Brot, das aus einer Mischung von Weizen- und Roggenmehl gebacken worden war, ein normales postprandiales Blutglucosemuster aufrechtzuerhalten. Bei dieser Mahlzeit kommen 28, 26 und 46% der Energie jeweils aus Protein, Fett bzw. Kohlehydraten. Die Verabreichung der Testverbindungen wurde 30 Minuten nach dem Erreichen von Normoglykämie vorgenommen (Glibenclamid, Salzlösung) bzw. begonnen (GLP-1 (7-36)amid). Die Infusion von (GLP-1(7-36)amid wurde 210 Minuten lang fortgesetzt. Nach 30 Minuten (Zeitpunkt Null) erhielten die Versuchspersonen die Testmahlzeit, welche innerhalb von 15 Minuten konsumiert wurde. Blutproben wurden bei -30, 0, 15, 30, 90, 120, 150 und 180 Minuten erhalten.

Ergebnisse

Nach dem Verzehr des Mahls wurde die mahlzeitbezogene C-Peptid-Reaktion, Glucagon- Reaktion und der isoglykämische mahlzeitbezogene Insulinbedarf (IMIR) gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefaßt. Tabelle 1
*) Glibenclamid besaß keinen signifikanten Einfluß auf die Glucagonfreisetzung.
Wie in der Tabelle angezeigt, erhöhten sowohl GLP-1 (7-36)amid als auch Glibenclamid die mahlzeitbezogene C-Peptid-Reaktion signifikant (p< 0,02) und übten bei Verabreichung in Kombination einen klaren synergistischen Einfluß aus. GLP-1 (7-36)amid unterdrückte die Glucagon-Reaktion (p< 0,01), während Glibenclamid keine signifikante Wirkung hatte. Jedoch wurde in Kombination mit GLP-1 (7-36)amid die Glucagon-Reaktion fast eliminiert. Schließlich verringerten sowohl Glibenclamid als auch GLP-1 (7-36)amid IMIR und in Kombination war IMIR so niedrig wie 2,7 ± 0,7.
Zusammenfassend demonstriert dieses Experiment eine starke synergistische Wirkung einer Kombination von GLP-1 (7-36)amid und Glibenclamid.

BEISPIEL 2

Synergistische Wirkung von GLP-1(7-36)amid und Glibenclamid bei NIDDM-Patienten mit einem sekundären Versagen der Sulfonylharnstoffbehandlung

Methoden

Acht Patienten mit NIDDM und sekundärem Versagen der Sulfonylharnstoffbehandlung nahmen an der Studie teil (Alter 57,6 ± 2,7 Jahre, Körpermasseindex 28,7 ± 1,5 kg/m², Diabetesdauer 7,6 ± 1,2 Jahre, HbA1C 5,8 ± 0,5). Die Diabetespatienten erfüllten die Kriterien der USA National Diabetes Data Group für NIDDM und IDDM. Keiner der Patienten wies eine beeinträchtigte Nierenfunktion, automatische Neuropathie oder proliferative Retinopathie auf und alle hatten eine normale Leberfunktion. Sie wurden instruiert, sich mindestens 2 Wochen vor und während der Studie von einer Standarddiät für Diabetespatienten zu ernähren. Die mit Sulfonylharnstoffen behandelten Patienten beendeten ihre Medikation eine Woche vor den Experimenten. Diejenigen, welche mit Insulin behandelt wurden, wurden instruiert, die Injektion von NPH-Insulin 24 Stunden vor den Untersuchungen zu beenden. Die Blutglucosekonzentrationen wurden mit subkutanen Injektionen von normalem Insulin eingestellt.
Alle Versuchspersonen wurden nach einem Fasten über Nacht untersucht. Um 7.30 Uhr am Morgen jeder Studie wurden drei Kanülen eingeführt. Eine Kanüle wurde in eine Vene in der Ellenbeuge plaziert und eingesetzt, um in Abständen Blut für Hormon-Assays zu entnehmen. Sie wurde nach jeder Probenentnahme mit Salzlösung gespült. Eine zweite Kanüle, von hinten in eine Handrückenvene eingeführt, wurde zur kontinuierlichen Überwachung von Blutglucosekonzentrationen eingesetzt. Das venöse Blut wurde arterialisiert durch Erwär mung des Unterarms und der Hand in einer temperaturregulierten Manschette (Kanthal Medical Heating AB, Stockholm, Schweden) bei 45ºC. Die dritte Kanüle wurde in die kontralaterale Ellenbeugenvene (Antecubitalvene) eingeführt und für alle Infusionen eingesetzt. Ab etwa 8.00 Uhr waren die Patienten mit einem Biostator verbunden, um ihre Blutglucosekonzentrationen zu normalisieren. Der Algorithmus des Biostators wurde auf die Normalisierung der basalen Blutglucosespiegel eingestellt. Der Zielwert für die Blutglucosekonzentrationen betrug 4-5 mMol/l. Als der Zielwert erreicht war, wurde der Biostator-Algorithmus auf Überwachung umgestellt und die Feedback-Insulininfusion gestoppt. Die Experimente wurden 30 Minuten nach dem Erreichen von Normoglykämie begonnen, etwa 90 Minuten nach Verbindung mit dem Biostator. Eine Infusion von physiologischer Kochsalzlösung oder 0,75 pMol/kg/Min. GLP-1 (7-36)amid (Peninsula Laboratories, St. Helens, Merseyside, England) wurde dann begonnen und 210 Minuten lang fortgesetzt. Bei Glibenclamid-Experimenten wurde eine intravenöse Injektion von 1 mg Glibenclamid (Hoechst AG, Deutschland) zum selben Zeitpunkt gegeben. Diese vier Studien wurden in randomisierter Weise durchgeführt, mit 2-4 Wochen Pause zwischen den Experimenten. Zum Zeitpunkt 0 erhielten die Versuchspersonen ein Standardessen wie in Beispiel 1 beschrieben, welches sie innerhalb von 15 Minuten verzehrten, während sie im Bett saßen. Blutproben wurden bei FV, -60, -30, -15, 0, 15, 30, 90, 120, 150 und 180 Minuten genommen. Die Blutglucose wurde kontinuierlich gemessen.

Ergebnisse

Im Grundzustand wurde die Wirkung auf die Blutglucose- und C-Peptidspiegel 45 Minuten nach Beginn der Verabreichung von GLP-1 (7-36)amid, Glibenclamid oder einer Kombination davon überprüft. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefaßt. Tabelle 2
Diese Ergebnisse demonstrieren klar die synergistische Wirkung der beiden Verbindungen, da Glibenclamid für sich allein keine signifikante Wirkung besaß, während die Wirkung der Kombination von GLP-1 (7-36)amid und Glibenclamid eindeutig diejenige von GLP-1 (7-36)- amid allein übertraf.
Nach dem Verzehr der Mahlzeit wurden die insulinogenen Indices (integrierte Insulin/- integrierte Glucose-Reaktion) berechnet, welche wiederum die synergistische Wirkung der beiden Verbindungen unterstrichen, wie in Tabelle 3 dargestellt. Tabelle 3

Claims

1. Verwendung einer wirksamen Menge an GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-36)amid oder eines pharmazeutisch annehmbaren Peptids, welches ein Fragment der GLP-1 (7-37)- Sequenz enthält, oder eines Analogons oder eines funktionellen Derivats eines solchen Peptids zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Diabetes Typ 2 in einem Behandlungsplan, der zusätzlich die Behandlung mit einem oralen hypoglykämischen Mittel umfaßt, welches ein Blocker des ATP-abhängigen Kaliumkanals auf β-Zellen ist.

2. Verwendung nach Anspruch 1 von GLP-1 (7-37) oder GLP-1 (7-36)amid.

3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, worin das orale hypoglykämische Mittel ein Sulfonylharnstoff ist.

4. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, worin das orale hypoglykämische Mittel Glibenclamid ist.

5. Verwendung an Anspruch 1 oder 2, worin das orale hypoglykämische Mittel (S)- (+)-2-Ethoxy-4-[2-[[3-methyl-1-[2-(1-piperidinyl)phenyl]butyl]aminol]-2-oxoethyl]- benzoesäure ist.