CN107308442A

CN107308442A - 包含glp‑1激动剂、胰岛素和甲硫氨酸的药物组合物

Info

Publication number: CN107308442A
Application number: CN201710447024.5A
Authority: CN
Inventors: A·哈根多夫; G·豪克; W·米勒; I·肖特勒; V·西夫克-亨兹勒; K·特尔奇
Original assignee: Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Current assignee: Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Priority date: 2009-11-13
Filing date: 2010-11-11
Publication date: 2017-11-03
Anticipated expiration: 2030-11-11
Also published as: CA2780460C; CY2017023I1; CY2017023I2; BR112012011128A2; US10029011B2; LTC2498802I2; PL2498802T3; KR20120104233A; US20120295846A1; IL219723A; CL2012001232A1; GT201200144A; EP2498802A1; RU2537239C2; MA33736B1; TR201809460T4; TW201138762A; DK2554183T3; CN102711805A; CA3011480A1

Abstract

本发明涉及一种包含GLP‑1激动剂、胰岛素和甲硫氨酸的药物组合物。具体而言涉及一种液体组合物，其包含GLP‑1激动剂或/和其药理学可容许盐、胰岛素或/和其药理学可容许盐、和任选地至少一种药学可接受赋形剂，其中所述组合物包含甲硫氨酸，在适当情况中作为用二甲双胍的添加疗法。

Description

包含GLP-1激动剂、胰岛素和甲硫氨酸的药物组合物

本申请是申请日为2010年11月11日、中国申请号为201080061411.1、发明名称为“包含GLP-1激动剂、胰岛素和甲硫氨酸的药物组合物”的发明申请的分案申请。

发明领域

本申请涉及包含GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐、胰岛素或/和其药理学可容许盐、和任选地至少一种药学可接受赋形剂的液体组合物，其中所述组合物包含甲硫氨酸。

本申请进一步涉及用于治疗糖尿病的依照本发明的组合物。本申请进一步涉及依照本发明的组合物在制造供治疗糖尿病用的药物中的用途。本申请进一步涉及一种用于制造依照本发明的组合物的方法，包括与胰岛素或/和其药学可接受盐、甲硫氨酸和任选地至少一种药学可接受赋形剂一起配制GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐。本申请进一步涉及一种用依照本发明的组合物治疗患者的方法，包括对所述患者施用所述组合物。

背景技术

胰岛素和GLP-1化合物的惯常组合物包含等张剂、用于调节pH的缓冲液、和防腐剂。进一步频繁使用的胰岛素组合物的组分是锌，其与胰岛素形成复合物。这导致胰岛素延迟作用的实现。

WO 2003/020201(Eli Lilly)涉及一种包含GLP-1化合物和基础胰岛素的液体预混合配制剂。具体的配制剂含有Val⁸-GLP-1或Exendin-4、胰岛素NPH、作为等张剂的甘油、作为防腐剂的间甲酚和酚、和pH 7.6或8的磷酸盐缓冲液。另一种配制剂包含Exendin-4或Val⁸-Glu²²GLP-1(7-37)OH,甘精胰岛素(insulin glargine)(Lantus)、锌、作为等张剂的甘油和甘露醇、作为防腐剂的间甲酚、锌、和乙酸钠，pH 4。

WO 2004/035623(Zealand Pharmaceuticals)披露了一种液体组合物，其包含稳定化的Exendin、50mM组氨酸、100至200mM蔗糖、甘露醇或其它可接受盐、20mM甲硫氨酸、20mM天冬酰胺-谷氨酰胺或Asp，pH为5.3。通过对Exendin-4(1-39)的氨基酸构件，例如在位置Gln13、Met14、Trp25、或Asn28处的某些修饰实现稳定化。此组合物不包含胰岛素。

WO 2005/046716(Novo Nordisk)披露了液体组合物，其包含利拉鲁肽(liraglutide)和门冬胰岛素(insulin aspart)、具有pH 7.7的缓冲液、作为表面活性剂的泊洛沙姆(poloxamer)188、酚、丙二醇、和任选地锌。在没有泊洛沙姆188的情况中，组合物是不稳定的。凭借聚山梨酯(polysorbate)20，实现稳定化。

WO 2006/029634(Novo Nordisk)涉及液体药物组合物，其包含促胰岛素肽(GLP-1激动剂)、胰岛素肽、和His^B10的配体(胰岛素B链第10位His的配体)。组合物可以包含聚山梨酯-20或泊洛沙姆188作为表面活性剂。此文件中披露的具体组合物包含人胰岛素或人B28Asp胰岛素(门冬胰岛素)、利拉鲁肽(GLP-1激动剂)、作为等张剂的甘油、乙酸锌，pH 7.4或7.9。根据所使用的胰岛素或利拉鲁肽的量，这些组合物于室温贮存15天后已经部分不稳定。这些组合物的稳定性通过添加His^B10的配体来实现。别的配制剂由利拉鲁肽、门冬胰岛素或地特胰岛素(detemir)、丙二醇、酚、和磷酸盐缓冲液，pH 7.7组成。这些组合物实际上立刻就是不稳定的。添加泊洛沙姆-188或聚山梨酯-20和His^B10的配体导致稳定。

WO 2006/051103(Novo Nordisk)披露了液体组合物，其包含地特胰岛素(即一种基础胰岛素)、利拉鲁肽(GLP-1化合物)、和作为表面活性剂的泊洛沙姆188或聚山梨酯20。别的组分是酚、NaCl、丙二醇、乙酸锌、和磷酸纳缓冲液或甘氨酰甘氨酸缓冲液(pH 7.7)。间甲酚存在于这些组合物中的一些中。通过添加泊洛沙姆188或聚山梨酯20，可以稳定组合物。

WO 2008/124522(Biodel)涉及包含胰岛素、锌螯合剂(例如，EDTA或EGTA)、和GLP-1类似物的组合物。

全世界约1.20亿人患有糖尿病。这些包括约1200万I型糖尿病患者，对于所述I型糖尿病患者，内分泌胰岛素分泌不足的替换是目前唯一可能的疗法。那些受累的患者终身依赖于胰岛素注射，通常一天几次。II型糖尿病与I型糖尿病形成对比之处在于不总是存在胰岛素缺乏，而是在许多病例中，尤其是在晚期阶段，认为在与口服抗糖尿病药(antidiabetic)组合适当的情况中，用胰岛素的治疗是最有利的治疗形式。

在健康个体中，胰腺的胰岛素释放与血糖浓度严格相关。血糖水平升高(如那些在餐后发生的)被胰岛素分泌的相应升高快速补偿。在禁食状态中，血浆胰岛素水平下降到基础值，该基础值足以确保对胰岛素敏感的器官和组织连续供应葡萄糖，并且在夜间保持低肝葡萄糖生成。通过外源的，通常为皮下的胰岛素施用来替换内源胰岛素分泌一般不接近上文所描述的血糖生理学调节的质量。通常，存在着血糖向上或向下脱离轨迹的例子，并且在其最严重的形式中，这些例子可以是危及生命的。然而，另外，在多年间处于升高的、而没有初始症状的血糖水平构成相当大的健康风险。美国的大规模DCCT研究(The DiabetesControl and Complications Trial Research Group(1993),N.Engl.J.Med.329,977-986)明确显示了，长期升高的血糖水平造成晚期糖尿病并发症的形成。晚期糖尿病并发症是微血管和大血管损伤，其在一些情况中表现为视网膜病变(retinopathy)、肾病(nephropathy)、或神经病(neuropathy)，而且导致失明(blindness)、肾衰竭、和四肢丧失(loss of extremities)，并且另外与心血管病症的风险升高有关。从这点看，可以推断糖尿病疗法的改善必须主要旨在将血糖尽可能接近地保持在生理学范围内。依照强化胰岛素疗法的概念，这要依靠速效和缓效胰岛素制剂的注射(一天几次)来实现。速效配制剂在进餐时给予，以补偿血糖的餐后升高。缓效基础胰岛素意图在不导致低血糖的情况下确保胰岛素的基础供应，尤其是在夜间。

胰岛素是一条由51个氨基酸组成的多肽，所述氨基酸分成两条氨基酸链：具有21个氨基酸的A链和具有30个氨基酸的B链。各条链通过2个二硫桥连接在一起。胰岛素制剂已经在糖尿病疗法中采用了多年。此类制剂不仅使用天然存在的胰岛素，而且最近，还使用了胰岛素衍生物和胰岛素类似物。

胰岛素类似物是天然存在的胰岛素，即人胰岛素或动物胰岛素的类似物，其与相应的在其它方面相同的天然存在的胰岛素的差异在于用其它氨基酸对至少一个天然存在的氨基酸残基的取代和/或至少一个氨基酸残基的添加/删除。所讨论的氨基酸也可以是非天然存在的氨基酸。

胰岛素衍生物是通过化学修饰获得的天然存在的胰岛素或胰岛素类似物的衍生物。化学修饰可以在于例如将一个或多个限定的化学基团添加至一个或多个氨基酸上。一般而言，与人胰岛素相比，胰岛素衍生物和胰岛素类似物的活性稍有改变。

作用的开始得到加速的胰岛素类似物记载于EP 0 214 826、EP 0 375 437、和EP0 678 522。EP 0 124 826涉及B27和B28的替换等。EP 0 678 522描述了在位置B29中具有不同氨基酸，优选地脯氨酸，而不是谷氨酸的胰岛素类似物。EP 0 375 437涵盖在B28处具有赖氨酸或精氨酸的胰岛素类似物，其还可以任选地在B3和/或A21处修饰。

EP 0 419 504披露了通过修饰B3中的天冬酰胺和位置A5、A15、A18或A21处的至少一种别的氨基酸来提供保护而免于化学修饰的胰岛素类似物。

WO 92/00321描述了位置B1-B6中的至少一个氨基酸已经用赖氨酸或精氨酸替换的胰岛素类似物。依照WO 92/00321的此类胰岛素具有延长的效果。EP-A 0 368 187中所描述的胰岛素类似物也展现出延迟的效果。

用于胰岛素替换的天然存在的胰岛素的商品化制剂在胰岛素起源(例如，牛、猪、人胰岛素)上，并且还在其组成上不同，并且由此可以影响活性概况(作用的开始和持续时间)。经由组合不同胰岛素产品，有可能获得极其多种活性概况中的任一种，并且在很大程度上引起生理学血糖值。现今，重组DNA技术容许制备此种经修饰的胰岛素。它们包括甘精胰岛素(Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素，Lantus)，具有延长的作用持续时间。甘精胰岛素以澄清的、酸性溶液形式注射，并且由于其溶解特性，在皮下组织的生理学pH范围中作为稳定的六聚物联合沉淀。甘精胰岛素一天注射一次，并且与其它长效胰岛素相比在其平坦的血清概况和夜间低血糖风险的相关降低方面是显著的(Schubert-Zsilavecz等,2:125-130(2001))。

导致作用持续时间延长的甘精胰岛素的特定制剂以具有酸性pH的澄清溶液为特征。

Exendin是一组可以降低血糖浓度的肽。Exendin与GLP-1(7-36)的序列具有某种相似性(53％,Goke等J.Biol Chem 268,19650-55)。Exendin-3和Exendin-4通过与Exendin受体相互作用在豚鼠胰脏的腺泡细胞中刺激细胞cAMP生成的增加(Raufman,1996,Reg.Peptides 61:1-18)。与Exendin-4形成对比，Exendin-3实现胰腺的腺泡细胞中的淀粉酶释放增加。Exendin充当GLP-1激动剂。

胰高血糖素样肽1(GLP-1)是一种内分泌激素，其在口服摄取葡萄糖或脂肪后增强胰岛素应答。一般地，GLP-1降低胰高血糖素浓度，减缓胃排空，刺激胰岛素(原)合成，增强对胰岛素的敏感性，并且刺激不依赖于胰岛素的糖原合成(Holst(1999),Curr.Med.Chem6:1005,Nauck等(1997)Exp Clin Endocrinol Diabetes 105:187,Lopez-Delgado等(1998)Endocrinology 139:2811)。人GLP-1具有37个氨基酸残基(Heinrich等,Endocrinol.115:2176(1984),Uttenthal等,J Clin Endocrinol Metabol(1985)61:472)。GLP-1的活性片段包括GLP-1(7-36)和GLP-1(7-37)。

已经提出了Exendin-3、Exendin-4和Exendin激动剂通过降低胃能动性和胃排空来治疗糖尿病和预防高血糖症(US 5,424,286和WO98/05351)。

Exendin类似物可以以天然Exendin-4序列的氨基酸取代和/或C端截短为特征。此类Exendin类似物记载于WO 99/07404、WO 99/25727、和WO 99/25728。

AVE0010的固相合成记载于WO 01/04156A1。AVE0010具有如下的序列：脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂。此物质在WO 01/04156中以SEQ ID NO:93公开：

H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-M-E-E-E-A-V-R-L-F-I-E-W-L-K-N-G-G-P-S-S-G-A-P-P-S-K-K-K-K-K-K-NH₂(SEQ ID NO:1)

Exendin-4(39AS)具有序列：

H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-M-E-E-E-A-V-R-L-F-I-E-W-L-K-N-G-G-P-S-S-G-A-P-P-P-S-NH₂(SEQ ID NO:2)

Exendin-3具有序列(J.Bio.Chem.,267,1992,7402-7405)：

H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂(SEQ ID NO:3)

GLP-1具有序列：

H-A-E-G-T-F-T-S-D-V-S-S-Y-L-E-G-Q-A-A-K-E-F-I-A-W-L-V-K-G-R-NH₂(SEQID NO:4)

发明内容

本发明的目的是提高包含GLP-1激动剂和胰岛素的液体配制剂的稳定性。更具体地，本发明的目的是改善物理和化学完整性。我们已经发现了此目的是通过用甲硫氨酸配制GLP-1激动剂和胰岛素实现的。

发现了甲硫氨酸能够提高包含GLP-1激动剂诸如AVE0010和胰岛素诸如甘精胰岛素的组合物的贮存稳定性。甲硫氨酸不影响这些组合物的物理完整性。

药学活性多肽的稳定性可以受到多种机制损害。这些包括pH、温度、光、和某些组分的影响。

结合本发明，发现了一系列惯常的胰岛素配制剂或GLP-1激动剂配制剂组分对于包含胰岛素和GLP-1激动剂的配制剂的化学或/和物理完整性和贮存稳定性是不利的。例如，这些是乙酸盐、聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、苯扎氯铵、和赖氨酸。因此，依照本发明的组合物优选没有这些组分。

因而，本发明提供了一种液体组合物，其包含GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐、胰岛素或/和其药理学可容许盐、和任选地至少一种药学可接受赋形剂，其中所述组合物包含甲硫氨酸。

优选地，依照本发明的组合物包含范围为0.5mg/mL至20mg/mL的量，更优选地范围为1mg/mL至5mg/mL的量，特别优选地3.0mg/mL的量的甲硫氨酸。可以使用D-型的甲硫氨酸。同样地，可以使用L-型的甲硫氨酸。同样地，可以使用任何期望比率的D-型和L-型的混合物。

更特别地，依照本发明的组合物没有表面活性剂，诸如多元醇和多元醇的偏酯及脂肪酸酯和醚，诸如甘油和山梨糖醇的那些。更特别地，依照本发明的组合物没有选自下组的甘油和山梨糖醇的偏酯及脂肪酸酯和醚：此外，更特别地，依照本发明的组合物没有选自下组的多元醇：聚丙二醇、聚乙二醇、泊洛沙姆、Pluronics、Tetronics。更特别地，依照本发明的组合物没有至少一种选自下组的物质：聚山梨酯、聚山梨酯和泊洛沙姆。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有聚山梨酯，诸如例如聚山梨酯20。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有聚山梨酯80。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有泊洛沙姆，诸如例如泊洛沙姆188。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有苯扎氯铵。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有组氨酸。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有EDTA，更特别地EDTA钠。

更特别地，依照本发明的组合物基本上没有，优选地没有组氨酸和EDTA钠。

依照本发明的组合物可以包含一种或多种通常用于缓冲pH的物质(缓冲物质)。此类缓冲物质的例子是乙酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐。更特别地，依照本发明的组合物可以以例如作为GLP-1激动剂或/和胰岛素的反荷离子足够的量包含一种或多种通常用于缓冲pH的物质。依照本发明的组合物可以包含一种或多种缓冲物质，例如量各为多至1mg/ml、多至0.5mg/ml、多至0.1mg/ml、多至0.05mg/ml、多至0.02mg/ml、或多至0.01mg/ml。同样地，依照本发明的组合物可以基本上没有缓冲物质。优选地，依照本发明的组合物没有缓冲物质。

依照本发明的组合物可以例如以多至1mg/ml、多至0.5mg/ml、多至0.1mg/ml、多至0.05mg/ml、多至0.02mg/ml、或多至0.01mg/ml的量包含乙酸盐。例如，这些量作为GLP-1激动剂的反荷离子是足够的。同样地，依照本发明的组合物可以基本上没有乙酸盐。优选地，依照本发明的组合物没有乙酸盐。

依照本发明的组合物可以例如以多至1mg/ml、多至0.5mg/ml、多至0.1mg/ml、多至0.05mg/ml、多至0.02mg/ml、或多至0.01mg/ml的量包含柠檬酸盐。例如，这些量作为GLP-1激动剂的反荷离子是足够的。同样地，依照本发明的组合物可以基本上没有柠檬酸盐。优选地，依照本发明的组合物没有柠檬酸盐。

依照本发明的组合物可以例如以多至1mg/ml、多至0.5mg/ml、多至0.1mg/ml、多至0.05mg/ml、多至0.02mg/ml、或多至0.01mg/ml的量包含磷酸盐。例如，这些量作为GLP-1激动剂的反荷离子是足够的。同样地，依照本发明的组合物可以基本上没有磷酸盐。优选地，依照本发明的组合物没有磷酸盐。

本发明的药物组合物可以具有酸性或生理学pH。优选地，酸性pH范围在pH 1–6.8、pH 3.5–6.8、或pH 3.5–5的范围中。优选地，生理学pH的范围为pH 2.5–8.5，更优选地pH4.0至8.5，甚至更优选地pH 6.0至8.5。特别优选的是约4.5的pH。对于pH调节，生理学安全的稀酸(通常为HCl)和碱(通常为NaOH)是合适的。

依照本发明的组合物可以包含合适的防腐剂。合适的防腐剂是例如酚、间甲酚、苯甲醇、和/或对羟基苯甲酸酯。间甲酚是优选的。然而，也可以省略防腐剂。

依照本发明的组合物可以包含锌离子。优选地，锌离子的浓度范围为1μg/ml至2mg/ml，更优选地范围为5μg至200μg锌/ml，更特别地最大值为0.06mg/ml，特别优选地为0.06mg/ml。

此外，依照本发明的组合物可以包含合适的等张剂。合适的等张剂是例如甘油、右旋糖、乳糖、山梨糖醇、甘露醇、葡萄糖、NaCl、钙或镁化合物诸如CaCl₂等。甘油、右旋糖、乳糖、山梨糖醇、甘露醇和葡萄糖的浓度范围通常为100–250mM，NaCl的浓度为多至150mM。甘油是优选的。更特别地，20.0mg/ml的85％甘油是优选的。

依照本发明的组合物可以进一步包含别的添加剂，诸如盐，其延迟至少一种胰岛素的释放。优选地，组合物没有这些添加剂。

更特别地，组合物意图用于胃肠外施用。优选地，依照本发明的组合物是可注射组合物，更优选地用于皮下注射。更特别地，本发明的组合物适合于一天注射一次。

更特别地，在于+5℃或25℃的温度贮存1个月、2个月、4个月、或6个月后，依照本发明的配制剂具有开始贮存时的活性的至少80％、至少90％、至少95％、或至少98％的活性。

在本申请中，“活性”可以意指在依照本发明的配制剂中使用的胰岛素的活性。用于测定胰岛素活性的方法是本领域技术人员已知的。

在本申请中，“活性”可以同样意指在依照本发明的配制剂中使用的GLP-1激动剂的活性。用于测定GLP-1激动剂的活性的方法是本领域技术人员已知的。

更特别地，依照本发明的配制剂在贮存1个月、2个月、4个月、或6个月后展现出化学完整性。更特别地，化学完整性意指在于+5℃、25℃、或40℃的温度贮存后，与开始贮存相比，配制剂包含至少80％、至少90％、至少95％、或至少98％的活性成分，处于基本上在化学上未改变的形式。

化学完整性可以意指GLP-1激动剂的化学完整性。GLP-1激动剂可以包含甲硫氨酸残基(例如AVE0010中的第14位)。更特别地，GLP-1激动剂的化学完整性意指阻止甲硫氨酸残基的氧化。

同样地，化学完整性可以意指胰岛素的化学完整性。

优选地，化学完整性意指胰岛素和GLP-1激动剂的完整性。

更特别地，依照本发明的配制剂在贮存1个月、2个月、4个月、或6个月后展现出物理完整性。更特别地，物理完整性意指在于+5℃、25℃、或40℃的温度贮存后，与开始贮存相比，配制剂包含至少80％、至少90％、至少95％、或至少98％的活性成分，处于基本上在物理上未改变的形式。

物理完整性可以意指GLP-1激动剂的完整性。同样地，物理完整性可以意指胰岛素的完整性。更特别地，物理完整性意指GLP-1激动剂或/和胰岛素不形成聚集体，诸如例如原纤维。

优选地，物理完整性意指胰岛素和GLP-1激动剂的完整性。

优选地，GLP-1激动剂选自下组：Exendin-3及其类似物和衍生物、Exendin-4及其类似物和衍生物，且在该情况中，更优选地，GLP-1激动剂选自下组：AVE0010和Exendin-4。

Exendin-3、Exendin-3的类似物和衍生物、Exendin-4、和Exendin-4的类似物和衍生物可以参见WO 01/04156、WO 98/30231、US 5,424,286、EP申请99 610043.4、和WO 2004/005342。通过提及而将这些文件收入本文。可以依靠本文中所描述的方法来合成这些文件中所描述的Exendin-3、Exendin-4、及其类似物和衍生物，此后任选地进行修饰。

AVE0010(SEQ ID NO:1)、Exendin-4(SEQ ID NO:2)、和Exendin-3(SEQ ID NO:3)的序列显示高度相似性。AVE0010和Exendin-4的序列在位置1-37是相同的。来自Exendin-4的序列1-39在39个位置的37个(94％)处与位置48-86的Exendin-3序列相同。参照序列，本领域技术人员可以容易地将本文中涉及特定序列(例如AVE0010或Exendin-4的序列)的规定位置转化成其它序列。

更特别地，Exendin-3或/和Exendin-4的类似物和衍生物含有经修饰的氨基酸序列。例如，可以删除单一氨基酸(例如Exendin-4中的脱Pro36、脱Pro37、脱Asp28、脱Met(O)14及Exendin-3中的相应位置)。同样地，可以取代单一位置(例如Exendin-4中的Met(O)¹⁴、Trp(O₂)²⁵、IsoAsp²⁸、Asp²⁸Pro³⁸及Exendin-3中的相应位置)，在该情况中也可以使用非天然的氨基酸诸如Met(O)(甲硫氨酸亚砜或甲硫氨酸砜)、Trp(O₂)(N-甲酰犬尿氨酸)、或/和异Asp(β-天冬氨酸或异天冬氨酸)。可以将非天然氨基酸(以相应氨基酸构件的形式)容易地插入序列中。

此外，可以例如通过额外的序列诸如-(Lys)-、-(Lys)₂-、-(Lys)₃-、-(Lys)₄-、-(Lys)₅-、-(Lys)₆-、-Asn-(Glu)₅-来修饰C-端或/和N-端，在该情况中，-(Lys)₄-、-(Lys)₅-、-(Lys)₆-、-Asn-(Glu)₅-是优选的。优选地，将C端的羧基基团修饰为酰胺基团(-NH₂)。任选地，实施C-端或/和N-端的修饰作为完成合成后的进一步的步骤。

可以在完成依照本发明的方法的合成循环后的进一步的步骤中制造药学可容许盐。肽的药学可容许盐的制造是本领域技术人员已知的。优选的药学可容许盐是乙酸盐。

优选地，GLP-1激动剂选自下组：Exendin-4、Exendin-4的类似物和衍生物及其药理学可容许盐。

进一步优选的GLP-1激动剂是选自下组的Exendin-4类似物：

H-脱Pro³⁶-Exendin-4-Lys₆-NH₂，

H-脱(Pro^36,37)-Exendin-4-Lys₄-NH₂，

H-脱(Pro^36,37)-Exendin-4-Lys₅-NH₂及其药理学可容许盐。

进一步优选的GLP-1激动剂是选自下组的Exendin-4类似物：

脱Pro³⁶[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)，

脱Pro³⁶[异Asp²⁸]Exendin-4(1-39)，

脱Pro³⁶[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)，

脱Pro³⁶[Met(O)¹⁴,异Asp²⁸]Exendin-4(1-39)，

脱Pro³⁶[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-2(1-39)，

脱Pro³⁶[Trp(O₂)²⁵,异Asp²⁸]Exendin-2(1-39)，

脱Pro³⁶[Met(O)¹⁴Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)，

脱Pro³⁶[Met(O)¹⁴Trp(O₂)²⁵,异Asp²⁸]Exendin-4(1-39)及其药理学可容许盐。

进一步优选的GLP-1激动剂是选自下组的Exendin-4类似物，如前一段中所描述的，其中肽-Lys₆-NH₂附接于Exendin-4类似物的C端。

进一步优选的GLP-1激动剂是选自下组的Exendin-4类似物：

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

脱Asp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸Exendin-4(1-39)-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro37,Pro³⁸[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

H-脱Asp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵]Exendin-4(1-39)-NH2，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

脱Met(O)¹⁴Asp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸Exendin-4(1-39)-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro^36,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

脱Asp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵]Exendin-4(1-39)-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-NH₂，

脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-(Lys)₆-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂，

H-Asn-(Glu)₅-脱Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]Exendin-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂及其药理学可容许盐。

同样地，GLP-1激动剂可以选自下组：GLP-1及GLP-1的类似物和衍生物。进一步优选的GLP-1激动剂选自下组：Arg³⁴,Lys²⁶(N^ε(γ-谷氨酰(N^α-十六酰基)))GLP-1(7-37)[利拉鲁肽]及其药理学可容许盐。

进一步优选的GLP-1激动剂是AVE0010。AVE0010具有序列脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂(SEQ ID NO:1)。同样地，AVE0010的药学可容许盐是优选的。

更特别地，GLP-1激动剂，例如AVE0010以范围为0.01mg/ml至0.5mg/ml或0.05mg/ml至1.5mg/ml的量使用。

在本申请中，术语“胰岛素”不仅涵盖未修饰的胰岛素，而且还包含胰岛素类似物、胰岛素衍生物、和胰岛素代谢物。依照本发明的组合物包含一种或多种独立选自下组的胰岛素：胰岛素(例如，未修饰的胰岛素)、胰岛素类似物、胰岛素衍生物、和胰岛素代谢物及其任何期望的组合。

至少一种胰岛素可以独立选自下组：牛胰岛素、其类似物、衍生物和代谢物、猪胰岛素、其类似物、衍生物和代谢物、和人胰岛素、其类似物、衍生物和代谢物。优选地，至少一种胰岛素独立选自人胰岛素、其类似物、衍生物和代谢物。

此外，依照本发明的胰岛素可以独立选自：未修饰的胰岛素，更特别地选自：牛胰岛素、猪胰岛素和人胰岛素。

至少一种胰岛素可以独立选自下组：牛胰岛素、猪胰岛素和人胰岛素。更优选地，至少一种胰岛素独立选自人胰岛素。依照本发明的胰岛素可以选自未修饰的胰岛素，更特别地选自牛胰岛素、猪胰岛素和人胰岛素。

依照本发明的胰岛素衍生物是通过化学修饰获得的天然存在的胰岛素和/或胰岛素类似物的衍生物。化学修饰可以在于例如将一种或多种限定的化学基团添加至一个或多个氨基酸上。

记载于EP 0 214 826,EP 0 375 437,EP 0 678 522,EP 0 419 504,WO 92/00321,EP-A 0 368 187及WO2009/063072的胰岛素类似物可以是依照本发明的组合物的一部分。通过提及而将文件EP 0 214 826,EP 0 375 437,EP 0 678 522,EP 0 419 504,WO92/00321,EP-A 0 368 187和WO 2009/063072纳入本文。

依照本发明的一种优选的胰岛素类似物可以选自下组：Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素(甘精胰岛素)、Lys(B3)-Glu(B29)人胰岛素；Lys^B28Pro^B29人胰岛素(赖脯胰岛素)、B28Asp人胰岛素(天冬胰岛素)、人胰岛素，其中位置B28中的脯氨酸已经用Asp,Lys,Leu,Val或Ala替换，且其中位置B29中的Lys可以用Pro替换；AlaB26人胰岛素；脱(B28-B30)人胰岛素；脱(B27)人胰岛素或B29Lys(ε-十四酰),脱(B30)人胰岛素(地特胰岛素(insulindetermir))、N^εB29-十四酰脱(B30)人胰岛素、N^εB29-(N^α-(HOOC(CH₂)₁₄CO)-γ-Glu)脱B30人胰岛素、Lys^B29(N^ε石胆酰-γ-Glu)-脱(B30)人胰岛素、N^εB29-ω-羧基十五酰-γ-L-戊二酰亚胺(glutaylamide)脱B30人胰岛素、和N^εB29-ω-羧基十五酰-γ-氨基-丁酰基脱(B30)人胰岛素。

依照本发明的优选的胰岛素衍生物可以选自下组：B29-N-肉豆蔻酰-脱(B30)人胰岛素、B29-N-棕榈酰-脱(B30)人胰岛素、B29-N-肉豆蔻酰人胰岛素、B29-N-棕榈酰人胰岛素、B28-N-肉豆蔻酰Lys^B28Pro^B29人胰岛素、B28-N-棕榈酰-Lys^B28Pro^B29人胰岛素、B30-N-肉豆蔻酰-Thr^B29Lys^B30人胰岛素、B30-N-棕榈酰-Thr^B29Lys^B30人胰岛素、B29-N-(N-棕榈酰-Υ-谷氨酰)-脱(B30)人胰岛素、B29-N-(N-石胆酰-Υ-谷氨酰)-脱(B30)人胰岛素、B29-N-(ω-羧基十七酰)-脱(B30)人胰岛素和B29-N-(ω-羧基十七酰)人胰岛素、N^εB29-十四酰脱(B30)人胰岛素、N^εB29-(N^α-(HOOC(CH₂)₁₄CO)-γ-Glu)脱B30人胰岛素、Lys^B29(N^ε石胆酰-γ-Glu)-脱(B30)人胰岛素、N^εB29-ω-羧基十五酰-γ-L-戊二酰亚胺脱B30人胰岛素、和N^εB29-ω-羧基十五酰-γ-氨基-丁酰脱(B30)人胰岛素。

依照本发明的更高度优选的胰岛素衍生物选自下组：Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素、Lys^B28Pro^B29人胰岛素(赖脯胰岛素)、B28Asp人胰岛素(天冬胰岛素)、B29Lys(ε-十四酰),脱B30人胰岛素(地特胰岛素)。

依照本发明的组合物含有60-6000nmol/ml，优选地240-3000nmol/ml如本文中所限定的胰岛素。根据使用的胰岛素，240-3000nmol/ml的浓度大致对应于1.4-35mg/ml或40-500个单位/ml的浓度。

特别优选地，本发明提供了如本文中所描述的组合物，其包含至少一种独立选自下组的胰岛素：Lys^B28Pro^B29人胰岛素(赖脯胰岛素)、B28Asp人胰岛素(天冬胰岛素)、B29Lys(ε-十四酰),脱B30人胰岛素(地特胰岛素)、和甘精胰岛素(Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素)，并且包含AVE0010和/或其药理学可容许盐。特别优选地，本发明进一步提供了一种如本文中所描述的组合物，其包含甘精胰岛素(Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素)和AVE0010(脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂)和/或其药理学可容许盐。这些特别优选的组合物优选地具有1–6.8的酸性pH，更优选地pH 3.5–6.8，甚至更优选地pH3.5–4.5。

在一个具体的实施方案中，依照本发明的配制剂包含下列组分：

(a)脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

(b)Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素，

(c)氯化锌，

(d)间甲酚,

(e)L-甲硫氨酸，

(f)甘油，

(g)盐酸，若调节至约4.5的pH是需要的话，

(h)NaOH溶液，若调节至约4.5的pH是需要的话，和

(i)水。

更特别地，依照本发明的配制剂由(a)至(i)中提及的组分组成。任选地，可以省略间甲酚。因此，则依照本发明的配制剂由组分(a)至(c)和(e)至(i)组成。

本发明进一步提供了依照本发明的至少两种配制剂的组合。在此情况中，提供了第一和第二组合物和任选地至少一种别的药物组合物，其各自包含胰岛素和GLP-1激动剂。

因此，本发明提供了一种组合，其包含第一药物组合物和第二药物组合物和任选地至少一种别的药学组合物，其各自包含至少一种胰岛素和至少一种GLP-1激动剂，并且含有相对于所述组合物的总重量的不同重量分数的至少一种胰岛素和/或至少一种GLP-1激动剂。

在本申请中，“任选地，至少一种别的药物组合物”意指在第一和第二药物组合物外，依照本发明的组合可以包含至少一种别的药物组合物。因此，依照本发明的组合可以包含例如3,4,5,6,7,8,9,10或更多种依照本发明的药物组合物。

优选的组合是包含依照本发明的第一和第二药物组合物的那些。

同样优选的是包含依照本发明的第一、第二和第三药物组合物的组合。

同样优选的是包含依照本发明的第一、第二、第三和第四药物组合物的组合。

同样优选的是包含第一、第二、第三、第四和第五药物组合物的组合。

可以在所述第一药物组合物、所述第二药物组合物、和在使用的情况中所述至少一种别的药物组合物中以如下的方式选择所述至少一种胰岛素和所述至少一种GLP-1激动剂的重量分数，使得所述药物组合物含有基于所述重量分数的胰岛素与GLP-1激动剂的不同比率。

在此情况中，第一组合物可以含有最小的比率，而第二组合物含有下一更大的比率。在存在至少一种别的组合物的情况中，它可以含有下一更大的比率。在也存在别的组合物的情况中，它继而可以含有下一更大的比率。因此，组合物可以含有基于重量分数的从第一增加至第二和在使用的情况中别的组合物的胰岛素与GLP-1激动剂的比率。

优选地，第一药物组合物、第二药物组合物、和在使用的情况中至少一种别的药物组合物中的两种活性成分之一，即至少一种胰岛素或至少一种GLP-1激动剂的重量分数在每种情况中选择为使得可以通过施用限定体积的第一、第二和/或至少一种别的组合物来施用预定剂量的此活性成分。特别优选地，此活性成分是至少一种胰岛素。

优选地，第一药物组合物、第二药物组合物、和在使用的情况中至少一种别的药物组合物中的两种活性成分中的另一种，即至少一种胰岛素或至少一种GLP-1激动剂的重量分数选择为使得基于重量分数的胰岛素与GLP-1激动剂的比率从第一增加至第二和在使用的情况中别的组合物。特别优选地，此活性成分是至少一种GLP-1激动剂。

此外，测定药物组合物中的两种活性成分中另一种的重量分数，使得可以以如下的方式选择药物组合物之一，使得以限定的体积给予要施用的两种活性成分中的第一种的剂量和要施用的第二活性成分的剂量。因此，选择含有期望比率的药物组合物。

在理论上，会有可能为每个个体提供至少一种胰岛素与至少一种GLP-1激动剂在治疗上期望的重量分数比率的药物组合物，以获得对于每名患者在这两种活性成分方面的最佳剂量(根据需要改编)。

在本发明中，特定数目的药物组合物是足够的，以覆盖两种活性成分实际需要的剂量。对于每名患者，限定的剂量范围在两种活性成分之每种的治疗合理间隔内限定。由此，要施用的剂量应当基本上在特定患者的此剂量范围内波动，而没有任何过度给药或给药不足。

因为必须对单独的患者调适并精确给药的主要是胰岛素的量，所以GLP-1激动剂的浓度范围要允许含有限定比率的至少一种胰岛素与至少一种GLP-1激动剂的依照本发明的药物组合物与相关的、协同量的GLP-1激动剂同时覆盖治疗范围的胰岛素剂量。该比率可以选择为使得每个期望的胰岛素剂量具有其相应的至少一种GLP-1激动剂剂量，其位于期望的范围，例如协同范围内。如上文较早列出的，第一、第二和在使用的情况中至少一种别的药物组合物的比率也可以选择为使得该比率从第一组合物增加到第二组合物，并且在使用的情况中到至少一种别的组合物。若组合物(例如，第一组合物)在期望的胰岛素剂量处的GLP-1激动剂剂量在GLP-1激动剂期望的剂量范围外(一般在之上)，则选择具有更大的至少一种胰岛素与至少一种GLP-1激动剂比率的下一组合物(例如，第二组合物)或别的组合物进行使用，其中在期望的胰岛素剂量的GLP-1激动剂的量位于期望的范围内。组合的第一、第二和在使用的情况中至少一种别的组合物的比率可以进一步选择为使得与至少一种GLP-1激动剂的期望剂量对应的胰岛素剂量范围彼此接壤(border)和/或彼此重叠。优选地，范围重叠。更特别地，重叠意味着有可能选择至少两种组合物，其在至少一种胰岛素的期望剂量时各自含有位于期望的剂量范围内的至少一种GLP-1激动剂的量。

例如，3种组合物足以将用于个别患者的至少一种胰岛素的剂量调节至选自15至80个单位的胰岛素的范围的水平及同时剂量给药具有范围为10至20μg内的量的GLP-1激动剂(参见图4)。

还有可能提供依照本发明的组合，其中将比率选择为使得对于每种期望的GLP-1激动剂剂量，存在着位于期望的范围内的至少一种胰岛素的相应剂量。第一、第二和在使用的情况中至少一种别的药物组合物的比率也可以选择为使得与至少一种胰岛素的期望剂量对应的GLP-1激动剂的剂量范围彼此接壤和/或彼此重叠。优选地，范围重叠。更特别地，重叠在此上下文中意味着有可能选择至少两种组合物，其在至少一种GLP-1激动剂的期望剂量时各自含有位于期望的剂量范围内的至少一种胰岛素的量。

优选地，依照本发明的组合含有不超过10种如上文所限定的药物组合物，更优选地，不超过5，不超过4，不超过3或2种药物组合物。

依照本发明的组合物可以含有在每种情况中相同或不同重量分数的至少一种GLP-1激动剂。例如，依照本发明的至少两种组合物可以含有基本上相同重量分数的至少一种GLP-1激动剂。

优选的是，第一、第二和在使用的情况中别的组合物含有基本上相同重量分数的至少一种GLP-1激动剂和不同重量分数的至少一种胰岛素。

然而，依照本发明的组合物还可以含有在每种情况中相同或不同重量分数的至少一种胰岛素。例如，依照本发明的至少两种组合物可以含有基本上相同重量分数的至少一种胰岛素。

特别优选的是，第一、第二和在使用的情况中别的组合物含有基本上相同重量分数的至少一种胰岛素和不同重量分数的至少一种GLP-1激动剂。

依照本发明的第一优选组合物包含：

依照本发明的第二优选组合物包含：

依照本发明的第三优选组合物包含：

依照本发明的第四优选组合物包含：

特别优选的是包含提及的第一、第二、第三和第四优选组合物中的至少2、3或4种的组合。

在本申请中，“约”意指组分可以存在于例如依照本发明的组合物和/或组合中的规定数值左右±10、±20、或±30的范围内；优选±10。

在依照本发明的组合物或组合包含超过一种胰岛素时，这些胰岛素彼此独立选择。

在依照本发明的组合物或组合包含超过一种GLP-1激动剂时，这些GLP-1激动剂彼此独立选择。

更特别地，依照本发明的组合作为药物提供。

另外，本发明提供了一种包含依照本发明的组合的试剂盒，所述组合包含至少一种，不超过四种依照本发明的组合物而且还有任选地依照本发明的试剂盒可以意图被医务人员或没有专业医学训练的人，更特别地被患者自身或帮助者诸如亲戚使用。在依照本发明的试剂盒中，在分开的包装中装配包含依照本发明的组合的单独药物组合物，并且因此患者能够选择对于目前的需要合适的组合物，并且施用与需要一致的量。例如，依照本发明的试剂盒包含含有依照本发明的至少一种组合物(任选地与的组合物组合)的一组注射器、玻璃安瓿、和/或笔形式的依照本发明的组合。

合适的包装是具有合适锁合(closure)的注射器或玻璃管，在需要时可以自其吸出个体治疗有效剂量。同样合适的是用于施用胰岛素的注射笔；此类笔包含容器(例如，筒)，其含有依照本发明的药物组合物。

更特别地，依照本发明的试剂盒是注射笔，其由两个分开的容器组成，在每种情况中在需要时可以自所述容器吸出个体治疗剂量。同样地，试剂盒是由两个容器组成的注射器，其中第二容器装备为贮库针(reservoir needle)。

在本发明中，优选地，试剂盒由第一配制剂和第二配制剂的组合组成，所述第一配制剂包含在水中的GLP-1激动剂、胰岛素、甘油、氯化锌、任选地间甲酚、L-甲硫氨酸，pH为4.5，所述第二配制剂优选地包含在水中的胰岛素、甘油、氯化锌、和间甲酚，pH为4.5。

优选地，第一配制剂可以具有下列组成：

优选地，第二配制剂可以具有下列组成：

本发明进一步提供了一种用依照本发明的组合物治疗患者的方法，包括对所述患者施用组合物。

本发明还进一步提供了一种用依照本发明的组合或用如本文中所描述的试剂盒治疗患者的方法。更特别地，此方法包括施用依照本发明的组合，该组合包含第一药物组合物和第二药物组合物和任选地至少一种别的药物组合物，它们各自包含至少一种胰岛素和至少一种GLP-1激动剂，并且包含相对于组合物的总重量的不同重量分数的至少一种胰岛素和/或至少一种GLP-1激动剂，所述方法包括：

(a)选择要施用的至少一种胰岛素的剂量，

(b)选择要施用的至少一种GLP-1激动剂的剂量，

(c)自第一、第二和在使用的情况中至少一种别的药物组合物选择组合物，其包含如下浓度的来自(a)和(b)的剂量，使得来自(a)和(b)的剂量存在于相同体积中，并

(d)确定并施用与来自(a)和(b)的剂量对应的量。

依照患者的个体要求确定依照步骤(a)和/或步骤(b)的剂量。

可以通过参照表格来实施依照本发明的治疗方法的步骤(c)。此种表格可以是依照依照本发明的组合、依照本发明的药物、或依照本发明的试剂盒的一部分。实施例2含有依照本发明的表的例子。

更特别地，依照本发明的组合物、依照本发明的组合、依照本发明的药物或/和依照本发明的试剂盒意图用于治疗糖尿病，更特别地用于治疗I型或II型糖尿病。其它可能的适应症是与糖尿病有关的症状。优选地，使用依照本发明的组合物来控制禁食、餐后、或/和吸收后血浆葡萄糖浓度，改善葡萄糖耐量，预防低血糖，预防胰腺β-细胞的功能损失，实现重量减轻，或/和阻止重量增加。

本发明进一步提供依照本发明的组合物、依照本发明的组合、或依照本发明的试剂盒在制造供治疗糖尿病，更特别地I型或II型，或/和与其有关的症状用的药物中的用途，如本文中所描述的。

本发明进一步提供了一种用于制造依照本发明的组合物、依照本发明的组合或/和依照本发明的试剂盒的方法，包括与胰岛素或/和其药学可接受盐、甲硫氨酸、和任选地至少一种药物可接受赋形剂一起配制GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐。

本发明进一步提供了一种用于制造依照本发明的组合物的方法，包括与甲硫氨酸和任选地至少一种药物可接受赋形剂一起配制GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐。

本发明进一步提供了依照本发明的组合物以及施用二甲双胍、甘精胰岛素、或AVE0010，更特别地在施用二甲双胍、甘精胰岛素、或AVE0010的添加疗法(add-on therapy)中的用途。

更特别地，组合物包含脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂(AVE0010)和/或其药理学可容许盐、甘精胰岛素和/或其药理学可容许盐。

特别优选的是优选组合物在不能用甘精胰岛素和/或AVE0010充分控制的II型糖尿病患者中的添加疗法。还涵盖的是比50岁年轻和/或具有至少30的体重指数的患者。

在本发明中，更特别地，添加疗法牵涉用依照本发明的组合物作为二甲双胍、AVE0010、和/或甘精胰岛素的补充剂治疗II型糖尿病。依照本发明的组合物可以在24小时的时间间隔(一天一次剂量)中添加。可以依靠不同施用路径来施用二甲双胍、甘精胰岛素、和AVE0010。二甲双胍可以口服施用，AVE0010和甘精胰岛素在每种情况中皮下施用。

用依照本发明的添加疗法治疗的患者可以具有范围为7％至10％的HbA1c值。优选地，他们的年龄范围为18至50岁。

更特别地，依照本发明的添加疗法中的用途可适用于不能仅用二甲双胍、AVE0010、或甘精胰岛素充分控制II型糖尿病的患者。该疗法在经由甘精胰岛素或AVE0010控制不足的情况中是优选的。

本发明进一步提供了依照本发明的组合物在指示应用甘精胰岛素和AVE0010时作为饮食补充剂以控制II型糖尿病患者中的血糖水平的用途。

更特别地，如下施用二甲双胍：至少1.0g/天，优选地至少1.5g/天，持续3个月。

本发明还涉及如下各项：

1.一种液体组合物，其包含GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐、胰岛素或/和其药理学可容许盐，和任选地至少一种药学可接受赋形剂，其中所述组合物包含甲硫氨酸。

2.如项1中的液体组合物，其中所述组合物包含药学可接受防腐剂或/和药学可接受等张剂。

3.如项1或2中的液体组合物，其中所述组合物包含间甲酚或/和甘油。

4.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述组合物具有范围为3.5至5的pH。

5.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述组合物包含范围为0.5mg/mL至20mg/mL的量，更特别地范围为1mg/mL至5mg/mL的量的甲硫氨酸。

6.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述组合物于+25℃的温度贮存6个月后展现出化学完整性。

7.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述组合物于+25℃的温度贮存6个月后展现出物理完整性。

8.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述GLP-1激动剂选自下组：GLP-1及其类似物和衍生物、Exendin-3及其类似物和衍生物、Exendin-4及其类似物和衍生物，其中优选地所述GLP-1激动剂选自下组：脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂和Exendin-4。

9.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述胰岛素选自下组：人胰岛素、其类似物、衍生物和代谢物。

10.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述胰岛素选自下组：Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素、Lys^B28Pro^B29人胰岛素、B28Asp人胰岛素、和B29Lys(ε-十四酰),脱B30人胰岛素。

11.如前述项中任一项的液体组合物，其中所述组合物具有下列组分：

(a)脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

(b)Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素，

(c)氯化锌，

(d)间甲酚(任选的)，

(e)L-甲硫氨酸，

(f)甘油，

(g)盐酸，若调节至约4.5的pH是需要的话，

(h)NaOH溶液，若调节至约4.5的pH是需要的话，和

(i)水。

12.如前述项中任一项的组合物，其中所述组合物是可注射组合物。

13.如前述项中任一项的组合物，其用于治疗糖尿病。

14.一种组合，其包含如项1至13中任一项中的第一药物组合物和如项1至13中任一项中的第二药物组合物，和任选地如项1至13中任一项中的至少一种别的药物组合物，每种包含至少一种胰岛素和至少一种GLP-1激动剂，并且以相对于所述组合物的总重量的不同重量分数含有所述至少一种胰岛素和/或所述至少一种GLP-1激动剂。

15.如项14中的组合，其中可以在所述第一药物组合物、所述第二药物组合物、和在使用的情况中所述至少一种别的药物组合物中以如下的方式选择所述至少一种胰岛素和所述至少一种GLP-1激动剂的重量分数，使得所述这些药物组合物含有基于所述重量分数的不同比率的胰岛素与GLP-1激动剂。

16.如项14或15中的组合，其中所述第一、第二和在使用的情况中别的组合物含有基本上相同重量分数的所述至少一种胰岛素和不同重量分数的所述至少一种GLP-1激动剂。

17.如项14或15中的组合，其中所述第一、第二和在使用的情况中别的组合物含有基本上相同重量分数的所述至少一种GLP-1激动剂和不同重量分数的所述至少一种胰岛素。

18.一种试剂盒，其包含如权利14至17中任一项的组合。

19.如项1至13中任一项的组合物、如项14至17中任一项的组合、或如项18中的试剂盒在制造供治疗糖尿病用的药物中的用途。

20.一种用于制造如项1至13中任一项的组合物、如项14至17中任一项的组合、或如项18中的试剂盒的方法，包括与胰岛素或/和其药学可接受盐、甲硫氨酸和任选地至少一种药学可接受赋形剂一起配制GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐。

21.一种用如项1至13中任一项的组合物、如项14至17中任一项的组合、或如项18中的试剂盒治疗患者的方法，包括对所述患者施用所述组合物。

22.如前述项1至18中任一项的组合物与二甲双胍、胰岛素、和/或GLP-1激动剂和/或其药理学可容许盐的施用一起使用的用途。

23.如项22中的用途，包括添加疗法，更特别地用胰岛素和/或GLP-1激动剂进行。

24.如项22和23中任一项的组合物的用途，其中将所述疗法应用于II型糖尿病不能用胰岛素和/或GLP-1激动剂充分控制的患者。

25.如项1至18中任一项的组合物在指示应用胰岛素或GLP-1激动剂时作为饮食补充剂以控制II型糖尿病患者中血糖水平的用途。

26.如项22和23中任一项的组合物的用途，其中经治疗的患者具有范围为7％至10％的HbA1c值。

27.如项22、23和24中任一项的组合物用于治疗II型糖尿病和/或肥胖的用途。

附图说明

本发明通过以下的图和实施例进一步阐明。

图1显示了相对于贮存开始，于不同温度贮存1个月后AVE0010中的氧化甲硫氨酸Met(ox)的含量。框显示了AVE0010参照配制剂No.1和2的数值。

图2显示了相对于贮存开始，于不同温度贮存1个月后没有Met(ox)的AVE0010的杂质含量。

框显示了AVE0010参照配制剂于25℃和于40℃的数值。

图3显示了相对于贮存开始，于不同温度贮存1个月后甘精胰岛素的杂质含量。窄框显示了甘精胰岛素参照配制剂于25℃和于40℃的数值。宽框标示具有最低AVE0010杂质分数的配制剂。

图4：“3支笔覆盖所有”概念。

具体实施方式

实施例1

1.研究目的

测试包含GLP-1激动剂(AVE0010)和胰岛素(甘精胰岛素,Lantus)的组合物的物理和化学稳定性。

2.使用的配制剂

对于测试的配制剂，以下列浓度/量使用物质：

在结合配制剂组分提及因数时(例如，1/2、1/4、2x、3x、5x，如在1/2乙酸盐、5x赖氨酸、2x Lantus、和3x Lantus中的)，根据所述因数，以减少或增加的浓度使用所涉及物质的浓度。

3.测试方法

3.1物理稳定性

3.1.1 THT测试

硫代黄素T(THT)特异性结合蛋白质原纤维，这导致THT荧光变化。THT不结合AVE0010或胰岛素。可以在存在THT的情况中以荧光变化测量原纤维形成的动力学。荧光升高对应于原纤维形成。曲线的形状容许得出关于配制剂形成原纤维的趋势的结论。

在Tecan Infinite 200荧光测量仪上实施荧光测量。为了分析原纤维形成动力学，使用Photomed FluoDia 770高温荧光微板读板仪。用Tecan Infinite 200荧光测量仪于23℃实施硫代黄素T荧光光谱。将胰岛素(900μl)与10μl硫代黄素T(在H₂O中的1mM)混合。然后，将混合物分配入来自Biozym的黑色V形96孔板(每孔100μl)中。以增益(gain)为100、积分时间(integration time)为200μs，和25次读数于室温以450nm激发后在470和600nm间(以1nm的增量)测量荧光发射。

在Photomed FluoDia 770高温荧光微板读板仪上测量硫代黄素T的结合动力学。该仪器基本上由用于激发的50W石英卤素灯、用于激发和发射的滤光盘(filter wheel)(其可以各含有多至4个滤镜组)和PMT检测仪组成。96孔板的加热板就温度而言允许非常高的精确性(好于±0.3℃)。

将硫代黄素T溶液(10μl)(在超纯水中的10.1mM)添加至1ml配制剂，并通过颠倒小管数次来温和混合。然后，将混合物分配入来自Biozym的黑色V形96孔板中(每孔100μl，每份样品8个孔)。用下列参数实施所有测量：

自8个平行测量测定荧光平均值。

3.2化学稳定性

在制备(t0)后或在于4℃、25℃(60％相对湿度)、和40℃(75％相对湿度)贮存1个月后对配制剂测试化学稳定性。使用100％峰面积方法在来自Water Systems的HPLC仪(型号：alliance)上实施测量。对于分离，使用0.1％TFA和乙腈梯度作为流动相和C18反相柱(Jupiter)作为固定相。对于分析，用乙酸锌溶液处理配制剂，这导致甘精胰岛素的沉淀。将沉淀物离心下来，并且仅分析上清液。

甘精胰岛素的杂质：使用100％峰面积方法用HPLC(Water Systems)测定杂质量。对于分离，使用具有NaCl和乙腈梯度的磷酸钠缓冲溶液(pH 2.5)作为流动相。使用C18反相柱(Supersher)作为固定相。

4.关于物理稳定性的实验数据的汇总

5.THT测试

甲硫氨酸对形成原纤维的趋势没有影响。配制剂具有与参照配制剂(No.2和4)一样的荧光数值。在低于约6000的数值的情况中，不存在形成原纤维的趋势。

在组合AVE0010、Lantus、和甲硫氨酸与具有或没有聚山梨酯20的乙酸盐缓冲液(pH 4)时，存在着更大的形成原纤维的趋势：

配制剂13和14的数值明确位于形成原纤维的趋势的阈值上方。

6.1汇总

聚山梨酯20和聚山梨酯80可以导致浊度，其在双折射测试中可检出。因此，这两种物质均可以导致AVE0010和胰岛素的配制剂的物理不稳定性。

甲硫氨酸的添加不导致物理不稳定性。

7.化学稳定性

7.1在时间点t0时的稳定性

包含甲硫氨酸(具有和没有乙酸钠)的配制剂具有最低的杂质量(总体上，约1.2至1.5％)。下列配制剂具有低杂质量：

8 Lantus配制剂，AVE0010，甲硫氨酸，pH 4

9 Lantus配制剂，AVE0010，1/2乙酸盐缓冲液，甲硫氨酸，pH 4

11 Lantus配制剂，AVE0010，聚山梨酯20，甲硫氨酸，pH 4

13 Lantus配制剂，AVE0010，1/2乙酸盐缓冲液，聚山梨酯20，甲硫氨酸，pH 4

14 Lantus配制剂，AVE0010，乙酸盐缓冲液，聚山梨酯20，甲硫氨酸，pH 4

25 Lantus配制剂，AVE0010，甲硫氨酸，pH 4.5

26 Lantus配制剂，AVE0010，1/2乙酸盐缓冲液，甲硫氨酸，pH 4.5

28 Lantus配制剂，AVE0010，聚山梨酯20，甲硫氨酸，pH 4.5

30 Lantus配制剂，AVE0010，1/2乙酸盐缓冲液，聚山梨酯20，甲硫氨酸，pH 4.5

31 Lantus配制剂，AVE0010，乙酸盐缓冲液，聚山梨酯20，甲硫氨酸，pH 4.5

不包含甲硫氨酸的配制剂显示更高的杂质分数。

聚山梨酯20对配制剂的化学稳定性没有负影响。

乙酸盐缓冲液在将其与甲硫氨酸和聚山梨酯20组合时对化学稳定性没有负影响。

在配制剂中存在赖氨酸时，杂质的总和更大。同样适用于包含聚山梨酯80、泊洛沙姆188、和苯扎氯铵的配制剂。

测定甘精胰岛素的杂质揭示了所有配制剂都具有相当的(comparable)杂质量(0.3至0.4％)。

7.2 1个月后的稳定性

7.2.1 AVE0010的杂质

分析配制剂中的氧化甲硫氨酸的含量。AVE0010的序列在第14位具有一个甲硫氨酸残基。甘精胰岛素的序列没有甲硫氨酸残基。因此，氧化甲硫氨酸的含量指示在甲硫氨酸残基处对AVE0010的氧化。图1中汇总了数据。总体上，数据显示了，在pH 4.5、没有甲硫氨酸的情况中，Met(ox)的分数比在pH 4.0时更高。在没有甲硫氨酸作为配制剂组分的情况中，在甘精胰岛素的含量增加或AVE0010的含量减少时，Met(ox)的分数最大。

一般地，于40℃/75％相对湿度贮存后测量Met(ox)的最大分数。在这里，Met(ox)-AVE0010的最小分数(<1％)将存在于配制剂8,9,11,13,14,25,26,28,30和31中。这些配制剂的数值在AVE0010参照配制剂No.1和2的数值范围(图1中的框)中。

图2中呈现了在1个月后没有Met(ox)的AVE0010的杂质。框显示了AVE0010参照配制剂于25℃和于40℃的数值。与AVE0010参照配制剂相比具有相同或更好的杂质数值的配制剂在框内或框下。这适用于配制剂24,25,26,28,29,30,31,33和34(40℃)。高于AVE0010参照配制剂杂质数值的杂质数值指示甘精胰岛素的杂质。一般地，具有pH 4.5的配制剂比在pH 4.0时具有更少的杂质。

在于40℃贮存1个月后，下列配制剂具有最低的Met(ox)含量，并同时具有最低的其它杂质含量(比较图1和2)。它们比AVE0010参照配制剂更好或与之相同：

25Lantus配制剂、AVE0010、甲硫氨酸，pH 4.5

26Lantus配制剂、AVE0010、1/2乙酸盐缓冲液、甲硫氨酸，pH 4.5

28Lantus配制剂、AVE0010、聚山梨酯20、甲硫氨酸，pH 4.5

30Lantus配制剂、AVE0010、1/2乙酸盐缓冲液、聚山梨酯20、甲硫氨酸，pH 4.5

这些配制剂也属于那些在时间点t0时具有最低的AVE0010杂质量的配制剂。所有配制剂都包含甲硫氨酸。聚山梨酯20对杂质没有负影响。

图3中呈现了甘精胰岛素的杂质。配制剂3和4是甘精胰岛素的参照配制剂。这些配制剂的数值以窄框标示。就AVE0010杂质而言鉴定为最好的配制剂的所有配制剂(宽框，更特别地配制剂25,26,28和30)就甘精胰岛素杂质而言比甘精胰岛素参照配制剂好(于40℃为约1.5至2.4％)。

因此，可以自此实验推出甲硫氨酸造成包含胰岛素(例如，Lantus)和GLP-1激动剂(例如，AVE0010)的组合物的贮存稳定性升高。甲硫氨酸的添加使得此组合物具有化学完整性。

8.结论

本文中所描述的数据导致下列结论：

●甲硫氨酸导致化学稳定性升高，并且对GLP-1激动剂，更特别是AVE0010，和胰岛素，更特别是Lantus的组合的配制剂的物理稳定性没有负影响。因此，甲硫氨酸作为这些组合物的组分是有利的。

●乙酸盐可以导致物理不稳定性。此不稳定性随乙酸盐浓度增加而更大。因此，GLP-1激动剂，更特别是AVE0010，和胰岛素，更特别是Lantus的组合的配制剂(其没有乙酸盐)与包含乙酸盐的相应组合物相比是有利的。

●聚山梨酯20对GLP-1激动剂，更特别是AVE0010，和胰岛素，更特别是Lantus的组合的配制剂的物理和化学稳定性没有负影响。通过组合较低浓度的乙酸盐(1/2乙酸盐)与聚山梨酯20，可以部分补偿乙酸盐的负效果。在无乙酸盐的组合物中，聚山梨酯20的添加没有导致任何优点。因此，应当制备没有聚山梨酯20的GLP-1激动剂，更特别是AVE0010，和胰岛素，更特别是Lantus的组合的配制剂。

●赖氨酸(在正常的和较高的浓度)、苯扎氯铵、聚山梨酯80、和泊洛沙姆188已经显示了在开始研究时(t0)的化学不稳定性。对于赖氨酸，这也适用于THT测试的结果。

实施例2

“3支笔覆盖所有”概念(图4)

●具有3种不同预定比例的3支预混合笔：

(a)混合物A：每mL 100U Lantus+66.66μg AVE0010

(b)混合物B：每mL 100U Lantus+40μg AVE0010

(c)混合物C：每mL 100U Lantus+25μg AVE0010

●使用3支预混合笔：图4中的例示性表出自每剂15至80U Lantus和10至20μgAVE0010的治疗性范围。对于特定的患者，要施用的Lantus剂量是设定或预定的。在左手栏中查找预定的剂量。在混合物A–混合物C栏中提及范围为10至20μg的相应AVE0010剂量时，将相应的混合物被选出，计量，并施用。范围是重叠的：例如，在需要26至30ULantus时，可以选择混合物A或混合物B(具有较高的AVE0010剂量)。相应地，这适用于混合物B和C。例如，如果确定胰岛素的剂量为50U，则要计量0.5ml混合物B或混合物C。此剂量含有20μg(混合物B)或12.5μg(混合物C)AVE0010。

●结论：假设实现了范围为10至15μg的可能的AVE0010效果和范围为15至22μg的治疗效果，服用15-80U的Lantus剂量的几乎所有患者在他们使用三支预混合笔(其含有三种不同Lantus:AVE0010比率(混合物A、B、或C))之一时可以同样接受范围为10至20μg的治疗剂量的AVE0010。由于Lantus与AVE0010的可能比率的较宽范围，可以将笔中的比率微调，使得至少一支笔中的每剂Lantus包括期望剂量的AVE0010。

Claims

2.如权利要求1中要求保护的液体组合物，其中所述组合物包含间甲酚或/和甘油。

3.如前述权利要求中任一项要求保护的液体组合物，其中所述GLP-1激动剂选自下组：GLP-1及其类似物和衍生物、Exendin-3及其类似物和衍生物、Exendin-4及其类似物和衍生物，其中优选地所述GLP-1激动剂选自下组：脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂和Exendin-4。

4.如前述权利要求中任一项要求保护的液体组合物，其中所述胰岛素选自下组：Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素、Lys^B28Pro^B29人胰岛素、B28Asp人胰岛素、和B29Lys(ε-十四酰),脱B30人胰岛素。

5.如前述权利要求中任一项要求保护的液体组合物，其中所述组合物具有下列组分：

(a)脱Pro³⁶Exendin-4(1-39)-Lys₆-NH₂，

(b)Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)人胰岛素，

(c)氯化锌，

(d)间甲酚(任选的)，

(e)L-甲硫氨酸，

(f)甘油，

(g)盐酸，若调节至约4.5的pH是需要的话，

(h)NaOH溶液，若调节至约4.5的pH是需要的话，和

(i)水。

6.一种组合，其包含如权利要求1至5中任一项中要求保护的第一药物组合物和如权利要求1至5中任一项中要求保护的第二药物组合物，和任选地如权利要求1至5中任一项中要求保护的至少一种别的药物组合物，每种包含至少一种胰岛素和至少一种GLP-1激动剂，并且以相对于所述组合物的总重量的不同重量分数含有所述至少一种胰岛素和/或所述至少一种GLP-1激动剂。

7.一种试剂盒，其包含如权利6要求保护的组合。

8.如权利要求1至5中任一项要求保护的组合物、如权利要求6要求保护的组合、或如权利要求7中要求保护的试剂盒在制造供治疗糖尿病用的药物中的用途。

9.一种用于制造如权利要求1至5中任一项要求保护的组合物、如权利要求6要求保护的组合、或如权利要求7中要求保护的试剂盒的方法，包括与胰岛素或/和其药学可接受盐、甲硫氨酸和任选地至少一种药学可接受赋形剂一起配制GLP-1激动剂或/和其药理学可容许盐。

10.一种用如权利要求1至5中任一项要求保护的组合物、如权利要求6要求保护的组合、或如权利要求7中要求保护的试剂盒治疗患者的方法，包括对所述患者施用所述组合物。