JP2001525371A - Ｇｌｐ−１製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ａ) 界面活性剤に結合されたＧＬＰ-１ペプチドの経口吸収、及び、ｂ) これらのペプチドを含む製剤の長期の貯蔵に備えた方法、並びに、製剤が示される。例えば、ＧＬＰ-１／ＤＳＳ複合体が非経口に代えて経口投与され、これは、糖尿病患者または他のＧＬＰ-１により処置される症状の患者にとって、より便利で、そして、これにより患者に応じるのが楽になる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の背景 改善された貯蔵特性を有する製剤が示される。これらの製剤は、界面活性剤に
結合するＧＬＰ-１ペプチドの経口吸収に特に適する。

【０００２】 例えば、注射ではなく経口摂取された場合にはペプチドが破壊されるため、治
療用ペプチドの投与は、より好ましい経口投与よりも非経口経路にしばしば制限
されている。多くのペプチドは臨床的に有効であることが示されており、もし投
与が簡単で受容者に無難なものであれば、より広範囲の使用が可能であるので、
これは残念なことである。例えば、II型、場合によってはＩ型糖尿病を患うヒト
患者においてもＧＬＰ-１様分子は、抗-糖尿病活性を有する。ＧＬＰ-１による 処置では、高いグルコースレベルでのみ活性が誘導され(インシュリン分泌及び 生合成が増加され、グルカゴン分泌が低減され、胃部を空にするのを遅らせる) 、そのため、インシュリンまたはスルホニル尿素よりも潜在的にずっと安全な治
療が提供される。食後、及び、患者のグルコースレベルは、適切なＧＬＰ-１治 療により正常なレベルに近づけることができる。また、II型患者における脾臓β
細胞の機能を保護、及び、さらには回復させる能力をＧＬＰ-１様分子が有する ことを示唆する報告がある。他方、有効な処置とするためには、各食事の際、ま
たは、その直前にＧＬＰ-１製剤を注射により投与することが必要かも知れない 。これは、インシュリンの投与に用いられる治療方式法である。このような治療
方式法のため、長期間にわたって冷蔵または環境温度で貯蔵された、複数回の使
用用の溶液製剤が好ましい。溶液の劣化及び汚染を避けるため、このような製剤
は十分な抗菌性を有する保存剤を含まねばならない。残念なことに、例えばペプ
チドである治療剤に、保存剤は有害な作用を及ぼす傾向がある。例えば、ＧＬＰ
-１分子の溶液は、フェノール等の保存剤の存在下で構造的変化を受ける。中性 付近のｐＨのＧＬＰ-１分子の水溶液は、保存剤であるメタ-クレゾール(ｍ-クレ
ゾール)の存在下で濁り、沈澱物が生成する。従って、溶液の清澄さ、化合物の 完全さ及び生物学的活性を保持しつつ、冷蔵(約4℃、若しくは、より低い)及び ／または環境温度での貯蔵を可能にする、ＧＬＰ-１分子等のペプチドの製剤の ための添加剤が必要とされる。

【０００３】発明の概要 (ａ)高い親和性で界面活性剤に結合するＧＬＰ-１ペプチドの経口吸収用の、(
ｂ)これらのペプチドを含む製剤の長期貯蔵のための製剤が、本発明により提供 される。

【０００４】 本発明の1態様は、ＧＬＰ-１ペプチド及び少量の界面活性剤を含む製剤である
。好ましい界面活性剤には、ＤＳＳ(ドクセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号[57
7-11-7])及び関連物質；ドクセートカルシウム[ＣＡＳ番号 128-49-4]、並びに 、ドクセートカリウム[ＣＡＳ番号 7491-09-0]が含まれる。他の界面活性剤には
、ＳＤＳ(ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム)、カプリル酸
ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール
酸ナトリウム、及び、グリココール酸ナトリウムが含まれる。適当な薬剤にはさ
らに、両性イオン界面活性剤(例えば、Ｎ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニオ-
１-プロパンスルホネート、３-コールアミド-１-プロピルジメチルアンモニオ- １-プロパン-スルホン酸塩）、カチオン性界面活性剤(セチルピリジニウムクロ リド)、非イオン界面活性剤(Ｔｒｉｔｏｎ(登録商標)Ｘ-１００、ドデシルβ-Ｄ
-グルコピラノシド)、または、ポリマー性界面活性剤(Ｔｗｅｅｎ(登録商標)-４
０、Ｔｗｅｅｎ(登録商標)-８０、Ｂｒｉｊ-３５(登録商標))が含まれる。

【０００５】 本発明の製剤に用いられるペプチドには、ＧＬＰ-１またはＧＬＰ-１様分子が
含まれる。好ましいＧＬＰ-１様分子は、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１である。その他の適
当なＧＬＰ-１様分子には、2つの天然のＧＬＰ-１形体である位置8のアナログ、
及び、Ｃ-末端に酸を含む分子が含まれる。

【０００６】 該製剤は、ｐＨ約6.5〜9.0で、より好ましくはｐＨ約7〜8で安定である。製剤
は保存剤を含む。好ましい保存剤には、ｍ-クレゾール、フェノール、メチルパ ラベン及び、ベンジルアルコールが含まれる。4℃及び環境温度での長期の保存 の間、製剤は安定である。製剤は場合により、例えばグリセリンまたは塩化ナト
リウムである等張剤を含む。

【０００７】 本発明の別の態様は、糖尿病またはＧＬＰ-１様分子の投与が必要とされる他 の症状の患者を処置するための方法である。本発明の製剤を得、患者に薬理学的
に有効量の製剤を投与することを本発明は含む。非経口の経路もまた適当である
が、製剤を投与するため、好ましくは経口経路が用いられる。

【０００８】発明の詳細な説明 (ａ)高い親和性で界面活性剤に結合するＧＬＰ-１ペプチドの経口吸収、及び 、(ｂ)これらのペプチドを含む保存された製剤の長期貯蔵が、本発明の方法、及
び、製剤により提供される。本発明の1態様では、ＧＬＰ-１を非経口に代えて経
口投与するために、ＧＬＰ-１／ＤＳＳ複合体が用いられる。発明のこの一態様 により、糖尿病患者及びＧＬＰ-１様分子による処置が必要とされる他の症状の 患者に、より便利で従いやすいものが提供される。この特性は、ＧＬＰ-１処置 をより有用で、広範囲で有効にする。保存剤の使用により、微生物による汚染が
避けられ、それにより1つの溶液を複数回使用することが可能となる。

【０００９】 ドクセートナトリウム(ＤＳＳ)を含む製剤中のＧＬＰ-１ペプチドの相当な部 分が経口で吸収されるであろうことを示す幾つかの重要な観測結果がある： ａ．ＤＳＳはＧＬＰ-１に高い親和性で結合する； ｂ．ＤＳＳの結合は、ＧＬＰ-１の二次構造を変える； この変化した構造は
、Milstein(1996年)により記載された、膜を介した運搬が可能な形体に対応する
かも知れない。ＤＳＳは、いわゆる担体分子として機能しているようである。 ｃ．製剤の身体(皮下)への投与後、ＧＬＰ-１ペプチドは完全な生物学的活 性を示す；これは、製剤中のＧＬＰ-１が受容体結合能を保持しているか、或い は、製剤中のＧＬＰ-１-ＤＳＳ複合体が分解し、α-へリックス構造の天然ＧＬ Ｐ-１を再形成し得ることを示唆する；ＣＤ試験により、ＧＬＰ-１-ＤＳＳ混合 物の2日にわたる透析により、ＧＬＰ-１が元のα-へリックス構造に戻らなかっ たことが示された。 ｄ.ＤＳＳは、緩下剤としての使用が人体で既に立証されているので、大容 量のＤＳＳを安全に経口投与することができる；経口投与されたＤＳＳは全身で
吸収される。

【００１０】 非常に低いレベル(ペプチドに対してモルベースで2：1)のアニオン性界面活性
剤ドクセートナトリウムの添加はまた、等張で、中性付近のｐＨ(ｐＨ7.8)であ り、さらに適当な保存剤(ｍ-クレゾール)を含む製剤中のＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-
３７)ＯＨの溶液安定性を劇的に向上させた。この製剤は、世界中の抗微生物-滅
菌基準に適合する、改良された製品を提供する。約2℃〜約37℃、より好ましく は約4℃〜約25℃に渡る広範囲での貯蔵条件内において製剤の安定性が改善され ている。

【００１１】 1態様として、長期貯蔵に適したＧＬＰ-１アナログの1回または複数回使用で きる、経口使用できる製剤を調製することをこの製剤は可能にする。さらに、Ｄ
ＳＳによりＧＬＰ-１のが可溶性ミセルまたは集合状態で存在することを容易に するので、この製剤により、皮下投与された後の改善され、延長された作用時間
が提供される。

【００１２】 アニオン性界面活性剤であるドクセートナトリウム(ＤＳＳ)は、特にＶａｌ⁸-
ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨである、ＧＬＰ-１化合物に対して非常に高い親和性を 有しており、このペプチドに結合するとＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１の二次構造が大部分 α-ヘリックスであった状態から、大部分βシートの状態に変換される。ＤＳＳ 分子(群)が結合されたＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１のやや大きい形体が、サイズ排除クロ マトグラフィー(ＳＥＣ)で観察され、二次構造の変化が円二色性実験(ＣＤ)で示
された。

【００１３】 イヌに皮下注射したＤＳＳ及びＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１を含む製剤は、向インシュ リン性活性の効能が、リン酸緩衝溶液中のＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１(ＰＢＳ製剤)に匹 敵することが示された。

【００１４】 界面活性剤の好ましい態様には、ＤＳＳ(ドクセートナトリウム、ＣＡＳ登録 番号[577-11-7]及び関連物質；ドクセートカルシウム[ＣＡＳ番号 128-49-4]、 ドクセートカリウム[ＣＡＳ番号 7491-09-0]が含まれる。

【００１５】 ＳＤＳ(ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム)、カプリル酸
ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール
酸ナトリウム、及び、グリココール酸ナトリウムを含むその他の活性剤もまた好
ましい。

【００１６】 その他の適当な界面活性剤には、両性イオン界面活性剤(例えば、Ｎ-アルキル
-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホネート、３-コールアミド-１-プ
ロピルジメチルアンモニオ-１-プロパン-スルホン酸塩）、カチオン性界面活性 剤(セチルピリジニウムクロリド)、非イオン界面活性剤(Ｔｒｉｔｏｎ(登録商標
)Ｘ-１００、ドデシルβ-Ｄ-グルコピラノシド)、または、ポリマー性界面活性 剤(Ｔｗｅｅｎ(登録商標)-４０、Ｔｗｅｅｎ(登録商標)-８０、Ｂｒｉｊ-３５( 登録商標))が含まれる。

【００１７】 好ましい保存剤には、ｍ-クレゾール及びフェノールが含まれる。また、メチ ルパラベン、ベンジルアルコール及びその他の類似の保存剤も好ましい。

【００１８】 好ましい等張剤はグリセリンであり、また、その他のあらゆる等張剤が好まし
い(例えば、塩化ナトリウム)。

【００１９】 賦形剤単独では、本発明の特徴である溶液安定性の劇的な向上は得られないで
あろうが、場合により、グリセリン、ｍ-クレゾール、フェノール、メチルパラ ベン等の広範囲にわたる賦形剤が製剤中に含まれ得る。これらの賦形剤の幾つか
は保存剤であり、また幾つかは等張剤である。

【００２０】 ＧＬＰ-１様分子には、界面活性剤としっかりと (即ち、高い親和性で) 結合 する、ＧＬＰ-１アナログ及び誘導体、ＧＬＰ-１分子、天然及びＧＬＰ-１アナ ログが含まれる。好ましいＧＬＰ-１分子は、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１である。

【００２１】 天然ＧＬＰ-１(７-３６)ＮＨ2及びＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨ、及び、その他の ＧＬＰ-１アナログ等のＧＬＰ-１分子もまた、本発明の実施に適する。位置8ア ナログ及びＣ-末端酸を含むアナログもまた好ましい。高い親和性で界面活性剤 と結合するのであれば、その他のアナログもまた全て好ましい。

【００２２】 「ＧＬＰ-１」とは、ＧＬＰ-１(７-３７)を意味する。当分野の慣習により、 ＧＬＰ-１(７-３７)のアミノ末端は番号7、そしてカルボキシ末端は番号37を割 り当てられている。ＧＬＰ-１(７-３７)のアミノ酸配列は当分野において周知で
あるが、読者の便宜のため、配列番号１として示す。

【００２３】 「ＧＬＰ-１アナログ」は、ＧＬＰ-１と比べて1またはそれより多いアミノ酸 の置換、欠失、反転(inversion)または付加を有する分子と定義される。当分野 において周知のＧＬＰ-１アナログには、例えば、ＧＬＰ-１(７-３４)、ＧＬＰ-
１(７-３５)、ＧＬＰ-１(７-３６)、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｇｌｎ⁹-Ｇ ＬＰ-１(７-３７)、Ｄ-Ｇｌｎ⁹-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｔｈｒ¹⁶-Ｌｙｓ¹⁸-ＧＬ Ｐ-１(７-３７)、及び、Ｌｙｓ¹⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)が含まれる。

【００２４】 「ＧＬＰ-１誘導体」は、ＧＬＰ-１またはＧＬＰ-１アナログのアミノ酸配列 を有するが、さらに付加的に1、若しくは、それ以上のアミノ酸側鎖基、α炭素 原子、末端アミノ基、または、末端カルボキシル酸基が化学的に改変された分子
として定義される。化学的改変には、これらに限定されるわけではないが、化学
的部分の付加、新しい結合の形成、及び、化学的部分の除去が含まれる。アミノ
酸側鎖基での改変には、これらに限定されるわけではないが、リジンε-アミノ 基のアシル化、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンのＮ-アルキル化、グルタ ミン酸またはアスパラギン酸のカルボキシル酸基のアルキル化、及び、グルタミ
ンまたはアスパラギンの脱アミド化が含まれる。末端アミノの改変には、これら
に限定されるわけではないが、デス-アミノ、Ｎ-低級アルキル、Ｎ-ジ-低級アル
キル、及び、Ｎ-アシル改変が含まれる。末端カルボキシル基の改変には、これ らに限定されるわけではないが、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミ
ド、及び、低級アルキルエステル改変が含まれる。低級アルキルとは、Ｃ(₁)〜 Ｃ(₄)アルキルである。さらに、1若しくはそれ以上の側鎖、または、末端基を当
業者に公知の保護基によって保護し得る。アミノ酸のα炭素は、モノ-またはジ-
メチル化し得る。

【００２５】 米国特許第5,120,712号に特許請求される分子である、ＧＬＰ-１(７-３７)Ｏ Ｈの本発明における使用は特に好ましい。該特許は本明細書の一部を構成する。
このような分子は、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチド、並びに、該ペ
プチドの医薬的に許容され得る酸付加塩、該ペプチドの医薬的に許容され得るカ
ルボキシレート塩、該ペプチドの医薬的に許容され得る低級アルキルエステル、
並びに、アミド、低級アルキルアミド及び低ジアルキルアミドからなる群より選
択される該ペプチドの医薬的に許容され得るアミドからなる群より選択される該
ペプチドの誘導体からなる群より選択される。

【００２６】 本発明における使用が好ましいＧＬＰ-１アナログ及び誘導体の群は、米国特 許第5,545,618号に特許請求される種々のＧＬＰ-１分子からなる。該特許は本明
細書の一部を構成する。

【００２７】 本発明における使用が好ましいＧＬＰ-１アナログ及び誘導体の群は、式： Ｒ₁−配列番号２−Ｒ₂ (式中、Ｒ₁は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-ア
ミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、α-フルオロメ
チル-ヒスチジン、及び、α-メチル-ヒスチジンからなる群より選択され、そし て、Ｒ₂がＮＨ₂及びＧｌｙ-ＯＨからなる群より選択される。) の分子、及びその医薬的に許容され得る塩からなる。

【００２８】 多数のこのようなＧＬＰ-１アナログ及び誘導体が開示され、例えば： ＧＬＰ-１(７-３６)ＮＨ₂、Ｇｌｙ⁸-ＧＬＰ-１(７-３６)ＮＨ₂、Ｇｌｎ⁹-ＧＬＰ
-１(７-３７)、Ｄ-Ｇｌｎ⁹-ＧＬＰ-１(７-３７)、アセチル-Ｌｙｓ⁹-ＧＬＰ-１(
７-３７)、Ｔｈｒ⁹-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｄ-Ｔｈｒ⁹-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａ ｓｎ⁹-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｄ-Ａｓｎ⁹-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｓｅｒ²²-Ａｒｇ ²³ -Ａｒｇ²⁴-Ｇｌｎ²⁶-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｔｈｒ¹⁶-Ｌｙｓ¹⁸-ＧＬＰ-１(７-
３７)、Ｌｙｓ¹⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａｒｇ²³-ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａｒｇ^{2 4} -ＧＬＰ-１(７-３７)等を含む(例えば、ＷＯ91/11457号参照)。

【００２９】 本発明での使用が好ましいその他の活性化合物群は、ＷＯ91/11457号に開示さ
れており、以下の(ａ)〜(ｅ)からなる群から選択される、少なくとも１つの改変
を有するＧＬＰ−１(７-３４)、ＧＬＰ-１(７-３５)、ＧＬＰ-１(７-３６)、ま たは、ＧＬＰ-１(７-３７)、またはそれらのアミド形体、及び、それらの医薬的
に許容され得る塩より本質的になる。 (ａ)位置26、及び／または、位置34のリジンの代りに、グリシン、セリン、
システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バ
リン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン若
しくはＤ-リジンの少なくとも1つが置換；位置36のアルギニンの代りに、グリシ
ン、セリン、システイン,スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、 アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、
リジン、または、Ｄ-アルギニンが置換； (ｂ)位置31のトリプトファンの代りに、酸化耐性アミノ酸が置換； (ｃ)以下の置換の少なくとも1つを有する：位置16のバリンの代りにチロシ ン；位置18のセリンの代りにリジン；位置21のグルタミン酸の代りにアスパラギ
ン酸；位置22のグリシンの代りにセリン；位置23のグルタミンの代りにアルギニ
ン；位置24のアラニンの代りにアルギニン；及び、位置26のリジンの変わりにグ
ルタミン；並びに、 (ｄ)以下の置換の少なくとも1つを有する：位置8のアラニンの代りにグリシ
ン、セリン、またはシステイン；位置9のグルタミン酸の代りにアスパラギン酸 、グリシン、セリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チ
ロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはフェ
ニルアラニン；位置10のグリシンの代りにセリン、システイン、スレオニン、ア
スパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシ
ン、メチオニン、またはフェニルアラニン；そして、位置15のアスパラギン酸の
代りにグルタミン酸；並びに、 (ｅ)以下の置換の少なくとも1つを有する：位置7のヒスチジンの代りにグリ
シン、セリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン
、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはフェニルア
ラニン、または、ヒスチジンのＤ-、若しくは、Ｎ-アシル化若しくはアルキル化
形体の 置換が(ａ)、(ｂ)、(ｄ)及び(ｅ)の場合、置換されたアミノ酸は場合によりＤ- 体であり得、そして、位置7におけるアミノ酸置換は場合によりＮ-アシル化また
はＮ-アルキル化形体で有り得る。

【００３０】 酵素ジペプチジル-ペプチダーゼＩＶ(ＤＰＰ ＩＶ)が、投与されたＧＬＰ-１ のイン・ビボで観察される迅速な不活性化の原因かも知れない(Mentleinら、1993
年)ので、ＤＰＰ ＩＶの活性から保護されたＧＬＰ-１アナログ及び誘導体の投 与は好ましく、そして、Ｇｌｙ⁸-ＧＬＰ-１(７-３６）、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-
３７)ＯＨ、α-メチル-Ａｌａ⁸-ＧＬＰ-１(７-３６)ＮＨ₂、及び、Ｇｌｙ⁸-Ｇｌ
ｎ²¹-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨ、または、それらの医薬的許容され得る塩の使用 はより好ましい。

【００３１】 本発明での使用に好ましい他の分子は、米国特許第5,512,549号に特許請求さ れる化合物を含む。該特許は本明細書の一部を構成する。この群は、式： Ｒ₁−配列番号３−Ｒ₂ (式中、Ｒ₁は、４-イミダゾプロピオニル、４-イミダゾアセチル、または４-イ ミダゾ-α,α-ジメチル-アセチルからなる群より選択され、そして、Ｒ₂がＧｌ ｙ-ＯＨまたはＮＨ₂からなる群より選択される。さらに、配列番号３中の位置27
のＬｙｓは、Ｃ₆〜Ｃ₁₀の直鎖状アシルからなる群より選択されるアシル基であ ってもよく、または、何もなくてもよい。) 、及び、その医薬的に許容され得る塩によって定義される。

【００３２】 本発明での使用により好ましい配列番号３の化合物は、ＸａａがＡｒｇであり
、そして位置27のＬｙｓがＣ₆〜Ｃ₁₀の直鎖状のアシルであるものである。

【００３３】 本発明での使用が特に好ましい配列番号３の化合物は、ＸａａがＡｒｇであり
、位置27のＬｙｓがＣ₆〜Ｃ₁₀の直鎖状のアシルであり、そしてＲ₂がＧｌｙ-Ｏ Ｈであるものである。

【００３４】 本発明での使用がさらにより好ましい配列番号３の化合物は、ＸａａがＡｒｇ
であり、位置27のＬｙｓがＣ₆〜Ｃ₁₀の直鎖状のアシルであり、Ｒ₂がＧｌｙ-Ｏ Ｈであり、そして、Ｒ₁が４-イミダゾプロピニルであるものである。

【００３５】 本発明での使用が最も好ましい配列番号３の化合物は、ＸａａがＡｒｇであり
、位置27のＬｙｓがＣ₈の直鎖状のアシルであり、Ｒ₂がＧｌｙ-ＯＨであり、そ して、Ｒ₁が４-イミダゾプロピニルであるものである。

【００３６】 ＧＬＰ-１(７-３６)アミドである配列番号４、またはその医薬的に許容され得
る塩の、本発明における使用もまた非常に好ましい。Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３ ７)ＯＨである配列番号５、またはその医薬的に許容され得る塩の、本発明にお ける使用は最も好ましい。

【００３７】 ＤＳＳに結合する他の非-ＧＬＰ-１関連ペプチドも、本発明の方法及び製剤に
より経口吸収可能になし得る。これらのペプチドが、本明細書中に記載の製剤の
候補となるかどうか確認するために、それらが高い親和性で界面活性剤に結合し
、結合により二次構造が明らかな変異を受けるかを確認することは有用である。
本発明の試験に適当なのは、他のＤＳＳ様分子(ＳＤＳのようなアニオン性界面 活性剤)；例えば0.1：1〜20：1または50：１の広い範囲にわたるＤＳＳ：ＧＬＰ
-１比；広い範囲の製剤条件(ｐＨ、他の非活性賦形剤、グリセリン、アルコール
、ポリマー性添加剤、コーティング等)；錠剤、液剤またはカプセル形体；等で ある(Remingtonの『Pharmaceutical』、1980年)。

【００３８】 実施例 以下の実施例は例示のためのものであり、本発明の範囲を限定するものではな
い。

【００３９】実施例１： Ｖａｌ8-ＧＬＰ-1(７-３７)ＯＨとＤＳＳとの保存製剤 Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨを1ｍｇ/ｍｌ、16ｍｇ/ｍｌのグリセリン、 及び、10ｍＭのリン酸三ナトリウムを含む水溶液中に溶解することにより、本発
明の製剤を製造した。1Ｎ ＨＣｌを用いて約ｐＨ8.1に溶液を調整した。

【００４０】 保存剤ｍ-クレゾールを純粋エタノール中に100ｍｇ/ｍｌの濃度で製造した。

【００４１】 ホットプレート上で穏やかに温めることにより、ドクセートナトリウム(ＤＳ Ｓ)を水中に20ｍｇ/ｍｌの濃度で製造した。

【００４２】 3ｍｌガラスバイアル中のＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨの各500μＬ試料に
、0、3.3、6.6または16.5μＬのＤＳＳ溶液に続いて、15.8μＬの保存剤ｍ-クレ
ゾール溶液を添加した。手で掻き混ぜることにより、穏やかにバイアル中の成分
を混合した後、各清澄な溶液のｐＨをｐＨ7.8に調整した。4℃、環境温度、及び
37℃でそれぞれ同じ内容の試料をインキュベートした。環境温度では4時間以内 に、0または3.3μＬのＤＳＳ溶液を含む試料がペプチドの変性のために濁った。

【００４３】 37℃における16時間のインキュベーション後、全ての型の試料は、清澄であっ
た。その後、溶液を4℃でインキュベートした。また同じく、0及び3.3μＬのＤ ＳＳ溶液を含む溶液が濁り、濁ったままであった。

【００４４】 それぞれ、ＤＳＳのＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨに対する比が2：1及び10
：1に対応する、ＤＳＳの溶液を6.6μＬまたは16.5μＬ含む溶液は、4℃で少な くとも6週間清澄であった。この時点でのＨＰＬＣ分析により、それぞれＶａｌ⁸ -ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨの純度は、98.3％及び97.2％であることが示された。

【００４５】実施例２： Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨとＤＤＳとの保存製剤 16ｍｇ/ｍｌのグリセリンおよび10ｍＭのリン酸三ナトリウムを含む水性溶液 中に、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨを約1.0ｍｇ/ｍｌで溶解することにより
本発明の製剤を製造した。５Ｎ ＨＣｌを用いて溶液を約ｐＨ8.0に調整した。そ
の後、溶液を0.2μ及び0.02μのフィルターで濾過した。ペプチド濃度を280ｎｍ
のでの紫外線(ＵＶ)分析により定量した。

【００４６】 純粋エタノール中の100ｍｇ/ｍｌ溶液から乾燥した1.62ｍｇの固体ＤＳＳに、
ＤＳＳのＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１に対するモル比が2：1となるよう、6.5ｍｌのＶａｌ ⁸ -ＧＬＰ-１溶液を添加した。環境温度で15分間、穏やかに攪拌した後、純粋エ タノール中の100ｍｇ/ｍｌより乾燥した20.5ｍｇのｍ-クレゾールに、ｍ-クレゾ
ール濃度が約3.15ｍｇ/ｍｌとなるように溶液を添加した。環境温度で15分間穏 やかに攪拌した後、溶液を約ｐＨ7.7に調整し、0.2μのフィルターに通した。こ
の製剤の一部を4℃及び環境温度で貯蔵した。

【００４７】 18週間後、4℃及び環境温度に維持された製剤を試験した。どちらの溶液も清 澄であった。この時点で、ＨＰＬＣ分析により、4℃及び環境温度での試料のＶ ａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨの純度がそれぞれ、98.3％及び90.8％であること
が示された。

【００４８】実施例３： 製剤のイン・ビボにおける効果 実施例２の製剤の一部を、高められたグリセミンレベル(200ｍｇ/ｄｌ)にされ
たビーグル犬に皮下注射した。各動物に3ナノモル/ｋｇのＶａｌ⁸-ＧＮＰ-１を 注射した。高血糖を維持するために必要なグルコース注入率を、注射後2.5時間 測定し、ビヒクルコントロール溶液の注射と比較した。

【００４９】 ビヒクルコントロールとの比較で、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１製剤の注射により、注 射後2時間にわたってより高いグルコース注入値(innfusion)が得られ、これらの
条件下でペプチドの適切な生物学的活性が維持されていることが示された。

【００５０】実施例４： 他の界面活性剤とのＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)の保存製剤 16ｍｇ/ｍｌグリセリン及び10ｍＭリン酸三ナトリウムを含む水溶液中に、１ ｍｇ/ｍｌでＶａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨを溶解することによって、本発明 の製剤を製造した。2Ｎ ＨＣｌを用いて約ｐＨ8.0に溶液を調整した。

【００５１】 保存剤ｍ-クレゾールを純粋エタノール中に100ｍｇ/ｍｌの濃度で製造した。

【００５２】 本明細書中に記載の種々の製剤賦形剤を、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１(７-３７)ＯＨ溶
液の3ｍｌガラスバイアル中の500μＬ試料に添加した。環境温度で約45分間攪拌
した後、純粋エタノール中の100ｍｇ/ｍｌ ｍ-クレゾール溶液を15.8μｌ添加し
、約3ｍｇ/ｍｌのｍ-クレゾール濃度とした。試験溶液の清澄度を、環境温度で 約3時間観察した後、4℃で一晩観察した。

【００５３】 いかなる添加剤も含まないと、Ｖａｌ⁸-ＧＬＰ-１溶液は、環境温度及び4℃の
両方で濁る。以下の界面活性剤の添加により溶液の清澄さは環境温度では保護さ
れたが、4℃では保護されなかった：10μｌのＴｗｅｅｎ-４０、10μｌのＴｗｅ
ｅｎ-８０。これは、これらの界面活性剤が、製剤安定性を向上させたためであ る。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｋ 37/28 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA12 BB01 CC11 CC21 DD03 DD05 DD08 DD09 DD14 DD19 DD22 DD23D DD26 DD37R DD38D DD41 DD55 DD69 DD70 FF14 FF36 FF39 FF68 4C084 AA02 AA03 BA01 BA19 DB35 MA17 MA52 NA03 NA10 ZA362 ZA702 ZC352

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 界面活性剤、及び、ＧＬＰ-１様ペプチドを含む製剤。
2. 【請求項２】 界面活性剤が、ＤＳＳ(ドクセートナトリウム、ＣＡＳ登録 番号[577-11-7])及び関連物質；ドクセートカルシウム[ＣＡＳ番号 128-49-4]、
   及びドクセートカリウム[ＣＡＳ番号 7491-09-0]からなる群より選択される、請
   求項１に記載の製剤。
3. 【請求項３】 界面活性剤が、ＳＤＳ(ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウ リル硫酸ナトリウム)、カプリル酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシ コール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、及び、グリココール酸ナトリ
   ウムからなる群より選択される、請求項１に記載の製剤。
4. 【請求項４】 界面活性剤が、両性イオン界面活性剤(例えば、Ｎ-アルキル
   -Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホネート、３-コールアミド-１-プ
   ロピルジメチルアンモニオ-１-プロパン-スルホン酸塩）、カチオン性界面活性 剤(セチルピリジニウムクロリド)、非イオン界面活性剤(Ｔｒｉｔｏｎ(登録商標
   )Ｘ-１００、ドデシル β-Ｄ-グルコピラノシド)、または、ポリマー性界面活性
   剤(Ｔｗｅｅｎ(登録商標)-４０、Ｔｗｅｅｎ(登録商標)-８０、若しくは、Ｂｒ ｉｊ-３５(登録商標))からなる群より選択される、請求項１に記載の製剤。
5. 【請求項５】 ＧＬＰ-１様分子が、 配列番号１； 配列番号４； 配列番号５； 式：Ｒ₁−配列番号２−Ｒ₂のペプチド (式中、Ｒ₁は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチ ジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、α
   -フルオロメチル-ヒスチジン、及び、α-メチル-ヒスチジンからなる群より選択
   され、そして、Ｒ₂がＮＨ₂からなる群より選択される。)； 式：Ｒ₁−配列番号３−Ｒ₂のペプチド (式中、Ｒ₁は、４-イミダゾプロピオニル、４-イミダゾアセチル、ま
   たは４-イミダゾ-α,α-ジメチル-アセチルからなる群より選択され、そして、 Ｒ₂がＧｌｙ-ＯＨまたはＮＨ₂からなる群より選択される。さらに、配列番号３ 中の位置27のＬｙｓは、Ｃ₆〜Ｃ₁₀の直鎖状アシルからなる群より選択されるア シル基であってもよく、または、何もなくてもよい。)； 及び、その医薬的許容され得る塩、 からなる群より選択される、請求項１に記載の製剤。
6. 【請求項６】 さらに、ｐＨ約6.5から約9.0で安定であることにより定義さ
   れる請求項１に記載の製剤。
7. 【請求項７】 さらに、ｐＨ約7.0から約8.0で安定であることにより定義さ
   れる請求項１に記載の製剤。
8. 【請求項８】 さらに等張剤を含む、請求項１に記載の製剤。
9. 【請求項９】 等張剤がグリセリンである、請求項８に記載の製剤。
10. 【請求項１０】 等張剤が塩化ナトリウムである、請求項８に記載の製剤。
11. 【請求項１１】 さらに保存剤を含む、請求項１に記載の製剤。
12. 【請求項１２】 保存剤が、ｍ-クレゾール、フェノール、メチルパラベン 、及び、ベンジルアルコールからなる群より選択される、請求項１１に記載の製
    剤。
13. 【請求項１３】 ＧＬＰ-１の投与の必要が示される症状の患者を処置する 方法であって、請求項１〜１２のいずれかに記載の製剤を得、そして薬理学的に
    有効量の製剤を患者に投与することを含む方法。
14. 【請求項１４】 症状が糖尿病である、請求項１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 症状が、肥満、心筋梗塞、異化状態または卒中からなる群
    より選択される、請求項１３に記載の方法。
16. 【請求項１６】 投与が経口投与である、請求項１２または１３に記載の方
    法。