CN103501612A

CN103501612A - 抑制表皮生长因子受体导致的癌症中细胞增殖的化合物

Info

Publication number: CN103501612A
Application number: CN201280021702.7A
Authority: CN
Inventors: D.C.达尔加诺; 黄卫生; W.C.莎士比亚; 王义汉; 朱笑天
Original assignee: Ariad Gene Therapeutics Inc
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-05-04
Filing date: 2012-05-04
Publication date: 2014-01-08
Anticipated expiration: 2032-05-04
Also published as: CN103501612B; JP2014514348A; KR101884010B1; CA2832504C; JP5999177B2; IL228739B; CA2832504A1; BR112013027734A2; KR20140028057A; WO2012151561A1; EP2704572A4; US9834518B2; IL228739A0; US20120316135A1; EP2704572B1; MX360404B; MX2013012895A; EA201391626A1; AU2012250517A1; EP2704572A1

Abstract

本发明涉及式(I)化合物、药物组合物以及治疗患有EGFR导致的癌症的患者的方法，其中各变量如本文中所定义。

Description

抑制表皮生长因子受体导致的癌症中细胞增殖的化合物

背景技术

本发明涉及药物组合物以及抑制细胞增殖的方法。

在具有非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的人类临床试验中，已发现激酶抑制剂厄洛替尼和吉非替尼是有效的，但是仅对一小类患者。后来确定出响应的患者在表皮生长因子受体(EGFR)的基因中具有某些突变。突变形式的EGFR为酶活性的而不需要配体刺激。它们还对于激酶抑制剂如厄洛替尼和吉非替尼(其完全结合至EGFR激酶域的ATP结合位点)是尤其敏感的。那些突变体已经在科学文献中进行了详细地分类和描述。它们包括在激酶域中的小缺失或点突变(如先前已经大量进行的报道)。参见，例如，Sharma,Nat.Rev.Cancer7:169(2007)(exon19mutations characterized by in-frame deletions ofamino-acids747account for45%of mutations,exon21mutations resulting inL858R substitutions account for40–45%of mutations,and the remaining10%ofmutations involve exon18and20)；Sordella等人,Science305:1163(2004)；和Mulloy等人,Cancer Res.67:2325(2007)。

不幸的是，EGFR基因中的其他突变(例如，T790M突变)产生突变的EGFR蛋白(药物如厄洛替尼和吉非替尼对其结合不好)。那些突变与对药物具有抗性和具有此类突变的癌症患者的复发相关。

需要新的诊断方法和疗法以用于治疗EGFR导致的癌症(其中突变造成了对前线酪氨酸激酶抑制剂(“TKI”)疗法的抗性)。具体地，对于抑制细胞表达如吉非替尼-抵抗的或厄洛替尼-抵抗的EGFR基因的新疗法能够带来显著的益处。

发明内容

本发明涉及一类EGFR导致的癌症，包括EGFR突变体导致的癌症(例如，带有T790M突变的突变体或任何其他与对厄洛替尼和吉非替尼产生抗性相关的突变体)的活性抑制剂。该抑制剂具有如下所示的式(I)的结构：

本发明涉及式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐。

在式(I)中，U¹和U²均为N，U³为C-R^e；或U³为N，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d；或U³为C-R^e，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d；V¹为O或NH；V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂或CF₂；R^V为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基或芳基；R^d为H、CF₃、CN、C_1-4烯基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或卤素；R^e为H或NH₂；或者R^d和R^e与它们连接的嘧啶环原子一起形成含有一个、两个或三个独立地选自N、S和O的杂原子的5-或6-元环，其中该5-或6-元环被R^h取代；R^h为H、C_1-4烷基或卤素；R^g为H、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、包含1、2、3或4个N原子的5或6元杂环，或者与R^g2结合形成5-至7-元杂环，其中各个R^3A、R^3B、R^3C、R^3D、R^3E、R^3F、R^3G、R^3H和R^3I独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B，或者R^3C和R^3D，或者R^3F和R^3G，与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；R^g2为H、F、W¹、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、C_1-6烷氧基、C_1-4烷基，或者，R^g2和R^g与其连接的原子一起形成包含1-3个独立地选自P、N、O和S的杂原子的5-至7-元杂环，该杂环为未取代的或取代的；R^g1为H、F、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I，或包含1个或2个N原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；环A选自：

R^b2为H、F，或为含有1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；R^b4为H、F、W¹、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基，或C_3-6环烷基氧基、-OC(O)N(R^5A)(R^5B)、NR^5CC(O)OR^5D；包含1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的，或者，R^b4和R^a1与其连接的原子一起形成包含1、2或3个N或O原子的6元杂环，其为未取代的或取代的；各个R^5A、R^5B、R^5C和R^5D独立地选自H、烷基、烯基、炔基和杂烷基，或者R^5A和R^5B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；R^a1与R^b4结合形成6元杂环，或为H、卤素、W¹、-CN、-NO₂、-R¹、-OR²、-O-NR¹R²、-NR¹R²、-NR¹-NR¹R²、-NR¹-OR²、-C(O)YR²、-OC(O)YR²、-NR¹C(O)YR²、-SC(O)YR²、-NR¹C(=S)YR²、-OC(=S)YR²、-C(=S)YR²、-YC(=NR¹)YR²、-YC(=N-OR¹)YR²、-YC(=N-NR¹R²)YR²、-YP(=O)(YR¹)(YR²)、-NR¹SO₂R²、-S(O)_rR²、-SO₂NR¹R²、-NR¹SO₂NR¹R²，或

R^a2为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基，或C_3-6环烷基氧基；各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；各自出现的R¹和R²独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；各个X₁和X₂独立地选自CH和N；R⁴选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；W¹为选自下列的基团：-NR⁷C(O)CH=CH₂、-NR⁷C(O)CH=CH(CH₃)、-NR⁷C(O)CH=C(CH₃)₂、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CR⁹R¹⁰、-C(O)CH=CH₂、-CH₂P(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-OP(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-NHS(O)₂(CH=CH₂)、-NR⁷C(O)C≡C-CH₃、-NR⁷C(O)C≡C-H、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CH₂、

R⁷为H、烷基或杂烷基；R⁸为C_1-4烷基；各自出现的R⁹和R¹⁰独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；R¹¹为-C(O)-OR¹²、-CH₂N(CH₃)₂、H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R¹²为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R¹³为H或C_1-4烷基、或其药学上可接受的盐，其中R^a1、R^g2和R^b4中的一个包括W¹，且其中该化合物包含至少一个选自下列的取代基：-P(O)(R^6A)(R^6B)、-S(O)N(R^6C)(R^6D)、-S(O)₂R^6E，其中各个R^6A、R^6B、R^6C、R^6D和R^6E独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^6A和R^6B，或者R^6C和R^6D，或者R^6F和R^6G，与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的。

在某些实施方案中，本发明提供了式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐

其中

U¹和U²均为N，U³为C-R^e；或U³为N，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d；或U³为C-R^e，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d；

V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂，或CF₂；

R^V为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基或芳基；

R^d为H、CF₃、CN、C_1-4烯基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或卤素；R^e为H或NH₂；或者R^d和R^e与它们连接的嘧啶环原子一起形成含有一个、两个或三个独立地选自N、S和O的杂原子的5-或6-元环，其中该5-或6-元环被R^h取代；

R^h为H、C_1-4烷基或卤素；

R^g为H、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、包含1、2、3或4个N原子的5或6元杂环，或者与R^g2结合形成5-至7-元杂环，其中各个R^3A、R^3B、R^3C、R^3D、R^3E、R^3F、R^3G、R^3H和R^3I独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B，或者R^3C和R^3D，或者R^3F和R^3G，与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；

R^g2为H、F、W¹、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、C_1-6烷氧基、C_1-4烷基，或者，R^g2和R^g与其连接的原子一起形成包含1-3个独立地选自P、N、O和S的杂原子的5-至7-元杂环，该杂环为未取代的或取代的；

R^g1为H、F、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I，或含有1个或2个N原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；

环A选自：

R^b2为H、F，或为含有1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；

R^b4为H、F、W¹、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基，或C_3-6环烷基氧基、-OC(O)N(R^5A)(R^5B)、-NR^5CC(O)OR^5D；包含1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的，或者，R^b4和R^a1与其连接的原子一起形成包含1、2或3个N或O原子的6元杂环，其为未取代的或取代的；

各个R^5A、R^5B、R^5C和R^5D独立地选自H、烷基、烯基、炔基和杂烷基，或者R^5A和R^5B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；

R^a1与R^b4结合形成6元杂环，或为H、卤素、W¹、-CN、-NO₂、-R¹、-OR²、-O-NR¹R²、-NR¹R²、-NR¹-NR¹R²、-NR¹-OR²、-C(O)YR²、-OC(O)YR²、-NR¹C(O)YR²、-SC(O)YR²、-NR¹C(=S)YR²、-OC(=S)YR²、-C(=S)YR²、-YC(=NR¹)YR²、-YC(=N-OR¹)YR²、-YC(=N-NR¹R²)YR²、-YP(=O)(YR¹)(YR²)、-NR¹SO₂R²、-S(O)_rR²、-SO₂NR¹R²、-NR¹SO₂NR¹R²，或

R^a2为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基，或C_3-6环烷基氧基；

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

各自出现的R¹和R²独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；

R⁴选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；

W¹为选自下列的基团：-NR⁷C(O)CH=CH₂、-NR⁷C(O)CH=CH(CH₃)、-NR⁷C(O)CH=C(CH₃)₂、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CR⁹R¹⁰、-C(O)CH=CH₂、-CH₂P(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-OP(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-NHS(O)₂(CH=CH₂)、-NR⁷C(O)C≡C-CH₃、–NR⁷C(O)C≡C-H、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CH₂、

R⁷为H、烷基或杂烷基；

R⁸为C_1-4烷基；

各自出现的R⁹和R¹⁰独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；

R¹¹为-C(O)-OR¹²、-CH₂N(CH₃)₂、H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；

R¹²为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；和

R¹³为H或C_1-4烷基，

或其药学上可接受的盐，其中R^a1、R^g2和R^b4中的一个包含W¹，且其中所述化合物包含至少一个-P(O)(R^6A)(R^6B)，其中各个R^6A和R^6B独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^6A和R^6B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的。

该化合物可进一步描述为式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)或式(Ie)：

其中环A、R^e、R^d、R^g、R^g1和R^g2如式(I)中所定义。

该化合物还可描述为式(IIa)、式(IIb)或式(IIc)：

在式(IIa)-(IIc)中，V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂或CF₂；R^V为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基或芳基；R^d为H、CF₃、CN、C_1-4烯基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或卤素；R^e为H或NH₂；或者R^d和R^e与它们连接的嘧啶环原子一起形成含有一个、两个或三个独立地选自N、S和O的杂原子的5-或6-元环，其中该5-或6-元环被R^h取代；R^h为H、C_1-4烷基或卤素；R^a2为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基，或C_3-6环烷基氧基；R^g为-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、包含1、2、3或4个N原子的5或6元杂环，或者与R^g2结合形成5-至7-元杂环，其中各个R^3A、R^3B、R^3C、R^3D、R^3E、R^3F、R^3G、R^3H和R^3I独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B，或者R^3C和R^3D，或者R^3F和R^3G，与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；R^g2为H、F、W¹、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、C_1-6烷氧基、C_1-4烷基，或者，R^g2和R^g与其连接的原子一起形成包含1-3个独立地选自P、N、O和S的杂原子的5-至7-元杂环，该杂环为未取代的或取代的；R^g1为H、F、-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I，或包含1个或2个N原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；R^b2为H、F，或为含有1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；R^b4为H、F、W¹、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基，或C_3-6环烷基氧基、-OC(O)N(R^5A)(R^5B)、-NR^5CC(O)OR^5D；包含1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的，或者，R^b4和R^a1与其连接的原子一起形成包含1、2或3个N或O原子的6元杂环，其为未取代的或取代的；各个R^5A、R^5B、R^5C和R^5D独立地选自H、烷基、烯基、炔基和杂烷基，或者R^5A和R^5B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；R^a1与R^b4结合形成6元杂环，或为H、卤素、W¹、-CN、-NO₂、-R¹、-OR²、-O-NR¹R²、-NR¹R²、-NR¹-NR¹R²、-NR¹-OR²、-C(O)YR²、-OC(O)YR²、-NR¹C(O)YR²、-SC(O)YR²、-NR¹C(=S)YR²、-OC(=S)YR²、-C(=S)YR²、-YC(=NR¹)YR²、-YC(=N-OR¹)YR²、-YC(=N-NR¹R²)YR²、-YP(=O)(YR¹)(YR²)、-NR¹SO₂R²、-S(O)_rR²、-SO₂NR¹R²、-NR¹SO₂NR¹R²，或

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；各自出现的R¹和R²独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；各个X₁和X₂独立地选自CH和N；R⁴选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；W¹为选自下列的基团：-NR⁷C(O)CH=CH₂、-NR⁷C(O)CH=CH(CH₃)、-NR⁷C(O)CH=C(CH₃)₂、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CR⁹R¹⁰、-C(O)CH=CH₂、-CH₂P(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-OP(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-NHS(O)₂(CH=CH₂)、-NR⁷C(O)C≡C-CH₃、-NR⁷C(O)C≡C-H、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CH₂、

在某些实施方案中，本发明提供了式(IIa)、式(IIb)或式(IIc)所示的化合物：

其中

V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂或CF₂；

R^d为H、CF₃、CN、C_1-4烯基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或卤素；R^e为H或NH₂；或者R^d和R^e与它们连接的嘧啶环原子一起形成环含有一个、两个或三个独立地选自N、S和O的杂原子的5-或6-元环，其中该5-或6-元环被R^h取代；

R^h为H、C_1-4烷基或卤素；

R^g为–P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、包含1、2、3或4个N原子的5或6元杂环，或者与R^g2结合形成5-至7-元杂环，其中各个R^3A、R^3B、R^3C、R^3D、R^3E、R^3F、R^3G、R^3H和R^3I独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B，或者R^3C和R^3D，或者R^3F和R^3G，与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；

W¹为选自下列的基团：-NR⁷C(O)CH=CH₂、-NR⁷C(O)CH=CH(CH₃)、-NR⁷C(O)CH=C(CH₃)₂、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CR⁹R¹⁰、-C(O)CH=CH₂、-CH₂P(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-OP(O)(R⁸)(CH=CH₂)、-NHS(O)₂(CH=CH₂)、-NR⁷C(O)C≡C-CH₃、-NR⁷C(O)C≡C-H、-NR⁷C(O)C(R¹¹)=CH₂、

R⁷为H、烷基或杂烷基；

R⁸为C_1-4烷基；

R¹³为H或C_1-4烷基，

在一些具体实施方案中，该化合物还可描述为任一式(IIIa)-(IIIe)或其药学上可接受的盐：

在式(IIIa)-(IIIe)中，R^a1、R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义。

在某些实施方案中，该化合物还可描述为任一式(IVa)-(IVe)或其药学上可接受的盐：

在式(IVa)-(IVe)中，R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义。

在一些具体实施方案中，该化合物还可描述为任一式(Va)-(Ve)或其药学上可接受的盐：

在式(Va)-(Ve)中，R^a1、R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义。

该化合物还可描述为任一式(VIa)-(VIe)或其药学上可接受的盐：

在式(VIa)-(VIe)中，R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义，R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；各自出现的R¹和R²独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；各个X₁和X₂独立地选自CH和N；W¹如式(I)中所定义；R⁴选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基。

该化合物还可描述为任一式(VIIa)-(VIIe)或其药学上可接受的盐：

在(VIIa)-(VIIe)中，R^a1、R^a2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义。

该化合物还可描述为任一式(VIIIa)-(VIIIe)或其药学上可接受的盐：

在式(VIIIa)-(VIIIe)中，R^a2、R^b2、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义；R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；W¹如式(I)所定义；各自出现的R¹和R²独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；各个X₁和X₂独立地选自CH和N；R⁴选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基。

该化合物还可描述为任一式(IXa)-(IXe)或其药学上可接受的盐：

在式(IXa)-(IXe)中，R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义，R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

该化合物还可描述为任一式(Xa)-(Xe)或其药学上可接受的盐：

在式(Xa)-(Xe)中，R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如式(I)中所定义，R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

在前述任一化学式的一种具体实施方案中，R^a2为H、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。

在前述任一化学式的某些具体实施方案中，R^d为H、Cl、F、Br、I、CN、CH₃、CF₃、CH₂CH₂=CH₂或环丙基。

在前述任一化学式的一种具体实施方案中，R^b2为H。

在前述任一化学式的某些具体实施方案中，R^g1为H，R^g2为H、F、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。

在前述任一化学式的一种具体实施方案中，R^g为-P(O)(R^3A)(R^3B)或-S(O)₂R^3E，其中R^3A、R^3B和R^3E如式(I)中所定义。例如，R^g可选自-P(O)(CH₃)₂和-S(O)₂(CH(CH₃)₂)。

在前述任一化学式的某些具体实施方案中，R^a1为包含1或2个N或O原子的5或6元杂环，其为未取代的或被烷基取代。例如，R^a1可选自下列基团：

在前述任一化学式的一种具体实施方案中，R^a2为甲氧基；R^d为Cl、F、Br、I或CH₃；R^g为-P(O)(CH₃)₂或-S(O)₂(CH(CH₃)₂)。

在某些实施方案中，在式(I)化合物中，U¹为N，U²为C-R^d，U³为C-R^e；U¹为C-R^d，U²为N，U³为C-R^e；U¹为N，U²为N，U³为C-R^e；或U³为N，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d。

在其他实施方案中，在式(I)化合物中，U¹为N；U²为C-R^d；U³为C-R^e；R^a2为OCH₃；R^g或R^g1为-P(O)(R^3A)(R^3B)；各个R^3A和R^3B独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；R^b4为-NHC(O)C(R¹¹)=CR⁹R¹⁰；各自出现的R⁹和R¹⁰独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；R¹¹为-C(O)-OR¹²、-CH₂N(CH₃)₂、H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R¹²为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基。示例性的化合物包括下列化合物，其中V¹为NH，V¹为O，R^d为Cl，R^g或R^g1为–P(O)(CH₃)₂或-P(O)(CH₂CH₃)₂，和/或R^b4为-NHC(O)C(R¹¹)=CH₂。在一些具体实施方案中，R^b4为-NHC(O)C(R¹¹)=CH₂；R¹¹为-C(O)-OR¹²、-CH₂N(CH₃)₂、H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R¹²为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R^d为Cl；R^g或R^g1选自-P(O)(CH₃)₂和-P(O)(CH₂CH₃)₂。

在任一式(I)、(Ia)-(Ic)、(IIa)-(IIc)、(IIIa)-(IIIe)、(IVa)-(IVe)、(Va)-(Ve)、(VIa)-(VIe)、(VIIIa)-(VIIIe)、(IXa)-(IXe)和(Xa)-(Xe)的化合物的一种实施方案中，R^b4为-NHC(O)CH=CH₂。

本发明涉及一种在受试者中治疗EGFR导致的癌症的方法，其通过向该受试者给药治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。

在相关的方面，本发明涉及一种在受试者中治疗EGFR导致的癌症的方法，所述方法包括(a)提供具有特征在于存在表皮生长因子受体激酶(EGFR)突变的EGFR导致的癌症的受试者，和(b)向该受试者给药治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，EGFR导致的癌症的特征在于存在一种或多种选自下列的突变：(i)L858R，(ii)T790M，(iii)L858R和T790M二者，(iv)delE746_A750，和(v)delE746_A750和T790M二者。

在上述方法中，该EGFR导致的癌症可为非小细胞肺癌(NSCLS)；成胶质细胞瘤；胰腺癌；头颈癌(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌；卵巢癌；前列腺癌；腺癌，或本文中描述的任一EGFR导致的癌症。

在上述方法的某些实施方案中，该方法还包括在给药本发明化合物(例如，任一式(I)、(Ia)-(Ic)、(IIa)-(IIc)、(IIIa)-(IIIe)、(IVa)-(IVe)、(Va)-(Ve)、(VIa)-(VIe)、(VIIIa)-(VIIIe)、(IXa)-(IXe)和(Xa)-(Xe)的化合物)6天内(例如，2周，1周、6天、5天、4天、3天、2天、1天内，或同时)，向该受试者给药选自厄洛替尼、吉非替尼和其药学上可接受的盐的第一代激酶抑制剂，其中各个本发明化合物和该第一代激酶抑制剂以共同足以治疗该EGFR导致的癌症的量给药。

在一个相关的方面中，本发明的特征在于抑制表达EGFR突变的细胞增殖的方法，所述方法包括使本发明化合物或其药学上可接受的盐以足以抑制增殖的量接触所述细胞。例如，该EGFR突变的特征在于在表皮生长因子受体激酶(EGFR)中存在一种或多种选自以下的突变：(i)L858R、(ii)T790M、(iii)L858R和T790M二者、(iv)delE746_A750、(v)delE746_A750和T790M二者，以及本文所述的任一其他EGFR突变。在某些实施方案中，所述细胞为癌症细胞(例如，来源于非小细胞肺癌(NSCLS)；成胶质细胞瘤；胰腺癌；头颈癌(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌；卵巢癌；前列腺癌；腺癌，或本文所述的任一其他表达EGFR的癌症的细胞)。

本发明的特征还在于一种在受试者中治疗选自厄洛替尼、吉非替尼和其药学上可接受的盐的第一代激酶抑制剂难治的EGFR导致的癌症的方法，其通过向该受试者以足以治疗该癌症的量给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。

在上述任一式中，该化合物可以为其游离碱的形式或药学上可接受的盐的形式。

对本发明方法的响应标准可根据实体瘤(RECIST)指导方针中的响应评价标准(参见Eur.J.Cancer45:228(2009))进行分级，其定义癌症患者在治疗过程中改善(“响应”)、保持不变(“稳定”)或恶化(“进展(progression)”)的情况。完全响应的特征在于：(i)所有目标病损(lesion)消失；和(ii)任一病理淋巴结(无论是目标或非目标)在短轴上必须减少到<10mm。部分响应的特征在于：(i)以基线总直径为参考，目标病损的直径总和至少减少了30%。进行性疾病的特征在于：(i)以研究中的最小总和为参考(这包括基线总和，如果其在研究中是最小的)，目标病损的直径总和至少增加5%、10%或20%；或(ii)出现一个或多个新的病损。

术语“给药”是指给予哺乳动物一定剂量的药物组合物的方法，其中所述方法是例如口服、静脉内、腹膜内、动脉内或肌内。优选的给药方法可以有所不同，取决于各种因素，例如，药物组合物的成分、潜在或实际疾病的位置和疾病的严重程度。

“EGFR导致的癌症”是指以EGFR基因的不适合的高表达为特征或以改变EGFR核酸分子或多肽的生物活性的EGFR基因突变为特征的癌症。EGFR导致的癌症可出现在任何组织(包括脑、血液、结缔组织、肝、口、肌肉、脾、胃、睾丸和气管)中。EGFR导致的癌症包括非小细胞肺癌(NSCLS)，包括一种或多种鳞状细胞癌、腺癌、腺癌、细支气管肺泡癌(BAC)、局灶侵入性BAC(BAC with focal invasion)，具有BAC特征的腺癌，以及大细胞癌；神经肿瘤，如成胶质细胞瘤；胰腺癌；头颈癌症(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌；前列腺癌；腺癌；以及包括EGFR介导的癌症。

“EGFR突变体”或“突变体”包括EGFR蛋白或EGFR编码序列的氨基酸或核苷酸序列中一个或多个缺失、置换或添加。EGFR突变体还可以包括一个或多个缺失、置换或添加，或其片段，只要该突变体相对于野生型EGFR保留或增加了酪氨酸激酶活性。在具体的EGFR突变体中，激酶或磷酸化活性相对于野生型EGFR可以增加(例如，至少5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或甚至100%)。具体的EGFR突变体如本文所述，其中在相对于人EGFR中氨基酸的位置提供了突变，如NCBIGenBank Reference Sequence:NP_005219.2中提供的序列所述。

本文使用的术语“抑制表达EGFR突变体的细胞的增殖”是指适度地减缓、停止或逆转表达EGFR的细胞在体外或在体内的生长速率。理想的是，当使用合适的测定细胞生长速率的方法进行测定时(例如，本文所述的细胞生长测定法)，生长速率至少减慢10%、20%、30%、50%或甚至70%。EGFR突变体可以是本文所述的任一EGFR突变体。

本文使用的术语“难治的”指的是对给定的具体治疗为进行性响应的癌症。所述癌症可以是从初次给药治疗为难治的，或随着时间的推移在响应治疗时发展为难治的。

术语“序列同一性”是指两个或多个核酸序列或者或两个或多个氨基酸序列之间共享同一性，以序列之间的同一性形式表达。序列同一性可以以同一性百分比的方式来测量；百分比越高，序列越相同。当使用标准方法进行对比时，核酸或氨基酸序列的同系物或直系同源物具有相对高程度的序列同一性。用于比较的序列对比方法是本领域熟知的。各种程序和对比算法如下所述：Smith and Watermann,Adv.Appl.Math.2:482(1981)；Needleman andWunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)；Pearson and Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444(1988)；Corpet等人,Nuc.Acid Res.16:10881(1988)；Huang等人,Computer Appls.in the Biosciences8:155(1992)；和Pearson等人,Meth.Mol.Biol.24:307(1994)。Altschul等人(J.Mol.Biol.215:403(1990))提供了详细考虑的序列对比方法和同源性计算。NCBI Basic Local Alignment SearchTool(BLAST)(Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403(1990))可从几个来源获得，包括National Center for Biological Information(NCBI)网站，用于连接序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx。额外的信息可以在NCBI网站上找到。BLASTN用于比较核酸序列，而BLASTP用于比较氨基酸序列。为比较两个核酸序列，选项可以按如下设置：-i设置为包含要比较的第一个核酸序列的文件；-j设置为包含要比较的第二个核酸序列的文件；-p设置为blastn；-o设置为任何所期望的文件名；-q设置为-1；-r设置为2；和所有其他选项保留它们的默认设置。一旦对比，匹配的数目根据计数两个序列中存在的相同的核苷酸或氨基酸残基的位置数来确定。序列同一性百分比通过匹配数除以所标识序列中陈列的序列长度或铰接长度(如源于所标识序列中陈列的30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350或400个连续的核苷酸或氨基酸残基)，随后将所得的值乘以100。两个核酸分子密切相关的一个指征是，这两个分子在严格的条件下相互杂交。严格的条件是序列依赖的，且在不同的环境参数下是不相同的。在严格的条件下杂交至EGFR基因序列的核酸分子通常在上述条件下，基于整个EGFR基因或所述基因的选定部分(例如，包含本文所述的突变密码子的基因的激酶结构域或片段)杂交至探针。

本文使用的术语“治疗”是指为了预防和/或治疗目的给予药物组合物。“预防疾病”是指预防性处理尚未患病但容易患有特定疾病或处于特定疾病的风险的受试者。“治疗疾病”或用于“治疗性处理”是指向已经患有疾病的受试者给予治疗，以改善或稳定所述受试者的病症。因此，在权利要求书和实施方案中，治疗是以治疗或预防目的给药于受试者。

术语“烷基”是指直链、支链、环状或多环非芳香烃基，其可以是取代的或未取代的。除非另有说明，“烷基”基团包含1-8个，且优选1-6个碳原子。低级烷基是指含1-6个碳原子的烷基基团。烷基的实例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、戊基、异戊基、叔戊基、环戊基、己基、异己基、环己基和正庚基。示例性的取代烷基基团包括，但不限于，卤代烷基基团(例如，氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基)、羟基甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、苄基、取代的苄基和苯乙基。

术语“烷氧基”是指烷基的亚类，其中烷基基团如上述定义且具有通过氧桥连接所示数量的碳，即-O-烷基，其中所述烷基基团含有1-8个碳原子并且是取代的或未取代的。示例性的烷氧基基团包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正丁氧基、仲戊氧基、-OCF₃和-O-环丙基。

术语“卤代烷基”是指烷基的亚类，其中烷基基团如上述定义，且烷基的一个或多个氢原子被卤素原子取代。示例性的卤代烷基基团包括，但不限于，三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基等。

术语“烯基”是指含一个或多个双键且具有2-8个碳原子的支链或直链烃基。烯基可任选包括单环或多环状环，其中每个环期望为3-6元。烯基基团可以是取代的或未取代的。烯基基团包括，但不限于，乙烯基、烯丙基、2-环丙基-1-乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基和2-甲基-2-丙烯基。

术语“炔基”是指含一个或多个叁键且具有2-8个碳原子的支链或直链烃基。炔基基团可以是取代的或未取代的。炔基包括，但不限于，乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。

术语“环烷基”是指3-13个碳原子的环状或多环状烃基，其任何碳原子都是饱和的。环烷基基团可以是取代的或未取代的。示例性的环烷基基团包括，但不限于，环丙基、降冰片基、[2.2.2]二环辛烷和[4.4.0]二环癸烷等，当作为其它烷基部分时可以任选被取代。

术语“环烯基”是指含有一个或多个双键的3-13个碳原子，优选5-8个碳原子的环状或多环状烃基。环烯基基团可以是取代的或未取代的。示例性的环烯基基团包括，但不限于，环戊烯基、环己烯基和环辛烯基。

术语“环炔基”是指含有一个或多个叁键的5-13个碳原子的环状或多环状烃基。环炔基基团可以是取代的或未取代的。

术语“杂烷基”是指具有1-14个碳原子的支链或直链烷基、烯基或炔基基团，还具有1、2、3或4个独立地选自N、O、S和P的杂原子。杂烷基包括，但不限于，叔胺、仲胺、醚、硫醚、酰胺、硫酰胺(thioamides)、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯(thiocarbamates)、腙、亚胺、磷酸二酯(phosphodiesters)、氨基膦酸酯(phosphoramidates)、磺酰胺和二硫化物(disulfides)。杂烷基可任选包括单环、双环或三环状环，其中每个环期望为3-6元。杂烷基基团可以是取代的或未取代的。杂烷基的实例包括，但不限于，聚醚，如甲氧基甲基和乙氧基乙基。

本文使用的“杂环”和“杂环基”是指具有5-14个环原子的非芳香环体系，其中一个或多个环碳，优选1-4个，各自被杂原子如N、O、S或P替换，其可单独使用或在“杂环基-烷基”(杂环基取代的C_1-6烷基)、“杂环基-烷氧基”(杂环基取代的C_1-6烷氧基)或“杂环氧基-烷基”(杂环氧基取代的C_1-6烷基)中作为较大基团的一部分，并且包括芳烷基、芳烷氧基和芳氧基烷基基团。杂环可以是取代的或未取代的并可包含1、2或3个稠合的或非稠合的环体系。理想的是，所述杂环为由2-6个碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的杂原子组成的5-至7-元单环或7-至14-元双环杂环，并包括任一上述定义的杂环稠合到苯环上的任何双环基团。示例性的杂环包括，但不限于，3-1H-苯并咪唑-2-酮、(1-取代的)-2-氧代-苯并咪唑-3-基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉基、3-吗啉基、4-吗啉基、2-硫吗啉基、3-硫吗啉基、4-硫吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、二唑酮基(diazolonyl)、N-取代的二唑酮基、1-苯并吡咯酮(1-phthalimidinyl)、苯并氧杂环己烷基(benzoxanyl)、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并氧杂环戊烯基、苯并硫杂环戊烷基(benzothiolanyl)和苯并噻烷基(benzothianyl)。杂环基团可包含两个或多个上面所列的环。杂环包括下述基团，其中非芳香含杂原子的环稠合到一个或多个芳香或非芳香环上，如在二氢吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基中，其中连接基团或连接点在非芳香含杂原子的环上。

单独使用或作为较大基团(如“芳烷基”(芳基取代的C_1-6烷基)、“芳烷氧基”(芳基取代的C_1-6烷氧基)或“芳氧基-烷基”(芳氧基取代的C_1-6烷基)中)的一部分使用的术语“芳基”是指具有6-14个环原子的芳香单环或多环基团，如苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基并且包括芳烷基、芳烷氧基和芳氧基烷基基团。“芳基”环可以是取代的或未取代的。术语“芳基”包括稠合的多环芳香环体系，其中芳香环稠合到一个或多个环上。芳基基团的非限制性实例包括苯基、羟基苯基、卤代苯基、烷氧基苯基、二烷氧基苯基、三烷氧基苯基、亚烷基二氧基苯基、萘基、菲基、蒽基、菲并(phenanthro)、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。本文使用的术语“芳基”的范围内也包括下述基团，其中芳香环稠合到一个或多个非芳香环上，如在茚满基、菲啶基或四氢萘基中，其中连接基团或连接点在芳香环上。

本文使用的术语“杂芳基”是指稳定的杂环基，和具有5-14个环原子的多杂环芳香基团。杂芳基基团可以是取代的或未取代的并且可以包含单环或多环状环体系。典型的杂芳环的实例包括5-元单环，如噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、异噻唑基、呋咱基、异

唑基和噻唑基；6-元单环，如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基和三嗪基；和多环杂环，如苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、苯并氧硫杂环己烯基(phenoxathienyl)、吲嗪基、异吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并噻唑、苯并咪唑、四氢喹啉、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌间二氮苯基(perimidinyl)、菲咯啉基(phenanthrolinyl)、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基和吩

嗪基(参见，例如Katritzky，Handbook of Heterocyclic Chemistry)。示例性的杂芳基环包括，但不限于，2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异唑基、4-异

唑基、5-异唑基、2-

二唑基、5-二唑基、2-

唑基、4-唑基、5-

唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、5-四唑基、2-三唑基、5-三唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并

唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基和苯并异

唑基。杂芳基基团还包括下述基团，其中杂芳香环稠合到一个或多个芳香或非芳香环上，其中连接基团或连接点在杂芳香环上，如四氢喹啉、四氢异喹啉和吡啶并[3,4-d]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪基、吡唑并[1,5-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,5-a]嘧啶基、吡唑并[1,5-b][1,2,4]三嗪、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、咪唑并三嗪基、吡咯并[2,3-d]嘧啶基、三唑并嘧啶基和吡啶并吡嗪基。

芳基基团或杂芳基基团可包含一个或多个取代基。芳基或杂芳基基团的示例性取代基包括卤素(F、Cl、Br或I)、烷基、烯基、炔基、杂烷基、-NO₂、-CN、-R^A、-OR^B、-S(O)_rR^B(其中r为0、1或2)、-SO₂NR^AR^B、-NR^AR^B、-O-NR^AR^B、-NR^A-NR^AR^B、-(CO)YR^B、-O(CO)YR^B、-NR^A(CO)YR^B、-S(CO)YR^B、-NR^AC(=S)YR^B、-OC(=S)YR^B、-C(=S)YR^B、-YC(=NR^A)YR^B、-YC(=N-OR^A)YR^B、-YC(=N-NR^AR^B)YR^B、-COCOR^B、-COMCOR^B(其中M为C_1-6烷基基团)、-YP(O)(YR^C)(YR^C)、-P(O)(R^C)₂、-Si(R^C)₃、-NR^ASO₂R^B和-NR^ASO₂NR^AR^B，其中每次出现的Y独立地为-O-、-S-、-NR^A-或化学键(即，-(CO)YR^B因此包括-C(=O)R^B、-C(=O)OR^B和-C(=O)NR^AR^B)。

R^C选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和杂环基。在每次出现时，每个R^A和R^B独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和杂环基。

每个R^A、R^B和R^C任选具有一个或多个取代基，所述取代基选自氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、碳环、杂环、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、烷氧基、卤代烷氧基基团、羟基、受保护的羟基基团(例如，-O-X，其中X为酰基、苯基、取代的苯基、苄基、取代的苄基、苯乙基或取代的苯乙基)、-M-杂芳基、-M-杂环、-M-芳基、-M-OR^B、-M-SR^B、-M-NR^AR^B、-M-OC(O)NR^AR^B、-M-C(=NR^B)NR^AR^B、-M-C(=NR^A)OR^B、-M-P(=O)(R^C)₂、Si(R^C)₃、-M-NR^AC(O)R^B、-M-NR^AC(O)OR^B、-M-C(O)R^B、-M-C(=S)R^B、-M-C(=S)NR^AR^B、-M-C(O)NR^AR^B,、-M-C(O)NR^B-M-NR^AR^B、-M-NR^BC(NR^A)NR^AR^B、-M-NR^AC(S)NR^AR^B、-M-S(O)₂R^A、-M-C(O)R^A、-M-OC(O)R^A、-MC(O)SR^B、-M-S(O)₂NR^AR^B、-C(O)-M-C(O)R^B、-MCO₂R^B、-MC(=O)NR^AR^B、-M-C(=NH)NR^AR^B和-M-OC(=NH)NR^AR^B，其中M为C_1-6烷基基团。取代的R^A、R^B或R^C基团的非限制性示例包括卤代烷基和三卤代烷基、烷氧基烷基、卤代苯基、氯甲基、三氯甲基、三氟甲基、甲氧基乙基、烷氧基苯基、卤代苯基、-CH₂-芳基、-CH₂-杂环、-CH₂C(O)NH₂、-C(O)CH₂N(CH₃)₂、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)NH₂、-CH₂CH₂NH₂、-CH₂CH₂CH₂NEt₂、-CH₂OCH₃、-C(O)NH₂、-CH₂CH₂-杂环、-C(=S)CH₃、-C(=S)NH₂、-C(=NH)NH₂、-C(=NH)OEt、-C(O)NH-环丙基、-C(O)NHCH₂CH₂-杂环、-C(O)NHCH₂CH₂OCH₃、-C(O)CH₂CH₂NHCH₃、-CH₂CH₂F、-C(O)CH₂-杂环、-CH₂C(O)NHCH₃、-CH₂CH₂P(=O)(CH₃)₂和-Si(CH₃)₃。

烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、杂烷基、环烷基、环烯基、环炔基或杂环基团可包含一个或多个选自对于芳基或杂芳基基团的上面所列的那些取代基，以及=O、=S、=NH、=NNR^AR^B、=NNHC(O)R^B、=NNHCO₂R^B或=NNHSO₂R^B，其中R^A和R^B如上文所定义。

从以下详细说明和权利要求书，本发明的其它特征和优点将是显而易见的。

具体实施方式

本发明的特征在于可用于治疗具有EGFR导致的癌症的患者的化合物，所述癌症包括厄洛替尼或吉非替尼难治或变得难治的癌症，或具有本文所述的EGFR突变的癌症，其通过向该患者给药式(I)化合物。

EGFR突变体

可利用本发明的组合物和方法治疗的EGFR导致的癌症包括，例如，在EGFR的氨基酸或核苷序列或其片段中一个或多个缺失、替换或添加的EGFR突变体。

EGFR突变可以发生在EGFR序列的任何部位。通常，EGFR突变体源自激酶结构域(即EGFR序列中的外显子18-24)或胞外结构域(即EGFR序列中的外显子2-16)的突变。例如，突变通常发生在激酶结构域，包括外显子18中的一个或多个点突变(例如，L688P、V689M、P694L/S、N700D、L703V、E709K/Q/A/G/V、I715S、L718P、G719C/A/S/R或S720P/F)、可包括或可不包括插入的外显子19中的缺失(例如，delG719、delE746_E749、delE746_A750、delE746_A750insRP、delE746_A750insQP、delE746_T751、delE746_T751insA/I/V、delE746_T751insVA、delE746_S752、delE746_S752insA/V/D、delE746_P53insLS、delL747_E749、delL747_A750、delL747_A750insP、delL747_T751、delL747_T751insP/S/Q、delL747_T751insPI、delL747_S752、delL747_S752insQ、delL747_P753、delL747_P753insS/Q、delL747_L754insSR、delE749_A750、delE749_A750insRP、delE749_T751、delT751_I759、delT751_I759insS/N或delS752_I759)、外显子19中的复制(例如，K739_I44dupKIPVAI)、外显子19中的点突变(例如，L730F、W731Stop、P733L、G735S、V742A、E746V/K、A750P、T751I、S752Y、P753S、A754P或D761Y)、外显子20中的框内插入(例如，D761_E762insEAFQ、A767_S768insTLA、V769_D770insY、V769_D770insCV、V769_D770insASV、D770_N771insD/G、D770_N771insNPG、D770_N771insSVQ、P772_H773insN/V、P772_H773insYNP或V774_C775insHV)、可包括或可不包括插入的外显子20中的缺失(例如，delM766_A767、delM766_A767insAI、delA767_V769、delD770或delP772_H773insNP)、外显子20中的复制(例如，S768_D770dupSVD、A767_V769dupASV或H773dupH)、外显子20中的点突变(例如，D761N、A763V、V765A/M、S768I、V769L/M、S768I、P772R、N771T、H773R/Y/L、V774M、R776G/H/C、G779S/F、T783A、T784F、L792P、L798H/F、T790M、R803W、K806E或L814P)或外显子21中的点突变(例如，G810S、N826S、L833V、H835L、L838V、A839T、K846R、T847I、H850N、V851I/A、I853T、L858M/R、A859T、L861Q/R、G863D、A864T、E866K或G873E)。在肺癌中，活化的突变体是典型的，而且746-750(ELREA)和L858R的90%缺失导致EGFR在无配体刺激的情况下持续磷酸化。具体地，50%肺癌的耐药性源自T790M点突变。

例如，在成胶质细胞瘤中，突变典型地但非唯一地发生在胞外结构域，包括缺乏胞外结构域和与v-erbB癌蛋白类似的EGFR突变株I(EGFRvI)；缺乏来自结构域IV的83个氨基酸的EGFRvII；和缺乏来自结构域I和II的氨基酸30-297的EGFRvIII，其是最常见的扩增，且在30-50%的成胶质细胞瘤和5%的鳞状细胞癌中有报道。成胶质细胞瘤的其他突变包括以下外显子的一个或多个点突变：外显子2(例如，D46N或G63R)、外显子3(例如，结构域I的R108K)、外显子7(例如，结构域II的T263P或A289D/T/V)、外显子8(例如，R324L或E330K)、外显子15(例如，结构域IV的P596L或G598V)或外显子21(激酶结构域的L861Q)。

EGFR突变体也包括那些如本文所述的两个或多个突变的组合。典型的组合包括S768I和G719A；S768I与V769L；H773R和W731Stop；R776G和L858R；R776H和L861Q；T790M和L858R；T790M和delE746_A750；R803W和delE746_T751insVA；delL747_E749和A750P；delL747_S752和E746V；delL747_S752和P753S；P772_H773insYNP和H773Y；P772_H773insNP和H773Y；以及D770_N771insG和N771T。其他示例性的组合包括任何包含T790M的组合(例如，T790M和L858R或T790M和delE746_A750，具有或不具有单突变L858R和delE746_A750的伴随抑制)。

EGFR突变可以为激活突变或抵抗突变。激活突变包括那些具有增加药物敏感性的替换(例如，G719C/S/A,delE746_A750，或L858R)。抵抗突变包括那些具有增加药物抗性的替换(例如，T790M或包含T790M的任一组合)。

EGFR导致的癌症包括那些具有本发明所述的任一突变体的癌症。例如，EGFRvIII常发现于成胶质细胞瘤，并在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和肺癌中也有报道。示例性的EGFR导致的癌症为：成胶质细胞瘤、肺癌(如鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、腺癌、细支气管肺泡癌(BAC)、局灶侵入性BAC、具有BAC特征的腺癌和大细胞癌)、胰腺癌、头颈癌(例如，鳞状细胞癌)、乳腺癌、结肠直肠癌、上皮癌(例如，鳞状细胞癌)、卵巢癌和前列腺癌。

具体地，在此描述的本发明会有益于具有较高风险TKI-抵抗的突变的患者人群。每年约8,000至16,000个新发病例可基于以下进行估计：非小细胞肺癌的发病率(在美国约160,000个新发病例)、一般群体中对厄洛替尼的响应(约10%，产生16,000个敏感人群)、激活突变的存在(白种人中10-20%和亚洲人中30-40%，产生16,000-32,000个敏感人群)、继发抗药性的获得(大多数(如果不是所有)患者，产生16,000-32,000个敏感人群)和携带T790M点突变的患者百分比(约50%，产生8,000-16,000个敏感人群)。带TKI抗性突变的患者包括那些对厄洛替尼、吉非替尼、CL-387,785、BIBW2992(CAS登记号439081-18-2)、CI-1033，来那替尼(HKI-272)、MP-412(AV-412)、PF-299804、AEE78和XL64中的一个或多个抵抗的癌症患者。

尤其是，本发明涉及治疗具有T790M点突变的EGFR导致的癌症。通常，可逆性抑制剂(例如，CI-1033、来那替尼(HKI-272)和PF-299804)在具有T790M突变的细胞系中效力较低，且在临床可达到的浓度下不能抑制T790M。由于T790M与WT的ATP Km类似，抑制突变体的浓度将会抑制WT，并导致胃肠道和皮肤事件。

EGFR突变体也包括EGFR的其他氨基酸和核苷酸序列的一个或多个缺失、置换或添加，例如点突变，其保留或增加酪氨酸激酶或磷酸化活性。突变体是蛋白或多肽时，优选的置换是保守置换，其为性质(如结构、电性、极性或疏水性)相似的氨基酸之间的置换。例如，置换可以发生在碱性氨基酸之间(例如，Lys、Arg和His)、或酸性氨基酸之间(例如，Asp和Glu)、或具有不带电荷的极性侧链的氨基酸之间(例如，Gly、Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr和Cys)、或具有疏水性侧链的氨基酸之间(例如，Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe和Met)、或具有分支侧链的氨基酸之间(例如，Thr、Val、Leu和Ile)、或具有芳香侧链的氨基酸之间(例如，Tyr、Trp、Phe和His)。

若该突变体为核酸，则编码EGFR突变蛋白的DNA可以包括如本文所定义的在严格条件下能够杂交至编码EGFR突变体的核苷酸序列的互补序列的核苷酸序列。本文使用的严格条件包括低度、中度或高度严格的条件。严格条件的实例包括在约42-55℃、约2-6x SSC中杂交，然后在约50-65℃、含约0.1-0.2%SDS的约0.1-1x SSC中洗涤，其中1x SSC为含有0.15M NaCl和0.015M柠檬酸钠的溶液，pH值为7.0。洗涤可以进行一次或多次。通常，严格条件可被设置为在限定的离子强度和pH下，低于特定核苷酸序列的熔化温度(Tm)约5℃的温度。

EGFR和编码它们的DNA的氨基酸和核苷酸序列可从已知的数据库获得，例如NCBI GenBank(美国)、EMBL(欧洲)等。例如，EGFR[人]的GenBank登录号包括MIM131550、AAI28420、NM_005228、NP_005219.2和GeneID:1956。

EGFR导致的癌症的表征

本发明的组合物和方法可用于治疗患有EGFR导致的癌症(即，特征在于EGFR突变体的表达或过表达的癌症)的受试者。EGFR突变体的表达或过表达可在诊断或预后分析中通过评估生物样品中的或细胞分泌的EGFR突变体的水平来确定(例如，通过使用抗EGFR抗体或抗-p-EGFR抗体进行的免疫组织化学分析；FACS分析等)。可选择地，或额外地，可以测量细胞中编码EGFR突变体的核酸或mRNA的水平，例如，通过使用对应于编码EGFR突变体的核酸或其补体的基于核酸的探针进行的荧光原位杂交技术；(FISH；参见WO98/45479，1998年10月公开)，Southern印迹法，Northern印迹法或聚合酶链反应(PCR)技术，如实时定量PCR(RT-PCR)。也可以通过测量生物样品如血清中的脱落的抗原来研究EGFR突变体的表达，例如，使用基于抗体的分析方法(也参见，例如，美国专利号4,933,294，1990年6月12日提交；WO91/05264，1991年4月18日公开；美国专利5,401,638，1995年3月28日提交；和Sias等人的J.Immunol.Methods132:73(1990))。除上述分析方法外，可向熟练的专业人员提供多种体内分析方法。例如，可以将哺乳动物体内的细胞暴露于任选用可检测的标示物例如放射性同位素标记的抗体，并且抗体与哺乳动物细胞的结合可例如通过放射性外部扫描或通过分析取自先前暴露于抗体的哺乳动物的活检进行评估。

可在分离细胞中测量的生物学特性的实例包括mRNA的表达、蛋白表达和DNA定量。此外，通过本发明方法分离的细胞的DNA可被测序，或可以使用标准技术例如FISH或PCR确定某些序列特征(例如，多态性和染色体异常)。细胞的化学成分和其他分析物也可以在分离后测定。细胞也可以在不裂解的情况下测定，例如，使用细胞外或细胞内染料或通过其他观察，例如，在各种介质中的形态或生长特性。

虽然任何杂交技术均可用于检测基因重排，但一个优选的技术是荧光原位杂交(FISH)。FISH技术是一种细胞遗传学技术，它可用来检测和定位染色体上特定的DNA或RNA序列的存在或缺失。FISH结合使用荧光标记的核酸探针，该探针只结合到染色体中与其显示高度序列相似性的那些部分。荧光显微镜可用于找出结合到染色体上的荧光探针的位置。FISH的基本步骤如下所述。示例性的FISH探针包括Vysis EGFR SpectrumOrange/CEPSpectrumGreen探针(Abbott，Downers Grove，IL)，其杂交至带7p12；和ZytoLight SPEC EGFR/CEN7Dual Color探针(ZytoVision)，其杂交至7号染色体的着丝粒的α-卫星序列。

对于FISH，探针的构造应足够长以特异性地杂交到其目标上(而不是基因组中的相似序列上)，但不应太大以致于阻碍杂交过程。探针通常用荧光团、用抗体的靶标、用生物素或其任意组合来标记。这可通过多种方式，例如使用随机引物法、缺口平移和使用标记的核苷酸的PCR来完成。

通常，细胞群体的样品或等分用于FISH分析。例如，在一个制备方法中，将细胞用胰蛋白酶消化以分散成单细胞，通过细胞离心涂片法(cytospun)涂片于载玻片上，用多聚甲醛固定，然后储存于70%乙醇中。为制备用于FISH的染色体，染色体被牢固地连接到基底(通常是玻璃)上。制备后，将探针施加到染色体RNA并开始杂交。在几个洗涤步骤中，所有未杂交或部分杂交的探针被冲走。如果信号放大以超过显微镜的检测阈是必要的(这依赖于许多因素，如探针标记效率、探针种类和荧光染料)，则将荧光标记的抗体或链亲和素结合到标记分子上，从而放大荧光。

落射荧光显微镜可用于观察杂交的序列。光源灯(source lamp)的白光被过滤使得只有用于荧光分子激发的相关波长到达样品上。荧光染料通常在较大的波长下发射，这允许人们通过另一滤光器区分激发光和发射光。用更复杂的过滤器组，可能区分几种激发和发射频带从而区分几种荧光染料，这允许在同一束(strand)上观察多种不同的探针。

根据使用的探针，FISH可拥有从庞大的染色体或小(～100千碱基(kilobase))序列变化的分辨率。探针可仅通过计算点或比色进行定量。

等位基因特异性定量实时PCR也可用于识别编码突变体EGFR蛋白的核酸(参见，例如，Diagnostic Innovations DxS BCR-ABL T3151Mutation TestKit以及Singer等人的Methods in Molec.Biol.181:145(2001))。该技术采用Taq DNA聚合酶，其非常有效地区分3'-端引物的匹配和不匹配(当3'-基不匹配时，无有效扩增发生)。使用这种技术，3'-端引物可被设计为特异性杂交的核酸序列，该序列与如本文所述的编码EGFR突变体中的突变氨基酸的密码子相对应。采用这种方法，特定的突变序列可在患者样本中选择性扩增。这种技术还利用Scorpion探针分子，其是含PCR引物、荧光团和淬灭剂的双官能团的分子。探针中的荧光团与降低荧光的淬灭剂相互作用。在PCR反应中，当Scorpion探针与扩增子结合时，Scorpion探针中的荧光团和淬灭剂分离，这导致反应管的荧光增加。本文描述的任何引物均可用于等位基因特异性定量实时PCR。

可利用本领域中已知的方法分析生物样品以检测EGFR基因中的突变或EGFR基因的表达水平。方法如直接核酸测序、变化杂交(alteredhybridization)、异常的凝胶电泳迁移(aberrant electrophoretic gel migration)、错配结合蛋白(mismatch binding proteins)介导的结合或裂解、单链构象多态性(SSCP)分析或来自患者样本的PCR产物的限制性片段长度多态性(RFLP)分析可用于检测EGFR基因中的突变；ELISA可用于测量EGFR多肽的水平；以及PCR可用于测量EGFR核酸分子的水平。

可使用任何这些技术均以便于在候选基因中检测突变，并且每个在本领域中都是熟知的；特殊技术的实例描述但不限于Orita等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2766(1989))和Sheffield等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:232(1989))。此外，生物样品(例如，活检)中候选基因的表达可通过标准的Northern印迹分析来监测或可以借助PCR(参见，例如，Ausubel等人,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,New York,NY(1995)；PCR Technology:Principles and Applications for DNA Amplification,H.A.Ehrlich,Ed.,StocktonPress,NY；Yap等人,Nucl.Acids.Res.19:4294(1991))。

本领域技术人员可使用若干序列对比软件程序(例如，NCBI BLAST网站)识别核酸或蛋白序列中的残基(例如，氨基酸或核苷酸)或与残基对应的密码子或野生型EGFR或EGFR突变体中的密码子。这种软件程序可允许被比较序列在对比中存在缺口。使用这种软件，本领域技术人员可识别核苷酸、氨基酸或与特定的核苷酸、氨基酸相对应的氨基酸，或野生型EGFR或EGFR突变体中的密码子。

生物样品中的EGFR表达水平(例如，DNA、mRNA或蛋白)可通过使用本领域熟知的或本文所述的任何若干标准技术确定。示例性生物样品包括血浆、血液、痰液、胸腔积液、支气管肺泡灌洗或活检，如肺活检和淋巴结活检。例如，患者中生物样品(例如，血液或组织样品)中的EGFR表达可以通过标准的Northern印迹分析或通过定量PCR来监测(参见，例如，Ausubel等人的同上文献；PCR Technology:Principles and Applications for DNAAmplification,H.A.Ehrlich,Ed.,Stockton Press,NY；Yap等人,Nucl.Acids.Res.19:4294(1991))。

合成

式(I)化合物可利用类似于现有技术中描述的那些方法和原料制备，例如，如国际专利申请WO2004/080980、WO2005/016894、WO2006/021454、WO2006/021457、WO2009/143389和WO2009/126515中所详细描述。例如，式(I)化合物(其中R^e为H，R^d为H、Cl、CF₃或CH₃)可由2,4-二氯嘧啶、2,4,5-三氯嘧啶、2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶或2,4-二氯-5-甲基嘧啶各自合成，如PCT公开WO/2009/143389中所述。

式(I)化合物(其中R^d和R^e与它们连接的嘧啶环原子一起形成含有一个或两个杂原子的5-或6-元环)可按照PCT公开WO2009/126515中所述合成。

式(I)化合物(其中U¹和U²为N)可以，例如，利用类似于反应方程式A1中描述的那些方法来合成。

反应方程式A1

式(I)化合物(其中U³为N，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d)可以，例如，利用类似于反应方程式A2中描述的那些方法合成。

反应方程式A2

进一步的细节提供于实施例中。

制剂

式I化合物可以配制为药物组合物，其包含式I化合物(作为活性药物成分)或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。因此，本公开的内容提供包含式I化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

适于给药的包含式I化合物的药学上可接受的组合物可利用常规原料和方法(其中大量是公知的)配制。适宜的剂型包括溶液、悬浮液或乳液剂型中的那些，固体口服剂型例如胶囊、片剂、凝胶胶囊(gel caps)、囊片(caplets)等。制剂领域(包括前面所述的单位剂型)中的公知方法可见于，例如，“Remington:The Science and Practice of Pharmacy”(20th ed.,ed.A.R.Gennaro,2000,Lippincott Williams&Wilkins)。

式(I)化合物可配制用于在本发明方法中有效的任何给药途径(例如，口服、直肠、胃肠外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过透皮贴剂、粉剂、软膏剂或滴剂)、舌下、口含(bucally)、作为口用或鼻用喷雾剂)。为了用于本发明的方法中，式(I)化合物优选以剂量单位形式配制以便于给药和剂量均匀。例如，式(I)化合物可配制用作口服给药的胶囊，含标示量为10mg、50mg、100mg、150mg、250mg、500mg或本文所述的任何剂量的游离碱或所述化合物的酸加成盐(例如，盐酸盐)。本发明的单位剂量形式根据需要可以包括与本发明化合物或其盐一起配制的赋形剂、填充剂、流动增强剂、润滑剂和/或崩解剂。例如，单位剂量形式可以包括胶体二氧化硅(流动增强剂)、无水乳糖(填充剂)、硬脂酸镁(润滑剂)、微晶纤维素(填充剂)和/或淀粉羟乙酸钠(崩解剂)。本发明化合物和非活性成分可利用例如常规的混合和封装方法进行配制。或者，式(I)化合物按PCT公开号WO2009/143389和WO2009/126515中描述的方法进行配制。

治疗

式(I)化合物可用于治疗EGFR导致的癌症。尤其是，所述化合物可用于治疗表达EGFR突变体的EGFR导致的癌症和用于治疗对TKI疗法(例如，厄洛替尼或吉非替尼)难治的EGFR导致的癌症。

这类癌症可包括非小细胞肺癌(NSCLS)，包括以下的一种或多种：鳞状细胞癌、腺癌、腺癌、细支气管肺泡癌(BAC)、局灶侵入性BAC，具有BAC特征的腺癌，以及大细胞癌；神经肿瘤，如成胶质细胞瘤；胰腺癌；头颈癌(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌；前列腺癌；腺癌；以及包括EGFR介导的癌症。

本发明基于以下发现：式(I)化合物可用于治疗EGFR导致的癌症，表达EGFR突变体的EGFR导致的癌症，和用于治疗对TKI疗法(如厄洛替尼或吉非替尼)难治的EGFR导致的癌症。式(I)化合物也可用于需要此类治疗的患者中起到预防癌症复发的维持作用。

式(I)化合物的有效系统量通常在平均日剂量为10mg至2,000mg化合物/千克患者体重，以单次或多次给药。通常，本发明化合物可向该有此治疗需要的患者以每位患者约50至约2,000mg的日剂量范围给药。可每天、每周(或间隔数天)或以间歇时间表，给药一次或多次。例如，可在每周的基础上(例如每周一)，每天给予所述化合物一次或多次，不定地或持续几周，例如4-10周。或者，可每天给药持续几天(例如2-10天)，然后几天(例如1-30天)不给药所述化合物，不定地重复该循环或重复给定的次数，例如4-10个循环。例如，本发明的化合物可每天给药持续5天，然后间断9天，然后再每天给药持续5天，然后间断9天，以此类推，不定地重复该循环或共重复4-10次。

当TKI(例如，厄洛替尼或吉非替尼)与式(I)化合物组合使用时，该组合疗法的各个成分可以以它们单一疗法的剂量水平和方案给药。例如，厄洛替尼，对于治疗NSCLC，已经以每天150mg口服给药，对于胰腺癌，已经以每天100mg口服给药。在另一实例中，吉非替尼对于治疗NSCLC已经以每天250mg口服给药。

本发明化合物的有效系统量通常在平均日剂量为10mg至2,000mg化合物/千克患者体重，以单次或多次给药。通常，本发明化合物可向该有此治疗需要的患者以每位患者约50至约2,000mg的日剂量范围给药。可每天、每周(或间隔数天)或以间歇时间表，给药一次或多次。例如，可在每周的基础上(例如每周一)，每天给予所述化合物一次或多次，不定地或持续几周，例如4-10周。或者，可每天给药持续几天(例如2-10天)，然后几天(例如1-30天)不给药所述化合物，不定地重复该循环或重复给定的次数，例如4-10个循环。例如，本发明的化合物可每天给药持续5天，然后间断9天，然后再每天给药持续5天，然后间断9天，以此类推，不定地重复该循环或共重复4-10次。

或者，TKI(例如，厄洛替尼或吉非替尼)与式(I)化合物组合使用，其一种或两种成分的剂量水平降低。

提供以下实施例以便为本领域技术人员提供如何进行、制备和评估本文请求保护的方法和化合物的完整公开和说明，旨在仅仅示例本发明而非限制发明人认为的发明范围。

实施例1

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(6)

化合物6的合成步骤示于反应方程式1中。

反应方程式1

步骤1：化合物1的合成

向2-碘苯胺(1.0当量)和二甲基氧化膦(1.1当量)于DMF中的溶液添加磷酸钾(1.1当量)和乙酸钯/Xantphos(催化剂)。反应在150℃搅拌3小时，冷却至室温。蒸发溶剂，残余物使用DCM/水后处理。粗产物使用柱纯化(EtOAc/MeOH10:1)，得到1，为棕色固体(80%产率)。

步骤2：2的合成：

将2,4,5-三氯嘧啶(1.57当量)、1(1.0当量)和碳酸钾(3.14当量)在DMF中于60℃搅拌5小时，然后冷却至室温。将混合物过滤，滤液浓缩。残余物通过柱层析纯化(ISCO机器)(DCM/MeOH20:1)，得到2，为黄色固体(61%产率)。

步骤2a：8和3的合成：

反应方程式1a

将10g(59.5mmol,1.0当量)的4-甲氧基-3-硝基苯胺于65mL二

烷和65mL水中的悬浮液使用40%NaOH调节至pH12，然后再冰浴下分3批添加Boc₂O(26g,119.1mmol,2.0当量)。反应物在室温搅拌过夜。放置后，过滤混合物，得到黄色固体，15g，产率为95%。

将化合物8(6g,22.4mmol)溶于55mL乙酸乙酯中，添加Pd/C(10%,湿,0.5g)。将还原反应物在室温于H₂(30psi)中振摇1小时，过滤。滤液蒸发得到土色固体，5.4g，定量产率。

步骤3：4的合成：

将2(1.27g,4.0mmol)、3-Boc-氨基-5-甲氧基苯胺(965mg,4.0mmol)、乙酸钯(133mg,0.59mmol)、Xantphos(352mg,0.61mmol)和磷酸钾(1.4g,6.6mmol)于无水DMF(35mL)中的悬浮液在120℃加热过夜。反应冷却至室温后，添加乙酸乙酯以稀释反应，内容物通过硅藻土过滤。真空下除去溶剂。残余物通过快速柱层析在硅胶上纯化，得到纯产物1.3g(产率62%)，为土色固体。

步骤4：5的合成：

将HCl/二

烷(4N,4mL)添加至化合物4(440mg,0.85mmol)于MeOH(4mL)中的溶液中。反应混合物在室温搅拌过夜。白色沉淀过滤并干燥，得到标题产物，为白色固体(339mg，产率81%)。

步骤5：6的合成：

将化合物5(100mg,0.15mmol)溶于CH₂Cl₂(1.6mL)和DIEA(174μL,1mmol)中。溶液在冰浴中冷却。滴加丙烯酰氯(13ul,0.165mmol)。内容物在室温搅拌1小时。真空下除去溶剂，残余物通过制备型-TLC板(7.5%MeOH/DCM)纯化，得到终产物，为土色固体(24mg，产率34%)。

实施例2

(E)-N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(14)

化合物14的合成步骤示于反应方程式2中。

反应方程式2

步骤1：10的合成：

将化合物2(2g,6.3mmol)于密封试管中溶于NH₃/MeOH(7N,20mL)中，内容物在100℃加热3天。蒸发掉挥发物，残余物分配于EtOAc/H₂O之间，分离有机层，水层使用EtOAc萃取(2X)。合并的有机相干燥(Na₂SO₄)。浓缩后，残余物在硅胶上柱纯化(10%MeOH/DCM)，得到产物，为白色固体(1.1g，产率57%)。

步骤2：11的合成

将化合物10(908mg,3.0mmol)和2-碘-4-硝基苯甲醚(963mg,4.15mmol)在密封试管中溶于25mL无水DMF中，添加Pd(OAc)₂(86mg,0.38mmol)、Xantphos(227mg,0.30mmol)、K₃PO₄(921mg,4.3mmol)。内容物在120℃加热过夜。冷却至室温后，添加EtOAc，混合物通过硅藻土过滤，使用更多EtOAc洗涤。合并的滤液在真空下浓缩，残余物通过CombiFlash(MeOH/DCM)纯化。得到产物(476mg,35.5%)，为土色固体。

步骤3：12的合成

将化合物11(476mg,1.1mmol)溶于THF(18mL)/H₂O(13mL)中，添加Fe(300mg)和NH₄Cl(300mL)。混合物在65℃加热过夜。倾倒出液体，固体残余物使用更多THF洗涤。合并的溶液浓缩，得到残余物。将残余物溶于DCM中，通过棉花过滤。将溶液再次浓缩，得到粗产物480mg。

步骤4：14的合成

将化合物12(125.4mg,0.3mmol)、4-溴巴豆酸(49mg,0.3mmol)溶于3mL无水DCM中。然后添加EDCI(63mg,0.33mmol)。混合物在室温搅拌2小时。真空下除去挥发物，添加THF(3mL)，接着添加二甲基胺/H₂O溶液(40%,0.5mL,4.0mmol)。混合物在室温搅拌另外2小时。真空下除去溶剂，残余物通过制备型-TLC(10%MeOH/DCM)纯化，得到最终产物，为土色固体(48mg，产率30.2%)。

实施例3

(E)-N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-4-吗啉代丁-2-烯酰胺(15a)

利用实施例2中描述的步骤，除了在步骤4中，利用吗啉/水(4/6)代替二甲基胺/水溶液，制备化合物15a。

实施例4

(E)-N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁-2-烯酰胺(15b)

利用实施例2中描述的步骤，除了在步骤4中，利用1-甲基哌嗪/水(4/6)代替二甲基胺/水溶液，制备化合物15b。

实施例5a

(E)-N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丁-2-烯酰胺(15c)

实施例5b

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-3-甲基丁-2-烯酰胺(15d)

实施例5c

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)甲基丙烯酰胺(15e)

实施例5d

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(15f)

化合物15c、15d、15e和15f按照反应方程式5所示制备。

反应方程式5

通用步骤：将化合物5(100mg,0.15mmol)于0℃溶于CH₂Cl₂(1.6mL)中，添加DIEA(174μL,1mmol)。滴加酰氯(13μl,0.165mmol,1.1当量)。内容物在室温搅拌1小时。真空下除去溶剂，残余物通过制备型-TLC板(10%MeOH/DCM)纯化，收集相应的带，得到终产物。

实施例6a

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙炔酰胺(15g)

实施例6b

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丁-2-炔酰胺(15h)

化合物15g和15h按照反应方程式6中所示制备。

反应方程式6

通用步骤：将化合物12(84mg,0.20mmol)、相应的酸(0.27mmol,1.35当量)溶于无水DMF(2.0mL)中。添加DCC(56mg,0.27mmol,1.35当量)。内容物在室温搅拌过夜。真空下除去溶剂，残余物通过制备型-TLC板(6.5%MeOH/DCM)纯化，收集相应的带，得到终产物。

实施例7

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)乙烯磺酰胺(16)

化合物16的合成步骤示于反应方程式7中。

反应方程式7

将化合物12(200mg,0.48mmol)和NEt₃(344μL)于室温溶于5mL THF中，添加2-氯乙磺酰氯(115μL,1.1mmol)，内容物在室温搅拌1小时。真空下除去挥发物，残余物在制备型-TLC(2X)(7.5%MeOH/DCM)上纯化。产物为土色固体(56mg，产率23%)。

实施例8

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)丙烯酰胺(18)

化合物18的合成步骤示于反应方程式8中。

反应方程式8

步骤1：17的合成

将化合物2(158mg,0.50mmol)、1,3-二氨基环己烷(57.1mg,0.5mmol)在密封试管中溶于甲氧基乙醇(1.6mL)中，添加HCl/EtOH(200μl)。内容物在110℃加热过夜。真空下除去溶剂，残余物通过2制备型-TLC板(360mLDCM/24mL MeOH/12mL7N NH₃.MeOH)纯化，得到终产物为浅色固体(134mg，产率68%)。

步骤2：18的合成

将化合物17(70mg,0.177mmol)于0℃溶于CH₂Cl₂(1.6mL)中，添加DIEA(174μL,1mmol)。滴加丙烯酰氯(15μl,0.185mmol)。内容物在室温搅拌1小时。真空下除去溶剂，残余物通过制备型-TLC板(10%MeOH/DCM)纯化，得到两种终产物，为土色固体(反式29.4mg，产率43.8%；顺式14.1mg,21.4%)。

实施例9

N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲基膦酰基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺(23)

化合物23的合成步骤示于反应方程式9中。

反应方程式9

步骤1：21的合成

将化合物19(154mg,0.54mmol)和化合物20(107mg,0.54mmol)在密封试管中溶于4mL无水DMF中，添加Pd(OAc)₂(14mg,0.062mmol)、Xantphos(37mg,0.064mmol)和K₃PO₄(150mg,0.71mmol)。内容物在120℃加热过夜。冷却至室温后，添加EtOAc，混合物通过硅藻土过滤，使用更多的EtOAc洗涤。合并的滤液在真空下浓缩，残余物通过CombiFlash(MeOH/DCM)纯化。得到产物21(140mg，产率58%)，为橙色固体。

步骤2：22的合成

将化合物21(140mg,0.31mmol)溶于THF/水(3mL/3mL)的混合物中，添加Fe(75mg)、NH₄Cl(75mg)。内容物在65℃加热过夜。冷却至室温后，混合物通过棉花过滤。滤液浓缩，将残余物溶于7.5%MeOH/DCM中，再次通过棉花过滤。真空下除去溶剂后，得到粗产物，为土色固体(126mg，产率96%)。

步骤3：23的合成

将化合物22(163mg,0.15mmol)于0℃溶于CH₂Cl₂(1.6mL)中，添加DIEA(174μL,1mmol)。滴加丙烯酰氯(13μl,0.165mmol)。内容物在室温搅拌1小时。真空下除去溶剂，残余物通过制备型-TLC板(7.5%MeOH/DCM)纯化，得到终产物，为土色固体(40mg，产率56%)。

实施例10

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-2-甲基氧杂环丙烷-2-甲酰胺(25)

化合物25的合成步骤示于反应方程式10中。

反应方程式10

步骤：将化合物24(49mg,0.1mmol)溶于0.75mL HCOOH中，添加H₂O₂(37%,0.4mL)。内容物在40℃加热1小时。通过N₂流除去挥发物，残余物通过制备型-TLC(7.5%MeOH/DCM)纯化，得到产物，为土色固体(13.7mg，产率27%)。

实施例11

N-(3-((4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(15i)

利用实施例1中描述的步骤，除了利用2,4-二氯-5-氟嘧啶作为起始原料，制备化合物15i。

实施例12

N-(3-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(29)

化合物29的合成步骤示于反应方程式12。

反应方程式12

步骤1：26的合成

将5-溴-2,4-二氯嘧啶(2.8g,12.3mmol,1.0当量)、2-二甲基膦酰基苯胺(2.08g,12.3mmol,1.0当量)、K₂CO₃(2.04g,14.8mmol,1.2当量)和nBu₄HSO₄(417mg,1.23mmol,0.1当量)于50mL的DMF中的悬浮液在65℃搅拌7小时，冷却至室温。过滤后，将滤液蒸发至油状物，将其进行层析(DCM/MeOH20:1)，得到黄色固体，2.9g，产率66%。

步骤2：27的合成

将7(1.42g,3.938mmol,1.0当量)、2-甲氧基-5-硝基苯胺(927mg,5.513mmol,1.4当量)和2.5M HCl/EtOH(6mL)于35mL的2-甲氧基乙醇中的混合物密封，并在110℃搅拌5小时，冷却至室温。混合物使用饱和Na₂CO₃/DCM后处理，使用isco(MeOH/DCM1:20)纯化，在油泵上得到黄色泡沫520mg，产率27%。

步骤3：28的合成

将27(250mg,0.5mmol)、Zn(150mg)和NH₄Cl(150mg)于2mL的THF/H₂O(5:1)中的混合物在室温搅拌1.5小时，过滤。滤液使用饱和Na₂CO₃和DCM后处理。粗产物使用制备板纯化，得到黄色固体，143mg，产率61%。

步骤4：29的合成

将苯胺(280mg,0.606mmol)溶于8mL的DCM中，添加0.3mL的三乙胺。将混合物冷却至-35℃，分批添加丙烯酰氯(54.8mg,49μl,0.606mmol,1.0当量)。反应在约-30℃搅拌15分钟，使用饱和Na₂CO₃淬灭。混合物使用饱和Na₂CO₃/DCM后处理，使用制备板纯化，得到浅棕色固体，205mg，产率66%。

实施例13

N-(3-((4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(30)

化合物30的合成步骤示于反应方程式13中。

反应方程式13

步骤：将35mg(0.0678mmol)的29溶于1.5mL的EtOH中，添加Pd/C(10%,湿,5mg)。混合物在H₂气球下于室温搅拌过夜。将混合物过滤，使用制备板纯化，得到白色固体30，8.9mg，产率30%。

实施例14

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)-3-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(36)

化合物36的合成步骤示于反应方程式14中。

反应方程式14

步骤1：化合物31按照实施例1中合成化合物1描述的步骤制备，使用2-碘-3-甲基苯胺代替2-碘苯胺作为起始原料。将31(0.53mmol)、2,4,5-三氯嘧啶(1.0当量)、碳酸钾(1.2当量)和四丁基硫酸氢铵(0.1当量)于DMF的悬浮物在65℃搅拌18小时。一旦冷却，将反应混合物过滤，浓缩滤液。将残余物溶于EtOAc和水的混合物中。使用EtOAc(3×)萃取，合并的有机相浓缩，得到基本上纯的物质，其直接在下一步骤反应中使用。

步骤2：将32(0.82mmol)、2-甲氧基-5-硝基苯胺33(1当量)和TFA(3当量)于2-BuOH(3mL)中的溶液在100℃加热18小时。一旦冷却，将EtOAc和NaHCO₃水溶液添加至反应混合物中。萃取(3×)，浓缩合并的萃取液，得到固体，其在硅胶柱(ISCO机器)上使用10%MeOH的CH₂Cl₂溶液作为洗脱液纯化，得到34，为浅棕色固体(55%)。

步骤3：向34(0.46mmol)和锌粉(6当量)于丙酮(9mL)和水(1mL)中的悬浮液在0℃添加氯化铵(10当量)。混合物在室温搅拌30分钟后，HPLC表明完全转化。丙酮在旋转蒸发仪上除去，残余物悬浮于DCM和水中。进行过滤，滤液使用DCM萃取。浓缩合并的有机层得到粗苯胺35，其不用纯化直接在下一步骤使用。

步骤4：向苯胺35(0.43mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(1.1当量)于DCM(2mL)中的溶液中在0℃添加丙烯酰氯(1.05当量)。混合物在室温搅拌过夜后，挥发性成分在旋转蒸发仪上除去。残余物在硅胶柱上使用3%MeOH的DCM溶液作为洗脱液进行纯化，得到酰胺36，为米色固体(48mg,21%)。

实施例15

N-(3-((5-氯-4-((2-(二乙基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(37)

化合物37按照实施例14中描述进行合成，除了在步骤1中利用2-(二乙基膦酰基)苯胺。后面的按照实施例1步骤1中所示的步骤进行制备。

实施例16

2-(((3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)氨基)甲基)丙烯酸甲基酯(38)

化合物38的合成步骤示于反应方程式16中。

反应方程式16

将12(125mg,0.3mmol)、2-(溴甲基)丙烯酸甲基酯(1.3当量)和N,N-二异丙基乙基胺(1.3当量)于MeCN(5mL)中的溶液在80℃加热2小时。LC-MS表明单和二烷基化产物以几乎相等的量形成，还有少量的三-烷基化的产物。混合物进行制备型-HPLC(反相)纯化，然后进行制备型-TLC纯化(正相硅胶，10%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到标题化合物，为土色固体(15mg,10%)。

实施例17

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-2-((二甲基氨基)甲基)丙烯酰胺(40)

化合物40的合成步骤示于反应方程式17中。

反应方程式17

2-(二甲基氨基甲基)丙烯酸39按照文献步骤制备(Synth.Comm.1995,25,641)。向39(65mg,0.5mmol)、偶联试剂TBTU(1.2当量)和N,N-二异丙基乙基胺(3.0当量)于DMF(5mL)和DCM(20mL)中的溶液添加5(1当量)。混合物在室温搅拌过夜后，挥发性成分在旋转蒸发仪上除去，残余物通过反相制备型-HPLC纯化，得到标题化合物，为土色固体(23mg,9%)。

实施例18

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(48)

化合物48的合成步骤示于反应方程式18中。

反应方程式18

步骤1：起始原料41由3-氟-4-氯苯酚通过硝基化和随后的O-甲基化按照公开的文献制备(US专利公开20080300242)。将41(1.0g,4.86mmol)、1-甲基哌嗪(1当量)和K₂CO₃(1当量)于DMF(20mL)中的悬浮液在80℃加热4小时。除去DMF，残余物分配于DCM和水中。萃取，浓缩，然后硅胶柱层析(10%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到42(1.26g,91%)。

步骤2和3：将42(0.96g,3.4mmol)、二苯甲酮亚胺(benzophenoneimine)(1.5当量)、乙酸钯(0.1当量)、Xantphos(0.2当量)和碳酸铯(1.6当量)于DMF(20mL)中的脱气悬浮液在110℃加热过夜。一旦冷却，将反应混合物过滤，浓缩滤液。固体残余物溶于二

烷和2M aq.HCl(1:1,40mL)，然后在70℃加热2小时。在旋转蒸发仪上除去二

烷，水层使用DCM洗涤，然后使用aq.NaHCO₃碱化。萃取，浓缩，然后硅胶柱层析(10%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到43(0.41g,45%)。

步骤4：向43(0.38g,1.42mmol)于THF(15mL)中的溶液中在N₂于0℃分多批添加NaH(2当量)。不再观察到H₂气泡后，添加Boc₂O(4当量)。得到的反应混合物在50℃加热，然后回流2小时。反应使用MeOH淬灭。常规后处理接着硅胶柱层析(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到44(0.46g,88%)。

步骤5：使用EtOAc作为溶剂，44(0.46g)在50psi氢化，得到45(0.42g,99%)。除去溶剂后，粗物质直接在下一步骤中使用。

步骤6：将45(0.42g,3.4mmol)、2(1.5当量)、乙酸钯(0.1当量)、Xantphos(0.2当量)和碳酸铯(1.3当量)于DMF(10mL)中的脱气悬浮液在110℃加热48小时。常规后处理接着硅胶柱层析(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到46(0.49g,64%)。

步骤7：向46于DCM中的溶液添加过量的TFA。混合物在室温搅拌2小时后，挥发性成分在旋转蒸发仪上除去。残余物溶于EtOAC，溶液使用aq.NaHCO₃碱化。萃取并浓缩，得到47，为土色固体。

步骤8：粗物质47(100mg)转化为48，通过利用实施例14步骤4中描述的步骤。最终产物通过反相制备型-HPLC纯化(10.4mg,9%)。

实施例19

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(51)

化合物51的合成步骤示于反应方程式19中。

反应方程式19

步骤1：在N₂下，向41(0.5g,2.43mmol)和NaH(1.5当量)于THF(10mL)中的悬浮液中在0℃滴加2-(二甲基氨基)乙醇(1.1当量)于THF(2mL)中的溶液。得到的混合物在室温搅拌3小时。常规后处理接着硅胶柱层析(10%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到49(0.53g,79%)。

步骤2：向49(0.275g,1.0mmol)、Pd₂(dba)₃(0.1当量)、2-(二-叔丁基膦)-N,N-二甲基联苯基胺(0.1当量)和叔丁醇钠(1.4当量)于二

烷(10mL)中的脱气悬浮液添加NH3的二

烷溶液(0.5M，N2-密封的烧瓶,10mL)。得到的混合物在80℃加热3小时。常规后处理接着硅胶柱层析(15%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到50(0.15g,55%)。

步骤3-7：多取代的苯胺50转化为标题化合物51，按照实施例18中描述的步骤，其中50代替43。

实施例20

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,4-二甲氧基苯基)丙烯酰胺(54)

化合物54的合成步骤示于反应方程式20中。

反应方程式20

2,4-二甲氧基-5-硝基苯胺53由1,5-二氟-2,4-二硝基苯，通过双S_NAr取代反应，得到52，然后单还原硝基，按照公开的步骤(J.Org.Chem.2005,70,10660)制备。转化为标题化合物54，按照实施例14，通过53代替33，2代替32。

实施例21

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-N-(3-(二甲基氨基)丙基)丙烯酰胺(56)

化合物56的合成步骤示于反应方程式21中。

反应方程式21

步骤1：2-硝基-4-溴苯甲醚(2.32g,10mmol)、N,N-二甲基-1,3-丙二胺(1.1当量)、Pd₂(dba)₃(0.02当量)、dppf(0.04当量)和叔丁醇钠(1.5当量)于二

烷(20mL)中的脱气悬浮液在110℃加热过夜。一旦冷却后，反应使用水猝灭。挥发性成分在旋转蒸发仪上除去，残余物分配于EtOAc和水中。萃取并浓缩，接着硅胶柱层析(15%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到55(0.66g,26%)。

步骤2-6：仲胺55转化为标题化合物56，按照实施例18，通过55代替43。

实施例22

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)乙酰胺(63)

化合物63的合成步骤示例于反应方程式22。

反应方程式22

步骤1：将乙酸酐(7.8mL,82.6mmol)在剧烈搅拌下滴加至3-氟-4-氨基苯酚(10g,78.6mmol)于水(20mL)中的悬浮液中。不溶性酰胺几分钟内作为白色固体开始沉淀。反应混合物搅拌10多分钟后，白色固体通过过滤收集，使用冷水洗涤。硅胶柱层析(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到纯57(8.75g,66%)。

步骤2：向57(8.75g,51.73mmol)和K₂CO₃(1.1当量)于THF(30mL)中的悬浮液添加碘甲烷(1.2当量)。混合物在密封试管中在60℃加热过夜。过滤并浓缩，接着硅胶柱层析(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到纯58(7.17g,89%)。

步骤3：将硝酸(70%,3.83mL)在剧烈搅拌下滴加至58(7g)于DCM(70mL)中的溶液。在室温搅拌1小时后，反应混合物回流3小时。DCM在旋转蒸发仪上除去，残余物使用冷水洗涤，然后进行硅胶柱层析纯化(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)，得到59(3.26g,37%)。

步骤4：多取代的硝基苯59还原为相应的苯胺60，按照实施例14步骤3中描述的步骤。

步骤5：多取代的苯胺60(200mg,1mmol)于前体2(1.5当量)偶联，得到61(320mg,67%)，通过实施例18步骤6中描述的步骤。

步骤6：N-芳基乙酰胺61(320mg)在6N HCl加热回流30分钟。碱化后，萃取并浓缩，得到芳基胺62(290mg,98%)。

步骤7：粗62(150mg)转化为63，通过利用实施例14步骤4中描述的步骤。最终产物通过反相制备型-HPLC纯化(41mg,24%)。

实施例23

N-(3-((4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(70)

化合物70的合成步骤示于反应方程式23。

反应方程式23

步骤1：将2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5.0g,27mmol)悬浮于MeCN(300mL)和AcOH(60mL)。向其中一次性添加selectfluor(1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸)盐，1.4当量，13.2g)。反应混合物在60℃搅拌过夜。HPLC检测表明转化完全。溶剂蒸发至大约体积为～100mL后，添加甲苯(20mL)，将悬浮液过滤。将滤液蒸发至干，使用甲苯再蒸发(2×20mL)。残余物然后通过短硅胶垫(使用1/1DCM/EtOAc洗涤)和柱层析(ISCO机器，EtOAc/DCM，EtOAc，0-100%梯度)纯化，得到粗产物。静置后，观察到纯产物由柱级分中沉淀出来。将这些沉淀过滤，母液合并以进行沉淀收获第2批。总共得到1.23g产物64(22%产物,～90%纯度,Cl-异构体为主要的杂质)。

步骤2：将64(1.22g,6mmol)于THF(10mL)中的溶液在0℃缓慢添加至NaH(1当量)于THF(10mL)中的悬浮液中。混合物搅拌10分钟后，缓慢添加对甲苯磺酰氯(1当量)于THF(5mL)中的溶液。继续在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌过夜。HPLC监测反应显示完全，通过添加aq.NH₄Cl(1–2mL)淬灭。反应混合物然后通过硅藻土过滤，蒸发滤液。粗产物通过柱层析纯化(ISCO机器,EtOAc/庚烷,EtOAc，0-100%梯度)，得到65(1.22g,56%)。

步骤3：在微波器(20mL)中放置65(600mg,1.7mmol)、1(282mg,1.7mmol)和异丙醇(10mL)。添加HCl(1.3mL,4M的二

烷溶液)后，得到的混合物在微波反应器中在150℃搅拌2小时。蒸发溶剂，残余物通过硅胶柱层析纯化(ISCO机器,EtOAc/庚烷,0-100%EtOAc以洗脱出杂质，然后MeOH/DCM,0-20%MeOH)，得到纯66(900mg,54%)。

步骤4：称重中间体66(493mg,1mmol)、2-甲氧基-5-硝基苯胺33(168mg,1mmol)、K₂CO₃(1.4mmol)、Pd₂dba₃(5mol%)和X-Phos(10mol%)于100mL圆底烧瓶中，并置于N₂下。溶剂甲苯(10mL)和叔丁醇(2mL)作为混合物添加，将搅拌的溶液排空，并再次填充N₂，进行三次。得到的混合物然后在110℃搅拌过夜。HPLC表明反应完全，蒸发溶剂。残余物通过硅胶柱层析在ISCO机器(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)上纯化，得到偶联产物67(570mg,91%)。

步骤5：多取代的硝基苯67还原为相应的苯胺68，按照实施例14步骤3中描述的步骤。

步骤6：粗苯胺68(123mg)转化为69，通过利用实施例14步骤4中描述的步骤。产物通过硅胶柱层析在ISCO机器(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)纯化。产率：69mg,51%。

步骤7：将69(60mg)和TBAF(1M的THF溶液,0.3mL)于THF(10mL)中的溶液回流5小时。HPLC表明完全反应。蒸发溶剂后，残余物通过硅胶柱层析在ISCO机器(5%MeOH的DCM溶液作为洗脱液)上纯化。产物使用TBAF:水共同洗脱，得到纯产物(10mg,21%)。

实施例24-25和27-31按照反应方程式24中所示的方法制备，通过合适的醇代替1-(2-羟基乙基)-4-甲基哌嗪。

反应方程式24：

步骤1：向5-氟-2-硝基苯甲醚(50mmol,8.5g)和锌粉(3.5当量,11.4g)于丙酮(45mL)和水(5mL)中的悬浮液在0℃分多批添加氯化铵(11当量,29.3g)。混合物在室温搅拌过夜后，HPLC表明完全反应。丙酮在旋转蒸发仪上除去，残余物悬浮于DCM和水。进行过滤，滤液使用DCM萃取。浓缩合并的有机层，得到粗苯胺(～7.0g)，其不用纯化直接在下一步骤使用。

步骤2：向4-氟-2-甲氧基苯胺(5.1g,36.1mmol)于浓硫酸(55mL)中的悬浮液中在冰冷却下经15分钟分批添加硝酸胍(4.38g,36.1mmol)。混合物在同一温度下再搅拌15分钟。然后将反应物倾倒至饱和的冷NaHCO₃溶液中，通过过滤收集沉淀的固体。将残余物溶于EtOAc，并用无水Na₂SO₄干燥。除去溶剂，得到B(4.72g)。

步骤3：将上面化合物B(0.1g,0.53mmol)和4-(邻二甲基氧膦基苯胺基)-5-氯-2-氯嘧啶(0.17g,0.53mmol)溶于2-丁醇(1.2mL)和三氟乙酸(0.25mL)的混合物中，并在密封试管中加热至100℃持续过夜。然后将反应混合物冷却至室温，倾倒至饱和的NaHCO₃溶液，同时搅拌，得到橙色固体，将其过滤，使用Et₂O洗涤以除去最后痕量的水。产物干燥，得到C(0.19g)，其直接在下一步骤使用。

步骤4：将NaH(0.039g,0.96mmol,60%于油中的分散液)置于干燥密封的微波试管中。向其中，滴加溶于无水四氢呋喃(1.6mL)中的1-(2-羟基乙基)-4-甲基哌嗪(0.023g,0.16mmol)。混合物在室温搅拌20分钟。然后一次性将该中间体C(0.075g,0.16mmol)加至该悬浮液中，将混合物在密封试管中加热至67℃，持续25分钟。混合物降至室温，使用几滴甲醇淬灭。真空下除去溶剂，得到的粗物质进行FCC，使用DCM-MeOH(95/5)洗脱，得到所需的产物D(0.081g)。

步骤5：将化合物D(0.078g,0.13mmol)溶于丙酮(1.3mL)和水(0.3mL)的混合物中。向其中添加锌纳米粉末(0.07g,1.3mmol)，之后立即分小批添加NH₄Cl(0.16g,2.6mmol)。混合物在室温剧烈搅拌30分钟。然后将无水Na₂SO₄添加至该搅拌的混合物中，得到的粗物质过滤，蒸发溶剂，将残余物溶于DCM，直接负载于硅胶筒上，使用DCM-MeOH-NH₃(90/10)洗脱，得到所需产物E(0.044g)。

步骤6：向E(0.044g,0.078mmol)于无水四氢呋喃(0.52mL)中的溶液在0°C在搅拌下添加DIPEA(0.027mL,0.156mmol)。接着添加丙烯酰氯(0.007g,0.078mmol)。反应在该温度再搅拌1小时。真空下除去溶剂，粗产物通过FCC纯化，使用DCM-MeOH-NH₃(90/10)洗脱，得到胶状物，其进一步使用Et₂O处理，得到固体物质F(0.02g)。

实施例24

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)丙烯酰胺

实施例25

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丙烯酰胺

实施例26

N-丙烯酰基-N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例27

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((1-(二乙基氨基)-3-甲氧基丙-2-基)氧基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例29

rac-(R)-N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((1-(二乙基氨基)-3-甲氧基丙-2-基)氧基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例30

实施例31

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(2-(二甲基氨基)-2-甲基丙氧基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例32-34按照反应方程式26中所示的方法制备，通过仲胺代替(3-二甲基氨基)吡咯烷。

反应方程式26：

将N-Boc-吡咯烷-3-酮、仲胺、氰基硼氢化钠和硫酸镁于DCM中的悬浮液在40℃搅拌过夜。通过过滤除去固体成分，将2.5N HCl的MeOH溶液添加至滤液中，得到的溶液在室温搅拌30分钟。挥发性成分在旋转蒸发仪上除去。残余物分配于DCM和aq.NaHCO₃。合并的有机相浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化，得到(3-二烷基氨基)吡咯烷C，其转化为最终化合物，通过C代替(3-二甲基氨基)吡咯烷。

实施例32

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-吗啉代苯基)丙烯酰胺

实施例33

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二乙基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例34

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((3-(二甲基氨基)丙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例35

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-2-((二异丙基氨基)甲基)丙烯酰胺

实施例35按照反应方程式27中所示的方法制备。

反应方程式27：

仲胺转化为2-(二烷基氨基甲基)丙烯酸A，按照文献的方法(Synth.Comm.1995,25,641)。这些转化为最终化合物，按照反应方程式17中所示的方法，通过使用A代替39。

实施例36

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲基苯基)丙烯酰胺

实施例36按照反应方程式28中所示的方法制备。

反应方程式28：

2-氟-5-硝基苯胺或2-甲基-5-硝基苯胺转化为所需的化合物，按照反应方程式28中所示的方法。

实施例37

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(2-(二甲基氨基)-3-甲氧基丙氧基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例37按照反应方程式34中所示的方法制备。

反应方程式34：

步骤1：向苄基缩水甘油醚(5.0g)于MeOH(5.0mL)中的溶液添加NaOMe(5.0mL,25%甲醇溶液)。混合物加热至50℃，持续1小时，然后加热回流5分钟。混合物使用湿NaHCO₃处理，过滤。蒸发溶剂，将残余物溶于DCM(20mL)。溶液干燥，蒸发，得到浅黄色油状物(4.8g，产率80%)。

步骤2：将步骤1产物(3.0g)于DCM(100mL)中的溶液使用PDC(6.0g)和分子筛(4.0g)处理。混合物在室温搅拌4小时，使用Et₂O(100mL)稀释。混合物通过用Celite垫过滤，蒸发溶剂，得到黄色油状物(1.7g，产率57%)。

步骤3：化合物按照下面步骤合成：向2,2-二甲基-1,3-二

烷-5-酮(2.6g)、二甲基胺HCl盐(1.8g)于DCM(50mL)中的混合物添加NaHB(OAc)₃(6.0g)和Et₃N(3.0mL)。反应混合物在室温搅拌过夜，然后使用aq.NaHCO₃稀释。有机层干燥，蒸发，得到无色油状物(2.5g，产率79%)。

步骤4：步骤-3产物(1.5g)于MeOH(10mL)中的溶液加入Pd-C(0.5g,10%湿)，在氢气球下在室温氢化过夜。滤除催化剂，蒸发溶剂，得到产物(0.64g，产率71%)，为无色油状物。

步骤5：化合物由化合物B和步骤-4产物按照通用步骤合成，为黄色固体。

步骤6：实施例37按照下面的类似步骤合成：向(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-硝基苯基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(240mg)于丙酮(1.0mL)和Zn粉(0.3g)、NH₄Cl(0.15g)的混合物中添加几滴水。混合物在室温搅拌15分钟，然后使用DCM(5mL)稀释。过滤后，蒸发有机溶液，残余物用于下一步骤。残余物溶于THF(3.0mL)和Et₃N(0.05mL)，溶液使用丙烯酰氯处理。反应通过HPLC监测，直到起始原料消失。反应使用aq.NaHCO₃淬灭，使用DCM(2x5.0mL)萃取。有机溶液浓缩，残余物通过制备型-TLC板(10%MeOH/DCM)纯化，得到所需产物。

实施例38

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-((2-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺

实施例38按照反应方程式35中所示的方法制备。

反应方程式35：

步骤1：向N,N`-二甲基乙二胺(300mg)于DMF(2.0mL)中的溶液添加K₂CO₃(1.0g)和化合物B(466mg)。混合物在80℃加热3小时。蒸发溶剂，残余物使用DCM萃取，然后通过制备型-TLC板(10%MeOH/DCM，具有1%NH₃的甲醇溶液)纯化，得到产物，为黄色固体(400mg，产率75%)。

步骤2：步骤1产物(1当量)于DMF(3.0mL)中的溶液使用NaHCO₃(0.5g)和相应的溴化合物(2.5当量)在50℃处理5小时。蒸发溶剂，产物通过制备型-TLC板(8%MeOH/DCM)纯化，得到产物，为黄色固体。

步骤3：实施例38按照实施例37的步骤6中使用的类似步骤合成。

实施例39

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(2-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)乙氧基)苯基)丙烯酰胺

实施例39按照反应方程式36中所示的方法制备。

反应方程式36：

步骤1：将N-(2-甲氧基乙基)甲基胺(1.8g)和溴乙酸乙基酯(3.4g)于乙腈(20mL)中的混合物使用K₂CO₃(4.0g)和NaI(20mmol)处理。混合物回流过夜。蒸发溶剂，残余物使用DCM萃取，然后在硅胶柱上纯化(0-8%MeOH/DCM)，得到产物，为无色油状物(3.2g，产率93%)。

步骤2：向步骤-1产物(3.5g)于THF(20mL)中的溶液分批添加LAH(800mg)。得到的混合物在室温搅拌过夜，然后使用EtOAc和水猝灭。过滤后，蒸发有机溶液，得到无色油状物(2.0g，产率75%)。

步骤3：步骤3产物化合物由化合物B(400mg)和步骤-4产物按照通用步骤合成，得到标题化合物，为黄色固体(200mg，产率40%)。

步骤4：实施例39按照实施例37的步骤6中使用的类似步骤合成。

实施例40

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(3-(二乙基氨基)丙基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例40按照反应方程式39中所示的方法制备。

反应方程式39：

步骤1：向3-甲氧基-4-硝基苄基醇(5g)于DCM(100mL)中的溶液添加PDC(1.5当量)和分子筛(6.0g)。混合物在室温搅拌2小时，使用Et₂O(100mL)稀释。混合物通过用Celite垫过滤，蒸发溶剂。残余物使用少量MeOH洗涤，得到灰白色固体(3.7g，产率74%)。

步骤2：向步骤-1产物(0.91g)于DCM(10mL)中的溶液添加(乙氧基羰基亚甲基)三苯基正膦(2.0g)。混合物在室温搅拌30分钟。蒸发溶剂，残余物在硅胶(20%Et₂O)/庚烷)上纯化，得到浅黄色固体(1.1g，产率87%)。

步骤3：步骤-2产物(0.52g)于MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd-C(0.5g,10%湿)，在氢气球下在室温氢化过夜。滤除催化剂，蒸发溶剂，得到黄色油状物(0.45g，产率97%)。

步骤4：在小瓶中加入H₂SO₄(2.0mL)，冷却至0℃。小心地加入步骤-3产物(0.4g)。添加硝酸胍(1当量)。混合物在0℃搅拌2小时，在室温搅拌1小时。混合物使用过量湿NaHCO₃处理，使用DCM(10mL)萃取。产物通过制备型-TLC板(8%MeOH/DCM)纯化，得到橙色固体(0.34g，产率71%)。

步骤5：将化合物C(320mg)、步骤-4产物(268mg)和TFA(0.3mL)于2-BuOH(2mL)中的溶液在100℃加热18小时。一旦冷却后，将EtOAc和aq.NaHCO₃加至反应混合物。萃取(3×)，合并的萃取物浓缩，得到固体，其通过制备型-TLC板(15%MeOH/DCM)纯化，得到橙色固体(410mg，产率71%)。

步骤6：向步骤-5产物(400mg)于MeOH(2.0mL)中的悬浮液中添加K₂CO₃(1.0g)和水(0.5mL)。将反应小瓶密封并在60℃加热15分钟。混合物冷却至室温，将上层转移至新的小瓶，并使用水稀释。pH通过添加HCl水溶液(2N)调节至5-6，通过过滤收集产物，为黄色固体(310mg，产率86%)。

步骤7：向步骤-6产物(260mg)和Et₂NH(1.1mmol)于DMF(2.0mL)中的混合物中添加HBTU(1.3mmol)和Et₃N(0.14mL)。混合物在室温搅拌2小时，使用DCM(5.0mL)稀释。混合物使用aq.K₂CO₃洗涤，蒸发。残余物通过制备型-TLC板(15%MeOH/DCM)纯化，得到橙色固体(250mg，产率87%)。

步骤8：向步骤-7产物(250mg)于THF(1.0mL)中的溶液中添加BH₃Me₂S(4.0mL,2.0M THF溶液)。混合物在60℃搅拌2小时，蒸发溶剂。残余物溶于MeOH(2.0ml)，使用湿K₂CO₃在密封小瓶中于70℃处理1小时。蒸发有机溶液，残余物通过制备型-TLC板(25%MeOH/DCM)纯化，得到橙色固体(170mg，产率70%)。

步骤9：实施例40按照实施例37的步骤6中使用的类似步骤合成。

实施例41

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例41按照反应方程式40中所示的方法制备。

反应方程式40：

步骤1：N,N-二乙基-2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙酰胺按照本文中公开的方法制备。

步骤2：向N,N-二乙基-2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙酰胺(1.0g)于THF(5.0mL)中的溶液中添加BH₃Me₂S(20.mL,2.0M THF溶液)。混合物在60℃搅拌2小时，蒸发溶剂。残余物溶于MeOH(10ml)，使用湿K₂CO₃在密封小瓶中于70℃处理1小时。蒸发有机溶液，残余物在硅胶柱上纯化(5%MeOH/DCM)，得到产物，为橙色油状物(0.62g，产率65%)。

步骤3：步骤-2产物(600mg)于MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd-C(0.5g)，在氢气球下在室温氢化3小时。滤除催化剂，蒸发溶剂，得到黄色油状物(430mg，产率81%)。

步骤4：步骤4的产物按照反应方程式39的步骤4的步骤合成，为橙色油状物。

步骤5：步骤4的产物按照反应方程式13的步骤5合成，得到橙色固体。

步骤6：实施例41按照实施例37的步骤6中使用的类似步骤合成。

本发明的化合物

下面所示的化合物利用类似于本文中描述的方法合成，可用于治疗EGFR导致的癌症。

实施例42

rac-N-((1R,3R)-3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)丙烯酰胺

实施例43

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)丙烯酰胺

实施例44

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-N-甲基丙烯酰胺

实施例45

N-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例46

1-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮

实施例47

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-乙氧基苯基)丙烯酰胺

实施例48

N-(5-((5-氯-4-((2-(二乙基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例49

N-(5-((5-氯-4-((2-(二乙基膦酰基)-3-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例50

N-(3-((5-氯-4-((2-(二乙基膦酰基)-3-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例51

(E)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲基膦酰基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氧基)苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺

实施例52

N-(5-((5-氯-4-((2-(二乙基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例53

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)-3-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例54

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例55

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例56

(E)-N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺

实施例57

(E)-N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺

实施例58

N-(3-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)氧杂环丙烷-2-甲酰胺

实施例59

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-吗啉代苯基)氧杂环丙烷-2-甲酰胺

实施例60

(2-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-((甲基(乙烯基)膦酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦

实施例61

N-(5-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二乙基氨基)乙基)(乙基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例62

N-(2-((2-(二乙基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)-5-乙基嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例63

N-(3-((4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)-5-乙基嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例64

N-(3-((4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例65

N-(3-((5-环丙基-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

实施例66

本发明的其他化合物

下面所示的化合物可以利用类似于本文中描述的那些方法合成，且可用于治疗EGFR导致的癌症。

生物学测试

测量本发明化合物针对人EGFR(天然序列)和针对带有L858R突变和L858R/T790M双突变的EGFR的激酶抑制活性(EGFR、L858R、和L858R/T790M，各自示于表1)。其他分析可使用EGFR缺失突变体例如delE746-A750(具有或不具有额外的T790M突变)进行。分析条件包括具有3μM的最高浓度(单份)和10μM ATP的10点曲线。

我们还评估了式(I)化合物对表达目标EGFR突变体或对照(即，表达野生型EGFR的细胞系)的BaF3细胞的抗增殖活性。测试利用MTT进行。

表1

1.A=>0且<51nM；B=>51nM且<100nM；C=<101nM且<250nM；D=>250nM

其他实施方案

在本说明书中提及的所有公开、专利和专利申请在此引入本文作为参考，正如每个独立的公开或专利申请具体地和单独地指出以引入本文作为参考一样。

虽然本发明已经结合其具体实施方案进行了描述，但应理解其能够进一步改进且本申请意欲包括本发明的任何改变、使用或改良，只要大体上遵循本发明的原理，且包括偏离本发明公开的但来自本发明所属且可应用于上文中提及的必要特征的本领域中已知或常规实践范围内的那些内容，并包括在权利要求的范围内。

其他实施方案在权利要求的范围内。

Claims

1.式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂或CF₂；

R^h为H、C_1-4烷基或卤素；

环A选自：

R^b2为H、F、或为含有1、2或3个N或O原子的5或6元杂环，该杂环为未取代的或取代的；

Ra¹与R^b4结合形成6元杂环，或者为H、卤素、W¹、-CN、-NO₂、-R¹、-OR²、-O-NR¹R²、-NR¹R²、-NR¹-NR¹R²、-NR¹-OR²、-C(O)YR²、-OC(O)YR²、-NR¹C(O)YR²、-SC(O)YR²、-NR¹C(=S)YR²、-OC(=S)YR²、-C(=S)YR²、-YC(=NR¹)YR²、-YC(=N-OR¹)YR²、-YC(=N-NR¹R²)YR²、-YP(=O)(YR¹)(YR²)、-NR¹SO₂R²、-S(O)_rR²、-SO₂NR¹R²、-NR¹SO₂NR¹R²，或

R^a2为H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_3-6烯基氧基或C_3-6环烷基氧基；

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；

和

R⁷为H、烷基或杂烷基；

R⁸为C_1-4烷基；

R¹³为H或C_1-4烷基，

2.权利要求1的化合物，其中所述化合物为式(IIa)、式(IIb)或式(IIc)所示的化合物：

其中

V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂或CF₂；

R^h为H、C_1-4烷基或卤素；

R^g为-P(O)(R^3A)(R^3B)、-S(O)N(R^3C)(R^3D)、-S(O)₂R^3E、-C(O)N(R^3F)(R^3G)、-OC(O)N(R^3F)(R^3G)、-NR^3HC(O)OR^3I、包含1、2、3或4个N原子的5或6元杂环，或者与R^g2结合形成5-至7-元杂环，其中各个R^3A、R^3B、R^3C、R^3D、R^3E、R^3F、R^3G、R^3H和R^3I独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B，或者R^3C和R^3D，或者R^3F和R^3G，与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；

和

R⁷为H、烷基或杂烷基；

R⁸为C_1-4烷基；

R¹³为H或C_1-4烷基，

3.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(IIIa)-(IIIe)所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中R^a1、R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如权利要求1所定义。

4.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(IVa)-(IVe)所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如权利要求1所定义。

5.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(Va)-(Ve)所示化合物或其药学上可接受的盐：

6.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(VIa)-(VIe)所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中R^a2、R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如权利要求1所定义，R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；

W¹如权利要求1所定义；和

R⁴选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基。

7.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(VIIa)-(VIIe)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R^a1、R^a2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如权利要求1所定义。

8.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(VIIIa)-(VIIIe)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R^a2、R^b2、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如权利要求1所定义，R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

W¹如权利要求1所定义；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；和

9.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(IXa)-(IXe)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R^b2、R^b4、R^g、R^g1、R^g2、R^d和R^h如权利要求1所定义，R^a1选自W¹、-R¹、-C(O)YR²、-C(=S)YR²、-C(=NR¹)YR²、-C(=N-OR¹)YR²、-C(=N-NR¹R²)YR²、-S(O)_rR²和

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

W¹如权利要求1所定义；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；和

10.权利要求1的化合物，其中所述化合物为任一式(Xa)-(Xe)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

W¹如权利要求1所定义；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；和

11.权利要求2-10中任一项的化合物，其中R^a2为H、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。

12.权利要求2-10中任一项的化合物，其中R^d为H、Cl、F、Br、I、CN、CH₃、CF₃、CH₂CH₂=CH₂或环丙基。

13.权利要求2-6或8-10中任一项的化合物，其中R^b2为H。

14.权利要求2-10中任一项的化合物，其中R^g1为H，R^g2为H、F、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。

15.权利要求2-10中任一项的化合物，其中R^g为-P(O)(R^3A)(R^3B)或-S(O)₂R^3E，其中R^3A、R^3B和R^3E如权利要求1所定义。

16.权利要求15的化合物，其中R^g为-P(O)(CH₃)₂或-S(O)₂(CH(CH₃)₂)。

17.权利要求2、3或5-10中任一项的化合物，其中R^a1为包含1或2个N或O原子的5或6元杂环，其为未取代的或被烷基取代。

18.权利要求17的化合物，其中R^a1选自任一下面的基团：

19.权利要求2-10中任一项的化合物，其中R^a2为甲氧基；R^d为Cl、F、Br、I或CH₃；R^g为-P(O)(CH₃)₂或-S(O)₂(CH(CH₃)₂)。

20.权利要求1的化合物，其中U¹为N，U²为C-R^d，U³为C-R^e。

21.权利要求1的化合物，其中U¹为C-R^d，U²为N，U³为C-R^e。

22.权利要求1的化合物，其中U¹为N，U²为N，U³为C-Re。

23.权利要求1的化合物，其中U¹为N；U²为C-R^d；U³为C-R^e；R^a2为OCH₃；R^g或R^g1为-P(O)(R^3A)(R^3B)；各个R^3A和R^3B独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^3A和R^3B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；R^b4为-NHC(O)C(R¹¹)=CR⁹R¹⁰；各自出现的R⁹和R¹⁰独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基和杂芳基；R¹¹为-C(O)-OR¹²、-CH₂N(CH₃)₂、H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R¹²为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基。

24.权利要求23的化合物，其中V¹为NH。

25.权利要求23的化合物，其中V¹为O。

26.权利要求23-25中任一项的化合物，其中R^d为Cl。

27.权利要求23-26中任一项的化合物，其中R^g或R^g1为-P(O)(CH₃)₂或-P(O)(CH₂CH₃)₂。

28.权利要求23-27中任一项的化合物，其中R^b4为-NHC(O)C(R¹¹)=CH₂；R¹¹为-C(O)-OR¹²、-CH₂N(CH₃)₂、H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基；R¹²为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂烷基、杂环基或杂芳基。

29.权利要求28的化合物，其中R^d为Cl。

30.权利要求28-29中任一项的化合物，其中R^g或R^g1为-P(O)(CH₃)₂或-P(O)(CH₂CH₃)₂。

31.权利要求1的化合物，其中U³为N，U¹和U²中的一个为N，另一个为C-R^d。

32.一种在受试者中治疗EGFR导致的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的权利要求1-31中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。

33.一种在受试者中治疗EGFR导致的癌症的方法，所述方法包括(a)提供具有特征在于存在表皮生长因子受体激酶(EGFR)突变的EGFR导致的癌症的受试者，和(b)向所述受试者给药治疗有效量的权利要求1-31中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。

34.权利要求的方法33，其中所述EGFR导致的癌症的特征在于存在一个或多个选自以下的突变：(i)L858R、(ii)T790M、(iii)L858R和T790M二者、(iv)delE746_A750，以及(v)delE746_A750和T790M二者。

35.权利要求32-34中任一项的方法，其中所述EGFR导致的癌症为非小细胞肺癌(NSCLS)；成胶质细胞瘤；胰腺癌；头颈癌(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌；卵巢癌；前列腺癌；或腺癌。

36.权利要求32-35中任一项的方法，其还包括，在给药权利要求1-31中任一项的化合物6天内，向所述受试者给药选自厄洛替尼、吉非替尼和其药学上可接受的盐的第一代激酶抑制剂，其中各个所述的权利要求1-31中任一项的化合物和所述的第一代激酶抑制剂以共同足以治疗所述EGFR导致的癌症的量给药。

37.一种抑制表达EGFR突变的细胞的增殖的方法，所述方法包括将所述细胞与以足以抑制所述增殖的量的权利要求1-31中任一项的化合物或其药学上可接受的盐接触。

38.权利要求37的方法，其中所述EGFR突变的特征在于在表皮生长因子受体激酶(EGFR)中存在一个或多个选自以下的突变：(i)L858R、(ii)T790M、(iii)L858R和T790M二者、(iv)delE746_A750，以及(v)delE746_A750和T790M二者。

39.权利要求37或38的方法，其中所述细胞为癌细胞。

40.权利要求39的方法，其中所述癌细胞为来自下列的细胞：非小细胞肺癌(NSCLS)；成胶质细胞瘤；胰腺癌；头颈癌(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌；卵巢癌；前列腺癌；或腺癌。

41.一种在受试者中治疗选自厄洛替尼或吉非替尼或其药学上可接受的盐的第一代激酶抑制剂难治的EGFR导致的癌症的方法，所述方法包括以足以治疗该癌症的量的向所述受试者给药权利要求1-31中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。

42.药物组合物，其包含式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

V¹为O、S、NR^V、CO、CH₂或CF₂；

R^h为H、C_1-4烷基或卤素；

环A选自：

各个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR¹-；

各个X₁和X₂独立地选自CH和N；

和

R⁷为H、烷基或杂烷基；

R⁸为C_1-4烷基；

R¹³为H或C_1-4烷基，

或其药学上可接受的盐，其中R^a1、R^g2和R^b4中的一个包含W¹，且其中所述化合物包含至少一个-P(O)(R^6A)(R^6B)，其中各个R^6A和R^6B独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂烷基，或者R^6A和R^6B与其连接的原子一起结合形成5-或6-元杂环，其为未取代的或取代的；和

药学上可接受的赋形剂。