COMPOSICIONES Y COMPUESTOS COMO INHIBIDORES DE C1NASA DE PROTEÍNA
REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS La presente Solicitud reclama el beneficio de Solicitud de
Patente Provisional EE.UU. Número 60/647,606, presentada el 25 de Enero del 2005. Esta solicitud está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Campo de la Invención La presente invención proporciona una clase novedosa de compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y métodos de uso de dichos compuestos para el tratamiento o prevención de enfermedades o padecimientos asociados con la actividad de cinasa anormal o desregulada, particularmente enfermedades o padecimientos que involucra la activación anormal de las cinasas Abl, Bcr-Abl, FGFR3, PDGFRß, Flt3 y b-Raf. Antecedentes de la Invención Las cinasas de proteína representan una familia grande de proteínas, las cuales juegan un papel central en la regulación de una amplia variedad de procesos celulares y control de mantenimiento sobre la función celular. Una parte, sin limitación de esta lista de cinasas incluyen: receptor de cinasas de tirosina tales como el factor de crecimiento derivado de plaquetas de cinasa de receptor (PDGF-R) y el factor de crecimiento de los fibroblastos del receptor, FGFR3;
las cinasas de tirosina sin receptor tales como Abl y la cinasa de fusión BCR-Abl; y cinasas de serina/treonina tales como las cinasas b-RAF, SGK, MAP (es decir, MKK4, MKK6, etc.) y SAPK2a y SAPK2ß. Se ha observado que la actividad de cinasa aberrante en varios estados de enfermedad incluyendo padecimientos proliferativos benignos y malignos así como enfermedades resultantes de una activación inapropiada de los sistemas nerviosos e inmunes. Los compuestos novedosos de la presente invención inhiben la actividad de uno o más cinasas de proteína y son, por lo tanto, esperados para ser útiles en el tratamiento de enfermedades asociadas a la cinasa. Breve Descripción de la Invención En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I:
en donde: n es seleccionado de 0, 1, 2, 3 y 4; R-i es seleccionado de hidrógeno, alquiloC1-6, ariloC6-?o-alquiloC0.4, heteroariloC5.10-alquiloCo-4, cicloalquiloC3.12-alquiloC0- , heterocicloalquiloC3.8-alquiloC0.4 y -XNR7R8;
en donde cualquier arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo de R es opcionalmente sustituido con radicales 1-3 seleccionados independientemente de halo, alquiloC1-6, halo-sustituido-alquilod-e, alcoxiC?.6, halo-substituido-alcoxiCt.6, alquiltiod.e, halo-sustituido-alquiltioC1-6l -XNR7R8, -XNR7XNR7R8, -XNR7R9, ariloC6.10-alquiloCo-4, heteroariloC5.?o-alquilo-C0-4, cicloalquiloC3.12-alquilo-C0- y heterocicloalquiloC3-8-alquiloC04; en donde cualquiera de los substituyentes arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo en R^ pueden ser opcionalmente sustituidos por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados de halo, alquiloCi. 6, halo-sustituido-alquiloC?.6, hidroxi-sustituido-alquiloC1-6, alcoxiC?-6 y halo-sustituido-alcoxiCt-6; y en donde cualquier alquilo de R^ pueden tener un metileno reemplazado con O; en donde cada X es independientemente seleccionada de un enlace y alquilenoCt.6; R7 y R8 son independientemente seleccionados de hidrógeno y alquiloC!.6; en donde cualquier metileno de R7 y R8 pueden ser remplazados con O; en donde R es seleccionado de ar¡loC6-?o-alquiloC0- , heteroariloC5-?o-alquiloC0.4, cicloalquiloC3.12-alqu¡loCo- y heterocicloalquiloC3-8-alquiloC0-4; R2 es seleccionado de hidrógeno y alquiloC!.6; R3 es seleccionado de hidrógeno y alquiloC?.6; R4 es seleccionado de halo, alquiloC1-6, halo-sustituido-alquiloCt.6, alcoxiC?_6, halo-sustituido-alcoxiC?.6, alquiltioC -6 y halo-sustituido-alquil tioC?_6; R15 es seleccionado de -NR5Y(O)R6 e -Y(O)NR5R6; en
donde Y es seleccionado de C, S, S(O), P y P(O); R5 es seleccionado de hidrógeno y alquiloC1-6; y R6 es seleccionado de ar?loC6-?o. heteroariloC5.?o, c?cloalqu?loC3 12 y heteroc?cioalqu?loC3.8; en donde dicho arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo de R& es substituido opcionalmente con 1 a 3 substituyentes independientemente seleccionados de halo, alqu?loC?-6, halo-sustituido-alquiloC1-6, alcoxiCi 6, halo-sust?tu?do-alcox?d-6, alqu?lt?oC1-6, halo-sustituido-alquiltiod 6, ar?loC6 10-alqu?loC04, heteroariloC5.?o-alqu?loC0-4, cicloalqu?loC3 ?2-alqu?loC04, heteroc?cloalquiloC3-8-alcoxiC0- y heteroc?cloalqu?loC3 8-alqu?loC04, en donde los substituyentes arilo, heteroaplo, cicloalquilo o heterocicloalquilo en R6 pueden ser opcionalmente sustituidos además por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados de hidroxi, halo, alqu?lod.6, halo-substituido-alquilod 6, h?drox?-sust?tu?do-alquiloC1-6, alcoxiC1-6 y halo-sust?tu?do-alcox?-C? 6, y los derivados de óxido-N, derivados de profármacos, derivados protectores, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos, y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables(es decir, hidratos) de dichos compuestos. En un segundo aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica la cual contiene un compuesto de la Fórmula I o un derivado de óxido-N, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos; o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación con uno o más excipientes adecuados.
En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un método de tratamiento a una enfermedad en un animal el cual inhibe la actividad de cinasa, particularmente Abl, Bcr-Abl, FGFR3, PDGFRß, Flt3 y una actividad Raf-b, pueden prevenir, inhibir o aminorar la patología y/o sintomología de las enfermedades, el cual dicho método comprende la administración a un animal en una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I o un derivado de óxido-N, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad en un animal en el cual la actividad de cinasa, particularmente Abl, Bcr-Abl, FGFR3, PDGFRß, Flt3 y actividad b-Raf, que contribuye a la patología y/o sintomología de la enfermedad. En un quinto aspecto, la presente invención proporciona un proceso para la preparación de compuestos de la Fórmula I y los derivados de óxido-N, derivados de profármacos, derivados protegidos, isómeros individuales y combinaciones de isómeros de los mismos, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Descripción Detallada de la Invención Definiciones "Alquilo" es un grupo así como un elemento estructural de
otros grupos, por ejemplo alquilo-halo-substituido y alcoxi, pueden ser entre ellos de cadena recta o ramificada AlcoxiCi incluye, metoxi, etoxi, y similares Alquilo-halo-sustituido incluye tpfluorometilo, pentafluoroetilo, y similares 'Aplo' significa un anillo de ensamble aromático monociclico o bicic co fusionado que contiene de seis a diez átomos de anillo de carbono Por ejemplo, aplo puede ser fenilo o naftilo, preferentemente fenilo "Apleno" significa un radical divalente derivado de un grupo aplo "Heteroaplo" es tal como se definió para el aplo anterior en donde uno o mas de los miembros de anillo es un heteroátomo Por ejemplo heteroaplo incluye pipdilo, indolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, benzofuranilo, benzopiranilo, benzotiopiranilo, benzo[1 ,3]d?oxol, imidazolilo, benzo-imidazolilo, pipmidinilo, furanilo, oxazohlo, isoxazolilo, tpazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, tienilo, etc "Cicloalquilo significan un ensamble de anillo saturado o parcialmente insaturado, monocíclico o bicíclico fusionado o policíclico enlazado que contiene el numero de átomos de anillo indicado Por ejemplo, c?cloalqu?loC3 10 incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc "Heterocicloalquilo" significa cicloalquilo, como se describe en esta solicitud, que proporciona uno o más de los anillos de carbón indicados, son reemplazados por una porción seleccionada de -O-, -N = , -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- o -S(O)2-, en donde R es hidrógeno, alquilod 4 o un grupo de protección de nitrógeno Por ejemplo,
heteroc?cloalqu?loC38 como se utiliza en la presente solicitud para describir los compuestos de la presente invención que incluye morfolino, pirrohdinilo, p?rrol?d?n?lo-2-ona, piperazinilo, pipepdinilo, pipepdmilona, 1 ,4-d?oxa-8-aza-esp?ro[45]dec-8-ilo, etc. "Halógeno" (o halo) preferentemente representan cloro o fluoro, pero puede ser también bromo o yodo "Panel de cinasa" es una lista de cinasas que comprenden Abl(humana), Abl(T315l), JAK2, JAK3, ALK, JNK1a1, ALK4, KDR, Aurora-A, Lck, BIk, MAPK1, Bmx, MAPKAP-K2, BRK, MEK1, CaMKII(rata), Met, CDK1/c?cl?naB, p70S6K, CHK2, PAK2, CK1, PDGFRa, CK2 PDK1, c-kit, P?m-2, c-RAF, PKA(h), CSK, PKBa, cSrc, PKCa, DYRK2, Plk3, EGFR, ROCK-I, Fes, Ron FGFR3, Ros, Flt3, SAPK2a, Fms, SGK Fyn, SIK, GSK3ß, Syk, IGF-1R, Tie-2, IKKß, TrKB, IR, WNK3, IRAK4, ZAP-70, ITK, AMPK(rata), LIMK1, Rsk2, Ax1, LKB1, SAPK2ß, BrSK2, Lyn (h), SAPK3, BTK, MAPKAP-K3, SAPK4, CaMKIV, MARK1, Snk, CDK2/c?cl?nA, MINK, SRPK1, CDK3/c?cl?nE, MKK4(m), TAK1, CDK5/p25, MKK6(h), TBK1, CDK6/c?chnD3, MLCK, TrkA, CDK7/c?cl?nH/MAT1 , MRCKß, TSSK1, CHK1, MSK1, Yes, CK1d, MST2, ZIPK, c-Kit (D816V), MuSK, DAPK2, NEK2, DDR2, NEK6, DMPK, PAK4, DRAK1, PAR-1Ba, EphAI, PDGFRß, EphA2, P?m-1, EphA5, PKBß, EphB2, PKCßl, EphB4, PKCd, FGFR1, PKC?, FGFR2, PKCT, FGFR4, PKD2, Fgr, PKG1ß, Fl ti, PRK2, Hck, PYK2, HIPK2, Ret, IKKa, RIPK2, IRR, ROCK-ll(humano), JNK2a2, Rse, JNK3, Rsk1(h), PI3 Ky, PI3 Kd y PI3-Kß. Los compuestos de la presente invención son protegidos contra el
panel de cinasa (tipo natural y/o mutación de las mismas) e inhibición de la actividad de por lo menos uno de dichos miembros del panel. "Formas mutantes de BCR-Abl" significa cambios de aminoácidos solos o múltiples de la secuencia tipo-sitio. Las mutaciones en BCR-ABI actúa mediante interrupción critica de puntos de contacto entre la proteína y el inhibidor (por ejemplo, Gleevec, y similares), más frecuentemente, mediante inducción a la transición del estado inactivo al activo, es decir, para una conformación para la cual BCR-ABL y Gleevec es incapaz para el enlace. Después del análisis de muestras clínicas, se encontró respuesta a mutaciones en conjunto con el fenotipo resistente que ha sido incrementado lentamente pero inexorablemente sobre el tiempo. Las mutaciones parecidas al grupo en cuatro regiones principales. Un grupo de mutaciones (G250E, Q252R, Y253F/H, E255K/V) incluye aminoácidos que forman el circuito enlazando fosfato para ATP (también se conoce como el P-circuito). Un segundo grupo (V289A, F311L, T315I, F317L) pueden ser encontrados en el sitio de enlace Gleevec e interactúa directamente con el inhibidor a través de enlaces de hidrógeno o interacciones Van der Waal's. El tercer grupo de mutaciones (M351T, E355G) grupos en una proximidad cerca al dominio catalítico. El cuarto grupo de mutaciones (H396R/P) está ubicado en el circuito de activación, cuya conformación es la conexión molecular controlando la activación/inactivación de la cinasa. Se ha detectado resistencia de los puntos de mutaciones
BCR-ABL en conjunto con Gleevec en CML y ALL pacientes que incluyen: M224V, L248V, G250E, G250R, Q252R, Q252H, Y253H, Y253F, E255K, E255V, D276G, T277A, V289A, F311L, T315I, T315N, F317L, M343T, M315T, E355G, F359V, F359A, V379I, F382L, L387M, L387F, H396P, H396R, A397P, S417Y, E459K, y F486S (Las posiciones de aminoácidos, indicadas mediante un código solo de letra, son aquellas para la secuencia GenBank, número de acceso AAB60394, y corresponde para ABL tipo 1a; Martinelli y asociados, Haematológica/The Hematology Journal, 2005, Abril; página de la 90 a la 4). De otro modo por lo menos condicionado para la presente invención, Bcr-Abl para referirse al tipo-sitio y formas mutantes de la enzima. "Tratar", "tratando" y "tratamiento" se refiere al método de aliviar o mitigar una enfermedad y/o sus síntomas que lo acompañan. Descripción de las Modalidades Preferidas La presente invención proporciona compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la cinasa, particularmente Abl, Bcr-Abl, FGFR3, PDGFRß, Flt3 y b-Raf enfermedades relacionadas con la cinasa. Por ejemplo, leucemia y otros padecimientos relacionados a BCR-Abl pueden ser tratados mediante la inhibición del tipo natural y formas mutantes de Bcr-Abl. En una modalidad, con referencia a los compuestos de la Fórmula I, son los compuestos de la Fórmula la:
en donde: m es seleccionado de 0 y 1; Ri es seleccionado de hidrógeno, alquilod.6, ariloC6-?o-alquiloC0- , heteroariloC5.10-alquiloCo- , cicloalquiloC3.12-alquiloC0-4, heterocicloalquiloC3.8-alquiloC0-4 y -XNR7R8; en donde cualquier arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo de R, es opcionalmente sustituido con radicales 1-3 seleccionados independientemente de alquiloC?.6, -XNR7R8, -XNR7XNR7R8, -XNR7R9, heteroar¡loC5.10-alquilo-Co-4, y heterocicloalquiloC3.8-alquiloC0-4; en donde cualquiera substituyentes heteroarilo, o heterocicloalquilo en R^ pueden ser opcionalmente substituidos por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados de alquilod-6 e hidroxi-substituido-alquiloC?-6 y en donde cualquier alquilo de RT pueden tener un metileno reemplazado con O; en donde cada X es independientemente seleccionada de un enlace y alquilenod-e; R7 y Rs son independientemente seleccionados de hidrógeno y alquilod-6; en donde cualquier metíleno de R7 y R8 pueden ser remplazados con O; en donde R9 es cicloalquiloC3.12-alquiloC0-4; R2 es seleccionado de hidrógeno y alquiloC?.6; R3 es seleccionado de hidrógeno y alquilod.6;
R4 es seleccionado de halo, alquilod.6. halo-substituido-alquiloCt.6, alcox¡d.6, y halo-substituido-alcoxid.6; L es seleccionado de -NR5C(O) y -C(O)NR5; R5 es seleccionado de hidrógeno y alquilod.6; y Río es halo-substitu¡do-alqu¡lod.6; y Rn es seleccionado de hidrógeno, halo, heteroariloC5-10 y heterocicloalquiloC3.8; en donde los substituyentes de heteroarilo o heterocicloalquilo en R10 pueden ser opcionalmente substituidos para
1 a 3 radicales independientemente seleccionados de hidroxi y alquilod-6- En otra modalidad, R-¡ es seleccionado de hidrógeno, metilo, isopropilo, imidazolilo-propilo, piperazinilo-propilo, piridinilo, dietil-amino-propilo, hidroxi-etilo, pirimidinilo, morfolino-propilo, fenilo, ciclopropilo, morfolino-etilo, bencilo y morfolino; en donde cualquiera de piridinilo, imidazolilo, piperazinilo o pirimidinilo de Ri es opcionalmente substituido con de 1 a 3 radicales independientemente seleccionados de metilo, metil-amino, dimetil-amino-metilo, ciclopropil-amino, hidroxi-etil-amino, dietil-amino-propil-amino, pirrol idinil-metilo, morfolino, morfolino-metilo, piperazinil metilo y piperazinilo; en donde cualquiera substituyentes de morfolino y piperazinilo de Ri es substituido además opcionalmente por un radical seleccionado de metilo, hidroxi-etilo y etilo; R2, R3 y R5 son cada uno hidrógeno; y R es metilo. En otra modalidad, m es seleccionado de 0 y 1; Río es trifluorometilo; y Rn es seleccionado de: halo; morfolino-metilo;
piperazinilo opcionalmente substituido con metilo, etilo o hidroxietilo; piperazmilo-metilo opcionalmente substituido con metilo o etilo; imidazo lo substituido opcionalmente con metilo; pirrolidinilo-metoxi; y pipepdinilo opcionalmente substituido con hidroxi. Los compuestos preferidos de la presente invención son seleccionados de ácido 2-(3-D?etilam?nopropilamino)-tiazol-5-carboxí co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzoilamino)-fenil]-amida; ácido 2-{6-[4-(2-H?drox?et?l)-p?peraz?n-1-?l]-2-metilpirimidin-4-ilamino}-ti azol -5-carboxíl ico [2-met?l-5-(3-trifluoromet?lbenzoilamino)-fenil]-amida; ácido 2-(2-H?drox?-et?lam?no)-t?azol-5-carboxílico {5-[3-(4-etil-piperaz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-metil-fenil}-amida; ácido 2-{6-[4-(2-H?drox?-et?l)-p?peraz?n-1-?l]-2-metil-pirimidin-4-ilam?no}-t?azol-5-carboxíl?co [2- me til -5-( 3-trif luo rom eti I-benzoilam?no)-fen?l]-am?da, ácido 2 -(3- Morf olin -4-? I -pro pila mi no )-tiazol-5-carboxíl?co [2-met?l- 5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lamino)-fen?l]-amida; ácido 2-(3-D?et?lam?no-prop?lam?no)-tiazol-5-carboxílico [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da; ácido 2- Fenilamino-t?azol-5-carboxíl?co [2-m etil -5-( 3-trif I uoro meti I -benzoilam?no)-fen?l]-am?da, ácido 2-(2-H id roxi -eti lamí no)-tiazol-5-carboxí I ico {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluorometil-benzoilam?no]-fen?l}-am?da, ácido 2-( 3-D? eti lamí no-propila mino )-tiazol-5-carboxílico {2-metil-5-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da; ácido 2-(3-Morfolin-4-il-propilam?no)-tiazol-5-carboxíl?co {2-met?l-5-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-amida; ácido 2-[6-(4-Etil-
p?peraz?n-1-?l)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-amida; ácido 2-(6-Cicloprop?lam?no-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-tiazol-5-carboxílico [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da; ácido 2-[6-(2-Hidrox?-et?lam?no)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-tiazol-5-carboxílico [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da; ácido 2-[6-(3-Dietilam?no-prop?lam?no)-2-met?l-p?pm?d?n-4-?lamino]-tiazol-5-carboxílico [2-met?l-5-(3-trifluorometil-benzo?lamino)-fenil]-amida; ácido 2-(2-Met?l-6-morfol?n-4-?l-p?pm?d¡n-4-ilam?no)-tiazol-5-carboxí I ico [2-met?l-5-(3-tr?fluorometil-benzoilamino)-fenil]-amida; ácido 2-(2-H?drox?-et?lam?no)-t?azol-5-carboxílico {5-[3-(4-hidroxi-piper?d?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-metii-fenil}-amida; ácido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carboxíl?co {5-[3-(4-h?drox¡-p?perid?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fenil}-am?da; ácido 2-(2-Morfol?n-4-?l-et?lam?no)-tiazol-5-carboxíl?co {5-[3-(4-h?drox?-p?per?d?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fenil}-amida, ácido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carboxílico {5-[3-(4-etil-píperazin-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l-benzoilam?no]-2-metil-fenil}-amida; ácido 2-(2-H?drox?-etilam?no)-t?azol-5-carboxílico {5-[3-(4-etil-piperaz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzoilamino]-2-metíl-fenil}-amida; ácido 2-Bencilam?no-t?azol-5-carboxíl?co {5-[3-(4-etil-piperazin-1-il)-5-trifluorometil-benzoilamino]-2-met?l-fenil}-amida; ácido 2-(2- Morfol?n-4-?l-et?lam?no)-t?azol-5-carboxílico {5-[3-(4-etil-piperazin-1 -il)-5-trifluorometil-benzo?lam?no]-2-met?l-fenil}am?da; ácido 2-[6-(2-Hidroxi-et?lam?no)-2-metil-p?r?m?d?n-4-ilamino]-tiazol-5-carboxílico {5-
[3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-amida, acido 2-(6-C?cloprop?lam?no-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, acido 2-(2-Met?l-6-morfol?n-4-?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-[6-(4-Et?l-p?peraz?n-1-?l)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1 -?l)-5-tr?floromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-amida, acido 2-[6-(3-D?et?lam?no-prop?lam?no)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-(2-Met?l-6-met?lam?no-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l benzol la m?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-[6-(2-H?drox?-et?lam?no)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carboxilico {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1 -il )-5-tr?fl uoro metí I-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, acido 2-(6-C?cloprop?lam?no-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, ácido 2-(2-Met?l-6-morfol?n-4-?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carboxíl?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, ácido 2-[6-(4-Et?l-p?peraz?n-1-?l)-2-met?l-p?pm?d?n-4-?la ?no]-t?azol-5-carboxilico {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, acido 2-[6-(3-D? eti lamí no-propí lamí no )-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, ácido 2-
Ciclopropil ami no-tiazol-5-carboxí lico {5-[4-(4-eti l-pi perazin- 1-il meti I )-3-trifluorometil-fenilcarbamoil]-2-metil-fenil}-amida; ácido 2- Metilamino-tiazol-5-carboxílico {5-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenilcarbamoil]-2-met¡l-fenil}-amida; ácido 2-Amino-tiazol-5-carboxílico {5-[4-(4-etil-piperazin-1 -i I meti I )-3-trif luorometil -fenilcarbamoil]-2-metil-fenil}-amida; ácido 2-(Piridin-2-ilamino)-tiazol-5-carboxílico {5-[4-(4-e til-pipe razin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-fenilcarbamoil]-2-metil-fenil}-amida; 2-(Pirídin-2-ilamino)-tíazol-5-carboxílico [2-metil-5-(4-morfol i n-4-ilmetil-3-trif luorometil -fenilcarbamoil)-fenil]-amida; ácido 2-(Piridin-2-ilamino)-tiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(4-piperazin-1-elmetil-3-trifluorometil-fenilcarbamoil)-fenil]-amida; ácido 2-(Piridin-2-ilamino)-tiazol-5-carboxílico {2-met¡l-5-[4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-fenilcarbamoil]-fenil}-amida; ácido 2-Ciclopropilamino-tiazol-5-carboxílico {2-metil-5-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-fe nilcarb amoil] -fenil}-a mida; ácido 2-Metilamino-tiazol-5-carboxílico {2-metil-5-[4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-fenilcarbamoíl]-fenil}-amida; ácido 2-Ciclopropilamino-tiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(4-pi perazin- 1-il meti l-3-trif I uo rom etil -fenilcarbamoíl)-fenil]-amida; ácido 2-Metilamino-tiazol-5-carboxílico [2-m etil -5-(4-pi perazin- 1-il meti I -3-trif luorometil-f en i Ica rba moil)-fenil]-amida; ácido 2-Ciclopropilamino-tiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(4-morfolin-4-ilmetil-3-trifluorometil-fenilcarbamoil)-fenil]-amida; ácido 2-Metilamino-tiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(4-morfolin-4-ilmetil-3-trifluorometíl-fenilcarbamoil)-fenil]-amida; ácido 2-Ciclopropilamino-
t?azol-5-carbox?l?co (5-{[1 -ter-but?l-5-(4-met?l-p?peraz?n-1 -?lmet?l)-1 H-p?razol-3-carbon?lJ-am?no}-2-met?l-fen?l)-am?da, acido
C?cloprop?lam?no-í?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, acido 2-Met?lam?no-t?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l]-fen?l}-am?da, acido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[4-(4-met?l-p?peraz?n-1-?lmet?l)-3-tr?fluoromet?l-fen?lcarba o?l]-fen?l}-am?da, acido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, acido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carboxilico {5-[4-(4-et?l-p?peraz?n-1-?lmet?l)-3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fernl}-am?da acido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carboxi co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1 -?l)-5-tpfluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da acido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carboxilico (5-{3-[4-(2-h?drox?-et?l)-p?peraz?n-1 -?l]-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no}-2-met?l-fen?l)-am?da, acido 2-(2-Morfol?n-4-?l-et?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {5-[(5-ter-but?l-t?ofeno-2-carbon?l)-am?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-ca box 11 ico {5-[(5-ter-but?l-t?ofeno-2-carbon?l)-am?no]-2-met?l-fen?l}-amida, acido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carboxíl?co {5-[(5-ter-but?l-2-met?l-2H-p?razol-3-carbon?l)-am?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-{5-[4-(2-H?drox?-et?l)-p?peraz?n-1-?l]-p?r?d?n-2-?lam?no}-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da, ácido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co (5-{3-[4-(2-h?drox?-et?l)-p?peraz?n-1-?l]-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no}-2-met?l-fen?l)-am?da,
ácido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carboxíl?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoro et?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, acido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, acido 2-(P?pd?n-3-?lam?no)-t?azol-5-carboxí co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, ácido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, ácido 2-(3-lm?dazol-1-?l-prop?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, acido 2-(2-Morfol?n-4-?l-et?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {5-[(5-ter-but?l-2-met?l-2H-p?razol-3-carbon?l)-am?no]-2-met?l-fentl}-am?da, acido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carboxíl?co [5-(4-cloro-3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-2-met?l-fen?l]-am?da, ácido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carboxíl?co {5-[(1 -ter-but?l-5-met?l-1 H-p?razol-3-carbon?l)-am?nol-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-(P? r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[3-(p?rrol?d?n-2-?lmetox?)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, acido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carboxíl?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-p?peraz?n-1-?l)-5-trifluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da, ácido 2-(P?ridin-2-ilamino)-t?azol-5-carbox?l?co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lammo]-fen?l}-am?da, ácido 2-(6-Met?l-p?pd?n-3-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, ácido 2-(2-Morfol?n-4-il-et?lam?no)-tiazol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, ácido 2-lsoprop?lam?no-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, ácido 2-[3-(4-Met?l-
p?peraz?n-1-?l )-prop?lam?no]-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-fen?lcarbamo?l)-fen?l]-am?da, acido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(4-p?peraz?n-1-?lmet?l-3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da, ácido 2-(P?r?d?n-2-?lam?no)-t?azol-5-carboxílico {5-[4-(4-et?l-p?peraz?n-1-?lmet?l)-3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da, ácido 2-C?cloprop?lam?no-t?azol-5-carboxílico [2-met?l-5-(4-morfol?n-4-?lmet?l-3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da, acido 2-{6-[4-(2-H?drox?-et?l)-p?peraz?n-1 -?l]-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no}-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tpfluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da, ácido 2-[6-(4-Met?l-p?peraz?n-1-?l)-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzolam?no)-fen?l]-am?da, acido 2-{6-[4-(2-H?drox?-et?l)-p?peraz?n-1 -?l]-p?r?m?d'n-4-?lam?no}-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tpfluoromet?l-ben7?ilam?no)-fen?l]-am?da, acido 2-[2-M et?l-6-( 4-met il-p?peraz?n-1-?l)-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzolam?no)-fen?l]-am?da, y ácido 2-{4-[4-(2-H?drox?-et?l)-p?peraz?n-1-?l]-p?r?d?n-2-?lam?no}-t?azol-5-carboxíl?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzolam?no)-fen?l]-am?da Farmacología y Utilidad Los compuestos de la presente invención modulan la actividad de cinasa y, así mismo, son útiles para el tratamiento de enfermedades o padecimientos en que las cinasas, contribuyen a la patología y/o sintomologia de la enfermedad Se inhibieron los ejemplos de las cmasas mediante los compuestos y composiciones descritos en la presente descripción y contra lo cual los métodos
descritos en la presente son útiles incluyen, pero no se limitan a, cinasas Abl, Bcr-Abl, FGFR3, PDGFRß, Flt3 y b-Raf. Esta involucrada la cinasa de tirosina Abelson (es decir, Abl, c-Abl) en la regulación del ciclo de la célula, en la respuesta celular a la tensión genotóxica, y en la transmisión de información acerca del ambiente celular mediante la señalización de integrina. Esto parece generalmente, que la proteína Abl efectúa un papel complejo como un módulo celular que integra señales de varias fuentes extracelulares e intracelulares y que decisiones influencian con respecto al ciclo de la célula y la apóptosis. La cinasa de tirosina Abelson incluye sub-tipos derivados tal como la fusión quimérica (oncoproteína) BCR-Abl con la actividad de cinasa de tirosina desregulada o la v-Abl. Es crítica la BCR-Abl en la patogénesis del 95% de leucemia mielo?enosa crónica (CML) y el 10% de leucemia linfocítica aguda. STI-571 (Gleevec) es un inhibidor de la cinasa de tirosina oncogénica BCR-Abl y es utilizado para el tratamiento de leucemia mieloide crónica (CML). Sin embargo, algunos pacientes en la etapa de crisis depurativa de la CML son resistentes al STI-571 debido a las mutaciones en la cinasa BCR-Abl. Se han reportado por encima 22 mutaciones a la fecha siendo común la mayor parte de G250E, E255V, T315I, F317L y M351T. Los compuestos de la presente invención inhiben la cinasa abl, especialmente la cinasa v-abl. Los compuestos de la presente invención también inhiben la cinasa tipo-natural BCR-Abl y las mutaciones de la cinasa BCR-Abl y son por lo tanto adecuados para
el tratamiento de cáncer Bcr-abl-positivo y enfermedades de tumor, tal como leucemias (especialmente leucemia mieloide crónica y leucemia nfoblástica aguda, en donde se encuentran especialmente mecanismos de acción apoptóticos), y también se muestran efectos en el subgrupo de células de raíz leucémica, así como un potencial para la purificación de estas células in vitro después de la eliminación de dichas células (por ejemplo, eliminación de la médula del hueso) y la re-implantación de las células una vez que han sido libres de células de cáncer (por ejemplo, re-implantación de células de la médula del hueso purificadas) PDGF (Plaqueta-derivada del Factor de Crecimiento) es comúnmente que ocurra un factor de crecimiento, el cual juega un papel importante tanto en el crecimiento normal y también en la proliferación de la célula patológica, así se observa en la carcmogénesis y enfermedades de las células del músculo-plano de los vasos sanguíneos, por ejemplo en la aterosclerosis y trombosis Los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad en el receptor PDGF (PDGFR) y son por lo tanto, adecuados para el tratamiento de enfermedades de tumor, tales como gliomas, sarcomas, tumores de la próstata, tumores del colon, seno, y ovario. Pueden ser utilizados los compuestos de la presente invención, no solamente como una substancia de inhibición del tumor, por ejemplo en células pequeñas de cáncer de pulmón, pero también como un agente para curar los padecimientos proliferativos no malignos, tales como aterosclerosis, trombosis, psoriasis,
escleroderma, y fibrosis, asi como para la protección de células de raíz, por ejemplo para combatir al efecto hemotóxico de los agentes quimioterapéuticos, tales como 5-fluorurac?lo, y en el asma Los compuestos de la presente invención pueden ser especialmente utilizados para el tratamiento de enfermedades, las cuales responden a la inhibición de la cinasa de receptor PDGF Los compuestos de la presente invención muestran efectos útiles en el tratamiento de padecimientos que provienen como un resultado de la transplantacion, por ejemplo, transplantación alogénica, especialmente rechazo del tejido, así como especialmente la bronquiolitis destructiva (OB), es decir un rechazo crónico de transplantes de pulmón alogenicos En contraste a pacientes sin OB, aquellos con OB muestran con frecuencia una concentración elevada de PDGF en fluidos lavage broncoalveolares Los compuestos de la presente invención también son efectivos en enfermedades asociadas con la proliferación y migración de células del músculo-plano vascular (donde PDGF y PDGF-R con frecuencia también juegan un papel), tal como la restenosis y aterosclerosis Estos efectos y las consecuencias de los mismos para la proliferación o migración de células del músculo-plano vascular m vitro e in vivo pueden ser demostrados mediante la administración de los compuestos de la presente invención, y también en su efecto mediante la investigación en el espesor del intimo vascular seguido de daños mecánicos m vivo Se cree que ciertas condiciones proliferativas anormales
son asociadas con una expresión raf y son, por lo tanto, demostradas ser una respuesta para la inhibición de una expresión raf. Anormalmente los niveles altos de expresión de la proteína raf son también implicados en la transformación y proliferación celular anormal. Estas condiciones proliferativas anormales son también demostradas para ser la respuesta a la inhibición de la expresión raf. Por ejemplo, la expresión de la proteína c-raf es demostrada para jugar un papel en la proliferación de la célula anormal desde que se ha reportado que el 60% de todas la línea de célula de carcinoma de pulmón expresa extraordinariamente niveles altos de c-raf mARN y proteína. Además ejemplos de las condiciones proliferativas anormales son padecimientos hiper-proliferativos tales como cánceres, tumores, hiperplasia, fibrosis pulmonar, angiogénesis, psoriasis, aterosclerosis y proliferación de la célula del músculo plano en los vasos sanguíneos tal como estenosis o restenosis seguido de angioplastía. La trayectoria de señalización celular de la cual raf es una parte, también ha sido implicada en padecimientos inflamatorios caracterizados por la proliferación de la célula-T (activación y crecimiento de la célula-T), así como por ejemplo rechazo al injerto de tejido, choque de entoxina, y nefritis glomerular. Flt3 es un miembro de la familia de cinasa de tirosina del receptor (RTK) tipo lll. Flt3 (cinasa de tirosina similar fms) es también conocida como FLk-2 (cinasa 2 de hígado fetal). Se ha documentado la expresión aberrante del gen Flt3 tanto en leucemia a la edad adulta como a la infancia incluyendo leucemia mieloide
aguda (AML) AML con mielodisplasia tp neage (AML/TMDS), leucemia linfoblastica aguda (ALL), y síndrome mielodisplástico (MDS) Las mutaciones de activación del receptor Flt3 han sido encontradas en aproximadamente 35% de los pacientes con leucemia mieloblástica aguda (AML), y son asociadas con una prognosis pobre La mutación más común involucra la duplicación en la estructura dentro del dominio de la membrana, con un adicional del 5 al 10% de pacientes que tienen una mutación de punto en asparagma 835 Ambas de estas mutaciones son asociadas con la activación constitutiva de la actividad de cmasa de tirosma de Flt3, y resulta en la proliferación y señales de viabilidad en la ausencia de ligandos. Han sido mostrados en pacientes de la forma mutante de expresión del receptor que ha disminuido la probabilidad de curarse Por lo tanto, existe una evidencia de acumulación para un papel por hiper-actividad (mutada) Fli3 actividad de cinasa en leucemia humana y síndrome mielodisplastico Esto es pronto para el solicitante para la búsqueda para nuevos inhibidores del receptor Flt3 como una aproximación terapéutica posible en estos pacientes, y para dichos pacientes quienes han fallado previamente en las terapias de fármacos disponibles actualmente y/o terapias de transplantes de células de raíz Generalmente las leucemias resultan de daños genéticos adquiridos (no heredados) al ADN de las células hematopoyéticas inmaduras en la médula ósea, nodos nfoides, bazo, u otros órganos del sistema inmune y sanguíneo Los efectos son el crecimiento
acelerado y el bloqueo en la maduración de células, resultando en la acumulación de células llamadas "leucémicas depurativas", las cuales no funcionan como células sanguíneas normales, y una falla para producir células de médula normal, principalmente para una deficiencia de células rojas (anemia), plaquetas y células blancas normales Las células depurativas son normalmente producidas por la médula ósea y usualmente se desarrollan dentro de células de sangre madura, comprendiendo aproximadamente el 1% de todas las células de la médula En la leucemia, la depuración no madura adecuadamente y se acumula en la médula ósea En la leucemia mieloide aguda (AML), existen los llamados mieloblastos mientras que en la leucemia nfoblastica aguda (ALL) son conocidos como linfoblastos Otra leucemia es la leucemia linaje-mezclado (MLL) El termino "AML con mielodisplasia de triple linaje (AML/TMDS)" se refiere una forma poco común de leucemia caracterizada por un cuadro dishematopoyético acompañando a la leucemia aguda, una respuesta pobre a la inducción por quimioterapia, y una tendencia a la recaída con el síndrome mielodisplástico puro El término "Síndrome mielodisplástico (MDS)" se refiere a un grupo de enfermedades sanguíneas en la cual la médula ósea detiene normalmente su funcionamiento, resultando en una deficiencia en el número de células sanguíneas sanas. Comparado con leucemia, en el cual un tipo de célula sanguínea es producido en cantidades altas, cualquiera y algunas veces todos los tipos de
células sanguíneas son afectadas en MDS. Al menos 10,000 casos ocurren anualmente en los Estados Unidos. Arriba de una tercera parte de pacientes diagnosticados con MDS han desarrollado leucemia mieloide aguda. Por esta razón algunas veces la enfermedad es referida como previamente una leucemia. El síndrome mielodisplástico es algunas veces también llamado mielodisplasia dismielopoyesis o leucemia oligoblástica. El MDS también se refiere como leucemia suave cuando cantidades altas de células depurativas permanecen en la médula. El síndrome mielodisplástico, similar a leucemia, resulta de un daño genético al ADN de una célula sola en la médula ósea. Ciertas anormalidades en los cromosomas se presentan en pacientes con MDS. Estas anormalidades son llamadas translocaciones, las cuales ocurren cuando una parte de las rupturas de cromosoma y llega a ser adherida a una parte de la ruptura de un cromosoma diferente. Se encuentran frecuentemente los mismos defectos en leucemia mieloide aguda. Sin embargo, la leucemia de diferentes MDS se debe a que a todas las células sanguíneas del paciente son anormales y todas se derivan de la misma célula de raíz dañada. Los pacientes con leucemia, contienen en su médula ósea una mezcla de células sanguíneas sanas y enfermas. Se trató actualmente al AML y el síndrome mielodisplástico avanzado con dosis altas de fármacos y quimioterapia citotóxica así como arabinosida de citosina y daunorubicina. Este tipo de tratamiento induce aproximadamente el 70% de los pacientes a
ingresar en remisiones hematológicas Sin embargo, más de la mitad de los pacientes que ingresan a remisión tendrán recaídas a pesar de la administración de quimioterapia durante períodos largos de tiempo Casi todos los pacientes quienes tampoco fallaron para ingresar a remisión inicialmente, o recayeron más tarde después de obtener la remisión, últimamente debido a la leucemia. El transplante de médula ósea puede curar arriba del 50 al 60% de los pacientes que soportaron el procedimiento, pero solamente cerca de una tercera parte de los pacientes con AML ó MDS son elegidos para recibir un transplante Nuevos y efectivos fármacos son urgentemente necesitados para el tratamiento de pacientes los cuales fallan al ingresar a remisión con terapias estándar, pacientes quienes mas tarde recaen, y pacientes que no son elegidos para transplante de célula de raíz Además, un fármaco efectivo nuevo se podría agregar a la terapia estándar con la esperanza lógica que resultará en una quimioterapia de inducción mejorada para todos los pacientes FGFR3 es parte de una familia receptores de cinasa de tirosina relacionados estructuralmente codificados mediante 4 genes diferentes Son asociados puntos específicos de mutaciones en diferentes dominios del gen principal FGFR3 para la activación constitutiva del receptor con padecimientos del esqueleto dominante autosomal, mieloma múltiple, y una proporción grande de la vejiga y cáncer cervical (Cappellen, y asociados, Nature, vol.23). La activación de mutaciones ubicadas en genes FGFR3 de ratón y el
objetivo de activación FGFR3 para el crecimiento de la placa de cartílago en ratones resulta en enanismo. Análogo a nuestro concepto, la interrupción del objetivo del FGFR3 en ratones resultó en el sobrecrecimiento de vértebras y huesos grandes. Además, del 20 al 25% de las células de mieloma múltiple contienen un desplazamiento cromosómico t(4;14)(p16.3;q32.3) con puntos de ruptura en 4p16 ubicados en 50-100kb centroméricos para FGFR3. En casos raros de mieloma múltiple, las mutaciones de activación de FGFR3 previamente se han visto en padecimientos del esqueleto y se han encontrado que son siempre acompañados de desplazamiento cromosomal. Recientemente, las mutaciones somáticas FGFR3 (R248C, S249C, G372C, y K652E) se han identificado en una proporción mayor de células de cáncer de vejiga y en algunas células de cáncer cervical, siendo un hecho identificar mutaciones de activación germinal que causan la displasia tanatofórica, una forma de enanismo letal en el período neonatal. Los compuestos de la presente invención tienen una utilidad terapéutica para mielomas múltiples siendo más efectivos que el tratamiento actual, para el cáncer de vejiga y evitar la alteración de vida por cistectomía, y para un cáncer cervical en aquellos pacientes los cuales tienen un futuro fértil. De acuerdo con lo anterior, la presente invención además proporciona un método para la prevención o tratamiento de cualquiera de las enfermedades o padecimientos descritos anteriormente en un sujeto con necesidad de dicho tratamiento, cuyo
método comprende la administiacion a dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva (Ver la Publicación, anterior "Administration and Pharmaceutical Compositions",) de un compuesto de la Formula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo Para cualquiera de los usos anteriores, la administración requerida de dosis variara dependiendo del modo de administración, la condición particular se trato y el efecto deseado Administración y Composiciones Farmacéuticas En general, los compuestos de la presente invención serán administrados en cantidades terapéuticamente efectivas por cualquiera de los modos usuales y aceptables conocidos en la técnica ambos simple o en comb nación con uno o más agentes terapéuticos Una cantidad terapéuticamente efectiva puede variar ampliamente dependiendo de la severidad de la enfermedad, la edad y la salud relacionada con el sujeto, la energía de los compuestos utilizados y otros factores En general, son indicados satisfactoriamente los resultados para ser obtenidos sistemicamente en dosis diarias de aproximadamente de 003 a 25 mg/kg por peso corporal Una dosis diaria indicada en mamífero mayor, por ejemplo humanos, esta en el índice desde aproximadamente de 05mg hasta aproximadamente 10ümg, convenientemente administrados, es decir en dosis divididas de hasla cuatro veces al día en una forma retardada Las formas de dosis de unidad adecuadas para la admimstiacion oral que comprende de aproximadamente 1 a 50 mg del ingrediente activo
Son administrados los compuestos de la presente invención como composiciones farmacéuticas por cualquier ruta convencional, en particular, enteralmente, es decir, oralmente, es decir en la forma de tabletas o capsulas, o parenteralmente, es decir, en la forma de soluciones inyectables o suspensiones, tópicas, es decir en la forma de lociones, geles, ungüentos o cremas, en forma nasal o supositorio Las composiciones farmacéuticas comprenden un compuesto de la presente invención en forma libre o en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en conjunto con al menos uno de los vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables pueden ser elaborados de una manera convencional por mezclado, granulación o métodos de cobertura Por ejemplo, las composiciones orales pueden ser tabletas o capsulas gelatinosas que comprenden el ingrediente activo junto cor a) diluyentes, es decir, lactosa, dextrosa, sacarosa manitol sorbitol, celulosa y/o glicina, b) lubricantes, es decir sílice, talco, acido esteárico, su magnesio o sal de calcio y/o polieMenglicol, también para tabletas c) enlazadores, es decir, silicato de aluminio de magnesio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, y/o polivinilpirrohdona, si se desea d) desintegrantes, es decir, almidones, agar, ácido algínico, o su sal de sodio, o mezclas efervescentes, y/o e) absorbentes, colorantes, sabopzantes y edulcorantes Las composiciones inyectables pueden ser soluciones isotónicas acuosas o suspensiones, y pueden ser preparados supositorios a partn de grasas, emulsiones o suspensiones Las
composiciones pueden ser esterilizadas y/o contienen adyuvantes así como agentes de conservación, estabilización, humidificación, o emulsificación, promotores de solución, sales para la regulación de la presión osmótica y/o reguladores. Además, existen también muchos que contienen otras substancias terapéuticamente valiosas. Las formulaciones adecuadas para aplicaciones transdérmicas incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención con un transportador. Un transportador puede incluir solventes farmacológicamente aceptables absorbibles para pasar ayuda a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los aparatos transdérmicos son en la forma de vendajes comprendiendo un miembro de rompimiento, un contenedor que contiene el compuesto opcionalmente con transportadores, opcionalmente un índice de barreras de control para suministrar el compuesto a la piel del huésped en un índice controlado y determinado previamente por un período largo de tiempo, y medios para asegurar el aparato a la piel. También pueden ser utilizadas formulaciones transdérmicas de matriz. Las formulaciones adecuadas para aplicación tópica, es decir, a la piel y ojos, son soluciones preferentemente acuosas, ungüentos, cremas o geles bien conocidos en la técnica. Dichos solubilizadores contienen, estabilizadores, agentes para el incremento de tonicidad, reguladores y conservadores. Son administrados los compuestos de la presente invención en cantidades terapéuticamente efectivas en combinación con uno o más agentes terapéuticos (combinaciones farmacéuticas). Por
ejemplo, ocurren efectos sinergisticos con substancias inmunomoduladoras o anti-inflamatopas por ejemplo, cuando son utilizados en combinación con ciclospopna, rapamicina, o ascomicina, o inmunosupresores análogos de los mismos, por ejemplo, ciclospopna A (CsA), ciclospopna G, FK-506, rapamicina, o compuestos comparables corticosteroides, ciclofosfamida, azatioppna, metotrexato, brequinar leflunomida, mizopbina, ácido micofenolico, micofenolato mofetilo, 15-desox?espergual?na, anticuerpos inmunosupresores, especialmente anticuerpos monoclonales para receptores de leucocitos, por ejemplo MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45 CD58 o sus hgandos, u otros compuestos inmunomodulares, tales como CTLA41g En donde los compuestos de la presente invención son administrados en conjunto con otras terapias, dosis de los compuestos co-administrados dependiendo por supuesto de la variación del tipo de co-farmaco empleado, en el fármaco especifico empleado, en la condición que ha sido tratada La presente invención también proporciona a combinaciones farmacéuticas, es decir, un equipo, comprende a) un primer agente el cual es un compuesto de la presente invención tal como se describe en la misma, en forma libre o en una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y b) en por lo menos un co-agente El equipo puede comprender instrucciones para su administración Los términos ' co-admimstracion" o "administración
combinada" o en forma similar son utilizados en la presente para llamar a la administración de los agentes terapéuticos seleccionados en un solo paciente, y se incluyen en regímenes de tratamiento en los cuales los agentes no son necesariamente administrados por la misma ruta de administración o en el mismo tiempo. El término "combinación farmacéutica" tal como se utiliza en la misma significa un producto que resulta de la mezcla o combinación de más de un ingrediente activo e incluye combinaciones fijas y no fijas de los ingredientes activos. El término "combinación fija" significa que los ingredientes activos, es decir, un compuesto de la Fórmula I y un co-agente, ambos son administrados a pacientes simultáneamente en la forma de un entero simple o dosis. El término "combinación no fija" significa que los ingredientes activos, es decir un compuesto de la Fórmula I y un co-agente, ambos son administrados a pacientes como entidades separadas simultáneamente, concurrentemente o secuencialmente, con límites de tiempo no especificados, en donde dicha administración proporciona terapéuticamente niveles efectivos de los 2 compuestos en el cuerpo del paciente. Posteriormente se aplica a terapias de cocktail, es decir, la administración de 3 o más ingredientes activos. Procesos para la Elaboración de Compuestos de la Presente Invención La presente invención también incluye procesos para la prelación de compuestos de la invención. En las reacciones descritas, puede ser necesario proteger grupos funcionales
reactivos, por ejemplo grupos hidroxi, amino, imino, tío o carboxi, en donde estos son deseados en el producto final, para evitar su participación no deseada en las reacciones Los grupos de protección convencional son utilizados de acuerdo con una práctica estándar por ejemplo, ver la Publicación de T W Greene y P G. M Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry", Jhon Wiley y Sons, 1991 Los compuestos de la Formula I pueden ser preparados mediante el procedimiento descrito en el Esquema de Reacción I a continuación Esquema de Reacción I
1.2) fl) en donde n, R,, R2, R3) R4, R5 y R6 se definen en Breve Descripción de la Invención Se preparó un compuesto de la Fórmula I mediante un compuesto de reacción de la fórmula 2 con un compuesto de la fórmula 3 en la presencia de un solvente adecuado (es decir 1 ,3-d?met?l-2-?m?dazol?dona, o similares) La reacción procede en un rango de temperatura de aproximadamente 50°C a aproximadamente 120°C y se completa arriba de 12 horas Los ejemplos en detalle de la síntesis de los compuestos de la Fórmula I se encuentran en los Ejemplos, anteriores
Procesos Adicionales para la Elaboración de los Compuestos de la Presente Invención Se preparo un compuesto de la presente invención como una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable mediante la reacción de formas de base libre de los compuestos con un ácido orgánico o inorgánico farmacéuticamente aceptable.
Alternativamente, se preparó una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la presente invención mediante la leacción de una forma de ácido libre del compuesto con una base orgánica o inorgánica farmacéuticamente aceptable Alternativamcntfc, se preparo formas de sales de los compuestos de la piesente invención utilizando sales de materiales de partida o intermediarios Se preparo formas de base libre o ácido libre de los compuestos de la presente invención a partir de sales de adición de base correspondiente o sales de adición de ácido, respectivamente Por ejemplo, se convirtió un compuesto de la presente invención en una sal de adición de ácido correspondiente a la base libre mediante el tratamiento con una ba^e adecuada (es decir, hidróxido de amonio, solución, hidroxido de sodio, y similares). Se convirtió un compuesto de la presente invención en una sal de adición base a partir del ácido libre correspondiente mediante el tratamiento con un ácido adecuado (es decir, acido clorhídrico, etc.). Se prepararon los compuestos de la presente invención en
una forma no oxidizada a partir de oxidos-N de los compuestos de la presente invención mediante tratamiento con un agente de reducción (es decir, azufre, dióxido de azufre, tpfenil fosfina, borohidruro de litio, borohidruio de sodio, tpcloruro fosforoso, tpbromuro, o similares) en un solvente orgánico inerte adecuado (es decir, acetonitplo, etanol, dioxano acuoso, o similares) a una temperatura de 0 a 80°C Se prepararon los derivados de los profármacos de los compuestos de la presente invención mediante métodos conocidos para aquellos expertos en la técnica (es decir, ver para detalles adicionales Saulnier y asociados, (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vo! 4 p 1985) Se prepararon por ejemplo, profarmacos adecuacos mediante la reacción de compuestos no depvatizados de la µresenie invención con un agente de carbamilacion adecuada (es decir 1 ,1 -aciloxialquilcarbanoclopdato, carbonato de para-nitrofenilo, o similares) Se elaboraron los depvados protegidos de los compuestos de la presente invención mediante los medios conocidos por aquellos expertos en la técnica Una descripción detallada de las técnicas aplicables a la creación de giupos de protección se encuentra en la Publicación de T W Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3?a edición, John Wiley y Sons, Ine , 1999 Los compuestos de la presente invención pueden ser convenientemente preparados, o formados durante el proceso de la invención, como solventes (es decir, hidratos) Se prepararon
convenientemente hidratos de compuestos de la presente invención mediante recpsta zacion a par t ?t de una mezcla de solvente acuosa/orgánica utilizando un solvente orgánico tal como dioxina, tetrahidrofurano o metanol Se prepararon los compuestos de la presente invención como estereoisómeros individuales mediante la reacción de una mezcla racemica del compuesto con un agente de resolución óptimamente activo para formar un par de compuestos diastereosimepcos, la separación y recuperación de enantiómeros óptimamente puros Mientras la resolución de los enantiómeros pueden ser llevado fuera utilizando derivados diastereomépcos covalentes de los compuestos de la presente invención, se prefieren complejos disociados (es d jar, sales diastereomépcas cristalinas) Los diastereomeroe tienen a?fereníes propiedades físicas (es decir, puntos de f sion, puntos de ebulhcon, solubilidad, reactividad, etc ) y pueden ser separados f cilmente tomando ventaja de estas disimilitudes Se separaron los diastereomeros mediante cromatografía, o preferentemente, mediante separación/resolución de técnicas basadas en la solubilidad de diferencias actualizadas El enantiómero optimamenle puro es posteriormente recuperado, junto con un agente de resolución, por cualquier medio práctico que podría no resultar en racemización Una descripción con más detalle de las técnicas aplicables a la resolución de los estereoisómeros de los compuestos a partir de la mezcla racemica se encuentra en la Publicación Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H Wilen,
"Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 En resumen, los compuestos de la Fórmula I pueden ser elaborados mediante un proceso, el cual involucra; (a) que los esquemas de reacción I; y (b) opcionalmente la conversión de un compuesto de la presente invención en un sal farmacéuticamente aceptable; (c) opcionalmente la conversión de una forma de sal de un compuesto de la presente invención a una forma sin sal; (d) opcionalmente la conversión de un compuesto de forma no oxidizada de un compuesto de la presente invención en un óxido-N farmacéuticamente aceptable; (e) opcionalmente la conversión de una forma de óxido-N de un compuesto de la presente invención en su forma no oxidizada; (f) opcionalmente la resolución de un isómero individual de un compuesto de la présenle invención a partir de una mezcla de isómeros, (g) opcionalmente la conversión de un compuesto no derivatizado de la presente invención en un profármaco derivado farmacéuticamente aceptable; y (h) opcionalmenie la conversión de un profármaco derivado de un compuesto de la presente invención para su forma no derivatizada Insofar como la producción de los materiales de partida no es particularmente descrita, son conocidos los compuestos o pueden
ser preparados ana!op <mep - los ¡rétodos conocidos en la técnica tal co o es descrito e'1 ios Fjempios a continuación. Un ex erto en la técnica podrá apreciar que las transformaciones aníp.riores sor» solamente representativas de métodos para pre?.'arac<ói? de ios compuestos de la presente invención, y qim otros métodos bien conocidos pueden ser utilizados similarmeime. Ejemplos Un ejemplo adicional de la presente invención, pero no limitativo de los eiemp'os que a continuación se ilustran en la preparación de los emprestes do ¡a Fórmula I de acuerdo a la presence mvem.i ¡< ' .} e Í p S o 1 Ácido 2-( 3-D i eli I a rnin.jp i op-iamincHiazol-S-carboxílico [2-metil-5-(3- trifluo r o me tj L_be n zp] ja mmoHenill-amida
A una solución agitada de 4 -rnetil-3-nitroaniiina (1.00 g,
6.57 mmo!) y triotilamina (1.10 mL, 7.09 mmol) a una temperatura de 0°C se agregó cloruro d.-:.3 -tritiuoromfitilbenzoil (4.90 g, 31.0 mmol) y la mezcla ts ¿o\{¿> cummie ¡ hora ÍÍ temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con r ;Q\c y se lavó con una solución de bicarbonato de sodio gc ^so saturado. La capa orgánica se secó
sobre MgSO y se concentró en una presión reducida para producir un producto crudo. Se disolvió el producto crudo en MeOH y se agregó 10% de Pd/C a una solución. La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró en una placa de Celita y el filtrado se concentró bajo presión reducida para producir N-(3-amino-4-metilfenil)-3-trifluorometil-benzamida en la forma de un sólido gris oscuro. A una solución agitada de N-(4-metil-3-nitrofeníl)-3-trifluorometilbenzamida (250 mg, 0.85 mmol), ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico (177 mg, 0.85 mmo!), y diisopropiletil-amina (0.59 mL, 3.4 mmol) en DMF se agregó O-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio hexafluorofosfato (355 mg, 0.93 mmol), y la mezcla se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con 10% de solución de tiosulfato de sodio acuoso. La capa orgánica se secó con MgSO4 y se concentró en presión reducida. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo para producir ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(3-trifluorometil-benzoilamino)-fenil]-amida en la forma de un sólido color marrón. Se disolvió ácido 2-Bromotiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(3-trifluorometilbenzoil-amino)-fenil]-amida (25 mg, 52 µmol) en 3-(dietilamino)-propilarnina y la mezcla se agitó durante 4 horas a una temperatura de 80°C. El producto crudo se diluyó con DMSO (1 mL) y se purificó mediante HPLC preparativo para producir ácido 2-(3-dietilaminopropilamino)-tiazol-5-carboxílico [2-metil-5-(3-
trifluorometil-benzoilamino)-fenil]-am?da en una forma de sal TFA: 1H RMN 400 MHz (DMSO-dB) o 967 (s 1H), 943 (br, 1H), 8.35 (t, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 3.35 (q, 2H), 2.89 (m, 6H), 2.19 (s, 3H), 1.93 (m, 2H), 1.20 (t, 6H); MS m/z 534.4 (M + 1). Ejemplo 2 Ácido 2-I6-Í4- (2-H?droxietil)-piperazin-1-il1-2-metilpirimidin-4-ilamino)-t?azol-5-carboxílico [2-meti l-5-( 3-trif luorometil benzoi la mino )- fenill-amida
A una suspensión de 2-aminotiazol-5-carboxilato de metilo (4.90 g, 31.0 mmol) y NaH (dispersión del 60% en aceite mineral, 1.36 g, 34.1 mmol) en DMF a Lina temperatura de 0°C se agregó 4,6-dicloro-2-melil-pirim¡dina (5.05 g, 31.0 mmol) en DMF y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución al 10% de tiosulfato de sodio acuoso. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se cristalizó a partir de MeOH para producir 2-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-ilamino)-tiazol-5-carboxilato de metilo en la forma de un sólido blanco. A una solución agitada de 2-(6-cloro-2-metil-pirimidin-4-ilamino)-liazol-5-carboxüato de metilo (3.97 g, 14.0 mmol) en MeOH
se agrego 4 N NaOH (15 mL) y la mezcla se agitó durante 12 horas a una temperatura de 00° C Se neutralizo la mezcla de reacción con 1 N HCl y se filtro el precipitado resultante y se lavó con MeOH para producir acido 2-(6-cloro-2-met?l-Dir?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carboxílico en la forma de un solido color blanco A una solución de ácido 2-(6-cloro-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azo!-5-carbox?l?co (230 mg, 085 mmol), N-(3-Am?no-4-met?l-fen?l)-3-tr?fluoromet?lbenzam?da (250 mg, 085 mmol), y dnsopropiletilamina (059 mL, 34 mmol) en DMF se agregó O-(7-azabenzotr?azol-1 -?l)-N,N,N',N'-tetramet?luron?o hexafluorofosfato
(355 mg, 093 mmol) y la mezcla se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente La mezcla de reacción se diluyo con EtOAc y se lavo con una solución del 10% de tiosulfato de sodio acuoso La capa organ?ca se seco sotre MgSO4 y se concentro bajo presión reducida El producto cpja'o se purifico mediante HPLC de preparación paia producir un acido 2-(6-cloro-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carbo ?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluorometil-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da en la forma de un solido blanco A una solución agitada de un acido 2-(6-cloro-2-metil-pin m?d?n-4-? lamino )-t?azol-5-carbox?!?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?!am?no)-fen?l]-am?da se agrego (25 mg, 46 µmol) 1 ,3-d?met?l-2-imidazolidona (02 mL) sobrante 2-p?peraz?n-1-?l-etanol (100 mg) en 1 ,3-d?met?l-2-?m?dazol?dona (02 mL) y la mezcla se agitó durante 4 horas a una temperatura de 60°C El producto crudo se diluyó con DMSO (1 mL) y se purifico mediante HPLC de preparación para
producir ácido 2-{6-[4-(2-H?drox?et?l)-p?peraz?n-1-il]-2-metilp?rimidin-4-?lam?no}-t?azol-5-carboxíl?co [2-metil-5-(3-trifluoromet?lbenzo?lam?no)-fen?l]-am?da en la forma de una sal TFA: H RMN 400 MHz (MeOH-d4) d 826 (s, 1H), 820 (d, 1H), 8 15 (s, 1H), 790 (d, 1H), 783 (s, 1H), 774 (t, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.31 (d, 1H), 6.20 (br, 1H), 393 (dd, 2H), 3.50 (br, 8H), 3.35 (dd, 2H), 2.53 (s, 3H), 231 (s, 3H), MS m/z 641.5(M + 1) Ejemplo 3 Ácido 2-(2-H?drox?-et?lam?no)-t?azol-5-carboxílico (5- [3-( 4-e til- pipe raz?n-1-?l)-5-tr?fl uoro metí l-benzoilammol -2 -meti I -fenil - amida
A una solución agitada de 4-met?l-3-n?troan?l?na (259 mg,
1.7 mmo!), ácido 3-(4-et?l-p?poraz?n-1 -?l)-5-trifluoromet?l-benzoico (514 mg, 1.7 mmol), y dusopropiletil-amina (1.19 mL, 6.8 mmol) en DMF se agregó O-(7-azabenzotr?azol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronío hexafluorofosfato (710 mg, 1.9 ?n,mo¡), y la mezcla se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución de tiosulfato de sodio acuoso al 10%. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró bajo presión reducida para producir un producto crudo. El producto crudo se disolvió en MeOH y se agregó 10% de Pd/C a la solución. La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura
ambiente bajo hidrogeno La mezcla de reacción se filtro sobre una placa de Celita y el filtrado se concentro bajo presión reducida para producir N-(3-Am?no-4-met?lfen?l)-3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tpfluorometilbenzarnida A una solución agitada de N-(3-Am?no-4-met?lfen?l)-3-(4-etil-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?lbenzam?da (345 mg, 085 mmol), ácido 2-bromot?azol-5-carbox?l?co (177 mg, 085 mmol), y diisopropiletil-amina (059 mL 34 mmol) en DMF se agrego O-(7-azabenzotr?azol-1-?l)-N,N,N',N'-tetramet?iuron?o hexafluorofosfato (355 mg, 093 mmol), y la mezcla se agito durante 12 horas a temperatura ambiente La mezcla de reacción se diluyo con EtOAc y se lavó con solución de tiosulfato de sodio acuoso al 10% La capa orgánica se seco sobre MgS04 y se concentro bajo presión reducida El producto crudo se purifico mediante el preparativo HPLC para producir acido 2-bromot?azol-5 carboxihco {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1 -?l)-5-tr?fluoromet?lbenzo?!a,t,?no]-2-met?lfen?l}-am?da en la forma de un solido color marrón Acido 2-Bromot?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?lbenzo?lam?no]-2-met?lfen?l}-am?da (25 mg, 42 µmol) se disolvió en etanolamma y la mezcla se agitó durante 4 horas a una temperatura de 80°C El producto crudo se diluyo con DMSO (1 mL) y se purifico mediante HPLC de preparación para producir ácido 2-(2-h?drox?-et?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co {5-[3-(4-et?l-p?peraz?n-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-2-met?l-fen?l}-am?da en la forma de una sal TFA 1H RMN 400 MHz (MeOH-d4) d 787 (s, 1H), 777 (s,
1H), 7.75 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.24 (d, 1H), 4.50 (br, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.68 (br, 2H), 3.45 (m, 2H), 3.22 (br, 6H), 2.23 (s, 3H), 1.38 (t, 3H), MS m/z 577.5(M + 1). Se obtuvieron a través de la repetición de los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores, utilizando materiales de partida apropiados, los siguientes compuestos de la Fórmula I, tal como se identifican en la Tabla 1.
Tabla 1
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Ensayos Se ensayaron los compuestos de la presente invención para medir su capacidad para inhibir la proliferación celular selectivamente de las células de expresión Ba/F3 BCR-Abl (Ba/F3-p210) comparadas con las células parentaies BaF3. Se probaron selectivamente los compuestos de inhibición, la proliferación de estas células BCR-Abl transformadas por la actividad anti-proliferativa en células de expresión Ba/F3 encontrados en cualquier tipo o formas mutantes de Bcr-abl en pacientes resistentes al Gleevec (mutaciones G250E, E255V, T315I, F317L y M351T). Además, se ensayaron los compuestos para medir su capacidad para inhibir Abl, Bcr-Abl. FGFR3, PDGFRß Flt3 y cinasas b-Raf. Inhibición de la proliferación dependiente celular BCR-Abl (método de colocación completa Alta) La línea celular de múrido utilizada es la Ba/F3 transformada la línea celular de múrido pro-B con BCR-Abl cADN (Ba/F3-p210). Se mantuvieron estas células en RPMI/suero fetal bovino al 10% (RPMI/FCS) suplementado con 50 µg/mL de penicilina,
50 µg/mL de estreptomicna y 200 mM de L-glutamina Las células no transformadas Ba/F3 Ba/F3 son mantenidas similarmente con la adición de un recombinante de múrido IL3 La inhibición de BCR-Abl celular dependiente de proliferación Se selló células Ba/F3-p210 en un depósito 96 placas TC en una densidad de 15,000 células por depósito Se agregó 50 µl de dos diluciones en serie de dobles de los compuestos de prueba (Cmax es -10 µM) a cada depósito (se incluyó como control positivo STI571). Después de la incubación de las células durante 48 horas a una temperatura de 37°C se agrego al 5% de CO2, 15 µL de MTT (Promega) a cada deposito y las células se incubaron durante 5 horas adicionales So ciant'fico la densidad óptica en 570nm espectrofotometpcameníe y valores IC50, se determinó la concentración de compuestos requerida por 50% de inhibición, de una dosis de curva de respue sía Efecto en ia distt ibiucion de! ciclo celular Se sellaron células Pa/F3 y Ba/F3-p210 en 6 placas de depósito TC en 25x10b células por depósito en un medio de 5ml, y se agregó el compuesto de prueba en 1 ó 10 µM (se incluyó STI571 como un control) Las células posteriormente se incubaron durante 24 ó 48 horas a una tempeotura de 37°C, 5% de CO2 Se lavó 2 ml de células de suspensión con PBS, se fijo en EtOH al 70% durante 1 hora y se trató con PBS/ED1 A/RNasa A durante 30 minutos. Se agregó yoduro de propidio (Cf= 10 µg/ml) y se cuantificó la intensidad de fluorescencia mediante citometría de flujo en el
S sIistema FACScalibur™ (RD Bioscences) Los compuestos de prueba de la presente invención domosíiaron un efecto apoptotico en las células Ba/F3-p210 pero no inducieron apoptosis en las células parentales Ba/F3 Efecto en la Autofosfoplación Celular BCR-Abl Se cuantifico la autofosfoplación BCR-Abl con tomas Elisa utilizando un anticuerpo de toma específico c-abl y un anticuerpo de antifosfotirosma Se sellaron las células Ba/F3-p210 en placas TC de 96 depósitos en 2x105 células por depósito en un medio de 50 µL Se agregó 50 µL de dos diluciones de serie de dobles de los compuestos de prueba (Crp?) es 10 µM) para cada depósito (se incluyo St!571 como un control positivo) Las células se incubaron durante 90 minutos a una t irioe-atura de 37°C, y 5% de CO2 Las células posteriormente se trataron durante 1 hora en hielo con 150 µL de regulador lisis (50 mM Tns-HCI, pH 74, 150 mM NaCI, 5 mM EDTA, 1 mM EGTA y 1% NP-40) conteniendo inhibidores de proteasa y fosfatasa Se agregó 50 µL ae células hsato a optiplacas de 96 depósitos cubieitas previamente con un anticuerpo específico anti-abl y bloqueado Las placas se incubaron durante 4 horas a una temperatura de 4°C Después se lavaron con un regulador TBS-Tween 20, se agregó 50 µL de aicalina-fosfatasa conjugada con un anticuerpo aníi-fosfotirosma y la placa se incubó además durante la noche a una temperatura de 4°C Después se lavó con un regulador TBS-Tweep 20 se agrego 90 µL <¡e un substrato luminiscente y se cuantificó la luminiscencia utilizando el sistema Acquest™ (Aparatos
Moleculares) Los compuestos de prueba de la presente invención que inhibieron la proliferación de las células de expresión BCR-Abl, inhibieron la autofosfoplacion BCR-Abl en una forma de dosis dependiente Efecto en la proliferación de células de expresión de formas mutantes de Bcr-abl Se probaron los compuestos de la presente invención para su efecto antiprolifreativo en células de expresión Ba/F3 de cualquier tipo o formas mutantes de BCR-Abl (G250E, E255V, T315I, F317L, M351T) que confiere ¡a resistencia o sensibilidad disminuida a STI571 Los efectos antiproliferativos de estos compuestos en las células de expresión mutantes-BCR-Abl y en células no transformadas se probaron ísl como se describe a continuación. Los valores IC50 de los com?ues'o careciendo de toxicidad en las células no transformadas se determinaron a partir de la dosis de respuesta curva obtenido tal como describe a continuación FGFR3 (Ensayo Enzimático) Se transportó un ensayó de actividad de cinasa con FGFR3 purificado actualizado en un volumen final de 10 µL que contiene 025 µg/mL de enzima en un regulador de cinasa (30 mM Tps-HCI pH75, 15 mM MgCI2, 4 5 mM MnCI2. 15 µM Na3VO4 y 50 µg/mL BSA), y substratos (5 µg/mL b?ot?n-pol?-EY(Glu, Tyr) (CIS-US, Inc.) y 3µM ATP) Se elaboraron dos soluciones la primera solución contiene 5 µl de la enzima FGFR3 en el regulador de cmasa fue primero distribuido en un formato 384- ProxiPlate® (Perkin-Elmer)
seguido oor la adición de 50 nL de los compuestos disueltos en DMSO, posteriormente 5 µl de la segunda solución que contiene el substrato (poh-EY) y se agregó a cada depósito el regulador de cinasa ATP Se incubaron las reacciones a temperatura ambiente durante una hora, detenidas mediante la adición de 10 µL la mezcla de detección HTRF, la cual contiene 30 mM Tris-HCl pH7.5, 0.5 M KF, 50 mM ETDA, 02 mg/mL BSA, 15 µg/mL estreptav?d?n-XL665 (CIS-US, Ine ) y 150 ng/mL cpptato conjugado anti-fosfotirosma de anticuerpo (CIS-US, Ine ) Después de una hora de incubación a temperatura ambiente tener en cuenta la interacción de estreptavidin-biotin, a la vez de que se leyeron las señales fluorescentes resueltas en Anulyet GT (Molecular Devices Corp). Se calcularon los valores ICA mediante el análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 12 concentraciones (1 3 diLición de 50 µM a 028 nM) En este ensayo, los compuestos de la presente invención tienen un IC50 en el rango de 10 nM a 2 µM FGFR3 (Ensayo Celular) Se probaron los compuestos de la presente invención para su habilidad para inhibir células de proliferación Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, las cuales dependen de la actividad de cinasa FGFR3 celular Se cultivó en una suspensión Ba/F3-TEL-FGFR3 superior a 800,000 céiulas/mL, RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino al 10% en un cultivo medio Se distribuyeron células en placas de formato de 384 depósitos en 5000 células/depósito en un cultivo
medio de 50 µL Se disolvieron los compuestos de la presente invención y se diluyeron con dime lsulfóxido (DMSO) Se elaboraron puntos Twelve en diluciones de 1 3 series en DMSO para crear gradientes de concentraciones generalmente en un rango de 10 mM a 005 µM Se agregaron las células con 50 nL de compuestos de dilución y se incubaron durante 48 horas en un incubador de cultivo celular. Se utilizó AlamarBIue® (Sistemas de Diagnóstico TREK), para monitorear el ambiente de reducción creado por células de proliferación, se agregaron a las células en una concentración final del 10%. Después de cuatro horas adicionales de incubación a una temperatura de 37°C en el incubador de cultivo celular, se cuantificaro.n ias señale , de fluorescencia a partir de la reducción AlamarBIue© (Excitación en £30 mn, Emisión en 580 nm) en Analyst GT (Molecular Devicer Corp ) Se calcularon los valores IC50 mediante el análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 12 concentraciones FLT3 y PDGFRß (Ensayo Celuiar) Son conducidos los efectos de los compuestos de la presente invención en la actividad celular de FLT3 y PDGFRß utilizando métodos idénticos La! como se describió más arriba para la actividad celular FGFR3, excepto que en vez de la utilización de Ba/F3-TEL-FGFR3, Ba/F3-FLT3-ITD y se utilizó Ba/F3-Tel-PDGFRß, respectivamente. b-Raf - ensayo enzimático Se probaron \o- compuestos de la presenten invención para
su habilidad para inhibir la actividad de b-Raf. Se llevó a cabo el ensayo en placas MaxiSorp de 384-de?ósitos (NUNC) con paredes oscuras y fondo claro Se diluyó el substrato l?Ba, en DPBS (1:750) y se agregó 15µl a cada deposito. Se incubaron las placas a una temperatura de 4°C durante la noche y se lavaron 3 veces con TBST (25 mM Tris, pH 8.0, 150 mM NaCI y 0.05% Tween-20) utilizando limpiador de la placa EMBLA. Se bloquearon las placas mediante Superblock (15µl/depósito) durante 3 horas a temperatura ambiente, se lavaron 3 veces con TBST y paí-dried. Se agregó el regulador de ensayo conteniendo 20µM ATP ( 10 µ I ) a cada depósito seguido por un compuesto de 100n? ó 500nl. .Se diluyó b-Raf en el regulador de ensayo (1µl en 25ul) y 10µ ! de b-Raf diluido se agregó a cada depósito (0.4µg/deoós?to). Ss incubaron las placas a temperatura ambiente durante 25 hoias. Se detuvo la reacción de cinasa por las placas de lavado 6 veces con TBST. Se diluyó el anticuerpo Phosph-l?Ba (Ser32/36) en Superbioque (1.10,000) y se agregó 15µl a cada depósito. Se incubaron las placas 3 una temperatura de 4°C durante la noche y se lavaron 6 veces con TBST. Se diluyó el conjugado-AP cabra-anti-ratón IgG en Superbioque (1:1,500) y se agregó 15µl a cada depósito. Se incubaron las placas a temperatura ambiente durante 1 hora y se lavaron 6 veces con TBST. Se agregó 15µl de substrato fluorescente Attophos AP (Promega) a cada depósito y se incubaron las placas a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se leyeron las placas en ?cquest o Analyst GT utilizando el Programa de Intensidad de Fluorescencia (Excitación 455 nm, Emisión 580
nm) b-Raf - ensayo celular Se probdron los co puesics de la presente invención en células A375 para su habilidad para inhibir la fosforilación de MEK. Se derivó la línea celular A375 (ATCC) a partir de un melanoma humano del paciente y tiene una mutación V599E en el gen B-Raf. Se elevaron los niveles de tosfor?lado MEK debido a la mutación de B-Raf Se incubaron célula;- A375 sub-confluentes a confluentes con compuestos durante 2 horas a una temperatura de 37°C en un medio libre de suero. Posteriormente se lavaron las células una vez con PBS frío y lisado con el regulador lisis conteniendo 1% de Tritón X100. Son sometidas a centrifugación, los tensioactivos para SDS-PAGE, y µoeíepoi nente transferidos a membranas nitrocelulosas. Postepormen?e c-m'i ccirieímf-m 7.: membranas a manchado con el anticuerpo ant?-fosfo-ME.K (ee-,217/2?1 ) (Señalización Celular). Se monitoreo la cantidad cíe fosfoplado MEK mediante la densidad de bandas fosfo-MEK en las membranas nitrocelulosas. Actualización de KinaseProfiler™ - Ensayo de enlazamiento de filtro enzimático de adio Se ensayaron los compuestos de la presente invención para su habilidad para inhibir miembros individuales del panel de cinasa. Se probaron los compuestos en duplicados en una concentración final de 10 µM seguidos de un protocolo genérico. Observar que la composición del regulador de cinasa y los substratos varían para cinasas diferentes incluidas en el "panel de actualización
KinaseProfiler™ ' El reguladoi d:? cinaea (25µL, 10x - contienen MnCI2 cuando es req?endo), actividad de cinasa (Unidades 0.001-0.01, 25µL), especílico o peµtido Pol?(Glu4-Tyr) (5-500µM o .01mg/ml) en un reguladoi de cinosa y (50µM, 5µL) regulador de cinasa se mezclaron con hit lo Se agregó una mezcla de Mg/ATP (10µl_, 675 (o 3375) mM MgCI2, 450 (ó 225) µM ATP y 1 µCi/µl [y-32P]-ATP (3000C?/mmol)) y la reacción se incubó en aproximadamente 30°C durante aproximadamente 10 minutos. Se manchó la mezcla de reacción (20µL) de 2cm x 2cm P81 (fosfocelulosa para cargar positivamente substratos de péptido) o No. 1 (para substrato de péptido Poli (Glu4-Tyr) marcos de papel. Los marcos de ensayo son lavados 4 veces, durante 5 minutos cada uno, con ácido fosfórico al ü 75% y se lavaron una vez con acetona durante 5 minutos Loe marcos de ensayo son transferidos a la escmtilacón vial, m! ue es ntiiaaón de; cocktail y se agregó 32P (cpm) de incorporación al p phdo de substrato que es cuantificado con un contador de escintiiacion Beckman Se calculó la inhibición en porcentaje de cada reacción Los compuestos de la Fórmula I, en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable, exhibe propiedades farmacológicas que se puedan evaluar, por ejemplo, como se indicó en las pruebas m vitro descritas en la solicitud Por ejemplo, los compuestos de la ¡7 pnula I preferentemente muestran un IC50 en el índice de 1 x 1ü"1ü a 1 x 105 M, preferentemente menor de 150 nM para por lo menos una de las siguientes cmasas: Abl, Bcr-Abl,
FGFR3 PDGFRß b-Paf v F I - ^ Por ejemplo (i j acido ?-!_R-(4 et??-p?pe? ?n-1-?l)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-carbox?l?co [2-met?l-5-(3-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no)-fen?l]-am?da (Ejemplo 8) tiene un IC 0 de 5 nM, 2 29 µM 12 nM 1 27 µM 5 nM y 5 nM para un tipo natural, G250E,
E255V, T315I, F317L y M351T Bci-abl respectivamente, (n) acido 2-[6 í4-et?¡-Diperaz?n-1 -?l)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azol-5-ca?box?l?co {2-rnet?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tr?fluoromet?l-benzo?lam?no]-fen?l}-am?da (Ejemplo 29) tiene un IC50 de 8 nM y 570 nM para un tipo natural y T315I Bcr-Abl respectivamente (ni) a ?d_> 2 (¿ m jíi?-5-morfol?n-4-?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no)-t?azol-5-carbox?l?co v°-n?et?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1-?l)-5-tpfluoromet?l-ben7?i?annno]-fen?l}-am?da (Ejemplo 28) tiene un IC50 de 5 nM para PDGFRß y (\v) acido 2-[6-(2-h?d?ox?-et?lam?no)-2-met?l-p?r?m?d?n-4-?lam?no]-t?azoi-'5-carbox?l co {2-met?l-5-[3-(4-met?l-?m?dazol-1 -?l)-5-tpfluoromet?l-benzo?lam?no|-feinl} amida (Compuesto 5) tiene un IC50 de 41 nM para Flt-3 Los compuestos de la Formula I en una concentración de
10µM, preferentemente mostró un porcentaje de inhibición mayor de aproximadamente 50%, preferentemente mayor de 70%, contra una o mas de las siguientes cmasa ADI, Bcr-Abl, FGFR3, PDGFRß, b-Raf, y Flt-3 Quedara envend'do que los ejemplos y modalidades
descritos en la misma son solo propósitos ilustrativos y que varias modificaciones o cambies a la luz de la misma serán tomados por expertos en la técnica y serán incluidos dentro del espíritu y alcance de la presente solicitud y alcance de las reivindicaciones adjuntas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patentes citadas en la misma e incorporadas como referencia para todos sus propósitos