CN101805261A - 一种杜仲叶制备绿原酸精品的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杜仲叶制备绿原酸精品的方法，采用去离子水常温浸泡提取，压榨(或离心)，大孔吸附柱层析富集，醋酸乙酯萃取，去离子水重结晶的工艺流程，针对目标产物绿原酸易分解的不稳定性采取了系列保护措施：控制温度pH、加入抗氧化剂、缩短生产周期等，具有低成本、易操作、高回收率及高含量的特点。为工厂化规模开发、充分利用杜仲资源开辟一条新的途径。

Description

一种杜仲叶制备绿原酸精品的方法

技术领域

本发明涉及一种杜仲叶制备绿原酸精品的方法。

背景技术：

绿原酸(Chlorogenic acid)是由咖啡酸(Cafieic acid)与奎宁酸(Quinic acid)组成的缩酚酸，异名咖啡单宁酸，化学名3-O-咖啡酰奎宁酸(3-O-Cafeoylquinic acid)，分子式为C₁₆H₁₈O₉，相对分子质量354.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。它是许多中药材的有效成分之一，又是某些成药的质量指标。绿原酸广泛应用于医药、日用化工和食品等行业。虽然绿原酸较为普遍地存在于各类植物中，但含量较高的植物并不多见。近年来的研究表明，杜仲(Eucommia ulmoides)中绿原酸的含量较高，其中叶的含量为1-3％左右。杜仲在我国作为药用已经有几百年的历史，栽培面积相当广泛，全国约有杜仲林20万平方公顷，每年可产叶几百万吨。但是目前杜仲高端产品的开发生产滞后，特别是单一成分的分离与提纯；低端产品只有零星生产，造成大量杜仲资源的浪费，使过去发展起来的杜仲生产基地陷入两难境地，这主要是由于有些研究仅停留在实验室阶段，缺乏应用于实际生产的成套技术，如果能够用于提取药用甚至化学纯绿原酸，无疑将会产生巨大的社会和经济效益。目前杜仲叶绿原酸研究中的主要提取方法有：溶剂提取法、超声波提取法、超临界CO₂法、提取法酶提取法等；绿原酸的纯化分离方法有：聚酰胺柱层析法、超滤膜分离法、铅盐沉淀分离法、溶剂萃取分离法、大孔树脂分离法。但上述方法存在投资大、技术要求高、重金属残留及纯度低等问题，规模化生产困难。

本发明的目的是利用这些年来对杜仲叶中绿原酸提取分离的研究基础，提供一种具有低成本、易操作、高含量特点的绿原酸精品制备方法。为杜仲叶的开发利用开辟一条新的途径。

本发明所述之杜仲叶制备绿原酸精品的工艺流程：杜仲叶粗粉碎——去离子水常温浸泡提取——压榨(或离心)——柱层析富集——溶剂萃取——粗结晶——重结晶(精品)；

具体方法如下：

(1)杜仲叶粗粉碎；

(2)去离子水常温浸泡提取，温度30-40℃，调节PH值至3.0-3.5，时间30-60分钟/次，重复3-4次，

(3)浸提液澄清后用大孔树脂上柱吸附，再经30-50％乙醇洗脱，加入还原剂真空低温浓缩，其中大孔树脂是AAS、NKA-II、NKA-9之一种，还原剂为亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠之一种，

(4)醋酸乙酯萃取洗脱液低温浓缩至比重1.05-1.10，用等倍量水饱和溶剂常温萃取，合并萃取液，回收溶剂后低温浓缩至有浑浊出现，静置结晶，其中所选用的萃取溶剂为正丁醇、丙酮、醋酸乙酯中的一种，也可以是其几种的混合，

(5)重结晶用去离子水1∶2-1∶4热溶，过滤，低温静置结晶，低温干燥，成品。

本发明采用去离子水常温浸泡提取，压榨(或离心)，大孔吸附柱层析富集、溶剂萃取、去离子水重结晶的工艺流程，针对目标产物绿原酸易分解的不稳定性采取了系列保护措施：控制温度、PH值、加入抗氧化剂、缩短生产周期等，具有低成本、易操作、高回收率及高含量的特点，为工厂化规模开发、充分利用杜仲资源开辟一条新的途径。

具体实施方式

下面结合三个实施例，对本发明作进一步说明。实施例1.杜仲叶1000Kg，粗粉碎，加入8000L去离子水中，浸泡温度30℃，30分钟后沥干，加入去离子水6000L继续温浸，重复4次。压榨浸泡后的杜仲叶，合并浸泡提取液，按1∶5加盐酸调整PH值至3.0，经过滤后上吸附柱NKA-9，多柱套用，至吸附饱和，用30％乙醇倍量洗脱，洗脱液加入0.5％(W/V)亚硫酸氢钠，减压回收乙醇，低温(T≤60℃)浓缩至比重1.05，用等倍量水饱和醋酸乙酯3-4次常温萃取，合并醋酸乙酯相回收溶剂后低温(T≤50℃)浓缩至有浑浊出现，静置结晶12小时，重结晶，得白色结晶产品6.4Kg，HPLC含量：98.8％。

实施例2.杜仲叶1500Kg，粗粉碎，加入12000L去离子水中室温浸泡，间歇搅拌，温度30℃，40分钟后沥干，加入去离子水9000L继续温浸，重复4次，压榨浸泡后的杜仲叶，合并浸泡提取液，用1∶5盐酸调整PH值至3.0。经过滤后上吸附柱AAS，多柱套用，至吸附饱和，30％乙醇倍量洗脱，洗脱液加入0.5％(W/V)亚硫酸氢钠、0.3％硫代硫酸钠，减压回收乙醇，低温(T≤60℃)浓缩至比重1.06，用等倍量水饱和醋酸乙酯3-4次常温萃取，合并醋酸乙酯相回收溶剂后低温(T≤50℃)浓缩至有浑浊出现，静置结晶12小时，重结晶，得白色结晶产品9Kg，HPLC含量：98.2％。

实施例3.杜仲叶1000Kg，粗粉碎，加入8000L去离子水，浸泡温度40℃，30分钟后沥干，加入去离子水6000L继续温浸，重复4次，压榨浸泡后的杜仲叶，合并浸泡提取液，1∶5盐酸调整PH值至3.0，经过滤后上吸附柱NKA-II，多柱套用，至吸附饱和，30％乙醇倍量洗脱，洗脱液加入0.4％(W/V)亚硫酸氢钠，减压回收乙醇，低温(T≤60℃)浓缩至比重1.10，用等倍量水饱和醋酸乙酯3-4次常温萃取，合并醋酸乙酯相回收溶剂后低温(T≤50℃)浓缩至有浑浊出现，静置结晶12小时，去离子水重结晶，得白色结晶产品6.4Kg，HPLC含量：98.5％。

渣压榨后可提取杜仲胶。

Claims (1)

1.一种杜仲叶制备绿原酸精品的方法，它是将杜仲叶粗粉碎——去离子水常温浸泡提取——压榨(或离心)——柱层析富集——溶剂萃取——粗结晶——重结晶(精品)；

其特征在于：

(1)杜仲叶粗粉碎；

(2)去离子水常温浸泡提取，温度30-40℃，调节PH值至3.0-3.5，时间30-60分钟/次，重复3-4次，

(3)浸提液澄清后用大孔树脂上柱吸附，再经30-50％乙醇洗脱，加入还原剂真空低温浓缩，其中大孔树脂是AAS、NKA-II、NKA-9之一种，还原剂为亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠之一种，

(4)醋酸乙酯萃取洗脱液低温浓缩至比重1.05-1.10，用等倍量水饱和溶剂常温萃取，合并萃取液，回收溶剂后低温浓缩至有浑浊出现，静置结晶，其中所选用的萃取溶剂为正丁醇、丙酮、醋酸乙酯中的一种，也可以是其几种的混合，

(5)重结晶用去离子水1∶2-1∶4热溶，过滤，低温静置结晶，低温干燥，成品。