UA128389C2

UA128389C2 - Мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка має активність заміщувати кофакторну функцію фактора коагуляції крові viii (fviii), та фармацевтичний склад, який містить згадану молекулу як активний інгредієнт

Info

Publication number: UA128389C2
Application number: UAA202002066A
Authority: UA
Inventors: Юрі Теранісі; Юри Тераниси; Кадзукі Като; Кадзуки КАТО; Хікару Коґа; Хикару КОГА; Томоюкі Іґава; Томоюки ИГАВА; Кадзукі Ямаґуті; Кадзуки ЯМАГУТИ; Тецухіро Соєда; Тецухиро Соеда
Original assignee: Чугаі Сейяку Кабусікі Кайся; Чугаи Сейяку Кабусики Кайся
Priority date: 2017-09-29
Filing date: 2018-09-27
Publication date: 2024-07-03
Also published as: KR102078957B1; WO2019065795A1; MX2020002710A; IL284913A; MY204641A; JP6496095B1; TW201936634A; CN111108202A; US20200354473A1; JP2023110093A; BR112020005834A2; AU2018338859B2; CN111108202B; CN118994408A; CO2020003432A2; SG10202007194PA; SG11201810270SA; TW201920253A; PE20210005A1; JP2025061487A

Abstract

Винахід стосується біспецифічного антитіла, чия активність пригнічення активації FIX не є підвищеною і чия активність заміщування кофакторної функції FVIII є підвищеною.

Description

Галузь техніки

Цей винахід стосується мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул, які мають активність заміщувати кофакторну функцію фактора коагуляції крові МІ (ЕМІ), та фармацевтичних складів з ними. Винахід також стосується антигензв'язувальних молекул, у яких регулюється асоціація між важким ланцюгом та легким ланцюгом, способів виробництва антигензв'язувальної молекули, у якій регулюється асоціація між важким ланцюгом та легким ланцюгом, та способів регуляції асоціації між важким ланцюгом та легким ланцюгом антигензв'язувальної молекули.

Попередній рівень техніки

Гемофілія А - це порушення гемостазу, спричинене природженим зниженням або дефіцитом функції фактора коагуляції крові МИ! (ЕМ). Пацієнтам з гемофілією А фармацевтичний склад з ЕМ зазвичай вводять для лікування кровотечі за потреби (лікування за потреби). В останні роки фармацевтичні склади з ЕМІІЇ також вводять профілактично для попередження випадків кровотечі (превентивне введення; непатентні документи 1 та 2). Період напіврозпаду фармацевтичних складів з ЕМ у крові становить приблизно від 12 до 16 годин.

Тому, для безперервного попередження фармацевтичні склади з ЕМІЇЇ вводять пацієнтам тричі на тиждень (непатентні документи З та 4). При лікуванні за потреби фармацевтичні склади з

ЕМІЇЇ також додатково вводяться, коли це потрібно, з регулярними інтервалами для запобігання рецидиву кровотечі. Крім того, введення фармацевтичних складів з ЕМ виконується внутрішньовенно. Тому, існує велика потреба у фармацевтичних агентах з меншими складнощами порівняно з фармацевтичними складами з ЕМП.

Іноді у пацієнтів з гемофілією розвиваються антитіла проти ЕМ! (інгібітори). Такі інгібітори протидіють ефектам фармацевтичних складів з ЕМІІІ. Для лікування кровотечі у пацієнтів, у яких утворилися інгібітори (пацієнтів з інгібіторами), вводяться фармацевтичні склади обхідної дії. Їх механізми дії не залежать від функції ЕМІІІЇ, тобто від функції каталізувати активацію фактора коагуляції крові Х (ЕХ) активованим фактором коагуляції крові ЇХ (РІХа). Тому, у деяких випадках, фармацевтичні склади обхідної дії не можуть достатньо ефективно зупинити кровотечу. Отже, існує велика потреба у терапевтичних агентах, на які не впливає присутність інгібіторів та які здатні функціонально заміщувати ЕМП.

Як засіб розв'язання цих проблем були описані біспецифічні антитіла, які заміщують функцію ЕМ, та їх застосування. (Патентні документи 1, 2, З та 4). Біспецифічні антитіла проти

КІХа та ЕХ здатні заміщувати функцію ЕМІІЇ внаслідок розташування цих двох факторів дуже близько один до одного, внаслідок чого спостерігається активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ (непатентний документ 5). Повідомлялося, що активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ антитіл можна покращити шляхом оптимізації афінності та спрямованості на РІХа та ЕХ (непатентний документ 6). Крім того, відомо, що на активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ антитіл впливає ізотип дО, характер дисульфідного зв'язку, амінокислотна послідовність шарнірної ділянки та присутність або відсутність цукрових ланцюгів у Ес-ділянці (непатентний документ 7). Повідомлялося, що АСЕ910 (еміцизумаб), який має високу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ! та який є одним з цих антитіл, демонструє гемостатичні ефекти на мавпячих моделях з гемофілією (непатентні документи 8 та 9). Крім того, у клінічних випробуваннях на здорових суб'єктах було підтверджено, що АСЕ910 (еміцизумаб) досягає відмінної фармакокінетики (тривалий період напіврозпаду), та він добре переноситься (непатентний документ 10), та у клінічних випробуваннях за участю пацієнтів з гемофілією А з інгібіторами або без них внаслідок введення АСЕ910 (еміцизумабу) частота кровотечі помітно знижувалася порівняно з періодом до введення АСЕ910 (еміцизумабу) (непатентний документ 11).

Як описано вище, у клінічних випробуваннях АСЕ910 (еміцизумабу) спостерігалися ефекти зниження частоти кровотечі. Однак, в аналізах тромбіноутворення іп міго із застосуванням плазми з дефіцитом ЕМ ефекти покращення дії АСЕ910 (еміцизумабу) на максимальне значення тромбіноутворення (висота піка) були нижчими порівняно з кількістю, утвореною у присутності нормального рівня ЕМ, який становить 100 одиниць/декалітр (непатентний документ 8). Тому, бажаним є подальше підвищення ефективності ліків. Крім того, враховуючи зручність для пацієнтів з гемофілією А, існує потреба у біспецифічних антитілах, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ та які здатні далі знижувати дозу введення внаслідок покращення специфічної активності, та їм подібних.

Зазвичай, трапляються випадки, коли фармацевтичний препарат на основі антитіла діє як антиген, індукуючи виробництво анти-антитіла (АБА) (непатентний документ 12). Оскільки безперервне введення АСЕ910 (еміцизумабу) стає складним для пацієнтів з гемофілією з 60 виникненням АБА (антиідіотипічних антитіл до АСЕ910 (еміцизумабу)), існує потреба у біспецифічних антитілах, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ та які можна вводити таким пацієнтам.

АСЕ910 (еміцизумаб) - це біспецифічне антитіло, оптимізоване з точки зору багатьох аспектів шляхом введення багатьох амінокислотних замін в антитіло-прототип ПВ51. Антитіло- прототип ЯНВ51 отримали шляхом гуманізації біспецифічного антитіла, яке набули внаслідок імунізації тварини та яке розпізнає ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ. АСЕ910 (еміцизумаб) має високу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ (непатентний документ б та патентний документ 4). Однак, для посилення ефективності ліків та покращення специфічної активності необхідне біспецифічне антитіло, яке заміщує функцію ЕМІЇ, при цьому необхідно, щоб таке антитіло мало вищу максимальну активність (максимальну активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІІ) порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом) та було б здатне демонструвати активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ при концентраціях, нижчих ніж концентрація АСЕ910 (еміцизумабу). Однак, на цей час, не було жодних повідомлень щодо біспецифічних антитіл, які мають помітно високу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом) з точки зору концентрації та максимальної активності (патентні документи 4 та 5).

Попередньо про декілька методів повідомлялося як про методи отримання біспецифічних антитіл типу Ідс, які мають константну ділянку людини (антитіла типу дос, які мають константну ділянку людини, яка має специфічність зв'язування з антигеном А на одному плечі та специфічність зв'язування з антигеном В на іншому плечі). Зазвичай біспецифічні антитіла типу до складаються з двох типів Н-ланцюгів (а саме: Н-ланцюга для антигену А та Н-ланцюга для антигену В) та з двох типів І -ланцюгів (а саме: І-ланцюга для антигену А та І-ланцюга для антигену В). Коли експресуються такі біспецифічні антитіла типу дб, можливі 10 типів комбінацій, такі як комбінації Н2І2, оскільки експресуються два типи Н-ланцюгів та два типи І - ланцюгів. Серед них є один тип комбінації, яка має бажану специфічність зв'язування (Ідс, який має специфічність зв'язування з антигеном А на одному плечі та специфічність зв'язування з антигеном В на іншому плечі). Отже, для того, щоб набути бажане біспецифічне антитіло, необхідно очистити один тип антитіла, що представляє інтерес, від решти з числа десяти типів антитіл, що є надзвичайно низьким за ефективністю та надзвичайно важким.

Повідомлялося про способи розв'язання цієї проблеми, які включають переважно вивільнення ІдсС, який має гетерологічну комбінацію Н-ланцюга для антигену А та Н-ланцюга для антигену В, шляхом заміни амінокислот у ділянці СНЗ Н-ланцюга до (патентні документи 6, 7, 8 та 9 та непатентні документи 13 та 14). Серед цих способів повідомлялося про способи, у яких використовуються фізичні перешкоди у формі "виступу" та "западини", та способи, у яких використовується відштовхування електричних зарядів.

Також повідомлялося про спосіб ефективного отримання бажаної молекули, де використовується спільний І-ланцюг, у якому І-ланцюг для антигену А та І-ланцюг для антигену В присутні на одній і тій же амінокислотній послідовності (патентні документи 10 та 11).

Однак, оскільки застосування спільного І -ланцюга може суттєво знизити афінність до антигену, то цей спосіб необов'язково є оптимальним. Отже, для того, щоб біспецифічне антитіло зв'язувалося з двома антигенами з високою афінністю, переважно, щоб асоціювалися лише | - ланцюг та Н-ланцюг для антигену А та асоціювалися лише І -ланцюг та Н-ланцюг для антигену

В. Крім того, повідомлялося про спосіб, який дозволяє, щоб Н-ланцюги та І-ланцюги для кожного антигену асоціювалися незалежно від варіабельних ділянок, при цьому спосіб включає заміну амінокислот у доменах СНІ та Сі, які є константними ділянками, замість заміни амінокислот у варіабельних ділянках (патентні документи 7, 12 та 13). Однак, у цьому способі залишається багато чого для вдосконалення з точки зору ефективності виробництва біспецифічного антитіла, яке представляє інтерес.

Перелік цитувань

Патентні документи

Патентний документ 1 - УМО 2005/035754

Патентний документ 2 - МО 2005/035756

Патентний документ З - МО 2006/109592

Патентний документ 4 - МО 2012/067176

Патентний документ 5 - МО 2017/110980

Патентний документ 6 - МО 1996/027011

Патентний документ 7 - УМО 2006/106905

Патентний документ 8 - УМО 2009/089004.

Патентний документ 9 - МО 2010/129304 бо Патентний документ 10 - МО 98/050431

Патентний документ 11 - УМО 2006/109592

Патентний документ 12 - МО 2007/147901

Патентний документ 13 - УМО 2013/065708

Непатентні документи

Непатентний документ 1 - Віоса 58, 1-13 (1981)

Непатентний документ 2 - Маїшге 312, 330-337 (1984)

Непатентний документ З - Маїшге 312, 337-342 (1984)

Непатентний документ 4 - Віоспіт.Віорпуз.Асіа 871, 268-278 (1986)

Непатентний документ 5 - Маї Мед. 2012 Осг18 (10):1570-4.

Непатентний документ 6 - РІ о5 Опе. 2013;8 (2)х:е57479.

Непатентний документ 7 - МАБ5. 2015;7 (1):120-8.

Непатентний документ 8 - ) Тпготб Нає!тозві. 2014 Рер;12 (2):206-213.

Непатентний документ 9 - Віоса. 2014 Мом 13;124 (20):3165-71.

Непатентний документ 10 - Віоса. 2016, МоІ.127, 13

Непатентний документ 11 - Мем Епа У Меа 2016, 374521, 2044-2053

Непатентний документ 12 - Зе/Мопзеїї Моїште 1, 2010 - Ізвце 4

Непатентний документ 13 - Ргоївїп Епдіпеегіпо. 1996, Мої.9:617-621

Непатентний документ 14 - Майшге Віоїтесппоіоду. 1998, МоІ.16:677-681

Суть винаходу

Задачі, що вирішуються винаходом

Цей винахід було здійснено з прийняттям до уваги вищезгаданих обставин. Завдання цього винаходу - отримати мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка має активність заміщувати кофакторну функцію фактора коагуляції крові МІ! (ЕМІІІ), та фармацевтичні склади, які містять таку молекулу як активний інгредієнт.

Крім того, цей винахід було здійснено з прийняттям до уваги вищезгаданих обставин. Інше завдання цього винаходу - отримати антитіла, у яких регулюється асоціація між важким ланцюгом та легким ланцюгом, способи отримання антитіла, у якому регулюється асоціація між важким ланцюгом та легким ланцюгом, та способи регулювання асоціації між важким ланцюгом та легким ланцюгом антитіла.

Засоби вирішення задач

Для отримання біспецифічних антитіл з високою специфічною активністю та максимальною активністю заміщувати кофакторну функцію ЕМ автори цього винаходу отримали з бібліотеки антитіл людини нові легкі ланцюги, які мають послідовності, відмінні від послідовностей АСЕ910 (еміцизумабу), які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІ, та отримали біспецифічні антитіла, у яких амінокислотні заміни були зроблені на різних ділянках легких ланцюгів та важких ланцюгів АСЕ910 (еміцизумабу). Потім вони визначили, що активність пригнічувати активацію фактора коагуляції крові ЇХ (РІХ) зростає з підвищенням активності заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Внаслідок цілеспрямованого дослідження авторам цього винаходу вдалося визначити біспецифічні антитіла, активність яких пригнічувати активацію РІХ не підвищується та активність яких заміщувати кофакторну функцію ЕМІІЇ підвищується.

Крім того, автори цього винаходу вибрали константну ділянку важкого ланцюга СНІ та константну ділянку легкого ланцюга (СІ) як ділянки важкого ланцюга та легкого ланцюга, які слід піддати регуляції стосовно асоціації, та здійснили цілеспрямовані дослідження щодо регуляції асоціації між СНІ та СІ. Як наслідок, авторам цього винаходу вдалося визначити, що небажану асоціацію СНІ та СІ можна пригнітити шляхом заміни специфічних амінокислотних залишків, присутніх на границі контакту між СНІ та Сі, амінокислотними залишками, які електростатично відштовхують один одного, та що гетерогенні молекули утворюються ефективніше, ніж при застосуванні вищеописаних модифікацій, при яких утворюють тільки виступ та западину у СНЗ.

Цей винахід було здійснено на підставі таких результатів, та ним конкретно пропонується наступне від 1) до (25), що наведено нижче:

ПЇ мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка має функцію заміщувати функцію фактора коагуляції крові МІ, при цьому молекула включає першу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з фактором коагуляції крові ІХ та/або активованим фактором коагуляції крові ІХ, та другу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з фактором коагуляції крові Х, де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга (0499) включає НМК-НІ, що включає 60 амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 1, НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 2, та НМАК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 3, та варіабельний домен легкого ланцюга (ОМК131) включає НМК-11, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 162, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 163, та НМЕ-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 164; та де друга антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга та варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга (2327) включає НМЕ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 4, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 5, та НМАК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 6, та варіабельний домен легкого ланцюга (МІ 095) включає НМК-11, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 165, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 166, та НМКЕ-І-3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 167; де один або більше амінокислотних залишків замінені іншими амінокислотами, видалені або вставлені у щонайменше одну з НМК.

І) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за |1|, де: щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 34, 97, 98, 100, 100а, 1005 їі 100е згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або видалений з нього, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 26, 27, 30, 31, 32, 53, 55, 92, 93, 95 і 96 згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою амінокислотою у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або вставлений в нього, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 51, 56, 57, 59, 61, 62, 65 і 102 згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 24, 26, 27, 29, 30, 31, 32, 50, 92, 94, 95, 95а і 96 згідно з нумерацією за Кабат, замінений у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки або видалений в нього;

ІЗЇ мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за |1| або (21, де: у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою гістидин, амінокислотний залишок на позиції 34 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 97 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 98 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 100 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 100а являє собою аспарагінову кислоту або видалений, амінокислотний залишок на позиції 1006 являє собою аланін або гістидин, або амінокислотний залишок на позиції 100е являє собою гістидин або ізолейцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат; у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 53 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 55 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 93 являє собою серин або аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою пролін, або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою гліцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат; у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аспарагін, глутамін або гістидин, амінокислотний залишок на позиції 51 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 56 являє собою треонін або аргінін, амінокислотний залишок на позиції 57 являє собою валін, амінокислотний залишок на позиції 59 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 61 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 62 являє собою лізин, амінокислотний залишок на позиції 65 являє собою аспарагін або глутамін, або амінокислотний залишок на позиції 102 являє собою валін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за

Кабат; і 60 у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 24 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 29 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою глутамін, серин або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою глутамін або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 50 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 94 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою аспарагінову кислоту або аланін, амінокислотний залишок на позиції 95а являє собою тирозин або видалений, або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою треонін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат;

ЇЇ мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (1) до ІЗ), де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга включає: 1) НУМА-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ОО МО: 168, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 169, ії НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 170 (ОНОТ1); 2) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 171, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 172, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 173 (0НО2);

З) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 174, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 175, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 176 (0ОНОЗ); 4) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 177, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 178, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 179 (0НО4); 5) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО 10 МО: 180, НУВ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 181, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 182 (ОНОб); або

Зо 6) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 183, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮО МО: 184, і НУК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 185 (0ОНО?); і варіабельний домен легкого ланцюга включає: 1) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 186, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 187, і НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 188 (01 21); 2) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 189, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 190, ї НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 191 (01 22);

З) НМВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 192, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 193, ії НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 194 (ОЇ 23); 4) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 195, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 196, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 197 (01 24); 5) НУВ-І7, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО І МО: 198, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 199, ї НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 200 (01 25); б) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 201, НУВ-І2, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 202, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 203 (01 26); 7) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 204, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 205, ї НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 206 (01 28); 8) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 207, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 208, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 209 (01 29); 9) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 210, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 211, ії НМК-ІЗ, що включає амінокислотну бо послідовність за БЕО ІЮО МО: 212 (01 30);

10) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 213, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 214, ії НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 215 (01 31); 11) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 216, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 217, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 218 (01 32); або 12) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 219, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 220, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 221 (01 33), і де друга антигензв'язувальна ділянка включає варіаабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга включає: 1) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 222, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 223, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 224 (НОТ); 2) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 225, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 226, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 227 (НО);

З) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 228, НУВ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 229, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 230 ()НОЗ); 4) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 231, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 232, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 233 (НО); 5) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 234, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 235, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 236 (НО); 6) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 237, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 238, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 239 (ЧНОб); 7) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 240, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 241, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 242 ()НО7); 8) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 243, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 244, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 245 (НОВ); 9) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 246, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 247, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 248 (НОВ); 10) НУМВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 249, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮО МО: 250, ії НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮ МО: 251 ()Н10); або 11) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО І МО: 252, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 253, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 254 ()НІ11), і варіабельний домен легкого ланцюга включає: 1) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 255, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 256, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 257 (ЛІ 01);

БО 2) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 258, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 259, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 260 (ДІ 02); 3) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 261, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 262, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 263 (ЛІ 03); 4) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 264, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 265, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 266 (ЛІ 04); 5) НУВ-І7, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 267, НМК-І2, що 60 включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 268, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 269 (ЛІ 05); б) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 270, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 271, і НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 272 (ЛІ 06); 7) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 273, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 274, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 275 (21 07); 8) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 276, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 277, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 278 (ЛІ 08); 9) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО І МО: 279, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 280, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 281 (ЛІ 09); 10) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО 10 МО: 282, НУВ-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 283, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮО МО: 284 (110); або 11) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 285, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 286, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 287 (ЛІ 11);

І5Ї мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за |1|, де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга за 5ЕО ІЮО МО: 45 (0499) і варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЕБЕО ІЮ МО: 13 (ОМКІ131), ії друга антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга за 5ЕО ІО МО: 46 (2327) і варіабельний домен легкого ланцюга за 5ЕО ІЮ МО: 31 ()МІ 095), де один або більше амінокислотних залишків замінені іншими амінокислотами, видалені або вставлені у щонайменше один з варіабельних доменів важкого ланцюга або варіабельних доменів легкого ланцюга; (ЇЇ мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за (БІ, де: щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 34, 39, 97, 98, 100, 100а, 1005 і 100е згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою

Зо амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або видалений з нього, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 26, 27, 30, 31, 32, 38, 45, 53, 55, 60, 70, 76, 79, 80, 83, 85, 92, 93, 95 і 96 згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою амінокислотою у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або вставлений в нього, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 28, 31, 39, 51, 56, 57, 59, 61, 62, 65, 67, 73, 8265 і 102 згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, і щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 3, 8, 15, 24, 26, 27,29, 30, 31, 32, 38, 48, 49, 50, 79, 92, 94, 95, 95а і 96 згідно з нумерацією за Кабат, замінений іншою амінокислотою у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки або видалений з нього;

Ї7 мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за |5І| або |бЇ, де: у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою гістидин, амінокислотний залишок на позиції 34 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 39 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 97 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 98 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 100 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 100а являє собою аспарагінову кислоту або видалений, амінокислотний залишок на позиції 1006 являє собою аланін або гістидин, або амінокислотний залишок на позиції 100е являє собою гістидин або ізолейцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат, у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 38 являє собою лізин, амінокислотний залишок на позиції 45 являє собою глутамінову 60 кислоту, амінокислотний залишок на позиції 53 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 55 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 60 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 70 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 76 являє собою аспарагін, амінокислотний залишок на позиції 79 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 80 являє собою пролін або аланін, амінокислотний залишок на позиції 83 являє собою метіонін або аланін, амінокислотний залишок на позиції 85 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 93 являє собою серин або аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою пролін, або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою гліцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат, у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 28 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аспарагін, глутамін або гістидин, амінокислотний залишок на позиції 39 являє собою лізин, амінокислотний залишок на позиції 51 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 56 являє собою треонін або аргінін, амінокислотний залишок на позиції 57 являє собою валін, амінокислотний залишок на позиції 59 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 61 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 62 являє собою лізин, амінокислотний залишок на позиції 65 являє собою аспарагін або глутамін, амінокислотний залишок на позиції 67 являє собою лейцин, амінокислотний залишок на позиції 73 являє собою ізолейцин, амінокислотний залишок на позиції 825 являє собою глутамінову кислоту, або амінокислотний залишок на позиції 102 являє собою валін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат, і у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції З являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 8 являє собою пролін, амінокислотний залишок на позиції 15 являє собою лейцин, амінокислотний залишок на позиції 24 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 29 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою глутамін, серин або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою глутамін або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 38 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 48 являє собою ізолейцин, амінокислотний залишок на позиції 49 являє собою тирозин, амінокислотний залишок на позиції 50 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 79 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 94 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою аспарагінову кислоту або аланін, амінокислотний залишок на позиції 95а являє собою тирозин або видалений, або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою треонін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат;

ІВ мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від |1Ї до І/, де перша антигензв'язувальна ділянка включає: варіабельний домен важкого ланцюга (ОН), що включає амінокислотну послідовність за

ЗЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 57, 5ЕО ІО МО: 58, ЗЕО І МО: 59 або ЗЕО ІО МО: 60, і варіабельний домен легкого ланцюга (01), що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО

ІО МО: 61, 5БЕО ІО МО: 62, 5ЕБЕО ІО МО: 63, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 65, 5ЕО І МО: 66, ЗЕО

ІО МО: 67, ЗЕО ІЮ МО: 68, ЗЕО ІЮ МО: 69, 5ЕО І МО: 70, ЗЕО ІЮ МО: 71 або ЗЕО ІЮО МО: 72; і друга антигензв'язувальна ділянка включає: варіабельний домен важкого ланцюга (ОН), що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО

ІО МО: 73, 5ЕО ІО МО: 74, 5ЕБО ІО МО: 75, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО І МО: 77, ЗЕО ІО МО: 78, 5ЕО 5О0 ІО МО: 79, ЗЕО ІЮ МО: 80, ЗЕО І МО: 81, 5ЕО ІО МО: 82 або 5ЕО ІО МО: 83, і варіабельний домен легкого ланцюга (0), що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО

ІО МО: 84, БЕО ІО МО: 85, 5ЕБО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІО МО: 87, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО ІО МО: 89, 5ЕО

ІО МО: 90, ЗЕО ІЮ МО: 91, ЗЕО І МО: 92, БЕО ІО МО: 93 або 5ЕО ІО МО: 94;

ІЗЇ мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (1) до І8Ї, де перша антигензв'язувальна ділянка включає константні ділянки, що включають амінокислотні послідовності, представлені в (1) або (2) нижче, і друга антигензв'язувальна ділянка включає константні ділянки, що включають амінокислотні послідовності, представлені в (1) або (2) нижче, які є відмінними від константних ділянок, включених в першу антигензв'язувальну ділянку: бо (1) 5ЕО ІЮО МО: 119 як константна ділянка важкого ланцюга і 5ЕО ІЮ МО: 100 як константна ділянка легкого ланцюга (2) 5ЕО ІЮО МО: 118 як константна ділянка важкого ланцюга і 5ЕО ІЮО МО: 102 як константна ділянка легкого ланцюга;

П10Ї мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від |1| до (9|, яка являє собою мультиспецифічне антитіло або біспецифічне антитіло;

ПІ біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла і легкий ланцюг першого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові ІХ та/або з активованим фактором згортання крові ІХ, і важкий ланцюг другого антитіла і легкий ланцюг другого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові Х, де біспецифічне антитіло являє собою біспецифічне антитіло за будь-яким з від (а) до (м) нижче: (а) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 120, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 126, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 138, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ХЕО 10 МО: 149 (ОНОТ/ОІ 21//Ю0НО01// 01); (Б) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 138, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 149 (ОНО2/ОЇ 22/20НО1/01-01); (с) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 122, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 128, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 1О МО: 150 (ФНОЗ/ОЇ 23/0НО2/1 02); (4) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 122, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 129, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 150 (ОНОЗ/ОЇІ 24//Ю0НОг2/ 02); (є) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 140, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 151 (ФНО2/О1 22/20НОЗ3/О1-03); () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 141, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 152 (ФНО2/ОІ 22/20НО4/21 04); (9) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗХЕО ІЮ МО: 150 (ОНОг/ОЇ 22/ОНО2/1 02); (п) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 130, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 150 (ОНОЗМОЇ 25/0Н02/21 02); () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 131, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 150 (ОНОЗМОЇ 26//ОНО2/1 02); (Ї) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 131, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає бо амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 153 (ОНОМ/ОЇ 26//ОНОБ/О 05);

(К) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 132, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 153 (ОНОМОЇ 28/ОНО5/21-05); () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 132, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 143, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 154 (ОНОЗМОЇ 28/О0НО6/О1 06); (т) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 133, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 153 (ОНОДМОЇ 29/О0НО5/1 05); (п) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 133, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 143, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 154 (ОНОДМ/ОЇ 29/О0НО6/О1 06); (о) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 134, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 144, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 155 (2НОб/О1 30/О0НО7/21-07); (р) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 135, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 145, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 156 (ОНОЗ/ОЇ 31/О0НО8/21-08); (4) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 136, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 144, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 155 (ФНОб/ОІ 32/20НО7/21-07); (ї) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 136, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 146, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 І1О МО: 157 (О2НОб/ОЇІ 32/20НО9/21-09); (5) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 134, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 147, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 158 (2НОб/ОІ 30/О0Н10/01-10); () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 125, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 137, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 148, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 1О МО: 159 (ФНО7/О1 33/ОН11/01-11); (0) біспецифічне антитіло, яке зв'язується з епітопами, ідентичними як епітопу у факторі згортання крові ЇХ і/або активованому факторі згортання крові ЇХ, так і епітопу у факторі згортання крові Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (0; (м) біспецифічне антитіло, яке конкурує за зв'язування як з епітопом у факторі згортання крові ІХ і/або активованому факторі згортання крові ІХ, так і з епітопом у факторі згортання крові

Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (); 121 антигензв'язувальна молекула, в якій асоціація між важким ланцюгом і легким ланцюгом є регульованою, де один набір або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (а) до (с) нижче, у бо важкому ланцюзі і легкому ланцюзі антигензв'язувальної молекули, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного: (а) амінокислотний залишок в константній ділянці важкого ланцюга (СНІ), який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕІ, і амінокислотний залишок в константній ділянці легкого ланцюга (СІ), який знаходиться на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат, (Б) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИи, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат, (с) амінокислотні залишки в СНІ, які знаходяться на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

Е), ї амінокислотні залишки в Сі, які знаходяться на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією за

Кабат;

І13Ї антигензв'язувальна молекула за (12), де додатково два або більше амінокислотних залишків, що утворюють границю контакту між варіабельною ділянкою важкого ланцюга і варіабельною ділянкою легкого ланцюга, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного;

І14Ї антигензв'язувальна молекула за (|13), де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, являють собою один або два набори амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених в (а) або (Б) нижче: (а) амінокислотний залишок у варіабельній ділянці важкого ланцюга, який знаходиться на позиції 39 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок у варіабельній ділянці легкого ланцюга, який знаходиться на позиції 38 згідно з нумерацією за Кабат, (Б) амінокислотний залишок у варіабельній ділянці важкого ланцюга, який знаходиться на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок у варіабельній ділянці легкого ланцюга, який знаходиться на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат;

П15Ї антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (121 до (14Ї, де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, вибрані з амінокислотних залишків, включених в набір (Х) або (У) нижче: (Х) глутамінова кислота (Е), аспарагінова кислота (0), (У) лізин «К), аргінін (К), гістидин (Н);

І16Ї антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (12)| до (15), яка являє собою біспецифічне антитіло; 17 спосіб отримання антигензв'язувальної молекули, в якій асоціація між важким ланцюгом і легким ланцюгом є регульованою, при цьому спосіб включає етапи від (1) до (3) нижче: (1) здійснення модифікування нуклеїнової кислоти (нуклеїнових кислот), що кодує(ють) константну ділянку важкого ланцюга (СНІ) і константну ділянку легкого ланцюга (СІ), так, що один набір або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (а) до (с) нижче, електростатично відштовхують один одного: (а) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат, (Б) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИи, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат, (с) амінокислотні залишки в СНІ, які знаходяться на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

Кабат; (2) введення модифікованої(их) нуклеїнової кислоти (нуклеїнових кислот) в клітину-хазяїна і культивування клітини-хазяїна таким чином, щоб експресувалася(ися) нуклеїнова кислота (нуклеїнові кислоти); (3) збирання антигензв'язувальної молекули з культури клітини-хазятна; 16Ї Спосіб регулювання асоціації між важким ланцюгом і легким ланцюгом в антигензв'язувальній молекулі, при цьому спосіб передбачає здійснення модифікування нуклеїнової кислоти так, що один набір або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (а) до (с) нижче, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного: (а) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат, (р) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат, (с) амінокислотні залишки в СНІ, які знаходяться на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

Е), ї амінокислотні залишки в Сі, які знаходяться на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією за бо Кабат;

П19| Виділена нуклеїнова кислота, яка кодує мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу за будь-яким з від (1) до (9), мультиспецифічне антитіло за |10Ї, біспецифічне антитіло за 101, 111 або (16) або антигензв'язувальну молекулу за будь-яким з від (121) до І151; (29 клітина-хазяїн, яка містить нуклеїнову кислоту за (191; (21) Спосіб отримання мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, мультиспецифічного антитіла, біспецифічного антитіла або антигензв'язувальної молекули, де спосіб передбачає культивування клітини-хазяїна за |20| так, щоб вироблялися мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, мультиспецифічне антитіло, біспецифічне антитіло або антигензв'язувальна молекула; (22)| фармацевтичний склад, який містить мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу за будь-яким з від (1) до (9), мультиспецифічне антитіло за (10), біспецифічне антитіло за (101,

ПІ або (16) або антигензв'язувальну молекулу за будь-яким з від (121 до (15) і фармацевтично прийнятний носій;

І23|Ї фармацевтичний склад за |22)Ї, який призначений для застосування в профілактиці та/"або лікуванні кровотечі, хвороби, яка супроводжує кровотечу, або хвороби, що спричиняється кровотечею;

І24| фармацевтичний склад за (23), де кровотеча, хвороба, яка супроводжує кровотечу, або хвороба, що спричиняється кровотечею, являє собою хворобу, яка розвивається та/або прогресує внаслідок зниження або дефіциту активності фактора згортання крові МІ! та/або активованого фактора згортання крові МІ; (25| фармацевтичний склад за |24), де хвороба, яка розвивається та/або прогресує внаслідок зниження або дефіциту активності фактора згортання крові МІІЇ та/або активованого фактора згортання крові МІЇЇ, являє собою гемофілію А, хворобу з появою інгібітору проти фактора згортання крові МІ! та/або активованого фактора згортання крові МІІІ, набуту гемофілію або хворобу Вілебранда.

До того ж, цим винаходом передбачається наступне:

І26| мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (| до |91|, мультиспецифічне антитіло за (|10)Ї, біспецифічне антитіло за (|10Ї, (11) або (|16| або антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (121) до (15), що призначені для застосування як ліків; (27| мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від (| до |91|, мультиспецифічне антитіло за |10| або біспецифічне антитіло за (10) або (11), що призначені для застосування в профілактиці та/або лікуванні кровотечі, хвороби, яка супроводжує кровотечу, або хвороби, що спричиняється кровотечею; (28| мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від |1| до (89, мультиспецифічне антитіло за |10| або біспецифічне антитіло за (10) або (11), що призначені для використання для заміщення кофакторної функції ЕМП;

І29| застосування мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули за будь-яким з від (11) до |З), мультиспецифічного антитіла за (10| або біспецифічного антитіла за |10| або (11) у виробництві ліків для лікування кровотечі, хвороби, яка супроводжує кровотечу, або хвороби, що спричиняється кровотечею;

ІЗОЇ застосування мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули за будь-яким з від (11) до ІЗ), мультиспецифічного антитіла за |10| або біспецифічного антитіла за (10) або (11) у виробництві ліків для заміщення кофакторної функції ЕМП;

ІЗ1| спосіб лікування індивідуума з кровотечею, хворобою, яка супроводжує кровотечу, або хворобою, що спричиняється кровотечею, при цьому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули за будь-яким з від |(1| до

ІЗ), мультиспецифічного антитіла за (10) або біспецифічного антитіла за (10) або (111; і

ІЗ2Ї спосіб заміщення кофакторної функції ЕМ! у індивідуума, при цьому спосіб передбачає етап введення індивідууму ефективної кількості мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули за будь-яким з від (1) до (9), мультиспецифічного антитіла за (10) або біспецифічного антитіла за (10 або (11) для заміщення кофакторної функції ЕМП.

ІЗЗ3Ї спосіб отримання антигензв'язувальної молекули за (17), який передбачає на етапі (1) етап здійснення модифікування нуклеїнової кислоти так, що амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, є вибраними з амінокислотних залишків, включених в групу (Х) або (У) нижче: (Х) глутамінова кислота (Е), аспарагінова кислота (0), та (У) лізин «К), аргінін (К), гістидин (Н); 60 ЇЗ4Ї спосіб отримання антигензв'язувальної молекули за (17| або |З3З)Ї, який додатково передбачає на етапі (1) етап здійснення модифікування нуклеїнової кислоти так, що два або більше амінокислотних залишків, що утворюють границю контакту між варіабельною ділянкою важкого ланцюга і варіабельною ділянкою легкого ланцюга, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного;

ЇЗ5ІЇ спосіб отримання антигензв'язувальної молекули за |З4|, де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, являють собою будь-який один набір амінокислотних залишків, вибраний з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених в (а) або (Б) нижче: (а) амінокислотний залишок у варіабельній ділянці важкого ланцюга, який знаходиться на позиції 39 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок у варіабельній ділянці легкого ланцюга, який знаходиться на позиції 38 згідно з нумерацією за Кабат, та (Б) амінокислотний залишок у варіабельній ділянці важкого ланцюга, який знаходиться на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок у варіабельній ділянці легкого ланцюга, який знаходиться на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат;

ІЇЗЄЇ спосіб отримання антигензв'язувальної молекули за |З4| або |З5), де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, вибрані з амінокислотних залишків, включених в набір (Х) або (У) нижче: (Х) глутамінова кислота (Е), аспарагінова кислота (0), та (У) лізин (К), аргінін (К), гістидин (Н);

ЇЗ/| спосіб за (18), де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, вибрані з амінокислотних залишків, включених в набір (Х) або (У) нижче: (Х) глутамінова кислота (Е), аспарагінова кислота (0), та (У) лізин «К), аргінін (К), гістидин (Н);

ІЇЗ8ІЇ спосіб за |18) або |З/Ї, де додатково два або більше амінокислотних залишків, що утворюють границю контакту між варіабельною ділянкою важкого ланцюга і варіабельною ділянкою легкого ланцюга, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного;

ЇЗ9|Ї спосіб за |З8Ї, де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, являють собою будь-який один набір амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених в (а) або (Б) нижче: (а) амінокислотний залишок у варіабельній ділянці важкого ланцюга, який знаходиться на позиції 39 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок у варіабельній ділянці легкого ланцюга, який знаходиться на позиції 38 згідно з нумерацією за Кабат, (Б) амінокислотний залишок у варіабельній ділянці важкого ланцюга, який знаходиться на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок у варіабельній ділянці легкого ланцюга, який знаходиться на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат; і

ІЇ4ОЇ спосіб за |З8)| або |ІЗ9), де амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, вибрані з амінокислотних залишків, включених в набір (Х) або (У) нижче: (Х) глутамінова кислота (Е), аспарагінова кислота (0), та (У) лізин (К), аргінін (К), гістидин (Н).

До того ж, цим винаходом передбачається наступне: 41) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула за будь-яким з від || до (/|, яка являє собою будь-яку з від (а) до (у) нижче: (а) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 56, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 61, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 84 (ОНОТ/О1І 21//)0НО01/Л 01); (Б) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 84 (ОНОг/ОІ 22//)0НО1/1 01); (с) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 58, бо варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 63, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 23//)НО2/ 02);

(4) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 58, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 64, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ОО МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 24//)НОг/ 02);

(є) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 75, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ІО МО: 86 (ОНОг/ОЇІ 22//)НО3/ 03);

() мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 76, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕБЕО ІЮО МО: 87

(ОНОг/ОІ 22//)НО4/ 04);

(ду мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕ ІО МО: 85 (ОНОг/ОІ 22//)НО2/ 02);

(п) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 65, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 25//)НО2/ 02);

() мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 26//)НО2/ 02);

() мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 88 (ОНОЗ/ОЇ 26//)НО5/ 05);

(К) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 88 бо (ОНОЗ/ОЇ 28//О0НО5/ 05);

() мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 89 (ОНОЗ/ОЇ 28//0НО6/ 06);

(т) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 88 (ОНОЗ/ОЇ 29//)НО5/ 05);

(п) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮО МО: 89 (ОНОЗ/ОЇ 29//)НО6/ 06);

(о) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮ МО: 90 (ОНОб/О! 30//)НО7/1 07);

(р) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 70, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 80, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за З5ЕБЕО ІЮ МО: 91

(ОНОЗ/ОЇ 31//)НО8/ 08);

(д4) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 71, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮ МО: 90 (ОНОб/О 32//)0НО7/ 07);

(г) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 60,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 71, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 81, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮ МО: 92 (ОНОб/ОЇ 32//)НО09/11 09);

(5) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 82, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІЮ МО: 93 (ОНОб/ОІ 30//)Н10/21-10);

() мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 105, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну

60 послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 72, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 83, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 95ЕБО І МО: 94 (ОНО7Т/ОІ 33//)Н11/1-11); (0) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з епітопами, ідентичними як епітопу у факторі згортання крові ІХ і/або активованому факторі згортання крові

ЇХ, так і епітопу у факторі згортання крові Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (); і (у) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка конкурує за зв'язування як з епітопом у факторі згортання крові ЇХ і/або активованому факторі згортання крові ІХ, так і з епітопом у факторі згортання крові Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (); і

ІЇ42| біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла і варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, який зв'язується з фактором згортання крові ЇХ і/або активованим фактором згортання крові ЇХ, і варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові Х, де біспецифічне антитіло являє собою будь-яке біспецифічне антитіло з від (а) до (у) нижче: (а) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 56, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 61, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 10 МО: 84 (9ОНО1/91 21/2Н01/1- 01); (Б) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО 10 МО: 84 (ОНОг/ОІ 22/ОНО1/1 01); (с) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 58, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 63, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО 1Ю МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 23//ОНО2/ 02); (4) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 58, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 64, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 24/)НОг/ 02); (є) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 75, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 86 (2ФНО2/О1 22//О0НОЗ/21- 03); () біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 76, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 87 (2ФНО2/01 22//ЮНО4/Л1 04); (9) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 85 (ОНО2/01 22/20НО02/21 02); (п) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен 60 легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 65,

варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 85 (ОНОЗМ/ОЇ 25/00Н02/21 02);

() біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО І МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 85 (ОНОЗ/ОЇ 26//ОНО02/21 02);

() біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО І МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 88 (ОНОЗ/ОЇ 26//ОНО5/1 05);

(К) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 88 (ОНОЗ/ОЇ 28//О0НО05/1 05);

() біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 67,

варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 89 (ОНОЗ/ОЇ 28/О0НО6/1 06);

(т) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 88 (ОНОЗ/ОЇ 29/О0НО05/1 05);

(п) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 89 (ОНОЗ/ОЇ 29/О0НО6/1 06);

(о) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 90 (ОНОб/01 30/О0НО7/21-07);

(р) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 70, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 80, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 91 (ОНОЗ/ОЇ 31/О0НО08/1 08);

(4) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 71,

варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 90 (ОНОб/ОІ 32/20НО07/21-07);

(г) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен

60 легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 71,

варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 81, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 92 (ОНОб/ОІ 32/20Н09/21-09); (5) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 82, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 93 (ОНОб/О1 30/О0Н10/1-10); (0 біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 105, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 72, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 83, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 94 (ФНО7/01 33/ОН11/1-11); (0) біспецифічне антитіло, яке зв'язується з епітопами, ідентичними як епітопу у факторі згортання крові ЇХ і/або активованому факторі згортання крові ЇХ, так і епітопу у факторі згортання крові Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (0; (м) біспецифічне антитіло, яке конкурує за зв'язування як з епітопом у факторі згортання крові ІХ і/або активованому факторі згортання крові ІХ, так і з епітопом у факторі згортання крові

Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (0).

Стислий опис ілюстративного матеріалу

Фіг. 1 демонструє реакційну здатність біспецифічних антитіл, що мають нові І -ланцюги, по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу).

Фіг. 2 демонструє різні впливи, які може здійснювати активність пригнічувати активацію РІХ на активацію РІХ.

Фіг. З демонструє графіки, побудовані щодо активності пригнічувати активацію РІХ в залежності від активності заміщувати кофакторну функцію ЕМП, які отримані від модифікацій нових І -ланцюгів та модифікацій Н-ланцюгів.

Фіг. 4-1 демонструє залежність від концентрації активності біспецифічних антитіл, що мають комбінацію модифікацій І -ланцюга та Н-ланцюга, заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Фіг. 4-2 демонструє залежність від концентрації активності біспецифічних антитіл, що мають комбінацію модифікацій Н-ланцюга та І -ланцюга, заміщувати кофакторну функцію ЕМ.

Фіг 5 демонструє максимальне значення тромбіноутворення (пікові висоти) для біспецифічних антитіл, що мають комбінацію модифікацій Н-ланцюга та І -ланцюга, в аналізах тромбіноутворення.

Фіг. 6 демонструє зв'язування отриманих біспецифічних антитіл з позаклітинним матриксом (ЕСМ).

Фіг. 7 демонструє фармакокінетику отриманих біспецифічних антитіл.

Фіг. 8 демонструє типи скомбінованих незбіжних пар, які можуть експресуватися.

Фіг. 9-1 демонструє дані катіонообмінної хроматографії (СІЕХ) отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-2 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-3 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-4 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-5 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-6 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-7 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-8 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-9 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-10 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-11 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-12 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-13 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-14 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного бо антитіла.

Фіг. 9-15 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-16 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-17 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-18 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-19 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 9-20 демонструє дані катіонообмінної хроматографії отриманого біспецифічного антитіла.

Фіг. 10 демонструє результати вимірювання активності біспецифічних антитіл, що мають нові Ї-ланцюги, заміщувати кофакторну функцію ЕМ.

Відомості, що підтверджують можливість здійснення винаходу

І. Визначення "Акцепторна каркасна ділянка людини" для цілей цього опису винаходу - це каркасна ділянка, яка включає амінокислотну послідовність каркасної ділянки варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркасну ділянку варіабельного домену важкого ланцюга (МН), які походять від каркасної ділянки імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної ділянки людини, як визначається нижче. Акцепторна каркасна ділянка людини, "що походить від" каркасної ділянки імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної ділянки людини, може включати таку ж саму їх амінокислотну послідовність або вона може мати зміни в амінокислотній послідовності. У деяких варіантах здійснення кількість амінокислотних змін становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше або 2 або менше. У деяких варіантах здійснення акцепторна каркасна ділянка МІ людини є ідентичною у послідовності до послідовності каркасної ділянки Мі. імуноглобуліну людини або до послідовності консенсусної каркасної ділянки людини. "Афінність" означає силу сукупності нековалентних взаємодій між єдиною ділянкою зв'язування молекули (наприклад, антитіла) та її партнером по зв'язуванню (наприклад, антигеном). Якщо інше не вказано, як застосовується у цьому описі, "афінність зв'язування" означає притаманну афінність зв'язування, яка відображає взаємодію 1:1 між членами пари зв'язування (наприклад, антитілом та антигеном). Афінність молекули Х до її партнера У можна взагалі представити як константу дисоціації (Ка). Афінність можна вимірювати звичайними відомими у галузі способами, які включають описані у цьому описі способи. Специфічні ілюстрації та приклади варіантів здійснення вимірювання афінності зв'язування описано далі.

Антитіло із "дозрілою афінністю" означає антитіло з однією або більше змінами в одній або більше гіперваріабельних ділянках (НМК) порівняно з початковим антитілом, яке не має таких змін, при цьому внаслідок таких змін відбувається покращення афінності антитіла до антигену.

Мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, описані у цьому описі, включають першу антигензв'язувальну ділянку та другу антигензв'язувальну ділянку, які здатні специфічно зв'язуватися з щонайменше двома відмінними типами антигенів.

В одному варіанті здійснення потрібно тільки, щоб перша антигензв'язувальна ділянка та друга антигензв'язувальна ділянка мали активність зв'язування з фактором коагуляції крові ІХ (ГРІХ) та/або активованим фактором коагуляції крові ІХ (РІХа) та фактором коагуляції крові Х (ЕХ), відповідно, та приклади включають ділянки, необхідні для зв'язування антигенів, такі як антитіла, молекули "скаффолд" (антитілоподібні молекули), або пептиди, або фрагменти, що містять такі ділянки. Молекули "скаффолд" - це молекули, які демонструють функцію шляхом зв'язування з молекулами-мішенями, та будь-який з поліпептидів можна застосовувати, доки вони є конформаційно стійкими поліпептидами, які можуть зв'язуватися з щонайменше одним антигеном-мішенню. Приклади таких поліпептидів включають варіабельні ділянки антитіла, фібронектин (МО 2002/032925), домен білка А (МО 1995/001937), домен І ОЇ -рецептора А (МО 2004/044011, МО 2005/040229), анкірин (МО 2002/020565), та їм подібне, та також молекули, описані у документах Мудгеп еї аї. (Ситепі Оріпіоп іп 5ігисіига! Віоіоду, 7: 463-469 (1997); та

УЧошитаї ої Іттипої! Меїйодв5, 290: 3-28 (2004)), Віп2 еї аї. (Майте Віотесй 23: 1257-1266 (2005)), та

Ноззе еї а!. (Ргоївїіп бсіепсе 15: 14-27 (2006)). Крім того, як згадується у Сшт Оріп Мої ТНег. 2010

Аца; 12(4): 487-95 і ЮОгидв. 2008; 68(7): 901-12, можна застосовувати пептидні молекули, які можуть зв'язуватися з антигенами-мішенями.

Поліпептиди у цьому винаході взагалі означають білки та пептиди, які мають довжину 60 приблизно десять амінокислот або більше. Поліпептиди зазвичай походять від організмів, проте особливо не обмежуються ними, та, наприклад, вони можуть складатися зі штучно побудованої послідовності. Вони можуть також бути будь-якими природними поліпептидами або синтетичними поліпептидами, рекомбінантними поліпептидами або їм подібним. Крім того, фрагменти вищезгаданих поліпептидів також включені до поліпептидів цього винаходу.

В одному варіанті здійснення приклади мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул включають мультиспецифічні антитіла, які можуть зв'язуватися специфічно з щонайменше двома відмінними антигенами або двома відмінними епітопами на одному й тому ж антигені.

В одному варіанті здійснення мультиспецифічні антитіла цього винаходу - це біспецифічні антитіла (В5АБ) (їх можна також називати антитілами з подвійною специфічністю).

У цьому описі терміни "активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ", "активність заміщувати ЕМ" та "активність заміщувати функцію ЕМ!" застосовуються синонімічно та означають активність зв'язування з РІХ та/або РіІХа та ЕХ для сприяння активації ЕХ (сприяння утворенню активованого фактора коагуляції крові Х (ЕХа)).

В одному варіанті здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ, - це мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які зв'язуються з РІХ та/або РіХа та ЕХ.

У певних варіантах здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ, - це мультиспецифічні антитіла, які зв'язуються з ІХ та/або БіХа та ЕХ. В іншому специфічному варіанті здійснення мультиспецифічні антитіла, які зв'язуються з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, - це біспецифічні антитіла, які зв'язуються з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ.

Термін "біспецифічні антитіла, які зв'язуються з РІХ та/або РіІХа та ЕХ" означає біспецифічне антитіло, яке здатне зв'язуватися з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ з достатньою афінністю, так що таке антитіло є корисним як діагностичний та/або терапевтичний агент при спрямованій дії на РІХ та/лабо БіХа та ЕХ. В одному варіанті здійснення ступінь зв'язування РІХ- та/або РіІХа- зв'язувального та ЕХ-зв'язувального біспецифічного антитіла з непов'язаним білком, який не є

НІХ, білком, який не є РіХа, або білком, який не є ЕХ, становить менш ніж 1095 від зв'язування антитіла з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, як вимірюється (наприклад, за допомогою радіологічного імуноаналізу (РІА)). У певних варіантах здійснення антитіло, що зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та

ЕХ, має константу дисоціації (Ка) 100 мкМ або менше, 10 мкМ або менше, 1 мкМ або менше, 100 нМ або менше, 10 нм або менше, 1 нм або менше, 0,1 нМ або менше, 0,01 нМ або менше або 0,001 нм або менше (наприклад, 105 М або менше, наприклад, від 105 М до 1079 М, наприклад, від 109 М до 1079 М). У певних варіантах здійснення біспецифічне антитіло, що зв'язується з РІХ та/або РіІХа та ЕХ, зв'язується з епітопами у РІХ, РіХа та ЕХ, які є консервативними серед ГРІХ, серед РіХа та серед ЕХ від різних зразків, відповідно.

У цьому винаході, у певних варіантах здійснення, термін "антитіло" застосовується синонімічно з терміном "антигензв'язувальна молекула". У цьому винаході терміни "антитіло" та "антигензв'язувальна молекула" застосовуються у найширшому сенсі, та вони включають моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, варіанти антитіл (такі як химерні антитіла, гуманізовані антитіла, мінітіла (низькомолекулярні антитіла) (включаючи фрагменти антитіл, до яких довільно можна додати інші молекули), та мультиспецифічні антитіла), доки вони демонструють бажану антигензв'язувальну активність або біологічну активність. Приклади "антитіла" або "антигензв'язувальної молекули" у цьому винаході включають молекулу, у якій молекулу-скаффолд, що зв'язується з НА5, було додано до Раб (антитіло, у якому нормальною є тільки частина Раб). Крім того, у цьому винаході "антитіло" може також бути поліпептидом або гетеромерним мультимером. Переважні антитіла - це моноклональні антитіла, химерні антитіла, гуманізовані антитіла, антитіла людини, злиті з Ес антитіла та мінітіла, такі як фрагменти антитіл.

Як застосовується у цьому описі, термін "антитіло" означає зв'язувальний білок, який включає антигензв'язувальну ділянку. Терміни "зв'язувальна ділянка" та "антигензв'язувальна ділянка", як застосовуються у цьому описі, означають ділянку молекули антитіла, з якою антиген дійсно зв'язується. Термін "антигензв'язувальна ділянка" включає варіабельний домен важкого ланцюга (УН) антитіла та варіабельний домен легкого ланцюга (МІ) антитіла (пару МНЛЛІ). "Фрагмент антитіла" означає молекулу, яка є відмінною від інтактного антитіла та яка включає частину інтактного антитіла, яка зв'язується з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають, проте не обмежуються ними, Ем, Раб, Раб",

Еабр-зн, К(аб)»; діатіла; лінійні антитіла; молекули одноланцюгового антитіла (наприклад, зсЕм) та мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл. "Антитіло, що зв'язується з таким самим епітопом", що й референтне антитіло, означає бо антитіло, яке блокує зв'язування референтного антитіла з його антигеном у конкурентному аналізі на 5095 або більше, та, у свою чергу, референтне антитіло блокує зв'язування антитіла з його антигеном у конкурентному аналізі на 5095 або більше. У цьому описі запропоновано приклад конкурентного аналізу.

Термін "химерне" антитіло означає антитіло, у якому частина важкого та/або легкого ланцюга походить від певного джерела або виду, проте решта важкого та/або легкого ланцюга походить від іншого джерела або виду. "Клас" антитіла означає тип константного домену або константної ділянки, які притаманні його важкому ланцюгу. Існує п'ять головних класів антитіл: ІдА, дО, ІДЕ, Ідс та І9М, та декілька з цих класів можна далі розділити на підкласи (ізотипи), наприклад, Іден, ІдС2, ІДдСз, са, ІдА: та

ІдАг. Константні домени важкого ланцюга, які відповідають різним класам імуноглобулінів, називаються альфа, дельта, епсилон, гамма та мю, відповідно. "Ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичного складу, означає ефективну кількість, у дозах та протягом періоду часу, необхідних для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату.

Термін "Ес-ділянка" у цьому описі застосовується для визначення С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, яка містить принаймні частину константної ділянки. Термін включає Ес- ділянки нативної послідовності та варіантні Ес-ділянки. В одному варіанті здійснення Ес-ділянка важкого ланцюга дос людини простягається від Суз226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак, С-кінцевий лізин (І уз447) або гліцин-лізин (Спіу446-І уз447) Ес-ділянки може бути присутнім або може бути відсутнім. Якщо інше особливо не вказано у цьому описі, нумерація амінокислотних залишків в Ес-ділянці або константній ділянці здійснюється згідно з номенклатурою ЕМ, яку також називають ЕО-індексом, як описано у Карбаї еї аЇ., ЗХедоепсев ої

Ргоївіпв ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс Неайй Зегмісе, Маййопа! Іпвзійшев ої Неайй,

Веїпезаа, МО, 1991. "Каркасна ділянка" або "ЕК" означає залишки варіабельного домену, відмінні від залишків гіперваріабельних ділянок (НУК). ЕК варіабельного домену зазвичай складається з чотирьох

ЕВ-доменів: ЕК1, ЕК2, ЕКЗ та ЕК4. Отже, послідовності НМК та ЕК зазвичай з'являються у наступній послідовності у МН (або М): ЕК1-НІ(І1)-ЕН2-На(І2)-ЕНЗ-НЗІ(І 3)-ЕВА.

Терміни "повнорозмірне антитіло", "інтактне антитіло" та "повне антитіло" застосовуються у цьому описі взаємозамінним чином та означають антитіло, яке має структуру, суттєво подібну до структури нативного антитіла, або яке має важкі ланцюги, які містять Ес-ділянку, як визначається у цьому описі.

Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітини-хазяїна" та "культура клітини-хазяїна" застосовуються взаємозамінним чином та означають клітини, у які введено екзогенну нуклеїнову кислоту, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяїни включають "трансформанти" та "трансформовані клітини", які включають первинно трансформовані клітини та потомство, що від них походить, незважаючи на кількість пасажів. Потомство може не бути повністю ідентичним батьківській клітині стосовно вмісту нуклеїнової кислоти, але воно може мати мутації. У цей опис включено потомство-мутанти, які мають таку ж саму функцію або біологічну активність, що й спочатку трансформована клітина, яку піддали скринінгу та вибрали. "Антитіло людини" - це антитіло, яке має амінокислотну послідовність, яка відповідає амінокислотній послідовності антитіла, яке виробляється людиною або клітиною людини або яке походить від джерела, що не є людиною та що використовує репертуари антитіл людини або інші послідовності, які кодують антитіло людини. Це визначення антитіла людини специфічно виключає гуманізоване антитіло, яке включає антигензв'язувальні залишки не людини. "Консенсусна каркасна ділянка людини" означає каркасну ділянку, яка представляє найчастіше виникаючі амінокислотні залишки у виборі послідовностей каркасних ділянок МІ. або

МН імуноглобуліну людини. Зазвичай, вибір послідовностей МІ або МН імуноглобуліну людини відбувається з підгрупи послідовностей варіабельного домену. Зазвичай, підгрупа послідовностей - це підгрупа як у Кабаї еї а!Ї., ЗХедоепсез ої Ргоївіпз5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві,

Ей Еайіоп, МІН Рибіїсайоп 91-3242, ВеШезаа МО (1991), моІ5. 1-3. В одному варіанті здійснення, для МІ, підгрупа - це підгрупа каппа І, як у Кабаї еї а!., зирга. В одному варіанті здійснення, для МН, підгрупа -- це підгрупа І, як у Кабаї еї а!., зирга. "Гуманізоване" антитіло означає химерне антитіло, яке включає амінокислотні залишки від

НМК не людини та амінокислотні залишки від ЕК людини. У певних варіантах здійснення гуманізоване антитіло включатиме по суті всі з щонайменше одного, а зазвичай двох варіабельних доменів, у яких усі або по суті усі НМК (наприклад, СОК) відповідають ділянкам антитіла не людини, та всі або по суті всі ЕК відповідають ділянкам антитіла людини. 60 Гуманізоване антитіло може довільно включати принаймні частину константної ділянки антитіла, яка походить від антитіла людини. "Гуманізована форма" антитіла, наприклад, антитіла не людини, означає антитіло, яке зазнало гуманізації.

Термін "гіперваріабельна ділянка" або "НМ", як застосовується у цьому описі, означає кожну з ділянок варіабельного домену антитіла, які є гіперваріабельними у послідовності

Стіперваріабельні ділянки" або "СОМК") та/"або утворюють структурно визначені петлі

Стіперваріабельні петлі"), талабо містять залишки, що контактують з антигеном ("контакти з антигеном"). Зазвичай, антитіла включають шість НМЕК: три у МН (НІ, Н2, НЗ)татриум! (ІТ, 12,

ІЗ). Приклади НМК у цьому описі включають: (а) гіперваріабельні петлі, що виникають на амінокислотних залишках 26-32 (І 1), 50-52 (І 2), 91-96 (13), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) та 96-101 (НЗ) (СпоїШтіа апа І евК, у). Мої. ВіоїІ. 196:901-917 (1987)); (б) СОЕК, що виникають на амінокислотних залишках 24-34 (І 1), 50-56 (І 2), 89-97 (І 3), 31-3556 (НІ), 50-65 (Н2) та 95-102 (НЗ) (Кабаї еї а!., ЗХедоепсевз ої Ргоївіпз5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій

Е9. Рибіїс Неайй 5егуісе, Маїйопаї Інзійшез ої Неайй, Веїпезаа, МО (1991)); (с) контакти з антигеном, що виникають на амінокислотних залишках 27с-36 (І 1), 46-55 (І 2), 89-96 (І 3), 30-356 (НІ), 47-58 (Н2) та 93-101 (НЗ) (МасСаїйшШт еї аї. У. Мої. Віої. 262: 732-745 (1996)); та (4) комбінації (а), (5) та/або (с), включаючи амінокислотні залишки НМК 46-56 (12), 47-56 (І 2), 48-56 (І 2), 49-56 (І 2), 26-35 (НІ), 26-35Б6 (НІ), 49-65 (Нг), 93-102 (НЗ) та 94-102 (НЗ).

Якщо інше не вказано, залишки НУК та інші залишки у варіабельному домені (наприклад, залишки ЕК) нумеруються у цьому описі згідно з Кабаї еї а!., зирга. "Імунокон'югат" - це антитіло, кон'юговане з однією або більше гетерологічними молекулами (гетерологічною молекулою), включаючи, проте не обмежуючись ним, цитотоксичний агент. "Індивідуум" або "суб'єкт" - це ссавець. Ссавці включають, проте не обмежуються ними, свійських тварин (наприклад, корів, овець, котів, собак та коней), приматів (наприклад, людей та приматів, що не є людьми, наприклад мавп), кролів та гризунів (наприклад, мишей та щурів). У певних варіантах здійснення індивідуум або суб'єкт - це людина. "Виділене" антитіло - це антитіло, яке було відокремлене від компонента його природного оточення. У деяких варіантах здійснення антитіло очищують до більш ніж 9595 або 9995 чистоти, що визначається за допомогою, наприклад, електрофорезу (наприклад, електрофорезу на поліакриламідному гелі у присутності додецилсульфату натрію (505-РАСЕ), ізоелектричного фокусування (ІЕЕ), капілярного електрофорезу) або хроматографії (наприклад, іонообмінної хроматографії або високоефективної рідинної хроматографії (НРІ С) зі зворотною фазою). Для огляду способів оцінювання чистоти антитіла дивись, наприклад, Еіаїтап еї аї., У. Спготаїйодг. В 848:79-87 (2007). "Виділена" нуклеїнова кислота означає молекулу нуклеїнової кислоти, яку відокремили від компонента її природного оточення. Виділена нуклеїнова кислота включає молекулу нуклеїнової кислоти, яка міститься у клітинах, які зазвичай містять молекулу нуклеїнової кислоти, проте молекула нуклеїнової кислоти присутня позахромосомно або на хромосомній ділянці, відмінній від її природної хромосомної ділянки. "Виділена нуклеїнова кислота, що кодує біспецифічне антитіло, яке зв'язується з РІХ та/або

ЕРІХа та ЕХ" означає одну або більше молекул нуклеїнової кислоти, які кодують важкий та легкий ланцюги антитіла (або їх фрагменти), включаючи такі молекули нуклеїнової кислоти у єдиному векторі або окремих векторах, та такі молекули нуклеїнової кислоти присутні на одній або більше ділянках у клітині-хазяїні.

Термін "моноклональне антитіло", як застосовується у цьому описі, означає антитіло, отримане від популяції по суті гомогенних антитіл, тобто, окремі антитіла, які складають популяцію, є ідентичними та/або зв'язуються з одним і тим же епітопом, за виключенням можливих варіантів антитіл, наприклад, таких, які містять природно виникаючі мутації, або таких, які утворюються під час виробництва препарату моноклонального антитіла, при цьому такі варіанти зазвичай присутні у невеликих кількостях. На відміну від препаратів поліклонального антитіла, які зазвичай включають відмінні антитіла, спрямовані проти відмінних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклонального антитіла спрямоване проти єдиної детермінанти на антигені. Отже, означення "моноклональне" вказує на характер антитіла, яке отримують з по суті гомогенної популяції антитіл, та його не слід розглядати для визначення того, що антитіло мусить вироблятися будь-яким певним способом.

Наприклад, моноклональні антитіла для застосування згідно з цим винаходом можна отримати за різноманітними способами, включаючи, проте не обмежуючись ними, гібридомна методика, способи рекомбінантної ДНК, способи фагового дисплея та способи, що застосовують 60 трансгенних тварин, які містять усі або частину локусів імуноглобуліну людини, при цьому такі способи та інші приклади способів отримання моноклональних антитіл описуються у цьому описі. "Нативні антитіла" означають природні молекули імуноглобуліну з різноманітними структурами. Наприклад, нативні антитіла дб - це гетеротетрамерні глікопротеїни масою приблизно 150000 дальтон, які складаються з двох ідентичних легких ланцюгів та двох ідентичних важких ланцюгів, з'єднаних дисульфідним зв'язком. Від М- до С-кінця кожен важкий ланцюг має варіабельну ділянку (МН), яка також називається варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, з наступними трьома константними доменами (СНІ, СН2 та СНЗ). Подібно до цього від М- до С-кінця кожен легкий ланцюг має варіабельну ділянку (МІ), яка також називається варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, з наступним константним легким (СІ) доменом. Легкий ланцюг антитіла можна віднести до одного з двох типів, які називаються каппа (к) та лямбда (А), на основі амінокислотної послідовності її константного домену.

Термін "листівка-вкладиш" застосовується, щоб позначати інструкції, які зазвичай включено у комерційні упаковки терапевтичних продуктів та які містять інформацію щодо призначення, застосування, дози, способу введення, комбінованої терапії, протипоказань та/або застережень стосовно застосування таких терапевтичних продуктів. "Ідентичність амінокислотної послідовності у відсотках (95)" відносно референтної послідовності поліпептиду визначається як відсоткове відношення амінокислотних залишків у послідовності-кандидаті, які є ідентичними з амінокислотними залишками у референтній послідовності поліпептиду, після вирівнювання послідовностей та введення проміжків, якщо необхідно, для досягнення максимальної відсоткової ідентичності послідовності, при цьому будь-які консервативні заміни не вважаються частиною ідентичності послідовності.

Вирівнювання з метою визначення відсоткової ідентичності амінокислотної послідовності можна виконувати за різними способами, які відповідають досвіду у галузі, наприклад, застосовуючи доступне комп'ютерне програмне забезпечення, таке як програмне забезпечення ВІА5Т,

ВІ АБТ-2, АПОМ, Медаїдп (ОМАБТАК) або СЕМЕТУХ (зареєстрована торговельна марка) (Сепеїух Со., Ца.). Фахівці у цій галузі здатні визначити параметри, відповідні для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по усій довжині послідовностей, що порівнюються.

Комп'ютерна програма порівняння послідовностей АГ І5М-2 була розроблена Сепепіесі,

Іпс., та програмний код було зареєстровано з документацією користувача у Ш.5. Соругідні Ойісе,

Уумазпіпдіоп 0.С., 20559, де він зареєстрований за 0.5. Соругідні Кедізігайоп Мо. ТХО510087.

Програма АГІОМ-2 публічно доступна від Сепепіесі, Іпс., південний Сан-Фрациско, Каліфорнія, або її можна компілювати з програмного коду. Програму АМОМ-2 слід компілювати для застосування на платформі операційної системи ОМІХ, включаючи цифрову ОМІХ М4.00. Усі параметри порівняння послідовностей задаються програмою АГ ІОМ-2, та вони не змінюються. У ситуаціях, коли АЇЇОМ-2 застосовується для порівняння амінокислотних послідовностей, ідентичність у 95 амінокислотних послідовностей даної амінокислотної послідовності А до, з або проти даної амінокислотної послідовності В (що можна альтернативно перефразувати як дана амінокислотна послідовність А, яка має або включає певну ідентичність у 95 амінокислотних послідовностей до, з або проти даної амінокислотної послідовності В), підраховується наступним чином: 100 помножити на результат ділення Х/У, де Х - це кількість амінокислотних залишків, порахованих як ідентичні пари програмою вирівнювання послідовностей АГІСМ-2 у цьому програмному вирівнюванні А та В, та де У - це загальна кількість амінокислотних залишків у В. Буде визначено, що там, де довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності В, ідентичність у 95 амінокислотних послідовностей А до В не буде дорівнювати ідентичності у 90 амінокислотних послідовностей В до А. Якщо інше специфічно не стверджується, усі значення ідентичності у 96 амінокислотних послідовностей, які застосовуються у цьому описі, отримують так, як описано у безпосередньо попередньому абзаці із застосуванням комп'ютерної програми

АМПИаМ-2.

Термін "фармацевтичний склад" означає препарат, який має таку форму, щоб біологічна активність активного інгредієнта, що міститься у ньому, була ефективною, та який не містить жодних додаткових компонентів, які є неприйнятно токсичними для суб'єкта, якому буде вводитися цей склад. "Фармацевтично прийнятний носій" означає інгредієнт у фармацевтичному складі, відмінний від активного інгредієнта, який є нетоксичним для суб'єкта. Фармацевтично прийнятний носій бо включає, проте не обмежується ними, буфер, допоміжну речовину, стабілізатор або консервант.

Терміни "РІХ", "БІХа" та "ЕХ", як застосовуються у цьому описі, означають будь-який нативний "РІХ", будь-який нативний "РІХа" та будь-який нативний "ЕХ", відповідно, від будь- якого хребетного джерела, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) та гризуни (наприклад, миші та щури), якщо інше не вказано. Терміни охоплюють "повнорозмірні" "РІХ", "РІХа" та "ЕХ", які не зазнали процесингу, а також будь-яку форму "РІХ", "РІХа" та "ЕХ", яка стала результатом процесингу у клітині. Терміни також охоплюють природні варіанти "РІХ", "РІХа" та "ЕХ", наприклад, сплайс-варіанти або алельні варіанти.

Як застосовується у цьому описі, "лікування" (та його граматичні форми, такі як "лікувати" або "здійснення лікування") означає клінічне втручання у спробі змінити природний стан індивідуума, якого лікують, та його можна здійснювати або для профілактики, або під час перебігу клінічної патології. Бажані ефекти лікування включають, проте не обмежуються ними, профілактику виникнення або рецидиву хвороби, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих наслідків хвороби, попередження метастазу, зниження інтенсивності прогресування хвороби, зменшення інтенсивності або тимчасове полегшення стану хвороби та ремісію або покращення прогнозу. У деяких варіантах здійснення антитіла цього винаходу застосовуються для відтермінування розвитку хвороби або уповільнення розвитку хвороби.

Терміни "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" означають домен важкого або легкого ланцюгів антитіла, який залучається у зв'язування антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга та легкого ланцюга (МН та МІ,, відповідно) нативного антитіла зазвичай мають схожі структури, при цьому кожен домен включає чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) та три гіперваріабельні ділянки (НУК). |Дивись, наприклад, Кіпаї еї аІ. Кибу Іттипо/оду, б ед., М.Н. Ргеетап апа Со., раде 91 (2007). Єдиного домену МН або МІ. може бути достатньо для надання антигензв'язувальної специфічності. Крім того, антитіла, які зв'язуються з певним антигеном, можна виділити, застосовуючи домен МН або УМГ. з антитіла, яке зв'язується з цим антигеном, щоб здійснити скринінг бібліотеки комплементарних доменів УН або МІ, відповідно.

Дивись, наприклад, (Ропоїапо еї аї., 9). Іттипої. 150:880-887 (1993); Сіаїкзоп еї аї., Машгте 352:624-628 (1991)|.

Термін "вектор", як застосовується у цьому описі, означає молекулу нуклеїнової кислоти, спроможну розмножити іншу нуклеїнову кислоту, до якої вона приєднана. Термін включає вектор, який є нуклеїновокислотною структурою, що самореплікується, а також вектор, включений у геном клітини-хазяїна, у яку він був введений. Певні вектори спроможні спрямовувати експресію нуклеїнових кислот, з якими вони оперативно зшиті. Такі вектори позначаються у цьому описі як "вектори експресії".

ЇЇ. Композиції та способи

В одному аспекті цей винахід засновується, частково, на мультиспецифічних антигензв'язувальних молекулах, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП. У певних варіантах здійснення пропонуються мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які зв'язуються з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ. Мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули цього винаходу є корисними, наприклад, для лікування кровотечі, хвороби, яка супроводжується кровотечею, або хвороби, спричиненої кровотечею.

А. Приклади мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул, які зв'язуються з ГРІХ та/або

НКІХа та ЕХ.

В одному аспекті цим винаходом пропонуються виділені мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які зв'язуються за ГРІХ та/або РіХа та ЕХ. У певних варіантах здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули є біспецифічними антитілами, які зв'язуються з РІХ та/або РіХа та ЕХ, та такі біспецифічні антитіла мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Біспецифічне антитіло, яке зв'язується з РІХ та/або РіІХа та ЕХ, АСЕ910 (еміцизумаб), - це антитіло, яке описано у патентному документі (М/О 2012/067176) та яке описано нижче.

Це антитіло являє собою біспецифічне антитіло, в якому перший поліпептид і третій поліпептид є асоційованими і другий поліпептид і четвертий поліпептид є асоційованими, причому біспецифічне антитіло включає перший поліпептид, який являє собою Н-ланцюг, що містить амінокислотні послідовності за 5ЕО ІЮО МО: 1, 2 ії 3 НМАЕ-НІ, НУВ-Н2 ї НМК-НЗ (СОВ н- ланцюга 0499), відповідно; другий поліпептид, який являє собою Н-ланцюг, що містить амінокислотні послідовності за 5ЕО ІЮО МО: 4, 5 і 6 НМЕ-НІ, НУВ-НЕ2 ї НМК-НЗ (СОВ Н-ланцюга 327), відповідно; і третій і четвертий поліпептиди, які є однаковими І -ланцюгами, що містять амінокислотні послідовності за ЗЕО ІЮ МО: 7, 8 ї 9 НМК-І1, НМВ-12 ї НМК-І З (СО І -ланцюга

І 404), відповідно.

Ще конкретніше, це антитіло являє собою біспецифічне антитіло, в якому перший 60 поліпептид і третій поліпептид є асоційованими і другий поліпептид і четвертий поліпептид є асоційованими, причому це біспецифічне антитіло включає перший поліпептид, який являє собою Н-ланцюг, що містить амінокислотну послідовність за 5ЕО І МО: 45 варіабельної ділянки Н-ланцюга; другий поліпептид, який являє собою Н-ланцюг, що містить амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 46 варіабельної ділянки Н-ланцюга; і третій і четвертий поліпептиди, які є однаковими І -ланцюгами, що містять, амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 47 варіабельної ділянки І -ланцюга.

Ще конкретніше це антитіло являє собою біспецифічне антитіло, в якому перший поліпептид і третій поліпептид є асоційованими і другий поліпептид і четвертий поліпептид є асоційованими, причому біспецифічне антитіло включає перший поліпептид, який являє собою

Н-ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності за 5ЕО ІЮО МО: 10; другий поліпептид, який являє собою Н-ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності за ЗЕО ІЮО МО: 11; і третій і четвертий поліпептид, які є однаковими І -ланцюгами, що складаються з амінокислотної послідовності за 56010 МО: 12 (0499-2121/0327-2119/ 404-К).

Мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули цього винаходу являють собою мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають функцію заміщувати функцію ЕМ, де молекули включають першу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з ГРІХ і/або РіхХа, і другу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з ЕХ, де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга (0499) включає НМК-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 1, НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 2, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: З, і варіабельний домен легкого ланцюга (ОМК131) включає НМК-11, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 162, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 163, ії НМА-І 3, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 164, і де друга антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга (2327) включає НМЕ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 4, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 5, і НМА-Н3З, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 6, і варіабельний домен легкого ланцюга (МІ 095) включає НУМК-11, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 165, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 166, ії НМК-І 3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 167; де один або більше амінокислотних залишків замінені іншими амінокислотами, видалені або вставлені в щонайменше одну з НМЕ.

У певних варіантах здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули цього винаходу - це мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають функцію заміщувати функцію ЕМ.

Крім того, в інших варіантах здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули цього винаходу - це мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають знижену реакційну здатність по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) порівняно з АСЕ910О (еміцизумабом). У цьому описі фраза "що мають знижену реакційну здатність по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) порівняно з

АСЕ910 (еміцизумабом)" означає, що, коли зв'язувальна спроможність (95) між антиідіотипічним антитілом та міченим АСЕ910 вимірюється за допомогою способу, описаного у прикладі 1, та якщо концентрація антитіла, яку слід виміряти, становить 100 мкг/мл, зв'язувальна спроможність переважно знижується на 1095 або більше, переважніше вона знижується на 20905 або більше та іще переважніше знижується на 3095 або більше.

Крім того, в інших варіантах здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули - це мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають підвищену активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІІ та вищу активність навіть при низькій концентрації антитіла порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом).

В інших варіантах здійснення мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули не мають по суті активності пригнічувати активацію БІХ та мають підвищену активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом). У цьому описі "що не мають по суті активності пригнічувати активацію ГРІХ" означає, що коли значення оптичної густини (00) вимірюються із застосуванням способу, продемонстрованого у прикладах, зниження значення оптичної густини (00) порівняно з контрольним значенням ОО становить 0,025 або менше, переважно 0,02 або менше та переважніше 0,01 або менше. 60 В одному варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки, де щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 34, 97, 98, 100, 100а, 10065 їі 100е згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки, де щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 26, 27, 30, 31, 32, 53, 55, 92, 93, 95 і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою або вставленим у варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, де щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 51, 56, 57, 59, 61, 62, 65 і 102 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, де щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 24, 26, 27, 29, 30, 31, 32, 50, 92, 94, 95, 95а і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього.

В одному варіанті здійснення, мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула цього винаходу являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, де: щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 34, 97, 98, 100, 100а, 10065 їі 100е згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 26, 27, 30, 31, 32, 53, 55, 92, 93, 95 і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або вставленим в нього, щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 51, 56, 57, 59, 61, 62, 65 і 102 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, і щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 24, 26, 27, 29, 30, 31, 32, 50, 92, 94, 95, 95а і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього.

В одному варіанті здійснення, варіабельний домен важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки, де: у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою гістидин, амінокислотний залишок на позиції 34 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 97 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 98 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 100 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 100а являє собою аспарагінову кислоту або видалений, амінокислотний залишок на позиції 1006 являє собою аланін або гістидин або амінокислотний залишок на позиції 100е являє собою гістидин або ізолейцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки, де: у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 60 27 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою аргінін,

амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 53 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 55 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 93 являє собою серин або аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою пролін або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою гліцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, де: у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аспарагін, глутамін або гістидин, амінокислотний залишок на позиції 51 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 56 являє собою треонін або аргінін, амінокислотний залишок на позиції 57 являє собою валін, амінокислотний залишок на позиції 59 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 61 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 62 являє собою лізин, амінокислотний залишок на позиції 65 являє собою аспарагін або глутамін або амінокислотний залишок на позиції 102 являє собою валін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за

Кабат.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки, де: у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 24 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 29 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою глутамін, серин або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою глутамін або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 50 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 94 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою аспарагінову кислоту або аланін, амінокислотний залишок на позиції 95а являє собою тирозин або видалений або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою треонін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат.

В одному варіанті здійснення мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула цього винаходу являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, де: у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою гістидин, амінокислотний залишок на позиції 34 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 97 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 98 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 100 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 100а являє собою аспарагінову кислоту або видалений, амінокислотний залишок на позиції 1006 являє собою аланін або гістидин або амінокислотний залишок на позиції 100е являє собою гістидин або ізолейцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат; у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 53 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 55 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 93 являє собою серин або аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою пролін або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою гліцин, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат; у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аспарагін, глутамін або гістидин, амінокислотний залишок на позиції 51 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 56 являє собою треонін або аргінін, амінокислотний залишок на позиції 57 являє собою валін, 60 амінокислотний залишок на позиції 59 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції

61 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 62 являє собою лізин, амінокислотний залишок на позиції 65 являє собою аспарагін або глутамін або амінокислотний залишок на позиції 102 являє собою валін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за

Кабат; і у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки амінокислотний залишок на позиції 24 являє собою треонін, амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 29 являє собою серин, амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою глутамін, серин або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін, амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою глутамін або глутамінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 50 являє собою глутамін, амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аланін, амінокислотний залишок на позиції 94 являє собою аспарагінову кислоту, амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою аспарагінову кислоту або аланін, амінокислотний залишок на позиції 95а являє собою тирозин або видалений або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою треонін, при цьому вказана позиція відповідає нумерації за Кабат.

В одному варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга, який включає: 1) НУМА-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ОО МО: 168, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 169, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮ МО: 170 (ОНОТ1); 2) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 171, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 172, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 173 (0НО2);

З) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 174, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 175, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 176 (0ОНОЗ); 4) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 177, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 178, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 179 (0НО4); 5) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 180, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 181, ії НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 182 (ОНОб); або 6) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 183, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 184, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 185 (9НО7).

В одному варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга, який включає: 1) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 186, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 187, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 188 (01 21); 2) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 189, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 190, ї НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 191 (01 22); 3) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 192, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 193, ії НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 194 (01 23);

БО 4) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 195, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІО МО: 196, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 197 (01 24); 5) НУВ-І7, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 198, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 199, ї НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 200 (01 25); б) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 201, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 202, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 203 (01 26); 7) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 204, НМК-І2, що 60 включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 205, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 206 (01 28); 8) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 207, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 208, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 209 (01 29); 9) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 210, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 211, ї НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 212 (01 30); 10) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 213, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 214, ії НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 215 (01 31); 11) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 216, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 217, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 218 (01 32); або 12) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 219, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 220, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІО МО: 221 (01 33).

В одному варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга, який включає: 1) НУМВА-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 222, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 223, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 224 (НОТ); 2) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 225, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 226, і НУК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 227 (НО);

З) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 228, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 229, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 230 ()НОЗ); 4) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 231, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 232, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 233 (ЧНО); 5) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 234, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 235, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 236 (НО); 6) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 237, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 238, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 239 ()НОб); 7) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 240, НУВ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 241, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 242 ()НО7); 8) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 243, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 244, ії НМАК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 245 (НОВ); 9) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 246, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 247, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 248 (НОВ); 10) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 249, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 250, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮ МО: 251 (ОН10); або

БО 11) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО І МО: 252, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 253, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 254 (Н11).

В одному варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга, який включає: 1) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 255, НМУВ-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 256, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 257 (ЛІ 01); 2) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 258, НМК-12, що 60 включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 259, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 260 (ЛІ 02); 3) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 261, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 262, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 263 (ЛІ 03); 4) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 264, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 265, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 266 (ЛІ 04); 5) НУВ-І7, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 267, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 268, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 269 (ЛІ 05); б) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 270, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 271, і НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 272 (ЛІ 06); 7) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 273, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІО МО: 274, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 275 (ЛІ 07); 8) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 276, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 277, і НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 278 (ЛІ 08); 9) НМВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ІЮ МО: 279, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 280, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 281 (ДІ 09); 10) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 282, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 283, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮО МО: 284 (110); або 11) НУВ-І/1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 285, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 286, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 287 (4111).

В одному варіанті здійснення мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула цього винаходу являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга включає: 1) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 168, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 169, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 170 (ОНОТ1); 2) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ОО МО: 171, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 172, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 173 (0НО2);

З) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 174, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 175, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 176 (0ОНОЗ); 4) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 177, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 178, і НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 179 (0НО4); 5) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 180, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 181, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 182 (ОНОб); або 6) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 183, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 184, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну

БО послідовність за 5Е0 ІЮ МО: 185 (0ОНО?); і варіабельний домен легкого ланцюга включає: 1) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 186, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 187, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 188 (01 21); 2) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 189, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 190, ї НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 191 (01 22); 3) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 192, НМУВ-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 193, ії НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну бо послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 194 (01 23);

4) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 195, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 196, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 197 (01 24); 5) НУВ-І7, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 198, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 199, ї НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 200 (01 25); б) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 201, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 202, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 203 (01 26); 7) НМВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ІЮ МО: 204, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 205, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 206 (01 28); 8) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 207, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 208, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 209 (01 29); 9) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 210, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 211, ії НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 212 (01 30); 10) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 213, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІО МО: 214, ї НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 215 (01 31); 11) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 216, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 217, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 218 (01 32); або 12) НМВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 219, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 220, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 221 (01 33); і де друга антигензв'язувальна ділянка включає варіаабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга включає: 1) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 222, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 223, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 224 (НОТ); 2) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 225, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 226, і НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 227 (НО);

З) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 228, НМК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 229, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 230 (УНОЗ); 4) НУМВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ОО МО: 231, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 232, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 233 (НО); 5) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 234, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 235, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 236 (НО); б) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 237, НУВ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 238, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 239 ()НОб); 7) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 240, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 241, ії НМЕК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 242 ()НО7); 8) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 243, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 244, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 245 (НОВ); 9) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 246, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 247, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 248 (УНОЗ); 10) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 249, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 250, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну бо послідовність за 5ХЕО ІЮ МО: 251 ()Н10); або

11) НУВ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 252, НМЕ-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 253, і НМК-НЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 254 ()НІ11) ; і варіабельний домен легкого ланцюга включає: 1) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 255, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 256, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 257 (ЛІ 01); 2) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 258, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 259, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 260 (ЛІ 02); 3) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 261, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІО МО: 262, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 263 (ЛІ 03); 4) НУВ-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 264, НМК-12, що включає амінокислотну послідовність за зХЕО ІЮО МО: 265, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 266 (ЛІ 04); 5) НУВ-І7, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 267, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 268, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 269 (ЛІ 05); б) НМВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ІЮ МО: 270, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 271, і НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 272 (ЛІ 06); 7) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 273, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 274, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 275 (ЛІ 07); 8) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 276, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 277, і НМК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 278 (ЛІ 08); 9) НУВ-І71, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 279, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 280, ії НМК-І 3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 281 (ЛІ 09); 10) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 282, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 283, ії НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 284 (ДІ10); або 11) НУВ-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 285, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 286, і НМК-І3, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 287 (4111).

В одному варіанті здійснення цього винаходу мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули цього винаходу - це мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають функцію заміщувати функцію фактора коагуляції крові МИ, де молекули включають першу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з фактором коагуляції крові ІХ та/або активованим фактором коагуляції крові ІХ, та другу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з фактором коагуляції крові Х, де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга (0499) за 5ЕО ІО МО: 45 та варіабельний домен легкого ланцюга (ОМК131) за 5ЕО ІЮ

МО: 13, та друга антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга (92327) за ЗЕО ІО МО: 46 та варіабельний домен легкого ланцюга (МІ 095) за 5ЕО ІО МО: 31, та де один або більше амінокислотних залишків замінені іншими амінокислотами у принаймні одному з варіабельних доменів важкого ланцюга або варіабельних доменів легкого ланцюга або видалені з нього.

У варіанті здійснення у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 34, 39, 97, 98, 100, 100а, 1006 і 100е згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього.

У варіанті здійснення у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 26, 27, 30, 31, 32, 38, 45, 53, 55, 60, 70, 76, 79, 80, 83, 85, 92, 93, 95 і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або вставленим в бо нього.

У варіанті здійснення у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 28, 31, 39, 51, 56, 57, 59, 61, 62, 65, 67, 73, 825 і 102 згідно з нумерацією за

Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки.

У варіанті здійснення у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 3, 8, 15, 24, 26, 27, 29, 30, 31, 32, 38, 48, 49, 50, 79, 92, 94, 95, 95а і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього.

У варіанті здійснення в мультиспецифічній антигензв'язувальній молекулі цього винаходу: щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 31, 34, 39, 97, 98, 100, 100а, 1005 їі 100е згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього; щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 26, 27, 30, 31, 32, 38, 45, 53, 55, 60, 70, 76, 79, 80, 83, 85, 92, 93, 95 і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки або вставленим в нього; щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 28, 31, 39, 51, 56, 57, 59, 61, 62, 65, 67, 73, 8265 і 102 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки; і щонайменше один амінокислотний залишок, вибраний з амінокислотних залишків на позиціях 3, 8, 15, 24, 26, 27, 29, 30, 31, 32, 38, 48, 49, 50, 79, 92, 94, 95, 95а і 96 згідно з нумерацією за Кабат, є заміненим іншою амінокислотою у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки або видаленим з нього.

У варіанті здійснення у варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу амінокислотний залишок на позиції 31 (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою гістидин; амінокислотний залишок на позиції 34 являє собою аланін; амінокислотний залишок на позиції 39 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 97 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 98 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 100 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 100а являє собою аспарагінову кислоту або видалений; амінокислотний залишок на позиції 1006 являє собою аланін або гістидин; і амінокислотний залишок на позиції 100е являє собою гістидин або ізолейцин, у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки.

У варіанті здійснення у варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу амінокислотний залишок на позиції 26 (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою треонін; амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 38 являє собою лізин; амінокислотний залишок на позиції 45 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 53 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 55 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 60 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 70 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 7/6 являє собою аспарагін; амінокислотний залишок на позиції 79 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 80 являє собою пролін або аланін; амінокислотний залишок на позиції 83 являє собою метіонін або аланін; амінокислотний залишок на позиції 85 являє собою треонін; амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 93 являє собою серин або аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою пролін або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою гліцин, у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки.

У варіанті здійснення у варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу амінокислотний залишок на позиції 28 (згідно з нумерацією за Кабат; те 60 ж саме застосовується до наступного) являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аспарагін, глутамін або гістидин; амінокислотний залишок на позиції 39 являє собою лізин; амінокислотний залишок на позиції 51 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 56 являє собою треонін або аргінін; амінокислотний залишок на позиції 57 являє собою валін; амінокислотний залишок на позиції 59 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 61 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 62 являє собою лізин; амінокислотний залишок на позиції 65 являє собою аспарагін або глутамін; амінокислотний залишок на позиції 67 являє собою лейцин; амінокислотний залишок на позиції 73 являє собою ізолейцин; амінокислотний залишок на позиції 825 являє собою глутамінову кислоту або амінокислотний залишок на позиції 102 являє собою валін, у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки.

У варіанті здійснення у варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки цього винаходу амінокислотний залишок на позиції З (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 8 являє собою пролін; амінокислотний залишок на позиції 15 являє собою лейцин; амінокислотний залишок на позиції 24 являє собою треонін; амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою глутамін; амінокислотний залишок на позиції 29 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою глутамін, серин або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою глутамін або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 38 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 48 являє собою ізолейцин; амінокислотний залишок на позиції 49 являє собою тирозин; амінокислотний залишок на позиції 50 являє собою глутамін; амінокислотний залишок на позиції 79 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аланін; амінокислотний залишок на позиції 94 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою аспарагінову кислоту або аланін; амінокислотний залишок на позиції 95а являє собою тирозин або видалений або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою треонін, у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки.

У варіанті здійснення в мультиспецифічній антигензв'язувальній молекулі цього винаходу: амінокислотний залишок на позиції 31 (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою гістидин; амінокислотний залишок на позиції 34 являє собою аланін; амінокислотний залишок на позиції 39 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 97 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 98 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 100 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 100а являє собою аспарагінову кислоту або видалений; амінокислотний залишок на позиції 1006 являє собою аланін або гістидин і амінокислотний залишок на позиції 100е являє собою гістидин або ізолейцин, у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки; амінокислотний залишок на позиції 26 (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою треонін; амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою аспарагінову кислоту або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 38 являє собою лізин; амінокислотний залишок на позиції 45 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 53 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 55 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 60 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 70 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 76 являє собою аспарагін; амінокислотний залишок на позиції 79 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 80 являє собою пролін або аланін; амінокислотний залишок на позиції 83 являє собою метіонін або аланін; амінокислотний залишок на позиції 85 являє собою треонін; амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 93 являє собою серин або аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою пролін або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою гліцин, у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки; амінокислотний залишок на позиції 28 (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аспарагін, глутамін або гістидин; амінокислотний залишок на позиції 39 60 являє собою лізин; амінокислотний залишок на позиції 51 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 56 являє собою треонін або аргінін; амінокислотний залишок на позиції 57 являє собою валін; амінокислотний залишок на позиції 59 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 61 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 62 являє собою лізин; амінокислотний залишок на позиції б5 являє собою аспарагін або глутамін; амінокислотний залишок на позиції 67 являє собою лейцин; амінокислотний залишок на позиції 73 являє собою ізолейцин; амінокислотний залишок на позиції 825 являє собою глутамінову кислоту або амінокислотний залишок на позиції 102 являє собою валін, у зазначеному вище варіабельному домені важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки; амінокислотний залишок на позиції З (згідно з нумерацією за Кабат; те ж саме застосовується до наступного) являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 8 являє собою пролін; амінокислотний залишок на позиції 15 являє собою лейцин; амінокислотний залишок на позиції 24 являє собою треонін; амінокислотний залишок на позиції 26 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 27 являє собою глутамін; амінокислотний залишок на позиції 29 являє собою серин; амінокислотний залишок на позиції 30 являє собою глутамін, серин або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 31 являє собою аргінін; амінокислотний залишок на позиції 32 являє собою глутамін або глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 38 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 48 являє собою ізолейцин; амінокислотний залишок на позиції 49 являє собою тирозин; амінокислотний залишок на позиції 50 являє собою глутамін; амінокислотний залишок на позиції 79 являє собою глутамінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 92 являє собою аланін; амінокислотний залишок на позиції 94 являє собою аспарагінову кислоту; амінокислотний залишок на позиції 95 являє собою аспарагінову кислоту або аланін; амінокислотний залишок на позиції 95а являє собою тирозин або видалений або амінокислотний залишок на позиції 96 являє собою треонін, у зазначеному вище варіабельному домені легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки.

У варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮ МО: 56, 5ЕО ІЮО МО: 57, ЗЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІО МО: 59 або 5ЕО ІО МО: 60.

У варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга першої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 61, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІО МО: 63, ЗЕО ІО МО: 64, або 5ЕО ІО МО: 65, ЗЕО І МО: 66, 5ЕО ІЮ

МО: 67, 5ЕО ІО МО: 68, ЗЕО ІЮ МО: 69, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІЮО МО: 71, або ЗЕО ІО МО: 72.

У варіанті здійснення варіабельний домен важкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮ МО: 73, ЗЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 75, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО І МО: 77, 5ЕО І МО: 78, 5ЕО І МО: 79, ЗЕОІЮО МО: 80, ЗЕО І МО: 81, 5ЕО ІО МО: 82 або 5ЕО ІО МО: 83.

У варіанті здійснення варіабельний домен легкого ланцюга другої антигензв'язувальної ділянки мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою варіабельний домен легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 84, ЗЕО ІО МО: 85, 5ЕО ІЮО МО: 86, ЗЕО ІО МО: 87, або 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІО МО: 89, 5ЕО ІЮ

МО: 90, 5ЕО ІО МО: 91, ЗЕО ІЮ МО: 92, 5БЕО ІО МО: 93, або 5ЕО ІО МО: 94.

У варіанті здійснення мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула цього винаходу являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, де перша антигензв'язувальна ділянка включає: варіабельний домен важкого ланцюга (ОН) за 5ЕО ІЮ МО: 56, ЗЕО ІЮО МО: 57, ЗЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 59 або 5ЕО ІО МО: 60; і

БО варіабельний домен легкого ланцюга (ОЇ) за 5ЕО ІО МО: 61, ЗЕО ІЮО МО: 62, ЗЕО І МО: 63,

ЗЕО ІО МО: 64, або 5ЕО ІЮ МО: 65, ЗЕО ІО МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 67, ЗЕО ІО МО: 68, 5ЕО ІО МО: 69, 5ЕО ІО МО: 70, БЕО ІЮО МО: 71, або ЗЕО ІЮ МО: 72, і де друга антигензв'язувальна ділянка включає: варіабельний домен важкого ланцюга (ОН) за ЗЕО ІЮ МО: 73, ЗЕО ІО МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 75,

ЗЕО ІО МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 77, 5ЕБЕО І МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 79, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 81,

ЗЕО ІЮ МО: 82 або ЗЕО ІО МО: 83; і варіабельний домен легкого ланцюга (0) за 5ЕО ІЮО МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 85, 5ЕО ІЮО МО: 86,

ЗЕО ІО МО: 87, або 5ЕО ІЮ МО: 88, ЗЕО ІО МО: 89, 5ЕО ІЮ МО: 90, ЗЕО ІЮО МО: 91, 5БЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІО МО: 93, або ЗЕО ІЮ МО: 94. 60 У варіанті здійснення цей винахід передбачає мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, що включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла, що зв'язуються з РІХ і/або РіІХа, і варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла, що зв'язуються з ЕХ, яка являє собою будь-яку з мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул від (а) до (хм) нижче: (а) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9ОНО1/01 21//УН01//Л 01), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 56, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 61, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 84; (Б) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО2/О1 22//НО1/7ЛІ 01), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 84; (с) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНОЗ/ОЇ 23/2НО02/2І 02), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 58, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 63, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 85; (4) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНОЗ/О1І 24/)Н02/2І 02), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 58, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 64, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 85; (е) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ФНО2/01 22/2)НО3/2І.03), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 75, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 86; (Ї мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО2/01 22/2Н04/)І 04), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 76, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 87; (9) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9НО2/О1 22//НО02/7І 02), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ

МО: 85; (п) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО4/О1 25//)НО2/7І 02), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 65, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 74, і варіабельний 60 домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 85; () мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9НО4/01 26/)НО2/)І 02), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 85; () мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9НО4/01 26//)НО5/)І 05), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО:88; (К) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО4/ОЇ 28//)НО5/)І 05), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 88; () мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9НО4/01 28/)НО6/)І 06), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 89; (т) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9ОНО4/01 29//0Н05/)І 05), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 88; (п) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО4/О1 29//ДНО6/7 06), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 89; (о) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (9НОб/О1 30//ЛНО7/7Л 07), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ 5О МО: 90; (р) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО4/О1 31//ЛНО8/7Л 08), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 70, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 80, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 91; (д) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНОб/О1І 32//2НО07/7 07), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну 60 послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 71, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 90; (у) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНОб/ОІ 32//)НО9/7І 09), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 71, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 81, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 92; (5) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНОб/01 30/ОН10/2І10), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 82, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 93; () мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула (ОНО7/01 33//)Н11//Л 11), яка включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 105, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 72, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 83, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 94; (0) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з епітопами, ідентичними як епітопу у РІХ і/або РіІХа, так і епітопу у ЕХ, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (Ю; (у) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка конкурує за зв'язування як з епітопом у РІХ і/або РіХа, так і з епітопом у ЕХ, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (Ф).

У варіанті здійснення константна ділянка важкого ланцюга мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою константну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 118 або 5ЕО ІО МО: 119.

У варіанті здійснення константна ділянка легкого ланцюга мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули цього винаходу являє собою константну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 100 або 5ЕО ІО МО: 102.

У варіанті здійснення мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула цього винаходу являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, де перша антигензв'язувальна ділянка включає константну ділянку за (1) або (2) нижче, і друга антигензв'язувальна ділянка включає константну ділянку за (1) або (2) нижче, яка не є константною ділянкою, включеною в першу антигензв'язувальну ділянку: (1) 5ЕО ІО МО: 119 для константної ділянки важкого ланцюга і ЗЕО І МО: 100 для константної ділянки легкого ланцюга; (2) 5ЕО ІЮ МО: 118 для константної ділянки важкого ланцюга і 5ЕБО ІЮО МО: 102 для константної ділянки легкого ланцюга.

У варіанті здійснення мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула цього винаходу являє собою мультиспецифічне антитіло. В наступному варіанті здійснення мультиспецифічне антитіло цього винаходу являє собою біспецифічне антитіло.

У варіанті здійснення цей винахід передбачає біспецифічне антитіло, яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла, що зв'язуються з ГРІХ і/або РіХа, і вараабельний домен важкого ланцюга другого антитіла і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла, що зв'язуються з ЕХ, яке являє собою будь-яке біспецифічне антитіло з від (а) до (у) нижче: (а) біспецифічне антитіло (ОНО1/0121//)Н01/). 01), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 56, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 61, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга 60 другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 84;

(5) біспецифічне антитіло (ОНО2/ОЇ22//2Н01/) 01), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 73, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮО МО: 84; (с) біспецифічне антитіло (9НОЗ/ОЇ 23/)НО27)І 02), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 58, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 63, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮО МО: 85;

(4) біспецифічне антитіло (ОНОЗ/ОЇ 24//)Н02/)1 02), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 58,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 64, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 85;

(6) біспецифічне антитіло (ОНО2/ОЇ22/2НО03/) 03), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 75, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 86;

(9 біспецифічне антитіло (9НО2/01 22/)Н04/)І 04), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 76, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за БЕО ІЮ МО: 87;

(9) біспецифічне антитіло (ОНО2/ОЇ22/2Н02/)1 02), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 57, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 62, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 85;

(п) біспецифічне антитіло (ОНО4/ОЇ 25//)Н02/)1 02), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 65, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 85;

(Ї) біспецифічне антитіло (ОНО/ОІ 26/ЮНО2/)І 02), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 59,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 74, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 85;

() біспецифічне антитіло (ОНОЗОЇ 26//УНО5/І 05), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 66, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 88;

(К) біспецифічне антитіло (ЗНОЗ/ОЇ 28//)НО5/)І 05), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга

60 другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 88;

(Ї) біспецифічне антитіло (ОНО/ОЇ 28/)НО06/)І 06), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 67, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 89; (т) біспецифічне антитіло (ОНО4/О129//)НО5/Л05), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 77, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 88;

(п) біспецифічне антитіло (ОНО4/ОЇ 29//ЛНО6/)106), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 68, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 78, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 89;

(о) біспецифічне антитіло (ОНОб6/ОЇ 30/УНО7/)І 07), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 52Е0 ІЮО МО: 90;

(р) біспецифічне антитіло (ОНО4/ОЇ 31//)Н08/)1 08), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 59, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 70, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 80, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 91;

(4) біспецифічне антитіло (0ОНОб6/ОЇІ 32//2НО07/)І 07), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 71, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 79, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 52Е0 ІЮО МО: 90;

() біспецифічне антитіло (ФНОЄ/ОІ 32//)НО9/ 09), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 60, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 71, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 81, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 92;

(5) біспецифічне антитіло (9НОбЄ/ОЇ 30/ОНІ10/ЛІ10), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 60,

варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 69, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 82, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5260 ІО МО: 93;

(9 біспецифічне антитіло (9НО7/О1 33//)Н11/)І 11), яке включає варіабельний домен важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 105, варіабельний домен легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 72, варіабельний домен важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 83, і варіабельний домен легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 52Е0 ІО МО: 94;

(0) біспецифічне антитіло, яке зв'язується з епітопами, ідентичними як епітопу у факторі згортання крові ЇХ і/або активованому факторі згортання крові ЇХ, так і епітопу у факторі згортання крові Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (0;

(у) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка конкурує за зв'язування як з епітопом у факторі згортання крові ЇХ і/або активованому факторі згортання крові ІХ, такі з

60 епітопом у факторі згортання крові Х, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (0.

У варіанті здійснення цей винахід передбачає біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла і легкий ланцюг антитіла, що зв'язуються з РІХ і/або РіХа, і важкий ланцюг другого антитіла і легкий ланцюг антитіла, що зв'язуються з ЕХ, яке являє собою будь- яке біспецифічне антитіло від (а) до (м) нижче:

(а) біспецифічне антитіло (ОНО1/01І 21/)УН01/) 01), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 120, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 126, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 138, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 149;

(5) біспецифічне антитіло (Ф9НО2/ОІ 22//)НО1/Л/Л01), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 138, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 149;

(с) біспецифічне антитіло (9НОЗ/ОЇ 23/)НО2/)1 02), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 122, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 128, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 150;

(4) біспецифічне антитіло (ФНОЗ/ОЇІ 24/)НО02/)1. 02), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 122, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 129, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 150;

(є) біспецифічне антитіло (Ф9НО2/ОІ 22//)НОЗ3/Л03), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 140, ії легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 151;

(0 біспецифічне антитіло (9НО2/О1 22/)Н04/)1 04), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 141, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 152;

(9) біспецифічне антитіло (9НО2/01І 22//)НО2/)І. 02), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 150;

(п!) біспецифічне антитіло (9НО4/0І 25//)НО2/Л02), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 130, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 150;

() біспецифічне антитіло (ОНО4/ОІ 26/)НО2/7Л102), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮО МО: 131, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 150;

() біспецифічне антитіло (ОНО4/ОІ 26/)НО5/Л05), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 131, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 153;

(К) біспецифічне антитіло (ОНО4/ОЇ 28/)НО5/)1.05), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 132, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІЮ МО: 153;

бо () біспецифічне антитіло (ОНО4/ОІ 28/)НО6/Л06), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮО МО: 132, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 143, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 154; (т) біспецифічне антитіло (ОНО4/ОЇ 29//ДНО5/)ЛІ. 05), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 133, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 153; (п) біспецифічне антитіло (9НО4/01І 29//)НОб6/Л 06), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 133, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 143, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 154; (о) біспецифічне антитіло (9НОб6/ОІ 30//)НО7/Л07), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 134, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 144, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 155; (р) біспецифічне антитіло (9НО4/О1І 31//)НО8/ЛІ08), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 135, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ОО МО: 145, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 156; (4) біспецифічне антитіло (9НОб6/ОІ 32//)НО7/Л07), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 136, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 144, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО І МО: 155; () біспецифічне антитіло (9НОб6/ОІ 32//)НОЗ9З/Л09), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 136, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 146, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 157; (5) біспецифічне антитіло (9НОб6/ОЇ 30/)Н10/)ЛІ. 10), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 134, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 147, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 158; (0 біспецифічне антитіло (9НО7/О1 33/)НІ11/)/ 11), яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 125, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 137, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 148, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 159; (0) біспецифічне антитіло, яке зв'язується з епітопами, ідентичними як епітопу у РІХ і/або

КІХа, так і епітопу у ЕХ, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (О; (у) мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка конкурує за зв'язування як з епітопом у РІХ і/або РіХа, так і з епітопом у ЕХ, які розпізнаються будь-яким з антитіл від (а) до (Ф).

У варіанті здійснення цей винахід додатково передбачає мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка має функцію заміщувати функцію фактора згортання крові

МІЇ, яка включає першу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з фактором згортання крові

ЇХ і/або активованим фактором згортання крові ІХ, і другу антигензв'язувальну ділянку, яка зв'язується з фактором згортання крові Х, де перша антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга (0499) включає НМК-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 1, НМАК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 2, і НМК-Н3З, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮО МО: 3, 60 де вваріабельний домен легкого ланцюга (ОМК131) включає НМК-І1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІО МО: 162, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 163, і НМАК-ІЗ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 164, і де друга антигензв'язувальна ділянка включає варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга (2327) включає НМЕ-НІ, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 4, НМЕК-Н2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 5, і НМА-Н3З, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 6, де варіабельний домен легкого ланцюга (МІ 095) включає НМК-Ї1, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕБЕО ІО МО: 165, НМК-І2, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 166, ії НМК-ІЗ3, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ

МО: 167.

В певних варіантах здійснення вказані вище антитіла від (а) до (у) являють собою антитіла, що мають функцію заміщувати функцію ЕМП.

В інших варіантах здійснення вказані вище антитіла від (а) до (м) - це антитіла, у яких реакційна здатність по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) є зниженою порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом). У цьому описі фраза "реакційна здатність по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) є зниженою порівняно з

АСЕ910 (еміцизумабом)" означає, що, коли зв'язувальна спроможність (95) між антиїдіотипічним антитілом та міченим АСЕ910 вимірюється із застосуванням способів, описаних у цьому описі, та якщо випробовувану речовину додають у концентрації 100 мкг/мл, реакційна здатність переважно знижується на 1095 або більше, переважніше вона знижується на 2095 або більше, іще переважніше знижується на 3095 або більше.

Антиїдіотипічні антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) можна отримати за допомогою, наприклад, наступного способу. Е(аб)2 0499/ 404, що розпізнає РІХ(а), та Е(аб)» У327/ 404, що розпізнає ЕХ, АСЕ910 (еміцизумабу) вводять кролям та отримують кролячу сироватку Е(аб')2 проти 0499/1404 та кролячу сироватку Е(аб)2 проти 9327/1404. Одержані за допомогою сульфату амонію фракції цих сироваток застосовують до колонки, щоб видалити Ідс-реактивні антитіла. Далі здійснюють афінну очистку, застосовуючи зв'язану з 0499/404 (2327/1404) колонку, та 9327/1404 (0499/І 404) -реактивні антитіла видаляються із застосуванням зв'язаної з 3327/1404 (0499/1404) колонки, та, таким чином, отримують поліклональні антиідіотипічні антитіла, які специфічно зв'язуються з 0499/ 404 (2327/1404).

Спроможність зв'язування (95) антиіїдіотипічного антитіла з міченим АСЕ910 (еміцизумабом) можна вимірити за допомогою, наприклад, електрохімічного люмінесцентного імуноаналізу, та це дозволяє оцінити пригнічення зв'язування за допомогою випробовуваної речовини. Коли застосовуються антиїідіотипічні антитіла, отримані, як згадано вище, випробовувану речовину (біспецифічне антитіло) додають у концентрації 0, 1, 3, 10, 30 або 100 мкг/мл до суміші антиїдіотипічного антитіла до 0499/1404, антиіїдіотипічного антитіла до .)327/1404, міченого біотином АСЕ910 (еміцизумабу) та міченого ФО РО-ТАС АСЕ910 (еміцизумабу), та отриманий змішаний розчин інкубують протягом ночі при низькій температурі. Потім змішаний розчин додають до планшета з 96 лунками, та планшет промивають, та потім вимірюють зв'язувальну спроможність за способом електрохімічної люмінесценції.

В інших варіантах здійснення, порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом), вказані вище антитіла від (а) до (м) мають посилену активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ та вищу активність при низькій концентрації антитіла.

В інших варіантах здійснення вказані вище антитіла від (а) до (м) по суті не мають активності пригнічувати активацію РІХ та мають підвищену активність заміщувати кофакторну функцію

ЕМІЇ порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом). У цьому описі фраза " по суті не мають активності пригнічувати активацію ГРІХ" означає, що, коли оптична густина (00) вимірюється за допомогою способу, продемонстрованого у цьому описі, зниження значення ОО порівняно з контрольним значенням ОО становить 0,025 або менше, переважно 0,02 або менше, переважніше 0,01 або менше.

Амінокислоти, що містяться в амінокислотних послідовностях, описаних у цьому описі, можуть піддаватися пост-трансляційній модифікації (наприклад, модифікація М-кінцевого глютаміну у піроглютамінову кислоту внаслідок піроглютамілування є добре відомою для фахівців у цій галузі). Природно, такі послідовності з модифікованими після трансляції амінокислотами також включаються до амінокислотних послідовностей, описаних у цьому описі.

У наступному аспекті винаходом пропонуються мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула або біспецифічне антитіло, що зв'язуються з тим же самим епітопом, що і 60 запропоновані у цьому описі мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула або біспецифічне антитіло, що зв'язуються з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ. Наприклад, у певних варіантах здійснення пропонуються мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула або біспецифічне антитіло, що зв'язуються з тим же самим епітопом, що і мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула або біспецифічне антитіло, згадані вище від (а) до (хм).

У наступному аспекті винаходу біспецифічне антитіло, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіХа та

ЕХ згідно з будь-яким вищезгаданим варіантом здійснення, - це моноклональне антитіло, включаючи химерне антитіло, гуманізоване антитіло або антитіло людини. В одному варіанті здійснення біспецифічне антитіло, яке зв'язується з РІХ та/або РіІХа та ЕХ, - це фрагмент антитіла, наприклад, фрагмент (5сЕм)», діатіло або фрагмент Е(аб)». В іншому варіанті здійснення антитіло - це повнорозмірне антитіло, наприклад, інтактне антитіло 954 або антитіло іншого класу або ізотипу, як визначено у цьому описі.

У наступному аспекті біспецифічне антитіло, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, згідно з будь-яким вищезгаданим варіантом здійснення, може включати будь-які ознаки, самостійно або у комбінації, як описано у Розділах 1 - 7 нижче. 1. Афінність антитіла

У певних варіантах здійснення запропоноване у цьому описі антитіло має константу дисоціації (Ка), яка становить 100 мкМ або менше, 10 мкМ або менше, 1 мкМ або менше, 100

НМ або менше, 10 нМ або менше, 1 нМ або менше, 0,1 нМ або менше, 0,01 нМ або менше або 0,001 нм або менше (наприклад, 105 М або менше, наприклад, від 105 М до 10792 М, наприклад, від 109 М до 10-79 М).

В одному варіанті здійснення Ка вимірюють за допомогою аналізу зв'язування з міченим ізотопом антигеном (КІА). В одному варіанті здійснення КІА здійснюють з варіантом Еаб антитіла, яке представляє інтерес, та його антигеном. Наприклад, афінність зв'язування розчину аб стосовно антигену вимірюють шляхом урівноваження Бар мінімальною концентрацією (725І)-міченого антигену у присутності серій титрування неміченого антигену з наступним захопленням зв'язаного антигену планшетом, покритим антитілом проти Раб (дивись, наприклад, Спеп еї аї., У. Мої. Віої. 293:865-881(1999)). Для того, щоб створити умови для аналізу, планшети з багатьма лунками МІСКОТІТЕК (зареєстрована торговельна марка) (Тнепто 5сіепійс) покривають протягом ночі 5 мкг/мл захоплюючого антитіла проти Раб (Сарреї!

І абз) у 50 мМ карбонату натрію (рН 9,6), а потім блокують 295 (мас./об.) альбуміном бичачої сироватки у РВ5 (розчині з фосфатним буфером) протягом від 2 до 5 годин при кімнатній температурі (приблизно 23"С). На планшеті без адсорбенту (Мипс 2269620) 100 пмМ або 26 пмМ

Г25Ц антигену змішують з послідовними розведеннями Раб, що представляє інтерес (наприклад, узгоджується з визначенням антитіла проти МЕСЕ, Рабр-12, у Ргезіа єї аїІ., Сапсег Вев. 57:4593- 4599 (1997)). Раб, що представляє інтерес, потім інкубують протягом ночі; проте інкубацію можна продовжувати протягом тривалішого періоду часу (наприклад, протягом приблизно 65 годин), щоб гарантовано відбулося урівноваження. Після цього суміші переносять до планшета захоплення для наступної інкубації при кімнатній температурі (наприклад, протягом однієї години). Розчин потім видаляють, а планшет промивають вісім разів 0,195 полісорбатом 20 (ТМ/ЕЕМ-20 (зареєстрована торговельна марка)) у РВ5. Коли планшети висохнуть, додають 150 мкл/лунку сцинтилятору (МІСВО5СІМТ-20 "М РасКкага) та піддають планшети рахуванню на гамма-лічильнику ТОРСОИШМТ М (РаскКага) протягом 10 хвилин. Концентрацію кожного Раб, яка становить менше ніж 2095 максимального зв'язування або дорівнює їм, вибирають для використання в конкурентно-зв'язувальних аналізах.

Згідно з іншим варіантом здійснення Ка вимірюють, застосовуючи аналіз поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОКЕ (зареєстрована торговельна марка). Наприклад, аналіз із застосуванням ВІАСОКЕ (зареєстрована торговельна марка)-200 або ВІАСОКЕ (зареєстрована торговельна марка)-300 (ВіІАсоге, Іпс., Різсаїаулау, МО) здійснюють при 257"С з чипами іммобілізованого антигену СМ5 при - 10 одиницях відповіді (КО). В одному варіанті здійснення біосенсорні чипи з карбоксиметилованого декстрану (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс.) активуються М-етил-

М'-(З-диметиламінопропіл)-карбодіїміду гідрохлоридом (ЕЮОС) та М-гідроксисукцинімідом (МН) згідно з інструкціями постачальника. Антиген розводять 10 мМ ацетатом натрію, рН 4,8, до 5 мкг/мл (70,2 мкМ) перед впорскуванням при витраті потоку 5 мкл/хвилину, щоб отримати приблизно 10 одиниць відповіді (КО) з'єднаного білка. Після впорскування антигену впорскується 1 М етаноламін, щоб блокувати групи, які не прореагували. Для вимірювання кінетичних параметрів впорскуються послідовні двократні розведення Раб (від 0,78 нМ до 500

НМ) у РВЗ з 0,0595 поверхнево-активної речовини (РВ5Т) полісорбат-20 (ТМ/ЕЕМ-2О"М) при 2570 при витраті потоку приблизно 25 мкл/хвилину. Швидкість асоціації (Коп) та швидкість дисоціації (Коб) розраховують, застосовуючи просту модель зв'язування Ленгмюра один до одного 60 (ВІАСОКЕ (зареєстрована торговельна марка) ЕмаїІшайоп Боїймаге версія 3.2), шляхом одночасної обробки сенсограм асоціації та дисоціації. Рівноважну константу дисоціації (Ка) розраховують як відношення Кон/Коп. Дивись, наприклад, Спеп еї аї., .). Мої. Віої. 293:865-881 (1999). Якщо швидкість асоціації перебільшує 106 М" с! внаслідок описаного вище аналізу поверхневого плазмонного резонансу, тоді швидкість асоціації можна визначити шляхом застосування способу гасіння флюоресценції, який вимірює підвищення або зниження інтенсивності флюоресценцентного випромінювання (збудження - 295 нм; випромінювання - 340 нм; смуга пропускання 16 нм) при 257С 20 нМ антитіла проти антигену (форма Раб) у РВ5, рН 7,2, у присутності антигену у концентраціях, що підвищуються, як вимірюється у спектрометрі, такому як спектрофотометр, обладнаний зупиненням потоку (Амім Іпзігитепів), або спектрофотометр серії 8000 5ІМ-АМІМСО"М (ТпегтобЗресігопіс) з кюветою, що перемішується. 2. Фрагменти антитіла

У певних варіантах здійснення антитіло, що пропонується у цьому описі, - це фрагмент антитіла. Фрагменти антитіла включають, проте не обмежуються ними, (5сЕм)г, діатіло або

К(ар)2 та інші фрагменти, описані нижче. Для огляду певних фрагментів антитіла дивись

Ниазоп еї аІ. Маї. Меа. 9:129-134 (2003). Для огляду фрагментів 5сЕм дивись, наприклад,

Рінскіййп, іп Те РПаптасоІоду ої Мопосіопа! Апіїродіє5, мої. 113, Нозепригу апа Мооге еаФв., (5ргіпдег-Мепад, Мем Могк), рр. 269-315 (1994); дивись також УМО 93/16185 та патенти США Мо Мо 5,571,894 та 5,587,458. Для обговорення фрагментів Е(ар)г, які включають залишки епітопу зв'язування рецептора реутилізації та які мають подовжений період напіврозпаду іп мімо, дивись патент США Мо 5,869,046.

Діатіла - це фрагменти антитіл з двома антигензв'язувальними ділянками, які можуть бути бівалентними або біспецифічними. Дивись, наприклад, (ЕР 404,097; МО 1993/01161; Ниазоп єї а!., Маї. Меа. 9:129-134 (2003); та Ноїїїподег еї а!., Ргос. Май). Асад. 5сі. ОБА 90: 6444-6448 (1993)|.

Фрагменти антитіл можна отримати за різноманітними способами, включаючи, проте не обмежуючись ними, протеолітичне перетравлення інтактного антитіла, а також виробництво рекомбінантними клітинами-хазяїнами (наприклад, Е. соїї або фаг), як описано у цьому описі. 3. Химерні та гуманізовані антитіла

У певних варіантах здійснення антитіло, що пропонується у цьому описі, - це химерне антитіло. Певні химерні антитіла описуються, наприклад, у (патенті США Мо 4,816,567 та

Могтізоп еї аї., Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)|Ї. В одному прикладі химерне антитіло включає варіабельну ділянку не людини (наприклад, варіабельну ділянку, що походить від миші, щура, хом'яка, кроля або примата, що не є людиною, такого як мавпа) та константну ділянку людини. У наступному прикладі химерне антитіло -- це антитіло з "перемкнутим класом", у якому клас або підклас було змінено з класу або підкласу початкового антитіла. Химерні антитіла включають їх антигензв'язувальні фрагменти.

У певних варіантах здійснення химерне антитіло - це гуманізоване антитіло. Зазвичай, антитіло не людини гуманізується, щоб знизити імуногенність стосовно людей, при цьому зберігається специфічність та афінність початкового антитіла не людини. Взагалі, гуманізоване антитіло включає один або більше варіабельних доменів, у яких НУК, наприклад СОК, (або їх частини) походять від антитіла не людини, а ЕК (або їх частини) походять від послідовностей антитіла людини. Гуманізоване антитіло довільно також включатиме принаймні частину константної ділянки людини. У деяких варіантах здійснення деякі залишки ЕК у гуманізованому антитілі замінені відповідними залишками від антитіла не людини (наприклад, антитіла, від якого походять залишки НУК), наприклад, щоб зберегти або покращити специфічність або афінність антитіла.

Огляд гуманізованих антитіл та способів їх отримання зроблений, наприклад, у (АІтаадго апа

Екапв5зоп, Егопі. Віовсі. 13:1619-1633 (2008)|), та вони далі описуються, наприклад, у |Ніесптапп еї аї., Маїшге 332:323-329 (1988); Оцееп еї аї., Ргос. Маг Асад. 5сі. ОБА 86:10029-10033 (1989);

БО патентах США МоМо 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321 та 7,087,409; Казптіїгі єї аї., Меїоа» 36:25- 34 (2005) (де описується трансплантація ділянки, що визначає специфічність (ЗОК)); РааіІап,

МОЇ. Іттипої. 28:489-498 (1991) (де описується "змінювання поверхні" (тезигпасіпд")); баІГгАсдна еї а)І., Меїноадз» 36:43-60 (2005) (де описується "перестановка ЕК" ("ЕК зпи!ийіїпа")); та О5бошт єї а!., Метоазз 36:61-68 (2005) та Кіїтка еї аї!., Вг. У. Сапсег, 83:252-260 (2000) (де описується підхід "керованої селекції" ("дцїдеа зеІесійоп") до перестановки ЕК) |.

Каркасні ділянки людини, які можна застосовувати для гуманізації, включають, проте не обмежуються ними: каркасні ділянки, вибрані за допомогою способу "найкращої відповідності" ("безі-її") |дивись, наприклад, Зітв5 еї аї. У. Іттипої. 151:2296 (1993)); каркасні ділянки, що походять від консенсусної послідовності особливої підгрупи варіабельних ділянок легкого або 60 важкого ланцюгів антитіл людини |дивись, наприклад, Сапег еї аЇ. Ргос. Маї!. Асай. Зсі. О5А,

89:4285 (1992); та Ргевіа еї аї. 9. Іттипої., 151:2623 (1993); зрілі (соматично мутовані) каркасні ділянки людини або зародкові каркасні ділянки людини |дивись, наприклад, АЇІтадго апа

Егапввзоп, Егопі. Віобсі. 13:1619-1633 (2008); та каркасні ділянки, що походять з бібліотек скринінгу ЕК |дивись, наприклад, Васа еї аї., 9). Віої. Спет. 272:10678-10684 (1997) та Козок еї а!., У. Віої. Спет. 271:22611-22618 (1996)|. 4. Антитіла людини

У певних варіантах здійснення антитіло, що пропонується у цьому описі, - це антитіло людини. Антитіла людини можна отримати, застосовуючи різноманітні відомі у галузі способи.

Антитіла людини описуються взагалі у (мап Бі)К апа мап де УміпКкеї, Ст. Оріп. Рнаптасої. 5: 368- 74 (2001) та І опрего, Ситт. Оріп. Іттипої. 20:450-459 (2008)).

Антитіла людини можна отримати шляхом введення імуногену трансгенній тварині, яку модифікували для отримання інтактних антитіл людини або інтактних антитіл з варіабельними ділянками людини, у відповідь на антигенну стимуляцію. Такі тварини зазвичай містять усі або частину локусів імуноглобуліну людини, які замінюють ендогенні локуси імуноглобуліну або які присутні зовні хромосом або інтегровані випадково у хромосоми тварин. У таких трансгенних мишей ендогенні локуси імуноглобуліну зазвичай є інактивованими. Для огляду способів отримання антитіл людини від трансгенних тварин дивись | опрега, Маї. Віоїесп. 23:1117-1125 (2005)). Дивись також, наприклад, |(патенти США Мо 6,075,181 та 6,150,584, де описується технологія ХЕМОМОИШБЕ"М: патент США Мо 5,770,429, де описується технологія НОМАВ (зареєстрована торговельна марка); патент США Мо 7,041,870, де описується технологія К-М

МОИ5БЕ (зареєстрована торговельна марка), та публікація патентної заявки США Мо Ш5 2007/0061900), де описується технологія МЕГОСІМОШ5ЗЕ (зареєстрована торговельна марка).

Варіабельні ділянки людини від інтактних антитіл, генерованих такими тваринами, можна далі модифікувати, наприклад, шляхом поєднання з відмінною константною ділянкою людини.

Антитіла людини можна також отримати за способами на основі гібридом. Описано клітинні лінії мієломи людини та гетеромієломи миші-людини для отримання моноклональних антитіл.

Дивись, наприклад, Ко2брог .). Іттипої!., 133: 3001 (1984); Вгодеийг еї а!., Мопосіопа! Апіїроду

Ргодисіоп Тесппідне5 апа Арріїсайоп5, рр. 51-63 (МагсеІ ОекКег, Іпс., Мем/ ХогКк, 1987); та

Воеєгпег вї аї., У. Іттипої!., 147: 86 (1991). Антитіла людини, отримані за допомогою гібридомної технології В-клітин людини, також (описано у Гі еї аї., Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА, 103:3557-3562 (2006)). Додаткові способи включають способи, описані, наприклад, у (патенті США Мо 7,189,826 (де описується виробництво моноклональних антитіл ІДМ людини лінями гібридомних клітин) та

Мі, Хіападаії Міапуїхие, 26(4)265-268 (2006) (де описуються гібридоми людини-людини).

Технологія з використанням гібридоми людини (тритомна технологія) також описується у

З5 Мої тег5 апа Вгапаїеїп, Нісіоіоду апа Нізіораїйоїоду, 20(3):927-937 (2005) та МоїІтег5 апа

Вгапаїеїп, Метоавз апа Ріпаїпор5 іп Ехрегітепіа! апа Сіїіпіса! Рнаптасоіоду, 27(3):185-91 (2005).

Антитіла людини можна також отримати шляхом виділення послідовностей варіабельного домену клону Ем, вибраних з похідних від людини фаг-дисплейних бібліотек. Такі послідовності варіабельного домену можна потім комбінувати з бажаним константним доменом людини.

Способи вибору антитіл людини з бібліотек антитіл описуються нижче. 5. Антитіла, що походять з бібліотек

Антитіла цього винаходу можна виділити за допомогою скринінгу комбінаторних бібліотек щодо антитіл з бажаною активністю або типами активності. Наприклад, у цій галузі відомі різноманітні способи генерування фаг-дисплейних бібліотек та скринінгу таких бібліотек стосовно антитіл, яким притаманні бажані характеристики зв'язування. Огляд таких способів наведено, наприклад, у Ноодепроот еї аї. в Меїоавз іп МоїІесшаг Віоіоду 178:1-37 (О'Вгпіеп еї аї., ед., Нитап Ргезвз, Тоїоула, МУ, 2001, та вони далі описані, наприклад, у (МсСапйепу еї аї., Маїиге 348:552-554; СіІаскзоп еї аї., Маїшге 352: 624-628 (1991); МагїКкз еї аї., У. Мої. Вісі. 222: 581-597 (1992); Магк5 апа Вгадригу, в Меїйодз іп МоїІесшаг Віоіоду 248:161-175 (Го, ед., Нитап Ргев5,

Тоїоула, МУ, 2003); Біани еї аї., У. Мої. Віоії. 338(2): 299-310 (2004); І ее еї аї., У. Мої. Віої. 340(5): 1073-1093 (2004); РеІПоизе, Ргос. Маї!. Асай. сі. ОБА 101(34): 12467-12472 (2004); та | ее еї аї.,

У. Іттипої. Меїшоаз 284(1-2): 119-132 (2004).

У певних способах фагового дисплея репертуари генів МН та МІ. окремо клонуються шляхом полімеразно-ланцюгової реакції (ПЛР) та рекомбінуються випадково у фагові бібліотеки, які потім можна піддати скринінгу стосовно антигензв'язувального фага, як описано у ГММіпег еї аї.,

Апп. Вем. Іттипої!., 12: 433-455 (1994)). Фаг зазвичай відображає фрагменти антитіла або як одноланцюгові фрагменти Ем (зсЕм), або як фрагменти Раб. Бібліотеки від імунізованих джерел пропонують високоафінні антитіла до імуногена без необхідності будування гібридом.

Альтернативно, інтактний репертуар можна клонувати (наприклад, від людини), щоб отримати бо єдине джерело антитіл до широкого ряду невласних антигенів та також власних антигенів без будь-якої імунізації, як (описано співавторами сгіййне еї а. ЕМВО У, 12: 725-734 (1993)).

Зрештою, інтактні бібліотеки можна також отримати за допомогою синтезу шляхом клонування неперебудованих сегментів М-гена зі стовбурових клітин та застосовуючи праймери ПЛР, які містять випадкову послідовність, щоб кодувати надзвичайно варіабельні ділянки СОКЗ та виконати перебудову іп мйго, як описано співавторами |Ноодепроот апа Уміпієг, У. Мої. Віо1., 227: 381-388 (1992)). Патентні публікації, які описують фагові бібліотеки антитіл людини, включають, наприклад: (патент США Мо 5,750,373 та патентні публікації США МоМо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 та 2009/00023601.

Антитіла або фрагменти антитіл, виділені з бібліотек антитіл людини, вважають у цьому описі антитілами людини або фрагментами антитіл людини. 6. Мультиспецифічне антитіло

У контексті цього винаходу термін "мультиспецифічне антитіло" означає антитіло, яке може специфічно зв'язуватися з відмінними типами епітопів. Конкретніше, мультиспецифічні антитіла - це антитіла, які мають специфічність до щонайменше двох відмінних типів епітопів, та, на додаток до антитіл, які розпізнають відмінні антигени, також включаються антитіла, які розпізнають відмінні епітопи на одному й тому ж антигені. (Наприклад, коли антигени є гетерологічними рецепторами, тоді мультиспецифічні антитіла зв'язуються з різними доменами, які складають гетерологічні рецептори; альтернативно, коли антигени - це мономери, тоді мультиспецифічні антитіла зв'язуються з багатьма ділянками на мономерних антигенах).

Зазвичай, такі молекули зв'язуються з двома антигенами (біспецифічні антитіла), проте вони можуть навіть мати специфічність до більшої кількості антигенів (наприклад, трьох типів). У специфічних варіантах здійснення один з антигенів - це РІХ та/або РіХа, а інший - це ЕХ.

Біспецифічне антитіло можна отримати як повне антитіло або як фрагмент антитіла.

Способи отримання мультиспецифічних антитіл включають, проте не обмежуються ними, рекомбінантну спільну експресію двох пар важкого ланцюга - легкого ланцюга імуноглобуліну, які мають відмінні специфічності |дивись Міївївїп апа СиеїйЙйо, Маїште 305: 537 (1983)), МО 93/08829 та ТгайпесКег еї аі., ЕМВО 3. 10: 3655 (1991)), та технологію "виступ у западину" ("Кпор-іп-поїе") дивись, наприклад, патент США Мо 5,731,168)|. Мультиспецифічні антитіла можна також отримати шляхом створення ефектів електростатичного регулювання для отримання гетеродимерних молекул Ес антитіла (МО 2009/089004А1); перехресного зшивання двох або більше антитіл або фрагментів |дивись, наприклад, патент США Мо 4,676,980 та

Вгеппап еї аї., Зсіепсе, 229: 81 (1985)); шляхом застосування лейцинової "застібки-блискавки" для отримання біспецифічних антитіл Ідивись, наприклад, Кобвієїпу еї аї., У. Іттипо)., 148(5):1547-1553 (1992)|; шляхом застосування технології "діатіла" для отримання фрагментів біспецифічних антитіл (дивись, наприклад, Ноїїїпдег єї аЇ., Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА, 90:6444- 6448 (1993)); та шляхом застосування одноланцюгових димерів Ем (з5сЕм) дивись, наприклад,

Стирег еї аї!., У. Іттипої!., 152:5368 (1994)); та шляхом отримання триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, у |Тий еї аї. у. Іттипої. 147: 60 (1991)|.

Побудовані антитіла з трьома або більше функціональними антигензв'язувальними ділянками, включаючи "антитіла-восьминоги", також включені у цей опис Ідивись, наприклад, 5 2006/0025576А11. 7. Варіанти антитіл

У певних варіантах здійснення передбачаються варіанти амінокислотних послідовностей антитіл, запропонованих у цьому описі винаходу. Наприклад, може бути бажаним покращити афінність зв'язування та/або інші біологічні властивості антитіла. Варіанти амінокислотних послідовностей антитіла можна отримати шляхом введення відповідних модифікацій у нуклеотидну послідовність, що кодує антитіло, або шляхом пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делецію залишків з амінокислотних послідовностей антитіла та/або вставку залишків в них, та/або заміну залишків в амінокислотних послідовностях антитіла. Можна здійснювати будь-яку комбінацію делеції, вставки та заміни, щоб отримати кінцеву конструкцію, за умови, що кінцева конструкція має бажані характеристики, наприклад, зв'язування з антигеном. а) Варіанти заміни, вставки та делеції

У певних варіантах здійснення пропонуються варіанти антитіл, які мають одну або більше амінокислотних замін. Ділянки, які представляють інтерес для замісного мутагенезу, включають

НМК та ЕК. Консервативні заміни наведено у таблиці 1 під заголовком "переважні заміни".

Суттєвіші зміни наведено у таблиці 1 під заголовком "приклади замін", та, як описано нижче, з посиланням на класи амінокислотних бічних ланцюгів. Амінокислотні заміни можна зробити в 60 антитілі, що представляє інтерес, та виконати скринінг продуктів з бажаною активністю,

наприклад, збереженим/покращеним зв'язуванням з антигеном, зниженою імуногенністю або покращеними АОСС або СОС.

Таблиця 1

Приклади замін Переважні заміни залишок цец(Ю 00 |Норлейцин; Пе Ма; МесА2а;РНєїд 7777777 ес

Амінокислоти можна згрупувати згідно зі спільними властивостями бічного ланцюга: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, І ей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Сувз, 5ег, ТНг, Авп, Сп; (3) кислотні: Ар, СІМ; (4) основні: Нів, Гуз, Аго; (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюга: Су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ре.

Неконсервативні заміни спричинятимуть обмін члена одного з цих класів на інший клас.

Один тип о замісного варіанта спричиняє заміну одного або більше залишків гіперваріабельної ділянки початкового антитіла (наприклад, гуманізованого антитіла або антитіла людини). Взагалі, отриманий (отримані) варіант (варіанти) для подальшого дослідження матиме (матимуть) модифікації (наприклад, покращення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищену афінність, знижену імуногенність) відносно початкового антитіла та/або матиме (матимуть) по суті збережені певні біологічні властивості початкового антитіла. Прикладом замісного варіанта є антитіло зі зрілою афінністю, яке можна отримати за традиційним способом, наприклад, застосовуючи способи визрівання афінності на основі фагового дисплея, такі як описано у цьому описі. Стисло кажучи, один або більше залишків НУК піддають мутації, та варіанти антитіл відображаються на фагу та піддаються скринінгу щодо певної біологічної активності (наприклад, афінності зв'язування).

Зміни (наприклад, заміни) можна здійснювати у НУК, наприклад, щоб покращити афінність антитіла. Такі зміни можна робити у "гарячих точках" ("ПпПоївроїв") НМК, тобто залишках, що кодуються кодонами, які зазнають мутації з високою частотою під час процесу соматичного визрівання (дивись, наприклад, Спожапигу, Меїйод5 Мої. ВіоІї. 207:179-196 (2008)), та/або залишках, які контактують з антигеном, при цьому отриманий варіант МН або Мі тестують стосовно афінності зв'язування. Визрівання афінності внаслідок побудови та повторного вибору з вторинних бібліотек описано, наприклад, у (Ноодепроот еї а. в Меїнодз іп МоїЇІесшіаг Віоіоду 178:1-37 (О'Вгієп еї аї., ед., Нитап Ргез5, Тоїоула, М, (2001).)) У деяких варіантах здійснення визрівання афінності вводиться різноманіття у варіабельні гени, вибрані для визрівання, будь- яким з різноманітних способів (наприклад, ПЛР з помилками, перестановка ланцюгів або олігонуклеотид-спрямований мутагенез). Потім утворюють вторинну бібліотеку. Ця бібліотека потім піддається скринінгу з метою ідентифікувати будь-які варіанти антитіл з бажаною афінністю. Інший спосіб введення різноманіття застосовує НМК-спрямовані підходи, при яких рандомізуються декілька залишків НУК (наприклад, 4-6 залишків за один раз). Залишки НУК, які залучаються у зв'язування з антигеном, можна специфічно ідентифікувати, наприклад, застосовуючи аланін-скануючий мутагенез або моделювання. Часто мішенню стають саме

СОВ-НЗ та СОК-І 3.

У певних варіантах здійснення заміни, вставки або делеції можуть виникати у межах однієї або більше НМК, доки такі зміни суттєво не знижують спроможність антитіла зв'язуватися з антигеном. Наприклад, у НМК можна здійснити консервативні зміни (наприклад, консервативні заміни, як пропонується у цьому описі), які по суті не знижують афінність зв'язування. Такі зміни можуть, наприклад, відбуватися зовні залишків у НМК, що контактують з антигеном. У певних варіантах здійснення варіантів послідовностей УН та МІ, запропонованих вище, кожна НУК або залишається незмінною, або містить не більш ніж одну, дві або три амінокислотні заміни.

Корисний спосіб ідентифікації залишків або ділянок антитіла, які можуть бути мішенями для мутагенезу, називається "аланін-скануючий мутагенез", як описано у |Сиппіпдйат апа УУеїїЇв5 (1989) Зсієепсе, 244:1081-1085|. У цьому способі залишок або групу залишків-мішеней (наприклад, заряджені залишки, такі як аго, азр, піз, уз та діи) ідентифікують та замінюють нейтральною або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном) з метою визначення, чи відбувається вплив на взаємодію антитіла з антигеном.

На амінокислотних локалізаціях можна робити подальші заміни, які демонструють функціональну чутливість до початкових замін. Альтернативно або додатково, кристалічну структуру комплексу антиген-антитіло можна проаналізувати з метою ідентифікувати точки контакту між антитілом та антигеном. Такі контактні залишки та сусідні залишки можуть бути мішенями або їх можна виключити як кандидатів для заміни. Варіанти можна піддати скринінгу, щоб визначити, чи мають вони бажані властивості.

Вставки амінокислотних послідовностей включають аміно- та/або карбоксил-кінцеві злиття, довжина яких має діапазон від одного залишку до поліпептидів, які містять сто або більше залишків, а також вставки усередині послідовностей єдиного або численних амінокислотних залишків. Приклади кінцевих вставок включають антитіло з М-кінцевим залишком-метіонілом.

Інші варіанти вставок молекули антитіла включають злиття з ферментом (наприклад, для

АРЕРТ) або поліпептидом, який подовжує період напіврозпаду антитіла у плазмі, з М- або С- кінцями антитіла. р) Варіанти глікозилування

У певних варіантах здійснення антитіло, що пропонується у цьому описі, змінюється для того, щоб підвищити або знизити ступінь, до якого антитіло глікозилується. Додавання або делецію ділянок глікозилування в антитілі можна традиційно здійснювати шляхом зміни амінокислотної послідовності, так щоб утворити або видалити одну або більше ділянок глікозилування.

Там, де антитіло включає Ес-ділянку, приєднаний до неї вуглеводень можна змінювати.

Нативні антитіла, що виробляються клітинами ссавців, зазвичай включають розгалужений біантенальний олігосахарид, який взагалі приєднаний за допомогою М-зв'язку до Азп297 домену

СНаІ2 Ес-ділянки. Дивись, наприклад, Г(М/гідні еї ам. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997)). Олігосахарид може включати різноманітні вуглеводні, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (сІсСМАс), галактозу та сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до СіІсМАс у "стовбурі" біантенальної структури олігосахариду. У деяких варіантах здійснення модифікації олігосахариду в антитілі цього винаходу можна здійснити з метою утворення варіантів антитіла з певними покращеними властивостями. с) Варіанти Ес-ділянки

У певних варіантах здійснення одну або більше амінокислотних модифікацій можна ввести в

Ес-ділянку антитіла, що пропонується у цьому описі, тим самим генеруючи варіант Ес-ділянки.

Варіант Ес-ділянки може включати послідовність Ес-ділянки людини (наприклад, Ес-ділянку

І9С1, ІдСс2, ІДОЗ або ІдС4 людини), яка включає амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) на одній або більше амінокислотних позиціях.

У певних варіантах здійснення цей винахід передбачає варіант антитіла, якому притаманні деякі, але не усі ефекторні функції, які роблять його бажаним кандидатом для випадків застосування, при яких період напіврозпаду антитіла іп мімо є важливим, втім певні ефекторні функції (такі як комплементзалежна та антитілозалежна клітинна цитотоксичність) не є необхідними або є шкідливими. Аналізи цитотоксичності іп міго та/або іп мімо можна здійснити, щоб переконатися у зниженні/припиненні активності СОС та/або АЮСС. Наприклад, аналізи зв'язування Ес-рецептора (БСК) можна здійснити, щоб переконатися, що антитілу бракує 60 зв'язування з Ес гамма К (як наслідок, ймовірно бракує активності АОСС), проте воно зберігає спроможність зв'язуватися з ЕсКп. Первинні клітини для опосередкування АЮОСС, МК-клітини, експресують тільки Ес гамма Кін, у той час як моноцити експресують Ес гамма КІ, Ес гамма КІЇ та Ес гамма КІ. Експресія ГСК на кровотворних клітинах підсумовується у таблиці З та на сторінці 464 публікації (Намеїсй апа Кіпейї Аппи. Аем. Іттипої. 9:457-492 2 (1991)|.

Необмежувальні приклади аналізів іп мійго для оцінки активності АЮОСС молекули, що представляє інтерес, описані у (патенті США Мо 5,500,361 (дивись, наприклад, НеїЇбігот, І. еї аї.

Ргос. Маї! Асад. сі. ОБА 83:7059-7063 (1986)) та НеїБ5ігот, І еї аїЇ., Ргос. Маг! Асад. Зсі. ОБА 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (дивись Вгиддетапп, М. еї аїЇ., У. Ехр. Меа. 166:1351-1361 (1987))Ї. Альтернативно, способи нерадіоактивних аналізів можна застосовувати (дивись, наприклад, нерадіоактивний аналіз цитотоксичності АСТІ"М для потокової цитометрії

ІСеПТеснпоіоду, Іпс. Мошпіаіїп Міем, САЇ| та нерадіоактивний аналіз цитотоксичності СуютТох 96 (зареєстрована торговельна марка) (Рготеда, Мадізоп, УМІ)). Корисні ефекторні клітини для таких аналізів включають мононуклеари периферійної крові (РВМС) та природні клітини-кілери (МК). Альтернативно або додатково, активність АЮОСС молекули, що представляє інтерес, можна оцінити іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій як (описано у Сіупез еї аї. Ргос. Маг!

Асад. Зсі. ОБА 95:652-656 (1998) Можна також здійснити аналіз зв'язування С1д, щоб переконатися, що антитіло неспроможне зв'язуватися з С1д, та, отже, йому бракує активності

СОС. Дивись, наприклад, ЕЛАЙЗА зв'язування Сід та СЗс у (ММО 2006/029879 та УМО 2005/100402|. Для того, щоб оцінити активацію комплементу, можна здійснити аналіз СОС дивись, наприклад, Са7апо-Запіого еї аї., У. Іттипої. Меїйоа5 202:163 (1996); Стада, М.5. єї а!І., Віоса 101:1045-1052 (2003); та Стадо, М.5. апа М.). Сіеппівє, Віоса 103:2738-2743 (2004))).

Зв'язування ЕсКп та визначення кліренсу/періоду напіврозпаду іп мімо можна також здійснити, застосовуючи відомі у цій галузі способи |дивись, наприклад, Реїкома, 5.В. еї аї., Іпгї. Іттипої. 18(12):1759-1769 (2006)).

Описані певні варіанти антитіл з підвищеним або зниженим зв'язуванням з ЕсКп. Дивись, наприклад, патент США Мо 6,737,056; МО 2004/056312 та 5ПНієїдз еї аї., 9. Віо!. Спет. 9(2): 6591- 6604 (2001).

У И52005/0014934А1 (Ніпіоп сеї аЇ.) описуються антитіла з подовженим періодом напіврозпаду та підвищеним зв'язуванням з неонатальним рецептором Ес, який відповідає за перенос материнських (дб плоду |(Сицуег еї аї., У. Іттипої. 117:587 (1976) та Кіт еї аї.,..

Іттипої. 24:249 (1994)3). Ці антитіла включають Ес-ділянку з однією або більше замінами у ній, які підвищують зв'язування Ес-ділянки з ЕсКп. Такі варіанти Ес включають варіанти із замінами на одному або більше залишках Ес-ділянки: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміна залишку 434 Ес- ділянки (патент США Мо 7,371,8261.

Стосовно інших прикладів варіантів Ес-ділянки дивись такожІОипсап 4 УмМіпіег, Маїшге 322:738-40 (1988); патент США 3 5,648,260; патент США Мо 5,624,821 та УМО 94/293511. а) Варіанти сконструйованих з цистеїном антитіл

У певних варіантах здійснення може бути бажаним створити сконструйовані з цистеїном антитіла, наприклад, "(піоМАБ", у яких один або більше залишків антитіла замінені цистеїновими залишками. В особливих варіантах здійснення замінені залишки виникають на доступних ділянках антитіла. Внаслідок заміни цих залишків цистеїном реактивні тіолові групи розташовуються на доступних ділянках антитіла, та їх можна застосовувати для кон'югування антитіла з іншими складовими, такими як складові, що є ліками, або складові, що є зв'язаними з лінкером ліками, щоб утворити імунний кон'югат, як описано далі у цьому описі. У певних варіантах здійснення будь-який один або більше з наступних залишків може бути замінений цистеїном: М205 (нумерація за Кабат) легкого ланцюга; А118 (нумерація Е)) важкого ланцюга та 5400 (нумерація Е)) Ес-ділянки важкого ланцюга. Сконструйовані з цистеїном антитіла можна отримати, як описано, наприклад, у |(патенті США Мо 7,521,5411. е) Похідні антитіл

У певних варіантах здійснення антитіло, що пропонується у цьому описі, можна також модифікувати так, щоб воно містило додаткові небілкові складові, які є відомими у цій галузі та легко доступними. Складові, придатні для дериватизації антитіла, включають, проте не обмежуються ними, водорозчинні полімери. Необмежувальні приклади водорозчинних полімерів включають, проте не обмежуються ними, поліетиленгліколь (ПЕГ), співполімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (або гомополімери, або випадкові співполімери) та декстран або полі(п-вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери поліпропіленгліколю, співполімери оксиду 60 поліпропілену/оксиду етилену, поліоксіетиловані поліоли (наприклад, гліцерин), полівініловий 5О0 спирт та їх суміші. Поліеєтиленгліколь-пропіональдегід може мати переваги у виробництві завдяки його стійкості у воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу та може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може варіюватися, та, якщо приєднаний більш ніж один полімер, вони можуть бути такими однаковими або відмінними молекулами. Взагалі, кількість та/або тип полімерів, які застосовуються для дериватизації, можна визначити, враховуючи, проте не обмежуючись ними, особливі властивості або функції антитіла, які слід покращити, чи буде похідне антитіла застосовуватися під час лікування за визначеними умовами тощо.

В іншому варіанті здійснення пропонуються кон'югати антитіла та небілкової складової, які можна вибірково нагрівати, піддавши опромінюванню. В одному варіанті здійснення небілкова складова - це вуглецева нанотрубка (Кат еї аї!., Ргос. Май). Асай. бсі. ОБА 102: 11600-11605 (2005). Опромінювання може мати будь-яку довжину хвилі та воно включає, проте не обмежується ними, такі значення довжини хвилі, які не шкодять звичайним клітинам, але які нагрівають небілкову складову до температури, при якій клітини, які знаходяться біля небілкової складової антитіла, гинуть.

В. Рекомбінантні способи та композиції

Антитіла можна отримати, застосовуючи рекомбінантні способи та композиції, наприклад, як описано у (патенті США Мо 4,816,567|. В одному варіанті здійснення пропонується виділена нуклеїнова кислота, що кодує мультиспецифічне антитіло, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та

ЕХ, як описано у цьому описі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, яка включає МІ, та/або амінокислотну послідовність, яка включає УН антитіла (наприклад, легкий та/(або важкий ланцюги антитіла). У наступному варіанті здійснення пропонуються один або більше векторів (наприклад, векторів експресії), які містять таку нуклеїнову кислоту. У наступному варіанті здійснення пропонується клітина-хазяїн, яка містить таку нуклеїнову кислоту. В одному такому варіанті здійснення клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована за допомогою): (1) вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка включає Мі антитіла, та амінокислотну послідовність, яка включає МН антитіла; або (2) перший вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка включає Мі антитіла, та другий вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка включає МН антитіла. В одному варіанті здійснення клітина-хазяїн є еукаріотичною, наприклад, клітиною яєчнику китайського хом'ячка (СНО) або лімфоїдною клітиною (наприклад, клітиною МО, М5О, 5р2/0). В одному варіанті здійснення пропонується спосіб отримання мультиспецифічного антитіла, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ, при цьому спосіб включає культивування клітини-хазяїна,

З5 яка містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, як запропоновано вище, в умовах, придатних для експресії мультиспецифічного антитіла, яке зв'язується з РІХ та/або РіХа та ЕХ, та довільне отримання антитіла від клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини- хазяїна).

Для рекомбінантного виробництва мультиспецифічного антитіла, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ, нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, наприклад, як описано вище, виділяють та вставляють в один або більше векторів для подальшого клонування та/або експресії у клітині-хазяїні. Таку нуклеїнову кислоту можна легко виділити та секвенувати, застосовуючи традиційні процедури (наприклад, застосовуючи олігонуклеотидні зонди, спроможні специфічно зв'язуватися з генами, які кодують важкий та легкий ланцюги антитіла).

Придатні клітини-хазяїни для клонування та експресії векторів, що кодують антитіло, включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані у цьому описі. Наприклад, антитіла можна отримати у бактеріях, зокрема коли глікозилування та ефекторна функція Ес не є необхідними. Стосовно експресії фрагментів антитіл та поліпептидів у бактеріях дивись, наприклад, (патенти США МоМо 5,648,237, 5,789,199 та 5,840,523|. |Дивись також СНагноп,

Меїноавз іп Моїесшціаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. І о, ед., Нитапа Ргез5, Тоїоула, МУ, 2003), рр. 245- 254, де описана експресія фрагментів антитіла у Е. соїї.| Після експресії антитіло можна виділити з пасти бактеріальних клітин у розчинну фракцію, а потім далі очищувати.

Окрім прокаріотів, еукаріотні мікроби, такі як міцеліальні грибки або дріжджі є придатними хазяїнами для клонуваня або експресії векторів, що кодують антитіло, включаючи штами грибків та дріжджів, шляхи глікозилування яких були гуманізовані, внаслідок чого отримують антитіло з частковою або повною схемою глікозилування людини. Дивись |(Сегпдго55, Маї. Віотесі. 22:1409- 1414 (2004), та Іі егаї., Маї. Віотесі. 24:210-215 (2006)|.

Придатні клітини-хазяїни для експресії глікозилованого антитіла також походять від багатоклітинних організмів (безхребетних та хребетних). Приклади клітин безхребетних 60 включають клітини рослин та комах. Було ідентифіковано багато штамів бакуловірусів, які можна застосовувати у зв'язку з клітинами комах, особливо для трансфекції клітин 5родорієега

Ігидірегаа.

Культури рослинних клітин можна також застосовувати як хазяїнів. Дивись, наприклад, (патенти США МоМо 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978 та 6,417,429 (де описана технологія РІ АМТІВООІЕ5 М для отримання антитіл в трансгенних рослинах))|.

Клітини хребетних можна також використовувати як хазяїнів. Наприклад, можна використовувати клітинні лінії ссавців, які адаптовано для зростання у суспензії. Інші приклади корисних ліній клітин-хазяїнів ссавців - це клітинна лінія нирки мавпи СМ1, трансформована за допомогою 540 (СО5-7); лінія ембріональної нирки людини (293 або клітини 293, як описано, наприклад, у |Сганат еї аї., у). Сеп Мігої. 36:59 (1977))); клітини нирки немовля хом'яка (ВНК); клітини зепоїї миші (клітини ТМ4, як описано, наприклад, у МаїНег, ВіоЇ. Кергоа. 23:243-251 (1980)); клітини нирки мавпи (СМ1); клітини нирки африканської зеленої макаки (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собак (МОСК); клітини печінки щурів Буфало (ВК! ЗА); клітини легеня людини (М/138); клітини печінки людини (Нер 52); пухлина молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТКІ, як описано, наприклад, у |Маїнег єї а!., Аппаїє М.М. Асай. 5сі. 383:44-68 (1982)|; клітини МКС 5 та клітини Е54. Інші корисні лінії клітин-хазяїнів ссавців включають клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи клітини ОНЕК- СНО |паць еї аї., Ргос. Маї!. Асайд. 5сі. ОБА 77:4216 (1980)|; та клітинні лінії мієломи, такі як МО, МО та Зр2/0. Стосовно огляду певних ліній клітин-хазяїнів ссавців, придатних для отримання антитіл, дивись, наприклад, (Магакі апа УУи, Меїшоаз іп МоїІесшіаг

Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. І о, ед., Нитапа Ргезв, Тоїоула, МУ), рр. 255-268 (2003)).

С. Аналізи

Мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які зв'язуються з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ та які пропонуються у цьому описі, можна ідентифікувати, піддати скринінгу або характеризувати стосовно їх фізичних/хімічних властивостей та/або біологічної активності, застосовуючи різноманітні, відомі у цій галузі аналізи. 1. Аналіз зв'язування та інші аналізи

В одному аспекті антитіло винаходу тестують стосовно його активності зв'язуватися з антигеном, наприклад, за відомими способами, такими як ЕГІ5А, вестерн-блот тощо.

В іншому аспекті конкурентний аналіз можна застосовувати для ідентифікації антитіла, яке конкурує з будь-яким антитілом з мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РІХ та/або РіІХа та ЕХ, описаними у цьому описі, за зв'язування з РІХ та/або РіХа та ЕХ. У певних варіантах здійснення таке конкуруюче антитіло зв'язується з таким самим епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується описане у цьому описі мультиспецифічне антитіло, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ. Докладні приклади способів картування епітопу, з яким зв'язується антитіло, наведено у |Могтіз (1996) "Ерйоре Марріпд Ргоїосої5," в

Меїпоавз іп МоїІесшаг Віоіоду мої. 66 (Нитапа Ргезв, Тоїомжа, МУ).

У прикладі конкурентного аналізу іммобілізовані ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ інкубуються у розчині, який включає перше мічене антитіло, яке зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ (наприклад, будь- яке описане у цьому описі антитіло), та друге немічене антитіло, яке випробовують стосовно його спроможності конкурувати з першим антитілом за зв'язування з ГРІХ, РІХа або ЕХ. Друге антитіло може бути присутнім у гібридомній надосадовій рідині. Як контрольні, іммобілізовані

НІХ, РіІХа або ЕХ інкубують у розчині, який включає перше мічене антитіло, але не включає друге немічене антитіло. Після інкубування в умовах, які сприяють зв'язуванню першого антитіла з РІХ, РІХа або ЕХ, надлишок незв'язаного антитіла видаляють та вимірюють кількість міченого антитіла, асоційованого з іммобілізованими ГРІХ, РІХа або ЕХ. Якщо кількість міченого антитіла, асоційованого з іммобілізованими ГРІХ, РІХа або ЕХ, суттєво знижена у тестовому зразку відносно контрольного зразка, тоді це вказує на те, що друге антитіло конкурує з першим антитілом за зв'язування з ГРІХ, РІХа або ЕХ. Дивись |Напом апа Іапе (1988) Апіїрбодіев: А

Гарогаїогу Мапиаї сп.14 (Соїа 5ргіпд Нарог І арогаїогу, Соїа 5ргіпу Нагбог, ММ). 2. Аналізи активності

В одному аспекті пропонуються аналізи для визначення біологічної активності мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ та має біологічну активність. Біологічна активність може включати, наприклад, активність сприяти генеруванню ЕХа. Також пропонуються мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, які мають таку біологічну активність іп мімо та/або іп міїго.

У певних варіантах здійснення антитіло винаходу тестують стосовно такої біологічної активності. "Активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ!" означає, наприклад, активність підвищувати поглинання у тесті реакції активації ЕХ за допомогою РіІХа, застосовуючи спосіб 60 колориметричного кількісного аналізу, та активність збільшувати кількість утвореного тромбіну,

Б2 що підраховується у тесті тромбіноутворення із застосуванням сироватки гемофілії А.

Застосовуючи способи колориметричного кількісного аналізу можна оцінити активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП, конкретно - шляхом оцінювання її у системі вимірювання, яка включає мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу цього винаходу та, наприклад, синтетичний субстрат 5-2222 (синтетичний субстрат ЕХа) РіХа, ЕХ, та фосфоліпід. Наприклад, вимірювання можна виконувати за наступним способом. Усі реакції виконуються при кімнатній температурі. 5 мкл розчину антитіла, розведеного фізіологічним розчином з Тгіз-буфером, який містить 0,195 альбуміну бичачої сироватки (далі у цьому описі позначається як ТВ5В), змішують з 5 мкл фактора ІХа бета людини з концентрацією 150 нг/мл (Еп7уте Кезеагсі І абогайогієв), та цю суміш інкубують у планшеті з 384 лунками протягом 30 хвилин при кімнатній температурі.

Ферментативну реакцію у цій суміші ініціюють шляхом додавання 5 мкл фактора Х людини з концентрацією 24,7 мкг/мл (Еп7уте Кезеагсі І арогайгіез5), та через чотири хвилини реакцію припиняють шляхом додавання 5 мкл 0,5 М ЕОТА (ЕДТК). Хромогенну реакцію ініціюють шляхом додавання 5 мкл розчину хромогенного субстрату. Після 30 хвилин хромогенної реакції вимірюють зміну поглинання при 405 нм із застосуванням ЗресітоМах 340РСЗ84 (Моїіесшаг

Оемісевз). Розчинник фактора ІХа бета людини та фактора Х людини - це ТВ5В, що містить 4,0

МКМ фосфоліпідний розчин (5У5МЕХ СО.) та 1,5 мМ Сасі». 5-2222 (5БЕКІБІОЇ МЕПІСАЇ), який розчинюють в очищеній воді, щоб отримати розчин хромогенного субстрату при 1,47 мг/мл, та це застосовують у цьому аналізі. Ця система вимірювання демонструє кореляцію із суворістю хвороби та клінічним симптомом у випадках гемофілії А (Возеп 5, Апаеєгтззоп М, Віотбраск М еї а). Сіїпіса! арріісайноп5 ої а спготодепіс зибз5ігаїе теїнса ог деїгептіпайоп ої ЕМП асімпу. Тиготр

Наєтозві 1985; 54: 811-23).

Застосовуючи тест тромбіноутворення, активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ можна оцінити, специфічно, шляхом застосування системи вимірювання, яка включає мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу цього винаходу та, наприклад, плазму з дефіцитом ЕМІІ, активований фактор коагуляції крові ХІ, фосфоліпід, РІпо-буфер та Рійо- субстрат (РіиСа-Кі; синтетичний субстрат тромбіну). Наприклад, вимірювання можна виконувати за наступним способом. 8 мкл біспецифічного антитіла, розведеного ТВ5В, додають до 72 мкл плазми з дефіцитом ЕМ (Сеогде Кіпд), та цю суміш інкубують протягом 30 хвилин або більше при кімнатній температурі. Після цього додають 20 мкл тригерного розчину, що містить 20 мкМ фосфоліпід та 5 нг/мл фактора Хіа людини (Еп7уте Кезеагсі Іарогаїйогієв5).

Потім ініціюють реакцію коагуляції шляхом додавання 20 мкл змішаного розчину РІпо-буферу та

Еіно-субстрату БРіиСа-КИ («ТНготбБіпозсоре). Кількість утвореного тромбіну можна оцінити, застосовуючи вимірювання флюоресценції тромбіноутворення та систему аналізу (Тпготбіпозсоре). Тест тромбіноутворення із застосуванням плазми гемофілії А показує загальну активність коагуляції у випадку гемофілії А та кореляцію з клінічним симптомом хвороби |Зпіта М, Маївитоїо Т 5 Одіжага К. Мем аззаувз їТог топіюгіпу паеторніїа ігеаїтепі.

Наєеторпіїа 2008; 14: 83-92).

Термін "активність пригнічувати активацію РІХ" означає зниження поглинання в реакції активації РІХ за допомогою ЕХіа із застосуванням способу колориметричного кількісного аналізу. Конкретно здійснюється наступний спосіб. 5 мкл розчину антитіла, розведеного ТВ5В, змішують з 5 мкл фактора ІХ людини з концентрацією З одиниці/мл (СНгізітавз5іп М, дарап Віоса

Ргодисів Огдапілгаїййопі, та цю суміш інкубують у планшеті з 384 лунками протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Ферментативну реакцію у цій суміші розпочинають шляхом додавання 5 мкл фактора Хіа людини з концентрацією 90 нг/мл (Епгуте Кезеагсі І абогасогіє5), та через 60 хвилин реакцію припиняють шляхом додавання 5 мкл 0,5 М ЕОТА (ЕДТК). Хромогенну реакцію ініціюють шляхом додавання 10 мкл розчину хромогенного субстрату. Через 60 хвилин хромогенної реакції вимірюють зміну поглинання при 405 нм із застосуванням ЗресігоМах 340РСЗ384 (МоїІесшаг Оемісез). Розчинник фактора ІХ людини та фактора Хіа людини - це ТВ5В, що містить 6,0 мкМ фосфоліпідний розчин (5УЗ5МЕХ СО.) та 1,5 мМ Сасі». Спектрозим РіІХа (ЗекКкізциі Оіадповіїс5), який розчинюють в очищеній воді, щоб отримати розчин хромогенного субстрату при 6,7 мМ, та це змішують з етиленгліколем у пропорції 5:8 та застосовують у цьому аналізі.

Посилаючись на (05 2014/0080153 (МО 2012/093704)|, зв'язування антитіла з позаклітинним матриксом (ЕСМ) можна оцінити за допомогою наступної процедури. Позаклітинний матрикс

РІпепої Кеа Егее (вільний феноловий червоний) (ВО Маїгіде! 26137013) розводять за допомогою

ТВ5 при 2 мг/мл та 5 мкл цього розчину додають краплями у центр кожної лунки охолодженого на льоді планшета для вимірювання за методом електрохемілюмінесценції (ЕХЛ (ЕС) (Г15Х8- 6, М50О високий зв'язок). Потім це закупорюють плівкою для планшетів та залишають стояти 60 протягом ночі при 4"С. Далі зразок антитіла розводять до 9 мкг/мл за допомогою АСЕ5З-Т (20 мМ

АСЕ5, 150 мм Масі, рН 7,4 або рН 5,68, з додаванням 0,0195 Тм'ееп 20). Вторинне антитіло розводять до 2 мкг/мл за допомогою ЕСІ ОВ (АСЕ5 з додаванням 0,195 В5А та 0,0195 Тмееп 20). 25 мкл розчину антитіла додають до планшета з круглим дном, де 50 мкл ЕСГОВ розподілено у кожну лунку аліквотами. Блокувальний буфер ЕХЛ (ЕСІ) видаляють з планшета з

ЕСМ, який містить блокувальний буфер ЕСІ,, шляхом його нахилення та до планшета додають 50 мкл кожного розчину антитіла, згаданого вище. Потім, це збовтують протягом години при кімнатній температурі. Після видалення зразка шляхом нахилення додають до кожної лунки 50 мкл 0,2595 глютеральдегіду (приготовлено з АСЕ5-Т) та залишають стояти протягом 10 хвилин при кімнатній температурі. Кожну лунку промивають тричі РВ5-Ї (РВ5 з додаванням 0,0595

Тмееп 20), та до кожної лунки додають 50 мкл вторинного антитіла, розведеного ЕСІ ОВ до 1 мкг/мл, та це збовтують протягом години при кімнатній температурі без доступу світла. Потім 150 мкл буферу КЕАО (М50) додають до кожної лунки та детектують сигнал випромінювання світла сульфо-міткою, застосовуючи МЕБО 5ЕСТОК 5600 |Мезо Зсаїе Оізсомегу|.

Е. Фармацевтичні склади

Фармацевтичні склади мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з

КІХ та/або РіІХа та ЕХ, як описано у цьому описі, отримують у формі ліофілізованих складів або водних розчинів шляхом змішування такої мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка має бажану ступінь чистоти, з одним або декількома довільними фармацевтично прийнятними носіями (Кетіпдіоп'є Рпаптасешіса! Зсіепсез 161й еайіоп, Озої, А. Еа. (1980)|.

Фармацевтично прийнятні носії є зазвичай нетоксичними для реципієнта у дозах та концентраціях, що застосовуються, та вони включають, проте не обмежуються ними, буфери, такі як фосфат, цитрат та інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту та метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонію хлорид; гексаметонію хлорид; бензалконію хлорид; бензетонію хлорид; фенол; бутиловий або бензиловий спирт; алкілпарабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехол; резорцин; циклогексан; З-пентанол; та т-крезол); низькомолекулярні (менш ніж приблизно 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глютамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводні, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатори, такі як ЕОТА; цукри, такі як цукроза, маніт, трегалоза або сорбіт; протиіони, що утворюють солі, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, комплекси 7п-білок) та/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Приклади фармацевтично прийнятних носіїв у цьому описі далі включають засоби диспергування лікарських засобів у інтерстиціальному просторі, такі як розчинні нейтрально-активні глікопротеїни гіалуронідази (БНАБЕСР), наприклад, розчинні глікопротеїни гіалуронідази РН-20 людини, такі як гНиРН2го (НУ ЕМЕХ (зареєстрована торговельна марка), |(Вахієг Іпіегпайопа!, Іпс.Ї. Певні приклади

ЗНАБ5БЕОР та способи застосування, включаючи гНиРН2О, описані у (патентних публікаціях США

МоМо 2005/0260186 та 2006/0104968)|. В одному аспекті ЗНАБЕСР комбінується з одним або більше додатковими глікозамінгліканазами, такими як хондроїітинази.

Приклади ліофілізованих фармацевтичних складів антитіла описані у (патенті США Мо 6б,267,958). Водні фармацевтичні склади антитіла включають склади, (описані у патенті США Мо 6,171,586 та М/О2006/044908|, при цьому останні фармацевтичні склади включають гістидин- ацетатний буфер.

Фармацевтичний склад у цьому описі може також містити більш ніж один активний інгредієнт, якщо необхідно для особливого призначення, яке лікується, переважно активні інгредієнти з видами активності, які взаємно доповнюють одна одну та які шкідливо не впливають одна на одну. Наприклад, може бути бажаним далі включити ЕМП, ЕМІ, РІХ, інгібітор

ТЕРІ, антитромбін, спрямований на 5іРНК, конкретніше, це Адмаїгйєе, Адупомаїє, Реіра, Момобемеп,

МомоЕїідні, М8-СР, М9-СР, Сопсігитабр, ЕІосіа та Ейивзігап. Такі активні інгредієнти придатним чином присутні у комбінації у кількості, яка є ефективною для призначеної мети. ЕМІІЇ, ЕМІІ та

НІХ можуть включати їх сполуки, одержані шляхом злиття з Ес, та їх сполуки, одержані шляхом злиття з ПЕГ.

Активні інгредієнти можуть бути включені у мікрокапсули, приготовлені, наприклад, за способами коацервації або шляхом полімеризації на границі фаз, наприклад, мікрокапсули з гідроксиметилцелюлози або желатинові мікрокапсули та мікрокапсули з полі- (метилметакрилату), відповідно, у колоїдні системи доставки ліків (наприклад, ліпосоми, альбумінові мікрокульки, мікроемульсії, наночастинки та нанокапсули) або у макроемульсії. Такі способи описано у |Ветіпдіоп'є Рпагтасеціїса! Зсіепсев 161й еайіоп, О5ої, А. Еа. (1980)|.

Можна приготувати препарати з уповільненим вивільненням. Придатні приклади препаратів 60 з уповільненим вивільненням включають напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, які містять мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, при цьому матриці мають форму профільованих частинок, наприклад, плівок або мікрокапсул.

Склади, призначені для введення іп мімо, зазвичай є стерильними. Стерильності можна легко досягнути, наприклад, шляхом фільтрування крізь стерильні фільтраційні мембрани. б. Терапевтичні способи та композиції

Будь-яку мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка зв'язується з РІХ та/або РіІХа та ЕХ та яка пропонується у цьому описі, можна застосовувати у терапевтичних способах.

В одному аспекті пропонується мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, для застосування як лікарський засіб. У наступних аспектах пропонується мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з ГРІХ та/або

ЕІХа та ЕХ, для застосування під час лікування кровотечі, хвороби, що супроводжується кровотечею, або хвороби, спричиненої кровотечею. У певних варіантах здійснення пропонується мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з ГРІХ та/або

ЕІХа та ЕХ, для застосування у способі лікування. У певних варіантах здійснення винаходом пропонується мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з ГРІХ та/або

РІХа та ЕХ, для застосування у способі лікування індивідуума, який має кровотечу, хворобу, що супроводжується кровотечею, або хворобу, спричинену кровотечею, при цьому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ. В одному такому варіанті здійснення спосіб також передбачає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, наприклад, як описується нижче. У наступних варіантах здійснення винахід пропонує мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка зв'язується з РІХ та/або

РІХа та ЕХ, для застосування у заміщенні кофакторної функції ЕМ. У певних варіантах здійснення винаходом пропонується мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, для застосування у способі заміщення кофакторної функції

ЕМІЇЇ у індивідуума, при цьому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, для заміщення кофакторної функції ЕМ. "Індивідуум" згідно з будь-яким вищезазначеним варіантом здійснення - це переважно людина. У цьому винаході "кровотеча, хвороба, що супроводжується кровотечею, або хвороба, спричинена кровотечею" - це переважно хвороба, яка виникає та/або прогресує внаслідок зниження або дефіциту активності ЕМ та/або активованого фактора коагуляції крові МИ! (ЕМІШа). Така хвороба включає вищезгадану гемофілію А, гемофілію В, гемофілію С, хворобу з виникненням інгібітору проти ЕМШ/ЕМШа, набуту гемофілію та хворобу Вілебранда, проте хвороба не обмежується ними.

У наступному аспекті винаходом пропонується мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ, для застосування у виробництві або приготуванні лікарського препарату. В одному варіанті здійснення лікарський препарат призначений для лікування кровотечі, хвороби, що супроводжується кровотечею, або хвороби, спричиненої кровотечею. У наступному варіанті здійснення лікарський препарат призначений для застосування у способі лікування кровотечі, хвороби, що супроводжується кровотечею, або хвороби, спричиненої кровотечею, при цьому спосіб передбачає введення індивідууму, який має кровотечу, хворобу, що супроводжується кровотечею, або хворобу, спричинену кровотечею, ефективної кількості лікарського препарату. В одному такому варіанті здійснення спосіб також передбачає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, наприклад, як описано нижче. У наступному варіанті здійснення лікарський препарат призначений для заміщення кофакторної функції ЕМ. У наступному варіанті здійснення лікарський препарат призначений для застосування у способі заміщення кофакторної функції ЕМ у індивідуума, при цьому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості лікарського препарату для заміщення кофакторної функції

ЕМП. "Індивідуум" згідно з будь-яким вищезазначеним варіантом здійснення може бути людиною. У цьому винаході "кровотеча, хвороба, що супроводжується кровотечею, або хвороба, спричинена кровотечею" - це переважно хвороба, яка виникає та/або прогресує внаслідок зниження або дефіциту активності ЕМП та/або ЕМІШа. Така хвороба включає вищезгадану гемофілію А, гемофілію В, гемофілію С, хворобу з виникненням інгібітору проти

ЕМП/ЕМІШа, набуту гемофілію та хворобу Вілебранда, проте хвороба не обмежується ними.

У наступному аспекті винаходом пропонується спосіб лікування кровотечі, хвороби, що супроводжується кровотечею, або хвороби, спричиненої кровотечею. В одному варіанті здійснення спосіб передбачає введення індивідууму, який має кровотечу, хворобу, що супроводжується кровотечею, або хворобу, спричинену кровотечею, ефективної кількості 60 мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з РІХ та/або РіІХа та ЕХ. В одному такому варіанті здійснення спосіб також передбачає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, як описується нижче. "Індивідуум" згідно з будь-яким вищезазначеним варіантом здійснення може бути людиною.

У наступному аспекті винаходом пропонується спосіб заміщення кофакторної функції ЕМП у індивідуума. В одному варіанті здійснення спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з ГРІХ та/або РІХа та ЕХ, для заміщення кофакторної функції ЕМІІІ. В одному варіанті здійснення "індивідуум" - це людина.

У наступному аспекті винаходом пропонуються фармацевтичні склади, які містять мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ та яка пропонується у цьому описі, наприклад, для застосування у будь-якому вищеописаному способі лікування. В одному варіанті здійснення фармацевтичний склад містить будь-яку з мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул, що зв'язуються з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ та які пропонується у цьому описі, та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення фармацевтичний склад містить будь-яку з мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул, що зв'язуються з РБІХ та/або РіХа та ЕХ та які пропонуються у цьому описі, та щонайменше один додатковий терапевтичний агент, наприклад, як описується нижче.

Мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу цього винаходу можна застосовувати у терапії самостійно або у комбінації з іншими агентами. Наприклад, антитіло винаходу можна вводити разом з щонайменше одним додатковим терапевтичним агентом. У певних варіантах здійснення додатковий терапевтичний агент - це, наприклад, ЕМ, ЕМІЇ, РІХ, інгібітор ТЕРІ, антитромбін, спрямований на міРНК (зікМА); конкретніше, це Адймаїе, Адупомаїеє, Реїба,

Момобемеп, МомоЕБїідні, М8-СР, М9-ОР, Сопсігитаб, ЕІосіа та Ейивігап. ЕМП, ЕМІ та РІХ можуть бути їх сполуками, одержаними шляхом злиття з Ес, та їх сполуками, одержаними шляхом злиття з ПЕГ.

Така вищезазначена комбінована терапія охоплює комбіноване введення (коли два або більше терапевтичних агентів включено в один і той же склад або в окремі фармацевтичні склади) та окреме введення, у випадку якого введення мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули винаходу може здійснюватися до початку, одночасно та/або після введення додаткового терапевтичного агента або агентів. В одному варіанті здійснення введення мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіІХа та ЕХ, та введення додаткового терапевтичного агента здійснюють у межах приблизно одного місяця, двох місяців, трьох місяців, чотирьох місяців, п'яти місяців або шести місяців, або у межах приблизно одного, двох або трьох тижнів або у межах приблизно одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести днів одне від одного.

Мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу винаходу (та будь-який додатковий терапевтичний агент) можна вводити будь-яким придатним способом, включаючи парентеральне, внутрішньолегеневе та внутрішньоназальне введення, та, якщо є бажаним місцеве лікування, здійснюють введення усередину пошкодженої ділянки. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне введення, введення в артерію, внутрішньочеревне або підшкірне введення. Введення дози можна виконувати будь-яким придатним способом, наприклад, шляхом ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, частково залежно від того, чи є введення короткочасним або тривалим. У цьому описі передбачаються різноманітні схеми дозування, включаючи, проте не обмежуючись ними, єдине або багаторазові введення на різних часових точках, болюсне введення та імпульсну інфузію.

Мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули цього винаходу будуть виготовлятися у вигляді лікарського засобу, дозуватися та вводитися за способом, що узгоджується з гарною медичною практикою. Фактори, які слід враховувати у цьому контексті, включають певний розлад, який лікується, певного ссавця, якого лікують, клінічний стан окремого пацієнта, причину розладу, ділянку доставки агента, спосіб введення, схеми введення та інші фактори, відомі практикуючим лікарям.

Мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу необов'язково, проте довільно, виготовляють у складі з одним або більше агентами, які на цей час використовуються для профілактики або лікування певного розладу. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, присутньої у складі, типу розладу або лікування та інших факторів, що обговорюються вище. Вони взагалі застосовуються у тих самих дозах та вводяться такими самими способами, як описано у цьому описі, або вони приблизно становлять від 1ї до 9995 від доз, описаних у цьому описі, або застосовуються у будь-якій дозі та вводяться будь-яким способом, які емпірично/клінічно 60 визначаються як відповідні.

Для профілактики або лікування хвороби відповідна доза мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули винаходу (коли застосовується самостійно або у комбінації з одним або більше додатковими терапевтичними агентами) залежатиме від типу хвороби, яку слід лікувати, типу мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, суворості та перебігу хвороби, а також від того, чи вводиться мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула з метою профілактики або лікування, попередньої терапії, клінічного анамнезу пацієнта та реакції на антитіло, та на розсуд лікаря, що лікує. Мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула придатним чином вводиться пацієнтові за один раз або протягом курсу лікування. Залежно від типу та суворості хвороби приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1 мг/кг - 10 мг/кг) мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули можуть бути початковою дозою-кандидатом для введення пацієнтові, або, наприклад, шляхом одного введення, або більшої кількості введень, або шляхом безперервної інфузії. Одна звичайна щоденна доза може становити діапазон від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від згаданих вище факторів.

Для повторного введення протягом декількох днів або довше, залежно від стану, лікування взагалі буде підтримуватися, доки не виникне бажане пригнічення симптомів хвороби. Один приклад дози мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули становитиме діапазон від приблизно 0,05 мг/кг до приблизно 10 мг/кг. Отже, пацієнтові може вводитися одна або більше доз, які становлять приблизно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг або 10 мг/кг (або будь-яка їх комбінація). Такі дози можуть вводитися з проміжками, наприклад, кожного тижня або кожні три тижні (наприклад так, що пацієнт отримує від приблизно двох до приблизно двадцяти або, наприклад, приблизно шість доз мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули). Можна вводити початкову вищу навантажувальну дозу з наступним введенням однієї або більше нижчих доз. Однак, корисними можуть бути й інші схеми прийому. Прогрес цього лікування легко відстежується за допомогою традиційних способів та аналізів.

Зрозуміло, що будь-які з вищезгаданих фармацевтичних складів або терапевтичних способів можна виконувати, застосовуючи імунокон'югат цього винаходу замість або на додаток до мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка зв'язується з ГРІХ та/або РіХа та ЕХ.

Н. Промислові вироби

В іншому аспекті винаходу пропонується промисловий виріб, який містить матеріали, корисні для лікування, профілактики та/або діагностування розладів, описаних вище.

Промисловий виріб включає контейнер та етикетку на упаковці або інструкцію з використання, пов'язану з контейнером. Придатні контейнери включають, наприклад, пляшки, ампули, шприци, мішки для внутрішньовенних розчинів тощо. Контейнери можуть бути виготовлені з різноманітних матеріалів, таких як скло або пластмаса. Контейнер містить композицію, яка є самостійною або яка скомбінована з іншою композицією, ефективною для лікування, профілактики та/або діагностування стану, та він може мати отвір для стерильного доступу (наприклад, контейнер може бути мішком для внутрішньовенного розчину або може бути пляшечкою, яка має пробку, проникну для голки для підшкірної ін'єкції. Щонайменше один активний інгредієнт у композиції - це мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула винаходу. Етикетка або інструкція з використання вказує, що композиція застосовується для лікування вибраного стану. Крім того, промисловий вибір може включати (а) перший контейнер з композицією, що міститься у ньому, де композиція містить мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу винаходу; та (Б) другий контейнер з композицією, що міститься у ньому, де композиція містить додатковий цитотоксичний агент або терапевтичний агент іншої дії. Промисловий виріб у цьому варіанті здійснення винаходу може також включати інструкцію з використання, яка вказує, що композиції можна застосовувати для лікування певного стану.

Альтернативно або додатково промисловий виріб може також включати другий (або третій) контейнер, який містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як бактеріостатична вода для ін'єкції (ВУМУРІ), сольовий розчин з фосфатним буфером, розчин Рингера та розчин декстрози.

Він може також включати інші матеріали, бажані з комерційної точки зору та з точки зору користувача, включаючи інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки та шприци.

Інший варіант здійснення цього винаходу стосується мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, у якій асоціація важкого ланцюга та легкого ланцюга регулюється, способу виробництва мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, у якій асоціація важкого ланцюга та легкого ланцюга регулюється, та способу регулювання асоціації важкого ланцюга та легкого ланцюга в антигензв'язувальній молекулі.

Антигензв'язувальна молекула цього винаходу стосується антигензв'язувальної молекули, у якій асоціація важкого ланцюга та легкого ланцюга регулюється, у якій важкий ланцюг та легкий ланцюг, які складають антигензв'язувальну молекулу, - це комбінація важкого ланцюга та 60 легкого ланцюга, які представляють інтерес, та у якій амінокислотні залишки на заданих місцях у константній ділянці важкого ланцюга (СНІ) та константній ділянці легкого ланцюга (СІ) - це амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються (мають однаковий заряд).

У цьому винаході, перетворюючи амінокислотні залишки у заданих локалізаціях у СНІ та СІ. небажаної комбінації важкого ланцюга та легкого ланцюга на амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються (тобто, які мають однаковий заряд), можна запобігти утворенню небажаних комбінацій важкого ланцюга та легкого ланцюга, застосовуючи це відштовхування зарядів, та, як наслідок, можна створити бажану комбінацію важкого та легкого ланцюгів.

У цьому винаході фрази "регулювати асоціацію" та "асоціація регулюється" означають регулювання з метою досягти бажаної умови асоціації та конкретніше означають таке регулювання, щоб між важким ланцюгом та легким ланцюгом не утворювалися небажані асоціації.

У цьому винаході термін "границя контакту" зазвичай означає поверхню асоціації, яка є наслідком асоціації (взаємодії), та амінокислотні залишки, які утворюють границю контакту -- це, зазвичай, один або більше амінокислотних залишків, включених у поліпептидні ділянки, які беруть участь в асоціації, та, переважніше, амінокислотні залишки, які наближаються один до одного під час асоціації та залучаються у взаємодію. Конкретніше ця взаємодія включає, наприклад, випадки, коли амінокислотні залишки зближуються під час асоціації, утворюючи один з одним водневі зв'язки, електростатичні взаємодії або сольові містки.

У цьому винаході фраза "амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту" конкретніше означає амінокислотні залишки, включені у поліпептидну ділянку, яка утворює границю контакту. Наприклад, поліпептидні ділянки, які утворюють границю контакту, означають поліпептидні ділянки, що відповідають за селективне зв'язування між молекулами, такими як антигензв'язувальні молекули (наприклад, антитіла), ліганди, рецептори або субстрати.

Конкретніше, в антигензв'язувальних молекулах такі приклади включають константні ділянки важкого ланцюга, варіабельні ділянки важкого ланцюга, константні ділянки легкого ланцюга та варіабельні ділянки легкого ланцюга. "Модифікація" в амінокислотних залишках у цьому винаході специфічно означає заміну оригінального (оригінальних) амінокислотного (амінокислотних) залишку (залишків) іншим (іншими) амінокислотним (амінокислотними) залишком (залишками), делецію оригінального (оригінальних) амінокислотного (амінокислотних) залишку (залишків), додавання нового (нових) амінокислотного (амінокислотних) залишку (залишків) та їм подібне, проте переважно означає заміну одного або більше оригінальних амінокислотних залишків іншими амінокислотними залишками.

У переважному варіанті здійснення антигензв'язувальної молекули цього винаходу антигензв'язувальна молекула до початку регулювання асоціації має амінокислотні залишки у заданих локалізаціях у СНІ та СІ. небажаної комбінації важкого ланцюга та легкого ланцюга, які електрично відштовхуються (які мають однаковий заряд).

Внаслідок модифікування амінокислотних залишків у вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі на амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються (мають однаковий заряд), вважають, що асоціація цих амінокислотних залишків пригнічується силою відштовхування електричних зарядів.

Отже, у вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі модифіковані амінокислотні залишки - це переважно амінокислотні залишки, які наближаються один до одного під час асоціації у поліпептидних ділянках, що утворюють границю контакту.

Амінокислотні залишки, які наближаються під час асоціації, можна визначити за допомогою, наприклад, аналізу тривимірної структури поліпептиду та досліджування амінокислотних послідовностей поліпептидних ділянок, які утворюють границю контакту під час асоціації поліпептидів. Амінокислотні залишки на границі контакту, які взаємно наближуються один до одного, є переважними мішенями для "модифікації в антигензв'язувальній молекулі цього винаходу.

Відомо, що деякі амінокислоти мають електричний заряд. Взагалі відомо, що лізин («К), аргінін «К) та гістидин (Н) - це амінокислоти, які мають позитивний заряд (позитивно заряджені амінокислоти). Відомо, що аспарагінова кислота (0), глютамінова кислота (Е) та їм подібне - це амінокислоти, що мають негативний заряд (негативно заряджені амінокислоти). Крім того, відомо, що аланін (А), аспарагін (М), цистеїн (С), глютамін (0), гліцин (С), ізолейцин (І), лейцин (У), метіонін (М), фенілаланін (ЕР), пролін (Р), серин (5), треонін (Т), триптофан (М/), тирозин (У), валін (М) та їм подібне -- це амінокислоти, які не мають заряду, або неполярні амінокислоти.

Отже, амінокислоти, які взаємно електрично відштовхуються (мають однаковий заряд), у бо цьому винаході означають:

(1) амінокислоти, у яких одна з амінокислот є позитивно зарядженою амінокислотою та інша амінокислота є також позитивно зарядженою амінокислотою, та (2) амінокислоти, у яких одна з амінокислот є негативно зарядженою амінокислотою та інша амінокислота є також негативно зарядженою амінокислотою.

Амінокислоти можна модифікувати згідно з різноманітними способами, відомими у цій галузі.

Приклади цих способів включають, проте не обмежуються ними, сайт-спрямований мутагенез

ІНазпітоїо-Соїой, Т., Мігипо, Т., Одазанага, М. апа МаКадамжша, М. (1995) Ап оЇїїдодеохугірописіеоїіде-аїгесієа аца! атбег теїнса ог з5йе-аігесієд тиіадепевзів, Сепе 152, 271- 275; 2оПег, М.). апа тій, М. (1983) ОІідописіеоііде-аіїесівєй тшадепезіз ої ОМА падтепів сіопей іпіо М1З3 месіої5, Мештоав5 Епгутої. 100, 468-500; Ктате"г, МУ., Огиїва, М., дапзеп, НМУ.,

Ктате"г, В., РІПшотедег, М. апа гій, Н.). (1984) Те даррей аиріеєх ОМА арргоаси (ії оїїдописіеоїіде-аігесівєй тиайоп сопвігисіоп, Мисієїс Асіаз Нев. 12, 9441-9456; Ктате", МУ. апа

Ей, Н.). (1987) Оіїдописіеоїіае-аїкесієй сопвігосіїоп ої тшиїайопз5 міа зарреа диріеєх ОМА, Меїнсоаз

Епгутої. 154, 350-367; Кипкеї, Т.А. (1985) Наріа апа ейісіепі зіе-5ресіїс тшадепевів міо рНепоїуріс зеІесійоп, Ргос. Маї!. Асай. сі. ОБА 82, 488-492)|, мутагенез ПЛР, касетний мутагенез тощо.

Приклади амінокислотних модифікацій включають модифікацію незарядженої амінокислоти або неполярної амінокислоти на позитивно заряджену амінокислоту, модифікацію незарядженої амінокислоти або неполярної амінокислоти на негативно заряджену амінокислоту, модифікацію позитивно зарядженої амінокислоти на негативно заряджену амінокислоту та модифікацію негативно зарядженої амінокислоти на позитивно заряджену амінокислоту. Крім того, до амінокислотних модифікацій цього винаходу також включено модифікацію незарядженої амінокислоти або неполярної амінокислоти на іншу незаряджену амінокислоту або неполярну амінокислоту, модифікацію позитивно зарядженої амінокислоти на іншу позитивно заряджену амінокислоту та модифікацію негативно зарядженої амінокислоти на іншу негативно заряджену амінокислоту.

Модифікування амінокислот у цьому винаході включає здійснення однієї модифікації у кожному з важкого та легкого ланцюгів або здійснення численних модифікацій у кожному з важкого та легкого ланцюгів. Крім того, кількість модифікацій, що робляться у важкому ланцюзі та легкому ланцюзі, може бути однаковою або відмінною.

Модифікування амінокислот у цьому винаході включає здійснення численних модифікацій позитивно заряджених амінокислот або на важкому ланцюзі, або на легкому ланцюзі, та здійснення численних модифікацій негативно заряджених амінокислот на іншому ланцюзі. Крім того, можна здійснювати численні модифікації позитивно заряджених амінокислот, а також численні модифікації негативно заряджених амінокислот на одному й тому ж важкому ланцюзі або легкому ланцюзі. У цих модифікаціях можна також придатним чином комбінувати модифікації незаряджених амінокислот або неполярних амінокислот, а також модифікації незаряджених амінокислот або неполярних амінокислот.

У модифікаціях цього винаходу, наприклад, амінокислоти на одному з ланцюгів можна використовувати так, мовби вони не модифікуються, та у таких випадках необов'язково модифікувати і важкий ланцюг, і легкий ланцюг, та можна модифікувати лише один з ланцюгів.

Хоча не існує певних обмежень щодо кількості амінокислотних залишків, які піддаються модифікації в антигензв'язувальній молекулі цього винаходу, наприклад, коли модифікується константна ділянка антитіла, для того, щоб знизити зв'язувальну активність з антигеном та не підвищити імуногенність, переважно модифікувати настільки мало амінокислотних залишків, наскільки це можливо. Вищезгадане "мало" означає, наприклад, кількість від приблизно 1 до 30, переважно кількість від 1 до 20, навіть переважніше кількість від 1 до 15 та найпереважніше кількість від 1 до 5.

Константна ділянка легкого ланцюга антигензв'язувальної молекули цього винаходу - це переважно константна ділянка легкого ланцюга людини. Приклади константної ділянки легкого ланцюга включають константні ділянки типу ІдК (каппа), Іді-1, 19412, Ід І-3, Іді 6 та Іді 7 (лямбда).

Константна ділянка легкого ланцюга антигензв'язувальної молекули цього винаходу особливо не обмежується; коли застосовуються численні типи легких ланцюгів, тоді легкі ланцюги можуть бути легкими ланцюгами різних типів, наприклад, каппа та лямбода. Декілька послідовностей алотипів, отриманих внаслідок генетичного поліморфізму, описано у (Зедиепсев ої Ргоївїп5 ої

Іттипо!одісаї! Іпіегеві, МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242|, як константна ділянка ІдК (каппа) людини та константна ділянка Іді 7 (лямбда) людини, та будь-які з них можна використовувати у цьому винаході.

Константні ділянки антитіла, зокрема, константні ділянки важкого ланцюга можна, за 60 необхідності, модифікувати для того, щоб покращити функцію або стабільність антигензв'язувальної молекули. Приклади модифікацій для покращення / функції антигензв'язувальної молекули включають модифікації, які зміцнюють або ослаблюють зв'язування між антигензв'язувальною молекулою та рецептором Есу (Есук), модифікації, які зміцнюють або ослаблюють зв'язування між антигензв'язувальною молекулою та ЕсКп, модифікації, які зміцнюють або ослаблюють цитотоксичну активність (таку як активність АОСС та активність СОС) антигензв'язувальної молекули, та їм подібні. Крім того, також можуть бути включені модифікації, які покращують гетерогенність антигензв'язувальної молекули, та модифікації, які покращують імуногенність та/або фармакокінетичні параметри.

Крім того, стосовно гетерогенності С-кінцевої послідовності важкого ланцюга антитіла до повідомлялося |Апаі. Віоспет. 2007 ап 1:360(1):75-83| про амідування С-кінцевої карбоксильної групи шляхом делеції С-кінцевої амінокислоти, лізину, або шляхом делеції двох

С-кінцевих амінокислот, гліцину та лізину.

Отже, у цьому винаході, для того, щоб знизити гетерогенність С-кінця важкого ланцюга, переважно застосовувати Ідс, у якому стерто С-кінцевий лізин або С-кінцеві лізин та гліцин.

Оскільки їх антигенність в організмі людини була ослаблена, то очікують, що химерні та гуманізовані антитіла, які застосовують похідні від людини послідовності, будуть корисними при введенні людям для терапевтичних цілей або їм подібного.

Переважний приклад антигензв'язувальної молекули цього винаходу - це гетеромерний мультимер, що має два або більше типів СНІ та два або більше типів СІ. Цей гетеромерний мультимер переважно зв'язується з двома або більше типами епітопів, та його приклад - це мультиспецифічне антитіло.

Переважний приклад мультиспецифічного антитіла цього винаходу - це біспецифічне антитіло. Отже, переважний варіант здійснення антигензв'язувальної молекули цього винаходу - це біспецифічне антитіло, що складається з двох типів важких ланцюгів (першого важкого ланцюга та другого важкого ланцюга) та двох типів легких ланцюгів) першого легкого ланцюга та другого легкого ланцюга).

У точнішому описі "біспецифічних антитіл" переважних варіантів здійснення антигензв'язувальних молекул цього винаходу вищезгаданий "перший важкий ланцюг" означає один з двох важких ланцюгів (Н-ланцюгів), що утворюють антитіло, та "другий важкий ланцюг" означає інший Н-ланцюг, що відрізняється від першого Н-ланцюга. Тобто, з двох Н-ланцюгів один з них можна довільно визначити як перший Н-ланцюг, а інший можна визначити як другий

Н-ланцюг. Подібно до цього, "перший легкий ланцюг" означає один з двох легких ланцюгів (І - ланцюгів), що утворюють біспецифічне антитіло, та "другий І- ланцюг" означає відмінний від першого І -ланцюг. З двох І -ланцюгів один з них можна довільно визначити як перший І -ланцюг, а інший можна визначити як другий І -ланцюг. Зазвичай, перший І -ланцюг та перший Н-ланцюг походять від одного й того ж антитіла, яке зв'язується з певним антигеном (або епітопом), та другий І-ланцюг та другий Н-ланцюг також походять від одного й того ж антитіла, яке зв'язується з певним антигеном (або епітопом). У цьому описі пара І-ланцюг-Н-ланцюг, утворена першими Н-ланцюгом та І -ланцюгом, називається першою парою, а пара І -ланцюг-Н- ланцюг, утворена другими Н-ланцюгом та І -ланцюгом, називається другою парою. Антиген (або епітоп), що використовується для отримання антитіла, з якого походить друга пара, переважно відрізняється від антигену, який використовується для отримання антитіла, з якого походить перша пара. Конкретніше, антигени, що розпізнаються першою парою та другою парою, можуть бути одним і тим же антигеном, але переважно, щоб пари зв'язувалися з відмінними антигенами (або епітопами). У цьому випадку Н-ланцюги та І-ланцюги першої пари та другої пари переважно мають амінокислотні послідовності, які відрізняються одна від одної. Коли перша пара та друга пара зв'язуються з різними епітопами, то перша пара та друга пара можуть розпізнавати повністю відмінний антиген, або вони можуть розпізнавати відмінні ділянки (відмінні епітопи) на одному й тому ж антигені. Крім того, одна з них може розпізнавати антиген, такий як білок, пептид, ген або цукор, а інша може розпізнавати цитотоксичні речовини, такі як радіоактивні речовини, хіміотерапевтичні агенти або похідні від клітин токсини. Проте, коли бажають отримати антитіло, яке має пари, утворені специфічними комбінаціями Н-ланцюгів та

Ї -ланцюгів, тоді ці специфічні Н-ланцюги та І-ланцюги можна довільно визначити, як першу пару та другу пару.

Докладніше пояснення наведено нижче щодо випадку біспецифічного антитіла типу Ідс, яке має два типи константних ділянок важкого ланцюга СНІ (СНІ-А та СНІ-В) та два типи константних ділянок легкого ланцюга (СІ -А та СІ -В); проте цей винахід можна подібним чином застосовувати також і до інших антитіл.

Коли бажають отримати біспецифічне антитіло, яке розпізнаватиме один епітоп першою 60 СНІ-А та першою СІ-А та зв'язуватиметься з іншим епітопом другою СНІ1-В та другою СІ -В,

тоді теоретично існує ймовірність, що можна отримати 10 типів молекул антитіла, де кожен з чотирьох типів ланцюгів експресується для виробництва антитіла.

У цьому випадку бажані молекули антитіла можна переважно набути, якщо, наприклад, асоціація регулюється так, що асоціація СН1-А та СІ -В та/або між СНІ1-В та СІ -А пригнічується.

Приклад - це модифікування амінокислотних залишків, які утворюють границю контакту між

СНІ-А та СІ-В, на позитивно заряджені амінокислотні залишки та модифікування амінокислотних залишків, які утворюють границю контакту між СНІ-В та СІ-А на негативно заряджені амінокислотні залишки. Внаслідок цих модифікацій пригнічується небажана асоціація між СНІ1І-А та СІ-В, оскільки амінокислотні залишки, які утворюють границю контакту, є обидва позитивно зарядженими, та асоціація між СНІ-В та СІ-А також пригнічується, оскільки амінокислотні залишки, які утворюють границю контакту, є обидва негативно зарядженими.

Отже, небажана асоціація між СНІ-А та СІ-В та небажана асоціація між СНІ1-В та СІ-А пригнічуються, оскільки амінокислотні залишки, які утворюють границі контакту, взаємно мають однаковий заряд. Як наслідок, можна ефективно набути антитіла, які мають бажану асоціацію між СНІ-А та СІ-А та бажану асоціацію між СНІ1-В та СІ -В. Крім того, бажана асоціація між

СНІ-А та СІ-А відбувається за сприятливих умов, оскільки амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту, мають відміні один від одного типи зарядів; та бажана асоціація між СНІ1-В та СІ-В також відбувається за сприятливих умов, оскільки амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту, мають відміні один від одного типи зарядів. Отже, можна ефективно отримати антитіла з бажаною асоціацією.

Інший приклад - це модифікування амінокислотних залишків, що утворюють границю контакту між СНІ1І-А та СІ -В, на позитивно заряджені амінокислотні залишки, коли амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту між СІ-А та СНІ-В є взаємно незарядженими або неполярними амінокислотними залишками. Як наслідок такої модифікації, небажана асоціація між СНІ-А та СІ-В пригнічується, оскільки амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту є обидва позитивно зарядженими. З іншого боку, оскільки амінокислотні залишки, що утворюють границі контакту, - це амінокислоти, які взаємно електрично не відштовхуються, то бажана асоціація між СН1-А та СІ--А та бажана асоціація між СНІ1-В та СІ -В виникне легше, ніж у випадку, коли амінокислоти електрично відштовхуються. Отже, можна ефективно отримати антитіла, які мають бажану асоціацію між СНІ1-А та СІ -А та бажану асоціацію між СНІ1-В та СІ -

В. Між тим, у цьому прикладі, у випадку, коли амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту між СІ --А та СН1І-В, не є взаємно незарядженими або неполярними амінокислотами, їх можна модифікувати так, щоб вони стали взаємно незарядженими або неполярними амінокислотами.

Крім того, в іншому прикладі, коли амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту між СІ-В та СНІ1-В, є незарядженими або неполярними амінокислотами у СНІ1-В, тоді один з амінокислотних залишків, що утворює границю контакту між СНІ1-А та СІ-А, модифікується на позитивно заряджений амінокислотний залишок, тоді як інший модифікується на негативно заряджений амінокислотний залишок; та амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту між СІ-В та СНІ-В у СІ-В, модифікуються так, щоб мати однаковий заряд, що і модифікація, здійснена для СНІ-А. Як наслідок такої модифікації, у той час коли бажана асоціація між СНІ1-А та СІ -А відбувається за сприятливих умов, оскільки амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту, - це комбінація позитивного заряду та негативного заряду, бажана асоціація між СНІ-В та СІ-В не пригнічується, оскільки амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту, - це амінокислоти, які взаємно електрично не відштовхуються. Як наслідок, можна ефективно отримати антитіло, яке має бажану асоціацію між СНІ1-А та СІ -А та бажану асоціацію між СНІ1-В та СІ-В. Між тим, у цьому прикладі, коли амінокислотні залишки, що утворюють границю контакту між СІ -В та СНІ1-В, не є незарядженими або неполярними амінокислотами у СНІ-В, їх можна модифікувати так, щоб вони стали незарядженими або неполярними амінокислотами.

Крім того, застосування регуляції асоціації цього винаходу робить можливим пригнічувати асоціацію між СНІ (СНІ1-А та СНІ1І-В) або асоціацію між СІ (СІ -А та СІ -В).

Фахівці у цій галузі зможуть придатним чином визначити типи амінокислотних залишків, які зближуються під час асоціації на границі контакту СНІ та Сі. у бажаному поліпептиді, для якого бажано здійснити регуляцію асоціації за допомогою цього винаходу.

Крім того, фахівці у цій галузі зможуть також придатним чином отримати послідовності, які можна застосовувати як СНІ або Сі антитіла в організмі, такому як людина, мавпа, миша, кроль та їм подібне, застосовуючи публічну базу даних та їй подібне. Конкретніше, інформацію щодо амінокислотних послідовностей СНІ або Сі можна отримати за допомогою засобів, бо описаних у прикладах, наведених нижче.

Наприклад, стосовно біспецифічних антитіл, описаних у прикладах нижче, специфічні приклади амінокислотних залишків, які зближуються (які зустрічаються або контактують) на границі контакту СНІ та Сі після асоціації, включають комбінації, наведені нижче: - глютамін (0) на позиції 175 згідно з нумерацією БО у СНІ та зустрічний (контактуючий) треонін (Т) або серин (5) на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат у СІ; - глютамін (0) на позиції 175 згідно з нумерацією БО у СНІ та зустрічний (контактуючий) треонін (Т) або серин (5) на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат у СІ; - глютамін (0) на позиції 175 згідно з нумерацією БО у СНІ та зустрічний (контактуючий) серин (5) або треонін (Т) на позиції 131 та серин (5) або треонін (Т) на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат у Сі; та - лізин (К) на позиції 147 та глютамін (0) на позиції 175 згідно з нумерацією ЕЄО у СНІ та зустрічний (контактуючий) серин (5) або треонін (Т) на позиції 131 та серин (5) або треонін (Т) на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат у СІ.

Числа, наведені у нумерації ЕО у цьому винаході, вказані згідно з нумерацією ЕМО

ІбБеднепсез ої ргоївіпв ої іттипоіодіса! іпіегезі, МІН Рибіїсайоп Мо. 91-32421. У цьому винаході фрази "амінокислотний залишок на позиції Х згідно з нумерацією ЕО" та "амінокислота на позиції Х згідно з нумерацією ЕЕ" (де Х - це довільне число) можна також тлумачити як "амінокислотний залишок який відповідає позиції Х згідно з нумерацією ЕМО" та "амінокислота, яка відповідає позиції Х згідно з нумерацією ЕЕ". Як вказується у прикладах, описаних нижче, бажані антигензв'язувальні молекули можна з перевагою набути шляхом модифікування цих амінокислотних залишків та шляхом здійснювання способів цього винаходу.

У варіанті здійснення цим винаходом пропонується антигензв'язувальна молекула, у якій регулюється асоціація важкого ланцюга та легкого ланцюга, де один, або два, або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених від (а) до (с) нижче, у важкому ланцюгу та легкому ланцюгу антигензв'язувальної молекули - це амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються: (а) амінокислотний залишок, що міститься у СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, та амінокислотний залишок, що міститься у Сі. на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат; (Б) амінокислотний залишок, що міститься у СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією Є, та амінокислотний залишок, що міститься у Сі на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат; та (с) амінокислотні залишки, що містяться у СНІ на позиціях 147 та 175 згідно з нумерацією

Е), та амінокислотні залишки, що містяться у Сі. на позиціях 131 та 180 згідно з нумерацією за

Кабат;

У вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі "амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються" або "амінокислотні залишки, що мають однаковий заряд" переважно вибрані з амінокислотних залишків, які містяться у, наприклад, або наборі (Х), або наборі (У) нижче: (Х) глютамінова кислота (Е) або аспарагінова кислота (0); або (У) лізин «(К), аргінін (К) або гістидин (Н).

У вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі специфічні приклади наборів амінокислотних залишків, які взаємно електрично відштовхуються, включають набори амінокислотних залишків, наведених нижче: (а) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 180 згідно з нумерацією Є; (Б) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат; (с) амінокислотні залишки, що містяться в СНІ на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією Є, і амінокислотні залишки, що містяться в Сі. на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією за Кабат; (4) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотні залишки, що містяться в Сі. на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією за Кабат.

Цей винахід передбачає антигензв'язувальну молекулу, в якій один або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (аї) до (с2) нижче, у важкому ланцюзі і легкому ланцюзі антигензв'язувальної молекули являють собою амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються: (аї) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, який являє собою глутамінову кислоту (ЕЕ) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі на позиції 180 згідно з нумерацією БЕ, який являє собою 60 глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (Б);

(а2) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 180 згідно з нумерацією Є), який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (8); (01) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією Еи, який являє собою глутамінову кислоту (ЕЕ) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі на позиції 131 згідно з нумерацією БЕ, який являє собою глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0); (62) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 131 згідно з нумерацією Є), який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (8); (Сс1) амінокислотні залишки, що містяться в СНІ на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

БИ, які являють собою, кожен, глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотні залишки, що містяться в Сі на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією Є, які являють собою, кожен, глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0); (с2) амінокислотні залишки, що містяться в СНІ на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

Еи, які являють собою, кожен, лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), ії амінокислотні залишки, що містяться в Сі. на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією ЕЕ), які являють собою, кожен, лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К).

У вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі специфічні приклади амінокислотних залишків, які взаємно електрично відштовхуються, включають амінокислотні залишки, наведені нижче: (аї) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, який являє собою глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі на позиції 180 згідно з нумерацією БЕ, який являє собою глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0); (а2) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією Є, який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі на позиції 180 згідно з нумерацією Є, який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (8); (Б1) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією Є, який являє собою глутамінову кислоту (ЕЕ) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі на позиції 131 згідно з нумерацією БЕ, який являє собою глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0); (62) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 131 згідно з нумерацією Є), який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (8); (с1) амінокислотні залишки, що містяться в СНІ на позиціях 147 ї 175 згідно з нумерацією

БИ, які являють собою, кожен, глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотні залишки, що містяться в Сі на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією ЕМ, які являють собою, кожен, глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0); (с2) амінокислотні залишки, що містяться в СНІ на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

ЕУ, які являють собою, кожен, лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), і амінокислотні залишки, що містяться в Сі. на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією ЕЕ), які являють собою, кожен, лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К); (01) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, який являє собою глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0), і амінокислотні залишки, що містяться в Сі на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією ЕЕ, які являють собою, кожен, глутамінову кислоту (Е) або аспарагінову кислоту (0); (2) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, який являє собою лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К), і амінокислотні залишки, що містяться в

Сі на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією Є), які являють собою, кожен, лізин (К), гістидин (Н) або аргінін (К).

На додаток до вказаного вище зазначимо, що спосіб пригнічення СНІ/СЇ, який не пов'язаний з привнесенням відштовхування електричних зарядів на границі контакту між СНІ і

СІ 0МО 2013/065708), може бути застосований до антигензв'язувальної молекули цього винаходу. Ще конкретніше, цей винахід передбачає антигензв'язувальну молекулу, що має СНІ бо і Сі, де один або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (а) до (4) нижче, взаємно електрично відштовхуються: (а) амінокислотний залишок, що міститься в константній ділянці важкого ланцюга (СНІ) на позиції 147 згідно з нумерацією ЕИ, і амінокислотний залишок, що міститься в константній ділянці легкого ланцюга (СІ) на позиції 180 згідно з нумерацією ЕО; (Б) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 147 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 131 згідно з нумерацією ЕО; (с) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, їі амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 160 згідно з нумерацією ЕО; (4) амінокислотний залишок, що міститься в СНІ на позиції 213 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотний залишок, що міститься в Сі. на позиції 123 згідно з нумерацією ЕО.

Спосіб впровадження електричного відштовхування на границі контакту другої константної ділянки важкого ланцюга (СН2) або третьої константної ділянки важкого ланцюга (СНЗ) для пригнічення небажаної асоціації між важкими ланцюгами, спосіб впровадження електричного відштовхування на границі контакту варіабельної ділянки важкого ланцюга та варіабельної ділянки легкого ланцюга для пригнічення непередбаченої асоціації між важким ланцюгом та легким ланцюгом або спосіб модифікування амінокислотних залишків, які утворюють гідрофобне ядро, присутнє на границі контакту варіабельної ділянки важкого ланцюга та варіабельної ділянки легкого ланцюга, на полярні амінокислоти, які мають електричний заряд, для пригнічення непередбаченої асоціації між важким ланцюгом та легким ланцюгом, можна також застосовувати до антигензв'язувальних молекул цього винаходу (дивись УМО 2006/106905).

У способі, який пригнічує непередбачену асоціацію між важкими ланцюгами шляхом впровадження електричного відштовхування на границі контакту СН2 або СНЗ, приклади амінокислотних залишків, які контактують на границі контакту інших константних ділянок важкого ланцюга, включають ділянки, що відповідають позиції 356 (нумерація ЕМ) та позиції 439 (нумерація ЕМО), позиції 357 (нумерація ЕО) та позиції 370 (нумерація ЕМ), та позиції 399 (нумерація ЕМО) та позиції 409 (нумерація ЕО) у ділянці СНЗ. Стосовно нумерації константних ділянок антитіл можна звернутися до публікації Кабаї еї аї!. (Кабаї, Е.А., єї аі!., 1991, Зедиепсев5

ОЇ Ргоївіп5 ої Іттипої|одісаї Іпіегеві, МІН); та як нумерацію константних ділянок важкого ланцюга наведено нумерацію Е)О.

Конкретніше, наприклад, в антигензв'язувальній молекулі, яка містить два типи ділянок СНЗ важкого ланцюга, від 1 до З наборів амінокислотних залишків у ділянці СНЗ першого важкого ланцюга, які вибрані з наборів амінокислотних залишків від (1) до (3), наведених нижче, можна зробити так, щоб вони взаємно електрично відштовхувалися: (1) амінокислотні залишки, що містяться у ділянці СНЗ3 важкого ланцюга на позиції 356 та позиції 439 згідно з нумерацією Б; (2) амінокислотні залишки, що містяться у ділянці СНЗ важкого ланцюга на позиції 357 та позиції 370 згідно з нумерацією Еш; та (3) амінокислотні залишки, що містяться у ділянці СНЗ важкого ланцюга на позиції 399 та позиції 409 згідно з нумерацією ЕМ.

Крім того, антитіло може бути антитілом, яке має набір амінокислотних залишків у ділянці

СНЗ другого важкого ланцюга, відмінній від вищезгаданої ділянки СНЗ першого важкого ланцюга, де набір амінокислотних залишків вибраний з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (1) до (3) вище, та де від одного до трьох наборів амінокислотних залишків, які відповідають наборам амінокислотних залишків, наведених у від (1) до (3) вище, та які взаємно електрично відштовхуються у ділянці СНЗ першого важкого ланцюга, не відштовхуються електрично від відповідних амінокислотних залишків у ділянці СНЗ першого важкого ланцюга.

Амінокислотні залишки, описані у від (1) до (3) вище, наближаються один до одного після асоціації. Фахівці у цій галузі здатні визначити ділянки, що відповідають амінокислотним залишкам, описаним у від (1) до (3), згаданих вище, для бажаної ділянки СНЗ важкого ланцюга або константної ділянки важкого ланцюга за допомогою моделювання гомології та йому подібного, застосовуючи комерційно доступне програмне забезпечення, та відповідним чином модифікувати амінокислотні залишки на тих ділянках.

У вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі вирази "що відштовхуються електрично" або "Що мають однаковий заряд" означають, що, наприклад, будь-які два або більше амінокислотних залишків мають амінокислотні залишки, які містяться або у групі (Х), або у групі (У), згаданих вище.

У переважному варіанті здійснення вищезгаданої антигензв'язувальної молекули ділянка 60 СНЗ першого важкого ланцюга та ділянка СНЗ другого важкого ланцюга можуть бути перехресно зшиті за допомогою дисульфідних зв'язків.

У цьому винаході амінокислотний залишок, що піддається "модифікації" не обмежується амінокислотним залишком варіабельної ділянки антигензв'язувальної молекули або константної ділянки антитіла, про які згадується вище. Фахівці у цій галузі здатні визначити амінокислотні залишки, які утворюють границю контакту у варіанті поліпептиду або гетеромерному мультимері, шляхом моделювання гомології та йому подібному, застосовуючи комерційно доступне програмне забезпечення, та модифікувати амінокислотні залишки на тих ділянках так, щоб регулювати асоціацію. Моделювання гомології - це спосіб передбачення тривимірної структури білка, застосовуючи комерційно доступне програмне забезпечення. Коли будують структуру білка з невідомою тривимірної структурою, спочатку шукають білок, про який визначено, що він має надзвичайно високогомологічну тривимірну структуру до білка. Потім, застосовуючи цю тривимірну структуру як матрицю, будують структуру білка з невідомою структурою, та цю структуру далі оптимізують за допомогою способів молекулярної динаміки та їм подібних, щоб передбачити тривимірну структуру невідомого білка.

У способі впровадження електричного відштовхування на границі контакту варіабельної ділянки важкого ланцюга та варіабельної ділянки легкого ланцюга для пригнічення небажаної асоціації важкого ланцюга та легкого ланцюга приклади амінокислотних залишків, які контактують на границі контакту варіабельної ділянки важкого ланцюга (УН) та варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ), включають глютамін (0) на позиції 39 згідно з нумерацією за

Кабат у МН (ділянка ЕК2) та зустрічний (контактуючий) глютамін (0) на позиції 38 згідно з нумерацією за Кабат у Мі (ділянка ЕК2). Крім того, переважний приклад - це лейцин (І) на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат у МН (ЕК) та зустрічний пролін (Р) на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат у МІ. (ЕК2). Для нумерації цих ділянок посилалися на публікацію Кабаї, єї а!. (Кабаї, Е.А., вї а!., 1991, Зедиепсе ої Ргоївїпв ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, МІН).

Оскільки відомо, що ці амінокислотні залишки є надзвичайно консервативними у людей та мишей (У. МоїЇ. Кесодпіїй 2003; 16: 113-120), асоціацію варіабельних ділянок антигензв'язувальних молекул можна регулювати для асоціації МН-МіІ антигензв'язувальних молекул, відмінних від молекул, вказаних у прикладах, шляхом модифікування амінокислотних залишків, що відповідають вищезгаданим амінокислотним залишкам.

Специфічний приклад - це антигензв'язувальна молекула, у якій два або більше амінокислотних залишків, що утворюють границю контакту МН та Мі, - це амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються. Конкретніше, приклади включають антигензв'язувальну молекулу з одним набором або двома наборами амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у (а) або (Б) нижче: (а) амінокислотний залишок, що міститься у МН на позиції 39 згідно з нумерацією за Кабат, та амінокислотний залишок, що міститься у Мі. на позиції 38 згідно з нумерацією за Кабат; або (Б) амінокислотний залишок, що міститься у МН на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат, та амінокислотний залишок, що міститься у Мі. на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат.

Кожен з амінокислотних залишків, описаних у вищезгаданих (а) або (Б), наближається один до одного після асоціації. Фахівці у цій галузі зможуть визначити ділянки, які відповідають амінокислотним залишкам, описаним у вищезгаданих (а) або (Б), у бажаних МН або Мі, за допомогою моделювання гомології та йому подібного, застосовуючи комерційно доступне програмне забезпечення, та відповідним чином модифікувати амінокислотні залишки на тих ділянках.

У вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі "амінокислотні залишки, які взаємно електрично відштовхуються" переважно вибрані з амінокислотних залишків, що містяться, наприклад, у наборі (Х) або у наборі (У) нижче: (Х) глютамінова кислота (Е) або аспарагінова кислота (0) або (У) лізин «(К), аргінін (К) або гістидин (Н).

У способі модифікування амінокислотних залишків, які утворюють гідрофобне ядро, присутнє на границі контакту УН та МІ, на полярні амінокислоти, які мають електричний заряд, для пригнічення непередбаченої асоціації важкого ланцюга та легкого ланцюга, переважні приклади амінокислотних залишків, які спроможні утворювати гідрофобне ядро на границі контакту УН та МІ, включають лейцин (І) на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат у МН (ЕК) та зустрічний пролін (Р) на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат у МІ (ЕК2). Для нумерації цих ділянок як посилання застосовувалася КаБбаї, єї а!. (Кабаї, Е.А., еї аї.,, 1991, Зедиепсев ої

Ргоївіпо5 ої Іттипоіодісаї! Іптегеві, МІН).

Взагалі, термін "гідрофобне ядро" означає частину, яка утворюється внаслідок зборки бічних 60 ланцюгів гідрофобних амінокислот усередині асоційованих поліпептидів. Приклади гідрофобних амінокислот включають аланін, ізолейцин, лейцин, метіонін, фенілаланін, пролін, триптофан та валін. Крім того, амінокислотні залишки, відмінні від гідрофобних амінокислот (наприклад, тирозин), можуть залучатися до утворення гідрофобного ядра. Це гідрофобне ядро разом з гідрофільною поверхнею, у якій бічні ланцюги гідрофільних амінокислот розташовані назовні, стають рушійною силою для сприяння асоціації водорозчинних поліпептидів. Коли гідрофобні амінокислоти двох відмінних доменів присутні на молекулярній поверхні та зазнають впливу молекул води, ентропія підвищиться, та вільна енергія зросте. Отже, два домени асоціюватимуться один з одним, внаслідок чого знизиться вільна енергія, та вони стануть стабільними, та гідрофобні амінокислоти на границі контакту зануряться усередину молекули, утворюючи гідрофобне ядро.

Вважають, що, коли виникає поліпептидна асоціація, утворення гідрофобного ядра пригнічується внаслідок модифікування гідрофобних амінокислот, що утворюють гідрофобне ядро, на полярні амінокислоти, які мають електричний заряд; та, як наслідок, вважають, що поліпептидна асоціація пригнічується.

Фахівці у цій галузі зможуть розпізнати присутність або відсутність гідрофобного ядра, утворення сайту (ділянки) та їм подібного шляхом аналізу амінокислотних послідовностей стосовно бажаної антигензв'язувальної молекули. А саме, антигензв'язувальна молекула цього винаходу - це антигензв'язувальна молекула, яка характеризується тим, що амінокислотні залишки, спроможні утворювати гідрофобне ядро на границі контакту, модифіковані на амінокислотні залишки, які мають електричний заряд. Конкретніше, приклади включають антигензв'язувальну молекулу, у якій амінокислотні залишки, наведені або у (1), або у (2) нижче, є амінокислотними залишками, які мають електричний заряд. Бічні ланцюги амінокислотних залишків, наведених у (1) та (2) нижче, є прилеглими один до одного та можуть утворювати гідрофобне ядро: (1) амінокислотний залишок, що міститься у МН на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат; та (2) амінокислотний залишок, що міститься у Мі. на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат.

Переважні приклади амінокислотних залишків, які мають електричний заряд у вищезгаданій антигензв'язувальній молекулі, включають глютамінову кислоту (Е), аспарагінову кислоту (0), лізин (К), аргінін (К) та гістидин (Н). Переважніші приклади включають глютамінову кислоту (Е) та лізин «К).

Взагалі, амінокислотні залишки, описані у вищезгаданих (1) та (2), у людей та мишей, це відповідно: (1) лейцин (І) та (2) пролін (Р).

Отже, у переважному варіанті здійснення цього винаходу ці амінокислотні залишки піддають модифікації (такій як заміна амінокислотами, що мають електричний заряд). Крім того, типи вищезгаданих амінокислотних залишків (1) та (2) необов'язково обмежуються вищезгаданими амінокислотними залишками, але вони можуть також бути іншими амінокислотами, еквівалентними цим амінокислотним залишкам.

До антигензв'язувальних молекул цього винаходу можна застосовувати інші відомі способи.

Наприклад, з метою сприяти асоціації першої МН (МНІ) та першої МІ. (МІ.1) та/або другої МН (МН) та другої МІ. (МІ2), амінокислотний бічний ланцюг, який присутній у варіабельній ділянці одного з Н-ланцюгів, можна замінити більшим бічним ланцюгом (виступом), а амінокислотний бічний ланцюг, який присутній у протилежній варіабельній ділянці іншого Н-ланцюга, можна замінити меншим бічним ланцюгом (западиною), так щоб виступ міг влаштуватися у западині, що сприяє асоціації УНІ та МІ 1 та/або УНЗ2 та МІ2, а, як слідство, асоціацію УНІ та МІ 2 та/або

МНаІ та МІ1 можна також пригнічувати (МО 1996/027011; Відудмау, 9.В., еї аї., Ргоївіп Епдіпеегіпду (1996) 9, 617-621; Мегспапі, А.М., еї а!., Маїшге Віотесппоіоду (1998) 16, 677-6811.

Наприклад, у випадку ІдДС1 людини, для того, щоб зробити амінокислотний бічний ланцюг у ділянці СНЗ одного Н-ланцюга більшим бічним ланцюгом (виступом), виконують модифікації

У349С та Т36бМУ, а для того, щоб зробити амінокислотний бічний ланцюг у ділянці СНЗ іншого

Н-ланцюга меншим бічним ланцюгом, виконують модифікації 0356С, Т3365, І З368А та 407.

До антигензв'язувальних молекул цього винаходу можна застосовувати іще інші відомі способи. Цільову антигензв'язувальну молекулу можна ефективно отримати шляхом комплементарної асоціації СНЗ, застосовуючи сконструйований шляхом заміни ланцюга домен

СНЗ, у якому частина СНЗ одного Н-ланцюга антигензв'язувальної молекули замінюється послідовністю, що походить від ІДА, що відповідає цій частині, та комплементарна частина СНЗ іншого Н-ланцюга вводиться послідовністю, що походить від ЇДА, що відповідає цій частині 60 ІРгоївіп Епаіпеєгіпу Оезідп 8 5еїІесійоп, 23: 195-202, 20101.

До антигензв'язувальних молекул цього винаходу можна застосовувати іще інші відомі способи. Коли отримують біспецифічні антитіла, цільове біспецифічне антитіло можна отримати шляхом, наприклад, створення різниці в ізоелектричній точці, виконавши різні амінокислотні модифікації для кожної з варіабельних ділянок двох типів Н-ланцюгів, та застосування цієї різниці в ізоелектричній точці для очищення шляхом іонно-обмінної хроматографії (М/о 2007/114325).

Спосіб модифікування амінокислотного залишку на позиції 435 згідно з нумерацією ЕМ, що є сайтом, пов'язаним зі зв'язуванням між Ідс та білком А, на амінокислоту, яка має відмінну силу зв'язування з білком А, таку як Агу, можна також застосовувати до антигензв'язувальної молекули цього винаходу у комбінації з вищезгаданими способами. Застосовуючи цей спосіб, можна змінити взаємодію між Н-ланцюгом та білком А, та тільки гетеродимерні антигензв'язувальні молекули можна ефективно очистити, застосовуючи колонку з білком А.

Цей спосіб можна також застосовувати незалежно - без комбінування з вищезгаданими способами.

Модифікації цього винаходу можна застосовувати стосовно антигензв'язувальних молекул, таких як одна з нижчезазначених, наприклад, антигензв'язувальна молекула, яка має структуру, у якій, задля сприяння асоціації першої МН (УНІ) та першої МІ. (МІ1) та/або другої МН (МН) та другої МІ. (МІ 2), МНІ1 зшивається з Ес-ділянкою через першу СНІ, та МІ/1 зшивається з першою

СІ, та УН2 зшивається з іншою Ес-ділянкою через другу Сі, та М/2 зшивається з другою СНІ1 (Уго 09/80254).

Численні способи, наприклад, два або більше з вищезгаданих способів можна використовувати у комбінації для антигензв'язувальної молекули цього винаходу. Крім того, антигензв'язувальну молекулу цього винаходу можна отримати на основі антитіла, в якому були зроблені модифікації за вищезгаданими відомими способами.

Вказані нижче способи регулювання асоціації згідно з цим винаходом дозволяють, наприклад, ефективно отримувати антигензв'язувальні молекули, які є активними. Приклади такої активності включають зв'язувальну активність, нейтралізуючу активність, цитотоксичну активність, агоністичну активність, антагоністичну активність та ферментативну активність та їм подібну. Агоністична активність - це активність, яка індукує деякі види змін у фізіологічній активності внаслідок зв'язування антигензв'язувальної молекули з антигеном, таким як рецептор, що спричиняє сигнальну трансдукцію або їй подібне у клітинах. Приклади фізіологічної активності включають активність росту, активність виживання, активність диференціювання, транскрипційну активність, активність транспорту через мембрану, зв'язувальну активність, протеолітичну активність, активність фосфорилування/дефосфорилування, активність окиснення-відновлення, активність переносу, нуклеолітичну активність, активність дегідратації, активність, що викликає загибель клітин, та активність, що викликає апоптоз, та їм подібна, проте не обмежується ними.

Антигензв'язувальні молекули, що зв'язуються з бажаними антигенами або зв'язуються з бажаними рецепторами, можна ефективно отримати за допомогою способів цього винаходу.

Антигени цього винаходу особливо не обмежуються, та можна використовувати будь-який тип антигену. Приклади антигенів включають рецептори або їх фрагменти, ракові антигени, антигени МНС та диференціювальні антигени та їм подібне, проте особливо не обмежуються ними.

Приклади рецепторів цього винаходу включають рецептори, що належать до родини рецепторів кровотворних факторів, родини рецепторів цитокінів, родини рецепторів типу тирозинкінази, родини рецепторів серин/треонінкінази, родини рецепторів ТМЕ, родини рецепторів, зчеплених з білком С, родини рецепторів з якірним СРІ, родини рецепторів типу тирозинфосфатази, родини фактора адгезії, родини рецепторів гормонів та їм подібне.

Повідомлення щодо рецепторів, які належать до цих родин рецепторів, та їх характеристики можна знайти у різноманітних джерелах, наприклад, у (СооКе ВА., Кіпд ВУВ., мап аег Моїеп НУ. ед. Мем/ Сотргепепвіме Віоспетівігу МоІ.188 "Ногтопез апа Пеїг Асіоп5 Рагі ІІ" рр.1-46 (1988)

ЕіІземіег бсіепсе РибіїзНегз ВУ., Мем Моїк, ОСОБА; Райнпу ГІ. (1990) СеїІ, 61: 13-14; ШІгісн А., єї аї. (1990) СеїІ, 61: 203-212; Маззади! У. (1992) СеїІ, 69: 1067-1070; Міуа|їта А., єї аї. (1992) Аппи.

Веу. Іттипої., 10: 295-331; Тада Т. апа Кізпітоїйю Т. (1992) ЕАБ5ЕВ .)., 7: 3387-3396; Рапії УМІ., еї а!. (1993) Аппи. ВАеу. Віоспет., 62: 453-481; тій СА., еї аї. (1994) Сеї, 76: 959-962; Ріожшег ОВ. (1999) Віосніт. Віорпуз. Асіа, 1422: 207-234; МіуазаКка М. єд. Сеї! Тесппоіоду, Напарсоок 5епев "Напароок тог аднезіоп Тасіогє" (1994) Зпцішп5йа, ТоКуо, дарап; та їм подібних|. Приклади специфічних рецепторів, що належать до вищезгаданих родин рецепторів, включають рецептор еритропоетину (ЕРО) людини або миші, рецептор стимулюючого фактора колонії гранулоцитів 60 (0-С5Е) людини або миші, рецептор тромбопоетину (ТРО) людини або миші, рецептор інсуліну людини або миші, рецептор ліганду Е-3 людини або миші, рецептор похідного від бляшок фактора росту (РОСЕ) людини або миші, рецептор інтерферону (ІЕМ)-с або -В людини або миші, рецептор лептину людини або миші, рецептор гормону росту (СН) людини або миші, рецептор інтерлейкіну (І)-10 людини або миші, рецептор інсулін-подібного фактора росту (ІСЕ)-

Ї людини або миші, рецептор лейкоз-інгібувального фактора (ПЕ) людини або миші та рецептор ціліаарного нейротрофічного фактора (СМТЕ) людини або миші (НЕРОВ: 5ітоп, 5. єї аї. (1990)

Віоса 76, 31-35; тЕРОК: р'Апагеа, АЮ. еї аї. (1989) СеїІ 57, 277-285; па-С5ЕВ: Рикипада, В. єї а!ї. (1990) Ргос. Маї!. Асай. сі. ОБА. 87, 8702-8706; тОа-С5ЕВ: Рикипада, В. еї а!. (1990) Сеї 61, 341-350; НТРОВ: Мідоп, І. єї а!. (1992) 89, 5640-5644; тТРОВ: 5Кода, ВО. еї аї. (1993) 12, 2645- 2653; пПІп5А: Шігісн, А. еї аї. (1985) Маїиге 313, 756-761; пПЕп-3: Зтаї, 0. еї аї. (1994) Ргос. Маї!).

Асай. 5сі. ОБА. 91, 459-463; ПРОСЕВ: Стопулаїд, ВОК. еї аї. (1988) Ргос. Маї)!. Асай. сі. ОБА. 85, 3435-3439; ПІЕМ с/в ЕЕ: О7е, 6. еї а. (1990) СеїІ 60, 225-234; апа Моміск, 0. еї аї!. (1994) Сеї! 77, 391-400)).

Ракові антигени -- це антигени, які експресуються після злоякісної трансформації клітини, та їх також називають пухлиноспецифічними антигенами. Крім того, аномальні цукрові ланцюги, які виникають на поверхні клітини або на молекулі білка, коли клітина стає раковою, є також раковими антигенами, та їх також називають раковими антигенами цукрових ланцюгів.

Приклади ракових антигенів включають ЕрРСАМ (молекулу адгезії молекулярних клітин), яка експресується при багатьох видах раку, включаючи рак легеня (|Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА (1989) 86 (1), 27-31| (її полінуклеотидна послідовність вказується як КеїЗед Ассеввіоп Мо.

ММ 002354.2 та її поліпептидна послідовність вказується як КеїЗед Ассевзвіоп Мо.

МР 002345.2), СА19-9, СА1Т5-3, сіалований 55ЕА-1 (стадієспецифічний ембріональний антиген- 1) (5ІХ) (сіалований антиген Льюїса) тощо.

Антигени головного комплексу гістосумісності (МНС) можна взагалі підрозділити на антигени

МН класу І та антигени МНС класу ІІ: антигени МНС класу І включають НІ А-А, -В, -С, -Е, -Е, - та -Н; та антигени МНС класу ІІ включають НІ А-ОВ, -0О та -ОР.

Диференціювальні антигени включають СОЇ, СО02, СО3, 204, 205, С06, 207, СО08, СО10,

СОртта, СО116, СОТт1с, 2013, б014, 2015, С016, С018, 2019, 6020, 0021, С023, 0025, С0ра28,

Сорго, со030, 2032, 0033, 6034, 6035, 6038, 0040, брата, Срать, брага, Срагр, сра43,

Ср44, 20045, браБ5вВоО, Сра48, бр49а, Сра496, С049с, 20494, СОр49е, Сра491, С051, 2054, 2055, сбор56, 2057, 2058, С0О61, СО62Е, СО621, СОб2Р, С064, 2069, 2071, 2073, 2095, СО102, ср106, 20122, С0126 та Сру/130.

Антигензв'язувальна молекула цього винаходу може бути біспецифічним антитілом; та, у цьому випадку, два антигени (або епітопи), які розпізнаються цим антитілом, можна довільно вибрати з вищезгаданих рецепторів або їх фрагментів, ракових антигенів, антигенів МНС, диференціювальних антигенів та їм подібного. Наприклад, два антигени можна вибрати з рецепторів або їх фрагментів, два можна вибрати з ракових антигенів, два можна вибрати з антигенів МНС або два можна вибрати з диференціювальних антигенів. Крім того, кожен один антиген можна вибрати з двох антигенів, які довільно вибрані з, наприклад, рецепторів або їх фрагментів, ракових антигенів, антигенів МНС та диференціювальних антигенів.

Крім того, цей винахід передбачає спосіб отримання антигензв'язувальної молекули, в якому асоціація між важким ланцюгом і легким ланцюгом є регульованою. Переважний варіант здійснення способу отримання за цим винаходом представляє спосіб отримання антигензв'язувальної молекули, в якому асоціація між важким ланцюгом і легсим ланцюгом є регульованою, який передбачає: (1) здійснення модифікування нуклеїнових кислот, що кодують СНІ і Сі. так, що один набір або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (а) до (с) нижче, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного: (а) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією Є), і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 180 згідно з нумерацією за Кабат, (р) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 131 згідно з нумерацією за Кабат, і (с) амінокислотні залишки в СНІ, які знаходяться на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

Кабат; (2) введення модифікованих нуклеїнових кислот в клітину-хазяїна і культивування клітини- хазяїна таким чином, щоб експресувалися нуклеїнові кислоти; і (3) збирання антигензв'язувальної молекули з культури клітини-хазятна. 60 Крім того, цей винахід відноситься до способу отримання, який передбачає на вищезгаданому етапі (1) здійснення модифікування нуклеїнових кислот так, що амінокислотні залишки, що електрично відштовхують один одного, вибрані серед амінокислотних залишків, що містяться в будь-якій з груп вищезгаданих (Х) і (ХУ).

Більш того, цей винахід відноситься до способу отримання, який передбачає на вищезгаданому етапі (1) здійснення модифікування нуклеїнових кислот, так що два або більше амінокислотних залишків, що утворюють інтерфейс між МН і МІ, являють собою амінокислотні залишки, які електрично відштовхують один одного. Переважно, амінокислотні залишки, які електрично відштовхують один одного, являють собою будь-який набір амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з, наприклад, наборів амінокислотних залишків, наведених в да) і (Б) нижче: (а) амінокислотний залишок, який міститься в УН на позиції 39 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок, який міститься в Мі. на позиції 38 згідно з нумерацією за Кабат; або (Б) амінокислотний залишок, який міститься в УН на позиції 45 згідно з нумерацією за Кабат, і амінокислотний залишок, який міститься в МІ. на позиції 44 згідно з нумерацією за Кабат.

Вищезгадані амінокислотні залишки, які електрично відштовхують один одного, є переважно вибраними з амінокислотних залишків, що містяться в будь-якому наборі вищезгаданих (Х) і (У).

Крім того, цей винахід передбачає спосіб регулювання асоціації важкого і легкого ланцюгів в антигензв'язувальній молекулі. Переважний варіант здійснення способу регулювання асоціації за цим винаходом - це спосіб регулювання асоціації важкого і легкого ланцюгів антигензв'язувальної молекули, який включає здійснення модифікування нуклеїнових кислот так, що один набір або два або більше наборів амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається з наборів амінокислотних залишків, наведених у від (а) до (с) нижче, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного: (а) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕМ, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 180 згідно з нумерацією ЕИ, (р) амінокислотний залишок в СНІ, який знаходиться на позиції 175 згідно з нумерацією ЕИ, і амінокислотний залишок в Сі, який знаходиться на позиції 131 згідно з нумерацією ЕМ, і (с) амінокислотні залишки в СНІ, які знаходяться на позиціях 147 і 175 згідно з нумерацією

Е), і амінокислотні залишки в Сі., які знаходяться на позиціях 131 і 180 згідно з нумерацією ЕМ.

Крім того, цей винахід відноситься до способу регулювання асоціації, який передбачає на вищезгаданому етапі (1) здійснення модифікування нуклеїнових кислот так, що амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, є вибраними з амінокислотних залишків, включених у вищезгадану групу (Х) або (У).

Більш того, цей винахід відноситься до способу регулювання асоціації, який передбачає на вищезгаданому етапі (1) здійснення модифікування нуклеїнових кислот так, що два або більше амінокислотних залишків, що утворюють інтерфейс МН-МІ, являють собою амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного. Тут амінокислотні залишки, які електростатично відштовхують один одного, являють собою переважно будь-який набір з амінокислотних залишків, вибраний з групи, що складається з, наприклад, наборів амінокислотних залишків, наведених в (а) і (Б) нижче: (а) амінокислотний залишок у МН, який знаходиться на позиції 39 згідно з нумерацією за

Кабат, і амінокислотний залишок у Мі, який знаходиться на позиції 38 згідно з нумерацією за

Кабат, (Б) амінокислотний залишок у УН, який знаходиться на позиції 45 згідно з нумерацією за

Кабат, і амінокислотний залишок у МІ, який знаходиться на позиції 44 згідно з нумерацією за

Кабат.

Згідно зі способом регулювання асоціації цього винаходу бажане біспецифічне антитіло можна отримати переважно та ефективно, як описано раніше. А саме, бажаний гетеромерний мультимер у формі біспецифічного антитіла можна ефективно утворити з мономерної суміші.

Фраза "здійснення модифікування нуклеїнові кислоти" у вищезгаданих способах цього винаходу означає здійснення модифікування нуклеїнові кислоти так, щоб вони відповідали амінокислотним залишкам, введеним шляхом "модифікацій" цього винаходу. Конкретніше, вона означає здійснення модифікування нуклеїнових кислот, що кодують оригінальні (до модифікації) амінокислотні залишки, у нуклеїнові кислоти, що кодують амінокислотні залишки, які слід ввести шляхом модифікації. Зазвичай, це означає здійснення генних маніпуляцій або обробки з метою отримання мутацій, внаслідок яких відбувається щонайменше одна нуклеотидна вставка, делеція або заміна в оригінальній нуклеїновій кислоті, так що утворюються кодони, які кодують амінокислотні залишки, що представляють інтерес. Конкретніше, кодони, що кодують оригінальні амінокислотні залишки, замінюють кодонами, що кодують амінокислотні залишки, які 60 слід ввести шляхом модифікації. Таку модифікацію нуклеїнової кислоти здатні відповідним чином виконувати фахівці у цій галузі, застосовуючи відомі способи, такі як сайт-специфічний мутагенез та мутагенез ПЛР.

Крім того, цим винаходом пропонуються нуклеїнові кислоти, які кодують антигензв'язувальну молекулу цього винаходу. Крім того, вектори, які несуть ці нуклеїнові кислоти, також включені у цей винахід.

Крім того, цей винахід стосується фармацевтичних складів, які містять антигензв'язувальну молекулу цього винаходу та фармацевтично прийнятний носій. У цьому винаході фармацевтичні склади зазвичай означають фармацевтичні агенти для лікування, або профілактики, або тестування та діагностування хвороб.

Фармацевтичні склади цього винаходу можна виготовити за способами, відомими фахівцям у цій галузі. Крім того, антигензв'язувальну молекулу цього винаходу, якщо необхідно, можна змішати разом з іншими фармацевтичними речовинами. Наприклад, їх можна застосовувати парентерально у формі ін'єкції стерильного розчину або суспензії на основі води або іншої фармацевтично прийнятної рідини. Наприклад, їх можна виготовити як одиничні дози, які відповідають вимогам до приготування фармацевтичних препаратів, шляхом відповідного комбінування з фармацевтично прийнятними носіями або середовищами, конкретно - зі стерильною водою, фізіологічним сольовим розчином, рослинною олією, емульгатором, суспензією, детергентом, стабілізатором, ароматизатором, допоміжною речовиною, наповнювачем, консервантом, зв'язувальним агентом або їм подібним. У таких препаратах кількість активного інгредієнта регулюють так, щоб доза відповідала належним чином попередньо визначеному діапазону.

Амінокислоти, що містяться в амінокислотних послідовностях цього винаходу можуть бути модифікованими після трансляції (наприклад, модифікація М-кінцевого глютаміну на піроглютамінову кислоту внаслідок піроглютамінації є добре відомою фахівцям у цій галузі).

Природно, що такі модифіковані після трансляції амінокислоти включені до амінокислотних послідовностей цього винаходу.

Усі документи попереднього рівня техніки, процитовані у цьому описі винаходу, включені до нього шляхом посилання.

Приклади

Наступне - це приклади способів та композицій цього винаходу. Зрозуміло, що на практиці можна втілювати різноманітні інші варіанти здійснення, які відповідають загальному опису винаходу, наведеному вище.

Хоча вищеописаний винахід був детально описаний як ілюстрація та приклад задля чіткого його розуміння, описи та приклади не слід розглядати як такі, що обмежують обсяг винаходу.

Описи усієї патентної та наукової літератури, процитовані у цьому описі винаходу, безпосередньо включено у їх повному обсязі шляхом посилання.

Приклад 1. Отримання нових І-ланцюгів, які відповідають кожному Н-ланцюгу АСЕ910 (еміцизумабу)

АСЕ910 (еміцизумаб) - це гуманізоване антитіло Їдб4, яке складається з анти-РІХ(а) та анти-ЕХ та демонструє активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ. Воно складається з двох різних важких ланцюгів (2499 та .)327), які зв'язуються з РіІХ(а) та ЕХ, відповідно, та однакового І -ланцюга (І 404) (важкі ланцюги: 5ЕО ІО МО: 10 та 11; легкий ланцюг: ЗЕО ІО МО: 12). Можливий спосіб зниження реакційної здатності по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) та покращення активності заміщувати кофакторну функцію

ЕМІШ полягав в отримані з бібліотеки антитіл людини нового ІЇ-ланцюга з послідовністю, повністю відмінною від однакового І-ланцюга, відповідно до кожного з Н-ланцюгів антитіла проти РіІХ(а) та антитіла проти ЕХ (0499 та 4327). Отже, автори цього винаходу отримали нові

Ї -ланцюги, як показано на фіг. 10 та у таблиці 7, згідно з референтним прикладом 1. У цих прикладах РІХ(а) означає ГРІХ та/або РіІХа.

Ці антитіла досліджували стосовно реакційної здатності по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу). Антиідіотипічне антитіло до АСЕ910 (еміцизумабу) отримали за наступним способом. По-перше, Е(аб')2 0499/ 404 та Е(аб)2 9327/1404 від АСЕ910 (еміцизумабу), які розпізнають РІХ(а) та ЕХ, відповідно, ввели кролям та отримали кролячу сироватку проти 0499/1404 Р(аб)2 та кролячу сироватку проти 9327/1404 Р(ар)». Одержані за допомогою сульфату амонію фракції цих сироваток пропустили крізь зв'язану з Ї40 людини колонку, щоб видалити реактивні до ЇД людини антитіла. Далі, виконали афінне очищення, використовуючи зв'язану з 0499/1404 (або 92У327/Л 404) колонку, та видалили реактивні до 3327/1404 (або 0499/404) антитіла, використовуючи зв'язану з 4327/1404 (або 0499/ 404) колонку, та таким чином отримали поліклональні антиідіотипічні антитіла, які специфічно 60 зв'язуються з 0499/І 404 (або 2327/ 404).

Отримане антиідіотипічне антитіло використовували для вимірювання сили його зв'язування з міченим АСЕ910 (еміцизумабом) за допомогою електрохемілюмінесцентного імуноаналізу, при якому оцінювали пригнічення зв'язування випробовуваною речовиною. По-перше, випробовувану речовину (біспецифічне антитіло) додали у концентрації 0, 1, 3, 10, 30 або 100 мкг/мл до суміші антиіїдіотипічного антитіла до 0499/1404, антиїдіотипічного антитіла до 3327/1404, міченого біотином АСЕ910 (еміцизумабу) та міченого 5ЦГРО-ТАС АСЕ910 (еміцизумабу). Отриману суміш інкубували протягом ночі у холодильнику. Суміш потім додали до планшета з 96 лунками. Після того, як планшет промили, силу зв'язування виміряли за способом електрохемілюмінесценції.

Як приклад, у таблиці 2 показано результат для біспецифічного антитіла 0499/ОМК131//)327/ОМІ 095 (варіабельні ділянки: 560 ІЮ МО: 45/13//46/31; константні ділянки:

ЗЕО І МО: 95/99//97/101) та результат для 2499/01 20//2327/21 01 (варіабельні ділянки: ЗЕО ІЮ

МО: 45/43//46/44; константні ділянки: зЕО ІЮ МО: 95/99//97/101), які були отримані у прикладі 3, показано на фіг. 1. АСЕ910 (еміцизумаб) знижував силу зв'язування між міченим АСЕ910 (еміцизумабом) та антиідіотипічним антитілом в залежності від концентрації доданого антитіла, тим самим продемонструвавши пригнічувальний ефект. З іншого боку, була визначено, що антитіла з новими І -ланцюгами демонстрували суттєво знижене зв'язування з антиідіотипічним антитілом до АСЕ910 (еміцизумабу).

Отже, авторам цього винаходу вдалося успішно отримати нові І -ланцюги, які, навіть коли вони з'єднані з такими ж самими Н-ланцюгами, що й Н-ланцюги АСЕ910 (еміцизумабу) (ЗЕО ІЮ

МО: 45 та 46), демонструють суттєво знижене зв'язування з антиідіотипічним антитілом до

АСЕ910 (еміцизумабу) та мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ. Тому очікують, що ці біспецифічні антитіла можна вводити навіть тим пацієнтам з гемофілією А, у яких утворилося антиідіотипічне антитіло до АСЕ910 (еміцизумабу).

Таблиця 2

Біспецифічні антитіла, досліджені стосовно реакційної здатності по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу)

ЗЕО ІО МО ЕО ІЮ МО ЗЕО ІО МО ЗЕО ІО МО варіабельної аб -| варіабельної | варіабельної

Назва клону ділянки варіаоельної ділянки ділянки важкого ділянки легкого важкого легкого ланцюга 1 ланцюга 1 ланцюга 2 ланцюга 2

Приклад 2. Отримання модифікованих біспецифічних антитіл, що мають нові І -ланцюги, та тримання модифікованих Н-ланцюгів

Для того, щоб у біспецифічних антитіл, які мають нові І -ланцюги, отримані у референтному прикладі 1, покращити активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ, вибрали ОМК131 (ЗЕО

ІО МО: 13), новий І-ланцюг для антитіла проти РіХ(а), та УМГ 095 (5ЕО ІО МО: 31), новий І - ланцюг для антитіла проти ЕХ, а їх амінокислоти всеосяжним чином піддали мутації за допомогою способів, відомих фахівцям у цій галузі таких як ПЛР. Мутанти піддали великомасштабному скринінгу щодо активності заміщувати кофакторну функцію ЕМІІ та таким чином отримали варіанти амінокислотних замін з покращеною активністю заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Разом з цим, використовуючи отримані нові І -ланцюги, отримали варіанти замін, у яких усі

СОК 0499 та 24327 всеосяжним чином мутувалися внаслідок заміни усіма амінокислотами, за виключенням цистеїну. Варіанти піддали великомасштабному скринінгу стосовно активності заміщувати кофакторну функцію ЕМ, щоб визначити амінокислотні заміни, які покращили активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

У УММО2012/067176 успішно отримали біспецифічні антитіла, активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІЇ яких підвищилася, а пригнічувальний вплив яких на реакцію РіІХа активувати ЕХ із застосуванням ЕМІШа як кофактора не підвищився. Цей процес оптимізації також покращив активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП без підвищення пригнічувального впливу на реакцію РіІХа активувати ЕХ із застосуванням ЕМІПШа як кофактора, але вперше було визначено, що він впливає на активацію ГРІХ за допомогою ЕхХіа (фіг. З(1)).

Активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІ, наведену на фіг. З3(1), фіг. З(2) та фіг. 4,

вимірювали за способом, описаним у референтному прикладі 1, за винятком того, що концентрацію фактора Х людини змінили на 22,9 мкг/мл, а концентрацію фосфоліпіду - на 6,0

МКМ. Крім того, активність пригнічувати активацію РІХ означає знижене поглинання у реакції активації ГРІХ за допомогою ЕХіа, що визначається із застосуванням колориметрії. Конкретно, вимірювання виконували за наступним способом. 5 мкл розчину антитіла, розведеного ТВЗВ, змішали з 5 мкл фактора ІХ людини з концентрацією З одиниці/мл (Спгізітаззіп М, дарап Віоса

Ргодисів Огдапіганйоп) та інкубували у планшеті з 384 лунками при кімнатній температурі протягом 30 хвилин. Ферментативну реакцію у цій суміші ініціювали шляхом додавання 5 мкл фактора ХіІа людини з концентрацією 90 нг/мл (Еп7уте Кезеагсі! І арогафогіеєз). Через 60 хвилин реакцію припинили шляхом додавання 5 мкл 0,5 М ЕОТА. Реакцію забарвлення розпочали шляхом додавання 10 мкл розчину забарвлення субстрату. Через 60 хвилин реакції забарвлення виміряли зміну в поглинанні при 405 нм, застосовуючи бресіоМах 340РС384 (Моїесшіаг Оемісе5). Розчинником фактора ІХ людини та фактора Хіа людини був ТВ5В, що містив 6,0 мкМ фосфоліпідний розчин (5У5МЕХ СО.) та 1,5 мМ Сасі». Розчин забарвлення субстрату, Зресіголуте РІХ (ЗекКізиі Оіадповіїс5), використовували для цього аналізу після розчинення в очищеній воді, внаслідок чого отримали 6,7 мМ розчин, а потім його змішали з етиленгліколем у відношенні 5:8. Внаслідок цього вищезазначені зразки показали зниження значення оптичної густини (00) порівняно з умовами без антитіла, що вказує на те, що виробництво РіІХа знизилося. В активності заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ!Ї та активності пригнічувати активацію ГРІХ, як показано на фіг. 3, кінцева концентрація антитіла становила 100 мкг/мл. Кінцева концентрація антитіла означає концентрацію у змішаному розчині розчину антитіла, фактора ІХ людини та фактора Хіа людини. У притаманній реакції коагуляції іп мімо

ЕІХа виробляється внаслідок активації ГРІХ за допомогою ЕХіа. Тому, внаслідок пригнічення цього процесу активації знижується виробництво БіХа, що далі має негативний вплив на кількісне значення підвищення опосередкованої РіІХа активації ЕХ біспецифічним антитілом, яке має активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ! (фіг. 2). Отже, щоб отримати біспецифічне антитіло з вищою активністю заміщувати кофакторну функцію ЕМП переважно, щоб активність пригнічувати активацію ГРІХ була якомога нижчою.

Відповідно до цього на підставі результатів вищезгаданого великомасштабного скринінгу стосовно активності заміщувати кофакторну функцію ЕМІІЇ автори даного винаходу визначили численні амінокислотні модифікації, які значно підвищують активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ порівняно з підвищенням активності пригнічувати активацію БІХ. Конкретно такими модифікаціями є 5З0ОК, 5З1К, Т53К (усі згідно з нумерацією за Кабат) тощо. Ці модифікації багаторазово здійснили у ОМК131 (ЗЕО ІО МО: 13), внаслідок чого отримали 0120 (ОА 201) (ЗЕО ІО МО: 43). Далі, варіанти амінокислотних замін отримали шляхом всеосяжного здійснення численних амінокислотних замін у СОК у варіанті, що має 0120 як І -ланцюг для антитіла проти РІХ(а). Варіанти піддали великомасштабному скринінгу, вимірюючи активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ та активність пригнічувати активацію РІХ. Як наслідок, визначили комбінації модифікацій, які знижують активність пригнічувати активацію ГРІХ, при цьому зберігаючи активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ. Конкретно, вони були комбінаціями основних та кислотних залишків, такими як З3ОК/531К/М320, 53ОК/531К/М32Е та

О27РУКУЗО (усі згідно з нумерацією за Кабат) у І -ланцюгу антитіла проти РІХ(а).

Крім того, варіанти амінокислотних замін також отримали шляхом всеосяжного здійснення амінокислотних замін у ділянках ЕК, сайтах контакту з неантигеном, та їх піддали скринінгу стосовно визначення активності. Як наслідок, визначили численні модифікації, які далі підвищували активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ, при цьому зберігаючи активність пригнічувати активацію РІХ. Конкретно, варіанти амінокислотних замін, у яких Рпе83 у І -ланцюзі антитіла проти РІХ(а) замінили залишком Меї, залишком АїЇа або їм подібним або у яких Агд45 - залишком Си, продемонстрували підвищену активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Для того, щоб оптимізувати комбінацію вищезгаданих модифікацій, а також баланс антигензв'язувальної афінності (асоціації та дисоціації) як плеча проти РіІХ(а), так і плеча проти

ЕХ, здійснили вичерпні об'єднання в пари антитіл проти РІіХ(а) та проти ЕХ. Конкретно, для антитіла проти РІХ(а) Н-ланцюг модифікували шляхом здійснення У1О0Е, У100еєїЇ, або шляхом делеції с1О0а, або їх комбінації, | -ланцюг модифікували шляхом введення вставки АБ5ОЕ, КО2К, вставки Рго на позиції 95 або 19605 або їх комбінації. Для антитіла проти ЕХ Н-ланцюг модифікували шляхом здійснення Т28Е/О31Н або ОЮ31М/О, 1515, З56Т/К, 557М, 595, Е618В,

ЕбЄ2К, 065М/О, М671, К7ЗІ, 582БЕ, Е102М або комбінації цих модифікацій, а для І-ланцюга

УМІ095 (5ЕО ІО МО: 31) модифікували шляхом здійснення Е24Т, М2бЕ, Н270, 5295, ЮО3057/О/Е,

КЗІК, НЗ2Е/ЮО, 500, 092А, 5940, 5950/А, А9бах, М96т або комбінації цих модифікацій (усі 60 згідно з нумерацією за Кабат), тим самим оптимізуючи антигензв'язувальну афінність.

Як наслідок, авторам цього винаходу вдалося успішно отримати варіанти, активність яких пригнічувати активацію ГРІХ не підвищилася, проте активність яких заміщувати кофакторну функцію ЕМП помітно покращилася (біспецифічні антитіла, що складаються з комбінації константної ділянки Н-ланцюга за будь-якою з 5ЕО ІЮО МО: 95-98 та константної ділянки І- ланцюга за будь-якою з ЗЕО ІЮ МО: 99-104, та комбінації варіабельних ділянок, наведених у таблиці 4) порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом) та порівняно з варіантами, які у УМО2012067176 продемонстрували, що вони мають вищу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇЇ порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом) (біспецифічні антитіла, що складаються з константної ділянки Н-ланцюга 5ЕО ІЮО МО: 95 або 97 та константної ділянки Ї-ланцюга 5ЕО ІО МО: 99, та комбінації варіабельних ділянок, наведених у таблиці 3) (фіг. 3(2)). Крім того, як показано на фіг. 4, було визначено, що ці варіанти мають помітно покращену максимальну активність та специфічну активність порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом). Активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ, показану на фіг. 4, вимірювали за способом, описаним у референтному прикладі 1, за винятком того, що концентрацію фактора Х людини змінили на 22,9 мкг/мл, а концентрацію фосфоліпіду - на 6,0 мкМ.

Крім того, для того, щоб підтвердити, що активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇЇ сприяє утворенню тромбіну у плазмі, виконували тест тромбіноутворення за способом, відомим фахівцям у цій галузі. Конкретно, 8 мкл біспецифічного антитіла, розведеного ТВ5В, додали до 72 мкл плазми з дефіцитом ЕМП (Сеогде Кіпду) та інкубували при кімнатній температурі протягом 30 хвилин або довше. Далі, додали 20 мкл тригерного реагенту, що містив 20 мкМ фосфоліпід та 5 нг/мл фактора Хіа людини (Епгуте Кезеагсі І арогайогіє5). Далі, додали 20 мкл змішаного розчину Ріпо-буферу та Рійо-субстрату з РіиСа-Кії (Тпиготбріпозсоре), щоб розпочати реакцію коагуляції. Кількість утвореного тромбіну визначили, застосовуючи аналітичну систему для флуорометрії тромбіноутворення (Тпготбіпозсоре). Антитіло додали, щоб отримати кінцеву концентрацію 10 мкг/мл. Кінцева концентрація антитіла означає концентрацію суміші плазми з дефіцитом ЕМ ота розчину антитіла. Коли пікову висоту при додаванні антитіла використовували як показник рівня тромбіноутворення, результат показав, що усі біспецифічні антитіла, вказані у таблиці 5, демонстрували подальше підвищення рівня тромбіноутворення порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом, 0499/ 404//)327/1404). Крім того, при порівнянні з ЕМІІЇ, доданим як позитивний контрольний (Кодепаїе-Е5 ВІО-ЗЕТ; Вауег), ряд варіантів (ОНОТ/О 21//0НО01/9 01, ОНОг/ОЇ 22//ЮНО179СГ01, ОНОЗ/ОЇ 23/ЮНОгЛГОг, ОнНОЗОЇІ 24/9УНОг ог,

ОНОг/О 22//НОг/91 04, ОНОМОЇ 26/9НОгЛГО2,. ОНОМОЇ 26/9УНОБ/УСО5,. ОНОб/О 30//)НОТ/1-07,

ОНОг/О 31//9НОов8 ов, ОнНОб/О з2/9НоОТ/9УС07, ОНОб/О З32/9НО9//Л09,. ОНОб/О 30//УНІ1 0/9 10,

ОНО/ОІ 33/)Н11/)111) продемонстрували вищий рівень тромбіноутворення порівняно з тим, коли додавали 40 одиниць/дл ЕМІЇЇ, який є рівнем здорових людей (фіг. 5).

Таблиця З

Комбінації варіабельних ділянок АСЕ910 (еміцизумабу) та варіанти, які у М/О2012067176 показали, що мають вищу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІЇ порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом)

ЗЕО І МО ЗЕО І МО ЗЕО І МО ЗЕО І МО

Назва клону варіабельної варіабельної варіабельної варіабельної ділянки важкого | ділянки легкого | ділянки важкого | ділянки легкого ланцюга ланцюга ланцюга ланцюга

Таблиця 4

Варіанти, у яких значно покращилася тільки активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП

ЗЕО І МО ЗЕОІЮМО ЗЕО І МО ЗЕО І МО

Назва клону варіабельної варіабельної варіабельної варіабельної ділянки важкого | ділянки легкого | ділянки важкого| ділянки легкого ланцюга ланцюга ланцюга ланцюга оног/сІ22/оНноЗАОЗ | 57 17777762 | 775 ЩщЩ | 86 2 щФ оного ов/оногллОог | 59 1777766 | 77774 | 7 85.Ж Ж к оного ов/оноБлЛОю | 5 1766 | 777 | Ющ 88 2 щ оного гв/оНновАЛОЄ | 5 177767 | 78 | щ 89 оног/сі2гелНноБлЛОЇ | 5 177768 | 777 | ЮюЮюЮюЙвв що оног/сі29/НновАЛОЄ | 5 | 68 | 7 6 щЩ | 89 онов/сОІ30/УНО?ЮОЙ | 60717769 | 7 6 щЩ | 9 оного змНноВАОВ | 759 7 177777177077 77717809 2 онобв/сОЗ2/оНнО?ЮОЙ | 76077177 17111779 11111902 онов/сОсЗа/лнояЬОЯ | 76077711 17771181 11111192 0 онов/сізо/лунІолО | 607 177771769 | 82 г юДщ | 9

Приклад 3. Фармакокінетика (ФК) отриманих біспецифічних антитіл

Для зручності медикаментозного лікування пацієнтів з гемофілією А переважно, щоб антитіло, яке слід вводити, мало триваліший період напіврозпаду, щоб знизити частоту введення. Головні способи вдосконалення фармакокінетики антитіла включають спосіб підвищення рециркуляції у крові за допомогою ЕсКп та спосіб зниження клітинного поглинання через неспецифічне зв'язування (АОМЕ апа Тгапзіайопа! РнаптасокКіпеїїс5/Рпапптасодупатісв ої

Тнегарешіс Ргоївіпз (2015) р25-37І|.

Як показано у прикладі 2, авторам цього винаходу вдалося успішно отримати біспецифічні антитіла зі значно покращеною активністю заміщувати кофакторну функцію ЕМ, при цьому запобігаючи підвищенню їх активності пригнічувати активацію РІХ. У процесі утворення цих антитіл автори також зробили спробу ослабити неспецифічне зв'язування, яке може впливати на фармакокінетику антитіл.

Конкретно, систему аналізу зв'язування із позаклітинним матриксом (ЕСМ), яка відома як система оцінювання неспецифічного зв'язування іп мійго, використовували для оцінювання антитіл (патент США 2014/0080153|. Як наслідок, зв'язування з ЕСМ варіанта 0499/01 20//2327/21 01 (варіабельні ділянки: БЕО ІЮ МО: 45/43/46/44), який демонстрував високу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІІЇ у Прикладі 2, було дуже високим порівняно з

АСЕ910 (еміцизумабом). Проте, для варіантів, у яких Н-ланцюг антитіла проти РіІХ(а) був модифікований з використанням 5970, 1000, У100Е та їм подібних, а І -ланцюг антитіла проти

ЕІХ(а) був модифікований з використанням М320, М32Е, А55Е та їм подібних (що складаються з комбінації константної ділянки Нспй (важкого ланцюга) за будь-якою з 5ЕО ІЮО МО: 95-98 та константної ділянки Їсп (легкого ланцюга) за будь-якою з 5ЕО ІЮ МО: 99-104 та комбінації варіабельних ділянок, наведених у таблиці 5), зв'язування з ЕСМ було з успіхом помітно знижено (фіг. б).

Далі, варіанти, отримані внаслідок здійснення у константних ділянках вищезгаданих варіантів антитіл модифікації АСТ-Ес (Маре, (2017) МоїЇ.9, Мо.5, 844-853), яка покращує повернення у кров за допомогою ЕсКп, піддали тесту шляхом внутрішньовенного введення миші. Після введення антитіла зразки крові з часом зібрали та отримали плазму. Потім вимірювали концентрацію введеного антитіла у плазмі за способом І С-М5/М5. Дані часової динаміки концентрації антитіла у плазмі проаналізували за допомогою МУМіпМопіїпй мего 7.0 (Сепага), щоб розрахувати кліренс антитіла (СІ). В результаті цього визначили, що, при порівнянні з варіантом без модифікації АСТ-Ес, тобто ОНО1Т/091І 21/ОН01/)101 (варіабельні ділянки: БЕО ІЮ МО: 56/61//73/84) або ОНО2/О1 22/)НО2/)І 02 (варіабельні ділянки: 5ЕО ІЮО МО: 57/62//14/85), фармакокінетика антитіла (кліренс: СІ) була з успіхом помітно покращена у варіантах з модифікацією АСТ-Ес, а саме: ОНО4/О1 28//ОНО5/ДІ 05 (варіабельні ділянки: 5ЕО ІЮ

МО: 59/67//77/88),. ОНОМ/ОЇ 28//УНО6/2106 (варіабельні ділянки: 5ЕО ІЮ МО: 59/67//78/89),

ОНОЗ/О1 29//)НО5/І 05 (варіабельні ділянки: БЕО ІО МО: 59/68//77/88) та ОНОЗ/ОЇ 29//ЮНО6/-06 (варіабельні ділянки: ЗЕО ІЮ МО: 59/68//7 8/89) (фіг. 7).

Таблиця 5

Комбінації варіабельних ділянок біспецифічних антитіл, які демонструють низьку афінність зв'язування з ЕСМ

ЗЕОІЮМО ЗЕОІЮМО ЗЕО ІЮМО ЗЕОІЮМО

Назва клону варіабельної варіабельної варіабельної варіабельної ділянки важкого| ділянки легкого | ділянки важкого| ділянки легкого ланцюга ланцюга ланцюга ланцюга оного ов/оновАЛОЄ | 59 2 щ | 67 | 78 6 Щ | 88 оного га/лноБлОЮ | 59 2 щ| 68 | 7 | 88 оного 2а/оновАЛОЄ | 59 2 щ | 68 | 78 6 Щ | 89 онов/сОІ30/уНноОЛЮОЯ | 60 77177771717169 | Юля |. 4 оного зноВАОЇ | 759 17777770 | 780 | 2 Юющжщф ф9ч " онов/ОІЗ2/лоНногЮОХ | 77607777 11111799 онов/сОІЗг/онояОЯ | 76077777 11111811 Ї11111920 онов/сІз0/лунІоляО | 60 717777717169 | ющ-(8в2 Щ | 9 Ф

Приклад 4. Отримання біспецифічних антитіл

Як описано вище, автори цього винаходу здійснили модифікації двох відмінних важких ланцюгів (Н-ланцюгів) та двох відмінних легких ланцюгів (І-ланцюгів) біспецифічних антитіл, щоб отримати антитіла з переважною ефективністю та переважними властивостями.

Коли біспецифічне антитіло експресується, тоді експресуються два відмінні Н-ланцюги та два відмінні І-ланцюги. Тому можливі 10 різних комбінацій. Оскільки тільки одна з цих комбінацій представляє інтерес з точки зору біспецифічності, отримання біспецифічного антитіла, що представляє інтерес, потребує очищення одного антитіла, що представляє інтерес, з 10 відмінних антитіл, що є надзвичайно неефективним та складним. Як засіб розв'язання цієї проблеми відомий спосіб, у якому так робляться амінокислотні заміни у домені

СНЗ Н-ланцюгів Ід, що з перевагою вивільняється ЇдДС з двома комбінованими відмінними Н- ланцюгами, а для подальшого ефективного отримання молекули, що представляє інтерес, відомі амінокислотні заміни та їх комбінації у варіабельних ділянках та границі контакту доменів

СНІ-Сї для сприяння бажаної асоціації Н-ланцюга та І -ланцюга (М/О2013065708). Однак, також досліджувалися нові пари модифікацій.

Отримані антитіла та способи отримання

Далі в цьому описі важкий ланцюг та легкий ланцюг на боці антитіла проти РіХ(а) позначаються як О та к, відповідно, та важкий ланцюг та легкий ланцюг на боці антитіла проти

ЕХ позначаються як у та А, відповідно. Біспецифічне антитіло 01014-

САТІКІ С.АБ/АІ 869АЕ.ЕВЗМ-КТОО1494-54Т1Н СЛАБ/УІ 681К270-Іат! МІ 95 (варіабельні ділянки: 5ЕО ІЮ МО: 106/108//109/111, константні ділянки: 5ЕО ІЮ МО: 107/99//110/101) застосовували як матричну послідовність. Комбінації модифікацій, наведені у таблиці 6, зробили у цьому антитілі, щоб отримати варіанти.

Мета цього експерименту полягає у визначенні регуляції асоціації важкого ланцюга та легкого ланцюга. Однак, коли один важкий ланцюг має константну ділянку, яка сприяє легкому виникненню гомологічної асоціації, експресуються усі 9 типів молекул, що являють собою комбінації незбіжних пар, включаючи не тільки ті, що мають два відмінні важкі ланцюги, асоційовані гетерологічно, як показано на фіг. 8(8)-(10), але також й ті, які показано на фіг. 8(2)- (7). Це ускладнює аналіз та оцінювання молекули, що представляє інтерес (фіг. 8(1)). Тому, для того, щоб запобігти тому, щоб один важкий ланцюг спричиняв гомологічну асоціацію, зробили модифікації "виступ" та "западина" (КІН: виступи у западину) у константних ділянках важких ланцюгів (0 та .)), відповідно (5ЕО ІЮО МО: 107 та 110), так щоб кількість типів антитіл, які можуть експресуватися як комбінації незбіжних пар, скоротилася б з 9 типів до З типів (фіг. 8(8)-(10)), та виконали аналіз.

Під час трансфекції чотири ланцюги експресувалися при трьох співвідношеннях кількості плазмід (С0:КА 2 1:3:1:1, 1:1:1:1 та 1:1:1:3), та їх очищували за способами, відомими фахівцям у цій галузі. Коли ці ланцюги експресуються за умов, коли легкий ланцюг є надмірним, недостатня регуляція між важким та легким ланцюгами сприятиме утворенню комбінацій незбіжних пар. Навпаки, якщо біспецифічне антитіло, що представляє інтерес, утворюється з високою швидкістю за усіх трьох умов, можна вважати, що зроблена пара модифікацій має високу спроможність регуляції.

Крім того, для антитіл з незбіжних пар як референтні антитіла, що використовуються в катіонообмінній хроматографії (Сайоп Ехспапде Спготаїодгарпу (СІЕХ)), отримали референтні антитіла з однаковими легкими ланцюгами (С/к//Л)/к та О/А//О/Х) шляхом експресії трьох ланцюгів

О/к/) або О/АЛ).

Способи оцінки та аналізу

Отримані антитіла проаналізували за допомогою катіонообмінної хроматографії (СІЕХ), застосовуючи систему АПШапсе (МУаїеге). Спосіб з використанням градієнта двох рідин виконували, застосовуючи УМС-ВіоРго 5Р-Е, 4,6 х 100 мм як аналітичну колонку, СХ-1 рн

Стадіепі Вичїег А, рН 5,6 (Тнепто) як рухому фазу А та СХ-1 рН Стгадієпі Вимчег В, рН 102 (Тпепто) як рухому фазу В. Вимірювання здійснювали при довжині хвилі 280 нм. Дані аналізували із застосуванням ЕтроугегЗ3 (М/аїег5) та розрахували відношення для кожного виявленого піка. У випадках, коли спостерігався лише єдиний пік, коли експресувалися чотири ланцюги, цей пік визначали як головний пік, тобто пік біспецифічного антитіла. Коли спостерігали численні піки, пік, який не перекривав піки референтних антитіл для антитіл з незбіжних пар, які мали однаковий легкий ланцюг, визначали як головний пік.

Результати та обговорення

Відношення піка біспецифічного антитіла, розраховане на підставі даних аналізу, наведено у таблиці 6, та кожну хроматограму показано на фіг. 9.

Визначили нові пари модифікацій Мо 14 (пара з амінокислотного залишку на позиції 175 (згідно з нумерацією ЕУ) у СНІ та амінокислотного залишку на позиції 180 (згідно з нумерацією за Кабат) у СІ) та Мо 15 (пара з амінокислотного залишку на позиції 175 (згідно з нумерацією

ЕУ) у СНІ та амінокислотного залишку на позиції 131 (згідно з нумерацією за Кабат) у СІ), які демонстрували спроможність регуляції, порівнянну зі спроможністю регуляції пари Мо 10 (пара з амінокислотного залишку на позиції 147 (згідно з нумерацією ЕО) у СНІ та амінокислотного залишку на позиції 180 (згідно з нумерацією за Кабат) у СІ) та пари Мо 11 (пара з амінокислотного залишку на позиції 147 (згідно з нумерацією ЕО) у СНІ та амінокислотного залишку на позиції 131 (згідно з нумерацією за Кабат) у СІ), які належать до відомих модифікацій з УМО2013065708.

Крім того, визначили нову пару модифікацій Мо 9 (пара з амінокислотних залишків на позиції 147 (згідно з нумерацією ЕМ) та на позиції 175 (згідно з нумерацією ЕО) у СНІ та амінокислотних залишків на позиції 131 (згідно з нумерацією за Кабат) та позиції 180 (згідно з нумерацією за Кабат) у СІ), яка демонструвала таку ж високу спроможність регуляції, що і відома комбінація Мо 6 (пара з амінокислотних залишків на позиції 147 (згідно з нумерацією ЕМ) та на позиції 175 (згідно з нумерацією ЕМО) у СНІ та амінокислотних залишків на позиції 131 (згідно з нумерацією за Кабат) та позиції 160 (згідно з нумерацією за Кабат) у СІ).

Крім того, відомо, що специфічній асоціації між важким та легким ланцюгами сприяє пара модифікацій амінокислотного залишку на позиції 39 (згідно з нумерацією за Кабат) у МН та амінокислотного залишку на позиції 38 (згідно з нумерацією за Кабат) у МІ (М/О2013065708).

Тому, цю пару модифікацій зробили у Мо 9, внаслідок чого отримали Мо 18 та Мо 19, та це проаналізували. Як наслідок, спостерігали, що в результаті усіх модифікацій спроможність регуляції була високою.

Крім того, коли пару модифікацій Мо 9, яку вперше визначили у цьому винаході, застосували до матриці, яка має пару модифікацій (ЕЗ56К-К4З39Е) для стимульованої асоціації Н-ланцюга, відмінної від КІН (921014939Е-С24Т1АБІ 24409К.ЕЗБ56К/ АІ 869038КАЕ.ЕвЗ3М-КТО// 9У1494039К- 60 с4Т1АБІ 2409К.КАЗО9Е/ МІ 681.К270.038Е-Іат1МІ 95 (варіабельні ділянки: 5ЕБЕО І МО:

112/113//114/115, константні ділянки: БЕО ІЮ МО: 117/99//116/101)), також спостерігали високу спроможність регуляції (Мо. 20: 010149039Е-С4ТІН2АБІ 2409К.ЕЗ56К/АІ 869038КАЕ.Ев8ЗМ-

КОМИ 7Е1600//)1494039К-СА4Т1ІП1ЗАБІ С409К.КАЗОЕ/УІ 681.К270.038Е-Іатіро (варіабельні ділянки: ЗЕО ІЮ МО: 112/113//114/115, константні ділянки: зЗЕО ІЮ МО: 119/100//118/102).

Таблиця 6

Введені модифікації та відсоткове відношення біспецифічного антитіла за кожної умови експресії (95)

О-ланцюг у-ланцюг Ес Відсоток біспецифічного антитіла (95 кількості плгзмід

ОКХ, 9 147|751|1318 |23|31|60|8019 |47|75|13|38|23|31 | 60 80 1 1 З

А пииеея 0 21|-1-|ЇК!-|-|-|ЕЇЕЇЕЇ-(ЇЕ Е ЕЇ-|к кік/ ку кін 799,89 99,80199,58) з1І-1-1-1-1-|1-ЇЕЇ-(ЕЇ ТЕ -/-1-|- к/- Кк кін, 94,57 95,90194,63 4|-1-|ЇК!-1-71-|-ТЕЇЕЇ ТЕ ЕЕ -Ї |- -|к/ Кк кін, 796,95 98,67|д9,99 51-1-,1-1-1-71-,-1-|ЕЇ-ТЕ -ЕЇ-!Їк/-|- к/| кін, 189,47 в2и3|д2еБ 6|-1-|ЇК!-|-|-ЇЕЇТЕЇ-|-(Е ЕЕ -/-|- кі!к/-| кін, 799,15 98989523 71-1-1-1-1-1-(ЕЇ-|-|-(Е - ЕЇ- ко к!-/-| кін 798,19 95,81181,57 81|-1-|Їк!-/-71-,-ТЕЇ-!-|- ЕЕ єЕЇ-!к/-|к/ | кін, 85,85 79,87 |23 91|-1-|к!-|-|-ЇЕЇ-ЇЕЇ ТЕ ЕЕ -/-|- к/- /к/| кін, 197,53 97,75196,62 1о,1-1-,1-1-1-71-1-1- (ЕЕ! ТЕ -/-1-1-1-1|- к| кін, 85,72 78,41|43,93 11-1-1-1-1-1-(ЕЇ-/- | (ТЕ -/-1-|- 7 к/- 1 -| кін, 91,72 86,80136,37 12|-|-|Їк!-1-1- 1 (ЕЇ-Ї-|- ЕЕ -1-|- 07 -|к/-| кін 82,07 78 езиа 131-1-1-1-1-71-,1-1-1-1-1- А ЕЇ-|Їк/-|- 1 -| кін, 773,93 6669249 14|-1-|Їк!-1-1-1-1-(ЕЇ-|- ЕЕ -1-|-1-1|-к| кін, 80,27 76,61|46,85 151-1-|Їк!-/-71-(ЕЇ-ЇТ-Ї | ЛЕ -/-|- к!/- | | кін, 84,05 87101793 16|-(ЕЇЕЇ-!-/7-|кК!-|К/!-|- Кк -1-|- 1 ЕЇ- є! кін, 798,30 95,98І81,09 17|-(ЕЇЕЇ-!-/-|кІКк/-/-|1- к/-1-|- ЕЇ!- -| кін, 793,48 83385066) 18|1ЕЇ-|К!-|К|-ЕЇ-(ЕЇ кІє ЕЕ -(ЕЇ- КІ- КІ Кін, 796,50 99249985 19|К|-|к! ТЕЇ ТЕЇ-|ЕЇЕЇТЕ ЕЕ -|К/!- К/- к/| кін 199,59 9842І97,75

ПАСА ЕЕ вв ие 439Е "- вказує на те, що жодної модифікації не було зроблено. Кількість кожного залишку вказано згідно з нумерацією за Кабат для варіабельної ділянки Н-ланцюга, варіабельної ділянки | - ланцюга та константної ділянки І-ланцюга, а згідно з нумерацією БО - для константної ділянки Н-ланцюга.

Цей винахід виявив нові легкі ланцюги, які знижують реакційну здатність по відношенню до антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) та демонструють активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ, та виявив амінокислотні заміни та їх комбінації для важкого та легкого ланцюгів, які покращують активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ біспецифічних антитіл, що мають ці легкі ланцюги, при цьому не підвищуючи їхньої активності пригнічувати активацію РІХ. Ці амінокислотні заміни та їх комбінації є корисними для утворення біспецифічних антитіл, які мають кращу активність заміщувати кофакторну функцію ЕМ порівняно з АСЕ910 (еміцизумабом).

Референтний приклад 1

Можливий спосіб покращення активності АСЕ91О заміщувати кофакторну функцію ЕМ полягав в отриманні з бібліотеки антитіл людини нового І-ланцюга з послідовністю, повністю відмінною від спільного І -ланцюга, у відповідності з кожним з Н-ланцюгів антитіла проти РІХ(а) та антитіла проти ЕХ (0499 та 92327).

Звернувшись до способів, відомих фахівцям у цій галузі, конкретно, до Віоспетіса! апа

Віорпузіса! Везеатсп Соттипісаййопве, (2000), 275, 2, 553-557 та йому подібних, автори цього винаходу отримали нову бібліотеку, замінивши І -ланцюг антиідіотипічного антитіла до АСЕ910 (еміцизумабу) бібліотекою І -ланцюгів людини, та здійснили пенінг проти міченого біотином РіІХа людини та міченого біотином ЕХ людини, щоб отримати антитіла з новими легкими ланцюгами, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Як наслідок, ОМК131 (ЗЕО ІЮО МО: 13), ОМК284 (ЗЕО ІЮО МО: 14), ОМКЗ315 (5ЕО ІО МО: 15),

ОМІ 182 (5ЕО ІО МО: 16), ОМІ 492 (5ЕО ІО МО: 17) та ОМІ. 576 (5ЕО ІЮО МО: 18) були визначені як варіабельні ділянки Ї-ланцюга для біспецифічних антитіл проти ЕБІХ(а) людини, які мають активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ, та "МК131 (5ЕО ІО МО: 19), УМК163 (5ЕО І

МО: 20), УМК2г52 (5ЕО ІЮ МО: 21), УМК263(5ЕО І МО: 22), "МКЗ39(5ЕО ІО МО: 23), (БЕО ІЮ МО: 24), УМКЗ351 (5ЕО ІЮО МО: 25), УМКЗ6О (5ЕО ІО МО: 26), УМКЗ378 (5ЕО ІО МО: 27), УМКЗ382 (5ЕО

ІО МО: 28), УМІ 036 (5ЕО І МО: 29), УМ 072 (5ЕО І МО: 30), УМІ 095 (5ЕО ІО МО: 31), МІ 1 76 (5ЕО ІО МО: 32), УМ 208 (5ЕО ІО МО: 33), УМІ 224 (5ЕО ІО МО: 34), МІ 260 (5ЕО ІО МО: 35),

УМ 056 (З5ЕО ІО МО: 36), УМІ 059 (5ЕО І МО: 37), УМІ 226 (5ЕО ІО МО: 38), УМІ 250 (5ЕО ІЮ МО: 39), УМІ 263 (ЗЕО ІО МО: 40) та МІ 281 (ЗЕО ІО МО: 41) були визначені як варіабельні ділянки І - ланцюга для антитіла проти ЕХ людини.

Різноманітні біспецифічні антитіла, які мають ці нові І-ланцюги, експресували та їх очищували за способами, відомими фахівцям у цій галузі. Отримані антитіла наведені у таблиці 7 (показано назву клону, БХЕО ІЮ МО варіабельних ділянок важкого ланцюга та 5ЕО ІЮ МО варіабельних ділянок легкого ланцюга). Варіабельну ділянку нового І -ланцюга використовували тільки для одного з ланцюгів. Для інших ланцюгів використовували варіабельну ділянку 1404, спільний І-ланцюг АСЕ9ТО (5ЗЕО І МО: 45). Для Н-ланцюга використовували варіабельну ділянку 2499 (5ЕО ІЮО МО: 45) та варіабельну ділянку У327 (5ЕО ІО МО: 46). Задля зручності назви нових І-ланцюгів використовували як назви клонів. Для антитіла проти РіХ(а) використовували ОСІ (5ЕО ІО МО: 95) та СІ 1 (5ЕО ІО МО: 99) як константні ділянки Н-ланцюга та І-ланцюга, відповідно. Для антитіла проти ЕХ використовували .С1 (ЗЕО ІО МО: 97) та СІ З (ЗЕО ІО МО: 101) як константні ділянки важкого ланцюга та легкого ланцюга, відповідно.

Кожне очищене біспециічне антитіло застосовували для оцінювання активності заміщувати кофакторну функцію ЕМ за допомогою способу, відомого фахівцям у цій галузі. Конкретно, вимірювання виконували за наступним способом. Усі реакції виконували при кімнатній температурі. 5 мкл розчину антитіла, розведеного сольовим розчином з буфером Т"тгі5, який містив 0,195 альбумін бичачої сироватки (у цьому описі далі скорочується як ТВ5ЗВ), змішали з 5 мкл фактора ІХа бета людини з концентрацією 150 нг/мл (Епгуте Кезеагсі І арогайогієв) та інкубували у планшеті з 384 лунками при кімнатній температурі протягом 30 хвилин.

Ферментативну реакцію у цій суміші розпочали шляхом додавання 5 мкл фактора Х людини з концентрацією 24,7 мкг/мл (Еп7уте Кезеагсі І арогайогієз). Через 4 хвилини реакцію припинили, додавши 5 мкл 0,5 М ЕОТА. Реакцію забарвлення розпочали шляхом додавання 5 мкл розчину забарвлення субстрату. Після 30 хвилин реакції забарвлення виміряли зміну в поглинанні при 405 нм, застосовуючи ЗресігоМах 340РС384 (МоіІесшаг Оемісез). Розчинником фактора ІХа бета людини та фактора Х людини був ТВ5В, що містив 4,0 мкМ фосфоліпідного розчину (ЗХ5МЕХ

СО.) та 1,5 мМ Сасі». Розчин забарвлення субстрату, 5-2222 (БЕКІЗОЇ МЕПІСАМ,), розчинили очищеною водою до 1,47 мг/мл та використовували для аналізу. Результати вимірювання активності заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇЇ кожного очищеного біспецифічного антитіла наведено на фіг. 10. Кінцева концентрація антитіла, яка використовувалася у вимірюванні активності заміщувати кофакторну функцію ЕМ, показаної на фіг. 10, становила 66,7 мкг/мл для антитіл, утворених новим легким ланцюгом проти РіІХ(а), або 100 мкг/мл для антитіл, утворених новим легким ланцюгом проти ЕХ. Кінцева концентрація антитіла означає концентрацію у суміші розчину антитіла, фактора ЇХа бета людини та фактора Х людини.

Визначили, що усі біспецифічні антитіла, утворені з будь-яким з нових І-ланцюгів, мали активність заміщувати кофакторну функцію ЕМП.

Таблиця 7

Біспецифічні антитіла, які мають нові І -ланцюги, які були отримані важкого ланцюга легкого ланцюга

Референтний приклад 2

Отримали варіанти із замінами, у яких усі СОК 0499 та 9327, Н-ланцюги АСЕ910, всеосяжним чином піддали мутації шляхом заміни усіма амінокислотами, за винятком цистеїну.

Використовуючи ці варіанти та нові І -ланцюги, отримані у референтному прикладі 1, здійснили великомасштабний скринінг стосовно активності заміщувати кофакторну функцію ЕМ, щоб визначити амінокислотні заміни, які покращували активність заміщувати кофакторну функцію

ЕМІІ. Наприклад, амінокислотні заміни були зроблені у ОМК131, новому І -ланцюзі для антитіла проти РІХ(а) (варіабельна ділянка: 5ЕО ІО МО: 13), внаслідок чого отримали ОАЇ 187 (варіабельна ділянка: 5ЕО ІО МО: 42) та ОАІ 201 (варіабельна ділянка: 5ЕО ІЮ МО: 43). Подібно до цього амінокислотні заміни були зроблені у ОМ 095, новому І -ланцюзі для антитіла проти ЕХ (варіабельна ділянка: БЕО ІЮ МО: 31), внаслідок чого отримали .)УІ 280 (варіабельна ділянка: 5ЕО ІО МО: 44). Для антитіла проти РІХ(а) використовували ОС1 (ЗЕО ІО МО: 95) та СІ 1 (5ЗЕО

ІО МО: 99) як константні ділянки Н-ланцюга та І-ланцюга, відповідно. Для антитіла проти ЕХ використовували УС1 (ЗЕО ІЮ МО: 97) та СІ З (ЗЕО ІО МО: 101) як константні ділянки Н-ланцюга та І -ланцюга, відповідно.

Результат показав, що деякі амінокислотні заміни, наведені нижче у таблиці 8, можуть покращувати активність АСЕ910 (еміцизумабу) заміщувати кофакторну функцію ЕМ. При вимірюванні активності заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ спосіб, описаний у референтному прикладі 1, застосовували для варіантів з модифікованим Н-ланцюгом для антитіла проти ЕХ.

Для варіантів з модифікованим Н-ланцюгом для антитіла проти РІХ(а) виконували вимірювання, застосовуючи спосіб, описаний у референтному прикладі 1, за винятком того, що концентрацію фактора ІХа бета людини змінили на 450 нг/мл. Таблиця 8 демонструє специфічну активність кожного варіанта з амінокислотними замінами відносно АСЕ910 (еміцизумабу) (кожне значення у таблиці). У таблиці 8 (-) вказує на те, що рівень експресії антитіла був низьким.

Таблиця 8

Активність заміщувати кофакторну функцію ЕМІЇ варіантів біспецифічних антитіл, у яких амінокислотну заміну було зроблено у 0499 та 4327 я Ар рем вм е мов то єн кв км х 1 | М 04100 - | - Т0.010.010.010.0Ї - |1.010.010.010.015.510.010.010.0 110.0) / за | М Щ0.611.310.010.010.011.5| - |1.4|2.010.0|6.2|2.210.1|10.9|1.210.016.11|0.6| / з3| о |1-1/-1|-100|-|0лІ-0о0,!-|- ог /10лІ-1-1-1-1- 1 34 | 1 (12) / Мо78.910.010.0|2.4| - |8.010.2|2.9410.211.510.0|1.110.0 ІД1.8113.210.0

З5 | 0 Щ0.4|4.6|76.2, - ІЗ9.0и5.773.910.0| / |г2.8І156.010.0 10.1 10.1 |1.410.010.510.0 10.11 50 | 5 |54/1.010.914.110.0|Ї - (2.816.010.0|Ї / (0.013.310.0| - (0.210.011.21 3.5 | 1.3 51 | 1 10.0, /| - 10.010.0|2310.010.0|Ї - (0.310.010.01 - | - Т0.010.01 - Т0.010.0 52 | 5 |1.114810.010.010.013.811.019.918.1| / | - П5.110.034.000.1| - Іг6.018.2|2.0 5га| Р |04|- 10.7 | /Т0л14910.011.610.010.010.010.310.0| - 10.010.0101 | 1.3 53 | 5 Щ0.910.110.310.010.010.011 310.010.0Ї / |1.410.110.011.310.010.210.310.010.2 54 | с (13100100) - (00100 / |0.0|0ол|1.2| - (00100, 0.0) - | - ооо 55 | о Щ|0.010.0Ї - 10.010.0102|3.910.0Ї /| - (0.0 - Т0.0|141| - /7.410.010.010.01 56 | 5 | - (0.0/11.9134102|0.013210.0Ї - | / (02|1110.6|16.210.811.910.0| - (25.8 57 | т |2.7|21|3.013.1102117| - Т0.913.8|2.6| / (0.211.6|11.9|4.210.7|2.3|11.5|2.0 58 | М | - /17|1.910.4|Ї - (1л102Щ15.010.610.614.7 3.81 |5.813.610.214.5|15) / | М Щ|0.010.5| - 1.010010 |00|0л1| - | - | Щ0.0115| - |0.010.0)/1.0|о.4| У 60 | в 5.741134 13.9112|3.4|2.8| - (41|3.5|23| - | - |41|37| / |40|00,| - 61 | я (1.81 1.5/1.511.611.7/1.6|2.0|2.1|2.210.0|1.941.110.713.7| - | / 117114 б2 | Е |3.3|1.1)11.811.313.4|14|42|4.8|44|52|4516.01 /|3.01 3.010.0Ї - |1.610.0 63 | М (29125131) 1.311.01 / 01 10.510.110.4|1.110.510.1|3.510.110.014.010.5 | 66 64 | К (12/15/1312 |00|1л1|1л1|17011.2/1.3111104104|1.2| / |4.810.010.8 | 1. 95 | в /Щ0.010.410.0) - 0лІ02|0.0|10.0|1л1|0.0|0л| - / - | - (12) /10.010.010.0 96 | т /Щ5.510.510.411.610.111.3| - 3.3 Н5.0И5.0| / |4.211.5|1.610.510.3|1.3|2.1 | 2.6. 97 | с | - Т0.110.010.313.110.4| / |1.410.7|2.1|0.4 п1.611.8|1.210.210.111.011.9 | 1.1 98 | в /Щ4519.019.55.8|2.2|4.115.7|7.7|17.615.7|8.113.714.1|5.8|4.0) / /5.813.9|8.2 99 | Е /|3.4М0.417.015.515.817.011.713.014.314.014.8|3.41 / |4.2|2.2|2.013.3|1.8 | 3.6 лоба| с |5.4/1.115.115.810.410.6Ї / |2.7| - |1.7| 1.012.610.9|2.5|6.5|17.1|12.112.012.7 лобр| с |5.311.010.410.410.810.9| / (1.11 1.012.3111| 14112106 - (0.210.010.010.2 лобс| с (0.210.010.010.010.110.0Ї / |1.110.010.4|0.010.010.010.0| - 10.010.010.010.0 тооа| М Т0.010.510.3/0.310.310.610.010.010.010.1 (0.110.010.011.410.010.0110.3| / 3.6 10б0е| М 1Щ5.114.513.7 3.010.414.911.015.113.213.8|5.211.7115|194|11| - І3л|15І / слоог| є Пя7г4.9417.68.617.823.2) - М18.616.318.0 11.3) 1.312.010.710.010.6Ї / 101107 1011 о |5.2|41|2.111.818.613.912.313.212.613.1|2.9| 7 12.7 |2.4|2.3|2.512.1| 3.01 2.5 (лог | М |44|41|4.6|4.1|4.6|5.8|6.3|4.3|4.3|2.6|5.9|8.6|6.5|4.6| 3.6 | 3.2|3.9| 3.5 / 5

Модифікація Н-ланцюга антитіла проти ЕХ

Пози- Мута-ї А І Р.мМманРмо9о5т1Т0 тн нкК А ЕМ У ція ція М

З1 р - 8.9 13.014.2..- 11.015.514.714.615.312.5 / 14.017.412.611.213.713.313.6 32 М 10704 0.8 5.6 0.3 1.9, 53.3 / 4112542 0.2 0.8 5.2 3.1 3.5 44 1.5 43

ЗЗ М 041.8 2.8 1.7 001212 / 1.8, 34 01 02 0.0 0.01.50.1 0002 0.0 34 М 26110121 ./ - 124 .- - - - 16 - - 78 .- - 741.3 34 0 34 42 31 6.6 - 5.0 3.5 13.111.45.0 0.3 / 11.4 6.0 - 3.5 4.8 2.3

ОО 31 030205 - 241.2 41 1.8 3.9 1.7 / 1.3 0.1 0.1 0.0 0.6 0.0 01 51 1 10.2 / 10.3102 - 1281.6 - 9.511.512.7 0.6 0.7 - 3.1 0.1 4.8 0.7 4.7 52 М 1.8 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.6 / 0.7 2.9 0.0 0.1 0.5 3.5 0.0 0.1 0.1 0.0 0.0 52а Т 6.0 7.7 42 3.9 72 .9.0,32 - 0.911.9 ./ 0.1 0.0 1.0 0.3 0.1 1.5 4.0 0.7 53 А 3.7 7.4 5.0 5.3 3.0 6.9 3.912.46.0 3.8 0.3 1.4 1.9 7.2.9.8 / 7.4 8.9 5.8 54 З 12.84.33 36 62 0.1 8.010.85.3 54 / 63 2.7 1.1 5.8 3.1 4.7 10.116.012.2 сьо 11062 8.3 8.7 3.1 8.0 / 2.7 11.012.192 4.1 66104 7.0 7.9 7.6 7.3 6.7 56 Сб 8.3 11.211.411.6 8.8. / 11.313.313.313.8 4.6 3.2 8.4 10.212.310.413.710.3 57 З 11.910.9 6.5 12.212.112.913.710.612.9 ./ 10.96.99 0.7 2.5 0.1 0.3 0.8 3.0 01 58 1 5.8. / 7.7 3.9..- 3.7 1.3 6.3 7.2 2.7 11.30.1 2.7 3.3 7.5 4.2 4.8 2.6 5.5 59 М 3.211.85.9 3.7 0.4 1.3 1.7 5.9 7.8 72 94 6.7 6.012.7 4.0 3.2 4.9 606 / бо М 11.09.010.410.25.0, 9.6. 5.2.0/ 61 2.2 1.1 10.7 4.4 2.2 4.6 10.1 9.8 10.011.7 61 Е 17.612.510.8 6.4 6.8 2.3 7.5 2.6.11.112.0 7.9 3.6 / 5.3 9.6 6.9 8.1 7.7 6.9 62 Е 9.5 9.9 10.611.1 9.3 11.613.613.015.242 .2.9.- / 9.3 9.8 12.610.013.710.9 63 Е 12.511.36.3 12.1. .- 12.213.112.610.212.3 - 11.3 6.315.9 7.8 6.2.../ 16.716.3 64 ОО 16.214.711.816.0 9.7 14.815.015.0 / 15.815.314.416.213.714.212.415.713.915.5 65 0 01453 - 12.615.516.1. .- 11.515.015.415.614.9 14.214.812.914.514.912.414.8 95 А 02 0.61.6 1.0 0.7 1001 00 08010200 - 1257 / 000403 96 К 3.0 2.0 1.8 4.3 0.0 3.6 1.1 1.0 2.3 1.2 1.7 0.0 1.0 1.7 / 15.7 1.9 1.9 1.4 97 З 14822 1.6 52 1.4 3.710254 6.5 / 76 2.9 3.9 7.2 3.5 3.2 1.5 3.2 98 М 2.2 1.1.1.9 7.3 0.1 1.4 1.4 1.3 1.9 1.9.1.000.2.0.2 8.8 1.5 7.966942 / 99 по 46 - - 520.00.5 / 76 76 6.8 1.7 8.8 3.7 6.1 5.7 72 63 3.7 40 100 У 12.6 8.3 14.510.8 6.2 10.9 9.3 12.612.912.011.510.9 7.8 12.012.812.213.96.5.Ч/ 100а м 59 2.7 5.7 3.5 1.3 7.0 2.8 8.9 3.9 7.1 7.7 3.3 3.9 14.7 2.4 6.7 13.411.6 / 1006 (1 4.110.6 / 12.90.6 7.2. .0.0 4.8 3.9 1.9 3.1 1.5 0.3 8.0 0.8 0.2 14.86.2112 101 0 6.555254 5.3 6.7 68 6.7 6.7 706862 / 7034 4441 - - - 102 Е 12.111.710.811.7 6.9 13.312.611.211.3 9.4 10.212.5 / 10.310.910.510.512.712.9

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«110» ЧУГАЇ СЕЙЯКУ КАБУСІКІ КАЙСЯ (СНОСАЇ ЗЕЇМАКО КАВИЗНІКІ КАЇІЗНА) «1205 МУЛЬТИСПЕЦИФІЧНА АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНА МОЛЕКУЛА, ЯКА МАЄ АКТИВНІСТЬ

ЗАМІЩУВАТИ КОФАКТОРНУ ФУНКЦІЮ ФАКТОРА КОАГУЛЯЦІЇ КРОВІ МП! (ЕМП), ,

ТА ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ СКЛАД, ЯКИЙ МІСТИТЬ ЗГАДАНУ МОЛЕКУЛУ ЯК АКТИВНИЙ

ІНГРЕДІЄНТ

-1305 С1-А1716Р -1505 ОР 2017-189647 «151» 2017-09-29 «160» 287 170» РаїепіНп мегзіоп 3.5 «210» 1 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 1

Туг Туг Азр Пе Сп 1 5 «210» 2 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 2 зег Пе 5ег Рго Зег Спу Сп Зег ТАг Туг Туг Агу Ага Сім Маї Гуз 1 5 10 15 спіу «210» З «2115» 14 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» З 60

Агу Тнг Ссіпу Агу Сім Туг Сіу Спу Сіу Тгтр Туг Рне Азр Туг 1 5 10 «-210» 4 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 4

А5р Азп Азп Меї Азр 1 5 «2105» 5 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 5

Азр Пе Азп ТНг Агу бег Сіу Спу 5ег Пе Туг Азп Си Спи Рпе Сіп

Зо 1 5 10 15

А5р «-2105» 6 «-2115» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 6

Ага Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азвр Си 1 5 10 -2105» 7 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 7 бо

Гуз Аа бег Ага Авзп Іе Сіи Агу Сп І ей Аа 1 5 10 «210» 8 «2115 7 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 10. «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 8 ап Аа 5ег Агу Гуз Сім Бег 1 5 «210» 9 20. «2115» 9 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 25 «223» Штучно синтезована послідовність «400» 9

Сіп Сп Туг 5ег Авр Рго Рго Геи ТНг 30 1 5 «210» 10 «211» 448 35 «212» РВАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 40 «400» 10

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15 45 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг зо 50

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї 55 Зег Зеї Пе 5ег Рго 5ег Сіу Сіп 5ег ТНг Туг Туг Агу Аг Си Маї бо

Гуз Спіу Ага Ре Тнг Іе Зег Ага Азр Азп 5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 60 65 70 75 80

Ї еи Сп Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95

Аа Агу Ага Тнг Сіу Аг Спи Туг Сіу Спу Спу Ттр Туг Рне Авр Туг 100 105 110

Тр Сту Сп Слу ТНг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа 5ег ТНиг Гуз Су 115 120 125

Рго 5ег Ма! Ре Рго І ви Аїа Рго Суз 5ег Агу Зег ТАг Зег Сіи Зег 130 135 140

Тиг Айва Аа І єи Стлу Суз І еи Маї Гуз Азр Туг РНе Рго Си Рго Маї 145 150 155 160

Тпг Маї Зег Тгтр Авп 5ег С1лу Аа Геи Тнг Зег Сіпу Маї Ніз Тиг Рпе 165 170 175

Рго Аа Маї І ви Сип 5ег 5ег Стпу Геи Туг 5ег І еи Зег Зег Ма! Маї 180 185 190

Зо

ТАг Маї Рго 5ег Зег 5ег І ви Спу ТНиг Сп ТАг Туг Тнг Суз Азп Маї 195 200 205

Авбр Нів Гуз Рго бег Азп Тпг Гуз Маї Авр Гуз Ага Маї Спи Зег Гуз 210 215 220

Туг аїчу Рго Рго Су Рго Рго Суз Рго Аа Рго Си РнНе ГГ еи СПу Су 225 230 235 240

Рго бег Ма! Рне Геи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТНиг І ви Ме! Пе 245 250 255 зег Агу ТАг Рго Сіш Маї Тниг Суз Маї Маї Маї Азр Маї бег Сп Спи 260 265 270

Азр Рго Сіи Маї Сіп Рне Азп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Спи Маї Ні 275 280 285

Авп Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Сі См іп Туг Авзп 5ег Тниг Туг Ага 290 295 00

Уаї Ма! Зег Ма! І еи Тнг Маї І еи Ніз Сіп Авр Тр Гей Азп Су Гуз 60 305 з10 315 зго

Сіш Туг Гуз Суз Гуз Маї Зег Авп Гуз Су І ви Рго 5ег 5ег Пе Спи 325 330 335

Гуз Тниг Пе Зег Гуз Аа Гуз Спу Сп Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг 340 345 350

Тиг Ге Рго Рго бег Сіп Гуз Сім Меї Тнг Гуз Авп Сп Маї 5ег Гей 355 360 365

ТАг Суз І ви Маї Гуз Спіу Рне Туг Рго Зег Азр Їе Аа Маї Сіш Тгтр 370 375 380

Сіи Зег Азп Су Сп Рго Си Авп Авзп Туг Гуз Тиг ТАг Рго Рго Маї 385 390 395 400

І еи Азр 5ег Авр Сіпу 5ег Ре Ре Г єи Туг 5ег Гуз Геи Тнг Ма! Азр 405 а410 415

Гуз Зег Агу Тгр Сп Спи Спу Азп Маї Рпе 5ег Суз 5ег Ма! Меї Нів 420 425 430

Зо

Сім Аа І еи Ні Азп Агу Туг ТАг Сп Гуз 5егі еи 5ег І ви бег Рго 435 440 445 «2105» 11 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 11

Сп Маї Сіп Г еи Маї Сип Бег Спу Зег Сім Ге Гуз Гуз Рго Спу Аіа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Су Туг Тиг Ре ТНг Авр Авп 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп Тпг Агу Зег Сіу Спу Зег Пе Туг Азп Спи Сім Рпе 50 55 60 60

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Авр Гуз 5ег ТНг Азр Тпг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сі І єи бег 5ег І ви Агу 5ег Сіш Авр ТНг Ада Тнг Туг Ніз Сувз 85 90 95

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Си Ттр Спу Спи Спу 100 105 110

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 115 120 125

Рго ГГ еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140

Стпу Суз І еи Ма! Гуз Азр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Ма! Зег Тр 145 150 155 160

Авп Зег Сіу Аа І єи ТАг Зег Сіу Маї Ні Тиг Рне Рго Аїйа Маї І ви 165 170 175

Сіп бег Зег Су І еи Туг Зег І еи 5ег бег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зег ЗегІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНиг Суз Авп Маї Азр Ні Гуз Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіши РНе І еи Сіу Спіу Рго 5ег Ма! Рпе 225 230 235 240

І еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Ар Тпг І еи Ме! Пе Зег Агу ТАг Рго 245 250 255

Сі мМаї Тнг Суз Маї Маї Ма! Азр Маї 5ег Сіп Сім Авр Рго Сім Маї 260 265 270

СіІп РНе Азп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Спи Маї Ніз Авзп Аа Гуз ТНг 275 280 285

Гуз Рго Агу Си Сім Сп Туг Азп Зег ТНг Туг Ага Маї Маї 5ег Маї 290 295 00 60

Ї еи Тниг Маї І еи Ні Сіп Азвр Тр І еи Авзп Су Гуз Си Туг Гуз Сувз 305 з10 315 зго

Гуз Маї бег Авп І уз СЛУ І еи Рго бег 5ег Пе Си Гуз ТНг Пе 5ег 325 330 335

Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І еи Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365

Гуз Спіу Ре Туг Рго Зег Азр Іе Аа Маї Сім Тгтр Спи Бег Азп Спу 370 375 380

Сіп Рго Сіи Авп Авзп Туг Гуз Тпг ТНиг Рго Рго Маї Г еи Авр Зег Азр 385 390 395 400

Су Зег Рне РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тнг Маї Азр Гуз 5ег Агу Тр 405 до 415

Сіп Си Спу Азп Маї Рне 5ег Суз Зег Ма! Меї Ніз Сім Аа ГІ еи Нів 420 425 430

Авп Ніз Туг Тиг ап Спи Бег Геи Зег ГГ еи 5ег Рго 435 440 «2105» 12 «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 12

Азр Пе Сип Меї ТАг Сіп 5ег Рго 5ег Зег І ви 5ег Аа Зег Ма! СПу 1 5 10 15

Азр Аг Маї Тиг Пе Тнг Суз Гуз Аа бег Агу Авп Пе Спи Агу Сп 20 25 Зо

Ге Аа Тгтр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Сп Аа Рго Си Гей ГГ еи Пе 35 40 45

Туг Сп Аа 5ег Агу Гуз Спи Зег Спіу Ма! Рго Азр Агу Ре 5ег Спу бо 50 55 60 зег Агу Туг Сіу Тиг Азр РНе Тнг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр Іе Аа Тниг Туг Туг Су Сп Сп Туг Зег Азр Рго Рго І єи 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТАг Гуз Маї Сім Пе Гуз Агу Тнг Маї Аа Аа 100 105 110

Рго 5ег Ма! Рпе Пе Рне Рго Рго 5ег Азвр Си Сп Гей Гуз Зег Спу 115 120 125

Тиг Айва 5ег Маї Маї Суз І еи І еи Азп Азп РнНе Туг Рго Аго Сім Аа 130 135 140

Гуз Ма! Сп Тр Гуз Маї Азр Авп Аа І ви Сп 5ег Сіу Азп 5ег Сп 145 150 155 160

Сіи Зег Ма! Тиг Спи Сип Авр Зег Гуз Азр 5ег ТНиг Туг Зег І еи Бег 165 170 175

Зо зег ТигІ еи ТигГеи 5ег Гуз Аіа Авр Туг Си Гуз Нів Гуз Маї Туг 180 185 190

Аа Суз5 Си Маї Тниг Ні Сіп С1Іу І еи Зег 5ег Рго Ма! ТНг Гуз Зег 195 200 205

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «2105 13 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 13

Сі Пе МаїЇ Геи ТАг Сіп 5ег Рго Аа ТНг І еи 5ег Маї Зег Рго Спу 1 5 10 15

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сп 5ег Ма! Зег Зег Авп 20 25 Зо 60

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Сп Гуз Рго Сіу Сіп Аа Рго Ага Геи ГІ ви Пе 35 40 45

Тугаїу Аа 5ег ТНиг Аг Аа Тнг С1у Пе Рго Аа Агу РнНе 5ег Спіу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І єи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп 5ег (655 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Гуз Агу Рго Гей ТНг 85 90 95

Рпе Спу Спу Спу ТАг Гуз Маї Спм Пе Гув 100 105 «210» 14 «2115» 108 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 14

Зо

Азр ІПе Сіп Геи ТАиг Сп 5ег Рго 5ег Зег І ви 5ег Аа Зег Ма! СПу 1 5 10 15

Авр Ага Маї ТАг Пе Тнг Суз Ага Аа 5ег Сп Су Пе 5ег Зег Туг 20 25 Зо

Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І еи Геи Пе 35 40 45

Туг АІа Аа 5ег ТНг І еи Сип бег Су Маї Рго 5ег Ага РНе 5ег Су 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТНг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аа Тнг Туг Туг Суз Сип Сп Геи Авп 5ег Туг Гей Сіу 85 90 95

Пе Тиг Рпе Слу Рго Слпу ТАг Гуз Маї Авр Іе Гуз 100 105 «2105» 15 60 0о«2115 111

«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 15

Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп Тнг Рго І еи 5ег І еи Зег Ма! Тиг Рго Су 101 5 10 15

Сп Рго Аа бег Маї 5ег Суз І уз бЗег 5ег Сіп 5егіІ ей Гей Агу ТНг 20 25 зо

Азр Сту Гуз Аа Туг І еи Азвр Тгр Туг Геи Сп Гуз Рго Спіу Сп бег 35 40 45

Рго Сп І еи Ге Пе Туг Сім Маї Зег Гуз Ага РНе 5ег Сіу Маї Рго 50 55 бо

А5р Ага Рпе 5ег Спіу бег Сіу Зег Су ТНг Авр РНе ТНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 зег Агу Ма! Спи Аа Сіи Ар Маї Спу Ма! Туг Туг Суз Меї СіІп Аг9

Зо 85 90 95

Пе СіІп Аа І еи бег Рпе Спіу Спу Спіу ТНг Гуз Маї Авр Пе І уз 100 105 110 «2105» 16 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 16 зег Зег Су Геи Тнг Сп Рго Рго 5ег ГІ еи 5ег Ма! Зег Рго Спіу Сп 1 5 10 15

ТАг Аа бег Пе Тнг Суз 5ег С1у Нів І уз Ма! Спіу Авр Гуз Туг Аіа 20 25 зо зЗег Тр Туг Сп Сп Гуз Рго Сіу Сіп бег Рго Маї І єи Ма! Пе Тут 35 40 45

Сіп Авр 5ег Гуз Агу Рго Зег С1пу Пе Рго Спи Агу Ре 5ег Аа Зег 60 50 55 бо

Азп Зег Су Азп ТНг Аа ТНг Геи ТНг Пе 5ег Спу Тнг Сп Аа Маї 65 70 75 80

Азр Си Аа Азр Туг Туг Суз І ви Аа Тр Маї Рго Авп 5ег С1у Туг 85 90 95 ма! Рпе Сіпу Тнг Стлу Тиг Сп Маї Тнг Ма! Маї 100 105 15. «210» 17 «2115» 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 17

Сп 5ег Ма! Геи Тиг Сп Рго Аа 5ег Маї Зег Спу 5ег Рго Сіу Сп 1 5 10 15 зег Пе ТАпг Пе 5ег Суз Тиг Спіу Тиг Зег Зег Азр Маї Спу 5ег Туг 20 25 Зо

Ав І еи Маї Зег Ттр Туг СіІп Сп Ні Рго Сіу Гуз Аа Рго Гуз І еи 35

Ме! Пе Туг Сім Маї Зег Гуз Агу Рго Зег Сіу Ма! Зег Азп Агу Ріе 60 40 зег Сіу 5ег І уз Зег Спіу Азп ТНг Аа 5ег І еи Тнг Пе 5ег СІУу І еи 65 70 75 80 45 Сп Аіа Си Авр Си Аа Ар Туг Туг Суз Суз 5ег Туг Аіа Спу 5ег 85 90 95 зег ТНг І еи МаїЇ Рне Сіу Спу Спу Тнг Гуз ГГ еи ТНг Ма! І еи 50 100 105 110 «2105» 18 «211» 107 55 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«4005» 18

Сіп Зег АЇа ГІ єи Тнг Сп Рго Рго 5ег І еи Зег Маї 5Зег Рго Сіпу Сп 1 5 10 15

Сіп Авр 5ег І уз Агу Рго 5ег С1пу Пе Рго Си Агу РНе 5ег Аа 5ег 50 55 60

Азр Си Аа Азр Туг Туг Суз І ви Аа Тр Маї Рго Авп 5ег С1у Туг 85 90 95 ма! Рпе Сіпу Тнг Стлу Тиг Сп Маї Тнг Ма! Маї 100 105 «210» 19 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 19

Азп Пе Сп Меї Тнг Сп 5ег Рго 5ег 5ег Маї Зег АІа 5ег Маї СПУ 1 5 10 15

А5р ТАг Маї Тиг Пе Тниг Суз Агу Аїа 5ег Сп Туг Пе бег Азр Аг9 20 25 Зо

Ї еи Ага Ттр Туг СіІп Сп Гуз Рго С1іу Агу Рго Рго Гуз Маї І еи Пе 35 40 45

Туг Агу Аа 5ег Авп І єи Сп 5ег Спу Маї Рго 5ег Ага РНе Аг Сіу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Авп 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80 бо

Сіш Азр РНе Аа Іе Туг Туг Суз Сп Сіп Аа Гуз Азп РНе Рго Тр 85 90 95

Аа Ре Су Сп Сіу Тиг Гуз Маї Спи Рне Гуз 100 105 «210» 20 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 20

Азп Ме СіІп Меї Тнг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СПУ 201 5 10 15

Азр Аг Маї Тиг Пе Тнг Суз Агу Аа Зег Сп Зег Пе Ага Зег Туг зо 25

І еи Азп Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Слу Гуз Айа Рго Гуз І еи Г еи Пе 35 40 45

Туг аїу Аіа Ре Тнг Геи Сп ТАг Спу Маї Рго 5ег Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Аіа 5ег Сіу Тиг Азр РНе Тнг І еи Тнг Пе Авп Авп І єи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Ні Суз Сп Сп 5ег Туг Ага Пе Рго Тгтр 85 90 95

Тиг Ре ау Сіп Спу Тиг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «2105» 21 «211» 107 «212» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 21

Азп Ме Сп Меї Тнг Сп 5ег Рго Аа 5ег І еи 5ег Аа бег Ма! СПу 1 5 10 15 бо

Азр Гуз Маї Тиг Пе Тнг Суз Сіп Аа бег СіІп Азр Пе Спу Тит Зег 20 25 Зо

Гей Азп Тгр Туг Сп Сп Агу Рго Сіпу ТНг Аа Рго Гуз І еи ГГ еи Пе 35 40 45

Рпе Авр Тнг 5ег Авп І ви Спи Гуз Спу Ма! Рго Зег Ага Рпе Зег Спіу 50 55 60 зег І уз Зег СІш ТАг Туг Рне Тнг Рне Аїа Іе 5ег 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр Іе АїІа Тнг Туг Туг Суз Сіп Сп Зег Туг Азп ЇІе Рго Тгтр 85 90 95

Тиг РНе Су Агу Су Тнг Гуз Маї Сім Пе Тнг 100 105 «210» 22 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 22

Ав5р Іе Сп Гей Тнг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! Спу 1 5 10 15

Азр 5ег Ма! Тпг Пе Тнг Суз Ага Аа 5ег СіІп Зег Рпе ТНг Азп Туг 20 25 Зо

Ї еи Азп Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Стпу Гуз Аа Рго Гуз Маї Гей Пе 35 40 45

Туг аїу Аа 5ег ТНг ГГ еи Стіп ТАг сту Маї Рго 5ег Агу Рне 5ег Спу 60 50

Стпу Сіу бег Сіу АіІа Сіи Тук ТНг Гей Тит Пе 5ег Авп І ви Сп Рго 65 70 75 80 55 А5р Авр бег АІа ТНг Туг Туг Суз Сіп Сп б5ег Туг Зег ТНг Рго Тр 85 90 95

Тиг Ре ау Сіп Спу Тиг Гуз Маї Сім Пе Гуз бо 100 105

«2105» 23 «211» 107 00о«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 23

Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег ГГ еи Зег Аіа 5ег Ма! Спу 1 5 10 15

Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу ТНг БЗег Сп Туг Пе Спу Тнг Туг зо 20

І еи Азп Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Слу Гуз Айа Рго Гуз І еи Г еи Пе 25 Авп Зег Ма! бег Агу І ви Сіп ТНг Су Маї Рго 5ег Агу Рпе ТАг Спу 60

Спу Спу бег Сіу Тиг Азр РНе Тнг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго зо 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аа Тнг Туг Туг Суз Сіп Сп Спу Туг Зег ТНг Рго Ттр 85 90 95 35

Тиг Рне ау Сіп Спу Тиг Агу Маї Сім Пе Гуз 100 105 40 «210» 24 «2115 112 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 45 «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 24 50

Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп Тнг Рго І еи 5ег І еи Зег Ма! Тиг Рго Су 1 5 10 15 55 Сп Рго Аа 5ег Пе бег Суз І уз бег 5ег Сіп 5ег І еи Ї еи Агу 5ег 20 25 Зо

Азр Сту Гуз Тиг Туг І еи Сп Тр Туг І ви Сп Гуз Рго Спу Сіп 5ег 60 35 40 45

Рго Сп І еи Ге Пе Туг СІш Ма! Зег Зег Ага РНе 5ег Сіу Маї Рго 50 55 60

Сім Ага РНе 5ег Сіу бег Спіу бег Сіу Тиг Азр РНе Тнг ГГ еи Сі Пе 65 70 75 80 зег Агу Ма! Си Аа Азр Азр Маї Сіу Ма! Туг Туг Суз Меї Сип Спу 85 90 95

Ге Ніз Геи Рго Ттр ТНг Рпе Стпу Сіп Спу Тиг Гуз Маї Си Ма! Гуз 100 105 110 «2105» 25 20. «2115» 108 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 25 «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 25

Сі Пе Ма! Геи Тиг Сіп 5ег Рго Сіу ТНг Ге Зег І еи Зег Рго Спу 30 1 5 10 15

Сіи Зег Сіу Тиг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег СіІп 5ег Ма! Азп ТАг Аг зо

ТугГеи Аа Тр Туг Туг Сп Ага Рго Стпу Сіп Маї Рго Аго Гей Г еи 35 40 45

Пе Туг Сіу ТАг 5ег Азп Аго Аа Тниг Сіпу Пе Рго Авр Агу РНе 5ег 50 55 60

СПУ бБег Сіу Зег Спу ТНг Азр Ріе ТНг І еи ТНг Пе 5ег Ага І ви Спи 65 70 75 80

Рго Сіу Азр 5ег Сіу Ма! Туг Туг Суз Сіп Сіп бег Агу 5ег Зег Сп 85 90 95

Тер Тиг Рпе Сту Сп Спу ТАг Гуз Ма! Сім Пе Гуз 100 105 «2105» 26 «211» 107 «212» РАТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «-4005» 26 ма! Пе Тгтр Меї Тиг Сп 5ег Рго 5ег Зег Маї 5ег Аа 5ег Ма! Спу 1 5 10 15

Азр Аг Маї Тиг Пе Тнг Суз Агу Аа Зег Сп Спу Пе Авзп 5ег Аг9 20 25 зо

Ге Маї Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Стпу ТАг Аїа Рго Гуз Маї І еи Пе 35 40 45

Туг АІа Аа 5ег 5ег І ви С1Іп 5ег Спу Маї Рго бег Ага РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Авп 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аа Тнг Туг Туг Суз Сіп Сп Спіу Азп ТАг РНе Рго Ттр 85 90 95

Тиг Ре аїу Сип Спу Тиг Гуз Маї Спи Маї Гуз 100 105 «210» 27 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 27

Авп Ме Сіп Меї Тнг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Маї СПУ 1 5 10 15

Азр Тнг Ма! Тит Пе Тнг Суз Ага Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег 5ег Тгтр 20 25 ЗО

І еи Ага Тр Туг Сіп Ніз Гуз Рго Су Агу Аа Рго Агу 5ег І еи Пе 35 40 45

Туг Тиг Ага 5ег 5ег І еи Сп 5ег Сіпу Маї Рго Зег Ага РНе Зег Спіу 50 55 60 бо зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Рнпе ТНг І еи Тнг Пе Тнг Авп Ге Сп Рго 65 70 75 80

Сім А5р Ре Аа ТНиг Туг Туг Су Сп Сп Ага Ні Зег РНе Рго Тр 85 90 95 зег Рпе Су Рго Сіу ТАг Азп Маї Спи Пе Гув 100 105 «2105» 28 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 28

Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп Зег Рго 5ег 5ег Ма! Зег Аіа 5ег Ма! Спу 1 5 10 15

Азр Аг Маї Тпг Пе Тнг Суз Агу Аа Зег Сп Спу Пе Зег Гуз Тр 20 25 Зо

Зо

Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго С1пу Гуз Аа Рго Гуз І єеи Геи Пе 35 Авр бег Аа Тиг Авп ГГ еи Агу 5ег С1іу Маї Рго 5ег Агу РНе 5ег Спу 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТНг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго 40 (65 70 75 80

Сіш Азр І єи Аа Рне Туг Туг Суз Сп Сп Спіу Гуз Зег РНе Рго Тр 85 90 95 45

Тиг Ре ау Сіп Спу Тиг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 50 «210» 29 «2115» 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 55 «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 29 60

Сіп Зег Маї Ма! Тниг Сп Рго Рго Зег Маї 5ег Аа Аа Рго Сіу Сп 1 5 10 15

Гуз Ма! ТА Пе 5ег Суз Зег Спіу 5ег Зег 5ег Авп Пе Спіу Азп Авп 20 25 Зо

Туг Маї Зег Ттр Туг Сіп Сп Геи Рго Сіу ТНг Аїа Рго Гуз Геи І ви 35 40 45

Пе Туг Азр Авп Азвп Гуз Агу Рго 5ег Спіу Пе Рго Авр Аг Рпе 5ег 50 55 60

Стпу бег Гуз бег Спіу Тнг Зег Аіа ТНг І еи Стпу Пе Тиг Стпу І еи Сп 65 70 75 80

ТАиг ау Азр Сі Аа Азвр Туг Туг Суз Су ТНг Ттр Авр 5ег 5ег І єи 85 90 95

Зег Аа Туг Ма! Рне Стпу Тиг Сіу ТАг Гуз Маї Тниг Ма! Г еи 100 105 110 «210» 30 «2115» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «-400» 30 зег Туг Си Геи ТАг Сп Рго Геи 5ег Маї бег Маї Аа Рго Спу Сп 401 5 10 15

Тиг Айва Агу Іе Рго Суз Спу Спу Авп Авп Іе Спу Авп Гуз Азп Маї 20 25 Зо

Ні Тгтр Туг Сп Сіп Гуз Рго Стпу Сп Аа Рго Маї І еи Ма! Пе Туг 35 40 45

Агу Авр ТНг Авзп Ага Рго Бег С1пу Пе Рго Спи Аго Рпе 5ег СПу Зег 50 55 60

Авп Зег Сіу Ні5 ТНг Аа ТНг І еи Тнг Пе Зег Сіу Аа Сіп Аа Спіу 65 70 75 80

Азр Сіи Аа Азр Туг 5ег Суз Сп Маї Ттр Азр 5ег Сіу Тнг Ма! Маї бо 85 90 95

Рпе Стпу Спу Счу ТАг Гуз І еи Тнг Ма! І еи 100 105 «2105 31 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 31 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 1 5 10 15

ТАг Аа Ти Пе Тниг Суз Сіи Спу Авп Ні Пе Сіу Авр | уз Ніз Ма! 20 25 Зо

Ні Тр Туг Ніз Сіп Ага Рго Слу Сіп Аа Рго Іе І еи Ма! Меї Рне 35 40 45

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег Сіу Пе Рго Сім Агу Гей бег Сіу Бег 50 55 60

Азп Бег Су Азп ТАг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сп Аіа Спу 65 70 75 80

Азр Спи аїпу Авр Туг Туг Суз Сп Маї Ттр Азр 5ег 5ег 5ег Аа Маї 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Сну Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї 100 105 «210» 32 «211» 109 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 32

Зег Ма Геи Тнг Сіп Рго Рго 5ег І еи 5ег Аа Аїа Рго Сіпу Сип Ага 1 5 10 15 ма! Тнг Пе Зег Суз Зег Сіу бЗег Зег Зег Авп Пе сіу Авп Нів І еи 60 20 25 Зо ма! Бег Тгр Ніз Сіп Сп Ре Рго Сіу Тниг Аа Рго Гуз Аа ГГ еи Пе 35 40 45

Туг Азр Азп Азр Агу Аго Рго 5ег С1у Пе Рго Азр Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Гуз Зег Спу ТАг 5ег Аа ТНг ГГ еи Азр Пе Тнг Спіу Геи Сп ТНг 65 70 75 80 ау Азр Си Авіа Авр Туг Туг Суз Аа ТНг Тгр Ар Аа 5ег І еи Агу 85 90 95

Аа Маї Маї Рне Спу Спу Спу ТАг Гуз Геи Тнг Ма! І еи 100 105 «2105» ЗЗ3 «2115 111 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «4005» ЗЗ3

Сіп Зег Ма! Г еи ТНиг Сп Рго Рго Зег Ма! Зег Сіу Аа Рго Стпу Сип 1 5 10 15

Агоу Ма! Тниг Маї Зег Суз Азп Сіу Спіу Зег Зег Азп Пе Спіу Тиг Спу 20 25 Зо

Туг Азр Маї Ніз Ттр Туг Сп Сп І еи Рго Сіпу ТНг Аа Рго Гуз Пе 35 40 45

Ма Ше Рпе Су Авп 5ег Азп Ага Рго 5ег Сіу Ма! Рго Сіу Агу Рпе 60 зег Сіу 5Зег І уз Зег Спіу ТНг Зег Аа 5ег І єи Ма! Пе Аа СПУ І еи 50 65 70 75 80

Сіп Аа Сім Авр Сім Аа Азр Туг Туг Суз СіІп Зег Туг Азр Агу 5ег 85 90 95 55

Ї еи Зег Сіу Туг Ма! Рне Сіу ТАиг Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Гей 100 105 110 60

«210» 34 «2115» 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 34 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Агу 5ег Маї Бег Спу 5ег Рго Сіу Сп 1 5 10 15

Зег Ма! Тиг Пе 5ег Суз Тиг Спу Тиг Зег Зег Азр Маї Спу Ага Туг

Зо

Азп Туг Ма! 5ег Тгтр Туг Сп Сп Аго Рго Су Гуз Аїйа Рго Гуз Маї 20 35 40 45

Ме! Пе Туг Азр Ма! Пе Гуз Агу Рго 5Зег Сіу Маї Рго Аіа Агу Рпе 50 55 60 25 зЗег Сіу 5ег І уз Зег Спіу Азп ТНг Аа 5ег І еи Тнг Пе 5ег Су І еи 65 70 75 80

Зо

Сіп Рго Сіи Авр Си Аа Азр Туг Туг Суз 5ег 5ег Туг Аа Сіу Аа 85 90 95

Зег 5ег Ріпе Ма! Рпе Сіу ТАг сту Тнг Гуз Маї Тниг Ма! Гей 100 105 110 «2105» 35 «2115 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 35

Сіп Зег Ма! Г еи Тниг Сп Рго Рго Зег Аа Зег Спу ТНг Рго Сіпу Сіп 501 5 10 15

Аго Маї Авп Іе Зег Суз 5ег Спу 5ег Агу 5ег Азп Іе Аа Азп Авп 20 25 Зо

Туг Маї 5ег Тгр Туг Сп Нів І ви Рго Сіпу Тниг Маї Рго Гуз Маї Гей 35 40 45 60

Пе бег Авр Авп Авр сп Агу Зег 5ег Сіу Маї Рго Авзр Агу Рпе 5ег 50 55 60 ау Зегі уз Зег Спіу Тнг бег Аа 5ег І еи Аа Пе бег СпІуУ І ей Агу 65 70 75 80 зег Сім Азр Си Аа Ар Туг Туг Суз Аа Аїа Тр Азр Азр Агу Меї 85 90 95

Агу Сіу РНе Маї Рне Су Зег Спу ТАг Гуз Маї Тнг Ма! І еи 100 105 110 «2105» 36 «2115» 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 36

Сіп Зег Ма! Г еи Тниг Сп Рго Рго Зег Ма! Зег Аїа Аа Рго Сіу Сп 1 5 10 15

І уз Ма! Ти Пе бег Суз 5ег слу бег бег 5ег Азп Пе Спіу Азп Азп 20 25 Зо

Туг Маї Бег Тгтр Туг Сп Сіп Гей Рго Сіу ТАг Аа Рго Гуз І еи І єи 35 40 45

Стпу бег Гуз бег Спу ТНг 5ег АІа ТНг І еи Спу Пе Тиг Спу І еи Сп 65 70 75 80

ТАиг ау Азр Сі Аа Азвр Туг Туг Суз Су ТНг Ттр Авр 5ег 5ег І єи 85 90 95 зег АІа Туг Ма! Рне Стпу Тиг Слу ТНиг Гуз Маї Тнг Маї І еи 100 105 110 «2105» 37 «2115» 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 60 0о«220»

«223» Штучно синтезована послідовність «4005» 37

А5п Рпе Меї І єи Тиг Сп Рго Рго Зег Маї Зег Сіпу Аа Рго Ага Сп 1 5 10 15

Аго Маї Тпиг Пе Зег Су бег Спу Зег 5ег 5ег Азп Пе Спіу Азп Ага 20 25 Зо

Аа Ма! 5ег Тр Туг Сіп Ні Маї Рго С1у Гуз Рго Рго Агу І еи Пе 35 40 45 ма! Туг Ні5 Азр Азр Маї І ви 5ег 5ег Сіу Ма! Зег Спіу Агу Рпе 5ег 50 55 60

Аа 5ег І уз бег Спіу ТНг Зег Аа 5ег І єи Аа Пе бег С1у І ви Сп 65 70 75 80

Зег Сім Авр Сім Аа Азр Туг РНе Суз Аїа Аа Тгр Азр Аа Ага Геи 85 90 95

Азп Сту Тр Ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Гей Тнг Ма! І еи 100 105 110 «210» З8 «211» 109 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» З8

Сіп Зег Аа ГІ єи ТНиг Сп Рго Аа 5ег Маї Зег Спу Зег Рго Сну Сп 1 5 10 15 зег Пе Тпг Пе 5ег Суз Тиг Спіу Тиг Зег Зег Азр Маї Спу Спу Туг 20 25 Зо

Азп Туг Ма! 5ег Тгтр Туг Сп Сп Ні Рго Сіу Гуз Аа Рго Гуз І еи 35 40 45

Мей Ше Туг Авр Маї 5ег Авзп Агу Рго 5ег С1іу Ма! Зег Азп Ага Рпе 50 55 60 зЗег Сіу 5ег І уз Зег Сіу Азп ТНг Аа 5ег І еи ТНг Пе бег сту І еи 60/65 70 75 80

Сіп Аа Сім Азр Си Аа Азр Туг Туг Суз Зег Зег Туг Тиг Бег 5ег 85 90 95 зег ТПг І еи Рпе Сіпу Тиг Сіу ТАг Гуз Маї ТНг Ма! І еи 100 105 «210» 39 «2115» 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 39

Сіп Зег Ма! Г еи Тниг Сп Рго Аїа 5ег Маї Зег Спу Зег Рго Сну Сп 1 5 10 15 зе Пе Тпг Пе Зег Суз ТАг Спу Тит Зег 5ег А5р Ма! Спу Су Туг 20 25 Зо

Азп Туг Ма! 5ег Тгтр Туг Сп Сп Ні Рго Сіу Гуз Аа Рго Гуз Гей

Ти Пе Туг Азр Маї 5ег Азп Ага Рго 5ег Су Ма! Зег Азп Агу Рпе 60 35 зег Сіу 5ег І уз Зег Спіу 5ег бег Аа 5ег І еи ТНиг Пе бег СІу І еи 65 70 75 80 40

Сіп Аа Сім Азр Си Аа Азр Туг Туг Суз Зег Зег Туг ТНг Тиг Бег 85 90 95 45 Саіу Тиг Туг Маї Рне Сіпу Тиг Сіу ТАиг Тнг Маї Тниг Маї Гей 100 105 110 «210» 40 50 «2115 110 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 55 «223» Штучно синтезована послідовність «400» 40

Сіп Зег Аа І єи Тнг Сп Рго Ага 5ег Ма! Зег Спу Зег Рго Спіу Сп 601 5 10 15 зег Ма! Тит Пе Бег Суз Тиг Сіу ТАг 5ег Зег Азр Маї Спу Спу Туг 20 25 Зо

Ме! Пе Туг Авр Маї 5ег Гуз Агу Рго Зег Сіу Маї Рго Авр Ага Ріе 50 55 60

Бег Сіу бег Гуз 5ег Сіу Азп ТНг Аа 5ег І еи ТНг Пе бег Спу І еи 65 70 75 80

Сіп Аа Сім Азр Си Аа Азр Туг Туг Суз Сув Зег Туг Аа Сіпу Ага 85 90 95

Аго Сіу Туг Ма! Рпе Стпу Тиг Стпу ТНиг Гуз Маї Тнг Ма! І еи 100 105 110 «2105» 41 «211» 109 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 41

Сіп Зег Айва І єи ТНиг Сп Рго Ага 5ег Маї 5ег Аа 5ег Рго Сіу Сіп 1 5 10 15 зег Ма! Тиг Пе бег Суз Тиг Сіу ТАг 5ег 5ег Азр Маї Сіу Рпе Туг 20 25 Зо

Гуз Туг Маї Зег Тгтр Туг Сп Сп Туг Рго Су Гуз Аа Рго Гуз ГІ еи 35 40 45

Ме! Пе Туг Авр Маї 5ег Гуз Агу Рго Зег Сіу Маї Рго Авр Ага Ріе 50 55 60 зЗег Сіу 5ег І уз Зег Сіу Азп ТНг Аа 5ег І еи ТНг Пе бег сту І еи 65 70 75 80

Сіп Аа Сім Авр Сім Аа Азр Туг Туг Суз Сув Зег Туг Аа Спіу Зег 85 90 95 60

Азп Тнг Ма! Рне Сіу Тиг Спу ТНиг Гуз Маї Тнг Маї І еи 100 105 «210» 42 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 10. «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 42

Сім Пе Ма! Геи Тнг Сп 5ег Рго Аа ТнНг І еи 5ег Ма! Зег Рго Сіу 1 5 10 15

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сп 5ег Маї Агу бег Азп 20 25 Зо

Тугачу Аа 5ег ТНг Агу Аа Тиг Су Пе Рго Аїа Ага Ре 5ег Спу 50 55 60

Зо зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І еи Сп бег 65 70 75 80

Сім Ар Ре Аа Маї Туг Туг Суз Сіп Сп Туг Гуз 5ег Рго Геи ТНг 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «210» 43 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 43

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сп 5ег Маї Агу Ага Азп 20 25 Зо 60

Тугаїу Аа 5ег ТНиг Аг Аа Тнг С1у Пе Рго Аа Агу РнНе 5ег Спіу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег (655 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Гуз Зег Рго Геи ТНг 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «210» 44 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 44

Зо зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 1 5 10 15

ТА г Авіа ТНг Ше Тиг Суз Спи Су Авп Ніз Пе Сну Ар Гуз Ніз Маї 20 25 Зо

Ні Тгтр Тут Ні Сп Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіп Аа Су 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95

Маї Рпе Сіу Спу Спу Тнг Гуз Ма! Тиг Маї Маї 100 105 «210» 45 60 0о«2115» 123

«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 45

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 101 5 10 15 зег І еи Аг І еи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе Тиг Рнпе 5ег Туг Туг 20 25 зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Гуз Спу Агу Рпе Тнг Іе 5ег Ага Азр Авп 5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80

Аа Агу Ага Тнг Сіу Ага Спи Туг Сіу Спу Спу Тер Туг Рне Авр Туг 100 105 110

Тр Стлу Сп Слу ТНг Гей Маї ТАг Ма! Бег 5ег 115 120 «210» 46 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 46

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Спи І еи Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15

Зегї Маї Гуз Ма! Зег Сувз Гуз АІа 5ег Спу Туг Тит Рпе Тниг Ар Азп 20 25 зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Айїа Рго Спу Сп СПТУ Геи Си Ттр Меї 60 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп Тпг Агу Зег Сіу Спу Зег Пе Туг Азп Спи Сім Рпе 50 55 60

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї Тнг Маї Авр Гуз бег ТНиг Азр Тиг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Азр ТНг Аа ТНг Туг Ні Суз 85 90 95

Аа Агу Агу Гуз бег Туг Спу Туг ТугІ еи Авр Сім Тгтр Спу Спи Спу 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 «210» 47 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «400» 47

Азр Аг Маї Тиг Пе Тнг Суз Гуз Аа бег Аг Авп Іе Спи Агу Сп 20 25 зо

Ї еи Авіа Тр Туг Сіп Сіп Гуз Рго Сіу Сп Аа Рго Сім І еи І ви Пе 35 40 45

ТугаСіп Авіа 5ег Аг Гуз Спи бег Спу Маї Рго Ар Ага РНе 5ег Спу 60 зег Агу Туг Сіу Тиг Азр РНе Тнг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго 50 65 70 75 80

Сіш Азр Іе Аа Тниг Туг Туг Су Сп Сіп Туг Зег Азр Рго Рго І єи 85 90 95 55

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 60

«210» 48 «2115» 123 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 48

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15

Зегеи Аг І ви 5ег Суз Аа Аіа 5ег Сіу Рпе Тнг РНе 5ег Туг Туг зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї 20 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 бо 25

Гуз Сіу Ага Ре Тнг Іе Зег Ага Авр Азп з5ег І уз Азп ТНг Ге Туг 65 70 75 80

Аа Ага Агу бег Сіу Ага Спи Туг Сіу Сіу Спу Тгтр Туг Рне Авр Туг 100 105 110

Тр Стлу Сп Слу ТНг Гей Маї ТАг Ма! Бег 5ег 115 120 «210» 49 «2115» 123 «212» РВАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 49

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 20 25 зо бо

Азр Іе Азп Ттр Маї Аго Сіп Аа Рго Слу Гуз СПУ Геи Спи Тр Маї 35 40 45

Зег Бе Пе 5ег Рго 5ег Сіу Сип 5ег ТНг Туг Туг Агу Ага Си Маї 50 55 60

Гуз Сіу Ага Ре Тнг Іе Зег Ага Авр Азп з5ег І уз Азп ТНг Ге Туг (655 70 75 80

Аа Ага Ага Зег Са1у Ніз Азп Туг Спіу Спу Спу Ттр Туг Ре Авр Туг 100 105 110

Тр Стлу Сп Слу ТНг Гей Маї ТАг Ма! Бег 5ег 115 120 «210» 50 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 50

Сп Маї Сіп Г еи Маї Сп Бег Спіу Зег Сім Геи Гуз Гуз Рго Сіпу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Су Туг Тиг Ре ТНг Авр Авп 20 25 Зо

Сіу Авр Пе Авп Тпг Агу Зег Сіу Спу Зег Пе Туг Азп Спи Сім Рпе 60 50

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Авр Гуз 5ег ТНг Азр Тпг Аа Туг 65 70 75 80 55 Меї Сі І єи бег 5ег І ви Агу 5ег Сіш Авр ТНг Айва Тнг Туг Ніз Сувз 85 90 95

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Ніз Геи Азр Сіи Тгтр Спу Спи Спу бо 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег «2105 51 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 51

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї 5ег Суз ГГ уз Аа Зег Су Туг Тиг Ре ТНиг Азр Ап 20 25 зо

Авп Меї Азр Тгр Маї Агу СіІп Аа Рго Спу Сип Спу Ге Спи Ттр Меї

Сіу Авр Пе Авп ТНг Агу Зег Сіу Спу Зег Пе Туг Ап Си Си Рпе

Зо 50 55 бо

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Авр Гуз 5ег Тиг Спу ТАг Аа Туг 65 70 75 80 35

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Азр ТНг Аа Маї Туг Ніз Суз 85 90 95 40

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Си Ттр Спу Спи Спу 100 105 110 45 Ти гІ еи Маї Тниг Маї Зег Зег 115 «2105» 52 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 52

Азр Пе Сип Меї ТАг Сіп 5ег Рго 5ег Зег І ви 5ег Аа Зег Ма! СПу 601 5 10 15

Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Стпу СіІп Аіа Рго Си І еи Ге Пе 35 40 45

Туг Сп Аа 5ег Агу Гуз Спи Зег Сіу Маї Рго Азр Агу Ре 5ег Спу 50 55 60 зег Агу Туг Сіу Тиг Азр РНе Тнг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр Іе Аїа Тиг Туг Туг Суз Сп Сіп Туг Зег 5ег Рго Рго ГІ еи 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «2105» 53 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 53

Азр Пе Сіп Меї Тнг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І ви 5ег Аа 5ег Ма! СПУ 1 5 10 15

Азр Аго Ма! Тпг Пе Тнг Суз Гуз Аа 5ег І уз Азп Пе Сім Агу Авп 20 25 Зо

Ге Аа Тгтр Туг Сп Сп Гуз Рго Су Сп Айїа Рго Аго Г єи ГГ еи Пе 35 40 45

Туг Аг Аа Азвр Аго Гуз Спи Зег Спу Маї Рго Азр Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Агу Туг Сіу ТАиг Азр РНе Тнг Гей Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго 65 70 75 80

Сіш Азр Іе Аїа Тиг Туг Туг Суз Сіп Сп Туг 5ег 5ег Рго Рго І еи 85 90 95 60

Тиг Ре Сіпу Спіу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гув 100 105 «210» 54 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 10. «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 54

Авр Іе Сіп Меї Тнг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! Спу 1 5 10 15

Азр Аго Ма! Тпг Пе Тнг Суз Гуз Аа 5ег Агу Азп Пе Сім Агу Авп 20 25 Зо

Ї еи Авіа Тр Туг Сп Сп І уз Рго Сіпу С1Іп Аа Рго Сі І еи І еи Пе 35 40 45

Сім Авр Пе Аа Тиг Туг Туг Суз Сіп Сп Туг Зег Зег Рго Рго І еи 85 90 95

Тиг Ре Сіпу Спіу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гув 100 105 «2105» 55 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 55

Азр Аго Ма! Тпг Пе Тнг Суз Гуз Аа 5ег Агу Азп Пе Сім Агу Авп 20 25 Зо бо

Тугаїп Аа 5ег Аго Гуз Сім 5ег Сіу Ма! Рго Азр Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Агу Туг Сіу ТАиг Азр РНе Тнг Гей Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп Рго (655 70 75 80

Сіш Азр Іе Аїа Тиг Туг Туг Суз Сіп Сп Туг 5ег 5ег Рго Рго І еи 85 90 95

Тиг Ре Сіпу Спіу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гув 100 105 «2105» 56 «2115 123 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 56

Зо

Зегі еи Аг І еи 5ег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рпе Тнг Рне Зег Туг Туг 20 25 Зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Си Маї 50 55 60

Аа Агу Агу Тпг Су Агу Спи Туг А5р слу Спу Ттр Тут Рне Авр Туг 100 105 110

Тр Стлу Сп Слу ТНг Гей Маї ТАг Ма! Бег Зег 60 115 120

«2105» 57 «2115 123 00о«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 57

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг

Зо 20

Азр Аїа СіІп Тр Маї Аго Сіп Аа Рго Стпу Гуз СпІу Геи Спи Тр Маї 25 Зег Зеї Пе 5ег Рго 5ег Сіу Сіп 5ег ТНг Туг Туг Агу Аг Си Маї 60

Гуз Сіу Ага Ре Тнг Іе Зег Ага Авр Азп з5ег І уз Азп ТНг Ге Туг зо 65 70 75 80

Ї еи Сп Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 35

Аа Ага Ага Тиг Спу Зег Спи Авр Су Аа Стпу Тр Туг Рне Азр Туг 100 105 110 40

Тр Стлу Сп Слу ТНг Гей Маї ТАг Ма! Бег 5ег 115 120 45 «210» 58 «2115» 122 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 50 «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 58 55 Сп Маї Сіп Геи Маї Сім Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Суп Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 60 20 25 ЗО

Аа Ага Ага Тниг Сіпу Ага Спи Авр сту С1у Тгр Ні Ре Азр Туг Ттр 100 105 110

Стпу Сіп Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «2105» 59 «2115 122 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 59

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 20 25 Зо

А5р Іе Сіп Тгр Маї Агу Си Аа Рго Слу Гуз Спу Геи Спи Тр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Ї еи Сп Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 60

Аа Агу Ага Тнг Сіу Ага Спи Си пу С1іу Тгр Пе Рпе Ар Туг Тр 100 105 110

Стпу Сіп Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «210» 60 10. «2115» 122 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 60

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спіу СЛУ І еи Маї Сіп Рго Сіу Спу 201 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг зо 25

Азр Іе Сіп Тгтр Маї Аго Сіп Аїа Рго Сіу Гуз Спу Геи Сіи Тгр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 бо

Гуз Спіу Агу Ре Тнг ПІПе 5ег Ага Азр Авзп 5ег Гуз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80

Стпу Сіп Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «2105» 61 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 61 бо

Сім Ага Аа ТНг І еи 5ег Суз Агу Аа 5ег Сп 5ег Маї Агу Агу А5р 20 25 Зо

Тугачу Ага 5ег Аг Агу Аа Тнг С1пу Пе Рго Аїа Агу Ре 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз СіІп Сп Туг Гуз 5ег Рго ГГ еи ТНг 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «210» 62 «2115» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 62

Сі Пе МаїЇ Геи ТАг Сіп 5ег Рго Аа ТНг І еи 5ег Маї Зег Рго Спу 401 5 10 15

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аа ТНиг Сп 5ег Маї Агу Агу Азр 20 25 Зо

Туг ачу Ага 5ег Аг Агу Аа Тниг С1у Пе Рго Айїа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60

Бег Сіу бег Сіу Тиг Си Рне Тнг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп бБег 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Агу Зег Рго І еи ТНг 60 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «210» 63 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 63

Ге Ада Тгтр Туг Сп Сп Гуз Рго Сіу Сп Аїа Рго Си І еи Ге Пе 35 40 45

Туг ачу Ага 5ег Аг Агу Аа Тниг С1у Пе Рго Айїа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Агу Зег Рго ГГ еи ТНг 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «210» 64 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 64

Сім Пе Ма! Геи Тнг Сп 5ег Рго Айа ТнНг І єи 5ег Ма! Зег Рго Сіу 1 5 10 15

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі 60 20 25 Зо

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Аа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Сім Авр РНе Аа Маї Туг Туг Суз Сіп Сп Туг Агу Авр Рго ГГ еи Тпг 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «210» 65 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «400» 65

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі 20 25 Зо

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Гуз Гуз Рго Сіу Сіп Аа Рго Ага Г еи ГГ еи Пе 35 40 45

Тугаіу АІа 5ег Тнг Ага Спи Тнг Слпу Пе Рго Азр Агу РНе Зег Спіу 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Спи Рне Тнг І єи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 50 65 70 75 80

Сіш Азр Меї Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сіп Туг Агу Ар Рго Рго Стпу 85 90 95 55

Тиг Ре Сіу Спіу Счу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гув 100 105 60

«210» 66 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 66

Сім Ага Аа ТАг І еи 5ег Суз Агу Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Агу Си

Зо

Ї еи Айва Ттр Туг Сп Гуз І уз Рго Сіу С1Іп Аа Рго Сі І еи І еи Пе 20 35 40 45

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Аа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 25 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе 5ег 5ег І еи Сп 5ег 65 70 75 80

Зо

Сіш Азр Меї Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сіп Туг Агу Ар Рго Рго Стпу 85 90 95

ТАг Рпе Стпу Счіу Сліу Ти Гуз Маї Сім Пе Гув 100 105 «210» 67 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 67

Сі Пе МаїЇ Геи ТАг Сіп 5ег Рго Аа ТНг І еи 5ег Маї Зег Рго Спу 501 5 10 15

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа ТНг Ага 5ег Маї Агу Агу Азр 20 25 Зо

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Гуз Гуз Рго Слпу Сп АйЇа Рго Аго І єи І еи Пе 35 40 45 60

Тугаїу Аа 5ег Агу Агу Сіш Тг Су Пе Рго Азр Ага РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Си Рго 65 70 75 80

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Агу Авр Рго Рго Сіу 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «210» 68 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 68

Зо

Ге Аа Тгр Туг Сп Гуз Гуз Рго Спу Сп Аа Рго Аг ГГ еи І єи Пе 35 40 45

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Авр Агу Ре Зег Спіу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «210» 69 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 60 0о«220»

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 69

Сім Пе Ма! І еи Тниг Сіп Зег Рго Аа ТНг Геи Зег Ма! Зег Рго Стпу 1 5 10 15

Сім Азр Меї АїЇа Маї Туг Туг Суз Сп Сіп Туг Агу Авр Рго Рго Стпу 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз

Зо 100 105 «210» 70 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 70

Ї еи Айва Ттр Туг Сп Гуз І уз Рго Сіу С1Іп Аа Рго Сі І еи І еи Пе 35 40 45

Тугаїу Аа 5ег ТНг Ага Сім Тиг С1у Пе Рго Аїа Агу Ре 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Азвп 5ег І еи Сім Аїа 60 (65 70 75 80

Сіш Азр Аїа Аа Тиг Туг Туг Су Сп СіІп Туг Агу Авр Рго Рго Сіпу 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «2105 71 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 71

Сім Ага Аа ТАг І еи 5ег Суз Агу Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Агу Си 20 25 Зо

Ї еи Авіа Тр Туг Сп Сп І уз Рго Сіпу С1Іп Аа Рго Сі І еи І еи Пе

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тиг Су Пе Рго Айїа Агу РНе 5ег Су 60 35 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Азвп 5ег І еи Сім Аїа 65 70 75 80 40

Сіш Азр Аїа Аа Тиг Туг Туг Су СіІп СіІп Туг Агу Авр Рго Рго Сіпу 85 90 95 45 ТНгРпе Стпу Счіу Сліу Ти Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «2105» 72 50 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 55 «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 72

Сі Пе МаїЇ Геи ТАг Сіп 5ег Рго Аа ТНг І еи 5ег Маї Зег Рго Спу 601 5 10 15

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Сп Гуз Рго Сіу Сіп Аїа Рго Сім Геи І еи Пе 35 40 45

Тугаїу Ага 5ег Агу Агу Сіш ТАг сту Пе Рго Аа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Азвп 5ег І еи Сім Аїа 65 70 75 80

Сіш Азр Аїа Аа Тиг Туг Туг Су Сп Сп Туг Аго Ар Рго Рго Спу 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «2105» 73 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 73

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Су Туг Тиг Ре ТНг Авр Авп 20 25 Зо

Авп Меї Авр Тгр Маї Агу СіІп Аа Рго Спу Сип Спу Ге Спи Ттр Меї 35 40 45

Сіу Азр 5ег Азп ТНг Ага Бег Спіу Тиг Зег Пе Туг Азп Сім Спи Ріе 50 55 60

Меї Си І еи Зег 5ег І еи Агу бег Сіи Азр ТАг Аа Тиг Туг Ніз Су 85 90 95 60

ТАгІ еи Маї Тнг Маї бег 5ег 115 «210» 74 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 74

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 201 5 10 15 зег Ма! Гуз Ма! бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Азп Авзп зо 25

Сіу Авр Пе Авп ТНг Аго Зег Сіу Спіу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Рпе 50 55 бо

Сп Азп Агу Ма! Пе Меї Тнг Маї Авр Гуз 5ег ТНг Азр Тнг Аа Туг 65 70 75 80

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Маї Ттр Спіу Сім Су 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 «2105» 75 «211» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 75 бо

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15

Зег Маї Гуз Маї Зег Суз Гуз Аа бег Спу Туг Ти Рпе Тнг Ар Азп 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сип Спіу Геи Си Ттр Меї 35 40 45

Сіу Азр Пе Авп ТНг Агу бег С1іу Агу Маї Пе 5ег Азп Си Сім Ріе 50 55 60

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Азр Гуз бег ТНиг Авр Тиг Аа Туг 65 70 75 80

Аа Агу Аго Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг ГГ еи Ар Спи Тгтр Сіу Спи Спу 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 «2105» 76 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 76

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп 20 25 зо

Сашу А5р Іе Азп Тпг Аг 5ег Спіу Сіу Ма! Пе Туг Азп Спи Спи Ріе 50 55 60

Сіп Сп Ага Маї Пе Меї Тнг Маї Азвр Гуз 5ег ТНг Авр Тиг Айїа Туг 60/65 70 75 80

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 15. «2105» 77 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 77

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї Зег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Гуз Аїа Рго Спіу Сп С1Іу Геи Спи Ттр Меї 35

Сіу Авр Пе Азп ТНг Аго Зег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Рпе бо 40

Сіп Азр Аг ГГ еи Пе Меї Тнг Маї Азр Гуз Зег ТНиг Азр ТНиг Аа Туг 65 70 75 80 45 Меї Сі І єи бег 5ег І ви Агу 5ег Сіш Авр ТНг Айва Тнг Туг Ніз Сувз 85 90 95

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Маї Ттр Спіу Сім Су 50 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 55 «2105» 78 «2115» 119 «212» РАТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «-4005» 78

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Ма! бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Си Рне Тнг Ні Авзп 20 25 зо

Авп Меї Авр Тгр Маї Агу Гуз Айїа Рго Сіу Сіп Спу Геи Си Тгр Меї 35 40 45

Сіу Азр Пе Авп ТНг Агу Зег С1у Агу бег Пе Туг Азп Си Сім Ріе 50 55 бо

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Ар Іе Зег Тиг Азр Тиг Аа Туг 65 70 75 80

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Авр Маї Тгтр Спіу Спи Спу 100 105 110

ТИ еи Маї Тнг Маї бЗег Зег 115 «210» 79 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 79

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 501 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп 20 25 зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї 35 40 45 бо

Сіу Авр Пе Авп ТНг Аго Зег Сіу Спіу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Рпе 50 55 60

Сп Авр Аго Ге Пе Меї ТНг Маї Авр Гуз 5ег ТНг Авр Тиг Аїа Туг 65 70 75 80

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 «210» 80 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 80

Зо

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15

Бег Маї Гуз Ма! Зег Суз І уз Аіа бег Спу Туг Тк Рпе Тнг Сп Авп 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Гуз Аїа Рго Спіу Сп С1Іу Геи Спи Ттр Меї 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп Тпг Аго Зег Спу Сіу Ма! Пе Туг Азп Сім Спи Ріе 50 55 60

Сіп Азр Аг ГГ еи Пе Меї Тнг Маї Азр Гуз Зег ТНиг Азр ТНиг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Сім Азр ТНг Аа Тнг Тут Ні Суз 85 90 95

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Авр Сім Тгтр Счіу Спи Спіу 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег бо 115

«210» 81 «211» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 81

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп зо 20

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї 25 Су А5р Іе Азп Тпг Аг 5ег Спіу Сіу Ма! Пе Туг Азп Си Гуз Ріе бо

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Авр Гуз 5ег ТНг Азр Тпг Аа Туг зо 65 70 75 80

Меї Сі І еи бег Спи І еи Ага бег Си Ар ТНг Аа Тнг Туг Ні Суз 85 90 95 35

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Маї Ттр Спу Сім Спу 100 105 110 40

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 45 «210» 82 «211» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 50 «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 82 55 Сп Маї Сіп Г еи Маї Сип Бег Спу Зег Сім Ге Гуз Гуз Рго Спу Аіа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Ма! бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Си Рне Тнг Ні Авзп 60 20 25 Зо

Сіу Азр Пе Авп ТНг Агу Зег С1у Агу 5ег Пе Туг Азп Аг Сім Рпе 50 55 60

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Ар Іе Зег ТНг Азр Тнг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сі І єи бег 5ег І ви Агу 5ег Сіш Авр ТНг Айва Тнг Туг Ніз Суз 85 90 95

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 «210» 83 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 83

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне ТНиг Сіп Авп 20 25 Зо

Авп Меї Азр Тгр Маї Агу Гуз Аа Рго Спу Сіп Спу Ге Си Ттр Меї 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп Тпг Аго Зег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Спи Сім Ріе 50 55 60

Меї Сі І еи бег Спи І еи Ага бег Си Авр ТНг Аа Тнг Тут Ніз Суз 85 90 95 бо

ТАгІ еи Маї Тниг Маї 5ег Зег 115 «210» 84 10. «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 84 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 201 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тик Суз Сім Стпу Авп Ніз Пе Спу Авр Гуз Ні Маї

Зо 25

Ні Тгтр Тут Ні Сп Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе

Зо

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег Сіу Пе Рго Сім Агу Гей бег Сіу Бег 60 35 Авп бег Спіу Азп ТАг Аа 5ег ГГ еи ТАг Пе 5ег Спу Аа Сіп Аа СПУ 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 40 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! 100 105 45 «210» 85 «211» 107 «212» РАТ 50 «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 55 «400» 85 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 1 5 10 15 60

Ні Тгр Туг Ні СіІп Агу Рго Су Сп Айа Рго Іе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45

Сіп Азр Аа Аг Ага Рго 5ег Спу Пе Рго Сім Аго ГГ еи Зег Спу Бег 50 55 60

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! 100 105 «210» 86 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 86

Зег Туг Ма| І еи Тниг Сп Рго Маї 5ег Ма! 5ег Маї Аа Агу Сіу Сп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тниг Суз Тниг Сіу Авп Ніз Пе 5ег Азр Гуз Ні Маї 20 25 Зо

Сіп Азр Аа Аг Ага Рго 5ег Спу Пе Рго Сім Аго ГГ еи Зег Спу Зег 60 50

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіп Аа Су 65 70 75 80 55 А5р Си Сіу Авр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Азвр 5ег бег Авр Тут ТНг 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! бо 100 105

«210» 87 «211» 106 00о«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 87 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тиг Суз Спи Спіу Авп Сп Пе 5ег Сп Гуз С1п Маї

Зо 20

Ні Тгтр Тут Ні Сп Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45 25 Агу Авр Аа Агу Агу Рго Зег С1у Пе Рго Сіи Агу Гей Бег Сіу 5ег 50 55 60

Азр Спи апу Авр Туг Туг Суз Сп Маї Тгтр Авр 5ег 5ег Аа Маї Маї 85 90 95

Рпе Стпу Спу Спу ТАг Гуз Маї Тнг Ма! Маї 100 105 «210» 88 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 88 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Ага ГГ еи Спу Сп 1 5 10 15

ТАг Аіа Тит Пе Тиг Суз Спи Су Спи (п Пе Сіу бег Гуз Сіи Маї 20 25 Зо

Ні Тгтр Тут Ні5 Спи Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе 60 35 40 45

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег Сіу Пе Рго Сім Агу Гей Бег СПу Бег 50 55 60

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіши Аа Спу 65 70 75 80

Азр Сі Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег 5ег 5ег Туг ТНг 85 90 95

Маї Рпе Сіу Спу Спу Тнг Гуз Ма! Тиг Маї Маї 100 105 «210» 89 20. «2115» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 25 «223» Штучно синтезована послідовність «400» 89 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Ага ГГ еи Спу Сп 30 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тиг Суз Спи Спу Азп Сп Пе Сіу бег Агу Си Маї зо

Ні Тгтр Тут Ні5 Спи Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45

Авп бег Спіу Азп ТАг Аа 5ег ГГ еи ТАг Пе 5ег Спу АІа Сіи Аа СПУ 65 70 75 80

Азр Спи Сапу Авр Туг Туг Суз Сіп Маї Ттр Аа 5ег Азр Аїа Маї Маї 85 90 95

Рпе Стпу Спу Спу ТАг Гуз Маї Тнг Ма! Маї 100 105 «210» 90 «211» 107 «212» РАТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 90 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Ага ГГ еи Спу Сп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тик Суз Спи Сіу СПи Сп Пе Спіу Зег Гуз Спи Маї 20 25 Зо

Ні Тгр Туї Ніз СіІп Ага Рго Су Сіп Аїйа Рго Іе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45

Зо ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! 100 105 «2105» 91 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 91

Зег ТугаСіш Гей Тиг Сп Рго Рго 5ег Ма! 5ег Маї Ага І еи Спу Сп 1 5 10 15

Ні Тгтр Тут Ні5 Спи Агу Рго Су Сп Аа Рго Іе І еи Ма! Пе Туг 35 40 45

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег Сіу Пе Рго Сім Агу Гей бег Сіу Бег 50 55 60 60

А5р Сіи Сіу Авр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! 100 105 «2105» 92 «2115» 107 15. «212» РВАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 92 зег Туг Си Геи Тиг Сп Рго Рго 5ег Маї 5ег Маї Ага І еи Спу Сп 1 5 10 15

Ні Тгтр Тут Ні Сп Агу Рго Су Сіп Аїа Рго Іе Геи Маї Пе Туг 35 Ага Азвр Аа Ага Аго Рго 5ег Сіу Пе Рго Спи Ага Ї еи бег Спіу бег бо

Азп Зег Су Азп ТНг Аа 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Сіу Аа Си Аіа Су 40 (65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 45 ма! Рпе Сіпу Спу Спу Тиг Гуз Ма! Тнг Ма! Маї 100 105 50 «2105» 93 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 55 «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 93 бо зег Туг Си Геи Тиг Сп Рго Рго 5ег Маї Зег Маї Аа І еи Спу Сп 1 5 10 15

ТАгАїа Ти Ше Тниг Суз Супи С1іу Азп Сп Пе Спіу Сіи Гуз Спи Маї 20 25 Зо

Ні Тгтр Тут Ні СіІп Агу Рго Су Сп Айа Рго Іе Гей Ма! Меї Рпе 35 40 45

Азп Бег Су Азп ТАг Ага 5ег ГІ еи ТНиг Пе 5ег Спу Аа Сіи Аіа СПу 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ага 5ег Азр Аїйа Маї Маї 85 90 95

Рпе Стпу Спу Спу ТАг Гуз Маї Тнг Маї Маї 100 105 «210» 94 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 94 зег Туг Си Геи Тиг Сп Рго Рго Зег Маї Зег Маї Аа І еи Спу Спп 401 5 10 15

Авп бег Спіу Азп ТАг Аа 5ег ГГ еи ТАг Пе 5ег Спу АІа Спи Аа СПУ 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг бо 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! 100 105 «210» 95 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 95

Аа 5ег Тпг Гуз СІу Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго Суз Зег Ага 1 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа ГІ єи Сту Суз І еи Маї Гуз Азр Туг 20 25 Зо

Рпе Рго Си Рго Маї Тнг Маї 5ег Тгтр Азп 5ег С1у Аа Геи ТНг 5ег 35 40 45

Стпу Маї Ні5 Тнг РнНе Рго Аїа Маї І еи Сп 5ег Зег СПУ І еи Туг Зег 50 55 60

Ї еи бБег 5ег Маї Ма! Тниг Маї Рго 5ег 5ег 5ег І еи Спу Тиг Сіп ТНг 65 70 75 80

Туг Тиг Суз Азп Маї Авр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр ГГ уз 85 90 95

Ага Маї Сім Зег Гуз Туг Спу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго 100 105 110

Си Рпе Аг Аго Су Рго 5ег Маї Рпе Геи РнНе Рго Рго Гуз Рго Гуз 115 120 125

Азр ТНг І єи Меї Пе 5ег Аг9у ТНнг Рго Си Ма! Тнг Суз Маї Ма! Маї 130 135 140

Ар Маї Зег СіІп Си Авр Рго Спи Маї Сіп Рне Азп Тр Туг Ма! Азр 145 150 155 160

Сіу Ма! Си Маї Ні Авп Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Сі Си Сп Туг 165 170 175 60

Азп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї 5ег Маї І єи Тнг Ма! І еи Ні Сіп Азр 180 185 190

Прі ей Азп слу Гуз Сім Туг Гуз Суз Гуз Маї Бег Авп Гуз Су І еи 195 200 205

Рго 5ег 5ег Пе Сім Гуз ТАг Пе 5ег Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Ага 210 215 220

Сіш Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 5ег Сіп Гуз Спи Меї Тиг Гуз 225 230 235 240

Азп Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго 5ег Азр 245 250 255

Пе Аїа Маї Сім Тгтр Спи Бег Азп Стпу Сп Рго Спи Авп Авп Туг ГГ ув 260 265 270

ТНгТНг Ріо Рго Маї Гей Азр 5ег Азр Сіу 5ег РНе РнНе І єи Туг 5ег 275 280 285

Ага ГГ еи Тнг Маї Азр Гуз 5ег Ага Тгтр Сп Спи Спу Азп Маї Рпе 5ег 290 295 00

Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сіи Аа ГГ еи Ніз Авп Ні Туг Тиг Сіп Гув Бег 305 310 315 зго

Ї еи 5ег І ви 5ег Рго 325 «2105» 96 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 96

Аа 5ег Тпг Гуз СІу Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго Суз Зег Ага 1 5 10 15

Зег Тпг Зег Сім Зег ТНг Аа Аа І еи Спіу Суз ГІ еи Ма! Гуз Азр Туг 20 25 Зо

Рпе Рго Си Рго Маї Тнг Маї 5ег Тгтр Азп 5ег С1у Аа Геи ТНг 5ег бо 35 40 45

Стпу Маї Ні5 Тнг РнНе Рго Аїа Маї І еи Гуз 5ег Зег Су І еи Туг Зег 50 55 60

Аго Маї Сіи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго Суз Рго Рго Су Рго Аа Рго 100 105 110

Сім Рне І єи Су Сіу Рго бег Маї Рне І єи Рне Рго Рго Гуз Рго ГГ уз 115 120 125

Зо

Сіу Ма! Спи Маї Ні Авп Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Спи Си (п Туг 165 170 175

Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї 5ег Маї І єи Тниг Ма! І еи Ні Сіп Азр 180 185 190

Тр Геи Авзп Сіу Гуз Сім Туг Гуз Суз Гуз Маї 5ег Авзп Гуз С1у І еи 195 200 205

Сіш Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 5ег Сіп Гуз Спи Меї Тнг Гуз 225 230 235 240

Пе Аїа Маї Сім Тгтр Спи Бег Азп Стпу Сп Рго Сім Авп Авп Туг Гуз 260 265 270

Тиг Тниг Рго Рго Маї І еи Азр 5ег А5р Су Зег Рпе Рне ГІ єи Туг Зег 60 275 280 285

Ага ГГ еи Тнг Маї Азвр Гуз 5ег Аго Тгр Сп Спи Спу Азп Маї Рпе 5ег 290 295 00

Суз 5ег Ма! І еи Ніз Спи Аа ГГ еи Ні Аа Ніз Туг ТАг Аго Гуз Си 305 з10 315 зго

Їеи зегІ еи Зег Рго 325 15. «210» 97 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 97

Аа Зег ТНг Гуз Сіу Рго 5ег Ма! РНе Рго І єи Аа Рго Суз 5ег Аг9 1 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа ГІ єи Сту Суз І еи Маї Гуз Азр Туг 20 25 Зо

Рпе Рго Си Рго Маї Тнг Маї 5ег Тгтр Азп 5ег С1у Аа Геи ТНг 5ег 35

Стпу Маї Ні5 Тнг РнНе Рго Аїа Маї І еи Сп 5ег Зег СПУ І еи Туг Зег 60 40

Ї еи бБег 5ег Маї Ма! Тниг Маї Рго 5ег 5ег 5ег І еи Спу Тиг Сіп ТНг 65 70 75 80 45 Туг Тиг Суз Азп Маї Азвр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз 85 90 95

Ага Маї Сім Зег Гуз Туг Спу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго 50 100 105 110

Сіи РНе Аг Ага ау Рго 5ег Маї РНе І єи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз 115 120 125 55

Азр ТНг І єи Меї Пе 5ег Аг9у ТНнг Рго Си Ма! Тнг Суз Маї Ма! Маї 130 135 140 60

Азр Маї Зег Сип Сіи Авр Рго Си Маї Сіп РНе Авзп Тгр Туг Ма! А5р 145 150 155 160 ау Маї Сіи Маї Ні Авп Аа Гуз Тпг Гуз Рго Ага Сім Спи Спп Туг 165 170 175

Азп Бег ТНиг Туг Агу Маї Ма! Зег Ма! І еи Тниг Ма! Геи Ні Сп Азр 180 185 190

Сіш Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 5ег Сип СПИ Си Меї Тниг Гуз 225 230 235 240

А5п Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго 5ег Азр 245 250 255

Пе Аїа Маї Сім Тгтр Спи Бег Азп Стпу Сп Рго Сім Авп Авзп Туг Гуз 260 265 270

Тиг Тниг Рго Рго Маї І еи Азр 5ег А5р Су Зег Рпе Рне ГІ єи Туг Зег 275 280 285

Ага ГГ еи Тнг Маї Азр Гуз 5ег Аго Тгтр Сп Спи Спу Авп Маї Рпе 5ег 290 295 00

Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сіи Аа ГГ еи Ніз Авп Ні Туг Тиг Сп СіПм Бег 305 з10 315 зго

ТГеи зегі ви Зег Рго 325 «210» 98 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -4005» 98

Аа 5ег Тпг Гуз СІу Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго Суз Зег Ага 601 5 10 15 зег Тиг Зег Спи Зег ТАг Аа Аа ГІ єи Сту Суз І еи Маї Спи Ар Туг 20 25 Зо

Стпу Ма! Ні5 Тнг Рне Рго Аїа Ма! І еи Си бег Зег СПУ І еи Туг Зег 50 55 60

Ге 5ег Зег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег Зег 5ег І ви Спу Тиг Сп ТНг 65 70 75 80

Ага Маї Сіш 5ег Гуз Туг Спу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго 100 105 110

Сіи РНе І єи Сту Су Рго 5ег Маї РНе ГІ єи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз 115 120 125

Зо

Азр Тпиг І еи Меї Пе 5ег Аг ТНиг Рго Сіи Ма! Тнг Суз Маї Ма! Маї 130 135 140

Ав5р Маї Зег Сп Си Авр Рго Си Маї Сіп РНе Авзп Тгр Туг Ма! А5р 145 150 155 160

Сім Рго Сп Маї Туг Тиг ГГ еи Рго Рго 5ег Сіп Сім Спи Меї ТАг Гуз 225 230 235 240

Азп Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго 5ег Азр бо 245 250 255

Ага ГГ еи Тнг Маї Азвр Гуз 5ег Аго Тгтр Сп Спи Спу Авп Маї Рпе 5ег 290 295 00

Суз Зег Ма! І єи Ніз Сім Аа Г єи Ні Аа Ні Туг Тиг Ага Сім Спи 305 з10 315 зго

Їеи зегІ еи Зег Рго 325 «210» 99 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «400» 99

Агу Тнг Маї Аа Аа Рго 5ег Ма! РНе Пе Рне Рго Рго 5ег Азр Си 1 5 10 15

Сіп Гей Гу Зег Сіу Тниг Аа 5ег Маї Ма! Суз І еи Геи Авзп Азп Ре 20 25 Зо

Туг Рго Ага Сім Аа Гуз Маї Сіп Тгр Гуз Маї Ар Азп Аа ГГ еи Сіп 35 40 45

Зег Сіу Авп бег Сп Си 5ег Ма! Тиг Спи Сіп Авр Зег Гуз Азр 5ег 60

ТАг Туг ЗегІ еи 5ег бег ТНгІ еи ТНг І єи бег І уз Аіа Азр Туг Сім 50 65 70 75 80

Гуз Ні Гуз Маї Туг Аа Су Сім Маї ТНиг Ніз Сп Сіу Геи Зег Зег 85 90 95 55

Рго Маї Тиг Гуз Зег РНе Авп Агу Спіу Спи Суб 100 105 60

«210» 100 «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 100

Сіп Гей Гуз бег Спу ТНг Аа Сіш Маї Ма! Суз І еи І ви Азп Азп Ріе зо

Туг Рго Ага Сім Аа Гуз Маї Сіп Тгр Гуз Маї Ар Азп Аа ГГ еи Сіп 20 35 40 45 зег Сіу Азп бег Сп Спи бег Ма! Тк Спи Сп Авр 5ег І уз Авзр 5ег 50 55 бо 25

ТАг Туг Зег І еи 5ег бег ТНг І еи Си І еи 5ег Гуз АІа Авр Туг Си 65 70 75 80

Гуз Ні Гуз Маї Туг Аа Суз Спи Маї Тиг Ніз Сип Спу Геи 5ег Зег 85 90 95

Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Авп Агу Сіу Спи Суб 100 105 «2105» 101 «2115» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 101

Стпу Сіп Рго Гуз АЇа Аа Рго 5ег Маї ТНг І еи Рне Рго Рго 5ег 5ег 501 5 10 15

Сіи Си Гей Сп Айа Авп Гуз Аа ТНг Геи Маї Суз І еи Пе Зег Азр 20 25 зо

Рпе Туг Рго Слу Айа Ма! Тниг Маї Ага Тгтр Гуз Аа Азр 5ег 5ег Рго 35 40 45 бо ма! Гуз Аа Слу Маї Спи Тк Тниг ТАг Рго 5ег Гуз Сп Зег Азп Авп 50 55 60

Гуз Туг Аа Аїа бег 5ег Туг І єи бег І еи Тнг Рго Сім Сп Тр Гуз 65 70 75 80 зег Ніз Агу 5ег Туг Зег Суз С1Іп Ма! Тиг Ніз Сіи Спу бег ТНг Маї 85 90 95

Сіш Гуз ТАг Маї Аіа Рго ТАиг Спи Суб Бег 100 105 «210» 102 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 102

Стпу Сіп Рго Гуз АЇа Аа Рго 5ег Маї ТНг І еи Рне Рго Рго 5ег 5ег 1 5 10 15

Сіи Си Гей Сп Аа Азвп Гуз Аа Гуз І єи Маї Суз І ви Пе Зег А5р 20 25 зо

Рпе Туг Рго Слу Айа Ма! Тниг Маї Ага Тгтр Гуз Аа Азр 5ег 5ег Рго 35 40 45 ма! Гуз Аа Слу Маї Спи Тниг Тиг ТАг Рго 5ег Гуз Сп 5ег Авп Авп 50 55 60

Гуз Туг Аа Аа 5ег 5ег Туг І еи Гуз Геи ТАг Рго Сім Сп Тгтр Гуз 65 70 75 80 зег Ні Ага бег Туг Зег Суз Сп Маї Тнг Ні Спи Сіу бег Тнг Ма! 85 90 95

Сіш Гуз ТАг Маї Аіа Рго ТАиг Спи Суб Бег 100 105 2105 103 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 60 0о«220»

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 103

Ага ТНиг Маї Аїа Аа Рго 5ег Маї Рпеє Пе РнНе Рго Рго 5ег Авр Си 1 5 10 15

Сіп Гей Гу5 Зег Сіу Тниг Аіа Си Маї Маї Суз І еи Геи Авзп Азп Ре 20 25 Зо

Туг Рго Ага Сім Аа Гуз Маї Сіп Тгр Гуз Маї Ар Азп Аа ГГ еи Сіп 35 40 45 зег Сіу Азп бег Сі Спи 5ег Ма! Тиг Сіи Сп Авр 5ег Гуз Азр 5ег 50 55 60

Гуз Ніз Гуз Маї Туг Аа Суз Сіи Маї Тнг Ніз Сіп С1у І еи Бег 5ег 85 90 95

Рго Маї Тиг Гуз Зег РНе Авп Агу Спіу Спи Суб 100 105 «210» 104 «211» 106 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 104

Сіу Сп Рго Гуз Айа Аа Рго 5ег Ма! ТАг ГГ еи Рне Рго Рго 5ег 5ег 1 5 10 15

Сіи Си Гей Сп Айа Авп Гуз Аа ТНг ГГ еи Маї Суз І еи Пе Зег Азр 20 25 Зо

Рпе Туг Рго Слу Айа Маї Тнг Маї Ага Тр Гуз Аа Азр 5ег 5ег Рго 35 40 45

Маї Гуз Аа Сіу Маї Агу Тиг Тит Тнг Рго 5ег Гуз Сп 5ег Азп Авп 50 55 60

Гуз Туг Аа Аа 5ег 5ег ТугІ еи Зег Геи ТАг Рго Сім Сп Тгр Гуз 60/65 70 75 80 зег Ні Ага бег Туг Зег Суз Сп Маї Тнг Ні Спи Сіу бег Тнг Ма! 85 90 95

Сіш Гуз ТАг Маї Аіа Рго ТАиг Спи Суб Бег 100 105 «210» 105 «2115» 122 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 105

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу СПУ І еи Маї Сіп Рго Сіу Су 1 5 10 15 зегеи Ага еи 5ег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рпе Тнг РНе Зег Ні Туг 20 25 зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп Аїа Рго Слу Гуз Спу Геи Сім Тгр Маї

Зо 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 бо

Гуз Спіу Ага Рпе Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп 5ег Гуз Азп ТНг Геи Туг 65 70 75 80

Аа Агу Аг ТАг Авр Аго Си Авр Ніз Стпу Тр Пе Рне Азр Туг Тр 100 105 110

Стпу Сіп Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «210» 106 «2115» 122 «212» РВАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність бо

«400» 106

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Спіу Рпе ТНиг РНе Зег Туг Туг 20 25 Зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї 35 40 45

Зег Зег Пе 5ег Рго 5ег Сіу Сіп 5ег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Ї еи Сп Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Сім Авр ТНг Аїа Маї Туг Туг Суз 85 90 95

Зо

Стпу Сіп Стпу ТАг Гей Маї Тнг Ма! бЗег 5ег 115 120 «210» 107 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 107

Стпу Маї Ні5 Тнг РнНе Рго Аїа Маї І еи Сп 5ег Зег СПУ І еи Туг Зег 50 55 60 60

ТупТНг Сув Авп Маї Азр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Гуз 85 90 95

Азр ТНг І єи Меї Пе 5ег Аг9у ТНнг Рго Си Ма! Тнг Суз Маї Маї Ма! 130 135 140

Ар Маї Зег СіІп Си Авр Рго Спи Маї Сіп Рне Азп Тр Туг Ма! Азр 145 150 155 160 ау Маї Сіи Маї Ні Азп Аа Гуз Тнг Гуз Рго Аго Сім Спи Спп Туг 165 170 175

Тр Геи Авзп Сіу Гуз Сім Туг Гуз Суз Гуз Маї Бег Азп Гуз Спу Гей 195 200 205

Сіш Рго Сп Маї Суз Тниг Геи Рго Рго 5ег Сп Сіи См Меї Тниг Гуз 225 230 235 240

Авп Сп Маї 5ег І еи Тгр Суз ГІ еи Ма! Гуз Спіу Рпе Туг Рго Зег Азр 245 250 255

Пе Аїа Маї Сім Тгтр Спи Зег Азп Стпу Сп Рго Сім Авп Авзп Туг Гуз 260 265 270

Ага Г еи Тнг Маї Азр Гуз 5ег Аго Тгтр Сп Спи Спу Авп Маї Рпе 5ег 290 295 00 60

Суз 5ег Ма! І еи Ніз Спи Аа ГГ еи Ні Аа Ніз Туг ТАг Аго Гуз Си 05 310 315 зго

ТГеи Бегі ви 5ег Рго 325 «210» 108 10. «2115» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 108

Сіш Пе Маї Геи ТАг Сп Зег Рго Аа ТНг І еи 5ег Ма! Зег Рго Спу 201 5 10 15

Сіш Ага Аа Тиг Геи Зег Суз Агу Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Агу Си зо 25

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Аа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60

Тиг Ре Су Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз 100 105 «210» 109 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 109

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 бо зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп 20 25 Зо

Ав5п Меї Авр Тр Маї Агу Сп Аа Рго Спу Сип Спу Геи Спи Ттр Меї 35 40 45

ТНигІ еи Маї Тниг Маї Зег Зег 115 «210» 110 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 110

Аа 5ег Тпг Гуз СІу Рго 5ег Ма! РНе Рго І єи Аа Рго Суз 5ег Аг9 401 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа ГІ єи Сту Суз І еи Маї Гуз Азр Туг 20 25 Зо

Рпе Рго Си Рго Маї Тнг Маї 5ег Тгтр Азп 5ег Са1у Аа І ви ТНиг Зег 35 40 45

Ге бБег Зег Маї Ма! ТАиг Маї Рго 5ег Зег 5ег І ви Спу Тиг Сп ТНг 65 70 75 80

Туг Тиг Суз Азп Маї Авр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр ГГ уз 60 85 90 95

Авр Маї Зег Сп Си Азвр Рго Си Маї Сп Рпе Авп Тр Туг Ма! Азр 145 150 155 160

Зо

Сім Рго Сп Маї Туг Тиг ГГ еи Рго Рго 5ег СіІп Суз Сім Меї ТАг Гуз 225 230 235 240

Азп Сп Маї 5ег І єи бег Суз Аа Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго Зег Азр 245 250 255

ТАг Тнг Ро Рго Маї Гей Азр 5ег Азр Сіу 5ег РНе РнНе І єи Маї бег 275 280 285

Суз Зег МаїЇ І єи Ніз Сім Аа Г єи Ні Аа Ні Туг Тиг Ага Гуз Си 305 з10 315 з2г0

Їеи зегІ еи Зег Рго бо 325

«2105 111 «211» 107 00о«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 111 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Аа І ви Спу Спп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тик Суз Спи Сіу СПи Сп Пе Спіу Зег Гуз Спи Маї зо 20

Ні Тгтр Тут Ні СіІп Агу Рго Су Сп Аа Рго Іе Геи Ма! Меї Рне 25 Агу Авр Аа Агу Агу Рго Зег Сіу Пе Рго Сі Аг Гей бег Сіу Бег 60

Азп Бег Су Азп ТАг Аа 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Стпу Аа Си Аіа СПу зо 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 35 ма! Рпе Сіпу Спіу Спу ТАг Гуз Маї Тнг Ма! Маї 100 105 40 «2105» 112 «2115» 122 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 45 «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 112 50

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу СПУ 1 5 10 15 55 зегіеи Аго І еи 5ег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рпе Тнг Рне Зег Туг Туг 20 25 зо

Азр Іе Сіп Тгтр Маї Аг Си Аїа Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Тр Маї 60 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Гуз Сіу Ага Ре Тнг Іе Зег Ага Авр Азп з5ег Гуз Азп ТНгГ еи Туг 65 70 75 80

Ї еи Сп Меї Авп 5ег ГГ еи Аг Аїа Сім Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Сувз 85 90 95

Аа Агу Агу Тпг Су Агу Си Си су Спу Тер Пе Рне Азр Туг Ттр 100 105 110

Стпу Сіп Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120 «2105» 113 «211» 107 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «400» 113

Тугаїу Аа 5ег ТНг Ага Сім Тиг С1пу Пе Рго Аїа Агу Ре 5ег Спу 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 50 65 70 75 80

«210» 114 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 114

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Гуз Аїа Рго Спіу Сп С1Іу Геи Спи Ттр Меї 20 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп ТНг Аго Зег Сіу Спіу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Рпе 50 55 бо 25

Аа Агу Ага Гуз бег Туг Спу Туг Туг ГГ еи Азр Маї Ттр Спу Сім Су 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 115 «210» 115 «2115» 107 «212» РВАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 115 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Ага ГГ еи Спу Сп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тик Суз Спи Сіу СПи Сп Пе Спіу Зег Гуз Спи Маї 20 25 зо бо

Ага Азр Аа Ага Аго Рго бег Сіпу Пе Рго Си Ага Ї еи бег Спіу бег 50 55 60

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіши Аа Спу (655 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Ма! Тер Азр 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 ма! Рпе Сіу Спіу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Ма! Ма! 100 105 «210» 116 «2115» 325 «212» РАТ -213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 116

Зег Тпг Зег Спи Зег ТНг Аа Аа І еи Спу Суз І еи Ма! Гуз Азр Туг 20 25 Зо

Стпу Маї Ні5 Тнг РНе Рго Аїа Маї І еи Сп бег бег С1Іу І еи Туг 5ег 50 55 60

Туг Тиг Суз Азп Маї Авр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азвр Гуз 85 90 95

Ага Маї Сіш бег І уз Туг Спу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго 100 105 110

Сім Рне І єи Су Сіу Рго бег Маї Рне І єи Рне Рго Рго Гуз Рго І уз 60 115 120 125

Азр Маї Зег Сип Сіи Авр Рго Си Маї Сіп Ре Авзп Тгр Туг Ма! А5р 145 150 155 160

Авп бег ТНиг Туг Агу Маї Маї 5ег Ма! Геи Тнг Ма! Геи Ніз Сіп Азр 180 185 190

Зо

Гуз Геи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Ага Ттр СіІп Спи СПу Азп Маї Рпе 5ег 290 295 оо

Суз 5ег Ма! І еи Ніз Спи Аа ГГ еи Ні Аа Ніз Туг ТАг Агу СІМ Си 305 з10 315 зго

Їеи зегІ еи Зег Рго 325 «210» 117 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 60 0о«220»

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 117

Аа бег ТАг Гуз Сіу Рго 5ег Маї РНе Рго І єи АйЇа Рго Суз 5ег Аг9 1 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи Сту Суз І еи Маї Гуз Авр Туг 20 25 Зо

Стпу Маї Ні5 Тнг РнНе Рго Аїа Ма! І еи Сп бег 5ег Спу І еи Туг 5ег 50 55 60

Туг Тиг Суз Азп Маї Азвр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Гуз 85 90 95

Сім Рне І єи Су Сіу Рго 5ег Маї Рне І єи Рне Рго Рго | уз Рго І уз 115 120 125

Ар Маї Зег Сп Си Авр Рго Спи Маї Сіп Рне Авп Тр Туг Ма! Азр 145 150 155 160 ау Маї Сіи Маї Ніз Азп Аа Гуз Тнг Гуз Рго Агу Сім Спи Сп Туг 165 170 175

Азп 5ег ТНг Туг Агу Маї Маї 5ег Маї І єи Тниг Ма! І еи Ні Сип Азр 180 185 190

Рго 5ег 5ег Пе Сім Гуз ТАг Пе 5ег Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Ага 210 215 220 60

Авп Сп Маї 5ег І єи Тниг Суз І ви Маї Гуз Спіу РНе Туг Рго 5ег Азр 245 250 255

ТГеизегі ви Зег Рго 325 «2105» 118 «2115» 325 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 118

Аа 5ег Тпг Гуз СІу Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго Суз Зег Ага 401 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи Сту Суз І еи Маї Спи Азр Туг 20 25 Зо

Стпу Маї Ні5 Тнг РнНе Рго Аїа Ма! І еи Си бег Зег СІу І ей Туг 5ег 50 55 60

Ге бБег Зег Маї Ма! Тниг Маї Рго 5ег Зег 5ег І ви Спу Тиг Сп ТНг 65 70 75 80

Туг Тиг Суз Азп Маї Авр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Гуз 60 85 90 95

Сіи РНе ГГ єи Сту Су Рго 5ег Маї РНе І єи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз 115 120 125

Авр Маї Зег Сп Си Азвр Рго Спи Маї Сип Рпе Авп Ттр Туг Ма! Азр 145 150 155 160

Азп Бег ТНиг Туг Агу Маї Ма! Зег Ма! І еи Тниг Ма! ГІ еи Ні Сіп Азр 180 185 190

Зо

Рго 5ег 5ег Пе Сім Гуз ТАг Пе 5ег Гуз Аа Гуз Спу Сп Рго Ага 210 215 220

Азп Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! І уз Сіу Рне Туг Рго 5ег Азр 245 250 255

Гуз Геи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Ага Ттр СіІп Спи СПу Азп Маї Рпе 5ег 290 295 00

Суз Зег МаїЇ І єи Ніз Сім Аа Г єи Ні Аа Ні Туг Тиг Ага Сім Спи 305 з10 315 зго

Їеи зегІ еи Зег Рго бо 325

«210» 119 «2115» 325 00о«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 119

Аа 5ег Тпг Гуз СІу Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго Суз Зег Ага 1 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа ГІ єи Сту Суз І еи Маї Гуз Азр Туг

Зо 20

Рпе Рго Си Рго Маї Тнг Маї 5ег Тгтр Азп 5ег С1у Аа Геи ТНг 5ег 35 40 45 25 ау Маї Ніз Тнг Рне Рго Аа Маї І еи І уз бег 5ег С1пу І еи Туг 5ег 50 55 60

Туг Тиг Суз Азп Маї Авр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз 85 90 95

Сім Рне І єи Су Сіу Рго бег Маї РНе І єи Рне Рго Рго І уз Рго І уз 115 120 125

А5р ТАг І еи Меї Іе 5ег Агу ТНиг Рго Си Ма! Тнг Суз Маї Маї Маї 130 135 140

Ар Маї Зег СіІп Си Авр Рго Спи Маї Сіп Рне Азп Тгр Туг Ма! Азр 145 150 155 160

Азп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї 5ег Ма! І еи Тнг Ма! Геи Ні Сіп Азр 180 185 190 60

Рго Зег 5еї Пе Спи Гуз ТНиг Пе Зег Гуз Аа Гуз Су Сп Рго Ага 210 215 220

Сіш Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 5ег Сіп Гуз Спи Меї Тнг Гуз 10225 230 235 240

Азп Сп Маї 5ег І еи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго 5ег Азр 245 250 255

Гуз Геи ТНиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп Спи СпПу Азп Маї Рпе Зег 290 295 00

Їеи зегІ еи Зег Рго 325 «210» 120 «211» 448 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 120

Сіп Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Спу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 20 25 зо

А5р Іе СіІп Тр Маї Агу Сп Аа Рго Слу Гуз Спу Геи Спи Тр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї бо 50 55 60

Аа Ага Ага Тниг Сіпу Ага Спи Туг Азр Стпу Спу Тгтр Туг Ре Азр Туг 100 105 110

Тераїу іп Спу ТНг Г еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг І уз Спу 115 120 125

Рго 5ег Маї Рне Рго Ге Аа Рго Су 5ег Агу 5ег ТНг Зег Сім Бег 130 135 140

ТАг Аа Айа І єи Сіу Суз І еи Ма! Гуз Азр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї 145 150 155 160

Тпг Маї Зег Тгтр Авп 5ег Сту Аа Геи Тнг Зег Сіу Маї Ні5 Тиг Рпе 165 170 175

Зо

Рго Аа Маї І еи Гуз бег бег Сіу І еи Туг 5ег І еи 5ег Зег Ма! Маї 180 185 190

ТНАг Маї Рго 5ег Зег Зег І еи Спіу Тиг Сп Тиг Туг Тиг Суз Азп Маї 195 200 205

Авр Нів Гуз Рго 5ег Азп ТНг І уз Маї Авр Гуз Аго Маї Спи Зег Гуз 210 215 220

Туг ау Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Си РНе І вєи Спу Спу 225 230 235 240

Рго бег Ма! Рне Геи Рне Рго Рго І уз Рго І уз Азр ТНг І еи Меї Пе 245 250 255 зег Агу ТАг Рго Сіш Маї Тниг Суз Маї Маї Маї Азр Маї бег Сп Спи 260 265 270

А5р Рго Си Маї Сіп РНе Азп Тгр Туг Ма! Азр Стпу Ма! Спи Маї Нів 275 280 285

Азп Аа Гуз Тпг Гуз Рго Ага Сім Спи Сп Туг Азп 5ег ТНг Туг Ага 60 290 295 00

Уаї Ма! Зег Ма! І еи Тнг Маї І еи Ніз Сіп Авр Тгр Геи Азп Су Гуз 305 з10 315 зго

Гуз Тиг Пе Зег Гуз Аа Гуз Спу Сип Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг 340 345 350 15. ТАгГеи Рго Рго Зег СіІп Гуз Сіи Меї Тнг Гуз Азп Сп Маї 5ег І еи 355 360 365

Тпиг Суз І еи Маї Гуз Спу Рне Туг Рго Зег Азр Іе Аа Маї Сіш Тгтр 370 375 380

І еи Азр 5ег Авр Сіпу 5ег Ре Ре Г єи Туг 5ег Гуз Геи Тнг Ма! Азр 405 до 415

Зо

Гуз Зег Агу Тгр Сп Спи Спу Азп Маї Рпе 5ег Суз 5ег Маї І еи Нів 420 425 430

Сім Аа єи Ніз Аа Ніз Туг ТНг Агу Гуз С1и еи Зег І еи Зег Рго 435 440 445 «2105» 121 «211» 448 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 121

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 501 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 20 25 Зо

Азр Аїа СіІп Тр Маї Аго Сіп Аа Рго Стпу Гуз СпІу Геи Спи Тр Маї 35 40 45 60 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Гуз Счлу Ага Ре ТНг Іе 5ег Ага Азр Азп 5ег І уз Азп ТНг Ге Туг 65 70 75 80

Аа Ага Ага Тиг Спу Зег Спи Авр Су Аа Стпу Тр Туг Ре Азр Туг 100 105 110

Рго бег Маї РНе Рго І еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТНг 5ег Си 5ег 130 135 140

ТНг Аа Аа І єи Сіу Суз І еи Ма! Гуз Азр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї 145 150 155 160

Рго Аа Маї І еи Гуз бег 5ег Сіу І еи Туг 5ег І еи 5ег 5ег Маї Ма! 180 185 190

ТАг Маї Рго 5ег Зег 5ег І ви Сіу ТНиг Сп ТАг Туг Тнг Суз Азп Маї 195 200 205

Азр Нів Гуз Рго 5ег Азп ТНг І уз Маї Азр Гуз Аго Маї Спи Зег Гуз 210 215 220

Тугаїу Рго Рго Суз Ріо Рго Су Рго Аа Рго Сім Рпе Геи Спу СПу 225 230 235 240

Рго бег Ма! Рне Геи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Пе 245 250 255 зег Агу ТАг Рго Сіш Маї Тниг Суз Маї Маї Маї Азр Маї бег Сп Спи 260 265 270

Азр Рго Сіи Маї Сіп Рне Азп Тр Туг Ма! Азр Сту Маї Сіши Маї Нів 275 280 285 60

Азп Аа Гуз Тпг Гуз Рго Ага Сім Спи Сп Туг Азп 5ег ТНг Туг Ага 290 295 00

Маї Маї 5Бег Ма! І еи Тнг Ма! ГГ еи Ні Сп Азр Ттр ГГ еи Авп ау ГГ ув 305 з10 315 зго

Гуз Тниг Пе Зег Гуз Аа Гуз Спу Сіп Рго Аг Си Рго Сп Маї Туг 340 345 350

Тпиг Суз І еи Маї Гуз Спіу Рне Туг Рго 5ег Авр Іе Аа Маї Си Ттр 370 375 380

Сім Бег Авп ау Сп Рго Сіи Авп Азп Туг Гуз ТНг ТНг Рго Рго Маї 385 390 395 400

І еи Азр 5ег Азр Стпу 5ег Ре Ре Г єи Туг 5ег Гуз Геи Тнг Ма! Азр 405 до 415

Сі Аїйа І єм Ні Аа Ніз Туг Тниг Агу Гуз Сім ЇЇ еи бег І еи 5ег Рго 435 440 445 «210» 122 «2115» 447 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 122

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сіп Рго Спіу Су 1 5 10 15 зегіеи Аго І еи 5ег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рпе Тнг Рне Зег Туг Туг 20 25 Зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї бо 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Аа Агу Агу Тг Су Агу Си Авр Спу Спу Тгр Ні5 Рне Азр Туг Тр 100 105 110

Сіу Сп Сіу ТНг Ге Маї Тнг Маї Зег Зег Аа 5ег ТНг Гуз Сіу Рго 115 120 125 зег Маї Рпе Рго І еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТНг Зег Спи Зег ТНг 130 135 140

Аа Аїа І єи Стлу Суз І еи Ма! Гуз Ар Туг Ріє Рго Си Рго Маї ТНг 145 150 155 160

Зо ма! Бег Тгтр Авп з5ег Су Аа І еи Тниг Зег Сіу Маї Ніз Тнг Рпе Рго 165 170 175

Аа Маї І еи Гуз бег бег Су І еи Туг Зег І еи 5ег Зег Ма! Ма! ТНг 180 185 190

Уа! Рго 5ег бег 5ег І ви Сіу Тнг Сп ТАг Туг Тнг Су Азп Маї А5р 195 200 205

Ні Гуз Рго Зег Азп ТАг Гуз Маї Ар Гуз Ага Маї Спи Зег Гуз Туг 210 215 220

Стпу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи РНе Геи Спіу Спу Рго 225 230 235 240 зег Ма! Рпе ГГ еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТНиг Геи Ме! Пе 5ег 245 250 255

Агу Тпг Рго Сім Маї ТАиг Суз Маї Маї Маї Азр Маї 5Зег Сіп Си Азр 260 265 270

Рго Сііш Маї Сп Рне Авп Тр Туг Маї А5р Сіу Маї Сіи Маї Ні5 Авп 60 275 280 285

Аа Гуз Тиг Гуз Рго Ага Сім Спи Сп Туг Азп Зег ТАг Туг Ага Маї 290 295 ЗО

Уа! Зег Ма! І еи Тнг Маї І еи Ніз СіІп Авр Тгр І єи Азп Су ГГ уз Си 305 310 315 зго

Туг Гуз Суз Гуз Маї Зег Авп Гуз С1пу Геи Рго Зег Зег Пе Спи Гув 325 330 335

ТА Пе Зег уз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Сіш Рго Сіп Маї Туг Тиг 340 345 350

І еи Рго Рго Зег Сіп Гуз Спи Меї Тиг Гуз Азп ап Маї Зег ГГ еи ТНг 355 360 365

Суз І єи Ма! Гуз Спу Рпе Туг Рго 5ег Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр Спи 370 375 380 зег Азп С1у Сп Рго Си Авп Авзп Туг Гуз Тиг ТНг Рго Рго Маї І еи 385 390 395 400

Ар 5ег Азр Сіу бег Рне РнНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тнг Маї Авр ГГ уз 405 до 415

Бег Аго Тр СіІп Сіи Сіу Азп Маї Рне бег Суз 5ег Маї І еи Ні Си 420 425 430

Аа І еи Ніз Ага Ні Тут Тнг Агу І уз Спи І еи 5ег І еи бег Рго 435 440 445 «210» 123 «211» 447 «212» РВАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 123

Сіп Маї Сій І єи Маї Спи бег Сіу Спу СПУ І еи Маї Сіп Рго Сіу Су 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 20 25 Зо бо

Азр Іе Сіп Тгтр Маї Аг Сім Аа Рго Слу Гуз Спу Геи Сім Тгр Маї 35 40 45

Гуз Спіу Ага Рпе Тнг Пе Зег Ага Авр Авзп 5ег Гуз Азп ТНг Геи Туг (655 70 75 80

Аа Агу Ага Тиг Сіу Ага Спи Си пу сту Тгр Пе Рпе Ар Туг Тр 100 105 110

Сіу Сп Сіу ТНг Ге Маї Тнг Маї Зег Зег Аа 5ег ТНг Гуз Сіу Рго 115 120 125

Зеї Ма! Рне Рго Геий Аа Рго Суз Зег Агу 5ег ТНг Зег Си Зег ТНг 130 135 140

Аа Аїа І єи Стлу Суз І еи Ма! Гуз Ар Туг Ріє Рго Си Рго Маї ТНг 145 150 155 160 ма! Бег Тгтр Авп з5ег Су Аа І еи Тниг Зег Сіу Маї Ніз Тнг Рпе Рго 165 170 175

Аа Ма! І еи Гуз бег бег Су І еи Туг Зег І еи 5ег Зег Маї Ма! ТНг 180 185 190

Ні5 Гуз Рго бег Азп ТНАг Гуз Маї Ар Гуз Ага Маї Спи Зег Гуз Туг 210 215 220

Стпу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи РНе Геи Спіу Спу Рго 0225 230 235 240 зег Ма! Рпе ГГ еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТНиг Геи Ме! Пе 5ег 245 250 255

Агу Тнг Рго Сім Маї Тиг Суз Маї Маї Маї Азр Ма! Зег Сіп Сім А5р 260 265 270 60

Рго Сііш Маї Сп Рне Авп Тр Туг Маї А5р Сіу Маї Сіи Маї Ні5 Авп 275 280 285

Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Сі Си Сп Туг Азп 5ег ТНг Туг Агу Маї 290 295 00

Уа! Зег Ма! І еи Тнг Маї І еи Ніз СіІп Авр Тгр І єи Азп Су І уз СПИ 10305 310 315 320

Ти Пе Зег Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Сім Рго Сіп Маї Тут ТНг 340 345 350

Суз І ви Маї Гуз Спіу Ре Туг Рго Зег Азр Іе Аа Ма! Спи Ттр Си 370 375 380 зег Азп С1у Сп Рго Си Авп Авзп Туг Гуз Тиг ТНг Рго Рго Маї І еи 0 385 390 395 400

Ар 5ег Азр Сіу бег Рне РнНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тнг Маї Азвр І уз 405 до 415 зег Агу Ттр Сп Сіи С1у Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Маї І еи Ніб5 Спи 420 425 430

Аа Г еи Ніз Аа Ні Тут Тнг Агу Гуз Сім І еи бег І еи бег Рго 435 440 445 «210» 124 «2115» 447 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 124

Сп Маї Сіп Геи Маї Сім Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Суп Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНиг Рне Зег Туг Туг 60 20 25 Зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп Аїа Рго Спу Гуз Спу Гей Си Тр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Гуз Спіу Ага Ре Тнг Іе Зег Ага Азр Азп 5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80

Аа Агу Ага Тнг Сіу Ага Спи Си пу С1іу Тр Пе Ре Азр Туг Ттр 100 105 110

Сіу Сп Сіу ТНг Ге Маї Тнг Маї Зег Зег Аа 5ег ТНг Гуз Сіу Рго 115 120 125 зег Маї Рпе Рго І еи Аа Рго Су 5ег Агу 5ег ТНг 5ег Сім 5ег ТНг 130 135 140

Зо

Уа! Зег Ттр Азп 5бег Сіу Аа І еи Тнг бег Сіпу Маї Ні Тнг Рне Рго 165 170 175

Уа! Рго 5ег бег 5ег І ви Сіу Тиг Сп ТАг Туг Тнг Суз Азп Маї А5р 195 200 205

Стпу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи РНе І єи Сіу Спу Рго 225 230 235 240 зег Ма! Рпе ГГ еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТНиг Геи Ме! Пе 5ег 245 250 255

Агу Тнг Рго Сім Маї Тиг Суз Маї Маї Маї Азр Ма! Зег Сіп Сім А5р бо 260 265 270

Аа Гуз Тиг Гуз Рго Ага Сім Спи Сп Туг Азп Зег ТАг Туг Ага Маї 290 295 00

Уа! Зег Ма! І еи Тнг Маї І еи Ніз СіІп Авр Тгр І єи Азп Су І уз СПИ 305 310 315 зго

ТупГуз Суз І уз Ма! Зег Авп І уз Су І еи Рго 5ег 5ег Пе С1іи Гуз 325 330 335

Суз І єи Ма! Гуз Спу Рпе Туг Рго 5ег Азр Пе Аа Маї Сі Тер Сіи 370 375 380 зег Азп С1у Сп Рго Си Авп Авзп Туг Гуз Тиг ТНг Рго Рго Маї І еи 385 390 395 400

Авр бег Азр Су бег Рпе РНе ГГ еи Туг Зег Гуз Геи ТАг Ма! Авр Гуз 405 а410 415 зег Агу Ттр Сп Сіи С1у Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Маї І еи Ніб5 Спи 420 425 430

Аа І еи Ніз Ага Ні Туг Тнг Агу Гуз Сім І еи бег І еи бег Рго 435 440 445 «210» 125 «2115» 447 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 125

Сіп Маї Сій І єи Маї Сіи бег Сіу Спу Слу Гей Маї Сій Рго Спіу Су 1 5 10 15 бо зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Сіу Рпе ТНг РНе З5ег Ніз Туг 20 25 Зо

А5р Іе Сп Ттр Маї Аго Сіп Аа Рго Стпу Гуз СПУ Геи Спи Тр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Ага Ага Сім Маї 50 55 60

Аа Ага Ага Тнг Ар Аг Сім Авр Ні Сіу Тгр Пе Рне Азр Туг Ттр 100 105 110

Сіу Сип Счу ТНг Г еи Маї Тниг Маї Зег 5ег Аа 5ег ТНиг Гуз СІу Рго 115 120 125 зег Маї Рпе Рго І еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТНг Зег Спи Зег ТНг 130 135 140

Аа Аїа І єи Стлу Суз І еи Ма! Гуз Ар Туг Ріє Рго Си Рго Маї ТНг 145 150 155 160 ма! Бег Тгтр Авп з5ег Су Аа І еи Тниг Зег Сіу Маї Ніз Тнг Рне Рго 165 170 175

Маї Ро 5ег Зег Зег ГГ еи Спу Тиг Сп ТНг Туг Тниг Суз Азп Маї Азр 195 200 205

Стпу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Си РНе І еи Спу Спіу Рго 225 230 235 240 зег Ма! Рпе ГГ еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТНиг Геи Ме! Пе 5ег 245 250 255 60

Агу Тнг Рго Сім Маї Тиг Суз Маї Маї Маї Ар Маї Зег СіІп Си Азр 260 265 270

Аа Гуз Тиг Гуз Рго Ага Сіи Спи С1пп Туг Азп 5ег ТНг Туг Аг Маї 290 295 00

Уа! Зег Ма! І еи Тнг Маї І еи Ніз СіІп Авр Тгр І єи Азп Су І уз СПИ 305 з10 315 зго

Туг Гуз Суз Гуз Маї Зег Азп Гуз Стпу Г еи Рго Зег Зег Пе Сім Гув 325 330 335

Геи Рго Рго Зег Сп Гуз Спи Меї Тниг Гуз Азп ап Маї Зег І еи ТНг 355 360 365

Аїагеи нНіз Аа Ні Туг ТНг Аго Гуз Сіи І еи Бег Г еи 5ег Рго 435 440 445 «210» 126 «2115» 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 126

Сіш Пе Маї Геи ТАг Сп Зег Рго Аа ТНг І еи 5ег Ма! Зег Рго Спу 601 5 10 15

Сіш Ага Аа Тиг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сп 5ег Маї Агу Агу А5р 20 25 Зо

Ї еи Ага Тр Туг СіІп СіІп Гуз Рго Стпу СіІп Айа Рго Аго І єи Геи Пе 35 40 45

Рпе Спу Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гуз Аго Тиг Маї Ага Аїа Рго 100 105 110 зег Ма! Ріє Пе Рпеє Рго Рго 5ег Авр Сім Сіп Геи Гуз Зег СПУ ТНг 115 120 125

Зо

Аа Сі Маї Ма! Суз Геи І еи Азп Азп РнНе Туг Рго Аго Си Аа Гуз 130 135 140

Уа! Сіп Тр Гуз Маї Авр Авзп Аа І ви Сп 5ег Сіу Азп 5ег Сп СПИ 145 150 155 160 зег Ма! Тиг Спи Сп Авр 5ег І уз Азр 5ег ТНиг Туг 5ег І єи бег 5ег 165 170 175

ТигГеи Си Гей Бег Гуз Аа Ар Туг Си Гуз Ніз Гуз Маї Туг Аіа 180 185 190

Суз Сіиш Маї Тнк Ніз Сіп СПУ І еи бег 5ег Рго Ма! ТНг Гуз 5ег Рпе 195 200 205

Азп Агу ау Спи Сув 210 «210» 127 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 60 0о«220»

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 127

Туг ачу Ага 5ег Аг Агу Аа Тниг С1у Пе Рго Айїа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Рпе ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Сім Азр РНе Аа Маї Туг Туг Суз Сіп Сп Туг Агу 5ег Рго Геи ТНг 85 90 95

Рпе Спту Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гуз Аго Тнг Маї Айіа Аа Рго 100 105 110 зег Ма! Ріє Пе Рпеє Рго Рго 5ег Авр Сім Сіп Геи Гуз Зег СПУ ТНг 115 120 125

Аа Сі Маї Ма! Суз Геи І еи Азп Азп РнНе Туг Рго Аго Си Аа Гуз 130 135 140 ма! ап Тгр Гуз Маї Авр Авзп Аа Геи СіІп Зег Спу Азп 5ег Сіп Спи 145 150 155 160

Зег Ма!Ї Тиг Си Сп Азр 5ег Гуз Азр 5ег ТАг Туг Зег Геи 5ег Зег 165 170 175

Азп Агу ау Спи Сув 210 60

«210» 128 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 128

Сім Ага Аа ТАг І еи 5ег Суз Агу Аа ТНг Сіп 5ег Маї Агу Ага А5р

Зо

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Сп Гуз Рго Сіу Сіп Аїа Рго Сім Геи І еи Пе 20 35 40 45

Туг ачу Ага 5ег Аг Агу Аа Тниг С1у Пе Рго Айїа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 25 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Зо

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Агу Зег Рго І еи ТНг 85 90 95

Рпе Спу Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гуз Аго Тиг Маї Ага Аїа Рго 100 105 110 зег Ма! Ре Пе Рпеє Рго Рго 5ег Авр Сім Сп Геи Гуз Зег СПУ ТНг 115 120 125

Аа Сі Маї Ма! Суз Геи І еи Азп Азп РнНе Туг Рго Аго Си Аа Гуз 130 135 140 ма! діп Тгр Гуз Маї Азвр Авзп Аа Геи СіІп Зег Сіу Азп 5ег Сп Спи 145 150 155 160 зег Ма! Тиг Сім Стпп Ар Зег Гуз Ар 5ег Тпиг Туг 5ег І ви Бег 5ег 165 170 175

ТАгІГеи Сі І еи Бег Гуз Аа Азр Туг Сли Гуз Ніз ГІ уз Ма! Туг Аа 180 185 190

Суз Сіиш Маї Тнк Ніз Сіп СПУ І еи бег 5ег Рго Ма! ТНг Гуз 5ег Рпе бо 195 200 205

Азп Агу ау Спи Сув «210» 129 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 129

Ге Аїда Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Су Сп Айїа Рго Аго Г єи ГГ еи Пе 35 40 45

Сіш Азр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Туг Агу Азр Рго І еи ТНг 85 90 95

Рпе Спу Спу Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гуз Аго Тиг Маї Ага Аїа Рго 100 105 110

Зег Ма! РНе Іе РНе Рго Рго бег Авр Си Сп І ей Гу5 Зег Су ТНг 115 120 125

АІа Сіш Маї Маї Суз І еи І еи Азп Азп Рне Туг Рго Агу Си Аа І уз 130 135 140 ма! ап Тгр Гуз Маї Авр Авзп Аа Геи СіІп Зег Спу Азп 5ег Сіп Спи 145 150 155 160 зег Ма! Тиг Сім Стпп Ар Зег Гуз Ар 5ег Тпиг Туг 5ег І ви Бег 5ег 165 170 175 60

Суз Сіши Маї Тнг Ні Сп Су І еи бег 5ег Рго Маї Тнг Гуз бег РНе 195 200 205

Азп Агу ау Спи Сув 210 «210» 130 «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 130

Зо

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Гуз Гуз Рго Сіпу Сп Аїа Рго Аго І єи ГГ еи Пе 35 Туг ау АІа 5ег Тнг Ага Спи Тнг Слпу Пе Рго Азр Агу РНе Зег Спіу 60 зег Сіу Зег Су Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 40 (65 70 75 80

Сіш Азр Меї Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сіп Туг Агу Ар Рго Рго Стпу 85 90 95 45

Тиг Ре Сіпу Спу Спу ТАг Гуз Маї Сім Пе Гуз Агу Тнг Маї Аа Аа 100 105 110 50

Рго 5ег Маї Ре Пе Рне Рго Рго 5ег Азр Спи Сп Геи Гуз Зег СІу 115 120 125 55 ТНг Аіа Си Маї Ма! Суз І еи Гей Азп Азп Ре Туг Рго Ага Сім Аа 130 135 140

Гуз Ма! Сп Тр Гуз Маї Азр Авп Аа І ви Сп 5ег Сіу Азп 5ег Сп 60 145 150 155 160

Сіи Зег Ма! Тиг Спи Сип Авр Зег Гуз Азр 5ег ТНиг Туг Зег І еи Бег 165 170 175 зег ТигІ еи Спи І еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів І уз Ма! Туг 180 185 190

АІа Суз Спи Маї Тнг Ні Сіп С1у І еи 5ег 5ег Рго Маї Тиг Гуз 5ег 195 200 205

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «210» 131 20. «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 25 «223» Штучно синтезована послідовність «400» 131

Сі Пе МаїЇ Геи ТАг Сіп 5ег Рго Аа ТНг І еи 5ег Маї Зег Рго Спу 30 1 5 10 15

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі

Зо

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Айїа Агу Ре 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Сіш Азр Меї Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сіп Туг Агу Авр Рго Рго Спіу 85 90 95

Рго 5ег Маї Ре Пе Рне Рго Рго 5ег Азр Си Сп Гей Гуз Зег СПу 115 120 125 60

ТАг Аа Си Маї Маї Суз І еи Ї еи Азп Азп РнНе Туг Рго Ага Си Аїа 130 135 140

Гуз Ма! Сп Тр Гуз Маї Азр Авп Аа І еи Сіп бег Спу Азп 5ег Сп 145 150 155 160

Сіи Зег Ма! Тиг Спи Сип Авр Зег Гуз Азр 5ег ТНиг Туг Зег І еи Бег 165 170 175 зег ТНгІ еи Сім І еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів І уз Ма! Туг 180 185 190

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «2105» 132 «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 132

Си Пе Ма! Геи Тнг Сп 5ег Рго Айа ТнНг І єи 5ег Ма! Зег Рго Сіу 1 5 10 15

Ї еи Ага Тр Туг Сіп Гуз Гуз Рго Слпу Сп АйЇа Рго Аго І єи І еи Пе 35 40 45

Тугаїу Аа 5ег Агу Агу Сіш Тг Су Пе Рго Азр Ага РНе 5ег Спу 60 50 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Си Рго 65 70 75 80 55 Сім Ар Ре Аа Маї Туг Туг Суз Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго Спу 85 90 95

Тиг Ре Су Спу Спу ТАг Гуз Маї Сім Пе Гуз Агу Тнг Маї Аа Аа бо 100 105 110

Рго 5ег Маї Ре Пе Рне Рго Рго 5ег Азр Спи Сп Геи Гуз Зег СІу 115 120 125

Тиг Авіа Си Маї Маї Суз І еи І еи Азп Азп Ре Туг Рго Аго Сі Аа 130 135 140

Си Бег Ма! Тиг Сі Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег ТНг Туг Зег І еи 5ег 165 170 175 зег ТигІ еи Спи І еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів І уз Ма! Туг 180 185 190

АІа Суз Спи Маї Тнг Ні Сіп С1у І еи 5ег 5ег Рго Ма! ТНг Гуз Зег 195 200 205

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210

Зо «2105» 133 «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 133

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Авр Агу Ре Зег Спіу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80 60

ТАгРНе Стлу Сіу Сіу Тиг Гуз Маї Спи Пе Гуз Ага Тнг Маї Аа Аа 100 105 110

Тиг Айва Си Маї Маї Суз І еи І еи Азп Азп Ре Туг Рго Аго Сім Аа 130 135 140

Сіи Зег Ма! Тиг Спи Сип Авр Зег Гуз Азр 5ег ТНиг Туг Зег І еи Бег 165 170 175 зе ТигГеи Сіш Гей 5ег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Ніз Гуз Маї Туг 180 185 190

Аа Суз Си Маї Тнг Ні Сп Су І еи бег 5ег Рго Маї Тнг І уз бБег 195 200 205

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «210» 134 «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 134

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Спи Тнг С1пу Пе Рго Айїа Агу РНе 5ег Спу 60 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Си Ре ТНг І еи Тнг Пе бег 5ег І ви Сп 5ег 65 70 75 80

Сіш Азр Меї Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сп Туг Агу Ар Рго Рго Стпу 85 90 95

Зо зег ТигІ еи Спи І еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів І уз Ма! Туг 180 185 190

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «210» 135 «2115 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 135

Сіш Агу Айа Тнг Геи Зег Суз Агу Аїа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі 20 25 Зо 60

Тугаїу АІа 5ег Тиг Аго Сім Тиг Су Пе Рго Аїа Агу Ре 5ег Спу 50 55 бо зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Азп 5ег І еи Спи Аа (655 70 75 80

Тиг Ре Су Спу Спу ТАг Гуз Маї Сім Пе Гуз Агу Тнг Маї Аїа Аа 100 105 110

ТНг АІа Си Маї Маї Суз І еи І еи Азп Азп РнНе Туг Рго Агу Сім Аа 130 135 140

Сіи Зег Ма! Тиг Спи Сип Авр Зег Гуз Авзр 5ег ТНг Туг Зег І еи Бег 165 170 175 зег ТигІ еи Спи І еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів І уз Ма! Туг 180 185 190

Аа Суз Си Маї Тнг Ні Сп Су І еи 5ег 5ег Рго Маї Тнг І уз бБег 195 200 205

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «210» 136 «2115» 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 136

Тугаїу Аа 5ег ТНг Агу Сім Тнг Су Пе Рго Аа Агу РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Азвп 5ег І еи Сім Аїа 65 70 75 80

Рго 5ег Маї Ре Пе Рне Рго Рго 5ег Азр Спи Сп Геи Гуз Зег Спу 115 120 125

Зо

Гуз Ма! Сп Тр Гуз Маї Азр Авп Аа І ви Сп бег Спу Авзп 5ег Сіп 145 150 155 160

Сіи Зег Ма! Тиг Спи Сип Авр Зег Гуз Азр 5ег ТНиг Туг Зег І еи Бег 165 170 175 зег ТигІ еи Спи Г еи Зег Гуз Аа Азр Туг Си Гуз Нів Гуз Маї Туг 180 185 190

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 «210» 137 «2115 214 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 60 0о«220»

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 137

Тугаїу Ага 5ег Агу Агу Сіш ТАг С1у Пе Рго Аа Ага РНе 5ег Спу 50 55 60 зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре ТнНг І еи Тнг Пе Азвп 5ег І еи Сім Аїа 65 70 75 80

Сім Авр Аа Аа Тнг Туг Туг Суз Сип Сп Туг Агу Авр Рго Рго Сіу 85 90 95

Сім Бег Ма! Тиг Сі Сп Азр 5ег Гуз Авр 5ег ТНг Туг Зег Геи Зег 165 170 175 зег ТигІ еи Спи І еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів І уз Ма! Туг 180 185 190

Ре Авзп Агу Сіу Сіи Сувз 210 60

«210» 138 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 138

Зег Маї Гуз Ма! Зег Сувз Гуз Аа бег Спу Туг Тит Рпе Тниг Ар Азп

Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СПУ Геи Спи Ттр Меї 20 35 40 45

Сіу Азр 5ег Азп ТНг Ага Бег Спіу Тиг Зег Пе Туг Азп Сім Спи Ріе 50 55 60 25

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Авр Гуз 5ег ТНиг Азр Тпг Аа Туг 65 70 75 80

Зо

Аа Агу Ага Гуз бег Туг Сіу Туг Туг Геи Авр Сім Тгтр Счіу Спи Спіу 100 105 110

Спу Суз І еи Ма! Сіи Авр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Ма! Зег Тр 145 150 155 160

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тниг Рне Рго Аїа Маї І еи 165 170 175 ам бег бег Сіу І еи Туг 5ег І єи бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зег ЗегіІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНг Суз Авзп Маї Азвр Ніз Гуз Рго 60 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіши РНе І еи Спіу Су Рго 5ег Ма! Рне 225 230 235 240

Си Ма! Тиг Суз Маї Маї Ма! Ар Маї Зег Сп Си Авр Рго Сіи Маї 260 265 270

Гуз Рго Агу Си Сім Сп Туг Азп Зег ТАг Туг Агу Маї Маї 5ег Маї 290 295 00

Зо

Гуз Маї Зег Авп І уз С1у І еи Рго Зег 5ег Пе Спи Гуз Тиг Пе бег 325 330 335

Гуз АІа Гуз СпІу Сп Рго Агу Сі Рго Сіп Маї Туг ТНг І ей Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І еи Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365

Гуз Спіу Ре Туг Рго Зег Азр Іе Аа Маї Сім Тгтр Спи бег Азп Спіу 370 375 380

Сіп Рго Сіи Авп Авзп Туг Гуз Тпг ТНг Рго Рго Маї Геи Авр Зег Азр 385 390 395 400

Сіу Зег Рпе Рне І єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Маї Азр Гуз 5ег Ага Ттр 405 до 415

Сп Си Спу Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Маї І еи Ні Сіи Ага ГІ еи Ніб 420 425 430

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Гей 5ег І ви Зег Рго бо 435 440

«210» 139 «211» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 139

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Ма! бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Азп Авзп

Зо 20

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї 25 Су А5р Іе Азп Тпг Аг 5ег Спіу Сіу Ма! Пе Туг Азп Спи Спи Ріе 60

Сіп Азп Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Азр Гуз 5ег ТНг Азр Тпг Аа Туг зо 65 70 75 80

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Азр ТНг Аа ТНг Туг Ні Суз 85 90 95 35

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Су Туг Туг Геи Азр Маї Ттр Спіу Спи Спіу 100 105 110 40

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 115 120 125 45 Рго І єи Аїа Рго Суз 5ег Ага бег Тиг Зег СІш 5ег ТНг Аа Ага І єи 130 135 140

Спу Суз І еи Ма! Сіи Авр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Ма! Зег Тр 50 145 150 155 160

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Су Маї Ні Тиг Рне Рго Аїйа Маї І еи 165 170 175 55

Сім бег Зег Су І еи Туг Зег І еи 5ег бег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 бо зег ЗегіІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНг Суз Авп Маї Азр Нізв Гуз Рго 195 200 205 зег Авп ТАг Гуз Маї Азр Гуз Аго Маї Спи Бег Гуз Туг Су Рго Рго 210 215 220

Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Си РНе І еи Спіу Су Рго 5ег Ма! Рне 10225 230 235 240

Сі Маї Тнг Суз Маї Маї Ма! Азр Маї 5ег Сп Спи Авр Рго Спи Маї 260 265 270

Гуз Рго Агу Сіи Спи Сп Туг Азп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї 5ег Маї 290 295 00

Ї еи Тниг Маї І еи Ні Сіп Азвр Тр І еи Авзп Су Гуз Си Туг Гуз Сувз 305 з10 315 з20

Гуз Спу Рне Туг Рго 5ег Азр Пе Аа Маї Спи Ттр Сіи бег Азп СІу 370 375 380

Сіу Зег Рпе Рне І! єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Маї Азвр Гуз Зег Аг9 Тр 405 до 415

Сіп Си Спу Азп Маї Рне 5ег Суз Зег Маї І еи Ніз Сім Аа ГІ еи Ніб 420 425 430 60

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 140 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 10. «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 140

Сп Маї Сіп Геи Ма! Сип бег Спу Зег Сім Ге Гуз Гуз Рго Спу Аіа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї 5ег Суз Гуз Аа бег Су Туг Тиг Ре ТНг Авр Авп 20 25 Зо

Зо

Меї Сі І єи бег 5ег І ви Агу 5ег Сіш Авр ТНг Айва Тнг Туг Ніз Сувз 85 90 95

Авп бег Слу Аа І єи ТНиг Зег Сіу Маї Ні Тиг Рне Рго Аїйа Маї Гей 165 170 175

Сім бег Зег Су І еи Туг Зег І еи 5ег бег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег бо 180 185 190 зег ЗегіІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНг Суз Авзп Маї Азвр Ніз Гуз Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Сіш мМаї Тнг Суз Маї Маї Ма! Азр Маї 5ег Сп Спи Авр Рго Спи Маї 260 265 270

Гуз Рго Агу Спи Спи Сп Туг Азп 5ег ТАг Туг Агу Маї Маї 5ег Маї 290 295 00

Зо

Ї еи Тниг Маї І еи Ні Сіп Азвр Тр І еи Авзп Су Гуз Си Туг Гуз Сувз 305 з10 315 з2г0

Гуз Маї бег Авп І уз СІУу І еи Рго 5ег бег Пе Си І уз ТНиг Пе 5ег 325 330 335

Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І ви Тиг Суз І еи Маї 355 360 365

Сіп Рго Сіи Авп Авзп Туг Гуз Тиг ТНг Рго Рго Маї І еи Азр 5ег Азр 385 390 395 400

Сіу 5ег Рпе Ре Геи Туг 5ег Гуз І єи ТНиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Ттр 405 до 415

Сіп Си Спу Азп Маї Рне 5ег Суз Зег Ма! І еи Ні Сіи Аа Геи Нів бо 420 425 430

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «2105» 141 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 141

Авп Меї Азр Тгр Маї Агу СіІп Аа Рго Спу Сип Спу Ге Спи Ттр Меї 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп Тпг Аго Зег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Ріе 50 55 60

Сіп Сп Ага Маї Пе Меї Тнг Маї Азвр Гуз 5ег ТНг Авр Тиг Айїа Туг 65 70 75 80

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Авр ТНг Аа Тнг Тут Ні Суз 85 90 95

Ти гІ еи Маї Тниг Маї Зег Зег Аа 5ег ТНг Гуз Спу Рго 5ег Ма! Рне 115 120 125

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тниг Рне Рго Аїа Маї І еи 165 170 175 60

Сім бег Зег Су І еи Туг Зег І еи 5ег бег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190

ЗегЗег еи Сіу ТНг Сип ТНг Туг Тиг Су Азп Маї Авр Ніз Гуз Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Сп Рпе Авп Тр Туг Маї Азр Су Маї Сім Маї Ні Авп Аїа Гуз ТНг 275 280 285

Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 340 345 350

Зег Сп Сіи Спи Меї Тниг Гуз Авзп Сп Маї Зег І еи ТАиг Суз І еи Маї 355 360 365

Сіу Зег Рпе Рне І! єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Маї Азвр Гуз Зег Аг9 Тр 405 до 415 60

Сіп Си Спу Азп Маї Рне 5ег Суз Зег Маї І еи Ніз Сім Аа ГІ еи Ніб 420 425 430

Аа Ніз Туг Тиг Агу Сі Си ЇЇ еи Бег Г еи Зег Рго 435 440 «210» 142 10. «211» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 142

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 201 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп

Зо 25

Сп Авр Аго Ге Пе Меї Тнг Маї Азр Гуз 5ег ТНг Азр Тиг Аїа Туг 65 70 75 80

Рго ГГ еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140 ау Суз І єи Ма! Сіш Авр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Маї 5ег Тр 145 150 155 160

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тниг Рне Рго Аїа Маї І еи 60 165 170 175

Сім бег Зег Су І еи Туг Зег І еи 5ег бег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зег ЗегіІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНг Суз Авзп Маї Азвр Ніз Гуз Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Суз Ріо Рго Суз Рго Аа Рго Сіи РНе І еи Сіу Спіу Рго 5ег Ма! Рпе 225 230 235 240

І еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Ар Тпг І еи Ме! Пе Зег Агу Тнг Рго 245 250 255

СіІп РНе Азп Тр Туг Ма! Азр Сту Маї Спи Маї Ні Азп Аа Гуз ТНг 275 280 285

Зо

Ї еи Тниг Маї І еи Ні Сіп Азвр Тр І еи Азп Су Гуз Спи Туг Гуз Сувз 305 з10 315 з2г0

Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Си Рго Сп Маї Туг ТНг ГГ еи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І еи Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365

Гуз Счіу Ре Туг Рго 5ег Азр Іе Аа Маї Сім Тгтр Сім Бег Азп Спу 370 375 380

Сп Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг ТНг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Азр 385 390 395 400

Сіу Зег Рпе Рне І! єи Туг Зег Гуз Геи ТНг Маї Авр Гуз Зег Аг9 Тр бо 405 до 415

Аа Ні Тут Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 143 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 143

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си Гей Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15

Бе Маї Гуз Ма! Зег Суз І уз Аіа бег Су Туг Сі РНе Тнг Ні Ап 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Гуз Аа Рго Сіу Сп Спу Геи Си Ттр Меї

Сіу Азр Пе Авп ТНг Агу Зег С1у Агу бег Пе Туг Азп Си Сім Ріе 60 35

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї Тнг Маї Азр Пе 5ег ТНг Азр Тнг Аа Туг 65 70 75 80 40

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Азр ТНг Аа ТНг Туг Ні Суз 85 90 95 45 Аа Агу Аго Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг І еи Азр Маї Ттр Спу Сім Су 100 105 110

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 50 115 120 125

Рго Г еи Айа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140 55

Спу Суз І еи Ма! Сіи Авр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Ма! Зег Тр 145 150 155 160 бо

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тниг Рне Рго Аїа Маї І еи 165 170 175 а бег бег Сіу І еи Туг 5ег І ви бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зег ЗегіІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНг Суз Авзп Маї Азвр Ніз Гуз Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Сім Ма! Тиг Суз Маї Маї Ма! Авр Маї 5ег Сп Си Авр Рго Сіи Маї 260 265 270

Ї еи Тниг Маї І еи Ні Сіп Азвр Тр І еи Авзп Су Гуз Си Туг Гуз Сувз 305 з10 315 320

Гуз Аа Гуз Сіу Сп Рго Ага Сім Рго Сп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І еи Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365

Сіп Рго Сіи Авп Авзп Туг Гуз Тпг ТНг Рго Рго Маї Геи Авр Зег Азр 385 390 395 400 60

Сіу Зег Рпе Рне І! єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Маї Азвр Гуз Зег Аг9 Тр 405 до 415 іп Сі Спу Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Маї І еи Ні Сіи Аа І еи Ніб 420 425 430

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 144 «211» 444 15. «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 144

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї 35 сапу А5р Пе Азп Тпг Аг 5ег Спіу Сіу Ма! Пе Туг Азп Спи Спи Ріе 60

Сіп Азр Аг ГГ еи Пе Меї Тнг Маї Азр Гуз Зег ТНиг Азр ТНиг Аа Туг 40 (65 70 75 80

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Азр ТНг Аа ТНг Туг Ні Суз 85 90 95 45

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Маї Ттр Спіу Сім Су 100 105 110 50

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 115 120 125 55 Рго І єи Аїа Рго Суз 5ег Ага бег Тиг Зег Сіи бег ТНг Аа Аа І еи 130 135 140

Спу Суз І еи Ма! Сіи Авр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Ма! Зег Тр 60 145 150 155 160

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тнг Рне Рго Аїйа Маї І еи 165 170 175

Сім бег Зег Су І еи Туг Зег І еи 5ег бег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зег ЗегІ ви Сіу ТНиг Сп ТНг Туг ТНиг Суз Авп Маї Авр Ні Гуз Рго 195 200 205

Зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Бег Гуз Туг С1у Рго Рго 210 215 220

Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіши РНе І еи Спіу Спу Рго 5ег Ма! Рпе 225 230 235 240

Сі мМаї Тнг Суз Маї Маї Ма! Азр Маї 5ег Сп Сім Ар Рго Сім Маї 260 265 270

Зо

Гуз Рго Агу Сім Си Сп Туг Азп бег ТНиг Туг Агу Маї Ма! 5ег Ма! 290 295 00

Гуз Маї Зег Авп І уз Су І еи Рго Зег Зег Пе Сім Гуз Тиг Пе бег 325 330 335

Сіп Рго Сіи Авп Авзп Туг Гуз Тпг ТНг Рго Рго Маї Геи Авр Зег Азр во 385 390 395 400

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 145 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 145

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї Зег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тиг Рне Тнг Сіп Азп 20 25 Зо

Сіу Азвр Пе Азп ТНг Аг Зег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Рпе 60 40

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Сіу Туг Туг Геи Азр Си Ттр Спу Спи Спу 50 100 105 110

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 115 120 125 55

Рго ГГ еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140 бо

Авп бег Су Аа Г єи ТАг Зег Сілу Маї Ні Тиг Рне Рго Аїа Маї Гей 165 170 175

Гуз МаїЇ Зег Авп І уз С1пу І еи Рго бег 5ег Пе Сі Гуз ТНиг Пе 5ег 325 330 335

Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг Тиг Геи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І ви Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365

Гуз Спіу Ре Туг Рго Зег Азр Іе Аа Маї Сім Тгтр Спи Бег Азп Спу 370 375 380 60

Сіп Рго Сіи Авп Авп Туг Гуз Тпг ТНг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Азр 385 390 395 400 ау Зег Рпе Рпе Геи Туг Зег Гуз І еи ТНиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр 405 до 415

Сіп Си Спу Азп Маї Ре 5ег Суз Зег Ма! І еи Ні Сім Ага Геи Нів 420 425 430

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 146 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 146

Зо зег Ма! Гуз Маї бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Тнг Рне Тнг Сіп Азп 20 25 Зо

Авп Меї Азвр Тгр Маї Агу СіІп Аа Рго Спу Сип Спу Ге Спи Ттр Меї 35 40 45

Сіу Авр Пе Авп ТНг Аго Зег Сіу Спіу Ма! Пе Туг Азп Сім Гуз Рпе 50 55 60

Меї Сі І еи бег Спи І еи Ага бег Сім Ар ТНг Аа Тнг Туг Ніз Суз 85 90 95

ТНгІ еи Маї Тнг Маї 5Зег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Су Рго 5ег Ма! Рне 115 120 125

Рго ГГ еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи бо 130 135 140

Спу Суз І еи Ма! Сіи Авр Туг Рне Рго Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Тр 145 150 155 160

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тниг Рне Рго Аїа Маї І еи 165 170 175

Сім бег Зег Су І еи Туг Зег І еи бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190

ЗегБегіІ еи Спіу ТНг Сп Тнг Туг Тиг Су Азп Маї Авр Ніз ГГ ув Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи 5ег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

І еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТАг І еи Ме! Пе 5ег Агу ТАг Рго 245 250 255

Зо

Зег Сіп Сіи Спи Меї Тниг Гуз Авзп Сп Маї Зег І еи ТАиг Суз І еи Маї 355 360 365

Гуз Спіу Ре Туг Рго Зег Азр Іе Аа Маї Сім Тгтр Спи Бег Азп Спу бо 370 375 380

Аа Ні5 Туг Тиг Агу Сім Сі Гей 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 147 20. «211» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» 25 «223» Штучно синтезована послідовність «400» 147

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег Сіу 5ег Си І еи Гуз І уз Рго Сіу Аа 30 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Ма! бег Суз І уз Аа 5ег Сіу Туг Си Рне Тнг Ні Авзп

Зо

Сп Авр Агу Маї Пе Меї Тнг Маї Азр Пе 5ег ТНг Ар ТАг Аїа Туг 65 70 75 80

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 115 120 125 бо

Рго ГГ еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140 ау Сузі єси Ма! Сіш Авр Туг Рне Рго Сіи Рго Маї Тнг Маї 5ег Тр 145 150 155 160

Суз Рго Рго Суз Рго Аїйа Рго Сіи РНе ГГ еи Стпу Спу Рго 5ег Ма! Рне 225 230 235 240

СіІп РНе Азп Тр Туг Ма! Азр Сту Маї Спи Маї Ніз Авзп Аа Гуз ТНг 275 280 285

Геи ТАиг Маї Геи Ніз Сіп Ар Ттр Геи Авп сту Гуз Сім Туг Гуз Сув 305 з10 315 з2г0

Гуз Аа Гуз Спіу Сп Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І еи Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365 60

Гуз Спіу Ре Туг Рго Зег Азр Іе Аа Маї Сім Тгтр Сім Зег Азп Спу 370 375 380

Сп Рго Спи Авп Авп Туг Гуз Тпг Тнг Рго Рго Маї Геи Азр 5ег А5р 385 390 395 400

Сіу Зег Рпе Рне І! єи Туг Зег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз 5ег Ага Ттр 405 до 415

Аа Ні Туг Тнг Ага Спи Сім Геи 5ег І еи 5ег Рго 435 440 «210» 148 «2115» 444 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 148

Зо

Сіп Маї Сій І еи Маї Сіп бег С1іу 5ег Си І еи І уз І уз Рго Сіпу Аа 1 5 10 15

Бег Маї Гуз Ма! Зег Суз І уз Аіа бег Спу Туг Тиг Рне Тниг Сіп Авп 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Гуз Аїа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї 35 40 45

Сіп Азр Аг ГГ еи Пе Меї ТНиг Маї Ар Гуз Зег ТНг Азр Тнг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сі І еи бег Спи І еи Ага бег Си Ар ТНг Аа Тнг Туг Ні Суз 85 90 95

Аа Агу Ага Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг І еи Азр Спи Ттр Сіу Спи Су 100 105 110

ТАгІ еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Слу Рго 5ег Ма! Рпе 60 115 120 125

Рго ГГ еи Аа Рго Суз 5ег Агу 5ег ТАпг 5ег Сіи Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140

Азп Зег а1у Аа І ви Тиг Зег Сіпу Маї Ніз Тиг Рне Рго Аїа Маї І еи 165 170 175

Сі бег бег Сіу І еи Туг 5ег І ви бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зег ЗегІ ви Сіу ТНиг Сп Тнг Туг Тнг Суз Авп Маї Азр Ніз Гуз Рго 195 200 205 зег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз Агу Маї Спи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220

Зо

Сім Маї Тиг Суз Маї Маї Ма! Авр Маї 5ег Сп Си Авр Рго Сіи Маї 260 265 270

Гуз АІа Гуз СпІу Сп Рго Агу Сі Рго Сіп Маї Туг ТНг І ей Рго Рго 340 345 350 зег Сп Сі Си Меї ТАг Гуз Азп Сіп Маї Зег І еи Тниг Суз ГІ еи Маї бо 355 360 365

Сіу Зег Рпе Рне І! єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Маї Азвр Гуз Зег Аг9 Тр 405 а410 415

Сп Си Спу Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Маї І еи Ні Сіи Аа І еи Ніб 420 425 430

Аа Ні Туг Тнг Ага Сім Сім Геи 5ег І ви 5ег Рго 435 440 «210» 149 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 149 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 1 5 10 15

Ага Ар Аа Ага Аго Рго 5ег Сіу Пе Рго Спи Ага Ї еи бег Спіу бег 60

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіп Аа Су 50 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 55 ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї Сіпу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110 бо

Аа Рго 5ег Маї ТАг ГІ еи Рне Рго Рго 5ег 5ег Сім Сім Геи С1п Аа 115 120 125

Авп Гуз Аа Гуз І єи Маї Суз І ви Пе 5ег Азр РНе Туг Рго Сіу Аа 130 135 140 ма! Тнг Маї Ага Тгр Гуз Аа Азвр 5ег Зег Рго Маї Гуз Аа Слу Маї 10145 150 155 160

Сіи Тпг Тк Тнг Рго 5ег Гуз Сіп Зег Азп Авп Гуз Туг Аа Аа 5ег 165 170 175 зег ТугІ єи Гуз Геи Тнг Рго Спи Сп Тер Гуз 5ег Ніз Агу 5ег Туг 180 185 190 зег Суз СіІп Маї Тнг Ніз Сім Спу Зег Тнг Ма! Спи Гуз Тниг Маї Аа 195 200 205

Рго Тнг Сіи Суз бег 210 «210» 150 «2115» 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 150 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Ма! 5ег Маї Аіа Агу Сіу Сп 401 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тик Суз Сім Стпу Авп Ніз Пе Спу Авр Гуз Ні Маї 20 25 Зо

Ні Тгр Тут Ні Сіп Агу Рго Су Сп Аа Рго Їе І еи Ма! Меї Рне 35 40 45

Авп бег Сіу Азп ТАг Аа 5ег ГГ еи ТАг Пе 5ег Стпу Аа Сіп Аа СПУ 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг бо 85 90 95 ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї Сіпу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110

Азп Гуз Аа Гуз ГІ еи Маї Суз І еи Пе 5ег Авр Ре Туг Рго Слу Аа 130 135 140

Маї Тиг Маї Ага Ттр Гуз Аа Ар 5ег 5ег Рго Маї Гуз Аа Стпу Маї 145 150 155 160

Зо

Рго Тнг Сіи Суз бег 210 «210» 151 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 151

Зег Туг Ма! І еи Тниг Сп Рго Маї 5ег Ма! 5ег Маї Аа Агу Сіу Сп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тиг Суз Тиг Су Авп Ніз Пе 5ег Азр Гуз Ніз Маї 20 25 Зо

Сіп Азр Аа Аг Ага Рго 5ег Спу Пе Рго Сім Агоу Гей бБег Сіу Бег 50 55 60 60

А5р Си Слу Авр Туг Туг Суз СіІп Маї Тгтр Ар 5ег 5ег Азвр Туг ТНг 85 90 95 ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї Сіпу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110

Аа Рго 5ег Маї ТАг ГІ еи Рне Рго Рго 5ег Зег СіПми Спи Геи Сп Айїа 115 120 125

Азп Гуз Аа Гуз ГІ еи Маї Суз І еи Пе 5ег Авр Ре Туг Рго Слу Аа 130 135 140 ма! Тнг Маї Ага Тгр Гуз Аа Авр 5ег Зег Рго Маї Гуз Аа Сіу Маї 145 150 155 160

Сім ТАг Тнг Тек Рго 5ег І уз Сп 5ег Азп Азп І уз Туг Аа Аа 5ег 165 170 175 зег ТугІ єи Гуз Геи Тнг Рго Спи Сіп Тгр Гуз 5ег Ніз Ага 5ег Туг 180 185 190 зег Суз СіІп Маї Тнг Ніз Сім Спу Зег Тнг Ма! Спи Гуз Тниг Маї Аа 195 200 205

Рго Тнг Сіи Суз бег 210 «2105» 152 «2115 212 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 152 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї 5ег Маї 5ег Маї Аіа Ага Сіу Сіп 1 5 10 15

ТАг Аіа Ти Пе Тиг Суз Спи Спіу Авп Сп Пе 5ег Сіп Гуз СіІп Маї 20 25 Зо

Ні Тгтр Тут Ні Сп Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе бо 35 40 45

Азр Сі Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Авр 5ег 5ег Аа Маї Маї 85 90 95

Рпе Стпу Спу Спу ТАг Гуз Маї Тнг Ма! Маї Спу Сп Рго Гуз Аа Аіа 100 105 110

Рго 5ег Маї ТНг Геи Ре Рго Рго 5ег бег Сіи Спи Гей Сіп Аа А5п 115 120 125

Гуз Аа Гуз І єи Маї Суз І ви Пе 5ег Азр РНе Туг Рго Су Аа Маї 130 135 140

Тиг Маї Ага Тр Гуз Аа Азр 5ег 5ег Рго Маї Гуз Аа Сіпу Маї Спи 145 150 155 160

Зо

ТАг Тнг Ти Рго Зег Гуз Сіп 5ег Азп Азвп І уз Туг АІа Аа 5ег 5ег 165 170 175

ТугГеи Гуз Геи Тиг Рго Сіи Сіп Тер Гуз Зег Ніз Агу 5ег Туг Зег 180 185 190

Суз Сп Маї Тниг Ні Спи Сіу 5ег ТНг Ма! Спи Гуз Тнг Маї Аа Рго 195 200 205

ТАиг ам Суз 5ег 210 «2105» 153 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 153 зег Туг Ма! Геи Тнг Сіп Рго Маї 5ег Ма! 5ег Маї Аа І ви Спу Сп 1 5 10 15 60

Ні Тгр Тут Ні5 Сіш Агу Рго Су Сп Аа Рго Іе І еи Ма! Меї Рне 35 40 45

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГІ еи ТНг Пе 5ег Сіу АІа Спиши Аа СПу 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї Сіпу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110

Аа Рго бег Ма! Тиг Геи Рне Рго Рго 5ег 5ег Сім Спиши Геи Сп Аа 115 120 125

Азп Гуз Аа Гуз ГІ еи Маї Суз І еи Пе 5ег Авр Ре Туг Рго Слу Аа 130 135 140 ма! Тнг Маї Ага Тгр Гуз Аа Азвр 5ег Зег Рго Маї Гуз Аа Слу Маї 145 150 155 160

Сіи Тпг Тк Тнг Рго 5ег Гуз Сіп Зег Азп Авп Гуз Туг Аа Аа 5ег 165 170 175 зег ТугІ єи Гуз Геи Тнг Рго Спи Сп Тер Гуз 5ег Ніз Агу 5ег Туг 180 185 190

Зег Суз Сіп Ма! Тиг Ніз Спи Спу 5ег ТНиг Ма! Спи Гуз Тиг Маї Аа 195 200 205

Рго Тнг Сіи Суз бег 210 «210» 154 «2115 212 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«400» 154 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Ага ГГ еи Спу Сп 1 5 10 15

Тпиг Авіа ТАг Пе Тиг Суз Спи Спіу Азп Сп Пе Сіу бег Агу Сім Маї 20 25 Зо

Ага Авр Аа Ага Аго Рго 5ег Сіу Пе Рго Сіш Ага Ї еи бЗег Спіу 5ег 50 55 60

Азр Спи Сапу Авр Туг Туг Суз Сіп Маї Ттр Аа 5ег Ар Аїа Маї Ма! 85 90 95

Зо

Рго 5ег Маї ТНг Геи Ре Рго Рго 5ег 5Зег Си Си Геи Сп Аа Азп 115 120 125

Гуз Аа Гуз І ви Маї Суз І еи Пе 5ег Азр Ре Туг Рго Сіу Аа Маї 130 135 140

Тиг Маї Ага Тр Гуз Аа Азр 5ег 5ег Рго Маї Гуз Аа Сіу Маї Си (145 150 155 160

ТугГеи Гуз Геи ТНиг Рго Спи Сп Тгр Гуз 5ег Ні Агу Зег Туг Зег 180 185 190

Тигаїш Суз Зег 210 «210» 155 60 0о«2115» 213

«212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 155 зег Туг Ма! Геи Тнг Сп Рго Маї Зег Маї 5ег Маї Ага ГГ еи Спу Сп 101 5 10 15

Ав5п бег Спіу Азп ТАг Аа 5ег Геи ТАг Пе 5ег Спу АІа Спи Аа СПУ 65 70 75 80

Маї Тиг Маї Ага Ттр Гуз Аа Ар 5ег Зег Рго Маї Гуз Аа Стпу Маї 145 150 155 160

Сіи Тпг Тк Тнг Рго 5ег Гуз Сіп Зег Азп Авп Гуз Туг Аа Аа 5ег 165 170 175 зег ТугІ єи Гуз Геи Тнг Рго Спи Сп Тер Гуз 5ег Ніз Агу 5ег Туг 180 185 190 зег Суз СіІп Маї Тнг Ніз Сім Спу Зег Тиг Ма! Спи Гуз Тниг Маї Аа 195 200 205 60

Рго Тнг Сіи Суз бег «210» 156 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність 10. «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 156

Зег Тугсіш Гей Тнг Сп Рго Рго 5ег Ма! 5ег Маї Аа І еи Спу Сп 1 5 10 15

Ні Тгтр Туг Ні5 Спи Агу Рго Су Сп Аа Рго Іе І еи Ма! Пе Туг 35 40 45

Зо

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Спи Аа Спу 65 70 75 80

А5р Си Сіу Авр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег 5ег 5ег Тут ТНг 85 90 95 ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї Сіпу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110

Сім Тиг ТАг ТАг Рго Зег Гуз Сп Зег Авп Азп Гуз Туг Аа Аа 5ег 165 170 175 зег ТугІ єи Гуз Геи Тнг Рго Спи Сп Тер Гуз 5ег Ніз Агу 5ег Туг бо 180 185 190 зег Суз СіІп Маї Тнг Ніз Сім Спу Зег Тнг Ма! Спи Гуз Тниг Маї Аа 195 200 205

Рго Тнг Сіи Суз бег 210 «210» 157 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 157 зег Туг Си Геи Тиг Сп Рго Рго Зег Маї Зег Маї Аа І еи Спу Спп 1 5 10 15

ТАг Аіа Тк Пе Тиг Суз Спи Су Спи (п Пе Сіу бег Гуз Спи Маї 20 25 Зо

Ні Тгтр Тут Ні Сп Агу Рго Су Сп Аа Рго Іе І еи Ма! Пе Туг

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег Сіу Пе Рго Сім Аг Геи Бег Сіу Бег 60 35

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіши Аа Спу 65 70 75 80 40

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Тгтр Азвр 5ег 5ег 5ег Тут ТНг 85 90 95 45 Маї Рпе Сіу Спу Спу Тнг Гуз Ма! Тиг Ма! Маї Спу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110

Аа Рго 5ег Маї ТАг ГГ еи Рне Рго Рго 5ег Зег Сім Спи Геи Сп Аа 50 115 120 125

Азп Гуз Аа Гуз ГІ еи Маї Суз І еи Пе 5ег Авр Ре Туг Рго Слу Аа 130 135 140 55 ма! Тнг Маї Ага Тгр Гуз Аа Азвр 5ег Зег Рго Маї Гуз Аа Сіпу Маї 145 150 155 160 60

Сіи Тпг Тк Тнг Рго 5ег Гуз Сіп Зег Азп Авп Гуз Туг Аа Аа 5ег 165 170 175 зЗеї Тугі єи Гуз Геи ТАг Рго Спи Сіп Тер Гуз 5ег Ні Агу 5ег Туг 180 185 190 зег Суз СіІп Маї Тнг Ніз Сім Спу Зег Тнг Ма! Спи Гуз Тниг Маї Аа 195 200 205

Рго Тнг Спи Суз бег 210 «210» 158 «2115 212 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 158 зег Туг Си Геи Тиг Сп Рго Рго Зег Маї Зег Маї Аа І еи Спу Спп 1 5 10 15

Зо

Тпиг Авіа ТАг Пе Тиг Суз Спи Спіу Азп Сп Пе Сіу Си Гуз Си Маї 20 25 Зо

Ні Тр Туг Ніз Сіп Ага Рго Слу Сіп Аа Рго Іе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45

Гуз Аа Гуз І єи Маї Суз І ви Пе 5ег Азр РНе Туг Рго Су Аа Маї бо 130 135 140

ТугГеи Гуз Геи Тнг Рго Спи Сіп Тгр Гуз 5ег Ні Ага 5ег Туг Зег 180 185 190

Суз Сп Маї Тиг Ніз Спи Спту бег Тиг Ма! Сіи Гуз Тнг Маї Аа Рго 195 200 205

ТАиг ам Суз 5ег 210 «210» 159 «2115 213 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «400» 159 зег Туг Си Геи ТАг Сп Рго Рго Зег Маї Зег Маї Аа І еи Спу Спп 1 5 10 15

Ні Тгтр Тут Ні5 Си Агу Рго Су Сп Айа Рго Їе І еи Ма! Меї Рпе 35 40 45

Азп Зег Су Азп ТНг Ага 5ег ГГ еи ТНг Пе 5ег Спу Аа Сіши Аа Спу 50 65 70 75 80

Азр Сім Сіу Авзр Туг Туг Суз СіІп Маї Ттр Ар 5ег бег 5ег Тут ТАг 85 90 95 55 ма! Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Маї Тнг Маї Маї Сіпу Сп Рго Гуз Аа 100 105 110 60

Рго Тнг Сіи Суз бег 210 «210» 160 «2115 123 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 160

Сіп Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Спу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 401 5 10 15 зег І еи Аг І єи бег Суз Аїа Аа бег Спіу Рпе ТНиг Рпе 5ег Туг Туг 20 25 Зо

Азр Іе Сіп Ттр Маї Аго СіІп АйЇа Рго Стпу Гуз Спу Геи Си Тгр Маї 35 40 45 зег Зег Пе 5ег Рго бег Сіу Сп Зег ТНг Туг Туг Агу Ага Спи Маї 50 55 60

Гуз Спіу Агу Рпе Тнг Пе 5ег Ага Азр Авп 5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80

Ї еи Сп Меї Авп 5ег ГГ еи Агу Аїа Сім Ар ТАг Аа Маї! Туг Туг Суз бо 85 90 95

Тр Стлу Сп Слу ТНг Гей Маї ТАг Маї Бег Зег 115 120 «210» 161 «2115» 119 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 161

Зеї Маї Гуз Ма! Зег Сувз Гуз АІа 5ег Спу Туг Тит Рпе Тниг Ар Азп 20 25 Зо

Азп Меї Азр Тгр Маї Ага Сіп Аа Рго Спіу Сп СІу Геи Спи Ттр Меї

Сіу Авр Пе Авп Тпг Агу Зег Сіу Спу Зег Пе Туг Азп Спи Сім Рпе 60 35

Сіп Азр Агу Маї Пе Меї ТАг Маї Азр Гуз 5ег ТНг Азр Тиг Аа Туг 65 70 75 80 40

Меї Сі І еи бег 5ег І еи Ага бег Си Азр ТНг Аа ТНг Туг Ні Суз 85 90 95 45 Аа Агу Аго Гуз бег Туг Спу Туг Туг Геи Авр Спи Ттр Сіу Спи Су 100 105 110

Тиг Ге Маї Тнг Ма! Зег Зег 50 115 «210» 162 «2115 11 55 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«4005» 162

Ага Аа 5ег Сп 5ег Маї Зег Зег Авзп І ви Аа 1 5 10 «2105» 163 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 163

Сіу Аа 5ег ТНг Ага Аа Тиг 1 5 «210» 164 «211» 8 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 164

Сіп Сп Туг Гуз Агу Рго ГГ еи ТНг 1 5 «210» 165 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 165

Сім Сіпу Авп Ні Пе Сту Авр Гуз Ніз Маї Ні 1 5 10 «2105» 166 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 166

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 60 1 5

«210» 167 «-2115» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 167

Сіп Маї Тр Авр 5ег 5ег 5ег Аа Ма! Маї 1 5 10 «2105» 168 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -4005» 168

Туг Туг Азр Пе Сп 1 5 «2105» 169 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 169 зег Пе 5ег Рго Зег Спу Сп Зег ТАг Туг Туг Агу Ага Сім Маї Гуз 1 5 10 15 ау «210» 170 «2115» 14 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 170

Агу Тнг ау Аг Сім Туг Азр Сіу Стпу Тгтр Туг Рне Азр Туг 60 1 5 10

-2105» 171 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 171

Туг Туг Азр Аа Сіп 1 5 «-2105» 172 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 172 зег Пе 5ег Рго Зег Спу Сп Зег ТАг Туг Туг Агу Агу Сім Маї Гуз 1 5 10 15 спіу «2105» 173 «2115» 14 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 173

Ага Тнг Сіу бег Сі Авр Су Аа Сіу Тр Туг Рпе Авр Туг 1 5 10 «2105» 174 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 174

Туг Туг Азр Пе Сп 60 1 5

«2105» 175 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 175 зег Пе 5ег Рго Зег Спу Сп Зег ТАг Туг Туг Агу Ага Сім Маї Гуз 1 5 10 15 спіу «2105» 176 «-2115» 13 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005 176

Агу Тнг ау Агу Сім Авр Стпу Су Тер Ніз Рне Азр Туг 1 5 10 -2105» 177 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 177

Туг Туг Азр Іе Сп 1 5 «210» 178 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 178 зег Пе 5ег Рго Зег Спу Сп Зег ТАг Туг Туг Агу Ага Сім Маї Гуз 60 1 5 10 15 спіу «210» 179 «2115» 13 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 179

Агу Тнг ау Агу Сім Спи Спіу Спу Тр Пе РНе Азр Туг 1 5 10 «210» 180 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -400» 180

Туг Туг Азр Пе Сп 1 5 «210» 181 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -4005» 181

Зеїг Пе Зег Рго 5ег Спу Сип Зег ТНг Туг Туг Агу Аго Сім Маї Г ув 1 5 10 15 спіу «210» 182 «2115» 13 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

-4005» 182

Агу Тнг ау Агу Сім Спи Спіу Спу Тр Пе РНе Азр Туг 1 5 10 «2105» 183 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -4005» 183

Ні Туг Авр Іе Сіп 1 5 «210» 184 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 184 зег Пе 5ег Рго Зег Спу Сп Зег ТАг Туг Туг Агу Ага Сім Маї Гуз 1 5 10 15 ау «2105» 185 «2115» 13 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 185

Агу Тнг Авр Аго Сім Авр Ніз Сіу Тгр Пе Ре Авр Туг 1 5 10 «210» 186 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність бо

-4005» 186

Ага Аа 5ег Сіп 5ег Маї Аго Агу Азр І ви Аа 1 5 10 «210» 187 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 187

Сіу Аа 5ег Аго Ага Аа Тиг 1 5 «210» 188 «211» 8 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -400» 188

Сп Сп Ту Гуз 5ег Рго І еи ТНг 1 5 «210» 189 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 189

Агу Аа ТНиг Сіп 5ег Маї Агу Агу Авр ГГ еи Аа 1 5 10 «2105» 190 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 190

Сіу Аа 5ег Аго Ага Аа Тиг 60 1 5

«210» 191 «211» 8 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 191

Сіп Сп Туг Агу 5ег Рго І еи ТНг 1 5 «210» 192 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 192

Аг Аа Тниг Сп бег Маї Агу Агу Азвр І еи Аа 1 5 10 «2105» 193 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 193

Сіу Аа 5ег Аго Ага Аа Тиг 1 5 «210» 194 «211» 8 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 194 іп Сп Туг Аг 5ег Рго Геи ТНг 1 5 «2105» 195 60 «2115 11

«212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 195

Ага Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі І еи Аіа 1 5 10 «2105» 196 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 196

Сіу Аіа 5ег Тнг Агу Спи ТНг 1 5 «210» 197 «211» 8 «212» РВТ -213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 197

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Гей Тйг 1 5 «2105» 198 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність -4005» 198

Аг Аа 5ег Ага 5ег Маї Аг Агу Сі І еи Аа 1 5 10 «210» 199 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність 60 «220»

«223» Штучно синтезована послідовність «4005» 199 ау Авіа 5ег Тиг Агу Сіш ТАг 1 5 «210» 200 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 200

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго СІу ТНг 1 5 «210» 201 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 201

Ага Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі І еи Аіа 1 5 10 «2105» 202 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «-4005» 202

Сіу Аіа 5ег Тнг Агу Спи ТНг 1 5 «210» 203 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 203 60

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго Сіу ТНг 1 5 «210» 204 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 204

Аг Аа ТНиг Агу 5ег Маї Агу Агу Авр ГГ еи Аа 1 5 10 «210» 205 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «-4005» 205

Сіу Аа 5ег Агу Аг Си ТНг 1 5 «210» 206 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «-4005» 206

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго СІу ТНг 1 5 «210» 207 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 207

Аг Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі І еи Аа 1 5 10 бо

«210» 208 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «-4005» 208

Сіу Аіа 5ег Тнг Агу Спи ТНг 1 5 «210» 209 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 209

СІп Сп Туг Ага Авр Рго Рго С1пу Тпг 1 5 «210» 210

Зо «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 210

Ага Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі І еи Аіа 1 5 10 -2105» 211 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 211

Сіу Аіа 5ег Тнг Агу Спи ТНг 1 5 «-2105» 212 «211» 9 «212» РВТ 60 «213» Штучна послідовність 2А1

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 212

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго СІу ТНг 1 5 «210» 213 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 213

Ага Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі І еи Аіа 1 5 10 «210» 214 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 214 ау Аа бег ТАиг Агу Сіш ТАг 1 5 «210» 215 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 215

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго СІу ТНг 1 5 «210» 216 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«4005» 216

Ага Аа 5ег Агу 5ег Маї Агу Ага Сі І еи Аіа 1 5 10 «-210» 217 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 217

Сіу Аіа 5ег Тнг Агу Спи ТНг 1 5 «210» 218 «211» 9 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 218

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго СІу ТНг 1 5 «2105» 219 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 219

Агу Аа ТНиг Агу 5ег Маї Агу Агу Авр ГГ еи Аа 1 5 10 «210» 220 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 220

Сіу Аа 5ег Агу Аг Си ТНг 60 1 5 2А3

«-2105» 221 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 221

Сіп Сп Туг Агу Авр Рго Рго СІу ТНг 1 5 «-210» 222 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 222

Авр Азп Азп Меї Азр 1 5 «210» 223 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 223

Азр Бег Азп Тпг Ага Зег Сіу ТАг бег Пе Туг Азп Си Спи Рпе Сіп 1 5 10 15

Авр «210» 224 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 224

Агао Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азр Си 60 1 5 10

«210» 225 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 225

Авп Азп Азп Меї А5р 1 5 «210» 226 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 226

Азр ІПе Азп ТНг Агу бег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Си Сім Рпе Сп 1 5 10 15

Авп «2105» 227 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 227

Аг9у Гуз 5ег Туг Спіу Туг ТугГеи Азр Маї 1 5 10 «210» 228 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 228

Авр Азп Азп Меї Азр 60 1 5

«210» 229 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 229

Азр Пе Азп ТНг Агу бег Сіу Агу Маї Пе Зег Азп Спи Спи Рпе Сп 1 5 10 15

А5р «2105» 230 «-2115» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 230

Агао Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азр Си 1 5 10 «2105» 231 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «-4005 231

Сп Азп Азп Меї Азр 1 5 «2105» 232 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 232

Азр Пе Азп ТНг Агу бег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Сім Спи Рпе Сіп 60 1 5 10 15

Сіп «2105» 233 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 233

Ага Гуз Зег Туг Спу Туг Туг Геи Азвр Маї 1 5 10 «210» 234 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 234

Сіп Азп Азп Меї Азр 1 5 «210» 235 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 235

А5р Іе Азп ТАг Агу 5ег Сіу Су Маї Пе Туг Азп Спи Сім Рпе Сп 1 5 10 15

А5р «2105» 236 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«4005» 236

Агао Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Авр Маї 1 5 10 «210» 237 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 237

Ні Азп Азп Меї Азр 1 5 «210» 238 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 238

Азр Пе Азп ТНг Агу бег Сіу Агу 5ег Пе Туг Азп Си Спи Рпе Сп 1 5 10 15

Авр «210» 239 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 239

Ага Гуз Зег Туг Спу Туг Туг Геи Азвр Маї 1 5 10 «210» 240 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність бо

«4005» 240

Сіп Азп Азп Меї Азр 1 5 «-210» 241 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 241

Азр Пе Азп ТНг Агу бег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Сім Спи Рпе Сіп 1 5 10 15

А5р «210» 242 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 242

Аго Гуз 5ег Туг Сіу Туг ТугГеи Азр Маї 1 5 10 «210» 243 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 243

Сіп Азп Азп Меї Азр 1 5 «210» 244 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«400» 244

А5р «210» 245 «-2115» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 245

Ага Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азвр Си 1 5 10 «210» 246 «2115» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 246

Сп Азп Азп Меї Азр 1 5 «210» 247 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 247

Азр ІПе Азп ТНг Агу бег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Си Гуз Ріє Сп 1 5 10 15

А5р «210» 248 «-2115» 10 «212» РВТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 248

Агао Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азр Маї 1 5 10 «210» 249 «211» 5 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 249

Ні Азп Азп Меї Азр 1 5 «2105» 250 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 250

Ав5р Іе Авзп ТНг Агу 5ег Сіу Агу 5ег Пе Туг Азп Агу Си Рпе Сп 1 5 10 15

А5р «210» 251 «-2115» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 251

Агао Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азр Си 1 5 10 «2105» 252 «211» 5 «212» РВТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 252

Сіп Азп Азп Меї Азр 1 5 «210» 253 «2115 17 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 253

Азр Пе Азп ТНг Агу бег Сіу Спу Ма! Пе Туг Азп Сім Спи Рпе Сіп 1 5 10 15 -А5р «210» 254

Зо «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 254

Агао Гуз 5ег Туг Спу Туг Туг Геи Азр Си 401 5 10 «2105» 255 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 255

Сіи Спу Авп Ніз Пе Слпу Азвр Гуз Ні Маї Нів 1 5 10 «210» 256 «-2115 7 «212» РВТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «4005» 256

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 1 5 «2105» 257 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 257

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг ТНнг Маї 1 5 10 «210» 258 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 258

Си Спу Авп Ні Пе Сту Ар Гуз Ніз Маї Нів 1 5 10 «210» 259 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 259

Сіп Азр Аїа Аг Аго Рго 5ег 1 5 «210» 260 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність 60

«400» 260

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг ТНнг Маї 1 5 10 «210» 261 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 261

ТАиг ау Азп Ніз Пе 5ег Авр І уз Ні Маї Ні 1 5 10 «210» 262 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 262

Сіп Азр Аа Агу Аго Рго 5ег 1 5 «210» 263 «-2115» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 263

Сп Маї Ттр Авр 5ег 5ег Азр Туг ТНг Ма! 1 5 10 «210» 264 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 264

Сіи Спу Авзп Сп Пе 5ег Сип Гуз Сіп Маї Ні 60 1 5 10

«210» 265 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 265

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 1 5 «210» 266 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 266

Сіп маї Тгтр Авр 5ег 5ег Аа Маї Маї 1 5

Зо «210» 267 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 267

Сі Сіу Сі Сп Пе Сіу Зег Гуз Спи Маї Ні 1 5 10 «210» 268 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 268

Агу Авр Айа Агу Аго Рго 5ег 1 5 «210» 269 60 «211» 10

«212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 269

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг ТНнг Маї 1 5 10 «210» 270 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 270

Сіи С1іу Авзп Сп Пе Спу Зег Агу Спи Маї Ні 1 5 10 «210» 271 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 271

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 1 5 «2105» 272 «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 272

Сіп Маї Тгр Аа 5ег Азр Аїа Маї Маї 1 5 «2105» 273 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність 60 «220»

«223» Штучно синтезована послідовність «400» 273

Сім Счіу Сім Сп Пе Спу Зег Гуз Сім Маї Нів 1 5 10 «210» 274 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 274

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 1 5 «2105» 275 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність

Зо «400» 275

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг Тнг Маї 1 5 10 «2105» 276 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 276

Сі Сіу Сі Сп Пе Сіу Зег Гуз Спи Маї Ні 1 5 10 «2105» 277 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 277 60

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 1 5 «2105» 278 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 278

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг ТНнг Маї 1 5 10 «210» 279 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «4005» 279

Сі Сіу Сі Сп Пе Сіу Зег Гуз Спи Маї Ні

Зо 1 5 10 «210» 280 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 280

Агу Азр Аа Агу Агу Рго 5ег 1 5 «210» 281 «211» 10 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 281

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг ТНг Маї 1 5 10 бо

«210» 282 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 282

Сіи С1іу Авзп Сп Пе Спу Спи Гуз Спи Маї Нів 1 5 10 «210» 283 «-2115 7 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 283

Аг9у Авр Айа Агу Аго Рго 5ег 1 5 «210» 284

Зо «211» 9 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 284

Сіп Маї Тгр Аа 5ег Азр Аїа Маї Маї 1 5 «210» 285 «2115 11 «212» РВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 285

Сі Сіу Сі Сп Пе Сіу Зег Гуз Спи Маї Ні 1 5 10 «210» 286 «-2115 7 «212» РВТ 60 «213» Штучна послідовність

«223» Штучно синтезована послідовність «-4005 286

Агу Азр Аа Ага Аг Рго 5ег 1 5 «2105» 287 «2115» 10 «212» РАТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Штучно синтезована послідовність «400» 287

Сіп Маї Ттр Авр 5ег 5ег 5ег Туг ТНнг Маї

Claims

1 5 10 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Біспецифічне антитіло, яке має функцію заміщувати функцію фактора коагуляції крові МІЇЇ, яке включає важкий ланцюг першого антитіла і легкий ланцюг першого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові ІХ та/або з активованим фактором згортання крові ІХ, і важкий ланцюг другого антитіла і легкий ланцюг другого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові Х, де біспецифічне антитіло являє собою біспецифічне антитіло за будь-яким з від (а) до () нижче: (а) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 56, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 61, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 73, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 84; (Б) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 57, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 62, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 73, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 84; (с) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 58, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 63, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 74, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 85; (4) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 58, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БО ІЮО МО: 64, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 74, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 85; (є) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 57, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 62, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 75, і варіабельну ділянку легкого 60 ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0 ІЮО МО: 86;

(Ї) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 57, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 62, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 76, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІО МО: 87;

(9) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 57, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 62,

варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 74, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 85;

(п) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 65, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 74, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 85;

() біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла,

що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 66, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 74, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 85;

() біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 66, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 77, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що

Зо включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 88;

(Кк) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 67, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 77, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 88;

() біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 67,

варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 78, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 89;

(т) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО І МО: 68, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 77, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 88;

(п) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла,

що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 68, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 78, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 89;

(о) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 60, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 69, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 79, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що бо включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 90;

(р) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 59, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 70, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 91; (д) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 60, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 71, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ХЕО ІЮ МО: 79, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 52Е0 ІЮО МО: 90; (г) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 60, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 71, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 81, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮ МО: 92; (5) біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО І МО: 60, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 69, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 82, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 93; (9 біспецифічне антитіло, яке включає варіабельну ділянку важкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 105, варіабельну ділянку легкого ланцюга першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5БЕО ІО МО: 72, варіабельну ділянку важкого ланцюга другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 83, і варіабельну ділянку легкого ланцюга другого антитіла, що Зо включає амінокислотну послідовність за зЕО ІЮО МО: 94.

2. Біспецифічне антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що важкий ланцюг першого антитіла та легкий ланцюг першого антитіла включають константні ділянки, що включають амінокислотні послідовності, представлені в (1) нижче, а важкий ланцюг другого антитіла та легкий ланцюг другого антитіла включають константні ділянки, що включають амінокислотні послідовності, представлені в (2) нижче: (1) 5ЕО ІЮО МО: 119 як константна ділянка важкого ланцюга і 5ЕО ІЮО МО: 100 як константна ділянка легкого ланцюга, (2) 5ЕО ІЮО МО: 118 як константна ділянка важкого ланцюга і 5ЕО ІО МО: 102 як константна ділянка легкого ланцюга.

3. Біспецифічне антитіло, яке має функцію заміщувати функцію фактора коагуляції крові МІЇЇ, яке включає важкий ланцюг першого антитіла і легкий ланцюг першого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові ІХ та/або з активованим фактором згортання крові ІХ, і важкий ланцюг другого антитіла і легкий ланцюг другого антитіла, які зв'язуються з фактором згортання крові Х, де біспецифічне антитіло являє собою біспецифічне антитіло за будь-яким з від (а) до () нижче: (а) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 120, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 126, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 138, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає БО амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 149; (Б) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 138, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 149; (с) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 122, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 128, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає бо амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 150;

(4) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 122, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 129, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 150; (є) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 140, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 151; () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 141, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 152; (9) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 121, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 127, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 150; (п) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 130, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 150; () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 131, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 139, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає

Зо амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 150; () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 131, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 153; (К) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 132, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 153; () біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 132, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 143, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 154; (т) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 133, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 142, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає

БО амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 153; (п) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 133, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 143, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 154; (о) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 134, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 144, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає бо амінокислотну послідовність за ХЕО ІО МО: 155;

(р) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 123, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 135, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е0О ІЮО МО: 145, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 156; (4) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 560 ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 136, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 144, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 155; (ї) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІО МО: 136, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 146, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 157; (5) біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІО МО: 124, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 134, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 147, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 158; (Ю біспецифічне антитіло, яке включає важкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5Е6ЕО ІО МО: 125, легкий ланцюг першого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за ЗЕО ІЮ МО: 137, важкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮО МО: 148, і легкий ланцюг другого антитіла, що включає амінокислотну послідовність за 5ЕО ІЮ МО: 159.

4. Виділена нуклеїнова кислота, яка кодує біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-3.

5. Клітина-хазяїн, яка містить нуклеїнову кислоту за п. 4.

б. Фармацевтичний склад, який містить біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-3 і фармацевтично прийнятний носій.

7. Фармацевтичний склад за п. б, який призначений для застосування в профілактиці та/або лікуванні кровотечі, хвороби, яка супроводжує кровотечу, або хвороби, що спричиняється кровотечею.

8. Фармацевтичний склад за п. 7, де кровотеча, хвороба, яка супроводжує кровотечу, або хвороба, що спричиняється кровотечею, являють собою хворобу, яка розвивається та/або прогресує внаслідок зниження або дефіциту активності фактора згортання крові МІ! та/або активованого фактора згортання крові МІ.

9. Фармацевтичний склад за п. 8, де хвороба, яка розвивається та/або прогресує внаслідок зниження або дефіциту активності фактора згортання крові МИ! та/або активованого фактора згортання крові МІ, являє собою гемофілію А, хворобу з появою інгібітору проти фактора згортання крові МІ та/або активованого фактора згортання крові МИ, набуту гемофілію або хворобу Вілебранда.

«5 о ще - ДА ші ннн ек ож 13 Пон : : : ЕФ вв ОТ кВА | т ВЕЖ де Е 1 За : : : кор От Х б | | :

4. А тк : : : Із! ї-- ве 4 : З : : І : от : : М жюжнхлюеєюття ! БЕ ; | | " / ЩОДО 00000000 ння а а 40 6О ва 100 120 концентрація антитіла (мкг/млу он СМОЗИОМК131/7И329/ЛІМЦОЯ5 0 як ОД9ЗУІОЇ 2 ЛИЗ2 УЛ ттин--давал аа тллом :

Фіг. 1 1) Коли активність пригнічувати «і Коли активність пригнічувати активацію РІХ є низькою активацно РІХ 2 високою кт. рес СЕХів) (Ех од Шк ти вх ОМИИИНВ у МЕН Ви т 4 нн І ши «| сь: 1 сх Кох й ними ОО кованих Ера и Ах Кк ЕН ни Же ШЕ се оз сФОббстео тт 00 сОкКра)м

Фіг. 2 г) Ж : : | Бех йк -- - Її : : щі ненжжеженижку, : є т 08 фо в і Й Ж : й : й ВОЖ ОВ Б оон нн он нн тн ння - Е Гоа Її | ее : а е КІ й Ж 04. а шо шен й ве. пеня а. по Я ше и ж вд. Ж. У : : ж ЖОВ ДЯ оон сот ВК. пе оф Я оно те 0 чавун клани я ЕБОЯІ сезаляодлизат ої і: ї ' ї а Е й ВО Сельнопоменічуючі но В Е в : : о . па о 0, О.25 пе Активність пригнічувати активацію РІХ 90) р У 18) Бисоко- ОВ у активні я ши «оті «фу; пня нео еЕ ш | т 8 б : ша о. "Я. -- | шин де ї ' : ! : БОЮ фот ння нене нене вх і г 2 ші ефе яко р щ к ДО Боно ав деко руч однин ння е і сювзаллоацАвотл Я «аз ї : : 8 б Ї ж АВ : Сильнопригничуючі па Бо 0 925 па Активність пригнічувати активацію РІХ 00

Фіг. З

А па ро рн же " : и НЕТ о Бо ооо а сзавя заоаааня лою ЕН о МВВ ЗК хо щш : ! ЗЕ п . Я сен КАК ЗАМ НІ Я Б вОВИККЕ З з ! як : сх ! т : о. ї Кот оо й пакт ач ож : п х зе СЕ ТК

Е.О ЖКОояк од ї ЖЕ й ї ска же граки Як 1 с вв К- са она ! - їх пло Е у пе СЕН Я ЕЕ

ЖЕ . у . 6 ше і : : Вт оо лчичезсчюхичитимї зо ЗК Віа В ї са - Тек КТ НЕ т ї плов «фен У НИК ик й ! що І бо ню ню ; Концентрація біспецифічного антитіла (мкл) п АВ Ї

В о. - в аа | і сад : оц Я КН НН. Ж ож МНН ї м я ев | ! ї й о ма З «ее ОоНазОБІа Не ся гі Пе я дв ' Ї В У ПАН я у, я пе НО ОКО Е з ЯЗ ' у а ев по НМ ак : МЕ - дви ки - кх 7 1 ЖОж ода з є Зак Аа І - в в.м : ЕЕ ; с рела Али ота вм в р і У ян ВЗ ЕК. І ож ПО Я М ї я и тк : КУ сю НЕ АТ а пів: о, ОМ БКУЧ НОМ КЕ 1 : ща пон овофкких ОК М З І Я НЕК дк ! Концентравій біспецифічного знтитіна (мкелал) сн АВ

Фіг. 4-1 а : ій Р ее Он свое ох Ех бр. ВЕ | Р ї г ще ях і ж щей я Ї 2 : : ад і Кон сессії НЯ ВН: а ЛЕВ ЯК не : Р: Я Я тю її: ОО НЕ ки десни щ Ж п дк се В ЗВО НВ МНЕ жо Ех | Р: в Е іа КА ЩЕ я я «А, Ге ОНОВОр ОВО ї ШОВ я, і Др я 5 т ам кока х і : БЕ йо я я У Сава Аа Я о ї шк е . і ОЇ а с НЕ ННІ : я жи і : пай. ек о ВТО НО НА : ЛА нн ооюкдюннх Я І «ВК КІТ | : : м од і о вню цю р : Концентрація біспецифічного антиятіма ге венах ВВНЗ | : оо я вот ідола Ж т - пе НО НІНО НЯ тож с Ї і і її и ЩІ ча і : ї 7 г) Е ри пре КИ ру гук : Ї шоу й тво ЕВ ООН її: Я Бай . ЕЙ пет ТНК ЖАВНИХ : " ЗЕ Боося ц І її : ї ЩЕ в г о а з | ї я КН ЗІ И ово НЯ я З Ух ЩЕ де з І Бу ж х КЕ: в в ШНЮ З у й СОВИ ОЛОВО че КЕКВ МЕН дк. Ї : Ще В пяд й я о од ЧА Я Р ху а ї х Кї ж це суху ря її: : «ЕЕ Е ій р с ВЗН АНЯ В й : ТЕ ТЕ А уукнтюртече внут кре чкренн нтх п КЕН ТУ ЕЕ ЯН ; : за: ви і оцю і : Концентрація біспецифічного антитнта рмкрнет п» АК о ї КАК КК КК КК КК КК КК тт, І

Фіг. 4-2

Висота піка (нМ) . В 5 15 15 500 20. С НОВО ОЗІНОТАНО зненненнннвнвннввнннннн ОО ЗМНОШОСИУМНОСАН Ко мвювноювиююнююювювюввввввюквиомх : / ОНОЖОІ22ІОНОЗ ОЗ. пенннаннввновнннннвовня Над ООНУНОгЬНКО - знанием есникозонизнновоанизввннах СНО ОБЛОНОЗУЄОЮ . змиви . онов гном ог СНО СВ НОВЕ живим вин нини мн нонвннне : НОСІ ОВ НОВАНОВ зишонитнанкинтининя няння : ОРОС З МОНО ВАЛ ОВ ннннннинннннннннннннннннннннннннннннні ОНОВБКЗОМНОМАНО знанню : Нноше зано ою : С СНО лЛС УЗН. зникне: о ОЯООЛ ЗОЗ нити 0 СМООЛ ВОІВ ОВ мнтих 0 ОЗ ЗО 5ОИ 324. жиник 0 СОКОЛ ЗМО нини 0 ОКОЛО ЗА пек 0 СМОЛ ОЛІЯ жк / ЕМУНЕя одідя нин ; : ЕМ ХО ОдДІДИ - зни . ЕЕ ЯС сдіди - живими

Фіг. 5

- А: - ші ж що Ж В г г. ж : г ЕеДоеН с ж

ЩО. 5 а

Де. . шо Я Я г. Я що : Б щш 34 с т-во : щ »з

З з. Зк ж ШЕ. Кік і ех 3 ші... В ж В. в. я хв вв Й Який я МН Не бо Я ФМ КМ КК и ших а ши ек я -У що с в Я йо а а У я НН КН ШК А «ее ше яке я я й" . ях і тей дк я я я й "« ге ев г г в У

Фіг. 6 с й «АД доня маш . ОО я т шт ча ш-- ща с «з є жо о о в т З да да щі - і М ч їх 3 ж жд Ж Ж се Ж - - -- -- - - Я що оо Бе сі с ся ся ев е шої, шої, сне, сеї янв ей

(45. і С С с с -ї еї «Е «Е «ії « Гак є с с с с Ж Ж, Ж Я Ж Ж га Га. с С і Го.

Фіг. 7

Комбінації незбіжних пар; Комбінації незбіжних паро нкі теоретично можуть піспя введення модифікації експресуватися "виступ у западину" А А НГ пи г гтг""|"' (0 ІНАЙАННЕЛЕ 3) НАЛЕННАМА По болях Що лис ' п) ІНфАВИНЕВАЯЯ с ОНАЛЕААНЯ ОБО ОАВМА ово СМАНОА і 4 НВИАЙНЕВАВ 4 НАЙ ВЯНВА ОКО КК б аАЛИХ ' дух РК нн ня Чо у ння Ан яння фесереєтєєефесесее кн ссююеееесесесся ект кєкккрекккюєккюєжкюекккююкккюєкккнн і ІНВИАЙНЯКА а НАЙЛМНВЯ А: Ор жкнак ро валик Дунтнннкфннннк поки фен нн уехехехфк мех ки ОО (ЩО НАД АННАЛА ЗВ НАВАННВМА ОО бвуснк ЩО сикнчих на о НВ ск - М шо ОЙ а «і ШК б або а Я в ач Сб Я о Ж й Б С ше й ие м ся Ши : Виступ Ж Западинн зи у за о ще Ки ох ви шо юн пише ав ші ха щі ай ча й Молекупи, які спід

5 . ї проаналізувати У ше ЗУ 7 7

Фіг. 5 щі. Б М ж ЖИ с, Ж же КК п - ! т ї Кк. ТЕ Го З З ши п ЕжНься ЕМ г порннннн З ЗУ КЕ У З перу Х удллляяя З : ТО -дК І " 4 су ря ї ї : : ЖЕ 3 Ї " пня ї с: ї З : і КЕ Ї ЗЕ з д пу м - ї -х не 3 З ЗК о ЕВ З пен Тоня Мен М ВЗ ЕІ пише ше Ж і ТБ Т В че ки ши пер їжа УЧ нє Ж Я щі В Ж я Я і мові сс М ТЕ КЗ 3 Кох З 2 сіті Ко 3 ГТ чих 3 : ЕК й Ко ях рин ії ва : ї Чо З і У З з В у : : у ЕЕ Ж ж ї- ті і : З ТК ау ї З то Х жк ско : Х.: ди ї Я ОВК КО о ж хм і в : я : З КЕ Ж О:5 РЕ Кі їж : Ж З КЕ жів рії і а Ж ! Же ері он і Ж : З ЖК С ї Доннюцінкя : ж КЕ і пі ; . ЖЕ з пл ї М З ща КО я ліф В їх ї 15 : ---3 : З Ж КЕ ж Ед жі : Ї Я З КЕ і її ВІ і М - ЖЕ З ї Н І хі я : КО і і Еш : і те : 3 К ; ї 1 КУ х 1 -е : З с і Н ї Н ек : : " ї ї Клллий : Ки: ле : і хх. з ї ї Доогстя знах З ЩЕ і З те Е ої і : согсгоіе а: : КЯ А ПОЗ ї пеня нтя я їх . Я ш мор. тої Ян» ко с ше й Бе кі м З Ж 3 А З т Те : г ! а і ЯК ЗЕ М У їз | ! ; З т Зло Ж ї ЗЕ ї Я : кт : ге 1 ї ех за С р ї с : ї : : Її НЕ а ї гена : ее і

ОБ . по і ї я г. Я : Я її Я КІ ї бе 1 ї 3 У З З КІ о : я : Н ї щі ос ЗЕ ж ї а з Ж як у о : КО Кот ї но : і ЧЕН і В. Ф ї т ШІ К З Ко ж 3 й : БЕ з Х : не | я : І: ря т. З З ї ї Ох їж Е х : В ВЕ х г З : І ЕТ ож ши о її 3-53 З КІ. г З ї ди і з нк ї ї с й я гони х А : З Сх Пш ; ТЯ Ж 8. з К. ше М : , ГУ Я : ЕЕ Ко. ЗЕМ хе з Ко УЖ пох ї са І : ей Я Е З КО пу Зно їх Мун іч тн Ж гг КЕ. А і ЖЕ ЕЕ ЕКЗ :

НЕ. п рекефесня ж ог В : т З ЩЕ ! З КІ а 7 х з : і ї БІК 8. ХХ Ж Її У їх я ї 1 ї і ЗК з КІ «Я х, г 5 : : ї 5 КО хо : М ї :

В. ТЕ ОК У КО Х Тя- хо : її не Кк ше ж ж ід Зв ; 1 ї БО що КО Й ЕК Те Я З їз ще З КІ хх у х : ! р ші Ж ї ок ОБ : і Ішх Ж ЕІ Мах й ї ї т 3 зн ЕЕ х ХК ух 5 : З Т їв т З в і че ВО Ще і : І В ВІ ГО ення ВО» ще : її ей ЕЕ о 5 З наласджалнн ші Я х і им ЕЕ ож Ж З ще КО 5 Я : - В шва З ї З ВЕ. ГЕ че і і ї З же ТЕБЕ В, ЕМ же : Е Ку КІ й з : і ї Ух ко. КІ В ця ж ї ії ї ЗЕ з КІ їх. це ж : і І М: я З ї з З у ьЕ З З Її М сх з :

В. Щеня З Вл КО не Її с З Ж ; З фу да З ; Ж о фісшяяняя в'я У Я і та ке ЩЕ п ж пе : Еф я Х 1ї- їх це її З 85 З ЕІ у ців : і ТЕ Кі ж пе Тека її і КЕ Я п і І 15 ! ух ч ЗМІ К с З вів а ! о Тк КЗ ос фнжжкя ЗЕ -й Я М їЕ ї Ж роси " з КЕ Ж й 1 о- с, т Ї З З їх Шк їх 1 рі їй ЕЕ ії Ж поні ; Ж Її З Ж з ше Е ! її пуху 7 їх І 15 м ще суду» сте і т сект КУМ ЖУИ а ,

1. со ж 1 уч х ща у дей ЕК ЖЕ шт ща б БО ї Тр З З о сві ді ОС ох я М пон шо в Б Я сек шили ! уко ок ше те Горе З ще шю Сх шк є і Тім. щ- З У : т се З зо НК АС ; Б - ЕЕ Кк ос З А і жо, я Ей г ж ТЕЖ З і жі а 1 Я 3 Я р ї ї " З З ї їх 5 лох З ! ї-е Я як Ше я ТО Зегетсседреннся 1 я КЕ і х З ве й ! а ! ! ів.

нед тах ТК У ТБ ек Я БІВ Ї РОК ж 1 ЕЕ хо ві о ж Бр в фея І ї і ж ; ет ЧУВ щі БІ Бех : УК ЖК усно її у В КЕ Млини тлали ллитанитритв, пули КЛ ТІ ІННА ЛІ МНН ТТН Т ХІТ КЛІК КТ г. ГЕ ї - ! 1: З е ! ; ЦО яні тів ЕВ и і і Тр кі кі ах рих щі М'н Н х ї з вк хх ї - . ї і їх ї Пожорекіряі ; се в г - дея а о нії і : : Й І : і ! ї Ефреннентфннфнннф нення | їз ре - З ї - ; ї ї ' а хх у і ї ЗВ ї- ,. - її ; Я ЗЕ у : ї ХЕ . ря Ї ї. о й 1. у ОБО 1 ОВО дня С ЕЕ : и ши: | і С й її Вк " оон пктеотск Кота : чажк у КМ тей З Коко Н І а ОБ В А а се Н І лляну я шен Н х їх Є її щі : їз і 3 Мк і : ТЕ ж Ще х : х ик 11 Я і Її ж 3 х 1 вна З п УЖЕ ш їх х їх І хх х ї : ї - я її з ї ї ї їх яв і о ев у « і : с: ож : В, В тоже ня я Без ! з й пе ЖІ й, В Ода оо ж ї шк ВУ ММ і ш: я т о Ер ії 5 : і я У і Ти З Як З І5 г їх і ' ее КОМОЮ Її Мо: І ; х Коах ша Я - КОТ жЗ роя м . Не і г «оддентЕтннння Ж шко сх оби ! г Кк СО ТБЕЮ оте, За | з хе тарі її ще т рн : ск | ТОБ ор г шоу екнке От ! по г і ГО фінан Як -е КЕ ; ї ї- ТЕТ, ї й оз : ті, ВІВ , с і : ЯН чі: ЕІ «ях 1 оба, : і є пмогоднтнняя т ї 5 я І : ге Е ; к ре ! ян БОС с я У ; ї М ж х КЕ і схе веннфнннвнвнвниЕ ЖІ нт нет х во 5 Бош

Б р. ек пік : ее : - В з є З : я ої Го ї об ' | тет Кт Її ї «її х ї с ' Ї І Її їх , М 1 Я М. Б г ї со і їв: Я : В х 1 її і щі В З г ! Я Ж Її 5 Х х. Н : ї са її : КЕ :ї заншн 3 т ІВ З їх - і жі, я. ге - жі а їі ря Я франя і сів «з ях Тк ІБ ШИ ГКР що і шщх БІБ РО ГЕТЕ с сек ї й нн АЖ ва ІЕЕ 8 ЩІ х я в ії щі аг ! і 5 ш ЖЕ ай : с 1 Мі Якої І я мі йвцуВ М Мах Те ІБ ї Я ж щі ха : тр кв : Ж сів - «М ії щен І р ЩЕ р Тек же Ї а є й 3 Її Її же я оГя- еВ РОБ ж Я. і я ї ї ї У сви : Ек. КУХ : г З їх юр с. я Мк ТРЕК ї А СОБІ сгееееетете о няні 1 Я і Ї в х р одер уч ту феее у р чк у куст р н ерудит вм несу сему но - З іо тТшш ННЯ Ще ож см ко що ЩО Ж СМ КЗ З У Ок щз а ж ОБЖ, якожеоожеожв ша бу ка шо ЖЖ ско ОБ т с ос с) се ос соєю с Я ТЕ ; : ях є і мі. ди К «ка шо її І і. ДИ х |. т я Ї ї і Ї . ї

Фіг. 9-2

ЛЕ 2 ! ЕР еХ Р : Ге А Мк т р, і ! Ір - хв те З сх З ан В т МЕ ше кад М і ВУ Ж пли гос ї «є я З їв ВЗ БЕ НН : З Ї КПК ї ! Во и їв 055 І ШИ пня І А чує З трон ї т пер

: в. ме пох щ-і тр т ї З те Фрі кі Бех піни : і щі щі і. : пннне Гдляяя І ї фо ХК : су так р пи вену : Ще себя в. а г й З і фетою гак ж ії -е І я З ї К ї ї Я пн У : і : кіз і Бра іт : Бі 115 т-і п ї сх Ї сс Є : ЖІ, Ж ТЕ ме Мис ря ї є ще » Я Е хх: З : дея 1 15 Б. я і Б 7 р ї й ШЕ ДЕ Й ей : в її : 5 В Ге чек пок нАн Ї ; ще : Ж Е : Ві: фо: х. ; ; Х р : щі Ж ї З ек ; й Її ї г: же т Е їх В жан зе ї шк рф вк і ' - З я Еш : Ро Кед Е я Ко ні о хі : ї Бе | 1 ї ш хі ї | Тех З Сх ї КЕ ї ОК З НЕ: КЕ з щ що. | ШЕ: х -х ЩЕ ї у Н Й З ; за шк ; : шо і ЕЕ ІВ - З Е М З Ж ГНЕ ї-- ї свя ої ї ' Тк 1 я їх Шк : «ів і що ш : и З ї хе Ох ї Ор З : ме З ох І - Е в ТУ З Е | З щХ ЕОг ще 155 з - й ! -щу пе ї й. ще З : зак Кк | че шій : Не ї ж " : і К М. : з фо І ще щі ї ит у З т ї - і я ст Ох ї ж : ще ок ме і ж х 5. ше ранах сша і г ї Щ84 ма з 3: . НИ 3 З ї Ма ї МХ Те: її 7 Е З доця у Ж 5 ї ї ' ! ХК нн ї Пон се т ХМ ка й ів ї а т ЩЕ Е че Ех | І ях ї х ТОК: Ти і ЖОг : НЯ Ї з - : ВІ ї жом -їЕ ! ш Е ОО ОО ' - Кт З ї г ї ше ВИК : НН Кг 5 | в : Ко З Ж: стрднннюнюютеннкий У їж З БІ : я Ем Я сонне У ; їоех Ї зе вн Ї СЕ ТЕЙ : 5 Є : фон іх З КІ -Е ї я З т ее 1 Ог 1 | ши г : Іі й : ро НЯ ; ЕЕ 1 : і в : в Іі ! : Ко 5 ОК Го КЕ я же - ії 1 й ЖІ СУ ОБ ! : Бе я | жа Ж р ї і ож ї р ід УЩа Ж: ак в І ВЕ Зі З Гек г Е 8 СЕ В ї її сек с т ї щі М ЕЕ БЕ зхжюєюєюєхх КО: ї Та то .. умо з ї Н г їх сек що В. ї Її У РКО ЖІ Ма Ж ЖК -к се ож оф РО в геї З нер коми г КМ ї а і У ЕЕ ВК "хх ЕН 1815 Тк, р ЕІ ох й ш ї їй хз ІБ 7 ГТ уж РЕК їх НК ма х КІ: Ше сек І ж СЕ ї - ЩЕ КК Р ЖЕ СЯ Те 1 С смеетенчнЕ Я» та; а ге ж в в пре с у що р ї ке я -оожх -5 г Є ро дір Миколи К з їв ї що Ж З кю Фу - оо йооя - декехеую 5: ї ЗЕ «ок -о- 5 Кк руч їх З ! є : » є я печер І фо ІА з Я щ- . т Го ге - фани т: ї Тозавннжних З 7 шкокї к І ка бо МКК ю тя г ї З ЩЕ А У со - що терти - ї ! З КУ -оОжя я я- ой шо ет ї з в схо ж в) т- 5 ко

Кк. ка -е -5 як З Ной 5 с т А щоку жу ке ІВ ГК пі Б тек її їх ре щі пої Кк ях Ів Вів БІ в свя : : 1 З її ! І К- ! ЩО зві | С ні ж Е - ! позі те 15 фо : ї хо т т хо ! їх КУ ! що Не Вірі х ! я 1 : : і З х ї і їх : Цуенеенеетеі есте ен І в ! гез : кофе Е ї 18 Ге Х Б їх у і і КОКО х я іа : 3008 я ї Н 7 73 т КУ З ї Е їде КЕ їх і З й Е з К. х шини зо се ! 3 52 : шо оф ОО цеЖ ! їм шк ще ее г у Х е ; гро : і г 1 іш м І. ШЕ а за а Я 1 о ш ! й т ОА во її опе шо є в п ї ше в ї КА ЕН! Ох і : ; ОК 5 ЕН : хх : с: К ЩО ші РЕ ГИ ОК ! ж ЩО Жені шк ! м бр пз а: а КО і Кн Кв ! ш 1: ух ШУ і Ей ї 1 ЕЕ й КО | КОМ ! в о ї ї кое Ко: і КО ор рення 2 беж КО і ЕК а ї З ММ 3 Х Є ЩО з т Ко ще, ТЕ Ку ЕКО опе ЕЕ У і і | І ! М 1 я Ж о. її : 3 ЕХ: М ще М її ї йо : З і - і т : Кн С тлнмем Б 1 ї і пен М я Ме ре чо 00 ше Еш і ог я : пе ї : ї Бе Ї З ! як Ж З ж ЕХ ї Зла хх 5 3 г: їж «ох т: т ко НО Зх її : ж джин ЕЕ ва ща Ам з Ка її і-іі, З 5 і ІшІЕ Бк Ті ї ХЕ З хе ХХ: ГОЕЧВЕ ек І - се і ток : х В ОСЕ Ж . ї ах ех КІ КОКО ОБЖ вдрння пуке і В ІЗ у У ! в ЩІ ке КГ ЕМ ; У де 3 535 ЕЕ. то. НЕ Й Кох : в їх р ї З щі. і ї Межі як її Як М З з ! ТБ ЖОВ КЕ Ор ж БЕЖ р

5. в Ж. ш Кок ОВО Ей ой, Ср В рова і ях ОК спр меді КО пожежо ТЕО р уж ! ож; ЩЕ 5 шої і Мо 1 їь СОЇ о ння М ос В ов ШЕ ; я ж л ней г ЩО : -к Ж ОУК: ; ї ї у З: ї С Бекесркек ун тост сх отри уст ефеяЕ. Кент ом док котре ке кт ке досту кн, ! 5 - с ж же с «З ек с ск о З я с с сх : а ї Б же ща -- що ко якою ооо АК со кб 3 кс сю Єз є Є З Є оюю єю є ші: ІВ по во ; Ох х ї у. о

Фіг. 2-4 рифу ЕЕ таж НЕ ЕС як я ІБ БИ НЕ ке вн ІІ М мі ї х М у ііі, 1 ї Я Ж ллхннллнн БІБІК т БЕН вч Її ї і. З ЕТ З ів ЄВ З і ї 5 їх ; дм Н я ТАМИ : і й -і і Е е ВН : ке 5 порі ЕЕ сеї день хеекххекннєккнюкннх : Те 15 Зо р ан: 115 х.ї ви : фе Зо «ііі ранню В її ЕЕ ! її ре МЕ рік рі Тем : хх ЕЕ а ргв ж м т Банери сн і В ша х СРС КМ І зерен В пені : СЕС Ж днк І ЩІ і «в в ЕТ ре : ; 3 : Ж і . : Ж и : кож і ІВ і дурня рія ! 5 ке і БІБ о ЕК її : ще ЦД ЕЕ рт З ХЕ й я кож КО : жі кі ХЕ стан У В Ж її жу ОБ : НЕ її Ся | ші ск І ве 35 З с аьіф Е є ни КО Я дими : З З о х ЕД я яв І х ех 3 З ї 5 ї Ї рей р НЯ ЕТ Я і ж Б в і Ї х ї 1815 ШЕ ех Ї Ще Е вію Е НН ї їв ІБ щи і Ко Ї Ой рн сн гі і і рогах : х (ШЕ Кі : Мо ї ше З ЕЕ Би Ко : ух роя й щі і ца ї ТТ: ТОЖ2 фен я: в'я В ї. К - т сш зн КІ : ії ї і : ї І сім; «3 1 КІ оду ї Ему 4 тез 2 З З ше ї ха ї с : - | 23 КІ Е ї СК шк Рог І чех 3 ЗК 4 КЗ : ї Ва ура е». КО І вка З 8 ні Кк Тож ї с и ОКА : в 1 ж ЗЕ ї ; Й Бор : ші і З : ОО ї шо Х г з її ; є К Ж у У ї т : 3 1 | зер же : ; ай ! ші КІ У. З Б ї ж чо : Я 3 ї КІ Ко 3 Ка ї МО Кк : 3 Тк КІ м Моя : нище ї сі ж : ім 15 | щи Гі ї я у і те ка ск ГО ї Ше : жі ші о і с ї Кого ї їх ; КІ ох Не ї ТО Ме щі НЕ Й І пня, ї ЕД уекенд Її уж ж у КО ря ї РОК ех : СІ Я Ж ге З ІТ ї Бі Во Шин КУ г - і ЕОМ ї ух Е дн ке ї їж Ж і Бак СЯ ши а ІК. ок : шк я: кв їз 1 І КОЕОЧЕ ї хх са з : 1 1 ї З : щі ж Я ; Тс 151 КОЖ ї со ВИ ; КІ нн І 3 жк її і Р : З і хх ! З- нена КЗ : Чак КО : шенні КІ 1 зн Ж 1 ко : ві Ов І ОН НО я ТЕ : Ж фс ЕІ Рок щ ВІ КОХ ші щен КІ ї ша Є З кт: У ї і Її 3 ОО: М. і ВОК я Бі ШЕ ог Б. р І я хі: г КО жом ші 1: : ж зов я сфе і ЕЕ Де й ге і - ЇХ ї їх о 1 шо 1 105 Е зве Я шк ге 6. | що гі ЕЕ ЕСЕ З 8 кох ПИВ Й ОК

: . ж 1 3 Е з ї ож . сек ОЇ 5 ї т ДЕ З г зо жі шк Ж земне на ев Ка З з га я Я. : її жи по БЖ Е шо ек З з ох : ! Ж і МОЗ 3 «і Ж МН КОЛ ес ї пло Х Я Зб "о Д ке ВЖЕ КУ Хо і ше ее вух ка; ЖК свя шах Бі: ром ОБ 55 на 5 : ї : ї ї й ї - : 5 в ння г СЕ оо хо : У дененефрнн». й - ееяи теки юже уже М З 3 г шо жо ї жі ну с декрет жекекиере о їз Ж мі МО КОМ : -к ї ; пр З 2-5 7 енер ки с 5 1 : її : Поеми г Ж 2-3 ца чк с кеВ, охжхжкн ще їх і вікі 5 ОК с ос етери ретее чесне М х г ; т Во; с Гек Є ециекиеетт У Її : тій і «тк Ох має ен ни х з х Я гл х А я й ее : - ди се З 55 5 : ; 7 Се еожяку сс ж З - їз на дк : зви си. 5-56 є НН З А ' синя 5 ї г

Фіг. 9-5 ка - їж я ; « хо з і. и « с ЛК я р ЖЕ Б : їж КЗ ІЕЕ ВЕ ж ЕВ Я Б 1 сення ІБК є АЖ Е іі у Ех ї АКА : : ПИ : я Ке я ! В: мне Ї св ке ож рі -к ! ех ПОД нн ї з Зо о Еш ї Ту пен ннннння : Я Сх Еш Бе аа - и ! Я р ЕКО де ТЕ фнннреннняя : фросеснкефря з ї г шк х 1 : і шніх : се їх их з х у Ї пнрерняня : дсссефесссосой ї в З за Її щі ! т І: що їм ї ЖЖ ї Ж ро ї КЕ зе я Бр Го аз ї усне Вінн еко і 51 ї І де Ще 1 що о Я ЕЕ оду г Її о ше р - ЕКохюююкя рі шк ри ще й Р ї Кд ї Я оососеов кни ї ї ке ш : : в ! Би 1 ЩЕ хаос й Кі у в ї ! і є ї -- ЕК ще : ) а джен ке : ВК ї : їла - хз ІІ ЕН ЕХ : Ше ї ші й КВУ : м ше ВЕ ї ша : ОВ ів І ще; : Б Б ОІВ ШЕ той : т Вк і т їз - Ко: ї - З : 1 ін МІ КІ: Ех ; ль г пе фу м КО: пе : З З : тя рек КЕ: їх : со ї 1 : ї машю в кОК ЖЕ Мо : 5-5 Ех х вже І оку З ї ї ж о їх : В : Я- КОЖ ко Я: як їх т й. Є 5 цАЛя Ї й ші. ЩЕ й я : ох сх й ща КО в : 53 Ж Я г Її у Я ХУ: шо Р : м що 3 о ОБЖ ї Що ге : м : ФІ Ще ща ве ш Е і ШЕУ ї Ж р КО: Кх Ки ТОЖ ї дей їх : в чі га к : «І ї хо пер: ! ч КО ї ї їх с Пн нн щ кі Ж Ге ! ро : й НЕ ях ! ; пе росії ЕЕ. : КК їх пневеовооовнвнаосх я с ї- ї т зала, У ї КАККННе ї г ра Е : і : з х і Кк З : ХУ шк КЕ ке Е ; Е В оте й ВЕ ї ох ї мк щі: опе Є В ОБ : ж ет Кр: пох Ж КЕ Е В : з Б Я: : вих о ОО ї я Ж Я: - ре щ-щ- Ж Е Е їх і 5 у: Ер я КО : шо ЩО р я Е РАХ У Е ке БЕ а х ва пи а : Колидсериня У ї т - КЕ сехжккжккди, ї ї ях. ШРІ ОІВ рон ї ж ГЕ : Ф ря З КЗ фе» КОЖ б Е яр сх я що жо сві и Е и Е м ЕЙ пишна ше ОБ Я: сх ГЕ 1 І ШЕ, КУ М а х Мах СІшІш Ж рн, ще ІВ : то десррененея а їж ко шх Ж ЩЕ шо ВК їх -- Те со ДЕ з ж хг Е ЖЕ У хх 5 пед) щі км с че шк Е як г 7 рже не й Ще о щі Е ї ї Десесесе и Бу тм ВО : я К Ж | В ЕЕ Б Без ї КО Ууррулинме ї КЕ я 8 Ї В 5 р внутр й ї 8 Е у не ОРЕ о порчу -к пе і рве : щі чо ух м ее перук тах р-е ї Її сг шк зу Ії : ж са оз ж же ОМ ОЖ ї-е Сб 8 нн ке ї ее С ОК є ль здо з ре я сети зах ї охнлккднкккої ді с З жа З 2. г стосу : А ше троє в жо с жі ме ; | по а пін ди : Фрі гіг. 9-6 пе Ех іа Кр їх ОК о еоОКокх : 5 ВН ЖІ шов КТ ш З хв т ІЩЕ ії ТАЖ фосжеор хо не ї КО жк КОХ ТК х ЖОВ фо хе я їх 3 з Е; ві і ще Бі ВА сКОО У тех Ві Б і ; я ДУАХУ ОК кікнння їх тт : рення ХУ щ : і ТК її Б ва ї ї ПО Р ж С тяжку іт. ї і о Ра ах Би і р ран : 1 Бо р Бе ЕР Ге : о ії ро фрі г и Св ОО пері ЯМ 1: ї х ії ї : : М ї і їх : ї Я 2 ноннйннннниой Кк і 14 : ї їх т т У ШО і ЕЕ - хе грот юю І. кі жі БЕ 1 Би ШЕ т ІВ РІ іш: 115 ші ші шин киш Я т ї : її : ї ХО ре х - Ї ся 5 ї. 5 1 Мкккук юю юю єю х ї -5 Клин х ї 3 ї ер ох КК ефе ке : Ок і кіш тої фо : ! а опа БІбш : ше фрі: КОКЕУ : жор ї со фо Ж с Ж ї 51 фік; й ВОК : г ї СОУ КЕ: ЯКУ і ж 5 : РЕМ, ЕУЩ їх : я и ІМ У ВІ в ; - ов ТБ сід. її п. : ща ТО ЕК фрелчуевх ЕК ІК : М жі Я їх Я ї зх ЖІ з їх і . ух х . ОО: ОВ : я ай тора І гЯ ЕМ ЖІ КОХ : й 7 СЕ І фонефнннннннняй ї ; : х І т ЕІ їжу : г ря З з их оз ЖІ МА : я Я й ОК Та Кир є а ЖІ КОЛЕ : - Її пос зір ЕЕ ж ї : зни Й, ї : І І ій хх к. І «КК її РО фею; - Тез : нні КВ тк КО г : ж ОМ ї шк о ЖІ У хм : Ох ї ; Бу 4 х І о І : ХК: ї голе фо ЖІ ХК ОХ х : хх. Ї ОНКО феососвіюссоос Ж: як ; ЕК : ї -

БК. дей В ів : ко І В т ЕВ КО : їжа ї го о зе Ж я Ток й у ХО дня ЩЕ Я яке Ж: ВЕ ТЗ її Т-кі 51 ві: щ м : СЕ М Я ї ОМ РА ЖІ 7 М в ГНН "рас, Я 1 ї ; лак КІ я . ї пе - Ї ї ре я МОЇ зпнкнннккккно око ССь Я 1 5153 ї : БУ каже ск поз Ки ог ї с; ЖК я о : К.йе 1 ще ВОД ї : кас ЖІ о ї що ак 5 г З ї ; ЖІ ВО 1 1 Хе оте рогєз В раз Ї ще рої Ж: ї пе їх їх ; фр иг 1 ї ло Її : ер ЕІ їх Ж , їх ї ко Же фіитня ЖІ ї пк ї й ї г; надо Ж їх рах Ущ

Іри. ВЕ ж ї шрот Ж: Шо ЕВ об т шЕ о КЕ 1 КЕ В БЕ її гг Вр ЗІ ів ДОБ

ТБ. ЕІ ск зр, один Х

КР. Ж я те у: Ди оф ее ї : т ро Ох Км я ж ЖІ щі 1 ож ко. ТЕЗ я я Тез її перен ЖІ ве Ж п р

І В. 15 шк вх я ГО ха швах: Ї кп К У КМ 3 се. її Я. Ж ЕЕ ке ха, ур Бе де ге : сх То пра ве ЯК ОК я ск БОБ їх 5 жав їх Ії и М ек їв цу У 1 : саше пе - Мн я Вера - як в ї : Мк : КОобоо т У 3 дже ї ші, нн в в У дуктів укусі д вий ї : х ; т що й з ; К му ож ху ца М ї м х - 18185 ше сою Ффсемо мі є ж 3 шо Ії жо йеж о орехотек о ВУЖ КК Б - БО її їшІКІ- ока мк о ба а а а Ка ОКО Я БО її їж: и ж си ун нені сукно вне кож - м яко м фра ща кі ї ем НЯ їх А ду ї : ее : В ї ее їх х Я

Фіг. 9-7

ІМК о В 5 ТК В х ЗБЕ і БЕ ОКУ ЗВ ооосеефсесскя СНІВ ОКО КК Кок паяння У -- ЦЕН КМ, ТЕ ї КТ: - 7 Ж в ТІ ! гг яв ! Я оо між С жі ж р : ОМ тез 1 о о їд ро Вже ва, р : : хо З поофюкнн ї ї 23 мож ши і У : і У вів КІС сії хі ін : : : 1 іге Кі ря : | і і | ШЕ Я 5 | Б Я кеВ : В Н ЖЕ 1 о Б о Ї В У : хм КЕ ї ї 1 : ї В кі Н : З : їх І 1 З Я и КОЮ доблннннодкюннлолодннняяямя Ух людсь Хе» З шк ІВ ; а БОБ Ге В ше Я ох пої оте ї ж ро . ші: і Е ї : Рі : ЗЕ З З і Е Я ї Хе жк З З - Я ї ї з В Ой в т І кр ке : А ШЕ ВТ і ІФ ; - я х ШЕ: Інк ЕХ І ХЕ ї ще ЖЕ Б ПЕ : ї : з Ж Бу Я фен ІФ ї -кі БЕ

БТ. Б : «а ГЕ і ан ГУ 1 ке Клиде І ПОМ одкж ТЕ і но т З : тот ОБ і Бе ка Ї Бі ї Ба ЯН МК у х ї г З Фі ЕК І 3 Вк : : 5 : Вк і 5 ; Бфу рт і ОК ж ке ЩЕ ж ЖЕ во фжк : ще т. Ь ме 1 ві їх : ще В. «Еті: о с ої їх : З ж із 15 5 : НВ ге 1 її Я і пан пити є : ї «кн КК ОХ ї та В ї ЯН ос 1 га ї ш- ШК: ї М І ЕВ і те ІВ - Кк таз Я З й ВОГЕ | ще ОПяВ : 151, Ї фняхсях Те й ех с оо юхь Кіа ОБЖ В ПЕ в Ж важ рі ТЕН -- ОА о Її

ЕЕ. ж її з ен 1 вв ВІ, Е БЕЖ « В Он ! я ше на ЖЕ 151 КЕ ї : зріє 1 рія Б Сх ШЕ ах БЕ Я о ЕЇ з її р ее і Фо 1 ЕВ іч . во суттю В і чик ї ШИП керу дути м тдти тт зутухуукутрутттуттттуттехухттєі - Бк вав Ваг ї тей ЯК я тт со се їх ха ОБ швея зе5б5БбБв5 ща о ча СО са ка : ОВК те т Те я т се г т. т У ек ІВ НИ о г о г ог са ос с ОО Ж А ки Що і

Фіг. 9-8 шт 89 с ТОБ В щ і і я кі З а й : с сі 3 ЩІ 5 п Е М СБ ШЕ 3 : Ей З о їж с Б жяя з ів кі ЩА Б іі ре к з З і : Б Бо З : ж: - г КО кі І ї зе у КУ ; ЕЕ ві пі Аня КЕ ж Ж : пе плялляяк 3 ; : З ; 3 пах і З 3 ення : 3 й 1 ї птнятннняня і ра. 3-1 Я І пняннн І У (Ж от --- ї пня і зх х ях -і сер : Зх 1 Ве Як якхх т о і їі че шкі -е КЕ еч нн 1 ч- п З Б рення І ШК Прання ші ї їх І педятянння і ІК, ! ї шин т г : ни : ЕЕ і зефеаессння З їі Кер мими ! кі і ; овали КО р с тен і ке в "Її Ї х З КЕ ж я. нинр : Б «| / ї хі х го в ЕГ : ш- Ж. шк : ї Кі ра : же

: в. Б ЕЕ ! ПО : - і Я НО дез ї не. нні Не : шк хі, Ох 3 З 7 ЕЕ : ше ЕЕГ 5 ! ші З ! Ка ЕІ В ря В і і 5. і її г. І щі шк І І й КЕ в Б щі ех 7 Ів ще в ЕЕ і ре : г - і їх 3 3 ї фе : Її Ї ЕК і же ії З Кк : р і 3 | і Ро : Е : с і | : : "ж у и і о : і ! не іо НИ , 3 ї Толя : Кі -- : їн хі і : Ж му : ж ї Надя і ч ше ! З Кора : : 5 : ще і і ! КО : ще ог : ся АЖ е ї | ще ЕЕ я : З ХЕ й : т З Ії | Ше ЕІ : Б і : ж ! і ко КГ ; що КГ : і як «Її і де З Як з ї й СН і Кого ре | ! а Ж. ве їОоКеж ; ге я З ж ж ння і во ша : з ша ОХ а . й | мо 07

3.3 ех : Е г : Е ї і т Шо дн о і ох їв : ж і ее і 3 у ї ї : з ше М ЕЕ У ІВ ' че В : МОЗ Ех ; вшшя Е | г і ся МУ Ов Що ши ї ж ше и Б дккнеленх Й її | С : х Ох УМ ї З- ї : ої ві КЕ НИ о ЩЕ : ен ЖЕ ван : Ж і і Іі | З БК ШУ Ма 1 Бо ! і - 5 й : Го : : 35 : : АС т Та г. ХЕ В, | і. ше іш КЕ х с : 5 о КЕ шк т ої тк и М : іі і х. КЕ у : : і ві «1 г КЕ я : М шк | ож ей : І ез : « й х З г, ; : 5 о. щі 5 я С: ЕЕ : «Її г ї е ї 1 а -е се ща Ех гео ма і ті І елннии ху ХХ ОШЖЕ рік роя рія г ЕК щи Ж Гу 1БЯ осесюєюкююмх ЩЕ я і с щі кн щ Кі МЕ ооо КІ і Сі х 3 рані дО Кг БЕ - пове ВК ! т г се 3 жК ї їх З є їж ї : -ї ект ха : скін Ї і ЖЕ й тн гора ! г цій З і я ; із 15 Ж : ще її и тА : г-Я ІМ ЩщЩщ | еВ сю 7 ре і шк | ШЕ - по, - ру І - 1 «ке г Ж р: Е І і у 3.1 я -« зекучнкх Її ГЕ нка : ЕІ ки Кг і І жі 1 с те ско туняу: В Б м іа : ка | їх со ян З дику з Ко І : - Біжи жів. ше Заеа 25 Хе с ТУ, ех : 3, как шо фо і г ! щі є сх т КУ З Ок сх ин р Мч З Ех тя пк НИ З печу З о. с - в денний о що АВ Гео

Фіг. 9-9

Елі шу ян поло ІК их ЕІ І БК у Б рек ві ТОК в ОО т. же Ж І в І ТЕ Ж Г їз ЗІ іх ГК І ІІ Б феввнннМнЕНННА Й нннннНфнннвЕ їде нку : ! сере я ша нн : : З Е Ж ї їх : піків В | ЕН ї . спе В ою же ЇХ ї ї шо З і Ж Е 1 - : щ Як З м ік і кі тт ТРК : М ку В ех я З З же г яко кох 1 Каду : се і Х ож ех де їх ОЇ нн а ї п : є 1 З рф ; В ши ШЕ М Мф 1 ТЕ р 1, га БР їКє В З 5 Я: ; Ві р ї т Що2У " : 33 5: Ж Ще КЕ РОК дення -о В ТЕР ВІ МЕ Б ГО : Те в їх 5 : Е я шої С ї Ті 55 ї 5 З Е : і БЕ і оре оці снкккнх що Ж : Е КО : Те в теж у ка погоди У Е : Т Ф же м і І оща ц 1 Кс оте то | ей і Це : Ж -к ї ! ри ЗХ Кахж ІБ: ко. р : ПІ

БРВ. : | й іш Іі Кі ЕК ех і ж ї пі щі КІ ТО а 1 ку г ші сосок КІ її Ка і У. 11555 я у ЕЕ о З ЖІ 151 І ОКей : яко Ве, Тех ЕВ сення іі щі ' ай Б щі 1 і Ех ! х Зх піку ЕІ ха і о : я Гах гі - Я і ж ло отв і Ж ом ! сни 1 Е Пл гей і зе не БЕЖ ВІ ШЕ Б ог і і ЩЕ Е Й нн Ж ро ЕК ! ТЕМ ї Т як | їх КО їв в КО 1 їх : ТІ 1 КО т с 7 ої ка | : Ї її їІКіх ЯКІ Ь Еге : Еш ота ве Є ог ! ІБ орі мі з , ОБ Р ре І Т Ох " і х їооМже сх : т ОС 7 ж Ко: х ї От Б Е і у - Х і КК ЕН ої ж Ох жа як лососеві КК Ох ж 1 Б 18 онко тка Ж їх шу В о : Ж Ко; Кола : БОГ ГгЕ ері сш п сті З. в | Гі ото Кі КЕ Ж с її росла і ої ів З р с ІЕШЩІВ щ Кі в Гу : ТО - КЕ . 5: шині хе : ЕЖіІ ЖЕ КО ре

Г.Е Зі ГІ 1 БЕ о І кі КО КІ ! ; Гах я ІЕЕ БІБ ЕЕ щі (ОЇ пененнемехютоомодстомомотхеннквн сеї - ни В : Т 4 КО УУМУХУКнх У х Я ОК ІЕжЖі 14 Як й тов Е ЕК стрес Я Б 1 щі ТОЖ ЖІ ох ії Вії и ої : появ 1ДК Ж ШЕ ж ЕЕ 2 Гб І СЕУ В я рок : Т ОБЖ де а Хе | ХК КЕ іа. І Ех 1 шко» КО У БЕ, Е: ін во рр : ТЕ оси З і ї щи Її У б Кох хек г тшІ В Ж сеї ВІ їх Її ІІ гу . т яв утри дея зе ЕКО її і о. й чЕ ес жо о см є с МА Мирон хнттняЕ с Іщіх п обо в в ог Ма КЗ ща о єЗ ОК ОЗ З зе ко ї Т ок ї- у й к м ж. хо 0 є. ке с. з ще свбссосоесзо - я й оз в ї їщіІВ їз и - : ї : Сей ТІВ а ск «З ша Ж) с рено | А ї : З в БО ЖОє

Фіг. 9 - 10 рот БІ Ерні й ВЕ і щі р фриніннех

ІІІ. Тік 3

ЕІ. і щі 3 ПОЗ С5Х як КМ Кк н. ін Ся я ща дейле птн мнения : : ко кА У 1 я 55 ово іш мих НЕ, 8 ОО ж ти Ер Ге : Би Це рк іні пев рі і БІ ! і ЕМ і Е С рих ! І і 5 х і Ії : і З Те венннфрннняй З ГЕ | ті Пе і Ех ! В, ! 1: ее хі а ї ЧИ і 5 Ку ЖЕ Р і вх те | Ж -й га ЖІ То ! А ді | я Х Я ж 5, ! щ | г ї о а. Ус У з хг. пе і в шен рок : ге і Б: кі ОМ : КБ і МІЖ і Оля і ЕД ! жі і Ко ї ге ГБ І і ВО ! ріж і-й Фр і У : я Р щі Е ОМ : у ой : те ! ди і пе : В Ко я З . і ще : сен жін ' їй : ши ну щі і м ! її я її ; що ва ! йон : 5 Ж ж ЖЖ оф 0 СИ жо і х Її к То ро : Еоротя і же і я 1 жу ж ! ІК І око ї ! р Че Б ж бе я її ТБ й Тез ! г. : й 8 ї Її Н х ке : ГУ і Кор ов Ноя : їв і Ж ЕГО Е пе : ше З ІС - я ак і Тж5 нена кн " в" од 5 і З : : х ВЕ ЕХ : ї Її к є : кн те ще ЕЕ : Зк ння Б. 5 Бл Ж їж : акт Бе ! Ко КЕ хОІОЖУ і 4 і рен я і 5 ЕЕ : ка Ж ЕОІОжУ : зи Зх Н НН я ЕОМ і я фр і х ге ! ім ! ес т ІВ ов пк : -і м ЦИ Та У Іі» ї-і п. ПО, ОБ І ер Це роя ОЕМ Ві ж їж КЗ Пе Я ж ОГО ії 5 ще З и Ехо КК КК, х 55 Є п БЕ ЖЕ й / : й в я їх 5 Ж к п ву їх ІОВ о т З Жах М кЕї . ІЕЕ КОН ТОЖ я ту і с іш Знак Ж КЕ ІЖ ще я віщі: шк ше Кк ща ря. а міх В рено р де ов ТІ шив кн І: 2 р 7 : -щі Кі З екв к дея «Й ВЕ ! ШІ» ЦК ей аж її 1-5 Перекрут ре оо вк я Я ех ; ї фея доз Брови р нок збе Я. учи Тит «М я : Ж ще чих. ча См о ша з Ком є то У еру КВ і ще г дик м сао ДАХ ; ши є оС іх А : -. ! ТІ я є З ха а о й роко що Є 0 ко ж ї п вва дню у щу х ж - х: ся х. 7 то с З їж зсассовобоОоссо ща і ге. ді т ша с Є 5 і ї Ай : - ! КУ іх ї :

фіг. 5-11

ОВК перря Жак К з і о РІ пек хе БОКСУ ЖК ср ах і Б - р сх Кі Ше : їе ї ЖЖ рах ще і : В Ка НЯ Б їх Е5З ЗЕ ря її с ер : ц і ІВ --ітісі ож реє : ху 1 хо г ОМ дй Я ; хх ккккккккккткккккккк : її 5 жі бі х і Ту пен : кі ї ж ; тою софт се. В Е ! парі | огех 1 тез : роя сек жк р ожх ОККО Я БЖ : І Моє ї У р ТІ ; І фосоогоогосфреєюєоску 3 їх Ви З ях

: з. зооікососоє сс і НЕСЕ З : Ко ях її її ЗК ї я ІНШ ! 5 В ік ві ОК френнніня Кг : Ко її їх ш : що х княжий 5: : Кк ШИ Ех ш лою ї Е хх: овен БАН. РЕ Те 13 їг : о Ж шко ши ше я КЕ і КО що ор КІ г ї і Е ХК. Б І ЖЯ : щі сто. З ЕК : КО ге : шо ж ВК -5 т В ї КО З : ЩЕ фееннфнннняї х гЕшу і ВХ : щі ї їх ш і Ж : 5 Е - ї и : ЖІ Тож ЕК а ї Ох : шо : й Б Ж Ї Ох ! ж ОКА С Вико» ї г і І ЕЕ Ж ІВ : ої ! 7 да БЕ : Я КО - ї хх що : в її інше й : Ок В їв - : я сфокккжтя Е 3 І КАЄ ЖІ Б А о ' Же кан ге Не нн І с : о й хі ЕЕ : о І От : - те ! а 5 БВ : І і «їх я ! ж й : вх | аз : ях, Є : ж й : Кох ї Мих Есе : МОХ м : Ф - Е ФУ вух ї с ! сі о : іх щі ШК їх : БЖ ЕН : ах г | ре ! й і я Ж ОТ дн 1: : ! ЖЕ: ; шу ТК яч 7 » з ; ї КО хх: : х з: ввввовввактх КИ ще г : р І: Ко, Ж ТРУ обер і: ге ж : : мое ВЖЕ: ж БЕ вк Ре : чик В М: ЕЕ ак Б 1: тік Ж : поеОЕ їв : я Ше ї ЕЕ БЕ 1: : 5 Мі фо нююоокююююооою КОГО ІБ г ще : Кох ї осокою їх Ії ро : щі : а і ігеж ОБ т рр ша ЩІ Пиши 1 : КУ пла : ія Я : т ОІВ пока г шій В й пт Ке ; Кг ! Її по ка - і Не : щ ЕЕ род іме Ж 5 А їх ово о ТЕ А рій : В І з ї С : но ж ще геї і КК, : Ки їж ЗК Тож : г шко К МУ пек К Ух ві В ї хо ЕВ НЕК К КІ : ж Ка чи : Ше Х я с Кох : ех «ВЕ т є 3 ПУ ОВУ КЕ: х ще щ 5 КУ щ 5 що БІВ око Есе : а: ЩЬО Це ї Іо ще РІК : 5 Еш Боосюсссні х Вк І г БВ фуокутютчня ож ІвшЕ : а ща деки. Ж ще Х КЕ БЕ ГКЗ ковою З племен й : 1 с ке с МИ : г : я | а с --е ; Ма тю усу 5 : Б с г ех я ре КУ У ге : ща ОО щ ге. с с режи кВ 1 З с є ге то вади що ; 15 є в ее : 5 - Яке ВК їх : Ж що ви !

Фіг. 3-12 пе ЕІ, іс Ж іі не ОО 5 : 5 Ко ї- : х с ЕІ : 5 ї - З щі 38 вій ї ЕЕ Я і : її ех --- х : ку че 7 в | ж у ї ХО ад о кктенння : 5 ж мі щ ІМ ах ДЕКО І х З : ї де У КІ рюють х і 3 Е КІ ШЕ КУ й : ресдркфсснся й дення ТЕ по п : ще КЕ і ї їх - КЕ

: 0. В «ЇЇ хі ї КІ де : їх " й 5 3 щі КЕ ср ї хору : Гея ЦЕ 11 : тІС З І : п сте є й 5 їх Ка й З їх : В с її хі Іі ух е щі її : я їх ж Зоосеетеєтеосессссесссте 1 ї і І 5 ші (Я т 1 : па себя ть. : ге : не : к ев ! М : г ве Іі ї ж ! їх і - : їй : з Ті у : Ж лофт, ї ї : Ж ї как Ж ш : Кз : "в 1 НКУ щі: ї В : фе Кк ї ех ї Б ї г кб о ї ї : зво вих їх іч те : В і В лай ЇЇ ев шини ця : ; ; с ше . - Я : ЯК Те 1895 ; а А : ж шо 0 : в ї - : «ЧУ : з й : Я : Адм них ! ДІ ї Ж : се Ех у і жа Ки Я ші : хх с с і ню БВ : Є Е жі с їй ї ї їй : схджккодіккя з ї ш : їх: ух 1 «І щ х гез : ЕЕ : -ії Ж х под : Ех ! інн : Гері Не : - Ся ! зн е р : "фе Її Ме 1 Гей : се о Я ї КО, І Же. Ка : ше ї Кг рек ЕІ оф : ге х й. : Ж щі ї рі 1 та : Кі: ї т і-г РІ: : щі | ! В і ЕІ : Ко Жнттуюрннння ї ї ж їх В | «в шк ЕФ і: : хе ЕЕ? ІВ З їде СЕ ЕВ ЩІ Е т дно Я і ре ж Кі у ше пон ї 13 Ра ЕК Я що я | Ж ле ж їжу ІА да «і ВО їх 1-х петттнтннне Ж з ж - Ех -х не : ше рю т С р і «ку ; ні 1 ЕТ ЖЕ І Б ей ге Ві: М пт оООО з пе : щі шт КЕ: іх й жк Б : ші ї-- ж с еру тУХУу як КК Іо т й Ті - 158 ЕВ ЕВ педа --е 5 с : 2 и Ж й : док ча с І ск єв є сх що Сі нукутхтя ї ож пев - шо нин ки : чй « с осСу є Моб бо Же нс ца - кеуУквУє ВХ : А ПОВ шо в й сі су сх с є г : їз - х ой і ні Ай -ошо

Фіг. 9 - 13

Норкові ння ГЕ шк рн інфу МА хх ІН ЕЕ ді В і і ІІ АЖ З ОВ нні І м 5 і ЖЕ З ПЕ з СЕ Ж Зх : НЯ С фр фу І т шк х ї. їж С х ї ее є 5. ОКУ щої тк НК Зі хх З М Не КОЖ НК. НЕЯ КО ЕН ЕН ВИХ кі Пллляв кох ї Ії : АХ унія рин : 5 її пон : 5 Може ї - папналннннАлннннятв : 5 ЩО. же ; : Ж : а її МО ях ох В Ех дних : до ЕВ: По ші бе З пепнннннннннннннннх : - в КЕ сор оже де с їх ї палях : 1-3 Боже ше 1 ї ння : 5 по ШК ге р ЩІ: ть : 5 М | рр Кота КЕ. і 1 а с Її їх У Хо. а З ка З 5 й 5 КЕ я З в'я : Х сн Ми 3 ЖІ ДЯ ДЕ ж рі ! у З їз 5 СЕС Б : В Гявее ї Я т У ї ї ЖІ Е ' хх їтжЗ : КЕБіІЖ її ЖІ А ї ї З я : ж ї Ж 5 хх ї : і: " БТІ Е ПО пої І : ХА я 5 ЩЕЯ и ж 5 ш ЕЕ т. ; Ї 15 : я ж ТІ й ТЕ є - Зх : шкі см РОН нини З А но хх Е Щі хх : ку ОК в «код кнннанитня х ЖІ ГЕ : ЕК Косяк «ОЇ ї Ох ї ЖІ у ро ! Б і : ; і Кз : жі 8 : т Б Ї доояовсснсоо ог : я М ни Е Я ! | р : і Б | щу : ІВ 1 «Ж г ї ї с їх: : У ї рн : ХЕ ї Ж хе Я хх Її Х я Е з ХО ЕВ п : ту ей їте жу ЕМ: Й ї Ж Її т ЕУЩНЯ Не хх : І ї о І іх 53 : : їх : -к З шк я Кен і ф 15 : ев хай й : ші : ХО : і а З ге ОА | - 1: : в: пі : флори 7 ее і КК Я з І : що Б Ока «Ох : чи ! шоу ї ще Тех : ж Бе ЩІ ОО Ен і в Ех : КІ : щі снення : щу ОМ І ї дан Е : що Ж 5 : М й ЕХ ї хі М Й : е Н и ж ай ї я г : У КЗ : іі де -е ок їх і з ре ж й х сх : В ! КЗ жо їх се : Т6 : к Ж - Я я ї її пнннедення БО ех : рі : ча ке ОК ве Ї БЕ : Ех: о КО а п Х 1ї:сУ : ОБ. ї ож ї но У ТЕ : в : зе ї Ти : З Я вок В Ід ше Ві б Цей ГЕ : І 3 ; ї т Її ЕЕ: : Кі й : о гж КОМ : х ії ; Тр іш і : МУ : : І 1 : М і їх 1 (їв : ші і ї 5 Б : ші : ко т Те : дО : : іш 1 Ів : У ех Ток : ТЕХ У ог» : ка ЕЕ: : ї я її з ї- ЕК чи ик : : СКК КК фа 1 КІ Ор | | пон кОм Е її ВЗ ВЕ: Х Ж Я ЕК ре НЗ І КХ ї Ії М Ж: ОВ я ге і БМВ М ї - х : КІ 1: З ще т ЩЕ лосі йон Р ря Н х С З ж її шо р лк кке Кк ЖЕ «а : повноти Мі ЩО ОБО їха зе о а я для Може КОТ г же ДУ хОгОоКч БВ М См ще ІК з кА М : В обж -хо їх р аа г жо іі я ОО 1 В І З що 3 Ох з ; У - її: Пара МЕ ж ж Ж х Ж КУ : Засн 6 Мах фо КЗ АЖ дк Кі кЗ : в ї Ви З 2 ох ец : ех, з : ві ; Ко їх: В З Ка Ї й : ЩО 2 дур ум Кох а ом : ВУЖ: хі птн нкнея рі що як са : ж З дяяий: -е - с тоетутуттютех Я Ж 7 ЗК : Кк: Геї г тр й се со тр дит т Ід м я їх : ке їх т їн жор її жі ие де У - ЕЯеи : ФІ. со пе й с з те Се : Фін й кон хо ще се о тм ях хе рутин КЕ : я пос є єї мі а Ба я - рани ще : ШИК: З с ж с 3 СУ 5 є см ша є зум шу р З о в 5 5 ие : Еней ТА " т є ва аз Об : в ту Ме сь Кз : ка З кр Я - ж с -х АХ : дшЕ З чеї - я й : ХЕ : «У. З не З" АВ

Фіг. 5-1

ТЕЖ Е Ж іі НЯ пе с Же пери і ях р Білі НК В хе В 51 ІІ жк жі 7 З в ї : Е ОЇ ж ї " км ї Ве хе ї : Е и з ой ї Я рю І ЄВ Їж ж ря ; ЩО Кфояе кож. же Гея ген дя ї ЩО ка ха пов які жк Є жк ж Ж 95 гр, о : З ї ї ї ОМ Н з Є ї хі х. Кого І Тож ! тя ІБ а ; й т а 5 Б 1 в, ех дя до Алл й ; : ї | ї Е г КЗ : , ї г т ! кі Щ Н ЕВ ЕЕ я ГУ І її З я ї я ре ї БЕ Ох ї с ї КО ГИШНЯ ї Я 3 Ко НІ Вр В к Ї ЖЕО КЕ ! шеф Ї : Е М Е ї з х - Я В зх ВЕ : В треї ж он : р 1 ши - ни : ші Бі Її КУ ї Ше їх : Е Ж ЖІ Кох ї -х ве ЩЕ ї ї г с ї С, хг жів ВКі: ї ко Ї щей НЕ У сей З : МОГ ї сх я Ох ж іх ї КЕ : С з Я г скрін ! сотня : ЖОВ І те : а : сен їй с ї хг ї 5 : ру і : М Корлях ї п і іш З Й ї БО ог : фіг : 5 із ї шо Я Е : ЗЕ : сх ї Ка ї. : З М ! інн ї ; Где ї З як ЕТ : ях ОО : р і ГЕ Я у шшш ей Б ОС ; р А Б жо Пн г ! СДН ще: Я. ХЕ мМ М ї ши 1 ї Кк: «г І х хоч ше я и НИ іс : й 2 ї пон в а и ВОД їх Ж х хх 5 е ї сх зх ІК х 5: . : « ЕЕ: ії Щ х 5 с. : х " ї : й ї З і девею Ге І: Я Я х : ї. -е : ВИ ОруК зд ї : Б. хх 3: 7 : сті В ї ОО хх 3 ! - і ї о ях 1 ! ЕІ. І АВ г і жікіз Пукеесесну гоже І - вс ! щі З Бе я г тж дн КМ ї Є -- В З фн- вен хх ДОД М ее ня М і ж ан - я Кк чх я х з г Ст х тях я х В 1 ! 5 УББ бер | ке ів я З ПК ГЕ БИ ен ТнЖ за ; іхеее | Ж г. же, фо, Ж Візія ЗЕ іа: З дні р Е се «і щ ЕВ а р ! т ле ї ВЕ КІ НІ « -г Біо - г І; кі ще її ї її -О Е Е.О ї ве Ах З ж : їж к ТУ у лу у туту ух, бас ед ЕЕ У КУ у яю Уч ех щ- і щі еко ша а що мк - Ж І ЩІ КІ ОТЖЕ ше ж шо ше ОО в ща 5 ТЕТ ще се є є що о Зо є ! Е щі с оща що с к ка 5 шов КУ шо соб жо ді А і ВЕ ії а |в

Фіг. 5-15

ПО зо щі ря ж ЩІ і е ее БІК Б «5 їх ї 5 Її ! ! я г ії Й БІ в! Й ЩЕ і хі і я торт Б ЛА і ее ' БІ є Г кехтекекеня І. ш 1 РУ - і п г г с ; Я оо хе Пи ; | В | З : р КР Ку і ї слу : І В т З й - | Я ; Кл ЖОБох Ді З : З я і що : ї же Ех Ж | і р ну і Х ж : З КЕ лак і ще я й | : - 5 в ; | ! ВВ, ІВ, ІЙ й М» Г ЕЕ Б ТЕ. ке : ; : : Е в | св : ММ ТІ Шк. : -Ї З рі Е Теж ШІ Н 1 Ж о : : х Еш ; о : - " | | Я ков їі о | | і ! ш ї 5 ї ї М щ- ; З : ї КЗ шЕ , : : і Її к ї х КЕ і ї і Кі х Ж щі т ще ШИ БЕ. щ І Де БІ ЕФ. Ко їй се : ! з ве З і ! «а ох ; ї : і Я "з 1 й :

Фіг. 5 - 16 : лаб і кккккя я о

Ідна К ях ме КЕ "Ки ід їж «БЖ. і жк 1 Дня їжі в ЖК а . т ше с ЕІ ЕІ ХА . | ї 5 пня няня няня ІБЕЦИМИХ | о КЕ: шЕМІВ ення : її Тв І ЖЖ КАМ ї Ге ші в ЖЕ | ХК : ї ї В - В ОК 8 ї В ІК - З дн те ї ще що хі я щік ях я рода нев 7 2 ЖІ ; прі : ех З : БОМ оеріємо щи вер кер НЯ ї її ом о -і як ке ; | І 7 ї г м ТЕО й ши чек ї : | о ї Ж пі : ї ї 5 | ГТ Ех т х ші ї їз ЕЕ ї Б ї ТЕ х та ай В ж ї і Ії і - і я, БЕ ДИ: є Ії ! її і пез КО ОХ ї Її ї 1 х ШО Кіз що ; 5 ї х її ТІ: ЖЕ Я ев ж й і щі. и Тр | г г В ооювнсснойї Ж що 1 їв ЕН осо осюююю вою ва ' а в : І чере ОЇ Мосооєосоовосоєссюдося х се А 8 іч дя Его ! о ШЕ : хі « ше РОС | й ї З жо о: КУ ; З с. : і ме ОЇ оте | Ї 18 ЇЇ в р ! ща її 5 : ЕЕ у: іа і : о Ж і Е КОХ : го, БІО іш Я: роз | ї я І 0 Кт Ек. я З Ж Я: же ! ЕЄ в 1 КО й: е і 3 а ї-- о Шк. -ї РОМ : В К 3 Я: Я Н Те 8 : фея Я: Іс : ; ТЕ и щх Я: в | З В ше Ї Іжа : Ії ГУ ЕЕ й не 5 в і Ї ; ОО Е : є пої ТЕ -- ЕК м я ї ре: з К СЗЗ о І БО І З ву Ок ; ч Тож І ВК В: - фія Ер І : ОВ Ж ж ЕКів : - / х п З ! її То Ї ТО ж : Ж ! Ен НЕ 3 я І І : ОБ ї Ж з щі: С х ІН Е | в НІ хх Ж: ж їх сеї ї і в хі ЩА А: . о Ше В ї Х - ; УНН юку ! це й ! . З ї З ху їз Ї селллжклллм с в : І ї 3 ! КУ к 5: Ж Ії 1 ! я й : | ке В : ТІВ -у ха. НІ. ЕЕ | З | і КУ Без ї ВОК я- В Її : : : ОК жех ге 5 ев і й Тов'я їн- І поз ЕІ Ж РОБ : БА Х: Ов От а : г ТІК ві Гл к В. 1 ІМ ІЖ - з ях 1615 і: його ше ва Її Мом Х 7 ї Кп Ге ект ш ї в. Не « Я: най є ТЕ в. ; 8 Ж оже Я: Й шо є і : 57 - у: с о НН а | Є В сееттееота оче ; В ОО НЕ СЕБЕ я. І хх ЯК ше І і І ко ТЕ 2 ї | В. І ї дно - КО / : ВЕ Я ех Ен ж Е КОЮ лі е «а Р п, с. М нучтух» принт В ; її ! і зубний ух : с я : - У пре медика ; то З ее 5 є ще з З ї ші (Ин. пені Я ТиБЕВ 5 я Вії» - БЕ З БЕ 5 З З ваБвАВВЕ : «КОХ ее КУ сс шк ЩЕ ОБ пос с ше : МУ Кох кодоюккю - Б ЕВ ї В.Б ї ще кл шх т. У шко --х 23 г З ' ' ї ЩІ ЗБЕ схо з, од ді с ішіві, ї і І ї 7 к ї - ве їж як і мехххх Хна

- .

Фіг. 5-17 росу ее В т 1 -е 1 їж Ж їж Б кв Ж ї З З і кі і ї БОБ ! Ж ді ї СЕ іі п т п і ак ї ЕІ Тай хі Зх і фен тоже ях : 7 г ї тй- і Її Не ІВ їх хх КК І | сш рххосх | т охо сссювінноя пен ! її ШЕ нотоеоеео все ветеетестння ! » се У тори ух ї ние : Ге 1 В буо3 ж «я 3 В Е Ку пиши : ЗШ коре ії пе. сення : ї Е й нене Шах - І ї 5 ) х спиляти ПН шщщ а 0 і пен флллллсуи т ц : 3 ж о ї - х снення ! песен Її -- Ок Б хі ! ре Її З 5 ї жі пек ії ! ! Біші й ! ре ре Кі і Та їж й «і ві Ж є: Я і ння ШІ а : ен іч З В : ХХ МЕ в треесе : -, ї в Й. еЕ В : 5 І 7 еще со мені І СІМ ї да НЕ З : - 1 і Го ст Ол пон нен і М КЗ ши п і Я щі ! Ж ї- : М ї ; чу - : хі І ві І а фра р 3 : Ах 7 ї ії ї сої в ВІКІ у: (В : Ії Ох їх Ж Х ї 15 т КЗ іі В: МОЇ ' з ї Ше У ї г їжі 1 Х ! і 1 ї й іш В ї ТО ї ЕЕ Ки ши іі

Б |. це 17 сек Т Я: Її м ї о зі щі : ше Ж і - КВ КО: З і Кк ТО: г ї Б: : БІБ . як ШИ В : м ЗЕ Ше 1 ї ' в о о в ТЕЛЕ Е й В. К : щі 1 В ще М нш її : їв І СЯ щої -і і ей Тай са : на ЖЕ А: Й ; 1 і р ож се Є ее ШЕ в

: . шк роя що Ф

! Б. жо х В со ЕТ, я о ЕЕ : КІ Б. хм КО о і ке інн До ооемесоомомв аа КК ; г і ге ї й: сосок Ї реєенння Н ськ - З т - с ї х ї - хо : зн ї ву т Ше ІМ хх Кн ІЕЕ ; рн їщ51 кВ КЕ КО не ЕК 18 я За геї Ж й і. ре І ож НЕСЕ ЖЕ Її тою Не і кож ТЕ вх : ї ТЕ : РК т До дея КОМ ЧЕ Тв щої ї м : її х й ще і : З І Кк хі хі Я З ун НЕ ! Ж Ь щі | КН шо і жа І ТЕ : У ях ШУ 1 5 ще Е б'ю ОО Е ЕЕ тож ї рі у щі ог : і я РЕ пероні К Ок ї п ; й Тох ре Ж ї г пак ТА сечу КК ї Кн с т Є Тр: : дБ щі ГІВ ТЕХ : ж обо ВК 1 -- з 2 : же» дя ї Що В «3 КЕ ТЕ : и Ж У щої ЧЖжо і БІ жк В 5 в пише ОО ' Ж ! и ; ї : Боже ТО ї Я Ії ПЕ і. і Ф чими ї з : щі т Я. : сеехеикекфикиєкиєкин 3 ї хх і щі іх СЯ в є У тт ве: вия : в х Ех її ях сх з пе Зоо ! Ж фнтнйння Ї нки З де г. -щ Є ВУ БОКІВ «Я Ф : Ся є що поссеесесссессссссея : : р 5 « ї ВУ оч щ- 2-х ща легені : ЕІ Се са Гаї ща шк : -і АВ " «3 : з ї ї ! Х 1-5 М Те пат : ї

ІГ. а - ча рю» : я яке? пи х. я РК жом 4 З ге ЕЕ ко р ї --Е Я Н Е РБК ж: ія Ж ЖЕ ке м і ІМ їх ї У ч ТЕЖ Еш Ка ї- Ак х : ії ЩІ щур БІ ! КА п щі мок шо . | / ІВ В шо по Кк дЕКІЖ ро . 3 : Б ші ж і я ие Е ркееюксске т в З р « Е шннтя. ї З ет ЕМ: пе Ж ши Її ! Іо "У В : : Тех С 1 1 й , ве хе ша У ЕК - : оз гм и. . ; : НІ їж зх те КЕ : : Бе ща х І х ка : щ І ш . -е : їх а кож І ; г де Пряні» Х Во З ; Гей Ж ; згогесефреогасвооссо, В З ШЕ 3 Її х ха Е.

З ш 3 ЩІ г 1 і і : х ЖЕ | | І ! ! БІ б соску | ! | й їх 1 ее Н те : І о тт ша і ха ї Її се жі ж ! їі В. нен пек ! з ші Ей і КЕ е ц ф сек в Кс | - Б їх З і КЕ ' | Й о че . : Кия ! Щ ; я І ГО дк і щік ж в. с | а ; ЕК. ' в : ! : с і і | ще ЕК | | : Й їх | їх з ще ' кжсжсжсвсатю всю і | ! 18 ї МЕ, і в : Ку спіІЖ ! ! в | . ІБ ії ! в 5 і | | га КОХ ' щи ЩІ - ШЕ ї- ів оо ЩЕ - : жу Ї. і КЕ, о ї че Ер ї Ух Щ в : І Ба ї їм 15 Н - в в | 5 І Ер і що ; в к-З : бі ях 4: ' хе: Її оо пе о ' І Ге ї | Го . - | ї ї це Ї с : ЯК хх ! ге Я х Ще Е г СЕ " ЖК ке ДЖ І І Й Бити Во у ОЕ ї з І сіном Еш І: І жів ЖІ КЕ ГЕ ша чі ооо 18 |: її с БЖ 8. вени «як КУ т 7 : | їі 5 їв го Е ОА, Пій т Ві ЕВ: : хх з ; їв - її й ІВ ' Кесіреєфсня ; 2 і х ї в : в : Бе | | ОА Ох ОТЖЕ, ! БІ Бе І щі І ! г : 5 Ек ; ох ГНЕ є, я КЇ зх і Її і І т ТЕ ще ч і Щі І ВЕ Це в : ' ще М ж р СЕЗ ї ше 1 КЕ ТЕН, ШІ ТЕ ві я шк. п пок Фі Е я ї Ж ХУ ЖЖ ж ів Я: | о ї і ; ї- кала ; | | : ї | : г - ! ких ІБ нен шоу і в і ЕІ НЕ писк ін, 7 5 | х ; пули кА ААУ М х нах. й т і пл дхуя що ; га ! едяи.

Креннаннмну -ї д оре? БУ У у У ща к й Я у лях. ; ' щі іх гН ж щ З З ' в Кс З 2 х їх З І хїь гемеу В 5 ; : : Я с У , жі «1 З с З ї ЯЗ І Е І ів і г іж ві ІВ 19 ший ! ак : З хо Ж - І

: де її хи ше ХЕ Я КА ЖК с т ек ря НВК арх я Ес Бі А М й Ба Кв Е й хх 5 Я УВІ хі їх ЖЕК хе с г ча ок ЗИ їжу ЗК хі Н рік їх ЛК ї Ї . БАБІ пня ЕК БЕ пд: Мет БІ щі ни ше | т їх ка Ка Су коса ЧИ що е : ж У з с В т декан У: ТІ Ек 13 т 25 ХОР 5 х ї Ж же З ж З МЕНА

ВІР. й ї ; ех ЖЕ ту По З Ех пиши ошіІпілтов, свй. На : б вікі а 1, ; от

Г т. я ще КТ й гя : її ж ЕК ІК ЕН ролу Ка : Ей р Ме ; Гм ї ; ЖІ с : Не З ж есе ї вла їх А ї се Е оБнннннни її Я 5 ТЕ ї се х-йї снкнкнн Кк Код ох Я щ ї г ІБ дреннннннянифеннння ї 5 КЕ жа я Ж їх : БО ШЕ рів НИ тка : Ії й БЕБІ ші З рожа : щи : НИ ваний ре КУ дала - Е х Ху Е В ВЕ Е Зх т ї Е ТЕХ : ІІ. ИН: З В ї ї ГЕ. Геї Ж Н ЗК Ї - чек о; ке : шОх жк ї І яр да ТЕО ж ОВ : Я ЖІ. : МЕ - в іє ї ЕЕ : КЕ : що о Не Ї дей : 5 ша: еВ о Я ї КУ з Н ОО: ВЖЕ. п со Її с ї х КК: ї : х ь Х 1 хі ОО а 8 В жк : к : цгеЗ : Ж рення ЕЕ ь : : Прояв ї ОК 3 й В: КО. их : ще Її ТК, КК: - М і Ко Її, ЗЕ: 1 3: й в. Я й КМ К ящу її з МЕ Ї 5: 2 да : 7 ЕК М ГЕ Ін сь, ше тя іі Зіщі дя Ії : Бе іш ів В: с от яке! ТЕ їж щі 1 В їх ; Ва: 1 х далефльмі В: - йо жа ЗЕ їх. Ух Я В: Е : зр З х з ї ТІ ЗЕ, їх кКї її В: з х : Зх ї - ї й х м ї : зе КО френння В ж ве Я х ї ШК Ві з диня їх Е: хв 19 тн -к В ї в : х -З - ОЗ Ь Ї У: гессоо опе ОКА ї йє їм и а Орфея ЕВ. бе Б шк п ВЕ ьня о Б Я І : жі їж: ге Ж. п сова, ще 185 Ще Ше ТЕО ше І є ї те р: їз пшж о. 5 преса ї «її і» : КЕ Пе 3 бе тях І ІВ жі: їх їж 3 хи КБ ї т а: Зк : НІ я їх ше ОВ а х І ; Я Е-ШЩУ ЖАХ и з ЛІ кхи ї ; Ж щі З: хі їх 1 УК ТМТУ ріс ещк ї як В: Ж НІ 3 пКкккнккККККК ТВ і Фюдняни ЩА В «са | ро ї т Г В: Во прЕ: М ї яю ш ї Я Ж: песогоо во 1 ка пе їі їх ї ЖЕ, ЕН Ж пок Тк Корі р тив ЕЕ ТЕ 5 ї ш З Ї В ЕІ Ро ех оф ре т- ЕН ТЕ в ї ле У Еш К | Жим Поля 1 ТМ 185 Еш за | ТП ТЕЖ їх 1 бланниї фор Пе жі яз ї як КИ З Ж «і ВЕ жі г. сен Еш Я 1 ПА БЕся іш щі З З т як 7 ІЕЕ В ! тт В пав В Ін і о ен ТЕ Коса кох тт ї Ж з К м, сх ї ше х ШЕ іже РО рова в СО, їх і з В Ії ьо пеухетьрееттуєиьк У х І регати У . І : : срежтстрееемутииех я хе ші. КО УЖ рееерееерентн шк сю ма зі ре взає шо с во че Ба Я СІВ ЕЕ ї Фосетння сени киева жено: сок да ке є ж ї ер Учити - шу з їй 3 ОО г то з с с то є ї ж КБ - 7 - -2х У і са ї ай щ сесю ге їн ї МІЖ Са ща З зо а т що їй хо ї Ж щі го у й а ш Б ? ї бе геї й У Є с й У хоч, щу зе -Щ8 ОК «г ї «КЕ: З ї-З я С - СХ ї. 5-8858 зве о АВ їі щі 1 са , - ок 18 Я чес ї їх І Еко : ї Б : ВІ х дю рек» ї г ж їі1Ж 5 т : Ії : пенні 7 хе ї - Ї - : ши

Фіг. 9-2

МКУ ю Шнижиженннаниника сезонна б 205 1 245 кт сть закаіивати Кефае терну функціо УНК каз: панни ІМКлБ3 "нини ІчКазо "нинннинннннни учкаа в! ЗМК Никон омкУ7е петанк ІМк352 нини нмісю Поновити ппобо нини ніс?2 нови Ісав нен ІМЕ2ОВ окт 224 нежжинннаниних оз нини ІМЕ2БО низин ІМЕ23 нини ОМЕ2І Мини таза зни Аекищнієкь зафуюати касфак» торнву функці. КУЩІ ріг. 10 0 КомпютернаверсткаВ. Мацелої 00000000 "ДО "Український національний офіс інтелектуальної власності та інновацій", вул. Дмитра Годзенка, 1, м. Київ -- 42, 01601.