NL8202885A - Preparaten met een werking tegen virussen en methoden en produkten waarbij van dergelijke preparaten gebruik wordt gemaakt. - Google Patents

Description

ι V-. α - 1 - r ·. ι

Preparaten met een werking tegen virussen en methoden en pro-dukten waarbij van dergelijke preparaten gebruik wordt gemaakt.

De uitvinding heeft betrekking op een klasse van 5 preparaten met een werking tegen virussen die erg doeltreffend zijn tegen gewone ademhalingsvirussen, z.oals rhinovirussen, parainfluenzavirussen en adenovirussen en op methoden en produkten waarbij van dergelijke preparaten gebruik wordt gemaakt. De uitvinding heeft in het bijzonder betrekking op een 10 nieuw type virucidaal preparaat, dat op verschillende substra- ten, zoals cellulosevliezen, niet geweven strukturen en mate-rialen op textielbasis , kan worden aangebracht. Bovendien kan de groep virucidale preparaten waarop deze uitvinding betrekking heeft eveneens worden opgenomen in neussprays, 15 gelaatscreme's, handlotions., lipsticks en overeenkomstige kosme- tische preparaten. De preparaten kunnen eveneens worden aange-wend als bestanddelen in reinigingsmiddelen voor keukens en badkamers, poetsmiddelen voor meubels en vloeren en overeenkomstige preparaten voor de huishouding..

20 Virologisten, erkend op het gebied van ademhalings virussen, zijn het er in het algemeen over eens dat rhinovirus-sen, influenzavirussen en adenovirussen tot de belangrijkste groep van pathogene middelen behoren die ademhalingsziekten veroorzaken. In het bijzonder rhinovirussen worden de belang-25 rijkste veroorzaker van wat in het algemeen bekend staat als een gewone kou beschouwd.

De uitdrukking "rhinovirusweerspiegelt de ont-wikkeling van de neus die leidt tot overvloedige neusontladingen indien infekties door deze groep van virussen worden veroor-30 zaakt. Bhinovirussen horen tot de picornavirus familie van virussen die, bij gebrek aan een uitwendig omhulsel, vaak worden gekarakteriseerd als naakte virussen. Hoewel meer dan 100 verschillende antigene typenvan rhinovirussen bekend zijn, bezitten ze gemeenschappelijk bepaalde, algemene belangrijke 3202885 ♦ - 2 - eigenschappen. Zo hebben ze bijvoorbeeld alle tegen ether be-stand zijnde capsiden en ze bevatten alle enkel-streng ENA (pngeveer 2,6 x 10 daltons). Verder worden ze alle moeilijk door gewone kiemdodende middelen, zoals kwaternaire ammonium-5 verbindingen, geinaktiveerd.

Onder adenovirussen vallen meer dan dertig antigene typen. Indien ze in het ademhalingsstelsel komen, veroorzaken ze ontsteking van de weefsels, hetgeen tot symptomen van pharyngitis, bronchitis enz. leidt. Hoewel de meeste adenovirus infek-10 ties in de kindertijd plaatshebben, zijn infekties van volwas- senen verre van ongewoon. Evenals rhinovirussen, ontbreekt bij adenovirussen een membraanomhulsel, doch de adenokernen bevatten in tegenstelling met de rhino-kernen een dubbelstreng DM. Adenovirussen zijn buitengewoon bestand tegen inaktivering. 15 Parainfluenzavirussen behoren tot de paramyxovirus familie. Ze spelen een belangrijke rol in het voorkomen van ziekten van de onderste luchtwegen bij kinderen en van de bovenste luchtwegen bij volvassenen. De parainfluenzavirussen zijn MA-bevattende virussen met een voor ether gevoelig lypo-20 proteine omhulsel dat het nucleocapside omgeeft. Deze virussen zijn bestand tegen inaktivering door lage concentraties van carbonzuren.

Recent werk van Dick en anderen /Dick, E.C. en Chesney, P.J., "Textbook of Pediatric Diseases, Feigin, R.D. en 25 Cherry, J.D. ed., Vol. II, biz. 1167 (19δ1) W.B. Saunders Pub. Co., Phila., PA/ heeft veel licht geworpen op de vijze van overdracht van ademhalingsziekten veroorzaakt door rhinovirussen. Hoewel de precieze wijze van overdracht van ademhalingsziekten niet geheel bekend is, hebben veldstudies door 30 de hiervoorgenoemde onderzoekers overtuigend aangetoond dat het doeltreffend overdragen van ziekten, zoals een gewone kou, gewoonlijk een dichte nadering of kontakt, direkt of indirekt, van het geinfekteerde objekt en het potentiele slaehtoffer vereist (indirekt kontakt kan worden opgevat als 35 een kontakt dat via een intervenierend oppervlak, bijvoorbeeld 8202885 5 * - 3 - tafelblad of deurknop enz) plaatsvindt. Het zal dus mogelijk zijn de keten van infektie te onderbreken en zijn vermogen tot verspreiding te verminderen, indien de virussen door onmiddel-lijk blootstellen aan een virucidaal middel onwerkzaam gemaakt 5 kunnen vorden zodra ze door de neus van een geinfekteerd per- soon vorden afgegeven. Bovendien kunnen, na het tot uiting komen, virussen die zich in het gelaat of de handen van een geinfekteerd persoon verbergen eveneens vorden gedood indien een geschikt kiemdodend middel snel in kontakt vordt gebracht 10 met het geschikte oppervlak van het lichaam, dat vil zeggen gezicht, handen enz. Een veefsel of doek bestemd voor het gelaat, dat een snelverkend, doeltreffend virucidaal preparaat bevat, vormt een geschikt middel voor hetvoldoen aan de hiervoor-vermelde doelstellingen.

15 Er bestond langdurig behoefte aan een veilig en v goedkoop virucidaal middel dat doeltreffend is tegen de gevone virussen van het ademhalingsstelsel of luchtvegen. Een-voudige, in de huishouding toegepaste, kiemdodende middelen zijn niet doeltreffend tegen rhino- en adenovirussen.

20 In het Amerikaanse octrooischrift U.0^5-36^4- ten name van Richter is een vegverpbaar papierprodukt geimpreg-neerd met een jodofoor (dat vil zeggen jodium en een drager) met kiemdodende eigenschappen beschreven, dat bruikbaar is als voorvasmiddel bij een chirurgische routinevasbehandeling. In 25 dit octrooischrift is opgemerkt dat de stabiliteit van het jodo foor vordt vergroot bij een lage pH en dat kleine hoeveelheden van zvakke organische zuren, zoals citroenzuur of azijnzuur, ter regeling van de pH kunnen vorden toegevoegd. In het Amerikaanse octrooischrift 3.881.210 van Drach en medeverkers is 30 een van tevoren bevoehtigde afneemdoek voor sanitaire doel- einden, die een bactericide kan bevatten, beschreven. Het Amerikaanse octrooischrift 3.65^.165 van Bryant en medeverkers heeft betrekking op een reinigingsmiddel-hygienisch verzorgings-middel voor afneemdoeleinden met jodium' met een 35 bactericideverking beschreven. Yerder heeft het Amerikaanse oc- 8202885 -u- trooischrift 3.567*118 van Shepherd en medewerkers hetrekking op een vezelmateriaal voor reinigings^doeleinden met een hekleding van een hydrofiel aerylaat of methacrylaat dat onder andere een bactericide bevat.

5 Hoewel in de stand der techniek is beschreven dat jodiumpreparaten en -produkten een virucidaal effekt met een ruim spektrum bezitten, moest er nog commercieel een goedkoop produkt worden ontwikkeld dat met succes de verspreiding van virussen, zoals het rhinovirus of influenzavirus, tegengaat.

10 Moeilijkheden met jodium zijn bijvoorbeeld het gevolg van de toxiciteit ervan en het feit dat het een primair irriterend middel voor dierlijk weefsel is. Deze werking is niet-selektief voor de proteinen van bacterien of van zoogdieren en het onge-doseerde gebruik ervan op de huid kan zweren veroorzaken.

15 Bovendien kan de aktiviteit ervan worden verminderd of worden tegengegaan door de werking van biologische vloeistoffen, zoals bloedserum. Pogingen jodium te modificeren teneinde deze moeilijkheden te vermijden, zijn niet geheel succesvol geweest.

Er zijn in de literatuur verwijzingen naar de bac-20 tericiae werking van zuren, zoals citroenzuur, £bijvoorbeeld,

Beid, James D., "The Disinfectant Action of Certain Organic Acids", American Journal of Hygiene, 16, 5^0-556 (1932)J. De virucidale werking verschilt echter fundamenteel van bactericide werking^ omdat virussen en bacterien versehillende micro-25 organismen met versehillende eigenschappen zijn. Zo repliceren virussen bijvoorbeeld niet buiten gastcellen en bacterien vel. Kwaternaire ammoniumverbindingen, zoals benzalkoniumchloride, zijn vaak doeltreffend tegen bacterien, doch niet tegen virussen, zoals de versehillende rhinovirussen.

30 Hoewel het bekend is dat rhinovirussen labiel zijn ten opzichte van waterige oplossingen van zuren onder lage pH omstandigheden /bijvoorbeeld Davis, B.D. en medewerkers; "Microbiology" biz. 1303. Harper E. Row (uitgevers) New York, 1973 en Rueckert, R.R., "Picornaviral Architecture" Comparative 35 Virology- Academic Press, New York (1971)9 biz. 19^-3067, maken 8202885 J Λ - 5 - bekende referenties geen melding van het toepassen van dit concept in epidemiologisch verband, zoals onderbreking van de keten van infektie veroorzaakt door rhinovirussen. Het enige systematische onderzoek van de virucidale werking van organische 5 znren (citroenzuur, appelzuur enz) dat in de algemeen besehik- bare literatuur voorkomt werd uitgevoerd door Poll, Biondi, Uberti, Ponti, Balsari en Cantoni /Poll, G. en medewerkers: "Yirucidal Activity of Organic Acids" Food Chem. (England) k(k)251~8 (1979)7· Deze onderzoekers vonden onder andere dat citroenzuur, appelzuur, 10 pyrodruivenzuur en barnsteenzuur, doeltreffend zijn tegen herpesvirussen, orthomyxovirussen en rhabdovirussen (Rabies virus). Hun proeven werden met waterige oplossingen van de zuivere zuren uitgevoerd bij kamertemperatuur. Er werd geen substraat of drager gebruikt. De drie virussen die door deze 15 onderzoekers voor het onderzoek werden uitgekozen waren alle door membraan omhulde virussen, die in dat verband gelijken op parainfluenza 3. Poli en medewerkers namen eveneens waar dat deze zuren niet doeltreffend zijn tegen adenovirus, dat , zoals reeds eerder werd opgemerkt, een naakte virus is. Op 20 grond hiervan werd geconcludeerd dat deze zuren doeltreffend zijn tegen door membraan omhulde virussen, doch niet tegen de naakte virussen.

Deskundigen weten dat adenovirussen bestand zijn tegen zuren.

25 De onderhavige uitvinding verschaft een virucidaal produkt, preparaat en methode die zeer doeltreffend zijn voor een breed spektrum van virussen en toch zonder bezwaren bereid en toegepast kunnen werden. Het voorgaande is gebaseerd op de vondst dat carbonzuren, zoals citroenzuur, appelzuur en barn-30 steenzuur, in een geschikte drager, niet alleen doeltreffend zijn tegen bepaalde, door een membraan omhulde, luchtwegvirussen, doch eveneens tegen rhinovirus, een naakte virus. Bovendien zijn ze in aanwezigheid van een oppervlakteaktief middel, zoals natriumdodecylsulfaat, eveneens werkzaam tegen adenovirus. Boven-35 dien kunnen onder de produkten volgens de uitvinding eveneens 8202885 - 6 - een substraat , zoals een weefsel bestemd voor het gelaat of een niet geweven vlies, waarin dergelijke preparaten zijn opge-nomen, vallen. Volgens de uitvinding wordt een doeltreffende hoeveelheid van een dergelijk preparaat in kontakt gebracht (via deze prodfeten) 5 met het aangetaste gebied. In het algemeen kunnen deze prepa raten zonder moeilijkheden worden gehanteerd en leiden niet i tot schadelijke effekten indien ze volgens de uitvinding -worden aangewend. Bovendien hebben de preparaten, toegepast op een substraat, zoals een weefsel bestemd voor het gelaat, geen 10 of -weinig schadelijke effekten op de kleur, geur, sterkte of andere belangrijke eigenschappen. De produkten kunnen worden toegepast als een droge afneemdoek doch ze kunnen eveneens vochtig worden gehouden en als bijvoorbeeld een vochtige afneemdoek worden toegepast.

15 De onderhavige uitvinding is het resultaat van de verrassende vondst dat bepaalde zuren, zoals citroenzuur, appel-zuur, barnsteenzuur en benzoezuur, toegepast in geschikte con-centraties en op de wijze als hierna verder is beschreven, zeer doeltreffend zijn tegen de rhinovirussen 16, 1A en 86 en 20 parainfluenza 3. Toegepast in aanwezigheid van een oppervlakte-aktief middel, zoals natriumdodecylsulfaat (SDS) blijken deze zuren eveneens doeltreffend te zijn tegen adenovirus 5· (De voor onderzoek gekozen speciale virussen, dat wil zeggen RV-16, RV-IA, RV-86, Para-3, en Adeno-5, zijn representatief voor hun 25 klassen). In het algemeen zullen de carbonzuren die bij de uitvinding kunnen worden toegepast formule R-C00H hebben, waarin R een lage alkylgroep (1-6 koolstofatomen), een gesubstitueerde lage alkylgroep, /bijvoorbeeld een door hydroxyl gesubstitueerde lage alkylgroep (bijvoorbeeld CH^CHOH-), een door carboxyl 30 gesubstitueerde lage alkylgroep (bijvoorbeeld H00C-CH -CH -), een door carboxyl en hydroxyl gesubstitueerde lage alkylgroep (bijvoorbeeld EOOCCH^CROH-), een door carboxyl en halogeen gesubstitueerde lage alkylgroep (bijvoorbeeld H00CCS CHBr-), een door carboxyl en twee hydroxylgroepen gesubstitueerde lage 35 alkylgroep (bijvoorbeeld H00C-CH0H-CH0H-)?een door twee carboxyl 8202885 - 7 - en hydroxyl gesubstitueerde lage alkylgroep,

OK

(bijvoorbeeld HOOC-CH^C-CH^-).

ίίΟΟΗ 5 een lage alkenylgroep, een door -carboxyl gesubstitueerde lage alkenylgroep (bijvoorbeeld H00CCH=CH-), een door twee carboxyl-groepen gesubstitueerde lage alkenylgroep

COOH

io S.

(bijvoorbeeld H00C-CH^C=CH-), een fenylgroep, een gesubstitueerde fenylgroep (bijvoorbeeld een door hydroxyl gesubstitueerde fenylgroep HO-CgH^-) enz , 15 kan zijn. De hiervoorgegeven defenities dienen slechts ter toelichting en zijn niet beperkend.

Het oppervlakteaktieve middel kan niet-ionogeen zijn (bijvoorbeeld de gepolyoxyethyleneerde alkylfenolen, zoals TRITON X-100 van Rohm en Haas, de gepolyoxyetty leneerde 20 sorbitolesters zoals TWEEN W^van ICI United States, Inc.), kationogeen (bijvoorbeeld cetylpyridiniumchloride. (C^H^^iCH^)^-CH^Cl-) en methylbenzethoniumchloride

Me h 25 (Me3CCH2C(Me)2-C6H3(Me)-OCH2CH2OCH2-CHj-CH2C6H5 Cl )

Me of anionogeen (bijvoorbeeld natriumdodecylsulfaat (CH^CB^) CH20S03-Na), de 1 ,i+-bis(2-ethylhexyl) ester en het natriumzout 30 van sulfobarnsteenzuur, van de American Cyanamid Company onder de handelsnaam AEROSOL 0TV De aanbevolen anionogene oppervlakteaktieve middelen kunnen worden voorgesteld door de formules 35 1. (R0S0 ) M+

j X

8202885 - 8 - waarin Μ een een-, twee- of driewaardig metaalkation of een ammonium-of gesubstitueerd ammoniumion, x een geheel getal en R een alkylgroep voorstellen.

f jWl \ 5

\03S-CEC02E2 j X

waarin M+ en x de hiervoor gedefinieerde betekenissen hebben 10 · ... . . . .

en R^ en R , die al of met gelijk kunnen zijn, een alifatische groep met rechte of vertakte keten kunnen voorstellen. Opper-vlakteaktieve middelen zijn in het algemeen, alleen toegepast, niet virucidaal ten opziehte van de naakte virussen, zoals rhinovirus.

1C .

J Hoewel de uitvmdmg met beperkt is tot het gebruik van een celluloseweefsel (zoals een weefsel bestemd voor behande- ling van het gelaat, weefsels voor de badkamer, handdoeken enz) als het substraat of de drager voor virucidale middelen, wordt

met een weefsel bestemd voor behandeling van het gelaat geimpreg-PO

neerd met deze nieuwe virucidale middelen m voldoende mate het basisprincipe van de uitvinding toegelicht en dit vormt een eenvoudige en bruikbare uitvoeringsvorm van de uitvinding. Daarom werden de hiernavolgende onderzoekingen uitgevoerd met weefsels bestemd voor behandeling van het gelaat als substraat. Voorbeelden van geschikte niet-geweven substraten zijn vochtige afneemmaterialen, zoals vochtige crepe handdoeken en door spinnen gebonden en smeltgeblazen polymere weefsels die gewoon-lijk bij het vervaardigen van materialen die bestemd zijn voor het hospitaal, zoals chirurgische kleding, kussenslopen, lakens, mantels enz, worden toegepast. Alle soorten textielmaterialen, waaronder laminaten van verschillende materialen, kunnen even-eens als geschikte substraten worden aangewend. Zo zijn bij-voorbeeld hygienische gelaatsmaskers voor personen die lijden aan ziekten van de luchtwegen uitstekende voorbeelden ^ waarbij de onderhavige uitvinding kan worden toegepast. Andere 8202885 - 9 - dragers zullen aan deskundigen duidelijk zijn en kunnen bijvoor-beeld bestemd zijn als lotions, sprays, creme's , reinigings-middelen enz.

Algemeen gesproken was de methode voor het bereiden 5 of vervaardigen van de in de hiernavolgende voorbeelden toege- paste monsters eenvoudig en verliep zonder komplikaties. Drie maal gevouwen KLEENE^ gezichtshanddoeken (27,5 x 30,0 cm, 2 basisgewicht ongeveer 26 lb/2880 ft. voor alle drie omgevouwen delen tezamen) werden door eenvoudig onderdompelen geimpregneerd 10 met -waterige oplossingen van citroenzuur, appelzuur, barnsteen- zuur en benzoezuur. De zuren werden hetzij afzonderlijk, hetzij als een homogeen mengsel toegepast. C-ewoonlijk bevatte de impregnerende oplossing eveneens een gering percentage van een oppervlakteaktief middel, zoals Aerosol-OT -/bet natriumzout 15 van de 1 , Wbis(2-ethylhexyl) ester van sulfobarnsteenzuur, van

American Cyanamid/, of natriumdodecylsulfaat. Ter verbetering van de zachtheid van het weefsel werd eveneens gebruik gemaakt van een geringe hoeveelheid glycerol. De verzadigde weefsels werden tussen walsen uitgeperst teneinde de overmaat van de 20 vloeistof te verwijderen en een gelijkmatige verzadiging te verzekeren. De weefsels werden gewogen, gedroogd en de mate van verzadiging (dat wil zeggen het percentage dat ter verzadiging was opgenomen) werd berekend. De weefsels waren daarna gereed voor onderzoek op de virucidale werking.

25 De toegepaste methode voor het onderzoek van de virucidale werking was volgens standaard virulogische onder- zoekmethoden (TCIDrn) met eenvoudige variaties, die nodig waren 50 door de aanwezigheid van het cellulosesubstraat.

30 Hier volgt een beschrijving van de toegepaste methode:

Virucidale onderzoek-methode I. Materialen: A. Oplossingen: 1. Neutraliserehde oplossing ml 2 M Na^HPO^ 35 8202885 -ΙΟΙ ,2 ml 1,0 Μ citroenzuur 92,4 ml 1X Medium 199 (voedings-medium voor weefselkultuur) 5 2. Hank's - Mcllvaine zoutoplossing (HMSS): 2.0 ml 1,0 citroenzuur tot 2 1 verdund met de evenwichts- zoutoplossing volgens Hank 18.0 ml 2,0 M steriel Ha.HPO, .

2 4 de pH van deze oplossing is 7,0 10 3. Hank's evenwichtszoutoplossing: (g/l in tweemaal gedestilleerd water) HaCl 8,0 KC1 0,4 15 MgS0^.7H20 0,2

CaClg (watervrij) 0,14

KagHPO^.aHgO 0,06 KH2P°4 (watervrij) 0,06

Glucose 1 ,0 20 Fenol-rood 0,005

NaHC03 0,35

Opmerking: de hi e rvo orb e schreven oplossingen zi-jn niet viruci-daal.

25 B. Virussen en weef selkultuur celli.jnen: 1. Rhinovirus type 16, type 1A en type 86? Rhinovirus typen 16, 1A en 86 (respektievelijk RV-16, 1A en 86) werden gekweekt in Ohio State HeLa (0-HeLa) weefselkultuurcellen en bij -51° C 30 opgeslagen totdat zij werden gehruikt. Het virucidale onderzoek met de rhinovirussen werd uitgevoerd onder toepassing van 0-HeLa weefselkultuurproefbuizen die bij 33° C waren geinkubeerd in een ronddraaiende trommel.

35 8202885 -11-

t I

2, Parainfluenza type 3: Parainfluenza type 3 (para 3) werd gekweekt in kultuurcellen ran nierweefsel van rhesus-apen en bij -51° C opgeslagen totdat het werd gebruikt. Het virueidale onderzoek met Para 3 virus werd uitgevoerd onder toepassing 5 van 0-HeLa weefselkultuur proefbuizen die stationair waren ge- inkubeerd bij 33° C.

3. Adenovirus type 5· Adenovirus type 5 (Adeno 5) werd gekweekt in kultuurcellen van HEp-2 weefsel en bij -51° C opgeslagen 10 totdat het werd gebruikt. Het virueidale onderzoek met adeno 5 virus werd uitgevoerd onder toepassing van Human Epitheleal Carcinoma — 2 (HEp-2) weefselkultuur proefbuizen in een statio-naire toestand geinkubeerd bij 3T° C.

15 II. Methoden.

A. Virucidaal onderzoek:

Men bereidde een mengsel van gelijke volumedelen virus en speeksel. Uit een Kimberly-Clark KLEENE]^weefsel 2 . .

sneed men een monster van 6,25 cm en bracht dit m een Petn-20 schaal van kunststof (een behandeld weefsel is een weefsel dat geimpregneerd is met het te onderzoeken virueidale middel),,Het mengsel van virus en speeksel (0,1 ml) werd direkt op het monster gepipetteerd en men liet dit 1 minuut inwerken. Opgemerkt wordt.dat dit een tweevoudige virusverdunning is. Ha 1 minuut 25 pipetteerde men 5 ml neutraliserende oplossing op het monster in. de Petri-schaal en roerde 3 seconden. Dit is nu een honderd-voudige virusverdunning. Het mengsel van neutraliserende oplossing, virus en speeksel werd daarna uit de Petri-schaal gepipetteerd en toegevoegd aan een buis die 5 ml van een Hank's-30 Mcllvaine zoutoplossing bevatte. Het monster werd nu in dezelfde buis gebracht door tegen de schaal te tikken en met de punt van de pipet het monster in de buis te duwen. De buis bevatte de 10 ml oplossingen en het monster werd 30 seconden rondgedraaid. • -2 3

Deze buis bevatte een 10 5 of 1:200 verdunning van het virus.

-2 3 35 Van de 10 ’ verdunning werd een reeks tienvoudige verdunningen 8202885 -12- (met een verse pipet voor elke verdunning) bereid door 0,3 ml van de voorgaande verdunning te nemen en deze toe te voegen aan 2,7 ml van de Hanks' - Mcllcaine zoutoplossing. 0,1 Ml werd geent in elke proefbuis van de weefselkultuur. In het alge-5 meen werden twee buizen per verdunning geent.

Voor elk onderzoek werden twee reeksen kontroles toegepast, De eerste kan "de virus kontrole" worden genoemd, aangezien deze ten doel heeft het infektievermogen van de virussuspensie zelf, zonder speeksel of weefselsubstraat, te 10 kontroleren. De virussuspensie werd in HMSS in een tienvoudige reeks verdund. 0,1 Ml van de specifieke verdunningen werden per weefselkultuurcel-proefbuis geent. De informatie die uit deze kontrole werd verkregen gaf het aantal infektueuze virus-eenheden dat in de virusoplossing , die bij -51° C was opge-15 slagen, aanwezig was en verzekert dat een evenredig gedeelte van de virusoplossing dat bij de proef werd gebruikt tijdens het vriezen, opslaan of ontdooien geen infektievermogen had verloren.

De tweede kontrole, "de weefsel kontrole", berustte 20 op het uitvoeren van een virucidaal onderzoek onder toepassing van 6,25 cm^ onbehandeld KLEENE]F^weefsel. De informatie verkregen uit deze kontrole gaf het aantal infektueuze virus- eenheden dat uit een onbehandelde afveegdoek met een oppervlak van 6,25 cm volgens de virucidale onderzoekmethode kan worden 25 gewonnen. De geente weefselkultuurbuizen werden voor het aan- tonen van een virale infektie gedurende 7 dagen geobserveerd.

Het eindpunt van een virucidale proef voor een bepaalde afveeg- doek is die verdunning van de virus die slechts een van de twee geente buizen infekteert. Dit getal wordt gedefinieerd 30 als de weefselkultuurinfektiedosis of TCID . De resultaten van de virucidale werking van een bepaalde afveegdoek worden gewoonlijk uitgedrukt als het "log verschil" tussen de gewone log van het TCID resultaat van het behandelde monster, afge-50 1 'trokken van de gewone log van het TCID ^ van het onbehandelde 35 monster.

8202885 Γ -13-

De virueidale werking van een monster kan op de volgende wijze van het "log verschil" worden afgeleid: Λ-Μ 5 Virucidale verking = / - 100 % \ x 1 vaarin X = de beginconcentratie van het virus (infektueuze 10 eenheden/0,1 ml) van het van het onbehandelde monster dat als kontrole werd gebruikt.

Y = de eindconcentratie van het virus (infektueuze eenheden/0,1 ml) van het' behandelde monster.

15 In de volgende voorbeelden is de berekeningsmethode toegelicht (bij deze proeven is de viruseindconcentratie altijd gelijk aan of minder dan 10 3 infektueuze eenheden/0,1 ml).

Voor het grootste gedeelte van de verkregen resultaten is 2 3 de viruseindconcentratie minder dan 10 * , Met een virus- 6 3 20 beginconcentratie van 10 3 duidt dit op een log verschil groter dan U en een percentage doding groter dan 99»99 %)· 6 3 1. Beginconcentratie: X = 10°’ 2 3

Eindconcentratie: Y = 10 3 25 Log verschil = (log 10^>3 - log 102’3) = i| /106’3 - 102’3 \

Virucidaal rendement = (— -7—5-/ x 100 % V 10 3^ y fo2,3(io^ ~ 1) \ _ = (—-z-z- x 100 %

30 V 10β,3 J

= 99,99 % 1+ 8 2. Beginconcentratie: X = 10 3 35 8202885 -1U-2 3

Eindconcentratie: Y = 10 ’

Log verschil = 2,5 /M _ 2>3 \

Virucidaal rendement = (-;—5- x 100 $

\ ioM J

c = 99,7 % ?

De hiervooijbeschreven methode is in overeenstemming met standaard microbiologische onderzoekmethoden. Hiermede worden binnen de variatiegrenzen die Terbonden zijn aan biolo-gische proeven betrouwbare en reprodueeerbare resultaten ver-kregen.

Resultaten.

De resultaten zijn weergegeven in de tabellen A, B en C. Uit de gegevens in tabel A blijkt, dat eenvoudige or-ganische carbonzuren, zoals citroenzuur, appelzuur, wijnsteen-zuur, barnsteenzuur en derivaten daarvan (bijvoorbeeld 2-broom-

M

barnsteenzuur) en benzoezuur en de derivaten daarvan (salicyl- zuur), toegepast in een weefsel bestemd voor ’net gelaat in geschikte concentraties een krachtige virucidale werking tegen rhinovirus 16 en parainfluenza 3 uitoefenen.

Bovendien blijkt dat, indien ze tezamen met een oppervlakteaktief middel, zoals Aerosol 0T of natriumdodecyl- sulfaat, worden toegepast, de concentraties van de zuren in het weefsel bestemd voor het gelaat, zonder dat de virucidale 25 & ’ werking wordt opgeofferd;kunnen worden verlaagd.

In tabel B zijn de resultaten van proeven met * ·* zuurmengsels gekozen uit de groep citroenzuur, benzoezuur, barnsteenzuur en appelzuur opgenomen. Uit deze gegevens blijkt, dat weefsels bestemd voor het gelaat behandeld met de zuur-3° mengsels een virucidale werking tegen rhinovirus 16 en parainfluenza 3 uitoefenen. Uit de gegevens opgenomen in tabel B blijkt dat een weefsel bestemd voor het gelaat geimpregneerd met een systeem van gemengde zuren, zoals citroenzuur en appelzuur en ^ .een geschikt oppervlakteaktief middel, zoals SDS, doeltreffend 8202385 -15- is tegen rhinovirus 16, 1A en 86 en adenovirus 5· Deze voor-beelden tonen aan, in overeenstemming met de uitvinding, dat eenvoudige organische zuren, zoals citroenzuur, appelzuur, barnsteenzuur,toegepast tezamen met een geschikt oppervlakte-5 aktief middel, zoals SDS, krachtig virucidaal werkzaam zijn tegen gewone ademhalings- of luchtwegvirussen, vaarvan rhino-virus 16, 1A en 86, parainfluenza 3 en adenovirus 5 kenmerkende voorbeelden zijn. Bovendien zijn produkten die gebruik maken van de -weefsels bestemd voor het gelaat als middel voor het 10 toepassen van de genoemde preparaten met virucidale werking zeer doeltreffend.

De betekenis van de uitvinding berust op het feit de dat het/basis voor het onderbreken van de infektieketen ver-oorzaakt door ademhalings- of luchtwegvirussen verschaft. Aange-15 zien virussen zich niet buiten de gastcel vermeerderen, biedt de in de proeven aangetoonde mate van inaktivering een eenvoudige en praktische methode voor het verminderen van de virusconcen-tratie in de buurt van een persoon geinfekteerd met een ademhalings- of luchtweginfektie. Op zijn beurt zal dit veer in 20 aanzienlijke mate het vermogen van de infektie zich te ver-spreiden verminderen.

25 8202885 -16- β β ί> -ρ 0) οο Λ ft ο β β ·Η Φ 03 £ β β β φ Μ Γβ β -¾¾ -&S. -6¾.

0 -Ρ Η ^ ^ -Ρ Μ β 'Η ΟΝ ΟΝ ΟΝ ϊ φ β ι>- ονΟνον ,ββ g , r_j rv λ η Λ ρ CQ φ Clj Οι 0\ 0\ 0\ 3^

p r& u ο\ σ\ ο\ ο\ ?S

U ^rs • Η (D Q 'Ν ^ > H “ s 00 Η “ g β β β β β Ρ β Ν ft η η β ·Η & '5 φ ο ο ο rj r-J Η Η β no -R d Η Ή *— ^ Ρ • Η 03¾¾¾¾¾¾¾¾.¾¾.¾¾ -6¾¾¾¾¾¾¾¾¾¾¾ "β β β Ο β β β ΟΝ ΟΝ Ον ΟΝ ΟΝ ΟΝ 0\ ΟΝ ΟΝ ΟΝ ΟΝ ΟΝ β β β -honOnOnOnonon on on on On ο\ On ft |> η k* λ r* γ» λ λ λ c> «\ λ rv η λ Ο Ον Ον Ον Ον Ον Ον ΟνΟνΟνΟνΟνον Λ β β β 0\ ΟΝ ΟΝ 0\ ΟΝ ΟΝ ΟΝΟνΟνΟΝΟΝΟΝ Ο Ο Ο— •ri/N'N ^ s\ /\ η Λ m -Ρ νο Η β j=j J) -ρ Λ Η 03 03 ° rj> β 0) β

β Μ β S

•Η -Ρ Η -β 5 > ο Ο -6¾ Λί η <tj Ο Ο ft *Η b β Η ft F* 5 Η ·Η Ρ ·Η — U -β 0) βπ ^ γΟ ψ

XI β -Ρ ο ο I

Π3 β ft CO Μ CM

Eh -Ρ ρ φ Ρ Λ1 φ β ·Η CQ Ο ,β ·η -β 5Ρ j β ft β β --. β -¾¾ β β β β -Ρ Ρ φ ,- φ φ φ -¾¾ --· φ ^ φ φ φ φ β ι hr Ρ> φ φ ϊ^,φτ^ϊ^ι/νφφφφ φ ft- φ Λί Μ Μ r- bO « Μ Μ Β) Μ ο · κ _ρ ft — τ— CM τ- Ο β β ^ β h. β φ φ β Β CQ CO CO EH „ ft β φ ο π η η ο -ρ -β β ft <J CQ CQ CQ <! g N g* Λ.Η > f-ι ·- * β 03 φ . ---.¾¾ ΦΦ-Ρ φ p -¾¾ -6¾ ^ -6¾ ^¾¾ > Η +3 -¾¾¾¾^ ^--ΦΟ Η Μ CM C— Ο η LTN -¾¾ " 60+3 Ν

β β - - t— _^r cvj con ι -6¾^¾¾ ^ o S

Γβ COCO'''' —' - β — CO 03 .β Ρ β ο CM ΟΝ Ον Φ -=! Ο *- ΟΝ Φ ·Η β β — ββφ^-. " [j η - ^ -οββ 1> ft β β +3 -6¾ ΟΝ β --- X ο -Ρ ? ^|μ,£Η^ββθ3---β ββ 5°¾¾ Ρ> ft ββββΝΝ β-β- Ν β β Ρ β > β β X β ββββ βββ-'βββββ Ρ! , β φ β 03 0-]0003ΦΦβθβΦβθ3 03 -Ρ ft Ρ ft ββββφΦΡ'—βφ03ΗΗ Ρ Q Φ Η ρ ·Η ΦΦΦΦΡ·Ρ8^-1ο1-Ρ-Φ|>5ί=4 ΦΦΛ β φ ο Ο Ο Ο Ο 03 03 Ο H03OOCJ 03 Ρ 03 β ββββββθβφβ33*Η*Η ωω«Η Φ β +3-P-P-PPPPPft,rN>Pftft Ρ β h5 Η ·Η -Η ·Η ·Η ·Η β β Ρ β ft ·Η Φ β β -Ρ Ρ Ο β j> ΟΦΟΟΡΡ |03β>ρθ303 βΗΟ ft '3 φ φ ο β η Η Ρ a 1 Γ φ β Φ Ο β •Η Φ +3 ϊ Κ 'Γ1 C η Φ > Ο β ΐ Η ω Ά -Ρ _ρ Ο* Μ ΜΗ 1—I *Ρ W ^

φ ΟΟ Η Η 1> Η Η t1 ^ L, Η U

κ >βΗΗΗΗ>>> l>H!x!!x!|x| ftftft Ο 8202885 -17- ΡΠ Ν g -p S d 1) φ ϊ> Λ -Ρ ΰ <D d η t— t— b- ον σ\ t— b— £— on b- t— b— o On on o o -p m h a; ch o\ cr\ σ\ on σ\ σ\ o\ σ\ σ\ σ\ σ\ o\ t- t- in t— σ\ o\ σ\ σ\ ρ o φ §.HO.Ova\C^CT\Oi<^ONONONC^ONONa\C?NONC>iaNO.ON ·Η i> d pa chONO\0\o\o\o\o\o\ONO\o\Chwc?\maiO\CKO\ ? 3 d d λ /\ λ λ α./νλλ/\/^α^\Λ/'Λ1^·λ/χ/ν/ν s 5 Φ d ω § δ Μ « -Ρ -Ρ Ο Η VD Φ w a - ^ ω W Ρ rj ^ ρ Ρ ra s , d -n pi S φ •Η Ο ?4 p u;

j> p.HCF\0\ONO\Cr\0\0\0\0\Cr\a\C?\C!\0\0\0\0\0\C— t- M

£h t> ca σ\ σ\ o\ σ\ o\ o\ o\ o\ σ\ ca σ\ σ\ ca On on θ\ o\ σ\ σ\ ω 'η

ry\ , ^ Q ΛΛΛΛΛΛηΛΛ-ΛΛπηΛΛΛΛΛΛΟ »(-} (U

i> d OaCACACACAONCACACACACAO'iONCACACACACACACA Μ Φ d *h cACA0\CAcr\0\CA0‘\CA0\a\0\CAcr\CACF\CA0\CACA cd Is N ΙΕ!Α/'·Λ·ΛΛ·ΛΑΛ/ΝΛ/'ί'^.ΛΑ^ΛΛ.Α H jj | / & 1 ί! ώΗ § •H P g > d -H 0 “ £ s & s

Cw 03 d Φ g “ ω _ £ S ft .__si ° φ φ "P" — s ti

rn aJ) -p *—·. Lf\ CP, ft M

St; P ,- O cvj —· O P

£ φ "3 ^ v- ,- ,- ,- ,- t- r-τ- v- V- τ-0_ T- _0__r-r- g '—C^ P

OO .¾ ft d ο φ ο ο ο ο ο ο ο O Q O O O Q O O O O ><! Q ft d _, pq-H Η ρ<]<ι;<|<;<ι;<1<;·=ι!<!<ι!<ι!<ι!<ι1<!<!<!<1ΕΗ!ΏΕα g ft

Λ ft ft n P

H d 0| Φ jj .r-l ® t «) Id a B ^ § I a ft Λ B ^ ·Η d gp d u

S S <u -P S

φ φ d . h Φ^*ίΜ WOO O ^ g h ti

-P dd IIIII - ««IIIIIIIII “II

^ -p u 3 LP,lAtn LTN ^ Cd ω H

d M Cd d ftonfH

φ|ρΝ ^ ^ jj 75 ΰ Φ

g g ω.Η Η M

ft I * § ·£ φ ^ r-iod airocvJ^^ooovoonoo^tp-dM -P S1 hr πΐ q. ^ί· Illlltll «i·»·*·*·»*»·'·»·»! »««* <u Jd^,

c cdftd ΚΛΙΛ ΙΛ ΙΛ LA ΙΛ ΙΛ LlAPf- UA CT\ "S

φ$«Γν S *H t3Q ^ 0 φ o : ,_, , ρ &c d φ d S φ d o S o p<

rj ,_j jcq r, £4 O

cd b> dd CMCJWIMW OJcd|> +3 S > φ 3 « « « « « I I 1 I 1 1 ! I I I I I I I " rd φ PNOOOOO ^ -U H fl V· φ Φ d φ I CO -Ρ Φ S rd CQ m > φ φ d φ φ 'd Ο P> P Μ

p dP OOOO-ilAOOW'-vnr-VOOOCOP 'o3 ^ J

0) J_Dd o r — (X) r,^nnr,nor.nr>Ar,r<\[ p lH/P\ O d d d .Hp ooo ""Ooooooo'i-O’-o-d-cniAi φ αχ®) ο φ a U S r- T- T- tp-00 *- '"iW&J’T'i1"

_ι Η <h Ο 1 H

prd a φ m a -p an -ρ φ ft p> p ΦΡΟ&ΦΟ

Σ JJ H ttf) CQ Ο M-H

U Ρ Η H HH HpOEHN

Η ρ Η HH HH>HHH!x!HH ΦΦΡίΗΦΦ

d Ο · Η ί> HHHM HHHH>t>!>>HXXM PPM ft 'PM

8202885 -18- ΙΛ

rH

CO Φ pi w d 'η •η ο ο ο ον ον ο ο νο > ο\ σ\ c— ον σ\ ον φ 00 Ο r, * π γ, » * > d σ\ ον ον ον ον ον w φ ον ον ον ον ον ον -ρ pj rat Φ 5η d Λ •Η ί> νο 3 Ο -Ρ 03 d £ d ΐ>

•Η Φ CQ

Ρ δ d Ρ 5η Φ 5η Λ rat ·Η I 1 I I I ΟΝ Φ a £j j> Λ ·Η <; φ ο σ\ > ρ α σ\ φ

Ή .r\ tlO

Φ Η Λ d d 5π Ρ 5η d Φ •Η Ό Ρ ί> ·Η ο φ <: g d ρ* je •Η 5η ί> Ρ ·Η Μ 5η Ρ !> d w Η 5η Ή « Φ ·Η ΟΝ Φ NO +3 i> I I I I I d

CQ 0 ON fO

<D fl ON

w bO ·Η /\ ft pi -ρ Λ o 5h O 5h

• HO P

t> Η ·Μ Ο P £

d P

•H -p NO O

p pi r- 5h P, pi ft d m

o d -η d P

Φ g 5h ϋ t—I faC Ή co α)φι- }> onono\0\onon ·η ,Ο -Ο ο onononononon δ eg (D PJ nnnnnn φ

Eh CQ Ρ ·η ononOnOnOnOn rd

Od p onononononon φ CQ Φ 5h 5h

d pi P

Φ nd P

φ , ·Η g *3 I Φ g | - pS -s ra d -¾ ‘d bo

d -p 5 B

Φ 5h Ρ > Ρ Φ

rat ·Η d 5h Φ bO

t£ ί> rat a) ·ΗΡ CM CO CO CM CO O d

dO Ο Pi -P CQ PJ

Φ d 5h ftPCd CM CM CM CM CM CM dd δ Φ ft Ο d CQ od φ raj φ d bJO cD rH ?h

ri I ω -P

d d d h ft it do rat ο φ ·η a 5h la t- ro in b- o p *h -p

Q Q, a n a a r» n (DN CD

+3 drod ΙΛ 1Λ 1Λ ΙΛ LA ΙΛ p Φ d

Ρ 5h N bo P

φ -H d H

tp j> ] o -p d Ρ d > Φ ω

(DO Φ P H

0 bO >5 rH 5h?h oOCM-d-cOCMO 5h Φ d -Pd ηΛΟΓ,Λη do o d ·η d o^-^-or-o oo *2 raj ora v— t— r—T— v— -I— I ! |> Ο

•Η HP

o rat d raj |

d Η Ρ δ P

C Φ Η Φ Φ *H

.ρ Φ H HHbOP5n

> p Η > Η Η H CO -P

Ρ η H i> !> > > ΦΦ d φ oo M jxj « £<j t*j hi 'dp d id °d 1¾ hi R hi 1¾ 1¾ d p 8202885 I « -19-

Teneinde meer in het bijzonder de verbeterde effekten verkregen volgens de uitvinding toe te lichten, werden extra voorbeelden uitgevoerd waarbij de concentratie van ge-kozen zuurpreparaten werden geyarieerd en de virucidale werking 5 bij 1 en 5 minuten werd gemeten. Deze resultaten zijn samenge- yat in tabel D. In het algemeen zijn de zuurpreparaten yolgens de uitvinding in hoge mate virueidaal werkzaam, bijvoorbeeld in het geval van rhinovirussen of parainfluenza's brengen ze een log-daling van 2 of een grotere inaktivering in 1 minuut of 10 korter t ewe eg.. Voor adenovirus sen zal de tijd 5 minuten of kor- ter zijn. In het algemeen is de mate van inaktivering na 5 minuten groter dan na 1 minuut, zoals te verwachten is. In de ver-melde resultaten komen bepaalde kleine inconsequenties voor, die te wijten zijn aan de foutengrens en de wijze waarop het 15 onderzoek werd uitgevoerd. Het zal deskundigen duidelijk zijn dat de doeltreffendheid eveneens wordt beinvloed door de hoeveelheid preparaat die beschikbaar is voor het kontakt met de virus die, weer afhangt van de aard van de drager. Zoals bijvoorbeeld uit de hierna.volgende tabel D blijkt kan een 20 betrekkelijk dikke drager met grote ledige ruimten, zoals wol, ondoeltreffend zijn, tenzij ze met grote hoeveelheden van het preparaat wordt behandeld. Aan de andere kant zal een lichtgewicht, betrekkelijk gesloten struktuur, zoals een weefsel of niet-geweven materiaal, minder preparaat vereisen. Op basis 25 van de beschreven proeven kan de doeltreffendheid van een be paalde kombinatie van preparaat en drager worden bepaald.

Zoals bijvoorbeeld uit tabel D blijkt is citroenzuur doeltref-fend in eoncentraties onderzocht van 5~10 % toevoeging. De toegepaste methode wordt hierna beschreven.

30 Voor deze voorbeelden werden TCID^ resultaten verkregen onder toepassing van WI-38 cellen van Flow Laboratories , Inc. die slechts weinig doorgangen hebben doorgemaakt en die men in het begin tenminste een doorgang heeft laten doorlopen teneinde te verzekeren dat ze groeivermogen bezitten. De inhoud 35 van de kolven werden daarna 1:2 gesplitst en geent in weefsel- 8202885 -20- kultuurplaten met een samenstel van 96 putjes en een vlak 2 bodemgroeigebied van 0,32 cm verkregen van M A Bioproducts. De cellen werden bij 37° C geincubeerd in 5 % CO^ en waren na 2b uren, alvorens ze bij de proef toe te passen, gewoonlijk 5 voor 80-90 % met een vliesje bedekt en hadden een normaal uiterlijk. Het milieu (2 % MM) dat zowel voor de verdunningen als het handhaven van de cellen werd toegepast was MEM Eagles met Earles BSS (met glutamine, gentamycine en 2 % toegevoegd serum van een foetaal kalf). Het rhinovirus 1A werd verkregen 10 van het National Institute of Allergy and Infectious Diseases,

Bethesda, Maryland. Een flesje werd opgenomen door WI-38 cellen en er weer uitgenomen nadat een cytopathogeen effekt (CPE) na 2 dagen naenting was aangetoond. Het virus werd gewonnen, over evenredige delen verdeeld en bij -70° C bevroren en later een 15 in WI-38 cellen in/feamengestelde plaat met 96 kommetjes geti- treerd.

Voor de proef werd het medium uit de platen ver-wijderd door een steriel gaas tussen de pLaat en het deksel aan te brengen- en de plaat om te keren. Alle zes toegepaste 20 kommetjes ontvingen 0,1 ml 2 % MM. Aan de kommetjes die ge- bruikt werden als celcontroles werdjnogeens 0,1 ml 2 % MM toegevoegd. Aan de cellen waaraan de verbindingen moesten worden toegevoegd voegde men aan elk van de zes kommetjes 0,1 ml van de geschikte verdunning van het materiaal toe. Voor de begin-25 verdunning mengde men de voorraad virus 1:1 met 2 % MM. Daarna werden 100 microml van deze virusverdunning in een Petri-schaal aan een behandelde schijf toegevoegd. Het virus werd gelijkmatig over een weefselschijf, onder toepassing van een injektiespuit van een microliter, aangebracht. Men liet het 30 virus 1 minuut of 5 minuten op de schijf, voegde daarna 5 ml 2 % MM aan de schijf in de Petri-schaal toe en bewoog de een schijven/weinig. De schijf en de oplossing werden verwijderd en in een steriele buis gebracht en door schudden gedurende • 30 seconden bewogen, waardoor de eerste oplossing werd verkre-35 gen. Uit de oorspronkelijke buis werden 3 tienvoudige verdunningen 8202835 -21- bereid en 0,1 ml van alle vier verdunningen werden toegevoegd aan de eenlaag ¥1-38 cellen. Voor elke verdunning werden zes kommetjes gebruikt. op 1 en 5 minuten werden niet-behandelde kontroles onderzocht, met en zonder virus en bij elke proef 5 werd eveneens een virustitratie uitgevoerd. De platen werden in 5 % CO gedurende de duur van de proef weer geincubeerd bij 37° C.

Zuren zoals sulfaminezuur en fosforzuur bleken eveneens een virucidale werking te hebben. Deze zuren bleken 10 echter dragers, zoals weefsels, te ontleden.

15 8202885 -22- d

Q) CM CM CM CM CM CO CM CM CM CM CM CM CM CM

jj OCOCOCOtD COCOCA COCOOOCO COCO CO CJO CO CO CO 00 jh ,_„ q, 3 ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο o ο o ο ο ο o (0 ο o

•H ¢) .n d Π\ CA CA CA CACO CAO\CAO<ACACACA CACA CACACACA CACA

^ +d ·η ·Η CA CA CA CA CAVO O CA CA CAVO CACACACA CACA CACACACA CACA

0 p! ^ S /x A-AA A/v,AA /x A./\A.A

{5 0 +2 0 m H

a &?.

Ό —- *d j·j-_d* _=i· j· -s·

3 B CA CA CA UA UA CACACA CA CACA CO [>- CACACACACACACA

Lj C*d η λ <"ι λ η η λ n rv λο r»n n r n fi c n

•H \0 -ri CA CA CA CA CA Ο O CACACA-3-CA<iCACA COCA CACACACACACACA

> VI) S CACACACACA CACACACOCASCACA CACA CACACACACACACA

/>· A /'A^S ΛΑΛ A A Λ/\Αχ/\ΛΑΑγ a> 1 0 'a is ^ . "8 ualalcnualtn ic\ ia t— la ua la ua la c— la ua la la ua la h() rn 0 ¢1 h·— f— t— t— C— LA t— C— t— t—VO t— t— t— t— t— t— ΰ O t> fJ r—I λ η η η η η γ»λοολλλλ λπ λ η λ λ eg η λ

φ w OJ w CM W Ο O CMCMCOOCMCMCMCM CM CM CM CM CM CM CM CM

-P !i , A/s(Ay\A A- /a/n A /a A A /a A A ΑΛ A

•H pR

^ Η Ό H

2 H 0 t- O

CjS 0.W VO-=f CAOOOO OUA OOOO " O

H S ffl <λ1<Λ|,αΙ^ί0^--^’υΛ CMCMCMOOCMCMCMCM CM CM CM CM CM CM CM

r-f .3 O LA UA LA (O CO UAUA UA IA t— CM LA LA LA LA LA UA O

0 >3 £ <M CM CM CO CO CM CM O 00 CM CM 00 CAUA CMCMCMCMCMCMO

O rO.JJ ο ο ο ο o ooooo<Joo " o ο ο ο ο ο ο o

cd rnB ro CO CO CM CM Ο O COCOCOOCOSCOCM v-CM COCOCOCOCOCOCO

Eh -P JI ί> 0 0 ΛΛΑΑΛ AAA A A ΛΑΛΛ·ΛΛ/ί' g-A,

d, H 0 f— UA COCO LA

CJ ,-, 03 .ω ο Ο Ο Ο O r— CM OOOCAO O CO (OUA OOOOOOCM

\0 LAI P m ο ο ο ο ο ο o οοοοο<|οο or, 0000000

\0 ft 0 3 0 CM CM CM CM CM UA UA CMCMCMCOCM^CMCM COCM CMCMCMCMCMCMCM

Η P p Is s/ x/ v ·>/ v· A A" *s/ vv V ^ a/ v ^ -V -a/ a/ EH nj ^ Sf

1 0 CH H p Q

||-h| I 1 > ' ' < ' ' ' I ' 1 1 1 1 „· & ΐ -a -g 5

rtdihn J· W J-MO J· CM CAVO CO LA CA CM r— O CM t-- GO CA CO CO LA CO

m .3 0) Ό ooooo 00000000 00 0000000 O-PObfi CM CA CM C— UA CO r— CAVO-^'-OlA-UACM CM O ACMMJJ <-

Pi a SJ 0 T- ^ r-r- O Sh ο 0 -p Tss. f>

5h jj sd § p I P

P P 0 Ph pBrt P

P P 0 P A P § P

W H s i = = to = s = N = = = 0Ρ--Ρ = = = H = = 38 y pp 9 s 3 3, *3 yp a h 0 . d P ft ,¾5 ·3 PP s ft y) M piid ee CMcniitN) a

I—I

I !χί IH MM M

LjHM Η Η ί> H MMX Η HH H

ηωΚ HMMM>> >>M MH> M HM}xJ MH

gj ^^saaaa 5B ββββββ 82 0 2 S 85 -23- β •Η β ft ^ ,β ·γ-3 β Η ΟΙ ΟΙ R ·Η ·Η (U — w ω ν ft bD ft οο cn οο on !> . fe c^(h i vo co co vo oo vo ca ca ca σ% uo fig •H <D 'f-a β ΛΛ r ft Λ Λ ft fl ft n<q λ Λ0)Π3 μ+3·η·η ca o\-ft cacacacacacacaco vo ca t— Η -p Η β ft t> ε ca σ\ σ\ cacacacacacacaco σ\ο\ σ\ φ *Μ *β s| ^ ^ Λ 3£« Q) C0 3 " § rdS ω ^ " ^ J, ·Η Ό Η *ί1 § J- ft ·Η β Η 5 ΟΝ-β· -3- -β· -β· ^ Η ·Η fi β β " CAVO CA CA CA CA CA CA CVJOnO ®

ϋ! -£ί Lj 0\ fl ft ft ΛΛΛ ΠΛΛ <2J 0t3D*H

*5 \m ‘5 CA CA CO CACACAOCACACACU COCAO teq 13¾¾

p S CACA CACACACACACACAOO CACAVD ^OJO

Ayb ΛΛλ^ AA 3°¾

bp , fi β K

η 1 ω ω •R p · ft faO "

ft ft Φ H

£ ' ouALrvuAOUAt-r— t— t— o t- Ofip

* 5 -=i- C— CV1 t--=T ¢- ft- r-r~T-t-^tT- VO

tiO CQOQJ «\nr> ΟΛΛΛΛΛΛΛ OCk <^J Λ β *H

β Ο ί> O ft 0J CVJ r- CMOJCMCVIOOOOOOO r- ros <U Φ > ft _ /*» A AAAAAAA A- a fi βΛ ' β β ο 50 s ο ft •h Hrt > 'a ε i—i r7—ϊ ! fi β I n 3d MOO)

How O o . S!5R

ft'— rrift Ο O CO ΟΟΟΟΟΟΟ-β· OO O . ·Η β •η Kjfi § φ oj oj oo aicvicviajcviaicjft- ooojS oo φ S p ^ ft ^ ^ Ά/ "V ~n/'V( ->/ *>/ -V A ./ ή/ [> j> 0 <u ω fi o- o .. 0 bO ft w W> I ft Φ

Η·3ο 1ΑΙΛ1Α 1Λ1ΛΙΛ IAUA- MO

ω ft β waito aiwaioooop poj -r? -h

jQ rQ · ; λλλ «οογ\Λπλλλ r\ r\ r\ Cu *H dJ -fJ

ft .ηωβ oooor- οοοοοοι-οοοοοοο ^ oo o P ^ ® ^ -s ^ ^ 8 ii j ^ 'ΌΑ λλλ ^ s I § 3 So. -g-g S , ^ ϋΗ /' U tt i~i Q) O UA 'UA '<~3

OfioJir03 O Oft- OOOt-OOOCM OOVO •Hft*'· b> S St 13 H oil 01011111 n r. ο π3 P (ί · to w fi 01 3o| CViaiOO aiCMCMOOWCVlCMft- CVICM-β- . +3^00 ! h ft λ & i "V-^// .^/ v v/v/ v ^ <d β ε S' ' ate wd Λ <u _ « H rd . ft -S ft β ^

-6¾ bf ββ a Μ V P

f u) Ή ·Η Ή Q) fi lOJft.p ftdJft

RftOmg bD 60 "ftft 51 ^ -Η β w III I I | | | | | | | 1 β ε S11 +30 ft® ft ^ ® III llllllli R H ¢) <D LT\ ft Η ώ ·Η O VOVO Η Ο β ι Ο r* Ο g ft Λ Λ 1—I β β "

Ο Ο Ο β (ϋ Ο CA

I » ί> bD ft ΟΙ α> LIA Ο Ο CA

β 0) 60 \ βΜ60Ρ»β'- (U-nflJ’p. ο CO CO OLOOOOCOLTNO ο <u I ε j O ft Obi: onn *100/1 #ionri «Ϊ IS] Ο O ft Λ ββριο! o\\o o is- if\ oj ίο. ai CJ ι- o b£) dfiiuo ΗΟβω 0 fi O *— p fl / i t—| ft m /> Ο4-Ι0β oft-65.> fi β,βο^^αι ^ b> e: ° ι . β rfft-oftft/RUA βοα>·ρ ! 9 β fi fi ΛβΗΟΟ ^^Rft | | R IS] β ft -β- Ή CD ft Ή II β β a .Η β Ν ββθΰ>-ε^ βΟΟΟ ot, (L) fi (DN ρ r- 0) [|] β (D S Ή fi ΙΟ fi fi ·Ηβ Ο Ο ΟΗβ-PObOPQ 0(ϋβ β ββββ fifisrs-CHEss fi(D= ω II β fi Μ β>βρΗ β Ο ES3 ft9 Μ ftftH βοοββ·

t3 Ιοί) ·Ηβ Ο τ-Ift OiSA/OfiQJ <UM

!ββ 3 ίο ft ocf α,ρβρβ bp a) fi ft m ο β •ri 0) t>s β β ·Η Η Η i>H>ftS-Hid

I *0 ; Η ΗΗ ΗΗ> Η Η R

S ® 'Η te>te BPtexaBHte 6§ § I

g^aaaa§aaBaaaatea a §· 8202885 -2k- β φ mo -ρ ι— β 6— t·- β m o\ o\ ra ·η σ\ σ\ σ\ rj d λ λ η 60 β Os Os Os Os β ·η ιτ\ os os os os 3 £ ^ ^ ^ β β ω ·η Η «

U

ο g β 'R β ω Λ *H b> *Ρ * 1 β ΟΝ β ·Η •η S os as σ\ σ\

Os Os Os Os 65. Τ Ι β ω A) ft OP Ο -65.

Ό *Η 60 -Ρ β Ο X ·Η

Ο β CM

ί> Φ Η III

Η ω -ρ φ ι ι ι cq 60 X ·Ρ Ρ

Η 0) β Ό CQ

φ Ο Η ·Η θ -Ρ ϊ> a β Εη Ό 60¾¾ Φ Ο β t> Ή Φ 60 β 1Λ ΙΛ ΙΛ 1Λ Φ β ι- Ο β -μ Ν

CM

Λ Ο β ΜΟ 00 MO ΜΟ 4 !_| Λ Λ Λ r\ \ ΙΛ νο ΙΑ ΙΛ Η Τ— !— Ί Ο β I β β β β Ρ Ν β . Η Φ = ~ ~ β β β ts! EQ ·Η • ίβ

ι—I

Φ Η φ Η ,α Η Μ Η

% fc> Η Μ X

> Π μί J

8 2 0 2 Β 8 5 -25-

Qmdat deze zuren oplosbaar zijn in water, kunnen ze met groot gemak uit een waterige oplossing, zoals door onder- dompelen, bekleden of andere gebruikelijke methoden, zoals besproeien of gravure bedrukken, op vele substraten worden 5 aangebracht. Bij bet aanbrengen op de substraten wordt het preparaat toegepast in een voldoende hoeveelheid om een hierin gedefinieerde virucidale werking te verkrijgen. Hoewel de doel- treffende ondergrens voor de zuren niet nauwkeurig is bepaald, zal in het algemeen voor een materiaal zoals een weefsel bestemd 2 10 voor het gelaat met een basisgewicht tussen 23-31 lbs.:2880 ft (3 x gevouwen) de opname tenminste ongeveer 2 $ en bij voorkeur ongeveer 5 % wan zuren, zoals citroenzuur, op droge basis be-dragen. Andere substraten, zoals niet-geweven materialen, kunnen eveneens worden gebruikt.

15 Wat de andere substraten betreft, verdienen die met een grote bevochtigbaarheid de voorkeur. Zoals reeds ver-meld, wordt aangenomen dat de geringe virucidale werking bij substraten zoals wol toe te schrijven is aan het onvermogen van het virucidale preparaat het substraat binnen te dringen.

20 Past men mengsels van zuren toe, dan kunnen deze in elke hoeveelheid aanwezig zijn, doch bij voorkeur bevatten.. de mengsels tenminste ongeveer 0,2-10 % van elk zuur, op basis van het substraat na het drogen.

Gebruikt men tevens oppervlakteaktieve middelen, 25 dan worden deze bij voorkeur gekozen uit de groep van anionogene oppervlakteaktieve middelen en opgenomen in een hoeveelheid van ongeveer 0,05-5 %, op basis van het gewicht van het substraat na het drogen.

Bij toepassing van de virucidaal aktieve orga- 30 nische zuren, zoals hiervoor gedefinieerd, in andere substraten v of dragers, zoals lotions, mondwasmiddelen, creme’s, sprays, reinigingsmiddelen enz., kan de virucidaal doeltreffende hoeveelheid gemakkelijk door toepassing van de in deze beschrijving vermelde methoden worden bepaald, Zo betekent bijvoorbeeld een 35 log-daling van 2 of meer dat 99 % of meer van de gastvirussen 8202835 -26- worden geinaktiveerd bij kontakt met de hierin beschreven zuur-preparaten met een verking tegen virussen.

Volgens de uitvinding wordt dus een virucidaal prodiikt verschaft, dat, onder de omstandigheden van normaal 5 gebruik, volkomen voldoet aan de doelstellingen en de voordelen heeft zoals vermeld in de voorgaande beschrijving.

10 8202885

Claims (23)

1. Een virucidaal preparaat, met het kenmerk, dat dit een fysiologisch aanvaardbare drager die een virucidaal doeltreffende hoeveelheid van een of een aantal zuren, die elk formule R-COOH hebben, waarin R een lage alkylgroep, een gesub-5 stitueerde lage alkylgroep, een carboxylgroep bevattende lage alkylgroep, een carboxyl en hydroxyl bevattende lage alkylgroep, een carboxyl en halogeen bevattende lage alkylgroep, een carboxyl en twee hydroxylgroepen bevattende lage alkylgroep, een twee carboxyl en hydroxyl bevattende lage alkylgroep, een 10 lage alkenylgroep, een carboxylgroep bevattende lage alkenyl- groep, een twee carboxylgroepen bevattende lage alkenylgroep, een fenylgroep of een gesubstitueerde fenylgroep voorstelt, bevat.

2. Virucidaal preparaat volgens conclusie 1, 15 met het kenmerk, dat dit tevens een niet-ionogeen, kationogeen en/of anionogeen oppervlakteaktief middel bevat.

3. Preparaat volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men als zuur citroenzuur, appelzuur, barnsteenzuur, benzoezuur en/of een gesubstitueerd derivaat 20 daarvan, of een mengsel van deze zuren, toepast. Preparaat volgens conclusie 2 of 3, met het kenmerk, dat men als oppervlakteaktief middel een ge-polyoxyethyleneerde alkylfenol, gepolyoxyethyleneerde sorbitol-ester, kwaternair ammoniumzout, zout van een ester van zwavel- ΘΪ1 25 zuur, zout van een alkylsulfonzuur />f zout van een sulfobarnsteen- zuurester met formule f ?V°2ri\ (eso3)m+? of (ROSO3] M+“Af M+L I I 30 v 2 2y x · waarin M+ een een-, twee- of driewaardig metaalkation of een ammonium- of gesubstitueerd ammoniumion voorstelt, x een geheel 8202885 -28- getal is, R een alkylgroep weergeeft en R.^ en R , die al of niet gelijk kunnen zijn, een alifatische groep met rechte of vertakte keten voorstelt, toepast.

5. Preparaat volgens conclusie h, met het kenmerk, 5 dat men als oppervlakteaktief middel het natriumzout van de 1,U-bis(2~ethylhexyl)ester van sulfobarnsteenzuur en/of natrium-dodecylsulfaat toepast.

6. Preparaat volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van citroenzuur 10 en appelzuur kiest.

7. Preparaat volgens conclusie 1-5, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van citroenzuur en benzoezuur kiest.

8. Preparaat volgens conclusie 1-5, met het kenmerk, 15 dat men als zuur een mengsel van citroenzuur en barnsteenzuur kiest.

9. Preparaat volgens conclusie 1-5, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van appelzuur en benzoezuur kiest.

10. Preparaat volgens conclusie 1-5, met het kenmerk, 20 dat men als zuur een mengsel van appelzuur en barnsteenzuur kiest.

11. Preparaat volgens conclusie 1-5s met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van barnsteenzuur en benzoezuur kiest.

12. Een virucidaal produkt waarin een veefsel- of vliessubstraat zijn opgenomen, dat een doeltreffende hoeveelheid 25 van een preparaat bevat . -waarin een of een aantal zuren als gedefinieerd in conclusie 1 zijn opgenomen.

13. Produkt volgens conclusie 12, met het kenmerk, dat dit preparaat eveneens een niet-ionogeen, kationogeen en/of anionogeen oppervlakteaktief middel bevat. 30 1k. Produkt volgens conclusie 12 of 13, met het kenmerk, dat men als substraat een cellulose weefsel, niet-geweven weefsel en/of een textielmateriaal gebruikt.

15· Produkt volgens conclusie 1U, met het kenmerk, dat men als zuur citroenzuur, barnsteenzuur, benzoezuur en/of een 35 gesubstitueerd derivaat daarvan, of mengsels van deze zuren toe- 8202885 -29- past, waarbij het zuur(en) in een hoeveelheid ran ongeveer 2% of meer van het gevicht van het substraat aanwezig is.

16. Produkt volgens conclusie 1U, met het kenmerk, dat men als substraat een celluloseweefsel hestemd voor het 5 gelaat gebruikt.

17. Produkt volgens conclusie 1^-, met het kenmerk, dat men als oppervlakteaktief middel een middel als gedefinieerd in conclusie ^ gebruikt.

18. Produkt volgens conclusie 1^, met het kenmerk, 10 dat men als oppervlakteaktief middel het natriumzout van een'1,U- bis(2-ethylhexyl)ester van sulfobarnsteenzuur en/of natriumdode-eylsulfaat toepast.

19. Produkt volgens conclusie 1^, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van citroenzuur en appelzuur gebruikt.

20. Produkt volgens conclusie 1U, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van citroenzuur en benzoezuur gebruikt .

21. Produkt volgens conclusie 1^, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van citroenzuur en barnsteenzuur 20 toepast.

22. Produkt volgens conclusie 1^, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van appelzuur en benzoezuur gebruikt .

23. Produkt volgens conclusie 1^, met het kenmerk, 25 dat men als zuur een mengsel van appelzuur en barnsteenzuur toepast. 2k. Produkt volgens conclusie 1H, met het kenmerk, dat men als zuur een mengsel van barnsteenzuur en benzoezuur gebruikt.

25. Werkwijze voor het onderbreken of verhinderen van de verspreiding van een ademhalingsvirus , met het kenmerk, dat men een gebied vaarin een virus aanwezig is behandelt met een doeltreffende hoeveelheid van een preparaat of produkt volgens een der voorgaande conclusies. 35 26, Produkten, waarin een preparaat volgens conclu- 8202885 -30- 5 sie 1-11 zijn opgenomen.

27. Gevormde produkten volgens conclusie 26. / « i -7/, l·1'/ y / I ' / '> 8202885