KR100694427B1 - 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 - Google Patents
코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100694427B1 KR100694427B1 KR1020050116940A KR20050116940A KR100694427B1 KR 100694427 B1 KR100694427 B1 KR 100694427B1 KR 1020050116940 A KR1020050116940 A KR 1020050116940A KR 20050116940 A KR20050116940 A KR 20050116940A KR 100694427 B1 KR100694427 B1 KR 100694427B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- corynebacterium
- inosinic acid
- microorganism
- pyridoxal phosphate
- kccm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 38
- GRSZFWQUAKGDAV-UHFFFAOYSA-N Inosinic acid Natural products OC1C(O)C(COP(O)(O)=O)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N IMP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N 0.000 title claims abstract description 30
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 title claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 5
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 25
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 101150082753 nifS gene Proteins 0.000 description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 11
- 101100187081 Trichormus variabilis (strain ATCC 29413 / PCC 7937) nifS1 gene Proteins 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- 101150021879 iscS gene Proteins 0.000 description 10
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 4
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 4
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 4
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 3
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 3
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 3
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035406 Cysteine desulfurase, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 108010076804 DNA Restriction Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102100039239 Amidophosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010039224 Amidophosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101100184272 Arabidopsis thaliana NIFS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589149 Azotobacter vinelandii Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000186249 Corynebacterium sp. Species 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101001023837 Homo sapiens Cysteine desulfurase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000005298 Iron-Sulfur Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010081409 Iron-Sulfur Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010020943 Nitrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- CDEWYZPQOSTQOQ-VQFZJOCSSA-N [(2R,3S,4R,5R)-3,4-dihydroxy-5-(6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound [C@@H]1([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(=O)(O)O)O1)N1C=NC=2C(O)=NC=NC12.[C@@H]1([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(=O)(O)O)O1)N1C=NC=2C(O)=NC=NC12 CDEWYZPQOSTQOQ-VQFZJOCSSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 102000030626 cysteine desulfurase Human genes 0.000 description 1
- 108091000099 cysteine desulfurase Proteins 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052945 inorganic sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940086388 thiamine hydrochloride 5 mg Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 코리네박테리움(Corynebacterium) 속 미생물에서 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 과발현시켜, 향상된 수율로 5'-이노신산을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물을 제조하는 방법, 이러한 방법에 따라 제조된 미생물, 및 이러한 미생물을 이용하여 5'-이노신산을 생산하는 방법에 관한 것이다.
코리네박테리움, 5'-이노신산, 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈
Description
도 1은 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈(nifS)를 코딩하는 유전자의 클로닝 과정을 나타낸다.
도 2는 클로닝된 pECCG117-nifS 벡터를 나타낸다.
본 발명은 5'-이노신산의 생산에 관한 것으로서, 구체적으로는 코리네박테리움(Corynebacterium) 속 미생물에서 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 과발현시켜 향상된 수율로 5'-이노신산을 생산하는 미생물을 제조하는 방법, 이러한 방법으로 제조된 미생물 및 이러한 미생물을 이용하여 5'-이노신산을 생산하는 방법에 관한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명은 코리네 박테리움 암모니아게네스 (Corynebacterium ammoniagenes) [종전 브레비박테리움 (Brevibacterium)] CJHB100(KCCM-10330)를 숙주세포로 이용하며, 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈(이하 “nifS유전자”라 함)를 과발현할 목적으로 셔틀벡터에 클로닝한 후, 형질전환된 미생물에 의한 직접 발효법으로 고생산성의 5`-이노신산을 생산하는 코리네박테리움 암모니아게네스 CJMJ01 (KCCM-10694P), 및 이러한 미생물을 이용하여 배양액 중에 5`-이노신산을 축적시켜 생산하는 방법에 관한 것이다.
5'-이노신산(5'-inosinic acid)은 핵산 생합성 대사계의 중간물질로서, 동식물의 체내에서 생리적으로 중요한 역할을 수행할 뿐 아니라, 식품, 의약품 및 각종 의료적 이용 등 다방면에 이용되고 있으며, 특히 글루타민산 나트륨과 같이 사용하면 맛의 상승효과가 커서 정미성 조미료로 각광을 받고 있는 핵산계 조미료 중 하나이다.
5'-이노신산을 제조하는 방법으로, 효모 세포로부터 추출한 리보핵산을 효소적으로 분해하는 방법(일본 특허공고 제1614/1957호 등), 발효에 의해 생산된 이노신을 화학적으로 인산화하는 방법(Agri. Biol. Chem.,36, 1511(1972) 등) 및 5'-이노신산을 생산할 수 있는 미생물을 배양하고 배지에 축적된 5'-이노신산을 회수하는 방법이 있다. 이러한 방법 중에서 현재 가장 많이 사용되고 있는 방법이 미생물을 이용하여 5'-이노신산을 생산하는 방법이다. 5'-이노신산을 생산하는데 이용 하는 미생물 중 코리네박테리움 (Corynebacterium) 속 균주, 예를 들어 코리네박테리움 암모니아게네스(Corynebacterium ammoniagenes)를 발효시킴으로써 제조하는 방법(대한민국 특허공개 제2003-42972호 등) 등이 공지되어 있다.
피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈 (pyridoxal phosphate-dependent cystein desulfurase) 는 미생물에서 시스테인의 황을 무기 황화물로 전환 하는데 필요한 니트로게네이즈 메탈로클루스터의 형성 (nitrogenase metallocluster formation)에 이용된다(Cystein desulfurase activity indicates a role for NIFS in metallocluster biosynthesis: Proc. Natl.Acad Sci USA Vol. 90, pp 2754-2758). 철과 아연을 포함하는 단백질은 많은 생물체에 존재하고 있으며, 이들 철과 아연은 세포내에서 전자 전달 및 단백질의 활성 촉매와 조절에 중요한 역할을 담당한다. 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈는 이와 같은 철과 아연을 포함하는 집합체를 형성하는데 사용되는 것으로 알려져 있다. 또한 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈가 결손된 균주에서 균체 성장의 둔화와 철과 아연을 포함하는 단백질의 효소 활성이 떨어진다는 보고가 있다 (Genetic Analysis of the isc Poeron in Escheichia coli Involved in the Biogenesis of cellular Iron-Sulfur Protein: J.Biochem.Vol.130, pp 63-71). 뿐만 아니라 A. 비네란디(vinelandii)의 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈는 B. 서브틸리스(subtilis)의 글루타민 포스포리보실 피로포스페이트 아미도트란스퍼레이즈(Glutamine phosphoribosyl pyrophosphate amidotransferase) 의 활성 증가에도 기여한다고 알려져 있다(Role of NifS in maturation of Glutamine Phosphoribosyl pyrophosphate Amidotransferase: Journal of Bacteriology, Dec 1997, PP 7587- 7590).
이에, 본 발명자는 코리네박테리움 (Corynebacterium) 속 균주로부터 5'-이노신산을 고역가로 생산할 수 있는 개선된 균주를 개발하고자 연구하던 중, 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈 (pyridoxal phosphate-dependent cystein desulfurase)를 코딩하는 유전자 서열을 포함하는 벡터로 형질 전환시켰을 때 5'-이노신산이 고역가로 생산된다는 것을 발견함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 발현하는 재조합 벡터로 코리네박테리움(Corynebacterium) 속 미생물을 형질 전환시킴으로써, 향상된 수율로 5'-이노신산을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기한 방법으로 제조된 미생물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기한 균주를 이용하여 5'-이노신산을 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
하나의 양태로서, 본 발명은 코리네박테리움(Corynebacterium) 속 미생물을 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 발현하는 재조합 벡터로 형질전환시키는 것을 포함하는, 향상된 수율로 5'-이노신산을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
구체적 양태에서, 본 발명은 코리네박테리움 암모니아게네스(Corynebacterium ammoniagenes)를 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 발현하는 재조합 벡터로 형질 전환시켜 이를 과발현시킴으로써, 5'-이노신산을 고농도로 생산하는 형질 전환된 코리네박테리움 암모니아게네스를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 코리네박테리움 속 미생물은 5'-이노신산을 생산할 수 있는 것으로 알려진 미생물이다. 코리네박테리움 속 미생물은 바람직하게는 코리네박테리움 암모니아게네스이다.
본 발명의 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 코딩하는 유전자는 상기 효소를 생산하는 미생물로부터 얻을 수 있다. 구체적 양태로서, 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 코딩하는 유전자는 코리네박 테리움 암모니아게네스 미생물에서 얻을 수 있다. 본 발명의 구체적 실시 예에서는, 코리네박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872의 염색체 서열분석을 통하여, 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 코딩하는 유전자가 약 1.2b 크기로 존재함을 확인하였다.
본 발명의 재조합 벡터는 중합효소 연쇄반응을 통하여 얻은 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 코딩하는 유전자를 DNA 제한효소, 예를 들어 EcoRV 및 X- balI 등으로 절단하고, 동일한 DNA 제한효소로 절단한 벡터에 DNA T4 리가아제 등을 사용하여 삽입시켜 제조할 수 있다. 사용 가능한 벡터는 특별히 제한되는 것은 아니며 공지된 발현벡터를 사용할 수 있다. 바람직하게는 pECCG117 벡터(Biotechnology letters vol 13, No.10, p.721-726(1991) 또는 대한민국 특허공고 제92-7401호)를 사용할 수 있으며, 상기 재조합 벡터는 상기 pECCG117 벡터에 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 코딩하는 유전자를 삽입시켜 제조한 pECCG117-nifS 벡터가 바람직하다. 또한 본 발명의 재조합 벡터는 약 300bp의 프로모터, 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 코딩하는 유전자, 및 약 300bp의 터미네이터를 포함하고 있다.
구체적 실시 예에서, 상기 재조합 벡터, 예를 들어 pECCG117-nifS를 사용하여 선형 DNA단편을 통상적인 일렉트로포레이션(electroporation) 방법을 이용하여 미생물 균주(예를 들어, 코리네박테리움 암모니아게네스 (Corynebacterium ammoniagenes) KCCM-10330, 대한민국 특허공고 제10-2001-0073897호)에 전달하고, 선별마커인 항생제 카나마이신(kanamycine)을 포함하는 배지에서 배양하여 선별할 수 있다. 선별된 변이주 내의 pECCG117-nifS 벡터의 삽입은 PCR을 통하여 확인할 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 발현하는 재조합 벡터로 형질 전환시킨 코리네박테리움 속 미생물에 관한 것이다.
본 발명의 형질전환된 코리네박테리움 속 미생물은 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 과발현시키고 5'-이노신산을 고농도로 생산하는 미생물을 의미한다. 본 발명의 구체적 실시 예에서 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 과발현하며 5'-이노신산을 고농도로 생산하도록 형질전환된 코리네박테리움 암모니아게네스를 코리네박테리움 암모니아게네스 CJMJ01로 명명하였으며, 이를 부다페스트 조약 하에 서울 서대문구 홍제1동 소재의 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM)에 2005년 11월 7일자로 수탁번호 KCCM-10694P로 기탁하였다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기의 형질전환된 코리네박테리움 속 미생물을 배양하여 그 배양액으로부터 5'-이노신산을 생산하는 방법에 관한 것이다.
상기의 형질전환된 코리네박테리움 속 미생물은 적당한 탄소원, 질소원, 아미노산, 비타민 등을 함유한 통상의 배지 내에서 호기성 조건 하에서 온도, pH 등을 조절하면서 배양할 수 있다.
탄소원으로는 글루코오스, 프럭토오스, 살균된 전처리 당밀 (즉, 환원당으로 전환된 당밀)등과 같은 탄수화물이 사용될 수 있고, 질소원으로는 암모니아, 염화암모늄, 황산암모늄과 같은 각종 무기질소원 및 펩톤, NZ-아민, 육류 추출물, 효모추출물, 옥수수 침지액, 카세인 가수분해물, 어류 또는 그의 분해생성물, 탈지 대두 케이크, 또는 그의 분해생성물 등 유기질소원이 사용될 수 있다. 무기화합물로는 인산1수소칼륨, 인산2수소칼륨, 황산마그네슘, 황산철, 황산망간, 탄산칼슘 등이 사용될 수 있으며, 이외에 필요에 따라 비타민 및 영양 요구성 염기 등이 첨가될 수 있다.
배양은 호기적 조건 하에서 예를 들면, 진탕 배양 또는 통기 교반배양에 의해, 바람직하게는 20 내지 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 배지의 pH는 배양하는 동안 중성근처에서 유지하는 것이 바람직하다. 배양은 5 내지 6일 동안 수행할 수 있으며, 직접 발효에 의해 축적된 5`-이노신산을 통상의 방법으로 회수할 수 있다. 구체적 실시 예에서, 본 발명에 의하여 형질전환된 코리네박테리움 속 미생물은 형질전환하지 않은 코리네박테리움 속 미생물에 비하여 높은 수율로 5'-이노신 산을 생산하였다.
이하, 본 발명을 실시 예를 통하여 더욱 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명이 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예
1.
nifS
유전자의
클로닝
코리네박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872의 염색체 유전자를 분리하고, 이를 주형으로 하여 서열번호 1과 서열번호 2의 프라이머를 이용하여 중합효소연쇄반응을 통하여 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈 유전자(nifS 유전자)를 얻었다. 얻어진 nifS 유전자의 단편을 제한효소 EcoRV (New England Biolabs, Beverly, MA)과 XbaI (New England Biolabs, Beverly, MA)으로 절단하였다. 리가아제(New England Biolabs, Beverly, MA)를 이용하여 상기 유전자 단편을 EcoRV 와 XbaI 제한효소로 절단시킨 선상의 pECCG117 벡터에 접합하였다. 접합된 DNA를 코리네박테리움 암모니아게네스 (Corynebacterium ammoniagenes) KCCM-10330)에 일렉트로포레이션 (electroporation)을 통하여 형질전환하고, 1리터 당 카나마이신 (kanamycin) 10 ㎎을 포함하는 CM 고체배지 (육즙 10g/L, 효모엑기스 10g/L, 박토펩톤 10g/L, 염화나트륨 2.5g/L, 박토아가 1.7%, pH 7.0)에서 배양하여 단일 콜로니들을 회수하였다. 회수된 콜로니들을 동일한 항생제가 첨가된 CM 액체 배지에서 키운 다음, 플라스미드를 분리하여 그 크기를 일차로 확인하고, 2차로 pECCG117의 다중 클로닝 부위의 양끝단을 포함하는 프라이머를 이용하여 콜로니 PCR을 수행함으로써, 삽입된 DNA의 크기를 통해 형질전환 여부를 확인하였다. 이를 간략하게 나타내면 도 1과 같으며, 클로닝된 pECCG117- nifS 벡터는 도 2와 같다.
nifS 유전자를 증폭하기 위한 프라이머들은 각각 다음과 같다.
프라이머 nifS -F (서열번호 1):
5'-TGC AGA TAT CGG TGT AGG CAA TGA ATT CGC -3'
프라이머 nifS -B (서열번호 2):
5'-GCC CTC TAG AGG TCA CGG CAG TAA GCA AGC -3'
이 과정을 통해 선별된 nifS 유전자를 포함하는 균주를 코리네박테리움 암모니아게네스 (Corynebacterium ammoniagenes) CJMJ01로 명명하였고, 2005년 11월 7일 한국미생물보존센터에 기탁하였다 (수탁번호: KCCM-10694P).
실시예 2. 삼각 플라스크 발효 역가 시험
종배지 3ml를 지름18mm 시험관에 분주하고 가압 살균한 후, 코리네박테리움 암모니아게네스 (Corynebacterium ammoniagenes) CJMJ01(KCCM-10694P)를 접종하고 30℃ 온도에서 24시간 진탕 배양하여 종배양액으로 사용하였다. 발효배지 27ml를 500ml 진탕용 삼각플라스크에 분주하고 120℃ 온도에서 10분간 가압살균한 후, 종배양액 3ml을 접종하여 5 내지 6일간 배양하였다. 회전수는 분당 200회, 온도 32℃, pH 7.2로 조절하였다. 배지 내 5'-이노신산 축적량을 모균주인 KCCM-10330 과 비교한 결과는 하기 표1과 같으며, 본 발명에 따른 균주의 경우 5'-이노신산 축적량이 약 4 % 향상된 것을 알 수 있다. 상기 종배지 및 발효배지의 조성은 다음과 같다.
종배지: 포도당 5%, 펩톤0.5%, 육즙 0.5%, 효모엑기스 1%, 염화나트륨 0.25%, 아데닌 100mg/l, 구아닌100mg/l, pH7.2
플라스크 발효배지: 글루타민산 나트륨 0.1%, 암모늄클로라이드 1%, 황산마그네슘1 .2%, 염화칼슘 0.01%, 황산철 20mg/l, 황산망간 20mg/l, 황산아연 20mg/l, 황산구리 5mg/l, L-시스테인 23mg/l, 알라닌 24mg/l, 니코틴산 8mg/l, 비오틴 45㎍/l, 티아민염산 5mg/l, 아데닌 30mg/l, 인산(85%) 1.9%, 과당, 포도당 및 당밀을 혼합하여 환원당으로 8% 되게 첨가하여 사용
| 균주명 | IMP 농도(g/L) | 대조군 대비 증가율 (%) |
| 대조군(KCCM-10330) | 14.86±0.082 | - |
| pECCG117-nifS | 15.45±0.22 | 4 |
실시예
3. 1L 발효조에서의
발효역가
실험
실시예 2의 종배지 50ml를 500ml 진탕용 삼각플라스크에 분주하고 상법에 따라 가압살균 후, 사용 균주를 접종하고 30℃에서 24시간 동안 진탕 배양하여 종배양액으로 사용하였다. 발효조 종배지 200ml를 1L-발효조에 넣고 온도 120℃에서 15분간 가압살균하여 종배양액 50ml를 접종한 다음 3일 동안 배양하였다. 회전수는 분당 900회, 온도 28 내지 34℃, pH 7.2로 조절하였다.
이때 배지 내 5'-이노신산 축적량을 모균주인 KCCM-10330 과 비교한 결과는 하기 표 2와 같으며, 본 발명에 따른 균주의 경우 5'-이노신산 축적량이 15.18 g/L이었다. 이는 동일한 조건 하에서 친주 KCCM-10330을 배양한 결과(13.66g/l) 보다 더 우수하였다.
발효조 배지: 효모 추출액 0.5%, 수산화칼륨(85%) 17g/l 1%, 황산마그네슘 57.6 g/l, 황산철 29mg/l, 황산망간 29mg/l, 황산아연 29mg/l, 황산구리 7.2mg/l, L-시스테인 35mg/l, 알라닌 42mg/l, 니코틴산 14mg/l, 비오틴 70㎍/l, 티아민염산 7.2mg/l, 아데닌 225.5 mg/l, 인산(85%) 2.3%, 과당, 포도당 및 당밀을 혼합하여 환원당으로 7.7% 되게 첨가하여 사용
| 균주명 | IMP 농도 (g/L) | 발효 시간 (hr) | 수율 (%) |
| 대조군(KCCM-10330) | 13.66 | 61 | 16.30 |
| pECCG117-nifS | 15.18 | 61 | 17.16 |
피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈 유전자를 과발현시킨 형질 전환된 코리네박테리움 속 미생물을 이용하여 5'-이노신산을 생산하는 경우에, 직접 발효법에 의해 경제적으로 보다 높은 생산성으로 5'-이노신산을 생산할 수 있다.
Claims (6)
- 삭제
- 삭제
- 코리네박테리움 암모니아게네스(Corynebacterium ammoniagenes) 유래의 피리독살 포스페이트 디펜던트 시스테인 디설퍼레이즈를 발현하는 재조합 벡터로 형질 전환시켜 제조된 코리네박테리움 속 미생물.
- 제3항에 있어서, 형질전환되어 제조된 미생물이 코리네박테리움 암모니아게네스 CJMJ01(KCCM-10694P)인 미생물.
- 제3항의 형질전환되어 제조된 미생물을 배양하여, 그 배양액으로부터 5'-이노신산을 생산하는 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 형질전환되어 제조된 미생물이 코리네박테리움 암모니아게네스 CJMJ01(KCCM-10694P)인 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020050116940A KR100694427B1 (ko) | 2005-12-02 | 2005-12-02 | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020050116940A KR100694427B1 (ko) | 2005-12-02 | 2005-12-02 | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR100694427B1 true KR100694427B1 (ko) | 2007-03-12 |
Family
ID=38103460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020050116940A Active KR100694427B1 (ko) | 2005-12-02 | 2005-12-02 | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100694427B1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008088156A1 (en) * | 2007-01-15 | 2008-07-24 | Cj Cheiljedang Corporation | Microorganism producing inosine and method of producing inosine using the same |
| KR100857379B1 (ko) | 2007-01-11 | 2008-09-11 | 씨제이제일제당 (주) | 포스포라이보실 아미노이미다졸 카복실라아제가 과발현된미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 생산 방법 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996030501A1 (fr) * | 1995-03-24 | 1996-10-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede de production d'acides nucleiques |
| KR20010100223A (ko) * | 2000-03-17 | 2001-11-14 | 손 경 식 | 5'-이노신산 생산 미생물 |
| KR20020053892A (ko) * | 2000-12-26 | 2002-07-06 | 손 경 식 | 5'-이노신산을 고수율로 생산하는 미생물 코리네박테리움암모니아게네스 씨제이아이피009 및 그를 이용한5'-이노신산 생산방법 |
| KR20030074597A (ko) * | 2000-09-20 | 2003-09-19 | 바스프 악티엔게젤샤프트 | 코리네박테리아 게놈의 변형 방법 |
| KR20050059641A (ko) * | 2003-12-15 | 2005-06-21 | 씨제이 주식회사 | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조방법 |
-
2005
- 2005-12-02 KR KR1020050116940A patent/KR100694427B1/ko active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996030501A1 (fr) * | 1995-03-24 | 1996-10-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede de production d'acides nucleiques |
| KR20010100223A (ko) * | 2000-03-17 | 2001-11-14 | 손 경 식 | 5'-이노신산 생산 미생물 |
| KR20030074597A (ko) * | 2000-09-20 | 2003-09-19 | 바스프 악티엔게젤샤프트 | 코리네박테리아 게놈의 변형 방법 |
| KR20020053892A (ko) * | 2000-12-26 | 2002-07-06 | 손 경 식 | 5'-이노신산을 고수율로 생산하는 미생물 코리네박테리움암모니아게네스 씨제이아이피009 및 그를 이용한5'-이노신산 생산방법 |
| KR20050059641A (ko) * | 2003-12-15 | 2005-06-21 | 씨제이 주식회사 | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조방법 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 논문 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100857379B1 (ko) | 2007-01-11 | 2008-09-11 | 씨제이제일제당 (주) | 포스포라이보실 아미노이미다졸 카복실라아제가 과발현된미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 생산 방법 |
| WO2008088156A1 (en) * | 2007-01-15 | 2008-07-24 | Cj Cheiljedang Corporation | Microorganism producing inosine and method of producing inosine using the same |
| US8168422B2 (en) | 2007-01-15 | 2012-05-01 | Cj Cheiljedang Corporation | Microorganism producing inosine and method of producing inosine using the same |
| US8187840B2 (en) | 2007-01-15 | 2012-05-29 | Cj Cheiljedang Corporation | Microorganism producing inosine and method of producing inosine using the same |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101166027B1 (ko) | 5'-이노신산 생산성이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 핵산의 생산방법 | |
| US7794990B2 (en) | Microorganism of corynebacterium genus having enhanced L-lysine production ability and method of producing L-lysine using the same | |
| KR100838035B1 (ko) | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용한 ｌ-라이신 생산 방법 | |
| US7575899B2 (en) | Microorganism of the genus Corynebacterium having enhanced L-lysine productivity and method of producing L-lysine using the microorganism of the genus Corynebacterium | |
| KR100882418B1 (ko) | 이노신을 생산하는 미생물 및 그를 이용한 이노신 제조방법 | |
| KR101049023B1 (ko) | 5'-이노신산 생산능이 향상된 코리네박테리움암모니아게네스 및 그를 이용한 5'-이노신산의 생산방법 | |
| KR100954052B1 (ko) | Ａｂｃ-트랜스포터를 코딩하는 유전자가 불활성화된코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조방법 | |
| JP3848297B2 (ja) | リボフラビンを生産する微生物及びこれを用いたリボフラビンの生産方法 | |
| KR100542568B1 (ko) | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 | |
| KR100694427B1 (ko) | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 | |
| KR100857379B1 (ko) | 포스포라이보실 아미노이미다졸 카복실라아제가 과발현된미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 생산 방법 | |
| KR100402320B1 (ko) | 5'-크산틸산을 고수율로 생산하는 미생물 코리네박테리움암모니아게네스 엔브이4-82-9 및 그를 이용한 5'-크산틸산생산방법 | |
| KR100785248B1 (ko) | ｐｕｒＣ 유전자가 과발현된 미생물 및 이를 이용한5'-이노신산의 생산방법 | |
| KR100959662B1 (ko) | 이노신 생산능을 갖는 코리네박테리움속 미생물 및 이를이용한 이노신의 생산 방법 | |
| KR100547585B1 (ko) | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 제조방법 | |
| KR101056872B1 (ko) | 핵산계 물질의 생산성이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 그를 이용한 핵산계 물질의 생산 방법 | |
| KR100576341B1 (ko) | 5'-뉴클레오티다제를 코딩하는 유전자가 불활성화된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 제조방법 | |
| KR100937326B1 (ko) | 옥시도리덕테이즈를 코딩하는 유전자가 불활성화된코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조방법 | |
| KR20030051237A (ko) | 리보플라빈을 생산하는 미생물 및 이를 이용한리보플라빈의 생산방법 | |
| KR100402322B1 (ko) | 5'-크산틸산을 고수율로 생산하는 미생물 코리네박테리움암모니아게네스 씨제이엑스피002 및 그를 이용한5'-크산틸산 생산방법 | |
| KR100964078B1 (ko) | 5'-이노신산 생산능이 향상된 코리네박테리움암모니아게네스 및 그를 이용한 5'-이노신산 생산 방법 | |
| KR100588577B1 (ko) | 5’-이노신산을 생산하는 미생물 및 이를 사용한5’-이노신산의 생산 방법 | |
| KR100547586B1 (ko) | ｕｓｈＡ 유전자가 불활성화된 재조합 에스케리키아속 미생물 및 이를 이용한 5'-구아닐산 합성효소를 배지 중에 축적시키는 방법 | |
| KR100977440B1 (ko) | 코리네박테리움속 미생물로부터 분리된 신규한 유전자,이에 의해 형질전환된 이노신을 생산하는 코리네박테리움속미생물 및 이를 이용한 이노신의 생산방법 | |
| KR20100038639A (ko) | 변형된 ｐｕｒＣ 유전자를 가진 미생물 및 이를 이용한 이노신의 생산방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20051202 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20061121 Patent event code: PE09021S01D |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20070130 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20070306 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20070306 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20100104 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20101221 Start annual number: 5 End annual number: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20120102 Start annual number: 6 End annual number: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20121218 Year of fee payment: 7 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20121218 Start annual number: 7 End annual number: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20131128 Year of fee payment: 8 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20131128 Start annual number: 8 End annual number: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20141226 Year of fee payment: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20141226 Start annual number: 9 End annual number: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20151228 Year of fee payment: 10 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20151228 Start annual number: 10 End annual number: 10 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20171129 Year of fee payment: 12 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20171129 Start annual number: 12 End annual number: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20181126 Year of fee payment: 13 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20181126 Start annual number: 13 End annual number: 13 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20191125 Year of fee payment: 14 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20191125 Start annual number: 14 End annual number: 14 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20201126 Start annual number: 15 End annual number: 15 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20211123 Start annual number: 16 End annual number: 16 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20221122 Start annual number: 17 End annual number: 17 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20241126 Start annual number: 19 End annual number: 19 |