JPH08503950A - 徐放性成長ホルモン含有マイクロスフェア - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 成長ホルモンポリマー徐放システムを記述し、この中の成長ホルモンは良好な生物学的活性を保持しておりそして注射で投与後長期間に渡って放出される。好適な態様では、ポリマー−成長ホルモン混合物の凝固を生じさせる非常に低い温度を用いてヒト成長ホルモンポリマーマイクロスフェアを製造することにより、非常に高い生物学的活性および材料保持性を示すポリマーマイクロスフェアを生じさせる。このマイクロスフェアをインビトロで試験した時、１日から数カ月以上の長期に渡る、生物学的活性を示す成長ホルモンの徐放が達成された。分解改質剤、孔形成剤および成長ホルモンの安定剤を含めることによって、徐放性を変化させることができる。

Description

【発明の詳細な説明】 徐放性成長ホルモン含有マイクロスフェア／ 発明の背景 本発明は、一般に、成長ホルモンの徐放（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａ ｓｅ）に適したポリマーのマイクロスフェアに関するものである。 ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は下垂体が分泌する蛋白質である。この蛋白質に はアミノ酸が１９１個含まれており、その分子量は２２，０００である。ｈＧＨ は、成長し得る体の全組織の成長を生じさせる。このホルモンは、成長を生じさ せる一般的な効果に加えて、以下の代謝効果に関与している：１）細胞の蛋白質 合成を高めること、２）グルコースの利用度を低くすること、および３）脂肪組 織からの脂肪酸可動化を高めること。下垂体機能不全性小人症を治療する目的で ｈＧＨが用いられており、これの投与は、皮下または筋肉内ルートにより週に３ 回行われている。 成長ホルモンを投与するには一般に筋肉内（ＩＭ）または皮下（ＳＱ）注射を 頻繁に行う必要がある。成長ホルモンの徐放性調合物が示す利点には、注射の回 数が少なくなることで患者の承諾度および許容度が高まること、血液レベルの山 と谷の変化がなくなることで治療的有益さが向上すること、並びに山と谷の変化 が低くなることで薬の全投薬量が潜在的に低くなることなどが含まれる。 化合物の血液レベルを調節する１つの手段は、ポリマー分解および／または薬 剤拡散の関数として化合物を放出するポリマーマトリックスの形態でそれを投与 する手段である。生分解性を示す多様なポリマー類お よび生分解性を示さない多様なポリマー類が上記用途で用いられてきており、そ れらには、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）類の如きポリエステル類、ポリ無 水物類、ポリオルトエステル類およびエチレン酢酸ビニルポリマー類などが含ま れる。放出の調節は、一般に、適切なポリマー、カプセル封じ条件、薬剤充填量 および賦形剤を選択することによって行われる。 このポリマー系の例は、Ｌａｎｇｅｒの米国特許第４，８９１，２２５号およ びＬａｎｇｅｒの米国特許第４，９０６，４７４号（ポリ無水物類）、Ｆｏｌｋ ｍａｎ他の米国特許第４，３９１，７９７（エチレン酢酸ビニルポリマー類）、 Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎの米国特許第４，７６７，６２８号（ポリラクチド、ポリ ラクチド−コ−グリコール酸）、並びにＴｉｃｅ他の米国特許第４，５３０，８ ４０号（ポリラクチド、ポリグリコリドおよびコポリマー類）の中に記述されて いる。 しかしながら、所望の速度で所望の期間に渡って徐放を達成するのは困難であ る。更に、その薬剤のカプセル封じで用いる条件は、その搬送すべき薬剤の劣化 を生じさせるような条件であってはならないと共に、そのポリマーマトリックス が薬剤と反応してこの薬剤の失活を生じさせるか或はこの薬剤と結合するような 条件であってはならない。臨床現場で重要な如く、この搬送手段は、その製造で コスト有効性を示す必要があり、貯蔵安定性を示す必要があると共に、標準的方 法で投与できなくてはならない。 従って、本発明の１つの目的は、活性または材料の損失をほとんど生じさせな いで、成長ホルモン、特にヒト成長ホルモンが入っているマイクロスフェアを製 造する方法を提供することにある。 本発明のさらなる目的は、活性を示す成長ホルモンを含んでおりそしてこれを 調節された様式で放出し得る、幅広い範囲のポリマー類から生じさせたマィクロ スフェアを製造する方法、並びに上記方法で製造されたマイクロスフェアを提供 することにある。 発明の要約 成長ホルモンポリマー徐放システムを記述し、この中の成長ホルモンは良好な 生物学的活性を保持しておりそして投与後長期間に渡って放出される。好適な態 様では、ポリマー−成長ホルモン混合物の凝固を生じさせる非常に低い温度を用 いて成長ホルモンポリマーマイクロスフェアを製造することにより、非常に高い 生物学的活性および材料保持性を示すポリマーマィクロスフェアを生じさせる。 粉末にした成長ホルモンと一緒にポリマー、好適にはポリ（ラクチド）を塩化メ チレンなどの如き溶媒の中に溶解させる。このポリマー／成長ホルモン混合物を 、液化ガス、例えば窒素などで覆った凍らせた非溶媒、例えばエタノールなどが 入っている容器の中に、このポリマー／活性剤溶液または懸濁液の凝固点より低 い温度で噴霧する。この噴霧された粒子は、その冷えた液化ガスに接触すると凝 固してマイクロスフェアを生じた後、沈んで、その凍っている非溶媒層の上に到 達する。その後、その凍っている非溶媒の解凍を行う。この非溶媒が解ける時、 そのマイクロスフェアはまだ凍ったままであり、その液状になった非溶媒の中に 沈み込む。また、このマイクロスフェア内の溶媒も解凍して、ゆっくりとその非 溶媒の中に抽出され、その結果として、成長ホルモンが入っている硬化したマイ クロスフェアが生じる。 ヒト成長ホルモンを用いた実施例でこのマイクロスフェアをィンビト ロまたはインビボで試験した時、生物学的活性を示す成長ホルモンが１日から３ カ月の長期に渡って徐放されることが示された。ポリマー分解改質剤、孔形成剤 および成長ホルモン用安定剤を含めることによって、徐放性を変化させることが できる。 図の簡単な説明 図１は、成長ホルモンを毎日８０μｇ投与したラット（黒丸）、成長ホルモン を毎日２０μｇ投与したラット（白四角）、および成長ホルモンをマイクロスフ ェアから放出させたラット（黒四角）に関する、１４日間に渡る体重（ｇ）の平 均的変化を経時的（日）に示したグラフである。 発明の詳細な説明 生体適合性を示すポリマーマイクロスフエアの中に成長ホルモンを約５０％重 量／重量以下の量で組み込むことによって、成長ホルモンが入っているマイクロ スフェアを製造するが、ここで、この成長ホルモンが入っているマイクロスフェ アは、少なくとも２４時間から１ないし３カ月の期間に渡ってこの成長ホルモン を徐放することによって特徴づけられる。好適な態様において、このポリマーは 生分解性を示し、最も好適には加水分解で分解を生じ、このマイクロスフェアの 直径は１８０ミクロン未満、最も好適には７０ミクロン未満であり、そして皮下 または筋肉内注射で投与するに適切であり（２３ゲージの針で注射するに適切な 大きさは、直径で１８０μｍ未満であろう）、そしてこのマイクロスフェアに含 有させるヒト成長ホルモンの量は０．０１重量％から約５０重量％である。 「マイクロスフェア」を本明細書で用いる場合、特に明記しない限り 、成長ホルモンが全体に分散しているポリマーで作られている固体球、並びに微 細粒子および微細カプセルを意味する目的で用いる。不規則な形状を有するポリ マーまたはポリマー−薬剤粒子を記述する場合特に微細粒子を言及する。微細カ プセルは、ポリマーでないコアが備わっているか或は外側殻とは異なるポリマー のコアが備わっている球形ポリマー考案物である。 成長ホルモンの「徐放」（「ｓｕｓｔａｌｎｅｄ」または「ｅｘｔｅｎｄｅｄ 」ｌｒｅｌｅａｓｅ）を本明細書で用いる場合、これは、連続的または不連続的 、線形または非線形であってもよい。これは、所望の効果を生じさせるように１ 種以上のポリマー組成物、薬剤充填量、賦形剤または分解増強剤を選択するか或 は他の修飾を用いて投与を単独か、組み合わせてか或は逐次的に行うことにより 、達成可能である。 成長ホルモンは、生理学的緩衝剤および塩類が入っている凍結乾燥粉末の形態 で入手可能である。成長ホルモンを マイクロスフェアの中に組み込む方法 ポリマーマイクロスフェアの中に活性剤を組み込むことができる技術は種々知 られている。スプレー乾燥 スプレー乾燥では、ポリマーのための溶媒の中で、ポリマーと成長ホルモンを 一緒に混合した後、この溶液を噴霧してその溶媒を蒸発させることにより、その 活性剤が入っているポリマー滴を残存させる。Ｋ．Ｍａｓｔｅｒｓ著「Ｓｐｒａ ｙ Ｄｒｙｉｎｇ Ｈｎａｄｂｏｏｋ」（Ｊｏｈｎ Ｗｌｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ 、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８４）およびＰａｔｒｉｃｋ Ｂ．Ｄｅａｓｙ著「Ｍ ｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ ａｔｌｏｎ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ」（Ｍａ ｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８４）（これの教 示は本明細書に組み入れられる）の中で詳しくスプレ−乾燥が論評されている。 スプレ−乾燥では、この工程を行っている間に熱が発生することが原因で活性が いくらか失われる可能性があると共に、そのチャンバの側面が有する大きな表面 にそのポリマーが粘着することが原因でその材料がかなりの量で失われる可能性 があることから、これは好適でない。溶媒蒸発 溶媒蒸発技術を用いることでもマイクロスフェアを生じさせることができる。 この技術は、溶解しているか或は分散している活性剤が入っている有機溶媒の中 にポリマーを溶解させることを伴っている。次に、このポリマー／活性剤溶液を 、通常は水溶液である撹拌連続相に加える。この水中油エマルジョンを安定にす る目的で、その水相の中に乳化剤を入れる。次に、数時間以上かけてその有機溶 媒を蒸発させることにより、このポリマーをそのコア材料の回りに堆積させる。 米国特許第３，７３７，３３７号および米国特許第３，５２３，９０６号か、米 国特許第３，６９１，０９０号（減圧下）か、或は米国特許第３，８９１，５７ ０号（熱をかける）に記述されているように単一段階でそのマイクロスフェアか ら溶媒を除去することができる。米国特許第４，３８９，３３０号の中に２段階 技術が記述されている。また、Ｓａｔｏ他「薬剤徐放用の生分解性多孔質マイク ロスフェア、Ｉ．加工条件および溶媒除去技術の評価」、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ ｌｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５、２１−３０（１９８８）の中に報告されてい るように、凍結乾燥を用い ることでマイクロスフェアから溶媒を除去することができる。この方法の技術は 本明細書に組み入れられる。 溶媒蒸発はかなりうまく働くが、Ｂｅｎｉｔａ他著「薬剤充填ポリ（ｄ，１− ラクチド）マイクロスフェアの特徴づけ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｌ．７３、１ ７２１−１７２４（１９８４）の中に報告されているように、薬剤が水相に移行 して失われることが原因でその組み込まれる材料の量が理論値よりも通常低くな ることから、好適でない。相分離 相分離技術を用いることでもまたマイクロスフェアを生じさせることができる 。この技術は、油中水エマルジョンまたは水中油エマルジョンを生じさせること を伴う。温度、ｐＨまたはイオン濃度を変化させるか或は沈澱剤を添加すること によって、ポリマーをその連続相から沈澱させて活性剤の上に到達させる。例え ば、米国特許第４，６７５，８００号他などには、活性蛋白質が入っているポリ （乳酸−コ−グリコール酸）マイクロスフェアを生じさせることが記述されてい る。最初、油中水エマルジョンの水相の中に蛋白質を溶解させるか、或はその蛋 白質を固体としてそのポリマー相の中に分散させる。次に、このポリマーのため の非溶媒、例えばシリコンオイルなどを添加することによって、その水滴または 薬剤粒子の回りにポリマーを沈澱させる。大部分の相分離技術と同様、この最終 生成物は微細カプセルの形態である。ポリマー膜カプセルで取り囲まれたコア材 料が、微細カプセルの中に含まれている。しかしながら、成長ホルモンの搬送を 行う場合、これらの考案物から活性剤を放出させる速度を調節するのが困難であ り得ることから、微細カプセルは好適な態様でない。 この相分離技術では、活性剤が入っているマイクロスフェアの生成がもたらさ れるが、溶媒抽出工程中にしばしば活性剤が失われる。加うるに、スプレー乾燥 の場合と同様、生物学的活性を示す蛋白質がその工程中に変性する可能性がある 。急速凍結、溶媒抽出 所望の特性を示す成長ホルモンマイクロスフェアを製造する好適な方法がＧｏ ｍｂｏｔｚ他の米国特許第５，０１９，４００号（これの教示は本明細書に組み 入れられる）の中に記述されている。 マイクロスフェア製造システムには２つの主要な態様がある、即ち液化ガス− 凍結非溶媒を組み合わせたシステムおよび凍結非溶媒システムがある。 超音波装置を用いて、ポリマーとカプセル封じすべき薬剤を溶液の状態で液化 ガスの中に噴霧する。この噴霧された粒子がその液化ガス（液体窒素）に接触す ると、それらか凍って凍結球を生じる。これらは、沈んで、凍っている非溶媒（ エタノール）の表面に到達する。この液体ガスを蒸発させると、その非溶媒が解 凍するにつれて、これらの球がその非溶媒の中に沈み込み始める。これらの球の 中の溶媒がその非溶媒の中に抽出されることで、そのカプセル封じすべき薬剤が 入っているマイクロスフェアが生じる。例えば、ポリラクチド−コ−グリコリド のポリマー類で球を生じさせる場合など、適宜、他の非溶媒、例えばヘキサンな どを上記非溶媒（エタノール）に加えると、その特定ポリマー類からの溶媒抽出 率が高くなる。 この液化ガスは、液体アルゴン（−１８５．６℃）、液体窒素（−１９５．８ ℃）、液体酸素（−１８２．９℃）、或はその噴霧された粒子 を直ちに凍らせて凍結球を生じさせる他の如何なる気体てあってもよい。酸素は 爆発性を示すと共に蛋白質の酸化を引き起こし得ることから、これは好適でない 。 また、この液化ガス−凍結非溶媒の組み合わせの代わりに、そのポリマーのた めの冷非溶媒を用いることができるが、但し、この非溶媒の温度をそのポリマー ／活性剤溶液の凝固温度よりも低くすることを条件とする。 両方の態様とも、そのポリマー／活性剤がその冷液体に接触するとそれらが直 ちに凝固し、そしてその後徐々に解凍した後、そのポリマーの溶媒がそのマイク ロスフェアから抽出されることが重要である。 この解凍速度は、その溶媒および非溶媒の選択に依存している。このポリマー のための溶媒に関しては、このポリマーのための非溶媒が最初に解けてその凍結 マイクロスフェアをその液体（後にこの中で凍結球の解凍が生じる）の中に沈み 込ませるように、その非溶媒よりも高い融点を有する溶媒を選択することが重要 である。このポリマーマイクロスフェアの製造で冷液体の非溶媒システムを用い る場合、これらのマイクロスフェアは直ちにその非溶媒の中に沈み込むことにな るであろう。このマイクロスフェア内の溶媒が解凍する時、この溶媒がその非溶 媒の中に抽出される。このポリマーのための溶媒とこのポリマーのための非溶媒 は、そのマイクロスフェアからの溶媒抽出を可能にするような混和性を示す必要 がある。表１に、この方法で使用可能な数種のポリマー／溶媒／非溶媒システム と共にそれらの融点を示す。 表１： ポリマー類および適当な溶媒と非溶媒システム、並びに溶媒および非溶 媒の融点（℃） ポリマー 溶媒 非溶媒 ポリ（ラクチド） 塩化メチレン エタノール （−９５．１） （−１１４．５） クロロホルム メタノール （−６３．５） （ −９７．５） ポリ（ラクチドーコー 酢酸エチル エタノール グリコリド酸） （−８３．６） （−１１４．５） アセトン エチルエーテル （−９５．４） （−１１６．３） 塩化メチレン イソペンタン （−９５．１） （−１３０） ポリ（カプロラクトン） 塩化メチレン エタノール （−９５．１） （−１１４．５） ポリ（ビニルアルコール） 水 アセトン （０） （ −９５．４） エチレン−酢酸ビニル 塩化メチレン エタノール （−９５．０） （−１１４．５） 音波ノズル、圧力ノズル、空気ノズルおよび回転噴霧器を含む、小さい粒子を 生じさせる目的で使用可能な多様な装置を用い、液化ガスまたは冷非溶媒どちら かの冷液体の中にポリマー／活性剤／溶媒混合物を噴霧することができる。 例えばノズル直径を変えることなどで滴サイズを変化させることにより、マイ クロスフェアサイズを幅広い範囲で作り出すことができる。非常に大きな球が望 まれている場合、シリンジを用いてその球を冷液体の 中に直接押し出すことができる。このポリマー溶液の固有粘度を高めることでも またマイクロスフェアサイズを大きくすることができる。この方法で生じさせる 球のサイズは直径で１０００ミクロン以上から５ミクロンに至る範囲であっても よい。注射可能なマイクロスフェアに好適なサイズ範囲は直径で３０から１８０ ミクロンである。この技術で生じるマイクロスフェアの形状は球形である。ポリマーマトリックスの選択 これらのマイクロスフェアを生じさせる目的で使用可能なポリマー類には、生 崩壊性を示すポリマー類、例えばポリ（ラクチド）、ポリ（ラクチド−コ−グリ コリド）、ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート類、ポリアミド類、ポリ 無水物類、ポリアミノ酸類、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリシ アノアクリレート類および分解性を示すポリウレタン類など、並びに非崩壊性ポ リマー類、例えばポリアクリレート類、エチレン−酢酸ビニルポリマー類および 他のアシル置換酢酸セルロース類およびそれらの誘導体、非崩壊性ポリウレタン 類、ポリスチレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダ ゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン類およびポリエチレンオキサイドな どが含まれる。ほとんど全ての種類のポリマーが使用可能であるが、但し所望の 融点を示す適当な溶媒および非溶媒を見付け出すことを条件とする。一般的には 、ポリマーが１％から３０％、好適にはポリマーが５−１０％入っているポリマ ー溶液を調製する。 好適な態様ではポリ（ラクチド）を用いる。この言葉を本明細書で用いる場合 、これは、乳酸またはラクチド単独のポリマー類、乳酸とグリコール酸のコポリ マー類、ラクチドとグリコリドのコポリマー類、上記 ポリマー類とコポリマー類の混合物などを包含しており、ここで、この乳酸また はラクチドはラセミ形態か或は光学的に純粋な形態であってもよい。分子量が１ ００，０００以下の範囲のポリラクチドを用いるのが最も望ましい。 ２つの異なる機構を用いて、これらのポリマー系から成長ホルモンを放出させ ることができる。この薬剤の放出は、この薬剤が溶解することにより投薬形態で 生じる水で満たされたチャンネルを通した拡散によってか、或は最初の微細カプ セル封じを行っている間にそのポリマーの溶媒を除去することによって作り出さ れる空隙を通して起こり得る。この２番目の機構は、そのポリマーが分解を生じ ることによって高まる放出である。時間と共にこのポリマーが崩壊し始め、そし てその考案物の空隙率が高まると共にこの考案物内に微細構造が生じてくる。こ れによって、薬剤放出のための追加的通路が作り出される。 バックボーンのエステル結合の加水分解が自然発生的に生じることによって、 このポリマー類の分解が起こる。従って、水吸収に影響を与えるポリマー特性を 変化させることによって、その速度を調節することができる。この特性には、モ ノマーの比率（グリコリドに対するラクチド）、Ｄ／Ｌラクチドとは対照的にＬ −ラクチドを用いること、そしてポリマーの分子量などが含まれる。これらの因 子により、最終的に水浸透率を支配する親水性および結晶性が決定される。親水 性を示す賦形剤、例えば塩類、炭水化物および界面活性剤などを組み込むことで もまた、この考案物への水浸透率を高めることができ、従ってポリマーの崩壊を 早めることができる。 このポリマーの特性および投薬形態の特性を変化させることによって 、上記放出機構各々の貢献度を調節することができると共に、成長ホルモンの放 出速度を変化させることができる。ゆっくりと崩壊するポリマー類、例えばポリ Ｌ−ラクチド、またはグリコリド組成率が低い高分子量のポリ（ラクチド−コ− グリコリド）などを用いると、その放出は拡散律速になるであろう。このグリコ リド組成率を高くしそしてその分子量を低くすると、そのポリマーの水吸収率が 高くなると共に加水分解速度も速くなり、その放出速度に崩壊要素が加わる。 このマイクロスフェアの中に入れる成長ホルモンの充填率を変化させることに よってもまた放出速度を調節することができる。その充填率を高くすると、その 薬剤が溶解する時点で生じる相互連結チャンネルの網目構造が増加することで、 このマイクロスフェアからの薬剤放出率が高まる。成長ホルモン充填率の好適な 範囲は３−３０％（重量／重量）の範囲である。 ｐＨを酸性または塩基性にするとポリマーの加水分解速度が速まり、従って酸 性もしくは塩基性の賦形剤を含めることてそのポリマーの崩壊速度を調節するこ とができる。これらの賦形剤を粒子として添加してもよいか、その組み込むべき 成長ホルモンと一緒に混合してもよいか、或はそのポリマーの中に溶解させても よい。 また、その放出期間に応じて、その成長ホルモンの効力を維持させる目的で賦 形剤を加えることも可能である。安定剤には、炭水化物、アミノ酸、脂肪酸およ び界面活性剤などが含まれ、これらは本分野の技術者に公知である。加うるに、 成長ホルモンが示す溶解度を変化させる賦形剤、例えば塩類、錯化剤（アルブミ ン、プロタミン）などを用いることで、そのマイクロスフェアからの蛋白質放出 速度を調節することができ る。成長ホルモンの放出速度、分解速度および安定性を変化させる添加剤 この成長ホルモンのための安定剤は、重量を基準にして、この蛋白質に対する 比率を基としている。その例には、炭水化物、例えばスクロース、ラクトース、 マンニトール、デキストランおよびヘパリンなど、蛋白質、例えばアルブミンお よびプロタミンなど、アミノ酸、例えばアルギニン、グリシンおよびトレオニン など、界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ（商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（商標） など、塩類、例えば塩化カルシウムおよび燐酸ナトリウムなど、並びに脂質、例 えば脂肪酸、燐脂質および胆汁塩などが含まれる。 これらの比率に関しては、一般に、炭水化物対蛋白質、アミノ酸対蛋白質、蛋 白質用安定剤対蛋白質、および塩類対蛋白質の比率は１：１０から４：１であり 、界面活性剤対蛋白質の比率は１：１０００から１：２０であり、そして脂質対 蛋白質の比率は１：２０から４：１である。 分解増強剤は、ポリマー重量に対する重量を基としている。これらは、その化 合物に応じて、蛋白質相に添加可能であるか、個別の相として（即ち粒子として ）添加可能であるか、或はポリマー相内に共溶解可能である。全ての場合におい て、その量は０．１から３０％（重量／ポリマー重量）でなくてはならない。分 解増強剤の種類には、無機酸類、例えば硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウ ムなど、有機酸類、例えばクエン酸、安息香酸、ヘパリンおよびアスコルビン酸 など、無機塩基、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸 亜鉛および水酸化亜鉛など、並びに有機塩基、例えば硫酸プロタミン、スペルミ ン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノ ールアミンなど、並びに界面活性済、例えばＴｗｅｅｎ（商標）およびＰｌｕｒ ｏｎｉｃ（商標）などが含まれる。 マトリックスに微細構造を加える孔形成剤（即ち水溶性化合物、例えば無機塩 類および糖類など）。粒子としてこれらを加える。その範囲は１から３０％（重 量／ポリマー重量）でなくてはならない。患者への マイクロスフェア投与 成長ホルモンを用いて種々の医学的状態を治療することに関する公知パラメー ターを基として、望まれる成長ホルモン投薬量が得られるように、皮下注射、筋 肉内注射、腹こう内および皮膚内注射によるか、粘膜への投与によるか（例えば 鼻孔内または座薬手段など）、或はインサイチュー搬送などにより、成長ホルモ ンが入っているマイクロスフェアを有効量で患者に投与する。 以下に示す非制限的実施例を用いて本発明のさらなる説明を行う。 実施例１： 成長ホルモンが入っているポリ（Ｌ−乳酸）マイクロスフェアの製 造 ３．２ｍＬの塩化メチレンにポリＤ／Ｌラクチド−コ−グリコリド（５０：５ ０）（固有粘度０．１６）（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｂｉｒ ｍｉｎｇｈａｍ ＡＬ）を０．５４ｇ溶解させた。このポリマー溶液に、１：４ のモル比で亜鉛イオンが入っている凍結乾燥ヒト成長ホルモンを６０ｍｇそして 重炭酸ナトリウム（１０ｍｇ）を加えた。この凍結乾燥蛋白質の粒子サイズ範囲 は２−５ミクロンであった。この溶液を１０ｍＬの気密シリンジの中に入れた。 ポリプロピレン製の丸い容器（直径が１７ｃｍで深さが８ｃｍ）に１００％エタ ノールを２００ｍＬの量で加えた。この溶液を液体窒素内で凍らせた後、５００ ｍＬの液体窒素で覆った。シリンジポンプを用い、このポリマー蛋白質混合物を 、そのシリンジから、その液体窒素とその凍らせたエタノールが入っている容器 の上に位置させた超音波ノズル（Ｍｏｄｅ，Ｓｏｎｌｃｓ ａｎｄ Ｍａｔｅｒ ｉａｌ、Ｄａｎｂｕｒｙ ＣＴ）の中に２ｍＬ／分でポンプ輸送した。このノズ ルを用いてその懸濁液を噴霧して滴を生じさせたが、この滴は、その液体窒素と 接触すると凝固してマイクロスフェアを生じ、このマイクロスフェアは、沈んで 、その凍っているエタノールの上に到達した。 この容器を−８００℃にすると、時間と共に、その液体窒素が蒸発しそしてそ のエタノールが解けた。このエタノールが解けるにつれて、そのマイクロスフェ アが液体の中に沈降し、その液体に塩化メチレンが抽出された。２４時間後、こ の容器に、予め−８０℃に冷却した１００％エタノールを更に２００ｍＬ加えた 。３日後、１ミクロンのＤｕｒａｐｏｒｅ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｏｒ ｄ、ＭＡ）を用いて、そのマイクロスフェアとエタノールが入っているスラリー の濾過を行った。次に、この濾過したマイクロスフェアの凍結乾燥を行った。 実施例２： ポリ（Ｄ／Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）マイクロスフェアから 放出される成長ホルモンのインビボアッセイ 実施例１で製造したマイクロスフェアを、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｐｈａｒｍａｃｏ ｐｅｉａの中に詳述されているラットを用いるバイオアッセイで試験した。下垂 体を切除したラットをＴａｃｏｎｌｃｓ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、Ｎｅｗ Ｙｏ ｒｋから入手した。３グループの動物を用いた。グループ１および２にそれそれ ２０μｇおよび８０μｇのｈＧＨを日に１回注射した。グループ３に関しては、 １８ｍｇのマイクロスフェア を背中に皮下注射した。これらの働物を標準的食餌で飼育すると共に自由に水を 与えた。 体重の増加度を図１に示す。この注射可能な調合物を用いた場合、効力を示す ホルモンが徐放され、その結果として体重が増加した。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年６月３０日 【補正内容】 請求の範囲 １． ポリ（ラクチド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）類、ポリ（カプ ロラクトン）、ポリカーボネート類、ポリアミド類、ポリ無水物類、ポリアミノ 酸類、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリシアノアクリレート類、 分解性を示すポリウレタン類、ポリアクリレート類、エチレン−酢酸ビニルのポ リマー類および他のアシル置換酢酸セルロース類およびそれらの誘導体、多糖類 、非崩壊性ポリウレタン類、ポリスチレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニ ル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン類、ポリエ チレンオキサイド、コポリマー類およびそれらの混合物から成る群から選択され る生体適合性ポリマー類で作られている、直径が１０００ミクロン未満のポリマ ーマイクロスフェアであって、０．１から３０重量％（重量／ポリマー重量）の 濃度で存在している、塩類、錯化剤、無機酸、有機酸、無機塩基、有機塩基およ び界面活性剤から成る群から選択される、成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形 剤およびポリマーの崩壊速度を調節する賦形剤との組み合わせで、このポリマー の中に分散している成長ホルモンを０．１から５０重量％の濃度で含んでおり、 そしてここで、この成長ホルモンを生理学的条件下で１日よりも長い期間に渡っ て放出するマイクロスフェア。 ２． 該ポリマーがポリラクチドまたはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）で ある請求の範囲１のマイクロスフェア。 ３． 該直径が１８０ミクロン未満である請求の範囲１のマイクロスフェア。 ４． 該崩壊速度を調節する賦形剤が孔形成剤であり、これを粒子形 態で該ポリマーに１から３０％（重量／ポリマー重量）の濃度で加える請求の範 囲１のマイクロスフェア。 ５． 該安定剤を炭水化物、アミノ酸、蛋白質、脂質、塩類、脂肪酸および界 面活性剤から成る群から選択する請求の範囲１のマイクロスフェア。 ６． 成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形剤が亜鉛イオンでありそしてこれ を０．１から３０％（重量／ポリマー重量）の濃度で存在させる請求の範囲１の マイクロスフェア。 ７． ポリマーの中に分散している成長ホルモンが０．１から５０重量％の濃 度で入っていると共に、このポリマーの崩壊速度を調節する賦形剤、ヒト成長ホ ルモンの効力を安定化する賦形剤、および成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形 剤、から成る群から選択される賦形剤が入っている、ポリ（ラクチド）、ポリ（ ラクチド−コ−グリコリド）類、ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート類 、ポリアミド類、ポリ無水物類、ポリアミノ酸類、ポリオルトエステル類、ポリ アセタール類、ポリシアノアクリレート類、分解性を示すポリウレタン類、ポリ アクリレート類、エチレン−酢酸ビニルのポリマー類および他のアシル置換酢酸 セルロース類およびそれらの誘導体、多糖類、非崩壊性ポリウレタン類、ポリス チレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、 クロロスルホン化ポリオレフィン類、ポリエチレンオキサイド、コポリマー類お よびそれらの混合物から成る群から選択される生体適合性ポリマー類で作られて おりそして成長ホルモンが０．１から５０重量％入っている直径が１８０ミクロ ン未満の生体適合性ポリマーマイクロスフェアを、成長ホルモンで治療すること が必要とされてい る患者に投与し、ここで、この成長ホルモンを１日よりも長い期間に渡って放出 させることを含む、成長ホルモンの投与方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 47/34 Ｃ 7433−4Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，Ｍ Ｇ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (72)発明者 バーンスタン，ハワード アメリカ合衆国マサチユセツツ州02139ケ ンブリツジ・センターストリート５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． ポリ（ラクチド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）類、ポリ（カプ ロラクトン）、ポリカーボネート類、ボリアミド類、ポリ無水物類、ポリアミノ 酸類、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリシアノアクリレート類、 分解性を示すポリウレタン類、ポリアクリレート類、エチレン−酢酸ビニルのポ リマー類および他のアシル置換酢酸セルロース類およびそれらの誘導体、多糖類 、非崩壊性ポリウレタン類、ポリスチレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニ ル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン類、ポリエ チレンオキサイド、コポリマー類およびそれらの混合物から成る群から選択され る生体適合性ポリマー類で作られている、直径が１０００ミクロン未満のポリマ ーマイクロスフェアであって、この中には、このポリマーの中に分散している成 長ホルモンが０．１から５０重量％の濃度で入っていると共に、このポリマーの 崩壊速度を調節する賦形剤、ヒト成長ホルモンの効力を安定化する賦形剤、およ び成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形剤、から成る群から選択される賦形剤が 入っており、そしてこの成長ホルモンを生理学的条件下で１日よりも長い期間に 渡って放出するマイクロスフェア。 ２． 該ポリマーがポリラクチドまたはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）で ある請求の範囲１のマイクロスフェア。 ３． 該直径が１８０ミクロン未満である請求の範囲１のマイクロスフェア。 ４． 該崩壊速度を調節する賦形剤が孔形成剤であり、これを粒子形態で該ポ リマーに１から３０％（重量／ポリマー重量）の濃度で加える 請求の範囲１のマイクロスフェア。 ５． 該安定剤を炭水化物、アミノ酸、蛋白質、脂質、塩類、脂肪酸および界 面活性剤から成る群から選択する請求の範囲１のマイクロスフェア。 ６． 成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形剤を０．１から３０％（重量／ポ リマー重量）の濃度で存在させ、そしてこれらを塩類、錯化剤、無機酸、有機酸 、無機塩基、有機塩基および界面活性剤から成る群から選択する請求の範囲１の マイクロスフェア。 ７． ポリマーの中に分散している成長ホルモンが０．１から５０重量％の濃 度で入っていると共に、このポリマーの崩壊速度を調節する賦形剤、ヒト成長ホ ルモンの効力を安定化する賦形剤、および成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形 剤、から成る群から選択される賦形剤が入っている、ポリ（ラクチド）、ポリ（ ラクチド−コ−グリコリド）類、ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート類 、ポリアミド類、ポリ無水物類、ポリアミノ酸類、ポリオルトエステル類、ポリ アセタール類、ポリシアノアクリレート類、分解性を示すポリウレタン類、ポリ アクリレート類、エチレン−酢酸ビニルのポリマー類および他のアシル置換酢酸 セルロース類およびそれらの誘導体、多糖類、非崩壊性ポリウレタン類、ポリス チレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、 クロロスルホン化ポリオレフィン類、ポリエチレンオキサイド、コポリマー類お よびそれらの混合物から成る群から選択される生体適合性ポリマー類で作られて おりそして成長ホルモンが０．１から５０重量％入っている直径が１８０ミクロ ン未満の生体適合性ポリマーマイクロスフェアを、成長ホルモンで治療すること が必要とされてい る患者に投与し、ここで、この成長ホルモンを１日よりも長い期間に渡って放出 させることを含む、成長ホルモンの投与方法。 ８． ポリ（ラクチド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）類、ポリ（カプ ロラクトン）、ポリカーボネート類、ポリアミド類、ポリ無水物類、ポリアミノ 酸類、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリシアノアクリレート類、 分解性を示すポリウレタン類、ポリアクリレート類、エチレン−酢酸ビニルのポ リマー類および他のアシル置換酢酸セルロース類およびそれらの誘導体、多糖類 、非崩壊性ポリウレタン類、ポリスチレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニ ル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン類、ポリエ チレンオキサィド、コポリマー類およびそれらの混合物から成る群から選択され る生体適合性ポリマー類で作られている請求の範囲７の方法。 ９． 該ポリマーがポリラクチドまたはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）で ある請求の範囲８の方法。 １０． 該マイクロスフェアの直径が７０ミクロン未満である請求の範囲７の 方法。 １１． 筋肉内、皮下、腹こう内または皮膚内注射で該マイクロスフェアを投 与する請求の範囲７の方法。 １２． 粘膜に塗布することによって該マイクロスフェアを投与する請求の範 囲７の方法。 １３． ａ）ポリマー一成長ホルモン溶液の滴を、噴霧されたこのポリマー溶 液に接触した時点でこの溶液の凝固を直ちに生じさせるに有効なほどこのポリマ ー溶液の凝固点より低い温度の液化ガスの中に噴霧することによって、この滴を 凍らせるが、ここで、上記液化ガスは、この ポリマーのための液状非溶媒の凍っている層の上に位置しており、そしてここで 、このポリマーの溶媒はその液状非溶媒に混和性を示し、 ｂ）その凍っているポリマー溶液滴内に存在している、該ポリマーの 溶媒を解かし、そして ｃ）この溶媒をその滴から液状非溶媒の中に抽出させて球形のポリマ ーマイクロスフェアを生じさせることにより、 成長ホルモンが０．１から５０重量％の濃度で入っていると共に、ポ リマーの崩壊速度を調節する賦形剤、成長ホルモンの効力を安定化する賦形剤、 および成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形剤、から成る群から選択される賦形 剤が更に入っている、ポリ（ラクチド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、 ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート類、ポリアミド類、ポリ無水物類、 ポリアミノ酸類、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリシアノアクリ レート類、分解性を示すポリウレタン類、ポリアクリレート類、エチレン−酢酸 ビニルのポリマー類および他のアシル置換酢酸セルロース類およびそれらの誘導 体、非崩壊性ポリウレタン類、ポリスチレン類、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビ ニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン類、ポリ エチレンオキサイド、コポリマー類およびそれらの混合物から成る群から選択さ れる生体適合性ポリマー類で作られている直径が１８０ミクロン未満のポリマー マイクロスフェアを製造する、 ことを含む、成長ホルモンを徐放投与するに適した考案物の製造方法。 １４． 該崩壊速度を調節する賦形剤が孔形成剤であり、これを粒子形態で該 ポリマーに１から３０％（重量／ポリマー重量）の濃度で加える請求の範囲１３ の方法。 １５． 該安定剤を炭水化物、アミノ酸、蛋白質、脂質、塩類、脂肪酸および 界面活性剤から成る群から選択する請求の範囲１３の方法。 １６． 成長ホルモンの溶解度を修飾する賦形剤を０．１から３０％（重量／ ポリマー重量）の濃度で存在させ、そしてこれらを塩類、錯化剤、無機酸、有機 酸、無機塩基、有機塩基および界面活性剤から成る群から選択する請求の範囲１ ３の方法。