JP6262158B2

JP6262158B2 - 免疫応答を増強するための組成物および方法

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Publication number: JP6262158B2
Application number: JP2015000020A
Authority: JP
Inventors: ジョンストン，ジェームズ; コルチャック，ボゼナ; バートン，グラハム
Original assignee: National Research Council of Canada
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Priority date: 2007-10-26
Filing date: 2015-01-05
Publication date: 2018-01-17
Anticipated expiration: 2028-10-23
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Description

本発明は、免疫応答を増強するためのカロテノイド酸化生成物の使用に関する。

多細胞生物は病原体に対する２つの一般的な免疫系を発達させてきた。これらの２つの系は生得または自然免疫（「生得免疫」としても知られる）と適応（獲得）免疫または特異的免疫である。これらの２つの系の間の主な違いは、病原体を認識する機構である。

生得免疫系は、微生物に存在する保存されている分子パターンの認識のために、生殖細胞系によりコードされている受容体セットを用いる。これらの分子パターンは、リポ多糖、ペプチドグリカン、リポテイコ酸、ホスファチジルコリン、細菌特異的タンパク質（リポタンパク質を含む）、細菌ＤＮＡ、ウイルス一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、非メチル化ＣｐＧ−ＤＮＡ、マンナンおよび様々な他の細菌および真菌細胞壁成分を含む、微生物の特定の構成要素に見られる。このような分子パターンはまた、植物アルカロイドなどの他の分子にも見られる。これらの生得免疫認識の標的は、微生物により産生されるが、感染した宿主生物によっては産生されないので、病原体関連分子パターン(Pathogen Associated Molecular Patterns)（ＰＡＭＰ）と呼ばれる。ＰＡＭＰを認識する生得免疫系の受容体は、パターン認識受容体(Pattern Recognition Receptors)（ＰＲＲ）と呼ばれる（Janeway et al., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 54:1 (1989); Medzhitov et al., Curr. Opin. Immunol. 94:4 (1997)参照）。これらの受容体は構造が異なり、いくつかの異なるタンパク質ファミリーに属する。これらの受容体のいくつかはＰＡＭＰを直接認識する（例えば、ＣＤ１４、ＤＥＣ２０５、コレクチン）が、他のもの（例えば、補体受容体）はＰＡＭＰ認識により生成される生成物を認識する。これらの受容体ファミリーのメンバーは一般に、（１）血漿中を循環する体液性受容体；（２）免疫細胞表面で発現されるエンドサイトーシス型受容体；および（３）細胞表面または細胞内のいずれかで発現可能なシグナル伝達受容体の３つの種類に分類することができる(Medzhitov et al., Curr. Opin. Immunol. 94:4 (1997); Fearon et al., Science 272:50 (1996))。

細胞ＰＲＲは、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球および表面上皮などの、適応免疫においてプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）として働く細胞を含む、生得免疫系のエフェクター細胞上で発現される。この発現特性は、以下に述べるように、ＰＲＲに生得的エフェクター機構を直接誘導し、また、炎症性サイトカインおよびケモカインなどの内因性シグナルセットの発現を誘導することによって、感染性病原体の存在に対して宿主生物に警戒体制をとらせる。この後者の機能は、侵入者に対抗するためのエフェクター力の効率的な動員を可能とする。

対照的に、適応免疫系は、脊椎動物にのみ見られ、各個の成分の発生中に体細胞機構によって生成される２種類の抗原受容体を用いる。この２種類の抗原受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と免疫グロブリン受容体（ＩｇＲ）であり、それぞれＴリンパ球とＢリンパ球の２つの特殊な細胞種で発現される。これらの抗原受容体の特異性は、リンパ球の成熟の間に、体細胞の遺伝子再構成、受容体サブユニットのランダムな対合のプロセスによって、また、再配列の際のコード領域への鋳型に依存しないヌクレオチドの付加によって、ランダムに生じる。

生得免疫系は、適応免疫応答の発動の制御および適当な細胞エフェクター応答の誘導に重要な役割を果たす(Fearon et al., Science 272:50 (1996))。現在、ナイーブなＴリンパ球の活性化には２つの異なるシグナルが必要であり、一方はＴＣＲにより認識される特異的抗原ペプチドであり、もう一方はＡＰＣ上で発現され、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ２８分子によって認識される、いわゆる共刺激シグナルＢ７であることが十分に確認されている(Lenschow et al., Annu. Rev. Immunol. 14:233 (1996))。ナイーブなＣＤ４^＋Ｔリンパ球の活性化には、特定の抗原とＢ７分子の両シグナルが同じＡＰＣ上で発現される必要がある。ナイーブなＣＤ４Ｔ細胞がＢ７シグナルの不在下で抗原を認識すれば、そのＴ細胞はアポトーシスによって死に至る。従って、ＡＰＣ上でのＢ７分子の発現は、ナイーブなＣＤ４Ｔリンパ球が活性化されるかどうかを制御する。ＣＤ４Ｔ細胞は細胞傷害性機能に関するＣＤ８Ｔ細胞の活性化および抗体生産に関するＢ細胞の活性化を制御するので、Ｂ７分子の発現は適応免疫応答が活性化されるかどうかを決定する。

生得免疫系はＢ７発現の制御に重要な役割を果たす(Fearon et al., Science 272:50 (1996); Medzhitov et al., Cell 91:295 (1997))。前述のように、生得免疫認識はＰＡＭＰを認識するＰＲＲにより媒介される。ＰＲＲによるＰＡＭＰの認識は、Ｂ７、サイトカインおよびケモカインなどのリンパ球の活性化に必要なシグナルをコードする遺伝子を含む、種々の誘導性免疫応答遺伝子の発現を制御するシグナル伝達経路の活性化をもたらす(Medzhitov et al., Cell 91:295 (1997); Medzhitov et al., Nature 388:394 (1997))。よって、ＰＡＭＰ認識の際のＰＲＲによるＢ７発現の誘導は、自己／非自己の識別を説明し、微生物由来抗原に特異的なＴ細胞だけが通常活性化されることを保証する。この機構は通常、自己抗原に特異的な自己反応性リンパ球の活性化を妨げる。

Ｂ７分子およびサイトカインの発現を制御する生得免疫系受容体は最近同定された(Medzhitov et al., Nature 388:394 (1997); Rock et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:588 (1998))。これらの受容体は、ショウジョウバエ(Drosophila)胚における背腹パターン化と成虫のハエにおける免疫応答の双方に関与する、いわゆるショウジョウバエＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のファミリーに属する(Lemaitre et al., Cell 86:973 (1996))。哺乳類生物において、このようなＴＬＲは、細菌生成物ＬＰＳ、ペプチドグリカンおよびリポタンパク質などＰＡＭＰを認識することが示されている(Schwandner et al., J. Biol. Chem. 274:17406 (1999); Yoshimura et al., J. Immunol. 163:1 (1999); Aliprantis et al., Science 285:736 (1999))。

感染性病原体により引き起こされる疾病に対して防御する手段として従来ワクチンが用いられて、ワクチン技術の発達とともに、限定されるものではないが、哺乳類の生殖能の制御、ホルモン作用の調節および腫瘍の予防または治療を含むさらなる適用に用いられて来た。疾病に対する防御に用いられるワクチンの主要な目的は、特定の微生物に免疫記憶を誘導することである。より一般には、ワクチンは、微生物に属するものであれ、または腫瘍細胞もしくはその他の病的もしくは異常細胞により発現されるものであれ、特定の抗原に対して免疫応答を誘導するために必要とされる。抗原に特異的な表面受容体を有するＢおよびＴリンパ球の分裂および分化は特異性と記憶の双方を生じる。

ワクチンが防御免疫応答を誘導するためには、次の要件を満たさなければならない：１）ワクチン接種後に防御免疫の標的となる特定の抗原またはそのフラグメントを誘導しなければならないこと、２）このような抗原を、免疫系により認識され得る形態、例えば、免疫認識前に分解耐性がある形態で提供しなければならないこと、および３）ＡＰＣを活性化して抗原をＣＤ４^＋Ｔ細胞に提示し、次に、Ｂ細胞の分化およびその他の免疫エフェクター機能を誘導しなければならないこと。

従来のワクチンは、宿主に接種した際にそれら自体は重篤な感染を引き起こすことはできないが、非改変種（または毒性）種を打ち消し得る、ウイルスまたは細菌の弱毒または死滅微生物の懸濁液を含む。この用語の使用は今や、能動的免疫予防を意図する任意の調製物（例えば、毒性株の死滅微生物または弱毒株（変種または突然変異種）の生きた微生物の調製物；微生物；真菌、植物、原虫、または後生動物誘導物もしくは生成物；および合成ワクチン）を本質的に含むように拡大されている。ワクチンの例としては、限定されるものではないが、天然痘に対する接種用の牛痘ウイルス、破傷風を予防するための破傷風毒素、百日咳(pertussis)を予防するための不活性化全細菌、連鎖球菌性肺炎を予防するための多糖サブユニットおよびＢ型肝炎を予防するための組換えタンパク質が挙げられる。

弱毒ワクチンも通常免疫原性であるが、それらの有効性が一般に毒性の分子決定に関する特殊で詳細な知見を必要とするために、それらの使用は制限されてきた。さらに、ワクチンにおける弱毒病原体の使用は、ほとんどの場合でヒトにおける安全な使用を妨げる様々なリスク因子を伴う。

他方、合成ワクチンに伴う問題は、それらが非免疫原性または非防御性である場合が多いということである。合成ワクチンの免疫原性を高めるために利用可能なアジュバントの使用は、アジュバント自体によって引き起こされる望ましくない副作用のために選択されない場合が多い。

アジュバントは抗原の免疫原性を高める任意の物質である。ミョウバンなどの化学物質がアジュバントであると考えられる場合が多いが、それらは担体に似た働きをし、抗原を安定化し、かつ／または抗原提示細胞との相互作用を促進することによって働くと思われる。最良のアジュバントは、生得免疫系を活性化する微生物の能力を模倣するものである。純粋な抗原は、リンパ球の活性化に必要な共刺激シグナル（例えば、Ｂ７．１またはＢ７．２）を誘導できないために免疫応答を誘導しない。よって、アジュバント活性の重要な機構は、アジュバントの通例の構成要素であるＰＡＭＰを担持する、微生物のまたは微生物様の構成要素により共刺激シグナルの誘導にあるものとされてきた（Janeway et al., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 54: 1 (1989)参照）。前述のように、ＰＲＲによるこれらのＰＡＭＰの認識はリンパ球の活性化（Ｂ７など）および分化（エフェクターサイトカイン）に必要なシグナルを誘導する。

免疫原性を増強するためにワクチン製剤にアジュバントを配合する利益は、これらの薬剤が有害な局部反応および／または全身反応を誘発するというリスクに比重を置かなければならない。局部的有害反応としては、注射部位における局部的炎症およびまれではあるが、肉芽腫または無菌性膿瘍の形成の誘発が挙げられる。実験動物に見られるアジュバントに対する全身反応としては、倦怠、発熱、アジュバント関節炎および前部ブドウ膜炎が挙げられる(Allison et al., Mol. Immunol. 28:279 (1991); Waters et al., Infect. Immun., 51:816 (1986))。このような反応は、多くの場合、アジュバントが誘発するサイトカイン特性によるものであり得る。よって、フロイントの完全アジュバントまたはフロイントの不完全アジュバントなどの多くの有用なアジュバントは毒性があり、従って、ヒトのワクチン接種ではなく、動物研究目的にのみ有用である。

ミョウバンは、有効性は比較的限られているとしても、生得免疫刺激剤ではなく、従って過度な炎症を引き起こさないので、現在、臨床アジュバントとして認可されている。

Janeway et al., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 54:1 (1989) Medzhitov et al., Curr. Opin. Immunol. 94:4 (1997) Fearon et al., Science 272:50 (1996) Lenschow et al., Annu. Rev. Immunol. 14:233 (1996) Medzhitov et al., Cell 91:295 (1997) Medzhitov et al., Nature 388:394 (1997) Rock et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:588 (1998) Lemaitre et al., Cell 86:973 (1996) Schwandner et al., J. Biol. Chem. 274:17406 (1999) Yoshimura et al., J. Immunol. 163:1 (1999) Aliprantis et al., Science 285:736 (1999) Janeway et al., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 54: 1 (1989) Allison et al., Mol. Immunol. 28:279 (1991) Waters et al., Infect. Immun., 51:816 (1986)

よって、炎症性応答を生じずに抗原の免疫原性を高めるアジュバントの必要がある。また、感染に対して宿主によるより迅速かつ有効な応答を生じさせるため、または抗生物質の有効性を高めるために、生得および適応免疫系を増感またはプライミングすることができる免疫系モジュレーターの必要がある。

発明の概要
本発明は、酸化的に変換されたカロテノイドおよびその成分の投与のための組成物、方法およびキットを提供する。これらの組成物は被験体の生得および適応免疫系を増感するのに有用であり得、よって、感染を処置するために、または免疫化のアジュバントとして使用することができる。

第１の態様において、本発明は、感染を有する被験体を処置する方法であって、被験体に酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を、その感染を処置するのに十分な量で投与することによる方法を特徴とする。

関連の態様において、本発明は、感染を有する、または感染のリスクを有するヒト被験体を処置する方法であって、被験体に酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を、その感染を処置するのに十分な量で投与することによる方法を特徴とする。

別の関連の態様において、本発明は、感染を有する、または感染のリスクを有する被験体を処置する方法であって、被験体にその感染を処置するのに十分な量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与することにより、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分が静脈内、眼球、筋肉内、局所、皮下または鼻腔内投与される方法を特徴とする。

本発明は、感染を有する被験体において免疫応答を増強する方法であって、被験体に有効量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与することによる方法を特徴とする。

本発明はまた、感染を有する、または感染のリスクを有するヒト被験体において免疫応答を増強する方法であって、被験体に有効量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与することによる方法を特徴とする。

本発明はさらに、感染を有する、または感染のリスクを有するヒト被験体において免疫応答を増強する方法であって、被験体に有効量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与することにより、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分が静脈内、眼球、筋肉内、局所、皮下または鼻腔内投与される方法を特徴とする。

上記方法の特定の実施形態では、感染は細菌、ウイルス、真菌または寄生虫によるものではない。例えば、感染は市中肺炎、上下気道感染、皮膚および軟組織感染、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染、腎盂腎炎、腹腔内感染、細菌性敗血症、中枢神経系感染、菌血症、創傷性感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷後感染、尿生殖路感染、骨盤炎症性疾患、心内膜炎または血管内感染であり得る。酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、眼の感染の処置のために眼球投与することができる。別の実施形態では、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、口腔感染の処置のために被験体の口腔に局所投与される。

上記方法のさらに他の実施形態において、被験体は感染を有すると診断されなかったが、感染のリスクがある。あるいは、これらの方法は感染を有する被験体を処置するためにも用いられる。

上記態様のいずれかの特定の実施形態では、その方法は、被験体に抗生物質を投与することをさらに含み、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分と抗生物質は同時に投与されるか、または互いに１４日以内、１０日以内、７日以内または３日以内に投与される。

関連の態様において、本発明は、免疫される被験体において抗原に対する適応免疫応答を増強する方法であって、（ｉ）被験体に有効量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与すること、および（ｉｉ）被験体に抗原を投与することを含み、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分が抗原の前に投与される方法を特徴とする。

本発明はまた、免疫されるヒト被験体において抗原に対する適応免疫応答を増強する方法であって、被験体に有効量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与することを含む方法を特徴とする。

本発明はさらに、免疫される被験体において抗原に対する適応免疫応答を増強する方法であって、被験体に有効量の酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を投与することを含み、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分が静脈内、眼球、筋肉内、局所、皮下または鼻腔内投与される方法を特徴とする。

関連の態様において、本発明は、免疫される被験体において抗原に対する適応免疫応答を増強するためのキットであって、（ｉ）酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含む医薬組成物と、（ｉｉ）抗原を含む医薬組成物と、（ｉｉｉ）被験体の免疫化のために酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分と抗原を投与することに関する説明書を含みキットを特徴とする。

適応免疫応答の増強に向けられた上記の方法またはキットのいずれにおいても、抗原は、例えば、細菌、ウイルス、真菌または寄生虫などの病原体に由来するものであり得る。特定の実施形態では、抗原は炭水化物、糖脂質、糖タンパク質、脂質、タンパク質、リポタンパク質、リン脂質またはポリペプチドである。病原体は例えば、生ウイルスまたは弱毒生ウイルスであり得る。いくつかの実施形態では、病原体は炭疽、インフルエンザ、ポリオ、麻疹、狂犬病または本明細書に記載されているいずれかの病原体である。

適応免疫応答の増強に向けられた上記の方法またはキットのいずれにおいても、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、抗原投与の１４日以内、１０日以内、８日以内、６日以内、４日以内、３日以内、２日以内に、または１日以内であっても投与することができる。特定の実施形態では、抗原は酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の前に投与される。他の実施形態では、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、抗原の前に投与される。さらに別の実施形態では、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、抗原と同時に投与される。

関連の態様において、本発明は、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分と抗原を含む医薬組成物を特徴とする。医薬組成物は例えば、経口、静脈内、筋肉内、眼球、局所、皮下または鼻腔内投与用に調剤することができる。特定の実施形態では、抗原は例えば、細菌、ウイルス、真菌または寄生虫などの病原体に由来するものであり得る。特定の実施形態では、抗原は炭水化物、糖脂質、糖タンパク質、脂質、タンパク質、リポタンパク質、リン脂質またはポリペプチドである。病原体は、例えば、生ウイルスまたは弱毒生ウイルスであり得る。いくつかの実施形態では、病原体は炭疽、インフルエンザ、ポリオ、麻疹、狂犬病または本明細書に記載されているいずれかの病原体である。

別の態様において、本発明は、（ｉ）酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含む医薬組成物と、（ｉｉ）感染を有する、または感染のリスクを有する被験体の処置のために組成物を投与することに関する説明書を含むキットを特徴とする。特定の実施形態では、感染は細菌、ウイルス、真菌または寄生虫によるものである。例えば、感染は市中肺炎、上下気道感染、皮膚および軟組織感染、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染、腎盂腎炎、腹腔内感染、細菌性敗血症、中枢神経系感染、菌血症、創傷性感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷後感染、尿生殖路感染、骨盤炎症性疾患、心内膜炎または血管内感染であり得る。他の実施形態では、キットは被験体に抗生物質を投与することに関する説明書をさらに含む。

本発明はまた、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含む練り歯磨きを特徴とする。この練り歯磨きは、本明細書に記載されているものなど、練り歯磨きの製造に有用であることが知られている任意の賦形剤ともに調剤することができる。

本発明はさらに、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含む口内洗浄剤を特徴とする。この口内洗浄剤は、本明細書に記載されているものなど、口内洗浄剤の製造に有用であることが知られている任意の賦形剤ともに調剤することができる。

本発明はまた、眼への投与用に調剤された、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含む医薬組成物を特徴とする。この医薬組成物は、例えば、点眼剤、眼用塗布剤、眼軟膏、眼用噴霧剤、結膜下注射剤もしくは硝子体内注射剤、コンタクトレンズ、結膜インサートまたは眼用インサートであり得る。この医薬組成物は、本明細書に記載されているものなど、眼への送達用製剤の製造に有用であることが知られている任意の賦形剤ともに調剤することができる。

上記の方法、組成物およびキットのいずれにおいても、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、酸化的に変換されたカロテノイドの重合成分を含み得る。他の実施形態では、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、２−メチル−６−オキソ−２，４−ヘプタジエナール、ジヒドロアクチニジオリド、β−シクロシトラール、β−イオノン、β−イオノン５，６−エポキシド、４−オキソ−β−イオノン、β−イオニリデンアセトアルデヒド、β−イオニリデンアセトアルデヒド５，６−エポキシド、４−オキソ−β−イオニリデンアセトアルデヒド、β−アポ−１３−カロテノン、β−アポ−１３−カロテノン５，６−エポキシド、４−オキソ−β−アポ−１３−カロテノン、レチナール、レチナール５，６−エポキシドまたはそれらの混合物を含む酸化的に変換されたカロテノイドの成分を含む。さらに別の実施形態において、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、２−メチル−６−オキソ−２，４−ヘプタジエナールを含む。望ましくは、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、酸化的に変換されたカロテノイドである。特定の実施形態では、酸化的に変換されたカロテノイドは、β−カロテン、リコペン、レチノイン酸またはカンタキサンチンの酸化生成物である。

上記の方法、組成物およびキットのいずれにおいても、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、経口、静脈内、筋肉内、眼球、局所、皮下、鼻腔内で、または本明細書に記載されている他のいずれかの投与経路によって投与することができる。

上記の方法、組成物およびキットのいずれにおいても、被験体はヒト、家庭内ペット（例えば、イヌ、ネコ、ウマまたは鳥類）、または農業用動物、例えば、ヒツジ、ブタ、畜牛（例えば、乳牛または肉牛）、家禽類（例えば、シチメンチョウまたはニワトリ）、または魚類（例えば、テラピア、ナマズ、マスまたはサケ）などであり得る。

本明細書において「有効量」とは、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の、被験体の生得または適応免疫系を増感する、従って、感染に対する免疫応答を増強する量を意味する。

「十分な量」とは、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の、感染または感染に関連する疾病を治療または予防するのに必要とされる量を意味する。感染により引き起こされる、または感染を原因とする症状の治療的処置または予防的処置に関して本発明を実施するために用いられる本発明の医薬組成物の有効量は、投与様式、被験体の齢、体重および健康状態によって異なる。最終的には、担当の医師または獣医が適当な量および投与計画を決定する。このような量は「十分な量」と呼ばれる。

本明細書において「カロテノイド」とは、植物、藻類、細菌および特定の動物（鳥類および甲殻類など）に見られるテルペノイド群の天然色素を意味する。カロテノイドには、炭化水素である（すなわち、酸素を含まない）カロテンとそれらの酸素化誘導体（すなわち、キサントフィル）が含まれる。カロテノイドの例としては、リコペン；β−カロテン；ゼアキサンチン；エキネノン；イソゼアキサンチン；アスタキサンチン；カンタキサンチン；ルテイン；シトラナキサンチン；β−アポ−８’−カロテン酸エチルエステル；アロキサンチン、アポカロテノール、アスタセン、アスタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、カロテンジオール、カロテントリオール、カロテノール、クリプトキサンチン、デカプレノキサンチン、エピルテイン、フコキサンチン、ヒドロキシカロテノン、ヒドロキシエキネノン、ヒドロキシリコペン、ルテイン、リコキサンチン、ニューロスポリン、フィトエン、フィトフルオエン、ロドピン、スフェロイジン、トルレン、ビオラキサンチンおよびゼアキサンチンなどのヒドロキシカロテノイド；ならびにアポカロテノイン酸、β−アポ−８’−カロテン酸、アザフリン、ビキシン、カルボキシルカロテン、クロセチン、ジアポカロテン酸、ニューロスポラキサンチン、ノルビキシンおよびリコペン酸などのカルボン酸カロテノイドが挙げられる。

本明細書において「成分」とは、２−メチル−６−オキソ−２，４−ヘプタジエナール、ジヒドロアクチニジオリド、β−シクロシトラール、β−イオノン、β−イオノン５，６−エポキシド、４−オキソ−β−イオノン、β−イオニリデンアセトアルデヒド、β−イオニリデンアセトアルデヒド５，６−エポキシド、４−オキソ−β−イオニリデンアセトアルデヒド、β−アポ−１３−カロテノン、β−アポ−１３−カロテノン５，６−エポキシド、４−オキソ−β−アポ−１３−カロテノン、レチナールおよびレチナール５，６−エポキシド；ならびにそれらの混合物から選択されるポリマー材料または化合物のいずれかを含む酸化的に変換されたカロテノイド混合物の活性な酸化成分を意味する。酸化的に変換されたカロテノイドの成分は、動物において感染を処置するか、または免疫応答を増強することができるという点で活性である。酸化的に変換されたカロテノイドのどの特定の画分が感染を処置し、かつ／または免疫応答を増強することができるのか評価するための方法は実施例に示されている。酸化的に変換されたカロテノイド混合物を各成分へ分画する方法は、米国特許第５，４７５，００６号およびＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／５２７，０３９（それぞれ参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。

本明細書において「免疫応答を増強する」とは、処置される前の同じ被験体に比べて、本明細書に記載されているような酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分で処置された被験体におけるＣＤ１４の発現の増加またはＴＨＰ−１細胞の食活性の増加を意味する。

「感染」とは、微生物（例えば、細菌、真菌またはウイルス）による宿主の侵害を意味する。例えば、感染は、哺乳類の体内もしくは身体上に通常存在する微生物の過度な増殖、または哺乳類中または哺乳類上に通常は存在しない微生物の増殖を含み得る。より一般には、感染は、微生物集団の存在が宿主身体に傷害を与えるいずれの状況であってもよい。微生物の増殖は軽度であるが、その微生物による種々の有毒成分の生産によって傷害が引き起こされる場合もある。希にではあるが、微生物が宿主外で増殖して毒素を産生し、それが摂取され、傷害がもっぱらこの微生物毒素の結果であるという場合もある。よって、被験体は、過度な量の微生物集団が被験体の体内もしくは身体上に存在する場合、または微生物集団の存在が被験体の細胞または他の組織を傷害している場合に感染を「受けている」。

本明細書において「酸化的に変換されたカロテノイド」とは、極めて低分子量の酸化的切断生成物と大きな割合のポリマー材料（すなわち、１，０００ダルトンより大きな分子量を有する酸化的に変換されたカロテノイドの成分）の混合物を生じる、最大６〜８モル当量の酸素または別の酸化剤からの当量の酸素と反応させられたカロテノイドを意味する。結果として生じる反応は、約１００〜８，０００ダルトンの範囲の分子量を有する分子種を含む混合物を生成する。ポリマー材料は、形成された様々な酸化フラグメントの多くの可能な化学的組換えにより形成されると考えられる。酸化的に変換されたカロテノイドを製造する方法は、米国特許第５，４７５，００６号およびＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／５２７，０３９（それぞれ参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。本明細書において「ＯｘＢＣ」とは、β−カロテンに由来する酸化的に変換されたカロテノイドを特に意味する。

「医薬組成物」とは、哺乳類における疾病の治療または予防のための治療計画の一部としての医薬の製造および販売を規制する政府当局の要件に適合する様式で１以上の医薬級賦形剤を用いて調剤された（例えば、ＧＭＰ規制に従って製造され、ヒト投与に適した）、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含有する組成物を意味する。医薬組成物は、例えば、経口投与用に単位投与形（例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット、ゲルキャップまたはシロップ）の形態で；局所投与用に（例えば、クリーム、ゲル、ローションまたは軟膏として）；静脈投与用に（例えば、粒状栓子を含まない無菌溶液として、静脈内使用に好適な溶媒系中に）；または本明細書に記載されている他のいずれかの製剤で調剤することができる。

「被験体」とは、限定されるものではないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ブタ、畜牛、家禽類および魚類を含む任意の脊椎動物を意味する。

本明細書において「処置する」とは、予防および／または治療目的で医薬組成物を投与することを意味する。「疾病を予防する」とは、特定の疾病にまだ罹患していないが、感受性があるか、またはそうでなければリスクのある被験体の予防的処置を意味する。「疾病を処置する」または「治療的処置に用いる」とは、疾病にすでに罹患している被験体に、その被験体の症状を改善するまたは安定化するために処置を投じることを意味する。よって、特許請求の範囲および実施形態において、処置するとは、治療または予防目的のいずれかのための被験体への投与である。本明細書において「リスクがある」とは、感染を受けやすい被験体を指す。被験体は、例えば、（ｉ）弱化した免疫系を有する（すなわち、免疫不全被験体）または（ｉｉ）微生物への曝露（すなわち、外科的手順、公衆との定常的な接触（学校の教師または医療従事者など）の結果として、または罹患／感染環境への曝露による）のために感染を受けやすい可能性がある。

２−メチル−６−オキソ−２，４−ヘプタジエナールの合成および精製はＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／５２７，０３９に報告されている。２−メチル−６−オキソ−２，４−ヘプタジエナールのより便宜な５段階の合成スキームが、２００３年５月２２日に公開されたＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１０／１９６，６９５に示されている。

本発明の組成物および方法は、被験体の生得および適応免疫系を感染に対して増感させるために使用することができる。

本発明のその他の特徴および利点は以下の詳細な説明、図面および特許請求の範囲から明らかになるであろう。

ＯｘＢＣで処理する前にＬＰＳとともにインキュベートした一次末梢血単球（ＰＢＭ）におけるＴＮＦ（Ａ）、ＩＬ−１β（Ｂ）およびＩＬ−６（Ｃ）レベルを示すグラフである。一次ＰＢＭをＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）とともに２４時間インキュベートした後に、示された濃度のＯｘＢＣで処理した。２４時間後、ＣＭを回収し、ＴＮＦ（Ａ）、ＩＬ−１β（Ｂ）およびＩＬ−６（Ｃ）レベルをＥＬＩＳＡにより検出した（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０２、スチューデントのｔ検定）。ＬＰＳに曝された精製ヒト単球は、炎症性サイトカインＩＬ−１βの発現の増強によりＯｘＢＣ処置に応答し、このことはＯｘＢＣの微生物感染に対する応答能を示唆する。ＯｘＢＣで処置する前にＬＰＳとともにインキュベートした一次ＰＢＭにおけるＩＬ−８（Ａ）およびＩＬ−１２（Ｂ）レベルを示すグラフである。一次ＰＢＭをＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）とともに２４時間インキュベートした後に、示された濃度のＯｘＢＣで処理した。２４時間後、ＣＭを回収し、ＩＬ−８（Ａ）およびＩＬ−１２（Ｂ）レベルをＥＬＩＳＡにより検出した（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、スチューデントのｔ検定）。ＬＰＳで刺激した後にＯｘＢＣに曝されたヒト単球において調節サイトカインＩＬ−８の発現が上昇し、このことはＯｘＢＣが抗微生物活性を増強する能力を有していることを示唆する。ＯｘＢＣで処理されたＴＨＰ−１細胞におけるＣＤ１４発現を示すグラフである。ＴＨＰ−１単球を示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照とともにインキュベートした。処理２４時間後にＦＡＣＳ分析を行った。値はＤＭＳＯ対照に対する倍率変化を示す。ミリスチン酸酢酸ホルボール（ＰＭＡ）は２５ｎｇ／ｍｌで用いた（^＊ｐ＜０．００１、ＤＭＳＯ対照に対するスチューデントのｔ検定）。ＯｘＢＣは、微生物成分と結合する受容体、ＣＤ１４の発現を促進し、感染に対する生得免疫応答をプライミングする。ＯｘＢＣで処理されたＴＨＰ−１細胞におけるＣＤ４０ＬおよびＣＤ８６の発現を示すグラフである。ＴＨＰ−１単球を示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照とともにインキュベートした。処理２４時間後にＦＡＣＳ分析を行った。値はＤＭＳＯ対照に対する倍率変化を示す。ＰＭＡは２５ｎｇ／ｍｌで用いた（^＊ｐ＜０．００５、^＊＊ｐ＜０．００１、ＤＭＳＯ対照に対するスチューデントのｔ検定）。ＯｘＢＣは、抗原提示およびリンパ球応答の刺激に関与する表面受容体の発現を増強し、従って、免疫刺激に対して応答する単球の活性を高めた。ＯｘＢＣ処理およびＬＰＳ刺激後のＴＨＰ−１細胞における分化抗原発現を示すグラフである。ＴＨＰ−１単球を示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照とともに２４時間インキュベートした後、５日後に１５ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。値はＯｘＢＣで処理しなかった対照に対する倍率変化を示す（^＊ｐ＜０．０２、非処理対照に対するスチューデントのｔ検定）。ＬＰＳによる刺激の前により低濃度のＯｘＢＣで単球を処理しても、生得免疫に関与する受容体の発現に有意な効果は無かった。ＯｘＢＣ処理およびＬＰＳ刺激後のＴＨＰ−１細胞における共刺激分子の発現を示すグラフである。ＴＨＰ−１単球を示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照とともに２４時間インキュベートした後、５日後に１５ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。値はＯｘＢＣで処理しなかった対照に対する倍率変化を示す（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．００５、^＊＊＊ｐ＜０．００１、非処理対照に対するスチューデントのｔ検定）。より低濃度のＯｘＢＣによる処理は、単球の、微生物に対する適応応答の誘導に関与する能力を高める傾向にある。ＯｘＢＣで処理されたＴＨＰ−１細胞における食作用を示すグラフである。ＴＨＰ−１単球を示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照とともに２４時間インキュベートした後、培地単独で２４時間回復させた。回復期間後に食作用を評価した。値は対照に対する倍率変化を示す。ＰＭＡは２５ｎｇ／ｍｌで用いた。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０２、^＊＊＊ｐ＜０．００２、対照に対するスチューデントのｔ検定。ＯｘＢＣはＴＨＰ−１細胞における食活性を有意に増強し、このことは抗微生物活性の増強を示唆する。ＯｘＢＣで処理され、かつ、ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ−１細胞における食作用を示すグラフである。ＴＨＰ−１単球を示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照とともに２４時間インキュベートした後、ＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）で処理した。ＬＰＳ刺激の２４時間後に食作用を評価した。値は対照に対する倍率変化を示す。ＰＭＡは２５ｎｇ／ｍｌで用いた。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０２、^＊＊＊ｐ＜０．００２、対照に対するスチューデントのｔ検定。ＯｘＢＣで処理されたＴＨＰ−１細胞は、ＬＰＳによる刺激の後に、非処理対照よりも大きな食活性を示した。ＯｘＢＣで処理され、かつ、ＬＰＳで刺激された一次ＰＢＭにおける食作用を示すグラフである。一次ＰＢＭを示された濃度のＯｘＢＣまたはＤＭＳＯ対照で２４時間インキュベートした後、ＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）で処理した。ＬＰＳ刺激の２４時間後に食作用を評価した。値は対照に対する倍率変化を示す。ＰＭＡは２５ｎｇ／ｍｌで用いた。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊＊ｐ＜０．００２、対照に対するスチューデントのｔ検定。一次ヒト単球は、ＬＰＳ刺激に応答してそれらの食活性を増強することによりＯｘＢＣ処理に応答した。

詳細な説明
本発明は、酸化的に変換されたカロテノイドおよびその成分の投与のための組成物、方法およびキットを提供する。これらの組成物は感染に対して被験体の生得および適応免疫系を増刊するのに有用であり得る。

療法
本発明は感染に対する被験体の生得および適応免疫系を増感するための方法を特徴とする。

本発明の療法は単独で、または別の療法とともに（すなわち、抗生物質療法と組み合わせて）行うことができ、家庭、診察室、診療所、病院の外来、または病院で提供することができる。治療期間は処置される疾病または障害のタイプ、患者の齢および状態、患者の疾病の病期およびタイプ、ならびに患者がその処置にどのように応答するかによって異なる。

微生物感染の処置
本発明の方法および組成物は、例えば、気道感染、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、尿路感染、複雑性感染、腎盂腎炎、腹腔内感染、細菌性敗血症、皮膚および皮膚構造感染、軟組織感染、中枢神経系感染、菌血症、創傷性感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷後感染、尿生殖路感染、骨盤炎症性疾患、心内膜炎、血管内感染、および本明細書に記載されている他のいずれかの感染を処置するために使用可能である。

抗原の免疫原性の増強
本発明の方法および組成物は、抗原の免疫原性を高めるために使用可能である（すなわち、免疫化に用いるアジュバントとして）。被験体が免疫され得る疾病には、ウイルス性疾患、アレルギー発現、粘膜を通過する、または粘膜表面に定着する細菌またはその他の病原体により引き起こされる疾病、ＡＩＤＳ、自己免疫疾患（全身性紅斑性狼瘡など）および癌などの、免疫化により治療または予防され得る全ての疾病が含まれる。本発明を用いて治療または予防可能なウイルス感染の例としては、ＥＢＶおよびＶＺ、特に、ヘルペスウイルス科（例えば、ＨＳＶおよびＨＣＭＶ）、アデノウイルス科、パポウイルス科（ＨＰＶなど）、ヘパドナウイルス科（ＨＢＶなど）などのＤＮＡウイルスによる感染、ピコルバウイルス科、特に、ポリウイルスおよびＨＡＶ、ライノウイルスおよびＦＭＤＶ、トガウイルス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科、パラミクソウイルス科（ＲＳＶなど）、またはオルソミクソウイルス科（インフルエンザウイルスなど）、およびレトロウイルス科、特にＨＩＶなどのＲＮＡウイルスによる感染が挙げられる。

併用療法
本発明の方法、キットおよび組成物はまた抗生物質を含み得る。例えば、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、限定されるものではないが、アミカシン、アプラマイシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、フォーチマイシン、フラジオマイシン、ゲンタマイシン、イスパマイシン、カナマイシン、ミクロノマイシン、ネオマイシン、ウンデシレン酸ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、ストレプトニコジドおよびトブラマイシンなどのアミノグリコシド；アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、クロラムフェニコールパルミレート(chloramphenicol palmirate)、パントテン酸クロラムフェニコール、フロルフェニコールおよびチアムフェニコールなどのアンフェニコール；リファンピシン、リファブチン、リファペンチンおよびリファキシミンなどのアンサマイシン；アミジノシリン、アムジノシリン、ピボキシル、アモキシリン、アンピシリン、アスポキシリン、アジドシリン、アズロシリン、バカンピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリン、カルベニシリン、カルフェシリン、カリンダシリン、クロメトシリン、クロキサシリン、シクラシリン、ジクロキサシリン、ジフェニシリン、エピシリン、フェンベニシリン、フロキシリン、ヘタシリン、レナンピシリン、メタンピシリン、メチシリン、メズロシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペナメシリン、ペネタメートヒドロヨージド(penethamate hydriodide)、ペニシリンＧベネタミン、ペニシリンＧベンザシン、ペニシリンＧベンズヒドリルアミン、ペニシリンＧカルシウム、ペニシリンＧヒドラガミン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧ、プロカイン、ペニシリンＮ、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザシン、ペニシリンＶヒドラバミン、ペニメピサイクリン、フェネチシリン、ピペラシリン、ピバピシリン、プロピシリン、キナシリン、スルベニシリン、タランピシリン、テモシリンおよびチカルシリンなどのβ−ラクタム；イミペネムなどのカルバペネム；１−カルバ（デシア）セファロスポリン、セファクトール、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファゾリン、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォチアム、セフピミゾール、セフピリミド、セフポドキシムプロキセチル、セフロキサジン、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリルナトリウム、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロスポリン、セファロシン、セファピリンナトリウム、セフラジン、ピブセファレキシン、セファロシン、セファクロール、セフォテタン、セフプロジル、ロラカルベフ、セフェタメットおよびセフェピムなどのセファロスポリン；セフブペラゾン、セフメタゾール、セフミノクス、セフェタンおよびセフォキシチンなどのセファマイシン；アズトレオナム、カルモナムおよびチゲモナンなどのモノバクタム；フロモキセフおよびモキソラクタムなどのオキサセフェム；クリンダマイシンおよびリンコマイシンなどのリンコサミド；アジスロマイシン、カルボマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシンおよび誘導体、ジョサマイシン、ロイコマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、プリマイシン、ロキタマイシン、ロサラマイシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシンおよびトロレアンドマイシンなどのマクロライド；アンフォマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン、コリスチン、エンデュラシジン、エニロマイシン、フサファンギン、グラミシジン、グラミシジンＳ、ミカマイシン、ポリミキシン、ポリミキシンβ−メタンスルホン酸、プリスチナマイシン、リストセチン、テイコプラニン、チオストレプトン、ツベラクチノマイシン、チロシジン、チロスリシン、バンコマイシン、ビオマイシン、バージニアマイシンおよび亜鉛バシトラシンなどのポリペプチド；スピサイクリン、クロロテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、グアメサイクリン、ライムサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セノサイクリンおよびテトラサイクリンなどのテトラサイクリン；ならびにブロジモプリム、テトロキソプリムおよびトリメトプリムなどの２，４−ジアミノピリミジン；フラルタドン、フラゾリウム、ニフラデン、ニフラテル、ニフルホリン、ニフルピリノール、ニフルプラジン、ニフルトイノールおよびニトロフラントインなどのニトロフラン；アミフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、フルメキン、ロメフロキサシン、ミロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキソリン酸、パーフロキサシン、ピペミド酸、ピロミド酸、ロソキサシン、テマフロキサシンおよびトスフロキサシンなどのキノロン；アセチルスルファメトキシピラジン、アセチルスルフィソキサゾール、アゾスルファミド、ベンジルスルファミド、クロラミン−β、クロラミン−Ｔ、ジクロラミン−Ｔ、フォルモスルファチアゾール、Ｎ２−ホルミル−スルフィソミジン、Ｎ４−β−Ｄ−グルコシルスルファニラミド、マフェニド、４’−（メチル−スルファモイル）スルファニラニリド、ｐ−ニトロスルファチアゾール、ノプリルスルファミド、フタリルスルファセタミド、フタリルスルファチアゾール、サラゾスルファジミジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファベンズアミド、スルファセタミド、スルファクロルピリダジン、スルファクリソイジン、スルファシチン、スルファジアジン、スルファジクラミド、スルファジメトキシン、スルファドキシン、スルファエチドール、スルファグアニジン、スルファグアノール、スルファレン、スルファロクス酸、スルファメラジン、スルファメータ、スルファメタジン、スルファメチゾール、スルファメトミジン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメトロール、スルファミドクリソイジン、スルファモキソール、スルファニルアミド、スルファニルアミドメタンスルホン酸トリエタノールアミン塩、４−スルファニルアミドサリチル酸、Ｎ４−スルファニリルスルファニルアミド、スルファニリルウレア、Ｎ−スルファニリル−３，４−キシルアミド、スルファニトラン、スルファペリン、スルファフェナゾール、スルファプロキシリン、スルファピラジン、スルファピリジン、スルファソミゾール、スルファシマジン、スルファチアゾール、スルファチオウレア、スルファトラミド、スルフィソミジンおよびスルフィソキサゾールなどのスルホンアミド；アセダプソン、アセジアスルホン、アセトスルホン、ダプソン、ジアシモスルホン、グルコスルホン、ソラスルホン、スクシスルホン、スルファニル酸、ｐ−スルファニルベンジルアミン、ｐ，ｐ’−スルホニルジアミン−Ｎ，Ｎ’ジガラクトシド、スルホキソンおよびチアゾールスルホンなどのスルホン；ダプトマイシンなどのリポペプチド；リネゾリドなどのオキサリドン；テリスロマイシンなどのケトリド；ならびにクロフォクトル、ヘキセジン、マガイニン、メテナミン、メテナミンアンヒドロメチレン−シトレート、馬尿酸メテナミン、マンデル酸メテナミン、スルホサリチル酸メテナミン、ニトロキソリン、スクアラミン、キシボルノール、シクロセリン、ムピロシンおよびツベリン（これらに限定されない）から選択される抗生物質と投与することができる。酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分と抗生物質療法の併用は、微生物の耐性株に対する抗生物質の有効性を高めるため、抗生物質による処置を行っている間に微生物の耐性株が形成する可能性の軽減するため、および／または抗生物質負荷を軽減するために望ましいものであり得る。これは酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を用いて微生物に対する宿主免疫応答を増強することによって達成することができる。

投与および調剤
本発明は、感染に対する被験体の生得および適応免疫系を増感するための組成物、キットおよび方法を特徴とする。酸化的に変換されたカロテノイドに関する典型的な用量は約５μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。望ましくは、５μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ体重の間、または５μｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間の用量が投与される。酸化的に変換されたカロテノイドの成分に関する典型的な用量は約０．０５μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。望ましくは、０．０５μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ体重の間、または０．０５μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ体重の間の用量が投与される。投与される酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の用量は、動物の種、食餌および齢などの変数によって異なり得る。実施例１に記載されているもののような標準的試験を用いて、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の用量および投与頻度を至適化することができる。

酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、製薬上許容される希釈剤、担体または賦形剤とともにヒト、家庭内ペット、家畜またはその他の動物に投与することができる。投与は局所、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼球、脳室内、嚢内、脊髄内、大槽内、腹腔内、鼻腔内、エアゾール、坐剤による投与または経口投与であり得る。特定の製剤では、酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は単位投与形で提供される。

治療用製剤は溶液または懸濁液の形態であってよく；経口投与用には、製剤は錠剤またはカプセル剤の形態；鼻腔用製剤では、粉末、点鼻剤、点耳剤またはエアゾールの形態であってよい。

製剤を作製するための当技術分野で周知の方法は、例えば、“Remington: The Science and Practice of Pharmacy” (20th ed., ed. A.R. Gennaro, 2000, Lippincott Williams & Wilkins)に見られる。非経口投与用製剤は、例えば、賦形剤、無菌水または生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油または水素化ナフタレンを含み得る。化合物の放出を制御するために、生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを用いてもよい。化合物の生体分布を制御するために、ナノ粒子製剤（例えば、生分解性ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、リポソーム）を用いてもよい。有用であり得る他の非経口送達系は、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入系およびリポソームを含む。吸入用製剤は賦形剤、例えば、ラクトースを含んでよく、あるいは例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリコレートおよびデオキシコレートを含有する水溶液であってもよく、あるいは点鼻剤の形態でまたはゲルとして投与するための油性溶液であってもよい。製剤における化合物の濃度は、投与される薬剤の用量および投与経路を含むいくつかの因子によって異なる。

徐放性製剤における化合物の投与は、式Ｉの化合物が（ｉ）狭い治療係数を有する（例えば、有害な副作用または毒性反応をもたらす血漿濃度と治療効果をもたらす血漿濃度の間の違いが小さい（一般に、治療係数ＴＩは、半致死量（ＬＤ５０）／中間有効用量（ＥＤ５０）の比として定義される））か；（ｉｉ）消化管において狭い吸収枠を有するか；または（ｉｉｉ）短い生体半減期を有し、従って、血漿レベルを治療レベルに維持するために１日に何回も投与する必要がある場合に有用である。

治療用化合物の放出速度が代謝速度にまさる徐放性を得るためには、多くの戦略を行うことができる。例えば、徐放性は、例えば適当な徐放性組成およびコーティングを含む、製剤パラメーターおよび成分の適当な選択によって得ることができる。例としては、単一または複数の単位錠剤またはカプセル組成物、油溶液、懸濁液、エマルション、マイクロカプセル、マイクロスフェア、ナノ粒子、パッチ剤およびリポソームが挙げられる。

経口用製剤としては、無毒な製薬上許容される賦形剤との混合物中に有効成分を含有する錠剤が含まれる。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤または増量剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、滑沢剤、流動促進剤および接着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油またはタルク）であり得る。

経口用製剤としてはまた、咀嚼錠、錠剤、カプレットまたはカプセル剤として（すなわち、有効成分が不活性固体希釈剤と混合されたゼラチン硬カプセル剤、または有効成分が水もしくは油性媒体と混合されたゼラチン軟カプセル剤として）単位投与形で提供することもできる。

酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、２００３年５月２２日に公開されたＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１０／１９６，６９５に記載されているような製薬上許容される希釈剤、担体または賦形剤を用いて調剤することができる。

口腔衛生製剤
酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分は、全般的口腔衛生に、特に歯垢、歯肉炎および口臭の原因となる微生物を死滅させるために有用な口内洗浄剤または練り歯磨きとして調剤することができる。酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の濃度は０．０００１〜１ｗ／ｗ％、より好ましくは０．００１〜０．１ｗ／ｗ％であり得る。

本発明の口内洗浄剤は、単に酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分と既存の口内洗浄剤を合わせることによって製造することができる。所望により、本発明の口内洗浄剤は、水、フッ化物、香味剤、アルコール、過酸化水素、チモール、オイカリプトール、ヘキセチジン、サリチル酸メチル、メントール、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、メチルパラベン、過酸化水素、臭化ドミフェン、酵素、カルシウム、亜鉛および／または甘味剤（すなわち、ソルビトール、スクラロース(sucralose)またはサッカリンナトリウム）をさらに含む。

本発明の練り歯磨きは、単に酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分と既存の練り歯磨きを合わせることによって製造することができる。所望により、本発明の練り歯磨きは、フッ化物（すなわち、フッ化ナトリウムまたはモノフルオロリン酸ナトリウム）、再石灰化剤（すなわち、ヒドロキシアパタイト、非晶質リン酸カルシウム、炭酸カルシウム）、発泡剤（すなわち、ラウリル硫酸ナトリウム）、炭酸ナトリウム、酵素、ビタミン、ハーブ、カルシウム、ホスホケイ酸カルシウムナトリウム、過酸化水素、抗菌剤（トリクロサン、塩化亜鉛）、増粘剤（すなわち、グリセリン）、および／または香味剤（すなわち、スペアミント、ペパーミント、レギュラーミントなど）をさらに含む。

眼用製剤
本発明の眼用医薬組成物は、既存の眼用製剤に酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を添加することによって製造することができる。所望により、この眼用医薬組成物は、バッファー、界面活性剤、安定剤、保存剤、眼用湿潤剤および／または眼用希釈剤を含む。眼用溶液に一般に用いられる湿潤剤としては、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、グリセリン、マンニトール、ポリビニルアルコールまたはヒドロキシエチルセルロースが挙げられ、希釈剤は水、蒸留水、無菌水または人工涙であってもよく、その中に湿潤剤は約０．００１％〜約１０％の量で存在する。酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分の濃度は０．０００１〜１ｗ／ｗ％、より好ましくは０．００１〜０．１ｗ／ｗ％であり得る。眼用組成物は、例えば、結膜炎、角膜剥離、潰瘍性感染性角膜炎、表層角膜炎、間質性角膜炎またはヘルペスウイルス関連角膜炎をもたらす眼の感染（すなわち、細菌、ウイルス、真菌、またはアメーバー、または寄生虫）の処置に使用することができる。

眼用溶液および眼用軟膏の例は当業者に周知の広く用いられているいくつかの方法を用いて、このような製剤に配合することができる。眼用溶液の場合は、例えば、必要であれば、蒸留水、水性基剤または他のいずれかの許容される基剤；塩化ナトリウムおよび濃グリセロールなどの等張化剤；リン酸ナトリウムおよび酢酸ナトリウムなどのバッファー；モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ステアリン酸ポリオキシル４０およびポリオキシエチレン水素化ヒマシ油などの界面活性剤；クエン酸ナトリウムおよびエデト酸ナトリウムなどの安定剤；塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、塩化ナトリウム、ホウ酸、パラヒドロキシ安息香酸エステル（ソルベート、ベンゾエート、プロピオネート）、クロロブタノール、ベンジルアルコール、水銀剤、パラベンなどの保存剤、ならびにそれらの混合物を用いて製造することができる。塩化ベンザルコニウムおよびチメロサールが好ましい保存剤である。眼用製剤は、ｐＨ調整のための酸および塩基；ソルビトール、グリセリンおよびデキストロースなどの張力付与剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールおよびその他のガムなどの他の粘度付与剤；界面活性剤、胆汁酸などの好適な吸収促進剤；ビスルフェートおよびアスコルベートのような抗酸化剤などの安定剤；エデト酸ナトリウムなどの金属キレート剤；ならびにポリエチレングリコールなどの薬物溶解度増強剤を含むなど多様であってあり得る。これらの付加的成分は十分な安定性を有する市販溶液の製造を助け、従って、必要な際に混合する必要がない。

本発明の眼用製剤は無菌水性担体、塗布剤または軟膏であり得る。塗布剤および軟膏は一般に、無菌の製薬上許容される塗布剤または軟膏基剤、例えば、鉱油−白色ワセリン基剤に溶解または懸濁された酸化的に変換されたカロテノイドまたはその成分を含む。塗布剤または軟膏組成物では、無水ラノリンもまた製剤中に含み得る。抗菌剤として製剤にチメロサールまたはクロロブタノールを添加することができる。

以下の実施例は、本明細書で特許請求される方法および組成物がどのように遂行、製造および評価されるかについての完全な開示および説明を当業者に提供するために示すものであり、単に本発明の例示を意図したものであって、本発明者らが発明とみなす範囲を限定するものではない。

実施例１酸化的に変換されたカロテノイド（ＯｘＢＣ）の添加後の単球サイトカイン特性の評価
次の結果は、ＯｘＢＣが単核食細胞においてサイトカイン応答を活性化することを示している。酸化的に変換されたカロテノイドは、侵入した病原体などの抗原刺激に応答する細胞をプライミングし、抗原刺激を受けた細胞において抗微生物活性を高める能力を有する。

炎症は、非特異的免疫性の主な要素であり、体が組織損傷を修復し、感染性、毒性またはアレルゲン性の因子から防御する最初の生理学的プロセスを形成する複雑な一連の事象である。炎症誘導性応答の誘導および伝播を制御する正確な機構は、依然として大部分は不明であるが、常在免疫細胞から放出されるケモカインおよび可溶性メディエーターは主要なメディエーターである。数多くの研究により、β−カロテンなどの微量栄養素は、サイトカインおよびその他の炎症誘導性メディエーターの産生を活性化することによって、明らかな炎症性応答への寄与を含む、多様なマクロファージの働きに著しく影響を及ぼし得ることが示されている。そのため、本発明者らは、ヒト単球およびリンパ球による炎症誘導性（腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インターロイキン（ＩＬ）−１β、ＩＬ−６およびインターフェロン（ＩＦＮ）−γ）および免疫調節性（ＩＬ−１２、ＩＬ−８および単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−１）のサイトカインの産生に対するＯｘＢＣの効果を評価した。

方法：
化合物の調製：
ＯｘＢＣは、β−カロテンから調製し（米国特許第５，４７５，００６号参照）、使用するまで−２０℃で保存した。保存溶液（５０ｍＭのカロテン当量）は、２６．８５ｍｇＯｘＢＣ／ｍｌＤＭＳＯを溶解することによって調製し、５００μｌのアリコートとして−８０℃で保存した。使用する２００μＭＯｘＢＣ溶液は、適当な培養培地での希釈によって調製し、濾過除菌した（孔径０．２２μＭ）。試験サンプルおよび対照サンプルの双方における、試験したＯｘＢＣの同等値およびその関連ＤＭＳＯ量を表１に示す。対照として等量のＤＭＳＯビヒクルを用いた。

細胞系統
ヒトＴＨＰ−１単球様細胞（急性単球性白血病）は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＴｉｓｓｕｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した（＃ＴＩＢ−２０２）。細胞を、２ｍＭＬ−グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清および抗生物質を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃＭＡＣｓ磁気分離システムを用いて、末梢血単球（ＰＢＭ）およびリンパ球（ＰＢＬ）をそれぞれ、ポジティブおよびネガティブセレクションによって、ＰＢＭＣから分離した。ＰＢＭを、２ｍＭＬ−グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウム、２０％ウシ胎児血清および抗生物質を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。１０％ＦＢＳを用いることを除いては同じ培地中にＰＢＬを播種した。具体的な細胞密度および実験条件を以下に記載する。

実験条件
細胞をナイーブ刺激モデルおよびＬＰＳ刺激モデルの双方で評価した。ナイーブ試験では、細胞を様々な時間枠でＯｘＢＣに直接曝し、ＥＬＩＳＡにより細胞馴化培地（ＣＭ）においてサイトカイン発現を評価した。ＬＰＳ刺激では、細胞をまずＯｘＢＣとともに示された期間インキュベートし、その時点でＯｘＢＣを除去し、前記化合物を含まない新鮮培地に置き換えた。その後、処理後の異なる時点において、ＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）で２４時間細胞を刺激した後、ＣＭにおけるサイトカインレベルをＥＬＩＳＡにより評価した。ＬＰＳ刺激過程の変形では、一次ＰＢＭをまずＬＰＳで２４時間刺激した。この初回刺激後、ＬＰＳ処理細胞をＯｘＢＣに２４時間曝した後、ＥＬＩＳＡ分析のためにＣＭを回収した。

酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）
ＥｎｄｏｇｅｎＨｕｍａｎＥＬＩＳＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用い、製造業者の説明書に従って、ＣＭにおけるサイトカインレベルの分析を行った。細胞残渣を除去するためにＣＭを遠心分離により調製し、サイトカインレベルが各分析評価の線形範囲内に入るように、そのまま用いるか、完全培地で希釈するか、Ｎａｎｏｓｅｐ３Ｋ遠心式濃縮機（Ｐａｌｌ）を用いて濃縮した。必要に応じて、サンプルを−８０℃で保存し、使用前に室温で徐々に解凍した。概略としては、対象サイトカインに対して特異的な抗体を吸着しておいたマイクロプレートの各ウェルに５０μｌサンプルを加え、室温で１〜３時間インキュベートした。プレートを３回洗浄して非特異的に結合した材料を除去し、対象サイトカインに対して特異的なビオチン化抗体とともにさらに１〜３時間インキュベートした。洗浄後、プレートをステプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシダーゼ試薬(steptavidin-horse radish peroxidase reagent)とともに３０分間インキュベートした後、洗浄サイクルをさらに行った。洗浄したプレートを３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質とともに３０分間インキュベートし、反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を測定した（参照波長５５０ｎｍ）。供給されている組換え標準を用いて、各サイトカインについて基準曲線を作成した。

結果および考察
最初の原理証明研究を、非処理（モック）またはＯｘＢＣ、ＰＭＡ（２５ｎｇ／ｍｌ）およびビヒクル（ＤＭＳＯ）で２４時間処理したＴＨＰ−１細胞において行った。ＯｘＢＣでの直接刺激には炎症性サイトカインレベルに対して認知できる効果はなかった（表２参照）が、調節性サイトカインＭＣＰ−１およびＩＬ−８において中等度の増加が検出できた。量の少ないサイトカインの検出を高めるために、これらの研究を、ＯｘＢＣをサンプルの濃度範囲（２．５μＭ、７．５μＭおよび１２．５μＭ）および濃度にわたって含むように拡大した。１２．５μＭのＯｘＢＣは、ＭＣＰ−１（５８．１±８．８％）およびＩＬ−８（４２．１±１．０％）の発現増加を誘導するが、他のサイトカインのレベルについては誘導しないことが分かった（表３参照）。さらに、より低い化合物濃度ではＭＣＰ−１およびＩＬ−８発現に変化は認められなかった。ＭＣＰ−１およびＩＬ−８は双方ともサイトカインとして働いて、感染または損傷の部位に免疫細胞を動員する。例えば、ＩＬ−８は、主として炎症性応答内に好中球を動員し、好中球動員因子（ＮＲＦ）とも呼ばれているが、一方、ＭＣＰ−１は、主として他の単球を動員する働きをする。単球／マクロファージによるいずれのサイトカインの発現も、抗原の検出または侵入した病原体の食作用に応答して誘導される。

ナイーブ単球様細胞を抗原刺激した際にＯｘＢＣが炎症性サイトカイン発現に対してあまり効果を示さなかった場合、本発明者らは、次に、前記化合物が炎症誘導性刺激、すなわちリポ多糖（ＬＰＳ）に対する単球反応を変更する可能性を評価した。この可能性を評価するために、第２の原理証明研究を行った。この研究では、ＴＨＰ−１細胞をＯｘＢＣ（０．１μＭ、０．５μＭ、１．０μＭ）で２４時間前処理し、５日間培養し、次いで、ＬＰＳでさらに２４時間刺激した後、ＥＬＩＳＡによりＴＮＦ発現を測定した。宿主内でのアベイラビリティーをより厳密に設計するためにより低い濃度のＯｘＢＣを選択し、一方、原型炎症誘導性サイトカインとしてＴＮＦを選択した。表４に示されるように、ＯｘＢＣでの前処理は、評価した全ての濃度において、ＬＰＳ刺激後のＴＮＦ発現をおよそ２５％アップレギュレートした。続いて、これらの研究を同様のプライミング・抗原刺激モデルを用いて他の炎症誘導性サイトカインに拡大した。細胞を０．１μＭまたは０．５μＭいずれかのＯｘＢＣでプライミングした際にはＩＬ−６およびＩＬ−１βで発現の増加が検出されたがＩＦＮγでは検出されなかった（表５参照）。興味深いことに、１．０μＭの前記化合物ではサイトカイン発現に変化は認められなかった。ＩＬ−６は急性期反応の発熱の最も重要なメディエーターの１つであるが、このサイトカインは、微生物抵抗性の維持にも必要である。ＴＮＦおよびＩＬ−１βはいずれも、食細胞およびリンパ球の働きを調節する生得免疫応答および炎症性応答において極めて重要な多面発現性サイトカインである。同様に、ＯｘＢＣ前処理は、ＬＰＳ刺激後の調節性サイトカインＩＬ−８の発現をアップレギュレートすることも分かった。具体的には、ＩＬ−８発現は、０．１μＭおよび０．５μＭのＯｘＢＣでの前処理後にそれぞれ、単にＬＰＳで刺激した細胞と比べて、３３±４％および４９±５％増加した。しかしながら、１μＭの前記化合物で前処理した培養物では相違は認められなかった。

単球は、最も重要な生得免疫応答のエフェクター細胞であるため、本発明者らは次に、ＯｘＢＣが、これまでにＬＰＳ刺激に曝されたことのある初代ＰＢＭにおける炎症性サイトカイン発現に影響を及ぼし得るかどうかを評価した。ＰＢＭを初めにＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）で２４時間処理し、次いで、様々な濃度のＯｘＢＣでさらに２４時間刺激した後、ＥＬＩＳＡ分析のためにＣＭを回収した。ＯｘＢＣ処理後に、ＩＬ−６発現における変化は認められなかったが、一方、ＴＮＦレベルは前記化合物の低濃度でのみ上昇した（およそ２５％）（図１参照）。しかしながら、ＩＬ−１β発現は５μＭより高いＯｘＢＣ濃度で一貫して上昇し、最大増加はおよそ５０％であった（図１）。調節性サイトカインであるＩＬ−８およびＩＬ−１２の評価により、ＯｘＢＣで前処理した細胞ではＩＬ−１２発現における変化は認められないが、ＩＬ−８発現は２．５μＭを超えるＯｘＢＣ濃度では非処理の単球と比べて著しく上昇することが明らかになった（図２）。

実施例２酸化的に変換されたカロテノイド（ＯｘＢＣ）での処理後の単球における免疫関連表面受容体の発現の評価
次の結果は、ＯｘＢＣ処理がＣＤ１４、ＣＤ５１、ＣＤ１６およびＣＤ３６（分化マーカーは全て単球の活性化に関与する）の発現増加と関連していることを示している。さらに、リンパ球共刺激分子ＣＤ８６（すなわちＢ７）およびＣＤ４０Ｌの発現増加も認められ、生得および適応免疫系の双方を活性化する能力が示唆された。ＬＰＳ刺激モデルでは、単球を低濃度のＯｘＢＣでプライミングした際に、分化マーカーレベルにおける変化はほとんど認められなかった。しかしながら、ＯｘＢＣ処理は、ＬＰＳ刺激に応答して、共刺激表面受容体の発現増加と関連していた。

未分化単球は、マクロファージへと分化するにつれて、小さな丸い形態を失い、サイズの増加、細胞拡散、および顆粒性を呈する。いくつかの分化抗原も単球において確認されており、それらは生得および特異免疫と関係のある様々な生物学的機能と関連していた。これらの表面抗原の発現特性は単球が分化するにつれて変化し、フローサイトメトリーにより混合集団中の成熟マクロファージ数を定量する手段を提供する。これらの研究では、細胞間接着（インテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８およびＣＤ５１）、微生物成分の結合（ＣＤ１４、ＬＰＳ受容体）、スカベンジングおよび食作用（ＣＤ３６）ならびに細胞性免疫応答（ＣＤ１６、抗体依存性細胞死に必要な低親和性ＩｇＧ受容体）のようなプロセスにおいて作用する代表的な表面部分のレベルを評価することによって、分化および生得的機能を評価した。一般に、これらの受容体は、ナイーブ単球ではより低いレベルで発現され、刺激によりアップレギュレートされる。単球の適応免疫機能に対するＯｘＢＣの影響を評価するために、ＭＨＣクラスＩＩ分子、ＨＬＡ−ＤＲおよびＨＬＡ−ＤＰの表面発現を評価した。これらの分子は、抗原提示に関与する特徴的な単球細胞表面マーカーである。同様に、共刺激白血球抗原Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌを含む、Ｔ細胞への抗原提示において役割を有する他の細胞表面分子の発現も決定した。

方法
化合物の調製
ＯｘＢＣストックは、実施例１に記載のとおり調製した。

細胞系統および条件
ヒトＴＨＰ−１単球様細胞（急性単球性白血病）は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＴｉｓｓｕｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した（＃ＴＩＢ−２０２）。細胞を、２ｍＭＬ−グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清および抗生物質を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。ＯｘＢＣ処理の２４時間前に細胞を播種し（５×１０^５細胞／ウェル、６ウェル培養プレート）、１）細胞をＯｘＢＣ（２．５μＭ、７．５μＭまたは１２．５μＭ）で２４時間処理した後(and than)、表面受容体の発現について評価すること；２）細胞をＯｘＢＣ（０．１μＭ、０．５μＭまたは１．０μＭ）で２４時間処理し、その時点でＯｘＢＣを含まない新鮮培地を分析の前に４８時間供給すること、および３）細胞をＯｘＢＣ（０．１μＭ、０．５μＭまたは１．０μＭ）で２４時間処理し、その時点でＯｘＢＣを含まない新鮮培地を５日間供給することの３つのプロトコールに従って分析するために回収した：。次いで、処理した細胞をＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）で分析の前に２４時間刺激した。相当する割合（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ単独中でインキュベートした細胞を対照とした。ＬＰＳ刺激を用いなかった研究では、ＰＭＡ２５ｎｇ／ｍｌ）を単球分化の陽性刺激因子として用いた。

ＦＡＣＳ分析
ヒトＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ３６、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＨＬＡ（幅広いイソ型）、ＨＬＡ−Ｂ_７、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０ＬおよびＣＤ３に対するフィコエリトリン（ＰＥ）標識一次抗体は、ＡｂＣａｍから入手した。直接免疫蛍光標識およびフローサイトメトリー分析を用いて受容体発現を評価した。概略としては、冷バッファー（１０％ＦＢＳおよび１％アジ化ナトリウムを含有するＰＢＳ）中の三反復の細胞アリコートを低光条件下で一次抗体（１０〜２０μｌ）とともに室温で４５分間インキュベートした。細胞を３回洗浄し、ＦａｃｓＡｒｉａセルソーターを用いた分析のために５００μｌのバッファー中に再懸濁した。非標識細胞および抗体単独で標識した細胞を対照とした。

結果および考察
ＴＨＰ−１細胞をＯｘＢＣで２４時間処理し、分化抗原の発現を直接標識フローサイトメトリーにより評価した。表６および図３に示されるように、ＯｘＢＣ処理の最も印象的な特徴は、評価した濃度範囲での原型単球分化抗原、ＣＤ１４の発現のアップレギュレーションであった。この効果は用量依存的であり、１２．５μＭのＯｘＢＣを用いた際に２倍の増加のピークを示し、ＰＭＡの効果に匹敵する結果であった。ＣＤ１４は、細菌ＬＰＳを検出するためにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）−４とともに補助受容体として作用する膜結合糖タンパク質である。ＣＤ１４は、そうすることにより、サイトカイン分泌を含む生得免疫応答（細菌感染）および炎症性応答の媒介において極めて重要な役割を果たす。そのため、ＯｘＢＣによるそのアップレギュレーションは、前記化合物が先天的基礎経路を活性化する能力を有することを示した。ＣＤ１４に加え、１２．５μＭ濃度のＯｘＢＣにおいて、ＣＤ５１（活性化後の内皮細胞への単球接着に関与するインテグリン）（３７％）およびＣＤ１６（抗体を認識して抗体誘導細胞死を支援するＦｃ受容体）（３９％）の発現のアップレギュレーションも認められた。まとめると、これらの結果により、ＯｘＢＣは単球様細胞に分化刺激を与えることができるということが証明された。対照としてリンパ球マーカーであるＣＤ３で染色することにより、ＴＨＰ−１細胞がその受容体を発現しないことが示されたことに留意すべきである（データは示していない）。

ＣＤ１１ｂ（骨髄細胞において優先的に発現されるインテグリン、これが関与することにより単球の活性化および炎症誘導性サイトカインの放出を導くシグナルが発生する）およびＣＤ３６（食作用の開始に関連する表面部分）は、単球様細胞において均一に近いレベルで構成的に発現される。そのため、本発明者らは、受容体密度の１つの指標としてこれらの分子についての染色後の蛍光強度も評価した。これは、明確に標識された細胞の存在量によって薄れてしまう潜在的影響を落とさないようにするために行った。表７に示されるように、ＣＤ３６発現は、１２．５μＭのＯｘＢＣでの処理後におよそ２７％増加するが、一方、ＣＤ１１ｂレベルはわずかに増加した。相対的には、ＰＭＡは両方の受容体の密度を２〜４倍に及ぶはるかに大きな差で増加させた。

抗原提示に関与する表面受容体の発現およびリンパ球反応の刺激もフローサイトメトリーにより評価した。ＨＬＡＢ７−２（ａｋａＣＤ８６）およびＣＤ４０Ｌの発現は、７．５μＭおよび１２．５μＭのＯｘＢＣでの処理によりアップレギュレートした（表８、図４）。ＣＤ８６は、ＣＤ２８との相互作用を通じて、マクロファージによるＴ細胞活性化に必要な補助刺激シグナルを与える。この相互作用は、活性化したマクロファージによって提示された抗原に対して応答するようにエフェクターＴ細胞をプライミングする。ＣＤ４０Ｌ、すなわちＣＤ１５４は、抗原提示細胞のＣＤ４０と結合し、共刺激分子として働く、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ４０ＬはＣＤ４^＋Ｔリンパ球で最も豊富に発現される；しかしながら、最近の発見は、ＣＤ４０Ｌが単球／マクロファージなどの他の免疫エフェクター細胞でも発現され、そこでＣＤ４０Ｌはマクロファージの活性化レベルを高め、食作用活性およびサイトカイン産生活性を増強する働きをすることを示した。このように、ＣＤ１４と同様に、これらの２つの分子は、活性化した単球が免疫刺激に対応する能力を高めるように作用する。

本発明者らは、次に、低濃度のＯｘＢＣ（≦１μＭ）での２４時間の処理およびおよそ５日後のＬＰＳ刺激後の受容体発現を評価した。ＬＰＳ刺激を行わない場合では、これらの濃度のＯｘＢＣで細胞を処理しても、高濃度の上記化合物で評価したいずれの受容体の発現ももたらされなかったことに留意すべきである（データは示していない）。同様に、０．１μＭでのＣＤ１１ｂ発現を除き、ＬＰＳ刺激後にＯｘＢＣ処理細胞と非処理細胞との間で分化抗原の発現において有意差は認められなかった（図５）。その一方、抗原提示に関与する共刺激分子、すなわちＨＬＡ（ＤＰ／ＤＲ／ＤＰ）およびＣＤ８６の発現は、ＬＰＳ刺激後にＯｘＢＣ処理培養物において非処理対照と比べて著しく上昇した（図６）。同様に、大多数のＣＤ４０発現はどの細胞集団においてもＯｘＢＣ処理によりアップレギュレートされなかったが、ＯｘＢＣ処理細胞の一部の集団ではＣＤ４０は非処理対照と比べてより豊富に発現された。このように、低濃度のＯｘＢＣでの処理は、微生物に対する適応性応答の誘導に関与する単球の能力を増強するように思われた。

実施例３酸化的に変換されたカロテノイド（ＯｘＢＣ）で処理されたヒト単球が示した食作用活性の評価
次の結果は、ＯｘＢＣ処理が食作用増加と関連していることを示している。この研究は、ＯｘＢＣが初代ヒト単球の培養物における食作用活性に影響を及ぼし得るかどうかを判定するために設計し、この研究によりＴＨＰ−１単球様細胞が確立された。ＯｘＢＣ単独で処理したナイーブ単球培養物では食作用増加は明らかであった。しかしながら、ＯｘＢＣの影響は、ＯｘＢＣで前処理した後、ＬＰＳで刺激した培養物において最大であった。これらの結果は、ＯｘＢＣが、増加した食作用活性でＬＰＳ刺激に応答するように単球をプライミングする能力を有することを示唆している。

食作用は、微生物−生得免疫の相互作用の標準的なモデルとなる生得免疫防御の基本的機構である。この作用を果たすために、食細胞は粒子認識およびインターナリゼーションに関与する広範囲の受容体を発現する。これらの受容体のうちのいくつかは、食作用を誘発する細胞内シグナルを伝達することができる。しかしながら、スカベンジャー受容体（例えばＣＤ３６）のような他のものは、標的との結合に関与するか、またはインターナリゼーション効率を高めるように作用する。食細胞−微生物接触は一見複雑そうに見えるプロセスであり、細胞骨格再構成、膜輸送の変化、微生物死滅機構の活性化、炎症誘導性および抗炎症性サイトカインおよびケモカインの産生、アポトーシスの活性化、ならびに適応免疫系に対する効率的な抗原提示に必要な分子の産生と同じくらい多様な細胞プロセスを誘発する多数の細胞内シグナルを必要とする。このように、食作用は、単球機能と生得的抗微生物防御の調節の両方に必須のプロセスである。実施例１および２の研究は、ＯｘＢＣが単球培養物における多様な生得的応答を活性化する能力を有することを示している。これらの応答の多くが食作用によって誘発され得ることから、本発明者らは、次に、ＯｘＢＣが単球における食作用活性に影響を及ぼす能力を評価した。

細胞系統および条件
ヒトＴＨＰ−１単球様細胞（急性単球性白血病）は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＴｉｓｓｕｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した（＃ＴＩＢ−２０２）。細胞を、２ｍＭＬ−グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清および抗生物質を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃＭＡＣｓ磁気分離システムを用いて、初代末梢血単球（ＰＢＭ）を混合末梢血単核細胞調製物から分離した。ＰＢＭを、２０％ウシ胎児血清を用いたことを除いてはＴＨＰ−１細胞と同じ培地中で培養した。以下に記載するＯｘＢＣ、ＰＭＡ（２５ｎｇ／ｍｌ）および／またはＬＰＳ（１５ｎｇ／ｍｌ）での処理の２４時間前に細胞を播種した（１×１０^５細胞／ウェル、９６ウェル培養プレート）。相当する割合（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ単独中でインキュベートした細胞を対照とした。

食作用アッセイ
単球培養における食作用は、フルオレセイン標識大腸菌（Ｋ１２株）細菌粒子の経口摂取に基づくＶｙｂｒａｎｔ食作用アッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｖ６６９４）を用いて評価した。概略としては、処理細胞を、ハンクスの緩衝塩溶液中、蛍光生物粒子懸濁液１００μｌとともに３７℃で５時間インキュベートした。インキュベーション後、この懸濁液を除去し、１００μｌの２％トリパンプルー溶液に１分間置き換えた。このトリパンプルー溶液を除去し、摂取された粒子の数を蛍光マイクロプレートリーダー（励起４８０ｎｍ、発光５２０ｎｍ）を用いて測定した。培地のみを含むウェル（無細胞）を陰性反応対照として用い、これに対して各実験反復を補正した。食活性の測定の前にＴＨＰ−１細胞とＰＢＭの双方に関して、（１）細胞を単にＯｘＢＣまたはＰＭＡで２４時間処理すること；（２）細胞をＯｘＢＣまたはＰＭＡで２４時間処理し、その時点で化合物を除去し、細胞を完全培地でさらに２４時間培養すること；および（３）細胞をＯｘＢＣまたはＰＭＡで２４時間処理し、その時点で化合物を除去し、ＬＰＳを含有する完全培地でさらに２４時間細胞を培養することの３つの処理過程を検討した。ＴＨＰ−１細胞に関しては、細胞をＯｘＢＣまたはＰＭＡで２４時間処理し、その時点で化合物を除去し、細胞を完全培地で７２時間回復させるというさらなる過程も検討した。回復後、細胞をＬＰＳで２４時間処理した後に食作用を測定した。

結果および考察
単球における食作用に対するＯｘＢＣの効果をまず、確立された単球様細胞系統、ヒトＴＨＰ−１細胞において、有意な毒性が生じないことが従前に示されている濃度および経時的推移を用いて評価した。ナイーブＴＨＰ−１細胞をＯｘＢＣで２４時間処理しても、評価したいずれの濃度でも食活性を有意に変化させなかった。これに対し、ＰＭＡ処理は食活性において対照培養物の１２．９４±２．０５倍の増大を伴った。しかしながら、ＯｘＢＣ処理は、食作用を評価する前にＴＨＰ−１細胞を２４時間回復させた際には、食活性に影響を及ぼすことが分かった。２．５、５または７．５μＭ（１．３４、２．６７または４．０２μｇ／ｍｌ）のＯｘＢＣで処理したＴＨＰ−１培養物では、対照に比べて有意に増大した食活性が見られたが、この効果はＰＭＡで見られたもののおよそ２分の１であった（図７参照）。ＯｘＢＣが１０μＭ（５．３８μｇ／ｍｌ）で、おそらくは毒性作用によって、処理培養物における食作用の程度を軽減したことを注記しておく。

実施例１および２は、ＯｘＢＣ処理が、ＬＰＳなどの二次刺激に対する応答を増強するように単球をプライミングすることができることを示す。これらの所見と一致して、ＯｘＢＣで処理されたＴＨＰ−１細胞はＬＰＳ刺激の後に非処理対照よりも大きな食活性を示す（図８）。２．５μＭ（１．３４μｇ／ｍｌ）を超える濃度のＯｘＢＣで前処理すると、ＰＭＡで処理された単球で見られたものと同等レベルまで食作用が増強された。

一次ＰＢＭを評価した場合にも同様の結果が見られた。ＯｘＢＣで２４時間処理した後に２４時間回復させる方法を用いた場合には、ＯｘＢＣ処理細胞において、対照に比べておよそ３５％の食活性の全般的増加が検出された。増加が見られたにもかかわらず、これらの結果は、反復間の変動のために統計学的有意性に達することができなかった。反復数を増やせば、変動を少なくすることによって、これらの応答をより有意な水準にまで高めることができたかもしれないが、この選択肢は、必要な一次細胞の数が多いために実行できなかった。しかしながら、ＴＨＰ−１細胞を用いた場合と同様に、ＯｘＢＣはＬＰＳ刺激に応答するようにＰＢＭをプライミングすることが分かった。図９に示されるように、ＯｘＢＣによる前処理には、最大レベルのＰＭＡで見られたものに匹敵する、ＬＰＳ刺激に対する食応答の増大が伴った。

また、ＯｘＢＣ処理後に７２時間回復させたＴＨＰ−１細胞においても食活性を評価した。ＯｘＢＣ単独で処理した細胞では、食作用の小さな増加が見られたが、これらの応答は、ＰＭＡ処理培養物で明らかな食活性の大きな増加を見れば、目立たないものである。これに比べ、ＯｘＢＣ前処理はここでも、７２時間後に送り込まれたＬＰＳ刺激に応答するようにＴＨＰ−１細胞をプライミングすることが分かった。５μＭ（２．６７μｇ／ｍｌ）を超える濃度のＯｘＢＣで前処理した単球では有意に増大した食活性が検出され、このことはＯｘＢＣ処置の効果が、単球が最初にＯｘＢＣに曝された後数日間持続することを示唆する。

ＯｘＢＣは、一次単球と確立された単球の双方の食活性を直接増強する能力を示す。しかしながら、免疫系に対するＯｘＢＣの最大の影響は、後のＬＰＳ刺激に対してより強い食応答で応答するように単球をプライミングする能力であると思われる。

他の実施形態
本明細書に述べられている全ての刊行物および特許出願ならびに特許は参照により本明細書に組み入れられる。

本発明を特定の実施形態に関して記載してきたが、さらなる改変が可能であると理解される。従って、一般に、当技術分野における公知または慣例の実施の範囲内にある本開示からの逸脱を含む、本発明の原則に従う本発明のいずれの変化、使用または適合を包含するものとする。

他の実施形態は特許請求の範囲内にある。

Claims

ポリマー材料を含む、細菌感染を有する被験体において免疫応答を増強するための医薬製剤であって、医薬製剤が被験体において免疫応答を増強するのに十分な量で投与され、ポリマー材料が６〜８モル当量の酸素とβ−カロテンの反応により形成される、前記医薬製剤。
ポリマー材料を含む、細菌感染を有するまたは細菌感染のリスクを有するヒト被験体において免疫応答を増強するための医薬製剤であって、ポリマー材料が６〜８モル当量の酸素とβ−カロテンの反応により形成される、前記医薬製剤。
ポリマー材料を含む、細菌感染を有するまたは細菌感染のリスクを有する被験体において免疫応答を増強するための医薬製剤であって、医薬製剤が静脈内、眼球、筋肉内、局所、皮下または鼻腔内投与され、ポリマー材料が６〜８モル当量の酸素とβ−カロテンの反応により形成される、前記医薬製剤。
細菌感染が市中肺炎、上下気道感染、皮膚および軟組織感染、急性細菌性中耳炎、細菌性肺炎、複雑性感染、腎盂腎炎、腹腔内感染、細菌性敗血症、中枢神経系感染、菌血症、創傷性感染、腹膜炎、髄膜炎、火傷後感染、尿生殖路感染、骨盤炎症性疾患、心内膜炎および血管内感染からなる群から選択されるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
眼の感染の処置のために眼球投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
口腔感染の処置のために被験体の口腔に局所投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
経口、静脈内、筋肉内、眼球、局所、皮下または鼻腔内投与される、請求項１または２に記載の医薬製剤。
被験体が細菌感染を有すると診断されなかったが、細菌感染のリスクがある、請求項２または３に記載の医薬製剤。
被験体が細菌感染を有する、請求項２または３に記載の医薬製剤。
抗生物質と組み合わせて使用するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬製剤であって、医薬製剤と抗生物質が同時に、または互いに１４日以内に投与される、前記医薬製剤。
抗生物質がアミノグリコシド、アンフェニコール、アンサマイシン、β−ラクタム、カルバペネム、セファロスポリン、セファマイシン、モノバクタム、オキサセフェム、リンコサミド、マクロライド、ポリペプチド、テトラサイクリン、２，４−ジアミノピリミジン、ニトロフラン、キノロン、スルホンアミド、スルホン、リポペプチド、およびケトリドからなる群から選択される、請求項１０に記載の医薬製剤。
抗生物質が、アミカシン、アプラマイシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、フォーチマイシン、フラジオマイシン、ゲンタマイシン、イスパマイシン、カナマイシン、ミクロノマイシン、ネオマイシン、ウンデシレン酸ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、ストレプトニコジド、トブラマイシン、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、クロラムフェニコールパルミテート、パントテン酸クロラムフェニコール、フロルフェニコール、チアムフェニコール、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、リファキシミン、アミジノシリン、アムジノシリン、ピボキシル、アモキシリン、アンピシリン、アスポキシリン、アジドシリン、アズロシリン、バカンピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリン、カルベニシリン、カルフェシリン、カリンダシリン、クロメトシリン、クロキサシリン、シクラシリン、ジクロキサシリン、ジフェニシリン、エピシリン、フェンベニシリン、フロキシリン、ヘタシリン、レナンピシリン、メタンピシリン、メチシリン、メズロシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペナメシリン、ペネタメートヒドロヨージド、ペニシリンＧベネタミン、ペニシリンＧベンザシン、ペニシリンＧベンズヒドリルアミン、ペニシリンＧカルシウム、ペニシリンＧヒドラガミン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧ、プロカイン、ペニシリンＮ、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザシン、ペニシリンＶヒドラバミン、ペニメピサイクリン、フェネチシリン、ピペラシリン、ピバピシリン、プロピシリン、キナシリン、スルベニシリン、タランピシリン、テモシリン、チカルシリン、イミペネム、１−カルバ（デシア）セファロスポリン、セファクトール、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファゾリン、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォチアム、セフピミゾール、セフピリミド、セフポドキシムプロキセチル、セフロキサジン、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリルナトリウム、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロスポリン、セファロシン、セファピリンナトリウム、セフラジン、ピブセファレキシン、セファロシン、セファクロール、セフォテタン、セフプロジル、ロラカルベフ、セフェタメット、セフェピム、セフブペラゾン、セフメタゾール、セフミノクス、セフェタン、セフォキシチン、アズトレオナム、カルモナム、チゲモナン、フロモキセフ、モキソラクタム、クリンダマイシン、リンコマイシン、アジスロマイシン、カルボマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシンおよび誘導体、ジョサマイシン、ロイコマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、プリマイシン、ロキタマイシン、ロサラマイシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、トロレアンドマイシン、アンフォマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン、コリスチン、エンデュラシジン、エニロマイシン、フサファンギン、グラミシジン、グラミシジンＳ、ミカマイシン、ポリミキシン、ポリミキシンβ−メタンスルホン酸、プリスチナマイシン、リストセチン、テイコプラニン、チオストレプトン、ツベラクチノマイシン、チロシジン、チロスリシン、バンコマイシン、ビオマイシン、バージニアマイシン、亜鉛バシトラシン、スピサイクリン、クロロテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、グアメサイクリン、ライムサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セノサイクリン、テトラサイクリン、ブロジモプリム、テトロキソプリム、トリメトプリム、フラルタドン、フラゾリウム、ニフラデン、ニフラテル、ニフルホリン、ニフルピリノール、ニフルプラジン、ニフルトイノール、ニトロフラントイン、アミフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、フルメキン、ロメフロキサシン、ミロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキソリン酸、パーフロキサシン、ピペミド酸、ピロミド酸、ロソキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、アセチルスルファメトキシピラジン、アセチルスルフィソキサゾール、アゾスルファミド、ベンジルスルファミド、クロラミン−β、クロラミン−Ｔ、ジクロラミン−Ｔ、フォルモスルファチアゾール、Ｎ２−ホルミル−スルフィソミジン、Ｎ４−β−Ｄ−グルコシルスルファニラミド、マフェニド、４'−（メチル−スルファモイル）スルファニラニリド、ｐ−ニトロスルファチアゾール、ノプリルスルファミド、フタリルスルファセタミド、フタリルスルファチアゾール、サラゾスルファジミジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファベンズアミド、スルファセタミド、スルファクロルピリダジン、スルファクリソイジン、スルファシチン、スルファジアジン、スルファジクラミド、スルファジメトキシン、スルファドキシン、スルファエチドール、スルファグアニジン、スルファグアノール、スルファレン、スルファロクス酸、スルファメラジン、スルファメータ、スルファメタジン、スルファメチゾール、スルファメトミジン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメトロール、スルファミドクリソイジン、スルファモキソール、スルファニルアミド、スルファニルアミドメタンスルホン酸トリエタノールアミン塩、４−スルファニルアミドサリチル酸、Ｎ４−スルファニリルスルファニルアミド、スルファニリルウレア、Ｎ−スルファニリル−３，４−キシルアミド、スルファニトラン、スルファペリン、スルファフェナゾール、スルファプロキシリン、スルファピラジン、スルファピリジン、スルファソミゾール、スルファシマジン、スルファチアゾール、スルファチオウレア、スルファトラミド、スルフィソミジン、スルフィソキサゾール、アセダプソン、アセジアスルホン、アセトスルホン、ダプソン、ジアシモスルホン、グルコスルホン、ソラスルホン、スクシスルホン、スルファニル酸、ｐ−スルファニルベンジルアミン、ｐ，ｐ'−スルホニルジアニリン−Ｎ，Ｎ'ジガラクトシド、スルホキソン、チアゾールスルホン、ダプトマイシン、リネゾリド、テリスロマイシン、クロフォクトル、ヘキセジン、マガイニン、メテナミン、メテナミンアンヒドロメチレン−シトレート、馬尿酸メテナミン、マンデル酸メテナミン、スルホサリチル酸メテナミン、ニトロキソリン、スクアラミン、キシボルノール、シクロセリン、ムピロシンならびにツベリンからなる群から選択される、請求項１１に記載の医薬製剤。
被験体における免疫応答の増強が、被験体におけるＩＬ−８の発現の増加を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
被験体における免疫応答の増強が、被験体におけるＭＣＰ−１の発現の増加を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
被験体における免疫応答の増強が、被験体における生得免疫系の活性化を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
被験体における免疫応答の増強が、被験体における適応免疫系の活性化を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
被験体における免疫応答の増強が、被験体における食作用活性の増加を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。