HU227790B1 - Aerosol formulations of peptides and proteins - Google Patents

Description

A találmány tárgyát aeroszol inhalátorból inhalálhatö, ovogyászatilag felhasználható peptideket és proteineket tartalmazó gyógyszertormát képezik.

A gyógyszerek egész sorát alkalmazzák aeroszol formákként szájon vagy orron keresztül. Az egyik széles körben használt eljárás az ilyen aeroszol formák elkészítésére az, amikor a gyógyszer szoszpenziös formáját készítik el, amely nem más, mint egy haj főanyagként ismert cseppfolyós gázban eloszlatott finom por. Az ilyen formák páciensnek való beadására rendszerint nyomás alatti, kimért adagolása inhalátort ípressarized matered dose ínhaler - pMDl) használnak. A készítmény rendszerint tartalmaz felületaktív anyagokat (szaríaktánsokat) a gyógyszerhatóanyagnak a hajtóanyagban való diszpergálása elősegítésére és a mifcronizált hatóanyag-részecskék aggregáiódásának megelőzésére.

Napjainkig a klór-fInor-szénhidrogéneket (CFC-ket) tekintették elfogadott hajfőanyagoknak az ilyen gyógyászati aeroszol formák esetében. A kiór-fluor-szénhidrogén (CFC) hajtóanyagokat tartalmazó formákban tipikusan alkalmazott felületaktív diszpergálő ágensek voltak például a szorbítán-trioieát, olaj sav, lenitinók és az etanol. Mivel kiderült, hogy a klor-fiuor-szenhidrogének károsítják a Földet körülvevő ózonréteget, a hajtóanyagok egy üj generációja lépett ezek helyébe.

A legígéretesebb áj hajtóanyagoknak a hidrogén-íluor-alkánokar (HFA), például az 1,1,1,2-tetrafiuor-etánt (P134a)_f az 1,1, i, 2, 3, 3,3-heptaflaor-propánt (P22?) és az 1,1-difiuor-etánt (Pl52a) tekintik. Ezek nemcsak környezetvédelmi szempontból elfogadhatók, hanem alacsony a tozicitásak is, és gőznyomásuk is

ΜίΖίΑΐΐΟ **· megfelel az aeroszol formákban történő felhasználásra. A klór-fluor-szénhidrogén (CFG) aeroszol formákban rendszerint alkalmazott felületaktív anyagok azonban nem különösebben alkalmasak a hajtóanyagok üg generációjával való együttes felhasználásra, és ezért az utóbbi években számos más felületaktív anyagot javasoltak a RFA-hajfőanyagokkal együtt való felhasználásra, többek között polietoxilezett felületaktív anyagokat és flucrozott felületaktív a n ya g okát.

A peptid-alapű gyógyszerek nem tartoznak a hagyományosan aeroszol forraákként alkalmazott gyógyszerek közé, jóllehet különböző aeroszol formákat már javasoltak ilyen célra. Például, az

US--P 5,284, 656 szemű szabadalmi leírás egy olyan granulooita telep stimuláló faktort (G-SCFI tartalmazö formát ismertet, amely a G-SCF rínom eloszlású porát tartalmazza egy hajtóanyagban egy felületaktív anyag, igy szorbitán-trioleát, szöjaiecítin vagy olajsav segítségévei szuszpendálva. Az US-P 5, 364, 8.38 számú szabadalmi leírás egy olyan inzulint tartalmazó formát ismertet, amelyben az inzulin száraz pora egy segédanyag, például olaj sav segítségével van egy alacsony forrásponté hajtóanyagban szuszpendálva. Az EP-A1-05186.00 számon közzétett európai szabadalmi bejelentésben közölnek egy 1,1,1,2,3,3,3-heptafiuor-propán hajtóanyagot, egy gyógyszerhatóanyagot és adott esetben egy felületaktív anyagot tartalmazö aeroszolos gyógyszerkészítményt. Felületaktív anyagként olaj sav vagy szójaiecítin alkalmazását j avasolják. A Wö 91/16038 számú nemzetközi közzétételi Iratban leírnak. egy aeroszolos készítményt szilárd polipeptidek adagolására, de ebben hajtóanyagként klör-íinor-szénbidrogéneket alkalíooa iup;

reá znak,

Meglepő módon azt találtok,- hegy különböző anyagok, amelyek elősegítik a polipeptídek felszívódását a légzötraktusban, különösen alkalmasak arra, hogy a HFA (hidrogén-finor-alkánj hajkőanyagokkal együtt felületaktív anyagokként alkalmazzuk azokat,

A találmány tárgyát olyan gyógyászati aeroszol készítmény képezi, amely (a) egy hidrogén--! luor-aikan (HFA) hajtóanyagot; (b) egy gyógyászatilag hatásos, a hajtóanyagban diszpergáiható polipeptidet és (o) egy felületaktív anyagot (szuriaktánst) tartalmaz, amely egy 8-16 szénatomos zsírsav vagy annak sója, egy epesav~sö, egy foszfolipid. vagy egy alkil-ssacharíd, és ez a felületaktív anyag fokozza a polipeptid szisztémás felszívódását az alsó légzötraktusban.

A találmány szerinti felületaktív anyagok meglepő módon alkalmasak a HFA hajtóanyagokkal. való együttes felhasználásra; ama képességük, hogy elősegítik a polipeptid felszívódását, kettős funkciót jelent számukra, ezért különösen előnyös azok felhasználása a találmány szerinti polipeptid aeroszol formákban.

Arai a zsírsavakat és azok sóit illeti, a 8-16 szénatomos zsírsavak sói előnyösek. Az előnyös zsírsav-sókra példák a nátrium-, kálium- és llzin-kapríiát (Cg, -kaprinát (C_i;?) , -lanrát (C;,) és -rairlsztát (Cg . Mivel az, ellenien természete nem különösebben lényeges, potenciálisan a zsírsavak bármely sója felhasználható. Egy különösen előnyös zsírsav só a nátriura-kaprinát,

Megfelelő epesav-sők lehetnek például a kölsav, kenodezoxikőisav, giikokőlsav, tauroköisav, glíkokenodezoxikóisav, tanrokenodezoxikőisav, dezoxikőlsav, giíkodezoxikölsav, tanrodezoxiköisav, litokólsav és urzodezoxikólsav sói.

Az epesav-sök közül előnyösek a trihidroxi-epssavak sói. Előnyösebbek a. köisav, glikokólsav és taurokólsav sói, különösen ások nátrium- és káliumsói. Legelőnyösebb epesav-sö a nátríum-taurokólát.

Alkalmas foszfolípídek lehetnek például a csak egy zsírsavláncot tartalmazó foszfolípídek, például a 1izofoszfatidil-kolín, a lizofoszfati.dii-glicerín, a lizofoszfatidíi-etanol-amin, a iizofoszfatidii-inozit és a iizofoszfatiöii-szsrín.

Megfelelő alkii-szacharidok lehetnek például az alkil-glükozídok és az alkíl-maitozídok, például a deci1-glükozld és a dode cí1-ma11ο z1d.

A legelőnyösebb felületaktív anyagok az epesav-sök.

A hajtóanyag az 1,1,1,2-tetrafluor-etán (P134a), 1,1,1,2,3,3,3-heptafInor-propán (P22?) és az 1,1-dlfluor-etán (PlSza) közül egyet vagy többet tartalmazhat, adott esetben egy vagy több egyéb hajtóanyaggal készült keverékben. A hajtóanyag előnyösen P134a vagy P227 vagy a Pl34a és a P227 keveréke, például a P134a és a P22? megfelelő sűrűségre beállított keveréke.

A polípeptid lehet bármely gyógyászatilag vagy diagnosztikaiiag felhasználható kis vagy közepes méretű peptid vagy protein; molekulatömegük egészen 40 kD-ig terjedhet, ami a szisztémás bevitel szempontjáből kívánatos érték. A találmány szerinti javított polípeptid felszívódási mechanizmus általánosan alkalmazható, és alkalmazni lehet valamennyi ilyen peptid esetében, bár azok felszívódása javulásának mértéke a polípeptid fizikai-kémiai tulajdonságaitól és az alkalmazott spéciázás felületaktív s-m: ·; no ««

anyagtól függően változik. Várható, hogy s találmány szerint legalkalmasabbak a 30 kD-ig terjedő aol-skulatömegű polipeptidek, például olyan polipeptidek, amelyek molekulatömege 25 kD-ig vagy 20 kD-ig, és különösen 15 kD-ig vagy 10 kD-ig terjed.

A polipeptid előnyösen egy peptid hormon, például inzulin, glukagon, az inzulin C-peptidje, vazopresszin, dezmopresszin, kortlkotropin (ACTH), kortikotropin releasing hormon (CRH?, gonadotropin releasing hormon (GnRH), gonadotropin releasing hormon agonisták és antagonisták, gonadotropin (luteinizáiő hormon vagy LHRHj, kalcítonin, paratiroid hormon (PTH), a PTH bioaktív fraomenseí, mint a P!H(34) és a DTHC38), növekedési hormon (Gö) '(például humán növekedési hormon, nGH) , növekedési hormon releasing hormon (GHRH), szomatosztatin, oxitocin, atriális nátraureiikus faktor (ANF), tireotropin releasing hormon (TP.H>, dezoxiríbonukleáz (Dbáz), proiaktin és folliculus stimuláló hormon (FSh) és a fentiek bármelyikének analógjai.

Egyéb lehetséges polipeptidek közé tartoznak a növekedési faktorok, interleukínok, polipeptid vakcinák, enzimek, endorfinok, glikoproteinek, lipoproteinek, a véralvadási kaszkádban szerepet játszó polipeptidek, amelyek farmakológia! hatásukat szisztémásán fejtik ki. Várható, hogy a legtöbb vagy Inkább az összes kicsiny vagy közepes méretű polipeptid hatékonyan vihető be a szervezetbe a találmány szerinti eljárásokkal.

Előnyös polipeptid az inzulin.

A hatóanyag mellett hajtóanyagot és felületaktív anyagot, továbbá kismennylségű {általában 5 %-ig, de esetleg 20 %-íg terjedő mennyiségű) etanolt is tartalmazhatnak a találmány szerinti szóra ijO készítmények. Az aeroszol készítmények rendszer int tartalmaznak etanoit, mivel az javítja a pontos adagoiású szelep működését, és bizonyos esetekben fokozza a diszperzió stabilitását.

A készítmény természetesen szükség esetén egyéb adalékanyagokat is tartalmazhat, beleértve más gyógyászatilag hatásos anyagokat, adjuvánsokat, vivöanyagokat, ízesíföanyagokat, puf.farokat, anfcioxidánsokat, kémiai stabilizátorokat és ehhez hasonló anyagokat. A megfelelő adalékanyagok példáiként említhetjük a laktőzt, glükózt, fruktözt, gaiaktózt, trebaiózt, szacharózt, maltőzt, rafíinőzt, melezitózt, sztaohíózt, laktatót, palatinitét, keményítőt, xilitet, mannltot, míoinozitot és hasonlókat és ezek hidrátjait, továbbá aminosavakat, például alani.nt, gliolnt és hetaint, továbbá peptideket és proteineket, például aibumint.

Előnyös hordozó a melezitó-z.

A találmány szerinti készítmények különleges előnye, hogy felhasználják a különleges felületaktív anyagok kettős természetéből fakadó előnyöket. A találmány szerinti felületaktív anyagok meglopó módon, nem csupán arra képesek, hogy a hajtóanyagok űj generációjában finom diszperziókat képezzenek, hanem arra is (és ez igen fontos tény), hogy elősegítsék a polipeptid felszívódását. A találmány szerinti, készítmények stabilak, és magas a bennük lévő polipeptid biológiai hasznosulása, és az eredmények jól reprodukálhatók.

A. találmány szerinti felületaktív anyagok fokozni képesek a polipeptid felszívódását, például azzal, hogy:

(i) Növelik egy polipeptid paraesl.luiáris aktivitását azáltal, hogy az epitheliáiís sejtek közötti szoros kapcsolatokban nőne φ V ♦ * Φ

Ο szerkezeti változásokat okoznak.

(2) Fokozzák egy polipeptid transzceliulárís permeabiiifását azáltal, hogy kölcsönhatásba lépnek a sejtmembránt alkotó lipidekkel vagy proteinekkel vagy extrahálják azokat.

(3) Kölcsönhatás jön létre a hatásfokozö és a polipeptid között, ami megnöveli a polipeptid vízben való oldékonyságát; ez oly módon történhet, hogy meggátolhatják a polipeptid aggregátumok (dimerek, trimerek, hexamerek) képződését, vagy beoidják a poiipeptidet a felszívódást fokozó miceilákba.

(4) As alveoiusokat és a tüdőjáratokat borító nyalkát feloldva vagy annak viszkozitását csökkentve lehetővé teszik a polipeptid közvetlen felszívódását az epitheiiáiis felületen.

(5) Csökkentik a tüdőben a proteáz inhibitorok aktivitását, ezáltal fokozzák a polipeptid stabilitását és felszívódását.

A felületaktív anyagok funkcionálhatnak csupán egy, a fentiekben ismertetett mechanizmus, de akár két vagy több mechanizmus szerint is. A több mechanizmus szerint funkcionáló felületaktív anyagok az egy vagy két mechanizmus szerint működőknél előnyösebbek a polipeptid hatékony felszívódásának elősegítése szempontjából.

A „fokozott felszívódás'' azt jelenti, hogy a felületaktív anyag jelenlétében a polipeptid nagyobb mennyisége szívódik fel a szisztémás keringésbe, mint anélkül.

A találmány szerint a felületaktív anyagok és a polipeptid aránya előnyösen az 1:10 és 1:0,2, előnyösen az 1:4 és 1:1, még előnyösebben az 1:4 és 1:2,5 közötti tartományba esik. A találmány szerinti készitményekben a polipeptid előnyös koncentrácioiOíUSOwZ

ja Ο'., 1 mg/md. és 25 mg/ml közé esik.

Amennyire csak lehetséges, a poíipeptid előnyösen olyan részecskékből áll/ amelyek átmérője iö'' ra-nél (10 μ) kisebb, például 10” és 10'' m (ö, 01-10 μ) vagy 10“' és 6 x 10* m, (0,01-6 μ), például 10^? és 5 x Iö” m (0,1-5 μ) közötti, Előnyösen a poíipeptid legalább 50 %-ban olyan részecskékből áll, amelyek a kívánt mérettartományba esnek. Például legalább 60 %-ban, előnyösen legalább 70 %-ban, meg előnyösebben legalább 80 %-ban és legelőnyösebben legalább 90 %-ban a poíipeptid olyan részecskékből áll, amelyek átmérője a kívánt mérettartományba esik.

Ezért a találmány szerinti felhasználásra kiválasztott poiipeptidet a készítményekbe történő bevitel előtt elő kell készíteni, annak érdekében, hogy a kívánt mérettartományba eső átmérőjű részecskékhez jussunk. Például a. poíipeptid míkronizálhatő egy megfelelő malomban, például egy gázsugárral működő malomban. Alternatív módon választhatunk egyéb eljárásokat is, példáui a porlasztva szárítást vagy az ellenőrzött kristályosítást, példáui szuperkritikus folyadékokból végzett kristályosítást.

A találmány szerinti felhasználásra szolgáló felületaktív anyag előnyösen ugyancsak olyan részecskékből all, amelyek mérete a kívánt mérettartományba esik. Megfelelő módon eljárhatunk úgy, hogy a poiipeptidet és a felületaktív anyagot összekeverjük egy vizes pufferoldatban, és szárítás után a kapott szilárd port adott esetben míkronizáljuk, Ezt a mikronizált port hozzáadhatjuk a hajtóanyag egy részéhez (és adott esetben etanolhoz} alacsony hőmérsékleten. A hatóanyag bekeverése után hozzáadhatjuk a még fennmaradó felületaktív anyagot és hajtóanyagot, és adott fr'fö.UUpl .esetben etanolt adhatunk hozzá, és· a kapott szuszpenzíót megfelelő tartályokba töltjük.

A. találmány szerinti polipeptid aeroszol tormák felhasználhatók betegségek helyi vagy szisztémás kezelésére, és adhatjuk azokat a felső és alsó légeteken keresztül, beleértve az orron át történő adást is. A találmány tárgyát képezi tehát a polipeptid aeroszol formák alkalmazása betegségek pulmonálisan történő kezelésére szolgáló gyógyszerek előállítására.

A találmány szerinti polipeptid aeroszol formákkal kezelhető betegségek azok, amelyeket minden esetben egy sajátos poüpeptiddei lehet kezelni; például a találmány szerinti, inzulint tartalmazó formák alkalmazhatók például cukorbetegség (díabetes; kezelésében, a kortikotropin-tartalmú formák alkalmazhatók például gyulladásos megbetegedések kezelésére, a GnRH tartalmú formák alkalmazhatók férfiak terméketlenségének kezelésében. Az indikációk valamennyi említett polipeptid esetében jól ismertek. A találmány szerinti polipeptid aeroszol formák ugyancsak alkalmazhatók profiiaktíkus (megelőző) kezelésre is.

A következő példák a találmányt szemléltetik, anélkül, hogy az oltalmi kör bármiféle korlátozását jelentenék,

Pl3áa és/vagy P22? haj tő-anyagokkal és különböző feiületaktív anyagokkal inzulin-tartalmú készítményeket állítottunk elő azzal a céllal, hogy megvizsgáljuk a képződő szuszpenziók minőségét. A következő példákban a kapott sznszpenziökat az „elfogadható vagy /íiö jelzőkkel minősítjük, Az elfogadható .szuszpenzióra jellemző az alábbiak közül egy vagy több tulajdonság: csekély hajlam a szétválásra, könnyű újra-díszpergáibatöság, csekély emíiup;

φ * φ * * φ-Χ ** * φ«φ* * φ ♦ Φ X fiokkulációs hajlani, a 'kristályosodási és morfológiai változó.....

sokra való hajlani hiánya, ezért ezek a diszperziók, megfelelően stabilak az egyenletes adagolás céljára. A jó diszperziók ennél még stabilabbak.

Eljárás:

65-75 tömegrész íazslini (lásd alább a táblázatban} egy kiöntés főzőpohárban vízben feloldunk. Hozzáadnak 25-35 tomegrész felületaktív anyagot (lásd alább a táblázatban), feloldjuk azt is, és a pn-t 7,4-re beállítjuk. Az oldatot a víz elpárologtatósával bepároljuk.. A kapott szilárd anyagot összetörjük, megszitáljuk, és gázsugárral működő malomban mikronizaijuk, A kapott porból 10-50 mu-ot bemérünk egy műanyaggal bevont üvegpalackba, a palackot lehűtjük mintegy -40C^K-ra szárazjég és izopropil-alkohol keverékében, és hozzáadunk 10 ml, ugyancsak mintegy -40C°~ ra lehűtött F134a hajtóanyagot. A palackot egy pontos adagolása szeleppel lezárjuk, es mintegy 30 másodperéig erőteljesen rázzuk. Az lg-in, példák esetében kiegészítésképpen még ultrahangos fürdőben mintegy 10 percen keresztül tartó kezelést is végzünk,

A képződött szuszpenziók minőségét a bevezetőben említett tulajdonságok alapján értékeljük, és az eredményeket az alábbiakban táblázatosán összesítjük.

♦ *

Eredmények:

Példa száma	Felületaktív anyag .........................................................................i	Fe lületaktív anyag:inzulin arány	A szuszpenzlö í minősége j
la	nátrí um-kapri nát	25:75	jó
ib	kaiium-kaprinát	27:73	jó
1c	lízin-kaprínát	35:65	jó
Id	riá tr í um-mi r i s z tát	30:70	jó
le	nátrium-iaorát	25:75	jó
If	nátrium-kapraiét	25:75	jó
íg	nátrium-taurokolát	25:75	jó
ib	dioktanoií-fesztáti di.l -glicerin	25:75	jó
ij	de de c 11 - ma 11 ο z i d	25:75	) 1
ik	11t opaImi tel1-£os z - fa tidli-gllce r í n	25:75	elfogadható !
X,	iizopalmítoil-fosz- fatidíi-kolin	25:75	elfogadható
1 rl·	dioktanoii-fősz táti di‘1-kői in	2 5 :7 5	3 ° I

2. példa.:

tömegrész nátrium-kaprlnátot és 75 tömegrész inzulint egymástól függetlenül mikron.! sálunk, és utána szárazon összekeverünk. Ebből a keverékből 40 mg-ot bemérünk egy műanyaggal bevont üvegpalackba, A palackot szárazjég és izopropíI-alkohol keverékében lehűtjük mintegy -4.G^:C°-ra, és ugyancsak kese! -400^-ra lehűtött 10 ml Piába hajtóanyagot adunk hozzá, A palackot lezárjuk egy pontos adagolást biztosító szeleppel, és mintegy 30 másodpercig erőteljesen rázzuk, dó szuszpenzió keletkezik.

85-75 tömegrész inzulint (lásd alább a táblázatban) egy kiöntés főzőpohárban vízben feloldunk. Hozzáadunk 25-35 tömegrész .felületaktív anyagot (lásd alább a táblázatban), és annak oldódása után a ρΗ-t 7,4-re beállítjuk. Az oldatot a víz elpárologtatásávai bepároijuk, A kapott szilárd anyagot összetörjük, megszitáljuk, és gázsugárral működő malomban mikron!záijuk. Ebből a porból 40-50 mg-ot mérünk be egy műanyaggal bevont üvegbe, amelyet azután szárazjég és izopropil-alkohoi keverékében mintegy -4ÖC°-ra lehőtunk. Hozzáadunk lö ml közei -40C^e~ra lehűtött P227 jelű hajtóanyagot, a palackot egy pontos adagolást biztosító szeleppel lezárjuk, és mintegy 30 másodpercig erőteljesen rázzuk, A 3g-3n. példák esetében a palackot ezenkívül még mintegy lö percig ultrahangos fürdőben kezeljük.

Eredmények:

Példa számai	Felületaktív anyag	.Fe lületaktív anyag:inzulin arány	A szuszpenzió minősége
3a	n á t r i um- ka p r i n á t	25:75	jö
3b	kálium-kaprinát	27:73	jö
i 3c	iizin-kaprinát	35:65	jó
i 3ö	nátrium-mirisztét	30: 70	jő
í 3 e	na f.rium~.l aurát	25:75	j ő
3f	nátrium-kaprílát	25:75	jó
3g	n á t r i um -1 a u r o k ο 1 á t	25:75	j Ő
3h	dioktanoil-foszfati- dí1-glicerin	25:75	jő
3j	d oda c i1 -ma .11 ο z id	2 5 : 7 5	jő
3k	iizopaimitoii-fősztáti dil-gliperin	25:75	elfogadható i
3»	1isopalmítoí1-foszfa- tidi i-koiin	25:75	el fogadható
1 3n	dioktanoil-fcssfati- di 1-kolin	25:75	jő

goafuy

DNáz-fc, felületaktív anyagot;, (nátrium-taurokolátot vagy dioktanoil“.f.oszfa.t.idii-giice.rint) és melezitÓ2t tartalmazó mikroni.zált formát (DNáz:detergens::melezitóz arány 1:0,33:98,67; a teljes tömeg 50 mg) betörtünk egy műanyaggal bevont üvegpalackba, ás lehűtjük mintegy ~40^:C°-ra. Hozzáadunk ugyancsak mintegy -40C''-ra lehűtött, mintegy 10 ml Pl34a vagy P227 hajtóanyagot, és a palackot egy pontos adagolást biztosító szeleppel lezárjuk. A palackot ultrahangos fürdőben, megközelítőleg 10 peroig kezeljük.

Azonos készítményeket is előállítunk, amelyekhez, azonban az ultrahangos fürdőt megelőzően 5 térfogat %-nyi etanolt adunk.

A keletkező szuszpenziök minőségét elkészültük után azonnal, illetve szobahőmérsékleten 20 órán át végzett tarolás után is ellenőrizzük. Mindegyik esetben jó szuszpenziót kapunk.

Nátrium-kaprrnátot és inzulint külön-külön mikron!sálunk, és azután a kapott porokat szárazon összekeverjük. A. nátrium-kapriná.t és az inzulin aránya 25:75·. Ebből a keverékből 80 mg-ot beteltünk egy aeroszo.los palackba, amelyet szárazjég és izopropíl-alkohol keverékében lehűtünk közel —40C^ö-ra, és 10 ml ugyancsak közel -4ÖC^e'~ra lehűtött P134a hajtóanyagot adunk hozzá. Az aeroszolon paiaokott egy pontosan SS μΐ adagolású szeleppel lezárjuk, és azután néhány peroig ultrahangos fürdőben kezeljük.

Az aeroszolból kibocsátott inzulin részecskék méretét egy „Andersen típusú impaktorra.1 vizsgáljuk 28,3 liter/perc kiáramlás! térfogatsebességnél. A finom ( 6 x 10m-nél (6 pm) kisebb] smaip· « » φ φ φ részecskék frakciója & kibocsátott dózis 41 %-át képezi. Két hónapi szobahőmérsékleten végzett tárolás után. a részecskék méretét ismét meghatároztuk, és káros változást nem tapasztaltunk. A finom részecskék frakciója 46 %-os volt.

mg/mi koncentrációban inzulin és natrium-taurokoIát 75:25 tömegarányé keverékét tartalmazó 50 darab aeroszoios palackot készítőnk a következő módon: Az anyagokat bemérjük egy kiöntés főzőpohárba, amelyet szárazjég és ízopropíi-alkohol elegyében közel ~4öC°~ra hütünk le. Hozzáadjak a aI34a hajtóanyagot (ezt is megközelítőén -40 C’-ra lehűtve), az elegyet Ultra Turrax keverővei néhány percig keverjük, és áttolójuk egy tárolótartályba. itt szintén -40 C^-on további PX34& hajtóanyag-mennyiséget adunk hozzá (a teljes térfogat 500 mi) . A készítményt Ultra

Turrax keverövei keverjük, azután 10 ml-es adagokban pontos adagolást biztosító inhalátorokba töltjük, amelyeket pontos adagolást biztositó szelepekkel zárunk le.

Az aeroszolokat különböző körülmények között tároljuk:

c*~on, száraz körülmények között 2,8 és 13 hétig,

C^ö~on, 30 % relatív légnedvesség mellett II hétig.

A szuszpenzlók minőségét kvalitatív becsléssel ellenőriztük;

valamennyi esetben jónak találtuk a kapott szüszpenzíókat.

Ezen kívül vizsgáljuk az inzulin stabilitását is standard nagyhatékonyságú foliyadékkromatográfiás technikákkal (KPLC), és meghatározzuk a bomlástermékek, igy a dezamido-inzulin és egyéb inzulin-eredetű szennyezések koncentrációját a kromatográfiás

J. ο ♦ ♦ « « görbe alatti terület (Aö'C) alapján. Vizsgálataink szerint valamennyi esetben áz elfogadható- határok között volt a szennyezések mennyisége {kevesebb# mint 5 % dez-amído-inzulin és 3 %-nái kevesebb inzulin-eredetű egyéb szennyezés).

(A 7. és 8. példákban leírt vizsgálatokat az 0. Nerbrínk és munkatársai által közölt módszer ( A Növel Dry Powder Aerosol Delivery System fór Reál Time Measnrement of the Inba led Dose to Large Animáló; Keresői Science and Technology £7, 147-161 (1997)) alkalmazásával végeztük.)

Sgy 5. példa szerint előállított készítménnyel töltött, nyomás alatti, pontos adagolásé inhalátort (MD-X) működésbe hozunk, és a kibocsátott aeroszolt egy kiterjesztő kamrába vezetjük. A kiterjesztő kamrán át 8 liter/perc sebességű légáramot vezetünk az elosztó rendszerbe, és az ahhoz kapcsolt 8 kutya mindegyikét. 5 percig tartó belélegezetésnek tesszük ki. A megcélzott inhalált dózis 1 u (egység) inzulin/t.estfcömeg-kg. A biológiai hasznosulás mértékét úgy határozzuk meg, hogy meghatározzuk az inzulin plazmaszintjét az inhaláció után, azután ezt Összehasonlítjuk a korábbi kísérletekből ismert, intravénásán injektált inzulin piazmaszintjévei. Azt találtuk, hogy a tüdőt elérő gyógyszerhatóanyag biológiailag 66 %.~foan hasznosult.

8. példa:

Nyomás alatti, pontos adagolása inhalátorokat (Mpl-ket) a 6.

bivO l y>Z ίί

X ♦ »«» ♦ X ·»« ** ♦ « » « Κ ·Χ » * «*<6 > ** *· példa szerinti készítménnyel vagy a felszívódást elősegítő anyag nélküli hasonló összetételű készítménnyel töltünk meg, Az egyes inhalátorokat működésbe hozzuk, és a kibocsátott aeroszolt egy kiterjesztő kamrában felfogjak. A kamrán át 8 liter/perc sebességű levegő-áramot vezetünk át egy elosztó rendszerbe, amelyhez kapcsolt 5 kutya mindegyikét 2 percig tartó beléiegezetésnek vetjük alá. A megcélzott inhalált inzulin dózis 1 V (egység) inznlin/tesfctömeg~kg, Vérmintákat veszünk az adagolás előtt és különböző időpontokban egészen az adagolás kezdetétől számított 2-45. percig. A plazma inzulin szintjét radioimmun vizsgálattal (RIA) határozzuk meg.

A felszívódást fokozó anyag nélkül készült formákból az inzulin általában viszonylag lassan szívódik fel; a plazma inzulin szintje néhány állat esetében csak az adagolás kezdete utáni

50-100 perc között mutat maximumot. Más állatok esetében a plazma inzulin szintje az adagolás kezdetétől számított 10. és 20. percek között éri el a csúcsot.

A találmány szerinti készítmények esetében a plazma inzulin szintje az adást követő 10 percen belül elérte a maximális plazma szintet valamennyi állat esetében, majd mintegy 25 perc eltelte után valamennyi állatnál egy újabb csúcsot észleltünk a plazma szintben.

srsrsíwz

Claims (3)

1. Szabadalmi igénypontok

   1. Aeroszol gyógyszerkészítmény, amely ía) egy hidrogén-f luor~alká?í (HFA) hajtóanyagot, íb) egy, a haj főanyagban diszpergáihatő, gyógyászatilag aktív polipeptídet és (e) a 8-16 szénatomos· zsírsavak vagy sóik, az epesav-sók, a csak egy zsír.savláncot tartalmazó foszfoiipídek vagy alkil-szacbaridok közül választott felületaktív anyagot és kívánt esetben gyógyszerészetileg elfogadható egyéb segédanyagot tartalmaz.
2. 2, Az 1. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a felületaktív anyag egy 8-1-6 szénatomos zsírsav sója.

   ü. A 2. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a zsírsav só a nátrium-, kálium- és lisin-kaprí'lát (C₈), -kaprinát ÍC_K) , -laurát íC,₂) és -mirisztát (Cüb közül kiválasztó 11 4. Az 1. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a felületaktív anyag egy trihidroxí-epesav sója.

   ö. A 4. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben az epesav-ső a kőisav, giikokólsav és taarokőlsav sói közül kiválasztott.

   6. Az S. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben az epesav-ső a köi.sav, giikokólsav é-s taurokőlsav nátrium- és kálium-sói közül kiválasztott.

   7. A 6. igénypont szerinti aeroszol gyógys.zer késsí tmé-ny, amelyben az epesavas só a nátrium-taurokolát.

   8. Az 1. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a felületaktív anyag lizofoszfatiöil-koiin, lízofosz19 amelyben a hajtóanyag 1,1,1,2-teí fatidil-glicerin, lisofoszfatidil-etanoi-amin, iizofoszfatidil-ínozít és lízofoszfatidil-szerin közül, kiválasztott.

   9.. Az 1. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a felületaktív anyag az alkíl-glükozidok és alkíl-maltozídok közül kiválasztott.

   10. A 9. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a felületaktív anyag a decii-glükosíd és dodecíl~mal~ to-zid közül kiválasztott.

   11. Az l-lö. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a hajtóanyag 1,1,1,2-tetrafluor-e'tán (Pl34a), 1,1,1,2, 3,3, 3-heptaflaor-propán ΓΡ227) és/vagy

   1,1-difluor-etán (D152a).

   lypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, finor-etán (P134a> és

   1,1,1,2,3,3,3-heptafluor-propán (P227) keveréke.

   13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a hajtóanyag 1,1,1,2-tetrafluor-etán <P134aí és 1,1, 1.,2, 3, 3,3-heptafinor-propán (P2.2.7.) megfelelő sűrűségű keveréke ,

   14. Az 1-13.

   gyógyszerkészítmény, amelyben a polipeptid molekulatömege legfeljebb 40 kD.

   15. A 14. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a polípeptid molekulatömege legfeljebb 30 kD.

   A 11 igénypontok bármelyike szerinti aeroszol amelyben a polipeptid molekulatömege legfeljebb 25 kD.

   me^vike szerint;

   Az 1 — 10. igénypontok tar;

   Λ5 ŐS ?- f > £ tx <·) gyógyszerkészítmény? amelyben a poiipeptid molekulatömege legfeljebb 20 kD.

   13, Az 1-17, igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény? amelyben a. poiipeptid molekulatömege legfeljebb 15 kD.

   19. Az 1-18. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény? amelyben a poiipeptid molekulatömege legfeljebb 10 kD.

   20. Az 1-19. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény? amelyben a poiipeptid egy peptidhormon.

   21. Az. 1-13, igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény? amelyben a poiipeptid az inzulin? glukagon? az. inzulin C-peptídje? vazopresszín? dezmopresszin? körüket ropin ÍACTH)? korti.kotropin relessing hormon (CRH) ? gonadotropin releasing hormon (GnPH)? gonadotropin (luteinizáió hormon vagy LHB.H) ? kalcitonin, paratiroid hormon (PTH)? a paratiroid hormon biológiailag aktív fragmensei? mint a PTH (34) és a PTH (38)? növekedési hormon (GE) (például humán növekedési hormon? hGH)? növekedési hormon releasing hormon (GHRB)? szomatosztatin? oxitökein? at.rial nátriuretikus faktor (ANF) ? üreotropin releasing hormon (TRH) ? dezoxiríbonukl.eáz {DNáz}?

   prolaktin és follioulus stimuláló hormon (FSH) közül kiválasztott .

   22. A 21. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény? amelyben a poiipeptid inzulin,

   23. Az 1-22. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény? amely a hajtóanyag és a felületaktív anyag

   6·.· ΰ 1 ♦ · tömegének 20 %~aig terjedő mennyiségű etanolt tartalmaz.

   24. Az 1-23. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amely a hajtóanyag és a felületaktív anyag tömegének 5 %-áig terjedő mennyiségű etanolt tartalmaz.

   25. Az 1-24. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amely adjutánsok, vivőanyagok, ízesitőanyagok, pufferanysgok, antíoxídánsok és kémiai stabilizátorok közül kiválasztott segédanyagokat tartalmaz.

   26. A 25. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a segédanyag a 1 aktőz, glükóz, fruktöz, galaktőz, trehalőz, szacharóz, maltőz, raffínöz, maliit, melesitőz, sztachiőz, laktit, palatinit, keményítő, xilit, mannát, mioinozít vagy ezek bidrátjai, alanin, giicin, bétáin és albumin közül kiválást tort.

   27. A 26. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a vivőanyag melezitőz.

   28. Az 1-27. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben, a felületaktív anyag 1:10 és 1:0,2 közötti felületaktív anyag : polípeptid. aránynak megfelelő mennyiségben van jelen.

   29. A 28. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a felületaktív anyag 1:4 és 1:1 közötti felületaktív anyag : polípeptid aránynak megfelelő mennyiségben van jelen.

   30. Az 1-29, igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amely 1Ö~^? - 1Ö~ m (0,01-10 pm) tartományba eső átmérőjű poiipeptid részecskéket tartalmaz,

   31. A 30. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amely 10' - 6 χ 1ί1^δ m. (Ο,Ι-fe μ©} tartományba eső átmérőjű poíipeptid részecskéket tartalmaz.

   32. A 30. igénypont szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amely 10' - 5 x 10^B m (0,1-5 um) tartományba eső átmérőjű polipeptíd. részecskéket tartalmaz.

   33. A 30-32. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a poíipeptid legalább 50 %-ban olyan részecskékből áll, amelyek a megadott mérettartományba esnek.

   34. A 30-32 . igénypontok, bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkész.ítmény, amelyben a poíipeptid legalább 60 %-ban olyan részecskékből áll, amelyek a megadott mérettartományba esnek.

   35. Ά 30-32,. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a polipeptíd legalább 70 %-ban olyan részecskékből áll, amelyek a megadott mérettartományba esnek.

   36. A 30—32. igénypontok bármelyike szerinti, aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a poíipeptid legalább 80 %-ban olyan részecskékből áll, amelyek a megadott mérettartományba esnek,

   37. A 30-32. igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a poíipeptid legalább 90 %-ban olyan részecskékből áll, amelyek a megadott mérettartományba esnek.
3. 3.8. As 1-37. Igénypontok bármelyike szerinti aeroszol gyógyszerkészítmény, amelyben a poíipeptid koncentrációja a készítményben 0,1 mg/ml és 25 mg/ml közé esik,

   39, Eljárás az 1-38. igénypontok bármelyike szerinti, poiipeptidet tartalmazó aeroszol gyógyszerkészítmény előállítására, a.zzal jellemezve, hogy a poiipeptidet és a felületaktív anyagot ás kívánt, esetben a segédanyagé (ka) t összekeverjük egy vizes ·\ϊ pufferoldatban, szilára porrá megszárítjuk, a szilárd port kívánt esetben mikronizáijuk, a kívánt esetben mikronízált port, a hajtóanyagot és esetleg etanolt beadagoljuk egy edénybe alacsony hőmérsékleten, összekeverjük, további mennyiségű hajtóanyagot és adott esetben etanolt adunk hozzá,

   40, Az 1-33. igénypontok bármelyike szerinti poiipeptid tartalmú aeroszol készítmény terápiában való felhasználásra.

   41. Az I-3S. igénypontok bármelyike szerinti poiipeptid tartalmú aeroszol készítmény alkalmazása betegségeknek a légzőrendszeren keresztül történő kezelésére szolgáié gyógyszerek előállítasára.,