PL215769B1 - Zwiazek ekteinascydynowy, kompozycja farmaceutyczna zawierajaca ten zwiazek i zastosowanie tego zwiazku - Google Patents

Description

Niniejszy wynalazek dotyczy związku ekteinascydynowego, kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek i zastosowania tego związku. Związek ekteinascydynowy ma właściwości przeciwnowotworowe, przy czym właściwości przeciwnowotworowe mają zwłaszcza analogi ekteinascydyny 743, Et-743.

Europejski opis patentowy EP 309.477 dotyczy ekteinascydyn 729, 743, 745, 759A, 759B i 770. Wykazano, że związki ekteinascydynowe mają właściwości antybakteryjne oraz inne użyteczne właściwości. Ekteinascydyna 743 obecnie jest poddawana próbom klinicznym jako środek przeciwnowotworowy.

Ekteinascydyna 743 ma złożoną strukturę tris(tetrahydroizochinolinofenolową) o poniższym wzorze (I):

W ekteinascydynie 743 mostek 1,4 ma strukturę o wzorze (IV):

Inne znane ekteinascydyny obejmują związki o różnych cyklicznych układach mostkowych, takich jak występujących w ekteinascydynach 722 i 736, w których mostek ma strukturę o wzorze (V):

ekteinascydynach 583 i 597, w których mostek ma strukturę o wzorze (VI):

PL 215 769 B1

oraz ekteinascydynach 594 i 596, w których mostek ma strukturę o wzorze (VII):

Pełna struktura tych i pokrewnych związków jest podana w J. Am. Chem. Soc., (1996), 118, 9017-9023. Na tę publikację niniejszym powołujemy się.

Obecnie ekteinascydyny są otrzymywane drogą izolacji z ekstraktów osłonie morskich Esteinascidin turbinata. Wydajność jest niska i poszukiwane są alternatywne sposoby otrzymywania.

Sposób syntetycznego wytwarzania związków ekteinascydynowych jest ujawniony w opisie patentowym U.S.A. 5.721.362; patrz również WO 9812198. Zastrzegany sposób jest długotrwały i skomplikowany. Dla zobrazowania, przedstawiono 38 przykładów, z których każdy opisuje jeden lub więcej etapów sekwencji syntezy prowadzącej do ekteinascydyny 743.

Zastrz. 25 opisu patentowego U.S.A. nr 5.721.362 jest nakierowane na pośredni związek fenolowy o podanym wzorze (11), który cytujemy jako półprodukt 11 lub lnt-11. Ma on strukturę bis(tetrahydroizochinolinofenolową) (II):

gdzie MOM oznacza podstawnik metoksymetylowy, a TBDPS oznacza podstawnik tert-butylodifenylosililowy.

Z półproduktu 11 możliwe jest zsyntetyzowanie innego interesującego środka przeciwnowotworowego, ftalascydyny, patrz Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999. Ftalascydyna jest pochodną bis(tetrahydroizochinolinofenolową) o wzorze (III):

PL 215 769 B1

Bardziej ogólnie, ftalascydyna i związki pokrewne są ujawnione w WO 0018233. Zastrz. 1 jest nakierowane na związki o wzorze:

w którym każda z grup podstawników zdefiniowanych przez R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 i R9 jest niezależnie wybrana z grupy obejmującej H, OH, OR', SH, SR', SOR', SO2R', NO2, NH2, NHR', N(R')2, NHC(O)R', CN, halogen, =O, C(=O)H, C(=O)R', CO2H, CO2R', C1-C12 alkil, C2-C12 alkenyl, C2-C12 alkinyl, podstawiony lub niepodstawiony aryl, podstawiony lub niepodstawiony aralkil i podstawiony lub niepodstawiony heteroaryl;

w którym każda z grup R' jest niezależnie wybrana z grupy obejmującej H, OH, NO2, NH2, SH, CN, halogen, =O, C(=O)H, C(O)CH3, CO2H, CO2CH3, C1-C12 alkil, C2-C12 alkenyl, C2-C12 alkinyl, aryl, aralkil i heteroaryl;

w którym każde koło zaznaczone linią przerywaną oznacza jedno, dwa lub trzy ewentualne wiązania podwójne;

w którym R7 i R8 mogą być dołączone do pierścieniowego układu karbocyklicznego lub heterocyklicznego;

i w którym każdy z X1 i X2 jest niezależnie zdefiniowany jak powyżej dla R1-R8, a ponadto obejmuje różne dozwolone definicje.

Znane są kolejne związki, które nie posiadają cyklicznego układu mostkowego. Obejmują one bis(tetrahydroizochinolinochinonowe) przeciwnowotworowe-przeciwbakteryjne antybiotyki safracyny i saframycyny oraz naturalne produkty pochodzenia morskiego renieramycyny i ksestomycyny, wyizolowane z hodowli mikroorganizmów i gąbek. Wszystkie one mają wspólny dimeryczny węglowy szkielet tetrahydroizochinolinowy. Związki te mogą być zaklasyfikowane do czterech typów, typów I do IV, w następstwie uwzględnienia charakteru utlenienia pierścieni aromatycznych.

Typ 1, dimeryczne izochinolinochinony, stanowi układ o wzorze (VIII) najczęściej występujący w tej klasie związków (patrz poniższa tablica I).

PL 215 769 B1

T a b l i c a I

Struktury antybiotyków saframycynowych typu I

Związek	Podstawniki
R14a	R14b	R21	R25a	R25b	R25c
saframycyna A	H	H	CN	O	O	CH3
saframycyna B	H	H	H	O	O	CH3
saframycyna C	H	OCH3	H	O	O	CH3
saframycyna G	H	OH	CN	O	O	CH3
saframycyna H	H	H	CN	OH	CH2COCH3	CH3
saframycyna S	H	H	OH	O	O	CH3
saframycyna Y3	H	H	CN	NH2	H	CH3
saframycyna Ydi	H	H	CN	NH2	H	C2H5
saframycyna Adi	H	H	CN	O	O	C2H5
saframycyna Yd2	H	H	CN	NH2	H	H
saframycyna Y2b	H	Qb	CN	NH2	H	CH3
saframycyna Y2b-d	H	Qb	CN	NH2	H	C2H5
saframycyna AH2	H	H	CN	Ha	OH a	CH3
saframycyna AH2Ac	H	H	CN	H	OAc	CH3
saframycyna AHi	H	H	CN	OH a	Ha	CH3
saframycyna AHiAc	H	H	CN	OAc	H	CH3
saframycyna Ar3	H	H	H	H	OH	CH3

^a przypisania mogą być wymienne ^b jeśli grupa Q ma wzór (IX):

Typ I aromatycznych pierścieni występuje w saframycynach A, B i C; G i H oraz S wyizolowanych z Streptomyces Iavendulae jako związki uboczne. Pochodna cyjanowa saframycyny A, nazwana

PL 215 769 B1 cyjanochinonoaminą znana jest z japońskiego zgłoszenia patentowego Kokai JP-A2 59/225189 oraz 60/084288. Saframycyny Y3, Yd1, Ad1 i Yd2 są wytwarzane przez S. Iavendulae przez bezpośrednią biosyntezę, z odpowiednim uzupełnianiem środowiska hodowlanego. Dimery saframycyn Y2b i Y2b-d utworzone przez wiązanie azotu na C-25 jednej jednostki z C-14 drugiej, również wytwarzano w uzupełnianym środowisku hodowlanym S. Iavendulae. Saframycynę AR1=AH2), produkt redukcji mikrobiologicznej saframycyny A na C-25 wytwarzany przez Rhodococcus amidophilus, otrzymano również przez niestereoselektywną chemiczną redukcję saframycyny A borowodorkiem sodu jako mieszaninę epimerów 1:1, a następnie wyizolowano chromatograficznie (pozostały izomer AH1 jest mniej polarny). W wyniku tej samej mikrobiologicznej konwersji otrzymano produkt dalszej redukcji saframycyny AR3, 21-decyjano-25-dihydrosaframycynę A (=25-dihydrosaframycyna B). Inny sposób mikrobiologicznej konwersji saframycyny A z użyciem gatunku Nocardia dostarczył saframycynę B, a dalsza redukcja za ₁ pomocą gatunku Mycobacterium dała saframycynę AH¹Ac. Otrzymano również drogą chemiczną 25O-octany saframycyny AH2 i AH1 do badań biologicznych.

Typ I związków o wzorze (X) również wyizolowano z gąbek morskich: patrz tablica II.

T a b l i c a II

Struktury typu I związków z gąbek morskich

	Podstawniki
R14a	R14b	R21	R
renieramycyna A	OH	H	H	-C(CH3)=CH-CH3
renieramycyna B	OC2H5	H	H	-C(CH3)=CH-CH3
renieramycyna C	OH	O	O	-C(CH3)=CH-CH3
renieramycyna D	OC2H5	O	O	-C(CH3)=CH-CH3
renieramycyna E	H	H	OH	-C(CH3)=CH-CH3
renieramycyna F	OCH3	H	OH	-C(CH3)=CH-CH3
ksestomycyna	OCH3	H	H	-CH3

Renieramycyny A-D wyizolowano z mikrobiologicznego ekstraktu gąbki gatunku Reniera pozyskanego w Meksyku, obok biogenetycznie pokrewnych monomerycznych izochinolin i związków pokrewnych. Struktura renieramycyny A pierwotnie została przypisana z odwrotną stereochemią na C-3, ₁

C-11 i C-31. Jednakże, po starannym sprawdzeniu danych ¹H NMR dla nowych pokrewnych związków, renieramycyn E i F, wyizolowanych z tej samej gąbki pozyskanej w Palau, okazało się, że połączenie pierścieni renieramycyn jest identyczne jak w saframycynach. To doprowadziło do wniosku, że pierwotnie przypisana stereochemia renieramycyn A i D musi być identyczna jak ta w saframycynach.

Ksestomycynę wykryto w gąbce gatunku Xestospongia pozyskanej z wód Sri Lanki.

Związki typu Il o wzorze (IX) z zredukowanym pierścieniem hydrochinonowym obejmują saframycyny D i F wyizolowane z S. Iavendulae oraz saframycyny Mx-1 i Mx-2 wyizolowane z Myxococcus xanthus.

Patrz tablica III.

PL 215 769 B1

T a b l i c a III Związki typu Il

Związek	Podstawniki
R14a	R14b	R21	R25a	R25b	R25c
Saframycyna D	O	O	H	O	O	CH3
Saframycyna F	O	O	CN	O	O	CH3
Saframycyna Mx-1	H	OCH3	OH	H	CH3	NH2
Saframycyna Mx-2	H	OCH3	H	H	CH3	NH2

Szkielet typu III wykryto w antybiotykach safracynach A i B wyizolowanych z hodowli Pseudomonas fluorescens. Te antybiotyki o wzorze (XII) złożone są z podjednostki tetrahydroizochinolinochinonowej oraz podjednostki tetrahydroizochinolinofenolowej,

w których R²¹ oznacza -H w safracynie A i oznacza -OH w safracynie B.

Saframycyna R, jedyny związek sklasyfikowany ze szkieletem typu IV, została również wyizolowana S. lavendulae. Ten związek o wzorze (XIII) złożony z pierścienia hydrochinonowego z estrem glikolowym w łańcuchu bocznym na jednym z tlenów fenolowych jest potencjalnym prolekiem saframycyny A ze względu na swą umiarkowaną toksyczność.

Wszystkie znane, omawiane wyżej związki zawierają skondensowany układ pięciu pierścieni o wzorze (XIV):

PL 215 769 B1

Pierścienie A i E mają charakter fenolowy w ekteinascydynach i niektórych innych związkach, natomiast w innych związkach, szczególnie saframycynach, pierścienie A i E są chinolowe. W znanych związkach pierścienie B i D są tetrahydro, natomiast pierścień C jest perhydro.

W WO 0069862 ujawniono rozmaite sposoby otrzymywania związków ekteinascydynowych, jak również analogi ekteinascydyn, a w tym ftalascydynę. Niniejszy wynalazek dotyczy kolejnych analogów ekteinascydyn do otrzymywania których stosowane są półprodukty ujawnione w WO 0069862 oraz półprodukty ujawnione w WO 9812198.

Niniejszy wynalazek dostarcza nowe związki ekteinascydynowe o skondensowanym układzie pięciu pierścieni (A) do (E).

Istotą wynalazku jest związek ekteinascydynowy o wzorze:

w którym

R¹ oznacza -CH2-NHR^a lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; alkenyl; lub acyl aminokwasowy;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; R²¹ oznacza -CN; lub

R¹ oznacza -CH2-N(R^a)2 lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza H; alkilo- CO-; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-;

alkenyl; lub acyl aminokwasowy;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; R²¹ oznacza -OH, przy czym alkil ma 1 do 12 atomów węgla, cykloalkil ma 3 do 12 atomów węgla, alkenyl ma 2 do 12 atomów węgla, grupa arylowa oznacza fenyl, heteroaryl oznacza pirydyl, acyl aminokwasowy obejmuje alanyl, L-arginyl, L-aspartyl, L-asparaginyl, L-cystyl, L-glutamyl, L-glutaminyl, L-glicyl, L-histydyl, L-hydroksyprolil, L-izoleucyl, L-leucyl, L-lizyl, L-metionyl, L-fenyloalanyl, L-prolil, L-seryl, L-treonyl, L-tyronyl, L-tryptofil, L-tyrozyl, i L-walil, oraz jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.

Szczególnymi przypadkami związku według wynalazku są związki, które odpowiadają wzorowi:

OMe

w którym R¹, R⁵, R¹⁸ i R²¹ mają znaczenie jak określono powyżej; oraz związki odpowiadające wzorowi:

PL 215 769 B1

5 18 21 w którym R¹, R⁵, R¹⁸ i R²¹ mają znaczenie jak określono powyżej.

W związkach określonych w obu ostatnio wymienionych wzorach korzystne są następujące grupy związków:

grupa pierwsza, w której:

R¹ oznacza -CH2-NHR^a lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkenylo-CO-; alkenylo-CO-; lub acyl aminokwasowy;

18

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” jest wybrane z grupy obejmującej H; oraz C1-C4alkilo-CO-; R¹⁸ 21 oznacza -OH; zaś R²¹ oznacza -CN, grupa druga, w której:

R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza haloalkilo-CO-; cykloalkiIoaIkiIo-CO-; haloalkilo-O-CO-;

aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; lub alkenyl;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; zaś R²¹ oznacza -CN. grupa trzecia, w której:

R¹ oznacza -CH2-N(R^a)2 lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza H; alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; alkenylo-CO-; lub acyl aminokwasowy;

18

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” jest wybrane z grupy obejmującej H oraz C1-C4alkilo-CO-; R¹⁸ ozna21 cza -OH; zaś R²¹ oznacza -OH. grupa czwarta, w której:

R¹ oznacza -CH2-N(R^a)2, gdzie R^a oznacza H; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; lub alkenyl;

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-; R¹⁸ 21 oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; zaś R²¹ oznacza -OH. grupa piąta, w której:

R¹ oznacza -CH2-OR^a, gdzie R^a oznacza H; alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; alkenyl; lub acyl ₅ aminokwasowy; R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-; R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H; alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; zaś R²¹ oznacza -OH.

W grupach pierwszej i trzeciej związków według wynalazku szczególnie korzystne są związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a.

W grupie czwartej związków według wynalazku szczególnie korzystne są związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a.

W grupach pierwszej i trzeciej związków według wynalazku szczególnie korzystne są też związki, w których R^a oznacza -aa-R^b, gdzie aa oznacza acyl aminokwasowy, a R^b jest jak określono wcześniej dla R^a w związkach z grupy pierwszej i trzeciej, przy czym korzystnie jest gdy acyl aminokwasowy jest dalej podstawiony przez jedną lub więcej grup R^a.

W grupie piątej związków według wynalazku szczególnie korzystne są związki, w których R^a oznacza -aa-R^b, gdzie aa oznacza acyl aminokwasowy, a R^b jest jak określono wcześniej dla R^a w związkach z grupy piątej, przy czym korzystnie jest gdy acyl aminokwasowy jest dalej podstawiony przez jedną lub więcej grup R^a.

W grupach pierwszej i trzeciej związków według wynalazku szczególnie korzystne są też związki, w których R¹ oznacza -CH2-NH-aa-R^b, gdzie aa oznacza acyl aminokwasowy, zaś R^b oznacza wodór; karbaminianową grupę zabezpieczającą; aryloalkenylo-CO-; haloalkilo-CO-; alkiIo-CO-; aryloalkilo-CO-; lub acyl aminokwasowy.

PL 215 769 B1 ₁

Równie korzystne są też związki według wynalazku, w grupach pierwszej i trzeciej, w których R¹ oznacza -CH2-NH-aa-R^b, gdzie aa oznacza alanyl i R^b jest wybrane z grupy obejmującej wodór, Boc, PhNHCS, CF3CO-, trans(trifluorometylo)cynamoil, cynamoil, C3F7CO-, butyryl, 3-chloropropionyl, hydrocynamoil, fenyloacetyl, oraz acetyl; aa oznacza walil i R^b jest wybrane z grupy obejmującej Cbz oraz Boc; aa oznacza fenyloalanyl i R^b oznacza Boc; aa oznacza profil i R^b oznacza Boc; aa oznacza arginyl i R^b oznacza Boc; lub aa oznacza tryptofil i R^b oznacza Boc.

₁

W grupie trzeciej związków według wynalazku korzystne są związki, w których R¹ oznacza

-CH2-NR^a-aa-R^b, gdzie aa oznacza acyl aminokwasowy, R^a oznacza alkilo-CO-, zaś R^b oznacza halo1 a b alkilo-CO-, a zwłaszcza związki, w których R¹ oznacza -CH2-NR^a-aa-R^b, gdzie aa oznacza acetyloalaab nyl, R^a oznacza acetyl lub butyryl, zaś R^b oznacza CF3-CO-.

W grupie pierwszej związków według wynalazku szczególnie korzystne są związki, w których 21 1 a a

R²¹ oznacza -CN, zaś R¹ oznacza -CH2- NHR^a, gdzie R^a oznacza alkilo-CO-; alkenylo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-, a zwłaszcza związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza acetyl, izowaleryl, dekanoil lub cynamoil, albo też związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza propionyl, mirystoil, stearoil, heksanoil lub krotonyl.

1

W związkach według wynalazku z grupy trzeciej korzystnie R²¹ oznacza OH i R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza wodór; alkilo- CO-; alkenylo-CO-; aryloalkilo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-.

Szczególnie korzystne w tej grupie są te związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza wodór; Troc, acetyl, izowaleroil, dekanoil, cynamoil, hydrocynamoil lub fenyloacetyl, albo te związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza propionyl, mirystoil, stearoil, heksanoil lub krotonyl.

1

W związkach według wynalazku z grupy czwartej korzystnie R²¹ oznacza OH i R¹ oznacza

-CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza wodór; alkenylo-CO-; aryloalkilo-CO-; heteroarylo-CO-; cykloalkiloalkilo1a

-CO-; lub alkenyl, przy czym szczególnie korzystne są tu związki, w których R¹ oznacza -CH2-NHR^a, a R^a oznacza cykloheksyloacetyl, cykloheksylopropionyl lub allil.

1

W związkach według wynalazku z grupy pierwszej korzystnie R²¹ oznacza -CN i R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza zabezpieczoną cysteinę; alkilo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-, przy czym szczególnie korzystne są tu związki, w których R¹ oznacza -CH2OR^a, a R^a oznacza butyryl; trans(trifluorometylo)cynamoil; lub cynamoil.

1

W związkach według wynalazku z grupy trzeciej korzystnie R²¹ oznacza -OH i R¹ oznacza

-CH2OR^a, gdzie R^a oznacza wodór; zabezpieczoną cysteinę; alkilo-CO-; aryloalkilo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-, przy czym szczególnie korzystne są tu związki, w których R¹ oznacza - CH2OR^a, gdzie R^a oznacza wodór; butyryl; trans(trifluorometylo)cynamoil; cynamoil; lub hydrocynamoil.

1

W związkach według wynalazku z grupy piątej korzystnie R²¹ oznacza -OH i R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a jest wybrane z grupy obejmującej wodór; zabezpieczoną cysteinę; pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH2-CH(NHProt^NH)-CO-, w którym Prot^SH i Prot^NH oznaczają grupy zabezpieczające dla tiolu i dla grupy aminowej; alkilo-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; pochodną cysteSH NH SH iny o wzorze Prot^SH-S-CH2-C(=NOProt^NH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza grupę zabezpieczającą dla OH tiolu a Prot^OH oznacza grupę zabezpieczającą dla hydroksylu; oraz pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH=C(-OProt^OH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza grupę zabezpieczającą dla tiolu a Prot^OH oznacza grupę zabezpieczającą dla hydroksylu, przy czym szczególnie jest korzystne gdy R^a jest wybrane z grupy obejmującej wodór; S-9-fluorenylometylo-O-TBDMS-cysteino; pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH2-CH(NHProt^NH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza 9-fluorenylometyl a Prot^NH oznaSH cza Troc; butyryl; (trifluorometylo)cynamoil; cynamoil; pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH2OH SH OH

C(=NOProt^OH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza 9-fluorenylometyl a Prot^OH oznacza metoksy; oraz poSH OH SH chodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH=C(-OProt^OH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza 9-fluorenylometyl a Prot^OH oznacza MOM.

₅

W związkach według wynalazku z grupy czwartej korzystnie R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO- gdzie alkil ma nieparzystą liczbę atomów węgla, lub ω-cykloheksyloalkilo-CO-, przy ₅ czym szczególnie jest korzystne gdy R⁵ oznacza -OCOCH3.

₅

W związkach według wynalazku z grupy drugiej albo piątej korzystnie R⁵ oznacza -OR”, gdzie

R” oznacza H; alkilo-CO- gdzie alkil ma nieparzystą liczbę atomów węgla, lub ω-cykloheksyloalkilo-CO-, ₅ przy czym szczególnie jest korzystne gdy R⁵ oznacza -OCOCH3.

₅

W związkach według wynalazku z grupy pierwszej albo trzeciej korzystnie R⁵ oznacza -OCOCH3.

PL 215 769 B1

W związkach według wynalazku z grupy czwartej albo piątej korzystnie R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H; lub alkilo-CO-, a szczególnie korzystnie R¹⁸ oznacza -OH.

W związkach według wynalazku z grupy drugiej korzystnie R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, lub alkilo-CO-, a szczególnie korzystnie R¹⁸ oznacza -OH.

W związku według wynalazku mającym następującą strukturę ogólną (I):

CH₂OR^a, oraz R^a, R⁵, R¹⁸ _R21

CN

1a korzystnie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a i zależnie wybrane z grup określonych poniżej:

_R ^a R⁵ R¹⁸

COCH2CH2CH3 OH OH

COCH=CHPh OAc i R² są każde nie-

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym następującą strukturę ogólną (II):

1a korzystnie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a i zależnie wybrane z grup określonych poniżej:

_R ^a R⁵ R¹⁸

COCH2CH2CH3 OH OH

COCH=CHPh OAc

CH₂OR^a, oraz R^a, R⁵, R¹⁸ R21

CN są każde nie-

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną I:

korzystnie jest gdy R¹ oznacza -CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^b, zaś R^b, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

_Rb

H

COCH2CH2CH3

COCH2Ph

COCH2CH2Ph

COCH=CHPh _R5

OH

OAc _R18

OH _R21

CN

CSNHPh

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną (II):

korzystnie jest gdy R¹ oznacza -CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^b, zaś R^b, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

_R5

OH

OAc _R18

OH _R21

CN _Rb

H

COCH2CH2CH3

COCH2Ph

COCH2CH2Ph

Boc

CSNHPh

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną (III) lub (IV):

korzystnie jest gdy R', X2, R1, oraz R6 są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R'	X2	R1
CH2CH=CH2	OH	OH
COCH2CH3	OAc	OAc
CO(CH2)4CH3		OCOCH2H6H11
CO(CH2)12CH3	OCOCF3	OCOCH2CH2C6H1
CO(CH2)16CH3	OCOCH2Cl	OCOCH2CH2CH3
COCH2C6H11	OCOCH2CH2Cl	OCO(CH2)4CH3
COCH2CH2C6H11	OCOCF2CF2CF3	OCO(CH2)8CH3
COCH=CHCH3		OCO(CH2)16CH3

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

R6

CN

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną (V):

korzystnie jest, gdy R', X2, R1, oraz R6 są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R'	X2	R1
CH2CH=CH2	OH	OH
COCH2CH3	OAc	OAc
CO(CH2)4CH3		OCOCH2C6H11
CO(CH2)12CH3	OCOCF3	OCOCH2CH2C6H1
CO(CH2)16CH3	OCOCH2Cl	OCOCH2CH2CH3
COCH2C6H11	OCOCH2CH2Cl	OCO(CH2)4CH3
COCH2CH2C6H11	OCOCF2CF2CF3	OCO(CH2)8CH3
COCH2Ph		OCO(CH2)16CH3

R6

CN

COCH2CH2Ph

COCH=CHCH3

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną (I):

korzystnie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a, -CH2OR^a oraz -CH2-NH-CO-CHCH3-NHR^a, zaś a 5 18 21

R^a, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej: ^a R⁵ R¹⁸ _R ²¹ _Ra

H

COCH2CH2CH3

COCH2Ph

COCH2CH2Ph

COCH=CHPh

OH

OAc

OH

OH

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2 _Oi=L>NHBoc

L,

Pb

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną (II):

korzystnie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a, -CH2OR^a oraz -CH2-NH-CO-CHCH3-NHR^a, zaś a 5 18

R^a, R _R ¹⁸ _{i R} ² a są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej: _R ⁵ R¹⁸ R²¹

OH OH OH

OAc

COCH2CH2CH3

COCH2Ph

COCH2CH2Ph

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

W związku według wynalazku mającym strukturę ogólną (III), (IV) lub (V):

(III)

(IV)

(V) korzystnie R', X2, R1 oraz R6 są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R'

H

CH2CH=CH2

CHCH2CH3

CO(CH2)4CH3

CO(CH2)12CH3

CO(CH2)16CH3

COCH2C6H11

COCH2CH2C6H11

COCH2Ph

X2

OH

OAc

OCH2CH=CH2

OCOCF3

OCOCH2Cl

OCOCH2CH2Cl

OCOCF2CF2CF3 ^R1 ^R6

OH OH

OAc

OCOCH2C6H11

OCOCH2CH2C6H11

OCOCH2CH2CH3

OCO(CH2)4CH3

OCO(CH2)8CH3

OCO(CH2)16CH3

COCH2CH2Ph

COCH=CHCH3

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

Szczególnie korzystnymi związkami według wynalazku są związki o wzorze:

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

przy czym pośród tych związków na szczególną uwagę zasługuje związek o wzorze (50):

Inną grupą szczególnie korzystnych związków według wynalazku są też związki o wzorze:

PL 215 769 B1

9J W

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

182

J

183

PL 215 769 B1

przy czym pośród tych związków na szczególną uwagę zasługuje związek odpowiadający wzorowi (112):

Grupą szczególnie korzystnych związków według wynalazku są także związki odpowiadające wzorowi:

PL 215 769 B1

przy czym pośród tych związków na szczególną uwagę zasługuje związek odpowiadający wzorowi (66):

PL 215 769 B1

Jeszcze inną grupą szczególnie korzystnych związków według wynalazku są związki o wzorze:

PL 215 769 B1

95

ΟΜβ

ΟΜβ

PL 215 769 B1 przy czym pośród tych związków na szczególną uwagę zasługuje związek odpowiadający wzorowi (116):

Zgodnie z wynalazkiem korzystne są związki o wzorze:

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

Z powyżej wymienionych korzystnych związków należy wyodrębnić dwie podgrupy, z których pierwszą podgrupę stanowią związki o wzorach:

PL 215 769 B1

natomiast drugą podgrupę stanowią związki o wzorach:

PL 215 769 B1

OMe

.NHBoe

11T

ii»

OMe

PL 215 769 B1

ΟΜ>

W związkach wymienionych wyżej w drugiej podgrupie najkorzystniejszymi są związki odpowiadające następującym wzorem:

wzorowi (100):

wzorowi (102)

PL 215 769 B1 wzorowi (104):

wzorowi (108):

oraz wzorowi (198):

Zgodna z wynalazkiem jest kompozycja farmaceutyczna, która zawiera jeden ze związków określonych powyżej, łącznie z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.

Zgodne z wynalazkiem jest również zastosowanie związku określonego powyżej do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia nowotworu.

Wymienione wyżej nowe związki mogą być wytwarzane z półproduktów ujawnionych w WO 9812198 lub półproduktów ujawnionych w WO 0069862.

Zgłaszający stwierdzili, że związki według wynalazku wykazują wyjątkową aktywność w leczeniu raków, takich jak leukemie, rak płuc, rak okrężnicy, rak nerki i czerniak.

A zatem niniejszy wynalazek pozwala na stosowanie związku według wynalazku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek do leczenia dowolnego ssaka, zwłaszcza człowieka, przez podawanie choremu osobnikowi, dotkniętego rakiem, terapeutycznie skutecznej ilości związku lub kompozycji.

PL 215 769 B1

Przykłady kompozycji farmaceutycznych obejmują jakiekolwiek stałe (tabletki, pigułki, kapsułki, granulaty, itd.) Iub ciekłe (roztwory, zawiesiny lub emulsje) z odpowiednimi kompozycjami do podawania doustnego, miejscowego lub pozajelitowego, i mogą one zawierać czysty związek lub w połączeniu z jakimkolwiek nośnikiem lub innymi farmakologicznie aktywnymi związkami. Kompozycje te winny być wyjaławiane, jeśli mają być podawane pozajelitowo.

Podawanie związków lub kompozycji według niniejszego wynalazku może następować dowolnym sposobem, takim jak infuzja dożylna, w preparacie doustnym, poprzez podawanie dootrzewnowe i dożylne. Korzystnie są stosowane infuzje trwające do 24 godzin, bardziej korzystnie 2-12 godzin, przy czym 2-6 godzinne są najbardziej korzystne. Krótkotrwałe infuzje, które umożliwiają prowadzenie leczenia bez całodobowej hospitalizacji, są szczególnie korzystne. Jednakże, infuzje mogą być 12 do 24 godzinne lub nawet dłuższe, jeśli konieczne. Infuzja może być przeprowadzana w odpowiednich odstępach, powiedzmy 2 do 4 tygodniowych. Kompozycje farmaceutyczne zawierające związki według wynalazku mogą być dostarczane w Iiposomach lub kapsułkach nanosferowych, w preparatach o przedłużonym uwalnianiu, lub innymi standardowymi środkami dostarczania.

Właściwe dostarczanie związków może być zróżnicowane zależnie od danego preparatu, sposobu podawania i szczególnego miejsca (situs), pacjenta oraz nowotworu poddawanego leczeniu. Również pod uwagę winny być wzięte inne czynniki, takie jak wiek, waga ciała, płeć, sposób odżywiania, czas podawania, szybkość wydalania, stan pacjenta, zestawienia lekowe, czułość reakcji i powaga choroby. Podawanie może być przeprowadzane w sposób ciągły lub okresowo, w obrębie maksymalnej dopuszczalnej dawki.

Związki i kompozycje według niniejszego wynalazku mogą być stosowane z innymi lekami zapewniając terapię skojarzoną. Inne leki mogą stanowić część tej samej kompozycji lub być dostarczone w odrębnej kompozycji do podawania w tym samym czasie lub w innym czasie. Rodzaj tego innego leku nie szczególnie ograniczony, a odpowiednimi kandydatami są:

a) leki o działaniu antymitotycznym, zwłaszcza te, które są adresowane do elementów cytoszkieletowych, a tym modulatorów mikrotubuli, takie jak leki taksanowe (takie jak taksol, paklitaksel, taksoter, docetaksel), podofilotoksyny lub alkaloidy barwinka (winkrystyna, winblastyna);

b) leki antymetabolitowe, takie jak 5-fluorouracyl, cytarabina, gemcytabina, analogi purynowe (takie jak pentostatyna, metotreksat);

c) środki alkilujące, takie jak iperyty azotowe (takie jak cyklofosfamid lub ifosfamid);

d) leki adresowane do DNA, takie jak leki antracyklinowe, adriamycyna, doksorubicyna, farmorubicyna lub epirubicyna;

e) leki adresowane do topoizomeraz, takie jak etopozyd;

f) hormony oraz agoniści lub antagoniści hormonów, takie jak estrogeny, antyestrogeny (tamoksyfen i związki pokrewne) oraz androgeny, flutamid, leuprorelina, goserelina, cyprotron lub oktreotyd;

g) leki, które są adresowane do transdukcji sygnałowej komórek nowotworowych, a w tym pochodne przeciwciał, takie jak herceptyna;

h) środki alkilujące, takie jak leki platyny (cis-platyna, karboplatyna, oksaliplatyna, paraplatyna) lub nitrozomoczniki;

i) leki potencjalnie oddziaływujące na przerzuty nowotworowe, takie jak inhibitory metaloproteaz substancji międzykomórkowej;

j) środki terapii genowej i antysensownej;

k) terapeutyki z przeciwciałami;

I) inne związki bioaktywne pochodzenia morskiego, zwłaszcza didemniny, takie jak aplidyna;

m) analogi steroidowe, zwłaszcza deksametazon;

n) leki przeciwzapalne, zwłaszcza deksametazon;

o) środki przeciwwymiotne, zwłaszcza deksametazon;

p) środki chroniące mięśnie szkieletowe, takie jak L-karnityna lub prekursory aminokwasów.

W analogach ekteinascydyny odpowiednie grupy zabezpieczające dla fenoli i grup hydroksylowych mogą obejmować etery i estry, takie jak etery alkilowe, alkoksyalkilowe, aryloksyalkilowe, alkoksyalkoksyalkilowe, alkilosililoalkoksyalkilowe, alkilotioalkilowe, arylotioalkilowe, azydoalkilowe, cyjanoalkilowe, chloroalkilowe, heterocykliczne, aryloacylowe, haloaryloacylowe, cykloalkiloalkilowe, alkenylowe, cykloalkilowe, alkiloaryloalkilowe, alkoksyaryloalkilowe, nitroaryloalkilowe, haloaryloalkilowe, alkiloaminokarbonyloaryloalkilowe, alkilosulfinyloaryloalkilowe, alkilosililowe i inne etery, oraz estry aryloacylowe, węglany arylo-alkilu, węglany alifatyczne, węglany alkilosulfinyloaryloalkilowe, węglany

PL 215 769 B1 alkilu, węglany arylo-haloalkilu, węglany arylo-alkenylu, karbaminiany arylu, estry alkilofosfinylowe, alkilofosfinotioilowe, arylofosfinotioilowe, sulfoniany arylo-alkilu i inne estry. Grupy takie mogą być ₁ podstawione przez grupy, uprzednio wymienione dla R¹.

Odpowiednie grupy zabezpieczające dla amin obejmują karbaminiany, amidy i inne grupy zabezpieczające, takie jak alkil, aryloalkil, sulfo- Iub halo-aryloalkil, haloalkil, alkilosililoalkil, aryloalkil, cykloalkiloalkil, alkiloaryloalkil, heterocykloalkil, nitroaryloalkil, acyloaminoalkil, nitroaryloditioaryloalkil, dicykloalkilokarboksyamidoalkil, cykloalkil, alkenyl, aryloalkenyl, nitroaryloalkenyl, heterocykloalkenyl, grupa heterocykliczna, hydroksyheterocykliczna, alkiloditio, alkoksy- lub halo- lub alkilosulfinyloaryloalkil, heterocykloacyl i inne karbaminiany, oraz alkanoil, haloalkanoil, aryloalkanoil, aryloalkanoil, alkenoil, heterocykloacyl, aroil, aryloaroil, haloaroil, nitroaroil i inne amidy, jak również alkil, alkenyl, alkilosililoalkoksyalkil, alkoksyalkil, cyjanoalkil, grupa heterocykliczna, alkoksyaryloalkil, cykloalkil, nitroaryl, aryloalkil, alkoksy- lub hydroksy-aryloalkil i wiele innych grup. Grupy takie ewentualnie mogą być pod₁ stawione przez grupy uprzednio wymienione dla R¹.

Przykłady takich grup zabezpieczających są podane poniżej: zabezpieczenie grupy -OH etery metyl metoksymetyl benzyloksymetyl metoksyetoksymetyl

2-(trimetylsililo)etoksymetyl metylotiometyl fenylotiometyl azydometyl cyjanometyl

2,2-dichloro-1,1-difluoroetyl

2-chloroetyl

2-bromoetyl tetrahydropiranyl

1-etoksyetl fenacyl

4-bromofenacyl cyklopropylometyl allil propargil izopropyl cykloheksyl t-butyl benzyl

2.6- dimetylobenzyl 4-metoksybenzyl o-nitrobenzyl

2.6- dichlorobenzyl 3,4-dichlorobenzyl 4-(dimetyloamino)karbonylobenzyl 4-metylosulfinylobenzyl 9-antrylometyl

4-pikolil heptafluoro-p-tolil tetrafluoro-4-pirydyl trimetylosilil t-butylodimetylosilil t-butylodifenylosilil triizopropylosilil estry oznaczenie

MOM

BOM

MEM

SEM

MTM

PTM

THP

EE

MPM lub PMB

Msib

TMS

TBDMS

TBDPS

TIPS

PL 215 769 B1

mrówczan arylu
octan arylu lewulinian arylu piwalonian arylu	ArOPv
benzoesan arylu 9-fluorokarboksylan arylu węglan arylo-metylu węglan 1-adamantylu węglan t-butylu	BOC-OAr
węglan 4-metylosulfinylobenzylu	Msz-Oar
węglan 2,4-dimetylopent-3-ylu	Doc-Oar
węglan arylo-2,2,2-trichloroetylu węglan arylo-winylu węglan arylo-benzylu karbaminian arylu dimetylofosfinyl	Dmp-OAr
dimetylofosfinotioil	Mpt-OAr
difenylofosfinotioil	Dpt-Oar
metanosulfonian arylu toluenosulfonian arylu 2-formylobenzenosulfonian arylu zabezpieczenie grupy NH2
karbaminiany	oznaczenie
metyl etyl 9-fluorenlometyl	Fmoc
9-(2-sulfo)fluorenylometyl 9-(2,7-dibromo)fluorenylometyl 17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenylometyl	Tbfmoc
2-chloro-3-indenylometyl	Climoc
benzo[f]inden-3-ylometyl	Bimoc
2,7-di-t-butylo[9-(10,10-diokso-10,10,10,10-	DBD-Tmoc
tetrahydrotioksantylo)]metyl 2,2,2-trichloetyl	Troc
2-trimetylsililoetyl	Troc
2-fenyloetyl	hZ
1-(1-adamantylo)-1-metyloetyl	Adpoc
2-chloroetyl 1.1- dimetylo-2-chloroetyl 1.1- dimetylo-2-bromoetyl 1.1- dimetylo-2,2-dibromoetyl	DB-t-BOC
1,1-dimetylo-2,2,2-trichloroetyl	TCBOC
1-metylo-1-(4-bifenylo)etyl	Bpoc
1-(3,5-di-t-butylofenylo)-1,1-metyloetyl	t-Burmeoc
2-(2'- oraz 4'-pirydylo)etyl	Pyoc
2,2-bis(4'-nitrofenylo)etyl	Bnpeoc
n-(2-piwaloiloamino)-1,1-dimetyloetyl 2-[(2-nitrofenylo)ditio]-1-fenyloetyl	NpSSPeoc
2-(n,n-dicykloheksylokarboksyamido)etyl t-butyl	BOC
1-adamantyl	1-Adoc
2-adamantyl	2-Adoc
winyl	Voc
allil	Aloc lub Alloc

PL 215 769 B1

1-izopropyloallil	Ipaoc
cynamyl	Coc
4-nitrocynamyl	Noc
3-(3'-pirydylo)prop-2-enyl	Paloc
8-chinolil n-hydroksypiperydynyl alkiloditio benzyl	Cbz lub Z
p-metoksybenzyl	Moz
p-nitrobenzyl	PNZ
p-bromobenzyl p-chlorobenzyl 2,4-dichlorobenzyl 4-metylosulfinylobenzyl	Msz
9-antrylometyl difenylometyl fenotiazynylo-(10)-karbonyl n'-p-toluenosulfonyloaminokarbonyl n'-fenyloaminotiokarbonyl amidy formamid acetamid chloroacetamid trifluoroacetamid	TFA
fenyloacetamid 3-fenylopropanamid pent-4-enamid pikolinamid 3-pirydylokarboksyamid benzamid p-fenylobenzamid n-ftalimid n-tetrachloroftalimid	TCP
4-nitro-n-ftalimid n-ditiasukcynimid	Dts
n-2,3-difenyloaleimid n-2,5-dimetylopirol n-2,5-bis(triizopropylosiloksylo)pirol	BIPSOP
adduct n-1,1,4,4-tetrametylodisililoazacyklo-	STABASE
pentanowy 1,1,3,3-tetrametylo-1,3-disilaizoindolina	BSB
szczególne grupy zabezpieczające -NH
n-metyloamina n-t-butyloamina n-alliloamina n-[2-(trimetylosililo)etoksy]metyloamina	SEM
n-3-acetoksypropyloamina n-cyjanometyloamina n-(1-izopropylo-4-nitro-2-okso-3-pirolin-3-ylo)- amina n-2,4-dimetoksybenzyloamina	Dmb
2-azanorborneny n-2,4-dinitrofenyloamina n-benzyloamina	Bn
n-4-metoksybenzyloamina	MPN

PL 215 769 B1

n-2,4-dimetoksybenzyloamina	DMPN
n-2-hydroksybenzyloamina	Hbn
n-(difenylometylo)amino	DPM
n-bis(4-metoksyfenylo)metyloamina n-5-dibenzosuberyloamina	DBS
n-trifenylometyloamina	Tr
n-[(4-metoksyfenylo)difenylometylo]amino		MMTr
n-9-fenylofluorenyloamina		Pf
n-ferrocenylometyloamina		Fcm
n-2-pikoliloamina, n'-tlenek n-1,1-dimetylotiometylenoamina n-benzylidenoamina n-p-metoksybenzylidenoamina n-difenylometylenoamina n-(5,5-dimetylo-3-okso-1-cykloheksenylo)amina n-nitroamina n-nitrozoamina difenylofosfinamid		Dpp
dimetylotiofosfinamid		Mpt
difenylotiofosfinamid		Ppt
fosforamidan dibenzylu 2-nitrobenzenosulfenamid		Nps
n-1-(2,2,2-trifluoro-1,1-difenylo)etylosufenamid		TDE
3-nitro-2-pirydynosulfenamid		Npys
p-toluenosulfonamid		Ts

benzenosulfonamid.

Przykłady korzystnych sposobów wytwarzania analogów ekteinascydyn zostaną najpierw rozważone w odniesieniu do związków wyjściowych 45, 43 i 25. Należy zauważyć, że szczególne podstawniki zwłaszcza w pozycjach C-5 i C-18 mogą być zmieniane.

Korzystne sposoby wytwarzania związków o wzorze I, Il i III przedstawiono poniżej na następujących schematach reakcji z przykładowymi, typowymi grupami podstawników.

Jak przedstawiono na schemacie 1, pierwszy etap wytwarzania korzystnych związków (I) (gdzie R1=OH, X2=OAc i R6=CN lub OH) ze związku 45, stanowi wysokowydajną konwersję grupy aminowej do grupy amidowej.

Po acylowaniu grupy aminowej, drugim etapem jest przekształcenie grupy CN w grupę OH w reakcji z azotanem srebra w AcCN/H2O.

Poniżej przedstawiono otrzymywanie innych związków o ogólnym wzorze I, wychodząc ze związku 17 (schemat 4).

PL 215 769 B1

Schemat 2

Jak zilustrowano na schemacie 2, kolejna grupa interesujących pochodnych o wzorze Il (gdzie R1=OH, X2=OAc i R6=CN lub OH) może być otrzymana ze związku 43 z wykorzystaniem następującej sekwencji. Acylowanie grupy aminowej dostarcza odpowiedni amid, a przekształcenie grupy CN w grupę OH następuje w reakcji z azotanem srebra w AcCN/H2O.

Poniżej przedstawiono otrzymywanie innych związków o ogólnym wzorze II, wychodząc ze związku 11 (schemat 4).

Schemat 3

III

Korzystną procedurą prowadzącą do otrzymania związków o wzorze III jest przekształcenie związku 25 w odpowiednią pochodną estrową drogą acylowania grupy OH, odbezpieczenie grupy fenolowej, a następnie acetylowanie i odbezpieczenie grupy MOM, dostarczając odpowiedni ester, a następnie przekształcenie grupy CN w grupę OH w reakcji z azotanem srebra w AcCN/H2O, dostarczając związek o wzorze III (gdzie R1=OH, X2=OAc i R6=CN lub OH).

Inne związki o ogólnych wzorach I i Il według niniejszego wynalazku można otrzymać ze związku 17 poprzez półprodukt aminowy 120, jak przedstawiono na schemacie 4.

PL 215 769 B1

Schemat 4

Następujące dodatkowe związki (a w tym na przykład 140 i 141) zostały otrzymane wychodząc z safracyny B (2), co przedstawiono szczegółowo w przykładach (schemat 5).

Specjalista w dziedzinie łatwo dostrzeże, że schematy reakcji niniejszym przedstawione mogą zostać zmodyfikowane i/lub połączone w różny sposób. Szczególnie materiał wyjściowy i/lub reagenty i reakcje mogą być zmieniane, celem dopasowania do innych zestawień grup podstawników we wzorach I, Il i III.

Półprodukty, pochodne i pokrewne struktury ekteinasycydynowe lub innych związki tetrahydroizochinolinofenolowe mogą być otrzymywane, wychodząc z naturalnych alkaloidów bis(tetrahydroizochinolinowych). Odpowiednie materiały wyjściowe do procesu półsyntetycznego obejmują klasy

PL 215 769 B1 antybiotyków saframycynowych i safracynowych dostępnych z rozmaitych bulionów hodowlanych, a także klasy związków reineramycynowych i ksestomycynowych dostępnych z gąbek morskich.

Ogólny wzór (XV) związków wyjściowych jest następujący:

w którym:

R¹ oznacza grupę amidometylenową, taką jak -CH₂-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, które to R^25a i R^25b tworzą grupę ketonową lub jedna oznacza -OH, -NH2 lub -OCOCH3, a pozostała oznacza

-CH2COCH3, -H, -OH lub -OCOCH3, pod warunkiem, że jeśli R^25a oznacza -OH lub -NH2, to R^25b nie 25c 1 oznacza -OH i R^25c oznacza -H, -CH3 lub -CH2CH3, lub R¹ oznacza grupę acyloksymetylenową, taką jak -CH2-O-CO-R, gdzie R oznacza -C(CH3)=CH-CH3 lub -CH3;

R⁵ i R⁸ są niezależnie wybrane spośród -H, -OH lub -OCOCH2OH lub oba R⁵ i R⁸ oznaczają grupę ketonową i pierścień A oznacza pierścień p-benzochinonowy;

oba R^14a i R^14b oznaczają -H lub jeden oznacza -H, a pozostały oznacza -OH, -OCH3 lub

-OCH₂CH₃, lub R^14a i R^14b łącznie tworzą grupę ketonową;

18 5 8

R¹⁵ i R¹⁸ są niezależnie wybrane spośród -H lub -OH, lub oba R⁵ i R⁸ oznaczają grupę ketonową, i pierścień A oznacza pierścień p-benzochinonowy; oraz

R²¹ oznacza -OH lub -CN.

Bardziej ogólny wzór tej klasy związków jest przytoczony poniżej:

w którym każda z grup podstawników zdefiniowanych przez R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 jest niezależnie wybrana z grupy obejmującej H, OH, OCH3, CN, =O, CH3;

w którym X oznacza różne funkcje amidowe lub estrowe zawarte w wymienionych produktach naturalnych;

w którym każde koło zaznaczone przerywaną linią oznacza jedno, dwa lub trzy ewentualne wiązania podwójne.

A zatem, przedstawione zostaną dalej drogi półsyntetyczne dla wytwarzania półproduktów, a w tym półproduktu 11, a zatem i wytwarzania związków ekteinascydynowych, jak również ftalascydynowych i związków dodatkowych. Każda z dróg półsyntetycznych obejmuje pewną liczbę etapów transformacji aż do uzyskania żądanego produktu. Dla dróg, które zostały zilustrowane mogą być dostarczone alternatywne drogi, poprzez na przykład zmianę kolejności etapów transformacji, jeśli jest to stosowne.

Poniżej zostało przedstawione dostarczenie wyjściowego materiału z grupą 21-cyjankową, o ogólnym wzorze (XVI):

PL 215 769 B1

w którym R¹, R⁵, R⁸, R^14a, R^14b, R¹⁵ i R¹⁸ są zdefiniowane jak powyżej.

Inne związki o wzorze (XVI) z różnymi podstawnikami w pozycji 21 również mogą stanowić możliwe materiały wyjściowe. Ogólnie kandydatem jest jakakolwiek pochodna możliwa do wytworzenia poprzez podstawienie nukleofilowe grupy 21-hydroksylowej w związkach o wzorze (XV), w którym

R²¹ oznacza grupę hydroksylową. Przykłady odpowiednich podstawników 21 obejmują, nie ograniczając zakresu:

grupę merkaptanową, grupę alkilotio (przy czym grupa alkilowa ma od 1 do 6 atomów węgla);

grupę arylotio (przy czym grupa arylowa ma od 6 do 10 atomów węgla i jest niepodstawiona lub podstawiona przez do 1 do 5 podstawników wybranych spośród na przykład grupy alkilowej mającej od 1 do 6 atomów węgla, grup alkoksylowych mających od 1 do 6 atomów węgla, atomów halogenów, grup merkaptanowych i grup nitrowych);

grupę aminową;

grupę mono- lub dialkiloaminową (przy czym dana lub każda grupa alkilowa ma od 1 do 6 atomów węgla);

grupę mono- lub diaryloaminową (przy czym dana lub każda grupa arylowa jest zdefiniowana jak powyżej w odniesieniu do grupy arylotio);

grupę α-karbonyloalkilową o wzorze -C(R^a)(R^b)-C(=O)R^c, w którym R^a i R^b są wybrane spośród atomów wodoru, grup alkilowych mających od 1 do 20 atomów węgla, grup arylowych (zdefiniowanych powyżej w odniesieniu do grup arylotio) i grup aralkilowych (w których grupa alkilowa mająca od 1 do 4 atomów węgla jest podstawiona przez grupę arylową zdefiniowaną powyżej w odniesieniu do grup arylotio) pod warunkiem, że jeden spośród R^a i R^b oznacza atom wodoru; R^c jest wybrany spośród atomu wodoru, grupy alkilowej mającej od 1 do 20 atomów węgla, grup arylowych (zdefiniowanych powyżej w odniesieniu do grup arylotio), grupy aralkilowej (w której grupa alkilowa mająca od 1 do 4 atomów węgla jest podstawiona przez grupę arylową zdefiniowaną powyżej w odniesieniu do grup arylotio), grupy alkoksylowej mającej od 1 do 6 atomów węgla, grupy aminowej lub grupy monolub dialkiloaminowej zdefiniowanej powyżej.

Zatem, przedstawiono sposoby, w których pierwszy etap polega na utworzeniu 21-pochodnej z użyciem reagenta nukleofilowego. Przytaczamy takie związki jako związki 21-Nuc.

Obecność grupy 21-cyjankowej jest wymagana dla pewnych produktów finalnych, w tym ekteinascydyny 770 i ftalascydyny, podczas gdy dla innych produktów finalnych funkcjonuje ona jako grupa zabezpieczająca, która może być łatwo przekształcona w inny podstawnik, taki jak grupa 21-hydroksylowa ekteinascydyny 743 lub 21-hydroksyftalascydyny. Stosowanie 21-cyjanozwiązku jako materiału wyjściowego skutecznie stabilizuje cząsteczkę w trakcie kolejnych etapów syntezy, aż do jej ewentualnego usunięcia. Inne związki 21-Nuc mogą zapewniać takie i inne zalety.

W jednym ważnym aspekcie, przedstawiono użycie 21-cyjanozwiązku o ogólnym wzorze (XVI) do otrzymywania związków bis- Iub tris(tetrahydroizochinolinofenolowych). Produkty, które można wytwarzać, obejmują półprodukty, takie jak półprodukt 11, lub ekteinascydyny i ftalascydyny, jak również nowe i znane związki o strukturze pokrewnej.

14a

Korzystne materiały wyjściowe obejmują te związki o wzorze (XV) lub (XVI), w których oba R i R^14b oznaczają wodór. Korzystne materiały wyjściowe również obejmują związki o wzorze (XV) lub (XVI), w których R¹⁵ oznacza wodór. Ponadto, korzystne materiały wyjściowe obejmują związki o wzorze (XV) lub (XVI), w których pierścień E oznacza pierścień fenolowy. Korzystne materiały wyjściowe ponadto obejmują związki o wzorze (XV) lub (XVI), w których co najmniej jeden, korzystniej co naj5 8 15 18 mniej dwa lub trzy spośród R⁵, R⁸, R¹⁵ i R¹⁸ nie oznaczają wodoru.

PL 215 769 B1

Przykłady odpowiednich materiałów wyjściowych obejmują saframycynę A, saframycynę B, saframycynę C, saframycynę G, saframycynę H, saframycynę S, saframycynę Y3, saframycynę Yd1, saframycynę Ad1, saframycynę Yd2, saframycynę AH2, saframycynę AH2Ac, saframycynę AH1, saframycynę AH1Ac, saframycynę AR3, renieramycynę A, renieramycynę B, renieramycynę C, renieramycynę D, renieramycynę E, renieramycynę F, ksestomycynę, saframycynę D, saframycynę F, saframycynę Mx-1, saframycynę Mx-2, safracynę A, safracynę B i safracynę R. Korzystne materiały wyjściowe 21 mają grupę cyjankową w pozycji 21, dla grupy R²¹.

W szczególnie korzystnym aspekcie, przedstawiono sposób półsyntetyczny, w którym etapy transformacji są zastosowane względem safracyny B:

Safracyna B cechuje się układem pierścieniowym pokrewnym ekteinascydynom. Związek ten ma tę samą strukturę pentacykliczną i ten sam charakter podstawienia w pierścieniu aromatycznym położonym po prawej stronie, pierścieniu E. A także, safracyna B wykazuje bardzo bliskie podobieństwa do niektórych półproduktów syntetycznych w totalnej syntezie Et-743, zwłaszcza do półproduktu 11. Taki półprodukt może być przekształcony w Et-743 z wykorzystaniem ogólnie znanego sposobu. Syntetyczna konwersja safracyny B do półproduktu 11 dostarcza zatem półsyntetyczny sposób otrzymywania Et-743.

A zatem może być dostarczony półprodukt 11 wytworzony z tego związku, safracyny B, oraz związki pochodzące od półproduktu 11, zwłaszcza związki ekteinascydynowe. Opisany sposób dotyczy również związków pochodzących od innych sugerowanych materiałów wyjściowych, oraz zastosowania tych związków do wytwarzania takich związków.

Bardziej korzystne materiały wyjściowe mają grupę 21-cyjankową. Aktualnie najbardziej tu korzystnym związkiem jest związek o wzorze 2. Związek ten jest otrzymywany bezpośrednio z safracyny B i jest uważany za kluczowy półprodukt w sposobie półsyntetycznym.

Cyjanosafracyna B może być dostarczona na drodze fermentacji ze szczepem wytwarzającym safracynę B, Pseudomonas fluorescens, i przeróbki bulionu hodowlanego z użyciem jonu cyjankowego. Korzystnym szczepem Pseudomonas fluorescens jest szczep A2-2, FERM BP-14, który jest wykorzystywany w procedurze według EP 055.299. Odpowiednim źródłem jonu cyjankowego jest cyjanek potasu. W typowej przeróbce, bulion hodowlany sączy się i dodaje nadmiar jonów cyjankowych. Po odpowiednim okresie mieszania, takim jak 1 godzina, pH doprowadza się do alkalicznego, powiedzmy 9,5, i po organicznej ekstrakcji uzyskuje się surowy ekstrakt, który może być dalej oczyszczany dostarczając cyjanosafracynę B.

Safracyna B zawiera alanylowy łańcuch boczny. Zgłaszający stwierdzili, że zabezpieczenie wolnej grupy aminowej grupą Boc może zapewnić istotne zalety.

PL 215 769 B1

Zwykle proces półsyntetycznego otrzymywania analogu ekteinasycydynowego obejmuje:

a) przekształcenie jeśli konieczne układu chinonowego pierścienia E w układ fenolowy;

b) przekształcenie jeśli konieczne układu chinonowego pierścienia A w układ fenolowy;

c) przekształcenie układu fenolowego pierścienia A w pierścień metylenodioksyfenolowy; oraz

d) przekształcenie w odpowiednią pochodną, np. poprzez acylowanie.

Etap (a) konwersji układu chinonowego pierścienia E w układ fenolowy może być dokonany za pomocą tradycyjnych metod redukcji. Odpowiednim układem reakcyjnym jest wodór i katalizator - pallad na węglu, ale inne układy redukcyjne również mogą być wykorzystywane.

Etap (b) konwersji, jeśli konieczny, układu chinonowego pierścienia A do układu fenolowego jest analogiczny do etapu (a) i nie wymaga dalszych szczegółów.

Etap (c) konwersji układu fenolowego pierścienia A do pierścienia metylenodioksyfenolowego może być dokonany kilkoma drogami, nieraz równolegle z etapem (b). Na przykład pierścień chinonowy A może być demetylowany na podstawniku metoksylowym w pozycji 7, zredukowany do dihydrochinonu i wychwycony odpowiednim reagentem elektrofilowym, takim jak CH2Br2, BrCH2CI, lub podobnym dwufunkcyjnym reagentem dając wprost układ pierścieniowy metylenodioksy, lub reagentem dwufunkcyjnym takim jak tiokarbonylodiimidazol, który prowadzi do podstawionego układu pierścienia metylenodioksy, który może być przekształcony w żądany pierścień.

Przekształcenie w pochodną w etapie (d) może obejmować acylowanie, na przykład grupą R^a-CO-, jak również przekształcenie grupy 12-NCH3 w 12-NH lub 12-NCH2CH3. Konwersja taka może być dokonana przed lub po innych etapach, z zastosowaniem dostępnych metod.

Tytułem ilustracji, możliwe jest obecnie przekształcenie cyjanosafracyny B do nowych analogów krótszą i prostszą drogą, w porównaniu ze sposobami uprzednio ujawnionymi. Cyjanosafracyna B może być przekształcona w półprodukt 25:

a z tej pochodnej jest możliwe wyprowadzenie dalszych analogów ekteinascydynowych.

Jeden z opisanych sposobów przekształca cyjanosafracynę B w półprodukt 25 w sekwencji reakcji, które obejmują zasadniczo (1) usunięcie grupy metoksylowej umieszczonej w pierścieniu A, (2) redukcję pierścienia A i tworzenie grupy metylenodioksy w jednej operacji, (3) hydrolizę funkcji amidowej umieszczonej przy węglu 1, (4) przekształcenie uzyskanej grupy aminowej w grupę hydroksylową.

Przekształcenie związku 2-cyjankowego w półprodukt 25 zwykle obejmuje następujące etapy (patrz schemat II):

tworzenie związku zabezpieczonego o wzorze 14 poprzez poddanie reakcji 2 z bezwodnikiem tert-butoksykarbonylowym;

przekształcenie 14 w dwu-zabezpieczony związek o wzorze 15 poprzez poddanie reakcji z eterem bromometylometylowym i diizopropyloetyloaminą w acetonitrylu;

selektywne eliminowanie grupy metoksylowej układu chinonowego w 15 w celu otrzymania związku o wzorze 16 poprzez poddanie reakcji z metanolowym roztworem wodorotlenku sodu;

przekształcenie 16 w metylenodioksy-związek o wzorze 18 wykorzystując poniższą korzystną sekwencję: (1) grupę chinonową związku 16 poddaje się redukcji w atmosferze wodoru z 10% Pd/C; (2) półprodukt hydrochinonowy przekształca się w metylenodioksy-związek o wzorze 17 poprzez poddanie reakcji z bromochlorometanem i węglanem cezu w atmosferze wodoru; (3) 17 przekształca się w związek o wzorze 18 poprzez zabezpieczenie wolnej grupy hydroksylowej w postaci grupy OCH2R; reakcję tą prowadzi się z BrCH2R i węglanem cezu, przy czym R może oznaczać aryl, CH=CH2, OR' itd.;

eliminację grup zabezpieczających tert-butoksykarbonylowej i metoksymetylowej z 18 dostarczając związek o wzorze 19 poprzez poddanie reakcji z roztworem HCI w dioksanie; ta reakcja jest również realizowana poprzez zmieszanie 18 z roztworem kwasu trifluorooctowego w dichlorometanie;

tworzenie związku tiomocznikowego o wzorze 20 poddając reakcji 19 z izotiocyjanianem fenylu;

PL 215 769 B1 przekształcenie związku o wzorze 20 w związek aminowy o wzorze 21 poprzez poddanie reakcji z roztworem chlorowodoru w dioksanie;

przekształcenie związku o wzorze 21 w pochodną N-Troc 22 poddając reakcji z chloromrówczanem trichloroetylu i pirydyną;

utworzenie zabezpieczonego hydroksyzwiązku o wzorze 23 poddając reakcji 22 z eterem bromometylometylowym i diizopropyloaminą;

przekształcenie związku o wzorze 23 w N-H pochodną 24 poddając reakcji z kwasem octowym i cynkiem;

przekształcenie związku o wzorze 24 w hydroksyzwiązek o wzorze 25 poddając reakcji z azotynem sodu w kwasie octowym. Alternatywnie można zastosować czterotlenek azotu w mieszaninie kwasu octowego i acetonitrylu, a następnie poddać obróbce wodorotlenkiem sodu. Można również zastosowań azotyn sodu w mieszaninie bezwodnika octowego-kwasu octowego, a następnie poddać obróbce wodorotlenkiem sodu.

Schemat Il

Konwersja półproduktu 25 w inne analogi jest zatem łatwa do przeprowadzenia, jak na przykład według schematu III, i zwykle obejmuje następujące etapy:

PL 215 769 B1 przekształcenie związku o wzorze 24 w pochodną 30 przez zabezpieczenie pierwszorzędowej funkcji hydroksylowej (S)-N-2,2,2-trichloroetoksykarbonylo-S-(9H-fluoren-9-ylometylo)cysteiną 29;

przekształcenie zabezpieczonego związku o wzorze 30 w pochodna fenolu 31 drogą rozszczepienia grupy allilowej wodorkiem tributylocyny i dichloro-bis(trifenylofosfino)palladem;

przekształcenie związku fenolowego o wzorze 31 w związek o wzorze 32 przez utlenianie bezwodnikiem benzenoseleninowym w niskiej temperaturze;

Droga przedstawiona powyżej dla przekształcenia półproduktu 25 może być dogodnie modyfikowana celem wytwarzania innych pochodnych.

Bardziej szczegółowo, konwersja wyjściowego 21-cyjanozwiązku do pokrewnego produktu, takiego jak o wzorze (XX), zwykle obejmuje następujące etapy:

a) przekształcenie, jeśli konieczne, układu chinonowego pierścienia E w układ fenolowy;

₅

b) utworzenie grupy R⁵ w pozycji 5 pierścienia A;

₁

c) utworzenie grupy R¹ w pozycji 1 pierścienia B;

d) przekształcenie, jeśli konieczne, układu chinonowego pierścienia A w układ fenolowy;

e) przekształcenie układu fenolowego pierścienia A w pierścień metylenodioksyfenolowy.

Etapy te wykazują wiele podobieństw względem etapów podanych uprzednio. Etap (c) zwykle polega na utworzeniu grupy -CH2NH2 w pozycji 1 i acylowaniu jej.

Ftalascydyna może być wytworzona z użyciem półproduktów ujawnionych dla przekształcenia cyjanosafracyny B do półproduktu 25. Na przykład półprodukty 21 i 17 są odpowiednimi materiałami wyjściowymi do wytwarzania ftalascydyny i innych analogów ekteinascydyny.

Jak przedstawiono na schemacie V, sposób syntetycznego wytwarzania ftalascydyny, wychodząc z półproduktu 21, obejmuje sekwencję następujących etapów:

przekształcenie 21 w związek o wzorze 27 w reakcji z bezwodnikiem ftalowym w dichlorometanie wobec karbonylodiimidazolu;

konwersję 27 do ftalascydyny poddając reakcji z wodorkiem tributylocyny i dichlorobis(trifenylofosfino)palladem w środowisku zasadowym, a następnie reakcji z chlorkiem acetylu.

Schemat V

Ftalascydyna

PL 215 769 B1

Jak przedstawiono na schemacie VI, sposób syntetycznego wytwarzania ftalascydyny, wychodząc z półproduktu 17, obejmuje sekwencję następujących etapów:

acetylowanie grupy hydroksylowej związku o wzorze 17 chlorkiem acetylu i pirydyną z dostarczeniem acetylowanego półproduktu o wzorze 42;

usunięcie grup zabezpieczających tert-butoksykarbonylowej i metoksymetylowej z 42 dostarczając związek o wzorze 43 w wyniku reakcji z roztworem HCI w dioksanie; reakcja ta może być również zrealizowana poprzez zmieszanie 42 z roztworem kwasu trifluorooctowego w dichlorometanie;

utworzenie związku tiomocznikowego o wzorze 44 w reakcji z izotiocyjanianem fenylu; konwersję związku o wzorze 44 w związek aminowy o wzorze 45 poddając reakcji z roztworem chlorowodoru w dioksanie;

przekształcenie 45 we ftalascydynę w reakcji z bezwodnikiem ftalowym w dichlorometanie wobec karbonylodiimidazolu.

Inne analogi mogą być wytworzone na przykład z 43 lub 45 w podobny sposób.

Schemat Vl

fenylu

CHjCI,

Fialascydyna

Konwersja 21-cyjanozwiązku do półproduktu 11 lub półproduktu pokrewnego o wzorze (XXI), zwykle obejmuje następujące etapy:

a) konwersję, jeśli konieczne, układu chinonowego pierścienia E w układ fenolowy;

₁

b) utworzenie grupy -OProt¹ w pozycji 18 pierścienia E;

₂

c) utworzenie grupy -CH2-OProt² w pozycji 1 pierścienia B; oraz

d) konwersję, jeśli konieczne, układu chinonowego pierścienia A w układ fenolowy;

e) konwersję układu fenolowego pierścienia A do pierścienia metylenodioksyfenolowego.

₁

Etap (b), tworzenie grupy -OProt¹ w pozycji 18 pierścienia E jest typową reakcją zabezpieczania grupy fenolowej i nie wymaga specjalnego omówienia. Właściwe warunki są dobierane w zależności o rodzaju grupy zabezpieczającej. Pozostałe etapy są podobne jak w innych reakcjach.

₂

Etap (b), tworzenie grupy -CH2-OProt² w pozycji 1 pierścienia B jest normalnie przeprowadzany poprzez utworzenie grupy -CH2NH2 w pozycji 1, a następnie przekształcenie funkcji aminowej w funk₁ cję hydroksylową i zabezpieczenie. Zatem, jeśli materiał wyjściowy zawiera grupę R¹, którą jest -CH225a 25b 25c

-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, to wymagane jest usunięcie grupy N-acylowej. Jeśli materiał wyjściowy zawie₁ ra grupę R¹, którą jest -CH2-O-CO-R, to modyfikacje nie są potrzebne w przypadku produktu ekteina₁ scydynowego, w którym podstawnik R¹ jest taki sam. W przypadku innych produktów, wymagane jest usunięcie grupy O-acylowej. Rozmaite procedury są dostępne dla takich deacylowań. W jednej odmianie, deacylowanie i konwersja do funkcji hydroksylowej są przeprowadzane w jednym etapie. Następnie, grupa ₁ hydroksylowa może być acylowana lub inaczej przekształcona dostarczając odpowiednią grupę R¹.

PL 215 769 B1

Opis patentowy U.S.A. nr 5.721.362 ujawnia sposoby syntetycznego wytwarzania ET-743 na drodze wieloetapowej syntezy. Jednym z półproduktów w tej syntezie jest półprodukt 11. Stosując cyjanosafracynę B jako materiał wyjściowy możliwe jest uzyskanie półproduktu 11, co zapewnia znacznie krótszą drogę do wytworzenia takiego półproduktu, a zatem i udoskonalenie sposobu wytwarzania ET-743.

Cyjanosafracyna B może być przekształcona do półproduktu 25 sposobami ujawnionymi powyżej. Możliwe jest uzyskanie z półproduktu 25 półproduktu 11 z wykorzystaniem poniższych etapów według schematu VII:

utworzenie zabezpieczonego hydroksyzwiązku o wzorze 26 poddając reakcji 25 z chlorkiem tert-butylodifenylosililu w obecności zasady;

finalne rozszczepienie grupy allilowej wodorkiem tributylocyny i dichloro-bis(trifenylofosfino)palladem w 26, co prowadzi do utworzenia półproduktu 11.

Schemat Vll

Jedną z praktycznych realizacji syntetycznego sposobu przekształcania safracyny B do półproduktu 11 jest modyfikacja i ciąg dalszy schematu VIII, która obejmuje następujące etapy:

stereospecyficzne przekształcenie związku, safracyny B, do związku o wzorze 2 przez selektywne zastąpienie OH przez CN w reakcji z KCN w środowisku kwaśnym;

utworzenie związku tiomocznikowego o wzorze 3 poddając reakcji związek o wzorze 2 z izotiocyjanianem fenylu;

konwersję związku tiomocznikowego o wzorze 3 w acetamid o wzorze 5 drogą hydrolizy w środowisku kwaśnym, a następnie dodając bezwodnik octowy; pośredni związek aminowy o wzorze 4 może być wydzielony po zakończeniu hydrolizy w środowisku kwaśnym poprzez dodanie kwaśnego węglanu sodu, ale ten związek pośredni jest wysoce nietrwały i jest szybko przekształcany w pięcioczłonową iminę cykliczną, konkretnie związek 6;

utworzenie zabezpieczonego związku o wzorze 7 poddając reakcji z eterem bromometylometylowym i diizopropyloetyloaminą w dichlorometanie;

selektywne demetylowanie grupy metoksylowej układu chinonowego związku o wzorze 7 do związku o wzorze 8 drogą reakcji z metanolowym roztworem wodorotlenku sodu;

przekształcenie związku o wzorze 8 w metylenodioksy-związek o wzorze 9 w następującej korzystnej sekwencji: (1) redukcję grupy chinonowej związku 8 w atmosferze wodoru z 10% Pd/C;

PL 215 769 B1 (2) przekształcenie pośredniego hydrochinonu w metylenodioksy-związek o wzorze 9 poddając reakcji z bromochlorometanem i węglanem cezu w atmosferze wodoru; (3) przekształcenie związku o wzorze 9 do związku po wzorze 10 poprzez zabezpieczenie wolnej grupy hydroksylowej w postaci grupy OCH2R, w reakcji z BrCH2R i węglanem cezu, przy czym R może oznaczać aryl, CH=CH2, OR' itd.;

przekształcenie grupy acetamidowej związku o wzorze 10 w odpowiednią grupę hydroksylową o wzorze 11 poddając reakcji z czterotlenkiem azotu w mieszaninie kwasu octowego i octanu, a następnie działając wodorotlenkiem sodu; alternatywnie może być zastosowany azotyn sodu w mieszaninie bezwodnika octowego i kwasu octowego, a następnie wodorotlenek sodu; alternatywnie grupa acetamidowa związku o wzorze 10 może być przekształcona w pierwszorzędową grupę aminową poprzez poddanie reakcji z hydrazyną lub z Boc2O, DMAP a następnie z hydrazyną; taka pierwszorzędowa amina może być przekształcona w odpowiednią grupę hydroksylową (związek o wzorze 11) poprzez oksydatywną konwersję aminy pierwszorzędowej do odpowiedniego aldehydu za pomocą benzenosulfonianu 4-formylo-1-metylopirydyniowego lub innego jonu pirydyniowego, a następnie działaniem DBU lub innej zasady i dalszą hydrolizę, a następnie redukcję aldehydu do odpowiedniej grupy hydroksylowej glinowodorkiem litu lub innym reagentem redukującym;

tworzenie zabezpieczonego związku o wzorze 26 poprzez poddanie reakcji z chlorkiem t-butylodifenylosililowym i dimetyloaminopirydyną w dichlorometanie;

przekształcenie związku sililowanego o wzorze 26 w półprodukt 11 przez odbezpieczenie grupy zabezpieczającej OCH2R, poprzez poddanie reakcji w warunkach redukcyjnych lub kwaśnych. Typowymi sposobami są czerń palladowa w atmosferze wodoru, wodny TFA lub wodorek tributylocyny i dichloro-bis(trifenylofosfino)pallad.

W jeszcze innej korzystnej modyfikacji, cyjanozwiązek o wzorze 2 może być przekształcony w półprodukt 11 według dalszego ciągu schematu II, obejmującego następujące etapy:

utworzenie zabezpieczonego hydroksyzwiązku o wzorze 26 w reakcji 25 z chlorkiem tert-butylodifenylosililu w obecności zasady;

finalne rozszczepienie grupy allilowej wodorkiem tributylocyny i dichloro-bis(trifenylofosfino)palladem w 26, które prowadzi do utworzenia półproduktu 11.

A zatem, możliwe jest przekształcenie cyjanosafracyny B w liczne półprodukty i pochodne o potencjalnej terapeutycznej czynności przeciwnowotworowej. Te półprodukty mogą być wytworzone wychodząc ze związków już ujawnionych, lub z zastosowaniem alternatywnych dróg.

Półprodukty niniejszym ujawnione obejmują związek 47 oraz liczne pochodne amidowe, wytworzone z wykorzystaniem związków 45 lub 43.

Na schemacie Vlll przedstawiono wytwarzanie związku 47 z wykorzystaniem następującej sekwencji:

tworzenie związku tiomocznikowego o wzorze 3 poddając reakcji związek o wzorze 2 z izotiocyjanianem fenylu;

przekształcenie związku tiomocznikowego o wzorze 3 w acetamid o wzorze 5 przez hydrolizę w środowisku kwaśnym, a następnie dodanie bezwodnika octowego; pośredni związek aminowy o wzorze 4 może być wyizolowany po zakończeniu hydrolizy w środowisku kwaśnym przez dodanie kwaśnego węglanu sodu, ale związek ten jest wysoce nietrwały i jest szybko przekształcany do pięcioczłonowej iminy cyklicznej, konkretnie związku 6;

tworzenie zabezpieczonego związku o wzorze 7 w reakcji z eterem bromometylometylowym i diizoproyloetyloaminą w dichlorometanie;

selektywne demetylowanie grupy metoksylowej układu chinonowego związku o wzorze 7 do związku o wzorze 8 poprzez poddanie reakcji z metanolowym roztworem wodorotlenku sodu;

przekształcenie związku o wzorze 8 w metylenodioksy-związek o wzorze 10 w korzystnej następującej sekwencji:(1) redukcja grupy chinonowej związku 8 w atmosferze wodoru z 10% Pd/C; (2) przekształcenie pośredniego hydrochinonu w metylenodioksy-związek o wzorze 9 poddając reakcji z bromochlorometanem i węglanem cezu w atmosferze wodoru; (3) przekształcenie związku o wzorze 9 do związku o wzorze 10 poprzez zabezpieczenie wolnej grupy hydroksylowej w postaci grupy alliloksylowej, w reakcji z bromkiem allilu i węglanem cezu;

przekształcenie związku o wzorze 9 w pochodną acetylową 46 w reakcji z chlorkiem acetylu w pirydynie;

PL 215 769 B1 przekształcenie związku o wzorze 46 w odbezpieczony związek 47 w reakcji z kwasem solnym w dioksanie.

Schemat Vlll

Inne użyteczne półprodukty amidowe są wytwarzane wychodząc z przedstawionego półproduktu 45 według następującego schematu:

Schemat IX

Etap drugi jest etapem ewentualnym. Proces ten jest szczególnie istotny jeśli grupa R oznacza grupę R^a uprzednio zdefiniowaną. Ponadto, schemat Vlll może być łatwo rozszerzony dla umożliwienia otrzymywania związków o wzorze (XXIII), poprzez wprowadzenie materiału wyjściowego z odmiennymi grupami z pozycji 5, zarówno z grupą, która ma się znajdować w produkcie, jak i z grupą która może być usunięta lub inaczej modyfikowana z wytworzeniem żądanej grupy.

PL 215 769 B1

Ze związku 45 można otrzymać grupę analogów w następującej sekwencji:

acylowanie grupy aminowej związku o wzorze 45 za pomocą licznych pochodnych acylowych z dostarczeniem odpowiednich amidów, przy czym korzystnymi grupami acylowymi są acetyl, chlorek cynamoilu, chlorek p-trifluorocynamoilu, chlorek izowalerylu, izotiocyjanian fenylu lub aminokwasy, lub inne przykłady podane uprzednio dla grup R^aCO-;

przekształcenie grupy CN w OH w reakcji z azotanem srebra w mieszaninie AcN/H2O.

Inne użyteczne pochodne półproduktów amidowych są wytwarzane wychodząc z uprzednio przedstawionego półproduktu 43 według następującego schematu:

Schemat X

Ze związku 43 można otrzymać inną grupę interesujących pochodnych z wykorzystaniem następującej sekwencji:

(a) acylowanie grupy aminowej związku 43 licznymi pochodnymi acylowymi dostarczając odpowiednie amidy, przy czym korzystnymi grupami acylowymi są acetyl, chlorek cynamoilu, chlorek p-trifluorocynamoilu, chlorek izowalerylu lub aminokwasy, lub inne przykłady podane uprzednio dla grup R^aCO-;

przekształcenie grupy CN w OH w reakcji z azotanem srebra w mieszaninie AcN/H2O.

W odniesieniu do związków aktywnych, ważnym jest następujący proces:

₅ gdzie R⁵ w produkcie finalnym jest zdefiniowane jak dla związku (XXXII) i może być odmienne w materiale wyjściowym, i może być przekształcone w takowy w części procesu,

R¹⁸ oznacza grupę hydroksylową w produkcie finalnym, ale może oznaczać zabezpieczoną grupę hydroksylową w materiale wyjściowym i może być przekształcone w takową w części procesu,

R¹² w produkcie finalnym może być takie same jak w materiale wyjściowym i może być przekształcone w takowy w części procesu,

R²¹ w produkcie finalnym ma zdefiniowane znaczenie, jeśli grupa hydroksylowa ma być utworzona z grupy cyjankowej w części procesu,

PL 215 769 B1

R^a ma zdefiniowane znaczenie, i może być dalej acylowane w części procesu dostarczając produkt finalny z omawianą acylowaną grupą R^a.

₅

R⁵ korzystnie oznacza oksyacetyl lub inną małą grupę oksyacylową w materiale wyjściowym i nie ulega zmianie podczas reakcji. R¹⁸ korzystnie oznacza grupę hydroksylową w materiale wyjścio12 wym i nie ulega zmianie podczas reakcji. R¹² korzystnie oznacza -NCH3- w materiale wyjściowym i nie 21 ulega zmianie podczas reakcji. R²¹ w produkcie finalnym ma zdefiniowane znaczenie, jeśli grupa hydroksylowa ma być utworzona z grupy cyjankowej w części procesu. R^a w produkcie finalnym korzystnie jest zdefiniowane w odniesieniu do związku o wzorze (XXIII).

₁ a także reakcję, w której grupa R¹ oznaczająca aminometylen jest przekształcana w grupę hydroksymetylenową.

Inny istotny sposób obejmuje reakcję otrzymywania 21-cyjanozwiązku o wzorze (XVI), która polega na poddaniu reakcji związku o wzorze (XV):

5 8 14a 15 18 21 w którym R¹, R⁵, R⁸, R^14a, R¹⁵ i R¹⁸ mają zdefiniowane znaczenie i R²¹ oznacza grupę hydroksylową, ze źródłem jonu cyjankowego, dostarczając żądany związek 21-cyjankowy.

Ponadto, uwzględniane są sposoby z użyciem innych związków zawierających grupy nukleofilowe z wytworzeniem podobnych związków o wzorze (XVI), w których pozycja 21 jest zabezpieczona przez inną grupę nukleofilową 21-Nuc. Na przykład związek 21-Nuc o wzorze (XVI) z podstawnikiem alkiloaminowym w pozycji 21 może być wytworzony poprzez poddanie reakcji związku o wzorze (XV) w którym R²¹ oznacza grupę hydroksylową, z odpowiednią alkiloaminą. Związek 21-Nuc o wzorze (XVI) z podstawnikiem alkilotio w pozycji 21 może być również wytworzony w reakcji związku o wzorze (XV), w którym R²¹ oznacza grupę hydroksylową, z odpowiednim alkanotiolem. Alternatywnie, związek 21-Nuc o wzorze (XVI) z podstawnikiem α-karbonyloalkilowym w pozycji 21 może być wytworzony w reakcji związku o wzorze (XV), w którym R²¹ oznacza hydroksyl, z odpowiednim związkiem karbonylowym, zwykle w obecności zasady. Inne drogi syntetyczne są możliwe dla innych związków 21-Nuc.

Inna istotna reakcja obejmuje przeróbkę produktu 21-cyjankowego, z utworzeniem związku 21-hydroksylowego. Związki takie mają interesujące właściwości in vivo.

Celem uniknięcia wątpliwości, stereochemia wskazywana w niniejszym opisie jest oparta na naszym przypisaniu poprawnej stereochemii produktów naturalnych. Jeśli jakikolwiek błąd zostanie wykryty w przypisaniu stereochemii, to może być konieczne dokonanie korekty w podanych wzorach.

PL 215 769 B1

Ponadto, w zakresie możliwości modyfikacji syntez, niniejszy wynalazek rozciąga się również na stereoizomery.

Czynność cytotoksyczna

Związek	IC50 (μΜ) J
	P-388	A-549	HT-29	MEL- 28	CV-1	DU-145
O Γ CM MK HaN^-k ' 2	0,009	0,018	0,018	0,018	0,023
►«γΛγ-*· j^ V«-iA#»* ' \ 14	0,15	>0,15	0,15	>0,15
t ?“· Μψγ“· u*yYy*^h* 0 MVo,A- *1 15	1,44	1,44	1,44	1 ,44
; OMe ΟΧ-ΧγΜ* “ ΐ>yu_ Λ“ 16	>1,5	>1,5	>1,5	>1,5
°v° 0 i 17	1,4	1,4	1,4	1,4
Xo 0v0^k,«· ^>ίΑψΛγ^Η4.«|, X N„J* <Ł / MM ^0-4^ °\ 18	0,01	0,01	0,01	0,01

PL 215 769 B1

“•’νΑί Cif V- o	OM· HO^ .M> ''YfwY'»** V £>4 Y 19	0,08	0,16	0,01	0,16
\	MO^. JL Μ»
	%> ' 20	0,01	0,01	0,01	0,01
\	CM· Υ*γΥΜ*Μ«	0,019	0,019	0,019	0,019
°Cf	21
\	CfM·
</7	fYYSt-pM» i Bn οΛ0.ο^ο, 22	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014
Y	OM· ^O^OyŁyM·
°^~0	YAA* JLrN^J^ r/.0-«^ 23	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13
\ °u	OMt 'fyhJ-H* *Ά 24	0,18	1,8	1,8	1,8	1,8	1,8
\ «•s-Λ,	OMr ^Αγ* YY^a-pMt JL.ł<	0,2	0,2	0,2	0,2		0,2
θ' Y Vo	Ά 25
Y OM* Q*/Y hoAL.M* *co\ y^TJ	0,008	0,008	0,008	0,008
%-Z	·&, 35
Om Msg m«s-A	O Z W, κν T* «. ' ϊχτ o / ^<*Ύ T\?r yd’**	0,01	0,01	0,01	0,01
ΌΓ	In 36

PL 215 769 B1

OfM V 2,	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
j ^ΥγΑϊΤ*1* Ύ>ν~χ-ν '42	0,13	0,13	0,13	0,13		0,13
CMc KClJL·,**· OAe Τ' J X 43	0,008	0,016	0,008	0,008		0,016
ΟΜ» *Vo X Jb· x 44	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OM* ΑΥγ 45	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
OIM HH ΡΙ*Ν5»ΐΗ.Α>κ l ° 3	0,015	0,015	0,015	0,015	0,018
OM* f Ύ YiYJ* “Χ> Ł, 6	2,171	2,171	2,171	2,171	2,171
OM* WsAt'** *Άυ> “* ° Χχ <A 5	0,005	0,005	0,005	0,005
k^oJkL·* ° Χχ X 7	0,22	0,22	0,22	0,22	0,22

PL 215 769 B1

, OMt ® ^łłM^ «Α 8	>9	>18,1	>18,1	>18,1	>18,1
i ι“ 4: A 9	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77		>1,77
Α,ΟγΪγ»»· “γΥνΉ* “·° %·£· <A 10	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65		>1,85
1 OMe PAe Γ j ^Yi^t £F* X Bh <A 46	0,016	0,016	0,016	0,016		0,016
OM· hO\jL,M· A 47	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OM* o** 17 ¥ '- c Y8 Λ-Λ 48	0,0008	0,001	0,0008	0,0008		0,001
OH* hcP-u* Cm* j7 j λ-ο '-WŻ* Ύ 49	0,007	0,007	0,007	0,007		0,007
CM* HO-Y_,Me tes 17 j <Λχ	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OM* ΗοΧ'ν-.** Łk Jx. Λ ι γτ* aĄ-\,«YX νο \ Ł* HH ΜΗ ł ^<A-w>X. 5Χ	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001

PL 215 769 B1

ΟΜ» OAc Γ ł IM Jw XV ct4· OTT 5* ο*γ^** MH o*śj^Y%^CF, M 52	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OU» **Łjv,iM a*e JT j tte^ jL irW^Niii OW> N-O < CM HH „A.NH..CF, Ł I 53	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
Ί χοΧΧ ^-0 ”°*ρΥ** XXX/* o Τ ϊ i \~© \ ĆN Λγ«., Μ» o 54	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
Otóe OH ΓΪ O T I · N-o \ CH NM όν*,, ** « 55	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
OM« HO^Jy. K-ο Ϊ·ΗΗ^“ “V 56	0,18	0,9	0,18	0,8		0,9
OM* ΗΟ^Χ^,Μ» 0« TT J °\2<jX &f A^L^«riC5***h 0 ' 57	0,14	0,14	0,14	0,14		0,14
Om ate jL jf o t, WHCSH** - 58	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001

PL 215 769 B1

C*M ewc JZ Γ “'ΥΫυνΧ οτϊΓ Λ Μ ° tt £0	0,001	0,001	0,0001	0,001		0,0005
OMe HGs^s^M· OAe J | ΣΧ2ΰ>** <jTr MH Ύ 6ł	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
$Mt r ΎΓ W NH u ^Τ'α	0,001	0,001		0,0005		0,001
GMe WOyL^Me “YrYgi VrO CR Y«	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
Ottt ^sAy'* OAe JT J Αθί> \*O ĆN MH u «Α*μτ— Ł < 64	0,001	0,001		0,001		0,001
Ot Γ’κί/ ¥Ql es 8 Łft	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe HCk^L^Me Oto J3 T ^Υνχχ/Οτ jęęO5* '—'O \ Órt *« «»	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe MO^kr*·* °* JT i 39QO* '-β 'nm’h Λ»γ»> ». 1 67	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001

PL 215 769 B1

ο«* OAc J Ϊ	0,0008	0,001	0,0008	0,0008		0,001
'«O	TY^A* «αΛ	68
	OM HD^s^W
	ęX Ą OH		0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
	A· NH 1	69
«* κ%Αχ OAć Γ Γ	»
V	rv*Ń3ib ΤΎ 1 iw		0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
	NH	70
GM·
Χοζ§* o \ OH		0,0008	0,0008	0,0001	0,0008		0,0001
	0A^	71
OM OM J jf Vn> ^*0 y, cn		0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
	NH Ł0	72
OM «χλ-Μ* o** J7 T wAv>X χοςχ	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
N-O	Fh	73
GM* wUs.4» OAC jl J
β i Vo	f' Ύ γ< \ c*		0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
	<X	74
OM OAe X g ΥτΥΧ ολΧ.γ>· V*O £m NM	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
	cTjcwii,	75

PL 215 769 B1

CMM hcl^L,m· OAc j3 i CiJ Ł mh X O HHfJ* ’ 70	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
OMt ζ&Α* V-ó * w MN 77	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
ofe rj '-0 CN j« cA^ 78	0,0001	0,0008	0,0001	0,0001		0,0008
(MM HO-s-Λγ·**· ζ)&γ* | ĆM HH i γ «NCM 79	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OMe ηοΥ.μι ο*ί X Τ m>· —0 , oh ΜΗ U 80	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe HCkYhyMi OAe ΊΓ J \ 6*Ύ ΜΗ OYJ 81	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
«Me Η&Υ\.Μ» o*? X J w? '•-“Ο \ OH MM 82	0,0001	0,0001	0,0001 .............................................	0,0001		0,0001
ΗοΑ3μ» °*« Σ] ν-ο * £tt «Η A—-χ 83	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

PL 215 769 B1

OWe ΗΟ^Χ,Μ» CAc T Γ V ί* Ω* οΧΐΥ Χο X ΟΗ ΚΗ 84	0,0001	0,0008	0,0001	0,0001		0,0008
ομ» χχΧχ* &* ΊΓ Γ ^χχ> ΥΥ5	0,0006	0,001	0,0006	0,001		0,0006
OWe «Ο^Χχ^Μ» %*ϋ X CN «Μ Α,Μ* WW 0A^xXgg	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
owe ho^JŁ. w» OAc X J Mł. JL ,/^ΧλΤ mz V-o 1, Sn Xro87	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
ow· OAc jT j ζώζχγ·* Χ© \ In r h </γ»γ«. ° 88	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
OM* '«kia* chu X J ζ&'ζγ' Ł-5 τ Sn nh « XX' i* « 89	0,001	0,007	0,001	0,001		0,007
OMa ΗΟ^Χ^Μβ c*e XI <W? o CM NH HHCta	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
OWa MCL^k,M· O*£ X J *X.yxXV. ττγ^Μ* οΥΥΥ t-o » Sh Αγ~χ [ ** o 91	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001

PL 215 769 B1

CM* Ote P T Me^X. UC 1 ĆH	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
»<« JLJ ζ&Χ^ N-ο X 6h NH oAfJ* NH (A^-^93	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
Ottw HO_X.U* Qtó j? J -Γ ?·3*· AW Vo 5h HH M YTOm	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
WsJZtt. OAc 22 J Mł. rrr ct* Λ^ΑγΚ^Χ <-O I ÓH N* M <Α·ν o. «· e 95	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OM* hqX.m O*t Jh ί ^sAzV\X oąXX> — 0 t i« ί. 0 96	0,001	0,007	0,001	0,001		0,007
*n. «* 1 ΜΟΝΛγΧ,Μ· ΑΑν* ^0 ĆN 0	>1	>1	>1	>1		>1
?** 1 «««χΧΧ,Μ* Ύχ3^ en ^. W 98	>1	>1	>1	>1		>1
*ih, 9* MGMOsJs-M· ζφζΧΧ* V-O 4 cw Ή) 99	0,7	0,7	0,7	0,7	0,7	0,7

PL 215 769 B1

OM* MtMKkJs^Wt j7 Y ΧΧ'ζγ*' Ύ»	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
CM* μομοΧ,μ» w T J Mi. ΓίΐΤ ^Wł ^Λ^ΛγκΧ* O ĆH JY 101	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
OM* MńMOsJs^ilt oh jLT “*ώζχχ °Vo 1Γ Cfł o V 102	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
CM* ΜΟΜθΧ<.Μί OH JT j “‘ώγχ <nx ^~~Ο 103	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
0«» w*>c^xi?Cx^ Vo CH O M 104	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
ΟΜ» ΜΟΜΟ^Χ,Μ» ΥΗτ* AW ~o \ GB <3*^-^ 105	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
«Aft M°W<SA* Tfe? '“O CK o oXyyCb t? 106	0,6	0,6	0,6	0,6		0,6
O«* MCMC<JL*Mi OAc J7 j jęcęS* '-o 1 6« 0 Ρά U 107	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1

PL 215 769 B1

OMt OAft Τ T '“O \ CH Αί1Μ	0,01	0,07	0,07	0,07		0,07
GM* o*c jT J oW> '-o 1 CM 109	0,0001	0,0008	0,0008	0,0008		0,0008
Ctóe «Α* Τ I '-O f CM O V no	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OM* QAc ΊΓ J 1 « 1 1*4 “* Vq ( cn Ηί HI	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
owt OM ΐ j -ζ<Γ*Γ Ε|τ £> Αύτ I, CM 0 d*«*Y*l M 112	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
OM* ΗΟ^Χ^μ* OM £ j '-O \ OM 113	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
C*»t QAe XJ ^ΊτΊΓ^^ίιί** Λ<Λγ %.o | OH 0 V 114	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe «Ο-^^-Μβ OAe JUj «<γγγ*Χ ολγΛγ«^>* '—0 * ĆH Ά) i«	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001

PL 215 769 B1

0Μ« π*.* Γ η	0,0001	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
	2γ3* I * * °* 0 A-*<q	116
\	ΟΜ»
0^0	ΜΟΜΟ,Υ^-Μ·
	rYS* AA		0,06	0,06	0,06	0,06		0,06
νο	| έ«
	0Λ^.«ΗβΜ	117
\	ΟΜ»
οΆ	^Άυ*4·
	ηα γΑ		0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
%·0	* ca
	Αγ**	118
\	OMt
<Α>	ΗΟκΑυ**1
	GY*		0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
\_ο	| έ*
	ΜΜ cA^,MWCSNMP(,	119
\	OMt
X	HCL^L,»
μ·<Α*			0,06	0,06	0,06	0,06		0,06
	γΑ
	*Wj	120
\	Om*
Αο	MO^JYl*·
	►/YY*1*1* A X -3^		0,006	0,006	0,006	0,006		0,006
ί-α	s>
	Ύ’ o	121
\	OM*
««Α
	Αγν-A		0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
Αί	Y
	Αο-^ζ ο	122

PL 215 769 B1

	OMe r^YSn-Mt	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
X\< ^»•1 %	124
Ο	OM· TO*^v“* ζ^Χγ^«ΪΗ· χ,ίΟ* %	125	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
0 Aę V-o	3Mb HO^JX|* Sz^-sz^ K_J§H	►	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
	%	126
\ Vo	«Μ *%>V« X %	127	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
\ 0Ae V.o	GM γ’^Υ^ΗΧι*· i. &t	Η	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
	Hm Ό	128
\ xo €Λο M*«vzk «ΠΓ V-o	OMe YyY-J-M» *-«Λ %	H 129	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1

PL 215 769 B1

DMł % V 130	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
©*% Τ'jj % V 131	0,5	0,5	0,5	0,5		0,5
CU Q*ft j ΜζΜΟ^Χ-^μ» % ν 132	0,1	0,1	0,1	0,1		0,1
W % U 133	0,05	0,05	0,05	0,05		0,05
γ, F*7sZ «* F J** MOMO^Jk^,*** cy**© jy | 8 ^T Pr '^J’** && % *> 134	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
OM· O Ϊ «3^-L.m· FjC^© £ J ΟΐΝΗ& % u 135	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
cu cm· Λ Υγ U© Τ 5i, Hm % Μ 136	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001

PL 215 769 B1

fi A Nh % 137	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
’τν* &** * h Μ°Αν**· A o V S( MM O«S. V 138	0,006	0,006	0,006	0,006		0,006
¢^ cu* % 139	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
CM* Μίγ*ΥΥρ^+«* łYpY β Γ CM γΛ S i 140	0,08	0,08	0,08	0,08		0,08
OM« Μ<Α«Χχ«« «ιΥι**γ·’ίΙΥ NY^ ar ht Υ 141	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01
ύΜ» G*e 73 Γ οΧ^μη** 174		0,0013	0,0013
o*c X F A \> ο*2^*β* 175		0,007	0,007

PL 215 769 B1

OM 176		0,014	0,014
OM* «0%-esk^M X -χΧ 177		>1	>1
OM Ο*^γβΝΗβ« v> H 178		0,00012	0,00012
OMł «Οχ^Χ-ζ·*» °** χ J *** cXws« V 179		0,012	0,012
OM# 448 X j <Γξ> bo 180		0,00015	0,00015
OM# - ¥f bo 181		0,00015	0,00015

PL 215 769 B1

w* Ą 182		0,0015	0,0015
w* T_j
		0,013	0,013
183
ΗΟγΧ^.*** ^ΥΥΥτΗ-ι*» οΑη'Χ^		0,0015	0,0015
184
I ©μ JL _ί μ» β ι^ ;Γ ^ι* CTTj.		0,12	0,12
185
JL ®* GA* J2 j
<ΓΪ> ο^«,		0,0014	0,0014
186
O ©As JZ Ίί Ui> JL _^_ JC^^T γγγ^ h4* m«		0,013	0,013
187

PL 215 769 B1

JJ O**e OAc J0 T ^—o V Zw MH O^Wy^Ph O 188		0,012	0,012
DAe J? f ίΠ^ 189		0,06	0,06
OM* AeO^Js^Mł ui> λ Ϊ 190		0,013	0,013
^a ?\ cum JL ί w· g 191		0,13	0,13
ΟΜ» ΑβΟ,^Α,Μ* OM T Jj *** <A^L,»i I 192		0,12	0,12
-a r* *** YyYiJ*1** LoęfV ^γ· 193		0,11	0,11

PL 215 769 B1

ΟΑ*Χ«, ΙΜ ο 194		0,012	0,012
0 Κ Ο*Η χ XjN οΑ^Χ»!» *· ο 195		0,012	0,012
γ-γγ CAe χ J «· ο 196		0,1	0,1
ΟΜ* 197		0,0018	0,0018
*\ «γΧ2. V-0 Χ„ΪΝ oA^w 198		0,0015	0,0015
ΟΜ* «O«<ŁSJ^M» VXoi, θ Ab 199		>1	>1

PL 215 769 B1

Czynność cytotoksyczna (M)

Guzy nowotworowe	Linia	om 7ΓΤ °VO T &H Z'' 0 66	OM· Mk. JL -j**. L.O V &K Ml 0Α^***γΟ*1 67 “ &	OMk ł*ł 70	om JL8 YfT Ϊ3“· ćręf 80
Pęcherza	5637	6.02E-10	3.42E-10	1,91 E-10	2.04E-11
Piersi	ΜΧ-1	1.65E-06	NA	2.38E-09	NA
Okrężnicy		784E-10	1,97E-08	2,12E-09	8.44E-12
Żołądka	Hs746t	7.90E-12	2.18E-09	7.10E-11	2.21E-09
Wątroby	SK-HEP-1	1,79E-12	6,01E-11	3.15E-09	9,91E-11
NSCL	A549	3,25E-09	7.68E-06	NA	NA
Jajnika	SK-OV-3	4.39E-11	1,02E-07	8,74E-09	NA
Trzustki	PANC-1	7.22E-11	4.17E-09	1.29E-10	1.19E-10
Przełyku	FADU	5,41 E-11	1.58E-09	3,71 E-10	5,98E-09
Prostaty	PC3	6.65E-09	2.15E-09	4.70E-09	1.52E-10
Prostaty	DU-145	5.73E-10	1.83E-07	2,22E-09	NA
Prostaty	LNCAP	5,45E-10	2,17E-10	3,94E-11
Nerki	786-0	6.58E-12	1,59E-09	1.72E-09	1.03E-10
SCL	NCI-H187	7,14E-14	9,57E-10	7,78E-14
Glejak siatkówki	Y-79	7.14E-14	7.36E-10	8.85E-11
Czerniak	Mel-28	2,60E-10	3,17E-09	2,18E-09	1,23E-10
V\Aókniako- mięsak	SW-694	9,91 E-10	NA	1.39E-06	NA

PL 215 769 B1

Chrzęstnia- komięsak	CHSA	3.24E-10	6,77E-09	1.39E-09	2.30E-10
Kostniako- mięsak	OSA-FH	1,94E-09	1,39E-09	1,09E-09	1.11E-10

Guzy nowotworowe	Linia	CMc TJ W 3 92	Yro 94	Or w* J7 w Λ-Ο 81
Pęcherza	5637	1.65E-10	7,85E-10	3,18-09
Piersi	ΜΧ-1	NA	nr~r-* r\/^· z,o5t-(Jb	NA
Okrężnicy	HT-29	7.43E-10	1,2E-10	NA
Żołądka	Hs746t	9.35E-10	6.25E-09	1,37E-07
Wątroby	SK-HEP-1	1.40E-09	9,03 E-10	9.50E-09
NSCL	A549	NA	NA	NA
Jajnika	SK-OV-3	NA	NA
Trzustki	PANC-1	8.93E-10	2,58E-9	1.03E-08
Przełyku	FADU	8,41 E-10	3,77E-08	1,14E-09
Prostaty	PC3	8,13E-10		9.34E-09
Prostaty	Dlł-145	NA	NA	NA
Prostaty	LNCAP		NA
Nerki	786-0	7,88E-10	2.90E-09	1,00E-08
SCL	NCI-H187		2.07E-12	—
Glejak siatkówki	Y-79		1.31E-11	7.78E-09
Czerniak	Mel-28	1,08E-09	1.13E-09	4.48E-09
Włókniako- mięsak	SW-694	NA
Chrzęstniako- mięsak	CHSA	1,08E-09	2,25E-09	1.09E-08
Kostniako- mięsak	OSA-FH	8,84E-10	1,35-08	9,50E-09

PL 215 769 B1

Leukemie i chłoniaki	Linia	_X_T β 66	DHF ®** JLi U ł w< Me 0 67	CHM <Uć j3 JT kto 7»	OU· «Μ jZjT Ν-Ϊ1 1 Ćto Wt e**'v*Y^ 80
Ogólna promielocytowa leukemia	HL60				9,38E-09
Ogólna ostra limfoblastów	MoltS	6.13E-10	2,8E-09	5,66E-10	1.55E-14
CML przewlekła mielogenowa	K562				2,33E-07
Leukemia włosowej komórki B	Mo-B
Chłoniak z limfocytów T	H9				1.99E-11
Chłoniak skórnych limfocytów T	Hut 78	5.50E-11	2,57E-10	4,62E-9	6,21 E-11
Chłoniak niezróżnicowany	MC116	2.15E-10	2.65E-10	3,8E-09	NA
Chłoniak Burkitta	RAMOS				7,77E-13
Chłoniak histiocytowy	U-937	1.77E-10	5.27E-11	3,28E-11	3,06E-11

Leukemie i chłoniaki	Linia	«Μ» »0,Αμ jZ i V 92	w* MC.J. ii« O*e IZ J AW Ao * Ą:rc> 94	Cmi «*< jTY —O ÓH CW 81
Ogólna promielocytowa leukemia	HL60	5,92E-09	1,23E-10	3.97E-10
Ogólna ostra limfoblastów	Moli 3	7,53E-12	8,85E-10	2,54E-09
CML przewlekła mielogenowa	K562	1,09E-08	4,45E-08

PL 215 769 B1

Leukemia włosowej komórki B	Mo-B
Chłoniak z limfocytów!	H9	4.48E-09	1.14E-08
Chłoniak skórnych limfocytów T	Hut 78	9,9E-10	1.06E-08	7,46E-09
Chłoniak niezróżnicowany	MC116	NA	1,41 E-09	1,13E-08
Chłoniak Burkitta	RAMOS	5,26-11	8,85E-10	7,15E-09
Chłoniak histiocytowy	U-937	5.15E-10

Guzy nowotworowe	Linia	o*c x i YPTt ki* q i I s —0 X OH MM 71	out Ote X j M· —i- τ-1* Q κ Co OM 93
Pęcherza	5637	2,81 E-09	2,84E-10
Piersi	ΜΧ-1	2,50E-06	NA
Okrężnicy	HT-29	NA	8.97E-09
Żołądka	Hs746t	2,97E-08	9.19E-09
Wątroby	SK-HEP-1	5,07E-09	1,08E-09
NSCL	A549	NA	9,41 E-09
Jajnika	SK-OV-3	2,21 E-07	NA
Trzustki	PANC-1	2.90E-09	1 ,ΟΟΕ-09
Przełyku	FADU	7,94E-09	1,39E-08
Prostaty	PC3	1,46-08	9,32E-10
Prostaty	DU-145	NA	NA
Prostaty	LNCAP	5.39E-09
Nerki	786-0	6,55E-09	1.72E-09
SCL	NCI-H187	3.98E-11
Glejak siatkówki	Y-79	3.14E-09
Czerniak	Mel-28	3,05E-08	1.15E-09

PL 215 769 B1

Włókniakomięsak	SW-694	NA	NA
Chrzęstniakomięsak	CHSA	1,73E-08	2.10E-09
Kostniakomięsak	OSA-FH	8.56E-08	1,30E-09

Guzy nowotworowe	Linia	O9M ΗοΧ,Μ· JTj ΥΎτ ąw τ-Ο X ÓH MM 82	OMt cwe JL ¥ ΥΥτ '—O ł 95 * °
Pęcherza	5637	9,91 E-10	1.17E-09
Piersi	ΜΧ-1	NA	1,92E-09
Okrężnicy	HT-29	NA	NA
Żołądka	Hs746t	1,36E-09	8,15E-09
Wątroby	SK-HEP-1	1,17E-Q9	6,21 IE-09
NSCL	A549	NA	NA
Jajnika	SK-OV-3	2,90E-08	NA
Trzustki	PANC-1	1,37E-09	8,61 E-09
Przełyku	FADU	3.05E-08	4.38E-08
Prostaty	PC3
Prostaty	DU-145	NA	NA
Prostaty	LNCAP	2,38E-08	1.77E-08
Nerki	786-0	2,27E-09	1,54E-08
SCL	NCI-H187	2,41 E-11	9.89E-11
Giejak siatkówki	Y-79	3.08E-10	7,45E-10
Czerniak	Mel-28	2,85E-09	1.42E-08
Włókniakomięsak	SW-694
Chrzęstniakomięsak	CHSA	1.63E-09	2,91 E-08
Kostniakomięsak	OSA-FH	ΊΓ | V/ f Eini· \J XZ	i, lOtz-UO

PL 215 769 B1

Leukemie i chłoniaki	Linia	«Κ 7 j «A-*·'.	OUt 93
Ogólna promielocytowa leukemia	HL60		1,50E-08
Ogólna ostra limfoblastów	Molt 3	1.62E-09	3,87E-09
CML przewlekła mielogenowa	K562		6,89E-08
Chłoniak z limfocytów T	H9		1,08E-08
Chłoniak skórnych limfocytów T	Hut 78	7,33E-09	1,97E-09
Chłoniak niezróżnicowany	MC116	1,62E-08	3,81 E-09
Chłoniak Burkitta	RAMOS		1,1 E-09
Chłoniak histiocytowy	U-937	1,92E-09	1.08E-09

Leukemie i chłoniaki	Linia	W OM Γ j t. M* 82	Wto ΣΓ LTII *** w Υγ-Τ-' 95 ~ ’
Ogólna promielocytowa leukemia	HL60	4.93E-10	7,36E-09
Ogólna ostra limfoblastów	Molt 3	9.86E-10	9,86E-10
CML przewlekła mielogenowa	K562	1,87E-08	1,18E-08
Chłoniak z limfocytów T	H9	1.20E-08	2,43-08
Chłoniak skórnych limfocytów T	Hut 78
Chłoniak niezróżnicowany	MC116	1,04E-09	1.49E-09
Chłoniak Burkitta	RAMOS		5,01 E-09
Chłoniak histiocytowy	U-937

Guzy nowotworowe	Linia	OMe Ote 17 i “ΤΥτΧ *Cef fiu o 114	CMe 37 ϊ ÓH 0 136
Pęcherza	5637	1.14E-08	1,71E-08

PL 215 769 B1

Piersi	ΜΧ-1	2,81 E-08	7.25E-13
Okrężnicy	HT-29	4,08E-07	2.96E-07
Żołądka	Hs746t	3,57E-08	1.24E-09
Wątroby	SK-HEP-1	1,63-08	1,94E-09
NSCL	A549	2,81 E-06	1,56-05
Jajnika	SK-0V-3	7,03E-06	7,78E-08
Trzustki	PANC-1	1,03E-08	9,47E-09
Przełyku	FADU	4,59E-07	2,46E-08
Prostaty	PC3	7,88 E-08
Prostaty	DU-145	7,03E-08	1.56E-06
Prostaty	LNCAP	5 98E-07	6,83E-08
Nerki	786-0	1,46E-08	5.26E-12
SCL	NCi-H187	8,02E-10	7.78E-14
Giejak siatkówki	Y-79	8.85E-10	t, f olZ“ 14
Czerniak	Mei-28	1.76E-08	5,89E-08
Włókniakomięsak	SW-694	3.38E-06	6,69E-06
Chrzęstniakomięsak	CHS A	2,53E-08	4,49E-08
Kostniakomięsak	OSA-FH	6.34E-08	5,26E-07

Guzy nowotworowe	Linia	owe ΜΟχΧ-κ'44* OAe Γ J \ OH Ύ 115	OWt ot* XI < ν-ο Λ 0«
Pęcherza	5637	7.88E-10	3,02Ε-08
Piersi	ΜΧ-1	NA	4.75Ε-08
Okrężnicy	HT-29	8.99E-09	1.34Ε-08
Żołądka	Hs746t	2.95E-08	7,05Ε-07
Wątroby	SK-HEP-1	1,29E-09	6.12Ε-08
NSCL	A549	8,22E-06	8,49Ε-09
Jajnika	SK-OV-3		3.55Ε-08

PL 215 769 B1

Trzustki	PANC-1	5,68E-10	1.28E-08
Przełyku	FADU	5.40E-11	2.47E-08
Prostaty	PC3	7,71 E-10	6.18E-10
Prostaty	DU-145	NA	1.17E-08
Prostaty	LNCAP		UjŁ-vL· \J 1
Nerki	786-0	9.23E-10	1,13E-08
SCL	NCI-H187		2.33E-10
Glejak siatkówki	Y-79	1.03E-08	2,64E-09
Czerniak	Mel-28	2.23E-08	1.25E-08
Włókniakomięsak	SW-694	8 53E-06	NA
Chrzęstniakomięsak	CHSA	1,55E-05	2,95E-08
Kostniakomięsak	OSA-FH	1,29E-09	5 01E-08

Leukemie i chłoniaki	Linia	OM 114	Ottł Iz J Οι**^* '-i \ ot* e 116
Ogólna promielocytowa leukemia	HL60		1.34E-08
Ogólna ostra limfoblastów	Molt3	1.44E-08	2.48E-09
CML przewlekła mielogenowa	K562	1.56E-07	6,13E-08
Chłoniak z limfocytów T	H9	1,56E-07	1.91E-08
Chłoniak skórnych limfocytów T	Hut 78	6,47E-08	7,31 E-09
Chłoniak niezróżnicowany	MC116	1,69E-08	6,38E-09
Chłoniak Burkitta	RAMOS	8.86E-09	7,15E-10
Chłoniak histiocytowy	U-937	7.6E-08

PL 215 769 B1

Leukemie i chłoniaki	Linia	<*** JT T '—O * &k n$	*«*» 8MŁ JL | e H3
Ogólna promielocytowa leukemia	HL60	3,1 E-09
Ogólna ostra limfoblastów	Molt3	8.69E-11	4.63E-08
CML przewlekła mieiogenowa	K562		2,11 E-08
Chłoniak z limfocytów T	H9	2.17E-08	6.76E-08
Chłontak skórnych limfocytów T	Hut 78	4,81 E-08	2,06E-08
Chłoniak niezróżnicowany	MC116	5,27E-11	1,51 E-08
Chłoniak Burkitta	RAMOS	1.86E-09	9,09E-09
Chłoniak histiocytowy	U-937		1.03E-08

P r z y k ł a d y

Niniejszy wynalazek jest zilustrowany poniższymi przykładami. P r z y k ł a d 1

Do roztworu 2 (21,53 g, 39,17 mmol) w etanolu (200 ml) dodano bezwodnik tert-butoksykarbonylowy (7,7 g, 35,25 mmol) i mieszaninę mieszano przez 7 godz. w 23°C. Następnie, reakcję zatężono w próżni, a pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu = 6:4) i otrzymano 14 (20,6 g, 81%) w postaci żółtego ciała stałego.

Rf: 0,52 (octan etylu:CHCl3 5:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,49(s, 1Η), 6,32(bs, 1H), 5,26(bs, 1H), 4,60(bs, 1H), 4,14(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,05(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,94(s, 3H), 3,81(d, J =4,8 Hz, 1H), 3,7(s, 3H), 3,34(br d, J=7,2 Hz, 1H), 3,18-3,00(m, 5H), 2,44(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,24(s, 3H), 1,82(s, 3H), 1,80-1,65(m, 1H), 1,48(s, 9H), 0,86(d, J=5,7 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 185,5, 180,8, 172,7, 155,9, 154,5, 147,3, 143,3, 141,5, 135,3,

130,4, 129,2, 127,5, 120,2, 117,4, 116,9, 80,2, 60,7, 60,3, 58,5, 55,9, 55,8, 54,9, 54,4, 50,0, 41,6,

40,3, 28,0, 25,3, 24,0, 18,1, 15,6, 8,5.

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H43N5O8: 649,7, znaleziono (M+H)⁺: 650,3.

PL 215 769 B1

Do mieszanego roztworu 14 (20,6 g, 31,75 mmol) w CH3CN (159 ml) dodano w 0°C diizopropyloaminę (82,96 ml, 476,2 mmol) i bromek metoksymetylenu (25,9 ml, 317,5 mmol) oraz dimetyloaminopirydynę (155 mg, 1,27 mmol). Mieszaninę mieszano w 23°C przez 24 godz. Reakcję potraktowano w 0°C wodnym 0,1 N HCI (750 ml) (pH=5) i ekstrahowano CH2CI2 (2 x 400 ml). Warstwę organiczną wysuszono (siarczan sodu) i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient mieszaniny heksan:octan etylu = 4:1 do heksan:octan etylu = 3:2) i otrzymano 15 (17,6 g, 83%) w postaci żółtego ciała stałego.

Rf: 0,38 (heksan:octan etylu 3:7).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,73(s, 1H), 5,35(bs, 1H), 5,13(s, 2H), 4,50(bs, 1H), 4,25(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,03(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,97(s, 3H), 3,84(bs, 1H), 3,82-3,65(m, 1H), 3,69(s, 3H), 3,56(s, 3H), 3,39-3,37(m, 1H), 3,20-3,00(m, 5H), 2,46(d, J=18 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,23(s, 3H), 1,85(s, 3H), 1,73-1,63(m, 1H), 1,29(s, 9H), 0,93(d, J=5,1 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 185,4, 180,9, 172,4, 155,9, 154,5, 149.0, 148,4, 141,6, 135,1, 131,0, 129,9, 127,6, 124,4, 123,7, 117,3, 99,1, 79,3, 60,7, 59,7, 58,4, 57,5, 56,2, 55,9, 55,0, 54,2, 50,0, 41,5, 39,9, 28,0, 25,2, 24,0, 18,1, 15,6, 8,5.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H47N5O9: 693,8; znaleziono (M+H)⁺: 694,3.

Do kolby zawierającej 15 (8 g, 1,5 mmol) w metanolu (1,6 I) dodano w 0°C wodny roztwór 1M wodorotlenku sodu (3,2 I). Reakcję mieszano przez 2 godz. w tej samej temperaturze, po czym zadano 6M HCI do pH=5. Mieszaninę ekstrahowano octanem etylu (3 x 11), połączone ekstrakty organiczne wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient CHCI3 do CHCI3:octan etylu = 2:1) i uzyskano 16 (5,3 mg, 68%).

Rf: 0,48 (CH3CN:H2O 7:3, RP-C18).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,73(s, 1H), 5,43(bs, 1H), 5,16(s, 2H), 4,54(bs, 1H), 4,26(d, J=1,8

Hz, 1H), 4,04(d, J=2,7 Hz 1H), 3,84(bs, 1H), 3,80-3,64(m, 1H), 3,58(s, 3H), 3,41-3,39(m, 1H), 3,22-3,06(m, 5H), 2,49(d, J = 18,6 Hz, 1H), 2,35(s, 3H), 2,30-2,25(m, 1H), 2,24(s, 3H), 1,87(s, 3H), 1,45-1,33(m, 1H), 1,19(s, 9H), 1,00(brd, J=6,6 Hz, 3H).

PL 215 769 B1 ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 184,9, 180,9, 172,6, 154,7, 151,3, 149,1, 148,6, 144,7, 132,9,

131,3, 129,8, 124,5, 123,7, 117,3, 116,8, 99,1, 79,4, 59,8, 58,6, 57,7, 56,2, 55,6, 54,9, 54,5, 50,1,

41,6, 40,1, 28,0, 25,3, 24,4, 18,1, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H45N5O9: 679,7; znaleziono (M+H)⁺: 680,3.

Do odgazowanego roztworu związku 16 (1,8 g, 2,64 mmol) w DMF (221 ml) dodano 10% Pd/C (360 mg) i mieszano pod H2 (ciśnienie atmosferyczne) przez 45 min. Reakcję przesączono przez celit pod argonem do kolby zawierającej bezwodny Cs2CO3 (2,58 g, 7,92 mmol). Następnie dodano bromochlorometan (3,40 ml, 52,8 mmol), rurę zatopiono i mieszano w 100°C przez 2 godz. Reakcję ochłodzono, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2. Warstwę organiczną zatężono i wysuszono (siarczan sodu) uzyskując 17 w postaci brązowego oleju, który użyto w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,36 (heksan:octan etylu 1:5, SiO2).

¹H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6,68(s, 1H), 6,05(bs, 1H), 5,90(s, 1H), 5,79(s, 1H), 5,40(bs, 1H), 5,31-5,24(m, 2H), 4,67(d, J=8,1 Hz, 1H), 4,19(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,07(bs, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,70(s, 3H), 3,67(s, 3H), 3,64-2,96(m, 5H), 2,65(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,04(s,3H), 2,01-1,95(m, 1H), 1,28(s, 9H), 0,87(d, J=6,3 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 172,1, 162,6, 154,9, 149,1, 145,7, 135,9, 130,8, 130,7, 125,1,

123,1, 117,8, 100,8, 99,8, 76,6, 59,8, 59,2, 57,7, 57,0, 56,7, 55,8, 55,2, 49,5, 41,6, 40,1, 36,5, 31,9,

31,6, 29,7, 28,2, 26,3, 25,0, 22,6, 18,2, 15,8, 14,1, 8,8.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H47N5O9: 693,34; znaleziono (M+H)⁺: 694,3.

P r z y k ł a d 5

Do kolby zawierającej roztwór 17 (1,83 g, 2,65 mmol) w DMF (13 ml), Cs2CO3 (2,6 g, 7,97 mmol) dodano w 0°C bromek allilu (1,15 ml, 13,28 mmol). Otrzymaną mieszaninę mieszano w 23°C przez 1 godz. Reakcję przesączono przez warstwę celitu i przemyto i przemyto CH2CI2. Warstwę organiczną wysuszono i zatężono (siarczan sodu). Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, CHCI3:octan etylu = 1:4) uzyskując 18 (1,08 mg, 56%) w postaci białego ciała stałego.

PL 215 769 B1

Rf: 0,36 (CHCI3: octan etylu 1:3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,70(s, 1H), 6,27-6,02(m, 1H), 5,94(s, 1H), 5,83(s, 1H), 5,37(dd, J1=1,01 Hz, J2=16,8 Hz, 1H), 5,40(bs, 1H), 5,25(dd, J1=1,0 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,10(s, 2H), 4,91(bs, 1H), 4,25-4,22(m, 1H), 4,21 (d, J=2,4 Hz, 1H), 4,14-4,10(m, 1H), 4,08(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,00(bs, 1 H), 3,70(s, 3H), 3,59(s, 3H), 3,56-3,35(m, 2H), 3,26-3,20(m, 2H), 3,05-2,96(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,63(d, J=18 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,09(s, 3H), 1,91-1,80(m, 1H), 1,24(s, 9H), 0,94(d, J=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 172,0, 154,8, 148,8, 148,6, 148,4, 144.4, 138,8, 133,7, 130,9,

130,3, 125,1, 124,0, 120,9, 117,8, 117,4, 112,8, 112,6, 101,1, 99,2, 73,9, 59,7, 59,3, 57,7, 56,9, 56,8, 56,2, 55,2, 40,1, 34,6, 31,5, 28,1, 26,4, 25,1, 22,6, 18,5, 15,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H51N5O9: 733,4; znaleziono (M+H)⁺: 734.4.

P r z y k ł a d 6

Do roztworu 18 (0,1 g, 0,137 mmol) w dioksanie (2 ml) dodano 4,2M HCI w dioksanie i mieszaninę mieszano przez 1,2 godz. w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym kwaśnym węglanem sodu (60 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 70 ml). Warstwę organiczną wysuszono (siarczan sodu) i zatężono w próżni uzyskując 19 (267 mg, 95%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w kolejnych reakcjach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,17 (octan etylu.metanol 10:1, SiO2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,49(s, 1H), 6,12-6,00(m, 1H), 5,94(s, 1H), 5,86(s, 1H), 5,34(dd, J=1,0 Hz, J=17,4 Hz, 1H), 5,25(dd, J=1,0 Hz, J=10,2 Hz, 1H), 4,18-3,76(m, 5H), 3,74(s, 3H), 3,71-3,59(m, 1H), 3,36-3,20(m, 4H), 3,01-2,90(m, 1H), 2,60(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,97-1,86(m, 1H), 0,93(d, J=8,7 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 175,5, 148,4, 146,7, 144,4, 142,4, 138.9, 133,7, 131,3, 128,3,

120,8, 117,9, 117,4, 113,8, 112,4, 101,1, 74,2, 60,5, 59,1, 56,5, 56,1, 56,3, 56,0, 55,0, 50,5, 41,6,

39,5, 29,5, 26,4, 24.9, 21,1, 15,5, 9,33.

ESI-MS m/z obliczono dla C32H39N5O6: 589; znaleziono (M+H)⁺: 590. P r z y k ł a d 7

1S 20

Do roztworu 19 (250 mg, 0,42 mmol) w CH2CI2 (1,5 ml) dodano izotiocyjanian fenylu (0,3 ml, 2,51 mmol) i mieszaninę mieszano w 23°C przez 1 godz. Reakcję zatężono w próżni, a pozostałość

PL 215 769 B1 oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan do 5:1 heksan:octan etylu) uzyskując 20 (270 mg, 87%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,56 (CHCI3: octan etylu 1:4).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 8,00(bs, 1H), 7,45-6,97(m, 4H), 6,10(s, 1H), 6,08-6,00(m, 1H), 5,92(s, 1H), 5,89(s, 1H), 5,82(s, 1H), 5,40(dd, J=1,5 Hz, J=17,1 Hz, 1H), 3,38(bs, 1H), 5,23(dd, J=1,5 Hz, J=10,5 Hz, 1H), 4,42-4,36(m, 1H), 4,19-4,03(m, 5H), 3,71(s, 3H), 3,68-3,17(m, 4H), 2,90(dd, J=7,8 Hz, J=18,3 Hz, 1H), 2,57(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,25(s,3H), 2,12(s, 3H), 2,10(s, 3H), 1,90(dd, J=12,3 Hz, J=16,5 Hz, 1H), 0,81 (d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 178,4, 171,6, 148,6, 146,8, 144,3, 142,7, 138,7, 136,2, 133,6, 130,7, 129,8, 126,6, 124,2, 124,1, 120,9, 120,5, 117,7, 117,4, 116,7, 112,6, 112,5, 101,0, 74,0, 60,6, 59,0, 57,0, 56,2, 56,1, 55,0, 53,3, 41,4, 39,7, 26,3, 24,8, 18,3, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H44N6O6S: 724,8; znaleziono (M+H)⁺: 725,3. P r z y k ł a d 8

Do roztworu 20 (270 mg, 0,37 mmol) w dioksanie (1 ml) dodano 4,2N HCI/dioksan (3,5 ml) i reakcję mieszano w 23°C przez 30 min. Następnie dodano octan etylu (20 ml) i H2O (20 ml) i warstwę organiczną zdekantowano. Warstwę wodną zalkalizowano nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (60 ml) (pH=8) w 0°C, po czym ekstrahowano CH2CI2 (2 x 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne wysuszono (siarczan sodu) i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, octan etylu:metanol = 5:1) uzyskując związek 21 (158 mg, 82%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,3 (octan etylu.metanol 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6,45(s, 1H), 6,12-6,03(m, 1H), 5,91(s, 1H), 5,85(s, 1H), 5,38(dd, J1=12 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,24(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 4,23-4,09(m, 4H), 3,98(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,90(bs, 1H), 3,72(s, 3H), 3,36-3,02(m, 5H), 2,72-2,71(m, 2H), 2,48(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,85(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 148,4, 146,7, 144,4, 142,8, 138,8, 133,8, 130,5, 128,8, 121,5,

120,8, 118,0, 117,5, 116,9, 113,6, 112,2, 101,1, 74,3, 60,7, 59,9, 58,8, 56,6, 56,5, 55,3, 44,2, 41,8,

29,7, 26,5, 25,7, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z obliczono dla C29H34N4O5: 518,3; znaleziono (M+H)⁺: 519,2.

P r z y k ł a d 9

Do roztworu 21 (0,64 g, 1,22 mmol) w CH2CI2 (6,13 ml) dodano w -10°C pirydynę (0,104 ml,

1,28 mmol) i chloromrówczan 2,2,2-trichloroetylu (0,177 ml, 1,28 mmol). Mieszaninę mieszano w tej temperaturze przez 1 godz., po czym reakcję potraktowano 0,1 N HCI (10 ml) i ekstrahowano CH2CI2

PL 215 769 B1 (2 x 10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczono za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu = 1:2) uzyskując 22 (0,84 g, 98%) w postaci białej piankowatej substancji stałej.

Rf: 0,57 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,50(s, 1H), 6,10-6,00(m, 1H), 6,94(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,87(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73(bs, 1H), 5,37(dq, J1=1,5HZ, J2=17,1 HZ, 1H), 5,26(dq, J1=1,8 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 4,60(d, J=12Hz, 1H), 4,22-4,10(m, 4H), 4,19(d, J=12 Hz, 1H), 4,02(m, 2H), 3,75(s, 3H), 3,37-3,18(m, 5H), 3,04(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,63(d, J=18 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,26(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,85(dd, J1=12,3 Hz, J2= 15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 154,3, 148,5, 146,7, 144,5, 142,8, 139,0, 133,8, 130,7, 128,7,

121,3, 120,8, 117,8, 117,7, 116,8, 112,7, 101,2, 77,2, 74,3, 60,7, 59,9, 57,0, 56,4, 55,3, 43,3, 41,7,

31,6, 26,4, 25,3, 22,6, 15,9, 14,1, 9,4.

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H35CI3N4O7: 694,17; znaleziono (M+H)⁺: 695,2.

P r z y k ł a d 10

Do roztworu 22 (0,32 g, 0,46 mmol) w CH3CN (2,33 ml) dodano w 0°C diizopropyloetyloaminę (1,62 ml, 9,34 mmol), eter bromometylometylowy (0,57 ml, 7,0 ml) i dimetyloaminopirydynę (6 mg, 0,046 mmol). Mieszaninę ogrzewano w 30°C przez 10 godz. Następnie, reakcję rozcieńczono dichlorometanem (30 ml) i wylano do wodnego roztworu HCI o pH=5 (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, a rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując pozostałość, którą oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu = 2:1) i uzyskano 23 (0,304 g, 88%) w postaci białego piankowatego ciała stałego.

Rf: 0,62 (heksan:octan etylu 1:3).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,73(s, 1H), 6,10(m, 1H), 5,94(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,39(dq, J1=1,5 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,26(dq, J1=1,8 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,12(s, 2H), 4,61(d, J=12 Hz, 1H), 4,55(t, J=6,6 Hz, 1H), 4,25(d, J=12Hz, 1H), 4,22-4,11(m, 4H), 4,03(m, 2H), 3,72(s, 3H), 3,58(s, 3H), 3,38-3,21(m, 5H), 3,05(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,65(d, J=18 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,12(s, 3H), 1,79(dd, J1=12,3 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 154,3, 148,6, 148,4, 144,5, 139,0, 133,6, 130,6, 130,1, 125,07,

124,7, 124,0, 121,1, 117,7, 112,6, 101,2, 99,2, 77,2, 74,4, 74,1, 59,8, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 56,68,

55,3, 43,2, 41,5, 26,4, 25,2, 15,9, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H39CI3N4O8: 738,20; znaleziono (M+H)⁺: 739,0.

P r z y k ł a d 11

Do zawiesiny 23 (0,304 g, 0,4 mmol) w 90% wodnym kwasie octowym (4 ml) dodano pył cynkowy (0,2 g, 6,17 mmol) i reakcję mieszano przez 7 godz. w 23°C. Mieszaninę przesączono przez warstwę celitu, którą przemyto CH2CI2. Warstwę organiczną przemyto wodnym nasyconym roztworem

PL 215 769 B1 kwaśnego węglanu sodu (pH=9) (15 ml) i wysuszono nad siarczanem sodu. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując 24 (0,191 g, 83%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,3 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,68(s, 1H), 6,09(m, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,83(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,39(dq, J1=1,5 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,25(dq, J1=1,5 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,10(s, 2H), 4,22-4,09(m, 3H), 3,98(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,89(m, 1H), 3,69(s, 3H), 3,57(s, 3H), 3,37-3,17(m, 3H), 3,07(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,71(m, 2H), 2,48(d, J=18Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,19(s, 3H), 2,17(s, 3H), 1,80(dd, J1=12,3 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 148,5, 148,2, 144,3, 138,7, 133,7, 130,7, 129,9, 125,0, 123,9,

121,3, 117,9, 117,5, 113,6, 112,0, 101,0, 99,2, 74,0, 59,8, 59,7, 58,8, 57,6, 57,0, 56,2, 55,2, 44,2,

41,5, 31,5, 26,4, 25,6, 22,5, 16,7,14,0, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H38N4O6: 562,66, znaleziono (M+H)⁺: 563,1.

P r z y k ł a d 12

Do roztworu 24 (20 mg, 0,035 mmol) w H2O (0,7 ml) i THF (0,7 ml) dodano w 0°C NaNO2 (12 mg, 0,17 mmol) i 90% wodny AcOH (0,06 ml), i mieszaninę mieszano w 0°C przez 3 godz. Po rozcieńczeniu CH2CI2 (5 ml) warstwę organiczną przemyto wodą (1 ml), wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu = 2:1) i uzyskano 25 (9,8 mg, 50%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,34 (heksan:octan etylu 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,71(s, 1H), 6,11(m, 1H), 5,92(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,87(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,42(dq, J1=1,5 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,28(dq, J1=1,5 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,12(s, 2H), 4,26-4,09(m, 3H), 4,05(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,97(t, J=3,0 Hz, 1H), 3,70(s, 3H), 3,67-3,32(m, 4H), 3,58(s, 3H), 3,24(dd, J1=2,1 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 3,12(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,51(d, J=18 Hz, 1H), 2,36(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,12(s, 3H), 1,83(dd, J1=12,3 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz1 CDCI3) δ 148,7, 148,4, 138,9, 133,7, 131,1, 129,4, 125,1, 123,9, 120,7,

117,6, 117,5, 113,2, 112,3, 101,1, 99,2, 74,0, 63,2, 59,8, 59,7, 57,9, 57,7, 57,0, 56,5, 55,2, 41,6, 29,6,

26,1, 25,6, 22,6, 15,7, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H37N3O7: 563,64; znaleziono (M+H)⁺: 564,1.

P r z y k ł a d 13

Wyjściowy materiał (2,0 g, 5,90 mmol) dodano do zawiesiny wodorku sodu (354 mg, 8,86 mmol) w THF (40 ml) w 23°C. Następnie zawiesinę potraktowano chloromrówczanem allilu (1,135 ml, 8,25 mmol) w 23°C, po czym ogrzewano we wrzeniu przez 3 godziny. Zawiesinę ochłodzono, odsączono, a ciało stałe przemyto octanem etylu (100 ml) i przesącz zatężono. Surowy olej umieszczono w heksanie (100 ml) i trzymano w 4°C przez noc. Po zdekantowaniu rozpuszczalnika, jasnożółtą zawiesinę potraktowano CH2CI2 (20 ml) i strącono heksanem (100 ml). Po 10 minutach rozpuszczalnik zdekantowano ponownie. Operację powtórzono aż do pojawienia się białego ciała stałego. Białe ciało stałe odsączono i wysuszono uzyskując związek 29 (1,80 g, 65%) w postaci białego ciała stałego.

PL 215 769 B1 ¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,74(d, J=7,5 Hz, 2H), 7,62(d, J=6,9 Hz, 2H), 7,33(t, J=7,5 Hz, 2H), 7,30(t, J=6,3 Hz, 2H), 5,71(d, J=7,8 Hz, 1H), 4,73(d, J=7,8 Hz, 2H), 4,59(m, 1H), 4,11(1, J=6,0 Hz, 1H), 3,17(dd, J=6,0 Hz, J=2,7 Hz, 2H), 3,20(dd, J=5,4 Hz, J=2,1 Hz, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 173,6, 152,7, 144,0, 139,7, 137,8, 126,0, 125,6, 123,4, 118,3, 73,4, 52,4, 45,5, 35,8, 33,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C20H18CI3NO4S: 474,8; znaleziono (M+Na)⁺: 497,8.

P r z y k ł a d 14

Me

Mieszaninę związku 25 (585 mg, 1,03 mmol) i związku 29 (1,47 mg, 3,11 mmol) azeotropowano z bezwodnym toluenem (3 x 10 ml). Do roztworu 25 i 29 w bezwodnym CH2CI2 (40 ml) dodano DMAP (633 mg, 5,18 mmol) i EDOHCI (994 mg, 5,18 mmol) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 3 godziny. Mieszaninę podzielono pomiędzy nasycony wodny roztwór kwaśnego węglanu sodu (50 ml) i warstwy rozdzielono. Warstwę wodną przemyto CH2CI2 (50 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Surowy produkt oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (octan etylu/heksan 1:3) otrzymując 30 (1,00 g, 95%) w postaci jasnokremowo-żółtego ciała stałego.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72(m, 2H), 7,52(m, 2H), 7,38(m, 2H), 7,28(m, 2H), 6,65(s, 1H), 6,03(m, 1H), 5,92(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,79(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,39(m, 1H), 5,29(dq, J=10,3 Hz, J=1,5 Hz, 1H), 5,10(s, 2H), 4,73(d, J=11,9 Hz, 1H), 4,66(d, J=11,9 Hz, 1H), 4,53(m, 1H), 4,36-3,96(m, 9H), 3,89(t, J=6,4 Hz, 1H), 3,71(s, 3H), 3,55(s, 3H), 3,33(m, 1H), 3,20(m, 2H), 2,94(m, 3H), 2,59(m, 1H), 2,29(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,02(s, 3H),1,83(dd, J=16,0 Hz, J=11,9 Hz, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 169,7, 154,0, 148,8, 148,4, 145,7, 144,5, 140,9, 139,0, 133,7,

130,9, 130,6, 127,6, 127,0, 124,8, 124,6, 124,1, 120,8, 119,9, 118,2, 117,7, 117,3, 112,7, 112,1,

101,3, 99,2, 74,7, 73,9, 64,4, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 55,4, 53,3, 46,7, 41,4, 36,5, 34,7, 31,5, 26,4, 24,9,

22,6, 15,7, 14,0, 9,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C51H53CI3N4O10S: 1020,4; znaleziono (M+H)⁺: 1021,2.

P r z y k ł a d 15

31

Do roztworu 30 (845 mg, 0,82 mmol), kwasu octowego (500 mg, 8,28 mmol) i (PPh3)2PdCI2 (29 mg, 0,04 mmol) w bezwodnym CH2CI2 (20 ml) w 23°C wkroplono Bu3SnH (650 mg, 2,23 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano w tej temperaturze przez 15 min., z bąblowaniem. Surowy produkt potraktoPL 215 769 B1 wano wodą (50 ml) i ekstrahowano CH2CI2 (3 x 50 ml). Warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Surowy produkt oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (octan etylu/heksan w gradiencie od 1:5 do 1:3) uzyskując związek 31 (730 mg, 90%) w postaci jasnokremowo-żółtego ciała stałego.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72(m, 2H), 7,56(m, 2H), 7,37(m, 2H), 7,30(m, 2H), 6,65(s, 1H), 5,89(s, 1H), 5,77(s, 1H), 5,74(s, 1H), 5,36(d, J=5,9 Hz, 1H), 5,32(d, J=5,9 Hz, 1H), 5,20(d, J=9,0, 1H), 4,75(d, J=12,0 Hz, 1H), 4,73(m, 1H), 4,48(d, J=11,9 Hz, 1H), 4,08(m, 4H), 3,89(m, 1H), 3,86(t, J=6,2 Hz, 1H), 3,70(s, 3H), 3,69(s, 3H), 3,38(m, 1H), 3,25(m, 1H), 3,02-2,89(m, 4H), 2,67(s, 1H), 2,61(s, 1H), 2,51(dd, J=14,3 Hz, J=4,5 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,23(s, 3H), 1,95(s, 3H), 1,83(m, 1H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,2, 152,5, 148,1, 146,2, 144,4, 144,3, 143,3, 139,6, 134,6,

129,7, 129,6, 126,2, 125,6, 123,4, 123,3, 121,6, 118,5, 116,3, 110,7, 110,2, 105,1, 99,4, 98,5, 75,2,

73,3, 61,7, 58,4, 57,9, 56,3, 56,1, 55,1, 54,7, 53,9, 51,9, 45,2, 40,1, 35,6, 33,3, 24,8, 23,3, 14,5, 7,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C48H49CI3N4O10S: 980,3; znaleziono (M+H)⁺: 981,2.

Do roztworu 31 (310 mg, 0,32 mmol) w bezwodnym CH2CI2 (15 ml) w -10°C dodano roztwór bezwodnika benzenoseleninowego 70% (165 mg, 0,32 mmol) w bezwodnym CH2CI2 (7 ml) przez kaniulę, utrzymując temperaturę -10°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w -10°C przez 5 min. Dodano nasycony roztwór kwaśnego węglanu sodu (30 ml) w tej temperaturze. Warstwę wodną przemyto dalszymi porcjami CH2CI2 (40 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Surowy produkt oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (octan etylu/heksan w gradiencie od 1:5 do 1:1) otrzymując 32 (287 mg, 91%, HPLC: 91,3%) w postaci jasnokremowo-żółtego ciała stałego, jako mieszaninę dwóch izomerów (65:35), które użyto w następnym etapie.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ (mieszanina izomerów) 7,76(m, 4H), 7,65(m, 4H), 7,39(m, 4H), 7,29(m, 4H), 6,62(s, 1H), 6,55(s, 1H), 5,79-5,63(m, 6H), 5,09(s, 1H), 5,02(d, J=6,0 Hz, 1H), 4,99(d, J=6,0 Hz, 1H), 4,80-4,63(m, 6H), 4,60(m, 1H), 4,50(m, 1H), 4,38(d, J=12,8 Hz, J=7,5 Hz, 1H), 4,27(dd, J=12,8 Hz, J=7,5 Hz, 1H), 4,16-3,90(m, 10H), 3,84(s, 3H), 3,62(s, 3H), 3,50(s, 3H), 3,49(s, 3H), 3,33-2,83(m, 14H), 2,45-2,18(m, 2H), 2,21(s, 6H), 2,17(s, 6H), 1,77(s, 6H), 1,67(m, 2H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ (mieszanina izomerów) 168,6, 168,4, 158.6, 154,8, 152,8, 152,5,

147,3, 147,2, 146,8, 144,1, 144,0, 140,8, 139.7, 137,1, 129,8, 129,3, 128,4, 128,7, 126,5, 125,5,

123.7, 123,6, 123,5, 123,4, 122,2, 121,3, 118,3, 115,8, 115,5, 110,2, 106,9, 103,5, 103.2, 100,1, 99,6,

97,9, 97,7, 93,8, 73,4, 70,9, 69,2, 64,9, 62,5, 59,3, 58,9,58,4, 56,7, 56,3, 56,2, 55,4, 55,2, 55,1, 54,9,

54.7, 54,3, 54,1, 53,8, 52,8, 45,5, 40,5, 40,0, 39,8, 35,8, 35,5, 33,9, 33,7, 30,1, 28,8, 24,2, 24,1, 21.2,

14,5, 14,4, 12,7,6, 0,5,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C48H49CI3N4O11S: 996,3; znaleziono (M+H)⁺: 997,2.

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 17

Kolbę reakcyjną wygrzano dwukrotnie w płomieniu, przedmuchano kilkakrotnie pod próżnią/argonem i trzymano w atmosferze argonu do reakcji. Do roztworu DMSO (39,1 ml, 0,55 mol, 5 równoważników) w bezwodnym CH2CI2 (4,5 ml) dodano wkraplając bezwodnik triflanowy (37,3 ml, 0,22 mol, 2 równoważniki) w -78°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w -78°C przez 20 minut, następnie dodano roztwór 32 (110 mg, 0,11 mmol, HPLC: 91,3%) w bezwodnym CH2CI2 (1 ml podczas dodawania i 0,5 ml do przemycia) w -78°C, przez kaniulę. Podczas dodawania utrzymywano temperaturę w -78°C w obydwu kolbach, a kolor uległ zmianie z żółtego na brązowy. Mieszaninę reakcyjną mieszano w -40°C przez 35 minut. Podczas tego okresu roztwór zmienił się z żółtego na ciemnozielony. W tym czasie dodano wkraplając ⁱPr2NEt (153 ml, 0,88 mol, 5 równoważników) i mieszaninę reakcyjną trzymano w 0°C przez 45 minut, w którym to czasie kolor uległ zmianie na brązowy. Następnie wkroplono t-butanol (41,6 ml, 0,44 mol, 4 równoważników) i 2-^tbutylo-1,1,3,3-tetrametyloguanidynę (132,8 ml, 0,77 mol, 7 równ.) i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 40 minut. Po tym czasie wkroplono bezwodnik octowy (104,3 ml, 1,10 mol, 10 równoważników) i mieszaninę reakcyjną trzymano w 23°C przez 1 godzinę. Następnie mieszaninę reakcyjną rozcieńczono CH2CI2 (20 ml) i przemyto nasyconym wodnym roztworem NH4CI (50 ml), kwaśnym węglanem sodu (50 ml) i chlorkiem sodu (50 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (eluent: octan etylu/heksan gradient od 1:3 do 1:2) uzyskując związek 33 (54 mg, 58%) w postaci ja snożółtego ciała stałego.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,85(s, 1H), 6,09(s, 1H), 5,99(s, 1H), 5,20(d, J=5,8 Hz, 1H), 5,14(d, J=5,3 Hz, 1H), 5,03(m, 1H), 4,82(d, J=12,2, 1H), 4,63(d, J=12,0 Hz, 1H), 4,52(m, 1H), 4,35-4,17(m, 4H), 3,76(s, 3H), 3,56(s, 3H), 3,45(m, 2H), 2,91(m, 2H), 2,32(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,12(m, 2H), 2,03(s, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,5, 167,2, 152,7, 148,1, 147,1, 144,5, 139,6, 139,1, 130,5, 129,0, 123,7, 123,5, 123,3, 118,8, 116,5, 112,1, 100,6, 97,8, 73,3, 60,5, 59,4, 59,2, 58,3, 57,6, 57,4,

56,1, 53,3, 53,1, 40,6, 40,0, 31,0, 22,2, 18,9, 14,4, 8,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H39CI3N4O11S: 842,1; znaleziono (M+H)⁺: 843,1.

P r z y k ł a d 18

PL 215 769 B1

Do roztworu 33 (12 mg, 0,014 mmol) w suchym dichlorometanie (1,2 ml) i acetonitrylu do HPLC (1,2 ml) dodano w 23°C jodek sodu (21 mg, 0,14 mmol) i świeżo przedestylowany (znad wodorku wapnia pod ciśnieniem atmosferycznym) chlorek trimetylosililowy (15,4 mg, 0,14 mmol). Mieszanina reakcyjna zmieniła barwę na pomarańczową. Po 15 minutach roztwór rozcieńczono dichlorometanem (10 ml) i przemyto świeżym nasyconym wodnym roztworem Na2S2O4 (3 x 10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Otrzymano związek 34 (13 mg, ilościowo) w postaci jasnożółtego ciała stałego, które użyto bez dalszego oczyszczania.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,85(s, 1H), 6,09(s, 1H), 5,99(s, 1H), 5,27(d, J=5,8 Hz, 1H), 5,14(d, J=5,3 Hz, 1H), 5,03(d, J=11,9 Hz, 1H), 4,82(d, J=122, 1H), 4,63(d, J=13,0 Hz, 1H), 4,52(m, 1H), 4,34(m, 1H), 4,27(bs, 1H), 4,18(m, 2H), 3,76(s, 3H), 3,56(s, 3H), 3,44(m, 1H), 3,42(m, 1H), 2,91(m, 2H), 2,32(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,03(s, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H35N4O10S: 798,1; znaleziono (M+H)⁺: 799,1.

Do roztworu 34 (13 mg, 0,016 mmol) w mieszaninie kwasu octowego/H2O (90:10; 1 ml) dodano pył cynkowy (5,3 mg, 0,081 mmol) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w 70°C przez 6 godz. Po tym czasie, ochłodzono do 23°C, rozcieńczono CH2CI2 (20 ml), przemyto wodnym nasyconym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i wodnym roztworem Et3N (15 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash na żelu krzemionkowym-NH2 (eluent: octan etylu/heksan, gradient od 0:100 do 50:50) i uzyskano związek 35 (6,8 mg, 77% po dwóch etapach) w postaci jasnożółtego ciała stałego.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,51(s, 1H), 6,03(dd, J=1,3 Hz, J=26,5 Hz, 2H), 5,75(bs, 1H), 5,02(d, J=11,6 Hz, 1H), 4,52(m, 1H), 4,25(m, 2H), 4,18(d, J=2,5 Hz, 1H), 4,12(dd, J=1,9 Hz, J=11,5 Hz, 1H), 3,77(s, 3H), 3,40(m, 2H), 3,26(t, J=6,4 Hz, 1H), 2,88(m, 2H), 2,30-2,10(m, 2H), 2,30(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,18(s, 3H), 2,02(s, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 174,1, 168,4, 147,8, 145,4, 142,9, 140,8, 140,1, 131,7, 130,2,

129,1, 128,3, 120,4, 118,3, 117,9, 113,8, 111,7, 101,7, 61,2, 59,8, 59,2, 58,9, 54,4, 53,8, 54,4, 41,3,

41,5, 34,1, 23,6, 20,3, 15,5, 9,4.

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H34N4O8S: 622,7; znaleziono (M+H)⁺: 623,2.

PL 215 769 B1

Roztwór jodku 4-karboaldehydo-N-metylopirydyniowego (378 mg, 1,5 mmol) w bezwodnym DMF (5,8 ml) zadano bezwodnym toluenem (2 x 10 ml) celem usunięcia wody drogą azeotropowego oddestylowywania toluenu. Do tego pomarańczowego roztworu dodano przez kaniulę, w 23°C, roztwór 35 (134 mg, 0,21 mmol), uprzednio obrabiany bezwodnym toluenem (2 x 10 ml), w bezwodnym CH2CI2 (destylowanym znad CaH2, 7,2 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godziny. Następnie dodano kroplami DBU (32,2 μΙ, 0,21 mmol) w 23°C i całość mieszano w 23°C przez 15 minut. Do mieszaniny reakcyjnej dodano świeżo przygotowany nasycony wodny roztwór kwasu szczawiowego (5,8 ml) i całość mieszano przez 30 minut w 23°C. Następnie mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C i porcjami dodawano NaHCO3, po czym dodano wodny nasycony roztwór NaHCO3. Mieszaninę ekstrahowano Et2O. Do warstwy wodnej dodano K2CO3 i warstwę ekstrahowano Et2O. Połączone warstwy organiczne wysuszono MgSO4 i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (AcOEt/heksan od 1/3 do 1/1) dostarczając związek 36 (77 mg, 57%) w postaci jasnożółtego ciała stałego.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,48(s, 1H), 6,11(d, J=1,3 Hz, 1H), 6,02(d, J=1,3 Hz, 1H), 5,70(bs, 1H), 5,09(d, J=11,3 Hz, 1H), 4,66(bs, 1H), 4,39(m, 1H), 4,27(d, J=5,6 Hz, 1H), 4,21(d, J=10,5 Hz, 1H), 4,16(d, J=2,6 Hz, 1H), 3,76(s, 3H), 3,54(d, J=5,1 Hz, 1H), 3,42(d, J=8,5 Hz, 1H), 2,88-2,54(m, 3H), 2,32(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,14(s, 3H), 2,04(s, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 186,7, 168,5, 160,5, 147,1, 146,4, 142,9, 141,6, 140,7, 130,4, 129,8, 121,7 (2C), 120,0, 117,8, 117,1, 113,5, 102,2, 61,7, 61,4, 60,3, 59,8, 58,9, 54,6, 41,6, 36,9,

29,7, 24,1, 20,3, 15,8, 14,1, 9,6.

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H31N3O9S: 621,7; znaleziono (M+H)⁺: 622,2.

P r z y k ł a d 21

Do roztworu 36 (49 mg, 0,08 mmol) i 2-[3-hydroksy-4-metoksyfenylo]etyloaminy (46,2 mg, 0,27 mmol) w etanolu (2,5 ml) dodano żel krzemionkowy (105 mg) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 14 godz. Rozcieńczono heksanem i naniesiono na kolumnę chromatograficzną (octan etylu/heksan z 1/3 do 1/1) uzyskując Et-770 (55 mg, 90%) w postaci jasnożółtego ciała stałego.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,60(s, 1H), 6,47(s, 1H), 6,45(s, 1H), 6,05(s, 1H), 5,98(s, 1H), 5,02(d, J=11,4 Hz, 1H), 4,57(bs, 1H), 4,32(bs, 1H), 4,28(d, J=5,3 Hz, 1H), 4,18(d, J=2,5 Hz, 1H), 4,12(dd, J=2,1 Hz, J=11,5 Hz, 1H), 3,78(s, 3H), 3,62(s, 3H), 3,50(d, J=5,0 Hz, 1H), 3,42(m, 1H), 3,10(ddd, J1=4,0 Hz, J2=10,0Hz, J1=11,0Hz, 1H), 2,94(m, 2H), 2,79(m, 1H), 2,61(m, 1H), 2,47(m, 1H), 2,35(m, 1H), 2,32(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,09(m, 1H), 2,04(s, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H42N4O10S: 770,7; znaleziono (M+H)⁺: 771,2.

P r z y k ł a d 22

PL 215 769 B1

Do roztworu 21 (22 mg, 0,042 mmol) w CH2CI2 (0,8 ml) dodano bezwodnik ftalowy (6,44 mg, 0,042 mmol) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godz. w 23°C. Następnie, dodano karbonylodiimidazol (1 mg, 0,006 mmol) i mieszaninę mieszano w 23°C przez 7 godz. Następnie dodano karbonylodiimidazol (5,86 mg, 0,035 mmol) i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez kolejne 17 godz. Roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (15 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 2:1) i uzyskano 27 (26,4 mg, 96%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,58 (octan etylu).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,73-7,64(m, 4Η), 6,40(s, 1H), 6,12-6,01(m, 1H), 5,63(s, 1H), 5,58(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,37(dd, J1=1,8 Hz, J2=17,4 Hz), 5,23(dd, J1=1,8 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,12(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,22-4,15(m, 3H), 4,08(d, J=1,8 Hz, 1H), 3,68(s, 3H), 3,59-3,55(m 2H), 3,35(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,27-3,16(m, 2H), 3,05(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,64(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,09(s, 3H), 1,80(dd, J1=11,4 Hz, J2=15 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 167,7, 148,9, 146,4, 144,2, 142,6, 139,5, 134,0, 133,5, 132,0, 131,0, 128,3, 123,0, 121,3, 120,9, 118,1, 117.5, 116,8, 113,6, 112,4, 100,8, 74,5, 60,6, 60,5, 57,7,

56,6, 55,6, 55,5, 42,3, 41,7, 26,6, 25,5, 15,9, 9,46.

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H35N4O7: 648,79; znaleziono (M+H)⁺: 649,3.

P r z y k ł a d 23

Do roztworu 27 (26 mg, 0,041 mmol) w CH2CI2 dodano kwas octowy (11 ml), (PPh3)2PdCI2 (36 mg) i Bu3SnH (28 ml, 0,10 mmol) w 23°C. Po 2 godzinach mieszania w tej temperaturze reakcję naniesiono na kolumnę typu flash (SiO2, gradient: heksan do heksan:octan etylu 2:1) i uzyskano 28 (24,7 mg,

99%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,33 (heksan:octan etylu 2:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,75-7,70(m, 2H), 7,69-7,65(m, 2H), 6,39(s, 1H), 5,82(bs, 1H), 5,50(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,0(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,45(bs, 1H), 4,23-4,19(m, 2H), 4,10-4,09(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,60-3,48(m, 2H), 3,36-3,33(m, 1H), 3,26-3,20(m, 1H), 3,14-3,08(m, 1H), 3,98(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,61(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,06(s, 3H), 1,85(dd, J1=12 Hz, J2=15,3 Hz).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 167,8, 146,4, 145,1, 143,9, 142,7, 137,1, 133,5, 131,9, 130,8,

128,4, 122,9, 120,8, 118,0, 116,8, 114,0, 113,4, 106,4, 100,4, 60,6, 60,5, 57,8, 56,6, 55,5, 55,2, 42,6, 41,5, 25,6, 25,5, 15,8, 8,9.

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H32N4O7: 608,6; znaleziono (M+H)⁺: 609,2. P r z y k ł a d 24

PL 215 769 B1

Do roztworu 28 (357 mg, 0,058 mmol) w CH2CI2 (3 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (41,58 μΙ, 0,58 mmol) i pirydynę (47,3 μΙ, 0,58 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (15 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 60:40) dostarczając ftalascydynę (354 mg, 94%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,37 (CH3CN:H2O 7:3, RP-18).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72-7,68(m, 2H), 7,67-7,63(m, 2H), 6,38(s, 1H), 5,69(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,64(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,30(bs, 1H), 4,25-4,21 (m, 2H), 4,02(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,64-3,62(m, 5H), 3,33(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,21-3,16(m, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,76(dd, J1=1,8 HZ, J2=15,6 Hz, 1H), 2,63(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0(s, 3H), 1,73(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8,

130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0 56,3, 55,4, 41,6, 41,5, 26,5,

25,2, 20,2, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H34N4O8: 650; znaleziono (M+H)⁺: 651.2.

Do roztworu 17 (300 mg, 0,432 mmol) w CH2CI2 (2 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (30,7 μΙ, 0,432 mmol) i pirydynę (34,9 μΙ, 0,432 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godz. w tej temperaturze, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (15 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 42 (318 mg, 100%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnej reakcji bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,5 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3), δ 6,66(s, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,83(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,42(t, J=6,6 Hz, 1H), 5,07(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,98(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,16(d, J=1,8 Hz, 1H), 4,11(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,98(bs, 1H), 3,73-3,61 (m, 2H), 3,64(s, 3H), 3,52-3,48(m, 1H), 3,50(s, 3H), 3,33(d, J=9,6 Hz, 1H), 3,17-3,14(m, 1H), 2,97-2,87(m, 1H), 2,75-2,70(d, J=16,8 Hz, 1H), 2,26(s, 6H), 2,16(s, 3H), 1,96(s, 3H), 1,70(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 HZ, 1H), 1,33(S, 9H), 0,59(d, J=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 172,0, 168,3, 162,3, 148,2, 144,4, 140,4, 140,2, 130,9, 130,5,

125.3, 123,4, 120,8, 117,6, 112,7, 111,7, 101,4, 99,1, 79,2, 59,5, 58,8, 57,5, 57,4, 56,4, 55,5, 55,0,

41.3, 39,0, 28,2, 26,4, 24,6, 19,9, 18,4, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H49N5O10: 735,82; znaleziono (M+H)⁺: 736,3.

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 26

Do roztworu 42 (318 mg, 0,432 mmol) w CH2CI2 (2,16 ml), dodano kwas trifluorooctowy (1,33 ml, 17,30 mmol) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 3,5 godz. w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (60 ml) i ekstrahowano CH2CI2 (2 x 70 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono (siarczan sodu) i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, octan etylu:metanol 20:1) i uzyskano 43 (154 mg, 60%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,22 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3). δ 6,47(s, 1H), 6,22(bs, 1H), 5,95(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,08-4,06(m, 2H), 4,01(bs, 1H), 3,69(s, 3H), 3,49(d, J=3,6 Hz, 1H), 3,33(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,26-3,22(m, 1H), 2,95(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,80-2,76(m, 2H), 2,58(d, J=18Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,21(s, 3H), 1,96(s, 3H), 1,77(dd, J1=12,3 HZ, J2=15,6 HZ, 1H), 0,90(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 174,8, 169,0, 146,8, 144,4, 142,8, 140,5, 140,2, 131,1, 128,8,

120,8, 120,5, 117,1, 112,9, 111,6, 101,5, 60,3, 59,0, 56,5, 56,3, 55,6, 55,1, 50,2, 41,6, 39,5, 26,8,

26,3, 24,9, 20,2, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H37N5O7: 591,65; znaleziono (M+H)⁺: 592,3.

Do roztworu 43 (154 mg, 0,26 mmol) w CH2CI2 (1,3 ml) dodano izotiocyjanian fenylu (186 μΙ, 1,56 mmol) i mieszaninę mieszano w 23°C przez 2 godz. Reakcję zatężono w próżni, a pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan do heksan:octan etylu 1:1) i uzyskano 44 (120 mg, 63%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,41 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3). δ 8,17(s, 1H), 7,49-7,44(m, 3H), 7,31-7,24(m, 3H), 7,05(d, J=6,9Hz,

1H), 5,98(d, J=1,2Hz, 1H), 5,87(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,52(bs, 1H), 4,54(t, J=6,6 Hz, 1H), 4,15(d, J=2,1

Hz, 1H), 4,03(d, J=2,7 Hz, 2H), 3,80(bs, 1H), 3,66(s, 3H), 3,40(bs, 1H), 3,32(d, J=7,8 Hz, 1H), 3,16(d,

J=11,7 Hz, 1H), 2,82-2,61(m, 3H), 2,29(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,80(dd, J1=12,0

Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 0,62(d, J=6,0 Hz, 3H).

PL 215 769 B1 ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 178,5, 171,9, 168,7, 146,7, 144,5, 142.6, 140,6, 140,3, 136,3, 131,0, 129,9, 128,9, 126,7, 124,4, 120,9, 120.6, 117,7, 116,6, 112,7, 111,9, 101,4, 60,4, 58,7, 57,5, 56,1, 55,7, 55,1, 53,3, 41,4, 38,8, 26,3, 24,4, 20,2, 18,1, 15,3, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H42N6O7S: 726,3; znaleziono (M+H)⁺: 727,3.

P r z y k ł a d 28

ΟΜβ

Do roztworu 44 (120 mg, 0,165 mmol) w dioksanie (0,9 ml) dodano 5,3N mieszaninę HCI/dioksan (1,8 ml) i reakcję mieszano w 23°C przez 2,5 godz. Następnie, dodano CH2CI2 (10 ml) i H2O (5 ml) i warstwę organiczną zdekantowano. Fazę wodną zaalkalizowano nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (20 ml) (pH=8) w 0°C, po czym ekstrahowano CH2CI2 (2 x 15 ml). Połączone ekstrakty organiczne wysuszono (siarczan sodu) i zatężono w próżni uzyskując 45 (75 mg, 87%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnej reakcji bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,23 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,43(s, 1H), 5,94(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,87(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,10(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,98(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,91(bs, 1H), 3,69(s, 3H), 3,34-3,25(m, 2H), 3,05(dd, J1=1,8 Hz, J2=8,1 Hz, 1H), 2,80-2,73(m, 3H), 2,46(d, J=18 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,20(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,79(dd, J1=12,6 Hz, J2=16,2 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,7, 146,7, 144,4, 142,9, 140,4, 130,4, 128,9, 121,1, 120,8,

117,8, 116,8, 113,6, 111,5, 101,4, 67,6, 60,5, 59,8, 58,4, 56,6, 55,8, 55,3, 43,6, 41,8, 31,3, 25,6, 20,2,

15,6, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C28H32N4O6: 520,58; znaleziono (M+H)⁺: 521,3.

P r z y k ł a d 29

Do roztworu 45 (10 mg, 0,02 mmol) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano bezwodnik ftalowy (2,84 mg, 0,02 mmol) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godz. w 23°C. Następnie dodano karbonylodiimidiazol (0,5 mg, 0,003 mmol) i mieszaninę mieszano w 23°C przez 7 godz. Następnie dodano karbonylodiimidazol (2,61 mg, 0,016 mmol) i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez dodatkowe 17 godz. Roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 60:40) i uzyskano ftalascydynę (11,7 mg, 93%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,37 (CH3CN:H2O 7:3, RP-18).

PL 215 769 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72-7,68(m, 2H), 7,67-7,63(m, 2H), 6,38(s, 1H), 5,69(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,64(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,30(bs, 1H), 4,25-4,21(m, 2H), 4,02(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,64-3,62(m, 5H), 3,33(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,21-3,16(m, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,76(dd, J1=1,8 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 2,63(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,0(s, 3H), 1,73(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8,

130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6, 26,5, 25,2, 20,2, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H34N4O8: 650; znaleziono (M+H)⁺: 651,2.

Do roztworu 25 (18 mg, 0,032 mmol) w DMF (0,05 ml) dodano w 0°C katalityczną ilość DMAP (0,5 mg, 0,004 mmol), imidazol (5 mg, 0,08 mmol) i chlorek tert-butylodifenylosililowy (12,5 μΙ, 0,048 mmol), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 6 godzin w 23°C. Dodano wodę (10 ml) w 0°C i warstwę wodną ekstrahowano mieszaniną heksan:octan etylu 1:10 (2 x 10 ml). Warstwę organiczną wysuszono (siarczan sodu), przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan.octan etylu 3:1) uzyskując 26 (27 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,29 (heksan:octan etylu 3:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,61-7,58(m, 2H), 7,42-7,28(m, 8H), 6,71 (s, 1H), 6,19-6,02(m, 1H), 5,78(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,64(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,40(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,27(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,13(s, 2H), 4,45(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,24(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,17-4,06(m, 3H), 3,75(s, 3H), 3,64(dd, J1=2,4 Hz, J2=9,9 Hz, 1H), 3,59(s, 3H), 3,42-3,21 (m, 4H), 3,10(dd, J1=8,1 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,70(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,26(s, 3H), 2,11(s, 3H), 2,08-1,89(m, 1H), 0,87(s, 9H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 148,5, 148,3, 148,1, 144,0, 139,0, 135,6, 135,4, 133,8, 133,1,

132,6, 130,5, 130,3, 129,6, 129,4, 127,5, 127,4, 125,1, 124,3, 121,6, 118,5, 117,5, 112,9, 111,7,

100,8, 99,2, 74,0, 67,7, 61,5, 59,6, 59,0, 57,7, 57,1, 55,4, 41,6, 29,6, 26,6, 25,5, 18,8, 15,8, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C47H55N3O7Si: 801,3; znaleziono (M+H)⁺: 802,3.

P r z y k ł a d 31

Do roztworu 26 (7 mg, 0,0087 mmol) w CH2CI2 (0,15 ml), dodano kwas octowy (2,5 μΙ, 0,044 mmol)), (PPh3)2PdCI2 (0,5 mg, 6,96 x 10^-4 mmol) i Bu3SnH (3,5 μΙ, 0,013 mmol) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w tej temperaturze przez 1 godz. Roztwór rozcieńczono mieszaniną heksan:octan etylu 5:1 (0,5 ml), naniesiono na kolumnę typu flash (SiO2, gradient 5:1 heksan.octan etylu) i uzyskano

ET-11 (5 mg, 75%) w postaci białego ciała stałego.

100

PL 215 769 B1

Rf: 0,36 (heksan:octan etylu 1:5, krzemionka).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,56(m, 2H), 7,41-7,25(m, 8H), 6,67(s, 1H), 5,72(d, J=1,0 Hz, 1H), 5,58(d, J=1,0 Hz, 1H), 5,51(s, 1H), 5,38(d, J=5,75 Hz, 1H), 5,16(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,57(d, J=2,9 Hz, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,09(m, 1H), 3,72(s, 3H), 3,71(s, 3H), 3,68(dd, J1=2,1 Hz, J2=10,4 Hz, 1H), 3,38-3,26(m, 3H), 3,11(dd, J1=2,5 Hz, J2=15,7 Hz, 1H), 3,01(dd, J1=8,9 Hz, J2=17,9 Hz, 1H), 2,70(d, J=17,9 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,06(s, 3H), 1,89(dd, J1=12,1 Hz, J2=15,7 Hz, 1H), 0,9(s, 9H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 149,0, 147,4, 145,3, 144,3, 136,3, 135,7, 135,4, 133,2, 130,9, 130,5, 129,6, 129,5, 127,5, 125,0, 118,6, 112,5, 112,1, 105,7, 100,5, 99,8, 68,5, 61,5, 59,7, 58,8, 57,7, 56,9, 56,5, 55,4, 41,7, 26,6, 26,2, 25,5, 18,9, 15,8, 14,2, 8,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C44H51N3O7Si: 761; znaleziono (M+H)⁺: 762.

Roztwór 2 (3,0 g, 5,46 mmol) i izotiocyjanian fenylu (3,92 ml, 32,76 mmol) w CH2CI2 (27 ml) mieszano w 23°C przez 1,5 godz. Mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy CH2CI2 (10 ml) i H2O (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient: heksan do 2:3 heksan:octan etylu) i otrzymano 3 (3,29 g, 88%) w postaci żółtego ciała stałego.

Rf: 0,27 (ACN:H2O 3:2, RP-C18).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,77(bs, 1H), 7,42-7,11(m, 5H), 6,65(d, 1H), 6,29(s, 1H), 5,6-5,5(m, 1H), 4,19-4,14(m, 2H), 4,08(d, 1H), 3,92(s, 3H), 3,87-3,65(m, 6H), 3,77(s, 3H), 3,37-2,98(m, 8H), 2,50(d, 1H), 2,31(s, 3H), 2,20(s, 3H), 1,96(d, 1H), 1,87(s, 3H), 1,81-1,75(m, 1H), 0,96(d, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 185,7, 180,9, 178,9, 172,0, 155,7, 147,1, 143,2, 142,4, 136,0,

135,1, 130,5, 129,9, 129,3, 128,5, 126,9, 124,4, 120,2, 117,4, 116,3, 77,1, 60,9, 58,6, 56,2, 55,8, 55,0,

54,6, 53,5, 41,7, 40,3, 25,1, 24,5, 18,4, 15,8, 8,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H40N6O6S: 684,8; znaleziono (M+H)⁺: 685,2.

Roztwór 3 (0,143 g, 0,208 mmol) w 6,5M mieszaninie HCI/dioksan (150 ml) mieszano w 23°C przez 6 godz. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodano toluen (3 ml) i warstwę organiczną zdekantowano. Pozostałość podzielono pomiędzy nasycony wodny roztwór kwaśnego węglanu sodu (3 ml) i CHCI3 (3 x 3 ml). Warstwę organiczną wysuszono i zatężono uzyskując tytułowy związek w postaci mieszaniny 4 i 6 (4:6 90:10), która powoli cyklizowała do 6 w trakcie przechowywania.

Rf: 0,4 (octan etylu:metanol 5:1, krzemionka).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,45(s, 1H), 4,16(m, 1H), 4,02(d, 1H), 3,96(s, 3H), 3,79(m, 2H),

3,75(s, 3H), 3,35(m, 1H), 3,20-3,00(m, 3H), 2,87(d, 1H), 2,75(d, 1H), 2,43(d, 1H), 2,34(s, 3H), 2,30(s,

3H), 1,93(s, 3H), 172-1,5(m, 3H).

PL 215 769 B1

101

ESI-MS m/z: obliczono dla C26H30N4O5: 478,5; znaleziono (M+H)⁺: 479,2.

Roztwór 3 (0,143 g, 0,208 mmol) w 6,5 M mieszaninie HCI/dioksan (150 ml) mieszano w 23°C przez 1 godz. Odparowanie rozpuszczalnika dało pozostałość, którą oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (octan etylu/metanol/trietyloamina 100:25:0,1) i otrzymano 6 (80 mg, 83%) w postaci żółtego ciała stałego.

Rf: 0,26 (ACN:H2O 3:2, RP-C18).

¹H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 6,46(s, 1H), 5,9(bs, 1H) 4,67(dd, J=18,3 Hz, J=7,8 Hz, 1H), 4,24(d, 1H), 4,16(s, 3H), 3,93(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,8(m, 2H), 3,77(s, 3H), 3,45(m, 2H), 3,08(dd, J=17,9 Hz, J=3,6 Hz, 1H), 2,78(m, 1H), 2,55(d, 1H), 2,3(m, 1H), 2,3(s, 3H), 2,28(s, 3H), 1,90(s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 186,2, 162,1, 154,9, 146,9, 145,3, 143,0, 130,1, 129,4, 128,1, 125,0, 121,4, 116,4, 116,2, 66,6, 60,7, 60,7, 60,1, 59,6, 58,8, 55,6, 54,9, 41,9, 25,3, 24,7, 15,7, 8,9.

ESI-MS m/z: obliczono dla C26H28N4O4: 460,5; znaleziono (M+H)⁺: 461.1.

Do roztworu 3 (2,38 g, 3,47 mmol) w dioksanie (5 ml) dodano 5,3M HCI w dioksanie (34 ml) i reakcję mieszano w 23°C przez 45 minut. Następnie dodano Ac2O (51 ml, 539,5 mmol) i mieszaninę mieszano przez 4 godz. Reakcję ochłodzono do 0°C i podzielono pomiędzy nasycony wodny Na2CO3 (300 ml) i octan etylu (300 ml) w tej temperaturze. Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient CH2CI2 do CH2CI2:octan etylu 1:2) otrzymując 5 (1,75 g, 97%) w postaci żółtego ciała stałego.

Rf: 0,53 (ACN:H2O 3:2, RP-C18).

¹H NMR (300 MHz,CDCI3): δ 6,51(s, 1H), 5,98(bs, 1H), 4,84(dd, 1H), 4,17(d, 1H), 4,00(d, 1H), 3,99(s, 3H), 3,85(bs, 1H), 3,81(m, 1H), 3,74(s, 3H), 3,70(d, 1H), 3,23(m, 1H), 3,11(dd, 1H), 3,09(m, 1H), 2,93(m, 2H), 2,44(d, 1H), 3,67(s, 3H), 2,25(s, 3H), 1,70(s, 3H), 1,60-1,50(m, 2H), 1,29(s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 185,9, 180,8, 169,9, 160,2, 156,2, 147,0, 143,1, 140,4, 136,1,

130,6, 129,6, 127,9, 120,4, 117,2, 61,0, 60,7, 58,6, 56,1, 55,7, 55,1, 54,3, 41,8, 41,1, 25,7, 23,9, 22,2,

15,7, 8,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C28H32N4O6: 520,6; znaleziono (M+H)⁺: 521.1.

102

PL 215 769 B1

Do roztworu 5 (1,75 g, 3,36 mmol) w CH2CI2 (17 ml) dodano w 0°C diizopropyloetyloaminę (11,7 ml, 67,23 mmol), DMAP (20 mg, 0,17 mmol) i eter bromometylometylowy (4,11 ml, 50,42 mmol). Po 6 godz. w 23°C reakcję podzielono pomiędzy CH2CI2 (50 ml) i wodny nasycony roztwór kwaśnego węglanu sodu (25 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN/H2O 1/1) otrzymując 7 (1,32 g, 70%) w postaci żółtego ciała stałego.

Rf: 0,34 (ACN:H2O 2:3, RP-C18).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,74(s, 1H), 5,14(s, 2H), 4,82(m, 1H), 4,22(d, 1H), 4,00(s, 3H), 4,0(m, 1H), 3,83(m, 2H), 3,7(s, 3H), 3,58(s, 3H), 3,4(m, 1H), 3,2-2,95(m, 6H), 2,43(d, 1H), 2,37(s, 3H), 2,22(s, 3H), 1,89(s, 3H), 1,5-1,4(m, 2H), 1,31(s, 3H).

¹³C NMR (75 MHZ, CDCI3): δ 185,9, 180,7, 169,6, 156,2, 148,9, 148,5, 140,3, 136,2, 131,3,

130,1, 127,7, 124,6, 123,7, 117,3, 99,5, 99,2, 60,9, 59,7, 58,8, 57,7, 56,4, 55,7, 55,0, 54,2, 51,0, 41,6, 41,0, 40,5, 25,5, 23,9, 22,3, 19,3, 15,6, 14,6, 8,6.

ESI-MS m/z: obliczono dla C30H36N4O7: 564,6; znaleziono (M+H)⁺: 565,3.

Do roztworu 7 (0,37 g, 0,65 mmol) w metanolu (74 ml) w 0°C dodano 1M wodorotlenek sodu (130 ml). Reakcję mieszano przez 15 minut, po czym zadano w 0°C 6M HCI do pH=5. Mieszaninę ekstrahowano octanem etylu (3 x 50 ml), połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1/1) uzyskując 8 (232 mg, 65%) w postaci żółtego oleju.

Rf: 0,5 (ACN:H2O 3:2, RP-C18).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,75(s, 1H), 5,15(s, 2H), 4,86(m, 1H), 4,26(d, 1H), 4,01(d, 1H), 3,88-3,81(m, 2H), 3,70(s, 3H), 3,58(s, 3H), 3,39(m, 1H), 3,27-3,21(m, 1H), 3,18-3,08(m, 2H), 3,03-2,97(m, 1H), 2,47(d, 1H), 2,37(s, 3H), 2,22(s, 3H), 1,90(s, 3H), 1,57-1,46(m, 2H), 1,33(s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 185,3, 180,6, 175,9, 170,1, 151,5, 148,9, 148,6, 143,3, 133,7, 131,5, 129,9, 124,7, 123,5, 117,1, 117,0, 99.2, 59,8, 58,7, 57,8, 56,3, 55,3, 54,9, 54,3, 41,5, 40,7,

29,6, 25,5, 24,4, 22,2, 20,7, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z: obliczono dla C29H34N4O7: 550,6; znaleziono (M+H)⁺: 551,2.

PL 215 769 B1

103

Do odgazowanego roztworu związku 8 (240 mg, 0,435 mmol) w DMF (30 ml) dodano 10% Pd/C (48 mg) i reakcję mieszano pod H2 (ciśnienie atmosferyczne) przez 1 godz. Reakcję przesączono przez warstwę celitu pod argonem jako bezbarwny roztwór do naczynia Schlenka zawierającego Cs2CO3 (240 mg, 0,739 ml). Następnie dodano bromochlorometan (0,566 ml, 8,71 mmol). Naczynie szczelnie zamknięto i całość mieszano w 90°C przez 3 godz. Reakcję ochłodzono, przesączono przez celit i przemyto CH2CI2. Warstwę organiczną zatężono i wysuszono (siarczan sodu) uzyskując 9 w postaci brązowego oleju, który użyto w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,36 (SiO2, heksan:octan etylu 1:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,71(s, 3H), 5,89(d, 1H), 5,81(d, 1H), 5,63(bs, 1H), 5,33(d, 1H), 5,17(d, 1H), 4,97(m, 1H), 4,20(d, 1H), 4,09(m, 1H), 3,99(m, 1H), 3,68(m, 1H), 3,65(s, 6H), 3,59-3,47(m, 4H), 3,37-3,27(m, 2H), 3,14-2,97(m, 2H), 2,62(d, 1H), 2,32(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,08(s, 3H), 1,72(m, 1H), 1,36(s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 169,8, 149,1, 147,4, 145,5, 136,2, 130.9, 130,8, 125,0, 122,9,

117,7, 112,6, 111,8, 106,4, 100,8, 99,8, 59,8, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,5, 55,2, 41,6, 40,1, 29,6, 25,9, 25,0, 22,6, 15,6, 8,8.

ESI-MS m/z: obliczono dla C30H36SiN4O7: 564,6; znaleziono (M+H)⁺: 565,3.

P r z y k ł a d 39

Do kolby zawierającej 9 (245 mg, 0,435 mmol) w DMF (4 ml) dodano w 0°C węglan cezu (425 mg, 1,30 mmol) i bromek allilu (376 μΙ, 4,35 mmol), i mieszaninę mieszano w 23°C przez 1 godz. Reakcję przesączono przez warstwę celitu i podzielono pomiędzy CH2CI2 (25 ml) oraz H2O (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono (siarczan sodu) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując pozostałość, którą oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, CHCI3:octan etylu 1:2) otrzymując 10 w postaci żółtego oleju (113 mg, 43%).

Rf: 0,36 (heksan:octan etylu 1:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,74(s, 1H), 6,3-6,0(m, 1H), 5,94(d, 1H), 5,87(d, 1H), 5,43-5,36(m, 2H), 5,22(s, 2H), 5,00(m, 1H), 4,22(m, 1H), 4,17-4,01 (m, 1H), 3,98(m, 2H), 3,71-3,67(m, 1H), 3,69(s, 3H), 3,62-3,51(m, 3H), 3,58(s, 3H), 3,39-3,37(m, 1H), 3,31-3,26(m, 3H), 3,09(dd, 1H), 2,56(d, 1H), 2,36(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,11(s, 3H), 2,24-2,10(m, 1H), 1,82-1,73(m, 1H), 1,24(bs, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 169,4, 148,8, 148,3, 139,1, 133,7, 130,9, 130,3, 125,2, 120,2,

117,7, 113,1, 112,6, 101,3, 99,3, 74,1, 59,7, 59,3, 57,8, 57,0, 56,1, 56,1, 55,2, 41,6, 41,0, 40,9, 29,7,

26,3, 22,5, 15,6, 9,3.

ESl-MS m/z: obliczono dla C33H40N4O7: 604,7; znaleziono (M+H)⁺: 605,3.

104

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 40

Do roztworu 9 (22 mg, 0,039 mmol) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (2,79 μΙ, 0,039 mmol) i pirydynę (3,2 μΙ, 0,039 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 46 (22 mg, 93%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,4 (heksan:octan etylu 1:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3), δ 6,74(s, 1H), 5,97(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J=0,9 Hz, 1H), 5,12(d, J=5,7 Hz, 2H), 5,04(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,90(t, J=6 Hz, 1H), 4,17(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,05(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,71(s, 3H), 3,57(s, 3H), 3,50-3,44(m, 2H), 3,38-3,36(m, 1H), 3,30-3,26(m, 1H), 3,00(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,79(d, J=12,9 Hz, 1H), 2,60(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,35(s, 3H), 2,32(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,68(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H38N4O8: 606,67; znaleziono (M+H)⁺: 607,3.

P r z y k ł a d 41

Do roztworu 46 (8 mg, 0,013 mmol) w dioksanie (0,1 ml) dodano 5,3N mieszaninę HCI/dioksan (0,5 ml) i reakcję mieszano w 23°C przez 1 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 47 (5 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,4 (heksan:octan etylu 1:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3), δ 6,51(s, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,97(bs, 1H), 4,11(bs, 1H), 4,04-4,02(m, 2H), 3,75(s, 3H), 3,65(d, J=2,1 Hz, 2H), 3,56-3,30(m, 2H), 3,04(dd, J1=7,5 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,80(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,59(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,76(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,33(s, 3H), 1,25(s, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C30H34N4O7: 562,61; znaleziono (M+H)⁺: 563,3.

P r z y k ł a d 42

45

PL 215 769 B1

105

Do roztworu 45 (10 mg, 0,0192 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek izowalerylu (2,34 μΙ, 0,0192 mmol) i pirydynę (1,55 μΙ, 0,0192 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 1:2) uzyskując 48 (11 mg, 95%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,12 (heksan: octan etylu 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,50(s, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,75(s, 1H), 5,02(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,10(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,06(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,02(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,77(s, 3H), 3,76-3,71(m, 1H), 3,86-3,28(m, 3H), 3,04(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=15,9 Hz, 1H), 2,55(d, J=18 Hz, 1H), 2,32(s, 6H), 2,26(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,84-1,68(m, 2H), 1,36(d, J=7,2 Hz, 2H), 0,69(d, J=6,6 Hz, 3H), 0,62(d, J=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H40N4O7: 604,69; znaleziono (M+H)⁺: 605,3.

P r z y k ł a d 43

Do roztworu 45 (10 mg, 0,0192 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek izowalerylu (3,98 μΙ, 0,0192 mmol) i pirydynę (1,55 μΙ, 0,0192 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 1:2) uzyskując 49 (12,4 mg, 96%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,7 (octan etylu:metanol 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,50(s, 1H), 5,98(d, J=1,5Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5Hz, 1H), 5,73(s, 1H), 5,08(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,10(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,05(m, 1H), 4,01(m, 1H), 3,76(s, 3H), 3,65-3,61(m, 1H), 3,40-3,27(m, 3H), 3,03(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,6 Hz, 1H), 2,78(d, J=13,2 Hz, 1H), 2,57(d, J=8,3 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,31(s, 3H), 2,25(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,79(dd, J1=12,0 Hz, J2=16,5 Hz, 1H), 1,73-1,42(m, 4H), 1,33-1,18(m, 10H), 1,03(m, 2H), 0,87(t, J=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H50N4O7: 674,83; znaleziono (M+H)⁺: 675,5.

P r z y k ł a d 44

Do roztworu 45 (14,5 mg, 0,0278 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek trans-3-trifluorometylocynamoilu (4,76 μΙ, 0,0278 mmol) i pirydynę (2,25 μΙ, 0,0278 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunię106

PL 215 769 B1 to pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 1:1) uzyskując 50 (18,7 mg, 94%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,64 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CH3OD), δ 7,74-7,55(m, 4H), 7,23(d, J=16,0 Hz, 1H), 6,34(s, 1H), 6,12(d, J=16,0 Hz, 1H), 6,07(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,96(d, J=0,9 Hz, 1H), 4,39(d, J=2,4Hz, 1H), 4,07-4,05(m, 1H), 3,81(bs, 1H), 3,46-3,51(m, 3H), 3,42(s, 3H), 3,09(br d, J=12,0 Hz, 1H), 2,94-2,85(m, 2H), 2,74(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,38(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,80(s, 3H), 1,84-1,75(m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,7, 165,3, 146,5, 144,7, 142,6, 140,6, 138,0, 135,9, 131,0, 130,9, 129,1, 128,6, 125,8, 125,7, 124,5, 124.4, 122,7, 121,2, 117,8, 116,5, 113,0, 112,0, 101,7, 60,4,

59,1, 56,5, 56,4, 55,6, 55,3, 41,8, 40,3, 26,6, 25,1, 20,3, 15,4, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H37F3N4O7: 718,72; znaleziono (M+H)⁺: 719,3.

P r z y k ł a d 45

Do roztworu 43 (33 mg, 0,0557 mmol) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek izowalerylu (6,79 μΙ, 0,0557 mmol) i pirydynę (4,5 μΙ, 0,0557 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 1:2) uzyskując 51 (34 mg, 91%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,09 (heksan: octan etylu 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,46(s, 1H), 6,10(bs, 1H), 5,99(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,90(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,30(t, J=6,0 Hz, 1H), 4,10-4,05(m, 3H), 3,81(bs, 1H), 3,74(s, 3H), 3,54(bs, 1H), 3,38-3,36(m, 1H), 3,29-3,21(m, 1H), 3,00(dd, J1=8,0 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,25(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,95-1,90(m, 3H), 0,87(d, J=6,6 Hz, 6H), 0,76(d, J=6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H45N5O8: 675,77; znaleziono (M+H)⁺: 676,3.

P r z y k ł a d 46

Do roztworu 43 (33 mg, 0,0557 mmol) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek trans-3-trifluorometylocynamoilu (9,52 μΙ, 0,0557 mola) i pirydynę (4,5 μΙ, 0,0557 mola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml).

Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod

PL 215 769 B1

107 zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 1:2) uzyskując 52 (40 mg, 92%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,21 (heksan:octan etylu 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 7,74-7,47(m, 4H), 6,49(s, 1H), 6,40(d, J=15,6 Hz, 1H), 6,00(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,47(t, J=6Hz, 1H), 4,12-4,09(m, 3H), 3,93(bs, 1H), 3,71(s, 3H), 3,59-3,58(m, 1H), 3,38(d, J=7,8 Hz, 1H), 3,29(d, J=12,0 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=8,1 HZ, J2=18,3HZ, 1H), 2,79-2,78(m, 1H), 2,65(d, J=18,3 Hz, 1H) 2,29(s, 6H), 2,28(s, 3H), 2,22(s, 3H), 1,84-1,80(m, 1H), 0,85-0,84(m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,9, 168,8, 164,4, 146,9, 144,6, 143.0, 140,5, 140,5, 139,3, 135,7,

131,1, 131,0, 129,4, 129,1, 126,0, 124,1, 124,0, 122,4, 121,1, 120,7, 120,6, 117,7, 116,9, 112,8, 112,0,

101,6, 60,6, 59,3, 57,1, 56,3, 55,9, 55,2, 49,0, 41,7, 49,9, 26,5, 25,1, 20,2, 18,4, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C41H42F3N5O8: 789,8; znaleziono (M+H)⁺: 790,3.

P r z y k ł a d 47

53

Do roztworu 43 (10 mg, 0,0169 mmol) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 23°C bezwodnik trifluorooctowy (2,38 μΙ, 0,0169 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 3:2) uzyskując 53 (10,7 mg, 93%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,57 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,45(s, 1H), 6,00(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,90(d, J=12 Hz, 1H), 5,87(bs, 1H), 5,32(bs, 1H), 4,12(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,08(d, J=1,8 Hz, 1H), 3,78-3,56(m, 3H), 3,72(s, 3H), 3,40(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,25(d, J=9,3 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,77(dd, J1=2,1 Hz, J2=15,9 HZ, 1H), 2,68(d, J=18,6 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,75(dd, J1=11,4 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 0,69(d, J=6,3 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 170,1, 168,6, 156,0, 147,0, 144,6, 143.0, 140,6, 140,4, 131,0,

129.4, 120,9, 120,7, 117,6, 116,8, 112,4, 112.1, 101,6, 60,5, 59,0, 57,1, 56,3, 55,6, 55,2, 48,7, 41,6,

39.4, 26,5, 24,9, 20,2, 17,8, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z obliczono dla C33H36F3N5O8: 687,63; znaleziono (M+H)⁺: 688,66.

P r z y k ł a d 48

54

Do roztworu 19 (11 mg, 0,0169 mmol) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 23°C bezwodnik trifluorooctowy (2,38 μΙ, 0,0169 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin, po czym roztwór roz108

PL 215 769 B1 cieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:octan etylu 3:2) uzyskując 54 (10,7 mg, 93%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,6 (octan etylu:metanol 5:1).

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H39F3N5O7: 685,69; znaleziono (M+H)⁺: 686,3.

P r z y k ł a d 49

Do roztworu 54 (100 mg, 0,415 mmol) w CH2CI2 (4 ml), dodano kwas octowy (40 μΙ), (PPh3)2PdCI2 (8,4 mg, 0,012 mmol) i Bu3SnH (157 μΙ, 0,56 mmol) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w tej temperaturze przez 2 godziny, po czym reakcję naniesiono na kolumnę typu flash (SiO2, gradient heksan do 2:1 heksan:octan) i uzyskano 55 (90 mg, 96%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,6 (heksan:octan etylu 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,55(d, J=7,2 Hz, 1H), 6,45(s, 1H), 5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,82(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,37(t, J=6,0 Hz, 1H), 4,15(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,04(d, J=1,8 Hz, 1H), 3,70(s, 3H), 3,66-3,53(m, 2H), 3,37-3,31(m, 2H), 3,19-3,15(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,08-3,00(m, 2H), 2,56(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,91(dd, J1=12,0 HZ, J2=15,6 Hz, 1H), 0,84(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 170,1, 156,3, 147,3, 144,9, 144,4, 143.3, 136,7, 130,7, 129,3,

120,6, 117,6, 117,4, 114,4, 112,1, 107,7, 101,0, 85,8, 60,5, 59,3, 56,5, 56,4, 56,2, 55,2, 48,9, 41,6, 40,9, 25,7, 25,3, 18,0, 15,6, 8,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H35F3N5O7: 645,63; znaleziono (M+H)⁺: 646,2.

Do roztworu 17 (200 mg, 0,288 mmol) w CH2CI2 (1,44 ml) dodano w 23°C kwas trifluorooctowy (888 μΙ, 11,53 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym kwaśnym węglanem sodu (60 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 70 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono w próżni uzyskując 56 (147 mg, 93%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnej reakcji bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,19 (octan etylu:metanol 5:1).

PL 215 769 B1

109 ¹H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 6,48(s, 1H), 5,88(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,81(d, J=0,9 Hz, 1H), 4,35(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,15(d, J=1,8 Hz, 1H), 3,99-3,98(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,52-2,96(m, 7H), 2,68(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,24(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,06(s, 3H), 1,85(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 0,91(d, J=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CD3OD): δ 173,2, 149,1, 145,6, 144,9, 138,0, 132,2, 130,6, 121,4, 119,6, 117,4, 114,3, 109,2, 102,5, 82,3, 60,4, 58,4, 58,3, 57,8, 56,6, 50,1, 42,3, 41,6, 27,8, 26,2, 19,5, 15,5, 9,8.

ESI-MS m/z: obliczono dla C29H35N5O6: 549,62; znaleziono (M+H)⁺: 550,3.

P r z y k ł a d 51

OMe

Do roztworu 56 (10 mg, 0,018 mmol) w CH2CI2 dodano izotiocyjanian fenylu (13 μΙ, 0,109 mmol) i mieszano w 23°C przez 1,5 godz. Mieszaninę reakcyjną zatężono w próżni, a pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan do 1:1 heksan:octan etylu) i otrzymano 57 (8 mg, 65%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,57 (octan etyl u: metanol 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,88(bs, 1H), 7,41-7,36(m, 2H), 7,27-7,22(m, 1H), 7,02-7,00(d, J=7,8 Hz, 2H), 6,71(d, J=7,2 Hz, 1H), 6,31(s, 1H), 6,17(bs, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,83(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,55(bs, 1H), 5,20-5,17(m, 1H), 4,16(d, J=1,8 Hz, 1H), 4,05(bs, 1H), 4,02(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,79(s, 3H), 3,75-3,71 (m, 1H), 3,35(d, J=7,8 Hz, 1H), 3,28-3,19(m, 2H), 3,12-2,97(m, 2H), 2,50(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,15-2,09(dd, J1=11,4 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,95(s, 3H), 0,88(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 178,5, 171,7, 147,2, 145,0, 144,3, 143,3, 137,0, 135,7, 130,6,

130,4, 129,6, 127,5, 124,3, 120,6, 117,7, 117,2, 115,3, 112,1, 108,3, 100,9, 60,9, 59,5, 56,7, 56,5, 56,2, 55,2, 54,1, 41,7, 41,1, 26,3, 25,4, 18,5, 15,8, 9,0.

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H40N6O6S: 684,81; znaleziono (M+H)⁺: 685,3.

P r z y k ł a d 52

OMe OMe

Do roztworu 57 (45 mg, 0,065 mmol) w CH2CI2 (0,5 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (4,67 μΙ, 0,065 mmol) i pirydynę (5,3 μΙ, 0,065 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 3 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 40:60) uzyskując 58 (14 mg, 28%) w postaci białego ciała stałego.

110

PL 215 769 B1

Rf: 0,34 (CH3CN:H2O 7:15).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3). δ 11,90(d, J=6,6 Hz, 1H), 7,45-7,40(m, 3H), 7,18-7,15(m, 2H), 6,58(s, 1H), 6,00(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,70(s, 1H), 5,37(t, J=4,8Hz, 1H), 4,48(m, 1H), 4,23(bs, 1H), 4,07(bs, 2H), 3,85-3,75(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,46-3,41(m, 2H), 3,24-3,20(m, 1H), 3,00-2,95(m, 1H), 2,87-2,75(m, 1H), 2,31(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,85(dd, J1=11,4 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,66(s, 3H), 0,82(d, J=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 182,6, 174,3, 171,0, 146,6, 144,6, 142,7, 142,3, 140,7, 140,2, 131,3, 129,8, 129,3, 128,9, 128,8, 121,5, 120,4, 117,3, 116,6, 112,8, 112,0, 111,3, 101,5, 60,5, 59,0,

57,6, 56,2, 55,9, 55,3, 55,1, 41,6, 39,4, 27,8, 26,5, 24,8, 20,2, 17,1, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H44N6O8S: 768,88; znaleziono (M+H)⁺: 769,2.

P r z y k ł a d 53

Do roztworu 57 (130 mg, 0,189 mmol) w dioksanie (1 ml) dodano 5,3N HCI w dioksanie (1,87 ml) i reakcję mieszano w 23°C przez 4 godziny. Następnie do roztworu dodano CH2CI2 (15 ml) i H2O (10 ml), a warstwę organiczną zdekantowano. Warstwę wodną zaalkalizowano nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (60 ml) (pH=8) w 0°C, po czym ekstrahowano octanem etylu (2 x 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne wysuszono (siarczan sodu) i zatężono w próżni uzyskując 59 (63 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,15 (octan etylu:metanol 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3), δ 6,67(s, 1H), 5,99(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,10(bs, 1H), 4,32(d, J=7,2 Hz, 1H), 4,25(dd, J1=3,6 Hz, J2=9,3 HZ, 1H), 3,7(s, 3H), 3,71-3,64(m, 2H), 3,50(dd, J1=2,4 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 3,42-3,37(m, 2H), 3,16(dd, J1=3,6 Hz, J2=12,9 Hz, 1H), 2,57(dd, J1=9,3 Hz, J2=12,9 Hz, 1H), 2,27(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,91(dd, J1=12,0 HZ, J2=15,9 HZ, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C26H30N4O5: 478,5; znaleziono (M+H)⁺: 479,3.

P r z y k ł a d 54

Do roztworu 43 (20 mg, 0,0338 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek cynamoilu (5,63 μΙ, 0,0338 mmol) i pirydynę (2,73 μΙ, 0,0338 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) uzyskując 60 (22 mg, 90%) w postaci białego ciała stałego.

PL 215 769 B1

111

Rf: 0,56 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,51(s, 1H), 7,50-7,47(m, 2H), 7,36-7,35(m, 2H), 6,43(s, 1H), 6,36(brd, J=15,9 Hz, 2H), 6,01(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(brd, J=1,5 Hz, 2H), 5,42(t, J=6,0 Hz 1H), 4,12-4,07(m, 3H), 3,96-3,95(m, 1H), 3,73(bs, 3H), 3,58(bs, 2H), 3,39(d, J=8,7 Hz, 1H), 3,25(d, J=11,7 Hz, 1 H), 3,0(dd, J1=7,5 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,78(d, J=15,9 Hz, 1H), 2,67(d, J=16,5 Hz, 1H), 2,29(s, 6H), 2,23(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,82(dd, J1=11,4Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 0,83(d, J=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 172,0, 165,0, 146,9, 144,6, 143,1, 141,0, 140,5, 134,8, 131,0, 129,7, 129,1, 128,8, 127,8, 125,5, 123,8, 123.0, 121,1, 120,5, 117,7, 116,9, 112,8, 112,0, 101,9, 60,6, 59,2, 57,1, 56,4, 55,9, 55,3, 48,8, 41,7, 40,0, 26,5, 25,1, 20,3, 18,5, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H43N5O8: 721,8; znaleziono (M+H)⁺: 722,3. P r z y k ł a d 55

Do roztworu 45 (19 mg, 0,0364 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek heptafluorobutyrylu (5,44 μΙ, 0,0364 mmol) i pirydynę (2,95 μΙ, 0,0364 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) uzyskując 61 (11,7 mg, 45%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,76 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,46(s, 1H), 6,12(bs, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,72(bs, 1H), 4,13-4,11(m, 2H), 4,0(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,98-3,96(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,39(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,39-3,28(m, 2H), 3,09(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,80(d, J=16,2 Hz, 1H), 2,46(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 6H), 2,21(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,80(dd, J1=12,0 HZ, J2=16,2 HZ, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H31F7N5O7: 716,6; znaleziono (M+H)⁺: 717,2.

P r z y k ł a d 56

Do roztworu 43 (24 mg, 0,04 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek butyrylu (4,15 μΙ, 0,04 mmol) i pirydynę (3,28 μΙ, 0,04 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) uzyskując 62 (24 mg, 90%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,35 (EtOAc:MeOH 5:1).

112

PL 215 769 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,47(s, 1H), 6,10(d, J=6,5 Hz, 1H), 6,0(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,86(bs, 1H), 5,31(d, J=6,9 Hz, 1H), 4,11-4,06(m, 3H), 3,85-3,81(m, 1H), 3,75(s, 3H), 3,59-3,53(m, 2H), 3,38(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,27-3,22(m, 1H), 3,0(dd, J1=7,8 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 2,79(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,63(d, J=17,1 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,0(s, 3H), 1,80(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,58(q, J=7,2 Hz, 2H), 0,89(t, J=7,2 Hz, 3H), 0,76(d, J=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H43N5O8: 661,64; znaleziono (M+H)⁺: 662,3.

P r z y k ł a d 57

Do roztworu 43 (19 mg, 0,0364 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek cynamoilu (6,06 mg, 0,0364 mmol) i pirydynę (2,95 μΙ, 0,0364 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) uzyskując 63 (20,1 mg, 85%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,65 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,39-7,29(m, 5H), 6,42(s, 1H), 6,01(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73(bs, 1H), 5,24(t, J=6,8 Hz, 1H), 4,12-4,08(m, 3H), 3,66-3,64(m, 2H), 3,58(bs, 3H), 3,36(d, J=8,7 Hz, 1H), 3,29(d, J=12,0 Hz, 1H), 2,98(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,33(s, 6H), 2,29(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,84(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H38N4O7: 650,72; znaleziono (M+H)⁺: 651,2.

P r z y k ł a d 58

Do roztworu 43 (20 mg, 0,0338 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek 3-chloropropionylu (3,22 μΙ, 0,0338 mmol) i pirydynę (2,73 μΙ, 0,0338 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) uzyskując 64 (20,5 mg, 89%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,32 (EtOAc:heksan 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,48(s, 3H), 6,28(m, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz,

1H), 5,86(bs, 1H), 5,31(m, 1H), 4,08-4,07(m, 3H), 3,75(s, 3H), 3,72-3,53(m, 5H), 3,39(d, J=8,1 Hz,

1H), 3,24(d, J=12,0 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,79(d, J=13,5 Hz, 1H), 2,50(t,

J=6,3 Hz, 2H), 2,32(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,0(s, 3H), 1,79(dd, J1=12,3 Hz, J2=14,8 Hz, 1H),

0,81(d, J=6,3 Hz, 3H).

PL 215 769 B1

113

P r z y k ł a d 59

Do roztworu 43 (19 mg, 0,0364 mmol) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek butyrylu (3,78 μΙ, 0,0364 mmol) i pirydynę (2,95 μΙ, 0,0364 mmol). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 20:1) uzyskując 64 (19 mg, 87%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,6 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,75(s,

1H), 5,01(t, J=6,4 Hz, 1H), 4,10-4,09(m, 1H), 4,06(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,03-4,02(m, 1H), 3,76(s, 3H), 3,67-3,60(m, 1H), 3,42-3,35(m, 2H), 3,29(d, J=12,0 Hz, 1H), 3,02(dd, J1=7,8 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,79(d, J=14,1 Hz, 1H), 2,56(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,31(s, 3H), 2,25(s, 3H), 1,78(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,63(s, 3H), 1,53-1,46(m, 2H), 1,28-1,16(m, 2H), 0,68(t, J=7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H38N4O7: 590,67; znaleziono (M+H)⁺: 591,2.

P r z y k ł a d 60

Do roztworu 50 (31,7 mg, 0,044 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) dodano AgNO3 (225 mg, 1,32 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 17 godzin. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) uzyskując 66 (16 mg, 51%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,26 (EtOAc.MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,66-7,42(m, 4H), 7,20(bs, 1H), 6,44(s, 1H), 5,97(b, J=1,2 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,76(bs, 1H), 5,28(bs, 1H), 4,54(bs, 1H), 4,43(bs, 1H), 4,00(bs, 1H), 3,68-3,57(m, 4H), 3,47(d, J=3,3 Hz, 1H), 3,40(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,17(d, J=6,9 Hz, 1H), 2,92(dd, J1=8,1 HZ, J2=17,7 HZ, 1H), 2,74(d, J=17,1 Hz, 1H), 2,48(d, J=18,6 Hz, 1H), 2,32(s, 6H), 2,28(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,76(dd, J1=12,0 Hz, J2=16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H38F3N3O8: 709; znaleziono (M-17)⁺: 692,3.

114

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 61

Do roztworu 53 (57 mg, 0,0828 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) dodano AgNO3 (650 mg, 3,81 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony NaHCO3 (10 ml), mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) uzyskując 67 (28 mg, 50%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,47(s, 1H), 5,97(s, 1H), 5,88(s, 1H), 5,35(bs, 1H), 4,51(bs, 1H), 4,41(bs, 1H), 4,12-4,05(m, 1H), 4,00(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,77(s, 3H), 3,64(bs, 1H), 3,46(d, J=3,3 Hz, 1H), 3,34(d, J=11,4 Hz, 1H), 3,18(d, J=1,5 Hz, 1H), 2,95(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,70(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,48(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,28(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,26(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,68(dd, J1=12 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 0,86(d, J=6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H37F3N4O9: 678,66; znaleziono (M⁺-17): 661,2.

P r z y k ł a d 62

Do roztworu 48 (32 mg, 0,0529 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) dodano AgNO3 (270 mg,

1,58 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godz. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony NaHCO3 (10 ml), mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) uzyskując 68 (18 mg, 56%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,40 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,95(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,23(d, J=6,9 Hz, 1H), 4,45(d, J=3,3 Hz, 1H), 4,38(s, 1H), 4,01(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,78(m, 1H), 3,77(s, 3H), 3,41-3,37(m, 1H), 3,17-3,15(m, 1H), 2,96(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,70(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,40(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,30(s, 6H), 2,27(s, 3H), 1,76-1,65(m, 1H), 1,35-1,25(m, 2H), 0,89-0,82(m, 1H), 0,69(d, J=6,6 Hz, 3H), 0,58(d, J=6,6 Hz, 3H).

PL 215 769 B1

115

P r z y k ł a d 63

β9

Do roztworu 51 (27 mg, 0,04 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) dodano AgNO3 (204 mg,

1,19 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godz. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony NaHCO3 (10 ml), mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) uzyskując 69 (10 mg, 38%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,38 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,48(s, 1H), 6,16(bs, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,33(t, J=6,0 Hz, 1H), 4,50(m, 1H), 4,40(m, 1H), 4,11-4,09(m, 1H), 4,00(d, J=2,6 Hz, 1H), 3,78(s, 3H), 3,41-3,32(m, 3H), 3,18(d, J=8,4 Hz, 1H), 2,94(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,70(d, J=14,4 Hz, 1H), 4,45(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,04(s, 3H), 2,00-1,86(m, 3H), 1,73(m, 1H), 0,87(d, J=6,3 Hz, 6H).

P r z y k ł a d 64

Do roztworu 63 (15 mg, 0,023 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) dodano AgNO3 (118 mg,

0,691 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony NaHCO3 (10 ml), mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) uzyskując 70 (20,1 mg, 85%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,43 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,38-7,28(m, 5H), 6,48(s, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,75(bs, 1H), 5,38(brd, 1H), 5,30(bs, 1H), 4,53(m, 1H), 4,42(m, 1H), 4,02(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,78-3,65(m, 5H), 3,46-3,40(m, 2H), 3,17(d, J=7,8 Hz, 1H), 2,94(dd, J1=7,8 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,73(d, J=16,8 Hz, 1H), 2,45(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 6H), 2,28(s, 3H), 1,97(s, 3H), 1,77(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

116

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 65

Do roztworu 65 (25 mg, 0,042 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/ 0,5 ml) dodano AgNO3 (215,56 mg, 1,269 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 17 godzin. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony NaHCO3 (10 ml), mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:2) uzyskując 71 (16 mg, 65%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,0,5 (EtOAc:MeOH 5:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,95(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,78(s, 1H), 5,19(bs, 1H), 4,45(d, J=3,3 Hz, 1H), 4,37(bs, 1H), 4,11(brd, J=4,8 Hz, 1H), 4,01(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,76(s, 1H), 3,71-3,69(m, 1H), 3,49-3,35(m, 1H), 3,24(d, J=13,5 Hz, 1H), 3,15(d, J=9,3 Hz, 1H), 2,95(dd, J1=8,1 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,70(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,40(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,29(s, 3H), 2,26(s, 3H), 1,96(s, 3H), 1,75-1,66(m, 1H), 1,52-1,17(m, 2H), 0,66(t, J=7,2 Hz, 3H).

P r z y k ł a d 66

Do roztworu 45 (35 mg, 0,0672 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek hydroksycynamoilu (11,58 μΙ, 0,0672 mmola) i pirydynę (5,43 μΙ, 0,0672 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godz., po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 2:1 do octanu etylu) i uzyskano związek 72 (30 mg, 68%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,51 (octan etylu:MeOH 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,12(m, 3H), 7,05-7,00(m, 2H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J=1,2 Hz, 1H), 5,73(s, 1H), 5,04(brt, 1H), 4,08(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,02(bs, 1H), 4,00(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,58(dd, J1=4,5 Hz, J2=13,8 Hz, 1H), 3,47(bs, 3H), 3,33(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,29(dt, J1=2,7 Hz, J2=11,7 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,79(d, J=14,1 Hz, 1H), 2,58-2,50(m, 3H), 2,32(s, 3H), 2,29(s, 3H), 2,03(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,94-1,76(m, 4H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H40N4O7: 652,7; znaleziono (M+Na)⁺: 675,3.

PL 215 769 B1

117

P r z y k ł a d 67

Do roztworu związku 45 (45 mg, 0,0576 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek fenyloacetylu (7,61 μΙ, 0,0576 mmola) i pirydynę (4,6 μΙ, 0,0576 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu do heksan:octan etylu 1:1) i uzyskano związek 73 (25,8 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,5 (heksan:octan etylu:MeOH 5:10:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,18-7,17(m, 3H), 6,85(bs, 2H), 6,54(s, 1H), 5,89(d, J=1,5Hz, 1H), 5,83(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,76(s, 1H), 5,08(bs, 1H), 4,12(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,09(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,98(bs, 1H), 3,73(s, 3H), 3,51-3,46(m, 2H), 3,35(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,25(dt, J1=2,7 Hz, J2=12,0 Hz, 1H), 3,03(d, J=8,7 Hz, 1H), 3,02-2,94(m, 2H), 2,75(d, J=16,8 Hz, 1H), 2,63(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,35(s, 3H), 2,30(s, 3H), 2,22(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,80(dd, J1=12,0 Hz, J2=16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H38N4O7: 638,7; znaleziono (M+1)⁺: 639,2.

P r z y k ł a d 68

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,0576 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek propionylu (5 μΙ, 0,0576 mmola) i pirydynę (4,6 μΙ, 0,0576 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwor rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 5:1 do heksan:octan etylu 1:1 do octanu etylu) i uzyskano związek 74 (23 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,59 (heksan:octan etylu:MeOH 5:10:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,76(s, 1H), 5,00(t, 1H), 4,09(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,04(bs, 2H), 3,74(s, 3H), 3,62(dd, J1=6,6 Hz, J2=13,2 Hz, 1H), 3,43(bs, 1H), 3,37(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,29(d, J=12,0 Hz, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,80(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,55(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,78(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,64-1,50(m, 2H), 0,70(t, J=7,8 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H36N4O7: 576,6; znaleziono (M+1)⁺: 577,2.

118

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 69

OMe

Do roztworu związku 45 (15 mg, 0,0288 mmola) w CH2CI2 (0,25 ml) dodano w 0°C chlorek mirystoilu (7,83 μΙ, 0,0288 mmola) i pirydynę (2,3 μΙ, 0,0288 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 6:1 do heksan:octan etylu 1:1) i uzyskano związek 75 (15 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,65 (heksan :octan etylu:MeOH 10:10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,49(s, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,72(s, 1H), 4,99(t, 1H), 4,09(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,05(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,02(bs, 1H), 3,76(s, 3H), 3,61-3,59(m, 1H), 3,39(bs, 1H), 3,35(d, 7=7,8 Hz, 1H), 3,29(d, J=12,3 Hz, 1H), 3,04(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,55(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 6H), 2,25(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,78(dd, J1=1,23 Hz, J2=15,0 Hz, 1H), 1,25-1,24(m, 12H), 0,87(d, J=6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C42H58N4O7: 730,9; znaleziono (M+1)⁺: 731,4.

P r z y k ł a d 70

Do roztworu związku 45 (15 mg, 0,0288 mmola) w CH2CI2 (0,25 ml) dodano w 0°C chlorek stearoilu (9,7 μΙ, 0,0288 mmola) i pirydynę (2,3 μΙ, 0,0288 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 3:1 do heksan.octan etylu 1:1) i uzyskano związek 76 (16 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,46 (heksan:octan etylu:MeOH 10:10:1).

¹H NMR NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,49(s, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73(s, 1H), 4,99(t, J=5,1 Hz, 1H), 4,09(d, J=1,8 Hz, 1H), 4,05(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,76(s, 3H), 3,61-3,59(m, 1H), 3,38(bs, 1H), 3,36(d, J=7,2 Hz, 1H), 3,28(d, J=12,0 Hz, 1H), 3,03(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=15,9 Hz, 1H), 2,57(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,31(s, 3H), 2,24(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,77(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,25-1,24(m, 16H), 0,87(d, J=6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C46H66N4O7: 786,4; znaleziono (M+22)⁺: 809,5.

PL 215 769 B1

119

P r z y k ł a d 71

Do roztworu związku 45 (31 mg, 0,0595 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek heksanoilu (8,32 μΙ, 0,0595 mmola) i pirydynę (4,8 μΙ, 0,0595 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 3:2 do octanu etylu) i uzyskano związek 77 (26 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,65 (octan etylu.MeOH 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J =1,5 Hz, 1H), 5,74(s, 1H), 5,00(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,09(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,05(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,76(s, 3H), 3,61-3,58(m, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,56(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,31(s, 6H), 2,25(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,78(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,53-1,40(m, 2H), 1,29-1,12(m, 4H), 1,07-0,97(m, 2H), 0,81(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H42N4O7: 618,7; znaleziono (M+1)⁺: 619,3.

P r z y k ł a d 72

OMe OMe

Do roztworu związku 45 (20 mg, 0,0384 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek trans-krotonylu (3,68 μΙ, 0,0384 mmola) i pirydynę (3,1 μΙ, 0,0384 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 4:1 do octanu etylu) i uzyskano związek 78 (16 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,55 (octan etylu:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50-6,40(m, 1H), 6,46(s, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,77(s, 1H), 5,08(bst, 1H), 4,10(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,05(m, 2H), 3,78(s, 3H), 3,67(bs, 1H), 3,42-3,29(m, 3H), 3,04(dd, J1=8,1 HZ, J2=18,3 HZ, 1H), 2,78(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,53(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,26(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,79(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,70(dd, J1=1,2 Hz, J2=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H 36N407: 588,6; znaleziono (M+1)⁺: 589,3.

120

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 73

NHCbz

Do roztworu związku 45 (50 mg, 0,096 mmola) w CH2CI2 (0,5 ml) dodano w 0°C Cbz-L-VaI-OH (24,12 μΙ, 0,096 mmola) i karbonylodiimidazol (18,7 μΙ, 0,115 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin, po czym rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:octan etylu 4:1) i uzyskano związek 79 (25 mg, 34%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,7 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,33-7,28(m, 5H), 6,45(s, 1H), 5,96(s, 1H), 5,90(bs, 1H), 5,82(s, 1H), 5,53(bs, 1H), 5,09(bs, 1H), 5,05(d, J=3,3 Hz, 2H), 4,16(bs, 1H), 4,09(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,02(bs, 1H), 3,75(s, 3H), 3,74(m, 1H), 3,37-3,35(m, 2H), 3,26-3,21 (m, 3H), 3,00(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,77(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,55(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,25(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,70-1,66(m, 1H), 0,65(d, J=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C41H47N5O9: 753,8; znaleziono (M+1)⁺: 754,2.

P r z y k ł a d 74

Do roztworu związku 72 (18 mg, 0,0275 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) dodano AgNO3 (140,5 mg, 0,827 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 10:1) i uzyskano związek 80 (13 mg, 74%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,37 (EtOAc:MeOH 5:1) ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,11(m, 3H), 7,06-7,01(m, 2H), 6,43(s, 1H), 5,95(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,71(bs, 1H), 5,19(bs, 1H), 4,45(d, J=3,0 Hz, 1H), 4,37(bs, 1H), 4,02-3,96(m, 1H), 3,75-3,68(m, 2H), 3,48(s, 3H), 3,41-3,36(m, 2H), 3,28-3,24(m, 1H), 3,15(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,01-2,88(m, 2H), 2,70(d, J=15,9 Hz, 1H), 2,57-2,51(m, 2H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,00(s, 6H), 1,77-1,68(m, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H41N3O8: 643,3; znaleziono (M-17)⁺: 626,2.

PL 215 769 B1

121

P r z y k ł a d 75

OMe

Do roztworu związku 73 (23 mg, 0,036 mmola) w CH3CN/H2O (1,5ml/1 ml) dodano AgNO3 (183 mg, 1,08 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc:MeOH 5:1 do MeOH) i uzyskano związek 81 (9,3 mg, 41%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,3 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,17-7,13(m, 3H), 6,85(m, 2H), 6,54(s, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,84(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,22(m, 1H), 4,43(bs, 1H), 4,39(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,00(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,71(s, 3H), 3,64-3,29(m, 2H), 3,16(d, J=8,7 Hz, 1H), 2,98-2,88(m, 3H), 2,67(d, J=14,8 Hz, 1H), 2,45(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,22(s, 3H), 1,97(s, 3H), 1,68(dd, J1=12,8 Hz, J2=14,7 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H39N3O8: 629,7; znaleziono (M⁺-OH): 612,3.

P r z y k ł a d 76

Do roztworu związku 74 (20 mg, 0,0346 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (176,6 mg, 1,04 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAciMeOH 1:1) i uzyskano związek 82 (12,9 mg, 66%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,3 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,95(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,19(d, 1H), 4,46(d, J=3,0 Hz, 1H), 4,38(d, J=1,8 Hz, 1H), 4,00(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,74(s, 3H), 3,70-3,66(m, 1H), 3,38(dt, J1=2,7 Hz, J2= 13,2 Hz, 1H), 3,25(d, J=13,8 Hz, 1H), 3,16(d, J=7,5 Hz, 1H), 2,96(dd, J1=7,2 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,71 (d, J=15,6 Hz, 1H), 2,40(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,29(s, 3H), 2,24(s, 3H), 1,97(s, 3H), 1,71 (dd, J1=11,7 Hz, J2=15,3 Hz, 1H), 1,60-1,48(m, 2H), 0,67(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C30H37N3O8: 567,6; znaleziono (M-17)⁺: 550,2.

122

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 77

Do roztworu związku 77 (14 mg, 0,0226 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (115,3 mg, 0,68 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 83 (9 mg, 65%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,25 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,96(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73(bs, 1H), 4,44(d, J=3,6 Hz, 1H), 4,37(s, 1H), 4,01(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,77(s, 3H), 3,73-3,64(m, 1H), 3,39(dt, J1=3,0 Hz, J2=9,3 HZ, 1H), 3,22(d, J=14,5 Hz, 1H), 3,16(d, J=7,5 Hz, 1H), 2,95(dd, J1=8,1 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 2,70(d, J=14,5 Hz, 1H), 2,41(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,29(s, 3H), 2,25(s, 3H), 1,96(s, 3H), 1,71(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,48-1,46(m, 2H), 1,24-1,10(m, 4H), 1,00-0,95(m, 2H), 0,80(t, J=7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H43N3O8: 609,7; znaleziono (M-17)⁺: 592,3.

P r z y k ł a d 78

Do roztworu związku 78 (15 mg, 0,025 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (130 mg, 0,764 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 1:1) i uzyskano związek 84 (10 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,19 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,49(s, 1H), 6,47-6,37(m, 1H), 5,94(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88(d,

J=1,5Hz, 1H), 5,77(bs, 1H), 5,26(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,93(d, J=14,7 Hz, 1H), 4,48(d, J=11,1 Hz, 1H),

4,38(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,02(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,79(s, 3H), 3,76-3,72(m, 1H), 3,42(dt, J1=2,7 Hz,

J2=12,0 HZ, 1H), 3,28(d, J=13,2 Hz, 1H), 3,15(d, J=6,6 Hz, 1H), 2,96(dd, J1=8,7 Hz, J2=18,0 Hz, 1H),

PL 215 769 B1

123

2,70(d, J=15,0 Hz, 1H), 2,38(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,28(s, 3H), 1,95(s, 3H), 1,72(dd, J1=12,3

Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 1,98(dd, J1=1,5 Hz, J2=6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H37N3O8: 579,6; znaleziono (M-17)⁺: 562,3.

P r z y k ł a d 79

Do roztworu związku 43 (25 mg, 0,422 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek hydrocynamoilu (6,27 μΙ, 0,422 mmola) i pirydynę (3,41 μΙ, 0,422 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 4:1 do EtOAc) i uzyskano związek 85 (30 mg, 68%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,54 (EtOAc:MeOH 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,28-7,14(m, 5H), 6,45(s, 1H), 6,07(brd, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(s, 1H), 5,31(brt, 1H), 4,09-4,06(m, 3H), 3,80-3,75(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,57-3,51(m, 2H), 3,38(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,24(m, 1H), 3,00(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,89-2,85(m, 2H), 2,79(d, J=16,5 Hz, 1H), 2,61(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,79(dd, J1=12,3 Hz, J2=16,2 Hz, 1H), 0,72(d, J=6,6 Hz, 3H).

ESl-MS m/z: obliczono dla C40H45N5O8: 723,8; znaleziono (M+23)⁺: 746,3.

P r z y k ł a d 80

OMe OMe

Me Me O

Do roztworu związku 43 (20 mg, 0,0338 mmola) w CH2CI2 (0,25 ml) dodano w 0°C chlorek heksanoilu (4,72 μΙ, 0,0338 mmola) i pirydynę (2,73 μΙ, 0,0338 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1 do EtOAc) i uzyskano związek 86 (10 mg, 43%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,74 (EtOAc:MeOH 10:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,47(s, 1H), 6,12(brd, 1H), 6,00(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2

Hz, 1H), 5,30(m, 1H), 4,09-3,99(m, 3H), 3,84-3,82(m, 1H), 3,75(s, 3H), 3,57-3,55(m, 2H), 3,39(d,

J=6,9 Hz, 1H), 3,24(d, J=12,0 Hz, 1H), 3,04(dd, J1=9,0 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,77(d, J=115,3 Hz, 1H),

124

PL 215 769 B1

2,63(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,80(dd, J1=11,7 Hz,

J2=15,6 Hz, 1H), 1,55-1,50(m, 2H), 1,30-1,22(m, 6H), 0,87(t, J=6,9 Hz, 3H), 0,75(d, J=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H47N5O8: 689,8; znaleziono (M+1)⁺ 690,3.

P r z y k ł a d 81

Do roztworu związku 43 (33 mg, 0,0557 mmola) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek fenyloacetylu (7,36 μΙ, 0,0557 mmola) i pirydynę (4,5 μΙ, 0,0557 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 2:1) i uzyskano związek 87 (13 mg, 32%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,63 (heksan:EtOAc:MeOH 5:10:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,37-7,20(m, 5H), 6,26(s, 1H), 6,14(d, J=6,6 Hz, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,83(s, 1H), 5,27(t, J=6,2 Hz, 1H), 4,11(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,07(d, J=3,0 Hz, 1H), 4,04(s, 1H), 3,86-3,81(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,54-3,53(m, 2H), 3,44(bs, 2H), 3,36(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,22(dt, J1=2,7 Hz, J2=12,0 Hz, 1H), 2,93(dd, J1=7,2 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,77(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,59(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,26(s, 3H), 2,17(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,78(dd, J1=10,8 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 0,65(d, J=6,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H43N5O8: 709,8; znaleziono (M+1)⁺: 710,3.

P r z y k ł a d 82

Do roztworu związku 43 (30 mg, 0,05 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek propionylu (4,40 μΙ, 0,05 mmola) i pirydynę (4,04 μΙ, 0,05 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1 do EtOAc) i uzyskano związek 88 (18 mg, 56%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,49 (heksan:EtOAc:MeOH 1:10:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,46(s, 1H), 6,16(brd, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,95(s, 1H),

5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,34(brt, 1H), 4,12-4,06(m, 3H), 3,84(bs, 1H), 3,74(s, 3H), 3,63(dd, J1=6,3 Hz,

J2=12,9 Hz, 1H), 3,50-3,48(m, 1H), 3,39(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,23(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=8,4 Hz,

PL 215 769 B1

125

J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,63(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 1,87-1,80(m, 1H), 1,06(t, J=7,5 Hz, 3H), 0,74(d, J=6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H41N5O8: 647,7; znaleziono (M+1)⁺: 648,2.

P r z y k ł a d 83

89

Do roztworu związku 43 (20 mg, 0,0338 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek propionylu (3,238 μΙ, 0,0338 mmola) i pirydynę (2,73 μΙ, 0,0338 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 3:1 do EtOAc) i uzyskano związek 89 (11,5 mg, 52%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,57 (EtOAc:MeOH 10:1) ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,82-6,70(m, 1H), 6,46(s, 1H), 6,11(d, 1H), 6,00(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,85(s, 1H), 5,77(dd, J1=1,5 Hz, J2=15,3 Hz, 1H), 5,37(bst, 1H), 4,13-4,06(m, 3H), 3,19(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,55(m, 2H), 3,38(d, J=1,5 Hz, 1H), 3,23(d, J=11,4 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=15,0 Hz, 1H), 2,65(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,85-1,82(m, 4H), 0,77(d, J=6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H41N5O8: 659,7; znaleziono (M+1)⁺: 660,3.

P r z y k ł a d 84

Do roztworu związku 43 (15 mg, 0,0253 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek Cbz-L-VaI-OH (6,39 μΙ, 0,0253 mmola) i karbonylodiimidazol (4,86 μΙ, 0,03 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1 do EtOAc) i uzyskano związek 90 (6,7 mg, 32%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,79 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,35(bs, 5H), 6,46(s, 1H), 6,28(d, J=6,0 Hz, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,77(s, 1H), 5,44(bs, 1H), 5,30(bs, 1H), 5,08(s, 2H), 4,09-4,06(m, 3H), 3,94-3,89(m, 1H), 3,70-3,66(m, 5H), 3,38(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,01 96(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,3 Hz, 1H),

126

PL 215 769 B1

2,79(d, J=14,1 Hz, 1H), 2,63(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,20(s, 3H), 1,99(s, 3H),

1,97-1,81(m, 2H), 0,83(d, J=6,6 Hz, 3H), 0,80(d, J=6,6 Hz, 3H), 0,75(d, J=6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C44H52N6O10: 824,9; znaleziono (M +1)⁺:825,4.

P r z y k ł a d 85

Do roztworu związku 62 (20 mg, 0,030 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (154 mg, 0,90 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 3:1) i uzyskano związek 91 (13 mg, 66%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,18 (EtOAc:MeOH 10:1).

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H44N4O9: 652,7; znaleziono (M-17)⁺:635,3.

P r z y k ł a d 86

Do roztworu związku 85 (10 mg, 0,0138 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (70,4 mg, 0,414 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 4:1) i uzyskano związek 92 (7 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,20 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,25-7,13(m, 5H), 6,47(s, 1H), 6,13(brd, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,34(brt, 1H), 4,50(bs, 1H), 4,40(bs, 1H), 4,00(bs, 1H), 3,76(s, 3H), 3,70-3,65(m, 3H), 3,34(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,17(d, J=5,1 Hz, 1H), 2,98-2,83(m, 3H), 2,72(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,44(d, J=19,2 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,27(s, 6H), 1,97(s, 3H), 1,72(m, 1H), 0,82(d, J=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H46N4O9: 714,8; znaleziono (M-17)⁺: 697,3.

PL 215 769 B1

127

P r z y k ł a d 87

Do roztworu związku 86 (6 mg, 0,0087 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (44 mg, 0,26 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml) i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 93 (5 mg, 85%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,018 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,48(s, 1H), 6,17(d, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,33(bs, 1H), 4,51(d, 1H), 4,40(d, 1H), 4,00(d, 1H), 3,78(s, 3H), 3,76-3,65(m, 2H), 3,36-3,32(m, 2H), 3,18(d, J=6,9 Hz, 1H), 2,98-2,89(m, 1H), 2,71(d, J=15,0 Hz, 1H), 2,45(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,26(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,68-1,50(m, 3H), 1,29-1,19(m, 6H), 0,88-0,84(m, 6H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H48N4O9: 680,7; znaleziono (M-17)⁺: 663,3.

P r z y k ł a d 88

Do roztworu związku 87 (12 mg, 0,0169 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (86 mg, 0,507 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml) i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 94 (8,8 mg, 74%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,34-7,18(m, 5H), 6,37(s, 1H), 6,20(d, 1H), 5,96(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,30(t, 1H), 4,50(bs, 1H), 4,39(d, J=1,8 Hz, 1H), 3,99(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,73(s, 3H), 3,69-3,60(m, 3H), 3,37-3,30(m, 3H), 3,17(d, J=18,1 Hz, 1H), 2,89(dd, J1=7,5 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,21(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,71(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,0 Hz, 1H), 0,77(d, J=6,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H44N4O9: 700,7; znaleziono (M-17)⁺: 683,2.

128

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 89

Do roztworu związku 88 (14 mg, 0,0216 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (110 mg, 0,648 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 95 (9,7 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,16 (EtOAc:MeOH 5:1).

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H42N4O9: 638,7; znaleziono (M-17)⁺: 621,2.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,48(s, 1H), 6,10(d, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,36(bs, 1H), 4,51(bs, 1H), 4,40(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,00(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,78(s, 3H), 3,76-3,62(m, 3H), 3,33(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,18(d, J=8,4 Hz, 1H), 2,94(dd, J1=8,4 Hz, J2=16,5 HZ, 1H), 2,72(d, J=15,0 Hz, 1H), 2,45(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,22(s, 3H), 1,97(s, 3H), 1,86(m, 2H), 1,73(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,0 Hz, 1H), 1,05(t, J=7,8 Hz, 3H), 0,83(d, J=6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H42N4O9: 638,7; znaleziono (M-17)⁺: 621,2.

P r z y k ł a d 90

Do roztworu związku 89 (10 mg, 0,015 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (77,2 mg, 0,454 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 1:1) i uzyskano związek 96 (9 mg, 92%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,016 (EtOAc.MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,76-6,69(m, 1H), 6,47(s, 1H), 6,18(brd, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,71(dd, J1=1,5 HZ, J2=16,2 Hz, 3H), 5,32(bs, 1H), 4,50(m, 1H), 4,41(m, 1H), 3,99(m, 1H), 3,78(m, 4H), 3,64-3,58(m, 2H), 3,34(d, J=11,1 Hz, 1H), 3,17(d, J=8,6 Hz, 1H),

PL 215 769 B1

129

2,95(dd, J1=7,5 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 2,70(d, J=16,2 Hz, 1H), 2,48(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,17(s, 6H), 1,97(s, 3H), 1,82-1,74(m, 4H), 0,88(t, J=5,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H42N4O9: 650,7; znaleziono (M-17)⁺: 633,3.

Do roztworu związku 25 (100 mg, 0,177 mmola) w CH2CI2 (0,5 ml) dodano w 0°C chlorek butyrylu (24 μΙ, 0,23 mmola) i pirydynę (17 μΙ, 0,212 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (30 ml) i przemyto 0,1N HCI (20 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 3:1) i uzyskano związek 97 (99 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,64 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,66(s, 1H), 6,16-6,05(m, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,87(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,40(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,26(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,13-5,08(m, 2H), 4,44(dd, J1=3,6 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 4,21-4,07(m, 5H), 3,74(m, 1H), 3,72(s, 1H), 3,57(s, 3H), 3,35(d, J=10,5 Hz, 1H), 3,26-3,21(m, 2H), 3,98(dd, J1=8,7 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,54(d, J=18,0 Hz), 2,30(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,13(s, 3H), 1,92-1,65(m, 3H), 1,42-1,34(m, 2H), 0,80(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H43N3O9: 633,7; znaleziono (M+1)⁺: 634,3.

P r z y k ł a d 92

Do roztworu związku 25 (100 mg, 0,177 mmola) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek trans3-(trifluorometylo)cynamoilu (35 μΙ, 0,23 mmola) i pirydynę (17 μΙ, 0,212 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (30 ml) i przemyto 0,1 N HCI (20 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1) i uzyskano związek 98 (99 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,478 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,64-7,48(m, 4H), 7,37(d, J=15,6 Hz, 1H), 6,62(s, 1H), 6,16-6,07(m, 1H), 6,12(d, J=15,6 Hz, 1H), 5,94(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,89(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,41 (dd, J1=1,8 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,28(dd, J1=1,8 HZ, J2=12,0 HZ, 1H), 5,04(q, J=6,0 Hz, 1H), 4,60(dd, J1=3,3 HZ, J2=11,1 Hz, 1H), 4,22-4,15(m, 5H), 3,90(dd, J1=4,2 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,55(s, 3H), 3,38(s, 3H), 3,35-3,34(m, 1H), 3,27-3,25(m, 1H), 3,22(bs, 1H), 2,98(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,61(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,16(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,80(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C41H42F3N3O8: 761,7; znaleziono (M+1)⁺: 762,3.

130

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 93

Do roztworu związku 25 (68 mg, 0,12 mmola) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek hydrocynamoilu (20 μΙ, 1,12 mmola) i pirydynę (10 μΙ, 1,01 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (30 ml) i przemyto 0,1 N HCI (20 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 5:1 do heksan:EtOAc 2:1) i uzyskano związek 99 (41 mg, 49%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,47 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,29-7,18(m, 3H), 7,04-7,02(m, 2H), 6,66(s, 1H), 6,16-6,07(m, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,87(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,40(dd, J1=1,7 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 5,26(dd, J1=1,7 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,09(dd, J1=6,0 Hz, J2=8,7 Hz, 2H), 4,43(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 4,20-4,14(m, 3H), 4,06(t, J=3,7 Hz, 1H), 4,02(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,72(dd, J1=4,5 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,56(s, 3H), 3,55(s, 3H), 3,32(brd, J=8,7 Hz, 1H), 3,26(dd, J1=1,9 Hz, J2=8,1 Hz, 1H), 3,23-3,20(m, 1H), 3,01 (brd, J=8,1 Hz, 1H), 3,23-3,20(m, 1H), 3,26(dd, J1=1,9 Hz, J2=8,1 Hz, 1H), 2,95(d, J=1,8 Hz, 1H), 2,71-2,64(m, 3H), 2,53(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,26(s, 3H), 2,14(s, 6H), 1,83(dd, J1=12,3 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H45F3N3O8: 695,3; znaleziono (M+1)⁺: 696,3.

P r z y k ł a d 94

Do roztworu związku 25 (100 mg, 0,177 mmola) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek cynamoilu (35 mg, 0,21 mmola) i pirydynę (17 μΙ, 0,212 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (30 ml) i przemyto 0,1 N HCI (20 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 6:1) i uzyskano związek 100 (94 mg, 76%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,49 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,42-7,33(m, 6H), 6,62(s, 1H), 6,16-6,05(m, 1H), 6,10(d, J=15,9Hz, 1H), 5,94(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,43(dd, J1=3,0 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,27(dd, J1=3,0 Hz, J2=12,0 HZ, 1H), 5,04(q, J=6,0 Hz, 1H), 4,55(dd, J1=3,9 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 4,22-4,15(m, 5H), 3,87(dd, J1=4,5 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,55(s, 3H), 3,39(s, 3H), 3,36-3,33(m, 1H), 3,26-3,22(m, 2H), 2,98(dd, J1=8,1 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,63(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,82(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H43N3O8: 693,3; znaleziono (M+1)⁺: 694,3.

PL 215 769 B1

131

P r z y k ł a d 95

Do roztworu związku 97 (40 mg, 0,063 mmola) w CH2CI2 (0,7 ml) dodano w 23°C kwas octowy (17,8 μΙ), Pd(PPh)2CI2 (3,64 mg, 0,0052 mmola) i Bu3SnH (67,9 μΙ, 0,252 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w tej temperaturze, po czym roztwór wylano na kolumnę chromatograficzną typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 5:1 do heksan:EtOAc 3:1) i uzyskano związek 101 (30 mg, 80%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,4 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,65(s, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,82(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,54(s, 1H), 5,33(d, J=6,0 Hz, 1H), 5,13(d, J=6,0 Hz, 1H), 4,54(dd, J1=3,6 H, J2=11,4 Hz, 1H), 4,18(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,13(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,07(t, J=3,3 Hz, 1H), 3,75(dd, J1=3,9 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,70(s, 3H), 3,35(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,24(dd, J1=2,7 Hz, J2=8,7HZ, 1H), 3,10(dd, J1=2,4 Hz, J2=15,0 Hz, 1H), 3,01(d, J=8,1 Hz, 1H), 2,95(d, J=7,8 Hz, 1H), 2,58(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,10(s, 3H), 1,89-1,66(m, 3H), 1,36-1,25(m, 2H), 0,77(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H39N3O8: 593,6; znaleziono (M+1)⁺: 594,8.

P r z y k ł a d 96

Do roztworu związku 98 (37 mg, 0,0485 mmola) w CH2CI2 (0,7 ml) dodano w 23°C kwas octowy (20 μΙ), Pd(PPh3)2CI2 (4 mg, 0,0057 mmola) i Bu3SnH (53 μΙ, 0,194 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin w tej temperaturze, po czym roztwór wylano na kolumnę chromatograficzną typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 6:1 do heksan: EtOAc 2:1) i uzyskano związek 102 (25 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,38 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,63-7,60(m, 2H), 7,50-7,49(M, 2H), 7,24(d, J=15,9 Hz, 1H), 6,59(s, 1H), 5,98(d, J=15,9 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,84(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,66(s, 1H), 5,20(d, J=6,0 Hz, 1H), 4,87(d, J=6,0 Hz, 1H), 4,71(dd, J1=2,7 Hz, J2=10,8 Hz, 1H), 4,16-4,15(m, 3H), 3,93(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,66(s, 3H), 3,36(brd, J=10,2 Hz, 1H), 3,26(brd, J=11,7 Hz, 1H), 3,10(brd, J=15,0 Hz, 1H), 2,96(dd, J1=7,8 Hz, J2=17,7 HZ, 1H), 2,62(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,27(s,3H), 2,14(s, 3H), 1,97(s,3H), 1,79(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,8 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H38F3N3O8: 721,7; znaleziono (M+1)⁺: 722,2.

132

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 97

Do roztworu związku 99 (41 mg, 0,059 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 23°C kwas octowy (25 μΙ), Pd(PPh3)2CI2 (5 mg, 0,0071 mmola) i Bu3SnH (63 μΙ, 0,235 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4,5 godziny w tej temperaturze, po czym roztwór wylano na kolumnę chromatograficzną typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 6:1 do heksan:EtOAc 1:1) i uzyskano związek 103 (34,2 mg, 89%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,49 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,24-7,15(m, 3H), 7,03-7,01(m, 2H), 6,65(s, 1H), 5,89(bs, 1H), 5,82(bs, 1H), 5,49(s, 1H), 5,31 (d, J=6,0 Hz, 1H), 5,12(d, J=6,0 Hz, 1H), 4,53(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 4,18(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,07(m, 2H), 3,75(dd, J1=3,9 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,69(s, 3H), 3,62(s, 3H), 3,32(d, J=7,8 Hz, 1H), 3,25(d, J=10,8 Hz, 1H), 3,12(d, J=14,7Hz, 1H), 3,00(d, J=7,8 Hz, 1H), 2,94(d, J=8,1 Hz, 1H), 2,66-2,60(m, 3H), 2,57(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,28(s, 3H), 2,14(s, 3H), 2,10(bs, 3H), 1,83-1,74(m, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H41N3O8: 655,7; znaleziono (M+1)⁺: 656,3.

P r z y k ł a d 98

Do roztworu związku 100 (40 mg, 0,0576 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 23°C kwas octowy (25 μΙ), Pd(PPh3)2CI2 (4,8 mg, 0,007 mmola) i Bu3SnH (62 μΙ, 0,23 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin w tej temperaturze, po czym roztwór wylano na kolumnę chromatograficzną typu flash (SiO2, gradient heksan.EtOAc 4:1 do heksan: EtOAc 1:1) i uzyskano związek 104 (30 mg, 82%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,41 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,36(s, 5H), 7,30(d, J=16,2 Hz, 1H), 6,59(s, 1H), 5,99(d, J=16,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,84(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,60(s, 1H), 5,20(d, J=5,6 Hz, 1H), 4,94(d, J=5,6 Hz, 1H), 4,63(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,4 Hz, 1H), 4,18-4,15(m, 3H), 3,91 (dd, J1=3,9 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,66(s, 3H), 3,49(s, 3H), 3,35(brd, J=15,0 Hz, 1H), 3,26(brd, J=11,4 Hz, 1H), 3,10(brd, J=15,0 Hz, 1H), 2,96(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,0 HZ, 1H), 2,63(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,27(s, 3H), 2,13(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,80(dd, J1=12,0 Hz, J2=14,4 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H39N3O8: 653,7; znaleziono (M+23)⁺: 676,2.

PL 215 769 B1

133

P r z y k ł a d 99

Do roztworu związku 101 (24 mg, 0,041 mmola) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (3 μΙ, 0,041 mmola) i pirydynę (3,3 μΙ, 0,041 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 5:1 do heksan:EtOAc 1:1) i uzyskano związek 105 (23 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,40 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,66(s, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,58(d, J=3,0 Hz, 1H), 4,54(d, J=3,0 Hz, 1H), 4,07(t, J=3,3 Hz, 1H), 3,77(dd, J1=3,9 Hz, J2=11,4 Hz, 1H), 3,73(s, 3H), 3,57(s, 3H), 3,35(d, J=10,2 Hz, 1H), 3,22(dt, J1=2,7 Hz, J2=11,7Hz, 1H), 2,98(dd, J1=8,1 HZ, J2=18,0 HZ, 1H), 2,80(d, J=13,5 Hz, 1H), 2,58(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,30(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,89-1,76(m, 2H), 1,72-1,66(m, 1H), 1,37-1,25(m, 2H), 0,78(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H41N3O9: 635,7; znaleziono (M+1)⁺: 636,8.

P r z y k ł a d 100

Do roztworu związku 102 (16 mg, 0,022 mmola) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (1,9 μΙ, 0,0266 mmola) i pirydynę (2,15 μΙ, 0,0266 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (7 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 4:1 do EtOAc) i uzyskano związek 106 (12 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,60 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,83(bs, 1H), 7,65-7,58(m, 2H), 7,49-7,44(m, 1H), 7,14(d, J=16,2 Hz, 1H), 6,62(s, 1H), 6,06(d, J=16,2 Hz, 1H), 6,00(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,95(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,02(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,96(bs, 1H), 4,92(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,15-4,11(m, 3H), 3,88(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,08(bs, 3H), 2,93(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,80(d, J=13,2 Hz, 1H), 2,64(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 2,08(s, 3H), 1,91(s, 3H), 1,69(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H40F3N3O9: 763,7; znaleziono (M+1)⁺: 764,2.

134

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 101

Do roztworu związku 103 (34 mg, 0,052 mmola) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (4,4 μΙ, 0,062 mmola) i pirydynę (5 μΙ, 0,062 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (7 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 4:1 do EtOAc) i uzyskano związek 107 (25,5 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,48 (heksan.EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz1 CDCI3) δ 7,25-7,14(m, 3H), 7,06-7,04(m, 2H), 6,66(s, 1H), 5,96(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,11(d, J=5,4 Hz, 1H), 4,14(d, J=3,3 Hz, 1H), 4,07(d, J=3,6 Hz, 1H), 4,04(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,78(dd, J1=3,3 Hz, J2=10,8 Hz, 1H), 3,55(s, 3H), 3,51(s, 3H), 3,33(brd, J=8,1 Hz, 1H), 3,23(dt, J1=2,7 Hz, J2=11,7 Hz, 1H), 2,97(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,81(d, J=14,1 Hz, 1H), 2,63-2,52(m, 3H), 2,33(s, 3H), 2,29(s, 3H), 2,26-2,02(m, 2H), 2,09(s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,74(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H43N3O9: 697,7; znaleziono (M+1)⁺: 698,3.

P r z y k ł a d 102

Do roztworu związku 104 (29 mg, 0,0443 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (3,77 μΙ, 0,053 mmola) i pirydynę (4,3 μΙ, 0,053 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan.EtOAc 4:1 do EtOAc) i uzyskano związek 108 (21,6 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,58 (heksan.EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,47-7,44(m, 2H), 7,35-7,34(m, 3H), 7,29(d, J=15,9 Hz, 1H), 6,62(s, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,05(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,94(d, J=5,7Hz, 1H), 4,81(d, J=11,5 Hz, 1H), 4,16-4,11(m, 3H), 3,34(brd, J=5,4 Hz, 1H), 3,24(bs, 3H), 3,22-3,20(m, 2H), 2,94(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,80(d, J=14,1 Hz, 1H), 2,64(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,28(s, 3H), 2,09(s, 3H), 1,94(s, 3H), 1,71(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H41N3O9: 695,7; znaleziono (M+1)⁺: 696,2.

PL 215 769 B1

135

P r z y k ł a d 103

105 109

Do roztworu związku 105 (16 mg, 0,025 mmola) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w ciągu 3,5 godziny w 23°C kwas trifluorooctowy (77 μΙ, 1 mmola). Mieszaninę reakcyjną potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan.EtOAc 1:1) i uzyskano związek 109 (12 mg, 81%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,32 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz,CDCI3) δ 6,43(s, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,69(s, 1H), 4,51(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 4,10-4,05(m,3H), 3,78-3,77(m, 1H), 3,75(s, 3H), 3,33(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,22(dt, J1=2,7 Hz, J2=12,0 Hz, 1H), 2,96(dd, J1=8,4 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,80(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,55(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,87-1,66(m, 3H), 1,37-1,27(m, 2H), 0,77(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H31N3O8: 591,6; znaleziono (M+1)⁺: 592,8.

P r z y k ł a d 104

Do roztworu związku 106 (90 mg, 0,1178 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (750 μΙ, 4,71 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 7 godzin w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (20 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 15 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan.EtOAc 1:1) i uzyskano związek 110 (71 mg, 84%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,6 (heksan.EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,76(bs, 1H), 7,62-7,57(m, 2H), 7,48-7,45(m, 1H), 7,12(d, J=16,2 Hz, 1H), 6,37(s, 1H), 6,00(d, J=16,2 Hz, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,60(bs, 1H), 4,88(d, J=10,2 Hz, 1H), 4,14(bs, 1H), 4,10(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,03(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,89(dd, J1=2,7 Hz, J2=11,4 Hz, 1H), 3,32(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,26-3,21(m, 4H), 2,91 (dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,82(d, J=13,8 Hz, 1H), 2,58(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,05(s, 3H), 1,89(s, 3H), 1,84(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H36F3N3O8: 719,7; znaleziono (M+1)⁺: 720,3.

136

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 105

Do roztworu związku 107 (20 mg, 0,286 mmola) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (88 μΙ, 1,144 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny w 23°C. Mieszaninę reakcyjną potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan: EtOAc 1:1) i uzyskano związek 111 (18 mg, 96%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,39 (heksan.EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,16(m, 3H), 7,06-7,04(m, 2H), 6,43(s, 1H), 5,96(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 6,66(s, 1H), 4,52(dd, J1=3,3 HZ, J2=11,1 Hz, 1H), 4,07(s, 1H), 4,05(d, J=3,3 Hz, 1H), 4,03(d, J=2,4Hz, 1H), 3,76(dd, J1=3,6 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,56(s, 3H), 3,31(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,23(d, J=12,0 Hz, 1H), 2,95(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,80(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,63-2,58(m, 2H), 2,53(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,61(s, 3H), 2,21-2,09(m, 2H), 2,13(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,85(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H39N3O8: 653,7; znaleziono (M+1)⁺: 654,3.

P r z y k ł a d 106

Do roztworu związku 108 (14 mg, 0,02 mmola) w CH2CI2 (0,4 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (61,5 μΙ, 0,8 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 6 godzin w 23°C. Mieszaninę reakcyjną potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan: EtOAc 2:1) i uzyskano związek 112 (12 mg, 92%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,36 (heksan:EtOAc 1:1).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H37N3O8: 651; znaleziono (M+l)⁺: 652,2.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,46-7,45(m, 2H), 7,35-7,20(m, 4H), 6,38(s, 1H), 6,05(d, J=15,9 Hz, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,57(s, 1H), 4,71(d, J=9,3 Hz, 1H), 4,17-4,13(m, 2H), 4,08(d, J=1,9 Hz, 1H), 3,89(dd, J1=3,6 Hz, J2=11,4 Hz, 1H), 3,33(m, 5H), 3,26-3,22(m, 1H), 2,93(dd, J1=9,0 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 2,34(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,05(s, 3H), 1,97(s, 3H), 1,81(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H37N3O8: 651; znaleziono (M+l)⁺: 652,2.

PL 215 769 B1

137

P r z y k ł a d 107

109 ¹¹³

Do roztworu związku 109 (10 mg, 0,017 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (86 mg, 0,5 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc: MeOH 3:1) i uzyskano związek 113 (7 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,41 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,45(s, 1H), 5,95(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,65(bs, 1H), 4,50-4,48(m, 2H), 4,44(d, J=2,1 Hz, 1H), 3,96(d, J=3,0 Hz, 1H), 3,76(s, 3H), 3,74-3,70(m, 1H), 3,30(d, J=12,3 Hz, 1H), 3,13(d, J=7,5 Hz, 1H), 2,86(dd, J1=5,7 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,73(d, J=14,7 Hz, 1H), 2,48(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,17(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,86-1,55(m, 3H), 1,42-1,23(m, 2H), 0,75(t, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H38N2O9: 582,6; znaleziono (M-17)⁺: 565,3.

P r z y k ł a d 108

Do roztworu związku 110 (42,8 mg, 0,059 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (303 mg, 1,78 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 114 (30 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,30 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,75(bs, 1H), 7,61-7,56(m, 2H), 7,45-7,42(m, 1H), 7,12(d, J=16,2 Hz, 1H), 6,38(s, 1H), 6,02(d, J=16,2 Hz, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,50(bs, 1H), 4,87(bs, 1H), 4,56(m, 1H), 4,45(bs, 1H), 3,92(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,31(dt, J1=3,6 Hz, J2=12,9 Hz, 1H), 3,21(bs, 3H), 3,13(d, J=7,8 Hz, 1H), 2,82(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,75(d, J=14,7 Hz, 1H), 2,49(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,05(s, 3H), 1,89(s, 3H), 1,78(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H37F3N2O9: 710,6; znaleziono (M-17)⁺: 693,2.

138

PL 215 769 B1

P r z y k ł a d 109

Do roztworu związku 111 (12 mg, 0,018 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (93,5 mg, 0,55 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc: MeOH 1:1) i uzyskano związek 115 (10 mg, 86%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,43 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,14(m, 3H), 7,05-7,03(m, 2H), 6,45(s, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,63(brd, 1H), 4,55-4,49(m, 2H), 4,43(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,96(d, J=3,1 Hz, 1H), 3,80-3,73(m, 1H), 3,56(bs, 3H), 3,32(dt, J1=3,3 Hz, J2=12,6 Hz, 1H), 3,13(d, J=6,0 Hz, 1H), 2,86(dd, J1=7,5 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,74(d, J=14,7 Hz, 1H), 2,61-2,56(m, 2H), 2,47(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,13(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,99-1,94(m, 2H), 1,78(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,0 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H40N2O9: 644,7; znaleziono (M-17)⁺: 627,2.

P r z y k ł a d 110

Do roztworu związku 112 (12 mg, 0,018 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (93 mg, 0,55 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 1:1) i uzyskano związek 116 (8 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,41 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,44-7,43(m, 2H), 7,34-7,27(m, 4H), 6,39(s, 1H), 6,03(d, J=15,9 Hz, 1H), 5,96(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,55(m, 1H), 4,47(m, 1H), 4,50(m, 1H), 3,94(d, J=3,6 Hz, 1H), 3,85(dd, J1=3,3 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,66(bs, 3H), 3,34-3,31(m, 2H), 3,13(d, J=5,1 Hz, 1H), 2,93-2,73(m, 2H), 2,53(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,94-1,82(m, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H38N2O9: 642,7; znaleziono (M-17)⁺: 625,2.

PL 215 769 B1

139

P r z y k ł a d 111

Do roztworu związku 17 (6,28 g, 9,06 mmola) w CH2CI2 (45,3 ml) dodano w 0°C chloromrówczan allilu (3,85 ml, 36,24 mmola) i pirydynę (2,93 ml, 36,24 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 16 godzin, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (150 ml) i przemyto 0,1 N HCI (2 x 100 ml).

Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując związek 117 (5,96 g, 84%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,56 (CH2CI2-EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,72(s, 1H), 6,05-5,94(m, 1H), 6,01(s, 1H), 5,91(s, 1H), 5,44(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,35(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,34(m, 1H), 5,10(d, J=5,7 Hz, 1H), 5,05(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,68(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,65(dt, J1=1,2 Hz, J2=6 Hz, 1H), 4,18(brd, J=9 Hz, 2H), 4,04(bs, 1H), 3,70(s, 3H), 3,67-3,60(m, 1H), 3,55(s, 3H), 3,43-3,41(m, 2H), 3,29-3,25(m, 2H), 3,00(dd, J1=8,7 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,90(dd, J1=2,4 Hz, J2=16,2 Hz, 1H), 2,75(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,35(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,06(s, 3H), 1,83(dd, J1=11,4 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,39(s, 9H), 0,73(d, J =6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,1, 152,8, 148,6, 148,3, 144,6, 140,7, 140,6, 131,5, 131,2,

131,1, 130,4, 125,3, 125,0, 123,3, 120,9, 119,1, 118,8, 117,6, 112,9, 112,0, 101,6, 99,2, 71,8, 69,0,

68,4, 59,7, 59,2, 57,6, 57,3, 56,7, 55,8, 55,2, 41,4, 39,9, 28,2, 26,0, 25,0, 18,6, 15,6, 9,0.

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H51N5O11: 777,8; znaleziono (M+1)⁺: 778,3.

P r z y k ł a d 112

Do roztworu związku 117 (3,96 g, 5,09 mmola) w MeOH (37,4 ml) dodano w 0°C trimetylochlorosilan (6,5 ml, 50,9 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godziny, a następnie usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono EtOAc (70 ml) i przemyto nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 (2 x 45 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto w próżni otrzymując związek 118 (2,77 g, 86%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,61 (heksan:EtOAc 1:1).

140

PL 215 769 B1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 6,45(m, 1H), 6,10-6,03(m, 1H), 6,00(s, 1H), 5,93(s, 1H), 5,47(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,38(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 4,81-4,64(m, 2H), 4,10-4,03(m, 3H), 3,75(s, 3H), 3,70-3,44(m, 2H), 3,35(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,28(dt, J1=2,7 Hz, J2=9 HZ, 1H), 2,98(dd, J1=7,8 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,90(dd, J1=2,7 Hz, J2=16,2 Hz, 1H), 2,78(dd, J1=6,9 Hz, J2=14,1 Hz, 1H), 2,63(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,30(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,88(dd, J1=13,2 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 0,95(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 175,8, 152,9, 146,6, 144,6, 142,5, 140,8, 140,6, 131,5, 131,3,

128.5, 121,1, 120,8, 118,9, 117,8, 117,0, 113,2, 111,9, 101,7, 68,9, 60,6, 59,1, 56,6, 56,4, 55,7, 55,2,

50.5, 41,7, 39,4, 26,1, 25,0, 21,0, 15,6, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H39N5O8: 633,6; znaleziono (M+l)⁺: 634,2. P r z y k ł a d 113

Do roztworu związku 118 (3,52 g, 5,56 mmola) w CH2CI2 (28 ml) dodano w 23°C izotiocyjanian fenylu (3,99 ml, 33,36 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 3 godziny, po czym usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash i uzyskano związek 119 (3,5 g, 82%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,52 (CH2CI2:EtOAc 1:5).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,69(bs, 1H), 7,49-7,46(m, 2H), 7,34-7,21(m, 2H), 6,96(d, J=6,9 Hz, 1H), 6,06-5,97(m, 1H), 6,03(s, 1H), 5,96(bs, 1H), 5,91(s, 1H), 5,66(s, 1H), 5,47(dd, J1=1,5 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,37(dd, J1=1,5 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,36(s, 1H), 4,75-4,70(m, 2H), 4,54-4-49(m, 1H), 4,14(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,07-4,06(m, 2H), 3,70(s, 3H), 3,44(m, 1H), 3,35(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,21 (dt, J1=2,7 Hz, J2=6,6 Hz, 1H), 2,94-2,82(m, 2H), 2,63(d, J=18 Hz, 1H), 2,24(s, 3H), 2,06(s, 3H), 2,06(s, 3H), 1,90(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 0,71(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75MHz, CDCI3) δ 178,6, 171,9, 152,8, 146,7, 144,5, 142,6, 140,8,140,5, 136,3,

131,3, 131,0, 129,9, 129,8 128,9, 126,7, 125,2, 124,3, 121,1, 120,6, 118,9, 317,7, 116,5, 112,8, 112,1, 101,6, 68,9, 60,5, 58,9, 57,3, 56,1, 55,9, 55,1, 53,3, 41,5, 39,2, 25,9, 24,6, 20,9, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H44Na3O8S: 768,8; znaleziono (M+1)⁺: 769,3.

P r z y k ł a d 114

11S

PL 215 769 B1

141

Do roztworu związku 119 (3,38 g, 4,4 mmola) w MeOH (22 ml) dodano w 0°C trimetylochlorosilan (2,3 ml, 22 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 1,5 godziny, a następnie usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono EtOAc (100 ml) i przemyto 0,1 N HCI (2 x 75 ml). Warstwę wodną zalkalizowano nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 i ekstrahowano CH2CI2 (2 x 100 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto w próżni otrzymując związek 120 (2,47 g, 100%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,45(s, 1H), 6,05-5,98(m, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,44(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,35(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 4,75-4,71 (m, 2H), 4,12-4,30(m, 1H), 3,99(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,92(bs, 1H), 3,73(s, 3H), 3,36-3,26(m, 2H), 3,06(dd, J1=8,4 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,89(dd, J1=2,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 2,75-2,73(m, 2H), 2,48(d, J=18 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,05(s, 3H), 1,85(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

¹³C NMR 75 MHz, CDCI3) δ 153,0, 146,6, 144,5, 142,8, 140,7, 131,5, 130,5, 128,9, 121,3, 120,9, 119,1, 117,9, 116,7, 113,8, 111,6, 101,5, 69,0, 60,6, 59,8, 58,7, 56,5, 56,0, 55,3, 44,2, 41,8,

31,6, 26,1, 25,7, 15,7, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C30H34N4O7: 562,6; znaleziono (M+1)⁺: 563,2.

P r z y k ł a d 115

Do roztworu związku 120 (2,57 g, 4,4 mmola) w CH2CI2 (44 ml) dodano w -20°C TrocCI (0,91 ml, 6,6 mmola) i pirydynę (0,53 ml, 6,6 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w 0°C przez 30 minut, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (50 ml) i przemyto 0,1 N HCI (2 x 25 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując związek 121 (3,24 g, 100%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,62 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 6,07-6,01(m, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,93(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,68(s, 1H), 5,46(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,37(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 4,74(t, J=5,7 Hz, 2H), 4,63-4,62(m, 1H), 4,54(d, J=12 Hz, 1H), 4,30(d, J=12 Hz, 1H), 4,14-4,11(m, 2H), 4,02-4,01(m, 2H), 3,75(s, 3H), 3,36-3,26(m, 3H), 3,04(dd, J1=8,1 Hz, J2=17,7 HZ, 1H), 2,91(dd, J1=2,4 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 2,60(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,84(dd, J1=12 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H35CI3N4O9: 738,0; znaleziono (M+1)⁺: 737,2.

P r z y k ł a d 116

142

PL 215 769 B1

Do roztworu związku 121 (0,45 g, 0,60 mmola) w CH3CN (4 ml) dodano w 0°C diizopropyloetyloaminę (2,17 ml, 12,46 mmola), eter bromometylometylowy (0,76 ml, 9,34 mmola) i dimetyloaminopirydynę (8 mg, 0,062 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w 40°C przez 5 godzin. Następnie reakcję rozcieńczono CH2CI2 (50 ml) i przemyto 0,1 N HCI (2 x 25 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymujac związek 122 (0,453 g, 95%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,31 (RP-18 CH3CN-H2O 8:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,70(s, 1H), 6,05-5,99(m, 1H), 5,97(s, 1H), 5,92(s, 1H), 5,43(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,34(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,10-5,04(171, 2H), 4,72-4,68(m, 2H), 4,60(t, J=5,7 Hz, 1H), 4,49(d, J=12,3 Hz, 1H), 4,38(d, J=12,3 Hz, 1H), 4,18(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,03-4,00(m, 2H), 3,71(s, 3H), 3,54(s, 3H), 3,38-3,22(m, 4H), 3,04(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,91(dd, J1=2,4 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 2,61(d, J=18 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,76(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H39CI3N4O10: 782,0; znaleziono (M+1)⁺: 783,2.

P r z y k ł a d 117

Do zawiesiny związku 122 (0,45 g, 0,579 mmola) w 90% wodnym kwasie octowym (6 ml) dodano sproszkowany cynk (0,283 g, 4,34 mmola) i reakcję mieszano przez 6 godz. w 23°C. Następnie mieszaninę przesączono przez warstwę celitu, który przemyto CH2CI2 (25 ml). Warstwę organiczną przemyto nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (pH=9) (2 x 15 ml), wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując związek 123 (0,351 g, 100%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,38 (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,68(s, 1H), 6,06-5,99(m, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,25 Hz, 1H), 5,44(dd, J1=1,5 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 5,36(dd, J1=1,5 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,08(q, J=5,7 Hz, 2H), 5,74-4,70(m, 2H), 4,02(d, J=3 Hz, 1H), 4,00(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,91(m, 1H), 3,71(s, 3H), 3,56(s, 3H), 3,37-3,35(m, 1H), 3,29(t, J=2,7 Hz, 1H), 3,08(dd, J1=7,5 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,90(dd, J1=2,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 2,74(dd, J1=2,4 Hz, J2=5,1 Hz, 2H), 2,48(d, J=18 Hz, 1H), 2,35(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,05(s, 3H), 1,80(dd, J1=12 Hz, J2=15,9 Hz, 2H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C32H38N4O8: 606,6; znaleziono (M+1)⁺: 607,3.

Do roztworu związku 120 (100 mg, 0,177 mmola) w CH2CI2 (0,7 ml) dodano w 0°C chlorek cynamoilu (29,5 μΙ, 0,177 mmola) i pirydynę (14,37 μΙ, 0,177 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (10 ml). WarPL 215 769 B1

143 stwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 2:1 do heksan:EtOAc 1:3) otrzymując związek 124 (86 mg, 70%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,77 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,39-7,26(m, 5H), 7,25(d, J=15,6 Hz, 1H), 6,44(s, 1H), 6,01(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,94(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,68(s, 1H), 5,65(d, J=15,6 Hz, 1H), 5,44(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,35(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,18(t, J=6 Hz, 1H), 4,73-4,69(m, 2H), 4,11-4,09(m, 3H), 3,66-3,58(m, 2H), 3,65(s, 3H), 3,38-3,31(m, 3H), 3,02(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,92(dd, J1=2,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 2,59(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,05(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,89(dd, J1=12,3 HZ, J2=16,2 HZ, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 165,5, 152,7, 146,6, 144,4, 142,6, 140.7, 140,5, 140,1, 134,7,

131,2, 130,6, 129,3, 128,7, 128,4, 127,6, 120.8, 120,5, 120,3, 118,9, 117,6, 116,5, 113,2, 111,8,

101,6, 68,8, 60,4, 59,0, 56,2, 56,1, 55,7, 55,0, 41,5, 40,6, 25,9, 25,1, 15,5, 9,0.

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H40N4O8: 692,7; znaleziono (M+1)⁺: 693,2.

P r z y k ł a d 119

Do roztworu związku 124 (495 mg, 0,713 mmola) w CH2CI2 (28 ml) dodano w 0°C kwas octowy (163 μΙ), Pd(PPh3)2CI2 (50 mg, 0,0713 mmola) i Bu3SnH (384 μΙ, 1,42 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w 23°C, po czym roztwor wylano na kolumnę chromatograficzna typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1 do EtOAc) i uzyskano związek 125 (435 mg, 100%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,22 (heksan:EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,36-7,33(m, 5H), 7,28(d, J=15,9 Hz, 1H), 6,45(s, 1H), 5,90(s, 1H), 5,83(s, 1H), 5,55(d, J=15,6 Hz, 1H), 5,24(t, J=12,9 Hz, 1H), 4,17(d, J=1,8 Hz, 1H), 4,10-4,07(m, 2H), 3,72(s, 3H), 3,46-3,32(m, 3H), 3,14-3,00(m, 2H), 2,54(d, J=18 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,05(s, 6H), 1,89(dd, J1=12 Hz, J2=15,3 Hz, 1H), ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 165,7, 146,9, 145,1, 144,2, 143,0, 140,8, 136,5, 134,5, 130,6,

129,4, 128,9, 127,9, 127,7, 120,8, 119,8, 117,8, 114,1, 112,9, 107,1, 100,8, 60,5, 59,2, 56,4, 56,0,

55,1, 41,4, 30,7, 25,5, 25,3, 15,5, 8,9.

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H36N4O6: 608,6; znaleziono (M+1)⁺: 609,2.

P r z y k ł a d 120

144

PL 215 769 B1

Do roztworu związku 125 (86 mg, 0,124 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (632 mg, 3,72 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 2:1) i uzyskano związek 126 (70 mg, 83%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,07 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,40-7,28(m, 5H), 7,25(d, J=15,6 Hz, 1H), 6,48(s, 1H), 6,00-5,94(m, 1H), 5,96(s, 1H), 5,92(s, 1H), 5,89(s, 1H), 5,53(d, J=15,6 Hz, 1H), 5,42-5,36(m, 2H), 5,31 (dd, J1=1,2 Hz, J2=10,8 Hz, 1H), 4,71-4,65(m, 2H), 4,51(d, J=3 Hz, 1H), 4,42(bs, 1H), 4,07(bs, 1H), 3,79(dd, J1=6,9 Hz, J2=12,9 Hz, 1H), 3,68(s, 3H), 3,62-3,59(m, 1H), 3,41-3,37(m, 1H), 3,16(d, J=7,8 Hz, 1H), 2,95(dd, J1=7,5 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 2,88-2,83(m, 1H), 2,43(d, J=18 Hz, 1H), 2,28(s, 3H), 2,10(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,81(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 165,5, 152,9, 146,7, 144,5, 144,4, 142.7, 141,0, 140,0, 134,6,

131,4, 130,7, 129,2, 128,8, 128,5, 127,8, 127,7, 124,6, 121,2, 120,9, 118,9, 116,5, 114,9, 314,7,

111,3, 101,6, 93,3, 92,3, 83,2, 68,9, 60,6, 57,8, 56,8, 56,6, 56,3, 52,5, 52,2, 41,6, 26,1, 24,6,

15,6, 9,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H41N3O9: 683,7; znaleziono (M-17)⁺: 666.3.

Do roztworu związku 120 (1,61 g, 2,85 mmola) w CH2Cl2 (4 ml) dodano w 0°C chlorek hydrocynamoilu (423 μ|, 2,85 mmola) i pirydynę (230 μ|, 2,85 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (50 ml) i przemyto 0,1 N HCI (30 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (SiO2, gradient heksan.EtOAc 2:1 do EtOAc) otrzymując związek 127 (1,64 g, 83%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,63 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,26-7,14(m, 3H), 7,04-7,01(m, 2H), 6,44(s, 1H), 6,07-5,99(m, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,75(bs, 1H), 5,45(dd, J1=1,5 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 5,36(dd, J1=1,5 Hz, J2=10,2 Hz, 1H), 5,03(t, J=5,7 Hz, 1H), 5,74-5,66(m, 2H), 4,09(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,97(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,62(dd, J1=8,4 Hz, J2=13,5 Hz, 1H), 3,42(s, 3H), 3,37-3,28(m, 3H), 3,04-2,87(m, 3H), 2,67-2,46(m, 4H), 2,29(s, 3H), 2,05(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,831,79(m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,8, 152,8, 146,7, 144,5, 144,4, 142,7, 140,9, 140,8, 140,6,

131,4, 130,7, 128,9, 128,4, 128,2, 128,1, 126,0, 120,8, 120,4, 118,9, 117,6, 116,6, 113,0, 111,9,

101,6, 68,9, 60,3, 59,0, 56,3, 56,2, 55,6, 55,1, 41,6, 40,3, 37,7, 31,0, 25,9, 25,2, 15,5, 9,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H42N4O8: 694,3; znaleziono (M+1)⁺: 695,3.

PL 215 769 B1

145

Do roztworu związku 127 (50 mg, 0,072 mmola) w CH3CN/H2O (1,5 ml/1 ml) dodano AgNO3 (444 mg, 2,16 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 24 godziny. Następnie dodano w 0°C solankę (10 ml) i wodny roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór ekstrahowano, a warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 3:1) i uzyskano związek 128 (30 mg, 61%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,65 (EtOAc:MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,22-7,11(m, 3H), 7,06-7,03(m, 2H), 6,43(s, 1H), 6,08-5,98(m, 1H), 5,96(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,66(bs, 1H), 5,44(dd, J1=1,5 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 5,36(dd, J1=1,5 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 4,78-4,65(m, 2H), 4,44(d, J=3 Hz, 1H), 4,36(bs, 1H), 3,99(td, J1=2,1 Hz, J2=9,9 Hz, 1H), 3,78-3,67(m, 1H), 3,56(dt, J1=1,5 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,43(s, 3H), 3,30-3,12(m, 2H), 3,02-2,89(m, 1H), 2,83(dd, J1=2,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 2,62-2,51(m, 2H), 2,36(d, J=18,6 Hz, 1H), 2,27(s, 3H), 2,02(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,86-1,66(m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,6, 146,7, 141,2, 141,1, 131,5, 130,5, 128,9, 128,3, 128,2,

128,2, 125,9, 124,7, 121,1, 121,0, 118,8, 111,3, 101,6, 94,0, 83,2, 68,8, 60,3, 57,9, 56,3, 52,3, 52,0, 41,7, 41,6, 41,1, 37,9, 31,1, 31,0, 26,1, 24,6, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H43N3O9: 685,7; znaleziono (M-17)⁺: 668,3.

Do roztworu związku 127 (1,64 g, 2,36 mmola) w CH3CN (12 ml) dodano w 0°C diizopropyloetyloaminę (8,22 ml, 47,2 mmola), eter bromometylometylowy (2,89 ml, 35,4 mmola) i dimetyloaminopirydynę (29 mg, 0,236 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w 40°C przez 5 godzin. Następnie reakcję rozcieńczono CH2CI2 (80 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 x 25 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując związek 129 (1,46 g, 84%), który użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

146

PL 215 769 B1

Rf: 0,24 (RP-18 CH3CN-H2O 8:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,27-7,11(m, 3H), 7,05-7,02(m, 2H), 6,67(s, 1H), 6,08-5,98(m, 1H), 5,96(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,44(dd, J1=1,2 Hz, J2=17,1Hz, 1H), 5,34(dd, J1=1,2 Hz, J2=10,5 Hz, 1H), 5,05(d, J=6 Hz, 1H), 5,00(d, J=6 Hz, 1H), 4,97(t, J=5,1 Hz, 1H), 4,75-4,68(m, 2H), 4,16(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,98-3,97(m, 1H), 3,68-3,67(m, 1H), 3,65-3,61(m, 1H), 3,52(s, 3H), 3,35(s, 3H), 3,32-3,26(m, 3H), 3,05-2,86(m, 3H), 2,59-2,48(m, 2H), 2,30(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,94(s, 3H), 1,91-1,67(m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,4, 152,7, 148,5, 148,3, 144,5, 140,9, 140,8, 140,4, 131,1, 130,9, 130,4, 130,1, 128,4, 128,2, 126,0, 124,6, 123,7, 120,3, 119,0, 112,9, 111,8, 101,6, 99,1, 68,9,

59,4, 59,1, 57,5, 56,7, 56,3, 55,4, 55,1, 41,5, 40,2, 37,7, 30,9, 25,8, 25,2, 15,5, 9,0.

ESI-MS m/z: obliczono dla C41H46N4O9: 738,8; znaleziono (M+23)⁺: 761,2.

P r z y k ł a d 124

Do roztworu związku 129 (1,46 g, 1,97 mmola) w CH2CI2 (40 ml) dodano w 0°C kwas octowy (450 μΙ), Pd(PPh3)2CI2 (138 mg, 0,197 mmola) i Bu3SnH (1,06 ml, 3,95 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin w 23°C, po czym roztwór wylano na kolumnę chromatograficzna typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1 do EtOAc) uzyskując związek 130 (1,1 g, 85%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,22 (heksan:EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,21-7,12(m, 3H), 6,98-6,95(m, 2H), 5,86(s, 1H), 5,84(s, 1H), 5,79(bs, 1H), 5,26(d, J=6 Hz, 1H), 5,11(d, J=6 Hz, 1H), 5,05(t, J=5,7 Hz, 1H), 4,19(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,03(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,99(bs, 1H), 3,65(s, 3H), 3,56(s, 3H), 3,53-3,42(m, 2H), 3,34(d, J=8,7 Hz, 1H), 3,27(brd, J=11,7 Hz, 1H), 3,11(d, J=15 Hz, 1H), 2,99(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,64-2,52(m, 3H), 2,29(s, 3H), 2,08(s, 3H), 2,06(s, 3H), 1,84(t, J=7,8 Hz, 2H), 1,71(dd, J1=12,9 Hz, J2=13,5 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,7, 149,0, 147,6, 140,6, 132,1, 131,9, 130,9, 130,5, 128,5,

128,4, 128,3, 128,0, 126,0, 124,9, 124,6, 123,1, 117,6, 100,8, 99,6, 59,6, 58,9, 57,6, 56,6, 56,5, 55,6,

55,1, 41,5, 37,8, 31,5, 31,1, 25,9, 25,1, 22,6, 15,5, 8,8.

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H42N4O7: 654,7; znaleziono (M⁺+Na): 655,1.

P r z y k ł a d 125

Do roztworu związku 130 (130 mg, 0,198 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 0°C bezwodnik trifluoroacetylu (41,9 μΙ, 0,297 mmola) i pirydynę (24 μΙ, 0,297 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (7 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan.EtOAc 4:1 do heksan.EtOAc 1:4) otrzymując związek 131 (93 mg, 62%) w postaci białego ciała stałego.

PL 215 769 B1

147

Rf: 0,30 (heksan:EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,25-7,16(m, 3H), 7,04-7,02(m, 2H), 6,78(s, 1H), 6,02(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,95(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,11(d, J=6,6 Hz, 1H), 4,98(d, J=6,6 Hz, 1H), 4,95(t, J=6,3 Hz, 1H), 4,61(bs, 1H), 4,30(s, 1H), 4,08(s, 1H), 3,96(d, J=7,2 Hz, 1H), 3,66-3,54(m, 1H), 3,50(s, 3H), 3,39(s, 3H), 3,19(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,88(d, J=18,6 Hz, 1H), 2,79(dd, J1=2,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 2,66-2,62(m, 1H), 2,57(s, 3H), 2,06(s, 6H), 1,94-1,87(m, 1H), 1,77-1,68(m, 2H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H41F3N4O8: 750,7; znaleziono (M+Na)⁺: 751,2.

Do roztworu związku 130 (130 mg, 0,198 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano w 0°C chlorek chloroacetylu (23,65 μΙ, 0,297 mmola) i pirydynę (24 μΙ, 0,297 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (7 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 2:1 do heksan:EtOAc 1:1) otrzymując związek 132 (130 mg, 90%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,31 (heksan.EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,24-7,15(m, 3H), 7,07-7,05(m, 2H), 6,69(s, 1H), 6,00(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,94(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,11(d, J=5,7 Hz, 1H), 5,04(d, J=5,7 Hz, 1H), 4,93(m, 1H), 4,36(s, 2H), 4,16(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,01(m, 2H), 3,64(dd, J1=6,9 Hz, J2=12,3 Hz, 1H), 3,54(s, 3H), 3,40(s, 3H), 3,38-3,35(m, 2H), 2,29(dt, J1=3 Hz, J2=12 Hz, 1H), 3,03(dd, J1=7,8 HZ, J2=18 Hz, 1H), 2,77(dd, J1=2,4 Hz, J2=16,2 Hz, 1H), 2,58-2,52(m, 3H), 2,32(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,92-1,85(m, 1H), 1,76-1,65(m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,6, 164,9, 148,3, 144,6, 140,9, 140,8, 139,8, 132,1, 131,9, 131,1,130,0, 128,2, 126,0, 125,0, 124,6, 123,5, 120,1, 117,5, 113,0, 111,5, 101,7, 99,1, 64,9, 59,7, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,2, 55,1, 41,5, 40,2, 39,9, 37,7, 30,9, 26,3, 25,1, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H43CIN4O8: 730,2; znaleziono (M+1)⁺: 731.1.

P r z y k ł a d 127

Do roztworu związku 130 (130 g, 0,198 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano w 0°C chlorek chloropropionylu (28,35 μΙ, 0,297 mmola) i pirydynę (24 μΙ, 0,297 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto 0,1 N HCI (7 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, całość przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan:EtOAc 1:1) otrzymując związek 133 (94 mg, 64%) w postaci białego ciała stałego.

148

PL 215 769 B1

Rf: 0,43 (heksan.EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,12(m, 3H), 7,06-7,04(m, 2H), 6,69(s, 1H), 5,97(s, 1H), 5,92(s, 1H), 5,08(d, J=6 Hz, 1H), 5,00(d, J=6 Hz, 1H), 4,97(m, 1H), 4,16(bs, 1H), 4,00(m, 1H), 3,88(t, J=6,9 Hz, 2H), 3,75(t, J=6,9 Hz, 2H), 3,59(dd, J1=6,3 Hz, J2=12,3 Hz, 1H), 3,53(s, 3H), 3,37(s, 3H), 3,03-3,26(m, 1H), 3,17-2,97(m, 3H), 2,83-2,73(m, 2H), 2,58-2,52(m, 3H), 2,31(s, 3H), 2,03(s, 6H), 1,93-1,86(m, 1H), 1,79-1,64(m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,9, 167,8, 148,3, 144,7, 140,8, 132.1, 132,0, 131,1, 130,2,

128,2, 126,1, 125,2, 124,6, 123,7, 122,2, 120.2, 117,6, 114,7, 112,9, 111,8, 101,7, 99,3, 74,9, 65,0,

59,6, 59,0, 57,7, 56,7, 56,4, 55,4, 55,1, 41,5, 38,5, 37,8, 37,2, 31,0, 26,4, 25,2, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C40H45CIN4O8: 744,2; znaleziono (M+1)⁺: 745,0.

P r z y k ł a d 128

Do roztworu związku 130 (16 mg, 0,244 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano w 0°C chlorek heptafluorobutyrylu (54,5 μΙ, 0,366 mmola) i pirydynę (40 μΙ, 0,49 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (10 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient heksan.EtOAc 2:1 do heksan:EtOAc 1:4) otrzymując związek 134 (120 mg, 63%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,40 (heksan:EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,25-7,16(m, 3,H), 7,04-7,02(m, 2H), 6,77(s, 1H), 6,02(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,96(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,11(d, J=6,6 Hz, 1H), 4,95(d, J=6,6 Hz, 1H), 4,94(m, 1H), 4,58(m, 1H), 4,25(bs, 1H), 4,06(bs, 1H), 3,88(d, J=6,9 Hz, 1H), 3,64(dd, J1=7,5 Hz, J2=12,9 Hz, 1H), 3,55-3,53(m, 1H), 3,49(s, 3H), 3,38(s, 3H), 3,17(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,9 Hz, 1H), 2,85(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,77(dd, J1=2,7 Hz, J2=16,2 Hz, 1H), 2,60-2,57(m, 3H), 2,56(s, 3H), 2,06(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,96-1,88(m, 1H), 1,79-1,69(m, 2H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C41H41F7N4O8: 850,7; znaleziono (M+1)⁺: 851,3.

P r z y k ł a d 129

Do roztworu związku 131 (93 mg, 0,123 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (381 μΙ, 4,95 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 6 godzin w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnienieniem, otrzymując związek 135 (65 mg, 75%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

PL 215 769 B1

149 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,24-7,15(m, 3H), 7,04-7,01(m, 2H), 6,45(s, 1H), 6,03(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,62(s, 1H), 4,97(m, 1H), 4,09(d, J=1,8 Hz, 1H), 4,03(bs, 1H), 3,99(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,73(dd, J1=7,5 Hz, J2=12 Hz, 1H), 3,38(s, 3H), 3,34-3,28(m, 3H), 3,05(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,75(dd, J1=3,3 Hz, J2=16,5 Hz, 1H), 2,60-2,47(m, 3H), 2,30(s, 3H), 2,05(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,91-1,65(m, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H37F3N4O7: 706,2; znaleziono (M+1)⁺: 707,2.

P r z y k ł a d 130

Do roztworu związku 132 (130 mg, 0,177 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (545 μΙ, 7,08 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 3,5 godziny w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując związek 136 (118 mg, 97%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,27 (heksan.EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,13(m, 3H), 7,06-7,03(m, 2H), 6,45(s, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,04(t, J=4,5 Hz, 1 H), 4,37(bs, 2H), 4,13(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,03(bs, 2H), 3,68-3,61 (dd, J1=7,2 Hz, J2=12,3 Hz, 1H), 3,40(s 3H), 3,37-3,28(m, 3H), 3,02(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,6 Hz 1H), 2,75(dd, J1=2,7 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 2,58-2,50(m, 3H), 2,32(s, 3H), 2,01 (s, 6H), 1,94-1,67(m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,8, 165,0, 146,8, 144,6, 142,9, 141.0, 140,9, 139,8, 132,0,

130,3, 129,4, 128,5, 128,3, 126,0, 120,8, 120,1, 117,4, 116,1, 113,0, 111,5, 101,7, 60,5, 58,7, 56,3,

56,2, 55,2, 55,0, 41,5, 40,4, 39,5, 37,7, 31,0, 29,6, 26,4, 25,3, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H39CIN4O7: 686,2; znaleziono (M+1)⁺: 687,2.

P r z y k ł a d 131

Do roztworu związku 133 (94 mg, 0,126 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (385 μΙ, 5,0 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2,5 godziny w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując związek 137 (118 mg, 97%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,24 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,25-7,14(m, 3H), 7,05-7,03(m, 2H), 6,44(S, 1H), 5,98(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,82(s, 1H), 5,20(t, J=4,8 Hz, 1H), 4,07(d, J=2,1 Hz, 1H), 5,82(s, 1H),

150

PL 215 769 B1

5,20(t, J=4,8 Hz, 1H), 4,07(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,98(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,93-3,84(m, 2H), 3,63(ddd, J1=1,5 Hz, J2=6,9 Hz, J3=12Hz, 1H), 3,44(bs, 3H), 3,37-3,26(m, 3H), 3,11-3,06(m, 2H), 3,01(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,80(brd, J=13,8 Hz, 1H), 2,58-2,47(m, 3H), 2,29(s, 3H), 2,03(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,93-1,68(m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,7, 168,0, 146,7, 144,6, 142,8, 142,1, 141,0, 140,8, 140,1, 130,7, 129,0, 128,2, 126,0, 122,2, 120,9, 116.7, 114,7, 113,1, 111,7, 102,3, 101,7, 72,0, 60,4, 59,1,

56,4, 56,3, 55,7, 55,2, 41,7, 40,3, 38,8, 37,8, 37,1, 31,0, 26,4, 25,2, 15,5, 9,4.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H41CIN4O7: 700,2; znaleziono (M+23)⁺: 723,1.

P r z y k ł a d 132

Do roztworu związku 134 (46 mg, 0,054 mmola) w CH2CI2 (1 ml) dodano w 0°C kwas trifluorooctowy (166 μΙ, 2,16 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 10 godzin w 23°C. Reakcję potraktowano w 0°C nasyconym wodnym roztworem kwaśnego węglanu sodu (15 ml) i ekstrahowano octanem etylu (2 x 10 ml). Połączone warstwy organiczne wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując związek 138 (35 mg, 80%) w postaci białego ciała stałego, które użyto w następnych etapach bez dalszego oczyszczania.

Rf: 0,26 (heksan:EtOAc 1:1).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,23-7,12(m, 3H), 7,04-7,01(m, 2H), 6,45(s, 1H), 6,03(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,97(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,64(s, 1H), 4,98(m, 1H), 4,09(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,03(bs, 1H), 3,98(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,75(dd, J1=9,6 Hz, J2=14,1 Hz, 1H), 3,35(s, 3H), 3,29-3,24(m, 3H), 3,04(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,74(dd, J1=3,0 Hz, J2=16,8 Hz, 1H), 2,57-2,45(m, 3H), 2,30(s, 3H), 2,03(s, 6H), 1,92-1,64(m, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H37F7N4O7: 806,7; znaleziono (M+1)⁺: 807,3.

Do roztworu związku 136 (45 mg, 0,065 mmola) w CH2CI2 (0,3 ml) dodano w 0°C chlorek acetylu (4,65 μΙ, 0,065 mmola) i pirydynę (5,2 μΙ, 0,065 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez godziny, a następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (7 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2,

PL 215 769 B1

151 gradient heksan.EtOAc 5:1 do EtOAc) otrzymując związek 139 (27 mg, 57%) w postaci białego ciała stałego.

Rf: 0,36 (heksan:EtOAc 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,26-7,14(m, 3H), 7,07-7,04(m, 2H), 6,84(s, 1H), 6,00(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,94(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,94(t, J=5,1 Hz, 1H), 4,39-4,38(m, 2H), 4,02(bs, 2H), 3,67(d, J=3 Hz, 1H), 3,60-3,54(m, 1H), 3,47-3,35(m, 3H), 3,42(s, 3H), 3,26(dt, J1=4,8 Hz, J2=8,7 Hz, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,64-2,38(m, 3H), 2,35(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,06(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,95-1,69(m, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H41CIN4O8: 729,2; znaleziono (M+23)⁺: 752,3.

P r z y k ł a d 134

140

Do roztworu związku 2 (15 mg, 0,0273 mmola) w CH2CI2 (0,2 m|) dodano w 0°C ch|orek acety|u (1,94 μΙ, 0,0273 mmo|a) i pirydynę (2,20 μΙ, 0,0273 mmo|a). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 20 minut, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 m|). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 5:1) otrzymując związek 140 (9 mg, 56%) w postaci jasnożó|tego ciała stałego.

Rf: 0,56 (EtOAc.MeOH 1:2).

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,52(s, 1H), 6,40(s, 1H), 5,73(d, J=7,5 Hz, 1H), 4,95(d, J=6,9 Hz, 1H), 4,20(d, J=1,5 Hz, 1H), 4,00(s, 3H), 3,86(d, J =4,5 Hz, 1H), 3,79(s, 3H), 3,78-3,77(m, 1H), 3,40-335(m, 2H), 3,24(dt, J1=3,6 Hz, J2=11,4 Hz, 1H), 3,17(d, J=7,8 Hz, 1H), 3,11(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,04(dd, J1=3,6 Hz, J2=18,6 Hz, 1H), 2,92(dt, J1=3,3 Hz, J2=14,1 Hz, 1H), 2,43(d, J=18,0 Hz, 1H), 2,37(s, 3H), 2,29(s, 3H), 1,89(s, 3H), 1,79(s, 3H), 1,75(dd, J1=2,7 Hz, J2=6,9 Hz, 1H), 0,99(d, J=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H37N5O7: 591,6; znaleziono (M+1)⁺: 592,3.

P r z y k ł a d 135

141

Do roztworu związku 2 (15 mg, 0,0273 mmola) w CH2CI2 (0,2 ml) dodano w 23°C bezwodnik trifluorooctowy (3,85 μΙ, 0,0273 mmo|a). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (15 ml) i przemyto 0,1 N HCI (5 m|). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, a rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (SiO2, gradient EtOAc do EtOAc:MeOH 4:1) otrzymując związek 141 (12,1 mg, 69%) w postaci jasnożółtego ciała stałego.

152

PL 215 769 B1

Rf: 0,73 (EtOAc.MeOH 5:1).

¹H NMR (300 MHz1 CDCI3) δ 6,90(d, J=6,6 Hz, 1H), 6,56(s, 1H), 5,11(d, J=6,6 Hz, 1H), 4,47(bs, 1H), 4,23(bs, 1H), 3,97(s, 3H), 3,93(bs, 1H), 3,85-3,81(m, 1H), 3,77(s, 3H), 3,40-3,36(m, 2H), 3,23(dd, J1=7,2 Hz, J2=18,6 Hz, 1H), 3,13-3,08(m, 3H), 1,86(s, 3H), 1,74(dd, J1=10,8 Hz, J2=16,8 Hz, 1H), 1,07(d, J=6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H34F3N5O7: 645,6; znaleziono (M+1)⁺: 646,3.

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,058 mmola) w CH2CI2 (0,87 ml) dodano w temperaturze pokojowej DIPEA (15,0 μΙ, 0,086 mmola), EDC^HCI (27,6 mg, 0,145 mmola), N-Boc-fenyloalaninę (22,9 mg, 0,086 mmola) i DMAP (0,7 mg, 0,006 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) i roztworem 10%

NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan: EtOAc 1:2) otrzymując związek 174 (17 mg, 38%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,35 heksan.AcOEt 1:2.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) 7,24-7,15(m, 3H), 7,05-7,02(m, 2H), 6,43(s, 1H), 5,88(s, 1H), 5,78(s, 1H), 5,64(s, 1H), 5,63(bs, 1H), 4,80(bs, 1H), 3,98(s, 1H), 3,85(bs, 2H), 3,75(bs, 1H), 3,58(bs, 1H), 3,53(bs, 3H), 3,38(m, 1H), 3,17-3,10(m, 3H), 2,90(dd, J1=8,7 Hz, J2=17,7 Hz, 1H), 2,73(d, J=14,4 Hz, 1H), 2,57(m, 1H), 2,43-2,37(m, 1H), 2,25(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,10(s, 3H), 1,94(s, 3H), 1,76(dd, J1=12,3 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,19(bs, 9H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) 171,2, 168,8, 146,6, 144,6, 142,8, 140.6, 137,0, 130,7, 129,5, 129,0,

128,4, 126,8, 121,1, 121,0, 117,8, 116,7, 113,3, 111,8, 101,5, 60,5, 59,7, 57,0, 56,4, 55,3, 41,9, 41,6,

38,7, 31,6, 29,7, 28,2, 26,5, 25,2, 22,6, 20,3, 15,7, 14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C42H49N5O9: 767,87; znaleziono (M+1)⁺: 768,3.

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,058 mmola) w CH2CI2 (0,87 ml) dodano w temperaturze pokojowej DIPEA (15,0 μΙ, 0,086 mmola), EDC^HCI (27,6 mg, 0,145 mmola), N-Boc-walinę (18,8 mg, 0,086 mmola) i DMAP (0,7 mg, 0,006 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) i roztworem 10%

NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej

PL 215 769 B1

153 typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) otrzymując związek 175 (18 mg, 43%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,25 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,42(s, 1H), 5,97(s, 1H), 5,82(s, 1H), 5,73(bs, 1H), 5,50(bs, 1H), 4,82(bs, 1H), 4,15(bs, 1H), 4,03(bs, 1H), 3,96(bs, 1H), 3,72(s, 3H), 3,61(m, 1H), 3,41-3,15(m, 3H), 2,96(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,72(d, J=16,5 Hz, 1H), 2,53(d, J=18 Hz, 1H), 2,25(s, 3H), 2,21(s, 3H), 1,93(s, 3H), 1,81(dd, J1=14,1 Hz, J2=14,7 Hz, 1H), 1,34(s, 9H), 0,83-0,76(m, 2H), 0,61(d, J=6,3 Hz, 3H), 0,54(d, J=6,3 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,6, 168,7, 155,4, 146,8, 144,5, 142,9, 140,7, 130,7, 128,8, 121,0, 120,6, 117,7, 116,8, 113,3, 111,9, 101,4, 60,6, 60,0, 59,3, 57,2, 56,3, 55,2, 41,7, 29,7, 29,3,

28,2, 26,2, 25,2, 22,6, 20,3, 18,9, 17,7, 15,7, 14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H49N5O9: 719,82; znaleziono (M+1)⁺: 720,3.

P r z y k ł a d 138

Do roztworu związku 45 (38 mg, 0,073 mmola) w CH2CI2 (1,09 ml) dodano w 23°C DIPEA (19,0 μΙ, 0,109 mmola), EDC^HCI (34,9 mg, 0,182 mmola), N-Boc-prolinę (23,5 mg, 0,109 mmola) i DMAP (0,8 mg, 0,007 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4,5 godziny. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) i roztworem 10% NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:1) otrzymując związek 176 (33 mg, 63%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,14 heksan:EtOAc 1:2.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,49(s, 1H), 6,02(bs, 1H), 5,90(s, 1H), 5,74(s, 1H), 4,19(bs, 1H), 4,09(bs, 1H), 3,98(bs, 1H), 3,76(s, 3H), 3,38(d, J=6 Hz, 2H), 3,22(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,15-2,99(m, 2H), 2,80(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,63-2,58(m, 1H), 2,32(s, 3H), 2,26(s, 6H), 1,99(s, 3H), 1,78-1,62(m, 1H), 1,50-0,83(m, 7H), 1,21(s, 9H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H47N5O9: 717,81; znaleziono (M+1)⁺: 718,3.

P r z y k ł a d 139

Do roztworu związku 45 (50 mg, 0,144 mmola) w CH2CI2 (0,98 ml) dodano w 23°C DIPEA (41,8 μΙ, 0,240 mmola), EDC^HCI (46,0 mg, 0,240 mmola), hydrat chlorowodorku N-Boc-argininy (47,2 mg, 0,144 mmola) i DMAP (1,1 mg, 0,01 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny. Następnie rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) otrzymując związek 177 (58 mg, 78%) w postaci białego ciała stałego.

154

PL 215 769 B1

Rf=0,40 MeOH:EtOAc 1:5.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,53(bs, 1H), 6,95(bs, 3H), 6,54(bs, 1H), 6,48(s, 1H), 6,07(s, 1H), 6,00(bs, 1H), 5,88(s, 1H), 5,11(bs, 1H), 4,23(s, 1H), 4,08(s, 1H), 4,02(s, 1H), 3,76(s, 3H), 3,70(bs, 1H), 3,48(bs, 1H), 3,37(d, J=6,9 Hz, 1H), 3,18(d, J=10,2 Hz, 1H), 3,00-2,94(m, 3H), 2,82-2,70(m, 2H), 2,34(s, 3H), 2,25(s, 6H), 1,99(s, 3H), 1,73(brt, J=14,1 Hz, 1H), 1,40(s, 9H), 1,25(bs, 3H), 0,95-0,85(m, 2H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H52N8O9: 776,88; znaleziono (M+1)⁺: 777,3.

Do roztworu związku 45 (50 mg, 0,096 mmola) w CH2CI2 (1,44 ml) dodano w 23°C DIPEA (25,8 μΙ, 0,144 mmola), EDC^HCI (46,0 mg, 0,240 mmola), N-Boc-tryptofan (43,8 mg, 0,144 mmola) i DMAP (1,2 mg, 0,009 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) i roztworem 10% NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) otrzymując związek 178 (57 mg, 74%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,12 heksan:EtOAc 1:1, ¹H NMR (300 mHz, CDCI3) δ 8,50(bs, 1H), 7,73-7,71(m, 1H), 7,13-7,12(m, 3H), 6,51(s, 1H), 5,72(s, 1H), 5,36(bs, 1H), 5,28(bs, 1H), 4,95(bs, 1Η), 4,41(bs, 1H), 4,05(s, 1H), 3,70(s, 3H), 3,50(bs, 2H), 3,30-3,17(m, 4H), 2,89-2,82(m, 3H), 2,40(s, 3H), 2,29(s, 3H), 2,19(s, 3H), 2,03(s, 3H), 1,49(s, 9H), 1,26-1,25(m, 2H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C44H50N6O9: 806,90; znaleziono (M+1)⁺: 807,3.

Do roztworu związku 178 (43 mg, 0,053 mmola) w CH3CN/H2O (3 ml/2 ml) dodano AgNO3 (271 mg, 1,60 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 17 godzin. Następnie dodano w 0°C wodny nasycony roztwór NaCI (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (15 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 179 (24 mg, 56%) w postaci białego ciała stałego.

PL 215 769 B1

155

Rf=0,38 EtOAc:MeOH 5:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,40(s, 1H), 7,66(bs, 1H), 7,25-7,21(m, 1H), 7,16-7,09(m, 2H), 6,45(s, 1H), 5,75(bs, 1H), 5,55(bs, 1H), 5,45(s, 1H), 5,25(bs, 1H), 4,36(bs, 1H), 4,16(bs, 1H), 4,05(bs, 1H), 3,95(s, 1H), 3,69(s, 3H), 3,35-3,02(m, 6H), 2,83-2,73(m, 3H), 2,35(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,19(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,77(dd, J1=12 Hz, J2=15,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C43H51N5O10: 797,89; znaleziono (M-17)⁺: 780.

P r z y k ł a d 142

Do roztworu związku 45 (50 mg, 0,0960 mmola) w CH2CI2 (0,7 ml) dodano w 0°C chlorek 2-chloronikotynoilu (17,7 mg, 0,101 mmola) i pirydynę (8,1 μΙ, 0,101 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym roztwór rozcieńczono CH2CI2 (5 ml) i przemyto 0,1 N HCI (3 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan.EtOAc 1:1 otrzymując związek 180 (45 mg, 71%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,18 heksan:EtOAc 1:2.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,32-8,29(m, 1H), 7,38-7,34(m, 1H), 7,14-7,09(m, 1H), 6,14(s, 1H), 5,97(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,92-5,91(m, 2H), 5,75(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,18(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,15(s, 1H), 4,07(s, 1H), 3,91-3,73(m, 2H), 3,68(s, 3H), 3,36(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,31 (dt, J1=2,4 Hz, J2=11,7 Hz, 1H), 2,92(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,80(d, J=16,2 Hz, 1H), 2,58(d, J=18 Hz, 1H), 2,31(s, 3H), 2,27(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,91(s, 3H), 1,97-1,83(m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 168,6, 164,8, 150,3, 147,2, 146,5, 144.6, 142,5, 140,6, 139,0, 130,9, 130,5, 128,8, 122,3, 120,8, 120,3, 117.6, 116,3, 112,7, 112,1, 101,6, 60,6, 58,8, 56,5, 56,3, 55,6, 55,1, 41,6, 39,8, 31,5, 26,2, 24,9, 20,3, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C34H34CIN5O7: 659,2; znaleziono (M+1)⁺: 660,1.

P r z y k ł a d 143

156

PL 215 769 B1

Do roztworu związku 180 (39 mg, 0,059 mmola) w CH3CN/H2O (3 ml/2 ml) dodano AgNO3 (301 mg, 1,77 mmola) i reakcję mieszano w 23°C przez 17 godzin. Następnie dodano w 0°C wodny nasycony roztwór NaCI (10 ml) i wodny nasycony roztwór NaHCO3 (10 ml), i mieszaninę mieszano przez 15 minut, przesączono przez warstwę celitu i przemyto CH2CI2 (20 ml). Roztwór zdekantowano, a warstwę organiczną wysuszono i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii typu flash (SiO2, EtOAc:MeOH 5:1) i uzyskano związek 181 (28 mg, 73%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,24 EtOAc:MeOH 5:1.

¹H NMR (300 mHz, CDCI3) δ 8,33-8,31(m, 1H), 7,40-7,35(m, 1H), 7,16-7,09(m, 2H), 6,20(s, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,96(s, 1H), 5,92(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,63(bs, 1H), 4,60(bs, 1H), 4,47(bs, 1H), 4,02-3,95(m, 2H), 3,69(s, 3H), 3,65-3,56(m, 1H), 3,48(s, 3H), 3,43-3,38(m, 1H), 3,17(brd, J=7,2 Hz, 1H), 2,88(dd, J1=8,7 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,74(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,40(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,26(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,77(dd, J1=12 Hz, J2=15 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 168,1, 165,0, 150,0, 147,2, 146,5, 144,4, 142,5, 140,9, 138,7,

131.5, 130,2, 128,9, 122,3, 121,1, 120,7, 116,1, 114,4, 111,4, 101,5, 82,6, 60,6, 57,8, 56,2, 52,1, 41,6,

31.5, 26,4, 24,5, 22,6, 20,3, 15,6, 14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C33H35CIN4O8: 650,2; znaleziono (M-17)⁺: 633,3.

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,058 mmola) w CH2CI2 (0,87 ml) dodano w 0°C DIPEA (15,0 μΙ, 0,086 mmola), EDC^HCI (27,6 mg, 0,145 mmola), kwas cykloheksylooctowy (12,2 mg, 0,086 mmola) i DMAP (0,7 mg, 0,006 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) i 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) otrzymując związek 182 (10 mg, 27%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,11 heksan: EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,91(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,75(s, 1H), 5,02-4,91(m, 1H), 4,11(bs, 1H), 4,04(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,78(s, 3H), 3,72-3,69(m, 1H), 3,38-3,29(m, 3H), 3,05(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,77(d, J=15,6 Hz, 1H), 2,54(d, J=18,6 Hz, 1H), 2,33(s, 3H), 2,32(s, 3H), 2,27(s, 3H), 1,98(s, 3H), 1,79(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1H), 1,59-0,61(m, 13H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C36H44N4O7: 644,76; znaleziono (M+1)⁺: 645,3.

PL 215 769 B1

157

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,058 mmola) w CH2CI2 (0,87 ml) dodano w 0°C DIPEA (15,0 μΙ, 0,086 mmola), EDC^HCI (27,6 mg, 0,145 mmola), kwas cykloheksylooctowy (12,2 mg, 0,086 mmola) i DMAP (0,7 mg, 0,006 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 5 godzin. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz roztworem 10% NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) otrzymując związek 183 (17 mg, 38%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,13 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,87(s, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,95(t, J=5,7 Hz, 1H), 4,08(bs, 1H), 4,00(bs, 1H), 3,71(s, 3H), 3,64(d, J=1,8 Hz, 2H), 3,38(d, J=6,6 Hz, 1H), 3,33-3,32(m, 1H), 3,27(d, J=11,7 Hz, 1H), 3,06(dd, J1=7,8 Hz, J2=18,0 Hz, 1H), 2,65-2,59(m, 1H), 2,50-2,47(m, 1H), 2,35(s, 3H), 2,27(s, 6H), 1,99(s, 3H), 1,78-1,74(m, 1H), 1,60-0,62(m, 26H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C44H56N4O8: 768,94; znaleziono (M+1)⁺: 769,3.

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,058 mmola) w CH2CI2 (0,87 ml) dodano w 0°C DIPEA (15,0 μΙ, 0,086 mmola), EDC^HCI (27,6 mg, 0,145 mmola), kwas cykloheksylopropionowy (13,5 mg, 0,086 mmola) i DMAP (0,7 mg, 0,006 mmola), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 6 godzin w 23°C. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz roztworem 10% NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan.EtOAc 1:2) otrzymując związek 184 (15 mg, 39%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,15 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,50(s, 1H), 5,98(s, 1H), 5,91(s, 1H), 5,74(s, 1H), 5,01(t, J=5,1 Hz, 1H), 4,09(bs, 1H), 4,06(s, 1H), 4,02(bs, 1H), 3,76(s, 3Η), 3,64-3,58(m, 1H), 3,42-3,41(m, 1H), 3,36(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,28(d, J=12,3 Hz, 1H), 3,05(dd, J1=8,6 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,79(d, J=14,7 Hz, 1H), 2,57(d, J=18 Hz, 1H), 2,32(s, 3H), 2,30(s, 3H), 2,25(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,77(dd, J1=12,0 Hz, J2=15,9 Hz, 1H), 1,62-0,71(m, 15H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H46N4O7: 658,78; znaleziono (M+1)⁺: 659,3.

P r z y k ł a d 147

Do roztworu związku 45 (30 mg, 0,058 mmola) w CH2CI2 (0,87 ml) dodano w 0°C DIPEA (15,0 μΙ, 0,086 mmola), EDC^HCI (27,6 mg, 0,145 mmola), kwas cykloheksylopropionowy (13,5 mg, 0,086

158

PL 215 769 B1 mmola) i DMAP (0,7 mg, 0,006 mmo|a), i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 6 godzin. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz roztworem 10% NaHCO3 (5 m|). Warstwę organiczną wysuszono nad Na2SO4, przesączono, a rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) otrzymując związek 185 (21 mg, 46%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,17 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,86(s, 1H), 5,99(s, 1H), 5,92(s, 1H), 4,97(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,10(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,01(bs, 1H), 3,70(s, 3H), 3,64(d, J=2,4 Hz, 1H), 3,51(bs, 1H), 3,37(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,23(d, J=11,1 Hz, 1H), 3,02(dd, J1=7,8 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,69-2,59(m, 4H), 2,35(s, 3H), 2,26(s, 6H), 2,00(s, 3H), 1,76-0,72(m, 30H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 173,1, 171,5, 168,2, 147,9, 144,7, 142,5, 140,7, 140,3, 130,9, 130,6, 127,7, 123,3, 120,0, 117,5, 113,1, 111,9, 101,6, 60,5, 59,0, 57,3, 56,7, 55,2, 55,0, 41,6, 39,9,

37,2, 33,5, 33,0, 32,9, 32,9, 32,8, 32,5, 32,4, 31,9, 31,7, 29,7, 29,3, 26,6, 26,5, 26,2, 24,9, 20,3, 15,8,

14,1, 9,4.

ESI-MS m/z: obliczono dla C46H60N4O8: 796,4; znaleziono (M+1)⁺: 797,5.

P r z y k ł a d 148

Do roztworu 72 (111 mg, 0,162 mmola) w CH2CI2 (0,81 ml) dodano DIPEA (56,3 μΙ, 0,324 mmola), chlorek butyrylu (33,6 μΙ, 0,324 mmola) i DMAP (1,96 mg, 0,016 mmo|a) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w tej temperaturze przez 5 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 m|). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) dostarczając 186 (65,4 mg, 54%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,21 heksan:EtOAc 1:2.

¹H NMR (300 MHz1 CDCI3) δ 7,24-7,15(m, 3Η), 7,12-7,04(m, 2H), 6,84(s, 1H), 5,98(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,2 Hz, 1H), 4,97(t, J=5,7 Hz, 1H), 4,03(m, 3H), 3,63(d, J=2,7 Hz, 1H), 3,50(m, 2H), 3,44(s, 3H), 3,37(d, J=8,4 Hz, 1H), 3,24(dt, J1=2,7 Hz, J2=11,7 Hz, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 HZ, J2=18,3 Hz, 1H), 2,65-2,54(m, 7H), 2,35(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,07(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,87-1,75(m, 3H), 1,08(t, J=7,5 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,7, 170,8, 168,2, 147,8, 144,7, 142,5, 140,8, 140,6, 140,3,

131.1, 130,5, 128,3, 128,2, 127,6, 126,0, 123,2, 117,5, 112,9, 111,8, 101,6, 60,2, 59,0, 57,3, 56,6,

55.1, 54,9, 41,5, 39,9, 37,8, 36,0, 31,0, 26,5, 24,8, 22,6, 20,2, 18,5, 15,6, 13,7, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C41H46N4O8: 722,83; znaleziono (M+1)⁺: 723.2.

PL 215 769 B1

159

Do roztworu 72 (80 mg, 0,122 mmola) w CH2CI2 (0,61 ml) dodano DIPEA (64,0 μΙ, 0,367 mmola), chlorek heksanoilu (49,5 μΙ, 0,367 mmola) i DMAP (1,50 mg, 0,012 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w tej temperaturze przez 5 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 6:4) dostarczając 187 (86,1 mg, 94%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,25 heksan:EtOAc 1:2.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,20-7,06(m, 3H), 6,99-6,97(m, 2H), 6,77(s, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,85(s, 1H), 4,90(m, 1H), 3,96(d, J=3 Hz, 2H), 3,57-3,55(m, 1H), 3,43(bs, 2H), 3,36(bs, 3H), 3,29(brd, J=10,5 Hz, 1H), 3,18(d, J=11,7 Hz, 1H), 2,97(dd, J1=4,8 Hz, J2=12 Hz, 1H), 2,582,46(m, 6H), 2,28(s, 3H), 2,18(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,95(s, 3H), 1,86-1,66(m, 7H), 1,41-1,38(m, 2H), 0,86-0,81(m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,7, 171,0, 168,2, 147,8, 144,7, 142,5, 140,8, 140,6, 140,3,

131,1, 130,5, 128,3, 128,2, 127,6, 126,0, 117,5, 112,9, 111,8, 101,6, 60,2, 59,0, 57,3, 56,6, 55,1, 55,0, 41,5, 39,9, 37,8, 34,1, 31,3, 31,1, 29,6, 24,8, 24,7, 22,3, 20,2, 15,6, 13,8.

ESI-MS m/z: obliczono dla C43H50N4O8: 750,88; znaleziono (M+1)⁺: 751,3.

Do roztworu 85 (80 mg, 0,110 mmola) w CH2CI2 (0,55 ml) dodano DIPEA (57,7 μΙ, 0,331 mmola), chlorek butyrylu (34,4 μΙ, 0,331 mmola) i DMAP (1,30 mg, 0,011 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 5 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) dostarczając 188 (70,1 mg, 80%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,54 MeOH:EtOAc 1:5.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,28-7,14(m, 5H), 6,80(s, 1H), 6,07(d, J=6,6 Hz, 1H), 6,00(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,35(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,12(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,05(bs, 1H), 3,89(brt, J=6,9 Hz, 1H), 3,66(s, 3H), 3,64-3,63(m, 1H), 3,59-3,45(m, 2H), 3,40(brd, J=7,8 Hz, 1H), 3,20(dt, J1=2,7 Hz, J2=12 Hz, 1H), 3,00(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,87(t, J=8,1 Hz, 2H), 2,71 (d, J=18,6 Hz, 1H), 2,66-2,61(m, 1H), 2,58(t, J=7,2 Hz, 2H), 2,41-2,35(m, 2H), 2,33(s, 3H), 2,23(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,90-1,77(m, 3H), 1,08(t, J=7,2 Hz, 3H), 0,69(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,0, 171,3, 170,8, 168,5, 147,7, 144,7, 142,5, 140,6, 140,5, 140,3, 131,0, 130,7, 128,4, 128,2, 127,7, 126.1, 123,1, 120,3, 117,5, 112,7, 111,8, 101,6, 60,3, 59,1, 57,3, 57,2,

55,4, 54,9, 48,2, 41,5, 39,5, 38,0, 36,0, 31,4, 26,8, 26,6, 24,6, 20,1, 18,5, 18,1, 15,7, 13,7, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C44H51N5O9: 793,9; znaleziono (M+1)⁺: 794,3.

160

PL 215 769 B1

mmola), chlorek heksanoilu (46,3 μΙ, 0,331 mmola) i DMAP (1,30 mg, 0,011 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 5 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) dostarczając 189 (80 mg, 88%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,23 heksan:EtOAc 1:3.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,21-7,08(m, 5H), 6,74(s, 1H), 6,00(d, J=6,9 Hz, 1H), 5,94(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,84(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,24(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,06(bs, 1H), 4,00(bs, 1H), 3,83(t, J=6 Hz, 1H), 3,59(s, 3H), 3,57(m, 1H), 3,53-3,40(m, 2H), 3,33(d, J=7,8 Hz, 1H), 3,14(d, J=11,7 Hz, 1H), 2,94(dd, J1=8,4 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,81(t, J=7,5 Hz, 2H), 2,65(d, J=18 Hz, 1H), 2,602,54(m, 1H), 2,52(t, J=7,2 Hz, 2H), 2,35-2,29(m, 2H), 2,27(s, 3H), 2,17(s, 3H), 2,15(s, 3H), 1,95(s, 3H), 1,76-1,60(m, 3H), 1,35-1,29(m, 2H), 1,84(m, 2H), 0,85-0,78(m, 3H), 0,62(t, J=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,0, 171,3, 171,1, 168,4, 147,8, 144,8, 142,6, 140,7, 140,5,

131,2, 130,6, 128,4, 128,3, 127,7, 126,2, 123,1, 120,3, 117,5, 112,6, 112,0, 101,7, 60,4, 59,1,

57,4, 57,2, 55,4, 54,9, 48,3, 41,5, 39,6, 38,1, 34,1, 33,6, 31,5, 31,3, 26,7, 24,7, 22,3, 20,2, 18,2, 15,7, 13,9, 9,3.

ESI-MS m/z: obliczono dla C46H55N5O9: 821,96; znaleziono (M+1)⁺: 822,3.

Do roztworu 53 (100 mg, 0,145 mmola) w CH2CI2 (0,72 ml) dodano DIPEA (50,6 μΙ, 0,291 mmola) i chlorek acetylu (20,7 μΙ, 0,291 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) dostarczając 190 (27 mg, 25%) w postaci białego ciała stałego.

PL 215 769 B1

161

Rf=0,24 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,82(s, 1H), 6,02(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,92(d, J=0,9 Hz, 1H), 5,30(bs, 1H), 4,14(d, J=2,7 Hz, 1H), 4,10(s, 1H), 3,90-3,73(m, 2H), 3,68(s, 3H), 3,67(bs, 1H), 3,49(bs, 1H), 3,42(brd, J=8,1 Hz, 1H), 3,24-3,20(m, 1H), 3,01(dd, J1=8,4 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,78(d, J=18 Hz, 1H), 2,64(brd, J=15,6Hz, 1H), 2,36(s, 3H), 2,34(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,20(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,77(dd, J1=11,7 Hz, J2=15,6 Hz, 1 H), 0,65(d, J=6,6Hz, 3H).

¹³C NMR (75 mHz, CDCI3) δ 170,2, 168,6, 168,1, 167,6, 147,9, 144,9, 142,8, 140,5, 131,5, 131,0, 127,7, 123,2, 120,3, 117,5, 112,3, 112,2, 101,7, 60,4, 59,0, 57,4, 57,2, 55,2, 54,9, 48,6,

41,5, 39,1, 36,6, 29,7, 26,7, 24,6, 20,7, 20,2, 17,6, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C35H38F3N5O9: 729,70; znaleziono (M+1)⁺: 730,3.

P r z y k ł a d 153

Do roztworu 53 (150 mg, 0,218 mmola) w CH2CI2 (1,09 ml) dodano DIPEA (151,9 μΙ, 0,87 mmola), chlorek butyrylu (90,6 μΙ, 0,87 mmola) i DMAP (2,70 mg, 0,02 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 4:1) dostarczając 191 (20,2 mg, 12%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,3 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,81(s, 1H), 6,03(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,16(t, J=5,4 Hz, 1H), 4,13(d, J=2,1 Hz, 1H), 4,10(bs, 1H), 3,87-3,82(m, 1H), 3,80-3,74(m, 1H), 3,68(s, 3H), 3,64(d, J=3 Hz, 1H), 3,52-3,47(m, 1H), 3,42(brd, J=7,2 Hz, 1H), 3,24-3,20(m, 1H), 3,02(dd, J1=8,1 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,77(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,64(brd, J=16,2 Hz, 1H), 2,58(t, J=7,2 Hz, 2H), 2,33(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,87-1,73(m, 3H), 1,08(t, J=7,2 Hz, 3H), 0,68(d, J=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,8, 172,1, 170,4, 157,8, 150,0, 146,9, 144,8, 142,6, 142,5,

133,3, 132,8, 129,6, 125,3, 122,3, 119,5, 118,4, 115,7, 114,3, 114,2, 103,8, 62,4, 61,0, 59,4, 59,2, 57,2, 57,0, 50,6, 43,6, 41,2, 38,1, 31,7, 28,7, 26,6, 22,2, 20,6, 19,7, 17,5, 15,7, 11,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C37H42F3N5O9: 757,75; znaleziono: 758,5 (M+1)⁺, 780,5 (M+23)⁺.

162

PL 215 769 B1

Do roztworu 53 (150 mg, 0,218 mmola) w CH2CI2 (1,09 ml) dodano DIPEA (151,9 μΙ, 0,87 mmola), chlorek acetylu (62,0 μΙ, 0,87 mmola) i DMAP (2,70 mg, 0,02 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 5 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) dostarczając 192 (111 mg, 62%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,25 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,80(s, 1H), 5,87(s, 1H), 5,81(s, 1H), 4,70(dd, J1=2,4 Hz, J2=9,9 Hz, 1H), 4,20(d, J=6,3 Hz, 1H), 4,09(s, 1H), 3,74(s, 3H), 3,60(s, 1H), 3,28(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,17(d, J=12 Hz, 1H), 3,07(dd, J1=7,2 Hz, J2=18,3 Hz, 1H), 2,93(d, J=13,2 Hz, 1H), 2,66(d, J=15,3 Hz, 1H), 2,53(d, J=17,7 Hz, 1H), 2,47-2,20(m, 1H), 2,37(s, 1H), 2,33(s, 3H), 2,26(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,08(s, 3H), 2,00(s, 3H), 1,96(s, 3H), 1,72(t, J=14,4 Hz, 1H), 1,53(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 174,1, 168,6, 168,4, 167,5, 147,7, 144,8, 142,2, 140,4, 131,1,

130,5, 126,9, 123,3, 120,4, 117,5, 112,4, 111,8, 101,1, 60,7, 60,6, 57,6, 57,2, 56,6, 55,3, 52,7,

48,3, 41,5, 31,6, 29,7, 26,4, 25,5, 23,0, 22,6, 20,7, 20,5, 20,2, 17,8, 15,9, 14,1, 9,5,

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H42F3N5O11: 813,7; znaleziono (M+1)⁺: 814,3.

Do roztworu 53 (150 mg, 0,218 mmola) w CH2CI2 (1,09 ml) dodano DIPEA (151,9 μΙ, 0,87 mmola), chlorek butyrylu (90,6 μΙ, 0,87 mmola) i DMAP (2,70 mg, 0,02 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 4:1) dostarczając 193 (58 mg, 30%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,38 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,85(s, 1H), 5,99(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,90(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,47-5,42(m, 2H), 4,09-4,08(m, 2H), 3,69(s, 3H), 3,66(m, 1H), 3,41(d, J=7,5 Hz, 1H), 3,28-3,18(m, 2H), 3,07(dd, J1=8,1 Hz, J2=18 Hz, 1H), 2,66(d, J=18,6 Hz, 1H), 2,61-2,39(m, 3H), 2,34(s, 3H), 2,26(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,95-1,79(m, 6H), 1,72-1,59(m, 6H) 1,09(t, J=7,5 Hz, 3H), 0,99-0,94(m, 6H), 0,85(d, J=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,2, 170,7, 169,1, 168,4, 148,1, 145,0, 142,7, 140,9, 140,6,

131,2, 130,5, 128,4, 123,4, 119,9, 117,6, 113,0, 112,1, 101,9, 60,7, 59,5, 57,6, 56,5, 55,7, 55,2, 41,8,

41,4, 36,3, 35,8, 29,9, 27,0, 25,3, 20,5, 20,0, 18,8, 18,3, 15,8, 14,0, 13,8, 13,4, 12,7, 9,6.

ESI-MS m/z: obliczono dla C45H54F3O11: 897,93; znaleziono (M+1)⁺: 898,3.

PL 215 769 B1

163

P r z y k ł a d 156

Do roztworu 53 (150 mg, 0,218 mmola) w CH2CI2 (1,09 ml) dodano DIPEA (151,9 μΙ, 0,87 mmola), chlorek heksanoilu (121,9 μΙ, 0,87 mmo|a) i DMAP (2,70 mg, 0,02 mmo|a) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 m|). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 4:1) dostarczając 194 (37,5 mg, 22%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,32 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,80(s, 1H), 6,02(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,92(d, J=1,2 Hz, 1H), 5,22(t, J=5,7 Hz, 1H), 4,13(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,09(s, 1H), 3,88-3,81(m, 1H), 3,80-3,71(m, 1H), 3,67(s, 3H), 3,64(d, J=3 Hz, 1H), 3,52-3,43(m, 1H), 3,41(brd, J=6,6 Hz, 1H), 3,23-3,19(m, 1H), 3,00(dd, J1=8,7 Hz, J2=18,6 Hz, 1H), 2,77(d, J=18Hz, 1H), 2,67-2,56(m, 3H), 2,33(s, 3H), 2,24(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,01(s, 3H), 1,82-1,74(m, 4H), 1,43-1,38(m, 3H), 0,97-0,88(m, 3H), 0,67(d, J=6,9Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,2, 170,3, 168,6, 148,2, 145,1, 143,0, 140,8, 140,7, 131,7, 131,1, 127,8, 123,5, 120,6, 117,7, 112,5, 102.0, 60,7, 59,2, 57,6, 57,4, 55,4, 55,2, 48,9, 41,8, 34,4, 31,8, 31,6, 29,9, 26,9, 25,0, 24,8, 22,9, 22,5, 20,4, 17,9, 15,8, 14,3, 14,1, 9,5.

ESI-MS m/z: obliczono dla C39H46F3N5O9: 785,81; znaleziono: 786(M+1)⁺, 805,5 (M+23)⁺.

mmola) i chlorek dekanoilu (92,7 μΙ, 0,436 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 m|). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) dostarczając 195 (75 mg, 41%) w postaci białego ciała stałego.

164

PL 215 769 B1

Rf=0,32 heksan:EtOAc 1:1,

ESI-MS m/z: obliczono dla C43H54F3N5O9: 841,91; znaleziono (M+1)⁺: 842,3.

Do roztworu 53 (150 mg, 0,218 mmola) w CH2CI2 (1,09 ml) dodano DIPEA (75,9 μΙ, 0,436 mmola) i chlorek stearoilu (147,3 μΙ, 0,436 mmola) w 0°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C przez 4 godz. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) dostarczając 196 (86 mg, 41%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,42 heksan:EtOAc 1:1 ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,81(s, 1H), 6,03(s, 1H), 5,92(s, 1H), 5,21(bs, 1H), 4,14(s, 1H), 4,10(s, 1H), 3,88-3,74(m, 2H), 3,67(s, 3H), 3,64(d, J=3 Hz, 1H), 3,49(brd, J=14,7 Hz, 1H), 3,42(d, J=8,1 Hz, 1H), 3,22(brd, J=11,4 Hz, 1H), 3,02(dd, J1=8,7 Hz, J2=18,6 Hz, 1H), 2,78(d, J=18 Hz, 1H), 2,68-2,56(m, 3H), 2,33(s, 3H), 2,25(s, 3H), 2,02(s, 3H), 1,82-1,73(m, 3H), 1,42-1,19(m, 28H), 0,87(t, J=7,2 Hz, 3H), 0,67(d, J=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,0, 170,2, 168,5, 147,9, 144,8, 142,8, 140,4, 131,4, 130,9,

127,5, 123,3, 120,4, 117,5, 112,4, 112,1, 101,7, 60,4, 58,9, 57,4, 57,2, 55,2, 55,0, 48,6, 41,5, 39,0,

34,2, 31,9, 29,7, 29,6, 29,4, 29,3, 29,2, 26,7, 25,1, 24,6, 22,7, 20,2, 17,6, 15,5, 14,1, 9,2.

ESI-MS m/z: obliczono dla C51H70F3N5O9: 953,5; znaleziono (M+1)⁺: 954,4.

Do roztworu 45 (10 mg, 0,019 mmola) w CH2CI2 (0,095 ml) dodano trietyloaminę (2,94 μΙ, 0,021 mmola) i bromek allilu (2,0 μΙ, 0,023 mmola) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 6 godz., a następnie rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, MeOH:EtOAc 1:5) dostarczając 197 (3,8 mg, 35%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,19 EtOAc:MeOH 5:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,43(s, 1H), 5,95(s, 1H), 5,89(s, 1H), 5,62-5,59(m, 1H), 4,94-4,84(m, 2H), 4,19(s, 1H), 4,08(s, 1H), 3,98(t, J=4,5 Hz, 1H), 3,76(s, 3H), 3,32-3,26(m, 2H), 3,07(dd,

J1=7,5 Hz, J2=17,4 Hz, 1H), 2,89(d, J=6 Hz, 2H), 2,80(d, J=3,9 Hz, 1H), 2,76(d, J=3,3 Hz, 1H), 2,57-2,52(m, 2H), 2,33(s, 6H), 2,24(s, 3H), 1,99(s, 3H), 1,88-1,79(dd, J1=12,9 Hz, J2=15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C31H36N4O6: 560,64; znaleziono (M+1)⁺: 561,3.

PL 215 769 B1

165

Do roztworu 146 (50 mg, 0,096 mmola) w CH2CI2 (0,96 ml) dodano pirydynę (11,7 μΙ, 0,144 mmola) i chlorek cynamoilu (24 mg, 0,144 mmola) w 23°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 18 godz. w tej temperaturze. Następnie roztwór rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto kolejno 0,1 N HCI (5 ml) oraz 10% roztworem NaHCO3 (5 ml). Warstwę organiczną wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 1:2) dostarczając 198 (54 mg, 86%) w postaci białego ciała stałego.

Rf=0,45 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,41-7,37(m, 6H), 6,38(s, 1H), 6,19-6,03(m, 1H), 6,08(d, J=15,9 Hz, 1H), 5,93(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,5 Hz, 1H), 5,62(s, 1H), 5,38(dd, J1=1,5 Hz, J2=17,1 Hz, 1H), 5,26(dd, J1=1,5 HZ, J2=10,5 Hz, 1H), 4,47(dd, J1=3,6 Hz, J2=10,8 Hz, 1H), 4,23-4,11(m, 5H), 3,89(dd, J1=4,8 Hz, J2=11,1 Hz, 1H), 3,51(s, 3H), 3,34(brd, J=8,4 Hz, 1H), 3,27-3,21 (m, 2H), 2,97(dd, J1=7,8 Hz, J2=17,7Hz, 1H), 2,28(s, 3H), 2,15(s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,91 (dd, J1=12 Hz, J2=15,6 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 166,5, 148,8, 146,7, 144,7, 144,5, 142,7, 139,5, 134,4, 134,1, 131,1, 130,6, 129,1, 128,7, 128,2, 121,9, 121,2, 118,5, 117,8, 116,8, 112,9, 112,7, 101,5, 74,7, 65,2, 60,7, 60,6, 57,4, 56,8, 56,6, 55,7, 41,9, 31,8, 26,7, 25,5, 22,9, 15,9, 14,4, 9,7.

ESI-MS m/z: obliczono dla C38H39N3O7: 649,7; znaleziono (M+1)⁺: 650,3.

P r z y k ł a d 161

OMe

Do roztworu 161 (78,5 mg, 0,146 mmola) oraz pochodnej cysteiny (81,1 mg, 0,247 mmola) w bezwodnym CH₂CI₂ (7,3 ml) dodano DMAP (50 mg, 0,41 mmola) i EDC-HCI (78,1 mg, 0,41 mmola) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C w atmosferze argonu przez 1,5 godz. Następnie mieszaninę rozcieńczono CH2CI2 (20 ml) i ekstrahowano wodnym nasyconym roztworem kwaśnego węglanu sodu (25 ml). Fazę wodną ekstrahowano dodatkową porcją CH2CI2 (20 ml) i połączone ekstrakty wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt z reakcji oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (wewnętrzna średnica kolumny 2 cm, wysokość warstwy krzemionkowej 10 cm) eluując mieszaniną octanu etylu/heksanu, z gradientem od 1:4 do 3:1. Otrzymano związek 199 (113 mg, 88%) w postaci bladożółtego ciała stałego.

Rf=0,36 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ: 7,76(d, J=7,8 Hz, 2H), 7,63(d, J=7,8 Hz, 2H), 7,40(t, J=7,6 Hz,

2H), 7,29(t, J=7,6 Hz, 2H), 6,54(s, 1H), 5,80(s, 1H), 5,74(s, 1H), 5,10(d, J=5,7 Hz, 1H), 5,08(d, J=5,7

Hz, 1H), 4,50(dd, J =4,9 Hz, J=11,8 Hz, 1H), 4,20-4,05(m, 4H), 4,02(s, 3H), 3,81(s, 3H), 3,61(d,

J=13,8 Hz, 1H), 3,55(d, J=13,8 Hz, 1H), 3,50(s, 3H), 3,21(m, 1H), 3,06(m, 1H), 3,00(d, J=6,0 Hz, 2H),

166

PL 215 769 B1

2,90(dd, J=8,9 Hz, J=17,4 Hz, 1H), 2,79(s, 1H), 2,56(m, 1H), 2,50(dd, J=4,8 Hz, J=14,9 Hz, 1H), 2,21(s, 3H), 2,18(s, 3H), 1,80(s, 3H), 1,75(m, 2H).

ESI-MS m/z: obliczono dla C46H48N4O10S: 848,3; znaleziono: 849,3 (M+1)⁺, 871,3 (M+23)⁺. HPLC: warunki: kolumna: Symmetry CIS, faza ruchoma: CH3CN/H2O w gradiencie od 50 do 100% przez 25 minut, 0=1 ml/min., t=40°C. Czas retencji: 16,04 minuty. Czystość według HPLC na podstawie pola powierzchni pików: 89,29%.

Do roztworu 161 (80 mg, 0,148 mmola) oraz pochodnej cysteiny (76 mg, 0,223 mmola) w bezwodnym CH₂CI₂ (6,8 ml) dodano DMAP (45 mg, 0,37 mmola) i EDC-HCI (71 mg, 0,37 mmola) w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C w atmosferze argonu przez 2,5 godz. Następnie mieszaninę rozcieńczono CH2CI2 (20 ml) i ekstrahowano wodnym nasyconym roztworem kwaśnego węglanu sodu (25 ml). Fazę wodną ekstrahowano dodatkową porcją CH2CI2 (20 ml) i połączone ekstrakty wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt z reakcji oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (wewnętrzna średnica kolumny 2 cm, wysokość warstwy krzemionkowej 10 cm) eluując mieszaniną octanu etylu/heksanu, z gradientem od 1:4 do 3:1. Otrzymano związek 200 (83 mg, 65%) w postaci bladożółtego ciała stałego.

Rf=0,5 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ: 7,71(m, 3H), 7,49(d, J=7,3 Hz, 1H), 7,36(t, J=7,3 Hz, 2H), 7,32-7,23(m, 2H), 6,65(s, 1H), 5,80(s, 1H), 5,79(s, 1H), 5,13(d, J=6,1 Hz, 1H), 5,11(d, J=6,1 Hz, 1H), 5,05(d, J=6,1 Hz, 1H), 5,01 (d, J=6,3 Hz, 1H), 4,76(dd, J=3,9 Hz, J=11,9 Hz, 1H), 4,15-4,03(m, 4H), 3,96(t, J=4,0 Hz, 1H), 3,87(s, 3H), 3,55(s, 3H), 3,51(s, 3H), 3,34-3,29(m, 2H), 3,24(dd, J=5,5 Hz, J=13,5 Hz, 1H), 3,03(m, 1H), 2,97(t, J=7,5 Hz, 1H), 2,44-2,35(m, 3H), 2,29(s, 3H), 2,14(s, 3H), 1,98(dd, J=8,06, J=15,1 Hz, 2H), 1,75(s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 196,98, 161,13, 158,21, 149,01, 148,78, 145,05, 144,91, 141,01, 140,69, 140,07, 137,53, 132,76, 131,15, 129,41, 127,70, 127,67, 127,21, 126,83, 125,28, 125,05, 124,94, 122,51, 119,84, 119,73, 116,61, 110,26, 104, 57, 101,40, 99,23, 96,70, 70,25, 63,15, 60,40, 58,89, 57,52, 56,98, 56,72, 56,15, 55,06, 47,22, 41,37, 38,26, 35,22, 29,57, 25,34, 15,62, 7,26.

ESI-MS m/z: obliczono dla C47H49N3O11S: 863,97; znaleziono: 865,0 (M+1)⁺, 887,1 (M+23)⁺, HPLC: warunki: kolumna: Symmetry C18, faza ruchoma: CH3CN/H2O w gradiencie od 50 do 100% przez 25 minut, 0=1 ml/min, t=40°C. Czas retencji: 15,36 minuty. Czystość według HPLC na podstawie pola powierzchni pików: 91,56%.

PL 215 769 B1

167

Do roztworu 161 (418 mg, 0,77 mmola) oraz pochodnej cysteiny (321 mg, 0,77 mmola) w bezwodnym CH₂CI₂ (35 ml) dodano DMAP (235 mg, 1,92 mmola) i EDC-HCI (369 mg, 1,92 mmola) w 23°C, i mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C w atmosferze argonu przez 2 godz. Następnie mieszaninę rozcieńczono CH2CI2 (20 m|) i ekstrahowano wodnym nasyconym roztworem kwaśnego węg|anu sodu (25 m|). Fazę wodną ekstrahowano dodatkową porcją CH2CI2 (20 m|) i połączone ekstrakty wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt z reakcji oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (wewnętrzna średnica ko|umny 3 cm, wysokość warstwy krzemionkowej 11 cm) e|uując mieszaniną octanu ety|u/heksanu, z gradientem od 1:3 do 3:1. Otrzymano związek 201 (372 mg, 52%) w postaci b|adożółtego ciała stałego.

Rf=0,41 heksan:EtOAc 1:1.

¹H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,76-7,64(m, 4H), 7,41-7,30(m, 4H), 6,54(s, 1H główny izomer), 6,51(s, 1H, uboczny izomer), 5,69(s, 1H, uboczny izomer), 5,67(s, 1H, główny izomer), 5,60(s, 1H uboczny izomer), 5,57(s, 1H główny izomer), 5,08(s, 2H), 4,26(t, J=5,1 Hz1 1H uboczny izomer), 4,23(t, J=4,9 Hz, 1H główny izomer), 4,07-4,03(m, 3H), 3,98-3,88(m, 3H), 3,84(s, 3H), 3,71(dt, J1=5,6 Hz, J2=10,0 Hz, 1H), 3,49(s, 3H, główny izomer), 3,49(s, 3H, uboczny izomer), 3,40(dt, J1=5,6 Hz, J2=9,5 HZ, 1H), 3,18(m, 3H), 3,11(m, 1H), 2,91-2,82(m, 1H), 2,48-2,28(m, 2H), 2,24(s, 3H), 2,16(s, 3H, główny izomer), 2,14(s, 3H, uboczny izomer), 2,03(s, 3H), 1,91(dt, J1=8,8 Hz, J2=14,4 Hz, 3H), 1,76(s, 3H, uboczny izomer), 1,76(s, 3H główny izomer), 0,85(s, 9H uboczny izomer), 0,85(s, 9H główny izomer), 0,04 oraz 0,01 (s, 6H oba izomery).

ESI-MS m/z: obliczono dla C51H61N3O10SSi: 935,4; znaleziono: 936,4 (M+1)⁺, 958,3 (M+23)⁺.

Do roztworu 25 (2 mg, 0,0035 mmo|a) oraz nadmiarowej i|ości pochodnej cysteiny w bezwodnym CH₂CI₂ (0,2 ml) dodano nadmiar DMAP i nadmiar EDC-HCI w 23°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 23°C w atmosferze argonu przez 14 godz. Następnie mieszaninę rozcieńczono CH2CI2 (10 ml) i przemyto wodnym nasyconym roztworem kwaśnego węg|anu sodu (10 m|). Fazę wodną ekstrahowano dodatkową porcją CH2CI2 (10 m|). Połączone ekstrakty wysuszono Na2SO4, przesączono i rozpuszcza|nik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt z reakcji oczyszczano za pomocą chromatografii ko|umnowej typu flash (SiO2, heksan:EtOAc 4:1) dostarczając 202 w postaci b|adożółtego ciała stałego.

¹H NMR (300 MHz, CDCI3) (poor resolution) δ 7,78,7,62(m, 4H), 7,41-7,26(m, 4H), 6,73(s, 1H), 6,10(m, 1H), 5,92(d, J=1,3 Hz, 1H), 5,88(d, J=1,3 Hz, 1H), 5,40-5,22(m, 2H), 5,11(s, 3H), 5,02(d, J=13,8 Hz, 1H), 4,29-4,02(m, 6H), 3,97(m, 1H), 3,72(d, J=12,5 Hz, 2H), 3,70(s, 3H), 3,58(s, 3H), 3,51 (d, J=12,3 Hz, 2H), 3,50(s, 3H), 3,49-3,20(m, 4H), 2,54-2,28(m, 4H), 2,40(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,16(s, 3H).

Procedury fermentacyjne

P r z y k ł a d A

Środowisko posiewowe YMP3 zawierające 1% glukozy, 0,25% ekstraktu byd|ęcego, 0,5% bakto-peptonu, 0,25% NaCI, 0,8% CaCO3 zaszczepiono 0,1% zamrożonym, wegetatywnym szczepem muzealnym mikroorganizmu A2-2 Pseudomonas fluorescens i inkubowano na wytrząsarce rotacyjnej (250 obr./min.) w 27°C. Po 30 godzinach inkubowania hodow|ę posiewową dodano do fermentora z mieszadłem ze środowiskiem hodow|anym złożonym z 2% dekstrozy, 4% mannitolu, 2% suszonych drożdży piwnych (Vita|evor® Bio|ux, Belgia), 1% (NH4)2SO4, 0,04% K2HPO4; 0,8 KCI; 0,001% FeCI3, 0,1% L-tyr, 0,8% CaCO3, 0,05% PPG-2000, 0,2% si|ikonu przeciw pienieniu się (ASSAF-100, RHODIA UK). Stery|izację prowadzono w 122°C przez 30 minut. Objętość zaszczepiona stanowiła 2% (obj./obj.). Temperatura wynosiła 27°C (0 do 16 godz.) i 24°C od 16-tej godziny do końca procesu (41 godz.). Ciśnienie rozpuszczonego t|enu przekraczało 25%. pH utrzymywano przy 6,0 za pomocą roz168

PL 215 769 B1 cieńczonego kwasu siarkowego od 28-mej godziny do końca procesu. Nadciśnienie wynosiło 0,5 bara. 1% mannitolu lub sorbitolu dodawano od 16 godz. do końca procesu (przez dwa dni kolejne) i 2% przez trzy dni procesu fermentacyjnego.

Po 41 lub 64 godz. bulion fermentacyjny musi zostać wyekstrahowany aby wyizolować safracynę B, lub sklarowany bulion musi być poddany obróbce KCN w celu wyizolowania cyjanosafracyny B.

P r z y k ł a d B

Otrzymywanie cyjanosfracyny B z surowego ekstraktu.

Klarowanie lub filtracja bulionu fermentacyjnego przy pH 6 usuwa ciała stałe. Sklarowany bulion jest korygowany do pH 9,5 za pomocą rozcieńczonego wodorotlenku sodu i ekstrahowany dwukrotnie 2:1 (obj./obj.) octanem etylu, chlorkiem metylenu lub octanem butylu. Ekstrakcje przeprowadza się w naczyniu z mieszaniem w trakcie 20 min., utrzymując temperaturę mieszaniny w 8 do 10°C. Dwie fazy rozdzielono za pomocą wirówki ciecz-ciecz. Fazę organiczną wysuszono bezwodnym siarczanem sodu lub zamrażając i odfiltrowując lód. Fazę organiczną (warstwę octanu etylu) odparowano otrzymując oleisty surowy ekstrakt.

P r z y k ł a d C

Otrzymywanie cyjanosafracyny B z klarowanego bulionu

Klarowanie lub filtracja bulionu fermentacyjnego o pH 6 usuwa ciała stałe. Sklarowany bulion skorygowano do pH 3,9 za pomocą stężonego kwasu octowego. Dodano 0,5 grama KCN na litr sklarowanego bulionu i inkubowano w 20°C przez 1 godzinę, mieszając. Następnie temperaturę obniżono do 15°C, pH skorygowano do 9,5 za pomocą rozcieńczonego wodorotlenku sodu i ekstrahowano 2:1,5 (obj./obj.) octanem etylu. Ekstrakcję prowadzono w naczyniu z mieszadłem przez 20 minut, utrzymując temperaturę mieszaniny w 8 do 10°C. Dwie fazy rozdzielono za pomocą wirówki ciecz-ciecz. Fazę organiczną wysuszono bezwodnym siarczanem sodu. Fazę tę (warstwę octanu etylu) odparowano uzyskując oleisty surowy ekstrakt. Ekstrakt ten oczyszczano za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash (SiO2, gradient 20:1 do 10: do 5:1 octan etylu:metanol) uzyskując ilościowo związek 2 w postaci jasnożółtego ciała stałego.

Rf: 0,55 (octan etylu:metanol 5:1); t_R=19,9 min. [HPLC, Delta Pack C4, 5 μm, 300 A, 15 x 3 mm, λ = 215 nm, przepływ 0,7 ml/min., temp. = 50°C, gradient: CH3CN-aq, NaOAc (10 mM) 85%-70% (20')];

¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,54(dd, J₁=4,4 Hz, J₂=8,4 Hz, 1H), 6,44(s, 1H), 4,12(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,04(d, J=2,4 Hz, 1H), 4,00(s, 3H), 3,87(bs, 1H), 3,65(ddd, J1=I1S Hz, J2=8,7 Hz, J3=9,9 Hz, 1H), 3,35(br d, J=8,4 Hz, 1H), 3,15-2,96(m, 4H), 2,92(q, J=7,2 Hz, 1H), 2,47(d, J=18,3 Hz, 1H), 2,29(s, 3H), 2,18(s, 3H) 1,83(s, 3H), 1,64(ddd, J1=2,7 Hz, J2=11,1 Hz, J3= 14,1 Hz, 1H), 0,79(d, J=7,2 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 186,0 (q), 175,9 (q), 156,2 (q), 146,8 (q), 142,8 (q), 140,7 (q), 136,6 (q), 130,5 (q), 128,8 (q), 127,0 (q), 120,5 (s), 117,4 (q), 116,5 (q), 60,8 (t), 60,4 (s), 58,7(t), 56,2 (s), 55,7 (s), 54,8 (s), 54,8 (s), 54,4 (s), 50,0 (s), 41,6 (t), 39,8 (d), 25,2 (d), 24,4 (d), 21,2 (t), 15,5 (t), 8,4 (t).

ESI-MS m/z: obliczono dla C29H35N5O6: 549,6; znaleziono (M+Na)⁺: 572,3.

P r z y k ł a d D

Środowisko (50 I) złożone z dekstrozy (2%), mannitolu (4%), suchych drożdży piwnych (2%), siarczanu amonu (1%), fosforanu dipotasowego (0,04%), chlorku potasu (0,8%), heksahydratu chlorku żelaza(lll) (0,001%), L-tyrozyny (0,1%), węglanu wapnia (0,8%), glikolu polipropylenowego 2000 (0,05%) i środka przeciwpieniącego ASSAF 1000 (0,2%) umieszczono w naczyniu fermentacyjnym o pojemności 75 I i po sterylizacji zaszczepiono hodowlą posiewową (2%) szczepu A2-2 (FERM BP-14), i hodowano z napowietrzaniem, mieszając, w 27°C do 24°C przez 64 godziny (napowietrzanie 75 I na minutę i mieszanie od 350 do 500 obr./min.). pH kontrolowano poprzez automatyczne dodawanie rozcieńczonego kwasu siarkowego od 27 godziny do końca procesu. 2% mannitolu dodawano od 16 godziny do końca procesu. Uzyskane środowisko hodowlane (45 I), po usunięciu komórek drogą wirowania, skorygowano do pH 9,5 rozcieńczonym wodorotlenkiem sodu, ekstrahowano dwukrotnie 25 litrami octanu etylu. Mieszaninę przeniesiono do naczynia z mieszaniem na 20 minut w 8°C. Dwie fazy rozdzielono za pomocą wirówki ciecz-ciecz. Fazy organiczne zamrożono w -20°C i przesączono w celu usunięcia lodu, a następnie odparowano uzyskując 40 g ciemnego oleistego surowego ekstraktu. Po wprowadzeniu grupy cyjankowej i oczyszczeniu, otrzymano 3,0 g cyjanosafracyny B.

P r z y k ł a d E

Środowisko (50 I) złożone z dekstrozy (2%), mannitolu (4%), suchych drożdży piwnych (2%), siarczanu amonu (1%), fosforanu dipotasowego (0,02%), chlorku potasu (0,2%), heksahydratu chlorku żelaza(lll) (0,001%), L-tyrozyny (0,1%), węglanu wapnia (0,8%), glikolu polipropylenowego 2000

PL 215 769 B1

169 (0,05%) i środka przeciwpieniącego ASSAF 1000 (0,2%) umieszczono w naczyniu fermentacyjnym o pojemności 75 I i po sterylizacji zaszczepiono hodowlą posiewową (2%) szczepu A2-2 (FERM BP-14), i hodowano z napowietrzaniem, mieszając, w 27°C do 24°C przez 41 godzin (napowietrzanie 75 I na minutę i mieszanie od 350 do 500 obr./min.). pH kontrolowano poprzez automatyczne dodawanie rozcieńczonego kwasu siarkowego od 28 godziny do końca procesu. 1% mannitolu dodawano od 16 godziny do końca procesu. Uzyskane środowisko hodowlane (45 I), po usunięciu komórek drogą wirowania, skorygowano do pH 3,9 za pomocą 200 ml stężonego kwasu octowego. Dodano 25 gramów 97% cyjanku potasu i po 1 godzinie mieszania w 20°C pH skorygowano do 9,5 za pomocą 1500 ml 10% wodorotlenku sodu. Następnie ekstrahowano 35 litrami octanu etylu. Mieszaninę przeniesiono do naczynia z mieszaniem na 20 minut w 8°C. Dwie fazy rozdzielono za pomocą wirówki ciecz-ciecz. Fazę organiczną wysuszono bezwodnym siarczanem sodu i odparowano uzyskując 60 g ciemnego oleistego surowego ekstraktu.

Claims (62)

1. Związek ekteinascydynowy o wzorze:

OMe

Me

C

Me w którym

R^{1 *} oznacza -CH2-NHR^a lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; alkenyl; lub acyl aminokwasowy;

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H1 alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-;

R²¹ oznacza -CN; lub

R¹ oznacza -CH2-N(R^a)2 lub -CH2OR^a1 gdzie R^a oznacza H; alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; alkenyl; lub acyl aminokwasowy;

c

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

1 fi

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-;

R²¹ oznacza -OH, przy czym alkil ma 1 do 12 atomów węgla, cykloalkil ma 3 do 12 atomów węgla, alkenyl ma 2 do 12 atomów węgla, grupa arylowa oznacza fenyl, heteroaryl oznacza pirydyl, acyl aminokwasowy obejmuje alanyl, L-arginyl, L-aspartyl, L-asparaginyl, L-cystyl, L-glutamyl, L-glutaminyl, L-glicyl, L-histydyl, L-hydroksyprolil, L-izoleucyl, L-leucyl, L-lizyl, L-metionyl, Lfenyloalanyl, L-prolil, L-seryl, L-treonyl, L-tyronyl, L-tryptofil, L-tyrozyl, i L-walil, oraz jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.

2. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że odpowiada wzorowi:

OMe

1 5 1 fi 21 w którym R¹, R⁵, R¹⁸ i R²¹ mają znaczenie jak określono w zastrz. 1.

3. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że odpowiada wzorowi:

OMe

5 18 21

1 5 18 21 w którym R¹, R⁵, R¹⁸ i R²¹ mają znaczenie jak określono w zastrz. 1.

PL 215 769 B1

171

4. Związek według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że

R¹ oznacza -CH2-NHR^a lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-;

aryloalkenylo-CO-; alkenylo-CO-; lub acyl aminokwasowy;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” jest wybrane z grupy obejmującej H; oraz C1-C4alkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OH; zaś

R²¹ oznacza -CN.

5. Związek według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że

R¹ oznacza -CH2OR^a1 gdzie R^a oznacza haloalkilo-CO-; cykloalkiIoaIkiIo-CO-; haloalkilo-O-CO-;

aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; lub alkenyl;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; zaś

R²¹ oznacza -CN.

6. Związek według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że

R¹ oznacza -CH2-N(R^a)2 lub -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza H; alkilo- CO-; haloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; alkenylo-CO-; lub acyl aminokwasowy;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” jest wybrane z grupy obejmującej H oraz C1-C4alkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OH; zaś

R²¹ oznacza -OH.

7. Związek według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że

R¹ oznacza -CH2-N(R^a)2, gdzie R^a oznacza H; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; lub alkenyl;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; zaś

R²¹ oznacza -OH,

8. Związek według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że

R¹ oznacza -CH2-OR^a, gdzie R^a oznacza H; alkilo-CO-; haloalkilo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; haloalkilo-O-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; heteroarylo-CO-; alkenylo-CO-; alkenyl; lub acyl aminokwasowy;

₅

R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO-; cykloalkilo-CO-; lub haloalkilo-CO-;

R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H; alkilo-CO-; lub cykloalkiloalkilo-CO-; zaś

R²¹ oznacza -OH.

1a

9. Związek według zastrz. 4 albo 6, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a.

1a

10. Związek według zastrz. 7, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a.

ab

11. Związek według zastrz. 4 albo 6, znamienny tym, że R^a oznacza -aa-R^b, gdzie aa oznacza ba acyl aminokwasowy, a R^b jest jak określono dla R^a w zastrz. 4 albo 6.

ab

12. Związek według zastrz. 8, znamienny tym, że R^a oznacza -aa-R^b, gdzie aa oznacza acyl ba aminokwasowy, a R^b jest jak określono dla R^a w zastrz. 8.

13. Związek według zastrz. 11, znamienny tym, że acyl aminokwasowy jest dalej podstawiony przez jedną lub więcej grup R^a.

14. Związek według zastrz. 12, znamienny tym, że acyl aminokwasowy jest dalej podstawiony przez jedną lub więcej grup R^a.

1b

15. Związek według zastrz. 4 albo 6, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NH-aa-R^b, gdzie aa oznacza acyl aminokwasowy, zaś R^b oznacza wodór; karbaminianową grupę zabezpieczającą;

aryloalkenylo-CO-; haloalkilo-CO-; alkilo-CO-; aryloalkilo-CO-; lub acyl aminokwasowy.

1b

16. Związek według zastrz. 4 albo 6, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NH-aa-R^b, gdzie aa oznacza alanyl i R^b jest wybrane z grupy obejmującej wodór, Boc, PhNHCS, CF3CO-, trans(trifluorometylo)cynamoil, cynamoil, C3F7CO-, butyryl, 3-chloropropionyl, hydrocynamoil, fenyloacetyl, oraz acetyl; aa oznacza walił i R^b jest wybrane z grupy obejmującej Cbz oraz Boc; aa oznacza fenyloalanyl i R^b oznacza Boc; aa oznacza prolil i R^b oznacza Boc; aa oznacza arginyl i R^b oznacza Boc; lub aa oznacza tryptofil i R^b oznacza Boc.

1 a b

17. Związek według zastrz. 6, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NR^a-aa-R^b, gdzie aa ab oznacza acyl aminokwasowy, R^a oznacza alkilo-CO-, zaś R^b oznacza haloalkilo-CO-.

1 a b

18. Związek według zastrz. 17, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NR^a-aa-R^b, gdzie aa ab oznacza acetyloalanyl, R^a oznacza acetyl lub butyryl, zaś R^b oznacza CF3-CO-.

21 1

19. Związek według zastrz. 4, znamienny tym, że R²¹ oznacza -CN, zaś R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza alkilo-CO-; alkenylo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-.

172

PL 215 769 B1

20. Związek według zastrz. 19, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza acetyl, izowaleryl, dekanoil lub cynamoil.

21. Związek według zastrz. 19, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza propionyl, mirystoil, stearoil, heksanoil lub krotonyl.

21 1 a

22. Związek według zastrz. 6, znamienny tym, że R²¹ oznacza OH i R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza wodór; alkilo-CO-; alkenylo-CO-; aryloalkilo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-.

21 1 a

23. Związek według zastrz. 7, znamienny tym, że R²¹ oznacza OH i R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza wodór; alkenylo-CO-; aryloalkilo-CO-; heteroarylo-CO-; cykloalkiloalkilo-CO-; lub alkenyl.

24. Związek według zastrz. 22, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza wodór; Troc1 acetyl, izowaleroil, dekanoil, cynamoil, hydrocynamoil lub fenyloacetyl.

25. Związek według zastrz. 22, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza propionyl, mirystoil, stearoil, heksanoil lub krotonyl.

26. Związek według zastrz. 23, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2-NHR^a, gdzie R^a oznacza cykloheksyloacetyl, cykloheksylopropionyl lub allil.

21 1 a

27. Związek według zastrz. 4, znamienny tym, że R²¹ oznacza -CN i R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza zabezpieczoną cysteinę; alkilo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-.

28. Związek według zastrz. 27, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza butyryl; trans(trifluorometylo)cynamoil; lub cynamoil.

21 1 a

29. Związek według zastrz. 6, znamienny tym, że R²¹ oznacza -OH i R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza wodór; zabezpieczoną cysteinę; alkilo-CO-; aryloalkilo-CO-; lub aryloalkenylo-CO-.

30. Związek według zastrz. 29, znamienny tym, że R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a oznacza wodór; butyryl; trans(trifluorometylo)cynamoil; cynamoil; lub hydrocynamoil.

21 1 a

31. Związek według zastrz. 8, znamienny tym, że R²¹ oznacza -OH i R¹ oznacza -CH2OR^a, gdzie R^a jest wybrane z grupy obejmującej wodór; zabezpieczoną cysteinę; pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH2-CH(NHProt^NH)-CO-, w którym Prot^SH i Prot^NH oznaczają grupy zabezpieczające dla tiolu i dla grupy aminowej; alkilo-CO-; aryloalkilo-CO-; aryloalkenylo-CO-; pochodną cysteiny

SH OH SH o wzorze Prot^SH-S-CH2-C-(=NOProt^OH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza grupę zabezpieczającą dla tiolu

OH SH a Prot^OH oznacza grupę zabezpieczającą dla hydroksylu; oraz pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-SOH SH OH

-CH=C-(-OProt^OH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza grupę zabezpieczającą dla tiolu a Prot^OH oznacza grupę zabezpieczającą dla hydroksylu.

32. Związek według zastrz. 31, znamienny tym, że R^a jest wybrane z grupy obejmującej wodór;

S-9-fluorenylometylo-O-TBDMS-cysteino; pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH2-CH(NHProt^NH)SH NH

-CO-, w którym Prot^SH oznacza 9-fluorenylometyl a Prot^NH oznacza Troc; butyryl; (trifluSH OH orometylo)cynamoil; cynamoil; pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S-CH2-C(=NOProt^OH)-CO-,

SH OH w którym Prot^SH oznacza 9-fluorenylometyl a Prot^OH oznacza metoksy; oraz pochodną cysteiny o wzorze Prot^SH-S- CH=C(-OProt^OH)-CO-, w którym Prot^SH oznacza 9-fluorenylometyl a Prot^OH oznacza MOM.

₅

33. Związek według zastrz. 7, znamienny tym, że R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza H; alkilo-CO- gdzie alkil ma nieparzystą liczbę atomów węgla, lub ω-cykloheksyloalkilo-CO-.

₅

34. Związek według zastrz. 5 albo 8, znamienny tym, że R⁵ oznacza -OR”, gdzie R” oznacza

H; alkilo-CO- gdzie alkil ma nieparzystą liczbę atomów węgla, lub ω-cykloheksyloalkilo-CO-.

₅

35. Związek według zastrz. 4 albo 6, znamienny tym, że R⁵ oznacza -OCOCH3.

₅

36. Związek według zastrz. 33 albo 34, znamienny tym, że R⁵ oznacza -OCOCH3.

37. Związek według zastrz. 7 albo 8, znamienny tym, że R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H; lub alkilo-CO-.

38. Związek według zastrz. 5, znamienny tym, że R¹⁸ oznacza -OR, gdzie R oznacza H, lub alkilo-CO-.

39. Związek według zastrz. 37 albo 38, znamienny tym, że R¹⁸ oznacza -OH.

PL 215 769 B1

173

40. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma następującą strukturę ogólną (I):

gdzie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a i -CH2OR^a, oraz R^a, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R^a R⁵ R¹⁸ R²¹ COCH2CH2CH3 OH OH CN COCH=CHPh OAc

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

174

PL 215 769 B1

41. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma następującą strukturę ogólną (II):

gdzie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a i -CH2OR^a, oraz R^a, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R^a R⁵ R¹⁸ R²¹ COCH2CH2CH3 OH OH CN COCH=CHPh OAc

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

175

42. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma następującą strukturę ogólną (I):

gdzie R¹ oznacza -CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^b, zaś R^b, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R^b R⁵ R¹⁸ R²¹ H OH OH CN COCH2CH2CH3 OAc COCH2Ph COCH2CH2Ph COCH=CHPh

Boc

CSNHPh

43. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma następującą strukturę ogólną (II):

gdzie R¹ oznacza -CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^b, zaś R^b, R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezaleznie wybrane z grup określonych poniżej:

R^b R⁵ R¹⁸ R²¹ H OH OH CN COCH2CH2CH3 OAc COCH2Ph COCH2CH2Ph COCH=CHPh

176

PL 215 769 B1

CSNHPh

44. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma strukturę ogolną (III) lub (IV);

gdzie R', X2, R1, oraz R6 są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

R' X2 R1 CH2CH=CH2 OH OH COCH2CH3 OAc OAc CO(CH2)4CH3 OCOCH2H6H11 CO(CH2)12CH3 OCOCF3 OCOCH2CH2C6H1 CO(CH2)16CH3 OCOCH2Cl OCOCH2CH2CH3 COCH2C6H11 OCOCH2CH2Cl OCO(CH2)4CH3 COCH2CH2C6H11 OCOCF2CF2CF3 OCO(CH2)8CH3 COCH=CHCH3 OCO(CH2)16CH3

R6

CN

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

PL 215 769 B1

177

45. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma strukturę ogó|ną (V):

korzystnie jest, gdy R', X2, R1, oraz R6 są każde nieza|eżnie wybrane z grup okreś|onych poniżej:

R' X2 R1 CH2CH=CH2 OH OH COCH2CH3 OAc OAc CO(CH2)4CH3 OCOCH2C6H11 CO(CH2)12CH3 OCOCF3 OCOCH2CH2C6H1 CO(CH2)16CH3 OCOCH2Cl OCOCH2CH2CH3 COCH2C6H11 OCOCH2CH2Cl OCO(CH2)4CH3 COCH2CH2C6H11 OCOCF2CF2CF3 OCO(CH2)8CH3 COCH2Ph OCO(CH2)16CH3

R6

CN

COCH2CH2Ph

COCH=CHCH3

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

Boc

178

PL 215 769 B1

46. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma strukturę ogólną (I):

gdzie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a, -CH2OR^a oraz -CH2-NH-CO-CHCH3-NHR^a zaś R^a,

R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

_R ⁵ _R ¹⁸

OH OH

OAc ⁸ i R _Ra H

COCH2CH2CH3

COCH2Ph

COCH2CH2Ph

COCH=CHPh _R21

OH

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

179

47. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że ma strukturę ogólną (II):

gdzie R¹ jest wybrane spośród -CH2-NHR^a, -CH2OR^a oraz -CH2-NH-CO-CHCH3-NHR^a zaś R^a,

R⁵, R¹⁸ i R²¹ są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej:

_R ^a R⁵ R¹⁸

H OH OH

COCH2CH2CH3 OAc

COCH2Ph

COCH2CH2Ph

COCH2CH2Ph

COCH=CHPh _R21

OH

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(R)-CH(CH3)NHCOCF3

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

180

PL 215 769 B1 gdzie R', X2, R1 oraz R6 są każde niezależnie wybrane z grup określonych poniżej: R' X₂ R₁ R₆ H OH OH OH CH2CH=CH2 OAc OAc CHCH2CH3 OCH2CH=CH2 CO(CH2)4CH3 OCOCH2C6H11 CO(CH2)12CH3 OCOCF3 OCOCH2CH2C6H11 CO(CH2)16CH3 OCOCH2Cl OCOCH2CH2CH3 COCH2C6H11 OCOCH2CH2Cl OCO(CH2)4CH3 COCH2CH2C6H11 OCOCF2CF2CF3 OCO(CH2)8CH3 COCH2Ph OCO(CH2)16CH3

COCH2CH2Ph

COCH=CHCH3

COCH(CH3)NHCOCH2CH2Ph

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH3)2

PL 215 769 B1

181

49. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że stanowi związek o wzorze:

182

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

183

OMe

Me

184

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

185

186

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

187

188

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

189

190

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

191

192

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

193

194

PL 215 769 B1

51. Związek według zastrz. 49, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (50):

52. Związek według zastrz. 50, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (112):

PL 215 769 B1

195

OMe

NH

196

PL 215 769 B1

54. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że stanowi związek o wzorze:

PL 215 769 B1

197

198

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

199

200

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

201

55. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (66):

56. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (116):

202

PL 215 769 B1

57. Związek o wzorze:

PL 215 769 B1

203

204

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

205

206

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

207

208

PL 215 769 B1

58. Związek według zastrz. 57, znamienny tym, że stanowi związek o wzorze:

PL 215 769 B1

209

59. Związek według zastrz. 57, znamienny tym, że stanowi związek o wzorze:

210

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

211

OMe

118

212

PL 215 769 B1

PL 215 769 B1

213

214

PL 215 769 B1

60. Związek według zastrz. 59, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (100):

61. Związek według zastrz. 59, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (102):

PL 215 769 B1

215

62. Związek według zastrz. 59, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (104):

OMe

Związek według zastrz. 59, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (108):

OMe

64. Związek według zastrz. 59, znamienny tym, że odpowiada wzorowi (198):

65. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera związek określony w zastrz. 1 do 64, łącznie z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.

66. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 1 do 64 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia nowotworu.