[go: up one dir, main page]

NO335001B1 - Isoksazolforbindelser, og farmasøytisk preparat som omfatter forbindelsene, som inhibitorer for varmesjokkproteiner - Google Patents

Isoksazolforbindelser, og farmasøytisk preparat som omfatter forbindelsene, som inhibitorer for varmesjokkproteiner Download PDF

Info

Publication number
NO335001B1
NO335001B1 NO20054195A NO20054195A NO335001B1 NO 335001 B1 NO335001 B1 NO 335001B1 NO 20054195 A NO20054195 A NO 20054195A NO 20054195 A NO20054195 A NO 20054195A NO 335001 B1 NO335001 B1 NO 335001B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
isoxazole
carboxylic acid
acid ethylamide
compound according
solution
Prior art date
Application number
NO20054195A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20054195L (no
NO20054195D0 (no
Inventor
Martin James Drysdale
Brian William Dymock
Harry Finch
Paul Webb
Edward Mcdonald
Karen Elizabeth James
Kwai Ming Cheung
Thomas Peter Mathews
Original Assignee
Cancer Rec Tech Ltd
Cancer Res Inst
Vernalis R&D Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0303105A external-priority patent/GB0303105D0/en
Priority claimed from GBGB0306560.4A external-priority patent/GB0306560D0/en
Priority claimed from GB0313751A external-priority patent/GB0313751D0/en
Application filed by Cancer Rec Tech Ltd, Cancer Res Inst, Vernalis R&D Ltd filed Critical Cancer Rec Tech Ltd
Publication of NO20054195D0 publication Critical patent/NO20054195D0/no
Publication of NO20054195L publication Critical patent/NO20054195L/no
Publication of NO335001B1 publication Critical patent/NO335001B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/422—Oxazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/08—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

Isoksazoler med formel (A) eller (B) er inhibitorer for HSP90-aktivitet og anvendbare til behandling av f.eks. kreft, hvor Rx er en gruppe med formel (IA): -Ar1-(Alk1)p- (Z)r- (Alk2)s-Q, hvor i hvilken som helst kompatibel kombinasjon Ar1 er et eventuelt substituert aryl- eller heteroarylradikal, Alk1 og Alk2 er eventuelt substituerte to-verdige Ci-C6-alkylen eller C2-C6-alken-ylenradikaler, p, r og s er uavhengig av hverandre 0 eller 1, Z er -0-, -S-, -(C=0)-f -(C=S)-, -S02-, -C(=0)0-, -C-(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC-(=0)-, -NRASO2- eller -NRA-, hvor RA er hydrogen eller d-C6-alkyl, og Q er hydrogen eller et eventuelt substituert karbosyklisk eller heterosyklisk radikal; R2 er (i) en gruppe med formel (IA) ovenfor, eller (ii) et karboks-amidradikal, eller (iii) en ikke-aromatisk, karbosyklisk eller heterosyklisk ring hvor et ringkarbon eventuelt er substituert, og/eller hvor et ringnitrogen eventuelt er substituert med en gruppe med formel - (Alk1)p-(Z) r-

Description

Denne oppfinnelsen vedrører substituerte isoksazoler som har HSP90-inhiberende aktivitet, anvendelsen av slike forbindelser i medisin, i forbindelse med sykdommer som gir respons på inhibering av HSP90-aktivitet, slik som kreft, og farma-søytiske preparater som inneholder slike forbindelser.
Oppfinnelsens bakgrunn
Molekylære chaperoner opprettholder den passende folding og konformasjon
til proteiner, og er av avgjørende betydning ved regulering av balansen mellom protein-syntese og nedbrytning. De er blitt påvist å være viktige ved regulering av mange viktige cellulære funksjoner, slik som celleproliferasjon og apoptose (Jolly og Morimoto, 2000; Smith et al., 1998; Smith, 2001).
Varmesiokkproteiner ( HSP- er)
Eksponering av celler overfor en rekke miljømessige stress, inkludert varmesjokk, alkoholer, tungmetaller og oksidativt stress, resulterer i den cellulære akkumulering av en rekke chaperoner, vanlig kjent som varmesjokkproteiner (HSP-er). Induksjon av HSP-er beskytter cellen mot den innledende stresskrenkelse, bedrer restitusjon og fører til opprettholdelse av en stresstolerant tilstand. Det er imidlertid også blitt klart at bestemte HSP-er også kan spille en viktig molekylær chaperonrolle under normale, stressfrie betingelser ved å regulere den korrekte folding, nedbrytning, lokalisering og funksjon av en økende liste av viktige cellulære proteiner.
En rekke multigenfamilier av HSP-er finnes, med individuelle genprodukter varierende i cellulær ekspresjon, funksjon og lokalisering. De er klassifisert etter molekylær vekt, f.eks. HSP70, HSP90 og HSP27. Flere sykdommer hos mennesker kan erverves som et resultat av proteinfeilfolding (en oversikt er gitt av Tytell et al., 2001; Smith et al., 1998). Følgelig kan utviklingen av terapier som avbryter det molekylære chaperonmaskineri vise seg å være gunstig. Ved noen tilstander (f.eks. Alzheimers sykdom, prionsykdommer og Huntingtons sykdom) kan feilfoldede proteiner forårsake proteinaggregasjon som resulterer
i neurodegenerative forstyrrelser. Feilfoldede proteiner kan også resultere i tap av villtypeproteinfunksjon, noe som fører til deregulerte molekylære og fysiologiske funksjoner i cellen.
HSP-er har også vært implisert i kreft. For eksempel finnes det bevis for differensiell ekspresjon av HSP-er, noe som kan relatere seg til stadiet i tumorprogresjon (Martin et al., 2000; Conroy et al., 1996; Kawanishi et al., 1999; Jameel et al., 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al., 1991). Som et resultat av involveringen av HSP90 i forskjellige kritiske onkogene reaksjonsspor og oppdagelsen av at bestemte naturlige produkter med antikreftaktivitet retter seg mot dette molekylære chaperon, er det fascinerende nye konsept blitt utviklet om at inhibering av HSP-funksjon kan være nyttig ved behandlingen av kreft. Den første inhibitor for molekylært chaperon gjennomgår for tiden kliniske forsøk.
HSP90
HSP90 utgjør ca. 1-2% av totalt cellulært protein, og er vanligvis til stede i cellen som en dimer i forbindelse med ett av en rekke andre proteiner (se f.eks. Pratt, 1997). Det er av avgjørende betydning for cellelevedyktighet, og det utviser doble chaperonfunksjoner (Young et al., 2001). Det spiller en nøkkelrolle i den cellulære stress-respons ved å interagere med mange proteiner etter deres naturlig forekommende konformasjon, og det er blitt endret ved hjelp av forskjellige miljøstress, slik som varmesjokk, noe som sikrer adekvat proteinfolding og forhindring av ikke-spesifikk aggregasjon (Smith et al., 1998). I tillegg tyder nye resultater på at HSP90 også kan spille en rolle i bufring mot effektene av mutasjon, sannsynligvis ved å korrigere den ukorrekte folding av mutantproteiner (Rutherford og Lindquist, 1998). HSP90 har imidlertid også en viktig regulatorisk rolle. Under normale fysiologiske betingelser spiller HSP90 sammen med sin endoplasmatiske retikulumhomolog GRP94 en administrativ rolle i cellen, idet det opprettholder den konformasjonelle stabilitet og modning av flere nøkkelklientproteiner. Disse kan inndeles i tre grupper: (a) steroidhormonreseptorer, (b) Ser/Thr eller tyrosinkinaser (f.eks. ERBB2, RAF-1, CDK4 og LCK), og (c) en samling av tilsynelatende ubeslektede proteiner, f.eks. mutant p53 og den katalytiske underenhet i telomerase hTERT. Alle disse proteinene spiller nøkkelregulatoriske roller i mange fysiologiske og biokjemiske prosesser i cellen. Nye HSP90-klientproteiner identifiseres hele tiden.
Den svært konserverte HSP90-familien hos mennesker består av fire gener, nemlig de cytosoliske HSP90a- og HSP90p- isoformene (Hickey et al., 1989), GRP94 i det endoplasmatiske retikulum (Argon et al., 1999) og HSP75/TRAP1 i den mitokondriske matriks (Felts et al., 2000). Det antas at alle familiemedlemmene har en lik virkningsmåte, men binder seg til forskjellige klientproteiner avhengig av deres lokalisering i cellen. For eksempel er ERBB2 kjent for å være et spesifikt klientprotein til GRP94 (Argon et al., 1999), og type 1 tumornekrosefaktorreseptor (TNFR1) og RB er begge blitt påvist å være klienter for TRAP1 (Song et al., 1995; Chen et al., 1996).
HSP90 deltar i en serie av komplekse interaksjoner med et spekter av klient-og regulatorproteiner (Smith, 2001). Selv om de nøyaktige molekylære detaljene gjenstår å bli belyst, har biokjemiske og røntgenkrystallografiske studier (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997) utført i løpet av de siste få årene gitt stadig mer detaljert innsyn i chaperonfunksjonen til HSP90.
Etter tidligere uenighet vedrørende dette spørsmålet er det nå klart at HSP90 er et ATP-avhengig molekylært chaperon (Prodromou et al., 1997), idet dimerisering av nukleotidbindingsdomenene er av avgjørende betydning for ATP-hydrolyse, som igjen er av avgjørende betydning for chaperonfunksjon (Prodromou et al., 2000a). Binding av ATP resulterer i dannelsen av en toroidaldimerstruktur hvor de N-terminale domenene bringes i nærmere kontakt med hverandre, noe som resulterer i en konformasjonell endring kjent som "klemmemekanismen" (Prodromou og Pearl, 2000b).
Kjente HSP90- inhibitorer
Den første klassen av HSP90-inhibitorer som ble oppdaget, var benzo-kinonansamycinklassen, som omfatter forbindelsene herbimycin A og geldanamycin. De ble påvist å reversere den maligne fenotype til fibroblaster transformert ved hjelp av v-Src-onkogenet (Uehara et al., 1985), og deretter utvise sterk antitumoraktivitet i dyremodeller både in vitro (Schulte et al., 1998) og in vivo (Supko et al., 1995).
Immunutfellings- og affinitetsmatriksstudier har vist at den viktigste virkningsmekanismen til geldanamycin involverer binding til HSP90 (Whitesell et al., 1994; Schulte og Neckers, 1998). Dessuten har røntgenkrystallografiske studier vist at geldanamycin konkurrerer i ATP-bindingssetet og inhiberer den intrinsiske ATPase-aktivitet av HSP90 (Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998). Dette forhindrer igjen dannelsen av modne multimere HSP90-komplekser som er i stand til å chaperonere klientproteiner. Som et resultat av dette måles klientproteinene for nedbrytning via ubiquitinproteasomreaksjonssporet. 17-allylamino, 17-demetoksygeldanamycin (17AAG) bi-beholder egenskapen med HSP90-inhibering, noe som resulterer i klientproteinutarming og antitumoraktivitet i cellekultur- og xenograftmodeller (Schulte et al., 1998; Kelland et al., 1999), men har signifikant lavere hepatotoksisitet enn geldanamycin (Page et al., 1997). 17AAG evalueres for tiden i kliniske forsøk i fase I.
Radicicol er et makrosyklisk antibiotikum som er påvist å reversere den maligne fenotype til v-Src og v-Wa-Ras-transformerte fibroblaster (Kwon et al., 1992; Zhao et al., 1995). Det ble påvist å bryte ned en rekke signalgivende proteiner som en følge av HSP90-inhibering (Schulte et al., 1998). Røntgenkrystallografiske data bekreftet at radicicol også binder seg til det N-terminale domene i HSP90 og inhiberer den intrinsiske ATPase-aktivitet (Roe et al., 1998). Radicicol mangler antitumoraktivitet in vivo på grunn av den ustabile kjemiske natur til forbindelsen.
Kumarinantibiotika er kjent for å binde seg til bakteriell DNA-gyrase i et ATP-bindingssete som er homologt til det i HSP90. Kumarinet, novobiocin, ble påvist å binde seg til karboksyenden av HSP90, det vil si i et annet sete enn det som okkuperes av benzokinonansamyciner og radicicol som binder seg i N-enden (Marcu et al., 2000b). Dette resulterte imidlertid fortsatt i inhibering av HSP90-funksjon og nedbrytning av en rekke HSP90-chaperonerte signalproteiner (Marcu et al., 2000a). Geldanamcyin kan ikke binde HSP90 etter novobiocin; dette tyder på at det må foreligge noe interaksjon mellom de N- og C-terminale domenene, og er i overensstemmelse med det syn at begge setene er viktige for HSP90-chaperonegenskaper.
En purinbasert HSP90-inhibitor, PU3, er blitt påvist å resultere i nedbrytningen av signalmolekyler, inkludert ERBB2, og å forårsake cellesyklusstans og differensiering i brystkreftceller (Chiosis et al., 2001).
Videre er det i WO 00/08001 beskrevet isoksazoler for behandling av østrogenrelatert kreft, som brystkreft og endometriekreft.
HSP90 som et terapeutisk mål
På grunn av dets involvering ved regulering av en rekke signalgivende reaksjonsspor som er av avgjørende betydning før driving av fenotypen til en tumor, og den oppdagelse at bestemte bioaktive, naturlige produkter utøver sine effekter via HSP90-aktivitet, vurderes nå det molekylære chaperon HSP90 som et nytt mål for antikreftlegemiddelutvikling (Neckers et al., 1999).
Den dominerende virkningsmekanisme til geldanamycin, 17AAG, og radicicol involverer binding til HSP90 i ATP-bindingssetet lokalisert i det N-terminale domene i proteinet, noe som fører til inhibering av den intrinsiske ATPase-aktivitet av HSP90 (se f.eks. Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997; Panaretou et al., 1998).
Inhibering av HSP90-ATPase-aktivitet forhindrer rekruttering av kochaperoner og oppmuntrer til dannelsen av en type HSP90-heterokompleks hvorfra disse klientproteinene målrettes for nedbrytning via ubiquitinproteasomreaksjonssporet (se f.eks. Neckers et al., 1999; Kelland et al., 1999).
Behandling med HSP90-inhibitorer fører til selektiv nedbrytning av viktige proteiner som er involvert i celleproliferasjon, cellesyklusregulering og apoptose, prosesser som er fundamentalt viktige ved kreft.
Inhibering av HSP90-funksjon er blitt påvist å forårsake selektiv nedbrytning av viktige signalproteiner som er involvert i celleproliferasjon, cellesyklusregulering og apoptose, prosesser som er fundamentalt viktige, og som vanligvis dereguleres ved kreft
(se f.eks. Hostein et al., 2001). En attraktiv fremgangsmåte for utvikling av legemidler mot dette målet for anvendelse på sykehus er at samtidig utarming av proteiner forbundet med den transformerte fenotype, kan få en sterk antitumoreffekt og oppnå en terapeutisk fordel mot kreft versus normale celler. Disse hendelsene nedstrøms for HSP90-inhibering antas å være ansvarlige for antitumoraktiviteten av HSP90-inhibitorer i cellekultur- og dyremodeller (se f.eks. Schulte et al., 1998; Kelland et al., 1999).
Kort beskrivelse av oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelsen av en klasse av substituerte isoksazolforbindelser som HSP90-inhibitorer, f.eks. for inhibering av kreftcelleproliferasjon. Oppfinnelsen omfatter også nye isoksazolforbindelser per se, og farmasøytiske preparater som inneholder dem.
Nærmere beskrivelse av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en forbindelse som angitt i krav 1, hvor forbindelsen har formel (A) eller (B)
eller et salt, hydrat eller solvat derav,
hvor
Ri er en gruppe med formel (IB)
hvor i hvilken som helst kompatibel kombinasjon
R er én eller flere eventuelle substituenter,
Alk<1>og Alk<2>er eventuelt substituerte toverdige Ci-C6-alkylen- eller C2-C6-alkenylenradikaler,
p, r og s er uavhengig av hverandre 0 eller 1,
Z er -O-, -S-, -(C=0)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=0)0-, -C(=0)NR<A->, -C(=S)NR<A->, - S02NRA-,-NR<A>C(=0)-, -NR<A>S02- eller -NR<A->, hvor RA er hydrogen eller Ci-C6-alkyl, og
Q er hydrogen eller et eventuelt substituert karbosyklisk eller heterosyklisk radikal;
R2er
(i) en gruppe med formel (IA):
hvor i hvilken som helst kompatibel kombinasjon
Ar<1>er et eventuelt substituert aryl- eller heteroarylradikal, ogAlk<1>,Alk<2>, p, r, s, Z og Q er som definert i forhold til Ri, (ii) et karboksamidradikal, eller
(iii) en ikke-aromatisk, karbosyklisk eller heterosyklisk ring hvor et ringkarbon eventuelt er substituert, og/eller hvor et ringnitrogen eventuelt er substituert med en gruppe med formel -(Alk^p-CZJr-CAIk^s-Q, hvor Q, Alk<1>, Alk<2>, Z, p, r og s er som definert ovenfor i forhold til gruppe (IA); og
R3er en karboksyl-, karboksamid- eller karboksylester-gruppe,
hvor "karbosyklisk" betyr et syklisk radikal hvis ringatomer alle er karbon, og omfatter
monosyklisk aryl-, sykloalkyl- og sykloalkenyl radikaler;
hvor "heterosyklyl" eller "heterosyklisk" betyr et mono-, bi- eller trisyklisk, aromatisk radikal som inneholder ett eller flere heteroatomer valgt fra S, N og O; et mono-, bi- eller trisykliske, ikke-aromatisk radikal inneholdende ett eller flere heteroatomer valgt fra S, N og O; og grupper som består av et monosyklisk, ikke-aromatisk radikal inneholdende en eller flere slike heteroatomer som er kovalent bundet til et annen slikt radikal, eller til et monosyklisk, karbosyklisk
radikal;
hvor "aryl" betyr et mono-, bi, eller trisyklisk, karbosyklisk aromatisk radikal;
hvor uttrykket "eventuelt substituert" betyr substituert med opp til 4 kompatible substituenter, som hver uavhengig av hverandre er valgt blant(Ci-C6)alkyl, (Ci-C6)alkoksy, hydroksy, hydroksy(Ci-C6)alkyl, merkapto, merkapto(Ci-C6)alkyl, (Ci-C6)alkyltio, halo (inkludert fluor, brom og klor), trifluormetyl, trifluormetoksy, nitro, nitril(-CN), okso, fenyl, -COOH, -COOR<A>, -CORA, - S02R<A>, -CONH2, -S02NH2, -CONHR<A>, -S02NHR<A>, -CONR<A>R<B>, -S02NR<A>R<B>, -NH2, -
NHR<A>, -NR<A>R<B>, -OCONH2, -OCONHR<A>, -OCONR<A>R<B>, -NHCOR<A>, -NHCOOR<A>, -
NR<B>COOR<A>, -NHS02ORA, -NRBS02OH, -NRBS02ORA, -NHCONH2, -NR<A>CONH2, - NHCONHR<8>,-NR<A>CONHR<B>, -NHCONR<A>RBog -NR<A>CONR<A>R<B>, hvor RA ogR<B>
uavhengig av hverandre er en (d-C6)alkylgruppe, og
uttrykket "karboksamid" betyr en gruppe med formel -CONH2eller en metylaminokarbonyl-,
etylaminokarbonyl- eller isopropylamino-karbonylgruppe, eller en gruppe med formel -CONRB(Alk)nRA hvor
Alk er et eventuelt substituert toverdig alkylen-, alkenylen- eller
alkynylenradikal,
n er 0 eller 1,
R<B>er hydrogen eller en Ci-C6-alkyl- eller Ci-C6-alkenylgruppe,
RA er hydroksy eller eventuelt substituert karbosyklisk gruppe eller
heterosyklylgruppe,
eller RA og R<B>danner sammen med nitrogenatomet som de er bundet til, en N-heterosyklisk ring som eventuelt kan inneholde ett eller flere ytterligere heteroatomer valgt blant O, S og N, og som eventuelt kan være substituert på ett eller flere ring-C- eller -N-atomer.
Slik det her er brukt:
henviser uttrykket "karboksylgruppe" til en gruppe med formel -COOH;
henviser uttrykket "karboksylestergruppe" til en gruppe med formel -COOR, hvor R er et radikal som er faktisk eller tenkt avledet fra hydroksylforbindelsen ROH; og
henviser uttrykket "karboksamidgruppe" til en gruppe med formel -CONRaRb, hvor -NRaRber en primær eller sekundær (inkludert syklisk) aminogruppe som er faktisk eller tenkt avledet fra ammoniakk eller aminet HNRaRb.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "(Ca-Cb)alkyr hvor a og b er hele tall, til et rettkjedet eller forgrenet alkylradikal som har fra a til b karbonatomer. Når f.eks. a er 1 og b er 6, omfatter således uttrykket metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sek.-butyl, t-butyl, n-pentyl og n-heksyl.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "toverdig (Ca-Cb)alkylenradikal" hvor a og b er hele tall, til en mettet hydrokarbonkjede som har fra a til b karbonatomer og to umettede valenser.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "(Ca-Cb)alkenyl" hvor a og b er hele tall, til et rettkjedet eller forgrenet alkenylradikal som har fra a til b karbonatomer, og som inneholder minst én dobbeltbinding ved E- eller Z-konfigurasjon, inkludert f.eks. etenyl og all vi -
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "toverdig (Ca-Cb)alkenylenradikal" hvor a og b er hele tall, til en hydrokarbonkjede som har fra a til b karbonatomer, minst én dobbeltbinding og to umettede valenser.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "(Ca-Cb)alkynyl" hvor a og b er hele tall, til et rettkjedet eller forgrenet alkenylradikal som har fra a til b karbonatomer, og som inneholder minst én trippelbinding, inkludert f.eks. etynyl og prop-2-ynyl.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "toverdig (Ca-Cb)alkynylenradikal" hvor a og b er hele tall, til et rettkjedet eller forgrenet alkynylradikal som har fra a til b karbonatomer, og som inneholder minst én trippelbinding, og to umettede valenser.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "sykloalkyl" til et mettet, karbosyklisk radikal som har 3-8 karbonatomer og omfatter f.eks. syklopropyl, syklobutyl, syklopentyl, sykloheksyl, sykloheptyl og syklooktyl.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "sykloalkenyl" til et karbosyklisk radikal som har 3-8 karbonatomer som inneholder minst én dobbeltbinding, og omfatter f.eks. syklopentenyl, sykloheksenyl, sykloheptenyl og syklooktenyl.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "aryl" til et mono-, bi- eller trisyklisk, karbosyklisk, aromatisk radikal. Illustrerende for slike radikaler erfenyl, bifenyl og naftyl.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "karbosyklisk" til et syklisk radikal hvis ringatomer alle er karbon, og omfatter monosykliske aryl-, sykloalkyl- og sykloalkenyl-radikaler.
Slik det her er brukt, henviser uttrykket "heteroaryl" til et mono-, bi- eller trisyklisk, aromatisk radikal som inneholder ett eller flere heteroatomer valgt fra S, N og O. Illustrerende for slike radikaler er tienyl, benztienyl, furyl, benzfuryl, pyrrolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tiazolyl, benztiazolyl, isotiazolyl, benzisotiazolyl, pyrazolyl, oksazolyl, benzoksazolyl, isoksazolyl, benzisoksazolyl, isotiazolyl, triazolyl, benztriazolyl, tiadiazolyl, oksadiazolyl, pyridinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, triazinyl, indolyl og indazolyl.
Slik det her er brukt, omfatter det ikke nærmere bestemte uttrykk "heterosyklyl" eller "heterosyklisk" "heteroaryl", som definert ovenfor, og betyr særlig et mono-, bi- eller trisyklisk, ikke-aromatisk radikal som inneholder ett eller flere heteroatomer valgt fra S, N og O, og grupper som består av et monosyklisk, ikke-aromatisk radikal som inneholder ett eller flere slike heteroatomer som er kovalent bundet til et annet slikt radikal, eller til et monosyklisk, karbosyklisk radikal. Illustrerende for slike radikaler er pyrrolyl-, furanyl-, tienyl-, piperidinyl-, imidazolyl-, oksazolyl-, isoksazolyl-, tiazolyl-, tiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyridinyl-, pyrrolidinyl-, pyrimidinyl-, morfolinyl-, piperazinyl-, indolyl-, morfolinyl-, benzfuranyl-, pyranyl-, isoksazolyl-, benzimidazolyl-, metylendioksyfenyl-, etylendioksyfenyl-, maleimido- og suksinimidogrupper.
Med mindre annet er angitt i den sammenheng som det opptrer, betyr uttrykket "substituert" anvendt på hvilken som helst rest her, substituert med opptil fire kompatible substituenter som hver uavhengig kan være f.eks. (Ci-C6)alkyl, (Ci-C6)alkoksy, hydroksy, hydroksy(Ci-C6)alkyl, merkapto, merkapto- (Ci-C6)alkyl, (Ci-C6)alkyltio, halo (inkludert fluor, brom og klor), trifluormetyl, trifluormetoksy, nitro, nitril (-CN), okso, fenyl,
-COOH, -COOR<A>, -CORA, -S02R<A>, -CONH2, -S02NH2, -CONHR<A>, -S02NHR<A>, -CONRARB, -
S02NR<A>R<B>, -NH2, -NHR<A>, -NR<A>R<B>, -OCONH2, -OCONHR<A>, -OCONR<A>R<B>, -NHCORA, -NHCOORA, -
NR<B>COOR<A>, -NHS02ORA, -NRBS02OH, -NRBS02ORA,-NHCONH2, -NRACONH2, -NHCONHR<8>, - NR<A>CONHR<B>, -NHCONRARB eller -NR<A>CONRAR<B>, hvor RA og R<B>uavhengig av hverandre er en (Ci-C6)alkylgruppe. En "eventuell substituent" kan være en av substituentgruppene ovenfor. Blant substituentene ovenfor er (d-C6)alkyl, halo, trifluormetyl, trifluormetoksy, trifluor-metylsulfonyl og fenyl de som vanligst anses som lipofile. Andre substituenter angitt som inneholder alkylgrupper, kan være lipofile avhengig av de bestemte alkylgruppene som er til stede.
Slik det her er brukt, omfatter uttrykket "salt" baseaddisjons-, syreaddisjons-og kvaternære salter. Forbindelser ifølge oppfinnelsen som er sure, kan danne salter, inkludert farmasøytisk eller veterinærmedisinsk akseptable salter, med slike baser som alkalimetallhydroksider, f.eks. natrium- og kaliumhydroksider; jordalkalimetallhydroksider, f.eks. kalsium-, barium- og magnesiumhydroksider; med organiske baser, f.eks. N-metyl-D-glukamin, cholin, tris(hydroksymetyl)aminometan, L-arginin, L-lysin, N-etylpiperidin, dibenzylamin og lignende. De forbindelsene (I) som er basiske, kan danne salter, inkludert farmasøytisk eller veterinærmedisinsk akseptable salter, med uorganiske syrer, f.eks. med hydrohalogensyrer, slik som saltsyre eller hydrobromsyre, svovelsyre, salpetersyre eller fosforsyre og lignende, og med organiske syrer, f.eks. med eddiksyre, vinsyre, ravsyre, fumarsyre, maleinsyre, eplesyre, salisylsyre, sitronsyre, metansulfonsyre, p- toluensulfonsyre, benzosyre, benzensulfonsyre, glutaminsyre, melkesyre, mandelsyre og lignende.
Uttrykket "lipofil" slik det her er brukt i forbindelse med en substituent, betyr at den har en positiv substituenthydrofobisitetskonstant (71). (En positiv verdi for n indikerer at substituenten er mer lipofil enn hydrogen, mens en negativ verdi indikerer at den er mindre lipofil, det vil si mer hydrofil, enn hydrogen.)
Noen forbindelser ifølge oppfinnelsen inneholder ett eller flere faktiske eller potensielle kirale sentre på grunn av tilstedeværelsen av asymmetriske karbonatomer. Tilstedeværelsen av flere asymmetriske karbonatomer gir opphav til en rekke diastereoisomerer med R- eller S-stereokjemi i hvert kiralt sentrum. Oppfinnelsen omfatter alle slike diastereoisomerer og blandinger derav.
Et aspekt av oppfinnelsen omfatter forbindelser med formel (A) eller (B) ovenfor, og salter, N-oksider, hydrater eller solvater derav, og prolegemidler for dem, bortsett fra de følgende tre forbindelser (X), (Y) og (Z), som er kommersielt tilgjengelige:
Under iakttakelse av de ovenfor nevnte utelukkelser omfatter oppfinnelsen særlig dem hvor substituentene Ru R2og R3er som omtalt og angitt i de etterfølgende avsnitt med overskriftene "Radikalet Ri", "Radikalet R2", og "Radikalet R3". Et annet aspekt omfatter anvendelsen av slike forbindelser til behandling av sykdommer som gir respons på inhibering av HSP90-aktivitet.
Radikalet R _,
Gruppen Ri har formel (IB)
hvor Alk<1>, Alk<2>, p, r, s, Z og Q er som definert ovenfor i forhold til Rlfog R er én eller flere eventuelle substituenter. I slike strukturer er det videre foretrukket at ringkarbonatomet
ved siden av hydroksylgruppen er usubstituert. I den videre omtalen av RLsom følger, gjelder denne preferansen i tillegg til eventuelle andre muligheter som er nevnt.
I de enkleste strukturene som oppfinnelsen vedrører, kan hver av p, r og s være 0, og Q kan være hydrogen, slik at Ri er eventuelt substituert aryl eller heteroaryl- I slike tilfeller kan Ri f.eks. være eventuelt substituert fenyl, fortrinnsvis 2-hydroksyfenyl, som kan være videre substituert, f.eks. med én eller flere av hydroksy, metyl, etyl, metoksy, etoksy, klor og brom. For tiden foretrukket er forbindelser hvor Ri er 2,4-dihydroksyfenyl, substituert i 5-stillingen med en liten lipofil substituent, som f.eks. håret molekylærvolum som er likt med eller mindre enn det til tert.-butyl, slik som metyl, etyl, isopropyl, isobutyl, tert.-butyl, klor eller brom, spesielt etyl, isopropyl eller klor. I slike 5-substituerte 2,4-diyhdroksyfenylforbindelser ifølge oppfinnelsen kan hydroksylgruppene være beskyttet ved hjelp av grupper som avspaltes i kroppen for å frigjøre hydroksylgruppene. Kjente prolegemiddeltypegrupper av denne sorten som avspaltes til hydroksyler, omfatter slike alkylkarbonyloksygrupper som metylkarbonyloksy, og slike alkylaminokarbonyloksygrupper som dialkylamino- eller isopropylaminokarbonyloksy.
I andre enkle strukturer som oppfinnelsen vedrører, kan p, r og s igjen hver være 0, og Q kan være en eventuelt substituert karbosyklisk eller heterosyklisk ring, f.eks. en fenyl- eller pyridylring. I slike tilfeller er Q en direkte substituent i den eventuelt substituerte Ar<m>ring.
I mer komplekse strukturer som oppfinnelsen vedrører, kan én eller flere av p, r og s være 1, og Q kan være hydrogen eller en eventuelt substituert karbosyklisk eller heterosyklisk ring. For eksempel kan p og/eller s være 1, og r kan være 0, slik at Q er bundet til Ar<1>ved hjelp av et alkylen- eller alkenylenradikal, f.eks. et Ci-C3-alkylenradikal, som eventuelt er substituert. I andre tilfeller kan hver av p, r og s være 1, i hvilket tilfelle Q er bundet til Ar<1>ved hjelp av et alkylen- eller alkenylenradikal som er avbrutt ved hjelp av det heteroatomholdige Z-radikal. I ytterligere andre tilfeller kan p og s være 0, og r kan være 1, i hvilket tilfelle Q er bundet til Ar<1>via det heteroatomholdige Z-radikal.
Bestemte eksempler på Ri-grupper av typene ovenfor er til stede i forbindelsene i eksemplene her.
Radikalet R?
Når R2er av type (i), det vil si en gruppe med formel (IA), omfatter eksempler fenyl, 2-, 3- eller 4-pyridyl, 2- eller 3-furanyl, 2- eller 3-tienyl og tiazolyl, hvor eventuelle substituenter omfatter hvilke som helst av dem angitt ovenfor i definisjonen av "substituert", f.eks. metoksy, etoksy, metylendioksy, etylendioksy, fluor, klor, brom og trifluormetyl. For eksempel kan R2være fenyl substituert i 4-stillingen med Ci-C6-alkoksy, slik som metoksy eller etoksy, eller med fluor, klor, brom, piperazinyl, N-metylpiperazinyl eller piperidinyl.
For tiden foretrukne R2-substituenter omfatter dem som har delformelen:
hvor den substituerte aminogruppe -NR<10>R<U>er en oppløseliggjørende gruppe. Mange slike oppløseliggjørende grupper er kjent innen medisinsk kjemi. Eksempler omfatter morfolinyl, piperidinyl, piperazinyl, pyrrolidinyl, etylamino, isopropylamino, dietylamino, sykloheksylamino, syklopentylamino, metoksyetylamino, piperidin-4-yl, N-acetylpiperazinyl, metylsulfonylamino, tiomorfolinyl, tiomorfolinyldioksid, 4-hydroksyetylpiperidinyl og 4-hydroksypiperidinyl. Vår samtidig innleverte internasjonale patentsøknad nr. PCT/GB2003/ 005275 beskriver HSP90-inhiberende pyrazolforbindelser som er analoge med isoksazolene som denne oppfinnelsen vedrører, og som antas å binde seg til HSP90-målet på en analog måte. De pyrazolforbindelsene har en karboksamidgruppe i stillingen som tilsvarer R2i de foreliggende isoksazoler. Når R2i de foreliggende isoksazoler er et karboksamidradikal av type (ii) ovenfor, omfatter følgelig eksempler de som er til stede i pyrazolforbindelsene ifølge PCT/GB2003/005275, f.eks. karboksamider med formel
hvor
Alk er et toverdig alkylen-, alkenylen eller alkynylenradikal, f.eks. et -CH2-, - CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH=CH- eller -CH2CCCH2-radikal, og Alk-radikalet kan eventuelt være substituert;
n er 0 eller 1;
R<B>er hydrogen eller en Ci-C6-alkyl- eller C2-C6-alkenylgruppe, f.eks. metyl, etyl, n- eller isopropyl, eller allyl;
RA er hydroksy eller eventuelt substituert karbosyklisk rest, f.eks. hydroksy-og/eller klorsubstituert fenyl og 3,4-metylendioksyfenyl, eller heterosyklyl, f.eks. pyridyl, furyl, tienyl, N-piperazinyl eller N-morfolinyl, hvor hvilke som helst av de heterosykliske ringene kan være substituert;
eller RA og R<B>danner sammen med nitrogenet som de er bundet til, en N-heterosyklisk ring som eventuelt kan inneholde ett eller flere ytterligere heteroatomer valgt fra O, S og N, og som eventuelt kan være substituert på ett eller flere ring-C- eller -N-atomer, og eksempler på slike N-heterosykliske ringer omfatter morfolino, piperidinyl, piperazinyl og N-fenylpiperazinyl.
Radikalet R^
R3er karboksyl-, karboksamid eller karboksylester-gruppe.
I én utførelsesform angår foreliggende oppfinnelse en forbindelse ifølge krav 1 hvor forbindelsen har formel (ID) eller formel B-regioisomeren derav
hvor hver R uavhengig av hverandre er en eventuell substituent valgt blant eventuelle substituenter som definert i (a), og R3er en karboksamidgruppe som definert i (a). I en annen utførelsesform angår foreliggende oppfinnelse en forbindelse ifølge krav 1 hvor forbindelsen har formel (IE) eller formel B-regioisomeren derav
hvor R3er en karboksamidgruppe som definert i (a), R9er -CH2NR<10>R<U>eller -NR<10>R<U>, hvor den substituerte aminogruppe -NR<10>R<U>er en oppløseliggjørende gruppe valgt blant morfolinyl, piperidinyl, piperazinyl, pyrrolidinyl, etylamino, isopropylamino, dietylamino, sykloheksylamino, syklopentylamino, metoksyetylamino, piperidin-4-yl, N-acetylpiperazinyl, N-metylpiperazinyl, metylsulfonylamino, tiomorfolinyl, tiomorfolinyldioksid, 4-hydroksyetylpiperidinyl og 4-hydroksypiperidinyl, og R8er en eventuell substituent valgt blant eventuelle substituenter som definert i (a).
Generelt antas klassen av forbindelser definert ovenfor i forhold til formel (I) å være nye, og oppfinnelsen omfatter alle nye medlemmer av den klassen og deres salter, hydrater og solvater, og prolegemidler derav.
Bestemte forbindelser som oppfinnelsen vedrører, omfatter dem ifølge eksemplene, særlig de følgende, og deres salter, N-oksider, hydrater og solvater: 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
4-(4-dietylaminometylfenyl)-5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)-fenyl]isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-etylaminometylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-[4-(isopropylaminometyl)fenyl]-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
4-(4-sykloheksylaminometylfenyl)-5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
4- [4-(tert.-butylaminometyl)fenyl]-5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5- (2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-{4-[(2-metoksy-etylamino)metyl]-fenyl}isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreisopropylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)-fenyl]isoksazol-3-karboksylsyreisopropylamid
5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)-fenyl]isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-dietylaminornetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
3- (5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-5-karboksylsyreetylamid
4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(4,6-dihydroksy-2'-rnetyl-bifenyl-3-yl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
4-(4-dietylaminometylfenyl)-5-(4I<->fluor-4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5- (2'-fluor-4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)-4-(4-pyrrolidin-l-ylmetylfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(2,4-dihydroksy-5-fenetylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreisopropylamid
4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5- (5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)fenyl]-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-dietylaminometylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-yl metyl )fenyl]-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid
5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid.
Forbindelser som oppfinnelsen vedrører, kan fremstilles ved hjelp av litteraturfremgangsmåter, slik som dem ifølge fremstillingseksemplene her, og fremgangsmåter som er analoge med disse.
For eksempel kan noen forbindelser med formel (IA) fremstilles ved omsetning av hydroksylamin og en forbindelse med formel (III)
hvor ring A tilsvarer gruppen RLi forbindelsene (IA), og R2 og R3er som definert i forhold til formel (I). Forbindelser fremstilt på denne måten kan så modifiseres kjemisk for å innføre ønskede substituenter for å fremstille andre forbindelser med formel (A). Når f.eks. Ri er en fenylring som eventuelt allerede bærer substituenter, vil innføringen av en bromsubstituent ofte muliggjøre innføring av andre substituenter i bromsetet ved hjelp av sp2-kobling.
Ved en annen vei til noen forbindelser med formel (A) dannes isoksazolringen ved omsetning av en forbindelse (IV) med hydroksylamin hvor R<1>!og R<*>3er medlemmer av substituentklassene Ri og R3definert ovenfor, for å fremstille isoksazolen (V)
etterfulgt av innføring av den ytterligere substituent R2, f.eks. ved bromering eller jodering av ringkarbonet i (V) og sp2-kobling, og/eller modifikasjon av de resulterende R<1>!-, R<1>3- og R2-substituenter i isoksazolen.
Dessuten kan noen isoksazolregioisomerer (B) fremstilles fra isoksazolene (A) ved omsetning med trimetyloksoniumbortrifluorid, og forbindelser fremstilt på denne måten kan igjen så modifiseres kjemisk for å innføre ønskede substituenter for å fremstille andre forbindelser med formel (IA).
Det vil forstås at det under syntesene ovenfor kan være ønskelig å beskytte eventuelle reaktive grupper, slik som hydroksyler, og å avbeskytte senere. Ytterligere syntesedetaljer er beskrevet i eksemplene her.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er inhibitorer for HSP90 og er således anvendelige i behandlingen av sykdommer som gir respons på inhibering av HSP90-aktivitet, slik som kreft; virussykdommer, slik som hepatitt C (HCV) (Waksman, 2002); immunsuppresjon, slik som transplantasjon (Bijlmakers, 2000, og Yorgin, 2000); antiinflammatoriske sykdommer (Bucci, 2000), slik som reumatoid artritt, astma, MS, sukkersyke type I, lupus, psoriasis og inflammatorisk tarmsykdom; cystisk fibrose (Fuller, 2000); angiogeneserelaterte sykdommer (Hur, 2002, og Kurebayashi, 2001); diabetisk retinopati, hemangiomer, psoriasis, endometriose og tumorangiogenese. En HSP90-inhibitor ifølge oppfinnelsen kan også beskytte normale celler mot kjemoterapi indusert toksisitet og være anvendbar ved sykdommer hvor en mangel på å gjennomgå apoptose er en underliggende faktor. En slik HSP90-inhibitor kan også være anvendbar ved sykdommer hvor induksjonen av en cellestress- eller varmesjokkproteinrespons vil kunne være gunstig, f.eks. beskyttelse mot hypoksisk-iskemisk skade på grunn av forhøyelse av HSP70 i hjertet (Hutter, 1996, og Trost, 1998) og hjernen (Plumier, 1997 og Rajder, 2000). En HSP90-inhibitor vil også kunne være anvendbar ved sykdommer hvor proteinfeilfolding eller - aggregasjon er en viktig forårsakende faktor, f.eks. traversyke/CJD, Huntingtons og Alzheimers sykdom (Sittler, 2001, Trazelt, 1995, og Winklhofer, 2001).
Oppfinnelsen tilveiebringer følgelig også:
(i) anvendelse av en forbindelse i følge kravene til fremstilling av et medikament for bruk i en fremgangsmåte for behandling av sykdommer eller tilstander som gir respons på inhibering av HSP90-aktivitet hos pattedyr, særlig mennesker, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere til pattedyret en mengde av en forbindelse med formel (A) eller (B), som definert ovenfor, eller et salt, hydrat eller solvat derav, som er effektiv når det gjelder å inhibere HSP90-aktiviteten; (ii) en forbindelse med formel (A) eller (B), som definert ovenfor, eller et salt, hydrat eller solvat derav, for anvendelse innen human- eller veterinærmedisinen, særlig ved behandlingen av sykdommer eller tilstander som gir respons på inhibering av HSP90-akti vitet; (iii) et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse med formel (A) eller
(B), som definert og angitt ovenfor, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer. Oppfinnelsen omfatter særlig en oppløsning eller suspensjon av en slik forbindelse i en
steril, fysiologisk akseptabel bærer, f.eks. vandig saltoppløsning.
Det vil forstås at det bestemte dosenivå for enhver bestemt pasient vil avhenge av mange forskjellige faktorer, inkludert aktiviteten til den bestemte forbindelse som anvendes, alderen, kroppsvekten, den generelle helsetilstand, kjønnet, kosten, administreringstidspunktet, administreringsveien, utskillingshastigheten, legemiddel-kombinasjonen og den forårsakende mekanisme, og alvorligheten av den bestemte sykdom som behandles. Generelt vil en egnet dose for oralt administrerbare formuleringer vanligvis være i området fra 0,1 til 3000 mg, én, to eller tre ganger daglig, eller den ekvivalente daglige mengde administrert ved innsprøyting eller andre veier. Optimale dosenivåer og doseringshyppighet vil imidlertid bli bestemt av kliniske forsøk, slik det er vanlig på fagområdet.
Forbindelsene som oppfinnelsen vedrører, kan fremstilles for administrering ved hjelp av enhver vei som er i overensstemmelse med deres farmakokinetiske egen-skaper. De oralt administrerbare preparater kan være i form av tabletter, kapsler, pulvere, granulater, sug eta bl ette r, væske- eller gelpreparater, slik som orale, topiske eller sterile, parenterale oppløsninger eller suspensjoner. Tabletter og kapsler for oral administrering kan være i enhetsdosepresentasjonsform, og kan inneholde slike vanlige eksipienser som bindemidler, f.eks. sirup, akasie, gelatin, sorbitol, tragant eller polyvinylpyrrolidon; fyllstoffer, f.eks. laktose, sukker, maisstivelse, kalsiumfosfat, sorbitol eller glysin; tabletteringssmøremidler, f.eks. magnesiumstearat, talkum, polyetylenglykol eller silika; desintegrasjonsmidler, f.eks. potetstivelse; eller slike akseptable fuktemidler som natriumlaurylsulfat. Tablettene kan belegges i henhold til metoder som er godt kjent innen normal farmasøytisk praksis. Flytende orale preparater kan være i form av f.eks. vann- eller oljesuspensjoner, oppløsninger, emulsjoner, siruper eller eliksirer, eller kan presenteres som et tørt produkt for rekondisjonering med vann eller annen egnet bærer før bruk. Slike flytende preparater kan inneholde vanlige additiver, slik som oppslemmingsmidler, f.eks. sorbitol, sirup, metylcellulose, glukosesirup, gelatinhydrogenerte, spiselige fettstoffer; emulgeringsmidler, f.eks. lecitin, sorbitanmonooleat eller akasie; ikke-vandige bærere (som kan omfatte spiselige oljer), f.eks. mandelolje, fraksjonert kokosnøttolje, oljeaktige estere, slik som glyserol, propylenglykol eller etylalkohol; konserveringsmidler, f.eks. metyl- eller propyl-p-hydroksybenzoat eller sorbinsyre, og om ønsket vanlige smaks- eller fargemidler.
For topisk applikasjon til huden kan legemidlet utformes til en krem, lotion eller salve. Krem- eller salveformuleringer som kan anvendes til legemidlet, er vanlige formuleringer som er godt kjent på fagområdet, f.eks. som beskrevet i slike farmasøytiske standardverker som den britiske farmakopé.
Den aktive bestanddel kan også administreres parenteralt i et sterilt medium. Avhengig av bæreren og konsentrasjonen som anvendes, kan legemidlet enten være oppslemmet eller oppløst i bæreren. Fortrinnsvis kan adjuvanser, slik som et lokalanestetikum, konserveringsmidler og bufringsmidler, være oppløst i bæreren.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen er også anvendbare i in vitro- a na lyser som er avhengige av inhibering av HSP90-aktivitet, f.eks. ved screening med hensyn på alternative klasser av HSP90-inhibitorer, hvor testforbindelsen konkurrerer med eller fortrenger en forbindelse ifølge denne oppfinnelsen. Denne fremgangsmåten for inhibering av HSP90-aktivitet omfatter å bringe et HSP90-enzym og en forbindelse med formel (A) eller (B), som definert og angitt ovenfor, i kontakt in vitro.
De følgende eksempler illustrerer fremstillingen av og aktivitetene til bestemte forbindelser ifølge oppfinnelsen.
Eksempler 1- 4
Eksempel 1 4- r4-( 4- metoksvfenyl)- 3- metvlisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol Trinn 1 l-( 2, 4- dihvdroksvfenv0- 2-( 4- metoksvfenv0etanon Resorcinol (4,4 g, 40 mmol) og 4-metoksyfenyleddiksyre (6,6 g, 40 mmol) i bortrifluorideterat (25 ml, 0,2 mol) ble varmet opp under nitrogenatmosfære ved 90 °C i ca. 90 minutter, hvorved man fikk en lyserød oppløsning. Oppløsningen fikk avkjøles og ble helt over i vandig natriumacetat (200 ml, 10 %), og blandingen ble omrørt, hvorved man fikk en blekgul utfelling. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og vasket med vann (200 ml). Faste stoffer ble tatt opp i etylacetat (250 ml), og det ble vasket med vann (200 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert til et gult, halvfast stoff. Triturering med dietyleter (100 ml) ga l-(2,4-dihydroksyfenyl)-2-(4-metoksyfenyl)-etanon som et blekoransje, fast stoff, tørket under vakuum (2,2 g).
LC-retensjonstid 2,39 minutter [M + H]<+>259,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (DMSO-d6) 7,95 (d, J 8,9 Hz, ArH), 7,2 (d, J 8,7 Hz, 2 ArH), 6,9 (d, J 8,7 Hz, 2 ArH), 6,4 (d, J 9,9 ArH), 6,25 (s, ArH), 4,2 (s, 2 CH2), 3,75 (s, 3 OCH3).
Trinn 2
7- hvdroksv- 3-( 4- metoksvfenv0- 2- metvlkromen- 4- on
Eddiksyreanhydrid (3 ml, 30 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av kaliumkarbonat (4,0 g, 29 mmol) og l-(2,4-dihydroksyfenyl)-2-(4-metoksyfenyl)etanon (l,95g, 7,5 mmol) i DMF (10 ml), og den resulterende suspensjon ble varmet opp ved 115 °C i ca. 90 minutter. Blandingen fikk avkjøles og ble helt over i vann (200 ml), hvorved man fikk en gråhvit utfelling. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og vasket med vann (100 ml) og dietyleter (2 x 40 ml), hvorved man fikk 7-hydroksy-3-(4-metoksyfenyl)-2-metylkromen-4-on som et gråhvitt pulver, tørket under vakuum (1,65 g). LC-retensjonstid 2,26 minutter [M + H]<+>283,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (DMSO-cU) 7,8 (d, J 8,7 Hz, ArH), 7,2 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 7,0 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,9 (d, J 8,7 ArH), 6,8 (s, ArH), 3,8 (s, 3 OCH3), 2,2 (s, 3 CH3).
Trinn 3
4- r4-( 4- metoksvfenvl)- 3- metvlisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol
Hydroksylaminhydroklorid (0,35 g, 5 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 7-hydroksy-3-(4-metoksyfenyl)-2-metylkromen-4-on (0,14 g, 0,5 mmol) i pyridin (3 ml), og blandingen ble varmet opp under refluks i ca. 4 timer. Oppløsningen fikk avkjøles og ble helt over i vann (50 ml), og det ble ekstrahert med dietyleter (50 ml). Ekstraktene ble vasket med vann (3 x 50 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (30 ml). Opp-løsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk en lysebrun gummi.
Råproduktene ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi på silika under eluering med etylacetat/heksan (1:2), hvorved man fikk en fargeløs gummi. Triturering med heksan ga 4-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol som et hvitt pulver, tørket under vakuum (0,087 g). LC-retensjonstid 2,20 minutter [M + H]<+>298,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (DMSO-d6) 7,1 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,85 (d, J 8,6 Hz, ArH), 6,8 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,25 (s, ArH), 6,15 (d, J 8,6 Hz, ArH), 3,65 (s, 3 OCH3), 2,15 (s, 3 CH3).
Eksempel 2
4- brom- 6- r4-( 4- metoksvfenv0- 3- metvlisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol
Benzyltrimetylammoniumtribromid (3,95 g, 10 mmol) ble tilsatt porsjonsvis til en isavkjølt suspensjon av 4-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol (eksempel 1) (2,95 g, 10 mmol) i diklormetan (50 ml), og blandingen ble omrørt i ca. 60 minutter ved romtemperatur. Etylacetat (300 ml) ble tilsatt, og blandingen ble vasket med vann (3 x 200 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk et lysebrunt, fast stoff. Råproduktene ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi på silika under eluering med etylacetat/heksan (1:2), hvorved man fikk 4-brom-6-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol som et hvitt, fast stoff, tørket under vakuum (3,42 g). LC-retensjonstid 2,38 minutter [M + H]<+>378,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (aceton-de) 7,35 (s, ArH), 7,2 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,9 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,65 (s, ArH), 3,8 (s, 3 OCH3), 2,25 (s, 3 CH3).
Eksempel 3
5- r4- f4- metoksvfenvl)- 3- metvlisoksazol- 5- vllbifenvl- 2, 4- diol
Trinn 1 5-( 2. 4- bis- benzvloksv- 5- bromfenvn- 4-( 4- metoksvfenvlV3- metvlisoksazol
Benzylbromid (0,36 ml, 3 mmol) ble tilsatt en suspensjon av 4-brom-6-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol (eksempel 2) (0,55 g, 1,5 mmol) og cesiumkarbonat (0,85 g, 2,6 mmol) i DMF (5 ml), og blandingen ble omrørt i ca. 18 timer ved romtemperatur. Vann (100 ml) ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med dietyleter (2 x 30 ml). De kombinerte ekstrakter ble vasket med vann (4 x 75 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk en lysebrun gummi. Triturering med heksan ga 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol som et gråhvitt, fast stoff, tørket under vakuum (0,5 g). LC-retensjonstid 3,08 minutter [M + H]<+>558,4 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,55 (s, ArH), 7,35-7,25 (m, 5 ArH), 7,2 (m, 3 ArH), 6,95 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,85 (m, 2 ArH), 6,7 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,35 (s, ArH), 4,95 (s, 2 CH2), 4,6 (S, 2 CH2), 3,75 (s, 3 OCH3), 2,25 (s, 3 CH3).
Trinn 2
5-( 4, 6- bis- benzvloksvbifenvl- 3- vl)- 4-( 4- metoksvfenvn- 3- metvlisoksazol
Kaliumfosfat (0,1 g, 0,5 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol (0,14 g, 0,25 mmol) og fenylborsyre (0,095 g, 0,75 mmol) i 1,4-dioksan (4 ml) under nitrogenatmosfære. Tetrakis-(trifenylfosfin)palladium(O) (kat.) ble tilsatt, og suspensjonen ble varmet opp ved 80 °C i ca. 18 timer. Suspensjonen fikk avkjøles, og etylacetat (25 ml) ble tilsatt. Blandingen ble vasket med vann (3 x 25 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (25 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk en lysebrun gummi. Triturering med heksan ga 5-(4,6-bis-benzyloksybifenyl-3-yl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol som et gråhvitt, fast stoff, tørket under vakuum.
LC-retensjonstid 3,08 minutter [M + H]<+>554,4 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,4 (m, 2 Ar//), 7,35 (s, Ar//), 7,3-7,1 (m, 11 Ar//), 6,95 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,9 (m, 2 ArH), 6,7 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,45 (s, ArH), 4,9 (s, 2 CH2), 4,7 (s, 2 CH2), 3,75 (s, 3 OCH3), 2,25 (s, 3 CH3).
Trinn 3
7- hvdroksy- 3-( 4- metoksyfenvl)- 2- metyl- 6- fenylkromen- 4- on
Ammoniumformiat (3,2 g, 50 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 5-(4,6-bis-benzyloksybifenyl-3-yl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol (1,4 g, 2,5 mmol) i metanol (20 ml)/etylacetat (10 ml) under nitrogenatmosfære. Palladium-på-karbon (10 %) (kat.) ble tilsatt, og suspensjonen ble varmet opp ved 60 °C i ca. 18 timer. Suspensjonen fikk avkjøles, etylacetat (150 ml) ble tilsatt, og suspensjonen ble filtrert. Filtratet ble vasket med vann (3 x 100 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk en lysebrun gummi. Triturering med metanol ga 7-hydroksy-3-(4-metoksyfenyl)-2-metyl-6-fenylkromen-4-on som et gråhvitt, fast stoff, tørket under vakuum.
LC-retensjonstid 2,58 minutter [M + H]<+>359,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (DMSO-de) 7,9 (s, ArH), 7,5-7,3 (m, 5 ArH), 7,25 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 7,1 (s, ArH), 7,05 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 3,85 (s, 3 OC//3), 2,2 (s, 3 C//3).
Trinn 4
5- r4-( 4- metoksvfenv0- 3- metvlisoksazol- 5- vllbifenvl- 2, 4- diol
Hydroksylaminhydroklorid (75 mg, 1,08 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 7-hydroksy-3-(4-metoksyfenyl)-2-metyl-6-fenylkromen-4-on (105 mg, 0,29 mmol) i pyridin (2 ml), og blandingen ble varmet opp under refluks i ca. 6 timer, hvorved man fikk en blekgul oppløsning. Oppløsningen fikk avkjøles, og vann (20 ml) ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med dietyleter (2 x 10 ml). De kombinerte ekstrakter ble vasket med vann (2 x 20 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (10 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert. Råproduktene ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika, under eluering med etylacetat/heksan (1:1), hvorved man fikk tittel-forbindelsen som et gråhvitt pulver (80 mg).
LC-retensjonstid 2,56 minutter [M + H]<+>374,3 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (aceton-de) 7,5-7,3 (m, 5 ArH), 7,2 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 7,0 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,9 (d, J 8,6 Hz, ArH), 6,35 (s, ArH), 6,1 (d, J 8,7 Hz, ArH), 3,85 (s, 3 OCH3), 2,25 (s, 3 CH3).
Eksempel 4
4- klor- 6- r4-( 4- metoksvfenvl)- 3- metvlisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol
Hydroksylaminhydroklorid (0,7 g, 10 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 6-klor-7-hydroksy-3-(4-metoksyfenyl)-2-metylkromen-4-on [fremstilt analogt med eksempel 1, trinn 2] (0,32 g, 1,0 mmol) i pyridin (4 ml), og blandingen ble varmet opp under refluks i ca. 6 timer, hvorved man fikk en blekgul oppløsning. Oppløsningen fikk avkjøles, og vann (20 ml) ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med dietyleter (2 x 10 ml). De kombinerte ekstrakter ble vasket med vann (2 x 20 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (10 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert. Råproduktene ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika, under eluering med etylacetat/heksan (1:1), hvorved man fikk 4-klor-6-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol som et gråhvitt pulver (0,103 g). LC-retensjonstid 2,37 minutter [M + H]<+>332,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (aceton-d6) 7,2 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 7,15 (s, ArH), 6,9 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,6 (s, ArH), 3,85 (s, 3 OCH3), 2,25 (s, 3 CH3).
Forbindelsene ifølge eksemplene 1-4 hadde en HSP90-IC50i området A når de ble testet i "Malachite Green"-ATPase-analysen beskrevet nedenunder. I de etterfølgende tabeller gir den siste spalten resultatet på samme grunnlag for den aktuelle forbindelse, bortsett fra i tilfellet med eksempel 12b, hvor den oppgitte aktivitet er som målt i fluorescenspolariseringsanalysen beskrevet nedenunder.
Eksemplene 5-16 ble fremstilt ved å anvende reaksjonen beskrevet i eksemplene 1-4. Andre detaljer vedrørende fremstillingseksemplene 6 og 7 er analoge med dem i eksemplene 86 og 87.
<*>Også tilgjengelig kommersielt fra Interbioscreen
<§>Tilgjengelig kommersielt fra Enamine
"Fremstilt fra beskyttet bromresorcinolmellomprodukt med kobber(I)cyanid i dimetylformamid ved 150 °C
<***>Fluorescenspolariseringsanalyse: "A" = < 10^M; "B" = > 10
Eksempel 14
4- r4- f4- metoksvfenvl)- 3- metvlisoksazol- 5- vll- 6- fenetvlbenzen- l, 3- diol
ble fremstilt fra styrylborsyrekobling av bromisoksazolforbindelsen ifølge eksempel 2, trinn 1, som beskrevet ovenfor, etterfulgt av reduksjon og behandling med hydroksylamin, analogt med eksempel 3. LC-retensjonstid 2,56 minutter [M + H]<+>402 (kjøretid 3,75 minutter). Eksempel 15 4- r4- f4- metoksvfenvl)- 3- metvlisoksazol- 5- vll- 2, 6- bis- f4- metvlpiperazin- l- vlmetvnbenzen-1, 3- diol
N-metylpiperazin (0,125 ml, 1,1 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 4-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol (0,15 g, 0,5 mmol) og paraform- aldehyd (0,040 g) i 1,4-dioksan (4 ml), og blandingen ble varmet opp under refluks i ca. 18 timer, hvorved man fikk en brungul oppløsning. Oppløsningen fikk avkjøles, og etylacetat (25 ml) ble tilsatt. Blandingen ble vasket med vann (3 x 25 ml) og mettet, vandig natrium-kloridoppløsning (25 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk en lysebrun gummi. Triturering med heksan ga 4-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]-2,6-bis-(4-metyl pi perazin-l-yl metyl )benzen-l,3-diol (0,121 g) som et lysebrunt pulver. LC-retensjonstid 1,61 minutter [M + H]<+>522,6 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (aceton-de) 7,2 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,95 (s, ArH), 6,8 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 3,85 (s, 3 OCH3), 3,75 (s, 2 CH2), 3,65 (s, 2 CH2), 2,9-2,0 (br, s, 16 CH2), 2,3 (s, 3 CH3), 2,25 (S, 3 CH3), 2,2 (s, 3 CH3).
Eksempel 16
2, 4- dihvdroksv- 5- r4- f4- metoksvfenvn- 3- metvlisoksazol- 5- vllbenzosvremetvlester
Trinn 1
n-butyllitium (100jllI) ble tilsatt til en oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol (154 mg, 0,28 mmol) i tetrahydrofuran (2,5 ml) under nitrogenatmosfære ved -78 °C. Oppløsningen ble omrørt ved -70 °C i 30 minutter, hvorved man fikk en oransje oppløsning. Reaksjonen ble stanset med metylklor-formiat (100 jllI, 3 ekv.), og reaksjonsblandingen fikk varmes opp til romtemperatur i 30 minutter. Oppløsningen ble tilsatt mettet, vandig ammoniumklorid (5 ml). Blandingen ble ekstrahert med etylacetat (3x5 ml). De kombinerte ekstrakter ble vasket med vann (2x5 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (5 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert. Råproduktet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika, under eluering med etylacetat i heksan (gradient 20 % til 60 %
etylacetat), hvorved man fikk 2,4-bis-benzyloksy-5-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzosyremetylester (72 mg).
LC-retensjonstid 4,95 minutter [M + H]<+>536,4 (kjøretid 7,5 minutter).
NMR (DMSO-de) 7,8 (s, ArH), 7,55 (d, J 7,1 Hz, 2 ArH), 7,4 (t, J 6,2 Hz, 2 ArH), 7,35 (d, J 6,1 Hz, ArH), 7,3 (m, 3 ArH), 7,1 (m, 4 ArH), 7,0 (s, ArH), 6,9 (d, 8,8 Hz, 2 ArH), 5,3 (s, 2 CH2), 5,1 (s, 2 CH2), 3,78 (s, OCH3) 3,76 (s, OCH3), 2,28 (s, CH3).
Trinn 2
Ammoniumformiat (172 mg, 20 ekv.) ble tilsatt til en oppløsning av 2,4-bis-benzyloksy-5-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzosyremetylester (72 mg, 0,13 mmol) i metanol (2 ml)/etylacetat (1 ml) under nitrogenatmosfære. 10 % palladium-på-karbon (kat.) ble tilsatt, og suspensjonen ble varmet opp ved 60 °C over natten. Opp-løsningen fikk avkjøles. Etylacetat (5 ml) ble tilsatt, oppløsningen ble vasket med vann (2 x 5 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (5 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert. Råproduktene ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika, under eluering med etylacetat i heksan (gradient 25 % til 45 % etylacetat), hvorved man fikk 2,4-dihydroksy-5-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]benzosyremetylester (7,0 mg). LC-retensjonstid 2,49 minutter [M + H]<+>356,3 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (CDCI3), 5 = 10,85 (s, ArOH), 7,52 (s, ArOH), 7,12 (d, J 8 Hz, 2 ArH), 6,98 (s, ArH), 6,91 (d, J 8 Hz, 2 ArH), 6,45 (s, ArH), 3,78 (s, 3 OCH3), 3,71 (s, 3 OCH3), 2,21 (s, 3 CH3).
Forbindelsene ifølge eksemplene 14-16 hadde en HSP90-IC50i henholdsvis områdene "A"', "B" og "B", når de ble testet i "Malachite Green"-ATPase-analysen beskrevet nedenunder.
Likeledes ble eksemplene 17-20 ble fremstilt idet reaksjonen ble stanset med henholdsvis N-formylpiperidin, fenyltioisocyanat, 2-metoksyfenylisocyanat og benzaldehyd. Den endelige avbeskyttelsesreaksjon ble utført med bortriklorid, som beskrevet for eksempel 23 (siste reaksjon i reaksjonsskjema 5). Eksempel 21 varet biprodukt fra trinn 1, eksempel 16. Oppgitte aktiviteter er de som ble oppnådd i "Malachite Green"-analysen beskrevet nedenunder.
Eksempel 22 4- benzvl- 6- r4-( 4- metoksvfenvl)- 3- metvlisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol Karbonsvre- 2- benzovl- 5- etoksvkarbonvloksvfenvlesteretvlester
Trietylamin (10 ml, 72,2 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 2,4-dihydroksy-benzofenon (1) (5,4 g, 23,3 mmol) i TH F (50 ml), og oppløsningen ble avkjølt til 0 °C. Etylklorformiat (6,9 ml, 72,2 mmol) ble sakte tilsatt, og suspensjonen ble omrørt i ca. 30 minutter ved 0 °C, og i ca. 3 timer ved romtemperatur. Vann (150 ml) ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med dietyleter (150 ml). Ekstraktene ble vasket med vann (2 x 150 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (100 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk 4-benzylbenzen-l,3-diol som en lysegrønn gummi, som størknet etter å ha stått (8,2 g).
LC-retensjonstid 2,73 minutter [M + H]<+>359,2 (kjøretid 3,75 minutter).
5 (kloroform-d) 7,7 (m, 2 ArH), 7,5 (m, 2 ArH), 7,35 (m, 2 ArH), 7,15 (m, 2 ArH), 4,25 (q, J 7,1 Hz, 2 CH2), 4,05 (q, J 7,1 Hz, 2 CH2), 1,35 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3), 1,15 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3).
4- benzvlbenzen- l, 3- diol
En oppløsning av natriumborhydrid (1,85 g, 49 mmol) i vann (30 ml) ble tilsatt til en isavkjølt oppløsning av karbonsyre-2-benzoyl-5-etoksykarbonyloksyfenyl-esteretylester (3,6 g, 10 mmol) i TH F (30 ml). Blandingen ble omrørt i ca. 60 minutter ved 0 °C, og i ca. 60 timer ved romtemperatur, hvorved man fikk en lyserød suspensjon. Vann (150 ml) ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med dietyleter (150 ml). Ekstraktene ble vasket med vann (2 x 100 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk en blekgul gummi. Gummien ble tatt opp i vandig natriumhydroksid (20 ml, 10 %), og oppløsningen ble varmet opp under refluks i ca. 60 minutter. Oppløsningen fikk avkjøles og ble surgjort med saltsyre (5 ml, 37 %). Blandingen ble ekstrahert med dietyleter (50 ml). Ekstraktene ble vasket med vann (3 x 40 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (30 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert, hvorved man fikk 4-benzylbenzen-l,3-diol som en mørkerød gummi (2,1 g). LC-retensjonstid 2,28 minutter [M + H]<+>, ikke noe ion (kjøretid 3,75 minutter). 5 (kloroform-d) 7,2 (m, 3 ArH), 7,1 (m, 2 ArH), 6,85 (d, J 8,1 Hz, ArH), 6,3 (d, J 8,1 Hz, ArH), 6,2 (s, ArH), 3,85 (s, 2 CH2). 4-benzylbenzen-l,3-diolen ble brukt som utgangsmaterialet i en syntese ifølge reaksjonsskjema 1, hvorved man fikk eksempel 23. Eksempel 23 3- r2. 4- dihvdroksv- 5- r4- f4- metoksvfenvn- 3- metvlisoksazol- 5- vllfenvl>akrvlsvre Trinn 1 3- r2. 4- bis- benzvloksv- 5- r4- f4- metoksvfenvn- 3- metvlisoksazol- 5- vllfenvl>akrvlsvre- tert.- butvlester
Diisopropyletylamin (1 ml, 5,7 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol (0,56 g, 1,0 mmol) i tert.-butylakrylat (1 ml, 6,8 mmol) og 1-butanol (8 ml) under nitrogenatmosfære. Di-klorbis(tri-o-tolylfosfin)palladium(II) (kat.) ble tilsatt, og suspensjonen ble varmet opp ved 140 °C i ca. 18 timer, hvorved man fikk en gul/grønn oppløsning. Oppløsningen fikk avkjøles og ble konsentrert til en gul/grønn gummi. Råproduktet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika, under eluering med etylacetat/heksan (1:9), hvorved man fikk 3-{2,4-bis-benzyloksy-5-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]fenyl}akrylsyre-tert.-butyl-ester som en gul/grønn gummi (315 mg). Utgangsmateriale (170 mg) ble gjenvunnet.
LC-retensjonstid 3,23 minutter [M + H]<+>604,6 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d), 7,85 (d, J 16,1 Hz, CH), 7,6 (s, ArH), 7,4-7,25 (m, 8 ArH), 7,05 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,9 (m, 2 ArH), 6,8 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,5 (s, ArH), 6,35 (d, J 16,1 Hz, CH), 5,05 (s, 2 CH2), 4,75 (s, 2 CH2), 3,75 (s, 3 OCH3), 2,25 (s, 3 CH3), 1,5 (s, 9 CCH3).
Trinn 2
3- r2, 4- dihvdroksv- 5- r4- f4- metoksvfenvn- 3- metvlisoksazol- 5- vllfenvl>akrvlsvre
Bortrikloridoppløsning (2 ml, 1,0 M i diklormetan) ble sakte tilsatt til en oppløsning av 3-{2,4-bis-benzyloksy-5-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]-fenyl}akrylsyre-tert.-butylester (50 mg, 0,09 mmol) i diklormetan (1 ml) ved -78 °C (tørris/aceton) under nitrogenatmosfære. Den resulterende oppløsning ble omrørt i ca. 1 time ved -78 °C, og i ca. 90 minutter ved romtemperatur. Oppløsningen ble avkjølt til -78 °C, og vann (2 ml) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt i ca. 30 minutter ved romtemperatur. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt, og oppløsningen ble vasket med vann (2x5 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (10 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert til en blekgul gummi. Triturering med heksan ga et gult, fast stoff, faste stoffer ble fjernet ved filtrering, vasket med heksan og tørket under vakuum, hvorved man fikk 3-{2,4-dihydroksy-5-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]fenyl}akrylsyre (10 mg) som et gult pulver. LC-retensjonstid 2,08 minutter [M + H]<+>368,3 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (aceton-de) 7,85 (d, J 16,1 Hz, CH), 7,5 (s, ArH), 7,25 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,95 (d, J 8,8 Hz, 2 ArH), 6,6 (s, ArH), 6,35 (d, J 16,1 Hz, CH), 3,8 (s, 3 OCH3), 2,25 (S, 3 CH3).
Likeledes ble 4-[4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol-5-yl]-6-styrylbenzen-1,3-diol (eksempel 24) fremstilt ved hjelp av bortrikloridavbeskyttelse av 5-(2,4-bis- benzyloksy-5-styrylfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol (fremstilt fra styrylborsyrekobling av bromisoksazolmellomprodukt, eksempel 3). LC-retensjonstid 2,08 minutter [M + H]<+>368,3 (kjøretid 3,75 minutter).
Forbindelsene ifølge eksemplene 22-24 hadde en HSP90-IC50i henholdsvis områdene "A", "B" og "C" når de ble testet i "Malachite Green"-ATPase-analysen beskrevet nedenunder.
Eksempel 25 5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- metoksvfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid Trinn 1 l-( 5- klor- 2, 4- dihydroksyfenv0etanon
Eddiksyre (17,5 ml) ble dråpevis tilsatt til en suspensjon av 4-klorresorcinol (42,5 g, 0,293 mmol) i bortrifluorideterat (200 ml) under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble varmet opp ved 90 °C i 3,5 timer og fikk avkjøles til romtemperatur. Et fast stoff var blitt dannet etter ca. 1 times avkjøling. Blandingen ble helt over i 700 ml av en 10 % (vekt/volum) vandig natriumacetatoppløsning. Denne blandingen ble kraftig omrørt i 2,5 timer. Et lysebrunt, fast stoff var blitt dannet, som ble filtrert, vasket med vann og lufttørket over natten, hvorved man fikk l-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)etanon (31,6 g, 58<%>)<.>
LCMS: [M-H]<+>185.
Trinn 2
l-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- klorfenv0etanon
Benzylbromid (30 ml) ble tilsatt til en blanding av l-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)etanon (20 g, 0,107 mol) og kalium karbonat (37 g, 2,5 ekv.) i acetonitril (350 ml). Blandingen ble varmet opp ved refluks i 6 timer og fikk så avkjøles, og det ble omrørt over natten. Blandingen ble filtrert, og de faste stoffene ble vasket med diklormetan (3 x 100 ml). De kombinerte organiske ekstrakter ble inndampet under vakuum, hvorved man fikk et blekgult, fast stoff som ble triturert med en blanding av heksan (350 ml)/etylacetat (15 ml) og filtrert, hvorved man fikk et gråhvitt, fast stoff, l-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)etanon (35,4 g, 90 %).
^-NMR (400 MHz) i overensstemmelse med formel.
Trinn 3
4- f2. 4- bis- benzyloksy- 5- klorfenyn- 2- hydroksy- 4- okso- but- 2- ensvreetylester
Natriummetall (1,35 g, 0,058 mol) ble tilsatt i små stykker i et tidsrom på 20 minutter til omrørt vannfri etanol under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble så omrørt i ytterligere 10 minutter inntil alt natriumet hadde reagert, hvorved man fikk en homogen oppløsning. l-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)etanon (10,0 g, 0,027 mol) ble tilsatt i porsjoner i løpet av 2-3 minutter, og den resulterende suspensjon ble omrørt i 5 minutter før tilsetning av dietyloksalat (6 ml, 0,043 mol), som ga en tykkere, gul utfelling. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til refluks (hvorved man fikk homogen brun oppløsning) i 4 timer og fikk så avkjøles til romtemperatur, og eddiksyre (6 ml) ble tilsatt. De resulterende faste formene ble triturert, filtrert, vasket med etanol og tørket, hvorved man fikk et gult, fast stoff (12,0 g, 95 %).
<X>H-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,2 (t, 3 H), 4,19 (q, 2 H), 5,05 (s, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 6,50 (s, 1 H), 7,22-7,41 (m, 10 H), 7,97 (s, 1 H).
Trinn 4
5-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- klorfenv0isoksazol- 3- karboksylsyreetylester
Hydroksylaminhydroklorid (0,89 g, 12,8 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 4- (2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-2-hydroksy-4-okso-but-2-ensyreetylester (5,00 g, 10,7 mmol) i absolutt etanol (100 ml). Reaksjonsblandingen ble varmet opp ved refluks i 4 timer og fikk så avkjøles til omgivelsestemperatur (i løpet av denne tiden forblir blandingen heterogen, men blir lysere gul i farge). Blandingen ble filtrert, og det filtrerte faste stoff ble vasket med vann (2 x 20 ml), etanol (2 x 20 ml) og tørket under vakuum ved 45 °C. Dette gir 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester som et dunet, gult stoff, 4,49 g (91 %).
LCMS: [M + H]<+>466, 464 (3<7>CI,<35>CI).
^-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,42 (t, 3 H), 4,42 (q, 2 H), 5,13 (s, 2 H), 5,14 (s, 2 H), 6,62 (s, 1 H), 7,01 (s, 1 H), 7,35-7,43 (m, 10 H), 8,00 (s, 1 H).
Trinn 5
5- ( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- klorfenv0isoksazol- 3- karboksylsyreetylamid
En oppløsning av etylamin i metanoloppløsning (2,0 M, 40 ml, 80 mmol) ble tilsatt til en omrørt suspensjon av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester (4,40 g, 9,51 mmol) i absolutt etanol (50 ml). Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 80 °C (oljebadtemperatur) i 5 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og fikk stå over natten. Et fargeløst, fast produkt ble dannet, og reaksjonsblandingen ble avkjølt videre i et isvannbad, filtrert og vasket med kald etanol (2 x 20 ml). Det fargeløse produkt ble tørket under vakuum, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid, 3,42 g (78 %).
LCMS: [M + H]<+>465, 463 (<37>CI,<35>CI).
^-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,25 (t, 3 H), 3,48 (m, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 5,2 (s, 2 H), 6,59 (s, 1 H), 6,83 (brt, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 7,30-7,41 (m, 10 H), 7,97 (s, 1 H).
Trinn 6
5-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- klofrenv0- 4- bromisoksazol- 3- karboksylsyreetylamid
En oppløsning av brom i eddiksyre (0,6 M, 7,2 ml, 4,32 mmol) ble tilsatt til en omrørt suspensjon av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (2,00 g, 4,32 mmol) og natriumacetat (0,708 g, 8,64 mmol) i eddiksyre (30 ml) ved omgivelsestemperatur. Blandingen ble varmet opp til 80 °C og ble homogen innen 5-10 minutter, hvorved man fikk en mørkerød oppløsning. Etter oppvarming i 2,5 timer ble oppløsningen gul av farge. TLC-analyse viste utgangsmateriale og produkt til stede. Ytterligere 2,0 ml (1,2 mmol) av bromet i eddiksyreoppløsning ble tilsatt i løpet av 2 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur, og eddiksyre ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en fast rest som ble fordelt mellom eter (200 ml) og vann (200 ml). Fasene ble separert, og den organiske fasen ble vasket med vann (3 x 100 ml), mettet, vandig natriumbikarbonatoppløsning (2 x 100 ml) og mettet, natriumkloridoppløsning (1 x 200 ml). Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en gul olje som ble renset ved hjelp av hurtigkromatografi på silikagel under eluering med 1-20 % etylacetat i heksan. Dette gir produkt som fargeløst, fast stoff, 1,2 g (52 %).
LCMS: [M + H]<+>543, 541(81Br,<79>Br).
^-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,26 (t, 1 H), 3,50 (m, 2 H), 5,01 (s, 2 H), 5,12 (s, 2 H), 6,62 (s, 1 H), 6,74 (brt, 1 H), 2,28-7,41 (m, 10 H), 7,53 (s, 1 H).
Trinn 7
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- f4- metoksvfenvnisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
Til en blanding av 4-metoksyfenylborsyre (0,178 g, 1,17 mmol) og 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (0,507 g, 0,94 mmol) ble det tilsatt natriumhydrogenkarbonat (237 mg, 2,82 mmol), etterfulgt av DMF (5 ml) og vann (1,0 ml). Blandingen ble avgasset ved evakuering og gjennombobling med nitrogen (tre ganger), etterfulgt av bobling med nitrogengass gjennom blandingen i 5 minutter. Diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) (66 mg, 0,094 mmol) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp under nitrogenatmosfære ved 90 °C i 2 timer (reaksjonsblanding blir mørkebrun av farge). Ytterligere 10 mg diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp ved 90 °C i 15 timer og fikk så avkjøles til omgivelsestemperatur. Mesteparten av oppløsningsmidler ble fjernet under vakuum, og resten ble fordelt mellom etylacetat (50 ml) og vann (50 ml). Denne blandingen ble filtrert gjennom en kiselgurpute for å fjerne palladiumrester, og så ble fasene separert, og den organiske fasen ble vasket med vann (2 x 30 ml), mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml) og så tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en gul olje (598 mg). Det urensede reaksjonsprodukt ble renset ved hjelp av adsorpsjon på silikagel og så hurtigkromatografi på silikagel (20 g IST) under eluering med en oppløsningsmiddelgradient fra 1 til 20 % etylacetat i heksan. Dette gir 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et fargeløst, fast stoff (0,223 g, 40 %).
LCMS: [M + H]<+>571, 569 (<37>CI,<35>CI).
<X>H-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,21 (t, 3 H), 3,44 (m, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 4,73 (s, 2 H), 6,45 (s, 1 H), 6,65 (t, 1 H), 6,80 (d, 2 H), 7,14 til 7,44 (m, 8 H), 6,95 (m, 2 H).
Trinn 8
5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- metoksvfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
Til en isbadavkjølt oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (0,213 mg, 0,374 mmol) i diklormetan (5 ml) under nitrogenatmosfære ble det tilsatt en 1,0 M oppløsning av bortriklorid i diklormetan (1,12 ml, 1,12 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0 °C i 15 minutter og så ved omgivelsestemperatur i 35 minutter. Reaksjonsblandingen ble på nytt avkjølt til 0 °C, og reaksjonen ble stanset ved tilsetning av mettet, vandig natriumhydrogenkarbonat-oppløsning (5 ml). Etter omrøring i 5 minutter ble diklormetanet fjernet under vakuum, og resten ble fordelt mellom etylacetat (30 ml) og vann (30 ml). Fasene ble separert, og den organiske fasen ble vasket med vann (30 ml), mettet, vandig natriumkloridoppløsning (30 ml) og så tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk et skumlignende, fargeløst stoff som ble renset ved hjelp av adsorpsjon på silikagel og så hurtigkromatografi på silikagel (10 g IST) under eluering med 50 % etylacetat i heksan. Dette gir 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et fargeløst, fast stoff (0,097 g, 67<%>)<.>
LCMS: [M + H]<+>391, 389 (<37>CI,<35>CI).
HH-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 5 1,08 (t, 3 H), 3,22 (m, 2 H), 3,73 (s, 3 H), 6,59 (s, 1 H), 6,87 (d, 1 H), 7,13-7,17 (m, 3 H), 8,88 (brt, 1 H), 10,09 (s, 1 H), 10,62 (s, 1 H).
Eksempel 25 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
Likeledes ble eksempel 26 fremstilt ved sammenkobling av den Boc-beskyttede 4-piperazinofenylboratester som ovenfor. Denne boratesteren ble laget fra l-(4-bromfenyl)piperazin ved hjelp av Boc-beskyttelse, etterfulgt av boratesterdannelse ved hjelp av Pd-katalysert kobling med bis(tetrametylpinakolato)dibor. Eksempel 27 ble laget på lignende måte. Eksempel 27a ble laget ved avbeskyttelse av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid.
Eksempel 28 4- klor- 6- r3- metvl- 4- f3- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol
Trinn 1
l-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenv0- 3- hvdroksv- but- 2- en- l- on
Til en oppløsning av keton (15 g) i EtOAc (200 ml) ble det tilsatt natriummetall (3,0 g) i små stykker. Suspensjonen ble omrørt ved romtemperatur i 15 minutter og så varmet opp til refluks over natten. Reaksjonen ble stanset med eddiksyre, og den gule utfellingen ble filtrert. Denne ble triturert i heksaner, hvorved man fikk lysegule krystaller. NMR indikerte at dette var det forventede produkt - hovedsakelig i enolform - små spor av ketoform.
Trinn 2
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenv0- 3- metvlisoksazol
Diketonet (4,0 g) ble oppslemmet i 80 % vandig EtOH. Hydroksylaminhydroklorid (3,4 g) og natriumacetat (4,0 g) ble tilsatt, og pH ble regulert til 8/9 med 2 M NaOH. Oppløsningen ble kokt under tilbakeløpskjøling i 24 timer (vanskelig å overvåke ved hjelp av TLC på grunn av svært like Rf-verdier). Etter dette tidsrommet ble oppløsningen surgjort til pH 5 med 1 M HCI og helt over i vann. Den hvite utfellingen ble filtrert, vasket med vann og triturert med heksan, hvorved man fikk et hvitt, fast stoff. Anmerkning: Forbindelse kan også vaskes med eter om nødvendig for å fjerne sporurenheter, men dette er vanligvis ikke nødvendig. NMR indikerte at dette var det forventede produkt.
Trinn 3
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenv0- 4- iod- 3- metvlisoksazol
Isoksazol (2 g) ble plassert i en blanding av eddiksyre (24 ml) og vann (30
ml). Jodmonoklorid (2 g overskudd) ble tilsatt, og oppløsningen ble varmet opp ved 80 °C i 2- 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble 10 % Na2S03(natriumsulfitt) i vann tilsatt (50 ml). Et viskøst oransje, fast stoff/en olje ble separert fra blandingen og ble vasket med vann. Dette ble så oppløst i aceton og filtrert. Fjerning av acetonet under vakuum ga en klebrig, oransje olje som størknet til et oransje, fast stoff over natten. NMR og LCMS indikerte at dette var det påtenkte produkt.
Trinn 4
3- r5-( 2. 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvlV3- metvlisoksazol- 4- vl1benzaldehvd
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-jod-3-metylisoksazol (200 mg, 0,38 mmol) og 3-formylbenzenborsyre (85 mg, 1,5 ekv.) ble oppløst i DMF (12 ml) før 1 M natriumhydrogenkarbonatoppløsning (1,1 ml, 3,0 ekv.) og Pd(Ph3P)2CI2(21 mg, 0,08 ekv.) ble tilsatt med omrøring. Reaksjonsblandingen ble overført til tre mikrobølgerør som ble lukket, og blandingene ble avgasset før de ble bestrålt ved hjelp av en startstyrke på 200 W til en temperatur på 150 °C i 15 minutter i et CEM-mikrobølgeapparat. Etter avkjøling ble reaksjonsblandingene slått sammen og fordelt mellom etylacetat (10 ml) og vann (10 ml). Vannlaget ble fraskilt og ekstrahert på nytt med etylacetat (10 ml). De organiske stoffene ble så slått sammen og vasket med vann (2 x 20 ml), saltoppløsning (20 ml) og tørket over Na2S04før de ble kondensert i vakuum og renset ved hjelp av hurtigkromatografi på silikagel under eluering med 25 % etylacetat i heksan.
LCMS tR= 9,06, MS m/z 510,4 [M + H]<+>.
Trinn 5
4-^ 3- r5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 3- rnetvlisoksazol- 4- vnbenzvl>morfolin
3-[5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-3-metylisoksazol-4-yl]benzaldehyd (25 mg, 0,05 mmol) og morfolin (0,3 ml) ble blandet med DCE (0,5 ml) i et mikrobølgerør. Natriumtriacetoksyborhydrid (15 mg, 1,4 ekv.) ble tilsatt, røret ble lukket og nitrogenatmosfære innført. Etter 1 time ble mer natriumtriacetoksyborhydrid (15 mg) tilsatt, og reaksjonsblandingen fikk stå med omrøring over natten. TLC-analyse viste at reaksjonen ikke var blitt fullført, så en dråpe eddiksyre ble tilsatt, og reaksjonsblandingen fikk igjen stå med omrøring over natten, hvoretter reaksjonen ble stanset med 1 M NaHC03-oppløsning (7 ml), og det ble ekstrahert over i EtOAc (5 ml). Dette ble tørket over MgS04, og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk 13 mg av råproduktet som et gråhvitt pulver som ble tatt videre til avbeskyttelsestrinnet.
Trinn 6
4- klor- 6- r3- metvl- 4- f3- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 5- vllbenzen- l, 3- diol
4-{3-[5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-3-metylisoksazol-4-yl]benzyl}-morfolin ble avbeskyttet som vist tidligere, og råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ TLC under eluering med 10 % etanol i diklormetan, hvorved man fikk 0,6 mg (7 % utbytte) av produktet som et hvitt pulver.
LCMS tR= 5,46, MS m/z 399,3 [M-H]".
Eksempel 28 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
Eksempel 29
l- r3- r5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 3- metvlisoksazol- 4- vllbenzvl>piperidin- 4-karboksvlsvreamid
Fremstilt ved å anvende en lignende fremgangsmåte på 4-klor-6-[3-metyl-4-(3-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-5-yl]benzen-l,3-diol, bortsett fra at isonipekotamid erstattet morfolinet, og natriumtriacetoksyborhydrid (3 ekv.) og eddiksyre (1 dråpe) ble tilsatt ved starten. Reaksjonen var fullstendig etter 18 timer, og det erholdte råprodukt etter opparbeidelse ble tatt over til avbeskyttelsestrinnet.
l- r3- r5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 3- metvlisoksazol- 4- vnbenzvl>piperidin- 4-karboksvlsvreamid
l-{3-[5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-3-metylisoksazol-4-yl]benzyl}-piperidin-4-karboksylsyreamid ble avbeskyttet som vist tidligere, og råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ TLC under eluering med 10 % etanol i diklormetan, hvorved man fikk 0,7 mg (3 % utbytte) av produktet som et hvitt pulver.
LCMS tR= 5,36, MS m/z 442,3 [M + H]<+>.
Eksempel 29 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
På en lignende måte ble eksempel 30 fremstilt:
Eksempel 31
Trinn 1 5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- iodisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (0,90 g, 1,94 mmol), N-jodsuksinimid (0,44 g, 1 ekv.) og ammoniumcerium(IV)nitrat (0,53 g, 0,5 ekv.) ble oppslemmet i acetonitril (55 ml) før oppvarming til refluks (oljebad 100 °C) hvoretter blandingen ble homogen. Etter 18 timer ble oppløsningen avkjølt, og oppløsnings-midlet ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en tykk, oransje olje. Denne ble fordelt mellom DCM (25 ml) og vann (10 ml), det organiske lag ble beholdt og vasket med saltoppløsning (2 x 25 ml) før tørking over Na2S04. DCM ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk 0,88 g (77 % utbytte) av produktet som et oransje/gyllenbrunt farget pulver.
LCMS tR= 8,75, MS m/z 589,1 [M + H]<+>.
Trinn 2
l-( 3- bromfenv0- 4- metylpiperazin
1,3-dibrombenzen (0,90 ml, 7,49 mmol), N-metylpiperazin (0,28 ml, 2,50 mmol) og vannfritt toluen (7 ml) ble tilsatt ved hjelp av sprøyte til en tørr, argonfylt kolbe. Oppløsningen ble grundig blandet før BINAP (47 mg) og Pd2dba3(23 mg) ble tilført kolben på nytt, ble fylt med argon, og DBU (0,93 g, 2,5 ekv.) ble tilsatt via sprøyte. Reaksjonsblandingen ble varmet til 60 °C før nyoppmalt natrium-tert.-butoksid ble tilsatt i én porsjon for å starte reaksjonen. Reaksjonsblandingen fikk stå ved omrøring ved 60 °C over natten, og TLC-analysen syntes å vise at noe piperazin fortsatt var til stede, så reaksjonsblandingen ble varmet opp til 100 °C og omrørt i ytterligere 24 timer, hvoretter den ble fordelt mellom EtOAc (20 ml) og vann (20 ml). Vannlaget ble ekstrahert på nytt med EtOAc, og de kombinerte organiske stoffene ble vasket med 1,6 M HCI-oppløsning (2 x 10 ml). Den sure oppløsningen som inneholder produktet, ble så gjort basisk først med et likt volum 1 M NaOH-oppløsning til sur oppløsning, og så ble fast natriumbikarbonat
forsiktig tilsatt for å gjøre pH = 8,5 før ekstraksjon tilbake i EtOAc (2 x 15 ml), som ble vasket med saltoppløsning, tørket over MgS04og inndampet til tørrhet, hvorved man fikk 0,50 g (78 % utbytte) av det rene produkt som en gul olje.
LCMS tR= 4,55, MS m/z 255,4/257,3 [M + H]<+>.
Trinn 3
l- metvl- 4- r3-( 4, 4, 5, 5- tetrametvl- ri, 3, 21dioksaborolan- 2- vl) fenyllpiperazin
Til en oppløsning av PdCI2(dppf). DCM (10 mg, 0,012 mmol) i vannfritt toluen (4 ml) i et argonfylt, lukket mikrobølgerør ble det tilsatt l-(3-bromfenyl)-4-metylpiperazin (100 mg, 0,39 mmol), Et3N (0,11 ml, 2 ekv.), og 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioksaborolan (0,09 ml, 1,5 ekv.). Mikrobølgerøret ble evakuert og på nytt fylt med argon før det ble bestrålt i en CEM-mikrobølgereaktor ved 100 °C i 1 time under anvendelse av en innledende strømstyrke på 200 W. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom mer toluen (6 ml) og vann (10 ml), det organiske lag ble fraskilt, vasket med vann (1 x 10 ml), tørket over MgS04og så inndampet under vakuum, hvorved man fikk en lilla/brun rest som ble brukt til Suzuki-kobling uten ytterligere rensing.
LCMS tR= 0,97, MS m/z 303,5 [M + H]<+>.
Trinn 4
5- f2. 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- r3- f4- metvlpiperazin- l- vnfenvllisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (38 mg, 0,07 mmol) og l-metyl-4-[3-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)fenyl]piperazin (31 mg, 2 ekv.) ble koblet sammen ved å anvende Suzuki-fremgangsmåten beskrevet tidligere, hvorved man fikk 37 mg (83 % utbytte) av råstoffet som en brun olje som ble tatt videre til avbeskyttelsestrinnet.
Trinn 5
5-( 5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- r3-( 4- metvlpiperazin- l- vl) fenvllisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)fenyl]-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid ble avbeskyttet, som vist tidligere. Utfellingen som ble dannet i løpet av omsetningen, ble fraskilt, fordelt mellom EtOAc og vann. Vannlaget ble tatt vare på, gjort basisk ved å anvende fast natriumhydrogenkarbonat, og produktet ble ekstrahert ved å anvende EtOAc (2 x 10 ml). De kombinerte organiske stoffene ble vasket med saltoppløsning (10 ml), tørket over MgS04og inndampet under vakuum, hvorved man fikk 5,2 mg (20 % utbytte) av produkt som et gyllenbrunt farget pulver.
LCMS tR= 5,58, MS m/z 457,3 [M + H]<+>.
<5>H (d<4->MeOH), 7,17 (1 H, m, Ar-//), 7,09 (1 H, s, Ar-//), 6,94 (1 H, m, Ar-//), 6,80 (1 H, m, Ar-//), 6,49 (1 H, s, Ar-//), 3,13 (4 H, t, NCH2CH2N-CH3), 2,69 (2 H, q, CONHCH2CH3), 2,61 (4 H, t, NCH2CH2N-CH3), 2,37 (3 H, s, NCH2CH2N-CH3), 1,19 (3 H, t, CONHCH2CH3).
Eksempel 31 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
Eksempler 32-38 i tabellen nedenunder ble fremstilt på lignende måte, men med de følgende variasjoner: 1. For eksempel 36 ble dioksaborolanmellomproduktet fremstilt som følger: Trinn 1 l-( 4- bromfenv0- 4- metylpiperazin l-(4-bromfenyl)-piperazin (1 g, 4,1 mmol) og kaliumkarbonat (1,8 g, 3 ekv.) i DMF (15 ml) ble behandlet med metyljodid (250 ul, 1,1 ekv.), og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonen ble stanset med avionisert vann (10 ml), og det ble ekstrahert med etylacetat. Den organiske fasen ble vasket med natriumhydrogenkarbonat for å fjerne eventuell dimetylert urenhet, det ble tørket, og oppløsningsmidlet ble fjernet, hvorved man fikk l-(4-bromfenyl)-4-metylpiperazin i 73 % utbytte.
LC-retensjonstid 2,21 minutter [M + H]<+>256 (kjøretid 3,75 minutter).
Trinn 2
l- metvl- 4- r4- f4, 4, 5, 5- tetrametvl- ri. 3, 21dioksaborolan- 2- vl) fenvllpiperazin
l-(4-bromfenyl)-4-metylpiperazin (750 mg, 3 mmol) i DMSO (15 ml) med bis(pinakolato)diboran (1,1 g, 1,5 ekv.) og kaliumacetat (900 mg, 3 ekv.). Suspensjonen ble avgasset før behandling med PdCI2(dppf) (kat.), og det ble omrørt ved 80 °C. Ytterligere bis(pinakolato)diboran (1 ekv.) ble tilsatt etter 3 timer, og det ble omrørt i ytterligere 2 timer. Suspensjonen ble fordelt mellom etylacetat og vann. Rensing ved hjelp av kolonnekromatografi, 0-8 % metanolgradient i diklormetan, hvorved man fikk l-metyl-4-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)fenyl]piperazin i 62 % utbytte.
LC-retensjonstid 1,83 minutter [M + H]<+>303 (kjøretid 3,75 minutter).
2. For eksemplene 37 og 38 ble det brukt et borsyremellomprodukt i stedet for et diaoksaborolan, idet det førstnevnte ble fremstilt på følgende måte:
4- rf2- metvlsulfonvnetvlaminometvnfenvlborsvre ( mellomprodukt for eksempel 37)
4-aminometylfenylborsyrehydroklorid (560 mg, 3 mmol) i etanol (5 ml) ble behandlet med metylvinylsulfon (260 ul, 1 ekv.) og trietylamin (1,2 ml, 3 ekv.). Oppløsningen ble omrørt ved 100 °C i 2 timer. Etanol ble fjernet under vakuum, det ble
fordelt i vann og butanol, hvorved man fikk 4-[(2-metylsulfonyl)etylaminometyl]fenylborsyre i 94 % utbytte. LC-retensjonstid 0,39 minutter [M + H]<+>258 (kjøretid 3,75 minutter). 4-[N-metyl-S,S-dioksotiomorfolino]fenylborsyre (mellomprodukt for eksempel 38)
4-aminometylfenylborsyrehydroklorid (456 mg, 2,4 mmol) i etanol (8 ml) ble behandlet med vinylsulfon (244 ul, 1 ekv.) og trietylamin (2 ekv.), og oppløsningen ble omrørt ved 100 °C i 3 timer. Etanol ble fjernet under vakuum, og det ble fordelt i vann og butanol, hvorved man fikk produktet i 88 % utbytte. LC-retensjonstid 1,65 minutter [M + H]<+>270 (kjøretid 8 minutter).
Eksempel 39
Trinn 1 5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- f3- klorfenvnisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (60 mg, 0,11 mmol) og 3-klorbenzenborsyre (23 mg, 1,3 ekv.) ble koblet sammen med ved å anvende Suzuki-metoden som er beskrevet tidligere, hvorved man fikk 35 mg (55 % utbytte) av råproduktet som brunt pulver som ble ført videre til neste trinn.
Trinn 2
r5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- f3- klorfenvnisoksazol- 3- vlmetvlletvlamin
Til en oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(3-klorfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (36 mg, 0,06 mmol) i vannfritt THF under argon ble det tilsatt 1 M boran-THF-kompleks (1 ml), og oppløsningen ble kokt under tilbakeløpskjøling over natten. Etter avkjøling ble oppløsningen helt over til en "Isolute SPE Flash SCX-2" 5 g kolonne som hurtig ble eluert med metanol (2 x 20 ml). Det ønskede produkt ble så utvunnet ved eluering med en blanding av 10 % ammoniakk i metanol (2 x 10 ml) som ble inndampet under vakuum, hvorved man fikk 23 mg (65 % utbytte) av et lysegult pulver.
LCMS (LCT) tR= 8,18, MS m/z 558,8 [M + H]<+.>
Eksempel 39 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
Eksempel 40 ble fremstilt på lignende måte:
Eksempel 41 Trinn 1 5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4-( 4- formvlfenvnisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (fremstilt som for eksempel 31) (2 g, 3,4 mmol), 4-formy I borsyre (0,612 g, 4,08 mmol), NaHC03(10,2 ml, 1 M vandig oppløsning, 10,2 mmol), PdCI2(PPh3)2(119 mg, 0,17 mmol) og DMF (50 ml) ble slått sammen. Blandingen ble så avgasset ved bobling med N2gjennom den i 5 minutter før den ble varmet opp ved 80 °C i 1 time. Blandingen ble så inndampet under vakuum og fordelt mellom EtOAc (3 x 50 ml) og vann (50 ml). De kombinerte tørkede (Na2S04), organiske stoffene ble inndampet under vakuum, hvorved man fikk en urenset olje. Denne ble oppløst i EtOAc og sendt gjennom en Si02-plugg, idet det ble vasket grundig med EtOAc. Filtratet ble inndampet under vakuum, og den resulterende olje ble triturert med Et20, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-formylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1,577 g, 82 %) som et lyst farget, fast stoff.
LC/MS: RT = 2,908 minutter. 567,3 (MH<+>).
Trinn 2
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
Eddiksyre (0,37 ml, 6,44 mmol) ble tilsatt dråpevis til en blanding av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-formylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (730 mg, 1,29 mmol), morfolin (0,225 ml, 2,58 mmol) og oppmalte 3 Å-molekylsikter (730 mg) og MeOH (21 ml). Dette fikk stå ved omrøring over natten under N2. Blandingen ble så inndampet under vakuum, og det resulterende råprodukt ble fordelt mellom CH2CI2(3 x 40 ml) og mettet NaHC03-oppløsning (40 ml). De kombinerte tørkede (Na2S04), organiske stoffene ble inndampet under vakuum, hvorved man fikk urenset 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (810 mg) som et gult, fast stoff.
LC/MS: RT = 2,365 minutter. 638,4 (MH<+>).
Trinn 3
5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
BCI3(1 M oppløsning i CH2CI2, 3,87 ml, 3,87 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av det urensede 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetyl-fenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (810 mg,~1,29 mmol) i CH2CI2(30 ml) ved 0 °C. Reaksjonsblandingen fikk så nå romtemperatur. Mettet, vandig NaHC03(40 ml) ble så sakte tilsatt, og den resulterende blanding ble konsentrert under vakuum. Denne ble så fordelt mellom EtOAc (3 x 50 ml) og vann (50 ml). De kombinerte, tørkede (Na2S04) organiske stoffene ble inndampet under vakuum. Hurtigkromatografi under eluering med CH2CI2-10 % MeOH/1 % NH3/CH2CI2ga 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (380 mg, 64 % over to trinn) som et gult skum.
LC/MS: RT = 1,751 minutter. 458,2 (MH<+>).
Eksempel 41 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
I den følgende tabell ble eksempler 42-64 fremstilt ved hjelp av fremgangsmåter som er analoge med eksempel 41, ved å anvende det passende aldehyd eller keton.
Ytterligere forbindelser 41a-s ble fremstilt ved hjelp av fremgangsmåter som er analoge med eksempel 41:
Eksempel 65 Trinn 1 l-( 2, 4- bis- benzyloksyfenvnetanon 35 g 2,4-dihydroksyacetofenon (0,230 mol, 1 ekv.) ble oppløst i 500 ml acetonitril. 79,5 g kaliumkarbonat (0,575 mol, 2,5 ekv.) og 86,6 g benzylbromid (0,506 mol, 2,2 ekv.) ble tilsatt. Blandingen ble kokt under tilbakeløpskjøling i 64 timer, avkjølt, og acetonitril ble fjernet under redusert trykk. Resten ble separert mellom vann og etylacetat. Resten var hovedsakelig monobenzylert resorcinol.
Råproduktet (43 g) ble så oppløst i 250 ml DMF. Kaliumkarbonat (29 g, 0,210 mol, 1,2 ekv.) og 25 ml benzylbromid (0,210 mol, 1,2 ekv.) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt over natten. Oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk, og resten ble separert mellom etylacetat og vann. Etter fjerning av oppløsningsmidlet ble resten triturert med heksan for å fjerne overskudd av benzylbromid.
LC-MS [M + H]<+>= 333.
Utbytte: 51,2 g (67 %).
Trinn 2
l-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- bromfenv0etanon
51,2 g l-(2,4-bis-benzyloksyfenyl)etanon (0,154 mol, 1 ekv.) ble oppløst i 250 ml DMF. 27,42 g N-bromsuksinimid (0,154 mol, 1 ekv.) i 100 ml DMF ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble helt over i 700 ml vann, og utfellingen ble frafiltrert. Filterkaken ble skylt med vann, og det fargeløse, faste stoff ble rekrystallisert fra 370 ml acetonitril.
LC-MS [M + H]<+>= 411 &413.
Utbytte: 58,15 g (92 %).
Trinn 3
4-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- bromfenyD- 2, 4- dioksosmørsvreetylester
9,75 g natrium (0,424 mol, 3 ekv.) ble oppløst i 500 ml absolutt etanol (1,5 timer). 58 g l-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)etanon (0,141 mol, 1 ekv.) og 30,98 g dietyloksalat (0,212 mol, 1,5 ekv.) ble tilsatt, og blandingen ble kokt under tilbakeløps-kjøling i 2 timer. Etter avkjøling ble blandingen helt over i 220 ml 2 N vandig HCI, og produktet ble ekstrahert over i 700 ml diklormetan. Oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk, og den gule rest ble triturert med 150 ml dietyleter.
Utbytte: 69,24 g (96 %).
<X>H-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,27 (t, 3 H), 4,27 (q, 2 H), 5,13 (d, 2 H), 6,54 (s, 1 H), 7,37 (m, 10 H), 8,17 (s, 1 H).
Trinn 4
5-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- bromfenv0isoksazol- 3- karboksylsyreetylester
69,3 g 4-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-2,4-dioksosmørsyreetylester (0,135 mol, 1 ekv.) ble oppløst i 750 ml etanol. 14,11 g hydroksylaminhydroklorid (0,203 mol, 1,5 ekv.) ble tilsatt. Blandingen ble kokt under tilbakeløpskjøling i 2,5 timer og avkjølt. Den ble så helt over i 1000 ml vann, og utfellingen ble frafiltrert. Filterkaken ble vasket med 500 ml vann, etterfulgt av 75 ml dietyleter og tørket.
Utbytte: 67,62 g (99 %).
^-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,39 (t, 3 H), 4,41 (q, 2 H), 5,11 (d, 2 H), 5,15 (d, 2 H), 6,58 (s, 1 H), 6,99 (s, 1 H), 7,35 (m, 10 H), 8,16 (s, 1 H).
Trinn 5
5-( 2, 4- bis- benzyloksy- 5- bromfenv0isoksazol- 3- karboksylsyreetylamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester ble oppslemmet i etanol og etylamin (2 M i metanol, 3 ekv.). Den resulterende gule suspensjon ble varmet opp til refluks (80 °C) under nitrogen, på hvilket tidspunkt reagensene gikk over i oppløsning. Dette ble varmet opp i 14 timer og fikk så avkjøles til omgivelsestemperatur. Det ble dannet en hvit utfelling som ble frafiltrert og vasket med ytterligere etanol før den ble tørket under vakuum.
LC-MS-retensjonstid 2,868 minutter [M + H]<+>= 507 & 509 (kjøretid 3,75 minutter).
Trinn 6
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- stvrvlfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
Til en blanding av trans-2-fenyl vinyl borsyre (0,472 g, 3,2 mmol) og 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1,079 g, 2,13 mmol) ble det tilsatt natriumhydrogenkarbonat (536 mg, 6,39 mmol), etterfulgt av DMF (25 ml) og vann (5 ml). Blandingen ble avgasset ved evakuering og gjennombobling med nitrogen (tre ganger), etterfulgt av bobling med nitrogengass gjennom blandingen i 5 minutter. Diklor-bis(trifenylfosfin)palladium(II) (149 mg, 0,21 mmol) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp under nitrogenatmosfære ved 80 °C i 7 timer (reaksjonsblandingen blir mørke-brun av farge etter 10 minutter). Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur, og mesteparten av oppløsningsmidler ble fjernet under vakuum. Den resulterende rest ble fordelt mellom etylacetat (100 ml) og vann (100 ml), og denne blandingen ble filtrert gjennom en kiselgurpute for å fjerne palladiumrester. Fasene ble separert, og den organiske fasen ble vasket med vann (2 x 50 ml), mettet, vandig natrium-kloridoppløsning (100 ml) og så tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk et brunt, fast stoff (800 mg). Kiselgurfilterkaken ble vasket med diklormetan og så tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk et brunt, fast stoff (541 mg). De kombinerte produktporsjoner ble renset ved hjelp av triturering med etylacetat-heksanblanding. Dette gir 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-styrylfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et lysebrunt, fast stoff (808 mg, 71 %).
LCMS: [M + H]<+>531.
HH-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,12 (t, 3 H), 3,37 (m, 2 H), 4,95 (s, 2 H), 5,07 (S, 2 H), 6,46 (S, 1 H), 6,70 (brt, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,17 (d, 1 H), 7,23 (d, 1 H), 7,32-7,44 (m, 15 H), 8,09 (s, 1 H).
Trinn 7
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- fenetvlfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
Palladium-på-aktivkarbon-katalysator (10 %, 50 mg) ble tilsatt til en avgasset oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-styrylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (690 mg, 1,30 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml) under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble hydrogenert i til sammen 4,75 timer med ytterligere Pd-på-aktivkarbon-katalysator (50 mg) tilsatt etter 0,75 og 2,5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en kiselgurpute som ble vasket med 1,4-dioksan (20 ml) og diklormetan (20 ml). De kombinerte filtratoppløsningsmidler ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk et kremfarget, fast stoff som ble renset ved hjelp av hurtigkromatografi på silikagel (20 g, IST) under eluering med 10-50 % etylacetat i heksan. Dette gir 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-fenetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et blekgult, fast stoff (609 mg, 88 %).
LCMS: [M + H]<+>533.
HH-NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1,26 (t, 3 H), 2,86-2,96 (m, 4 H), 3,49 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 5,18 (s, 2 H), 6,56 (s, 1 H), 6,81 (t, 1 H), 7,07 (s, 1 H), 7,15-7,20 (m, 3 H), 7,23-7,28 (m, 2 H), 7,31-7,42 (m, 10 H), 7,73 (s, 1 H).
Trinn 8
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- fenetvlfenvl)- 4- bromisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
N-bromsuksinimid (207 mg, 1,16 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-fenetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (564 mg, 1,06 mmol) i acetonitril (20 ml). Cerisk ammoniumnitrat (290 mg, 0,53 mmol) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp til refluks (noe som gir homogen oransje oppløsning), og det ble omrørt i 30 minutter. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur, og acetonitril ble fjernet under vakuum. Resten ble fordelt mellom etylacetat (50 ml) og vann (50 ml), og fasene ble separert. Den organiske fasen ble vasket med mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml) og tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en gul olje som ble renset ved hjelp av hurtigkromatografi på silikagel (20 g, IST) under eluering med 10-30 % etylacetat i heksan. Dette gir 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-fenetylfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid som gul olje (326 mg, 53 %).
LCMS: [M + H]<+>613, 611.
Trinn 9
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- fenetvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
Til en blanding av 4-morfolin-4-ylmetylfenylpinnakolboran (0,215 g, 0,71 mmol) og 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-fenetylfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (0,347 g, 0,57 mmol) ble det tilsatt natriumhydrogenkarbonat (142 mg, 1,69 mmol), etterfulgt av DMF (10 ml) og vann (2,0 ml). Blandingen ble avgasset ved evakuering og gjennombobling med nitrogen (tre ganger), etterfulgt av bobling med nitrogengass gjennom blandingen i 5 minutter. Diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) (40 mg, 0,057 mmol) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp under nitrogenatmosfære ved 80 °C i 5 timer (reaksjonsblandingen blir mørkebrun av farge). Ytterligere 20 mg (0,029 mmol) diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp ved 80 °C i 15 timer og fikk så avkjøles til omgivelsestemperatur. Mesteparten av oppløsnings-midler ble fjernet under vakuum, og resten ble fordelt mellom etylacetat (50 ml) og vann (50 ml). Denne blandingen ble filtrert gjennom en kiselgurpute for å fjerne palladiumrester, så ble fasene separert, og den organiske fasen ble vasket med vann (2 x 50 ml), mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml) og så tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtratoppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en brun olje. Reaksjonsråproduktet ble renset ved hjelp av hurtigkromatografi på silikagel (20 g, IST) under eluering med en oppløsningsmiddelgradient fra 30 til 70 % etylacetat i heksan. Dette gir 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-fenetylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som gul olje (0,110 g, 27 %).
LCMS: [M + H]<+>708.
Trinn 10
5-( 2, 4 - dihvdroksv- 5- fenetvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamidhvdroklorid
Til en isbadavkjølt oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-fenetylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (0,109 g, 0,15 mmol) i diklormetan (4 ml) under nitrogenatmosfære ble det tilsatt en 1,0 M oppløsning av bortriklorid i diklormetan (0,45 ml, 0,45 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0 °C i 20 minutter og så ved omgivelsestemperatur i 3,5 timer. Reaksjonsblandingen ble på nytt avkjølt til 0 °C, og reaksjonen ble stanset ved tilsetning av mettet, vandig natrium-hydrogenkarbonatoppløsning (5 ml). Etter omrøring i 5 minutter ble diklormetanet fjernet under vakuum, og resten ble fordelt mellom etylacetat (20 ml) og vann (20 ml). Fasene ble separert, og den organiske fasen ble vasket med vann (20 ml), mettet, vandig natrium-kloridoppløsning (20 ml) og så tørket over natriumsulfat. Blandingen ble filtrert, og filtrat-oppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk en lysebrun olje som ble renset ved hjelp av adsorpsjon på silikagel og så hurtigkromatografi på silikagel (10 g, IST) under eluering med 0-5 % metanol i etylacetat. Dette ga en fargeløs olje som ble triturert med 1,0 M HCI i dietyleteroppløsning (5 ml), hvorved man fikk 5-(2,4-dihydroksy-5-fenetylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamidhydroklorid (0,019 g, 24 %).
LCMS: [M + H]<+>528.
^-NMR (400 MHz, d6-DMSO) 5 1,08 (t, 3 H), 2,60 (m, 4 H), 2,90-3,30 (m, 6 H), 3,67 (m, 2 H), 3,87 (m, 2 H), 4,30 (s, 2 H), 6,46 (s, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 7,05-7,49 (m, 5 H), 7,40-7,68 (m, 4 H), 8,90 (brs, 1 H), 9,67 (s, 1 H), 9,89 (s, 1 H), 10,75 (brs, 1 H).
Eksempel 65 hadde aktivitet "A" i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
Eksemplene i den følgende tabell ble fremstilt ved hjelp av fremgangsmåter som er analoge med eksempel 64, og hadde aktivitetene som er vist i fluorescenspolariseringsanalysen, som beskrevet nedenunder.
De ytterligere eksempler 75a-v i den følgende tabell ble også fremstilt ved hjelp av fremgangsmåter som er analoge med eksempel 65.
Eksempel 76
Trinn 1 3-( 2, 4- bis- benzvloksy- 5- bromfenv0- 4-( 4- metoksyfenv0- 5- metylisoksazol
Trimetyloksoniumbortrifluorid (Aldrich, 70 mg, 0,47 mmol) ble tilsatt til en omrørt oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-3-metylisoksazol (eksempel 3, trinn 1) (120 mg, 0,22 mmol) i diklormetan (3 ml), og omrøring ble fortsatt i 3 timer. Den resulterende blanding ble konsentrert under vakuum, hvorved man fikk et hvitt, halvfast stoff som ble blandet med hydroksylaminhydroklorid (70 mg, 1,0 mmol), kaliumkarbonat (120 mg, 0,87 mmol) og metanol (2 ml), og det ble varmet opp ved refluks i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom vann (20 ml) og etylacetat (2 x 10 ml), og de kombinerte organiske faser ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og inndampet under vakuum, hvorved man fikk en fargeløs olje. Råproduktet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika (10 g), under eluering med heksan, etterfulgt av dietyleter/heksan (1:1), hvorved man fikk 3-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-5-metylisoksazol som et hvitt, fast stoff (44 mg, 37 %). LC-retensjonstid 5,55 minutter [M + H]<+>556,0 og 558,0 (kjøretid 8,00 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,64 (s, ArH), 7,35-6,76 (m, 14 ArH), 6,34 (s, ArH), 4,90 (S, 2 CH2), 4,60 (S, 2 CH2), 3,79 (s, 3 CH3), 2,46 (s, 3 CH3).
Trinn 2
4- brom- 6-[ 4- f4- metoksvfenvn- 5- metvlisoksazol- 3- vllbenzen- lf3- diol
Bortrikloridoppløsning (1 M i diklormetan, 1 ml, 1 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 3-(2,4-bis-benzyloksy-5-bromfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-5-metylisoksazol (38 mg, 0,068 mmol) i diklormetan (1 ml), og omrøring ble fortsatt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom vann (20 ml) og diklormetan (2 x 20 ml), og de kombinerte organiske faser ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk en brun olje. Råproduktet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika (10 g), under eluering med heksan, etterfulgt av heksan/ dietyleter (3:1, deretter 1:1), hvorved man fikk 4-brom-6-[4-(4-metoksyfenyl)-5-metylisoksazol-3-yl]benzen-l,3-diol som en fargeløs olje (11 mg, 43 %). LC-retensjonstid 2,52 minutter [M + H]<+>376,1 og 378,1 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (DMSO-d6), 10,40 (s, OH), 9,69 (s, OH), 7,22 (ArH), 7,10-6,89 (m, 4 ArH), 6,5 (s, ArH), 3,7 (s, OCH3), 2,46 (s, CH3).
Denne forbindelsen hadde aktivitet "A" i HSP90-fluorescenspolariseringsanalysen.
Eksempel 76A
Den følgende forbindelse er kommersielt tilgjengelig (Interbioscreen) og hadde aktivitet "B" i fluorescenspolariseringsanalysen:
De følgende forbindelser ble laget i henhold til eksempel 76:
Eksempel 77
Fremstilling av 5-( 5- tert.- butvl- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenvl)-isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
Trinn 1 l-( 5- tert.- butvl- 2. 4- dihvdroksvfenvnetanon
Svovelsyre (4 ml, 75 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 2,4-dihyroksy-acetofenon (22,8 g, 150 mmol) i en blanding av 2-metyl-2-propanol (35 g, 470 mmol) og trifluoreddiksyre (80 ml) under nitrogenatmosfære. Den resulterende suspensjon ble varmet opp, oljebadtemperatur 75 °C, i ca. 3 timer, hvorved man fikk en lyserød oppløsning. Den resulterende oppløsning fikk avkjøles og ble helt over i is/vann (350 ml), hvorved man fikk en blekrosa utfelling. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og vasket med vann (600 ml) og heksan (200 ml), hvorved man fikk et blekrosa pulver. Det ble tørket under vakuum
(40 °C), hvorved man fikk l-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)etanon som et blekoransje pulver (28,8 g, 92 %). LC-retensjonstid 2,74 minutter [M + H]<+>209,1 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,35 (s, ArH), 6,05 (s, ArH), 7,35 (m, 2 ArH), 2,35 (s, 3 CH3), 1,15 (S, 9 CH3).
Trinn 2
l-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- tert.- butvlfenv0etanon
Benzylbromid (10 ml, 84 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av acetofenonet (13,5 g, 65 mmol) i DMF (50 ml), kaliumkarbonat (20 g, 145 mmol) ble tilsatt, og suspensjonen ble omrørt ved romtemperatur i ca. 4 timer. Den resulterende suspensjon ble helt over i vann (200 ml), hvorved man fikk en blekoransje utfelling. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og vasket med vann. De faste stoffene ble tatt opp i diklormetan (150 ml), og oppløsningen ble vasket med vann (2 x 100 ml) og mettet, vandig natriumklorid-oppløsning (100 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til en lyserød olje.
Oljen ble tatt opp i 2-metyl-2-propanol (100 ml), og kalium-tert.-butoksid (7,5 g, 67 mmol) ble tilsatt, hvorved man fikk en blekgul utfelling, benzylbromid (8 ml, 67 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble varmet opp under refluks i ca. 1 time. Den resulterende suspensjon fikk avkjøles og ble helt over i vann (250 ml), hvorved man fikk en blekoransje utfelling. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og vasket med vann. De faste stoffene ble tatt opp i etylacetat (150 ml) og vasket med vann (2 x 200 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (100 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til et oransje, halvfast stoff, triturering med metanol ga et blekrosa, fast stoff. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og tørket under vakuum (40 °C), hvorved man fikk l-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)etanon som et blekrosa pulver (9,1 g, 36 %). LC-retensjonstid 3,03 minutter [M + H]<+>389,3 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,65 (s, ArH), 7,25-7,15 (m, 10 ArH), 6,35 (s, ArH), 4,95 (S, 2 CH2), 4,9 (S, 2 CH2) 2,4 (s, 3 CH3) 1,2 (s, 9 CH3).
Trinn 3
4- f2. 4- bis- benzvloksv- 5- tert.- butvlfenvn- 2- hvdroksv- 4- okso- but- 2- ensvreetvlester
Natriumetoksid (2,8 g, 41 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av l-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)etanon (7,8 g, 20 mmol) i etanol (40 ml). Dietyloksalat (4 ml, 29,5 mmol) ble tilsatt, og den resulterende suspensjon ble varmet opp under refluks i ca. 2 timer, hvorved man fikk en lyserød oppløsning. Oppløsningen fikk avkjøles og ble helt over i vann (200 ml), blandingen ble surgjort med saltsyre (50 ml, 1 M), og det ble ekstrahert med diklormetan (150 ml). Ekstraktene ble vasket med vann (2 x 200 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (100 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til en gul gummi. Triturering med heksan ga et gult, fast stoff. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og vasket med heksan og tørket under vakuum (40 °C), hvorved man fikk 4-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-2-hydroksy-4-okso-but-2-ensyreetylester som et gult pulver (9,1 g, 93 %).
NMR (kloroform-d) 8,0 (s, ArH), 7,5-7,35 (m, 11 ArH), 6,6 (s, ArH), 5,2 (s, 2 CH2), 5,15 (s, 2 CH2), 4,3 (q, J 7,1 Hz, 2 CH2), 1,4 (s, 9 CH3), 1,25 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3).
Trinn 4
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- tetr.- butvlfenv0isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlester
Hydroksylaminhydroklorid (3,6 g, 52 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 4-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-2-hydroksy-4-okso-but-2-ensyreetylester (9,0 g, 18,5 mmol) i etanol (75 ml), og suspensjonen ble varmet opp under refluks i ca. 4 timer. Den resulterende oppløsning fikk avkjøles og ble helt over i vann (200 ml), hvorved man fikk en gråhvit utfelling. De faste stoffene ble fjernet ved filtrering og tatt opp i diklormetan (150 ml). Oppløsningen ble vasket med vann (150 ml) og mettet, vandig natriumklorid-oppløsning (50 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til et gråhvitt, fast stoff. De faste stoffene ble vasket med heksan og tørket under vakuum (40 °C), hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester som et lysebrunt pulver (8,0 g, 89 %). LC-retensjonstid 3,13 minutter [M + H]<+>486,5 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,85 (s, ArH), 7,4-7,25 (m, 10 ArH), 6,9 (s, ArH), 6,5 (s, ArH), 5,1 (s, 2 CH2), 5,0 (s, 2 CH2), 4,35 (q, J 7,1 Hz, 2 CH2), 1,4 (s, 9 CH3), 1,35 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3).
Trinn 5
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- tert.- butvlfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester (10,0 g, 20,6 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av etylamin i metanol (60 ml, 2,0 M), og suspensjonen ble varmet opp, oljebadtemperatur 75 °C, i ca. 2 timer. Den resulterende oppløsning fikk avkjøles og ble konsentrert til en lysebrun olje, diklormetan (150 ml) ble tilsatt, og oppløsningen ble vasket med vann (100 ml) og mettet, vandig natriumklorid-oppløsning (75 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til en brun olje som størknet etter å ha stått (9,9 g, tilnærmet kvantitativt).
LC-retensjonstid 3,02 minutter [M + H]<+>485,3 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,8 (s, ArH), 7,4-7,2 (m, 10 ArH), 7,0 (s, ArH), 6,75 (brt, J 5,4 Hz, NH), 6,5 (s, ArH), 5,1 (s, 2 CH2), 5,0 (s, 2 CH2), 3,4 (dq, J 5,4 Hz, 7,1 Hz, 2 CH2), 1,35 (s, 9 CH3), 1,15 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3).
Trinn 6
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- tert.- butvlfenvn- 4- iodisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
N-jodsuksinimid (9,0 g, 40 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (9,9 g, 20,4 mmol) i acetonitril (60 ml). Ammoniumceriumnitrat (0,25 g, 0,46 mmol) ble tilsatt, og suspensjonen ble omrørt i ca. 18 timer. Den resulterende suspensjon ble konsentrert og resten tatt opp i diklormetan (125 ml). Den resulterende oppløsning ble vasket med vandig natriummetabisulfittoppløsning (2 x 100 ml, 5 %), vann (100 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (100 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til en lyserød gummi. Triturering med etanol (25 ml) ga et gråhvitt, fast stoff, faste stoffer ble fjernet ved filtrering og vasket med etanol. Det ble tørket under vakuum (40 °C), hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et gråhvitt pulver (7,75 g, 62 %). LC-retensjonstid 3,07 minutter [M + H]<+>611,2 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,45-7,25 (m, 11 ArH), 6,8 (br, t, J 5,4 Hz, NH), 6,6 (s, ArH), 5,05 (s, 4 CH2), 3,5 (dq, J 5,4 Hz, 7,1 Hz, 2 CH2), 1,35 (s, 9 CH3), 1,2 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3).
Trinn 7
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- tert.- butvlfenv0- 4-( 4- formvlfenv0isoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
Vandig oppløsning av kaliumfosfat (25 ml, 1,2 M) ble tilsatt til en oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (6,1 g, 10 mmol) og 4-formylfenylborsyre (2,35 g, 15,7 mmol) i 1,4-dioksan (75 ml) under nitrogenatmosfære. Diklor-bis(tri-o-tolylfosfin)palladium(II) (kat.) ble tilsatt, og blandingen ble varmet opp, oljebadtemperatur 100 °C, i ca. 1 time. Blandingen fikk avkjøles, og vannlaget ble fraskilt og ekstrahert med etylacetat (100 ml). De kombinerte organiske stoffene ble konsentrert, hvorved man fikk en lysebrun gummi.
Råproduktet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika (600 ml), eluering med etylacetat/heksan (1:3), hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-4-(4-formylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et blekgult skum (5,18 g, 88 %). LC-retensjonstid 3,01 minutter [M + H]<+>589,4 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d), 9,75 (s, CHO), 7,5 (d, J 6,9 Hz, 2 ArH), 7,2 (d, J 6,9 Hz, 2 ArH), 7,15-7,0 (m, 8 ArH), 6,8 (m, 2 ArH), 6,65 (br, t, J 5,4 Hz, NH), 6,2 (s, ArH), 4,8 (s, 2 CH2), 4,5 (s, 2 CH2), 3,2 (dq, J 5,4 Hz, 7,1 Hz, 2 CH2), 1,1 (s, 9 CH3), 1,05 (t, J 7 Hz, 3 CH3).
Trinn 8
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- tert.- butvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
Natnumcyanborhydnd (65 mg, 1,03 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-4-(4-formylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (125 mg, 0,21 mmol), morfolin (50 ul, 0,57 mmol) og eddiksyre (kat.) i metanol (4 ml), og oppløsningen ble omrørt i ca. 72 timer. Diklormetan (50 ml) ble tilsatt, og oppløsningen ble vasket med vann (2 x 50 ml) og mettet, vandig natriumkloridoppløsning (50 ml). Oppløsningen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og konsentrert til en fargeløs gummi.
Råproduktet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi, silika (20 g), eluering med etylacetat/heksan (1:1), hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som en fargeløs olje (35 mg, 25 %). LC-retensjonstid 2,56 minutter [M + H]<+>660,8 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (kloroform-d) 7,35-7,05 (m, 15 ArH), 6,7 (br, t, J 5,4 Hz, NH), 6,4 (s, ArH), 4,9 (s, 2 CH2), 4,75 (s, 2 CH2), 3,6 (t, J 4,5 Hz, 4 CH2), 3 (s, 2 CH2), 3,35 (dq, J 5,4 Hz, 7,1 Hz, 2 CH2), 2,35 (br, s, 4 CH2), 1,15 (t, J 7,1 Hz, 3 CH3), 1,1 (s, 9 CH3).
Trinn 9
5- f5- tert.- butvl- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
En oppløsning av bortriklorid (1 ml, 1,0 M i diklormetan) ble tilsatt til en opp-løsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-tert.-butylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (35 mg, 0,05 mmol) i diklormetan (1 ml) ved -20 °C (is/metanol) under nitrogenatmosfære. Den resulterende oppløsning ble omrørt ved 0 °C (is/vann) i ca. 90 minutter. Metanol (2 ml) ble tilsatt, og oppløsningen ble konsentrert til en brun gummi.
Råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ HPLC, hvorved man fikk 5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et hvitt pulver (formiatsalt) (21 mg, 75 %). LC-retensjonstid 1,97 minutter [M + H]<+>480,5 (kjøretid 3,75 minutter).
NMR (DMSO-d6) 8,8 (t, J 5,6 Hz, NH), 7,25 (d, J 7,2 Hz, 2 ArH), 7,15 (d, J 7,2 Hz, 2 ArH), 6,7 (s, ArH), 6,45 (s, ArH), 3,45 (br, s, 4 CH2), 3,2 (dq, J 5,6 Hz, 7,2 Hz, 2 CH2), 2,3 (br, s, 4 CH2), 1,1 (s, 9 CH3), 1,05 (t, J 7,2 Hz, 3 CH3).
Denne forbindelse hadde aktivitet "A" i HSP90-fluorescenspolariseringsanalysen.
På lignende måte med fremstillingen av forbindelsen ifølge eksempel 77 ble eksemplene 77a-f fremstilt.
Eksempel 78
Fremstilling av 5- f2, 4- dihvdroksv- 5- isobutvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
Trinn 1 l-( 2, 4- bis- benzyloksvfenyl) etanon
Kaliumkarbonat (2,5 ekv.) ble tilsatt til en oppløsning av 2',4'-dihydroksyacetofenon (1 ekv.) i acetonitril (400 ml), og suspensjonen ble omrørt ved romtemperatur. Benzylbromid (2,5 ekv.) ble tilsatt dråpevis i løpet av 10 minutter, og blandingen ble varmet opp ved refluks i 18 timer. Blandingen ble avkjølt og inndampet under vakuum, hvorved man fikk en oppslemming. Oppslemmingen ble fordelt mellom vann og etylacetat, og lagene ble separert. Vannlaget ble ekstrahert videre med diklormetan, og de organiske ekstrakter ble slått sammen, tørket (MgS04) og inndampet under vakuum. Produktet ble triturert med heksan, filtrert og vasket med kald heksan og tørket under vakuum ved 45 °C, hvorved man fikk l-(2,4-bis-benzyloksyfenyl)etanon som et hvitt pulver.
LC-retensjonstid 2,704 minutter [M + H]<+>333,3.
Trinn 2
2, 4- bis- benzvloksv- l- isopropenvl benzen
Metyltrifenylfosfoniumbromid (1,1 ekv.) ble oppslemmet i vannfritt TH F, og det ble avkjølt til 0 °C under nitrogen. 1,6 M n-butyllitium i heksaner (1,1 ekv.) ble tilsatt dråpevis, og det ble omrørt i 30 minutter. l-(2,4-bis-benzyloksyfenyl)etanon (1 ekv.) ble oppløst i vannfritt TH F og tilsatt dråpevis til suspensjonen. Da tilsetningen var fullført, ble isbadet fjernet, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen over natten. Metanol ble tilsatt til reaksjonsblandingen, og den resulterende oppløsning ble inndampet under vakuum. Heksan ble tilsatt til den resulterende olje, og det ble varmet opp til refluks i 30 minutter, deretter ble det filtrert gjennom kiselgur. Væsken ble inndampet under vakuum, hvorved man fikk en olje som ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi under eluering med 30 % etOAc i heksan, hvorved man fikk 2,4-bis-benzyloksy-l-isopropenylbenzen.
Rf retensjonstid 0,722, 3:1 heksan:EtOAc.
Trinn 3
4- isopropylbenzen- l, 3- diol
2,4-bis-benzyloksy-l-isopropenylbenzen ble tatt opp i oppløsning i etanol og tilsatt til 10 % palladium-på-karbon som var blitt forfuktet med vann. Hydrogen ble innført i kolben, og blandingen fikk ristes i 16 timer. Katalysatoren ble filtrert fra reaksjonsblandingen ved hjelp av en egnet metode, og væsken ble konsentrert under vakuum, hvorved man fikk 4-isopropylbenzen-l,3-diol som et hvitt, krystallinsk stoff.
LC-retensjonstid 2,088 minutter [M + H]<+>153,1.
Trinn 4
l-( 2, 4- dihvdroksv- 5- isopropylfenv0etanon
4-isopropylbenzen-l,3-diol (1 ekv.) ble tatt opp i BF3.OEt2(6 ekv.), og eddiksyre ble tilsatt (2 ekv.). Oppløsningen ble varmet opp i 16 timer ved 90 °C og fikk så avkjøles til romtemperatur. Oppløsningen ble tilsatt dråpevis til 10 % NaOAc (vandig) og fikk stå i 4 timer før den ble ekstrahert over i EtOAc. De organiske fasene ble slått sammen og vasket med mettet NaHC03(vandig), og så tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum. Restoljen ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi under eluering med diklormetan, hvorved man fikk l-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)etanon som et hvitt, fast stoff. LC-retensjonstid 2,633 minutter [M + H]<+>195,1. Trinn 5 l-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- isopropylfenv0etanon l-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)etanon (1 ekv.) ble oppløst i DMF, og kaliumkarbonat (2,2 ekv.) og så benzylbromid (2,2 ekv.) ble tilsatt. Suspensjonen ble varmet opp med omrøring til 150 °C under nitrogen i 16 timer. Oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur, og blandingen ble helt over i 1 M HCI (vandig) og så ekstrahert over i etylacetat. De organiske fasene ble kombinert og vasket på nytt med 1 M HCI (vandig) og så fem ganger med saltoppløsning. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk et fast stoff som ble renset ved hjelp av triturering med dietyleter:heksan (1:1), hvorved man fikk l-(2,4-bis-benzyloksy-5-iso-propylfeny I )eta non.
LC-retensjonstid 3,575 minutter [M + H]<+>375,2.
Trinn 6
4- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- isopropylfenvn- 2- hvdroksv- 4- okso- but- 2- ensvreetvlester
Natrium (2,8 ekv.) ble tilsatt til etanol under nitrogen ved romtemperatur, og det ble omrørt i 25 minutter for å generere natriumetoksid. l-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)etanon (1 ekv.) ble oppløst i ytterligere etanol, og det ble tilsatt til en natriumetoksidoppløsning. Dietyloksalat (1,64 ekv.) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble varmet opp til refluks i 4 timer. Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur, og tilstrekkelig 1 M HCI (vandig) ble tilsatt for surgjøring av reaksjonsblandingen, som så ble konsentrert under vakuum. Den resulterende gummi ble fordelt mellom diklormetan og saltoppløsning, og den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og inndampet under vakuum, hvorved man fikk 4-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-2-hydroksy-4-okso-but-2-ensyreetylester som en gul gummi.
LC-retensjonstid 3,057 minutter [M + H]<+>475.
Trinn 7
5-( 2, 4- bis- benzvloksy- 5- isopropylfenvDisoksazol- 3- karboksylsyreetylester
4-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-2-hydroksy-4-okso-but-2-ensyreetylester (1 ekv.) ble oppløst i etanol med omrøring. Hydroksylaminhydroklorid (1,2 ekv.) ble tilsatt, og oppløsningen ble varmet opp til refluks i 4 timer under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under vakuum. Resten ble fordelt mellom saltoppløsning og diklormetan. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester som et fast stoff.
LC-retensjonstid 3,059 minutter [M + H]<+>472.
Trinn 8
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- isopropylfenv0isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester ble oppløst i overskudd av 2 M etylamin i metanol, og det ble varmet opp i "Smith Synthesizer"-mikrobølgeovnen ved 120 °C i 600 sekunder. Oppløsningen ble konsentrert under vakuum, hvorved man fikk et fast stoff som ble renset ved hjelp av heksantriturering, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid.
LC-retensjonstid 2,979 minutter [M + H]<+>471,3.
Trinn 9
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- isopropylfenvn- 4- iodisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i vannfritt acetonitril, og N-jodsuksinimid (2,0 ekv.) etterfulgt av cerisk ammoniumnitrat (0,05 ekv.) ble tilsatt, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, og den resulterende gummi ble fordelt mellom etylacetat og saltoppløsning. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi under eluering med 9:1 heksan:etylacetat, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid som en olje.
LC-retensjonstid 2,975 minutter [M + H]<+>597,2.
Trinn 10
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- isopropylfenvn- 4- iodisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i vannfritt DMF. 1 M Na2C03(vandig) ble tilsatt, etterfulgt av 4- formylfenylborsyre (2 ekv.) og så katalytisk PdCI2(PPh3)2. Nitrogen ble boblet gjennom oppløsningen i 10 minutter ved omgivelsestemperatur, hvoretter temperaturen ble forhøyet til 80 °C under nitrogenatmosfære i 15 minutter. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat. Denne oppløsningen ble vasket med saltoppløsning, så tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk en olje. Det ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi under eluering med 10 % EtOAc i heksan, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et hvitt, fast stoff.
LC-retensjonstid 2,981 minutter [M + H]<+>575,3.
Trinn 11
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- isopropvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvl) isoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i metanol, og oppmalte 3 Å-sikter ble tilsatt. Morfolin (2 ekv.) ble tilsatt, etterfulgt av natriumcyanborhydrid (2 ekv.). Eddiksyre (5 ekv.) ble tilsatt dråpevis, og suspensjonen ble omrørt under nitrogen ved omgivelsestemperatur i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med DCM, og det ble vasket med mettet NaHC03(vandig). Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum. Den resulterende gummi ble renset ved hjelp av hurtigkromatografi under eluering med 1 % MeOH i DCM, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som en fargeløs olje.
LC-retensjonstid 4,42 minutter [M + H]<+>646,2, metode B.
Trinn 12
5- f2, 4- dihvdroksv- 5- isopropvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i vannfritt DCM, og under nitrogenatmosfære ble det avkjølt til 0 °C. 1 M BCI3i DCM ble tilsatt dråpevis, og oppløs-ningen ble omrørt under disse betingelsene i 30 minutter. Metanol (2 ml) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum. Rensing av prøven ved hjelp av preparativ LC/MS ga 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetyl-fenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et hvitt, fast stoff.
LC-retensjonstid 1,991 minutter [M + H]<+>466,3.
Denne forbindelse hadde aktivitet "A" i HSP90-fluorescenspolariseringsanalysen.
På lignende måte med fremstillingen av forbindelsen ifølge eksempel 78 ble eksemplene 78a-u fremstilt.
Eksempel 78v
Fosforsvre- 4- klor- 5- fdietoksvfosforvloksv)- 2- r3- etvlkarbamovl- 4- f4- metoksvfenvnisoksazol- 5- vllfenvlesterdietvlester
Til en fast blanding av 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-metoksyfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (11 mg, 2,1 x IO"2 mmol) og MgO (25 mg) i en liten ampulle ble 10 dråper dietylklorfosfat tilsatt. Den resulterende blanding ble varmet opp og omrørt ved 70 °C i 1 time, og utviklingen av reaksjonen ble overvåket ved hjelp av TLC. Etter avkjøling ble MeOH (1 ml) og DCM (1 ml) tilsatt. Etter filtrering ble løsningsmidlene fordampet, og gul olje ble erholdt. Difosforylesteren ble fraskilt ved hjelp av preparativ TLC, hvorved man fikk 4 mg.
Rf = 0,35.
<X>H-NMR5= 7,95 (1 H, s, bred), 7,74 (1 H, s), 7,55 (1 H, s), 7,32 (2 H, d, J = 9,0 Hz), 6,90 (2 H, d, J = 9,0 Hz), 4,30 (8 H, q), 3,80 (3 H, s), 3,40 (2 H, q), 1,35 (12 H, t) og 1,25 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 661,1 (RT = 7,60 minutter).
Eksempel 79
Fremstilling av 5-( 2, 4- dihvdroksv- 5- isobutvlfenvn- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenyl) isoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
Trinn 1 l-( 2, 4- dihvdroksvfenv0- 2- metvlpropan- l- on
Resorcinol (1 ekv.) ble tatt opp i BF3.OEt2(6 ekv.), og isosmørsyre (1 ekv.) ble tilsatt. Oppløsningen ble varmet opp i 1,5 timer ved 90 °C og fikk så avkjøles til romtemperatur. Oppløsningen ble tilsatt dråpevis til 10 % NaOAc (vandig) og fikk stå i 4 timer før den ble ekstrahert over i EtOAc. De organiske fasene ble slått sammen og vasket med mettet NaHC03(vandig), så tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk l-(2,4-dihydroksyfenyl)-2-metylpropan-l-on som en rød olje som ble brukt uten ytterligere rensing.
LC-retensjonstid 2,279 minutter [M + H]<+>181,1.
Trinn 2
4- isobutvlbenzen- l, 3- diol
Etylklorformiat (3 ekv.) ble sakte tilsatt til en avkjølt (0 °C) oppløsning av 1-(2,4-dihydroksyfenyl)-2-metylpropan-l-on (1 ekv.) og trietylamin (3 ekv.) i THF. Blandingen ble varmet opp til omgivelsestemperatur og omrørt i 3 timer før den ble filtrert og de faste stoffene vasket med kaldt THF. De kombinerte filtrater ble avkjølt til 0 °C, og natriumborhydrid (4 ekv.) i et volum av vann som var likt med THF-filtratene, ble sakte tilsatt. Blandingen ble varmet opp til omgivelsestemperatur, omrørt i 3 timer og fortynnet med vann. Blandingen ble ekstrahert to ganger med dietyleter, de kombinerte ekstrakter ble konsentrert til tørrhet og på nytt oppslemmet i 10 % vandig natrium-hydroksidoppløsning (4 ekv.). Etter koking under tilbakeløpskjøling i 90 minutter ble blandingen avkjølt, surgjort med 5 M vandig HCI og ekstrahert to ganger med dietyleter. De organiske ekstraktene ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert til tørrhet, hvorved man fikk 4-isobutylbenzen-l,3-diol som en uklar olje som ble brukt uten ytterligere rensing.
NMR i overensstemmelse med formel.
Trinn 3
l- f2. 4- dihvdroksv- 5- isobutvlfenvnetanon
4-isobutylbenzen-l,3-diol (1 ekv.) ble tatt opp i BF3.OEt2(6 ekv.), og eddiksyre (2 ekv.) ble tilsatt. Oppløsningen ble varmet opp i 16 timer ved 90 °C og fikk så avkjøles til romtemperatur. Oppløsningen ble tilsatt dråpevis til 10 % NaOAc (vandig) og fikk stå i 4 timer før den ble ekstrahert to ganger med dietyleter. De organiske fasene ble slått sammen og vasket med mettet NaHC03(vandig), så tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk l-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)etanon som ble brukt uten ytterligere rensing.
NMR i overensstemmelse med formel.
Trinn 4
l-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenvl) etanon
l-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)etanon (1 ekv.) ble oppløst i DMF, og kaliumkarbonat (4,4 ekv.) og så benzylbromid (4,4 ekv.) ble tilsatt. Suspensjonen ble varmet opp med omrøring til 150 °C under nitrogen i 16 timer. Oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur, filtrert og konsentrert til tørrhet. Dette faste stoffet ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi (silika, heksanenetylacetat 4:1) og så rekrystallisert fra etylacetat:heksaner, hvorved man fikk l-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)etanon som fargeløse krystaller.
LC-retensjonstid 3,030 minutter [M + H]<+>389,3.
Trinn 5
4-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenvl)- 2, 4- dioksosmørsvreetvlester
Natrium(3 ekv.) ble tilsatt til etanol under nitrogen ved romtemperatur, og det ble omrørt inntil fullstendig oppløsning inntrådte. l-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)etanon (1 ekv.) ble tilsatt, etterfulgt av dietyloksalat (1,5 ekv.), og reaksjonsblandingen ble varmet opp til refluks i 4 timer. Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble surgjort med 2 M HCI (vandig), hvorved man fikk en gul utfelling av 4- (2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-2,4-dioksosmørsyreetylester som ble erholdt ved filtrering.
LC-retensjonstid 3,254 minutter [M + H]<+>489,3.
Trinn 6
5- ( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlester
4-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-2,4-dioksosmørsyreetylester (1 ekv.) ble oppløst i etanol med omrøring. Hydroksylaminhydroklorid (1,2 ekv.) ble tilsatt, og oppløsningen ble varmet opp til refluks i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, hvorved man fikk en utfelling. Denne utfellingen ble erholdt ved filtrering, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester som et hvitt, fast stoff.
LC-retensjonstid 3,261 minutter [M + H]<+>486,3.
Trinn 7
5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenv0isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylester ble oppløst i 2 M etylamin i metanol (10 ekv.), og det ble varmet opp i "Smith Synthesizer"-mikrobølgeovnen ved 120 °C i 600 sekunder. Oppløsningen ble konsentrert under vakuum, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et hvitt, fast stoff som ble brukt uten ytterligere rensing.
LC-retensjonstid 3,112 minutter [M + H]<+>485,3.
Trinn 8
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenvn- 4- iodisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) og N-jodsuksinimid (2,0 ekv.) ble oppløst i acetonitril, cerisk ammoniumnitrat (0,1
ekv.) ble tilsatt, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, og den resulterende gummi ble fordelt mellom etylacetat og saltoppløsning. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi under eluering med 4:1 heksan:etylacetat, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutyl-fenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid som en olje.
LC-retensjonstid 3,089 minutter [M + H]<+>611,2.
Trinn 9
5- f2, 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenvn- 4- f4- formvlfenvnisoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i DMF, og 1 M Na2C03(vandig) (3 ekv.) ble tilsatt, etterfulgt av 4-formylfenylborsyre (2 ekv.) og katalytisk PdCI2(PPh3)2. Nitrogen ble boblet gjennom oppløsningen i 10 minutter ved omgivelsestemperatur, hvoretter temperaturen ble økt til 80 °C under nitrogenatmosfære i 2 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat. Denne oppløsningen ble vasket med saltoppløsning, så tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvorved man fikk en olje som ble renset ved hjelp av kolonnekromatografi under eluering med 10 % etOAc i heksan, hvorved man fikk 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-formylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et hvitt, fast stoff.
LC-retensjonstid 5,57 minutter [M + H]<+>589,1, metode B.
Trinn 10
5- f2. 4- bis- benzvloksv- 5- isobutvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-formylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i metanol, og oppmalte 3 Å-sikter ble tilsatt. Morfolin (2 ekv.) ble tilsatt, etterfulgt av eddiksyre (5 ekv.). Etter omrøring i 30 minutter ble natriumcyanborhydrid (2 ekv.) tilsatt porsjonsvis, og suspensjonen ble omrørt under nitrogen ved omgivelsestemperatur i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom kiselgur og konsentrert til tørrhet. Kolonnekromatografi, eluering med 5 % MeOH i DCM, ga 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som en fargeløs olje.
LC-retensjonstid 4,53 minutter [M + H]<+>660,2, metode B.
Trinn 11
5- f2, 4- dihvdroksv- 5- isobutvlfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1 ekv.) ble oppløst i vannfritt DCM og under nitrogenatmosfære, og det ble avkjølt til 0 °C. 1 M BCI3i DCM (9 ekv.) ble tilsatt dråpevis, og oppløsningen ble omrørt i 30 minutter. Metanol (2 ml) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum. Rensing av prøven ved hjelp av preparativ LC/MS ga 5-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid som et hvitt, fast stoff.
LC-retensjonstid 1,902 minutter [M + H]<+>480,3.
Denne forbindelse hadde aktivitet "A" i HSP90-fluorescenspolariseringsanalysen.
På lignende måte med fremstillingen av forbindelsen ifølge eksempel 79 ble eksempel 80 fremstilt. Rensing av prøven ved hjelp av preparativ LC/MS ga forbindelsen som et hvitt, fast stoff.
Eksempel 81 N- r5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- fluorfenvnisoksazol- 3- vlmetvllmetansulfonamid Eksempel 82 N- r5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- fluorfenvnisoksazol- 3- vlmetvllacetamid 5-( 2, 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4-( 4- fluorfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreamid
5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-jodisoksazol-3-karboksylsyreamid (0,45 g, 0,80 mmol) ble krysskoblet til 4-fluorfenylborsyre (0,17 g, 1,5 ekv.) ved å anvende standardbetingelsene beskrevet ovenfor. Råproduktet, et oransje, fast stoff (0,40 g), ble ført videre til neste trinn uten ytterligere rensing.
LCMS (LCQ) tR= 8,70, MS m/z 529,1 [M + H]<+>.
C- r5- f2. 4- bis- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- f4- fluorfenvnisoksazol- 3- vllmetvlamin
Til en oppløsning av 5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-fluorfenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreamid (0,40 g, 0,76 mmol) i vannfritt THF (20 ml) under argon ble det tilsatt 1 M boran-THF-kompleks (1 ml), og oppløsningen ble kokt under tilbakeløps- kjøling over natten. Etter avkjøling ble reaksjonen stanset med metanol (10 ml), og produktet ble renset ved å anvende Isolute SPE Flash SCX-2, 5 g, hvorved man fikk 0,30 g (77 % utbytte) som et pulver.
LCMS (LCQ) tR= 7,54, MS m/z 515,2 [M + H]<+>.
N- r5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- fluorfenvnisoksazol- 3- vlmetvllmetansulfonamid C-[5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-fluorfenyl)isoksazol-3-yl]metyl-amin (100 mg, 0,19 mmol) ble oppløst i DCM (3 ml) før tilsetningen av metansulfonylklorid (17 jxl, 1,1 ekv.) og trietylamin (30 ul, 1,1 ekv.). Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur over natten før den ble inndampet til tørrhet under vakuum, hvorved det ble tilbake et urenset, benzyl beskyttet produkt som en blåfarget rest (90 mg). Denne ble avbeskyttet ved å anvende standardfremgangsmåten med bortriklorid beskrevet ovenfor og renset ved hjelp av preparativ TLC (10 % etanol i DCM), og Soxhlet-ekstraksjon av silika ved hjelp av eter ga den rene forbindelsen som et tilnærmet fargeløst, fast stoff (8 mg, 10 % utbytte).
LCMS (LCQ) tR= 6,65, MS m/z 411,2 [M-H]\
<5>H (d<4->MeOH), 7,19 (2 H, m, Ar-H), 7,04 (1 H, s, Ar-W), 7,03 (2 H, m, Ar-H), 6,34 (1 H, s, Ar-H), 4,27 (2 H, s, CH2NH), 2,81 (3 H, s, S02CH3).
N- r5- f5- klor- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4- f4- fluorfenvnisoksazol- 3- vlmetvllacetamid
Til en oppløsning av C-[5-(2,4-bis-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-fluorfenyl)-isoksazol-3-yl]metylamin (100 mg, 0,19 mmol) i DCM ble det tilsatt eddiksyreanhydrid (130jlxI, 7,0 ekv.) og trietylamin (81 ul, 3,0 ekv.). Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur inntil aminet var forbrukt. Oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum, hvorved man fikk det gulfargede, oljeaktige, urensede, benzyl beskyttede produkt. Dette ble avbeskyttet ved å anvende standardfremgangsmåten med bortriklorid beskrevet ovenfor og renset ved hjelp av preparativ TLC, og Soxhlet-ekstraksjon av silika ved hjelp av eter ga den rene forbindelse som et fargeløst, fast stoff (10 mg, 14 % utbytte).
LCMS (LCQ) tR= 6,57, MS m/z 377,1 [M + H]<+>.
<5>H (d<4->MeOH), 7,17 (2 H, m, Ar-H), 7,01 (1 H, s, Ar-H), 6,98 (2 H, m, Ar-H), 6,32 (1 H, s, Ar-H), 4,37 (2 H, s, CH2NH), 1,77 (3 H, s, COCH3).
Eksempler 83, 84 og 85
5- f5- etvl- 4- hvdroksv- 2- metoksvfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid ( 83)
5-( 5- etvl- 2- hvdroksv- 4- metoksvfenvn- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenvl) isoksazol- 3-karboksvlsvreetvlamid ( 84)
5-( 5- etvl- 2, 4- dimetoksvfenvl)- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvreetvlamid ( 85)
Til en argonfylt kolbe inneholdende 5-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (25 mg, 0,055 mmol) og N,N-(diisopropyl)aminometylpolystyren [PS-DIEA] (35 mg, 3,83 mmol/g, 2,4 ekv.) ble det tilsatt vannfritt DCM (2,3 ml) og vannfri metanol (0,25 ml). Under forsiktig omrøring ble 2 M (trimetylsilyl)diazometan i heksaner (28 ul, 1,0 ekv.) tilsatt, og oppløsningen ble omrørt over natten ved romtemperatur. Argon ble boblet gjennom oppløsningen i 10 minutter, harpiksen ble frafiltrert, og de flyktige stoffene ble fjernet under vakuum. Den urensede rest ble renset ved hjelp av halvpreparativ HPLC, hvorved man fikk 5-(5-etyl-4-hydroksy-2-metoksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (83) (5,52 mg, 21 %), 5-(5-etyl-2-hydroksy-4-metoksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3- karboksylsyreetylamid (84) (1,14 mg, 4 %), 5-(5-etyl-2,4-dimetoksyfenyl)-4-(4-morfolin-4- ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid (1,46 mg, 5 %) og det ikke-metylerte utgangsmaterialet.
83: LCMS (LCT) tR= 4,95, MS m/z 466,4 [M + H]<+>.
84: LCMS (LCT) tR= 5,14, MS m/z 466,4 [M + H]<+.>
85: LCMS (LCT) tR= 5,45, MS m/z 480,4 [M + H]<+>.
NMR-data bekreftet fastsettelsene.
Eksempel 86
Etvl- 5-( 5- klor- 2- hvdroksvfenvl)- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenvl)- isoksazol- 3- karboksamid
Trinn 1 Metyl- 2- benzovloksy- 5- klorbenzoat
En blanding av metyl-5-klor-2-hydroksybenzoat (2,5 g, 13,4 mmol), K2C03(3,7 g, 26,8 mmol) og benzylbromid (2,98 g, 17,4 mmol) i aceton (30 ml) ble kokt under tilbakeløpskjøling i 12 timer. Etter avkjøling ble aceton fordampet. EtOAc (100 ml) ble tilsatt, og det ble filtrert. Det organiske lag ble så vasket med 1 M HCI (1 x 80 ml), salt-oppløsning (2 x 80 ml) og tørket med Na2S04. Etter filtrering og fordamping av oppløs-ningsmidlet ble det erholdt gule, halvfaste stoffer (3,2 g).
<X>H-NMR (de-aceton) 5 = 7,73 (1 H, d), 7,60-7,30 (1 H + 5 H, m), 7,28 (1 H, d), 5,30 (2 H, s) og 3,90 (3 H, s).
Trinn 2
l-( 2- benzvloksv- 5- klorfenv0- 2-( trifenvl- l5- fosfanvliden) etanon
Til en omrørt suspensjon av trifenylfosfoniumbromid (2,14 g, 6,0 mmol) i tørket THF (30 ml) ved romtemperatur ble det tilsatt 1,6 M n-BuLi i heksan (5,25 ml, 8,39 mmol). Den oransje suspensjon ble omrørt i 3 timer. Deretter ble en oppløsning av metyl-2-benzoyloksy-5-klorbenzoat (0,83 g, 3,0 mmol) i THF (8 ml) sakte tilsatt. Den resulterende blanding ble omrørt ved 60 °C i 2 timer og filtrert etter avkjøling. DCM (100 ml) ble tilsatt til filtratet, og de kombinerte organiske lag ble vasket med saltoppløsning (2 x 80 ml). Etter filtrering og fordamping av oppløsningsmidlet ble det erholdt en gul olje (2,0 g). Det ble så renset ved hjelp av kromatografi og eluert med EtOAc:heksan/l:l, hvorved man fikk 0,97 g faste stoffer.
Rf = 0,43.
^-NMR (de-aceton) 5 = 7,80-7,52 (20 H, m), 7,40-7,20 (1 H + 1 H + 1 H, m), 5,25 (2 H, s), 4,72 (1 H, s, trans-H) og 4,62 (1 H, s, cis-H).
LCMS: (M + 1)<+>= 521,2 (RT = 5,94 minutter).
Trinn 3
Etyl- 4-( 2- benzvloksy- 5- klorfenvD- 2, 4- diokso- 3-( trifenyl- l5- fosfanyliden) butyrat
Til en oppløsning av l-(2-benzyloksy-5-klorfenyl)-2-(trifenyl-X<5->fosfanyliden)etanon (0,49 g, 0,94 mmol), NEt3(96 mg, 0,94 mmol) og DMAP (12 mg, 0,09 mmol) i tørt toluen (20 ml) ved romtemperatur ble etylkloroksoacetat (0,38 g, 2,78 mmol) i toluen (5 ml) tilsatt. Blandingen ble omrørt i 2 timer og helt over i vann (50 ml). Det organiske lag ble fraskilt, og det vandige lag ble ekstrahert med EtOAc (2 x 40 ml). De kombinerte organiske lag ble så vasket med mettet NaHC03-oppløsning (2 x 40 ml), mettet sitronsyre (1 x 40 ml), saltoppløsning (1 x 40 ml) og tørket. Urenset olje (0,36 g) ble renset ved hjelp av kromatografi og eluert med EtOAc.
Rf = 0,88.
^-NMR (de-aceton) 5 = 7,75-7,40 (15 H, m), 7,30 (1 H, dd), 7,15 (1 H, d), 7,05 (1 H, d), 5,10 (2 H, s), 3,60 (2 H, q) og 1,10 (3 H, s).
LCMS: (M + 1)<+>= 621,2 (RT = 6,49 minutter).
Trinn 4
Etyl- 3-( 2- benzovloksy- 5- klorbenzoyl)- 3- brom- 3H- azirin- 2- karboksylat
Til en oppløsning av etyl-4-(2-benzyloksy-5-klorfenyl)-2,4-diokso-3-(trifenyl-X<5->fosfanyliden)butyrat (0,143 g, 0,23 mmol) i DCM (8 ml) ved romtemperatur ble en blanding av TMSN3(40 mg, 0,35 mmol) og NBS (62 mg, 0,35 mmol) i DCM (6 ml) tilsatt. Den resulterende oppløsning ble omrørt i 2 timer. Etter fordamping av oppløsningsmidlet ble råproduktet renset ved hjelp av preparativ TLC. Gult, fast stoff (38 mg) ble erholdt.
Rf = 0,73 (EtOAc:heksan 1:2).
^-NMR (de-aceton) 5 = 7,80 (1 H, d), 7,60 (1 H, dd), 7,40 (5 H, m), 7,30 (1 H, d), 5,20 (2 H, s), 4,10 (2 H, q) og 1,00 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 438,0 (RT = 7,32 minutter).
Trinn 5
Etvl- 5-( 2- benzovloksv- 5- klorfenvlV4- bromisoksazol- 3- karboksvlat
Etyl-3-(2-benzoyloksy-5-klorbenzoyl)-3-brom-3H-azirin-2-karboksylat (55 mg, 0,12 mmol) ble varmet opp ved refluks i tørt toluen i 2 timer. Etter fordamping av oppløsningsmidlet ble de urensede faste stoffer (34 mg) erholdt og renset ved hjelp av preparativ TLC (EtOAc:heksan/l:2).
Rf = 0,73 (fluorescerende).
^-NMR (de-aceton) 5 = 7,60 (1 H, d), 7,50 (1 H, dd), 7,40 (1 H, d), 7,30 (5 H, m), 5,25 (2 H, s), 4,42 (2 H, q) og 1,40 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 438,0 (RT = 7,09 minutter).
Trinn 6
Etvl- 5- f2- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- bromisoksazol- 3- karboksamid
Til en oppløsning av etyl-5-(2-benzoyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylat (30 mg, 6,8 x IO"<2>mmol) i EtOH (1 ml) ble etylamin (70 % i vann, 1 ml) tilsatt. Oppløsningen ble varmet opp ved 100 °C i en CEM-mikrobølgereaktor (200 W) i 1 time. Deretter ble oppløsningsmidlet fordampet, og forbindelsen ble renset ved hjelp av preparativ TLC, hvorved man fikk faste stoffer (20 mg).
Rf = 0,39 (EtOAc:heksan/l:4).
^-NMR (de-aceton) 5 = 8,10 (1 H, s, bred), 7,50 (1 H, d), 7,45-7,35 (1 H + 1 H, m), 7,25 (5 H, m), 5,20 (2 H, s), 3,40 (2 H, q) og 1,20 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 437,1 (RT = 6,57 minutter).
Trinn 7
Etvl- 5- f2- benzvloksv- 5- klorfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3- karboksamid
En blanding av etyl-5-(2-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksamid (30 mg, 5,6 x IO"<2>mmol), Pd(Ph3P)4(4 mg, 3,5 x IO"<2>mmol), 4-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)benzyl]morfolin (63 mg, 0,2 mmol) og 1 M NaHC03-oppløsning (0,2 ml) i DME (1 ml) ble omrørt ved 80 °C under argongass i 16 timer. Etter avkjøling ble oppløsningen fortynnet med vann (8 ml), og det ble ekstrahert med EtOAc (2 x 20 ml). De kombinerte organiske lag ble vasket med saltoppløsning (1 x 20 ml) og tørket. Etter filtrering og fordamping av oppløsningsmidlene ble råproduktet renset ved hjelp av preparativ TLC, hvorved man fikk 30 mg faste stoffer.
Rf = 0,44 (EtOAc).
^-NMR (d6-aceton) 5 = 8,25 (1 H, s, bred), 7,60 (1 H, d), 7,55 (1 H, dd), 7,45 (1 H, d), 7,30-6,90 (9 H, m), 5,00 (2 H, s), 3,55 (4 H, m), 3,45 (2 H + 2 H, s + q), 2,30 (4 H, m) og 1,20 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 532,2 (RT = 4,39 minutter).
Trinn 8
Etvl- 5- f5- klor- 2- hvdroksvfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3- karboksamid
Til en oppløsning av etyl-5-(2-benzyloksy-5-klorfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksamid (25 mg, 4,7 x IO"<2>mmol) i DCM (5 ml) ved 0 °C ble 1 M BCI3i DCM (0,15 ml) tilsatt. Den resulterende uklare, gule oppløsning ble så omrørt ved 0 °C i 15 minutter og romtemperatur i 3-4 timer inntil den ble klar. Deretter ble oppløsningen tilsatt MeOH (1 ml). Mettet NaHC03(1 ml) ble så tilsatt, og det ble ekstrahert med EtOAc (2 x 2 ml) og tørket. Etter at oppløsningsmidlet var frafiltrert og inndampet, ble den urensede olje renset ved hjelp av preparativ TLC (EtOAc:MeOH/50:l), hvorved man fikk 12 mg faste stoffer.
^-NMR (d4-MeOD) 5 = 7,60 (2 H, d), 7,50-7,30 (1 H + 1 H + 1 H, m), 7,00 (2 H, d), 3,70 (4 H, m), 3,60 (2 H, s), 3,50 (2 H, q), 2,60 (4 H, m) og 1,25 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 442,2 (RT = 3,54 minutter).
4-hydroksyisomen ble fremstilt på en lignende måte som dens 2-hydroksymotpart på følgende måte:
Eksempel 87 Etvl- 5-( 3- klor- 4- hvdroksvfenvl)- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3- karboksamid Trinn 1 Metvl- 4- benzovloksv- 3- klorbenzoat
Metyl-3-klor-4-hydroksybenzoat (1,0 g, 5,36 mmol) ga et urenset fast stoff (1,57 g).
^-NMR (d6-aceton) 5 = 8,00 (1 H, d), 7,95 (1 H, dd), 7,60-7,40 (5 H, m), 7,35 (1 H, d), 5,40 (2 H, s) og 3,90 (3 H, s).
Trinn 2
l-( 4- benzyloksy- 3- klorfenvn- 2-( trifenyl- l5- fosfanyliden) etanon
Metyl-4-benzoyloksy-3-klorbenzoat (1,5 g, 5,40 mmol) ga et urenset fast stoff (2,5 g).
Rf = 0,31 (EtOAc: heksan/l:l).
HH-NMR (d6-aceton) 5 = 8,05 (1 H, d), 7,90 (1 H, dd), 7,85-7,35 (20 H, m), 7,20 (1 H, d), 5,30 (2 H, s), 4,60 (1 H, s, trans-H) og 4,50 (1 H, s, cis-H).
LCMS: (M + 1)<+>= 521,2 (RT = 5,29 minutter).
Trinn 3
Etyl- 4- f4- benzyloksy- 3- klorfenvn- 2, 4- diokso- 3- ftrifenyl- X5- fosfanvliden) butvrat l-(4-benzyloksy-3-klorfenyl)-2-(trifenyl-X5-fosfanyliden)etanon (1,84 g, 3,53 mmol) ga et urenset fast stoff (1,43 g).
^-NMR (de-aceton) 5 = 8,00-7,35 (22 H, m), 7,20 (1 H, d), 5,35 (2 H, s), 3,55 (2 H, q) og 1,14 (3 H, s).
LCMS: (M + 1)<+>= 621,2 (RT = 7,29 minutter).
Trinn 4
Etvl- 3- f4- benzovloksv- 3- klorbenzovn- 3- brom- 3H- azirin- 2- karboksvlat
Etyl-4-(4-benzyloksy-3-klorfenyl)-2,4-diokso-3-(trifenyl-X<5->fosfanyliden)butyrat (0,74 g, 1,19 mmol) ga et fast stoff (0,168 g) etter kolonne- og preparativ TLC-rensing.
Rf = 0,24 (EtOAc:heksan/l:6).
^-NMR (de-aceton) 5 = 8,00 (1 H, d), 7,90 (1 H, dd), 7,50 (1 H, d), 7,40 (5 H, m), 5,40 (2 H, s), 4,05 (2 H, q) og 0,95 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 438,1 (RT = 7,27 minutter).
Trinn 5
Etvl- 5-( 4- benzovloksv- 3- klorfenv0- 4- bromisoksazol- 3- karboksvlat
Etyl-3-(4-benzoyloksy-3-klorbenzoyl)-3-brom-3H-azirin-2-karboksylat (68 mg, 0,16 mmol) ga et fast stoff (20 mg) etter preparativ TLC og krystallisering (EtOH).
Rf = 0,26 (fluorescerende) (EtOAc:heksan/1:4).
^-NMR (de-aceton) 5 = 8,00 (1 H, d), 7,90 (1 H, dd), 7,50 (1 H, d), 7,40 (5 H, m), 5,35 (2 H, s), 4,45 (2 H, q) og 1,40 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 438,0 (RT = 7,39 minutter).
Trinn 6
Etvl- 5-( 4- benzvloksv- 3- klorfenv0- 4- bromisoksazol- 3- karboksamid
Etyl-5-(4-benzoyloksy-3-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksylat (10 mg, 2,3 x IO"<2>mmol) ga et urenset fast stoff (8 mg).
Rf = 0,53 (EtOAc:heksan/l:2).
^-NMR (de-aceton) 5 = 8,15 (1 H, s, bred), 8,00 (1 H, d), 7,90 (1 H, dd), 7,50 (1 H, d), 7,40 (5 H, m), 5,32 (2 H, s), 3,42 (2 H, q) og 1,20 (3 H, t).
Trinn 7
Etvl- 5- f4- benzvloksv- 3- klorfenvn- 4- f4- morfolin- 4- vlmetvlfenvnisoksazol- 3- karboksamid
Etyl-5-(4-benzyloksy-3-klorfenyl)-4-bromisoksazol-3-karboksamid (10 mg, 2,3 x IO"<2>mmol) ga et urenset fast stoff (10 mg), som så ble brukt i neste trinn uten noen ytterligere rensing.
Trinn 8
Etvl- 5-( 3- klor- 4- hvdroksvfenvl)- 4-( 4- morfolin- 4- vlmetvlfenvl) isoksazol- 3- karboksamid
Etyl-5-(4-benzyloksy-3-klorfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksamid (8 mg, 1,5 x IO"<2>mmol) ga et urenset fast stoff (2 mg) etter to gangers rensing ved hjelp av preparativ TLC (EtOAc:MeOH/50:l).
^-NMR (d4-MeOD) 5 = 7,70 (2 H, d), 7,60 (1 H, d), 7,45 (1 H + 1 H, m), 7,00 (2 H, d), 3,80 (4 H, m), 3,75 (2 H, s), 3,50 (2 H, q), 2,82 (4 H, m) og 1,25 (3 H, t).
LCMS: (M + 1)<+>= 442,2 (RT = 4,47 minutter).
Eksempel 88
3- r4- f4- bromfenvnisoksazol- 5- vll- 5- klor- 2, 6- dihvdroksvbenzaldehvd
Trinn 1 3- f4- bromfenvn- 6- klor- 7- hvdroksv- 4- okso- 4H- kromen- 8- karbalderivd
3-(4-bromfenyl)-6-klor-7-hydroksykromen-4-on (0,35 g, 1 mmol) og heksametylentetramin (0,14 g, 1 mmol) ble oppløst i iseddik (20 ml), og det ble varmet opp over natten ved 100 °C. Varm 6 M HCI (10 ml) ble tilsatt, og blandingen ble varmet opp i ytterligere 1 time før den ble helt over i vann. Den dannede utfelling ble filtrert, vasket og tørket, hvorved man fikk det rene ønskede produkt som et lysebrunt, fast stoff.
LCMS (LCQ) tR= 8,27, MS m/z 377,3/379,2 [M-H]\
Trinn 2
3- r4- f4- bromfenvnisoksazol- 5- vll- 5- klor- 2, 6- dihvdroksvbenzaldehvd
Til en oppløsning av 3-(4-bromfenyl)-6-klor-7-hydroksy-4-okso-4H-kromen-8-karbaldehyd (53,5 mg, 0,14 mmol) i EtOH (6 ml) ble hydroksylaminhydroklorid (100 mg, 1,4 mmol) tilsatt. Den resulterende blanding ble varmet opp ved refluks i 16 timer. EtOH ble fordampet, og EtOAc (20 ml) ble tilsatt. Det organiske lag ble vasket med mettet NaHC03og tørket. Faste stoffer (33 mg) ble erholdt da den resulterende olje ble triturert med eter.
HH-NMR (de-DMSO) 5 = 9,83 (1 H, s), 8,70 (1 H, s), 8,21 (1 H, s), 7,78 (2 H,
d) og 7,68 (2 H, s).
LCMS: (M + 1)<+>= 394,1 (RT = 8,60 minutter).
Eksempel 89
5- f5- etvl- 2- hvdroksv- 4- metoksvfenvn- 4- f4- fluorfenvnisoksazol- 3- karboksvlsvrehvdroksvamid
Trinn 1 l-( 5- etvl- 2, 4- dihvdroksvfenv0- 2-( 4- fluorfenvnetanon
Etylresorcinoi (5,37 g, 39 mmol) og 4-fluorfenyleddiksyre (6,00 g, 39 mmol) ble oppløst i eterat-BF3(40 ml). Oppløsningen ble varmet opp ved 80 °C i 4 timer. Da den var avkjølt, ble vann (100 ml) forsiktig tilsatt, og oppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (2 x 80 ml). De organiske lagene ble så vasket med mettet NaHC03(forsiktig) (2 x 100 ml) og saltoppløsning (2 x 100 ml) og tørket med Na2S04. Etter rensing med avfargende aktivkarbon ble det erholdt en mørkegrønn sirup (10,5 g).
Rf = 0,4 (EtOAc:n-heksan/l:3). Forbindelsen ble brukt i neste trinn uten ytterligere rensing.
^-NMR (d6-aceton) 5 = 7,80 (1 H, s), 7,35 (2 H, m), 7,00 (1 H, m), 6,35 (1 H, s), 4,35 (2 H, s), 2,55 (2 H, q) og 1,10 (3 H, t).
Trinn 2
4- f5- etvl- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 3- f4- fluorfenvn- 2, 4- dioksosmørsvreetvlester
Til en oppløsning av l-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)etanon (10,3 g, 37,6 mmol) i tørket pyridin (100 ml) ved 0 °C ble etylkloroksoacetat (15,4 g, 112,8 mmol) tilsatt. Oppløsningen ble omrørt ved 0 °C i 4 timer og ved romtemperatur i 16 timer. Det vandige lag ble nøytralisert med 1 M HCI og ekstrahert med DCM (2 x 100 ml). De kombinerte DCM-lag ble så vasket med 2 M HCI (2 x 80 ml), mettet NaHC03(1 x 100 ml), saltoppløsning (1 x 100 ml) og tørket med Na2S04. Etter filtrering og fordamping av oppløsningsmidlet ble det erholdt en mørkebrun olje (11,4 g).
Rf = 0,22 (EtOAc:n-heksan/l:2). LCMS viser at det er en blanding av ønsket produkt [(M-l)" = 373,1, RT = 7,27] og det ringsluttede kromenkarboksylat [(M-l)" = 355,4, RT = 7,83] i et forhold på ca. 6:1. En liten mengde prøve ble renset ved hjelp av preparativ TLC for spektroskopisk analyse.
^-NMR (de-aceton) 5 = 7,75 (1 H, s), 7,30 (2 H, m), 7,00 (1 H, m), 6,45 (1 H, s), 4,65 (1 H, s), 4,25 (2 H, q), 2,55 (2 H, q) og 1,10 (6 H, t).
Trinn 3
6- etvl- 3- f4- fluorfenvn- 7- hvdroksv- 4- okso- 4H- kromen- 2- karboksvlsvreetvlester
4-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-3-(4-fluorfenyl)-2,4-dioksosmørsyreetylester (3,22 g, 8,6 mmol) ble kokt under tilbakeløpskjøling i en blanding av 0,8 M HCI og MeOH (20 ml/20 ml) i 3 timer ved 100 °C. Deretter ble MeOH fordampet, og det vandige lag ble ekstrahert med EtOAc (2 x 60 ml). De kombinerte organiske lag ble vasket med mettet NaHC03(1 x 80 ml), saltoppløsning (2 x 80 ml), vann (1 x 80 ml) og tørket med Na2S04. Etter rensing med avfargende aktivkarbon og fordamping av oppløsningsmidlet ble det erholdt brune, klebrige stoffer. De ble så ekstrahert med varm eter, og det ble erholdt mørkegule, faste stoffer (0,26 g).
Rf = 0,43 (EtOAc:n-heksan/l:2).
LCMS: (M + 1)<+>= 357,3 (RT = 7,83).
HH-NMR (d6-aceton) 5 = 9,75 (1 H, s), 7,80 (1 H, s), 7,25 (2 H, m), 7,10 (1 H, m), 6,90 (1 H, s), 4,05 (2 H, q), 2,70 (2 H, q), 1,20 (3 H, t) og 0,95 (3 H, t).
Trinn 4
6- etvl- 3-( 4- fluorfenvl)- 7- metoksv- 4- okso- 4H- kromen- 2- karboksvlsvreetvlester
Jodmetan (0,10 ml, 12 ekv.) ble tilsatt til en oppløsning av 6-etyl-3-(4-fluorfenyl)-7-hydroksy-4-okso-4H-kromen-2-karboksylsyreetylester (50 mg, 0,14 mmol) og kaliumkarbonat (58 mg, 3,0 ekv.) i aceton, og blandingen ble kokt under tilbakeløpskjøling over natten. De flyktige stoffene ble så fordampet under vakuum, og resten ble fordelt mellom vann (15 ml) og EtOAc (15 ml). Det organiske lag ble vasket med saltoppløsning, tørket over MgS04og inndampet til tørrhet under vakuum, hvorved man fikk et hvitt, krystallinsk produkt (45 mg, 87 % utbytte).
<5>H (CDCI3), 7,96 (1 H, s, Ar-H), 7,27 (2 H, m, Ar-H), 7,12 (2 H, m, Ar-H), 6,92 (1 H, s, Ar-H), 4,16 (2 H, q, C02-CH2CH3), 3,95 (3 H, s, OCH3), 2,71 (3 H, q, CH2CH3), 1,24 (3 H, t, C02CH2CH3), 1,04 (3 H, t, CH2CH3).
Trinn 5
5-( 5- etvl- 2- hvdroksv- 4- metoksvfenvn- 4-( 4- fluorfenvl) isoksazol- 3-karboksvlsvrehvdroksvamid
Til 6-etyl-3-(4-fluorfenyl)-7-metoksy-4-okso-4H-kromen-2-karboksylsyreetylester (25 mg, 0,068 mmol) i etanol (2,5 ml) ble det tilsatt hydroksylamin (50 % i vann, 1 ml), og oppløsningen ble omrørt i 48 timer. De flyktige stoffene ble avdampet under vakuum, og resten ble renset ved hjelp av preparativ TLC (10 % MeOH i DCM), hvorved man fikk det ønskede produkt som et lysebrunt, fast stoff (3 mg, 12 % utbytte).
LCMS (LCT) tR= 6,54, MS m/z 373,17 [M + H]<+>.
<5>H (de-aceton), 10,73 (1 H, bred s), 8,59 (1 H, bred s), 7,39 (2 H, m, Ar-H), 7,07 (2 H, m, Ar-H), 7,00 (1 H, s, Ar-H), 6,55 (1 H, s, Ar-H), 3,82 (3 H, s, OCH3), 2,48 (2 H, q, CH2CH3), 1,30 (1 H, bred s), 1,01 (3 H, t, CH2CH3).
Eksempel 90
5-( 5- etvl- 2, 4- dihvdroksvfenvn- 4-( 4- fluorfenvl) isoksazol- 3- karboksvlsvrehvdroksvamid
Til 6-etyl-3-(4-fluorfenyl)-7-hydroksy-4-okso-4H-kromen-2-karboksylsyreetylester (25 mg, 0,070 mmol) i etanol (2,5 ml) ble det tilsatt hydroksylamin (50 % i vann, 1 ml), og oppløsningen ble omrørt i 48 timer. De flyktige stoffene ble avdampet under vakuum, og resten ble renset ved hjelp av preparativ TLC (15 % MeOH i DCM), hvorved man fikk det ønskede produkt som et brunt, fast stoff (2 mg, 8 % utbytte).
LCMS (LCT) tR= 5,63, MS m/z 359,13 [M + H]<+.>
<5>H (de-aceton), 10,72 (1 H, bred s, CONH), 8,69 (1 H, bred s, Ar-OH), 8,59 (1 H, bred s, Ar-OH), 7,39 (2 H, m, Ar-H), 7,06 (2 H, m, Ar-H), 6,99 (1 H, s, Ar-H), 6,52 (1 H, s, Ar-H), 2,49 (2 H, q, CH2CH3), 1,31 (1 H, bred s), 1,08 (3 H, t, CH2CH3).
Biologiske resultater
Den intrinsiske ATPase-aktivitet til HSP90 kan måles ved å anvende gjær-HSP90 som et modellsystem. Analysen, basert på bruken av malakittgrønt til målingen av uorganisk fosfat, ble brukt til å teste HSP90-inhiberende aktivitet til noen av forbindelsene ifølge eksemplene her.
Malakittgrønn ATPase- analvse
Materialer
Kjemikalier er av den høyeste renhet som er kommersielt tilgjengelig, og alle vandige oppløsninger er fremstilt i AR-vann. På grunn av behovet for å minimalisere forurensning med uorganisk fosfat, bør det gjøres foranstaltninger med oppløsninger og apparat som anvendes i analysene. Glasstøy og pH-meter skylles med dobbeltdestillert eller avionisert vann før bruk, og hvis det er mulig, bør ikke plastutstyr brukes. Det brukes hansker i alle prosedyrer. (1) Greiner 384-brønners (Greiner 781101) eller Costar 384-brønners, flatbunnede multibrønnplater av polystyren (VWR). (2) Analysebuffer av (a) lOOmM Tris-HCI, pH 7,4, (b) 150 mM KCI, (c) 6 mM MgCI2, lagret ved romtemperatur. (3) 0,0812 % (vekt/volum) malakittgrønt (M 9636, Sigma Aldrich Ltd.,
Poole, UK), lagret ved romtemperatur.
(4) 2,32 % (vekt/volum) polyvinylalkohol USP (P 1097, Sigma Aldrich Ltd, Poole, UK) i kokende vann (se anmerkning 1), fikk avkjøles og ble lagret ved romtemperatur. (5) 5,72 % (vekt/volum) ammoniummolybdat i 6 M saltsyre, lagret ved romtemperatur.
(6) 34 % (vekt/volum) natriumsitrat, lagret ved romtemperatur.
(7) 100 mM ATP, dinatriumsalt, spesiell kvalitet (47699, Sigma Aldrich), lagret ved -20 °C. (8) E. co//-uttrykt gjær-HSP90-protein, renset > 95 % (se f.eks. Panaretou et al., 1998), og lagret i 50jllI alikvoter ved -80 °C.
Fremgangsmåte
1. Fortynn testforbindelser til 500 |aM i AR-vann (DMSO-konsentrasjon vil være 2,5 %). Overfør 2,5jllI av disse forbindelsene direkte fra datter-platen til analyseplaten, hvorved man får en endelig analyse konsentrasjon på 100^M. For å oppnå 12-punkters IC50-verdier utføres seriefortynninger i forholdet 1:2 for å fremstille en serie analyse-konsentrasjoner fra 100 nM til 97,6 nM (2,5 % DMSO), og overfør 2,5 |j.l av hver konsentrasjon til analyseplaten. Kolonne 1 i analyseplaten inneholder ikke noen forbindelse, som en negativ kontroll. En
tilleggsrekke uten noen forbindelse brukes også som en bakgrunn.
2. Fremstill ATP ved å fortynne 100 mM standard til 925 |aM med analysebuffer, og alikvoter 5 ml fortynnet ATP til hver brønn, inkludert
kontroller (endelig analysekonsentrasjon 370 nM).
3. Tilsett 5jllI buffer til bakgrunnsrekke.
4. Fortynn enzympreparat til 1,05 |aM med analysebuffer, og alikvoter 5 ul i hver forbindelsesbrønn og til den negative kontrollkolonne. 5. Samle opp reagensene i bunnen av brønnen, tildekk plate med platelokk og inkuber over natten ved 37 °C. 6. Som første ting om morgenen: fremstill malakittgrønt-reagenset. Tilsett 2 deler malakittgrønt-oppløsning, 1 del polyvinylalkohol-oppløsning, 1 del ammoniummolybdatoppløsning og 2 deler AR-vann. 7. Snu opp ned for å blande, og la det stå i ca. 1 time inntil fargen skifter fra brun til gyllengul. 8. Tilsett 40 ul malakittgrønt-reagens til hver brønn, la det stå i 5 minutter for utvikling av farge.
9. Tilsett 5jllI natriumsitratreagens til hver brønn (se anmerkning 2).
10. Tildekk på nytt med platelokk og rist på platerister i minst 15 minutter. 11. Mål absorbans ved 620 nM ved å anvende en egnet plateavleser (f.eks. Victor, Perkin Eimer Life Sciences, Milton Keynes, UK). Under disse betingelsene er kontrollabsorbansen 0,9-1,4, og bakgrunnen er 0,2-0,35, noe som gir et forhold mellom signal og støy på ca. 12. Z'-faktoren beregnet fra data erholdt ved å anvende disse betingelsene,
er mellom 0,6 og 0,9.
Anmerkninger
(1) Polyvinylalkoholen oppløses vanskelig i kokende vann, og omrøring i 2-3 timer er nødvendig. (2) Tidsintervallet mellom tilsetning av malakittgrønt-reagenset og natriumsitratet bør holdes så lavt som mulig for å redusere den ikke-enzymatiske hydrolyse av ATP. Så snart natriumsitratet tilsettes, er
fargen stabil i opptil 4 timer ved romtemperatur.
(3) Forbindelser kan tilsettes til analyseplatene ved å anvende en Biomek FX Robot (Beckman Coulter). En Multidrop 384-dispenser (Thermo
Labsystems, Basingstoke, UK) kan passende anvendes for å tilsette reagenser til platen. (4) Analysebetingelsene ble optimalisert med hensyn til tid, protein- og substratkonsentrasjon for å oppnå minimal proteinkonsentrasjon samtidig som forskjellen mellom signal og støy ble bibeholdt. (5) Forhold mellom signal og støy (S/N) beregnes ved å anvende den følgende ligning:
(S-B)/V(SD i S)<2>+ (SD i B)<2>
(6) For å bestemme spesifikk aktivitet av HSP90 fremstilles en rekke uorganiske fosfatkonsentrasjoner (0-10 uM), og absorbansen ved 620 nm måles som beskrevet. Spesifikk aktivitet beregnes ut fra kalibreringskurven som fås.
Forbindelsene testet i analysen ovenfor ble fastlagt til én av to aktivitets-områder, nemlig A = < 50 nM, B = > 50 |aM, og disse fastleggelsene er rapportert ovenfor.
En vekstinhiberingsanalyse ble også anvendt til evalueringen av kandidat-HSP90-inhibitorer: Fastleggelse av cvtotoksisitet ved hielp av sulforodamin B- analvse ( SRB- analvse) : beregning av 50 % inhibitorkonsentrasion ( IC ™)
Dag 1
1) Bestem celleantall ved hjelp av hemocytometer.
2) Ved å anvende en 8-kanalers multipipettor, tilsett 160jllI av celle-suspensjonen (3600 celler/brønn eller 2 x IO<4>celler/ml) til hver brønn i en 96-brønners mikrotiterplate.
3) Inkuber over natten ved 37 °C i en C02-inkubator.
Dag 2
4) Standardoppløsninger av legemidler fremstilles, og seriefortynninger av hvert legemiddel utføres i medium, hvorved man får slutt - konsentrasjoner i brønner. 5) Ved å anvende en multipipettor, tilsettes 40 jllI legemiddel (ved 5 x sluttkonsentrasjon) til brønner in kvadruplo. 6) Kontrollbrønner er på hver side av 96-brønnersplatene, hvor 40jllI medium tilsettes.
7) Inkuber plater i C02-inkubator i 4 dager (48 timer).
Dag 6
8) Bank medium forsiktig av i avløpsvask og senk platen sakte ned i 10 % iskald trikloreddiksyre (TCA). La det stå i ca. 30 minutter på is. 9) Vask plater tre ganger i ledningsvann ved å senke platene ned i bad av avledningsvann og banke det forsiktig av.
10) Tørk i inkubator.
11) Tilsett 100 jllI 0,4 % SRB i 1 % eddiksyre til hver brønn (bortsett fra den siste raden (høyre side) i 96-brønnersplaten, dette er 0 %-kontrollen, det vil si ikke noe legemiddel, ingen farge. Den første rekken vil være 100 %-kontrollen uten legemiddel, men med farge). La det stå i 15 minutter. 12) Vask bort ubundet SRB-farge med fire vaskinger med 1 % eddiksyre.
13) Tørk plater i inkubator.
14) Oppløseliggjør SRB ved å anvende 100 jllI 10 mM Tris-base og plasser platene på platerister i 5 minutter. 15) Bestem absorbans ved 540 nm ved å anvende en plateavleser. Beregn gjennomsnittlig absorbans for brønner in kvadruplo og uttrykk den som en prosentandel av verdi for kontroll- og ubehandlede brønner. 16) Plott % absorbansverdier versus log i legemiddelkonsentrasjon og
bestem IC50-verdien.
Som en illustrasjon ga forbindelsen ifølge eksempel 2 en IC50-verdi i "A"-området (< 50 |aM) for SRB-vekststans-analysen.
En fluorescenspolariseringsanalyse ble også anvendt til evalueringen av noen av forbindelsene ifølge eksemplene:
Fluorescenspolariseringsanalvse
Fluorescenspolarisering (også kjent som fluorescensanisotropi) måler rotasjonen av en fluorescerende type i oppløsning, hvor desto større molekyl dess mer polarisert fluorescensemisjon.
Når fluoroforen eksiteres med polarisert lys, polariseres også det emitterte lys. Molekylstørrelsen er proporsjonal med polariseringen av fluorescensemisjonen.
Den fluoresceinmerkede probe - RBT0045864-FAM -
binder seg til HSP90 (fullengde-human-, fullengde-gjær- eller N-terminaldomene-HSP90), og anisotropien (rotasjon av probe:protein-komplekset) måles.
Testforbindelse tilsettes til analyseplaten, den får stå og ekvilibrere og anisotropien måles på nytt. En eventuell endring i anisotropi skyldes kompetitiv binding av forbindelse til HSP90, og derved frigivelse av probe.
Materialer
Kjemikalier har den høyeste renhet som er kommersielt tilgjengelig, og alle vandige oppløsninger lages i AR-vann.
1) Costar 96-brønners sort analyseplate nr. 3915.
2) Analysebuffer av (a) 100 mM Tris, pH 7,4, (b) 20 mM KCI, (c) 6 mM
MgCI2, lagret ved romtemperatur.
3) BSA (bovint serumalbumin) 10 mg/ml (New England Biolabs nr.
B9001S). 4) 20 mM probe i 100 % DMSO-standardkonsentrasjon, lagret i mørke ved romtemperatur. Arbeidskonsentrasjon er 200 nM fortynnet i AR-vann og lagret ved 4 °C. Sluttkonsentrasjon i analyse 80 nM. 5) E. co//-uttrykt human fullengde-HSP90-protein, renset > 95 % (se f.eks. Panaretou et al., 1998), og lagret i 50 jllI alikvoter ved -80 °C.
Fremgangsmåte
1) Tilsett 100 pl 1 x buffer til brønner 11A og 12A (= FP BLNK).
2) Fremstill analyseblanding - alle reagenser holdes på is med et lokk på beholderen, ettersom proben er lyssensitiv.
3) Alikvoter 100 ul analyseblanding til alle andre brønner.
4) Lukk platen og oppbevar den i mørke ved romtemperatur i 20 minutter for å ekvilibrere.
Forbindelsesfortvnningsplate - 1 x 3 fortvnningsserier
1) I en klar 96-brønners v-bunnet plate - (nr. VWR 007/008/257) tilsett
10 Ml 100 % DMSO til brønnene Bl-Hll.
2) Til brønnene Al-All tilsett 17,5 ul 100 % DMSO.
3) Tilsett 2,5 ul cpd til Al. Dette gir 2,5 mM (50 x) standard cpd - under antakelse av cpd-er i 20 mM.
4) Gjenta for brønnene A2-A10. Kontroll i kolonnene 11 og 12.
5) Overfør 5 ul fra rad A til rad B - ikke kolonne 12. Bland godt.
6) Overfør 5 ul fra rad B til rad C. Bland godt.
7) Gjenta til rad G.
8) Tilsett ikke noen forbindelse til rad H - dette er 0-raden.
9) Dette gir en 1 x 3 fortynningsserie fra 50 uM til 0,07 uM.
10) I brønn B12 fremstill 20 ul 100 uM standardforbindelse.
11) Etter første inkubasjon avleses analyseplaten på en Fusion o-FP-plateavleser (Packard BioScience, Pangbourne, Berkshire, UK). 12) Etter den første avlesningen tilsettes 2 ul fortynnet forbindelse til hver brønn for kolonnene 1-10. I kolonne 11 (gir standardkurve) tilsett bare forbindelse Bll-Hll. Tilsett 2 ul 100 mM standard cpd til brønnene B12-H12 (er positiv kontroll). 13) Z'-faktoren beregnes fra null-kontroller og positive brønner. Det gir
vanligvis en verdi på 0,7-0,9.
Testede forbindelser i analysen ovenfor ble fastlagt til ett av to aktivitets-områder, nemlig A = < 10^M, B = > 10 nM, og disse fastleggelsene er rapportert ovenfor. Som illustrasjon ga forbindelsen ifølge eksempel 2 en IC50-verdi i "A"-området.
Litteraturhenvisninger
En rekke publikasjoner er sitert ovenfor for mer fullstendig å beskrive og åpenbare oppfinnelsen og den teknikkens stand som oppfinnelsen vedrører. Nedenunder er det gitt fullstendige henvisninger til disse referansene.
Argon, Y. og Simen, B.B., 1999 "Grp94, an ER chaperone with protein and peptide binding properties", Semin. Cell Dev. Biol., vol. 10, s. 495-505.
Bijlmakers, M.-J.J.E., Marsh, M., 2000 "Hsp90 is essential for the synthesis and subsequent membrane association, but not the maintenance, of the Src-kinase p56lck", Molecular Biology of the Cell, vol. 11(5), s. 1585-1595.
Bucci, M., Roviezzo, F., Cicala, C, Sessa, W.C., Cirino, G., 2000 "Geldanamycin, an inhibitor of heat shock protein 90 (Hsp90) mediated signal transduction has anti-inflammatory effects and interacts with glucocorticoid receptor in vivo", Brit. J. Pharmacol., vol 131(1), s. 13-16.
Chen, C-F., Chen, Y., Dai, K.D., Chen, P.-L., Riley, D.J. og Lee, W.-H., 1996, "A new member of the hsp90 family of molecular chaperones interacts with the retinoblastoma protein during mitosis and after heat shock", Mol. Cell. Biol., vol. 16, s. 4691-4699.
Chiosis, G., Timaul, M.N., Lucas, B., Munster, P.N., Zheng, F.F., Sepp-Lozenzino, L og Rosen, N., 2001, "A small molecule designed to bind to the adenine nucleotide pocket of HSP90 causes Her2 degradation and the growth arrest and diffe-rentiation of breast cancer cells", Chem. Biol., vol. 8, s. 289-299.
Conroy, S.E. og Latchman, D.S., 1996, "Do heat shock proteins have a role in breast cancer?", Brit. J. Cancer, vol. 74, s. 717-721.
Felts, SJ., Owen BAL, Nguyen, P., Trepel, J., Donner, D.B. og Toft, D.O., 2000, "The HSP90-related protein TRAP1 is a mitochondrial protein with distinct functional properties", J. Biol. Chem., vol. 5, s. 3305-3312.
Fuller, W., Cuthbert, A.W., 2000, "Post-translational disruption of the delta F508 cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-molecular Chaperone complex with geldanamycin stabilizes delta F508 CFTR in the rabbit reticulocyte lysate", J. Biol. Chem., vol 275(48), s. 37462-37468.
Hickey, E., Brandon, S.E., Smale, G., Lloyd, D. og Weber, L.A., 1999, "Sequence and regulation of a gene encoding a human 89-kilodalton heat shock protein", Mol. Cell. Biol., vol. 9, s. 2615-2626.
Hoang, A.T., Huang, J., Rudra-Gonguly, N., Zheng, J., Powell, W.C., Rabindron, S.K., Wu, C. og Roy-Burman, P., 2000, "A novel association between the human heat shock transcription factor I (HSF1) and prostate adenocarcinoma, Am. J. Pathol., vol. 156, s. 857-864.
Hostein, I., Robertson, D., Di Stefano, F., Workman, P. og Clarke, P.A., 2001, "Inhibition of signal transduction by the HSP90 inhibitor 17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin results in cytostasis and apoptosis", Cancer Res., vol. 61, s. 4003-4009.
Hur, E., Kim, H.-H., Choi, S.M., Kim, J.H., Yim, S., Kwon, H.J., Choi, Y., Kim, D.K., Lee, M-O, Park, H., 2002, "Reduction of hypoxia-induced transcription through the repression of hypoxia-inducible facto r-la/a ry I hydrocarbon receptor nuclear translocator DNA binding by the 90-kDa heat-shock protein inhibitor radicicol", Mol. Pharmacol., vol 62(5), s. 975-982.
Hutter et al., 1996, Circulation, vol. 94, s. 1408.
Jameel, A., Skilton, R.A., Campbell, T.A., Chander, S.K., Coombes, R.C. og Luqmani, Y.A., 1992, "Clinical and biological significance of HSP89a in human breast cancer", Int. J. Cancer, vol. 50, s. 409-415.
Jolly, C. og Morimoto, R.I., 2000, "Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death", J. Nati. Cancer Inst., vol. 92, s. 1564-1572.
Kawanishi, K., Shiozaki, H., Doki Y., Sakita, I., Inoue, M., Yano, M., Tsujinata, T., Shamma, A. og Monden, M., 1999, "Prognostic significance of heat shock proteins 27 and 70 in patients with squamous cell carcinoma of the esophagus", Cancer, vol. 85, s. 1649-1657.
Kelland, LR., Abel, G., McKeage, M.J., Jones, M., Goddard, P.M., Valenti, M., Murrer, B.A. og Harrap, K.R., 1993, "Preclinical antitumour evaluation of bis-acetalo-amino-dichloro-cyclohexylamine platinum (IV): an orally active platinum drug", Cancer Research, vol. 53, s. 2581-2586.
Kelland, LR., Sharp, S.Y., Rogers, P.M., Myers, T.G. og Workman, P., 1999, "DT-diaphorase expression and tumor cell sensitivity to 17-allylamino, 17-demethoxygeldanamycin, an inhibitor of heat shock protein 90", J. Nati. Cancer Inst., vol. 91, s. 1940-1949.
Kurebayashi, J., Otsuki, T., Kurosumi, M., Soga, S., Akinaga, S., Sonoo, H., 2001, "A radicicol derivative, KF58333, inhibits expression of hypoxia-inducible factor-la and vascular endothelial growth factor, angiogenesis and growth of human breast cancer xenografts", Jap. J. Cancer Res., vol 92(12), 1342-1351.
Kwon, H.J., Yoshida, M., Abe, K., Horinouchi, S. og Bepple, T., 1992, "Radicicol, an agent inducing the reversal of transformed phentoype of src-transformed fibroblasts, Biosci., Biotechnol., Biochem., vol. 56, s. 538-539.
Lebeau, J., Le Cholony, C, Prosperi, M.T. og Goubin, G., 1991, "Constitutive overexpression of 89 kDa heat shock protein gene in the HBL100 mammary cell line converted to a tumorigenic phenotype by the EJ/T24 Harvey-ras oncogene", Oncogene, vol. 6, s. 1125-1132.
Marcu, M.G., Chadli, A., Bouhouche, I., Catelli, M. og Neckers, L., 2000a, "The heat shock protein 90 antagonist novobiocin interacts with a previously unrecognized ATP-binding domain in the carboxyl terminus of the chaperone", J. Biol. Chem., vol. 275, s. 37181-37186.
Marcu, M.G., Schulte, T.W. og Neckers, L., 2000b, "Novobiocin and related coumarins and depletion of heat shock protein 90-dependent signaling proteins", J. Nati. Cancer Inst., vol. 92, s. 242-248.
Martin, K.J., Kritzman, B.M., Price, L.M., Koh, B., Kwan, C.P., Zhang, X., MacKay, A., 0'Hare, M.J., Kaelin, C.M., Mutter, G.L., Pardee, A.B. og Sager, R., 2000, "Linking gene expression patterns to therapeutic groups in breast cancer", Cancer Res., vol. 60, S. 2232-2238.
Neckers, L., Schulte, T.W. og Momnaaugh, E., 1999, "Geldanamycin as a potential anti-cancer agent: its molecular target and biochemical activity", Invest. New Drugs, vol. 17, s. 361-373.
Page, J., Heath, J., Fulton, R., Yalkowsky, E., Tabibi E., Tomaszewski, J., Smith, A. og Rodman, L., 1997, "Comparison of geldanamycin (NSC-122750) and 17-allylaminogeldanamycin (NSC-330507D) toxicity in rats", Proe. Am. Assoc. Cancer Res., vol. 38, s. 308.
Panaretou, B., Prodromou, C, Roe, S.M., 0'Brien, R., Ladbury, J.E., Piper, P.W. og Pearl, L.H., 1998, "ATP binding and hydrolysis are essential to the function of the HSP90 molecular chaperone in vivo", EMBO J., vol. 17, s. 4829-4836.
Plumier et al., 1997, Cell. Stress Chap., vol. 2, s. 162.
Pratt, W.B., 1997 "The role of the HSP90-based chaperone system in signal transduction by nuclear receptors and receptors signalling via MAP kinase", Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., vol. 37, s. 297-326.
Prodromou, C. og Pearl, L.H., 2000a, "Structure and in vivo function of HSP90", Curr. Opin.Struct. Biol., vol. 10, s. 46-51.
Prodromou, C, Roe, S.M., 0'Brien, R., Ladbury, J.E., Piper, P.W. og Pearl, L.H., 1997, "Identification and structural characterization of the ATP/ADP-binding site in the HSP90 molecular chaperone", Cell, vol. 90, s. 65-75.
Prodromou, C, Panaretou, B., Chohan, S., Siligardi, G., 0'Brien, R., Ladbury, J.E., Roe, S.M., Piper, P.W. og Pearl, L.H., 2000b, "The ATPase cycle of HSP90 drives a molecular 'damp' via transient dimerization of the N-terminal domains", EMBO J., vol. 19, s. 4383-4392.
Rajder et al., 2000, Ann. Neurol., vol. 47, s. 782.
Roe, S.M., Prodromou, C, 0'Brien, R., Ladbury, J-E., Piper, P.W. og Pearl, L.H., 1999, "Structural basis for inhibition of the HSP90 molecular chaperone by the antitumour antibiotics radicicol and geldanamycin", J. Med. Chem., vol. 42, s. 260-266.
Rutherford, S.L. og Lindquist, S., 1998, "HSP90 as a capacitor for morphological evolution, Nature, vol. 396, s. 336-342.
Schulte, T.W., Akinaga, S., Murakata, T., Agatsuma T., Sugimoto, S., Nakano, H., Lee, Y.S., Simen, B.B., Argon, Y., Felts, S., Toft, D.O., Neckers, L.M. og Sharma, S.V., 1999, "Interaction of radicicol with members of the heat shock protein 90 family of molecular chaperones", Mol. Endocrinology, vol. 13, s. 1435-1448.
Schulte, T.W., Akinaga, S., Soga, S., Sullivan, W., Sensgard, B., Toft, D. og Neckers, L.M., 1998, "Antibiotic radicicol binds to the N-terminal domain of HSP90 and shares important biologic activities with geldanamcyin", Cell Stress and Chaperones, vol. 3, s. 100-108.
Schulte, T.W. og Neckers, L.M., 1998, "The benzoquinone ansamycin 17-allylamino-17-demethoxygeldanamcyin binds to HSP90 and shares important biologic activities with geldanamycin", Cancer Chemother. Pharmacol., vol. 42, s. 273-279.
Sittler et al., 2001, Hum. Mol. Genet., vol.10, s.1307.
Smith, D.F., 2001, "Chaperones in signal transduction", in: Molecular chaperones in the cell (P. Lund, red., Oxford University Press, Oxford and NY), s. 165-178.
Smith, D.F., Whitesell, L. og Katsanis, E., 1998, "Molecular chaperones: Biology and prospects for pharmacological intervention", Pharmacological Reviews, vol. 50, s. 493-513.
Song, H.Y., Dunbar, J.D., Zhang, Y.X., Guo, D. og Donner, D.B., 1995, "Identification of a protein with homology to hsp90 that binds the type 1 tumour necrosis factor receptor", J. Biol. Chem., vol. 270, s. 3574-3581.
Stebbins, C.E., Russo, A., Schneider, C, Rosen, N., Hartl F.U. og Pavletich, N.P., 1997, "Crystal structure of an HSP90-geldanamcyin complex: targeting of a protein chaperone by an antitumor agent", Cell, vol. 89, s. 239-250.
Supko, J.G., Hickman, R.L, Grever, M.R. og Malspeis, L, 1995, "Preclinical pharmacologic evaluation of geldanamycin as an antitumour agent", Cancer Chemother. Pharmacol., vol. 36, s. 305-315.
Tratzelt et al., 1995, Proe. Nat. Acad. Sei., vol. 92, s. 2944.
Trost et al., 1998, J. Clin. Invest., vol. 101, s. 855.
Tytell, M. og Hooper, P.L., 2001, "Heat shock proteins: new keys to the development of cytoprotective therapies", Emerging Therapeutic Targets, vol. 5, s. 267-287.
Uehara, U., Hori, M., Takeuchi, T. og Umezawa, H., 1986, "Phenotypic change from transformed to normal induced by benzoquinoid ansamycins accompanies inactivation of p60src in rat kidney cells infected with Rous sarcoma virus", Mol. Cell. Biol., vol. 6, s. 2198-2206.
Waxman, Lloyd H., Inhibiting hepatitis C virus processing and replication (Merck &Co., Inc., USA). PCT internasjonal søknad (2002), WO 0207761.
Winklhofer et al. 2001, J. Biol. Chem., vol. 276, 45160.
Whitesell, L., Mimnaugh, E.G., De Costa, B., Myers, CE. og Neckers, L.M., 1994, "Inhibition of heat shock protein HSP90-pp60v-src heteroprotein complex formation by benzoquinone ansamycins: essential role for stress proteins in oncogenic transformation", Proe. Nati. Acad. Sei. USA., vol. 91, s. 8324-8328.
Yorgin et al. 2000, "Effects of geldanamycin, a heat-shock protein 90-binding agent, on T cell function and T cell nonreceptor protein tyrosine kinases", J. Immunol., vol 164(6), s. 2915-2923.
Young, J.C, Moarefi, I. og Hartl, F.U., 2001 "HSP90: a specialized but essential protein-folding tool", J. Cell. Biol., vol. 154, s. 267-273.
Zhao, J.F., Nakano, H. og Sharma, S., 1995, "Suppression of RAS and MOS transformation by radicicol", Oncogene, vol. 11, s. 161-173.

Claims (27)

1. Forbindelse, karakterisert vedat den har formel (A) eller (B)
eller et salt, hydrat eller solvat derav, hvor Ri er en gruppe med formel (IB)
hvor i hvilken som helst kompatibel kombinasjon R er én eller flere eventuelle substituenter, Alk<1>og Alk2 er eventuelt substituerte toverdige Ci-C6-alkylen- eller C2-C6-alkenylenradikaler, p, r og s er uavhengig av hverandre 0 eller 1, Z er -O-, -S-, -(C=0)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=0)0-, -C(=0)NR<A->, -C(=S)NR<A->, -S02NR<A->, -NR<A>C(=0)-, -NR<A>S02- eller -NR<A->, hvor RA er hydrogen eller Ci-C6-alkyl, og Q er hydrogen eller et eventuelt substituert karbosyklisk eller heterosyklisk radikal; R2er (i) en gruppe med formel (IA):
hvor i hvilken som helst kompatibel kombinasjon Ar<1>er et eventuelt substituert aryl- eller heteroarylradikal, ogAlk<1>, Alk<2>, p, r, s, Z og Q er som definert i forhold til Ri, (ii) et karboksamidradikal, eller (iii) en ikke-aromatisk, karbosyklisk eller heterosyklisk ring hvor et ringkarbon eventuelt er substituert, og/eller hvor et ringnitrogen eventuelt er substituert med en gruppe med formel -(Alk^p-CZX-CAIk^s-Q, hvor Q, Alk<1>, Alk<2>, Z, p, r og s er som definert ovenfor i forhold til gruppe (IA); og R3er en karboksyl-, karboksamid- eller karboksylester-gruppe, hvor "karbosyklisk" betyr et syklisk radikal hvis ringatomer alle er karbon, og omfatter monosyklisk aryl-, sykloalkyl- og sykloalkenyl radikaler; hvor "heterosyklyl" eller "heterosyklisk" betyr et mono-, bi- eller trisyklisk, aromatisk radikal som inneholder ett eller flere heteroatomer valgt fra S, N og O; et mono-, bi-eller trisykliske, ikke-aromatisk radikal inneholdende ett eller flere heteroatomer valgt fra S, N og O; og grupper som består av et monosyklisk, ikke-aromatisk radikal inneholdende en eller flere slike heteroatomer som er kovalent bundet til et annen slikt radikal, eller til et monosyklisk, karbosyklisk radikal; hvor "aryl" betyr et mono-, bi, eller trisyklisk, karbosyklisk aromatisk radikal; hvor uttrykket "eventuelt substituert" betyr: substituert med opp til 4 kompatible substituenter, som hver uavhengig av hverandre er valgt blant (d-C6)alkyl, (Ci-C6) alkoksy, hydroksy, hydroksy(Ci-C6)alkyl, merkapto, merkapto(Ci-C6)alkyl, (Ci-C6)alkyltio, halo (inkludert fluor, brom og klor), trifluormetyl, trifluormetoksy, nitro, nitril(-CN), okso, fenyl, -COOH, -COOR<A>, -CORA, -S02R<A>, -CONH2, -S02NH2, -CONHR<A>, -S02NHR<A>, -CONR<A>R<B>, -S02NRAR<B>, -NH2, -NHR<A>, -NR<A>R<B>, -OCONH2, -OCONHR<A>, -OCONR<A>R<B>, -NHCOR<A>, -NHCOOR<A>, -NR<B>COOR<A>, -NHS02OR<A>, -NRBS02OH, -NRBS02ORA,-NHCONH2, -NR<A>CONH2, -NHCONHR<8>, -NR<A>CONHR<B>, -NHCONR<A>R<B>og -NR<A>CONR<A>R<B>, hvor RA og R<B>uavhengig av hverandre er en (Ci-C6)alkylgruppe, og uttrykket "karboksamid" betyr: en gruppe med formel -CONH2eller en metylaminokarbonyl-, etylaminokarbonyl- eller isopropylamino-karbonylgruppe, eller en gruppe med formel -CONR<B>(Alk)nR<A> hvor Alk er et eventuelt substituert toverdig alkylen-, alkenylen- eller alkynylenradikal, n er 0 eller 1, R<B>er hydrogen eller en Ci-C6-alkyl- eller Ci-C6-alkenylgruppe, RA er hydroksy eller eventuelt substituert karbosyklisk gruppe eller heterosyklylgruppe, eller RA og R<B>danner sammen med nitrogenatomet som de er bundet til, en N-heterosyklisk ring som eventuelt kan inneholde ett eller flere ytterligere heteroatomer valgt blant O, S og N, og som eventuelt kan være substituert på ett eller flere ring-C- eller -N-atomer.
2. Forbindelse ifølge krav 1, hvor R3er en karboksamidgruppe.
3. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor forbindelsen er en med formel (A).
4. Forbindelse ifølge hvilket som helst av de forutgående krav, hvor ringkarbonatomet ved siden av hydroksylgruppen i radikal (IB) er usubstituert.
5. Forbindelse ifølge hvilket som helst av de forutgående krav, hvor hver av p, r og s i Ri er 0, og Q er hydrogen.
6. Forbindelse ifølge krav 2 eller hvilket som helst av kravene 3-5 når de er avhengige av krav 2, hvor Ri er eventuelt substituert fenyl, hvor uttrykket "eventuelt substituert" har betydningen definert i krav 1.
7. Forbindelse ifølge krav 5, hvor Ri er 2-hydroksyfenyl, eventuelt substituert videre med én eller flere av hydroksy, metyl, etyl, metoksy, etoksy, klor og brom.
8. Forbindelse ifølge krav 5, hvor Rx er 2,4-dihydroksyfenyl, substituert i 5-stillingen med metyl, etyl, isopropyl, isobutyl, tert.-butyl, klor eller brom.
9. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4, hvor p, r og s i Ri hver er 0, og Q er en eventuelt substituert karbosyklisk eller heterosyklisk ring, hvor uttrykket "eventuelt substituert" har betydningen definert i krav 1.
10. Forbindelse ifølge krav 9, hvor Q er en eventuelt substituert fenyl- eller pyridylring, hvor uttrykket "eventuelt substituert" har betydningen definert i krav 1.
11. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4, hvor p og/eller s i Ri hver er 1, og r er 0.
12. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4, hvor hver av p, r og s i Ri er 1.
13. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-4, hvor p og s i Ri hver er 0, og r er 1.
14. Forbindelse ifølge hvilket som helst av de forutgående krav, hvor R2er eventuelt substituert 2-, 3- eller 4-pyridyl, 2- eller 3-furanyl, 2- eller 3-tienyl eller tiazolyl, hvor uttrykket "eventuelt substituert" har betydningen definert i krav 1.
15. Forbindelse ifølge krav 14, hvor substituenter som er til stede i R2, er valgt blant metoksy, etoksy, metylendioksy, etylendioksy, fluor, klor, brom og trifluormetyl.
16. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-14, hvor R2er fenyl substituert i 4-stillingen med metoksy, etoksy, fluor, klor, brom, piperazinyl, N-metylpiperazinyl eller piperidinyl.
17. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-13, hvor R2har delformelen:
hvor den substituerte aminogruppe -NR<10>R<U>er valgt blant morfolinyl, piperidinyl, piperazinyl, pyrrolidinyl, etylamino, isopropylamino, dietylamino, sykloheksylamino, syklopentylamino, metoksyetylamino, piperidin-4-yl, N-acetylpiperazinyl, metylsulfonylamino, tiomorfolinyl, tiomorfolinyldioksid, 4-hydroksyetylpiperidinyl og 4-hydroksypiperidinyl.
18. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 2-17, hvor R3er etylaminokarbonyl eller isopropylaminokarbonyl.
19. Forbindelse ifølge krav 1, hvor forbindelsen har formel (ID) eller formel B-regioisomeren derav
hvor hver R uavhengig av hverandre er en eventuell substituent valgt blant "eventuelle substituenter" som definert i krav 1, og R3er en karboksamidgruppe som definert i krav 1.
20. Forbindelse ifølge krav 1, hvor forbindelsen har formel (IE) eller formel B-regioisomeren derav
hvor R3er en karboksamidgruppe som definert i krav 1, R9er -CH2NR<10>R<U>eller -NR<10>R<U>, hvor den substituerte aminogruppe -NR<10>R<U>er en oppløseliggjørende gruppe valgt blant morfolinyl, piperidinyl, piperazinyl, pyrrolidinyl, etylamino, isopropyl amino, dietylamino, sykloheksylamino, syklopentylamino, metoksyetylamino, piperidin-4-yl, N-acetylpiperazinyl, N-metylpiperazinyl, metylsulfonylamino, tiomorfolinyl, tiomorfolinyldioksid, 4-hydroksyety-lpiperidinyl og 4-hydroksypiperidinyl, og R8er en eventuell substituent valgt blant "eventuelle substituenter" som definert i krav 1.
21. Forbindelse ifølge krav 20, hvor R3er etylaminokarbonyl (CH3CH2NHC(=0)-) eller isopropylaminokarbonyl ((CH3)2CHNHC(=0)-), den substituerte aminogruppe -NR<1>0R<U>i R9er morfolinyl, piperidinyl, piperazinyl, pyrrolidinyl, etylamino, isopropylamino, dietylamino, sykloheksylamino, syklopentylamino, metoksyetylamino, piperidin-4-yl, N-acetylpiperazinyl, N-metylpiperazinyl, metylsulfonylamino, tiomorfolinyl, tiomorfolinyldioksid, 4-hydroksyetylpiperidinyl eller 4- hydroksypiperidinyl, og R8er etyl, isopropyl, brom eller klor.
22. Forbindelse ifølge krav 1, hvor den er valgt blant: 5- (2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5- (2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)fenyl] isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-etylaminometylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-[4-(isopropylaminometyl)fenyl]isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 4-(4-sykloheksylaminometylfenyl)-5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 4- [4-(tert.-butylaminometyl)fenyl]-5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5- (2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-{4-[(2-metoksy-etylamino)metyl]fenyl }isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreisopropylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropylfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)fenyl] isoksazol-3-karboksylsyreisopropylamid 5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)fenyl] isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-isobutylfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-tert.-butyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-dietylaminometylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 3- (5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-5-karboksylsyreetylamid 4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(4,6-dihydroksy-2'-metyl-bifenyl-3-yl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 4-(4-dietylaminometylfenyl)-5-(4'-fluor-4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5- (2'-fluor-4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)-4-(4-pyrrolidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(4,6-dihydroksybifenyl-3-yl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(2,4-dihydroksy-5-fenetylfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-piperidin-l-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreisopropylamid 4- (4-dietylaminometylfenyl)-5-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5- (5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)fenyl]isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-etyl-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-dietylaminometylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-[4-(4-metylpiperazin-l-ylmetyl)fenyl]isoksazol-3-karboksylsyreetylamid 5-(5-klor-2,4-dihydroksyfenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetylfenyl)isoksazol-3-karboksylsyreetylamid, og salter, hydrater og solvater derav.
23. Forbindelse ifølge krav 1, hvor den er 5-(2,4-dihydroksy-5-isopropyl-fenyl)-4-(4-morfolin-4-ylmetyl-fenyl)-isoksazol-3-karboksylsyreetylamid, eller et salt, hydrat eller solvat derav.
24. Forbindelse ifølge hvilket som helst av de forutgående krav, for anvendelse innen human- eller veterinærmedisinen.
25. Farmasøytisk preparat, karakterisert vedat det omfatter en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-23, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer.
26. Farmasøytisk preparat ifølge krav 25, hvor det er i form av en oppløsning eller suspensjon av forbindelsen i en steril, fysiologisk akseptabel bærer.
27. Farmasøytisk preparat ifølge krav 25, hvor det er i form av en oppløsning eller suspensjon av forbindelsen i en steril, vandig saltoppløsning.
NO20054195A 2003-02-11 2005-09-09 Isoksazolforbindelser, og farmasøytisk preparat som omfatter forbindelsene, som inhibitorer for varmesjokkproteiner NO335001B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0303105A GB0303105D0 (en) 2003-02-11 2003-02-11 Isoxazole compounds
GBGB0306560.4A GB0306560D0 (en) 2003-03-21 2003-03-21 Isoxazole compounds
GB0313751A GB0313751D0 (en) 2003-06-13 2003-06-13 Isoxazole compounds
PCT/GB2004/000506 WO2004072051A1 (en) 2003-02-11 2004-02-09 Isoxazole compounds as inhibitors of heat shock proteins

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20054195D0 NO20054195D0 (no) 2005-09-09
NO20054195L NO20054195L (no) 2005-11-09
NO335001B1 true NO335001B1 (no) 2014-08-18

Family

ID=32872455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20054195A NO335001B1 (no) 2003-02-11 2005-09-09 Isoksazolforbindelser, og farmasøytisk preparat som omfatter forbindelsene, som inhibitorer for varmesjokkproteiner

Country Status (19)

Country Link
US (6) US7705027B2 (no)
EP (1) EP1611112B1 (no)
JP (1) JP4921162B2 (no)
KR (1) KR101166749B1 (no)
CN (1) CN1771235B (no)
AU (1) AU2004210779B2 (no)
BR (1) BRPI0407403B1 (no)
CA (1) CA2515726C (no)
CY (1) CY1113761T1 (no)
DK (1) DK1611112T3 (no)
EA (1) EA009919B1 (no)
ES (1) ES2393483T3 (no)
HK (1) HK1091831A1 (no)
MX (1) MXPA05008335A (no)
NO (1) NO335001B1 (no)
NZ (1) NZ541479A (no)
PT (1) PT1611112E (no)
SI (1) SI1611112T1 (no)
WO (1) WO2004072051A1 (no)

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI332943B (en) 2001-07-10 2010-11-11 Synta Pharmaceuticals Corp Taxol enhancer compounds
TWI297335B (en) 2001-07-10 2008-06-01 Synta Pharmaceuticals Corp Taxol enhancer compounds
TWI252847B (en) 2001-07-10 2006-04-11 Synta Pharmaceuticals Corp Synthesis of taxol enhancers
TWI330079B (en) 2003-01-15 2010-09-11 Synta Pharmaceuticals Corp Treatment for cancers
BRPI0407403B1 (pt) 2003-02-11 2022-07-19 Cancer Research Technology Ltd Compostos de isoxazol e composição farmacêutica
GB0315111D0 (en) * 2003-06-27 2003-07-30 Cancer Rec Tech Ltd Substituted 5-membered ring compounds and their use
JPWO2005063222A1 (ja) * 2003-12-26 2007-07-19 協和醗酵工業株式会社 Ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤
MXPA06013705A (es) 2004-05-28 2007-02-13 Unigen Pharmaceuticals Inc Diarilalcanos como potentes inhibidores de enzimas binucleares.
GB0412769D0 (en) 2004-06-08 2004-07-07 Novartis Ag Organic compounds
ME01644B (me) 2004-06-23 2014-09-20 Synta Pharmaceuticals Corp BIS(TIO-HIDRAZID AMIDNE) SOLl ZA TRETMAN KANCERA
RU2375384C2 (ru) 2004-09-22 2009-12-10 Ниппон Каяку Кабусики Кайся Новый блок-сополимер, мицеллярный препарат и противораковое средство, включающее мицеллярный препарат в качестве активного ингредиента
EP1813270A4 (en) 2004-11-09 2009-07-01 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROTEIN INHIBITORS OF THE HSP90 FAMILY
EP2295416B1 (en) 2004-11-18 2016-01-27 Synta Pharmaceuticals Corp. Triazole compounds that modulate HSP90 activity
MX2007009888A (es) 2005-02-17 2007-10-16 Synta Pharmaceuticals Corp Compuestos para el tratamiento de trastornos proliferativos.
DE102005007304A1 (de) * 2005-02-17 2006-08-24 Merck Patent Gmbh Triazolderivate
FR2882361A1 (fr) * 2005-02-22 2006-08-25 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de 3-aryl-1,2-benzisoxazole, compositions les contenant et leur utilisation
JP4956737B2 (ja) * 2005-02-23 2012-06-20 国立大学法人名古屋大学 抗ポリグルタミン病剤
US8399464B2 (en) 2005-03-09 2013-03-19 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha HSP90 inhibitor
CN1834095B (zh) 2005-03-18 2011-04-20 中国科学院上海药物研究所 一类非核苷类抗病毒抑制剂及其制备方法和用途
JP2008137894A (ja) * 2005-03-22 2008-06-19 Nippon Kayaku Co Ltd 新規なアセチレン誘導体
FR2884252B1 (fr) 2005-04-08 2007-05-18 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives d'isoindoles, compositions les contenant, leur preparation et leurs utilisations pharmaceutiques notamment en tant qu'inhibiteurs d'activites de la proteine chaperone hsp90
TWI378090B (en) * 2005-04-13 2012-12-01 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
CA2604907A1 (en) 2005-04-15 2006-10-26 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination cancer therapy with bis(thiohydrazide) amide compounds
FR2885904B1 (fr) 2005-05-19 2007-07-06 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives du fluorene, compositions les contenant et utilisation
WO2006126751A1 (en) * 2005-05-25 2006-11-30 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology New diaryl-isoxazole derivatives, and pharmaceutical compositions containing the same for the prevention and the treatment of cancers
CA2618628C (en) 2005-08-18 2014-11-18 Synta Pharmaceuticals Corp. Triazole compounds that modulate hsp90 activity
GB0603880D0 (en) * 2006-02-27 2006-04-05 Novartis Ag Organic compounds
US7754725B2 (en) 2006-03-01 2010-07-13 Astex Therapeutics Ltd. Dihydroxyphenyl isoindolymethanones
WO2007111211A1 (ja) 2006-03-28 2007-10-04 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha タキサン類の高分子結合体
US20070259820A1 (en) * 2006-05-03 2007-11-08 The Regents Of The University Of Michigan Methods and reagents for activating heat shock protein 70
KR20090009241A (ko) 2006-05-18 2009-01-22 니폰 가야꾸 가부시끼가이샤 포도필로톡신류의 고분자 결합체
MX2009001877A (es) 2006-08-21 2009-03-02 Synta Pharmaceuticals Corp Compuestos para el tratamiento de trastornos proliferativos.
AU2007290490B2 (en) 2006-08-31 2011-09-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination with bis(thiohydrazide amides) for treating cancer
WO2008033449A2 (en) * 2006-09-14 2008-03-20 Synta Pharmaceuticals Corp. Compounds for the treatment of angiogenesis
EP2070971B1 (en) 2006-10-03 2016-06-22 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Compound of resorcinol derivative with polymer
WO2008044027A2 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds having hsp90 inhibitory or modulating activity
WO2008044041A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
GB0620259D0 (en) 2006-10-12 2006-11-22 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
JP5528807B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-25 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
JP5721949B2 (ja) 2006-10-12 2015-05-20 アステックス、セラピューティックス、リミテッドＡｓｔｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ 複合薬剤
JP5518478B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-11 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
WO2008056596A1 (en) 2006-11-06 2008-05-15 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymeric derivative of nucleic acid metabolic antagonist
WO2008056654A1 (en) 2006-11-08 2008-05-15 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymeric derivative of nucleic acid metabolic antagonist
US7799954B2 (en) 2006-11-17 2010-09-21 Abraxis Bioscience, Llc Dicarbonyl derivatives and methods of use
JP2010520176A (ja) * 2007-03-01 2010-06-10 ノバルティス アーゲー ５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルアミドの酸付加塩、水和物および多形、ならびにこれらの形態を含む製剤
CN101796043A (zh) 2007-07-25 2010-08-04 霍夫曼-拉罗奇有限公司 苯并呋喃-和苯并[b]噻吩-2-羧酸酰胺衍生物及其作为阻胺3受体调节剂的应用
EP3311813B1 (en) 2007-08-27 2019-08-07 Dart Neuroscience (Cayman) Ltd Therapeutic isoxazole compounds
WO2009026658A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 The University Of Sydney Ppar agonists
JP5349318B2 (ja) 2007-09-28 2013-11-20 日本化薬株式会社 ステロイド類の高分子結合体
WO2009049305A2 (en) 2007-10-12 2009-04-16 Arqule, Inc. 5- (2-hydroxyphenyl) tetrazoles as hsp90 inhibitors against cancer
TW200922595A (en) * 2007-10-12 2009-06-01 Novartis Ag Organic compounds
BRPI0817897A2 (pt) * 2007-11-02 2019-09-24 Methylgene Inc composto, composição, e, métodos de inibição da atividade hdac, e de tratamento de uma doença responsiva a um inibidor de atividade hdac
GB0722680D0 (en) * 2007-11-19 2007-12-27 Topotarget As Therapeutic compounds and their use
US8920788B2 (en) 2008-03-18 2014-12-30 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of physiologically active substances
GB0806527D0 (en) 2008-04-11 2008-05-14 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
LT5623B (lt) 2008-04-30 2010-01-25 Biotechnologijos Institutas, , 5-aril-4-(5-pakeistieji 2,4-dihidroksifenil)-1,2,3-tiadiazolai kaip hsp90 šaperono slopikliai ir tarpiniai junginiai jiems gauti
WO2009136572A1 (ja) 2008-05-08 2009-11-12 日本化薬株式会社 葉酸若しくは葉酸誘導体の高分子結合体
US20110124634A1 (en) * 2008-05-13 2011-05-26 Poniard Pharmaceuticals, Inc. Bioactive compounds for treatment of cancer and neurodegenerative diseases
TWI450898B (zh) 2008-07-04 2014-09-01 Sigma Tau Res Switzerland Sa 具有抗腫瘤活性之芳基異唑化合物
AU2009274158C1 (en) 2008-07-21 2019-09-05 Unigen, Inc. Series of skin-whitening (lightening) compounds
MX2011005667A (es) * 2008-11-28 2011-06-16 Novartis Ag Combinacion farmaceutica que comprende un inhibidor de hsp90 y un inhibidor de mtor.
KR20110103980A (ko) * 2008-11-28 2011-09-21 노파르티스 아게 피리도〔4,3-ｄ〕피리미딘 유래의 ｈｓｐ90-억제제 및 ｈｅｒ2 억제제를 포함하는 제약 조합물
WO2010121963A1 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Resorcinol derivatives as hsp90 inhibitors
EP2431403B1 (en) 2009-05-15 2016-09-28 Nipponkayaku Kabushikikaisha Polymer conjugate of bioactive substance having hydroxy group
JPWO2011040421A1 (ja) 2009-09-29 2013-02-28 武田薬品工業株式会社 スクリーニング方法
PL2488873T3 (pl) 2009-10-16 2016-01-29 Novartis Ag Biomarkery odpowiedzi farmakodynamicznej wobec guza
CN102753546A (zh) * 2010-02-17 2012-10-24 日东制药株式会社 新型5-元杂环衍生物及其制备方法
US9205086B2 (en) 2010-04-19 2015-12-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Cancer therapy using a combination of a Hsp90 inhibitory compounds and a EGFR inhibitor
EP2641605B1 (en) 2010-11-17 2018-03-07 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer derivative of cytidine metabolism antagonist
KR102113823B1 (ko) 2011-03-24 2020-05-21 유니젠, 인크. 디아릴프로판의 제조를 위한 화합물 및 방법
WO2013015661A2 (en) * 2011-07-28 2013-01-31 Ildong Pharm Co.,Ltd. Novel prodrugs of 5-(2,4-dihydroxy-5-isopropylphenyl)-n-ethyl-4-(5-methyl1-1,2,4-oxadiazol-3-yl)isoxazole-3-carboxamide
CN102351655A (zh) * 2011-08-18 2012-02-15 杭州澳赛诺化工有限公司 一种4-异丙基间苯二酚的合成方法
CA2847114C (en) 2011-09-11 2018-08-21 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Method for manufacturing block copolymer
KR20140078656A (ko) 2011-10-14 2014-06-25 노파르티스 아게 증식성 질환의 치료를 위한 hsp90 억제제와 조합된 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아 유도체
CN103086994A (zh) * 2011-10-31 2013-05-08 上海壹志医药科技有限公司 异噁唑衍生物的盐
WO2013067162A1 (en) 2011-11-02 2013-05-10 Synta Pharmaceuticals Corp. Cancer therapy using a combination of hsp90 inhibitors with topoisomerase i inhibitors
WO2013067165A1 (en) 2011-11-02 2013-05-10 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination therapy of hsp90 inhibitors with platinum-containing agents
WO2013074594A1 (en) 2011-11-14 2013-05-23 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination therapy of hsp90 inhibitors with braf inhibitors
CA2890699A1 (en) 2012-11-07 2014-05-15 Novartis Ag Combination therapy
WO2014074778A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Jacobus Pharmaceutical Company, Inc. Aryl derivatives and uses thereof
RS59690B1 (sr) 2012-11-09 2020-01-31 Medicines For Malaria Venture Mmv Derivativi heteroarila i njihova upotreba
AU2014229240B2 (en) * 2013-03-15 2017-06-15 Novartis Ag Biomarkers of tumor pharmacodynamic response
AU2014302458A1 (en) * 2013-06-26 2015-12-24 Proteostasis Therapeutics, Inc. Methods of modulating CFTR activity
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
ME03558B (me) 2014-03-14 2020-07-20 Novartis Ag Molekuli anti-lag-3 antiтela i njihove upotrebe
CA2952862A1 (en) * 2014-06-19 2015-12-23 Proteostasis Therapeutics, Inc. Compounds, compositions and methods of increasing cftr activity
DK3202766T3 (da) 2014-10-01 2020-03-23 Daiichi Sankyo Co Ltd Isoxazolderivat som muteret isocitratdehydrogenase 1-inhibitor
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
UY36351A (es) 2014-10-14 2016-06-01 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 y usos de las mismas
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
CN104725329B (zh) * 2015-01-13 2017-01-18 陕西科技大学 一种具有抗肿瘤活性的异恶唑羧酸类化合物及其合成方法
CA2974756A1 (en) * 2015-01-22 2016-07-28 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Resorcinol derivative as hsp90 inhibitors
JO3746B1 (ar) 2015-03-10 2021-01-31 Aduro Biotech Inc تركيبات وطرق لتنشيط الإشارات المعتمدة على "منبه أو تحفيز جين انترفيرون"
CN106349180B (zh) * 2015-07-14 2020-05-19 上海翰森生物医药科技有限公司 4,5-二苯基异噁唑衍生物及其制备方法和应用
EP3317301B1 (en) 2015-07-29 2021-04-07 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to lag-3
EP3316902A1 (en) 2015-07-29 2018-05-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
US20180222982A1 (en) 2015-07-29 2018-08-09 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1
CA3004138A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and tim-3 and their uses
US20180371093A1 (en) 2015-12-17 2018-12-27 Novartis Ag Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
CN107540624B (zh) * 2016-06-29 2020-06-16 广州市恒诺康医药科技有限公司 热休克蛋白抑制剂及其制备方法和应用
CN106146466A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 珠海赛隆药业股份有限公司（长沙）医药研发中心 富马酸沃诺拉赞中间体、其制备方法和制备富马酸沃诺拉赞的方法
US11098077B2 (en) 2016-07-05 2021-08-24 Chinook Therapeutics, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
CN109641858B (zh) * 2016-07-21 2021-06-25 正大天晴药业集团股份有限公司 间苯二酚类衍生物的结晶、盐及其制备方法
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
CN111217762B (zh) * 2018-11-23 2021-08-20 华中师范大学 多卤代5-(2-羟基苯基)异噁唑类化合物及其制备方法和应用
US20220362276A1 (en) * 2019-05-13 2022-11-17 The Trustees Of Princeton University Small Molecule Inhibitors of Viral Replication
CN110283080A (zh) * 2019-07-05 2019-09-27 山西大学 一种含氟的二苯甲酮衍生物及其制备方法和应用
WO2021152113A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Bayer Aktiengesellschaft Substituted 2,3-benzodiazepines derivatives
WO2022075780A1 (ko) * 2020-10-07 2022-04-14 광주과학기술원 과민성 방광의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN115160250B (zh) * 2021-04-02 2024-06-04 沈阳药科大学 4,6-联苯二酚类衍生物及其用途
US11324737B1 (en) * 2021-05-25 2022-05-10 Louis Habash Modulating expression level of a gene encoding a heat shock protein by treating a human subject with a nitroxide
US11729925B2 (en) 2021-06-15 2023-08-15 Erico International Corporation Mounting bracket with angled mounting openings for electrical boxes
CN114751870B (zh) * 2022-02-28 2023-10-20 贵州医科大学 一种2-(异噁唑-5-基)苯基-3,4-二羟基苯甲酸酯及其衍生物及合成方法和应用

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0418667B1 (de) * 1989-09-22 1995-08-16 BASF Aktiengesellschaft Carbonsäureamide
CA2102209C (en) * 1991-05-01 1997-11-18 Takashi Shindo Novel isoxazole derivative and salt thereof
WO1994024095A1 (en) * 1993-04-16 1994-10-27 Abbott Laboratories Immunosuppressive agents
IL128568A0 (en) * 1996-10-15 2000-01-31 Searle & Co Use of cyclooxygenase-2 inhibitors for the manufacture of a medicament for the treatment and prevention of neoplasia
AU6645998A (en) * 1996-12-23 1998-07-17 Du Pont Pharmaceuticals Company Oxygen or sulfur containing heteroaromatics as factor xa inhibitors
US6187797B1 (en) * 1996-12-23 2001-02-13 Dupont Pharmaceuticals Company Phenyl-isoxazoles as factor XA Inhibitors
ES2255294T3 (es) * 1998-08-07 2006-06-16 Chiron Corporation Derivados de isoxazol sustituidos como moduladores del receptor de estrogenos.
DE69910045T2 (de) * 1998-09-09 2004-04-22 Metabasis Therapeutics Inc., San Diego Neue heteroaromatische fructose 1,6-bisphosphatase inhibitoren
ID30237A (id) * 1998-12-24 2001-11-15 Metabasis Therapeutics Inc KOMBINASI PENGHAMBAT-PENGHAMBAT FBPase DAN PEMEKA-PEMEKA INSULIN UNTUK PENGOBATAN DIABETES
ATE402163T1 (de) * 1999-08-13 2008-08-15 Vertex Pharma Inhibitoren der c-jun n-terminalen kinase (jnk) und andere protein-kinasen
US6965033B2 (en) * 1999-12-22 2005-11-15 Metabasis Therapeutics, Inc. Bisamidate phosphonate prodrugs
US6673818B2 (en) 2001-04-20 2004-01-06 Pharmacia Corporation Fluoro-substituted benzenesulfonyl compounds for the treatment of inflammation
JP2002363079A (ja) * 2001-05-31 2002-12-18 National Cancer Center-Japan モフェゾラクを有効成分とする、消化管ポリープおよび／または消化管がんの予防または治療のための薬剤
DE60222804T2 (de) * 2001-12-21 2008-07-03 Vernalis (Cambridge) Ltd., Abington 3-(2,4)dihydroxyphenyl-4-phenylpyrazole und deren medizinische verwendung
BRPI0407403B1 (pt) * 2003-02-11 2022-07-19 Cancer Research Technology Ltd Compostos de isoxazol e composição farmacêutica
US20110201587A1 (en) * 2010-02-16 2011-08-18 Bio Holding, Inc. Hsp90 inhibitors and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
US20190358241A1 (en) 2019-11-28
SI1611112T1 (sl) 2012-12-31
CN1771235A (zh) 2006-05-10
PT1611112E (pt) 2012-11-02
EP1611112B1 (en) 2012-08-22
NZ541479A (en) 2008-11-28
BRPI0407403B1 (pt) 2022-07-19
US20060241106A1 (en) 2006-10-26
BRPI0407403A (pt) 2006-10-03
NO20054195L (no) 2005-11-09
AU2004210779B2 (en) 2010-06-10
US10413550B2 (en) 2019-09-17
CA2515726C (en) 2012-07-10
KR101166749B1 (ko) 2012-07-27
CN1771235B (zh) 2010-04-28
ES2393483T3 (es) 2012-12-21
US20100179138A1 (en) 2010-07-15
US8507480B2 (en) 2013-08-13
US8450310B2 (en) 2013-05-28
US20120252797A1 (en) 2012-10-04
NO20054195D0 (no) 2005-09-09
AU2004210779A1 (en) 2004-08-26
DK1611112T3 (da) 2012-11-19
EP1611112A1 (en) 2006-01-04
CY1113761T1 (el) 2016-07-27
US11234987B2 (en) 2022-02-01
CA2515726A1 (en) 2004-08-26
JP4921162B2 (ja) 2012-04-25
EA200501272A1 (ru) 2006-02-24
HK1091831A1 (en) 2007-01-26
US20170326152A1 (en) 2017-11-16
JP2006517572A (ja) 2006-07-27
MXPA05008335A (es) 2006-05-04
KR20050103925A (ko) 2005-11-01
US9718793B2 (en) 2017-08-01
EA009919B1 (ru) 2008-04-28
US20130289026A1 (en) 2013-10-31
US7705027B2 (en) 2010-04-27
WO2004072051A1 (en) 2004-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11234987B2 (en) Isoxazole compounds as inhibitors of heat shock proteins
US7612201B2 (en) Pyrazole compounds
US7803831B2 (en) 3-(2-hydroxy-phenyl)-1H-pyrazole-4-carboxylic acid amide derivatives as HSP90 inhibitors for the treatment of cancer
US7820658B2 (en) Substituted thieno[2,3-d]pyrimidines as HSP90 inhibitors
JP4891904B2 (ja) ピリミドチオフェン化合物
WO2006090094A1 (en) Pyrimidothiophene compounds for use as hsp90 inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: CANCER RESEARCH TECHNOLOGY LTD, GB