JPS61234788A - Ｌ−カルニチンの製造方法 - Google Patents
Ｌ−カルニチンの製造方法Info
- Publication number
- JPS61234788A JPS61234788A JP7792585A JP7792585A JPS61234788A JP S61234788 A JPS61234788 A JP S61234788A JP 7792585 A JP7792585 A JP 7792585A JP 7792585 A JP7792585 A JP 7792585A JP S61234788 A JPS61234788 A JP S61234788A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- genus
- carnitine
- crotonobetaine
- bacterium
- producing
- Prior art date
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の目的〕
本発明は、タロトノベタイン存在下微生物を嫌気条件下
で培養することにより、クロトノベタインより光学活性
Ｌ−カルニチンを製造する方法に関する。
で培養することにより、クロトノベタインより光学活性
Ｌ−カルニチンを製造する方法に関する。
（産業上の利用分野）
本発明の新規性は、微生物をクロトノベタイン存在下で
嫌気的に培養して効率的ＫＬ−カルニチンを生産する点
にある。
嫌気的に培養して効率的ＫＬ−カルニチンを生産する点
にある。
カルニチン（β−ヒドロキシ−γ−トリメチルーアミノ
酪酸）には０体およびＬ体の２種類の立体異性体が存在
することはよく知られている。Ｌ−力ルニチンは、通常
生体内に存在し、活性化した長鎖の遊離脂肪酸をミトコ
ンドリア膜から通過させるキャリアーとしての働きを有
する。
酪酸）には０体およびＬ体の２種類の立体異性体が存在
することはよく知られている。Ｌ−力ルニチンは、通常
生体内に存在し、活性化した長鎖の遊離脂肪酸をミトコ
ンドリア膜から通過させるキャリアーとしての働きを有
する。
カルニチンは左旋性のＬ−力ルニチンのみが天然物の形
態であるにもかかわらず、ラセミ体のカルニチンが食欲
増進剤などに用いられてきた。
態であるにもかかわらず、ラセミ体のカルニチンが食欲
増進剤などに用いられてきた。
しかし最近、少なくともいくつかの治療学的使用に対し
ては、Ｌ−力ルニチンのみを使用する方が効果的である
ことが明らかにさね、その重要性忙対する関心が高まり
つつある。
ては、Ｌ−力ルニチンのみを使用する方が効果的である
ことが明らかにさね、その重要性忙対する関心が高まり
つつある。
実際、心血管系での急性ならびに慢性の心筋虚血、狭心
症、心臓性の不整脈または、心不全の治療に用いられて
いる。
症、心臓性の不整脈または、心不全の治療に用いられて
いる。
（従来の技術）
光学活性り一カルニチンの製法としては、例えば下記の
方法が知られている。
方法が知られている。
（１） 化学的な合成法によって得られたラセミ体の
カルニチンを光学分割する方法。その光学分割の方法は
、前駆体であるＤＬ−カルニチンニトリルにＮ−アセチ
ル−Ｄ−グルタミン酸または、Ｎ−アセチル−し一グル
タミン酸を分割剤として加え塩を生成させ、溶解度の差
を利用して分割し、次いでこれ、を加水分解して、Ｌ−
およびＤ−カルニチンクロライドとなす（持分１１１８
４３−８２４８ ） 。
カルニチンを光学分割する方法。その光学分割の方法は
、前駆体であるＤＬ−カルニチンニトリルにＮ−アセチ
ル−Ｄ−グルタミン酸または、Ｎ−アセチル−し一グル
タミン酸を分割剤として加え塩を生成させ、溶解度の差
を利用して分割し、次いでこれ、を加水分解して、Ｌ−
およびＤ−カルニチンクロライドとなす（持分１１１８
４３−８２４８ ） 。
が代表的なものである。
（２）３−デヒドロカルニチンを微生物の酵素（カルニ
チンデヒドロゲナーゼ）の作用で不斉還元して、Ｌ−カ
ルニチンを得る方法。
チンデヒドロゲナーゼ）の作用で不斉還元して、Ｌ−カ
ルニチンを得る方法。
（米国特許第４，２２１，８６９号）
（３） γ−ブチロベタインに微生物の酵素（ヒドロ
キシラーゼ）を反応させることにより、Ｌ−カルニチン
を製造する方法。（特開昭５７−３９７９１）（４）
好気的培養法、あるいは好気的培養法により得られた
菌体を用いる方法によりタロドアベタインより、Ｌ−力
ルニチンを製造する方法（特開昭５９−１８３６９４．
特開昭５９−１９２０９５）がある。
キシラーゼ）を反応させることにより、Ｌ−カルニチン
を製造する方法。（特開昭５７−３９７９１）（４）
好気的培養法、あるいは好気的培養法により得られた
菌体を用いる方法によりタロドアベタインより、Ｌ−力
ルニチンを製造する方法（特開昭５９−１８３６９４．
特開昭５９−１９２０９５）がある。
しかしながら、（１） ＃ｉ光学分割剤として用いるＮ
−アセチル−Ｄ−グルタミン酸が高価であり、操作が複
雑で収率が悪い。
−アセチル−Ｄ−グルタミン酸が高価であり、操作が複
雑で収率が悪い。
（２）は、原料の３−デヒドロカルニチンが不安定で取
扱が困難な上、補酵素として高価なＮＡＤＨあるいはＮ
ＡＤを必要とする〇 （３）は、原料となるγ−ブチロベタインが高価である
などの理由で１以上あげたいずれの方法も工業的製造法
としては有利な方法とは云えない。
扱が困難な上、補酵素として高価なＮＡＤＨあるいはＮ
ＡＤを必要とする〇 （３）は、原料となるγ−ブチロベタインが高価である
などの理由で１以上あげたいずれの方法も工業的製造法
としては有利な方法とは云えない。
また、（４）の好気培養の場合、通気、攪拌を必要とし
、培養・管理が煩雑となり、また更に多くの付帯設備を
必要とする。
、培養・管理が煩雑となり、また更に多くの付帯設備を
必要とする。
そこで本発明者らは、エピクロルヒドリンより安価に製
造できるタロトノベタインに着目り、 Ｌ−力ルニチン
の新規製造法の開発を目的とし、鋭意検討を行なった結
果、タロトノベタイン存在下微生物を嫌気的に培養する
ことにより、効率的にＬ−力ルニチンを生産しうろこと
を見い出し、本発明を完成するに至った。
造できるタロトノベタインに着目り、 Ｌ−力ルニチン
の新規製造法の開発を目的とし、鋭意検討を行なった結
果、タロトノベタイン存在下微生物を嫌気的に培養する
ことにより、効率的にＬ−力ルニチンを生産しうろこと
を見い出し、本発明を完成するに至った。
更に嫌気条件下の培養においては、通気、攪拌などの煩
雑な培養・管理の必要がなく、かつ付帯設備の軽減が可
能となった。
雑な培養・管理の必要がなく、かつ付帯設備の軽減が可
能となった。
本発明において用いるクロトノベタインより光学活性Ｌ
−カルニチンを生産せしめる能力を有する微生物として
は、例えば、エシェリヒア コリＩＦＯ３３０１，プロ
テウス ブルガリカス ＩＦ０３８５１゜プロテウス
ミラピリス ＡＴＣＣ１２４５３，シトロバクタ−イン
ターメデクス ＩＦＯ１３５３９，ｙラボバクテリクム
ニステロアロマティカム ＩＦＯ３７５１゜サルモネ
ラ チフイムリクム ＩＦＯ１２５２９，バクテリクム
グラシル ＩＦＯ３２３１，エンテロバクタ−クロア
カニ ＩＦＯ３３２０，アシネトバクタ−カルコアセテ
ィカス ＩＦＯ１３００６，セラチア マルセンサス、
ＩＦＯ３７３６，ハ７二７ フルペイ ＩＦＯ３７３
１゜ミクロコツカス ロゼクス ＩＦ０３７６８ 等が
ある。
−カルニチンを生産せしめる能力を有する微生物として
は、例えば、エシェリヒア コリＩＦＯ３３０１，プロ
テウス ブルガリカス ＩＦ０３８５１゜プロテウス
ミラピリス ＡＴＣＣ１２４５３，シトロバクタ−イン
ターメデクス ＩＦＯ１３５３９，ｙラボバクテリクム
ニステロアロマティカム ＩＦＯ３７５１゜サルモネ
ラ チフイムリクム ＩＦＯ１２５２９，バクテリクム
グラシル ＩＦＯ３２３１，エンテロバクタ−クロア
カニ ＩＦＯ３３２０，アシネトバクタ−カルコアセテ
ィカス ＩＦＯ１３００６，セラチア マルセンサス、
ＩＦＯ３７３６，ハ７二７ フルペイ ＩＦＯ３７３
１゜ミクロコツカス ロゼクス ＩＦ０３７６８ 等が
ある。
本発明に用いられる培地は、クロトノベタインを含むほ
かは炭素源二窒素源：無機イオンなどを含有する通常の
培地である。
かは炭素源二窒素源：無機イオンなどを含有する通常の
培地である。
更にビタミン・アミノ酸々どの有機微量栄養素を添加す
ると望ましい結果が得られる場合が多い。
ると望ましい結果が得られる場合が多い。
炭素源としては、グルコース、！ルトースなどの炭水化
物、酢酸などの有機酸、アルコール類。
物、酢酸などの有機酸、アルコール類。
その他が使用できる。
窒素源としては、アシモニクム塩、ペプトン。
酵母エキス、コーンステイープリカーなどを用いること
ができる。
ができる。
無機イオンとしては、マグネシクムイオン、燐酸イオン
、カリイオン、その他が必要に応じ適宜使用できる。
、カリイオン、その他が必要に応じ適宜使用できる。
更に嫌気条件下での培養時に微生物の産生ずる電子を受
容し得る化合物、例えば硝酸塩、トリメチルアミンオキ
シド、７マール酸、メチオニンスル７オキシドなどを添
加すると、望ましい結果が得られる場合が多い。
容し得る化合物、例えば硝酸塩、トリメチルアミンオキ
シド、７マール酸、メチオニンスル７オキシドなどを添
加すると、望ましい結果が得られる場合が多い。
培養は、嫌気的条件下で行なう。培養釦適した温度は通
常は、１５〜６０℃、好適には２５〜４０℃とするのが
よい。
常は、１５〜６０℃、好適には２５〜４０℃とするのが
よい。
培地の初発ｐＨは３〜９．好適には５〜８がよい結果を
与える。
与える。
通常１〜１０日間の培養を行なえば望ましい結果が得ら
れる。
れる。
以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明する０
実施例１
表−１に記した微生物を０．３％ＫＨ２ＰＯ４，０，７
％に２ＨＰＯ４，０，１％（ＮＨ４）２３０４．０．０
１％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０，０，５％酵母エキス、Ｏ，
ＳＸポリペプトン。
％に２ＨＰＯ４，０，１％（ＮＨ４）２３０４．０．０
１％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０，０，５％酵母エキス、Ｏ，
ＳＸポリペプトン。
０、５ Ｘクロトノベタイン、ｐＨ７，０の組成の培地
２０−に植菌した後、密橙し温度３０℃で嫌気的ＶＣ４
８時間培養した。
２０−に植菌した後、密橙し温度３０℃で嫌気的ＶＣ４
８時間培養した。
培養終了後、培養上清に含まれるし一力ルニチン量をカ
ルニチンアセチルトランスフェラーゼと、ＤＴＮＢ を
用いる方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙユ４ ６１２（１９６９））で定量した。
ルニチンアセチルトランスフェラーゼと、ＤＴＮＢ を
用いる方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙユ４ ６１２（１９６９））で定量した。
結果を表−１に示す。
実施例２
エシェリヒア フリ ＩＦＯ３３０１を実施例ＩＫ示し
た培地に植菌し、表−２に示す化合物を０．５％濃度と
なるように添加した後、温度３０℃で嫌気的に４８時間
培養し九。培養終了後、培養上清に含まれるし一力ルニ
チン量を実施例１に示した方法で測定した。結果を表−
２に示す。
た培地に植菌し、表−２に示す化合物を０．５％濃度と
なるように添加した後、温度３０℃で嫌気的に４８時間
培養し九。培養終了後、培養上清に含まれるし一力ルニ
チン量を実施例１に示した方法で測定した。結果を表−
２に示す。
表 −２
実施例３
プロテウス ミラビリス ＡＴＣＣ１２４５３を、０．
５％硝酸カリクムを共存させた以外は実施例ＩＫ示した
と同様の組成の培地２．５βに植菌し、温度３０℃で嫌
気的に４８時間培養した。培養終了後、遠心分離して得
られた培養上清より、陽イオン交換樹脂を使って粗カル
ニチン画分を得た。この粗カルニチン画分を！Ｉ！硫酸
水素ナトリクムを用いる方法（特願昭５９−１８％３７
７）Ｋよってタロー得た。
５％硝酸カリクムを共存させた以外は実施例ＩＫ示した
と同様の組成の培地２．５βに植菌し、温度３０℃で嫌
気的に４８時間培養した。培養終了後、遠心分離して得
られた培養上清より、陽イオン交換樹脂を使って粗カル
ニチン画分を得た。この粗カルニチン画分を！Ｉ！硫酸
水素ナトリクムを用いる方法（特願昭５９−１８％３７
７）Ｋよってタロー得た。
得られたし一力ルニチンの旋光度は、〔α〕２５＝一３
０．３°（Ｃ＝１．０６．水溶液）であった。
０．３°（Ｃ＝１．０６．水溶液）であった。
出願人 製鉄化学工業株式会社
代表者 佐々木 浩
Claims (4)
- （１）クロトノベタイン存在下微生物を嫌気条件下で培
養することにより、クロトノベタインより光学活性Ｌ−
カルニチンを生産することを特徴とするＬ−カルニチン
の製造方法。 - （２）微生物がエシエリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）
属、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、バ
クテリウム（Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アシネトバクタ
ー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、セラチア（Ｓｅ
ｒｒａｔｉａ）属、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、
サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、ハフニア（Ｈ
ａｆｎｉａ）属、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏ
ｃｃｕｓ）属よりなる群より選ばれた属に属する少なく
とも一種の微生物である特許請求の範囲（１）記載の方
法。 - （３）嫌気条件下での培養時に微生物の産生する電子を
受容し得る化合物を添加する特許請求の範囲（１）記載
の方法。 - （４）電子を受容し得る化合物が硝酸カリウムまたは硝
酸ナトリウムである特許請求の範囲（３）記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7792585A JPS61234788A (ja) | 1985-04-11 | 1985-04-11 | Ｌ−カルニチンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7792585A JPS61234788A (ja) | 1985-04-11 | 1985-04-11 | Ｌ−カルニチンの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61234788A true JPS61234788A (ja) | 1986-10-20 |
Family
ID=13647665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7792585A Pending JPS61234788A (ja) | 1985-04-11 | 1985-04-11 | Ｌ−カルニチンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61234788A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62275689A (ja) * | 1985-12-09 | 1987-11-30 | Bio-Le Kk | Ｌ−カルニチンの製造法 |
| CN1058995C (zh) * | 1996-11-08 | 2000-11-29 | 江苏省微生物研究所 | L-肉碱或其盐的制备方法 |
-
1985
- 1985-04-11 JP JP7792585A patent/JPS61234788A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62275689A (ja) * | 1985-12-09 | 1987-11-30 | Bio-Le Kk | Ｌ−カルニチンの製造法 |
| CN1058995C (zh) * | 1996-11-08 | 2000-11-29 | 江苏省微生物研究所 | L-肉碱或其盐的制备方法 |
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