JPS5928481A - 抗生物質ｙ−０２０３９ｈおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規抗生物質ならびにその製造法に関する。

さらに詳しくは２本発明は後述の理化学的性質を有する
抗生物質Ｙ−０２０３９Ｈならびにパンラス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　）属に属する抗生物質Ｙ−０２０３９Ｈ生産
菌を培養して、培養物中にＹ−０２０３９Ｈを蓄積させ
、該培養物からＹ−０２０３９Ｈを採取することを特徴
とするＹ−０２０３９Ｈの製造法に関する。

本発明の抗生物質Ｙ−０２０３９Ｈは、各種の病原菌に
抗菌活性を示すので、これらの菌を起炎菌とする感染症
の治療に有効である。

つぎに、抗生物質Ｙ　−０２０３９Ｈの理化学的性質を
示す。

■　元素分析：炭素５１．７８％、水素８．２４％。

窒素１４．９１％ ■　融　　　点＝２２３〜２２７　”ｃ　（分解）■　
比旋光度：〔α］　２ｏ。＝−２５，５（Ｃ＝１．メク
ツ・−ル）■　赤外部吸収スペクトル　（ＫＢｒ錠）　
　第１図■　紫外部吸収スペクトル　（メタノール中）
第２図■　溶　解　性：メタノールに易溶、水に可溶。

■呈色反応 陽性：ニンヒドリ／反応 陰性：坂口反応 ■構成成分 本旨を６Ｎ−ＨＣ−ｅ　　ｌｌ０Ｃ／２０時間加水分解
スると、αｅγ−ジアミノ酪酸、ロイシン、ンエニルア
ラニノが生成する。同時にエーテル可溶分としてＣｌｌ
８２００３及びＣＩＯＨ２Ｏｏ３０分子式を有するβ−
ハイドロオキシ脂肪酸を生成する。

アミノ酸分析比の大略は　α・ｒ−ジアミノ酪酸：ロイ
シン：７ェニルアラニン＝７：３：１を示す。

■　薄層クロマトグラフィー　〔シリカゲル（メルク社
）〕展開溶媒　　　　　Ｒｆ値 展開溶媒　　　　　Ｒｆ値 以上の物性よりＹ−０２０３９Ｈはポリミキシン近縁の
新規なペプチド抗生物質である。

つぎ匠１本発明の目的物質の抗菌活性を寒天平板希釈法
で測定した結果をポリミキシンＢ（Ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ
Ｂ　）と対比して示すと第１表の通りである。

第１表 つぎに１本発明の抗生物質Ｙ−０２０３９Ｈの製造方法
について説明する。

本発明の目的物質は、バシラス属に属するｙ−０２０３
９Ｈａ産菌を栄養培地に培養して、　Ｙ　−０２０３９
８を蓄積させ、培養物からＹ−０２０３９Ｈを採取する
ことによって取得できる。

本発明の製造方法において使用する微生物は。

パシラス属に属し、Ｙ−０２０３９Ｈ生産能を有する微
生物であれば（・ずれのものも用℃・ることかできる。

このような微生物としては、たとえば。

バシラス　エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｐ、）　Ｙ
−０２０３９Ｈを挙げることができる。

この生産菌は茨城県水戸市那珂用の川底上より分離され
たバクテリアで、　Ｙ−０２０３９Ｈなる菌株番号を付
された。

以下にその菌学的性状を記す。

１）形態的性質 栄養寒天培地上、３３ｃで２８〜４８時間培養後。

本品は、０５〜１．ＯＸ　２．０〜５μｍの桿菌で、側
鞭毛を有し、ダラム染色陽性を示す。菌体の中央又はや
や末端よりに１個の星形の胞子を形成する。７２時間培
養のものではダラム染色は必ずしも陽性は示さない。

２）各種培地における生育状態 ■肉汁寒天平板培地（３３ｔｒ、２〜７日）白〜黄味白
で光沢のある円形のコロニーを形成し、ゴム状ないし粘
質となる。色素の産生は認められない。

■グルコース肉汁寒天平板培地（３３１１ｍｌ’、２〜
７日）白〜黄味白で光沢のある円形のコロニーを形成し
、著しくゴム状な（・し粘質になり、しだいに不透明と
なる。色素の産生は認められない。

■グルコース肉汁液体培養（３０ｔ：、２〜７日）培養
液は著しく粘質となる。培地は全体に濁る。リング形成
も菌膜の形成も認められなし・。

３）生理学的性質 ■硝酸塩の還元　　　　　　　　十 ■　ｖｐテスト　　　　　　　　　　＋■メチルレッド
試験　　　　　　十 〇インドールの生成　　　　　　− ■硫化水素の生成　　　　　　　− ■デンプンの加水分解　　　　　十 ■　クエン酸の利用（シモンズ培地）　　生育せず■　
ウレアーゼ　　　　　　　　　− ■オキシダーゼ　　　　　　　　＋ ［相］カタラーゼ　　　　　　　　　＋０チロシ／の分
解　　　　　　　− 〇　フェニルアラニンの脱アミノ作用　　　　　−〇　
ミルク培養　　酸を生じ凝固する ■ゼラチンの液化　　　　　　　十 ［相］生育温度　２０Ｃ以下では生育しない。

２５〜４０Ｃでは生育するが５０ｃで は生育しない。至適生育温度は ３０〜３７Ｃ６ ［相］　ｐ　Ｈ５，５〜８５で生育する。至適ｐＨは７
．０〜８．０゜ Ｏ嫌気性培養　　　　　　　　　　＋ ［相］　サブローデキストロース寒天上の生育　　　十
０００２％アジド添加プロスでの生育　　　　−［相］
　５％食塩添加プロスでの生育　　　　十７％食塩添加
ブロスでの生育　　　　−■糖の利用性 下記の糖を分解し酸を生成する。

り／ｌ／　＝ｒ　−ス、フジクトース、キシロース、マ
ンニトール。

下記の糖では酸の生成が認められない。

Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース。

以上の性状をまとめると、Ｙ−０２０３９Ｈ株は、ダラ
ム陽性の運動性を有する（側鞭毛）桿菌で。

胞子を形成し、特にグルコース１％含有培地上で粘質か
つゴム状を呈する。又１通性嫌気性でありｖｐテスト陽
性、カタラーゼ反応陽性、硝酸塩の還元性を有し、２５
〜４０Ｃの中温で生育する。このような性状を有する菌
属をＢｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒ
ｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第８版に
より検索すると、Ｙ−０２０３９Ｈ株はＢａｃＮｌｕｓ
属に属する。さらに＋　　Ｂａｃｉｌｌｕｓ属は２グル
ープに分類されておりグループ１２２種、グループ１１
２６種。

計４８種が記載されている。これらの中からＹ−０２０
３９Ｈ株に類似した菌種を検索すると、　Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓｐｏｌｙｍｙｘａ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｃｅ
ｒａｎｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｉｒｃｕｌａｕｓが
あげられる。これらの３株に共通な性質はダラム染色性
は陽性（〜変化しやすい）、胞子を菌体の中央かやや末
端に１個形成し、アラビノース。

キシロース、マンニトールから酸を生成し、インドール
反応、フェニルアラニン脱アミン化反応およびチロジノ
分解能は陰性である。

Ｙ−０２０３９Ｈ株の性質はアラビノースからの酸の生
成が認められなし・点を除いて、これらと一致している
。しかし、上記Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ
　Ｄｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ第８版の記載によると。

Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｃｅｒａｎｓはカゼインの分解
性が陰性であリグルコース含有培地で粘質ないしゴム状
のコロニーを形成せず、またＢａｃｉｌｌｕｓ　ｃｉｒ
ｃｕｌａｎｓは運動性ｔカゼインの分解、５％塩化ナト
リウムプロス中での生育などが必ずしも陽性でなく、グ
ルコース含有培地で粘質かつゴム状を呈しない点におい
て。

Ｙ−０２０３９Ｈ株とは異なる。一方＋　　Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ｐｏｌｙ−ｍｙｘａは菌形態、各種培地での生
育状態、各種の生理的性質などの点でＹ−０２０３９Ｈ
株と類似点が多し・が以下の性質が異って℃・る。

以上のことより、Ｙ−０２０３９Ｈ株はＢａｃｉｌｌｕ
ｓ　ｐｏｌｙ−ｍｙｘａの記載に似ているが一致しない
点もある。

従ってこの菌株をＢａｃｊｌｌｕｓ　ｓｐ　Ｙ−０２０
３９Ｈと命名した。Ｙ−０２０３９Ｈ株は工業技術院微
生物工業技術研究所に、受託番号、微工研菌寄第６６２
１号（ＦＥＲＭ　Ｐ−６６２１）として寄託されている
。

バシラス・ニス・ピーＹ−０２０３９）１株は、紫外線
、エックス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人工的
変異手段によって変異し得るものであり、このようにし
て得られる変異株であってもＹ−０２０３９Ｈ物質の生
産能を有する菌株はすべて本発明に使用することができ
る。

本発明圧より、　Ｙ−０２０３９Ｈ物質を得るには。

通常の微生物発酵に用（・もれる各種の培地が使用され
る。すなわち炭素源としては２例えばグルコース、Ｄ−
キシロース、フラクトース、マ／ニトール、Ｄ−ガラク
トース、シュクロース。

デキストリ／、デンプ／、水あめ、糖蜜、油脂類（例え
ば大豆油、オリーブ油など）が適宜用いられ、また窒素
源としては例えば粉末ブイヨン、コーンステイープ・リ
カー、グルテンミール、綿実粕、肉エキス、大豆粉、ペ
プトン、魚粉、乾燥酵母、尿素、硫酸アンモニウム、塩
化アンモニウム、硝酸アンモニウム、その他の有機また
は無機の窒素源などが利用される。金属塩としては例え
ばＮａ　、　Ｋ、　Ｍｇ　、　Ｃａ　、　Ｚｎ　、　Ｆ
ｅなどの硫酸塩、硝酸塩、塩化物、炭酸塩、燐酸塩など
が必要に応じて用（・もれ、またビタミン類、核酸塩基
類、アミノ酸などを適宜添加することもある。

培養方法としては、好気的条件下で培養するのが一般的
で、温度は２５〜３７Ｃの範囲が望ましく１．殊［３０
Ｕ付近が至適である。培地のｐＨは６〜８の範囲に保持
するのが好ましい。培養期間は一般匠３〜４日程度でよ
く、培養方法としては、振と５培養法、深部通気攪拌培
養法などの液体培地？使用するの−う−望ましい。

培養液から目的物質Ｙ−０２０３９Ｈの単離精製は。

通常の発酵産生物を培養液より分離採取する方１去に準
じて行う。例えば、各種有機溶媒による抽出法、各種吸
着剤によるクロマトグラフィーあるいは塩を形成させる
方法などを適当に組み合わせることにより単離すること
が出来る。

つぎに、実施例を挙げて１本発明の目的化合物およびそ
の製造方法をさら（（説明する。

実施例 グルコース１．０％、クリセロール１．０％、シュクロ
ース１０％、オートミール０５％、大豆粉２０％。

乾燥酵母１０％、カザミノ酸０．５％、　ＣａＣＯ３０
，１％。

ｐＨ７，０の培地を５０Ｃ）’ｍＺ容の三角フラスコに
５０　ｍｌ宛注ぎ常法どうり滅菌を行なった後、あらか
じめベネ、ト寒天斜面培地に生育せしめた。Ｃシラス　
エスピーＹ−０２０３９Ｈ株を接種し、３０Ｃで４８時
間培養を行う。

別にグルコース３０％、デキストリフ３．０％。

大豆粉１５％、　Ｋ２ＨＰＯ４０，０６％、　Ｋ）１２
ＰＯ４０，０２５％。

ＣｏＣｅ２＠　６Ｈ２００，０００４％、　ｐＨ７，０
の組成の培地を５００　ｍｌ容の三角フラスコＫ　６０
　ｍｌ宛１８本分注し、消泡剤としてアデカノール（旭
電化社製）を２滴宛加え、常法どうり滅菌を行った後上
記の培養液を４％の割合で植菌し３０ｔＺ’で９６時間
培養を行う。

培養終了後のｐＨシまおよそ６２を示す。培養液１．０
８１　Ｋ塩酸を加え、ｐＨ２に調整し室温で３０分攪拌
する。次いでアセト７１．１１を加え室温で約４０分静
置する。ラジオライト≠６００（昭和化学工業ＫＫ）約
１００ｇを加えｒ過する。沢洗液を集め苛性ソーダでｐ
Ｈ７に戻す。生じた沈殿をＰ去したのちＰ液をＩ　ＲＣ
５０（ＮＨ４）１００　ｍｌ　（ローム・アンド・・・
−ス社）を充填したカラムに通導し。

吸着させる。カラムを約５００ｍ１：の水で洗浄した后
、ｌＮ−ＮＨ４ＯＨで吸着された活性物質を溶出する。

溶出液を減圧上濃縮し、濃縮液をｐＨ・７に調整した后
、　ＣＧ　　５０（ＮＨ４）　（ローム・アンド・ハー
ス社）２５ｍＺを充填したカラムを通し吸着させる。カ
ラムを水で洗浄した后、０〜１Ｎ−ＮＨ４０Ｈ濃度勾配
法πより溶出する。活性画分を集め、減圧上濃縮したの
ち凍乾すると粗Ｙ　−０２０３９Ｈ４２ｍｇを得る。更
に粗Ｙ−０２０３９Ｈをプレパーレイティブ・シリカゲ
ルクロマトグラフイー［展開溶媒：クロロホルム：メタ
ノール：アンモニア（２０：１５：８）］Ｋ供し、活性
画分を掻き取り、同一溶媒で溶出する。溶出液を濃縮し
、濃縮液を再びプレバーレイティブーシリカゲルクロマ
トグラフィー〔展開溶媒：クロロホルム：エタノール：
１４％アンモニア（４ニア：２）　］に供し、活性画分
を掻き取り同一溶媒で溶出する。

溶出液を減圧下濃縮次いで凍乾するとＹ−０２０３９Ｈ
の白色粉末７６ｍｇを得る。

【図面の簡単な説明】

ｆｉｌ　　第１図は、物質Ｙ−０２０３９Ｈの赤外部吸
収スペクトルを示す。 （２）　　第２図は、物質Ｙ−０２０３９Ｈの紫外部吸
収スペクトルを示す。 特許出願人　山之内製薬株式会社 代理人　佐々木晃−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、つぎの理化学的性質を有する抗生物質Ｙ　−０２０
   ３９Ｈ （１１元素分析値：炭素’５１．７８％、水素８２４％
   。 窒素１４９１％ （２）融　　　点＝２２３〜２２７　Ｃ（分解）（３）
   　　比施光度：　〔α〕習＝−２５，５（Ｃ＝１．メタ
   ノール）（４）光外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）：　
   第１図（５）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）：
   第２図（６）溶　解　性：メタノールに易溶、水に不溶
   （７）呈色反応：二／ヒドリノ反応陽性坂口反応陰性 ２、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ属）に属する抗生物
   質Ｙ　−０２０３９Ｈ生産菌を培養し、培養物中にＹ−
   ０２０３９Ｈを蓄積させ、該培養物からＹ−０２０３９
   Ｈを採取することを特徴とするＹ−０２０３９Ｈの製造
   法。 ３、抗生物質Ｙ　−０２０３９Ｈ生産菌がパンラス　エ
   スピー　Ｙ　−０２０３９Ｈ株である特許請求の範囲第
   ２項記載の製造法。