JPS6332440B2

JPS6332440B2 -

Info

Publication number: JPS6332440B2
Application number: JP54092642A
Authority: JP
Inventors: Kazunori Ooba; Takashi Shomura; Takashi Tsuruoka; Michio Kojima; Shigeharu Inoe; Tatsuo Ito
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1979-07-23
Filing date: 1979-07-23
Publication date: 1988-06-29
Also published as: JPS5618600A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はミクロモノスポラ属に属する抗生物質
SF−2052物質生産菌を培養し、その培養物より
抗生物質SF−2052物質を採取することからなる
抗生物質SF−2052物質の製造法に関するもので
ある。抗生物質SF−2052物質はグラム陽性菌及びグ
ラム陰性菌に対して広範囲な抗菌力を有する有用
な抗生物質で、その化学構造は次式：で示され、ダクチロスポランギウム・マツザキエ
ンセ（Dactylosporangium matsuzakiense）に
よつて生産されることが知られている。（本出願
人の特願昭53−135921号；特開昭55−64597号公
報参照）。本発明者らは千葉県銚子市犬若の土壌より新た
に分離したミクロモノスポラに属する放線菌SF
−2098株が、その培養物中に抗生物質SF−2052
物質を生産することを見出した。上記の放線菌SF−2098株の菌学的性状は次の
通りである。形態 SF−2098株は一般に使用されている各種の
寒天培地上で気菌糸を形成しない。液体培地で
培養したSF−2098株を顕微鏡で観察すると、
分枝をもつて伸長した基生菌糸の各所に胞子が
１個ずつ着生しているのが見られる。電子顕微
鏡で観察すると胞子はほぼ球型で、直径は1.0
〜1.3ミクロンであり、胞子表面は先端がやゝ
丸味をおびた突起が多数存在し、一見、コンペ
イトウ状となる。各種培地上の生育状態種々の培地で28℃、15〜20日間培養し、観察
した生育状態は次表の通りである。色の標準は
Color Harmony Manuel（Container
Corporation of America社製）に従い〔〕
内に示す。

【表】生理的性質 (1) 生育温度範囲：15〜45℃ (2) ゼラチンの液化：陽性（20℃、21日培養） (3) 澱粉の加水分解：陽性（28℃、14日培養） (4) 脱脂乳に対する作用：ペプトン化及び凝
固、ともに陽性（28℃、21日培養） (5) メラニン様色素の生成：陰性 (6) 硝酸塩の還元：陰性（28℃、14日培養） (7) 耐塩性〔Intern.J.Syst.Bacteriol.、21、
240（1971）の方法〕：０〜1.5％で良好、３〜
４％でも生育するが５％では生育しない。炭素源の利用性〔培地：酵母エキス
（Difco）0.5％、炭酸カルシウム0.1％、バクト
寒天（Difco）1.5％〕

【表】細胞壁組成 Beckerらの方法〔Appl.Microbiol.13、236
（1965）〕により分析した結果、細胞壁組成成分
中のジアミノピメリン酸としてヒドロキシ・ジ
アミノピメリン酸が検出された。上述の通りSF−2098株は寒天培地において気
菌糸を着生せず、基生菌糸に胞子を単一形成する
中温菌であり、細胞壁中にヒドロキシ・ジアミノ
ピメリン酸を有することから、ミクロモノスポラ
属に属する菌株である。本発明者らは、SF−2098株をミクロモノスポ
ラ・エスピー・SF−2098（Micromonospora sp.
SF−2098）と称することにした。本SF−2098株
は微生物工業技術研究所に寄託されている（微工
研菌寄第5073号）。ミクロモノスポラ・エスピー・SF−2098株は
抗生物質SF−2052物質の唯一の生産菌として知
られているダクチロスポランギウム・マツザキエ
ンセとは属を異にし、従つて明瞭に区別される。本発明は、上記の知見に基づいて完成されたも
ので、ミクロモノスポラ属に属する前記の式
（）で示される抗生物質SF−2052物質の生産菌
を培地に培養し、その培養物より抗生物質SF−
2052物質を採取することを特徴とする抗生物質
SF−2052物質の製造法にある。ミクロモノスポラ・エスピー・SF−2098株は
他の放線菌の場合にみられるように、その性状が
変化しやすく、例えば、紫外線、エツクス線、放
射線、薬品等を用いる人工的変異手段で変異しう
るものであり、このような変異株であつても抗生
物質SF−2052物質の生産能を有するミクロモノ
スポラ属の菌はすべて本発明の方法に使用するこ
とが出来る。本発明の方法では、SF−2098株を通常微生物
が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。
例えば、炭素源としてグルコース、シユクロー
ス、デキストリン、澱粉、水あめ、糖みつ、大豆
油等を使用しうる。また窒素源として大豆粉、小
麦胚芽、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コー
ンステイープリカー、硝酸ソーダ、硫酸アンモニ
ウム等を使用しうる。その他、必要に応じて炭酸
カルシウム、塩化カリウム、燐酸塩等の無機塩類
を添加するほか菌の発育を助け、SF−2052物質
の生産を促進するごとき有機物及び無機物を適当
に添加することができる。培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同
じく液体培養法、特に深部培養法が最も適してい
る。培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な
温度は25〜40℃であるが通常30℃付近で培養す
る。PHは中性〜弱アルカリ性が望ましい。液体培
養で通常３〜10日間培養を行なうと、SF−2052
物質が培養液中に生成蓄積される。培養液内に生産、蓄積されたSF−2052物質を
単離精製するには、水溶性塩基性抗生物質の精製
に通常用いられる手段を適宜利用する。即ち、ダ
イヤイオンHP−20、アンバーライトXAD−２、
炭末等の吸着剤、セフアテツクスＧ−10、セフア
デツクスLH−20等のゲル過剤、アンバーライ
トIRC−50、アンバーライトCG−50、CM−セフ
アデツクス等の陽イオン交換樹脂によるクロマト
グラフイーが使用されるが、以下による精製方法
が効率的である。 SF−2098株の培養液をPH2.0に調整後ハイフロ
スーパーセル等の過助剤を用いて菌体その他の
固型物を除去し、次いで液中の有効成分をアン
バーライトIRC−50（Na⁺）に吸着させ0.4NHCl
水で溶出させる。この溶出液を水酸化ナトリウム
で中和後、活性炭で脱塩する。これをさらにCM
−セフアデツクス、活性炭カラム、セフアデツク
スLH−20のカラムクロマトグラフイー等を適宜
組み合わせることにより高純度のSF−2052物質
（HCl塩）を得ることができる。かくして得られたSF−2052物質（HCl塩）の
理化学的性状をSF−2052物質の標品と直接比較
した結果、完全に一致し、ミクロモノスポラに属
する放線菌SF−2098株がSF−2052物質を生産し
ていることが明白になつた。以下に本発明によつて得られたSF−2052物質
（HCl塩）の理化学的性状を示す。 (1) 外観：白色の無定形粉末 (2) 融点：170℃付近より徐々に褐変し、208〜
210℃で発泡分解する (3) 元素分析値：Ｃ、36.73％Ｈ、7.01％Ｎ、
12.42％ (4) 紫外部吸収スペクトル 220nｍ〜370nｍに特徴的な吸収極大がない。 (5) 赤外部吸収スペクトル主な吸収帯2900〜3500、1720、1650、1510、
1120、1050cm^-1 (6) 溶解性水に良く溶け、メタノールに可溶、クロロホ
ルム、酢酸エチル、ヘキサン、ベンゼン、エー
テル等の有機溶剤に実質的に不溶である。 (7) 安定性酸性から中性にかけて安定であるが、アルカ
リ性において不安定である。 (8) セルロース薄層クロマトグラフイーのRf値ｎ−プロパノール−ピリジン−酢酸−水
（15：10：３：12） 0.46 ｎ−ブタノール−酢酸−水（２：１：１）
0.10 (9) ペーパークロマトグラフイーのRf値（上昇
法）ｎ−プロパノール−ピリジン−酢酸−水
（15：10：３：12） 0.41 (10) 呈色反応陽性：ニンヒドリン、グレイツク−レイバツ
ク、レミユー反応陰性：坂口、硝酸銀反応 (11) 重水中で測定した水素核核磁気共鳴スペクト
ル（100MHz・TMS外部標準）では1.34ppm(d)
2.00ppm（ｍ）3.16ppm（ｓ）3.51ppm（ｓ）
5.33ppm(d)7.99ppm（ｓ）に主なシグナルが見
られる。 (12) 比旋光度＋86.8゜（c1、H₂O）次にSF−2052物質（硫酸塩として）の各種微
生物に対する抗菌活性を第１表に示す。

【表】培地：ハート・インフユージヨン・アガー
この様にしてSF−2052物質はグラム陽性菌、
陰性菌に対して強力な抗菌力を有している。以下に本発明の実施例を示すが、ここに示さな
かつた多くの変形あるいは修飾手段を用い得るこ
とはもちろんである。実施例１ (イ) SF−2098株の培養種菌としてミクロモノスポラ・エスピー・
SF−2098株（微工研菌寄第5073号）を用い、
種培地としてグルコース2.0％、ペプトン0.5
％、牛肉エキス0.2％、イースト0.3％、大豆粉
0.2％、炭酸カルシウム0.1％、（殺菌前PH未調
整）の培地を用いた。種菌３〜４白金耳を100ml容３角フラスコ中
20mlの上記種培地に接種し、28℃４日間培養す
る。これを種培養として20本培養した。次いでこの種培養400mlを500ml容３角フラス
コ中の生産培地80mlに４mlずつ100本に接種す
る。生産培地組成は水飴４％、大豆油0.3％、ソ
リユブルベジタブルプロテイン0.5％、フアー
マメデイア1.0％、硫酸第一鉄0.001％、塩化コ
バルト0.0001％、炭酸カルシウム0.2％（殺菌
前PH7.0）の培地を使用した。培養は28℃２日
間振盪培養方式で行なつた。培養液は6N塩酸水でPH2.0に調整後ハイフロ
スーパーセルを過助剤として用いて約7.0
の培養液を得た。 (ロ) SF−2052物質の採取実施例１(イ)で得た培養液７をアンバーラ
イトIRC−50（Na⁺）（ローム・アンド・ハース
社製）220mlを充填した塔に通し有効成分を吸
着させる。１の水で洗浄後、0.4N HCl溶液で溶離す
ると250ml分画でフラクシヨンNo.２〜５にかけ
て有効成分が溶出されてくる。このフラクシヨ
ンを0.2N水酸化ナトリウム溶液でPH４〜PH６
に調整後、活性炭150mlを充填した塔に通し有
効成分を吸着させる。500mlの水で洗浄後、50
％アセトン溶液（PH未調整）と50％アセトン溶
液（PH2.2）各々400mlずつ順次溶離すると、共
に有効成分が溶離されてくる。この活性溶液を
合した800mlを減圧濃縮し、アセトンを除去す
る。次いでこの濃縮液をCM−セフアデツクスＣ
−25（フアルマシア製）200mlを充填した塔を通
し有効物質を吸着させる。 0.3M塩化ナトリウム溶液１、0.5M塩化ナ
トリウム溶液１で洗浄した後、0.5M塩化ナ
トリウム溶液で溶離するとフラクシヨンNo.102
〜172（20ml分画）にかけて活性フラクシヨンが
溶離されてくる。この活性区分をクロマト用活
性炭（和光純薬製）50mlを充填した塔に通し有
効成分を吸着させ、200mlの水で洗浄後、50％
アセトン溶液、50％アセトン溶液（PH2.0）
各々200mlで溶離すると、有効物質が収率良く
溶離されてくる。この活性フラクシヨン800ml
を減圧濃縮して凍結乾燥すると、白色のSF−
2052物質がHCl塩として124mg（純度20％）得
られた。次いでこのうち120mgを50％メタノール水４
mlに溶解させ、予め90％メタノール水で洗浄し
たセフアデツクスLH−20（フアルマシア製）
380mlを充填した塔につけ、90％メタノール水
で展開するとフラクシヨンNo.12〜16（12ml分画）
にかけて有効物質が展開されてくる。この活性
フラクシヨン60mlを減圧濃縮し、凍結乾燥する
とSF−2052物質（HCl塩）の純品が白色粉末
として20mg得られた。

Claims

【特許請求の範囲】１ミクロモノスポラ属に属して次式で示される抗生物質SF−2052物質の生産菌を培
養し、その培養物より抗生物質SF−2052物質を
採取することを特徴とする抗生物質SF−2052物
質の製造法。