JPH1059864A - 経口がん転移抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 副作用が少なく、長期間投与することがで
き、かつ経口的に投与し得るがん転移抑制剤を提供す
る。 【解決手段】 非鉄飽和ラクトフェリン、ラクトフェリ
ン類の加水分解物、該加水分解物の薬学的に許容される
誘導体、該加水分解物の薬学的に許容される塩類、ラク
トフェリン類の加水分解物由来のペプチド類、該ペプチ
ド類の薬学的に許容される誘導体及び該ペプチド類の薬
学的に許容される塩類からなる群より選択される１種又
は２種の物質を有効成分として含有する経口がん転移抑
制剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、経口的に投与し得るが
ん転移抑制剤に関するものである。更に、詳しくは、本
発明は、非鉄飽和ラクトフェリン、ラクトフェリン類の
加水分解物、該加水分解物の薬学的に許容される誘導
体、該加水分解物の薬学的に許容される塩類、ラクトフ
ェリン類の加水分解物由来のペプチド類、該ペプチド類
の薬学的に許容される誘導体及び該ペプチド類の薬学的
に許容される塩類からなる群より選択される１種又は２
種の物質を有効成分として含有する経口がん転移抑制
剤、である。

【０００２】

【従来の技術】がんの診断、治療技術は著しく進歩し、
早期に発見されたがんの治癒率は、向上し続けている。
しかし、一旦治癒したかに見えたがんが再び他の臓器で
増殖する場合が多く、このためがんの臨床における転移
抑制の問題は重要性が増加している。転移の概略は、原
発巣からのがんの遊離、血管内又はリンパ節への侵入、
血流又はリンパ液中での移動、血管内皮、基底膜又はリ
ンパ節への接着、標的臓器での増殖等、多数の過程を経
ることが知られており（実験医学、第１２巻、第８号、
第９０６〜９１１ページ、１９９４年）、これらの過程
のいずれか、又は全部を阻害することにより、がん細胞
の転移を抑制することができる。

【０００３】従来、多くの制がん剤が転移抑制の目的に
も使用されてきたが、それらの転移抑制効果は明らかで
なかった（平成６年度日本癌学会総会記事、第４５８ペ
ージ、１９９４年）。また、新たに多数の物質が、がん
転移抑制を主たる目的として開発され、例えば、細胞外
マトリックスに存在する金属プロテアーゼ阻害剤として
転移浸潤を抑制できるカルボスチリル誘導体（特開平８
−８１４４３号公報）、細胞接着阻害活性を有する事に
より転移先の細胞にがん細胞の接着を防止するとされる
アミノハロゲノナフトキノン誘導体（特開平８−１１３
５５５号公報）等が知られている。

【０００４】これら種々の生理活性阻害因子は、その薬
剤が経口投与であっても、非経口投与であっても、それ
らの有効量を投与した場合、がん細胞以外の細胞にも同
様に作用するため強い副作用が現れ、有効量投与するこ
とは、患者のＱＯＬ(qualityof life) 上適切ではな
く、そのため満足すべきがん転移抑制剤は経口、非経口
を問わず、未だ実用化されていない。

【０００５】がんの転移は、乳がん等の原発巣から早期
に起こることも多いが、、５年後の生存率をもって一応
の治癒と解釈されるように、５年後、１０年後でも転移
して再発する（豊島滋著、「ガンの再発と転移」、第６
４ページ、自由国民社、１９７９年９月１０日、及び内
科、第４９巻、第６号、第１０６１〜１０６６ページ、
１９８２年）。従って、退院後のがん患者は、がん転移
抑制剤を、自宅療養段階において数年から１０年以上、
継続的に使用するのが普通であり、注射薬等は自宅療養
又は社会復帰後の患者が用いるためには、たとえ有効で
あっても多大な時間を費やして通院することが必要で、
多忙な患者にとって実用上使用が困難な薬剤である。こ
のような状況から長年にわたり安心して容易に使用で
き、かつ副作用の少ない経口投与薬剤が待望されていた
のである。

【０００６】天然物質であるドコサヘキサエン酸（ＤＨ
Ａ）及びその誘導体（特開平８−５３３５１号公報）、
シソの葉抽出物（特開平８−７３３７１号公報）等はこ
のような要望に合致する物質として開発されてきた。こ
れら天然物由来の経口がん転移抑制剤は、一般に副作用
は少ないが、効果は不十分であることが多く、また、独
特な風味、性状を有し、更に、酸化されやすい等使用上
不都合な性状を有する物質である。従って、個人の嗜好
性が高く、混合できる食品にも限界があり、多くの患者
が、がん転移抑制のため抵抗なく長期的、かつ継続的に
用いるのは困難であった。

【０００７】一方、ラクトフェリン(lactoferrin) は、
乳汁及び唾液、涙、粘膜分泌液等のヒトを含む哺乳動物
の体液に存在し、約１０％の糖鎖含量を有する分子量８
万前後の鉄結合性糖タンパク質であり、天然のラクトフ
ェリンは、通常飽和状態の１０〜２０％の鉄を結合して
いる（以下、非鉄飽和ラクトフェリンをＬｆと記載する
ことがある）。

【０００８】ラクトフェリンは、大腸菌、カンジダ菌、
クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を
示すことが知られており［ジャーナル・オブ・ペディア
トリクス(Journal of Pediatrics) 、第９４巻、第１ペ
ージ、１９７９年］、ブドウ球菌及び腸球菌に対して、
抗菌作用を有することも知られている［ジャーナル・オ
ブ・デイリー・サイエンス(Journal of Dairy Scienc
e)、第６７巻、第６０６ページ、１９８４年］。

【０００９】本発明者らは、ラクトフェリンの抗菌性に
着目し、哺乳類のラクトフェリン、アポラクトフェリ
ン、及び金属飽和又は部分飽和ラクトフェリン（以下、
これらをまとめてＬｆ類と記載することがある）の酸又
は酵素による加水分解物が、望ましくない副作用（例え
ば、抗原性等）等がなく、しかも未分解のそれらよりも
強い耐熱性及び抗菌性を有することを見い出し、既に特
許出願を行った（特開平５−３２００６８号公報、ヨー
ロッパ特許公開第４３８７５０号）。

【００１０】また、本発明者らは、Ｌｆ類の加水分解物
から強い抗菌活性を有するペプチドを単離し、それらの
ペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチド及びそ
れらのペプチドの誘導体を合成し、２０個のアミノ酸残
基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−９２９９４号公
報）、１１個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド
（特開平５−７８３９２号公報）、６個のアミノ酸残基
からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９７号公
報）、５個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特
開平５−１４９８２９６号公報）、３〜６個のアミノ酸
残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９５
号公報）を発明し、それぞれ既に特許出願した。

【００１１】更に、本発明者らは、Ｌｆ類の加水分解物
と同一のアミノ酸配列を有するペプチド又はこれらペプ
チドの誘導体に脳の保護作用（特開平６−１７２２００
号公報）、上皮細胞増殖因子による繊維芽細胞増殖を促
進する作用（特開平６−４８９５５号公報）及び神経成
長因子産生促進作用（特開平５−２３５５７号公報）が
あることを見い出し、それぞれ既に特許出願した。

【００１２】疾病の治療剤にラクトフェリンを応用した
例として、抗リウマチ剤（特開平５−１８６３６８号公
報）が知られており、ラクトフェリンの加水分解物につ
いては、チロシナーゼ活性阻害（ヨーロッパ特許公開第
４３８７５０号）、細胞への病原菌付着防止（特開平３
−２２０１３０号公報）、抗ウイルス作用（特開平１−
２３３２２６号公報）等が知られている。

【００１３】ラクトフェリンを抗がん剤として使用する
ことも検討され、例えば、鉄飽和ラクトフェリンは抗腫
瘍効果を有することが知られている（特公平５−８６９
３２号公報）。本発明者らは、ラクトフェリンを酸又は
酵素により加水分解した物質と同一のアミノ酸配列を有
するペプチド又はこれらペプチドの誘導体が非経口抗腫
瘍作用を有することを発見し、特許出願した（特開平７
−３０９７７１号公報）。

【００１４】がん転移抑制についても、いくつかの検討
がなされ、ラクトフェリンは、非経口投与により抗がん
転移活性を有するとの研究結果が、腫瘍細胞をマウスの
静脈内に注射し、ラクトフェリンは腹腔内に投与すると
いう特異な条件で報告されている［キャンサー・リサー
チ(Cancer Research) 、第５４巻、第２３１０〜２３１
２ページ、１９９４年］。更に、ラクトフェリン及びラ
クトフェリンのアミノ酸配列中の特定な２５個アミノ酸
からなるペプチドが、非経口投与によるがん転移抑制活
性を有することが発表されている（農芸化学会誌、第６
９巻、臨時増刊号、第１４３ページ、１９９５年）。

【００１５】このように、いくつかの研究にもかかわら
ず、ラクトフェリン、ラクトフェリン加水分解物又は特
定のアミノ酸配列を有するラクトフェリン由来のペプチ
ド等が経口投与により、がん転移抑制活性を有するか否
かについては、従来検討がなされていなかった。その理
由は、ラクトフェリンが経口投与された場合、消化酵素
の働きにより容易に分解されるため、生理活性、特にが
ん転移抑制活性のような高度な生理作用を示すはずがな
いと言う、タンパク質化学の一般的常識のためである。

【００１６】更に、ラクトフェリン加水分解物、ラクト
フェリン由来のペプチドは、加水分解前のタンパク質以
上に消化酵素によって分解されやすいことから、ラクト
フェリンと同様に経口投与によるがん転移抑制活性に関
しては何等検討がされていなかったのである。

【００１７】以上のとおり、長期使用でき、副作用が少
ない経口がん転移抑制剤が待望されていたが、未だに優
れた物質は、知られていないのが現実であり、またラク
トフェリン、ラクトフェリンの加水分解物、ラクトフェ
リン由来のペプチドが経口投与によりがん転移抑制作用
を有することは発表されておらず、文献にも記載されて
いない。

【００１８】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、副作用
が少なく、長期間投与することができ、かつ経口的に投
与し得るがん転移抑制剤を検索していたが、意外にも消
化酵素による分解が避けられないとされているＬｆに経
口がん転移抑制効果があることを見い出した。これを研
究する過程で、更に意外な現象として、Ｌｆ以上に消化
酵素による分解を受けやすいと考えられるラクトフェリ
ン類の加水分解物及びラクトフェリン類由来のペプチド
に、経口投与によるがん転移抑制効果があることを見い
出し、有効性の確認試験を重ねて、本発明を完成した。

【００１９】本発明は、以上の従来技術に鑑みてなされ
たものであり、副作用が少なく、長期間投与することが
でき、かつ経口的に投与し得るがん転移抑制剤を提供す
ることを目的としている。

【００２０】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明は、非鉄飽和ラクトフェリン、ラクトフェリン類の加
水分解物、該加水分解物の薬学的に許容される誘導体、
該加水分解物の薬学的に許容される塩類、ラクトフェリ
ン類の加水分解物由来のペプチド類、該ペプチド類の薬
学的に許容される誘導体及び該ペプチド類の薬学的に許
容される塩類からなる群より選択される１種又は２種の
物質を有効成分として含有する経口がん転移抑制剤、で
ある。

【００２１】また、本発明は、非鉄飽和ラクトフェリ
ン、ラクトフェリン類の加水分解物、該加水分解物の薬
学的に許容される誘導体、又は該加水分解物の薬学的に
許容される塩類が、３〜３２００ｍｇ／日／体重ｋｇの
割合で経口的に投与されること、ラクトフェリン類の加
水分解物由来のペプチド類、該ペプチド類の薬学的に許
容される誘導体、又は該ペプチド類の薬学的に許容され
る塩類が、０．２〜３２０ｍｇ／日／体重ｋｇの割合で
経口的に投与されること、及び該ペプチド類が、配列番
号１から配列番号３１のいずれかに記載のアミノ酸配列
を有することを望ましい態様としてもいる。

【００２２】次に、本発明について詳述する。

【００２３】

【発明の実施の形態】本発明の経口がん転移抑制剤の有
効成分の一つであるＬｆは、市販品又は哺乳動物の乳か
ら常法により分離されたものであり、生産量が多いこと
から、牛乳から分離されたものが望ましい。

【００２４】Ｌｆの分離、精製の一例を示せば、次のと
おりである。ＣＭ−セファロースＦＦ（ファルマシア社
製）をカラムに充填し、塩酸を通液し、水洗し、イオン
交換体を平衡化し、４℃に冷却したｐＨ６．９の脱脂乳
をカラムに通液し、透過液を回収し、再度同様にカラム
に通液する。次いで、蒸留水をカラムに通液し、食塩水
を通液し、イオン交換体に吸着した塩基性蛋白質溶出液
を得る。

【００２５】この溶出液に飽和度８０％で硫酸アンモニ
ウムを添加し、蛋白質を沈殿させ、遠心分離して沈殿を
回収し、飽和度８０％の硫酸アンモニウム溶液で洗浄
し、脱イオン水を添加して溶解し、得られた溶液を限外
濾過膜モジュール（例えば、旭化成社製のＳＬＰ００５
３）を用いて限外濾過し、のち水を添加し、同装置を用
いてダイアフィルトレーションを行い、脱塩し、凍結乾
燥し、粉末状ウシ・ラクトフェリンを得る。

【００２６】以上の方法により得られたＬｆの純度を、
電気泳動法により測定した結果、９５％（重量。以下、
分解率を除き、特に断りのない限り同じ）以上の純度を
有している。尚、凍結乾燥前の各精製工程におけるラク
トフェリン含有液を、本発明に使用できることは、いう
までもない。

【００２７】また、ヒトのＬｆは、大量に製造すること
はできないが、組換えＤＮＡ技術により得られる組換え
真菌、組換え乳牛（トランスジェニック・カウ）等によ
り生産されるヒトのＬｆであっても本発明に使用するこ
とができる。

【００２８】Ｌｆの有効投与量は、動物試験の結果から
積算して３〜３２００ｍｇ／日／体重ｋｇの範囲であ
る。

【００２９】本発明の経口がん転移抑制剤の他の有効成
分であるラクトフェリンの分解物又はペプチドをラクト
フェリンから製造する場合、出発物質として使用するラ
クトフェリンは、市販のラクトフェリン、哺乳類（例え
ば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ等）の初乳、移行
乳、常乳、末期乳等、又はこれらの乳の処理物である脱
脂乳、ホエー等から常法（例えば、イオン交換クロマト
グラフィー等）により分離したＬｆ、それらを塩酸、ク
エン酸等により脱鉄したアポラクトフェリン、アポラク
トフェリンを鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属でキレー
トした金属飽和又は部分飽和ラクトフェリン（以下、こ
れらをまとめてＬｆ類と記載することがある）であり、
市販品又は公知の方法により製造した調製品を使用する
こともできる。

【００３０】Ｌｆ類を、酸又は酵素を用いて加水分解す
る。酸による加水分解は、Ｌｆを０．１〜２０％、望ま
しくは５〜１５％、の濃度で水又は精製水に溶解し、得
られた溶液に塩酸、リン酸等の無機酸、又はクエン酸等
の有機酸を添加し、溶液のｐＨを１〜４、望ましくは２
〜３、に調整し、調整したｐＨにより適当な温度で所定
時間加熱し、加水分解する。例えば、ｐＨ１〜２に調整
した場合は、８０〜１３０℃、望ましくは９０〜１２０
℃、ｐＨ２〜４に調整した場合は、１００〜１３０℃、
望ましくは１００〜１２０℃、でそれぞれ１〜１２０分
間、望ましくは５〜６０分間、加熱する。

【００３１】酵素による加水分解は、Ｌｆを０．５〜２
０％、望ましくは５〜１５％、の濃度で水又は精製水に
溶解し、溶液のｐＨを使用する酵素の至適ｐＨに調整
し、１５〜５５℃、望ましくは３０〜５０℃、の温度に
加温し、３０〜６００分間、望ましくは６０〜３００分
間、保持して加水分解し、酵素反応液をそのまま、又は
中和し、加熱して酵素を失活する。

【００３２】使用する酵素は、特に制限がなく、市販の
酵素、例えば、モルシン（商標。盛進製薬社製。至適ｐ
Ｈ２．５〜３．０）、ブタペプシン（和光純薬工業社
製。至適ｐＨ２〜３）、スミチームＡＰ（商標。新日本
化学社製。至適ｐＨ３．０）、アマノＭ（商標。アマノ
社製。至適ｐＨ７．０）、トリプシン（ノボ社製。至適
ｐＨ８．０）等を単用又は任意に併用する。

【００３３】使用する酵素の量は、基質に対して０．１
〜５．０％の範囲、特に望ましくは０．５〜３．０％、
である。

【００３４】加水分解の分解率は、次の方法により測定
し、４〜５０％、望ましくは６〜４０％、である。即
ち、分解率は、ケルダール法により測定した全窒素量に
対するホルモール滴定法により測定したホルモール態窒
素量から式 分解率（％）＝（ホルモール態窒素量／全窒素量）×１
００ により算出した値である。

【００３５】Ｌｆ類加水分解物の有効投与量は、動物試
験の結果から積算して３〜３２００ｍｇ／日／体重ｋｇ
の範囲である。

【００３６】また、本発明のがん転移抑制剤の他の有効
成分であるＬｆ類由来のペプチドは、前記Ｌｆ類の加水
分解物から公知の分離手段によって単離されるペプチ
ド、このペプチドと同一のアミノ酸配列若しくは相同な
アミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの薬
学的に許容される誘導体、これらのペプチドの薬学的に
許容される塩類、これらのペプチドと同一若しくは相同
のアミノ酸配列を有する化学的に合成されたペプチド、
又はこれらの任意の混合物（以下、これらをペプチド類
と記載することがある）である。

【００３７】例えば、前記Ｌｆ類加水分解物の濾液を水
酸化ナトリウム溶液で中和し、８０℃で１０分間加熱し
て酵素を失活させ、室温に冷却し、遠心分離し、透明な
上清を得る。この上清を逆相高速液体クロマトグラフィ
−にかけ、０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含
む２０〜６０％のアセトニトリルのグラジエントで溶出
し、２７〜３０％のアセトニトリル含量の画分を分別
し、この画分を真空乾燥し、Ｌｆ類由来のペプチド類が
得られる。

【００３８】また、ペプチド自動合成装置（ファルマシ
アＬＫＢバイオテクノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎ
ｘ４１７０）を用い、シェパ−ド等による固相ペプチド
合成法［ジャ−ナル・オブ・ケミカル・ソサイエティ
−。パ−キン・トランザクション１：オーガニック・ア
ンド・バイオ−オーガニック・ケミストリー(Journal o
f Chemical Society． Perkin Transaction 1:Organic
and Bio-Organic Chemistry)、第５３８頁、１９８１
年］に基づいて次のとおりペプチドを合成することもで
きる。

【００３９】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸
又はFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−アス
パラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシク
ロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の
無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に
用いる。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアミノ
酸残基に相当するFmoc−アミノ酸無水物を、そのカルボ
キシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒として
ウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノ
ロジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジン
を含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ
酸のアミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配
列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−アミノ酸無水
物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定され
たアミノ酸の脱保護アミン官能基にカップリングさせ
る。以下同様にして順次アミノ酸を固定する。全部のア
ミノ酸のカップリングが終了し、所望のアミノ酸配列の
ペプチド鎖が形成された後、９４％ＴＦＡ、５％フェノ
−ル、及び１％エタンジオ−ルからなる溶媒で保護基の
除去及びペプチドの脱離を行ない、高速液体クロマトグ
ラフイ−によりペプチドを精製し、この溶液を濃縮し乾
燥すれば、合成によりＬｆ類由来のペプチド類が得られ
る。

【００４０】更に、これらのペプチド類と同一のアミノ
酸配列若しくは相同なアミノ酸配列を有するペプチド
類、これらのペプチド類の誘導体、これらのペプチド類
の薬学的に許容される塩類又はこれらの任意の混合物
は、例えば、前記特開平５−９２９９４号公報、特開平
５−７８３９２号公報、特開平５−１４８２９７号公
報、特開平５−１４９８２９６号公報及び特開平５−１
４８２９５号公報の各発明に記載された方法によって得
ることができる。

【００４１】Ｌｆ類由来のペプチド類の有効投与量は、
動物試験の結果から積算して０．２〜３２０ｍｇ／日／
体重ｋｇの範囲である。

【００４２】前記の方法によって得られるペプチド類と
しては、次のアミノ酸配列を有するペプチド類、その誘
導体又は塩類を望ましい態様として例示することができ
る。例えば、配列番号１、２及び２７のアミノ酸配列を
有するペプチド、その塩類又はその誘導体（特開平５−
７８３９２号公報）、配列番号３、４、５及び６のアミ
ノ酸配列を有するペプチド、その塩類又はその誘導体
（特開平５−１４８２９７号公報）、配列番号７、８、
９及び３１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類
又はその誘導体（特開平５−１４９８２９６号公報）、
配列番号１０乃至２１のアミノ酸配列を有するペプチ
ド、その塩類又はその誘導体（特開平５−１４８２９５
号公報）、配列番号２２から２６、２８、２９及び３０
のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類又はその誘
導体（特開平５−９２９９４号公報）である。

【００４３】前記ペプチド類の薬学的に許容される塩類
としては、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳
酸塩、酒石酸塩等の酸付加塩を例示でき、誘導体として
は、カルボキシル基をアミド化又はアシル化した誘導体
を例示することができる。

【００４４】前記のとおり得られたＬｆ、Ｌｆ類の加水
分解物、Ｌｆ類由来のペプチド類を、常法により糖衣
錠、タブレット、カプセル等の経口投与剤、栄養剤に配
合して経腸投与剤、飲料又はゼリー等の食品、又は飼料
として使用することができる。

【００４５】次に試験例を示して本発明を、更に詳述す
る。

【００４６】試験例１ この試験は、Ｌｆ及びＬｆ類由来ペプチドの経口がん転
移抑制効果を調べるために行った。

【００４７】１）試験試料、試験動物及び腫瘍細胞株 試験試料 市販のＬｆ粉末（森永乳業社製）及び参考例２と同一の
方法により、前記Ｌｆ粉末から調製したＬｆ由来ペプチ
ドを使用した。

【００４８】試験動物 ６週齢のＣＤＦ１マウス９０匹（日本チャールスリバー
社から購入）を、無作為に９群（１群１０匹）に分けて
使用した。

【００４９】腫瘍細胞 フィドラーらの方法［ネイチャー(Nature)、第２４２
巻、第１４８〜１４９ページ、１９７３年］を一部改良
し、次のとおり調製した。マウス大腸がんコロン２６細
胞（以下Ｃｏ２６細胞と記載することがある。財団法人
癌研究会癌研究所、癌化学療法センターより入手）１×
１０⁵ 個／マウスを、６週令Ｂａｌｂ／ｃマウス（日本
チャールスリバー社から購入）３匹に尾静脈注射し、約
３週間後に生成した肺転移腫瘍を取り出してすりつぶ
し、遊離した細胞の同数を再び同系統マウス３匹の尾静
脈に注射する。これを数回反復して、自然に肺に転移す
る高転移細胞系Ｃｏ２６Ｌｕを選別し、本試験に使用し
た。尚、Ｃｏ２６Ｌｕは、皮下移植後約１４日で転移す
ることが判明した。

【００５０】２）試験方法 ９群９０匹全てのＣＤＦ１マウスの背中皮下に１×１０
⁵ 個のＣｏ２６Ｌｕ細胞を移植した（０日目）。各群の
マウスに５〜９日目、１２〜１６日目及び１９〜２１日
目まで３００〜１０００ｍｇ／日／ｋｇ体重のＬｆ又は
３０〜１００ｍｇ／日／ｋｇ体重のＬｆ由来ペプチドを
１日１回経口投与し、対照群には何も投与しなかった。

【００５１】２２日目に肺を摘出し、アセトンで固定
し、目視により肺転移巣の数を計数し、肺への転移の抑
制効果を試験した。

【００５２】尚、Ｌｆ投与群中１群には１５０ｍｇ／日
／ｋｇ体重を１日２回（表１において１５０×２と表
示）、ペプチド投与群中１群には１５ｍｇ／日／ｋｇ体
重を１日２回（表１において１５×２と表示）投与し
た。

【００５３】３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなとおり、Ｌｆ及びＬｆ由来のペプチド投与群
は、投与量に応じて転移数はほぼ半減し、これらの物質
のがん転移抑制効果が明らかに認められた。更に、詳し
くは、Ｌｆ投与群では３００ｍｇ／日／ｋｇ体重の投与
量であっても、これを１日２回に分割して投与した群
が、より有効であり、一方Ｌｆ由来ペプチド投与群では
２回に分割して投与する意義は認められなかった。

【００５４】また一般の転移抑制剤では、その毒性のた
め移植した腫瘍の縮小が観察されるが、本試験では移植
腫瘍の大きさは、対照群とＬｆ及びＬｆ由来ペプチド投
与群との間で差がなく、これらの毒性が低いことが推定
された。更に、各臓器の顕微鏡観察によっても、肝臓等
他の臓器への転移は認められなかった。

【００５５】以上の結果から、Ｌｆ及びＬｆ由来のペプ
チドは、経口がん転移抑制効果があることが明らかであ
った。尚、他のペプチド類についても同様の試験を行っ
たが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００５６】

【表１】

【００５７】試験例２ この試験は、Ｌｆ、Ｌｆ加水分解物、及びＬｆ類由来ペ
プチド類の経口がん転移抑制効果を調べるために行っ
た。

【００５８】１）試験試料、試験動物及び腫瘍細胞株 試験試料 市販のＬｆ粉末（森永乳業社製。第１群に投与）、参考
例１と同一の方法によりこのＬｆ粉末から調製したＬｆ
加水分解物（第２群に投与）、参考例２と同一の方法に
よりこの加水分解物から調製したＬｆ由来ペプチド（第
３群に投与）、及び参考例３と同一の方法により化学的
に合成したＬｆ類由来ペプチド（有機合成ペプチド。第
４群に投与）を使用した。尚、対照としてウシ血清アル
ブミン（シグマ社製のフラクションＶ。対照群に投与）
を使用した。

【００５９】試験動物 ６週齢のＣＤＦ１マウス２０匹（日本チャールスリバー
社から購入）を、無作為に４群（１群５匹）に分けて使
用した。

【００６０】腫瘍細胞 試験例１で調製した肺への高転移細胞系Ｃｏ２６Ｌｕを
使用した。

【００６１】２）試験方法 Ｃｏ２６Ｌｕ細胞を移植後、各群に５日目から２７日目
まで毎日１回、表２に示す投与量により投与したこと、
及び２８日目に肺を摘出したことを除き、試験例１と同
一の方法により試験した。

【００６２】３）試験結果 この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなとおり、第１群乃至第４群はいずれも、対照群
と比較して転移数が少なく、これらの投与によるがん転
移抑制効果が認められた。尚、他のＬｆ、Ｌｆ類加水分
解物、及びＬｆ類由来ペプチド類についても同様の試験
を行ったが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００６３】

【表２】

【００６４】試験例３ この試験は、Ｌｆ類加水分解物の急性毒性を調べるため
に行った。

【００６５】１）使用動物 ６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購
入）の両性２０匹を用い、雄及び雌を無作為にそれぞれ
４群（１群５匹）に分けて使用した。

【００６６】２）試験方法 参考例１と同一の方法により製造したＬｆ加水分解物
を、注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、４ｍｌ／１０
０ｇ体重の割合で金属製玉付き針を用いて単回強制経口
投与し、急性毒性を試験した。投与量は１０００、２０
００及び４０００ｍｇ／ｋｇ体重であった。

【００６７】３）試験結果 この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から
明らかなとおり、この加水分解物を１０００ｍｇ／ｋｇ
体重及び２０００ｍｇ／ｋｇ体重の割合で投与した群に
死亡例は認められなかった。従って、この加水分解物の
ＬＤ₅₀は、２０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であり、毒性は
極めて低いことが判明した。尚、他のＬｆ加水分解物及
びＬｆ類由来のペプチド類についても同様の試験を行っ
たが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００６８】

【表３】

【００６９】試験例４ この試験は、ペプチド類の急性毒性を調べるために行っ
た。

【００７０】１）使用動物 ６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購
入）の両性３５匹を用い、雄及び雌を無作為にそれぞれ
７群（１群５匹）に分けて使用した。

【００７１】２）試験方法 参考例２と同一の方法で製造したＬｆ由来のペプチド
（加水分解物より精製したペプチド）及び参考例３と同
一の方法により製造したペプチド（有機合成によるペプ
チド）を、注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、４ｍｌ
／１００ｇ体重の割合で金属製玉付き針を用いて単回強
制経口投与し、急性毒性を試験した。投与量は１００
０、２０００及び４０００ｍｇ／ｋｇ体重であった。

【００７２】３）試験結果 この試験の結果は、表４に示すとおりである。表４から
明らかなとおり、いずれのペプチドを投与した場合も１
０００ｍｇ／ｋｇ体重及び２０００ｍｇ／ｋｇ体重の割
合で投与した群に死亡例は認められなかった。従って、
これらのペプチドのＬＤ₅₀は、２０００ｍｇ／ｋｇ体重
以上であり、毒性は極めて低いことが判明した。尚、他
のペプチド類についても同様の試験を行ったが、ほぼ同
様の結果が得られた。

【００７３】

【表４】

【００７４】参考例１（Ｌｆ加水分解物の調製） ウシのＬｆを使用して加水分解物を、次の方法により調
製した。

【００７５】市販されているウシのＬｆ（ミライ社製）
５００ｇを、精製水９．５ｌに溶解し、得られた溶液に
塩酸を添加してｐＨを３．０に調整し、のち市販の豚ペ
プシン（和光純薬工業社製）を１０ｇ添加し、３７℃で
６時間加水分解した。次に６規定の水酸化ナトリウムで
ｐＨを７．０に調整し、８０℃で１０分間加熱して酵素
を失活させ、室温に冷却し、セライト濾過し、濾液を凍
結乾燥し、粉末状のＬｆ加水分解物約４７０ｇを得た。
得られた加水分解物の分解率を前記と同一の方法により
測定した結果、３０％であった。

【００７６】参考例２（ペプチド類の調製） 市販されているウシのＬｆ（シグマ社製）５０ｍｇを精
製水０．９ｍｌに溶解し、０．１規定の塩酸でｐＨを
２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社
製）１ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次
いで０．１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調
整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温
に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、
透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯ
ＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマ
トグラフィ−にかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入
後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含
む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０
５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラ
ジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を
集め、真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃
度で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ
（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−に
かけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．
０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、の
ち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセ
トニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．
５分の間に溶出する画分を集め、真空乾燥し、ペプチド
を得た。

【００７７】前記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、
アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析
した。同一の試料を気相シ−クェンサ−（アプライド・
バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解
を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。ま
たＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾ
イック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法
［アナリティカル・バイオケミストリ−（Analytical B
iochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］
によりジスルフィド結合が存在することを確認した。

【００７８】その結果、このペプチドは、２５個のアミ
ノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基
がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ
−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイ
ン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合
した、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有している
ことが確認された。

【００７９】参考例３（ペプチド類の有機合成） ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用
い、シェパ−ド等による固相ペプチド合成法［ジャ−ナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエティ−。パ−キン・トラ
ンザクション１：オーガニック・アンド・バイオ−オー
ガニック・ケミストリー(Journal of Chemical Societ
y． Perkin Transaction 1:Organic and Bio-Organic C
hemistry)、第５３８頁、１９８１年］により、ペプチ
ドを次のとおり合成した。

【００８０】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸に、Ｎ，Ｎ−ジシクロ
ヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の無
水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に用
いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアスパラ
ギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、その
カルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒
としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオ
テクノロジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペ
リジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端
アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のちアミ
ノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−アルギ
ニン（Pmc:2,2,5,7,8-Pentamethyl-chroman-6-sulphony
l 基）無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂
に固定されたアスパラギンの脱保護アミン官能基にカッ
プリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、トリ
プトファン、グルタミン、及びフェニルアラニンを固定
した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、所望の
アミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４％ＴＦ
Ａ、５％フェノ−ル、及び１％エタンジオ−ルからなる
溶媒で保護基の除去及びペプチドの脱離を行ない、高速
液体クロマトグラフイ−によりペプチドを精製し、この
溶液を濃縮し、乾燥し、ペプチド粉末を得た。

【００８１】前記のペプチドについてアミノ酸分析計を
用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、次に参考例２
と同一のシークエンサーにより配列を決定したところ、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有することを確認
した。

【００８２】参考例４（アポラクトフェリンの調製） 脱脂乳から調製した市販のウシＬｆ粉末（ドモ社製）１
ｋｇを精製水２０ｌに溶解し、透析チューブ（三光純薬
社製。１−７／８）に入れ、４００ｌの０．１Ｍクエン
酸溶液（ｐＨ２．２）に対して４℃で３６時間透析し、
更にクエン酸を除去するため、４００ｌの脱イオン水に
対して、４℃で２４時間透析し（２回脱イオン水を交
換）、透析内液を、遠心分離して固形物を除去し、凍結
乾燥し、粉末状のアポラクトフェリン約９５０ｇを得
た。得られたアポラクトフェリンを分光光度計（日立製
作所製。２０００Ｕ）を用い、４５０ｎｍの吸光度によ
り、鉄の飽和度を測定した結果、飽和度は０％であっ
た。

【００８３】参考例５（アポラクトフェリン加水分解物
の調製） 参考例４のウシアポラクトフェリンを使用して加水分解
物を、次の方法により調製した。アポラクトフェリン５
００ｇを、精製水９．５ｌに溶解し、得られた溶液に１
Ｍ塩酸を添加してｐＨを２．０に調整し、１２０℃で１
５分間加熱し、冷却して加水分解物を得た。次に、６Ｍ
水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、セライト濾
過し、濾液を凍結乾燥し、粉末状のアポラクトフェリン
加水分解物約４００ｇを得た。この加水分解物の分解度
は、９％であった。

【００８４】参考例６（アポラクトフェリン由来ペプチ
ド類の調製） 参考例５のウシアポラクトフェリン加水分解物５０ｍｇ
を、精製水０．９ｍｌに溶解し、以下参考例２と同一の
方法で精製した。精製の最後のＴＳＫゲルＯＤＳ−１２
０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ
−では３５．５〜３７．５分の間に溶出する画分を集
め、真空乾燥し、アポラクトフェリン由来のペプチドを
得た。

【００８５】前記のペプチドを参考例２と同一の方法で
加水分解し、アミノ酸組成を分析し、アミノ酸配列を決
定し、更にＤＴＮＢを用いたジスルフィド結合分析法に
よりジスルフィド結合が存在することを確認した。

【００８６】その結果、このペプチドは、３２個のアミ
ノ酸残基からなり、１０番目と２７番目のシステイン残
基がジスルフィド結合し、１０番目のシステイン残基か
らＮ−末端側に９個のアミノ酸残基が、２７番目のシス
テイン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ
結合した、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有して
いることが確認された。

【００８７】次に実施例を示して本発明を、更に具体的
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
でない。

【００８８】

【実施例】

実施例１（Ｌｆを含有する動物用粉末飼料の調製） ウシのＬｆ（ミライ社製）６０ｇ及びＭＦ粉末飼料（オ
リエンタル酵母社製）３ｋｇを粉末混合機（関東混合機
社製。ＳＳ機種、型式Ｎｏ．１５１）で３０分間混合
し、５００ｇずつポリエチレン製の袋に分包し、２％Ｌ
ｆ含有飼料を得た。尚、この飼料を冷蔵庫内に保存し
た。

【００８９】実施例２（Ｌｆを配合した経腸栄養剤の調
製） 粉末状ウシのＬｆ（ミライ社製）２ｇ及び市販の経腸栄
養剤（エ−ザイ社製。クリニミール）１包（８９ｇ）に
５０〜６０℃の温湯１００ｍｌを添加し、泡立て器で均
一に混合し、更に温湯２４０ｍｌを添加して完全に溶解
し、これを１日数回分に分けて投与した。

【００９０】実施例３（Ｌｆを添加した飲料の調製） 脱脂粉乳（森永乳業社製）９０ｇを、５０℃の温湯８０
０ｍｌに溶解し、砂糖（日新精糖社製）３０ｇ、インス
タントコーヒー粉末（ネスレ社製）１４ｇ、カラメル
（昭和化工社製）２ｇ及びコーヒーフレーバー（三栄化
学社製）０．０１ｇ、を撹拌しながら順次添加して溶解
し、１０℃に冷却し、ウシのＬｆ（森永乳業社製）１ｇ
を水７５ｍｌに溶解した液を添加し、Ｌｆ０．１％を含
む乳飲料を調製した。

【００９１】実施例４（Ｌｆ散剤の調製） 予め６号ふるい（井内盛栄堂社製）で篩分けした市販の
ウシのＬｆ粉末（ミライ社製）１０ｇ及び乳糖（森永乳
業社製）５０ｇを乳鉢中で混和し、これに予め５号ふる
い（井内盛栄堂社製）で篩分けした乳糖４０ｇを添加し
て混和し、全量を再度５号ふるいで篩分けし、１包５ｇ
ずつ分包機（東京商会。ＯＭＰ−９０Ａ）で分包し、１
０％Ｌｆ散剤を得た。尚、この散剤を冷暗所に保存し
た。

【００９２】実施例５（Ｌｆ配合レアチ−ズケ−キの調
製） ビスケット（森永製菓社製）８枚計約１６０ｇを細切
し、加温して溶融したバタ−（森永乳業社製）３０ｇと
混合した。

【００９３】１８ｃｍの丸底の容器に敷き詰め、軽く
押し固める。

【００９４】粉末ゼラチン（マルハ社製）５ｇを水３
０ｍｌに膨潤させ、加温して溶解したす。

【００９５】ウシのＬｆ（ミライ社製）１０ｇを５０
℃に加温した牛乳（森永乳業社製）６０ｍｌに溶解し
た。

【００９６】クリ−ムチ−ズ（森永乳業社製）２５０
ｇを、加温して軟化し、クリ−ム状となし、グラニュ−
糖（三井精糖社製）５０ｇを添加して混練した。

【００９７】にのゼラチン液、の牛乳、レモン
汁１／２個分、を添加して混合し、冷却した。

【００９８】生クリ−ム（森永乳業社製）６０ｍｌを
泡立ててに添加し、の容器に充填し、冷蔵庫で冷却
して固化した。

【００９９】実施例６（Ｌｆ錠剤の調製） 約１ｌの乳鉢（中島製作所製）に結晶セルロース（和光
純薬工業社製）２０ｇを取り、水２０ｍｌを添加して混
和し、次いで予め４８メッシュのふるい（和科盛社製）
で篩分けした乳糖（森永乳業社製）２５ｇ及びウシのＬ
ｆ（森永乳業社製）５５ｇを添加して混和した。得られ
た湿塊をステンレス製２０メッシュふるい（和科盛社
製）上に取り、乾燥用ステンレス板２枚の上に手で押し
出して顆粒を形成し、手早く均等に分布させ、乾燥機に
入れ、２５℃で２日間乾燥し、微細な顆粒を得た。

【０１００】乾燥した顆粒を、ポリエチレン製２０メッ
シュふるいで篩分けし、ふるいを通過した顆粒を、広い
紙上に広げ、予め４８メッシュで篩分けしたステアリン
酸マグネシウム（関東化学社製）２ｇを添加し、手で混
ぜて均質にした。これを打錠機（木村製作所製。ＫＴ−
２型）により直径８ｍｍのＲ杵を使用して、打錠数を１
０、錠剤重量を０．６２ｇ及びモンサント硬度３．５〜
５．０ｋｇの圧縮圧力を設定して打錠し、５０％Ｌｆ含
有剤を得た。この錠剤を遮光したデシケーター（日本理
化学機器社製。ＮＲＴ−９０Ｂ）中に保存した。

【０１０１】実施例７（カプセル入りＬｆ加水分解物の
調製） 乳糖（和光純薬社製）６０ｇ、トウモロコシデンプン
（日清製粉社製）４０ｇ、結晶セルロース（和光純薬社
製）４０ｇ及び参考例１と同一の方法により調製したウ
シＬｆ加水分解物６０ｇを５０メッシュふるい（ヤマト
科学社製）により篩分けし、厚さ０．５ｍｍのポリエチ
レン製の袋にとり、転倒混合し、全自動カプセル充填機
（Cesere Pedini 社製。プレス式）を用い、前記粉末を
カプセル（日本エランコ社製。１号ゼラチンカプセル、
Op.Yellow No.6 Body 、空重量は７５ｍｇ）に内容量２
７５ｍｇで充填し、ウシＬｆ加水分解物８２ｍｇ入りの
カプセル剤を得た。尚、このカプセル剤を室温で保存し
た。

【０１０２】実施例８（Ｌｆ加水分解物を含有する固形
飼料の調製） 参考例１と同一の方法により調製したウシのＬｆ加水分
解物粉末５ｇ及び固形げっ歯類用飼料（船橋農場社製。
Ｆ２）１．５ｋｇを厚さ０．２ｍｍの透明ポリエチレン
製袋に入れ、開口部をポリエチレン製のひもで閉鎖し、
手で上下左右に約１０分間振盪し、粉末を固形試料の微
細な穴に入り込ませると同時に均一に混合し、のち２０
０ｇずつポリ袋に分包し、０．３３％Ｌｆ加水分解物含
有固形飼料を得た。尚、この飼料を冷暗所に保存した。

【０１０３】 実施例９（Ｌｆ加水分解物由来ペプチドを含有する錠剤） Ｌｆ加水分解物から得られたペプチド （参考例２と同一の方法により製造） ５０（ｍｇ） 結晶セルロース １７０ コーンスターチ ６６ タルク １１ ステアリン酸マグネシウム ３ １錠当り前記の割合の各原料を常法により均一に混合
し、造粒し、乾燥し、打錠し、１７％のペプチドを含有
する錠剤を得た。なお、Ｌｆ類加水分解物から得られた
ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。 実施例１０（Ｌｆ類加水分解物由来ペプチドを配合した
ババロアの調製） 板ゼラチン（マルハ社製）３枚約９ｇを水で膨潤させ、
チョコレ−ト（森永製菓社製。製菓用）３０ｇを、細切
して湯せんにつけて溶融した。これとは別にボールに卵
黄３個分を入れ、砂糖（三井精糖社製）７０ｇを添加
し、白みを帯びるまで泡立て器で攪拌し、これに前記溶
融チョコレートを添加し、更に攪拌して混合し、５０℃
に加温した牛乳（森永乳業社製）２２０ｍｌを徐々に添
加し、鍋に移し替えて弱火にかけ、絶えず攪拌しながら
加熱し、のち火を止めて膨潤させたゼラチンを添加し、
攪拌しながら溶解し、ステンレス製こし器で濾過し、氷
水中で冷却し、約５０℃に冷却したとき３０ｍｌの牛乳
に懸濁したウシのＬｆ由来ペプチド（参考例２と同一の
方法により調製）１ｇを添加し、攪拌して混合した。

【０１０４】一方、生クリーム（森永乳業社製。脂肪分
４５％ホイップクリーム）１００ｍｌをボールに入れ、
泡立て器で泡立て、これを前記の混合液に流し入れ、手
早く混合してステンレスの型に流し入れ、冷蔵庫内で固
化し、チョコレートババロアを得た。

【０１０５】 実施例１１（Ｌｆ由来有機合成ペプチドを含有する散剤） Ｌｆ類由来の有機合成ペプチド （参考例３と同様の方法により製造） ５０（ｍｇ） 結晶セルロース ３７５ コーンスターチ ５７５ １袋当り前記各材料を均一に混合し、常法により散剤１
５袋を調製した。尚、有機合成ペプチド以外の原料はい
ずれも市販品を用いた。

【０１０６】 実施例１２（有機合成ペプチドを含有するカプセル剤） Ｌｆ類由来の有機合成ペプチド （参考例３と同一の方法により製造） １０（ｍｇ） 乳糖 １２０ 結晶セルロース ４２ カルボキシメチルセルロース １０ タルク １５ ステアリン酸マグネシウム ３ １錠当り前記の割合の各原料を、常法により均一に混合
し、カプセル充填機を用いてカプセル剤を調製した。
尚、有機合成ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用
いた。

【０１０７】実施例１３（Ｌｆ類加水分解物を含有する
固形飼料の調製） 参考例６と同一の方法により調製したウシのアポラクト
フェリン加水分解物の粉末５ｇを用い、実施例８と同一
の方法により、０．３３％アポラクトフェリン加水分解
物含有固形飼料を得た。尚、この飼料を冷暗所に保存し
た。

【０１０８】 実施例１４（アポラクトフェリン加水分解物由来ペプチドを含有する錠剤） アポラクトフェリン加水分解物から得られたペプチド （参考例６と同一の方法により製造） ５０（ｍｇ） 結晶セルロース １７０ コーンスターチ ６６ タルク １１ ステアリン酸マグネシウム ３ １錠当り前記の割合の各原料を常法により均一に混合
し、造粒し、乾燥し、打錠し、１７％のペプチドを含有
する錠剤を得た。尚、アポＬｆ加水分解物から得られた
ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。

【０１０９】

【発明の効果】以上詳記したとおり、本発明は、非鉄飽
和ラクトフェリン、ラクトフェリン類の加水分解物、該
加水分解物の薬学的に許容される誘導体、該加水分解物
の薬学的に許容される塩類、ラクトフェリン類の加水分
解物由来のペプチド類、該ペプチド類の薬学的に許容さ
れる誘導体及び該ペプチド類の薬学的に許容される塩類
からなる群より選択される１種又は２種の物質を有効成
分として含有する経口がん転移抑制剤であり、本発明に
よって、奏せられる効果は次のとおりである。 （１）本発明のがん転移抑制剤は、食品、医薬品等とし
て経口的に容易に摂取してがんの転移を抑制できる。 （２）本発明のがん転移抑制剤は、食品である乳に由来
する蛋白質であるＬｆ、Ｌｆ類の加水分解物又はＬｆ類
に由来するペプチド類を有効成分としているので、長期
間使用しても副作用がなく、安全である。

【０１１０】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Lys Lys 1 5 10

【０１１１】配列番号：２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Arg Lys 1 5 10

【０１１２】配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Arg R01 R01 R01 R01 Arg 1 5

【０１１３】配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Arg 1 5

【０１１４】配列番号：５ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Lys 1 5

【０１１５】配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Arg R01 R01 R01 R01 Lys 1 5

【０１１６】配列番号：７ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Arg R01 R01 R01 Arg 1 5

【０１１７】配列番号：８ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Lys R01 R01 R01 Arg 1 5

【０１１８】配列番号：９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Arg R01 R01 R01 Lys 1 5

【０１１９】配列番号：１０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5

【０１２０】配列番号：１１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Phe Gln Trp Gln Arg 1 5

【０１２１】配列番号：１２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Gln Trp Gln Arg 1

【０１２２】配列番号：１３ 配列の長さ：３配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Trp Gln Arg 1

【０１２３】配列番号：１４ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Arg Arg Trp Gln Trp 1 5

【０１２４】配列番号：１５ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Arg Arg Trp Gln 1

【０１２５】配列番号：１６ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Trp Gln Trp Arg 1

【０１２６】配列番号：１７ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Gln Trp Arg 1

【０１２７】配列番号：１８ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Leu Arg Trp Gln Asn Asp 1 5

【０１２８】配列番号：１９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Leu Arg Trp Gln Asn 1 5

【０１２９】配列番号：２０ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Leu Arg Trp Gln 1

【０１３０】配列番号：２１ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Arg Trp Gln 1

【０１３１】配列番号：２２ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、２番のCys
と１９番のCys がジスルフィド結合している。 配列： Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys Val 20

【０１３２】配列番号：２３ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列においてCys*は、ジス
ルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル基を化学
的に修飾したシステインを示す。 配列： Lys Cys* Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys* Val 20

【０１３３】配列番号：２４ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、２番のCys
と１９番のCys がジスルフィド結合している。 配列： Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys Ile 20

【０１３４】配列番号：２５ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列においてCys*は、ジス
ルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル基を化学
的に修飾したシステインを示す。 配列： Lys Cys* Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys* Ile 20

【０１３５】配列番号：２６ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、３番のCys
と２０番のCys がジスルフィド結合している。 配列： Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 20 25

【０１３６】配列番号：２７ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。 配列： Lys Thr Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys 1 5 10

【０１３７】配列番号：２８ 配列の長さ：３８ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、１６番のCy
s と３３番のCys とがジスルフィド結合している。 配列： Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys 1 5 10 15 Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser 20 25 30 Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 35

【０１３８】配列番号：２９ 配列の長さ：３２ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１０
番のCys と２７番のCys とがジスルフィド結合してい
る。 配列： Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 10 15 Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg 20 25 30 Ala Phe

【０１３９】配列番号：３０ 配列の長さ：４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、配列の長さ
３６であって９番、２６番、及び３５番にCys を有する
ペプチドの、９番のCys と２６番のCys とがジスルフィ
ド結合し、上記配列の長さ３６のペプチドの３５番のCy
s が、配列の長さ１１であって１０番にCys を有するペ
プチドの１０番のCys とがジスルフィド結合している。 配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35 Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala 1 5 10

【０１４０】配列番号：３１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：本ペプチド、及び本ペプチドをフラグメン
トとして含むペプチド。次の配列において、R01 はCys
を除く任意のアミノ酸残基を示す。 配列： Lys R01 R01 R01 Lys 1 5

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 5/11 Ｃ０７Ｋ 5/11 5/117 5/117 7/06 7/06 7/08 7/08 14/79 14/79 (72)発明者 島村 誠一 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社生物科学研究所内 (72)発明者 高津 善太 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社生物科学研究所内 (72)発明者 関根 一則 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社生物科学研究所内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 非鉄飽和ラクトフェリン、ラクトフェリ
   ン類の加水分解物、該加水分解物の薬学的に許容される
   誘導体、該加水分解物の薬学的に許容される塩類、ラク
   トフェリン類の加水分解物由来のペプチド類、該ペプチ
   ド類の薬学的に許容される誘導体及び該ペプチド類の薬
   学的に許容される塩類からなる群より選択される１種又
   は２種の物質を有効成分として含有する経口がん転移抑
   制剤。
2. 【請求項２】 非鉄飽和ラクトフェリン、ラクトフェリ
   ン類の加水分解物、該加水分解物の薬学的に許容される
   誘導体、又は該加水分解物の薬学的に許容される塩類
   が、３〜３２００ｍｇ／日／体重ｋｇの割合で経口的に
   投与される請求項１に記載の経口がん転移抑制剤。
3. 【請求項３】 ラクトフェリン類の加水分解物由来のペ
   プチド類、該ペプチド類の薬学的に許容される誘導体、
   又は該ペプチド類の薬学的に許容される塩類が、０．２
   〜３２０ｍｇ／日／体重ｋｇの割合で経口的に投与され
   る請求項１に記載の経口がん転移抑制剤。
4. 【請求項４】 該ペプチド類が、配列番号１から配列番
   号３１のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する請求項
   １又は請求項３に記載の経口がん転移抑制剤。