JP7036503B2

JP7036503B2 - ビタミンｂ１２の安定性が優れたビタミンｂ１２含有酸性組成物

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Publication number: JP7036503B2
Application number: JP2017247336A
Authority: JP
Inventors: 香織喜田; 宗明朝武; 亮介石田
Original assignee: House Wellness Foods Corp
Current assignee: House Wellness Foods Corp
Priority date: 2017-12-25
Filing date: 2017-12-25
Publication date: 2022-03-15
Anticipated expiration: 2037-12-25
Also published as: JP2019110827A

Description

本発明は、ビタミンＢ_１２の分解速度が低減されている、及び／又はビタミンＢ_１２の安定性が優れた、ビタミンＢ_１２含有酸性組成物に関する。

ビタミンＢ_１２はビタミンＢ群の一種である。ビタミンＢ_１２は、神経機能と密接な関係があり、眼精疲労、筋肉痛、関節痛（肩こり、腰痛など）、神経痛、手足のしびれ等の神経症状の改善に効果があることから、ビタミンＢ_１２を配合した組成物が上市されている。

特許文献１には、ビタミンＢ_１とビタミンＢ_１２の両方を配合した液剤の保存安定性が悪いこと、その理由が、それぞれの安定ｐＨ領域が異なること、並びに、ビタミンＢ_１の分解物がビタミンＢ_１２の安定性を低下させること、ビタミンＢ_１２がショ糖水溶液中で特に不安定であることが記載されている。そして、特許文献１では、ビタミンＢ_１とビタミンＢ_１２両方の安定性向上のため、ｐＨを５．８～７．５に調整した内服用液剤が開示されている。

特許文献２には、ビタミンＢ_１とビタミンＢ_１２の両方の安定性を向上させるため、糖アルコールを添加し、ｐＨを３．５～４．５に調整した、複合ビタミン内服液剤が開示されている。

特許文献３には、ビタミンＢ_１２の１つのシアノコバラミンは、ｐＨ７．０～７．５の水溶液中で安定性が不安定であるが、タウリンを配合することにより安定化されることが開示されている。

特許文献４には、ビタミンＢ_１２は、ビタミンＢ_１、Ｂ_２、Ｂ_６、アスコルビン酸等の他のビタミン類と配合すると分解されて含量が低下するという課題が記載されている。そして、特許文献４ではこの課題を解決するための手段として、ビタミンＢ_１２を不活性担体に付着させ、その周囲を不活性糖類で被覆して成るビタミンＢ_１２含有組成物が開示されている。

特許文献５には、安定なビタミンＢ_１２製剤として、ビタミンＢ_１２類を含有するビタミンＥ類粒子がデンプン類中に分散状態にある組成物を、さらにケイ酸カルシウム中に分散させることを特徴とする粉末状組成物が記載されている。

特開２００１－７２５９４号公報特開平７－１１２９３３号公報特公昭６３－４０１６８号公報特開２０１６－２７００７号公報特開２００７－１８２３８６号公報

特許文献１ではビタミンＢ_１２の安定化のために内服用液剤のｐＨを５．８～７．５の範囲に調節する必要がある。特許文献２～５では、組成物中にビタミンＢ_１２と共に、安定化のために他の成分を配合することを前提としており、サプリメントや飲料の用途・形態が限定されてしまう場合がある。当該分野においては依然として、酸性組成物中でのビタミンＢ_１２の安定性を向上させる技術が切望されている。

本発明は、ビタミンＢ_１２の分解速度が低減されている、及び／又はビタミンＢ_１２の安定性が優れた、ビタミンＢ_１２含有酸性組成物を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２は、エタノールが存在することによって、その分解速度が増大すること、及び／又はその安定性が低下することを見出した。また、酸性組成物中に存在するエタノールの量を低減させることによって、ビタミンＢ_１２の分解速度が低減すること、及び／又はその安定性が向上することを見出した。

本発明はこれらの知見に基づくものであり、以下の発明を包含する。
［１］ビタミンＢ_１２を含有する酸性組成物であって、エタノールの含有量が０．１重量％未満であることを特徴とする、組成物。
［２］エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの含有量が合計で０．１重量％未満である、［１］に記載の組成物。
［３］プロトン性有機溶媒の含有量が合計で０．１重量％未満である、［２］に記載の組成物。
［４］容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、［１］～［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］ビタミンＢ_１２を含有する酸性組成物の製造方法であって、エタノールの量が０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、方法。
［６］エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、［５］に記載の方法。
［７］プロトン性有機溶媒の量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、［６］に記載の方法。
［８］前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、［５］～［７］のいずれかに記載の方法。
［９］酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の安定性を向上させる方法であって、前記組成物中に含まれるエタノールの量を０．１重量％未満とすることを含む、方法。
［１０］前記組成物中に含まれるエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、［９］に記載の方法。
［１１］前記組成物中に含まれるプロトン性有機溶媒の量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、［１０］に記載の方法。
［１２］前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、［９］～［１１］のいずれかに記載の方法。

本発明によれば、ビタミンＢ_１２の分解速度が低減されている、及び／又はビタミンＢ_１２の安定性が優れた、ビタミンＢ_１２含有酸性組成物を提供することができる。本発明によれば、保存安定性に優れ、ビタミンＢ_１２を効率的に摂取することが可能な、ビタミンＢ_１２含有酸性組成物を提供することができる。

本発明は、ビタミンＢ_１２を含有し、かつエタノールの含有量が低減されていることを特徴とする酸性組成物に関する。

本発明において、「ビタミンＢ_１２」とは、ビタミンＢ複合体の水溶性ビタミンの一つであり、コバルトを含むビタミンの総称である。ビタミンＢ_１２は、ヒドロキソコバラミン、アデノシルコバラミン、メチルコバラミン、シアノコバラミン、スルフィトコバラミン、或いは、医薬品や飲食品において許容可能なその誘導体又はその塩を、具体的な化合物として包含する。

ビタミンＢ_１２は食物から抽出又は精製されたものであってもよいし、微生物により生産されたものであってもよいし、化学的に合成されたものであってもよい。ビタミンＢ_１２を含有する食物としては、特に限定はされないが、牡蠣、しじみ、イクラ、さんま、にしん等の魚介類や、トリ、ウシ、ブタのレバー等の肉類を挙げることができる。

ビタミンＢ_１２のうちシアノコバラミンは、放線菌（ストレプトマイセス属）又は細菌（アグロバクテリウム属、バシルス属、フラボバクテリウム属、プロピオニバクテリウム属、リゾビウム属）などの培養液より分離して得ることができる。

本発明の組成物にはビタミンＢ_１２を、０．００１ｐｐｍ～５ｐｐｍ、好ましくは０．００５ｐｐｍ～０．５ｐｐｍ、より好ましくは、０．０１ｐｐｍ～０．０５ｐｐｍの範囲より選択される量にて適宜含めることができる。例えば、本発明の組成物には一回の経口摂取量当たり、ビタミンＢ_１２を０．９μｇ以上、１．０μｇ以上、１．２μｇ以上、１．５μｇ以上、１．８μｇ以上、２．０μｇ以上、２．１μｇ以上、２．２μｇ以上、２．３μｇ以上、２．４μｇ以上、２．５μｇ以上、３．０μｇ以上、３．２μｇ以上の範囲で適宜含めることができる。例えば、厚生労働省が公表する「日本人の食事摂取基準（２０１５年版）」にて推奨されるビタミンＢ_１２の摂取量（日）が含まれる範囲が好ましい。「一回の経口摂取量」とは、上記組成物が一度に経口摂取される量、あるいは短い時間間隔（例えば１０分以下、好ましくは５分以下の時間）をおいて連続的に複数回で経口摂取される総量を意味する。当該組成物が液状又は半固形状（ゲル状、ゾル状等）の形態である場合には、例えば５０ｍＬ～５００ｍＬ（典型的には５０ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、１８０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ又は５００ｍＬ）がその量である。一回の経口摂取量当たりに含まれるビタミンＢ_１２の量の上限は特に限定されず、例えば、１０μｇ以下、９μｇ以下、８μｇ以下、７μｇ以下、５μｇ以下、４μｇ以下の範囲より適宜決定することができる。

本発明において、「プロトン性有機溶媒」とは、自分自身で解離してプロトンを生じる有機溶媒を意味し、電気陰性度の大きな原子、すなわち、窒素原子や酸素原子に結合した水素原子を有するものを意味する。このようなプロトン性有機溶媒としては、例えば、低級アルコール（エタノール、メタノール）、グリセリン、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等が挙げられるが、これらに限定はされない。

下記実施例にて詳述されるとおり、エタノールは、酸性組成物中にてビタミンＢ_１２の分解速度を増大させる効果を有する。したがって、酸性組成物中に含まれるエタノールの量を低減することによって、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の分解速度を低減することができ、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の保存安定性を高めることができる。エタノールだけでなく、エタノールと同様にプロトン性有機溶媒であるグリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンもまた、ビタミンＢ_１２の分解速度を増大させる効果を有するため、好ましくは、酸性組成物中に含まれるエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計量を低減することによって、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の分解速度を低減することができ、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の保存安定性を高めることができる。特に好ましくは、酸性組成物中に含まれるプロトン性有機溶媒（エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等を含む）の合計量を低減することによって、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の分解速度を低減することができ、酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の保存安定性を高めることができる。

本発明の組成物に含まれるエタノールの量は、ビタミンＢ_１２の分解速度を低減し、及び／又は、保存安定性を高めるために、可能な限り低減させることが好ましく、組成物に含まれるエタノールの含有量を低減させるほど、組成物におけるビタミンＢ_１２の保存安定性を高めることができる。例えば、ビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物よりも、含まれるエタノールの量を低減することによって、従来の酸性組成物と比べて、ビタミンＢ_１２の分解速度が低減し、及び／又は、保存安定性の高い組成物を得ることができる。したがって、本発明の組成物に含まれるエタノールの量は、ビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物におけるエタノールの量と比べて少ない量であればよく、特に限定されるものではないが、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲とすることができる。特に好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲とすることができる。

本発明の組成物における、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計量は、ビタミンＢ_１２の分解速度を更に低減し、及び／又は、保存安定性を更に高めるために、可能な限り低減させることが好ましい。本発明の組成物中のエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計量は、ビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物における前記合計量と比べて少ない量であればよく、特に限定されるものではないが、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲とすることができる。特に好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲とすることができる。

本発明の組成物における、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等を含むプロトン性有機溶媒の合計量は、ビタミンＢ_１２の分解速度を更に低減し、及び／又は、保存安定性を更に高めるために、可能な限り低減させることが好ましい。本発明の組成物中のプロトン性有機溶媒の合計量は、ビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物における前記合計量と比べて少ない量であればよく、特に限定されるものではないが、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲とすることができる。特に好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲とすることができる。

本発明における「エタノール」、「エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミン」並びに「プロトン性有機溶媒」という用語は、それぞれ、本発明の酸性組成物の製造過程において配合されるものだけでなく、当該組成物の製造に用いられる原材料の製造過程において配合される／混入するものも包含する。例えば、今日、ほとんど全ての種類の香料製剤にはエタノールが含有される（植松ら、食衛誌、Vol.38,No.6,pp.452-459, December, 1997）。しかしながら、市販の香料製剤については、最終製品に配合した希釈剤は表示されるが、香料の抽出に用いた溶剤の場合には表示されない場合があり、また、香料製剤を調合する際に多種類の香料を混合することから、混合前の香料に含有されていた溶剤は表示されない場合がある。このため、香料製剤についてエタノールを含む旨の表示がない場合であっても、実際には含まれる場合があり、このような香料製剤を本発明の組成物に配合した場合には、組成物中のエタノールの含量を増大させ、ビタミンＢ_１２の分解速度を増大させ得る。

なお、本発明の組成物中の「エタノール」、「エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミン」並びに「プロトン性有機溶媒」の量は、それぞれ、従来公知の一般的な手法により測定することが可能である。例えば、組成物中の各溶媒成分の含有量は、当該組成物を無水硫酸ナトリウム及びアセトニトリルと混合し、これをろ過し、得られたろ液をアセトニトリルに溶解した液を分析サンプルとして、ガスクロマトグラフィーに付すことにより求めることができる（一色賢司、食衛誌．Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．１，ｐｐ.３９－４５，１９８５）。

本発明において、「酸性組成物」とは、ｐＨ値が４．５以下である組成物を意味し、例えば、ｐＨ４．５未満、ｐＨ４．４未満、ｐＨ４．３未満、ｐＨ４．２未満、ｐＨ４．１未満、ｐＨ４．０未満、ｐＨ３．９未満、ｐＨ３．８未満、ｐＨ３．７未満、ｐＨ３．６未満、ｐＨ３．５未満、ｐＨ３．４未満、又は、ｐＨ３．３未満とすることができる。ｐＨ値の下限は特に限定されず、酸性組成物の形態に応じて適宜決定することが可能であり、例えば、ｐＨ２．５以上、ｐＨ２．６以上、ｐＨ２．７以上、ｐＨ２．８以上、ｐＨ２．９以上、ｐＨ３．０以上、ｐＨ３．１以上、又は、ｐＨ３．２以上とすることができる。

本発明の酸性組成物が清涼飲料水の形態である場合には、当該ｐＨ値はｐＨ４．０未満とすることが好ましい。食品衛生法の食品別規格基準によれば、清涼飲料水の殺菌・除菌の方法はｐＨ４．０を境に大きく異なっており、ｐＨ４．０未満のものの殺菌は、中心部温度を６５℃にて１０分間加熱することが求められるのに対して、ｐＨ４．０以上のものの殺菌は、中心部温度を８５℃にて３０分間加熱することが求められる。故に、ｐＨ値の上限をｐＨ４．０未満とすることによって、殺菌工程による負荷を小さくし、殺菌工程におけるビタミンＢ_１２の分解を小さくすることができ、好ましい。なお、本明細書において、ｐＨ値は品温２０℃で測定された値を指す。

本発明の酸性組成物のｐＨ値は、加えられる酸味料の量を適宜調節することによって調節することができる。酸味料としては医薬や飲食品の製造に一般的に利用されるものが挙げられ、例えばクエン酸、リンゴ酸、グルコン酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、又はこれらの塩などがあり、これらのうちの１種又は２種以上の混合物を加えることができる。

本発明の酸性組成物には、ビタミンＢ_１２に加えて、医薬又は飲食品として許容可能な賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶剤、溶解補助剤、等張化剤、安定化剤、矯味矯臭剤、ｐＨ調整剤、香料製剤、甘味料、増粘剤、防腐剤、ビタミン類、寒天等のその他の原材料を、当該組成物において所望される形態に応じて適宜選択、配合することができる。ただし、これらの成分は、エタノールを含まない、又はエタノールの含量が低いものを利用することが好ましく、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンを含まない、又はそれらの合計含量が低いものを利用することがより好ましく、プロトン性有機溶媒（エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸、ブチルアミン等を含む）を含まない、又はプロトン性有機溶媒の合計含量が低いものを利用することが特に好ましい。例えば、上記のとおり、今日、ほとんど全ての種類の香料製剤にはエタノールが溶媒として含有される。本発明においては、このような香料製剤に代えて、溶媒としてエタノールではなく、中鎖脂肪酸及び／又は乳化剤から選択される一又は複数を利用する香料製剤を含めることができる。ここで特に限定されるものではないが、中鎖脂肪酸としては、Ｃ８，Ｃ１０，Ｃ１２トリグリセライド等を利用することが可能であり、乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等を利用することができる。

本発明の酸性組成物は、医薬品（医薬部外品を含む）又は飲食品の形態で提供することができる。これらの形態は、液状組成物又は半固形状組成物（ゲル状、ゾル状等）等の形態とすることができ、上記ビタミンＢ_１２に加えて、上記その他の原材料をその剤形に応じて、適宜配合し、常法に従って調製することができる。

例えば、本発明の酸性組成物は、容器詰め飲料とすることができる。本発明の酸性組成物（液状組成物）を収容するための容器は、飲料用容器として使用される容器を適宜用いることができ、限定されないが、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）製容器、所謂ＰＥＴボトルや、金属缶容器等が挙げられる。容器の形態は特に限定されない。また、容器の容量は特に限定されないが、例えば５０～５００ｍＬ（典型的には５０ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、１８０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ又は５００ｍＬ）、好ましくは１００～２００ｍＬとすることができる。

あるいは、本発明の酸性組成物は、容器詰めゼリー飲料とすることができる。本発明の酸性組成物（半固形状（ゲル状、ゾル状等）組成物）を収容するための容器は、ゼリー飲料用容器として使用される容器を適宜用いることができ、限定されないが、樹脂フィルム、及び／又は、金属フィルム製容器、パウチ容器等が挙げられる。また、容器の容量は特に限定されないが、例えば５０ｍＬ～２００ｍＬ（典型的には５０ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、１８０ｍＬ、２００ｍＬ）とすることができる。

本発明の酸性組成物は、食物から抽出もしくは精製されたビタミンＢ_１２、又は、化学的に合成されたビタミンＢ_１２、酸味料、必要に応じて上述のようなその他の原材料、並びに残部として水を混合し、エタノールの含有量がビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物におけるエタノールの含有量と比べて少ない量、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲、好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲となるようにして製造することができる。本発明のより好ましい実施形態に係る酸性組成物は、食物から抽出もしくは精製されたビタミンＢ_１２、又は、化学的に合成されたビタミンＢ_１２、酸味料、必要に応じて上述のようなその他の原材料、並びに残部として水を混合し、エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの合計の含有量がビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物におけるエタノールの含有量と比べて少ない量、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲、好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲となるようにして製造することができる。本発明の特に好ましい実施形態に係る酸性組成物は、食物から抽出もしくは精製されたビタミンＢ_１２、又は、化学的に合成されたビタミンＢ_１２、酸味料、必要に応じて上述のようなその他の原材料、並びに残部として水を混合し、プロトン性有機溶媒の合計の含有量がビタミンＢ_１２を含有する従来の酸性組成物におけるプロトン性有機溶媒の合計の含有量と比べて少ない量、具体的には０．１重量％未満、例えば、０．０９重量％未満、０．０８重量％未満、０．０７重量％未満、又は０．０６重量％未満の範囲、好ましくは、０．０５重量％以下、０．０４重量％以下、０．０３重量％以下、０．０２重量％以下、又は０．０１重量％以下の範囲となるようにして製造することができる。本発明の酸性組成物の容器への収容、及び殺菌の手段は任意に選択することができる。

以下に実施例及び試験例を示し、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。

＜実施例＞
（標品作成方法）
予め４００μｇ／ｍＬに調整したＢ_１２標準溶液５ｍｇを褐色メスフラスコに精秤し、水で２００ｍＬに希釈定容した。さらに、希釈定容した溶液の４ｍＬを褐色メスフラスコに精秤し、水で１００ｍＬに希釈定容し、ＨＰＬＣ測定における検量線作成のための標準溶液とした。

（ＨＰＬＣ測定前処理方法）
ビタミンＢ_１２を含む溶液サンプル２５ｇを褐色メスフラスコに精秤した。下記に記載する調整済み試薬を添加後、沸騰水中で３０分間の加熱を行った。
水：８０ｍＬ
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）：２０ｍＬ
シアン化カリウム（０．０５％）：２ｍＬ
加熱終了後に水冷却を行い、水で２００ｍＬに定容後、ＰＶＤＦフィルター（ＷｈａｔｍａｎＧＤ／ＸＳｙｒｉｎｇｅＦｉｌｔｅｒ；直径２５ｍｍ、孔径０．４５μｍ）を用いて溶液を濾過した。次に、コンディショニング済み固相カラム（アジレント・テクノロジー社製ＢｏｎｄＥｌｕｔｅＭＥＧＡＢＥ－Ｃ１８）に濾液を２５ｍＬ通液した。試料液通液後の固相カラムに洗浄液１００ｍＬを通液した。洗浄は、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）を水で１０倍に希釈した溶液を通液することで行った。２５ｍＬ容ナシ型フラスコ内に固相カラム吸着物を、メタノールを用いて溶出した。日本ビュッヒ社製ロータリーエバポレーター（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ（登録商標）Ｒ－２１０）を用いて濃縮乾固した後、水１ｍＬを添加して残留物を再溶解した。溶解物をＣＡフィルター（ＭＳＣＡＳｙｒｉｎｇｅＦｉｌｔｅｒ；直径１３ｍｍ、孔径０．４５μｍ）を用いて濾過し、試料溶液とした。

（ＨＰＬＣ測定条件）
装置：日立ハイテクサイエンス製ＬａＣｈｒｏｍＥｌｉｔｅ
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫＣ１８ＵＧ１２０５μｍ（３．０ｍｍφ×１５０ｍｍ）（資生堂）
温度：５０℃
流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
注入量：２００μＬ
検出：紫外可視分光検出器５５０ｎｍ
移動相：
Ａ：０．０５ｍｏｌ／ＬＫＨ_２ＰＯ_４（和光純薬工業株式会社）（ｐＨ２．１）
Ｂ：アセトニトリル（和光純薬工業株式会社）
Ａ／Ｂ＝９３／７

（ベース液調整方法）
イオン交換水にグラニュー糖２．５％、果糖１．２％、Ｌ－アスコルビン酸０．８％、クエン酸０．２％、クエン酸三ナトリウム０．２％、ビタミンＢ_１２０．０３２ｐｐｍになるように添加し、１．０Ｎ塩酸（和光純薬工業株式会社）、１．０Ｎ水酸化ナトリウム（和光純薬工業株式会社）を用いて目標ｐＨに調整しベース液とした。

（試験１）
表１に示す組成の各溶液を、ビタミンＢ_１２を含む溶液サンプルとしてＨＰＬＣ測定前処理方法に記載の方法で前処理して試料溶液とし、得られた試料溶液をＨＰＬＣ測定条件に従いＨＰＬＣ測定した。標準溶液を用いて作成した検量線を用い、ＨＰＬＣ測定値からビタミンＢ_１２量を求め、０日目の値とし、これを１００％とした。表１に示す組成の各溶液を遮光されたレトルトパウチに約１００ｍＬ室温充填後、ＬＡＵＤＡ製恒温水槽（Ｄ２０ＫＰ）を使用して８０℃１０分間の湯殺菌を行った。殺菌後の各溶液を、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製恒温庫（ＡＧＸ－３４５）を使用して５０℃で保存し同様に０日目、３日目のビタミンＢ_１２の測定を行った。

結果を表２に示す。表２の結果より、プロトン供与性有機溶媒であるエタノールを添加した比較例１ＥのみがビタミンＢ_１２の分解を促進した。溶解パラメーター（ＳＰ値、エタノール：１２．７、アセトニトリル：１１．９）がほぼ同等であるアセトニトリルを添加した比較例１Ａはほぼ実施例と同様の分解率となった。このことからビタミンＢ_１２の溶解度の影響はほぼなく、ビタミンＢ_１２の分解促進はエタノール特有の現象でビタミンＢ_１２の分解機構からプロトン供与性が原因と推察された。

＜参考実験＞
Ｉ．材料・測定方法
１．標準原液
葉酸１００ｍｇを２００ｍＬ褐色ビーカーに精秤し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（和光純薬）を５ｍＬ添加して溶解した。次いで、特級エタノール（和光純薬）１０ｍＬを添加・混和後、イオン交換水１００ｍＬと０．１Ｎ塩酸（和光純薬）にて溶液のｐＨを７．０～８．０に調整した。２００ｍＬ褐色メスフラスコとイオン交換水を用いて所定量に定容し、ＨＰＬＣ測定における検量線作成のための標準原液とした。

２．ＨＰＬＣ測定
葉酸を含む溶液サンプルは、重量を測定後、１．０Ｎ水酸化ナトリウム溶液（和光純薬）を用いてｐＨ１２．０（ＨＯＲＩＢＡ製ｐＨメーター（Ｆ－７２））に調整した。次いで、１０分間撹拌後（ＡＳＯＮＥ製マグネティックスターラー（ＲＳＨ－１ＡＮ））、１．０Ｎ塩酸（和光純薬）を用いてｐＨ７．０に調整し、ろ過し（ＡＳＯＮＥ製０．４５μｍフィルター（ＳＹ２５ＴＦ））、得られたろ液をＨＰＬＣ測定に付した。

ＨＰＬＣ測定は、以下の条件にて実施した。
装置：ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＨ－Ｃｌａｓｓシステム
カラム：ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅＣ１８５μｍ６×２５０ｍｍ
温度：５０℃
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：１２％メタノール（和光純薬）、０．３％酢酸（和光純薬）、１．０８％オクタスルホン酸Ｎａ溶液（和光純薬）

３．ベース液
イオン交換水にグラニュー糖２．５重量％、果糖１．２重量％、Ｌ－アスコルビン酸０．８重量％、クエン酸０．２重量％、クエン酸三ナトリウム０．２重量％、及び葉酸０．０００３重量％を添加し、１．０Ｎ塩酸（和光純薬）、及び１．０Ｎ水酸化ナトリウム（和光純薬）を用いて、所定のｐＨに調整し、ベース液とした。

ＩＩ．参考試験１：エタノール添加の影響（１）
下記表３に示す組成に従って、ベース液、ならびに、エタノール、又は、アセトニトリルを含み、所定のｐＨを有する溶液（参考例１～７、参考比較例１Ｅ～７Ｅ（エタノール添加）、参考比較例１Ａ～７Ａ（アセトニトリル添加））をそれぞれ調製した（０日目）。

各溶液を遮光されたレトルトパウチに１００ｍＬ室温充填し、その後８０℃にて１０分間湯殺菌（ＬＡＵＤＡ製恒温水槽（Ｄ２０ＫＰ））を行った。次いで、各溶液を５０℃で所定の期間保存し（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製恒温庫（ＡＧＸ－３４５））、保存後の各溶液中の葉酸量をＨＰＬＣにより測定した。

保存後の各溶液中の葉酸量の測定結果を下記表４に示す。なお、表中の葉酸量の数値は、０日目の溶液中の葉酸量を「１００」とする相対値にて示す。

表４に示すとおり、プロトン供与性有機溶媒であるエタノールを添加した参考比較例１Ｅ～７Ｅにおいて、葉酸の分解速度が顕著に増大したことが確認された。

一方、溶解パラメーター（ＳＰ値）がエタノールと同程度であるアセトニトリル（ＳＰ値、エタノール：１２．７、アセトニトリル：１１．９）を添加した参考比較例１Ａ～７Ａにおいては、参考例と同程度の葉酸量が確認され、アセトニトリルの添加により葉酸の分解速度が顕著に増大することは認められなかった。

これらの結果は、参考比較例１Ｅ～７Ｅにおいて認められる葉酸の分解速度の増大が、葉酸の溶媒に対する溶解度に由来するものではなく、エタノール添加に基づく、エタノールの存在に由来するものであることを示す。

ＩＩＩ．参考試験２：エタノール添加の影響（２）
下記表５に示す組成にしたがって、ベース液、及びエタノールを含み、ｐＨを３．５とする溶液（参考例８、９、参考比較例８Ｅ）をそれぞれ調製した（０日目）。

各溶液を上記参考試験１と同様に、レトルトパウチに充填、殺菌、保存し、保存後の各溶液中の葉酸量をＨＰＬＣにより測定した。

保存後の各溶液中の葉酸量の測定結果を下記表６に示す。なお、表中の葉酸量の数値は、０日目の溶液中の葉酸量を「１００」とする相対値にて示す。

表６に示すとおり、エタノールの添加によって保存後の葉酸量の低下が認められたが（上記表４の参考例４と比較）、エタノールを０．０３重量％及び０．０５重量％含む参考例８及び９と比べて、エタノールを０．５重量％含む参考比較例８Ｅにおいては、保存後の葉酸量が顕著に低いことが確認された。一方、参考例８及び９との間で、保存後の葉酸量に大きな差は認められなかった。

この結果より、エタノールの含量が多いほど葉酸の分解速度が大きいことが確認されるが、エタノールの含量が０．０５重量％以下となる場合には、葉酸の分解速度があまり変化しないことが示唆される。

ＩＶ．参考試験３：エタノール添加の影響（３）
下記表７に示す組成にしたがって、葉酸を含む溶液（参考例１０、参考比較例９Ｅ）をそれぞれ調製した（０日目）。なお、香料１はエタノールを含まず中鎖脂肪酸とグリセリン脂肪酸エステルを溶媒として用いて、溶液化した香料であり、香料２は溶媒としてエタノールを５０重量％（最終製品濃度０．１重量％）含む香料である。

各溶液を上記参考試験１と同様に、殺菌、保存し、保存後の各溶液中の葉酸量をＨＰＬＣにより測定した。

保存後の各溶液中の葉酸量の測定結果を下記表８に示す。なお、表中の葉酸量の数値は、０日目の溶液中の葉酸量を「１００」とする相対値にて示す。

表８に示すとおり、香料に含まれるという形にしてもエタノールが添加されることによって、溶液中の葉酸の分解速度は増大することが確認された。

一般的に、飲料や水系食品においては、分散性を高めるために香料はエタノール含有製剤が用いられている。しかしながら、上記の結果より、葉酸の分解速度を低減し、安定化を図るためには、エタノールを含有しない香料を用いること、すなわち、エタノールを含有しない原材料を用いることが有利であることが示された。

Claims

ビタミンＢ_１２及び香料製剤を含有する酸性組成物であって、前記香料製剤が中鎖脂肪酸及び／又は乳化剤から選択される一又は複数を溶媒として含む香料製剤であり、エタノールの含有量が０．１重量％未満であることを特徴とする、組成物。
エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの含有量が合計で０．１重量％未満である、請求項１に記載の組成物。
プロトン性有機溶媒の含有量が合計で０．１重量％未満である、請求項２に記載の組成物。
容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
ビタミンＢ_１２及び香料製剤を含有する酸性組成物の製造方法であって、前記香料製剤として、中鎖脂肪酸及び／又は乳化剤から選択される一又は複数を溶媒として含む香料製剤を用い、エタノールの量が０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、方法。
エタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、請求項５に記載の方法。
プロトン性有機溶媒の量が合計で０．１重量％未満となるように原材料を配合することを含む、請求項６に記載の方法。
前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、請求項５～７のいずれか一項に記載の方法。
ビタミンＢ _１２及び香料製剤を含有する酸性組成物中におけるビタミンＢ_１２の安定性を向上させる方法であって、前記香料製剤として、中鎖脂肪酸及び／又は乳化剤から選択される一又は複数を溶媒として含む香料製剤を用い、前記組成物中に含まれるエタノールの量を０．１重量％未満とすることを含む、方法。
前記組成物中に含まれるエタノール、グリセリン、メタノール、酢酸、ギ酸及びブチルアミンの量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、請求項９に記載の方法。
前記組成物中に含まれるプロトン性有機溶媒の量を合計で０．１重量％未満とすることを含む、請求項１０に記載の方法。
前記組成物が容器詰め飲料又は容器詰めゼリー飲料である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。