JP6877924B2

JP6877924B2 - 表皮細胞間機能強化剤

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Publication number: JP6877924B2
Application number: JP2016174670A
Authority: JP
Inventors: 聖子小泉; 清水　麻衣子; 麻衣子清水
Original assignee: Nitta Gelatin Inc
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Priority date: 2016-09-07
Filing date: 2016-09-07
Publication date: 2021-05-26
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Description

本発明は、表皮細胞間機能強化剤に関する。

コラーゲンおよびその加水分解物、ならびに該加水分解物に含まれるペプチドおよびその混合物は、従来から美容などの目的で化粧品に適用されたり、食品などに含まれている。たとえば、特開２００１−１３１０８４号公報（特許文献１）には、上記ペプチド混合物などによって生体内でのコラーゲンタンパク質の合成活性を飛躍的に高めるコラーゲン合成促進剤に関する開示がある。特開２００４−１２３６３７号公報（特許文献２）には、同様のペプチド混合物などを用いることにより、生体内でのヒアルロン酸産生を促進するヒアルロン酸産生促進剤に関する開示がある。特開２０１０−０２４２００号公報（特許文献３）には、生体コラーゲン合成促進剤、および生体コラーゲン合成促進作用を有するジペプチドまたはトリペプチドを含有する化粧品、医薬部外品および治療薬に関する開示がある。国際公開第２０１４／１７５００１号（特許文献４）には、上記ペプチド混合物などを用いた美白促進剤およびアトピー性皮膚炎改善剤に関する開示がある。

さらに下記非特許文献１乃至３には、コラーゲンの加水分解物による皮膚バリア機能の改善について記述されている。具体的には、コラーゲンの加水分解物を経口摂取した皮膚バリア機能異常マウスは、皮膚の保水量が改善され、かつその水分蒸散量も減少することにより、その異常が改善されたことが示されている。

特開２００１−１３１０８４号公報特開２００４−１２３６３７号公報特開２０１０−０２４２００号公報国際公開第２０１４／１７５００１号

Shimizu J. et al., Oral collagen-derived dipeptides, prolyl-hydroxyproline and hydroxyprolyl-glycine, ameliorate skin barrier dysfunction and alter gene expression profile in the skin, Biochem. Biophys. Res. Commun, 456(2015)626-630 Oba C. et al., Collagen hydrolysate intake improves the loss of epidermal barrier function and skin elasticity induced by UVB irradiation in hairless mice, Photodermatol Photoimmunol Photomed, 29(2013)204-211 Oba C. et al., Effect of administered collagen hydrolysate on gene expression profiles in mouse skin: a DNA microarray analysis, Physiol Genomics, 47(2015)355-363

ここで皮膚バリア機能とは、上皮系（外胚葉由来）の表皮および間葉系（中胚葉由来）の真皮から構成される皮膚における水分および熱の保持機能、ならびに外部からの異物侵入をはじめとした外的刺激に対する防御機能などをいう。この皮膚バリア機能が低下すると、水分保持の機能低下による皮膚の乾燥、細菌またはウイルスの侵入および感染、ならびに炎症およびアレルギー（所謂アトピー性皮膚炎）の発症などのリスクが高まる。したがって、皮膚バリア機能の改善を鑑みたとき、生体の最外側に位置する表皮をその対象とするのが最も効果的であると考えられるものの、上記特許文献１〜３および非特許文献１〜３は共に、上述したペプチド混合物などが表皮の皮膚バリア機能を改善させるか否かについて開示されていない。

さらに、表皮の皮膚バリア機能の改善を鑑みれば、表皮の各層（基底層、有棘層、顆粒層、角質層）を構成する細胞自身はもちろん、その細胞と細胞との間（細胞間）の機能強化も検討することが好ましいが、上記特許文献４には細胞間の機能強化についての言及はない。したがって、表皮における細胞間の機能を強化する上述のようなペプチド混合物などは未だ知られていない。

本発明は、上記実情に鑑みてなされ、少なくとも特定のペプチドを含有することにより、表皮における細胞間を機能強化することが可能な表皮細胞間機能強化剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、鋭意検討した結果、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体またはそれらの塩が、細胞間の機能強化に寄与する遺伝子の発現を促進する作用を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち本発明は、以下のとおりである。

［１］本発明は、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体またはそれらの塩を含有する、表皮細胞間機能強化剤である。

［２］さらに本発明は、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＧｌｕ−Ｈｙｐからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体またはそれらの塩と、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体またはそれらの塩とを含有する、表皮細胞間機能強化剤である。

［３］上記［１］または［２］に記載の表皮細胞間機能強化剤は、経口剤または経皮剤であることが好ましい。

［４］上記［１］〜［３］のいずれかに記載の表皮細胞間機能強化剤は、表皮細胞に作用することが好ましい。

［５］上記［１］〜［４］のいずれかに記載の表皮細胞間機能強化剤は、セラミド合成促進剤またはタイトジャンクション形成促進剤であることが好ましい。

本発明によれば、少なくとも特定のペプチドを含有することにより、表皮における細胞間を機能強化することが可能な表皮細胞間機能強化剤を提供することができる。具体的には、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体またはそれらの塩を含有する表皮細胞間機能強化剤は、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、クローディン１およびオクルディンをコードするｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）の発現量を増加させる。これらの発現量の増加を通じ、表皮内の細胞間におけるセラミドの合成およびタイトジャンクション（密着結合）の形成を促すことによって表皮細胞間機能強化、すなわち表皮における皮膚バリア機能の強化を果たすことが可能となる。

以下、本発明に係る表皮細胞間機能強化剤について詳細に説明する。本明細書において「Ｘ〜Ｙ」という形式の表記は、範囲の上限下限（すなわちＸ以上Ｙ以下）を意味しており、Ｘにおいて単位の記載がなく、Ｙにおいてのみ単位が記載されている場合、Ｘの単位とＹの単位とは同じである。

≪表皮細胞間機能強化剤≫
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体またはそれらの塩を含有する。

＜ペプチド＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤に含有されるペプチドは、上述のとおりＰｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上である（以下、「本ペプチド」とも記す）。表皮細胞間機能強化剤は、本ペプチドの他、後述するようにその誘導体、本ペプチドの塩およびその誘導体の塩を含むことができる。表皮細胞間機能強化剤は、本ペプチド、その誘導体、本ペプチドの塩およびその誘導体の塩のいずれかを少なくとも含有することにより、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、クローディン１およびオクルディンをコードするｍＲＮＡの発現量を増加させることができる。これらの発現量の亢進を通じ、表皮細胞間のセラミドの合成およびタイトジャンクションの形成を促すことにより、表皮細胞間の機能強化を果たすことが可能となる。

ここでセリンパルミトイルトランスフェラーゼは、セラミドの生合成プロセスに関与し、該プロセスの律速酵素であることが知られる。セリンパルミトイルトランスフェラーゼをコードするｍＲＮＡの発現量が増加することにより、セラミドの合成が促されて表皮内の細胞間におけるセラミド量が増加するものと考えられる。

クローディンは、タイトジャンクションを構成するタンパク質のひとつであり、少なくとも２４種のアイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ）が見つかっている。皮膚においてはクローディン１が主要であり、その遺伝子欠損マウスは皮膚からの過剰な水分損失により生後１日で死亡することから、クローディン１がタイトジャンクション形成にとって重要な因子であることが推察されている。さらにクローディン１は、膜裏打ちタンパク質ＺＯ−１などを介して細胞骨格であるアクチンフィラメントと結合することにより、細胞膜側面というタイトジャンクションの局在にも寄与していると考えられている。このクローディン１をコードするｍＲＮＡの発現量が増加すれば、表皮の細胞においてクローディン１量が増加し、表皮細胞間におけるタイトジャンクションの形成が促されると考えられる。オクルディンは、クローディンと同様にタイトジャンクションを構成する膜貫通型タンパク質のひとつとして知られる。オクルディンがタイトジャンクションの形成に関わる詳細な機序は未だ研究途上であるものの、それをコードするｍＲＮＡの発現は、表皮細胞におけるオクルディン量の指標、すなわちタイトジャンクション形成の指標になると考えられる。

表皮細胞間機能強化剤に含まれる本ペプチドは、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＧｌｕ−Ｈｙｐの少なくともいずれかであることが好ましく、より好ましくはＰｒｏ−ＨｙｐおよびＨｙｐ−Ｇｌｙの少なくともいずれかである。さらに本ペプチドは、上記群より選択される２種以上を組み合わせて用いることも好ましい。

本ペプチドは、２種以上のペプチドを組み合わせて用いる場合、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＧｌｕ−Ｈｙｐからなる群より選択される１種以上と、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上とからなる組み合わせの混合物（以下、「ペプチド混合物」とも記す）であることが好ましい。表皮細胞間機能強化剤は、このような組み合わせのペプチド混合物を含有することにより、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、クローディン１およびオクルディンをコードするｍＲＮＡの発現量をより一層増加させることができる。

本ペプチドは、たとえば、従来公知の固相合成法または液相合成法を用いてアミノ酸から合成することができる。固相合成法の場合はさらにＦｍｏｃ法とＢｏｃ法とが知られており、本ペプチドはいずれの方法でも合成することができる。これらの方法を用いて合成した種類の異なるペプチドを混合することにより、ペプチド混合物を製造することもできる。

さらに本ペプチドは、ゼラチンに従来公知のエンド型プロテアーゼおよびエキソ型プロテアーゼの２種以上を組み合わせて加水分解することによっても製造することができる。本ペプチドは、上記のプロテアーゼを用いて加水分解した後、この加水分解物を精製することにより得ることが好ましい。本ペプチドは、上記のプロテアーゼを用いて加水分解した場合、上記群より選択される１種のペプチドを製造することもでき、上記群より選択される２種以上からなるペプチド混合物を製造することもできる。

＜誘導体＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、上記群より選択される１種以上のペプチドの誘導体を含むことができる。ペプチドの誘導体とは、所謂化学修飾に関する技術を用いてペプチドを酸化し、還元し、または原子あるいは置換基の置き換えを行なうことなどにより、ペプチドの構造および特性を大幅に変化させない程度に改変した化合物をいう。本ペプチドを、ペプチドの誘導体とするためには、従来公知の化学修飾に関する技術を用いることができ、その具体的手段および処理条件は、従来公知の手段および条件を用いればよい。上記群より選択される１種以上のペプチドの誘導体を以下、「本ペプチドの誘導体」と記す場合がある。

化学修飾はペプチド中のアミノ酸単位毎に行うことができる。化学修飾の部位は、たとえばアミノ酸に含まれる水酸基、アミノ基およびカルボキシル基、ならびにぺプチドのＮ末端に位置するアミノ基、ぺプチドのＣ末端に位置する水酸基またはカルボキシル基などが例示される。これらの官能基の化学修飾によって、たとえば電荷を変えることができ、これにより水溶媒中での溶解性向上、他の成分との相溶性向上などの効果を得ることができる。

ヒドロキシプロリンの水酸基の化学修飾として、アセチル化が例示される。ぺプチドのＮ末端に位置するアミノ基の化学修飾として、スクシニル化、マレイル化、アセチル化などのアシル化、ポリぺプチジル化、脱アミノ化、ベンゾイル化、アルキルスルホニル化、アリルスルホニル化、ジニトロフェニル化、トリニトロフェニル化、カルバミル化、フェニルカルバミル化、チオール化などが例示される。ぺプチドのＣ末端に位置するカルボキシル基の化学修飾として、エステル化、アミド化などが例示される。さらに、本ペプチドをカチオン化することも可能であり、この場合エチレンジアミン化、スペルミン化などを行うことができる。

上述した化学修飾の具体的な方法を以下に例示する。まず、たとえば水酸基およびアミノ基に対するアセチル化は、水溶媒中または非水溶媒中で無水酢酸を作用させることなどによって行なうことができる。カルボキシル基に対するエステル化は、メタノールへの懸濁後に乾燥塩化水素ガスを通気することなどによって行なうことができる。さらに、カルボキシル基に対するアミド化は、カルボジイミドなどを作用させることによって行なうことができる。

＜ペプチドまたはその誘導体の塩＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、上述した群より選択される１種以上のペプチドまたはその誘導体の塩を含むことができる。「ペプチドの塩またはぺプチドの誘導体の塩」は、薬学上許容され得る塩であればよく、たとえば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩などの無機酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などの金属塩、トリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、アンモニウム塩などの有機または無機アンモニウム塩が例示される。本ペプチドをペプチドの塩またはぺプチドの誘導体の塩とするには、従来公知の方法を用いればよい。上記群より選択される１種以上のペプチドまたはその誘導体の塩を以下、「本ペプチドの塩または本ぺプチドの誘導体の塩」と記す場合がある。

本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、本ペプチド、その誘導体またはそれらの塩を合計で０．００１質量％以上含有することが好ましく、０．０１質量％以上含有することがより好ましい。さらに、本ペプチド、その誘導体またはそれらの塩を合計で０．１質量％以上もしくは１質量％以上含有することが最も好ましい。表皮細胞間機能強化剤は、モル濃度に換算すれば、本ペプチド、その誘導体またはそれらの塩を０．１ｍＭ以上含有することが好ましく、０．５ｍＭ以上含有することがさらに好ましい。本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、たとえば「ＴＹＰＥ−Ｓ」（新田ゼラチン株式会社製）を、本ペプチドを２種以上組み合わせたペプチド混合物として用いることが好適例として挙げられる。「ＴＹＰＥ−Ｓ」は、上述したペプチド混合物として、合計３．２質量％含む。さらに「ＬＣＰ」（新田ゼラチン株式会社製）は、上述したペプチド混合物として、合計１．６質量％含む。

ここで本発明に係る表皮細胞間機能強化剤に含有されるペプチド、その誘導体またはそれらの塩の組成およびその含有量は、たとえば液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析計（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を用いることにより測定することができる。

液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析計（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を用いた本ペプチドの具体的な測定条件は、以下のとおりである。

まずサンプルの水溶液を濾過した後、重炭酸アンモニウムバッファーで必要に応じで希釈することにより、測定用サンプルを得る。液体クロマトグラフには、固相にＯＤＳカラム（商品名：「ＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤＰＦＰ」、サーモフィッシャーサイエンティフィック製）を、移動相にメタノールおよび０．２質量％ギ酸を含む２ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液をそれぞれ用いる。この液体クロマトグラフにより測定用サンプルを一次分離した後、質量分析計（商品名：「ＴＳＱＶａｎｔａｇｅ」、サーモフィッシャーサイエンティフィック製）を用いて解析することにより目的とするペプチドの定量を行なう。

＜経口剤および経皮剤＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、経口剤または経皮剤であることが好ましい。すなわち表皮細胞間機能強化剤は、経口的に、または経皮的に種々の形態で投与することができる。その剤形は、経口剤の場合、たとえば錠剤、顆粒剤、カプセル剤、粉剤、液剤、懸濁製剤、乳化製剤などが例示される。さらに、経口剤には、表皮細胞間機能強化剤に含有される本ペプチド（その誘導体またはそれらの塩を含む）を食事または飲料に混ぜて摂取させる形態が含まれる。本ペプチドは、消化管でアミノ酸への分解もほとんど起こらず、腸管で迅速に吸収されるため、経口投与による摂取に適している。

経皮的に投与する場合、表皮細胞間機能強化剤は経皮剤であり、この場合の投与形態は、皮膚への塗布、注射剤、経皮吸収剤、坐剤、点鼻剤および吸入剤などが例示される。経皮剤の剤形は、皮膚へ直接塗布する液剤、フィルム剤、軟膏、クリーム剤、パップ剤などが例示される。

本発明に係る表皮細胞間機能強化剤の用量は、使用者の状態、体重、本ペプチドの種類、投与経路などによって異なるが、成人１日当たり、経口剤の場合、本ペプチドの含有量として約０．０１〜２０００ｍｇ、好ましくは約０．１〜１０００ｍｇ、より好ましくは約０．５〜５００ｍｇであり、特に好ましくは約１〜２００ｍｇである。経皮剤の場合、経皮剤全体に対する本ペプチドの含有量として約０．００００１〜２０質量％、好ましくは約０．０００１〜１０質量％、より好ましくは約０．００１〜５質量％である。これら製剤は、１日１〜数回に分けて、または１〜数日に１回投与することができる。本ペプチドを２種以上組み合わせたペプチド混合物である場合、このペプチド混合物の合計が上記投与量または上記含有量となるように調整すればよい。

さらに本ペプチドを製剤化し、表皮細胞間機能強化剤とする際の担体には、希釈剤、結合剤（シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビット、トラガカント、ポリビニルピロリドン）、賦形剤（乳糖、ショ糖、コーンスターチ、リン酸カリウム、ソルビット、グリシン）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ）、崩壊剤（バレイショデンプン）および湿潤剤（ラウリル硫酸ナトリウム）などを用いることができる。表皮細胞間機能強化剤を経口剤または経皮剤の医薬品または医薬部外品として適用する場合、従来公知の方法に従って、本ペプチド、製剤用の成分（たとえば、上述の担体）および後述する他の有効成分を混合することにより表皮細胞間機能強化剤を製造することができる。

本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、その作用効果を害しない範囲で、適宜他の有効成分を含有させてもよい。他の有効成分として、たとえばヒアルロン酸などが挙げられる。他の有効成分の配合量は、本発明の作用効果を害しない範囲で適宜、変更することができる。

本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、具体的には医薬品、医薬部外品、化粧品、特定保健用食品、健康食品などに適用され、あるいは様々な食材に含有させることにより、ヒト、哺乳動物などへ投与することができる。

＜角質層内および顆粒層内の細胞間における作用＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、表皮細胞に作用することが好ましい。具体的には、表皮細胞間機能強化剤は表皮角化細胞に作用し、角質層内または顆粒層内の細胞間機能に寄与する。角質層内の細胞間機能とは、セラミド、コレステロール、脂肪酸などを主体とした細胞間脂質が層状のラメラ構造を形成することにより果たされる表皮の角質層における水分保持機能、および外部からの異物侵入防止などの外的刺激に対する防御機能などをいう。顆粒層内の細胞間機能とは、タイトジャンクションの形成によって細胞同士が密着することにより果たされる表皮の顆粒層における水分保持機能、および外部からの異物侵入防止などの外的刺激に対する防御機能などをいう。このため、表皮細胞間機能強化剤は、たとえばセラミド合成促進作用を通じて角質層内の細胞間機能に寄与することにより、上記細胞間脂質の量（具体的にはセラミド量）が増加して上述した機能が充実するため、表皮の細胞間におけるバリア機能を強化することができる。さらに、表皮細胞間機能強化剤は、たとえばタイトジャンクション形成促進作用を通じて顆粒層におけるタイトジャンクションの形成密度を上昇させることにより上述した機能が充実するため、表皮の細胞間におけるバリア機能を強化することができる。

＜セラミド合成促進剤＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、表皮細胞においてセリンパルミトイルトランスフェラーゼの合成を亢進する作用を有する。セリンパルミトイルトランスフェラーゼは、上述したように表皮におけるセラミド生合成プロセスにおける律速酵素として知られる。このため生体内でのセラミド合成活性を把握する指標とすることができる。したがって本発明は、表皮細胞においてセリンパルミトイルトランスフェラーゼの合成を亢進する作用を有することにより、セラミド合成促進剤として角質層内の細胞間においてセラミド量を維持し、またはその量を増加させることができる。

＜タイトジャンクション形成促進剤＞
本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、表皮細胞においてクローディン１およびオクルディンの合成をそれぞれ亢進する作用を有する。クローディン１およびオクルディンは、上述したように表皮における顆粒層でのタイトジャンクションを構成するタンパク質としてそれぞれ知られる。このため生体内でのタイトジャンクションの形成を把握する指標とすることができる。したがって本発明は、表皮細胞においてクローディン１およびオクルディンの合成を亢進する作用を有することにより、タイトジャンクション形成促進剤として、顆粒層の細胞間においてタイトジャンクションの密度を維持し、またはその密度を増加させることができる。

セラミド合成促進剤およびタイトジャンクション形成促進剤の投与形態および剤形は、表皮細胞間機能強化剤として上記で説明したとおりである。すなわち、経口剤および経皮剤であることが好ましい。セラミド合成促進剤およびタイトジャンクション形成促進剤も、表皮細胞間機能強化剤と同様に、医薬品、医薬部外品、化粧品、特定保健用食品、健康食品などに適用され、あるいは様々な食材に含有させることにより、ヒト、哺乳動物などへ投与することができる。

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

≪ペプチドの準備≫
上述したペプチド固相合成法により、以下の実施例１〜１３および比較例１のペプチドを合成した。さらに、上述の質量分析計を用いることにより、その質量から各実施例および比較例で合成したペプチドが以下のとおりのものであることを確認した。

＜実施例１＞Ｐｒｏ−Ｈｙｐ［ＰＯ］
＜実施例２＞Ｈｙｐ−Ｇｌｙ［ＯＧ］
＜実施例３＞Ｇｌｕ−Ｈｙｐ［ＥＯ］
＜実施例４＞Ｇｌｙ−Ｐｒｏ［ＧＰ］
＜実施例５＞Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ［ＰＯＧ］
＜実施例６＞（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂［（ＰＯＧ）₂］
＜実施例７＞Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ［ＰＡＧ］
＜実施例８＞Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ［ＥＯＧ］
＜実施例９＞Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ［ＳＯＧ］
＜実施例１０＞Ｐｒｏ−Ａｌａ［ＰＡ］
＜実施例１１＞Ｐｈｅ−Ｈｙｐ［ＦＯ］
＜実施例１２＞Ａｌａ−Ｈｙｐ［ＡＯ］
＜実施例１３＞Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ［ＡＯＧ］
＜比較例１＞Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ［ＧＰＯ］。

さらに、上述のとおりに合成した実施例１〜１３のペプチドを組合せ、実施例１４〜４６のペプチド混合物を準備した。実施例１４〜４６のペプチド混合物は、各ペプチドを等量混合し、合計０．１ｍＭ（各０．０５ｍＭ）となるようにした。

＜実施例１４＞ＰＯ＋ＯＧ
＜実施例１５＞ＰＯ＋ＥＯ
＜実施例１６＞ＰＯ＋ＧＰ
＜実施例１７＞ＰＯ＋ＰＯＧ
＜実施例１８＞ＰＯ＋（ＰＯＧ）₂
＜実施例１９＞ＰＯ＋ＰＡＧ
＜実施例２０＞ＰＯ＋ＥＯＧ
＜実施例２１＞ＰＯ＋ＳＯＧ
＜実施例２２＞ＰＯ＋ＰＡ
＜実施例２３＞ＰＯ＋ＦＯ
＜実施例２４＞ＰＯ＋ＡＯ
＜実施例２５＞ＰＯ＋ＡＯＧ
＜実施例２６＞ＯＧ＋ＥＯ
＜実施例２７＞ＯＧ＋ＧＰ
＜実施例２８＞ＯＧ＋ＰＯＧ
＜実施例２９＞ＯＧ＋（ＰＯＧ）₂
＜実施例３０＞ＯＧ＋ＰＡＧ
＜実施例３１＞ＯＧ＋ＥＯＧ
＜実施例３２＞ＯＧ＋ＳＯＧ
＜実施例３３＞ＯＧ＋ＰＡ
＜実施例３４＞ＯＧ＋ＦＯ
＜実施例３５＞ＯＧ＋ＡＯ
＜実施例３６＞ＯＧ＋ＡＯＧ
＜実施例３７＞ＥＯ＋ＧＰ
＜実施例３８＞ＥＯ＋ＰＯＧ
＜実施例３９＞ＥＯ＋（ＰＯＧ）₂
＜実施例４０＞ＥＯ＋ＰＡＧ
＜実施例４１＞ＥＯ＋ＥＯＧ
＜実施例４２＞ＥＯ＋ＳＯＧ
＜実施例４３＞ＥＯ＋ＰＡ
＜実施例４４＞ＥＯ＋ＦＯ
＜実施例４５＞ＥＯ＋ＡＯ
＜実施例４６＞ＥＯ＋ＡＯＧ。

＜実施例４７＞
実施例４７として、コラーゲンを加水分解することにより得られるペプチド混合物として、市販のペプチド混合物（商品名：「ＴＹＰＥ−Ｓ」、新田ゼラチン株式会社製）を準備した。

この「ＴＹＰＥ−Ｓ」についてＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（商品名：「ＴＳＱＶａｎｔａｇｅ」、サーモフィッシャーサイエンティフィック製）を用い、上記の条件で分析したところ、本ペプチド混合物には以下のペプチドが含まれていた。

Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＧｌｕ−Ｈｙｐからなる群より選択される１種以上のペプチドとしてＰＯ：４２２ｐｐｍ、ＯＧ：１４５８１ｐｐｍ、ＥＯ：５８ｐｐｍを含有
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチドとしてＧＰ：６７２ｐｐｍ、ＰＯＧ：３４０ｐｐｍ、（ＰＯＧ）₂：４８９ｐｐｍ、ＰＡＧ：１２５２０ｐｐｍ、ＥＯＧ：３０８ｐｐｍ、ＳＯＧ：２８３ｐｐｍ、ＰＡ：２１４１ｐｐｍ、ＦＯ：２８３ｐｐｍ、ＡＯ：１２０ｐｐｍ、ＡＯＧ：３３１ｐｐｍを含有。

＜実施例４８＞
実施例４８として、コラーゲンを加水分解することにより得られるペプチド混合物として、市販のペプチド混合物（商品名：「ＬＣＰ」、新田ゼラチン株式会社製）を準備した。

この「ＬＣＰ」について上記のＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用い、上記実施例と同じ条件で分析したところ、本ペプチド混合物には以下のペプチドが含まれていた。

Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＧｌｕ−Ｈｙｐからなる群より選択される１種以上のペプチドとしてＰＯ：１６７ｐｐｍ、ＯＧ：５４５ｐｐｍ、ＥＯ：１４ｐｐｍを含有
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチドとしてＧＰ：２４９ｐｐｍ、ＰＯＧ：不検出、（ＰＯＧ）₂：５６ｐｐｍ、ＰＡＧ：１５５６８ｐｐｍ、ＥＯＧ：１２６ｐｐｍ、ＳＯＧ：３ｐｐｍ、ＰＡ：１０５ｐｐｍ、ＦＯ：不検出、ＡＯ：５０ｐｐｍ、ＡＯＧ：２９ｐｐｍ。

上記ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分析において、含有量が「不検出」と表記されているペプチドは、その含有量が検出限界以下であるか、または含有していないことを意味する。

≪ＲＮＡ発現量確認試験≫
本試験では、上述した実施例および比較例のペプチドまたはペプチド混合物の添加によって、表皮細胞において後述する標的遺伝子のＲＮＡ発現量が増加するか否かを調べた。その結果を表１〜６に示す。

本試験において表皮細胞には、ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（倉敷紡績株式会社製）を用いた。上記細胞を市販のシャーレに３．６×１０⁴細胞／ｃｍ²となるように播種し、無血清培地（商品名：「ＨｕＭｅｄｉａＫＧ−２」、倉敷紡績株式会社製）により７日間、培養した。上記細胞がシャーレ内でサブコンフルエントになっていることを確認後、シャーレ内の培地を成長因子を含まない無血清培地（商品名：「ＭＣＤＢ１５３培地」、株式会社機能性ペプチド研究所製）に置き換え、上記実施例および比較例のペプチドまたはペプチド混合物を表１〜６のとおりの濃度となるように３サンプルずつ添加するとともに、３７℃、二酸化炭素濃度５体積％の雰囲気下で７２時間培養した。その後、サンプル毎に細胞より全ＲＮＡを抽出した。続いて、この抽出物に対して従来公知の方法を用いて逆転写反応を行なってｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡに対し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを装置（商品名：「ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ」、アプライドバイオシステムズ製）により行なった。

リアルタイムＲＴ−ＰＣＲでは、標的遺伝子としてセリンパルミトイルトランスフェラーゼ（プライマー：Ｈｓ００２７２３１１＿ｍｌ）、クローディン１（プライマー：Ｈｓ００２２１６２３＿ｍｌ）およびオクルディン（プライマー：Ｈｓ００１７０１６２＿ｍｌ）のｍＲＮＡ量を上記実施例および比較例のサンプル毎に測定した。内部標準（補正遺伝子）にはＧＡＰＤＨを選択した。計算は検量線法を用いた。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲには、試薬キット（商品名：「ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｓｓａｙｓ」、アプライドバイオシステムズ社製）を用いた。

ＲＴ−ＰＣＲから得られたデータは、以下のようにして解析した。まず、３種の標的遺伝子のｍＲＮＡ量（遺伝子発現量）をそれぞれ算出した。次に、３種の標的遺伝子の遺伝子発現量を補正遺伝子としたＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現量で補正した。具体的には、３種の標的遺伝子の遺伝子発現量をＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現量で割った値（相対値）をそれぞれ求めた。

表１、２には、各実施例および比較例におけるセリンパルミトイルトランスフェラーゼの遺伝子発現量の相対値を示す。表３、４には、各実施例および比較例におけるクローディン１の遺伝子発現量の相対値を示す。表５、６には、各実施例および比較例におけるオクルディンの遺伝子発現量の相対値を示す。各表中の値は、各実施例および比較例における３サンプルの平均値±標準偏差である。各表中の＊、＊＊は、Ｐａｉｒｅｄ−ｔ−ｔｅｓｔにおいて、コントロールに対してそれぞれＰ＜０．０５、Ｐ＜０．０１の水準で有意差があることを示す。

≪評価結果≫
表１、２から理解されるように、本実施例のペプチド、すなわちＰｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチドは、セリンパルミトイルトランスフェラーゼの遺伝子発現を亢進させた。これにより、本ペプチドを含有する表皮細胞間機能強化剤は、セラミド合成促進剤としてセラミド合成を促すことにより、表皮における角質層内の細胞間においてセラミド量を維持し、またはその量を増加させることができることが分かる。

表３〜６から理解されるように、本実施例のペプチド、すなわちＰｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチドは、クローディン１およびオクルディンの遺伝子発現量を増加させた。これにより、本ペプチドを含有する表皮細胞間機能強化剤は、タイトジャンクション形成促進剤として、表皮における顆粒層の細胞間においてタイトジャンクションの形成を促すことにより、タイトジャンクションの密度を維持し、またはその密度を増加させることができることが分かる。

≪官能試験≫
上記の評価結果に基づき、本実施例のペプチド、すなわちＰｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチドを含有する表皮細胞間機能強化剤を化粧品（化粧料）および飲食品の用途で処方し、官能試験を行なったので、以下に説明する。各処方例において、これに用いる各製品は、常法により製造される。このため、各処方例では各製品の含有量のみを示した。さらに各処方例中、「適量」とは、本発明の作用効果を害しない範囲で、従来公知の含有量の範囲とすることを意味し、具体的には、０．００１〜１０質量％から選択される量をいう。

＜化粧水を用いた使用効果試験＞
本試験は、３３〜３５歳の肌の乾燥を自覚している健康な女性１０名を被験者とし、表７に示す組成（数値の単位は質量％）の化粧水（実施例４９および比較例２）を１日２回（朝および晩）、洗顔後に顔面に塗布させることにより行なった。具体的には、女性１０名の被験者のうち５名に実施例４９の化粧水を使用させ、残り５名の被験者に比較例２の化粧水を使用させた。この被験者１０名に対し、試験の開始から４週間後に、肌の潤い感、肌のキメ、化粧のりについて、試験の開始時を３点とする５段階の点数による評価（１点：悪化した、２点：やや悪化した、３：変わらない、４点：やや良化した、５点：良化した）をヒアリングした。ヒアリングした点数をその平均値として表８に示す。使用期間中に体調を崩す、または皮膚の異常を訴えた被験者はいなかった。

表８から理解されるように、本実施例のペプチド混合物を適用した化粧水は、比較例よりも、肌の潤い感、肌のキメ、化粧のりの各評価において優れていた。したがって本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、経皮的な表皮角化細胞への作用を通じて角質層内または顆粒層内の細胞間機能に寄与することにより、表皮の皮膚バリア機能の改善効果があることが示唆される。

＜美容ドリンクを用いた使用効果試験＞
本試験は、３１〜５６歳の肌の乾燥を自覚している健康な女性１０名を被験者とし、表９に示す組成（数値の単位は質量％）の美容ドリンク（実施例５０および比較例３）を１日１本（２０ｇ）、飲用させることにより行なった。具体的には、女性１０名の被験者のうち５名に実施例５０の美容ドリンクを飲用させ、残り５名の被験者に比較例３の美容ドリンクを飲用させた。この被験者１０名に対し、試験の開始から４週間後に、肌の潤い感、肌のキメ、化粧のりについて、試験の開始時を３点とする５段階の点数による評価（１点：悪化した、２点：やや悪化した、３：変わらない、４点：やや良化した、５点：良化した）をヒアリングした。ヒアリングした点数をその平均値として表１０に示す。使用期間中に体調を崩す、または皮膚の異常を訴えた被験者はいなかった。

表１０から理解されるように、本実施例のペプチド混合物を適用した美容ドリンクは、比較例よりも、肌の潤い感、肌のキメ、化粧のりの各評価において優れていた。したがって本発明に係る表皮細胞間機能強化剤は、経口的な表皮角化細胞への作用を通じて角質層内または顆粒層内の細胞間機能に寄与することにより、表皮の皮膚バリア機能の改善効果があることが示唆される。

≪その他の処方例≫
上記の評価結果に基づき、本実施例のペプチド、すなわちＰｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチドを含有する表皮細胞間機能強化剤の化粧品（化粧料）および飲食品の用途としてのその他の処方例を以下に示す。各処方例において、これに用いる各製品は、常法により製造される。このため、各処方例では各製品の含有量のみを示した。さらに各処方例中、「適量」とは、本発明の作用効果を害しない範囲で、従来公知の含有量の範囲とすることを意味し、具体的には、０．００１〜１０質量％から選択される量をいう。

＜処方例１＞クリーム状美容液質量％
１．水残部
２．メチルグルセス−１０５
３．グリセリン１０
４．１，３−ブチレングリコール１０
５．アルギニン０．８
６．カルボマー０．３
７．防腐剤適量
８．本実施例４８のペプチド混合物０．１。

＜処方例２＞シャンプー質量％
１．水残部
２．ラウリル硫酸ＴＥＡ１０
３．ココイルグルタミン酸Ｋ２
４．ラウラミドプロピルベタイン１．５
５．コカミドＤＥＡ３
６．グアーヒドロキシトリモニウムクロリド０．１
７．防腐剤適量
８．ｐＨ調整剤適量
９．香料適量
１０．本実施例４８のペプチド混合物０．１。

＜処方例３＞ヘアートリートメント質量％
１．水残部
２．ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド３
３．セタノール５
４．モノステアリン酸グリセリン１
５．エチルヘキサン酸セチル１
６．オリーブ油２
７．防腐剤適量
８．ｐＨ調整剤適量
９．香料適量
１０．本実施例４８のペプチド混合物０．１。

＜処方例４＞ゼリー質量％
１．水残部
２．砂糖２
３．果糖ぶどう糖液糖１０
４．リンゴ濃縮果汁２
５．リンゴ酸０．１
６．酒石酸０．１
７．クエン酸三ナトリウム０．１
８．ゲル化剤１
９．香料適量
１０．本実施例４８のペプチド混合物１。

＜処方例５＞タブレット質量％
１．ソルビトール残部
２．ショ糖脂肪酸エステル２
３．スクラロース０．１
４．リンゴ酸２
５．グレープフルーツフレーバー適量
６．レモンフレーバー適量
７．本実施例４８のペプチド混合物１。

＜処方例６＞クッキー質量％
１．小麦粉４０
２．食用油脂１０
３．砂糖２０
４．全卵１５
５．脱脂粉乳１０
６．コーンスターチ３
７．食塩０．２
８．香料適量
９．本実施例４８のペプチド混合物１。

以上のように本発明の実施の形態および実施例について説明を行なったが、上述の各実施の形態および実施例の構成を適宜組み合わせたり、様々に変形したりすることも当初から予定している。

今回開示された実施の形態および実施例はすべての点で例示であって、制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した実施の形態ではなく特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味、および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

Claims

Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体（環状ペプチドを除く。）またはそれらの塩を含有し、
前記誘導体は、前記ペプチドのＣ末端に位置する水酸基がアセチル化され、もしくは前記ペプチドのＮ末端に位置するアミノ基がスクシニル化、マレイル化、アセチル化または脱アミノ化され、もしくは前記ペプチドのＣ末端に位置するカルボキシル基がエステル化またはアミド化され、もしくは前記ペプチドがカチオン化された誘導体である、表皮顆粒層内における細胞間機能強化に用いる表皮細胞間機能強化剤。
Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＧｌｕ−Ｈｙｐからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体（環状ペプチドを除く。）またはそれらの塩と、
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）₂、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−ＨｙｐおよびＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群より選択される１種以上のペプチド、その誘導体（環状ペプチドを除く。）またはそれらの塩とを含有し、
前記誘導体は、前記ペプチドのＣ末端に位置する水酸基がアセチル化され、もしくは前記ペプチドのＮ末端に位置するアミノ基がスクシニル化、マレイル化、アセチル化または脱アミノ化され、もしくは前記ペプチドのＣ末端に位置するカルボキシル基がエステル化またはアミド化され、もしくは前記ペプチドがカチオン化された誘導体である、表皮顆粒層内における細胞間機能強化に用いる表皮細胞間機能強化剤。
前記表皮細胞間機能強化剤は、経口剤または経皮剤である、請求項１または２に記載の表皮細胞間機能強化剤。
前記表皮細胞間機能強化剤は、表皮細胞に作用する、請求項１〜３のいずれかに記載の表皮細胞間機能強化剤。
前記表皮細胞間機能強化剤は、タイトジャンクション形成促進剤である、請求項１〜４のいずれかに記載の表皮細胞間機能強化剤。