JP3122203B2 - 新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 - Google Patents
新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよびその製造方法Info
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- C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規ヘテロ分岐シクロ
デキストリンおよびその製造方法に関し、詳しくはグル
コシル基またはマルトシル基を側鎖として有する分岐シ
クロデキストリンの該側鎖にα結合でマンノシル基を結
合させた新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよび糖転
移作用を利用した、該新規ヘテロ分岐シクロデキストリ
ンの製造方法に関する。
デキストリンおよびその製造方法に関し、詳しくはグル
コシル基またはマルトシル基を側鎖として有する分岐シ
クロデキストリンの該側鎖にα結合でマンノシル基を結
合させた新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよび糖転
移作用を利用した、該新規ヘテロ分岐シクロデキストリ
ンの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】シク
ロデキストリン（以下、ＣＤと略記する。）は、グルコ
ースがα−１，４結合で連なった環状デキストリンで、
グルコース６，７，８個より成るそれぞれα，βおよび
γＣＤが良く知られている。最近ではＣＤの溶解度を改
善するため、これらＣＤにα−１，６結合でグルコシル
基やマルトシル基を結合させた分岐ＣＤが合成されてい
る。
ロデキストリン（以下、ＣＤと略記する。）は、グルコ
ースがα−１，４結合で連なった環状デキストリンで、
グルコース６，７，８個より成るそれぞれα，βおよび
γＣＤが良く知られている。最近ではＣＤの溶解度を改
善するため、これらＣＤにα−１，６結合でグルコシル
基やマルトシル基を結合させた分岐ＣＤが合成されてい
る。
【０００３】これらＣＤおよび分岐ＣＤには分子内部に
空洞があり、しかもこの空洞内部が疎水性になっている
ため、包接作用があり、各種油性物質を取り込む性質を
有している。ＣＤおよび分岐ＣＤは、このような性質を
もっているため、食品工業，化粧品工業，医薬品工業な
どの分野で広く使用されている。最近、医薬品工業の分
野では、薬剤の副作用を少なくするため、糖質の細胞認
識性に着目して、これをドラッグ・デリバリー・システ
ムの薬剤運搬体の標識細胞へのセンサーとして利用する
研究が活発に行われている。また、マンノースは生体内
の各部位に強い親和性を示すことが良く知られている。
空洞があり、しかもこの空洞内部が疎水性になっている
ため、包接作用があり、各種油性物質を取り込む性質を
有している。ＣＤおよび分岐ＣＤは、このような性質を
もっているため、食品工業，化粧品工業，医薬品工業な
どの分野で広く使用されている。最近、医薬品工業の分
野では、薬剤の副作用を少なくするため、糖質の細胞認
識性に着目して、これをドラッグ・デリバリー・システ
ムの薬剤運搬体の標識細胞へのセンサーとして利用する
研究が活発に行われている。また、マンノースは生体内
の各部位に強い親和性を示すことが良く知られている。
【０００４】そこで、本発明者らは分岐ＣＤの有する包
接作用とマンノースのこの特質を利用して、ドラッグ・
デリバリー・システムに応用することを目的として、分
岐ＣＤにマンノシル基を転移結合させたヘテロ分岐ＣＤ
の合成を試みた。その結果、市販の各種α−マンノシル
基転移酵素が、α−マンノシル化合物からグルコシル−
α，βおよびγＣＤ（以下、それぞれＧ１−αＣＤ，Ｇ
１−βＣＤおよびＧ１−γＣＤと略記する。）およびマ
ルトシル−α，βおよびγＣＤ（以下、それぞれＧ２−
αＣＤ，Ｇ２−βＣＤおよびＧ２−γＣＤと略記す
る。）の側鎖に、α結合でマンノシル基を転移結合させ
たヘテロ分岐ＣＤを合成することを見出した。さらに、
このうちタチナタマメ由来のα−マンノシル基転移酵素
は、Ｇ１−βＣＤの側鎖のグルコシル基およびＧ２−α
ＣＤの側鎖のマルトシル基の非還元性末端のグルコシル
基に、α−１，６結合で１個のマンノシル基を転移結合
させたヘテロ分岐ＣＤを優先的に合成することを見出
し、この知見に基づいて本発明を完成したのである。
接作用とマンノースのこの特質を利用して、ドラッグ・
デリバリー・システムに応用することを目的として、分
岐ＣＤにマンノシル基を転移結合させたヘテロ分岐ＣＤ
の合成を試みた。その結果、市販の各種α−マンノシル
基転移酵素が、α−マンノシル化合物からグルコシル−
α，βおよびγＣＤ（以下、それぞれＧ１−αＣＤ，Ｇ
１−βＣＤおよびＧ１−γＣＤと略記する。）およびマ
ルトシル−α，βおよびγＣＤ（以下、それぞれＧ２−
αＣＤ，Ｇ２−βＣＤおよびＧ２−γＣＤと略記す
る。）の側鎖に、α結合でマンノシル基を転移結合させ
たヘテロ分岐ＣＤを合成することを見出した。さらに、
このうちタチナタマメ由来のα−マンノシル基転移酵素
は、Ｇ１−βＣＤの側鎖のグルコシル基およびＧ２−α
ＣＤの側鎖のマルトシル基の非還元性末端のグルコシル
基に、α−１，６結合で１個のマンノシル基を転移結合
させたヘテロ分岐ＣＤを優先的に合成することを見出
し、この知見に基づいて本発明を完成したのである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、側
鎖としてグルコシル基またはマルトシル基を、α−、β
−またはγ−ＣＤにα−１，６結合で結合させた分岐Ｃ
Ｄの該側鎖のグルコシル基の水酸基にα結合でマンノシ
ル基が結合している新規ヘテロ分岐ＣＤ、並びに側鎖と
してグルコシル基またはマルトシル基を、α−、β−ま
たはγ−ＣＤにα−１，６結合で結合させた分岐ＣＤと
α−マンノシル化合物を含有する溶液に、α−マンノシ
ル基転移酵素を作用させることを特徴とする側鎖として
グルコシル基またはマルトシル基を、α−、β−または
γ−ＣＤにα−１，６結合で結合させた分岐ＣＤの該側
鎖のグルコシル基の水酸基にα結合でマンノシル基が結
合している新規ヘテロ分岐ＣＤの製造方法を提供するも
のである。
鎖としてグルコシル基またはマルトシル基を、α−、β
−またはγ−ＣＤにα−１，６結合で結合させた分岐Ｃ
Ｄの該側鎖のグルコシル基の水酸基にα結合でマンノシ
ル基が結合している新規ヘテロ分岐ＣＤ、並びに側鎖と
してグルコシル基またはマルトシル基を、α−、β−ま
たはγ−ＣＤにα−１，６結合で結合させた分岐ＣＤと
α−マンノシル化合物を含有する溶液に、α−マンノシ
ル基転移酵素を作用させることを特徴とする側鎖として
グルコシル基またはマルトシル基を、α−、β−または
γ−ＣＤにα−１，６結合で結合させた分岐ＣＤの該側
鎖のグルコシル基の水酸基にα結合でマンノシル基が結
合している新規ヘテロ分岐ＣＤの製造方法を提供するも
のである。
【０００６】本発明に係る新規ヘテロ分岐ＣＤは、図１
に示す構造式Ｉ〜VIIIで表すことができる。
に示す構造式Ｉ〜VIIIで表すことができる。
【０００７】本発明の新規ヘテロ分岐ＣＤは、グルコシ
ル基またはマルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤと
α−マンノシル化合物を含有する溶液に、α−マンノシ
ル基転移酵素を作用させることによって得られる。本発
明において、グルコシル基またはマルトシル基を側鎖と
して有する分岐ＣＤとしては、Ｇ１−αＣＤ，Ｇ１−β
ＣＤ，Ｇ１−γＣＤ，Ｇ２−αＣＤ，Ｇ２−βＣＤおよ
びＧ２−γＣＤのいずれでもよく、これらの混合物であ
ってもよい。
ル基またはマルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤと
α−マンノシル化合物を含有する溶液に、α−マンノシ
ル基転移酵素を作用させることによって得られる。本発
明において、グルコシル基またはマルトシル基を側鎖と
して有する分岐ＣＤとしては、Ｇ１−αＣＤ，Ｇ１−β
ＣＤ，Ｇ１−γＣＤ，Ｇ２−αＣＤ，Ｇ２−βＣＤおよ
びＧ２−γＣＤのいずれでもよく、これらの混合物であ
ってもよい。
【０００８】また、本発明に用いるα−マンノシル化合
物（以下、糖供与体と記す。）としては、例えばメチル
−α−マンノシド，フェニル−α−マンノシド，パラニ
トロフェニル−α−マンノシド，α−マンノオリゴ糖な
どのα−マンノシル基を含む配糖体やオリゴ糖、あるい
は多糖やその部分分解物およびそれらの混合物なども用
いることができる。
物（以下、糖供与体と記す。）としては、例えばメチル
−α−マンノシド，フェニル−α−マンノシド，パラニ
トロフェニル−α−マンノシド，α−マンノオリゴ糖な
どのα−マンノシル基を含む配糖体やオリゴ糖、あるい
は多糖やその部分分解物およびそれらの混合物なども用
いることができる。
【０００９】本発明に用いるα−マンノシル基転移酵素
としては、α−マンノシル化合物とグルコシル基または
マルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤを含有する溶
液に作用させたとき、糖供与体を分解し、そのα−マン
ノシル基をグルコシル基またはマルトシル基を側鎖とし
て有する分岐ＣＤの該側鎖にα結合で転移させ、ヘテロ
分岐ＣＤを合成するものであれば、いずれも使用可能で
ある。
としては、α−マンノシル化合物とグルコシル基または
マルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤを含有する溶
液に作用させたとき、糖供与体を分解し、そのα−マン
ノシル基をグルコシル基またはマルトシル基を側鎖とし
て有する分岐ＣＤの該側鎖にα結合で転移させ、ヘテロ
分岐ＣＤを合成するものであれば、いずれも使用可能で
ある。
【００１０】本発明に用いるα−マンノシル基転移酵素
は、自然界に広く分布しているものである。例えば、タ
チナタマメあるいはアーモンドなどの植物由来の酵素、
サザエや肝臓（ウシ，ラット，ヒト）などの動物由来の
酵素、さらにはアルスロバクター・オーレセンス，アス
ペルギルス・ニガーなどの微生物由来の酵素がよく知ら
れている。
は、自然界に広く分布しているものである。例えば、タ
チナタマメあるいはアーモンドなどの植物由来の酵素、
サザエや肝臓（ウシ，ラット，ヒト）などの動物由来の
酵素、さらにはアルスロバクター・オーレセンス，アス
ペルギルス・ニガーなどの微生物由来の酵素がよく知ら
れている。
【００１１】本発明の反応系において、グルコシル基ま
たはマルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤと糖供与
体を含む溶液（水溶液または懸濁液）は、該分岐ＣＤの
濃度が約１〜１００％（Ｗ／Ｗ），糖供与体の濃度が約
１〜５０％（Ｗ／Ｗ）であることが好ましく、かつ該分
岐ＣＤに対する糖供与体の比率（重量）は、使用する糖
供与体の種類によって異なるが、０．１〜５０倍の範
囲、好ましくは０．３〜２倍の範囲とするのが適当であ
る。
たはマルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤと糖供与
体を含む溶液（水溶液または懸濁液）は、該分岐ＣＤの
濃度が約１〜１００％（Ｗ／Ｗ），糖供与体の濃度が約
１〜５０％（Ｗ／Ｗ）であることが好ましく、かつ該分
岐ＣＤに対する糖供与体の比率（重量）は、使用する糖
供与体の種類によって異なるが、０．１〜５０倍の範
囲、好ましくは０．３〜２倍の範囲とするのが適当であ
る。
【００１２】反応液のｐＨは３〜１０、好ましくは４〜
９、温度は２０〜７０、好ましくは３０〜６０℃に調整
して反応させることが適当である。使用酵素量は反応時
間と密接な関係があるので、通常は反応が５〜１００時
間、好ましくは５〜２０時間で終了するような酵素量と
すればよいが、これらに限定されるものではない。
９、温度は２０〜７０、好ましくは３０〜６０℃に調整
して反応させることが適当である。使用酵素量は反応時
間と密接な関係があるので、通常は反応が５〜１００時
間、好ましくは５〜２０時間で終了するような酵素量と
すればよいが、これらに限定されるものではない。
【００１３】以上のような方法で反応させて得られた液
を、高速液体クロマトグラフィーにかけて、グルコシル
基またはマルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤへの
転移生成物を分取した後、酵素分解法により構造を調べ
た。得られた転移生成物のうち、Ｇ１−βＣＤおよびＧ
２−αＣＤへの転移生成物について、それぞれを分画，
分取した後、酵素分解法および核磁気共鳴により構造解
析を行った結果、図１に示す構造式Ｉ〜VIIIで表される
ヘテロ分岐ＣＤであることを確認した。
を、高速液体クロマトグラフィーにかけて、グルコシル
基またはマルトシル基を側鎖として有する分岐ＣＤへの
転移生成物を分取した後、酵素分解法により構造を調べ
た。得られた転移生成物のうち、Ｇ１−βＣＤおよびＧ
２−αＣＤへの転移生成物について、それぞれを分画，
分取した後、酵素分解法および核磁気共鳴により構造解
析を行った結果、図１に示す構造式Ｉ〜VIIIで表される
ヘテロ分岐ＣＤであることを確認した。
【００１４】
【実施例】次に、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ （１）転移反応 メチル−α−マンノシド３ｇ，Ｇ１−βＣＤ３ｇを５０
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０ｍｌに溶解させた
後、タチナタマメのα−マンノシル基転移酵素（シグマ
社製）を２５単位加え、４０℃にて４０時間反応させ
た。反応液の一部を高速液体クロマトグラフィーにより
分析した結果を図２に示す。反応終了後、酵素を熱失活
させた溶液を高速液体クロマトグラフィーにかけて転移
生成物８０ｍｇを分取した。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ （１）転移反応 メチル−α−マンノシド３ｇ，Ｇ１−βＣＤ３ｇを５０
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０ｍｌに溶解させた
後、タチナタマメのα−マンノシル基転移酵素（シグマ
社製）を２５単位加え、４０℃にて４０時間反応させ
た。反応液の一部を高速液体クロマトグラフィーにより
分析した結果を図２に示す。反応終了後、酵素を熱失活
させた溶液を高速液体クロマトグラフィーにかけて転移
生成物８０ｍｇを分取した。
【００１５】（２）構造解析 上記（１）で単離された転移生成物は、図３に示すよう
に、タチナタマメのα−マンノシダーゼにより、完全に
等モルのマンノースとＧ１−βＣＤに分解された。ま
た、13Ｃ−ＮＭＲ解析により、図４に示すように、Ｇ１
−βＣＤの側鎖のグルコシル基の６位の水酸基にα結合
でマンノシル基が結合した化合物（図１の構造式IV）で
あることが確認された。
に、タチナタマメのα−マンノシダーゼにより、完全に
等モルのマンノースとＧ１−βＣＤに分解された。ま
た、13Ｃ−ＮＭＲ解析により、図４に示すように、Ｇ１
−βＣＤの側鎖のグルコシル基の６位の水酸基にα結合
でマンノシル基が結合した化合物（図１の構造式IV）で
あることが確認された。
【００１６】実施例２ （１）転移反応 メチル−α−マンノシド３ｇ，Ｇ２−αＣＤ３ｇを５０
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０ｍｌに溶解させた
後、タチナタマメのα−マンノシル基転移酵素（シグマ
社製）を２５単位加え、４０℃にて４０時間反応させ
た。反応液の一部を高速液体クロマトグラフィーにより
分析した結果を図５に示す。反応終了後、酵素を熱失活
させた溶液を高速液体クロマトグラフィーにかけて転移
生成物５７ｍｇを分取した。
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０ｍｌに溶解させた
後、タチナタマメのα−マンノシル基転移酵素（シグマ
社製）を２５単位加え、４０℃にて４０時間反応させ
た。反応液の一部を高速液体クロマトグラフィーにより
分析した結果を図５に示す。反応終了後、酵素を熱失活
させた溶液を高速液体クロマトグラフィーにかけて転移
生成物５７ｍｇを分取した。
【００１７】（２）構造解析 （１）で単離された転移生成物は、タチナタマメのα−
マンノシダーゼにより、完全に等モルのマンノースとＧ
２−αＣＤに分解された。また、13Ｃ−ＮＭＲ解析によ
り、図６に示すように、Ｇ２−αＣＤの側鎖のマルトシ
ル基の非還元性末端または還元性末端のグルコシル基の
６位の水酸基にα結合でマンノシル基が結合した化合物
（図１の構造式II）であることが確認された。マンノー
スの代わりにガラクトースを用いて行った同様な反応で
は、Ｇ２−αＣＤの側鎖のマルトシル基の非還元性末端
のグルコシル基の６位の水酸基にα結合でガラクトシル
基が結合した化合物が得られたことがメチル化分析によ
り確認された。したがって、この場合もマルトシル基は
非還元性末端のグルコシル基の６位の水酸基にα結合し
ているものと考えられる。
マンノシダーゼにより、完全に等モルのマンノースとＧ
２−αＣＤに分解された。また、13Ｃ−ＮＭＲ解析によ
り、図６に示すように、Ｇ２−αＣＤの側鎖のマルトシ
ル基の非還元性末端または還元性末端のグルコシル基の
６位の水酸基にα結合でマンノシル基が結合した化合物
（図１の構造式II）であることが確認された。マンノー
スの代わりにガラクトースを用いて行った同様な反応で
は、Ｇ２−αＣＤの側鎖のマルトシル基の非還元性末端
のグルコシル基の６位の水酸基にα結合でガラクトシル
基が結合した化合物が得られたことがメチル化分析によ
り確認された。したがって、この場合もマルトシル基は
非還元性末端のグルコシル基の６位の水酸基にα結合し
ているものと考えられる。
【００１８】実施例３ （１）転移反応 フェニル−α−マンノシド１ｇ，Ｇ１−αＣＤ２ｇを５
０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０ｍｌに溶解させた
後、アーモンドのα−マンノシル基転移酵素（シグマ社
製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反応させた。反
応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマト
グラフィーにかけて転移生成物１５ｍｇを分取した。
０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０ｍｌに溶解させた
後、アーモンドのα−マンノシル基転移酵素（シグマ社
製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反応させた。反
応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマト
グラフィーにかけて転移生成物１５ｍｇを分取した。
【００１９】（２）構造解析 上記（１）で単離された転移生成物は、アーモンドのα
−マンノシダーゼにより完全に等モルのマンノースとＧ
１−αＣＤに加水分解された。さらに、この転移生成物
をＦＡＢ−ＭＳにより分析したところ、図７に示すよう
に分子量は、１２９６であることがわかった。また、９
７１にピークがあることより、この転移生成物は、Ｇ１
−αＣＤの側鎖のグルコシル基にマンノシル基が結合し
た化合物であることがわかった（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａ
ｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２１５（１９９１）１２７−
１３６）。以上のことより、上記（１）で単離された転
移生成物は、Ｇ１−αＣＤの側鎖のグルコシル基のＣ
２，Ｃ３，Ｃ４，Ｃ６位のいずれかの水酸基にα結合で
マンノシル基が転移した化合物（図１の構造式Ｉ）であ
ることが確認された。
−マンノシダーゼにより完全に等モルのマンノースとＧ
１−αＣＤに加水分解された。さらに、この転移生成物
をＦＡＢ−ＭＳにより分析したところ、図７に示すよう
に分子量は、１２９６であることがわかった。また、９
７１にピークがあることより、この転移生成物は、Ｇ１
−αＣＤの側鎖のグルコシル基にマンノシル基が結合し
た化合物であることがわかった（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａ
ｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２１５（１９９１）１２７−
１３６）。以上のことより、上記（１）で単離された転
移生成物は、Ｇ１−αＣＤの側鎖のグルコシル基のＣ
２，Ｃ３，Ｃ４，Ｃ６位のいずれかの水酸基にα結合で
マンノシル基が転移した化合物（図１の構造式Ｉ）であ
ることが確認された。
【００２０】実施例４ （１）転移反応 フェニル−α−マンノシド１ｇ，Ｇ２−βＣＤ２ｇを５
０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０ｍｌに溶解させた
後、アーモンドのα−マンノシル基転移酵素（シグマ社
製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反応させた。反
応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマト
グラフィーにかけて、転移生成物２０ｍｇを分取した。
０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０ｍｌに溶解させた
後、アーモンドのα−マンノシル基転移酵素（シグマ社
製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反応させた。反
応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマト
グラフィーにかけて、転移生成物２０ｍｇを分取した。
【００２１】（２）構造解析 （１）で単離された転移生成物は、アーモンドのα−マ
ンノシダーゼにより、完全に等モルのマンノースとＧ２
−βＣＤに加水分解された。また、１３Ｃ−ＮＭＲ解析
により、図８に示すように、Ｇ２−βＣＤの側鎖のマル
トシル基の非還元性末端のグルコシル基の６位の水酸基
にα結合でマンノシル基が転移した化合物（図１の構造
式ＶＩ）であることが確認された。
ンノシダーゼにより、完全に等モルのマンノースとＧ２
−βＣＤに加水分解された。また、１３Ｃ−ＮＭＲ解析
により、図８に示すように、Ｇ２−βＣＤの側鎖のマル
トシル基の非還元性末端のグルコシル基の６位の水酸基
にα結合でマンノシル基が転移した化合物（図１の構造
式ＶＩ）であることが確認された。
【００２２】実施例５ （１）転移反応 パラニトロフェニル−α−マンノシド５００ｍｇ，Ｇ１
−γＣＤ１ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）１０
ｍｌに溶解させた後、サザエのα−マンノシル基転移酵
素（シグマ社製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反
応させた。反応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速
液体クロマトグラフィーにかけて、転移生成物１５ｍｇ
を分取した。
−γＣＤ１ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）１０
ｍｌに溶解させた後、サザエのα−マンノシル基転移酵
素（シグマ社製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反
応させた。反応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速
液体クロマトグラフィーにかけて、転移生成物１５ｍｇ
を分取した。
【００２３】（２）構造解析 （１）で単離された転移生成物は、サザエのα−マンノ
シダーゼにより完全に等モルのマンノースとＧ１−γＣ
Ｄに加水分解された。さらに、この転移生成物をＦＡＢ
−ＭＳにより分析したところ、分子量は、１６２０であ
ることがわかった。また、１２９５にピークがあること
より、この転移生成物は、Ｇ１−γＣＤの側鎖のグルコ
シル基にマンノシル基が結合した化合物であることがわ
かった（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，２１５（１９９１）１２７−１３６）。以上のこと
より、（１）で単離された転移生成物は、Ｇ１−γＣＤ
の側鎖のグルコシル基のＣ２，Ｃ３，Ｃ４，Ｃ６位のい
ずれかの水酸基にα結合でマンノシル基が転移した化合
物（図１の構造式ＶＩＩ）であることが確認された。
シダーゼにより完全に等モルのマンノースとＧ１−γＣ
Ｄに加水分解された。さらに、この転移生成物をＦＡＢ
−ＭＳにより分析したところ、分子量は、１６２０であ
ることがわかった。また、１２９５にピークがあること
より、この転移生成物は、Ｇ１−γＣＤの側鎖のグルコ
シル基にマンノシル基が結合した化合物であることがわ
かった（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，２１５（１９９１）１２７−１３６）。以上のこと
より、（１）で単離された転移生成物は、Ｇ１−γＣＤ
の側鎖のグルコシル基のＣ２，Ｃ３，Ｃ４，Ｃ６位のい
ずれかの水酸基にα結合でマンノシル基が転移した化合
物（図１の構造式ＶＩＩ）であることが確認された。
【００２４】実施例６ （１）転移反応 パラニトロフェニル−α−マンノシド５００ｍｇ，Ｇ２
−γＣＤ１ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）１０
ｍｌに溶解させた後、サザエのα−マンノシル基転移酵
素（シグマ社製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反
応させた。反応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速
液体クロマトグラフィーにかけて転移生成物１８ｍｇを
分取した。
−γＣＤ１ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）１０
ｍｌに溶解させた後、サザエのα−マンノシル基転移酵
素（シグマ社製）を２０単位加え、４０℃にて１時間反
応させた。反応終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速
液体クロマトグラフィーにかけて転移生成物１８ｍｇを
分取した。
【００２５】（２）構造解析 上記（１）で単離された転移生成物は、サザエのα−マ
ンノシダーゼにより完全に等モルのマンノースとＧ２−
γＣＤに加水分解された。さらに、この転移生成物をＦ
ＡＢ−ＭＳにより分析したところ、分子量は、１７８２
であることがわかった。また、１２９５にピークがある
ことより、この転移生成物は、Ｇ２−γＣＤの側鎖のマ
ルトシル基にマンノシル基が結合した化合物であること
がわかった（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ，２１５（１９９１）１２７−１３６）。以上のこ
とより、上記（１）で単離された転移生成物は、Ｇ２−
γＣＤの側鎖のマルトシル基のいずれかのＣ２，Ｃ３，
Ｃ４，Ｃ６位のいずれかの水酸基にα結合でマンノシル
基が転移した化合物（図１の構造式ＶＩＩＩ）であるこ
とが確認された。
ンノシダーゼにより完全に等モルのマンノースとＧ２−
γＣＤに加水分解された。さらに、この転移生成物をＦ
ＡＢ−ＭＳにより分析したところ、分子量は、１７８２
であることがわかった。また、１２９５にピークがある
ことより、この転移生成物は、Ｇ２−γＣＤの側鎖のマ
ルトシル基にマンノシル基が結合した化合物であること
がわかった（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ，２１５（１９９１）１２７−１３６）。以上のこ
とより、上記（１）で単離された転移生成物は、Ｇ２−
γＣＤの側鎖のマルトシル基のいずれかのＣ２，Ｃ３，
Ｃ４，Ｃ６位のいずれかの水酸基にα結合でマンノシル
基が転移した化合物（図１の構造式ＶＩＩＩ）であるこ
とが確認された。
【００２６】
【発明の効果】本発明によれば、α−マンノシル基転移
酵素の糖転移作用を利用して、グルコシル基またはマル
トシル基を側鎖として有する分岐ＣＤの該側鎖のグルコ
シル基の水酸基にα結合でマンノシル基が結合している
新規ヘテロ分岐ＣＤを効率よく得ることができる。本発
明の新規ヘテロ分岐ＣＤは、医薬品分野のほか食品分
野，化粧品分野等における幅広い利用が期待される。
酵素の糖転移作用を利用して、グルコシル基またはマル
トシル基を側鎖として有する分岐ＣＤの該側鎖のグルコ
シル基の水酸基にα結合でマンノシル基が結合している
新規ヘテロ分岐ＣＤを効率よく得ることができる。本発
明の新規ヘテロ分岐ＣＤは、医薬品分野のほか食品分
野，化粧品分野等における幅広い利用が期待される。
【図１】 本発明に係る新規ヘテロ分岐ＣＤの構造式を
示す。
示す。
【図２】 実施例１における転移反応生成物の、高速液
体クロマトグラムを示す。
体クロマトグラムを示す。
【図３】 実施例１における転移反応生成物の、タチナ
タマメのα−マンノシル基転移酵素による分解物の高速
液体クロマトグラムを示す。
タマメのα−マンノシル基転移酵素による分解物の高速
液体クロマトグラムを示す。
【図４】 実施例１の（１）で単離された転移生成物の
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】 実施例２における転移反応生成物の、高速液
体クロマトグラムを示す。
体クロマトグラムを示す。
【図６】 実施例２の（１）で単離された転移生成物の
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図７】 実施例３の（１）で単離された転移生成物の
ＦＡＢ−ＭＳを示す。
ＦＡＢ−ＭＳを示す。
【図８】 実施例４の（１）で単離された転移生成物の
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 藤田 孝輝 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13番46号 塩水港精糖株式会社内 (72)発明者 桑原 宣洋 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13番46号 塩水港精糖株式会社内 (72)発明者 北畑 寿美雄 大阪府泉南郡熊取町野田621−440 (72)発明者 小泉 京子 大阪府藤井寺市春日丘３−14−３ (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C08B 37/16 C12P 19/00 - 19/64 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 側鎖としてグルコシル基またはマルトシ
ル基を、α−、β−またはγ−シクロデキストリンにα
−１，６結合で結合させた分岐シクロデキストリンの該
側鎖のグルコシル基の水酸基にα結合でマンノシル基が
結合している新規ヘテロ分岐シクロデキストリン。 - 【請求項２】 側鎖としてグルコシル基またはマルトシ
ル基を、α−、β−またはγ−シクロデキストリンにα
−１，６結合で結合させた分岐シクロデキストリンとα
−マンノシル化合物を含有する溶液に、α−マンノシル
基転移酵素を作用させることを特徴とする側鎖としてグ
ルコシル基またはマルトシル基を、α−、β−またはγ
−シクロデキストリンにα−１，６結合で結合させた分
岐シクロデキストリンの該側鎖のグルコシル基の水酸基
にα結合でマンノシル基が結合している新規ヘテロ分岐
シクロデキストリンの製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03324021A JP3122203B2 (ja) | 1991-11-13 | 1991-11-13 | 新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 |
| US07/958,579 US5356884A (en) | 1991-11-13 | 1992-10-08 | Hetero-branched cyclodextrins |
| EP92117621A EP0541984B1 (en) | 1991-11-13 | 1992-10-15 | Hetero-branched cyclodextrins and method of preparing them |
| DE69219558T DE69219558T2 (de) | 1991-11-13 | 1992-10-15 | Heteroverzweigte Cyclodextrine und Verfahren zu deren Herstellung |
| DK92117621.0T DK0541984T3 (da) | 1991-11-13 | 1992-10-15 | Hetero-forgrenet cyclodextrin og fremgangsmåde til fremstilling deraf. |
| CA002080868A CA2080868C (en) | 1991-11-13 | 1992-10-19 | Novel hetero-branched cyclodextrins and method of preparing them |
| US08/263,124 US5463039A (en) | 1991-11-13 | 1994-06-21 | Method of preparing hetero-branched cyclodextrins |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03324021A JP3122203B2 (ja) | 1991-11-13 | 1991-11-13 | 新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05306301A JPH05306301A (ja) | 1993-11-19 |
| JP3122203B2 true JP3122203B2 (ja) | 2001-01-09 |
Family
ID=18161264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03324021A Expired - Fee Related JP3122203B2 (ja) | 1991-11-13 | 1991-11-13 | 新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JP3122203B2 (ja) |
| CA (1) | CA2080868C (ja) |
| DE (1) | DE69219558T2 (ja) |
| DK (1) | DK0541984T3 (ja) |
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| JP5144957B2 (ja) * | 2007-05-16 | 2013-02-13 | ナノデックス株式会社 | 多分岐シクロデキストリン化合物、その製造方法、および標的指向性薬物送達システム用の薬物送達剤 |
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| JPS6346201A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-02-27 | Natl Food Res Inst | 重分岐サイクロデキストリン、及びその製法 |
| JPS6474997A (en) * | 1987-09-17 | 1989-03-20 | Nat Food Res | Complex branched cyclodextrin and production thereof |
| JPH0698012B2 (ja) * | 1988-05-13 | 1994-12-07 | 農林水産省食品総合研究所長 | 複分岐グルコシルーサイクロデキストリンの製法 |
| JP2775046B2 (ja) * | 1989-12-21 | 1998-07-09 | 農林水産省食品総合研究所長 | ヘテロ糖を含有する修飾サイクロデキストリンの製造方法 |
| TW282399B (ja) * | 1990-05-25 | 1996-08-01 | Takeda Pharm Industry Co Ltd |
-
1991
- 1991-11-13 JP JP03324021A patent/JP3122203B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-08 US US07/958,579 patent/US5356884A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-15 EP EP92117621A patent/EP0541984B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-15 DK DK92117621.0T patent/DK0541984T3/da active
- 1992-10-15 DE DE69219558T patent/DE69219558T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-19 CA CA002080868A patent/CA2080868C/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-06-21 US US08/263,124 patent/US5463039A/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2080868A1 (en) | 1993-05-14 |
| US5463039A (en) | 1995-10-31 |
| DK0541984T3 (da) | 1997-07-07 |
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| CA2080868C (en) | 2003-07-01 |
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| DE69219558T2 (de) | 1997-09-11 |
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| EP0541984B1 (en) | 1997-05-07 |
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