FR2625073A1

FR2625073A1 - Liquide de perfusion pour la conservation d'organes

Info

Publication number: FR2625073A1
Application number: FR8817334A
Authority: FR
Inventors: Folkert O Belzer; James H Southard
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 1987-12-29
Filing date: 1988-12-28
Publication date: 1989-06-30
Anticipated expiration: 2008-12-28
Also published as: JPH01246201A; KR890009409A; GB2213362B; HU200885B; NL193971C; ZA889683B; SE8804661D0; BE1003362A3; SE503182C2; HUT49782A; RU2019965C1; KR950015064B1; JPH0768082B2; SE8804661L; AU2761688A; CH678912A5; GB2213362A; AU609236B2; NL193971B; NL8803186A

Abstract

L'invention concerne la préparation d'organes pour la transplantation. Elle a pour objet une composition qui se prête à la conservation et au stockage d'un organe pour le transplanter à un patient et qui comprend un lactobionate et un hydroxyéthylamidon qui est sensiblement exempt d'éthylèneglycol, d'éthylènechlorhydrine, de chlorure de sodium et d'acétone et qui a un poids moléculaire de 150.000 à 350.000 daltons. La composition est préférée pour le traitement des reins, du foie et du pancréas.

Description

Liquide de perfusion pour la conservation d'organes - La conservation des

reins, qui est le stockage ex vivo de reins de cadavres, est un domaine relativement nouveau. La conservation des reins de cadavres pour la transplantation est de pratique cou- rante dans les hôpitaux, mais les progrès se sont limités à des expériences par essai et erreur. Bien que cette approche ait eu un succès partiel du point de vue clinique, les principes réels sous-jacents

à ces succès ne sont pas parfaitement élucidés.

Pendant que la transplantation rénale s'est développée d'une procédure strictement de recherche jusqu'à une thérapeutique clinique établie pour les affections rénales au stade terminal, la conservation des reins a progressé du stade de la recherche en

laboratoire jusqu'à un procédé clinique établi. Ac-

tuellement, les deux procédés les plus couramment appliqués à la conservation des reins sont la simple

conservation hypothermique et la perfusion continue.

Pour la conservation hypothermique, dans le procédé le plus courant, les organes sont prélevés sur le cadavre donneur etsont refroidis rapidement. Ceci est habituellement exécuté par une combinaison d'un refroidissement extérieur et d'une perfusion de brève

durée pour abaisser la température centrale aussi ra-

pidement que possible. Les reins sont ensuite conser-

vés immergés dans une solution de rinçage dans un sim-

ple récipient en matière plastique et maintenus à une température de 0 à 4-C par immersion du récipient dans

de la glace. Les avantages de ce procédé sont sa sim-

plicité, son faible coût et la commodité de transport des organes. La composition de la solution de rinçage pour assurer la conservation optimale a été étudiée

en détail.

Le second procédé de conservation des reins qui a fait l'objet d'investigations de laboratoire détaillées,de même que d'essais cliniques, est la perfusion continue pulsée. Les éléments fondamentaux de la perfusion continue sont, de façon générale, (1) l'écoulement pulsé, (2) l'hypothermie, (3) l'oxy- génation de la membrane et (4) un liquide de perfusion

contenant tant de l'albumine que des lipides. La per-

fusion continue offre divers avantages. Premièrement, la perfusion procure un délai suffisant pour faire de la transplantation à partir d'un cadavre une procédure partiellement sélective. Deuxièmement, elle permet des essais de viabilité avant l'implantation. Une

amélioration sensible des résultats de la transplan-

tation de reins de cadavres pourrait être attendue si le temps de conservation pouvait être prolongé

jusqu'aux cinq à sept jours nécessaires pour les pro-

cédés actuels d'essai de culture mixtes de lymphocytes.

La capacité de conserver avec succès des reins humains pendant deux à trois jours par simple stockage au froid après un rinçage initial avec une

solution d'électrolyte intracellulaire ou par perfu-

sion pulsée avec une solution d'électrolyte et de

protéine a offert un délai suffisant pour l'essai d'hi-

stocompatibilité entre le donneur et le receveur, la

répartition des reins entre les centres de transplan-

tation, la préparation soigneuse du receveur avant

l'opération, le délai pour que les résultats prélimi-

naires de culture du donneur deviennent disponibles et les restaurations vasculaires de la greffe rénale avant l'implantation. Les reins conservés pendant 72 heures par perfusion hypothermique pulsée avec du plasma cryoprécipité se sont révélés constituer un progrès sensible dans la conservation des reins humains et ont ainsi conduit au procédé de conservation préféré. La conservation des reins avec une solution de rinçage glacée d'électrolyte intracellulaire avant un simple stockage au froid a été appliquée avec succès pour conserver des reins humains pendant des

durées s'élevant jusqu'à 61 heures.

L'albumine du sérum, sous diverses formes,

est utilisée exclusivement pour la conservation cli-

nique des organes aux fins d'établir la pression oncotique nécessaire. Ces formes sont notamment le plasma cryoprécipité, la fraction protéique du plasma, l'albumine de sérum humain et le plasma traité sur gel de silice. Toutefois, du fait que ces liquides de perfusion sont préparés à partir de matières d'origine naturelle, des fluctuations sont inévitables. Il serait particulièrement avantageux de disposer d'un

liquide de perfusion contenant un colloide synthétique.

Par le passé, l'efficacité d'un grand nombre de colloides synthétiques pour la conservation des reins a fait l'objet d'expériences. Ces colloides sont notamment les dextranes, la polyvinylpyrrolidone, les Pluronics, l'hydroxyéthylamidon (HEA), le Ficoll, la gomme arabique et le polyéthylèneglycol. Aucun de

ceux-ci n'a été aussi efficace que l'albumine du sérum.

Toutefois, le HEA est efficace pendant 24 heures et parfois 72 heures de conservation. Ces colloides ont tous été essayés dans des liquides de perfusion à base de solution physiologique salée. Récemment, une excellente conservation de rein de chien pendant 72 heures a été observée avec un liquide de perfusion

contenant des anions gluconate au lieu d'anions chlo-

rure,avec de l'albumine de sérum humain (ASH) comme

colloide de support osmotique.

Dans les dernières années après 1960, deux études importantes ont démontré que les reins pouvaient

être conservés avec sûreté pendant 30 heures par stoc-

kage au froid (1) et pendant une durée atteignant 72 heures par perfusion continue (2). Ces deux études ont modifié la transplantation clinique des reins de cadavres d'une technique d'urgence en une technique semisélective. La solution de.,Collins ou la solution d'Eurocollins modifiée est préférée dans la plupart des centres de transplantation pour la conservation

des reins par stockage au froid.

L'introduction de la cyclosporine pour l'im-

munosuppression dans les années 1980 a ranimé l'inté-

rêt pour la transplantation d'autres organes, spécifi-

quement le foie, le pancréas, le coeur, les poumons et le bloc coeurpoumon. Toutefois, les procédés.de conservation qui sont efficaces'pour les reins se sont

- révélés inopérants pour ces autres organes. Par con-

séquent, la conservation clinique du coeur, du foie et du pancréas est maintenue à un minimum qui n'excède

pas 6 à 10 heures. Ces organes sont d'une transplan-

tation largement plus complexe que celle des reins et les opérations sont invariablement faites pendant la nuit lorsque les blocs opératoires sont disponibles

dans les hôpitaux donneurs. La brève durée de conser-

vation du coeur et du foie nécessite également deux équipes chirurgicales, l'une pour le donneur et l'autre

pour le receveur. L'augmentation du temps de conser-

vation de ces organes jusqu'à 30 heures aurait le même effet sur leur transplantation que celui exercé sur la transplantation des reins, à savoir augmenter les ressources d'organes, réduire le gaspillage d'organes, améliorer la distribution des organes et abaisser

les coûts.

Une solution de conservation utile pour tous les organes du donneur, tant pour le refroidissement de l'organe in situ chez le donneur que pour le stockage

au froid après le prélèvement de l'organe,serait sou-

haitable.

La présente invention a pour objet une compo-

sition convenant pour la conservation et le stockage

d'un organe destiné à la transplantation chez un pa-

tient, qui comprend un lactobionate et un hydroxyéthyl-

amidon qui est sensiblement exempt d'éthylèneglycol,

d'éthylènechlorhydrine, de chlorure de sodium et d'acé-

tone et qui a un poids moléculaire de 150.000 à 350.000,

outre un procédé pour la conservation d'un organe des-

tiné à la transplantation chez un patient, suivant le-

quel on dépose cet organe dans une telle composition.

Une telle composition ou liquide de perfusion a permis 72 heures de conservation pour le pancréas, 48 heures de stockage pour les reins et au moins 24 heures de

conservation pour le foie.

Bien que les liquides de perfusion à base d'albumine du sérum (ASH) assurent la viabilité du rein jusqu'à trois jours, les reins sont endommagés

comme le montrent les taux élevés de créatinine séri-

que après la transplantation et la durée nécessaire

pour le retour de ces taux élevés à la valeur normale.

Jusqu'à présent, des procédés acceptables

pour la conservation des reins n'ont pas été disponi-

bles. Ceux qui se sont révélés cliniquement efficaces sont limités par un stockage à court terme (trois jours) et une viabilité sensiblement réduite. La présente invention décrit la composition biochimique du liquide de perfusion et de la solution de stockage

convenant le mieux-pour les organes conservés en hy-

pothermie, ainsi qu'un nouveau. colloide synthétique osmotique qui permet une conservation à long terme

sensiblement améliorée.

La congélation et la perfusion continue en aérobiose sont théoriquement les seuls moyens pour assurer la conservation réellement à long terme (d'un mois à quelques années). Le simple stockage au froid a une durée limite spécifique au delà de laquelle l'organe n'est plus viable. L'hypothermie abaisse l'allure à laquelle les enzymes intracellulaires dégradent des composants cellulaires essentiels qui sont nécessaires à la viabilité de l'organe.

Il a été démontré que le simple refroidisse-

ment de reins ischémiques avec du sang froid conserve la fonction pendant 12 heures. Collins (Lancet 1969;

2:1219-1222) a montré que l'utilisation d'une solu-

tion de rinçage appropriée augmente à nouveau d'un facteur de 3 (jusqu'à 30 heures) le temps de stockage

des reins. L'inutilité de cette solution pour conser-

ver d'autres organes, comme le pancréas, le foie et

le coeur est due, croit-on, à des différences métabo-

liques spécifiques des organes.

Pour être efficace et appropriée, la solution

de rinçage doit avoir une composition qui réduit au mi-

nimum le gonflement cellulaire induit par l'hypother-

mie, empêche la dilatation de l'espace extracellulaire pendant la période de rinçage, empêche les lésions par les radicaux libres oxygène, spécialement pendant

la reperfusion, et apporte des substrats pour la ré-

génération de composés phosphatés très énergétiques

pendant la reperfusion.

Le gonflement cellulaire induit par l'hypo-

thermie est dû à l'accumulation d'eau. Cette tendance au gonflement peut être compensée par une addition de 110 à 140 millimoles (110 à 140 mOsm/kg de force osmotique) de substances auxquelles la cellule est imperméable (imperméants). Cette concentration en imperméants est à peu près égale à la concentration en glucose dans la solution de Collins pour le stockage

au froid (120 mM) et en imperméants dans d'autres solu-

tions pour le stockage au froid. Ainsi, un terme clé pour l'efficacité des solutions de stockage au froid

est la concentration appropriée d'un imperméant effi-

cace. Une solution efficace pour le rinçage à

froid doit empêcher la dilatation de l'espace extra-

cellulaire, dilatation qui peut avoir lieu pendant le rinçage in situ des organes du donneur et après que les organes ont été prélevés. Cette dilatation peut comprimer le système capillaire et faire que

la solution de rinçage est mal répartie dans le tissu.

La plupart des solutions de stockage à froid ne contien-

nent pas de substances qui exercent un support onco-

tique (albumine et autres colloPdes). Par conséquent, les composants de la solution de rinçage diffusent

rapidement dans les espaces extracellulaires et pro-

voquent l'oedème du tissu. Dès lors, la solution de rinçage in situ idéale devrait contenir des substances

qui créent une pression osmotique colloïdale et per-.

mettent l'échange libre des constituants essentiels de la solution de rinçage sans dilatation de l'espace

extracéllulaire.

Il existe d'importantes différences de métabolisme entre les reins, le foie et le pancréas

et ces différences peuvent influencer la bonne con-

servation de ces organes. La suppression du gonfle-

ment cellulaire nécessite d'utiliser un imperméant efficace. Le glucose, qui est l'imperméant principal dans la solution de Collins, n'est pas efficace pour le foie ou le pancréas et pénètre rapidement dans les

cellules (Southard, et al., Cryobiology 1986; 23:477-

482). Le mannitol qui est un autre imperméant d'usage courant pénètre à peu près autant que le glucose dans le foie. Par conséquent, une raison pour laquelle les solutions de conservation au froid qui contiennent du glucose ou du mannitol ne sont pas efficaces pour

le foie et le pancréas est que ces solutions ne con-

tiennent pas d'imperméant efficace.

Suivant la présente invention, la solution pour la conservation d'organes contient l'anion lactobionate et de préférence du raffinose comme imperméants pourla cellule et de préférence l'osmola- lité de la solution est d'environ 320 mOsm/L, avec K+ à 120 mM et Na+ à 30 mM. Le colloide protecteur est

un hydroxyéthylamidon modifié ayant un poids molécu-

laire moyen de 150.000 à 350.000 et spécialement de 200.000 à 300.000 daltons et un degré de substitution de 0,4 à 0,7. Le colloide préféré est sensiblement exempt d'hydroxyéthylamidon ayant un poids moléculaire

inférieur à 50.000 daltons.

Suivant la présente invention, l'hydroxyétyl-

amidon est dialysé contre de l'eau distillée-déminé-

ralisée ou bien traité autrement pour l'élimination de diverses impuretés dont il était antérieurement

inconnu qu'elles ont un effet nuisible sur l'effica-

cité des préparations d'hydroxyéthylamidon. Les sub-

stances éliminées par la dialyse sont les hydroxyéthyl-

amidons très petits, outre l'éthylèneglycol et l'éthy-

lènechlorhydrine qui sont des sous-produits de l'hydro-

xyéthylation, ainsi que le chlorure de sodium et l'acé-

tone résiduels. L'éthylèneglycol et l'éthylènechlor-

hydrine sont connus comme toxiques. Par conséquent, leur élimination, même s'ils sont présents en faible

quantité, est souhaitable.

Une autre considération importante pour un stockage à froid efficace est d'empêcher l'acidose intracellulaire. L'ischémie, même au froid, stimule la glycolyse et la glycogénolyse (effet Pasteur); et elle augmente aussi la production d'acide lactique et

la concentration des ions hydrogène. L'acidose tissu-

laire est fatale pour les cellules et peut induire une instabilité des lysosomes, activer les enzymes du

lysosome et altérer les propriétés des mitochondries.

La prévention de l'acidose intracellulaire est par conséquent une importante nécessité préalable à une bonne conservation. Certaines études ont montré que le fait de tamponner efficacement les solutions de stockage à froid ou celui d'utiliser des solutions de rinçage ayant un pH alcalin améliore le stockage des foies (Lie, TS et al., Transplant Proc. 1984, 16:134-137) et des pancréas (Abstract, Am. Soc. of Transplant Surgeons 13th Annual Meeting, 28-29 mai, 1987). La composition préférée conforme à la présente

invention a un pH d'environ 7,4.

Une autre considération importante pour un

stockage à froid efficace tient aux dégradations in-

duites par les radicaux libres oxygène pendant la re-

perfusion, mais le rôle exact de ces agents n'est pas encore élucidé. On est porté à croire que les radicaux libres oxygène peuvent avoir peu d'importance dans le foie et les reins humains parce que la xanthine oxydase

endogène a une activité relativement faible en comparai-

son de l'activité endogène élevée de la superoxyde

dismutase,qui capte les anions superoxyde. Au con-

traire, les lésions induites par les radicaux libres

oxygène peuvent être extrêmement graves dans les pou-

mons et les intestins qui sont sensibles à ces dégâts.

De préférence, la composition contient-donc du gluta-

thion. Une autre considération importante est le métabolisme énergétique. L'adénosine triphosphate

(ATP) se dégrade rapidement pendant le stockage hypo-

thermique et cette dégradation conduit à la formation de produits finals (adénosine, inosine et hypoxanthine)

pour lesquels la membrane plasmique est bien perméable.

La reperfusion de l'organe nécessite la régénération

rapide de l'activité de pompage du sodium, ce qui re-

quiert de i'ATP. La disponibilité de précurseurs

de 1'ATP peut donc être importante pour la conserva-

tion efficace d'un organe. La composition préférée

contient donc de l'adénosine.

L'hydroxyéthylamidon est typiquement présent

en une quantité de 3 à 8% en poids.

Dans une forme de réalisation préférée, la

solution de conservation et la composition de perfu-

sion comprennent non limitativement les constituants ci-après, de préférence à peu près en les quantités spécifiées:

TABLEAU 1

Substances Quantité par litre K+ -lactobionate 100 millimoles KH PO 25 millimoles 2 4 MgSO4 5 millimoles Raffinose 30 millimoles Adénosine 5 millimoles Glutathion 3 millimoles Insuline 100 unités Bactrim 0,5 ml Dexaméthazone 8 mg Allopurinol 1 mM

Hydroxyéthylamidon d'un poids molé-

culaire de 200.000 à 300.000

daltons et d'un degré de substi-

tution de 0,4 à 0,7 50 g

La solution est amenée à pH 7,4 à la tempé-

rature ambiante avec du NaOH. Les concentrations fi-

nales sont Na = 30 + 5mM, K+ = 120 + 5 mM, mOsm/litre =

320 + 5. Bactrim = triméthoprime (16 mg/ml) et sulfa-

méthoxazole (80 mg/ml).

Une autre composition préférée est la sui-

vante: Substance Quantité par litre Acide lactobionique 35,83 g Phosphate de potassium monobasique 3,40 g Raffinose pentahydraté* 17,83 g Sulfate de magnésium heptahydraté* 1,23 g Adénosine 1,34 g Allopurinol 0,136 g Glutathion (réduit) 0,922 g Pentafraction** 50,00 g Hydroxyde de potassium (10 N) 10,0 ml Hydroxyde de sodium ou acide chlorhydrique pour ajuster le pH à 7,4 Eau pour injections pour ajuster le volume à 1,0 litre * D'autres hydrates peuvent évidemment être utilisés

pour apporter une quantité équivalente.

** L'hydroxyéthylamidon obtenu dans l'exemple 1.

Par conséquent, la présente invention procure un plus long temps de conservation clinique des organes

et recourt à un collolde synthétique qui réduit au mi-

nimum les fluctuations qui sont constatées dans les produits de perfusion préparés à partir de dérivés naturels. Les exemples suivants illustrent davantage

la présente invention.

EXEMPLE 1

Préparation de l'hydroxyéthylamidon On dissout 100 g d'hydroxyéthylamidon dans

de l'eau distillée-déminéralisée pour faire une solu-

tion à 10% p/p. On introduit la solution de HEA dans des sacs à dialyse (34 mm x 18 pouces., soit 45 cm) opérant une coupure de poids moléculaire à 50.000 daltons,qu'on introduit dans un récipient de 10 à litres d'eau distillég-déminéralisée et on agite pendant 72 heures. On change l'eau quotidiennement, puis on recueille le HEA et on le congèle à -20C

jusqu'au moment de l'utiliser; il a un poids molécu-

laire de 200.000 à 300.000 daltons et un degré de sub-

stitution d'environ 0,4 à 0,5.

EXEMPLE 2

Conservation de pancréas de chien pendant 72 heures On utilise des chiennes qui sont des bâtardes

d'un poids de 15-25 kg pour l'expérience.

Technique opératoire. On induit l'anesthésie au

penthotal et on l'entretient avec de l'halothane.

Par une incision médiane, on prélève le segment

gauche (queue)du pancréas, comme décrit précédemment.

On transplante la greffe portant la rate attachée sur les vaisseaux iliaques soit immédiatement après

rinçage (témoin), soit après 48 et 72 heures de stoc-

kage au froid. On laisse le canal pancréatique ouvert

pour permettre aux sécrétions pancréatiques de s'écou-

ler librement dans la cavité abdominale. On n'utilise pas d'anticoagulants. On prélève le segment droit du

pancréas au moment de la transplantation.

Protocole expérimental. On administre à tous les chiens 0,5 g de Mandol I. V. avant le prélèvement et

pendant les trois premiers jours après la transplan-

tation. Les chiens reçoivent un aliment normal pour chien contenant du Viokase. Les animaux sont répartis en trois groupes: le groupe I (témoin), o après

le prélèvement et le rinçage, les greffes sont trans-

plantées immédiatement; le groupe 2 (48 heures de

stockage au froid) et le groupe 3 (72 heures de stoc-

kage au froid). On détermine la concentration en glucose du sang quotidiennement pendant la première semaine après la transplantation et ensuite deux fois par semaine. On exécute un test de tolérance au glucose par voie intraveineuse (TTGIV) 24 heures, 2 semaines et 4 semaines après la transplantation. On retire les greffes après 4 semaines et 2 à 3 jours plus tard, on exécute un TTGIV. Pour le TTGIV, on injecte du glucose (0,5 g/kg de poids du corps) et on détermine le glucose sanguin après 1, 5, 10, 20, 30, 60, 90 et 120 minutes. On calcule la valeur de K d'après la concentration en glucose dans le sang déterminée par les mesures de 5 à 60 minutes (9). Des valeurs pour le glucose supérieures à 150 mg % pendant plus de

2 jours et une valeur de K inférieure à 1,0 sont con-

sidérées comme étant des signes de diabète.

Conservation. La composition de la solution de con-

servation est donnée au tableau 1. Après en avoir été retiré, le pancréas est rincé avec environ 250 à 300 ml de solution de rinçage, à partir d'une hauteur de 60 cm. Le greffon est introduit dans un double sac en matière plastique, recouvert de solution de

conservation et disposé dans un bain d'eau glacée.

Statistiques. L'évaluation statistique est faite

au moyen du critère T de Student. Les valeurs indi-

quées sont les moyennes + l'écart-type.

Résultats Toutes les greffes ont été soigneusement

perfusées immédiatement après la transplantation.

Dans les greffes après conservation, divers degrés d'oedème intralobulaire se sont manifestés après 5 à

minutes de reperfusion. La rate a été bien perfu-

sée dans tous les cas. Comme le montre le tableau 2, cinq chiens sont morts, à savoir trois dans le groupe témoin et deux dans le groupe 3 (conservation de 72 heures). Les causes de la mort étaient sans relation avec la transplantation et tous les chiens sont morts,

avec des greffes fonctionnelles.

Au moment de la pancréatectomie, toutes les greffes (même les témoins) ont manifesté divers degrés

de fibrose, tout comme la rate. La thrombose arté-

rielle et veineuse n'a été évidente dans aucune des greffes. Les valeurs du glucose sanguin après la transplantation et les résultats du TTGIV sont données au tableau 2 pour chaque animal. Les valeurs moyennes

(+ l'écart-type) pour chaque groupe étudié sont éga-

lement données au tableau 2. La valeur moyenne du glucose sanguin pendant la première semaine après la transplantation était la plus élevée dans le groupe 3 (124+6 mg%) et cette valeur était significativement différente (P.<0,05) par comparaison avec les valeurs pour le groupe 1 (94+7 mg%) et pour le groupe 2 (107+7 mg%). La valeur moyenne de K au jour 1 était aussi significativement plus faible (P <0,05) dans le groupe 3 (1,85+0, 15%) par comparaison avec le

groupe 1 (2,44+0,14%) et le groupe 2 (2,53+0,22%).

Dans le groupe 3, les valeurs de K déterminées aux jours 14 (1,7+0,1%) et 28 (1,61+0,19%) sont restées semblables aux valeurs de K au jour 1 (P=NS). Dans les groupes 1 et 2; les valeurs de K ont baissé et à 2 semaines après la transplantation, il n'y avait

pas de différence significative entre les trois groupes.

A la quatrième semaine, la valeur de K pour le groupe 3 était meilleure que pour le groupe 2, mais quelque peu plus faible par comparaison avec le groupe témoin (une signification statistique n'a pu être dégagée

à cause des petits nombres dans le groupe 1).

TABLEAU 2

Fonction pancréatique après transplantation succédant à la conservation

Chien Conser- Glucose san- K % K % K % Remar-

* n vation guin, le TTGIV TTGIV TTGIV ques semaine (mg%) (1 jour) (2 semaines) (4 semaines) Groupe 1 1 Témoin 72,7+6,2 1,97 2,23 - c 2 Témoin 113,1+7,7' 2,48 1,73 1,33 3 Témoin 104,4+16,5 2,65 - - d 4 Témoin 93,9+9, 8 2,76 1,82 2,76 Témoin 78,5+16,1 2,38 1,44 - e b Moyenne 93,5+7,0 2,44+0, 14 1,81+0,16 2,05+0,71 Groupe 2 6 48 h SF 95,3+5,6 2,76 1,41 - f 7 48 h SF 91,1+7,3 2,65 1,92 - g 8 48 h SF 108,3+9,9 2,56 2,15 1,11 9 48 h SF 130,4+10,0 1,78 1,82 1,41 Moyenne 106,5+6,6 2,53+0,22 1,83+0,15b 1,26+0, 15 n os LN TABLEAU 2 (suite) Fonction pancréatique après transplantation succédant à la conservation

Chien Conser- Glucose san- K % K % K % Remar-

n vation guin, le TTGIV TTGIV TTGIV ques semaine (mg%) (1 jour) (2 semaines) (4 semaines) Groupe 3 72 h SF 113,5+11,8 1,47 1,52 2,30 11 72 h SF 108,7+ 9,8 1,73 - - h 12 72 h SF 132,9+10,6 1,15 1,30 1,38 13 72 h SF 105,0+ 9,1 2,55 2,37 1,68 14 72 h SF 118,8+ 5,3 2,02 - - i 72 h SF 143,2+ 4,0 2,16 1,97 2,03 16 72 h SF 150,0+ 8,1 1,92 1,86 1,15 17 72 h SF 115,9+ 11,0 1,77 1,77 1,15 a l50la Moyenne 123,5+ 5,9 1,85+0,15 1,71+0,18 1,62+0, 19 a (p< 0,05) contre groupes 1 et 2 f sacrifié le jour 14 b (p< 0,05) contre TTGIV 1 jour g sacrifié le jour 14 c mort le jour 27, effusion pleurale h mort le jour 15, effusion pleurale d mort le jour 5, abcès intra-abdominal i mort le jour 5, sans raison e mort le jour 26, intussusception apparente o t'

Tous les chiens sont devenus hyperglycémi-

ques (glucose sanguin supérieur à 200 mg%) après sup-

pression du pancréas, ce qui indique que l'organe transplanté était seul responsable de l'homéostasie du glucose. Dans le groupe 3, quatre animaux ont permis une observation de la survie à long terme. L'un des

chiens est mort de pneumonie 7 semaines après la trans-

plantation, mais était resté normoglycémique. Deux animaux ont été sacrifiés à 3 et 4 mois et un chien a été maintenu en vie pendant 6 mois. Aucun ne donnait

de signe de diabète et ils étaient tous normoglycémi-

ques.

EXEMPLE 3

Conservation du foie pendant 24 heures La conservation clinique du foie est limitée à environ 6-10 heures et sa prolongation jusqu'à 24 heures ou davantage pourrait avoir un effet sensible sur les transplantations du foie. On a utilisé le foie de lapin perfusé isolé pour -évaluer la qualité de la conservation après stockage au froid dans de la solution de Collins, de la fraction protéique de plasma de Cambridge (FPP), de la solution 'de Marshalls

et de la solution de la présente invention (tableau 1).

La production de bile pendant la perfusion normother-

mique des foies conservés au froid a été le paramètre

le plus utile de la viabilité et la vitesse de produc-

tion de la bile (ml/100 g/h + écart-type) chez le- témoin en comparaison avec les foies de lapin stockés

au froid pendant 24 heures est précisée au tableau.

Témoin - FPP Eurocollins Marshalls Solution de Cambridge conservation

,4+1,7 1,8+0,9 1,9+1,3 3,1+0,5 4,4+0,5

La solution de conservation décrite faisant l'objet de l'invention s'est révélée supérieure aux autres solutions de stockage à froid sur la base de la production de bile après 24 heures de stockage à

froid (2,4 C) et reperfusion normothermique.

Le dernier test de la conservation efficace du foie est le modèle par transplantation. La solu- tion de conservation a dès lors été essayée sur le

modèle par transplantation du foie orthotope du chien.

Après une simple perfusion de rinçage avec la solution, trois foies de chien ont été consécutivement stockés

pendant 24 à 26 heures. La transplantation a été ef-

fectuée suivant une technique combinée de "manchette" et suture. Tous les foies ont pris immédiatement l'aspect satisfaisant et les trois chiens se sont réveillés rapidement et se sont redressés-sur leurs

pattes dans les 4 heures de la fin de l'opération.

Les nombres de plaquettes étaient normaux 6 heures après l'opération. Les valeurs pour la bilirubine et les enzymes à 6 heures et pendant les 7

jours suivants sont reprises au tableau (moyen + écart-

type) et révèlent un retour rapide de la fonction hé-

patique normale. Un chien est mort 5 jours après

l'opération pour cause d'intussusception.

6 heures Jour 1 Jour 3 Jour 5 Jour 7 Bilirubinemg% 0,6+0,3 0,7+0,6 0,9+0, 7 0,5+0,4 0,4+0,2

SGOT 2148+983 1835+1145 61+16 55+40 45+21

Phosphatase 186+14 217+47 273+126 311+64 315+48 alcaline..

EXEMPLE 4

Conservation des reins On a essayé la solution de stockage à froid (SF) décrite pour la conservation des reins et éValué son effet sur la fonction rénale après reperfusion: 1) dans le modèle de rein de chien isolé perfusé (RPI); et 2) dans le modèle d'autotransplantation

chez le chien.

1) Les reins de chien ont été stockés à froid pendant 48 heures dans de la solution d'Eurocollins (EC) ou de la solution de stockage à froid (SF) décrite. On a déterminé la fonction rénale pendant la reperfusion avec le modèle RIP en utilisant une solution de Krebs-Henseleit modifiée oxygénée contenant de l'albumine,à 37'C pendant 90 minutes. On a recueilli les échantillons d'urine

toutes les 10 minutes et on les analysé. On a cal-

culé la vitesse de filtration glomérulaire (clairance de la créatininel, le rapport urine/protéine du plasma (U/P) et la réabsorption fractionnaire du sodium (Na %). Les résultats sont rassemblés au tableau 3 sous la forme des moyennes avec l'écart-type entre

parenthèses.

Les deux groupes avec reins stockés au froid ont présenté une baisse de la fonction rénale au moment de la reperfusion (par comparaison avec les reins

témoins). Au contraire des reins stockés avec la so-

lution d'Eurocollins, les reins stockés avec la solution

SF ont révélé une amélioration de la vitesse de fil-

tration glomérulaire et une réabsorption significa-

tive du sodium pendant RIP. Cette amélioration de la fonction suggère que les reins conservés dans SF sont susceptibles d'une réparation plus rapide des dégâts ischémiques par le froid que les reins conservés dans EC.

2) Huit reins de chien successifs conser-

vés pendant 48 heures dans SF ont été autotransplantés.

Trois animaux ont été sacrifiés enraison de complica-

tions techniques (thrombose artérielle, intussu-

sception). Les créatinines sériques après transplan-

tation (moyenne + écart-type> des cinq survivants

sont données au tableau 4.

L'étude indique une bonne conservation de la fonction rénale pendant 48 heures de stockage au froid avec la solution SF. Par conséquent, cette

solution est à même de conserver les reins, le pan-

créas et le foie et peut être utilisée pour le simple stockage au froid ou pour la perfusion continue.

TABLEAU 3

Minutes RIP 10 30 60 90

C* 12,93 (5,74) 15,15 (3,00) 16,00 (4,44) 12,06 (4,49)

Débit d'urine EC 5,84 (1,81) 17,48 (8,77) 24,41 (11,45) 30,31 (19,86) /1/min.g SF 2,52 (1,67) 6,20 (2,45) 6,60 (4,79) 10,53 (4,23)

C* 224,96 (88,90) 240,38 (30,70) 210,66 (57,77) 125,48 (31,62)

Vit. fil. gl. EC 8,09 (3,07) 29,60 (13,60) 38,32 (18,53) 37,30 (21,68) el/min.g SF 6,98 (5,46) 27,23 (13,75) 28,06 (23,71) 51,53 (27,20)

C* 0,09 (0,02) 0,10 (0,02) 0,12 (0,'06) 0,09 (0,02)

Rapport U/P EC 0,53 (0,19) 0,43 (0,09) 0,35 (0,07) 0,31 (0,15)

SF 0,43 (0,02) 0,5.8 (0,16) 0,64 (0,22) 0,59 (0,23)

C* 98,91 (0,81) 99,15 (0,47) 99,05 (0,44) 98,81 (0,48)

Na % EC 44,34 (4,93) 55,35 (8,98) 56,52 (0,11) 40,54 (20,52)

SF 64,09 (21,78) 85,71 (5,76) 86,20 (6,76) 87,87 (12,28)

* Reins témoins sur RIP

TABLEAU 4

Jours O 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 o Créatine 1,3. 3,1 2,5 2,4 2,2 2,0 1,6 1,6 1,4 1,4 1,2 In sérique (mg %) +0,2 +0,7.+1,1 +1,0 +0,9 +0,8 +0,5 +0,4 +0, 3 +0,3 +0,3

Claims

R E V E N D I C A T I O A S

1. Composition convenant pour la conservation et le stockage d'un organe destiné à la transplantation chez un patient, caractérisée en ce qu'elle comprend un lactobionate et un hydroxyéthylamidon qui est sensiblement exempt d'éthylèneglycol, d'éthylènechlorhydrine, de chlorure de sodium et d'acétone, et qui a fn poids moléculaire de 150.000 à 350.000 daltons.

2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que l'hydr!xyéthylamidon est sensiblement exempt d'hydroxyéthylamidon ayant

un poids moléculaire n'exédant pas 50.006 daltons.

3. Composition suivant la revendication i ou 2, caractérisée en ce

qu'elle est une solution ayant une osmolalité d'environ 320 mOsm/litre.

4. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes,

caractérisée en ce que l'amidon a un poids moléculaire de 200.000 à

300.000 daltons et un degré de substitution de 0,4 à 0,7.

5. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes,

caractérisée en ce qu'elle comprend aussi un électrolyte convenant pour entretenir la viabilité cellulaire et un médicament propre à réduire l'infection.

6. Composition suivant la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins l'un d'entre le dihydrogénophosphate de potassium,

la dexaméthasone.

7. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes,

caractérisSe en ce qu'elle comprend du raffinose.

22 2625073

8. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes,

caractérisée en ce qu'elle, comprend du glutathion.

9. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes,

caractérisée en ce qu'elle comprend au moins l'un d'entre l'adénosine,

l'insuline, l'allopurinol et la dexaméthasone.

10. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes,

caractérisée en ce que l'hydroxyéthylamidon est présent en une quantité

de 3 à 8% en poids.

11. Procédé pour la conservation d'un organe destiné à la transplan-

tation chez un patient, caractérisé en ce que l'on introduit cet organe

dans une composition suivant l'une quelconque des revendications précé-

dentes.