ES2200206T3

ES2200206T3 - Formulaciones en gel parala administracion topica de farmacos.

Info

Publication number: ES2200206T3
Application number: ES97950772T
Authority: ES
Inventors: Joseph M. Beaurline; Patrick J. Roddy; Mark A. Tomai
Original assignee: Minnesota Mining and Manufacturing Co
Current assignee: 3M Co
Priority date: 1996-12-03
Filing date: 1997-12-01
Publication date: 2004-03-01
Anticipated expiration: 2017-12-01
Also published as: US6365166B2; DK0942724T3; IL130065A; CZ195599A3; AU5368698A; KR20000069233A; EP0942724A2; WO1998024436A2; CA2273094C; EP0942724B1; NO992638L; CZ301713B6; AU723897B2; HU229599B1; CA2273094A1; BR9713677B1; KR100503716B1; WO1998024436A3; PT942724E; IL130065A0

Abstract

SE DESCRIBEN FORMULACIONES FARMACEUTICAS EN GEL PARA ADMINISTRACION TOPICA DE MEDICAMENTOS, QUE INCLUYEN UN FARMACO, DIOXIDO DE SILICIO COLOIDAL, TRIACETINA Y, PREFERENTEMENTE, PROPILENGLICOL. LAS FORMULACIONES EN GEL SON PERFECTAMENTE ADECUADAS PARA ADMINISTRACION TOPICA DEL FARMACO 4 - AMINO - 2 ETOXIMETIL - AL , AL - DIMETIL - 1H - IMIDAZO [4, 5 - C] QUINOLIN - 1 - ETANOL, EL CUAL, CUANDO SE APLICA TOPICAMENTE, INDUCE CITOQUINAS, TALES COMO INTERFERON Y EL FACTOR DE LA NECROSIS TUMORAL, LOCALMENTE EN LA PIEL O LAS MEMBRANAS MUCOSAS DE UN MAMIFERO. LAS FORMULACIONES EN GEL SON IGUALMENTE ADECUADAS PARA ADMINISTRACION TOPICA DE FARMACOS PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES QUE REPRESENTAN LESIONES CUTANEAS Y/O MUCOSAS, DADO QUE LAS FORMULACIONES EN GEL NO NECESITAN INCLUIR COMPUESTOS IRRITANTES.

Description

Formulaciones en gel para la administración tópica de fármacos.

Esta invención se refiere a las formulaciones farmacéuticas en gel mejoradas para la administración tópica de fármacos. En otro aspecto, esta invención se refiere a las formulaciones farmacéuticas tópicas en gel que contienen 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol.

Se conocen bien las formulaciones farmacéuticas en gel y crema para la administración tópica de fármacos, Sin embargo, muchas de tales formulaciones no son adecuadas para ciertas aplicaciones debido a problemas con, por ejemplo, la insolubilidad y/o degradación del fármaco en la formulación; la inestabilidad física de la formulación (separación de componentes, espesamiento, precipitación/aglomeración del ingrediente activo, y similares), y debido a la irritación de la piel o la mucosa a la que se aplica la formulación. También, dependiendo del propósito de la formulación, se puede desear si la formulación evita la liberación sistémica del ingrediente activo, particularmente cuando pueden originarse efectos secundarios como resultado de tal liberación sistémica.

El documento EP-A-0301589 se refiere a la administración de un broncodilatador a un sujeto usando un sistema de administración transdérmica, en el que el fármaco se mezcla en un gel que debe pasar una membrana de barrera antes de la administración sobre la piel.

El documento WO-A-9215582 se refiere a 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-aminas substituidas en posición 1 y 2 de fórmula (I), en la que X se selecciona del grupo que consiste en alcoxi, alcoxialquilo, haloalquilo, hidroxialquilo, alquilamido, amino, o amino o hidroxi-alquilo sustituido en el que el sustituyente es alquilo, azido, cloro, hidroxi, 1-morfolino, 1-pirrolidino, y alquiltio. Estos compuestos funcionan como agentes antivirales, inducen la biosíntesis de interferón, e inhiben la formación de tumores en modelos animales. Esta invención también proporciona intermedios para preparar tales compuestos, composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos, y métodos farmacológicos de utilización de tales compuestos

2

La patente de EE.UU. 5.238.944 describe una formulación tópica de 1-isobutil-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amina que es eficaz para el tratamiento de verrugas genitales y otras enfermedades. Sin embargo, aunque útil para su pretendido propósito, esta formulación es una crema, sujeta a potenciales problemas de separación, e incluye ácido isoestearico que la hace dolorosa si se aplica en lesiones abiertas como ocurre en el caso de infección por virus herpes simplex.

El compuesto 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol descrito en la patente de EE.UU. 5.389.640 es de la misma clase química que los compuestos como la 1-isobutil-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amina, aunque tiene algunas propiedades químicas, físicas y biológicas significativamente diferentes. Se ha demostrado que el compuesto induce el interferón y el factor de necrosis tumoral en ratones y ratas después de la administración oral. También se ha demostrado que el compuesto induce el interferón-\alpha, el factor de necrosis tumoral, la interleuquina-1\alpha, la interleuquina 1\beta, la interleuquina-6 y la interleuquina-8 en cultivos de células mononucleares humanas de sangre periférica. El compuesto también ha demostrado actividad antiviral en cobayas expuestos al virus herpes simplex cuando se administra subcutáneamente, dérmicamente o intravaginalmente 24 horas antes de la infección.

Sin embargo, la administración sistémica de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol también puede asociarse con ciertos efectos secundarios, incluidos fiebre, malestar, dolor de cabeza, náuseas y vómitos. La inducción tópica no sistémica de citoquinas tendría por tanto la ventaja de evitar los efectos secundarios asociados con la inducción sistémica de estas citoquinas.

Por consiguiente, un objeto de la presente es proporcionar una formulación farmacéutica en gel altamente estable que sea adecuada para la aplicación tópica en la piel y/o mucosa.

Un objeto relacionado es proporcionar una formulación en gel que sea adecuada para la aplicación en lesiones de piel y/o mucosas.

Otro objeto es proporcionar una formulación en gel en la cual el 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol sea soluble y no se degrade sustancialmente durante el almacenamiento.

Aún otro objeto es proporcionar una formulación tópica en gel para la administración tópica de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol que no administre sistémicamente cantidades indebidas del compuesto activo.

Estos objetos, así como otros que serán evidentes en referencia a la descripción siguiente, son proporcionados por las formulaciones farmacéuticas en gel que incluyen un fármaco, dióxido de silicio coloidal, triacetina y, preferentemente, propilenglicol. El fármaco es 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, que se ha encontrado que es suficientemente soluble y químicamente estable en las formulaciones en gel de la presente invención. Es más, se ha encontrado que las formulaciones en gel de la presente invención, a diferencia de ciertas otras formulaciones en gel, proporcionan una administración tópica excelente del fármaco mientras que substancialmente evitan la administración sistémica indeseada (de tal modo que evita efectos secundarios).

Como se indica, las formulaciones en gel de la invención incluyen preferentemente propilenglicol. Una razón es porque parece ser, sorprendentemente, que la inclusión de propilenglicol espesa las formulaciones en gel y que la integridad del gel resultante se mantiene a temperatura corporal. Debe indicarse, sin embargo, que se han encontrado adecuadas, aunque menos preferidas, las formulaciones en gel sin propilenglicol, pero que incluyen 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, dióxido de silicio coloidal, y triacetina.

Las presentes formulaciones son útiles en un método para inducir citoquinas, tales como el interferón y el factor de necrosis tumoral, localmente en la piel o membranas mucosas de un mamífero, que comprende colocar sobre la piel o membranas mucosas de un mamífero una cantidad de una formulación como se ha descrito más arriba eficaz para inducir citoquinas. Las formulaciones de la presente invención son también muy adecuadas para el tratamiento de enfermedades por la aplicación de la formulación a lesiones de piel y/o mucosas, ya que las formulaciones en gel no necesitan incluir componentes irritantes.

La invención se describirá más abajo con referencia a las pruebas realizadas usando el aparato mostrado en los dibujos de acompañamiento, en los que:

La Figura 1 es un aparato modificado de la célula de difusión de Franz para el ensayo de liberación de fármacos; y

La Figura 2 es un aparato alternativo a la célula de difusión de Franz modificada para el ensayo de liberación de fármacos.

Todos los porcentajes en peso relatados en la presente memoria están basados en el peso total de la formulación a menos que se indique otra cosa.

La presente invención proporciona formulaciones en gel que contienen 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol (algunas veces referido en la presente memoria como "el fármaco").

El compuesto 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol es un conocido potenciador de la respuesta inmune con propiedades antivirales. Se puede sintetizar usando el método descrito en la patente de EE.UU. 5.389.640. El compuesto se puede utilizar para tratar infecciones virales tales como las infecciones virales de Herpes simplex de Tipo I o Tipo II y las verrugas genitales. Además, el hecho de que el compuesto induzca una variedad de citoquinas incluyendo el interferón sugiere que él y las formulaciones tópicas que lo contienen pueden ser útiles en el tratamiento de otras enfermedades donde el interferón se ha mostrado eficaz. El 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol estará presente en una formulación de la invención en una cantidad terapéuticamente eficaz es decir, una cantidad eficaz para tratar el estado de enfermedad elegido como objetivo o para prevenir la recurrencia de tal enfermedad. Generalmente el 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol se presentará preferentemente en una formulación de la invención en una cantidad de 0,001 a aproximadamente 0,6 por ciento en peso, más preferentemente aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,5 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.

El 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol exhibe una solubilidad substancial en las formulaciones de la invención. Según una realización preferida de la invención, el fármaco se disuelve substancialmente por completo en la formulación.

Las formulaciones de la invención contienen dióxido de silicio coloidal como un agente gelificante. El dióxido de silicio coloidal está comercialmente disponible bajo varios nombres comerciales: AEROSIL de Degussa (Deutsche Gold- und Silber-Schneideanstalt vormals Roessler, Francfort, Alemania), CAB-O-SIL de Cabot Corporation (Tuscola, IL, USA), y Wacker HDK de Wacker-Chemie GmbH (Munich, Alemania). Varias calidades de dióxido de silicio coloidal que tiene diferentes superficies específicas están comercialmente disponibles. Una calidad preferida tiene una superficie específica de aproximadamente 200 m^{2}/g y está disponible bajo la designación comercial de AEROSIL 200. El dióxido de silicio coloidal estará generalmente presente en una formulación de la invención en una cantidad de aproximadamente 7 a aproximadamente 12 por ciento, preferentemente aproximadamente 8 a aproximadamente 11 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.

Las formulaciones de la invención contienen preferentemente propilenglicol (1,2-propanodiol). Se ha encontrado que la adición de propilenglicol, sorprendentemente, espesa las formulaciones en gel y proporciona un gel que mantiene su integridad a temperatura corporal. Se cree que el propilenglicol puede actuar como un disolvente para el dióxido de silicio coloidal y como un solubilizante para el fármaco. Generalmente el propilenglicol estará preferentemente presente en una formulación de la invención en una cantidad de aproximadamente 1 a aproximadamente 30 por ciento, y más preferentemente aproximadamente 5 a aproximadamente 25 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.

Las formulaciones de la invención también contienen triacetina (triacetato de 1,2,3-propanotriol). Se cree que la triacetina actúa como un disolvente para el dióxido de silicio coloidal y como un solubilizante para el fármaco. En esas formulaciones de la invención que no contienen propilenglicol, la triacetina estará generalmente presente en la cantidad de aproximadamente 88 a aproximadamente 93 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación. En esas formulaciones de la invención que contienen propilenglicol, la triacetina estará generalmente presente en una cantidad de aproximadamente 58 a aproximadamente 92 por ciento, preferentemente aproximadamente 63 a aproximadamente 88 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación. Sin embargo, los porcentajes reales de la triacetina y otros ingredientes dependerán de si se incluyen otros ingredientes en la formulación.

Una formulación de la presente invención puede prepararse por combinación del 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol con la triacetina y el propilenglicol, si está presente, y después calentando con mezclamiento a una temperatura de aproximadamente 50-55ºC. Cuando el 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol parece estar completamente disuelto, se añade el dióxido de silicio coloidal y se mezcla hasta que se humecte. La mezcla resultante se cizalla en un agitador de hélice de alta velocidad hasta que se forma un gel homogéneo.

Se ha encontrado que las formulaciones de la invención inducen localmente el interferón y el factor de necrosis tumoral en la piel de ratón. La inducción local ayuda a evitar los efectos secundarios asociados con la inducción sistémica de estas citoquinas. Según lo mencionado previamente, estos efectos secundarios incluyen fiebre, malestar, dolor de cabeza, náuseas y vómitos. La capacidad de las formulaciones de la invención para inducir interferón y factor de necrosis tumoral en la piel sugiere que serán útiles para el tratamiento tópico de enfermedades tales como las infecciones de Herpes simplex de Tipo I y Tipo II, verrugas incluyendo las verrugas genitales, carcinoma de células basales, neoplasia intraepitelial cervical y queratosis actínica.

Los ejemplos dispuestos más abajo están pensados para ilustrar la invención.

Método de ensayo de inducción de citoquinas

Los datos de inducción de citoquinas dados en los ejemplos de más abajo se obtuvieron usando el siguiente método de ensayo.

Para cada formulación que se ensaya, se dosifican dos grupos de ratones hembras sin pelo SKH-1 (cuatro ratones por grupo). Una porción de 10 \muL de la formulación que contiene el fármaco se aplica al flanco derecho y se frota durante 1 minuto. Una porción de 10 \muL de gel placebo (que contiene el mismo porcentaje en peso de dióxido de silicio y de propilenglicol que el gel de ensayo siendo el resto triacetina) se aplica al flanco izquierdo y se frota durante un minuto. El primer grupo de ratones se sacrifica una hora después de dosificar. El segundo grupo de ratones se sacrifica dos horas después de dosificar. Se lava la piel y se separan las muestras de tejido (100 mg) del flanco derecho (tratado con el fármaco) y del flanco izquierdo (tratado con el placebo). Las muestras individuales se colocan en crioviales y se congelan instantáneamente en nitrógeno líquido. Después las muestras se homogenizan en 1 mL de medio RPMI que contiene un 10% de suero de ternera fetal y se centrifuga a 2000 rpm durante 10 minutos. Los sobrenadantes se recogen y se congelan hasta que en ellos se analizan el factor de necrosis tumoral (TNF) y el interferón (INF). El TNF se ensaya utilizando un kit comercialmente disponible de ELISA (Genzyme, Cambridge, MA) y los resultados se expresan como pg/mL \pm ETM. El interferón se mide por bioanálisis utilizando fibroblastos de ratón L929 expuestos a virus de encefalomiocarditis. Los detalles del método de bioanálisis se han descrito por G. L. Brennan y L. H. Kronenberg en "Automated Bioassay of Interferons in Micro-test Plates", Biotechniques, Junio/Julio, 78, 1983, incorporada en la presente memoria como referencia. Indicado abreviadamente, el método es como sigue: las diluciones de interferón y las células L929 se incuban a 37ºC durante 12 a 24 horas. Las células incubadas se infectan con un inóculo de virus de encefalomiocarditis. Las células infectadas se incuban a 37ºC durante un periodo adicional antes de cuantificar en ellas el efecto citopático viral. El efecto citopático viral se cuantifica por tinción seguido por medidas espectrofotométricas de la absorbancia. Los resultados se expresan como unidades/mL \pm ETM basado en el valor obtenido para el estándar de referencia del interferón de ratón del NIH.

Método de ensayo de liberación de fármacos

Los datos de liberación de fármaco dados en los ejemplos de más abajo se obtuvieron utilizando el siguiente método de ensayo.

Se utiliza una célula (10) de difusión de Franz modificada del tipo mostrado en la Figura 1. La célula está hecha de vidrio y contiene aproximadamente 11 mL de fluido receptor en el cuerpo de la célula. La apertura del cuerpo de la célula es 1,6 cm de diámetro (área 2,0 cm^{2}). Se monta una sección de membrana (11) sintética (película de polietileno microporosa, CoTrans™ 9711 de la Compañía 3M) entre la porción (13) superior y la porción (15) inferior de la célula. La membrana se sostiene en su lugar por medio de una junta tórica (14) de Teflón®. Las porciones superior e inferior se sostienen juntas por medio de una pinza (no ilustrada).

La porción de la célula debajo de la membrana montada se llena completamente con fluido receptor (tampón de acetato sódico 0,1M, pH 4,0) de forma que el fluido receptor esté en contacto con la membrana. El fluido receptor se agita por medio de una barra (17) de agitación magnética y un agitador magnético (no ilustrado). El acceso (19) de muestreo se cubre excepto cuando se utiliza.

Cuando se evalúa una formulación en gel, la membrana se coloca a través de la apertura de la porción inferior de la célula de difusión. La junta tórica se coloca encima de la membrana. Una porción de 1,50 g de formulación se pone encima de la membrana y se extiende uniformemente sobre la porción de la membrana que cae dentro de la junta tórica. Se ensambla la célula de difusión y la porción inferior se llena con 11 mL de fluido receptor caliente (32 \pm 1ºC).

Se cubre el acceso de muestreo y la célula se pone en una cámara a temperatura (32 \pm 1ºC) y humedad (50% \pm 15% de humedad relativa) constantes. El fluido receptor se agita a lo largo del experimento. El volumen total de fluido receptor se retira en intervalos de tiempo transcurrido de 30, 60, 120, 240 y 360 minutos y se remplaza inmediatamente con fluido de nueva aportación. En el fluido retirado se analiza 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol utilizando un espectrofotómetro uv equipado con una célula de flujo (1,0 cm para geles que contienen 0,05% o 0,01% de fármaco; 0,2 cm para geles que contienen 0,25% de fármaco) y midiendo la absorbancia a 247 nm. Los resultados se presentan como la cantidad acumulada de fármaco liberado en 30, 60, 120, 240 y 360 minutos y se expresa en unidades de mg/cm^{2}.

Método de ensayo in vitro de penetración en la piel

Los datos de penetración en la piel dados en los ejemplos de más abajo se obtuvieron usando el siguiente método de ensayo.

Se utiliza una célula (20) de difusión de Franz modificada del tipo mostrado en la Figura 2. Se utilizan dos tipos de piel, piel de ratón sin pelo y piel de cadáver humano. Como muestra la Figura 2, la piel (22) se monta entre la porción (23) superior y la porción (25) inferior de la célula, que se sostienen juntas por medio de una pinza (28).

La porción de la célula debajo de la membrana montada se llena completamente de fluido receptor (tampón de acetato sódico 0,1M, pH 4,0) de forma que el fluido receptor esté en contacto con la piel. El fluido receptor se agita por medio de una barra (27) de agitación magnética y un agitador magnético (no ilustrado). El acceso (29) de muestreo se cubre excepto cuando se usa.

Cuando se evalúa una formulación en gel, la piel se coloca a través de la apertura de la porción inferior de la célula de difusión. Una porción de 300 mg de formulación se extiende uniformemente sobre la piel. La célula de difusión se ensambla y la porción inferior se llena con 10 mL de fluido receptor caliente (32 \pm 1ºC).

Se cubre el acceso de muestreo y la célula se pone en una cámara a temperatura (32 \pm 1ºC) y humedad (50% \pm 15% de humedad relativa) constantes. El fluido receptor se agita a lo largo del experimento. El volumen total de fluido receptor se retira en intervalos de tiempo transcurrido de 3, 6, 12, 24 y 72 horas y se remplaza inmediatamente con fluido de nueva aportación. Los primeros 5 mL del fluido retirado se filtran a través de un filtro Acrodisc CRPTFE de 25 mm y 0,45 \mum (Miltex Instrument Company, Ohio) y se descartan. Después se filtra una porción de 1 mL y se coloca en un vial de cromatografía líquida de alta eficacia. El vial se encapsula y luego se refrigera hasta el análisis. En la muestra se analiza 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol usando cromatografía líquida de alta eficacia (Columna: 15 cm X 0,46 cm Supelcosil LC-8-DB (Supelco, Inc., Bellefonte, PA, USA), tamaño de partícula 5 \mum; Fase móvil: acetonitrilo/tampón de fosfato amónico acuoso 75 mM con trietil amina 5 mM, 19%/81% v/v; Caudal: 2,0L/min; Detector: uv a 245 nm). Los resultados se presentan como la cantidad acumulada de fármaco que penetra en 3, 6, 12, 24 y 72 horas y se expresa en unidades de \mug/mL.

Ejemplo 1

Se añadió 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol (0,75 g) a triacetina (272,25 g) en un vaso de precipitados de vidrio de 600 mL. La mezcla resultante se calentó (aproximadamente 55ºC) con agitación hasta que se disolvió todo el fármaco. Se añadió dióxido de silicio coloidal (27,0 g, AEROSIL® 200 de Degussa, Frankfurt, Alemania) a la solución y se mezcló con una espátula hasta que se humectó. La mezcla se cizalló en un agitador de hélice de alta velocidad hasta que se formó un gel homogéneo. El gel contenía 0,25% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 90,75% de triacetina.

Ejemplo 2

Se pusieron propilenglicol (20,0 g), triacetina (343,0 g) y 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol (1,0 g) en un vaso de precipitados de vidrio de 600 mL y luego se calentó (50º \pm 5ºC) con agitación hasta que se disolvió todo el fármaco. Se añadió dióxido de silicio coloidal (36,0 g) a la solución y se mezcló con una espátula hasta que se humectó. La mezcla se cizalló en un agitador de hélice de alta velocidad hasta que se formó un gel homogéneo. El gel contenía 0,25% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 5,0% de propilenglicol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 85,75% de triacetina.

Ejemplo 3

Se pusieron propilenglicol (80,0 g) y 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol (1,0 g) en un vaso de precipitados de vidrio de 600 mL y luego se calentó (aproximadamente 50ºC) con agitación hasta que se disolvió todo el fármaco. Se añadió triacetina (283,0 g) y la mezcla resultante se agitó hasta que se obtuvo una solución. Se apagó la calefacción. Se añadió dióxido de silicio coloidal (36,0 g) a la solución y se mezcló con una espátula hasta que se humectó. La mezcla se cizalló en un agitador de hélice de alta velocidad hasta que se formó un gel homogéneo. El gel contenía 0,25% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 20,0% de propilenglicol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 70,75% de triacetina.

En las formulaciones en gel de los Ejemplos 1-3 se probó su capacidad para inducir citoquinas usando el método de ensayo descrito más arriba. Los resultados mostrados en la Tabla 1 de más abajo demuestran que las tres formulaciones produjeron la inducción significativa del interferón y el factor de necrosis tumoral en el sitio de aplicación del 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol. Los resultados se presentan como la media \pm error típico de la media de 4 animales ensayados individualmente. ND quiere decir no hecho.

TABLA 1

Inducción de citoquinas
Formulación	Tiempo (hr)	Concentración de citoquina
		Flanco derecho	Flanco izquierdo
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/mL)	(pg/mL)	(U/mL)	(pg/mL)
1	1	346 \pm 54	699 \pm 187	86 \pm 37	273 \pm 65
1	2	215 \pm 107	496 \pm 123	106 \pm 98	344 \pm 95
2	1	277 \pm 80	340 \pm 97	127 \pm 71	163 \pm 24
2	2	210 \pm 70	610 \pm 83	106 \pm 105	237 \pm 42
3	1	<1 \pm 0	304 \pm 39	<1 \pm 0	165 \pm 20
3	2	577 \pm 210	1138 \pm 232	105 \pm 98	454 \pm 175
No tratado	0	3 \pm 1	120 \pm 15	ND	ND

Ejemplo 4

Utilizando el método del Ejemplo 1, se preparó un gel que contenía 0,05% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 90,95% de triacetina.

Ejemplo 5

Utilizando el método del Ejemplo 2, se preparó un gel que contenía 0,05% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 5,0% de propilenglicol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 85,95% de triacetina.

Ejemplo 6

Utilizando el método del Ejemplo 3, se preparó un gel que contenía 0,05% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 20,0% de propilenglicol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 70,95% de triacetina.

En las formulaciones en gel de los Ejemplos 4-6 se probó su capacidad para inducir citoquinas usando el método de ensayo descrito más arriba. Los resultados mostrados en la Tabla 2 de más abajo demuestran que las tres formulaciones produjeron la inducción significativa del interferón y el factor de necrosis tumoral en el sitio de aplicación del 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol. Los resultados se presentan como la media \pm error típico de la media de 4 animales ensayados individualmente. ND quiere decir no hecho.

TABLA 2

Inducción de citoquinas
Formulación	Tiempo (hr)	Concentración de citoquina
		Flanco derecho	Flanco izquierdo
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/mL)	(pg/mL)	(U/mL)	(pg/mL)
4	1	0,9 \pm 0,5	412 \pm 105	<1,0	280 \pm 51
4	2	20 \pm 10	345 \pm 72	<1,0	153 \pm 19
5	1	0,3 \pm 0,3	348 \pm 35	<1,0	262 \pm 26
5	2	69 \pm 58	346 \pm 24	<1,0	194 \pm 19
6	1	<1 \pm 0	279 \pm 45	<1,0	170 \pm 40
6	2	43 \pm 32	260 \pm 47	<1,0	129 \pm 41
No tratado	0	<1,0	220 \pm 28	ND	ND

Ejemplo 7

Utilizando el método del Ejemplo 1, se preparó un gel que contenía 0,01% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 90,99% de triacetina.

Ejemplo 8

Utilizando el método del Ejemplo 2, se preparó un gel que contenía 0,01% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 5,0% de propilenglicol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 85,99% de triacetina.

Ejemplo 9

Utilizando el método del Ejemplo 3, se preparó un gel que contenía 0,01% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 20,0% de propilenglicol, 9,0% de dióxido de silicio coloidal, y 70,99% de triacetina.

En las formulaciones en gel de los Ejemplos 7-9 se probó su capacidad para inducir citoquinas usando el método de ensayo descrito más arriba. Los resultados mostrados en la Tabla 3 de más abajo demuestran que la formulación del Ejemplo 8 produjo la inducción significativa del factor de necrosis tumoral en el sitio de aplicación del 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol. Los resultados se presentan como la media \pm error típico de la media de 4 animales ensayados individualmente. ND quiere decir no hecho.

(Tabla 3 pasa a página siguiente)

TABLA 3

Inducción de citoquinas
Formulación	Tiempo (hr)	Concentración de citoquina
		Flanco derecho	Flanco izquierdo
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/mL)	(pg/mL)	(U/mL)	(pg/mL)
7	1	<1,0	455 \pm 93	<1,0	421 \pm 63
7	2	<1,0	382 \pm 86	<1,0	398 \pm 54
8	1	<1,0	406 \pm 25	<1,0	316 \pm 31
8	2	<1,0	296 \pm 23	<1,0	375 \pm 18
9	1	<1,0	380 \pm 43	<1,0	352 \pm 52
9	2	<1,0	296 \pm 23	<1,0	366 \pm 56
No tratado	0	<1,0	273 \pm 44	ND	ND

Ejemplo 10

Utilizando el método del Ejemplo 3, se preparó un gel que contenía 0,25% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 20,0% de propilenglicol, 8,0% de dióxido de silicio coloidal, y 71,75% de triacetina.

Ejemplo 11

Utilizando el método del Ejemplo 3, se preparó un gel que contenía 0,25% de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, 20,0% de propilenglicol, 10,0% de dióxido de silicio coloidal, y 69,75% de triacetina.

En las formulaciones en gel de los Ejemplos 2, 3, 5, 6, 8, 10 y 11 se probó su capacidad para liberar 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol usando el método de ensayo descrito más arriba. Los resultados mostrados en la Tabla 4 de más abajo demuestran que las cinco formulaciones liberan 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol. Cada valor es la media de los valores de 6 células de difusión.

TABLA 4

Liberación de fármaco
Formulación	Cantidad acumulativa liberada (mg/cm^{2})
	30 min	60 min	120 min	240 min	360 min
Ejemplo 2	0,13	0,18	0,24	0,41	0,56
Ejemplo 3	0,15	0,23	0,33	0,50	0,62
Ejemplo 5	0,03	0,04	0,05	0,09	0,11
Ejemplo 6	0,03	0,04	0,07	0,12	0,15
Ejemplo 8	0,024	0,041	0,062	0,091	0,108
Ejemplo 10	0,14	0,22	0,33	0,58	0,72
Ejemplo 11	0,12	0,17	0,25	0,45	0,59

Se determinó la penetración in vitro del 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol a través de la piel de ratón sin pelo o de la piel de cadáver humano de una formulación en gel del Ejemplo 3 utilizando el método de ensayo descrito más arriba. Los resultados mostrados en la Tabla 5 de más abajo demuestran que el gel libera 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol a y a través de la piel. Cada valor mostrado es la media de seis determinaciones independientes con la desviación típica.

TABLA 5

Penetración en la piel in vitro
Tiempo (horas)	Cantidad acumulativa que penetra (\mug/mL)
	Piel de ratón sin pelo	Piel de cadáver humano
3	0,073 \pm 0,08	0
6	0,147 \pm 0,133	0
12	0,413 \pm 0,210	0
24	1,085 \pm 0,380	0
48	2,89 \pm 1,18	0,292 \pm 0,088
72	5,455 \pm 3,88	0,493 \pm 0,158

Claims

1. Una formulación en gel para la administración tópica de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol, en la cual la formulación consiste esencialmente en:

una cantidad terapéuticamente eficaz de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol;

dióxido de silicio coloidal;

opcionalmente propilenglicol; y

triacetina.

2. Una formulación en gel según la reivindicación 1, en la que el 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol está presente en una cantidad de 0,01 por ciento a 0,5 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.

3. Una formulación en gel según la reivindicación 1, en la que el 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol se disuelve en la formulación en gel.

4. Una formulación en gel según la reivindicación 1, en la que el dióxido de silicio coloidal está presente en una cantidad de 8 a 10 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.

5. Una formulación en gel según la reivindicación 1, en la que la triacetina está presente en una cantidad de 88 a 93 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.

6. Una formulación en gel según la reivindicación 1, en la cual la formulación comprende:

(a): una cantidad terapéuticamente eficaz de 4-amino-2-etoximetil-\alpha,\alpha-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]quinolina-1-etanol;

(b): dióxido de silicio coloidal presente en una cantidad de 7 por ciento a 12 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación;

(c): propilenglicol presente en una cantidad de 1 por ciento a 30 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación; y

(d): triacetina presente en una cantidad de 58 por ciento a 92 por ciento en peso basado en el peso total de la formulación.