CZ301713B6

CZ301713B6 - Gelový prostredek pro lokální podávání 4-amino-2-ethoxymethyl-alfa,alfa-dimethyl-1H-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanolu

Info

Publication number: CZ301713B6
Application number: CZ0195599A
Authority: CZ
Inventors: M. Beaurline@Joseph; J. Roddy@Patrick; A. Tomai@Mark
Original assignee: Minnesota Mining And Manufacturing Company
Priority date: 1996-12-03
Filing date: 1997-12-01
Publication date: 2010-06-02
Also published as: CA2273094C; CA2273094A1; US20020015715A1; HUP0000568A2; AU723897B2; ATE245422T1; KR20000069233A; IL130065A; NZ335821A; US6365166B2; BR9713677A; EP0942724B1; ES2200206T3; US5939090A; AU5368698A; NO992638D0; WO1998024436A3; WO1998024436A2; BR9713677B1; JP2001501968A

Abstract

Gelový prostredek pro lokální podávání 4-amino-2-ethoxymethyl-.alfa.,.alfa.-dimethyl-1H-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanolu, který v podstate sestává z terapeuticky úcinného množství 4-amino-2-ethoxymethyl-.alfa.,.alfa.-dimethyl-1H-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanolu; koloidního oxidu kremicitého; poprípade propylenglykolu; a triacetinu.

Description

Gelový prostředek pro lokální podávání 4-amino-2-ethoxymethyl-CMX-dÍmethyl-lHimidazo|43-<lchinolin-l~ethanolu

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického gelového prostředku pro lokální podávání 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyI-lH-imidazo[4,5-c]ch i nolin-1 -ethanolu.

io

Dosavadní stav techniky

Farmaceutické gelové a krémové prostředky pro lokální podání léčiv jsou v oboru známé. Nicméně, mnohé z takových prostředků nejsou vhodné pro určité aplikace vzhledem k problémům souvisejícím například s nerozpustností a/nebo degradací léčiva v prostředku, fyzikální nestabilitou prostředku (separací složek, zahuštění, sráženími aglomerizací aktivních složek a podobně) a vzhledem k dráždění kůže nebo sliznice, na kterou je prostředek aplikován, Také -podle účelu prostředku - může být žádoucí, aby při podání prostředku nedocházelo k systémovému podání aktivní složky, zejména tehdy, když při takovém systémovém podání může dojít ke vzniku vedlejších účinků.

Patent US 5 238 944 popisuje lokální prostředek, obsahující l-isobutyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-4—amin, který je účinný pro léčbu bradavic v oblasti genitálu a jiných onemocnění. Nicméně, ačkoliv je přípravek užitečný pro zamýšlený účel, je tento prostředek krém, u kterého může docházet k problémům se separací, a obsahuje kyselinu isostearovou, která jej činí bolestivým při aplikaci na otevřené léze, jako jsou například léze vyskytující se v případě infekce virem herpes simplex.

Sloučenina 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyÍ-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol popsaná v patentu US 5 389 640 je ze stejné chemické třídy sloučenin jako 1-isobutyl-1Himidazo[4,5-c]chinolin-4-amin, ačkoliv má některé významně odlišné chemické, fyzikální a biologické vlastnosti. Bylo prokázáno, že sloučenina indukuje po orálním podání u myší a krys tvorbu interferonu a faktoru nekrózy nádorů. Bylo také prokázáno, že sloučenina indukuje tvorbu Ínterferonu-α, faktoru nekrózy nádorů, interleukinu-1 a, interleukinu-ΐβ, interleukinu-6 a inter35 Ieukinu-8 v kulturách lidských rnononukleámích buněk periferní krve. Sloučenina také vykazuje antivirovou aktivitu viru herpes simplex při subkutáním, demálním nebo intravaginálním podání morčatům 24 hodin před infekcí.

Nicméně, systémové podání 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dímethyl-lH-imidazo[4,5-c]40 chinolin—1 -ethanolu může být také doprovázeno nežádoucími účinky, včetně horečky, únavy, bolesti hlavy, nevolnosti a zvracení. Nesystémová lokální indukce cytokinů by proto měla být výhodná vtom, že nedojde kvedlejším účinkům spojeným se systémovou indukcí těchto cytokinů.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je farmaceutický gelový prostředek pro lokální podávání 4-amino-2ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu. Tento prostředek v podsta50 tě sestává z terapeuticky účinného množství 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin—1 -ethanolu; koloidního oxidu křemičitého; popřípadě propylenglykolu; a

-1 CZ 301713 B6 triacetinu.

Přednostní provedení gelového prostředku podle vynálezu zahrnují prostředek, v němž

- je 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-1 H-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol přítom5 ný v množství 0,01 až 0,5 % hmotnostního, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku;

- je 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl~lH-imidazo[4,5~c]chinolin-l-ethanol v gelovém prostředku rozpuštěn;

- je koloidní oxid křemičitý přítomný v množství 8 až 10 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku; a/nebo v němž io - je triacetin přítomný v množství 88 až 93 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Obzvláštní přednost se dává gelovému prostředku podle vynálezu, kteiý obsahuje is a) terapeuticky účinné množství 4-am ino-2-ethoxy methy Ι-α,α-d imethy 1-lH-imidazo [4,5-c]chinolin-l-ethanolu;

b) koloidní oxid křemičitý, v množství 7 až 12 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku;

c) propylenglykol, v množství 1 až 30 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku; a

d) triacetin, v množství $8 až 92 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Prostředek podle vynálezu neobsahuje žádné dráždivě složky, a je proto vhodný pro lokální aplikaci na kůži nebo sliznici nebo na kožní a/nebo slizniční léze savců, kde lokálně indukuje eytokiny, jako je interferon a faktor nekrózy nádorů. Účinná látka, tedy 4-amino-2-ethoxymethyI-a,a-dímethyI-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol, je v prostředku podle vynálezu solubilizována a nepodléhá degradaci při skladování. Prostředek je proto vysoce stabilní. Jeho výhodou také je, že účinná látka z něho v nežádoucím množství neproniká do systemického oběhu, což zabraňuje vzniku nežádoucích vedlejších účinků.

Jak bylo zmíněno, gelové prostředky podle předkládaného vynálezu výhodně obsahují propylen35 glykol. Jedním důvodem, proč tomu tak je, je překvapivě to, že obsažení propylenglykolu zahušťuje gelové prostředky a tak je integrita výsledného gelu při tělesné teplotě zachována. Mělo by být nicméně uvedeno, že gelové prostředky bez propylenglykolu, ale s 4-amino-2ethoxymethylHX,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolem, koloidním oxidem křemičitým a triacetinem, jsou také vhodné, ale méně výhodné.

Popis obrázků na připojených výkresech

Vynález bude popsán dále s odkazem na testy provedené za použití přístroje zobrazeného na 45 připojených výkresech, kde:

Obr. 1 je modifikovaný testovací Franzův přístroj pro uvolňování léčiva s difusní komůrkou; a

Obr. 2 je alternativně modifikovaný testovací Franzův přístroj pro uvolňování léčiva s difusní 50 komůrkou.

Všechna uvedená procenta jsou vztažena k celkové hmotnosti prostředku, pokud není uvedeno jinak.

-2LL 0WL/10 BO

Předkládaný vynález poskytuje gelové prostředky, které výhodně obsahují 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol (někdy též označovaný jako „léčivo“).

Sloučenina 4-amino-2-ethoxymethyl-a,cL-dimethyl-l H-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je známým činidlem zvyšujícím imunitní odpověď s antivirovými vlastnostmi. Může být syntetizována za použití techniky popsané v patentu US 5 389 640, jehož objev je zde uveden jako odkaz. Sloučenina muže být použita pro léčbu virových infekcí jako je infekce virem herpes simplex typ I a II a bradavice v oblasti genitálu. Dále, skutečnost, že sloučenina indukuje různé cytokiny io včetně interferonu naznačuje, že tato sloučenina a prostředky pro lokální podání obsahující tuto sloučeninu mohou být užitečné pro léčbu jiných onemocnění, při který je účinná léčba interferonem. 4-ammo-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl“lH-imÍdazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol bude výhodně přítomen v prostředku podle předkládaného vynálezu v terapeuticky účinném množství, tj. v množství účinném pro léčbu vybraného onemocnění nebo účinném pro prevenci recidivy takového onemocnění. Obyčejně bude 4~amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]-chinolin-l-ethanol přítomen v prostředku podle předkládaného vynálezu v množství 0,001 až 0,6 % hmotnostních, lépe přibližně od 0,01 do přibližně 0,5 % hmotnostních vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.

4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethy 1-1 H-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol vykazuje významnou rozpustnost v prostředcích podle předkládaného vynálezu. Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu je léčivo v podstatě zcela rozpuštěno v prostředku.

Prostředky podle předkládaného vynálezu obsahují koloidní oxid křemičitý jako gelotvomé činidlo, Koloidní oxid křemičitý je komerčně dostupný pod několika obchodními názvy: AEROSIL od Degussa (Deutsche Gold- und Silber Schneideanstalt vormals Roessler, Frankfurt, Germany), CAE-O-SIL od Cabot Corporation (Tuscola, IL, USA) a Wacker HDK od Wacker-Chemie GmbH (Munich, Germany). Komerčně dostupné jsou různé stupně koloidního oxidu křemičitého, které mají různé povrchové plochy. Výhodný přípravek má specifickou povrchovou plochu přibližně 200 m²/g a je dostupný pod obchodní značkou AEROSIL 200. Koloidní oxid křemičitý bude obyčejně v prostředcích podle předkládaného vynálezu obsažen v množství přibližně 7% až 12 %, výhodně 8 % až 11 %, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.

Prostředky podle předkládaného vynálezu výhodně obsahují propylenglykol (1,2-propandiol). Překvapivě bylo zjištěno, že přidání propylenglykolu zahušťuje gelové prostředky a tak umožňuje udržení integrity gelu pri tělesné teplotě. Soudí se, že propylenglykol může účinkovat jako rozpouštědlo pro koloidní oxid křemičitý a jako solubilízační činidlo pro léčivo. Propylenglykol bude obyčejně v prostředcích podle předkládaného vynálezu obsažen v množství přibližně 1 % až

30 %, výhodně 5 % až 25 %, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.

Prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují triacetin (1,2,3-propantrioltriacetát). Soudí se, že triacetin může účinkovat jako rozpouštědlo pro koloidní oxid křemičitý a jako solubilizační činidlo pro léčivo, v prostředcích podle předkládaného vynálezu, které neobsahují propylenglykol, bude triacetin obvykle obsažen v množství přibližně 88 % až 93 %, vzhledem k celkové hmotností prostředku. V prostředcích podle předkládaného vynálezu, které obsahují propylenglykol, bude triacetin obvykle obsažen v množství přibližně 58 % až 92 %, výhodně přibližně 63 % až 88 %, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku. Nicméně, aktuální procentuální obsah triacetinu a jiných složek bude záviset na tom, zda budou v prostředku obsaženy další přísady.

Prostředek podle předkládaného vynálezu může být vyroben smísením 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolÍn-l -ethanolu s triacetinem a propylenglykolem, pokud je přítomen, a zahřátím za míšení na teplotu přibližně 50 až 55 °C. Když se zdá, že

4~amino-2-ethoxymethyΙ-α,α-dimethy 1-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1 -ethanol je zcela rozpuš-3CZ 301713 B6 ten, přidá se koloidní oxid křemičitý a mísí se do smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel.

Bylo zjištěno, že prostředky podle předkládaného vynálezu indukují interferon a faktor nekrózy nádorů při lokální aplikaci na kůži myší. Lokální indukce napomáhá vyloučení nežádoucích účinků spojených se systémovým podáním těchto cytokinů. Jak bylo uvedeno výše, tyto nežádoucí účinky zahrnují horečku, únavu, bolesti hlavy, nevolnosti a zvracení. Schopnost prostředků podle předkládaného vynálezu indukovat produkci interferonu a faktoru nekrózy nádorů v kůži naznačuje, že budou užitečné pro lokální léčbu onemocnění jako je infekce herpes simplex virem typu I a II, bradavice, včetně bradavic v oblasti genitálu, bazocelulámí karcinom, intraepiteliální neoplasie čípku děložního a aktinická keratóza.

Příklady uvedené dále jsou ilustrací předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Test indukce cytokinů

Data indukce cytokinů uvedená v příkladech uvedených dále byla získána následující metodou.

Pro každý testovaný prostředek se použijí dvě skupiny holých SKH-1 myší samičího pohlaví (4 myši na skupinu). 10 μί prostředku obsahujícího léčivo se aplikuje na pravý bok a rozetře se během 1 minuty. 10 μί placebo gelu (který obsahuje stejný hmotnostní poměr oxidu křemičitého a propylenglykolu jako testovaný gel a zbytek tvoří triacetin) se aplikuje na levý bok a rozetře se během 1 minuty. Jednu hodinu po podání dávky se první skupina myší usmrtí. Dvě hodiny po podání dávky se usmrtí druhá skupina myší. Kůže se omyje a odeberou se vzorky tkáně (100 mg) z pravého boku (ošetřeného léčivem) a z levého boku (ošetřeného placebem). Jednotlivé vzorky se umístí do kryozkumavek a rychle se zmrazí v kapalném dusíku. Vzorky se potom homogeni30 zují v 1 ml RPMI media obsahujícího 10% fetální telecí sérum a centrifugují se při 2000 rpm (1/min) po dobu 10 minut. Supematant se odebere a zmrazí se do testování na přítomnost interferonu (IFN) a faktoru nekrózy nádorů (TNF). TNF je testován za použití komerčně dostupného ELISA kitu (Genzyme, Cambridge, MA) a výsledky jsou vyjádřeny jako pg/ml ± SEM. Interferon se měří za použití biotestu využívajícího L929 myších fibroblastů infikovaných virem encephalomyokarditidy. Podrobně je technika biotestu popsána v publikaci G.L. Brennan a L.H. Kronenberg, „Automated Bioassay of Interferons in Micro-test Plates“, Biotechniques, June/July 78, 1983, která je zde uvedena jako odkaz. Stručně, technika je následující: ředění interferonu a L929 buněk se inkubují při 37 °C po dobu 12 až 24 hodin. Inkubované buňky se infikují inokulem viru encephalomyokarditidy. Infikované buňky se inku40 bují po další dobu při 37 °C před kvantifikací virového cytopatického efektu. Virový cytopatický efekt se kvantifikuje barvením, po kterém následuje spektrofotometrické měření absorbance. Výsledky jsou vyjádřeny jako jednotky/ml ± SEM, vzhledem k hodnotám získaným pro NIH myší interferonový referenční standard.

Metoda testu pro uvolnění léčiva

Data uvolňování léčiva uvedená v příkladech uvedených dále byla získána následující metodou.

Použije se modifikovaná Franzova difusní komůrka Π) ukázaná na obr. 1. Komůrka je vyrobena so ze skla a obsahuje přibližně 11 ml reeeptorové kapaliny v těle komůrky. Otvor těla komůrky má průměr přibližně 1,6 cm (2,0 cm² povrchové plochy). Syntetická membrána JT (mikroporózní polyethylenový film, CoTran™9711 od 3M Company) je umístěn mezi horní částí J_3 a dolní částí 15 komůrky. Membrána je udržována v pozici pomocí Teflon* O-kroužku J_4. Horní a dolní část je spojena pomocí svorky (není zobrazena).

-4VZ. JVl 11J DU

Část komůrky pod membránou je zcela naplněna receptorovou kapalinou (0,1M pufr obsahující octan sodný, pH 4,0), takže receptorová kapalina je v kontaktu s membránou. Receptorová kapalina se mísí pomocí magnetické míchací tyčinky 17 a magnetické míchačky (není zobrazena). S výjimkou použití je vzorkový vstup uzavřen.

Při hodnocení gelového prostředku je membrána umístěna přes otvor dolní části difusní komůrky. O-kroužek se umístí na vrch membrány. 1,50 g prostředku se umístí na vrchní část membrány a šíří se rovnoměrně po povrchu membrány, který leží uvnitř O-kroužku. Difusní komůrka se sestaví a spodní část se naplní 11 ml teplé (32 ± 1 °C) receptorové kapaliny.

Vstupní otvor pro vzorek se uzavře a komůrka se umístí do inkubátoru s konstantní teplotou (32 ± 1 °C) a vlhkostí (50% ± 15% relativní vlhkost). Receptorová kapalina se v průběhu pokusu míchá. Celý objem receptorové kapaliny se odstraňuje v intervalech 30,60, 120,240 a 360 minut a ihned se nahradí čerstvou kapalinou. Odebraná kapalina se analyzuje na obsah 4-amino-215 ethoxymethy 1-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chino]in-l -ethanolu za použití UV spektrofotometru vybaveného průtokovou ky větou (1,0 cm pro gely obsahující 0,05 % nebo 0,01 % léčiva, 0,2 cm pro gely obsahující 0,25 % léčiva) a měří se absorbance při 247 nm. výsledky jsou uvedeny jako kumulativní množství léčiva uvolněného v 30, 60, 120, 240 a 360 minutě a jsou vyjádřeny v jednotkách mg/cm².

Test pro penetraci přes kůži in vitro

Data penetrace kůží uvedená v příkladech uvedených dále byla získána následující metodou.

Použije se modifikovaná Franzova difusní komůrka 20 ukázaná na obr. 2. Použijí se dva typy kůže, kůže holých myší a kůže lidských mrtvol. Jak je uvedeno na obr. 2, kůže 22 je uchycena mezi homí část 23 a dolní část 25 komůrky, které jsou přichyceny na sebe pomocí svorky 28.

Část komůrky pod membránou je zcela naplněna receptorovou kapalinou (0,lM pufr obsahující octan sodný, pH 4,0), takže receptorová kapalina je v kontaktu s kůží. Receptorová kapalina se mísí pomocí magnetické míchací tyčinky 27 a magnetické míchačky (není zobrazena). S výjimkou použití je vzorkový vstup 29 uzavřen.

Při hodnocení gelového prostředku je kůže umístěna přes otvor dolní části difusní komůrky.

300 mg prostředku se umístí rovnoměrně na kůži. Difusní komůrka se sestaví a spodní část se naplní 10 ml teplé (32 ± 1 °C) receptorové kapaliny.

Vstup pro vzorek se uzavře a komůrka se umístí do inkubátoru s konstantní teplotou (32 ± 1 °C) a vlhkostí (45% ± 15% relativní vlhkost). Receptorová kapalina se v průběhu pokusu míchá. Celý objem receptorové kapaliny se odstraňuje v intervalech 3, 6, 12, 24, 48 a 72 hodin a ihned se nahradí čerstvou kapalinou. Prvních 5 ml odebrané kapaliny se filtruje přes 0,45 μ Acrodisc CRPTFE 25 mm filtr (Miltex Instrument Company, Ohio) a odstraní se. Potom se filtruje 1 ml a umístí se do zkumavky pro kapalinovou chromatografii s vysokou rozlišovací schopností. Zkumavka se uzavře a potom se zmrazí do analýzy. Vzorek se analyzuje na obsah 4-amino-245 ethoxymethyl-a,a-dimethyl-l H-irnidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu za použití kapalinové chromatografie s vysokou rozlišovací schopností (kolona: 15 cm x 0,46 cm Supelcosil LC-8-DB (Supelco, INc., Bellefonte, PA, USA), velikost částic 5 pm; mobilní fáze: acetonitril/75 mM vodný pufr obsahující fosforečnan amonný s 5 mM triethylaminem, pH 2,5, 19%/l 8% obj ./obj.; průtok: 2,0 l/min; detektor: UV pri 245 nm). Výsledkyjsou uvedeny jako kumulativní množství léčiva penetrujícího v 3, 6, 12, 24, 48 a 72 hodině a jsou vyjádřeny v jednotkách pg/ml.

Příklad 1

4-amino-2-ethoxymethy 1-a,a-dimethy 1-1 H-imidazo[4,5-c]chinolín-l-ethanol (0,75 g) se přidá k triacetinu (272,25 g) v 600 ml skleněné kádince. Vzniklá směs se zahřívá (přibližně

-5CZ 301713 B6 °C) za míšení, dokud se nerozpustí veškeré léčivo. Do roztoku se přidá koloidní oxid křemičitý (27,0 g, AEROSILR 200 od Degussa, Frankfurt, Germany) a roztok se mísí tyčkou do dosažení smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel. Gel obsahuje 0,25 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-di5 methyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 90,75 % triacetinu.

Příklad 2 io

Propylenglykol (20,0 g), triacetin (343,0 g) a 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-l Hímidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol (1,0 g) se umístí v 600 ml skleněné kádince a provede se zahřívání (50 °C ± 5 °C) za míšení, dokud se nerozpustí všechno léčivo. Do roztoku se přidá koloidní oxid křemičitý a roztok se mísí tyčkou do dosažení smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel. Gel obsahuje 0,25 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dÍmethyl-l H-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 5,0% propylenglykolu, 9,0 % koloidního oxidu křemičitého a 85,75 % triacetinu.

Příklad 3

Propylenglykol (820,0 g) a 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dÍmethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanol (1,0 g) se umístí v 600 ml skleněné kádince a provede se zahřívání (přibližně 50 °C) za míšení, dokud se nerozpustí léčivo. Do roztoku se přidá triacetin (283,0 g) a výsledná směs se mísí, dokud nevznikne roztok. Zahřívání se ukončí. Do roztoku se přidá koloidní oxid křemičitý (36,0 g) a roztok se mísí tyčkou do dosažení smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel. Gel obsahuje 0,25 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-l H-ímidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu,

20,0 % propylenglykolu, 9,0 % koloidního oxidu křemičitého a 70, 75 % triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 1 až 3 se testují na schopnost indukovat tvorbu cytokinů metodou popsanou výše. Výsledky uvedené v tabulce 1, dále, demonstrují, že všechny tři prostředky vyvolávají signifikantní tvorbu interferonu a faktoru nekrózy nádorů v místě aplikace 4-amino-2ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu. Výsledky jsou uvedeny jako průměr ± průměrná standardní odchylka od 4 jednotlivě testovaných zvířat ND znamená neprovedeno.

Tabulka 1

Indukce cytokinů
Prostředek	Čas	Koncentrace	cytokinů
	(h)

		Pravý bok	Levý bok
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/ml)	(pg/ml)	(U/ml)	(pg/ml)
1	1	346+54	699+187	86+37	273+65
1	2	215+107	496+123	106+98	344+95
2	1	277+80	340+97	127+71	163+24
2	2	210+70	610+83	106+105	237+42
3	1	<1+0	304+39	<1+0	165+20
3	2	577+210	1138+232	105+98	454+175
neošetřeno	0	3±1	120+15	ND	ND

-6CL JUI/U BO

Příklad 4

Za použití metody příkladu 1 se připraví gel obsahující 0,05 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,adimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 9,0 % koloidního oxidu křemičitého a 90,95 % triacetinu.

Příklad 5 io Za použití metody příkladu 2 se připraví gel obsahující 0,05 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,adimethy 1-1 H-imidazo[4,5-cjchinolin—l—ethanolu, 5,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 85,95 % triacetinu.

Přikládá

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,05 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,adimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 70,95 % triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 4 az 6 se testují na schopnost indukovat tvorbu cytokinů metodou popsanou výše. Výsledky uvedené v tabulce 2, dále, demonstrují, že všechny tři prostředky vyvolávají signifikantní tvorbu interferonů a faktoru nekrózy nádorů v místě aplikace 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinoIin-l-ethanolu, Výsledky jsou uvedeny jako průměr ± průměrná standardní odchylka od 4 jednotlivě testovaných zvířat. ND znamená neprovedeno.

Tabulka 2

Indukce cytokinů
Prostředek	Čas	Koncentrace cytokinů
	Oi)

		Pravý bok	Levý bok
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/ml)	(pg/ml)	(u/ml)	(pg/ml)
4	1	0,9±0,5	412±105	<1,0	280±51
4	2	2O±1O	345±72	<1,0	153±19
5	1	0,3±Q,3	348±35	<1,0	262±26
5	2	69±58	346±24	<1,0	194±19
6	1	<l±0	279±45	<1,0	170+40
6	2	43±320	260±47	<1,0	129±41
neošetřeno	0	<1,0	220+28	ND	ND

Příklad 7

Za použití metody příkladu 1 se připraví gel obsahující 0,05 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,ad imethy l-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l -ethanolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 90,99 % triacetinu.

-7CZ 301713 B6

Příklad 8

Za použití metody příkladu 2 se připraví gel obsahující 0,01% 4-amino-2-ethoxymethyl-u₁a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanolu, 5,0 % propylenglykolu, 9,0 % koloidního oxidu křemičitého a 85,99 % triacetinu.

Příklad 9 io Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,01 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,adimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 70,99 % triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 7 až 9 se testují na schopnost indukovat tvorbu cytokinů metodou i5 popsanou výše. Výsledky uvedené v tabulce 3, dále, demonstrují, že prostředek z příkladu 8 vyvolává signifikantní tvorbu faktoru nekrózy nádorů v místě aplikace 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu. Výsledky jsou uvedeny jako průměr ± průměrná standardní odchylka od 4 jednotlivě testovaných zvířat. ND znamená neprovedeno.

Tabulka 3

Indukce cytokinů
Prostředek	Čas	Koncentrace cytokinů

	inj
		Pravý bok	Levý bok
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/ml)	(pg/ml)	(U/ml)	(pg/ml)
7	1	<1,0	455±93	<1,0	421±63
7	2	<1,0	382^86	<1,0	398±54
8	1	<1,0	406±25	<1,0	316+31
8	2	<1,0	296±23	<1,0	375±18
9	1	<1,0	380±43	<1, 0	352±52
9	2	<1,0	296±23	<1,0	366±56
neošetřeno	0	<1,0	273±44	ND	ND

Příklad 10

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,25 % 4_amino-2-ethoxymethyl-a,adÍmethyl-lH-imidazo[4,5-c]chÍnolin-l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 8,0% koloidního oxidu křemičitého a 71,75 % triacetinu.

Přikladli

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,25 % 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a35 dimethyl-l H-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 10,0% koloidního oxidu křemičitého a 69,75 % triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 2, 3, 5, 6, 8, 10 a 11 se testují na schopnost uvolňovat 4-amino-2ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol za použití testovací metody

-8uvedené výše. Výsledky uvedené v tabulce 4, dále, ukazují, že všech pět prostředků uvolňuje

4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-l H-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol. Každá hodnota je průměrem hodnot z 6 difusních komůrek.

Tabulka 4

Uvolňování léčiva
Prostředek	Kumulativní uvolněné množství (mg/cm^a)
příklad 2 Příklad 3 Příklad 5 Příklad 6 Příklad 8 Příklad 10 Příklad 11	30 min. 0,13 0,15 0,03 0,03 0,024 0,14 0,12	60 min. 0,18 0,23 0,04 0,04 0,041 0,22 0,17	120 min. 0,24 0,33 0,05 0,07 0,062 0,33 0,25	240 min. 0,41 0,50 0,09 0,12 0,091 0,58 0,45	360 min. 0,56 0,62 0,11 0,15 0,108 0,72 0,59

In vitro penetrace 4-amino-2-ethoxymethyI-a,a-dimethyí-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-lethanolu pres kůži holých myší nebo přes kůži lidských mrtvol zgelového prostředku podle io příkladu 3 byla určena za použití testovací metody uvedené výše. Výsledky uvedené v tabulce 5, dále, ukazují, že gel uvolňuje 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol do kůže a skrz kůži. Každá uvedená hodnota je průměr šesti nezávislých měření se standardní odchylkou.

Tabulka 5

	In vitro penetrace	přes	kůži
Čas (h)	Kumulativní penetrující	množství </zg/ml)
	Kůže holých myší	Kůže lidských mrtvol
3	0,073 ± 0,08		0
6	0,147 ± 0,133		0
12	0,413 ± 0,210		0
24	1,085 ± 0,380		0
48	2,89 ± 1,18		0,292 ± 0,088
72	5,455 ± 3,88		0,493 ± 0,158

Claims

5 1. Gelový prostředek pro lokální podávání 4-amin<>-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lHimidazo[4,5-c]chinolin-l -ethanolu, vyznačující se tím, že v podstatě sestává z terapeuticky účinného množství 4-amino-2-cthoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-Ímidazo[4_?5-c|chinolin-1 -ethanolu;

koloidního oxidu křemičitého; io popřípadě propylenglykolu; a triacetinu.
2. Gelový prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imÍdazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je přítomný v množství 0,01 až

15 0,5 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.
3. Gelový prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že
4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imídazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je v gelovém prostředku rozpuštěn.

20 4. Gelový prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že koloidní oxid křemičitý je přítomný v množství 8 až 10% hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.
5* Gelový prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že triacetin je přítomný

25 v množství 88 až 93 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.
6. Gelový prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje

a) terapeuticky účinné množství 4-aminO“2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH“imidazo[4,530 c]chinolin-l-ethanolu;

b) koloidní oxid křemičitý, v množství 7 až 12 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku;

35 c) propylenglykol, v množství l až 30 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku; a

d) triacetin, v množství 58 až 92 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.