EA006604B1

EA006604B1 - Сочетание агониста (5-ht2) и антагониста (5-ht6) серотонина в качестве фармацевтической композиции

Info

Publication number: EA006604B1
Application number: EA200300183A
Authority: EA
Inventors: Сукхвиндер Джоссан; Бьерн М. Нильссон; Хьелль С. Сакариассен; Ян Свартенгрен
Original assignee: Биовитрум Аб
Priority date: 2000-07-21
Filing date: 2001-07-19
Publication date: 2006-02-24
Also published as: KR20030036599A; CA2411192A1; BR0112661A; YU2603A; JP2004504376A; KR100845450B1; HK1057536A1; EA200300183A1; EP1301476A1; WO2002008178A1; SE0002754D0; CN1443162A; NO20030304L; NZ523216A; ZA200210234B; AU2001282734B2; MXPA03000548A; AU8273401A; NO20030304D0; HUP0301346A2

Abstract

Изобретение относится к способу предупреждения или лечения болезни, связанной с рецептором 5-HTи рецептором 5-НТ, включающему введение человеку или животному, нуждающемуся в этом, агониста рецептора 5-HTи антагониста рецептора 5-НТв количестве, достаточном для получения терапевтического действия. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество сочетания агониста рецептора 5-HTи антагониста рецептора 5-НТи, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к профилактике или лечению болезни, связанной с рецепторами

5-НТ₂с и 5-НТ₆. Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции для терапевтического применения, содержащей агонист рецептора 5-НТ_2С и антагонист рецептора 5-НТ₆.

Предпосылки создания изобретения

Серотонин (5-гидрокситриптамин или 5-НТ) является ключевым нейротрансмиттером периферической и центральной нервной системы (ПНС и ЦНС) и участвует в различных сенсорных, двигательных и поведенческих функциях, таких как регуляция питания, сон, температура тела, кровяное давление, эмоции и познание. В ПНС и ЦНС млекопитающих экспрессируются по меньшей мере 14 различных подтипов рецепторов серотонина, формально классифицированных; см. С1еппои с! а1., №июксг ВюЬсйау. Всу.. 1990, 14, 35-37; и Ό. Ноусг с! а1., Рйагшаеок Всу., 1994, 46, 157-203. Серотонинергические агонисты и антагонисты предлагаются для лечения широкого ряда расстройств, в том числе, тревоги, депрессии, гипертензии, мигрени, ожирения, злоупотребления лекарственными средствами и привыкания к ним, компульсивных расстройств, шизофрении, аутизма, нейродегенеративных расстройств (например, болезни Альцгеймера, паркинсонизма и хореи Гентингтона) и рвоты, вызываемой химиотерапией.

Подсемейство рецепторов 5-НТ₂ состоит из трех подтипов - рецепторов 5-НТ_2А, 5-НТ_2В и 5-НТ_2С. Серотониновые рецепторы 5-НТ_2С экспрессируются во многих участках головного мозга и участвуют в регуляции приема пищи (Ооипкй С.Т., ОЬск. Вск., 1995, 3, Зирр1. 4, 4493-4623; В1сксгб1кс М.1. с! а1., ΟίηЬс1ск. ОЬск. Мс!аЬ., 1999, 1, 207-214). Показано, что неспецифический агонист рецептора 5-НТ_2С мхлорфенилпиперазин (т-СРР), который несколько предпочтителен для рецептора 5-НТ_2С, снижает потребление корма у мышей, экспрессирующих нормальный рецептор 5-НТ_2С, в то время как соединение теряет активность в отношении мышей, экспрессирующих мутированную неактивную форму рецептора 5-НТ_2С (Тссо!! Ь.Н. с! а1., Упшс. 1995, 374, 542-546).

Кроме того, сообщается, что т-СРР и азепиноиндол И-22394А -последний недавно идентифицирован как агонист рецептора 5-НТ_2С (неопубликованные данные) - снижают массу тела у людей после лечения в течение двух и девяти недель, соответственно (\Уа1к11 А.Е.З.. Ркусйорйагтасо1оду, 1994, 116, 120122; Загдсп! Р.А. с! а1., Ркусйорйагтасо1оду, 1997, 133, 309-312; и Са11аи! Ό.Μ. с! а1., Сигг. Тйсг. Вск., 1967, 9, 579-581).

В последнее время ряд производных пирроло[3,2,1-у]хинолина идентифицирован как агонисты рецептора 5-НТ_2С, обладающие селективностью относительно рецептора 5-НТ_2А (1каас М. с! а1., Вюогд. Мсб. Сйст. Ьсй., 2000, 10, 919-921). Предполагается, что такие соединения представляют новый подход к лечению ожирения и эпилепсии.

Также предполагается, что подтип рецепторов 5-НТ_2С вовлекается в расстройства ЦНС, такие как депрессия и тревога (1сиск Г. с! а1., Ехрсй Орш. 1пуск!. Эгидк. 1998, 7, 1587-1599; Ьсуксп О.С.М. ГОгидк, 1999, 2, 109-120). Также предполагается, что подтип рецепторов 5-НТ_2С вовлекается в расстройства мочеиспускания, такие как недержание мочи (Ьсуксп О.С.М. ГОгидк, 1999, 2, 109-120).

Также рецептор 5-НТ₆ (идентифицированный в 1993 - Мопкта с! а1., Мо1. Рйагтасок, 1993, 43, 320327, и Виа! М. с! а1., Вюсйст. Вюрйук. Вск. Соттип., 1993, 193, 269-276) вовлекается в регуляцию приема пищи и расстройства ЦНС.

Так, например, в Всп!1су ЕС. с! а1., Вг. 1. РйагтасоГ 1999, 126, 66Р, описывается снижение потребления корма у крыс путем введения антагониста 5-НТ₆. Также некоторые антидепрессанты и атипичные антипсихотические средства показывают высокую аффинность к рецептору 5-НТ₆, что наводит на мысль о причастности рецептора 5-НТ₆ к шизофрении (Во!й с! а1., 1. Р11агтасо1. Ехр. Тйсг., 1994, 268, 1403-1410; 31с1дй! с! а1., Ехрсй Орш. Тйсг. Ра!сп!к, 1998, 8, 1217-1224; Воигкоп с! а1., Вг. 1. Рйагт., 1998, 125, 15621566; Воскк с! а1., Мо1. РйагтасоГ 1998, 54, 577-583; 31с1дй! с! а1., Вг. 1. Рйагтасо1., 1998, 124, 556-562). Кроме того, рецептор 5-НТ₆ связан с состояниями генерализованного стресса и тревоги (УокЫока с! а1., ЬгТс Зск, 1998, 17/18, 1473-1477).

Краткое изложение сущности изобретения

Согласно настоящему изобретению, неожиданно было обнаружено, что комбинированное введение агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора 5-НТ₆ снижает потребление пищи в большей степени, чем введение, или одного агониста, или одного антагониста. Такое комбинированное введение агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора 5-НТ₆ может представлять терапевтические преимущества по сравнению с лечением или одним агонистом или одним антагонистом.

Поэтому в одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество сочетания агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора 5-НТ₆ и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом аспекте изобретение относится к способу предупреждения или лечения болезни, в частности, ожирения, связанной с рецептором 5-НТ_2С и рецептором 5-НТ₆, включающему введение человеку или животному, нуждающемуся в этом, агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора 5-НТ₆ (одновременно или последовательно) в количествах, достаточных для получения лечебного эффекта.

- 1 006604

В еще одном аспекте изобретение относится к применению агониста рецептора 5-НТ₂с и антагониста рецептора 5-НТ₆ для получения лечебного средства для лечения болезни, связанной с рецептором 5НТ_2С и рецептором 5-НТ₆.

В другом аспекте изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, где агонист рецептора 5-НТ_2С и антагонист рецептора 5-НТ₆, соединенные в терапевтическом количестве, тщательно смешивают с фармацевтически приемлемым носителем.

В еще одном аспекте изобретение относится к продукту, содержащему агонист рецептора 5-НТ_2С и антагонист рецептора 5-НТ6, в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении болезни, в частности, ожирения, связанной с рецептором 5-НТ2С и рецептором 5-НТ6.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает воздействие на потребление корма мышами оЬ/оЬ после комбинированного введения агониста рецептора 5-НТ_2С (ΡΝυ-183933Ρ; 50 мг/кг, ро (перорально)) и антагониста рецептора 5НТ₆ (ΡNυ-186053Α; 50 мг/кг, 8с (подкожно)), а также действие одного агониста и одного антагониста.

Фиг. 2 показывает воздействие на потребление корма мышами оЬ/оЬ после комбинированного введения агониста рецептора 5-НТ_2С (ВУТ.2938Р; 5 мг/кг, §с) и антагониста рецептора 5-НТ₆ (ВУТ.5182С; 3 мг/кг, 5с). а также действие одного агониста и одного антагониста.

Подробное описание изобретения

Как указано выше, настоящее изобретение основано на неожиданном открытии, что комбинированное введение агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора 5-НТ₆ снижает потребление пищи в большей степени, чем введение или одного агониста или одного антагониста. Такое комбинированное введение агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора 5-НТ₆ также может представлять некоторые преимущества, например, при лечении ожирения, по сравнению с лечением, или одним агонистом, или одним антагонистом.

Во-первых, при комбинированном введении требуются меньшие дозы каждого соединения для получения подобного или улучшенного снижения потребления пищи, чем при лечении одним соединением.

Во-вторых, более низкие дозы, требуемые при комбинированном введении, могут снизить опасность вредных событий.

В-третьих, более низкие дозы, требуемые при комбинированном введении, могут снизить опасность развития толерантности и склонности к злоупотреблению.

В-четвертых, лечение, основанное на двух целях, может повысить индивидуальную лечебную эффективность относительно лечения, основанного на одной цели. Также может снизиться опасность неотвечаемости (нереспондеров).

Благоприятное воздействие комбинированного введения по данному изобретению полезно не только для модуляции пищевого поведения и для лечения избыточного веса и ожирения, но также может быть полезным для лечения расстройств ЦНС, таких как депрессия, мания, шизофренические расстройства, тревога, расстройства памяти (такие как болезнь Альцгеймера), мигрень, привыкание к чрезмерному употреблению лекарственных средств, судорожный синдром, личностные расстройства, посттравматический стресс-синдром и расстройства сна, а также для лечения недержания мочи (или вообще мочевого пузыря при повышенной активности), половых дисфункций, желудочно-кишечных расстройств и глаукомы.

Используемый в данном описании термин агонист рецептора 5-НТ_2С относится к соединению, вызывающему активацию серотонинового рецептора 5-НТ_2С. Агонист рецептора 5-НТ_2С предпочтительно имеет константу аффинности К₁ менее 50 нМ, предпочтительно менее 20 нМ, и внутреннюю активность ίη νίίτο, измеренную как содержание внутриклеточного Са²⁺, выше 20%, предпочтительно выше 50%, относительно 5-НТ (1 мкМ).

Используемый в данном описании термин антагонист рецептора 5-НТ₆ относится к соединению, вызывающему блокаду реакций, опосредуемых серотониновым рецептором 5-НТ₆. Антагонист рецептора 5-НТ₆ предпочтительно имеет константу аффинности К₁ менее 50 нМ, предпочтительно менее 20 нМ, и внутреннюю активность ίη νίίτο, измеренную как содержание внутриклеточного сАМР, менее 50%, предпочтительно менее 20%, относительно 5-НТ (1 мкМ).

Анализы ίη νίίτο, которые можно использовать для определения аффинности и внутренней активности, соответственно, агонистов рецептора 5-НТ_2С и антагонистов рецептора 5-НТ₆, известны в технике и приводятся ниже в экспериментальной части как анализы для определения аффинности к рецепторам 5НТ2А и 5-НТ₂в.

Как правило, агонисты рецептора 5-НТ_2С и антагонисты рецептора 5-НТ₆ должны быть достаточно селективны, чтобы не оказывать какого-либо существенного вредного побочного действия. Однако термины селективный и существенный в данном контексте должны интерпретироваться широко, причем их значения достаточно очевидны для специалистов в данной области техники.

Агонист рецептора 5-НТ_2С предпочтительно обладает селективностью для рецептора 5-НТ_2С по меньшей мере 5, предпочтительно по меньшей мере 10, предпочтительнее по меньшей мере 20 относи

- 2 006604 тельно рецепторов 5-НТ_2А, 5-НТ_2В и 5-НТ₆, соответственно (измеренной как отношения аффинностей 5НТ_2А/5-НТ_2С, 5-НТ_2В/5-НТ_2С и 5-НТ₆/5-НТ_2С).

Антагонист рецептора 5-НТ₆ предпочтительно обладает селективностью для рецептора 5-НТ₆ по меньшей мере 5, предпочтительно по меньшей мере 10, предпочтительнее по меньшей мере 20, относительно рецепторов 5-НТ_2А, 5-НТ_2В и 5-НТ_2С, соответственно (измеренной как отношения аффинностей 5НТ2А/5-НТ6, 5-НТ2В/5-НТ6 и 5-НТ2С/5-НТ6).

Соответствующие испытания для определения того, является ли соединение селективным агонистом рецептора 5-НТ_2С или селективным антагонистом рецептора 5-НТ₆, известны в технике, и как указывалось выше, описываются ниже в экспериментальной части.

В настоящее время предпочтительными агонистами рецептора 5-НТ_2С являются классы соединений арилпиперазинов и пиперазинилпиразинов, в частности, соединения, описанные в XVО 00/76984 и заявках на патент Швеции №№ 0004244-0 и 0004245-7, поданных 20 ноября 2000 г.

В частности, для целей настоящего изобретения в качестве агониста рецептора 5-НТ_2С используется фумарат (2К.)-метил-1-[3-[2-(3-пиридинил)окси]этокси}-2-пиразинил)-2-метилпиперазин (ВУТ.2938Р).

В настоящее время предпочтительными антагонистами рецептора 5-НТ₆ являются соединения класса азепининдолов, такие как класс арилсульфонзамещенных гексагидроазепининдолов, описанных в νθ 01/05793. Другими предпочтительными антагонистами рецептора 5-НТ₆ являются соединения класса арилсульфонилиндолов, такие как класс соединений, описанных в заявке на патент Швеции № 0003810-9.

В частности, для целей настоящего изобретения в качестве антагониста рецептора 5-НТ₆ используется гидрохлорид 6-метил-9-(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индол (РЫи-186053А).

Агонисты рецептора 5-НТ_2С и антагонисты рецептора 5-НТ₆ могут представлять собой соединения как таковые или, в соответствующих случаях, их фармацевтически приемлемые соли (аддитивные соли кислот и оснований) или их стереохимические изомерные формы (включая оптические изомеры, такие как энантиомеры и рацематы).

Фармацевтически приемлемые аддитивные соли, указанные выше, являются терапевтически активными нетоксичными аддитивными солями кислот и оснований, которые способны образовывать соединения. Соединения со свойствами оснований можно превратить в их фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот путем обработки основных форм соответствующей кислотой. Примерами кислот являются неорганические кислоты, такие как хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, иодисто-водородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, и органические кислоты, такие как уксусная кислота, пропановая кислота, гидроксиуксусная кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, щавелевая кислота, бензолсульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, трифторуксусная кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, салициловая кислота, п-аминосалициловая кислота, памовая кислота, бензойная кислота, аскорбиновая кислота и подобные кислоты. Примерами форм аддитивных солей оснований являются натриевые, калиевые, кальциевые соли и соли, образованные с фармацевтически приемлемыми аминами, такими как, например, аммиак, алкиламины, бензатин, и аминокислотами, такими как, например, аргинин и лизин. Используемый в данном описании термин аддитивная соль также включает сольваты, которые могут образовывать соединения и их соли, такие как, например, гидраты, алкоголяты и т.п.

Агонисты рецептора 5-НТ_2С и антагонисты рецептора 5-НТ₆ могут представлять собой пролекарства или формы, которые могут высвобождать нужный активный ингредиент после метаболической трансформации ίη νινο. Обычные процедуры отбора и получения подходящих пролекарственных производных описываются, например, в Эемдп οί Ргобгидк, еб. Н. Випбдаагб, ΕΙδονίοΓ. 1985.

Агонисты рецептора 5-НТ2С и антагонисты рецептора 5-НТ6 для целей введения можно включить в состав различных фармацевтических форм или в одну и ту же лекарственную форму, такую как одна и та же таблетка, или в отдельные лекарственные формы. Однако в последнем случае может оказаться целесообразным поместить стандартную лекарственную форму агониста рецептора 5-НТ2С и стандартную лекарственную форму антагониста рецептора 5-НТ₆ в одну и ту же упаковку, например в ячейки одного и того же блистера.

Агонисты рецептора 5-НТ_2С и антагонисты рецептора 5-НТ₆ в форме свободных оснований или солей можно включить в подходящие формы галеновых препаратов, такие как композиции для перорального применения, для инъекции, для введения в виде назального спрея, или подобные формы, в соответствии с принятыми фармацевтическими процедурами. Такие фармацевтические композиции согласно изобретению содержат эффективное количество агониста рецептора 5-НТ2С и антагониста рецептора 5НТ6 в сочетании с совместимыми фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями, что хорошо известно в технике. Носители могут представлять собой любое инертное вещество, органическое или неорганическое, подходящее для перорального, энтерального, ректального, чрескожного, подкожного или парентерального введения, такое как вода, желатин, аравийская камедь, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, натрийкрахмалгликолят, вторичный фосфат кальция, стеарат магния, тальк, коллидный диоксид кремния, и подобные вещества. Такие композиции также могут содержать другие

- 3 006604 фармакологически активные вещества и обычные добавки, такие как стабилизаторы, смачивающие вещества, эмульгаторы, корригенты, буферные вещества и т.п.

Композиции по изобретению можно получить, например, в твердой или жидкой форме для перорального применения, такой как таблетки, пилюли, капсулы, порошки, сиропы, эликсиры, диспергируемые гранулы, облатки, суппозитории и т.п., в форме стерильных растворов, суспензий или эмульсий для парентерального введения, спреев, например, назального спрея, трансдермальных препаратов, например пластырей, и т. п.

Уровень дозы каждого конкретного агониста рецептора 5-НТ₂с и антагониста рецептора 5-НТ₆ и частота приема доз конкретного сочетания будут изменяться в зависимости от различных факторов, включая возможности каждого конкретного используемого соединения, метаболическую устойчивость и длительность действия такого соединения, возраст пациента, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, способ и время введения, скорость выведения, сочетание лекарственных средств, тяжесть состояния, от которого лечат. Ежесуточная дозировка агониста рецептора 5-НТ_2С и антагониста рецептора

5-НТ₆, каждого, может колебаться от примерно 0,001 до примерно 150 мг/кг массы тела, предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 100 мг/кг массы тела, в частности, от примерно 0,1 до примерно 50 мг/кг массы тела, вводимая однократно или в виде нескольких доз, например, доз от 0,01 мг до примерно 1 г каждая. Как правило, такую комбинированную дозировку дают перорально, но также можно выбрать другой способ введения, например парентеральный или ректальный. Примером комбинированной лекарственной формы в виде таблеток может быть или форма (А) в виде двух отдельных таблеток, т.е. одной таблетки, содержащей 10, 20 или 50 мг агониста рецептора 5-НТ2с, и одной таблетки, содержащей 10, 20 или 50 мг антагониста рецептора 5-НТ₆, или (В) в виде комбинированной таблетки, содержащей 10, 20 или 50 мг агониста рецептора 5-НТ_2С и 10, 20 или 50 мг антагониста рецептора 5-НТ₆.

Изобретение поясняется с помощью приведенного ниже экспериментального раздела, не являющегося ограничительным.

Экспериментальный раздел

А. Получение испытываемых соединений

Свободное основание агониста рецептора 5-НТ_2С фумарата (2К)-метил-1-{3-[2-(3пиридинилокси)этокси]-2-пиразинил}пиперазина (ΡΝϋ-183933Γ) получают так, как описывается в \\'О 00/76984. Свободное основание превращают в его соль фумарат, т.пл. 126-129°С. МС т/ζ 315 (М)⁺. Элементный анализ: (С₁₆Н₂^₅О₂.С₄Н₄О₄), С, Н, Ν.

Антагонист рецептора 5-НТ₆ гидрохлорид 6-метил-9-(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡΝϋ-186053Ά) получают так, как описывается в \\'О 01/05793.

Агонист рецептора 5-НТ_2С фумарат (2К)-1-(3-{2-[(2-этокси-3-пиридинил)окси]этокси}-2пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Г) получают так, как описывается в \\'О 00/76984.

Антагонист рецептора 5-НТ6 гидрохлорид 1-(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ. 5182С) получают так, как описывается в заявке на патент Швеции № 0003810-9, поданной 20 октября 2000 г. Вкратце, ВУТ.5182С получают согласно общей процедуре, отображенной ниже на схеме 1, исходя из коммерчески доступного 4-пиперазиноиндола (соединение 1), которое проходит стадии (а)(с) с образованием гидрохлорида 1-(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (выход 80%). Чистота по ВЭЖХ >95%; ¹Н ЯМР (ДМСО-де) δ 9,64 (ушс, 2Н), 8,00-7,85 (м, 3Н), 7,79 (д, 1=3,77 Гц, 1Н), 7,707,65 (м, 1Н), 7,63-7,60 (м, 3Н), 7,27-7,22 (м, 1Н) , 6,95 (д, 1=3,76 Гц, 1Н), 6,81-6,77 (м, 1Н), 3,30-3,20 (м, 4Н); ¹³С-ЯМР (ДМСО-66) δ 144,79, 137,02, 135,22, 134,62, 129,82, 126,85, 125,63, 125,54, 123,49, 111,15, 107,87, 107,76, 47,81, 42,86; МС (поз. Е8-ЯА) т/ζ 342 (М+Н).

Схема 1

Стадия (а): Защита пиперазина группой ВОС по N4

4-Пиперазиноиндол (1 экв.), ΌΜΑΡ (0,1 экв.) и Εΐ₃Ν (4 экв.) растворяют в ДМФА. Добавляют (ВОС)₂О (1,1 экв.) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре (12 ч). ДМФА выпаривают, и остаток очищают хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформа, метанола и аммиака. ВЭЖХ: чистота 100%. МС т/ζ 302,2 (М+Н).

Стадия (Ь): Получение промежуточного соединения 3

Промежуточное соединение 2 (1,0 экв.) растворяют в ДМФА, добавляют %1 (1,3 экв.) и суспензию перемешивают в течение 0,5 ч в атмосфере азота. Добавляют бензолсульфонилхлорид (1,2 экв.), и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества выпари

- 4 006604 вают. Остаток растворяют в ЭС'М, раствор промывают насыщенным раствором №НС'О₃, сушат (Мд8О₄), фильтруют и концентрируют, и получают маслянистый остаток, который очищают хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюента гексана и этилацетата (7:3), и получают трет-бутил-4[1-(бензолсульфонил)-1Н-индол-4-ил)]-1-пиперазинкарбоксилат (3). ВЭЖХ: чистота 100%. Анализ методом ЯМР (¹Н и ¹³С) и МС подтверждает установленную структуру.

Стадия (с): Удаление защитной ВОС-группы

Группу ВОС из промежуточного соединения 3 удаляют, растворяя соединение в метаноле и добавляя затем эфир, насыщенный газообразным НС1. Гидрохлорид (4) отфильтровывают и сушат.

В. Получение фармацевтической композиции

Таблетка

	Ингредиенты	Мг/таблетку
1.	Агонист рецептора 5-НТ₂с	10,0
2.	Антагонист рецептора 5-НТ_б	10,0
3.	Микрокристаллическая целлюлоза	57,0
4.	Вторичный фосфат кальция	15,0
5.	Натрийкрахмалгликолят	5,0
6.	Коллоидный диоксид кремния	0,25
7.	Стеарат магния	0,75

Активные ингредиенты 1 и 2 смешивают с ингредиентами 3, 4, 5 и 6 в течение примерно 10 мин. Затем добавляют стеарат магния (7), полученную смесь перемешивают в течение примерно 5 мин и прессуют в форме таблеток с покрытием или без него.

С. Аффинность к рецепторам и анализ эффективности

Анализ аффинности к рецептору 5-НТ_2С

Аффинность к рецептору 5-НТ_2С определяют в сравнительных экспериментах, где с помощью технологии анализа близости сцинтилляции (8РА) контролируют способность соединения при серийном разведении заменять ³Н-меченный 5-НТ, связанный с мембранами, полученными из трансфицированной клеточной линии НЕК293, устойчиво экспрессирующей белок рецептора 5-НТ_2С человека. Неспецифическое связывание определяют с использованием 5 мкМ миансерина.

Анализ аффинности к рецептору 5-НТ2А

Аффинность к рецептору 5-НТ_2А определяют в сравнительных экспериментах, где способность соединения при серийном разведении заменять ³Н-меченный кетансерин или диэтиламид лизергиновой кислоты (БЗЭ), связанный с мембранами, полученными из трансфецированной клеточной линии СНО, устойчиво экспрессирующей белок рецептора 5-НТ_2А человека, контролируют путем измерения сцинтилляционным счетчиком радиоактивности гомогенатов мембран, фильтрованных на фильтрах из стекловолокна. Неспецифическое связывание определяют с использованием 5 мкМ миансерина.

Анализ аффинности к рецептору 5-НТ_2В

Аффинность к рецептору 5-НТ_2В определяют в сравнительных экспериментах, где способность соединения при серийном разведении заменять ³Н-меченный 5-НТ, связанный с мембранами, полученными из трансфицированной клеточной линии СНО, устойчиво экспрессирующей белок рецептора 5-НТ_2В человека, контролируют с помощью технологии анализа близости сцинтилляции (8РА). Неспецифическое связывание определяют с использованием 5 мкМ миансерина.

Анализ эффективности в отношении рецептора 5-НТ_2С

Эффективность агониста в отношении рецептора 5-НТ_2С определяют по способности соединения мобилизовать внутриклеточный кальций в трасфицированных клетках НЕК293, устойчиво экспрессирующего белок рецептора 5-НТ_2С человека, с использованием образующего хелатный комплекс с кальцием флуоресцентного красителя ГБиО-3 (81дта, Сент-Луис, Миссури, США). Относительную эффективность (%) измеряют относительно эффективности серотонина при содержании 1 мкМ.

Анализ аффинности к рецептору 5-НТ₆

В анализе на связывание радиолиганда используют диэтиламид [³Н]-лизергиновой кислоты (БЗЭ). Анализ осуществляют в 96-луночных планшетах путем добавления 11 мкл раствора испытываемого соединения при соответствующем разведении (в анализе используют 11 серийных концентраций образцов при двукратном повторе), 11 мкл раствора радиолиганда и 178 мкл промытой смеси гранул 8РА, сенсибилизированных МСА, и мембран в буфере для связывания, полученных из клеток НЕК293, содержащих клонированный рецептор 5-НТ₆ человека. Планшеты встряхивают в течение примерно 5 мин и затем инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем планшеты загружают в счетные кассеты и проводят подсчет импульсов в сцинтилляционном счетчике. Полученное срт (число импульсов в минуту) специфического связывания вставляют в односайтовую модель связывания с использованием СгарИ

- 5 006604

Раб Ρπδΐη, версия 2.0. Установленные значения 1С₅₀ переводят в величины К₁ константы аффинности с использованием уравнения Ченга-Прусоффа (Сйепд У.С. с1 а1., Вюсйет. РНагтасоЕ 1973, 22, 3099-3108).

Анализ эффективности в отношении рецептора 5-НТ₆

Возможности антагониста для рецептора 5-НТ₆ определяют по способности соединения антагонизировать повышение сАМР, вызываемое 5-НТ в клетках НЕК293, устойчиво экспрессирующих белок рецептора 5-НТ₆ человека, с использованием прямой системы скрининг-анализа сАМР 8РА (КРА559, Атегкйат Рйагтааа Вю1ес11, Упсала, Швеция).

Ό. Испытание на потребление корма

Испытываемые соединения

Агонисты рецептора 5-НТ_2С фумарат (2К)-метил-1-{3-[2-(3-пиридинилокси)этокси]-2пиразинил}пиперазина (ΡΝυ-183933Ε) и фумарат (2К)-1-(3-{2-[(2-этокси-3-пиридинил)окси]этокси}-2пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Е) растворяют в физиологическом растворе (0,9% №101) и разбавляют в том же носителе до соответствующей концентрации.

Антагонисты рецептора 5-НТ₆ гидрохлорид 6-метил-9-(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡNυ-186053А) и гидрохлорид 1-(фенилсульфонил)-4-(1пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ.5182С) растворяют и разбавляют в 25% циклодекстрине.

Свежие растворы получают в день обработки.

Животные

Используют самцов мышей в возрасте 8-9 недель (С57ВЕ/61Вот-Еер^оЬ (оЬ/оЬ), Бомхольтсгард, Дания) со средней массой тела 45 г. Животные содержатся по одному в клетках при 23±1°С, влажность 4060%, и имеют свободный доступ к воде и стандартному лабораторному корму. Световой цикл 12 ч света/12 ч темноты устанавливают, выключая свет в 5 ч дня. Животных выдерживают в течение по меньшей мере одной недели перед началом исследования. В периоды эксперимента животные получают специальный корм (ВюЗегу, Френктаун, Нью-Джерси, США, свободные от пыли гранулы с точной массой каждой 20 мг).

Экспериментальный раздел

В начале исследования животных переносят в специальные рабочие испытательные клетки (модульная система испытаний поведения животных НаЬйей, Со1Ьоигп ΙηκίΓ., Аллентаун, Пенсильвания, США). Такие клетки содержат кормушку с датчиками для измерения потребления корма, оптический ликометр для регистрации потребления воды и инфракрасный монитор для регистрации общей двигательной активности. Мониторы присоединяют к компьютеру, непрерывно контролирующему и регистрирующему события. Пищевые гранулы взвешивают в количестве, необходимом для одного полного исследования, и заполняют свежей водопроводной водой и взвешивают бутыли для воды. Животных выдерживают в новой для них окружающей среде в течение трех суток для установления базовых показателей. Животных взвешивают в 3 ч дня в начале и в конце исследования. Соединения вводят между 4,20 и 5,00 ч дня до наступления темноты. Три группы животных получают (ί) антагонист 5-НТ₆ в 25% циклодекстрине; (ίί) агонист 5-НТ_2С в физиологическом растворе и (ш) сочетание агониста 5-НТ_2С и антагониста 5-НТ₆, соответственно. При комбинированном введении антагонист 5-НТ₆ или физиологический раствор вводят за 30 мин до введения агониста 5-НТ_2С или 25% циклодекстрина. Четвертая группа получает, соответственно, носитель, вводимый таким же способом. Исследование заканчивают на пятый день. Взвешивание осуществляют на весах Ме111ег-То1ейо РК5002/рК802 с вспомогательным компьютером.

Оценка результатов

Группа для каждой дозы состоит из 12-16 животных. Данные корректируют на потерю корма, основанную на взвешивании потерянного корма в течение 22 ч, и предполагают, что такая потеря пропорциональна времени. Вычисления проводят с данными до и после обработки. Величины выражают в виде процентов от базового потребления корма (среднее±стандартное отклонение) для разницы между поглощением корма до обработки и через 3 ч (5-8 ч после полудня), 6 ч (5-11 ч после полудня), 12 ч (5 ч дня - 5 ч утра), 21 ч (5 ч дня - 2 ч дня).

Результаты, приведенные на фиг. 1, показывают, что комбинированная обработка антагонистом рецептора 5-НТ₆ ΡNυ-186053А (50 мг/кг, подкожно) и агонистом рецептора 5-НТ_2С №Ν0-183933Ε (50 мг/кг, перорально) снижает потребление корма значительно больше, чем соединения, принятые по одному. Соответственно, результаты, приведенные на фиг. 2, показывают, что комбинированная обработка агонистом рецептора 5-НТ_2С ВУТ.2938Е (5 мг/кг, подкожно) и антагонистом рецептора 5-НТ₆ВУТ.5182С (3 мг/кг, подкожно) снижает потребление корма через 12 и 21 ч после введения значительно больше, чем соединения, принятые по одному. Таким образом, очевидно, что комбинированное лечение агонистом рецептора 5-НТ2С и антагонистом рецептора 5-НТ6 снижает потребление корма более эффективно по сравнению с лечением, или одним агонистом, или одним антагонистом.

Claims

1. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество сочетания агониста рецептора 5-НТ_2С, которым является арилпиперазин, такой как пиперазинилпиразин и антагониста рецептора

- 6 006604

5-НТ₆, выбранного из азепиноиндолов, таких как арилсульфонзамещенные гексагидроазепининдолы и арилсульфонилиндолы или соли, энантиомера или пролекарства указанного агониста и/или антагониста и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой агонист рецептора 5-НТ_2С имеет селективность в отношении рецептора 5-НТ_2С по меньшей мере примерно 10, предпочтительно по меньшей мере примерно 20, по сравнению с рецептором 5-НТ_2А, рецептором 5-НТ_2В и рецептором 5-НТ₆, соответственно.

3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, в которой антагонист рецептора 5-НТ6 имеет селективность в отношении рецептора 5-НТ6 по меньшей мере примерно 10, предпочтительно по меньшей мере примерно 20, по сравнению с рецептором 5-НТ2А, рецептором 5-НТ2В и рецептором 5-НТ2С, соответственно.

4. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К.)-метил-1-{3-[2-(3-пиридинилокси)этокси]-2-пиразинил}пиперазина (ΡΝυ-183933Ε).

5. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-1-(3-{2-[(2-этокси-3-пиридинил)окси]этокси}-2-пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Е).

6. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 6-метил-9-(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡNυ-186053А).

7. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 1-(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ.5182С).

8. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп.1-7, в котором терапевтическое количество сочетания агониста рецептора 5-НТ2С, которым является арилпиперазин, такой как пиперазинилпиразин и антагониста рецептора 5-НТ6, выбранного из азепиноиндолов, таких как арилсульфонзамещенные гексагидроазепининдолы и арилсульфонилиндолы тщательно смешивают с фармацевтически приемлемым носителем.

9. Способ по п.8, в котором агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-метил-1-{3-[2-(3пиридинилокси)этокси]-2-пиразинил}пиперазина (ΡΝυ-183933Ε).

10. Способ по п.8, в котором агонистом рецептора 5-НТ2С является фумарат (2К)-1-(3-{2-[(2этокси-3-пиридинил)окси]этокси}-2-пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Е).

11. Способ по п.8, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 6-метил-9(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡNυ-186053А).

12. Способ по п.8, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 1(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ.5182С).

13. Продукт, содержащий агонист рецептора 5-НТ_2С, которым является арилпиперазин, такой как пиперазинилпиразин и антагонист рецептора 5-НТ6, выбранный из азепиноиндолов, таких как арилсульфонзамещенные гексагидроазепининдолы и арилсульфонилиндолы в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении болезни, связанной с рецептором 5-НТ_2С и рецептором 5-НТ₆.

14. Продукт по п.13, в котором агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-метил-1-{3-[2(3-пиридинилокси)этокси]-2-пиразинил}пиперазина (ΡΝυ-183933Ε).

15. Продукт по п.13, в котором агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-1-(3-{2-[(2этокси-3-пиридинил)окси]этокси}-2-пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Е).

16. Продукт по п.13, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 6-метил-9(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡNυ-186053А).

17. Продукт по п.13, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 1(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ.5182С).

18. Продукт по п.13, где болезнь выбирают из числа нарушений питания.

19. Продукт по п.18, где болезнь представляет собой избыточный вес или ожирение.

20. Применение агониста рецептора 5-НТ_2С, которым является арилпиперазин, такой как пиперазинилпиразин и антагониста рецептора 5-НТ₆, выбранного из азепининдолов, таких как арилсульфонзамещенные гексагидроазепининдолы и арилсульфонилиндолы для изготовления лечебного средства для лечения болезни, связанной с рецептором 5-НТ_2С и рецептором 5-НТ₆.

21. Применение по п.20, где агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-метил-1-{3-[2-(3пиридинилокси)этокси]-2-пиразинил}пиперазина (ΡΝυ-183933Ε).

22. Применение по п.20, где агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-1-(3-{2-[(2-этокси3-пиридинил)окси]этокси}-2-пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Е).

23. Применение по п.20, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 6-метил-9(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡNυ-186053А).

24. Применение по п.20, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 1(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ.5182С).

25. Применение по любому из пп.20-24, где болезнь выбирают из числа нарушений питания.

26. Применение по любому из пп.20-25, где болезнь представляет собой избыточный вес или ожирение.

- 7 006604

27. Способ предупреждения или лечения болезни, связанной с рецептором 5-НТ_2С и рецептором 5НТ₆, включающий введение человеку или животному, нуждающемуся в этом, агониста рецептора 5НТ2С, которым является арилпиперазин, такой как пиперазинилпиразин и антагониста рецептора 5-НТ6, выбранного из азепиноиндолов, таких как арилсульфонзамещенные гексагидроазепининдолы и арилсульфонилиндолы в достаточных количествах для обеспечения терапевтического эффекта.

28. Способ по п.27, где агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-метил-1-{3-[2-(3пиридинилокси)этокси]-2-пиразинил}пиперазина (ΡΝυ-183933Ρ).

29. Способ по п.27, где агонистом рецептора 5-НТ_2С является фумарат (2К)-1-(3-{2-[2-(этокси-3пиридинил)окси]этокси}-2-пиразинил)-2-метилпиперазина (ВУТ.2938Р).

30. Способ по п.27, в котором антагонистом рецептора 5-НТ6 является гидрохлорид 6-метил-9(фенилсульфонил)-1,2,3,4,5,6-гексагидроазепино[4,5-Ь]индола (ΡΝυ-186053Α).

31. Способ по п.27, в котором антагонистом рецептора 5-НТ₆ является гидрохлорид 1(фенилсульфонил)-4-(1-пиперазинил)-1Н-индола (ВУТ.5182С).

32. Способ по любому из пп.27-31, где болезнь выбирают из числа нарушений питания.

33. Способ по п.32, где болезнь представляет собой избыточный вес или ожирение.

34. Способ по любому из пп.27-33, где агонист рецептора 5-НТ_2С и антагонист рецептора 5-НТ₆вводят в виде комбинированной фармацевтической композиции.