DE2727730C2 - - Google Patents
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Description
Seit der Einführung automatischer hämatologischer
Verfahren durch Anwendung kontinuierlicher Durchflußsysteme
ist es technisch möglich geworden, die Anzahl Proben, die
während einer bestimmten Zeit analysiert werden können,
beträchtlich zu erhöhen. Mit dieser Verbesserung des Wirkungsgrades
entstand jedoch gleichzeitig das Bedürfnis zur
Stabilisierung oder Konservierung von Blutproben, um den
Transport der Proben von entfernten Stellen sowie das Ansammeln
von Proben für die Zuführung zu automatisierten
hämatologischen Systemen zu erleichtern.
In einer Vorrichtung mit einem automatisierten, kontinuierlichen
Durchflußsystem, wie beispielsweise Hemalog D
(Warenzeichen der Technicon Instruments Corporation), die
ein Laboratoriumstestinstrument darstellt, das die Bestimmung
der weißen Blutkörperchen erleichtern soll, werden durch
cytochemische Vorgänge einzelne Zellarten spezifisch identifiziert
und markiert. Der Strom aus angefärbten und nicht
angefärbten Zellen fließt durch eine optische Sichtkammer, wo
eine fotoelektrische Messung erfolgt. Elektronische Signale
werden nach ihrer Amplitude voneinander unterschieden und in
Kategorien entsprechend den verschiedenen Zelltypen eingeteilt.
Die Daten werden für eine Probe je Minute für die fünf Hauptarten
der weißen Blutkörperchen sowie für Juvenilformen von
Neutrophilen und einen unklassifizierten Rest in Form von
Prozentangaben und in "Zellen/Minuten³" ausgedruckt.
Bei den konservierten Blutzusammensetzungen gemäß der
Erfindung bleiben die roten Blutkörperchen auflösbar (= lysierbar).
Dies ist äußerst zweckmäßig, da in den meisten automatisierten
Systemen zur Zählung der weißen Blutkörperchen, wie
beispielsweise bei dem Hemalog-D-System, die roten Blutkörperchen
aufgelöst werden müssen, da sie die Zählung der weißen
Blutkörperchen und das Verfahren zu ihrer Identifizierung
stören.
Mit Hilfe des spezifischen Verfahrens zur chemischen
Identifizierung werden die weißen Blutkörperchen angefärbt.
Um bei derartigen Systemen zutreffende Analysen sicherzustellen,
müssen die Blutproben praktisch in demselben Zustand
sein, in dem sie von einem Patienten abgenommen worden
sind. Bekanntlich altert Blut, und es tritt ein Abbau
auf, der zu einem falschen Analysenergebnis führen kann. Da
beispielsweise bei der Apparatur "Hemalog-D" die Klassifizierung
der Zellen auf deren enzymatischer Aktivität beruht,
unterliegt diese Aktivität beim Stehen oder Altern des Blutes
Veränderungen und führt daher zu fragwürdigen Ergebnissen.
Außerdem treten beim Stehen von Blutproben auch noch andere
unerwünschte Erscheinungen auf, wie beispielsweise Verklumpen
und Zerbrechen der Zellen.
Da diese unerwünschten Erscheinungen immer stärker werden,
je länger die Blutprobe steht, hat es sich als notwendig
erwiesen, Wege zu finden, um die ursprüngliche Natur der
Probe über eine ausgedehnte Zeit derart zu konservieren, daß
bei einer Analyse zuverlässige Ergebnisse erhalten werden.
Aus US-PS 39 25 153 ist ein Mittel zur Konservierung
von Blut bekannt, das aus Glucose und einer Citratlösung besteht.
Aus US-PS 37 15 427 ist ein Verfahren zur Konservierung
von Erythrocyten bekannt, bei dem eine Erythrocyten-
Suspension nacheinander mit Methylglyoxal und Formaldehyd
behandelt wird. Aus DE-OS 22 60 774 ist ein Konservierungsmittel
für cytologische Proben bekannt, das aus Formaldehyd
und Thymol besteht. Insbesondere für die Haltbarmachung der
weißen Blutkörperchen sind die genannten Mittel bzw. Verfahren
nicht geeignet, da die Stabilisierung der Leukocyten nicht
oder nicht lange genug gelingt.
Aufgabe der Erfindung ist es, die Lebensdauer von
Blutproben so zu verlängern, daß genaue Zählungen von
weißen Blutkörperchen (white blood cell differential counts)
mit automatisierten kontinuierlichen Durchflußsystemen an
Blutproben durchgeführt werden können, die mehr als einen
Tag alt sind.
Gegenstand der Erfindung ist eine konservierte lysierbare,
nicht koagulierende Blutzusammensetzung in Form eines
Gemisches aus einer Blutprobe und einem ein Saccharid enthaltenden
Konservierungsreagenz, dadurch gekennzeichnet, daß
das Konservierungsreagenz aus einem wäßrigen Gemisch aus
einem Mono-, Di- oder Trisaccharid und Formaldehyd besteht
und die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung das
Saccharid in einer Menge von 0,05 bis 1,0% und den Formaldehyd
in einer Menge von 0,1 bis 0,8%, bezogen auf das Gewicht,
enthält.
In einer bevorzugten Ausführungsform besteht das Konservierungsmittel
aus Dextrose (einem Monosaccharid) und
Formaldehyd.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform enthält
die konservierte Blutzusammensetzung Dextrose und Formaldehyd
in Mengen von 1 bzw. 0,2 Gew.-%. In einer weiteren bevorzugten
Ausführungsform enthält die konservierte Blutzusammensetzung
Dextrose und Formaldehyd in einer Menge von 0,66
bzw. 0,13 Gew.-%.
Weiter wird vorzugsweise ein Antikoagulans in das System
eingebracht, indem man die Blutprobe oder das Konservierungsmittel
damit versetzt, und in den Fällen, in denen eine Blutprobe
abgezapft und danach unmittelbar mit dem Konservierungsmittel
versetzt wird, ist die letztgenannte Ausführungsform
bevorzugt. Ein beispielsweise verwendbares Antikoagulans
für die Zwecke der vorliegenden Erfindung ist das Trikaliumsalz
von Ethylendiamintetraessigsäure (K₃EDTA). In der
schließlich erzielten Blutzusammensetzung beträgt die Konzentration
von K₃EDTA typischerweise 0,1 bis 0,2 Gew.-%.
Die konservierte lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung
gemäß der Erfindung besitzt eine analytische
Lebensdauer bei 4° C bis und über 72 h und bei 25° C
bis und über 48 h. Die Vorteile eines derartigen Konservierungssystems
sind augenfällig: Man braucht die Probe nicht
innerhalb 24 h durch die Apparatur zu schicken, was bei
einer großen Anzahl von Proben unter Umständen Schwierigkeiten
bereiten würde.
Beispiele für zu Zwecken der Erfindung verwendbare
Monosaccharide sind Dextrose, Fructose und Galactose, wobei
Dextrose am meisten bevorzugt ist. Beispielhafte Disaccharide
sind Saccharose und Maltose. Ein beispielsweise verwendbares
Trisaccharid ist Raffinose.
Die Saccharidkomponente und der Formaldehyd werden in
wäßriger Form unter Verwendung von destilliertem oder entionisiertem
Wasser miteinander vereinigt und vorzugsweise,
beispielsweise durch ein 0,8-µ-Filter, filtriert.
Nach dem Filtrieren wird das Konservierungsreagenz mit
einer frischen Blutprobe kombiniert.
Die konservierte lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung,
die auf diese Weise hergestellt wird, wird
vorsichtig vermischt, beispielsweise durch Umdrehen des
Gefäßes, und anschließend bei Temperaturen von 1 bis 25° C
aufbewahrt, bis sie untersucht wird.
Eine konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung,
die bei 4° C mindestens 72 h aufbewahrt
werden kann und ein Gemisch aus einer Blutprobe und einem
Konservierungsmittel enthält, wobei das letztere aus einem
wäßrigen Gemisch aus Dextrose und Formaldehyd derart zusammengesetzt
ist, daß die erhaltene, konservierte Blutzusammensetzung
Dextrose und Formaldehyd in Mengen von 1 bzw.
0,2 Gew.-% enthält, wird wie folgt hergestellt:
Ein Gemisch mit einem Gehalt von 10 Gew.-% Dextrose
und 2 Gew.-% Formaldehyd in destilliertem oder entionisiertem
Wasser wird durch ein 0,8-µ-Filter filtriert und mit
einer nicht koagulierenden Blutprobe vereinigt. Das Volumenverhältnis
von Blutprobe zu Konservierungsreagenz beträgt
10 : 1.
Die erhaltene lysierbare, konservierte Blutzusammensetzung
wird durch Umdrehen des Gefäßes vorsichtig vermischt
und bei 4° C aufbewahrt.
Es werden konservierte, lysierbare, nicht koagulierende
Blutzusammensetzungen hergestellt, die denen gemäß Beispiel 1
ähnlich sind, wobei anstatt von Dextrose die folgenden
Saccharide verwendet werden:
Monosaccharide: Fructose, Galactose
Disaccharide: Saccharose, Maltose
Trisaccharide: Raffinose
Disaccharide: Saccharose, Maltose
Trisaccharide: Raffinose
Eine konservierte, lysierbare, nicht koagulierende
Blutzusammensetzung, die bei 25° C mindestens 48 h aufbewahrt
werden kann und aus einem Gemisch aus einer Blutprobe
und Konservierungsreagenz besteht, wobei das letztgenannte
aus einem wäßrigen Gemisch aus Dextrose, Formaldehyd und
dem Trikaliumsalz von Ethylendiamintetraessigsäure
(K₃EDTA) derart zusammengesetzt ist, daß die erhaltene
konservierte Blutzusammensetzung Dextrose, Formaldehyd und
K₃EDTA in Mengen von 0,66 Gew.-%, 0,13 Gew.-% bzw. 0,15
Gew.-% enthält, wird wie folgt hergestellt:
Ein Gemisch mit einem Gehalt von 20 Gew.-% Dextrose,
4 Gew.-% Formaldehyd und 4,5 Gew.-% K₃EDTA in destilliertem
oder entionisiertem Wasser wird durch ein 0,8-µ-Filter
filtriert und in einen Behälter verbracht, der unter Vakuum
steht. Danach wird eine frisch abgezogene Blutprobe unmittelbar
in den Vakuumbehälter eingeführt. Das Volumenverhältnis
von Blutprobe zu Konservierungsreagenz beträgt 30 : 1.
Die erhaltene lysierbare, konservierte, nicht koagulierende
Blutzusammensetzung wird vorsichtig durch Umkehren des
Gefäßes vermischt und bei 25° C aufbewahrt.
Konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzungen,
die der in Beispiel 3 beschriebenen
ähneln, werden hergestellt, indem man anstatt Dextrose die
folgenden Saccharide verwendet:
Monosaccharide: Fructose, Galactose
Disaccharide: Saccharose, Maltose
Trisaccharide: Raffinose
Disaccharide: Saccharose, Maltose
Trisaccharide: Raffinose
Eine konservierte, lysierbare, nicht koagulierende
Blutzusammensetzung, die bei 25° C mindestens 48 h aufbewahrt
werden kann und aus einem Gemisch aus einer Blutprobe
und einem Konservierungsreagenz besteht, das aus einem
wäßrigen Gemisch aus Dextrose, Formaldehyd, K₃EDTA und
Natriumchlorid in der Weise zusammengesetzt ist, daß die
erhaltene konservierte Blutzusammensetzung Dextrose, Formaldehyd,
K₃EDTA und Natriumchlorid in Mengen von 0,09 Gew.-%,
0,6 Gew.-%, 0,15 Gew.-% bzw. 0,4 Gew.-% enthält, wird wie
folgt hergestellt:
Ein Gemisch mit einem Gehalt von 0,1 Gew.-% Dextrose,
0,66 Gew.-% Formaldehyd, 0,17 Gew.-% K₃EDTA und 0,45 Gew.-%
Natriumchlorid in destilliertem oder entionisiertem Wasser
wird durch ein 0,8-µ-Filter filtriert und mit einer Blutprobe
im Volumenverhältnis von Blutprobe zu Konservierungsreagenz
von 1 : 9 vereinigt.
Die erhaltene lysierbare, konservierte, nicht koagulierende
Blutzusammensetzung wird durch Umkehren des Gefäßes
vorsichtig vermischt und bei 25° C aufbewahrt.
Claims (3)
1. Konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung
in Form eines Gemisches aus einer Blutprobe
und einem ein Saccharid enthaltenden Konservierungsreagenz,
dadurch gekennzeichnet,
daß das Konservierungsreagenz aus einem wäßrigen Gemisch aus einem Mono-, Di- oder Trisaccharid und Formaldehyd besteht und die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung das Saccharid in einer Menge von 0,05 bis 1,0 Gew.-% und den Formaldehyd in einer Menge von 0,1 bis 0,8 Gew.-% enthält.
dadurch gekennzeichnet,
daß das Konservierungsreagenz aus einem wäßrigen Gemisch aus einem Mono-, Di- oder Trisaccharid und Formaldehyd besteht und die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung das Saccharid in einer Menge von 0,05 bis 1,0 Gew.-% und den Formaldehyd in einer Menge von 0,1 bis 0,8 Gew.-% enthält.
2. Blutzusammensetzung gemäß Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet,
daß als Monosaccharid Dextrose verwendet wird, und die erhaltene
konservierte Blutzusammensetzung Dextrose und Formaldehyd
in einer Menge von 1 bzw. 0,2 Gew.-% oder 0,66 bzw.
0,13 Gew.-% enthält.
3. Blutzusammensetzung gemäß Anspruch 1 oder 2,
dadurch gekennzeichnet,
daß im Konservierungsreagenz oder in der Blutprobe ein
Antikoagulans enthalten ist, wobei die Konzentration im Falle
von Trikalium-EDTA in der konservierten Blutprobe 0,1 bis
0,2 Gew.-% beträgt.
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