CZ2000502A3

CZ2000502A3 - Prací detergentní prostředky obsahující enzymy, které odbourávají sacharidové gumy

Info

Publication number: CZ2000502A3
Application number: CZ2000502A
Authority: CZ
Inventors: Jean-Luc Philippe Bettiol; Steven Paul Georges Cooremans; Kevin Johnstone; Kotikanyadanam Sreekrishna; Charles Winston Saunders; Ivan Maurice Alfons Jan Herbots; Andre Cesar Baeck
Original assignee: The Procter & Gamble Company
Priority date: 1997-08-14
Filing date: 1998-06-10
Publication date: 2001-03-14
Also published as: BR9811189A; AU8064298A; MXPA00001617A; CN1276005A; MXPA00001610A; BR9811196A; JP4090689B2; EP1009796A1; HUP0003670A2; WO1999009131A1; JP2001515126A; DE69835214D1; ATE230013T1; DE69826294D1; ES2227845T3; ATE332958T1; CA2301156A1; EP1009794A1; JP2001515132A; CN1276826A

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká pracích detergentních prostředků obsahujících enzymy, které odbourávají sacharidové gumy.

Dosavadní stav techniky

Detergentní prostředky v dnešní době zahrnují komplexní kombinace aktivních složek, které splňují určité konkrétní potřeby. Zejména, současné detergentní prostředky obecně zahrnují detergentní enzymy, které poskytují užitek při čištění a péči o tkaniny, a konkrétněji cellulasové a amylasové enzymy.

Účinnost cellulytických enzymů, tj. cellulas, v problematice čištění textilií a činidlech tlumících drsnost tkanin, je již nějaký čas známá. Aktivita cellulasy spočívá v hydrolýze cellulosových vláken nebo substrátů cellulasou a v závislosti na konkrétní funkci cellulasy, která je endo- nebo exocellulasa a případně hemicellulasa. Cellulosové struktury se depolymerizují nebo štěpí na menší a proto rozpustnější nebo dispergovatelnější části. Zejména tato aktivita způsobuje, že se tkaniny vyčistí, oživí, změkčí a obecně se zlepší jejich charakteristiky na omak.

amylasách je v dané problematice známo, že způsobují odstranění skvrn z přírodně se vyskytujících nebo uměle přidaných škrobů obsažených ve skvrnách nebo nečistotách pocházejících z jídel nebo se amylasy přidávají jako apretační prostředek.

Skvrny nebo nečistoty od jídla tvoří většinu svrn nebo nečistot, které trápí zákazníky, a často obsahují potravinová aditiva. Neutralizační látky, kyselící látky, antioxidanty, • · • · · · · konzervační látky, sladidla, enzymy, stabilizátory a zahušťovadla, jako jsou hydrokoloidy a emulgátory, jsou obecně používaná potravinová aditiva. Zejména, zákazníci požadují zvyčující se množství texturačních činidel jako náhražek tuků, aby se snížilo množství tuku a kalorický obsah. Trh s hydrokoloidními texturačními a stabilizačními činidly, také zvanými jako potravinové gumy, roste o 4 % ročně, xanthanová guma má přírůstky o 6 % až 8 % ročně a carrageenová guma o 3 % ročně (Chemical Week, 19. června 1996, str. 32 až 34).

Pojem guma označuje skupinu průmyslově používaných polysacharidů (polymerů s dlouhým řetězcem) nebo jejich derivátů, které se hydratují horkou nebo studenou vodou na viskózní roztoky, disperze nebo gely. Gumy jsou klasifikovány jako přírodní a modifikované přírodní gumy včetně extraktů z mořských řas, rostlinných extrudátů, gum ze semen nebo kořenů a gum získávaných mikrobiální fermentací. Modifikované (polosyntetické) gumy zahnují cellulosové a škrobové deriváty a některé syntetické gumy, jako je nízkomolekulární methoxylovaný pektin, propylenglykol alginát a karboxymethyl a hydroxypropyl guarová guma (Gums v knize Encyclopedia Chemical Technology, 4. vydání, svazek 12, strany 842 až 862, J. Baird, Kelco oddělení firmy Merck). Viz také Carbohydrate Chemistry for Food Scientists (Eagan Press - 1997) R.L. Whistler a J.N. BeMiller, Kapitola 4, strany 63 až 89 a Direct Food Additives v knize Fruit Processing, P. Laslo, Bioprinciples and Applications, svazek 1, kapitola II, strana 313 až 325 (1996) Technomie publishing.

Některé z těchto gum, jako je xanthanová guma (E415, CEE číslo), gellanová guma (E416), guarová guma (E412) a tragakanth (E413), jsou široce používány samostatně nebo v kombinaci do mnoha potravin (Gums v knize ECT, 4.vydání, svazek 12, strany 842 až 862, J. Baird, Kelco oddělení firmy Merck). Zejména guarová guma se často používá do potravin jako zahušťovadlo a pojivo volné vody v omáčkách a salátových • ·

• · · · · · · · • · · · · · ···· ···· · · · ···· * · · · · • · · · · · · · ·· · · · ···· dresincích. Guarová guma se také používá jako pojivo volné vody a stabilizátor ve zmrzlinách a mražených dezertech. Volná voda ve zmrzlinových směsích způsobuje u finálních zmrzlin zrnitou texturu, ledové krystaly, špatné vlastnosti při tání a špatnou odolnost proti náhlému zahřátí. Zahrnutí stabilizátoru obsahujícího guarovou gumu v množství až 0,3 % zmrzlinové směsi vede k jemné textuře, pružnému produktu, který pomalu taje a má dobrou odolnost proti náhlému zahřátí. To je zejména vhodné pro rychlou pasterizaci z důvodu rychlé hydratace. Další potraviny, které lze stabilizovat guarovou gumou díky její schopnosti vázat vodu, jsou mražená jídla, sýry, náplně pečivá, polevy a krmivá pro zvířata. Dalšími příklady jsou alginové gumy známé svým použitím v ovocných šťávách, konzervovaných a zavařovaných jídlech, tragakanthové gumy používané v salátových dresincích, xanthanové gumy pro mlékárenské produkty a nápoje. Gellany se nalézají v polevách, mražených a mlékárenských produktech a agar ve zmrzlinách.

Specifita těchto potravinářských gum spočívá v tom, že po hydrataci vodou tvoří vysoce až velmi vysoce viskózní roztok. Některé z těchto gum, jako jsou guarová guma, alginová guma, arabská guma a karayová guma se také používají v papírenském průmyslu a volí se pro svou vysokou afinitu k celulósovým vláknům (Industrial gums, R.L. Whistler a J.N. BeMiller (Academie Press - 1973)). Jejich schopnost vyvločkovávat jíly a další anorganické materiály, jako jsou vápenaté soli, se využívá i v dalších aplikacích, jako je úprava vody. Vysoká vyskozita těchto potravinářských gum je žádoucí pro všechna uvedená jídla a další použití.

Nicméně, bylo překvapivě zjištěno, že tyto potravinářské gumy se silně adsorbují do bavlněných vláken tkanin a tím přilepují skvrny/nečistoty do tkaniny. K tomuto jevu dochází dokonce i když jsou gumy přítomny v potravinářských prostředcích ve velmi malých množstvích, jako je 0,01 % až 5 %, obvykleji 0,01 % až 0,8 %.

• · • ·

Také bylo překvapivě zjištěno, že schopnost těchto potravinářských gum vyvločkovávat jíly vede k tomu, že tkaniny vypadají zašle a žloutnou. To je velmi důležité, protože celkový účinek detergentů se posuzuje nejen jeho schopností odstraňovat skvrny a nečistoty, ale také schopností bránit opětovnému usazování nečistot nebo produktů rozštěpení nečistot nebo jakékoliv nerozpustné soli na pranou tkaninu. Efekt opětovného usazování vede k tomu, že praná látka je pokryta nevzhledným filmem, který vede ke vzniku viditelných pruhů nebo skvrn, které zůstávají nedotčené až do konce pracího procesu. Tyto zbytky zbylé na tkanině vedou k tomu, že tkanina vypadá zašlá a žloutne.

Jak je z uvedeného vidět, existuje trvalá potřeba pracích detergentních protředků, které poskytují vynikající celkový čistící účinek. Předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout prací detergentní prostředek, který poskytuje vynikající čisticí a bělicí účinky, zejména vynikající odstraňování skvrn/nečistot, odstraňování zašlosti a bělicí účinek.

Tyto požadavky splňuje vytvoření pracích detergentních prostředků obsahujících enzymy, které odbourávají sacharidové gumy.

Překvapivě bylo zjištěno, že prací detergentní prostředek podle předkládaného vynálezu obsahující enzymy, které odbourávají sacharidové gumy, poskytuje vynikající odstraňování skvrn/nečistot, odstraňování zašlosti a bělicí účinek, který je výsledkem hydrolýzy potravinářských sacharidových gum vázajících skvrny/nečistoty z tkanin nebo jílů na bavlněné tkaniny. Dále bylo zjištěno, že účinnost pracích detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu se zvýší přidáním vybraných tenzidů, dalšího enzymu, plnidla a/nebo bělicího systému.

GB2-169-393 popisuje způsob odstraňování celulosových nečistot a dalších zeleninových nečistot ze tkanin v barvírnách a dokončovacích valchovnách tak, že se působí • · · · · · · • · · · · · > ♦ · · 4 4 4 4 » 44····· ·« · enzymatickým prostředkem obsahujícím cellulolytické a pektolytické enzymy, které umožňují snížit koncentraci H₂SO₄během karbonizace tkaniny pod 2 %.

WO96/06532 se týká prostředky schopného zabít nebo zastavit rostoucí mikrobiální buňky pomocí bazických proteinů nebo peptidů biologického původu, např. protaminu nebo protaminsulfátu. Pro některé baktérie nebo houby tyto prostředky dále obsahují oxidoreduktasové nebo buněčné stěny štěpící enzymy, jako je endoglykosidasa typu II, lysozym a/nebo chitinasa.

WO95/35362 popisuje prostředků na nádobí čisticí prostředky, včetně pracích, a zejména prostředků na čištění v domácnostech, obsahující buněčné stěny štěpící enzymy, jako jsou pektinasy a/nebo hemicelulasy a nepovinně celulasy. Tyto prostředky jsou zejména vhodné pro odstraňování skvrn od zeleniny a nečistot a špíny podobné struktury. Tyto enzymy štěpící buněčné stěny odbourávají strukturní složky buněčných stěn rostlin, jako jsou strukturované polysacharidy (celulosy, hemicelulosy, pektiny) a zahrnují cellulolytické, pektin degradující a hemicelulosu degradující enzymy. Existuje velký počet enzymů štěpících buněčné stěny rostlin. Cellulolytické enzymy se dělí do tří skupin: endoglukanasy, exoglukanasy nebo cellobiohydrolasy a β-glukosidasy. Tké je známo velké množství enzymů odbourávajích pektiny: příklady jsou pektinestersa, pektinlyasa, pektátlyasa a endo- nebo exopolygalakturonasy. Kromě těchto enzymů odbourávájích hladké oblasti byly také nalezeny enzymy odbourávající rozvětvené oblasti. Pro odbourávání hemicelulosových struktur, jako je xylanasa, galaktanasa, arabinasa, lichenasa a mananasa, je známo velké množství enzymů.

Nicméně, použití enzymů, které odbourávají sacharidové gumy pro vynikající čisticí účinky na bavlněné tkaniny v pracích detergentních prostředcích, nebylo dosud dříve zjištěno.

Podstata vynálezu

Shrnutí vynálezu

Předkládaný vynález se týká pracích detergentních prostředků obsahujících enzymy, které odbourávají sacharidové gumy, poskytujících vynikající čisticí účinky na bavlněných tkaninách, a to zejména při odstraňování skvrn/nečistot, odtraňování zašlosti a bělicích účincích.

Podrobný popis vynálezu

Nezbytnou složkou Pracích detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu je enzym, který odbourává sacharidové gumy. Tyto enzymy jsou schopné hydrolyzovat neškrobové necelulosové potravinářské polysacharidy, které mají v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních/ viskozitu vyšší než 800 cPs (měřeno ve vodě při teplotě 25 °C, viskozimetr Brookfield Synchro-Lectic při 20 ot./min).

Překvapivě bylo zjištěno, že prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu poskytují vynikající čisticí a bělicí účinky, a to zejména při odstraňování skvrn/nečistot z potravin a čištění skvrn/nečistot způsobených zašlostí.

Bez ohledu na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že enzym, který odbourává sacharidovou gumu, hydrolyzuje potravinářská aditiva na bázi gumy, která jsou přítomna ve skvrnách/nečistotách od potravin vážících skvrny/nečistoty do bavlněných vláken. Bylo zjištěno, že tyto neškrobové necelulosové potravinářské polysacharidy mají velkou afinitu k bavlněným vláknům, a tak váží skvrny/nečistoty do tkaniny. Hydrolýzou těchto neškrobových necelulosových potravinářských polysacharidů se proto uvolní skvrny/nečistoty z bavlěné textilie.

Navíc, bylo překvapivě zjištěno, že prací detergentní prostředek podle předkládaného vynálezu dosahuje znatelného čištění zašlých tkanin a dobré účinnosti při bělení. Bez ohledu na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že se • * ··· ·* ·· • · · · · · 4«·· ··· Φ Φ · Φ ···· « ···· · · · ···· · · · « · «·····«·· • · · · ·· « «·φφ sacharidy, po rozštěpení na složky, při částečném vyčištění skvrn/nečistot od jídla v současnosti používanými detergentními prostředky, opětovně ukládají na tkaninu a reagují s nečistotami ve formě částic, jako jsou jílovité sloučeniny, což vede k zašlosti bavlěných tkanin. Enzymy, které odbourávají sacharidové gumy, podle předkládaného vynálezu hydrolyzují film sacharidů ukládající se na tkaniny, a proto brání vyvločkovávání těchto sloučenin s nečistotami ve formě částic.

Bez ohledu na nějakou konkrétní teorii se také předpokládá, že enzymatické působení enzymů, které odbourávají sacharidové gumy, podle předkládaného vynálezu způsobuje, že skvrny/nečistoty od jídla a skvrny/nečistoty vzniklé zašlostí tkanin, jsou přístupnější pro další detergenthí složky pracího detergentního prostředku, zejména bylo zjištěno, že účinnost pracího detergentního prostředku podle předkládaného vynálezu se zlepší spojením s vybraným tenzidem, dalším enzymem, plnidlem a/nebo bělicím systémem.

Enzymy podle předkládaného vynálezu mají hlavní nebo vedlejší aktivitu na neškrobové necelulosové potravinářské polysacharidy, které mají v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních, viskozitu vyšší než 800 cPs, jako je agar, algin, karawa, tragakanth, guarová guma, xanthan a/nebo jejich směsi.

Příklady průmyslových gum používaných jednotlivě nebo v kombinaci jako potravinářská aditiva jsou:

- gumy ze semen, jako je guarová guma, guma z kdoulových semen, guma z lněných semen a okrové gumy, tamarin, larchový arabinogalaktan;

- rostlinné exudáty, jako je arabská guma, ghatti, karaya, tragakanth;

- extrakty z mořských řas, jako je algin, agar, carrageenan, fukoidan, furcellaran, a

- biosyntetické gumy, jako je xanthan.

• ♦ 9 · « 9 9 9 9

9 9 9 9 9 · * · Μ • · » 4 4 · 9 9 · 4 4 • 4444 4 4 4 44 44 44 44 4 · ·«· 4··· • 44 4 9 4 9 9 9 9 9

Vhodné enzymy pro účely předkládaného vynálezu mají následující hlavní nebo vedlejší enzymatickou aktivitu:

arabinasy, endoarabanasy (E.C. 3.2.1.99), jako je endo-α-Ι,5-arabinosidasa, exoarabanasa (E.C. 3.2.1.55), exo A (a-1,2; a-1,3) arabinofuranosidasa, exo B (a-1,3; a-1,5) arabinofuranosidasa;

(a-1,2; a-1,3) fukosidasa, a-1,6-fukosidasa (E.C.

3.2.1.127);

β-l,2-galaktanasa, β-l,3-galaktanasa (E.C. 3.2.1.90), β-l,4-galaktanasa, β-l,6-galaktanasa, galaktanasa se také nazývá arabino galaktan galaktosidasa (E.C. 3.2.1.89), a a β galaktosidasa (E.C. 3.2.1.22 & 23), (E.C. 3.2.1.102) (E.C.

3.2.1.103) β-manosidasa (3.2.1.25), a-manosidasa (3.2.1.24), β-l,2-manosidasa, a-1,2-manosidasa, (E.C. 3.2.1.113) (E.C.

3.2.1.130), a-1,2-1,6-manosidasa (3.2.1.137), β-l,3-manosidasa (E.C. 3.2.1.77), β-l,4-manosidasa (E.C. 3.2.1.137), β-l,6-manosidasa (E.C. 3.2.1.101), a-1,3-1,6-manosidasa (E.C.

3.2.1.114), β-l, 4-manobiosidasa (E.C. 3.2.1.100);

glukuronosidasa (E.C. 3.2.1.131), glukuronidasa (E.C.

3.2.1.31), exo 1,2 nebo 1,4 glukuronidasa;

- agarasa (E.C. 3.2.1.81), carrageenasa (E.C. 3.2.1.83), a-1,2-xanthanlyasa, póly(α-L-guluronát)lyasa, také zvaná alginasa II (E.C. 4.2.2.11).

Preferované enzymy, které odbourávají sacharidové gumy jsou: manosidasy, β-manosidasa, endo-1,4-B-D-manosidasa, endo-1,2-fi-D-manosidasa a exo-1,3-fi-D-manosidasa;

galaktosidasy, exo-1,β-β-D-galaktosidasa a

1.3- fi-D-galaktosidasa;

glukuronidasy, glukuronosidasa a exo-1,2- nebo

1.4- glukuronidasa ♦ 9 • 9 9 9 9 9

- arabinasy, endo-α-Ι,5-arabinosidasa, exoarabanasa, exo A (a-1,2, a-1,3) arabinofuranosidasa, exo B (a-1,3, a-1,5) arabinofuranosidasa;

xanthanlyasa, póly(α-L-guluronát)lyasa, agarasa a carrageenasa.

Preferované enzymy, které odbourávají sacharidové gumy, určené pro specifické neškrobové necelulosové potravinářské polysacharidy, které mají v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních, viskozitu vyšší než 800 cPs jsou zejména následující: Enzymy hydrolyzující guarovou gumu (guarový prášek, jaguárové guma), *************************** (známé jako potravinářská aditiva E 410, E 412 a 21CFR 184, 1339 a 13423) jsou manosidasa, galaktomanosidasa, s výhodou endo manosidasa a galaktomanosidasa, jako je Gamanasa®, což je galaktomananasa z Aspergillus niger. Preferované enzymy pro odbourávání xanthanových gum jsou manosidasa, glukuronosidasa a glukosidasa. Pro odbourávání Karayovy gumy jsou preferované enzymy galaktosidasa a rhamnogalakturonasa. Pro odbourávání tragakanthové gumy jsou preferované enzymy galakturonasa, galaktosidasa, fukosidasa a arabanasa. Preferované enzymy pro odbourávání gellanových, agarových a carrageenasových gum jsou glukosidasa, rhamnosidasa a glukuronidasa, agarasa a carrageenasa. Preferované enzymy, které odbourávají manopyranosyluronové a gulopyranosyluronové jednotky obsažené v alginátu, jsou manuronasa a guluronasa.

Do předkládaného vynálezu jsou zahrnuty následující tři manany odbourávající enzymy: EC 3.2.1.25 β-manosidasa, EC 3.2.1.78 endo-1,4-fi-manosidasa, dále označovaná jako mananasa a EC 3.2.1.100 1,4-h-manobiosidasa (IUPAC Classification, Enzyme Nomenclature, 1992, ISBN 0-1-227165-3 Academie Press).

Ještě výhodněji obsahují prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu β-l,4-manosidasu (EC 3.2.1.78( označovanou jako mananasa. Pojem mananasa dále nebo

9*9 · · 99 · 9 9 9. · ♦ • 999 · 99 9

9999999 99 9

9 999 9999

999 9 99 9 99 99 galaktomananasa označuje mananasový enzym definovaný v dané problematice jako ten, který je oficiálně nazýván manan endo-1,4-beta-manosidasa a alternativně se pojmenovává jako beta-mananasa a endo-1,4-mananasa a katalyzuje reakce náhodné hydrolýzy 1,4-beta-D-manosidických spojek v mananech, galaktomananech, glukomananech a galaktoglukomananech.

Konkrétně manasasy (EC 3.2.1.78) tvoří skupinu polysacharas, které odbourávají manany a označuje enzymy, které jsou schopné štěpit polyosové řetězce obsahující manosové jednotky, tj. jsou schopné čtěpit glykosidické vazby v mananech, glukomananech a galaktoglukomananech. Manany jsou polysacharidy, které mají základní řetězec složený z β-1,4spojených manos, glukomanany jsou polysacharidy, které mají základní řetězec složený z více či méně· pravidelně se střídajících β-1,4 spojených manos a glukos a galaktomanany a galaktoglukomanany jsou manany a glukomanany s ot-1,6 připojenými galaktosovými rozvětveními. Tyto sloučeninny jsou případně i acetylované.

Odbourávání galaktomananů a galaktoglukomananů se usnadňuje úplným nebo částečným odstraněním galaktosových postranních větví. Dále se odbourávání acetylovaných mananů, glukomananů, galaktomananů a galaktoglukomananů usnadňuje úplnou nebo částečnou deacetylací. Acetylové skupiny se odstraňují alkalicky nebo mananacetylesterasami. Oligomery, které se uvolňují mananasami nebo kombinací mananas a a-galaktosidas a/nebo mananacetylesterasami se dále odbourávají tak, že se β-manosidasou a/nebo β-glukosidasou uvolní maltosa.

Mananasy byly zjištěny v několika organismech rodu Bacillus. Například, v práci Talbot a kol., Appl. Environ. Microbiol., sv. 56, č. 11, str. 3505 až 3510 (1990) se popisuje β-mananasa získaná z Bacillus stearothermopilus ve formě dimeru o molekulové hmotnosti 162 kDa a pH optimu 5,5 až 7,5. Mendoza a kol., World J. Microbiol. Biotech., sv. 10, č. 5, str. 551 až • · · · · · · · ♦ · · · · · · 9 9

9999 9 9 9 9999 9 φ · ♦ · ·· ··· · · « · ··· · 99 9 99 99

555 (1994), popisuje β-mananasu získanou z Bacillus subtilis o molekulové hmotnosti 38 kDa s optimem aktivity při pH 5,5 a

55C a pí 4,8. JP-0304706 popisuje β-mananasu získanou z

Bacillus sp. o molekulové hmotnosti 373 kDa, měřené gelovou filtrací, pH optimem 8 až 10 a pí 5,3 až 5,4. JP-63056289 popisuje získávání alkalické tepelně stabilní β-mananasy, která hydrolyzuje β-l,4-D-manopyranosidové vazby například mananů a produkují mano-oligosacharidy. JP-63036774 popisuje mikroorganismus Bacillus FERM P-8856, který produkuje β-mananasu a β-manosidasu při alkalickém pH. JP-08051975 popisuje alkalické β-mananasy z alkalofilního Bacillus sp. AM-001. Čištěná mananasa z Bacillus amyloliquefaciens použitelná při bělení papíru a způsob její přípravy je popsán ve WO 97/11164. WO 91/18974 popisuje hemicelulasy jako je glukanasa, xylanasa nebo mananasa aktivní při extrémním pH a teplotě. WO 94/25576 popisuje enzym z Aspergillus aculeatus. CBS 101.43 má mananasovou aktivitu, která je využitelná pro odbourávání a modifikaci materiálu ze stěn rostlinných buněk nebo buněk řas. WO 93/24622 popisuje mananasy izolované z Trichoderma reseei použitelné pro bělení lignocelulosových drtí. Hemicelulasy schopné odbourávání manan obsahující hemicelulosy jsou popsány ve WO 91/18974 a čištěné mananasy z Bacillus amyloliquefaciens jsou popsány ve WO 97/11164.

Zejména budou tyto mananasové enzymy alkalické mananasy definované dále, nejvýhodněji mananasy pocházející z bakteriálních zdrojů. Prací prostředek podle předkládaného vynálezu obsahuje zejména alkalickou mananasu vybranou z mananas z kmenu Bacillus agaradherens a/nebo Bacillus subtilis kmen 168, gen yght.

Pojem alkalický mananasový enzym zahnruje enzymy, které mají enzymatickou aktivitu přinejmenším 10 %, s výhodou přinejmenším 25 %, ještě výhodněji přinejmenším 40 %, maximální aktivity při daném pH v rozsahu 7 až 12, s výhodou

7,5 až 10,5.

· 9 9 9 9 9 « 9 · 9 9 9

9 9 · 9 9 9

999999* 99 9

9 9·9 9999

999 9 99 9 99 99

Nej výhodněji bude prací detergentní prostředek podle předkládaného vynálezu obsahovat alkalickou mananasu z Bacillus agaradherens. Tato mananasa je:

i) polypeptid produkovaný Bacillus agaradherens, NCIMB 40482 nebo ii) polypeptid obsahující aminokyselinovou sekvenci, která je uvedena v pozicích 32 až 343 v sekvenci identifikační číslo 2 nebo iii) analog polypeptidu definovaného v bodech i) nebo ii), který je přinejmenším ze 70 % homologický s tímto polypeptidem nebo je odvozen z tohoto polypeptidu náhradou, vynecháním nebo přidáním jedné nebo několika aminokyselin nebo je imunologicky reaktivní s polyklonální protilátkou vznikající proti tomuto peptidu v jeho čisté podobě.

Předkládaný vynález také zahrnuje izolovaný polypeptid, který má mananasovou aktivitu vybraný ze skupiny sestávající z (a) polynukleotidových molekul kódujících polypeptid, který má mananasovou aktivitu a obsahuje sekvenci oligonukleotidů, která je uvedena u sekvence identifikačního čísla 1 od nukleotidu 97 k nukleotidu 1029;

(b) homology (a) ;

(c) polynukleotidové molekuly, které kódují polypeptid mající mananasovou aktivitu, které jsou přinejmenším ze 70 % identické s aminokyselinovou sekvencí identifikačního čísla 2, ato od aminokyseliny 32 k aminokyselině 343;

(d) molekuly komplementární k (a), (b) nebo (c); a (e) degenerované nukelotidové sekvence (a) , (b), (c) nebo (d) .

Plasmid pSJ1678 obsahující polynukleotidovou molekulu (DNA sekvenci) kódující mananasu podle předkládaného vynálezu byl převeden do kmenu Escherichia coli, který byl vynálezci umístěn podle Budapešťské dohody o Mezinárodním rozpoznávání mikroorganismů umístěných pro účely patentové procedury v Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, • 9 9 · · · · · • · ···· « 9 · 9

9999 9 9 · ···« 9 · · * · • 9 9 9 9 9 9 9

99 9 99 99

Mascherorder Weg lb, D-38124 Brausnchweig, Spolková republika Německo, 18. května 1998 pod číslem DSM 12180.

Druhý nejpreferovanější enzym je mananasa z Bacillus subtilisis kmen 168 což je mananasa, která :

i) je kódována kódovací částí DNA sekvence identifikační číslo 5 nebo analogickou sekvencí a/nebo ii) je polypeptid obsahující aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako sekvence identifikační číslo 6 nebo iii) analogiyký polypeptid definovaný v bodě ii) , který je přinejmenším ze 70 % homologický s tímto polypeptidem nebo je odvozen z tohoto polypeptidu náhradou, vynecháním nebo přidáním jedné nebo několika aminokyselin nebo je imunologicky reaktivní s polyklonální protilátkou vznikající proti tomuto peptidu v jeho čisté podobě.

Předkládaný vynález také zahrnuje izolovaný polypeptid, který má mananasovou aktivitu vybraný ze skupiny sestávající z (a) polynukleotidových molekul kódujících polypeptid, který má mananasovou aktivitu a obsahuje sekvenci nukleotidů uvedenou jako sekvence identifikační číslo 5;

(b) homology (a);

(c) polynukleotidové molekuly, které kódují polypeptid mající mananasovou aktivitu, které jsou přinejmenším ze 70 % identické s aminokyselinovou sekvencí identifikačního čísla 6;

(d) molekuly komplementární k (a), (b) nebo (c); a (e) degenerované nukelotidové sekvence (a), (b) , (c) nebo (d) .

DEFINICE

Před podrobnou diskusí předkládaného vynálezu budou nejprve definovány následující pojmy:

Pojem ortholog (nebo homologické druhy) označuje polypeptid nebo protein získaný z jednoho druhu, který je homologický k analogickému peptidu nebo proteinu z jiného druhu.

* * *· * • ♦ · * · · · • * · · · · · · • ······· · · · • · · · · · ·

Pojem paralog označuje polypeptid nebo protein získaný z daného druhu, který je homologický k odlišnému peptidu nebo proteinu z téhož druhu.

Pojem expresní vektor označuje molekulu DNA, lineární nebo kruhovou, která obsahuje segment kódující polypeptid, který nás zajímá, funkčně spojený s dalšími segmenty, které zajišťují jeho transkripci. Takové další segmenty zahrnují promotérovou a terminační sekvenci a nepovinně zahrnují jeden nebo více počátků replikace, jeden nebo více vybratelných značek, zesilovač, polyadenylační signál a podobně. Expresní vektory jsou obecně odvozeny z plasmidové nebo virové DNA nebo obsahují prvky obou. Expresní vektor podle předkládaného vynálezu je jakýkoliv expresní vektor, který se běžně podrobuje rekombinantním DNA postupům a volba vektoru bude často záviset na hostitelské buňce, do které se vektor vkládá. Vektor tedy může být autonomně se replikující vektor, tj . vektor, který existuje jako extrachromosomální entita, jehož replikace je nezávislá na replikaci chromosomu, např. plasmid. Alternativně je vektro takový, který se po vnesení do hostitelské buňky integruje do genomu hostitelské buňky a replikuje se spolu s chromosomy, do kterých byl integrován.

Pojem rekombinantně exprimovaný, tak jak se používá v předkládaném vynálezu v souvislosti s expresí polypeptidů nebo proteinu, je definován stejně jako je to v dané problematice běžné. Rekombinantní exprese proteinu se obecně provádí tak, že se použije expresní vektor, jehož definice již byla uvedena.

Pojem izolovaný, pokud se týká molekuly polynukleotidu, označuje, že polynukleotid byl vyjmut z jeho přirozeného genetického prostředí, a proto neobsahuje jiné nepatřičné nebo nechtěné kódující sekvence a je ve formě vhodné pro použití do výrobních systémů na geneticky navržené proteiny. Takové izolované molekuly jsou ty, které jsou získány z jejich přirozeného prostředí a zahrnují cDNA a genomické klony.

9

9« 9 pojmem klonovaný protein/polypeptid, protein nalézá za

Izolované molekuly DNA podle předkládaného vynálezu neobsahuji jiné geny, se kterými jsou běžně spojeny, ale mohou obsahovat přirozeně se vyskytující 5' a 3' nepžepisované oblasti, jako jsou promotéry a terminátory. Identifikace připojených oblastí je odborníkům zřejmá (viz, například, Dynan a Tijan, Nátuře 316: 774 až 778, 1985).

Pojem izolovaný polynukleotid lze alternativně nahradit polynukleotid. Pokud je použit na pak pojem izolovaný ukazuje, že se podmínek jiných než jsou v přirozeném prostředí. V preferované formě izolovaný protein neobsahuje jiné proteiny, zejména jiné homologní proteiny (tj. homologní nečistoty (viz dále)). Preferováno je poskytnutí proteinu ve vyšší než 40% čistotě, ještě výhodněji ve vyšší než 60% čistotě. Ještě výhodněji se preferuje poskytnutí proteinu ve vysoce čisté formě, tj. vyšší než 80% čistotě, ještě výhodněji ve vyšší než 95 % čistotě a nej výhodněji ve vyšší než 99% čistotě, stanovené podle SDS-PAGE.

Pojem izolovaný protein/polypeptid lze alternativně nahradit pojmem čištěný protein/polypeptid.

Pojem homologní nečistoty označuje jakoukoliv nečistotu (např. jiný polypeptid než je polypeptid podle předkládaného vynálezu), která pochází z homologní buňky, . ze které byl původně polypeptid podle předkládaného vynálezu získán.

Pojem získaný z, tak jak se používá v předkládaném vynálezu v souvislosti s konkrétním mikrobiálním zdrojem, označuje, že polynukleotid a/nebo polypeptid vyráběný z konkrétního zdroje nebo z buňky, do které byl vložen zdrojový gen.

Pojem funkčně spojený, ve vztahu k částem DNA, označuje, že jsou části uspořádány tak, že je jejich funkce ve shodě pro jejich zamýšlené účely, např. transkripce se iniciuje v promotéru a pokračuje přes kódující část až do terminátoru.

4 • «·· 44 ·4

444 4444

4444 4444

4444 4 4 4 4444 4 4 4 4 4

44 4 4444

44 · 44 44

Pojem polynukleotid označuje jedno- nebo dvouvláknový polymer deoxyribonukleotidových nebo ribonukleotidových bází čtený od 5' ke 3' konci. Polynukleotidy zahrnují RNA a DNA a lze je izolovat z přírodních zdrojů, syntetizovat in vitro nebo připravit kombinací přírodních nebo syntetických molekul.

Pojem komplementy polynukleotidových molekul označuje polynukleotidové molekuly, které mají komplementární sekvenci bází a obrácenou orientaci ve srovnání s referenční sekvencí. Například, sekvence 5' ATGCACGGG 3’ je komplementární k sekvenci 5' CCCGTGCAT 3'.

Pojem degenerovaná nukleotidová sekvence označuje sekvenci nukleotidů, která zahrnuje jeden nebo více degenerovaných kodonů (ve srovnání s referenční polynukleotidovou molekulou, která kóduje polypeptid). Degenerované kodohy obsahují jiný triplet nukleotidů, ae kódují stejný aminokyselinový zbytek (tj. triplety GAU a GAC oba kódují Asp).

Pojem promotér označuje část genu obsahujícího DNA sekvence, které umožňují vazbu RNA polymerasy a iniciaci transkripce. Promotérové sekvence se obecně, ale ne vždy, nalézají v 5' nekódujících oblastech genů.

Pojem vylučovací signální sekvence označuje DNA sekvenci, která kóduje polypeptid (vylučovací peptid), který, jako složka většího polypeptidu, provází větší polypeptid vylučovací cestou buňky, ve které je syntetizován. Větší peptid se obecně štěpí tak, aby se vylučovací peptid odstranil během průchodu vylučovací cestou.

Jak využívat sekvence podle předkládaného vynálezu, abychom získali další příbuzné sekvence.

Popsané informace o sekvencích uvedené v předkládaném vynálezu, které se týkají polynukleotidové sekvence kódující mananasu podle předkládaného vynálezu, lze použít jako nástroj pro určení dalších homologických mananas. Například lze polymerasovou řetězovou reakci (PCR) použít pro amplifikaci i w*.— • 9

9999

9 «» * · • · · 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9999 9 9 99 9

9 9 9 9 9 9 9

99 9 9 9 9 9 seY.vencí kódujících další homologické mananasy z různých bakteriálních zdrojů, zejména jiných kmenů Bacillus.

Postup pro test aktivity

Polypeptid podle předkládaného vynálezu, který má mananasovou aktivitu lze testovat na mananasovou aktivitu podle standardních testovacích postupů známých v dané problematice, jako je nanesení testovaného roztoku do děr o průměru 4 mm vyříznutých v agarové desce obsahující 0,2 % AZCL galaktomanan (karob), tj. substrát pro test endo-1,4-beta-D-mananasy dostupné jako kat. č. I-AZGMA od firmy Megazyme v ceně 110 USD za 3 gramy.

(Internetová adresa firmy Megazyme je: http://www.megazyme.com/Purchase/index.html).

Polynukleotidy

Izolovaný polynukleotid podle předkládaného vynálezu bude hybridizovat se srovnatelně velikými oblastmi sekvence id. č. 1 nebo sekvence, která je s touto sekvencí komplementární, přinejmenším za středně těžkých podmínek.

Konkrétně budou polynukleotidy podle předkládaného vynálezu hybridizovat na denaturovanou dvouvláknovou DNA sondu, která buď obsahuje celou sekvenci uvedenou v pozicích 97 až 1029 sekvence id. č. 1, nebo jakoukoliv sondu, která obsahuje podsekvenci sekvence id. č. 1 o délce přinejmenším 100 párů bází, přinejmenším za středně těžkých podmínek, ale s výhodou za podmínek, které jsou těžké, které' jsou podrobněji popsány dále. Vhodné experimentální podmínky pro stanovení hybridizace za středně těžkých nebo těžkých podmínek mezi nukleotidovou sondou a homologickou DNA nebo RNA sekvencí zahrnují namočení filtru obsahujícího DNA fragmenty nebo RNA k hybridizaci v 5 x SSC (chlorid sodný / citrát sodný, Sambrook a kol., 1989) na dobu 10 minut a předhybridizaci filtru v roztoku 5 x SSC, x Denhardtově roztoku (Sambrook a kol., 1989), 0,5 % SDS a

100 pg/ml denaturované ultrazvukované DNA ze spermatu lososa • · ···· «· · ·· *· • · · · · · ♦ • · · · * · · · • · · *··* * · « · · • « · · · · · « * ··· · ·* · ♦· 0 (Sambrook a kol., 1989) následně pak hybridizaci v témže roztoku obsahujícím koncentraci 10 ng/ml náhodné primerové (Feinberg, A.P. a Vogelstein, B. (1993) Anal. Biochem. 132: 6 až 13), 32P-dCTP značené (specifická aktivita vyšší než 1 x 109 cpm/pg) sondy po dobu 12 hodin při teplotě 45 °C. Filtr pak byl dvakrát promýván po dobu 30 minut ve 2 x SSC, 0,5 % SDS při přinejmenším teplotě 60 °C (středně těžké podmínky), výhodněji přinejmenším při teplotě 65 °C (středně těžké/těžké podmínky), ještě výhodněji přinejmenším při teplotě 70 °C (těžké podmínky) a nejvýhodněji přinejmenším při teplotě 75 °C (velmi těžké podmínky).

Molekuly, ke kterým se oligonukleotidová sonda za těchto podmínek hybridizuje, se detekují pomocí rentgenového filmu.

Jak již bylo uvedeno, izolované polynukleotidy podle předkládaného vynálezu zahrnují DNA a RNA. Způsoby izolace DNA a RNA jsou v dané problematice dobře známé. DNA a RNA kódující geny, o které se zajímáme, lze klonovat v Genové bance nebo DNA knihovnách pomocí způsobů, které jsou v dané problematice známé.

Polynukleotidy kódující polypeptidy, které mají mananasovou aktivitu, podle předkládaného vynálezu se pak identifikují a izolují, například, hybridizaci nebo PCR.

Předkládaný vynález dále poskytuje polypeptidy, které jsou protějškem a polynukleotidy z jiných kmenů bakterií (orthologu nebo paralogů). Zejména zajímavé jsou mananasové polypeptidy z grampozitivních alkalofilních kmenů, zejména druhu Bacillus.

Látky homologické s polypeptidy, které mají mananasovou aktivitu, podle předkládaného vynálezu lze klonovoat díky informacím a prostředkům poskytovaných předkládaným vynálezem v kombinaci s konvenčními klonovacími technikami. Například, DNA sekvenci podle předkládaného vynálezu lze klonovat pomocí chromosomální DNA získané z typu buněk, které exprimují protein. Vhodné zdroje DNA lze zjistit testem Northern • · ·· · ·· ·· • · · ··· · · · · ··· ···· · · · · • ···· · · · ···· · · · · · • · · · · ···· ··· · ·· · ·· ·· blotováním se sondami navrženými ze sekvencí popsaných v předkládaném vynálezu. Z chromozomální DNA pozitivní buněčné linie je pak připravena knihovna. DNA sekvenci podle předkládaného vynálezu kódující polypeptid, který má mananasovou aktivitu, lze pak izolovat různými způsoby, jako je testování sondami navrženými ze sekvencí popsaných v předkládané přihlášce a patentových nárocích nebo jednou či více sadami degenerovaných sond založených na popsaných sekvencích. DNA sekvenci podle předkládaného vynálezu lze také klonovat pomocí polymerasové řetězové reakce neboli PCR (Mullis, U.S. patent 4,683,202) za použití primerů navržených ze sekvencí popsaných v předkládaném vynálezu. Kromě dalších metod lze DNA knihovnu použít pro přeměnu nebo naočkování hostujících buněk a expresi DNA, o kterou se zajímáme lze detekovat protilátkou (monoklonální nebo polyklonální) vznikající proti mananase klonované z B. agaradherens, NCIMB 40482, exprimované a čištěné postupem popsaným v oddílu Materiály a postupy a v příkladu 1, nebo testem aktivity, který se týká polypeptidu, který má mananasovou aktivitu.

Mananasu kódující část DNA sekvence klonované do plasmidu pSJ1678 přítomného v Escherichia coli DSM 12180 a/nebo analogickou DNA sekvenci podle předkládaného vynálezu lze klonovat z kmene bakterií Bacillus agaradherens, s výhodou z kmene NCIMB 40482, produkujícího enzym mající degradační aktivitu vůči mananu nebo z jiného nebo z příbuzného organismu jak je v předkládaném vynálezu popsáno.

Alternativně lze analogickou sekvenci zkonstruovat na základě DNA sekvence získatelné z plasmidu přítomného v Escherichia coli DSM 12180 (o kterém se předpokládá, že je shodný s připojenou sekvencí id. č. 1), např. který je její podsekvencí a/nebo zavedením nukleotidových substitucí, ze kterých nevznikne jiná aminokyselinová sekvence mananasy kódované DNA sekvencí, ale která odpovídá použití kodonu hostitelského organismu určeného pro produkci enzymu nebo zavedením nukleotidových substitucí, ze kterých vznikne jiná aminokyselinová sekvence (tj. variant manan degradujícího enzymu podle předkládaného vynálezu).

Polypeptidy

Sekvence aminokyselin č. 32 až 343 v sekvenci id. č. 2 je maturovaná mananasová sekvence.

Předkládaný vynález také poskytuje mananasové polypeptidy, které jsou v podstatě homologní k polypeptidu sekvence id. č. 2 a látky, které jsou k němu homologní (paralogy nebo orthology). Pojem v podstatě homologní se v předkládaném vynálezu používá pro označení polypeptidů, které mají 70%, s výhodou přinejmenším 80%, ještě výhodněji přinejmenším 85% a dokonce ještě výhodněji přinejmenším 90% sekvenční identitu se sekvencí uvedenou u aminokyselin č. 32 až 343 sekvence id. č. 2 nebo jejich orthologů nebo paralogů. Takové polypeptidy budou s výhodou přinejmenším z 95 % identické a nej výhodněji z 98 % nebo více identické se sekvencí uvedenou u aminokyselin č. 32 až 343 sekvence id. č. 2 nebo jejich orthologů nebo paralogů. Procento sekvenční stanovuje běžnými způsoby, prostřednictvím programů známých v dané problematice, jako je GAP poskytovaný v balíku programů GCG (Program Manual for the Wisconsin Package, verze 8, srpen 1994, Genetics Computer Group, 575, Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711), ketrý je popsán v práci Needleman, S.B., a Wunsch, C.D. (1970) ,Journal of

Molecular Biology, 48, 443 až 453, která je zde uvedena jako reference. GAP se používá pro porovnání polypeptidové sekvence s následujícími nastaveními: GAP creation penalty má hodnotu 3,0 a GAP extension penalty má hodnotu 0,1.

Sekvenční identita polynukleotidové molekuly se stanovuje podobnými postupy s použitím GAP s následujícími nastaveními pro porovnání DNA sekvence: GAP creation penalty má hodnotu 5,0 a GAP extension penalty má hodnotu 0,3.

identity se počítačových • · · · · · · ······· ·· · • · · · · · • · · « · · ·

Příprava enzymů podle předkládaného vynálezu s výhodou vychází z mikroorganismů, s výhodou z bakterií, řas nebo hub, zejména z bakterií, jako jsou bakterie náležející do ksupiny Bacillus, s výhodou k alkalofilnímu kmenu Bacillus, který lze vybrat ze skupiny sestávající z Bacillus agadherens a vysoce příbuzných bakterií Bacillus, které jsou při porovnání 16S rDNA sekvencí s výhodou přinejmenším z 95 % a ještě výhodněji z 98 % homologní s Bacillus agadherens.

V zásadě homologní proteiny a polypeptidy jsou charakterizovány tím, že je v nich jedna nebo více aminokyselin vyměněných, vynechaných nebo přidaných. Tyto změny jsou s výhodou malé, tj. jedná se o konzervativní výměny aminokyselin (viz Tabulka 2) a další výměny, které významně neovlivní tvar nebo aktivitu proteinu nebo polypeptidu, malá vynechání, typicky od jedné do 30 aminokyselin a malá prodloužení na aminovém nebo karboxylovém konci, jako je methioninový zbytek na aminovém konci, malý spojovací peptid do 20 až 25 zbytků nebo malá prodloužení, která usnadňují čištění (afinitní přívěsek), jako je polyhistidinová část proteinu A (Nilsson a kol., EMBO J., 4: 1075, 1985; Nilsson a kol., Methods Enzymol., 198: 3, 1991; viz obecně v práci Ford a kol., Protein Expression and Purification, 2: 95-107, 1991, které jsou zde uvedeny jako reference). DNA kódující afinitní přívěsky jsou dostupné od komerčních dodavatelů (např. Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ;. New England Biolabs, Beverly, MA).

Nicméně, dokonce i když jsou popsané změny s výhodou malé, jedná se někdy i o změny větší povahy, jako je spojení větších polypeptidů do 300 aminokyselin a více, a to jak na aminovém konci, tak na karboxylovém konci u mananasových polypeptidů podle předkládaného vynálezu.

• · • · · · · • · · ·

Tabulka 1

Konzervativní výměny aminokyselin

Bazické: arginin, lysin, histidin

Kyselé: kyselina glutamová, kyselina asparagová

Polární: glutamin, asparagin

Hydrofobní: leucin, isoleucin, valin

Aromatické: fenylalanin, tryptofan, tyrosin

Malé: glycin, alanin, serin, threonin, methionin

Kromě 20 standardních aminokyselin lze aminokyselinové zbytky polypeptidu podle předkládaného vynálezu nahradit nestandardními aminokyselinami (jako je 4-hydroxyprolin, 6-N-methyllysin, 2-aminoisobutanová kyselina, isovalin a α-methylserin). Omezené množství nekonzervativních aminokyselin, aminokyselin, které nejsou kódovány genetickým kódem a nepřirozených aminokyselin lze použít jako náhradu aminokyselinových zbytků. Nepřirozené aminokyseliny byly upravovány po syntéze proteinu a/nebo mají ve svém postranním řetězci chemickou strukturu, která je odlišná od chemické struktury, kterou mají standardní aminokyseliny. Nepřirozené aminokyseliny lze syntetizovat chemicky, nebo jsou, s výhodou, komerčně dostupné a zahrnují kyselinu pipekolinovou, kyselinu thiazolidinkarboxylovou, dehydroprolin, 3- a 4-methylprolin a 3,3-dimethylprolin.

Podstatné aminokyseliny v mananasových polypeptidech podle předkládaného vynálezu se zjišťují postupy, které jsou v dané problematice známé, jako je místně směrovaná mutageneze nebo alaninová skenovací mutageneze (Cunningham a Wells, Science 244: 1081-1085, 1989). Při alaninové skenovací mutagenezi se mutace jediným alaninem provede na každém místě v molekule a u vzniklých mutovaných molekul se zjišťuje jejich biologická aktivita (tj. mananasová aktivita), aby se zjistily aminokyselinové zbytky, které jsou nezbytné pro aktivitu molekuly. Viz také Hilton a kol., J. Biol. Chem., 271:

• φ

φ· φ φφ φ * φ · φφφφ φ φ φφφφφφφ φφ φ

4699-4708, 1996. Aktivní místo enzymu nebo i jiné biologické interakce lze také určit fyzikální analýzou struktury, která se zjišťuje takovými technikami jako je nukleární magnetická rezonance, krystalografie, elektronová difrakce nebo fotoafinitní značení ve spojení s mutací aminokyselin z domnělého kontantního místa. Viz, například de Vos a kol., Science, 255: 306-312, 1992, Smith a kol., J, Mol. Biol., 224: 899-904, 1992, Wlodaver a kol., FEBS Lett., 309: 59-64, 1992. Skutečnost, které aminokyseliny jsou podstatné, lze také odvodit z analýzy homologie s polypeptidy, které jsou příbuzné s polypeptidy podle předkládaného vynálezu.

Několikanásobnou výměnu aminokyselin lze provést a otestovat známými způsoby mutageneze a/nebo rekombinace a následně odpovídající testovací procedurou, jako jsou ty, které jsou posány v Reidhaar-Olson a Sauer, Science,. 241: 53-57, 1988, Bowie a Sauer, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 86: 2152-2156, 1989, WO 95/17413 nebo WO 95/22625. Krátce řečeno, tito autoři popisují postupy pro simultánní změny na dvou a více místech v polypeptidu nebo rekombinaci různých mutací (WO 95/17413, WO 95/22625) a následný výběr funkčních polypeptidů, sekvenování mutagenovaných peptidů, aby se stanovilo množství možných substitucí v každém místě. Lze využít i další způsoby, které zahrnují fágem zobrazovanou (např. Lowman a kol., Biochem, 30: 10832-10837, 1991, Ladner a kol., US patent č. 5,223,409, Huse, WIPO publikace WO 92/06204) a mítně směrovanou mutagenezi (Derbyshire a kol., Gene 46: 145, 1986, Ner a kol., DNA 7: 127, 1988).

Popsané způsoby mutageneze lze spojit s vysoce výkonnými automatizovanými metodami screeningu, aby se zjistila aktivita klonovaných mutagenovaných polypeptidů v hostitelských buňkách. Mutagenované molekuly DNA, které kódují aktivní polypeptidy, lze zpětně získat z hostitelských buněk a pomocí moderních zařízení rychle sekvenovat. Tyto postupy umožňují rychlé stanovení důležitosti jednotlivých aminokyselinových • 9

9999

• 9 9

9999 9 9

9 9 9

9 · zbytků v polypeptidech, které nás zajímají, a lze je použít na polypeptidy neznámé struktury.

Pomocí popsaných metod může odborník identifikovat a/nebo připravit různé polypeptidy, které jsou v zásadě homologní se zbytky 32 až 343 v sekvenci id. č. 2 a udržují si mananasovou aktivitu proteinu přirozeného typu.

Výroba proteinu

Proteiny a polypeptidy podle předkládaného vynálezu, včetně polypeptidů plné délky, jejich fragmentů a proteinů vzniklých spojením několika, lze vyrábět v geneticky upravených hostitelských buňkách pomocí běžných postupů. Vhodné hostitelské buňky jsou buňky takového typu, které mohou být transformovány nebo transfekovány exogenní DNA a růst v kultuře, a zahrnují baktérie, buňky hub a vyšší eukaryotní buňky rostoucí v kultuře. Preferovány jsou bakteriální buňky, zejména buňky rostoucí v kultuře, které jsou Gram-pozitivní. Zejména preferovány jsou Gram-pozitivní buňky z rodu Bacillus, a to buňky ze skupiny Bacillus subtilis, Bacillus lentus, Bacillus brevis, Bacillus stearothermophilus, Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Bacillus lautus, Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis a Bacillus agaradherens a zejména Bacillus agaradherens.

Techniky manipulace s klonovanými molekulami DNA a vkládání exogenní DNA do různých hostitelských buněk je popsáno v knihách Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989, Ausubel a kol. (editoři), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, lne., NY, 1987, a Bacillus subtilis and other Gram-positive Bacteria, Sonensheim a kol., 1993, American Society for Microbiology, Washington D.C., které jsou zde uvedeny jako reference.

Obecně se DNA sekvence kódující mananasu podle předkládaného vynálezu funkčně připojují k dalším genetickým prvkům, které jsou nutné pro jejich expresi, a obecně zahrnují v expresním vektoru promotér transkripce a terminátor. Vektor bude také obecně obsahovat jednu nebo více volitelných značek a jeden nebo více počátků replikace, ačkoliv odborník v dané problematice ví, že v některých systémech jsou volitelné značky na oddělených vektorech a replikace exogenní DNA se provádí integrací do genomu hostitelské buňky. Volba promotérů, terminátorů, volitelných markérů, vektorů a dalších prvků je rutinní prací v rámci znalostí odborníka v dané problematice. Mnoho takových prvků je popsáno v literatuře a jsou dostupné od komerčních dodavatelů.

Aby byl polypeptid nasměrován do vylučovací cesty hostitelské buňky, je v expresním vektoru umístěna vylučovací signální sekvence (také známá jako vedoucí sekvence, preprosekvence nebo presekvence). Vylučovací signální sekvence může patřit příslušnému polypeptidu nebo může být odvozena od jiného vylučovaného proteinu nebo může být syntetizována de novo. V dané problematice je známo mnoho vhodných vylučovacích sekvencí a jako referenci je možno uvést Bacillus subtilis and other Gram-positive bacteria, Sonensheim a kol., 1993, american Society for Microbiology, Washington D.C. a Cutting, S.M. (editor) Molecular biological methods for bacillus, John Wiley and Sons, 1990, kde jsou další popisy vhodných vylučovacích signálních sekvencí, zejména pro hostitelskou buňku Bacillus. Vylučovací signální sekvence je připojena k DNA sekvenci ve správném čtecím rámci. Vylučovací signální sekvence jsou obecně umístěny v pozici 5' DNA sekvence kódující polypeptid, který nás zajímá, ačkoliv některé signální sekvence mohou být umístěny kdekoliv v DNA sekvenci, která nás zajímá (viz, Welch a kol., US patent č. 5,037,746, Holland a kol., US patent č. 5,143,830).

Transformované nebo tranfekované hostitelské buňky se pěstují v kultuře podle běžných postupů v kulturním médiu obsahujícím živiny a další složky vyžadované pro růst « » • · · · » · · « · * • · · · · · · · · · f • ···· · · · ···· · · · · • · ··· · · · · • · · · ·· · · · ·· vybraných hostitelských buněk. Různá vhodná média, včetně definovaných médií a komplexních médií, jsou v dané problematice známa a obecně zahrnuji zdroj uhlíku, zdroj dusíku, esenciální aminokyseliny, vitamíny a minerály. Média také případně obsahují takové složky, jako jsou růstové faktory nebo sérum, podle potřeby. Růstové médium bude obecně vybráno pro buňky obsahující exogenně přidanou DNA pomocí, například, vyberu léky nebo nedostatkem esenciálních živin, které jsou doplněny volitelnou značkou nesenou na expresním vektoru nebo kotransfekovány do hostitelské buňky.

Izolace proteinu

Když se exprimovaný rekombinantní polypeptid vylučuje, lze tento polypeptid čistit mimo růstové médium. S výhodou se z média před čištěním polypeptidů odstraní hostitelské buňky (např. odstředěním).

Když se exprimovaný rekombinantní polypeptid nevylučuje z hostitelské buňky, pak se tato buňka s výhodou rozštěpí a polypeptid se uvolní do vodného extraktu, který je prvním stupněm těchto technik čištění. S výhodou se z média před čištěním polypeptidů odstraní hostitelské buňky (např. odstředěním).

Rozštěpení buněk se provádí běžnými postupy, jako je působení lysozymu nebo působení vysokého tlaku. Pro další popis takových technik rozštěpování buněk viz knihu Robert K. Scobes, Protein Purification, 2. vydání, Springer-Verlag).

Ať se exprimované rekombinantní polypeptidy (nebo chimérní polypeptidy) vylučují nebo ne, lze je čistit pomocí frakcionace a/nebo běžných čisticích postupů a médií.

Pro frakcionaci vzorků lze využít srážení síranem amonným a kyselou nebo chaotropní extrakci. Příklady čisticích kroků zahrnují hydroxyapatit, velikostní exkluzi, FPLC a HPLC na reversní fázi. Dále vhodná iontově výměnná média zahrnující derivatizované dextrany, agarosu, celulosu, polyakrylamid, speciální silikagely a podobně. Preferovány jsou PEI, DEAE,

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 ·· 9

9999999 99 · • 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 99 99

QAE a Q deriváty s tím, že nejpreferovanější je DEAE sefarosa pro vysoký průtok (Pharmacia, Piscataway, NJ). Příklady chromatografických médií zahrnují média derivatizovaná fenylem, butylem nebo oktylem, jako je fenyl sefarosa FF (Pharmacia), Toypearl butyl 650 (Toso Haas, Montgomeryville, PA), oktyl sefarosa (Pharmacia) a podobně, nebo polyakrylové pryskyřice, jako je Amberchrom CG 71 (Toso Haas) a podobně. Vhodné pevné nosiče zahrnují skleněné kuličky, pryskyřice na bázi silikagelu, celulosové pryskyřice, agarosové kuličky, zesíťované agarosové kuličky, polystyrénové kuličky, zesíťované polyakrylamidové pryskyřice a podobně, které jsou za podmínek, při kterých se používají, nerozpustné. Tyto pevné nosiče lze upravit reaktivními skupinami, které umožňují připojení proteinů aminoskupinami, karboxylovými skupinami, thiolovými skupinami, hydroxylovými skupinami a/nebo cukernými skupinami. Příklady z chemie provádějící taková připojení zahrnují kyanogenbromidovou aktivaci, N-hydroxysukcinimidovou aktivaci, epoxidovou aktivaci, thiolovou aktivaci, hydrazidovou aktivaci, a spojování karboxylových a aminových derivátů karbodiimidovým způsobem. Tyto a další pevné nosiče jsou dobře známé, v dané problematice široce využívané a jsou dostupné od komerčních dodavatelů.

Výběr konkrétního způsobu se provádí na základě rutinního návrhu a z části je určen vlastnostmi vybraného nosiče. Viz, například, knihu Affinity Chromatography: Principles & Methods, Pharmacia LKB Biotechnology, Uppsala, Sweden, 1988.

Polypeptidy podle předkládaného vynálezu nebo jejich fragmenty lze také připravit chemickou syntézou. Polypeptidy podle předkládaného vynálezu jsou monomery nebo multimery, glykosylované nebo neglykosylované, pegylované nebo nepegylované a zahrnují nebo nezahrnují výchozí methioninový aminokyselinový zbytek.

Na základě informace o sekvenci popsaných v předkládaném vynálezu lze klonovat DNA sekvenci plné délky kódující

« · · • φ φ φ φφφφ φ • ····· · · mananasu podle předkládaného vynálezu a obsahující DNA sekvenci uvedenou v sekvenci identifikační č. 1 přinejmenším jako DNA sekvence od pozice 97 do pozice 1029.

Klonování se provádí standardními .postupy známými v dané problematice jako jsou příprava genové knihovny z kmenu Bacilius, zejména z druhu B. agaradherens, NCIMB 40482;

nanesení takové knihovny na vhodné desky se substráty;

identifikace klonu zahrnujícího polynukleotidovou sekvenci podle předkládaného vynálezu standardními hybridizačními technikami za použití sondy založené na sekvenci identifikační č. 1, nebo identifikaci klonu z genové knihovny Bacillus agaradherens NCIMB 40482 inverzním PCR postupem za pomoci primerů založených na sekvenční informaci ze. sekvence identifikační č. 1. Pro další podrobnosti týkající se inversní PCR zde odkazujeme na knihu M.J. McPherson a kol., PCR A Practical approach, Information Press Ltd., Oxford, Anglie).

Na základě sekvenčních informací popsaných v předkládaném vynálezu (sekvence identifikační č. 1, sekvence identifikační č. 2) je izolace homologních polynukleotidových sekvencí kódujících homologní mananasu podle předkládaného vynálezu s využitím podobné strategie za použití genových knihoven z příbuzných mikrobiálních organismů, zejména genových knihoven z dalších kmenů druhu Bacillus, jako je alkalofilní druh Bacillus, je pro odborníky v dané problematice rutinní práce.

Alternativně lze DNA kódující manan nebo galaktomanan odbourávající enzymy podle předkládaného vynálezu obyčejně klonovat dobře známými postupy z vhodných zdrojů, jako je jakýkoliv z výše uvedených organismů, použitím syntetických oligonukleotidových sond připravených na základě DNA sekvence získatelné z plasmidu přítomného v Escherichia coli DSM 12180.

• · ····

9 9

9 9 · · · · 9 9 9 9

9 9 *· 9 9 9 99

Polynukleotidovou molekulu podle předkládaného vynálezu lze izolovat z Escherichia coli DSM 12180, ve kterém je plasmid získaný klonováním uložen. Předkládaný vynález se také týká izolované v zásadě čisté biologické kultury kmenu Escherichia coli, DSM 12180.

V předkládaném kontextu znamená termín příprava enzymu prostředek k získání bud’ konvenčního produktu enzymatické fermentace, případně izolovaného a čištěného z jediného druhu mikroorganismu, kdy tato příprava obvykle zahrnuje určitý počet různých enzymatických aktivit; nebo směsi monokomponentních enzymů, s výhodou enzymů odvozených z bakterií nebo hub, pomocí konvenčních rekombinantních technik, kdy jsou tyto enzymy fermentovány a případně izolovány a čištěny odděleně a pocházejí z různých zdrojů,' s výhodou houbových nebo bakteriálních zdrojů; nebo produktu fermentace mikroorganismu, který působí jako hostitelská buňka pro expresi rekombinantní mananasy, ale tento mikroorganismus současně produkuje další enzymy, např. enzymy odbourávající pektin, proteasy nebo celulasy, a jedná se o přírodní produkt fermentace z mikroorganismu, tj. enzymový komplex běžně produkovaný odpovídajícím přírodním mikroorganismem.

Způsob přípravy enzymového prostředku podle předkládaného vynálezu zahrnuje pěstování mikroorganismu, např. divokého typu, schopného produkovat mananasu za podmínek dovolujících vznik enzymu a získání enzymu z kultury. Pěstování se provádí pomocí běžných fermentačních technik, např. pěstování v třepaných lahvích nebo fermentorech s protřepáváním, čímž se zajistí dostatečné provzdušnění růstového média a vyvolá se vznik mananasového enzymu. Růstové médium případně obsahuje běžný zdroj dusíku, jako je pepton, extrakt z kvasnic nebo kasaminové kyseliny, omezené množství zdroje uhlíku, jako je dextrosa nebo sacharosa a inducer, jako je guarová guma nebo guma ze svatojánského chleba. Získání enzymu se provádí běžnými technikami, např. oddělením biomasy a roztoku nad ní • 0 • 0·· 0000 • 0 0000 0000

000000 0000000 00 0

odstřeďováním nebo filtrací, získání roztoku nad rozštěpenými buňkami, pokud je enzym vnitrobuněčný, případně následným čištěním, které je popsáno v EP 0 406 314 nebo krystalizací, která je popsána ve WO 97/15660.

Imunologická zkřížená reaktivita

Polyklonální protilátky, které se používají pro stanovení imunologické zkřížené reaktivity, se připravují s použitím čištěných mananasových enzymů. Konkrétněji se antisérum proti mananase podle předkládaného vynálezu získává z imunizovaných králíků (nebo jiných hlodavců) postupy popsanými v knize N. Axelsen a kol., A Manual of Quantitative Imunoelectrophoresis, Blackwell Scientific Publications, 1973, kapitola 23, nebo A. Johnston a R. Thorpe, Imunnochemistry in Practice, Blackwell Scientific Publications, 1982 (konkrétněji strany 27 až 31) . Čištěné imunoglobuliny lze získat z antiséra, například srážením solemi ((NH₄)₂SO₄) a následnou dialýzou a iontově výměnnou chromatografií, např. na DAEA-Sephadexu. Imunochemická charakterizace proteinů se provádí dvojitou difusní analýzou podle Outcherlonyho (O. Outcherlony v knize Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir, editor), Blackwell Scientific Publications, 1967, strany 655 až 706), zkříženou imunoelektroforézou (N. Axelsen a kol., A Manual of Quantitative Imunoelectrophoresis, Blackwell Scientific Publications, 1973, kapitoly 3 a 4) nebo raketovou imunoelektroforézou (N. Axelsen a kol., A Manual of Quantitative Imunoelectrophoresis, Blackwell Scientific Publications, 1973, kapitola 2).

Příklady použitelných bakterií produkujících enzymy nebo enzymové prostředky podle předkládaného vynálezu jsou Gram pozitivní bakterie, s výhodou z oddělení Bacillus/Lactobacillus, s výhodou kmenu z druhu Bacillus, ještě výhodněji kmenu Bacillus agaradherens, zejména kmenu Bacillus agaradherens, NCIMB 40482.

• · 99 9 ·» ·· · · · » · · 9 · • 9* 9 999 9 99 9

9999 · 9 9 9999 99 99 9

9 999 9999

999 9 99 9 99 99

Předkládaný vynález zahrnuje izolovanou mananasu, která má vlastnosti popsané výše a ve které nejsou homologické nečistoty, a vyrábí se pomocí konvenčních rekombinantních technik.

Stanovení katalytické aktivity (ManU - mananasová jednotka) mananasy

Kolorimetrický test: Jako substrát byl použit 0,2%

AZCL-Galaktomanan (Megazyme, Australia) v 0,1 M glycinovém pufru o pH 10,0. Test se provádí v Eppendorfových mikrozkumavkách o objemu 1,5 ml na tepelné míchačce za míchání a teploty 40 °C. Inkubace 0,750 ml substrátu s 0,05 ml enzymu po dobu 20 minut, odstřeďování po dobu 4 minut při 15 000 ot./min. Barva roztoku se měří při 600 nm v kyvetě délky 1 cm. Jedna mananasová jednotka (ManU)' odpovídá absorbanci 0,24 v 1 cm.

Získání mananasy z Bacillus agaradherens NCIMB 40482

Kmeny

Bacillus agaradherens NCIMB 40482 obsahující mananasový enzym kódující DNA sekvenci.

Kmen E. coli: Buňky E. coli SJ2 (Diderichsen, B., Wedsted, U., Hedegaard, L., Jensen, B.R., Sjoholm, C. (1990) Cloning of aldB, which encodes alpha-acetolactate decarboxylase, an exoenzyme from Bacillus brevis, J. Bacteriol., 172, 4315-4321), byly připraveny a transformovány elektroporací pomocí Gene Pul ser“ elektroporatoru od BIO-RAD postupem, který byl popsán výrobcem.

B. subtilis PL2306. Tento kmen je B. subtilis DN1885 s přerušenými apr a npr geny (Diderichsen, B., Wedsted, U., Hedegaard, L., Jensen, B.R., Sjoholm, C. (1990) Cloning of aldB, which encodes alpha-acetolactate decarboxylase, an exoenzyme from Bacillus brevis, J. Bacteriol., 172, 4315-4321) přerušenými v transkripční jednotce známého Bacillus subtilis celulasového genu, což vede k cellulasově negativním buňkám. Přerušení se provádí tak, jak je popsáno v knize Bacillus • 9

9*9* ·

9 99 9* • 9 9 9 9 *9 * 99* 9 9*9

9 9999 9 9 9 9 9

9 999 *99* *99 9 9* 9 99 99 subtilis and other Gram-Positive Bacteria, A.L. Sonenshein, J.A. Hoch a Richard Losick (editoři), American Society for microbiology, str. 618 (1993).

Kompetentní buňky byly připraveny a transformovány postupem popsaným v práci R.E. Yasbin, G.A. Wilson a F.E. Young (1975) Transformation and transfection in Lysogenic strains of Bacillus subtilis'. evidence for selective induction of prophage in competent cells, J. Bacteriol., 121: 296-304.

Plasmidy pSL1678 (popsaný podrobněji ve WO 94/19454, který je zde uveden jako reference).

pMOL944. Tento plasmid je pUBUO derivát obsahující prvky, které umožňují propagaci plasmidu v Bacillus subtilis, kanamycinu odolný gen a má silný promotérovy -a signální peptid klonovaný z amyL genu B. licheniformis ATCC14580. Signální peptid obsahující SacII místo umožňuje běžné klonování DNA kódující maturovanou část proteinu infuzí se signálním peptidem. To vede k expresi pre-proteinu, který je směrován na vnějšek buňky.

Plasmid byl konstruován pomocí běžných technik genového inženýrství, které jsou dále krátce popsány.

Konstrukce pMOL944

Plasmid pUBUO (T. McKenzie a kol., 1986, Plasmid 15:93-103) byl štěpen jedinečným restrikčním enzymem NcíII. PCR fragment amplífikovaný z amyL promotéru kódovaného na plasmidu pDN1981 (P.L. Jorgensen a kol., 1990, Gene, 96, str. 37 až 41) byl štěpen Ncil a vložen do Ncil štěpeného pUBUO, čímž byl získán plasmid pSJ2624.

Použité dva PCR primery mají následující sekvence:

LWN5494 5'-GTCGCCGGGGCGGCCGCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC-3'

LWN54 95 5'-GTCGCCCGGGAGCTCTGATCAGGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATG

AGGCAGCAAGAAGAT-3’

Primer LWN5494 vkládá do plasmidu Notl centrum.

99 99

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 9 999· 99 99 9

9 9 9 9 9 9 9

99 9 99 99

Plasmid pSJ2624 byl pak štěpen Sací a Notl a nový PCR fragment amplifikovaný na amyL promotéru kódovaném na pDN1981 byl štěpen Sací a Notl a tento fragment DNA byl vložen do Sacl-Notl štěpeném pSj2624, čímž byl získán plasmid pSJ2670.

Toto klonování nahradí prdvní amyL promotér klonováním se stejným promotérem, ale v opačném směru. Dva primery použité pro PCR amplifikaci mají následující sekvence:

LWN5938 5’-GTCGGCGGCCGCTGATCACGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATGAGG

CAGCAAGAAGAT-3 '

LWN5939 5'-GTCGGAGTCCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC-3’

Plasmid pSJ2670 byl štěpen restrikčními enzymy Pstl a Bell a PCR fragment amplifikovaný z klonované DNA sekvence kódující alkalickou amylasu SP722 (popsanou v Mezinárodní patentové přihlášce vydané jako WO95/26397, která je zde zahrnuta jako reference) byl štěpen Pstl a Bell a vkládán, čomž byl získán plasmid pMOL944. dva primery použité pro amplifikaci mají následující sekvenci.

LWN78 64 5'-AACAGCTGATCACGACTGATCTTTTAGCTTGGCAC-3'

LWN7 901 5'-AACTGCAGCCGCGGCACATCATAATGGGACAAATGGG-3'

Primer LWN7901 vkládá do plasmidu SacII centrum.

Klonování genu mananasy z Bacilius agaradherens

Příprava genové DNA

Kmen Bacillus agaradherens NCIMB 40482 byl propagován v tekutém médiu postupem popsaným ve WO94/01532. Po 16 hodinách inkubace při 30 °C a 300 ot./min, byly buňky odebrány a genová DNA izolována postupem popsaným v práci Pitcher, D.G., Saunders, N.A., Owen, R.J. (1989), Rapid extraction of bacterial genomic DNA with guanidinium thiocyanate. Lett. Appl. Microbiol., 8, 151-156.

Příprava genové knihovny

Genová DNA byla částěčně rozštěpena restrikčním enzymem Sau3A a dělena podle velikosti elektroforézou na 0,7% agarosovém gelu. Fragmenty o velikosti 2 kb až 7 kb byly izolovány elektroforézou na DEAE celulosovém papíru • · «· · ·· ·» ·· · · · · » · · · * · · · · · · e · « · • ·♦»» · · · »··· · · · · «

7>Λ · · · · · ····

-D «·· 9 99 9 99 99 (Dretzen, G., Bellard, M., Sassone-Corsi, P., Chambon, P. (1981), A reliable method for the recovery of DNa fragments from agarose and acrylamide gels. Anal. Biochem., 112, 295-298).

Izolované fragmenty DNA byly ligovány do BamHI štěpené pSJ1678 plasmidové DNA a ligační směs byla použita pro transformaci E. coli SJ2.

Identifikace pozitivních klonů

DNA knihovna v E. coli zkonstruovaná popsaným způsobem byla testována na LB agarových deskách obsahujících 0,2% AZCL-galaktomanan (Megazyme) a 9 μΐ/ml· chloramfenikolu tak, že se inkubovala přes noc při 37 °C. Klony vykazující mananasovou aktivitu se projevily světle modrým dufusním okolím. Plasmidová DNA z jednoho z těchto klonů byla izolována Qiagenovým plasmidovým spinovým přípravkem na 1 ml živného média přes noc (buňky inkubovány při teplotě 37 °C v TY s 9 μΐ/ml chloramfenikolu a třepání při 250 ot./min.

Tento klon (MB525) byl dále charakterizován DNA sekvenováním klonovaného Sau3A DNA fragmentu, kdy bylo toto DNA sekvenování provedeno směrem od primerů pomocí sekvenační soupravy v Taq deoxy koncovém cyklu (Perkin-Elmer, USA), fluorescenčně značenými konci a vhodnými oligonukleotidy jako primery.

Apalýza výsledků sekvenování byla provedena podle Devereux a kol. (1984) Nucleic Acids Res., 12, 387-395. Sekvence kódující mananasu je uvedena jako sekvence identifikační č. 1. Odvozená proteinová sekvence je uvedena jako sekvence identifikační číslo 2.

Subklonování a exprese mananasy v B. subtilis

Mananasu kódující DNA sekvence podle předkládaného vynálezu byla PCR amplifikována za použití sady PCR primerů sestávající ze dvou oligonukleotidů:

0 000« ♦ t 0 ·» 00

0 * 0 0 0 0

000 0 00 0

0 00·0 00 00 0

0 0 0 0 0 0

0 « 0 0 0 0

Mananasa-horní-SacII

5' -CAT TCT GCA GCC GCG GCA GCA AGT ACA GGC TTT TAT GTT GAT

GG-3'

Mananasa-dolní-Notl

5'-GAC GAC GTA CAA GCG GCC GCG CTA TTT CCC TAA CAT GAT GAT ATT TTC G-3’

Restrikční centra Scall a Notl jsou podtržena.

Chromosomální DNa izolovaná z B. agaradherens NCIMB 40482 postupem, který již byl popsán, byla použita jako templát v PCR reakci provedené s Amplitaq DNA Polymerasou (Perkin Elmer) podle návodu výrobce. PCR reakce byla provedena v PCR pufru (10 mM Tris-HCl, pH 8,3, 50 mM KC1, 1,5 mM MgCl₂, 0,01% (hmotnost látky na objem rozpouštědla) gelatin) obsahujícím 200 μΜ dNTP, 2,5 jednotky AmpliTaq polymerasy (Perkin-elmer, Cetus, USA) a 100 pmol každého primeru..

PCR reakce byla provedena pomocí tepelného DNA cykleru (Landgraf, Německo). jedna inkubace při teplotě 94 °C po dobu 1 minuty byla následována třiceti cykly PCR sestávajícími z denaturace při 94 °C po dobu 30 sekund, chlazení na teplotu 60 °C po dobu 1 minuty a prodlužování při teplotě 72 °C po dobu 2 minut. Alikvotní podíly amplifikačního produktu o objemu pět μΐ byly analyzovány elektroforézou na 0,7% agarosovém gelu (NuSieve, EMC). Velikost DNA fragmentů 1,4 kb prokázala správnou amplifikaci genového segmentu.

Subklonování PCR fragmentu

Alikvotní podíly PCR produktů vyrobených postupem, který již byl popsán, o objemu čtyřicetpět μΐ byly čištěny pomocí čisticí sady QIAquick PCR (Qiagen, USA) podle návodu výrobce. Čištěná DNA byla vymývána v 50 μΐ 10 mM Tris-HCl, pH 8,5.

pMOL944 (5 μρ) a dvacetpět μΐ čištěného PCR fragmentu bylo štěpeno SacII a Notl, podrobeno elektroforéze v 0,8% agarosovém gelu gelujícím při nízké teplotě (SeaPlaque GTG, EMC) a odpovídající fragmenty byly z gelu vystřiženy a čištěny

»« ·· ·> · · · • · * · • · · 4» • 9 9 9 • 9 99 pomocí extrakční sady QIAquick Gel (Qaigen, USA) podle návodu výrobce. Izolované PCR DNA fragmenty pak byly ligovány do pMOL944 štěpeného SacII-Notl a čištěného. Ligace byla prováděna přes noc při teplotě 16 °C pomocí 0,5 gg DNA fragmentu, jedné jednotky T4 DNA ligasy a T4 ligasového pufru (Boehringer Mannheim, Německo).

Pro transformaci kompetentní B. subtilis PL23006 byla použita ligační směs. Transformované buňky byly naneseny na desky obsahující LBPG-10 gg/ml Kanamycinu. Po 18 hodinách inkubace při teplotě 37 °C byly na deskách pozorovány kolonie. Některé klony byly analyzovány izolací DNA plasmidu z živného média kultury pěstované přes noc.

Jeden takový pozitivní klon byl několikrát opakovaně nanesen na výše použitou agarovou desku, tento klon byl pojmenován MB594. Klon MB594 byl pěstován přes noc v TY-10 gg/ml kanamycinu při teplotě 37 °C a další den byl 1 ml buněk použit pro izolaci plasmidu z buněk pomocí Qiaprep Spin Plasmid Miniprep Kit č. 27106 na základě doporučení výrobce pro přípravu plasmidu B. subtilis. Tato DNA pak byla sekvenována a byla zjištěna DNA sekvence odpovídající maturované části mananasy, tj. pozic 94 až 1404 připojené sekvence identifikační č. 3. Odvozený maturovaný protein je uveden jako sekvence identifikační č. 4. Je zřejmé, že 3' konec mananasy kódované sekvencí identifikační č. 1 byl změněn na konec uvedený v sekvenci identifikační č. 3 kvůli návrhu nižšího primeru použitého v PCR. Výsledná aminokyselinová sekvence je uvedena v sekvenci identifikační č. 4 a je zřejmé, že C konec sekvence identifikační č. 2 (SHHVREIGVQFSAADNSSGQTALYVDNVTLR) byl změněn na C konec sekvence identifikační č. 4 (IIMLGK).

Média

TY (popsáno v knize Ausubel, F.M. a kol. (editoři) Current Protocols in molecular Biology, John Wiley and Sons, 1995).

• 9

999 9 9 9 9 9 99 9 Q-7 9 9999 99 9 9999 99 99 9

Ο / 99999 9999

999 9 99 9 99 99

LB agar (popsáno v knize Ausubel, F.M. a kol. (editoři) Current Protocols in molecular Biology”, John Wiley and Sons,

1995).

LBPG je LB agar (viz výše) doplněný 0,5% glukosou a 0,05 M fosforečnanem draselným o pH 7,0.

Médium BPX je popsáno v EP 0 506 780 (WO 91/091129)

Exprese, čištění a charakterizace mananasy z Bacillus agaradherens

Klon MB 594 získaný postupem popsaným v oddíle Materiál a postupy byl pěstován ve 25 x 200 ml média BPX s 10 gg/ml kanamycinu v třepacích lahvích o objemu 500 ml po dobu 5 dnů při teplotě 37 °C při 300 ot./min.

Pak bylo spojeno 6 500 ml tekutiny po pěstování klonu MB 594 (várka č. 9813) z třepacích lahví a pH bylo upraveno na 5,5.

Pak bylo za míchání přidáno 146 ml kationtového činidla (C521) a 292 ml aniontového činidla (A130) , čímž došlo k vysrážení. Vysrážený materiál byl oddělen odstředěním za použití odstředivky Sorval RC 3B při 9 000 ot./min při teplotě 6 °C po dobu 20 minut. Získaný roztok byl dočištěn pomocí skleněného filtru Whatman GF/D a C a nakonec zahuštěn na filtronu oddělujícím 10 kDa.

pH tohoto koncentrátu bylo upraveno pomocí hydroxidu sodného na hodnotu 7,5. Čirý roztok byl nanesen na aniontově výměnnou chromatografickou kolonu obsahující 900 ml Q-Sepharosy ekvilibrovanou 50 mmol Tris o pH 7,5. Mananasově aktivní pás byl vymyt gradientem chloridu sodného.

Čistý enzym poskytl jediný pás ná SDS-PAGE o molekulové hmotnosti 38 kDa. Aminokyselinová sekvence mananasového enzymu tj. přepsaná DNa sekvence, je uvedena jako sekvence identifikační č. 2.

Stanovení kinetických konstant

Substrát: guma ze svatojánského chleba a analýza na redukující cukry (PHBAH); guma ze svatojánského chleba Sigma (G-0753).

Kinetické stanovení pomocí různých koncentrací gumy ze svatojánského chleba a inkubace po dobu 20 minut při teplotě 40 °C při pH 10 poskytlo:

K_cat: 467 za sekundu

Κ„,: 0,08 gramu na I

Molekulová hmotnost: 38 kDa pí (izoelektrický bod): 4,2

Zjištěné teplotní optimum mananasy bylo 60 ’C.

Profil aktivity v závislosti na pH prokázal maximum mezi pH 8 až 10.

DSC diferenční skanovací kalorimetrie poskytla jako telotu tání 77 °C při pH 7,5 v pufru tris, což ukazuje, že enzym je velmi tepelně stálý.

Slučitelnost s detergenty za použití 0,2% AZCL-Galaktomananu jako substrátu a inkubace postupem při teplotě 40 °C, který již byl popsán, prokázala vynikající slučitelnost s běžnými tekutými detergenty a dobrou slučitelnost s běžnými práškovými detergenty.

Získání mananasy 168 z Bacillus subtilis β-mananasa z Bacillus subtilis byla charakterizována a čištěna následujícím postupem.

Gen Bacillus subtilis byl prozkoumán z hlediska homologie se známou genovou sekvencí β-mananasy Bacillus sp. (Mendoza a kol., Biochemica et Biophysica Acta, 1243: 552-554, 1995).

Oblast kódující ydhT, jejíž produkt nebyl známý, vykazovala 58% podobnost se známou β-mananasou Bacillus. Pro amplifikaci sekvencí kódujících maturovanou část domnělé β-mananasy byly navrženy následující oligonukleotidy: 5'-GCT CAA TTG GCG CAT ACT GTG TCG CCT GTG-3' a 5’-GAC GGA TCC CGG ATT CAC TCA ACG ATT GGC G-3’. Celková genová DNA z Bacillus subtilis kmen 1A95 byla použita jako templát pro amplifikaci ydhT maturované oblasti za použití výše uvedených primerů. PCR se provádí pomocí GENE-AMP PCR sady s AMPLITAQ DNA polymerasou (Perkin Elmer, Applied Biosystems, Foster City, CA) . Po výchozí době tání při teplotě 95 °C trvající 5 minut následovalo 25 cyklů s následujícím programem: tání při 95 °C po dobu 1 minuty, chladnutí při teplotě 55 °C po dobu 2 minut a prodlužování při teplotě 72 °C po dobu 2 minut. Po posledním cyklu byla reakce udržována při teplotě 72 °C po dobu 10 minut, aby se zajistilo kompletní prodloužení. PCR produkty byly čištěn za použití PCR čisticí sady QIAquick (Qaigen, Chatsworth, CA).

ydhT maturovaná oblast amplifikovaná z Bacillus subtilis kmen 1A95 byla vložena do expresního vektoru pPG1524 (který již byl popsán) následujícím způsobem. Ampli.fi kovaný fragment o velikosti 1028 bp byl štěpen Mfe I a BamH I. Expresní vektor pPG 1527 byl štěpen EcdR 1 a BamH I. Restrikční produkty byly čištěny za použití PCR čisticí sady QIAquick (Qaigen, Chatsworth, CA) . Dva fragmenty byly ligovány za použití DNA ligasy (13 hodin, 16 °C) a použity pro transformaci kompetentní E. coli kmen DH5-a. Ampicilinu odolné kolonie byly pěstovány pro preparaci DNA. DNA byla pak charakterizována restrikční analýzou. Plasmid pPG3200 obsahující maturovanou oblast genu ydhT. Plasmid pPG3200 pak byl použit pro transformaci kompetentního Bacillus subtilis kmen PG 632 (Saunders a kol., 1992).

Sedm klonů Bacillus subtilis odolných proti kanamycinu a jeden kontrolní klon PG 632 byly pěstovány ve 20 ml média 20/20/5 (20 g/1 tryptonu, 20 g/1 extraktu z kvasnic, 5 g/1 NaCl) doplněném 1 ml 25% maltrinu, 120 μΐ 10 mM MnCl₂ a 20 μΐ 50 mg/ml kanamycinu. Klony byly pěstovány přes noc v třepacích lahvích o objemu 250 ml při teplotě 37 °C při 250 ot./min, aby se exprimoval protein. Buňky byly odstřeďovány po dobu 15 minut při 14 000 ot./min. Jeden μΐ roztoku po odstředění • · · · · · • · · · · · · • · · · · · • · · · · · · ······· ·· · • · · · · · · · · ··· · ·· · · · · · byl zředěn 99 μΐ 50 mM octanu sodného (pH 6,0) . Jeden μΐ tohoto naředěného roztoku pak byl testován pomocí endo-1,4-β-Mananase Beta-Mannazyme Tabs (Megazyme, Irsko) podle návodu výrobce. Absorbance byla odečítána při 590 nm na spektrofotometru Beckman DU640. Klon 7 vykazoval nejvyšší absorbanci při 1,67. Kontrola PG632 při 590 nm nevykázala žádnou absorbanci.

Roztok po odstředění byl analyzován SDS-PAGE na 10% až 20% Tris-glycinovém gelu (Novex, san Diego, CA) , aby se potvrdila očekávaná velikost proteinu 38 kDa. Vzorky byly připraveny následujícím způsobem. Vzorek ydhT klonu 7 o objemu 500 μΐ a roztoky po odstředění PG 632 byly vysráženy 55,5 μΐ 100% kyseliny trichloroctové (Sigma) , promyty 100 μΐ 5>% kyseliny trichloroctové, resuspendovány v 50 μΐ Tris-glycinovém SDS vzorkovém pufru (Novex) a vařeny po dobu 5 minut. Jeden μΐ každého vzorku byl podroben elektroforéze na gelu při 30 mA po dobu 90 minut. Široký pás proteinu byl pro klon 7 ydhT pozorován při 38 kDa.

Fermentace Bacillus subtilis ydhT klonu 7 v objemu 10 1 byla provedena ve fermentoru B-Braun Biostat C. Podmínky fermentace byly následující. Buňky byly pěstovány po dobu 18 hodin v médiu 20/20/5 při teplotě 37 °C. Na konci fermentace byly buňky odstraněny a roztok byl zahuštěn na objem 1 litru za použití tangenciálního průtokového filtračního systému. Konečný výtěžek β-mananasy v koncentrovaném roztoku byl stanoven na 3 g/1.

Čištění β-mananasy z fermentačního roztoku bylo provedeno následujícím způsobem: 500 ml fermentačního roztoku bylo odstřeďováno po dobu 10 minut při 10 000 ot./min při teplotě 4 °C. Odstředěný roztok byl pak dialyzován přes noc při teplotě 4 °C ve dvou dávkách o objemu 4 1 v 10 mM fosfátu draselném (pH 7,2) přes membránu Spectrapor oddělující molekulové hmotnosti 12 000 až 14 000 (Spectrum). Dialyzovaný • · ·· · ·· ·· ··· ··· ···· • · · · · · · ···· • ···· · · · ···· · · · · · • · · · · ···· • · · · · · · · · ·· roztok byl odstřeďován po dobu 10 minut při 10 000 ot./min při teplotě 4 °C. Aniontové výměnná kolona naplněná 300 ml Q-Sepharose s vysokým průtokem (Pharmacia) byla ekvilibrována 1 litrem 10 mM fosfonátu draselného (pH 7,2) při teplotě 20 °C a pak na tuto kolonu bylo nalito 300 ml roztoku po odstředění.

Byly získány dvě frakce o objemu 210 ml (vzorek A) a 175 ml (vzorek B). Tyto dvě frakce byly testovány způsobem, který již byl popsán s tím rozdílem, že roztoky byly zředěny 199 μΐ 50 mM octanu sodného (pH 6,0) a vykazovaly absorbanci 0,38 a 0,52. Dva μΐ každého vzorku byyly přidány do 8 μΐ Tris-glycin SDS vzorkového pufru (Novex, CA) a vařeny po dobu 5 minut. Výsledné vzorky byly podrobeny elektroforéze na 10% až 20% Tris-Glycinovém gelu (Novex, CA) po dobu 90 minut při 30 mA. Hlavní pás odpovídající 38 kDa byl přítomen v obou vzorcích a zahrnovla více než 95 % celkového množství proteinu. BCA proteinový etst (Pierce) byl proveden na obou vzorcích podle návodu výrobce, za použití hovězího sérumalbuminu jako standardu, a vzorek A a vzorek B obsahovaly 1,3 mg/ml a 1,6 mg/ml β-mananasy. Identita proteinu byla potvrzena hmotnostní spektrometrií s rozprašováním iontů a aminokyselinovou sekvenční analýzou provedenou směrem od aminokonce.

Stanovení enzymatické aktivity čištěných vzorků β-mananasy bylo provedeno následujícím způsobem. Všechny testy využívají endo-1,4-β-Mananase Beta-Mannazyme Tabs (Megazyme, Irsko), který již byl popsán. Aktivita v rozsahu pH 3,0 až 9,0 byla stanovena v 50 mM citrátfosfátovém pufru, pro stanovení aktivity při pH 9,5 byl použit 50 mM CAPSO (Sigma) a pro rozsah pH 10,0 až 11,0 byl použit 20 mM CAPS pufr. pH optimum pro β-mananasu Bacillus subtilis bylo stanoveno na 6,0 až 6,5. Profil teplotní aktivity byl stanoven v 50 mM citrátfosfátovém pufru (pH 6,5). Enzym vykazoval optimální aktivitu při teplotě 40 °C až 45 °C. β-mananasa Bacillus subtilis si uchovávala • ·· · 9 9

9 9 9 · • · · · · · · ···· · · · ···· · · · · · významnou aktivitu při teplotě nižší než 15 °C a teplotě vyšší než 80 ’C. Specifická aktivita proti β-l,4-galaktomananu byla stanovena na 160 000 gmol/min*mg β-mananasy při použití endo-1,4-h-Mananase Beta-Mannazyme Tabs (Megazyme, Irsko) podle návodu výrobce. Nukleotidové a aminokyselinové sekvence β-mananasy Bacillus subtilis jsou uvedeny jako sekvence identifikační č. 5 a 6.

Enzym odbourávající sacharidovou gumu je obsažen v pracích detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu obecně v množství 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní, výhodněji 0,0001 % hmotnostních až 0,1 % hmotnostních, nejvýhodněji 0,0006 % hmotnostních až 0,02 % hmotnostních čistého enzymu na hmotnost prostředku.

Enzym odbourávající sacharidovou gumu podle předkládaného vynálezu má, kromě enzymatického jádra obsahujícího katalytickou doménu, také doménu vážící celulosu (CBD), přičemž doména vážící celulosu a enzymatické jádro (katalyticky aktivní doména) enzymu jsou funkčně spojeny. Celulosu vážící doména (CBD) existuje jako integrální část kódovaného enzymu nebo je do enzymu vložena CBD z jiného zdroje, čímž vznikne enzymový hybrid. V tomto kontextu je třeba pojem celulosu vážící doména chápat tak, jak je definován v Peter Tomme a kol., Cellulose-Binding Domains Classification and Properties v knize Enzymatic Degradation of Insoluble Carbohydrates, John N. Saddler a Michael H. Penner (editoři), ACS Symposium Series č. 618, 1996. Tato definice klasifikuje více než 120 celulosu vážících domén do 10 oddělení (I až X) a ukazuje, že CBD se nalézají v různých enzymech, jako jsou celulasy, xylanasy, mananasy, arabinofuranosidasy, acetylesterasy a chitinasy. CBD byly také nalezeny v řasách, např. v červené řase Porphyra purpurea, ve formě nehydrolytického polysacharid vážícího proteinu, viz Peter Tomme a kol., Cellulose-Binding Domains Classification • · · and Properties v knize Enzymatic Degradation of Insoluble Carbohydrates, John N. Saddler a Michael H. Penner (editoři), ACS Symposium Series č. 618, 1996. Nicméně většina CBD je z celulas a xylanas. CBD se nalézají na N a C koncích proteinů nebo jsou interní. Enzymatické hybridy jsou v dané problematice známy, viz např. WO 90/00609 a WO 95/16782 a připravují se převedením DNA konstruktu obsahujícího přinejmenším fragment DNA kódující celulosu vážící doménu ligovanou, s nebo bez spojky, do DNA sekvence kódující enzym odbourávající . sacharidovou gumu do hostitelské buňky a pěstování hostitelské buňky tak, že exprimuje spojený gen. Enzymatické hybridy lze popsat jako CBD-MR-X, kde CBD je N-koncová nebo C-koncová oblast aminokyselinové sekvence odpovídající přinejmenším celulosu vážící doméně; MR je prostřední část (spojka) a případně jen vazba nebo krátká spojující skupina sestávající s výhodou ze 2 až 100 atomů uhlíku, ještě výhodněji ze 2 až 40 atomů uhlíku; nebo s výhodou ze 2 až 100 aminokyselin, ještě výhodněji ze 2 až 40 aminokyselin a X je N-koncová nebo C-koncová oblast enzymu podle předkládaného vynálezu.

Uvedené enzymy jsou jakéhokoliv vhodného původu, jako je rostlinný, živočišný, bakteriální, z hub a z kvasnic. Původ je dále mezofilní nebo extremofilní (psychrofilní, psychrotropní, termofilní, barofilní, alkalofilní, acidofilní, halofilní, atd.). Lze použít čištěné nebo nečištěné formy těchto enzymů. V dnešní době je běžnou praxí upravovat původní přírodní typy enzymů technikami proteinového nebo genového inženýrství, aby se optimalizovala jejich účinnost v čisticích prostředcích podle předkládaného vynálezu. Například lze navrhnout takové varianty, kdy je zvýšena slučitelnost enzymu vůči běžným složkám takových prostředků. Alternativně lze navrhount variantu, kdy je optimální pH, stabilita při bělení a působení chelátů, katalytická aktivita a podobně u enzymu upraveno přesně podle potřeb konkrétního čisticího použití.

• · · · · · · · • · · · · · ···· ···· · · · ···· · · · · · • · · * · · · · • ·» · ·· ··

Konkrétně je třeba dávat pozor na aminokyseliny citlivé na oxidaci v případě stability při bělení a na povrchové napětí při slučitelnosti s detergenty. Iso.elektrický bod takových enzymů lze upravit nahrazením některých nabitých aminokyselin, např. zvýšení isoelektrického bodu pomůže zlepšit slučitelnost s aniontovými tenzidy. Stabilitu enzymů lze dále zvýšit vytvořením např. přídavných solných můstků a zesílením center vážících kov, aby se zvýšila stabilita při působení chelátů.

Složky detergentu

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také případně obsahují další složky detergentu. Přesná povaha těchto dalších složek a množství, ve kterém jsou použity, závisí na fyzické formě prostředku a povaze čisticí operace, pro kterou se používají.

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu s výhodou dále obsahují detergentní složky vybrané z některých tenzidů, dalších enzymů, plnidla a/nebo bělícího systému.

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu jsou tekuté, ve formě pasty, gelů, tyčinek, tablet, sprejů, pěn, prášku nebo ve formě granulí. Granulované prostředky jsou někdy také v kompaktní formě, tekuté prostředky jsou někdy také v koncentrované formě.

Preferovaný typ gelového detergentu je vysoce účinný prací gelový prostředek obsahující 15 % hmotnostních až 40 % hmotnostních aniontové tenzidové složky, která sestává z: (i) % hmotnostních až 25 % hmotnostních alkylpolyethoxylovaných sulfátů, ve kterých alkyl sestává z 10 až 22 atomů uhlíku a polyethoxylovaný řetězec obsahuje 0,5 až 15, s výhodou 0,5 až 5 a ještě výhodněji 0,5 až 4 ethylenoxidové jednotky; a (ii) % hmotnostních až 20 % hmotnostníchmastných kyselin.

Gelové prostředky podle předkládaného vynálezu dále obsahují jednu nebo více dalších detersivních složek vybraných ze skupiny sestávající z necitrátových plnidel, optických zjasňovadel, polymerů uvolňujících nečistoty, inhibitorů • · ·· · ·· ·· • · · ··· · · 9 · • · 9 9 · 9 · 9 9 9 9 9 ···· «► · · ···· · · · · · • · · 9 9 9 9 9 9 999 9 99 · 99 99 přenosu barviv, polymemích disperzních činidel, enzymů, činidel potlačujících pěnivost, vonných látek, barviv, plnidel ve formě solí, hydrotropů, činidel bránících opětovnému usazování nečistit, činidel bránících zapírání, činidel fixujících barvy, činidel bránících třepení a jejich směsí.

Gelové prostředky podle předkládaného vynálezu mají při rychlosti otášení 20 s'¹ viskozitu 100 cP až 4 000 cP, s výhodou 300 cP až 3 000 cP, ještě výhodněji 500 cP až 2 000 cP a jsou během skladování stálé.

Bez vazby na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že přítomnost elektrolytů působí na viskozitu gelových prostředků. Gelovitá povaha prostředků podle předkládaného vynálezu je ovlivněna volbou tenzidů a množstvím přítomných elektrolytů. V preferovaných provedeních podle předkládaného vynálezu budou prostředky dále obsahovat 0 % hmotnostních až 10 % hmotnostních, s výhodou 2 % hmotnostní až 6 % hmotnostních, výhodněji 3 % hmotnostních až 5 % hmotnostních vhodného eletrolytu nebo jeho kyselinového ekvivalentu. Pro použití podle předkládaného vynálezu je citrát sodný vysoce preferovaný elektrolyt.

Prostředky podle předkládaného vynálezu nepovinně obsahují 0 % hmotnostních až 10 % hmotnostních rozpouštědel a hydrotropů. Bez vazby na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že přítomnost přítomnost rozpouštědel a hydrotropů může ovlivnit rovnováhu strukturovaného uspořádání prostředků oproti isotropnímu uspořádání. Rozpouštědlo označuje rozpouštědla obecně používaná v průmyslu detergentů, včetně alkylmonoalkoholů, di- a trialkoholů, ethylenglykolu, propylenglykolu, propandiolu, ethandiolu, glycerinu atd. Hydrotrop označuje hydrotropy obecně používané v průmyslu detergentů, včetně tenzidů s krátkým řetězcem, které pomáhají solubilizovat další tenzidy. Další příklady hydrotropů zahrnují kumen, xylen nebo toluensulfonát, močovinu, alkyl (C₈

4 44 4 44 44 • · · ··· 4 4 4 4

4 4 4 4 4 · 4 44 4 λ _r 4 4444 · 4 44444 4 4 44 4

4θ 444444444

444 4 44 4 44 44 nebo s kratším řetězcem) karboxyláty, alkyl (C₈ nebo s kratším řetězcem) sulfáty a ethoxylované sulfáty.

Mastné kyseliny, které se používají v předkládaném vynálezu, zahrnují nasycené a/nebo nenasycené mastné kyseliny získané s přírodních zdrojů nebo připravené synteticky. Příklady mastných kyselin zahrnují kapronovou, laurovou, myristovou, palmitovou, stearovou, arachidonovou a behenovou kyselinu. Další mastné kyseliny zahrnují palmitoolejovou, olejovou, linoleovou, linolenovou a ricinolejovou kyselinu.

Prostředky podle předkládaného vynálezu lze připravit do formy prostředků vhodných pro ruční praní nebo pro praní v pračce včetně přídavných prostředků pro praní a prostředků vhodných pro použití při namáčení a/nebo předpírání silně znečištěných tkanin, změkčujících prostředků přidávaných do máchání.

Pokud jsou prostředky podle předkládaného vynálezu připraveny jako prostředky vhodné pro použití při praní v automatické pračce, pak tyto prostředky podle předkládaného vynálezu s výhodou obsahují tenzid a plnidlo a další jednu nebo více detergentních složek, s výhodou vybraných z organických polymerních sloučenin, bělicích činidle, dalších enzymů, činidel potlačujících pěnivost, dispezních činidel, disperzních činidel na bázi mýdla, činidel suspendujících nečistoty a činidel bránících opětovnému usazování nečistot a inhibitorů koroze. Prací prostředky také případně obsahují změkčující činidla, jako jsou další detergentní složky. Takové prostředky obsahující enzymy hydrolyzující sacharidové gumy, provádějí čištění tkanin, odstraňování skvrn, mají bělicí účinek, změkčují, zlepšují barevnost a brání přenosu barev.

Prostředky podle předkládaného vynálezu lze také použít jako přídavné detergentní produkty. Takové přídavné produkty jsou určeny pro doplnění nebo zesílení účinku běžných detergentních prostředků.

• · · · • φ φ φ • φ φ φ φ φ · φ φφ φφ

Pokud je to potřeba, hustota pracích prostředků podle předkládaného vynálezu při 20 °C je 400 g/1 až 1200 g/1, s výhodou 500 g/1 až 950 g/1.

Kompaktní forma prostředků podle předkládaného vynálezu je nejlépe charakterizována svou hustotou a, z hlediska prostředku, množstvím solí anorganického plnidla, což jsou běžné složky detergentních prostředků v práškové formě; v běžných detergentních prostředcích jsou soli plnidla přítomny v podstatném množství, typicky 17 % hmotnostních až 35 % hmotnostních celkového prostředku. V .kompaktních prostředcích jsou soli plnidla přítomny v množství, které nepřesahuje 15 % hmotnostních celkového prostředku, s výhodou nepřesahuje 10 % hmotnostních, a nej výhodněji nepřesahuje 5 % hmotnostních prostředku. Anorganické plnidlové soli, tak jak se používají v prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou vybrány ze solí síranů a chloridů s alkalickými kovy a kovy alkalických zemin. Preferovaná plnidlová sůl je síran sodný.

Tekuté detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu jsou přípdaně také v koncentrované formě, což znamená, že tekuté detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu obsahují nižší množství vody ve srovnání s běžnými tekutými detergenty. Typicky je obsah vody v koncentrovaném tekutém detergentu s výhodou nižší než 40 % hmotnostních, výhodněji 30 % hmotnostních a nejvýhodněji nižší než 20 % hmotnostních detergentního prostředku.

Tenzidový systém

Prací detergentní prostředek podle předkládaného vynálezu obecně obsahuje tenzidový systém, ve kterém je tenzid vybrán ze skupiny sestávající z neionogenních a/nebo aniontových a/nebo kationtových a/nebo amfolytických a/nebo zwitteriontových a/nebo semipolárních tenzidů. S výhodou prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu obsahují neionogenní, aniontový a/nebo kationtový tenzid.

9 ·· 99 • · · 9 9 · 9 9 9 9

999 9 999 9 99 · · ···· · 9 99999 9 9 ·· 9

4θ 9 9 999 9999

999 9 99 9 99 99

Překvapivě bylo zjištěno, že prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu dále obsahující neionogenní, aniontový a/nebo kationtový tenzid mají zlepšené odstraňování skvrn a nečistot od jídla lépe čistí zašlé tkaniny a mají lepší bělicí účinek.

Bez vazby na nějakou konkrétní teorii, se předpokládá, že enzymatická hydrolýza vede k malým částicím, které se snáze odstraňují neionogenními tenzidy bez ohledu na konkrétní nečistotu. Preferované neionogenní tenzidy jsou alkylethoxyláty AE3 až AE7. Také se předpokládá, že kombinace kationtových tenzidů s enzymatickou hydrolýzou sacharidových gum degradovatelných enzymy, poskytuje zlepšený celkový účinek.

Tenzid je typicky přítomen v množství 0,1 .% hmotnostních až 60 % hmotnostních. Preferovanější množství jsou 1 % hmotnostní až 35 % hmotnostních a nejvýhodněji 1 % hmotnostní až 30 % hmotnostních pracího detergentního prostředku podle předkládaného vynálezu.

Tenzid je s výhodou použit tak, aby byl slučitelný s enzymatickými složkami přítomnými v prostředku. V tekutých nebo gelovitých prostředcích je tenzid použit tak, že zvyšuje nebo přinejmenším nenarušuje stabilitu enzymu v těchto prostředcích.

Neionogenní tenzidy

Polyethylen,· polypropylen a polybutylenoxidové kondenzáty s alkylfenoly jsou vhodné pro použití jako neionogenní tenzid v tenzidových systémech podle předkládaného vynálezu, s tím že polypropylenoxidové kondenzáty jsou preferovány. Tyto sloučeniny zahrnují kondenzační produkty alkylfenolů, které mají alkylové skupiny sestávající z 6 až 14 atomů uhlíku, s výhodou z 8 až 14 atomů uhlíku, a to buď s přímým řetězcem, nebo s rozvětveným řetězcem s alkylenoxidem. V preferovaném provedení je ethylenoxid přítomen v množství 2 moly až 25 molů, výhodněji 3 moly až 15 molů, ethylen oxidu na mol

9 9 9

9 9 9 9 9 9 • 9 9 9

9 9 9

alkylfenolu. Komerčně dostupné neionogenní tenzidy tohoto typu zahrnují Igepal” CO-630 prodávaný firmou GAF Corporation a Triton™ X-45, X-114, X-100 a X-102, které jsou všechny prodávány firmou Rohm & Haas Company. Tyto tenzidy se obecně označuj i j ako alkylfenolalkoxyláty (např alkylfenolethoxyláty).

Kondenzační produkty primárních a sekundárních alifatických alkoholů s 1 molem až 25 moly ethylenoxidu jsou vhodné pro použití jako neionogenní tenzid v systému neionogenních tenzidů podle předkládaného vynálezu. Alkylový řetězec alifatického alkoholu je přímý nebo rozvětvený, primární nebo sekundární a obecně sestává z 8 až 22 atomů uhlíku. Preferované jsou kondenzační produkty alkoholů, které mají alkylovou skupinu sestávající z 8 až 20 atomů uhlíku, výhodněji z 10 až 18 atomů uhlíku, se 2 moly až 10 moly ethylenoxidu na mol alkoholu. v uvedených kondenzačních produktech jsou přítomny 2 moly až 7 molů ethylenoxidu a nej výhodněji 2 moly až 5 molů ethylenoxidu na mol alkoholu. Příklady komerčně dostupných neionogenních tenzidů tohoto typu zahrnují Tergitol” 15-S-9 (kondenzační produkt C_n až C₁₅lineárního alkoholu s 9 moly ethylenoxidu), Tergitol” 24-L-6 NMW (kondenzační produkt C₁₂ až C₁₄ primárního alkoholu s 6 moly ethylenoxidu s úzkou distribucí molekulových hmotností) , které jsou oba prodávány firmou Union Carbide Corporation; Neodol™ 45-9 (kondenzační produkt C₁₄ až C_x5 lineárního alkoholu s 9 moly ethylenoxidu) , Neodol” 23-3 (kondenzační produkt C₁₂až C₁₃ lineárního alkoholu se 3,0 molu ethylenoxidu), Neodol” 45-7 (kondenzační produkt C₁₄ až C₁₅ lineárního alkoholu se 7 moly ethylenoxidu), Neodol” 45-5 (kondenzační produkt C₁₄až C₁₅ lineárního alkoholu s 5 moly ethylenoxidu) prodávané firmou Shell Chemical Company; Kyro” EOB (kondenzační produkt C₁₃ až C₁₅ alkoholu s 9 moly ethylenoxidu) , prodávaný firmou The Procter & Gamble Company; a Genapol LA 030 nebo 050 (kondenzační produkt C₁₂ až C₁₄ alkoholu se 3 moly nebo s 5 moly • * 99 9 99 99

999 999 9999

999 9 999 9 «9 «

9999 99 9 9999 99 99 9

9 999 9999

999 9 99 9 99 99 ethylenoxidu), prodávaný firmou Hoechst. Preferovaný rozsah HLB v těchto produktech je 8 až 11 a nejvýhodněji 8 až 10.

Jako neionogenni tenzid v tenzidovém systému podle předkládaného vynálezu jsou také použitelné alkylpolysacharidy popsané v U.S. patentu 4, 565,647, Llenado, vydaném 21. 1. 1986, které obsahují hydrofobní skupiny sestávající z 6 až 30 atomů uhlíku, s výhodou z 10 až 16 atomů uhlíku a polysacharidu, např. polyglykosidu, hydrofilní skupina obsahuje 1,3 až 10, s výhodou 1,3 až 3, nejvýhodněji 1,3 až 2,7 cukerné jednotky. Lze použít jakýkoliv redukující sacharid sestávající z 5 nebo 6 atomů uhlíku, např. glukosa, galaktosa a galaktosylovými skupinami lze nahradit glykosylové skupiny (nepovinně s hydrofobními skupinami připojenými v pozici 2-,

3-, 4- atd., čímž vznikají glukosidy nebo ga-laktosídy). Vazba mezi cukry je např. mezi pozicí jedna na jednom cukru a pozicí 2-, 3-, 4- a/nebo 6- na předcházejícím cukry.

Preferované alkylpolyglykosidy jsou sloučeniny obecného vzorce I:

R²O (C_nH_2nO) _t (glykosyl) _x(I) kde R² je vybráno ze skupiny sestávající z alkylu, alkylfenylu, hydroxyalkylu, hydroxyalkylfenylu a jejich směsí, ve kterých alkyly sestávají z 10 až 18 atomů uhlíku, s výhodou z 12 až 14 atomů uhlíku, n je 2 nebo 3, s výhodou 2, t je 0 až 10, s výhodou 0, a x je 1,3 až 10, s výhodou 1,3 až 3, nejvýhodněji 1,3 až 2,7. Glykosyl je s výhodou odvozen od glukosy. Při přípravě těchto sloučenin se nejprve vyrobí alkohol nebo alkylpolyethoxyalkohol a ten se pak nechá reagovat s glukosou nebo zdrojem glukosy, čímž vznikne glukosid (připojení v pozici 1-) . Další glykosylové jednotky lze pak připojit přes jejich pozici 1- k pozici 2-, 3-, 4a/nebo 6- předcházející glykosylové jednotky, s výhodou zvláště k pozici 2-.

• φ ΦΦΦ· »· » φφ φφ • Φ · ο φ · φ φφφφ φφφφ φ · φ φφφφ · φ φ φ φ φ φ φφφ φφφφ φφφ φ φφ φ ·Φ φφ

Pro použití jako přídavný neionogenní tenzidový systém podle předkládaného vynálezu jsou také vhodné kondenzační produkty ethylenoxidu s hydrofobní bází vznikající kondenzací propylenoxidu s propylenglykolem. Hydrofobní část těchto sloučenin má s výhodou molekulovou hmotnost 1500 až 1800 a není rozpustná ve vodě. Přidání polyoxyethylennových jednotek k této hydrofobní části vede ke zvýšení rozpustnosti molekuly jako celku ve vodě a tekutý charakter produktu se udrží až do bodu, kde je obsah polyethylenu 50 % hmotnostních celkové hmotnosti kondenzačního produktu, což odpovídá kondenzaci až se 40 moly ethylenoxidu. Příklady sloučenin tohoto typu zahrnují některé komerčně dostupné tenzidy, jako je Plurafac™ LF404 a Pluronic”, prodávané firmou BASF.

Také jsou pro použití jako neionogenní tenzidy v systému neionogenních tenzidů podle předkládaného vynálezu vhodné kondenzační produkty ethylenoxidu s produkty vznikajícími reakcí propylenoxidu a ethylendiaminu. Hydrofobní skupina těchto produktů sestává z reakčního produktu ethylendiaminu a přebytku propylen oxidu a obecně má molekulovou hmotnost 2500 až 3000. Tato hydrofobní skupina se kondenzuje s ethylenoxidem v takovém rozsahu, že výsledný produkt kondenzace obsahuje 40 % až 80 % hmotnostních polyoxyethylenu a má molekulovou hmotnost 5 000 až 11 000. Příklady neionogenního tenzidu tohoto typu zahrnují některé komerčně dostupné sloučeniny Tetroníc™ prodávané firmou BASF.

Pro použití jako neionogenní tenzid v tenzidovém systému podle předkládaného vynálezu · jsou preferovány polyethylenoxidové kondenzáty alkylfenolů, kondenzační produkty primárních a sekundárních alifatických alkohlů s 1 molem až 25 moly ethylenoxidu, alkylpolysacharidy a jejich směsi. Nejpreferovanější jsou C₈ až C₁₄ alkylfenolethoxyláty, které obsahují 3 až 15 ethoxylových skupin a C₈ až C₁₈alkoholethoxyláty (s výhodou v průměru C₁₀) , které obsahují 2 až 10 ethoxylových skupin a jejich směsi.

• · ·0 0 00 00

000 00« 0000

000 0 000 0 00 ·

0000 0 0 0 0000 0 0 0 0 0 0 0 *00 0000 *00 · 0« 0 00 0·

Vysoce preferované neionogenní tenzidy jsou tenzidy na bázi amidu polyhydroxymastné kyseliny obecného vzorce II:

R² - C - N - Z

II I

R¹ (II) kde R¹ je H nebo R¹ je C3 až C4 uhlovodík, 2-hydroxyethyl, 2-hydroxypropyl nebo jejich směs, R² je C5 až C₃₁ uhlovodík a Z je polyhydroxyuhlovodík, který má lineární uhlovodíkový řetězec přinejmenším se 3 hydroxylovými skupinami přímo připojenými na řetězec nebo jeho alkoxylovaný derivát. S výhodou je R¹ methyl, R² je přímý C_n až C₁₅ alkyl nebo C₁₆ až ,C₁₈alkyl nebo alkenyl, jako je alkyl odvozený z kokosového oleje nebo jejich směsi, a Z je získáno z redukujícího cukru, jako je glukosa, fruktosa, maltosa, laktosa, reduktivní aminací.

Aniontové tenzidy

Preferované aniontové tenzidy určené pro použití podle předkládaného vynálezu jsou alkylestery sulfátů a lineárních alkylbenzenových tenzidů. Používané vhodné aniontové tenzidy jsou lineární alkylbenzensulfonátové a alkylestersulfonátové tenzidy včetně lineárních esterů C₈ až C₂₀ karboxylových kyselin (tj. mastných kyselin), které jsou sulfonovány plynným S0₃ postupem podle The Journal of the American Oil Chemists Society, 52 (1975), str. 323-329. Vhodné výchozí látky zahrnují přírodní mastné látky, které jsou odvozeny z loje, palmového oleje atd.

Preferovaný alkylestersulfonátový tenzid, zejména pro

použití	při praní,	zahrnuj e	alkylestersulfonátové tenzidy
obecného	vzorce III:		0
			II
		R³ - CH - I	C - OR⁴
		1 so₃m

(III)

kde R³ je C8 až C20 uhlovodík, s výhodou alkyl nebo jejich kombinace, R⁴ je Cx až C₆ uhlovodík, a výhodou alkyl nebo jejich kombinace a M je kation, který tvoří ve vodě rozpustnou sůl s alkylester sulfonátem. Vhodné kationty tvořící sůl zahrnují kovy, jako je sodík, draslík a lithium a substituované nebo nesubstituované amoniové kationty, jako je monoethanolamin, diethanolamin a triethanolamin. S výhodou je R³ C10 až C16 alkyl a R⁴ je methyl, ethyl nebo isopropyl. zejména preferované jsou methylesterysulfonátů, ve kterých R³ je C10 až C₁₀ alkyl.

Další vhodné aniontové tenzidy zahrnují alkylsulfátové tenzidy, kterými jsou ve vodě rozpustné soli nebo kyseliny obecného vzorce IV:

ROSO3M (IV) kde R je s výhodou C₁₀ až C₂₄ uhlovodík, s výhodou alkyl nebo hydroxyalkyl, který zahrnuje C_lo až C₂₀ alkylovou složku, ještě výhodněji C₁₂ až C₁₈ alkyl nebo hydroxyalkyl a M je H nebo kation, např. kation alkalického kovu (např. sodík, draslík, lithium) nebo amonný nebo substituovaný amonný kation (např. methyl-, dimethyl- a trimethylamonný kation a kvarterní amonné kationty, jako je tetramethylamonný kation a dimethylpiperidiniový kation a kvarterní amoniové kationty odvozené z alkylaminů, jako je ethylamin, diethylamin, triethylamin a jejich směsi a podobně) . Typicky jsou alkyly C₁₂až C₁₆ preferovány pro nižší prací teploty (např. nižší než 50 °C) a alkyly C₁₆ až C₁₈ jsou preferovány pro vyšší prací teploty (např. vyšší než 50 °C).

Do detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu lze použít i další, aniontové tenzidy použitelné pro čisticí účely. Ty zahrnují soli (včetně, například, sodných, draselných, amonných a substituovaných amonných solí, jako jsou mono-, dia triethanolaminové soli) mýdla, C₈ až C₂₂ primární nebo sekundární alkansulfonáty, C₈ až C₂₄ olef insulfonáty, • φ • · Φ · e 9 φφφφ ···.· · · · · · · · • ·ΦΦΦ · · · ···· · Φ Φ Φ Φ • φ φ·φ φφφφ •ΦΦ · ·Φ Φ φφ ΦΦ sulfonované polykarboxylové kyseliny připravené sulfonací pyrolyzovaného produktu z citrátů kovů alkalických zemin, např. postupem, který je popsán v britské patentové přihlášce č. 1,082, 179, C₈ až C₂₄ alkylpolyglykolethersulfáty (obsahující až 10 molů ethylenoxidu), alkylglycerolsulfonáty, acylglycerolsulfonáty mastných kyselin, glycerol sulfáty odvozené od mastných olejů, alkylfenolethylenoxidethersulfáty, parafinsulfonáty, alkylfosfáty, isethionáty, jako jsou aacylisethionáty, N-acyltauráty, alkylsukcinamáty a sulfosukcináty, monoestery sulfosukcinátů (zejména nasycené a nenasycené C₁₂ až C₁₈ monoestery) a diestery sulfosukcinátů (zejména nasycené a nenasycené C₆ až C₁₂ diestery), acyl sarkosináty, sulfáty alkylpolysacharidů, jako jsou sulfáty alkylpolyglukosidů (neionogenní nesulfonované sloučeniny, které jsou popsány dále), rozvětvené primární alkylsulfáty a alkylpolyethoxykarboxyláty, jako jsou sloučeniny obecného vzorce V:

RO (CH₂CH₂O) _k-CH₂COO-M⁺ (V) kde R je C_g až C₂₂ alkyl, k je celé číslo 1 až 10 a M je kation tvořící rozpustnou sůl. Také jsou vhodné kyseliny z pryskyřic a hydrogenované kyseliny z pryskyřic, jako je rosin, hydrogenovaný rosin a kyseliny z pryskyřic a hydrogenované kyseliny z pryskyřic přítomné nebo odvozené z tálového oleje.

Další příklady jsou posány v knize Surface Active Agents and Detergents (sv. I a II, Schwartz, Perry a Berch) . Různé takové tenzidy jsou také obecně popsány v U.S. patentu 3,929,678, vydaném 30. 12. 1975, Laughlin a kol., sloupec 23, řádek 58 až sloupec 29 řádek 23, které jsou zde uvedeny jako reference) .

Pokud jsou použity, pak prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu typicky obsahují 1 % hmotnostní až 40 % hmotnostních, s výhodou 3 % hmotnostní až 20 % hmotnostních takových aniontových tenzidů.

• ···· * ·

Vysoce preferované aniontové tenzidy, zahrnující alkylalkoxylované sulfátové tenzidy, podle předkládaného vynálezu jsou ve vodě rozpustné soli nebo kyseliny obecného vzorce VI:

RO (A) _mSOjM (VI) kde R je nesubstituovaný C₁₀ až C₂₄ alkyl nebo hydroxyalkyl, obsahující C₁₀ až C₂₄ alkylovou složku, s výhodou C₁₂ až C₂₀ alkyl nebo hydroxyalkyl, ještě výhodněji C₁₂ až C₁₈ alkyl nebo hydroxyalkyl, A je ethoxyl nebo propoxyl, m je větší než nula, typicky 0,5 až 6, výhodněji 0,5 až 3 a M je H nebo kation, kterým je, například, kation kovu (např. sodný, draselný, litný, vápenatý, hořečnatý, atd.), amonný nebo substituovaný amonný kation. Pro předkládaný vynález jsou také vhodné alkylethoxylované sulfáty stejně jako alkylpropoxylované sulfáty. Konkrétní příklady substituovaných amonných kationtů zahnrují methyl-, dimethyl-, trimethylamonné kationty a kvarterní amonné kationty, jako je tetramethylamonný a dimethylpiperidiniový kation a ty, které jsou odvozeny z alkylaminů, jako je ethylamin, diethylamin, triethylamin,

jejich směsi 'a podobně.	Příklady tenzidů jsou	C₁₂	až	^18
alkylpolyethoxylát (1,0)	sulfát (C₁₂-C₁₆E (1, 0)M) ,	0-12	až	čie
alkylpolyethoxylát (2,25)	sulfát (C₁₂-C₁₈E (2,25)M) ,	c₁₂	až	C₁₈
alkylpolyethoxylát (3,0)	sulfát (C₁₂-C₁₈E (3, 0)M) a	c₁₂	až	C₁₈
alkylpolyethoxylát (4,0)	sulfát (C₁₂-C₁₈E (4, 0)M) ,	kde	M	je

vybráno ze sodíku a draslíku.

Kationtové tenzidy

Kationtové čisticí tenzidy vhodné pro použití v pracích detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou takové, které mají jednu uhlovodíkovou skupinu s dlouhým řetězcem. Příklady takových kationtových tenzidů zahrnují amonné tenzidy, jako jsou alkyltrimethylamoniumhalogenidy a tenzidy obecného vzorce VII:

• · • · · · · · · · · · · • ···· · · · ···· · · · · 9 · · · * ···· «·· « ·· 9 99 99 [R²(OR³)y] [R⁴ (OR³) y] ₂R⁵N⁺ X' (VII) kde R² je alkyl nebo alkylbenzyl, sestávající z 8 až 18 atomů uhlíku v alkylovém řetězci; každé R³ je vybráno ze skupiny sestávající z -CH2CH2~, -CH2CH (CH3)-, CH2CH (CH2OH)-, -CH2CH2CH2- a jejich směsí; každé R⁴ je vybráno ze skupiny sestávající z Cx až C₄ alkylu, C_x až C₄ hydroxyalkylu, benzylové cyklické struktury vzniklé spojením dvou skupin R⁴,

-CH₂-CHOH-CHOHCOR⁶CHOHCH₂OH, kde R⁶ je jakákoliv hexosa nebo hexosový polymer o molekulové hmotnosti nižší než 1000 a hodík, kdy Y není 0; R⁵ je stejné jako R⁴ nebo se jedná o alkyl, ve kterém není celkové množství atomů uhlíku R² plus R⁵větší než 18; každé y je 0 až 10 a celkový součet y je 0 až 15; a X je jakýkoliv slučitelný anion.

Kvartem! amoniový tenzid vhodný pro použití podle předkládaného vynálezu je sloučenina obecného vzorce VIII:

(VIII) kde R1 je alkyl s krátkým řetězcem (C6 až CIO) nebo alkylamidoalkyl obecného vzorce IX:

c₆-c₁₀·

(IX) y je 2 až 4, s výhodou 3,

R2 je H nebo Cl až C3 alkyl, x je 0 až 4, s výhodou 0 až 2, nejvýhodněji 0,

R3, R4 a R5 jsou stejné nebo různé a jedná se buď o alkyl s krátkým řetězcem (Cl až C3) nebo alkoxylovaný alkyl obecného vzorce X:

• · · · · · · · · • · » · · * · · · « ··· · · · · · · · 9 • ···· · · · ···· « Φ · · · • · ··· · · · · • · · · « · · · · · · kde R6 je C_x až C₄ alkyl a z je 1 nebo 2

X' je anion, s výhodou halogenid, např. methylsulfát.

Preferované kvartemí amoniové tenzidy jsou takové, které odpovídají sloučenině obecného vzorce VIII, a

R_x je C₈, C₁₀ nebo jejich směs, x=o,

R₃, R₄ = CH₃ a R₅ = CH₂CH₂OH.

Vysoce preferované kationtové tenzidy jsou ve vodě rozpustné kvartemí amoniové sloučeniny použitelné v prostředcích podle předkládaného vynálezu obecného vzorce XI:

chlorid nebo

R₁R₂R₃R₄N⁺ X (XI) kde R_x je C₈ až C₁₆ alkyl, každé z R₂, R₃ a R₄ jsou nezávisle C_xaž C₄ alkyl, C_x až C₄ hydroxyalkyl, benzyl a ~(C₂H₄₀)_xH, kde x je 2 až 5 a X je anion. Ne více než jedno z R₂, R₃ nebo R₄ by nemělo být benzyl. Preferovaná délka alkylového řetězce R_x je C₁₂ až C₁₅ zejména když je alkyl směs řetězců různých délek odvozených z kokosového oleje nebo palmového oleje nebo je odvozen synteticky výstavbou olefinů nebo 0X0 alkoholovou syntézou. Preferované skupiny pro R₂R₃ a R₄ jsou methyl a hydroxyethyl a anion X je vybrán ze skupiny sestávající z halogenidu, methylsulfonátu, octanu a fosforečnanu.

Příklady vhodných kvarterních amoniových sloučenin obecného vzorce XI určených pro použití podle předkládaného vynálezu jsou:

(kokosový alkyl)trimethylamoniumchlorid nebo bromid;

(kokosový alkyl)methyldihydroxyethylamoniumchlorid nebo bromid;

decyltriethylamoniumchlorid;

decyldimethylhydroxyethylamoniumchlorid nebo bromid;

«9 * 9 9 · · • 9 · · · · · • · 9 9 9 9 9 9

9999999 99 · • 9 · 9 9 9 9 • · 9 9» 99

C₁₂ až C₁₅ dimethylhydroxyethylamoniumchlorid nebo bromid;

(kokosový alkyl)dimethylhydroxyethylamoniumchlorid nebo bromid;

myristyltrimethylamoniummethylsulfát; lauryldimethylbenzylamoniumchlorid nebo bromid; lauryldimethyl (ethenoxy) „amoniumchlorid nebo bromid; cholinestery (sloučeniny obecného vzorce XI, kde R_x je

CH₂-CH₂-O-C-C₁₂ až C₁₄ alkyl a R,, R, a R₄ jsou methyly) .

II dialkylimidazoly (sloučeniny obecného vzorce XI).

Další kationtové tenzidy použitelné v předkládaném vynálezu jsou také popsány v U.S. patentu 4,228,044, Cambre, vydaném 14. října 1980 a v evropské patentové přihlášce EP 000,224.

Typické kationtové složky určené pro změkčování tkanin zahrnují ve vodě nerozpustné kvarterní amoniové látky aktivní při změkčování tkanin nebo jejich odpovídající aminové prekursory, přičemž nejpoužívanější jsou di-(alkyl s dlouhým řetězcem)amoniumchlorid nebo methylsulfát.

Z nich jsou preferovaná kationtové změkčovadla následující:

1) di(alkyl odvozený z loje)dimethylamoniumchlorid (DTDMAC);

2) di(hydrogenovaný alkyl odvozený z loje)dimethylamoniumchlorid;

3) di(hydrogenovaný alkyl odvozený z loje)dimethylamoniummethylsulfát;

4) distearyldimethylamoniumchlorid;

5) dioleyldimethylamoniumchlorid;

6) dipalmitylhydroxyethylmethylamoniumchlorid;

7) stearylbenzyldimethylamoniumchlorid;

8) di(alkyl odvozený z loje)trimethylamoniumchlorid;

9) di(hydrogenovaný alkyl odvozený z loje)trimethylamoniumchlorid;

10) C₁₂ až C₁₄ alkyl hydroxyethyldimethylamoniumchlorid;

11) C₁₂ až C₁₈ alkyl dihydroxyethylmethylamoniumchlorid;

12) di(stearoyloxyethyl)dimethylamoniumchlorid (DSOEDMAC);

• 9 99 9 99 9 9 • · · ♦ · · 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 9 9 9999 φ * · φ Φ

Φ Φ Φ · Φ φφφφ «ΦΦ 4 ΦΦ Φ ΦΦ ··

13) di(alkyl odvozený z loje - oxyethyl)dimethylamoniumchlorid;

14) di(alkyl odvozený z loje)imidazoliniummethylsulfát;

15) 1-[2-(alkyl odvozený z loje)ylamidoethyl]-2-(alkyl odvozený z loje)ylimidazoliniummethylsulfát.

Biodegradovatelné kvarterní amoniové sloučeniny byly představeny jako alternativy k tradičně používaným di(alkyl s dlouhým řetězcem)amoniumchloridům a methylsulfátům. Takové kvarterní amoniové sloučeniny obsahují alk(en)ylové skupiny s dlouhým řetězcem přerušené funkčními skupinami, jako jsou karboxylové skupiny. Takové materiály a prostředky změkčující tkaniny, ve kterých jsou obsaženy, jsou popsány v mnoha publikacích, jako je EP-A-0, 040,562 a EP-A-0,239, 910.

Kvarterní amoniové sloučeniny a aminové prekursory podle předkládaného vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce XII:

R3 _/R2

N— (CH₂)_n-Q-Tl Rl

X^- (xii) nebo sloučeniny obecného vzorce XIII:

R2 /

—(CH₂)_n—CH-CH₂

Á. 6 i

Ίί

XT (xiii) kde Q je vybráno ze skupiny sestávající z -O-C(O)-, -C(O)-O-, -O-C(O)-O-, -NR⁴-C(O)~, -C(O)-NR⁴-,

R¹ je (CH₂)_n-Q-T² nebo T³,

R² je (CH₂)_m-Q-T⁴ nebo T⁵ nebo R³,

R³ je C_x až C₄ alkyl nebo C_x až C₄ hydroxyalkyl nebo H,

R⁴ je H nebo C_x až C₄ alkyl nebo C_x až C₄ hydroxyalkyl,

T¹, T², T³, T⁴, T⁵ jsou nezávisle C_n až C₂₂ alkyl nebo alkenyl,

000 0 00 0 • ···· 0 · 0 00 00 0 0 0 0 0 • · 000 0000

0 0 0 00 0 00 0 0 n a m jsou celá čísla 1 až 4 a

X' je anion slučitelný se změkčovadlem. Nikterak neomezující příklady aniontů slučitelných ze změkčovadlem zahrnují chlorid nebo methylsulfát.

Alkyl nebo alkenyl, řetězce T¹, T², T³, T⁴, T⁵ musí sestávat přinejmenším z 11 atomů uhlíku. Řetězec je přímý nebo rozvětvený. Lůj je běžný a levný zdroj alkylů a alkenylů s dlouhým řetězcem. Zejména preferovány jsou sloučeniny, ve kterých T¹, T², T³, T⁴, T⁵ představují směs materiálů s dlouhým řetězcem, typicky z loje.

Konkrétní příklady kvarterních amoniových sloučenin vhodných pro použití ve vodných prostředcích určených na změkčování tkanin podle předkládaného vynálezu zahrnují:

1) N,N-di(alkyl odvozený z loje - oxyethyl)-N,N-dimethylamoniumchlorid;

2) N,N-di(alkyl odvozený z loje - oxyethyl)-N-methyl-N-(2-hydroxyethyl)amoniummethylsulfát;

3) N,N-di[2-(alkyl odvozený z loje)yloxy-2-oxoethyl]-N,N-dimethylamoniumchlorid;

4) N,N-di[2-(alkyl odvozený z loje)yloxyethylkarbonyloxyethyl]-N,N-dimethylamoniumchlorid;

5) N-[2-(alkyl odvozený z loje)yloxy-2-ethyl]-N-[2-(alkyl odvozený z loje)yl-2-oxoethyl]-N,N-dimethylamoniumchlorid;

6) Ν,Ν,Ν-tri[(alkyl odvozený z loje)yloxyethyl]-N-methylamoniumchlorid;

7) N-[2-(alkyl odvozený z loje)yloxy-2-oxoethyl]-N-(alkyl odvozený z loje)-N,N-dimethylamoniumchlorid; a

8) 1,2-dí(alkyl odvozený z loje)yloxy-3-trimethylamoniumpropanchlorid;

a směsi těchto materiálů.

Při použití takových kationtových tenzidů v pracích detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu budou kationtové tenzidy typicky tvořit 0,2 % hmotnostních až 25 % hmotnostních, s výhodou 1 % hmotnostní až 8 % hmotnostních.

• · * · · 4 • 4 4 4 4 4

444444 44

4 4 ·

4 4 4 4 4

reduktas, pululanas,

Konvenční detergentní enzymy

Prací detergentní prostředky s výhodou obsahují kromě enzymů odbourávajících sacharidové gumy jeden nebo více enzymů, které mají čisticí účinek, pečují o látky a/nebo provádějí apreturu látky, s výhodou celulasy a/nebo amylasy.

Překvapivě bylo zjištěno, že prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu obsahující další enzym, zejména celulasu a/nebo amylasu mají lepší účinnost při odstraňování skvrn a nečistot z jídla, čištění zapranosti a bělení. Konkrétně bylo zjištěno, že celulolytické enzymy jsou zejména použitelné při odbourávání látek přidávaných do jídal na celulosových polysacharidů, a proto jsou použitelné při napomáhání odstraňování skvrn/nečistot z bavlněných tkanin.

Bez vazby na nějakou konkrétní teorii sě předpokládá, že tento zlepšený čisticí účinek je výsledkem společného působení enzymaticky hydrolyzujíčího celulasového enzymu na bavlněnou tkaninu a enzymu odbourávajícího sacharidovou gumu na polysacharid vážící skvrnu na bavlněnou tkaninu. Podobně dochází ke zlepšenému čisticímu účinku při působení amylasy na apretační prostředek pokrývající povrch bavlněné tkaniny a enzymu odbourávajícího sacharidovou gumu na polysacharid vážící skvrnu na bavlněnou tkaninu.

Takové enzymy zahrnují enzymy vybrané z celulas, hemicelulas, peroxidas, proteas, glukoamylas, amylas, xylanas, lipas, fosfolipas, esteras, kutinas, pektinas, keratanas, oxidas, fenoloxidas, lipoxygenas, ligninas, tanas, pentosanas, β-glukanas, arabinosidas, hyaluronidas, chondritinas, lakas nebo jejich směsi.

Celulasy použitelné podle předkládaného vynálezu zahrnují bakteriální i houbové celulasy. S výhodou mají pH optimum 5 až 12 a specifickou aktivitu vyšší než 50 CEVU/mg (CÉVU celulosová viskozitní jednotka). Vhodné celulasy jsou popsány v U.S. patentu 4,435,307, Barbesgoard a kol.,

WO96/02653, které popisují houbové celulasy

J61078384 a produkované • · · · ♦ · · «· • · » · * 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

99999· 9999999 99 9 • · 9 9 9 9 9 9 9

9 * ·· · 99 99

Humicola insolens, Trichoderma, Thielavia a Sporotrichum.

EP 739 982 popisuje celulasy izolované z nových druhů

Bacillus. Vhodné celulasy jsou také popsány v GB-A-2,075,028; GB-A-2,095,275; DE-OS-2,247,832 a WO95/26398.

Příklady takových celulas jsou celulasy produkované kmenem Humicola insolens (Humicola grisea var. thermoidea), zejména kmenem Humicola DSM 1800.

Další vhodné celulasy jsou celulasy pocházející z Humicola insolens o molekulové hmotnosti 50 kDa, isoelektrickém bodu 5,5 a obsahující 415 aminokyselin, a 43 kDa endoglukanasa odvozená z Humicola insolens, DSM 1800, vykazující celulasovou aktivitu, přičemž preferovaná endoglukanasová složka má aminokyselinovou sekvenci popsanou v PCT patentové přihlášce č. WO 91/17243. Také jsou vhodné celulasy jako jsou EGIII celulasy z Trichoderma longibrachiatum popsané ve W094/21801, Genencor, vydaném 29. září 1994. Zvláště vhodné celulasy jsou celulasy, které chrání barvy. Příklady takových celulas jsou celulasy popsané v Evropské patentové přihlášce č. 91202879.2, podaném 6. listopadu 1991 (Novo), zejména použitelné jsou Carezyme a Celluzyme (Novo Nordisk A/S). Viz také WO91/17244 a WO91/21801. Další celulasy vhodné pro péči o tkaniny a/nebo své čistící vlastnosti jsou popsány ve WO96/34092, WO96/17996 a WO95/24471.

Tyto celulasy jsou normálně použity v detergentních prostředcích v množstvích 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní čistého enzymu vztaženo na hmotnost deetrgentního prostředku.

Pro odstraňování skvrn na bázi cukrů lze použít amylasy (a a/nebo β). WO94/02597, Novo Nordisk A/S, vydaný 3. února 1994, popisuje čistící prostředky, které obsahují mutantní amylasy.

Viz také W095/10603, Novo Nordisk A/S, vydaný 20. dubna 1995.

Další amylasy známé pro použití v čistících prostředcích zahrnují a- a β-amylasy. oc-amylasy jsou známé v dané tij · ·

4 4 · problematice a zahrnují ty, které jsou popsané v U. č. 5,003,257; EP 252,666; W091/00353; FR

EP 285.123·; EP 525,610; EP 368,341 a britské ♦ · 4 4*4«

4 4 4 · 44 ·

4444444 44 4 • · · 4 4 4 4

4 44 44

S. patentu 2, 676, 456; patentové přihlášce č. 1,296,839 (Novo). Další vhodné amylasy jsou amylasy se zvýšenou stabilitou popsané ve WO94/18314, vydaném 18. srpna 1994 a WO96/05295, Genencor, vydaném 22. února 1996 a amylasové varianty, které mají další modifikace, dostupné od firmy Novo Nordisk A/S, popsané ve WO 95/10603, vydaném v dubnu 1995. Také jsou vhodné amylasy popsané v EP 277 216,

WO95/26397 a WO96/23873 (vše od firmy Novo Nordisk).

Příklady komerčních ct-amylasových produktů jsou Purafect Ox Am® od firmy Genencor a Termamyl®, Ban®, Fungamyl® a Duramyl®, které jsou všechny dostupné od firmy Novo Nordisk A/S Dánsko. WO95/26397 popisuje další vhodné amylasy: α-amylasy, které mají specifickou aktivitu přinejmenším o 25 % vyšší než Termamyl® v etplotním rozsahu 25 °C až 55 °C a při hodnotách pH 8 až 10, měřeno pomocí testu na ct-amylasovou aktivitu Phadebas®. Vhodné jsou varianty uvedených enzymů popsané ve WO96/23873 (Novo Nordisk). Další amylolytické enzymy se zlepšenými vlastnostmi ve vztahu k úrovni aktivity a kombinací tepelné stability a vyšší aktivity jsou popsány ve WO95/35382.

Amylolytické enzymy jsou v detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu v množstvích 0,0001 % hmotnostníchaž 2 % hmotnostní, s výhodou 0,00018 % hmotnostních až 0,06 % hmotnostních, výhodněji 0,00024 % hmotnostních až 0,048 % hmotnostních čistého enzymu vztaženo na hmotnost prostředku.

Preferovaná kombinace je prací deetrgentní prostředek, který je směsí běžně používaných enzymů jako jsou proteasa, amylasa, lipasa, kutinasa a/nebo celulasa ve spojení s jedním nebo více enzymy odbourávajícími stěny rostlinných buněk.

Peroxidasové enzymy se používají v kombinaci se zdroji kyslíku, např. peroxyuhličitanem, peroxyboritanem, peroxysíranem, peroxidem vodíku, atd. a s fenolickým

9 · • · · ♦ 9 * 9 • · substrátem, jako jsou molekuly zlepšující bělení. Používají se pro bělení roztoku, tj . brání přenosu barviv nebo pigmentů ze substrátů během praní na další substráty v pacím roztoku. Peroxidasové enzymy jsou v dané problematice známy, například, křenová peroxidasa, ligninasa a haloperoxidasa, jako je chlora bromperoxidasa. Detergentní prostředky obsahující peroxidasu jsou popsány, například, v PCT mezinárodní přihlášce WO 89/099813, WO89/09813 a v evropské patentové přihlášce EP č. 91202882.6, podané 6. listopadu 1991 a EP č. 96870013.8, podané 20. února 1996. Také je vhodný lakasový enzym.

Podpůrné látky se používají v množství 0,1 % hmotnostních až 5 % hmotnostních vztaženo na celkovou hmotnost prostředku. Preferované podpůrné látky jsou substituované fenthiaziny a fenoxaziny, 10-fenothiazinpropionová kýseliná (PPT), 10-ethylfenothiazin-4-karboxylová kyselina (EPC), 10-fenoxazinpropionová kyselina (POP) a 10-methylfenoxazin (popsaný ve WO 94/12621) a substituované syringáty (C3 až C5 substituované alkylsyringáty) a fenoly. Preferované zdroje peroxidu vodíku jsou peroxyuhličitan sodný nebo peroxyboritan sodný.

Tyto peroxidasy jsou normálně používány v detergentním prostředku v množství 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní čistého enzymu vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Další preferované enzymy, které se používají do detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu zahrnují lipasy. Vhodné Upasové enzymy pro použití v detergentech zahrnují ty, které produkují mikroorganismy ze skupiny Pseudomonas, jako je Pseudomonas stutzeri ATCC 19.154, jak je popsáno v britském patentu 1,372,034. Vhodné lipasy zahrnují ty, které vykazují pozitivní imunologickou křížovou reakci s protilátkou na lipasu, vyráběné mikroorganismem Pseudomonas fluorescent IAM 1057. Tato lipasa je dostupná od firmy Amano Pharmaceutical Co. Ltd., Nagoya, Japonsko, pod obchodním názvem Lipase P Amano, který se dále označuje jako

4» 44

4 4 4

4 4 «

4 4 4

Amano-P. Další vhodné komerčně dostupné lipasy zahrnují Amano-CES, lipasy z Chromobakter viscosum, např. Chromobacter viscosum var. lipolyticum NRRLB 3673 od firmy Toyo Jozo Co., Tagata, Japan, Chromobakter viscosum lipasy od firmy U.S. Biochemical Corp., USA a Disoynth Co., Nizozemí a lipasy z Pseudomonas gladioli. Zejména vhodné lipasy jsou lipasy, jako je Ml Lipasa® a Lipomax® (Gist-Brocades) a Lipolase® a Lipolase Ultra® (Novo), o kterých bylo zjištěno, že jsou velmi účinné při použití v kombinaci s prostředky podle předkládaného vynálezu. Také jsou vhodné lipolytické enzymy popsané v EP 258 068, WO 92/05249 a WO 95/22615 firmy Novo Nordisk a ve WO 94/03578, WO 95/35381 a WO 96/00292 firmy Unilever.

Také jsou vhodné kutinasy [EC 3.1.1.50], které lze pokládat za zvláštní druh lipasy, konkrétně lipas, které nevyžadují povrchovou aktivaci. Přídavek kutinas do detergentních prostředků byl popsán např. ve WO-A-88/09367 (Genencor); WO 90/09446 (Plant Genetic System) a WO 94/14963 a WO 94/14964 (Unilever).

Lipasy a/nebo kutinasy jsou normálně používány v detergentním prostředku v množství 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní čistého enzymu vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Vhodné proteasy jsou subtilisiny, které se získávají z konkrétních kmenů B. subtilis a B. licheniformis (subtilisin BPN a BPN') . Jedna z vhodných proteas se získává z kmenu Bacillus, který má maximální aktivitu v rozsahu pH 8 až 12, vyvinutém a prodávaném jako ESPERASE® firmou Novo Industries A/S z Dánska, dále označované jako Novo. Příprava tohoto enzymu a analogických enzymů je popsána v GB 1,243,784 firmy Novo. Další vhodné proteasy zahrnují ALCALASE®, DURAZYM® a SAVINASE® firmy Novo a MAXATASE®, MAXACAL®, PROPERASE® a MAXAPEM® (protein vyvinutý jako Maxacal) od firmy Gist-Brocades. Proteolytické enzymy také zahrnují modifikované bakteriální serinové proteasy, jako jsou ty, které jsou

9 99 9 99 99

99» 999 9999

9 9 9 999 9 99 · • 9999 99 9 9999 99 99 9

9 999 9999

999 9 99 9 99 99 popsány v evropské patentové přihlášce sériového čísla 87 303761.8, podané 28. dubna 1987 (konkrétně strany 17, 24 a 98) a které se v předkládaném vynálezu nazývají Proteasa B a v evropské patentové přihlášce 199,404, Venegas, vydané 29. října 1986, která se týká upraveného bakteriálního serinového proteolytického enzymu, který se v předkládaném vynálezu nazývá Proteasa A. Vhodná je také proteasa, ketrá se v předkládaném vynálezu nazývá Proteasa C, což je variant alkalické serinové proteasy z Bacillus, ve kterém je v pozici 27 nahrazen lysin argininem, v pozici 104 nahrazen tyrosin valinem, v pozici 123 nahrazen serin asparaginem a v pozici 274 nahrazen alanin threoninem. Proteasa C je popsána v EP 90915958:4, odpovídající WO 91/06637, vydaném 16. května 1991. V předkládaném vynálezu jsou také zahrnuty geneticky modifikované varianty, zejména Proteasy C.

Preferovaná proteasa se označuje jako Proteasa D a je to hydrolasový variant, který má aminokyselinovou sekvenci, která se nenachází v přírodě a která je odvozena z prekurzoru karbonylhydrolasy nahrazením různých aminokyselin za různé aminokyselinové zbytky v pozicích, které jsou v karbonylhydrolase ekvivalentní pozici +76, s výhodou také v kombinaci s jedním nebo více aminokyselinovými zbytky v pozicích ekvivalentních pozici vybrané ze skupiny sestávající +99, +101, +103, +104, +107, +123, +127, +105, +109, +126, +128, +135, +156, +166, +195, +197, +204, +206, +210, +216, +217, +218, +222, +260, +265 a/nebo +274 podle číslování subtilisinu Bacillus amyloliquefaciens, jak je popsáno ve WO95/10591 a v patentové přihlášce C. Ghosh a kol., Bleaching Compositions Comprising Protease Enzymes, která má US sériové č. 08/322,677, podaná 13. října 1994. Také je vhodný karbonylhydrolasový variant proteasy popsané ve WO95/10591, který má aminokyselinovou sekvenci, která je odvozena z prekurzoru karbonylhydrolasy nahrazením různých aminokyselin v pozicích, které jsou v prekurzorovém enzymu ekvivalentní • 9

9999 9

9 99 99

9 9 9 9 9 9

999 9 99 9

9 9999 99 99 9

9 9 9 9 9 9

9 9* 99 pozici +210 v kombinaci s jedním nebo více následujících zbytků +33, +62, +67, +76, +100, +101, +103, +104, +107, +128, +129, +130, +132, +135, +156, +158, +164, +166, +167, +170, +209, +215, +217, +218 a +222, kde číslování pozic odpovídá přirozenému subtilisinu z Bacillus amyloliquefaciens nebo odpovídajícím aminokyselinovým zbytkům v jiných karbonylhydrolasách nebo subtilisinech, jako je Bacillus lentus subtilisin (společně projednávaná patentová přihláška US sériové č. 60/048,550, podaná 4. června 1997).

Do předkládaného vynálezu jsou také vhodné proteasy popsané v patentové přihlášce EP 251 446 a WO 91/06637, proteasa BLAP® popsaná ve WO91/02792 a její varianty popsané ve WO 95/23221.

Viz také proteasa do vysokého pH z Bacillus sp. NCIMB 40338 popsaná ve WO 93/18140 A, Novo. Enzymatické detergenty obsahující proteasu, jeden nebo více dalších enzymů a reverní proteasový inhibitor jsou popsány ve WO 92/03529 A, Novo. Pokud je potřeba, je dostupná proteasa, která má snížené adsorpční schopnosti a zvýšenou účinnost při hydrolýze, popsaná ve WO 95/07791, Procter & Gamble. Rekombinantní proteasa podobná trypsinu vhodná do detergentů podle předkládaného vynálezu je popsána ve WO 94/25583, Novo. Další vhodné proteasy jsou popsány v EP 516 200, Unilever.

Proteolytické enzymy jsou používány v detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu v množství 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní, s výhodou 0,001 % hmotnostních až 0,2 % hmotnostních, ještě výhodněji 0,005 % hmotnostních až 0,1 % hmotnostních čistého enzymu vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Uvedené enzymy jsou jakéhokoliv vhodného původu, jako je rostlinný, živočišný, bakteriální, z hub a z kvasnic. Původ je dále mezofilní nebo extremofilní (psychrofilní, psychrotropní, termofilní, barofilní, alkalofilní, acidofilní, halofilní, atd.). Lze použít čištěné nebo nečištěné formy těchto enzymů.

V dnešní době je běžnou praxí upravovat původní přírodní typy

9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 9 9999 99 99 9 • · 9 9 9 9 9 9

9 99 9 99 99 enzymů technikami proteinového nebo genového inženýrství, aby se optimalizovala jejich účinnost v čisticích prostředcích podle předkládaného vynálezu. Například lze navrhnout takové varianty, kdy je zvýšena slučitelnost enzymu vůči běžným složkám takových prostředků. Alternativně lze navrhount variantu, kdy je optimální pH, stabilita při bělení a působení chelátů, katalytická aktivita a podobně u enzymu upraveno přesně podle potřeb konkrétního čisticího použití.

Konkrétně je třeba dávat pozor na aminokyseliny citlivé na oxidaci v případě stability při bělení a na povrchové napětí při slučitelnosti s detergenty. Isoelektrický bod takových enzymů lze upravit nahrazením některých nabitých aminokyselin, např. zvýšení isoelektrického bodu pomůže zlepšit slučitelnost s aniontovými tenzidy. Stabilitu enzymů lze dále zvýšit vytvořením např. přídavných solných můstků a zesílením center vážících kov, aby se zvýšila stabilita při působení chelátů. Zvláštní pozornost je třeba věnovat celulasám, protože většina celulas má oddělené vazebné domény (CBD). Vlastnosti takových enzymů lze dále změnit úpravami v těchto doménách.

Tyto enzymy jsou normálně používány v detergentních prostředcích v množstvích 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní čistého enzymu vztaženo na celkovou hmotnost prostředku. Enzymy lze přidat jako oddělené složky (tablety, granulát, stabilizované tekutiny, atd.) obsahující jeden enzym nebo jako směs dvou či více enzymů (např. kogranuláty).

Další složky, které lze použít do detergentů, jsou tlumiče oxidace enzymů, které jsou popsány ve společně projednávané evropské patentové přihlášce 92870018.6, podané

31. ledna 1992. Příklady takových tlumičů oxidace enzymů jsou ethoxylované tetraethylenpolyaminy.

Mnoho enzymatických materiálů a prostředky pro jejich použití v syntetických detergentních prostředcích jsou také popsány ve WO 9307263 A a WO 9307260 A, Genencor International, WO 8908694 A, Novo a US 3,553,139, · 00 0 00 00 »0 0 0 0 0 0**0 ··· · 0 0 0 · 0 0 · • 0000 0 0 0 0000 0 0 * 0 ·

0 000 00*0

0*0 · 00 * *0 0*

5. ledna 1971, McCarty a kol. Enzymy jsou dále popsány v US 4,101,457, Plače a kol., 18. července 1978 a v US 4,507,219, Hughes, 26. března 1985. Enzymové materiály použitelné do tekutých detergentních prostředků a jejich zahrnutí do takových prostředků jsou popsány v US 4,261,868, Hora a kol.,

14. dubna 1981. Enzymy určené pro použití v detergentech se různými způsoby stabilizují. Techniky stabilizace enzymů jsou popsány a jejich příklady jsou uvedeny v US 3,600,319, 17.

srpna 1971, Gedge a kol., EP 199,405 a EP 200,586,

29. října 1986, Venegas. Stabilizace enzymového systému je také popsána, například, v US 3,519,570. Použitelný kmen Bacillus sp. AC 13 poskytující proteasy, xylanasy a celulasy je popsán ve WO 9401532 A, Novo.

Bělicí činidlo

Překvapivě bylo zjištěno, že prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu dále obsahující bělicí činidlo, zejména bělicí systém s bělicím aktivátorem, jsou účinnější při odstraňování svrn/nečistot z jídla, odstraňování zapranosti a při bělení. Bez vazby na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že bělicí systémy s bělicím aktivátorem snáze působí na menší chromoforní částice vznikající ze sacharidových gum enzymatickou hydrolýzou, a to zejména při nižší teplotě.

Další nepovinné detergentní složky, které lze použít do pracích detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu zahrnují bělicí činidla, jako je peroxid vodíku, PB 1, PB 4 a peroxyuhličitan s velikostí částic 400 mikrometrů až 800 mikrometrů.

Tato bělicí činidla zahrnují jedno nebo více kyslikatých bělicích činidel a, vzávislosti na vybraném bělicícm činidle, jeden nebo více bělicích aktivátorů. Pokud jsou použity, pak jsou kyslíkaté bělicí sloučeniny typicky přítomny v množství 1 % hmotnostní až 25 % hmotnostních.

• 9 9 9 » 9 9 1

9 9 <

> 9 9 1

9 9 4

99 zahrnují hexahydrát methachlorperoxybenzoát

Bělicí činidlo pro použití podle předkládaného vynálezu je jakékoliv bělicí činidlo používané do pracích detergentních prostředků včetně kyslíkatých bělidel stejně jkao i dalších, která jsou známa v dané problematice. Bělicí činidlo vhodné pro předkládaný vynález je aktivované nebo neaktivované bělicí činidlo.

Jednou ze skupin kyslíkatých bělicích činidel, které lze použít, jsou bělicí činidla na bázi peroxykarboxylových kyselin a jejich solí. Vhodné příklady této skupiny činidel monoperoxyftalátu hořečnatého, hořečnatý, 4-nonylamino-4-oxoperoxybutanovou kyselinu a diperoxydodekandiovou kyselinu. Taková bělicí činidla jsou popsána v US patentu 4,483,781, US patentové přihlášce 740,446, evropské ' patentové přihlášce 0,133,354 a US patentu 4,412,934. Velmi preferovaná bělicí činidla zahrnují 6-nonylamino-6-oxoperoxykapronovou kyselinu, která je popsána v US patentu 4,634,551.

Další skupinou bělicích činidel, které lze také použít, jsou halogenová bělicí činidla. Příklady halogenanových bělicích činidel zahrnují, například, trichlorisokyanurovou kyselinu a dichlorisokyanuráty sodný a draselný a N-chlor a N-brom alkan sulfonamidy. Takové materiály se normálně přidávají v množství 0,5 % hmotnostních až 10 % hmotnostních konečného produktu, s výhodou v množství 1 % hmotnostní až 5 % hmotnostních.

Činidla uvolňující peroxid vodíku lze použít v kombinaci s bělícími aktivátory, jako je tetraacetylethylendiamin (TAED), nonanoyloxybenzensulfonát (NOBS, popsaný v US patentu 4,412, 934), 3, 5-trimethylhexanoloxybenzensulfonát (ISONOBS, popsaný v EP 120,591) nebo pentaacetylglukosa (PAG) nebo fenolsulfátový ester N-nonanoyl-6-aminokapronové kyseliny (NACA-OBS, popsaný ve WO94/28106), který se perhydrolyzuje na formu peroxykyseliny, která je aktivní bělicí částicí, což vede ke zlepšení bělícího účinku. Také jsou jako aktivátory vhodné acylované estery citrátů, jako jsou ty, které jsou

popsány ve společně projednávané evropské patentové přihlášce č. 91870207.7 a nesymetrický acyklický imidový bělicí aktivátor obecného vzorce XIV:

O O

který je popsaný firmou Procter & Gamble ve společně projednávaných patentových přihláškách US sériového čísla 60/022,786 (podáno 30. července 1996) a čísla 60/028,122 (podáno 15. října 1996), kde R_T je C₇ až C₁₃ nasycený nebo nenasycený lineární nebo rozvětvený alkyl, R₂ je C₂ až C₈nasycený nebo nenasycený lineární nebo rozvětvený alkyl a R₃ je C_x až C₄ nasycený nebo nenasycený lineární nebo rozvětvený alkyl.

Použitelná bělicí činidla, včetně peroxykyselin a bělicích systémů, zahrnují bělicí aktivátory a peroxidové bělicí sloučeniny určené pro použití v detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou popsány v našich společně projednávaných přihláškách USSN 08/136,626, PCT/US95/07823,

WO95/27772, WO95/27773, WO95/27774 a WO95/27775.

Peroxid vodíku může být také přítomen tak, že se přidá enzymatický systém (tj. enzym a jeho substrát), který je schopen produkovat na začátku nebo během praní a/nebo máchání peroxid vodíku. Takové enzymové systémy jsou popsány v EP patentové přihlášce 91202655.6 podaném 9. října 1991.

Katalyzátory obsahující kov určené pro použití v bělicích prostředcích, zahrnují katalyzátory obsahující kobalt, jako je pentaaminacetát kobaltitý a katalyzátory obsahující mangan, jako jsou ty, které jsou popsány v EPA 549,271, EPA 549,272, EPA 458 397, US 5,246,621, EPA 458 398, US 5,194,416 a US 5,114,611. Bělicí prostředky obsahující peroxidové sloučeniny, bělicí katalyzátor obsahující mangan a chelatační činidlo jsou popsány v patentové přihlášce č. 94870206.3.

·* · • · ·«·* ·

V dané problematice jsou známa i jiná bělicí činidla než kyslíkatá bělicí činidla a lze je také použít. Jedním z typů nekyslíkatých bělicích činidel, která jsou zejména zajímavá, jsou fotoaktivovaná bělicí činidla, jako jsou sulfonované zinečnaté a/nebo hlinité ftalocyaniny. Tyto materiály se ukládají během praní na prané látky. Po ozáření světlem v přítomnosti kyslíku, jako na visících šatech nechaných uschnout na denním světle, se sulfonovaný zinečnatý ftalocyanin aktivuje a, následně, vybělí substrát. Preferovaný zinečnatý ftalocyanin a fotoaktivovaný bělicí postup jsou popsány v US patentu 4,033,718. Typicky obsahují detergentní prostředky 0,025 % hmotnostních až 1,25 % hmotnostních sulfonovaného zinečnatého ftalocyaninu.

Systém plnidel

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu s výhodou obsahují plnidlo, ještě výhodněji anorganické plnidlo, nejvýhodněji Zeolit A, vrstvený křemičitan a/nebo tripolyfosforečnan sodný. Překvapivě bylo zjištěno, že prací detergentní prostředek podle předkládaného vynálezu dále obsahující plnidlo má zlepšený účinek při odstraňování skvrn/nečistot. z jídla, odstraňování zapranosti a bělení. Bez vazby na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že sacharidové gumy vychytávají vápník a tak omezují enzymatickou hydrolýzu. Proto se při použití plnidla očekává odstranění zachyceného vápníku a zlepšení působení enzymů odbourávajících sacharidové gumy.

Pro použití podle předkládaného vynálezu je vhodný jakýkoliv běžný systém plnidel, včetně hlinitokřemičitanových materiálů, křemičitanů, polykarboxylátů, alkyl- nebo alkenyljantarové kyseliny a mastných kyselin, materiálů, jako je ethylendiamintetraacetát, diethylentriaminpentamenthylenacetát, látek vychytávajících kovové ionty, jako jsou aminopolyfosfonáty, konkrétně ethylendiamintetramethylenfosfonová kyselina a

99 • · φφφφ • φ φφ φ ·* 9

9 9

9 9 9

9 9 9999

9 9 9

99 9

9 9

9 «

Φ Φ Φ

ΦΦ 99 diethylentriaminpentamethylenřosfonová kyselina. Také lze použít fosfátová plnidla.

Vhodná plnidla jsou anorganické iontově výměnné materiály, běžně anorganické hydratované hiinitokřemičitanové materiály, konkrétněji hydratované syntetické zeolity, jako je hydratcvaný zeolit A, X, B, HS nebo MAP.

Další vhodný anorganický materiál na plnidlo je vrstvený křemičitan, např. SKS-6 (Hoechst). SKS-6 je krystalický vrstvený křemičitan sestávající z křemičitanu sodného (Na₂Si₂o,) .

Vhodné polykarboxyláty obsahující jednu karboxylovou skupinu zahrnují kyselinu mléčnou, kyselinu glykolovou a jejich etherové deriváty, které jsou popsány v belgických patentech č. 831,368, 821, 369 a 821,370. Polykarboxyláty obsahující dvě karboxylové skupiny zahrnují ve vodě rozpustné soli kyseliny jantarové, kyseliny malonové, kyseliny ethylendioxydioctové, kyseliny maleinové, kyseliny diglykolové, kyseliny vinné, kyseliny tartronové a kyseliny fumarové stejně jako etherové karboxvláty popsané v German Offenlegenschrift 2,446,686 a 2,446,687 a US patentu č. 3,935,257 a sulfinylkarboxyláty popsané v belgickém patentu č. 840,623. Polykarboxyláty obsahující tři karboxylové skupiny zahrnují, zejména, ve vodě rozpustné citráty, akonitráty a citrakonáty stejně jako deriváty kyseliny jantarové, jako jsou karboxymethyloxysukcináty popsané v britském patentu č. 1,379,241, laktoxysukcináty popsané v nizozemské přihlášce 7205873 a oxypolykarboxylátové materiály, jako jsou 2-oxa-l,1,3-propantrikarboxyláty popsané v britském patentu č. 1,387,447.

Polykarboxyláty obsahující čtyři karboxylové skupiny zahrnují oxydisukcináty popsané v britském patentu č. 1,261,829, 1,1,2,2-ethantetrakarboxyláty, 1,1,3,3-propantetrakarboxyláty a 1,1, 2,3-propantetrakarboxyláty. Polykarboxyláty obsahující sulfo substituenty zahrnují • ·· · ·· ·· • ··· 4 4 * · ·· 4 · · 4 4 4 4 4

4444 9 9 9 9999 9 9 99 9

9 9 9 9 9 9 9

99 9 99 99 sulfosukcinátové deriváty popsané v britských patentech č. 1,398,421 a 1,398,422 a v US patentu č. 3,936,448 a sulfonované pyrolyzované citráty popsané v britském patentu č. 1,082,179, zatímco polykarboxyláty obsahující fosfonové substituenty jsou popsány v britském patentu č. 1,439,000.

Alicyklické a heterocyklické polykarboxyláty zahrnují cyklopentan-cis,cis,cis-tetrakarboxyláty, cyklopentadienidpentakarboxyláty, 2,3,4,5-tetrahydrofuran-cis,cis,cis-tetrakarboxyláty, 2,5-tetrahydrofuran-cis-dikarboxyláty, 2,2,5,5-tetrahydrofurantetrakarboxyláty, 1,2,3,4,5,6-hexanhexakarboxyláty a karboxymethylderiváty polyhydroxyalkoholů, jako je sorbitol, manitol a xylitol. Aromatické polykarboxyláty zahrnují deriváty kyseliny melitové, kyseliny pyromelitové a kyseliny ftalové popsané v britském patentu čí 1,425,343.

sou hydroxykarboxyláty činidla, plnidel

Preferované polykarboxyláty obsahující až tři karboxylové skupiny na jednu molekulu, konkrétněji citráty.

Preferované systémy plnidel určené pro použití podle předkládaného vynálezu zahrnují směs ve vodě nerozpustného hlinitokřemičitanového plnidla, jako je zeolit A, nebo vrstveného křemičitanu (SKS-6) a ve vodě rozpustného karboxylátového chelatačního činidla, jako je kyselina citrónová. Další preferované systémy plnidel zahrnují směs ve vodě nerozpustných hlinitokřemičitanových plnidel, . jako je zeolit A a ve vodě rozpustného karboxylátového chelatačního jako je kyselina citrónová. Preferované systémy určené pro použití v tekutých detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou mýdla a polykarboxyláty.

Další materiály plnidel, které tvoří část systému plnidel určeného pro použití v granulovaných prostředcích, zahrnují anorganické materiály, jako jsou uhličitany, hydrogenuhličitany a křemičitany alkalických kovů a organické ··* · · · ···· • · · · ··· · ·· « γ,Γ · ···· · · · ···· · · · · · /ο ········· ··· · ·· · ·· · · materiály, jako jsou organické fosfonáty, aminopolyalkylenfosfonáty a aminopolykarboxyláty.

Další vhodné ve vodě rozpustné organické soli jsou homonebo kopolymerní kyseliny nebo jejich soli, ve kterých polykarboxylová kyselina sestává přinejmenším ze dvou karboxylových zbytků oddělených jeden od druhého ne více než dvěma atomy uhlíku. Polymery tohoto typu jsou popsány v GB-A-1,596,756. Příklady takových solí jsou polyakryláty o molekulové hmotnosti 2000 až 5000 a jejich kopolymery s anhydridem kyseliny maleinové, které mají molekulovou hmotnost 20 000 až 70 000 a zejména 40 000.

Plnidlové soli jsou v detergentech normálně použity v množstvích 5 % hmotnostních až 80 % hmotnostních vztaženo na hmotnost prostředku, s výhodou v množstvích .10 % hmotnostních až 70 % hmotnostních a nejvýhodněji v množstvích 30 % hmotnostních až 60 % hmotnostních.

Další systém tenzidů

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují jiné kationtové, amfolytické, zwitteriontové a semipolární tenzidy, stejně jako neionogenní a/nebo aniontové tenzidy než ty, které již byly v předkládaném vynálezu popsány.

Amfolytické tenzidy jsou pro použití v pracích detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu také vhodné. Tyto tenzidy lze obecně popsat jako alifatické deriváty sekundárních nebo terciárních aminů nebo alifatické deriváty heterocyklických sekundárních a terciárních aminů, ve kterých má alifatický zbytek přímý nebo rozvětvený řetězec. Jeden z alifatických substituentů obsahuje přinejmenším osm atomů uhlíku, typicky 8 až 18 atomů uhlíku a přinejmenším jeden obsahuje aniontovou ve vodě solubilizující skupinu, např. karboxyl, sulfonát, sulfát. Viz US patent č. 3,929,678, Laughlin a kol., vydaný 30. prosince 1975 ve sloupci 19, řádky 18 až 35, pro příklady amfolytických tenzidů.

e · terciárních kvarterních skupinou rozpustné

Pokud jsou použity, pak prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu typicky obsahují 0,2 % hmotnostních až 15 % hmotnostních, s výhodou 1 % hmotnostní až 10 % hmotnostních takových amfolytických tenzidů.

Pro použití v pracích prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou také vhodné zwitteriontové tenzidy. Tyto tenzidy lze obecně popsat jako deriváty sekundárních a terciárních aminů, deriváty heterocyklických sekundárních a aminů nebo deriváty kvarterních amoniových, fosfoniových nebo terciárních sulfoniových sloučenin. Viz US patent č. 3,929,678, Laughlin a kol., vydaný 30. prosince 1975 ve sloupci 19, řádek 38 až sloupec 22, řádek 48, pro příklady zwitteriontových tenzidů.

Pokud jsou použity, pak prací detergentní . prostředky podle předkládaného vynálezu typicky obsahují 0,2 % hmotnostních až 15 % hmotnostních, s výhodou 1 % hmotnostní až 10 % hmotnostních takových zwitteriontových tenzidů.

Semipolární neionogenní tenzidy jsou zvláštní neionogenních tenzidů, které zahrnují ve vodě aminoxidy obsahující jeden alkyl sestávající z 10 až 18 atomů uhlíku a 2 skupin vybraných ze skupiny sestávající z alkylů a hydroxyalkylů sestávajících z 1 až 3 atomů uhlíku, ve vodě rozpustné fosfinoxidy obsahující jeden alkyl sestávající z 10 až 18 atomů uhlíku a 2 skupin vybraných ze skupiny sestávající z alkylů a hydroxyalkylů sestávajících z 1 až 3 atomů uhlíku a ve vodě rozpustné sulfoxidy obsahující jeden alkyl sestávající z 10 až 18 atomů uhlíku a 2 skupin vybraných ze skupiny sestávající z alkylů a hydroxyalkylů sestávajících z 1 až 3 atomů uhlíku.

Semipolární neionogenní tenzidy zahrnují aminoxidové tenzidy obecného vzorce XV:

o

I

R3(OR4)xN(R5)2 (XV) • 9 9 • · 9 9 9

9999 99999«

99 9 99 99 kde R³ je alkyl, hydroxyalkyl nebo alkylfenyl nebo jejich směs sestávající z 8 až 22 atomů uhlíku, R⁴ je alkylen nebo hydroxyalkylen sestávající ze 2 až 3 atomů uhlíku nebo jejich směsi, x je 0 až 3 a každé R⁵ je alkyl nebo hydroxyalkyl sestávající z 1 až 3 atomů uhlíku nebo polyethylenoxid sestávající z 1 až 3 ethylenoxidových skupin. R⁵ jsou případně připojeny jedna k druhé, např. přes atom kyslíku nebo atom dusíku, čímž tvoří cyklickou strukturu.

Tyto aminoxidové tenzidy zejména zahnrují C₁₀ až C₁₈alkyldimethylaminoxidy a C₈ až C₁₂ alkoxyethyldihydroxyethylaminoxidy.

Pokud jsou použity, pak prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu typicky obsahují 0,2 % hmotnostních až 15 % hmotnostních, s výhodou 1 % hmotnostní' až 10 % hmotnostních takových semipolárních tenzidů.

Prací detergentní prostředek podle předkládaného vynálezu dále obsahuje kotenzid vybraný ze skupiny primárních nebo terciárních aminů. Primární aminy vhodné pro použití podle předkládaného vynálezu jsou typu R_XNH₂, kde R_x je C₆ až C₁₂, s výhodou C₆ až C₁₀ alkyl nebo R₄X(CH₂)_n, kde X je -0-, -C(0)NHnebo -NH-, R₄ je C₆ až C₁₂ alkyl a n je 1 až 5, s výhodou 3. R_xalkyl je přímý nebo rozvětvený a je případně přerušen až 12, s výhodou méně než 5 ethylenoxidovými jednotkami.

Preferované aminy podle předkládaného vynálezu jsou n-alkylaminy. Vhodné aminy pro použití podle předkládaného vynálezu jsou vybrány ze skupiny sestávající z 1-hexylaminu, 1-oktylaminu, 1-decylaminu a laurylaminu. Další preferované primární aminy zahrnují C8 až CIO oxypropylamin, oktyloxypropylamin, 2-ethylhexyloxypropylamin, laurylamidopropylamin a amidopropylamin.

Vhodné terciární aminy určené pro použití podle předkládaného vynálezu zahrnují terciární aminy typu R₁R₂R₃N, kde R_x a R₂ jsou C_x až C₈ alkyly nebo skupina obecného vzorce

XVI:

• 4 • · • · · · · · · alkyl nebo R₃ je

R₄ je C₄ až C₁₂, n

CH,

Rs

-CH—o) / ·

H x (xvi)

R₃ je buď C₆ až C

12' s výhodou C₆ až C

10'

NH-,

R₄X(CH₂)_n, kde X je -0-, -C(0)NH- nebo je 1 až 5, s výhodou 2 až 3. R₅ je H nebo C_x až C₂ alkyl a x je 1 až 6.

R₃ a R₄ jsou lineární nebo rozvětvené, R₃ je alkyl, který je případně přerušen až 12, s výhodou méně než 5, ethylenoxidovými skupinami.

Preferované terciární aminy jsou aminy typu R₁R₂R₃N, kde R_x je Cg až C₁₂ alkyl, R₂ a R₃ jsou C_r až C₃ nebo skupina obecného vzorce XVI, kde R₅ je H nebo CH₃ a x = 1 až 2.

Také jsou preferovány amidoaminy obecného vzorce XVII:

O

R,—C—NH—(CH₂)_n-N-(R₂)₂ (XVII) kde R_x je C₆ až C₁₂ alkyl, n je 2 až 4, s výhodou n je 3, R₂ a R₃ je Cj až C₄.

Nejpreferovanější aminy podle předkládaného vynálezu zahrnují 1-oktylamin, 1-hexylamin, 1-decylamin, 1-dodecylamin, C8 až ClOoxypropylamin, N-koko-1,3-diaminopropan, (alkyl odvozený z kokosového oleje)dimethylamin, lauryldimethylamin, lauryl-bis(hydroxyethyl)amin, koko-bis(hydroxyethyl)amin, laurylamin propoxylovaný 2 moly, oktylamin propoxylovaný 2 moly, laurylamidopropyldimethylamin, C8 až CIO amidopropyldimethylamin a CIO amidopropyldimethylamin.

Nejpreferovanější aminy určené pro použití v prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou 1-hexylamin, 1-oktylamin, 1-decylamin, 1-dodecylamin. Zejména žádaný je n-dodecyldimethylamin a bishydroxyethyl(alkyl odvozený z kokosového oleje)amin a sedmkrát ethoxylovaný oleylamin, laurylamidopropylamin a kokoamidopropylamin.

·· φ φφ φφ φ · φ ΦΦΦ· • φφφ · φφ φ φφ φφφφφφφ φφ φ φ φ φ φφφφ φ φ φ φ φ φφ

Péče ο barvy a prospěšné účinky při péči o tkaniny Do předkládaného vynálezu lze také zahrnout technologie, které poskytují určitý typ péče o barvy. Příklady takových technologií jsou kovové katalyzátory určené pro údržbu barev. Takové kovové katalyzátory jsou popsány ve společně projednávané evropské patentové přihlášce č. 92870181.2. Činidla fixující barvy, polyolefinové disperze proti mačkání a pro zlepšenou absorpci vody, vonná látka a aminofunkční polymer určený pro péči o barvy a vonná látka jsou další příklady technologií péče o barvy / péče o tkaniny a jsou popsány ve společně projednávané patentové přihlášce č. 968701140.9, podané 9. listopadu 1996.

Do pracích detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu lze také zahrnout činidla změkčující tkaniny, tato ⁷činidla jsou anorganického typu nebo organického typu. Příklady anorganických změkčujících činidel jsou smektitové hlinky uvedenyé v GB-A-1 400 898 a v USP 5,019,292. Organická změkčující činidla zahrnují ve vodě rozpustné terciární aminy, které jsou popsány v GB-A-1 514 276 a EP-B 0 011 340 a jejich kombinace s mono C12 až C14 kvarterními amoniovými solemi, které jsou popsány v EP-B-0 026 527 a EP-B-0 026 528 a di(dlouhý řetězec)amidy, které jsou popsány v EP-B-0 242 919. Další použitelné organické složky do sytému pro změkčování tkanin jsou polyethylenoxidové materiály o vysoké molekulové hmotnosti, které jsou popsány v EP-A-0 299 575 a 0 313 146.

Množství smektitové hlinky je normálně 2 % hmotnostní až 20 % hmotnostních, s výhodou 5 % hmotnostních až 15 % hmotnostních s tím, že materiál se přidává do zbytku prostředku ve formě suché směsné složky. Organická činidla na změkčování tkanin, jako jsou ve vodě nerozpustné terciární aminy nebo amidy se dvěma dlouhými řetězci se používají v množství 0,5 % hmotnostních až 5 % hmotnostních, normálně 1 % hmotnostní až 3 % hmotnostní, zatímco polyethylenoxidy o vysoké molekulové hmotnosti a ve vodě rozpustné kationtóvé • * « 9 9 9 9 9 9 9 9 QO · ···· » · ····· · 9 99 9 OU 9 9 999 9999

9 9 9 9 9 9 9 99 materiály se přidávají v množstvích 0,1 % hmotnostních až 2 % hmotnostní, normálně 0,15 % hmotnostních až 1,5 % hmotnostních. Tyto materiály se normálně přidávaní do té části prostředku, která se suší natříkáním, ačkoliv v některých případech je lepší přidat je jako suchou směs částic nebo je nastříkat jako roztavenou směs na nebo do pevných složek prostředku.

Chelatační činidla

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu nepovinně obsahují jedno nebo více činidel chelatujících železo a/nebo mangan. Taková chelatační činidla lze vybrat ze skupiny sestávající z aminokarboxylátů, aminofosfonátů, polyfunkčně substituovaných aromatických chelatačních činidel a jejich směsí, které jsou všechny dále definovány! Bez vazby na nějakou konkrétní teorii se předpokládá, že kladné účinky těchto materiálů jsou způsobeny částečně jejich výjimečnou schopností odebírat ionty železa a manganu z pracích roztoků tak, že vznikají cheláty. ·

Aminokarboxyláty použitelné jako nepovinná chelatační činidla zahrnují ethylendiamintetraacetáty, N-hydroxyethylendiamintetraacetáty, nitriltriacetáty, ethylendiamin tetrapropionáty, triethylentetraminhexacetáty, diethylentriaminpentaacetáty a ethanoldiglyciny, jejich soli s alkalickými kovy, amoniakem a substituovaných amoniakem a jejich směsi.

Pro použití v prostředcích podle předkládaného vynálezu, pokud jsou v detergentním prostředku povolena alespoň malá celková množství fosforu, jsou také vhodné aminofosfonáty zahrnující ethylendiamintetrakis(methylenfosfonáty) jako je DEQUEST. S výhodou tyto aminofosfonáty neobsahují alkyly nebo alkenyly delší než je 6 atomů uhlíku.

V prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou také použitelná polyfunkčně substituovaná aromatická chelatační činidla. Viz US patent 3,812,044, vydaný 21. května 1974,

0*0 0 0* 9

0 ******* 0* * • · · * * * * • · 0 0 0 00

Connor a kol. Preferované sloučeniny tohoto typu v kyselinové formě jsou dihydroxydisulfobenzeny, jako je 1,2-dihydroxy-3,5-disulfobenzen.

Preferované biologicky odbouratelné chelatační činidlo určené pro použití podle předkládaného vynálezu je ethylendiamindisukcinát (EDDS), zejména jeho [S,S] izomer, který je popsán v US patentu 4,704,233, 3. listopadu 1987, Hartman a Perkins.

Prostředky podle předkládaného vynálezu případně také jako chelatační činidla nebo koplnidla použitelná například s nerozpustnými plnidly, jako jsou zeolity, vrstvené křemičitany a podobně, obsahují ve vodě rozpustné soli methylglycindioctové kyseliny (MGDA) nebo její kyselinovou formu.

Pokud jsou použity, pak tato chelatační činidla obecně tvoří 0,1 % hmotnostních až 15 % hmotnostních detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu. Ještě výhodněji, pokud jsou použita, chelatační činidla tvoří 0,1 % hmotnostních až 3,0 % hmotnostních takových prostředků.

Činidlo tlumící vznik mydlin

Další nepovinnou složkou je činidlo tlumící vznik mydlin, jehož příkladem jsou silikony a směsi silikon - oxid křemičitý. Silikony lze obecně popsat jako alkylované polysiloxanové materiály, zatímco oxid křemičitý se normálně používá v jemně dělené formě, jejímž příkladem jsou aerogely oxidu křemičitého a hydrofobní oxidy křemičité různých typů. Tyto materiály lze použít jako částice, ve kterých je činidlo tlumící vznik mydlin s výhodou uvolnitelně zahrnuto do ve vodě rozpustného nebo ve vodě dispergovatelného, v zásadě povrchově neaktivního detergentního nepropustného nosiče. Alternativně lze činidlo tlumící vznik mydlin rozpustit nebo dispergovat v tekutém nosiči a aplikovat nastříkáním na jednu nebo více dalších složek.

9· 9 9999 • 99 9 · 9 999· 9 9 9 9 999 9 99 9

QQ 9 9999 9 9 ······· 99 ·

O Z. ········ • 99 9 99 * 99 99

Preferovaná silikonová činidla tlumící vznik mydlin jsou popsána v US patentu 3 933 672, Bartollota a kol. Další zvláště použitelná činidlo tlumící vznik mydlin jsou samo elulgující se silikonová činidla tlumící vznik mydlin, popsaná v německé patentové přihlášce DTOS 2 646 126 vydané 28. dubna 1977. Příkladem takové sloučeniny je DC-544, komerčně dostupný od firmy Dow Corning, což je kopolymer siloxan-glykol. Zejména preferovaná činidla tlumící vznik mydlin jsou systémy činidel tlumících vznik mydlin obsahující směs silikonových olejů a 2-alkylalkanolů. Vhodné 2-alkylalkanol je 2-butyloktanol, který je komerčně dostupný pod obchodním názvem Isofol 12 R.

Takový systém tlumící vznik mydlin je popsán ve společně projednávané evropské patentové přihlášce č. 92870174.7 podané 10. listopadu 1992.

Zejména preferovaná silikonová činidla tlumící vznik mydlin jsou popsána ve společně projednávané evropské patentové přihlášce č. 92201649.8. Takové prostředky obsahují směsi silikon / oxid křemičitý v kombinaci s neporézním oxidem křemičitým, jako je Aerosil®.

Činidla tlumící vznik mydlin jsou normálně použita v množstvích 0,001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní prostředku, s výhodou 0,01 % hmotnostních až 1 % hmotnostní.

Další složky

Lze použít i další složky používané v pracích detergentních prostředcích, jako jsou činidla usspendující nečistoty, činidla uvolňující nečistoty, optická zjasňovadla, abrasiva, baktericidy, látky bránící blednutí barev, barvicí činidla a/nebo zapouzdřené nebo nezapouzdřené vonné látky.

Zejména vhodné materiály pro zapouzdření jsou ve vodě rozpustné kapsule, které sestávají z matrice polysacharidových a polyhydroxylových sloučenin, které jsou popsány v GB 1,464,616. Další vhodné ve vodě rozpustné zapouzdřující materiály jsou dextriny odvozené z neželatinovaných esterů kyselin se škrobem, a to se substituovanými dikarboxylovými • « ·· · ·* ·« «·· · » · ·«·* « · · · »·· · * · · • ······ ···»··· ·· · • » · » · ···· • · · · · · · ·» ·· kyselinami, které jsou popsány v US 3,455,838. Tyto dextrinové estery s kyselinami jsou, s výhodou, připravovány z takových škrobů, jako je kukuřičný, ze saga, z tapioky a bramborový. Vhodné příklady takových zapouzdřujících materiálů zahrnují N-Lok vyráběný firmou National Starch. N-Lok zapouzdřující materiál sestává z modifikovaného kukuřičného škrobu a glukosy. Škrob je modifikován přidáním monofunkčně substituovaných skupin, jako je anhydrid oktenyljantarové kyseliny.

Činidla bránící opětovnému usazování nečistot a činidla suspendující nečistoty podle předkládaného vynálezu zahrnují celulosové deriváty, jako je methylcelulosa, karboxymethylcelulosa a hydroxyethylcelulosa a homo- nebo kopolymerní polykarboxylové kyseliny nebb jejich soli. Polymery tohoto typu zahrnují polyakryláty a kopolymery anhydridů kyseliny maleinové a kyseliny akrylové, které již byly zmíněny jako plnidla, stejně jako kopolymery anhydridů kyseliny maleinové s ethylenem, methylvinyletherem nebo kyselinou methakrylovou, přičemž anhydrid kyseliny maleinové tvoří přinejmenším 20 molárních procent kopolymeru. Tyto materiály se normálně používají v množstvích 0,5 % hmotnostních až 10 % hmotnostních, ještě výhodněji 0,75 % hmotnostních až 8 % hmotnostních, nejvýhodněji 1 % hmotnostní až 6 % hmotnostních prostředku.

Preferovaná optická zjasňovadla jsou aniontového charakteru a jejich příklady jsou disodná sůl 4,4’-bis-(2-diethanolamino-4-anilino-s-triazin-6-ylamino)stilben-2:2’-disulfonátu, disodná sůl 4,4’-bis-(2-morfolino-4-anilino-s-triaziií-6-ylamino)stilben-2:2'-disulfonátu, disodná sůl 4,4¹-bis-(2,4-dianilino-s-triazin-6-ylamino)stilben-2:2’-disulfonátu, monosodná sůl 4',4-(2,4-dianilino-s-triazin-6-ylamino)stilben-2-sulfonátu, disodná sůl 4,4'-bis-(2-anilino-4-(Nmethyl-N-2-hydroxyethylamino)-s-triazin-6-ylamino)stilben-2,2'-disulfonátu, disodná

4,4'-bis-(4-fenyl-2,1,3sůl • · ····

-triazol-2-yl)stilben-2,2’-disulfonátu, disodná sůl 4,4’-bis-(2-anilino-4-(l-methyl-2-hydroxyethylamino)-s-triazin-6-ylamino)stilben-2,2'-disulfonátu, sodná sůl 2-(stilbyl-4-(nafto-1', 2':4,5)-1,2,3-triazol-2-sulfonátu a 4,4’-bis-(2-sulfostyryl)bifenyl. Vysoce preferovaná zjasňovadla jsou konkrétně zjasňovadla ze společně projednávané evropské patentové přihlášky č. 95201943.8.

Další použitelné polymerní materiály jsou mají molekulovou 2000 až 8000 a polyethylenglykoly, hmotnost 1000 až nej výhodněji 4000. hmotnostních až hmotnostních až 2,5 uvedené soli homozejména ty, které 10 000, konkrétněji Ty se používají v množstvích 0,20 % 5 % hmotnostních, výhodněji 0,25 % % hmotnostních. Tyto polymery a dříve nebo kopolymerních polykarboxylátů jsou hodnotné pro zlepšení bělicích účinků a čisticích účinků na hlinku, protonovatelné a oxidovatelné nečistoty v přítomnosti nečistot z přechodných kovů.

Činidla uvolňující nečistoty použitelná v prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou běžně používané kopolymery nebo terpolymery kyseliny tereftalové s ethylenglykolovými a/nebo propylenglykolovými jednotkami v různých uspořádáních. Příklady takových polymerů jsou popsány v US patentech č. 4116885 a 4711730 a evropské publikované patentové přihlášce č. 0 272 033. Konkrétní preferované polymery podle EP-A-0 272 033 jsou (CH₃(PEG) ₄₃) ₀,₇₅ (POH)₀₍₂₅[(T-PO)₂,₈(TPEG)₀₍₄]T(PO-H)_0<25( (PEG)₄₃CH₃)_o<75 kde PEG je -(OC₂H₄)O-, PO je (OC₃H₆O) a T je (pcOC₆H₄CO) .

Také jsou velmi použitelné modifikované polyestery jako náhodné kopolymery dimethyltereftalátu, dimethylsulfoisoftalátu, ethylenglykolu a 1,2-propandiolu, kdy koncové skupiny sestávají primárně ze sulfobenzoátu a sekundárně z monoesterů ethylenglykolu a/nebo propandiolu. Cílem je získání polymeru ukončeného na obou koncích sulfobenzoátovými skupinami, primárně v předkládaném kontextu znamená, že • 44 4 ·♦ ·4 • · · 4 9 · 4 4 • · · · 4 ♦ 4 4 4 4 •44« «4 4 4444 44 44 4 • 4 4 4 4444

44 4 44 44 většina kopolymerů podle předkládaného vynálezu je ukončena sulfobenzoátovými skupinami. Nicméně, některé kopolymery jsou méně než úplně ukončeny, a proto jejich koncové skupiny sestávají z monoesteru ethylenglykolů a/nebo propan-1,2-diolu, proto sekundárně označuje takové sloučeniny.

Vybrané polyestery podle předkládaného vynálezu obsahují 46 % hmotnostních kyseliny dimethyltereftalové, 16 % hmotnostních propan-1,2-diolu, 10 % hmotnostních ethylenglykolů, 13 % hmotnostních kyseliny dimethylsulfobenzoové a 15 % hmotnostních kyseliny sulfoisoftalové a mají molekulovou hmotnost 3000. Polyestery a jejich způsoby přípravy jsou podrobněji popsány v EPA 311 342.

V dané problematice je dobře známo, že volný chlór ve vodovodní vodě prudce deaktivuje enzymy obsažené v detergentních prostředcích. Proto použitím lapačů chlóru, jako je peroxyboritan, síran amonný, siřičitan sodný nebo polyethylenimin v množství 0,1 % hmotnostních celkového prostředku dojde ke zlepšení stability detergentních enzymů Prostředky obsahující lapače chlóru jsou popsány v patentové přihlášce 92870018.6, podané

31. ledna 1992.

Alkoxylované polykarboxyláty, jako jsou ty, které se připravují z polyakrylátů, jsou použitelné podle předkládaného vynálezu pro lepší účinnost při odstraňování mastnot, takové materiály jsou popsány ve WO 91/08281 a PCT 90/01815 na str. 4 a následujících, které jsou zde uvedeny jako reference. Chemicky, tyto materiály zahrnují polyakryláty, které mají jeden ethoxylový postranní řetězec na každých 7 až 8 akrylátových jednotek. Postranní řetězce jsou

- (CH₂CH₂O) _ra (CH₂) _nCH₃, kde m je 2 až 3 a n je 6 až 12. Postranní řetězce jsou připojeny esterově k polyakrylátovému základnímu řetězci, čímž vzniká polymerní struktura typu hřebenu. Molekulová hmotnost se mění, ale typicky je v rozsahu 2000 až 50 000. Takové alkoxylované polykarboxyláty obsahují 0,05 % pri praní evropské • · φ φ φφφφ • · · · φ φ φφφφ ·!··*· ····«·· φφ φ • · φ φ · φ φ φ φ φφ · φφφφ hmotnostních až 10 % hmotnostních prostředků podle předkládaného vynálezu.

Dispergátory

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují dispergátory. Vhodné ve vodě rozpustné organické soli jsou homo- nebo kopolymery kyselin nebo jejich solí, ve kterých polykarboxylová kyselina zahrnuje přinejmenším dva karboxylové zbytky oddělené jeden od druhého ne více než dvěma atomy uhlíku. Polymery tohoto typu jsou popsány v GB-A-1,596, 756. Příklady takových solí jsou polyakryláty o molekulové hmotnosti 2000 až 5000 a jejich kopolymery s anhydridem kyseliny maleinové, které mají molekulovou hmotnost 1000 až 100 000.

Zejména lze do pracích detergentních prostředků podle předkládaného vynálezu přidat kopolymer akrylátu a methakrylátu jako je 480N o molekulové hmotnosti 4000 v množství 0,5 % hmotnostních až 20 % hmotnostních prostředku.

Prostředky podle předkládaného vynálezu případně obsahují peptizátorovou sloučeninu pro jádrové mýdlo, která má s výhodou disperzní sílu pro jádrové mýdlo (LSDP), která je definována v předkládaném vynálezu, ne vyšší než 8, s výhodou ne vyšší než 7, nejvýhodněji ne více než 6. Peptizátorová sloučenina pro jádrové mýdlo je s výhodou použita v množství 0 % hmotnostních až 20 % hmotnostních.

Číselné měření účinnosti peptizátoru pro jádrové mýdlo je dáno disperzní sílou pro jádrové mýdlo (LSDP), která se stanovuje disperzním testem pro jádrové mýdlo, který je popsán v článku H.C. Boghetty a C.A. Bergman, J. Am. Oil. Chem. Soc., sv. 27, strany 88 až 90, (1950). Tento disperzní test pro jádrové mýdlo odborníci v dané problematice široce využívají, viz například následující přehledné články, W.N. Linfield, Surfactant Science Series, sv. 7, str. 3, W.N. Linfield, Tenside surf. det., sv. 27, strany 159 až 163 (1990) a M.K. Nagarajan, W.F. Masler, Cosmetics and Toiletries, sv.

• 9

9 • · 9 9 9 · 9 · ·· 9999 9999

9999 99 9 9999 · 9 99 9

99 9 9999

99 9 99 99

104, strany 71 až 73 (1989) . LSDP je % hmotnostní poměr disperzního činidla ku oleátu sodnému potřebnému pro disperzi usazeniny jádrového mýdla vzniklé 0,025 g oleátu sodného ve 30 ml vody o tvrdosti 333 ppm CaCO₃ (Ca : Mg = 3 : 2) ekvivalentu.

Tenzidy, které mají dobrou schopnost peptizace jádrového mýdla, zahrnují některé aminoxidy, betainy, sulfobetainy, alkylethoxysulfáty a ethoxylované alkoholy.

Příkady tenzidů, které mají LSDP ne vyšší než 8 určených pro použití podle předkládaného vynálezu zahrnují C₁₆ až C₁₈dimethylaminoxidy, C₁₂ až C₁₈ alkylethoxysulfáty se středním stupněm 'ethoxylace 1 až 5, zejména C₁₂ . až C₁₅alkylethoxysulfátové tenzidy se stupněm ethoxylace 3 (LSDP = 4) a C₁₄ až C₁₅ ethoxylované alkoholy se ..'středním stupněm ethoxylace buď 12 (LSDP = 6) nebo 30, prodávané pod obchodními názvy Lutensol A012 a Lutensol A030 firmou BASF GmbH.

Polymerní peptizátory jádrového mýdla vhodné pro použití podle předkládaného vynálezu jsou popsány v článku M.K. Nagarajan, W.F. Masler, Cosmetics and Toiletries, svazek 104, strany 71 až 73 (1989).

Také lze jako sloučeniny peptizující jádrové mýdlo použít hydrofobní bělidla, jako je 4-[N-oktanoyl-6-aminohexanoyl]benzensulfonát, 4-[N-nonanoyl-6-aminohexanoyl]benzensulfonát, 4-[N-dekanoyl-6-aminohexanoyl]benzensulfonát a jejich směsi a nonanoyloxybenzensulfonát spolu s hydrofilními / hydrofobními bělícími prostředky.

Tlumení přenosu barev

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují sloučeniny tlumicí přenos barev z jedné tkaniny na druhou vznikajícímu při solubilizaci a suspendování barviv během praní barevných tkanin.

Polymerní činidla tlumicí přenos barev

Prací detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují 0,001 % hmotnostních až 10 % hmotnostních, s • ·· · ·· #· • · · · » · · · ·· · · · · · · · · ··«· · · · ···· · · · · · • · · t · · · · • · · · · * ·· výhodou 0,01 % hmotnostních až 2 % hmotnostní, ještě výhodněji 0,05 % hmotnostních až 1 % hmotnostní polymerních činidel tlumicích přenos barev. Tato polymerní činidla tlumicí přenos barev se normálně používají do pracích detergentních prostředků, aby se zabránilo přenosu barviv z barevných tkanin na jiné tkaniny, které se perou zároveň s nimi. Tyto polymery mají schopnost komplexovat nebo adsorbovat nestálá barviva, která se vypírají z barvených tkanin dříve než dojde k obarvení dalších tkanin v pracím roztoku.

Zejména vhodná polymerní činidla tlumicí přenos barev jsou polyamin-N-oxidové polymery, kopolymery N-vinylpyrrolidonu a N-vinylimidazolu, polyvinylpyrrolidonové . polymery, polyvinyloxazolidony a polyvinylimidazoly nebo jejich směsi.

Přidání takových polymerů také zlepší účinnost enzymů podle předkládaného vynálezu.

a) polyamin-N-oxidové polymery

Polyamin-N-oxidové polymery vhodné pro použití podle předkládaného vynálezu obsahují jednotky obecného vzorce XVIII:

P

I

A_x

I

R (XVIII) kde P je polymerovatelná jednotka, ke které je připojena skupina R-N-0 nebo kde skupina R-N-0 tvoří část polymerovatelné jednotky nebo kombinace obojího,

0 0

II II II

A je NC, CO, C, -O-, -S-, -N-, x je 0 nebo 1,

R jsou alifatické, ethoxylované alifatické, aromatické, heterocyklické nebo alicyklické skupiny nebo jakákoliv jejich kombinace, ke které je dusík skupiny N-0 připojen nebo, ve které je dusík skupiny N-0 částí těchto skupin.

Skupina N-0 je skupina obecného vzorce XIX:

• 9

9···

9 99 99 • 9 9 9 9 9 ·

999 9 99 9

9999999 99 ·

9 9 9 9999

99 9 99 99 (Rl) _χ-Ν-(R2) _yI (R3)_z (XIX) nebo XX:

I

-N-(Rl)_x (XX) kde Rl, R2 a R3 jsou alifatické skupiny, aromatické, heterocyklické nebo alicyklické skupiny nebo jejich kombinace, x a/nebo y a/nebo z je 0 nebo 1 a dusík skupiny N-0 je k nim připojen nebo dusík skupiny N-0 tvoří část těchto skupin..

Skupina N-0 je částí polymerovatelné jednotky (P) nebo je připojen k polymernímu základnímu řetězci nebo se jedná o kombinaci obojího.

Vhodné polyamin-N-oxidy, ve kterých skupina N-0 tvoří část polymerovatelné jednotky, zahrnují polyamin-N-oxidy ve kterých R je vybráno z alifatických, aromatických, alicyklických nebo heterocyklických skupin.

Jedna skupina těchto polyamin-N-oxidů zahrnuje skupinu polyamin-N-oxidů, ve kterých dusík skupiny N-0 tvoří část skupiny R. Preferované polyamin-N-oxidy jsou takové, ve kterých R je heterocyklické skupina jako je pyridin, pyrrol, imidazol, pyrrolidin, piperidin, chinolin, akridin a jejich deriváty.

Další skupina polyamin-N-oxidů zahrnuje skupinu polyamin-N-oxidů, ve ketrých je dusík skupiny N-0 připojen ke skupině R.

Další vhodné polyamin-N-oxidy jsou polyaminoxidy, ve kterých je skupina N-0 připojena k polymerovatelné jednotce.

Preferovaná skupina těchto polyamin-N-oxidů jsou polyamin-N-oxidy obecného vzorce XVIII, kde R jsou aromatické, t · ·· · ·· ·# ·· · ··· · · · # « · ♦ ···· » · · · • ♦··· * · · ···· · · · · · • · · · · · · · ♦

........* ·* heterocyklické nebo alicyklické skupiny, ve kterých je dusík funkční skupiny N-0 částí skupin R.

Příklady těchto skupin jsou polyaminoxidy, ve kterých R je heterocyklické sloučenina, jako je pyridin, pyrrol, imidazol a jejich deriváty.

Další preferovanou skupinou polyamin-N-oxidů . jsou polyaminoxidy obecného vzorce XVIII, ve kterých R jsou aromatické, heterocyklické nebo alicyklické skupiny, ve ketrých je dusík funkční skupiny N-0 připojen ke skupinám R.

Příklady této skupiny jsou polyaminoxidy, ve kterých jsou skupiny R aromatické, jako je fenyl.

Lze použít jakýkoliv polymemí základní řetězec, pokud je vzniklý aminoxidový polymer ve vodě rozpustný a působí proti přenosu barviv. Příklady vhodných polymemích ' základních řetězců jsou polyvinyly, poylalkyleny, polyestery, poylethery, polyamidy, polyimidy, polyakryláty a jejich směsi.

Anim-n-oxidové polymery podle předkládaného vynálezu mají typicky poměr aminu ku amin-N-oxidu 10 : 1 až 1 : 1 000 000.

Nicméně množství aminoxidových skupin přítomných v polyaminoxidovém polymeru se mění podle příslušného kopolymerace nebo podle příslušného stupně N-oxidace. S výhodou je poměr aminu ku amin-N-oxidu 2 : 3 až 1 : 1 000 000. Ještě výhodněji je 1 : 4 až 1 : 1 000 000, nejvýhodněji 1 : 7 až 1 : 1 000 000. Polymery podle předkládaného vynálezu zahrnují náhodné nebo blokové kopolymery, ve kterých je jedním typem monomeru amin-N-oxid a dalším typem monomeru je nebo není amin-N-oxid. Aminoxidová jednotka polyamin-N-oxidů má pKa <10, s výhodou pKa < 7, nej výhodněji pKa <6.

Polyaminoxidy lze získat většinou v jakémkoliv stupni polymerace. Stupeň polymerace není pro materiál kritický pokud má požadovanou rozpustnost ve vodě a příslušnou sílu suspendovat barviva.

• 4 • 44«

4 44 44

4 4 4 4 4 4 » 444 4 44 4

4444444 44 4

4 44 4 444 4

444 4 4» 4 44 44

Typicky je střední molekulová hmotnost 500 až 1 000 000, s výhodou 1000 až 50 000, ještě výhodněji 2000 až 30 000 a nejvýhodněji 3000 až 20 000.

b) kopolymery N-vinylpyrrolidonu a N-vinylimidazolu

N-vinylimidazol / N-vinylpyrrolidonové polymery použité v předkládaném vynálezu mají střední molekulovou hmotnost 5000 až 1 000 000, s výhodou 5000 až 200 000.

Vysoce preferované polymery určené pro použití v detergentních prostředcích podle předkládaného vynálezu zahnrují polymer vybraný z N-vinylimidazol / N-vinylpyrrolidonových kopolymerů, ve kterých má polymer střední molekulovou hmotnost 5000 až 50 000, ještě výhodněji 8000 až 30 000, nejvýhodněji 10 000 až 20 000.

Střední molekulová hmotnost se zjišťuje -rozptylem světla, který je popsán v práci Barth, H.G. a Mays J.W., Chemical Analysis sv. 113, Modern Methods of Polymer Characterization.

Vysoce preferované N-vinylimidazol / N-vinylpyrrolidonové kopolymery mají střední molekulovou hmotnost 5000 až 50 000, výhodněji 8000 až 30 000 a nejvýhodněji 10 000 až 20 000.

N-vinylimidazol / N-vinylpyrrolidonové kopolymery o uvedené střední molekulové hmotnosti poskytují vynikající výsledky při tlumení přenosu barviv a neovlivňují negativně čisticí účinek detergentních prostředků, ve kterých jsou obsaženy.

N-vinylimidazol / N-vinylpyrrolidonové kopolymery podle předkládaného vynálezu mají molární poměr N-vinylimidazolu ku N-vinylpyrrolidonu 1 až 0,2, výhodněji 0,8 až 0,3 a nej výhodněji 0,6 až 0,4.

c) Polyvinylpyrrolidon

Detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také využívají polyvinylpyrrolidon (PVP) o střední molekulové hmotnosti 2500 až 400 000, s výhodou 5000 až 200 000, výhodněji 5000 až 50 000 a nejvýhodněji 5000 až 15 000. Vhodné polyvinylpyrrolidony jsou komerčně dostupné od firmy ISP

4 4 44 99

4 4 4 4*4

9 9 9 · 4 · 4

9 9999999 9 9 ·

4 444 4444

444 4 44 4 44 44 • » »•44

Corporation, New York, NY a Montreal, Kanada pod obchodními názvy PVP K-15 (viskozitní molekulová hmotnost 10 000), PVP

K-30 (střední molekulová hmotnost 40 000), PVP K-60 (střední molekulová hmotnost 160 000) a PVP K-90 (střední molekulová hmotnost 360 000) . Další vhodné polyvinylpyrrolidony, které jsou komerčně dostupné od firmy BASF Corporation, zahrnují Sokalan HP 165 a Sokalan HP 12 a dále polyvinylpyrrolidony známé odborníkům v problematice detergentů (viz například

EP-A-262,897 a EP-A-256,696).

d) Polyvinyloxazolidon

Detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také využívají jako polyvinyloxazolidon.

činidlo tlumicí přenos barviv Polyvinyloxazolidony mají střední molekulovou hmotnost 2500 až 400 000, s výhodou 5000 až

200 000, ještě výhodněji 5000 až 50 000 a nejvýhodněji 5000 až 15 000.

e) Polyvinylimidazol

Detergentní prostředky podle předkládaného vynálezu také využívají jako činidlo tlumicí přenos barviv polyvinylimidazol. Tyto polyvinylimidazoly mají střední molekulovou hmotnost 2500 až 400 000, s výhodou 5000 až 200 000, ještě výhodněji 5000 až 50 000 a nejvýhodněji 5000 až 15 000.

f) Zesíťované polymery

Zesíťované polymery jsou polymery jejichž základní řetězce jsou do určité míry propojeny, tato spojení jsou chemické nebo fyzikální povahy, třeba s aktivními skupinami na základním řetězci nebo na rozvětveních, zesíťované polymery byly popsány v Journal of Polymer Science, svazek 22, strany 1035 až 1039.

V jednom provedení byly zesíťované polymery vyrobeny tak, že vytvořily trojrozměrnou pevnou strukturu, která uvězní barviva v pórech tvořených touto trojrozměrnou strukturou. V dalším provedení zachycují zesíťované polymery barviva bobtnáním.

Takové zesíťované polymery jsou popsány ve projednávané patentové přihlášce 94870213.9.

• 4 ·· · *· 04 · ··· 4 4 · 4 • 4 4 4 4 4 » 4 44 4

444444 4444444 44 4

4 4 44 4404 • 44 4 4* 4 44 44 společně

Příklady provedeni vynálezu

Způsob praní

Prostředky podle předkládaného vynálezu lze použít v zásadě při jakémkoliv pracím nebo čisticím způsobu, včetně namáčení, předpírání a způsobech, které zahrnují máchání, při kterém se přidává zvláštní složka určená do máchání.

Postup popsaný v předkládaném vynálezu zahrnuje uvedení tkaniny . do kontaktu s pracím roztokem obvyklým způsobem a blíže je popsán v následujících příkladech.

Postup podle předkládaného vynálezu se běžně provádí jako čisticí postup. Čištění se s výhodou provádí při teplotě 5 °C až 95 °C, zejména 10 °C až 60 °C. pH vzniklého roztoku je s výhodou 7 až 11. S výhodou bude mít prací detergentní složka podle předkládaného vynálezu ve formě 1% roztoku ve vodě, vyjádřeno v procentech hmotnostních, phodnotu pH 7 až 9,5 (díky čemuž se označuje jako alkalický detergent).

Následující příklady jsou zamýšleny jako přiblížení prostředků podle předkládaného vynálezu, ale neznamenají žádné omezení nebo jinou definici rámce předkládaného vynálezu.

Množství enzymů jsou v detergentních prostředcích vyjádřena jako hmotnost čistého enzymu ve hmotnosti celkového prostředku a pokud není uvedeno jinak, složky detergentu jsou vyjádřeny ve formě hmotnosti celkových složek. Zkratky složek mají následující význam:

LAS : lineární C_n až C₁₃ alkylbenzen sulfonát sodný

TAS : (alkyl odvozený z loje)sulfát sodný

CxyAS : C_lx až C_ly alkylsulfát sodný

CxySAS : C_lx až C_ly sekundární (2, 3) sulfát sodný

CxyEz : C_lx až C_ly hlavně lineární primární alkohol kondenzovaný průměrně se z moly ethylenoxidu • · ·· 99 *· · 99 ··

9 9 9 9 9 9

9 9 · 9 9 9 9 • · 9 *999 9 · · · * • 9 9 Λ · 9 9 9 9

999 9 9« * 99 99

CxyEzS : C_lx až C_ly alkylsulfát sodný kondenzovaný průměrně se z moly ethylenoxidu

QAS : R₂’N+(CH₃) ₂ (C₂H₄OH) s R₂ = C₁₂ až C₁₄

QAS 1 : R₂*N+(CH₃) ₂ (C₂H₄OH) s R₂ = C₈ až C_n

APA : C₈ až C₁₀ amidopropyldimethylamin

Mýdlo : Lineární alkylkarboxylát sodný odvozený ze směsi

80/20 mastných kyselin z loje a kokosového oleje

Neionogenni: C₁₃ až C₁₅ směsně ethoxylovaný/propoxylovaný mastný alkohol s průměrným stupněm ethoxylace 3,8 a průměrným stupněm propoxylace 4,5

Neodol 45-13: C14-C15 lineární primární alkohol ethoxylát, prodávaný firmou Shell Chemical Co.

Quat : kvarterní tenzid vybraný z jednoho nebo více následujících: lauryltrimethylamoniúmchlorid, myristyltrimethylamoniumchlorid, palmityltrimethylamoniumchlorid, (alkyl odvozený z kokosového oleje)trimethylamoniumchlorid, (alkyl odvozený z kokosového oleje)trimethylamoniummethylsulfát, (alkyl odvozený z kokosového oleje)dimethylmonohydroxyethylamoniumchlorid, (alkyl odvozený z kokosového oleje)dimethylmonohydroxyethylamoniummethylsulfát, stearyldimethylmonohydroxyethylamoniumchlorid, stearyldimethylmonohydroxyethylamoniummethylsulfát, di-C₁₂ až C₁₄ alkyldimethylamoniumchlorid

STS : toluensulfonát sodný

CFAA : C₁₂ až C₁₄ alkyl N-methylglukamin

TFAA : C₁₆ až C₁₈ alkyl N-methylglukamin

TPKFA : C₁₂ až C₁₄ ukončené, zcela rozštěpené mastné kyseliny

DEQA : di(alkyl odvozený z loje - oxyethyl)dimethylamoniumchlorid

DEQA(2) : di(alkyl odvozený z loje - oxyethyl)hydroxyethyldimethylamoniummethylsulfát

DTDMAMS : di(alkyl odvozený z loje)dimethylamonium• · · · ♦ ···· ··* · · · · · · · • · · · · · · · · · · • ···· · · · ··♦· · · · « · • · · · · ' · · · ·

...... * *· ··

SDASA

methylsulfát : stearyldimethylamín : trojitě stlačení kyselina stearová v poměru 1 : 2

Křemičitan: amorfní křemičitan sodný (poměr SiO₂ : NaO₂ =1,6

	až 3,2)
Zeolit A	: hydratovaný hlinitokřemičitan sodný Na₁₂ (AlO₂SiO₂) ₁₂·27Η₂Ο lehož velikost částic je 0, 1 mikrometr až 10 mikrometrů (hmotnost je vyjádřena na bezvodém základě)
Na-SKS-6	: krystalický vrstvený křemičitan 6-Na₂Si₂O₅
Citrát	: dihydrát citrátu trisodného o aktivitě 86,4 % a velikosti částic 425 mikrometrů až 850 mikrometrů
Boritan	: boritan sodný

Uhličitan : bezvodý uhličitan sodný s velikostí částic 200 mikrometrů až 900 mikrometrů

Hydrogenuhličitan : bezvodý hydrogenuhličitan sodný s velikostí částic

	400 mikrometrů až 1200 mikrometrů
Síran	: bezvodý síran sodný
Mg síran	: bezvodý síran horečnatý
STPP	: polyfosforečnan trisodný
TSPP	: pyrofosforečnan tetrasodný
MA/AA	: náhodný kopolymer akrylátu s maleátem v poměru 4 : 1 se střední molekulovou hmotností 70 000 až
MA/AA 1	80 000 : náhodný kopolymer akrylátu s maleátem v poměru 6 ; 4 se střední molekulovou hmotností 10 000
AA	: polymer polyakrylátu sodného se střední molekulovou hmotností 4 500
PB1	: bezvodý monohydrát peroxyboritanu sodného NaBO₂»H₂O₂
PB4	: bezvodý tetrahydrát peroxyboritanu sodného NaBO · 311.0 · HO

Peroxy* 99 999 9999

9 9 9 9 9 9 9 9 9 « 9 9··· 9 99 ·

9999 99 9 9999 99 99 9

9 999 9999

...........

uhličitan : bezvodý peroxyuhličitan sodný 2Na₂CO₃· 3H₂O₂

NaDCC	: dichlorisokyanurát sodný
TAED	: tetraacetylethylendiamin
NOBS	: nonanoyloxybenzensulfonát ve formě sodné soli

NACA-OBS : (6-nonamidokaproyl)oxybenzensolfonát

DTPA	: diethylentriaminpentaoctová kyselina
HEDP	: 1,1-hydroxyethandifosfonová kyselina
DETPMP	: diethyltriaminpenta(methylen)fosfonát prodávaný firmou Monsanto pod obchodním názvem Dequest 2060
EDDS	: ethylendiamin-N,Ν'-dijantarová kyselina, (S,S)izomer ve formě sodné soli

Fotoaktivované bělidlo : sulfonovaný zinečnatý ftalocyanin zapouzdřený v dextrinovém rozpustném polymeru

Fotoaktivované bělidlo 1: sulfonovaný hlinitý ftalocyanin zapouzdřený v

	dextrinovém rozpustném polymeru
PAAC	: pentaaminacetát kobaltitý
Mananasa	: mananasa prodávaná pod obchodním názvem Gamanasa® firmou Novo Nordisk A/S a/nebo galaktomanasa extrahovaná z enzymového produktu prodávaného pod obchodním názvem Rohapec® BIL firmou Rohm

Alkalická

mananasa	: mananasa z Bacillus agaradherens, NCIMB 40482
Proteasa	: proteolytický enzym prodávaný pod obchodním názvem Savinasa, Alcalasa, Durazym firmou Novo Nordisk A/S, Maxacal, Maxapem prodávaný firmou Gist-Brocades a proteasy posané v patentech WO91/06637 a/nebo WO95/10591 a/nebo EP 251 446.
Amylasa	: amylolytický enzym prodávaný pod obchodním názvem Purafact OX Am® popsaný ve WO94/18314, WO96/05265 prodávaný firmou Genencor, Termamyl®, Fungamyl® a Duramyl®, které jsou všechny dostupné od firmy Novo Nordisk A/S a dále ty, ketré jsou popsány ve

• · • · · • · · · ·

WO95/26397

Lipasa : lipolytický enzym prodávaný pod obchodním názvem Lipolase, Lipolase Ultra firmou Novo Nordisk A/S a Lipomax prodávaný firmou Gist-Brocades.

Celulasa : celulytický enzym prodávaný pod obchodním názvem Carezym, Celuzym, a/nebo Endolase firmou Novo Nordisk A/S

CMC : karboxymethylcelulosa sodná

PVP : polyvinylový polymer se střední molekulovou hmotností 60 000

PVNO : polyvinylpyridin-N-oxid se střední molekulovou hmotností 50 000

PVPVI : kopolymer vinylimidazolu a vinylpyrrolidonu se střední molekulovou hmotností 20 000

Zjasňovadlo 1: 4,4'-bis(2-sulfostyryl)bifenyl disodný Zjasňovadlo 2: 4,4'-bis(4-anilin-6-morfolin-l, 3,5-triazin-2-yl)stilben-2,2'-disulfonát disodný

Silikonové činidlo proti pěnění : polydimethylsiloxanové činidlo tlumící pěnění se siloxanoxyalkylenovým kopolymerem jako disperzním činidlem s poměrem činidla tlumícího pěnění k disperznímu činidlu 10 : 1 až 100 : 1

Činidlo tlumící vznik mydlin : 12% silikon/oxid křemičitý, 18% stearylalkohol, 70% škrob v granulované formě

Činidlo způsobující zákal : na vodě založená monostyrenlatexová směs, prodávaná firmou BASF Aktiengesellschaft pod obchodním názvem Lytron 621

SRP 1 : aniontové ukončené poylestery

SRP 2 : diethoxylovaný póly(1,2-propylentereftalátový) •ΦΦΦΦ · φ krátký blokový polymer

QEA : bis ( (C₂H₅O) (C₂H₄O) _n) (CH₃)-N⁺-C6C12-N⁺-(CH3) bis ( (C₂H₅O) (C₂H₄O))_n, kde n = 20 až 30

PEI : polyethylenimin se střední molekulovou hmotností

1800 a středním stupněm ethoxylace 7

Polymer A : modifikované polyaminy PEI (Mr = 182) se středním stupněm ethoxylace = 15

Polymer B : modifikované polyaminy PEI (Mr = 600) se středním stupněm ethoxylace =20

Polyamidpolyamin

SCS

HMWPEO

PEG_X

PEO : polyamidové polyaminy podle předkládaného vynálezu jsou komerčně prodávány pod obchodními názvy: Kymen®, Kymen 557H®, Kymen 557LX®, Reten® a Cartaretin® : kumensulfonát sodný : polyethylenoxid o vysoké molekulové hmotnosti : polyethylenglykol o molekulové hmotnosti x : polyethylenoxid se střední molekulovou hmotností

000

TEPAE : tetraethylenpentamin ethoxylát

Příklad 1

Následující prací detergentní prostředky o vysoké hustotě byly připraveny podle předkládaného vynálezu:

	I	II	III	IV	V	VI
LAS	8,0	8, 0	8, 0	2,0	6, 0	6, 0
TAS	-	0,5	-	0,5	1,0	0,1
C46 (S)AS	2,0	2,5	-	-	-	-
C25AS	-	-	-	7,0	4,5	5, 5
C68AS	2,0	5, 0	7,0	-	-	-
C25E5	-	-	3,4	10, 0	4,6	4,6
C25E7	3,4	3,4	1,0	-	-	-
C25E3S	-	-	-	2, 0	5, 0	4,5
QAS	-	0, 8	-	-	-	-
QAS 1	-	-	-	0, 8	0, 5	1,0
Zeolit A	18, 1	18,0	14,1	18, 1	20, 0	18,1
Citrónová k.	-	-	-	2,5	-	2,5

• · 4

4

Uhličitan	13, 0	13, 0	27,0	10, 0	10, 0	13, 0
Na-SKS-6	-	-	-	10, 0	-	10, 0
Křemičitan	1,4	1,4	3, 0	0, 3	0,5	0,3
Citrát	-	1,0	-	3, 0	-	-
Síran	26, 1	26, 1	26, 1	6, 0	-	-
Mg síran	0, 3	-	-	0, 2	-	0,2
MA/AA	0, 3	0, 3	0, 3	4,0	1,0	1,0
CMC	0, 2	0, 2	0,2	0,2	0,4	0,4
PB4	9,0	9,0	5, 0	-	-	-
Peroxy- uhličitan	—		—	—	18, 0	18,0
TAED	1,5	0,4	1,5	-	3, 9	4,2
NACA-OBS	-	2, 0	1,0	-	-	-
DETPMP	0,25	0,25	0, 25	0,25	-	-
SRP 1	-	-	-	0,2	-	0,2
EDDS	-	0,25	0,4	- ;	0,5	0,5
CFAA		1,0	-	2,0	-	-
HEDP	0, 3	0, 3	0, 3	0, 3	0,4	0,4
QEA	-	-	-	0, 2	-	0, 5
Mananasa	0, 005	0, 002	0,0008	0, 001	0, 002	0, 001
Proteasa	0, 009	0, 009	0, 01	0, 04	0, 05	0, 03
Amylasa	0, 002	0, 002	0, 002	0, 006	0, 008	0, 008
Celulasa	0,0007	-	-	0,0007	0,0007	0,0007
Lipasa	0, 006	-	-	0, 01	0, 01	0, 01
Fotoaktivované bělidlo (ppm)	15	15	15	—	20	20
PVNO/PVPVI	-	-	-	0,1	-	-
Zjasňovadlo 1	0, 09	0, 09	0, 09	-	0, 09	0, 09
Vonná látka	0, 3	0, 3	0, 3	0,4	0,4	0,4
Silikonové činidlo proti	0, 5	0, 5	0, 5	—	0, 3	0, 3
pěnění
Hustota v g/1	850	850	850	850	850	850
Různé a malé			Zbytek do	100 %
zbytky

• · ·

100

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · · · · · • · · · ···· • · Φ · f 9 9 9 9

Příklad 2

Následující granulované prací detergentní prostředky, které

jsou použitelné	zejména při	podmínkách praní v	evropské
pračce, byly připraveny	podle předkládaného vynálezu:
	I	II	III	IV	V	VI
LAS	5, 5	7,5	5, 0	5, 0	6, 0	7,0
TAS	1,25	1,9	-	0, 8	0,4	0,3
C24AS/C25AS	-	2,2	5,0	5, 0	5, 0	2,2
C25E3S	-	0, 8	1,0	1,5	3, 0	1,0
C45E7	3, 25	-	-	-	-	3,0
TFAA	-	-	2, 0	-	-	-
C25E5	-	5, 5	-	-	-	-
QAS	0, 8	-	-	-	-	-
QAS 1	-	0,7	1,0	0, 5	1,0	0,7
STPP	19, 7	-	-	-		-
Zeolit A	-	19, 5	25, 0	19, 5	20, 0	17, 0
NaSKS-6/citrónová kyselina	-	10, 6	—	10, 6	—	—
(79:21)
Na-SKS-6	-	-	9,0	-	10, 0	10, 0
Uhličitan	6,1	21,4	9,0	10, 0	10, 0	18, 0
Hydrogen- uhličitan	—	2, 0	7,0	5, 0		2,0
Křemičitan	6, 8	-	-	0, 3	0, 5	-
Citrát	-	-	4,0	4,0	-	-
Síran	39, 8	-	-	5, 0	-	12, 0
Mg síran	-	-	0,1	0,2	0,2	-
MA/AA	0, 5	1,6	3, 0	4,0	1,0	1,0
CMC	0, 2	0,4	1,0	1,0	0,4	0,4
PB4	5, 0	12, 7	-	-	-	-
Peroxy- uhličitan	—	—	—	—	18,0	15,0
TAED	0, 5	3,1	-	-	5,0	-
NACA-OBS	1,0	3, 5	-	-	-	2,5
DETPMP	0, 25	0,2	0, 3	0,4	-	0,2
HEDP	-	0, 3	-	0, 3	0, 3	0, 3
QEA	-	-	1,0	1,0	1,0	-
Mananasa	0, 005	0, 002	0, 008	0, 005	0, 002	0, 001
Proteasa	0, 009	0, 03	0, 03	0, 05	0, 05	0, 02

	101	• 9	9 · · 9 « 9 9 9 9 9 9 · 9 9 9 9 9
9999 9 9 9 • 9 · 9 9 9 9	9999 9 9 9 9 9 «
Lipasa	0, 003	0, 003	0, 006	0, 006	0, 006	0, 004
Celulasa	0,0006	0,0006	0,0005	0,0005	0,0007	0,0007
Amylasa	0, 002	0, 002	0, 006	0, 006	0, 01	0, 003
PVNO/PVPVI	-	-	0, 2	0, 2	-	-
PVP	0,9	1,3	-	-	-	0,9
SRP 1	-	-	0,2	0,2	0,2	-
Fotoaktivované	15	27	-	-	20	20
bělidlo (ppm) Fotoaktivované bělidlo 1(ppm)	15	-	-	-	-	-
Zjasňovadlo 1	0, 08	0,2	-	-	0, 09	0, 15
Zjasňovadlo 2	-	0, 04	-	-	-	-
Vonná látka	0, 3	0, 5	0,4	0, 3	0,4	0,3
Silikonové činidlo proti	0, 5	2,4	0, 3	0, 5	0, 3	2,0
pěnění
Hustota v g/1	750	750	750	750	750	750
Různé a malé			Zbytek do	100 %

zbytky

Příklad 3

Následující detergentní prostředky, které jsou použitelné

zejména při podmínkách	praní v evropské	pračce,	byly
připraveny podle	předkládaného I II	vynálezu: III	IV	V	VI
Foukaný prášek
LAS	6, 0	5, 0	11, 0	11,0	6, 0	6, 0
TAS	2,0	-	-	-	2, 0	2, 0
Zeolit A	24,0	-	-	-	20, 0	20, 0
STPP	-	27, 0	24,0	24,0	-	-
Síran	4,0	6, 0	13, 0	13, 0	-	-
MA/AA	1,0	4,0	6, 0	6, 0	2, 0	2,0
Křemičitan	1,0	7,0	3, 0	3, 0	3, 0	3, 0
CMC	1,0	1,0	0,5	0, 5	0, 6	0, 6
Zjasňovadlo 1	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
Silikonové	1,0	1,0	1,0	1,0	0, 3	0, 3
činidlo proti pěnění
DETPMP	0,4	0,4	0,2	0,2	0,4	0,4

• φ ·φ · φφφφ φφφ φ φ · φφφφ φφφ φφφφ φφφφ • φ φ φ φ φ φ φ · φ φ φ φ φ φφ φ

102

Nastříkáno
Zjasňovadlo	0, 02	-	-	-	0, 02	0, 02
C45E7	-	-	-	-	5, 0	5, 0
C45E2	2,5	2,5	2, 0	2,0	-	-
C45E3	2, 6	2, 5	2, 0	2, 0	-	-
Vonná látka	0, 5	0, 3	0, 5	0,5	0,2	0,2
Silikonové činidlo proti	0, 3	0, 3	0,3	0, 3	—	—
pěnění
Suchá aditiva
QEA	-	-	-	-	1,0	1,0
EDDS	0, 3	-	-	-	-	-
Síran	2,0	3, 0	5, 0	5, 0	10,0	IQ, 0
Uhličitan	6, 0	13, 0	15, 0	15, 0	14,0	14,0
Citrónová k.	2, 5	-	-	-	2,0	2,0
QAS 1	0, 5	-	-	- .	0,5	0, 5
Na-SKS-6	10, 0	-	-	-	-	-
Peroxy- uhličitan	18,5	—	—		—
PB4	-	18,0	10, 0	10, 0	21,5	21, 5
TAED	2, 0	2,0	-	-	2,0	2, 0
NACA-OBS	3, 0	2,0	4,0	4,0	-	-
Mananasa	0, 005	0, 002	0,0008	-	0, 001	- ·
Alkalická	-	-	-	0, 001	-	0, 002
mananasa
Proteasa	0, 03	0, 03	0, 03	0, 03	0, 03	0, 03
Lipasa	0, 008	0, 008	0, 008	0, 008	0, 004	0, 004
Amylasa	0, 003	0, 003	0, 003	0, 003	0, 003	0, 003
Zjasňovadlo 1	0, 05	-	-	-	0, 05	0, 05
Různé a malé			Zbytek do	100 %
zbytky
Příklad 4
Následuj ící	granulované	detergentní prostředky	byly
>řipraveny podle	předkládaného	vynálezu:
	I	II	III	IV	V	VI
Foukaný prášek
LAS	23,0	8, 0	7,0	9,0	7,0	7,0
TAS	-	-	-	-	1,0	-

C45AS	6, 0	6, 0
C45AES	-	1,0
C45E35	-	-
Zeolit A	10, 0	18, 0
MA/AA	-	0, 5
MA/AA 1	7,0	-
AA	-	3, 0
Síran	5, 0	6, 3
Křemičitan	10, 0	1, o
Uhličitan	15, 0	20, 0
PEG 4000	0,4	1,5
DTPA	-	0,9
Zjasňovadlo 2	0, 3	0,2
Nastříkáno
C45E7	-	2, 0
C25E9	3, 0	-
C23E9	-	-
Vonná látka	0, 3	0, 3
Aglomeráty
C4 5AS	-	5, 0
LAS	-	2, 0
Zeolit A	-	7,5
Uhličitan	-	4,0
PEG 4000	-	0, 5
Různé (voda atd.)	—	2, 0
Suchá aditiva
QAS	-	-
Citrónová k.	-	-
PB4	-	-
PB1	4,0	1,0
Peroxy- uhličitan	—	—
Uhličitan	-	5, 3
NOBS	4,0	-
Methylcelulosa	0, 2	-
Na-SKS-6	8,0	-
STS	-	-

·· 9

103

	•	9 4 4· 444444 4 • 4 4 4 4 94	9 4 4 9944 · · « 9 •
5, 0	8, 0	-	-
1,0	1,0		-
-	-	2,0	4, 0
14,0	12,0	10, 0	10, 0
-	-	-	2, 0
3, 0	2, 0	3, 0	3, 0
14,3	11,0	15, 0	19, 3
1,0	1,0	1,0	1,0
10, 0	20,7	8, 0	6, 0
1,5	1,0	1,0	1,0
0, 5	-	-	0, 5
0,3	-	0,1	0,3
-	-	2,0	2, 0
-	-	-	-
1,5	2, 0	-	2, 0
0, 3	2, 0	0, 3	0, 3
5, 0	2, 0	-	5, 0
2, 0	-	-	2, 0
7,5	8,0	-	7,5
4,0	5, 0	-	4,0
0, 5	-	-	0, 5
2, 0	2,0	-	2,0

-	-	1,0	—
-	-	2,0	-
-	-	12, 0	1,0
3, 0	2, 0	-	-
-	-	2, 0	10,0
1,8	-	4,0	4,0
6, 0	-	-	0, 6
-	-	-	-
-	-	-	-
2,0	-	1,0	-

«φ ·

	104	• Φ	Φ φφ · ΦΦ φ · φ φ · φ φ · · φ φ Φ φφφφ φ φ φ φ φ φ· · Φ
• Φ • φ φ·	Φ · φ • φ φ
Kulmen sulfonová kyselina	-	1,0	-	-	2, 0
Mananasa	0, 005	0, 002 0, 001	0, 008	0, 001	0, 001
Proteasa	0, 02	0, 02 0, 02	0, 01	0, 02	0, 02
Lipasa	0, 004	0,004	-	0, 004	0, 004
Amylasa	0, 003	0,002	-	0, 003	-
Celulasa	0,0005	0,0005 0,0005	0,0007	0,0005	0,0005
PVPVI	-	-	-	0, 5	0,1
PVP	-	-	-	0,5	-
PVNO		0, 5	0, 3	-	-
QEA	-	-	-	1,0	-
SRP 1	0,2	0,5 0,3	-	0,2	-
Silikonové činidlo proti pěnění	0, 2	0,4 0,2	0,4	ο,ι
Mg síran Různé a malé zbytky		0,2 Zbytek do 100 %	0,2
Příklad 5
Následuj ící	detergentní prostředky	neobsahuj ící	žádné
bělidlo, které byly připraveny	jsou vhodné zejména pro praní barevných podle předkládaného vynálezu:	tkanin,
	I	II III	IV	V

Foukaný prášek

Zeolit A	15, 0	15, 0	15,0	-
Síran	-	-	5, 0	-	-
LAS	3, 0	3, 0	3, 0	-	-
DETPMP	0,4	0,4	0, 5	-	-
CMC	0,4	0,4	0,4	-	-
MA/AA	4,0	4,0	4,0	-
Aglomeráty
C4 5AS	-	-	-	11,0	11,0
LAS	6, 0	6, 0	5, 0	-	-
TAS	3, 0	3, 0	2, 0	-	-
Křemičitan	4,0	4,0	4,0	-	-
Zeolit A	10, 0	10, 0	15,0	13,0	13,0
CMC	-	-	-	0, 5	0, 5

4

105 ♦ 4 4 4 4 4 4

4«4 4 44 4

4444444 44 4 ♦ 4 4 4 4 4 4 • 4 4 4 4 <4

MA/AA	-	-		2, 0	2, 0
Uhličitan	9,0	9,0	7,0	7,0	7,0
Nastříkáno
Vonná látka	0, 3	0, 3	0, 3	0, 5	0, 5
C45E7	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0
C25E3	2, 0	2, 0	2, 0	2, 0	2, 0
Suchá aditiva
MA/AA	-	-	-	3, 0	3,0
Na-SKS-6	-	-	-	12,0	12,0
Citrát	10, 0	10, 0	-	8, 0	8, 0
Hydrogenuhličitan	7,0	7,0	3, 0	5, 0	5, 0
Uhličitan	8, 0	8,0	5, 0	7,0	7,0
PVPVI/PVNO	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5
Mananasa	0,0008	-	0,0005	0, 001	-
Alkalická	-	0,0008	-	-	0, 002
mananasa
Proteasa	0,03	0, 03	0, 02	0, 05	0, 05
Lipasa	0, 008	0, 008	0, 008	0, 008	0,008
Amylasa	0, 01	0, 01	0, 01	0, 01	0, 01
Celulasa	0, 001	0, 001	0, 001	0, 001	0, 001
Silikonové	5, 0	5, 0	5, 0	5, 0	5, 0
činidlo proti
pěnění
Síran	-	-	9,0	-	-
Hustota (g/1)	700	700	700	700	700
Různé a malé		Zbytek do 100	%

zbytky

Příklad 6

Následující detergentní prostředky byly připraveny podle předkládaného vynálezu:

Základní granule	I	II	III	IV
Zeolit A	30, 0	22, 0	24, 0	10, 0
Síran	10, 0	5,0	10,0	7,0
MA/AA	3, 0	-	-	-
AA	-	1,6	2,0	-
MA/AA 1	-	12, 0	-	6, 0
LAS	14, 0	10, 0	9, 0	20, 0

4

4 *

4*4

4 4*444 4

4

4 4 4

44 ► 4 4 4 » *4 4 > 4 4 4 » 4 4 4

4 4 4

106

C4 5AS	8, 0	7,0	9,0	7,0
C45AES	-	1,0	1,0	-
Křemičitan	-	1,0	0, 5	10, 0
Mýdlo	-	2,0	-	-
Zjasňovadlo 1	0,2	0,2	0,2	0,2
Uhličitan	6, 0	9,0	10, 0	10, 0
PEG 4000	-	1,0	1,5	-
DTPA	-	0,4	-	-
Nastříkáno
C25E9	-	-	-	5, 0
C45E7	1,0	1,0	-	-
C23E9	-	1,0	2, 5	-
Vonná látka	0,2	0, 3	0, 3	-
Suchá aditiva
Uhličitan	5, 0	10, 0	18, 0	8, 0
PVPVI/PVNO	0,5	-	0,3	-
Mananasa	0, 005	0, 002	0,0008	0, 001
Proteasa	0, 03	0, 03	0, 03	0, 02
Lipasa	0, 008	-	-	0, 008
Amylasa	0, 002	-	-	0, 002
Celulasa	0,0002	0,0005	0,0005	0,0002
NOBS	-	4,0	-	4,5
PB 1	1,0	5, 0	1,5	6, 0
Síran	4,0	5, 0	-	5, 0
SRP 1	-	0,4	-	-
Činidlo tlumící	-	0, 5	0, 5	-
vznik mydlin
Různé a malé zbytky		Zbytek do	100 %

Příklad 7

Následující granulované detergentní připraveny podle předkládaného vynálezu:

I II prostředky byl

Foukaný prášek Zeolit A STPP Síran Uhličitan

20, 0

20,0

III	IV
15, 0	15, 0
-	-
5, 0	5, 0
5, 0	5, 0

Φ Φ »· φ φφ Φ· • · · φφφ φφφφ φφφ φφφφ φφφφ φ φφφφ φ · φ φφφφ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φφφφ φφφ * φφ φ φ · φφ

107

TAS	-	-	1,0	1,0
LAS	6, 0	6, 0	6, 0	6, 0
C68AS	2, 0	2,0	-	-
Křemičitan	3, 0	8,0	-	-
ΜΑ/ΑΑ	4,0	2,0	2,0	2, 0
CMC	0, 6	0, 6	0,2	0,2
Zjasňovadlo 1	0, 2	0, 2	0,1	0,1
DETPMP	0,4	0,4	0,1	0,1
STS	-	-	1,0	1,0
Nastříkáno
C45E7	5, 0	5, 0	4,0	4,0
Silikonové činidlo	0,3	0, 3	0,1	0,1
proti pěnění
Vonná látka	0,2	0,2	0, 3	0, 3
Suchá aditiva
QEA	-	-	1,0 ·'	1,0
Uhličitan	14, 0	9,0	10,0	10,0
PB 1	1,5	2,0	-	-
PB 4	18,5	13, 0	13, 0	13,0
TAED	2,0	2, 0	2,0	2, 0
QAS	-	-	1,0	1,0
Fotoaktivované	15 ppm	15 ppm	15 ppm	15 ppm
bělidlo
Na-SKS-6	-	-	3,0	3,0
Mananasa	0, 005	0, 002	0,0008	-
Alkalická mananasa	-	-	-	0, 001
Proteasa	0, 03	0, 03	0,007	0, 007
Lipasa	0, 004	0, 004	0, 004	0, 004
Amylasa	0, 006	0, 006	0, 003	0, 003
Celulasa	0,0002	0,0002	0,0005	0,0005
Síran	10, 0	20, 0	5, 0	5, 0
Hustota (g/1)	700	700	700	700
Různé a malé zbytky		Zbytek	do 100 %

108 • · ·* · 9· ·· • · · · · · · « · · ··· · ··· · ·· · • ···· · · · ··»* · · 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 9 9999

Příklad 8
Následující detergentní	prostředky	byly připraveny pc
předkládaného vynálezu:
	I	II	III
Foukaný prášek
Zeolit A	15, 0	15, 0	15,0
Síran	-	5, 0	-
LAS	3, 0	3, 0	3, 0
QAS	-	1,5	1,5
DETPMP	0,4	0, 2	0,4
EDDS	-	0,4	0,2
CMC	0,4	0,4	0,4
MA/AA	4,0	2,0	2, 0
Aglomerát
LAS	5, 0	5, 0	5, 0
TAS	2,0	2, 0	1,0
Křemičitan	3, 0	3,0	4,0
Zeolit A	8, 0	8,0	8, 0
Uhličitan	8, 0	8,0	4,0
Nastříkáno
Vonná látka	0, 3	0, 3	0, 3
C45E7	2,0	2, 0	2, 0
C25E3	2, 0	-	-
Suchá aditiva
Citrát	5,0	-	2,0
Hydrogenuhličitan	-	3, 0	-
Uhličitan	8,0	15, 0	10, 0
TAED	6, 0	2,0	5, 0
PB 1	14,0	7,0	10,0
PEO	-	-	0,2
Bentonitová hlinka	-	-	10,0
Mananasa	0, 005	0, 002	0,0008
Proteasa	0, 03	0, 03	0, 03
Lipasa	0, 008	0, 008	0, 008
Celulasa	0, 001	0, 001	0, 001
Amylasa	0, 01	0, 01	0, 01
Silikonové činidlo proti	5, 0	5, 0	5,0

pěnění

3,0

850 850

Zbytek do 100 %

109

0 4 4 4 4

4444 4 · 44441

4 * ·

4 44 0

Síran

Hustota (g/1) Různé a malé zbytky

Příklad 9

Následující detergentní předkládaného vynálezu:

850 prostředky byly připraveny podle

	I	II	III	IV
LAS	18, 0	14, 0	24,0	20, 0
QAS	0,7	1,0	-	0,7
TFAA	-	1,0	-	-
C25E56.5	-	-	1,0	-
C45E7	-	1,0	-	-
C45E3S	1,0	2, 5	1,0	-
STPP	32,0	18, 0	30,0 '	22,0
Křemičitan	9,0	5, 0	9,0	8,0
Uhličitan	11, 0	7,5	10, 0	5, 0
Hydrogenuhličitan	-	7,5	-
PB 1	3, 0	1,0	-	-
PB 4	-	1,0	-	-
NOBS	2,0	1,0	-	-
DETPMP	-	1,0	-	-
DTPA	0,5	-	0,2	0,3
SRP 1	0, 3	0,2	-	0,1
MA/AA	1,0	1,5	2, 0	0, 5
CMC	0, 8	0,4	0,4	0,2
PEI	-	-	0,4	-
Síran	20, 0	10, 0	20, 0	30, 0
Mg síran	0,2	-	0,4	0, 9
Mananasa	0, 005	0, 002	0, 005	0, 001
Proteasa	0, 03	0, 03	0, 02	0, 02
Amylasa	0, 008	0, 007	-	0, 004
Lipasa	0, 004	-	0, 002	-
Celulasa	0,0003	-	-	0,0001
Fotoaktivované	30 ppm	20 ppm	-	10 ppm
bělidlo
Vonná látka	0,3	0, 3	0,1	0,2
Zjasňovadlo 1/2	0, 05	0, 02	0, 08	0,1

Různé a malé zbytky Zbytek do 100 %

110 • 0 00 0 00 00 •» 0 0 0 0 «000 • 0 · 0·0· 0 0 0 0 0 000000 0000000 00 0 0 0 000 00*0

000 0 00 0 00 00

Příklad 10

Následující tekuté detergentní prostředky byly připraveny podle předkládaného vynálezu (množství jsou uvedena jako díly hmotnosti, enzymy jsou uvedeny jako čistý enzym):

	I	II	III	IV	v
LAS	11, 5	8, 8	-	3, 9	-
C25E2.5S	-	3, 0	18, 0	-	16,0
C45E2.25S	11,5	3, 0	-	15,7	-
C23E9	-	2,7	1, 8	2,0	1,0
C23E7	3,2	-	-		-
CFAA	-	-	5,2	-	3,1
TPKFA	1,6	-	2,0	0, 5	2, 0
Citrónová k. (50%)	6, 5	1,2	2, 5	4,4	2,5
Ca formiát	0,1	0, 06	0,1	-	-
Na formiát	0, 5	0, 06	0,1	0, 05	0, 05
SCS	4,0	1,0	3, 0	1,2	-
Boritan	0, 6	-	3, 0	2,0	2,9
Na hydroxid	5, 8	2, 0	3, 5	3,7	2,7
Ethanol	1,75	1,0	3, 6	4,2	2,9
1,2-propandiol	3, 3	2,0	8, 0	7,9	5, 3
Monoethanolamin	3, 0	1,5	1,3	2,5	0, 8
TEPAE	1,6	-	1,3	1,2	1,2
Mananasa	0, 005	0, 001	0, 002	0,0005	0,0002
Proteasa	0, 03	0, 01	0, 03	0, 02	0, 02
Lipasa	-	-	0, 002	-	-
Amylasa	-	-	-	0, 002	-
Celulasa	-	-	0,0002	0,0005	0,0001
SRP 1	0,2	-	0,1	-	-
DTPA	-	-	0, 3	-	-
PVNO	-	-	0, 3	-	0,2
Zjasňovadlo 1	0,2	0, 07	0,1	-	-
Silikonové	0, 04	0, 02	0,1	0,1	0,1

činidlo proti pěnění

Různé a voda

6»·· • · ···»

111 • 9 ·· * 9 9 · • · · · • · · » • · · · « · »·

Příklad 11

Následující tekuté detergentní prostředky byly připraveny podle předkládaného vynálezu (množství jsou uvedena jako díly

hmotnosti, enzymy jsou	uvedeny	jako čistý	enzym):
	I	II	III	IV
LAS	10, 0	13, 0	9,0	-
C25AS	4,0	1,0	2, 0	10, 0
C-25E3S	1,0	-	-	3, 0
C25E7	6, 0	8,0	13, 0	2,5
TFAA	-	-	-	4,5
APA	-	1,4	-	-
TPKFA	2, 0	-	13, 0	7,0
Citrónová k.	2, 0	3, 0	1,0	1,5
Dodecenyl/tetradecenyl jantarová	12, 0	10, 0	—	-
kyselina
Mastná kyselina z	4,0	2,0	1,0	-
řepky
Ethanol	4,0	4,0	7,0	2,0
1,2-Propandiol	4,0	4,0	2, 0	7,0
Monoethanolamin	-	-	-	5, 0
Triethanolamin	-	-	8, 0	-
TEPAE	0, 5	-	0, 5	0, 2
DETPMP	1,0	1,0	0,5	1,0
Mananasa	0,0002	0,0005	0, 005	0,0005
Proteasa	0, 02	0, 02	0, 01	0, 008
Lipasa	-	0, 002	-	0, 002
Amylasa	0, 004	0, 004	0, 01	0, 008
Celulasa	-	-	-	0, 002
SRP 2	0, 3	-	0,3	0,1
Kyselina Boritá	0,1	0,2	1,0	2, 0
Ca chlorid	-	0, 02	-	0, 01
Zjasňovadlo 1	-	0,4	-	-
Činidlo tlumící	0,1	0, 3	-	0,1
vznik mydlin
Činidlo způsobující	0, 5	0,4	-	0, 3
zákal
NaOH tak, aby	8,0	8, 0	7,6	7,7

výsledné pH bylo

Různé a voda	112	« 9 »· · » · « «1 ··· 9 • · ·· »	m · » • · · » • · · · . • · ···» · · • · · » ·· « .·
Příklad 12
Následující tekuté detergentní	prostředky	byly	připraveny
podle předkládaného vynálezu	(množství jsou uvedena	jako díly
hmotnosti, enzymy	jsou uvedeny jako	čistý enzym):
	I	II	III	IV	V
LAS	25, 0	-	-	-	-
C25AS	-	13, 0	18, 0	15, 0	18, 0
C25E3S	-	2,0	2,0	4,0	2, 0
C25E7	-	-	4,0	4,0	4,0
TFAA	-	6, 0	8,0	8, 0	8, 0
APA	3, 0	1,0	2, 0	-	2,0
TPKFA	-	15, 0	11,0	11,0	11,0
Citrónová k.	1,0	1,0	1,0 ;	1,0 ¹	1,0
Dodecenyl/tetradecenyl jantarová kyselina	15, 0
Mastná kyselina z řepky	1,0	—	3, 5		3, 5
Ethanol	7,0	2,0	3,0	2, 0	3, 0
1,2-Propandiol	6, 0	8, 0	10, 0	13, 0	10, 0
Monoethanolamin	-	-	9,0	9,0	9,0
TEPAE	-	-	0,4	0, 3	0,4
DETPMP	2,0	1,2	1,0	-	1,0
Mananasa	0, 0001 0	, 0002	0, 005	0,0005	-
Alkalická	-	-	-	-	0, 005
mananasa
Proteasa	0, 08	0, 02	0, 01	0, 02	0,01
Lipasa	-	-	0, 003	0,003	0, 003
Amylasa	0, 004	0, 01	0, 01	0, 01	0,01
Celulasa	-	-	0, 004	0, 003	0,004
SRP 2	-	-	0,2	0,1	0,2
Kyselina Boritá	1,0	1,5	2,5	2, 5	2,5
Bentonitová hlinka	4,0	4,0	—
Zjasňovadlo 1	0,1	0,2	0, 3	-	0, 3
Činidlo tlumící vznik mydlin	0,4	—	~~	—	—

• · ·· · ··

4 4 4 · · 4 • 44 4444 4 • 4444 4 4 · ···· 4 4 4 4 4

	113	444 4 44 4 44
Činidlo způsobující zákal	0, 8	0,7	- - -
NaOH tak, aby	8, 0	7,5	8, 0 8,2 8,0

výsledné pH bylo Různé a voda

Příklad 13

Následující tekuté detergentní	prostředky	byly	připraveny
podle předkládaného vynálezu	(množství jsou uvedena	jako díly
hmotnosti, enzymy jsou uvedeny jako	čistý enzym):
	I	II		III
LAS	27, 6	18,9		27, 6
C4 5AS	13, 8	5,9		13, 8
C13E8	3, 0	3,1		3, 0
Olejová kyselina	3,4	2, 5		3,4
Citrónová kyselina	5,4	5,4		5,4
Na hydroxid	0,4	3, 6		0,4
Ca formiát	0,2	0,1		0,2
Na formiát	-	0, 5
Ethanol	7,0	-		7,0
Monoethanolamin	16, 5	8, 0		16, 5
1,2-propandiol	5, 9	5, 5		5,9
Xylensulfonová kyselina	-	2,4		-
TEPAE	1,5	0, 8		1,5
Proteasa	0, 05	0, 02		0, 05
Mananasa	0, 005	0,0002	-
Alkalická mananasa	-	-		0, 001
PEC	-	0,7		-
Zjasňovadlo 2	0,4	0,1		0,4
Vonná látka	0, 5	0, 3		0, 5
Voda a malé zbytky
Příklad 14
Následující gelové detergentní	prostředky	byly	připraveny
podle předkládaného vynálezu:
I	II	III	IV	V
C12-15E2.5S 21	20,2	22, 7	13, 6	20,2

• ·

C12LAS

C12-14 glukosamid

C12-14EO7

C12-15EO9

C8-10 amidopropylamin

CIO amidopropylamin Citrónová k.

C12/14 mastná kyselina

Mastná kyselina z palmového jádra

Mastná kyselina z řepky Mananasa

Alkalická mananasa

Proteasa Lipasa Amylasa Celulasa Zjasňovadlo 1 Polymer A Polymer B Polyamin-polyamid

Polyethoxylované polyaminy

Činidlo uvolňuj ící nečistoty

Ethanol

1,2-propandiol Monoethanolamin

NaOH

Boritá kyselina Borax

Činidlo potlačující vznik mydlin

	114	• 9 9 9 99 9 9 99	9 9 9 9 9
-	-	-	9,1	-
4, 0	2, 5	-	-	2, 5
4,5	-	-	-	-
-	0, 6	0, 6	0, 6	0, 6
1,3	-	-	-	-
-	1,3	1,3	1,3	1,3
1,0	5, 0	1,0	1,0	5, 0
-	10, 0	10, 0	10, 0	10, 0
8, 0	-	-	-	-
8, 0	-	-	-	-
0,0001	0,0002	0, 005	0,0005	-
-	-	-		0,0008
0, 02	0, 03	0, 03	0, 03	0,03
0, 001	0, 002	0, 003	0, 002	0, 002
0, 003	0, 002	0, 002	0, 002	0, 002
0,0007	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
0,15	0, 15	0,15	0,15	0,15
0,7	0, 6	0, 6	0, 6	0, 6
-	1,2	1,2	1,2	1,2
2, 0	1,0	1,0	-	1,0
-	2, 0	-	-	2,0
-	0,1	0,1	0,1	0,1
0,7	0, 5	0,5	0,5	0, 5
4,0	4,0	4,0	4,0	4,0
0,7	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5
2, 8	7,0	7,0	7,0	7,0
2, 0	-	-	-	-
-	2,5	2, 5	2,5	2,5
-	0,1	0,1	0,1	0,1

• « ··· ···· ··· ··· ···· • · · · · · · · · · · • ······ ······· ·· ·

	115	• · · · · ·	4 · ·
Polydimethyl- siloxan	0,2	-	-	-
Vonná látka	0, 5	0, 75	0, 75 0, 75	0,75
Barvivo	-	0, 04	0, 04 0, 04	0, 04
Různé a voda		Zbytek do 100 %

Příklad 15

Následující gelové detergentní prostředky byly připraveny podle předkládaného vynálezu:

	I	II	III	IV
C12-15E2.5S	18,2	22, 6	27, 6	22, 6
C12-15EO9	0, 6	0, 6	0, 6	0, 6
CIO amidopropylamin	1,3	1,3	1,3	1,3
Citrónová k.	1,0	1,0	1,0	1,0
C12/14 mastná kyselina	10, 0	10, 0	.7,5	10, 0
Quat	1,0	5, 0	-	-
Mananasa	0, 005	0, 001	0, 002	0,0005
Proteasa	0, 03	0, 01	0, 03	0, 03
Lipasa	0, 002	0, 002	0, 002	0, 002
Amylasa	0, 003	0, 002	0, 001	0, 002
Celulasa	0,0001	0, 0004	0,0001	0,0001
Zjasňovadlo 1	0, 15	0, 15	0, 15	0, 15
Polymer A	0, 6	0, 3	0, 6	0, 6
Polymer B	1,2	0, 6	1,2	1,2
Činidlo uvolňující nečistoty	0,1	0,1	0,1	0,1
Ethanol	0, 5	0, 5	0,5	0,5
1,2-propandiol	4,0	4,0	4,0	4,0
Monoethanolamin	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5
NaOH	7,0	7,0	7,0	7,0
Boritá kyselina	-	-	-	-
Borax	2,5	2,5	2,5	-
Činidlo potlačující vznik mydlin	0,1	0,1	0,1	0,1
Vonná látka	0, 75	0, 75	0, 75	0,75
Barvivo	0, 04	0, 04	0, 04	0, 04
Různé a voda		Zbytek do	100 %

116

Příklad 16

Následující granulované detergentní prostředky pro praní

tkanin, které mají schopnost	provádět změkčení	během praní
byly připraveny podle předkládaného vynálezu:
	I	II
C45AS	-	10,0
LAS	7,6	-
C68AS	1,3	-
C45E7	4,0	-
C25E3	-	5,0
Koko-alkyldimethylhydroxy- ethylamoniumchlorid	1,4	1,0
Citrónová k.	5, 0	3, 0
Na-SKS-6	-	11,0
Zeolit A	15, 0	, 15, 0
MA/AA	4,0	4,0
DETPMP	0,4	0,4
PB 1	15, 0	-
Peroxyuhličitan	-	15, 0
TAED	5, 0	5, 0
Smektitová hlinka	10, 0	10, 0
PEO o vysoké molekulové hmotnosti	—	0,1
Mananasa	0, 01	0,001
Proetasa	0, 02	0, 01
Lipasa	0, 02	0,01
Amylasa	0, 03	0,005
Celulasa	0, 001	-
Křemičitan	3, 0	5, 0
Uhličitan	10, 0	10, 0
Činidlo potlačující vznik mydlin	1,0	4,0
CMC	0, 2	0,1
Různé a voda	Zbytek do	100 %

Příklad 17

Následující změkčovací prostředky přidávané do máchání byly připraveny podle předkládaného vynálezu:

117

9 9 9 9 9 9 9 9 ··· 9 · 9 9*99 • 99 · 9 · · 9 · · *

999· 9 9 9 9999 99 99 9

9 999 9999

999 9 »9 9 «9 99

		I		II
DEQA (2)		20, 0		20, 0
Alkalická mananasa		-		0, 002
Mananasa		0,0008		-
Celulasa		0, 001		0, 001
HCL		0, 03		0, 03
Činidlo proti pěnění		0, 01		0, 01
Modré barvivo		25 ppm		25 ppm
CaCl₂		0,20		0,20
Vonná látka		0, 90		0,90
Různé a voda		Zbytek	do 100	Q, Ό
Příklad 18
Následující změkčovací	prostředky	na tkaninu a	prostředky
přidávané k tkaninám před sušením byly	připraveny podle
předkládaného vynálezu:
I	II	III	IV	V
DEQA 2, 6	19,0	-	-	-
DEQA (2)	-	-	-	51, 8
DTMAMS	-	-	26, 0	-
SDASA	-	70, 0	42, 0	40,2
Stearová kyselina 0,3	-	-	-	-
z IV=0
Neodol 45-13	-	13, 0	-	-
Chlorovodíková 0,02	0, 02	-	-	-
kyselina
Ethanol	-	1,0	-	-
Mananasa 0,0008	0,0002	0,0005	0, 005	0,0002
Vonná látka 1,0	1,0	0,75	1,0	1,5
Glykoperse S-20	-	-	-	15,4
Glycerol monostearát	—		26,0
Digeranylsukcinát	-	0,38	-	-
Silikonové 0,01 činidlo proti	0, 01			-
pěnění
Elektrolyt	0,1	-	-	-
Hlinka	-	-	3, 0	-
Barvivo 10 ppm	25 ppm	0, 01	-	-

·· ·· • · · • φ · φ · · · ·«····· φ φ · • · φ · · · · ·· · Φ· ·· ·· φ

118

Voda a malé zbytky

100 % 100 %

Příklad 19

Následující prací detergentní prostředky ve formě tyčinky

byly připraveny podle předkládaného	vynálezu (množství	jsou
uvedena jako	díly	hmotnosti,	enzymy	j sou	uvedeny	jako	čistý
enzym):
	I	II	III	IV	V	III	VI	V
LAS	-	-	19, 0	15, 0	21, 0	6,75	8, 8	-
C2 8AS	30, 0	13, 5	-	-	-	15,75	11,2	22,5
Na laurát	2, 5	9, 0	-	-	-	-	-	-
Zeolit A	2,0	1,25	-	-	-	1,25	1,25	1,25
Uhličitan	20, 0	3, 0	13, 0	8, 0	10, 0	15, 0	15, 0	10, 0
Ca	27,5	39, 0	35, 0	-	-	40, 0	' -	40, 0
Uhličitan
Síran	5, 0	5, 0	3, 0	5, 0	3, 0	-	-	5, 0
TSPP	5, 0	-	-	-	-	5, 0	2,5	-
STPP	5, 0	15, 0	10, 0	-	-	7,0	8, 0	10,0
Bentonitová	-	10, 0	-	-	5, 0	-	-	-
hlinka
DETPMP	-	0,7	0, 6	-	0, 6	0,7	0,7	0,7
CMC	-	1,0	1,0	1,0	1,0	-	-	1,0
Talek	-	-	10, 0	15, 0	10, 0	-	-	-
Křemičitan	-	-	4,0	5,0	3, 0	-	-	-
PVNO	0, 02	0, 03	-	0, 01	-	0, 02	-	-
MA/AA	0,4	1,0	-	-	0,2	0,4	0,5	0,4
SRP 1	0, 3	0, 3	0, 3	0,3	0,3	0,3	0, 3	0,3
Mananasa	0,0005	0,0005	0,0008	0,0005	0,0002	0,0002	0,0001	0,0005
Amylasa	-	-	0, 01	-		-	0, 002	-
Proteasa	-	0,004		0,003	0,003	-	-	0, 003
Lipasa	-	0, 002	-	0,002	-	-	-	-
Celulasa	-	0,0003	-	-	0,0003	0,0002	-	-
PEO	-	0,2	-	0,2	0,3	-	-	0, 3
Vonná látka	1,0	0,5	0, 3	0,2	0, 4	-	-	0,4
Mg síran	-	-	3, 0	3, 0	3, 0	-	-	-
Zj asňovadlo	0, 15	0,1	0,15	-	-	-	-	0,1

· · 999 9999

999 9 999 9 99 9 « 9999 99 9 9999 99 99 9

9 999 9999

Fotoakti- - 15,0 15,0 15,0 15,0 - - 15,0 vované bělidlo (ppm)

Příklad 20

Následující prostředky určené jako přídavek do detergentu byly připraveny podle předkládaného vynálezu:

	I	II	III	IV
LAS	-	5, 0	5, 0	5, 0
STPP	30, 0	-	20, 0	20, 0
Zeolit A	-	35, 0	20, 0	20, 0
PB 1	20, 0	15, 0	-	-
TAED	10, 0	8, 0	-	-
Mananasa	0, 005	0,0002	0, 001	-
Alkalická mananasa	-	-	-	0, 005
Proteasa	-	0, 3	0, 3	0, 3
Amylasa	-	0, 06	0, 06	0, 06
Malé zbytky, voda a		Zbytek do	100 %

různé

Seznam sekvencí (1) Obecné informace

Předkladatel:

Jméno:	: The	Procter	&	Gamble	Company
Ulice:	: One	Procter	&	Gamble	Plaza
Město:	: Cincinnati,	Ohio
Země:	USA

Poštovní kód: 45202

Název vynálezu: Prací detergentní prostředky enzymy, které odbourávají sacharidové gumy obsahuj ící

Počet sekvencí: 6

Forma čitelná pro počítač: Typ média: disketa

120 • · · · ♦ · φφφ • · · φφφ* φφφ • φ····· φφφφφφφ φφ • · φφφ φφφ • · φ φ φ* φ φφ

Počítač: IBM PC kompatibilní

Operační systém: PC-DOS / MS-DOS Software: Patentln 1.0 verze 1.25 (EPO)

Sekvence identifikační číslo 1

Charakteristiky sekvence:

Délka: 1407 párů bází

Typ: nukleová kyselina

Vláknitost: jednoduchá

Topologie: lineární

Typ molekuly: genová DNA

Původní zdroj

Vlastnosti:

Jméno / klíč: CDS

Umístění: 1-1428

Popis sekvence: sekvence identifikační číslo 1

AT GAAAAAAAAG T TAT C AC AGAT T T AT CAT T T AAT TAT T T GCACAC T TAT AATA

AGTGTGGGAATAATGGGGATTACAACGTCCCCATCAGCAGCAAGTACAGGC

T T T TAT GT T GATGGCAATAC GT TATAT GAC GCAAATGGGCAGCCAT T TGTCAT

GAGAGGTATTAACCATGGACATGCTTGGTATAAAGACACCGCTTCAACAGCT

ATTCCTGCCATTGCAGAGCAAGGCGCCAACACGATTCGTATTGTTTTATCAG

ATGGCGGTCAATGGGAAAAAGACGACATTGACACCATTCGTGAAGTCATTG

AGCTTGCGGAGCAAAATAAAATGGTGGCTGTCGTTGAAGTTCATGATGCCA

CGGGTCGCGATTCGCGCAGTGATTTAAATCGAGCCGTTGATTATTGGATAG

AAATGAAAGATGCGCTTATCGGTAAAGAAGATACGGTTATTATTAACATTGCA

AACGAGTGGTATGGGAGTTGGGATGGCTCAGCTTGGGCCGATGGCTATATT

GATGTCATTCCGAAGCTTCGCGATGCCGGCTTAACACACACCTTAATGGTTG

ATGCAGCAGGATGGGGGCAATATCCGCAATCTATTCATGATTACGGACAAG

ATGTGTTTAATGCAGATCCGTTAAAAAATACGATGTTCTCCATCCATATGTAT ♦ · · ·

121

9 99

GAGTATGCTGGTGGTGATGCTAACACTGTTAGATCAAATATTGATAGAGTCA

TAGATCAAGACCTTGCTCTCGTAATAGGTGAATTCGGTCATAGACATACTGA

TGGTGATGTTGATGAAGATACAATCCTTAGTTATTCTGAAGAAACTGGCACA

GGGTGGCTCGCTTGGTCTTGGAAAGGCAACAGTACCGAATGGGACTATTTA

GACCTTTCAGAAGACTGGGCTGGTCAACATTTAACTGATTGGGGGAATAGAA

TTGTCCACGGGGCCGATGGCTTACAGGAAACCTCCAAACCATCCACCGTAT

TTACAGATGATAACGGTGGTCACCCTGAACCGCCAACTGCTACTACCTTGTA

TGACTTTGAAGGAAGCACACAAGGGTGGCATGGAAGCAACGTGACCGGTG

GCCCTTGGTCCGTAACAGAATGGGGTGCTTCAGGTAACTACTCTTTAAAAGC

CGATGTAAATTTAACCTCAAATTCTTCACATGAACTGTATAGTGAACAAAGTC

GTAATCTACACGGATACTCTCAGCTCAACGCAACCGTTCGCCATGCCAATTG

GGGAAATCCCGGTAATGGCATGAATGCAAGACTTTACGTGAAAACGGGCTC

TGATTATACATGGCATAGCGGTCCTTTTACACGTATCAATAGCTCCAACTCA

GGAACAACGTTATCTTTTGATTTAAACAACATCGAAAATAGTCATCATGTTÁG

GGAAATAGGCGTGCAATTTTCAGCGGCAGATAATAGCAGTGGTCAAACTGC

TCTATACGTTGATAACGTTACTTTAAGATAG

Sekvence identifikační číslo 2

Charakteristiky sekvence:

Délka: 493 aminokyselin Typ: aminokyselinová Topologie: lineární

Typ molekuly: protein

Popis sekvence: sekvence identifikační číslo 2

MKKKLSQIYHLIICTLIISVGIMGITTSPSAASTGFYVDGNTLYDANGQPFVMRGIN

HGHAWYKDTASTAIPAIAEQGANTIRIVLSDGGQWEKDDIDTIREVIELAEQNKM

VAWEVHDATGRDSRSDLNRAVDYWIEMKDALIGKEDTVIINIANEWYGSWDGS

AWADGYIDVIPKLRDAGLTHTLMVDAAGWGQYPQS1HDYGQDVFNADPLKNTM

FSIHMYEYAGGDANTVRSNIDRVIDQDLALVIGEFGHRHTDGDVDEDTILSYSEE

TGTGWLAWSWKGNSTEWDYLDLSEDWAGQHLTDWGNRIVHGADGLQETSKP • · • ·

122 .....

STVFTDDNGGHPEPPTATTLYDFEGSTQGWHGSNVTGGPWSVTEWGASGNY

SLKADVNLTSNSSHELYSEQSRNLHGYSQLNATVRHANWGNPGNGMNARLW

KTGSDYTWHSGPFTRINSSNSGTTLSFDLNNIENSHHVREIGVQFSAADNSSGQ

TALYVDNVTLR

Sekvence identifikační číslo 3

Charakteristiky sekvence: Délka: 1407 párů bází Typ: nukleová kyselina Vláknitost: jednoduchá Topologie: lineární

Typ molekuly: genová DNA

Popis sekvence: sekvence identifikační číslo 3

AT GAAAAAAAAG T T AT CAC AGAT T T AT C AT T TAAT TAT T T GCACAC T T ATAAT A AGTGTGGGAATAATGGGGATTACAACGTCCCCATCAGCAGCAAGTACAGGC

TTTTATGTTGATGGCAATACGTTATATGACGCAAATGGGCAGCCATTTGTCAT

GAGAGGTATTAACCATGGACATGCTTGGTATAAAGACACCGCTTCAACAGCT

ATTCCTGCCATTGCAGAGCAAGGCGCCAACACGATTCGTATTGTTTTATCAG

ATGGCGGTCAATGGGAAAAAGACGACATTGACACCATTCGTGAAGTCATTG

AGCTTGCGGAGCAAAATAAAATGGTGGCTGTCGTTGAAGTTCATGATGCCA

CGGGTCGCGATTCGCGCAGTGATTTAAATCGAGCCGTTGATTATTGGATAG

AAATGAAAGATGCGCTTATCGGTAAAGAAGATACGGTTATTATTAACATTGCA

AACGAGTGGTATGGGAGTTGGGATGGCTCAGCTTGGGCCGATGGCTATATT

GATGTCATTCCGAAGCTTCGCGATGCCGGCTTAACACACACCTTAATGGTTG

ATGCAGCAGGATGGGGGCAATATCCGCAATCTATTCATGATTACGGACAAG

ATGTGTTTAATGCAGATCCGTTAAAAAA.TACGATGTTCTCCATCCATATGTAT

GAGTATGCTGGTGGTGATGCTAACACTGTTAGATCAAATATTGATAGAGTCA

TAGATCAAGACCTTGCTCTCGTAATAGGTGAATTCGGTCATAGACATACTGA

TGGTGATGTTGATGAAGATACAATCCTTAGTTATTCTGAAGAAACTGGCACA

GGGTGGCTCGCTTGGTCTTGGAAAGGCAACAGTACCGAATGGGACTATTTA

123 • 9 · · • 9 9 9

9 9 9

99

GACCTTTCAGAAGACTGGGCTGGTCAACATTTAACTGATTGGGGGAATAGAA

TTGTCCACGGGGCCGATGGCTTACAGGAAACCTCCAAACCATCCACCGTAT

TTACAGATGATAACGGTGGTCACCCTGAACCGCCAACTGCTACTACCTTGTA

TGACTTTGAAGGAAGCACACAAGGGTGGCATGGAAGCAACGTGACCGGTG

GCCCTTGGTCCGTAACAGAATGGGGTGCTTCAGGTAACTACTCTTTAAAAGC

CGATGTAAATTTAACCTCAAATTCTTCACATGAACTGTATAGTGAACAAAGTC

GTAATCTACACGGATACTCTCAGCTCAACGCAACCGTTCGCCATGCCAATTG

GGGAAATCCCGGTAATGGCATGAATGCAAGACTTTACGTGAAAACGGGCTC

TGATIATACATGGCATAGCGGTCCTTTTACACGTATCAATAGCTCCAACTCA

GGAACAACGTTATCTTTTGATTTAAACAACATCGAAAATATCATCATGTTAGG

GAAATAG

Sekvence identifikační číslo 4

Charakteristiky sekvence: Délka: 468 aminokyselin Typ: aminokyselinová Topologie: lineární

Typ molekuly: protein

Popis sekvence: sekvence identifikační číslo 4

MKKKLSQfYHLIICTLIISVGIMGITTSPSAASTGFYVDGNTLYDANGQPFVMRGIN

HGHAWYKDTASTAiPAIAEQGANTIRIVLSDGGQWEKDDIDTIREVIELAEQNKM

VAWEVHDATGRDSRSDLNRAVDYWIEMKDALIGKEDTVIINIANEWYGSWDGS

AWADGYIDVIPKLRDAGLTHTLMVDAAGWGQYPQSIHDYGQDVFNADPLKNTM

FSIHMYEYAGGDANTVRSNIDRVÍDQDLALVIGE FGHRHTDGDVDEDTILS YSEE

TGTGWLAWSWKGNSTEWDYLDLSEDWAGQHLTDWGNRIVHGADGLQETSKP

STVFTDDNGGHPEPPTATTLYDFEGSTQGWHGSNVTGGPWSVTEWGASGNY

SLKADVNLTSNSSHELYSEQSRNLHGYSQLNATVRHANWGNPGNGMNARLYV

KTGSDYTWHSGPFTRINSSNSGTTLSFDLNNIENIIMLGK ··

Μ · · 4 ♦ 9 9 9 9 • · · ···· · · · · • 4444 · 9 9 9999 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

124 ··· · ·· * ·· 44

Sekvence identifikační číslo 5

Charakteristiky sekvence:

Délka: 1029 párů bází Typ: nukleová kyselina Vláknitost: jednoduchá Topologie: lineární

Typ molekuly: genová DNA

Popis sekvence: sekvence identifikační číslo 5

5' AAT TGG CGC ATA CTG TGT CGC CTG TGA ATC CTA ATG CCC AGC AGA

CAA CGG

CAA AAA

AAA ACA

CAG GAG

TGA TCC

TGA ACT

GGC GAG

TTG CGT

CGC TCG

ACC GAG

TGC GTT

ČGA ACA

ACC GCC

GAA ATG

TTT

CCG

ACA

CAT

TTT

CTA

TGG

CTG

AGG

CTG

ATA

GAA

TCC

GAA

GCG

CCA

CCG

GGC

AAT

CGC

CTG

CTA

TTT

ATG

GCT

GCG

ATT

ATG

CCA

GAG

GAT

GGC

TTG

AAA

CAG

CAA

ATA

TTG

AAG

ATT

CAA

TAG

ATG

TAA

GCT

GCA

ACG

GCG

ATT

TAA

TGT

CGT

ATT

GGA

AAA

ATG

GCG

GAA

TTC

CGC

AAA

TCA

GTT

TGC

ACC

TGG

CGA

ACC

CTG

CTT

TTC

AGT

CAG

GGC

ATT

TTA

AAA

CAC

CGA

TTA

CAA

ATG

ATC

AGT

ATA

AAA

ACA

TAT

TAG

ATT

CAG

CAA

CAG

CGG

AAG

GGA

AGC

GGC

TAA

ATG

CCA

TGC

TCA

GCA

TAA

TTG

CTG

ACG

GAC

TTC

AAG

AGT

TGG

AGA

ACC

AAG

GTG

TGC

CTG

TTC

TGT

TCA

GGC

CGC

TGC

ATG

AAA

TGA

ACG

GCG

AAT

GGT

TTT

GGT

GGG

GAC

TCA

CAT

ATA

ACC

AAA

AGG

ATA

ATG

AAA

GAA

TCT

CTC

TAT

ATA

AAC

AGC

TCT

ACA

AGA

AAA

TCT

ATC

ATT

ATA

TGA

CCG

ACA

CAA

GAG

GAC

TTG

ATC

ATT

TGA

TTT

GGG

TTT

ACT

CTC

CCG

ACG

CCA

ACC

GAG

ATT

TTA

AAA

CTG

ATT

TTT

ACC

CGG

GCG

CGT

CTT

ACG

TGG

ATA

TTG

TCG

GAT

TAG

ATG

CGT

ATT

TTC

AAG

ATG

CCT

ACT

CGA

TCA

ATG

GAT

ACG

ATC

AGC

TAA

CAG

CGC

TTA

ATA

AAC

CAT

TTG

CTT

TTA

CAG

AAG

TCG

GCC

CGC

AAA

CAG

CAA

ACG

GCA

GCT

TCG

ATT

ACA

GCC

TGT

TCA

ATG

CAA

TAA

AAC

AAA

AAT

ATC

CTA

AAA

CCA

TTT

ACT

TTC

TGG

CAT

GGA ATG ATG AAT GGA GCG CAG CAG TAA ACA AGG GTG CTT CAG CTT *

♦ · 9 *

9 9 ·

9 9 9

99

125

TAT ATC ATG ACA GCT GGA CAC TCA ACA AGG GAG AAA TAT GGA ATG GTG ATT CTT TAA CGC CAA TCG TTG AGT GAA TCC GGG ATC 3'

Sekvence identifikační číslo 6

Charakteristiky sekvence:

Délka: 363 aminokyselin

Typ: aminokyselinová

Topologie: lineární

Typ molekuly: protein

Popis sekvence: sekvence identifikační číslo 6 ydhT 1

LFKKHTISLLIIFLLASAVLAKPIEAHTVSPVNPNAQQTTKTVMNWLAHL 50 ydhT 51

PNRTENRVLSGAFGGYSHDTFSMAEADRIRSATGOSPAIYGCDYARGWLE 100 ydhT 101

TANIEDSIDVSCNGDLMSYWKNGGIPQISLHLANPAFOSGHFKTPITNDQ 150 ydhT 151

YKNILDSATAEGKRLNAMLSKIADGLQELENQGVPVLFRPLHEMNGEWFW 200 ydhT 201

WGLTSYNQKDNERISLYKOLYKKIYHYMTDTRGLDHLIWVYSPDANRDFK 250 ydhT 251

TDFYPGASYVDIVGLDAYFQDAYSINGYDQLTALNKPFAFTEVGPOTANG 300 ydhT 301

SFDYSLFINAIKQKYPKTIYFLAWNDEWSAAVNKGASALYHDSWTLNKGE 350 ydhT 351

IWNGDSLTPIVE*. 363

126 • · · · ···· * · · · · · 9 9 9 9

9999 9 9 9 9999 99 99 9

9 9 9 9 9 9 9 • · ·· · 99 99

Průmyslová využitelnost

Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou průmyslově využitelné při výrobě detergentů určených pro čištění tkanin a/nebo odstraňování skvrn z tkaniny a/nebo bělení tkanin a/nebo změkčování tkanin a/nebo péči o barevný vzhled tkaniny a/nebo tlumení přenosu barviv z tkaniny.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Prací detergentní prostředek, vyznačuj ící tím, že obsahuje detergentní složku, enzym odbourávající sacharidovou gumu, kdy tento enzym odbourává neškrobové, necelulosové potravinářské polysacharidy o viskozitě vyšší než 800 cPs v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních.
2. Prací detergentní prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že polysacharid je vybrán z agaru, alginu, karawa, tragakanthu, guarové gumy, svatojánského chleba, xanthanu a/nebo jejich směsí.
3. Prací detergentní prostředek podle nároků 1 až 2, vyznačující se tím, že enžym odbourávající sacharidové gumy je vybrán z manosidasy, zejména β-manosidasy, endo-1,4-B-D-manosidasy, endo-1,2-h-D-manosidasy; galaktosidasy, zejména exo-1,3-fi-D-manosidasy, exo-1,δ-β-D-galaktosidasy a 1,3-B-D-galaktosidasy; glukuronidasy, glukuronosidasy, exo-1,2 nebo 1,4-glukuronidasy; arabinasy, zejména endo-a-1, 5-arabinosidasy, exo-arabanasy, exo-A-(a-1,2; a-1,3)arabinofuranosidasy, exo-B-(a-1,3; a-1,5)arabinofuranosidasy, ; xanthanlyasy, póly(α-L-gulukonát)lyasy; agarasy, karageenasy a/nebo jejich směsi.
4. Prací detergentní prostředek podle nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že enzym odbourávající sacharidové gumy je β-manosidasa (EC 3.2.1.78-mananasa).
5. Prací detergentní prostředek podle nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že enzym odbourávající sacharidové gumy je přítomen v množství 0,0001 % hmotnostních až 2 % hmotnostní, s výhodou 0, 0005 % hmotnostních až 0,1 % hmotnostních, ještě výhodněji 0,0006 % hmotnostních až 0,015 % hmotnostních čistého enzymu vztaženo na hmotnost celkového prostředku.

r

128 • · 44 4 ·4 ·« ·· · 4 · · 4 4 4 4 • 4 4 · · 4 4 4 4 4 4 • ♦··· 44 4 ···· 44 44 · • 4 4 · 4 44«· ··· · ·· · ··
6. Prací detergentní prostředek podle nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že dále obsahuje tenzid vybraný z neionogenního a aniontového tenzidu, kationtového tenzidu a/nebo jejich směsí.
7. Prací detergentní prostředek podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje další enzym, s výhodou celulasu a/nebo amylasu.
8. Prací detergentní prostředek podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje plnidlo, s výhodou anorganické plnidlo, ještě výhodněji plnidlo vybrané ze zeolitu A, vrstveného křemičitanů, tripolyfosforečnanu sodného a/nebo jejich směsí.
9. Prací detergentní prostředek podle' kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje aktivovaný bělicí systém.
10. Prací detergentní prostředek podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že je tento prostředek v tekuté formě, ve formě pasty, gelu, tyčinky, tablet, spreje, pěny, prášku nebo granulí.
11. Prací detergentní prostředek ve formě gelu podle nároku 10, vyznačující se tím, že obsahuje 15 % hmotnostních až 40 % hmotnostních aniontové tenzidové složky, která obsahuje:

(i) 5 s hmotnostních až 25 % hmotnostních alkylpolyethoxylátsulfátů, ve kterých alkyl sestává z 10 až 22 atomů uhlíku a polyethoxylátový řetězec sestává z 0,5 až 15, s výhodou z 0,5 až 5 a ještě výhodněji z 0,5 až 4, ethylenoxidových jednotek a (ii) 5 % hmotnostních až 20 % hmotnostních mastných kyselin.
12. Detergentní aditivum, vyznačující se tím, že obsahuje enzym odbourávající sacharidové gumy.
13. Prostředek změkčující tkaniny, vyznačuj ící tím, že obsahuje enzym odbourávající sacharidové gumy,

129 • · ··· ·

Τ]/<Όλ • ·

Φ·φφ · • φ φφφφ • Φ φ · · φφ kdy tento enzym odbourává neškrobové, necelulosové potravinářské polysacharidy o viskozitě vyšší než 800 cPs v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních, a dále obsahuje kationtový tenzid obsahující dva řetězce velké délky.
14. Použití enzymu odbourávajícího sacharidové gumy, kdy tento enzym odbourává neškrobové, necelulosové potravinářské polysacharidy o viskozitě vyšší než 800 cPs v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních, v pracím detergentním prostředku pro čištění tkanin a/nebo odstraňování skvrn z tkaniny a/nebo bělení tkanin a/nebo změkčování tkanin a/nebo péči o barevný vzhled tkaniny a/nebo tlumení přenosu barviv z tkaniny.
15. Použití enzymu odbourávajícího sacharidové gumy podle nároku 14 pro odstranění neškrobových,1 necělulosových potravinářských polysacharidů o viskozitě vyšší než 800 cPs v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních.
16. Použití enzymu odbourávajícího sacharidové gumy podle nároků 14 až 15, kdy polysacharid je vybrán z agaru, alginu, karawa, tragakanthu, guarové gumy, svatojánského chleba, xanthanu a/nebo jejich směsí.
17. Použití enzymu odbourávajícího sacharidové gumy podle nároků 14 až 16 a celulasy pro odstranění neškrobových potravinářských polysacharidů o viskozitě vyšší než 800 cPs v 1% roztoku, vyjádřeno v procentech hmotnostních.