发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的不足之处,而提供一种原料来源丰富,免疫调节功能好的乳酸菌肽奶饮料及其制备工艺。
本发明技术方案如下:乳酸菌肽奶饮料,是由下列按重量计的原料和配方制成,以1000份饮料计,并用水来调节至1000份饮料:
鲜牛奶 400份
白砂糖 60份
稳定剂S-3503 2份
FH9 CMC-Na 2.8份
骨髓肽 10-12份
胎盘肽 0-2份
胶原肽 0-2份
丹麦乳酸菌 0.010份
安赛蜜 0.110-0.120份
柠檬酸 0.462份
苹果酸 0.224份
柠檬酸钠 0.346份
食用香精 0.035-0.040份。
制备乳酸菌肽奶饮料的工艺,如下步骤:
1、收奶
从牧场收回鲜牛奶,入平衡槽, 脱气、过滤、冷却、入贮奶罐;
2、纯奶的予处理
将冷藏的纯奶打入平衡槽,加热,离心净乳,升温,降温加入菌种,封盖;
3、发酵
恒温发酵约7小时,直到酸度为96-100°T,降温;
4、化胶
在发酵的同时化胶,加水,稳定剂与砂糖干混均匀后,入调配器,搅拌至稳定剂溶解;
5、溶解肽粉
在发酵结束前20分钟,溶解肽粉,升温80℃,恒温20分钟,巴氏杀菌,冷却至20℃,待用;
6、调配
发酵乳搅拌均匀,入调配罐,测酸度,按顺序加入用水调好的安赛蜜、柠檬酸、苹果酸及柠檬酸钠三种混合酸及肽的水溶液。
7、均质脱气
将肽奶乳酸菌饮料,予热至45℃,经脱气、均质,均质压力为180-200bar;
8、杀菌、灌装
经110℃(保持6秒)超高温杀菌,冷却,包装等后处理工序。
稳定剂S-3503-一种复合型酸奶稳定剂,其成份包括:高甲洋基果胶,羧甲基纤维素钠,黄原胶、槐豆胶、磷酸盐、罗望子多糖胶、瓜尔豆胶。
FH9 CMC-Na:羧甲基纤维素钠,耐酸稳定剂。
三种肽粉的介绍:
1、从牛羊鲜骨肉组织提取的骨髓肽
颐宁多肽是我公司从牛羊鲜骨肉组织提取的生物活性肽,1997年被国家卫生部批准生产,具有“调节免疫”功能的保健食品。将这种活性肽产品加入奶中,制成的饮料无疑具有免疫调节的作用。
2、从羊胎盘组织提取的胎盘肽
胎盘具有丰富的营养和特殊的生理作用,胎盘中的有效成份具有美容的功能已被广泛认可。我公司采用生物工程技术,将胎盘内营养物质分离提纯,并将其大分子的优质蛋白质经过蛋白酶降解成活性肽,再经过滤、超滤、浓缩、干燥而成胎盘肽粉。将这种肽粉加入奶中制成饮料,具有促进细胞新陈代谢、平衡细胞营养、美容养顏、延缓衰老的效果。
3、从动物皮肤、蹄筋中提取的胶原肽
动物皮肤、蹄筋具有丰富的胶原蛋白和弹性蛋白,经高压蒸煮,将组织中的蛋白质溶于水中,利用生物蛋白酶降解成活性肽,再经过滤、超滤、浓缩、干燥而成胶原肽粉,将这种肽粉加入奶中制成的饮料,能为皮肤中细胞新陈代谢过程中胶原蛋白和弹性蛋白的合成提供很好的活性基础物质。长期饮用,使皮肤光洁有弹性。
三种肽粉的质量标准:
将骨髓肽样品送到北京医科大学营养与食品卫生教研室,该教研室作了保健食品免疫调节作用检验报告,现将检验结果陈述如下:
检验指标:
小鼠的脾脏和胸腺重;抗体形成细胞(PFC)的测定,用Jerne改良玻片法;迟发型变态反应(DTH),用足跖肿胀法测定;巨噬细胞吞噬功能的检测,采用碳粒廓清法测定,统计方法:用两组均数检验。
实验动物:
昆明种雌雄小鼠,6-8周龄、18-22克,北京医科大学科学实验动物部提供,合格证号为:医动字01-3049。
实验设计:
动物分对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。上述三个实验组的剂量分别为0.25g/Kg、1.0g/Kg和3.0g/Kg体重。分别相当于人每日用量的2.5、10和30倍,共连续灌胃14天。
测定结果:
1、各剂量组小鼠的胸腺重量与对照组比较均有明显的增加,小鼠脾脏重量与对照组比较未见有明显变化(表1)。
2、中、高剂量组小鼠IgM-PFC数/全脾与对照组比较明显增高(表2)。
3、高剂量组小鼠的迟发型变态反应(DTH) 与对照组比较有明显增强,低、中剂量组与对照组比较未见明显变化(表3)。
4、各剂量组小鼠碳粒廓清率(K)和廓清指数(a)与对照组比较未见明显变化(表4)。
表1骨髓肽对小鼠免疫器官重量的影响(X±S)
组别 |
n |
脾脏相对重 |
胸腺相对重 |
溶剂对照 |
12 |
5.82±1.31 |
3.70 ±0.68 |
低剂量组 |
12 |
5.81±1.56 |
4.58±1.10* |
中剂量组 |
12 |
5.71±1.13 |
4.54 ±1.27* |
高剂量组 |
12 |
5.54±1.16 |
4.48 ±1.02* |
相对重=脏器重(mg)/体重(g)
与对照组比较*P<0.05
表2骨髓肽对小鼠IgM-PFC/脾的影响(XS)
组别 |
n |
IgM-PFC/全脾 |
溶剂对照 |
12 |
91,201 2.24 |
低剂量组 |
12 |
117,490 1.41 |
中剂量组 |
10 |
234,423 1.40** |
高剂量组 |
12 |
213,796 1.44** |
与对照组比较**P<0.01
表3骨髓肽对小鼠DTH反应的影响(X±S)
组别 |
n |
足跖增加厚度(mm) |
溶剂对照 |
12 |
0.52±0.14 |
低剂量组 |
12 |
0.52±0.17 |
中剂量组 |
12 |
0.63±0.18 |
高剂量组 |
12 |
0.66±0.18* |
与对照组比较*P<0.05
表4骨髓肽对小鼠碳粒廓清的影响(X±S)
组别 |
n |
K |
α |
溶剂对照 |
11 |
0.0436±0.0180 |
6.80±0.77 |
低剂量组 |
11 |
0.0471±0.0077 |
6.94±0.62 |
中剂量组 |
11 |
0.0559±0.0202 |
6.88±0.73 |
高剂量组 |
12 |
0.0380±0.0082 |
6.81±0.49 |
结果小结:
小鼠经口给予骨髓肽14天后,检测结果表明,骨髓肽有明显增加小鼠胸腺重量,增强体液免疫功能(IgM-PFC)和细胞免疫功能(DTH)的作用,未见对巨噬细胞吞噬功能明显的影响。
根据卫生部监督司1996年颁布的《保健食品功能学评价和检验方法》进行延缓衰老作用中果蝇生存试验的检测和评价,现将胎盘肽进行检测和评价。
实验动物及受试物:黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。按照常规方法进行繁殖,收集10小时内羽化的成虫,乙醚麻醉喜爱,区分雌雄。由三盛国际(上海/张家口)生物工程有限公司提供,产品批号:970418。
试剂与仪器:暗温箱、培养指管、乙醚、苯甲酸、玉料粉、红糖、酵母粉、琼脂等。
动物分组与受试物给予:将实验动物随机分为正常对照(NC)、低剂量(LD)、中剂量(MD)和高剂量(HD)4个组,每组雌雄果蝇约100只,将胎盘肽加入熔化的果蝇基础饲料中,充分调匀,LD、MD和HD组分别以含0.2、1.0和5.0%胎盘肽的果蝇基础饲料饲养,NC组用普通饲料饲养,持续到实验结束。
实验步骤和方法:将实验动物每25只称重并放在一培养管(3×13cm)中,在28±1℃、相对湿度55%左右的暗温箱内饲养。每支培养管内培养基厚度为0.5-1.0cm。每3-4天更换一次培养基,每日定时3次统计果蝇死亡数并排除因其他原因死亡的果蝇,直到全部死亡。试验结束后,计算最高寿命,平均寿命及半数死亡时间,最高寿命即每组最后死亡的10只果蝇成虫存活天数的平均数,平均寿命以不同存活时间果蝇的死亡数按加权平均法计算,半数死亡时间以累计死亡率与存活天数的直线回归法求得。
结果
胎盘肽对果蝇平均寿命的影响:
从表1可以看出,低、中剂量的胎盘肽对果蝇平均寿命无延长作用,高剂量的胎盘肽对果蝇平均寿命均显著延长。
表1、胎盘肽对果蝇平均寿命的影响
组别 | 性别 | 样本数 |
平均体重(μg) | 平均寿命(d)n | P值 |
对照组 |
雄 |
95 |
780 |
30.2±9.2 | |
|
雌 |
97 |
920 |
32.7±9.0 | |
低剂量组 |
雄 |
82 |
780 |
30.8±11.6 |
>0.05 |
|
雌 |
93 |
920 |
32.6±12.6 |
>0.05 |
中剂量组 |
雄 |
83 |
780 |
32.1±10.7 |
>0.05 |
|
雌 |
103 |
920 |
34.6±10.7 |
>0.05 |
高剂量组 |
雄 |
93 |
780 |
34.0±9.7 |
<0.05 |
|
雌 |
96 |
920 |
35.4±10.0 |
<0.05 |
a:X±SD
2、胎盘肽对果蝇半数死亡时间的影响:
从表2可以看,低剂量组的胎盘肽对果蝇的半数死亡时间没有延长作用,中剂量的胎盘肽以雌雄果蝇半数死亡时间显著延长,高剂量胎盘肽对雌雄果蝇半数死亡时间均显著延长。
表2、胎盘肽对果蝇半数死亡时间的影响
组别 | 性别 | 样本数 |
平均体重(μg) | 平均寿命(d)n | P值 |
对照组 |
雄 |
95 |
780 |
29.0±10.3 | |
|
雌 |
97 |
920 |
31.2±9.0 | |
低剂量组 |
雄 |
82 |
780 |
29.3±10.9 |
>0.05 |
|
雌 |
93 |
920 |
32.0±11.3 |
>0.05 |
中剂量组 |
雄 |
83 |
780 |
31.1±9.8 |
>0.05 |
|
雌 |
103 |
920 |
33.8±9.0 |
<0.05 |
高剂量组 |
雄 |
93 |
780 |
32.7±10.9 |
<0.05 |
|
雌 |
96 |
920 |
34.2±12.0 |
<0.01 |
a:X±SD
3、胎盘肽对果蝇最高寿命的影响:
从表3可以看出:低剂量的胎盘肽对果蝇的最高寿命无延长作用,中和高剂量的胎盘肽对雌性果蝇的最高寿命均有显著延长。
表3胎盘肽对果蝇最高寿命的影响
组别 | 性别 | 样本数 |
平均体重(μg) | 平均寿命(d)n | P值 |
对照组 |
雄 |
95 |
780 |
44.8±2.7(n=10) | |
|
雌 |
97 |
920 |
47.6±2.1(n=10) | |
低剂量组 |
雄 |
82 |
780 |
44.9±2.9(n=10) |
>0.05 |
|
雌 |
93 |
920 |
47.4±3.9(n=10) |
>0.05 |
中剂量组 |
雄 |
83 |
780 |
45.8±2.0(n=10) |
>0.05 |
|
雌 |
103 |
920 |
49.6±2.0(n=10) |
<0.05 |
高剂量组 |
雄 |
93 |
780 |
46.5±2.0(n=10) |
>0.05 |
|
雌 |
96 |
920 |
52.2±2.9(n=10) |
<0.01 |
a:X±SD
评价:
从以上三个指标的结果可以看出,所试剂量的胎盘肽均有一个以上的剂量对果蝇寿命的延长有明显效果,可以判定胎盘肽的果蝇生存试验结果为阳性。
根据卫生部监督司1996年颁布的《保健食品功能学评价和检验方法》利用D-半乳糖衰老模型动物进行小鼠过氧化脂质含量和老化相关酶的检测和评价,将胎盘肽进行检测和评价,其结果如下:
1、动物:
6周龄左右的昆明种雌性小鼠,体重范围18-22g,购自解放军总医院实验动物中心。
2、试剂:
分析纯D-半乳糖、硫代巴比妥酸(TBA),购自上海试剂二厂、四乙氧基丙烷(TEP)为Difico分装,购自北京化学试剂商店、叠氨钠、还原型谷胱甘肽购自华美生物工程公司、二硫对硝基苯甲酸(DTNB),购自北京百泰生化技术公司,其它普通试剂均购白军事医学科学院药品器材库。
3、动物分组及给药:
将动物随机分为正常对照(NC)、D-半乳糖模型对照(DC),胎盘肽低剂量(LD)、中剂量(MD)和高剂量(HD)5个组。每组10只动物。NC和DC组每天分别颈后皮下注射生理盐水0.2ml,DC、LD、MD和HD组每日颈后皮下注射D-半乳糖水溶液0.2ml(60mg/kg体重),LD、MD和HD组动物每日灌服胎盘肽内容物悬浮液,剂量分别为20.8(含硒8.33μg)和125.0(含硒25.0μg)mg硒旺粉剂/kg。相当于正常成人日口服最低推荐剂量1粒胶囊,即250mg(含硒50μg)60/kg体重的5、10和30倍,持续30天后活杀。
4、观察指标及方法:
小鼠全血中MDA含量,采用TBA荧光法;小鼠全血中GSH-PX活力,采用GSH-DTNB比色法。
5、统计处理:所有数据用SAS软件进行方差分析(ANOVA)
结果
1、胎盘肽对小鼠全血中MDA含量的影响:
从表1所示结果可以看出,与对照组相比多试剂量的胎盘肽均能明显降低小鼠的过氧化脂质含量。
表1、胎盘肽对小鼠全血中MDA含量的影响
组别 |
剂量(mg/kg) |
鼠数(只) |
MDA(nmol/ml全血)n |
模型对照组 |
0 |
12 |
3.63±0.17 |
正常对照组 |
0 |
11 |
3.80±0.15* |
低剂量组 |
20.8 |
11 |
3.63±0.082## |
中剂量组 |
41.7 |
9 |
3.45±0.15*## |
高剂量组 |
125.0 |
11 |
3.40±0.057**## |
#:与DC组比较.P<0.05:##:P<0.01
*:与NC组比较.P<0.05:**:P<0.01
a:x±SD
2、胎盘肽对小鼠全血GSH-PX活力的影响:
表2所示结果表明,所试剂量的胎盘肽均能升高小鼠全血中GSH-PX活力,其中,中、高剂量组与对照组相比显著升高。
表2、胎盘肽对小鼠全血GSH-PX活力的影响
组别 |
剂量(mg/kg) |
鼠数(只) |
MDA(nmol/ml全血)n |
模型对照组 |
0 |
12 |
41.2±3.27 |
正常对照组 |
0 |
11 |
33.1±3.74** |
低剂量组 |
20.8 |
11 |
35.6±4.70** |
中剂量组 |
41.7 |
9 |
39.2±4.29## |
高剂量组 |
125.0 |
11 |
42.0±3.78## |
#:与DC组比较,P<0.05:##:P<0.01
*:与NC组比较,P<0.05:##:P<0.01
小结:
本检测结果表明,胎盘肽能显著降低小鼠全血中MDA的含量,中、高剂量能明显升高小鼠全血中GSH-PX活力,因此,可以判定胎盘肽具有延缓衰老作用。
本发明相比现有技术的奶具有如下优点:
该品除具有普通乳酸菌饮料酸甜爽口,易消化的特点外,其独到之处是含有生物活性肽,分子小、吸收快、活性强。骨髓肽(颐宁的肽)具有免疫调节功能;胎盘肽是一种独特的美容功能因子;胶原肽是合成人体肌肤中胶原蛋白和弹性蛋白的很好的活性基础物质。所以儿童、成人常饮本品,可促进体内细胞新陈代谢、平衡细胞营养、提高机体免疫力。女士型乳酸菌肽奶饮料,使肌肤得到由内到外的滋养作用,是现代女士美容、养顏的理想饮品。