TWI610671B - 輔酶Ｑ１０（ＣｏＱ１０）之靜脈注射調配物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本文揭示適於非經腸投與諸如輔酶Q10等某些疏水活性劑之調配物。本文亦提供其製備方法及使用其治療腫瘤病症之方法。該等調配物包含水溶液；疏水活性劑，其經分散以形成粒子之膠狀奈米分散液；及分散穩定劑及調理作用降低劑中之至少一者，其中活性劑之膠狀奈米分散液分散成平均大小小於200nm之奈米分散粒子。製備非經腸調配物之方法包含以以下方式藉由高壓均質化分散疏水活性劑：(1)向65℃水浴中添加疏水活性劑並混合形成疏水活性劑/水混合物；(2)向該疏水活性劑/水混合物中添加分散穩定劑並於65℃下混合形成疏水活性劑/水/穩定劑混合物；(3)添加調理作用降低劑以形成疏水活性劑/水/穩定劑/降低劑混合物；(4)將微射流均質機預加熱至65℃；及(5)藉由於65℃下在微射流均質機中混合疏水活性劑/水/穩定劑/降低劑混合物來進行處理，以便形成平均粒徑小於200nm之疏水活性劑膠狀奈米分散液。本文亦提供藉由將本文所述調配物投與個體以便治療或預防腫瘤病症來治療腫瘤病症之方法。

Description

輔酶Q10(CoQ10)之靜脈注射調配物及其使用方法

本申請案主張2010年3月12日申請之標題為「Intravenous Formulations of Coenzyme Q10(CoQ10)and Methods of Use Thereof」之臨時申請案第61/313,632號及2010年9月21日申請之標題為「Intravenous Formulations of Coenzyme Q10(CoQ10)and Methods of Use Thereof」之臨時申請案第61/385,107號的優先權，每一案件之全部內容皆以引用方式明確地併入本文中。

在發達國家，目前癌症係主要致死因素之一。儘管最近研究已在很大程度上提高吾人對腫瘤發生之許多分子機制的瞭解且已提供許多治療癌症之新途徑，但大多數惡性腫瘤之標準治療仍為整體切除、化學療法及放射療法。儘管越來越成功，但該等治療之每一者均可引發許多不期望副作用。舉例而言，外科手術可造成疼痛、對健康組織之創傷性損傷及瘢痕。放射療法及化學療法可引發噁心、免疫阻抑、胃潰瘍及次要腫瘤發生。業內仍期望包括癌症在內之疾病之改良治療方法及能夠遞送生物活性劑以幫助治療疾病及其他病況的組合物。

用於包括癌症之病況而投與住院患者之所有藥物中之約60%係以注射形式給予。靜脈注射調配物現在具有作為藥物之媒劑的主要作 用。發現靜脈注射調配物由於可靠性、精確性、方便性、避免口服投與藥物之胃刺激可能、及連續以及間歇藥物療法之重要性而在藥物之投與中具有較大用途。在過去十年中已不斷改善提供靜脈內投與之技術，且該等靜脈注射調配物之使用已逐年改善。

國際專利申請公開案地WO/2009/126764號(2009年4月9日申請)揭示利用CoQ10之癌症治療。本申請案之全文以引用方式併入本文中。

CoQ10具有10個類異戊二烯單元之長側鏈，其使得藥物極其親脂且實際上不溶於水。經口投與CoQ10之生物利用度通常極低且可變且發現其與調配物之溶解速率有關。靜脈內投與系統由於低經口生物利用度及其本徵高可變性而尤其在癌症患者之護理方面特別令人感興趣。CoQ10由於其親脂性需要納入靜脈內投與用載劑中，以便其藥物動力學受載劑系統影響。

輔酶Q10(本文中亦稱作CoQ10、泛醌或泛癸利酮)係受歡迎之營養補充品且可在營養商店、健康食品商店、藥房及諸如此類中以膠囊形式發現，其作為維他命樣補充品以經由泛醇(CoQ10之還原形式)之抗氧化性幫助保護免疫系統。發現CoQ10存於整個人類身體之大多數組織及其他哺乳動物之組織中且濃縮於線粒體中。CoQ10極為親脂且對於大多數部分而言不溶於水中。不溶解性與具有烴性質之50個碳原子類異戊二烯側鏈有關，如CoQ10之以下結構所示。

高度疏水之CoQ10基本上不溶於水溶液中。對於欲非經腸投與之CoQ10而言，其應包含於與(例如)靜脈注射相容之穩定調配物中。一種製備存於水性介質中之CoQ10之靜脈注射調配物的方法需要納入一 或多種表面活性劑及可允許產生CoQ10粒子存於水性介質中之分散液的其他實體。伴隨此方法有許多困難。主要困難與CoQ10在低於約50℃之溫度下為固體之事實有關。CoQ10之固體粒子存於水性介質中之分散液涉及難以製備針對臨床應用具有最長約2年之穩定性的安全調配物。已採用該等固體粒子分散液，但在靜置時，含有CoQ10之粒子降落至容器底部，且藉由攪拌或震盪進行再分散並不滿足醫療用途之要求。成功之調配物應具有最長約2年之化學及物理穩定性且為臨床用途提供精確劑量。第二主要困難係具有在靜脈內投與時不導致在血流內粒子分離或沉澱的調配物。該分離可對血流有害且潛在地危及生命。

具有增強CoQ10之生物利用度之目標的許多不同調配物可參見專利文獻。在EP 23349(04.02.81)中，Taki及Takahira揭示，藉由共投與長鏈脂肪酸及單甘油酯改良經口投與CoQ10之淋巴吸收。藉由投與含有CoQ10之油狀(表面活性劑)溶液之膠囊增大腸吸收揭示於不同專利中，例如WO 8604503 A1(14.08.86)、JP 63188623 A2(04.08.88)、JP 62067019 A2(26.03.87)、JP 59148735 A2(25.08.84)及JP 56012309 (06.02.81)。CoQ10於膠粒溶液中之溶解闡述於EP 522433 A1(13.01.93)、WO 8803019 A1(05.05.88)及JP 59148718 A2(25.08.84)中。Ueno等人(Acta Pharm.Nord.,1(1989)99-104)報告藉由在具有β-環糊精之複合物中納入CoQ10來增大經口生物利用度。類似調配物揭示於JP 56109590 A2(31.08.81)中。此外，報告於乳液中引入CoQ10可增強腸吸收，如(例如)Yano等人於EP 494654 A2(15.07.92)中所述。呈非晶形物理狀態、尤其過冷熔融之CoQ10粒子闡述於美國專利第6,197,349號(2001年3月6日頒佈)及第6,207,178號(2001年3月27日頒佈)中。

對於非經腸、尤其靜脈內投與而言，必須將CoQ10引入載劑媒劑中，此乃因由於其親脂性而不可製造具有CoQ10之治療濃度的水溶液。用於靜脈內投與泛癸利酮之卵磷脂穩定之大豆油乳液由Groke及 Polzer(DE 3524788 A1,22.01.87)、Sugio等人(JP 62123113 A2.04.06.87)以及Mizushima等人(JP 60199814 A2.09.10.85)揭示。JP 63319046 A2(27.12.88)闡述經多糖塗佈之大豆油乳液媒劑。然而，由於CoQ10於植物油中之相對較差溶解性，可引入乳液中之CoQ10的濃度受限。

含有泛癸利酮之蛋卵磷脂及膽固醇的脂質體製劑揭示於EP 69399 A2(12.01.83)中。多糖修飾之脂質體闡述於(例如)EP 94692 A1(23.11.83)、JP 60001124 A2(07.01.85)及JP 63313727 A2(21.12.88)中。

然而，將藥物引入載劑系統之缺點可能在於：由於載劑之生物分佈、其RES活性及自載劑媒劑之藥物釋放會影響生物分佈，故可引起物質之藥物動力學的不期望改變及/或顯著可變性。Bogentoft等人(Folkers K.,Littaru G.P.,Yamagami T.(編輯)，Biomedical and Clinical Aspects of Coenzyme Q.，第6卷，Elsevier 1991，第215至224頁)觀察到，分別在混合膠粒系統或乳液媒劑中靜脈內投與時，泛癸利酮在RES器官中累積。此外，生物活性物質在載劑中之溶解性經常過低以致於不能在調配物之可接受體積中獲得治療劑量。另外，載劑粒子本身之毒性副作用已尤其論述於用於非經常脂質乳液之文獻中(Hajri T.等人，Biochim.Biophys.Acta 1047(1990)121-130；Connelly P.W.等人；Biochim.Biophys.Acta 666(1981)80-89；Aviram M.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.155(1988)709-713；Singh M.等人；J.Parenter.Sci.Technol.40(1986)34-40；Cotter R.等人，Am J.Clin.Nutr.41(1985)994-1001；Untracht S.,Biochim.Biophys.Acta 711(1982)176-192)。

就此藥物之醫藥調配物而言，CoQ10係有問題之物質。對於CoQ10之醫藥靜脈注射製劑而言，若必須減小粒徑，則傳統方法不成功。舉例而言，由於輔酶Q10之非脆性性質及低熔點，不可使用球磨 機、錘磨機、噴射磨機或低溫研磨等使材料微粉化。

本發明包含適於靜脈內投與個體以產生臨床上有效之輔酶Q10(本文中亦稱作CoQ10或Q10)之血液含量的穩定且無毒CoQ10調配物。

本發明亦包含製備適於靜脈內投與個體以產生臨床上有效之CoQ10之血液含量的穩定且無毒CoQ10調配物的方法。

在本文主張之本發明之某些非限制性實施例中，提供適於靜脈內投與個體之治療調配物。在某些實施例中，治療調配物包括水溶液；疏水活性劑，其經分散以形成粒子之膠狀奈米分散液；及分散穩定劑及調理作用降低劑中之至少一者。將活性劑之膠狀奈米分散液分散成大小小於200nm之奈米分散粒子。在一些實施例中，分散穩定劑選自天然或半合成磷脂。舉例而言，適宜穩定劑包括聚乙氧基化(a/k/a聚乙二醇化)蓖麻油(Cremophor® EL)、聚乙氧基化氫化蓖麻油(Cremophor® RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸鹽(聚乙二醇化維他命E、維他命E TPGS)、山梨醇酐脂肪酸酯(Spans®)、膽汁酸及膽汁酸鹽或二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)。在一些實施例中，穩定劑係DMPC。

在某些實施例中，調理作用降低劑選自保麗視明(poloxamine)及泊洛沙姆(poloxamer)。適宜泊洛沙姆包括泊洛沙姆188。在一些實施例中，調理作用降低劑係泊洛沙姆188。

在一些實施例中，疏水活性劑係輔酶Q10(即CoQ10、泛癸利酮、泛醌等)。

在一些實施例中，疏水活性劑係CoQ10，調理作用降低劑係泊洛沙姆188且分散穩定劑係DMPC。

在某些實施例中，膠狀奈米分散液係懸浮液。

在某些實施例中，膠狀奈米分散液係乳液。

在一些實施例中，膠狀奈米分散液之活性劑呈結晶形式。

在一些實施例中，膠狀奈米分散液之活性劑呈過冷熔融形式。

亦提供調配物具有容重分別為4%、3%及1.5%之CoQ10、DMPC及泊洛沙姆的實施例。在其他實施例中，CoQ10、DMPC及泊洛沙姆之容重分別係8%、6%及3.0%。

在一些實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約10nm與約200nm之間。

在一些實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約10nm與約100nm之間。

在一些實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約30nm與約80nm之間。

在一些實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約35nm與約40nm之間。

在一些實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約45nm。

在某些實施例中，調配物包含水溶液；疏水活性劑，其經分散以形成粒子之膠狀奈米分散液；及分散穩定劑及調理作用降低劑中之至少一者。將活性劑之膠狀奈米分散液分散成大小小於200nm之脂質體。

在一些實施例中，分散穩定劑形成單層脂質體。在其他實施例中，脂質體係在雙層之間具有水性空間及在雙層內具有親脂空間之雙層狀多層脂質體。在其他實施例中，疏水活性劑包埋於雙層之親脂空間內。在其他實施例中，多層脂質體進一步包括包埋於雙層之間之水性空間中的親水試劑。

在某些實施例中，調配物包含水溶液；疏水活性劑，其經分散以形成粒子之膠狀奈米分散液；及DMPC及調理作用降低劑。在一些 實施例中，調理作用降低劑選自由泊洛沙姆及保麗視明組成之群。在一些實施例中，調理作用降低劑係泊洛沙姆188。在一些實施例中，疏水活性劑係輔酶Q10(CoQ10)。在一些實施例中，疏水活性劑係輔酶Q10(CoQ10)且調理作用降低劑係泊洛沙姆188。在一些實施例中，調配物具有容重分別為4%、3%及1.5%之CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188。在其他實施例中，調配物具有容重分別為8%、6%及3%之CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188。在一些實施例中，膠狀奈米分散液係懸浮液。在其他實施例中，膠狀奈米分散液係乳液。在一些實施例中，膠狀奈米分散液之活性劑呈結晶形式。在其他實施例中，膠狀奈米分散液之活性劑呈過冷熔融形式。

在一些實施例中，調配物包含水溶液；分散形成粒子之膠狀奈米分散液的疏水活性劑；及DMPC。將活性劑之膠狀奈米分散液分散成平均大小小於200nm之奈米分散粒子。在一些實施例中，疏水活性劑係輔酶Q10(CoQ10)。在一些實施例中，膠狀奈米分散液係懸浮液。在其他實施例中，膠狀奈米分散液係乳液。在一些實施例中，膠狀奈米分散液之活性劑呈結晶形式。在其他實施例中，膠狀奈米分散液之活性劑呈過冷熔融形式。在一些實施例中，調配物具有容重分別為4%及3%之CoQ10及DMPC。在其他實施例中，CoQ10及DMPC之容重分別為8%及6%。在一些實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約10nm與約200nm之間。在其他實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約10nm與約100nm之間。在其他實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約30nm與約80nm之間。在其他實施例中，奈米分散粒子之平均大小介於約35nm與約40nm之間。在其他實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約45nm。

在某些實施例中，調配物包含水溶液；CoQ10，其經分散形成粒子之膠狀奈米分散液；分散穩定劑，其選自由聚乙二醇化蓖麻油、 Cremophor EL、Cremophol RH40、聚乙二醇化維他命E TPGS及二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)組成之群；及調理作用降低劑，其選自由泊洛沙姆及保麗視明組成之群。將CoQ10之膠狀奈米分散液分散成平均大小介於約10nm與約100nm之間之奈米分散粒子。

在某些實施例中，調配物包含水溶液；CoQ10，其經分散形成粒子之膠狀奈米分散液；DMPC；及泊洛沙姆188。將CoQ10之膠狀奈米分散液分散成平均大小介於約30nm與約80nm之間之奈米分散粒子。

在某些實施例中，提供製備適於靜脈內投與之CoQ10奈米分散液的方法。在一些實施例中，該方法包含以以下方式藉由高壓均質化分散疏水活性劑：(1)向65℃水浴中添加疏水活性劑並混合形成疏水活性劑/水混合物；(2)向該疏水活性劑/水混合物中添加分散穩定劑並於65℃下混合形成疏水活性劑/水/穩定劑混合物；(3)添加調理作用降低劑以形成疏水活性劑/水/穩定劑/降低劑混合物；(4)將微射流均質機預加熱至65℃；及(5)藉由於65℃下在微射流均質機中混合疏水活性劑/水/穩定劑/降低劑混合物來進行處理，以便形成平均粒徑小於200nm之疏水活性劑膠狀奈米分散液。

在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾膠狀奈米分散液以使CoQ10膠狀奈米分散粒子結晶之步驟。

在一些實施例中，該方法進一步包含添加凍乾保護劑之步驟。在一些實施例中，凍乾保護劑係營養糖。在一些實施例中，營養糖選自由以下組成之群：乳糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神經胺酸、葡萄糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡萄糖胺、甘露醇、山梨醇、精胺酸、甘胺酸及蔗糖。

在一些實施例中，該方法包括選自由以下組成之群之分散穩定劑：聚乙二醇化蓖麻油、Cremophor EL、Cremophor RH40、聚乙二醇化維他命E、維他命E TPGS及二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)。 在一些實施例中，分散穩定劑係DMPC。在一些實施例中，調理作用降低劑選自由泊洛沙姆及保麗視明組成之群。在一些實施例中，調理作用降低劑係泊洛沙姆188。在一些實施例中，調理作用降低劑係泊洛沙姆188且分散穩定劑係DMPC。在一些實施例中，疏水活性劑係CoQ10。在一些實施例中，疏水活性劑係CoQ10，調理作用降低劑係泊洛沙姆188且分散穩定劑係DMPC。在一些實施例中，膠狀奈米分散液之CoQ10呈過冷熔融形式。在其他實施例中，膠狀奈米分散液之CoQ10呈結晶形式。

在一些實施例中，自本發明方法產生之調配物包含水溶液；疏水活性劑，其經分散形成粒子之膠狀奈米分散液；及分散穩定劑及調理作用降低劑中之至少一者。將活性劑之膠狀奈米分散液分散成平均粒徑小於200nm之奈米分散粒子。在一些實施例中，CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188之容重分別係4%、3%及1.5%。在其他實施例中，CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188之容重分別係8%、6%及3%。在一些實施例中，疏水活性劑膠狀奈米分散液之平均粒徑介於約10nm與約100nm之間。在其他實施例中，疏水活性劑膠狀奈米分散液之平均粒徑介於約35nm與40nm之間。在其他實施例中，疏水活性劑膠狀奈米分散液之平均粒徑小於45nm。

在一個實施例中，調配物在使用之前利用與血液等滲之標準醫藥非經腸稀釋劑進行稀釋。適宜非經腸稀釋劑之非限制性實例包括N鹽水、5%右旋糖、乳酸林格氏溶液(ringer's solution)及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。可經4小時或更短時間投與稀釋調配物，即輸注液。輸注液可以緩慢點滴形式或藉由計量泵送系統間歇或連續投與。該輸注液可在使用之前利用過濾器(例如1微米至5微米過濾器)在線過濾。在一些實施例中，將調配物製為輸注用無菌產品，其中藉由過濾、高壓蒸汽滅菌、放射或諸如此類達成滅菌。業內已知各種滅菌方法。在一個實 施例中，製備調配物以使其不含內毒素。在一個實施例中，製備調配物以使其不含可引發傳染性海綿狀腦炎(BSE/TSE)之有機體。

本文亦提供治療或預防個體腫瘤病症之方法。在一些實施例中，治療或預防個體腫瘤病症之方法包含向個體靜脈內投與如本文所述治療調配物以便治療或預防腫瘤病症。在一些實施例中，以經選擇對個體中所治療腫瘤病症有效之劑量進行靜脈內投與。在一些實施例中，腫瘤病症係侵襲性或轉移性腫瘤病症。在一些實施例中，侵襲性或轉移性腫瘤病症選自由以下組成之群：胰腺癌、肝細胞癌、尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、轉移性乳癌、轉移性黑素瘤、腦癌(星形細胞瘤、膠狀細胞瘤)、神經內分泌癌、結腸癌、肺癌、骨肉瘤、非雄激素依賴性前列腺癌、卵巢癌及非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's Lymphoma)。在其他實施例中，腫瘤病症係非侵襲性腫瘤病症。在一些實施例中，非侵襲性腫瘤病症選自由非轉移性乳癌、雄激素依賴性前列腺癌、小細胞肺癌及急性淋巴細胞白血病組成之群。

在治療方法之一些實施例中，調配物包含約4%輔酶A10、約3% DMPC及約1.5%泊洛沙姆188。

在某些實施例中，提供抑制個體之腫瘤細胞生長的方法。在一些實施例中，該方法包含將如本文所述治療調配物靜脈內投與個體以便抑制腫瘤細胞生長。在一些實施例中，以經選擇可有效抑制個體中腫瘤細胞生長之劑量進行靜脈內投與。在一些實施例中，調配物包含約4%輔酶Q10、約3% DMPC及約1.5%泊洛沙姆188。

在一些實施例中，腫瘤病症係與蛋白之Bcl-2家族失調有關或相關的腫瘤病況。

圖1繪示如自左至右繪示之標記為形式R、A、O及C之CoQ10奈米粒子的凍乾樣品，其中形式R、O及C各自20次通過均質化過程，而 形式A 40次通過均質化過程。

圖2繪示如自左至右繪示之標記為形式G、Q、S及T之CoQ10奈米粒子的凍乾樣品，其中形式G、Q、S及T各自20次通過均質化過程。

圖3繪示如自左至右繪示之標記為形式U及V之CoQ10奈米粒子的凍乾樣品，其中形式U及V各自20次通過均質化過程。

圖4繪示凍乾樣品形式A之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖5繪示凍乾樣品形式C之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖6繪示凍乾樣品形式G之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖7繪示凍乾樣品形式O之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖8繪示凍乾樣品形式Q之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖9繪示凍乾樣品形式R之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖10繪示凍乾樣品形式S之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖11繪示凍乾樣品形式T之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖12繪示凍乾樣品形式U之XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖13繪示凍乾樣品形式V的XRDP圖案(上方跡線)且其與自CoQ10塊狀物質獲得之圖案(下方跡線)疊加。

圖14繪示處理時間對膠狀奈米粒子之效應，其中CoQ10係5g， DMPC係3g，且係在92mL水中均質化。

圖15繪示藉由本文所揭示方法形成之脂質體，其中該脂質體係雙層狀單層脂質體。

圖16繪示藉由本文所揭示方法形成之脂質體，其中該脂質體係雙層狀多層脂質體。

圖17繪示通過次數對膠狀奈米粒子之大小的效應，其中CoQ10：DMPC：泊洛沙姆之調配物比率係4：1：0、4：2：0及4：3：0。

圖18繪示通過次數對膠狀奈米粒子之大小的效應，其中CoQ10：DMPC：泊洛沙姆之調配物比率係4：1：1、4：2：1及4：3：1。

圖19繪示通過次數對膠狀奈米粒子之大小的效應，其中CoQ10：DMPC：泊洛沙姆之調配物比率係4：3：0.5、4：3：1及4：3：1.5。

圖20繪示通過次數對膠狀奈米粒子之大小的效應，其中CoQ10：DMPC：泊洛沙姆之調配物比率係4：2：0.5、4：2：1及4：2：1.5。

圖21基於投與不包括泊洛沙姆之調配物I，以圖表形式繪示CoQ10在血漿中之平均濃度隨時間(min)之變化。

圖22基於投與包括泊洛沙姆之調配物II，以圖表形式繪示CoQ10在血漿中之平均濃度隨時間(min)之變化。

圖23以圖表形式繪示，與單獨化學療法及與化學療法組合相比，CoQ10奈米粒子之靜脈注射調配物以4：3：1.5之CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188比率治療惡性綠色瘤之肝純系的功效。

圖24以圖表形式繪示，與單獨化學療法及與化學療法組合相比，CoQ10奈米粒子之靜脈注射調配物以4：3：1.5之CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188比率治療惡性綠色瘤之肺純系的功效。

圖25使用OCR作為讀出值以圖表形式繪示兩種CoQ10靜脈注射調配物對HepG2細胞的效應。調配物I係4：3：0 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188且調配物II係4：3：1.5 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188。

圖26使用OCR作為讀出值以圖表形式繪示兩種CoQ10靜脈注射調配物對MCF-7細胞的效應。調配物I係4：3：0 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188且調配物II係4：3：1.5 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188。

圖27使用OCR作為讀出值以圖表形式繪示兩種CoQ10靜脈注射調配物對PC-3細胞的效應。調配物I係4：3：0 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188且調配物II係4：3：1.5 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188。

圖28使用OCR作為讀出值以圖表形式繪示兩種CoQ10靜脈注射調配物對PaCa2細胞的效應。調配物I係4：3：0 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188且調配物II係4：3：1.5 CoQ10：DMPC：泊洛沙姆188。

圖29繪示西式墨點法，其測定在治療24小時後卡斯蛋白酶在凝膠1中之含量。

圖30繪示西式墨點法，其測定在治療24小時後肌動蛋白在凝膠1中之含量。

圖31繪示西式墨點法，其測定在治療24小時後卡斯蛋白酶在凝膠2中之含量。

圖32繪示西式墨點法，其測定在治療24小時後肌動蛋白在凝膠2中之含量。

圖33繪示PC3中觀察到之標準化卡斯蛋白酶3蛋白含量。

圖34繪示在PaCa2中觀察到之標準化卡斯蛋白酶3蛋白含量。

圖35繪示在HepG2細胞中觀察到之非標準化卡斯蛋白酶3蛋白含量。

圖36繪示在HDfa細胞中觀察到之標準化卡斯蛋白酶3蛋白含量。

圖37繪示MiaPACA2研究中未治療NSG小鼠的結果。

圖38繪示MiaPACA2研究中未治療NSG小鼠的結果。

圖39繪示MiaPACA2研究中經賦形劑對照治療之NSG小鼠的結果。

圖40繪示MiaPACA2研究中經0.5mg/kg 4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療之NSG小鼠的結果，該調配物係經約4小時經由靜脈輸注 投與。

圖41繪示MiaPACA2研究中經5mg/kg 4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療之NSG小鼠的結果，該調配物係經約4小時經由靜脈輸注投與。

圖42繪示MiaPACA2研究中經10mg/kg 4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療之NSG小鼠的結果，該調配物係經約4小時經由靜脈輸注投與。

圖43繪示MiaPACA2研究中經25mg/kg 4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療之NSG小鼠的結果，該調配物係經約4小時經由靜脈輸注投與。

圖44繪示MiaPACA2研究中經50mg/kg 4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療之NSG小鼠的結果，該調配物係經約4小時經由靜脈輸注投與。

圖45繪示經單一療法多柔比星治療之小鼠的存活結果。

圖46繪示經多柔比星與4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物之組合療法治療之小鼠的存活結果。

圖47繪示雄性及雌性大鼠及狗之CoQ10之平均肝濃度與劑量。

本發明之各種實施例將參考圖式加以描述。

本發明係關於水溶性較差之活性醫藥藥劑(例如CoQ10)的靜脈注射調配物。

本發明之靜脈注射調配物可將精確量之活性醫藥藥劑(例如CoQ10)遞送至血流中以輸送至諸如肝及心臟等器官及包括腫瘤在內之其他組織。本發明提供(例如)CoQ10之臨床上且治療有效且有用之靜脈注射調配物，其在普通環境溫度下穩定且分散特性在至少12個月之時段內基本上未改變。

出於優化可讀性及有利於瞭解如本文所述本發明之目的，考慮本文所用術語及片語之以下定義可為有利的。

I. 定義

根據本發明且如本文所用，除非另外明確指明，否則定義以下術語具有以下含義。

除非上下文另外明確指出，否則「一」(「a」、「an」)及「該」(「the」)包括複數意義。

本文所用「醫藥上可接受之」組份係適用於人類及/或動物而無過度之不良副作用(例如毒性、刺激及過敏性反應)並與合理益處/風險比相稱者。

本文所用術語「安全且治療有效量」係指當以本揭示內容之方式使用組份時足以產生與合理益處/風險比相稱之期望治療反應而無過度之不良副作用(例如毒性、刺激或過敏性反應)之該組份的量。所謂「治療有效量」係指有效產生期望治療反應之本發明化合物的量。舉例而言，加速傷口癒合、減輕疼痛及疲勞。該具體的安全且有效量或治療有效量會隨該等如下因素變化：所治療之特定病況、患者之身體狀況、所治療之哺乳動物或動物類型、治療期程、並存療法(若存在)之性質及所採用之具體調配物及化合物或其衍生物之結構。

「治療」係指以預防病症發展或改變病症之病理學或症狀為目的來實施之干預。因此，「治療」係指治療性治療及預防性或防範性措施二者。彼等需要治療者包括已患有病症者以及彼等需預防病症者。本文所用「經改善」或「治療」係指症狀接近標準化值(例如，健康患者或個體中獲得之值)，例如小於50%不同於標準化值、在實施例中小於約25%不同於標準化值、在其他實施例中小於10%不同於標準化值、且在又一些實施例中存在之症狀並不顯著不同於如使用常規統計測試測定之標準化值。

本文所用「經改善症狀」或「經治療症狀」係指症狀接近標準化值，例如小於50%不同於標準化值、在實施例中小於約25%不同於標準化值、在其他實施例中小於約10%不同於標準化值、且在又一些實施例中存在之症狀並不顯著不同於如使用常規統計測試測定之標準化值。

本文所用「調理作用」係指標記本文所述親脂生物活性劑以供吞噬細胞攝入及破壞的過程。調理作用涉及調理素與生物活性劑之結合。在調理素結合至膜之後，吞噬細胞被吸引至活性劑。調理素係在吞噬作用過程中用作結合增強劑的任一分子。

本文所用術語「調理作用降低劑」係指結合活性劑作用來降低調理素在吞噬作用過程中用作結合增強劑之能力之任何試劑。

根據本發明，提供改良投與親脂生物活性劑(其亦可稱作疏水生物活性劑)之調配物。本文所用「親脂生物活性劑」或「疏水生物活性劑」包括不溶或實質上不溶於水中之試劑。具體而言，本文所用親脂生物活性劑可具有在約1000份水中小於約1份生物活性藥物之水中溶解性。

本文所用術語「膠狀」係指細分狀態，此意味著分散於介質中之分子或多分子粒子在一個方向上具有至少大約介於1nm與1μm之間之尺寸。

本文所用「分散液」或「膠狀分散液」係指任一狀態(例如固體、液體或氣體)之膠體級粒子分散於不同組合物或狀態之連續相中。在靜脈內藥物遞送中，連續相實質上係水且分散粒子可為固體(懸浮液)或不混溶液體(乳液)。

本文所用「過冷熔融」係指活性劑均質化之後之狀態，其中於低於活性劑之塊狀材料之熔點的溫度下，膠狀粒子並不呈固體或結晶形式而是呈非晶態。

本文所用「凍乾保護劑」係指醫藥上可接受之賦形劑，在凍乾過程、之後儲存及再構成期間其保護分散活性劑抵抗去穩定狀況。

術語「膠狀粒子」、「分散粒子」、「奈米分散粒子」及「膠狀分散粒子」在本文中均可互換使用且係指活性劑於呈塊狀狀態或熔融狀態之奈米粒子中的分散形式。

除非另外指明，否則本文所用術語「調配物」係指包括泊洛沙姆之CoQ10。

欲藉由本發明方法治療之「患者」或「個體」可意指人類或非人動物，哺乳動物較佳。應注意，本文所述之臨床觀察係利用人類個體得到，且在至少一些實施例中，個體係人類。

「治療有效量」係指在投與患者以治療疾病時足以實施疾病之該治療的化合物之量。在投與以預防疾病時，該量足以避免或延遲疾病發作。「治療有效劑量」將端視該化合物、該疾病及其嚴重程度以及待治療患者之年齡、體重等情況而不同。

「預防」(「Preventing」或「prevention」)係指患疾病或病症之風險降低(即，在可能暴露於或易患該疾病但尚未經歷或顯示該疾病之症狀的患者中，達成該疾病之至少一個臨床症狀不再發展)。

術語「預防性」或「治療性」治療係指向個體投與一種或多種標題組合物。倘若在臨床表現不期望病況(例如，疾病或主體動物之其他不期望狀態)之前投與，則該治療為預防性，亦即，其可防止該主體發展成不期望病況，而倘若在表現出不期望病況之後投與，則該治療係治療性的(即，意欲減少、改善或維持現存不期望病況或其副作用)。

術語「治療效應」係指在動物，特定言之哺乳動物，且更具體而言人類中由藥理活性物質引發之局部或全身效應。因此，該術語意指任何意欲在動物或人類中用於診斷、治癒、減輕、治療或預防疾病 或用於增強期望身體或精神之發展及狀況之物質。片語「治療有效量」意指可以適用於任何治療之合理效益/風險比產生某些期望局部或全身效應之此一物質之量。在某些實施例中，化合物之治療有效量將取決於其治療指數、溶解性及諸如此類。舉例而言，可以足以產生適用於該治療之合理效益/風險比之量投與藉由本發明方法發現之某些化合物。

術語「病症」及「疾病」係包括性使用且係指身體任一部分、器官或系統(或其任一組合)之正常結構或機能的任何偏離。具體疾病表現特徵性症狀及體徵，包括生物學、化學及物理學變化，且經常與各種其他因素相關，包括(但不限於)人口統計、環境、職業、遺傳及病史因素。某些特徵性體徵、症狀及相關因素可經由各種方法定量以獲取重要診斷資訊。

術語「表現」在本文中用於意指自DNA產生多肽之過程。該過程包括將基因轉錄至mRNA中及將此mRNA轉譯成多肽。端視使用之上下文而定，「表現」可指RNA、蛋白或二者之產生。

術語「基因之表現程度」或「基因表現程度」係指mRNA、以及mRNA前體初生轉錄物、轉錄處理中間體、成熟mRNA及降解產物之含量、或由細胞中之基因編碼之蛋白的含量。

現在將詳細參考本發明之較佳實施例。儘管將結合較佳實施例來闡述本發明，但應瞭解，其並不意欲將本發明限定至彼等較佳實施例。相反，此意欲涵蓋可包括於如隨附申請專利範圍所界定之本發明精神及範疇內之替代、修改及等效形式。

在所有情況下，在本申請案中，若存在一系列引用數值，則應瞭解，所引用數值中任一者可為數字範圍之上限或下限。應進一步瞭解，本發明涵蓋所有該等數字範圍，即具有數字上限與數字下限之組合的範圍，其中上限及下限中之每一者的數值可為本文引用之任一數值。

II. 組合物

本發明提供CoQ10組合物用於治療並預防癌症。本發明之組合物可本身或存於與適宜載劑或賦形劑混合之醫藥組合物中投與患者。在治療呈現目標病症之患者時，投與治療有效量之一或多種藥劑(例如該等藥劑)。治療有效劑量係指可在患者中改善症狀或延長存活之化合物的量。

可用本發明之組合物治療來自許多不同物種之個體。該等動物之非窮盡性列表包括諸如小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、豬、馬、牛、狗、貓等哺乳動物、及諸如猴、猿及人類等靈長類動物。彼等已知遭受肌肉疲勞、疼痛、傷口及諸如此類之動物個體可適用於本發明。具體而言，遭受傷害、外科手術、關節炎、肌肉疲勞、癌症及諸如此類之人類患者係適用於本文所揭示本發明的動物個體。藉由使本文所教示方法適於醫學或獸醫學中已知之其他方法(例如，根據個體動物之重量調節所投與物質之劑量)，可容易地優化本發明中所採用之組合物以用於其他動物。

本發明組合物之適宜投與途徑可包括非經腸遞送，其包括(僅列舉幾個)靜脈內肌內、皮下、髓內注射、以及鞘內、直接心室內、靜脈內、腹膜內、鼻內或眼內注射。在一個實施例中，可藉由直接注射至腫瘤投與本文所提供組合物。在一些實施例中，可藉由靜脈注射或靜脈輸注投與本發明調配物。在一個實施例中，藉由靜脈注射投與本發明組合物。在一個實施例中，藉由靜脈輸注投與本發明組合物。若投與途徑係(例如)靜脈輸注，則本文提供其中靜脈輸注液包含約40mg/mL濃度之活性劑(例如輔酶Q10)的實施例。若藉由靜脈輸注投與組合物，則將其稀釋於磷酸鹽緩衝鹽水中。在一些實施例中，可組合一或多種投與途徑，例如靜脈內及瘤內、或靜脈內及經口、或靜脈內及口服、或靜脈內及經皮或經黏膜。

本文所述組合物可以任一適宜調配物投與個體。舉例而言，CoQ10可經調配用於非經腸遞送，例如用於皮下、靜脈內、肌內或瘤內注射。該等組合物可以單次濃注、多次注射或藉由連續輸注(例如，靜脈內或藉由腹膜透析)投與。對於非經腸投與而言，可以經滅菌之無熱原形式調配該等組合物。亦可藉由僅向含有細胞之流體中添加組合物將本發明之組合物在活體外投與細胞(例如，在細胞或活體外培養物中產生Bcl-2)。

對於本發明之實踐而言，使用醫藥上可接受之載劑將本文所揭示化合物調配成適於全身投與之劑量在本發明範疇內。在適當選擇載劑及適宜製造實踐情況下，可非經腸(例如靜脈注射)投與本發明之組合物、尤其彼等調配為溶液者。

該等化合物之毒性及治療功效可在細胞培養物或實驗動物中藉由標準醫藥程序來測定，例如測定LD50(可導致群體中之50%死亡的劑量)及ED50(對群體中之50%具有治療效果的劑量)的程序。毒性與治療效果間之劑量比即為治療指數且其可表示為比率LD50/ED50。呈現大治療指數之化合物可為合意的。自該等細胞培養分析及動物研究所獲得之數據可用於調配用於人類之劑量範圍。該等化合物之劑量可在具有極低毒性或無毒性的循環濃度(包括ED50)範圍內。該劑量可視所用劑型及所用投與途徑在此範圍內變化。

適用於本發明中之醫藥組合物包括其中含有有效量活性成份以達成其預期目的之組合物。彼等熟習此項技術者尤其依據本文所提供詳細揭示內容完全有能力測定有效量。除活性成份外，該等醫藥組合物亦可含有包括賦形劑及輔助劑在內之適宜醫藥上可接受之載劑，其有利於將活性化合物處理成可醫藥上使用之製劑。調配用於靜脈內投與之製劑可呈膠狀分散液之溶液形式。

適於非經腸投與之醫藥組合物包括呈水溶性形式之活性化合物 的水溶液。另外，該等活性化合物之懸浮液可製備成適宜的油性注射懸浮液。適宜親脂溶劑或媒劑包括脂肪油(例如芝麻油)或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)或脂質體。水性注射懸浮液可含有能增加該懸浮液黏度之物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。視情況，該懸浮液亦可含有適宜穩定劑或增加該等化合物之溶解性的試劑，以能夠製得高濃度溶液。

III. 調配物

本發明提供包含疏水活性劑(例如輔酶Q10(CoQ10))之治療調配物，其適於如本文所述靜脈內投與個體。經由高壓均質化，將活性劑(例如CoQ10)粒子減小至產生小至足以穿過200nm滅菌過濾器之粒子。可靜脈注射小至足以穿過200nm滅菌過濾器之粒子。該等粒子遠小於血細胞且因此將不會使毛細血管發生栓塞。舉例而言，紅血細胞係6mm x 2mm之碟形物。該等粒子分散至穩定劑中並由其包圍或圍繞。儘管不希望受限於任何理論，但人們相信，穩定劑被吸引至疏水活性劑以使穩定劑圍繞疏水活性劑之分散粒子，從而形成懸浮液或乳液。懸浮液或乳液中之分散粒子包含穩定劑表面及由呈固態顆粒形式(懸浮液)或呈不混溶液體形式(乳液)之疏水活性劑組成的核心。在某些態樣中，分散粒子盤踞於脂質體之親脂區域中。

本文所提供分散膠狀系統提供優於先前技術之某些性能優點。舉例而言，本發明允許調配物中之高藥物載量而不使用共溶劑。另外，達成高且相對可再現之血漿含量，而不依賴於內源低密度脂蛋白載劑。更重要的是，本發明由於疏水活性劑之膠狀粒子的被動累積而在實體瘤中提供持續高之藥物含量。

本發明靜脈注射調配物實質上包含水及分散固態(懸浮液)或分散不混溶液體(乳液)之連續相。若粒子在很大程度上由活性劑(藥物)本身構成之分散膠狀系統可製得十分穩定，則該系統經常可比連續溶解 系統遞送更多藥物/單位體積。本發明提供水溶性較差之活性劑(例如CoQ10)的膠狀分散液。

藉由採用機械裝置(例如微射流均質機)，藉由高壓連續均質化減小粒徑，從而在噴射系統中形成膠體級液滴；或藉由在有限且曲折之通道中在高速液體流中剪切粒子來減小粒徑。分裂塊狀粒子本身需要大量能量。較小粒子會增大活性劑之介面面積。使用表面活性劑降低介面能量，藉此穩定分散液。粒徑決定總介面面積及介面能量，其必須經調節以達成穩定系統。隨著粒徑下降，產生粒子需要更大能量，且由於總表面積上升，表面活性劑必須提供更大介面能量。

經由如本文所例示高壓均質化將活性劑(例如CoQ10)之粒徑減小至小於200nm。在一些實施例中，粒徑減小至介於10nm與200nm之間或介於10nm與100nm之間或更佳介於30nm與80nm之間。在一些實施例中，所得膠狀活性劑(例如CoQ10)粒子係呈如本文所定義非晶形過冷狀態。

在某些實施例中，藉由凍乾製程使分散CoQ10粒子結晶以產生奈米分散粒子，其中活性劑核心呈結晶形式(參見圖1至3)。使用偏振光顯微鏡(PLM)或X-射線粉末繞射(XRDP)確認CoQ10膠狀分散液之結晶度並與塊狀CoQ10之XRDP進行比較(參見圖4至13)。在如圖1中所繪示之形式R中，使包含5.0wt% CoQ10、3.3wt%泊洛沙姆及91wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖1中自左側第一小瓶中所繪示的粒子。如圖9中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖1自左側第二小瓶中繪示之形式A中，使包含3wt% CoQ10、1.8wt% Lipoid SPC-3及95.2wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次以減小粒徑。隨後凍乾粒子以產生圖1中自左側第二小瓶中所繪示的粒子。如下圖4中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖1中所繪示之形式O中，使包含5.0wt% CoQ10、3.0wt% DMPC 及92wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖1中自左側第三小瓶中所繪示的粒子。如下圖7中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖1中所繪示之形式C中，使包含5.0wt% CoQ10、3.3wt%泊洛沙姆及91wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖1中自左側第四小瓶中所繪示的粒子。如圖5中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖2中所繪示之形式G中，使包含5.0wt% CoQ10、3.0wt% Lipoid SPC-3及92wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖2中自左側第一小瓶中所繪示的粒子。如圖6中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖2中所繪示之形式Q中，使包含5.0wt% CoQ10、2.5wt% DMPC、0.5wt%去氧膽酸鈉及92wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖2中自左側第二小瓶中所繪示的粒子。如圖8中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖2中所繪示之形式S中，使包含7.5wt% CoQ10、4.5wt% DMPC及88wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖2中自左側第三小瓶中所繪示的粒子。如圖10中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖2中所繪示之形式T中，使包含7.5wt% CoQ10、5.0wt%泊洛沙姆及87.5wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖2中自左側第四小瓶中所繪示的粒子。如圖11中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖3中所繪示之形式U中，使包含7.5wt% CoQ10、4.0wt% DMPC、1.0wt%泊洛沙姆188及87.5wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖3中自左側第一小瓶中所繪示的粒子。如圖12中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係結晶。在如圖3中所繪示之形式V中，使包含3.0wt% CoQ10、1.5wt% DMPC及95.5wt%水之調配物在微射流均質機中循環20次且隨後凍乾產生圖3中自左側第二小瓶中所繪示的粒子。如圖13中繪示之XRDP證實，CoQ10粒子係 結晶。

在凍乾粒子時，將乾燥器冷卻至-35℃。將以上調配物各自以3毫升添加至5mL血清小瓶中，一式兩份。將血清塞(serum vial)置於頂部但為水蒸汽逸出留出空間。將調配物置於-78℃冷凍機中1小時以快速冷凍。在此時段後，將所有物質整體轉移至乾燥器之中間架。立刻開始真空。16小時後，將溫度自-35℃調節至-30℃。24小時後，將溫度自-30℃調節至-28℃。2小時後，將溫度自-28℃調節至-26℃。4小時後，進一步將溫度調節至-26℃與-25℃之間。在達到-25℃後，對小瓶加塞並釋放真空至環境空氣。聯合小瓶並對如圖1至3中繪示之乾燥產物照相。

在減小分散粒徑時，可期望CoQ10混合物多次通過微射流均質機以獲得期望粒徑。在單次通過具有F12Y相互作用室(其具有75μm通道)之M110P微射流均質機後，產生平均直徑小於200nm之粒子。在通過20次後，粒子之平均直徑小於70nm(參見圖14)。調配物含有5g CoQ10、3g DMPC及92mL水。熟習此項技術者應瞭解，可端視期望治療用途調節CoQ10、DMPC及水之量。微射流均質機在25,000PSI之最大壓力下操作。在某些實施例中，較佳添加分散穩定劑及調理作用降低劑中之至少一者。在某些實施例中，使用分散穩定劑及調理作用降低劑二者製備膠狀粒子。較佳分散穩定劑包括聚乙氧基化(a/k/a聚乙二醇化)蓖麻油(Cremophor® EL)、聚乙氧基化氫化蓖麻油(Cremophor® RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸鹽(聚乙二醇化維他命E、維他命E TPGS)、聚山梨醇酯(Tweens®)、山梨醇酐脂肪酸酯(Spans®)、膽汁酸及膽汁酸鹽及DMPC，而較佳調理作用降低劑包括不同鏈長度之聚乙二醇、多糖、其他含PEG之共聚物、保麗視明或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。在某些實施例中，肝素亦構成適宜調理作用降低劑。泊洛沙姆在投與後提供親水表面以便降低粒子調理作 用。泊洛沙姆亦用作粒子表面修飾劑，添加龐大鏈以因空間相互作用降低調理作用。泊洛沙姆188(Pluronic® F68,Lutrol® F68)在中心嵌段中具有約28個PPG單元且在末端嵌段中具有79個PEG單元。疏水中心嵌段將分子錨固至粒子，且PEG末端嵌段係自粒子延伸。藉由PEG鏈之親水性及鏈之空間(空間填充)效應(即，蛋白不可到達表面)二者降低調理作用。

經由本文進一步闡述之方法，本發明提供適於靜脈內投與個體之治療調配物。治療調配物包括水溶液。在本發明之某些實施例中，水溶液係水。水溶液可用作膠狀系統用分散介質或非經腸投與及遞送膠狀粒子用調配物介質中之一者或二者。作為分散介質，水溶液可含有其他水溶性或水可分散穩定劑、等滲劑(例如甘油或木糖醇)、凍乾保護劑(例如蔗糖、葡萄糖、海藻糖等)、電解質、緩衝劑、防絮凝劑(例如檸檬酸鈉、焦磷酸鈉或十二烷基硫酸鈉)或防腐劑。

凍乾保護劑包含(但不限於)由糖、多元醇(例如，糖醇)及胺基酸組成之群。較佳凍乾保護劑包括諸如蔗糖、海藻糖及葡萄糖等糖。其他適宜糖包括乳糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神經胺酸、胺基糖(例如葡萄糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡萄糖胺(「葡甲胺」))、多元醇(例如甘露醇及山梨醇)、及胺基酸(例如精胺酸及甘胺酸)。

作為調配介質，水溶液可包括漢克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液、磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、生理鹽水緩衝液或可達成非經腸遞送調配物之適當pH及容量滲透莫耳濃度的其他適宜鹽或組合。水溶液可含有增加溶液黏度之物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。

本發明之治療調配物包括疏水或者以其他方式水溶性較差之活性劑。將疏水活性劑分散於水溶液中以便形成膠狀分散液，其中疏水活性劑之奈米分散粒子由分散穩定劑覆蓋或包圍或環繞以形成活性劑 (例如CoQ10)粒子之奈米分散液。奈米分散活性劑(例如CoQ10)粒子具有由疏水活性劑形成之核心，該疏水活性劑由穩定劑圍繞。類似地，在某些態樣中，穩定劑係具有親水及親脂兩個部分之磷脂。在均質化時，磷脂形成脂質體或其他奈米粒子。在某些態樣中，該等脂質體係雙層狀單層脂質體，而在其他態樣中，脂質體係雙層狀多層脂質體。分散活性劑(例如CoQ10)粒子分散於自磷脂形成之脂質體之雙層結構的親脂部分中。在某些其他態樣中，脂質體之核心與活性劑(例如CoQ10)粒子之奈米分散液之核心一樣由疏水活性劑形成且外層由磷脂之雙層結構形成。在某些實施例中，藉由凍乾製程處理膠狀分散液，藉此將奈米粒子分散液轉化為乾粉。

在本發明之某些實施例中，疏水劑係輔酶Q10(CoQ10)。輔酶Q10(本文中亦稱作CoQ10)亦習知為泛醌或泛癸利酮。CoQ10已為熟習此項技術者所熟知且進一步闡述於國際公開案第WO 2005/069916號中，該案件之全部揭示內容以引用方式併入本文中。CoQ10係存於真核細胞之線粒體電子運輸系統中之一系列聚異戊二烯基2,3-二甲氧基-5-甲基苯醌(泛醌)之一。人類細胞排他地產生CoQ10且發現其存於所有人類細胞之細胞膜及線粒體膜中，其中具有高能量需要之器官(例如肝及心臟)中具有最高含量。已估計CoQ10之體庫為約2克，其中50%以上係內源性。每天自飲食或生物合成需要約0.5克CoQ10。CoQ10係以噸之量自世界範圍之供應市場生產且可自Kaneka(工廠在Pasadena,Texas及Takasagoshi,Japan)獲得。

已表徵人類中之CoQ10的組織分佈及氧化還原態。通常，具有高能量需要或代謝活性之組織(例如，心臟、腎、肝及肌肉)具有相對較高濃度之CoQ10。血漿中之大多數CoQ10係以經還原泛醇形式存在。組織中之大部分CoQ10係呈還原形式之氫醌或泛醇。腦及肺除外。認為氧化態為組織中之氧化應激增大的反映。更具體而言，在心臟、 腎、肝、肌肉、腸及血液(血漿)中，分別約61%、75%、95%、65%、95%及96% CoQ10呈還原形式。

CoQ10極為親脂且對於大多數部分而言不溶於水中。由於CoQ10於水中之不溶解性、脂質中之有限溶解性及相對較大分子量，經口投與之CoQ10之吸收效率較差。Bhagavan等人(Free Rad.Res.40：445-453(2006))報告，在大鼠中，經口投與之CoQ10僅吸收約2%至3%，且CoQ10在腸中吸收期間或之後還原成泛醇。在由Matthews等人之研究(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：8892-8897(1998))中，發現在一些組織中，CoQ10吸收具有年齡依賴性。舉例而言，在年輕大鼠中，在投藥4天後，血漿、肝及脾濃度升高，但在心臟或腎中未觀察到升高。類似地，在1至2月齡動物中，經口投與不會增大CoQ10在腦中之濃度。然而，投與CoQ10至12月齡及24月齡大鼠可在大腦組織中累積呈氧化及還原兩種形式之CoQ10。有趣的是，在局部缺血-再灌注損傷後會刺激在年輕大鼠而非年老大鼠中產生CoQ10。

在本發明之一個實施例中，疏水活性劑係CoQ10、CoQ10之代謝物、CoQ10之結構單元、CoQ10之類似物或CoQ10之衍生物。CoQ10之類似物包括不具有或具有至少一個異平基重複之類似物。CoQ10具有以下結構：

其中x為10。在本發明中，CoQ10可包括CoQ10之衍生物，其中x為4至10個異平基單元中之任一數、或6至10個異平基單元中之任一數、或8至10個異平基單元中之任一數、或9至10個異平基單元中之任一數。 CoQ10包括完全氧化形式(亦稱作泛醌)、部分氧化形式(亦稱作半醌或泛半醌)、或完全還原形式(亦稱作泛醇)、或其任一混合物或組合。

CoQ10之結構單元包括CoQ10之任何組份或合成前體，較佳生物相關前體。因此，CoQ10之結構單元包括(但不限於)苯丙胺酸、酪胺酸、4-羥基苯基丙酮酸酯、苯基乙酸酯、3-甲氧基-4-羥基扁桃酸酯、香草酸、4-羥基苯甲酸酯、甲羥戊酸、法呢基(farnesyl)、2,3-二甲氧基-5-甲基-對苯醌、以及其相應酸或離子。實驗數據表明，CoQ10生物合成之結構單元(例如用於苯醌環之生物合成之前體、及彼等用於類異戊二烯重複之生物合成及其與苯醌環之附接者)可個別地投與或組合投與至靶細胞以調節細胞凋亡抑制劑Bcl-2之表現及/或細胞凋亡促進劑卡斯蛋白酶-3(Caspase-3)之表現。參見，例如，美國專利申請案第12/778,094號及其中提供之實例。

CoQ10之代謝物包括CoQ10之任何已知代謝物。參見，例如，Turunen等人之Biochemica et Biophysica Acta 1660：171-199(2004)，其全部內容皆以引用方式併入本文中。已識別之主要代謝物具有芳香族環，其具有縮短至5至7個原子之側鏈。下文展示該代謝物。該代謝物視情況可在碳4或碳1處經磷酸化。

CoQ10之衍生物包括與CoQ10結構上相同之任一化合物，只是一個原子經另一原子或原子群組替代。

適於納入此膠狀系統中之其他疏水活性劑包括麻醉劑，例如布坦卡因(butanilicain)、福莫卡因(fomocain)、利多卡因(lidocain)、丙胺卡因(prilocain)、丁卡因(tetracain)及依託咪酯(etomidate)；抗生素，例如磷黴素(fosfomycin)、膦胺黴素(fosmidomycin)及利福噴汀(rifapentin)；抗高血壓藥，例如米諾地爾(minoxidil)、二氫麥角毒(dihydroergotoxine)及恩屈嗪(endralazine)；抗低血壓藥，例如二氫麥角胺(dihydroergotamine)；全身性抗真菌劑，例如酮康唑(ketoconazole)、咪康唑(miconazole)及灰黃黴素(griseofulvin)；消炎劑，例如吲哚美辛(indomethacin)、雙氯芬酸(diclofenac)、布洛芬(ibuprofen)、酮洛芬(ketoprofen)及吡洛芬(pirprofen)；抗病毒劑，例如阿昔洛韋(aciclovir)、阿糖腺苷(vidarabin)及免疫球蛋白；ACE抑制劑，例如卡托普利(captopril)及依那普利(enalapril)；β阻斷劑，例如普萘洛爾(propranolol)、阿替洛爾(atenolol)、美托洛爾(metoprolol)、吲哚洛爾(pindolol)、氧烯洛爾(oxprenolol)及拉貝洛爾(laβlol)；支氣管擴張藥，例如異丙托溴銨(ipratropiumbromide)及索布瑞醇(sobrerol)；鈣拮抗劑，例如地爾硫卓(diltiazem)、氟桂利嗪(flunarizin)、異搏定(verapamil)、硝苯地平(nifedipin)、尼莫地平(nimodipin)及尼群地平(nitrendipin)；強心苷類，例如洋地黃毒苷(digitoxin)、地高辛(digoxin)、甲地高辛(methyldigoxin)及醋地高辛(acetyldigoxin)；頭孢菌素，例如頭孢唑肟(ceftizoxim)、頭孢氨苄(cefalexin)、頭孢噻吩(cefalotin)及頭孢噻肟(cefotaxim)；細胞生長抑制劑，例如氮芥(chlormethin)、環磷醯胺(cyclophosphamid)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、阿糖胞苷(cytarabin)、長春新鹼(vincristin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、多柔比星(doxorubicin)、博萊黴素 (bleomycin)、順鉑(cisplatin)、紅豆杉醇(taxol)、五氯甲定(penclomedine)及福莫司汀(estramustin)；安眠藥，例如氟西泮(flurazepam)、硝西泮(nitrazepam)及勞拉西泮(lorazepam)；精神治療藥物，例如奧沙西泮(oxazepam)、地西泮(diazepam)及溴西泮(bromazepam)；類固醇激素，例如可的松(cortisone)、氫化可的松(hydrocortisone)、潑尼松(prednisone)、潑尼松龍(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、黃體酮(progesterone)、孕烷諾龍(pregnanolone)、睪酮(testosterone)及睪酮十一烷酸鹽；血管擴張劑，例如嗎導敏(molsidomin)、肼屈嗪(hydralazin)及雙肼屈嗪(dihydralazin)；大腦血管擴張劑，例如二氫麥角毒、環煙酯(ciclonicat)及長春胺(vincamin)；泛醌及其類似物，例如泛癸利酮(ubidecarenone)及阿托伐醌(atovaquon)；親脂性維他命，例如維他命A、E、D、K及其衍生物；殺昆蟲劑、除草劑及殺蟲劑，例如歐殺松(acephate)、賽扶寧(cyfluthrin)、谷速松(azinphosphomethyl)、賽滅寧(cypermethrin)、芬氯磷(fenclofos)、撲滅司林(permelthrin)、胡椒醛(piperonal)、治滅寧(tetramethrin)及三福林(trifluralin)。在某些其他實施例中，膠狀系統包括mTor抑制劑、EGFr及FGF類似物。

活性劑可位於膠狀粒子之核心，其中其溶於、溶解於或分散於基質、及/或圍繞粒子核心之穩定劑層中，及/或可吸收至膠狀粒子之表面。生物活性物質可為溶解或結晶或非晶形或該等狀態中任一者之混合物。治療調配物亦包括分散穩定劑及調理作用降低劑中之至少一者。膠狀粒子可為如本文所述脂質體且亦可含有其他活性劑或其他非活性劑、或其他疏水或親水劑。

活性劑(例如CoQ10)塊狀材料分散成奈米粒子會增大介面能量，此乃因粒徑隨通過均質化過程而減小。分散穩定劑(例如DMPC)與活性劑(例如CoQ10)奈米粒子之親和性使得分散穩定劑(例如DMPC)包圍 奈米粒子並形成活性劑(例如CoQ10)奈米分散液。分散穩定劑藉由提供高介面能量且藉此防止或降低分散活性劑(例如CoQ10)粒子聚結來穩定活性劑(例如CoQ10)奈米分散液。在本發明之某些實施例中，脂質體係由膠狀分散液形成，其中磷脂穩定劑形成環繞疏水生物活性劑或物質之分散粒子的雙層系統。在某些實施例中，脂質體係如圖15中所繪示之雙層狀單層脂質體。在其他實施例中，脂質體係如圖15中所繪示之雙層狀多層脂質體。在某些實施例中，疏水活性劑之分散粒子在雙層之親脂部分內。在某些其他實施例中，若脂質體係多層，則疏水活性劑在雙層之親脂部分內。在脂質體係多層之某些其他實施例中，分散疏水活性劑在脂質體之雙層的親脂部分內且第二試劑在介於多層脂質體之雙層部分之間的親水部分中。

適當選擇表面活性劑或表面活性劑之混合物可產生調配物，其中貨架產品係藥物存於液體表面活性劑中之濃溶液，且在添加輸注流體時，由表面活性劑達成之介面能量減少足以將該系統乳化成膠狀系統。分散穩定劑可選自聚乙氧基化(a/k/a聚乙二醇化)蓖麻油(Cremophor® EL)、聚乙氧基化氫化蓖麻油(Cremophor® RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸鹽(聚乙二醇化維他命E、維他命E TPGS)、聚山梨醇酯(Tweens®)、山梨醇酐脂肪酸酯(Spans®)、膽汁酸及膽汁酸鹽及二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)。分散穩定劑組織於大小減小粒子之介面處並降低介面能量，此使得分散液更穩定。

磷脂對CoQ10具有高親和性，如由二者在生物膜中之緊密結合所證實。分散穩定劑包括於調配物中以在減小粒徑時至少降低介面張力。在膠狀分散液中，奈米分散粒子包括由穩定劑圍繞之活性劑核心。分散穩定劑通常係兩親性物質，即彼等具有分子之親水及疏水部分者。在粒子表面處，主要以分子之疏水部分突出進入核心且親水部分進入周圍分散介質之方式佈置兩親水物質。因此，表面係親水的。

其他適宜磷脂包括卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、磷脂醯甘油、磷脂酸、磷脂醯絲胺酸、溶血磷脂醯膽鹼、溶血磷脂醯乙醇胺、溶血磷脂醯甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂醯絲胺酸、PEG-磷脂醯乙醇胺、PVP-磷脂醯乙醇胺及其組合及與其之組合。

在一個實施例中，分散穩定劑並非選自卵磷脂、聚山梨醇酯80及奧拉克特(olacta)之群之試劑。在一個實施例中，分散穩定劑並非卵磷脂。在一個實施例中，分散穩定劑並非聚山梨醇酯80。在一個實施例中，分散穩定劑並非奧拉克特。

本發明之調配物可進一步包括調理作用降低劑。調理作用降低劑可選自不同鏈長度之聚乙二醇、多糖、其他含PEG之共聚物、保麗視明或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。如本文所定義，調理作用降低劑係指結合活性劑作用來降低調理素在吞噬作用過程中用作結合增強劑的能力的任何非活性劑。非活性劑應包括於FDA之非活性成份列表中，其全文以引用方式併入。非活性劑應不包括聚乙二醇化非離子型表面活性劑(例如，分別為聚山梨醇酯80、聚乙氧基化蓖麻油、及脂肪醇及酸之PEG醚及酯)，此乃因該等材料可引起極其超敏反應。因此，在一個實施例中，調理作用降低劑並非聚山梨醇酯80。在一個實施例中，調理作用降低劑並非聚乙氧基化蓖麻油。在一個實施例中，調理作用降低劑並非脂肪醇之PEG醚。在一個實施例中，調理作用降低劑並非脂肪酸之PEG酯。

舉例而言，大於10nm之膠體級粒子並不由腎過濾且將循環直至其由活性過程清除或其藉由擴散通過血管內皮細胞之間之空隙而滲出。網狀內皮系統(RES)或單核吞噬細胞系統(MPS)之吞噬細胞將藉由胞吞作用捕獲膠狀粒子。該等細胞包括與肝(庫普弗(Kupffer)細胞)、脾、淋巴結(血管周圍巨噬細胞)、神經系統(小神經膠狀細胞)及 骨(破骨細胞)有關之巨噬細胞。調理素(例如，免疫球蛋白、補體組份或其他血清蛋白)之非特異性附接使得粒子為外來物。核內體中之酶及氧化-反應環境將破壞所捕獲粒子。

可藉由許多因素(包括低於100nm之粒徑、表面中性或負電荷、及龐大親水鏈之吸附或結合)降低膠狀粒子之調理作用，從而產生較長循環。膠狀藥物遞送至實體瘤之實用性的重要要素源自腫瘤之獨特解剖及生理特性。腫瘤之毛細血管網絡係曲折的，其具有寬內皮接合處(100nm至780nm)，且腫瘤無淋巴引流。該等特性可將膠狀粒子被動靶向腫瘤。粒子經由滲漏接合處滲出並保留在腫瘤間質中。

調理作用降低劑包括於調配物中以修飾對粒子之生物反應。本發明提供藉由在本文所提供調配物中納入調理作用降低劑來降低藉由調理作用清除膠狀藥物粒子之能力的方法。調理作用降低劑之納入在腫瘤中比在血漿中產生更高藥物含量。

在一個實施例中，本發明之調配物不包含聚山梨醇酯80。在一個實施例中，本發明之調配物不包含聚乙氧基化蓖麻油。在一個實施例中，本發明之調配物不包含脂肪醇之PEG醚。在一個實施例中，本發明之調配物不包含脂肪酸之PEG酯。在一個實施例中，本發明之調配物不包含選自卵磷脂、聚山梨醇酯80及奧拉克特之群之試劑。在一個實施例中，本發明之調配物不包含卵磷脂。在一個實施例中，本發明之調配物不包含聚山梨醇酯80。在一個實施例中，本發明之調配物不包含奧拉克特。

已發現且本文中揭示，活性劑與非活性劑之比率對於控制粒徑很重要。為獲得分散穩定劑及調理作用降低劑之益處而不對任一者或粒徑之益處造成負面影響，可調節活性劑(例如CoQ10)、分散穩定劑(例如DMPC)及調理作用降低劑(例如泊洛沙姆)之比率以在靜脈內投與時提供期望粒徑及對膠狀分散液之期望生物反應。在某些實施例 中，製備調配物以使活性劑(例如CoQ10)、分散穩定劑(例如DMPC)及調理作用降低劑(例如泊洛沙姆)之容重分別各自為4%、3%及1.5%。在某些其他實施例中，活性劑(例如CoQ10)、分散穩定劑(例如DMPC)及調理作用降低劑(例如泊洛沙姆)之容重分別為8%、6%及3.0%。在某些實施例中，製備調配物以使CoQ10、DMPC及泊洛沙姆之容重分別各自為4%、3%及1.5%。在某些其他實施例中，CoQ10、DMPC及泊洛沙姆之容重分別係8%、6%及3.0%。

於高於疏水活性劑之熔點之溫度下對其進行分散以有利於分散。CoQ10之熔點為約48℃。本文中涵蓋，熔點可變且可(例如)包括47.5℃至49.5℃範圍內之任一值，例如47.5℃、48.0℃、48.5℃、49.0℃或49.5℃。在某些實施例中，將CoQ10混合於65℃水浴中以形成CoQ10/水混合物，藉此改良分散CoQ10及減小其粒徑之能力。

在較佳實施例中，經由高壓均質器(微射流均質機)(例如彼等自Microfluidics公司購得者)處理活性劑(例如CoQ10)。以高速將含有CoQ10之製程流泵入相互作用室中並藉由壁碰撞及氣蝕剪切粒子。該等剪切效應經重複通過微射流均質機減小粒徑。本發明之粒子具有奈米大小範圍內之大小分佈，其中平均粒徑小於約200nm，如由光子相關光譜測定。在一個實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約150nm。在一個實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約125nm。在一個實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約100nm。在一個實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約95nm、小於約90nm、小於約85nm、小於約80nm、小於約75nm、小於約70nm、小於約65nm、小於約60nm、小於約55nm、小於約50nm、小於約45nm、小於約40nm、小於約35nm、小於約30nm或小於約25nm。在一個實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約49nm、小於約48nm、小於約47nm、小於約46nm、小於約45nm、小於約44nm、小於約43nm、小 於約42nm或小於約41nm。在一個實施例中，奈米分散粒子之平均大小小於約45nm。應瞭解，利用該等值中之任一者作為上限或下限之範圍(例如，介於約40nm與49nm之間、介於約25nm與48nm之間或介於約25nm與47nm之間)亦欲為本發明之部分。

在某些其他實施例中，經由多次通過微射流均質機，平均粒徑減小至10nm與200nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至10nm與150nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至10nm與125nm之間。在其他實施例中，平均粒徑減小至10nm與100nm之間。在某些其他實施例中，平均粒徑減小至10nm與90nm之間、10nm與80nm之間、10nm與70nm之間、10nm與60nm之間、10nm與50nm之間、10nm與45nm之間、10nm與40nm之間、或10nm與30nm之間。在某些較佳實施例中，平均粒徑減小至20nm與80nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至20nm與70nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至20nm與60nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至20nm與50nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至25nm與45nm之間。在一個實施例中，平均粒徑減小至30nm與45nm之間。在某些其他較佳實施例中，平均粒徑減小至35nm與40nm之間。應瞭解，利用上述值中之任一者作為上限或下限之額外範圍(例如，介於30nm與80nm之間或介於30nm與40nm之間)亦欲為本發明之部分。

可較佳地具有呈懸浮液形式或另一選擇為呈乳液形式之膠狀分散液。如本文別處所定義，懸浮液或奈米懸浮液包含連續相及分散固體，而乳液包括分散不混溶液體。在某些態樣中，乳液包括已熔融並分散於連續相中形成奈米粒子之分散疏水劑。若疏水活性劑係CoQ10，則可進一步分散熔融且分散粒子且藉由隨後通過均質化過程進一步減小粒徑。對於固體粒子而言，熔融疏水活性劑之粒子越小，則介面能量越高。使用穩定劑(例如DMPC)藉由在分散粒子周圍形成 表面層、藉此產生奈米分散CoQ10粒子來穩定分散粒子。所形成粒子小於200nm。懸浮液包括藉由高能量均質化分散之塊狀疏水活性劑的粒子。在懸浮液中係疏水活性劑(例如CoQ10)之奈米分散液。舉例而言，CoQ10之奈米分散液包括由穩定劑(例如DMPC)圍繞之塊狀CoQ10的分散粒子。穩定劑在分散塊狀疏水劑周圍形成表面層且CoQ10之分散粒子形成奈米分散粒子之核心。在一些實施例中，奈米分散粒子呈非晶態。在某些其他實施例中，凍乾粒子並使CoQ10之奈米分散粒子的CoQ10核心結晶。

本文所述調配物可以有效量投與個體。有效量係能夠在治療個體或細胞中產生期望結果之量。如醫學及獸醫領域中所熟知，任一動物之劑量取決於許多因素，其包括特定動物體形大小、身體類型、年齡、欲投與之特定組合物、投與時間及途徑、一般健康狀況、及預投與、共投與或後投與藥物之效應。預計，對於約110lbs至約300lbs範圍內之個體而言，非經腸投與調配物之適當劑量可為約10mg至約500mg CoQ10。與細胞培養物一起使用之有效量亦可變，但可根據經驗容易地確定(即，藉由向細胞中添加不同濃度並選擇最佳產生期望結果之濃度)。預計，適當濃度可為約1μM至約250μM。

IV. 製備調配物之方法

CoQ10在室溫下為固態且主要為結晶物質且呈體相(即塊狀材料)。作為起始材料用於製備本發明膠狀粒子之固態塊狀材料可為非顆粒或顆粒，例如，粉末、沉澱、團塊、結晶或任何其他常用原材料。

在製備本發明之調配物時，在高於疏水活性劑之熔點的浴液中加熱水溶性較差之疏水活性劑(例如體相CoQ10)或水溶性較差之物質之混合物。舉例而言，CoQ10之熔點為約48℃。本文中涵蓋，熔點可變且可(例如)包括47.5℃至49.5℃範圍內之任一值。由水組成之浴液在65℃下。將於室溫下呈塊狀形式之CoQ10添加至65℃水中並混合形 成CoQ10/水混合物。在某些實施例中，將CoQ10/水混合物混合45分鐘。在某些其他實施例中，將其混合20分鐘至30分鐘。隨後將粉末DMPC添加至CoQ10/水混合物(M1)中並混合形成CoQ10/水/穩定劑混合物。在某些實施例中，於65℃下將CoQ10/水/穩定劑混合物(M2)混合25分鐘至45分鐘。在某些其他實施例中，於65℃下將CoQ10/水/穩定劑混合物混合30分鐘。隨後添加調理作用降低劑以形成CoQ10/水/穩定劑/降低劑混合物。將微射流均質機室預加熱至60℃至65℃。隨後藉由重複通過微射流均質機來處理CoQ10/水/穩定劑/降低劑(M3)，從而將粒徑減小至低於200nm。

適宜微射流均質機包括M110P且可經由Microfluidics公司(MFI)獲得。M110P具有75μm通道及F12Y相互作用室。在處理M3時，微射流均質機具有30,000psi之入口壓力。

在微射流均質機中通過20次後，粒徑減小至30nm與80nm之間、或較佳30nm與75nm之間。

藉由使用不同類型及量之穩定劑及調理作用降低劑將熔融CoQ10儲備材料乳化於水中來製備CoQ10之膠狀分散液。藉由探針型超音波及/或高壓均質化完成乳化。較佳地，藉由高壓均質化完成乳化。高壓均質化系統展示較小平均粒徑及更窄粒徑分佈。CoQ10之膠狀分散液之平均粒徑可因改變過程參數而在相當大範圍內變化，該等過程參數例如均質化設備、均質化參數(時間、循環、壓力等)及分散液之組成(穩定劑及調理作用降低劑之類型及量、相比率等)。Siekmann及Westesen闡述藉由乳化製得之CoQ10之亞微米大小之調配物，其中膠狀粒子呈非晶態(Siekmann,B.及K.Westesen.「Preparation and physicochemical characterization of aqueous dispersions of coenzyme Q10 nanoparticles.」Pharmaceutical Research 12，編號2(1995)：201-208)，其全文以引用方式併入本文中。

本發明提供疏水活性劑(例如CoQ10)之膠狀分散液，其藉由不同於由Siekmann及Westesen揭示之方法的方法製得。本發明提供乳化CoQ10以產生CoQ10之膠狀粒子的方法。儘管在一些實施例中粒子呈非晶態，但在其他實施例中，凍乾粒子以使膠狀CoQ10粒子呈結晶形式。在本發明之某些實施例中，在凍乾時使用凍乾保護劑以穩定粒徑。本發明中之其他顯著區別包括在本發明膠狀粒子之均質化中採用非活性劑。本發明揭示之方法包括如本文進一步闡述之穩定劑及調理作用降低劑中的至少一者。

本發明進一步包括疏水劑、穩定劑及調理作用降低劑之新穎比率。CoQ10之均質化過程產生非晶形CoQ10膠狀分散液，其包括泊洛沙姆(作為調理作用降低劑)及DMPC(作為分散穩定劑)，其之比率產生大小低於200nm且較佳約40nm之膠狀CoQ10粒子。適宜DMPC可自Genzyme公司，Lipoid,Avanti或NOF購得，而適宜泊洛沙姆188可自Spectrum公司或BASF公司購得。

在製備膠狀分散液時，CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188之容重分別經選擇為4%、3%及1.5%(即比率為4：3：1.5)。在某些其他適宜實施例中，CoQ10、DMPC及泊洛沙姆之容重分別為8%、6%及3%(即比率為8：6：3)。在某些實施例中，CoQ10之濃度介於30mg/mL與90mg/mL之間。在某些其他實施例中，對於4：3：1.5比率而言，CoQ10之濃度係約40mg/mL，對於8：6：3比率而言為約80mg/mL且對於6：3：1比率而言為約60mg/mL。

CoQ10之膠狀分散液在室溫下穩定若干週。粒徑在兩個或三個週內仍未改變，如表1及表2中所示。標記「過濾」及「重複」之各欄的比較指示，長達兩週之儲存並未顯著影響過濾懸浮液之粒徑。表1進一步證實，DMPC/CoQ10比之增大及泊洛沙姆188之添加會減小粒徑。於25℃及60%濕度下將CoQ10/DMPC/P188 4：3：0調配物儲存於穩 定室中。隨時間評定Z_avg(粒徑)。

用鹽水溶液稀釋4：3：1.5及4：3：0調配物(稀釋係數1.6)，即200μL懸浮液添加120μL鹽水。於25℃及60%濕度下將經稀釋及未經稀釋樣品儲存於穩定室中。24、48及96小時後評定粒徑。表3給出穩定結果。在鹽水稀釋及未經稀釋樣品中觀察到時間依賴性粒徑增大。自「0hr」至「48hr」，對於4：3：0調配物，粒徑增大5nm至8nm，且對於4：3：1.5調配物增大10nm至11nm。

在一些實施例中，本發明之調配物可包括約0.001%至約20%(w/w)輔酶Q10、更佳介於約0.01%與約15%之間且甚至更佳介於約0.1%與約10%(w/w)之間之輔酶Q10。在一個實施例中，調配物包括約4%(w/w)輔酶Q10。在一個實施例中，調配物包括約8%(w/w)輔酶Q10。在不同實施例中，調配物包括約0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%(w/w)輔酶Q10。CoQ10可自Kaneka Q10以呈粉末形式之Kaneka Q10(USP UBIDECARENONE)(Pasadena,Texas,USA)獲得。本文所例示方法中所用之CoQ10具有以下特性：殘餘溶劑滿足USP 467要求；水含量係約0.0%、小於0.05%或小於0.2%；灼燒殘渣係0.0%、小於0.05%或小於0.2%；重金屬含量小於0.002%或小於0.001%；純度介於98%與100%之間或為99.9%或99.5%。

在一些實施例中，本文所提供靜脈注射調配物係存於如上文製備之奈米懸浮液中之含有CoQ10的4%無菌水性膠狀分散液。在某些實施例中，調配物適於非經腸投與，包括靜脈內、腹膜內、同位、顱內、肌內、皮下、髓內注射、以及鞘內、直接心室內、鼻內或眼內注 射。在某些實施例中，調配物含有分別比率為4：3：1.5之CoQ10、二肉豆蔻醯基-磷脂醯膽鹼及泊洛沙姆188，該比率經設計以穩定粒子之奈米懸浮液。在一些實施例中，調配物包括磷酸鹽緩衝鹽水溶液，其含有磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、氯化鈉及注射用水。

在某些實施例中，CoQ10在調配物中之濃度介於1mg/mL與150mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10在調配物中之濃度介於5mg/mL與125mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10在調配物中之濃度介於10mg/mL與100mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10在調配物中之濃度介於20mg/mL與90mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10之濃度介於30mg/mL與80mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10之濃度介於30mg/mL與70mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10之濃度介於30mg/mL與60mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10之濃度介於30mg/mL與50mg/mL之間。在一個實施例中，CoQ10之濃度介於35mg/mL與45mg/mL之間。應瞭解，利用上述值中之任一者作為上限或下限之額外範圍(例如，介於10mg/mL與50mg/mL之間或介於20mg/mL與60mg/mL之間)亦欲為本發明之部分。

在某些實施例中，CoQ10在調配物中之濃度係約10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、31mg/mL、32mg/mL、33mg/mL、34mg/mL、35mg/mL、36mg/mL、37mg/mL、38mg/mL、39mg/mL、40mg/mL、41mg/mL、42mg/mL、43mg/mL、44mg/mL、45mg/mL、46mg/mL、47mg/mL、48mg/mL、49mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、85mg/mL、90mg/mL或95mg/mL。在一個實施例中，CoQ10在調配物中之濃度係約50mg/mL。在一個實施例中，CoQ10在調配物中之濃度係約60mg/mL。在一個實施例中，CoQ10在調配物中之濃度係約30mg/mL。在較佳實施例中，CoQ10在調配物中 之濃度係約40mg/mL。應瞭解，利用該等值中之任一者作為上限或下限之範圍(例如，介於37mg/mL與47mg/mL之間或介於31mg/mL與49mg/mL之間)亦欲為本發明之部分。

在一些實施例中，調配物之平均粒徑約介於10nm與200nm之間。在其他實施例中，粒徑在約10nm至100nm、約30nm至80nm或約35nm至40nm範圍內。在一些實施例中，調配物之平均粒徑在約10nm至150nm範圍內。在一個實施例中，平均粒徑在約10nm至125nm範圍內。在其他實施例中，平均粒徑在約10nm至100nm範圍內。在某些其他實施例中，平均粒徑在約10nm至90nm、10nm至80nm、10nm至70nm、10nm至60nm、10nm至50nm、10nm至45nm、10nm至40nm或10nm至30nm範圍內。在某些較佳實施例中，平均粒徑在約20nm至80nm範圍內。在一個實施例中，平均粒徑在約20nm至70nm範圍內。在一個實施例中，平均粒徑在約20nm至60nm範圍內。在一個實施例中，平均粒徑在約20nm至50nm範圍內。在一個實施例中，平均粒徑在約25nm至45nm範圍內。在一個實施例中，平均粒徑在約30nm至45nm範圍內。在某些其他較佳實施例中，平均粒徑在約35nm至45nm範圍內。應瞭解，利用上述值中之任一者作為上限或下限之額外範圍(例如，30nm至80nm或10nm至40nm)亦意欲為本發明之部分。

在某些實施例中，提供用於儲存及操作本文所提供奈米懸浮液膠狀調配物的套組，藉此將奈米懸浮液包裝於小瓶中並用氯丁基橡膠塞及鋁頂蓋密封。

V. 腫瘤病症之治療

本發明之調配物可用於治療腫瘤病症。因此，本發明提供治療或預防個體腫瘤病症之方法，其包含向該個體靜脈內投與足以治療或預防腫瘤病症之量的本發明調配物，藉此治療或預防腫瘤病症。本發 明之調配物亦可用於抑制腫瘤細胞生長。因此，本發明進一步提供抑制個體之腫瘤細胞生長的方法，其包含向該個體靜脈內投與本發明之調配物以便抑制腫瘤細胞生長。在某些實施例中，個體係人類個體。

該等調配物可包括存於醫藥上可接受之載劑中之疏水活性劑(例如CoQ10)或其代謝物在一些實施例中，該調配物可包括約0.001%至約20%(w/w)輔酶Q10、更佳介於約0.01%與約15%之間且甚至更佳介於約0.1%與約10%(w/w)之間之輔酶Q10。在一個實施例中，調配物包括約4%(w/w)輔酶Q10。在一個實施例中，調配物包括約8%(w/w)輔酶Q10。在不同實施例中，調配物包括約0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%(w/w)輔酶Q10。亦如本文所述，本發明之組合物可呈液體形式，能夠藉由彼等熟習此項技術者範圍內之任何投與方式或途徑引入個體。舉例而言，可藉由包括(但不限於)靜脈內、瘤內、其組合及諸如此類之投與途徑投與組合物。

在本發明之某些實施例中，提供藉由靜脈內投與人類本發明之輔酶Q10調配物以便進行治療或預防來治療或預防人類腫瘤病症的方法，其中向人類投與約0.5mg/kg至約10,000mg/kg、約5mg/kg至約5,000mg/kg、約10mg/kg至約3,000mg/kg範圍內之劑量的輔酶Q10。在一個實施例中，投與約10mg/kg至約1,400mg/kg範圍內之輔酶Q10。在一個實施例中，投與約10mg/kg至約650mg/kg範圍內之輔酶Q10。在一個實施例中，投與約10mg/kg至約200mg/kg範圍內之輔酶Q10。在不同實施例中，投與以下劑量之輔酶Q10：約2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140 mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、180mg/kg、190mg/kg或200mg/kg。應瞭解，利用該等值中之任一者作為上限或下限之範圍(例如，約50mg/kg至約200mg/kg、或約650mg/kg至約1400mg/kg)亦欲為本發明之部分。在一個實施例中，投與劑量係至少約1mg/kg、至少約5mg/kg、至少約10mg/kg、至少約12.5mg/kg、至少約20mg/kg、至少約25mg/kg、至少約30mg/kg、至少約35mg/kg、至少約40mg/kg、至少約45mg/kg、至少約50mg/kg、至少約55mg/kg、至少約60mg/kg、至少約75mg/kg、至少約100mg/kg、至少約125mg/kg、至少約150mg/kg、至少約175mg/kg、至少約200mg/kg、至少約300mg/kg或至少約400mg/kg。

在一個實施例中，每週投與一次輔酶Q10調配物。在一個實施例中，每週投與3次輔酶Q10調配物。在另一實施例中，每週投與5次輔酶Q10調配物。在一個實施例中，每天投與一次輔酶Q10調配物。在一些實施例中，若藉由輸注投與靜脈注射調配物，則藉由輸注經約1小時、2小時、3小時、4小時或更長時間投與劑量。在一個實施例中，藉由輸注經約4小時投與靜脈注射調配物。

在另一實施例中，輔酶Q10係以CoQ10靜脈注射調配物形式以如下劑量投與：約10mg/kg與約10,000mg/kg之間、約20mg/kg至約5000mg/kg、約50mg/kg至約3000mg/kg、約100mg/kg至約2000mg/kg、約200mg/kg至約1000mg/kg或約300mg/kg至約500mg/kgCoQ10，其中CoQ10調配物包含介於約1%與10%之間之輔酶Q10。在一個實施例中，CoQ10調配物包含約4%輔酶Q10。在一個實施例中，CoQ10靜脈注射調配物包含約8%輔酶Q10。在其他實施例中，CoQ10靜脈注射調配物包含約1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%或10%輔酶Q10。應瞭解，利用該等值中之任一者作為上限或下限之範 圍亦欲為本發明之部分。

本文所用「腫瘤病症」係指在人類中發現之所有類型之癌症或贅瘤或惡性腫瘤，其包括(但不限於)：白血病、淋巴瘤、黑素瘤、癌及肉瘤。本文所用術語或語言「腫瘤病症」、「癌症」、「贅瘤」及「腫瘤」可互換使用且呈單數或複數形式，其係指已經歷惡性轉化而對於主體有機體而言係病態之細胞。原發性癌細胞(即自惡性轉化位點附近獲得之細胞)可藉由已公認之技術、尤其組織檢查容易地與非癌細胞區分開。本文所用癌細胞之定義不僅包括原發性癌細胞，且亦包括癌幹細胞、以及癌祖細胞或衍生自癌細胞或原代之任何細胞。此包括轉移癌細胞、及衍生自癌細胞之活體外培養物及細胞系。當提及通常表現為實體瘤之一類癌症時，「可臨床檢測之」腫瘤係可基於腫瘤質量藉由(例如)諸如CAT掃描、MR成像、X-射線、超音波或觸診等程序檢測之腫瘤，及/或可由於自患者獲得之樣品中之一或多種癌症特異性抗原的表現而檢測之腫瘤。

術語「肉瘤」通常係指由類似於胚性結締組織之物質構成且通常包括包埋於纖維或同類物質中之緊密堆積的細胞之腫瘤。可用CoQ10存於靜脈注射調配物中之膠狀分散液治療之肉瘤的實例包括(例如)軟骨肉瘤、纖維肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、黏液肉瘤、骨肉瘤、艾伯內西氏肉瘤(Abemethy's sarcoma)、脂肪肉瘤、脂肉瘤、泡狀軟組織肉瘤、成釉細胞肉瘤、葡萄狀肉瘤、綠色瘤性肉瘤(chloroma sarcoma)、絨毛膜肉瘤(chorio sarcoma)、胚胎性肉瘤、維爾姆斯氏腫瘤肉瘤(Wilms' tumour sarcoma)、子宮內膜肉瘤、間質肉瘤、尤因氏肉瘤、筋膜肉瘤、纖維母細胞肉瘤、巨細胞肉瘤、粒細胞肉瘤、何傑金氏肉瘤(Hodgkin's sarcoma)、特發性多發性色素沉著出血性肉瘤、B細胞之免疫母細胞肉瘤、淋巴瘤、T細胞之免疫母細胞肉瘤、晏森氏肉瘤(Jensen's sarcoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、庫普弗細 胞肉瘤(Kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白血病性肉瘤、惡性間葉瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、網狀細胞肉瘤、勞氏肉瘤(Rous sarcoma)、漿液囊性肉瘤、滑膜肉瘤及毛細血管擴張性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。

所採用術語「黑素瘤」意指由皮膚及其他器官之黑素細胞系統產生之腫瘤。可用CoQ10存於靜脈注射調配物中之膠狀分散液治療之黑素瘤包括(例如)肢端著色斑性黑素瘤、無黑色素性惡性黑素瘤、良性幼年型黑素瘤、克勞德曼氏黑素瘤(Cloudman's melanoma)、S91黑素瘤、哈-帕二氏黑素瘤(Harding-Passey melanoma)、幼年型黑素瘤、惡性雀斑樣黑素瘤、惡性黑素瘤、結節性黑素瘤、甲下黑素瘤及淺表擴展性黑素瘤。

術語「癌」係指由傾向於浸入到周圍組織中並引起轉移瘤之上皮細胞構成之惡性新生長腫瘤。可用如本文所述CoQ10存於靜脈注射調配物中之膠狀分散液治療之癌包括(例如)腺泡癌(acinar carcinoma、acinous carcinoma)、腺樣囊性癌(adenocystic carcinoma、adenoid cystic carcinoma)、腺瘤癌(carcinoma adenomatosum)、腎上腺皮質癌、蜂窩狀癌、肺泡細胞癌、基底細胞癌(basal cell carcinoma、carcinoma basocellulare)、類基底細胞癌、基底鱗狀細胞癌、細支氣管肺泡癌、細支氣管癌、支氣管癌、腦狀癌(cerebriform carcinoma)、膽管細胞癌、絨毛膜癌、膠狀癌(colloid carcinoma)、粉刺狀癌、子宮體癌、篩狀癌、胸廓癌、皮膚癌、柱狀癌、柱狀細胞癌、導管癌、硬癌(carcinoma durum)、胚胎性癌、類腦狀癌(encephaloid carcinoma)、表皮樣癌、腺樣上皮細胞癌、外植癌、潰瘍性癌、纖維癌、膠樣癌(gelatiniform carcinoma、gelatinous carcinoma)、巨細胞癌(giant cell carcinoma、carcinoma gigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、粒層細胞癌、發母質癌、類血樣癌(haematoid carcinoma)、肝細胞 癌、許特耳細胞癌(Hurthle cell carcinoma)、玻璃質癌(hyaline carcinoma)、腎上腺樣癌、嬰兒胚胎性癌、原位癌、表皮內癌、上皮內癌、克羅姆佩柯赫爾氏腫瘤(Krompecher's carcinoma)、庫爾契茨基氏細胞癌(Kulchitzky-cell carcinoma)、大細胞癌、豆狀癌(lenticular carcinoma、carcinoma lenticulare)、脂瘤樣癌、淋巴上皮癌、髓樣癌(carcinoma medullare、medullary carcinoma)、黑色素癌、軟癌、merkel細胞瘤、黏蛋白性腺癌(mucinous carcinoma)、黏液癌(carcinoma muciparum)、黏液細胞癌、黏液表皮樣癌、黏液癌(carcinoma mucosum、mucous carcinoma)、黏液瘤樣癌、鼻咽癌、燕麥細胞癌、骨化性癌、類骨質癌(osteoid carcinoma)、乳頭狀癌、門脈周癌、前侵襲癌、棘細胞癌、粉刺癌、腎臟腎細胞癌、貯備細胞癌、肉瘤樣癌、施奈德氏癌(schneiderian carcinoma)、硬癌(scirrhous carcinoma)、陰囊癌、印戒細胞癌、單純癌、小細胞癌、馬鈴薯狀癌、球狀細胞癌、梭形細胞癌、海綿體癌、鱗狀癌、鱗狀細胞癌、繩捆癌、血管擴張性癌(carcinoma telangiectaticum、carcinoma telangiectodes)、移行細胞癌、結節性皮癌(carcinoma tuberosum、tuberous carcinoma)、疣狀癌及絨毛狀癌。

在用於治療癌症時，調配物可存於醫藥上可接受之載劑中，其可以治療有效量作為單一療法、與至少一種針對給定適應症之其他化學治療劑組合、與放射療法組合、之後外科手術干預以根本上去除腫瘤、與用於癌症之其他替代及/或互補可接受之治療組合及諸如此類投與癌發生之區域。在某些實施例中，本發明亦提供藉由投與患者之癌發生區域本發明組合物來重新激活突變/滅活p53蛋白的方法。

本發明亦提供藉由投與患者之癌發生區域本發明組合物來調節與癌發生相關之蛋白的方法。可由本發明組合物調節之該等蛋白包括(但不限於)Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Bid蛋白、Bim蛋白、Bad蛋白、Bak 蛋白、mcl-1蛋白、Bcl-xl蛋白、Bcl-xs蛋白、Bcl-w蛋白、Bik蛋白、Bok蛋白、BimL蛋白、Al蛋白、Hrk蛋白、Bik蛋白、BNIP3蛋白、BIk蛋白、Noxa蛋白、Puma蛋白、VEGF蛋白、FGF-1/FGF-2蛋白、Hif-α蛋白、血管抑制素蛋白、TGF-β蛋白、smad蛋白、cdk(細胞週期調節蛋白依賴性激酶)、PI3K/akt複合物。在其他實施例中，本發明之組合物可用於調控及/或恢復癌細胞中之健康細胞凋亡狀態。線粒體功能障礙及細胞凋亡失調與許多疾病(例如癌症及神經變性)相關。呼吸鏈(RC)功能障礙可在細胞凋亡中起作用，如使用線粒體DNA突變作為遺傳模型所證實。儘管一些突變消除整個RC，但其他突變靶向特定複合物，從而使電子流減少或完全喪失，從而導致受損呼吸及三磷酸腺苷(ATP)合成。儘管具有該等類似性，但對細胞凋亡刺激素之反應出現顯著不同。無RC之細胞防止線粒體-及內質網(ER)應激誘發之細胞凋亡。具有RC但不能產生電子流之細胞防止線粒體細胞凋亡，但其具有增大之ER應激敏感性。最後，電子流部分減少之細胞在兩種情況下均具有增大之細胞凋亡。RC以與ATP產生無關之上下相關方式調節細胞凋亡，且細胞凋亡反應係線粒體功能狀態與環境線索之間相互影響的結果。

亦可藉由經線粒體膜孔釋放諸如細胞色素C、Endo G或AIF等因子來調介細胞凋亡之執行及致癌因子之間之通信，該等線粒體膜孔在膜去極化時打開。癌細胞在氧存在下亦產生過量乳酸酯(需氧糖酵解)。現在，似乎此現象係兩個因素之產物：恢復更多胚胎性糖酵解代謝及改變氧化磷酸化(OXPHOS)以增加線粒體活性氧(ROS)之產生。改變Ras-PI3K-Akt信號轉導途徑可誘發己糖激酶II並使其附接至線粒體孔蛋白，其重定向線粒體ATP以磷酸化葡萄糖並驅動糖酵解。此外，藉由線粒體基因突變(種系或體細胞突變)部分抑制OXPHOS可減少流過電子傳遞鏈之電子流，從而增加線粒體ROS產生。增大之 ROS誘變處理核原致癌基因(起始)並驅動核複製(加速)，從而導致癌症。因此，己糖激酶II及線粒體ROS可為癌治療劑之有用替代靶標。與癌症有關之代謝通量在致癌狀態中受影響並向糖酵解狀態轉變。癌細胞之存活主要取決於葡萄糖代謝及低氧含量。更複雜的是，線粒體活性顯著削弱至休眠程度。基本上關閉通常與自檸檬酸循環(TCA)接受電子之複合物1-IV相關的氧化磷酸化。自由基之量及乳酸脫氫酶活性顯著升高。因此，癌細胞係呈以下狀態：(1)降低之氧(低氧症)；(2)增加自由基形成；(3)失調之細胞凋亡(細胞死亡)；(4)依賴葡萄糖代謝；(5)增加之血管形成；及(6)改變之免疫識別(自體調節狀態開始)。

一般而言，本文所述之CoQ10靜脈注射調配物可用於預防性或治療性治療任何贅瘤。在特定實施例中，調配物用於治療實體瘤。在本發明之不同實施例中，CoQ10用於治療或預防腦癌、中樞神經系統癌、頭頸癌、前列腺癌、乳癌、睪丸癌、胰腺癌、肝癌、結腸癌、膀胱癌、尿道癌、膽囊癌、腎癌、肺癌、非小細胞肺癌、黑素瘤、間皮瘤、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、肉瘤、骨癌、胃癌及神經管胚細胞瘤。在一個實施例中，本文所述之CoQ10靜脈注射調配物可用於治療綠色白血病，例如原發綠色白血病或次發或轉移性綠色白血病，例如，其呈遞、遷移或轉移至特定器官(例如，肺、肝或中樞神經系統)。

然而，使用本發明之CoQ10靜脈注射調配物之治療並不限於以上類型癌症。適合於用本發明之CoQ10靜脈注射調配物治療之癌症的實例包括(但不限於)(例如)何傑金氏病(Hodgkin's Disease)、非何傑金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、神經母細胞瘤、乳癌、卵巢癌、肺癌、橫紋肌肉瘤、原發性血小板增多症、原發性巨球蛋白血症、小細胞肺腫瘤、原發性腦腫瘤、胃癌、結腸癌、惡性胰腺胰島素瘤、惡性類癌、 膀胱癌、惡化前皮膚損傷、睪丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經母細胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、惡性高鈣血症、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎上腺皮質癌及前列腺癌。在一個實施例中，本文所述之CoQ10靜脈注射調配物可用於治療或預防各種類型之皮膚癌(例如鱗狀細胞癌或基底細胞癌)、胰腺癌、乳癌、前列腺癌、肝癌或骨癌。在一個實施例中，CoQ10用於治療皮膚腫瘤病症，其包括(但不限於)鱗狀細胞癌(包括SCCIS(原位)及更具侵襲性的鱗狀細胞癌)、基底細胞癌(包括淺表、結節及浸潤性基底細胞癌)、黑素瘤及光化性角化病。在一個實施例中，可用CoQ10治療之腫瘤病症或癌症並非黑素瘤。在一個實施例中，腫瘤病症係merkel細胞癌(MCC)。

在某些實施例中，CoQ10對癌細胞所具有之效應可部分取決於由癌細胞呈現之代謝及氧化流的不同狀態。CoQ10可用於中斷及/或干擾致癌細胞對糖酵解之依賴性的轉化及增大之乳酸酯利用。當其係關於癌症狀態時，此干擾糖酵解及腫瘤微環境之氧化流可以降低癌細胞發育之方式影響細胞凋亡及血管發生。在一些實施例中，CoQ10與糖酵解之相互作用及氧化流因素可增強CoQ10在癌症中發揮其恢復性細胞凋亡效應同時建立藥物發現及發展之可行藥物靶標的能力。儘管本發明聚焦於CoQ10及其代謝物，但與CoQ10有關之可替代CoQ10或與其組合投與的其他化合物包括(但不限於)苯醌、類異戊二烯、法尼醇(farnesol)、乙酸法呢基酯、焦磷酸法呢基酯、1-苯丙胺酸、d-苯丙胺酸、dl-苯丙胺酸、1-酪胺酸、d-酪胺酸、dl-酪胺酸、4-羥基-苯基丙酮酸酯、4-羥基-苯基乳酸酯、4-羥基-肉桂酸酯、酪胺酸或苯丙胺酸之二肽及三肽、3,4-二羥基扁桃酸酯、3-甲氧基-4-羥基苯基二醇、3-甲氧基-4-羥基扁桃酸酯、香草酸、苯基乙酸酯、吡哆素(pyridoxine)、S-腺苷甲硫氨酸、泛醇、甲羥戊酸、焦磷酸異戊基酯、苯基丁酸酯、4-羥基-苯甲酸酯、焦磷酸十異戊二烯基酯、β-羥基丁酸 酯、3-羥基-3-甲基-戊二酸酯、乙醯肉鹼、乙醯乙醯肉鹼、乙醯甘胺酸、乙醯乙醯甘胺酸、肉鹼、乙酸、丙酮酸、3-羥基-3-甲基戊二醯基肉鹼、絲胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、蘇胺酸、羥基脯胺酸、離胺酸、異白胺酸及白胺酸之所有異構體形式、甚至肉鹼及甘胺酸之碳數目C4至C8脂肪酸(丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸及硬脂酸)鹽，例如棕櫚醯基肉鹼及棕櫚醯基甘胺酸、及4-羥基-苯甲酸酯聚異戊二烯基轉移酶、該等化合物之任何鹽、以及其任何組合及諸如此類。

在一個實施例中，靜脈內投與如本文所述之CoQ10之膠狀分散液可減小腫瘤大小、抑制腫瘤生長及/或延長具有腫瘤之個體的存活時間。因此，本發明亦係關於藉由靜脈內投與人類或其他動物有效、無毒量之CoQ10來治療該人類或動物之腫瘤的方法。熟習此項技術者可能夠藉由常規實驗確定出於治療惡性腫瘤之目的之CoQ10的有效且無毒量。舉例而言，CoQ10之治療活性量可根據以下因素變化，例如疾病階段(例如，階段I對階段IV)、個體之年齡、性別、醫學併發症(例如，免疫抑制病況或疾病)及體重、及CoQ10激發個體中之期望反應的能力。可調節劑量方案以提供最佳治療反應。舉例而言，每日可投與若干分開劑量或者該劑量可依照治療情形之緊急程度所示按比例減少。

在另一態樣中，本發明亦提供治療或預防人類之侵襲性腫瘤病症的方法。該等方法包括以治療有效劑量靜脈內投與人類輔酶Q10，以便治療或預防侵襲性腫瘤病症。在一個實施例中，該等方法包括以較針對較小侵襲性或非侵襲性腫瘤病症所用或選擇之劑量方案低之選定劑量靜脈內投與人類輔酶Q10，以便預防或治療侵襲性腫瘤病症。在某些實施例中，侵襲性腫瘤病症包括胰腺癌、肝細胞癌、尤因氏肉瘤、轉移性乳癌、轉移性黑素瘤、腦癌(星形細胞瘤、膠狀細胞瘤)、 神經內分泌癌、結腸癌、肝癌、肺癌、骨肉瘤、非雄激素依賴性前列腺癌、卵巢癌及非何傑金氏淋巴瘤。

在有關態樣中，本發明提供治療或預防人類之非侵襲性腫瘤病症的方法。該等方法包括以治療有效劑量靜脈內投與人類輔酶Q10，以便治療或預防非侵襲性腫瘤病症。在一個實施例中，該等方法包括以較針對侵襲性腫瘤病症所用或選擇之劑量方案高之選定劑量靜脈內投與人類輔酶Q10，以便預防或治療非侵襲性腫瘤病症。在某些實施例中，非侵襲性腫瘤病症包括非轉移性乳癌、雄激素依賴性前列腺癌、小細胞肺癌及急性淋巴細胞白血病。

在本發明之一些實施例中，經由CoQ10與選自由以下組成之群之蛋白的相互作用來治療或預防腫瘤病症：HNF4-α、Bcl-xl、Bcl-xS、BNIP-2、Bcl-2、Birc6、Bcl-2-L11(Bim)、XIAP、BRAF、Bax、c-Jun、Bmf、PUMA、cMyc、轉醛醇酶1、COQ1、COQ3、COQ6、異戊二烯基轉移酶、4-羥基苯甲酸酯、嗜中性粒細胞胞漿因子2、一氧化氮合酶2A、超氧化物歧化酶2、VDAC、Bax通道、ANT、細胞色素c、複合物I、複合物II、複合物III、複合物IV、Foxo 3a、DJ-1、IDH-1、Cpt1C及Cam Kinase II在一些實施例中，腫瘤病症選自由白血病、淋巴瘤、黑素瘤、癌或肉瘤組成之群。

在本發明之某些實施例中，腫瘤病症選自由白血病、淋巴瘤、黑素瘤、癌及肉瘤組成之群。

在本發明之某些實施例中，該等方法進一步包括治療方案，其包括外科手術、放射、激素療法、抗體療法、利用生長因子之療法、細胞因子及化學療法中之任一者或組合。

所得CoQ10奈米粒子亦可用作載劑系統用於其他親脂藥物。舉例而言，可將維他命A及K3引入其中。

VI. 組合治療

在某些實施例中，本發明之調配物(例如CoQ10靜脈注射調配物)可與至少一種其他治療劑用於組合療法。CoQ10及/或其醫藥調配物及其他治療劑可加性或更佳協同起作用。在一個實施例中，CoQ10及/或其調配物與另一治療劑之投與同時投與。在另一實施例中，在投與另一治療劑之前或之後投與化合物及/或其醫藥調配物。在一個實施例中，CoQ10及額外治療劑協同作用。在一個實施例中，CoQ10及額外治療劑加性作用。

在一個實施例中，本發明之治療方法進一步包含投與一或多種額外試劑，例如一或多種治療劑。舉例而言，在一個實施例中，用於本發明之治療方法中中之額外試劑係化學治療劑。

化學治療劑通常屬於不同種類，其包括(例如)：1.拓撲異構酶II抑制劑(細胞毒性抗生素)，例如蒽環抗生素/蒽二酮，例如多柔比星、表柔比星(epirubicin)、伊達比星(idarubicin)及奈莫柔比星(nemorubicin)，蒽醌，例如米托蒽醌(mitoxantrone)及洛索蒽醌(losoxantrone)，及鬼臼毒素(podophillotoxine)，例如依託泊苷(etoposide)及替尼泊苷(teniposide)；2.影響微管形成之試劑(有絲分裂抑制劑)，例如植物生物鹼(例如，屬於衍生自具有生物活性及細胞毒性之植物之鹼性含氮分子之家族的化合物)，例如，紫杉烷，例如紫杉醇(paclitaxel)及多西他賽(docetaxel)、及vinka生物鹼，例如長春鹼(vinblastine)、長春新鹼及長春瑞濱(vinorelbine)及鬼臼毒素之衍生物；3.烷基化試劑，例如氮芥(nitrogen mustards)、吖丙啶化合物、磺酸烷基酯及具有烷基化作用之其他化合物，例如亞硝基脲、達卡巴嗪(dacarbazine)、環磷醯胺、異環磷醯胺(ifosfamide)及美法侖(melphalan)；4.抗代謝物(核苷抑制劑)，例如，葉酸鹽，例如葉酸、氟嘧啶、嘌呤或嘧啶類似物，例如5-氟尿嘧啶(5-fluoro尿嘧啶)、卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱(gemcitabine)、胺甲蝶呤(methotrexate) 及依達曲沙(edatrexate)；5.拓撲異構酶I抑制劑，例如托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、及9-硝基喜樹鹼(9-nitrocamptothecin)、及喜樹鹼衍生物；及6.鉑化合物/錯合物，例如順鉑、奧沙利鉑(oxaliplatin)及卡鉑(carboplatin)；用於本發明方法中之實例性化學治療劑包括(但不限於)氨磷汀(amifostine)(氨磷汀(ethyol))、順鉑、達卡巴嗪(DTIC)、更生黴素(dactinomycin)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)(氮芥)、鏈脲黴素(streptozocin)、環磷醯胺、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、羅氮芥(lomustine)(CCNU)、多柔比星(阿黴素(adriamycin))、多柔比星脂質體(鹽酸多柔比星脂質體(doxil))、吉西他濱(健擇(gemzar))、柔紅黴素(daunorubicin)、柔紅黴素脂質體(daunorubicin)(柔紅黴素脂質體(daunoxome))、丙卡巴肼(procarbazine)、絲裂黴素、阿糖胞苷、依託泊苷、胺甲蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)、長春鹼、長春新鹼、博萊黴素、紫杉醇(紅豆杉醇)、多西他賽(克癌易(taxotere))、阿地白介素(aldesleukin)、天冬醯胺酶、白消安(busulfan)、卡鉑、克拉屈濱、喜樹鹼、CPT-I l、10-羥基-7-乙基-喜樹鹼(SN38)、達卡巴嗪、S-I卡培他濱、替加氟(ftorafur)、5'去氧氟尿苷、UFT、恩尿嘧啶(enil尿嘧啶)、去氧胞苷(deoxycytidine)、5-氮胞嘧啶、5-氮去氧胞嘧啶、別嘌醇(allopurinol)、2-氯腺苷、三甲曲沙(trimetrexate)、胺基蝶呤(胺基pterin)、亞甲基-10-脫氮胺基蝶呤(MDAM)、奧沙鉑(oxaplatin)、吡鉑(picoplatin)、四鉑(tetraplatin)、沙鉑(satraplatin)、鉑-DACH、奧馬鉑(ormaplatin)、CI-973、JM-216及其類似物、表柔比星、磷酸依託泊苷、9-胺基喜樹鹼、10,11-亞甲基二氧基喜樹鹼、卡尼特素(karenitecin)、9-硝基喜樹鹼、TAS 103、長春地辛(vindesine)、L-苯丙胺酸氮芥、異環磷醯胺馬磷醯胺、培磷醯胺(perfosfamide)、氯乙環磷醯胺(trophosphamide)卡莫司汀、司莫司汀(semustine)、埃坡黴素(epothilone)A-E、雷替曲塞(tomudex)、6-巰 基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、安吖啶(amsacrine)、磷酸依託泊苷、卡尼特素、阿昔洛維(acyclovir)、伐昔洛韋(valacyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(rimantadine)、拉米夫定(lamivudine)、齊多夫定(zidovudine)、貝伐單抗(bevacizumab)、曲司佐單抗(trastuzumab)、利妥昔單抗(rituximab)、5-氟尿嘧啶、卡培他濱、噴司他丁(Pentostatin)、三甲曲沙、克拉屈濱、氟尿苷(floxuridine)、氟達拉濱(fludarabine)、羥基脲、異環磷醯胺、伊達比星、美司鈉(mesna)、伊立替康、米托蒽醌、托泊替康、亮丙瑞林(leuprolide)、甲地孕酮(megestrol)、美法侖、巰基嘌呤、光輝黴素(plicamycin)、米托坦(mitotane)、培加帕酶(pegaspargase)、噴司他丁、哌泊溴烷(pipobroman)、光輝黴素、鏈脲黴素、他莫昔芬(tamoxifen)、替尼泊苷、睪內酯(testolactone)、硫鳥嘌呤、噻替哌(thiotepa)、尿嘧啶氮芥、長春瑞濱、苯丁酸氮芥、順鉑、多柔比星、紫杉醇(紅豆杉醇)、博萊黴素、mTor、表皮生長因子受體(EGFR)、及成纖維細胞生長因子(FGF)及其組合，熟習此項技術者基於護理特定腫瘤或癌症之適當標準可易知。

在另一實施例中，用於本發明之組合療法中之額外試劑係化學劑。

生物試劑(亦稱作生物製劑)係生物系統(例如有機體、細胞或重組系統)之產物。該等生物劑之實例包括核酸分子(例如反義核酸分子)、干擾素、介白素、集落刺激因子、抗體(例如單株抗體)、抗-血管發生試劑及細胞因子。實例性生物劑於下文中更詳細論述且通常屬於多種類別，其包括(例如)：1.激素、激素類似物、及激素複合物，例如雌激素及雌激素類似物、黃體酮、黃體酮類似物及孕激素、雄激素、腎上腺皮質類固醇、抗雌激素、抗雄激素、抗睪酮、腎上腺類固醇抑制劑及抗-促黃體生成激素；及2.酶、蛋白質、肽、多株及/或單 株抗體，例如介白素、干擾素、集落刺激因子等。

在一個實施例中，生物劑係干擾素。干擾素(IFN)係體內天然存在之一類生物劑。干擾素亦在實驗室中產生且在生物療法中給予癌症患者。其顯示可改良癌症患者之免疫系統抵抗癌細胞起作用之方式。

干擾素可直接作用於癌細胞以減緩其生長，或其可使得癌細胞變成具有更正常行為之細胞。一些干擾素亦可刺激天然殺手(NK)細胞、T細胞及巨噬細胞，其係血流中幫助抗擊癌細胞之類型的白血細胞。

在一個實施例中，生物劑係介白素。介白素(IL)刺激許多免疫細胞之生長及活性。其係體內天然存在之蛋白(細胞因子及趨化因子)，但亦可在實驗室中製備。

一些介白素刺激免疫細胞(例如淋巴細胞)之生長及活性，該等免疫細胞用於破壞癌細胞。

在另一實施例中，生物劑係集落刺激因子。

集落刺激因子(CSF)係給予患者以鼓勵骨髓內之幹細胞產生更多血細胞之蛋白質。尤其當存在癌症時，身體持續需要新白血細胞、紅血細胞、及血小板。CSF係與化學療法一起給予以幫助增強免疫系統。當癌症患者接受化學療法時，骨髓產生新血細胞之能力受到阻抑，從而使得患者更易於發生感染。免疫系統之部分在無血細胞情況下不可起作用，因此集落刺激因子鼓勵骨髓幹細胞產生白血細胞、血小板及紅血細胞。

在適當細胞產生下，其他癌症治療可繼續使患者安全地接受更高劑量之化學療法。

在另一實施例中，生物劑係抗體。抗體(例如單株抗體)係在實驗室中產生之試劑，其結合至癌細胞。

當將破壞癌症之試劑引入體內時，其搜尋出抗體並殺死癌細 胞。單株抗體試劑並不破壞健康細胞。單株抗體經由多種機制達成其治療效應。其可具有產生細胞凋亡或程式性細胞死亡之直接效應。其可阻斷生長因子受體，從而有效地阻止腫瘤細胞增殖。在表現單株抗體之細胞中，其可導致抗獨特型抗體形成。

可用於本發明之組合治療中之抗體的實例包括抗-CD20抗體，例如但不限於西土西單抗(cetuximab)、托西奠單抗(Tositumomab)、利妥昔單抗及替坦異貝莫單抗(Ibritumomab)。抗-HER2抗體亦可與環境影響劑組合用於治療癌症。在一個實施例中，抗-HER2抗體係曲司佐單抗(赫賽汀(Herceptin))。可與環境影響劑組合用於治療癌症之抗體的其他實例包括抗-CD52抗體(例如阿來組單抗(Alemtuzumab))、抗-CD-22抗體(例如依哌佐單抗(Epratuzumab))及抗-CD33抗體(例如吉妥珠單抗(Gemtuzumab ozogamicin))。抗-VEGF抗體亦可與環境影響劑組合用於治療癌症。在一個實施例中，抗-VEGF抗體係貝伐單抗。在其他實施例中，生物劑係為抗-EGFR抗體(例如西土西單抗)之抗體。另一實例係抗-糖蛋白17-1A抗體依決洛單抗(edrecolomab)。許多其他抗腫瘤抗體已為業內所知且可由熟習此項技術者理解為涵蓋於本發明內。

在另一實施例中，生物劑係細胞因子。細胞因子療法使用蛋白質(細胞因子)以幫助個體之免疫系統識別並破壞彼等癌細胞。細胞因子係在體內由免疫系統天然產生，但亦可在實驗室中產生。此療法用於晚期黑素瘤並與輔助療法(主要癌症治療之後或除主要癌症治療外給予之療法)一起使用。細胞因子療法到達身體之所有部分以殺死癌細胞並阻止腫瘤生長。

在另一實施例中，生物劑係融合蛋白。舉例而言，重組人類Apo2L/TRAIL(Genentech)可用於組合療法。Apo2/TRAIL係經設計以激活促細胞凋亡受體DR4及DR5二者的第一雙重促細胞凋亡受體激動 劑，該等促細胞凋亡受體參與調控細胞凋亡(程式性細胞死亡)。

在一個實施例中，生物劑係反義核酸分子。

本文所用「反義」核酸包含與編碼蛋白之「正義」核酸互補，例如與雙鏈cDNA分子之編碼鏈互補、與mRNA序列互補或與基因之編碼鏈互補的核苷酸序列。因此，反義核酸可氫鍵結至正義核酸。

在一個實施例中，生物劑係siRNA分子，例如，增強血管發生之分子，例如bFGF、VEGF及EGFR。在一個實施例中，抑制血管發生之生物劑調介RNAi。RNA干擾(RNAi)係轉錄後靶基因沉默技術，其使用雙鏈RNA(dsRNA)降解含有與dsRNA相同序列之信使RNA(mRNA)(Sharp,P.A.及Zamore,P.D.287,2431-2432(2000)；Zamore,P.D.等人Cell 101,25-33(2000).Tuschl,T.等人Genes Dev.13,3191-3197(1999)；Cottrell TR及Doering TL.2003.Trends Microbiol.11：37-43；Bushman F.2003.MoI Therapy.7：9-10；McManus MT and Sharp PA.2002.Nat Rev Genet.3.737-47)。當內源核糖核酸酶將較長dsRNA裂解成較短(例如)21-或22-核苷酸長RNA(稱作小干擾RNA或siRNA)時，發生此過程。隨後較小RNA片段調介靶標mRNA的降解。用於合成RNAi之套組可自(例如)New England Biolabs或Ambion購得。在一個實施例中，在調介RNAi之分子中可採用用於反義RNA之一或多種化學物質。

使用反義核酸下調特定蛋白在細胞中之表現已為業內所熟知(參見，例如，Weintraub,H.等人，Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis,Reviews-Trends in Genetics，第1(1)卷1986；Askari,F.K.及McDonnell,W.M.(1996)N.Eng.J.Med.334：316-318；Bennett,M.R.及Schwartz,S.M.(1995)Circulation 92：1981-1993；Mercola,D.及Cohen,J.S.(1995)Cancer Gene Ther.2：47-59；Rossi,JJ.(1995)Br.Med.Bull.51.217-225；Wagner,R.W.(1994)Nature 372：333-335)。反 義核酸分子包含與另一核酸分子之編碼鏈互補之核苷酸序列(例如mRNA序列)，且因此能夠氫鍵結至另一核酸分子之編碼鏈。與mRNA之序列互補之反義序列可與mRNA之編碼區、mRNA之5'或3'非轉譯區或橋接編碼區之區及非轉譯區(例如，在5'非轉譯區及編碼區之接合處)中發現之序列互補。此外，反義核酸之序列可與編碼mRNA之基因的調控區(例如轉錄起始序列或調控元件)互補。較佳地，反義核酸經設計以與mRNA編碼鏈起始密碼子之前或跨越該起始密碼子之區域互補或位於3'非轉譯區中。

由於增強血管發生之分子的編碼鏈序列，可根據Watson及Crick鹼基配對之規則設計本發明之反義核酸。反義核酸分子可與mRNA之整個編碼區互補，但更佳為僅與mRNA之編碼或非編碼區之一部分反義的寡核苷酸。舉例而言，反義寡核苷酸可為圍繞mRNA之轉譯起始位點的區互補。反義寡核苷酸之長度可為(例如)約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個核苷酸。

可使用化學合成及酶連接反應使用業內已知之程序構造本發明之反義核酸。舉例而言，可使用天然存在之核苷酸或以各種方式修飾之核苷酸化學合成反義核酸(例如反義寡核苷酸)，該等經修飾核苷酸經設計以增大分子之生物穩定性或增大反義核酸與正義核酸之間形成之雙鏈體的物理穩定性，例如，可使用硫代磷酸酯衍生物及吖啶取代之核苷酸。可用於產生反義核酸之經修飾核苷酸的實例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-胰腺胞嘧啶、5-(羧基羥基甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基胺基甲基-2-硫脲苷、5-羧基甲基胺基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、β-D-半乳糖基q核苷、肌苷、N6-異戊烯基腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鳥嘌昤、5-甲基胺基甲基尿嘧啶、5-甲氧 基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基q核苷、5'-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、威丁塞苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲基酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-胺基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w及2,6-二胺基嘌呤。為抑制細胞中之表現，可使用一或多種反義寡核苷酸。或者，可使用表現載體以生物方式產生反義核酸，其中在反義定向上將核酸亞選殖至該表現載體中(即，自插入核酸轉錄之RNA可與目標靶核酸具有反義定向，其進一步闡述以下分部中)。

在又一實施例中，本發明之反義核酸係a-異頭核酸分子。a-異頭核酸分子與互補RNA形成特異性雙鏈雜合體，其中與常見a-單元相反，該等鏈彼此平行運行(Gaultier等人(1987)Nucleic Acids.Res.15：6625-6641)。反義核酸分子亦可包含2'-o-甲基核糖核苷酸(Inoue等人(1987)Nucleic Acids Res.15：6131-6148)或嵌合RNA-DNA類似物(Inoue等人(1987)FEBS Lett.215：327-330)。

在另一實施例中，本發明之反義核酸係調介RNAi之化合物。RNA干擾劑包括(但不限於)包括與靶基因或基因組序列同源之RNA分子的核酸分子、「短干擾RNA」(siRNA)、「短髮夾」或「小髮夾RNA」(shRNA)、及藉由RNA干擾(RNAi)干擾或抑制靶基因表現之小分子。RNA干擾係轉錄後靶基因沉默技術，其使用雙鏈RNA(dsRNA)降解含有與dsRNA相同序列之信使RNA(mRNA)(Sharp,P.A.及Zamore,P.D.287,2431-2432(2000)；Zamore,P.D.等人Cell 101,25-33(2000).Tuschl,T.等人Genes Dev.13,3191-3197(1999))。當內源核糖核酸酶將較長dsRNA裂解成較短21-或22-核苷酸長RNA(稱作小干擾RNA或siRNA)時，發生此過程。隨後較小RNA片段調介靶標mRNA的 降解。用於合成RNAi之套組可自(例如)New England Biolabs及Ambion購得。在一個實施例中，可採用用於反義RNA中之上述化學物質中之一或多者。

本發明方法中亦可使用編碼(例如)抑制血管發生之分子之核酸分子，可將該等核酸分子以適於在個體細胞中表現所編碼蛋白之形式引入個體中。抑制血管發生之實例性分子包括(但不限於)TSP-I、TSP-2、IFN-g、IFN-a、血管抑制素、血管內皮抑素、腫瘤抑素、癌抑素、VEGI、PEDF、血管抑制蛋白、及泌乳素2-甲氧基雌二醇之16kDa片段(關於綜述，參見Kerbel(2004)J.Clin Invest 114：884)。

舉例而言，將全長或部分cDNA序列選殖入重組表現載體中且使用標準分子生物技術將載體轉染至細胞中。舉例而言，可藉由使用聚合酶鏈反應(PCR)擴增或藉由篩選適當cDNA庫獲得cDNA。cDNA之核苷酸序列可用於設計可藉由標準PCR方法使cDNA擴增之PCR引物，或設計可使用標準雜交方法用於篩選cDNA庫的雜交探針。在cDNA之分離或擴增後，將DNA片段引入適宜表現載體中。

用於本發明本發明中之實例性生物劑包括(但不限於)吉非替尼(gefitinib)(易瑞沙(Iressa))、安美達(anastrazole)、已烯雌酚(diethylstilbesterol)、雌二醇(estradiol)、倍美力(premarin)、雷洛昔芬(raloxifene)、黃體酮、異炔諾酮(norethynodrel)、炔孕酮(esthisterone)、地美炔酮(dimesthisterone)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、乙酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、己酸羥孕酮(hydroxyprogesterone caproate)、炔諾酮(norethisterone)、甲基睪酮、睪酮、地塞米松(dexamthasone)、潑尼松(prednisone)、考的松(Cortisol)、舒汝美卓(solumedrol)、他莫昔芬、氟維司群(fulvestrant)、托瑞米芬(toremifene)、胺魯米特(aminoglutethimide)、睪內酯、屈洛昔芬(droloxifene)、阿那曲唑(anastrozole)、比卡魯胺 (bicalutamide)、氟利坦(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、戈舍瑞林(goserelin)、氟利坦、亮丙瑞林、曲普瑞林(triptorelin)、胺魯米特、米托坦、戈舍瑞林、西土西單抗、埃羅替尼(erlotinib)、伊馬替尼(imatinib)、托西奠單抗、阿來組單抗、曲司佐單抗、吉妥珠單抗、利妥昔單抗、替坦異貝莫單抗(tiuxetan)、貝伐單抗、地尼白介素2(Denileukin diftitox)、達克珠單抗(Daclizumab)、干擾素α、干擾素β、抗-4-1BB、抗-4-1BBL、抗-CD40、抗-CD 154、抗-OX40、抗-OX40L、抗-CD28、抗-CD80、抗-CD86、抗-CD70、抗-CD27、抗-HVEM、抗-LIGHT、抗-GITR、抗-GITRL、抗-CTLA-4、可溶性OX40L、可溶性4-IBBL、可溶性CD154、可溶性GITRL、可溶性LIGHT、可溶性CD70、可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CTLA4-Ig、GVAX®及其組合，熟習此項技術者基於護理特定腫瘤或癌症之適當標準可容易地明瞭。可藉由運作地連接可溶形式之試劑與(例如)Ig-Fc區將試劑製為(例如)融合蛋白。

應注意，可組合投與一種以上(例如，1、2、3、4、5種)額外試劑與本發明之CoQ10調配物。舉例而言，在一個實施例中，可組合投與兩種化學治療劑與CoQ10。在另一實施例中，可投與化學治療劑、生物劑及CoQ10。

可使用不同形式之生物劑。該等形式包括(但不限於)諸如以下等形式：原型(proform)分子、不帶電分子、分子複合物、鹽、醚、酯、醯胺及諸如此類，其在移植、注射或以其他方式插入腫瘤中時被生物激活。

藉由以下實例進一步瞭解本發明。然而，彼等熟習此項技術者將容易地明瞭，具體實驗細節僅用於闡釋目的且並不意指限制本文所述之本發明，其係由後文申請專利範圍界定。任何專利、專利申請案、專利申請公開案及貫穿本說明書引用之參考文獻的內容的全文皆 以引用方式併入本文中。

實例

以下實例提供實例性調配物用於製備CoQ10之膠狀分散液。

實例1-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：3：0-SOP4.1)： (a)向93mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成CoQ10/水混合物(M1)；(b)向M1中添加3g DMPC(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成CoQ10/水/DMPC混合物(M2)；(c)於65℃下對M2施用7000rpm之高剪切混合機達2分鐘；(d)將微射流均質機室預加熱至65℃；(e)於65℃及28,000PSI下在微射流均質機中處理M2。

實例2-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：2：0-SOP4.2)： (a)向94mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加3g DMPC(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)將微射流均質機處理室預加熱至65℃；(e)於65℃及30,000PSI下在預加熱微射流均質機中處理M2。

實例3-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：3：1-SOP4.3)： (a)向92mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加3g DMPC(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)向M2中添加1g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；(e)隨後以8,000rpm對M3施用高剪切混合機；(f)隨後將微射流均質機室預加熱至65℃；(g)隨後於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理M3。

實例4-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：2：1-SOP4.4)： (a)向93mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加2g DMPC(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M2； (c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)隨後向經剪切M2混合物中添加1g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；(e)將微射流均質機預加熱至65℃；(f)隨後於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理M3。

實例5-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：3：1-SOP4.4)： (a)向92mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)隨後向M1中添加3g DMPC(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M2；(c)隨後於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)向經剪切M2混合物中添加1g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；隨後將微射流均質機處理室預加熱至65℃；隨後於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理混合物M3。

實例6-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：1：0-SOP4.4)： (a)向95mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加1g DMPC(粉末)並混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)將微射流均質機處理室預加熱至65℃；(e)於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理經剪切M2混合物。

實例7-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：1：1-SOP4.4)： (a)向94mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加1g DMPC(粉末)並混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)向經剪切M2混合物中添加1g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；(e)將微射流均質機處理室預加熱至65℃；(f)於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理M3混合物。

實例8-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：3：0.5-SOP4.4)： (a)向92 mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加3g DMPC(粉末)並混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)向經剪切M2混合物中添加0.5g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；(e)將微射流均質機處理室預加熱至65℃；(f)於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理M3混合物。

實例9-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：3：1.5-SOP4.4)： (a)向91.5mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加3g DMPC(粉末)並混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)向經剪切M2混合物中添加1.5g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；(e)將微射流均質機處理室預加熱至65℃；(f)於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理M3混合物。

實例10-調配物CoQ10/DMPC/P188(4：2：1.5-SOP4.4)： (a)向92mL 65℃水中添加4g CoQ10並混合10分鐘以形成混合物M1；(b)向M1中添加2g DMPC(粉末)並混合10分鐘以形成混合物M2；(c)於65℃下以8,000rpm對M2施用高剪切混合機達2分鐘；(d)向經剪切M2混合物中添加1.5g P188(粉末)並於65℃下再混合10分鐘以形成混合物M3；(e)將微射流均質機處理室預加熱至65℃；(f)於65℃及30,000PSI下在微射流均質機中處理M3混合物。

如自圖17可見，調配物4：3：0-SOP4.1混合物之處理在通過18次後產生約50nm之粒徑；調配物4：2：0-SOP4.2在通過18次後產生約60nm之粒徑；調配物4：1：0-SOP4.4在通過18次後產生約80nm之粒徑。

如圖18中所繪示，向混合物中添加泊洛沙姆188(P188)顯示，調配物4：1：1-SOP4.4在通過12次後產生約80nm之粒徑；調配物4：2：1- SOP4.4在通過12次後產生約50nm之粒徑；且調配物4：3：1-SOP4.4在通過12次後產生約40nm之粒徑。因此，DMPC/CoQ10與DMPC/P188係決定粒徑之關鍵因素。儘管不希望受限於任何特定理論，但據信P188軟化DMPC層並有利於較小大小之粒子初始形成。

在某些實施例中，用不同量之P188調節4：3及4：2之CoQ10/DMPC比。如圖19中所繪示，當CoQ10/DMPC比為4：3時，P188濃度對最終粒徑無明顯影響。

類似地，針對CoQ10/DMPC 4：2比改變P188濃度對粒徑具有不明顯影響，如圖20中所見。

以下實例提供實例性實施例，其證實與投與本文所提供CoQ10之膠狀分散液的CoQ10靜脈注射調配物有關的用途及方法。

實例11-輔酶Q10之pK的測定：在研究投藥之前， 使39隻4至6週齡之雌性SCID.CB 17小鼠適應3至5天。在投與當天之前，藉由平均體重將39隻小鼠分成13組，每組3隻。在第0天，對第1至6組投與單一劑量之如本文所述無泊洛沙姆之調配物(調配物1)。藉由靜脈注射調配物1以100mg/kg投與第1至6組，且在投藥2h、4h、8h、12h、24h及36h後取血漿及組織(脾、肝、胰腺、肺及腦)樣品。在第0天，對第7至12組投與單一劑量之如本文所述具有泊洛沙姆之CoQ10調配物(調配物2)。藉由靜脈注射調配物2以100mg/kg投與第7至12組，且在投藥2h、4h、8h、12h、24h及36h後回收血漿及組織(脾、肝、胰腺、肺及腦)樣品。第13組未接受治療。

藉由使用LC/MS/MS實施生物分析以對CoQ10在小鼠血漿、肝、肺、脾、胰腺及腦組織中之含量進行定量。靜脈內投與最長36小時後，對於小鼠血漿而言，CoQ10定量在1-600μg/mL範圍內，且對於小鼠組織而言在0.25-100μg/mL範圍內。圖22及23提供血漿中之CoQ10調配物1的濃度曲線。圖24及25提供血漿中之CoQ10調配物2的 濃度曲線。圖26及27分別提供肝中之調配物1及2的濃度。圖28及29分別提供肺中之調配物1及2的濃度。圖30及31分別提供脾中之調配物1及2的濃度。圖32及33分別提供胰腺中之調配物1及2的濃度。圖34及35分別提供腦中之調配物1及2的濃度。

此研究之結果證實，與包含泊洛沙姆之調配物2相比，不包含泊洛沙姆之調配物1之輔酶Q10在肝及脾中累積較多。該等結果指示，在無泊洛沙姆下由肝及脾自血液清除較多輔酶Q10，且在存在泊洛沙姆下由該等器官自血液清除較少輔酶Q10，且與泊洛沙姆在輔酶Q10調配物中作為調理作用降低劑之作用一致。

實例12-CoQ10靜脈注射調配物對肝癌之效應： 以動物模型檢查本發明之輔酶Q10調配物抑制肝腫瘤細胞增殖的能力。對24隻Fischer 344大鼠腹膜內注射惡性綠色瘤之肝純系。隨後將大鼠隨機分組，每組6隻大鼠。第1組用作對照，在星期一、星期三及星期五時用0.5mL磷酸鹽緩衝鹽水治療達三(3)週。第II組藉由腹腔內注射接受20mg輔酶Q10之無菌奈米分散液。此調配物含有存於PBS中之4重量%輔酶Q10、3重量% DMPC及1.5重量%泊洛沙姆188。在星期一、星期三及星期五時藉由腹腔內注射投與體積為0.5mL之調配物達三(3)週。第III組接受一次35mg/kg環磷醯胺。第IV組在星期一、星期三及星期五時接受0.5mL 20mg 4：3：1.5 CoQ10調配物達三(3)週。另外，其接受一次35mg/kg環磷醯胺。

對照組中之所有動物截至移植後第20天均由於肝轉移而死亡。在用無菌4：3：1.5 CoQ10靜脈注射奈米分散液調配物治療之組(第II組)中，50%大鼠存活且無疾病。另外50%存活38天或更長時間。在僅用化學療法治療之組(第III組)中，1隻大鼠保持無疾病，而其他三隻大鼠存活最長34天。在接受4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物及化學療法之組(第IV組)中，6隻大鼠中之5隻無疾病且一隻存活最長38天。

4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物證實更好安全特性。未在接受CoQ10之動物觀察到副作用，如由體重增加及行為證實。單獨4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物作為單一試劑顯示比單獨化學療法更顯著之功效。此外，若組合使用4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物與化學療法，則 對存活之效應具有協同性，從而產生83%存活。圖35繪示該等結果。

總之，CoQ10調配物證實優於化學療法之改良安全性、比單獨化學療法更有效之治療肝癌的顯著治療活性，並證實與化學療法治療肝癌之協同治療活性。

實例13--對肝腫瘤每日投與CoQ10靜脈注射調配物之功效： 對7日齡Fischer 344大鼠之組(n=30/組)腹膜內注射惡性綠色瘤的肝純系。開始6小時後，經由腹膜內注射每日如下對動物投藥達20天：以0.5、2、5、10、25及50mg/kg/天投與未處理、鹽水對照、媒劑對照(存於PBS中之DMPC及泊洛沙姆188)、或4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物。死亡率如下：未處理及鹽水對照中30/30(截至第29天)；以0.5mg/kg/天為29/30(截至第29天)；以2mg/kg/天為27或28/30(截至第44天)；以5mg/kg/天為24/30(截至第55天)；以10mg/kg/天為21/30(截至第46天)；以25mg/kg/天為15/30(截至第46天)；及以50mg/kg/天為13/30(截至第53天)。除與劑量有關之存活延長外，4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物延遲開始死亡之日期(即，未處理及鹽水對照係在約第15天，與之相比，在2、5、10、25及50mg/kg/劑量下分別為約第25、38、36、40及45天)並減小死亡率曲線之斜率。

實例14-CoQ10靜脈注射調配物對肺腫瘤之效應： 以動物模型檢查本發明之輔酶Q10調配物抑制肺腫瘤細胞增殖的能力。對24隻Fischer 344大鼠腹膜內注射惡性綠色瘤之肺純系。隨後將大鼠隨機分組，每組6隻大鼠。第1組用作對照，在星期一、星期三及星期五時用0.5mL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)治療達三(3)週。第II組接受20mg 4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物，其以4：3：1.5調配物中之40mg/mL輔酶Q10的濃度包含於無菌奈米分散液中。在星期一、星期三及星期五時藉由腹腔內注射投與體積為0.5mL之調配物達三(3)週。第III組藉由腹腔內注射接受一次35mg/kg環磷醯胺。第IV組接受20mg 4：3：1.5 CoQ10靜 脈注射調配物(與第II組所用者相同之調配物)且在星期一、星期三及星期五時腹腔內注射0.5mL體積達三(3)週，且另外接受一次35mg/kg環磷醯胺。

對照組中之所有動物截至移植後第21天均由於肺轉移而死亡。在用4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療之組(第II組)中，50%大鼠存活且無疾病。另外50%存活40天或更長時間。在僅用化學療法治療之組(第III組)中，1隻大鼠無疾病，而4隻大鼠存活至第35天。一隻動物在對照範圍內死亡且因此將其視為非反應者。在接受4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物與化學療法之組合治療的組中，6隻大鼠中之6隻無疾病。

4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物證實更好安全特性。未在接受CoQ10之動物觀察到副作用，如由體重增加及行為證實。單獨4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物作為單一試劑顯示比單獨化學療法顯著且更大之功效。若組合使用4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物與化學療法，則治療活性具有協同性，從而產生100%存活。圖36繪示該等結果。

總之，4：3：1.5 CoQ10調配物證實優於化學療法之改良安全性、比單獨化學療法顯著且更大之治療肺癌的治療活性，並證實與化學療法治療肺癌之協同治療活性。

實例15--藉由CoQ10靜脈注射調配物活體外誘發細胞之細胞凋亡： 使用三個凋亡分析：(1)耗氧率(OCR)、(2)卡斯蛋白酶3活性分析及(3)卡斯蛋白酶3之西方墨點(Western Blotting)分析來確認CoQ10靜脈注射調配物對癌細胞之效應。

對於耗氧率分析而言，使用Seahorse裝置測定細胞系中之耗氧率。使用市售套組根據製造商之說明書使用比色方法測定卡斯蛋白酶3活性。藉由西方墨點分析使用專用於檢測卡斯蛋白酶3蛋白之抗體測定作為細胞凋亡之量度的卡斯蛋白酶3的表現增加。

使用OCR作為讀出值檢查兩種CoQ10靜脈注射調配物之效應。第一調配物(無泊洛沙姆)包括4% CoQ10、3% DMPC及93%水。第二調配物(具有泊洛沙姆)包括4% CoQ10、3% DMPC、1.5%泊洛沙姆P188及91.5%水。在開始治療6小時後針對每一細胞系之未治療「僅介質」對照評價兩種調配物對OCR之效應。兩種調配物使用最終濃度為50μM及100μM之CoQ10。

如圖25至28中所繪示，此研究之結果證實，高度癌症性或轉移性細胞系對4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療尤其敏感。所測試之大多數癌細胞系具有對4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物治療敏感之OCR值。CoQ10靜脈注射調配物降低HepG2細胞(50μM及100μM)、MCF-7細胞(100μM)、PC-3細胞(50μM及100μM)及PaCa2細胞(50μM及100μM)中之OCR。非轉移性細胞系LnCap及正常細胞系(例如HDFa)對CoQ10靜脈注射調配物不敏感。

在利用與上文所用相同之兩種CoQ10靜脈注射調配物(第一調配物包括4% CoQ10、3% DMPC及93%水，且第二調配物包括4% CoQ10、3% DMPC、1.5%泊洛沙姆P188及91.5%水)治療後的不同細胞系中測定卡斯蛋白酶3含量。具體而言，用CoQ10靜脈注射調配物治療PC-3、HepG2、MCF-7、HDFa及MIAPACA2細胞並治療24小時後進行收穫。該等細胞之整個細胞沉澱用於西方墨點法。利用Lamelli上樣染料(LDS)及水製備等效於10μg蛋白之樣品體積並將其在4-12% Bis-Tris新NuPAGE凝膠上在如下文詳述之兩個10泳道凝膠(每一泳道荷載15μL)上運行。

對於凝膠1(圖29及30)而言，泳道1含有僅用介質處理之MCF-7細胞的樣品，泳道2含有用無泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之MCF-7細胞的樣品，泳道3含有用包含泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之MCF-7細胞的樣品，泳道4含有僅用介質處理之HDFa細胞的樣品，泳道5含 有用無泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之HDFa細胞的樣品，泳道6含有用包含泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之HDFa細胞的樣品，泳道7含有僅用介質處理之Paca2細胞的樣品，泳道8含有用無泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之Paca2細胞的樣品，泳道9含有用包含泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之Paca2細胞的樣品，且泳道10含有標準蛋白大小標記。

對於凝膠2(圖31及32)而言，泳道1含有蛋白標記，泳道2含有僅用介質處理之PC3細胞的樣品，泳道3含有用無泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之PC3細胞的樣品，泳道4含有用包含泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之PC3細胞的樣品，泳道5含有僅用介質處理之HepG2細胞的樣品，泳道6含有用無泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之HepG2細胞的樣品，泳道7含有用包含泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之HepG2細胞的樣品，泳道8係空白且泳道9及10二者均含有蛋白大小標記。

使用1X MOPS緩衝液使用NOVEX Xcell Surelock系統利用200V下之電壓使凝膠運行50分鐘。隨後使用NOVEX Xcell Surelock濕轉移方案以35V之電壓將凝膠轉移1小時。將墨點用Invitrogen之Simply Blue Safestain(LC6065)染色5小時。

實施西方墨點分析以測定以上樣品中之卡斯蛋白酶3及β肌動蛋白的含量。對於卡斯蛋白酶3之檢測而言，轉移後，將每一墨點置於2層Whatman過濾紙之間並乾燥15分鐘至20分鐘。將墨點用甲醇活化5秒，用水洗滌5分鐘，並用TBST洗滌15分鐘。於室溫下用存於TBS-T中之5%封阻劑將墨點封阻1小時且隨後用TBS-T洗滌3次(1X-15'，2X 5'(每次))並藉由在4℃及振盪下培育過夜用存於5% BSA中之卡斯蛋白酶3之一級抗體(Santacruz sc7272)(以1：200稀釋)探測。

在與卡斯蛋白酶3之一級抗體一起培育過夜後，將墨點用TBS-T洗滌3次(1X-15'，2X 5'(每次))，並在室溫下振盪的同時用二級抗體 (抗小鼠，1：10,000稀釋)探測1小時。用TBS-T將墨點洗滌3次(1X-15'，2X 5'(每次))，與ECF試劑一起培育5分鐘且隨後用5100 Fuji雷射掃描儀以25μM解析度、16位元、綠色雷射在400V及500V下掃描每一墨點。

為檢測樣品中之肌動蛋白，藉由以下汽提卡斯蛋白酶3墨點：與甲醇一起培育30分鐘，之後用TBS-T洗滌兩個10分鐘，隨後於50℃下與汽提緩衝劑一起培育30分鐘，且之後用100mL或更多TBS-T洗滌兩次(每次30分鐘)。在雷射掃描儀中掃描墨點以確認完全汽提。將墨點用甲醇活化5秒，用水洗滌5分鐘，並用TBST洗滌15分鐘。於室溫下用存於TBS-T中之5%封阻劑將墨點封阻1小時且隨後用TBS-T洗滌3次(1X-15'，2X 5'(每次))並於室溫及振盪下用存於5% BSA(Sigma編號A5316純系AC 74)中之肌動蛋白的抗體(以1：5000稀釋)探測1小時。

在與肌動蛋白之一級抗體一起培育後，將膜用TBS-T洗滌3次(1X-15'，2X 5'(每次))，並在室溫下振盪的同時用二級抗體(抗小鼠，1：10,000稀釋)探測1小時。將墨點用TBS-T洗滌3次(1X-15'，2X 5'(每次))，與ECF試劑一起培育5分鐘且隨後用5100 Fuji雷射掃描儀以25μM解析度、16位元、綠色雷射在400V及500V下掃描每一墨點。

凝膠1之最終西方墨點示於圖29(卡斯蛋白酶3)及圖26(肌動蛋白)中，且凝膠2之最終西方墨點示於圖31(卡斯蛋白酶3)及圖32(肌動蛋白)中。對卡斯蛋白酶3之含量進行定量，標準化至肌動蛋白且所得數據提供於圖33至36中。

此研究之結果顯示，在用包含泊洛沙姆之CoQ10調配物處理之處理24小時後的PC3(圖33)及MiaPACA2(圖34)細胞中觀察到標準化卡斯蛋白酶3蛋白含量增加。未標準化卡斯蛋白酶3蛋白在處理24小時後之HepG2細胞中的含量繪示於圖35中，此乃因未觀察該等樣品之肌動蛋 白。HepG2下區帶之增大與具有上區帶之PACA2(圖34)及PC-3(圖33)細胞中觀察者極為類似。HDFa細胞中僅檢測到下區帶，且此區帶之強度隨著CoQ10處理而減小(圖36)，類似於利用HepG2中之上區帶觀察到之圖案(圖35)。總之，在用CoQ10處理後，在至少兩種PACA2及PC-3細胞中、且可能亦在HepG2細胞中觀察到卡斯蛋白酶3蛋白含量增大，表明誘發該等細胞中之細胞凋亡。在正常細胞中，在暴露於CoQ10靜脈注射調配物後，未觀察到誘發細胞凋亡。

實例16-CoQ10靜脈注射調配物對胰腺癌細胞系之效應： 關於NSG小鼠使用MiaPACA2胰腺細胞系。將小鼠在其圈養之無菌環境中麻醉。在動物達成外科麻醉水平時，放平小鼠，且觸摸腹部區域。胰腺位於胃後方、脾與胃之間，二者均係可觸及之器官。其後，藉由對動物進行輕柔操作以到達胃後方之區域在胰腺中注射10X1065細胞。所有該等程序均係在無菌條件下在生物安全櫃中實施，且亦在嚴格無菌條件下圈養動物以避免機會性感染。在注射細胞後，每日密切監測動物。隨後將動物隨機分成8組，其接受不同劑量之CoQ10靜脈注射調配物。第一組未治療，第2組僅接受鹽水；第3組接受賦形劑對照；第4組接受0.5mg/kg如本文所述之4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物；第5組接受5mg/kg如本文所述之4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物；第6組接受10mg/kg如本文所述之4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物；第7組接受25mg/kg如本文所述之4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物且第8組接受50mg/kg如本文所述之4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物。經由尾部靜脈靜脈內投與調配物，其中每隔一天投藥，每週三次達最長28天。結果之概述繪示於以下圖表(圖37至44)中。

未治療及鹽水治療對照組中之所有動物截至第21天均死亡。賦形劑治療之動物截至第36天死亡。注意到，用CoQ10靜脈注射調配物治療後，劑量有關之死亡率改良。0.5、5及10mg/kg/劑量之劑量分別 截至第31天、41天及56天導致完全死亡。於25及50mg/kg/劑量下，未觀察到完全死亡率，其中存活3隻及11隻動物。於5mg/kg/劑量及高於5mg/kg/劑量下存活率明顯增大，且於該等劑量下健康得以改良。另外，於25及50mg/kg/劑量下，分別存活動物中之3隻及4隻具有腫瘤。共投與50mg/kg之CoQ10靜脈注射調配物與多柔比星可顯著改良存活率(與多柔比星組中之30隻中0隻存活者相比，在60天時30隻動物中之25隻存活)以及提高無腫瘤之動物數(利用CoQ10靜脈注射調配物為25/30)。

實例17-與CoQ10靜脈注射調配物之組合療法及輔助化學療法： 多柔比星(一種強效化學治療劑)在本身腹膜內投與齧齒動物中時可致死。組合投與CoQ10靜脈注射調配物與多柔比星。如圖45及46中提供之圖表中可見，在組合投與多柔比星與4：3：1.5 CoQ10靜脈注射調配物時，齧齒動物之存活率比單獨投與多柔比星顯著增大。

如圖58中可見，靜脈注射之COQ10不僅是添加劑，而且亦保護免受多柔比星毒性。死亡率高度在統計學上顯著較低，僅幾個在第41天時開始死亡。然而，30隻動物中之25隻仍存活且截至第60天仍無癌症，其中六隻動物在第60天時呈現小的腫瘤。該等發現證實，所投與輔酶Q10調配物發揮有效輔助效應。

實例18--CoQ10對乳癌之效應： 在另一活體外研究中，評價CoQ10(50μM及100μM)在兩種乳癌細胞系(MCF-7及Sk-BR3)中對Bcl-2家族中各成員(bcl-2、bcl-xl、bid、bad、bak、mcl-1、bim及bax)、p53及卡斯蛋白酶4、8、12之效應。已有人提出Bcl-2蛋白家族係產生針對癌症療法之抗性之主要促進因素。CoQ10上調促細胞凋亡成員及BH3亞家族成員(bid、bad、bax、bim及bak)之蛋白表現，顯著降低抗細胞凋亡成員(bcl-xl、mcl-1及bcl-2)之含量、並促進細胞凋亡(藉由卡斯蛋白酶3、6及9之活化來量測)，從而恢復乳癌中之細胞凋亡潛力而 不對正常乳房組織造成任何不良作用。

實例19--CoQ10靜脈注射調配物之吸收/藥物動力學： 在靜脈內投與100mg/kg兩種CoQ10靜脈注射調配物中之一者後，測定CoQ10靜脈注射調配物之藥物動力學(表16至18)。調配物1不含有泊洛沙姆188，但調配物2含有泊洛沙姆188。每一調配物組中有18隻雌性小鼠，且在投藥2、4、8、12、24及36hr後處死三隻小鼠進行取樣。對於兩種調配物而言，血漿性質無明顯不同。測定約38hr之t_1/2值。在三隻未治療小鼠之組中無CoQ10靜脈注射調配物之可量測的血漿濃度。

在兩種毒性研究之毒動學評價中測定Sprague Dawley大鼠中之CoQ10靜脈注射調配物的藥物動力學參數。查理士河(Charles River)研究第20000711號係具有後續7天治療期之遞增劑量研究。對於遞增劑量期中之毒動學評價(表18)而言，九隻雄性及九隻雌性大鼠之組接受100、250、750及1,000mg/kg CoQ10靜脈注射調配物作為單次濃注靜脈注射。對於多重劑量期(表19)而言，九隻雄性及九隻雌性之組每三天接受250或500mg/kg CoQ10靜脈注射調配物作為濃注靜脈注射達7天。對於遞增劑量期且在多重劑量期之第7天，在投藥後5分鐘及15分鐘、及在投藥後1hr、4hr及24hr後自三隻雄性及三隻雌性之亞群收集樣品。對於接受100、250或500mg/kg之動物而言，濃度中之許多高於1mg/mL，且對於接受750或1,000mg/kg之動物而言，相當多高於10mg/mL，其中剩餘樣品中之許多高於1mg/mL。血漿特性係靜脈內投與特有的。儘管C_max及AUC_0-t通常隨著劑量增大，但有例外，且無明確線性劑量依賴性，其係利用靜脈內投與所期望的。t_1/2之估計值在0.8hr至10.0hr範圍內，且對性別或劑量物明顯依賴性。

在第二大鼠毒性研究(查理士河研究第20000328號)中，以1.0mL/min之速率以短靜脈輸注形式投與CoQ10，每週三次達四週。對於毒動學評價而言，九隻雄性及九隻雌性之三組接受62.5、125及250mg/kg CoQ10靜脈注射調配物(表20)。在第1天及第26天，在投藥後5分鐘及15分鐘、1hr、4hr、24hr及48hr時自三隻雄性及三隻雌性之亞群組採集樣品。於CoQ10靜脈注射調配物中之峰值全身暴露(如由C_max量測)及總暴露(如由AUC_0-t量測)隨著劑量增大而增大。C_max之增大相對於劑量接近線性，且AUC_0-t之增大稍微大於與劑量成比例之值。在第1天與第26天之間，C_max及AUC_0-t降低。在前兩個取樣時間即0.083或0.25hr時出現T_max。t_1/2可具有小劑量依賴性增大。無明顯性別差異。

在兩個毒性研究之毒動學評價中測定CoQ10靜脈注射調配物在小獵犬中之藥物動力學參數。查理士河研究第20000713號係具有後續5天至7天治療期之遞增劑量研究。在研究之遞增劑量期中(表16至18)，一組兩隻雄性及兩隻雌性狗接受250mg/kg CoQ10靜脈注射調配物作為單次濃注靜脈注射。在研究之多重劑量期(表19)中，在第1、3及5天，一組兩隻雄性及兩隻雌性狗接受125mg/kg CoQ10靜脈注射調配物作為濃注靜脈注射。對於第5天之雄性而言，CoQ10靜脈注射調配物之量係中間值，且在第7天時對雄性重新投藥。在遞增劑量期之第1天及多次投藥期之第1天及第5天(雌性)或第7天(雄性)時，在投藥後5分鐘及15分鐘、及1hr、4hr及24hr時採集血漿樣品。如藉由C_max及AUC_0-24所量測，250mg/kg之暴露約係125mg/kg的兩倍。250mg/kg(5.94hr至8.16hr)可能比125mg/kg(2.07hr至4.87hr)具有更長半衰期。在隔日投藥期間，雄性第1天及第7天及雌性第1天及第5天之參數類似。對於藥物動力學參數中之任一者而言，無一致性別差異。

在第二狗毒性研究(查理士河研究第20000334號)中，以5.0mL/min之速率以短靜脈輸注形式投與CoQ10靜脈注射調配物，每週三次達四週。五隻雄性及五隻雌性狗之四個組接受媒劑、31.25、62.5或125mg/kg CoQ10靜脈注射調配物(表20)。在第1天及第26天投藥前、投藥後5分鐘、15分鐘及30分鐘、及1hr、2hr、4hr、8hr及24hr時採集血漿樣品。在兩個取樣日期，兩種性別之C_max、AUC_0-t及AUC_0-∞皆隨劑量而增大。C_max之增加在第1天大於與劑量成比例之值，但在第26天接近與劑量成比例之值。AUC_0-t之增加在第1天及第26天皆大於與劑量成比例之值，然而，非線性量值在第26天較小。在第1天與第26天之間，低劑量及中劑量組之平均C_max及AUC_0-t具有輕微或較小變化，表明兩個較低劑量組之暴露變化極少。對於高劑量組而言，第 1天與第26天之間之平均C_max及AUC_0-t二者均降低。除具有0.5hr之T_max值之一隻高劑量雌性外，所有其他T_max值均出現在第一或第二取樣時間。對於兩個日期之低劑量及中劑量組及第26天時之高劑量動物而言，平均t_1/2值在1.91hr至3.62hr範圍內。對於第1天時之高劑量雄性及雌性而言，平均t_1/2值分別係3.92hr及4.14hr。對於藥物動力學參數中之任一者而言，無明顯性別差異。

使用亞成年雄性短尾猴實施非-GLP四週毒性研究(The Mannheimer Foundation Study 2010-01)。四隻短尾猴之組藉由靜脈注射接受31.25、62.5或125mg/kg CoQ10，每週三次達四週。在投藥之第一天時在投藥前、及投藥後0.25hr、1hr、6hr、24hr及48hr採集毒動學分析用血漿樣品。在第7、14、21及29天採集投藥前、而非投藥後樣品。主要結果顯示，C_max及AUC_0-t隨著劑量增大而增大。C_max之增大稍微大於與劑量直接成比例之值。AUC_0-t之增大看起來顯著大於與劑量直接成比例之值，但非線性可部分反映取樣時間表。T_max出現在第一取樣時間0.25hr時，在1hr時具有T_max之一隻動物除外。由於在6hr與24hr之間無取樣時間，故不可得出t_1/2之確定結論。

大鼠、狗及短尾猴中之四週毒性研究顯示C_max及AUC_0-t隨著劑量增大。觀察到一些增大係非線性的，但觀察到其他增大係線性的。大鼠及狗研究(其包括兩種性別之動物)未揭示藥物動力學存在任何明顯性別差異。

在單次投與調配物1或2中之100mg/kg CoQ10後，自小鼠採集肝、肺、脾、胰腺及腦之樣品(表21至23)。在投藥2hr、4hr、8hr、12hr、24hr及36hr後採集肝、肺、脾及胰腺之樣品。在投藥12hr、24hr及36hr後採集腦之樣品。亦自未經治療之小鼠採集所有組織之樣品。未經治療之小鼠之樣品均不具有任何可量測之CoQ10濃度。對 於調配物1及調配物2而言，投藥後樣品之結果類似。組織之結果指示，CoQ10靜脈注射調配物由肝及脾高度攝取，由肺中度攝取，且由胰腺極少攝取。關於腦之極有限數據指示，至少自12hr至36hr，可能腦含量類似於血漿濃度。

在查理士河研究第20000328號中，在每週三次靜脈內投與0、62.5、125或250mg/kg/劑量CoQ10靜脈注射調配物達四週結束約72hr後自大鼠採集肝、肺、胰腺及腦之樣品(表21至23)。在對照組之組織的任一者中無可量測之CoQ10靜脈注射調配物濃度。在投藥72hr後，在肝中具有高濃度，其具有大約線性劑量依賴性。肺及胰腺中之濃度比肝中低。僅兩隻高劑量雄性在腦中具有可量測之CoQ10靜脈注射調配物濃度；所有其他動物均不具有可量測之濃度。無組織濃度之明顯性別差異。

在查理士河研究第20000334號中，在每週三次靜脈內投與0、31.25、62.5或125mg/kg/劑量CoQ10達四週結束約72hr後自狗採集肝、肺、胰腺及腦之樣品(表21至23)。在對照組之肺、胰腺或腦樣品中無可量測之CoQ10靜脈注射調配物濃度。對照組中之兩隻雄性在肝樣品中具有低的CoQ10靜脈注射調配物含量，表明內源CoQ10靜脈注射調配物之低含量。投與72hr後，在來自經CoQ10靜脈注射調配物治療之狗的肝樣品中具有高濃度。平均濃度具有大約線性劑量依賴性。肺中之濃度比肝中之濃度小1%。胰腺或腦樣品均不具有可量測濃度。無組織濃度之明顯性別差異。

圖47顯示對於雄性及雌性大鼠及狗之CoQ10靜脈注射調配物之平均肝濃度對劑量。其顯示，對於大鼠及狗而言，劑量依賴性類似，且對於每一物種而言無明顯性別差異。

大鼠、狗中之四週毒性研究顯示C_max及AUC_0-t隨著劑量增大。一些增大觀察到非線性，但其他觀察到線性。大鼠及狗研究(其包括兩種性別之動物)未揭示藥物動力學存在任何明顯性別差異。

小鼠中之組織分佈研究的結果指示，CoQ10靜脈注射調配物由肝及脾高度攝取，由肺中度攝取，且由胰腺極少攝取。關於小鼠腦之極有限數據指示，至少自12hr至36hr，可能腦含量類似於血漿濃度。 大鼠及小鼠中之分佈之公開研究一般與來自小鼠中之CoQ10靜脈注射調配物之研究的有限數據一致。

在四週治療時期中之最後一次投藥72hr後採集的屍檢樣品顯示，在肝中具有CoQ10靜脈注射調配物之高濃度，在肺中具有較低濃度，在胰腺具有低(大鼠)或不可量測(狗)含量，且在每一物種之腦中無可量測之含量。對於大鼠及狗而言，平均肝濃度之劑量依賴性類似。無組織濃度之明顯性別差異。

實例20--大鼠中之CoQ10靜脈注射調配物的單劑量毒理學研究： 在大鼠中之單劑量毒性研究中，Sprague-Dawley大鼠(n=3/性別/組)經由尾部靜脈以100mg/kg、250mg/kg、750mg/kg(使用45.9mg/mL調配物)及750mg/kg及1000mg/kg(使用80mg/mL調配物)接受CoQ10調配物之單次靜脈內注射(查理士河研究第20000711號；表24)。觀察投藥三天後之動物。一個額外組(3/性別)僅接受媒劑(3% DMPC及1.5%泊洛沙姆188)。類似地治療額外9隻/性別/組並使用其進行毒動學研究。所評價參數包括死亡率及治療反應、詳細檢查、體重、食物消耗、血液學及臨床化學、眼觀病理學及器官重量。對除750mg/kg(45.9mg/mL)外之所有組中之動物的有限數量組織(心臟、腎、肝、肺、胰腺、變色皮膚樣品、淋巴結)實施組織病理學研究。每次投藥後評價毒動學。

以100mg/kg及250mg/kg(使用45.9mg/mL調配物)治療之動物在單劑量後並不顯示明顯測試物件有關之效應，且血液學數據通常不顯著。750mg/kg及1000mg/kg之劑量(使用80mg/mL調配物)產生死亡(於750mg/kg下每一性別有兩種動物且於1000mg/kg下兩隻雌性)。以750mg/kg給予45.9mg/mL調配物之一隻雌性亦死亡。該等動物在投藥當天似乎正常，但第二天發現死亡或因垂死而處死。

對體重或食物消耗無一致效應。臨床化學數據亦不顯著。

於750mg/kg及1000mg/kg下之屍檢發現顯示，胸腔中有流體且肝變色；於100mg/kg及250mg/kg下注意到淋巴結變色。以750mg/kg及1000mg/kg治療且死亡之動物的組織病理學評價揭示胸腔內流體、注射位點損傷及組織變色。在750mg/kg下死亡之兩隻雄性而非在下死亡之兩隻雌性中觀察到腎小球中之纖維蛋白沈積。在兩個劑量下死亡之動物中觀察到肺中之纖維蛋白沈積。在750mg/kg下死亡之一隻動物中觀察到肝壞死。在該兩個劑量下，除注射位點處之血管炎症外，存活者中之組織通常正常。除腎中之嗜酸性結晶(一隻雌性)、肺中之肺泡上皮增生(一隻雌性)及胰腺中之最小炎症(一隻雌性)外，媒劑處理之動物的評價通常不顯著。該等變化可能相同。

實例21--狗中之CoQ10靜脈注射調配物的單劑量毒理學研究： 小獵犬(n=1或2/性別)以250mg/kg及125mg/kg以緩慢濃注靜脈內注射形式接受單劑量之注射用無菌CoQ10奈米懸浮液(查理士河實驗室研究第20000713號；表24)。為在於250mg/kg下(使用含有6% DMPC及3%泊洛沙姆188之媒劑)觀察到顯著毒性之後評價媒劑之可能效應，用媒劑(6% DMPC及3%泊洛沙姆)、「完全」媒劑(3% DMPC及1.5%泊洛沙姆188)、或PBS/泊洛沙姆(不可製備DMPC存於PBS中之適宜調配物)處理狗之額外組。基於濃度為45.9mg/mL之CoQ10調配物，250mg/kg劑量及媒劑之初始注射速率係5.44mL/kg。基於濃度為35.6 mg/mL之CoQ10調配物，125mg/kg劑量之注射速率係3.51mL/kg。評價參數包括死亡率及治療反應、詳細檢查、體重、食物消耗、血液學及生物化學、眼觀病理學、及器官重量及有限組織病理學(投與250mg/kg、媒劑及完全媒劑之狗的心臟、腎、肝、肺、胰腺、變色皮膚)。每次投藥後測定毒動學。

投與250mg/kg之兩隻雄性及兩隻雌性在第2天由於明顯不良臨床體徵而垂死處死。為評價媒劑之可能作用，將媒劑投與另一組之1隻/性別。觀察到之反應與利用250mg/kg下治療之動物觀察者相同，包括垂死安樂死，此表明此劑量之媒劑決定一些(若並非所有)所注意效應。當以5.44mL/kg之相同速率投與至另一雄性及雌性時，此得以確認。將PBS及泊洛沙姆188投與至另一雄性及雌性狗不產生該等效應，此表明具有較高濃度賦形劑之媒劑調配物中的DMPC係產生效應之組份。在1隻/性別之第五組中，藥物調配物係使用3.51mL/kg之減少劑量體積以125mg/kg給予。效應限於嘔吐及軟大便，但動物存活。

僅在投與250mg/kg、媒劑及完全媒劑之動物中注意到對體重、食物消耗、臨床病理學(溶血)、腎、胃腸道、膽囊及膀胱之眼觀病理學變化、及與腎及肝中之溶血一致之微觀變化的不良作用。在投與PBS/泊洛沙姆188或125mg/kg之狗中未注意到發現。

毒動學數據顯示，C_max及AUC與劑量成比例地增大，且於250mg/kg/劑量下比於125mg/kg/劑量下半衰期稍微延長。

實例22--大鼠中之CoQ10靜脈注射調配物的重複投藥獨立性研究： 在大鼠中之一週重複投藥研究中，5隻大鼠/性別之兩組每3天接受250mg/kg及500mg/kg，總共三次投藥(查理士河實驗室研究第20000711號；表25)。評價參數包括死亡率及治療反應、詳細檢查、體重及眼觀病理學(針對死亡之動物)。未對該等動物實施組織病理學研究。在治療之最後一天評價毒動學。於250mg/kg/劑量下未觀察到 不良臨床體徵。於500mg/kg/劑量下，四隻動物死亡或處於垂死狀況而被處死：發現兩隻雄性在第2天死亡，一隻雌性在第3天垂死而安樂死(體溫降低及活性減小之臨床體徵)，且發現一隻雌性在第6天死亡。於500mg/kg/劑量下之存活者不顯示不良臨床體徵。兩個劑量下之動物截至第4天通常維持(雄性)或增加(雌性)體重，且其後經歷稍微體重減輕。血液學數據指示，於500mg/kg/天下網狀細胞及不同白血細胞類型增加。於兩個劑量下在一些動物中觀察到輕微多染性細胞增多症及/或紅血細胞大小不等症。在治療時期(單次投與)結束時，在接受500mg/kg/劑量之動物中注意到ALT、AST、GGT及尿氮之值增大以及總蛋白、白蛋白及球蛋白減少。在屍檢時，觀察到變色淋巴結、皮膚之皮下層變色及灰色肝以及注射位點損傷。與250mg/kg/劑量下之動物相比，注意到胸腺、附睪、前列腺、精囊腺、卵巢及子宮之重量減小，以及雌性之肝重量增大。未實施組織病理學研究。

毒動學數據顯示，一般而言，CoQ10之血漿濃度、C_max及AUC_0-t值隨劑量增大而增大。基於該等結果，選擇250mg/kg/劑量作為確認研究中之高劑量。

實例23--大鼠中之CoQ10靜脈注射調配物的4週重複投藥毒理學研究： 年輕成年Sprague Dawley大鼠(n=10/性別/組)藉由靜脈內注射以0、62.5、125及250mg/kg之劑量每週三次接受媒劑(含有泊洛沙姆188及DMPC之PBS)或測試物件(查理士河實驗室研究第20000328號；表26)。每一組中包括額外5大鼠/性別且在治療後維持2週恢復期。提供具有靶濃度為40mg/mL之CoQ10的測試物件之單一批料(編號0494-02-021)用於該研究。分別使用1.56mL/kg、3.13mL/kg及6.25mL/kg之劑量體積達成62.5mg/kg、125mg/kg及250mg/kg之劑量。投與與高劑量組相同劑量體積之媒劑。另外，9隻動物/性別之三個組用作毒動學(TK)動物且以與主要研究組相同之方式接受測試物件。評價參數包括籠旁(cage side)觀察、臨床觀察、體重、食物消耗、眼科學、臨床病理學評價(血液學、凝結測試、臨床化學及尿液分析)、眼觀病理學及器官重量。對在治療期結束時處死之動物的對照及高劑量組中之所有組織、及低劑量及高劑量組中之動物的骨髓、腎、肝、下頜及腸系膜淋巴結及脾實施組織病理學研究。恢復性處死之動物的檢查限於彼等顯示肉眼可見損傷之組織且包括肝及淋巴結。在第1天及第28天(最後一次投藥後)投藥5分鐘、15分鐘及60分鐘及4小時、24小時及48小時後自三隻TK動物/性別/組之群組採集血液用於測定測試物件之血漿濃度。

所有動物均存活至最終安樂死。未觀察到對臨床觀察、眼科學、血液學或尿液分析參數之測試物件有關的不良作用。觀察到以高劑量及在較低程度上以中等劑量治療之動物體重增加減少及食物消耗減少。在非治療期結束時觀察到稍微恢復。

血液學數據之評價揭示，主要限於高劑量雄性之紅細胞參數輕微但不一致地減小。未有意義地影響網狀細胞。往往在恢復期持續之高劑量動物中，活化部分促凝血酶原激酶時間稍微較長。僅在最高劑量下觀察到總白血細胞計數提高(亦由嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞或淋巴細胞增加反映)。臨床化學數據揭示，對於高劑量雄性而言，在治療期結束時AST、ALT、GGT及膽固醇之值增大，且在恢復期結束時更顯著。對於雌性而言，僅在恢復期結束時觀察到增大。

在屍檢(最終及恢復)時，測試物件有關之肉眼可見之變化包括於62.5mg/kg/劑量及高於62.5mg/kg/劑量下肝之灰色變色及多重淋巴結之灰色變色/增大、於125mg/kg/劑量及高於125mg/kg/劑量下脾增大、及於250mg/kg/劑量下灰色腎上腺、灰色卵巢及皮下皮膚變色。在最終及恢復性屍檢時，於250mg/kg/劑量下脾及肝重量增大。

在第29天計劃終止時測試物件有關的組織病理學包括腎上腺皮質之輕微至中度空泡變性(250mg/kg/劑量)、雄性胸骨骨髓中之最小至輕度紅細胞增生(

125mg/kg/劑量)、注射位點之輕度至顯著單核細胞浸潤(250mg/kg/劑量)、最小至輕度肝細胞空泡變性(

62.5mg/kg/劑量)、肝之最小至中度組織細胞浸潤(

62.5mg/kg/劑量)、多重淋巴結之最小至中度組織細胞浸潤(

62.5mg/kg/劑量)、雌性卵巢之輕度至中度組織細胞浸潤(250mg/kg/劑量雌性)、雌性真皮及/或皮下組織之輕度至中度組織細胞浸潤(

125mg/kg/劑量)、及雄性(

125mg/kg/劑量)及雌性(

62.5mg/kg/劑量)之脾之最小至中度組織細胞浸潤。在 恢復性動物中，注意到與主要研究動物中觀察者類似之測試物件有關的損傷；該等變化之嚴重性遵從劑量反應。發現包括：於

62.5mg/kg/劑量下腎上腺皮質之最小至顯著空泡形成(雄性及雌性)、於

125mg/kg/劑量下最小至中度局灶性或多灶性肝壞死(雄性及雌性)、於

62.5mg/kg/劑量下肝之最小至中度組織細胞浸潤及空泡形成(雄性及雌性)、於

62.5mg/kg/劑量下淋巴結之最小至中度組織細胞浸潤(雄性及雌性)、於

62.5mg/kg/劑量下脾之最小至顯著組織細胞浸潤(雄性及雌性)、及於

62.5mg/kg/劑量下卵巢之最小至中度組織細胞浸潤(雌性)。在若干器官/組織中，尤其於125及250mg/kg/劑量下恢復性動物中觀察到之變化的嚴重性比最終屍檢(包括腎上腺、肝及額外淋巴結(髂、腎、胰腺、頸、膕、縱隔及/或臂)時更顯著。

毒動學分析揭示，C_max及AUC以與劑量成比例或大於與劑量成比例之方式增大。第26天之值相對於第1天實質上較低。無顯著性別差異。下文展示有關數據之圖表(表27)。

在狗中之一週毒性研究中，一組2隻狗/性別每3天接受125mg/kg，總共投藥3次(查理士河實驗室研究第20000713號；表25)。所評價參數包括死亡率及治療反應、詳細檢查、體重、食物消耗、心臟 病學參數、血液學及臨床化學參數、器官重量及眼觀病理學。未對該等動物實施組織病理學研究。在治療之最後一天評價毒動學。

於125mg/kg/劑量下，未觀察到對所評價參數中之任一者具有不良作用，只是在治療期結束時紅細胞量及形態稍微降低。

毒動學數據顯示，在所投與第一與第三劑量之間，CoQ10靜脈注射調配物之血漿濃度、及C_max、AUC_0-24及AUC_0-∞之平均值相當。

基於該等結果，選擇125mg/kg/劑量作為確認狗研究中之高劑量。

在狗中之4週重複投藥研究中，四組小獵犬(n=3/性別/組)以31.25mg/kg、62.5mg/kg及125mg/kg之劑量藉由靜脈內注射每日接受含有CoQ10靜脈注射調配物之媒劑或藥品達4週(查理士河實驗室研究第20000334號；表28)。每一組中包括額外2隻狗/性別且在治療後維持2週恢復期。提供40mg/mL之單一測試物件濃度用於研究。分別使用0.78mL/kg、1.56mL/kg及3.13mL/kg之劑量體積達成31.25mg/kg、62.5mg/kg及125mg/kg之劑量。所評價參數包括籠旁觀察、臨床觀察、體重、食物消耗、檢眼鏡檢查、心電描記、臨床病理學、眼觀病理學、器官重量及組織病理學。在第1天及第26天投藥前及投與5分鐘、15分鐘、30分鐘及60分鐘及2小時、4小時、8小時及24小時後採集血樣用於測定CoQ10靜脈注射調配物之血漿濃度。

所有動物均存活至治療期結束。在恢復期之第二週期間處死垂死狀況下之一隻高劑量雌性狗(125mg/kg/天)。死前體徵包括食物消耗減少、體重減輕、肝酶提高、及在屍檢時肝出現灰色，但並不遵循此動物中之組織之組織病理學評價確定死亡之明確原因。

在所有其他動物中，未觀察到臨床觀察、體重、食物消耗、眼及心電描記評價、臨床病理學、宏觀及器官重量參數中之測試物件有關之不良作用。注意到在治療期結束時媒劑及高劑量治療動物的網狀細胞計數增大，其僅在恢復期結束時在雄性中持續。不可排除與調配物媒劑之相關性。在屍檢時，宏觀觀察限於在中等及高劑量組下肝出現灰色，亦在恢復性屍檢時注意到。在組織病理學下，除肝外未在任何組織中觀察到形態變化。鑑別所有組(包括媒劑治療組)中之肝細胞糖原沈積。在該等動物之肝中未注意到不良變化。在恢復期後，該等微觀變化限於中等及高劑量動物。

毒動學評價揭示，暴露隨著劑量增大而增大，其中C_max及AUC之增大往往大於與劑量成比例之值。無顯著性別差異，且在大多數情形下，在第1天及第26天暴露參數類似，只是在第26天時高劑量之值減小。下文展示有關數據之圖表(表29)。

IX. 相關參考文獻

本申請案中引用之所有公開案及專利文獻均出於所有目的以引用方式併入有關部分中，其併入程度如同將每一個別公開案或專利文件如此逐個指明。對於此文件中引用之不同參考文獻，申請者並不承認任何特定參考文獻係其揭示內容之「先前技術」。應瞭解，儘管已結合其具體說明闡述本發明，但上文說明係意欲闡釋而非限制本發明範疇，本發明之範疇係由隨附申請專利範圍之範疇所界定。其他態樣、優點、及修改皆涵蓋於下述申請專利範圍及其等效形式之範疇內。

提供所有圖以進行舉例說明而非予以限制。儘管已提供具體實例，但說明具有闡釋性而非限制性。可以任何方式組合先前所述實施例之特徵中之任一一或多者與本發明中之任何其他實施例的一或多個特徵。此外，閱讀本揭示內容後，彼等熟習此項技術者可明瞭本發明之許多變更。

等效形式

彼等熟習此項技術者僅使用常規實驗即可識別或能確定本文所述本發明具體實施例的許多等效形式。此等等效形式均意欲涵蓋在下述申請專利範圍內。

Claims (33)

1. 一種適於靜脈內投與個體之治療調配物，其包含：水溶液；輔酶Q10(CoQ10)；二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)；及調理作用降低劑；其中將該CoQ10分散成粒子之膠狀奈米分散液；及其中該CoQ10：DMPC容重比係4：2至4：3。
2. 如請求項1之調配物，其中該調理作用降低劑選自由泊洛沙姆(poloxamer)及保麗視明(poloxamine)組成之群。
3. 如請求項2之調配物，其中該調理作用降低劑係泊洛沙姆188。
4. 如請求項1之調配物，其中該膠狀奈米分散液係懸浮液。
5. 如請求項1之調配物，其中該膠狀奈米分散液係乳液。
6. 如請求項1之調配物，其中該膠狀奈米分散液之CoQ10呈結晶形式。
7. 如請求項1之調配物，其中該膠狀奈米分散液之CoQ10呈過冷熔融形式。
8. 如請求項3之調配物，其中該調配物具有容重分別為4%、3%及1.5%之CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188。
9. 如請求項3之調配物，其中該調配物具有容重分別為8%、6%及3%之CoQ10、DMPC及泊洛沙姆188。
10. 如請求項1之調配物，其中該等奈米分散粒子之平均大小介於約10nm與約200nm之間。
11. 如請求項1之調配物，其中該等奈米分散粒子之平均大小介於約10nm與約100nm之間。
12. 如請求項1之調配物，其中該等奈米分散粒子之平均大小介於約30nm與約80nm之間。
13. 如請求項1之調配物，其中該等奈米分散粒子之平均大小介於約35nm與約40nm之間。
14. 如請求項1之調配物，其中該等奈米分散粒子之平均大小小於約45nm。
15. 如請求項1之調配物，其中該調配物具有CoQ10：DMPC：調理作用降低劑為4：3：1.5之容重比。
16. 如請求項1之調配物，其中該調配物包含約4%之CoQ10。
17. 如請求項1之調配物，其中該CoQ10係以1至10wt%之量存在於該調配物中。
18. 如請求項1之調配物，其中該DMPC係以2至6wt%之量存在於該調配物中。
19. 如請求項1之調配物，其中該調理作用降低劑係以0.5至5wt%之量存在於該調配物中。
20. 一種適於靜脈內投與個體之治療調配物，其包含：水溶液；輔酶Q10(CoQ10)；及二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)；其中將該CoQ10分散成具有10nm至100nm之平均大小之粒子之膠狀奈米分散液；及其中CoQ10係以1至10wt%之量存在於該調配物中。
21. 如請求項20之調配物，其中該調配物包含約4%之CoQ10。
22. 一種適於靜脈內投與個體之治療調配物，其包含：水溶液；輔酶Q10(CoQ10)；及 二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)；其中將該CoQ10分散成具有10nm至100nm之平均大小之粒子之膠狀奈米分散液；及其中DMPC係以2至6wt%之量存在於該調配物中。
23. 一種有效量之如請求項1至22中任一項之治療調配物之用途，係用於製備治療或預防腫瘤病症的靜脈內藥劑。
24. 如請求項23之用途，其中該腫瘤病症係侵襲性或轉移性腫瘤病症。
25. 如請求項24之用途，其中該侵襲性或轉移性腫瘤病症選自由以下組成之群：胰腺癌、肝細胞癌、尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、轉移性乳癌、轉移性黑素瘤、腦癌、神經內分泌癌、結腸癌、肺癌、骨肉瘤、非雄激素依賴性前列腺癌、卵巢癌及非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's Lymphoma)。
26. 如請求項25之用途，其中該腦癌係星形細胞瘤或膠狀細胞瘤。
27. 如請求項23之用途，其中該腫瘤病症係非侵襲性腫瘤病症。
28. 如請求項27之方法，其中該非侵襲性腫瘤病症選自由非轉移性乳癌、雄激素依賴性前列腺癌、小細胞肺癌及急性淋巴細胞白血病組成之群。
29. 一種有效量之如請求項1至22中任一項之治療調配物之用途，係用於製備抑制個體中之腫瘤細胞生長的靜脈內藥劑。
30. 如請求項23或29之用途，其中該調配物包含約4%輔酶Q10及3% DMPC。
31. 如請求項30之用途，其中該調配物進一步包含1.5%泊洛沙姆188。
32. 一種製備如請求項1之治療調配物的方法，其中該方法包含以以下方式藉由高壓均質化分散疏水活性劑： 向65℃水浴中添加該疏水活性劑並混合形成疏水活性劑/水混合物；向該疏水活性劑/水混合物中添加分散穩定劑並於65℃下混合形成疏水活性劑/水/穩定劑混合物；添加調理作用降低劑以形成疏水活性劑/水/穩定劑/降低劑混合物；將微射流均質機預加熱至65℃；及藉由於65℃下在該微射流均質機中混合該疏水活性劑/水/穩定劑/降低劑混合物來進行處理；其中該疏水活性劑係輔酶Q10，該分散穩定劑為二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼，該調理作用降低劑係選自由泊洛沙姆及保麗視明組成之群。
33. 一種製備如請求項20至22中任一項之治療調配物的方法，其中該方法包含以以下方式藉由高壓均質化分散疏水活性劑：向65℃水浴中添加該疏水活性劑並混合形成疏水活性劑/水混合物；向該疏水活性劑/水混合物中添加分散穩定劑並於65℃下混合形成疏水活性劑/水/穩定劑混合物；將微射流均質機預加熱至65℃；及藉由於65℃下在該微射流均質機中混合該疏水活性劑/水/穩定劑混合物來進行處理；其中該疏水活性劑係輔酶Q10且該分散穩定劑為二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼。