JPS588010A - ユビデカレノン含有リポソ−ム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血液中から目標ｍｓへのエビデカレノ／の移行
を速やかならしめるユビデカレノン含有リポソームに関
する。

ユビデカレノン、別名コエンザイムＱｎは心機能の改善
に有効な医薬品として近年臨床上広く利用されるに至っ
たものである。　　　　　　・しかしながら、この物質
を静脈内投与あるいは経口投与した場合における血液中
から目ｍ１ｓｓへの移行速度についてはまだ改善される
べき余地が残され′ている。すなわち、轟験物質は前記
のごとＩ（ く畳機能の改善を目的゛とする医薬品であるから目標臓
器への初期移行速魔、および移行量が大きいことが望ま
れる。しかしながら、！！＆該物質物質来技術に基づい
て製剤化して投与した場合、血液中からの消失速度はか
なり小さくなり、従りて目標臓器への移行速度および移
行量も小さくなる。

そもそも当該物質は、４８〜５２℃の融点を有する常温
で固体状の脂溶性物質であるから、静脈内投与に便なら
しめるために界面活性剤２例えばＨＣＯ（ポリオキシエ
チレン硬化ヒマシ油）を使用するごとき従来技術によっ
て当該物質を可溶化しなければならない。しかしながら
、かくのごとく可溶化して投与した場合には、後記実験
例において示されるごとくユビデカレノンの血液中から
の消失速度は小さく、またユビデカレノンの目標臓器で
ある心臓、牌臓、肝臓、特に心臓への初期移行速度も小
さい。

かかる事情にかんがみ９本発明考は血液中から所定の目
標臓器への移行を上昇せしめる上で有効なユビデカレノ
ン含有組成物について種々検Ｉｎその結果ユビデカレノ
ンをリポソーム中に含有せしめることＫよって所期の解
決手段が提供されることを知り２本発明を完成するに至
った。

すなわち、後記実験例において示されるごとく投与後に
おける血液中からの消失速度および所定時間内における
臓器移行量を求めると１本発明リポソームを投与した場
合には、従来技術に係る可溶化液の投与の場合に比軟し
て、血液中からの消失速度がいちぢるしく大きく、また
肺、腎を除く諸臓器において高い移行量を示した。

なお、一般にリボンーム自体は公知のものであり、その
製法についても常法のものがある。しかし、リポソーム
技術をユビデカレノンに応用し。

エビデカレノン含有リポソームを１１Ｌ％し、それＫよ
ってユビデカレノンにおける前記の基本的問題を解決し
、ユビデカレノンの利用価値ないちぢるしく高めること
に成功したのは２本実Ｉ！ｊ！において初めてなされた
ものでる。以下に本発明の詳細な説明する。

本発明リポソームにおいてユビデカレノンは。

リポソームを構成する膜の中に會まれる。リポソーム膜
を構成する基本物質はリン脂質およびステロールであり
、ユビデカレノンはこれらと共存して、膜の中に均一に
分散している。本発明において使用されるリン脂質とし
ては１例えばホスファチデルコリン、ホスファチデルエ
タノールアミン。

ホスファチデルセリン、スフィンゴミエリン、ジセチル
リン酸、ステアリルアミン、ホスファチデルグリセロー
ル、ホスファチヂン酸、ホス７アチヂルイノシトール、
およびこれらの混合物をあげることができるが、特にこ
れらに限定されない。

ステロールとしてはコレステロールがもっとも好ましい
。

ユビデカレノン、リン脂質、ステロールの組成比につい
ては、ユビデカレノン１モル比に対してリン脂質は１０
モル比以上、ステロールは１モル比以上あれば十分であ
り２例えばユビデカレノン１モル比に対して、リン脂質
として卵黄ホスファチデルコリン、を使用する場合には
１０〜３０モル比またステロールとしてコレステロール
を使用する場合には１〜１０モル比が好ましい使用範囲
である。

ユビデカレノン１モル比に対するリン脂質とコレステ四
−ルの好ましいモル組成比の例を示せば以下１〜７のと
と（である。

ｐ’ｃ　　Ｉホスファチデルコリン ＤＣＰ　ニジセチルリン酸 ＰＳ　：ホスファチデルセリン ＳＡ　：ステアリルアミン 本発明リポソームは、電子ｌｌＩ黴鏡的には０．１〜５
．０声程度の粒経をもつ球体である。凍＃乾燥物は凝集
して外観上はプルツク状を呈しているが。

水または塩類溶液に投入するとよく分散し、均質なＳ＊
を与える。

次に本発明リポソームは、リポソームの製造に関する従
来技術な単用して製造することができる。

例えば、リポソームの膜構成成分とユビデカレノンをナ
スフラスコにとり、クロ繋ホルムを加えて一旦溶解し２
次Ｋｆｌｊｍ箇去し、生成膜をガラスく一ズおよび適当
な緩衝液等を加えて剥離し、超音波処理後セファデツク
スあるいはセファローズカラムに過して、リポソーム分
Ｉ１１な集め溶媒除去すればよい。溶Ｓ除去には例えば
凍結乾燥処理を適用することができる。

凍結乾燥処理は２．０丁ｅｒｒ以下で３時間以上おこな
えば、所定の目的が達成され、リポソームを場末状にと
り出すことができるが１本発明はこの条件に限定される
ものではない。望ましい条件としては、後記実施例に示
されるごとく２例えば０．３７ｏｒｒで５時間凍結乾燥
処理する方法が選ばれる。

本発明リポソームの効果を以下に記載する実験例をもっ
て説明する。

実験例１ 試料 実施例１記載においてＣ０Ｑｓ＊の代わりに１４Ｃ−Ｃ
ｏＱ１＠を使用した点を除いて実施例１記掌と同様の方
法によって調節したリポソームを検体試料とした。また
”Ｃ−Ｃ０ＱＩ＠に４倍量のＨＣＯ−６０を加えて超音
波処理して可溶化し１．生−食塩液を加えて０．６１１
Ｆ／ｄＫ゛調整したものを対照試料とした。

方法 動物実験 雄性モルモット（体重・３００〜３５０ハの左大腿部静
脈に検体試料０．６　ｗ９”Ｃ−Ｃ＠Ｑｎ／１１ＩＩヲ
注入した。また同じ投与量の対照試料を、同様の方法で
投与した。その後は９モルモットを憫育ケージに放置し
、所定時間経過ととに、罵静脈から採血した。採取した
血液中の１４（（◆Ｑ、濃度を以下に記載する方法で測
定した。

血液中放射能の測定゛　　　　　　　　′罵静脈より２
０４または５０４の血液を採取しＯ−７５１ａｌｔ）８
ｏ１ｔ＋＠ｎｅ　３５０Ａツブ四ビルアルコールＣＩＡ
）″１％可溶化し、数滴の過拳化水素水を加え脱色後、
　　ｉｎｓｔａｇｅｌｌｏ、５Ｎ　Ｉｆ（ン（９／’１
　）　５　ｍｌを加え、液体シンチレーシ曹ン・カウン
ターを用い放射能を一定した。

結果 一体試′科または対照試料を投与した場合の＋４Ｃ−Ｃ
ＯＱＩ・の血液中放射能濃度の経時変化を示すグラフを
図ＩＫ示した。

図１の説明 Ｏ印線は、検体試料を投与した場合のもの（２例の平均
値）、・印線は、対照試料を投与した場合のもの（３例
の平均値と標準偏差値）をそれぞれ示す。

図Ｉ　Ｋ’宗すよ５に、検体試料中の１４Ｃ−ＣＯＱＩ
＠の血中からの消失は、投与後１時間で折れ−がる２本
の直線で示され、その消失半減期は第１相目が１１．５
分、＃Ｉ２相目−１５，６時間であった。

また、対照試料中の１４０−８４瞳の血中からの消失は
、一本の直線で示され、その消失半減期は２０１時間で
あった。このことから検体試料中の”Ｃ−ＣｏＱｌ。の
血中からの消失は、対照試料中の”Ｃ−ＣｏＱｌ・の消
失より極めて速やかであることが見いだされる。

実験例２ 試料 −実験例１試料の項の記載と同じ検体試料および対照試
料を用いた。

方法 動物実験 雄性モルモット（体重３００ｇ〜３５０ＩＩ）の左大腿
部静脈に、前記試料をそれぞれ０．６ｊｌｆ／ζ注入し
た。その後は、飼育ケージに放置し、投与後３０分およ
び２４時間後に断頭と殺し、各臓器を摘出した。なお、
脳および心臓への血液の汚染を除去する目的で、生理食
塩水を左心室から原靜脈にかゆて環流し、脱自後、脳お
よび心臓を摘出した。

組織内放射能の測一定 ｉ＋＋ｎ約１００ｍｇを０．５　ｍの８＠１１１＠１１
＠３５ＯＫ加え。

５０℃、２時間のインキ龜ベートで組織を溶解後６−の
ｌ　ｉｓ　ｔａｇ＠１１０．ｓ　Ｎ　ＨＱＩ　（９１０
を加え、筐体シソチレーシ冒ン・カウンターを用いｍＩ
ＩＩｓｔ−ｗ定した。

結果 検体試料中の”Ｃ−ＣｏＱｌｅおよび対照試料中の１４
Ｃ−ＣＯＱＩＩをそれぞれ静脈内に注入後３０分２４時
間における主要臓器中の放射能濃度なＣａＱｌ。

換算量で表わし両者の臓器移行性を比較したのが図２な
いし［１４である。

図２ないし図４の説明 斜線入りのカラ五Ｗは、検体試料を投与した場合のもの
（２例の平均値）、白抜きのカラムロは、対照試料を投
与した場合のものく３例の平均値と標準偏差値、ただし
脳、心の投与後３０分の場合は２例の平均値）をそれぞ
れ示す。

１４０−ＣＯＱＩＩの組織への分布では対照試料に比べ
検体試料では速やかにＩＩｇＩｌ、が高くなり、かつ持
続性を示し、対照試料投４の場合とは異なった分布を示
した。まず、１１．心、肝、牌、副腎への移行で検体試
料の方が対照試料に比べて、速やかでかつｌ＆嬢度に分
布した。すなわち、投与後３０分では検体試料の方が心
臓において１６倍。

脳において２倍の濃度に分布するのが判明する。

以下Ｉ／Ｉｃ記載する実施例をもって本発明をさらに詳
細Ｋ１１羽する。

実施例１ 卵黄ホスファチデルコリン３６ダ（４，５Ｘ１０’ｍｏ
ｌ）、コレステロール５．８５Ｍｇ（１，５Ｘ　１０’
ｍｏｌ）ｋよびユビデカレノンすなわちＣｏＱ＋ｏ　２
−１６”ｉ！　（２，５Ｘｉ　０−−ｏｌ）を２−のク
ロロホルムに溶解し、ロータリー・エバポレーターを用
い減圧下でクロロホルムを除去した。得られた薄膜を減
圧デシケータ−で−夜乾燥し、クロロホルムを完全に除
去した。鷹に残った薄膜に３．０１＆ｌずつＺＷＡ計６
．Ｏｄの緩衝箪ムおよびグラスビーズ１個を加えて、膜
が完全にはがれるまでポルテックス・ミキサーで振りた
。

次に、この溶液を枝付き試験管に移し、アルゴン気流下
水浴中でプローブ型すニケーターを用い、３０秒ごと断
続的に５３分間、４２Ｗで超音波感層を行５と、半透明
なうす黄色の溶液が得られた。

との溶液を８＠ｐｈａｒｏｓ＠４Ｂカラム（１，６Ｘ４
５ｍ）Ｋ移し、緩衝液Ａで溶出し、１．８−ずつ６０本
の試験管に分取し試料を採取した。このカッ五の＃鎗体
積付近Ｋｌｌ出して来たものを０．０８＃にのボア・ナ
イズを有するポリカーボネート製メンブレンを用いて最
終体積ｌ、７　ｍ（Ｃｏ　Ｑｓ＠とし′ＣＧ、５５Ｍ９
含有）まで濃縮した。得られたリポソームの直径は１駆
観察により８０〜１００ｍであった。なお、緩ｌｌ１Ｉ
ｌムとは、０．１ＭＮ−を含む０．ＯＩＭリンｓｕｎ＋
ｉ液（ｐＨ７，４）である。

実施例２ 卵黄ホス７アチチルプリン６Ｇ、０η（３モル比）。

コレステロール９．８１１（１モル比）、ユビデカレノ
ン６．５Ｍｌ！（０，３モル比）を２００１Ｌｔのナス
型フラスコにとり、クロロホルム４−を加えて溶解し　
ＳＳを減圧１去する。生理食塩水４−とグラスビーズな
加工、ポルテックスミキサーを用〜て拡散させる。得ら
れる多重層膜を枝材試験管に移し、１１素ガス雰囲気下
、水浴中で超音液処理（２５ｋｖ、１５分）を行う。次
にセファデックスＧ−５０カラムに負荷し、生理食塩水
を溶出液として溶出せしめ、リポソーム分割を集め、３
０ＭＩＫ希釈する。これを凍結乾燥処理（９，３Ｔｏｒ
ｒ、　５時間）するとリポソームが得られる。

【図面の簡単な説明】

図１は実験例１結果の項に記載の図１に相当するＷＩＡ
箇である。 図２ないし＠４は実験例２結果の項に記載の図２ないし
図４に相当する図面である。 特許出願人 工−ザイ練式壷社 図１ 時間（ｈｒ　） ２１２ 雪　　　投与後の時間（ｈｒ　） 図　３ ツ　　　　投与後の時間（ｈｒ） ＠　４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　ユビデカレノンを含有するリポソーム（２）
   　　ユビデカレノンがリポソームの膜の中に存する特許
   請求の範囲第１項記載のリポソーム（３）　　リポソー
   ムの膜がリン脂質およびステロールより構成される属で
   ある特許請求の範囲第２項記載のリポソーム （４）　　リン脂質カ本スファチヂルコリン、ホスファ
   チデルエタノ−ルア建ン、ホスファチデルセリン、スフ
   ィンゴミエリン、ジセチルリン□酸、ステアリルアミン
   、ホスファチデルグリセ關−ル、ホス７アチヂン酸、ホ
   スファチデルイノシトール、およびこれらの拠金物であ
   る特許請求の範Ｈ第３項ｌｅ軟のリポソーム（Ｓ）　　
   ステロールがコレステロールである特許請求の範Ｓ菖３
   項または第４項記載のリポソーム（６）　　エビデカレ
   ノン１モル比に対してリン脂質が１０モル比以上、ステ
   ロールが１モル比以上である特許請求の範囲第３項乃至
   第５項記載のリポソーム