TWI527830B

TWI527830B - 介白素-１７ａ／ｆ（ｉｌ-１７ａ／ｆ）異源多肽及治療用途

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Publication number: TWI527830B
Application number: TW096145454A
Authority: TW
Inventors: 阿諾特大衛Ｐ; 巴拉茲馬西地; 葛希爾拉地尼可; 格尼奧斯丁Ｌ; 賀斯菲利浦Ｅ; 西莫維茲撒拉; 李詹姆士Ｍ; 歐陽文軍; 史塔洛法斯尼克梅立沙; 吳洋
Original assignee: 建南德克公司
Priority date: 2006-11-29
Filing date: 2007-11-29
Publication date: 2016-04-01
Also published as: RU2011140509A; NO20092448L; AU2007325316C1; SG177136A1; KR101561926B1; WO2008067223A8; BRPI0719288A2; UA103297C2; EP2450050A1; PE20081501A1; WO2008067223A9; ECSP099401A; MX2009005304A; RU2009124453A; CA2666549A1; AU2007325316B2; CN101563098A; MY185649A; ZA200902480B; CN104784688A

Description

介白素－17A/F(IL－17A/F)異源多肽及治療用途

本發明大體而言係關於本文中命名為介白素－17A/F(IL－17A/F)之新穎人類細胞激素的鑑別及分離。

胞外蛋白尤其在多細胞生物體的形成、分化及維持中起重要作用。許多個別細胞之命運(例如，增殖、遷移、分化或與其他細胞相互作用)通常由自其他細胞及/或直接環境接收之資訊支配。此資訊通常由分泌多肽(例如，促有絲分裂因子、存活因子、細胞毒性因子、分化因子、神經肽及激素)傳遞，該等分泌多肽繼而由各種細胞受體或膜結合蛋白接收並解譯。此等分泌多肽或信號轉導分子通常通過細胞分泌路徑以到達其於胞外環境中之作用位點。

分泌蛋白具有各種工業應用，包括作為藥劑、診斷劑、生物感測劑及生物反應劑。當前可用之多數蛋白質藥物，諸如溶解血栓劑、干擾素、介白素、紅血球生成素、群落刺激因子及各種其他細胞激素，為分泌蛋白。為膜蛋白之其受體亦具有作為治療劑或診斷劑之潛力。

膜結合蛋白及受體尤其在多細胞生物體的形成、分化及維持中可起重要作用。許多個別細胞之命運(例如，增殖、遷移、分化或與其他細胞相互作用)通常由自其他細胞及/或直接環境接收之資訊支配。此資訊通常由分泌多肽(例如，促有絲分裂因子、存活因子、細胞毒性因子、分化因子、神經肽及激素)傳遞，該等分泌多肽繼而由各種細胞受體或膜結合蛋白接收並解譯。該等膜結合蛋白及細胞受體包括(但不限於)：細胞激素受體、受體激酶、受體磷酸酶、細胞－細胞相互作用所涉及之受體，及細胞黏附分子(如選擇素及整合素)。舉例而言，調節細胞生長及分化之信號之轉導係部分藉由各種細胞蛋白磷酸化而調節。蛋白酪胺酸激酶(催化彼過程之酶)亦可充當生長因子受體。實例包括纖維母細胞生長因子受體及神經生長因子受體。

與分泌蛋白相似，膜結合蛋白及受體分子具有各種工業應用，包括作為藥劑及診斷劑。舉例而言，受體免疫黏附素可用作治療劑以阻斷受體－配位體相互作用。膜結合蛋白亦可用於篩選相關受體/配位體相互作用之潛在肽或小分子抑制劑。

工業與學術界均作出努力以鑑別新的、原生分泌蛋白及原生受體或膜結合蛋白。許多努力集中於篩選哺乳動物重組DNA庫以鑑別新穎分泌蛋白之編碼序列。篩選方法及技術之實例描述於文獻中[參見，例如Klein等人，Proc.Natl.Acad.Sci. ,93 ：7108－7113(1996)；美國專利第5,536,637號]。

在此方面，本發明係關於鑑別介白素－17(IL－17)家族之新穎分泌多肽，其已顯示與免疫介導之疾病及發炎疾病相關。免疫相關疾病及發炎疾病為相當複雜、通常多個互連生物路徑之表現或結果，該等路徑在正常生理學中對回應傷害或損傷、引發傷害或損傷修復及發動對抗外來生物體之先天及後天防衛而言為關鍵的。當此等正常生理路徑因直接與反應強度相關、因異常調節或過度刺激之結果、因自我反應或因此等各者之組合而引起其他傷害或損傷時，疾病或病態出現。

儘管此等疾病之起源通常涉及多步路徑及通常多個不同生物系統/路徑，但在此等路徑中之一或多者中之關鍵點處的介入可具有改善或治療作用。治療性介入可藉由拮抗有害過程/路徑或刺激有益過程/路徑而發生。

許多免疫相關疾病為已知的且已經廣泛研究。該等疾病包括免疫介導之發炎疾病(諸如類風濕性關節炎、免疫介導之腎病、肝膽病、發炎性腸病(IBD)、牛皮癬及哮喘)、非免疫介導之發炎疾病、傳染病、免疫缺乏疾病、瘤形成等。

T淋巴細胞(T細胞)為哺乳動物免疫反應之重要組份。T細胞識別與由主要組織相容性複合體(MHC)內之基因編碼之自我分子相關的抗原。該抗原可連同MHC分子一起呈現於抗原呈現細胞、病毒感染細胞、癌細胞、移植物等之表面上。T細胞系統消除此等對宿主哺乳動物造成健康威脅之變性細胞。T細胞包括輔助T細胞及細胞毒性T細胞。輔助T細胞在識別抗原呈現細胞上之抗原－MHC複合體後大量增殖。輔助T細胞亦分泌多種細胞激素(亦即淋巴激素)，該等細胞激素在參與免疫反應之B細胞、細胞毒性T細胞及多種其他細胞的活化中起核心作用。

體液與細胞介導之免疫反應中之核心事件為輔助T細胞之活化及選殖擴增。輔助T細胞活化係藉由T細胞受體(TCR)－CD3複合體與抗原呈現細胞表面上之抗原－MHC相互作用而引發。此相互作用介導誘導靜止輔助T細胞進入細胞週期(G0至G1轉換)之生物化學事件的級聯，且使得IL－2及有時IL－4之高親和力受體表現。經活化之T細胞歷經增殖並分化成記憶細胞或效應細胞之週期。

除經TCR介導之信號以外，T細胞之活化涉及由抗原呈現細胞所釋放之細胞激素或經抗原呈現細胞與T細胞上之膜結合分子相互作用而誘導之其他共同刺激。已顯示細胞激素IL－1及IL－6提供共同刺激信號。又，在抗原呈現細胞表面上表現之B7分子與在T細胞表面上表現之CD28及CTLA－4分子之間的相互作用實現T細胞活化。經活化之T細胞表現數目增加之細胞黏附分子，諸如ICAM－1、整合素、VLA－4、LFA－1、CD56等。

混合淋巴細胞培養或混合淋巴細胞反應(MLR)中之T細胞增殖為化合物刺激免疫系統之能力的既定指示。在許多免疫反應中，發炎性細胞滲入損傷或感染部位。如可由受侵襲組織之組織學檢查確定，遷移細胞可為嗜中性細胞、嗜酸性細胞、單核細胞或淋巴細胞。Current Protocols in Immunology ,John E.Coligan編，1994,John Wiley & Sons,Inc。

免疫相關疾病可藉由抑制免疫反應來治療。使用抑制具有免疫刺激活性之分子的中和抗體將有利於治療免疫介導之疾病及發炎疾病。可利用抑制免疫反應之分子(直接利用蛋白質或經由使用抗體促效劑)以抑制免疫反應且由此改善免疫相關疾病。

介白素－17(IL－17)為源自T細胞之前發炎性分子，其刺激上皮細胞、內皮細胞及纖維母細胞產生包括IL－6、IL－8、G－CSF及MCP－1之其他發炎性細胞激素及趨化激素[參見Yao,Z.等人，J.Immunol. ,122(12) ：5483－5486(1995)；Yao,Z.等人，Immunity ,3(6) ：811－821(1995)；Fossiez,F.等人，J.Exp.Med. ,183 (6)：2593－2603(1996)；Kennedy,J.等人，J.Interferon Cytokine Res.,16 (8)：611－7(1996)；Cai,X.Y.等人，Immunol.Lett,62 (1)：51－8(1998)；Jovanovic,D.V.等人，J.Immunol.,160 (7)：3513－21(1998)；Laan,M.等人，J.Immunol.,162 (4)：2347－52(1999)；Linden,A.等人，Eur Respir J,15 (5)：973－7(2000)；及Aggarwal,S.及Gurney,A.L.,J Leukoc Biol,71 (1)：1－8(2002)]。IL－17亦與包括TNF－α及IL－1β之其他細胞激素協同以進一步誘導趨化激素表現(Chabaud,M.等人，J.Immunol.161 (1)：409－14(1998))。介白素17(IL－17)對各種類型細胞顯示多效生物活性。IL－17亦具有誘導ICAM－1表面表現、T細胞增殖及CD34^＋人類祖細胞生長並分化成嗜中性白血球之能力。IL－17亦已牽涉於骨骼代謝中，且已表明在特徵在於存在經活化之T細胞及產生TNF－α之病理病狀(諸如類風濕性關節炎)及骨骼植入物鬆動中起重要作用(Van Bezooijen等人，J.Bone Miner.Res.,14 ：1513－1521[1999])。發現來源於類風濕性關節炎患者之滑膜組織之經活化T細胞比來源於正常個體或骨關節炎患者之彼等經活化T細胞分泌更大量之IL－17(Chabaud等人，Arthritis Rheum.,42 ：963－970[1999])。已表明此前發炎性細胞激素積極促使類風濕性關節炎之滑膜發炎。除其前發炎作用以外，IL－17似乎由另一機制促成類風濕性關節炎之病態。舉例而言，已顯示IL－17誘導成骨細胞中破骨細胞分化因子(ODF)mRNA之表現(Kotake等人，J.Clin.Invest.,103 ：1345－1352[1999])。ODF刺激祖細胞分化成破骨細胞(骨骼再吸收所涉及之細胞)。由於IL－17之含量在類風濕性關節炎患者之滑液中顯著增加，因此看似IL－17誘導之破骨細胞形成在類風濕性關節炎之骨骼再吸收中起至關重要的作用。亦咸信IL－17在諸如多發性硬化症(Matusevicius等人，Mult.Scler.,5 ：101－104(1999)；Kurasawa,K.等人，Arthritis Rheu 43 (11)：2455－63(2000))及牛皮癬(Teunissen,M.B.等人，J Invest Dermatol 111 (4)：645－9(1998)；Albanesi,C.等人，J Invest Dermatol 115 (1)：81－7(2000)；及Homey,B.等人，J.Immunol.164 (12：6621－32(2000))之某些其他自體免疫病症中起關鍵作用。

已進一步顯示IL－17藉由細胞內信號轉導來刺激人類巨噬細胞中Ca^2＋流入及[cAMP]_i 減少(Jovanovic等人，J.Immunol.,160 ：3513[1998])。經IL－17處理之纖維母細胞誘導NF－B活化[Yao等人，Immunity,3 ：811(1995)；Jovanovic等人，同上]，而經其處理之巨噬細胞活化NF－B及經有絲分裂原活化之蛋白激酶(Shalom－Barek等人，J.Biol.Chem.,273 ：27467[1998])。另外，IL－17亦與骨骼及軟骨生長所涉及之哺乳動物細胞激素樣因子7共有序列相似性。與IL－17多肽共有序列相似性之其他蛋白質為源自人類胚胎之介白素相關因子(EDIRF)及介白素－20。

與IL－17之廣泛作用一致，已發現IL－17之細胞表面受體在許多組織及細胞類型中廣泛表現(Yao等人，Cytokine,9 ：794[1997])。儘管人類IL－17受體(IL－R)之胺基酸序列(866個胺基酸)預測具有單一跨膜域及長的、525個胺基酸胞內域之蛋白質，但受體序列為獨特的且並不與來自細胞激素/生長因子受體家族之任何受體的序列相似。其加上IL－17本身與其他已知蛋白質之相似性的缺乏指示IL－17及其受體可為信號轉導蛋白及受體之新穎家族的一部分。已證實IL－17活性係經與其獨特細胞表面受體(本文中命名為人類IL－17R)結合而介導，其中先前研究已顯示使T細胞與可溶形式之IL－17受體多肽接觸抑制由PHA、刀豆球蛋白A(concanavalin A)及抗－TCR單株抗體誘導之T細胞增殖及IL－2產生(Yao等人，J.Immunol.,155 ：5483－5486[1995])。同樣地，顯著關注於鑑別及表徵與已知細胞激素受體(尤其IL－17受體)具有同源性之新穎多肽。

現已將介白素17識別為新興細胞激素家族的原型成員。人類及其他脊椎動物基因組之大規模定序已揭示存在編碼與IL－17明確相關之蛋白質的其他基因，由此定義新細胞激素家族。在人類及小鼠中存在IL－17家族之至少6個成員，包括IL－17B、IL－17C、IL－17D、IL－17E及IL－17F，以及新穎受體IL－17RH1、IL－17RH2、IL－17RH3及IL－17RH4(參見於2001年6月28日公開之WO 01/46420)。已證實一種此類IL－17成員(命名為IL－17F)與人類IL－17受體結合(IL－17R)(Yao等人，Cytokine,9 (11)：794－800(1997))。初始表徵表明，如IL－17，若干種此等新鑑別之分子具有調節免疫功能之能力。對於若干種此等因子已鑑別之有效發炎作用及與主要人類疾病之新興相關性表明此等蛋白質可能在發炎過程中具有顯著作用且可使治療性介入成為可能。

編碼人類IL－17F之基因定位於IL－17之相鄰處(Hymowitz,S.G.等人，Embo J,20 (19)：5332－41(2001))。IL－17與IL－17F共有44%胺基酸一致性，而IL－17家族之其他成員共有更有限之15－27%胺基酸一致性，其表明IL－17與IL－17F形成IL－17家族內之獨特子群(Starnes,T.等人，J Immunol,167 (8)：4137－40(2001)；Aggarwal,S.及Gurney,A.L.,J.Leukoc Biol,71 (1)：1－8(2002))。IL－17F似具有與IL－17相似之生物作用，且能促進IL－6、IL－8及G－CSF自多種細胞產生。與IL－17相似，其能誘導軟骨基質釋放且抑制新軟骨基質合成(參見於2002年11月28日公開之US－2002－0177188－A1)。因此，如同IL－17，IL－17F可潛在地促成發炎病症之病態。最近，此等作者已觀測到IL－17與IL－17F均在T細胞中由介白素23(IL－23)之作用誘導(Aggarwal,S.等人，J.Biol.Chem.,278 (3)：1910－4(2003))。對於IL－17與IL－17F共有相似染色體定位及顯著序列相似性之觀測以及對於IL－17及IL－17F似回應特定刺激而以同一細胞群體來誘導之觀測已使得包含IL－17與IL－17F之共價異源二聚體(本文中命名為IL－17A/F)之新人類細胞激素得以鑑別。人類IL－17A/F為獨特新細胞激素，可在蛋白質結構中與基於細胞之活性檢定中區別於人類IL－17及IL－17F。經使用經純化之重組人類IL－17A/F作為標準，已開發人類IL－17AF特異性ELISA。經使用此特異性ELISA，偵測到所誘導之人類IL－17A/F表現，其確證IL－17A/F天然地自培養物中之經活化之人類T細胞產生。因此，IL－17A/F為獨特新細胞激素，可作為經分離、經活化之人類T細胞之天然產物來偵測，其重組形式已在蛋白質結構與基於細胞之檢定中加以表徵，以使其不同於且可區別於相關細胞激素。因此，此等研究提供及鑑別推動免疫系統回應於先前可能尚無免疫學活性之特定抗原的新穎免疫刺激劑(亦即IL－17A/F)。同樣地，新鑑別之免疫刺激劑具有重要臨床應用。此新穎IL－17A/F細胞激素或其促效劑由此將具有作為免疫刺激劑之實際效用，而當需要抑制免疫反應(諸如自體免疫疾病)時將預期抑制IL－17A/F活性之分子(拮抗劑)具有實際效用。特定言之，針對此新細胞激素之抗體(模擬(促效劑抗體)或抑制(拮抗劑抗體)IL－17A/F之免疫活性)將具有治療品質。起作用以抑制此新穎細胞激素之活性的小分子亦將具有潛在治療用途。

A.實施例

本發明係關於適用於診斷及治療包括人類之哺乳動物之免疫相關疾病的組合物及方法。本發明係基於鑑別刺激或抑制哺乳動物之免疫反應之蛋白質(包括促效劑抗體及拮抗劑抗體)。免疫相關疾病可藉由抑制或增強免疫反應來治療。增強免疫反應之分子刺激或加強對抗原之免疫反應。可於治療上使用刺激免疫反應之分子，其中免疫反應的增強將為有利的。或者，可於治療上使用抑制對抗原之免疫反應、削弱或減少對抗原之免疫反應的分子(例如中和抗體)，其中免疫反應的削弱將為有利的(例如炎症)。因此，本發明之IL－17A/F多肽及其促效劑及拮抗劑亦適用於製備供治療免疫相關疾病及發炎疾病之藥品及藥劑。在一特定態樣中，該等藥品及藥劑包含治療有效量之IL－17A/F多肽、其促效劑或拮抗劑與醫藥學上可接受之載劑。較佳地，混雜物為無菌的。

在又一實施例中，本發明係關於鑑別IL－17A/F多肽之促效劑或拮抗劑之方法，其包含使IL－17A/F多肽與候選分子接觸及監測由該IL－17A/F多肽介導之生物活性。較佳地，IL－17A/F多肽為原生序列IL－17A/F多肽。在一特定態樣中，IL－17A/F促效劑或拮抗劑為抗－IL－17A/F抗體。

在另一實施例中，本發明係關於包含與載劑或賦形劑混雜之IL－17A/F多肽或結合該多肽之促效劑抗體或拮抗劑抗體之組合物。在一態樣中，該組合物包含治療有效量之多肽或抗體。在另一態樣中，當組合物包含免疫刺激分子時，該組合物適用於：(a)增強發炎性細胞滲入有需要之哺乳動物組織中，(b)刺激或增強有需要之哺乳動物之免疫反應，(c)增加有需要之哺乳動物回應於抗原之T淋巴細胞增殖，(d)刺激T淋巴細胞之活性，或(e)增加血管滲透性。在又一態樣中，當組合物包含免疫抑制分子時，該組合物適用於：(a)減少發炎性細胞滲入有需要之哺乳動物組織中，(b)抑制或減少有需要之哺乳動物之免疫反應，(c)降低T淋巴細胞之活性，或(d)減少有需要之哺乳動物回應於抗原之T淋巴細胞增殖。在另一態樣中，組合物包含其他活性成份，其可(例如)為其他抗體或細胞毒性劑或化學治療劑。較佳地，組合物為無菌的。

在另一實施例中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含將治療有效量之IL－17A/F多肽、其促效劑或其拮抗劑投予該哺乳動物。在一較佳態樣中，該免疫相關病症係選自由以下各者組成之群：全身性紅斑狼瘡；類風濕性關節炎；骨關節炎；青少年慢性關節炎；脊椎關節病；全身性硬化症；特發性炎性肌病；修格連氏症候群(Sjgren's syndrome)；全身性血管炎；肉狀瘤病；自體免疫溶血性貧血；自體免疫血小板減少症；甲狀腺炎；糖尿病；免疫介導之腎病；中樞神經系統及周邊神經系統之髓鞘脫失病，諸如多發性硬化症、特發性髓鞘脫失多發性神經病或吉蘭－巴雷症候群(Guillain－Barrsyndrome)及慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病；肝膽病，諸如傳染性、自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管炎；發炎性腸病、麩質敏感性腸病及惠普爾氏病(Whipple's disease)；自體免疫或免疫介導之皮膚病，包括大皰性皮膚病、多形紅斑及接觸性皮炎、牛皮癬；過敏性疾病，諸如哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏及蕁麻疹；肺部免疫疾病，諸如嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎；移植相關疾病，包括移植排斥反應及移植物抗宿主疾病。

在另一實施例中，本發明提供特異性結合上述或下述多肽中之任一者之抗體。視情況，該抗體為單株抗體、人源化抗體、抗體片段或單鏈抗體。在一態樣中，本發明係關於結合IL－17A/F多肽之經分離抗體。在另一態樣中，抗體模擬IL－17A/F多肽之活性(促效劑抗體)，或反之抗體抑制或中和IL－17A/F多肽之活性(拮抗劑抗體)。在另一態樣中，抗體為單株抗體，其較佳具有非人類互補判定區(CDR)殘基及人類構架區(FR)殘基。抗體可經標記且可固定於固體支撐物上。在又一態樣中，抗體為抗體片段、單株抗體、單鏈抗體或抗獨特型抗體。在另一態樣中，抗體片段或單鏈抗體包含選自由圖6以下列胺基酸序列展示之胺基酸序列組成之群的Fab片段：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41及SEQ ID NO：42，其中該Fab片段進一步包含三個重鏈可變區，該等重鏈可變區含有由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基7至16組成之CDR－H1、由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基30至46組成之CDR－H2及由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基78至少至胺基酸殘基96組成之CDR－H3，其中該Fab片段能結合IL－17A/F。在另一態樣中，抗體片段或單鏈抗體包含選自由圖6以下列胺基酸序列展示之胺基酸序列組成之群的Fab片段：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41及SEQ ID NO：42，其中該Fab片段進一步包含至少重鏈可變區，該重鏈可變區含有由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基7至16組成之CDR－H1及由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基30至46組成之CDR－H2，其中該Fab片段能結合IL－17A/F。在另一態樣中，抗體片段或單鏈抗體包含選自由圖6以下列胺基酸序列展示之胺基酸序列組成之群的Fab片段：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41及SEQ ID NO：42，其中該Fab片段進一步包含至少重鏈可變區，該等重鏈可變區含有由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基7至16組成之CDR－H1及由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基78至少至胺基酸殘基96組成之CDR－H3，其中該Fab片段能結合IL－17A/F。在另一態樣中，抗體片段或單鏈抗體包含選自由圖6以下列胺基酸序列展示之胺基酸序列組成之群的Fab片段：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41及SEQ ID NO：42，其中該Fab片段進一步包含至少重鏈可變區，該等重鏈可變區含有由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基30至46組成之CDR－H2及由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基78至少至胺基酸殘基96組成之CDR－H3，其中該Fab片段能結合IL－17A/F。在另一態樣中，抗體片段或單鏈抗體包含選自由圖6以下列胺基酸序列展示之胺基酸序列組成之群的Fab片段：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41及SEQ ID NO：42，其中該Fab片段進一步包含至少一個重鏈可變區，該重鏈可變區含有由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基7至16組成之CDR－H1、由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基30至46組成之CDR－H2或由SEQ ID NO：9－42之胺基酸殘基78至少至胺基酸殘基96組成之CDR－H3，其中該Fab片段能結合IL－17A/F。在另一態樣中，SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42之該CDR－H1區至少包含對應於胺基序列GFTI(本文中命名為SEQ ID NO：77)之胺基酸殘基7－10，其中該SEQ ID NO：77能結合IL－17A/F。在另一態樣中，SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42之該CDR－H2區至少包含對應於胺基酸序列YADSVK(本文中命名為SEQ ID NO：78)之胺基酸殘基41－46，其中該SEQ ID NO：78能結合IL－17A/F。

在另一實施例中，本發明係關於選自由下列核苷酸序列組成之群的經分離核酸分子：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75及SEQ ID NO：76，其中該核酸分子編碼以下列胺基酸序列展示之Fab片段：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42，其中該Fab片段能結合IL－17A/F。

在另一態樣中，本發明提供由核苷酸序列編碼之能結合IL－17A/F之經分離Fab片段，該核苷酸序列編碼如上文所述之胺基酸序列。產生該經分離Fab片段之方法亦描述於本文中，其中彼等方法包含在適合於表現該Fab片段之條件下培養含有包含適當編碼核酸分子之載體的宿主細胞，及自細胞培養物回收該Fab片段。

在另一實施例中，本發明提供包含與醫藥學上可接受之載劑混雜之抗－IL－17A/F抗體之組合物。在一態樣中，該組合物包含治療有效量之抗體。較佳地，組合物為無菌的。組合物可以液體醫藥調配物之形式投與，其可經保藏以達成延長之儲存穩定性。或者，抗體為單株抗體、抗體片段、人源化抗體或單鏈抗體。

在又一實施例中，本發明係關於製造物品，其包含：(a)包含IL－17A/F多肽或其促效劑、拮抗劑或特異性結合該多肽之抗體的組合物；(b)含有該組合物之容器；及(c)附著於該容器之標籤或包括於該容器中之包裝插頁，其提及該IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑於治療免疫相關疾病中之用途。該組合物可包含治療有效量之IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑。

在另一實施例中，本發明係關於診斷哺乳動物之免疫相關疾病之方法，其包含偵測(a)自該哺乳動物獲得之組織細胞之測試樣本中編碼IL－17A/F多肽之基因的表現量及(b)相同細胞類型之已知正常組織細胞之對照樣本中編碼IL－17A/F多肽之基因的表現量，其中與該對照樣本相比該測試樣本中較高或較低之表現量指示用來獲得測試組織細胞之哺乳動物之免疫相關疾病的存在。

在另一實施例中，本發明係關於診斷哺乳動物之免疫疾病之方法，其包含：(a)使抗－IL－17A/F抗體與自該哺乳動物獲得之組織細胞之測試樣本接觸，及(b)偵測該抗體與該測試樣本中之IL－17A/F多肽之間的複合體的形成；其中該複合體的形成指示該疾病存在或不存在。偵測可為定性或定量的，且可與監測相同細胞類型之已知正常組織細胞之對照樣本中複合體形成比較進行。測試樣本中所形成之大量複合體指示用來獲得測試組織細胞之哺乳動物之免疫疾病存在或不存在。抗體較佳帶有可偵側標記。複合體形成可(例如)由光學顯微鏡法、流式細胞術、螢光測定法或此項技術中已知之其他技術來監測。測試樣本通常自疑患有免疫系統缺乏或異常之個體獲得。

在另一實施例中，本發明提供判定樣本中IL－17A/F多肽存在之方法，其包含將疑含有IL－17A/F多肽之細胞之測試樣本暴露於抗－IL－17A/F抗體及測定該抗體與該細胞樣本之結合。在一特定態樣中，樣本包含疑含有IL－17A/F多肽之細胞且抗體與該細胞結合。該抗體較佳經可偵側標記及/或與固體支撐物結合。

在另一實施例中，本發明係關於免疫相關疾病診斷套組，其包含於合適封裝中之抗－IL－17A/F抗體及載劑。該套組較佳含有關於使用該抗體偵測IL－17A/F多肽存在之說明書。較佳地，該載劑為醫藥學上可接受的。

在另一實施例中，本發明係關於診斷套組，其含有於合適封裝中之抗－IL－17A/F抗體。該套組較佳含有關於使用該抗體偵測IL－17A/F多肽之說明書。

在另一實施例中，本發明提供診斷哺乳動物之免疫相關疾病之方法，其包含偵測自該哺乳動物獲得之組織細胞之測試樣本中IL－17A/F多肽的存在或不存在，其中該測試樣本中IL－17A/F多肽的存在或不存在指示該哺乳動物之免疫相關疾病的存在。

在另一實施例中，本發明係關於鑑別IL－17A/F多肽之促效劑之方法，其包含：(a)在適合於誘導通常由IL－17A/F多肽誘導之細胞反應的條件下使細胞與待篩選之測試化合物接觸；及(b)測定該細胞反應的誘導以判定該測試化合物是否為有效促效劑，其中該細胞反應的誘導指示該測試化合物為有效促效劑。

在另一實施例中，本發明係關於鑑別能抑制IL－17A/F多肽之活性之化合物的方法，其包含在足以允許候選化合物與IL－17A/F多肽相互作用之條件及時間下使此兩種組份接觸及判定該IL－17A/F多肽之活性是否受抑制。在一特定態樣中，候選化合物或IL－17A/F多肽係固定於固體支撐物上。在另一態樣中，未固定之組份帶有可偵側標記。在一較佳態樣中，此方法包含以下步驟：(a)在IL－17A/F多肽存在下在適合於誘導通常由IL－17A/F多肽誘導之細胞反應的條件下使細胞與待篩選之測試化合物接觸；及(b)測定該細胞反應的誘導以判定該測試化合物是否為有效拮抗劑。

在另一實施例中，本發明提供鑑別抑制通常表現IL－17A/F多肽之細胞中該多肽表現之化合物的方法，其中該方法包含使該等細胞與測試化合物接觸及判定該IL－17A/F多肽之表現是否受抑制。在一較佳態樣中，此方法包含以下步驟：(a)在適合於允許IL－17A/F多肽表現之條件下使細胞與待篩選之測試化合物接觸；及(b)測定該多肽之表現的抑制。

在另一實施例中，本發明係關於治療罹患免疫相關病症之哺乳動物之免疫相關病症的方法，其包含將編碼以下各者之核酸分子投予該哺乳動物：(a)IL－17A/F多肽、(b)IL－17A/F多肽之促效劑或(c)IL－17A/F多肽之拮抗劑，其中該促效劑或拮抗劑可為抗－IL－17A/F抗體。在一較佳實施例中，哺乳動物為人類。在另一較佳實施例中，核酸係經由離體基因療法來投與。在又一較佳實施例中，核酸包含於載體內，該載體更佳為腺病毒載體、腺相關病毒載體、豆狀病毒載體或反轉錄病毒載體。

在另一態樣中，本發明提供包含基本上由以下各者組成之病毒載體的重組病毒粒子：啟動子，編碼(a)IL－17A/F多肽、(b)IL－17A/F多肽之促效劑多肽或(c)IL－17A/F多肽之拮抗劑多肽的核酸，及用於該多肽之細胞分泌之信號序列，其中該病毒載體係與病毒結構蛋白相締合。較佳地，該信號序列係來自哺乳動物，諸如來自原生IL－17A/F多肽。

在又一實施例中，本發明係關於包含核酸構築體之離體生產細胞，該核酸構築體表現反轉錄病毒結構蛋白且亦包含基本上由以下各者組成之反轉錄病毒載體：啟動子，編碼(a)IL－17A/F多肽、(b)IL－17A/F多肽之促效劑多肽或(c)IL－17A/F多肽之拮抗劑多肽的核酸，及用於該多肽之細胞分泌之信號序列，其中該生產細胞封裝與結構蛋白相締合之反轉錄病毒載體以產生重組反轉錄病毒粒子。

在又一實施例中，本發明提供增強發炎性細胞自哺乳動物之維管結構滲入組織中之方法，其包含將(a)IL－17A/F多肽或(b)IL－17A/F多肽之促效劑投予該哺乳動物，其中發炎性細胞自哺乳動物之維管結構滲入得以增強。

在又一實施例中，本發明提供減少發炎性細胞自哺乳動物之維管結構滲入組織中之方法，其包含將(a)IL－17A/F多肽或(b)IL－17A/F多肽之拮抗劑投予該哺乳動物，其中發炎性細胞自哺乳動物之維管結構滲入得以減少。

在又一實施例中，本發明提供增加哺乳動物之T淋巴細胞活性之方法，其包含將(a)IL－17A/F多肽或(b)IL－17A/F多肽之促效劑投予該哺乳動物，其中哺乳動物之T淋巴細胞活性得以增加。

在又一實施例中，本發明提供降低哺乳動物之T淋巴細胞活性之方法，其包含將(a)IL－17A/F多肽或(b)IL－17A/F多肽之拮抗劑投予該哺乳動物，其中哺乳動物之T淋巴細胞活性得以降低。

在又一實施例中，本發明提供增加哺乳動物之T淋巴細胞增殖之方法，其包含將(a)IL－17A/F多肽或(b)IL－17A/F多肽之促效劑投予該哺乳動物，其中哺乳動物之T淋巴細胞增殖得以增加。

在又一實施例中，本發明提供減少哺乳動物之T淋巴細胞增殖之方法，其包含將(a)IL－17A/F多肽或(b)IL－17A/F多肽之拮抗劑投予該哺乳動物，其中哺乳動物之T淋巴細胞增殖得以減少。

在又一實施例中，本發明係關於如上文所述之IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑或抗－IL－17A/F抗體之用途，其係用於製備適用於治療對IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑(例如抗－IL－17A/F)起反應之病狀之藥劑。在一特定態樣中，本發明係關於IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑於治療退化性軟骨病症之方法中之用途。

在又一實施例中，本發明係關於治療哺乳動物之退化性軟骨病症之方法，其包含將治療有效量之IL－17A/F多肽、其促效劑或拮抗劑投予罹患該病症之該哺乳動物。

在又一實施例中，本發明係關於包含以下各者之套組：包含與醫藥學上可接受之載劑混雜之IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑之組合物；含有該組合物之容器；及附著於該容器之標籤，其提及該組合物於治療退化性軟骨病症中之用途。

在另一態樣中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含將治療有效量之一或多種能抑制IL－17A/F多肽中之IL－17A(SEQ ID NO：3)與IL－17F(SEQ ID No：4)之拮抗劑投予該哺乳動物。在一較佳實施例中，哺乳動物為人類受檢者。

在一實施例中，此方法包含投與治療有效量之IL－17A拮抗劑及IL－17F拮抗劑。

在另一實施例中，IL－17A拮抗劑為特異性結合IL－17A(SEQ ID NO：3)之抗體或其片段。

在另一實施例中，IL－17F拮抗劑為特異性結合IL－17F(SEQ ID NO：4)之抗體或其片段。

在又一實施例中，IL－17A拮抗劑為特異性結合IL－17A(SEQ ID NO：3)之抗體或其片段，且IL－17F拮抗劑為特異性結合IL－17F(SEQ ID NO：4)之抗體或其片段。

在又一實施例中，拮抗劑為特異性結合IL－17A/F多肽中之IL－17A(SEQ ID NO：3)與IL－17F(SEQ ID NO：4)之抗體或其片段。

在一不同實施例中，抗體為識別存在於IL－17A(SEQ ID NO：3)與IL－17F(SEQ ID No：4)上之相同或相似抗原決定基之交叉反應性抗體。

在又一實施例中，抗體為具有IL－17A及IL－17F特異性之雙特異性抗體或其片段。

在所有實施例中，抗體可為單株抗體，該單株抗體可為嵌合抗體、人源化抗體或人類抗體。

在另一實施例中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含同時靶向該哺乳動物之IL－17A及IL－17F，其中該方法包含將治療有效量之兩種相異抗體同時投予該哺乳動物，其中一種抗體特異性結合IL－17A且另一種抗體特異性結合IL－17F。該免疫相關病症可為全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症、特發性炎性肌病、修格連氏症候群、全身性血管炎、肉狀瘤病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫血小板減少症、甲狀腺炎、糖尿病、免疫介導之腎病、中樞神經系統或周邊神經系統之髓鞘脫失病、特發性髓鞘脫失多發性神經病、吉蘭－巴雷症候群、慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病、肝膽病、傳染性或自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、硬化性膽管炎、發炎性腸病、麩質敏感性腸病、惠普爾氏病、自體免疫或免疫介導之皮膚病、大皰性皮膚病、多形紅斑、接觸性皮炎、牛皮癬、過敏性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏、蕁麻疹、肺部免疫疾病、嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化、過敏性肺炎、移植相關疾病、移植排斥反應或移植物抗宿主疾病。

在另一實施例中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含同時靶向該哺乳動物之IL－17A及IL－17F，其中該方法包含將治療有效量之交叉反應性抗體投予該哺乳動物，其中該抗體識別存在於IL－17A(具有胺基酸序列SEQ ID NO：3之多肽)與IL－17F(具有胺基酸序列SEQ ID NO：4之多肽)上之相同或相似抗原決定基。該免疫相關病症可為全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症、特發性炎性肌病、修格連氏症候群、全身性血管炎、肉狀瘤病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫血小板減少症、甲狀腺炎、糖尿病、免疫介導之腎病、中樞神經系統或周邊神經系統之髓鞘脫失病、特發性髓鞘脫失多發性神經病、吉蘭－巴雷症候群、慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病、肝膽病、傳染性或自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、硬化性膽管炎、發炎性腸病、麩質敏感性腸病、惠普爾氏病、自體免疫或免疫介導之皮膚病、大皰性皮膚病、多形紅斑、接觸性皮炎、牛皮癬、過敏性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏、蕁麻疹、肺部免疫疾病、嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化、過敏性肺炎、移植相關疾病、移植排斥反應或移植物抗宿主疾病。

在另一實施例中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含同時靶向該哺乳動物之IL－17A及IL－17F，其中該方法包含將治療有效量之雙特異性抗體投予該哺乳動物，其中該抗體由兩臂組成，其中該抗體之一臂識別IL－17A且該抗體之另一臂識別IL－17F。該免疫相關病症可包括全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症、特發性炎性肌病、修格連氏症候群、全身性血管炎、肉狀瘤病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫血小板減少症、甲狀腺炎、糖尿病、免疫介導之腎病、中樞神經系統或周邊神經系統之髓鞘脫失病、特發性髓鞘脫失多發性神經病、吉蘭－巴雷症候群、慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病、肝膽病、傳染性或自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、硬化性膽管炎、發炎性腸病、麩質敏感性腸病、惠普爾氏病、自體免疫或免疫介導之皮膚病、大皰性皮膚病、多形紅斑、接觸性皮炎、牛皮癬、過敏性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏、蕁麻疹、肺部免疫疾病、嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化、過敏性肺炎、移植相關疾病、移植排斥反應或移植物抗宿主疾病。

在另一實施例中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含同時靶向該哺乳動物之IL－17A及IL－17F，其中該方法包含將治療有效量之雙特異性抗體投予該哺乳動物，其中該抗體由識別IL－17A之重鏈及識別IL－17F之輕鏈組成。該免疫相關病症可包括全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症、特發性炎性肌病、修格連氏症候群、全身性血管炎、肉狀瘤病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫血小板減少症、甲狀腺炎、糖尿病、免疫介導之腎病、中樞神經系統或周邊神經系統之髓鞘脫失病、特發性髓鞘脫失多發性神經病、吉蘭－巴雷症候群、慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病、肝膽病、傳染性或自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、硬化性膽管炎、發炎性腸病、麩質敏感性腸病、惠普爾氏病、自體免疫或免疫介導之皮膚病、大皰性皮膚病、多形紅斑、接觸性皮炎、牛皮癬、過敏性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏、蕁麻疹、肺部免疫疾病、嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化、過敏性肺炎、移植相關疾病、移植排斥反應或移植物抗宿主疾病。

在另一實施例中，本發明係關於治療有需要之哺乳動物之免疫相關病症之方法，其包含同時靶向該哺乳動物之IL－17A及IL－17F，其中該方法包含將治療有效量之雙特異性抗體投予該哺乳動物，其中該抗體由識別IL－17F之重鏈及識別IL－17A之輕鏈組成。該免疫相關病症可包括全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症、特發性炎性肌病、修格連氏症候群、全身性血管炎、肉狀瘤病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫血小板減少症、甲狀腺炎、糖尿病、免疫介導之腎病、中樞神經系統或周邊神經系統之髓鞘脫失病、特發性髓鞘脫失多發性神經病、吉蘭－巴雷症候群、慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病、肝膽病、傳染性或自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、硬化性膽管炎、發炎性腸病、麩質敏感性腸病、惠普爾氏病、自體免疫或免疫介導之皮膚病、大皰性皮膚病、多形紅斑、接觸性皮炎、牛皮癬、過敏性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏、蕁麻疹、肺部免疫疾病、嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化、過敏性肺炎、移植相關疾病、移植排斥反應或移植物抗宿主疾病。

B.其他實施例

在本發明之其他實施例中，本發明提供包含編碼IL－17A/F多肽之核苷酸序列之經分離核酸分子。

在一態樣中，經分離核酸分子包含與(a)編碼具有如本文所揭示之全長胺基酸序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之胺基酸序列或如本文所揭示之全長胺基酸序列之任何其他特定定義片段之IL－17A/F多肽的DNA分子，或(b)(a)之DNA分子之補體具有以下核酸序列一致性的核苷酸序列：至少約80%核酸序列一致性、或者至少約81%核酸序列一致性、或者至少約82%核酸序列一致性、或者至少約83%核酸序列一致性、或者至少約84%核酸序列一致性、或者至少約85%核酸序列一致性、或者至少約86%核酸序列一致性、或者至少約87%核酸序列一致性、或者至少約88%核酸序列一致性、或者至少約89%核酸序列一致性、或者至少約90%核酸序列一致性、或者至少約91%核酸序列一致性、或者至少約92%核酸序列一致性、或者至少約93%核酸序列一致性、或者至少約94%核酸序列一致性、或者至少約95%核酸序列一致性、或者至少約96%核酸序列一致性、或者至少約97%核酸序列一致性、或者至少約98%核酸序列一致性及或者至少約99%核酸序列一致性。

在其他態樣中，經分離核酸分子包含與(a)包含如本文所揭示之全長IL－17A/F多肽cDNA之編碼序列、如本文所揭示之缺乏信號肽的IL－17A/F多肽之編碼序列或如本文所揭示之全長胺基酸序列的任何其他特定定義片段之編碼序列的DNA分子，或(b)(a)之DNA分子之補體具有以下核酸序列一致性的核苷酸序列：至少約80%核酸序列一致性、或者至少約81%核酸序列一致性、或者至少約82%核酸序列一致性、或者至少約83%核酸序列一致性、或者至少約84%核酸序列一致性、或者至少約85%核酸序列一致性、或者至少約86%核酸序列一致性、或者至少約87%核酸序列一致性、或者至少約88%核酸序列一致性、或者至少約89%核酸序列一致性、或者至少約90%核酸序列一致性、或者至少約91%核酸序列一致性、或者至少約92%核酸序列一致性、或者至少約93%核酸序列一致性、或者至少約94%核酸序列一致性、或者至少約95%核酸序列一致性、或者至少約96%核酸序列一致性、或者至少約97%核酸序列一致性、或者至少約98%核酸序列一致性及或者至少約99%核酸序列一致性。

在又一態樣中，本發明係關於一種經分離核酸分子，其包含與(a)編碼由如本文所揭示之寄存於ATCC之人類蛋白cDNA中之任一者編碼的相同成熟多肽之DNA分子，或(b)(a)之DNA分子之補體具有以下核酸序列一致性的核苷酸序列：至少約80%核酸序列一致性、或者至少約81%核酸序列一致性、或者至少約82%核酸序列一致性、或者至少約83%核酸序列一致性、或者至少約84%核酸序列一致性、或者至少約85%核酸序列一致性、或者至少約86%核酸序列一致性、或者至少約87%核酸序列一致性、或者至少約88%核酸序列一致性、或者至少約89%核酸序列一致性、或者至少約90%核酸序列一致性、或者至少約91%核酸序列一致性、或者至少約92%核酸序列一致性、或者至少約93%核酸序列一致性、或者至少約94%核酸序列一致性、或者至少約95%核酸序列一致性、或者至少約96%核酸序列一致性、或者至少約97%核酸序列一致性、或者至少約98%核酸序列一致性及或者至少約99%核酸序列一致性。

另一實施例係針對IL－17A/F多肽編碼序列或其互補序列之片段，其可適用作(例如)用於編碼IL－17A/F多肽之片段的雜交探針，該等雜交探針可視情況編碼包含抗－IL－17A/F抗體之結合位點之多肽；或適用作反義寡核苷酸探針。該等核酸片段通常長度為至少約20個核苷酸，或者長度為至少約30個核苷酸，或者長度為至少約40個核苷酸，或者長度為至少約50個核苷酸，或者長度為至少約60個核苷酸，或者長度為至少約70個核苷酸，或者長度為至少約80個核苷酸，或者長度為至少約90個核苷酸，或者長度為至少約100個核苷酸，或者長度為至少約110個核苷酸，或者長度為至少約120個核苷酸，或者長度為至少約130個核苷酸，或者長度為至少約140個核苷酸，或者長度為至少約150個核苷酸，或者長度為至少約160個核苷酸，或者長度為至少約170個核苷酸，或者長度為至少約180個核苷酸，或者長度為至少約190個核苷酸，或者長度為至少約200個核苷酸，或者長度為至少約250個核苷酸，或者長度為至少約300個核苷酸，或者長度為至少約350個核苷酸，或者長度為至少約400個核苷酸，或者長度為至少約450個核苷酸，或者長度為至少約500個核苷酸，或者長度為至少約600個核苷酸，或者長度為至少約700個核苷酸，或者長度為至少約800個核苷酸，或者長度為至少約900個核苷酸，及或者長度為至少約1000個核苷酸，其中在此情形中，術語"約"意謂所提及之核苷酸序列長度加上或減去10%之所提及長度。應注意，IL－17A/F多肽編碼核苷酸序列之新穎片段可以常規方式藉由使用許多熟知序列對準程式中之任一者將IL－17A/F多肽編碼核苷酸序列與其他已知核苷酸序列對準及確定哪個(哪些)多肽編碼核苷酸序列片段為新穎的來確定。所有該等多肽編碼核苷酸序列皆涵蓋於本文中。亦涵蓋由此等核苷酸分子片段編碼之多肽片段，較佳為包含抗－IL－17A/F抗體之結合位點之彼等IL－17A/F多肽片段。

在另一實施例中，本發明提供由上文所鑑別之經分離核酸序列中之任一者編碼的經分離IL－17A/F多肽。

在某一態樣中，本發明係關於經分離IL－17A/F多肽，其包含與具有如本文所揭示之全長胺基酸序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之胺基酸序列或如本文所揭示之全長胺基酸序列之任何其他特定定義片段的IL－17A/F多肽具有以下胺基酸序列一致性的胺基酸序列：至少約80%胺基酸序列一致性、或者至少約81%胺基酸序列一致性、或者至少約82%胺基酸序列一致性、或者至少約83%胺基酸序列一致性、或者至少約84%胺基酸序列一致性、或者至少約85%胺基酸序列一致性、或者至少約86%胺基酸序列一致性、或者至少約87%胺基酸序列一致性、或者至少約88%胺基酸序列一致性、或者至少約89%胺基酸序列一致性、或者至少約90%胺基酸序列一致性、或者至少約91%胺基酸序列一致性、或者至少約92%胺基酸序列一致性、或者至少約93%胺基酸序列一致性、或者至少約94%胺基酸序列一致性、或者至少約95%胺基酸序列一致性、或者至少約96%胺基酸序列一致性、或者至少約97%胺基酸序列一致性、或者至少約98%胺基酸序列一致性及或者至少約99%胺基酸序列一致性。

在又一態樣中，本發明係關於經分離IL－17A/F多肽，其包含與由如本文所揭示之寄存於ATCC之人類蛋白cDNA中之任一者編碼之胺基酸序列具有以下胺基酸序列一致性的胺基酸序列：至少約80%胺基酸序列一致性、或者至少約81%胺基酸序列一致性、或者至少約82%胺基酸序列一致性、或者至少約83%胺基酸序列一致性、或者至少約84%胺基酸序列一致性、或者至少約85%胺基酸序列一致性、或者至少約86%胺基酸序列一致性、或者至少約87%胺基酸序列一致性、或者至少約88%胺基酸序列一致性、或者至少約89%胺基酸序列一致性、或者至少約90%胺基酸序列一致性、或者至少約91%胺基酸序列一致性、或者至少約92%胺基酸序列一致性、或者至少約93%胺基酸序列一致性、或者至少約94%胺基酸序列一致性、或者至少約95%胺基酸序列一致性、或者至少約96%胺基酸序列一致性、或者至少約97%胺基酸序列一致性、或者至少約98%胺基酸序列一致性及或者至少約99%胺基酸序列一致性。

在又一態樣中，本發明係關於經分離IL－17A/F多肽，其包含當與具有如本文所揭示之全長胺基酸序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之胺基酸序列或如本文所揭示之全長胺基酸序列之任何其他特定定義片段的IL－17A/F多肽之胺基酸序列相比時記為至少約80%＋(positive)、或者至少約81%＋、或者至少約82%＋、或者至少約83%＋、或者至少約84%＋、或者至少約85%＋、或者至少約86%＋、或者至少約87%＋、或者至少約88%＋、或者至少約89%＋、或者至少約90%＋、或者至少約91%＋、或者至少約92%＋、或者至少約93%＋、或者至少約94%＋、或者至少約95%＋、或者至少約96%＋、或者至少約97%＋、或者至少約98%＋及或者至少約99%＋之胺基酸序列。

在一特定態樣中，本發明提供無N末端信號序列及/或起始甲硫胺酸且由編碼如上文所述之胺基酸序列之核苷酸序列編碼的經分離IL－17A/F多肽。產生該經分離IL－17A/F多肽之方法亦描述於本文中，其中彼等方法包含在適合於表現IL－17A/F多肽之條件下培養含有包含適當編碼核酸分子之載體的宿主細胞，及自細胞培養物回收該IL－17A/F多肽。

在另一實施例中，本發明係關於如本文所定義之原生IL－17A/F多肽之促效劑及拮抗劑。在一特定實施例中，促效劑或拮抗劑為抗－IL－17A/F抗體或小分子。

在又一實施例中，本發明係關於鑑別IL－17A/F多肽之促效劑或拮抗劑之方法，其包含使IL－17A/F多肽與候選分子接觸及監測由該IL－17A/F多肽介導之生物活性。較佳地，IL－17A/F多肽為原生IL－17A/F多肽。

在又一實施例中，本發明係關於包含與載劑組合之如本文所述之IL－17A/F多肽或IL－17A/F多肽之促效劑或拮抗劑，或抗－IL－17A/F抗體的組合物。視情況，該載劑為醫藥學上可接受之載劑。

本發明之另一實施例係針對如上文所述之IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑，或抗－IL－17A/F抗體之用途，其係用於製備適用於治療對IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑，或抗－IL－17A/F抗體起反應之病狀之藥劑。

在本發明之其他實施例中，本發明提供包含編碼本文所述之多肽中之任一者之DNA的載體。亦提供包含任一種該載體之宿主細胞。舉例而言，宿主細胞可為CHO細胞、大腸桿菌(E.coli)細胞、酵母細胞或桿狀病毒感染之昆蟲細胞。進一步提供產生本文所述之多肽中之任一者之方法且其包含在適合於表現所要多肽之條件下培養宿主細胞及自細胞培養物回收所要多肽。

在其他實施例中，本發明提供包含與異源多肽或胺基酸序列融合之本文所述多肽中之任一者的嵌合分子。該等嵌合分子之實例包含與免疫球蛋白之抗原決定基標記序列或Fc區融合之本文所述多肽中之任一者。

在另一實施例中，本發明提供特異性結合上述或下述多肽中之任一者之抗體。視情況，該抗體為單株抗體、人源化抗體、抗體片段或單鏈抗體。

在其他實施例中，本發明提供適用於分離基因組核苷酸序列及cDNA核苷酸序列或適用作反義探針之寡核苷酸探針，其中彼等探針可來源於上述或下述核苷酸序列中之任一者。

I.定義

"原生序列IL－17A/F多肽"包含具有與源自天然物之相應IL－17A/F多肽相同之胺基酸序列的多肽。該等原生序列IL－17A/F多肽可自天然物分離或可由重組或合成方式產生。術語"原生序列IL－17A/F多肽"特定涵蓋特定IL－17A/F多肽之天然產生之截斷形式或分泌形式(例如胞外域序列)、該多肽之天然產生之變異體形式(例如，替代性接合形式)及天然產生之對偶基因變異體。在本發明之各個實施例中，本文所揭示之原生序列IL－17A/F多肽為包含附隨圖式所示之全長胺基酸序列之成熟或全長原生序列多肽。起始密碼子及終止密碼子在圖式中以粗體字展示且加下劃線。然而，儘管附隨圖式中所揭示IL－17A/F多肽經展示以本文中命名為圖式中之胺基酸位置1之甲硫胺酸殘基起始，但可設想並可能使用位於圖式中之胺基酸位置1上游或下游之其他甲硫胺酸殘基作為IL－17A/F多肽之起始胺基酸殘基。

本文所揭示之各種IL－17A/F多肽之"信號肽"之近似位置於本說明書及/或附隨圖式中加以展示。然而，應注意信號肽之C末端邊界可改變，但最有可能如本文最初所鑑別之信號肽C末端邊界之任一側上不超過約5個胺基酸，其中信號肽之C末端邊界可依照此項技術中常規用於鑑別胺基酸序列元素類型之準則來鑑別(例如Nielsen等人，Prot.Eng.,10 ：1－6(1997)及von Heinje等人，Nucl.Acids.Res.,14 ：4683－4690(1986))。此外，亦應瞭解，在一些狀況下，信號序列自分泌多肽之裂解並不完全均一，從而產生一種以上分泌物質。當信號肽在如本文所鑑別之信號肽之C末端邊界之任一側上不超過約5個胺基酸內裂解時，此等成熟多肽及編碼其之聚核苷酸均由本發明所涵蓋。

"IL－17A/F多肽變異體"意謂如上文或下文所定義與如本文所揭示之全長原生序列IL－17A/F多肽序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之IL－17A/F多肽序列或如本文所揭示之全長IL－17A/F多肽序列之任何其他片段具有至少約80%胺基酸序列一致性的活性IL－17A/F多肽。該等IL－17A/F多肽變異體包括(例如)在全長原生胺基酸序列之N末端或C末端處有一或多個胺基酸殘基添加或缺失之IL－17A/F多肽。通常，IL－17A/F多肽變異體將與如本文所揭示之全長原生序列IL－17A/F多肽序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之IL－17A/F多肽序列或如本文所揭示之全長IL－17A/F多肽序列之任何其他特定定義片段具有以下胺基酸序列一致性：至少約80%胺基酸序列一致性、或者至少約81%胺基酸序列一致性、或者至少約82%胺基酸序列一致性、或者至少約83%胺基酸序列一致性、或者至少約84%胺基酸序列一致性、或者至少約85%胺基酸序列一致性、或者至少約86%胺基酸序列一致性、或者至少約87%胺基酸序列一致性、或者至少約88%胺基酸序列一致性、或者至少約89%胺基酸序列一致性、或者至少約90%胺基酸序列一致性、或者至少約91%胺基酸序列一致性、或者至少約92%胺基酸序列一致性、或者至少約93%胺基酸序列一致性、或者至少約94%胺基酸序列一致性、或者至少約95%胺基酸序列一致性、或者至少約96%胺基酸序列一致性、或者至少約97%胺基酸序列一致性、或者至少約98%胺基酸序列一致性及或者至少約99%胺基酸序列一致性。通常，IL－17A/F變異體多肽之長度為至少約10個胺基酸，或者長度為至少約20個胺基酸，或者長度為至少約30個胺基酸，或者長度為至少約40個胺基酸，或者長度為至少約50個胺基酸，或者長度為至少約60個胺基酸，或者長度為至少約70個胺基酸，或者長度為至少約80個胺基酸，或者長度為至少約90個胺基酸，或者長度為至少約100個胺基酸，或者長度為至少約150個胺基酸，或者長度為至少約200個胺基酸，或者長度為至少約300個胺基酸，或更長。

關於本文所鑑別之IL－17A/F多肽序列之"胺基酸序列一致性百分數(%)"定義為在將候選序列與特定IL－17A/F多肽序列對準且必要時引入空位以達成最大序列一致性百分數且並不將任何保守取代視為序列一致性之一部分之後，候選序列中與特定IL－17A/F多肽序列中之胺基酸殘基相同之胺基酸殘基的百分率。出於確定胺基酸序列一致性百分數之目的的對準可由此項技術技能範圍內之多種方式達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST－2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定用於量測對準之適當參數，包括達成在比較中之序列全長上的最大對準所需之任何演算法。然而，為達成本文之目的，胺基酸序列一致性值%係使用序列比較電腦程式ALIGN－2產生，其中ALIGN－2程式之完整源代碼提供於下表1中。ALIGN－2序列比較電腦程式係由Genentech,Inc.編寫，且下表1所示之源代碼已以使用者文件存檔於U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，在此處其以美國版權登記號TXU510087登記。ALIGN－2程式經Genentech,Inc.(South San Francisco,California)公開可用或可自下表1所提供之源代碼編譯。ALIGN－2程式應經編譯以在UNIX作業系統上、較佳數位UNIX V4.0D上使用。所有序列比較參數皆係由ALIGN－2程式設定且不改變。

在使用ALIGN－2進行胺基酸序列比較之情況下，特定胺基酸序列A與特定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(其或者可表述成與特定胺基酸序列B具有或包含某一胺基酸序列一致性%之特定胺基酸序列A)計算如下：100×分數X/Y其中X為在序列對準程式ALIGN－2之A與B對準中由彼程式記為一致匹配之胺基酸殘基數，且其中Y為B中胺基酸殘基總數。應瞭解，當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A與B之胺基酸序列一致性%將不等於B與A之胺基酸序列一致性%。作為使用此方法計算胺基酸序列一致性%之實例，表2及表3展示如何計算命名為"比較蛋白"之胺基酸序列與所關注之假想多肽之胺基酸序列的胺基酸序列一致性%，"比較蛋白"表示與所關注之多肽作比較之多肽的胺基酸序列，且"X"、"Y"及"Z"各自表示不同假想胺基酸殘基。

除非另有特別規定，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性值%皆係如上一段中所述使用ALIGN－2電腦程式獲得。然而，胺基酸序列一致性值%亦可如下所述藉由使用WU－BLAST－2電腦程式獲得(Altschul等人，Methods in Enzymology 266：460－480(1996))。大部分WU－BLAST－2搜尋參數設定為預設值。未設定為預設值之彼等參數，亦即可調參數，以下列值設定：重疊間隔＝1，重疊分數＝0.125，字組臨限(T)＝11，且計分矩陣＝BLOSUM62。當使用WU－BLAST－2時，胺基酸序列一致性值%係藉由(a)如由WU－BLAST－2所確定在具有來源於原生多肽之序列的所關注之多肽之胺基酸序列與所關注之比較胺基酸序列(亦即，與所關注之多肽作比較之序列，其可為IL－17A/F變異體多肽)之間的匹配一致胺基酸殘基數除以(b)所關注之多肽的胺基酸殘基總數來確定。舉例而言，在表述"包含與胺基酸序列B具有至少80%胺基酸序列一致性之胺基酸序列A的多肽"中，胺基酸序列A為所關注之"比較蛋白"之比較胺基酸序列且胺基酸序列B為所關注之多肽之胺基酸序列。

胺基酸序列一致性百分數亦可使用序列比較程式NCBI－BLAST2來確定(Altschul等人，Nucleic Acids Res. 25：3389－3402(1997))。NCBI－BLAST2序列比較程式可自http：//www.ncbi.nlm.nih.gov下載或另外自National Institute of Health,Bethesda,MD獲得。NCBI－BLAST2使用若干搜尋參數，其中所有彼等搜尋參數皆設定為預設值，包括(例如)：無遮罩＝是，股線＝全部，預期發生＝10，最小低複雜性長度＝15/5，多路e值＝0.01，多路常數＝25，最終空位對準降＝25且計分矩陣＝BLOSUM62。

在使用NCBI－BLAST2進行胺基酸序列比較之情況下，特定胺基酸序列A與特定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(其或者可表述成與特定胺基酸序列B具有或包含某一胺基酸序列一致性%之特定胺基酸序列A)計算如下：100×分數X/Y其中X為在序列對準程式NCBI－BLAST2之A與B對準中由彼程式記為一致匹配之胺基酸殘基數，且其中Y為B中胺基酸殘基總數。應瞭解，當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A與B之胺基酸序列一致性%將不等於B與A之胺基酸序列一致性%。

"IL－17A/F變異體聚核苷酸"或"IL－17A/F變異體核酸序列"意謂編碼如下文所定義之活性IL－17A/F多肽且與編碼如本文所揭示之全長原生序列IL－17A/F多肽序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之全長原生序列IL－17A/F多肽序列或如本文所揭示之全長IL－17A/F多肽序列之任何其他片段之核苷酸序列具有至少約80%核酸序列一致性的核酸分子。通常，IL－17A/F變異體聚核苷酸將與編碼如本文所揭示之全長原生序列IL－17A/F多肽序列、如本文所揭示之缺乏信號肽之全長原生序列IL－17A/F多肽序列或如本文所揭示之全長IL－17A/F多肽序列之任何其他片段的核酸序列具有以下核酸序列一致性：至少約80%核酸序列一致性、或者至少約81%核酸序列一致性、或者至少約82%核酸序列一致性、或者至少約83%核酸序列一致性、或者至少約84%核酸序列一致性、或者至少約85%核酸序列一致性、或者至少約86%核酸序列一致性、或者至少約87%核酸序列一致性、或者至少約88%核酸序列一致性、或者至少約89%核酸序列一致性、或者至少約90%核酸序列一致性、或者至少約91%核酸序列一致性、或者至少約92%核酸序列一致性、或者至少約93%核酸序列一致性、或者至少約94%核酸序列一致性、或者至少約95%核酸序列一致性、或者至少約96%核酸序列一致性、或者至少約97%核酸序列一致性、或者至少約98%核酸序列一致性及或者至少約99%核酸序列一致性。變異體不涵蓋原生核苷酸序列。

通常，IL－17A/F變異體聚核苷酸之長度為至少約30個核苷酸，或者長度為至少約60個核苷酸，或者長度為至少約90個核苷酸，或者長度為至少約120個核苷酸，或者長度為至少約150個核苷酸，或者長度為至少約180個核苷酸，或者長度為至少約210個核苷酸，或者長度為至少約240個核苷酸，或者長度為至少約270個核苷酸，或者長度為至少約300個核苷酸，或者長度為至少約450個核苷酸，或者長度為至少約600個核苷酸，或者長度為至少約900個核苷酸，或更長。

關於本文所鑑別之IL－17A/F編碼核酸序列之"核酸序列一致性百分數(%)"定義為在將候選序列與特定IL－17A/F核酸序列對準且必要時引入空位以達成最大序列一致性百分數之後，候選序列中與所關注之IL－17A/F核酸序列中之核苷酸相同之核苷酸的百分率。出於測定核酸序列一致性百分數之目的的對準可由此項技術技能範圍內之多種方式達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST－2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。然而，為達成本文之目的，核酸序列一致性值%係使用序列比較電腦程式ALIGN－2產生，其中ALIGN－2程式之完整源代碼提供於下表1中。ALIGN－2序列比較電腦程式係由Genentech,Inc.編寫，且下表1所示之源代碼已以使用者文件存檔於U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，在此處其以美國版權登記號TXU510087登記。ALIGN－2程式經Genentech,Inc.(South San Francisco,California)公開可用或可自下表1所提供之源代碼編譯。ALIGN－2程式應經編譯以在UNIX作業系統上、較佳數位UNIX V4.0D上使用。所有序列比較參數皆係由ALIGN－2程式設定且不改變。

在使用ALIGN－2進行核酸序列比較之情況下，特定核酸序列C與特定核酸序列D之核酸序列一致性%(其或者可表述成與特定核酸序列D具有或包含某一核酸序列一致性%之特定核酸序列C)計算如下：100×分數W/Z其中W為在序列對準程式ALIGN－2之C與D對準中由彼程式記為一致匹配之核苷酸數，且其中Z為D中核苷酸總數。應瞭解，當核酸序列C之長度不等於核酸序列D之長度時，C與D之核酸序列一致性%將不等於D與C之核酸序列一致性%。作為核酸序列一致性%計算之實例，表4及表5展示如何計算命名為"比較DNA"之核酸序列與命名為"IL－17A/F－DNA"之核酸序列之核酸序列一致性%，其中"IL－17A/F－DNA"表示所關注之假想IL－17A/F編碼核酸序列，"比較DNA"表示與所關注之"IL－17A/F－DNA"核酸分子作比較之核酸分子的核苷酸序列，且"N"、"L"及"V"各自表示不同假想核苷酸。

除非另有特別規定，否則本文所用之所有核酸序列一致性值%皆係如前一段中所述使用ALIGN－2電腦程式獲得。然而，核酸序列一致性值%亦可如下所述藉由使用WU－BLAST－2電腦程式獲得(Altschul等人，Methods in Enzymology 266：460－480(1996))。大部分WU－BLAST－2搜尋參數設定為預設值。未設定為預設值之彼等參數，亦即可調參數，以下列值設定：重疊間隔＝1，重疊分數＝0.125，字組臨限(T)＝11，且計分矩陣＝BLOSUM62。當使用WU－BLAST－2時，核酸序列一致性值%係藉由(a)如由WU－BLAST－2所確定在具有來源於原生序列IL－17A/F多肽編碼核酸之序列的所關注之IL－17A/F多肽編碼核酸分子之核酸序列與所關注之比較核酸分子(亦即，與所關注之IL－17A/F多肽編碼核酸分子作比較之序列，其可為變異體IL－17A/F聚核苷酸)之間的匹配一致核苷酸數除以(b)所關注之IL－17A/F多肽編碼核酸分子的核苷酸總數來確定。舉例而言，在表述"包含與核酸序列B具有至少80%核酸序列一致性之核酸序列A的經分離核酸分子"中，核酸序列A為所關注之比較核酸分子且核酸序列B為所關注之IL－17A/F多肽編碼核酸分子的核酸序列。

核酸序列一致性百分數亦可使用序列比較程式NCBI－BLAST2來確定(Altschul等人，Nucleic Acids Res. 25：3389－3402(1997))。NCBI－BLAST2序列比較程式可自http：//www.ncbi.nlm.nih.gov下載或另外自National Institute of Health,Bethesda,MD獲得。NCBI－BLAST2使用若干搜尋參數，其中所有彼等搜尋參數皆設定為預設值，包括(例如)：無遮罩＝是，股線＝全部，預期發生＝10，最小低複雜性長度＝15/5，多路e值＝0.01，多路常數＝25，最終空位對準降＝25且計分矩陣＝BLOSUM62。

在使用NCBI－BLAST2進行序列比較之情況下，特定核酸序列C與特定核酸序列D之核酸序列一致性%(其或者可表述成與特定核酸序列D具有或包含某一核酸序列一致性%之特定核酸序列C)計算如下：100×分數W/Z其中W為在序列對準程式NCBI－BLAST2之C與D對準中由彼程式記為一致匹配之核苷酸數，且其中Z為D中之核苷酸總數。應瞭解，當核酸序列C之長度不等於核酸序列D之長度時，C與D之核酸序列一致性%將不等於D與C之核酸序列一致性%。

在其他實施例中，IL－17A/F變異體聚核苷酸為編碼活性IL－17A/F多肽且能較佳於嚴格雜交及洗滌條件下與編碼如本文所揭示之全長IL－17A/F多肽之核苷酸序列雜交的核酸分子。IL－17A/F變異體多肽可為由IL－17A/F變異體聚核苷酸編碼之彼等多肽。

"經分離"當用於描述本文所揭示之各種多肽時意謂已經鑑別且自其天然環境之組份分離及/或回收之多肽。其天然環境之污染物組份為將通常干擾多肽之診斷或治療用途之物質且可包括酶、激素及其他蛋白類或非蛋白類溶質。在較佳實施例中，多肽將經純化(1)至足以獲得藉由使用旋杯式定序儀所測定N末端或內部胺基酸序列之至少15個殘基之程度，或(2)至在非還原或還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie blue)或(較佳)銀染色由SDS－PAGE測定之均質。經分離多肽包括原位處於重組細胞內之多肽，若IL－17A/F多肽天然環境之至少一種組份將不存在。然而，通常，經分離多肽將由至少一個純化步驟來製備。

"經分離"IL－17A/F多肽編碼核酸或其他多肽編碼核酸為經鑑別且與該多肽編碼核酸之天然來源中通常與其相締合之至少一種污染核酸分子分離之核酸分子。經分離多肽編碼核酸分子不同於其天然發現之形式或設定。經分離多肽編碼核酸分子由此區別於存在於天然細胞中之特定多肽編碼核酸分子。然而，經分離多肽編碼核酸分子包括含於通常表現該多肽之細胞中之多肽編碼核酸分子，其中(例如)該核酸分子係處於不同於天然細胞之彼核酸分子的染色體位置。

術語"控制序列"係指在特定宿主生物體中表現以可操作方式連接之編碼序列所必需之DNA序列。舉例而言，適合於原核細胞之控制序列包括啟動子、視情況操縱序列及核糖體結合位點。已知真核細胞利用啟動子、多聚腺嘌呤信號及強化子。

當使核酸與另一核酸序列成功能關係時，該核酸係"以可操作方式連接"。舉例而言，前序列或分泌前導子之DNA以可操作方式連接多肽之DNA，其條件為該前序列或分泌前導子表現為參與該多肽分泌之前體蛋白；啟動子或強化子以可操作方式連接編碼序列，其條件為該啟動子或強化子影響該序列之轉錄；或核糖體結合位點以可操作方式連接編碼序列，其條件為該核糖體結合位點經定位以有利於轉譯。一般而言，"以可操作方式連接"意謂連接中之DNA序列為相連的，且在分泌前導子之狀況下為相連的且處於閱讀相中。然而，強化子無須相連。連接係藉由在適宜限制性位點處接合來實現。若該等位點不存在，則根據習知實務使用合成寡核苷酸接附子或連接子。

雜交反應之"嚴格度"可易於由一般熟習此項技術者確定，且一般為取決於探針長度、洗滌溫度及鹽濃度之經驗計算值。一般而言，較長探針對於適當黏接而言需要較高溫度，而較短探針需要較低溫度。當互補股存在於低於其熔融溫度之環境中時，雜交一般視變性DNA再黏接之能力而定。探針與可雜交序列之間的所要同源性程度愈高，可使用之相對溫度愈高。因此，遵循較高相對溫度將傾向於使反應條件嚴格度較高，而較低溫度將傾向於使反應條件嚴格度較低。對於雜交反應之嚴格度的其他細節及說明，參見Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers,(1995)。

如本文所定義之"嚴格條件"或"高嚴格度條件"可由以下彼等者來加以鑑別：(1)使用低離子強度及高溫以供洗滌，例如50℃下之0.015 M氯化鈉/0.0015 M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉；(2)雜交期間使用變性劑，諸如甲醯胺，例如42℃下之50%(v/v)甲醯胺與0.1%牛血清白蛋白/0.1% Ficoll/0.1%聚乙烯吡咯啶酮/50 mM磷酸鈉緩衝液(pH 6.5)與750 mM氯化鈉、75 mM檸檬酸鈉；或(3)使用42℃下之50%甲醯胺、5×SSC(0.75 M NaCl、0.075 M檸檬酸鈉)、50 mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5×Denhardt氏溶液、超音波處理之鮭魚精子DNA(50 μg/ml)、0.1% SDS及10%硫酸葡聚糖，在42℃下於0.2×SSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)中洗滌及在55℃下於50%甲醯胺中洗滌，繼之以55℃之由含有EDTA之0.1×SSC組成之高嚴格度洗滌。

"中等嚴格條件"可如由Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual ,New York：Cold Spring Harbor Press,1989所述來加以鑑別，且包括使用嚴格度低於上述彼等條件之洗滌溶液及雜交條件(例如，溫度、離子強度及%SDS)。中等嚴格條件之一實例為在37℃下於含有以下各者之溶液中培育隔夜：20%甲醯胺、5×SSC(150 mM NaCl、15 mM檸檬酸三鈉)、50 mM磷酸鈉(pH 7.6)、5×Denhardt氏溶液、10%硫酸葡聚糖及20 mg/ml變性剪切鮭魚精子DNA，接著在約37－50℃下於1×SSC中洗滌過濾器。熟習此項技術者將瞭解必要時如何調整溫度、離子強度等以適應諸如探針長度及類似者之因素。

術語"經抗原決定基標記"當用於本文時係指包含與"標記多肽"融合之IL－17A/F多肽之嵌合多肽。標記多肽具有足夠殘基以提供抗體可針對之抗原決定基，而足夠短以使其不干擾與其融合之多肽的活性。標記多肽較佳亦相當獨特以使抗體大體上不與其他抗原決定基交叉反應。合適之標記多肽一般具有至少六個胺基酸殘基，且通常介於約8個與50個胺基酸殘基之間(較佳，介於約10個與20個胺基酸殘基之間)。

如本文所用之術語"免疫黏附素"表示將異源蛋白("黏附素")之結合特異性與免疫球蛋白恆定域之效應功能組合之抗體樣分子。結構上，免疫黏附素包含具有不同於抗體之抗原識別及結合位點(亦即，為"異源"的)之所要結合特異性的胺基酸序列與免疫球蛋白恆定域序列之融合體。免疫黏附素分子之黏附素部分通常為至少包含受體或配位體之結合位點之相連胺基酸序列。免疫黏附素中之免疫球蛋白恆定域序列可自任何免疫球蛋白獲得，該免疫球蛋白諸如IgG－1、IgG－2、IgG－3或IgG－4亞型，IgA(包括IgA－1及IgA－2)、IgE、IgD或IgM。

術語"拮抗劑"以最廣泛含義使用，且包括部分或完全阻斷、抑制或中和本文所揭示之原生IL－17A/F多肽之生物活性的任何分子。以類似方式，術語"促效劑"以最廣泛含義使用，且包括模擬本文所揭示之原生IL－17A/F多肽之生物活性的任何分子。合適之促效劑或拮抗劑分子特定包括促效劑或拮抗劑抗體或抗體片段、原生IL－17A/F多肽之片段或胺基酸序列變異體、肽、反義寡核苷酸、小有機分子等。用於鑑別IL－17A/F多肽之促效劑或拮抗劑之方法可包含使IL－17A/F多肽與候選促效劑或拮抗劑分子接觸及量測通常與IL－17A/F多肽相關之一或多種生物活性的可偵側變化。

"治療"係指治療性治療與預防性量測，其中目的在於預防或減緩(減輕)所靶向之病理病狀或病症。彼等需要治療者包括已患有病症之彼等者以及傾向於患有病症之彼等者或欲預防病症之彼等者。

"慢性"投藥係指以與急性模式相反之連續模式投與藥劑，以使初始治療作用(活性)維持之時間延長。"間歇性"投藥為並非無中斷地連續進行而實質上為週期性之治療。

出於治療目的之"哺乳動物"係指歸類為哺乳動物之任何動物，包括人類、家畜及農畜及動物園動物、運動型動物或寵物，諸如狗、貓、牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔等。較佳地，哺乳動物為人類。

與一或多種其他治療劑"組合"投藥包括同時(並行)投藥及以任何次序連續投藥。

如本文所用之"載劑"包括醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，其在所使用之劑量及濃度下對暴露於其之細胞或哺乳動物無毒。通常，生理學上可接受之載劑為pH值緩衝水溶液。生理學上可接受之載劑之實例包括：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽平衡離子，諸如鈉離子；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN^TM 、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS^TM 。

術語"抗體"以最廣泛含義使用且特定涵蓋(例如)單一抗－IL－17A/F單株抗體(包括促效劑抗體、拮抗劑抗體及中和抗體)、具有多抗原決定基特異性之抗－IL－17A/F抗體組合物(例如，雙特異性抗體，只要其顯示所要生物活性即可)、多株抗體、單鏈抗－IL－17A/F抗體，及抗－IL－17A/F抗體之片段(見下文)，只要其顯示所要生物活性或免疫活性即可。術語"免疫球蛋白"(Ig)在本文中與抗體可互換使用。

"經分離抗體"為已經鑑別且自其天然環境之組份分離及/或回收之抗體。其天然環境之污染物組份為將干擾該抗體之診斷或治療用途之物質且可包括酶、激素及其他蛋白類或非蛋白類溶質。在較佳實施例中，抗體將經純化(1)至如由Lowry方法所測定大於95重量%之抗體且最佳大於99重量%，(2)至足以獲得藉由使用旋杯式定序儀所測定N末端或內部胺基酸序列至少15個殘基之程度，或(3)至在還原或非還原條件下使用庫馬斯藍或(較佳)銀染色由SDS－PAGE測定之均質。經分離抗體包括原位處於重組細胞內之抗體，其條件為該抗體之天然環境之至少一種組份將不存在。然而，通常，經分離抗體將由至少一個純化步驟來製備。

基本4鏈抗體單元為包含兩個相同輕(L)鏈及兩個相同重(H)鏈之異源四聚醣蛋白(IgM抗體由5個基本異源四聚體單元連同稱作J鏈之另一多肽組成且由此含有10個抗原結合位點，而分泌IgA抗體可聚合以形成包含2－5個基本4鏈單元連同J鏈之多價集合體)。在IgG之狀況下，4鏈單元一般為約150,000道爾頓(dalton)。每一L鏈由一個共價雙硫鍵與H鏈連接，而兩個H鏈由一或多個雙硫鍵(視H鏈同型而定)彼此連接。每一H鏈及L鏈亦具有規則間隔之鏈內雙硫橋。每一H鏈在N末端具有可變域(V_H )，接著對於α及γ鏈中之每一者而言具有三個恆定域(C_H )且對於μ及ε同型而言具有四個C_H 域。每一L鏈在N末端具有可變域(V_L )，接著在其另一端具有恆定域(C_L )。V_L 與V_H 對準且C_L 與重鏈(C_H 1)之第一恆定域對準。咸信特定胺基酸殘基形成輕鏈可變域與重鏈可變域之間的界面。成對V_H 與V_L 一起形成單一抗原結合位點。對於不同類別抗體之結構及特性，參見(例如)Basic and Clinical Immunology ，第8版，Daniel P.Stites,Abba I.Terr及Tristram G.Parslow(編)，Appleton & Lange,Norwalk,CT,1994，第71頁及第6章。

來自任何脊椎動物物種之L鏈可基於其恆定域之胺基酸序列而歸屬於兩個截然不同類型(稱作及λ)中之一者。視其重鏈(C_H )之恆定域之胺基酸序列而定，免疫球蛋白可歸為不同類別或同型。存在五種類別之免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其具有分別命名為α、δ、ε、γ及μ之重鏈。γ及α類基於C_H 序列及功能之相對微小差異而進一步分成子類，例如，人類表現以下子類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。

術語"可變"係指抗體間可變域之某些片段的序列大不不同。V域介導抗原結合且界定特定抗體針對其特定抗原之特異性。然而，可變性在橫跨可變域之110個胺基酸之跨度上並不均勻分布。實情為，V區由具有15－30個胺基酸之相對恆定片段(稱作構架區(FR))組成，該等片段由較短的各自長9－12個胺基酸之極度可變區(稱作"高變區")隔開。原生重鏈及輕鏈之可變域各自包含四個主要採用β－摺疊構型、由三個高變區連接的FR，該三個高變區形成連接β－摺疊結構且在一些狀況下形成β－摺疊結構之一部分的環。每一鏈中之高變區由FR緊密保持於一起，且與來自另一鏈之高變區促使形成抗體之抗原結合位點(參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。恆定域並不直接與抗體與抗原之結合有關，但顯示各種效應功能，諸如使抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。

術語"高變區"當用於本文時係指負責結合抗原之抗體的胺基酸殘基。高變區一般包含來自"互補判定區"或"CDR"之胺基酸殘基(例如，V_L 中之殘基約24－34(L1)、50－56(L2)及89－97(L3)，及V_H 中之殘基約1－35(H1)、50－65(H2)及95－102(H3)；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))及/或來自"高變環"之彼等殘基(例如，V_L 中之殘基26－32(L1)、50－52(L2)及91－96(L3)，及V_H 中之殘基26－32(H1)、53－55(H2)及96－101(H3)；Chothia及LeskJ.Mol.Biol. 196：901－917(1987))。

如本文所用之術語"單株抗體"係指獲自大體上均質抗體群體之抗體，亦即，組成該群體之個別抗體除可少量存在之可能天然產生之突變以外皆相同。單株抗體具高度特異性，其針對單一抗原位點。此外，與包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑對比，每一單株抗體針對抗原上之單一決定子。除其特異性以外，單株抗體之有利之處在於其可在不受其他抗體污染下合成。修飾語"單株"並不視為需要由任何特定方法產生抗體。舉例而言，適用於本發明之單株抗體可由Kohler等人，Nature, 256：495(1975)首先描述之融合瘤方法製備或可使用重組DNA方法於細菌、真核動物或植物細胞中製造(參見，例如美國專利第4,816,567號)。舉例而言，亦可使用Clackson等人，Nature ,352：624－628(1991)及Marks等人，J.Mol.Biol. ,222：581－597(1991)中所述之技術將"單株抗體"自噬菌體抗體庫分離。

本文中之單株抗體包括"嵌合"抗體，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或子類之抗體中的相應序列相同或同源，而該(等)鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或子類之抗體中的相應序列相同或同源；以及該等抗體之片段，只要其顯示所要生物學活性即可(參見美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,81：6851－6855(1984))。本文中所關注之嵌合抗體包括包含來源於非人類靈長類動物(例如舊大陸猴(Old World Monkey)、Ape等)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列的"靈長源化"抗體。

"完整"抗體為包含抗原結合位點以及C_L 及至少重鏈恆定域(C_H 1、C_H 2及C_H 3)之抗體。恆定域可為原生序列恆定域(例如，人類原生序列恆定域)或其胺基酸序列變異體。較佳地，完整抗體具有一或多個效應功能。

"抗體片段"包含完整抗體之一部分，較佳包含完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')₂ 及Fv片段；雙功能抗體；線抗體(參見美國專利第5,641,870號，實例2；Zapata等人，Protein Eng. 8(10)：1057－1062[1995])；單鏈抗體分子；及自抗體片段形成之多特異性抗體。

抗體之木瓜蛋白酶消化產生兩個稱為"Fab"片段之相同抗原結合片段，及剩餘"Fc"片段(其名稱反映其易於結晶之能力)。Fab片段由完整L鏈連同H鏈之可變區域(V_H )及一條重鏈之第一恆定域(C_H 1)組成。每一Fab片段關於抗原結合為單價的，亦即，其具有單一抗原結合位點。抗體之胃蛋白酶處理得到粗略對應於兩個具有二價抗原結合活性之經雙硫鍵連接之Fab片段且仍能交聯抗原之單一大F(ab')₂ 片段。Fab'片段與Fab片段之區別在於其在C_H 1域之羧基末端具有其他少量殘基(包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸)。Fab'－SH為本文中對於恆定域之半胱胺酸殘基帶有游離硫醇基之Fab'的名稱。最初所產生之F(ab)₂ 抗體片段為其間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab'片段對。亦已知抗體片段之其他化學偶合。

Fc片段包含由雙硫鍵保持於一起之兩條H鏈的羧基末端部分。抗體之效應功能係由Fc區中之序列確定，該區亦為由某些類型細胞上所發現之Fc受體(FcR)識別之部分。

"Fv"為含有完整抗原識別及結合位點之最小抗體片段。此片段由緊密、非共價締合之一個重鏈可變區域與一個輕鏈可變區域之二聚體組成。自此兩個域摺疊形成六個高變環(自H鏈及L鏈各3個環)，其有助於胺基酸殘基結合抗原且賦予抗體以抗原結合特異性。然而，即使單一可變域(或僅包含三個對抗原具特異性之CDR的一半Fv)亦具有識別及結合抗原之能力，但其親和力低於完整結合位點。

亦縮寫成"sFv"或"scFv"之"單鏈Fv"為包含連接於單一多肽鏈中之V_H 及V_L 抗體域的抗體片段。較佳地，sFv多肽進一步包含介於V_H 域與V_L 域之間的多肽連接子，該多肽連接子使sFv能形成抗原結合所要之結構。對於sFv之評論，參見Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies ，第113卷，Rosenburg及Moore編，Springer－Verlag,New York，第269－315頁(1994)；Borrebaeck 1995，見下文。

術語"雙功能抗體"係指藉由在V_H 域與V_L 之間使用短連接子(約5－10個殘基)以便達成V域之鏈間而非鏈內配對來構築sFv片段(參見前段)所製備之小抗體片段，其產生二價片段，亦即具有兩個抗原結合位點之片段。雙特異性雙功能抗體為兩個"交越"sFv片段之異源二聚體，其中兩個抗體之V_H 域及V_L 域存在於不同多肽鏈上。雙功能抗體更充分描述於(例如)EP 404,097；WO 93/11161；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,90：6444－6448(1993)中。

非人類(例如齧齒動物)抗體之"人源化"形式為含有最少之來源於非人類抗體之序列的嵌合抗體。主要地，人源化抗體為人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體之高變區的殘基經來自具有所要抗體特異性、親和力及容量之非人類物種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)之高變區的殘基置換。在一些情形下，人類免疫球蛋白之構架區(FR)殘基經相應非人類殘基置換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體中或供體抗體中未發現之殘基。可進行此等修飾以進一步改進抗體效能。一般而言，人源化抗體將包含大體上所有至少一個，且通常兩個可變域，其中所有或大體上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環，且所有或大體上所有FR為人類免疫球蛋白序列之FR。人源化抗體視情況亦將包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常為人類免疫球蛋白之恆定區。更多詳情，參見Jones等人，Nature 321：522－525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323－329(1988)；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol. 2：593－596(1992)。

"物種依賴性抗體"(例如哺乳動物抗人類IgE抗體)為其對於來自第一哺乳動物物種之抗原所具有之結合親和力強於其對於來自第二哺乳動物物種之抗原同源物所具有之結合親和力的抗體。通常，物種依賴性抗體"特異性結合"人類抗原(亦即，具有不大於約1×10^－7 M、較佳不大於約1×10^－8 M且最佳不大於約1×10^－9 M之結合親和力(Kd)值)，但對於來自第二非人類哺乳動物物種之抗原同源物所具有之結合親和力比其對於人類抗原之結合親和力弱至少約50倍或至少約500倍或至少約1000倍。物種依賴性抗體可為如上文所定義之各種類型抗體中之任一者，但較佳為人源化抗體或人類抗體。

"結合IL－17A/F之寡肽"為結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽之寡肽。結合IL－17A/F之寡肽可使用已知之寡肽合成方法來化學合成或可使用重組技術來製備及純化。結合IL－17A/F之寡肽之長度通常為至少約5個胺基酸，或者長度為至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個胺基酸，或更長，其中該等寡肽能結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽。結合IL－17A/F之寡肽可在無過度實驗之情況下使用所熟知之技術來鑑別。在此方面，應注意，用於篩選寡肽庫中能特異性結合多肽靶之寡肽的技術在此項技術中已為熟知(參見，例如美國專利第5,556,762號、第5,750,373號、第4,708,871號、第4,833,092號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,571,689號、第5,663,143號；PCT公開案第WO 84/03506號及第WO84/03564號；Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. ,81：3998－4002(1984)；Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. ,82：178－182(1985)；Geysen等人，Synthetic Peptides as Antigens ,130－149(1986)；Geysen等人，J.Immunol.Meth. ,102：259－274(1987)；Schoofs等人，J.Immunol. ,140：611－616(1988)；Cwirla,S.E.等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,87：6378；Lowman,H.B.等人(1991)Biochemistry ,30：10832；Clackson,T.等人(1991)Nature ,352：624；Marks,J.D.等人(1991),J.Mol.Biol. ,222：581；Kang,A.S.等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,88：8363；及Smith,G.P.(1991)Current Opin.Biotechnol. ,2：668)。

"結合IL－17A/F之有機分子"為結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽且不同於如本文所定義之寡肽或抗體之有機分子。結合IL－17A/F之有機分子可使用已知方法來鑑別及化學合成(參見，例如PCT公開案第WO00/00823號及第WO00/39585號)。結合IL－17A/F之有機分子之尺寸通常小於約2000道爾頓，或者尺寸小於約1500、750、500、250或200道爾頓，其中能結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽之該等有機分子可在無過度實驗之情況下使用所熟知之技術來鑑別。在此方面，應注意，用於篩選有機分子庫中能結合多肽靶之分子的技術在此項技術中已為熟知(參見，例如PCT公開案第WO 00/00823號及第WO 00/39585號)。

"結合"所關注之抗原(例如，腫瘤相關多肽抗原靶)之抗體、寡肽或其他有機分子為以足夠親和力結合抗原者，因此該抗體、寡肽或其他有機分子適用作靶向表現該抗原之細胞或組織的診斷劑及/或治療劑，且與其他蛋白質無顯著交叉反應。在該等實施例中，如由螢光活化細胞分選(FACS)分析或放射免疫沈澱(RIA)所測定，抗體、寡肽或其他有機分子與"非靶"蛋白結合之程度將小於該抗體、寡肽或其他有機分子與其特定靶蛋白結合之約10%。關於抗體、寡肽或其他有機分子與靶分子之結合，術語"特異性結合"特定多肽或特定多肽靶上之抗原決定基或對特定多肽或特定多肽靶上之抗原決定基"具特異性"意謂明顯不同於非特異性相互作用之結合。特異性結合可(例如)藉由與對照分子之結合相比確定分子之結合來量測，該對照分子一般為不具有結合活性之類似結構分子。舉例而言，特異性結合可藉由與類似於標靶之對照分子(例如，過量未經標記之標靶)競爭來確定。在此狀況下，若經標記之標靶與探針之結合受過量未經標記之標靶競爭性抑制，則指示特異性結合。如本文所用之術語"特異性結合"特定多肽或特定多肽靶上之抗原決定基或對特定多肽或特定多肽靶上之抗原決定基"具特異性"可(例如)由對於標靶具有至少約10^－4 M、或者至少約10^－5 M、或者至少約10^－6 M、或者至少約10^－7 M、或者至少約10^－8 M、或者至少約10^－9 M、或者至少約10^－10 M、或者至少約10^－11 M、或者至少約10^－12 M或更大之Kd的分子顯示。在一實施例中，術語"特異性結合"係指分子結合特定多肽或特定多肽上之抗原決定基而不實質上結合任何其他多肽或多肽抗原決定基的結合。

"抑制表現IL－17A/F多肽之腫瘤細胞生長"之抗體、寡肽或其他有機分子或"生長抑制"抗體、寡肽或其他有機分子為明顯抑制表現或過度表現適當IL－17A/F多肽之癌細胞生長的抗體、寡肽或其他有機分子。較佳之生長抑制抗－IL－17A/F抗體、寡肽或有機分子使表現IL－17A/F之腫瘤細胞之生長與適當對照相比抑制高於20%、較佳約20%至約50%，且甚至更佳高於50%(例如約50%至約100%)，該對照通常為未經測試中之抗體、寡肽或其他有機分子處理之腫瘤細胞。在一實施例中，生長抑制可在細胞培養物中於約0.1至30 μg/ml或約0.5 nM至200 nM之抗體濃度下量測，其中該生長抑制係在將腫瘤細胞暴露於抗體之後1－10天測定。活體內腫瘤細胞之生長抑制可以各種方式測定。若投與約1微克/公斤體重至約100毫克/公斤體重之抗－IL－17A/F抗體使得在自首次投與抗體起約5天至3個月內、較佳約5天至30天內腫瘤尺寸減小或腫瘤細胞增殖減少，則該抗體具有活體內生長抑制性。

"誘導細胞凋亡"之抗體、寡肽或其他有機分子為誘導如由磷脂結合蛋白V(annexin V)結合、DNA斷裂、細胞皺縮、內質網擴張、細胞分裂及/或膜囊(稱作細胞凋亡體)形成所確定之漸進式細胞死亡的抗體、寡肽或其他有機分子。細胞通常為過度表現IL－17A/F多肽之細胞。較佳地，細胞為腫瘤細胞，例如前列腺細胞、乳腺細胞、卵巢細胞、胃細胞、子宮內膜細胞、肺細胞、腎細胞、結腸細胞、膀胱細胞。可使用多種方法來評估與細胞凋亡相關之細胞事件。舉例而言，磷脂醯絲胺酸(PS)易位可由磷脂結合蛋白結合來量測；DNA斷裂可經DNA梯帶來評估；且核/染色質凝縮連同DNA斷裂可由亞二倍體細胞之任何增加來評估。較佳地，誘導細胞凋亡之抗體、寡肽或其他有機分子為在磷脂結合蛋白結合檢定中相對於未經處理之細胞使磷脂結合蛋白結合得以誘導約2至50倍、較佳約5至50倍且最佳約10至50倍之抗體、寡肽或其他有機分子。

抗體"效應功能"係指可歸因於抗體之Fc區(原生序列Fc區或胺基酸序列變異體Fc區)之彼等生物活性，且其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。

"抗體依賴性細胞介導之細胞毒性"或"ADCC"係指一種細胞毒性形式，其中結合至存在於某些細胞毒性細胞(例如天然殺傷(NK)細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)上之分泌Ig使此等細胞毒性效應細胞能與帶有抗原之靶細胞特異性結合且隨後以細胞毒素殺死靶細胞。抗體"武裝"細胞毒性細胞且為該殺傷作用絕對所需。介導ADCC之初級細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現總結於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol. 9：457－92(1991)之第464頁之表3中。為評估所關注分子之ADCC活性，可進行活體外ADCC檢定，諸如美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中所述之彼檢定。適用於該等檢定之效應細胞包括外周血液單核細胞(PBMC)及天然殺傷(NK)細胞。其他或另外，所關注分子之ADCC活性可在活體內，例如在動物模型中，諸如在Clynes等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 95：652－656(1998)中所揭示之彼動物模型中評估。

"Fc受體"或"FcR"描述與抗體之Fc區結合之受體。較佳之FcR為原生序列人類FcR。此外，較佳之FcR為結合IgG抗體的FcR(γ受體)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類之受體，包括此等受體之對偶基因變異體及替代性接合形式。FcγRII受體包括具有主要在其細胞質域方面不同之類似胺基酸序列之FcγRIIA("活化受體")及FcγRIIB("抑制受體")。活化受體FcγRIIA於其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基元(ITAM)。抑制受體FcγRIIB於其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITIM)。(參見評論M.Daron,Annu.Rev.Immunol. 15：203－234(1997))。FcR評論於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol. 9：457－492(1991)；Capel等人，Immunomethods 4：25－34(1994)；及de Haas等人，J.Lab.Clin.Med. 126：330－41(1995)中。其他FcR，包括有待將來鑑別之彼等FcR，皆由本文中之術語"FcR"所涵蓋。該術語亦包括新生受體FcRn，其負責將母本IgG轉移至胎兒(Guyer等人， J. Immunol. 117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol. 24：249(1994))。

"人類效應細胞"為表現一或多個FcR且執行效應功能之白血球。較佳地，該等細胞至少表現FcγRIII且執行ADCC效應功能。介導ADCC之人類白血球之實例包括外周血液單核細胞(PBMC)、天然殺傷(NK)細胞、單核細胞、細胞毒性T細胞及嗜中性白血球；其中PBMC及NK細胞為較佳。效應細胞可自原生來源(例如自血液)分離。

"補體依賴性細胞毒性"或"CDC"係指在補體存在下靶細胞之溶解。經典補體路徑之活化係藉由補體系統之第一組份(C1q)結合與其同源抗原結合之抗體(適當子類之抗體)而引發。為評估補體活化，可進行CDC檢定，例如Gazzano－Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所述。

詞"標記"當用於本文時係指與抗體直接或間接結合以產生"經標記"抗體之可偵測化合物或組合物。標記本身可偵測(例如放射性同位素標記或螢光標記)，或在酶標記之狀況下可催化可偵測之受質化合物或組合物之化學變化。

"固相"意謂本發明抗體可黏附之非水性基質。本文所涵蓋之固相之實例包括部分或完全由玻璃(受控微孔玻璃)、多醣(例如瓊脂糖)、聚丙烯醯胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇及聚矽氧形成之彼等固相。在某些實施例中，視情形而定，固相可包含檢定盤之孔；在其他實施例中，其為純化管柱(例如親和層析管柱)。此術語亦包括離散粒子之不連續固相，諸如美國專利第4,275,149號中所述之彼等固相。

"脂質體"為包含各種類型之脂質、磷脂及/或界面活性劑之小泡，其適用於將藥物(諸如IL－17A/F多肽或其抗體)傳遞至哺乳動物。脂質體之組份通常以雙層形式排列，類似於生物膜之脂質排列。

"小分子"在本文中定義為具有低於約500道爾頓之分子量。

術語"調節"意謂影響(例如，上調、下調或以其他方式控制)信號轉導路徑之水平。在信號轉導控制下之細胞過程包括(但不限於)：特定基因轉錄；正常細胞功能，諸如代謝、增殖、分化、黏附、細胞凋亡及存活；以及異常過程，諸如轉化、阻斷分化及癌轉移。

出於本文目的之"活性"係指保持原生或天然產生之IL－17A/F多肽之生物活性及/或免疫活性的IL－17A/F多肽之形式，其中"生物"活性係指由原生或天然產生之IL－17A/F多肽所引起而不同於誘導針對原生或天然產生之IL－17A/F多肽所具有之抗原決定基的抗體產生之能力的生物功能(抑制或刺激)，且"免疫"活性係指誘導針對原生或天然產生之IL－17A/F多肽所具有之抗原決定基的抗體產生之能力。較佳生物活性包括誘導NF－B活化及刺激前發炎趨化激素IL－8及IL－6產生。另一較佳生物活性包括刺激外周血液單核細胞或CD4^＋細胞。另一較佳生物活性包括刺激T淋巴細胞增殖。另一較佳生物活性包括(例如)自THP1細胞釋放TNF－α。另一活性包括增強關節軟骨中之基質合成。或者，另一活性包括促進關節軟骨基質分解以及抑制基質合成。另一較佳生物活性包括在發炎性腸病之輕度至重度階段期間或在中風期間調節介白素－17信號轉導路徑之水平。

"免疫"活性僅係指誘導針對原生或天然產生之IL－17A/F多肽所具有之抗原決定基的抗體產生之能力。

"退化性軟骨病症"描述特徵主要在於軟骨基質破壞之諸多病症。其他病理包括氧化氮產生及蛋白聚糖分解升高。涵蓋於此定義內之例示性病症包括(例如)關節炎(例如骨關節炎、類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎)。

術語"免疫相關病症"意謂哺乳動物之免疫系統之組份引起、介導或以其他方式促使哺乳動物發病之疾病。亦包括免疫反應之刺激或介入對疾病進程具有改善作用之疾病。此術語包括免疫介導之發炎疾病、非免疫介導之發炎疾病、傳染病、免疫缺乏疾病、瘤形成等。

術語"T細胞介導之疾病"意謂T細胞直接或間接介導或以其他方式促使哺乳動物發病之疾病。T細胞介導之疾病可與細胞介導作用、淋巴激素介導作用等相關，且若B細胞(例如)受T細胞所分泌之淋巴激素刺激，則甚至與B細胞相關作用相關。

可根據本發明治療之免疫相關疾病及發炎疾病(其中有一些為免疫介導之疾病或T細胞介導之疾病)之實例包括：全身性紅斑狼瘡；類風濕性關節炎；青少年慢性關節炎；脊椎關節病；全身性硬化症(硬皮病)；特發性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)；修格連氏症候群；全身性血管炎；肉狀瘤病；自體免疫溶血性貧血(免疫全血細胞減少症、陣發性睡眠性血紅蛋白尿症)；自體免疫血小板減少症(特發性血小板減少性紫癜、免疫介導之血小板減少症)；甲狀腺炎(格雷氏病(Grave's disease)、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、青少年淋巴細胞甲狀腺炎、萎縮性甲狀腺炎)；糖尿病；免疫介導之腎病(絲球體腎炎、腎小管間質性腎炎)；中樞神經系統及周邊神經系統之髓鞘脫失病，諸如多發性硬化症、特發性髓鞘脫失多發性神經病或吉蘭－巴雷症候群及慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病；肝膽病，諸如傳染性肝炎(A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎及其他非嗜肝性病毒肝炎)、自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管炎；發炎性腸病(潰瘍性結腸炎：克隆氏病(Crohn's disease))、麩質敏感性腸病及惠普爾氏病；自體免疫或免疫介導之皮膚病，包括大皰性皮膚病、多形紅斑及接觸性皮炎、牛皮癬；過敏性疾病，諸如哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏及蕁麻疹；肺部免疫疾病，諸如嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎；移植相關疾病，包括移植排斥反應及移植物抗宿主疾病。傳染病包括病毒性疾病，諸如AIDS(HIV感染)、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎及E型肝炎、疱疹等；細菌感染；真菌感染；原蟲感染；及寄生蟲感染。術語"有效量"為達成具體規定目的之IL－17A/F多肽及/或促效劑/拮抗劑之濃度或量。IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑之"有效量"可以經驗確定。此外，"治療有效量"為有效達成規定治療作用之IL－17A/F多肽及/或促效劑/拮抗劑之濃度或量。此量亦可以經驗確定。

如本文所用之術語"細胞毒性劑"係指抑制或妨礙細胞功能及/或致使細胞破壞之物質。該術語意欲包括放射性同位素(例如I¹³¹ 、I¹²⁵ 、Y⁹⁰ 及Re¹⁸⁶ )、化學治療劑，及毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源之酶促活性毒素或其片段。

"化學治療劑"為適用於治療癌症之化學化合物。化學治療劑之實例包括：阿黴素(adriamycin)，羥道諾紅黴素(doxorubicin)，表柔比星(epirubicin)，5－氟尿嘧啶，阿糖胞苷(cytosine arabinoside)("Ara－C")，環磷醯胺，噻替哌(thiotepa)，白消安(busulfan)，細胞毒素，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(Taxol，Bristol－Myers Squibb Oncology,Princeton,NJ)及歐洲紫杉醇(docetaxel)(Taxotere，Rhne－Poulenc Rorer,Antony,France)、多烯紫衫醇(toxotere)之紫杉醇(taxoid)，甲胺喋呤(methotrexate)，順鉑(cisplatin)，美法侖(melphalan)，長春鹼(vinblastine)，博萊黴素(bleomycin)，依託泊苷(etoposide)，異環磷醯胺(ifosfamide)，絲裂黴素C(mitomycin C)，米托蒽醌(mitoxantrone)，長春新鹼(vincristine)，長春瑞賓(vinorelbine)，卡鉑(carboplatin)，替尼泊甙(teniposide)，道諾黴素(daunomycin)，洋紅黴素(carminomycin)，胺基蝶呤(aminopterin)，放線菌素D(dactinomycin)，絲裂黴素(mitomycin)，埃斯培拉黴素(esperamicin)(參見美國專利第4,675,187號)，美法侖及其他相關氮芥。此定義中亦包括起作用以調節或抑制對腫瘤之激素作用的激素劑，諸如他莫西芬(tamoxifen)及歐納氏酮(onapristone)。

"生長抑制劑"當用於本文時係指抑制活體外或活體內細胞、尤其過度表現本文所鑑別之基因中之任一者的癌細胞生長之化合物或組合物。因此，生長抑制劑為顯著減少S期中過度表現該等基因之細胞之百分率的生長抑制劑。生長抑制劑之實例包括阻斷細胞週期進程(在除S期以外之階段)之藥劑，諸如誘導G1停滯及M期停滯之藥劑。經典M期阻斷劑包括長春鹼類(長春新鹼及長春鹼)；紫杉酚(taxol)；及拓撲異構酶II(topo II)抑制劑，諸如羥道諾紅黴素、表柔比星、道諾黴素(daunorubicin)、依託泊苷及博萊黴素。使G1停滯之彼等藥劑亦擴溢以引起S期停滯，例如DNA烷化劑，諸如他莫西芬、潑尼松(prednisone)、氮烯唑胺(dacarbazine)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、順鉑、甲胺喋呤、5－氟尿嘧啶及ara－C。其他資訊可見於The Molecular Basis of Cancer ,Mendelsohn及Israel編，第1章，題為"Cell cycle regulation,oncogens,and antineoplastic drugs" Murakami等人(WB Saunders：Philadelphia,1995)，尤其第13頁中。

術語"細胞激素"為對由一個細胞群體所釋放並作為細胞間介體對另一細胞起作用之蛋白質的通用術語。該等細胞激素之實例為淋巴激素、單核球激素及傳統多肽激素。細胞激素包括：生長激素，諸如人生長激素、N－甲硫胺醯基人生長激素及牛生長激素；副甲狀腺激素；甲狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素；前鬆弛素；醣蛋白激素，諸如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)及促黃體激素(LH)；肝細胞生長因子；纖維母細胞生長因子；泌乳素；胎盤生乳素；腫瘤生長因子－α及腫瘤生長因子－β；苗勒氏管抑制物質(mullerian－inhibiting substance)；小鼠促性腺激素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神經生長因子，諸如NGF－β；血小板生長因子；轉化生長因子(TGF)，諸如TGF－α及TGF－β；胰島素樣生長因子－I及胰島素樣生長因子－II；紅血球生成素(EPO)；成骨因子；干擾素，諸如干擾素－α、干擾素－β及干擾素－γ；群落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞－CSF(M－CSF)、顆粒球－巨噬細胞－CSF(GM－CSF)及顆粒球－CSF(G－CSF)；介白素(IL)，諸如IL－1、IL－1a、IL－2、IL－3、IL－4、IL－5、IL－6、IL－7、IL－8、IL－9、IL－10、IL－11、IL－12或IL－17；腫瘤壞死因子，諸如TNF－α或TNF－β；及其他多肽因子，包括白血病抑制因子(LIF)及kit配位體(KL)。如本文所用之術語細胞激素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質及原生序列細胞激素之生物活性等效物。

II.本發明之組合物及方法

A.全長IL－17A/F多肽本發明提供編碼本申請案中稱作IL－17A/F多肽之多肽的新鑑別及分離之核苷酸序列。詳言之，如以下實例進一步詳細揭示，已鑑別及分離編碼各種IL－17A/F多肽之cDNA。

B.IL－17A/F多肽變異體除本文所述之全長原生序列IL－17A/F多肽以外，預期可製備IL－17A/F變異體。IL－17A/F變異體可藉由將適當核苷酸變化引入IL－17A/FDNA中及/或藉由合成所要IL－17A/F多肽來製備。熟習此項技術者將瞭解，胺基酸變化可改變IL－17A/F之轉譯後過程，諸如改變糖基化位點之數目或位置或改變膜錨定特徵。

本文所述之原生全長序列IL－17A/F中或IL－17A/F之各個域中之變化可(例如)使用(例如)美國專利第5,364,934號中所陳述之保守性及非保守性突變之技術及準則中之任一者來進行。變化可為一或多個編碼IL－17A/F之密碼子的取代、缺失或插入，其使得與原生序列IL－17A/F相比IL－17A/F之胺基酸序列變化。視情況，變化可為在IL－17A/F之一或多個域中至少一個胺基酸經任何其他胺基酸取代。確定在不會不利影響所要活性之情況下哪一個胺基酸殘基可插入、取代或缺失可以將IL－17A/F之序列與同源已知蛋白質分子之彼序列比較且使在高同源性區域中所進行之胺基酸序列變化數最小為導則。胺基酸取代可為一個胺基酸經具有類似結構特性及/或化學特性之另一胺基酸置換(諸如白胺酸經絲胺酸置換)，亦即保守性胺基酸置換之結果。插入或缺失可視情況在約1個至5個胺基酸之範圍內。所允許之變化可藉由在序列中系統地進行胺基酸插入、缺失或取代且針對由全長或成熟原生序列所顯示之活性測試所得變異體來確定。

IL－17A/F多肽片段提供於本文中。舉例而言，當與全長原生蛋白比較時，該等片段可在N末端或C末端處截斷，或可缺乏內部殘基。某些片段缺乏並非IL－17A/F多肽之所要生物活性所必需之胺基酸殘基。

IL－17A/F片段可由諸多習知技術中之任一者來製備。所要肽片段可以化學方法合成。一替代方法包括藉由酶消化，例如藉由用已知使蛋白質在由特定胺基酸殘基所界定之位點處裂解之酶處理蛋白質，或藉由用合適之限制酶消化DNA來產生IL－17A/F片段且使所要片段分離。另一合適之技術包括由聚合酶鏈反應(PCR)分離及擴增編碼所要多肽片段之DNA片段。在PCR中，在5'及3'引子處使用界定DNA片段之所要末端之寡核苷酸。較佳地，IL－17A/F多肽片段與本文所揭示之原生IL－17A/F多肽共有至少一種生物活性及/或免疫活性。

在特定實施例中，所關注之保守性取代於表6中在標題較佳取代項下展示。若該等取代使生物活性變化，則引入表6中命名為例示性取代或如下文中參考胺基酸類別進一步所述之更多實質性變化且篩選產物。

對IL－17A/F多肽之功能或免疫特性之實質性修飾係藉由選擇在對維持以下各者之影響方面顯著不同的取代來實現：(a)取代區域中之多肽骨架之結構，例如呈摺疊或螺旋構型；(b)目標位點處之分子的電荷或疏水性；或(c)側鏈尺寸。基於常見側鏈特性將天然產生之殘基分成以下各組：(1)疏水性：正白胺酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性親水性：cys、ser、thr；(3)酸性：asp、glu；(4)鹼性：asn、gln、his、lys、arg；(5)影響鏈定位之殘基：gly、pro；及(6)芳族：trp、tyr、phe。

非保守性取代將需要此等類別中之一者之成員與另一類別交換。亦可將該等經取代之殘基引入保守性取代位點中或更佳引入剩餘(非保守性)位點中。

變化可使用此項技術中已知之方法來進行，該等方法諸如寡核苷酸介導(或定點)突變、丙胺酸掃描及PCR突變。可在經選殖之DNA上進行定點突變[Carter等人，Nucl.Acids Res.,13 ：4331(1986)；Zoller等人，Nucl.Acids Res.,10 ：6487(1987)]、卡匣突變(Wells等人，Gene,34 ：315[1985])、限制性選擇突變(Wells等人，Philos.Trans.R.Soc.London SerA,317 ：415[1986])或其他已知技術以產生IL－17A/F變異體DNA。

亦可使用掃描胺基酸分析以鑑別沿相連序列之一或多個胺基酸。較佳之掃描胺基酸為相對較小的、中性胺基酸。該等胺基酸包括丙胺酸、甘胺酸、絲胺酸及半胱胺酸。此群中丙胺酸通常為較佳掃描胺基酸，此係由於其消除超出β－碳之側鏈且較不可能改變變異體之主鏈構形(Cunningham及Wells,Science,244 ：1081－1085[1989])。丙胺酸亦因其為最常見胺基酸而通常較佳。此外，其常見於內埋位置與暴露位置處(Creighton,The Proteins ,(W.H.Freeman & Co.,N.Y.)；Chothia,J.Mol.Biol.,150 ：1[1976])。若丙胺酸取代並不得到足夠量之變異體，則可使用等排胺基酸。

C.IL－17A/F之修飾 IL－17A/F之共價修飾包括於本發明之範疇內。一種類型之共價修飾包括使IL－17A/F多肽之靶向胺基酸殘基與有機衍生劑反應，該衍生劑能與IL－17A/F之所選側鏈或N末端殘基或C末端殘基反應。以雙功能劑衍生適用於(例如)使IL－17A/F與在純化抗－IL－17A/F抗體之方法中使用之水不溶性支撐基質或表面交聯，且反之亦然。常用交聯劑包括(例如)：1,1－雙(重氮乙醯基)－2－苯基乙烷；戊二醛；N－羥基丁二醯亞胺酯，例如與4－疊氮基水楊酸之酯；同質雙功能亞胺酯，包括二丁二醯亞胺酯，諸如3,3'－二硫代雙(丙酸丁二醯亞胺酯)；雙功能順丁烯二醯亞胺，諸如雙－N－順丁烯二醯亞胺基－1,8－辛烷；及諸如甲基－3－[(對疊氮基苯基)二硫基]丙醯亞胺酯之試劑。

其他修飾包括使麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基分別脫醯胺化成相應麩胺醯基及天冬胺醯基殘基；使脯胺酸及離胺酸羥基化；使絲胺醯基或酥胺醯基殘基之羥基磷酸化；使離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α－胺基甲基化[T.E.Creighton,Proteins：Structure and Molecular Properties, W.H.Freeman & Co.,San Francisco，第79－86頁(1983)]；使N末端胺乙醯化；及使任何C末端羧基醯胺化。

包括於本發明範疇內之IL－17A/F多肽之另一類型共價修飾包含改變該多肽之原生糖基化模式。"改變原生糖基化模式"出於本文之目的意謂使見於原生序列IL－17A/F中之一或多個碳水化合物部分缺失(藉由移除潛在糖基化位點或藉由以化學及/或酶促方式消除糖基化)及/或添加原生序列IL－17A/F中不存在之一或多個糖基化位點。另外，該短語包括原生蛋白之糖基化的質變，其包括所存在之各種碳水化合物部分之性質及比例的變化。

將糖基化位點添加至IL－17A/F多肽中可藉由改變胺基酸序列而實現。該改變可(例如)藉由將一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基添加至原生序列IL－17A/F(針對O－連接之糖基化位點)中或經一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基取代來進行。IL－17A/F胺基酸序列可視情況經DNA水平上之改變，尤其藉由使編碼IL－17A/F多肽之DNA在預選鹼基處突變以便產生將轉譯成所要胺基酸之密碼子而改變。

增加IL－17A/F多肽上之碳水化合物部分之數目的另一方式為藉由使醣苷與多肽化學偶合或酶促偶合。該等方法在此項技術中描述於(例如)於1987年9月11日公開之WO 87/05330中及Aplin及Wriston,CRC Crit.Rev.Biochem. ，第259－306(1981)頁中。

IL－17A/F多肽上所存在之碳水化合物部分之移除可以化學方法或酶促方法實現，或藉由突變取代編碼充當糖基化標靶之胺基酸殘基的密碼子來實現。化學脫糖基化技術在此項技術中為已知的且(例如)由Hakimuddin等人，Arch.Biochem.Biophys.,259 ：52(1987)及由Edge等人，Anal.Biochem.,118 ：131(1981)描述。如由Thotakura等人，Meth.Enzymol.,138 ：350(1987)所述，多肽上之碳水化合物部分的酶促裂解可藉由使用多種內切醣苷酶及外切醣苷酶而達成。

IL－17A/F之另一類型共價修飾包含使IL－17A/F多肽與多種非蛋白類聚合物(例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯)中之一者以美國專利第4,640,835號、第4,496,689號、第4,301,144號、第4,670,417號、第4,791,192號或第4,179,337號所陳述之方式連接。

本發明之IL－17A/F亦可以某一方式修飾以形成包含與另一、異源多肽或胺基酸序列融合之IL－17A/F的嵌合分子。

在一實施例中，該嵌合分子包含IL－17A/F與標記多肽之融合體，該標記多肽提供抗標記抗體可選擇性結合之抗原決定基。抗原決定基標記一般置於IL－17A/F之胺基末端或羧基末端處。該等經抗原決定基標記形式之IL－17A/F的存在可使用針對標記多肽之抗體來偵測。又，提供抗原決定基標記使IL－17A/F能易於由親和純化使用結合該抗原決定基標記之抗標記抗體或另一類型親和基質來純化。各種標記多肽及其個別抗體在此項技術中已為熟知。實例包括聚組胺酸(poly－his)或聚－組胺酸－甘胺酸(poly－his－gly)標記；flu HA標記多肽及其抗體12CA5[Field等人，Mol.Cell.Biol.,8 ：2159－2165(1988)]；c－myc標記及其8F9、3C7、6E10、G4、B7及9E10抗體[Evan等人，Molecular and Cellular Biology,5 ：3610－3616(1985)]；及單純疱疹病毒醣蛋白D(gD)標記及其抗體[Paborsky等人，Protein Engineering,3(6) ：547－553(1990)]。其他標記多肽包括Flag－肽[Hopp等人，BioTechnology,6 ：1204－1210(1988)]；KT3抗原決定基肽[Martin等人，Science,255 ：192－194(1992)]；α－微管蛋白抗原決定基肽[Skinner等人，J.Biol.Chem.,266 ：15163－15166(1991)]；及T7基因10蛋白肽標記[Lutz－Freyermuth等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87 ：6393－6397(1990)]。

在一替代實施例中，嵌合分子可包含IL－17A/F與免疫球蛋白或免疫球蛋白之特定區域之融合體。對於二價形式之嵌合分子(亦稱作"免疫黏附素")而言，該融合體可為與IgG分子之Fc區的融合體。Ig融合體較佳包括可溶性(跨膜域缺失或失活)形式之IL－17A/F多肽取代Ig分子內之至少一個可變區。在一尤其較佳實施例中，免疫球蛋白融合體包括IgG1分子之鉸鏈、CH2及CH3區或鉸鏈、CH1、CH2及CH3區。對於免疫球蛋白融合體的產生，亦參見於1995年6月27日頒布之美國專利第5,428,130號。

在又一實施例中，本發明之IL－17A/F多肽亦可以某一方式修飾以形成包含與白胺酸拉鏈融合之IL－17A/F多肽的嵌合分子。各種白胺酸拉鏈多肽已在此項技術中得以描述。參見，例如Landschulz等人，Science,240 ：1759(1988)；WO 94/10308；Hoppe等人，FEBS Letters,344 ：1991(1994)；Maniatis等人，Nature,341 ：24(1989)。咸信，與IL－17A/F多肽融合之白胺酸拉鏈的使用可為輔助溶液中之可溶性IL－17A/F多肽二聚或三聚所需的。熟習此項技術者將瞭解白胺酸拉鏈可在IL－17A/F分子之N末端或C末端處融合。

D.IL－17A/F之製備以下描述主要係關於藉由培養經含有IL－17A/F核酸之載體轉化或轉染之細胞來產生IL－17A/F。當然，預期可使用此項技術中所熟知之替代方法以製備IL－17A/F。舉例而言，IL－17A/F序列或其部分可藉由使用固相技術直接合成肽而產生[參見，例如Stewart等人，Solid－Phase Peptide Synthesis ,W.H.Freeman Co.,San Francisco,CA(1969)；Merrifield,J.Am.Chem.Soc.,85 ：2149－2154(1963)]。活體外蛋白質合成可使用手動技術或由自動化進行。自動化合成可(例如)使用Applied Biosystems肽合成器(Foster City,CA)、使用製造商之說明書來實現。IL－17A/F之各個部分可獨立地以化學方法合成且使用化學或酶促方法組合以產生全長IL－17A/F。

1.編碼IL－17A/F之DNA之分離編碼IL－17A/F之DNA可獲自由咸信具有IL－17A/F mRNA且以可偵測量表現其之組織製備之cDNA庫。因此，人類IL－17A/F DNA可便利地獲自由人類組織(諸如實例中所述之人類組織)製備之cDNA庫。IL－17A/F編碼基因亦可獲自基因組庫或由已知合成程序(例如自動化核酸合成)獲得。

庫可用經設計以鑑別所關注之基因或由其編碼之蛋白質的探針(諸如，IL－17A/F之抗體或具有至少約20－80個鹼基之寡核苷酸)進行篩選。用所選探針篩選cDNA或基因組庫可使用標準程序進行，諸如Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual (New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述之標準程序。分離編碼IL－17A/F之基因之一替代方式為使用PCR方法[Sambrook等人，同上；Dieffenbach等人，PCR Primer：A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press,1995)]。

以下實例描述用於篩選cDNA庫之技術。選作探針之寡核苷酸序列應具有足夠長度且應充分明確以使假陽性最小。寡核苷酸較佳經標記以使其在與篩選中之庫中之DNA雜交後即可偵測。標記方法在此項技術中已為熟知，且包括使用如經³² P標記之ATP的放射性標記、經生物素標記或經酶標記。包括中等嚴格度及高嚴格度之雜交條件提供於Sambrook等人(同上)中。

以該等庫篩選方法鑑別之序列可與公共資料庫(諸如GenBank)或其他私人序列資料庫中寄存並可用之其他已知序列比較及對準。在分子之規定區域內或橫跨全長序列之序列一致性(在胺基酸或核苷酸水平上)可使用此項技術中已知且如本文所述之方法來確定。

具有蛋白質編碼序列之核酸可藉由首先使用本文所揭示之推導胺基酸序列來篩選所選cDNA或基因組庫，且必要時使用如Sambrook等人(同上)所述之習知引子延長程序以偵測前驅物且處理可能尚未反轉錄成cDNA之mRNA中間物而獲得。

2.宿主細胞之選擇及轉化用本文所述之用於產生IL－17A/F之表現載體或選殖載體使宿主細胞轉染或轉化且將該等宿主細胞在適當時經改質的習知營養培養基中培養以誘導啟動子、選擇轉化體或擴增編碼所要序列之基因。諸如培養基、溫度、pH值及類似條件之培養條件可由熟習此項技術者在無過度實驗之情況下選擇。一般而言，使細胞培養之生產力最大之原則、方案及實用技術可見於Mammalian Cell Biotechnology：a Practical Approach ,M.Butler編(IRL Press,1991)及Sambrook等人，同上中。

真核細胞轉染及原核細胞轉化之方法為一般熟習此項技術者所知，例如CaCl₂ 、CaPO₄ 、脂質體介導之方法及電穿孔。視所使用之宿主細胞而定，轉化係使用適於該等細胞之標準技術進行。使用氯化鈣之鈣處理(如Sambrook等人(同上)所述)或電穿孔一般用於原核細胞。如Shaw等人，Gene ,23 ：315(1983)及於1989年6月29日公開之WO 89/05859所述，用根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens )感染用於使某些植物細胞轉化。對於無該等細胞壁之哺乳動物細胞而言，可使用Graham及van der Eb,Virology ,52 ：456－457(1978)之磷酸鈣沈澱法。哺乳動物細胞宿主系統轉染之通用態樣已描述於美國專利第4,399,216號中。轉化成酵母通常係根據Van Solingen等人，J.Bact.,130 ：946(1977)及Hsiao等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),76 ：3829(1979)之方法進行。然而，亦可使用將DNA引入細胞中之其他方法，諸如藉由核顯微注射、電穿孔、細菌原生質體與完整細胞融合或聚陽離子(例如聚凝胺(polybrene)、聚鳥胺酸)。對於使哺乳動物細胞轉化之各種技術，參見Keown等人，Methods in Enzymology,185 ：527－537(1990)及Mansour等人，Nature,336 ：348－352(1988)。

用於本文中在載體中選殖或表現DNA之合適之宿主細胞包括原核細胞、酵母或較高等真核細胞。合適之原核細胞包括(但不限於)：真細菌(eubacteria)，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸內菌(Enterobacteriaceae)，諸如大腸桿菌。各種大腸桿菌菌株為公開可用的，諸如大腸桿菌K12菌株MM294(ATCC 31,446)、大腸桿菌X1776(ATCC 31,537)、大腸桿菌菌株W3110(ATCC 27,325)及K5 772(ATCC 53,635)。其他合適之原核宿主細胞包括腸內菌，諸如埃希氏菌(Escherichia )，例如大腸桿菌)；腸桿菌(Enterobacter )；伊文氏桿菌(Erwinia )；克雷伯氏菌(Klebsiella )；變形桿菌(Proteus )；沙門氏菌(Salmonella )，例如鼠傷寒沙門氏桿菌(Salmonella typhimurium )；沙雷氏菌(Serratia )，例如黏質沙雷菌(Serratia marcescans )；及志賀桿菌(Shigella )；以及芽孢桿菌(Bacilli )，諸如枯草芽孢桿菌(B.subtilis )及地衣芽孢桿菌(B.licheniformis )(例如於1989年4月12日公開之DD 266,710中所揭示之地衣芽孢桿菌41P)；假單胞菌(Pseudomonas )，諸如綠膿桿菌(P.aeruginosa )；及鏈黴菌(Streptomyces) 。此等實例為說明性的而非限制性的。菌株W3110為一尤其較佳之宿主或親本宿主，此係由於其為重組IL－17A/F管式醱酵之常用宿主菌株。較佳地，宿主細胞分泌最少量之蛋白水解酶。舉例而言，菌株W3110可經修飾以實現編碼宿主所內生之蛋白質之基因的遺傳突變，該等宿主之實例包括：大腸桿菌W3110菌株1A2，其具有完整基因型tonA ；大腸桿菌W3110菌株9E4，其具有完整基因型tonA ptr3 ；大腸桿菌W3110菌株27C7(ATCC 55,244)，其具有完整基因型tonA ptr3 phoA E15(argF－lac)169 degP ompT kan ^r ；大腸桿菌W3110菌株37D6，其具有完整基因型tonA ptr3 phoA E15(argF－lac)169 degP ompT rbs7 ilvG kan ^r ；大腸桿菌W3110菌株40B4，其為具有非康黴素抗性(non－kanamycin resistant)degP 缺失突變之菌株37D6；及具有於1990年8月7日頒布之美國專利第4,946,783號中揭示之突變周質蛋白酶的大腸桿菌菌株。或者，活體外選殖方法(例如PCR或其他核酸聚合酶反應)為合適的。

除原核生物以外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為IL－17A/F編碼載體之合適之選殖宿主或表現宿主。釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae )為常用之較低等真核宿主微生物。其他宿主包括粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe )[Beach及Nurse,Nature,290 ：140(1981)；於1985年5月2日公開之EP 139,383]；刻魯維拉酵母(Kluyveromyces)宿主(美國專利第4,943,529號；Fleer等人，Bio/Technology,9 ：968－975[1991])，諸如乳酸刻魯維拉酵母(K.lactis )(MW98－8C、CBS683、CBS4574；Louvencourt等人，J.Bacteriol.,154(2) ：737－742[1983])、脆壁刻魯維拉酵母(K.fragilis )(ATCC 12,424)、保加利亞刻魯維拉酵母(K.bulgaricus )(ATCC 16,045)、威克海姆刻魯維拉酵母(K.wickeramii )(ATCC 24,178)、瓦提刻魯維拉酵母(K.waltii )(ATCC 56,500)、果蠅刻魯維拉酵母(K.drosophilarum )(ATCC 36,906；Van den Berg等人，Bio/Technology,8 ：135[1990])、耐溫刻魯維拉酵母(K.thermotolerans )及馬克斯刻魯維拉酵母(K.marxianus )；耶氏酵母(yarrowia )(EP 402,226)；甲醇酵母(Pichia pastoris )(EP 183,070；Sreekrishna等人，J.Basic Microbiol.,28 ：265－278[1988])；假絲酵母(Candida )；裏氏木黴(Trichoderma reesei )(EP 244,234)；粗厚神經胞子菌(Neurospora crassa )(Case等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,76 ：5259－5263[1979])；許旺酵母(Schwanniomyces )，諸如西方許旺酵母(Schwanniomyces occidentalis )(於1990年10月31日公開之EP 394,538)；及絲狀真菌，諸如神經胞子菌(Neurospora )、青黴菌(Penicillium )、彎頸黴(Tolypocladium )(於1991年1月10日公開之WO 91/00357)；及麴菌(Aspergillus )宿主，諸如泡盛麴菌(A.nidulans )(Ballance等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.,112 ：284－289[1983]；Tilburn等人，Gene,26 ：205－221[1983]；Yelton等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81 ：1470－1474[1984])及黑麴菌(A.niger )(Kelly及Hynes,EMBO J.,4 ：475－479[1985])。甲醇酵母適用於本文且包括(但不限於)：能於甲醇上生長之選自由以下各者組成之屬的酵母：漢森酵母(Hansenula )、假絲酵母、克勒克酵母(Kloeckera )、畢赤酵母(Pichia )、植酵母(Saccharomyces )、球擬酵母(Torulopsis )及紅酵母(Rhodotorula )。例示此類酵母之一列特定種可見於C.Anthony,The Biochemistry of Methylotrophs,269 (1982)中。

用於表現經糖基化IL－17A/F之合適之宿主細胞來源於多細胞生物體。無脊椎動物細胞之實例包括昆蟲細胞，諸如果蠅S2(Drosophila S2)細胞及夜蛾Sf9(Spodoptera Sf9)細胞或夜蛾High 5細胞；以及植物細胞。適用之哺乳動物宿主細胞株之實例包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞及COS細胞。更具體實例包括經SV40轉化之猴腎CV1細胞株(COS－7，ATCC CRL 1651)；人胚腎細胞株(經次選殖用於在懸浮液培養物中生長之293或293細胞，Graham等人，J.Gen Virol.,36 ：59(1977))；中國倉鼠卵巢細胞/－DHFR(CHO，Urlaub及Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77 ：4216[1980])；小鼠塞特利氏細胞(mouse sertoli cell)(TM4，Mather,Biol.Reprod.,23 ：243－251[1980])；人肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝細胞(Hep G2,HB 8065)；及小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)。適當宿主細胞之選擇視為處於此項技術之技能範圍內。

3.可複製載體之選擇及使用可將編碼IL－17A/F之核酸(例如cDNA或基因組DNA)插入供選殖(例如DNA擴增)用或供表現用之可複製載體中。各種載體為公開可用的。載體可(例如)呈質體、黏質體、病毒粒子或噬菌體形式。可由多種程序將適當核酸序列插入載體中。一般而言，使用此項技術中已知之技術將DNA插入適當限制性核酸內切酶位點中。載體組份一般包括(但不限於)以下各者中之一或多者：信號序列、複製起點、一或多個標記基因、強化子元素、啟動子及轉錄終止序列。含有此等組份中之一或多者之合適載體的構築使用熟習此項技術者所知之標準接合技術。

IL－17A/F不但可直接重組產生，而且可作為與異源多肽之融合多肽重組產生，該異源多肽可為在成熟蛋白質或多肽之N末端處具有特定裂解位點之信號序列或其他多肽。一般而言，信號序列可為載體之組份，或其可為插入該載體中之編碼IL－17A/F之DNA的一部分。該信號序列可為選自(例如)鹼性磷酸酶、青黴素酶、lpp或熱穩定腸毒素II前導子之群的原核信號序列。對於酵母分泌而言，信號序列可為(例如)酵母轉化酶前導子、α因子前導子(包括植酵母及刻魯維拉酵母α因子前導子，後者描述於美國專利第5,010,182號中)，或酸性磷酸酶前導子、白色念珠菌(C.albicans )葡糖澱粉酶前導子(於1990年4月4日公開之EP 362,179)，或於1990年11月15日公開之WO 90/13646中所述之信號。在哺乳動物細胞表現中，哺乳動物信號序列可用於直接分泌蛋白質，該等信號序列諸如來自相同或相關物種之分泌多肽的信號序列以及病毒分泌前導子。

表現載體與選殖載體均含有使載體能於一或多個所選宿主細胞中複製之核酸序列。該等序列對於多種細菌、酵母及病毒而言已為熟知。來自質體pBR322之複製起點適合於多數革蘭氏陰性細菌，2μ質體源適合於酵母，且各種病毒源(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV或BPV)適用於哺乳動物細胞中之選殖載體。

表現載體及選殖載體通常將含有選擇基因，亦稱為可選擇標記。典型選擇基因編碼具有以下功能之蛋白質：(a)賦予對抗生素或其他毒素(例如安比西林(ampicillin)、新黴素(neomycin)、甲胺喋呤或四環素)之抗性；(b)補充營養缺陷；或(c)提供不可自複合培養基獲得之關鍵養分，例如編碼芽孢桿菌之D－丙胺酸消旋酶之基因。

哺乳動物細胞之合適可選擇標記之實例為能鑑別能夠吸收編碼IL－17A/F之核酸之細胞的彼等可選擇標記，諸如DHFR或胸苷激酶。當使用野生型DHFR時，適當宿主細胞為如由Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77 ：4216(1980)所述製備及繁殖之缺乏DHFR活性之CHO細胞株。酵母中使用之合適之選擇基因為存在於酵母質體YRp7中之trp 1基因[Stinchcomb等人，Nature,282 ：39(1979)；Kingsman等人，Gene,7 ：141(1979)；Tschemper等人，Gene,10 ：157(1980)]。trp 1基因為缺乏於色胺酸中生長之能力的突變酵母菌株提供選擇標記，例如ATCC編號44076或PEP4－1[Jones,Genetics,85 ：12(1977)]。

表現載體及選殖載體通常含有以可操作方式連接編碼IL－17A/F之核酸序列的啟動子以引導mRNA合成。由多種潛在宿主細胞識別之啟動子已為熟知。適合於為原核宿主使用之啟動子包括β－內醯胺酶及乳糖啟動子系統[Chang等人，Nature,275 ：615(1978)；Goeddel等人，Nature,281 ：544(1979)]；鹼性磷酸酶；色胺酸(trp)啟動子系統[Goeddel,Nucleic Acids Res.,8 ：4057(1980)；EP 36,776]；及雜交啟動子，諸如tac啟動子[deBoer等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80 ：21－25(1983)]。細菌系統中使用之啟動子亦將含有以可操作方式連接編碼IL－17A/F之DNA的Shine－Dalgarno(S.D.)序列。

為酵母宿主使用之合適啟動序列之實例包括3－磷酸甘油酸激酶之啟動子[Hitzeman等人，J.Biol.Chem.,255 ：2073(1980)]或其他糖分解酶之啟動子[Hess等人，J.Adv.Enzyme Reg.,7 ：149(1968)；Holland,Biochemistry,17 ：4900(1978)]，該等糖分解酶諸如烯醇酶、甘油醛－3－磷酸脫氫酶、六碳糖激酶、丙酮酸脫羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖－6－磷酸異構酶、3－磷酸甘油酸變位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖異構酶、磷酸葡糖異構酶及葡萄糖激酶。

作為具有轉錄受生長條件控制之額外優勢之誘導型啟動子的其他酵母啟動子為醇脫氫酶2、異細胞色素C(isocytochrome C)、酸性磷酸酶、與氮代謝相關之降解酶、金屬硫蛋白、甘油醛－3－磷酸脫氫酶及負責利用麥芽糖及半乳糖之酶的啟動子區。酵母表現中使用之合適之載體及啟動子進一步描述於EP 73,657中。

在哺乳動物宿主細胞中自載體轉錄IL－17A/F係(例如)由獲自諸如多瘤病毒、禽痘病毒(於1989年7月5日公開之UK 2,211,504)、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、禽類肉瘤病毒、細胞巨大病毒、反轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿猴病毒40(SV40)之病毒的基因組，獲自異源哺乳動物啟動子(例如肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子)及獲自熱休克啟動子的啟動子控制，其限制條件為該等啟動子與宿主細胞系統相容。

由較高等真核細胞轉錄編碼IL－17A/F之DNA可藉由將強化子序列插入載體中而增加。強化子為DNA之順位元作用元素，其通常為約10至300 bp，該等強化子對啟動子起作用以增加其轉錄。許多強化子序列現已自哺乳動物基因(血球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α－胎蛋白及胰島素)獲知。然而，通常吾人將使用來自真核細胞病毒之強化子。實例包括複製起點晚期(bp 100－270)之SV40強化子、細胞巨大病毒早期啟動子強化子、複製起點晚期之多瘤強化子及腺病毒強化子。強化子可在IL－17A/F編碼序列之5'或3'位置處接合至載體中，但較佳位於自啟動子之5'位點處。

用於真核宿主細胞(酵母細胞、真菌細胞、昆蟲細胞、植物細胞、動物細胞、人類細胞或來自其他多細胞生物體之有核細胞)之表現載體亦將含有終止轉錄及穩定mRNA所必需之序列。該等序列通常可自真核或病毒DNA或cDNA之5'及偶爾3'未轉譯區獲得。此等區域含有在編碼IL－17A/F之mRNA之未轉譯部分中轉錄為多聚腺苷酸化片段之核苷酸片段。

適於在重組脊椎動物細胞培養物中合成IL－17A/F之其他方法、載體及宿主細胞描述於Gething等人，Nature,293 ：620－625(1981)；Mantei等人，Nature,281 ：40－46(1979)；EP 117,060；及EP 117,058中。

4.偵測基因擴增/表現基因擴增及/或表現可於樣本中直接(例如)由習知南方墨點法、北方墨點法(量化mRNA轉錄)(Thomas,Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,77：5201－5205[1980])、點漬墨法(DNA分析)或原位雜交法，使用經適當標記之探針(基於本文所提供之序列)來量測。或者，可使用可識別特定雙鏈體之抗體，該等雙鏈體包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體及DNA－RNA雜交雙鏈體或DNA－蛋白質雙鏈體。該等抗體可繼而經標記且可進行檢定，其中雙鏈體與表面結合，以便在表面上形成雙鏈體後可偵測與雙鏈體結合之抗體的存在。

或者，基因表現可由免疫法(諸如細胞或組織切片之免疫組織化學染色)及細胞培養物或體液之檢定來量測，以直接量化基因產物之表現。適用於免疫組織化學染色及/或樣本流體檢定之抗體可為單株抗體或多株抗體，且可於任何哺乳動物中製備。便利地，抗體可針對原生序列IL－17A/F多肽或針對基於本文所提供之DNA序列的合成肽或針對與IL－17A/F DNA融合且編碼特定抗體抗原決定基之外源序列來製備。

5.多肽之純化 IL－17A/F之形式可自培養基或自宿主細胞溶解產物回收。若與膜結合，則可使用合適之清潔劑溶液(例如Triton－X 100)或藉由酶促裂解使其自膜釋放。表現IL－17A/F所使用之細胞可由各種物理或化學方式破壞，該等方式諸如凍融循環、超音波處理、機械破壞或細胞溶解劑。

可需要自重組細胞蛋白質或多肽純化IL－17A/F。以下程序例示合適之純化程序：藉由在離子交換管柱上分級；乙醇沈澱；逆相HPLC；於二氧化矽上或於陽離子交換樹脂(諸如DEAE)上層析；層析聚焦；SDS－PAGE；硫酸銨沈澱；使用(例如)Sephadex G－75凝膠過濾；蛋白質A瓊脂糖管柱以移除諸如IgG之污染物；及金屬螯合管柱以結合經抗原決定基標記形式之IL－17A/F。可使用各種蛋白質純化方法且該等方法在此項技術中已知並描述於(例如)Deutscher,Methods in Enzymology ,182(1990)；Scopes,Protein Purification：Principles and Practice ,Springer－Verlag,New York(1982)中。所選純化步驟將視(例如)所用產生方法之性質及所產生之特定IL－17A/F而定。

E.IL－17A/F之用途編碼IL－17A/F之核苷酸序列(或其互補序列)在分子生物學技術中具有各種應用，包括用作雜交探針、用於染色體及基因定位及用於產生反義RNA及DNA。IL－17A/F核酸亦將適用於由本文所述之重組技術製備IL－17A/F多肽。

全長原生序列IL－17A/F基因或其部分可用作cDNA庫之雜交探針以使全長IL－17A/F cDNA分離或使與本文所揭示之原生IL－17A/F序列具有所要序列一致性的其他cDNA(例如，編碼IL－17A/F之天然產生之變異體或來自其他物種之IL－17A/F的彼等cDNA)分離。視情況，探針之長度將為約20個至約50個鹼基。雜交探針可來源於全長原生核苷酸序列之至少部分新穎區，其中彼等區可在無過度實驗之情況下確定或自包括原生序列IL－17A/F之啟動子、強化子元素及內含子的基因組序列確定。舉例而言，篩選方法將包含使用已知DNA序列使IL－17A/F基因之編碼區分離以合成具有約40個鹼基之所選探針。雜交探針可由多種標記來標記，該等標記包括放射性核苷酸，諸如³² P或³⁵ S；或酶標記，諸如經由抗生蛋白/生物素偶合系統與探針偶合之鹼性磷酸酶。具有與本發明之IL－17A/F基因之序列互補之序列的經標記探針可用於篩選人類cDNA、基因組DNA或mRNA之庫以確定探針與該等庫中之哪些成員雜交。雜交技術進一步詳細描述於以下實例中。

使用本文所揭示之方法，本發明申請案所揭示之任何EST序列可類似地用作探針。

IL－17A/F核酸之其他適用片段包括包含能與靶IL－17A/F mRNA(有義)或IL－17A/F DNA(反義)序列結合之單股核酸序列(RNA或DNA)的反義或有義寡核苷酸。根據本發明，反義或有義寡核苷酸包含IL－17A/F DNA之編碼區之片段。該片段一般包含至少約14個核苷酸、較佳約14個至30個核苷酸。基於編碼特定蛋白質之cDNA序列得到反義或有義寡核苷酸之能力描述於(例如)Stein及Cohen(Cancer Res. 48：2659,[1988])及van der Krol等人(BioTechniques,6 ：958,[1988])中。

反義或有義寡核苷酸與靶核酸序列結合引起雙鏈體之形成，該等雙鏈體由包括雙鏈體之降解增強、轉錄或轉譯提前終止之若干方式中之一者或由其他方式阻斷靶序列之轉錄或轉譯。反義寡核苷酸由此可用於阻斷IL－17A/F蛋白質表現。反義或有義寡核苷酸進一步包含具有經修飾之糖－磷酸二酯主鏈(或其他糖鍵，諸如WO 91/06629中所述之彼等糖鍵)且該等糖鍵對內源核酸酶具抗性之寡核苷酸。糖鍵具抗性之該等寡核苷酸在活體內穩定(亦即，能抵抗酶促降解)，但保持能結合靶核苷酸序列之序列特異性。

有義或反義寡核苷酸之其他實例包括與有機部分(諸如WO 90/10048中所述之彼等有機部分)及增加寡核苷酸對靶核酸序列(諸如聚(L－離胺酸))之親和力的其他部分共價連接之彼等寡核苷酸。此外，嵌入劑(諸如玫瑰樹鹼(ellipticine))及烷化劑或金屬錯合物可與有義或反義寡核苷酸連接以改變反義或有義寡核苷酸對靶核苷酸序列之結合特異性。

可由包括(例如)CaPO₄ 介導之DNA轉染、電穿孔之任何基因轉移法或藉由使用諸如Epstein－Barr病毒之基因轉移載體將反義或有義寡核苷酸引入含有靶核酸序列之細胞中。在一較佳程序中，將反義或有義寡核苷酸插入合適之反轉錄病毒載體中。使含有靶核酸序列之細胞於活體內或離體與重組反轉錄病毒載體接觸。合適之反轉錄病毒載體包括(但不限於)來源於鼠類反轉錄病毒M－MuLV、N2(來源於M－MuLV之反轉錄病毒)之彼等反轉錄病毒載體，或命名為DCT5A、DCT5B及DCT5C之雙複本載體(參見WO 90/13641)。

如WO 91/04753中所述，亦可藉由與配位體結合分子形成結合物來將有義或反義寡核苷酸引入含有靶核苷酸序列之細胞中。合適之配位體結合分子包括(但不限於)：細胞表面受體、生長因子、其他細胞激素或與細胞表面受體結合之其他配位體。較佳地，配位體結合分子之結合並不實質性干擾配位體結合分子與其相應分子或受體結合之能力或並不實質性阻斷有義或反義寡核苷酸或其結合型式進入細胞中。

或者，如WO 90/10448中所述，可藉由形成寡核苷酸－脂質複合體來將有義或反義寡核苷酸引入含有靶核酸序列之細胞中。有義或反義寡核苷酸－脂質複合體較佳於細胞內由內源脂肪酶解離。

反義或有義RNA或DNA分子一般為至少約5個鹼基長度、約10個鹼基長度、約15個鹼基長度、約20個鹼基長度、約25個鹼基長度、約30個鹼基長度、約35個鹼基長度、約40個鹼基長度、約45個鹼基長度、約50個鹼基長度、約55個鹼基長度、約60個鹼基長度、約65個鹼基長度、約70個鹼基長度、約75個鹼基長度、約80個鹼基長度、約85個鹼基長度、約90個鹼基長度、約95個鹼基長度、約100個鹼基長度，或更長。

探針亦可在PCR技術中使用以產生用於鑑別緊密相關之IL－17A/F編碼序列之序列集合。

編碼IL－17A/F之核苷酸序列亦可用於構築雜交探針以定位編碼彼IL－17A/F之基因且對患有遺傳疾病之個體進行遺傳分析。可使用已知技術使本文所提供之核苷酸序列定位於染色體及染色體之特定區，該等技術諸如原位雜交、針對已知染色體標記之連鎖分析及以庫進行雜交篩選。

當IL－17A/F之編碼序列編碼與另一蛋白質結合之蛋白質(例如當該蛋白質為受體時)時，該蛋白質可於檢定中使用以鑑別結合相互作用所涉及之其他蛋白質或分子。由該等方法，受體/配位體結合相互作用之抑制劑可得以鑑別。該等結合相互作用所涉及之蛋白質亦可用於篩選結合相互作用之肽或小分子抑制劑或促效劑。又，受體蛋白可用於使相關配位體分離。篩選檢定可經設計以發現模擬原生IL－17A/F或IL－17A/F受體之生物活性的主導化合物。該等篩選檢定將包括能夠進行化學庫之高產量篩選的檢定，使其尤其適合於鑑別小分子藥物候選物。所涵蓋之小分子包括合成有機或無機化合物。檢定可以多種格局進行，包括蛋白質－蛋白質結合檢定、生物化學篩選檢定、免疫檢定及基於細胞之檢定，該等檢定在此項技術中已經充分描述。

編碼IL－17A/F或其經修飾形式之核酸亦可用於產生轉殖基因動物或"基因剔除"動物，該等動物繼而適用於開發及篩選治療學上適用之試劑。轉殖基因動物(例如小鼠或大鼠)為具有含有轉殖基因之細胞的動物，該轉殖基因係在出生前(例如胚胎期)引入動物或動物祖輩中。轉殖基因為整合至用來產生轉殖基因動物之細胞的基因組中之DNA。在一實施例中，編碼IL－17A/F之cDNA可用於根據經確立之技術選殖編碼IL－17A/F之基因組cDNA且基因組序列用於產生含有表現編碼IL－17A/F之DNA之細胞的轉殖基因動物。產生轉殖基因動物、尤其諸如小鼠或大鼠之動物的方法在此項技術中已為習知且描述於(例如)美國專利第4,736,866號及第4,870,009號中。通常，將針對IL－17A/F轉殖基因與組織特異性強化子之合併來靶向特定細胞。包括在胚胎期引入動物生殖細胞株中之編碼IL－17A/F之轉殖基因複本的轉殖基因動物可用於檢驗編碼IL－17A/F之DNA的表現增加之影響。該等動物可用作對於據信賦予針對(例如)與其過度表現相關之病理病狀的保護之試劑的測試動物。根據本發明之此方面，動物經試劑處理且與帶有轉殖基因之未經處理動物相比病理病狀之發病率降低將指示對於該病理病狀之潛在治療介入。

或者，IL－17A/F之非人類同源物可用於構築IL－17A/F"基因剔除"動物，該動物具有因編碼IL－17A/F之內源基因與引入動物之胚胎幹細胞中的編碼IL－17A/F之變異基因組DNA之間的同源重組而產生之編碼IL－17A/F之有缺陷或變異基因。舉例而言，編碼IL－17A/F之cDNA可用於根據經確立之技術選殖編碼IL－17A/F之基因組DNA。編碼IL－17A/F之一部分基因組DNA可缺失或經另一基因置換，該另一基因諸如編碼可用於監測整合之可選擇標記的基因。通常，未變異側翼DNA(處於5'末端與3'末端處)之數千鹼基包括於載體中[對於同源重組載體之描述，參見，例如Thomas及Capecchi,Cell,51 ：503(1987)]。將載體引入胚胎幹細胞株(例如藉由電穿孔)中且選擇所引入之DNA已與內源DNA同源重組之細胞[參見，例如Li等人，Cell,69 ：915(1992)]。接著將所選細胞注射至動物(例如小鼠或大鼠)之胚胞中以形成聚集嵌合體[參見，例如Bradley,Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells：A Practical Approach ,E.J.Robertson編(IRL,Oxford,1987)，第113－152頁]。可接著將嵌合胚胎植入合適之假孕雌性哺育動物中且使胚胎足月產下以形成"基因剔除"動物。在生殖細胞中擁有同源重組DNA之子代可由標準技術鑑別且用於繁殖所有細胞皆含有同源重組DNA之動物。基因剔除動物可(例如)針對其防禦某些病理病狀之能力及針對其病理病狀因無IL－17A/F多肽而產生之發展來進行表徵。

編碼IL－17A/F多肽之核酸亦可用於基因療法。在基因療法應用中，將基因引入細胞中以達成活體內合成治療學上有效之遺傳產物，例如以替代有缺陷之基因。"基因療法"包括習知基因療法，其中持久作用係藉由單次治療而達成；與投與基因治療劑，其包括一次或重複投與治療學上有效之DNA或mRMA。反義RNA及DNA可用作用於阻斷某些基因活體內表現之治療劑。已顯示可將短反義寡核苷酸引入細胞中，在該等細胞中該等寡核苷酸充當抑制劑，儘管因細胞膜限制其吸收而使其細胞內濃度較低。(Zamecnik等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,83 ：4143－4146[1986])。寡核苷酸可經修飾以增強其吸收，例如藉由用不帶電基團取代其帶負電之磷酸二酯基。

存在可用於將核酸引入活細胞中之多種技術。該等技術將視核酸活體外轉移至經培養細胞中抑或活體內轉移至所欲宿主之細胞中而改變。適合於使核酸活體外轉移至哺乳動物細胞中之技術包括使用脂質體、電穿孔、顯微注射、細胞融合、DEAE－葡聚糖、磷酸鈣沈澱法等。當前較佳之活體內基因轉移技術包括用病毒(通常反轉錄病毒)載體轉染及病毒鞘蛋白－脂質體介導之轉染(Dzau等人，Trendsin Biotechnology,11 ：205－210[1993])。在一些情況下，需要為核酸來源提供靶向靶細胞之試劑，該試劑諸如對細胞表面膜蛋白或靶細胞具特異性之抗體、針對靶細胞上之受體的配位體等。當使用脂質體時，結合與內飲作用相關之細胞表面膜蛋白之蛋白質可用於靶向(例如)對特定細胞類型具向性之衣殼蛋白或其片段、針對經歷循環內化之蛋白質的抗體、靶向細胞內定位且增強細胞內半衰期之蛋白質及/或促進其吸收。受體介導之內飲作用之技術由(例如)Wu等人，J.Biol.Chem.,262 ：4429－4432(1987)；及Wagner等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87 ：3410－3414(1990)描述。對於基因標記及基因療法方案之評論，參見Anderson等人，Science,256 ：808－813(1992)。

本文所述之IL－17A/F多肽亦可用作達成蛋白質電泳目的之分子量標記且經分離核酸序列可用於重組表現彼等標記。

編碼本文所述之IL－17A/F多肽或其片段之核酸分子適用於染色體鑑別。在此方面，不斷需要鑑別新染色體標記，此係由於基於實際序列資料，目前可使用之染色體標記試劑相對極少。本發明之每一IL－17A/F核酸分子可用作染色體標記。

本發明之IL－17A/F多肽及核酸分子亦可在診斷上用於組織定型，其中本發明之IL－17A/F多肽在一組織中之表現可能不同於在另一組織中之表現，較佳在患病組織中之表現不同於在同一組織類型之正常組織中之表現。IL－17A/F核酸分子將適用於產生供PCR、北方分析、南方分析及西方分析用之探針。

本文所述之IL－17A/F多肽亦可用作治療劑。本發明之IL－17A/F多肽可根據已知方法加以調配以製備醫藥學上適用之組合物，藉以將其IL－17A/F產品與醫藥學上可接受之載劑媒劑組合成混雜物。治療調配物係藉由將具有所要純度之活性成份與可選生理學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合來製備以供儲存(Remington's Pharmaceutical Sciences 第16版，Osol,A.編(1980))，該等治療調配物係呈凍乾調配物或水溶液之形式。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所使用之劑量及濃度下對接受者無毒，且包括：緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽平衡離子，諸如鈉離子；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN^TM 、PLURONICS^TM 或PEG。待用於活體內投藥之調配物須無菌。此易於藉由在凍乾及復水之前或之後經無菌濾膜過濾來實現。

本文之治療組合物一般係置於具有無菌接取口之容器中，該容器例如靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶。

投藥途徑與已知方法一致，例如由靜脈內、腹膜內、大腦內、肌肉內、眼內、動脈內或病灶內途徑注射或輸注，局部投藥，或由持續釋放系統投藥。

本發明之醫藥組合物之劑量及所要藥物濃度可視所預想之具體用途而改變。適當投藥劑量或投藥途徑的確定完全處於一般醫師之技能範圍內。動物實驗提供用於確定人類療法之有效劑量之可靠導則。有效劑量之種間按比例縮放可按照由Mordenti,J.及Chappell,W."The use of interspecies scaling in toxicokinetics"Toxicokinetics and New Drug Development ,Yacobi等人編，Pergamon Press,New York 1989，第42－96頁所制定之原則來進行。

當使用IL－17A/F多肽或其促效劑或拮抗劑之活體內投藥時，正常劑量視投藥途徑而定可在約10奈克/公斤哺乳動物體重/天至100毫克/公斤哺乳動物體重/天或更多之範圍內，較佳為約1微克/公斤/天至10毫克/公斤/天。關於特定劑量及傳遞方法之導則提供於文獻中；參見，例如美國專利第4,657,760號、第5,206,344號、或第5,225,212號。預期不同調配物將對於不同治療化合物及不同病症而言有效，靶向一個器官或組織之投藥(例如)可能需要以不同於靶向另一器官或組織之投藥之方式傳遞。

當IL－17A/F多肽之持續釋放投藥為具有適合於治療需投與IL－17A/F多肽之任何疾病或病症之釋放特徵的調配物所要時，涵蓋IL－17A/F多肽之微囊化。用於持續釋放之重組蛋白之微囊化已對人生長激素(rhGH)、干擾素－(rhIFN－)、介白素－2及MN rgp120成功進行。Johnson等人，Nat.Med.,2 ：795－799(1996)；Yasuda,Biomed.Ther. ,27：1221－1223(1993)；Hora等人，Bio/Technology,8 ：755－758(1990)；Cleland,"Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems,"Vaccine Design：The Subunit and Adjuvant Approach ,Powell及Newman編，(Plenum Press：New York,1995)，第439－462頁；WO 97/03692、WO 96/40072、WO 96/07399；及美國專利第5,654,010號。

此等蛋白質之持續釋放調配物係使用聚－乳酸－共－乙醇酸(PLGA)聚合物來開發，此歸因於該聚合物之生物相容性及廣泛之生物可降解特性。PLGA之降解產物(乳酸及乙醇酸)可在人體內快速清除。此外，此聚合物之降解性視其分子量及組成而定可在數月至數年內調整。Lewis,"Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer," M.Chasin及R.Langer(編)，Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker：New York,1990)，第1－41頁中。

本發明涵蓋篩選化合物以鑑別模擬IL－17A/F多肽(促效劑)或阻礙IL－17A/F多肽之作用(拮抗劑)之彼等化合物的方法。對於拮抗劑藥物候選物之篩選檢定經設計以鑑別與由本文所鑑別之基因編碼之IL－17A/F多肽結合或複合，或以其他方式干擾所編碼之多肽與其他細胞蛋白相互作用之化合物。該等篩選檢定將包括能夠進行化學庫之高產量篩選的檢定，使其尤其適合於鑑別小分子藥物候選物。

檢定可以多種格局進行，包括蛋白質－蛋白質結合檢定、生物化學篩選檢定、免疫檢定及基於細胞之檢定，該等檢定在此項技術中已經充分描述。

對於拮抗劑之所有檢定之共同之處在於：其要求使藥物候選物與由本文所鑑別之核酸編碼之IL－17A/F多肽在足以允許此兩種組份相互作用之條件及時間下接觸。

在結合檢定中，相互作用為結合且可於反應混合物中分離或偵測所形成之複合體。在一特定實施例中，將由本文所鑑別之基因編碼之IL－17A/F多肽或藥物候選物藉由共價或非共價連接固定於固相上(例如，微量滴定盤上)。非共價連接一般係藉由用IL－17A/F多肽之溶液塗佈固體表面並乾燥來實現。或者，可使用對待固定之IL－17A/F多肽具特異性之經固定抗體(例如單株抗體)以使該IL－17A/F多肽錨定於固體表面。檢定係藉由將可由可偵測標記作標記之未經固定組份添加至經固定組份(例如含有錨定組份之經塗佈表面)中來進行。當反應完成時，(例如)藉由洗滌移除未反應組份且偵測錨定於固體表面上之複合體。當最初未經固定組份帶有可偵測標記時，固定於表面上之標記之偵測指示複合發生。當最初未經固定組份不帶有標記時，可(例如)藉由使用特異性結合經固定複合體之經標記抗體來偵測複合。

若候選化合物與由本文所鑑別之基因編碼之特定IL－17A/F多肽相互作用但不與之結合，則其與彼多肽之相互作用可由熟知用於偵測蛋白質－蛋白質相互作用之方法來檢定。該等檢定包括傳統方法，諸如交聯、共免疫沈澱及經梯度或層析管柱共純化。另外，如由Chevray及Nathans,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89 ：5789－5793(1991)所揭示，蛋白質－蛋白質相互作用可藉由使用由Fields及同事(Fields及Song,Nature(London) ,340：245－246[1989]；Chien等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88 ：9578－9582[1991])所述之基於酵母之遺傳系統來監測。許多轉錄活化子(諸如酵母GAL4)由兩個物理學上離散之模域組成，一者充當DNA結合域，另一者充當轉錄活化域。上述出版物中所述之酵母表現系統(一般稱作"雙雜交系統")利用此特性且使用兩種雜交蛋白，在一者中靶蛋白與GAL4之DNA結合域融合，且在另一者中候選活化蛋白與活化域融合。在GAL4活化之啟動子控制下GAL1－lacZ報導基因的表現視GAL4活性經由蛋白質－蛋白質相互作用之重構而定。含有相互作用多肽之群落係用β－半乳糖苷酶之發色受質進行偵測。使用雙雜交技術鑑別兩種特定蛋白之間的蛋白質－蛋白質相互作用之完整套組(MATCHMAKER^TM )可購自Clontech。此系統亦可經擴展以定位特定蛋白相互作用所涉及之蛋白域以及精確定位對於此等相互作用而言至關重要之胺基酸殘基。

干擾編碼本文所鑑別之IL－17A/F多肽之基因與其他細胞內或細胞外組份相互作用之化合物可如下測試：通常在允許基因產品及細胞內或細胞外組份產品相互作用及結合之條件及時間下製備含有該兩種產品之反應混合物。為測試候選化合物抑制結合之能力，在不存在及存在測試化合物之情況下進行反應。另外，可將安慰劑添加至第三反應混合物中以充當陽性對照。如上所述監測測試化合物與存在於混合物中之細胞內或細胞外組份之間的結合(形成複合體)。對照反應物中而非含有測試化合物之反應混合物中形成複合體指示測試化合物干擾該測試化合物與其反應搭配物之相互作用。

為檢定拮抗劑，可將IL－17A/F多肽連同待針對特定活性進行篩選之化合物一起添加至細胞中且在該IL－17A/F多肽存在下該化合物抑制所關注之活性的能力指示化合物為IL－17A/F多肽之拮抗劑。或者，可藉由在競爭抑制檢定之適當條件下將IL－17A/F多肽及潛在拮抗劑與膜結合IL－17A/F多肽受體或重組受體組合來偵測拮抗劑。IL－17A/F多肽可經標記(諸如由放射性標記)，以便使用與受體結合之IL－17A/F多肽分子數來確定潛在拮抗劑之有效性。編碼受體之基因可由熟習此項技術者所知之諸多方法(例如配位體淘選及FACS分選)來鑑別。Coligan等人，Current Protocols in Immun.,1(2) ：第5章(1991)。較佳地，使用表現選殖，其中多聚腺苷酸化RNA係自對IL－17A/F多肽起反應之細胞製備且將自此RNA所產生之cDNA庫分成集合且用於使不對IL－17A/F多肽起反應之COS細胞或其他細胞轉染。將於玻璃載片上生長之經轉染細胞暴露於經標記之IL－17A/F多肽。IL－17A/F多肽可由多種方式標記，該等方式包括碘化或包括對於位點特異性蛋白激酶之識別位點。固定及培育後，對載片進行自動放射照相分析。鑑別陽性集合，且使用互動式子彙集及再篩選方法製備子集合併再轉染，最終得到編碼推定受體之單一純系。

作為用於受體鑑別之一替代方法，可使經標記之IL－17A/F多肽與表現受體分子之細胞膜或提取物製劑光親和連接。交聯物質由PAGE解析且將其暴露於X射線薄膜。含有受體之經標記複合體可加以切除，分解為肽片段，且對其進行蛋白微定序分析。自微定序分析獲得之胺基酸序列將用於設計一組簡幷寡核苷酸探針以篩選cDNA庫從而鑑別編碼推定受體之基因。

在對於拮抗劑之另一檢定中，在候選化合物存在下將表現受體之哺乳動物細胞或膜製劑與經標記之IL－17A/F多肽一起培育。可接著量測化合物增強或阻斷此相互作用的能力。

潛在拮抗劑之更具體實例包括結合免疫球蛋白與IL－17A/F多肽之融合體的寡核苷酸，及(尤其)包括(但不限於)以下各者之抗體：多株抗體及單株抗體及抗體片段、單鏈抗體、抗獨特性抗體及該等抗體或片段之嵌合或人源化型式，以及人類抗體及抗體片段。或者，潛在拮抗劑可為緊密相關之蛋白質，例如突變形式之IL－17A/F多肽，其識別受體但並不賦予作用，進而競爭性抑制IL－17A/F多肽之作用。

另一潛在IL－17A/F多肽拮抗劑為使用反義技術製備之反義RNA或DNA構築體，其中(例如)反義RNA或DNA分子起作用以藉由與所靶向之mRNA雜交且防止蛋白質轉譯來直接阻斷mRNA轉譯。反義技術可用於經三重螺旋形成或反義DNA或RNA控制基因表現，該兩種方法均係基於寡核苷酸與反義DNA或RNA結合。舉例而言，編碼本文之成熟IL－17A/F多肽之寡核苷酸序列5'編碼部分用於設計長度為約10個至40個鹼基對之反義RNA寡核苷酸。DNA寡核苷酸經設計以與轉錄所涉及之基因區互補(三重螺旋－參見Lee等人，Nucl.Acids Res.,6 ：3073(1979)；Cooney等人，Science,241 ：456(1988)；Dervan等人，Science,251 ：1360(1991))，進而阻礙轉錄及IL－17A/F多肽的產生。反義RNA寡核苷酸活體內與mRNA雜交且阻斷mRNA分子轉譯成IL－17A/F多肽(反義－Okano,Neurochem. ,56：560(1991)；Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (CRC Press：Boca Raton,FL,1988))。亦可將上述寡核苷酸傳遞至細胞中以使反義RNA或DNA可於活體內表現以抑制IL－17A/F多肽產生。當使用反義DNA時，來源於轉譯啟始位點之寡脫氧核糖核苷酸，例如介於靶基因核苷酸序列之約－10位置與＋10位置之間的寡脫氧核糖核苷酸，為較佳。

潛在拮抗劑包括結合IL－17A/F多肽之活性位點、受體結合位點或生長因子或其他相關結合位點，進而阻斷IL－17A/F多肽之正常生物活性之小分子。小分子之實例包括(但不限於)：小肽或類肽分子(較佳為可溶性肽)及合成非肽基有機或無機化合物。

核糖核酸酶為能催化RNA特異性裂解之酶促RNA分子。核糖核酸酶藉由與互補靶RNA以序列特異性方式雜交、接著內切核苷酸裂解而起作用。潛在RNA靶內特異性核糖核酸酶裂解位點可由已知技術鑑別。對於其他細節，參見，例如Rossi,Current Biology,4 ：469－471(1994)及PCT公開案第WO 97/33551號(於1997年9月18日公開)。

三重螺旋形成中用於抑制轉錄之核酸分子應為單股的且包含脫氧核苷酸。此等寡核苷酸之鹼基組成經設計以使其促進經由Hoogsteen鹼基配對原則形成三重螺旋，其一般在雙鏈體之一股上需要相當大的嘌呤或嘧啶段。對於其他細節，參見，例如PCT公開案第WO 97/33551號(同上)。

此等小分子可由上文所討論之篩選檢定中之任意一或多者及/或由熟習此項技術者所熟知之任何其他篩選技術來鑑別。

本文所揭示之分子的診斷及治療用途亦可基於下文揭示及描述之陽性功能性檢定套組。

F.組織分布表現IL－17A/F之組織位置可藉由測定各個人體組織中之mRNA表現來鑑別。該等基因之位置提供關於哪些組織最有可能受IL－17A/F多肽之刺激及抑制活性影響之資訊。特定組織中基因之位置亦提供用於下文所討論之活性阻斷檢定的樣本組織。

如前所述，各個組織中之基因表現可由習知南方墨點法、北方墨點法(量化mRNA轉錄)(Thomas,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77 ：5201－5205[1980])、點漬墨法(DNA分析)或原位雜交法，使用經適當標記之探針(基於本文所提供之序列)來量測。或者，可使用可識別特定雙鏈體之抗體，該等雙鏈體包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體及DNA－RNA雜交雙鏈體或DNA－蛋白質雙鏈體。

或者，各個組織中之基因表現可由免疫法(諸如組織切片之免疫組織化學染色)及細胞培養物或體液之檢定來量測，以直接量化基因產物之表現。適用於免疫組織化學染色及/或樣本流體檢定之抗體可為單株抗體或多株抗體，且可於任何哺乳動物中製備。便利地，抗體可針對IL－17A/F多肽之原生序列或針對基於編碼IL－17A/F多肽之DNA序列的合成肽或針對與編碼IL－17A/F多肽之DNA融合且編碼特定抗體抗原決定基之外源序列來製備。產生抗體之一般技術及北方墨點及原位雜交之專用方案提供於下文中。

G.抗體結合研究 IL－17A/F多肽之活性可由抗體結合研究進一步驗證，其中測試抗－IL－17A/F抗體抑制IL－17A/F多肽(相應)對組織細胞之影響的能力。例示性抗體包括多株抗體、單株抗體、人源化抗體、雙特異性抗體及雜結合抗體，該等抗體之製備將描述於下文中。

抗體結合研究可以任何已知之檢定方法進行，該檢定方法諸如競爭結合檢定、直接及間接夾心檢定及免疫沈澱檢定。Zola,Monoclonal Antibodies：A Manual of Techniques ，第147－158頁(CRC Press,Inc.,1987)。

競爭結合檢定依賴於經標記之標準物對於與有限量之抗體結合而言與測試樣本分析物競爭之能力。測試樣本中靶蛋白之量與最終與抗體結合之標準物的量成反比。為有利於測定最終結合之標準物的量，抗體較佳在競爭之前或之後不溶，使得與該等抗體結合之標準物及分析物可便利地與仍未結合之標準物及分析物分離。

夾心檢定涉及使用兩種抗體，每一種抗體能與待偵測之蛋白質之不同免疫原性部分或抗原決定基結合。在夾心檢定中，測試樣本分析物由固定於固體支撐物上之第一抗體結合，且其後第二抗體與分析物結合，由此形成不溶性三部分複合體。參見，例如美國專利第4,376,110號。第二抗體本身可經可偵測部分標記(直接夾心檢定)或可使用經可偵測部分標記之抗免疫球蛋白抗體量測(間接夾心檢定)。舉例而言，一種類型之夾心檢定為ELISA檢定，在此狀況下可偵測部分為酶。

舉例而言，對於免疫組織化學而言，組織樣本可為新鮮的或經冷凍的或可包埋於石蠟中且用諸如福馬林(formalin)之防腐劑固定。

H.基於細胞之檢定對於免疫相關疾病之基於細胞之檢定及動物模型可用於進一步瞭解本文所鑑別之基因與多肽之間的關係及免疫相關疾病之發展及發病機制。

在一不同方法中，用本文所述之cDNA使已知與特定免疫相關疾病有關之細胞類型的細胞轉染，且分析此等cDNA刺激或抑制免疫功能之能力。合適之細胞可經所要基因轉染，且針對免疫功能活性進行監測。該等經轉染之細胞株可接著用於測試多株抗體或單株抗體或抗體組合物抑制或刺激免疫功能(例如，調節T細胞增殖或發炎性細胞滲入)之能力。經本文所鑑別之基因之編碼序列轉染的細胞可進一步用於鑑別治療免疫相關疾病之藥物候選物。

另外，來源於轉殖基因動物(如下所述)之初級培養物可在本文之基於細胞之檢定中使用，而穩定細胞株為較佳。自轉殖基因動物得到連續細胞株之技術在此項技術中已為熟知(參見，例如Small等人，Mol.Cell.Biol.,5 ：642－648[1985])。

一種合適之基於細胞之檢定為混合淋巴細胞反應(MLR)。Current Protocols in Immunology ,3.12單元；J E Coligan,A M Kruisbeek,D H Marglies,E M Shevach,W Strober編，National Institutes of Health,John Wiley & Sons,Inc.出版。在此檢定中，測試化合物刺激或抑制經活化之T細胞增殖之能力得以檢定。將回應T細胞懸浮液與同種異體刺激細胞一起培養且藉由氚化胸苷之吸收來量測T細胞之增殖。此檢定為T細胞反應性之一般量測。由於多數T細胞回應於活化且在活化後即產生IL－2，由此在此檢定中回應性之差異部分反映由回應細胞產生IL－2之差異。MLR結果可由標準淋巴激素(IL－2)偵測檢定來驗證。Current Protocols in Immunology ，同上，3.15,6.3。

在MLR檢定中增殖性T細胞回應可歸因於所檢定分子之直接促有絲分裂特性或歸因於外部抗原誘導之活化。IL－17A/F多肽之T細胞刺激活性另外可由共同刺激檢定來驗證。T細胞活化需要經T細胞受體(TCR)介導之抗原特異性信號及經第二配位體結合相互作用(例如B7(CD80、CD86)/CD28結合相互作用)介導之共同刺激信號。CD28交聯使經活化T細胞之淋巴激素分泌增加。T細胞活化經由具有負性作用或正性作用之配位體的結合而具有負性控制與正性控制。CD28及CTLA－4為與B7結合之Ig超家族中之相關醣蛋白。與B7結合之CD28具有T細胞活化之正性共同刺激作用；相反，與B7結合之CTLA－4具有負性T細胞失活作用。Chambers,C.A.及Allison,J.P.,Curr.Opin.Immunol. ,(1997)9 ：396；Schwartz,R.H.,Cell (1992)71 ：1065；Linsley,P.S.及Ledbetter,J.A.,Annu.Rev.Immunol. (1993)11 ：191；June,C.H.等人，Immunol.Today (1994)15 ：321；Jenkins,M.K.,Immunity (1994)1 ：405。在共同刺激檢定中，IL－17A/F多肽係針對T細胞共同刺激或抑制活性進行檢定。

本發明之IL－17A/F多肽以及如由MLR及共同刺激檢定所確定為T細胞增殖之刺激劑(共同刺激劑)及其促效劑(例如促效劑抗體)的其他化合物(例如)適用於治療特徵在於免疫功能不良、次最佳或不足的免疫相關疾病。此等疾病係藉由經投與刺激性化合物(諸如刺激性IL－17A/F多肽)來刺激T細胞增殖及活化(及T細胞介導之免疫力)且增強哺乳動物之免疫反應來治療。刺激性多肽可為(例如)IL－17A/F多肽或其促效劑抗體。

如本發明中之刺激性化合物之直接用途已在關於4－1BB醣蛋白(腫瘤壞死因子受體家族之一成員)之實驗中驗證，該4－1BB醣蛋白與在預致敏T細胞上表現之配位體(4－1BBL)結合且轉導T細胞活化及生長信號。Alderson,M.E.等人，J.Immunol.,24 ：2219(1994)。

促效劑刺激性化合物之用途亦已經實驗驗證。藉由用促效劑抗－4－1BB抗體處理而活化4－1BB使腫瘤之根除得以增強。Hellstrom,I.及Hellstrom,K.E.,Crit.Rev.Immunol.,18 ：1(1998)。下文更詳細描述之治療腫瘤之免疫佐劑療法為本發明之刺激性化合物之用途的另一實例。

免疫刺激或增強作用亦可藉由拮抗或阻斷IL－17A/F之活性來達成，已發現該IL－17A/F之活性在MLR檢定中為抑制活性。消除化合物之抑制活性產生純刺激作用。合適之拮抗劑/阻斷性化合物為識別並結合抑制性蛋白，進而阻斷該蛋白與其受體之有效相互作用且抑制經由該受體之信號轉導的抗體或其片段。此作用已於實驗中使用據推測藉由移除因CTLA－4結合而產生之抑制信號來增強T細胞增殖之抗－CTLA－4抗體來驗證。Walunas,T.L.等人，Immunity,1 ：405(1994)。

或者，免疫刺激或增強作用亦可藉由投與具有血管滲透性增強特性之IL－17A/F多肽來達成。增強之血管滲透性將對可藉由免疫細胞(例如，單核細胞、嗜伊紅血球、PMN)局部滲入及發炎而削弱之病症有利。

另一方面，本發明之IL－17A/F多肽以及為T細胞增殖/活化、淋巴激素分泌及/或血管滲透性之直接抑制劑的其他化合物可直接用於抑制免疫反應。此等化合物適用於降低免疫反應程度且適用於治療特徵為過度活躍、超最佳或自體免疫反應之免疫相關疾病。本發明之化合物之此用途已由上述實驗驗證，在該等實驗中與受體B7結合之CTLA－4使T細胞失活。本發明之直接抑制性化合物以類似方式起作用。抑制血管滲透性之化合物之用途將預期減少發炎。該等用途將有利於治療與過度發炎相關之病狀。

或者，與刺激性IL－17A/F多肽結合且阻斷此等分子之刺激作用之化合物(例如抗體)產生純抑制作用且可用於藉由抑制T細胞增殖/活化及/或淋巴激素分泌而抑制T細胞介導之免疫反應。阻斷多肽之刺激作用抑制哺乳動物之免疫反應。此用途以在使用抗－IL2抗體之實驗中得以驗證。在此等實驗中，抗體與IL2結合且阻斷IL2與其受體結合，進而達成T細胞抑制作用。

I.動物模型基於細胞之活體外檢定結果可使用活體內動物模型及對於T細胞功能之檢定而進一步驗證。多種熟知之動物模型可用於進一步瞭解本文所鑑別之基因在免疫相關疾病之發展及發病機制中之作用，且測試候選治療劑之功效，該等候選治療劑包括原生多肽之抗體及其他拮抗劑，包括小分子拮抗劑。該等模型之活體內性質使其能預測人類患者之反應。免疫相關疾病之動物模型包括非重組動物與重組(轉殖基因)動物。非重組動物模型包括(例如)齧齒動物，例如鼠類模型。該等模型可藉由使用標準技術將細胞引入同系小鼠中產生，該等標準技術例如皮下注射、尾靜脈注射、脾植入、腹膜內植入、腎囊下植入等。

當將免疫活性細胞移植至免疫抑制或有耐性之患者中時，移植物抗宿主疾病發生。供體細胞識別並回應宿主抗原。回應可自威脅生命之重度炎症至腹瀉及減重之輕度病例變化。移植物抗宿主疾病模型提供評估T細胞抗MHC抗原及微量移植抗原之活性的方式。合適之程序詳細描述於Current Protocols in Immunology ，同上，4.3單元中。

皮膚同種異體移植排斥反應之動物模型為測試T細胞活體內介導組織破壞之能力的方式及其於移植排斥反應中之作用的量測。最常用及公認之模型使用鼠類尾皮移植物。重複實驗已顯示皮膚同種異體移植排斥反應係由T細胞、輔助T細胞及殺傷效應T細胞而非抗體介導。Auchincloss,H.Jr.及Sachs,D.H.,Fundamental Immunology ，第2版，W.E.Paul編，Raven Press,NY,889－992(1989)。合適之程序詳細描述於Current Protocols in Immunology ，同上，4.4單元中。可用於測試本發明之化合物之其他移植排斥反應模型為由Tanabe,M.等人，Transplantation ,58：23(1994)及Tinubu,S.A.等人，J.Immunol. ,4330－4338(1994)所述之同種異體心臟移植模型。

又，遲發型超敏之動物模型提供細胞介導之免疫功能之檢定。遲發型超敏反應為以炎症為特徵，直至抗原挑釁後一段時間後才達峰值的T細胞介導之活體內免疫反應。此等反應亦在諸如多發性硬化症(MS)及實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE，MS之模型)之組織特異性自體免疫疾病中發生。合適之程序詳細描述於Current Protocols in Immunology ，同上，4.5單元中。

EAE為以T細胞及單核細胞發炎及隨後中樞神經系統中之軸突髓鞘脫失為特徵的T細胞介導之自體免疫疾病。EAE一般視為人類MS之相關動物模型。Bolton,C.,Multiple Sclerosis,1 ：143(1995)。已開發急性與復發－緩解型模型。本發明之化合物可使用Current Protocols in Immunology ，上文，15.1及15.2單元中所述之方案針對T細胞抗免疫介導之髓鞘脫失病之刺激或抑制活性進行測試。亦參見髓鞘疾病之模型，其中如Duncan,I.D.等人，Molec.Med.Today ,554－561(1997)中所述將寡樹突神經膠質細胞或許旺氏細胞(Schwann cell)移植至中樞神經系統中。

接觸性超敏為細胞介導之免疫功能之簡單遲發型超敏活體內檢定。在此程序中，將皮膚暴露於外源半抗原，其引起遲發型超敏反應，量測並量化該遲發型超敏反應。接觸性敏感包括初始致敏期、接著誘出期。當T淋巴細胞遭遇其先前已接觸之抗原時誘出期出現。腫脹及炎症出現，使其成為人類過敏性接觸性皮炎之極佳模型。合適之程序詳細描述於Current Protocols in Immunology ,J.E.Cologan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shevach及W.Strober編，John Wiley & Sons,Inc.,4.2單元(1994)。又，Grabbe,S.及Schwarz,T,Immun.Today,19(1) ：37－44(1998)。

關節炎之動物模型為膠原蛋白誘發之關節炎。此模型共有人類自體免疫類風濕性關節炎之臨床、組織學及免疫特徵且為人類自體免疫關節炎之可接受模型。小鼠及大鼠模型之特徵為滑膜炎、軟骨及軟骨下骨侵蝕。本發明之化合物可使用Current Protocols in Immunology ，同上，15.5單元中所述之方案針對抗自體免疫關節炎之活性進行測試。亦參見Issekutz,A.C.等人，Immunology,88 ：569(1996)中所述之使用CD18及VLA－4整合素之單株抗體的模型。

已描述哮喘之模型，其中抗原誘發之氣管過度反應、肺嗜伊紅血球增多症及炎症係藉由用卵白蛋白對動物致敏且接著以由噴霧傳遞之相同蛋白質挑釁動物來誘發。若干動物模型(天竺鼠、大鼠、非人類靈長類動物)在以噴霧抗原挑釁後即顯示類似於人類異位性哮喘之症狀。鼠類模型具有許多人類哮喘特徵。針對治療哮喘之活性及有效性測試本發明之化合物的合適程序由Wolyniec,W.W.等人，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,18 ：777(1998)及其中所引用之文獻描述。

另外，本發明之化合物可在牛皮癬樣疾病之動物模型上測試。跡象表明牛皮癬之T細胞發病機制。本發明之化合物可在由Schon,M.P.等人，Nat.Med.,3 ：183(1997)所述之scid/scid小鼠模型中測試，其中小鼠顯示類似於牛皮癬之組織病理學皮膚病灶。另一合適之模型為如由Nickoloff,B.J.等人，Am.J.Path.,146 ：580(1995)所述而製備之人類皮膚/scid小鼠嵌合體。

重組(轉殖基因)動物模型可藉由使用產生轉殖基因動物之標準技術將本文所鑑別之基因之編碼部分引入所關注之動物的基因組中來工程化。可充當轉殖基因操作之標靶的動物包括(但不限於)小鼠、大鼠、兔、天竺鼠、綿羊、山羊、豬及非人類靈長類動物(例如狒狒、黑猩猩及猴)。此項技術中已知之將轉殖基因引入該等動物中之技術包括原核顯微注射(Hoppe及Wanger,美國專利第4,873,191號)；反轉錄病毒介導之至生殖細胞株中之基因轉移(例如Van der Putten等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82 ,6148－615[1985])；胚胎幹細胞中之基因靶向(Thompson等人，Cell,56 ,313－321[1989])；胚胎電穿孔(Lo,Mol.Cel.Biol.,3 ,1803－1814[1983])；精子介導之基因轉移(Lavitrano等人，Cell,57 ,717－73[1989])。對於評論，參見，例如美國專利第4,736,866號。

出於本發明之目的，轉殖基因動物包括僅在其一部分細胞中帶有轉殖基因之彼等轉殖基因動物("嵌合體動物")。轉殖基因可以單一轉殖基因形式整合或以串聯體(例如頭頭串聯或頭尾串聯)形式整合。亦可藉由遵循(例如)Lasko等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89 ,6232－636(1992)之技術將轉殖基因選擇性引入特定細胞類型中。

轉殖基因動物中轉殖基因之表現可由標準技術監測。舉例而言，南方墨點分析或PCR擴增可用於驗證轉殖基因之整合。可接著使用諸如原位雜交、北方墨點分析、PCR或免疫細胞化學之技術分析mRNA表現量。

可(例如)藉由組織檢查針對免疫疾病病態之徵候而對動物進行進一步檢查以確定免疫細胞至特定組織中之滲入。亦可進行阻斷實驗，其中將轉殖基因動物用本發明之化合物處理以確定化合物刺激或抑制T細胞增殖之程度。在此等實驗中，將與如上所述製備之IL－17A/F多肽結合之阻斷抗體投予動物且確定對免疫功能的影響。

或者，可構築"基因剔除"動物，其因編碼多肽之內源基因與引入動物胚胎細胞中之編碼相同多肽之變異基因組DNA之間的同源重組而具有編碼本文所鑑別之多肽的有缺陷或變異基因。舉例而言，編碼特定多肽之cDNA可用於根據經確立之技術選殖編碼彼多肽之基因組DNA。編碼特定多肽之一部分基因組DNA可缺失或經另一基因置換，該另一基因諸如編碼可用於監測整合之可選擇標記的基因。通常，未變異側翼DNA(處於5'末端與3'末端處)之數千鹼基包括於載體中[對於同源重組載體之描述，參見，例如Thomas及Capecchi,Cell,51 ：503(1987)]。將載體引入胚胎幹細胞株(例如藉由電穿孔)中且選擇所引入之DNA已與內源DNA同源重組之細胞[參見，例如Li等人，Cell,69：915(1992)]。接著將所選細胞注射至動物(例如小鼠或大鼠)之胚胞中以形成聚集嵌合體[參見，例如Bradley,Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells：A Practical Approach ,E.J.Robertson編(IRL,Oxford,1987)，第113－152頁]。可接著將嵌合胚胎植入合適之假孕雌性哺育動物中且使胚胎足月產下以形成"基因剔除"動物。在生殖細胞中擁有同源重組DNA之子代可由標準技術鑑別且用於繁殖所有細胞皆含有同源重組DNA之動物。基因剔除動物可(例如)針對其防禦某些病理病狀之能力及針對其病理病狀因無多肽而產生之發展來進行表徵。

J.免疫佐劑療法在一實施例中，本發明之免疫刺激性化合物可在治療腫瘤(癌症)之免疫佐劑療法中使用。現已充分確立T細胞識別人類腫瘤特異性抗原。一組由基因之MAGE、BAGE及GAGE家族編碼之腫瘤抗原在所有成人正常組織中為靜默的，但在諸如黑色素瘤、肺部腫瘤、頭頸部腫瘤及膀胱癌之腫瘤中大量表現。DeSmet,C.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93 ：7149(1996)。已顯示T細胞之共同刺激於活體外與活體內均誘導腫瘤消退及抗腫瘤反應。Melero,I.等人，Nature Medicine,3 ：682(1997)；Kwon,E.D.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94 ：8099(1997)；Lynch,D.H.等人，Nature Medicine,3 ：625(1997)；Finn,O.J.及Lotze,M.T.,J.Immunol.,21 ：114(1998)。本發明之刺激性化合物可以佐劑形式單獨或連同生長調節劑、細胞毒性劑或化學治療劑一起投與以刺激T細胞增殖/活化及對腫瘤抗原之抗腫瘤反應。生長調節劑、細胞毒性劑或化學治療劑可使用已知投藥方案以習知量投與。本發明化合物之免疫刺激活性使得生長調節劑、細胞毒性劑或化學治療劑之量減少，進而潛在地降低對患者之毒性。

K.藥物候選物之篩選檢定藥物候選物之篩選檢定經設計以鑑別與由本文所鑑別之基因或其生物活性片段編碼之多肽結合或複合，或以其他方式干擾所編碼之多肽與其他細胞蛋白相互作用之化合物。該等篩選檢定將包括能夠進行化學庫之高產量篩選的檢定，使其尤其適合於鑑別小分子藥物候選物。所涵蓋之小分子包括合成有機或無機化合物，其包括肽、較佳可溶性肽，(多)肽－免疫球蛋白融合體，及(尤其)包括(但不限於)以下各者之抗體：多株抗體及單株抗體及抗體片段、單鏈抗體、抗獨特型抗體及該等抗體或片段之嵌合或人源化型式，以及人類抗體及抗體片段。檢定可以多種格局進行，包括蛋白質－蛋白質結合檢定、生物化學篩選檢定、免疫檢定及基於細胞之檢定，該等檢定在此項技術中已經充分描述。所有檢定之共同之處在於：其要求使藥物候選物與由本文所鑑別之核酸編碼之多肽在足以允許此兩種組份相互作用之條件及時間下接觸。

在結合檢定中，相互作用為結合且可於反應混合物中分離或偵測所形成之複合體。在一特定實施例中，將由本文所鑑別之基因編碼之多肽或藥物候選物藉由共價或非共價連接而固定於固相上(例如，微量滴定盤上)。非共價連接一般係藉由用多肽之溶液塗佈固體表面並乾燥來實現。或者，可使用對待固定之多肽具特異性之經固定抗體(例如單株抗體)以使該多肽錨定於固體表面。檢定係藉由將可由可偵測標記作標記之未經固定組份添加至經固定組份(例如含有錨定組份之經塗佈表面)中來進行。當反應完成時，(例如)藉由洗滌移除未反應組份且偵測錨定於固體表面上之複合體。當最初未經固定組份帶有可偵測標記時，固定於表面上之標記之偵測指示複合發生。當最初未經固定組份不帶有標記時，可(例如)藉由使用特異性結合經固定複合體之經標記抗體來偵測複合。

若候選化合物與由本文所鑑別之基因編碼之特定蛋白質相互作用但不與之結合，則其與彼蛋白質之相互作用可由熟知用於偵測蛋白質－蛋白質相互作用之方法來檢定。該等檢定包括傳統方法，諸如交聯、共免疫沈澱及經梯度或層析管柱共純化。另外，如由Chevray及Nathans,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89 ,5789－5793(1991)所揭示，蛋白質－蛋白質相互作用可藉由使用由Fields及同事[Fields及Song,Nature(London),340 ,245－246(1989)；Chien等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88 ,9578－9582(1991)]所述之基於酵母之遺傳系統來監測。許多轉錄活化子(諸如酵母GAL4)由兩個物理學上離散之模域組成，一者充當DNA結合域，而另一者充當轉錄活化域。上述出版物中所述之酵母表現系統(一般稱作"雙雜交系統")利用此特性且使用兩種雜交蛋白，在一者中靶蛋白與GAL4之DNA結合域融合，且在另一者中候選活化蛋白與活化域融合。在GAL4活化之啟動子控制下GAL1－lac Z報導基因的表現視GAL4活性經由蛋白質－蛋白質相互作用之重構而定。含有相互作用多肽之群落係用β－半乳糖苷酶之發色受質進行偵測。使用雙雜交技術鑑別兩個特定蛋白之間的蛋白質－蛋白質相互作用之完整套組(MATCHMAKER^TM )可購自Clontech。此系統亦可經擴展以定位特定蛋白相互作用所涉及之蛋白域以及精確定位對於此等相互作用而言至關重要之胺基酸殘基。

為發現干擾本文所鑑別之基因與其他細胞內或細胞外組份相互作用之化合物，通常在允許基因產品與細胞內或細胞外組份產品相互作用及結合之條件及時間下製備含有該兩種產品之反應混合物。為測試測試化合物抑制結合之能力，在不存在及存在測試化合物之情況下進行反應。另外，可將安慰劑添加至第三反應混合物中以充當陽性對照。如上所述監測測試化合物與存在於混合物中之細胞內或細胞外組份之間的結合(形成複合體)。對照反應物中而非含有測試化合物之反應混合物中形成複合體指示測試化合物干擾該測試化合物與其反應搭配物之相互作用。

L.治療免疫相關疾病之組合物及方法適用於治療免疫相關疾病之組合物包括(但不限於)抑制或刺激免疫功能(例如，T細胞增殖/活化、淋巴激素釋放或免疫細胞滲入)之蛋白質、抗體、小有機分子、肽、磷酸肽、反義及核糖核酸酶分子、三重螺旋分子等。

舉例而言，反義RNA及RNA分子起作用以藉由與所靶向之mRNA雜交且防止蛋白質轉譯來直接阻斷mRNA轉譯。當使用反義DNA時，來源於轉譯起始位點之寡脫氧核糖核苷酸，例如介於靶基因核苷酸序列之約－10位置與＋10位置之間的寡脫氧核糖核苷酸，為較佳。

核糖核酸酶為能催化RNA特異性裂解之酶性RNA分子。核糖核酸酶藉由與互補靶RNA以序列特異性方式雜交、接著內切核苷酸裂解而起作用。潛在RNA靶內特異性核糖核酸酶裂解位點可由已知技術鑑別。對於其他細節，參見，例如Rossi,Current Biology,4 ,469－471(1994)及PCT公開案第WO 97/33551號(於1997年9月18日公開)。

三重螺旋形成中用於抑制轉錄之核酸分子應為單股的且包含脫氧核苷酸。此等寡核苷酸之鹼基組成經設計以使其促進經由Hoogsteen鹼基配對原則形成三重螺旋，其一般在雙鏈體之一股上需要相當大的嘌呤或嘧啶段。對於更多詳情，參見，例如PCT公開案第WO 97/33551號(同上)。

此等分子可由上文所討論之篩選檢定中之任一者或該等篩選檢定之任何組合及/或由熟習此項技術者所熟知之任何其他篩選技術來鑑別。

M.抗－IL－17A/F抗體在一實施例中，本發明提供可於本文中用作治療劑及/或診斷劑之抗－IL－17A/F抗體。例示性抗體包括多株抗體、單株抗體、人源化抗體、雙特異性抗體及雜結合抗體。

1.多株抗體多株抗體較佳係藉由多次皮下(sc)或腹膜內(ip)注射相關抗原及佐劑而於動物中產生。其可適用於使相關抗原(尤其當使用合成肽時)與在待免疫之物種中具免疫原性之蛋白質結合。舉例而言，可使用雙功能劑或衍生劑使抗原與匙孔螺血氰蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑結合，該雙功能劑或衍生劑例如順丁烯二醯亞胺基苄醯基磺基丁二醯亞胺酯(經半胱胺酸殘基結合)、N－羥基丁二醯亞胺(經離胺酸殘基)、戊二醛、丁二酸酐、SOCl₂ 或R¹ N＝C＝NR，其中R及R¹ 為不同烷基。

藉由將(例如)100 μg或5 μg蛋白質或結合物(分別對於兔或小鼠)與3體積之弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)組合且將溶液於多處經皮內注射使動物對抗原、免疫原性結合物或衍生物免疫。一個月後，用最初量之1/5至1/10之於弗氏完全佐劑中之肽或結合物藉由多處皮下注射對動物加強免疫。7至14天後，對動物進行取血，且檢定血清之抗體效價。對動物加強免疫直至效價平穩為止。結合物亦可於重組細胞培養物中以蛋白質融合體形式製成。又，凝集劑(諸如礬)適宜用於增強免疫反應。

2.單株抗體單株抗體可使用由Kohler等人，Nature ,256：495(1975)首先描述之融合瘤方法製成，或可由重組DNA方法(美國專利第4,816,567號)製成。

在融合瘤方法中，如上所述使小鼠或其他適當宿主動物(諸如倉鼠)免疫以誘出產生或能產生將特異性結合用於免疫之蛋白質之抗體的淋巴細胞。或者，可於活體外使淋巴細胞免疫。免疫後，使淋巴細胞分離且接著使用合適之融合劑(諸如聚乙二醇)使其與骨髓瘤細胞株融合以形成融合瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies：Principles and Practice ，第59－103頁(Academic Press,1986))。

將由此製備之融合瘤細胞接種且在合適之培養基中生長，該培養基較佳含有一或多種抑制未融合之親本骨髓瘤細胞(亦稱作融合搭配物)生長或存活之物質。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏酶次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT或HPRT)，則融合瘤之選擇性培養基通常將包括次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT培養基)，該等物質阻止缺乏HGPRT之細胞生長。

較佳之融合搭配物骨髓瘤細胞為有效融合、支持所選抗體產生細胞穩定高量產生抗體且對針對未融合之親本細胞選擇之選擇性培養基敏感的彼等骨髓瘤細胞。較佳之骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤細胞株，諸如購自Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,California USA之自MOPC－21及MPC－11小鼠腫瘤獲得之彼等鼠類骨髓瘤細胞株，及購自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection),Manassas,Virginia,USA之SP－2及衍生物(例如X63－Ag8－653)細胞。亦已描述人類骨髓瘤及小鼠－人類雜合骨髓瘤細胞株用於產生人類單株抗體(Kozbor,J.Immunol. ,133：3001(1984)；及Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications ，第51－63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。

檢定融合瘤細胞生長所處之培養基中針對抗原之單株抗體的產生。較佳地，由免疫沈澱或由諸如放射免疫檢定(RIA)或酶聯結免疫吸附劑檢定(ELISA)之活體外結合檢定來測定由融合瘤細胞產生之單株抗體的結合特異性。

單株抗體之結合親和力可(例如)由Munson等人，Anal.Biochem. ,107：220(1980)中所述之斯卡查德分析(Scatchard analysis)來測定。

一旦鑑別產生具有所要特異性、親和力及/或活性之抗體的融合瘤細胞，即可由限制稀釋程序次選殖純系且由標準方法使其生長(Goding,Monoclonal Antibodies：Principles and Practice ，第59－103頁(Academic Press,1986))。為達成此目的之合適培養基包括(例如)D－MEM或RPMI－1640培養基。另外，可(例如)藉由將細胞經腹膜內注射至小鼠中來使融合瘤細胞於動物體內活體內生長為腹水腫瘤。

由習知抗體純化程序使由次純系分泌之單株抗體與培養基、腹水或血清適當分離，該等純化程序諸如親和層析(例如，使用蛋白質A－瓊脂糖或蛋白質G－瓊脂糖)或離子交換層析、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析等。

編碼單株抗體之DNA易於分離且使用習知程序(例如，藉由使用能與編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)進行定序。融合瘤細胞充當該DNA之較佳來源。一旦分離，即可將DNA置於表現載體中，接著使其轉染至不會以其他方式產生抗體蛋白之宿主細胞(諸如大腸桿菌細胞、猿COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中，以在重組宿主細胞中獲得單株抗體的合成。關於細菌中編碼抗體之DNA之重組表現的評論文章包括Skerra等人，Curr.Opinion in Immunol. ,5：256－262(1993)及Plckthun,Immunol.Revs. 130：151－188(1992)。

在又一實施例中，可使單株抗體或抗體片段自使用McCafferty等人，Nature ,348：552－554(1990)中所述之技術產生之抗體噬菌體庫分離。Clackson等人，Nature ,352：624－628(1991)及Marks等人，J.Mol.Biol. ,222：581－597(1991)分別描述使用噬菌體庫來使鼠類抗體及人類抗體分離。後續出版物描述由鏈改組(Marks等人，Bio/Technology ,10：779－783(1992))以及作為用於構築極大噬菌體庫之策略的組合感染及活體內重組(Waterhouse等人，Nuc.Acids.Res. 21：2265－2266(1993))來產生高親和力(nM範圍)人類抗體。由此，此等技術為用於使單株抗體分離之傳統單株抗體融合瘤技術之可行性替代技術。

編碼抗體之DNA可(例如)藉由用人類重鏈及輕鏈恆定域(C_H 及C_L )序列取代同源鼠類序列(美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA ,81：6851(1984))或藉由使免疫球蛋白編碼序列與非免疫球蛋白多肽(異源多肽)之全部或部分編碼序列融合而修飾以產生嵌合或融合抗體多肽。非免疫球蛋白多肽序列可取代抗體之恆定域，或取代抗體之一個抗原組合位點之可變域以產生包含一個對抗原具特異性之抗原組合位點及另一個對不同抗原具特異性之抗原組合位點的嵌合二價抗體。

3.人類抗體及人源化抗體本發明之抗－IL－17A/F抗體可進一步包含人源化抗體或人類抗體。非人類(例如鼠類)抗體之人源化形式為含有最少之來源於非人類免疫球蛋白之序列的嵌合免疫球蛋白、其免疫球蛋白鏈或片段(諸如抗體之Fv、Fab、Fab'、F(ab')₂ 或其他抗原結合子序列)。人源化抗體包括人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體之互補判定區(CDR)的殘基經來自具有所要特異性、親和力及容量之非人類物種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠或兔)之CDR的殘基置換。在一些情形下，人類免疫球蛋白之Fv構架殘基經相應非人類殘基置換。人源化抗體亦可包含既非存在於受體抗體中亦非存在於所輸入之CDR或構架序列中之殘基。一般而言，人源化抗體將包含大體上所有至少一個，且通常兩個可變域，其中所有或大體上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白之彼等CDR區，且所有或大體上所有FR區為人類免疫球蛋白一致序列之彼等FR區。人源化抗體最佳亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常為人類免疫球蛋白之彼免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分[Jones等人，Nature,321 ：522－525(1986)；Riechmann等人，Nature,332 ：323－329(1988)；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2 ：593－596(1992)]。

使非人類抗體人源化之方法在此項技術中已為熟知。一般而言，人源化抗體具有一或多個自非人類來源引入其中之胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基常稱作"輸入"殘基，其通常係取自"輸入"可變域。人源化可基本上遵循Winter及同事之方法[Jones等人，Nature,321 ：522－525(1986)；Riechmann等人，Nature,332 ：323－327(1988)；Verhoeyen等人，Science,239 ：1534－1536(1988)]，藉由用齧齒動物CDR或CDR序列取代人類抗體之相應序列來進行。因此，該等"人源化"抗體為嵌合抗體(美國專利第4,816,567號)，其中大體上不及完整之人類可變域已經來自非人類物種之相應序列取代。實際上，人源化抗體通常為一些CDR殘基及可能一些FR殘基經來自齧齒動物抗體中之類似位點之殘基取代的人類抗體。

當抗體意欲用於人類治療用途時，有待用於製造人源化抗體之人類可變域(輕與重)之選擇對於減少抗原性及HAMA反應(人類抗小鼠抗體)而言極為重要。根據所謂"最佳擬合"方法，齧齒動物抗體之可變域之序列係對照已知人類可變域序列之完整庫來篩選。鑑別最接近齧齒動物V域序列之人類V域序列，且其中之人類構架區(FR)為人源化抗體所接受(Sims等人，J.Immunol. 151：2296(1993)；Chothia等人，J.Mol.Biol. ,196：901(1987))。另一方法使用來源於特定輕鏈或重鏈子群之所有人類抗體之一致序列的特定構架區。相同構架可用於若干種不同人源化抗體(Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol. 151：2623(1993))。

使抗體在保持對抗原之高結合親和力及其他良好生物特性下人源化更為重要。為達成此目的，根據一較佳方法，藉由使用親本序列及人源化序列之三維模型對親本序列及各種概念上之人源化產物進行分析的過程來製備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型普遍可用且為熟習此項技術者所熟悉。可使用說明及呈現所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構型結構的電腦程式。此等呈現之檢驗允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列起作用過程中可能起到的作用，亦即分析殘基對候選免疫球蛋白與其抗原結合之能力的影響。以此方式，可自接受者及輸入序列選擇FR殘基並使其組合，以便達成所要抗體特徵，諸如對靶抗原之親和力增加。一般而言，高變區殘基與對抗原結合之影響直接且最為實質性地相關。

涵蓋人源化抗－IL－17A/F抗體之各種形式。舉例而言，人源化抗體可為抗體片段(諸如Fab)，其視情況與一或多種細胞毒性劑結合以產生免疫結合物。或者，人源化抗體可為完整抗體，諸如完整IgG1抗體。

作為人源化之替代者，可產生人類抗體。舉例而言，現有可能產生免疫後能在不產生內源免疫球蛋白之情況下產生全人類抗體譜之轉殖基因動物(例如小鼠)。舉例而言，已描述嵌合及生殖細胞株突變小鼠中抗體重鏈接合區(J_H )基因的純合子缺失引起對內源抗體產生的完全抑制。人類生殖細胞株免疫球蛋白基因陣列至該等生殖細胞株突變小鼠中之轉移將使得在抗原挑釁後產生人類抗體。參見，例如Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature ,362：255－258(1993)；Bruggemann等人，Year in Immuno. 7：33(1993)；美國專利第5,545,806號、第5,569,825號、第5,591,669號(皆頒予GenPharm)；美國專利第5,545,807號；及WO 97/17852。

或者，噬菌體呈現技術(McCafferty等人，Nature 348：552－553[1990])可用於自來自未經免疫供體之免疫球蛋白可變(V)域基因譜活體外產生人類抗體及抗體片段。根據此技術，將抗體V域基因同框選殖至絲狀噬菌體(諸如M13或fd)之主要或次要鞘蛋白基因中，且呈現為噬菌體粒子表面上之功能抗體片段。由於絲狀粒子含有噬菌體基因組之單股DNA複本，因此基於抗體功能特性之選擇亦引起編碼顯示彼等特性之抗體之基因的選擇。由此，噬菌體模擬B細胞之一些特性。噬菌體呈現可以(例如)Johnson,Kevin S.及Chiswell,David J.,Current Opinion in Structural Biology 3：564－571(1993)中所評論之多種格局進行。V基因片段之若干來源可用於噬菌體呈現。Clackson等人，Nature ,352：624－628(1991)使一批多樣化抗噁唑酮抗體自來源於經免疫小鼠之脾的V基因之小隨機組合庫分離。可構築來自未經免疫人類供體之V基因譜且可基本上遵循由Marks等人，J.Mol.Biol. 222：581－597(1991)或Griffith等人，EMBO J. 12：725－734(1993)所述之技術使針對抗原(包括自身抗原)之一批多樣化抗體分離。亦參見美國專利第5,565,332號及第5,573,905號。

如上文所討論，人類抗體亦可由經活體外活化之B細胞產生(參見美國專利5,567,610及5,229,275)。

4.抗體片段在某些情況下，使用抗體片段而非使用整個抗體存在優點。較小尺寸之片段允許迅速清除且可使對實體腫瘤之可接近性得以改良。

已開發出各種用於產生抗體片段之技術。傳統上，此等片段係經由完整抗體之蛋白水解消化而得(參見，例如Morimoto等人，Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24：107－117(1992)；及Brennan等人，Science ,229：81(1985))。然而，現可直接由重組宿主細胞產生此等片段。Fab、Fv及ScFv抗體片段皆可在大腸桿菌中表現且自大腸桿菌分泌，由此允許容易地產生大量此等片段。可自上文所討論之抗體噬菌體庫分離抗體片段。或者，可直接自大腸桿菌回收Fab'－SH片段且使其化學偶合以形成F(ab')₂ 片段(Carter等人，Bio/Technology 10：163－167(1992))。根據另一方法，可直接自重組宿主細胞培養物分離F(ab')₂ 片段。包含補救受體結合抗原決定基殘基且活體內半衰期增加的Fab及F(ab')₂ 片段描述於美國專利第5,869,046號中。用於產生抗體片段之其他技術將易於為熟練從業者想到。在其他實施例中，所選抗體為單鏈Fv片段(scFv)。參見WO 93/16185；美國專利第5,571,894號；及美國專利第5,587,458號。Fv及sFv為具有完整組合位點而無恆定區之獨特種類；因此，其在活體內使用期間適合於減少之非特異性結合。sFv融合蛋白可經構築以得到效應蛋白於sFv之胺基或羧基末端之融合。參見Antibody Engineering ,Borrebaeck編，同上。抗體片段亦可為"線性抗體"，例如，如美國專利5,641,870所述。該等線性抗體片段可具有單特異性或雙特異性。

5.雙特異性抗體雙特異性抗體為對至少兩種不同抗原決定基具有結合特異性之抗體。例示性雙特異性抗體可與如本文所述之IL－17A/F蛋白之兩種不同抗原決定基結合。其他該等抗體可將IL－17A/F結合位點與另一蛋白之結合位點組合。或者，抗－IL－17A/F臂可與結合白血球上之觸發分子(諸如T細胞受體分子(例如CD3))或IgG之Fc受體(FcγR)(諸如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)及FcγRIII(CD16))之臂組合，以使細胞防衛機制集中及定位於表現IL－17A/F之細胞。雙特異性抗體亦可用於使細胞毒性劑定位於表現IL－17A/F之細胞。此等抗體具有IL－17A/F結合臂及結合細胞毒性劑(例如沙泊寧(saporin)、抗干擾素－α、長春生物鹼、蓖麻毒素A鏈、甲胺喋呤或放射性同位素半抗原)之臂。可製備全長抗體或抗體片段形式之雙特異性抗體(例如F(ab')₂ 雙特異性抗體)。

WO 96/16673描述雙特異性抗－ErbB2/抗－FcγRIII抗體且美國專利第5,837,234號揭示雙特異性抗－ErbB2/抗－FcγRI抗體。雙特異性抗－ErbB2/Fcα抗體示於WO98/02463中。美國專利第5,821,337號教示雙特異性抗－ErbB2/抗－CD3抗體。

製造雙特異性抗體之方法在此項技術中為已知的。全長雙特異性抗體之傳統產生方法係基於兩個免疫球蛋白重鏈－輕鏈對之共同表現，其中兩條鏈具有不同特異性(Millstein等人，Nature 305：537－539(1983))。由於免疫球蛋白重鏈及輕鏈之隨機搭配，此等融合瘤(四源雜交瘤)產生10種不同抗體分子之潛在混合物，其中僅一者具有正確雙特異性結構。通常由親和層析步驟進行之正確分子之純化相當繁瑣，且產物產率較低。類似程序揭示於WO 93/08829中及Traunecker等人，EMBO J. 10：3655－3659(1991)中。

根據不同方法，具有所要結合特異性(抗體－抗原組合位點)之抗體可變域係與免疫球蛋白恆定域序列融合。較佳地，該融合為與Ig重鏈恆定域(包含鉸鏈、C_H 2及C_H 3區之至少一部分)之融合。較佳地，含有輕鏈結合所需之位點的第一重鏈恆定區(C_H 1)存在於融合體中之至少一者中。將編碼免疫球蛋白重鏈融合體及(若需要)免疫球蛋白輕鏈之DNA插入單獨表現載體中，且使其共轉染至合適之宿主細胞中。此為調整實施例中三個多肽片段之相互比例提供較大靈活性，屆時構築中所用之不等比率之三條多肽鏈提供所要雙特異性抗體之最佳產率。然而，有可能將兩條或全部三條多肽鏈之編碼序列插入單一表現載體中，屆時等比率之至少兩條多肽鏈的表現得到高產率或屆時比率對所要鏈組合之產率並不具有顯著影響。

在此方法之一較佳實施例中，雙特異性抗體包含在一臂中之具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈及在另一臂中之雜交免疫球蛋白重鏈－輕鏈對(提供第二結合特異性)。已發現由於免疫球蛋白輕鏈僅存在於一半雙特異性分子中提供簡便之分離方式，故此不對稱結構有利於將所要雙特異性化合物與不合需要之免疫球蛋白鏈組合分離。此方法揭示於WO 94/04690中。對於產生雙特異性抗體之更多詳情，參見，例如Suresh等人，Methods in Enzymology 121：210(1986)。

根據美國專利第5,731,168號中所述之另一方法，一對抗體分子之間的界面可經工程化以使自重組細胞培養物回收之異源二聚體之百分率最大。較佳界面包含C_H 3域之至少一部分。以此方法，使一或多條來自第一抗體分子界面之小胺基酸側鏈經較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換。藉由將大胺基酸側鏈置換為較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)而於第二抗體分子界面上形成尺寸與大側鏈相同或相似之補償"空穴"。其提供用於增加異源二聚體之產率使其超過其他不合需要之最終產物(諸如同源二聚體)之機制。

雙特異性抗體包括交聯抗體或"雜結合"抗體。舉例而言，雜結合物中之抗體中之一者可與抗生蛋白偶合，另一者與生物素偶合。舉例而言，已提出該等抗體使免疫系統細胞靶向不合需要之細胞(美國專利第4,676,980號)且用於治療HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373及EP 03089)。雜結合抗體可使用任何便利之交聯方法製得。合適之交聯劑以及許多交聯技術在此項技術中已為熟知，且揭示於美國專利第4,676,980號中。

自抗體片段產生雙特異性抗體之技術亦已描述於文獻中。舉例而言，可使用化學鍵聯製備雙特異性抗體。Brennan等人，Science 229：81(1985)描述使完整抗體蛋白質裂解以產生F(ab')₂ 片段之程序。在二硫醇錯合劑亞砷酸鈉存在下使此等片段還原以穩定鄰近二硫醇且防止分子間雙硫鍵形成。接著使所產生之Fab'片段轉化成硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。接著藉由用巰基乙胺還原使Fab'－TNB衍生物中之一者再轉化成Fab'－硫醇，且將其與等莫耳量之另一Fab'－TNB衍生物混合以形成雙特異性抗體。所產生之雙特異性抗體可用作選擇性固定酶之試劑。

近期之發展已使直接自大腸桿菌回收Fab'－SH片段變得容易，可使該等片段化學偶合以形成雙特異性抗體。

Shalaby等人，J.Exp.Med. 175：217－225(1992)描述完全人源化雙特異性抗體F(ab')₂ 分子之產生。使每一Fab'片段自大腸桿菌單獨分泌出且進行活體外定向化學偶合以形成雙特異性抗體。由此形成之雙特異性抗體能與過度表現ErbB2受體之細胞及正常人類T細胞結合，且觸發人類細胞毒性淋巴細胞針對人類乳房腫瘤靶之溶解活性。亦已描述直接自重組細胞培養物製造並分離雙特異性抗體片段之各種技術。舉例而言，已使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體。Kostelny等人，J.Immunol. 148(5)：1547－1553(1992)。藉由基因融合使來自Fos及Jun蛋白質之白胺酸拉鏈肽與兩種不同抗體之Fab'部分連接。使抗體同源二聚體在鉸鏈區還原以形成單體，且接著使其再氧化以形成抗體異源二聚體。此方法亦可用於產生抗體同源二聚體。由Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444－6448(1993)所述之"雙功能抗體"技術已為製造雙特異性抗體片段提供替代機制。該等片段包含經連接子與V_L 連接之V_H ，該連接子過短而無法使同一鏈上之兩個域之間配對。因此，迫使一個片段之V_H 及V_L 域與另一片段之互補V_L 及V_H 域配對，藉此形成兩個抗原結合位點。亦已報導藉由使用單鏈Fv(sFv)二聚體製造雙特異性抗體片段之另一策略。參見Gruber等人，J.Immunol. ,152：5368(1994)。

涵蓋具有兩價以上之抗體。舉例而言，可製備三特異性抗體。Tutt等人，J.Immunol. 147：60(1991)。

6.雜結合抗體雜結合抗體亦處於本發明之範疇內。雜結合抗體包含兩個共價連接之抗體。舉例而言，已提出該等抗體使免疫系統細胞靶向不合需要之細胞[美國專利第4,676,980號]且用於治療HIV感染[WO 91/00360；WO 92/200373；EP 03089]。預期抗體可於活體外使用合成蛋白化學中已知之方法(包括涉及交聯劑之彼等方法)製備。舉例而言，可使用雙硫鍵交換反應或藉由形成硫醚鍵來構築免疫毒素。為達成此目的之合適試劑之實例包括亞胺基硫醇酯及甲基－4－巰基丁醯亞胺酯及(例如)美國專利第4,676,980號中所揭示之彼等試劑。

7.多價抗體多價抗體與二價抗體相比可更快地由表現抗體所結合之抗原的細胞內化(及/或異化)。本發明之抗體可為具有三個或三個以上抗原結合位點之多價抗體(IgM類別之抗體除外)(例如四價抗體)，該等多價抗體可易於藉由重組表現編碼抗體多肽鏈之核酸來製得。多價抗體可包含二聚化域及三個或三個以上抗原結合位點。較佳之二聚化域包含Fc區或鉸鏈區(或由其組成)。在此情形下，抗體將包含Fc區及三個或三個以上在Fc區胺基末端之抗原結合位點。本文中較佳之多價抗體包含三個至約八個(但較佳四個)抗原結合位點(或由其組成)。多價抗體包含至少一條多肽鏈(且較佳兩條多肽鏈)，其中多肽鏈包含兩個或兩個以上可變域。舉例而言，多肽鏈可包含VD1－(X1)_n －VD2－(X2)_n －Fc，其中VD1為第一可變域，VD2為第二可變域，Fc為Fc區之一條多肽鏈，X1及X2表示胺基酸或多肽，且n為0或1。舉例而言，多肽鏈可包含：VH－CH1－可撓性連接子－VH－CH1－Fc區鏈；或VH－CH1－VH－CH1－Fc區鏈。本文中多價抗體較佳進一步包含至少兩個(且較佳四個)輕鏈可變域多肽。本文中多價抗體可(例如)包含約兩個至約八個輕鏈可變域多肽。在此所涵蓋之輕鏈可變域多肽包含輕鏈可變域且視情況進一步包含CL域。

8.效應功能工程化可能需要關於效應功能對本發明之抗體進行修飾，(例如)以增強該抗體之抗原依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。此可藉由將一或多個胺基酸取代引入抗體之Fc區中來達成。其他或另外，可將半胱胺酸殘基引入Fc區中，藉此允許在此區中形成鏈間雙硫鍵。由此產生之同源二聚抗體可具有改良之內化能力及/或增加之補體介導之細胞殺傷性及抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。參見Caron等人，J.Exp Med. 176：1191－1195(1992)及Shopes,B.J.Immunol. 148：2918－2922(1992)。具有增強之抗腫瘤活性之同源二聚抗體亦可使用如Wolff等人，Cancer Research 53：2560－2565(1993)中所述之異質雙功能交聯劑來製備。或者，抗體可經工程化，其具有雙Fc區且可進而具有增強之補體溶解性及ADCC能力。參見Stevenson等人，Anti－Cancer Drug Design 3：219－230(1989)。為增加抗體之血清半衰期，如(例如)美國專利5,739,277中所述，吾人可將補救受體結合抗原決定基併入抗體(尤其抗體片段)中。如本文所用之術語"補救受體結合抗原決定基"係指IgG分子(例如IgG₁ 、IgG₂ 、IgG₃ 或IgG₄ )之Fc區之抗原決定基，其負責增加IgG分子之活體內血清半衰期。

9.免疫結合物本發明亦係關於包含與諸如化學治療劑、生長抑制劑、毒素(例如細菌、真菌、植物或動物來源之酶促活性毒素或其片段)之細胞毒性劑結合或與放射性同位素結合(亦即放射性結合物)之抗體的免疫結合物。

適用於產生該等免疫結合物之化學治療劑已於上文描述。可使用之酶促活性毒素及其片段包括：白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa ))、篦麻毒素A鏈、相思豆毒素(abrin)A鏈、莫迪素(modeccin)A鏈、α－帚麴菌素(alpha－sarcin)、油桐(Aleurites fordii )蛋白、康乃馨蛋白、洋商陸(Phytolaca americana )蛋白(PAPI、PAPII及PAP－S)、苦瓜(momordica charantia )抑制劑、麻楓樹蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis )抑制劑、天堂果蛋白(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麯黴(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、依諾黴素(enomycin)及黴菌毒素(tricothecene )。多種放射性核種可用於產生放射性結合抗體。實例包括²¹² Bi、¹³¹ I、¹³¹ In、⁹⁰ Y及¹⁸⁶ Re。抗體與細胞毒性劑之結合物係使用多種雙功能蛋白偶合劑製得，該等雙功能蛋白偶合劑諸如N－丁二醯亞胺基－3－(2－吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、亞胺基硫雑環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙功能衍生物(諸如己二亞胺酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙－疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙－重氮鹽衍生物(諸如雙(對重氮鹽苯甲醯基)－乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6－二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5－二氟－2,4－二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，Science,238：1098(1987)中所述來製備。經碳－14標記之1－異硫氰基苄基－3－甲基二伸乙三胺五乙酸(MX－DTPA)為用於使放射性核苷酸與抗體結合之例示性螯合劑。參見WO 94/11026。

抗體與一或多種諸如卡奇黴素(calicheamicin)、類美登素(maytansinoid)、黴菌毒素及CC1065之小分子毒素以及此等毒素之具有毒素活性之衍生物的結合物亦涵蓋於本文中。

美登素及類美登素 在一較佳實施例中，本發明之抗－IL－17A/F抗體(全長或片段)係與一或多個類美登素分子結合。

類美登素為藉由抑制微管蛋白聚合而起作用之有絲分裂抑制劑。美登素最先係自東非灌木齒葉美登木(Maytenus serrata )分離(美國專利第3,896,111號)。隨後，發現某些微生物亦產生類美登素，諸如美登醇(maytansinol)及C－3美登醇酯(美國專利第4,151,042號)。合成美登醇及其衍生物及類似物揭示於(例如)美國專利第4,137,230號；第4,248,870號；第4,256,746號；第4,260,608號；第4,265,814號；第4,294,757號；第4,307,016號；第4,308,268號；第4,308,269號；第4,309,428號；第4,313,946號；第4,315,929號；第4,317,821號；第4,322,348號；第4,331,598號；第4,361,650號；第4,364,866號；第4,424,219號；第4,450,254號；第4,362,663號；及第4,371,533號中，該等專利之揭示內容以引用的方式明確地併入本文中。

類美登素－抗體結合物 在試圖改良其治療指數之過程中，已使美登素及類美登素與特異性結合腫瘤細胞抗原之抗體結合。含有類美登素之免疫結合物及其治療用途揭示於(例如)美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1中，該等專利之揭示內容以引用的方式明確地併入本文中。Liu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：8618－8623(1996)描述包含與針對人類結腸直腸癌之單株抗體C242連接之類美登素(命名為DM1)的免疫結合物。發現該結合物對所培養之結腸癌細胞具有高細胞毒性且在活體內腫瘤生長檢定中顯示抗腫瘤活性。Chari等人，Cancer Research 52：127－131(1992)描述免疫結合物，其中類美登素經由雙硫鍵連接子與結合人類結腸癌細胞株上之抗原的鼠類抗體A7結合，或與結合HER－2/neu致癌基因之另一鼠類單株抗體TA.1結合。測試活體外TA.1－類美登素結合物對人類乳癌細胞株SK－BR－3的細胞毒性，該細胞株SK－BR－3每個細胞表現3×10⁵ 個HER－2表面抗原。藥物結合物達成與游離類美登素藥物類似之細胞毒性程度，該細胞毒性程度可藉由增加每個抗體分子之類美登素分子數目而增加。A7－類美登素結合物在小鼠體內顯示較低的全身性細胞毒性。

抗－IL－17A/F多肽抗體－類美登素結合物(免疫結合物) 藉由在不顯著降低抗體或類美登素分子之生物活性的情況下使抗－IL－17A/F抗體與類美登素分子化學連接來製備抗－IL－17A/F抗體－類美登素結合物。每個抗體分子所結合之平均3－4個類美登素分子已顯示增強靶細胞之細胞毒性之功效而對抗體功能或溶解度並無負面影響，但預期即使每個抗體1個毒素分子亦可增強細胞毒性而優於使用裸抗體所產生之細胞毒性。類美登素在此項技術中已為熟知且可由已知技術合成或自天然來源分離。合適之類美登素揭示於(例如)美國專利第5,208,020號中及上文所提及之其他專利及非專利公開案中。較佳之類美登素為美登醇及在美登素醇分子之芳環中或其他位置處經改質之美登醇類似物(諸如各種美登醇酯)。

技術中已知用於製造抗體－類美登素結合物之許多連接基團，該等連接基團包括(例如)美國專利第5,208,020號或EP專利0 425 235 B1及Chari等人，Cancer Research 52：127－131(1992)中所揭示之彼等連接基團。如上文所指出之專利中所揭示，連接基團包括二硫基、硫醚基、酸不穩定基團、光不穩定基團、肽酶不穩定基團或酯酶不穩定基團，二硫基及硫醚基為較佳。

抗體與類美登素之結合物可使用多種雙功能蛋白偶合劑製得，該等雙功能蛋白偶合劑諸如N－丁二醯亞胺基－3－(2－吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基－4－(N－順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷－1－甲酸酯、亞胺基硫雑環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙功能衍生物(諸如己二亞胺酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙－疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙－重氮鹽衍生物(諸如雙(對重氮鹽苯甲醯基)－乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6－二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5－二氟－2,4－二硝基苯)。尤佳之偶合劑包括提供雙硫鍵之N－丁二醯亞胺基－3－(2－吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)(Carlsson等人，Biochem.J.173：723－737[1978])及N－丁二醯亞胺基－4－(2－吡啶基硫基)戊酸酯(SPP)。

根據連接類型將連接子連接在類美登素分子多個位置處。舉例而言，使用習知偶合技術與羥基反應形成酯鍵。該反應可發生於具有羥基之C－3位置、經羥甲基改質之C－14位置、經羥基改質之C－15位置及具有羥基之C－20位置處。在較佳實施例中，該鍵結係形成於美登醇或美登醇類似物之C－3位置處。

卡奇黴素 所關注之另一免疫結合物包含與一或多個卡奇黴素分子結合之抗－IL－17A/F抗體。卡奇黴素家族之抗生素能在比皮莫耳濃度低的情形下產生雙股DNA斷裂。對於卡奇黴素家族結合物之製備，參見美國專利5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001、5,877,296(皆頒予American Cyanamid Company)。可使用之卡奇黴素之結構類似物包括(但不限於)：γ₁ ^I 、α₂ ^I 、α₃ ^I 、N－乙醯基－γ₁ ^I 、PSAG及θ^I ₁ (Hinman等人，Cancer Research 53：3336－3342(1993)；Lode等人，Cancer Research 58：2925－2928(1998)；及頒予American Cyanamid之前述美國專利)。可與抗體結合之另一抗腫瘤藥物為QFA，其為抗葉酸劑。卡奇黴素與QFA兩者均具有細胞內作用位點且不易於跨過質膜。因此，此等藥劑經由抗體介導之內化作用所達成之細胞吸收大大增強其細胞毒性作用。

其他細胞毒性劑 可與本發明之抗－IL－17A/F抗體結合之其他抗腫瘤劑包括BCNU、鏈脲佐菌素(streptozoicin)、長春新鹼及5－氟尿嘧啶，美國專利5,053,394、5,770,710中所述之統稱為LL－E33288複合體之藥劑家族，以及埃斯培拉黴素(esperamicin)(美國專利5,877,296)。

可使用之酶促活性毒素及其片段包括：白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌)、篦麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、莫迪素A鏈、α－帚麴菌素、油桐蛋白、康乃馨蛋白、洋商陸蛋白(PAPI、PAPII及PAP－S)、苦瓜抑制劑、麻楓樹蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制劑、天堂果蛋白、有絲分裂素、侷限麯黴、酚黴素、依諾黴素及黴菌毒素。參見，例如於1993年10月28日公開之WO 93/21232。

本發明進一步涵蓋在抗體與具有溶核活性之化合物(例如核糖核酸酶或DNA內切酶，諸如脫氧核糖核酸酶，亦即DNase)之間所形成之免疫結合物。

為選擇性破壞腫瘤，抗體可包含高放射性原子。多種放射性同位素可用於產生放射性結合抗－IL－17A/F抗體。實例包括At²¹¹ 、I¹³¹ 、I¹²⁵ 、Y⁹⁰ 、Re¹⁸⁶ 、Re¹⁸⁸ 、Sm¹⁵³ 、Bi²¹² 、P³² 、Pb²¹² 及Lu之放射性同位素。當結合物用於診斷時，其可包含用於閃爍攝影研究之放射性原子，例如tc^99m 或I¹²³ ；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記，諸如碘－123(再次)、碘－131、銦－111、氟－19、碳－13、氮－15、氧－17、釓、錳或鐵。

可以已知之方式將放射性標記或其他標記併入結合物中。舉例而言，肽可經生物合成或可藉由使用合適之胺基酸前驅物進行化學胺基酸合成來合成(涉及(例如)以氟－19替代氫)。可經由肽中之半胱胺酸殘基連接諸如tc^99m 或I¹²³ 、Re¹⁸⁶ 、Re¹⁸⁸ 及In¹¹¹ 之標記。可經由離胺酸殘基連接釔－90。可使用IODOGEN方法(Fraker等人(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80：49－57)合併碘－123。"Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy"(Chatal,CRC Press 1989)詳細描述其他方法。

抗體與細胞毒性劑之結合物可使用多種雙功能蛋白偶合劑製得，該等雙功能蛋白偶合劑諸如N－丁二醯亞胺基－3－(2－吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基－4－(N－順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷－1－甲酸酯、亞胺基硫雑環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙功能衍生物(諸如己二亞胺酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙－疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙－重氮鹽衍生物(諸如雙(對重氮鹽苯甲醯基)－乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6－二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5－二氟－2,4－二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，Science 238：1098(1987)中所述來製備。經碳－14標記之1－異硫氰基苄基－3－甲基二伸乙三胺五乙酸(MX－DTPA)為用於使放射性核苷酸與抗體結合之例示性螯合劑。參見WO94/11026。連接子可為促進細胞毒性藥物於細胞中釋放之"可裂解連接子"。舉例而言，可使用酸不穩定連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩定連接子、二甲基連接子或含雙硫鍵之連接子(Chari等人，Cancer Research 52：127－131(1992)；美國專利第5,208,020號)。

或者，可(例如)由重組技術或肽合成製造包含抗－IL－17A/F抗體及細胞毒性劑之融合蛋白。DNA之長度可包含編碼結合物之兩個部分的各別區域，該等區域彼此相鄰或由編碼連接子肽、不破壞結合物之所要特性的區域分隔。

在另一實施例中，抗體可與"受體"(諸如抗生蛋白鏈菌素)結合以用於預靶向腫瘤，其中將抗體－受體結合物投予患者，接著使用清除劑將未結合之結合物自循環移除，且接著投與與細胞毒性劑(例如放射性核苷酸)結合之"配位體"(例如抗生蛋白)。

10.免疫脂質體本文所揭示之抗－IL－17A/F抗體亦可調配成免疫脂質體。"脂質體"為包含各種類型之脂質、磷脂及/或界面活性劑之小泡，其適用於將藥物傳遞至哺乳動物。脂質體之組份通常以雙層形式排列，類似於生物膜之脂質排列。含有抗體之脂質體係由此項技術中已知之方法製備，諸如Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688(1985)；Hwang等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA 77：4030(1980)；美國專利第4,485,045號及第4,544,545號；及於1997年10月23日公開之WO 97/38731中所述之方法。循環時間增強之脂質體揭示於美國專利第5,013,556號中。

尤其適用之脂質體可由逆相蒸發法以包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生之磷脂醯乙醇胺(PEG－PE)之脂質組合物來產生。脂質體經具有規定孔徑之過濾器擠壓以得到具有所要直徑之脂質體。如Martin等人，J.Biol.Chem.257：286－288(1982)中所述，可經由二硫化物互換反應使本發明之抗體之Fab'片段與脂質體結合。化學治療劑視情況含於脂質體內。參見Gabizon等人，J.National Cancer Inst.81(19)：1484(1989)。

N.結合IL－17A/F之寡肽本發明之結合IL－17A/F之寡肽為結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽之寡肽。結合IL－17A/F之寡肽可使用已知之寡肽合成方法來化學合成或可使用重組技術來製備及純化。結合IL－17A/F之寡肽之長度通常為至少約5個胺基酸，或者長度為至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個胺基酸，或更長，其中該等寡肽能結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽。結合IL－17A/F之寡肽可在無過度實驗之情況下使用所熟知之技術來鑑別。在此方面，應注意，用於篩選寡肽庫中能特異性結合多肽靶之寡肽的技術在此項技術中已為熟知(參見，例如美國專利第5,556,762號、第5,750,373號、第4,708,871號、第4,833,092號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,571,689號、第5,663,143號；PCT公開案第WO 84/03506號及第WO 84/03564號；Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81：3998－4002(1984)；Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,82：178－182(1985)；Geysen等人，Synthetic Peptides as Antigens,130－149(1986)；Geysen等人，J.Immunol.Meth.,102：259－274(1987)；Schoofs等人，J.Immunol.,140：611－616(1988)；Cwirla,S.E.等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87：6378；Lowman,H.B.等人(1991)Biochemistry,30：10832；Clackson,T.等人(1991)Nature,352：624；Marks,J.D.等人(1991),J.Mol.Biol.,222：581；Kang,A.S.等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88：8363；及Smith,G.P.(1991)Current Opin.Biotechnol.,2：668)。

在此方面，噬菌體呈現為允許吾人篩選大寡肽庫以鑑別能特異性結合多肽靶之彼等庫之成員的一種熟知技術。噬菌體呈現為藉以使變異體多肽呈現為噬菌體粒子表面上與鞘蛋白之融合蛋白的技術(Scott,J.K.及Smith,G.P.(1990)Science 249：386)。噬菌體呈現之效用在於較大的選擇性隨機化蛋白質變異體(或隨機選殖cDNA)庫可針對以高親和力結合靶分子之彼等序列而迅速並有效地加以分選。肽(Cwirla,S.E.等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87：6378)或蛋白質(Lowman,H.B.等人(1991)Biochemistry,30：10832；Clackson,T.等人(1991)Nature,352：624；Marks,J.D.等人(1991),J.Mol.Biol.,222：581；Kang,A.S.等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88：8363)庫於噬菌體上之呈現已用於篩選數百萬多肽或寡肽中具有特異性結合特性者(Smith,G.P.(1991)Current Opin.Biotechnol.,2：668)。隨機突變體之分選噬菌體庫需要用於構築及繁殖大量變異體之策略、使用靶受體進行親和純化之程序及評估結合富集結果之方式。美國專利第5,223,409號、第5,403,484號、第5,571,689號及第5,663,143號。

儘管多數噬菌體呈現法已使用絲狀噬菌體，但λ形噬菌體呈現系統(WO 95/34683；U.S.5,627,024)、T4噬菌體呈現系統(Ren,Z－J.等人(1998)Gene 215：439；Zhu,Z.(1997)CAN 33：534；Jiang,J.等人(1997)can 128：44380；Ren,Z－J.等人(1997)CAN 127：215644；Ren,Z－J.(1996)Protein Sci.5：1833；Efimov,V.P.等人(1995)Virus Genes 10：173)及T7噬菌體呈現系統(Smith,G.P.及Scott,J.K.(1993)Methods in Enzymology,217,228,257；U.S.5,766,905)亦為已知的。

現已發展基本噬菌體呈現概念之許多其他改良及變化。此等改良增強呈現系統針對與所選靶分子之結合篩選肽庫之能力及以針對所要特性篩選功能蛋白之潛力而呈現此等蛋白之能力。已開發出用於噬菌體呈現反應之組合反應裝置(WO 98/14277)且噬菌體呈現庫已用於分析及控制雙分子相互作用(WO 98/20169；WO 98/20159)及限制性螺旋肽之特性(WO 98/20036)。WO 97/35196描述分離親和力配位體之方法，其中使噬菌體呈現庫與一種溶液(其中配位體將與靶分子結合)及第二種溶液(其中親和力配位體將不與靶分子結合)接觸，以選擇性分離結合配位體。WO 97/46251描述以親和力純化抗體生物淘選隨機噬菌體呈現庫且接著分離結合噬菌體，接著使用微定量盤孔進行微淘選過程以分離高親和力結合噬菌體之方法。亦已報導使用金黃色葡萄球菌(Staphlylococcus aureus )A蛋白作為親和力標記(Li等人(1998)Mol Biotech.,9：187)。WO 97/47314描述使用受質消減庫以使用可為噬菌體呈現庫之組合庫來區分酶特異性。使用噬菌體呈現選擇適用於清潔劑之酶之方法描述於WO 97/09446中。選擇特異性結合蛋白質之其他方法描述於美國專利第5,498,538號、第5,432,018號及WO 98/15833中。

產生肽庫且篩選此等庫之方法亦揭示於美國專利第5,723,286號、第5,432,018號、第5,580,717號、第5,427,908號、第5,498,530號、第5,770,434號、第5,734,018號、第5,698,426號、第5,763,192號及第5,723,323號中。

O.結合IL－17A/F之有機分子結合IL－17A/F之有機分子為結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽且不同於如本文所定義之寡肽或抗體之有機分子。結合IL－17A/F之有機分子可使用已知方法來鑑別及化學合成(參見，例如PCT公開案第WO 00/00823號及第WO 00/39585號)。結合IL－17A/F之有機分子之尺寸通常小於約2000道爾頓，或者尺寸小於約1500、750、500、250或200道爾頓，其中能結合、較佳特異性結合如本文所述之IL－17A/F多肽之該等有機分子可在無過度實驗之情況下使用所熟知之技術來鑑別。在此方面，應注意，用於篩選有機分子庫中能結合多肽靶之分子的技術在此項技術中已為熟知(參見，例如PCT公開案第WO 00/00823號及第WO 00/39585號)。結合IL－17A/F之有機分子可為(例如)醛、酮、肟、腙、半卡腙(semicarbazone)、卡脲(carbazide)、第一胺、第二胺、第三胺、N－取代肼、醯肼、醇、醚、硫醇、硫醚、二硫化物、羧酸、酯、醯胺、脲、胺基甲酸酯、碳酸酯、縮酮、硫縮酮、縮醛、硫縮醛、芳基鹵化物、磺酸芳酯、烷基鹵化物、磺酸烷酯、芳族化合物、雜環化合物、苯胺、烯烴、炔烴、二醇、胺基醇、噁唑烷、噁唑啉、噻唑烷、噻唑啉、烯胺、磺醯胺、環氧化物、氮丙啶、異氰酸酯、磺醯氯、重氮化合物、酸氯化物或類似有機分子。

P.篩選具有所要特性之抗－IL－17A/F抗體、結合IL－17A/F之寡肽及結合IL－17A/F之有機分子用於產生與IL－17A/F多肽結合之抗體、寡肽及有機分子之技術已於上文描述。必要時，吾人可進一步選擇具有某些生物特徵之抗體、寡肽或其他有機分子。

本發明之抗－IL－17A/F抗體、寡肽或其他有機分子之生長抑制作用可由此項技術中已知之方法來評估，例如，使用內源性地或在用IL－17A/F基因轉染後表現IL－17A/F多肽之細胞。舉例而言，適當腫瘤細胞株及經IL－17A/F轉染之細胞可經各種濃度下之本發明之抗－IL－17A/F單株抗體、寡肽或其他有機分子處理數天(例如2－7天)且用結晶紫或MTT染色或由一些其他比色檢定來分析。量測增殖之另一方法將藉由比較在存在或不存在本發明之抗－IL－17A/F抗體、結合IL－17A/F之寡肽或結合IL－17A/F之有機分子的情況下由經處理之細胞吸收之³ H－胸苷來量測。處理後，收集細胞且在閃爍計數器中量化併入DNA中之放射能之量。適當陽性對照包括用已知抑制所選細胞株生長之生長抑制抗體來處理彼細胞株。活體內腫瘤細胞之生長抑制可以此項技術中已知之各種方式測定。較佳地，腫瘤細胞為過度表現IL－17A/F多肽之細胞。較佳地，抗－IL－17A/F抗體、結合IL－17A/F之寡肽或結合IL－17A/F之有機分子將使活體外或活體內表現IL－17A/F之腫瘤細胞之細胞增殖與未經處理之腫瘤細胞相比抑制約25－100%、更佳約30－100%且甚至更佳約50－100%或70－100%，在一實施例中，抗體濃度為約0.5至30 μg/ml。生長抑制可在細胞培養物中於約0.5至30 μg/ml或約0.5 nM至200 nM之抗體濃度下量測，其中該生長抑制係在將腫瘤細胞暴露於抗體之後1－10天測定。若投與約1微克/公斤體重至約100毫克/公斤體重之抗－IL－17A/F抗體使得在自首次投與抗體起約5天至3個月內、較佳約5天至30天內腫瘤尺寸減小或腫瘤細胞增殖減少，則該抗體具有活體內生長抑制性。

為選擇誘導細胞死亡之抗－IL－17A/F抗體、結合IL－17A/F之寡肽或結合IL－17A/F之有機分子，可相對於對照來評估如由(例如)碘化丙啶(PI)、錐蟲藍或7AAD吸收所指示之膜完整性損失。可在無補體及免疫效應細胞存在下進行PI吸收檢定。用單獨培養基或含有適當抗－IL－17A/F抗體(例如，約10 μg/ml)、結合IL－17A/F之寡肽或結合IL－17A/F之有機分子的培養基培育表現IL－17A/F多肽之腫瘤細胞。將細胞培育3天之時段。各處理後，將細胞洗滌且等分至35 mm濾網封蓋之12×75管中(1毫升/管，每個處理組3個管)用於移除細胞團塊。管接著接收PI(10 μg/ml)。可使用FACSCAN流式細胞儀及FACSCONVERTCellQuest軟體(Becton Dickinson)分析樣本。誘導如由PI吸收所測定統計上顯著量之細胞死亡的彼等抗－IL－17A/F抗體、結合IL－17A/F之寡肽或結合IL－17A/F之有機分子可選作誘導細胞死亡之抗－IL－17A/F抗體、結合IL－17A/F之寡肽或結合IL－17A/F之有機分子。

為篩選與由所關注抗體結合之IL－17A/F多肽上之抗原決定基結合的抗體、寡肽或其他有機分子，可進行常規交叉阻斷檢定，諸如Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow及David Lane編(1988)中所述之彼交叉阻斷檢定。此檢定可用於判定測試抗體、寡肽或其他有機分子是否與已知抗－IL－17A/F抗體所結合之相同位點或抗原決定基結合。其他或另外，可由此項技術中已知之方法進行抗原決定基定位。舉例而言，可(諸如)由丙胺酸掃描使抗體序列突變以鑑別接觸殘基。最初針對與多株抗體之結合來測試突變抗體以確保適當摺疊。在不同方法中，對應於IL－17A/F多肽之不同區域之肽可在競爭檢定中與測試抗體一起或與測試抗體及具有經表徵或已知之抗原決定基之抗體一起使用。

Q.醫藥組合物可以醫藥組合物之形式投與本發明之活性IL－17A/F分子(例如，IL－17A/F多肽、抗－IL－17A/F抗體及/或各者之變異體)以及由上文揭示之篩選檢定所鑑別之其他分子以治療免疫相關疾病。

活性IL－17A/F分子(較佳本發明之多肽或抗體)之治療調配物係藉由將具有所要純度之活性分子與可選醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合來製備以供儲存(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編[1980])，該等治療調配物呈凍乾調配物或水溶液之形式。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所使用之劑量及濃度下對接受者無毒，且包括：緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苄基銨；氯化六烴季銨；氯化苯甲烴銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3－戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽平衡離子，諸如鈉離子；金屬錯合物(例如Zn－蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN^TM 、PLURONICS^TM 或聚乙二醇(PEG)。

由本文揭示之篩選檢定所鑑別之化合物可以類似方式、使用此項技術中所熟知之標準技術來調配。

脂染素(lipofection)或脂質體亦可用於將IL－17A/F分子傳遞至細胞中。當使用抗體片段時，特異性結合靶蛋白之結合域的最小抑制片段為較佳。舉例而言，基於抗體之可變區序列，可設計保持結合靶蛋白序列之能力的肽分子。該等肽可經化學合成及/或由重組DNA技術產生(參見，例如Marasco等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：7889－7893[1993])。

本文中調配物亦可含有一種以上為治療中之特定指征所需之活性化合物，較佳為具有彼此無不利影響之互補活性的彼等活性化合物。其他或另外，組合物可包含細胞毒性劑、細胞激素或生長抑制劑。該等分子適宜以有效達成所欲目的之量組合存在。

亦可將活性IL－17A/F分子截留於以下各者中：(例如)由凝聚技術或由界面聚合製備之微囊，分別例如羥甲基纖維素或明膠－微囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊；膠狀藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)；或巨乳液。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980)中。

待用於活體內投藥之調配物須無菌。此易於藉由經無菌濾膜過濾來實現。

可製備持續釋放製劑或IL－17A/F分子。持續釋放製劑之合適實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半滲透性基質，該等基質呈成形物品(例如薄膜或微囊)之形式。持續釋放基質之實例包括：聚酯；水凝膠(例如，聚(2－羥乙基－甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))；聚乳酸交酯(美國專利第3,773,919號)；L－麩胺酸與γ－乙基－L－麩胺酸酯之共聚物；不可降解性乙烯－乙酸乙烯酯；可降解性乳酸－乙醇酸共聚物，諸如LUPRON DEPOT^TM (包含乳酸－乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)之可注射微球體)；及聚－D－(－)－3－羥基丁酸。諸如乙烯－乙酸乙烯酯及乳酸－乙醇酸之聚合物能使分子釋放持續100天以上，而某些水凝膠釋放蛋白質持續較短時段。當經囊封之抗體於體內保持較長時間時，其可因暴露於37℃之潮濕環境而變性或凝集，導致生物活性損失及可能的免疫原性變化。視所涉及之機制而定，可設計合理的策略以達成穩定。舉例而言，若發現凝集機制為經由硫基－二硫化物互換形成分子間S－S鍵，則可藉由修飾氫硫基殘基、由酸性溶液凍乾、控制水分含量、使用適當添加劑及開發特定聚合物基質組合物來達成穩定。

R.治療方法預期本發明之多肽、抗體及其他活性化合物可用於治療各種免疫相關疾病及病狀(諸如T細胞介導之疾病)，包括特徵在於發炎性細胞滲入組織中、刺激T細胞增殖、抑制T細胞增殖、血管滲透性增加或減小或其受抑制之彼等疾病及病狀，諸如自體免疫疾病。

待用本發明之多肽、抗體及其他化合物治療之例示性病狀或病症包括(但不限於)：全身性紅斑狼瘡；類風濕性關節炎；青少年慢性關節炎；骨關節炎；脊椎關節病；全身性硬化症(硬皮病)；特發性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)；修格連氏症候群；全身性血管炎；肉狀瘤病；自體免疫溶血性貧血(免疫全血細胞減少症、陣發性睡眠性血紅蛋白尿症)；自體免疫血小板減少症(特發性血小板減少性紫癜、免疫介導之血小板減少症)；甲狀腺炎(格雷氏病、橋本氏甲狀腺炎、青少年淋巴細胞甲狀腺炎、萎縮性甲狀腺炎)；糖尿病；免疫介導之腎病(絲球體腎炎、腎小管間質性腎炎)；中樞神經系統及周邊神經系統之髓鞘脫失病，諸如多發性硬化症、特發性髓鞘脫失多發性神經病或吉蘭－巴雷症候群及慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病；肝膽病，諸如傳染性肝炎(A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎及其他非嗜肝病毒肝炎)、自體免疫慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管炎；發炎性腸病(潰瘍性結腸炎：克隆氏病)、麩質敏感性腸病及惠普爾氏病；自體免疫或免疫介導之皮膚病，包括大皰性皮膚病、多形紅斑及接觸性皮炎、牛皮癬；過敏性疾病，諸如哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏及蕁麻疹；肺部免疫疾病，諸如嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎；移植相關疾病，包括移植排斥反應及移植物抗宿主疾病。

在全身性紅斑性狼瘡症中，該疾病之中心介體為針對自身蛋白/組織之自體反應性抗體的產生及隨後免疫介導之炎症的產生。抗體直接或間接介導組織損傷。儘管尚未顯示T淋巴細胞與組織損害直接相關，但T淋巴細胞為自體反應性抗體發展所需。疾病起源由此為T淋巴細胞依賴性的。臨床上侵襲多個器官及系統，包括腎、肺、肌肉骨骼系統、黏膜與皮膚、眼、中樞神經系統、心血管系統、胃腸道、骨髓及血液。

類風濕性關節炎(RA)為主要涉及多個關節之滑膜並最終導致關節軟骨損傷之慢性全身性自體免疫發炎疾病。發病機制為T淋巴細胞依賴性的且與類風濕性因子、針對自身IgG之自體抗體的產生相關，最終導致在關節液及血液中達到高含量之免疫複合體的形成。關節中之此等複合體可誘導淋巴細胞及單核細胞顯著滲入滑膜中且隨後發生顯著滑膜變化；若由類似細胞外加眾多嗜中性白血球滲透，則滲入關節空隙/關節液中。受侵襲之組織主要為關節，通常呈對稱模式。然而，關節外疾病亦以兩種主要形式發生。一種形式為具有進行性關節病之關節外病灶及肺纖維化、血管炎及皮膚潰瘍之典型病灶的發展。第二種形式之關節外疾病為所謂弗耳提氏症候群(Felty's syndrome)，其於RA病程晚期發生，有時在關節病已變成靜態之後發生，且涉及嗜中性白血球減少症、血小板減少症及脾腫大的存在。其可伴隨多個器官中之血管炎，帶有梗塞、皮膚潰瘍及壞疽形成。患者通常亦於受侵襲關節上方之皮下組織中發展類風濕節結；節結晚期具有由混合發炎性細胞滲入物圍繞之壞疽中心。可在RA中發生之其他症包括：心包炎、胸膜炎、冠狀動脈炎、具有肺纖維化之間質性肺炎、乾燥性角膜結膜炎及類風濕節結。

青少年慢性關節炎為通常在16歲以下始發之慢性特發性發炎疾病。其表型與RA具有一些相似性；類風濕因子為陽性之一些患者歸類為青少年類風濕性關節炎。該疾病細分為三個主要類別：少關節型、多關節型及全身型。關節炎可為嚴重的且通常具破壞性且導致關節僵直及生長阻滯。其他症可包括慢性前葡萄膜炎及全身性澱粉樣變性病。

脊椎關節病為具有一些常見臨床特徵且通常與HLA－B27基因產物之表現相關之一組病症。該等病症包括：強直性脊椎炎、賴特氏症候群(Reiter's syndrome)(反應性關節炎)、與發炎性腸病相關之關節炎、與牛皮癬相關之脊椎炎、青少年發作型脊椎關節病及未分化型脊椎關節病。顯著特徵包括伴有或不伴有脊椎炎之骶骨關節炎；發炎性不對稱關節炎；與HLA－B27(I類MHC之HLA－B基因座之血清學定義之等位基因)之相關性；眼部炎症；及不存在與其他類風濕疾病相關之自體抗體。作為誘導疾病之關鍵最常牽涉之細胞為CD8^＋ T淋巴細胞，其為靶向由I類MHC分子呈現之抗原的細胞。CD8^＋ T細胞可對I類MHC等位基因HLA－B27起反應，如同其為由I類MHC分子表現之外來肽。已假設HLA－B27之抗原決定基可模擬細菌或其他微生物之抗原決定基且由此誘導CD8^＋ T細胞反應。

全身性硬化症(硬皮病)之病源未知。該疾病之特點為皮膚硬化；其可能係由活動性發炎過程誘導。硬皮病可為局部的或全身性的；血管病灶為常見的且微血管中之內皮細胞損傷為全身性硬化症發展過程中之早期及重要事件；血管損傷可經免疫介導。免疫基礎意指在皮膚病灶中存在單核細胞滲入物及在許多患者體內存在抗核抗體。ICAM－1通常在皮膚病灶之纖維母細胞之細胞表面上上調，此表明T細胞與此等細胞之相互作用在該疾病之發病機制中起作用。所涉及之其他器官包括：胃腸道：引起異常蠕動/運動之平滑肌萎縮及纖維化；腎：侵襲小弓形及小葉間動脈並最終導致腎皮層血流減少之同中心內皮下內膜增殖，其引起蛋白尿症、氮血症及高血壓；骨骼肌：萎縮症、間質纖維化、炎症；肺：間質性肺炎及間質纖維化；及心臟：收縮帶壞死、疤痕/纖維化。

包括皮肌炎、多肌炎及其他疾病之特發性炎性肌病為引起肌無力之未知病源之慢性肌肉發炎病症。肌肉損傷/發炎通常為對稱性及進行性的。自體抗體與多數形式相關。此等肌炎特異性自體抗體係針對與蛋白質合成有關之組份、蛋白質及RNA且抑制其功能。

修格連氏症候群係歸因於免疫介導之淚腺及唾液腺之發炎及隨後其功能破壞。該疾病可與發炎性結締組織疾病相關或伴隨發炎性結締組織疾病。此疾病與針對Ro及La抗原之自體抗體產生相關，Ro與La抗原均為小RNA－蛋白質複合體。病灶引起乾燥性角膜結膜炎、口乾症，其他症或相關症包括膽汁性肝硬化、周邊或感覺神經病及可觸摸性紫癜。

全身性血管炎為原發性病灶為炎症及隨後血管損害之疾病，該疾病引起受侵襲血管所供給之組織局部缺血/壞死/退化且在一些狀況下引起最終終末器官功能障礙。血管炎亦可以其他免疫發炎介導之疾病(諸如類風濕性關節炎、全身性硬化症等)的繼發性病灶或續發症之形式發生，尤其在亦與免疫複合體形成相關之疾病中。原發性全身性血管炎群中之疾病包括：全身壞死性血管炎：結節性多動脈炎、過敏性血管炎與肉芽腫病、多血管炎；韋格納氏肉牙腫病(Wegener's granulomatosis)；淋巴瘤樣肉芽腫病；及巨細胞動脈炎。混雜血管炎包括：皮膚黏膜淋巴結症候群(MLNS或川琦氏病(Kawasaki's disease))、獨立性CNS血管炎、貝西氏病(Behcet's Disease)、血栓閉塞性脈管炎(伯格氏病(Buerger's disease))及皮膚壞死性血管炎。咸信所列出之多數類型血管炎之發病機制主要係由於免疫球蛋白複合體沈積於血管壁中且隨後經由ADCC、補體活化或二者誘導發炎反應。

肉狀瘤病為未知病源之病狀，其特徵在於在體內幾乎任何組織中存在上皮樣肉芽腫；最常涉及肺。發病機制涉及經活化之巨噬細胞及淋巴樣細胞持續存在於疾病部位處，由此等細胞類型釋放之局部及全身活性產物的釋放而引起隨後之慢性續發症。

包括自體免疫溶血性貧血、免疫全血細胞減少症及陣發性睡眠性血紅蛋白尿症之自體免疫溶血性貧血為產生與在紅血球(且在一些狀況下為其他血細胞，亦包括血小板)之表面上表現之抗原反應的抗體之結果且反映經由補體介導之溶解及/或ADCC/Fc－受體介導之機制移除彼等抗體包被細胞。

在包括血小板減少性紫癜及其他臨床配置中之免疫介導之血小板減少症的自體免疫血小板減少症中，血小板破壞/移除因抗體或補體附著於血小板且隨後由補體溶解、ADCC或FC－受體介導之機制移除而發生。

包括格雷氏病、橋本氏甲狀腺炎、青少年淋巴細胞甲狀腺炎及萎縮性甲狀腺炎之甲狀腺炎為抗甲狀腺抗原之自體免疫反應之結果，其產生與存在於甲狀腺中且通常對甲狀腺具特異性之蛋白質反應的抗體。實驗模型存在，其包括自然產生之模型：大鼠(BUF及BB大鼠)及雞(肥胖型雞品系)；誘導性模型：用甲狀腺球蛋白、甲狀腺微粒體抗原(甲狀腺過氧化酶)中任一者使動物免疫。

I型糖尿病或胰島素依賴性糖尿病為胰島細胞之自體免疫破壞；此破壞係由自體抗體及自體反應性T細胞介導。針對胰島素或胰島素受體之抗體亦可產生對胰島素無反應性之表型。

包括絲球體腎炎及腎小管間質性腎炎之免疫介導之腎病為直接因產生抗腎抗原之自體反應抗體或T細胞，或間接因對其他非腎抗原具反應性之抗體及/或免疫複合體沈積於腎中而引起之抗體或T淋巴細胞介導之腎組織損傷的結果。因此，引起免疫複合體形成之其他免疫介導之疾病亦可誘導免疫介導之腎病作為間接續發症。直接與間接免疫機制引起產生/誘導腎組織中病灶發展之發炎反應，其最終導致器官功能損傷及在一些狀況下發展成腎衰竭。體液與細胞免疫機制可與病灶發病機制有關。

咸信包括多發性硬化症、特發性髓鞘脫失多發性神經病或吉蘭－巴雷症候群及慢性發炎性髓鞘脫失多發性神經病之中樞神經系統及周邊神經系統之髓鞘脫失病係基於自體免疫且因對寡樹突神經膠質細胞或直接對髓鞘所造成之損害而引起神經髓鞘脫失。在MS中，有跡象表明疾病誘導及發展依賴於T淋巴細胞。多發性硬化症為依賴於T淋巴細胞且具有復發－緩解型病程或慢性進行性病程之髓鞘脫失病。病源為未知的；然而，病毒感染、遺傳易感性、環境及自體免疫性皆為促成發病之因素。病灶含有主要T淋巴細胞介導、小膠質細胞及滲入性巨噬細胞之滲入物；CD4^＋ T淋巴細胞為病灶處之主要細胞類型。寡樹突神經膠質細胞死亡及隨後髓鞘脫失之機制為未知的，但可能受T淋巴細胞驅動。

包括嗜伊紅血球性肺炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎之發炎性及纖維化肺病可涉及失調之免疫發炎反應。彼反應的抑制將具有治療效益。

包括大皰性皮膚病、多形紅斑及接觸性皮炎之自體免疫或免疫介導之皮膚病係由自體抗體介導，其起源為T淋巴細胞依賴性的。

牛皮癬為T淋巴細胞介導之發炎疾病。病灶含有T淋巴細胞、巨噬細胞及抗原呈遞細胞及一些嗜中性白血球之滲入物。

包括哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、食物過敏及蕁麻疹之過敏性疾病具有T淋巴細胞依賴性。此等疾病主要由T淋巴細胞誘導之炎症、IgE介導之炎症或二者之組合介導。

包括移植排斥反應及移植物抗宿主疾病(GVHD)之移植相關疾病具有T淋巴細胞依賴性；抑制T淋巴細胞功能具改善作用。

免疫及/或發炎反應介入具有效益之其他疾病為傳染病，包括(但不限於)病毒感染(包括(但不限於)AIDS、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎及疱疹)、細菌感染、真菌感染及原蟲感染及寄生蟲感染(刺激MLR之分子(或衍生物/促效劑)可在治療上用於增強對傳染媒介之免疫反應)；免疫缺乏疾病(刺激MLR之分子/衍生物/促效劑可在治療上用於增強遺傳性、後天性、傳染性誘導(如HIV感染中)或醫原性(亦即，如來自化學療法)免疫缺乏之病狀的免疫反應)；及瘤形成。

已證實一些人類癌症患者顯現出對贅生性細胞上之抗原的抗體及/或T淋巴細胞反應。亦已顯示在瘤形成之動物模型中免疫反應的增強可引起彼特定贅瘤之排斥反應或消退。增強MLR中之T淋巴細胞反應之分子具有增強抗瘤形成之免疫反應的活體內效用。增強MLR中之T淋巴細胞增殖反應之分子(或以促效方式影響相同受體之小分子促效劑或抗體)可在治療上用於治療癌症。抑制MLR中之淋巴細胞反應之分子亦在瘤形成期間活體內起作用以抑制對贅瘤之免疫反應；該等分子可由贅生性細胞自身表現或其表現可由其他細胞中之贅瘤誘導。對該等抑制分子之拮抗作用(用抗體、小分子拮抗劑或其他方式)增強免疫介導之腫瘤排斥反應。

另外，抑制具有前發炎特性之分子可能在再灌注損傷、中風、心肌梗塞、動脈粥樣硬化、急性肺損傷、出血性休克、燒傷、敗血症/敗血性休克、急性腎小管壞死、子宮內膜異位、退化性關節病及胰腺炎中具有治療效益。根據已知方法(諸如團式靜脈內投藥或藉由經一定時段連續輸注)，由肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、胸內、經口、局部或吸入(鼻內、肺內)途徑將本發明之化合物(例如多肽或抗體)投予哺乳動物、較佳人類。多肽及抗體之靜脈內或吸入式投與為較佳。

在免疫佐劑療法中，其他治療方案(諸如抗癌劑之投與)可與本發明之蛋白質、抗體或化合物之投與組合。舉例而言，待用本發明之免疫佐劑治療之患者亦可接受抗癌劑(化學治療劑)或輻射療法。該等化學治療劑之製備及給藥時程可根據製造商之說明書或如由熟練從業者以經驗所確定來使用。該化學療法之製備及給藥時程亦描述於Chemotherapy Service ,M.C.Perry編，Williams & Wilkins,Baltimore,MD(1992)中。化學治療劑可先於免疫佐劑之投與或緊隨其後，或可與其同時給與。另外，抗雌激素化合物(諸如他莫西芬)或抗孕酮(諸如歐納氏酮)(參見EP 616812)可以已知用於該等分子之劑量給與。

可需要亦投與針對其他免疫疾病相關或腫瘤相關抗原之抗體，諸如與CD20、CD11a、CD18、ErbB2、EGFR、ErbB3、ErbB4或血管內皮因子(VEGF)結合之抗體。其他或另外，可將兩種或兩種以上結合本文所揭示之相同抗原或兩種或兩種以上不同抗原之抗體共同投予患者。有時，亦將一或多種細胞激素投予患者可能為有利的。在一實施例中，將IL－17A/F多肽與生長抑制劑共同投與。舉例而言，可首先投與生長抑制劑，繼之以IL－17A/F多肽。然而，亦涵蓋同時投藥或首先投藥。生長抑制劑之合適劑量為目前所使用之彼等劑量且可因生長抑制劑與IL－17A/F多肽之組合作用(協同作用)而降低。

為治療或減輕免疫相關疾病之嚴重性，本發明之化合物之適當劑量將視如上文所定義之待治療之疾病類型、疾病之嚴重性及病程，藥劑係出於預防目的抑或治療目的而投與，先前療法、患者之臨床病史及對化合物之反應，及主治醫師之判斷而定。化合物適宜一次性或經一系列治療而投予患者。

舉例而言，視疾病類型及嚴重性而定，約1 mg/kg至15 mg/kg(例如0.1－20 mg/kg)之多肽或抗體為(例如)藉由一或多次單獨投藥抑或藉由連續輸注而投予患者之初始候選劑量。典型日劑量可處於約1 mg/kg至100 mg/kg或更高劑量之範圍內，其視上文所提及之因素而定。對於經數天或更長時間重複投藥而言，視病狀而定，持續治療直至出現所要疾病症狀抑制為止。然而，其他給藥方案可為適用的。此療法之進程易於由習知技術及檢定來監控。

S.製造物品在本發明之另一實施例中，提供含有適用於診斷或治療上述病症之物質(例如，包含IL－17A/F分子)的製造物品。該製造物品包含容器及說明書。合適之容器包括(例如)大瓶、小瓶、注射器及測試管等。該等容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納有效診斷或治療病狀之組合物且可具有無菌接取口(例如，該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。組合物中之活性劑通常為本發明之多肽或抗體。在容器上或與容器相關聯之說明書或標籤指示組合物用於診斷或治療所選病狀。製造物品可進一步包含第二容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者之角度而言合乎需要之其他物質，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針、注射器及帶有使用說明之包裝插頁。

T.免疫相關疾病之診斷及預後細胞表面蛋白，諸如在某些免疫相關疾病中過度表現之蛋白質，為候選藥物或疾病治療之極佳標靶。上述蛋白質連同由免疫相關疾病病況中經擴增之基因編碼之分泌蛋白另外適用於此等疾病之診斷及預後。舉例而言，針對多發性硬化症、類風濕性關節炎、發炎性腸病或其他免疫相關疾病中經擴增基因之蛋白質產物的抗體可用作診斷劑或預後劑。

舉例而言，抗體(包括抗體片段)可用於以定性或定量方式偵測由經擴增或經過度表現之基因編碼之蛋白質("標記基因產物")的表現。抗體較佳配備有可偵側標記(例如螢光標記)，且可由光學顯微鏡法、流式細胞儀、螢光測定法或此項技術中已知之其他技術來監測結合。若經過度表現之基因編碼細胞表面蛋白，則此等技術尤其適合。該等結合檢定基本上如上所述進行。

與標記基因產物結合之抗體的原位偵測可(例如)由免疫螢光法或免疫電子顯微鏡法來進行。為達成此目的，將組織試樣自患者移除，且較佳藉由將經標記抗體覆於生物樣本上來將該抗體施加於其上。此程序亦允許測定標記基因產物於所檢查之組織中之分布。熟習此項技術者將想到多種組織學方法易用於原位偵測。

以下實例僅為達成說明之目的而提供，且並不意欲以任何方式限制本發明之範疇。

本說明書中所引用之所有專利及文獻皆以引用的方式全部併入本文中。

實例

除非另有指示，否則實例中所提及之市售試劑係根據製造商之說明書使用。以下實例中及貫穿本說明書由ATCC寄存編號鑑別之彼等細胞之來源為美國菌種保存中心(Manassas,VA)。

實例1

經鑑別為IL－17A/F之新穎IL－17細胞激素之重組表現 用編碼IL－17及IL－17F之cDNA表現載體使人類293腎細胞轉染 使用磷酸鈣沈澱程序，用等量之編碼人類IL－17、IL－17C及IL－17F基因之質體使人類293腎細胞轉染。對於各50%－80%融合T－150燒瓶，將50 μg之各質體混合以於細胞之上形成沈澱物層。轉染後一天，移除含有10% FCS、5 mM L－麩胺醯胺、盤尼西林(penicillin)－鏈黴素之50：50 F12：DMEM且用無血清PS24培養基更換且再培養四天。四天後，收集經調節之培養基，離心且無菌過濾，接著純化。

重組IL－17A/F之純化 A.初始分級步驟1：將2.5公升之來自人類293腎細胞瞬間培養物之重組IL－17A/F經調節培養基濃縮且使用10,000道爾頓截止膜針對20 mM乙酸鈉(pH 5.0)、1 mM疊氮化鈉(緩衝液A)透析至480毫升之體積，接著以6 ml/min施加於Pharmacia HiLoad S Sepharose 26/10管柱上。用以1%/分鐘之速率至100%緩衝液B(20 mM乙酸鈉，1 M NaCl，1 mM疊氮化鈉，pH 5.0)之線性梯度以6 ml/min之流動速率使管柱溶離，收集12 ml溶離份。對自此管柱收集之溶離份進行SDS PAGE分析。以銀染色顯現蛋白質。用分子質量標記對含有溶離份25－37之凝膠作標記(圖2)。溶離份31及32含有具有與IL－17A/F一致之約33 kD之表觀分子質量的蛋白質。

B.IL－17A/F之純化：將4 ml溶離份32(圖2)用0.1%三氟乙酸酸化，接著以0.5 ml/min施加於在0.1%三氟乙酸(緩衝液C)中平衡之Vydac C4管柱上，且以三階段梯度(經10分鐘0－35% D，經35分鐘35－50% D，經10分鐘50－100% D)梯度溶離至100%緩衝液D(於100%乙腈中之0.1%三氟乙酸)。圖2展示在214 nm及280 nm下量測之經溶離蛋白質之層析圖。乙腈階段梯度覆蓋整個分布。由胺基酸分析發現溶離份38之蛋白質濃度為0.536 mg/ml。對此溶離份進行凝膠、墨點、胺基酸序列及活性檢定。

彙集來自HiLoad S Sepharose運作之溶離份31及剩餘體積之溶離份32，且使用10 kD截止膜針對緩衝液A使其透析八小時，且通過0.2微米濾膜。將此物質以1 ml/min之流動速率裝載於在緩衝液A中平衡之Mono S管柱上，且以至100%緩衝液B之三階段梯度(經10管柱體積0－30% B，經45管柱體積30－75% B，經10管柱體積75－100% B)溶離，同時收集1毫升/溶離份。檢定溶離份26－43，且由胺基酸分析測定蛋白質濃度。溶離份31、32及33之濃度分別為0.258 mg/ml、0.359 mg/ml及0.291 mg/ml。主要對溶離份32及33進行凝膠、墨點、胺基酸序列、質譜及活性檢定。經使用西方墨點法針對IL－17及IL－17F含量檢定由層析產生之溶離份。使用1 μg/ml之針對IL－17或IL－17F之單株抗體偵測樣本中IL－17或IL－17F的存在。

IL－17A/F之質譜分析 由質譜分析確定成熟IL－17A/F之胺基酸序列及鏈間雙硫鍵(參見圖4A；展示具有鏈間及鏈內雙硫鍵之IL－17A/F異源二聚多肽)。偵測介於IL－17F與IL－17多肽鏈之間的兩個鏈間雙硫鍵[分別介於殘基47_IL－17F 與殘基129_IL－17 之間；及介於殘基137_IL－17F 與殘基33_IL－17 之間](圖4A中之粗黑線)。另外，兩個鏈內雙硫鍵形成於以下兩者之各者中：同源二聚體多肽鏈IL－17[介於殘基102與152之間；及介於殘基107至154之間]及IL－17F[介於殘基94與144之間；及介於殘基99與146之間](圖4A中之淺黑線)。胺基酸係相對於各前驅多肽鏈中之起始甲硫胺酸加以編號(圖4A)。圖4B展示將預期藉由以胰蛋白酶消化IL－17A/F而產生之含有介於IL－17鏈與IL－17F鏈之間的雙硫鍵之IL－17A/F肽片段的示意圖[分別將IL－17A/F雙硫鍵片段1號命名為SEQ ID NO：7；IL－17A/F雙硫鍵片段2號命名為SEQ ID NO：8]。含於此等片段內之胺基酸係相對於各鏈之起始甲硫胺酸加以指示及編號。

將由質譜所觀測之此等片段之計算近似分子質量在圖4B中示為3410.58 Da及2420.05 Da[分別對應於IL－17A/F雙硫鍵片段1號及2號]。進行基質輔助雷射脫附/離子化飛行時間質譜(MALDI－TOF)肽定位(圖4C)。在37℃下用Promega定序級胰蛋白酶將於400 mM NaCl、20 mM NaOAC緩衝液(pH 5)之緩衝液中之55 pmol IL－17A/F消化隔夜。使用2',4',6'－三羥基苯乙酮基質、以陽離子反射模式、採用延時引出進行基質輔助雷射脫附/離子化飛行時間質譜分析(MALDI－TOF)。所得肽圖含有具有[M＋H]^＋＝2420.12 Da(對於片段2)及3410.60 Da(對於片段1)之峰，其與經雙硫鍵連接之肽一致(圖4C)。在用二硫蘇糖醇使雙硫鍵還原及用碘乙醯胺使氫硫基烷基化之後在pH 8下消化第二樣本等分試樣。此樣本之MALDI－TOF光譜缺乏所討論之峰，此支持其指定為經雙硫鍵連接。由液相層析－電噴霧離子化離子阱－質譜(LC－ESI－MS)進一步表徵未經還原之樣本(圖4D)。離子層析圖表示(自上而下)總離子層析圖、IL－17A/F雙硫鍵片段2號[M＋2H]2＋及IL－17A/F雙硫鍵片段1號[M＋2H]3＋之重建離子層析圖(RIC)。觀測到與兩種異源二聚體一致之峰，而在同源二聚肽之預期質量下未觀測到高於背景化學雜訊之峰，由此指示不存在IL－17或IL－17F同源二聚體。接著由串聯質譜確證經雙硫鍵連接之異源二聚體之組成。在m/z 1210.9處雙價帶電前驅物之碰撞誘導解離對應於IL－17A/F雙硫鍵片段2號，且在m/z 1138.0處三價帶電前驅物之碰撞誘導解離對應於IL－17A/F雙硫鍵片段1號。在相應光譜中觀測到所預測之b－離子及y－離子系列片段峰。

針對與IL－17A/F結合之抗體的噬菌體庫篩選 為鑑別與IL－17A/F結合之抗體，篩選合成Fab抗體之噬菌體庫。鑑別三十四(34)個編碼相異Fab抗體序列之獨立純系。其能介導與IL－17A/F結合。製備人類抗體序列之噬菌體庫，且以與先前所述方式類似之方式篩選抗原特異性Fab(Gerstner,R.B.等人，J.Mol.Biol.,321(5)：851－62(2002))。簡言之，人源化單株抗體4D5(一種抗－HER2抗體)用作構築噬菌體呈現Fab庫之骨架。此等Fab藉由與可同質二聚化白胺酸拉鏈融合而以單價及/或二價方式呈現於噬菌體上。為產生庫多樣性，吾人決定使亦發現在天然抗體序列之Kabat資料庫中具高度多樣性之經表面暴露重鏈CDR殘基隨機化且形成相連補片。此外，吾人使用簡幷密碼子經修整的定點突變以在每一CDR位點處產生模擬天然免疫譜之胺基酸多樣性。使重鏈H1及H2之前兩個CDR具有與赫賽汀(Herceptin)長度相同之有限多樣性，而H3經設計以具有長度在7至19之範圍內之高簡幷性。自初始庫選擇所產生之所有抗體具有相同輕鏈。全長IgG或Fab可藉由將重鏈可變域一步選殖至提供所要同型特異性恆定區序列之載體中而產生。為進一步改良來自重鏈庫之結合子之親和力，可使用輕鏈CDR之第二步隨機化。含有三(3)個來自結合IL－17A/F之Fab之CDR[H1－H3]的重鏈可變域之區域的胺基酸序列展示於圖6中。展示編碼能結合IL－17A/F之相異抗體重鏈序列之34個Fab純系的預測胺基酸序列之區域的對準。三個重鏈CDR區指示為CDR－H1、CDR－H2及CDR－H3，分別加陰影。對於每一純系之相應SEQ ID NO分別如下：1號純系＝SEQ ID NO：9；2號純系＝SEQ ID NO：10；3號純系＝SEQ ID NO：11；4號純系＝SEQ ID NO：12；5號純系＝SEQ ID NO：13；6號純系＝SEQ ID NO：14；7號純系＝SEQ ID NO：15；8號純系＝SEQ ID NO：16；9號純系＝SEQ ID NO：17；10號純系＝SEQ ID NO：18；11號純系＝SEQ ID NO：19；12號純系＝SEQ ID NO：20；13號純系＝SEQ ID NO：21；14號純系＝SEQ ID NO：22；15號純系＝SEQ ID NO：23；16號純系＝SEQ ID NO：24；17號純系＝SEQ ID NO：25；18號純系＝SEQ ID NO：26；19號純系＝SEQ ID NO：27；20號純系＝SEQ ID NO：28；21號純系＝SEQ ID NO：29；22號純系＝SEQ ID NO：30；23號純系＝SEQ ID NO：31；24號純系＝SEQ ID NO：32；25號純系＝SEQ ID NO：33；26號純系＝SEQ ID NO：34；27號純系＝SEQ ID NO：35；28號純系＝SEQ ID NO：36；29號純系＝SEQ ID NO：37；30號純系＝SEQ ID NO：38；31號純系＝SEQ ID NO：39；32號純系＝SEQ ID NO：40；33號純系＝SEQ ID NO：41；34號純系＝SEQ ID NO：42。

另外，對於三十四(34)個純系中之每一者之相應編碼DNA序列展示於下表7中(分別為SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：76)。

基於細胞之檢定－IL－17A/F誘導IL－8及IL－6產生 針對IL－17A/F誘導IL－8產生之能力，檢定自上述Vydac C4純化步驟分離之溶離份(圖3)。藉由與TK－10細胞一起培育24小時(0.033微升溶離份/毫升細胞培養基)來測試溶離份。接著收集經調節之培養基且由ELISA對每一溶離份進行IL－8及IL－6濃度量測。發現溶離份38具有穩固活性。由胺基酸分析發現溶離份38之蛋白質濃度為0.536 mg/ml。對此溶離份進行凝膠、墨點、胺基酸序列及活性檢定(圖3)。或者，彙集來自HiLoad S Sepharose運作之溶離份31及剩餘體積之溶離份32，且使用10 kD截止膜針對緩衝液A使其透析八小時，且通過0.2微米濾膜。將此物質以1 ml/min之流動速率裝載於在緩衝液A中平衡之Mono S管柱上，且以至100%緩衝液B之三階段梯度(經10管柱體積0－30% B，經45管柱體積30－75% B，經10管柱體積75－100% B)溶離，同時收集1毫升/溶離份。檢定溶離份26－43，且由胺基酸分析測定蛋白質濃度。在溶離份31－33中鑑別呈具有30－35 kD之表觀分子質量的單一蛋白質形式之純IL－17A/F。溶離份31、32及33之濃度分別為0.258 mg/ml、0.359 mg/ml及0.291 mg/ml。凝膠及蛋白質序列分析顯示此物質與由C4管柱(上述)純化之IL－17A/F相同。比較由IL－17A/F、IL－17及IL－17F誘導IL－8及IL－6之劑量反應曲線展示於圖5中。在指定濃度下將IL－17A/F、IL－17及IL－17F與TK－10細胞一起培育24小時。收集經TK－10調節之培養基且由IL－8 ELISA及IL－6 ELISA分析。

討論 IL－17與IL－17F之mRNA的共同表現引起能與能結合IL－17之某些抗體及能結合IL－17F之某些抗體結合之新穎蛋白質物質分泌。此新穎蛋白質物質在本文中命名為介白素－17A/F(IL－17A/F)。當使人腎293細胞獨立表現IL－17或IL－17F時，未觀測到此物質。如圖1A及圖1B所展示，利用能識別IL－17(1－5道)或IL－17F(6－10道)之抗體使來自轉染細胞之經調節培養基免疫沈澱(IP)。接著由西方墨點分析解析經免疫沈澱之蛋白質且用針對IL－17(圖1A)或IL－17F(圖1B)點漬。在圖1A之8道中及圖1B之3道中由IL－17以與IL－17F之二聚複合體形式之存在指示IL－17A/F之偵測。如由非還原型SDS－PAGE測定，此物質之分子質量為約30－35 kD，其與包含由共價鍵連接之一分子IL－17及一分子IL－17F的物質一致。此新物質(IL－17A/F)的存在亦可視為具有與獨立表現IL－17或IL－17F時所觀測之電泳遷移率相異之電泳遷移率的蛋白質。同樣地，此新物質亦可在不使用抗體之情況下經由使用其他蛋白質偵測方法(諸如習知蛋白質染色技術)來觀測。

亦藉由用逆相層析解析存在於經調節之培養基中之分泌蛋白來觀測藉由共同表現IL－17與IL－17F所產生之新穎蛋白質物質的存在。亦藉由用逆相層析解析存在於經調節之培養基中之分泌蛋白來觀測藉由共同表現IL－17與IL－17F所產生之新穎蛋白質物質的存在。自由共同表現IL－17與IL－17F之細胞產生之分泌蛋白所觀測的蛋白質溶離份與對於產生IL－17或IL－17F之細胞所觀測之圖案的比較揭示另一蛋白質物質的存在。純化此蛋白質物質IL－17A/F且由管柱層析法使其分離至均質(圖2及圖3)。

經純化之蛋白質展現為如由非還原型SDS－PAGE所測定約30－35 kD之單帶(圖3A)。然而，在還原條件下，揭示具有約15－18 kD之表觀分子質量的兩條明確相異帶(未圖示)。因此，IL－17A/F為共價二聚體。評估新穎蛋白質組成之一獨立方式(N末端肽序列分析)亦明確指示經分離IL－17A/F含有IL－17與IL－17F肽(圖3B)。所偵測之肽序列與含於IL－17及IL－17F之N末端內之序列一致(圖3C)。西方墨點分析指示此新穎蛋白質物質亦能與能結合IL－17之抗體及能結合IL－17F之抗體相互作用。此等觀測中之每一者及新穎經分離蛋白質物質之獨特分子質量表明經分離蛋白質IL－17A/F為包含IL－17與IL－17F之共價締合的新穎蛋白質物質。

藉由使用質譜來進一步表徵連接IL－17A/F之IL－17鏈與IL－17F鏈之雙硫鍵的存在及位置。IL－17A/F內雙硫鍵之位置展示於示意圖4A中。兩個鏈間雙硫鍵連接IL－17A/F中之IL－17鏈與IL－17F鏈。將預期以胰蛋白酶消化IL－17A/F產生兩個含有鏈間雙硫鍵之相異肽片段(IL－17A/F雙硫鍵片段1號及2號；分別為SEQ ID NO：7及SEQ ID NO：8)。此等肽連同個別預測分子質量一起示意性展示(圖4B)。由基質輔助雷射脫附/離子化飛行時間質譜(MALDI－TOF)(圖4C)及由液相層析－電噴霧離子化離子阱－質譜(LC－ESI－MS)(圖4D)觀測此等肽。未偵測到對應於IL－17或IL－17F之同源二聚體之肽峰，此指示經純化之IL－17A/F包含IL－17鏈與IL－17F鏈之共價異源二聚體且不含有可偵測量之IL－17或IL－17F之同源二聚體。

另外，已藉由篩選合成Fab抗體之噬菌體庫來鑑別與IL－17A/F結合之抗體。鑑別三十四(34)個編碼相異Fab抗體序列之獨立純系。其能介導與IL－17A/F結合。含有三(3)個來自結合IL－17A/F之Fab之CDR[H1－H3]的重鏈可變域之區域的胺基酸序列展示於圖6中。展示編碼能結合IL－17A/F之相異抗體重鏈序列之34個Fab純系的預測胺基酸序列之區域的對準。三個重鏈CDR區指示為CDR－H1、CDR－H2及CDR－H3，分別以黃色突出。三十四(34)個純系中之每一者之相應胺基酸序列鑑別為SEQ ID NO：9－42。另外，所鑑別之三十四(34)個純系中之每一者的相應編碼DNA序列展示於下表7中(分別為SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：76)。由此，已鑑別選擇性結合IL－17A/F之新穎異源二聚複合體之特異性抗體，其可用以調節此新穎細胞激素之活性。

使用TK－10人腎細胞株，針對刺激前發炎反應之能力來分析IL－17A/F(圖5)。此細胞株回應於IL－17與IL－17F而產生IL－8。IL－17A/F亦穩固地誘導此細胞株中產生IL－8(圖5A)。令人關注地，觀測到IL－17A/F具有不同於IL－17或IL－17F之效能的獨特效能。在各種狀況下，活性方面之差異與IL－17及IL－17F相差約一個數量級。在此檢定中與IL－17F相比IL－17A/F之活性實質上更大表明IL－17A/F可包含IL－17F基因產物所產生之細胞激素活性的關鍵組份。此獨特效能可使分子能具有獨特之活體內作用範圍。IL－17A/F亦誘導由此細胞株產生IL－6(圖5B)。另外，有可能IL－17A/F因其可改變活體內受體子單元之動力學及利用之新穎異源二聚組成而可具有IL－17或IL－17F中不存在之其他特徵，從而產生獨特生物結果。

實例2

經活化之人類T細胞中所產生之新穎IL－17細胞激素的鑑別 新穎人類IL－17細胞激素(於本文中鑑別為人類IL－17A/F)在本文中首次描述為在經活化之人類T淋巴細胞中天然產生。進行人類T淋巴細胞之分離及活化且藉由如下所示之IL－17A/F ELISA偵測並定量量測IL－17A/F產生：人類T細胞之分離及活化 將來自正常健康供體之經肝素化(0.5 ml/50 cc)新抽取之人類血液用生理食鹽水以1：1稀釋，接著層化於LSM淋巴細胞分離培養基(ICN)上且如製造商(ICN)所建議加以離心。將經回收之單核淋巴細胞塗於完全RPMI(RPMI，10% FCS、2 mM L－麩胺醯胺、盤尼西林/鏈黴素(GIBCO))中之組織培養瓶中，在37℃下歷時1小時以耗盡單核細胞。將培養上清液離心以使剩餘細胞成球狀。接著由陰性選擇、使用CD4＋T細胞分離套組(MACS)分離人類T淋巴細胞。為活化經分離之T淋巴細胞，在4℃下將組織培養瓶用5 μg/ml之於PBS中之抗－CD3(BD Bioscience)及抗－CD28(BD Bioscience)中之每一者塗佈隔夜。移除塗佈培養基後，將經分離之人類T淋巴細胞以每毫升培養基兩百萬個細胞之近似密度塗於完全RPMI中。塗佈後在多個時間點收集培養基之樣本，且由ELISA針對IL－17A/F進行檢定。自來自未用抗－CD3及抗－CD28塗佈之瓶的細胞上清液收集未經活化之對照上清液。

抗－CD3/抗－CD28活化之人類T細胞中之人類IL－17A/F產生的ELISA量測 由ELISA量測人類IL－17A/F含量。將小鼠抗人IL－17在塗佈緩衝液(0.05 M碳酸鈉緩衝液，pH 9.6)中稀釋且塗佈於96孔微量滴定盤(Nunc)上，在2－8℃下歷時12－15小時。在室溫下進行所有後續步驟。藉由清空孔且添加阻斷緩衝液(PBS，0.5% BSA，10 ppm Proclin 300)來阻斷非特異性結合。培育1小時後，將孔用洗滌緩衝液(PBS，0.05% Tween 20，10 ppm Proclin 300)洗滌。接著添加在檢定緩衝液(PBS，0.5% BSA，0.05% Tween 20，10 ppm Proclin 300)中稀釋之人類IL－17A/F參考標準物及樣本。培育2小時後，將孔用洗滌緩衝液洗滌。添加在檢定緩衝液中稀釋之經結合生物素之小鼠抗人IL－17F且使其培育1小時。用洗滌緩衝液洗滌盤後，添加在檢定緩衝液中稀釋之抗生蛋白鏈菌素－HRP(辣根過氧化酶)(Amersham)且使其培育1小時。用洗滌緩衝液洗滌盤後，添加受質溶液TMB(四甲基聯苯胺)－過氧化酶(R & D Systems)。藉由添加2 N硫酸終止顯色。接著在微量滴定盤讀取器(SLT)上在450 nm下讀取盤，減去540 nm下之空白。使用四參數曲線擬合程式來產生標準曲線，且藉由自曲線之線性部分內插得到樣本濃度。在ELISA中包括IL－17A及IL－17F作為對照以說明對IL－17A/F之檢定特異性(圖12)。

結果： IL－17A/F產生之ELISA量測結果展示於圖11中。此等研究證實與未偵測到IL－17A/F產生之未經活化人類T細胞相比自經抗－CD3/抗－CD28活化之人類T淋巴細胞產生新穎細胞激素IL－17A/F。此等結果首次顯示回應於人類T淋巴細胞活化而產生及釋放新穎細胞激素的天然產生情況。另外，藉由當平行檢定時在三個樣本(31號－33號)中觀測到接近相等量之IL－17A/F來證實ELISA檢定之特異性。在此IL－17A/F特異性ELISA中偵測到量可忽略不計之IL－17A或IL－17F(圖12)。

本文中實例1與實例2所述之研究確立重組人類IL－17A/F為獨特新細胞激素，其可在蛋白質結構中與基於細胞之活性檢定中區別於人類IL－17及IL－17F。經使用經純化之重組人類IL－17A/F作為標準物，已開發人類IL－17AF特異性ELISA(展示於圖11中)。經使用此特異性ELISA，偵測到所誘導之人類IL－17A/F表現，其確證IL－17A/F自培養物中之經活化之人類T細胞天然產生。因此，IL－17A/F為獨特新細胞激素，可作為經分離、經活化之人類T細胞之天然產物來偵測，其重組形式已在蛋白質結構與基於細胞之檢定中加以表徵，以使其不同於且可區別於相關細胞激素。

此新細胞激素可起作用以調節活體內IL－17活性，其充當IL－17或其他相關細胞激素之結合位點的競爭抑制劑。IL－17A/F亦可藉由下調其自身結合位點及/或其他相關細胞激素之結合位點來調節其他相關細胞激素之活性。IL－17A/F可經細胞內配接子或信號轉導分子來顯示活性，該等細胞內配接子或信號轉導分子起作用以影響其自身信號轉導活性或其他相關細胞激素之信號轉導活性。IL－17A/F具有影響細胞表面上或胞內區內所發現之受體及輔受體配對之能力。

因此，此等研究提供及鑑別推動免疫系統回應於先前可能尚無免疫學活性之特定抗原的新穎免疫刺激劑(亦即IL－17A/F)。同樣地，新鑑別之免疫刺激劑具有重要臨床應用。已鑑別其他已知之免疫刺激劑，諸如IL－12。[參見Gubler等人PNAS 88 ,4143(1991)]。在新近癌症疫苗試驗中，來自University of Chicago及Genetics Institute(Cambridge,MA)之研究者已依賴於IL－12之免疫刺激活性來治療黑素瘤。[Peterson等人Journal of Clinical Oncology 21(12).2342－48(2003)]。其提取帶有一或多個黑素瘤細胞標記之循環白血球，使抗原分離，且將其返回患者。通常，患者將對其自身人類抗原無免疫反應。接著將患者用不同劑量之IL－12治療，IL－12為能誘導已由樹突狀細胞共同刺激之T細胞增殖的免疫刺激劑。歸因於IL－12之免疫刺激作用，治療提供與早先工作相比更好之結果，其中自外周血液單核細胞(PBMC)製備患者自身樹突狀細胞，將其用抗原處理，接著活體外培養且返回患者以刺激抗癌反應。[Thurner等人J.Exp.Med.190(11),1669－78(1999)]。同樣地，此新穎IL－17A/F細胞激素或其促效劑將由此具有作為免疫刺激劑之實際效用。而當需要抑制免疫反應時(諸如自體免疫疾病中)，將預期抑制IL－17A/F活性之分子(拮抗劑)具有實際效用。

因此，針對此新細胞激素之抗體(模擬(促效劑抗體)或抑制(拮抗劑抗體)IL－17A/F之免疫活性)將具有治療品質。起作用以抑制此新穎細胞激素之活性的小分子亦將具有潛在治療用途。

實例3

IL－17A/F作為雜交探針之用途 以下方法描述編碼IL－17A/F之核苷酸序列作為雜交探針之用途。

使用包含如本文所揭示之全長或成熟IL－17A/F之編碼序列的DNA作為探針以在人類組織cDNA庫或人類組織基因組庫中篩選同源DNA(諸如編碼IL－17A/F之天然產生之變異體的彼等DNA)。

在以下高嚴格度條件下進行含有任一庫DNA之濾膜的雜交及洗滌。在42℃下在50%甲醯胺、5×SSC、0.1% SDS、0.1%焦磷酸鈉、50 mM磷酸鈉(pH 6.8)、2×Denhardt氏溶液及10%硫酸葡聚糖之溶液中進行經放射性標記之IL－17A/F源性探針與濾膜的雜交，歷時20小時。在42℃下在0.1×SSC及0.1% SDS之水溶液中進行濾膜的洗滌。

可接著使用此項技術中已知之標準技術鑑別與編碼全長原生序列IL－17A/F之DNA具有所要序列一致性的DNA。

實例4

IL－17A/F在大腸桿菌中之表現 此實例說明藉由在大腸桿菌中重組表現來製備IL－17A/F多肽之未經糖基化形式。

使用所選PCR引子初始擴增編碼IL－17A/F多肽之DNA序列。該等引子應含有對應於所選表現載體上之限制酶位點的限制酶位點。可使用多種表現載體。合適載體之一實例為pBR322(來源於大腸桿菌；參見Bolivar等人，Gene,2 ：95(1977))，其含有抗安比西林及抗四環素之基因。用限制酶消化載體且使其脫磷酸化。接著使經PCR擴增之序列接合至載體中。該載體將較佳包括編碼抗生素抗性基因、trp啟動子、polyHis前導子(包括前六個STII密碼子、polyHis序列及腸激酶裂解位點)、IL－17A/F多肽編碼區、λ轉錄終止子及argU基因之序列。

接合混合物接著用於使用Sambrook等人(同上)所述之方法使所選大腸桿菌菌株轉化。由其在LB盤上生長之能力來鑑別轉化體且接著選擇抗生素抗性菌落。可使質體DNA分離且由限制性分析及DNA定序來確證。

可使所選純系在補充有抗生素之液體培養基(諸如LB肉湯)中生長隔夜。隔夜培養物可隨後用於接種大規模培養物。接著使細胞生長至所要光學密度，在此期間啟用表現啟動子。

將細胞再培養數小時後，可藉由離心收集細胞。可使用此項技術中已知之各種試劑溶解藉由離心所獲得之細胞小球，且可接著在允許蛋白質緊密結合之條件下使用金屬螯合管柱純化經溶解之IL－17A/F蛋白。

可使用以下程序使IL－17A/F多肽在大腸桿菌中以經poly－His標記之形式表現。使用所選PCR引子初始擴增編碼IL－17A/F多肽之DNA。該等引子將含有對應於所選表現載體上之限制酶位點的限制酶位點，及提供有效及可靠的轉譯引發作用、在金屬螯合管柱上快速純化及以腸激酶蛋白水解移除之其他適用序列。接著使經PCR擴增、經poly－His標記之序列接合至表現載體中，該表現載體用於使基於菌株52(W3110 fuhA(tonA)lon galE rpoHts(htpRts)clpP(lacIq))之大腸桿菌宿主轉化。首先於30℃下在震盪下使轉化體在含有50 mg/ml卡本西林(carbenicillin)之LB中生長直至達到3－5之O.D.600。接著將培養物以50－100倍稀釋至CRAP培養基(藉由將3.57 g(NH₄ )₂ SO₄ 、0.71 g檸檬酸鈉．2H₂ O、1.07 g KCl、5.36 g Difco酵母提取物、於500 mL水中之5.36 g Sheffield hycase SF以及110 mM MPOS(pH 7.3)、0.55%(w/v)葡萄糖及7 mM MgSO₄ 混合來製備)中且於30℃下在震盪下生長約20－30小時。移除樣本以由SDS－PAGE分析來驗證表現，且使大批培養物離心以使細胞成球狀。冷凍細胞小球直至純化及再摺疊為止。

使來自0.5至1 L醱酵之大腸桿菌糊狀物(6－10 g小球)以10體積(w/v)再懸浮於7 M胍、20 mM Tris(pH 8)緩衝液中。添加固體亞硫酸鈉及連四硫酸鈉以分別配成0.1 M及0.02 M之最終濃度，且在4℃下將溶液攪拌隔夜。此步驟產生變性蛋白，其所有半胱胺酸殘基由亞硫酸化阻斷。使溶液以40,000 rpm在Beckman Ultracentrifuge中離心30 min。將上清液用3－5體積之金屬螯合管柱緩衝液(6 M胍，20 mM Tris，pH 7.4)稀釋且經0.22微米濾膜過濾至澄清。將澄清提取物裝載於在金屬螯合管柱緩衝液中平衡之5 ml Qiagen Ni－NTA金屬螯合管柱上。用含有50 mM咪唑(Calbiochem，Utrol級)之另一緩衝液(pH 7.4)洗滌管柱。用含有250 mM咪唑之緩衝液使蛋白質溶離。彙集含有所要蛋白質之溶離份且儲存於4℃下。基於蛋白質之胺基酸序列、由其在280 nm下之吸光度、使用所計算之消光係數來估算蛋白質濃度。

藉由將樣本緩慢稀釋至由20 mM Tris(pH 8.6)、0.3 M NaCl、2.5 M脲、5 mM半胱胺酸、20 mM甘胺酸及1 mM EDTA組成之新製備之再摺疊緩衝液中使蛋白質再摺疊。選擇再摺疊體積以使最終蛋白質濃度介於50至100微克/毫升之間。在4℃下將再摺疊溶液緩緩攪拌12－36小時。藉由添加TFA至0.4%之最終濃度(pH值約為3)使再摺疊反應中止。將溶液經0.22微米濾膜過濾且添加乙腈至2－10%最終濃度，隨後進一步純化蛋白質。將再摺疊蛋白質在Poros R1/H逆相管柱上、使用0.1% TFA之移動緩衝液、以10至80%乙腈之梯度溶離進行層析。在SDS聚丙烯醯胺凝膠上分析具有A280吸光度之溶離份之等分試樣且彙集含有均質再摺疊蛋白質之溶離份。一般而言，在乙腈之最低濃度下使多數蛋白質之經適當再摺疊物質溶離，此係由於彼等物質與其疏水性內部最緊密從而免於與逆相樹脂之相互作用。通常在較高乙腈濃度下使凝集物質溶離。除自所要形式解析蛋白質之摺疊異常形式以外，逆相步驟亦自樣本移除內毒素。

彙集含有所要摺疊IL－17A/F多肽之溶離份，且使用導向溶液之溫和氮氣流移除乙腈。藉由透析或藉由凝膠過濾，使用在調配緩衝液中平衡之G25 Superfine(Pharmacia)樹脂將蛋白質調配至含有0.14 M氯化鈉及4%甘露糖醇之20 mM Hepes(pH 6.8)中，且將其無菌過濾。

實例5

IL－17A/F在哺乳動物細胞中之表現 此實例說明藉由在哺乳動物細胞中重組表現來製備IL－17A/F多肽之潛在糖基化形式。

載體pRK5(參見EP 307,247，於1989年3月15日公開)用作表現載體。視情況，使用(諸如)Sambrook等人(同上)所述之接合方法使IL－17A/F DNA接合至具有所選限制酶之pRK5中以允許插入IL－17A/F DNA。所得載體稱為pRK5－IL－17A/F。

在一實施例中，所選宿主細胞可為293細胞。使人類293細胞(ATCC CCL 1573)在組織培養盤中在諸如補充有胎牛血清及視情況營養組份及/或抗生素之DMEM的培養基中生長至融合。將約10 μg pRK5－IL－17A/F DNA與約1 μg編碼VA RNA基因之DNA[Thimmappaya等人，Cell,31：543(1982)]混合且溶解於500 μl之1 mM Tris－HCl、0.1 mM EDTA、0.227 M CaCl₂ 中。將500 μl之50 mM HEPES(pH 7.35)、280 mM NaCl、1.5 mM NaPO₄ 逐滴添加至此混合物中，且在25℃下使沈澱物形成歷時10分鐘。使沈澱物懸浮且將其添加至293細胞中且使其在37℃下靜置約4小時。吸出培養基且添加2 ml於PBS中之20%甘油歷時30秒。接著用無血清培養基洗滌293細胞，添加新鮮培養基且將細胞培育約5天。

轉染後約24小時，移除培養基且用培養基(單獨)或含有200 μCi/ml³⁵ S－半胱胺酸及200 μCi/ml³⁵ S－甲硫胺酸之培養基更換。培育12小時後，收集經調節之培養基，在旋轉過濾器上濃縮且裝載於15% SDS凝膠上。可使經處理之凝膠乾燥且暴露於薄膜歷時所選時段以顯現IL－17A/F多肽的存在。含有經轉染細胞之培養物可進行進一步培育(於無血清培養基中)且在所選生物檢定中測試培養基。

在替代技術中，可使用由Somparyrac等人，Proc.Natl.Acad.Sci.,12 ：7575(1981)所述之硫酸葡聚糖方法將IL－17A/F瞬間引入293細胞中。在旋轉瓶中使293細胞生長至最大密度且添加700 μg pRK5－IL－17A/F DNA。首先藉由離心自旋轉瓶濃縮細胞且用PBS洗滌。將DNA－葡聚糖沈澱物在細胞小球上培育4小時。將細胞用20%甘油處理90秒，用組織培養基洗滌，且再引入含有組織培養基、5 μg/ml牛胰島素及0.1 μg/ml牛轉鐵蛋白之旋轉瓶中。約四天後，使經調節之培養基離心且過濾以移除細胞及碎片。可接著濃縮含有經表現之IL－17A/F多肽之樣本且由任何所選方法(諸如透析及/或管柱層析)純化。

在另一實施例中，可在CHO細胞中表現IL－17A/F多肽。可使用諸如CaPO₄ 或DEAE－葡聚糖之已知試劑使pRK5－IL－17A/F轉染至CHO細胞中。如上所述，可培育細胞培養物，且用培養基(單獨)或含有諸如³⁵ S－甲硫胺酸之放射性標記之培養基更換培養基。確定IL－17A/F多肽存在後，可用無血清培養基更換培養基。較佳地，將培養物培育約6天，且接著收集經調節之培養基。可接著濃縮含有經表現之IL－17A/F多肽之培養基且由任何所選方法純化。

亦可在宿主CHO細胞中表現經抗原決定基標記之IL－17A/F。可將IL－17A/F次選殖至pRK5載體外。次純系插入物可進行PCR以與諸如poly－His標記之所選抗原決定基標記同框融合至桿狀病毒表現載體中。可接著將經poly－His標記之IL－17A/F插入物次選殖至含有諸如DHFR之選擇性標記的SV40驅動載體中用於選擇穩定純系。最後，可用SV40驅動載體使CHO細胞轉染(如上所述)。可如上所述進行標記以驗證表現。可接著濃縮含有經表現、經poly－His標記之IL－17A/F之培養基且由任何所選方法(諸如由Ni^2＋－螯合親和層析)純化。

IL－17A/F多肽亦可由瞬間表現程序在CHO及/或COS細胞中表現或由另一穩定表現程序在CHO細胞中表現。

使用以下程序在CHO細胞中進行穩定表現。使蛋白質表現為IgG構築體(免疫黏附素)，其中個別蛋白質之可溶形式(例如胞外域)之編碼序列與含有鉸鏈、CH2及CH2域之IgG1恆定區序列融合；及/或表現為經poly－His標記之形式。

PCR擴增後，使用如Ausubel等人，Current Protocols of Molecular Biology ,3.16單元，John Wiley and Sons(1997)中所述之標準技術將個別DNA次選殖於CHO表現載體中。構築CHO表現載體以具有所關注之DNA之相容限制性位點5'及3'以允許cDNA便利改組。CHO細胞中表現所使用之載體係如Lucas等人，Nucl.Acids Res.,24：9 1774－1779(1996)中所述，且其使用SV40早期啟動子/強化子以驅動所關注之cDNA及二氫葉酸還原酶(DHFR)表現。DHFR表現允許選擇轉染後質體之穩定維持。

使用市售轉染試劑Superfect(Qiagen)、Dosper或Fugene(Boehringer Mannheim)將12微克所要質體DNA引入約10,000,000個CHO細胞中。如Lucas等人(同上)所述使該等細胞生長。如下所述使約3×10⁷ 個細胞在安瓿中冷凍以供進一步生長及生產。

藉由置放於水浴中將含有質體DNA之安瓿解凍且藉由渦旋混合。將內含物吸入含有10 mL培養基之離心管中且以1000 rpm離心5分鐘。抽吸上清液且使細胞再懸浮於10 mL選擇培養基(含有5%經0.2 μm透析過濾之胎牛血清的經0.2 μm過濾之PS20)中。接著將細胞等分至含有90 mL選擇培養基之100 mL旋轉器中。1－2天後，將細胞轉移至填充有150 mL選擇生長培養基之250 mL旋轉器中且在37℃下培育。再經2－3天後，將250 mL、500 mL及2000 mL旋轉器以3×10⁵ 個細胞/毫升接種。藉由離心且再懸浮於生產培養基中使細胞培養基更換為新鮮培養基。儘管可使用任何合適之CHO培養基，但實際上可使用於1992年6月16日頒布之美國專利第5,122,469號中所述之生產培養基。將3 L生產旋轉器以1.2×10⁶ 個細胞/毫升接種。第0天，測定細胞數目、pH值。第1天，對旋轉器採樣且開始用經過濾之空氣噴射。第2天，對旋轉器採樣，且使溫度轉換至33℃，且採用30 mL之500 g/L葡萄糖及0.6 mL之10%消泡劑(例如35%聚二甲基矽氧烷乳液，Dow Corning 365醫用級乳液)。在整個生產過程中，必要時調整pH值以使其保持於7.2左右。10天後或直至生存力降至70%以下為止，藉由離心且經0.22 μm濾膜過濾來收集細胞培養物。將濾液儲存於4℃下或立即裝載於管柱上以供純化。

對於經poly－His標記之構築體而言，使用Ni－NTA管柱(Qiagen)純化蛋白質。將咪唑添加至經調節之培養基中至5 mM之濃度，隨後純化。在4℃下以4－5 ml/min之流動速率將經調節之培養基泵送至在含有0.3 M NaCl及5 mM咪唑之20 mM Hepes(pH 7.4)緩衝液中平衡之6 ml Ni－NTA管柱上。裝載後，用另一平衡緩衝液洗滌管柱且用含有0.25 M咪唑之平衡緩衝液使蛋白質溶離。隨後以25 ml G25 Superfine(Pharmacia)管柱使高度純化之蛋白質脫鹽至含有10 mM Hepes、0.14 M NaCl及4%甘露糖醇(pH 6.8)之儲存緩衝液中，且儲存於－80℃下。

如下自經調節之培養基純化免疫黏附素(含Fc)構築體。將經調節之培養基泵送至已在20 mM磷酸鈉緩衝液(pH 6.8)中平衡之5 ml蛋白質A管柱(Pharmacia)上。裝載後，用平衡緩衝液充分洗滌管柱，隨後用100 mM檸檬酸(pH 3.5)溶離。藉由將1 ml溶離份收集至含有275 μL之1 M Tris緩衝液(pH 9)之管中來立即中和經溶離之蛋白質。隨後如上文對於經poly－His標記之蛋白質所述將高度純化之蛋白質脫鹽至儲存緩衝液中。由SDC聚丙烯醯胺凝膠及由Edman降解進行N末端胺基酸定序來評估均質性。

實例6

IL－17A/F在酵母中之表現 以下方法描述IL－17A/F多肽在酵母中之重組表現。

首先構築酵母表現載體用於自ADH2/GAPDH啟動子細胞內產生或分泌IL－17A/F。將編碼IL－17A/F多肽及啟動子之DNA插入所選質體中之合適限制酶位點中以引導IL－17A/F多肽之細胞內表現。對於分泌而言，可將編碼IL－17A/F之DNA連同編碼ADH2/GAPDH啟動子、原生IL－17A/F信號肽或其他哺乳動物信號肽或(例如)酵母α－因子或轉化酶分泌信號/前導序列及連接序列(若需要)之DNA一起選殖至所選質體中用於表現IL－17A/F。

可接著用上述表現質體使諸如酵母菌株AB110之酵母細胞轉化，且在所選醱酵培養基中培養。可藉由用10%三氯乙酸沈澱且由SDS－PAGE分離、接著用庫馬斯藍染色劑使凝膠染色來分析經轉化之酵母上清液。

可隨後藉由經離心自醱酵培養基移除酵母細胞且接著使用所選濾芯式過濾器濃縮培養基來分離並純化重組IL－17A/F多肽。可使用所選管柱層析樹脂進一步純化含有IL－17A/F多肽之濃縮物。

實例7

IL－17A/F在經桿狀病毒感染之昆蟲細胞中之表現 以下方法描述IL－17A/F多肽在經桿狀病毒感染之昆蟲細胞中之重組表現。

在含於桿狀病毒表現載體內之抗原決定基標記上游使編碼IL－17A/F之序列融合。該等抗原決定基標記包括poly－His標記及免疫球蛋白標記(如IgG之Fc區)。可使用多種質體，包括得自市售質體之質體，諸如pVL1393(Novagen)。簡言之，由PCR以與5'及3'區互補之引子擴增編碼IL－17A/F之序列或IL－17A/F之編碼序列之所要部分，諸如編碼跨膜蛋白之胞外域之序列或編碼成熟蛋白質(當蛋白質處於細胞外時)之序列。5'引子可合併側翼(所選)限制酶位點。接著將產物用彼等所選限制酶消化且次選殖至表現載體中。

藉由使用脂質體(購自GIBCO－BRL)使上述質體及BaculoGold^TM 病毒DNA(Pharmingen)共轉染至草地黏蟲(Spodoptera frugiperda )("Sf9")細胞(ATCC CRL 1711)中來產生重組桿狀病毒。在28℃下培育4－5天後，收集所釋放之病毒且用於進一步擴增。如由O'Reilley等人，Baculovirus expression vectors：A Laboratory Manual ,Oxford：Oxford University Press(1994)所述進行病毒感染及蛋白質表現。

可接著(例如)由如下進行Ni^2＋－螯合親和層析來純化經表現、經poly－His標記之IL－17A/F。如由Rupert等人，Nature,362 ：175－179(1993)所述自經重組病毒感染之sf9細胞製備提取物。簡言之，洗滌Sf9細胞，使其再懸浮於超音波處理緩衝液(25 mL Hepes，pH 7.9；12.5 mM MgCl₂ ；0.1 mM EDTA；10%甘油；0.1% NP－40；0.4 M KCl)中，且於冰上超音波處理兩次歷時20秒。藉由離心使超音波處理物澄清，且將上清液在裝載緩衝液(50 mM磷酸鹽，300 mM NaCl，10%甘油，pH 7.8)中稀釋50倍且經0.45 μm濾膜過濾。製備具有5mL之床體積的Ni^2＋－NTA瓊脂糖管柱(購自Qiagen)，用25 mL水洗滌且用25 mL裝載緩衝液平衡。將經過濾之細胞提取物以0.5毫升/分鐘裝載於該管柱上。用裝載緩衝液將管柱洗滌至基線A₂₈₀ ，在此時開始收集溶離份。接著，用第二洗滌緩衝液(50 mM磷酸鹽，300 mM NaCl，10%甘油，pH 6.0)洗滌管柱，其使非特異性結合之蛋白質溶離。再次達到A₂₈₀ 基線後，在第二洗滌緩衝液中以0至500 mM咪唑梯度使管柱展開。收集1 mL溶離份且由SDS－PAGE及銀染色或西方墨點法以與鹼性磷酸酶(Qiagen)結合之Ni^2＋－NTA分析。彙集含有經溶離、經His₁₀ 標記之IL－17A/F的溶離份且針對裝載緩衝液透析。

或者，可使用包括(例如)蛋白質A或蛋白質G管柱層析之已知層析技術進行經IgG標記(或經Fc標記)之IL－17A/F的純化。

實例8

結合IL－17A/F之抗體之製備 此實例說明可特異性結合IL－17A/F之單株抗體的製備。

產生單株抗體之技術在此項技術中為已知的且描述於(例如)Goding(同上)中。可使用之免疫原包括經純化之IL－17A/F多肽、含有IL－17A/F多肽之融合蛋白及在細胞表面上表現重組IL－17A/F多肽之細胞。可由熟習此項技術者在無過度實驗之情況下進行免疫原選擇。

用在完全弗氏佐劑中乳化且以1－100微克之量經皮下或腹膜內注射之IL－17A/F免疫原使小鼠(諸如BALB/c)免疫。或者，將免疫原在MPL－TDM佐劑(Ribi Immunochemical Research,Hamilton,MT)中乳化且注射至動物之後足肉墊中。接著在10至12天後用在所選佐劑中乳化之另外免疫原對經免疫之小鼠加強免疫。其後，歷時數週，亦可用其他免疫注射劑對小鼠加強免疫。可藉由眼窩後取血自小鼠週期性獲得血清樣本用於在ELISA檢定中測試以偵測抗－IL－17A/F抗體。

已偵測合適之抗體效價後，可用IL－17A/F之最終靜脈內注射劑注射對抗體呈"陽性"之動物。三至四天後，將小鼠處死且收集脾細胞。接著使脾細胞與所選鼠類骨髓瘤細胞株(諸如P3X63AgU.1，購自ATCC，編號CRL 1597)融合(使用35%聚乙二醇)。融合產生融合瘤細胞，可接著將其塗於含有HAT(次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷)培養基之96孔組織培養盤中以抑制未融合細胞、骨髓瘤雜交體及脾細胞雜交體增殖。

將在ELISA中針對對IL－17A/F之反應性來篩選融合瘤細胞。分泌針對IL－17A/F之所要單株抗體之"陽性"融合瘤細胞的確定處於此項技術之技能範圍內。

可將陽性融合瘤細胞經腹膜內注射至同系BALB/c小鼠中以產生含有抗－IL－17A/F單株抗體之腹水。或者，可使融合瘤細胞在組織培養瓶或轉瓶中生長。純化腹水中產生之單株抗體可使用硫酸銨沈澱、接著凝膠排阻層析來實現。或者，可使用基於抗體與蛋白質A或蛋白質G結合之親和層析。

實例9

使用特異性抗體進行IL－17A/F多肽之純化 可由蛋白質純化技術中之多種標準技術來純化原生或重組IL－17A/F多肽。舉例而言，由免疫親和層析、使用對所關注之IL－17A/F多肽具特異性之抗體來純化前IL－17A/F多肽、成熟IL－17A/F多肽或早IL－17A/F多肽。一般而言，藉由使抗－IL－17A/F多肽抗體與經活化之層析樹脂共價偶合來構築免疫親和管柱。

藉由用硫酸銨沈澱或藉由在經固定之蛋白質A(Pharmacia LKB Biotechnology,Piscataway,N.J.)上純化來自免疫血清製備多株免疫球蛋白。同樣地，由硫酸銨沈澱法或於經固定之蛋白質A上層析來自小鼠腹水製備單株抗體。使經部分純化之免疫球蛋白與諸如經CnBr活化之SEPHAROSE^TM (Pharmacia LKB Biotechnology)的層析樹脂共價連接。使抗體與樹脂偶合，阻斷該樹脂，且根據製造商之說明書洗滌衍生樹脂。

該免疫親和管柱用於藉由自含有可溶形式之IL－17A/F多肽之細胞製備溶離份來純化IL－17A/F多肽。此製劑係藉由經添加清潔劑使整個細胞或經由差速離心獲得之亞細胞溶離份溶解或由此項技術中所熟知之其他方法而得。或者，可使含有信號序列之可溶性IL－17A/F多肽以適用之量分泌至用來生長細胞之培養基中。

使含有可溶性IL－17A/F多肽之製劑通過免疫親和管柱，且在允許IL－17A/F多肽之較佳吸光度之條件(例如在清潔劑存在下之高離子強度緩衝液)下洗滌管柱。接著，在破壞抗體/IL－17A/F多肽結合之條件(例如低pH值緩衝液，諸如pH值約2－3；或高濃度之離液劑，諸如脲或硫氰酸根離子)下使管柱溶離，且收集IL－17A/F多肽。

實例10

藥物篩選 本發明尤其適用於藉由在多種藥物篩選技術中之任一者中使用IL－17A/F多肽或其結合片段來篩選化合物。該測試中所使用之IL－17A/F多肽或片段可游離於溶液中、附著於固體支撐物、負載於細胞表面上或位於細胞內。一種藥物篩選方法利用經表現IL－17A/F多肽或片段之重組核酸穩定轉化之真核或原核宿主細胞。在競爭結合檢定中針對該等經轉化之細胞來篩選藥物。存活或固定形式之該等細胞可用於標準結合檢定。吾人可量測(例如)IL－17A/F多肽或片段與測試中之藥劑之間複合體的形成。或者，吾人可檢查由測試中之藥劑所引起之IL－17A/F多肽與其靶細胞或靶受體之間複合體形成的減少。

因此，本發明提供篩選可影響IL－17A/F多肽相關之疾病或病症之藥物或任何其他藥劑的方法。此等方法包含使該藥劑與IL－17A/F多肽或其片段接觸及由此項技術中所熟知之方法檢定(i)藥劑與IL－17A/F多肽或片段之間複合體的存在，或(ii)IL－17A/F多肽或片段與細胞之間複合體的存在。在該等競爭結合檢定中，通常對IL－17A/F多肽或片段加以標記。繼合適之培育後，使游離IL－17A/F多肽或片段與以結合形式存在之彼IL－17A/F多肽或片段分離，且游離或未經複合標記之量為特定藥劑與IL－17A/F多肽結合或干擾IL－17A/F多肽/細胞複合體之能力的量測。

另一藥物篩選技術提供針對與多肽具有合適之結合親和力之化合物的高產量篩選且詳細描述於1984年9月13日公開之WO 84/03564中。簡言之，在諸如塑膠針腳或一些其他表面之固體基板上合成大量不同小肽測試化合物。當應用於IL－17A/F多肽時，使肽測試化合物與IL－17A/F多肽反應且洗滌。由此項技術中所熟知之方法偵測經結合之IL－17A/F多肽。亦可將經純化之IL－17A/F多肽直接塗佈於盤上以在上述藥物篩選技術中使用。另外，非中和抗體可用於捕捉肽且將其固定於固體支撐物上。

本發明亦涵蓋使用競爭性藥物篩選檢定，其中能結合IL－17A/F多肽之中和抗體與測試化合物就與IL－17A/F多肽或其片段之結合而特異性競爭。以此方式，抗體可用於偵測與IL－17A/F多肽共有一或多個抗原決定子之任何肽的存在。

實例11

合理藥物設計 合理藥物設計之目的在於產生所關注之生物活性多肽(亦即IL－17A/F多肽)或與之相互作用之小分子(例如促效劑、拮抗劑或抑制劑)的結構類似物。此等實例中之任一者可用於製造作為IL－17A/F多肽之更具活性或更穩定形式或增強或干擾活體內IL－17A/F多肽之功能的藥物(參看Hodgson,Bio/Technology,9 ：19－21(1991))。

在一方法中，由x射線晶體學分析、由電腦模型化或最為通常地由該兩種方法之組合來確定IL－17A/F多肽或IL－17A/F多肽－抑制劑複合體之三維結構。須確定IL－17A/F多肽之形狀與電荷以闡明結構且確定分子之活性位點。有時，可藉由基於同源蛋白質之結構模型化而獲得關於IL－17A/F多肽之結構的有用資訊。在兩種狀況下，相關結構資訊用於設計類似IL－17A/F多肽樣分子或鑑別有效抑制劑。合理藥物設計之適用實例可包括如由Braxton及Wells,Biochemistry,31 ：7796－7801(1992)所示具有改良之活性或穩定性或如由Athauda等人，J.Biochem.,113 ：742－746(1993)所示充當原生肽之抑制劑、促效劑或拮抗劑之分子。

亦可能如上所述使由功能檢定所選擇之靶特異性抗體分離且接著解出其晶體結構。此方法原則上得到核心藥物(pharmacore)，可基於其進行隨後之藥物設計。有可能藉由產生對於功能性、具有藥理學活性之抗體的抗獨特型抗體(anti－id)而完全繞開蛋白質晶體學分析。作為鏡像之鏡像，將預期anti－id之結合位點為原始受體之類似位點。anti－id可接著用於鑑別肽且自以化學方式或以生物學方式產生之肽組分離該等肽。經分離之肽將接著用作核心藥物。

根據本發明，可使足夠量之IL－17A/F多肽可用於進行諸如X射線晶體學分析之分析研究。另外，本文所提供之IL－17A/F多肽胺基酸序列之知識將提供替代x射線晶體學分析或除x射線晶體學分析以外使用電腦模型化技術之導則。

實例12

活體內疾病模型 在類風濕性關節炎及多發性硬化症之小鼠模型中評估將抗－IL－17A抗體與抗－IL－17F抗體組合作為自體免疫疾病之治療性治療的作用。所測試之小鼠模型包括經II型膠原蛋白處理以誘發膠原蛋白誘發之關節炎(CIA)之小鼠(類風濕性關節炎(RA)之鼠類模型)或經髓鞘寡樹突神經膠質細胞醣蛋白(MOG)處理以誘發實驗性過敏性腦脊髓炎(EAE)之小鼠(多發性硬化症(MS)之鼠類模型)。

(1)CIA第0天，用100 μl完全弗氏佐劑(CFA)中之100 μg II型牛膠原蛋白使7－8週齡DBA－1J小鼠(Jackson Lab；Bar Harbor,Maine)免疫。(Barck等人，Arthritis & Rheumatism ,50：3377－3386(2004))。在尾巴根部右側經皮內(i.d.)注射CFA中之II型膠原蛋白。第21天，於尾巴左側經皮內注射100 μl不完全弗氏佐劑中之100 μg II型牛膠原蛋白。第45天，將動物分成以下各組：(1)於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg鼠類IgG2a同型對照mAb(MuIgG2a)，經皮下(SC)，每週三次，歷時七週(n＝40)；(2)於100 μl生理食鹽水中之4 mg/kg鼠類TNFRII－Fc(Enbrel之鼠類替代品)(MuTNFII－Fv)＋於100 μl生理食鹽水中之3 mg/kg甲胺喋呤(MTX)，SC，每週兩次，歷時七週(n＝40)；及(3)於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg倉鼠－鼠類嵌合抗－IL－17A(MuAnti－IL17)及倉鼠－鼠類嵌合抗－IL－17F(MuAnti－IL－17F)單株抗體(mAb)，SC，每週三次，歷時七週(n＝40)。

第33天起，使用標準關節炎計分方法每週兩次對動物進行計分。計分方法為每個腳爪0－4分(其中0意謂不患病，且4表示涉及整個腳爪之紅斑及水腫)，每隻動物最高計分為16分。基於第45天之體重及進行計分之疾病隨機分配治療組1－3中之動物。均衡三個治療組以含有相等數目之患有輕度疾病(平均計分0－3；每個治療組22－23隻小鼠)、中度疾病(平均計分4－8；每個治療組11－13隻小鼠)及重度疾病(平均計分9及9以上；每個治療組4－6隻小鼠)之小鼠。在研究結束時，第81天，獲取關節之微電腦化斷層掃描(MicroCT)(Barck等人，Arthritis & Rheumatism ,50：3377－3386(2004))影像，且計算關節皮層骨骼體積(JCBV)。

在經II型膠原蛋白處理以誘發膠原蛋白誘發之關節炎(CIA)之DBA－1J小鼠中，抗－IL－17A抗體與抗－IL－17F抗體之組合(組3)使得當與第81天經單獨對照IgG2a(組1)治療之小鼠的最終臨床計分相比時第81天最終臨床計分降低(p＝0.02，Dunnett氏測試；Hsu,J.C.,Multiple Comparisons Theory and Methods,Chapman and Hall(1996))。此外，在經II型膠原蛋白處理以誘發膠原蛋白誘發之關節炎(CIA)之DBA－1J小鼠中，如由與經鼠類IgG2a同型對照mAb治療之小鼠約3.7之JCBV相比抗－IL－17A與抗－IL－17F治療之組約4.5之較大關節皮層骨骼體積(JCBV)所量測，用抗－IL－17A抗體與抗－IL－17F抗體之組合治療保護小鼠免於骨骼損傷(p<0.001；Dunnett氏測試)。

IL－17A抗體與IL－17F抗體之組合降低患有CIA之小鼠之最終臨床疾病計分及阻斷患有CIA之小鼠之骨骼損傷的能力表明IL－17A與IL－17F之組合可為治療免疫相關疾病(諸如類風濕性關節炎)之標靶。

在類似實驗中，研究中增加用單獨抗－IL17A抗體治療，產生第四組。結果展示於圖19及圖20中。對照為同型匹配之抗人豬草－IgG2a抗體(Genentech,Inc.)，圖中列為"豬草"。使用以下準則判定每個腳爪之臨床計分：0＝無紅斑及腫脹跡象1＝侷限於中足(跗骨)或足踝之紅斑及輕度腫脹2＝自足踝延伸至中足之紅斑及輕度腫脹3＝自足踝延伸至蹠骨關節之紅斑及中度腫脹4＝涵蓋足踝、足部及足趾之紅斑及重度腫脹平均計分＝四個腳爪計分之和。平均每日臨床計分＝每日平均計分之平均值。最終臨床計分＝研究最後一天之平均計分。

資料顯示抗－IL17A抗體與抗－IL17F抗體之組合與用單獨抗－IL17A治療相比以統計上顯著之方式更有效。

(2)EAE如下所述用髓鞘寡樹突神經膠質細胞醣蛋白(MOG)誘導四組小鼠(每組15隻小鼠)，且此外，在用CFA中之MOG35－55肽抗原誘導後該等組接受以下抗體劑量，每週三次：(1)(組1)於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg鼠類IgG2a同型對照mAb(抗－GP120抗體)，經由腹膜內注射(IP)；(2)(組2)於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg倉鼠－鼠類嵌合抗－IL－17A(MuAnti－IL17)mAb，經由IP；(3)(組3)於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg倉鼠－鼠類嵌合抗－IL－17F(MuAnti－IL17F)mAb，經由IP；及(4)(組4)於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg倉鼠－鼠類嵌合抗－IL－17A(MuAnti－IL17)mAb，經由IP，及於100 μl生理食鹽水中之6 mg/kg倉鼠－鼠類嵌合抗－IL－17F(MuAnti－IL－17F)mAb，經由IP。

在用MOG誘導前一天(－1天)，投與如上所述之抗體劑量作為首劑量。在用MOG誘導當天(第0天)，用含有於100 μl PBS及100 μl CFA中之200 μg MOG35－55肽(Liu等人，Nat.Med. ,4(1)：78－83(1998)；Suen等人，J.Exp.Med. ,186(8)：1233－40(1997))之200 μl乳液以皮內方式使小鼠免疫，該乳液係藉由將不完全弗氏佐劑(IFA)與結核分枝桿菌(M.tuberculosis )H37A(死亡並乾燥)混合至於CFA中2 mg/ml之結核分枝桿菌濃度(200 μg結核分枝桿菌/小鼠)來製備。用100 μl PBS中之200 ng百日咳毒素(Pertussis Toxin)經由IP進一步注射小鼠。

第2天，用100 μl PBX中之200 ng百日咳毒素經由IP進一步注射小鼠。

對於餘下研究，將如上所述之抗體劑量每週三次投予小鼠。

第1天起，使用多發性硬化症計分方法(下述)每週至少三次針對臨床疾病來評估小鼠。此外，每日評估達到4級疾病之小鼠(若4級動物在5天內不緩和至3級或更低級，則對動物施以無痛致死術)。此外，在研究結束時評估脊髓及腦中之淋巴細胞。使用以下評級系統評估多發性硬化症計分方法：(1)0級表示無明顯疾病徵候之正常小鼠；(2)1級表示尾巴不舉(尾巴不舉描述為當提起小鼠時尾部完全軟弱且尾尖無捲曲)或後肢無力(後肢無力描述為步態蹣跚，其體征為行走時小鼠後肢自金屬線籠頂部垂下)，但並非二者同時；(3)2級表示尾巴不舉且後肢無力；(4)3級表示部分後肢癱瘓(部分後肢癱瘓描述為小鼠不能使用後肢以維持尾部姿態或行走，但某種程度上仍可移動一或兩肢)；(5)4級表示完全後肢癱瘓(完全後肢癱瘓描述為後肢完全喪失活動性，小鼠自身僅靠其前肢拖動)；及(6)5級表示因EAE而瀕臨死亡之狀態及死亡(出於人道原因施以無痛致死術)。

在患有髓鞘寡樹突神經膠質細胞醣蛋白(MOG)誘發之實驗性過敏性腦脊髓炎(EAE)之小鼠中，抗－IL－17A抗體與抗－IL－17F抗體之組合(組4)使得當與第34天經gp120(組1)治療之小鼠之最終臨床計分相比時第34天最終臨床計分降低(p<0.01，Dunnett氏測試)。單獨抗－IL－17A(組2)或抗－IL－17F(組3)在降低臨床計分方面並不如組合形式之抗－IL－17A與抗－IL－17F般有效。來自MOA及CIA模型之結果表明諸如類風濕性關節炎(RA)及多發性硬化症(MS)之自體免疫疾病的治療可能需要阻斷組合形式之IL－17A與IL－17F路徑。

IL－17A抗體與IL－17F抗體之組合降低患有MOG誘發之EAE之小鼠的最終臨床疾病計分之能力表明IL－17A與IL－17F之組合可為治療免疫相關疾病(諸如多發性硬化症)之標靶。靶向IL－17A及IL－17F之組合治療可包括雙重特異性/交叉反應性抗體(如實例15所述基於序列同源性或結構同源性來識別存在於IL－17A與IL－17F上之相同或相似抗原決定基之抗體)、雙特異性抗體(已經工程化以識別IL－17A與IL－17F之抗體，例如該抗體之一臂識別IL－17A而同一抗體之另一臂識別IL－17F，或抗體之重鏈識別IL－17A而同一抗體之輕鏈識別IL－17F)及組合投與之IL－17A＋IL－17F抗體(兩種抗體，一者識別IL－17A且一者識別IL－17F)。

實例13

活體外T細胞活化 與Th1及Th2不同(參見美國申請案第10/697,599號，US 2004/0156849，申請於10/29/03)且產生IL－17之T輔助譜系Th_IL－17 係由IL－23(Hunter等人，Nat.Rev.Immunol., 5：521－531(2005)；Holscher等人，Curr.Opin.Invest.Drugs ,6：489－495(2005))以及諸如IL－6及TNFβ之其他細胞激素(Veldhoen M等人，Immunity, 24：179－89(2006))刺激。為測定Th_IL－17 細胞中IL－17A及IL－17F之產生量，用IL6及TGFβ活化T細胞且由PCR分析來量化IL－17A及IL－17F之量。關於Th_IL－17 細胞之新興資料表明此T細胞子組能誘導組織發炎及自體免疫，且由此在自體免疫疾病中起重要作用(Bettelli等人，Nat Immunol 8：345－350(2007))。

將經FACS純化之原生CD4＋CD62L＋CD25－CD44hi(>99%純度)T細胞(原生CD4＋T細胞之群體)在塗佈有αCD3(抗－CD3抗體)之盤上培育48小時。如下在以下各組中添加於溶液中之細胞激素(包括IL－6、IL－27及TGFβ)及αCD28(抗－CD28抗體)：(1)無細胞激素，(2)IL－6，(3)IL－27，(4)IL－6＋IL－27，(5)IL－6＋TGFβ或(6)IL－6＋TGFβ＋IL－27。由定量PCR分析測定IL－23R、IL－17A及IL－17F之表現且標準化成rp119。(何為rp119？)藉由將該表現標準化成刺激前在經FACS純化之細胞中所量測之表現來計算誘導倍率。

由IL－6及TGFβ活體外活化T細胞使得當與以無處理(組1)、單獨IL－6(組2)、單獨IL－27(組3)、IL－6＋IL－27(組4)及IL－6＋TGFβ＋IL－27(組6)活化相比時IL－17A的產生增加(約18,000倍誘導)及IL－17F的產生增加(約300,000倍誘導)(組5)(圖13)。

IL－6及TGF－β誘導IL－17A與IL－17F產生之結果以及來自實例12之活體內結果表明藉由阻斷Th_IL－17 細胞之功能有效治療諸如類風濕性關節炎及多發性硬化症之自體免疫疾病可包括抑制IL－17A與IL－17F。靶向IL－17A及IL－17F之組合治療可包括雙重特異性/交叉反應性抗體(如實例15所述基於序列同源性或結構同源性來識別存在於IL－17A與IL－17F上之相同或相似抗原決定基之抗體)、雙特異性抗體(已經工程化以識別IL－17A與IL－17F之抗體，例如該抗體之一臂識別IL－17A而同一抗體之另一臂識別IL－17F，或抗體之重鏈識別IL－17A而同一抗體之輕鏈識別IL－17F)及組合投與之IL－17A＋IL－17F抗體(兩種抗體，一者識別IL－17A且一者識別IL－17F)。

實例14

受體/配位體相互作用之鑑別－用於鑑別受體/配位體相互作用之PRO多肽篩選檢定的綜述 在此檢定中，為達成鑑別受體/配位體相互作用之目的，針對與一組潛在受體或配位體分子結合之能力來測試各種PRO多肽。已知受體之配位體、已知配位體之受體或新穎受體/配位體對的鑑別適用於多種指征，其包括(例如)將生物活性分子(與配位體或受體連接)靶向已知表現受體或配位體之細胞；將受體或配位體用作偵測疑含有該受體或配位體之組合物中受體或配位體存在之試劑，其中該組合物可包含疑表現配位體或受體之細胞；調節已知表現或回應於受體或配位體之細胞的生長或其他生物或免疫活性；調節表現受體或配位體之細胞的免疫反應或對該等細胞之免疫反應，允許製備將調節表現受體或配位體之細胞生長或生物或免疫活性的針對該受體或配位體之促效劑、拮抗劑及/或抗體；及將易於為一般熟習此項技術者想到之各種其他指征。

一般而言，如下進行檢定。使疑為受體之配位體的本發明PRO多肽表現為含有人類IgG之Fc域之融合蛋白(免疫黏附素)。藉由允許免疫黏附素多肽與表現候選PRO多肽受體之細胞(例如Cos細胞)相互作用且以針對Fc融合域之螢光試劑觀測經結合之免疫黏附素且由顯微鏡檢查來偵測受體－配位體結合。藉由使編碼可充當受體分子之PRO多肽之cDNA表現載體庫的規定子組平行地瞬間轉染來產生表現候選受體之細胞。接著在針對可能的受體結合進行測試之PRO多肽免疫黏附素存在下將細胞培育1小時。接著將細胞洗滌且用三聚甲醛固定。接著將細胞與針對PRO多肽免疫黏附素之Fc部分的螢光素結合之抗體(例如FITC結合之山羊抗人Fc抗體)一起培育。接著將細胞再次洗滌且由顯微鏡檢查。藉由存在經編碼特定PRO多肽受體或受體集合之cDNA轉染之細胞的螢光標記及不存在已經其他cDNA或cDNA集合轉染之經類似製備細胞的類似螢光標記來判斷陽性相互作用。若cDNA表現載體之規定集合經判斷為對與PRO多肽免疫黏附素之相互作用呈陽性，則對包含該集合之個別cDNA種類進行個別測試(集合"分解")以確定編碼能與PRO多肽免疫黏附素相互作用之受體的特異性cDNA。

在此檢定之另一實施例中，使經抗原決定基標記之潛在配位體PRO多肽(例如8組胺酸"His"標記)與一組潛在受體PRO多肽分子相互作用，該等受體PRO多肽分子已表現為與人類IgG之Fc域的融合體(免疫黏附素)。與經抗原決定基標記之PRO多肽共同培育1小時後，以蛋白質A珠粒使候選受體各自免疫沈澱且洗滌該等珠粒。由與針對抗原決定基標記之抗體之經免疫沈澱複合體的西方墨點分析來確定潛在配位體相互作用。若在關於候選受體之西方墨點分析中觀測到經抗原決定基標記之蛋白質的預期分子量之帶，則判斷相互作用發生，但關於該組潛在受體之其他成員未觀測到相互作用發生。

使用上述檢定，已於本文中鑑別以下受體/配位體相互作用：(1)PRO1031(本文中命名為人類IL－17B配位體)與PRO5801(本文中命名為人類IL－17RH1受體)結合。

(2)PRO10272(本文中命名為人類IL－17E配位體)與PRO5801(本文中命名為人類IL－17RH1受體)結合。

(3)PRO20110(本文中命名為人類IL－17F配位體)與人類IL－17受體(IL－17R)[(Yao等人，Cytokine,9(11) ：794－800(1997)；本文中亦命名為PRO1]及PRO20040(本文中命名為人類IL－17RH2受體)結合。

(4)PRO1031(IL－17B配位體)及PRO1122(IL－17C配位體)並不與人類IL－17受體結合(Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),97(2) ：773－778(2000))。

實例15

IL－17F受體結合；IL－17F結構確定 A.方法(1)結合量測 藉由在Pharmacia BIAcore 1000儀器(Phamacia Biosensor,Piscataway NJ)上進行SPR量測來測定與IL－17R或IL－17RH1(PRO5801)結合之IL－17、IL－17E(PRO10272)或IL－17F(PRO20110)之動力學及親和力。藉由使用製造商開發之方案，經由與胺基隨機偶合(N－羥基丁二醯亞胺化學)使IL－17配位體或受體固定於CM5感測器晶片之流槽上。對於IL－17R、IL－17RH1及IL－17F獲得約500個共振單元(RU)之固定水平，而IL－17及IL－17E固定水平分別為1200及1500 RU。對於與經固定之IL－17結合之IL－17R獲得強信號。然而，當使IL－17R固定時，對於IL－17結合僅獲得弱信號，此表明受體固定使結合位點失活。用乙醇胺阻斷未反應之位點後，使用25 μL/min之流動速率進行結合量測。對於一系列六個、兩倍連續稀釋之蛋白質溶液獲得感測圖。所使用之最高濃度為1000或500 nM蛋白質且在含有0.05% Tween－20之電泳緩衝液PBS中製備溶液。藉由注射0.1 M乙酸、0.2 M NaCl之25 μL等分試樣(pH 3)以使非共價結合之蛋白質溶離而於結合循環之間再生感測器晶片表面。根據1：1結合模型，藉由使用製造商提供之軟體進行非線性回歸分析來評估感測圖。在量測IL－17變異體之間針對結合受體之競爭的單獨實驗中，將固定濃度之受體與變化濃度之IL－17蛋白質一起培育，接著將此混合物注射至具有經固定IL－17蛋白質之流槽上。自締合期完成後所獲得之共振信號來測定所結合之受體的量。

(2)晶體學 在19℃下，IL－17F於含有1.0 M硫酸鋰、0.5 M硫酸銨、1%乙醇及100 mM檸檬酸鈉(pH 5.6)之孔溶液上方之懸滴中結晶成六邊形片。將晶體收集至由無乙醇之孔溶液組成之人工母液中。將晶體浸入含有20%甘油之人工母液中，且於液氮中急驟冷卻，隨後收集資料。在內部旋轉陽極產生器上以CuKα輻射收集初始資料且發現空間群為P6 ₁ 或P6 ₅ ，其中兩種二聚體處於不對稱單元中。對於定相而言，藉由在補充有2 mM硫柳汞(thimerosal)之人工母液中浸泡6小時使晶體衍生。在斯坦福同步輻射實驗室(Stanford Synchrotron Radiation Laboratory)在射束線9－2處收集原生資料組及三波長Hg MAD(多波長異常繞射，Multiwavelength Anomalous Diffraction)實驗。使用HKL套件中之程式(Otwinowski,Z.及Minor,W.,Methods Enzymol.176 ：307－326(1997))處理資料組。使用CCP4程式組(CCP4,Acta Cryst. D50 ：760－763(1994))進行結構確定。帕特生圖(Patterson map)指示若干良好排序之Hg原子存在，該等Hg原子之位置係使用程式Rantan來確定。以MLPHARE進行相位精化。檢查DM改進圖指示空間群為P 6₅ 且揭示非晶體學對稱性(NCS)運算子。每一原體在等價、NCS相關位點處結合單一硫柳汞。

將初始結構建立於四次NCS平均及溶劑平整化實驗圖中且使用如由Molecular Simulations,Inc.改進之程式REFMAC_4.0(CCP4,Acta Cryst. D50 ：760－763(1994)及Brnger,A.T.(1992),X－PLOR Manual,3.1版(New Haven,Connecticut：Yale University))進行精化。在薄解析度殼層中選擇經隔離用於計算自由R值之映像。在位置精化、模擬黏接及各向同性溫度因子精化期間使用最大可能目標函數、總體各向異性修正及真實空間整體溶劑修正。針對2.65△遠端資料組進行初始精化，但Hg位點周圍之無序證實難以模型化，因此最終精化係針對2.85△原生資料組，使用相同組之自由R映像來進行。在最終模型中，四種來源於載體之殘基：殘基1至8及殘基128－133在原體A、B及X中無序，而殘基1－6及130－133在原體Y中無序。在XY二聚體中，內環(殘基X20－X23及Y20－Y25)無序；此同一環在AB單體中較差排序。Ramachandran曲線顯示所有非甘胺酸、非脯胺酸殘基中之90%處於最有利區域中，9.2%處於額外容許區域中，0.7%(3個殘基)處於寬泛容許區域中，且無殘基處於非容許區域中。資料收集及精化統計於表8中。IL－17F之座標已寄存於蛋白質資料庫(Protein Data Bank)中且存取碼仍有待指定。程式areaimol及resarea(CCP4,Acta Cryst. D50 ：760－763(1994))用於可接近表面積計算。程式Molscript(Kraulis,P.J.,J.Appl.Cryst.103 ：1345－1352(1999))、Raster3D(Merrit,E.A.及Murphy,M.E.P.,Acta Cryst. D50 ：869－873(1994))、Insight97(MSI)及Grasp(Nichols等人，Proteins 11 ：281－296(1991))用於分析且獲得圖15、圖17及圖18。

B.結果及討論(1)受體結合 表面電漿共振(SPR)用於判定IL－17F(PRO20110)是否結合兩種經報導結合IL－17蛋白質之受體IL－17R(命名為PRO1)及IL－17RH1(PRO5801)中之任一者之胞外域(ECD)。然而，對於經固定之IL－17F未觀測到結合IL－17R或IL－17RH1(分別高達1 μM及0.5 μM)。與之相比，IL－17R以適中結合親和力結合經固定之IL－17(參見下表8)，此與關於對此相互作用之親和力之先前報導(Yao等人，Cytokine 9 ：794－800(1997))一致。同樣地，IL－17RH1對IL－17E顯示高結合親和力(表7)，此與對於誘導細胞釋放IL－8所觀測之效能(Lee等人，J.Biol.Chem.276 ：1660－1664(2001))一致。此外，如預期，在IL－17RH1與IL－17之間及IL－17E與IL－17R之間未觀測到結合(Shi等人，J.Biol.Chem.275 ：19167－19176(2000)；Lee等人，J.Biol.Chem.276 ：1660－1664(2001))。

為測試缺乏IL－17R或IL－17RH1與IL－17F之結合是否可為固定連接活化之結果，在競爭實驗中測試IL－17F/受體結合。在此等實驗中，將固定濃度之IL－17R(500 nM)或IL－17RH1(31 nM)與變化濃度之配位體一起培育，且接著注射於IL－17或IL－17E表面上。儘管可溶性IL－17可有效阻斷IL－17R與經固定之IL－17結合，但對於2 μM IL－17F未觀測到有競爭。此外，儘管結合由可溶性IL－17E完全抑制，但1.3 μM IL－17F不可阻斷IL－17RH1與經固定之IL－17E結合。此等結果指示IL－17F並不以高親和力與IL－17R或IL－17RH1之經純化、單體ECD結合。如實例14(圖14)所示，已顯示IL－17F配位體與新穎IL－17RH2受體(PRO20040)結合。

儘管IL－17F似乎具有與IL－17之活性相關之活性，但IL－17F於活體外並不以高親和力結合IL－17R。然而，可偵測到IL－17F與經IL－17R轉染之Cos細胞之結合增強(未圖示)，此表明IL－17F可能會利用IL－17R，但僅在與其他尚未鑑別之組份組合以形成高親和力信號轉導複合體的情況下。已對IL－17假定類似機制以說明受體親和力與其生物活性之效能之間的差異(Yao等人，Cytokine 9 ：794－800(1997))。本文所呈現之結果表明不管所涉及之受體如何，IL－17F信號轉導皆產生與IL－17刺激IL－17R類似之下游活性。

(2)IL－17F之結構確定 由多波長Hg異常繞射法解出人類IL－17F之結構，且在2.85△解析度下將其精化成分別為28.8%及23.3%之R_free 及R_cryst (參見下表9)。IL－17F原體之核心包含兩對反平行β－股；一對包括股線1(殘基52－59)及2(殘基66－73及77－79)，而另一對包括股線3(89－103)及4(110－125)。股線2間雜有較短的不規則β結構段。兩個雙硫橋(Cys 72/Cys 122及Cys 77/Cys 124)連接股線2與4。第三雙硫鍵(Cys 17/Cys 107)將一個原體之股線3與4之間的環與相鄰原體之N末端延伸區連接形成廣泛二聚體觸點(如下文所討論)。此N末端延伸區亦含有與另一原體上之股線3'以氫鍵鍵結之β－股(股線0，殘基25－32)及小α－螺旋(殘基43－48)。在Asn 53處觀測額外電子密度，其與如自序列分析及經純化之蛋白質表徵所預期之此殘基的糖基化一致。

此結構揭示IL－17F為胱胺酸結家族蛋白質之遠緣同源物(McDonald,N.Q.及Hendrickson,W.A.,Cell 73 ：421－424(1993))，就其獨特胱胺酸連接性來命名(圖15)。胱胺酸結之特徵為兩組由股線2與4之間的雙硫鍵連接之成對β－股(股線1與2及股線3與4)(圖15，插圖)。第三雙硫橋穿過此大環以連接股線1與3。與之相比，IL－17F僅含有用來命名家族之三個獨特胱胺酸鍵中之兩者。在IL－17F中，Cys 72/Cys 122及Cys 77/Cys 124雙硫鍵形成典型胱胺酸結之大環。會藉由穿過此大環而形成"結"之第三雙硫鍵不存在；實情為，位於與胱胺酸結蛋白質中之第三雙硫鍵相同之三維空間中的殘基50及89為IL－17F中之絲胺酸。Ser 50呈與結－蛋白質中之相應半胱胺酸相同之構形，而Ser 89並非如此。值得關注的，儘管結構表明可容納第三雙硫鍵，但絲胺酸在所有IL－17家族成員之此等位置中保守(參見圖16)。

(3)二聚 IL－17F以類似於神經生長因子(NGF)及其他神經生長素(neutrophin)之平行方式二聚(McDonald等人，Nature 354 ：411－414(1991))。然而，二聚體界面異常大，與對於NGF總共3400△² (約1700△² /單體)相比嵌埋總共6800△² (或約3400△² /單體)(PDB代碼1WWW；Weismann等人，Nature 401 ：184－188(1999))。約三分之一之界面係由一個單體之股線3及4與另一單體之相同股線之間的相互作用而形成，類似於神經生長素中所見之二聚體界面。IL－17F所獨有的為由相互作用所嵌埋之大量表面積，該等相互作用涉及每一原體之N末端延伸區(殘基8－48)達到越過典型二聚體界面且針對其他原體之各個部分進行裝填。

IL－17F二聚體之總體骨架結構可描述為衣服，其中摺疊及1'/2'形成袖子，胱胺酸結雙硫鍵排成衣領，且摺疊3/4及3'/4'連同N末端延伸區一起形成主體，其以形成底部裙套之兩個三股摺疊(包括股線4/3/0'及0/3'/4')結束(圖15B；尺寸65△×25△×30△)。分子表面上之顯著特徵為定位於二聚體界面處之異常大的空穴(18△×10△×10△深)，其基本上安置為衣服中之口袋。由股線3與3'中之殘基(來自兩條鏈之Gln 95、Glu 96、Thr 97及Leu 98)及股線4及4'中之殘基(Lys 115'、Val 118及Val 120')形成空穴底部。N末端之殘基排成空穴之一側(殘基Arg 37、Val 38、Met 40)，而另一側由來自以下各者之殘基排成：股線1(Tyr 54)、股線2(Val 68、Glu 66)及此等股線之間的翻折(Tyr 63及Pro 64)。Tyr 63與Pro 64之間的肽鍵呈獨特順式構形。由於此脯胺酸在所有IL－17序列中保守且緊隨其後的始終為大的疏水性殘基(參見圖16)，因此此肽鍵在所有IL－17家族成員中不可能呈順式構形。用於使結構定相之含汞化合物硫柳汞結合於此空穴之下端(如圖17定向)，佔據30%之空間。

上文所討論之結構特徵證實IL－17同源物(IL－17F)為胱胺酸結摺疊超家族之成員且類似於NGF子族之成員二聚。IL－17蛋白質與超家族之其他成員共有可忽略不計之序列相似性。舉例而言，IL－17F與NGF之基於結構之序列對準揭示僅十個殘基之一致性，該等殘基包括在胱胺酸結基元中保守之四個半胱胺酸(未圖示)。有限序列保守性為胱胺酸結摺疊超家族之典型特徵(McDonald,N.Q.及Hendrickson,W.A.,Cell 73 ：421－424(1993))。

IL－17F之結構允許泛化至其他IL－17家族成員。包括β－摺疊位置及大環雙硫鍵之胱胺酸結摺疊應於所有IL－17同源物中得以保持(圖16)。詳言之，IL－17與IL－17F類似，其共有幾乎50%序列一致性，此可能預測IL－17與IL－17F將在何處共有表面特徵及其將在何處有差異。圖17展示根據與IL－17之序列一致性來著色之IL－17F之分子表面。僅IL－17F表面上之廣泛保守補片處於每一原體之平面上(圖17B)及空穴"上方"之區域上(圖17A)。原體面上之保守區域可表現維持結構所需或潛在識別共同結合搭配物所需之保守特徵。由此預期IL－17F表面中之大空穴亦存在於IL－17中，但將包含保守殘基與可變殘基。

與之相比，IL－17B、IL－17C及IL－17E之序列與IL－17F及IL－17有顯著差異，尤其在輔助胱胺酸鍵之數目及位置以及N末端延伸區之長度及序列方面有顯著差異。儘管存在此差異，但仍可能關於雙硫鍵連接性及其將對其他家族成員中之N末端延伸區所具有之影響作出若干預測。舉例而言，IL－17B以非共價二聚體之形式分泌(自CHO或昆蟲細胞(Shi等人，J.Biol.Chem.275 ：19167－19176(2000)及未圖示之資料)，其指示所有八個半胱胺酸殘基在二聚體之單鏈內成對。IL－17B中兩個額外半胱胺酸中之一者(Cys 103)位於大環中所包括之股線2中之兩個半胱胺酸之間，而第二個額外半胱胺酸處於股線3與4之間的翻折中(圖16及圖15)。基於胱胺酸結摺疊在所有IL－17同源物中保守之假設，IL－17B之股線2中之額外半胱胺酸(Cys 103)處於太遠位置而不能與股線3/4環中之任一半胱胺酸鍵結。因此，IL－17B之Cys 103與N末端延伸區中之Cys 64須以雙硫鍵鍵結，留下股線3/4環中之兩個半胱胺酸彼此鍵結。為使此等相互作用發生，N末端延伸區在IL－17B中須呈與IL－17F根本上不同之構形。其為合理的，此係由於此部分結構中之序列在家族間並不保守，其形成極不規則之二級結構且主要裝填於分子外周上。基於此分析，預期在股線2中亦具有額外半胱胺酸之IL－17C及IL－17E亦可能具有呈與IL－17F及IL－17顯著不同之構形的N末端。此分析基於N末端之雙硫鍵鍵結模式將家族分成兩類。

IL－17F結構之顯著特徵為由二聚體界面中之殘基所形成之異常大的空穴(圖18)，其暗示可結合另一分子之區域。空穴(每個二聚體兩個)包含嚴格保守或始終具有類似化學特徵之殘基(Tyr 54、Tyr 63、Pro 64、Val 120)之組合以及在IL－17家族成員之間極其可變，提供賦予對分子間相互作用之特異性之潛力的其他殘基(Arg 37、Val 38、Met 40、Ala 95)之組合。空穴不具有明確靜電表面特徵，但實則由疏水性、極性及帶電殘基之組合形成(參見圖17A及圖18A)。基於序列分析，將預期類似空穴存在於其他IL－17家族成員中；然而，倘若N末端延伸區之構形可能不同，則空穴之特定特徵在IL－17B、IL－17C及IL－17E中將完全不同。

NGF在與IL－17F中之空穴位置類似之位置處結合其高親和力受體TrkA。圖18B及圖18C展示處於突出空穴位置及TrkA結合位點之相同定位中之IL－17F及NGF(預期為所有神經營養因子(neurotrophin)/Trk複合體利用；Weismann等人，Nature 401 ：184－188(1999))。神經營養因子同源二聚體(NGF、NT3、NT4)之已知結構在其表面上在此位置處亦具有缺口，但其比IL－17F中之空穴更小且更適度(McDonald等人，Nature 354 ：411－414(1991)；Butte等人，Biochemistry 37 ：16846－16852(1998)；Robinson等人，Protein Sci.8 ：2589－2597(1999))。Trk家族成員為經由其膜近端細胞外類Ig域而與神經營養因子相互作用之受體酪胺酸激酶。儘管未預期IL－17R或IL－17RH1之結構含有類Ig摺疊，但IL－17蛋白質及神經營養因子可採用其表面上之類似區域以結合其受體。

神經營養因子不僅結合特定Trk受體，而且可同時結合p75^NTR (所有神經營養因子共同之第二受體)。p75^NTR 經由富含胱胺酸之胞外域結合其神經營養因子配位體，預期該胞外域類似於腫瘤壞死因子受體1(TNFR1)或死亡受體5之結構(Banner等人，Cell 73 ：431－445(1993)；Hymowitz等人，Mol.Cell 4 ：563－571(1999)；Mongkolsapaya等人，Nat.Struc.Biol. 6 ：1048－1053(1999))。已基於突變資料提出NGF：p75^NTR 相互作用之模型(Weismann,C.及de Vos,A.M.,Cell.Mol.Life Sci.58 ：1－12(2001))且其表明在配位體二聚體之任一端以及每一原體上之平坦表面處之環與p75^NTR 相互作用。IL－17R及IL－17RH1之序列並不類似於p75^NTR 且未預期採用類TNFR1摺疊。然而，倘若IL－17與神經生長素摺疊相似，則考慮IL－17之第二受體組份的可能性為合理的，此類似於神經生長素系統。

此外，亦已表明蛋白質spztle採用神經營養因子摺疊(Mizuguchi等人，TIBS 23 ：239－242(1998))且已在遺傳上(儘管並非由直接結合實驗)顯示其為果蠅(Drosophila )Toll受體之受體(Morisato等人，Cell 76 ：677－688(1994))。由於IL－17經NF－B以與IL－1及Toll受體(儘管該等受體之胞外域極為不同，但就其胞內域而言共有共同摺疊)所使用之路徑類似的路徑轉導信號，因此合理地預期IL－17受體之胞內域或胞外域(包括作為信號轉導複合體之仍未知組份之其他者)可能在結構上類似於此等受體之部分。然而，不論受體結構如何，IL－17配位體與受體之間的相互作用模式皆將最有可能涉及IL－17二聚體結構側面中之深空穴。

圖1展示表現及分離命名為IL－17A/F之新穎人類細胞激素之結果。如圖1A及圖1B所指示，用編碼單獨或組合之人類IL－17及IL－17F之cDNA表現載體使人類293腎細胞轉染。如圖1A及圖1B所指示，利用能識別IL－17(1－5道)或IL－17F(6－10道)之抗體使轉染細胞之經調節培養基免疫沈澱(IP)。展示西方墨點分析，其證實圖1A之8道中及圖1B之3道中二聚IL－17A/F複合體存在。二聚IL－17A/F複合體之尺寸與包含一條IL－17多肽鏈及一條IL－17F多肽鏈之共價異源二聚物質一致。

圖2展示重組IL－17A/F的純化。圖2A展示來自IL－17A/F於S－瓊脂糖管柱上初始分級之蛋白質溶離份之銀染色SDS－PAGE的結果。溶離份31及32含有具有與IL－17A/F一致之約33 kD之表觀分子質量的蛋白質。圖2B展示使用Vydac C4管柱層析法進一步純化IL－17A/F之結果。展示在214 nm及280 nm下量測之經溶離蛋白質之層析圖。圖2C證實來自Vydac C4純化管柱之經純化IL－17A/F蛋白質溶離份誘導TK－10細胞中產生IL－8。

圖3展示IL－17A/F之胺基酸序列分析之結果。圖3A展示經純化IL－17A/F之非還原型SDS－PAGE分析。將經溶解之蛋白質轉移至PVDF膜且用庫馬斯藍蛋白質染色劑染色。於右側指示分子量標記之位置。圖3B展示經分離IL－17A/F之N末端序列分析之結果(自圖3A所示之帶之N末端序列分析所偵測的胺基酸殘基)。序列分析揭示兩個N末端序列(分別將序列1命名為SEQ ID NO：1且將序列2命名為SEQ ID NO：2)。圖3C展示人類IL－17之胺基酸序列(展示於圖3C與圖8中，命名為SEQ ID NO：3)及人類IL－17F之胺基酸序列(展示於圖3C與圖10中，命名為SEQ ID NO：4)。IL－17及IL－17F之信號序列加下劃線。對於所示IL－17及IL－17F多肽序列，與存在於IL－17A/F中之兩個N末端肽序列(SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2)具有一致性之序列以粗體突出。

圖4展示IL－17A/F之質譜分析。圖4A為展示成熟IL－17A/F異源二聚體之具有其鏈間及鏈內雙硫鍵之胺基酸序列(SEQ ID NO：77)的示意圖。雙硫鍵所涉及之半胱胺酸由黑點(．)及殘基號指示。雙硫鍵由連接經鍵結之半胱胺酸之黑線指示。形成鏈間雙硫鍵之彼等雙硫鍵由粗黑線突出。圖4B展示將預期藉由胰蛋白酶消化IL－17A/F產生並含有介於IL－17鏈與IL－17F鏈之間的雙硫鍵之IL－17A/F肽片段1號及2號之示意圖[分別將IL－17A/F雙硫鍵片段1號命名為SEQ ID NO：7；將IL－17A/F雙硫鍵片段2號命名為SEQ ID NO：8]。含於此等片段內之胺基酸相對於各鏈之起始甲硫胺酸指示及編號。亦指示將預期由質譜觀測之此等片段之計算近似分子質量。圖4C展示IL－17A/F之基質輔助雷射脫附/離子化飛行時間質譜(MALDI－TOF)肽圖。所得肽圖含有[M＋H]^＋＝2420.12 Da及3410.60 Da之峰，其與經雙硫鍵連接之肽一致。圖4D展示由液相層析－電噴霧離子化離子阱－質譜(LC－ESI－MS)進一步表徵IL－17A/F之未經還原樣本。離子層析圖表示(自上而下)總離子層析圖、IL－17A/F雙硫鍵片段2號[M＋2H]^2＋及IL－17A/F雙硫鍵片段1號[M＋2H]^3＋之重建離子層析圖(RIC)。觀測到與兩種異源二聚體一致之峰，而在同質二聚肽之預期質量下未觀測到高於背景化學雜訊之峰。

圖5A展示比較由IL－17A/F、IL－17及IL－17F誘導之前發炎反應之劑量反應曲線。在指定濃度下將IL－17A/F、IL－17及IL－17F與TK－10細胞一起培育24小時。顯示IL－17A/F具有有效IL－8誘導活性，在亞nM濃度下觀察到強活性。圖5B展示比較由IL－17A/F、IL－17及IL－17F誘導IL－6之劑量反應曲線。在指定濃度下將IL－17A/F、IL－17及IL－17F與TK－10細胞一起培育24小時。收集TK－10經調節之培養基且由IL－6 ELISA分析。

圖6展示含有來自結合IL－17A/F之Fab之CDR H1－H3的重鏈可變區之區域的胺基酸序列。展示編碼能結合IL－17A/F之相異抗體重鏈序列之三十四(34)個純系(分別為SEQ ID NO：9至SEQ ID NO：42)之預測胺基酸序列之區域的對準。三個重鏈CDR區(CDR－H1、CDR－H2、CDR－H3)加陰影。

圖7展示原生序列IL－17 cDNA之核苷酸序列(SEQ ID NO：5)。

圖8展示來源於圖7所示之SEQ ID NO：5之編碼序列的胺基酸序列(SEQ ID NO：3)。

圖9展示原生序列IL－17F cDNA之核苷酸序列(SEQ ID NO：6)。

圖10展示來源於圖9所示之SEQ ID NO：6之編碼序列的胺基酸序列(SEQ ID NO：4)。

圖11展示自抗－CD3/抗－CD28活化之人類T細胞產生之IL－17A/F的IL－17A/F ELISA量測。

圖12展示IL－17A/F ELISA之特異性，其中展示平行檢定之三個溶離份31號－33號含有接近相等量之IL－17A/F(IL－17A及IL－17F用作對照)。

圖13展示當用IL－6及TGFβ誘導T細胞時IL－17A與IL－17F產生量增加之程度。

圖14描繪細胞激素之IL－17家族及重疊受體－配位體特異性之複合模式。由左至右，圖14展示IL－17配位體結合IL－17受體(IL－17R；本文中命名為PRO1)；IL－17B配位體(PRO1031)結合IL－17RH1受體(PRO5801)；IL－17E配位體(PRO10272)結合IL－17RH1受體(PRO5801)；IL－17F配位體(PRO20110)結合IL－17受體(IL－17R，本文中命名為PRO1)且結合IL－17RH2受體(PRO20040)；IL－17C配位體(PRO1122)及IL－17D配位體(PRO21175)並不與IL－17R、IL－17RH1或IL－17RH2受體相互作用。

圖15展示IL－17F之結構。圖15A展示IL－17F單體之帶狀迹線。股線經標記。雙硫鍵展示為球棍代表圖，其中硫原子著黃色。其他半胱胺酸之近似位置展示為橘黃色球。插圖展示典型結之草圖代表圖。圖15B以紅色及藍色展示IL－17F二聚體之帶狀迹線。雙硫鍵係如圖15A所展示。圖15C展示來自NGF－TrkA複合體之NGF之結構(Weismann等人，Nature 401 ：184－188(1999))。一無序環連接股線2及3。

圖16展示IL－17F與其他IL－17家族成員之序列對準。IL－17與IL－17F之間的一致序列及保守序列之區域分別以綠色及黃色突出。當其他家族成員在此等區域中亦具有保守殘基或一致殘基時，其著相似顏色。半胱胺酸殘基以橘黃色指示。置換典型結半胱胺酸之保守絲胺酸以白色字母突出。預期在所有IL－17中保守之雙硫鍵由連接經鍵結之胱胺酸之黑線指示。形成IL－17F中之鏈間雙硫鍵之兩個胱胺酸以星號標記。IL－17F中之二級結構元素在序列上方展示為藍色箭頭(β－股)或圓柱體(α－螺旋)。殘基編號自成熟序列起始。

圖17展示IL－17F(PRO20110)與IL－17分子結構之比較。兩個正交視圖，IL－17F之分子表面之"側視圖"(A)及"正視圖"(B)，根據如圖16所示之IL－17與IL－17F之間的序列保守性來著色。在兩個蛋白質之間相同之殘基的表面著綠色，同源殘基著黃色，而顯著不同之殘基著白色。(B)之視圖定向於自圖15B之視圖旋轉約15°。形成空穴之殘基經標記。圖17C為圖17B之表面之"剖面"視圖，其展示IL－17F之任一側上之大空穴如何深入穿透至二聚體之主體中。

圖18展示IL－17F表面與NGF上之TrkA結合位點之比較。圖18A及圖18B展示IL－17F之分子結構如圖17定向。IL－17F根據靜電表面電位來著色：紅色，－5 kT；白色，0 kT；及藍色，＋5 kT。空穴之位置係如圓圈所指示。圖18C展示與畫面(B)之IL－17F相同定位之NGF的分子結構；TrkA之域5展示為綠色帶(Weismann等人，Nature 401 ：184－188(1999)；pdb代碼1WWW)。

圖19及圖20展示抗－IL－17A/F抗體於膠原蛋白誘發之關節炎(CIA)之小鼠模型中之功效。

<110> 美商建南德克公司<120> 介白素－17A/F(IL－17A/F)異源多肽及治療用途<130> 39766－0206－1R1P1.PCT <140> 096145454 <141> 2007－11－29 <150> 11/606,192 <151> 2006－11－29 <160> 80 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> 智人<220> <221> Unsure <222> 10 <223> 未知胺基酸<400> 1<210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> 智人<400> 2<210> 3 <211> 155 <212> PRT <213> 智人<400> 3 <210> 4 <211> 163 <212> PRT <213> 智人<400> 4<210> 5 <211> 1859 <212> DNA <213> 智人<400> 5 <210> 6 <211> 559 <212> DNA <213> 智人<400> 6 <210> 7 <211> 21 <212> PRT <213> 智人<400> 7<210> 8 <211> 12 <212> PRT <213> 智人<400> 8<210> 9 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 9<210> 10 <211> 93 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 10<210> 11 <211> 91 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 11<210> 12 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 12 <210> 13 <211> 92 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 13<210> 14 <211> 101 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 14<210> 15 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 15<210> 16 <211> 99 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 16<210> 17 <211> 93 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 17 <210> 18 <211> 92 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 18<210> 19 <211> 98 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 19<210> 20 <211> 98 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 20<210> 21 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 21<210> 22 <211> 97 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 22 <210> 23 <211> 98 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 23<210> 24 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 24<210> 25 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 25<210> 26 <211> 97 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 26<210> 27 <211> 97 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 27 <210> 28 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 28<210> 29 <211> 101 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 29<210> 30 <211> 101 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 30<210> 31 <211> 90 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 31<210> 32 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 32 <210> 33 <211> 101 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 33<210> 34 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 34<210> 35 <211> 98 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 35 <210> 36 <211> 96 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 36<210> 37 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 37 <210> 38 <211> 101 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 38<210> 39 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 39<210> 40 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 40 <210> 41 <211> 94 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 41<210> 42 <211> 93 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 合成多肽<400> 42 <210> 43 <211> 288 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 43<210> 44 <211> 279 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 44<210> 45 <211> 273 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 45<210> 46 <211> 288 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 46<210> 47 <211> 276 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 47<210> 48 <211> 303 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 48<210> 49 <211> 282 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 49 <210> 50 <211> 297 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 50<210> 51 <211> 279 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 51<210> 52 <211> 276 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 52<210> 53 <211> 294 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 53<210> 54 <211> 294 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 54<210> 55 <211> 288 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 55<210> 56 <211> 291 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 56<210> 57 <211> 294 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 57<210> 58 <211> 282 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 58<210> 59 <211> 291 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 59<210> 60 <211> 291 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 60 <210> 61 <211> 291 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 61<210> 62 <211> 288 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 62<210> 63 <211> 303 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 63<210> 64 <211> 303 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 64<210> 65 <211> 267 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 65<210> 66 <211> 282 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 66<210> 67 <211> 303 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 67 <210> 68 <211> 288 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 68<210> 69 <211> 294 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 69<210> 70 <211> 288 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 70<210> 71 <211> 280 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 71<210> 72 <211> 303 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 72<210> 73 <211> 282 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 73<210> 74 <211> 282 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 74<210> 75 <211> 282 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 75<210> 76 <211> 279 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 合成聚核苷酸<400> 76<210> 77 <211> 133 <212> PRT <213> 智人<400> 77 <210> 78 <211> 132 <212> PRT <213> 智人<400> 78<210> 79 <211> 10 <212> PRT <213> 智人<400> 79<210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> 智人<400> 80

(無元件符號說明)

Claims

一種一或多種能抑制IL-17A(SEQ ID NO：3)與IL-17F(SEQ ID No：4)兩者之拮抗抗體之用途，其係用於製造治療哺乳動物之免疫相關病症的藥劑，其中該免疫相關病症為多發性硬化症(MS)或類風濕性關節炎(RA)。
如請求項1之用途，其中該哺乳動物為人類受檢者。
如請求項2之用途，其包含治療有效量之IL-17A拮抗抗體或其抗原結合片段及IL-17F拮抗抗體或其抗原結合片段之用途。
如請求項3之用途，其中該IL-17A拮抗抗體特異性結合IL-17A(SEQ ID NO：3)。
如請求項3之用途，其中該IL-17F拮抗抗體特異性結合IL-17F(SEQ ID NO：4)。
如請求項3之用途，其中該IL-17A拮抗抗體特異性結合IL-17A(SEQ ID NO：3)，且該IL-17F拮抗抗體特異性結合IL-17F(SEQ ID NO：4)。
如請求項2之用途，其中該拮抗抗體特異性結合IL-17A(SEQ ID NO：3)與IL-17F(SEQ ID NO：4)兩者。
如請求項7之用途，其中該抗體為交叉反應性抗體或其抗原結合片段。
如請求項7之用途，其中該抗體為具有IL-17A特異性及IL-17F特異性之雙特異性抗體或其抗原結合片段。
如請求項3至9中任一項之用途，其中該抗體為單株抗體或其抗原結合片段。
如請求項10之用途，其中該單株抗體或抗原結合片段為嵌合的、人源化的或人類的。
一種治療有效量之可與IL-17A及IL-17F交叉反應之抗體或其片段之用途，其中該抗體可特異性結合IL-17A(SEQ ID NO：3)與IL-17F(SEQ ID NO：4)兩者，該抗體或其片段係用於製造供治療哺乳動物之免疫相關病症之藥劑，其中該免疫相關病症為多發性硬化症(MS)或類風濕性關節炎(RA)。
一種治療有效量之雙特異性抗體之用途，其中該抗體由兩臂組成，其中該抗體之一臂可識別具有胺基酸序列SEQ ID NO：3之多肽之IL-17A，而該抗體另一臂可識別具有胺基酸序列SEQ ID NO：4之多肽之IL-17F，該抗體係用於製備供治療哺乳動物之免疫相關病症之藥劑，其中該免疫相關病症為多發性硬化症(MS)或類風濕性關節炎(RA)。