[go: up one dir, main page]

TW201625688A - 經半胱胺酸改造之抗體及接合物 - Google Patents

經半胱胺酸改造之抗體及接合物 Download PDF

Info

Publication number
TW201625688A
TW201625688A TW104130168A TW104130168A TW201625688A TW 201625688 A TW201625688 A TW 201625688A TW 104130168 A TW104130168 A TW 104130168A TW 104130168 A TW104130168 A TW 104130168A TW 201625688 A TW201625688 A TW 201625688A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
cysteine
seq
amino acid
group
Prior art date
Application number
TW104130168A
Other languages
English (en)
Inventor
桑尼爾 巴可塔
漢斯 艾瑞克森
賈格R 瓊杜拉
凱瑟琳 柯薩克
瑞伽那 歐里
湯瑪斯 皮勒
Original Assignee
建南德克公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 建南德克公司 filed Critical 建南德克公司
Publication of TW201625688A publication Critical patent/TW201625688A/zh

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817Toxins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013Luminescence
    • A61K49/0017Fluorescence in vivo
    • A61K49/005Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058Antibodies
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04Organic compounds
    • A61K51/08Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明係關於一種在重鏈或輕鏈中包含游離半胱胺酸胺基酸之經半胱胺酸改造之抗體,其製備係藉由以半胱胺酸置換一或多個胺基酸殘基誘變親代抗體之核酸序列以編碼該經半胱胺酸改造之抗體;表現該經半胱胺酸改造之抗體;及分離該經半胱胺酸改造之抗體。

Description

經半胱胺酸改造之抗體及接合物 相關申請案之交叉參考
本申請案主張2014年9月12日申請之美國臨時申請案第62/050,022號之優先權,其全文以引用之方式併入本文中。
本發明大體上係關於經反應性半胱胺酸殘基改造之抗體及更具體言之係關於具有治療或診斷應用之抗體。該等經半胱胺酸改造之抗體可接合化學治療藥物、毒素、親和性配體諸如生物素及偵測標記諸如螢光團。本發明亦係關於使用抗體及抗體藥物接合物化合物於活體外、原位及活體內診斷或治療哺乳動物細胞或相關病理狀況之方法。
抗體藥物接合物(ADC)係受矚目之靶向化學治療分子,因為其藉由將有效細胞毒性藥物靶向至抗原表現腫瘤細胞而組合抗體及細胞毒性藥物兩者之理想性質,藉此增強其抗腫瘤活性。給定靶抗原之成功ADC開發取決於抗體選擇、連接子穩定性、細胞毒性藥物效力(potency)及連接子-藥物與該抗體接合之模式之最佳化。
藥物部分連接至抗體之習知方式(即,透過共價鍵連接)通常導致其中藥物部分連接在抗體上之許多位點之異分子混合物。例如,細胞毒性藥物通常透過抗體之通常多數(often-numerous)離胺酸殘基接合至抗體,從而產生異抗體藥物接合物混合物。取決於反應條件,異混 合物通常含有具有0至約8或更多個連接藥物部分之抗體分佈。此外,在具有藥物部分對抗體之特定整數比率之接合物之每個子組內,係其中藥物部分連接在抗體上之各種位點之可能異混合物。分析型及製備型方法不足以分離及表徵自接合反應所產生之異混合物內之抗體藥物接合物種類分子。抗體係大型、複雜且結構多樣之生物分子,通常具有許多反應性官能基。其等與連接子試劑及藥物-連接子中間物之反應性取決於諸如pH、濃度、鹽濃度及共溶劑之因素。此外,由於難以控制反應條件及表徵反應物及中間物,因此無法複製多步接合方法。
不同於在接近pH 7時質子化及低親核性之大多數胺類,半胱胺酸硫醇在中性pH下係反應性的。由於游離硫醇基團(RSH,硫氫基)係相對反應性的,因此具有半胱胺酸殘基之蛋白質通常以其氧化形式(諸如,二硫連接之寡聚物)存在或具有內部橋接之二硫基團。抗體半胱胺酸硫醇基團對親電子接合試劑比對抗體胺或羥基通常更具反應性(即,更具親核性)。藉由使蛋白質之各種胺基酸殘基突變成半胱胺酸胺基酸之半胱胺酸硫醇基團改造係可能成問題,特別在未成對(游離Cys)殘基或彼等相對容易進行反應或氧化者之情況下。在蛋白質之濃縮液中,無論在大腸桿菌(E.coli)之周質、培養上清液中抑或在部分或完全純化之蛋白質中,蛋白質表面上之未成對Cys殘基可成對並氧化以形成分子間二硫鍵,及因此形成蛋白質二聚物或多聚物。二硫化物二聚物形成使新Cys對接合至藥物、配體或其他標記呈現非反應性。此外,若蛋白質在最新被改造之Cys與現存之Cys殘基間氧化形成分子內二硫鍵,則Cys基團兩者均無法用於活性位點參與及相互作用。此外,可藉由三級結構之錯折疊或損失使蛋白質呈現非活性或非特異性(Zhang等人(2002)Anal.Biochem.311:1-9)。
在其中被改造之半胱胺酸可用於接合,但不干擾免疫球蛋白折 疊及組裝或改變抗原結合及效應子功能之位點具有半胱胺酸取代之抗體(THIOMABTM抗體)(Junutula等人,2008b Nature Biotech.,26(8):925-932;Dornan等人(2009)Blood 114(13):2721-2729;US 7521541;US 7723485;WO2009/052249)。然後此等THIOMABTM抗體可透過被改造之半胱胺酸硫醇基團接合至細胞毒性藥物以獲得具有均勻化學計量(例如,在具有單個被改造之半胱胺酸位點之抗體中,每個抗體高達2個藥物)之THIOMABTM抗體藥物接合物(TDC)。對抗不同抗原之多種抗體之研究已顯示TDC在異種移植模型中係如習知ADC般有效且在相關臨床前模型中於較高劑量下係耐受。已針對抗體之不同位置(例如,輕鏈-Fab、重鏈-Fab及重鏈-Fc內之特定胺基酸位置(即,位點))之藥物連接來改造THIOMABTM抗體。THIOMABTM抗體之活體外及活體內穩定性、效用(efficacy)及PK性質因其同源性及對細胞毒性藥物之位點特異性接合而提供優於習知ADC之獨特優勢。
本申請案包含在重鏈或輕鏈中包括游離半胱胺酸胺基酸之新穎、經分離之經半胱胺酸改造之抗體(THIOMABTM抗體)之揭示內容。
本發明之一態樣係一種製備經分離之經半胱胺酸改造之抗體(THIOMABTM抗體)的方法,其方式為藉由以半胱胺酸置換一或多個胺基酸殘基誘變親代抗體之核酸序列以編碼該經半胱胺酸改造之抗體;表現該經半胱胺酸改造之抗體;及分離該經半胱胺酸改造之抗體。
本發明之另一態樣係經分離之經半胱胺酸改造之抗體(THIOMABTM抗體)之接合物,其中該抗體係共價連接至捕捉標記、偵測標記、藥物部分或固體載體。
在某些實施例中,本發明係包括選自表1至4中任一張表中及較 佳表12中指定之半胱胺酸突變之半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造之抗體。在特定實施例中,該半胱胺酸突變係游離半胱胺酸胺基酸。在某些實施例中,重鏈中之半胱胺酸突變係選自表23中指定之半胱胺酸突變。在某些實施例中,輕鏈中之半胱胺酸突變係選自表14中指定之半胱胺酸突變。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係選自由HC-I195C、HC-S420C、HC-Y432C及LC-G64C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係選自由HC-Y432C及LC-G64C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由Y33C、G162C、V184C、I195C、S420C、Y432C及Q434C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由R19C、E46C、T57C、Y59C、A60C、M100cC、W103C、G162C、I195C、V258C、S420C、H425C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由Y33C、G162C、V184C及I195C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由R19C、E46C、Y59C、A60C、M100cC、W103C、V258C、H425C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。
在某些實施例中,該半胱胺酸突變係輕鏈突變且係選自由Y55C、G64C、T85C及T180C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係輕鏈突變且係選自由T31C、S52C、G64C、R66C、A193C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係輕鏈突變且係選自由G64C、T85C及T180C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該半胱胺酸突變係輕鏈突變且係選自由S52C、G64C、R66C及A193C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在特定實施例中,輕鏈中之半胱胺酸突變係選自由包括根據Kabat編號之LC-I106C、LC-R108C、LC- R142C及LC-K149C之半胱胺酸突變之群(參見圖1A;表1)。在一較佳實施例中,輕鏈中之半胱胺酸突變係Kabat編號之LC-K149C(參見圖1A)。
在較佳實施例中,重鏈中之半胱胺酸突變係選自包括根據EU編號之HC-T114C、HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-E382C、HC-S424C、HC-N434C及HC-Q438C之半胱胺酸突變之群(參見圖1B;表2)。在一較佳實施例中,重鏈中之半胱胺酸突變係根據Kabat編號之HC-A143C(即,根據EU編號之HC-A140C)(參見圖1B21表2)。在一較佳實施例中,重鏈中之半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-A174C(參見圖1B21表2)。
在某些實施例中,藉由包括以下步驟之方法製備如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體:(i)藉由以半胱胺酸置換一或多個胺基酸殘基誘變親代抗體之核酸序列以編碼該經半胱胺酸改造之抗體;(ii)表現該經半胱胺酸改造之抗體;及(iii)分離該經半胱胺酸改造之抗體。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係一種包括白蛋白結合肽(ABP)之融合蛋白。在特定實施例中,該ABP包括選自以下之序列:a)CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF(SEQ ID NO:144);b)QRLMEDICLPRWGCLWEDDF(SEQ ID NO:145);c)QRLIEDICLPRWGCLWEDDF(SEQ ID NO:146);d)RLIEDICLPRWGCLWEDD(SEQ ID NO:147);或e)DICLPRWGCLW(SEQ ID NO:148)。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係選自單株抗體、抗體片段、雙特異性抗體、嵌合抗體、人類抗體及人類化抗體。在特定實施例中,該抗體片段係Fab片段。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗HER2抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗MUC16抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗STEAP1抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗CD79b抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗CD22抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗B7H4抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗Ly6E抗體。在某些實施例中,如本 文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗NaPi2b抗體。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體結合至受體(1)至(53)中之一或多者:(1)BMPR1B(骨成形蛋白受體IB型);(2)E16(LAT1、SLC7A5);(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原);(4)0772P(CA125、MUC16);(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增效因子、間皮素(mesothelin));(6)Napi3b(亦稱為NaPi2b)(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質載體家族34(磷酸鈉)成員2、II型鈉依賴性磷酸鹽運輸蛋白3b);(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、信號素(Semaphorin)5b Hlog、sema域、七血小板反應素(thrombospondin)重複體(1型及類1型)跨膜域(TM)及短細胞質域、(信號素)5B);(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因);(9)ETBR(內皮素B型受體);(10)MSG783(RNF124、假想蛋白FLJ20315);(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白);(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬態受體電位陽離子通道子家族M成員4);(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸形癌衍生之生長因子); (14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/EB病毒受體(Epstein Barr virus receptor))或Hs.73792);(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關β)、B29);(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有SH2域之磷酸酶錨蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C);(17)HER2;(18)NCA;(19)MDP;(20)IL20Rα;(21)短蛋白聚糖(Brevican);(22)EphB2R;(23)ASLG659;(24)PSCA;(25)GEDA;(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3);(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功型);(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關α、B細胞特異性蛋白);(29)CXCR5(柏基特氏(Burkitt's)淋巴瘤受體1、G蛋白偶合受體);(30)HLA-DOB(MHC II類分子之B子單元(Ia抗原);(31)P2X5(嘌呤受體(purinergic receptor)P2X配體閘控型離子通道5);(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2);(33)LY64(淋巴球抗原64(RP105)、富含白胺酸重複體(LRR)家族之I型膜蛋白); (34)FcRH1(類Fc受體蛋白1);(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受體易位相關2);(36)TENB2(推定跨膜蛋白多糖);(37)PMEL17(銀同源物;SILV;D12S53E;PMEL17;SI;SIL);(38)TMEFF1(具有類EGF及兩個類卵泡抑素(follistatin)域1之跨膜蛋白;腦腫瘤抑癌蛋白-1(Tomoregulin-1));(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α1;GFRA1;GDNFR;GDNFRA;RETL1;TRNR1;RET1L;GDNFR-α1;GFR-α1);(40)Ly6E(淋巴球抗原6複合體、基因座E;Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)(41)TMEM46(shisa同源物2);(42)Ly6G6D(淋巴球抗原6複合體、基因座G6D;Ly6-D、MEGT1);(43)LGR5(含有富含白胺酸重複體之G蛋白偶合受體5;GPR49、GPR67);(44)RET(ret原致癌基因;MEN2A;HSCR1;MEN2B;MTC1;PTC;CDHF12;Hs.168114;RET51;RET-ELE1);(45)LY6K(淋巴球抗原6複合體、基因座K;LY6K;HSJ001348;FLJ35226);(46)GPR19(G蛋白偶合受體19;Mm.4787);(47)GPR54(KISS1受體;KISS1R;GPR54;HOT7T175;AXOR12);(48)ASPHD1(含有天冬胺酸β-羥化酶域1;LOC253982);(49)酪胺酸酶(TYR;OCAIA;OCA1A;酪胺酸酶;SHEP3);(50)TMEM118(環指蛋白跨膜2;RNFT2;FLJ14627); (51)GPR172A(G蛋白偶合受體172A;GPCR41;FLJ11856;D15Ertd747e);(52)CD33;及(53)CLL-1(CLEC12A、MICL及DCAL2)。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係共價連接至捕捉標記、偵測標記、藥物部分或固體載體。在特定實施例中,該抗體係共價連接至生物素捕捉標記。在特定實施例中,該抗體係共價連接至螢光染料偵測標記。在特定實施例中,該螢光染料係選自螢光素型、玫瑰紅型、丹磺醯(dansyl)、麗絲胺(Lissamine)、花青、藻紅素、德州紅(Texas Red)及其類似物。在特定實施例中,該抗體係共價連接至選自3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、89Zr、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At及213Bi之放射性核種偵測標記。在特定實施例中,該抗體係藉由螯合配體共價連接至偵測標記。在特定實施例中,該螯合配體係選自DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA及TETA。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係共價連接至選自美登醇(maytansinoid)、奧利斯他汀(auristatin)、尾海兔素(dolastatin)、新月毒素(trichothecene)、CC1065、卡奇黴素(calicheamicin)、烯二炔類抗生素(enediyne antibiotics)、紫杉烷(taxane)及蒽環類藥物之藥物部分以形成具有式I(即,Ab-(L-D)p)之抗體藥物接合物,其中Ab係抗體,L係連接子,D係藥物部分及p係1、2、3或4。在特定實施例中,該抗體藥物接合物具有以下結構:
在特定實施例中,該式I之接合至如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體之藥物(D)係具有以下結構之美登醇:
其中波浪線指示D之硫原子共價連接至連接子;R係獨立地選自H、甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基及3,3-二甲基-2-丁基;及m係1、2或3。
在特定實施例中,該式I之接合至如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體之藥物(D)係選自以下結構:
在特定實施例中,該式I之接合至如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體之藥物(D)具有以下結構:
其中n係0、1或2。
在特定實施例中,該式I之接合至如本文描述經半胱胺酸改造之 抗體之藥物(D)係具有以下結構之單甲基奧利斯他汀藥物部分MMAE或MMAF:
在本發明之某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體具有以下結構中之一者:
其中Val係纈胺酸;Cit係瓜胺酸;及p係1、2、3或4。在本發明之某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體具有以下結構:
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係接合至落於以下類別中之一者中之藥物(在本說明書之後面部分中進一步詳細描述):奧利斯他汀、尾海兔素、新月毒素、CC1065、卡奇黴素、烯二炔類抗生素、紫杉烷、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚(CBI)二聚物、CBI-PBD異二聚物及蒽環類藥物。
在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體之連接子(L)包括硫醇反應性試劑。在特定實施例中,該連接子(L)係選自由馬來醯亞胺、碘乙醯胺及吡啶基二硫化物組成之群。在特定實施例中,該連接子(L)係吡啶基二硫化物。在特定實施例中,該連接子(L)係吡啶基二硫化物及該藥物(D)係MMAE。
在某些實施例中,本發明包括一種製備抗體藥物接合物之方法,其包括使經半胱胺酸改造之抗體(Ab)之至少一個游離半胱胺酸與連接子-藥物(L-D)試劑反應以形成具有式(即,Ab-(L-D)p)之抗體藥物接合物,其中Ab係經半胱胺酸改造之抗體,L係連接子,D係藥物部分及p係1、2、3或4;及其中該經半胱胺酸改造之抗體包括一或多個游離半胱胺酸胺基酸,其中至少一個游離半胱胺酸胺基酸係選自表1或2中之任一張表中指定之半胱胺酸突變或另一選擇係選自表34中指定之替代穩定半胱胺酸突變。在某些實施例中,本發明包括一種製備抗體藥物接合物之方法,其包括使經半胱胺酸改造之抗體(Ab)之至 少一個游離半胱胺酸與連接子-藥物(L-D)試劑反應以形成具有式(即,Ab-(L-D)p)之抗體藥物接合物,其中Ab係經半胱胺酸改造之抗體,L係連接子,D係藥物部分及p係1、2、3或4;及其中該經半胱胺酸改造之抗體包括一或多個游離半胱胺酸胺基酸,其中至少一個游離半胱胺酸胺基酸較佳係選自表12中指定之半胱胺酸突變或另一選擇係選自表34中指定之替代穩定半胱胺酸突變。
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係在重鏈中且係選自表23中指定之半胱胺酸突變。在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係在輕鏈中且係選自表14中指定之半胱胺酸突變。在一較佳實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係選自圖21中指定之半胱胺酸突變。在其他實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係選自表5中指定之半胱胺酸突變。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係選自由HC-I195C、HC-S420C、HC-Y432C及LC-G64C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係選自由HC-Y432C及LC-G64C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由Y33C、G162C、V184C、I195C、S420C、Y432C及Q434C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由R19C、E46C、T57C、Y59C、A60C、M100cC、W103C、G162C、I195C、V258C、S420C、H425C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱 胺酸突變係重鏈突變且係選自由Y33C、G162C、V184C及I195C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係重鏈突變且係選自由R19C、E46C、Y59C、A60C、M100cC、W103C、V258C、H425C及N430C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係在輕鏈中且係選自由Y55C、G64C、T85C及T180C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係在輕鏈中且係選自由T31C、S52C、G64C、R66C、A193C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係在輕鏈中且選自由G64C、T85C及T180C(根據Kabat編號)組成之群。在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸突變係在輕鏈中且係選自由S52C、G64C、R66C及A193C(根據Kabat編號)組成之群。
在較佳實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中輕鏈中之半胱胺酸突變係選自包括根據Kabat編號之LC-I106C、LC-R108C、LC-R142C及LC-K149C之半胱胺酸突變之群(參見圖1A21)。在較佳實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中輕鏈中之半胱胺酸突變係根據Kabat編號之LC-K149C(參見圖1A21表1)。
在較佳實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中重鏈中之半胱胺酸突變係選自包括根據EU編號之HC-T114C、HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-E382C、HC-S424C、HC-N434C及HC-Q438C之半胱胺酸突變之群(參見圖1B21表2)。在較佳實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中重鏈中之半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-A140C(即,根據Kabat編號之HC-A136C)(參見圖1B21表2)。在較佳實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中重鏈中之半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-L174C(參見圖1B21表2)。
在某些實施例中,該等方法可用以製造如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體,其中藉由一種包括以下步驟之方法製備經半胱胺酸改造之抗體:(i)藉由以半胱胺酸置換一或多個胺基酸殘基誘變親代抗體之核酸序列以編碼該經半胱胺酸改造之抗體;(ii)表現該經半胱胺酸改造之抗體;及(iii)分離該經半胱胺酸改造之抗體。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係包括白蛋白結合肽(ABP)之融合蛋白。在特定實施例中,該ABP包括選自以下之序列:a)CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF(SEQ ID NO:144);b)QRLMEDICLPRWGCLWEDDF(SEQ ID NO:145);c)QRLIEDICLPRWGCLWEDDF(SEQ ID NO:146);d)RLIEDICLPRWGCLWEDD(SEQ ID NO:147);或e)DICLPRWGCLW(SEQ ID NO:148)。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係選自單株抗體、抗體片段、雙特異性抗體、嵌合抗體、人類抗體及人類化抗體。在特定實施例中,該抗體片段係Fab片段。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗 體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗HER2抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗MUC16抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗STEAP1抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗CD79b抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗CD22抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗B7H4抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗Ly6E抗體。在某些實施例中,如本文描述之經半胱胺酸改造之抗體係抗NaPi2b抗體。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體結合至受體(1)至(53)中之一或多者:(1)BMPR1B(骨成形蛋白受體IB型);(2)E16(LAT1、SLC7A5);(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原);(4)0772P(CA125、MUC16);(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增效因子、間皮素);(6)Napi3b(亦稱為NaPi2b)(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質載體家族34(磷酸鈉)成員2、II型鈉依賴性磷酸鹽運輸蛋白3b);(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、信號素5b Hlog、sema域、七血小板反應素重複體(1型及類1型)跨膜域(TM)及短細胞質域、(信號素)5B);(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因);(9)ETBR(內皮素B型受體);(10)MSG783(RNF124、假想蛋白FLJ20315); (11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白);(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬態受體電位陽離子通道子家族M成員4);(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸形癌衍生之生長因子);(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/EB病毒受體)或Hs.73792);(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關β)、B29);(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有SH2域之磷酸酶錨蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C);(17)HER2;(18)NCA;(19)MDP;(20)IL20Rα;(21)短蛋白聚糖;(22)EphB2R;(23)ASLG659;(24)PSCA;(25)GEDA;(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3);(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功型);(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關α、B細胞特異性蛋白);(29)CXCR5(柏基特氏淋巴瘤受體1、G蛋白偶合受體); (30)HLA-DOB(MHC II類分子之B子單元(Ia抗原);(31)P2X5(嘌呤受體P2X配體閘控型離子通道5);(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2);(33)LY64(淋巴球抗原64(RP105)、富含白胺酸重複體(LRR)家族之I型膜蛋白);(34)FcRH1(類Fc受體蛋白1);(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受體易位相關2);(36)TENB2(推定跨膜蛋白多糖);(37)PMEL17(銀同源物;SILV;D12S53E;PMEL17;SI;SIL);(38)TMEFF1(具有類EGF及兩個類卵泡抑素(follistatin)域1之跨膜蛋白;腦腫瘤抑癌蛋白-1);(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α1;GFRA1;GDNFR;GDNFRA;RETL1;TRNR1;RET1L;GDNFR-α1;GFR-α1);(40)Ly6E(淋巴球抗原6複合體、基因座E;Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)(41)TMEM46(shisa同源物2);(42)Ly6G6D(淋巴球抗原6複合體、基因座G6D;Ly6-D、MEGT1);(43)LGR5(含有富含白胺酸重複體之G蛋白偶合受體5;GPR49、GPR67);(44)RET(ret原致癌基因;MEN2A;HSCR1;MEN2B;MTC1;PTC;CDHF12;Hs.168114;RET51;RET-ELE1);(45)LY6K(淋巴球抗原6複合體、基因座K;LY6K;HSJ001348;FLJ35226);(46)GPR19(G蛋白偶合受體19;Mm.4787); (47)GPR54(KISS1受體;KISS1R;GPR54;HOT7T175;AXOR12);(48)ASPHD1(含有天冬胺酸β-羥化酶域1;LOC253982);(49)酪胺酸酶(TYR;OCAIA;OCA1A;酪胺酸酶;SHEP3);(50)TMEM118(環指蛋白跨膜2;RNFT2;FLJ14627);(51)GPR172A(G蛋白偶合受體172A;GPCR41;FLJ11856;D15Ertd747e);(52)CD33;及(53)CLL-1(CLEC12A、MICL及DCAL2)。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係共價連接至捕捉標記、偵測標記、藥物部分或固體載體。在特定實施例中,該抗體係共價連接至生物素捕捉標記。在某些實施例中,該抗體係共價連接至螢光染料偵測標記。在某些實施例中,該螢光染料係選自螢光素型、玫瑰紅型、丹磺醯、麗絲胺、花青、藻紅素、德州紅及其類似物。在某些實施例中,該抗體係共價連接至選自3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、89Zr、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At及213Bi之放射性核種偵測標記。在特定實施例中,該抗體係藉由螯合配體共價連接至偵測標記。在特定實施例中,該螯合配體係選自DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA及TETA。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係共價連接至選自美登醇、奧利斯他汀、尾海兔素、新月毒素、CC1065、卡奇黴素、烯二炔類抗生素、紫杉烷及蒽環類藥物之藥物部分以形成具有式I(即,Ab-(L-D)p)之抗體藥物接合物,其中Ab係抗體,L係連接子,D係藥物部分及p係1、2、3或4。
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有以下結構:
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體之藥物(D)係具有以下結構之美登醇:
其中波浪線指示D之硫原子共價連接至連接子;R係獨立地選自H、甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基及3,3-二甲基-2-丁基;及m係1、2或3。
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該藥物(D)係選自以下結構:
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其具有以下結構:
其中n係0、1或2或
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中D係具有以下結構之單甲基奧利斯他汀藥物部分MMAE或MMAF:
在特定實施例中,該等方法可用以製造選自以下結構之經半胱胺酸改造之抗體:
其中Val係纈胺酸;Cit係瓜胺酸;及p係1、2、3或4。
在特定實施例中,該等方法可用以製造接合至以下類別中之藥物(在本說明書之後面部分中進一步詳細描述)之經半胱胺酸改造之抗體:奧利斯他汀、尾海兔素、新月毒素、CC1065、卡奇黴素、烯二炔類抗生素、紫杉烷、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚(CBI)二聚物、CBI-PBD異二聚物及蒽環類藥物。
在特定實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該連接子(L)包括硫醇反應性試劑。在特定實施例中,該連 接子(L)係選自由馬來醯亞胺、碘乙醯胺及吡啶基二硫化物組成之群。在特定實施例中,該連接子(L)係吡啶基二硫化物。在特定實施例中,該連接子(L)係吡啶基二硫化物及該藥物(D)係MMAE。
在某些實施例中,該等方法可用以製造經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係經分離之經半胱胺酸改造之抗體。在某些實施例中,該等方法可用以製造經分離之經半胱胺酸改造之抗體,其中輕鏈中之經分離之半胱胺酸突變係選自包括根據Kabat編號之LC-I106C、LC-R108C、LC-R142C及LC-K149C之半胱胺酸突變之群(參見圖1A圖21)。在某些實施例中,該等方法可用以製造經分離之經半胱胺酸改造之抗體,其中輕鏈中之經分離之半胱胺酸突變係根據Kabat編號之LC-K149C(參見圖1A21表1)。在某些實施例中,該等方法可用以製造經分離之經半胱胺酸改造之抗體,其中重鏈中之經分離之半胱胺酸突變係選自包括根據EU編號之HC-T114C、HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-E382C、HC-S424C、HC-N434C及HC-Q438C之半胱胺酸突變之群(參見圖1B21表2)。在某些實施例中,該等方法可用以製造經分離之經半胱胺酸改造之抗體,其中重鏈中之經分離之半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-A140C(即,根據根據Kabat編號之HC-A136C)(參見圖1B21表2)。
在一較佳實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有以下半胱胺酸突變中之一者:根據Kabat編號之LC-K149C及根據EU編號之HC-A140C(參見表12圖1A1B)。
在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有0.8至1.0之硫醇反應性值。在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有0.9至1.0之硫醇反應性值。在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之 抗體具有0.6至0.9之硫醇反應性值。在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有0.5至0.7之硫醇反應性值。在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有0.4至0.6之硫醇反應性值。在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有0.3至0.5之硫醇反應性值。在本發明之某些實施例中,如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體具有0.2至0.4之硫醇反應性值。
在某些實施例中,本發明係一種醫藥組合物,其包括如本文描述之任何經半胱胺酸改造之抗體。
圖1A顯示針對4D5輕鏈之Kabat編號方案。圖1B顯示針對4D5抗體之相較於Kabat編號方案(中排)及EU編號方案(右排)之起始於N端之序列性編號方案(左排)。
圖2顯示抗體中之用於半胱胺酸誘變及藥物接合的例示性位點。粗體且加下劃線之殘基係用於半胱胺酸誘變之例示性位點。加下劃線之殘基係用於半胱胺酸誘變之額外例示性位點。圖2A(SEQ ID NO:198)顯示重鏈中之用於半胱胺酸誘變之例示性及額外之例示性殘基。圖2B(SEQ ID NO:199)顯示輕鏈中之用於半胱胺酸誘變之例示性及額外之例示性殘基。用於半胱胺酸誘變之較佳位點附以灰色陰影並包含根據EU編號之HC-T114C、HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-E382C、HC-S424C、HC-N434C及HC-Q438C(圖2A)及根據Kabat編號之LC-I106C、LC-R108C、LC-R142C及LC-K149C(圖2B)。在較佳之根據EU編號之HC-A140C(根據Kabat編號之HC-A136C)及Kabat編號之LC-K149C上加方框並用大號字體加以突出。
圖3顯示用於聚集分析及計算之聚集體及單體峰之代表性圖。在 8與10分鐘間之大峰係單體峰及8分鐘時之小峰係聚集體峰。
圖4顯示THIOMABTM抗體之UV280 LC/MS層析圖。圖4A顯示藉由UV280 LC/MS偵測之接合峰。圖4B顯示DAR0(裸抗體)、DAR1及DAR2接合峰。
圖5顯示用於進行全抗體半胱胺酸篩選之方案。對PDS-MMAE及MC-vc-MMAE接合物進行全抗體篩選。因此,製造並測試648種PDS-MMAE及648種MC-vc-MMAE(總計1296種)THIOMABTM抗體。
圖6顯示MC-vc-MMAE及PDS-MMAE接合物之代表性穩定性圖。圖6A顯示在0hr、48hrs及96hrs時使用LC/MS分析之PDS-MMAE LC-R142C THIOMABTM抗體之代表性穩定性圖。圖6B顯示在0hr,48hrs及96hrs時使用LC/MS分析之MC-vc-MMAE LC-R142C THIOMABTM抗體之代表性穩定性圖。
圖7顯示如藉由藥物負載百分率評定之不同PDS-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性的圖。
圖8顯示如藉由藥物負載百分率評定之不同MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性的圖。
圖9顯示LC-K149C、LC-V205C及HC-A114C THIOMABTM抗HER2及抗CD33抗體隨時間變化之平均DAR的圖。
圖10顯示例示性THIOMABTM抗體結構。圖10A顯示硫代Her2-hu7C2-HC-A118C-二硫-PBD及硫代Her2-hu7C2-LC-K149C-二硫-PBD THIOMABTM抗體之結構。圖10B顯示硫代Her2-hu7C2-LC-K149C-CBI二聚物之結構。圖10C顯示硫代Her2-hu7C2-LC-K149C-二硫-CBI-PBD之結構。圖10D顯示硫代Her2-hu7C2-LC-K149C-二硫-PNU之結構。圖10E顯示硫代Her2-hu7C2-HC-A118C-馬來醯亞胺-PNU及硫代Her2-hu7C2-LC-K149C-馬來醯亞胺-PNU之結構。
圖11顯示MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之圖(非成比例)。
圖12顯示PDS-MMAE THIOMABTM抗體之圖(非成比例)。
圖13顯示接合至LC-K149C經半胱胺酸改造之抗體之某些藥物之酶催化修飾的圖。該等修飾係如下:念珠藻素經歷醯胺裂解;微管溶素(Tubulysin)經歷乙醯基損失(即,去乙醯作用);CBI-PBD異二聚物連接子-藥物中間物經歷胺基甲酸酯損失及類紫杉醇係不穩定的並顯示多個酶催化裂解。
圖14A顯示HC-A140C相較於LC-K149C提供對微管溶素之乙醯基之保護。具體言之,使用LCMS顯示使用HC-A140C作為連接位點相較於使用LC-K149C作為連接位點使藥物在培養24hrs後更少降解。圖14B14C使用新穎全血分析顯示在培養24hrs後HC-A140C比LC-K149C更穩定。
圖15使用多個回合之WB分析顯示相較於LC-K149C,HC-A140C之乙醯基損失大幅減少。證實HC-A140C挽救乙醯基損失修飾。
圖16A顯示HC-A140C提供對CBI-PBD異二聚物連接子-藥物中間物之胺基甲酸酯基團之保護。具體言之,使用LCMS顯示使用HC-A140C作為連接位點比使用LC-K149C作為連接位點使藥物培養24hrs後更少降解(圖16A)。圖16B16C使用新穎全血分析顯示在培養24hrs後HC-A140C比LC-K149C更穩定。
圖17使用如本文描述之新穎全血分析顯示HC-A140C比LC-K149C更穩定。
圖18A顯示HC-A140C提供類紫杉醇免受修飾的保護。具體言之,使用LCMS顯示使用HC-A140C作為連接位點相較於使用LC-K149C作為連接位點使藥物在培養24hrs後更少降解。圖18B18c使用新穎全血分析顯示在培養24hrs後HC-A140C比LC-K149C更穩定。
圖19使用新穎全血分析顯示HC-A140C比LC-K149C更穩定(例如,就保護類紫杉醇藥物損失而言)。
圖20顯示HC-A140C相較於LC-K149C保護念珠藻素免受醯胺及酯裂解。
圖21顯示用於映射至抗體之圖之PDS及-vc連接子之較佳HC及LC半胱胺酸突變。
現將詳細參考本發明之某些實施例,其實例說明於隨附結構及式中。儘管將結合列舉型實施例描述本發明,但應瞭解其等無意將本發明限制於彼等實施例。相反,本發明旨在涵蓋所有替代物、修飾物及等效物,其等可包含於如申請專利範圍所定義之本發明之範圍內。
熟習此項技術者將知曉類似於或等效於彼等本文描述者之可用於實施本發明之許多方法及材料。本發明不以任何方式限制於描述之方法及材料中。
除非另有規定,否則本文使用之技術及科學術語具有如本發明所屬技術領域中之一般技術者通常瞭解之相同含義,並與以下一致:Singleton等人(1994)Dictionary of Microbiology and Molecular Biology,第2版,J.Wiley & Sons,New York,NY;及Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immunobiology,第5版,Garland Publishing,New York。
定義
除非另外規定,否則如本文使用之下列術語及短語旨在具有下列含義:當本文使用商標時,申請者旨在獨立地包含該商標產品之商標產品調配物、類名藥物及活性醫藥成分。
本文之術語「抗體」係以最廣泛意義使用且具體涵蓋單株抗體、多株抗體、二聚物、多聚物、多特異性抗體(例如,雙特異性抗體)及抗體片段,只要其等顯示所需生物活性即可(Miller等人(2003) Jour.of Immunology 170:4854-4861)。抗體可係鼠類、人類、人類化、嵌合或衍生自其他種類。抗體係免疫系統產生之可識別並結合至特異性抗原之蛋白質。(Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immuno Biology,第5版,Garland Publishing,New York)。靶抗原通常具有許多個由多個抗體上之CDR識別之結合位點(亦稱為表位)。每個特異性結合至不同表位之抗體具有不同結構。因此,一種抗原可具有超過一種相應之抗體。抗體包含全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子之免疫活性部分,即,含有免疫特異性結合受關注之靶之抗原或其部分之抗原結合位點的分子,此類靶包含(但不限於)癌細胞或產生與自體免疫疾病相關之自體免疫抗體之細胞。本文揭示之免疫球蛋白可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如,IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)、類別(例如,IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。該等免疫球蛋白可衍生自任何種類。然而,在一態樣中,免疫球蛋白係人類、鼠類或兔起源。
「抗體片段」包括全長抗體之一部分,通常係其抗原結合或可變區。抗體片段之實例包含Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段;雙抗體;線性抗體;迷你抗體(Olafsen等人(2004)Protein Eng.Design & Sel.17(4):315-323)、Fab表現文庫產生之片段、抗遺傳型(抗Id)抗體、CDR(互補決定區)及上述任何免疫特異性結合至癌細胞抗原、病毒性抗原或微生物抗原之抗體之表位結合片段、單鏈抗體分子;及形成自抗體片段之多特異性抗體。
在某些實施例中,本文提供之抗體係多特異性抗體(例如,雙特異性抗體)。如本文使用之術語「多特異性抗體」係指包括具有多表位特異性(即,可結合至一個分子上之兩個或更多個不同表位或可結合至兩個或更多個不同分子上之表位)之抗原結合域之抗體。
在一些實施例中,多特異性抗體係對至少兩個不同抗原結合位 點具有結合特異性之單株抗體(諸如雙特異性抗體)。在一些實施例中,多特異性抗體之第一抗原結合域及第二抗原結合域可結合同一分子內之兩個表位(分子內結合)。例如,多特異性抗體之第一抗原結合域及第二抗原結合域可結合至相同分子上之兩個不同表位。在某些實施例中,多特異性抗體所結合之兩個不同表位係通常非藉由單特異性抗體(諸如(例如)習知抗體或一個免疫球蛋白單一可變域)同時結合的表位。在一些實施例中,多特異性抗體之第一抗原結合域及第二抗原結合域可結合位於兩個不同分子內之表位(分子間結合)。例如,多特異性抗體之第一抗原結合域可結合至一個分子上之一個表位,而該多特異性抗體之第二抗原結合域可結合至不同分子上之另一表位,藉此交聯該等兩個分子。
在一些實施例中,多特異性抗體(諸如雙特異性抗體)之抗原結合域包括兩個VH/VL單元,其中第一VH/VL單元結合至第一表位及第二VH/VL單元結合至第二表位,其中每個VH/VL單元包括重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。此類多特異性抗體包含(但不限於)全長抗體、具有兩個或更多個VL及VH域之抗體及抗體片段(諸如Fab、Fv、dsFv、scFv、雙抗體、雙特異性雙抗體及三抗體(triabody)、已共價或非共價連接之抗體片段)。進一步包括至少一部分重鏈可變區及/或至少一部分輕鏈可變區之VH/VL單元亦可稱為「臂」或「半體(hcmimcr)」或「半抗體」。在一些實施例中,半體包括一充足部分重鏈可變區以容許與第二半體形成分子內二硫鍵。在一些實施例中,半體包括節(knob)突變或孔(hole)突變(例如)以容許與包括互補孔突變或節突變之第二半體或半抗體進行異二聚化。下文將進一步討論節突變及孔突變。
在某些實施例中,本文提供之多特異性抗體可係雙特異性抗體。如本文使用之術語「雙特異性抗體」係指包括可結合至一個分子 上之兩個不同表位或可結合至兩個不同分子上之表位之抗原結合域之多特異性抗體。本文亦可將雙特異性抗體稱為具有「雙重特異性(dual specificity)」或為「雙重特異(dual specific)」。例示性雙特異性抗體可結合分子及任何其他抗原。在某些實施例中,結合特異性中之一者係針對分子及另一者係針對CD3。參見,例如,美國專利案第5,821,337號。在某些實施例中,雙特異性抗體可結合至相同分子之兩個不同表位。在某些實施例中,雙特異性抗體可結合至兩個不同分子上之兩個不同表位。雙特異性抗體亦可用以將細胞毒性試劑定位至表現受關注之分子之細胞。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
製造多特異性抗體之技術包含(但不限於)兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之重組共表現(參見Milstein及Cuello,Nature 305:537(1983)、WO 93/08829及Traunecker等人,EMBO J.10:3655(1991))及「節至孔中」改造(參見,例如,美國專利案第5,731,168號、WO2009/089004、US2009/0182127、US2011/0287009、Marvin及Zhu,Acta Pharmacol.Sin.(2005)26(6):649-658及Kontermann(2005)Acta Pharmacol.Sin.,26:1-9)。如本文使用之術語「節至孔中」或「KnH」技術係指藉由在多肽相互作用之界面處將隆凸(節)引入一個多肽中及將空腔(孔)引入另一多肽中以活體外或活體內導引兩個多肽配對在一起之技術。例如,已將KnH引入抗體之Fc:Fc結合界面、CL:CH1界面或VH/VL界面中(參見,例如,US 2011/0287009、US2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431、Zhu等人,1997,Protein Science 6:781-788及WO2012/106587)。在一些實施例中,KnH在製造多特異性抗體期間驅動兩個不同重鏈配對在一起。例如,在Fc區中具有KnH之多特異性抗體可進一步包括連接至每個Fc區之單一可變域,或進一步包括與類似或不同輕鏈可變域配對之不同重鏈可變 域。KnH技術亦可用以將兩個不同受體細胞外域配對在一起或配對包括不同靶識別序列(例如,包含親和體、肽抗體及其他Fc融合)之任何其他多肽序列。
如本文使用之術語「節突變」係指在一多肽與另一多肽相互作用之界面處將隆凸(節)引入該多肽中之突變。在一些實施例中,該另一多肽具有孔突變。
如本文使用之術語「孔突變」係指在一多肽與另一多肽相互作用之界面處將空腔(孔)引入該多肽中之突變。在一些實施例中,該另一多肽具有節突變。下文提供簡明之非限制性討論。
「隆凸」係指至少一個胺基酸側鏈,其突出自第一多肽之界面及因此可定位於相鄰界面(即,第二多肽之界面)之補償性空腔中以便於穩定異多聚物,及藉此(例如)相較於形成同多聚物更傾向於形成異多聚物。隆凸可存在於原始界面中或可經合成引入(例如,藉由改變編碼界面之核酸)。在一些實施例中,改變編碼第一多肽之界面之核酸以編碼隆凸。為此,以編碼至少一個相較於原始胺基酸殘基具有更大側鏈體積之「輸入」胺基酸殘基之核酸置換編碼第一多肽之界面中之至少一個「原始」胺基酸殘基之核酸。應瞭解可具有超過一個原始及相應之輸入殘基。各種胺基殘基之側鏈體積顯示例如在US2011/0287009之表1中。可將引入「隆凸」之突變稱為「節突變」。
在一些實施例中,用於形成隆凸之輸入殘基係選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)之天然生成胺基酸殘基。在一些實施例中,輸入殘基係色胺酸或酪胺酸。在一些實施例中,用於形成隆凸之原始殘基具有小側鏈體積,諸如丙胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈胺酸。
「空腔」係指至少一個凹陷自第二多肽之界面並因此容納第一多肽之相鄰界面上之相應隆凸之胺基酸側鏈。空腔可存在於原始界面 中或可合成引入(例如,藉由改變編碼界面之核酸)。在一些實施例中,改變編碼第二多肽之界面之核酸以編碼空腔。為此,用編碼至少一個相較於原始胺基酸殘基具有更小側鏈體積之「輸入」胺基酸殘基之DNA置換編碼第二多肽之界面中之至少一個「原始」胺基酸殘基之核酸。應瞭解可具有超過一個原始及相應之輸入殘基。在一些實施例中,用於形成空腔之輸入殘基係選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)之天然生成胺基酸殘基。在一些實施例中,輸入殘基係絲胺酸、丙胺酸或蘇胺酸。在一些實施例中,用於形成空腔之原始殘基具有大側鏈體積,諸如酪胺酸、精胺酸、苯丙胺酸或色胺酸。可將引入「空腔」之突變稱為「孔突變」。
隆凸「可定位」於空腔中,此意謂隆凸及空腔分別在第一多肽與第二多肽之界面上之空間位置,且隆凸與空腔之尺寸將使得該隆凸可位於空腔中而不顯著干擾第一與第二多肽在界面處之正常結合。由於隆凸(諸如Tyr、Phe及Trp)通常不自界面之軸線垂直延伸且具有較佳構形,因此在一些情況下,隆凸與相應空腔之對齊可依賴基於三維結構(諸如藉由X射線晶體繞射法或核磁共振(NMR)獲得之三維結構)之一對隆凸/空腔模型。此可使用此項技術中廣泛接受之技術達成。
在一些實施例中,IgG1恆定區中之節突變係T366W(EU編號)。在一些實施例中,IgG1恆定區中之孔突變包括一或多個選自T366S、L368A及Y407V(EU編號)之突變。在一些實施例中,IgG1恆定區中之孔突變包括T366S、L368A及Y407V(EU編號)。
在一些實施例中,IgG4恆定區中之節突變係T366W(EU編號)。在一些實施例中,IgG4恆定區中之孔突變包括一或多個選自T366S、L368A及Y407V(EU編號)之突變。在一些實施例中,IgG4恆定區中之孔突變包括T366S、L368A及Y407V(EU編號)。
亦可藉由以下方式製造多特異性抗體:改造用於製造抗體Fc-異 二聚物分子之靜電轉向效應(WO 2009/089004A1);交聯兩個或更多個抗體或片段(參見,例如,美國專利案第4,676,980號及Brennan等人,Science,229:81(1985));使用白胺酸拉鍊以產生雙特異性抗體(參見,例如,Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992));使用「雙抗體」技術製造雙特異性抗體片段(參見,例如,Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993));及使用單鏈Fv(sFv)二聚物(參見,例如,Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994));及製備如描述於(例如)Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)中之三特異性抗體。
本文亦包括經三個或更多個功能性抗原結合位點改造之抗體(包含「章魚(Octopus)抗體」或「雙重可變域免疫球蛋白」(DVD))(參見,例如,US 2006/0025576A1及Wu等人,Nature Biotechnology(2007))。本文之抗體或片段亦包含包括結合至分子及(另一種)不同抗原之抗原結合位點的「雙重作用(Dual Acting)FAb」或「DAF」(例如,參見,US 2008/0069820)。
如本文使用之術語「單株抗體」係指自一群大體上同源抗體獲得之抗體,即,除可少量存在之可能天然生成突變外,包括該群體之個別抗體係相同。單株抗體係高度特異性,其定向單一抗原位點。此外,相較於包含定向不同決定子(表位)之不同抗體的多株抗體製劑,每個單株抗體定向抗原上之單一決定子。除單株抗體之特異性外,其優勢還在於其可不被其他抗體污染的方式合成。修飾語「單株」指示該抗體角色獲得自大體上同源抗體群,及不應視為需要藉由任何特定方法製造抗體。例如,可藉由Kohler等人(1975)Nature 256:495最先描述之融合瘤方法製造或可藉由重組DNA方法(例如,參見:US 4816567、US 5807715)製造根據本發明使用之單株抗體。該等單株抗體亦可使用(例如)Clackson等人(1991)Nature,352:624-628;Marks等 人(1991)J.Mol.Biol.,222:581-597中描述之技術分離自噬菌體抗體文庫。
本文之單株抗體具體包含「嵌合」抗體,其中一部分重鏈及/或輕鏈係與衍生自特定種類或屬於特定抗體類別或子類之抗體中之相應序列相同或同源,而該(等)鏈之剩餘部分係與衍生自另一種類或屬於另一抗體類別或子類之抗體及此類抗體之片段中之相應序列相同或同源,只要其等顯示所需生物活性即可(US 4816567及Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855)。本文關注之嵌合抗體包含「靈長類化」抗體,其包括衍生自非人類靈長類動物(例如,舊大陸猴、猿類等)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列。
本文之「完整抗體」係一種包括VL與VH域及輕鏈恆定域(CL)與重鏈恆定域CH1、CH2及CH3之抗體。該等恆定域可係天然序列恆定域(例如,人類天然序列恆定域)或其胺基酸序列變體。完整抗體可具有一或多個「效應子功能」,其係指彼等歸因於抗體之Fc恆定區(天然序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區)之生物活性者。抗體效應子功能之實例包含C1q結合;補體依賴性細胞毒性;Fc受體結合;抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC);吞噬作用;及細胞表面受體(諸如B細胞受體及BCR)之下調。
在某些實施例中,可將一或多種胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區內,藉此產生Fc區變體。該Fc區變體可包括在一或多個胺基酸位置包括胺基酸修飾(例如,取代)之人類Fc區序列(例如,人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中,本發明考量具有一些但非全部效應子功能使得其成為其中活體內抗體之半衰期係重要的,但仍有某些效應子功能(諸如補體及ADCC)係多餘或有害的應用之理想候選者之抗體變體。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以證實CDC及/或ADCC活性 之減少/損耗。例如,可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合(因此很可能缺乏ADCC活性),但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之初生細胞NK細胞僅表現Fc(RIII,而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及Fc(RIII。造血細胞上之FcR表現匯總於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)之第464頁之表3中。以評定受關注之分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例係描述於美國專利案第5,500,362號(參見,例如,Hellstrom,I.等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985);5,821,337(參見Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中。或者,可使用非放射性分析方法(參見,例如,用於流動式細胞量測術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA;及CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。針對此類分析適用之效應子細胞包含周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。另一選擇或此外,可於活體內(例如)在動物模型諸如揭示於Clynes等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)之動物模型內評定受關注之分子之ADCC活性。亦可進行C1q結合分析以證實該抗體無法結合C1q並因此缺乏CDC活性。參見,例如,在WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評定補體活化作用,可進行CDC分析(參見,例如,Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996);Cragg,M.S.等人,Blood 101:1045-1052(2003);及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。亦可使用此項技術中已知的方法進行FcRn結合及活體內廓清率/半衰期測定(參見,例如,Petkova,S.B.等人,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
在一些實施例中,可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗 體之Fc部分中以增加IgG結合至新生Fc受體。在某些實施例中,該抗體包括以下三種根據EU編號之突變:M252Y、S254T及T256E(「YTE突變」)(美國專利案第8,697,650號;亦參見Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006))。在某些實施例中,該YTE突變不影響抗體結合至其同源抗原之能力。在某些實施例中,相較於天然(即,非YTE突變體)抗體,該YTE突變增加抗體之血清半衰期。在一些實施例中,相較於天然(即,非YTE突變體)抗體,該YTE突變增加該抗體之血清半衰期達3倍。在一些實施例中,相較於天然(即,非YTE突變體)抗體,該YTE突變增加該抗體之血清半衰期達2倍。在一些實施例中,相較於天然(即,非YTE突變體)抗體,該YTE突變增加該抗體之血清半衰期達4倍。在一些實施例中,相較於天然(即,非YTE突變體)抗體,該YTE突變增加該抗體之血清半衰期達至少5倍。在一些實施例中,相較於天然(即,非YTE突變體)抗體,該YTE突變增加該抗體之血清半衰期達至少10倍。參見,例如,美國專利案第8,697,650號;亦參見Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006)。
在某些實施例中,該YTE突變體提供一種調節抗體之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性的方式。在某些實施例中,該YTEO突變體提供一種調節定向人類抗原之人類化IgG抗體之ADCC活性的方式。參見,例如,美國專利案第8,697,650號;亦參見Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006)。
在某些實施例中,該YTE突變體容許同時調節血清半衰期、組織分佈及抗體活性(例如,IgG抗體之ADCC活性)。參見,例如,美國專利案第8,697,650號;亦參見Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006)。
具有降低效應子功能之抗體包含彼等根據EU編號之Fc區殘基 238、265、269、270、297、327及329中之一或多者之取代者(美國專利案第6,737,056號)。此類Fc突變體包含在根據EU編號之胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者處經取代之Fc突變體,包含根據EU編號之殘基265及297取代成丙胺酸(即,根據EU編號之D265A及N297A)之所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利案第7,332,581號)。在某些實施例中,該Fc突變體包括以下兩種胺基酸取代:D265A及N297A。在某些實施例中,該Fc突變體由以下兩種胺基酸取代組成:D265A及N297A。
在某些實施例中,野生型人類Fc區之位置329(EU編號)(P329)之脯胺酸經甘胺酸或精胺酸或大至足以破壞Fc/Fcγ受體界面內之脯胺酸夾心結構之胺基酸殘基取代,該界面係形成於Fc之P329與FcgRIII之色胺酸殘基W87及W110間(Sondermann等人:Nature 406,267-273(2000年7月20日))。在另一實施例中,Fc變體中之至少一個進一步之胺基酸取代係S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S及在另一實施例中,該至少一個進一步之胺基酸取代係全部根據EU編號之人類IgG1 Fc區之L234A及L235A或人類IgG4 Fc區之S228P及L235E(美國專利案第8,969,526號,以引用之方式將其全部內容併入本文中)。
在某些實施例中,多肽包括野生型人類IgG Fc區之Fc變體,其中該多肽之人類IgG Fc區之P329經甘經胺酸取代及其中該Fc變體包括在人類IgG1 Fc區之L234A及L235A處或在人類IgG4 Fc區之S228P及L235E處之至少兩個進一步之胺基酸取代,及其中根據EU編號編號該等殘基(美國專利案第8,969,526號,以引用之方式將其全部內容併入本文中)。在某些實施例中,包括P329G、L234A及L235A(EU編號)取代之多肽顯示對人類FcγRIIIA及FcγRIIA之降低親和性以下調ADCC至由包括野生型人類IgG Fc區之多肽誘導之ADCC之至少20%及/或下調 ADCP(美國專利案第8,969,526號,以引用之方式將其全部內容併入本文中)。
在一特定實施例中,包括野生型人類Fc多肽之Fc變體之多肽包括三重突變:根據EU編號(P329/LALA)之位置Pro329、L234A及L235A突變之胺基酸取代(美國專利案第8,969,526號,以引用之方式將其全部內容併入本文中)。在特定實施例中,該多肽包括以下胺基酸取代:根據EU編號之P329G、L234A及L235A。
描述具有對FcR之改善或減弱結合之某些抗體變體。(參見,例如’美國專利案第6,737,056號;WO 2004/056312及Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些實施例中,抗體變體包括具有改善ADCC之一或多個胺基酸取代(例如,在Fc區之位置298、333及/或334(EU編號)處之取代)之Fc區。
在一些實施例中,在Fc區中作出之改變導致經改變(即,改善或減弱)之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC),例如,如描述於美國專利案第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人,J.Immunol.164:4178-4184(2000)中。
具有增加之半衰期及改善之對新生Fc受體(FcRn)(其負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))之結合之抗體係描述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包括其中具有一或多種取代之Fc區,該等取代改善Fc區至FcRn之結合。此類Fc變體包含彼等在Fc區殘基中之一或多者處具有取代者:238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434,例如,根據EU編號之Fc區殘基434之取代(美國專利案第7,371,826號)。亦參見Duncan & Winter,Nature 322:738-40 (1988);美國專利案第5,648,260號;美國專利案第5,624,821號;及涉及Fc區變體之其他實例之WO 94/29351。
完整抗體取決於其等重鏈之恆定域之胺基酸序列可被指定至不同「類別」。五種主要類別完整免疫球蛋白抗體為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,及可將此等中之若干者進一步分為「子類」(同型),例如,IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及IgA2。對應於不同類別抗體之重鏈恆定域被分別稱為α、δ、ε、γ及μ。熟知不同類別免疫球蛋白之子單元結構及三維組態。Ig形式包含鉸鏈修飾或無鉸鏈形式(Roux等人(1998)J.Immunol.161:4083-4090;Lund等人(2000)Eur.J.Biochem.267:7246-7256:US 2005/0048572;US 2004/0229310)。
「經半胱胺酸改造之抗體」或「經半胱胺酸改造之抗體變體」係其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代之抗體。經半胱胺酸改造之抗體之硫醇基團可接合(例如,經由連接子)至藥物部分以形成THIOMABTM抗體(即,THIOMABTM抗體藥物接合物(TDC))。在特定實施例中,經取代之殘基出現於該抗體之可獲得之位點處。藉由以半胱胺酸取代彼等殘基,藉此將反應性硫醇基團定位於該抗體之可獲得之位點處及可用以將該抗體接合至其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)以產生如本文進一步描述之免疫接合物。例如,THIOMABTM抗體可係一種在輕鏈(例如,根據Kabat編號之G64C、I106C、R108C、K149C或R142C)中或在重鏈(例如,根據Kabat編號之HC-D101C、HC-V184C或HC-T205C或根據EU編號之HC-T114C、HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-E382C、HC-S424C、HC-N434C及HC-Q438C(即,根據Kabat編號之HC-A136C係根據EU編號之HC-A140C)中具有非半胱胺酸天然殘基至半胱胺酸之單一突變的抗體(參見圖1B))。在特定實例中,THIOMABTM抗體在重鏈或者輕鏈中 具有單一半胱胺酸突變使得每個全長抗體(即,具有兩個重鏈及兩個輕鏈之抗體)具有兩個被改造之半胱胺酸殘基。
「ErbB受體」係一種受體蛋白酪胺酸激酶,其屬於ErbB受體家族,該家族之成員係細胞生長、分化及存活之重要介體。該ErbB受體家族包含四個不同成員,其包含表皮細胞生長因子受體(EGFR、ErbB1、HER1)、HER2(ErbB2或p185neu)、HER3(ErbB3)及HER4(ErbB4或tyro2)。已使用人類乳房腫瘤細胞系SKBR3表徵一組抗ErbB2抗體(Hudziak等人(1989)Mol.Cell.Biol.9(3):1165-1172)。用稱為4D5之抗體獲得最大抑制,4D5抑制細胞增殖達56%。在此分析中,該組中之其他抗體減少細胞增殖至較小程度。進一步發現該抗體4D5可使ErbB2過表現之乳房腫瘤細胞系對TNF-α之細胞毒性效應敏感(US 5677171)。Hudziak等人中討論之抗ErbB2抗體進一步表徵在於Fendly等人(1990)Cancer Research 50:1550-1558;Kotts等人(1990)In Vitro 26(3):59A;Sarup等人(1991)Growth Regulation 1:72-82;Shepard等人,J.(1991)Clin.Immunol.11(3):117-127;Kumar等人(1991)Mol.Cell.Biol.11(2):979-986;Lewis等人(1993)Cancer Immunol.Immunother.37:255-263;Pietras等人(1994)Oncogene 9:1829-1838;Vitetta等人(1994)Cancer Research 54:5301-5309;Sliwkowski等人(1994)J.Biol.Chem.269(20):14661-14665;Scott等人(1991)J.Biol.Chem.266:14300-5;D'souza等人Proc.Natl.Acad.Sci.(1994)91:7202-7206;Lewis等人(1996)Cancer Research 56:1457-1465;及Schaefer等人(1997)Oncogene 15:1385-1394中。該ErbB受體通常包括細胞外域,其可結合ErbB配體;親脂性跨膜域;守恆細胞內酪胺酸激酶域;及攜載數個可經磷酸化之酪胺酸殘基之羧基端信號域。該ErbB受體可係「天然序列」ErbB受體或其「胺基酸序列變體」。較佳地,該ErbB受體係天然序列人類ErbB受體。因此,「ErbB受體家族之成 員」包含EGFR(ErbB1)、ErbB2、ErbB3、ErbB4。
術語「胺基酸序列變體」係指具有胺基酸序列在一定程度上不同於天然序列之多肽。該等胺基酸序列變體在天然胺基酸序列之胺基酸序列內之某些位置具有取代、缺失及/或插入。藉由習知名稱、一個字母及三個字母編碼指定胺基酸。
例如,在某些實施例中,胺基酸序列變體將具有與天然ErbB配體之至少一個受體結合域或與天然ErbB受體之至少一個配體結合域至少約70%序列一致性,及較佳地,其將係至少約80%,更佳地,具有與此類受體或配體結合域至少約90%序列同源性。
「序列一致性」係定義為在比對序列並引入間隙後(若需要)以達成最大百分率序列一致性後胺基酸序列變體中相同之殘基的百分率。此項技術中熟知用於比對之方法及電腦程式。一種此類電腦程式係於1991年12月10日在美國版權局(United States Copyright Office)(Washington,DC 20559)以使用者檔申請之Genentech,Inc.授權之「Align 2」。
「天然抗體」係通常約150,000道耳頓之異四聚醣蛋白,其包括兩個相同之輕(L)鏈及兩個相同之重(H)鏈。每個輕鏈係藉由一個共價二硫鍵連接至重鏈,同時二硫鍵之數量在不同免疫球蛋白同型之重鏈間變化。每個重鏈及輕鏈亦具有規律性間隔之鏈內二硫橋。每個重鏈在一端具有可變域(VH),接著係許多恆定域。每個輕鏈在一端具有可變域(VL)及在其另一端具有恆定域。該輕鏈之恆定域與該重鏈之第一恆定域對齊,及該輕鏈可變域係與該重鏈之可變域對齊。據信特定胺基酸殘基在輕鏈與重鏈可變域間形成界面。
術語「可變」係指可變域之某些部分在抗體間之序列中廣泛不同及係用於每個特定抗體針對其特定抗原之結合及特異性中的事實。然而,該可變性非平均分佈於抗體之整個可變域上。其係集中於輕鏈 與重鏈可變域兩者中被稱為高度可變區之三個片段中。可變域之更高度守恆部分稱為框架區(FR)。天然重鏈及輕鏈之可變域各包括四個主要採用由三個高度可變區連接之β折疊組態之FR,高度可變區形成連接β折疊結構及在一些情況下形成β折疊結構之部分之迴路。藉由FR將每個鏈中之高度可變區及與來自其他鏈之高度可變區近距離地放置在一起,有助於形成抗體之抗原結合位點(參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)。該等恆定域係非直接涉及抗體結合至抗原,但顯示各種效應子功能,諸如抗體參與抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)。
當本文使用時,術語「高度可變區」係指抗體之負責抗原結合之胺基酸殘基。該高度可變區通常包括來自「互補性決定區」或「CDR」之胺基酸殘基(例如,輕鏈可變域中之殘基24至34(L1)、50至56(L2)及89至97(L3)及重鏈可變域中之31至35(H1)、50至65(H2)及95至102(H3);Kabat等人同上)及/或彼等來自「高度可變迴路」之殘基(例如,輕鏈可變域中之殘基26至32(L1)、50至52(L2)及91至96(L3)及重鏈可變域中之26至32(H1)、53至55(H2)及96至101(H3);Chothia及Lesk(1987)J.Mol.Biol.,196:901-917)。「框架區」或「FR」殘基係彼等除如本文定義之高度可變區殘基外之可變域殘基。
抗體之木瓜蛋白酶消化產生兩個各具有單一抗原結合位點之相同抗原結合片段(稱為「Fab」片段)及剩餘之「Fc」片段,其等名稱反映其易於結晶之能力。胃蛋白酶處理產生具有兩個抗原結合位點且仍可交聯抗原之F(ab’)2片段。
「Fv」係含有完整抗原識別及抗原結合位點之最小抗體片段。此區由具有緊密非共價結合之一條重鏈及一條輕鏈可變域之二聚物組 成。在此組態中,每個可變域之三個高度可變區互相作用以在VH-VL二聚物之表面上界定抗原結合位點。總而言之,該等六個高度可變區賦予抗體抗原結合特異性。然而,甚至單一可變域(或包括僅三個對抗原具有特異性之高度可變區之Fv之一半)具有識別並結合抗原之能力,然而親和性低於整個結合位點。
該Fab片段亦含有輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域(CH1)。Fab’片段由於在包含來自抗體鉸鏈區之一或多個半胱胺酸之重鏈CH1域之羧基端添加少量殘基而不同於Fab片段。本文針對Fab’指定Fab’-SH,其中恆定域之該(等)半胱胺酸殘基具有至少一個游離硫醇基團。F(ab’)2抗體片段最初製造成其間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab’片段對。亦已知抗體片段之其他化學偶合。
可將來自任何脊椎動物種類之抗體之「輕鏈」基於其恆定域之胺基酸序列指定至兩種明顯不同之類型(稱為kappa(κ)及lambda(λ))中之一者。
「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包括抗體之VH及VL域,其中此等域係存在於單一多肽鏈中。較佳地,該Fv多肽進一步包括在VH與VL域間之多肽連接子,其使scFv可形成所需結構以供抗原結合。針對scFv之綜述,參見Plückthun之The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore編,Springer-Verlag,New York,第269至315頁(1994)。抗ErbB2抗體scFv片段係描述於WO 93/16185;美國專利案第5571894號;及第5587458號中。
非人類(例如,囓齒動物)抗體之「人類化」形式係含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列之嵌合抗體。人類化係一種將鼠類抗原結合資訊轉移至非免疫性人類抗體接受體(acceptor)之方法及已導致許多治療適用之藥物。人類化方法通常起始於將所有六個鼠類互補性決定區(CDR)轉移至人類抗體框架上(Jones等人,(1986)Nature 321:522- 525)。此等經CDR移植之抗體通常不保留其對抗原結合之原始親和性,且事實上,親和性通常嚴重受損。除CDR外,亦必須併入選擇非人類抗體框架殘基以保持適當之CDR構形(Chothia等人(1989)Nature 342:877)。已顯示為支撐經移植之CDR之結構性構形而將關鍵小鼠框架殘基轉移至人類接受體會恢復抗原結合及親和性(Riechmann等人(1992)J.Mol.Biol.224,487-499;Foote及Winter,(1992)J.Mol.Biol.224:487-499;Presta等人(1993)J.Immunol.151,2623-2632;Werther等人(1996)J.Immunol.Methods 157:4986-4995;及Presta等人(2001)Thromb.Haemost.85:379-389)。大多數情況下,人類化抗體係人類免疫球蛋白(接受者抗體),其中來自接受者之高度可變區之殘基經來自諸如具有所需特異性、親和性及容量之小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之非人類種類(供體抗體)之高度可變區之殘基置換。在一些實例中,人類免疫球蛋白之框架區(FR)殘基經相應之非人類殘基置換。此外,人類化抗體可包括未在接受者抗體中或在供體抗體中發現之殘基。作出此等修飾以進一步改善抗體性能。通常,該人類化抗體將大體上包括全部至少一個及通常係兩個可變域,其中高度可變迴路中之全部或大體上全部對應於彼等非人類免疫球蛋白之高度可變迴路者及FR中之全部或大體上全部係彼等人類免疫球蛋白序列之FR者。該人類化抗體視需要亦將包括免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分,通常係人類免疫球蛋白之一部分。其他細節參見US 6407213;Jones等人(1986)Nature,321:522-525;Riechmann等人(1988)Nature 332:323-329;及Presta,(1992)Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596。
「游離半胱胺酸胺基酸」係指已被改造為親代抗體、具有硫醇官能基(-SH)及非配對成分子內或分子間二硫橋之半胱胺酸胺基酸殘基。
術語「硫醇反應性值」係對游離半胱胺酸胺基酸之反應性之定 量表徵。該硫醇反應性值係經半胱胺酸改造之抗體中之與硫醇反應性試劑反應之游離半胱胺酸胺基酸之百分率,及其被轉化為最大值1。例如,經半胱胺酸改造之抗體上之與硫醇反應性試劑(諸如生物素-馬來醯亞胺試劑)以100%之產率反應以形成經生物素標記之抗體之游離半胱胺酸胺基酸具有1.0的硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以90%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.9之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以80%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.8之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以70%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.7之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以60%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.6之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以50%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.5之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以40%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.4之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以30%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.3之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以20%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.2之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之與硫醇反應性試劑以10%產率反應之另一半胱胺酸胺基酸具有約0.1之硫醇反應性值。被改造為相同或不同之親代抗體之完全不與硫醇反應性試劑反應之另一半胱胺酸胺基酸具有0之硫醇反應性值。可藉由ELISA分析、質譜術、液相層析法、自放射攝影術或其他定量分析測試進行特定半胱胺酸之硫醇反應性值之測定。
「親代抗體」係一種包括其中一或多個胺基酸殘基係經一或多個半胱胺酸殘基置換之胺基酸序列之抗體。該親代抗體可包括天然或 是野生型序列。相對於抗體之其他天然、野生型或經修飾之形式,該親代抗體可具有業已存在之胺基酸序列修飾(諸如,添加、缺失及/或取代)。親代抗體可定向受關注之靶抗原(生物重要之多肽)。亦預期定向非多肽抗原(諸如與腫瘤相關之醣脂類抗原;參見US 5091178)之抗體。
例示性親代抗體包含對細胞表面及跨膜受體及腫瘤相關抗原(TAA)具有親和性及選擇性之抗體。
經「分離」之抗體係一種已自其自然環境之組分識別及分離及/或回收之抗體。其自然環境之污染物組分係將干擾抗體之診斷或治療用途之材料,且可包含酶、激素及其他蛋白性或非蛋白性溶質。在較佳實施例中,如藉由勞立法(Lowry method)測定,抗體將經純化(1)至抗體之超過95重量%,及更佳係超過99重量%,(2)至足以藉助於轉杯定序儀獲得N端或內部胺基酸序列中之至少15個殘基之程度,或(3)至藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用考馬斯亮藍(Coomassie blue)或(較佳地)銀著色劑之同源性。由於抗體之自然環境之至少一種組分將係不存在的,因此經分離之抗體包含在重組細胞內原位之抗體。然而,通常,將藉由至少一個純化步驟製備經分離之抗體。
「結合」受關注之分子靶或抗原(例如,ErbB2抗原)之抗體係可以足夠親和性結合抗原之抗體,該足夠親和性使得該抗體可用於靶向表現該抗原之細胞。其中該抗體係結合ErbB2之抗體,其相對於其他ErbB受體將通常優先結合ErbB2且可係不與其他蛋白質(諸如EGFR、ErbB3或ErbB4)顯著交叉反應之抗體。在此類實施例中,如藉由經螢光活化之細胞分選(FACS)分析或放射免疫沉澱法(RIA)測定,抗體結合至此等非ErbB2蛋白(例如,細胞表面結合至內源性受體)之程度將小於10%。有時,(例如)如描述於Schecter等人(1984)Nature 312:513及Drebin等人(1984)Nature 312:545-548中,該抗ErbB2抗體將不與大 鼠neu蛋白顯著交叉反應。
針對本發明包含之抗體之分子靶包含CD蛋白及其配體,諸如(但不限於):(i)CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD34、CD40、CD79α(CD79a)及CD79β(CD79b);(ii)ErbB受體家族之成員,諸如EGF受體、HER2、HER3或HER4受體;(iii)細胞黏著分子,諸如LFA-1、Mac1、p150,95、VLA-4、ICAM-1、VCAM及α-v/B-3整聯蛋白,包含其α或β子單元(例如,抗CD11a、抗CD18或抗CD11b抗體);(iv)生長因子,諸如VEGF;IgE;血族抗原;flk2/flt3受體;肥胖(OB)受體;mpl受體、CTLA-4;蛋白C;BR3;c-met;組織因子等;及(v)細胞表面及跨膜腫瘤相關抗原(TAA)。
術語「抗Ly6E抗體」及「結合至Ly6E之抗體」係指可以足夠親和性結合Ly6E而可用作靶向Ly6E之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)量測,抗Ly6E抗體結合至無關之非Ly6E蛋白之程度係小於該抗體結合至Ly6E之程度的約10%。在某些實施例中,結合至Ly6E之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗Ly6E抗體結合至在不同種類之Ly6E間保守之Ly6E的表位。
術語「抗STEAP1抗體」及「結合至STEAP1之抗體」係指一種可以足夠親和性結合STEAP1而可用作靶向STEAP1之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗STEAP1抗體結合至無關之非STEAP1蛋白之程度係小於該抗體結合至STEAP1之程度的約10%。在某些實施例中,結合至STEAP1之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自 10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗STEAP1抗體結合至在不同種類之STEAP1間保守之STEAP1的表位。
術語「抗CD79b抗體」及「結合至CD79b之抗體」係指一種可以足夠親和性結合CD79b而可用作靶向CD79b之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗CD79b抗體結合至無關之非CD79b蛋白之程度係小於該抗體結合至CD79b之程度的約10%。在某些實施例中,結合至CD79b之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗CD79b抗體結合至在不同種類之CD79b間保守之CD79b的表位。
術語「抗MUC16抗體」及「結合至MUC16之抗體」係指一種可以足夠親和性結合MUC16而可用作靶向MUC16之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗MUC16抗體結合至無關之非MUC16蛋白之程度係小於該抗體結合至MUC16之程度的約10%。在某些實施例中,結合至MUC16之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗MUC16抗體結合至在不同種類之MUC16間保守之MUC16的表位。
術語「抗HER2抗體」及「結合至HER2之抗體」係指一種可以足夠親和性結合HER2而可用作靶向HER2之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗HER2抗體結合至無關之非HER2蛋白之程度係小於該抗體結合至HER2之程 度的約10%。在某些實施例中,結合至HER2之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗HER2抗體結合至在不同種類之HER2間保守之HER2的表位。
術語「抗CD22抗體」及「結合至CD22之抗體」係指一種可以足夠親和性結合CD22而可用作靶向CD22之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗CD22抗體結合至無關之非CD22蛋白之程度係小於該抗體結合至CD22之程度的約10%。在某些實施例中,結合至CD22之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)。在某些實施例中,抗CD22抗體結合至在不同種類之CD22間保守之CD22的表位。
術語「抗CD79b抗體」及「結合至CD79b之抗體」係指一種可以足夠親和性結合CD79b而可用作靶向CD79b之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗CD79b抗體結合至無關之非CD79b蛋白之程度係小於該抗體結合至CD79b之程度的約10%。在某些實施例中,結合至CD79b之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗CD79b抗體結合至在不同種類之CD79b間保守之CD79b的表位。
術語「抗NaPi2b抗體」及「結合至NaPi2b之抗體」係指一種可以足夠親和性結合NaPi2b而可用作靶向NaPi2b之診斷及/或治療試劑之抗體。在一實施例中,如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)測定,抗 NaPi2b抗體結合至無關之非NaPi2b蛋白之程度係小於該抗體結合至NaPi2b之程度的約10%。在某些實施例中,結合至NaPi2b之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如,10-8M或更小,例如自10-8M至10-13M;例如自10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施例中,抗NaPi2b抗體結合至在不同種類之NaPi2b間保守之NaPi2b的表位。
除非另有指示,否則術語「單株抗體4D5」係指一種具有鼠類4D5抗體(ATCC CRL 10463)之或衍生自其之抗原結合殘基之抗體。例如,該單株抗體4D5可係鼠類單株抗體4D5或其變體(諸如人類化4D5)。例示性人類化4D5抗體包含如在美國專利案第5821337號中之huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7及huMAb4D5-8(曲妥珠單抗,HERCEPTIN®)。
除非另有指示,否則術語「單株抗體7C2」或「7C2」係指一種具有7C2.v2.2.LA抗體之或衍生自其之抗原結合殘基之抗體。該7C2抗體係抗HER2抗體。
「hu7C2.v.2.2.LA抗體藥物接合物」(hu7C2 ADC)係指接合至藥物之人類化7C2抗體。在特定實施例中,該人類化7C2抗體經由被改造之半胱胺酸及連接子接合至藥物。在特定實施例中,該人類化7C2 ADC可與一或多種額外之選自曲妥珠單抗(Herceptin®)、T-DM1(Kadcyla®)及帕妥珠單抗(pertuzumab)(Perjeta®)之治療試劑共投與。在一些實施例中,hu7C2 ADC係與曲妥珠單抗共投與。在一些實施例中,hu7C2 ADC係與T-DM1共投與。在一些實施例中,hu7C2 ADC係與帕妥珠單抗共投與。在一些實施例中,hu7C2 ADC係與曲妥珠單抗及帕妥珠單抗共投與。在一些實施例中,hu7C2 ADC係與T-DM1及帕 妥珠單抗共投與。
術語「治療」係指治療性治療及預防性(prophylactic或preventative)方法,其中該標的係預防或減慢(減少)非所需之生理變化或疾病,諸如癌症之發展或擴散。出於本發明之目的,有利或所需之臨床結果包含(但不限於)無論可偵測或不可偵測之症狀之緩解、疾病程度之減輕、穩定(即,不惡化)之疾病狀態、疾病進展之延遲或減慢、疾病狀態之改善或緩和及緩解(無論部分或完全)。「治療」亦可意謂相較於若未接受治療之預期存活而延長存活。彼等需治療者包含彼等已患有病症或疾病者及彼等易患有該病症或疾病者或彼等其中待預防該病症或疾病者。
術語「治療有效量」係指有效治療哺乳動物中之疾病(disease或disorder)之藥物之量。在癌症之情況下,藥物之該治療有效量可減少癌細胞數量;減小腫瘤尺寸;抑制(即,一定程度上減慢或較佳係停止)癌細胞滲透入周邊器官;抑制(即,一定程度上減慢或較佳係停止)腫瘤轉移;抑制(一定程度上)腫瘤生長;及/或(一定程度上)舒解一或多種與該癌症相關之症狀。至該藥物可阻止現存癌細胞之生長及/或殺死現存癌細胞之程度,其可係細胞增殖抑制性及/或細胞毒性的。針對癌症治療,可(例如)藉由評定疾病進展之時間(TTP)及/或測定反應速率(RR)量測效用。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物中之以失調之細胞生長為典型特徵之生理病症。「腫瘤」包括一或多種癌性細胞。癌症之實例包含(但不限於)癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌症更特定實例包含鱗狀細胞癌(例如,上皮鱗狀細胞癌)、包含小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)之肺癌、肺之腺癌及肺之鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、包含胃腸癌之胃部或胃癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、 肝腫瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎臟或腎癌、前列腺癌、陰門癌、甲狀腺癌、肝臟癌、肛門癌、陰莖癌及頭頸癌。
「表現ErbB之癌症」係一種包括細胞表面存在ErbB蛋白之細胞之癌症。「表現ErbB2之癌症」係一種癌症,該癌症在其細胞表面產生足夠濃度之ErbB2使得抗ErbB2抗體可結合至該細胞並針對該癌症產生治療效應。
「過表現」抗原性受體之癌症係一種相較於相同組織類型之非癌性細胞而在其細胞表面顯著具有更高濃度受體(諸如ErbB2)之癌症。此種過表現可由基因擴增或由增加之轉錄或轉譯引起。可藉由評估存在於細胞表面上之受體蛋白之增加濃度(例如,經由免疫組織化學分析;IHC)在診斷或預後性分析中判定受體過表現。另一選擇或此外,技術人員可(例如)經由螢光原位雜交(FISH;參見WO 98/45479)、南方墨點法或諸如即時定量PCR(RT-PCR)之聚合酶鏈反應(PCR)技術量測細胞中之編碼受體之核酸之濃度。
「化學治療」係使用在癌症治療中適用之化學治療試劑。
「化學治療試劑」係一種無關作用機制而在癌症治療中適用之化學化合物。如本文使用,術語「藥物」或「藥物部分」係化學治療試劑之實例。因此,本文中描述之THIOMABTM抗體包括經半胱胺酸改造之抗體、連接子及藥物,該藥物可係任何本文描述之化學治療試劑。
化學治療試劑之類別包含(但不限於):烷基化試劑、抗代謝物、紡錘體抑制劑植物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓樸異構酶抑制劑、抗體、光敏劑及激酶抑制劑。化學治療試劑之實例包含:厄洛替尼(erlotinib)(TARCEVA®,Genentech/OSI Pharm.)、多西他賽(docetaxel)(TAXOTERE®,Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶、5-氟尿 嘧啶,CAS號51-21-8)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®,Lilly)、PD-0325901(CAS號391210-10-9,Pfizer)、順鉑(cisplatin)(順-二胺,二氯化鉑(II),CAS號15663-27-1)、卡鉑(carboplatin)(CAS號41575-94-4)、紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL®,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-側氧基-2,3,4,6,8-五氮雜雙環[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲醯胺,CAS號85622-93-1,TEMODAR®,TEMODAL®,Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯)苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺、NOLVADEX®,ISTUBAL®,VALODEX®)及多柔比星(doxorubicin)(ADRIAMYCIN®)、Akti-1/2、HPPD及雷帕黴素(rapamycin)。
化學治療試劑之更多實例包含:奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN®,Sanofi)、硼替佐米(bortezomib)(VELCADE®,Millennium Pharm.)、索坦(sutent)(SUNITINIB®,SU11248,Pfizer)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®,Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)(GLEEVEC®,Novartis)、XL-518(MEK抑制劑,Exelixis,WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制劑,AZD6244,Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制劑,Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制劑,Novartis)、XL-147(PI3K抑制劑,Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®,AstraZeneca)、亞葉酸鈣(leucovorin)(醛葉酸)、雷帕黴素(西羅莫司(sirolimus),RAPAMUNE®,Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®,GSK572016,Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafarnib)(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR®,BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®,AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(CAMPTOSAR®,CPT-11,Pfizer)、替吡法尼(tipifarnib) (ZARNESTRATM,Johnson & Johnson)、ABRAXANETM(無聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor))、紫杉醇之經白蛋白改造之奈米顆粒調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、凡德他尼(vandetanib)(rINN,ZD6474,ZACTIMA®,AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU 5271;Sugen)、替西羅莫司(temsirolimus)(TORISEL®,Wyeth)、帕唑帕尼(pazopanib)(GlaxoSmithKline)、莰佛胺(canfosfamide)(TELCYTA®,Telik)、噻替哌(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN®,NEOSAR®);烷基磺酸鹽,諸如硫酸布他卡因(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan);氮丙啶,諸如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及烏瑞替哌(uredopa);伸乙亞胺類及甲基蜜胺類,包含六甲蜜胺、三伸乙蜜胺、三伸乙磷醯胺、三伸乙硫代磷醯胺及三甲基蜜胺;乙醯素(特別係拉他辛(bullatacin)及拉他辛酮(bullatacinone));喜樹鹼(camptothecin)(包含合成類似物拓撲替康(topotecan));苔蘚蟲素(bryostatin);卡裹斯他汀(callystatin);CC-1065(包含其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物);念珠藻素(特別係念珠藻素1及念珠藻素8);尾海兔素;倍癌黴素(包含合成類似物KW-2189及CB1-TM1);艾榴塞洛素;水鬼蕉鹼(pancratistatin);葡枝珊瑚醇(sarcodictyin);海綿素(spongistatin);氮芥,諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、鹽酸甲氧氮芥、黴法蘭(melphalan)、新氮芥(novembichin)、膽甾醇對苯乙酸氮芥(phenesterine)、松龍苯芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard);亞硝基脲,諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine); 抗生素,諸如烯二炔類抗生素(例如,卡奇黴素、卡奇黴素γ1I、卡奇黴素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186);達內黴素(dynemicin)、達內黴素A;雙膦酸鹽類,諸如氯膦酸鹽;埃斯培拉黴素(esperamicin);及新製癌菌素發色團及相關之色蛋白烯二炔類抗生素發色團)、阿拉克黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、氨茴黴素(authramycin)、重氮絲胺酸、博來黴素(bleomycins)、放線菌素(cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、噬癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、嗎啉基-多柔比星、氰基嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及脫氧阿黴素)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、諸如絲裂黴素C之絲裂黴素(mitomycins)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、泊非羅黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲黴素(strcptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物,諸如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物,諸如二甲葉酸、胺甲葉酸、喋羅呤、三甲曲沙;嘌呤類似物,諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤;嘧啶類似物,諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、伊諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine);及雄激素,諸如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostarolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone);抗腎上腺,諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛斯坦(trilostane);葉酸補充物,諸如亞葉酸;醋葡醛內酯(aceglatone);醛磷醯胺糖苷;胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid);恩尿嘧啶(eniluracil);安吖啶(amsacrine);百思布啶(bestrabucil);比生群(bisantrene);依達曲沙(edatraxate);狄福胺(defofamine);秋水仙胺(demecolcine);亞絲醌(diaziquone);依氟鳥胺酸(elfornithine);依利醋銨(elliptinium acetate);埃博黴素(epothilone);依託格魯(etoglucid);硝酸鎵;羥基脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);羅尼達寧(lonidainine);美登醇,諸如美登素及安絲菌素(ansamitocins);丙胱腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌達醇(mopidanmol);硝林(nitraerine);噴司他汀(pentostatin);苯奈米特(phenamet);吡柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);鬼臼酸(podophyllinic acid);2-乙基醯肼;甲基苄肼;PSK®多糖複合體(JHS Natural Products,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);利索新(rhizoxin);西佐喃(sizofiran);鍺螺胺(spirogermanium);細偶氮酸(tenuazonic acid);三亞胺醌;2,2',2"-三氯三乙胺;新月毒素(T-2毒素、韋拉卡瑞A(verracurin A)、桿孢菌素A及蛇形菌素);乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine);達卡巴嗪(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴衛矛醇(mitolactol);哌血生(pipobroman);加賽特辛(gacytosine);阿拉伯糖苷(Ara-C);環磷醯胺;噻替哌;6-硫代鳥嘌呤;巰基嘌呤;甲胺喋呤;鉑類似物,諸如順鉑及卡鉑;長春花鹼(vinblastine);依托泊苷(etoposide)(VP-16);異環磷醯胺;米托蒽醌;長春新鹼(vincristine);長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE®);諾消靈(novantrone);替尼泊苷(teniposide);依達曲沙(edatrexate); 道諾黴素(daunomycin);胺蝶呤(aminopterin);卡培他濱(capecitabine)(XELODA®,Roche);伊班膦酸鹽(ibandronate);CPT-11;拓撲異構酶抑制劑RFS 2000;二氟甲基鳥胺酸(DMFO);類視色素,諸如視黃酸;及任何上文之醫藥上可接受之鹽酸及衍生物。
如本文使用之術語「細胞毒性試劑」係指抑制或阻止細胞之功能及/或引起細胞之破壞之物質。化學治療試劑(即,「藥物」或「藥物部分」)可係細胞毒性試劑。因此,其中本文描述之THIOMABTM抗體包括經半胱胺酸改造之抗體、連接子及藥物,該藥物可係本文描述之任何細胞毒性試劑。術語旨在包含放射性同位素(例如,211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、60C及Lu之放射性同位素)、化學治療試劑及毒素,諸如細菌、真菌、植物或動物起源之小分子毒素或酶活性毒素,包含其合成類似物及衍生物。
「噬菌體顯示」係一種使變體多肽顯示為融合至噬菌體表面上之外殼蛋白之融合蛋白,例如,絲狀噬菌體、顆粒之技術。噬菌體顯示之一種效用在於可對彼等以高親和性結合至靶分子之序列者快速並有效地分選無規化蛋白變體之大文庫的事實。已使用噬菌體上之肽及蛋白文庫之顯示以篩選數百萬之多肽以篩選出具有特異性結合性質者。已使用多價噬菌體顯示方法以顯示小無規肽及小蛋白,通常透過融合至絲狀噬菌體之pIII或pVIII(Wells及Lowman,(1992)Curr.Opin.Struct.Biol.,3:355-362及在其中引用之參考文獻)。在單價噬菌體顯示中,蛋白或肽文庫係融合至噬菌體外殼蛋白或其部分,及在野生型蛋白之存在下在低濃度下表現。結合性效應相對於多價噬菌體減小,使得分選係基於內在配體親和性,及使用噬菌粒載體,其簡單化DNA操作。Lowman及Wells,Methods:A companion to Methods in Enzymology,3:205-0216(1991)。噬菌體顯示包含用於產生抗體類分子之技術(Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001) Immunobiology,第5版,Garland Publishing,New York,第627-628頁;Lee等人)。
「噬菌粒」係具有細菌起源之複製(例如,Co1E1)及噬菌體之基因間區之複本之質體載體。噬菌粒可用於任何已知噬菌體(包含絲狀噬菌體及人字噬菌體)上。該質體通常亦將含有針對抗生素抗性可選擇之標記。選殖至此等載體中之DNA片段可作為質體傳播。當攜載此等載體之細胞具有所有生產噬菌體顆粒所需之基因時,質體之複製模式變化至旋轉循環複製以形成一股質體DNA及封裝噬菌體顆粒之複本。該噬菌體可形成傳染性或非傳染性噬菌體顆粒。此術語包含含有連接至異源性多肽基因噬菌體外殼蛋白基因或其片段作為基因融合使得該異源性多肽顯示於該噬菌體顆粒表面上之噬菌粒。
「連接子」、「連接子單元」或「連接」意謂包括將抗體共價連接至藥物部分之共價鍵或原子鏈之化學部分。在各種實施例中,該連接子指定為L。連接子包含二價基團,諸如烷基二基、伸芳基、伸雜芳基、諸如-(CR2)nO(CR2)n-之部分、烷氧基(例如,聚伸乙基氧基、PEG、聚亞甲基氧基)及烷基胺基(例如,聚乙胺基、JeffamineTM)之重複單元;及二酸酯及醯胺,包含琥珀酸酯、琥珀醯胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯及己醯胺。
術語「標記」意謂可共價連接至抗體且具有以下功能之任何部分:(i)提供可偵測信號;(ii)與第二標記相互作用以修飾由該第一或第二標記提供之可偵測信號(例如,FRET(螢光共振能量轉移);(iii)穩定化與抗原或配體之相互作用或增加與抗原或配體之結合之親和性;(iv)藉由電荷、疏水性、形狀或其他物理參數影響移動性(例如,電泳移動性或細胞滲透性);或(v)提供捕捉部分以調節配體親和性、抗體/抗原結合或離子錯合。
本文使用之立體化學定義及慣例通常遵循S.P.Parker編, McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York;及Eliel,E.及Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley & Sons,Inc.,New York。許多有機化合物以光學活性形式存在,即,其等具有旋轉平面偏光之平面之能力。在描述光學活性化合物時,使用前綴D及L或R及S以指示分子關於其對掌性中心之絕對組態。使用前綴d及l或(+)及(-)以指定該化合物旋轉平面偏光之符號,(-)或l意謂該化合物係左旋的。加(+)或d前綴之化合物係右旋的。針對給定之化學結構,此等立體異構物係相同,只是其等彼此互為鏡像。特異性立體異構物亦可稱為對映體及此類異構物之混合物通常稱為對映性混合物。對映體之50:50混合物稱為外消旋混合物或外消旋物,其可發生其中化學反應或方法中無立體選擇性或立體特異性。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指兩種對映性種類之等莫耳混合物,該混合物缺乏光學活性。
如本文使用之短語「醫藥上可接受之鹽」係指ADC之醫藥上可接受之有機或無機鹽。例示性鹽包含(但不限於)硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、葡萄糖二酸鹽、蟻酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(即,1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))鹽。醫藥上可接受之鹽可涉及包含另一分子(諸如乙酸鹽離子、琥珀酸鹽離子或其他相對離子)。該相對離子可係任何穩定親代化合物上之電荷之有機或無機部分。此外,醫藥上可接受之鹽可在其結構內具有超過一個帶電原子。其中多個帶電原子係醫藥上可接受之鹽之一部分之實例可具有多個相對離子。因此,醫 藥上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
「醫藥上可接受之溶劑合物」係指一或多種溶劑分子與ADC之結合。形成醫藥上可接受之溶劑合物之溶劑之實例包含(但不限於)水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。
經半胱胺酸改造之抗體
本發明之化合物包含其中野生型或親代抗體之一或多個胺基酸經半胱胺酸胺基酸(即,及「經改造之半胱胺酸」)置換(即,「經取代」或「經突變」)之經半胱胺酸改造之抗體。任何形式之抗體皆可被如此改造(即,經突變)。例如,親代單株抗體可被改造以形成「THIOMABTM抗體」。THIOMABTM抗體之一項實例係具有被改造之半胱胺酸之抗體片段(即,Fab)。此Fab THIOMABTM抗體可稱為「ThioFab」。應注意單一位點突變在ThioFab中產生被單一改造之半胱胺酸殘基,同時單一位點突變在THIOMABTM抗體中因IgG抗體之二聚性質而產生兩個被改造之半胱胺酸殘基。針對新引入之被改造之半胱胺酸硫醇基團之反應性評估具有被改造之半胱胺酸(Cys)殘基之突變體。該硫醇反應性值係在0至1.0之範圍內之相對數值術語並可針對任何經半胱胺酸改造之抗體進行量測。本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.0至1.0之範圍內。具體言之,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.1至1.0之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.0至0.1、0.1至0.5、0.1至0.6、0.1至0.7、0.1至0.8、0.1至0.9或0.1至1.0之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.2至1.0、0.3至1.0、0.4至1.0、0.5至1.0、0.6至1.0、0.7至1.0或0.8至1.0之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.6至1.0之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.7至1.0之範圍 內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.8至10之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.5至0.8之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.5至0.9之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.5至0.7之範圍內。在某些實施例中,本發明之經半胱胺酸改造之抗體之硫醇反應性值係在0.5至1.0之範圍內。
本發明之設計、選擇及製備方法實現可與親電子官能反應的經半胱胺酸改造之抗體。此等方法進一步實現抗體接合物化合物,諸如在指定之經設計之選擇性位點與藥物分子之接合之抗體藥物接合物(ADC)化合物。抗體表面上之反應性半胱胺酸殘基容許透過硫醇反應性基團(諸如馬來醯亞胺或鹵乙醯基)特異性接合藥物部分。Cys殘基之硫醇官能對馬來醯亞胺基之親核性反應性係約1000倍高於蛋白中之任何其他胺基酸官能(諸如離胺酸殘基之胺基或N端胺基)。碘乙醯基及馬來醯亞胺試劑中之硫醇特異性官能可與胺基反應,但需要較高之pH(>9.0)及較長之反應時間(Garman,1997,Non-Radioactive Labelling:A Practical Approach,Academic Press,London)。
本發明之經半胱胺酸改造之抗體較佳保留其野生型、親代抗體相對部分之抗原結合能力。因此,經半胱胺酸改造之抗體可結合(較佳係具體言之)至抗原。此類抗原包含(例如)腫瘤相關抗原(TAA)、細胞表面受體蛋白及其他細胞表面分子、跨膜蛋白、信號傳遞蛋白、細胞存活調節因子、細胞增殖調節因子、與組織發育或分化相關(例如,已知或懷疑功能性助於組織發育或分化)之分子、淋巴因子、細胞介素、涉及細胞週期調節之分子、涉及血小管生成之分子及與血管生成相關(例如,已知或懷疑功能性有助於血管生成)之分子。腫瘤相關抗原可係團簇分化因子(即,CD蛋白)。經半胱胺酸改造之抗體可結 合之抗原可係上文提及之分類中之一者之子類的成員,其中該分類之其他子類包括具有不同特性之(相對於受關注之抗原)之其他分子/抗原。
該親代抗體亦可係選自如以引用之方式明確併入本文中之US 5821337之表3中描述之huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7及huMAb4D5-8(曲妥珠單抗,HERCEPTIN®)之人類化抗體;如本文描述之人類化520C9(WO 93/21319)及人類化2C4抗體。
本發明之經半胱胺酸改造之抗體可係位點特異性的並可有效偶合硫醇反應性試劑。該硫醇反應性試劑可係多官能性連接子試劑、捕捉(即,親和性)標記試劑(例如,生物素-連接子試劑)、偵測標記(例如,螢光團試劑)、固相固定化試劑(例如,SEPHAROSETM、聚苯乙烯或玻璃)或藥物-連接子中間物。硫醇反應性試劑之一項實例係N-乙基馬來醯亞胺(NEM)。在一例示性實施例中,THIOMABTM抗體與生物素-連接子試劑之反應提供生物素化THIOMABTM抗體,藉由生物素化THIOMABTM抗體可偵測及量測被改造之半胱胺酸殘基之存在及反應性。THIOMABTM抗體與多官能性連接子試劑之反應提供具有官能化連接子之THIOMABTM抗體,其可進一步與藥物部分試劑或其他標記反應。THIOMABTM抗體與藥物-連接子中間物之反應提供THIOMABTM抗體藥物接合物。在某些實施例中,該THIOMABTM抗體係ThioFab。
本文描述之例示性方法通常可應用於抗體之識別及製造及更通常係透過應用本文描述之設計及篩選步驟而應用於其他蛋白質。
可將此種方法應用於其中反應性基團係(例如)馬來醯亞胺、碘乙醯胺、吡啶基二硫化物或其他硫醇反應性接合配偶體之其他硫醇反應性試劑之接合(Haugland,2003,Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals,Molecular Probes,Inc.;Brinkley,1992,Bioconjugate Chem.3:2;Garman,1997,Non-Radioactive Labelling:A Practical Approach,Academic Press,London;Means(1990)Bioconjugate Chem.1:2;Hermanson,G.in Bioconjugate Techniques(1996)Academic Press,San Diego,第40至55頁、第643至671頁)。該配偶體可係細胞毒性試劑(例如,諸如多柔比星之毒素或百日咳毒素)、諸如螢光染料類螢光素或玫瑰紅之螢光團、用於成像或放射治療金屬之螯合試劑、肽基或非肽基標記或偵測標誌(tag)或廓清率修飾試劑,諸如聚乙二醇之各種異構物、結合至第三組分之肽或另一碳水化合物或親脂性試劑。
識別於本文之例示性抗體(hu4D5)上之位點主要係在抗體之跨抗體之所有種類而十分保守之恆定域中。此等位點應廣泛適用於其他抗體而不進一步需要結構性設計或特異性抗體結構之知識,且不干擾抗體可變域固有之抗原結合性質。
可在癌症治療中適用之經半胱胺酸改造之抗體包含(但不限於)對抗細胞表面受體及腫瘤相關抗原(TAA)之抗體。可使用此類抗體作為裸抗體(未接合至藥物或標記部分)或作為式I抗體藥物接合物(ADC)。腫瘤相關抗原係此項技術中已知及可使用此項技術中熟知之方法及資訊來製備用於產生抗體。在針對癌症診斷及治療發現有效細胞靶之嘗試中,研究者一直試圖識別相較於一或多種正常非癌性細胞,特異性表現於一或多種特定類型癌細胞之表面上之跨膜或另外腫瘤相關多肽。通常,相較於非癌性細胞之表面,此類腫瘤相關多肽係更大量表現於癌細胞之表面上。此類腫瘤相關細胞表面抗原多肽之識別已產生經由基於抗體之治療特異性靶向癌細胞以達到破壞之能力。
TAA之實例包含(但不限於)列於下文中之TAA(1)至(53)。出於方便之目的,與此等抗原相關之資訊(此項技術中已知該等資訊中之全 部)係列於下文中且包含名稱、別名、基因庫登錄號及主要參考文獻,遵循國家生物技術資訊中心(NCBI)之核酸及蛋白質序列識別慣例。可在公共資料庫(諸如基因庫)中獲得對應於TAA(1)至(53)之核酸及蛋白質序列。藉由抗體靶向之腫瘤相關抗原包含具有相對於所舉參考文獻中識別之序列至少約70%、80%、85%、90%或95%之序列一致性,或大體上顯示與具有所舉參考文獻中發現之序列之TAA相同生物性質或特性之所有胺基酸序列變體及同功型。例如,具有變體序列之TAA通常可特異性結合至抗體,該抗體特異性結合至具有所列之相應序列之TAA。以引用之方式明確併入本文明確援引之參考文獻中之序列及揭示內容。
腫瘤相關抗原(1)至(53):
(1)BMPR1B(骨成形蛋白受體IB型,基因庫登錄號NM_001203)ten Dijke,P.等人,Science 264(5155):101-104(1994);Oncogene 14(11):1377-1382(1997));WO2004063362(技術方案2);WO2003042661(技術方案12);US2003134790-A1(第38至39頁);WO2002102235(技術方案13;第296頁);WO2003055443(第91至92頁);WO200299122(實例2;第528至530頁);WO2003029421(技術方案6);WO2003024392(技術方案2;圖112);WO200298358(技術方案1;第183頁);WO200254940(第100至101頁);WO200259377(第349至350頁);WO200230268(技術方案27;第376頁);WO200148204(實例;圖4);NP_001194骨形態基因性蛋白受體,IB型/pid=NP_001194.1。交叉參考:MIM:603248;NP_001194.1;AY065994;
(2)E16(LAT1、SLC7A5,基因庫登錄號NM_003486)Biochem.Biophys.Res.Commun.255(2),283-288(1999),Nature 395(6699):288-291(1998),Gaugitsch,H.W.等人,(1992)J.Biol.Chem. 267(16):11267-11273);WO2004048938(實例2);WO2004032842(實例IV);WO2003042661(技術方案12);WO2003016475(技術方案1);WO200278524(實例2);WO200299074(技術方案19;第127至129頁);WO200286443(技術方案27;第222、393頁);WO2003003906(技術方案10;第293頁);WO200264798(技術方案33;第93至95頁);WO200014228(技術方案5;第133至136頁);US2003224454(圖3);WO2003025138(技術方案12;第150頁);NP_003477溶質載體家族7(陽離子胺基酸運輸蛋白,y+系統),成員5/pid=NP_003477.3-智人;交叉參考:MIM:600182;NP_003477.3;NM_015923;NM_003486_1;
(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原,基因庫登錄號NM_012449);Cancer Res.61(15),5857-5860(2001),Hubert,R.S.等人,(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(25):14523-14528);WO2004065577(技術方案6);WO2004027049(圖1L);EP1394274(實例11);WO2004016225(技術方案2);WO2003042661(技術方案12);US2003157089(實例5);US2003185830(實例5);US2003064397(圖2);WO200289747(實例5;第618至619頁);WO2003022995(實例9;圖13A,實例53;第頁173,實例2;圖2A);NP_036581前列腺之六跨膜上皮抗原;交叉參考:MIM:604415;NP_036581.1;NM_012449_1;
(4)0772P(CA125、MUC16,基因庫登錄號AF361486);J.Biol.Chem.276(29):27371-27375(2001));WO2004045553(技術方案14);WO200292836(技術方案6;圖12);WO200283866(技術方案15;第116至121頁);US2003124140(實例16);交叉參考:GI:34501467;AAK74120.3;AF361486_1;
(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增效因子、間皮素,基 因庫登錄號NM_005823)Yamaguchi,N.等人,Biol.Chem.269(2),805-808(1994),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(20):11531-11536(1999),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(1):136-140(1996),J.Biol.Chem.270(37):21984-21990(1995));WO2003101283(技術方案14);WO2002102235(技術方案13;第287至288頁);WO2002101075(技術方案4;第308至309頁);WO200271928(第320至321頁);WO9410312(第52至57頁);交叉參考:MIM:601051;NP_005814.2;NM_005823_1;
(6)Napi3b(亦稱為NaPi2b)(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質載體家族34(磷酸鈉)成員2、II型鈉依賴性磷酸鹽運輸蛋白3b,基因庫登錄號NM_006424)J.Biol.Chem.277(22):19665-19672(2002),Genomics 62(2):281-284(1999),Feild,J.A.等人,(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.258(3):578-582);WO2004022778(技術方案2);EP1394274(實例11);WO2002102235(技術方案13;第326頁);EP875569(技術方案1;第17至19頁);WO200157188(技術方案20;第329頁);WO2004032842(實例IV);WO200175177(技術方案24;第139至140頁);交叉參考:MIM:604217;NP_006415.1;NM_006424_1;
(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、信號素5b Hlog、sema域、七血小板反應素重複體(1型及類1型)跨膜域(TM)及短細胞質域、(信號素)5B,基因庫登錄號AB040878);Nagase T.等人,(2000)DNA Res.7(2):143-150);WO2004000997(技術方案1);WO2003003984(技術方案1);WO200206339(技術方案1;第50頁);WO200188133(技術方案1;第41至43、48至58頁);WO2003054152(技術方案20);WO2003101400(技術方案11);登錄號:Q9P283;EMBL;AB040878; BAA95969.1.Genew;HGNC:10737;
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因,基因庫登錄號AY358628);Ross等人(2002)Cancer Res.62:2546-2553;US2003129192(技術方案2);US2004044180(技術方案12);US2004044179(技術方案11);US2003096961(技術方案11);US2003232056(實例5);WO2003105758(技術方案12);US2003206918(實例5);EP1347046(技術方案1);WO2003025148(技術方案20);交叉參考:GI:37182378;AAQ88991.1;AY358628_1;
(9)ETBR(內皮素B型受體,基因庫登錄號AY275463);Nakamuta M.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.177,34-39,1991;Ogawa Y.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.178,248-255,1991;Arai H.等人,Jpn.Circ.J.56,1303-1307,1992;Arai H.等人,J.Biol.Chem.268,3463-3470,1993;Sakamoto A.,Yanagisawa M.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.178,656-663,1991;Elshourbagy N.A.等人,J.Biol.Chem.268,3873-3879,1993;Haendler B.等人,J.Cardiovasc.Pharmacol.20,s1-S4,1992;Tsutsumi M.等人,Gene 228,43-49,1999;Strausberg R.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002;Bourgeois C.等人,J.Clin.Endocrinol.Metab.82,3116-3123,1997;Okamoto Y.等人,Biol.Chem.272,21589-21596,1997;Verheij J.B.等人,Am.J.Med.Genet.108,223-225,2002;Hofstra R.M.W.等人,Eur.J.Hum.Genet.5,180-185,1997;(例如)Puffenberger等人,Cell 79,1257-1266,1994;Attie T.等人,Hum.Mol.Genet.4,2407-2409,1995;Auricchio A.等人,Hum.Mol.Genet.5:351-354,1996;Amiel J.等人,Hum.Mol.Genet.5,355-357,1996;Hofstra R.M.W.等人,Nat.Genet.12,445-447, 1996;Svensson P.J.等人,Hum.Genet.103,145-148,1998;Fuchs S.等人,Mol.Med.7,115-124,2001;Pingault V.等人,(2002)Hum.Genet.111,198-206;WO2004045516(技術方案1);WO2004048938(實例2);WO2004040000(技術方案151);WO2003087768(技術方案1);WO2003016475(技術方案1);WO2003016475(技術方案1);WO200261087(圖1);WO2003016494(圖6);WO2003025138(技術方案12;第144頁);WO200198351(技術方案1;第124至125頁);EP522868(技術方案8;圖2);WO200177172(技術方案1;第297至299頁);US2003109676;US6518404(圖3);US5773223(技術方案1a;31-34欄);WO2004001004;
(10)MSG783(RNF124、假想蛋白FLJ20315,基因庫登錄號NM_017763);WO2003104275(技術方案1);WO2004046342(實例2);WO2003042661(技術方案12);WO2003083074(技術方案14;第61頁);WO2003018621(技術方案1);WO2003024392(技術方案2;圖93);WO200166689(實例6);交叉參考:LocusID:54894;NP_060233.2;NM_017763_1;
(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白,基因庫登錄號AF455138);Lab.Invest.82(11):1573-1582(2002));WO2003087306;US2003064397(技術方案1;圖1);WO200272596(技術方案13;第54至55頁);WO200172962(技術方案1;圖4B);WO2003104270(技術方案11);WO2003104270(技術方案16);US2004005598(技術方案22);WO2003042661(技術方案12);US2003060612(技術方案12;圖10);WO200226822(技術方案23;圖2);WO200216429(技術方案12;圖10);交叉參考:GI:22655488;AAN04080.1;AF455138_1;
(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬態受體電位陽離子通道子家族M成員4,基因庫登錄號NM_017636);Xu,X.Z.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(19):10692-10697(2001),Cell 109(3):397-407(2002),J.Biol.Chem.278(33):30813-30820(2003));US2003143557(技術方案4);WO200040614(技術方案14;第100至103頁);WO200210382(技術方案1;圖9A);WO2003042661(技術方案12);WO200230268(技術方案27;第391頁);US2003219806(技術方案4);WO200162794(技術方案14;圖1A至D);交叉參考:MIM:606936;NP_060106.2;NM_017636_1;
(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸形癌衍生之生長因子,基因庫登錄號NP_003203或NM_003212);Ciccodicola,A.等人,EMBO J.8(7):1987-1991(1989),Am.J.Hum.Genet.49(3):555-565(1991));US2003224411(技術方案1);WO2003083041(實例1);WO2003034984(技術方案12);WO200288170(技術方案2;第52至53頁);WO2003024392(技術方案2;圖58);WO200216413(技術方案1;第94至95、105頁);WO200222808(技術方案2;圖1);US5854399(實例2;17-18欄);US5792616(圖2);交叉參考:MIM:187395;NP_003203.1;NM_003212_1
(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/EB病毒受體)或Hs.73792基因庫登錄號M26004);Fujisaku等人(1989)J.Biol.Chem.264(4):2118-2125);Weis J.J.等人,J.Exp.Med.167,1047-1066,1988;Moore M.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84,9194-9198,1987;Barel M.等人,Mol.Immunol.35,1025-1031,1998;Weis J.J.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.83,5639-5643,1986;Sinha S.K.等人,(1993)J.Immunol.150,5311-5320;WO2004045520(實例4);US2004005538(實例1);WO2003062401(技術方案9);WO2004045520(實例 4);WO9102536(圖9.1至9.9);WO2004020595(技術方案1);登錄號:P20023;Q13866;Q14212;EMBL;M26004;AAA35786.1.
(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關β)、B29,基因庫登錄號NM_000626或11038674);Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(7):4126-4131,Blood(2002)100(9):3068-3076,Muller等人(1992)Eur.J.Immunol.22(6):1621-1625);WO2004016225(技術方案2,圖140);WO2003087768,US2004101874(技術方案1,第102頁);WO2003062401(技術方案9);WO200278524(實例2);US2002150573(技術方案5,第15頁);US5644033;WO2003048202(技術方案1,第306及309頁);WO 99/558658、US6534482(技術方案13,圖17A/B);WO200055351(技術方案11,第1145至1146頁);交叉參考:MIM:147245;NP_000617.1;NM_000626_1
(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有SH2域之磷酸酶錨蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C,基因庫登錄號NM_030764、AY358130);Genome Res.13(10):2265-2270(2003),Immunogenetics 54(2):87-95(2002),Blood 99(8):2662-2669(2002),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(17):9772-9777(2001),Xu,M.J.等人,(2001)Biochem.Biophys.Res.Commun.280(3):768-775;WO2004016225(技術方案2);WO2003077836;WO200138490(技術方案5;圖18D-1-18D-2);WO2003097803(技術方案12);WO2003089624(技術方案25);交叉參考:MIM:606509;NP_110391.2;NM_030764_1
(17)HER2(ErbB2,基因庫登錄號M11730);Coussens L.等人,Science(1985)230(4730):1132-1139);Yamamoto T.等人,Nature 319,230-234,1986;Semba K.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82,6497-6501,1985;Swiercz J.M.等人,J.Cell Biol.165,869-880,2004;Kuhns J.J.等人,J.Biol.Chem.274,36422-36427,1999;Cho H.-S.等 人,Nature 421,756-760,2003;Ehsani A.等人,(1993)Genomics 15,426-429;WO2004048938(實例2);WO2004027049(圖1I);WO2004009622;WO2003081210;WO2003089904(技術方案9);WO2003016475(技術方案1);US2003118592;WO2003008537(技術方案1);WO2003055439(技術方案29;圖1A至B);WO2003025228(技術方案37;圖5C);WO200222636(實例13;第95至107頁);WO200212341(技術方案68;圖7);WO200213847(第71至74頁);WO200214503(第114至117頁);WO200153463(技術方案2;第41至46頁);WO200141787(第15頁);WO200044899(技術方案52;圖7);WO200020579(技術方案3;圖2);US5869445(技術方案3;31-38欄);WO9630514(技術方案2;第56至61頁);EP1439393(技術方案7);WO2004043361(技術方案7);WO2004022709;WO200100244(實例3;圖4);登錄號:P04626;EMBL;M11767;AAA35808.1.EMBL;M11761;AAA35808.1;
(18)NCA(CEACAM6,基因庫登錄號M18728);Barnett T.等人,Genomics 3,59-66,1988;Tawaragi Y.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.150,89-96,1988;Strausberg R.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:16899-16903,2002;WO2004063709;EP1439393(技術方案7);WO2004044178(實例4);WO2004031238;WO2003042661(技術方案12);WO200278524(實例2);WO200286443(技術方案27;第427頁);WO200260317(技術方案2);登錄號:P40199;Q14920;EMBL;M29541;AAA59915.1.EMBL;M18728;
(19)MDP(DPEP1,基因庫登錄號BC017023);Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(26):16899-16903(2002));WO2003016475(技術方案1);WO200264798(技術方案33;第85至87頁);JP05003790(圖6至 8);WO9946284(圖9);交叉參考:MIM:179780;AAH17023.1;BC017023_1;
(20)IL20Rα(IL20Ra、ZCYTOR7,基因庫登錄號AF184971);Clark H.F.等人,Genome Res.13,2265-2270,2003;Mungall A.J.等人,Nature 425,805-811,2003;Blumberg H.等人,Cell 104,9-19,2001;Dumoutier L.等人,J.Immunol.167,3545-3549,2001;Parrish-Novak J.等人,J.Biol.Chem.277,47517-47523,2002;Pletnev S.等人,(2003)Biochemistry 42:12617-12624;Sheikh F.等人,(2004)J.Immunol.172,2006-2010;EP1394274(實例11);US2004005320(實例5);WO2003029262(第74至75頁);WO2003002717(技術方案2;第63頁);WO200222153(第45至47頁);US2002042366(第20至21頁);WO200 146261(第57至59頁);WO200146232(第63至65頁);WO9837193(技術方案1;第55至59頁);登錄號:Q9UHF4;Q6UWA9;Q96SH8;EMBL;AF184971;AAF01320.1;
(21)短蛋白聚糖(BCAN、BEHAB,基因庫登錄號AF229053);Gary S.C.等人,Gene 256,139-147,2000;Clark H.F.等人,Genome Res.13,2265-2270,2003;Strausberg R.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002;US2003186372(技術方案11);US2003186373(技術方案11);US2003119131(技術方案1;圖52);US2003119122(技術方案1;圖52);US2003119126(技術方案1);US2003119121(技術方案1;圖52);US2003119129(技術方案1);US2003119130(技術方案1);US2003119128(技術方案1;圖52);US2003119125(技術方案1);WO2003016475(技術方案1);WO200202634(技術方案1);
(22)EphB2R(DRT、ERK、Hek5、EPHT3、Tyro5,基因庫登錄號NM_004442);Chan,J.及Watt,V.M.,Oncogene 6(6),1057-1061 (1991)Oncogene 10(5):897-905(1995),Annu.Rev.Neurosci.21:309-345(1998),Int.Rev.Cytol.196:177-244(2000));WO2003042661(技術方案12);WO200053216(技術方案1;第41頁);WO2004065576(技術方案1);WO2004020583(技術方案9);WO2003004529(第128至132頁);WO200053216(技術方案1;第42頁);交叉參考:MIM:600997;NP_004433.2;NM_004442_1;
(23)ASLG659(B7h,基因庫登錄號AX092328);US20040101899(技術方案2);WO2003104399(技術方案11);WO2004000221(圖3);US2003165504(技術方案1);US2003124140(實例2);US2003065143(圖60);WO2002102235(技術方案13;第299頁);US2003091580(實例2);WO200210187(技術方案6;圖10);WO200194641(技術方案12;圖7B);WO200202624(技術方案13;圖1A至1B);US2002034749(技術方案54;第45至46頁);WO200206317(實例2;第320至321頁,技術方案34;第321至322頁);WO200271928(第468至469頁);WO200202587(實例1;圖1);WO200140269(實例3;第190至192頁);WO200036107(實例2;第205至207頁);WO2004053079(技術方案12);WO2003004989(技術方案1);WO200271928(第233至234頁、第452-453頁);WO 0116318;
(24)PSCA(前列腺幹細胞抗原前驅物,基因庫登錄號AJ297436);Reiter R.E.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95,1735-1740,1998;Gu Z.等人,Oncogene 19,1288-1296,2000;Biochem.Biophys.Res.Commun.(2000)275(3):783-788;WO2004022709;EP1394274(實例11);US2004018553(技術方案17);WO2003008537(技術方案1);WO200281646(技術方案1;第頁164);WO2003003906(技術方案10;第288頁);WO200140309(實例1;圖17);US2001055751(實例1;圖1B);WO200032752(技術方案18;圖1); WO9851805(技術方案17;第97頁);WO9851824(技術方案10;第94頁);WO9840403(技術方案2;圖1B);登錄號:O43653;EMBL;AF043498;AAC39607.1;
(25)GEDA(基因庫登錄號AY260763);AAP14954脂肪瘤HMGIC融合類配偶體蛋白/pid=AAP14954.1-智人(人類);WO2003054152(技術方案20);WO2003000842(技術方案1);WO2003023013(實例3,技術方案20);US2003194704(技術方案45);交叉參考:GI:30102449;AAP14954.1;AY260763_1;
(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3,基因庫登錄號AF116456);BAFF受體/pid=NP_443177.1-智人:Thompson,J.S.等人,Science 293(5537),2108-2111(2001);WO2004058309;WO2004011611;WO2003045422(實例;第32至33頁);WO2003014294(技術方案35;圖6B);WO2003035846(技術方案70;第615至616頁);WO200294852(136至137欄);WO200238766(技術方案3;第133頁);WO200224909(實例3;圖3);交叉參考:MIM:606269;NP_443177.1;NM_052945_1;AF132600;
(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功型、BL-CAM、Lyb-8、Lyb8、SIGLEC-2、FLJ22814,基因庫登錄號AK026467);Wilson等人(1991)J.Exp.Med.173:137-146;WO2003072036(技術方案1;圖1);交叉參考:MIM:107266;NP_001762.1;NM_001771_1;
(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關α、Ig β(CD79B)共價相互作用並在Ig M分子之表面上形成複合體,轉化涉及B細胞分化之信號之B細胞特異性蛋白),pI:4.84,MW:25028 TM:2[P]基因染色體:19q13.2,基因庫登錄號NP_001774.10);WO2003088808、US20030228319;WO2003062401(技術方案9);US2002150573(技術方案4,第13至14頁);WO9958658(技術方案13,圖16);WO9207574 (圖1);US5644033;Ha等人(1992)J.Immunol.148(5):1526-1531;Mueller等人(1992)Eur.J.Biochem.22:1621-1625;Hashimoto等人(1994)Immunogenetics 40(4):287-295;Preud’homme等人(1992)Clin.Exp.Immunol.90(1):141-146;Yu等人(1992)J.Immunol.148(2)633-637;Sakaguchi等人(1988)EMBO J.7(11):3457-3464;
(29)CXCR5(柏基特氏淋巴瘤受體1、G蛋白偶合受體,其經CXCL13趨化因子活化,作用於淋巴球遷移及體液防禦,在HIV-2傳染及可能在AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤及白血病之發展中起作用);372 aa,pI:8.54 MW:41959 TM:7[P]基因染色體:11q23.3,基因庫登錄號NP_001707.1);WO2004040000;WO2004015426;US2003105292(實例2);US6555339(實例2);WO200261087(圖1);WO200157188(技術方案20,第269頁);WO200172830(第12至13頁);WO200022129(實例1,第152至153頁,實例2,第254至256頁);WO9928468(技術方案1,第38頁);US5440021(實例2,49至52欄);WO9428931(第56至58頁);WO9217497(技術方案7,圖5);Dobner等人(1992)Eur.J.Immunol.22:2795-2799;Barella等人(1995)Biochem.J.309:773-779;
(30)HLA-DOB(MHC II類分子之B子單元(Ia抗原),其結合肽並呈遞至CD4+ T淋巴球);273 aa,pI:6.56,MW:30820.TM:1[P]基因染色體:6p21.3,基因庫登錄號NP_002111.1);Tonnelle等人(1985)EMBO J.4(11):2839-2847;Jonsson等人(1989)Immunogenetics 29(6):411-413;Beck等人(1992)J.Mol.Biol.228:433-441;Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99:16899-16903;Servenius等人(1987)J.Biol.Chem.262:8759-8766;Beck等人(1996)J.Mol.Biol.255:1-13;Naruse等人(2002)Tissue Antigens 59:512-519;WO9958658(技術方案13,圖15);US6153408(35至38欄);US5976551(168至170欄);US6011146(145至146欄);Kasahara等人(1989)Immunogenetics 30(1):66-68;Larhammar等人(1985)J.Biol.Chem.260(26):14111-14119;
(31)P2X5(嘌呤受體P2X配體-閘控型離子通道5、細胞外ATP閘控之離子通道可涉及突觸傳輸及神經形成,缺陷可導致先天逼尿肌不穩定性之病理生理學);422 aa),pI:7.63,MW:47206 TM:1[P]基因染色體:17p13.3,基因庫登錄號NP_002552.2);Le等人(1997)FEBS Lett.418(1-2):195-199;WO2004047749;WO2003072035(技術方案10);Touchman等人(2000)Genome Res.10:165-173;WO200222660(技術方案20);WO2003093444(技術方案1);WO2003087768(技術方案1);WO2003029277(第82頁);
(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2);359 aa,pI:8.66,MW:40225,TM:1[P]基因染色體:9p13.3,基因庫登錄號NP_001773.1);WO2004042346(技術方案65);WO2003026493(第51至52、第57至58頁);WO200075655(第105至106頁);Von Hoegen等人(1990)J.Immunol.144(12):4870-4877;Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99:16899-16903;
(33)LY64(淋巴球抗原64(RP105),富含白胺酸重複體(LRR)家族之I型膜蛋白,調節B細胞活化作用及細胞凋亡,功能損失與患有全身性紅斑狼瘡之病患中增強之疾病活性相關);661 aa,pI:6.20,MW:74147 TM:1[P]基因染色體:5q12,基因庫登錄號NP_005573.1);US2002193567;WO9707198(技術方案11,第39至42頁);Miura等人(1996)Genomics 38(3):299-304;Miura等人(1998)Blood 92:2815-2822;WO2003083047;WO9744452(技術方案8,第57至61頁);WO200012130(第24至26頁);
(34)FcRH1(類Fc受體蛋白1、免疫球蛋白Fc域之推定受體,其含有C2型類Ig及ITAM域、可在B淋巴球分化中起作用);429 aa,pI: 5.28,MW:46925 TM:1[P]基因染色體:1q21-1q22,基因庫登錄號NP_443170.1);WO2003077836;WO200138490(技術方案6,圖18E-1-18-E-2);Davis等人(2001)Proc.Natl.Acad.Sci USA 98(17):9772-9777;WO2003089624(技術方案8);EP1347046(技術方案1);WO2003089624(技術方案7);
(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受體易位相關2,可能在B細胞發育及淋巴瘤生成中起作用之推定免疫受體;藉由易位下調基因發生在一些B細胞惡性腫瘤中);977 aa,pI:6.88,MW:106468,TM:1[P]基因染色體:1q21,基因庫登錄號人類:AF343662、AF343663、AF343664、AF343665、AF369794、AF397453、AK090423、AK090475、AL834187、AY358085;小鼠:AK089756、AY158090、AY506558;NP_112571.1;WO2003024392(技術方案2,圖97);Nakayama等人(2000)Biochem.Biophys.Res.Commun.277(1):124-127;WO2003077836;WO200138490(技術方案3,圖18B-1-18B-2);
(36)TENB2(與生長因子及卵泡抑素之EGF/分化因子家族相關之TMEFF2、tomoregulin、TPEF、HPP1、TR、推定跨膜蛋白多糖);374 aa,NCBI登錄號:AAD55776、AAF91397、AAG49451,NCBI RefSeq:NP_057276;NCBI基因:23671;OMIM:605734;SwissProt Q9UIK5;基因庫登錄號AF179274、AY358907、CAF85723、CQ782436;WO2004074320;JP2004113151;WO2003042661;WO2003009814;EP1295944(第69至70頁);WO200230268(第329頁);WO200190304;US2004249130;US2004022727;WO2004063355;US2004197325;US2003232350;US2004005563;US2003124579;Horie等人(2000)Genomics 67:146-152;Uchida等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602;Liang等人(2000)Cancer Res.60:4907-12;Glynne-Jones等人(2001)Int J Cancer. Oct 15;94(2):178-84.(37)PMEL17(銀同源物;SILV;D12S53E;PMEL17;SI;SIL);ME20;gp100)BC001414;BT007202;M32295;M77348;NM_006928;McGlinchey,R.P.等人(2009)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.106(33),13731-13736;Kummer,M.P.等人(2009)J.Biol.Chem.284(4),2296-2306;
(38)TMEFF1(具有類EGF及兩個類卵泡抑素域1之跨膜蛋白;腦腫瘤抑癌蛋白-1);H7365;C9orf2;C9ORF2;U19878;X83961;NM_080655;NM_003692;Harms,P.W.(2003)Genes Dev.17(21),2624-2629;Gery,S.等人(2003)Oncogene 22(18):2723-2727;
(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α1;GFRA1;GDNFR;GDNFRA;RETL1;TRNR1;RET1L;GDNFR-α1;GFR-α1);U95847;BC014962;NM_145793 NM_005264;Kim,M.H.等人(2009)Mol.Cell.Biol.29(8),2264-2277;Treanor,J.J.等人(1996)Nature 382(6586):80-83;
(40)Ly6E(淋巴球抗原6複合體,基因座E;Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1);NP_002337.1;NM_002346.2;de Nooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6),768-774;Zammit,D.J.等人(2002)Mol.Cell.Biol.22(3):946-952;
(41)TMEM46(shisa同源物2(非洲爪蟾);SHISA2);NP_001007539.1;NM_001007538.1;Furushima,K.等人(2007)Dev.Biol.306(2),480-492;Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10):2265-2270;
(42)Ly6G6D(淋巴球抗原6複合體,基因座G6D;Ly6-D,MEGT1);NP_067079.2;NM_021246.2;Mallya,M.等人(2002)Genomics 80(1):113-123;Ribas,G.等人(1999)J.Immunol.163(1):278-287;
(43)LGR5(含有富含白胺酸重複體之G蛋白偶合受體5;GPR49、GPR67);NP_003658.1;NM_003667.2;Salanti,G.等人(2009)Am.J.Epidemiol.170(5):537-545;Yamamoto,Y.等人(2003)Hepatology 37(3):528-533;
(44)RET(ret原致癌基因;MEN2A;HSCR1;MEN2B;MTC1;PTC;CDHF12;Hs.168114;RET51;RET-ELE1);NP_066124.1;NM_020975.4;Tsukamoto,H.等人(2009)Cancer Sci.100(10):1895-1901;Narita,N.等人(2009)Oncogene 28(34):3058-3068;
(45)LY6K(淋巴球抗原6複合體,基因座K;LY6K;HSJ001348;FLJ35226);NP_059997.3;NM_017527.3;Ishikawa,N.等人(2007)Cancer Res.67(24):11601-11611;de Nooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6):768-774;
(46)GPR19(G蛋白偶合受體19;Mm.4787);NP_006134.1;NM_006143.2;Montpetit,A.and Sinnett,D.(1999)Hum.Genet.105(1-2):162-164;O'Dowd,B.F.等人(1996)FEBS Lett.394(3):325-329;
(47)GPR54(KISS1受體;KISS1R;GPR54;HOT7T175;AXOR12);NP_115940.2;NM_032551.4;Navenot,J.M.等人(2009)Mol.Pharmacol.75(6):1300-1306;Hata,K.等人(2009)Anticancer Res.29(2):617-623;
(48)ASPHD1(含有天冬胺酸β-羥化酶域1;LOC253982);NP_859069.2;NM_181718.3;Gerhard,D.S.等人(2004)Genome Res.14(10B):2121-2127;
(49)酪胺酸酶(TYR;OCAIA;OCA1A;酪胺酸酶;SHEP3);NP_000363.1;NM_000372.4;Bishop,D.T.等人(2009)Nat.Genet.41(8):920-925;Nan,H.等人(2009)Int.J.Cancer 125(4):909-917;
(50)TMEM118(環指蛋白跨膜2;RNFT2;FLJ14627); NP_001103373.1;NM_001109903.1;Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10):2265-2270;Scherer,S.E.等人(2006)Nature 440(7082):346-351。
(51)GPR172A(G蛋白偶合受體172A;GPCR41;FLJ11856;D15Ertd747e);NP_078807.1;NM_024531.3;Ericsson,T.A.等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100(11):6759-6764;Takeda,S.等人(2002)FEBS Lett.520(1-3):97-101。
(52)CD33(唾液酸結合之類免疫球蛋白凝集蛋白家族之一員)係經67-kDa醣基化之跨膜蛋白。CD33係表現於除約定之骨髓單核細胞及紅系祖細胞外之大多數骨髓狀及單核細胞之白血病細胞上。其未見於早期多功能幹細胞、成熟顆粒球、淋巴細胞或非造血細胞上(Sabbath等人,(1985)J.Clin.Invest.75:756-56;Andrews等人,(1986)Blood 68:1030-5)。CD33在其細胞質尾部含有兩個酪胺酸殘基,其各後係類似許多抑制受體中可見之基於免疫受體酪胺酸之抑制基序(ITIM)之疏水性殘基。
(53)CLL-1(CLEC12A、MICL及DCAL2)編碼類C型凝集蛋白/C型類凝集蛋白域(CTL/CTLD)超家族之成員。此家族之成員分享共同蛋白折疊並具有不同功能,諸如細胞黏著、細胞-細胞信號傳遞、醣蛋白轉化及在發炎及免疫反應中之作用。經此基因編碼之蛋白係顆粒球及單核細胞功能之被動調節者。或者,已描述此基因之數個剪接轉錄變體,但未測定此等變體中之一些的全長性質。此基因係緊密連接至染色體12p13上之自然殺手基因複合體區域中之其他CTL/CTLD超家族成員(Drickamer K(1999)Curr.Opin.Struct.Biol.9(5):585-90;van Rhenen A等人,(2007)Blood 110(7):2659-66;Chen CH等人(2006)Blood 107(4):1459-67;Marshall AS等人,(2006)Eur.J.Immunol.36(8):2159-69;Bakker AB等人,(2005)Cancer Res.64 (22):8443-50;Marshall AS等人,(2004)J.Biol.Chem.279(15):14792-802)。已顯示CLL-1係II型跨膜受體,其包括類單一C型類凝集蛋白域(未預測其結合鈣或糖)、莖區、跨膜域及含有ITIM基序之短細胞質尾部。
該親代抗體亦可係包括白蛋白結合肽(ABP)序列(Dennis等人(2002)「Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins」J Biol Chem.277:35035-35043;WO 01/45746)之融合蛋白。本發明之抗體包含具有藉由以下文獻教示之ABP序列之融合蛋白:(i)Dennis等人(2002)J Biol Chem.277:35035-35043,表III及IV中,第35038頁;(ii)US 20040001827,[0076];及(iii)WO 01/45746,第12至13頁,並以引用之方式將其等全部併入本文中。
誘變
藉由各種此項技術中已知之方法製備編碼起始多肽之胺基酸序列變體之DNA。此等方法包含(但不限於)藉由早期製得之編碼多肽之DNA之定點(或寡核苷酸介導)之誘變、PCR誘變及卡匣式誘變之製造。亦可藉由限制片段操作或以合成寡核苷酸重疊延長PCR來構築重組抗體之變體。誘變引子編碼半胱胺酸密碼子置換。可使用標準誘變技術以形成編碼此類突變體經半胱胺酸改造之抗體之DNA。通用指南可發現於Sambrook等人Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989;及Ausubel等人Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley-Interscience,New York,N.Y.,1993中。
定點誘變係一種用於製備取代變體(即,突變體蛋白質)之方法。此項技術中熟知此技術(參見例如,Carter(1985)等人Nucleic Acids Res.13:4431-4443;Ho等人(1989)Gene(Amst.)77:51-59;及Kunkel 等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:488)。簡而言之,在進行DNA之定點誘變時,藉由首先使編碼所需突變之寡核苷酸與單股起始DNA雜交來改變該起始DNA。雜交後,使用經雜交之寡核苷酸作為引子及使用該單股起始DNA作為模板,使用DNA聚合酶以合成整個第二股。因此,該編碼所需突變之寡核苷酸併入所得之雙股DNA中。定點誘變可於表現在表現質體中表現待經誘變處理之蛋白之基因內進行及所得質體可經定序以證實所需半胱胺酸置換突變之引入(Liu等人(1998)J.Biol.Chem.273:20252-20260)。方案及格式之定點包含彼等市售(例如)QuikChange®多定點誘變套組(Stratagene,La Jolla,CA)。
PCR誘變亦適用於製造起始多肽之胺基酸序列變體。參見Higuchi,(1990),在PCR協議中,第177至183頁,Academic Press;Ito等人(1991)Gene 102:67-70;Bernhard等人(1994)Bioconjugate Chem.5:126-132;及Vallette等人(1989)Nuc.Acids Res.17:723-733。簡而言之,當少量模板DNA用作PCR中之起始材料時,來自模板DNA中之相應區之序列略有不同之引子可用以形成相對較大量之特異性DNA片段,其不同於僅在其中引子不同於模板之位置處之模板序列。
用於製備變體、卡匣式誘變之另一種方法係基於Wells等人(1985)Gene 34:315-323描述之技術。起始材料係包括待突變之起始多肽DNA之質體(或其他載體)。識別待突變之起始DNA中之該(等)密碼子。在經識別之突變位點之每一側上必須具有唯一之限制核酸內切酶位點。若無此類限制位點存在,則可使用上文描述之寡核苷酸介導之誘變方法在起始多肽DNA中之適當位置引入其等而形成其等。在此等位點切割質體DNA以將其線性化。使用標準程序合成編碼限制位點間之但含有所需突變之DNA序列之雙股寡核苷酸,其中分別合成該等兩股寡核苷酸及然後使用標準技術將其等雜交在一起。藉由亞磷醯胺化 物合成方法製備寡核苷酸(US 4415732;US 4458066;Beaucage,S.及Iyer,R.(1992)「Advances in the synthesis of oligonucleotides by the phosphoramidite approach」,Tetrahedron 48:2223-2311)。此雙股寡核苷酸稱為卡匣式。此卡匣式經設計以具有可與經線性化之質體之末端相容之5'及3'末端,使得其可直接拼接至該質體。此質體現含有經突變之DNA序列。可藉由DNA定序證實含有經編碼之半胱胺酸置換之突變體DNA。
亦藉由寡核苷酸定向誘變使用雙股質體DNA作為模板以基於PCR之誘變形成單一突變(Sambrook及Russel,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版;Zoller等人(1983)Methods Enzymol.100:468-500;Zoller,M.J.及Smith,M.(1982)Nucl.Acids Res.10:6487-6500)。
在本發明中,使用顯示於M13噬菌體上之hu4D5(Gerstner等人(2002)「Sequence Plasticity In The Antigen-Binding Site Of A Therapeutic Anti-HER2 Antibody」,J Mol Biol.321:851-62)以用於作為模型系統之實驗中。將半胱胺酸突變引入hu4D5-噬菌體、hu4D5及ABP-hu4D5構築體中。使用如早期描述之聚乙二醇(PEG)沉澱方法(Lowman,Henry B.(1998)Methods in Molecular Biology(Totowa,New Jersey)87(組合之肽文庫方案)249-264)進行hu4D5-THIOMABTM抗體-噬菌體製備。
PHESELECTOR分析
PHESELECTOR(用於選擇反應性硫醇之噬菌體ELISA)分析容許以ELISA噬菌體格式偵測抗體中之反應性半胱胺酸基團。參見美國專利案第7,521,541號及美國專利公開案第20110301334號,以引用之方式將其等全部內容併入本文中。具體言之,該PHESESLECTOR分析包含在適當表面上塗覆受關注之蛋白(例如,抗體),接著以噬菌體顆 粒培養及然後添加經HRP標記之二級抗體且偵測吸光度之方法。可以快速、穩健及高通量之方式篩選顯示於噬菌體上之突變體蛋白質。可產生經半胱胺酸改造之抗體之文庫並經受使用相同方法之結合選擇以適當地識別合併自抗體或其他蛋白質之無規蛋白-噬菌體文庫之游離Cys之反應性位點。此技術包含使顯示於噬菌體上之半胱胺酸突變體蛋白質與亦係硫醇反應性之親和性試劑或報導子基團反應。
在某些實施例中,該PHESELECTOR分析包含下列步驟:1)將牛血清白蛋白(BSA)、一部分或全部靶蛋白(例如,erbB2細胞外域(HER2))及鏈黴親和素(100μl,2μg/ml)分別塗覆於Maxisorp 96孔板上;2)以0.5%吐溫20(含於PBS中)阻斷後,將生物素化及未生物素化之THIOMABTM抗體-噬菌體(2x1010個噬菌體顆粒)在室溫下培養1小時(例如,若該靶蛋白係erbB2細胞外域(HER2),則hu4D5-THIOMABTM抗體-噬菌體);3)用噬菌體培養後,用經山葵過氧化酶(HRP)標記之二級抗體(抗M13噬菌體外殼蛋白,pVIII蛋白抗體)培養;4)進行標準HRP反應並在450nm下量測吸光度;5)藉由計算針對鏈黴親和素之OD450/針對靶蛋白(例如,HER2)之OD450間之比值量測硫醇反應性使得硫醇反應性值1指示半胱胺酸硫醇之完全生物素化。
蛋白質表現及純化
編碼經半胱胺酸改造之抗體之DNA易於分離且可使用習知程序(例如,藉由使用可特異性結合至編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸探針)定序。融合瘤細胞充當此類DNA之來源。一經分離,則可將該DNA放置於表現載體中,然後將其轉染至宿主細胞(諸如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HEK293T細胞)或其他原本不產生抗體蛋白質之哺乳動物宿主細胞(諸如骨髓瘤細胞)(US 5807715;US 2005/0048572;US 2004/0229310)中,以獲得重組宿主細胞中單株抗體的合成。在大多數情況下,經半 胱胺酸改造之抗體之產率類似於野生型抗體。具有編碼抗體之DNA之細菌中之重組表現的綜述性文章包含Skerra等人(1993)Curr.Opinion in Immunol.5:256-262及Plückthun(1992)Immunol.Revs.130:151-188。
經設計及選擇後,可藉由以下方法製造具有高反應性未成對Cys殘基之經半胱胺酸改造之抗體(例如,THIOMABTM抗體):(i)於細菌(例如,大腸桿菌)系統或哺乳動物細胞培養系統(WO 01/00245)(例如,中國倉鼠卵巢細胞細胞(CHO))或HEK293細胞(例如,HEK293T細胞)中表現;及(ii)使用一般蛋白純化技術純化(Lowman等人(1991)J.Biol.Chem.266(17):10982-10988)。在本發明之特定實施例中,該等THIOMABTM抗體係表現於哺乳動物細胞表現系統中。在特定實施例中,該哺乳動物細胞表現系統係HEK293T細胞。
THIOMABTM抗體係全長抗體,其包含在抗體內形成二硫鍵之天然半胱胺酸殘基。因此,此等天然半胱胺酸殘基不具有與藥物-馬來醯亞胺接合之任何反應性硫醇基團(除非經還原試劑處理)。因此,最新被改造之Cys殘基可保持未成對及可與親電子連接子試劑或藥物-連接子中間物(諸如藥物-馬來醯亞胺)反應(即,與其接合)。
重鏈及輕鏈之被改造之Cys殘基之結構位置係根據序列性編號系統編號。此序列性編號系統係與針對4D5抗體之Kabat編號系統(Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)相關。使用Kabat編號系統,實際線性胺基酸序列可含有較少或額外對應於縮短可變域之FR或CDR或插入於其中之胺基酸。藉由圖1A及1B中之序列性編號及Kabat編號識別經半胱胺酸改造之重鏈變體位點及輕鏈變體位點。
硫醇反應性亦可一般化至抗體之某些域,諸如輕鏈恆定域(CL)及 重鏈恆定域CH1、CH2及CH3。可分別在完整抗體IgA、IgD、IgE、IgG及IgM(包含IgG子類:IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及IgA2)之重鏈恆定域α、δ、ε、γ及μ中進行導致約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9及0.95及更高之硫醇反應性值之半胱胺酸置換。
經標記之經半胱胺酸改造之抗體
本發明之經半胱胺酸改造之抗體可與任何標記部分接合,該標記部分可透過反應性半胱胺酸硫醇基團共價連接至該抗體(Singh等人(2002)Anal.Biochem.304:147-15;Harlow E.及Lane,D.(1999)Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Springs Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY;Lundblad R.L.(1991)Chemical Reagents for Protein Modification,第2版,CRC Press,Boca Raton,FL)。經連接之標記可用以:(i)提供可偵測信號;(ii)與第二標記相互作用以修飾第一或第二標記所提供之可偵測信號,(例如)以產生FRET(螢光共振能量轉移);(iii)穩定化與抗原或配體之相互作用或增強與抗原或配體結合之親和性;(iv)藉由電荷、疏水性、形狀或其他物理參數影響移動性(例如,電泳移動性或細胞滲透性);或(v)提供捕捉部分以調節配體親和性、抗體/抗原結合或離子錯合。
經標記之經半胱胺酸改造之抗體可用於診斷分析中,例如,用於偵測特異性細胞、組織或血清中受關注之抗原之表現。針對診斷應用,該抗體通常以可偵測部分標記。可獲得可通常分組為以下分類之許多標記:
(a)放射性同位素(放射性核種),諸如3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、89Zr、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At或213Bi。經放射性同位素標記之抗體可用於靶向受體之成像實驗中。可使用描述於Current Protocols in Immunology,(1991)第1及2卷,Coligen等人編,Wiley-Interscience, New York,NY,Pubs.中之技術,以結合、螯合或其他方式錯合放射性同位素金屬之配體試劑標記該抗體,其中該試劑可與該抗體之被改造之半胱胺酸硫醇反應。可錯合金屬離子之螯合配體包含DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA及TETA(Macrocyclics,Dallas,TX)。可經由與本發明之抗體藥物接合物錯合靶向放射性核種(Wu等人(2005)Nature Biotechnology 23(9):1137-1146)。DOTA-馬來醯亞胺試劑與經半胱胺酸改造之抗體之游離半胱胺酸胺基酸反應並在該抗體上提供金屬錯合配體(Lewis等人(1998)Bioconj.Chem.9:72-86)。螯合連接子標記試劑諸如DOTA-NHS(1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸單(N-羥基琥珀醯亞胺酯)係市售(Macrocyclics,Dallas,TX)。以經放射性核種標記之抗體之受體靶成像可藉由偵測及定量腫瘤組織中抗體之進展積聚來提供通路活化之標記(Albert等人(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.8:1207-1210)。
金屬螯合錯合物適用作成像實驗之抗體標記(US 2010/0111856;US 5342606;US 5428155;US 5316757;US 5480990;US 5462725;US 5428139;US 5385893;US 5739294;US 5750660;US 5834456;Hnatowich等人(1983)J.Immunol.Methods 65:147-157;Meares等人(1984)Anal.Biochem.142:68-78;Mirzadeh等人(1990)Bioconjugate Chem.1:59-65;Meares等人(1990)J.Cancer1990,Suppl.10:21-26;Izard等人(1992)Bioconjugate Chem.3:346-350;Nikula等人(1995)Nucl.Med.Biol.22:387-90;Camera等人(1993)Nucl.Med.Biol.20:955-62;Kukis等人(1998)J.Nucl.Med.39:2105-2110;Verel等人(2003)J.Nucl.Med.44:1663-1670;Camera等人(1994)J.Nucl.Med.21:640-646;Ruegg等人(1990)Cancer Res.50:4221-4226;Verel等人(2003)J.Nucl.Med.44:1663-1670;Lee等人(2001)Cancer Res.61:4474-4482;Mitchell,等人(2003)J.Nucl.Med.44:1105-1112; Kobayashi等人(1999)Bioconjugate Chem.10:103-111;Miederer等人(2004)J.Nucl.Med.45:129-137;DeNardo等人(1998)Clinical Cancer Research 4:2483-90;Blend等人(2003)Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals 18:355-363;Nikula等人(1999)J.Nucl.Med.40:166-76;Kobayashi等人(1998)J.Nucl.Med.39:829-36;Mardirossian等人(1993)Nucl.Med.Biol.20:65-74;Roselli等人(1999)Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals,14:209-20)。
(b)螢光標記,諸如稀土螯合物(銪螯合物),包含FITC、5-羧基螢光素、6-羧基螢光素之螢光素型;包含TAMRA之玫瑰紅型;丹磺醯;麗絲胺;花青;藻紅素;德州紅及其類似物。可使用(例如)揭示於Current Protocols in Immunology(同上)中之技術將該等螢光標記接合至抗體。螢光染料及螢光標記試劑包含彼等市售自Invitrogen/Molecular Probes(Eugene,OR)及Pierce Biotechnology,Inc.(Rockford,IL)者。
諸如螢光染料及化學發光染料之偵測標記(Briggs等人(1997)「Synthesis of Functionalised Fluorescent Dyes and Their Coupling to Amines and Amino Acids」J.Chem.Soc.,Perkin-Trans.1:1051-1058)提供可偵測信號及通常適用於標記抗體,較佳具有下列性質:(i)經標記之抗體應產生具有低背景之極高信號,使得在無細胞或基於細胞之分析兩者中皆可敏感地偵測少量抗體;及(ii)經標記之抗體應係光穩定的,使得可觀察、監測並記錄該螢光信號而無顯著光漂白。針對涉及經標記之抗體細胞表面結合至膜或細胞表面(特別係活細胞)之應用,該等標記較佳(iii)具有良好水溶性以達成有效接合物濃度及偵測敏感性及(iv)對活細胞係非毒性的以免於破壞細胞之正常代謝過程或引起早熟細胞死亡。
(c)可獲得或揭示(US 4275149)各種酶受質標記。該酶通常催 化色原受質之可使用各種技術量測之化學改變。例如,該酶可催化受質中之可分光光度法量測之顏色變化。或者,該酶可改變該受質之螢光或化學發光。用於定量螢光之變化之技術如上文描述。該化學發光受質受化學反應而變得電子激發及然後可發射可被量測(例如,使用化學光度計)或將能量贈予螢光接受體之光。酶標記之實例包含螢光素酶(例如,螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶;美國專利案第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、蘋果酸脫氫酶、尿素酶、諸如山葵過氧化酶(HRP)之過氧化酶、鹼性磷酸酶(AP)、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、醣氧化酶(例如,葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄醣-6-磷酸脫氫酶)、雜環氧化酶(諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶)、乳過氧化酶、微過氧化酶及類似物。用於將酶結合至抗體之技術描述於O'Sullivan等人(1981)「Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay」,in Methods in Enzym.(J.Langone & H.Van Vunakis編),Academic Press,New York,73:147-166中。
酶受質組合之實例(美國專利案第4,275,149號及第4,318,980號)包含(例如):(i)以過氧化氫酶作為受質之山葵過氧化酶(HRP),其中該過氧化氫酶氧化染料前驅物(例如,鄰苯二胺(OPD)或3,3',5,5'-四甲基聯苯胺鹽酸鹽(TMB));(ii)以對硝基苯基磷酸鹽作為色原受質之鹼性磷酸酶(AP);及(iii)具有色原受質(例如,對硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶)或螢光受質4-甲基傘形酮-β-D-半乳糖苷酶之β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)。
標記可直接接合經半胱胺酸改造之抗體。例如,該抗體可接合生物素及上文提及之標記之三種廣泛分類中之任何一者可與抗生物素蛋白或鏈黴親和素接合或反之亦然。生物素選擇性結合至鏈黴親和素 及因此,該標記可以此間接方式接合抗體。或者,為達成標記與多肽變體之間接接合,該多肽變體係接合小半抗原(例如,地穀新)及上文提及之不同類型之標記中之一者係接合抗半抗原多肽變體(例如,抗地穀新抗體)。因此,可達成標記與多肽變體之間接接合(Hermanson,G.(1996)in Bioconjugate Techniques Academic Press,San Diego)。
本發明之多肽變體可應用於任何已知分析方法,諸如ELISA、競爭性結合分析、直接及間接三明治分析及免疫沉澱分析(Zola,(1987)Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques,第147至158頁,CRC Press,Inc.)中。
偵測標記可用於局部化、可視化及量化結合或識別結果。本發明之經標記之抗體可偵測細胞表面受體。經可偵測標記之抗體之另一用途係一種基於珠粒之免疫捕捉方法,其包括接合珠粒與經螢光標記之抗體並一經配體之結合即偵測螢光信號。類似結合偵測方法論利用表面電漿子共振(SPR)效應以量測並偵測抗體-抗原相互作用。
本發明之經標記之經半胱胺酸改造之抗體可藉由以下各種生物醫學及分子成像之方法及技術用作成像生物標記及探針,諸如:(i)MRI(核磁共振成像);(ii)MicroCT(電腦化斷層攝影術);(iii)SPECT(單一光子發射電腦化斷層攝影術);(iv)PET(正電子發射斷層攝影術)Tinianow,J.等人(2010)Nuclear Medicine and Biology,37(3):289-297;Chen等人(2004)Bioconjugate Chem.15:41-49;US 2010/0111856;(v)生物發光;(vi)螢光;及(vii)超音波。免疫閃爍圖術係一種成像過程,其中向動物或人類病患投與經放射性物質標記之抗體並拍攝該抗體局部化之身體中之位點的圖像(US 6528624)。可客觀量測成像生物標記並作為正常生物過程、致病過程或治療干預之藥理學反應之指標評估。生物標記可係以下數種類型:0型係疾病之自然歷史標記及與已知臨床指標(例如,類風濕性關節炎中之滑液發炎 之MRI評定)縱向相關;I型標記捕捉根據作用機制之干預之效應,儘管該機制可能與臨床結果無關;II型標記起替代終點之作用,其中生物標記之變化或來自生物標記之信號預測「證實」靶向回應,諸如類風濕性關節炎中藉由CT量測之骨糜爛之臨床益處。因此成像生物標記可提供關於以下之藥效動力學(PD)治療資訊:(i)靶蛋白之表現;(ii)治療劑結合至該靶蛋白(即,選擇性)及(iii)廓清率及半衰期藥物動力學資料。活體內成像生物標記相對於基於實驗室之生物標記之優點包含:非侵襲性治療;可量化;全身評定;重複性給藥及評定(即,多個時間點)及自臨床前(小動物)至臨床(人類)結果之潛在可轉移效應。針對一些應用,生物成像代替或最小化臨床前研究之動物實驗中之數量。
肽標記方法係熟知。參見Haugland,2003,Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals,Molecular Probes,Inc.;Brinkley,1992,Bioconjugate Chem.3:2;Garman,(1997)Non-Radioactive Labelling:A Practical Approach,Academic Press,London;Means(1990)Bioconjugate Chem.1:2;Glazer等人(1975)Chemical Modification of Proteins.Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology(T.S.Work及E.Work編)American Elsevier Publishing Co.,New York;Lundblad,R.L.及Noyes,C.M.(1984)Chemical Reagents for Protein Modification,第I及II卷,CRC Press,New York;Pfleiderer,G.(1985)「Chemical Modification of Proteins」,Modern Methods in Protein Chemistry,H.Tschesche編,Walter DeGryter,Berlin and New York;及Wong(1991)Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking,CRC Press,Boca Raton,Fla.);De Leon-Rodriguez等人(2004)Chem.Eur.J.10:1149-1155;Lewis等人(2001)Bioconjugate Chem.12:320-324;Li等人(2002)Bioconjugate Chem.13:110-115;Mier等人(2005)Bioconjugate Chem.16:240-237。
以兩個部分(足以接近之螢光報導子及淬滅劑)標記之肽及蛋白質經歷螢光共振能量轉移(FRET)。報導子基團通常係受某種波長下之光激發並將能量轉移至接受體或淬滅劑、基團之螢光染料,其具有適當斯托克斯位移(Stokes shift)以在最大亮度下發射。螢光染料包含具有芳族性經擴大之分子,諸如螢光素及玫瑰紅及其衍生物。可藉由完整肽中之淬滅劑部分部分或顯著淬滅該螢光報導子。肽一經肽酶或蛋白酶裂解,則可量測螢光中之可偵測之增加(Knight,C.(1995)「Fluorimetric Assays of Proteolytic Enzymes」,Methods in Enzymology,Academic Press,248:18-34)。
本發明之經標記之抗體亦可用作親和性純化試劑。在此方法中,使用此項技術中熟知之方法將該經標記之抗體固定於諸如Sephadex樹脂或濾紙之固相上。使該經固定之抗體與含有待純化之抗原之樣品接觸,及之後用將大體上移除樣品中除待純化之抗原(其結合至該經固定之多肽變體)外之所有材料之合適溶劑清洗載體。最後,用另一合適之溶劑諸如將自該多肽變體釋放抗原之pH 5.0甘胺酸緩衝液清洗該載體。
標記試劑通常具有可與以下反應之反應性官能(reactive functionality):(i)與經半胱胺酸改造之抗體之半胱胺酸硫醇直接反應以形成經標記之抗體;(ii)與連接子試劑反應以形成連接子-標記中間物;或(iii)與連接子抗體反應以形成經標記之抗體。標記試劑之反應性官能包含:馬來醯亞胺、鹵代乙醯基、碘乙醯胺琥珀醯亞胺基酯類(例如,NHS、N-羥基琥珀醯亞胺)、異硫氰酸酯、磺醯氯、2,6-二氯三嗪基、五氟苯酯及亞磷醯胺化物,然而亦可使用其他官能基。
連接子藥物與THIOMABTM抗體之接合
本文描述之THIOMABTM抗體係接合至兩種不同之連接子藥物以 證實重鏈及輕鏈內之每個位點之被改造之半胱胺酸之接合效率。
在代表性抗體Hu抗HER2 4D5(「4D5抗體」)之每個位置改造半胱胺酸殘基以產生THIOMABTM抗體。每個THIOMABTM抗體分別接合至兩種連接子藥物(MC-vc-PAB-MMAE及PDS-MMAE)。在96孔過濾板(體積2ml,購自EK Scientific之聚丙烯0.45um過濾器)中進行接合。該等板容許水性緩衝液僅在500xg下離心2min後流動通過。將450μl呈含於20%乙醇中之50%漿體形式之MabSelect SuRe樹脂(GE Healthcare)添加至每個孔中。將該樹脂清洗3次並平衡於50mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、2mM EDTA(緩衝液A)中。
將每種THIOMABTM抗體(1.5mg)添加至每個孔中並容許在板振盪器上在600RPM下在RT下結合至樹脂30min。30min後,將該等板離心以移除過量緩衝液。在室溫(RT)下在0.9ml於緩衝液A中之2mM二硫蘇糖醇之存在下將該等THIOMABTM抗體攪拌還原整夜。藉由用緩衝液A清洗兩次純化去除還原試劑及任何半胱胺酸或麩胱甘肽阻斷劑。用1ml含於緩衝液A中之1mM脫氫抗壞血酸(DHAA)清洗該等板三次以使該等板飽含氧化試劑。在最後添加0.9ml含於緩衝液A中之1mM DHAA後,容許在RT下於板振盪器上將該等HIOMABTM抗體再氧化3hrs。
藉由離心移除氧化試劑。兩倍莫耳過量(佔可利用之硫醇基團)之連接子藥物(MC-vc-PAB-MMAE或者PDS-MMAE)(其溶解於含於緩衝液A中之10% DMA中)添加至每個孔中並在RT下於板振盪器上以THIOMABTM抗體培養2hrs。用平衡緩衝液清洗該等板六次純化去除過量連接子藥物。用pH 2.7之0.1M甘胺酸緩衝液在RT下於板振盪器上將接合之THIOMABTM抗體溶離30min。立即用15%之0.5M Tris(pH 8.0)中和該等THIOMABTM抗體。藉由LC/MS分析定量每個mAb接合之藥物數量。藉由尺寸排阻層析法評定接合物之聚集。
質譜術分析
使用液相層析電噴霧離子化質譜(LC-ESI-MS)分析以精確分子量測定接合之THIOMABTM抗體(Cole,R.B.Electro Spray Ionization Mass Spectrometry:Fundamentals,Instrumentation And Applications.(1997)Wiley,New York)。
LC/MS分析係於6224質量飛行時間(TOF)LC/MS(Agilent Technologies)上進行。於加熱至80℃之PRLP-S柱,1000Å,8μm(50mm×2.1mm,Agilent Technologies)上層析樣品。使用在0.7ml/min流動速率下於3分鐘內自34至42% B之線性梯度(溶劑A,0.05% TFA之水溶液;溶劑B,0.04% TFA之乙腈溶液)及使用電噴霧源直接離子化溶離液。使用Agilent Mass Hunter定性分析軟體收集資料並解卷積。使用存在於LC/MS層析圖中之經解卷積之峰之豐度計算藥物相對抗體之比率(DAR)。
THIOMABTM抗體之聚集分析
尺寸排阻層析法係於1100系列HPLC(Agilent Technologies)上進行。在Shodex KW 802.5柱上層析樣品。使用一種使用pH 6.2之0.2M磷酸鉀、0.25氯化鉀之流動相以0.75ml/min進行15min的等濃度方法以溶離該接合物。自來自UV 280nm層析圖之聚集及單體峰之積分面積計算聚集百分率。
曲妥珠單抗之硫代IgG變體之改造
將半胱胺酸引入全長單株抗體曲妥珠單抗(HERCEPTIN®,Genentech Inc.)中之重鏈及輕鏈之每個殘基處(SEQ ID NO.:1(4D5重鏈)及SEQ ID NO.:2(4D5輕鏈)之每個天然非半胱胺酸殘基突變成半胱胺酸)。代表性4D5抗體之重鏈具有450個胺基酸:12個半胱胺酸殘基及438個非半胱胺酸殘基。代表性4D5抗體之輕鏈具有214個胺基酸:6個半胱胺酸殘基及208個非半胱胺酸殘基。具體言之,單一殘基自其 天然胺基酸突變成半胱胺酸,藉此導致具有兩個被改造之半胱胺酸殘基之全長抗體。每個半胱胺酸突變係接合至PDS-MMAE及MC-vc-MMAE。此導致總計648種THIOMABTM抗體:648種PDS-MMAE THIOMABTM抗體及648種MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體。此等經半胱胺酸改造之抗體(THIOMABTM抗體)表現於培養基中之HEK293T細胞中。
SEQ ID NO:18
SEQ ID NO:19
在一較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括表2中之根據Kabat編號之重鏈突變中之一或多者。在一較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體在如彼等列於表2中根據4D5序列者之相同位置包括 被改造之半胱胺酸。在一較佳實施例中,在THIOMABTM抗體中於表2中識別之被改造之半胱胺酸或位置相同之被改造之半胱胺酸係游離半胱胺酸。在一較佳實施例中,該THIOMABTM抗體在根據Kabat編號之位置HC-A136C(即,根據EU編號之HC-A140C)包括被改造之半胱胺酸(參見實例11)。
在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括圖21中之根據EU編號之重鏈突變中之一或多者。具體言之,該經半胱胺酸改造之抗體中之重鏈半胱胺酸突變係選自由以下根據EU編號之各物組成之位點之群:HC-T110C、HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-E382C、HC-S242C、HC-N434C及Q438C。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括藉由PDS連接子在選自由以下根據EU編號之各物組成之群之被改造之半胱胺酸處接合至藥物部分之經半胱胺酸改造之抗體:HC-A140C、HC-L174C、HC-L179C、HC-G371C、HC-Y373C、HC-S424C及HC-Q438C。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括藉由vc-(即,馬來醯亞胺)連接子在選自由以下組成之群之被改造之半胱胺酸處接合至藥物部分之經半胱胺酸改造之抗體:HC-T110C、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-E382C及HC-N434C。
在某些實施例中,該等THIOMABTM抗體包括表3中根據Kabat編號之重鏈突變中之一或多者。在某些實施例中,該等THIOMABTM抗體在如彼等列於表3中根據4D5序列者之相同位置處包括被改造之半胱胺酸。例如,若抗體在其重鏈中之根據Kabat編號之位置5包括天然丙胺酸(A)(如相較於4D5中之天然纈胺酸(V)),則該丙胺酸可突變為半胱胺酸以產生HC-A5C THIOMABTM抗體。在某些實施例中,在該等THIOMABTM抗體中於表3中識別之被改造之半胱胺酸或位置相等之 被改造之半胱胺酸係游離半胱胺酸。
在某些實施例中,該等THIOMABTM抗體包括列於表3中之序列。在某些實施例中,具有列於表3中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括PDS連接子。在某些實施例中,具有列於表3中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括馬來醯亞胺(例如,-vc)連接子。在特定實施例中,重鏈位點(根據Kabat編號)係突變為選自以下之群之半胱胺酸以形成經半胱胺酸改造之抗體並使用PDS連接子連接至藥物:V2C、T29C、Y30C、A37C、E43C、Y77C、W96C、G97C、D105C、T139C、N159C、A162C、G166C、G178C、L179C、V188C、I199C、N203C、S207C、E388C、K414C、Q418C、S242C、Y436C、T437C、Q438C、L443C及M104C。在特定實施例中,重鏈位點(根據Kabat編號)係突變為選自以下之群之半胱胺酸以形成經半胱胺酸改造之抗體並使用-vc(即,馬來醯亞胺)連接子連接至藥物:V2C、L1C、V2C、L8C、R16C、F24C、I26C、Y30C、Q36C、A37C、K40C、L42C、E43C、T51C、G53C、T55C、R56C、Y57C、A58C、T66C、N74C、Q79C、W107C、T120C、K121C、A140C、G166C、G178C、 T187C、I199C、T209C、F243C、M252C、E258C、V262C、N276C、V282C、L309C、T335C、S337C、R344C、Q347C、K360C、G371C、E382C、P387C、E388C、S403C、K414C、Q418C、G420C、N421C、S424C、N434C、Y436C、T437C、Q438C、K439C、S442C、L443C、M104C及N81C。
在特定實施例中,包括選自列於表2中之突變之重鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有針對如本文描述之穩定性測定分析使用親和性-捕捉LC-MS分析獲得之在1.0與2.0間之平均DAR(參見實例1213)。在特定實施例中,包括選自列於表2中之突變之重鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在1.1與1.3間之平均DAR。在特定實施例中,包括選自列於表2中之突變之重鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在1.3與1.5間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表1中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.5與1.8間之平均DAR。在特定實施例中,包括選自列於表2中之突變之重鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在1.8與2.0間之平均DAR。
在一較佳實施例中,該等經半胱胺酸改造之抗體包括表2中之根據Kabat編號之重鏈突變中之一或多者。在一較佳實施例中,該等經半胱胺酸改造之抗體在如彼等列於表2中根據4D5序列者之相同位置包括被改造之半胱胺酸。例如,若抗體在於其重鏈中之根據Kabat編號之位置19包括天然離胺酸(K)(如相較於4D5中之天然精胺酸(R)),該離胺酸可突變成半胱胺酸以產生K19C THIOMABTM抗體。在一較佳實施例中,在THIOMABTM抗體中於表2中識別之被改造之半胱胺酸或位置相同之被改造之半胱胺酸係游離半胱胺酸。
在一較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括表1中之根據Kabat編號之輕鏈突變中之一或多者。在一較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括在如彼等列於表1中根據4D5序列者之相同位置包括被改造之半胱胺酸。在一較佳實施例中,在THIOMABTM抗體中於表1中識別之被改造之半胱胺酸或位置相同之被改造之半胱胺酸係游離半胱胺酸。在一較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體在根據Kabat編號之位置LC-K149C包括被改造之半胱胺酸(參見實例27)。在較佳實施例中,該LC-K149C抗體係經由PDS連接子接合至藥物部分。在較佳實施例中,該LC-K149C抗體係經由-vc(即,馬來醯亞胺)連接子接合至藥物部分。
在某些實施例中,該等THIOMABTM抗體包括圖21中之根據Kabat編號之輕鏈突變中之一或多者。具體言之,經半胱胺酸改造之抗體中之輕鏈半胱胺酸突變係選自由以下根據Kabat編號之各物組成之位點之群:LC-T22C、LC-K39C、LC-Y49C、LC-Y55C、LC-T85C、LC-T97C、LC-I106C、LC-R108C、LC-R142C、LC-K149C及LC-V205C。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括半藉由PDS連接子在選自由以下根據Kabat編號之各物組成之群之被改造之半胱胺酸處接合至藥物部分之胱胺酸被改造之抗體:LC-I106C、LC-R108C及LC-V205C。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括藉由vc-(即,馬來醯亞胺)連接子在選自由以下根據Kabat編號之各物組成之群之被 改造之半胱胺酸處接合至藥物部分之經半胱胺酸改造之抗體:LC-T22C、LC-K39C、LC-Y49C、LC-Y55C、LC-T85C、LC-T97C、LC-R142C及LC-K149C。
在特定實施例中,包括選自列於表1中之突變之輕鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有針對如本文描述之穩定性測定分析使用親和性-捕捉LC-MS分析獲得之在1.0與2.0間之平均DAR(參見實例1213)。在特定實施例中,包括選自列於表1中之突變之輕鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在1.1與1.3間之平均DAR。在特定實施例中,包括選自列於表1中之突變之輕鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在1.3與1.5間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表1中之半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造之抗體具有在1.5與1.8間之平均DAR。在特定實施例中,包括選自列於表1中之突變之重鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在1.8與2.0間之平均DAR。在特定實施例中,包括選自列於表1中之突變之重鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有在0.8與1.4間之平均DAR。
在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括列於表1中之序列。在較佳實施例中,具有列於表1中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括PDS連接子。在較佳實施例中,具有列於表1中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括-vc連接子。
在某些實施例中,該等THIOMABTM抗體包括列於表4中之序列。在某些實施例中,具有列於表4中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括PDS連接子。在某些實施例中,具有列於表4中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括-vc連接子。
在某些實施例中,包括選自列於表4中之突變之輕鏈半胱胺酸突變之經半胱胺酸改造的抗體具有針對如本文描述之穩定性測定分析使用親和性-捕捉LC-MS分析獲得之在1.0與2.0間之平均DAR(參見實例 1213)。在特定實施例中,具有選自列於表4中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.3與1.9間之平均DAR。在特定實施例中,在特定實施例中,具有選自列於表4中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.3與1.8間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表4中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.5與1.9間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表4中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在0.8與1.0間之平均DAR。
在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括圖21中根據EU編號之輕鏈突變中之一或多者。具體言之,經半胱胺酸改造之抗體中之輕鏈半胱胺酸突變係選自由以下根據EU編號之各物組成之位點之群:LC-T22C、LC-K39C、LC-Y49C、LC-Y55C、LC-T85C、LC-T97C、LC-I106C、LC-R108C、LC-R142C、LC-K149C及LC-V205C。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括藉由PDS連接子在選自由以下根據EU編號之各物組成之群之被改造之半胱胺酸處接合至藥物部分之經半胱胺酸改造之抗體:LC-T22C、LC-K39C、LC-Y49C、LC-Y55C、LC-T85C、LC-T97C、LC-R142C及LC-K149C。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括藉由vc-(即,馬來醯亞胺)連接子在選自由以下組成之群之被改造之半胱胺酸處接合至藥物部分之經半胱胺酸改造之抗體:LC-I106C、LC-R108C及LC-V205C。
在某一實施例中,該等THIOMABTM抗體包括列於表5中之序列。在某一實施例中,該等THIOMABTM抗體在如彼等列於表5中根據4D5序列者之相同位置處包括被改造之半胱胺酸。例如,若抗體在其重鏈中之根據Kabat編號之位置40包括天然絲胺酸(S)(如相較於4D5中之天然丙胺酸(A)),則該絲胺酸可突變成半胱胺酸以產生S40C THIOMABTM抗體。在某一實施例中,在THIOMABTM抗體中於表5中識別之被改造之半胱胺酸或位置相同之被改造之半胱胺酸係游離半胱 胺酸。
在某些實施例中,該等THIOMABTM抗體包括列於表5中之序列。在某些實施例中,具有列於表5中之突變及/或序列之THIOMABTM抗體包括-vc或PDS連接子。
在特定實施例中,具有選自列於表5中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.0與2.0間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表5中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.3與1.9間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表5中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.3與1.8間之平均DAR。在特定實施例中,具有選自列於表5中之半胱胺酸突變之THIOMABTM抗體具有在1.5與1.9間之平均DAR。
根據另一實施例,該等THIOMABTM抗體包括表1至5中任一張表中識別之被改造之半胱胺酸。在較佳實施例中,該等THIOMABTM抗體包括表12中任一張表中識別之被改造之半胱胺酸。根據另一實施例,可針對任何靶抗原設計THIOMABTM抗體。
THIOMABTM抗體設計及改造
在抗HER2 hu4D5抗體之重鏈及輕鏈之每個位置引入單一半胱胺酸取代(即,製造總計648種具有PDS連接子之抗體及總計648種具有一vc連接子之抗體)(實例1)。亦在抗CD33抗體、抗STEAP1抗體、抗MUC16抗體、抗NaPi2b抗體、抗Ly6E抗體、抗CD22抗體、抗CD79b抗體、抗B7H4抗體及額外之抗HER2抗體之選擇位置引入單一半胱胺酸取代。根據本文描述之方法製造所有重鏈突變體及輕鏈突變體。根 據Kabat編號系統編號重鏈及輕鏈序列。每個Kabat位置之根據序列性編號及EU編號之相同位置係提供於圖1A1B中。在輕鏈中,Kabat、序列性及EU編號皆指示相同數字。
重鏈及輕鏈4D5 THIOMABTM抗體係經由PDS或vc連接子接合至藥物(即,製造總計648種具有PDS連接子之抗體及總計648種具有vc連接子之抗體)。針對平均藥物-抗體比率(DAR)、濃度(mg/mL)、聚集(%總計)及穩定性(實例2)篩選每個THIOMABTM抗體。因此,每個THIOMABTM抗體具有針對PDS及vc接合物之DAR、濃度、聚集及穩定性量測值。PDS接合物與量測值係提供於本文之表中及vc接合物與量測值係提供於本文之表中。
以起始濃度1mg/mL之源材料(即,PDS-MMAE THIOMABTM抗體)分析表67中識別之PDS-MMAE THIOMABTM抗體。表67中識別之PDS-MMAE THIOMABTM抗體之DAR計算值全部DAR1。表67中識別之所有PDS-MMAE THIOMABTM抗體經再氧化具有50%之聚集。針對ELISA複製,表6中識別之PDS-MMAE THIOMABTM抗體顯示在大鼠基質中隨時間至少77%之穩定性。表6中分析之相同樣品用於針對表7進行之實驗中。表7顯示表6之ELISA穩定性結果之LCSM證實。
以起始濃度1mg/mL之源材料(即,MC-VC-MMAE THIOMABTM抗體)分析表89中識別之MC-VC-MMAE THIOMABTM抗體。針對表89中識別之MC-VC-MMAE THIOMABTM抗體之DAR計算值全部DAR1。表89中識別之所有MC-VC-MMAE THIOMABTM抗體經再 氧化具有50%之聚集。針對ELISA複製,表8中識別之MC-VC-MMAE THIOMABTM抗體顯示在大鼠基質中隨時間至少77%之穩定性。
針對表8至10中識別之PDS-MMAE及-vc-MMAE THIOMABTM抗體之DAR計算值全部>DAR0。針對兩種ELISA複製中之至少一者,表8中識別之PDS-MMAE THIOMABTM抗體顯示在大鼠基質隨時間至少80%之穩定性。
有趣地,經vc-及PDS接合之經半胱胺酸改造之抗體(即,THIOMABTM抗體)之DAR、濃度、聚集及穩定性係不相同。例如,表67(PDS連接子)及表89(vc連接子)之較佳經半胱胺酸改造之抗體係不相同。例如,接合至藥物部分之PDS連接子之較佳頂端穩定位點係LC-T22C、LC-K39C、LC-Y49C、LC-Y55C、LC-T85C、LC-T97C、LC-R142C、LC-K149C、HC-A140C、HC-L174C、HC- L179C、HC-G371C、HC-Y373C及HC-S424C,同時接合至藥物部分之-vc連接子之較佳頂端穩定位點係根據EU編號之LC-I106C、LC-R108C、LC-V205C、HC-T110C(Kabat編號)、HC-T187C、HC-T209C、HC-V262C、HC-G371C、HC-E382C、HC-N434C(參見圖21)。因此,在篩選中,僅HC-G371C係用於PDS及-vc之頂端位點。因此,判定當將藥物部分接合至具有PDS或-vc連接子之經半胱胺酸改造之抗體時對穩定性發揮最佳作用之位點係不可預測的且需大量實驗。
THIOMABTM抗體之硫醇反應性
可藉由如美國專利案第7,521,541號(以引用之方式將其全部內容併入本文中)中描述之生物素化及鏈黴親和素結合量測全長IgG經半胱胺酸改造之抗體(THIOMABTM抗體)之硫醇反應性。具體言之,可實施西方墨點分析以篩選與生物素-馬來醯亞胺特異性接合之THIOMABTM抗體。在此分析中,可於還原SDS-PAGE上分析該等抗體及藉由以鏈黴親和素-HRP培養明確探查生物素之存在。可在重鏈或者輕鏈中觀察到鏈黴親和素-HRP之相互作用,此取決於哪種被改造之cys變體被使用及該結合可與無被改造之半胱胺酸之野生型IgG之生物素-鏈黴親和素相互作用進行比較,藉此指示相較於野生型抗體之任何背景結合,哪種THIOMABTM抗體特異性接合生物素。
抗體藥物接合物
本發明之經半胱胺酸改造之抗體可與任何治療試劑(即,藥物部分)接合,該治療試劑可透過反應性半胱胺酸硫醇基團共價連接至該抗體。出於例示性目的,揭示於本文提供之表中之經半胱胺酸改造之抗體係接合至美登醇藥物(具體言之係MMAE)。
抗體藥物接合物(ADC)化合物之例示性實施例包括經半胱胺酸改造之抗體(Ab)及藥物部分(D),其中該抗體具有一或多個游離半胱胺 酸胺基酸且該抗體係透過該等一或多個游離半胱胺酸胺基酸藉由連接子部分(L)連接至D;該組合物具有式I:Ab-(L-D) p I
其中p係1、2、3或4。藉由以本文描述之方法引入之半胱胺酸殘基之數量限制可經由硫醇反應性連接子部分接合至抗體分子之藥物部分之數量。因此式I之例示性ADC包括具有1、2、3或4個被改造之半胱胺酸胺基酸之抗體。
抗體藥物接合物化合物(ADC)之另一例示性實施例包括經半胱胺酸改造之抗體(Ab)、白蛋白結合肽(ABP)及藥物部分(D),其中該抗體係藉由連接子部分(L)連接至該藥物部分及該抗體係藉由醯胺鍵或第二連接子部分連接至該白蛋白結合肽;該組合物具有式Ia:ABP-Ab-(L-D) p Ia
其中p係1、2、3或4。
本發明之ADC化合物包含彼等具有抗癌活性效用者。特定言之,該等化合物包含藉由連接子接合(即,共價連接)至藥物部分(即,毒素)之半胱胺酸經改造之抗體。當該藥物未接合至抗體時,該藥物具有細胞毒性或抑制細胞生長效應。因此,藉由接合至抗體調節藥物部分之生物活性。本發明之抗體藥物接合物(ADC)可向腫瘤組織選擇性遞送有效劑量之細胞毒性試劑,藉以達成更大之選擇性(即,較低之有效劑量)。
藥物部分
抗體藥物接合物(ADC)之藥物部分(D)包含具有細胞毒性或抑制細胞生長效應之任何化合物、部分或基團。藥物部分包含:(i)化學治療試劑,其等可用作微管蛋白抑制劑、有絲分裂抑制劑、拓樸異構酶抑制劑或DNA嵌入劑;(ii)可起酶促作用之蛋白毒素;及(iii)放射性同 位素。
例示性藥物部分包含(但不限於)美登醇、奧利斯他汀、尾海兔素、新月毒素、CC1065、卡奇黴素及其他烯二炔類抗生素、紫杉烷、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚(CBI)二聚物、CBI-PBD異二聚物、蒽環類藥物及其立體異構物、同電子排列體、類似物或衍生物。
適用作美登醇藥物部分之美登素化合物係此項技術中熟知並可根據已知方法分離自自然源、使用基因性改造技術製造(參見Yu等人(2002)PROC.NAT.ACAD.SCI.(USA)99:7968-7973)或根據已知方法合成製造之美登醇及美登醇類似物。
例示性美登醇藥物部分包含彼等具有諸如以下經修飾之芳環者:C-19-脫氯(US 4256746)(藉由安絲菌素(ansamytocin)P2之氫化鋰鋁還原製備);C-20-羥基(或C-20-脫甲基)+/- C-19-脫氯(美國專利案第4361650號及第4307016號)(藉由使用鏈黴菌屬(Streptomyces)或放線菌屬(Actinomyces)脫甲基或使用LAH脫氯製備);及C-20-脫甲氧基、C-20-醯氧基(-OCOR)、+/-脫氯(美國專利案第4,294,757號)(藉由使用醯基氯醯化製備)及彼等在其他位置具有修飾者。
例示性美登醇藥物部分亦包含彼等具有諸如以下修飾者,:C-9-SH(US 4424219)(藉由美登醇與H2S或P2S5之反應製備);C-14-烷氧基甲基(脫甲氧基/CH2OR)(US 4331598);C-14-羥甲基或醯氧基甲基(CH2OH或CH2OAc)(US 4450254)(製備自Nocardia);C-15-羥基/醯氧基(US 4364866)(藉由以鏈黴菌屬轉化美登醇製備);C-15-甲氧基(美國專利案第4313946號及第4315929號)(分離自滑桃樹(Trewia nudlflora));C-18-N-脫甲基(美國專利案第4362663號及第4322348號)(藉由以鏈黴菌屬使美登醇脫甲基化製備);及4,5-脫氧(US 4371533)(藉由三氯化鈦/LAH還原美登醇製備)。已知美登素化合物上之許多位 置視連接類型而用作鍵聯位置。例如,對於形成酯鍵,具有羥基之C-3位置、經羥甲基修飾之C-14位置、經羥基修飾之C-15位置及具有羥基之C-20位置均適合。
式I之抗體藥物接合物(ADC)之藥物部分(D)包含具有以下結構之美登醇:
其中波浪線指示D之硫原子共價連接至抗體藥物接合物(ADC)之連接子(L)。R可獨立地係H或選自以下之C1-C6烷基:甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基及3,3-二甲基-2-丁基。將醯胺基連接至硫原子之伸烷基鏈可係甲烷基、乙烷基或丙基(即,m係1、2或3)。
美登素化合物藉由透過抑制微管蛋白(microtubulin protein、tubulin)之聚合而在有絲分裂期間抑制微管之形成以抑制細胞增殖(Remillard等人(1975)Science 189:1002-1005)。美登素及美登醇係高細胞毒性但其於癌症治療中之臨床用途已受主要歸因於其對腫瘤之差選擇性之嚴重全身性副作用極大限制。因為美登素對中樞神經系統及胃腸道系統之嚴重副作用,所以已停止使用美登素之臨床試驗(Issel 等人(1978)Can.Treatment.Rev.5:199-207)。
美登醇藥物部分係在抗體藥物接合物中受矚目之藥物部分,因為其係:(i)藉由發酵產品之發酵或化學修飾、衍生可相對容易地製備;(ii)適合以適用於透過非二硫化物連接子接合至抗體之官能基衍生;(iii)在血漿中穩定;及(iv)有效抵抗各種腫瘤細胞系(US 2005/0169933;WO 2005/037992;US 5208020)。
如同其他藥物部分,針對本發明之化合物涵蓋美登醇藥物部分之所有立體異構物(即,D之掌性碳之R及S組態之任何組合)。在一個實施例中,該美登醇藥物部分(D)將具有以下立體化學:
美登醇藥物部分之例示性實施例包含:DM1,(CR2)m=CH2CH2;DM3,(CR2)m=CH2CH2CH(CH3);及DM4,(CR2)m=CH2CH2C(CH3)2,其具有以下結構:
該連接子可視連接類型連接至美登醇分子之各種位置。例如,可藉由使用習知偶合技術與羥基反應形成酯鍵。該反應可發生於具有羥基之C-3位置、經羥甲基修飾之C-14位置、經羥基修飾之C-15位置 及具有羥基之C-20位置處。在一較佳實施例中,該鍵係形成於美登醇或美登醇類似物之C-3位置。
I之抗體藥物接合物(ADC)之藥物部分(D)亦包含尾海兔素及其肽性類似物及衍生物、奧利斯他汀(美國專利案第5635483號;第5780588號)。已顯示尾海兔素及奧利斯他汀干擾微管動力學、GTP水解及細胞核及細胞分裂(Woyke等人(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)並具有抗癌活性(US 5663149)及抗真菌活性(Pettit等人(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。各種形式之尾海兔素或奧利斯他汀藥物部分可透過肽性藥物部分之N(胺基)端或C(羧基)端共價連接至抗體(WO 02/088172;Doronina等人(2003)Nature Biotechnology 21(7):778-784;Francisco等人(2003)Blood 102(4):1458-1465)。
藥物部分包含尾海兔素、奧利斯他汀(US 5635483;US 5780588;US 5767237;US 6124431)及其類似物及衍生物。已顯示尾海兔素及奧利斯他汀干擾微管動力學、GTP水解及細胞核及細胞分裂(Woyke等人(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)並具有抗癌活性(US 5663149)及抗真菌活性(Pettit等人(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。尾海兔素或奧利斯他汀藥物部分可透過肽性藥物部分之N(胺基)端或C(羧基)端連接至該抗體(WO 02/088172)。
例示性奧利斯他汀實施例包含連接N端之單甲基奧利斯他汀藥物部分DE及DF,其揭示於US 7498298及US 7659241中,各案件以全文引用之方式明確併入本文中。
I之抗體藥物接合物(ADC)之藥物部分(D)包含透過N端連接至該抗體且具有以下結構之單甲基奧利斯他汀藥物部分MMAE及MMAF:
例示性MMAE ADC係顯示於圖11及12中。
通常,可藉由在兩個或更多個胺基酸及/或肽片段間形成肽鍵製備基於肽之藥物部分。例如,可根據肽化學領域中熟知之液相合成方法(參見E.Schröder及K.Lübke,「The Peptides」,第1卷,第76至136頁,1965,Academic Press)製備此類肽鍵。
該藥物部分包含卡奇黴素及其類似物及衍生物。抗生素之卡奇黴素家族可在子皮莫耳濃度下產生雙股DNA斷裂。為製備卡奇黴素家族之接合物,參見US 5712374;US 5714586;US 5739116;US 5767285;US 5770701;US 5770710;US 5773001;US 5877296。可使用之卡奇黴素之結構性類似物包含(但不限於)γ1 I、α2 I、α3 I、N-乙醯基-γ1 I、PSAG及θI 1(Hinman等人Cancer Research 53:3336-3342(1993);Lode等人Cancer Research 58:2925-2928(1998)。
在一些實施例中,ADC包括吡咯并苯并二氮呯(PBD)。在一些實施例中,PBD二聚物識別並結合至特異性DNA序列。天然產物安曲黴素(PBD)係首次報告於1965(Leimgruber等人,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87:5793-5795;Leimgruber等人,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87:5791-5793)中。自此之後,已報告大量PBD(天然生成及類似物)(Thurston等人,(1994)Chem.Rev.1994,433-465),包含三環PBD支架之二聚物(US 6884799;US 7049311;US 7067511;US 7265105; US 7511032;US 7528126;US 7557099)。不希望受任何特定理論束縛,據信該二聚物結構賦予具有B形DNA之小凹槽之異構螺旋度適當之三維形狀,導致結合位點之緊密貼合(Kohn,In Antibiotics III.Springer-Verlag,New York,第3至11頁(1975);Hurley及Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19:230-237)。已顯示具有C2芳基取代基之二聚性PBD化合物適用作細胞毒性試劑(Hartley等人(2010)Cancer Res.70(17):6849-6858;Antonow(2010)J.Med.Chem.53(7):2927-2941;Howard等人(2009)Bioorganic and Med.Chem.Letters 19(22):6463-6466)。
在一些實施例中,可使用PBD化合物作為前藥,藉由在N10位置提供活體內可移除之氮保護基團來對其進行保護(WO 00/12507;WO 2005/023814)。
在一些實施例中,該免疫接合物包括接合至一或多個卡奇黴素分子之抗體。抗生素之卡奇黴素家族及其類似物可在子皮莫耳濃度下產生雙股DNA斷裂(Hinman等人,(1993)Cancer Research 53:3336-3342;Lode等人,(1998)Cancer Research 58:2925-2928)。卡奇黴素具有細胞內作用位點,但在某些實例中,其不容易跨過血漿膜。因此,此等試劑透過抗體介導之內化之細胞攝取可(在一些實施例中)極大增加其細胞毒性效應。以卡奇黴素藥物部分製備抗體藥物接合物之非限制性例示性方法係描述(例如)於US 5712374;US 5714586;US 5739116;及US 5767285中。
在一些實施例中,接合至該抗體之卡奇黴素藥物部分係具有下式之化合物:
其中X係Br或I;L係連接子;R係氫、C1-6烷基或-C(=O)C1-6烷基;及Ra係氫或C1-6烷基。
在一些實施例中,X係Br,Ra係氫及R係異丙基。
在其他實施例中,X係Br,Ra係氫及R係乙基。
在其他實施例中,X係I,Ra係氫及R係異丙基。
在其他實施例中,X係I,Ra係氫及R係乙基。
在一些實施例中,X係Br,Ra係氫及R係-C(=O)CH3
在其他實施例中,X係I,Ra係氫及R係-C(=O)CH3
在其他實施例中,X係I,Ra係乙基及R係-C(=O)CH3
在其他實施例中,X係Br,Ra係乙基及R係-C(=O)CH3
PBD二聚物已接合至抗體及所得之ADC顯示具有抗癌性質(US 2010/0203007)。PBD二聚物上之非限制性例示性鍵聯位點包含五員吡咯并環、在PBD單元間之系鏈(tether)及N10-C11亞胺基(WO 2009/016516;US 2009/304710;US 2010/047257;US 2009/036431;US 2011/0256157;WO 2011/130598)。
在一些實施例中,ADC包括吡咯并苯并二氮呯(PBD)。在一些實施例中,PBD二聚物識別並結合至特異性DNA序列。天然產物安曲黴素(PBD)係首次報告於1965(Leimgruber等人,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87:5793-5795;Leimgruber等人,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87:5791-5793)中。自此之後,已報告大量PBD(天然生成及類似物) (Thurston等人,(1994)Chem.Rev.1994,433-465),包含三環PBD支架之二聚物(US 6884799;US 7049311;US 7067511;US 7265105;US 7511032;US 7528126;US 7557099)。不希望受任何特定理論束縛,據信該二聚物結構賦予具有B形DNA之小凹槽之異構螺旋度適當之三維形狀,導致結合位點處之緊密貼合(Kohn,In Antibiotics III.Springer-Verlag,New York,第3至11頁(1975);Hurley及Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19:230-237)。已顯示具有C2芳基取代基之二聚性PBD化合物適用作細胞毒性試劑(Hartley等人(2010)Cancer Res.70(17):6849-6858;Antonow(2010)J.Med.Chem.53(7):2927-2941;Howard等人(2009)Bioorganic and Med.Chem.Letters 19(22):6463-6466)。
在一些實施例中,可使用PBD化合物作為前藥,藉由在N10位置提供活體內可移除之氮保護基團來對其進行保護(WO 00/12507;WO 2005/023814)。
PBD二聚物已接合至抗體及所得之ADC顯示具有抗癌性質(US 2010/0203007)。PBD二聚物上之非限制性例示性鍵聯位點包含五員吡咯并環、在PBD單元間之系鏈及N10-C11亞胺基(WO 2009/016516;US 2009/304710;US 2010/047257;US 2009/036431;US 2011/0256157;WO 2011/130598)。
ADC之非限制性例示性PBD二聚物組分係具有式A:
及其鹽及溶劑合物,其中:波浪線指示連接至該連接子之共價連接位點; 虛線指示於C1與C2間或C2與C3間視需要存在雙鍵;R2係獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR且視需要進一步選自鹵基或二鹵基,其中RD係獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基;R6及R9係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn及鹵基;R7係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn及鹵基;Q係獨立地選自O、S及NH;R11係H或R,或其中Q係O、SO3M,其中M係金屬陽離子;R及R’係各獨立地選自視需要經取代之C1-8烷基、C1-12烷基、C3-8雜環基、C3-20雜環及C5-20芳基且視需要與基團NRR’相關,R及R’連同其等連接之氮原子形成視需要經取代之4-、5-、6-或7-員雜環;R12、R16、R19及R17係如分別針對R2、R6、R9及R7所定義;R"係C3-12伸烷基,該鏈中可穿插一或多個雜原子(例如O、S、N(H)、NMe)及/或芳環(例如苯或吡啶,其環視需要經取代);及X及X’係獨立地選自O、S及N(H)。
在一些實施例中,R及R’係各獨立地選自視需要經取代之C1-12烷基、C3-20雜環及C5-20芳基且視需要與基團NRR’相關,R及R’連同其等連接之氮原子形成視需要經取代之4-、5-、6-或7-員雜環。
在一些實施例中,R9及R19係H。
在一些實施例中,R6及R16係H。
在一些實施例中,R7及R17皆係OR7A,其中R7A係視需要經取代之C1-4烷基。在一些實施例中,R7A係Me。在一些實施例中,R7A係Ch2Ph,其中Ph係苯基。
在一些實施例中,X係O。
在一些實施例中,R11係H。
在一些實施例中,於每個單體單元中在C2與C3間具有雙鍵。
在一些實施例中,R2及R12係獨立地選自H及R。在一些實施例中,R2及R12獨立地係R。在一些實施例中,R2及R12獨立地係視需要經取代之C5-20芳基或C5-7芳基或C8-10芳基。在一些實施例中,R2及R12獨立地係視需要經取代之苯基、噻吩基、萘基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基。在一些實施例中,R2及R12係獨立地選自=O、=CH2、=CH-RD及=C(RD)2。在一些實施例中,R2及R12各係=CH2。在一些實施例中,R2及R12各係H。在一些實施例中,R2及R12各係=O。在一些實施例中,R2及R12各係=CF2。在一些實施例中,R2及/或R12獨立地係=C(RD)2。在一些實施例中,R2及/或R12獨立地係=CH-RD
在一些實施例中,當R2及/或R12係=CH-RD時,每個基團可獨立地具有如下顯示之組態中之任何一者:
在一些實施例中,=CH-RD係呈構形(I)。
在一些實施例中,R"係C3伸烷基或C5伸烷基。
在一些實施例中,ADC之例示性PBD二聚物組分具有式A(I)之結構: 其中n係0或1。
在一些實施例中,ADC之例示性PBD二聚物組分具有式A(II)之結構: 其中n係0或1。
在一些實施例中,ADC之例示性PBD二聚物組分具有式A(III)之結構: 其中RE及RE"係各獨立地選自H或RD,其中RD係如上文定義;及其中n係0或1。
在一些實施例中,n係0。在一些實施例中,n係1。在一些實施例中,RE及/或RE"係H。在一些實施例中,RE及RE"係H。在一些實施例中,RE及/或RE"係RD,其中RD係視需要經取代之C1-12烷基。在一些實施例中,RE及/或RE"係RD,其中RD係甲基。
在一些實施例中,ADC之例示性PBD二聚物組分具有式A(IV)之結構: 其中Ar1及Ar2各獨立地係視需要經取代之C5-20芳基;其中Ar1及Ar2可相同或不同;及 其中n係0或1。
在一些實施例中,ADC之例示性PBD二聚物組分具有式A(V)之結構: 其中Ar1及Ar2各獨立地係視需要經取代之C5-20芳基;其中Ar1及Ar2可相同或不同;及其中n係0或1。
在一些實施例中,Ar1及Ar2係各獨立地選自視需要經取代之苯基、呋喃基、噻吩基(thiophenyl)及吡啶基。在一些實施例中,Ar1及Ar2各獨立地係視需要經取代之苯基。在一些實施例中,Ar1及Ar2各獨立地係視需要經取代之噻吩-2-基或噻吩-3-基。在一些實施例中,Ar1及Ar2各獨立地係視需要經取代之喹啉基或異喹啉基。該喹啉基或異喹啉基可透過任何可獲得之環位置結合至PBD核。例如,該喹啉基可係喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基及喹啉-8-基。在一些實施例中,該喹啉基係選自喹啉-3-基及喹啉-6-基。該異喹啉基可係異喹啉-1-基、異喹啉-3-基、異喹啉-4-基、異喹啉-5-基、異喹啉-6-基、異喹啉-7-基及異喹啉-8-基。在一些實施例中,該異喹啉基係選自異喹啉-3-基及異喹啉-6-基。
ADC之其他非限制性例示性PBD二聚物組分係具有式B:
及其鹽及溶劑合物,其中: 波浪線指示連接至該連接子之共價連接位點;連接至OH之波浪線指示S或R組態;RV1及RV2係獨立地選自H、甲基、乙基及苯基(苯基可視需要經氟取代,特別係在4位置處)及C5-6雜環基;其中RV1及RV2可相同或不同;及n係0或1。
在一些實施例中,RV1及RV2係獨立地選自H、苯基及4-氟苯基。
在一些實施例中,連接子可連接在PBD二聚物藥物部分之各種位點之一者處,包含B環之N10亞胺、C環之C-2內/外位置或連接A環之系鏈單元(參見下文結構C(I)及C(II))。
ADC之非限制性例示性PBD二聚物組分包含式C(I)及C(II):
式C(I)及C(II)係以其N10-C11亞胺形式顯示。例示性PBD藥物部分亦包含甲醇胺及受保護之甲醇胺形式,如顯示於下表中:
其中:X係CH2(n=1至5)、N或O;Z及Z’係獨立地選自OR及NR2,其中R係含有1至5個碳原子之第 一、第二或第三烷基鏈;R1、R’1、R2及R’2係各獨立地選自H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包含經取代之芳基)、C5-20雜芳基、-NH2、-NHMe、-OH及-SH,其中在一些實施例中,烷基、烯基及炔基鏈包括多達5個碳原子;R3及R’3係獨立地選自H、OR、NHR及NR2,其中R係含有1至5個碳原子之第一、第二或第三烷基鏈;R4及R’4係獨立地選自H、Me及OMe;R5係選自C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包含經鹵基、硝基、氰基、烷氧基、烷基、雜環基取代之芳基)及C5-20雜芳基,其中在一些實施例中,烷基、烯基及炔基鏈包括多達5個碳原子;R11係H、C1-C8烷基或保護基團(諸如乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBZ)、9-茀基亞甲氧基羰基(Fmoc)或包括諸如纈胺酸-瓜胺酸-PAB之自毀單元之部分);R12係H、C1-C8烷基或保護基團;其中R1、R’1、R2、R’2、R5或R12中之一者之氫或A環間之-OCH2CH2(X)nCH2CH2O-間隔子之氫係經連接至ADC之連接子之鍵置換。
ADC之例示性PBD二聚物部分包含(但不限於)(波浪線指示共價連接至該連接子之位點): 包括PRD二聚物之ADC之非限制性例示性實施例具有下列結構:
PBD二聚物-Phe-Lys-PAB-Ab,其中:n係0至12。在一些實施例中,n係2至10。在一些實施例中,n係4至8。在一些實施例中,n係選自4、5、6、7,及8。
在一些實施例中,可藉由經由硫原子使包含吡啶離去基團之連接子-藥物中間物與抗體之半胱胺酸硫醇接合以形成二硫鍵製造本文描述之包括PBD二聚物之ADC。此外,在一些實施例中,可藉由接合包含硫代吡啶基離去基團之連接子-藥物中間物製造本文描述之包括PBD二聚物之ADC,其中該吡啶環係經一或多個硝基取代。在一些實施例中,該吡啶基環係經-NO2單取代。在一些實施例中,該-NO2單 取代相對於二硫化物係對位。在一些實施例中,透過N10位置連接該PBD二聚物。例如,可藉由將單甲基乙基吡啶基二硫化物、經N10連接之PBD連接子中間物(下文顯示)接合至抗體以製造包括PBD二聚物之非限制性例示性ADC:
PBD二聚物-val-cit-PAB-Ab及PBD二聚物-Phe-Lys-PAB-Ab之連接子係蛋白酶可裂解,同時PBD二聚物-馬來醯亞胺-縮醛之連接子係酸不穩定。
可根據此項技術中已知的方法製備PBD二聚物及包括PBD二聚物之ADC。參見例如WO 2009/016516;US 2009/304710;US 2010/047257;US 2009/036431;US 2011/0256157;WO 2011/130598;WO 2013/055987。
在一些實施例中,ADC包括蒽環類藥物。蒽環類藥物係顯示細胞毒性活性之抗生素化合物。雖不欲受任何特定理論束縛,但是研究已指示可操作蒽環類藥物以藉由許多不同機制殺死細胞,該等機制包含:1)將藥物分子嵌入細胞之DNA中,藉此抑制DNA依賴性核酸合成;2)藉由該藥物產生自由基,其然後與細胞大分子反應以造成該等細胞損害及/或3)藥物分子與細胞膜之相互作用(參見例如C.Peterson等人,「Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia」於Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy;N.R.Bachur,「Free Radical Damage」同上刊物,第97至102頁)。因為細胞毒性潛力,蒽環類藥物已用於治療許多癌症, 諸如白血病、乳癌、肺癌、卵巢腺癌及肉瘤(參見例如P.H-Wiernik,在Anthracycline:Current Status And New Developments第11頁中)。
非限制性例示性蒽環類藥物包含多柔比星、表柔比星、伊達比星、道諾黴素、奈莫柔比星(nemorubicin)及其衍生物。已製造並研究道諾黴素及多柔比星之免疫接合物及前藥(Kratz等人(2006)Current Med.Chem.13:477-523;Jeffrey等人(2006)Bioorganic & Med.Chem.Letters 16:358-362;Torgov等人(2005)Bioconj.Chem.16:717-721;Nagy等人(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834;Dubowchik等人(2002)Bioorg.& Med.Chem.Letters 12:1529-1532;King等人(2002)J.Med.Chem.45:4336-4343;EP 0328147;US 6630579)。抗體藥物接合物BR96-多柔比星與腫瘤相關抗原Lewis-Y特異性反應並已在I階段及II階段研究中進行評估(Saleh等人(2000)J.Clin.Oncology 18:2282-2292;Ajani等人(2000)Cancer Jour.6:78-81;Tolcher等人(1999)J.Clin.Oncology 17:478-484)。
PNU-159682係奈莫柔比星之有效代謝物(或衍生物)(Quintieri等人,(2005)Clinical Cancer Research 11(4):1608-1617)。奈莫柔比星係多柔比星與在多柔比星之醣苷胺基上之2-甲氧基嗎啉基之半合成類似物並已處於臨床評估中(Grandi等人(1990)Cancer Treat.Rev.17:133;Ripamonti等人(1992)Brit.J.Cancer 65:703;),包含針對肝細胞癌之II/III階段試驗(Sun等人(2003)Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22,Abs1448;Quintieri(2003)Proceedings of the American Association of Cancer Research,44:第1版,Abs 4649;Pacciarini等人(2006)Jour.Clin.Oncology 24:14116)。
以式Ia或其醫藥上可接受之鹽顯示包括奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之非限制性例示性ADC:
其中R1係氫原子、羥基或甲氧基及R2係C1-C5烷氧基;L1及Z共同係如本文描述之連接子(L);T係如本文描述之抗體(Ab);及m係1至約20。在一些實施例中,m係1至10、1至7、1至5或1至4。
在一些實施例中,R1及R2皆係甲氧基(-OMe)。
以式Ib或其醫藥上可接受之鹽顯示包括奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之另一非限制性例示性ADC:
其中R1係氫原子、羥基或甲氧基及R2係C1-C5烷氧基;L2及Z共同係如本文描述之連接子(L);T係如本文描述之抗體(Ab);及m係1至約20。在一些實施例中,m係1至10、1至7、1至5或1至 4。
在一些實施例中,R1及R2皆係甲氧基(-OMe)。
在一些實施例中,含有奈莫柔比星之ADC之奈莫柔比星組分係PNU-159682。在一些此類實施例中,ADC之藥物部分可具有下列結構中之一者: 其中波浪線指示連接至該連接子(L)。
包含PNU-159682之蒽環類藥物可透過數個鍵聯位點及各種連接子(US 2011/0076287;WO2009/099741;US 2010/0034837;WO 2010/009124)(包含本文描述之連接子)接合至抗體。
包括奈莫柔比星及連接子之例示性ADC包含(但不限於):
PNU-159682馬來醯亞胺縮醛-Ab;
PNU-159682-val-cit-PAB-Ab;
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子-Ab;
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子(R1R2)-Ab,其中:R1及R2係獨立地選自H及C1-C6烷基;及 PNU-159682-馬來醯亞胺-Ab。
PNU-159682馬來醯亞胺縮醛-Ab之連接子係酸不穩定的,而PNU-159682-val-cit-PAB-Ab、PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子-Ab及PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子(R1R2)-Ab之連接子係可蛋白酶裂解。
例示性PNU ADC係顯示於圖10D及10E中。
在一些實施例中,ADC包括1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚 (CBI)。DNA小凹槽烷化劑之5-胺基-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯并[e]吲哚(胺基CBI)類別係有效之細胞毒素(Atwell等人,(1999)J.Med.Chem.,42:3400)且已在針對癌症治療設計之前藥之許多類別中用作效應子單元。此等已包含抗體接合物(Jeffrey等人,(2005)J.Med.Chem.,48:1344)、用於基於硝基苄基胺甲酸鹽之基因治療之前藥(Hay等人,(2003)J.Med.Chem.46:2456)及作為經缺氧活化之前藥之相應之硝基-CBI衍生物(Tercel等人,(2011)Angew.Chem.,Int.Ed,50:2606-2609)。已藉由烷基鏈將CBI及吡咯[2,1-c][1,4]苯并二氮呯(PBD)藥效團連接在一起(Tercel等人(2003)J.Med.Chem 46:2132-2151)。
在一些實施例中,ADC包括1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚(CBI)二聚物(WO 2015/023355)。
例示性CBI二聚物ADC係顯示於圖10B中。
在一些此類實施例中,該二聚物係異二聚物,其中該二聚物中之一半係CBI部分及該二聚物中之另一半係PBD部分。
例示性CBI-PBD異二聚物ADC係顯示於圖10C中。
在一些實施例中,CBI二聚物包括下式:
其中R1係選自H、P(O)3H2、C(O)NRaRb或結合至連接子(L)之鍵;R2係選自H、P(O)3H2、C(O)NRaRb或結合至連接子(L)之鍵;Ra及Rb係獨立地選自H及視需要經一或多個F取代之C1-C6烷基, 或Ra及Rb形成五或六員雜環基團;T係選自C3-C12伸烷基、Y、(C1-C6伸烷基)-Y-(C1-C6伸烷基)、(C1-C6伸烷基)-Y-(C1-C6伸烷基)-Y-(C1-C6伸烷基)、(C2-C6伸烯基)-Y-(C2-C6伸烯基)及(C2-C6伸炔基)-Y-(C2-C6伸炔基)之系鏈基團;其中Y係獨立地選自O、S、NR1芳基及雜芳基;其中伸烷基、伸烯基、芳基及雜芳基係獨立地及視需要經F、OH、O(C1-C6烷基)、NH2、NHCH3、N(CH3)2、OP(O)3H2及C1-C6烷基取代,其中烷基係視需要經一或多個F取代;或伸烷基、伸烯基、芳基及雜芳基係獨立地及視需要經結合至L之鍵取代;D'係選自以下之藥物部分:
其中波浪線指示連接至T之位點;X1及X2係獨立地選自O及NR3,其中R3係選自H及視需要經一或多個F取代之C1-C6烷基;R4係 H、CO2R或結合至連接子(L)之鍵,其中R係C1-C6烷基或苄基;及R5係H或C1-C6烷基。
在一些實施例中,該免疫接合物包括接合至一或多個鵝膏毒素分子之抗體。鵝膏毒素係包括8個胺基酸之環肽。其等可分離自毒鵝膏菌或經合成製備。鵝膏毒素特異性抑制哺乳動物細胞之DNA依賴性RNA聚合酶II,及藉此亦抑制受影響之細胞之轉錄及蛋白質生物合成。細胞中轉錄之抑制導致生長及增殖之停止。參見,例如,Moldenhauer等人JNCI 104:1-13(2012)、WO2010115629、WO2012041504、WO2012119787、WO2014043403、WO2014135282及WO2012119787,以引用之方式將其全部內容併入本文中。在一些實施例中,該一或多種鵝膏毒素分子係一或多種α-鵝膏毒素分子。
其他藥物部分包含諸如以下之蛋白毒素:白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈(Vitetta等人(1987)Science,238:1098)、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α-八疊球菌、桐油蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、多花白樹毒蛋白、米托菌素(mitogellin)、局限曲黴素、酚黴素、伊諾黴素及新月毒素(WO 93/21232)。
應瞭解其中超過一個親核性基團與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應,然後所得產物係具有一或多種連接至抗體之藥物部分之分佈之ADC化合物的混合物。每個抗體之藥物平均數量(DAR)可藉由雙重ELISA抗體分析計算自該混合物,該分析針對抗體及該藥物。可藉由質譜術識別該混合物中之個別ADC分子並藉由HPLC例如疏水性相互作用層析術分離(參見,例如,McDonagh等人(2006)Prot.Engr. Design & Selection 19(7):299-307;Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070;Hamblett,K.J.等人,「Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」Abstract No.624,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,March 27-31,2004,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月;Alley,S.C.等人,「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates」Abstract No.627,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,March 27-31,2004,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月)。在某些實施例中,具有單一負載值之同源性ADC可藉由電泳或層析術分離自接合混合物。
表18之抗體藥物接合物51至58(參見,實例16)可藉由偶合藥物部分與連接子試劑及根據WO 2013/055987;WO 2015/023355;WO 2010/009124;WO 2015/095227之程序,及與任何本文所述之抗體(包含經半胱胺酸改造之抗體)接合來製備。具體抗體藥物接合物列於表19中(參見,實例16)。
藥物部分亦包含具有核分解活性之化合物(例如,核糖核酸酶或DNA核酸內切酶)。
治療放射性同位素包含:32P、33p、90Y、125I、131I、131In、153Sm、186Re、188Re、211At、212Bi、212Pb及Lu之放射性同位素。
可以已知方式將放射性同位素或其他標記併入接合物中(Fraker等人(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-57;「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」Chatal,CRC Press 1989)。經碳14標記之1-異硫氰苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於將放射性核種接合至抗體之例示性螯合試劑(WO 94/11026)。
額外之ADC之具體實例係呈現於實例16中。
連接子
「連接子」(L)係雙官能或多官能部分,其可用以將一或多種藥物部分(D)連接至抗體(Ab)以形成式I抗體藥物接合物(ADC)。在一些實施例中,可使用具有用於共價連接至藥物及抗體之反應性官能之連接子製備抗體藥物接合物(ADC)。例如,在一些實施例中,抗體(Ab)之半胱胺酸硫醇可與連接子或藥物-連接子中間物之反應性官能基形成鍵以製造ADC。
在一態樣中,連接子具有可與存在於抗體上之游離半胱胺酸反應以形成共價鍵之官能。此類非限制性例示性反應性官能包含馬來醯亞胺、鹵代醯胺、α-鹵代乙醯基、經活化之酯(諸如琥珀醯亞胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯)、酐、酸性氯化物、磺醯氯、異氰酸酯及異硫氰酸酯。參見,例如,在Klussman等人,(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773之第766頁之接合方法及本文之實例。
在一些實施例中,連接子具有可與存在於抗體上之親電子基團反應之官能。此類例示性親電子基團包含(但不限於)醛及酮羰基。在一些實施例中,連接子之反應性官能之雜原子可與抗體上之親電子基團反應並形成結合至抗體單元之共價鍵。此類非限制性例示性反應性官能包含(但不限於)醯肼、肟、胺基、肼、縮胺基硫脲、肼羧酸酯及芳醯肼。
連接子可包括一或多種連接子組分。例示性連接子組分包含6-馬來醯亞胺基己醯基(「MC」)、馬來醯亞胺基丙醯基(「MP」)、纈胺酸-瓜胺酸(「val-cit」或「vc」)、丙胺酸-苯丙胺酸(「ala-phe」)、對胺基苄氧基羰基(「PAB」)、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-琥珀醯亞胺酯(「SPP」)及4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1羧酸酯(「MCC」)。此項技術中已知各種連接子組分,其中之一些描述於下文中。
連接子可係促進藥物釋放之「可裂解之連接子」。非限制性例示性可裂解之連接子包含酸不穩定之連接子(例如,包括腙)、蛋白酶敏感(例如,肽酶敏感)之連接子、光不穩定之連接子、或含有二硫化物之連接子(Chari等人,Cancer Research 52:127-131(1992);US 5208020)。
在某些實施例中,連接子具有下式II:-A a -W w -Y y - II
其中A係「延伸單元」,及a係0至1之整數;W係「胺基酸單元」,及w係0至12之整數;Y係「間隔子單元」,及y係0、1或2;及Ab、D及p係如上文針對式I所定義。此類連接子之例示性實施例係描述於美國專利案第7,498,298中,以引用之方式將其明確併入本文中。
在一些實施例中,連接子組分包括將抗體連接至另一連接子組分或連接至藥物部分之「延伸單元」。非限制性例示性延伸單元係顯示於下文中(其中波浪線指示共價連接至抗體、藥物或額外之連接子組分之位點):
在一些實施例中,該連接子可係擬肽性連接子,諸如彼等描述於WO2015/095227、WO2015/095124或WO2015/095223中者,該等文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一個態樣中,連接子具有反應性位點,該反應性位點具有對存在於抗體上之親核性半胱胺酸呈反應性之親電子基團。該抗體之半胱胺酸硫醇對連接子上之親電子基團具有反應性並形成結合至連接子之共價鍵。適用之親電子基團包含(但不限於)馬來醯亞胺及鹵代醯胺基。
經半胱胺酸改造之抗體根據在Klussman等人,(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773之第766頁之接合方法及根據實例4之方案與具有親電子官能基(諸如馬來醯亞胺或α-鹵代羰基)之連接子試劑或藥物-連接子中間物反應。
在又另一實施例中,連接子試劑或藥物-連接子中間物之反應性基團含有硫醇反應性官能基,其可與抗體之游離半胱胺酸硫醇形成鍵。硫醇反應官能基之實例包含(但不限於)馬來醯亞胺、α-鹵代乙醯基、經活化之酯(諸如琥珀醯亞胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯、酐、酸性氯化物、磺醯氯、異氰酸酯及異硫氰酸酯)。
在另一實施例中,該連接子可係用於透過分支、多官能連接子部分將超過一個藥物部分共價連接至抗體之樹突型連接子(Sun等人 (2002)Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215;Sun等人(2003)Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768;King(2002)Tetrahedron Letters 43:1987-1990)。樹突連接子可增加藥物相對於抗體之莫耳比率(即,負載),該莫耳比率係與ADC之效力相關。因此,在經半胱胺酸改造之抗體具有僅一個反應性半胱胺酸硫醇基團之情況下,可透過樹突連接子連接大量藥物部分。
該連接子可包括將抗體(Ab)連接至本發明之經半胱胺酸改造之抗體-藥物接合物(ADC)之藥物部分(D)之胺基酸殘基。該等胺基酸殘基可形成二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元。胺基酸殘基包含彼等天然生成及較小胺基酸及非天然生成之胺基酸類似物(諸如瓜胺酸)者。
適有用之胺基酸殘基單元可經設計適用並最佳化其選擇性以供特定酶之酶裂解(例如,腫瘤相關蛋白酶以釋放活性藥物部分)。在一個實施例中,胺基酸殘基單元(諸如纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit))係由組織蛋白酶B、C及D或胞漿素蛋白酶催化裂解之胺基酸殘基單元。
連接子單元可係具有諸如對胺基苄基胺甲醯基(PAB)單元之自毀類型,其中該ADC具有例示性結構:
其中Q係-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基;m係自0至4變化之整數;及p自1至4變化。
自毀間隔子之其他實例包含(但不限於)電子類似於PAB基團諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(US 7375078;Hay等人(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237)及鄰位或對位胺基苄基縮醛之芳族化合物。可使 用醯胺鍵一經水解即經環化之間隔子,諸如經取代或未經取代之4-胺基丁酸醯胺(Rodrigues等人(1995)Chemistry Biology 2:223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等人(1972)J.Amer.Chem.Soc.94:5815)及2-胺基苯丙酸醯胺(Amsberry等人,(1990)J.Org.Chem.55:5867)。在甘胺酸處經取代之含胺藥物之消除(Kingsbury等人(1984)J.Med.Chem.27:1447)亦係在ADC中適用之自毀間隔子之實例。
在另一實施例中,連接子L可係用於透過分支、多官能連接子部分將超過一個藥物部分共價連接至抗體之樹突型連接子(Sun等人(2002)Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215;Sun等人(2003)Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768)。樹突連接子可增加藥物相對於抗體之莫耳比率(即,負載),該莫耳比率係與ADC之效力相關。因此,在經半胱胺酸改造之抗體具有僅一個反應性半胱胺酸硫醇基團的情況下,可透過樹突連接子連接大量藥物部分(WO 2004/01993;Szalai等人(2003)J.Amer.Chem.Soc.125:15688-15689;Shamis等人(2004)J.Amer.Chem.Soc.126:1726-1731;Amir等人(2003)Angew.Chem.Int.Ed,42:4494-4499)。
式Ia抗體藥物接合物化合物之實施例包含(val-cit)、(MC-val-cit)及(MC-val-cit-PAB):
Ia抗體藥物接合物化合物之其他例示性實施例包含結構:
其中X係: ,-(CH2)n-,-(CH2CH2O)n-, Y係: 及R獨立地係H或C1-C6烷基;及n係1至12。
在另一實施例中,連接子具有反應性官能基,該反應性官能基具有對存在於抗體上之親電子基團呈反應性之親核性基團。抗體上之適用之親電子基團包含(但不限於)醛及酮羰基。連接子之親核性基團之雜原子可與抗體上之親電子基團反應並形成結合至抗體單元之共價鍵。連接子上之適用之親核性基團包含(但不限於)醯肼、肟、胺基、肼、縮胺基硫脲、肼羧酸酯及芳醯肼。抗體上之親電子基團提供用於連接至連接子之便利位點。
通常,肽型連接子可藉由在兩個或更多個胺基酸及/或肽片段間形成肽鍵來製備。此類肽鍵可(例如)根據肽化學領域中熟知之液相合成方法(E.Schröder及K.Lübke(1965)「The Peptides」,第1卷,第76至136頁,Academic Press)來製備。
在另一實施例中,該連接子可經調節穩定性或反應性之基團取代。例如,諸如磺酸根(-SO3 -)或銨之帶電取代基可視用以製備ADC之合成路徑而增加試劑之水溶性並促進連接子試劑與抗體或藥物部分之偶合反應,或促進Ab-L(抗體-連接子中間物)與D之偶合反應或D-L (藥物-連接子中間物)與Ab之偶合反應。
本發明之化合物明確涵蓋(但不限於)用以下連接子試劑製得之ADC:BMPEO、BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、硫代EMCS、硫代GMBS、硫代KMUS、硫代MBS、硫代SIAB、硫代SMCC及硫代SMPB及SVSB(琥珀醯亞胺基-(4-乙烯碸)苯甲酸酯),及包含雙馬來醯亞胺試劑:DTME、BMB、BMDB、BMH、BMOE、BM(PEO)3及BM(PEO)4,其等係購買自Pierce Biotechnology,Inc.,Customer Service Department,P.O.Box 117,Rockford,IL.61105 U.S.A,1-800-874-3723,International +815-968-0747。參見第467至498頁,2003-2004應用手冊及目錄(Applications Handbook and Catalog)。雙馬來醯亞胺試劑容許經半胱胺酸改造之抗體之硫醇基團以順序性或同時性方式連接至含有硫醇之藥物部分、標記或連接子中間物。除馬來醯亞胺外,對經半胱胺酸改造之抗體、藥物部分、標記或連接子中間物之硫醇基團呈反應性之其他官能基包含碘乙醯胺、溴乙醯胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、異氰酸酯及異硫氰酸酯。
適用之連接子試劑亦可經由其他商業來源諸如Molecular Biosciences Inc.(Boulder,CO)或根據描述於Toki等人(2002)J.Org.Chem.67:1866-1872;Walker,M.A.(1995)J.Org.Chem.60:5352-5355;Frisch等人(1996)Bioconjugate Chem.7:180-186;US 6214345;WO 02/088172;US 2003130189;US2003096743;WO 03/026577;WO 03/043583及WO 04/032828中之程序合成獲得。
具有馬來醯亞胺延伸及對位胺基苄基胺甲醯基(PAB)自毀間隔子之例示性纈胺酸-瓜胺酸(val-cit或vc)二肽連接子試劑具有結構:
其中Q係-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基;及m係自0至4變化之整數。
可根據Dubowchik等人,(1997)Tetrahedron Letters,38:5257-60製造具有馬來醯亞胺延伸單元及對胺基苄基自毀間隔子單元之例示性phe-lys(Mtr)二肽連接子試劑,及其具有結構:
其中Mtf係單-4-甲氧基三苯甲基,Q係-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基;及m係自0至4變化之整數。
本發明之例示性抗體藥物接合物化合物包含:
其中Val係纈胺酸;Cit係瓜胺酸;p係1、2、3或4;及Ab係經半胱胺酸改造之抗體。其他例示性抗體藥物接合物(其中美登醇藥物部分DM1係透過BMPEO連接子連接至曲妥珠單抗之硫醇基團)具有結構:
其中Ab係經半胱胺酸改造之抗體;n係0、1或2;及p係1、2、3或4。
抗體藥物接合物之製法
可藉由使用熟習此項技術者已知的有機化學反應、條件及試劑之數種途徑製備式I之ADC,該等途徑包含:(1)經半胱胺酸改造之抗體之半胱胺酸基團與連接子試劑反應以經由共價鍵形成抗體-連接子中間物Ab-L,接著與經活化之藥物部分D反應;及(2)藥物部分之親核性基團與連接子試劑反應以經由共價鍵形成藥物-連接子中間物D-L,接著與經半胱胺酸改造之抗體之半胱胺酸基團反應。可以各種經半胱胺酸改造之抗體、藥物部分及連接子使用接合方法(1)及(2)以製備式I抗體藥物接合物。
抗體半胱胺酸硫醇基團係親核性的且可與包含以下之連接子試劑及藥物-連接子中間物上之親電子基團反應以形成共價鍵:(i)活性酯,諸如NHS酯、HOBt酯、鹵代蟻酸酯及酸性鹵化物;(ii)烷基及苄基鹵化物,諸如鹵代醯胺;(iii)醛、酮、羧基及馬來醯亞胺基團;及(iv)二硫化物,包含吡啶基二硫化物,經由硫化物交換。藥物部分上之親核性基團包含(但不限於):胺、硫醇、羥基、醯肼、肟、肼、縮 胺基硫脲、肼羧酸酯及芳醯肼基團,其等可與連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應以形成共價鍵。
美登素可(例如)轉化為May-SSCH3,其可還原為游離硫醇May-SH並與經修飾之抗體(Chari等人(1992)Cancer Research 52:127-131)反應以形成具有二硫化物連接子之美登醇-抗體免疫接合物。已報告具有二硫化物連接子之抗體-美登醇接合物(WO 04/016801;US 6884874;US 2004/039176 A1;WO 03/068144;US 2004/001838 A1;美國專利案第6441163號、第5208020號、第5416064號;WO 01/024763)。以連接子試劑4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-琥珀醯亞胺酯構築該二硫化物連接子SPP。
在某些條件下,可藉由以諸如DTT(克萊蘭氏(Cleland's)試劑,二硫蘇糖醇)或TCEP(參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽;Getz等人(1999)Anal.Biochem.第273:73-80卷;Soltec Ventures,Beverly,MA)之還原試劑之處理使經半胱胺酸改造之抗體具有反應性以與連接子試劑接合。以約50倍過量之TCEP在37℃下將表現於CHO細胞中之全長經半胱胺酸改造之單株抗體(THIOMABTM抗體)還原3hrs以還原可於新引入之半胱胺酸殘基與存在於培養基中之半胱胺酸間形成之二硫鍵。稀釋經還原之THIOMABTM抗體並將其以含於pH 5之10mM乙酸鈉中之形式裝載於HiTrap S柱上,及用含有0.3M氯化鈉之PBS溶離。以稀釋(200nM)之水性硫酸銅(CuSO4)在室溫下在存在於親代Mab中之半胱胺酸殘基間重建二硫鍵整夜。可使用此項技術中已知的其他氧化劑(即,氧化試劑)及氧化條件。周圍空氣氧化亦有效。此溫和之部分再氧化步驟以高保真度有效形成鏈內二硫鍵。添加約10倍過量之藥物-連接子中間物(例如,BM(PEO)4-DM1),混合並使其在室溫下靜置一小時以實現接合並形成抗體藥物接合物(即,經接合之THIOMABTM抗體)。凝膠過濾並裝載該接合混合物及透過HiTrap S柱溶離以移除過量之藥物- 連接子中間物及其他雜質。
例如,美國專利公開案第20110301334號(以引用之方式將其全部內容併入本文中)顯示製備表現自用於接合之細胞培養物之經半胱胺酸改造之抗體的一般方法。半胱胺酸加成物假定連同各種鏈間二硫鍵經還原裂解以產生抗體之還原形式。成對半胱胺酸殘基間之該等鏈間二硫鍵在部分氧化條件(諸如曝露於周圍氧氣)下再形成。該等新引入、被改造及未成對之半胱胺酸殘基保持可用於與連接子試劑或藥物-連接子中間物反應以形成本發明之抗體接合物。表現於哺乳動物細胞系中之THIOMABTM抗體導致透過-S-S-鍵與被改造之Cys形成外部接合之Cys加成物。因此,不得不以還原及氧化程序處理經純化之THIOMABTM抗體以產生反應性THIOMABTM抗體。使用此等THIOMABTM抗體以接合含有馬來醯亞胺之細胞毒性藥物、螢光團及其他標記。
製造並可於本文提供之表中發現例示性THIOMABTM抗體接合物。
活體外細胞增殖分析
通常,藉由以下方法量測抗體藥物接合物(ADC)之細胞毒性或抑制細胞生長活性:於細胞培養基中使具有受體蛋白(例如,HER2)之哺乳動物細胞曝露該ADC之抗體;培養該等細胞達自約6小時至約5天之時間;及量測細胞活力。使用基於細胞之活體外分析以量測本發明之ADC之活力(增殖)、細胞毒性及細胞凋亡(凋亡蛋白酶活化作用)之誘導。
可藉由細胞增殖分析量測抗體藥物接合物之活體外效力。例如,CellTiter-Glo®發光細胞活力分析係一種市售(Promega Corp.,Madison,WI)之基於鞘翅目(Coleoptera)螢光素酶之重組表現之同源性分析方法(美國專利案第5583024號、第5674713號及第5700670號)。 此細胞增殖分析基於存在之ATP(一種代謝活性細胞之指示物)之定量測定培養物中之活細胞數量(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88;US 6602677)。以96孔格式進行該CellTiter-Glo®分析使其適用於自動化高通量篩選(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6:398-404)。該同源性分析程序涉及向培養於血清補充之培養基中之細胞直接添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)。無需細胞清洗、培養基之移除及多個移液步驟。該系統在添加試劑並混合後在10分鐘內在384孔格式中偵測少至15個細胞/孔。可用ADC連續處理該等細胞或其等可經處理並分離自ADC。通常,經短暫(即3小時)處理之細胞顯示與經連續處理之細胞相同的效力效應。
該同源性「添加-混合-量測」格式導致細胞溶解並形成與存在之ATP之量成比例之發光信號。ATP之量直接與存在於培養物中之細胞之數量成比例。該CellTiter-Glo®分析形成螢光素酶反應產生之「輝光型(glow-type)」發光信號,該發光信號視細胞類型及所用培養基而具有通常大於五個小時之半衰期。以相對發光單位(RLU)反映活細胞。受質甲蟲螢光素係經重組螢火蟲螢光素酶氧化脫羧基並伴有ATP至AMP之轉化且形成光子。
活體內效用
可藉由高表現之基因轉殖之外植體小鼠模型量測本文描述之THIOMABTM抗體之活體內效用(例如,可藉由高表現之HER2基因轉殖之外植體小鼠模型量測製造自抗HER2 4D5抗體之本文提供之表中的THIOMABTM抗體)。同種異體移植物可傳播(例如)自不回應於HERCEPTIN®治療或對HERCEPTIN®治療回應較差之Fo5 mmtv基因轉殖之小鼠。可用抗HER2 4D5 THIOMABTM抗體及安慰劑PBS緩衝液對照物(載體)治療個體一次及可監測3週以量測腫瘤加倍、細胞死亡之對數及腫瘤收縮之時間。
抗體藥物接合物之投與
可藉由任何適合待治療之病症之途徑投與本發明之抗體藥物接合物(ADC)。該ADC通常將非經腸投與,即輸注、皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外。
醫藥調配物
本發明之治療抗體藥物接合物(ADC)之醫藥調配物通常製備成用於非經腸投與(即,利用醫藥上可接受之非經腸載體進行之推注、靜脈內、腫瘤內注射)及單元劑量可注射形式。將具有所需純度之抗體藥物接合物(ADC)視需要與醫藥上可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)第16版,Osol,A.編)混合成凍乾調配物或水溶液之形式。
可藉由將此類具有所需純度之抗體(即,THIOMABTM抗體)與一或多種可選之醫藥上可接受之載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.編(1980))混合成凍乾調配物或水溶液形式來製備之本文描述之經半胱胺酸改造之抗體之醫藥調配物。醫藥上可接受之載劑係通常在所用劑量及濃度下對接受者無毒及包含(但不限於):諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸之緩衝液;包含抗壞血酸及甲硫胺酸之抗氧化劑;防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苄基銨;氯化六甲雙胺;氯化苄烷銨;氯化苄乙氧銨;酚醇、丁醇或苯甲醇;諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯之對羥基苯甲酸烷基酯;兒茶酚;間苯二酚;環已醇;3-戊醇;及間甲酚);低分子量(小於約10個殘基)多肽;諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白之蛋白質;諸如聚乙烯基吡咯啶酮之親水性聚合物;諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸之胺基酸;包含葡萄醣、甘露糖或糊精之單醣、雙醣及其他碳水化合物;諸如EDTA之螯合試劑;諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇之糖;諸如鈉之成鹽相對離子; 金屬錯合物(例如,Zn-蛋白複合體)及/或諸如聚乙二醇(PEG)之非離子界面活性劑。本文之例示性醫藥上可接受之載劑進一步包含間質性藥物分散試劑,諸如可溶性中性活性透明質酸酶醣蛋白(sHASEGP),例如,人類可溶性PH-20透明質酸酶醣蛋白,諸如rHuPH20(HYLENEX®,Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP(包含rHuPH20)及使用方法係描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中,sHASEGP係與諸如硫酸軟骨素酶之一或多種額外之醣胺聚糖酶組合。
例示性凍乾抗體及免疫接合物調配物係描述於美國專利案第6,267,958號中,以引用之方式將其全部內容併入本文中。水性抗體或免疫接合物調配物包含彼等描述於美國專利案第6,171,586號及WO2006/044908中者(後者調配物包含組胺酸-乙酸鹽緩衝液),以引用之方式將其等兩者之全部內容併入本文中。
本文之調配物亦含有超過一種針對治療中之特定適應症所必需之活性成分,較佳係彼等具有不對彼此造成不利影響之互補活動性者。
可將活性成分包埋於(例如)藉由凝聚技術或藉由界面聚合製得之微膠囊中,例如,分別包埋於羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊中,該等活性成分呈膠態藥物遞送系統(例如,脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)形式或呈巨乳液形式。此類技術係揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.編(1980)中。
可製備緩釋製劑。緩釋製劑之合適之實例包含含有抗體或免疫接合物之固體疏水性聚合物之半滲透性基質,該等基質係呈成形物件(例如,薄膜或微膠囊)之形式。
待用於活體內投與之調配物通常係無菌的。可(例如)藉由無菌過 濾膜過濾易於達成無菌。
抗體藥物接合物治療方法及組合物
預期可使用本發明之抗體藥物接合物(ADC)以治療特徵在於腫瘤抗原過表現之各種疾病(diseases或disorders)。例示性病症係過度增殖性疾病,其等包含良性或惡性腫瘤及白血病及淋巴惡性腫瘤。其他疾病包含神經元、神經膠、星狀細胞、下視丘、腺、巨噬細胞、上皮、基質、囊胚腔、炎性、血管生成及免疫(包含自體免疫)之疾病。
通常,待治療之疾病(diseases或disorders)係過度增殖性疾病(諸如癌症)。本文中待治療之癌症實例包含(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌症之更特定實例包含鱗狀細胞癌症(例如,上皮鱗狀細胞癌症)、包含小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺之腺癌瘤及肺之鱗狀癌瘤等肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、包括胃腸癌之胃部或胃癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝腫瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌瘤、唾液腺癌瘤、腎臟或腎癌、前列腺癌、陰門癌、甲狀腺癌、肝臟癌瘤、肛門癌瘤、陰莖癌瘤及頭頸癌。
可於治療中使用ADC化合物之自體免疫疾病包含風濕性疾病(諸如,例如,類風濕性關節炎、休格倫氏症候群(Sjögren's syndrome)、硬皮症、諸如SLE及狼瘡性腎炎之狼瘡、多發性肌炎/皮肌炎、冷凝球蛋白血症、抗磷脂抗體症候群及牛皮癬性關節炎)、骨關節炎、自體免疫腸胃及肝臟疾病(諸如,例如,炎性腸病(例如,潰瘍性結腸炎及克隆氏疾病)、自體免疫胃炎及惡性貧血、自體免疫肝炎、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎及腹腔疾病)、血管炎(諸如,例如,ANCA相關血管炎,包括變應性肉芽腫血管炎(Churg-Strauss vasculitis)、華格納氏肉芽病(Wegener's granulomatosis)及多動脈炎)、自體免疫神經性疾病(諸如,例如,多發性硬化症、眼陣攣肌陣攣症 候群、重症肌無力、視神經脊髓炎、帕金森氏病、阿茲海默氏病及自體免疫多發性神經病變)、腎病(諸如,例如,腎小球性腎炎、古巴士德氏症候群(Goodpasture’s syndrome)及伯格氏疾病(Berger’s disease))、自體免疫皮膚疾病(諸如,例如,牛皮癬、蕁麻疹、水痘、尋常性天皰瘡、大皰性類天皰瘡及皮膚紅斑狼瘡)、血液疾病(諸如,例如,血小板減少症紫癜症、栓塞性血小板減少症紫癜症、輸血後紫癜及自體免疫溶血性貧血)、動脈粥樣硬化、眼色素層炎、自體免疫聽力疾病(諸如,例如,內耳疾病及聽力損失)、貝塞特氏疾病(Behcet's disease)、雷諾氏症候群(Raynaud's syndrome)、器官移植及自體免疫內分泌疾病(諸如,例如,與糖尿病相關之自體免疫疾病,諸如胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、愛迪生氏疾病(Addison’s disease)及自體免疫甲狀腺疾病(例如,格雷氏疾病(Graves’disease)及甲狀腺炎))。更佳之此類疾病包括(例如)類風濕性關節炎、潰瘍性結腸炎、ANCA相關血管炎、狼瘡、多發性硬化症、休格倫氏症候群、格雷氏疾病、IDDM、惡性貧血、甲狀腺炎及腎小球性腎炎。
針對疾病之預防或治療,ADC之適當劑量將取決於如上文定義之待治療之疾病之類型、該疾病之嚴重性及病程、出於預防目的抑或出於治療目的投與該分子、先前治療、病患之臨床歷史及對該抗體之反應及主治醫師之判斷。該分子適合向病患一次性投與或經一系列之治療。取決於疾病之類型及嚴重性,約1μg/kg至15mg/kg(例如,0.1-20mg/kg)之分子係向病患投與之初始候選劑量,無論係以(例如)一次或多次分別投與之形式抑或係以連續輸注之形式。典型之每日劑量可視上文提及之因素而自約1μg/kg至100mg/kg或更大變化。待向病患投與之ADC之例示性劑量係在病患體重之約0.1至約10mg/kg之範圍內。
針對經數天或更久之重複投與,該治療視病症情況而持續至出 現疾病症狀之所需抑制。例示性給藥方案包括投與約4mg/kg之初始負載劑量,接著投與約2mg/kg每週維持劑量之抗ErbB2抗體。其他劑量方案可係適用。藉由習知技術及分析容易監測此治療之進程。
在一態樣中,本文提供之THIOMABTM抗體可用於抑制細胞增殖之方法中。例如,可使用抗HER2 THIOMABTM抗體以抑制HER2陽性細胞之細胞增殖。藉助於第二項實例,可使用抗CD33 THIOMABTM抗體以抑制CD33陽性細胞之細胞增殖。因此,可相對表現於腫瘤細胞上之任何多肽製造抗體及該抗體可經改造以包含用於藥物接合之非天然半胱胺酸(即,可將該抗體改造為THIOMABTM抗體)。一旦THIOMABTM抗體製造而成,則抑制細胞增殖之方法包括在容許於細胞表面上使THIOMABTM抗體結合至靶(例如,HER2)之條件下使該細胞曝露於THIOMABTM抗體(例如,抗HER2 THIOMABTM抗體),藉此抑制細胞之增殖。在某些實施例中,該方法係活體外或活體內方法。
可使用購買自Promega(Madison,WI)之CellTiter-GloTM發光細胞活性分析分析活體外細胞增殖之抑制。該分析基於對存在之ATP(其係代謝活性細胞之指示物)之定量以測定培養物中之活細胞數量。參見Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88、美國專利案第6602677號。可於96-或384孔格式中進行該分析使其負責自動化高通量篩選(HTS)。參見Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6:398-404。該分析程序涉及向經培養之細胞中直接添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)。此導致細胞溶解並形成藉由螢光素酶反應產生之發光信號。該發光信號係與存在之ATP之量成比例,該存在之ATP之量直接與存在於培養物中之活細胞之數量成比例。可藉由光度計或CCD照相機成像裝置記錄資料。以相對光單位(RLU)表示發光輸出。
在另一態樣中,提供作為藥劑使用之THIOMABTM抗體(例如,抗HER2 THIOMABTM抗體)。在其他態樣中,提供在一種治療方法中使 用之THIOMABTM抗體。在一非限制性實施例中,提供在治療HER2陽性癌症中使用之抗HER2 THIOMABTM抗體。在某些實施例中,本發明提供在一種治療患有HER2陽性癌症之個體之方法中使用之抗HER2 THIOMABTM抗體,該方法包括向該個體投與有效量之抗THIOMABTM抗體。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。在一非限制性實施例中,提供用於治療CD33陽性癌症之抗CD33 THIOMABTM抗體。在某些實施例中,本發明提供在治療患有CD33陽性癌症之個體之方法中使用之抗CD33 THIOMABTM抗體,該方法包括向該個體投與有效量之抗THIOMABTM抗體。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗HER2 THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗HER2 THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療HER2陽性癌症之方法中,該方法包括向患有HER2陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗MUC16 THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗MUC16 THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療MUC16陽性癌症之方法中,該方法包括向患有MUC16陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗STEAP1 THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗STEAP1 THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療STEAP1陽性癌症之方法中,該方法包括向患有STEAP1陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗NAPI2B THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗NAPI2B THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療NAPI2B陽性癌症之方法中,該方法包括向患有NAPI2B陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗LY6IE THIOMABTM抗體)之中之用途。例如,抗LY6E THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療LY6E陽性癌症之方法中,該方法包括向患有LY6E陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗B7H4 THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗B7H4 THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療B7H4陽性癌症之方法中,該方法包括向患有B7H4陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗CD79B THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗CD79B THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療CD79B陽性癌症之方法中,該方法包括向患有CD79B陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此 種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供THIOMABTM抗體在製造或製備藥劑(例如,抗CD22 THIOMABTM抗體)中之用途。例如,抗CD22 THIOMABTM抗體藥劑係用於一種治療CD22陽性癌症之方法中,該方法包括向患有CD22陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
在另一態樣中,本發明提供一種藉由投與THIOMABTM抗體或其藥劑而用於治療癌症之方法。在特定實施例中,該THIOMABTM抗體或其藥劑阻止癌細胞之增殖。在特定實施例中,該THIOMABTM抗體或其藥劑促進癌細胞之細胞凋亡。在特定實施例中,該THIOMABTM抗體或其藥劑減小癌細胞之腫瘤體積。在一此種實施例中,該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外之治療試劑,例如,如下文描述之治療試劑。
本發明之THIOMABTM抗體可單獨用於或與其他試劑組合用於治療中。例如,本發明之抗體或免疫接合物可與至少一種額外之治療試劑共投與。例如,該額外之治療試劑可係如本文定義之第二THIOMABTM抗體或化學治療試劑。
上文提及之此類組合治療包含組合投與(其中兩種或更多種治療試劑係包含於相同或不同之調配物中)及分別投與,在此種情況下,本發明之抗體或免疫接合物之投與可發生在額外之治療試劑及/或佐劑之投與之前、同時及/或之後。本發明之抗體或免疫接合物亦可與放射治療組合使用。
可藉由任何合適之方式投與本發明之THIOMABTM抗體(及任何額外之治療試劑),包含非經腸、肺內及鼻內及(若需要局部治療)病灶內 投與。非經腸輸注包含肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。可以任何合適之途徑給藥,例如,藉由注射(諸如靜脈內或皮下注射),給藥途徑部分取決於該投與係短暫抑或係長期的。各種給藥安排包含(但不限於)經各種時間點之單次或多次投與、推注投與,及本文涵蓋脈動輸注。
將以符合良好醫學實務之方式調配、定劑量及投與本發明之THIOMABTM抗體。此內文中之考慮因素包含治療中之特定疾病、治療中之特定哺乳動物、個體病患之臨床病症、疾病病因、試劑遞送之位點、投與方法、投與安排及醫務人員已知的其他因素。THIOMABTM抗體無需,但視需要與目前用以預防或治療討論中之疾病之一或多種試劑調配。此類其他試劑之有效量取決於存在於該調配物中之抗體或免疫接合物之量、疾病或治療之類型及上文討論之其他因素。此等通常以如本文描述之相同劑量及投與途徑,或以本文描述之劑量之約自1至99%,或以經經驗性/臨床性判定係適當之任何劑量及任何途徑使用。
針對疾病之預防或治療,本發明之THIOMABTM抗體之適當劑量(當單獨使用或與一或多種其他額外之治療試劑組合使用時)將取決於待治療之疾病類型、抗體或免疫接合物之類型、疾病之嚴重性及病程、出於預防之目的抑或係出於治療之目的投與該THIOMABTM抗體、先前治療、病患之臨床歷史及對THIOMABTM抗體之反應及主治醫師之判斷。該THIOMABTM抗體適合向病患一次性投與或經一系列之治療。取決於該疾病之類型及嚴重性,約1μg/kg至15mg/kg(例如,0.1mg/kg至10mg/kg)之THIOMABTM抗體可係向該病患投與之初始候選劑量,無論係(例如)藉由一次或更多次分別投與抑或藉由連續輸注。一種典型之每日劑量可能視上文提及之因素而自約1μg/kg至100mg/kg或更大變化。針對取決於病症之經數日或更久之重複投 與,該治療將通常持續至出現對疾病症狀之所需抑制。THIOMABTM抗體之一種例示性劑量將在自約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍內變化。因此,可向病患投與約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)之一或多種劑量。可間歇性投與此類劑量,例如,每週或每三週(例如,使得病患接收自約二至約二十或例如,約六劑量之抗體)。可投與初始較高負載劑量,接著一或多種較低劑量。然而,其他劑量方案可係適用。藉由習知技術及分析可易於監測此治療之進展。
應瞭解可使用本發明之THIOMABTM抗體及如本文定義之第二化學治療試劑進行上文調配物或治療方法中之任何一者。
經標記之抗體成像方法
在本發明之另一實施例中,可針對具有診斷、藥效動力學及治療應用之成像實驗透過具有放射性核種、螢光染料、生物發光觸發之受質部分、化學發光觸發之受質部分、酶及其他偵測標記之半胱胺酸硫醇標記經半胱胺酸改造之抗體。通常,藉由注射、輸注或口服向活機體(例如,人類、囓齒動物或其他小動物、經輸注之器官或組織樣品)投與經標記之經半胱胺酸改造之抗體(即,「生物標記」或「探針」)。偵測一段時間內之探針分佈並藉由影像呈現。
製造物件
在本發明之另一實施例中,提供包含對上文描述之疾病之治療適用之材料之製造物件或「套組」。該製造物件包括容器或該容器上或與該容器相關之標籤或包裝插頁。合適之容器包含(例如)瓶、小瓶、注射器、泡鼓包裝等。該等容器可形成自各種材料(諸如玻璃或塑膠)。該容器裝有本發明之THIOMABTM抗體,其有效治療病症且可具有無菌進入孔(例如,該容器可係靜脈內溶液包或具有可藉由皮下注射針刺破之瓶塞之小瓶)。該組合物中之至少一種活性試劑係 THIOMABTM抗體。標籤或包裝插頁指示該組合物係用於治療所選病症(諸如癌症)。另一選擇或此外,該製造物件可進一步包括第二(或第三)容器,該容器包括醫藥上可接受之緩衝液,諸如無菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。其可進一步包含令商業及使用者觀點滿意之其他材料,包含其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
實例
實例1:THIOMAB TM 抗體之製法
使用hu4D5質體作為雙股DNA模板形成THIOMABTM抗體。使用來自Agilent Technologies之Quick Change II XL套組進行基於PCR之定點誘變。
使用以下方法以定點誘變以製造THIOMABTM抗體:1)使用Hu4D5質體DNA(50-100ng);2)使用含有所需突變之正向及反向引子(各1μM);3)向25μl反應混合物中添加dNTP(0.4mM)及PfuUltra HF DNA聚合酶(2.5個單位);4)在熱循環裝置(Applied Biosystems,Foster City,CA)中培養樣品以使其初始變性(在94℃下變性4min),接著循環20次0.5min之變性(94℃)、0.5min之退火(52℃)及10min之鏈延伸(68℃);5)用DpnI限制酶將經PCR擴增之DNA樣品在37℃下培養4h;6)用經DpnI處理之PCR樣品(2μl)轉形感受態細胞(Novablue Singles,50μl);7)自經轉形之板挑選單一集落並在含有卡本西林(50ug/ml)之5ml 2YT培養基中生長;及8)純化質體DNA並藉由DNA定序篩選所獲之殖株以識別該抗體序列之輕鏈及重鏈區中之半胱胺酸取代及非特異性突變之缺乏。
將經半胱胺酸改造之hu4D5質體穩定轉染至哺乳動物細胞系中以產生蛋白。用於此研究之293T細胞系係以SV40大型T抗原穩定轉染之懸浮適應(suspension adapted)之HEK293細胞系。瞬態轉染前,在80% 增濕培養箱中在37℃、5% CO2下及150rpm攪拌速度及25mm拋徑之條件下將細胞作為種系(seed train)培養在搖瓶中。使用以1%超低IgG血清(Sigma,St.Louis,MO)補充之Gibco Freestyle 293表現培養基(Life Sciences,Carlsbad CA)作為種系生產培養基。除非另有說明,否則在具有30mL最終工作體積之50mL tubespin(Stettler等人,2007)中進行所有瞬態轉染並分96批處理。為提高效率而使用Biomek FXP液體處理機器人以將細胞大量分配於96個tubespin中。轉染後,於80%增濕Kuhner ISF1-X培養箱中在37℃、5% CO2及225rpm之攪拌速度及50mm之拋徑下將細胞培養7天。
對於轉染,以1.0e6個細胞/mL接種細胞並於轉染前在37℃、5% CO2下培養2h。在接種時以75mM之濃度向生產培養物中添加丙戊酸。以最大化製備規模純化編碼所選THIOMABTM hu IgG1抗體之質體DNA(Sigma,St.Louis,MO)。利用標準瞬態轉染方法,將30ug DNA稀釋於基於DMEM之培養基中至3mL最終體積。然後向DNA溶液中添加60ul 7.5mM 25kDa線性PEI,混合並於室溫下培養10mins,接著添加至細胞中。
實例2:THIOMAB TM 抗體之接合
使每個根據實例1製得之經半胱胺酸改造之抗體(THIOMABTM抗體)分別接合至兩種連接子藥物:MC-vc-PAB-MMAE及PDS-MMAE。例如,將4D5 LC-K149C經半胱胺酸改造之抗體製成兩種不同之THIOMABTM抗體:1)4D5 LC-K149C-MC-vc-PAB-MMAE及2)4D5 LC-K149C-PDS-MMAE。較佳之接合之額外之實例可發現於表1及2及本說明中且包含(但不限於)根據EU編號之4D5 HC-A140C-MC-vc-PAB-MMAE及4D5 HC-A140C-PDS-MMAE及根據EU編號之4D5 HC-L174C-MC-vc-PAB-MMAE及4D5 HC-L174C-PDS-MMAE。可於表34中發現在完全抗體篩選中識別之最穩定之接合物之其他實例。針對 用於-vc及PDS接合之較佳位點參見圖21
於96孔過濾板(體積2ml,來自EK Scientific之聚丙烯0.45um過濾器)中進行THIOMABTM抗體之接合。該等板容許水性緩衝液僅在500xg下離心2min後流動通過。將450μl呈含於20%乙醇中之50%漿體形式之MabSelect SuRe樹脂(GE Healthcare)添加至每個孔中。將該樹脂清洗3次並平衡於50mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、2mM EDTA(緩衝液A)中。向每個孔中添加1.5mg每種THIOMABTM抗體並容許於板振盪器上在600RPM下在RT下結合至樹脂30min。30min後,將該等板離心以移除過量緩衝液。然後在RT下在0.9ml含於緩衝液A中之2mM二硫蘇糖醇(DTT)之存在下將THIOMABTM抗體攪拌還原整夜。用緩衝液A清洗兩次來移除還原試劑(即,DTT)及任何半胱胺酸或麩胱甘肽阻斷劑。
然後用1ml含於緩衝液A中之1mM脫氫抗壞血酸(DHAA)清洗該等板三次以使該等板飽含氧化試劑。最後一次添加0.9ml含於緩衝液A中之1mM DHAA後,容許在板振盪器上在RT下再氧化該等THIOMABTM抗體。藉由離心移除氧化試劑。
添加兩倍莫耳過量(佔可利用之硫醇基團)之連接子藥物(MC-vc-PAB-MMAE或PDS-MMAE)(其溶解於含於緩衝液A中之10% DMA中)至每個孔中並在板振盪器上在RT下用THIOMABTM抗體培養2hrs。藉由用平衡緩衝液(緩衝液A)清洗該等板6次以移除過量連接子藥物。
用pH 2.7之0.1M之甘胺酸緩衝液在板振盪器上在RT下溶離THIOMABTM抗體30min。然後立即用15%之0.5M Tris(pH 8.0)中和該等THIOMABTM抗體。藉由LC/MS分析定量每種THIOMABTM抗體接合之藥物之數量。藉由尺寸排阻層析法評定接合物之聚集。
實例3:THIOMAB TM 抗體之質譜分析
使用質譜分析(即,LC/MS分析)測定每種THIOMABTM抗體之藥 物-抗體比率(DAR)。
在6224質量飛行時間(TOF)LC/MS機器(Agilent Technologies)上進行LC/MS分析。於加熱至80℃之PRLP-S柱,1000Å,8μm(50mm×2.1mm,Agilent Technologies)上層析樣品。使用在0.7ml/min流動速率下於3分鐘內自34至42% B之線性梯度(溶劑A,0.05% TFA之水溶液;溶劑B,0.04% TFA之乙腈溶液)及使用電噴霧源直接離子化溶離液。使用Agilent Mass Hunter定性分析軟體收集資料並解卷積。使用存在於LC/MS層析圖中之經解卷積之峰之豐度計算藥物DAR。可於(例如)上文之表6至12中發現DAR計算值。
此外,對在抗體之每個位置含有單一被改造之半胱胺酸突變之4D5經半胱胺酸改造之抗體進行LC/MS分析。表13至16中之空白細胞代表非確定性實驗,非0 DAR。
實例4:MC-vc-MMAE及PDS-MMAE THIOMAB TM 抗體之聚集分析
經由尺寸排阻分析對表6至10中呈現之每種THIOMABTM抗體進行聚集分析。
在1100系列HPLC(Agilent Technologies)上進行尺寸排阻層析法。在Shodex KW 802.5柱上層析樣品。使用一種使用pH 6.2之0.2M磷酸鉀、0.25M氯化鉀之流動相以0.75mL/min進行15min之等濃度方法以溶離該接合物。自來自UV 280nm層析圖之聚集及單體峰之積分面積計算聚集百分率。圖3顯示用於聚集分析及計算之聚集及單體峰之代表性圖。
實例5:THIOMAB TM 抗體之接合分析。
使用液相層析-質譜分析(LC/MS或LCMS)進行THIOMABTM抗體之接合分析。如顯示於圖4A圖4B中,THIOMABTM抗體之UV280 LC/MS層析圖顯示DAR0(裸抗體)、DAR1及DAR2接合。針對完整抗體半胱胺酸(其中出於連接連接子-藥物以製造ADC之目的,製造在抗體內之每個位置具有單一半胱胺酸突變之4D5抗體以判定抗體內之不可預測之最穩定位點)篩選之最穩定位點之LCMS結果係顯示於表79中。
實例6:MC-vc-MMAE及PDS-MMAE THIOMAB TM 抗體之穩定 性分析。
針對在三個時間點(0hr、48hrs及96hrs)下之大鼠血漿及緩衝液(0小時)一式兩份地生成PDS-MMAE及MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性樣品。用於穩定性篩選之實驗程序之流程圖係提供於圖5中。為產生穩定性樣品,向351μL大鼠血漿或緩衝液(1X PBS,0.5% BSA,15PPM Proclin)中添加9μL每種THIOMABTM抗體(即,源材料)及然後將其等完全混合。源材料之濃度(Conc.)係提供於(例如)表6810中。一經混合,則將120μL大鼠血漿穩定性樣品等分於三個不同組之試管中以用於三個不同時間點。然後將針對大鼠血漿及緩衝液之0hr時間點放置於-80℃之冷凍箱中,同時將針對大鼠血漿之48hr及96hr時間點放置於37℃培養箱中之振盪器上。當48hr及96hr樣品達到給定之時間點時,亦將其等放置於-80℃之冷凍箱中。使用質譜分析在0hr、48hrs及96hrs下顯示MC-vc-MMAE及PDS-MMAE LC-R142C THIOMABTM抗體之穩定性之代表性圖係提供於圖6A及6B中。
使用ELISA分析以測定PDS-MMAE及MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性。藉由ELISA使用人類erb2之細胞外域(ECD)作為捕捉抗體及使用山羊抗人類IgG山葵過氧化物(HRP)作為偵測抗體測定大鼠血漿中總抗體(經接合及未經接合之THIOMABTM抗體)的濃度。該分析具有0.5mg/mL之偵測限值(LOD)及800倍之最小稀釋。
藉由ELISA使用供捕捉用之抗藥物單株抗體及使用供偵測用之山羊抗人類IgG-HRP來測定大鼠血漿中經接合之PDS-MMAE及MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之濃度。該分析具有0.5mg/mL之偵測限值(LOD)及800倍之最小稀釋。
計算基於特定經半胱胺酸改造之位點之接合之藥物負載穩定性。使用在時間0hr之經接合之抗體濃度相對於在0hr下之總抗體濃度(如藉由ELISA測定)之比率計算標準化至總抗體之0hr下之經接合 之抗體濃度使得[C0]/[T0]=nC0。使用在時間48hr下之經接合之抗體之濃度相對於在48hr下之總抗體濃度(如藉由ELISA測定)之比率計算標準化至總抗體之48hr下之經接合之抗體濃度使得[C48]/[T48]=nC48
藉由計算48hr下之經接合之抗體相對於0hr下之經接合之抗體(如藉由ELISA判定)之比率測定穩定性百分率以計算藥物負載百分率穩定性使得nC48/nC0=藥物負載百分率穩定性。
圖7顯示在48hr時間點下量測之較佳PDS-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性的圖。圖8顯示在48hr時間點下量測之較佳MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性的圖。可於本文提供之表中發現所有經篩選之PDS-MMAE及MC-vc-MMAE THIOMABTM抗體之穩定性。
實例7:LC-K149C、LC-V205C及HC-A114C THIOMAB TM 抗體之製法
使用抗CD33及抗HER2抗體製造LC-K149C、LC-V205C及HC-A114C THIOMABTM抗體並基於平均DAR(圖9)評定彼等THIOMABTM抗體之穩定性。相較於HC-A114C及LC-V205C,抗HER2 LC-K149C THIOMABTM抗體在抗HER2抗體中顯示出人意料之穩定性。具體言之,抗HER2 LC-K149C THIOMABTM抗體之藥物接合係穩定的且該THIOMABTM抗體在接合後保留2DAR六天。同樣地,抗CD33 LC-K149C THIOMABTM抗體亦將保留2DAR 6天。相比之下,抗HER2 LC-V205C及HC-A114C THIOMABTM抗體。
實例8:PDS-MMAE THIOMAB TM 抗體在接合後48hr及96hr之穩定性
進行抗體之半胱胺酸篩選以測定哪種所得PDS-THIOMABTM抗體具有≧1DAR;≧1mg/mL之源原液濃度(source stock concentration);≦50%之聚集(經再氧化);基於ELISA(兩種重複)大鼠血漿中之VC變 體藥物負載在48hrs內具有80%穩定性;基於ELISA(兩種重複)大鼠血漿中之PDS變體藥物負載在48hrs內具有70%穩定性;及藉由可靠之MS譜證實之高達96hrs之穩定性。具體言之,出於例示性目的使用4D5抗體使得熟習此項技術者將明瞭可以任何抗體替代4D5抗體。
該篩選針對半胱胺酸改造及連接子-藥物連接識別輕鏈及重鏈(參見表12)內之較佳候選者及額外之穩定位點(參見表34)以產生穩定ADC。該實驗之結果係提供於表6至12中。
實例9:MC-vc-MMAE THIOMAB TM 抗體在接合後48hr及96hr之穩定性
進行抗體之半胱胺酸篩選以測定哪種所得MC-vc-THIOMABTM抗體具有≧1DAR;≧1mg/mL之源原液濃度;≦50%之聚集(經再氧化);基於ELISA(兩種重複)大鼠血漿中之VC變體藥物負載在48hrs內具有80%穩定性;基於ELISA(兩種重複)大鼠血漿中之PDS變體藥物負載在48hrs內具有70%穩定性;及藉由可靠之MS譜證實之高達96hrs之穩定性。具體言之,出於例示性目的使用4D5抗體使得熟習此項技術者將明瞭可以任何抗體替代4D5抗體。
該篩選針對半胱胺酸改造及連接子-藥物連接識別輕鏈及重鏈(參見表12)內之較佳候選者及額外之穩定位點(參見表34)以產生穩定ADC。該實驗之結果係提供於表6至12中。
實例10:活體外細胞增殖分析
可藉由使用下列方案之細胞增殖分析(CellTiter Glo Luminiscent Cell Viability Assay,Promega Corp.Technical Bulletin TB288;Mendoza等人(2002)Cancer Res.62:5485-5488)量測THIOMABTM抗體之效用:
1.可將100μl於培養基中含有約104個細胞(SKBR-3、BT474、MCF7或MDA-MB-468)之細胞培養物之分液放置於96孔不透明壁板之 每個孔中。
2.製造含有培養基而無細胞之對照孔。
3.可向實驗性孔中添加THIOMABTM抗體並培養3至5天。
4.可將該等板平衡至室溫約30分鐘。
5.可添加與存在於每個孔中之細胞培養基同體積之CellTiter-Glo試劑。
6.在軌道振盪器上混合內容物2分鐘以誘導細胞溶解。
7.在室溫下培養該板10分鐘以穩定發光信號。
8.可以RLU=相對發光單位記錄發光並報告於圖中。
可以1000-2000個/孔(PC3系)或2000-3000個/孔(OVCAR-3)於96孔板(50uL/孔)中接種某些細胞。一天(PC3)或兩天(OVCAR-3)後,可以50μL體積添加THIOMABTM抗體至9000、3000、1000、333、111、37、12.4、4.1或1.4ng/mL之最終濃度,及「無ADC」之對照孔僅接收培養基。將條件一式兩份或一式三份。3(PC3)或4-5(OVCAR-3)天後,添加100μL/孔Cell TiterGlo II(基於螢光素酶之分析;藉由ATP濃度量測增殖)並可使用光度計測定細胞計數。資料可按照例如每組重複之發光之平均值及標準偏差誤差條柱繪製成圖。或者可根據Promega之方案進行CellTiter Glo發光細胞活性分析(Promega):
1.將PC3/Muc16、PC3/neo(以50μL/孔)以1000個細胞/孔接種於培養基中。Ovcar3細胞應以2000個細胞/孔(以50μL)接種於其培養基中(PC3/neo及PC3/MUC16生長於50/50/10%FBS/麩醯胺酸/250μg/mL G-418中,OVCAR-3生長於RPMI/20%FBS/麩醯胺酸中)。容許細胞附接整夜。
2.以工作濃度18μg/ml開始,將THIOMABTM抗體1:3連續稀釋於培養基中(此導致9μg/ml之最終濃度)。向業已在孔中之50μL之細胞及培養基中添加50μL經稀釋之ADC。
3.培養72-96hrs(標準係72小時,但當長滿85至95%之細胞時監測0ug/mL濃度以停止分析)。
4.添加100μL/孔之Promega Cell Titer Glo試劑,振盪3min並在光度計上讀數。
實例11:在高表現HER2基因轉殖外植體小鼠中之腫瘤生長抑制、活體內效用
適用於基因轉殖實驗之動物可獲得自標準商業來源,諸如Taconic(Germantown,N.Y.)。許多品系係合適的,但FVB雌性小鼠較佳,因為其具有較高腫瘤形成易感性。使用FVB雄性供交配及使用輸精管經切除之CD.1種鼠以刺激假孕。輸精管經切除之小鼠可獲得自任何商業供應商。用FVB小鼠或129/BL6 x FVB p53異型接合之小鼠生育元祖者(founder)。使用在p53對偶基因處具有異型接合性之小鼠以可能增加腫瘤形成。然而,此證明係多餘的。因此,一些F1腫瘤係具有經混合之品系。元祖腫瘤僅係FVB。獲得具有一些發展中之腫瘤而無窩仔之六個元祖者。
藉由IV注射ADC以單一劑量或多劑量治療具有腫瘤(傳播自Fo5 mmtv基因轉殖小鼠之同種異體移植物)之動物。在注射後之各種時間點評定腫瘤體積。
腫瘤易出現於表現neu(HER2之大鼠同源物)之經突變活化之形式之基因轉殖小鼠中,但過表現於人類乳癌中之HER2係未突變及腫瘤形成之穩健性遠低於過表現非突變之HER2之基因轉殖小鼠中之腫瘤形成(Webster等人(1994)Semin.Cancer Biol.5:69-76)。
為改善具有非突變之HER2之腫瘤形成,使用HER2 cDNA質體產生基因轉殖小鼠,其中刪除上游ATG以防止在此類上游ATG密碼子處啟動轉譯,否則其將減小來自HER2之下游真實啟動密碼子之轉譯啟動的頻率(例如,參見Child等人(1999)J.Biol.Chem.274:24335- 24341)。此外,向5’端添加嵌合內含子,其亦應提高如早期報告之表現水平(Neuberger及Williams(1988)Nucleic Acids Res.16:6713;Buchman及Berg(1988)Mol.Cell.Biol.8:4395;Brinster等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:836)。嵌合內含子係衍生自Promega載體Pci-neo哺乳動物表現載體(bp 890-1022)。該cDNA 3’端側懸人類生長激素外顯子4及5及多腺核苷酸化序列。此外,使用FVB小鼠,因為此品系更易感腫瘤發展。使用來自MMTV-LTR之啟動子以確保乳腺中之組織特異性HER2表現。以AIN 76A飲食飼養動物以增加腫瘤形成易感性(Rao等人(1997)Breast Cancer Res.and Treatment 45:149-158)。
可針對其他腫瘤類型製造並研究類似活體內模型。例如,可製造活體內模型以使用CD33表現模型研究抗CD33 THIOMABTM抗體之效用。
實例12:使用HC-A140C以救援連接子-藥物不穩定性
如本文討論,發現LC-K149C(根據Kabat編號)係用於半胱胺酸取代之較佳位點,因其保留連接子藥物之穩定性(即,該連接子-藥物保持結合至該抗體之被改造之LC-K149C位置)中。然而,但出人意料地發現,即使該連接子保持結合至經半胱胺酸改造之抗體之LC-K149C,但某些藥物在連接至經半胱胺酸改造之抗體之位置LC-K149C時經歷酶修飾。具體言之,驚訝地發現經由連接子連接至LC-K149C之某些藥物經歷酶修飾,諸如胺基甲酸酯基團損失、乙醯基損失(即,去乙醯)、磷酸鹽損失、糖損失及醚裂解。
觀察到某些藥物(包含但不限於念珠藻素、微管溶素M、類紫杉醇藥物及CBI-PBD異二聚物連接子-藥物中間物)在連接至經半胱胺酸改造之抗體之LC-K149C時之修飾後,檢查表1至4之額外位點(包含HC-A118C、LC-V205C、HC-S121C及HC-A140C)以觀察使用其等是否可減少及/或消除藥物修飾。具體言之,觀察到念珠藻素經歷醯胺 裂解;微管溶素經歷乙醯基損失(即,去乙醯);CBI-PBD異二聚物連接子-藥物中間物經歷胺基甲酸酯損失;及類紫杉醇係不穩定的且在經由連接子接合至經半胱胺酸改造之抗體上之LC-K149C時顯示裂解(參見圖13)。
出人意料地發現HC-A140C提供對微管溶素之乙醯基之保護(參見圖14A至14C)。具體言之,使用LCMS顯示使用HC-A140C作為連接位點相較於使用LC-K149C作為連接位點使藥物在培養24hrs後更少降解(圖14A)。使用新穎全血分析類似顯示HC-A140C更穩定。
針對新穎全血(WB)分析(如本文針對第一時間描述),樣品係形成於小鼠(CB17 SCID)、大鼠(Sprague-Dawley)、食蟹猴及/或人類全血血漿及緩衝液(0及24小時)中。藉由生物再生收集血液,然後整夜冷藏運輸及全血一經到達立即製造樣品。為製造穩定性樣品,在緩衝液(1X PBS,0.5% BSA,15PPM Proclin)中進行源材料之初始稀釋使得所有分子之濃度係1mg/mL。然後進行1:10x之稀釋(36uL 1mg/mL初始稀釋+324uL血液或緩衝液)以形成最終濃度為100ug/mL之穩定性樣品。一經混合,則將150μL全血/緩衝液穩定性樣品針對兩個不同時間點等分至兩組不同試管。然後將0小時時間點置於-80℃。
以三輪WB分析證實在HC-A140C及LC-K149C處之乙醯基損失。證實HC-A140C減少乙醯基損失修飾(圖15)。
出人意料地發現HC-A140C提供對CBI-PBD異二聚物連接子-藥物中間物之胺基甲酸酯基團之保護(參見圖16A至16C)。具體言之,使用LCMS顯示使用HC-A140C作為連接位點相較於使用LC-K149C作為連接位點使藥物在培養24hrs後更少降解(圖16A)。使用新穎全血分析類似顯示HC-A140C更穩定(圖17)。
亦出人意料地發現HC-A140C提供類紫杉醇免受修飾之保護(參見圖18A-18C)。具體言之,使用LCMS顯示使用HC-A140C作為連接位 點相較於使用LC-K149C作為連接位點使藥物在培養24hrs後更少降解(圖18A)。使用新穎全血分析類似顯示HC-A140C更穩定(例如,就保護類紫杉醇藥物損失而言)(圖19)。
正如藉由將藥物連接至HC-A140C而非LC-K149C而出人意料地觀察到針對微管溶素、CBI-PBD異二聚物連接子-藥物中間物及類紫杉醇藥物之保護,亦發現HC-A140C防止念珠藻素發生醯胺及酯裂解(參見圖20)。
對具有PDS及/或馬來醯亞胺(即,vc-)連接子之抗HER2抗體(具體言之,係4D5)及/或抗CD22抗體進行實驗。
實例13:針對PDS鍵聯之最穩定位點之識別
藉由使用親和性-捕捉LC-MS分析分析0、48及96hr血漿穩定性樣品進一步評估ELISA篩選之最穩定變體。首先,用HBS-EP緩衝液(GE Healthcare,Sunnyvale,CA)清洗經鏈黴親和素塗覆之磁珠(Life Technologies Corporation,Grand Island,NY)2x,然後使用KingFisher Flex(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)將其與人類erb2之生物素化細胞外域(ECD)混合並在室溫下輕微攪拌培養2hrs。2hrs後,用HBS-EP緩衝液清洗SA珠/生物素-ECD複合體2x,與經稀釋之血漿穩定性樣品混合及然後在室溫下輕微攪拌培養2hrs。2hrs後,用HBS-EP緩衝液清洗SA珠/生物素-ECD/樣品複合體2x,接著用水(Optima H2O,Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)清洗2x及最後用10%乙腈清洗1x。然後在收集磁珠前,將該等磁珠放置於培養其之30%乙腈/0.1%蟻酸中在室溫下輕微攪拌溶離30mins。然後將經溶離之樣品裝載於LC-MS(Synapt-G2S,Waters,Milford,MA)上以進行分析。
亦使用其中樣品經水稀釋至100ug/mL並針對50uM半胱胺酸及50mM碳酸氫銨之最終濃度而與100uM半胱胺酸及100mM碳酸氫銨緩衝液1:1混合之半胱胺酸還原分析評估最穩定PDS-MMAE變體。然 後在黑暗中在室溫下培養樣品18小時及然後添加等體積之60%乙腈/0.2%蟻酸以中止該反應。然後將樣品裝載於LC-MS(Synapt-G2S,Waters,Milford,MA)上以進行分析。
較佳之穩定PDS-MMAE變體係識別於表1及2中及額外之穩定變體係識別於表3及4中。具體言之,最穩定之PDS-MMAE變體係明確識別於圖21實例2中。
實例14:針對-vc(即,馬來醯亞胺)鍵聯之最穩定位點之識別
藉由使用親和性-捕捉LC-MS分析分析0、48及96hr血漿穩定性樣品進一步評估ELISA篩選之最穩定變體。首先,用HBS-EP緩衝液(GE Healthcare,Sunnyvale,CA)清洗經鏈黴親和素塗覆之磁珠(Life Technologies Corporation,Grand Island,NY)2x,然後使用KingFisher Flex(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)將其與人類erb2之生物素化細胞外域(ECD)混合並在室溫下輕微攪拌培養2hrs。2hrs後,用HBS-EP緩衝液清洗SA珠/生物素-ECD複合體2x,與經稀釋之血漿穩定性樣品混合及然後在室溫下輕微攪拌培養2hrs。2hrs後,用HBS-EP緩衝液清洗SA珠/生物素-ECD/樣品複合體2x,接著用水(Optima H2O,Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)清洗2x及最後用10%乙腈清洗1x。然後在收集磁珠前,將該等磁珠放置於培養其之30%乙腈/0.1%蟻酸中在室溫下輕微攪拌溶離30mins。然後將經溶離之樣品裝載於LC-MS(Synapt-G2S,Waters,Milford,MA)上以進行分析。
較佳之穩定vc-MMAE變體係識別於表1及2中及額外之穩定變體係識別於表34中。具體言之,最穩定之vc-MMAE變體係明確識別於圖21實例2中。
實例15:可經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之例示性抗體
任何抗體可經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個 半胱胺酸)。已經使用本文描述之方法改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之例示性抗體包含(但不限於)對抗以下抗原之抗體:HER2、MUC16、STEAP1、NaPi2b、CD22、Ly6E、CLL-1、B7H4及CD79。
某些半胱胺酸已被改造之抗HER2抗體包含4D5及7C2(參見本文之實例及圖)。同樣地,已在抗CD33、抗MUC16、抗STEAP1、抗Ly6E、抗B7H4、抗CD22及抗CD79b抗體中作出單一半胱胺酸突變。
已經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之抗MUC16抗體之實例包含具有下列序列之抗體:
已經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之抗STEAP1抗體之實例包含具有下列序列之抗體:
已經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之抗NaPi2b抗體之實例包含具有下列序列之抗體:
已經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之抗Ly6E抗體之實例包含具有下列序列之抗體:
已經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之抗CD79b抗體之實例包含具有下列序列之抗體:
已經改造以具有單一半胱胺酸突變(即,每個抗體兩個半胱胺酸)之抗CD22抗體之實例包含具有下列序列之抗體:
對上文描述之經改造以具有LC-K149C突變之抗Ly6E抗體進行實驗。對上文描述之經改造以具有LC-K149C突變之抗NaPi2b抗體進行實驗。同樣地,對上文描述之經改造以具有LC-K149C突變之抗CD22抗體進行實驗。
此外,本文描述之抗CD22抗體亦經改造以具有根據EU編號之HC-L174C突變。
對上文描述之經改造以具有HC-A140C突變(根據EU編號)之抗CD22抗體進行實驗。對上文描述之經改造以具有HC-L174C突變(根據EU編號)之抗CD22抗體進行實驗。
某些抗CLL1抗體已經半胱胺酸改造以包含表12中之較佳位點中之一者及可經揭示於表34中之穩定位點中之一者改造。具體言之,抗CLL1抗體係經半胱胺酸改造以包含LC-K149C半胱胺酸突變。
某些抗B7H4抗體可經半胱胺酸改造以包含表12中之較佳位點中之一者及可經揭示於表34中之穩定位點中之一者改造。
除本文描述之實驗外,本文描述之抗體中之任何一者可經改造以具有表12中描述之待製成經半胱胺酸改造之抗體(即,THIOMABTM抗體)之較佳經改造之半胱胺酸位點中之任何一者。此外,本文描述之抗體中之任何一者可經改造以具有表34中描述之待製成經半胱胺酸改造之抗體(即,THIOMABTM抗體)之穩定經改造之半胱胺酸位點中之任何一者。具體言之,本文描述之抗體中之任何一者可經改造以具有LC-K149C、HC-A140C(根據EU編號)或HC-L174C(根據EU編號)且可以PDS或-vc連接子接合至本文描述之藥物中之一者。
實例16:例示性ADC
可使用將藥物連接至經改造之半胱胺酸殘基之連接子將本文描述之抗體中之任何一者接合至本文描述之藥物類別中之任何一者。此類ADC之實例可藉由偶合藥物部分與連接子試劑及根據以下文獻之程序:WO 2013/055987;WO 2015/023355;WO 2010/009124;WO 2015/095227來製備並將其等接合至本文描述之經半胱胺酸改造之抗體中之任何一者。
下列術語及縮寫用於下表中:DAR=藥物/抗體比率平均值;A118C(重鏈,EU編號)(或者稱為根據GNE之序列性編號之A121C(參見圖1B)及或者稱為根據Kabat編號之A114C);K149C(輕鏈,Kabat編號);重鏈野生型(「WT」)之A140C(EU編號);經半胱胺酸改造之突變體抗體(「硫代」);輕鏈(「LC」);重鏈(「HC」);6-馬來醯亞胺基己醯基(「MC」);馬來醯亞胺基丙醯基(「MP」);纈胺酸-瓜胺酸(「val-cit」或「vc」);丙胺酸-苯丙胺酸(「ala-phe」);對胺基苄基(「PAB」);對胺基苄氧基羰基(「PABC」);1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚(「CBI」);吡咯并苯并二氮呯(「PBD」)及單甲 基奧利斯他汀(「MMAE」)。
此類額外之ADC之實例包含(但不限於)彼等提供於下表17中者。
應注意為簡化,上文結構及彼等具有ADC 51至63者僅顯示一種連接至抗體之連接子-藥物基團。如上文提及,多於一種連接子-藥物基團可連接至抗體。
已製成之ADC之具體實例係提供於表1819中。表18提供已製成之其中L-D連接至抗體之經半胱胺酸改造之位點LC-K149C之ADC之實例。表19提供已製成之其中L-D連接至抗體之經半胱胺酸改造之位點HC-A140C之ADC之實例。
表18:已製成之其中L-D連接至抗體之經半胱胺酸改造之位點
表1819兩者中,於經緩衝之生理鹽水中計算DAR。
本發明不限於實例中揭示之特定實施例之範圍,該等實例僅意欲說明本發明之少數態樣及功能相等之任何實施例係在本文發明之範圍內。事實上,除彼等本文顯示及描述者外之本發明之各種修飾將為熟習此項技術者明瞭及旨在落於隨附申請專利範圍之範圍內。
本說明書通篇中援引之所有專利、專利申請案及參考文獻以全文引用之方式及出於所有目的而明確併入本文中。
<110> 美商建南德克公司 桑尼爾 巴可塔 漢斯 艾瑞克森 賈格 R 瓊杜拉 凱瑟啉 柯薩克 瑞伽那 歐里 湯瑪斯 皮勒
<120> 經半胱胺酸改造之抗體及接合物
<130> 01146-0052-00US
<150> US 62/050,022
<151> 2014-09-12
<160> 199
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:LC-I106C
<400> 1
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:LC-R108C
<400> 2
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:LC-R142C
<400> 3
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:LC-K149C
<400> 4
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-T114C
<400> 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-A140C
<400> 6
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-L174C
<400> 7
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-L179C
<400> 8
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-T187C
<400> 9
<210> 10
<211> 11
<212> PPT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-T209C
<400> 10
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-V262C
<400> 11
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-G371C
<400> 12
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-Y373C
<400> 13
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-E382C
<400> 14
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-S424C/HC-S420C
<400> 15
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-N434C
<400> 16
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:HC-Q438C
<400> 17
<210> 18
<211> 449
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:經半胱胺酸改造之抗體
<400> 18
<210> 19
<211> 214
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:經半胱胺酸改造之抗體
<400> 19
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V2C
<400> 20
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L4C
<400> 21
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V5C
<400> 22
<210> 23
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L11C
<400> 23
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:R19C
<400> 24
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:F27C
<400> 25
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:I29C
<400> 26
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T32C
<400> 27
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y33C
<400> 28
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q39C
<400> 29
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:A40C
<400> 30
<210> 31
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K43C
<400> 31
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L45C
<400> 32
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:E46C
<400> 33
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T53C
<400> 34
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G55C
<400> 35
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T57C
<400> 36
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:R58C
<400> 37
<210> 38
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y59C
<400> 38
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:A60C
<400> 39
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T68C
<400> 40
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:N76N
<400> 41
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y79C
<400> 42
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q81C
<400> 43
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:W95C
<400> 44
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G96C
<400> 45
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:D101C
<400> 46
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:W103C
<400> 47
<210> 48
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T116C
<400> 48
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K117C
<400> 49
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T135C
<400> 50
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:N155C
<400> 51
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:A158C
<400> 52
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G162C
<400> 53
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G174C
<400> 54
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L175C
<400> 55
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T183C
<400> 56
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V184C
<400> 57
<210> 58
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:I195C
<400> 58
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<222> 合成肽:N199C
<400> 59
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S203C
<400> 60
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:F239C
<400> 61
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:M248C
<400> 62
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:E254C
<400> 63
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V258C
<400> 64
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:N272C
<400> 65
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V278C
<400> 66
<210> 67
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L305C
<400> 67
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T331C
<400> 68
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S333C
<400> 69
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:R340C
<400> 70
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q343C
<400> 71
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K356C
<400> 72
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:E384C
<400> 73
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S399C
<400> 74
<210> 75
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K410C
<400> 75
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q414C
<400> 76
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G416C
<400> 77
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:N417C
<400> 78
<210> 79
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y432C
<400> 79
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T433C
<400> 80
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K435C
<400> 81
<210> 82
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S438C
<400> 82
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L439C
<400> 83
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:M100cC
<400> 84
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:N82aC
<400> 85
<210> 86
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S12C
<400> 86
<210> 87
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S14C
<400> 87
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G16C
<400> 88
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:R18C
<400> 89
<210> 90
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T22C
<400> 90
<210> 91
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:R24C
<400> 91
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q27C
<400> 92
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T31C
<400> 93
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:A32C
<400> 94
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q38C
<400> 95
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K39C
<400> 96
<210> 97
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G41C
<400> 97
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K42C
<400> 98
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:P44C
<400> 99
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y49C
<400> 100
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S50C
<400> 101
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S52C
<400> 102
<210> 103
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:F53C
<400> 103
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:L54C
<400> 104
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y55C
<400> 105
<210> 106
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S63C
<400> 106
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:G64C
<400> 107
<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:R66C
<400> 108
<210> 109
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:D70C
<400> 109
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T72C
<400> 110
<210> 111
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T74C
<400> 111
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S76C
<400> 112
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q79C
<400> 113
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T85C
<400> 114
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:H91C
<400> 115
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Y92C
<400> 116
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:P95C
<400> 117
<210> 118
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T97C
<400> 118
<210> 119
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:F98C
<400> 119
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K103C
<400> 120
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:E105C
<400> 121
<210> 122
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K107C
<400> 122
<210> 123
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:P119C
<400> 123
<210> 124
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:K126C
<400> 124
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T129C
<400> 125
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S131C
<400> 126
<210> 127
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q147C
<400> 127
<210> 128
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:W148C
<400> 128
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:A153C
<400> 129
<210> 130
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q155C
<400> 130
<210> 131
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S156C
<400> 131
<210> 132
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S159C
<400> 132
<210> 133
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q160C
<400> 133
<210> 134
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:S162C
<400> 134
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:Q166C
<400> 135
<210> 136
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T172C
<400> 136
<210> 137
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T180C
<400> 137
<210> 138
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V191C
<400> 138
<210> 139
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:A193C
<400> 139
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:E195C
<400> 140
<210> 141
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:V205C
<400> 141
<210> 142
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:T206C
<400> 142
<210> 143
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:N210C
<400> 143
<210> 144
<211> 30
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:白蛋白結合肽
<400> 144
<210> 145
<211> 20
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:白蛋白結合肽
<400> 145
<210> 146
<211> 20
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:白蛋白結合肽
<400> 146
<210> 147
<211> 18
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:白蛋白結合肽
<400> 147
<210> 148
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:白蛋白結合肽
<400> 148
<210> 149
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Muc16抗體HVR-L1
<400> 149
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Muc16抗體HVR-L2
<400> 150
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Muc16抗體HVR-L3
<400> 151
<210> 152
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Muc16抗體HVR-H1
<400> 152
<210> 153
<211> 17
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Muc16抗體HVR-H2
<400> 153
<210> 154
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Muc16抗體HVR-H3
<400> 154
<210> 155
<211> 108
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗Muc16抗體輕鏈可變區
<400> 155
<210> 156
<211> 116
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗Muc16抗體重鏈可變區
<400> 156
<210> 157
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗STEAP-1 HVR-H1
<400> 157
<210> 158
<211> 17
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗STEAP-1 HVR-H2
<400> 158
<210> 159
<211> 15
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗STEAP-1 HVR-H3
<400> 159
<210> 160
<211> 17
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗STEAP-1 HVR-L1
<400> 160
<210> 161
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗STEAP-1 HVR-L2
<400> 161
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗STEAP-1 HVR-L3
<400> 162
<210> 163
<211> 124
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗STEAP1重鏈可變區
<400> 163
<210> 164
<211> 113
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗STEAP1輕鏈可變區
<400> 164
<210> 165
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗NaPi2b HVR-H1
<400> 165
<210> 166
<400> 166 000
<210> 167
<211> 18
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗NaPi2b HVR-H2
<400> 167
<210> 168
<211> 13
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗NaPi2b HVR-H3
<400> 168
<210> 169
<211> 16
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗NaPi2b HVR-L1
<400> 169
<210> 170
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗NaPi2b HVR-L2
<400> 170
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗NaPi2b HVR-L3
<400> 171
<210> 172
<211> 120
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗NaPi2b重鏈可變區
<400> 172
<210> 173
<211> 113
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗NaPi2b輕鏈可變區
<400> 173
<210> 174
<211> 107
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12輕鏈可變區
<400> 174
<210> 175
<211> 120
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12重鏈可變區
<400> 175
<210> 176
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 HVR-L1
<400> 176
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 HVR-L2
<400> 177
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 HVR-L3
<400> 178
<210> 179
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 HVR-H1
<400> 179
<210> 180
<211> 16
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 HVR-H2
<400> 180
<210> 181
<211> 12
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 HVR-H3
<400> 181
<210> 182
<211> 214
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 K149C κ輕鏈
<400> 182
<210> 183
<211> 450
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:抗Ly6E抗體hu9B12 v12 IgG1重鏈
<400> 183
<210> 184
<211> 117
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:huMA79bv28重鏈可變區
<400> 184
<210> 185
<211> 112
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:huMA79bv28輕鏈可變區
<400> 185
<210> 186
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:huMA79bv28 HVR H1
<400> 186
<210> 187
<211> 18
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:huMA79bv28 HVR H2
<400> 187
<210> 188
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:huMA79bv28 HVR H3
<400> 188
<210> 189
<211> 15
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:huMA79bv28 HVR L1
<400> 189
<210> 190
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:huMA79bv28 HVR L2
<400> 190
<210> 191
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:huMA79bv28 HVR L3
<400> 191
<210> 192
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗CD22 HVR H1
<400> 192
<210> 193
<211> 18
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗CD22 HVR H2
<400> 193
<210> 194
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗CD22 HVR H3
<400> 194
<210> 195
<211> 16
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗CD22 HVR L1
<400> 195
<210> 196
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗CD22 HVR L2
<400> 196
<210> 197
<211> 10
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成肽:抗CD22 HVR L3
<400> 197
<210> 198
<211> 450
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:圖2A-重鏈中之半胱胺酸誘變
<400> 198
<210> 199
<211> 214
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 合成多肽:圖2B-輕鏈中之半胱胺酸誘變
<400> 199

Claims (66)

  1. 一種經半胱胺酸改造之抗體,其包括在重鏈中之選自由以下組成之群之半胱胺酸胺基酸:根據EU編號之T114C、A140C、L174C、L179C、T187C、T209C、V262C、G371C、Y373C、E382C、S424C、N434C及Q438C,或在輕鏈中之選自由以下組成之群之半胱胺酸胺基酸:根據Kabat編號之I106C、R108C、R142C及K149C。
  2. 如請求項1之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體包括選自由以下組成之群之序列:HC-T114C QGTLV C VSSAS SEQ ID NO.:5、HC-A140C TSGGT C ALGCL SEQ ID NO.:6、HC-L174C TFPAV C QSSGL SEQ ID NO.:7、HC-L179C LQSSG C YSLSS SEQ ID NO.:8、HC-T187C LSSVV C VPSSS SEQ ID NO.:9、HC-T209C HKPSN C KVDKK SEQ ID NO.:10、HC-V262C PEVTC C VVDVS SEQ ID NO.:11、HC-G371C TCLVK C FYPSD SEQ ID NO.:12、HC-Y373C LVKGF C PSDIA SEQ ID NO.:13、HC-E382C IAVEW C SNGQP SEQ ID NO.:14、HC-S424C QGNVF C CSVMH SEQ ID NO.:15、HC-N434C HEALH C HYTQK SEQ ID NO.:16、HC-Q438C HNHYT C KSLSL SEQ ID NO.:17、LC-1106C GTKVE C KRTVA SEQ ID NO.:1、LC-R108C KVEIK C TVAAP SEQ ID NO.:2、LC-R142C NNFYP C EAKVQ SEQ ID NO.:3及 LC-K149C AKVQW C VDNAL SEQ ID NO.:4。
  3. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該重鏈中之該半胱胺酸突變係選自由根據EU編號之L174C、A140C及Y373C組成之群。
  4. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該重鏈中之該半胱胺酸突變係根據EU編號之A140C。
  5. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該重鏈中之該半胱胺酸突變係根據EU編號之L174C。
  6. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該重鏈中之該半胱胺酸突變係根據EU編號之Y373C。
  7. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該輕鏈中之該半胱胺酸突變係K149C。
  8. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其係藉由包括以下之方法製備:(i)藉由以半胱胺酸置換一或多個胺基酸殘基誘變親代抗體之核酸序列以編碼該經半胱胺酸改造之抗體;(ii)表現該經半胱胺酸改造之抗體;及(iii)分離該經半胱胺酸改造之抗體。
  9. 如請求項8之經半胱胺酸改造之抗體,其中該誘變包括定點誘變。
  10. 如請求項8之經半胱胺酸改造之抗體,其中該半胱胺酸係游離半胱胺酸且其中該方法進一步包括:(i)使該經半胱胺酸改造之抗體之該游離半胱胺酸與硫醇反應性親和性試劑反應以產生經親和性標記之經半胱胺酸改造之抗體,其包含共價連接至該游離半胱胺酸之親和性試劑;及(ii)量測該經親和性標記之經半胱胺酸改造之抗體對捕捉介質 之結合。
  11. 如請求項10之經半胱胺酸改造之抗體,其中該硫醇反應性試劑包括馬來醯亞胺部分。
  12. 如請求項10之經半胱胺酸改造之抗體,其中該硫醇反應性試劑包括生物素部分及該捕捉介質包括鏈黴親和素(streptavidin)。
  13. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係選自單株抗體、抗體片段、雙特異性抗體、嵌合抗體、人類抗體及人類化抗體。
  14. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗體片段係Fab片段。
  15. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗HER2抗體。
  16. 如請求項15之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗HER2抗體係曲妥珠單抗(trastuzumab)。
  17. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗Ly6E抗體。
  18. 如請求項17之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗Ly6E抗體包括:(i)包括SEQ ID NO:179之胺基酸序列之HVR-H1;及包括SEQ ID NO:180之胺基酸序列之HVR-H2;包括SEQ ID NO:181之胺基酸序列之HVR-H3;包括SEQ ID NO:176之胺基酸序列之HVR-L1;包括SEQ ID NO:177之胺基酸序列之HVR-L2;及包括SEQ ID NO:178之胺基酸序列之HVR-L3;或(ii)包括SEQ ID NO:175之胺基酸序列之重鏈可變區及包括SEQ ID NO:174之胺基酸序列之輕鏈可變區。
  19. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改 造之抗體係抗CD79b抗體。
  20. 如請求項19之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗CD79b抗體包括:(i)包括SEQ ID NO:186之胺基酸序列之HVR-H1;及包括SEQ ID NO:187之胺基酸序列之HVR-H2;包括SEQ ID NO:188之胺基酸序列之HVR-H3;包括SEQ ID NO:189之胺基酸序列之HVR-L1;包括SEQ ID NO:190之胺基酸序列之HVR-L2;及包括SEQ ID NO:191之胺基酸序列之HVR-L3;或(ii)包括SEQ ID NO:184之胺基酸序列之重鏈可變區及包括SEQ ID NO:185之胺基酸序列之輕鏈可變區。
  21. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗MUC16抗體。
  22. 如請求項21之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗MUC16抗體包括:(i)包括SEQ ID NO:152之胺基酸序列之HVR-H1;及包括SEQ ID NO:153之胺基酸序列之HVR-H2;包括SEQ ID NO:154之胺基酸序列之HVR-H3;包括SEQ ID NO:149之胺基酸序列之HVR-L1;包括SEQ ID NO:150之胺基酸序列之HVR-L2;及包括SEQ ID NO:151之胺基酸序列之HVR-L3;或(ii)包括SEQ ID NO:156之胺基酸序列之重鏈可變區及包括SEQ ID NO:157之胺基酸序列之輕鏈可變區。
  23. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗STEAP1抗體。
  24. 如請求項23之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗STEAP1抗體包括:(i)包括SEQ ID NO:157之胺基酸序列之HVR-H1;及包括SEQ ID NO:158之胺基酸序列之HVR-H2;包括SEQ ID NO:159之胺基酸序列之HVR-H3;包括SEQ ID NO:160之胺基酸序列之HVR-L1;包括SEQ ID NO:161之胺基酸序列之HVR-L2;及包括SEQ ID NO:162之胺基酸序列之HVR-L3;或(ii)包括SEQ ID NO:163之胺基酸序列之重鏈可變區及包括SEQ ID NO:164之胺基酸序列之輕鏈可變區。
  25. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗NaPi2b抗體。
  26. 如請求項25之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗STEAP1抗體包括:(i)包括SEQ ID NO:165之胺基酸序列之HVR-H1;及包括SEQ ID NO:167之胺基酸序列之HVR-H2;包括SEQ ID NO:168之胺基酸序列之HVR-H3;包括SEQ ID NO:169之胺基酸序列之HVR-L1;包括SEQ ID NO:170之胺基酸序列之HVR-L2;及包括SEQ ID NO:171之胺基酸序列之HVR-L3;或(ii)包括SEQ ID NO:172之胺基酸序列之重鏈可變區及包括SEQ ID NO:173之胺基酸序列之輕鏈可變區。
  27. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體係抗CD22抗體。
  28. 如請求項25之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗CD22抗體包括:(i)包括SEQ ID NO:192之胺基酸序列之HVR-H1;及包括SEQ ID NO:193之胺基酸序列之HVR-H2;包括SEQ ID NO:194之胺基酸序列之HVR-H3;包括SEQ ID NO:195之胺基酸序列之HVR-L1;包括SEQ ID NO:196之胺基酸序列之HVR-L2;及包括SEQ ID NO:197之胺基酸序列之HVR-L3。
  29. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該經半胱胺酸改造之抗體結合至以下受體(1)至(53)中之一或多者:(1)BMPR1B(骨成形蛋白受體IB型);(2)E16(LAT1、SLC7A5);(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原);(4)0772P(CA125、MUC16);(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增效因子、間皮素(mesothelin));(6)Napi3b(NaPi2b、NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質載體家族34(磷酸鈉)成員2、II型鈉依賴性磷酸鹽運輸蛋白3b);(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、信號素(Semaphorin)5b Hlog、sema域、七血小板反應素(thrombospondin)重複體(1型及類1型)跨膜域(TM)及短細胞質域、(信號素)5B);(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因);(9)ETBR(內皮素B型受體);(10)MSG783(RNF124、假想蛋白FLJ20315);(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白);(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬態受體電位陽離子通道子家族M成員4);(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸形癌衍生之生長因子);(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/EB病毒受體 (Epstein Barr virus receptor))或Hs.73792);(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關β)、B29);(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有SH2域之磷酸酶錨蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C);(17)HER2;(18)NCA;(19)MDP;(20)IL20Rα;(21)短蛋白聚糖(Brevican);(22)EphB2R;(23)ASLG659;(24)PSCA;(25)GEDA;(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3);(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功型);(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關α、B細胞特異性蛋白);(29)CXCR5(柏基特氏(Burkitt's)淋巴瘤受體1、G蛋白偶合受體);(30)HLA-DOB(MHC II類分子之B子單元(Ia抗原);(31)P2X5(嘌呤受體(purinergic receptor)P2X配體閘控型離子通道5);(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2);(33)LY64(淋巴球抗原64(RP105)、富含白胺酸重複體(LRR)家族之I型膜蛋白); (34)FcRH1(類Fc受體蛋白1);(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受體易位相關2);(36)TENB2(推定跨膜蛋白多糖);(37)PMEL17(銀同源物;SILV;D12S53E;PMEL17;SI;SIL);(38)TMEFF1(具有類EGF及兩個類卵泡抑素(follistatin)域1之跨膜蛋白;腦腫瘤抑癌蛋白-1(Tomorcgulin-1));(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α1;GFRA1;GDNFR;GDNFRA;RETL1;TRNR1;RET1L;GDNFR-α1;GFR-α1);(40)Ly6E(淋巴球抗原6複合體、基因座E;Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)(41)TMEM46(shisa同源物2);(42)Ly6G6D(淋巴球抗原6複合體、基因座G6D;Ly6-D、MEGT1);(43)LGR5(含有富含白胺酸重複體之G蛋白偶合受體5;GPR49、GPR67);(44)RET(ret原致癌基因;MEN2A;HSCR1;MEN2B;MTC1;PTC;CDHF12;Hs.168114;RET51;RET-ELE1);(45)LY6K(淋巴球抗原6複合體、基因座K;LY6K;HSJ001348;FLJ35226);(46)GPR19(G蛋白偶合受體19;Mm.4787);(47)GPR54(KISS1受體;KISS1R;GPR54;HOT7T175;AXOR12);(48)ASPHD1(含有天冬胺酸β-羥化酶域1;LOC253982);(49)酪胺酸酶(TYR;OCAIA;OCA1A;酪胺酸酶;SHEP3);(50)TMEM118(環指蛋白,跨膜2;RNFT2;FLJ14627); (51)GPR172A(G蛋白偶合受體172A;GPCR41;FLJ11856;D15Ertd747e);(52)CD33;及(53)CLL-1(CLEC12A、MICL及DCAL2)。
  30. 如請求項1或2之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗體係共價連接至捕捉標記、偵測標記、藥物部分或固體載體。
  31. 如請求項30之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗體係共價連接至生物素捕捉標記。
  32. 如請求項30之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗體係共價連接至螢光染料偵測標記。
  33. 如請求項30之經半胱胺酸改造之抗體,其中該螢光染料係選自螢光素型、玫瑰紅型、丹磺醯(dansyl)、麗絲胺(Lissamine)、花青、藻紅素、德州紅(Texas Red)及其類似物。
  34. 如請求項30之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗體係共價連接至選自以下之放射性核種偵測標記:3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、89Zr、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At及213Bi。
  35. 如請求項30之經半胱胺酸改造之抗體,其中該抗體係藉由螯合配體共價連接至偵測標記。
  36. 如請求項35之經半胱胺酸改造之抗體,其中該螯合配體係選自DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA及TETA。
  37. 一種抗體藥物接合物,其包括請求項1至36中任一項之抗體共價連接至藥物部分以形成具有式I之抗體藥物接合物:Ab-(L-D) p I其中Ab係該抗體,L係連接子,D係該藥物部分,及p係1、 2、3或4,且其中該藥物部分係接合至如請求項1或2之經改造之半胱胺酸胺基酸。
  38. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中L包括選自以下之基團:6-馬來醯亞胺基己醯基(MC)、馬來醯亞胺基丙醯基(MP)、纈胺酸-瓜胺酸(val-cit(-vc))、丙胺酸-苯丙胺酸(ala-phe)及對胺基苄氧基羰基(PAB)。
  39. 如請求項37之抗體藥物接合物,其係由選自以下之連接子試劑製備:4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-琥珀醯亞胺酯(SPP)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1羧酸N-琥珀醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫基)丁酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯(SPDB)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-琥珀醯亞胺酯(SIAB)。
  40. 如請求項37之抗體藥物接合物,其係由包括馬來醯亞胺、碘乙醯胺、溴乙醯胺或二硫化物之連接子試劑製備。
  41. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中L形成二硫化物連接子。
  42. 如請求項40之抗體藥物接合物,其中該連接子試劑包括吡啶基二硫化物(PDS)。
  43. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中L包括纈胺酸-瓜胺酸(val-cit(-vc))。
  44. 如請求項37至43中任一項之抗體藥物接合物,其中該藥物部分(D)係美登醇(maytansinoid)、奧利斯他汀(auristatin)、尾海兔素(dolastatin)、新月毒素(trichothecene)、CC1065、卡奇黴素(calicheamicin)、烯二炔類抗生素(enediyne antibiotics)、紫杉烷(taxane)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚物、1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯并[e]吲哚(CBI)二聚物、CBI-PBD異二聚物或蒽環類藥物。
  45. 如請求項44之抗體藥物接合物,其中D係單甲基奧利斯他汀藥物部分MMAE,其具有結構: 其中波浪線指示與該連接子共價連接之位點。
  46. 如請求項44之抗體藥物接合物,其中該抗體藥物接合物係選自結構: 其中Val係纈胺酸;Cit係瓜胺酸;及p係1、2、3或4。
  47. 如請求項44之抗體藥物接合物,其中D係PBD二聚物藥物,其具有結構: 及其鹽及溶劑合物,其中:波浪線指示與該連接子共價連接之位點;虛線指示在C1與C2間或在C2與C3間之視需要存在雙鍵;R2係獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR,並視需要進一步選自鹵基或二鹵基,其中RD係獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、 CO2H及鹵基;R6及R9係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn及鹵基;R7係獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn及鹵基;Q係獨立地選自O、S及NH;R11係H或R,或其中Q係O、SO3M,其中M係金屬陽離子;R及R’係各獨立地選自視需要經取代之C1-8烷基、C1-12烷基、C3-8雜環基、C3-20雜環及C5-20芳基,並視需要與基團NRR’相關,R及R’連同其等連接之氮原子形成視需要經取代之4、5、6或7員雜環;R12、R16、R19及R17係分別如R2、R6、R9及R7所定義;R"係C3-12伸烷基,該鏈中可穿插一或多個雜原子(例如O、S、N(H)、NMe)及/或芳環(例如苯或吡啶,其環視需要經取代);及X及X’係獨立地選自O、S及N(H)。
  48. 如請求項47之抗體藥物接合物,其中該PBD二聚物之結構係: 包括其鹽及溶劑合物,其中波浪線指示與該連接子共價連接之位點;連接至OH之波浪線指示S或R組態;RV1及RV2係獨立地選自H、甲基、乙基及苯基(該苯基可視需要特別在4位置經氟取代)及C5-6雜環基;其中RV1及RV2可相同或不同;及n係0或1。
  49. 如請求項47之抗體藥物接合物,其係選自:
  50. 如請求項44之抗體藥物接合物,其中D係CBI二聚物藥物,其具有結構: 其中 R1係選自H、P(O)3H2、C(O)NRaRb或至連接子(L)之鍵;R2係選自H、P(O)3H2、C(O)NRaRb或至連接子(L)之鍵;Ra及Rb係獨立地選自H及視需要經一或多個F取代之C1-C6烷基,或Ra及Rb形成五或六員雜環基團;T係選自以下之系鏈(tether)基團:C3-C12伸烷基、Y、(C1-C6伸烷基)-Y-(C1-C6伸烷基)、(C1-C6伸烷基)-Y-(C1-C6伸烷基)-Y-(C1-C6伸烷基)、(C2-C6伸烯基)-Y-(C2-C6伸烯基)及(C2-C6伸炔基)-Y-(C2-C6伸炔基);其中Y係獨立地選自O、S、NR1、芳基及雜芳基;其中伸烷基、伸烯基、芳基及雜芳基係獨立地及視需要地經F、OH、O(C1-C6烷基)、NH2、NHCH3、N(CH3)2、OP(O)3H2及C1-C6烷基取代,其中烷基視需要經一或多個F取代;或伸烷基、伸烯基、芳基及雜芳基係獨立地及視需要地經至L之鍵取代;D'係一種藥物部分,其選自: 其中波浪線指示連接至T之位點;X1及X2係獨立地選自O及NR3,其中R3係選自H及視需要經一或多個F取代之C1-C6烷基;R4係H、CO2R或至連接子(L)之鍵,其中R係C1-C6烷基或苄基;及R5係H或C1-C6烷基。
  51. 如請求項50之抗體藥物接合物,其係選自:
  52. 一種製備抗體藥物接合物之方法,其包括使經半胱胺酸改造之抗體(Ab)之至少一個半胱胺酸與連接子-藥物中間物反應以形成 具有式I之抗體藥物接合物:Ab-(L-D) p I其中Ab係如請求項1至50中任一項之經半胱胺酸改造之抗體,L係連接子,D係藥物部分,及p係1、2、3或4;且其中該經半胱胺酸改造之抗體包括一或多個半胱胺酸胺基酸。
  53. 如請求項52之製備抗體藥物接合物之方法,其中該半胱胺酸突變係選自由根據EU編號之HC-L174C、HC-A140C及HC-Y373C組成之群。
  54. 如請求項52之製備抗體藥物接合物之方法,其中該半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-A140C。
  55. 如請求項52之製備抗體藥物接合物之方法,其中該半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-L174C。
  56. 如請求項52之製備抗體藥物接合物之方法,其中該半胱胺酸突變係根據EU編號之HC-Y373C。
  57. 如請求項52之製備抗體藥物接合物之方法,其中該半胱胺酸突變係LC-K149C。
  58. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有根據EU編號之A140C之重鏈突變,L包括吡啶基二硫化物(PDS),且D係選自由CBI-PBD異二聚物、念珠藻素、類紫杉醇及微管溶素(tubulysin)M組成之群。
  59. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有根據EU編號之A140C之重鏈突變,L包括-vc連接子,及D係選自由CBI-PBD異二聚物、念珠藻素、類紫杉醇及微管溶素M組成之群。
  60. 如請求項59之抗體藥物接合物,其中D係CBI-PBD異二聚物:
  61. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有選自由根據EU編號之R142C及K149C組成之群之輕鏈突變且L包括吡啶基二硫化物(PDS)。
  62. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有選自由根據EU編號之A140C、L174C、L179C、G371C、Y373C及S424C組成之群之重鏈突變且L包括吡啶基二硫化物(PDS)。
  63. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有選自由根據EU編號之L106C及R108C組成之群之輕鏈突變且L係-vc連接子。
  64. 如請求項37之抗體藥物接合物,其中該經半胱胺酸改造之抗體具有選自由根據EU編號之T114C、T187C、T209C、V262C、G371C、E382C及N434C組成之群之重鏈突變且L係-vc連接子。
  65. 一種抗體藥物接合物,其中該抗體藥物接合物係選自表18或表19中列舉之抗體藥物接合物中之一者。
  66. 一種醫藥組合物,其包括如請求項1至65中任一項之經半胱胺酸改造之抗體或抗體藥物接合物。
TW104130168A 2014-09-12 2015-09-11 經半胱胺酸改造之抗體及接合物 TW201625688A (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462050022P 2014-09-12 2014-09-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201625688A true TW201625688A (zh) 2016-07-16

Family

ID=54200088

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW104130168A TW201625688A (zh) 2014-09-12 2015-09-11 經半胱胺酸改造之抗體及接合物

Country Status (17)

Country Link
US (3) US10077318B2 (zh)
EP (2) EP3191521A2 (zh)
JP (5) JP2017531620A (zh)
KR (1) KR20170052600A (zh)
CN (1) CN107108724A (zh)
AR (1) AR101844A1 (zh)
AU (1) AU2015314826A1 (zh)
BR (1) BR112017003236A2 (zh)
CA (1) CA2957354A1 (zh)
HK (1) HK1243103A1 (zh)
IL (1) IL250449A0 (zh)
MX (1) MX2017003123A (zh)
RU (1) RU2017107502A (zh)
SG (1) SG11201701128YA (zh)
TW (1) TW201625688A (zh)
WO (1) WO2016040856A2 (zh)
ZA (1) ZA201700944B (zh)

Families Citing this family (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6707445B2 (ja) * 2013-10-21 2020-06-10 ジェネンテック, インコーポレイテッド 抗Ly6E抗体及び使用方法
CN107106700B (zh) 2013-12-16 2020-10-30 基因泰克公司 肽模拟化合物及其抗体-药物缀合物
EA033456B1 (ru) 2013-12-16 2019-10-31 Genentech Inc Конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидомиметические линкеры
TW201625688A (zh) * 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 經半胱胺酸改造之抗體及接合物
EP3191135B1 (en) 2014-09-12 2020-08-19 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
DK3262071T3 (da) * 2014-09-23 2020-06-15 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til anvendelse af anti-CD79b-immunkonjugater
EP3259285A2 (en) 2015-02-16 2017-12-27 Lonza Ltd Cl and/or ch1 mutated antibodies for drug conjugation
JP2018524295A (ja) * 2015-06-15 2018-08-30 ジェネンテック, インコーポレイテッド 抗体及び免疫複合体
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
KR20180090290A (ko) 2015-12-04 2018-08-10 시애틀 지네틱스, 인크. 사차화 튜불리신 화합물들의 컨쥬게이트들
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
MX2018007479A (es) 2015-12-21 2018-08-01 Squibb Bristol Myers Co Anticuerpos variantes para conjugacion especifica de sitio.
JP2019509322A (ja) 2016-03-22 2019-04-04 バイオノミクス リミテッド 抗lgr5モノクローナル抗体の投与
CN109963871A (zh) * 2016-08-05 2019-07-02 豪夫迈·罗氏有限公司 具有激动活性的多价及多表位抗体以及使用方法
WO2018045090A1 (en) * 2016-09-01 2018-03-08 Immunomab, Inc. Bispecific antibodies
EP3534949A4 (en) * 2016-11-07 2020-07-22 Seattle Genetics, Inc. DISTRIBUTION OF GENETICALLY MODIFIED CYSTEINE HAIRDRESSES
WO2018106842A1 (en) * 2016-12-06 2018-06-14 City Of Hope Cysteine peptide-enabled antibodies
US11660351B2 (en) * 2016-12-21 2023-05-30 Bayer Aktiengesellschaft Antibody drug conjugates (ADCs) having enzymatically cleavable groups
CA3052837A1 (en) * 2017-02-28 2018-09-07 Seattle Genetics, Inc. Cysteine mutated antibodies for conjugation
PE20191758A1 (es) 2017-03-22 2019-12-12 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares
SG11201909218RA (en) 2017-04-03 2019-11-28 Hoffmann La Roche Antibodies binding to steap-1
TW201836647A (zh) * 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗-prlr抗體藥物軛合物(adc)及其用途
US20200114017A1 (en) * 2017-06-16 2020-04-16 Bionomics Limited Antibody drug conjugates that bind lgr5
JP7153082B2 (ja) * 2017-06-20 2022-10-13 バイリ-バイオ(チェンドゥ)ファーマスーティカル シーオー.,エルティーディー. システイン改変抗体-毒素複合体(tdc)の部位特異的結合サイトのスクリーニング
GB201711208D0 (en) 2017-07-12 2017-08-23 Iontas Ltd Ion channel inhibitors
JP7117088B2 (ja) * 2017-08-04 2022-08-12 シスメックス株式会社 抗体及びその製造方法、並びに抗体の熱安定性を向上させる方法
CN107446050A (zh) 2017-08-11 2017-12-08 百奥泰生物科技(广州)有限公司 Trop2阳性疾病治疗的化合物及方法
US11623965B2 (en) 2017-08-16 2023-04-11 Bristol-Myers Squibb Company Prodruggable antibodies, prodrugs thereof, and methods of use and making
AU2018364114B2 (en) * 2017-11-08 2024-09-26 Yafei Shanghai Biolog Medicine Science & Technology Co., Ltd. Conjugates of biomolecule and use thereof
TWI805665B (zh) 2017-12-21 2023-06-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合hla-a2/wt1之抗體
CN111511400A (zh) 2017-12-29 2020-08-07 豪夫迈·罗氏有限公司 抗vegf抗体及其使用方法
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
EP3740233A4 (en) * 2018-01-18 2021-11-24 Magenta Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR DEPLOYING CD134 + CELLS
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
SG11202009542PA (en) 2018-03-29 2020-10-29 Genentech Inc Modulating lactogenic activity in mammalian cells
CR20210047A (es) 2018-07-02 2021-05-21 Amgen Inc Proteína de unión al antígeno anti-steap1
MX2021000827A (es) 2018-08-03 2021-03-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno que contiene dos dominios de union a antigeno que estan enlazados entre si.
WO2020061419A1 (en) * 2018-09-20 2020-03-26 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Targeting moiety-drug grafted immune cell compositions and methods of use
EA202191175A1 (ru) * 2018-10-29 2021-09-08 Мерсана Терапьютикс, Инк. Сконструированные с цистеином конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидсодержащие линкеры
US11130804B2 (en) 2018-12-21 2021-09-28 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody that binds to VEGF and IL-1beta and methods of use
TW202428614A (zh) 2018-12-21 2024-07-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合cd3之抗體
AU2020213565A1 (en) 2019-01-28 2021-08-05 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anti-CD79B antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
CN111675762B (zh) * 2019-03-11 2023-12-01 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含半胱氨酸的抗体、药物偶联物及其应用
SG11202109569RA (en) 2019-03-21 2021-10-28 Immunogen Inc Methods of preparing cell-binding agent-drug conjugates
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
JP2022543551A (ja) 2019-07-31 2022-10-13 エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Gprc5dに結合する抗体
MX2022001156A (es) 2019-07-31 2022-02-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se fijan a gprc5d.
CN113330029A (zh) * 2019-08-19 2021-08-31 沈阳药科大学 抗体的突变体及其应用
EP4025609A4 (en) * 2019-09-05 2023-10-04 Memorial Sloan Kettering Cancer Center ANTI-STEAP1 ANTIBODIES AND USES THEREOF
KR20220064980A (ko) 2019-09-18 2022-05-19 제넨테크, 인크. 항 klk7 항체, 항 klk5 항체, 다중특이적 항 klk5/klk7 항체, 및 사용 방법
JP7296467B2 (ja) 2019-12-18 2023-06-22 エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Hla-a2/mage-a4に結合する抗体
EP4100433A4 (en) 2020-02-05 2024-03-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR PRODUCING AND/OR ENRICHING RECOMBINANT ANTIGEN-BINDING MOLECULES
JP2023514727A (ja) 2020-02-21 2023-04-07 シルバーバック セラピューティックス インコーポレイテッド ネクチン-4抗体コンジュゲートおよびその使用
JP7481856B2 (ja) * 2020-02-25 2024-05-13 シスメックス株式会社 改変抗体及びその製造方法、並びに抗体の熱安定性を向上させる方法
TW202202620A (zh) 2020-03-26 2022-01-16 美商建南德克公司 經修飾之哺乳動物細胞
EP4126940A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
AU2021250186A1 (en) 2020-03-31 2022-12-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha DLL3-targeting multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
AR122569A1 (es) 2020-06-08 2022-09-21 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-vhb y métodos de uso
MX2022015887A (es) 2020-06-19 2023-01-24 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y folr1.
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
EP4168456A1 (en) 2020-06-19 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to cd3
CN115916825A (zh) 2020-06-19 2023-04-04 豪夫迈·罗氏有限公司 与cd3和cd19结合的抗体
WO2021262783A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Genentech, Inc. Apoptosis resistant cell lines
IL299508A (en) 2020-07-01 2023-02-01 Ars Pharmaceuticals Inc Anti-asgr1 antibody conjugates and uses thereof
KR20230038735A (ko) 2020-07-17 2023-03-21 제넨테크, 인크. 항-notch2 항체 및 이용 방법
CN116648507A (zh) 2020-08-28 2023-08-25 基因泰克公司 宿主细胞蛋白的CRISPR/Cas9多重敲除
EP4208201A1 (en) 2020-09-04 2023-07-12 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf-a and ang2 and methods of use
TW202233671A (zh) 2020-10-20 2022-09-01 美商建南德克公司 Peg結合抗mertk抗體及其使用方法
EP4288458A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
AR125074A1 (es) 2021-03-12 2023-06-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5 / klk7 y métodos de uso
JP2024518709A (ja) 2021-04-10 2024-05-02 プロファウンドバイオ ユーエス カンパニー Folr1結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
IL307501A (en) 2021-04-19 2023-12-01 Hoffmann La Roche Modified mammalian cells
WO2022226317A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
JP2024521107A (ja) 2021-05-21 2024-05-28 ジェネンテック, インコーポレイテッド 目的の組換え産物を産生するための修飾細胞
EP4370545A1 (en) 2021-07-12 2024-05-22 Genentech, Inc. Structures for reducing antibody-lipase binding
JP2024527606A (ja) 2021-07-14 2024-07-25 ジェネンテック, インコーポレイテッド 抗c-cモチーフケモカイン受容体8(ccr8)抗体及び使用方法
JP2024528631A (ja) 2021-07-22 2024-07-30 エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ヘテロ二量体Fcドメイン抗体
AU2022318483A1 (en) * 2021-07-28 2024-02-22 Merck Patent Gmbh Water soluble prodrug, conjugates and uses thereof
JP2024528217A (ja) 2021-08-03 2024-07-26 エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗体および使用方法
JP2024540536A (ja) 2021-11-19 2024-10-31 アーディアジェン コーポレーション Gpc3結合剤、そのコンジュゲートおよびその使用方法
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗notch2抗體及結合物及其使用方法
TW202342518A (zh) 2022-02-09 2023-11-01 國立研究開發法人醫藥基盤 健康 營養研究所 與fcrl1結合之抗體或該抗體片段
EP4519322A1 (en) * 2022-05-03 2025-03-12 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
WO2023240067A2 (en) * 2022-06-07 2023-12-14 Ngb Biopharmaceuticals, Inc. Multimerization of binding molecules having an antibody constant region variant and mutations that reduce effector functions
WO2024028282A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Gate2Brain, S.L. Site-specific modification by a bbb-shuttle of antibody-based entities for crossing the blood-brain barrier
CN115850449A (zh) * 2022-09-29 2023-03-28 苏州智核生物医药科技有限公司 抗体和缀合物
TW202421664A (zh) 2022-10-07 2024-06-01 美商建南德克公司 用抗c—c模體趨化因子受體8(ccr8)抗體治療癌症之方法
AR130916A1 (es) 2022-11-01 2025-01-29 Heidelberg Pharma Res Gmbh Anticuerpo anti-gucy2c y usos del mismo
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
WO2024108178A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genentech, Inc. Signal amplification and multiplexing using mass tags for ia-lc-ms/ms based assays
TW202432607A (zh) 2023-01-18 2024-08-16 美商建南德克公司 多特異性抗體及其用途
WO2024156672A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to csf1r and cd3
WO2024191785A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Genentech, Inc. Fusions with proteases and uses thereof
WO2024189048A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 Heidelberg Pharma Research Gmbh Subcutaneously administered antibody-drug conjugates for use in cancer treatment
US20240327522A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Genentech, Inc. Anti-alpha v beta 8 integrin antibodies and methods of use
WO2024231320A1 (en) 2023-05-08 2024-11-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
WO2024238537A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Pd-1 -regulated il-2 immunocytokine and uses thereof
WO2024263761A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Antibodies and uses thereof
WO2025010424A1 (en) 2023-07-06 2025-01-09 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against staphylococcus antigens and methods of using the same
WO2025021838A1 (en) 2023-07-26 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
CN116650660B (zh) * 2023-07-27 2023-11-03 上海偌妥生物科技有限公司 制备抗体偶联小分子药物的方法及其应用

Family Cites Families (406)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6098584A (ja) 1983-11-02 1985-06-01 Canon Inc カメラ―体形vtr
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5316757A (en) 1984-10-18 1994-05-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Synthesis of polyazamacrocycles with more than one type of side-chain chelating groups
US5342606A (en) 1984-10-18 1994-08-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
AU6355090A (en) 1989-08-23 1991-04-03 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
AU9016591A (en) 1990-10-25 1992-05-26 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on B cells
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
ES2149772T5 (es) 1991-03-29 2008-02-16 Genentech, Inc. Receptores humanos pf4a y su utilizacion.
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US6011146A (en) 1991-11-15 2000-01-04 Institut Pasteur Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US5739294A (en) 1991-12-10 1998-04-14 The Dow Chemical Company Bicyclopol yazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as contrast agents
US5480990A (en) 1991-12-10 1996-01-02 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes for use as contrast agents
US5428139A (en) 1991-12-10 1995-06-27 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as radiopharmaceuticals
ATE295420T1 (de) 1992-02-06 2005-05-15 Chiron Corp Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
WO1993021319A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 Cetus Oncology Corporation HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
WO1994006474A1 (en) 1992-09-16 1994-03-31 Galagen Inc. ANTIBODY TREATMENT OF $i(HELICOBACTER PYLORI)
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
DE69303494T2 (de) 1992-11-13 1997-01-16 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US5462725A (en) 1993-05-06 1995-10-31 The Dow Chemical Company 2-pyridylmethylenepolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents
US5385893A (en) 1993-05-06 1995-01-31 The Dow Chemical Company Tricyclopolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
EP0731106B1 (en) 1993-10-01 2004-11-17 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Dolastatin derivatives
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
DK0853487T3 (da) 1995-09-18 2000-10-23 Us Health Neutraliserende monoklonale antistoffer mod respiratorisk syncytial virus
US5834456A (en) 1996-02-23 1998-11-10 The Dow Chemical Company Polyazamacrocyclofluoromonoalkylphosphonic acids, and their complexes, for use as contrast agents
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
WO1997044452A1 (en) 1996-05-17 1997-11-27 Schering Corporation Human b-cell antigens, related reagents
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
ATE268340T1 (de) 1997-03-10 2004-06-15 Univ California Prostata stammzell-antigen (psca)
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
JP4213224B2 (ja) 1997-05-02 2009-01-21 ジェネンテック,インコーポレーテッド ヘテロマルチマー及び共通成分を有する多重特異性抗体の製造方法
US6890749B2 (en) 1997-05-15 2005-05-10 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6753165B1 (en) 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
US6248564B1 (en) 1997-08-29 2001-06-19 Harvard University Mutant MHC class I molecules
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
US7005504B2 (en) 1998-01-22 2006-02-28 Genentech, Inc. Antibody fragment-peg conjugates
EP1062232B1 (en) 1998-03-13 2008-09-10 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
PT1068241E (pt) 1998-04-02 2007-11-19 Genentech Inc Variantes de anticorpos e respectivos fragmentos
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP1078092B1 (en) 1998-05-13 2011-08-03 Epimmune Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
US7049311B1 (en) 1998-08-27 2006-05-23 Spirogen Limited Pyrrolbenzodiazepines
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
AU5963699A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Mcmaster University Spliced form of (erb)b-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
AU776672B2 (en) 1998-12-30 2004-09-16 Beth Israel Deaconess Medical Center Characterization of a calcium channel family
MX353234B (es) 1999-01-15 2018-01-08 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con función efectora alterada.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
IL144371A0 (en) 1999-01-29 2002-05-23 Corixa Corp Her-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
US7465785B2 (en) 1999-03-08 2008-12-16 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a nucleic acid over-expressed in melanoma
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7312303B2 (en) 1999-05-11 2007-12-25 Genentech, Inc. Anti-PRO4980 antibodies
WO2000075655A1 (fr) 1999-06-03 2000-12-14 Takeda Chemical Industries, Ltd. Procede de criblage avec cd100
LT2803367T (lt) 1999-06-25 2018-03-26 Immunogen, Inc. Gydymo būdai, naudojant anti-erbb antikūno-maitanzinoido konjugatus
CN101518653B (zh) 1999-06-25 2015-08-19 基因技术股份有限公司 使用抗ErbB抗体-类美坦素偶联物的治疗方法
US20030119113A1 (en) 1999-07-20 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
AU7573000A (en) 1999-09-01 2001-03-26 Genentech Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
EP1229934B1 (en) 1999-10-01 2014-03-05 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
EP1226177B1 (en) 1999-10-29 2008-07-09 Genentech, Inc. Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use
CA2393126C (en) 1999-11-29 2016-05-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Isolation of five novel genes coding for new fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
AU1807401A (en) 1999-11-30 2001-06-12 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
EP1568373A3 (en) 1999-12-10 2005-12-21 Epimmune Inc. Inducing cellular immune responses to HER2/neu using peptide and nucleic acid compositions
AU783473B2 (en) 1999-12-23 2005-10-27 Zymogenetics Inc. Soluble interleukin-20 receptor
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
EP2248828A1 (en) 1999-12-23 2010-11-10 ZymoGenetics, Inc. Method for treating inflammation
EP2180054A1 (en) 1999-12-24 2010-04-28 Genentech, Inc. Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
ES2274823T3 (es) 1999-12-29 2007-06-01 Immunogen, Inc. Agentes cototoxicos que comprenden doxorrubicinas y daunorrubicinas y su utilizacion terapeutica.
US7297333B2 (en) 2000-01-20 2007-11-20 Genentech, Inc. Anti-PRO10268 antibodies
CA2398102A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
US20030104562A1 (en) 2000-02-11 2003-06-05 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001062794A2 (en) 2000-02-22 2001-08-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
EP1261743A2 (en) 2000-03-07 2002-12-04 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
JP2004521602A (ja) 2000-03-24 2004-07-22 ファハリ サッチオグリュ 前立腺特異的または精巣特異的な新規の核酸分子、ポリペプチド、ならびに診断法および治療法
EP1268554A2 (de) 2000-03-31 2003-01-02 IPF Pharmaceuticals GmbH Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
WO2001075177A2 (en) 2000-04-03 2001-10-11 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Tumor markers in ovarian cancer
JP2003532057A (ja) 2000-04-07 2003-10-28 アリーナ・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツド 非内因性の、構成的に活性化される既知gタンパク質−共役受容体
PT2857516T (pt) 2000-04-11 2017-08-28 Genentech Inc Anticorpos multivalentes e utilizações dos mesmos
AU2001263105A1 (en) 2000-05-18 2001-11-26 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
US20020051990A1 (en) 2000-06-09 2002-05-02 Eric Ople Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
JP2004523203A (ja) 2000-06-16 2004-08-05 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド Gタンパク質結合受容体
JP2004502417A (ja) 2000-06-30 2004-01-29 アムジェン インコーポレーテッド B7様分子およびその使用
CA2413186A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Incyte Genomics, Inc. Extracellular matrix and cell adhesion molecules
CA2406649A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6891030B2 (en) 2000-07-27 2005-05-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research T-cell immunoregulatory molecule
AU2001287639A1 (en) 2000-07-28 2002-02-13 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
AU2001283360A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
CA2419533A1 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of her-2/neu-associated malignancies
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU2001270118A1 (en) 2000-08-24 2002-03-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1346040A2 (en) 2000-09-11 2003-09-24 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AR030612A1 (es) 2000-09-12 2003-08-27 Smithkline Beecham Corp Procedimiento e intermedios
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
US20030119121A1 (en) 2000-09-15 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
ES2267814T3 (es) 2000-09-15 2007-03-16 Zymogenetics, Inc. Metodo para tratar la inflamacion.
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
EP1320604A2 (en) 2000-09-18 2003-06-25 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
JP2005506033A (ja) 2000-10-13 2005-03-03 イーオーエス バイオテクノロジー インコーポレイテッド 前立腺癌の診断法、前立腺癌モジュレータースクリーニングの組成物及び方法
AU2002230659A1 (en) 2000-11-07 2002-05-21 Zymogenetics Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
US20020159986A1 (en) 2001-01-12 2002-10-31 John Langenfeld Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
EP1425302A2 (en) 2001-01-24 2004-06-09 Protein Design Labs Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
US20030073144A1 (en) 2001-01-30 2003-04-17 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
WO2002064775A1 (en) 2001-02-12 2002-08-22 Bionomics Limited Identification of genes involved in the tumourigenic process
WO2002071928A2 (en) 2001-03-14 2002-09-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
AU2002311787A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Zycos Inc. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
AU2002254615A1 (en) 2001-04-17 2002-10-28 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Repeat sequences of the ca125 gene and their use for diagnostic and therapeutic interventions
CA2444691A1 (en) 2001-04-18 2002-10-31 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
AU2002334799B2 (en) 2001-04-26 2009-05-07 Biogen Ma Inc. Cripto-specific antibodies
PT1390389E (pt) 2001-04-26 2009-04-03 Biogen Idec Inc Anticorpos que bloqueiam o cripto e as utilizações dos mesmos
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2002089747A2 (en) 2001-05-09 2002-11-14 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US20030078399A1 (en) 2001-05-11 2003-04-24 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, CA125, and uses thereof
NZ529638A (en) 2001-05-24 2007-08-31 Zymogenetics Inc Taci-immunoglobulin fusion proteins
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
WO2002098358A2 (en) 2001-06-04 2002-12-12 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002320264B2 (en) 2001-06-05 2008-05-01 Exelixis, Inc. GFATs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
EP1572872A2 (en) 2001-06-05 2005-09-14 Exelixis, Inc. Igs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
EP1517998A2 (en) 2001-06-18 2005-03-30 EOS Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
AU2002322280A1 (en) 2001-06-21 2003-01-21 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20030108958A1 (en) 2001-06-28 2003-06-12 Rene De Waal Malefyt Biological activity of AK155
US20030120040A1 (en) 2001-06-29 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and Transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2002314433A1 (en) 2001-07-02 2003-01-21 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
US7446185B2 (en) 2001-07-18 2008-11-04 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
AU2002337657A1 (en) 2001-07-25 2003-02-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
BR0211614A (pt) 2001-08-03 2006-10-31 Genentech Inc polipeptìdeo tacis e br3 e empregos dos mesmos
EP1478772A2 (en) 2001-08-14 2004-11-24 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
WO2003018621A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
WO2003029262A2 (en) 2001-08-29 2003-04-10 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US20040235068A1 (en) 2001-09-05 2004-11-25 Levinson Arthur D. Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation and compositions useful for the treatment of such disorders
ES2532757T3 (es) 2001-09-06 2015-03-31 Agensys, Inc. Ácido nucleico y proteína correspondiente denominados STEAP-1 útiles en el tratamiento y la detección de cáncer
AU2002330039A1 (en) 2001-09-17 2003-04-01 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003025228A1 (en) 2001-09-18 2003-03-27 Proteologics, Inc. Methods and compositions for treating hcap associated diseases
EP2174953A1 (en) 2001-09-18 2010-04-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2460621A1 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US20030077644A1 (en) 2001-09-28 2003-04-24 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in CD72
AU2002362436A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
AU2002362454A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
AU2002351505B2 (en) 2001-10-19 2008-04-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2003035846A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Structure of tall-1 and its cognate receptor
DE60217152T2 (de) 2001-10-31 2007-10-31 Alcon Inc. Knochen-morphogene proteine (bmp), bmp-rezeptoren und bmp-bindungsproteine und ihre verwendung bei der diagnose und behandlung des glaukoms
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
CA2467242A1 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
EP1448226A1 (en) 2001-11-29 2004-08-25 Genset S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
CA2469941A1 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003049704A2 (en) 2001-12-11 2003-06-19 University Of Massachusetts Antibodies to treat cancer
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
JP2005514063A (ja) 2001-12-21 2005-05-19 イデックス ラボラトリーズ インコーポレイテッド イヌ免疫グロブリン可変ドメイン、イヌ化抗体、ならびにそれらを作製および使用する方法
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
JP2005526501A (ja) 2002-02-21 2005-09-08 デューク・ユニヴァーシティ 自己免疫疾患用の試薬および治療方法
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM
WO2003083047A2 (en) 2002-03-01 2003-10-09 Exelixis, Inc. MP53s AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US7202033B2 (en) 2002-03-21 2007-04-10 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Identification of kinase inhibitors
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
CA2480404A1 (en) 2002-03-25 2003-10-30 Uab Research Foundation Fc receptor homolog, reagents, and uses thereof
AU2003222103A1 (en) 2002-03-28 2003-10-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
AU2003223469A1 (en) 2002-04-05 2003-10-27 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98p4b6 useful in treatment and detection of cancer
US20040101874A1 (en) 2002-04-12 2004-05-27 Mitokor Inc. Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
EP2011886A3 (en) 2002-04-16 2009-02-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20030224467A1 (en) 2002-04-17 2003-12-04 Osborne C. Kent AIB1 as a prognostic marker and predictor of resistance to endocrine therapy
WO2003093444A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Incyte Corporation Transporters and ion channels
AU2003229294A1 (en) 2002-05-15 2003-12-02 Avalon Pharmaceuticals Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20030224454A1 (en) 2002-05-30 2003-12-04 Ryseck Rolf Peter Human solute carrier family 7, member 11 (hSLC7A11)
AU2003239969A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
AU2003240495A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
DE60336227D1 (de) 2002-06-06 2011-04-14 Oncotherapy Science Inc Gene und proteine mit bezug zu menschlichem kolonkrebs
AU2003249691A1 (en) 2002-06-07 2003-12-22 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
JP2005533794A (ja) 2002-06-18 2005-11-10 アーケミックス コーポレイション アプタマー−毒素分子およびこれを使用する方法
MXPA04012725A (es) 2002-06-20 2005-09-30 Snaptrack Inc Reduccion de interferencia cruzada en un receptor de gps y sistema de comunicacion combinado.
EP1539218A4 (en) 2002-06-20 2007-08-22 Univ California COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING LYMPHOCYTE ACTIVITY
EP2365004B1 (en) 2002-06-21 2016-01-06 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
EP1521769B1 (de) 2002-07-09 2015-09-09 Dömling, Alexander Tubulysinkonjugate
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
CN1692127A (zh) 2002-07-25 2005-11-02 健泰科生物技术公司 Taci抗体及其用途
EP1575514A2 (en) 2002-07-31 2005-09-21 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
HUE027549T2 (hu) 2002-07-31 2016-10-28 Seattle Genetics Inc Hatóanyagot tartalmazó konjugátumok és alkalmazásuk rák, autoimmun betegség vagy fertõzéses betegség kezelésére
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
AU2003259913A1 (en) 2002-08-19 2004-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7504211B2 (en) 2002-08-27 2009-03-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods of using EPHA2 for predicting activity of compounds that interact with and/or modulate protein tyrosine kinases and/or protein tyrosine kinase pathways in breast cells
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
CN1691964A (zh) 2002-09-06 2005-11-02 曼康公司 表位序列
WO2004040000A2 (en) 2002-09-09 2004-05-13 Nura, Inc G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
CA2500978A1 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill University Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
EP1570078A4 (en) 2002-10-04 2006-09-13 Van Andel Res Inst MOLECULAR CLASSIFICATION OF RENAL TUMORS AND DISCOVERING NEW DIAGNOSTIC MARKERS
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
NZ538996A (en) 2002-10-31 2008-04-30 Genentech Inc Methods and compositions for increasing antibody production
EP2364716A3 (en) 2002-11-08 2012-01-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases
AU2003295511A1 (en) 2002-11-13 2004-06-03 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
EP2292259A3 (en) 2002-11-15 2011-03-23 MUSC Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
JP2006516189A (ja) 2002-11-15 2006-06-29 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ アーカンソー Ca125遺伝子、および診断および治療のためのその使用
US20080213166A1 (en) 2002-11-20 2008-09-04 Biogen Idec Inc. Novel Gene Targets and Ligands that Bind Thereto for Treatment and Diagnosis of Colon Carcinomas
US7557092B2 (en) 2002-11-21 2009-07-07 University Of Utah Research Foundation Purinergic modulation of smell
AU2003298786A1 (en) 2002-11-26 2004-06-18 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
CA2508519A1 (en) 2002-12-02 2004-06-17 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Se Cretary Of The Department Of Health And Human Services Recombinant immunotoxin and use in treating tumors
EP1581641A4 (en) 2002-12-06 2006-11-15 Diadexus Inc COMPOSITIONS, SPREADING VARIATIONS AND METHODS RELATED TO OVARAL SPECIFIC GENES AND PROTEINS
JP2004198419A (ja) 2002-12-13 2004-07-15 Bayer Healthcare Llc Timp1を用いた検出方法
EP1944320A1 (en) 2002-12-16 2008-07-16 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
ES2388280T3 (es) 2002-12-20 2012-10-11 Abbott Biotherapeutics Corp. Anticuerpos que reaccionan frente a GPR64 y utilización de los mismos
WO2004058309A1 (en) 2002-12-23 2004-07-15 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
CA2512536A1 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
WO2004063355A2 (en) 2003-01-10 2004-07-29 Protein Design Labs, Inc. Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of matastatic cancer
US20040171823A1 (en) 2003-01-14 2004-09-02 Nadler Steven G. Polynucleotides and polypeptides associated with the NF-kappaB pathway
EP1583821A4 (en) 2003-01-15 2007-07-18 Millennium Pharm Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING UROLOGICAL DISORDERS USING GENES 44390, 54181, 211, 5687, 884, 1405, 636, 4421, 5410, 30905, 2045, 16405, 18560, 2047, 33751, 52872, 14063, 20739, 32544, 43239, 44373, 51164, 53010, 16852, 1587, 2207, 22245, 2387, 52908, 69112, 14990, 18547, 115, 579
CA2513113A1 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
JP2009520459A (ja) 2003-02-14 2009-05-28 サイグレス ディスカバリー, インコーポレイテッド 癌における治療標的
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
US6884799B2 (en) 2003-03-31 2005-04-26 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines and process thereof
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
AU2004284075A1 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック, インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP1723152B1 (en) 2004-03-09 2015-02-11 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
ES2549077T3 (es) * 2004-04-07 2015-10-22 Genentech, Inc. Espectrometría de masas de conjugados de anticuerpos
EP2067789A1 (en) 2004-04-13 2009-06-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-P selectin antibodies
EP2286844A3 (en) 2004-06-01 2012-08-22 Genentech, Inc. Antibody-drug conjugates and methods
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ox40l抗體
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
WO2006036834A2 (en) 2004-09-24 2006-04-06 Amgen Inc. MODIFIED Fc MOLECULES
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
WO2008020827A2 (en) 2005-08-01 2008-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Altered polypeptides, immunoconjugates thereof, and methods related thereto
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
MY162174A (en) 2005-10-07 2017-05-31 Exelixis Inc Azetidines mek inhibitors for the treatment of proliferative diseases
PT1813614E (pt) 2006-01-25 2012-01-09 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina
CN101037475B (zh) 2006-03-15 2012-08-15 上海中信国健药业股份有限公司 一种嵌合受体及其制备方法和用途
JP2009538629A (ja) 2006-05-30 2009-11-12 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体およびイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
US20090182127A1 (en) 2006-06-22 2009-07-16 Novo Nordisk A/S Production of Bispecific Antibodies
MX2009000709A (es) 2006-07-18 2009-02-04 Sanofi Aventis Anticuerpo antagonista contra epha2 para el tratamiento de cancer.
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
MX2009008430A (es) 2007-02-09 2009-10-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-robo4 y sus usos.
JP5290276B2 (ja) 2007-05-08 2013-09-18 ジェネンテック, インコーポレイテッド システイン改変抗muc16抗体および抗体−薬物結合体
WO2009012256A1 (en) 2007-07-16 2009-01-22 Genentech, Inc. Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
US8088378B2 (en) 2007-07-16 2012-01-03 Genetech Inc. Anti-CD79B antibodies and immunoconjugates and methods of use
PL2019104T3 (pl) 2007-07-19 2014-03-31 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne obejmujące nowe pochodne tomaymycyny i ich zastosowanie terapeutyczne
WO2009052249A1 (en) 2007-10-19 2009-04-23 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
ES2774337T3 (es) 2008-01-07 2020-07-20 Amgen Inc Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática
AU2009205995B2 (en) 2008-01-18 2014-04-03 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
US8742076B2 (en) 2008-02-01 2014-06-03 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
WO2010009124A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Genentech, Inc. Anthracycline derivative conjugates, process for their preparation and their use as antitumor compounds
EP2321352B1 (en) 2008-07-18 2016-01-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions monovalent for cd28 binding and methods of use
ES2604668T3 (es) 2009-02-05 2017-03-08 Immunogen, Inc. Nuevos derivados de benzodiacepina
CN102481373A (zh) * 2009-03-27 2012-05-30 葛兰素集团有限公司 药用融合体和缀合物
PL3192529T3 (pl) 2009-04-08 2020-08-24 Heinz Faulstich Zawierające amatoksynę terapeutyczne komponenty wiążące powierzchnię komórki zaprojektowane do terapii guza nowotworowego
JP5739880B2 (ja) 2009-06-04 2015-06-24 ノバルティス アーゲー IgG結合のための部位を同定するための方法
WO2011005481A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
DE102009035875A1 (de) 2009-08-03 2011-02-24 Dge Dr.-Ing. Günther Engineering Gmbh Verfahren zur Herstellung von Bio- oder Klärgas
GB0920127D0 (en) 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
CA2789337A1 (en) 2010-02-16 2011-08-25 Medimmune, Llc Hsa-related compositions and methods of use
WO2011118739A1 (ja) * 2010-03-26 2011-09-29 協和発酵キリン株式会社 新規修飾部位導入抗体および抗体フラグメント
MA34277B1 (fr) 2010-04-15 2013-06-01 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazépines et conjugués de celles-ci
WO2011133886A2 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
MX336540B (es) * 2010-06-08 2016-01-22 Genentech Inc Conjugados y anticuerpos manipulados geneticamente con cisteina.
BR112013001043A2 (pt) 2010-07-15 2016-05-24 Thomson Ind Inc mancal de movimento linear com estrutura de travamento mútuo
EP2436398B1 (en) 2010-09-30 2013-01-23 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin-conjugates with improved linkers
CN103313990B (zh) * 2010-11-17 2016-07-20 基因泰克公司 丙氨酰美登醇抗体偶联物
MX355255B (es) 2011-02-04 2018-04-11 Genentech Inc Variantes de fc y métodos para su producción.
EP2497499A1 (en) 2011-03-10 2012-09-12 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin-conjugates with improved linkages
US8969526B2 (en) 2011-03-29 2015-03-03 Roche Glycart Ag Antibody Fc variants
ES2556584T3 (es) 2011-10-14 2016-01-19 Medimmune Limited Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas
US11147852B2 (en) * 2011-12-23 2021-10-19 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
AU2013266604B2 (en) 2012-05-21 2016-09-08 Genentech, Inc. Anti-Ly6E antibodies and immunoconjugates and methods of use
EA201590174A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие анти-cd22 антитела
CN104717979A (zh) 2012-08-02 2015-06-17 基因泰克公司 抗etbr抗体和免疫偶联物
US20150218220A1 (en) 2012-09-12 2015-08-06 Brian Alan MENDELSOHN Amatoxin derivatives and cell-permeable conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase
KR102447350B1 (ko) * 2013-02-08 2022-09-23 노파르티스 아게 면역접합체의 제조를 위한 항체의 변형에 사용되는 특정 부위
EP2774624A1 (en) 2013-03-04 2014-09-10 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin derivatives
CN105636612B (zh) * 2013-08-12 2020-01-14 基因泰克公司 抗体-药物缀合物及使用和治疗方法
EA033456B1 (ru) 2013-12-16 2019-10-31 Genentech Inc Конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидомиметические линкеры
BR112016013258A2 (pt) 2013-12-16 2018-01-16 Genentech Inc composto conjugado anticorpo-droga, composição farmacêutica, método para tratar câncer e kit
CA2928952A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
CN107106700B (zh) 2013-12-16 2020-10-30 基因泰克公司 肽模拟化合物及其抗体-药物缀合物
WO2015110935A1 (en) 2014-01-27 2015-07-30 Pfizer Inc. Bifunctional cytotoxic agents
PL3900742T3 (pl) 2014-09-11 2024-12-09 Seagen Inc. Ukierunkowane dostarczanie substancji leczniczych zawierających aminę trzeciorzędową
EP3191135B1 (en) * 2014-09-12 2020-08-19 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
TW201625688A (zh) * 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 經半胱胺酸改造之抗體及接合物

Also Published As

Publication number Publication date
AR101844A1 (es) 2017-01-18
WO2016040856A3 (en) 2016-05-06
RU2017107502A3 (zh) 2019-07-24
AU2015314826A1 (en) 2017-03-02
US20230130874A1 (en) 2023-04-27
EP3388449A3 (en) 2018-10-24
JP2024150467A (ja) 2024-10-23
JP2017531620A (ja) 2017-10-26
EP3388449A2 (en) 2018-10-17
BR112017003236A2 (pt) 2017-11-28
JP2022137034A (ja) 2022-09-21
EP3191521A2 (en) 2017-07-19
US10077318B2 (en) 2018-09-18
US20160130358A1 (en) 2016-05-12
CA2957354A1 (en) 2016-03-17
MX2017003123A (es) 2017-05-12
SG11201701128YA (en) 2017-03-30
HK1243103A1 (zh) 2018-07-06
RU2017107502A (ru) 2018-10-12
IL250449A0 (en) 2017-03-30
US20200017601A1 (en) 2020-01-16
CN107108724A (zh) 2017-08-29
WO2016040856A2 (en) 2016-03-17
KR20170052600A (ko) 2017-05-12
ZA201700944B (en) 2019-06-26
JP2020143067A (ja) 2020-09-10
JP2021073176A (ja) 2021-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230130874A1 (en) Cysteine Engineered Antibodies and Conjugates
JP4948413B2 (ja) システイン操作抗体および結合体
RU2626537C2 (ru) Полученные с помощью генной инженерии антитела с цистеиновыми заменами и их конъюгаты
MX2007003404A (es) Anticuerpos y conjugados diseñados de cisteina