SK541288A3

SK541288A3 - Phosphate of 4'-demethylepipodophyllotoxinglucosides, method of preparation thereof, required intermediates, use of the said compounds and pharmaceutical composition them containing

Info

Publication number: SK541288A3
Application number: SK5412-88A
Authority: SK
Inventors: Mark G Saulnier; Peter D Senter; John F Kadow
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1987-08-04
Filing date: 1988-08-02
Publication date: 1998-10-07
Also published as: LU87290A1; SK279325B6; LU90138I2; IL87290A0; ES2010775A6; FI87790C; NL970042I2; SE502214C2; PT88186A; NO883299L; GB2207674A; FR2622193A1; DE3826562A1; AT398974B; GR880100512A; US4904768A; NL8801934A; NO920665D0; SG101291G; SE8802815D0

Description

Vynález sa týka nových- 4'-fosfátov epipodofylotoxínglukozidov, spôsobov ich výroby, potrebných medziproduktov a použitia uvedených zlúčenín na liečenie nádórov, ako i farmaceutických prípravkov s obsahom týchto nových zlúčenín na uvedenú liečbu.

Doterajší stav techniky

Etopozid (VP-16, látka vzorca I) a tenipozid (VM-26, vzorec II) sú klinicky používané látky, odvodené od prírodného lignanu podofylotoxínu.Táto skupina zlúčenín sa niekedy označuje ako 4-demetylepipodofylotox' i-glukozid

Etopozid a tenipozid sú účinné pri liečení rôznych nádorov vrátane nádorov semenníkov, pľúcneho karcinómu z malých buniek, nádorov i

vaječníkov, mliečnej žľažy, štítnej žľazy, močového mechúra a mozgu, leukémia nelymfocytárnehó typu a Hodgkinovej choroby.

Zlúčeniny vzorcov I Ja II a spôsob ich výroby popísali Wartburg a spol. v americkom patentovom jspise č. 3 408 441 a Keller - Juslen a spol.

I v americkom patentovom spise č. 3 524 844. Zlúčeniny popísané v týchto ί

publikáciách, hlavne etopozid a tenipozid, slúžia ako východiskové látky na prípravu 4'-fosfátov epipôdofylotoxín - glukozidov spôsobom podľa tohto vynálezu. ¹

Fosforylácia terapeutických činidiel obsahujúcich hydroxylovú skupinu bola už používaná ako prostriedok na predĺženie doby do začiatku účinku lieku.

i

Fosforylované deriváty sa pôsobením enzýmu fosfatázy in vivo štiepia za uvoľnenia pôvodnej aktívnej látky. Diskusia fosfátov ako potenciálnych prekurzorov liekov je uvedená v práci „Rational for Design of Biologically Reversible Drug Derivatives: Prodrugs (Sinkula a Yalkowsky, J. Pharm. Sci., 1975, 64, 181 až 210 na str. 189 až 191). Ako príklady fosfátov známych protinádorových činidiel možno uviesť camptothecin (Japan Kokai 21 - 95 394 a 21-95 393, Derwent Abst. č. 87-281016 a 87-281 ľ 15) a daurorubicin (americký patentový spis č. 4 185 111).

Seligman a spol. pripravili dvojsodnú soľ podofylotoxín - fosfátu, tento fosfát sa však nehydrolyzuje fosfatázou prostatovej kyseliny a oproti základnému podofylotoxínu nemá nižšiu toxicitu, pozri Cancer Chemotherapy Reports, I, 59, 233 -242 (1975).

Podstata vynálezu

Vynález sa týka fosfátov 4'-demetylepipodofylotoxín - glukozidov, ktoré sú účinné protinádorové činidlá. Hlavne dihydrogénfosfát 4'demetylepipodofylotoxín- glukozidu a jeho soli, ktoré sú dobre rozpustné vo vode, čo je z farmaceutického hľadiska veľká prednosť v porovnaní s bežnými terapeutickými činidlami tohto druhu, etopozidom a tenip^r židom, ktoré sú len minimálne rozpustné vo vode.

Vynález popisuje 4'-fosfáty 4'-demetylepipodofylotoxín - glukozidov všeobecného vzorca V v ktorom

R⁶ znamená atóm vodíka a

R¹ predstavuje alkylovú skupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, alkenylovú skupinu s 2 až 10 atómami uhlíka, cykloalkylovú skupinu s 5 až 6 atómami uhlíka, 2-furylovú skupinu, 2-tienylovú skupinu, arylovú skupinu so 6 až 10 atómami uhlíka, aralkylovú skupinu so 7 až 14 atómami uhlíka alebo aralkenvlovú skupinu s 8 až 14 atómami uhlíka, pričom každý z aromatických kruhov môže byť prípadne substituovaný jedným alebo niekoľkými substituentmi vybranými zo skupiny zahrňujúcej atómy halogénov, alkylové skupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, alkoxyskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, hydroxylovú skupinu, nitroskupinu a aminoskupinu, alebo

R¹ a R⁶ znamenajú vždy alkylovú skupinu s 1 až 8 atómami uhlíka alebo R¹a R⁶ spoločne s uhlíkovým atómom, na ktorý sú naviazané, tvoria cykloalkylovú skupinu s 5 až 6 atómami uhlíka,

X predstavuje kyslík alebo síru, a

R⁷ a R⁸ nezávisle od seba znamenajú vždy atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, A-substituovanú alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, cykloalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, A-substituovanú cykloalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, arylovú skupinu so 6 až 10 atómami uhlíka, A-substituovanú arylovú skupinu, alkylsubstituovanú arylovú skupinu, aralkylovú skupinu so 7 až 14 atómami uhl'ka, A-substituovanú aralkylovú skupinu alebo alkylsubstituovanú aralkylovú skupinu, pričom hore uvedeným substituentom A sa myslí jedna alebo niekoľko skupín vybraných z hydroxylovej skupiny, alkoxyskupín, alkanoyloxyskupin, kyanoskupiny, aminoskupiny, alkylaminoskupín, dialkylaminoskupín, karboxylovej skupiny, alkyltioskupín, merkaptoskupiny, merkaptotioskupiny, nitropyridyldisulfidového zvyšku, alkanoylaminoskupín, alkanoylových skupín, karbamoylové skupiny, nitroskupiny a atómov halogénov a ich farmaceutický použiteľné soli.

Soli zlúčenín všeobecného vzorca V zahrňujú ako monoaniónové, tak dianiónové soli. Katiónom môže byť ión kovu, ako ión alkalického kovu, kovu alkalickej zeminy alebo iného bežného kovu alebo organická dusík obsahujúca skupina, ako amóniová, mono-, di- alebo trialkylamónio á alebo pyridíniová skupina. Katión sa s výhodou zvolí zo skupiny zahrňujúcej katión sodný, draselný, lítny, cézny, horečnatý, vápenatý, hlinitý, amónny a mono-, di- a trialkylamóniový. Výhodné sú zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorom R⁷ a R⁸ predstavujú atómy vodíka a ich farmaceutický použiteľné soli.

Najvýhodnejšie zlúčeniny sú potom etopozid-4'-dihydrogénfosfát, resp. tiofosfát nižšie uvedených vzorcov Via a Vlb, ktoré znázorňujú dvojsodné soli hore uvedených zlúčenín, ktoré rovnako patria medzi najvýhodnejšie látky.

^P(ONa)₂

X (VI) a: X = 0 b: X = S

Ďalšie výhodné vyhotovenie predstavujú zlúčeniny hore uvedeného všeobecného vzorca V, v ktorom R⁷ a R⁸ sú rovnaké a sú vybrané zo skupiny zahrňujúcej 2,2,2-trihalogénetylovú skupinu, 2-kyánetylovú skupinu, alkylové skupiny s 1 až 5 atómami uhlíka, fenylovú skupinu a fenylalkylové skupiny, pričom fenylový kruh je prípadne substituovaný alkylovou skupinou, halogénom alebo nitroskupinou.

Ďalej vynález popisuje protinádorovo účinné fosfors nidáty všeobecného vzorca VII

R6

v ktorom

R¹, R⁶ a X majú hore uvedený význam,

Y predstavuje atóm chlóru alebo hydroxylovú skupinu alebo zvyšok NR⁴R⁵a

R², R³, R⁴ a R⁵ nezávisle od seba znamenajú vždy atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, alkenylovú skupinu s 2 až 5 atómami uhlíka, cykloalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, A-substituovanú alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, A-substituovanú alkenylovú skupinu s 2 až 5 atómami uhlíka alebo A-substituovanú cykloalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, alebo R² a R³ spoločne s dusíkovým atómom, na ktorý sú naviazané, tvoria troj- až šesťčlenný kruh, alebo R⁴ a R⁵ spoločne s dusíkovým atómom, na ktorý sú naviazané, tvoria troj- až šesťčlenný kruh, pričom hore uvedení substituenti A majú vyššie uvedený význam, a ich farmaceutický použiteľné soli.

VIII

R6

v ktorom

R¹, R⁶ a X majú hore uvedený význam, pričom tieto látky sa používajú pri výrobe zlúčenín všeobecného vzorca V.

Vynález rovnako popisuje spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca V, v ktorých R⁷ a R⁸ predstavujú atómy vodíka a ich farmaceutický použiteľných solí, vyznačujúci sa tým, že sa (a) zlúčenina všeobecného vzorca IX

R6

OH v ktorom:

R¹ a R⁶ majú hore uvedený význam, prevedie na zlúčeninu všeobecného vzorca X

v ktorom

R¹ , R⁶ a X majú hore uvedený význam a

G predstavuje chrániacu skupinu fosfátového zvyšku, (b) zo zlúčeniny všeobecného vzorca X sa odštiepi chrániaca skupina alebo chrániace skupiny fosfátového zvyšku a (c) produkt získaný v stupni (b) sa prípadne prevedie na farmaceutický použiteľnú soľ.

Chrániace skupiny fosfátového zvyšku zahrňujú i skupiny uvedené vyššie pre symbol R⁷, s výnimkou vodíka, nijako sa však neobmedzujú na tieto skupiny.

Ak nie je uvedené inak, používaným výrazom „alkyl sa myslia príslušné zvyšky s priamymi alebo rozvetvenými reťazcami, halogénmi sa myslia atómy brómu, chlóru, fluóru a jódu a výrazom „etopofos“ sa označuje dvojsodná soľ etopozid-4'-fosfátu (t. j. zlúčenina vzorca Via).

Fenolickú skupinu 4'-demetylepipodofylotoxín-glukozidov je možné fosforylovať oxychloridom fosforečným alebo tiofosforylchloridom za vzniku zodpovedajúceho dichlórfosfátu alebo dichlórtiofosfátu vzorca Vili. Fosforylačná reakcia sa vykonáva vo vhodnom bezvodom organickom rozpúšťadle, napríklad v acetonitrile a výhodne v prítomnosti terciárnej amínovej bázy, napríklad Ν,Ν-diizopropyletylamínu. Priebeh reakcie možno sledovať chromatografiou na tenkej vrstve, podľa ktorej je možné usúdiť na optimálnu reakčnú dobu podľa výskytu škvrny zodpovedajúcej produktu alebo podľa vymiznutia škvrny východiskového materiálu alebo podľa obidvoch týchto údajov. Podľa našej skúsenosti sa môže reakčná doba pohybovať zhruba od 4 do 72 hodín. Zdá sa, že dĺžka reakčnej doby závisí od kvality používaného fosforylačného činidla.

4'-dichlórfosfáty všeobecného vzorca VIII sú mnohostranné medziprodukty, ktoré je možné podrobiť reakcii s nukleofilnými činidlami za vzniku širokej palety fosfátových a tiofosfátových derivátov. Tak je možné tieto medziprodukty hydrolyzovať na fosfáty, pričom v prítomnosti bázy sa získa soľ tohto fosfátu. Reakciou s nadbytkom vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného poskytujú zlúčeniny všeobecného vzorca VIII dvojsodné soli príslušných 4'-fosfátov alebo 4'-tiofosfátov. Na získanie príslušných solí možno používať rovnako hydrogénuhličitany obsahujúce iné katióny, ako katión draselný alebo amónny. Dichlórfosfátové medziprodukty všeobecného vzorca VIII možno podrobovať reakciám s amínmi za vzniku buď zodpovedajúcich fosforodiamidátov alebo chlórfosforomonoamidátov. Ako príklady vhodných amínov je možné bez akéhokoľvek obmedzovania menovať amoniak, primárne amíny, ako etylamín, chlóretylamín, allylamín, dimetylaminopropylamín, hydroxyetylamín, cyklohexylamín a aminocyklohexanol a sekundárne amíny, ako dietylamín, piperidín, etylmetylamín, metylaminoetanol, etylbutylamín a podobne. Používané množstvá amínu vzhľadom k množstvu epipodofylotoxín dichlórfosfátu je možné upravovať v prospech vzniku jedného alebo iného reakčného produktu. Tak napríklad ak sa použije veľký nadbytok amínu vzhľadom k epipodofylotoxínovému derivátu, získa sa symetrický fosforodiamidát, t. j. zlúčenina všeobecného vzorca VII, v ktorom Y znamená rovnako zvyšok NR²R³, zatiaľ čo pri použití menšieho mn :žstva amínu vzniká chlórfosforomonoamidát, t.j. zlúčenina všeobecného vzorca VII, v ktorom Y znamená chlór. Chlórfosforomonoamidáty je možné hydrolyzovať za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca VII, v ktorom Y znamená hydroxylovú skupinu alebo jej soli, alebo je možné podrobiť reakcii s iným amínom za vzniku nesymetrických fosforodiamidátov, t. j. zlúčenín všeobecného vzorca VII, v ktorom Y predstavuje zvyšok NR⁴R⁵ odlišný od zvyšku NR²R³.

Hore popísané postupy ilustruje nasledujúca reakčná schéma.

nadbytok r²r³nh

Triestery fosforečnej kyseliny sú zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorom. R⁷ a R⁸ neznamenajú vodík. Tieto zlúčeniny je možné pripraviť reakciou 4'-demetylepipodofylotoxín-glukozidu s diesterhalogenidom fosforečnej kyseliny, t. j. so zlúčeninou všeobecného vzorca

Hal-P(X)(OR⁷)(OR⁸)

Zistilo sa, že táto reakcia najúčinnejšie prebieha v acetonitrile v prítomnosti organickej trialkylamínovej bázy, ktorou je s výhodou diizopropyletylamín. Používa sa najmenej jeden ekvivalent halogénfosfátu a aminovej bázy, pričom sa s výhodou pracuje s miernymi radbytkami obidvoch týchto činidiel oproti používanému epipodofylotoxín-glukozidu. Reakciu je možné vykonávať pri ľubovoľnej teplote vedúcej k vzniku produktu. Zdá sa, že reakciu, ktorá môže trvať až niekoľko dní, uľahčujú mierne zvýšené teploty, napríklad teplota 30 až 40 °C.

Symetrické diesterhalogenidy fosforečnej kyseliny (t. j. zlúčeniny, v ktorých R⁷ = R⁸) je možné účelne pripravovať z alkoholu a napríklad fosforylchloridu, nesymetrické diestery (t. j. zlúčeniny, v ktorých R⁷^ R⁸), potom možno pripravovať z alkoholu a esterdihalogenidu fosforečnej kyseliny. Triestery fosforečnej kyseliny možno rovnako pripravovať inými spôsobmi, napríklad najprv prevedením fenolu na príslušný fosfit, napríklad reakciou s činidlom vzorca (C₆H₅CH₂O)PN(i-C₃H7)2 a nasledujúcou oxidáciou fosfitu na fosfát, napríklad za použitia mchlórperbenzoovej kyseliny.

Triestery fosforečnej kyseliny môžu ďalej slúžiť ako medziprodukty pri výrobe zlúčenín všeobecného vzorca V a ich solí. Tak napríklad dihydroxyfosfát (zlúčenina všeobecného vzorca V, v ktorom R⁷ = R⁸= vodík) sa získa katalytickou hydrogenáciou difenylesteru (zlúčenina všeobecného vzorca V, v ktorom R⁷ = R⁸ = fenyl). Medzi ďalšie vhodné chrániace skupiny fosfátového zvyšku patria bez akéhokoľvek obmedzovania 2,2,2-trichlóretylová skupina, benzylová skupina, kyánetylová skupina, p-nitrofenylová skupina, pnitrobenzylová skupina, p-nitrofenetylová skupina a p-brómfenylová skupina. Dihydroxyfosfáty (zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorom R⁷ = R⁸ = H) sa prevádzajú na solí s bázami reakciou s príslušnými bázami, napríklad s hydrogénuhličitanom sodným, hydrogénuhličitanom amónnym alebo organickými aminmi. Alternatívne je možné soli pripraviť preliatím roztoku dihydroxyfosfátu stĺpcom iónomeniča obsahujúceho žiadaný katión.

I keď pri práci spôsobom podľa vynálezu sa ako fosforylačné činidlá používajú oxychlorid fosforečný, diesterhalogenidy fosforečnej kyseliny a ich zodpovedajúce sírne analógy, je pochopiteľné, že je možné používať i iné fosforové činidlá schopné fosforylovať fenoly. Vhodné reakčné podmienky a prostredie je možné zvoliť v závislosti od použitého fosforylačného činidla. Príklady rôznych fosforylačných činidiel sú uvedené v publikácii „Current Methods of Phosphorylation of Biological Molecules“ (Synthesis, 1977, 737 752). '

Reprezentatívne zlúčeniny podľa vynálezu boli testované čo sa týka protinádorovej účinnosti proti transplatovateľnej myšej leukémii P388. Všetky pokusy boli vykonávané na myších samcoch (CDF), ktorým bolo naočkované 10⁸ ascitických buniek myšej leukémie P388. Testy sa vykonávali s použitím etopozid-4'-fosfátu, jeho dvojsodnej soli a dvojsodnej soli etopozid-4'-tiofosfátu. Inokulácia nádorom a aplikácia testovanej látky sa vykonávajú intravenózne. Vo všetkých ostatných pokusoch sa inokulácia nádorom a aplikácia testovanej látky vykonávajú intraperitoneálne. Vo všetkých prípadoch sa ako pozitívna kontrola aplikuje etopozid, a to intraperitoneálne. Pokusy trvajú 28 až 46 dní. Po skončení pokusu sa vždy zaznamená počet prežívajúcich exemplárov. Protinádorová účinnosť sa vyjadruje v percentách T/C, čo je pomer strednej doby prežitia (MST) zvierat ošetrených testovanou látkou k strednej dobe prežitia kontrolnej skupiny ošetrenej soľným roztokom. Zlúčenina majúca percento T/C 125 alebo vyššie sa všeobecne pokladá za látku vykazujúcu výraznú protinádorovú účinnosť pri teste na leukémiu P388. V nasledujúcej tabuľke 1 sú uvedené výsledky hore uvedeného testu. Uvádzajú sa maximálne hodnoty % T/C a dávky, pri ktorých dochádza k tomuto účinku.

Tabuľka I Protinádorová účinnosť proti myšej leukémii P388

Zlúčenina	Dávka^x) (mg/kg/inj.)	Aplikačná cesta	MST (dni)	% T/C
Nádorové bunky implantované intravenózne:
Príklad 1	140	IV	29,0	363
(etopozid)	50	IP	20,5	256
Príklad 4	200	IP	18,0	225
(etopozid)	100	IP	21,5	269
Príklad 8	125	IV	24,5	306
(etopozid)	100	IP	29,5	369
Nádorové bunky implantované intraperitoneálné:
Príklad 2	240	IP	16,5	165
(etopozid)	60	IP	25,0	250
Príklad 3	200	IP	15,5	155
(etopozid)	100	IP	27,0	270
Príklad 7	240	IP	25,0	250
(etopozid)	100	IP	26,0	260
Príklad 9	150	IP	19,5	217
(etopozid)	100	IP	24,0	267

Legenda:

^x) látky sa aplikujú, ak nie je uvedené inak, 5. a 8. deň (za prvý deň sa pokladá deň implantácie nádoru)

Preukázalo sa, že zlúčeniny podľa vynálezu sú účinné proti nádorom transplantovaným pokusným zvieratám. Konkrétne zlúčenina zodpovedajúca vzorcu Via („etopofos“) vykazuje pri teste na leukémiu P388 výrazne vyššiu protinádorovú účinnosť ako etopozid. Toto selektívne činidlo predstavuje vo vode veľmi dobre rozpustný prekurzor etopozidu, ktorý má in vitro nižšiu protinádorovú účinnosť, ale alkalickou fosfatázou sa rýchlo štiepi za uvoľnenia etopozidu. Takto uvoľnený etopozid vykazuje rovnakú cytotoxicitu ako etopozid pôvodný.

Vynález rovnako popisuje spôsob inhibície nádorov u cicavcov, ktorý spočíva v tom, že sa cicavcovi trpiacemu na nádor aplikuje účinná dávka protinádorovo účinnej zlúčeniny všeobecného vzorca V alebo VII. Na tento účel je možné účinnú látku aplikovať zvyčajnou cestou, ako je, bez akéhokoľvek obmedzenia, aplikácia intravenózna, intramuskulárna, intratumorálna, intraarteriálna, intralymfatická a orálna.

Ďalej vynález popisuje farmaceutický prostriedok obsahujúci zlúčeninu všeobecného vzorca V alebo VII a farmaceutický použiteľný nosič. Tento protinádorový prostriedok môže byť v ľubovoľnej farmaceutickej forme vhodnej pre žiadaný spôsob aplikácie. Ako príklady takýchto prostriedkov možno uviesť pevné preparáty pre orálne podanie, ako tabletky, kapsule, pilulky, prášky a granule, kvapalné preparáty pre orálne podanie, ako roztoky, suspenzie, sirupy alebo elixíry a preparáty pre parenterálne podanie, ako sterilné roztoky, suspenzie či emulzie. Tieto prostriedky možno rovnako vyrábať vo forme sterilných pevných preparátov, ktoré je možné bezprostredne pred ich použitím rozpustiť v sterilnej vode, fyziologickom soľnom roztoku é-iebo inom sterilnom injekčnom prostredí.

Odborníci nebudú mať problémy so stanovením optimálnych dávok a režimu dávkovania pre ošetrovaného cicavca. Je pochopiteľné, že aktuálna používaná dávka sa bude meniť v závislosti od používanej liekovej formy a účinnej látky, od spôsobu aplikácie, miesta aplikácie, ošetrovaného subjektu a liečenej choroby. Ďalej je potrebné brať do úvahy mnohé ďalšie faktory ovplyvňujúce účinok lieku, vrátane veku, hmotnosti, pohlavia, výživy, doby aplikácie, spôsobu aplikácie, rýchlosti vylučovania, stavu pacienta, kombinácie účinných látok, citlivosti pacienta na účinnú látku a rozsahu choroby.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Vynález je ďalej popísaný formou príkladov, ktorými nie je nijako obmedzovaný. V týchto príkladoch sú všetky nukleárne magnetické rezonančné spektrá (NMR), merané s použitím deuterochloroformu alebo deutériumoxidu ako vnútorného štandardu a NMR spektrá fosforu (vzťahujúc voči ext. 85 % vodnej H3PO4) sa merajú na spektrometri Bruker WM360. Infračervené spektrá (IČ) sa merajú na spektrometri Perkin - Elmer 1800 Fourier Transform Infrared Spectrophotometer. Výraz „veľmi rýchla chromatografia“ sa týka metódy, ktorú popísali W. C. Still, M. Kahn a A. Mitra v J. Org. Chem., 1978, 43, 2923 a vykonáva sa na silikagéli (E. Merck, 230 až 400 mesh) Chromatografia na reverznej fáze sa vykonáva za pretlaku dusíka s použitím C18 (oktadecylsilán) na silikagéli (priemer častíc 40 pm).

/ Príklad 1

Dvojsodná soľ etopozid-4'-fosfátu (zlúčenina Via)

Suspenzia 2,30 g (3,91 mmól) etopozidu v 210 ml suchého acetonitrilu sa za miešania magnetickým miešadlom zahrieva až do takmer úplného rozpustenia. Výsledný roztok sa nechá ochladiť na teplotu miestnosti a pridá sa k nemu 2,36 ml (13,5 mmól) Ν,Ν-diizopropyletylamínu. Zmes sa ochladí na 0 °C a pomocou injekénej striekačky sa k nej v priebehu 30 sekúnd pridá 666 mg (4,34 mmól) oxychloridu fosforečného. Reakčná zmes sa v priebehu 2 až 3 hodín nechá ohriať na teplotu miestnosti a pri teplote miestnosti sa 63 hodín mieša, pričom na konci tohto obdobia sa z nej odoberie vzorka zodpovedajúca 20 objemovým percentám, ktorá sa nechá reagovať s dietylamínom ako je popísané v príklade 2.

K zvyšnej časti reakčnej zmesi sa pridá roztok 6,0 g (71,4 mmól) hydrogénuhličitanu sodného v 110 ml deionizovanej vody_; zmes sa 80 minút mieša pri teplote miestnosti a potom sa roztrepe medzi roztok 20 ml nasýteného vodného hydrogénuhličitanu sodného v 125 ml deionizovanej vody a 350 ml etylacetátu. Organická vrstva sa dalej extrahuje raz 50 ml deionizovanej vody, spojené vodné vrstvy sa premyjú 250 ml etylacetátu a kvôli odstráneniu rozpustných rozpúšťadiel sa jednu hodinu evakuujú pri teplote miestnosti na 67 Pa. Vodný podiel sa potom nanesie na stĺpec s priemerom 4 cm, obsahujúci 15 cm oktadecylsilánu na silikagéli, ktorý bol pripravený v metanole a ekvilibrovaný s vodou. Po aplikácii celého vodného podielu sa stĺpec kvôli odstráneniu anorganických solí vymyje 175 ml vody, načo sa produkt eluuje zmesou vody a metanolu v pomere 4:1. Zahustením eluátu za tlaku 67 Pa sa získa 744 mg (36 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebnej pevnej látky. Alternatívne sa lyofilizáciou získa čistá zlúčenina uvedená v názve vo forme veľmi ľahkého chumáčovitého p^roduktu.

IČ (KBr-technika): 3426, 1775, 1593, 1505, 1486, 1337, 1239, 1191, 1122, 1078, 1034, 983, 927, 888, 876, 851, 840, 697, 685, 664, 547 cm’¹.

¹ H-NMR (360 MHz, deuteriumoxid, hodnoty δ): 6,93 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,93 (d, 2H), 5,09 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 4,83 (q, 1H, J = 5,0 Hz), 4,68 (d,

H, J = 7,9 Hz), 4,62 (d, 1 H, J = 5,7 Hz), 4,47 - 4,35 (m, 2H), 4,24 (dd, 1 H, J = 4,4 a 10,4 Hz), 3,64 (s, 6H), 3,68 - 3,52 (m, 3H), 3,44 - 3,30 (m, 3H), 3,17 3,07 (m, 1H), 1,31 (d, 3H, J = 5,0 Hz).

¹³C-NMR (90 MHz, deuteriumoxid, hodnoty δ): 178,5, 151,8, 148,1, 146,1,

135,0, 132,6, 130,9, 127,4, 109,9, 109,5, 107,4, 101,3, 100,4, 99,6, 79,2, 73,7, 72,7,72,2, 69,1, 67,1, 65,4, 55,6, 42,8, 40,3, 37,5, 18,8.

³¹P-NMR (146 MHz, deuteriumoxid, hodnoty δ): 3,79. Hmotové spektrum (FAB): m/e 713 (M⁺ + H);

pre C₂9H₃iNa₂O₁₆P vypočítané M⁺ 712.

Analýza: pre C₂9H₃₁Na₂0i6P vypočítané: 48,89 % C, 4,39 % H nájdené* 48,72 % C, 4,56 % H

6,45 , Na, 6,56 % Na.

* upravené pre 8,16 % H₂O (stanovené podľa Karí Fischera).

Príklad 2

Etopozid-4'-(bis-[N,N-dietyl]fosfónamid) (VII, X = 0, R¹ = metyl, R⁶ = H, Y = N(Et)₂, R² = R³ = Et)

Ako je uvedené v príklade 1, vnesie sa 20 % objemových zmesi, v ktorej bola vykonávaná reakcia etopozidu s oxychloridom fosforečným, do 4 ml dietylamínu a zmes sa 3 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a slabo oranžový zvyšok sa vyčistí veľmi rýchlou chromatografiou na silikagéli. Eluáciou 4 % metanolom ''metylénchloride sa získa 271,3 mg (46,9 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme nažltlého pevného materiálu.

IČ (KBr-technika): 3408, 2974, 2936, 2877, 1774, 1598, 1508, 1486, 1467, 1421, 1383, 1339, 1234, 1191, 1162, 1130, 1098, 1079, 1037, 902, 858, 795, 713, 700, 544 cm·¹.

¹H-NMR (360 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 6,79 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,20 (s, 2H), 5,96 (ABq, 2H), 4,87 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 4,71 (q, 1H, J = 5,1 Hz), 4,61 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 4,57 (d, 1H, J = 5,2 Hz), ), 4,39 (dd, 1H, J = 9,1 a 10,2 Hz), 4,22 - 4,13 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,55 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,32 - 3,10 (m, 11H), 2,94 - 2,83 (m, 1H) , 1,37 (d, 3H, J = 5,1 Hz) 1,10 (m, 12H).

³¹P-NivlR (146 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 16,49.

Hmotové spektrum (FAB): m/e 779 (M⁺ + H);

573 (M⁺ - cukornatý zvyšok); pre C37H51N2O14P vypočítané M⁺ 778.

Príklad 3

Etopozid-4'-(N,N-[2-chlóretyl]fosforylchlorid) (VII, R¹ = metyl, R⁶ = H, X = O, Y = Cl, R² = R³ = CH₂CH₂CI)

Suspenzia 2,00 g (3,40 mmól) etopozidu v 220 ml suchého acetonitrilu sa za miešania magnetickým miešadlom zahrieva až do takmer úplného rozpustenia všetkých pevných podielov, potom sa ochladí na teplotu miestnosti a pridá sa k nej 2,05 ml (11,8 mmól) Ν,Ν-diizopropyletyiamínu. Výsledná zmes sa pod dusíkom ochladí na 0 oC a v priebehu 30 sekúnd sa k nej pomocou injekčnej striekačky pridá 624 mg (4,07 mmól) oxychloridu fosforečného. Reakčná zmes sa 2,5 hodiny mieša magnetickým miešadlom pri teplote 0 oC a potom ešte 1,5 hodiny pri teplote miestnosti, načo sa k nej rýchlo pridá 1,82 g (10,2 mmól) bis(2-chlóretylamín)-hydrochloridu a ihneď potom 2,10 ml (12,0 mmól) Ν,Ν-diizopropyletylamínu. Reakčná zmes sa 80 minút mieša pri teplote miestnosti a potom sa vo vákuu zahustí na objem cca 5 ml. Zvyšok sa rozpustí v 400 ml etylacetátu a 5 ml metanolu, roztok sa premyje dvakrát vždy 200 ml pufra s pH 5, 150 ml vody a 150 ml roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom sodným a síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odparí. Žltooranžový pevný zvyšok sa vyčistí veľmi rýchlou chromatografiou na silikagéli za použitia 3 až 4 % metanolu v metylénchloride ako eluačného činidla. Získa sa 1,25 g (45,4 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebnej pevnej látky.

¹H-NMR (360 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 6,82 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,99 (d, 2H), 4,90 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 4,73 (q, 1H, J = 5,0 Hz),

4,65 - 4,60 (m, 2H), 4,41 (m, 1H), 4,25 - 4,15 (m, 2H), 3,75 - 3,65 (m, 5H), 3,72 (s, 6H), 3,60 - 3,23 (m, 9H), 2,91 - 2,80 (m, 1H), 1,38 (d, 3H, J = 5,0 Hz).

³¹P-NMR (146 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 11,16 a 10,96 (dva signály vzhľadom k chirálnemu fosforu).

Hmotové spektrum (FAB): m/e 812, 810, 808;

pre C33H39CI3NO14P vypočítané M⁺ (³⁵CI) 809.

Príklad 4

Dvojsodná soľ etopozid-4'-tiofosfátu (zlúčenina vzorca Vlb)

Suspenzia 2,04 g (3,47 mmól) etopozidu v 175 ml suchého acetonitrilu sa za miešania magnetickým miešadlom zahrieva až do takmer úplného rozpustenia. Výsledný roztok sa nechá ochladiť na teplotu miestnosti a pridá sa k nemu 2,00 ml (11,5 mmól) Ν,Ν-diizopropyletylamínu. Zmes sa ochladí na 0 °C a v priebehu 30 sekúnd sa k nej pomocou injekénej striekačky pridá 0,720 g (4,17 mmól) tiofosforylchloridu. Výsledná zmes sa nechá počas 2 až 3 hodín pomaly ohriať na teplotu miestnosti, pri teplote miestnosti sa mieša ešte 16 hodín, načo sa zahreje na 30 až 35 oC a na tejto teplote sa udržiava ešte 4 hodiny. Chromatogram vzorky zmesi na tenkej vrstve (5 % metanol v dichlórmetáne) obsahuje hlavnú novú škvrnu s vyšším R_f ako má etopozid. K reakčnej zmesi sa pridá 7,4 g pevného hydrogénuhličitanu sodného a potom 100 ml deionizovanej vody, zmes sa mieša najprv 1,5 hoc ^:ny pri teplote 25 až 28 oC a potom 1,5 hodiny pri teplote miestnosti, načo sa roztrepe medzi 200 ml deionizovanej vody, 30 ml vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 300 ml etylacetátu. Ďalšie spracovanie a chromatografia na reverznej fáze sa vykonáva analogickým spôsobom ako v príklade 1. Získa sa 1,03 g (40,8 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebnej pevnej látky.

¹H-NMR (360 MHz, deuteriumoxid, hodnoty δ): 6,93 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,93 (d, 2H), 5,09 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 4,83 (q, 1H, J = 5,0 Hz), 4,68 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 4,63 (d, 1H, J = 5,7 Hz),), 4,47 - 4,35 (m, 2H), 4,24 (dd, 1H, J = 4,3 a 10,5 Hz), 3,64 (s, 6H), 3,67 - 3,52 (m, 3H), 3,47 - 3,29 (m, 3H), 3,17 3,07 (m, 1 H), 1,31 (d, 3H, J = 5,0 Hz).

Hmotové spektrum (FAB): m/e 728 (M⁺), 706 (M⁺ + H - Na);

pre C₂₉H3iNa₂O₁₅PS vypočítané M⁺ 728.

Príklad 5

Etopozid-4'-[[N,N-bis(2-chlóretyl)amino]-[N-(3-hydroxypropyl)amino]]fosfát (VII, X = O, R¹ = metyl, R⁶ = H, R² = R² = 2-chlóretyl, Y = NH(CH₂)₃OH)

K roztoku 280 mg (0,346 mmól) zlúčeniny z príkladu 3 v 3 ml dichlórmetánu sa za miešania magnetickým miešadlom pridá roztok 33,5 mg (0,446 mmól) 3-amino-1- propanolu v 1 ml dichlórmetánu. Po 5 minútach sa pridá ďalších 31,0 mg (0,413 mmól) 3-amino-1 -propanolu v 0,5 ml absolútneho metanolu. Reakčná zmes sa čistí priamym nanesením na 4 preparatívne dosky pre chromatografiu na tenkej vrstve (silikagél Merck, hrúbka vrstvy 1 mm), ktoré sa vyvíjajú v 5 až 8 % metanolu v dichlórmetáne. Pás obsahujúci žiadaný produkt sa vymyje 5 % metanolom v etylacetáte, roztok sa odparí vo vákuu a zvyšok sa vysuší za tlaku 13 Pa. Získa sa 185 mg (63 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebnej pevnej látky tvorenej zmesou diastereomérov na fosfore.

¹H-NMR (360 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 7,20 (šs, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,50 a 6,48 (2s, 1H), 6,26 a 6,25 (2s, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,88 (m, 1H), 4,73 (q,

H), 4,64 - 4,57 (m, 2H), 4,40 (m, 1 H), 4,21 - 4,13 (m, 2H), 3,71, 3,70 (2s, 6H), 3,71-3,06 (m, 18H), 2,90 - 2,80 (m, 1H), 1,37 (d, 3H).

Hmotové spektrum (FAB): m/e 849, 851 (M⁺ + H, ³⁵Cl, ³⁷CI);

pre C36H47CI2N2O15P vypočítané M⁺ 848 (³⁵CI) a 850 (³⁷CI).

Príklad 6

Etopozid-4'-[[N,N-bis(2-chlóretyl)amino]-[N-[2-[(3-nitropyridyl-2-yl)disulfid]-etyl]]amino]-fosfát (VII, X = O, R¹ = metyl, R⁶ = H, R² = R³ = 2-chlóretyl, Y = NH(CH₂)₂-SS-(3nitropyridil-2-yl))

K zmesi 248 mg (0,306 mmól) zlúčeniny z príkladu 3 a 105 mg (0,393 mmól) 2-(3-nitropyridyl)-1-(2-aminoetyl)disulfid-hydrochloridu sa pridá 7 ml dichlórmetánu a potom 100 μΙ (0,570 mmól) diizopropyletylamínu a 0,5 ml suchého metanolu. Výsledný roztok sa 1,5 hodinu mieša pri teplote miestnosti a potom sa vyčistí priamym nanesením na 4 dosky pre preparatívnu chromatografiu na tenkej vrstve (silikagél Merck, hrúbka vrstvy 1 mm), ktoré sa vyvíjajú 4 až 5 % metanolom v etylacetáte. Pás obsahujúci žiadaný produkt sa vymyje 5 % metanolom v etylacetáte, roztok sa odparí vo vákuu a zvyšok sa ďalej suší vo vákuu 13 Pa. Získa sa 231,7 mg (75,3 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltohnedej pevnej látky tvorenej zmesou diastereoizomérov na fosfore.

IČ (KBr-technika): 1774, 1598, 1584, 1559, 1509, 1486, 1456, 1421, 1397,

1342, 1236, 1160, 1128, 1096, 1038, 1004, 926, 857, 747, 699 cm'¹.

¹H-NMR (360 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 8,81 a 8,77 (2m, 1H), 8,48 (m, 1H), 7,33 (m, 1 H), 6,81 (s, 1 H), 6,51 a 6,50 (2s, 1H), 6,26 (šs, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,89 (m, 1H), 4,73 (q, 1H), 4,65 - 4,52 (m, 3H), 4,41 (m, 1H), 4,24 - 4,14 (m, 2H), 3,71, 3,70 (2s, 6H), 3,71-2,85 (m, 19H), 2,68 (šs, 1H, OH), 2,37 (šs, 1H, OH), 1,37 (d, 3H).

Hmotové spektrum (FAB): m/e 1005, 1007 (M⁺ + H); ³⁵CI, ³⁷CI);

pre C40H47CI2N4O16PS2 vypočítané M⁺ 1004 (³⁵CI) a 1006 (³⁷CI).

Príklad 7

Etopozid-4 '-difenylfosfát (R¹ = CH₃₎ R⁶ = H, R⁷ = R⁸ = fenyl)

K suspenzii 10,50 g (17,84 mmól) etopozidu vysušeného nad oxidom fosforečným pri 80 oC/67 Pa, v 450 ml suchého acetonitrilu sa pridá najprv 4,20 ml (24,1 mmól) diizopropyletylamínu a potom pomocou injekčnej striekačky 2,00 ml (9,65 mmól) difenyl-chlórfosfátu. Zmes sa pod dusíkom 2 hodiny mieša pri teplote 50 oC, pričom dôjde k rozpusteniu všetkého etopozidu. Pridá sa ďalších 1,80 ml (8,68 mmól) difenyl-chlórfosfátu a reakčná zmes sa 72 hodín zahrieva na 45 °C. Po pridaní dalších 0,75 ml (4,3 mmól) amínovej bázy a 0,80 ml (3,86 mmól) difenyl-chlórfosfátu sa zmes 7 hodín mieša pri teplote 40 až 45 oC, načo sa k nej pridá ešte 0,40 ml (1,93 mmól) difenyl-chiórfosfátu a zmes sa nechá 22 hodín reagovať pri teplote 40 až 45 oC. Po pridaní 20 ml izopropanolu sa rozpúšťadlo odparí vo vákuu, pevný zvyšok sa rozpustí v 500 ml dichlórmetánu a roztrepe sa so 400 ml vody. Vodná vrstva sa extrahuje100 ml dichlórmetánu, spojené organické extrakty sa premyjú 250 ml roztoku chloridu sodného a vysušia sa síranom sodným a síranom horečnatým. Po odparení na rotačnej odparke a nasledujúcej veľmi rýchlej chromatografii na silikagéli za použitia 2 až 3 % metanolu v dichlórmetáne ako eluačného činidla sa získa 12,50 g (85 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebnej pevnej látky.

Hmotové spektrum (FAB): m/e 820 (M + H)⁺

IČ (KBr-technika): 3460, 2925, 1775, 1601, 1490 cm'¹.

¹H-NMR (360 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 7,28 (m, 8H), 7,15 (m, 2H), 6,78 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,95 (m, 2H), 4,85 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,60 (d, J = 7,6, 1H), 4,56 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,22 - 4,13 (m, 2H), 3,72 - 3,60 (m, 1H), 3,48 (s, 6H), 3,54 - 3,28 (m, 3H), 3,23 (dd, J = 14,2, 5,3 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H, 1,35 (d, J = 5,1 Hz, 3H).

Analýza: pre C41H41O16P vypočítané: 60,00 % C, 5,04 % H, nájdené: 60,20 % C, 5,16 % H.

Príklad 8

Etopozid-4'-fosfát (V, R¹ = CH₃, R⁶ = H, R⁷ = R⁸ = H)

K roztoku 0,79 g (0,962 mmól) etopozid-4'-difenylfosfátu (produkt z príkladu 7) v 95 ml absolútneho etanolu sa pridá 0,198 g (0,87 mmól) čerstvého oxidu platičitého a zmes sa v Parrovej aparatúre 4 hodiny hydrogenuje pri teplote miestnosti za tlaku 3,15 až 3,5 MPa. Reakčná zmes sa sfiltruje cez vrstvu kremeiiny, ktorá sa premyje etanolom. Filtrát sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa 14 hodín suší vo vákuu nad oxidom fosforečným. Získa sa 0,627 g (94 %) žiadaného produktu vo forme bielej pevnej látky.

Hmotové spektrum (FAB): m/e 669 (M + H)⁺

IČ (KBr-technika): 3440, 2930, 1778, 1604, 1498 cm*¹.

¹H-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid, hodnoty δ): 6,93 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,12 (s, 2H), 5,94 (m, 2H), 5,17 (šs, 1H), 4,86 (d, J = 3,93 Hz, 1H), 4,64 (q, J = 7,5, 5,8 Hz, 1H), 4,51 -4,42 (m, 2H), 4,20 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 4,01 (dd, J = 12,1, 5,3 Hz, 1H), 3,51 (s, 6H), 3,51 - 2,75 (m, 7H), 2,83 (m, 1H), 1,16 (d, J = 5,1 Hz, 3H).

¹³C-NMR (perdeuterodimetylsulfoxid, hodnoty δ): 174,5, 151,2, 151,1, 147,7,

146,2, 126,1, 132,3, 128,8, 109,8, 109,7, 107,9, 101,5, 101,2, 98,5, 80,0, 74,3, 72,7, 71,7, 67,6, 67,2, 65,7, 55,8, 43,0, 37,1, 20,2, 18,5.

Analýza: pre C29H33O16P . 0,85 % H₂O vypočítané: 50,95 % C, 5,11 % H, nájdené: 51,42% C, 4,97 % H.

Príklad 9

Etopozid-4'-bis(2,2,2-trichlóretyl)fosfát (VIII, R⁶ - CH3, R¹ = H, R⁷ = R⁸ = CH2CCI₃)

Postup popísaný v príklade 7 sa opakuje za použitia bis(2,2,2-trichlóretyl) chlórfosfátu. Po veľmi rýchlej chromatografii na silikagéli sa v 100 % výťažku získa zlúčenina uvedená v názve, vo forme bezfarebnej pevnej látky.

IČ (KBr-technika): 1780, 1610, 1490, 1415, 1345, 1240, 1040, 960, 725 cm'¹.

¹H-NMR (300 MHz, deuterochloroform, hodnoty δ): 6,81 (s, 1H), 6,49 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,98 (dd, 2H), 4,88 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 4,82 - 4,70 (m, 5H), 4,64 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 4,61 (d, 1H, J = 5,3 Hz), 4,41 (dd, 1H), 4,25-4,13 (m, 2H), 3,75 (m, 1H), 3,73 (s, 6H), 3,56 (m, 1H), 3,43 (dd, 1H), 3,34 - 3,24 (m, 3H), 2,91 - 2,82 (m, 1H), 1,38 (d, 3H, J = 4,9 Hz)

Hmotové spektrum (FAB): m/e 928,9848 (M⁺ + H);

vypočítané 928,9872 (pre C33H36CI6O16P).

Príklad 10

Dvojsodná soľ etopozid-4'-fosfátu z etopozid-4'-fosfátu

Metóda A

Na 20 g komerčného katexu Dowex 50 x 8-100 v H⁺-cykle (Aldrich Chemical Co.) sa pôsobí nadbytkom 1N hydroxidu sodného. Výsledným katexom v Na⁺-cykle sa naplní kolóna s priemerom 2 cm a stĺpec sa ekvilibruje s vodou. Na stĺpec sa potom nanesie 1,25 g (1,87 mmól) etopozid-4'-fosfátu (produkt z príkladu 8) rozpustených v 25 ml deionizovanej vody a stĺpec sa vymýva vodou. Frakcie obsahujúce zlúčeninu uvedenú v názve sa spoja a po filtrácii sa lyofilizujú. Získa sa 1,15 g zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bieleho chumáčovitého materiálu.

Metóda B

K 2,90 g (4,34 mmól) surového etopozid-4'-fosfátu (produkt z príkladu 8) sa pridá 50 ml deionizovanej vody a 3,00 g (35,7 mmól) hydrogénuhličitanu sodného. Zmes sa 30 minút mieša pri teplote miestnosti, pričom počas tejto doby prestane vývoj oxidu uhličitého. Reakčná zmes sa potom podrobí chromatografii spôsobom popísaným v príklade 1. Eluáciou najprv 300 ml deionizovanej vody a potom zmesi vody a metanolu v pomere 4 : 1 sa získa po lyofilizácii 1,90 g (61 %) čistej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme chumáčovitej bielej pevnej látky.

Príklad 11

Všeobecný postup popísaný v príklade 2 sa opakuje s tým rozdielom, že sa namiesto dietylamínu použije vždy príslušný amín uvedený nižšie. Získajú sa zodpovedajúce etopozid-4'-fosforodiamidáty uvedené v nasledujúcom prehľade.

Amín	Zlúčenina všeobecného vzorca VII
(X=O, R¹=metyl,	R⁶=H, Y=NR²R³)
	R²	R³

propylamín	H	ch₂ch₂ch₃
etanolamín	H	ch₂ch₂oh
metoxyetylamín	H	ch₂ch₂och₃
N-acetyletyléndiamín	H	CH₂CHNC(O)CH₃
2-metylallylamín	H	CH₂CH(CH₃)=CH₂
allylamín	H	ch₂ch=ch₂
dimetylaminopropylamín	H	(CH₂)N(CH₃)₂
N-metyletyléndiamín	H	ch₂ch₂nch₃
trifluóretylamín	H	ch₂cf₃
2-aminoetántiol	H	ch₂ch₂sh
cyklohexylamín	H	cyklohexyl
2-amino-1 -metoxypropán	H	CH(CH₃)CH₂OCH₃
2-(etyltio)etylamín	H	ch₂ch₂sch₂ch₃
chlóretylamín	H	ch₂ch₂ci
4-aminocyklohexanol	H
etylmetylamín	ch₃	ch₂ch₃
etylbutylamín	CH2CH3	(CH₂)₃CH₃
metylaminoetanol	ch₃	ch₂ch₂oh
bis(2-chlóretyl)amín	ch₂ch₂ci	ch₂ch₂ci

2-propylaminoetanol	CH₂CH₂CH₃	C.i₂CH₂OH
3-metylaminopropionitril	ch₃	ch₂ch₂cn
piperidín	R² + R³ =	-(CH₂)₅-

Príklad 12

Všeobecný postup popísaný v príklade 3 sa opakuje s tým, že sa bis(2chlóretyl)amín nahradí vždy príslušným amínom uvedeným nižšie. Získajú sa zodpovedajúce etopozid-chlórfosforoamidáty uvedené v nasledujúcom prehľade.

Amín	Zlúčenina všeobecného vzorca VII (X=O, R¹=metyl, R⁶=H, Y=CI)
	R²	R³
propylamín	H	ch₂ch₂ch₃
etanolamín	H	ch₂ch₂oh
metoxyetylamín	H	ch₂ch₂och₃
N-acetyletyléndiamín	H	CH₂CHNC(O)CH₃
2-metylallylamín	H	CH₂CH(CH₃)=CH₂
allylamín	H	ch₂oh=ch₂
dimetylaminopropylamín	H	(CH₂)N(CH₃)₂

N-metyletyléndiamín	H	CH₂CH₂NCH₃
trifluóretylamín	H	c -í₂cf₃
2-aminoetántiol	H	ch₂ch₂sh
cyklohexylamín	H	cyklohexyl
2-amino-1 -metoxypropán	H	CH(CH₃)CH₂OCH₃
2-(etyltio)etylamin	H	ch₂ch₂sch₂ch₃
chlóretylamín	H	ch₂ch₂ci
4-aminocyklohexanol	H	4-OH-cyklohexyl
etylmetylamín	ch₃	CH₂CH₃
etylbutylamín	ch₂ch₃	(CH₂)₃CH₃
metylaminoetanol	ch₃	ch₂ch₂oh
dietylamín	ch₂ch₃	ch₂ch₃
2-propylaminoetanol	ch₂ch₂ch₃	ch₂ch₂oh
3-metylaminopropionitril	ch₃	CH₂CH₂CN
piperidín	R² + R³ =	-(CH₂)₅-

Príklad 13

Všeobecný postup popísaný v príklade 5 sa opakuje s tým, že sa namiesto 3-aminopropanolu použije niektorý z nižšie uvedených amínov. Získajú sa nasledujúce nesymetrické etopozid-fosforodiamidáty:

	Zlúčenina všeobecného vzorca VII
Amín	(X=O, R¹=metyl, R⁶=H, Y=	=NR⁴R⁵, R²=R³=CH₂CH₂CI)
	R⁴	R⁵
propylamín	H	CH₂CH₂CH₃
etanolamín	H	ch₂ch₂oh
metoxyetylamín	H	ch₂ch₂och₃
N-acetyletyléndiamín	H	CH₂CHNC(O)CH₃
2-metylallylamín	H	CH₂CH(CH₃)=CH₂
allylamín	H	ch₂ch=ch₂
dimetylaminopropylamín	H	(CH₂)N(CH₃)₂
N-metyletyléndiamín	H	ch₂ch₂nch₃
trifluóretylamín	H	ch₂cf₃
2-aminoetántiol	H	ch₂ch₂sh
cyklohexylamín	H	cyklohexyl
2-amino-1 -metoxypropán	H	CH(CH₃)CH₂OCH₃
2-(etyltio)etylamín	H	ch₂ch₂sch₂ch₃
chlóretylamín	H	ch₂ch₂ci

4-aminocyklohexanol	H	4-OH-cyklohexyl
etylmetylamín	ch₃	ch₂ch₃
etylbutylamín	ch₂ch₃	(CH₂)₃CH₃
metylaminoetanol	ch₃	C H₂CH₂OH
bis-(2-chlóretyl)amín	ch₂ch₂ci	ch₂ch₂ci
2-propylaminoetanol	ch₂ch₂ch₃	ch₂ch₂oh
3-metylaminopropionitril	ch₃	ch₂ch₂cn
piperidín	R² + R³ =	-(CH₂)₅-

Príklad 14

Všeobecný postup popísaný v príklade 7 sa opakuje s tým, že sa namiesto difenyl-chlórfosfátu použijú nižšie uvedené chlórfosfáty, za vzniku zodpovedajúcich diesterov etopozid-4'-fosfátov, v ktorých X = O, R¹ = metyl, R⁶= H a R⁷ a R⁸ = R definovaný nižšie.

Chlórfosfáty vzorca (RO)₂P(O)CI

R metyl etyl benzyl p-nitrobenzyl p-nitrofenyl p-brómbenzyl p-nitrofenetyl kyánetyl o-(terc.butyl)fenyl

Príklad 15

Všeobecné postupy popísané v príkladoch 1 až 14 sa opakujú s tým, že sa namiesto východiskových etopozidov použijú vždy príslušné tenipozidové zlúčeniny. Získajú sa zodpovedajúce tenipozidové produkty

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY kde

R® znamená vodík a R* skupinu alkylovú s 1 až 10 atómami uhlíka, alkenylovú s 2 až 10 atómami uhlíka, cykloalkylovú s 5 až 6 atómami uhlíka, 2-furylovú, 2tienylovú, arylovú so 6 až 10 atómami uhlíka, aralkylovú so 7 až 14 atómami uhlíka, aralkenylovú s 8 až 14 atómami uhlíka, pričom v každom prípade môže byť aromatický kruh nesubstituovaný alebo prípadne substituovaný raz či viackrát halogénom, alkylovou či alkoxylovou skupinou vždy s 1 až 8 atómami uhlíka, hydroxylovou skupinou, nitro- a aminoskupinou alebo R^-· a r6 znamenajú v obidvoch prípadoch alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo R^ a R⁸ spolu s uhlíkovým atómom, na ktorom sú viazané, tvoria cykloalkylovú skupinu s 5 až 6 atómami uhlíka,

X znamená kyslík alebo síru,

R⁷ a R⁸ navzájom nezávisle znamenajú vodík, alkylovú či A-substituovanú alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, cykloalkylovú či A-substituovanú cykloalkylovú skupinu vždy s 3 až 6 atómami uhlíka, arylovú či A-substituovanú arylovú skupinu vždy so 6 až 10 atómami uhlíka, alkylsubstituovanú arylovú skupinu, aralkylovú, prípadne A-substituovanú či alkylsubstituovanú aralkylovú skupinu vždy so 7 až 13 atómami uhlíka, pričom uvedeným A-substituentom je jedna či viacero skupín z funkcií, ako sú hydroxylová, nitropyridyldisulfidická skupina, nitroskupina a halogén alebo zodpovedajúce vhodné soli týchto derivátov.
2. Deriváty 4-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu všeobecného vzorca

R⁸

OH

O

O o

ch₃o

o.

och₃

HO

OH (Va) kde R¹, R⁶ a X majú významy podľa nároku 1 alebo zodpovedajúce farmaceutický vhodné soli.
3. Deriváty 4-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 1, kde R⁶znamená vodík a R¹ znamená metylovú či 2-tienylovú skupinu.
4. Deriváty 4-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 2, kde R¹znamená metylovú či tienylovú skupinu a R^ znamená vodík.
5. Deriváty 4-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 2, kde RÔ znamená vodík a R”1 metylovú skupinu.
6. Deriváty 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 5, kde X znamená kyslík.
7. Deriváty 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 5, kde X znamená síru.
8. Deriváty 4-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 5, kde farmaceutický vhodnou soľou je soľ sodná.
9. Disodná soľ4'fosfátu etopozidu podľa nároku 1 vzorca

R6 ^P(ONa)₂

O (Via)
10. Disodná soľ4-tioetopozidu podľa nároku 1 vzorca ^XP(ONa)₂ (Vlb)
11. Derivát 4-fosfátu epipodofylotoxinglukozidu pooía nároku 1, kde R? znamená alkylovú alebo A-substituovanú alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, cykloalkylovú, prípadne A-substituovanú cykloalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, arylovú, prípadne A-substituovanú či alkylovanú arylovú skupinu vždy so 6 až 10 atómami uhlíka, aralkylovú, prípadne A-substituovanú či alkylovanú aralkylovú skupinu vždy so 7 až 14 atómami uhlíka a R^ znamená vodík alebo skupinu, ako bola definovaná pre R?, pričom substituenti A majú významy, ako boli uvedené v nároku 1 alebo zodpovedajúca farmaceutický vhodná soľ.
12. Derivát 4-fosfátu epipodofylotoxinglukozidu podľa nároku 11, kde R^ znamená vodík a R*1 znamená metylovú či 2-tienylovú skupinu.
13. Derivát 4-fosfátu epipodofylotoxinglukozidu podlá nároku 12, kde R?

a r8 znamenajú vzájomne nezávisle alkylovú skupinu, prípadne substituovanú halogénom alebo kyanovou skupinou, vždy s 1 až 5 atómami uhlíka, arylovú skupinu so 6 až 10 atómami uhlíka a aralkylovú skupinu so 7 až 14 atómami uhlíka, pričom cyklická časť uvedených arylových a aralkylových skupín môže byť substituovaná alkylovou skupinou s jedným až piatimi atómami uhlíka, halogénom či nitroskupinou.
14. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu pódia nároku 13, kde R1 znamená metylovú skupinu.
15. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 14, kde X znamená kyslík.
16. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 15, kde R? a R8 znamenajú v obidvoch prípadoch fenylovú skupinu.
17. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 15, kde R? a R8 znamenajú v obidvoch prípadoch 2,2,2-trichlóretylovú skupinu.
18. Deriváty 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 1 všeobecného vzorca v 11 (VII )

Y'

NR2R3 kde R V R6 a X majú významy, ako boli uvedené v nároku 1, Y znamená chlór, hydroxylovú skupinu alebo skupinu vzorca NR⁴r5, ďalej R2, r3, r4 r5 znamenajú vzájomne nezávisle vodík, alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, alkoxylovú skupinu s 2 až 5 atómami uhlíka, cykloalkylovú skupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, každú z nich prípadne substituovanú A-substituentom podľa nároku 1, alebo r2, r3 a dusíkový atóm, na ktorom sú viazané, znamenajú dohromady troj- až šesťčlenný kruh, alebo R⁴, R⁵ a dusíkový atóm, na ktorom sú viazané, znamenajú dohromady troj- až šesťčlenný kruh alebo zodpovedajúce farmaceutický vhodné soli.
19. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 18, kde R^ znamená vodík, RÍ znamená metylovú či 2-tienylovú skupinu, Y znamená chlór alebo skupinu NR⁴R5, X znamená kyslík alebo síru a R2, r3, r4 _a r5 znamenajú vzájomne nezávisle alkylovú skupinu a substituovanú halogénom alebo hydroxylovou skupinou, vždy s 1 až 5 atómami uhlíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, substituovanú nitrodipyridyldisulfidickou skupinou.
20. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 19, kde X znamená kyslík.
21. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 20, kde R1 znamená metylovú skupinu.
22. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 21, kde R2 a r3 znamenajú vždy 2-chlóretylovú skupinu a Y znamená chlór.
23. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 21, kde Y znamená skupinu vzorca NR⁴R5.
24. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 23, kde R2, r3, r4 _a r5 znamenajú vo všetkých prípadoch etylovú skupinu.
25. Derivát 4-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 23, kde R2 a r3 znamenajú v obidvoch prípadoch 2-chlóretylovú skupinu, R⁴ znamená vodík a R^ znamená 3-hydroxypropylovú skupinu.
26. Derivát 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu podľa nároku 23, kde R2 a r3 znamenajú v obidvoch prípadoch 2-chlóretylovú skupinu, R⁴ znamená vodík a r5 znamená skupinu vzorca

-CH₂-CH₂-S-S

O₂N'
27. Derivát 4-fosfátu epipodofylotoxínu ako medziprodukt pre prípravu zlúčenín podľa nároku 1 všeobecného vzorca VIII kde R¹, R6 a X majú významy, uvedené v nároku 1.
28. Spôsob výroby derivátu 4'-fosfátu epipodofylotoxínglukozidu všeobecného vzorca V podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa

a) pôsobí na zlúčeninu všeobecného vzorca IX

R6

OH kde R¹ a R⁶ majú významy podľa nároku 1, zlúčeninou všeobecného vzorca P(X)CI₃ kde X má významy podľa nároku 1, pričom sa reakcia vykonáva za prítomnosti akceptora vodíka za vzniku medziproduktu všeobecného vzorca VIII

CH₃O (VIII)

OCI-b

b) hydrolyzuje sa zlúčenina vzorca VIII, prípadne za prítomnosti bázy za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca X či jej farmaceutický vhodnej soli

R6

R1 (X) alebo

c) sa vykoná reakcia zlúčeniny všeobecného vzorca X s najmenej jedným ekvivalentom každej zo skupiny R^OH a R^OH, kde R? a R^ majú významy podľa nároku 1, to za obmedzenia, že R? a r8 neznamenajú v obidvoch prípadoch vodík a reakcia sa vykoná za prítomnosti akceptora vodíka a ak jeden zo symbolov R? alebo R^ znamená vodík, môže sa získaná zlúčenina previesť na farmaceutický vhodnú soľ pôsobením bázy.

77 '{vŕšť
29. Spôsob prípravy zlúčení r/pod ľa nároku 18, vyznačujúci sa tým, že sa

a) pôsobí na medziprodukt všeobecného vzorca VIII amínom vzorca HNR2r3, kde R^ a R3 majú významy podľa nároku 18, alebo na zodpovedajúcu adičnú soľ s kyselinou za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca XI

R6

R1 o

HO (xi)

b) a prípadne sa pôsobí na zlúčeninu všeobecného vzorca XI sekundárnym amínom vzorca HNR4r5, kde R⁴ a R^ majú významy podľa nároku 18 alebo na zodpovedajúcu adičnú soľ kyseliny za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca

CL /NR2R3

Ρ\

II ^NR2r3 (X)

c) hydrolyzuje sa zlúčenina všeobecného vzorca XI, prípadne za prítomnosti bázy, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca XIII

R6 (XIII) ^0H ||^NR2R3

X
30. Medziprodukt podľa nároku 27, kde R⁶ znamená vodík, R¹ metylovú skupinu a X kyslík.
31. Medziprodukt podľa nároku 27, kde R⁶ znamená vodík, R¹ metylovú skupinu a X síru.
32. Farmaceutický prípravokyVyznačujúČÍ sa tým, že obsahuje antitumorovo účinné množstvo zlúčeniny podľa nároku 1 alebo nároku 10 spolu s farmaceutický vhodným nosičom.
33. Farmaceutický prípravok podľa nároku 30 vyznačujúci sa tým, že uvedenou zlúčeninou podľa nároku 1 je disodná soľ4-fosfátu etopozidu.