SI9011409A

SI9011409A - O-methyl azitromycin derivates, methods and intermediates for their preparation and methods for preparation of pharmaceuticals products which comprise them

Info

Publication number: SI9011409A
Application number: SI9011409A
Authority: SI
Inventors: Gabrijela Kobrehel; Gorjana Lazarevski; Slobodan Djokic
Original assignee: Pliva Pharm & Chem Works
Priority date: 1990-07-18
Filing date: 1990-07-18
Publication date: 1995-10-31
Also published as: CZ280640B6; GR3018330T3; CN1029738C; HU9202619D0; RU2045533C1; HRP920491A2; HUT59935A; HU9802439D0; PL166379B1; BG60593B1; US5250518A; CA2046956C; ES2081397T3; DE69114198T2; JP2657132B2; CA2046956A1; HRP920491B1; EP0467331B1; CS219591A3; HU221803B1

Description

PLIVA farmaceutska, kemijska, prehrambena i kozmetička industrija, d.d.

Ο-Metil derivati azitromicina, postopki in intermediati za njihovo pripravo ter postopki za pripravo farmacevtskih preparatov, kijih vsebujejo

Izum se nanaša na O-metil derivate azitromicina, nove polsintetične makrolidne antibiotike iz skupine azalidov z antimikrobnim delovanjem, njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli, metode in intermediate za njihovo pridobivanje ter metode priprave in uporabe kot farmacevtskih preparatov, kijih vsebujejo.

Izum se nanaša na O-metil derivate azitromicina s splošno formulo (I)

kjer je

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ - -CH3, R⁴ = H (la) Rl = R² = CO2CH2C₆H₅, R³ = R⁴ = -CH₃ (Ib)

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ = H, R⁴ = -CH3 (Ic) Rl = r2 ₌r4 ₌ h, R³ = -CH₃ (Id)

Rl = r2 =h, R³ = R⁴ = -^ch3 (^ie)

Rl = r2 ₌r3 ₌ R r4 = -CH₃ (If)

Rl = R⁴ =H, R² = R³ = ‘^CH3 (Ig)

Rl = H, R² = R³ = R⁴ = -CH₃ (Ih)

Rl = r3 ₌h, R² = R⁴ = -CH₃ (Ii) in na njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli z anorganskimi ali organskimi kislinami.

Eritromicin A je makrolidni antibiotik, katerega zgradbo karakterizira 14-členski aglikonski obroč s keto skupino v C-9 položaju (Bunch R. L. in sod.. US patent 2,653,899; 9/1953). Med makrolidnimi antibiotiki je na vodilnem mestu pri humani terapiji infekcijskih obolenj. V kislem okolju lahko preide v anhidroeritromicin, neaktiven C-6/C-12 metabolit spiroketalne zgradbe (Kurath P. in sod., Experientia 1971, 27, 362). Znano je, da se spirociklizacija eritromicina A uspešno inhibira s kemijsko transformacijo C-9 ketona ob pripravi C-9 oksima (Bokič S. in sod., Tetrahedron Lett., 1967, 1945) ali C-9(S), oz. C-9(R) amina (Egan R. S. in sod., J. Org. Chem., 1974, 39, 2492) ali z eliminacijo C-9 ketona in razširitvijo aglikonskega prstana (Kobrehel G. in sod., US patent 4,328,334 5/1982). Z Beckmannovim pregrajevanjem eritromicin A oksima in nato z redukcijo dobljenega iminoetra (Bokič S. in sod., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1986, 1881) je sintetiziran prvi 15-členski makrolidni antibiotik iz skupine azalidov, 11-aza-lO-deokso-lO-dihidroeritromicin A. Z Nmetiliranjem na novo uvedene sekundarne amino skupine v aglikonskem obroču po modificiranem Eschvveiler-Clarkovem postopku s formaldehidom ob prisotnosti mravljinčne kisline (Kobrehel G. in S. Bokič, BE Pat. 892,357 7/1982) ali preliminarno zaščito amino skupin s prevajanjem v ustrezne N-okside in nato z alkiliranjem in redukcijo dobljenih N-oksidov (Bright G., US patent 4,474,768 10/1984) je pripravljen N-metil-1 l-aza-10-deokso-10-dihidroeritromicin A (9-deokso-9a-aza-9a-metil-9a-homoeritromicin A, IUPAC Nomenklatura organske kemije, 1979, 68 - 70, 459, 500 - 503), kateri se klinično obravnava? pod generičnim imenom AZITHROMYCIN. Razen večje stabilnosti v kisli sredini, z ozirom na izhoden antibiotik, kaže azitromicin povečano in vitro aktivnost z ozirom na gram-negativne mikroorganizme, izrazito višjo koncentracijo v tkivu in prav tako se preučuje možnost enodnevnega doziranja (ratshema J. in sod., Antimikrob. Agents Chemother., 1987, 31 1939).

Nadalje je znano, da se C-67C-12 spirociklizacija eritromicina A uspešno inhibira z Ometiliranjem hidroksilne skupine v C-6 položaju aglikonskega prstana (VVatanabe Y. in sod., US patent 4,331,803 5/1982). Z reakcijo eritromicina z benzilkloroformatom in nato z metiliranjem dobljenega 2’-O,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-derivatom ob eliminaciji zaščitnih skupin v 2’- in 3’- položaju in N-metiliranjem 3'-metilamino skupine pod reduktivnimi pogoji ob 6-O-metileritromicinu nastanejo značilne količine ll-Ometil- in 6,11-di-O-metileritromicina (Morimo S. in sod., J. Antibiotics 1984, 37, 187). večja selektivnost se doseže s preliminarnim oksimiranjem C-9 ketona ter O-metiliranjem ustreznih benziloksimino derivatov (Morimoto S. in sod., US patent 4,680,368 7/1987). 6-O-Metileritromicin klinično obravnavamo pod generičnim imenom CLARITHROMYCIN. Z ozirom na eritromicin A, klaritromicin pokaže povečano in vitro aktivnost z ozirom na gram-pozitivne mikroorganizme (Kirist H. A. in sod., Antimicrobial Agents and Chemother., 1989, 1419).

Po znanem in utrjenem stanju tehnike O-metil derivati azitromicina in njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli s kislinami, postopki in intermediati za njihovo pridobivanje ter postopki priprave farmacevtskih preparatov, ki jih vsebujejo, do danes niso bili znani.

Ugotovili smo, kar predstavlja predmet tega izuma, da O-metil derivate azitromicina, nove polsintetične antibiotike iz skupine azalidov z antimikrobnim delovanjem in njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli z anorganskimi ali organskimi kislinami lahko pripravimo z reakcijo azitromicina ali njegovega dihidrata (Dokič S. in sod., J. Chem. Research (S), 1988, 152 - 153; (M) 1988, 1239 - 1261) z benzilklorformatom in nato z O-metiliranjem hidroksilnih skupin v C-6 in C-ll položaju dobljenega 2’-O,3’-Nbis(benziloksikarbonil)-N-demetilazitromicina z metiljodidom ob prisotnosti ustreznih baz in nato z eliminacijo zaščitnih benziloksikarbonilnih skupin v 2’- in 3’- položaju s postopkom hidrogenolize ter z reduktivnim N-metiliranjem 3’-metilamino skupine s formaldehidom ob prisotnosti mravljinčne kisline ali drugega redukcijskega sredstva in nato po potrebi z reakcijo z anorganskimi ali organskimi kislinami.

Ugotovili smo, da se dajo pripraviti O-metil derivati azitromicina s splošno formulo (I) ch₃

kjer je

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ = -CH3, R⁴ = H (la) Rl = r2 = CO₂CH2C₆H5, R³ = R⁴ = -CH3 (Ib)

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ = H, R⁴ = -CH3 (Ic) Rl = r2 =r4 = h, R³ = -CH3 (Id)

Rl = r2 ₌h, r3 = r4 = -CH₃ (le)

Rl = r2 ₌r3 = H, R⁴ = -^ch3 (If)

Rl = R⁴ =H, R² = R³ = '^CH3 (lg)

Rl = H, R² = R³ = R⁴ = -CH₃ (Ih)

Rl = R³ =h, R² = R⁴ = -CH₃ (Ii) in njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli z anorganskimi ali organskimi kislinami, z reakcijo azitromicina ali njegovega dihidrata s formulo (Ila)

Ila R¹ = H, R² = -CH₃

Ilb Rl = R² = CO₂CH₂C₆H₅ kjer Rl predstavlja vodik, R² je -CH3 skupina, z benzilkloroformatom z viškom ustrezne baze, kot je natrijev hidrogen karbonat, v reakcijskem inertnem topilu, kot je benzen, pri temperaturi od 25 °C do 60 °C, v času od 3 do 24 ur, odvisno od temperature reakcije in nato z = O-metiliranjem hidroksilnih skupin v C-6 in C-ll položaju dobljenega 2’-O,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetilazitromicina s formulo (Ilb), kjer sta Rl in R² medsebojno enaka in pomenita benziloksikarbonilno skupino z 1 - 18 molskim prebitkom ustreznega sredstva za metiliranje, kot je metil jodid, dimetilsulfat, metilmetan sulfonat ali metil p-toluensulfonat, ob prisotnosti ustrezne baze kot je npr. natrijev hidrid, kalijev ali natrijev lug v polarnem topilu kot npr. dimetilsulfoksid ali Ν,Ν-dimetilformamid ali zmes z inertnim topilom, kot so npr. tetrahidrofuran, acetonitril, etilacetat, 1,2-demetoksietan pri temperaturi od 0 °C d osobne temperature, v času od 4 do 30 ur, da dobimo zmes 2’-O,3-Nbis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6-O-metil-azitromicina (la), kjer sta Rl in R²medsebojno enaka in predstavljata benzioksikarbonilno skupino. R³ predstavlja -CH3 skupino, R⁴ predstavlja vodik, 2’-O,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6,ll-di-Ometilazitromicin (Ib), kjer sta Rl in R² enaka in predstavljata benziloksikarbonilni skupini in R³ in R⁴ predstavljata -CH3 skupino in 2’-0,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-Ndemetil-ll-O-metilazitromicin (lc), kjer sta Rl in R² medsebojno enaka in predstavljata benziloksikarbonilni skupini, R³ predstavlja vodik in R⁴ predstavlja -CH3 skupino, ki jo po potrebi podvržemo

A) separaciji na stolpcu silikagela (Siliča gel 60, Merck Co., 70 -230 mesh) ob uporabi sistema topil CH₂C1₂:CH₃OH:NH4OH (90:9:1.5) da dobimo kromatografsko homogeno spojino (la) z Rf 0.794, (Ib) z Rf 0.816 in (lc) z Rf 0.943, ki jih nato podvržemo eliminaciji zaščitnih benziloksikarbonilnih skupin v 2’- in 3’- položaju s postopkom hidrogenolize v raztopini nižjih alkoholov kot npr. metanola ali etanola, ob prisotnosti katalizatorja kot npr. paladijskega črnila ali paladija na oglju v atmosferi vodika pod tlakom od 1 - 20 bar, ob mešanju reakcijske zmesi v teku 4 do 14 ur pri sobni temperaturi, da dobimo po filtraciji katalizatorja in izolaciji produkta z običajnimi postopki pH gradient ekstrakcije (pH 5.0 in pH 9.0) iz vode z ustreznim hidrofobnim topilom kot so kloroform, diklormetan, etilacetat in podobno, 6-O-metil-Ndemetilazitromicin (Id), kjer Rl , R² in R4 predstavljajo vodik in R² predstavlja -CH3 skupino ali 6,11-di-O-metil-N-demetilazitromicin (le), kjer Rl in R² predstavljata vodik, R² in R^ predstavljata-CH3 skupino ali 11-O-metil-N-demetilazitromicin (If), kjer Rl, R² in R² predstavljajo vodik, predstavlja -CH3 skupino, ki jih nato podvržemo redukcijskem N-metiliranju 3’-metilamino skupine z 1- 3 ekvivalenti formaldehida (37%) ob prisotnosti enake količine mravljinčne kisline (98 - 100 %) ali nekega drugega vira vodika, v reakcijsko inertnem topilu kot so npr. halogenirani ogljikovodiki, kot. npr. kloroform ali nižji alkoholi, kot npr. metanol ali etanol, nižji ketoni kot npr. aceton pri temperaturi refluksiranja reakcijske zmesi v teku 2 do 8 ur, da dobimo po izolaciji produkta z običajnimi metodami pH gradient ekstrakcije (pH 5.0 in pH 9.0) 6-O-metilazitromicin (Ig), kjer sta Rl in R^ medsebojno enaka in predstavljata vodik in R² in R² predstavljata -CH3 skupino ali 6,11-di-O-metilazitromicin (Ih), kjer Rl predstavlja vodik in so R², R-¹ in R^ medsebojno enaki in skupaj predstavljajo -CH3 skupino ali ll-O-metilazitromicin (Ii), kjer sta Rl in R² medsebojno enaka in predstavljata vodik in R² in R^ predstavljata -CH3 skupino, ali alternativno

B) eliminaciji zaščitnih benziloksikarbonilnih skupin v 2’- in 3’- položajih s postopkom hidrogenolize kot smo navedli v točki A), da dobimo zmes 6-O-metil- (Id), 6,11-di-Ometil- (le) in 11-O-metil-N-demetilazitromicina (If),katero podvržemo reduktivnemu N-metiliranju s formaldehidom (37%) ob prisotnosti mravljinčne kisline (98 - 100%) ali nekega drugega vira vodika, kot smo navedli v A), da dobimo zmes 6-O-metil- (Ig), 6,11-di-O-metil- (Ih) in ll-O-metilazitromicina (Ii), kjer imajo Rl. R², R² in R^ zgoraj navedeni pomen, katero nato podvržemo separaciji na stolpcu silikagela ob uporabi sistema topila ChbCbUH^-Ol-hNl^OH (90:9:1.5). da dobimo kromatografsko homogen (TLC. isti sistem topila), (lg) z Rf 0.494, ( Ih) z Rf 0.575 ii; f Ii) z Rf 0.536.

Farmacevtsko sprejemljive adicijske soli, ki so prav tako predmet tega izuma, pridobimo z reakcijo O-metil derivatov azitromicina s formulo (I) z najmanj ekvimolsko količino ustrezne anorganske ali organske kisline, kot so klorovodikova, jodovodikova, žveplova, fosforna, ocetna, propionska, trifluorocetna, maleinska, citronska, stearinska, jantarna, etiljantarna, metansulfonska, benzensulfonska, p-toluensulfonska, laurilsulfonska in podobne v reakcijskem inertnem topilu. Adicijske soli izoliramo s filtracijo - v kolikor so netopne v reakcijskem inertnem topilu - z obarjanjem s pomočjo netopila ali odparevanjem topila, najpogosteje z liofilizacijo.

Ο-Metil derivati azitromicina (Ig), (Ih) in (Ii) in njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli z anorganskimi ali organskimi kislinami imajo močno antimikrobno delovanje. Antibakterijska in vitro aktivnost je določena s skupino gram-pozitivnih in gram-negativnih test-bakterij in kliničnih izolatov.

Rezultati izraženi kot minimalne inhibicijske koncentracije (MIC, ^g/ml) kažejo, da se z 6-O-metiliranjem azitromicina poveča antibakterijska aktivnost v odnosu na eritromicin A (Tabela 1 in Tabela 2). Glede na dobljene rezultate pripravljene spojine lahko uporabimo kot antibiotike za zdravljenje raznih infekcijskih bolezni v običajnih farmacevtskih oblikah.

Tabela 1. Antibakterijska in vitro aktivnost 6-O-metilazitromicina (Ig) v primerjavi z eritromicinom A

Posk. organizem	Minimalne inhibitorne koncentracije (MlCvjug/ml)
	Eritromicin A	(Ig)
Staphylococcus ciureus ATCC 6538 P	< 0.4	< 0.4
Streptococcus faecalis ATCC 8043	< 0.4	< 0.4
Sarcina lutea ATCC 9341	< 0.4	< 0.4
Escherichia coli ATCC 10536	50.0	1.6
Klebsiella pueuniouiae ATCC 10031	> 50.0	12.5
Pseudomonas aeruginosa NETC 10490	> 50.0	> 50.0

Tabela 2. Antibakterijska in vitro aktivnost 6-O-metilazitromicina (Ig) v primerjavi z eritromicinom A v seriji sveže izoliranih kliničnih izolatov

Posk. organizem Minimalne inhibitorne koncentracije (MICvgg/ml)

Eritromicin A (Ig)

Staphylococcus
aureus 10099	0.1	0.05
Staphylococcus saprophyticus 3947	0.4	0.4
Enterococcus 10390	0.8	0.8
Staphylococcus aureus 10097	0.1	0.05
Sireptococcus pneuinoniae 4050	0.1	0.025
Haemophylus influenzae 4028	0.05	0.05

Postopek priprave O-metil derivatov azitromicina prikazujejo naslednji primeri, ki v ničemer ne omejujejo obseg izuma.

Primer 1

Z^-OD^N-Bisfbenziloksikarbonil j-N-demetilazitromicin (Ilb);

Metoda A - Raztopini azitromicin dihidrata (30 g, 0.038 molov) v 140 ml suhega benzena smo dodali ΝηΗΟΟβ (48 g), reakcijsko zmes smo segrevali in mešali pri 55 do

60 °C in nato postopoma 1 uro dokapavali 75 ml (89.63 g. 0.53 molov) benzilkloroformata. Reakcijsko suspenzijo smo mešali pri isti temperaturi 3 ure in jo pustili stati čez noč pri sobni temperaturi. Benzensko suspenzijo smo trikrat ekstrahirali s 150 ml 0.25N HCl, benzensko raztopino sušili nad CaCl2, filtrirali in uparili pod zmanjšanim tlakom do gostega olja. Dobljeni ostanek smo dokapavali ob intenzivnem mešanju v 500 ml ohlajenega petroletra, reakcijsko suspenzijo mešali ob hlajenju nadaljnje 4 ure, usedlino filtrirali, izprali s petroletrom ter sušili, da smo dobili 27.5 g (71.6%) naslovnega produkta, tal. 95 - 102 °C.

TLC, CH2CI2-CH3OH-NH4OH (90:9:1.5) R_f 0.925

IR(CHC1₃): 3510, 3350, 2960,1740, 1690, 1605, 1450, 1380, 1330, 1290, 1255,1160, 1115,1050, 995 cm’¹.

IH NMR (CDCI3): 2.301 (3H, 9a-NCH3), 2.844, 2.802 (3H, 3’-NCH₃), 3.397 ppm (3H, 3”-OCH₃).

2’-Q,3^,-N-Bis(benziloksikarbonil)-N-demetilazitromicin (Ilb):

Metoda B - Raztopini benzilkloroformata (30 ml, 0.21 molov) v 50 ml suhega benzena smo dodali ob mešanju NaHCO₃ (22 g) in nato postopoma 3 ure po 15 g (0.019 molov) azitromicina. V trenutku koje dodano 3/4 od skupne količine azitromicina, smo dodali še nadaljnjih 15 ml (0.106 molov) benzilkloroformata. Reakcijsko zmes smo mešali 24 ur pri sobni temperaturi, filtrirali in filtrat trikrat ekstrahirali s 150 ml 0.25N HCl, sušili nad MgSO4 ter uparili pod zmanjšanim tlakom. Z dodatkom petroletra nastane usedlina surovega 2’-0,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetilazitromicin, dobljeno usedlino smo filtrirali in takoj nato suspendirali ob mešanju v 50 ml hladnega etra. reakcijsko suspenzijo smo mešali 1 uro pri sobni temperaturi, usedlino filtrirali in sušili, da smo dobili 8.67 g (43.09 %) TLC homogenega produkta z enakimi fizikalnokemijskimi konstantami, kot smo navedli v Metodi A.

Primer 2

O-Metiliranje 2’-O.3’-N-Bis(benziloksikarbonil)-N-demetilazitromicin a (la), (Ib) in (lej

Raztopini 6 g (0.006 molov) produkta iz Primera 1 v 64 ml dimetilsulfoksida in tetrahidrofurana (1:1) smo dodali 6.6 ml (0.106 molov) metiljodida in nato postopoma 4 ure pri sobni temperaturi 1.2 g (cca. 0.03 mole) 55 - 60 % NaH v olju. Reakcijsko suspenzijo smo mešali nadaljnjih 5 ur, pustili stati čez noč in nato izlili k nasičeni raztopini NaCl (100 ml) ter dvakrat ekstrahirali s 100 ml etilacetata. Združene organske ekstrakte smo trikrat oprali s 100 ml nasičene raztopine NaCl, sušili nad K2CO3 ter uparili, da smo dobili 6.35 g surovega produkta, ki smo ga podvrgli hidrogenolizi po postopku opisanem v Primeru 9, ali pa po potrebi očistili s kromatografijo na stolpcu silikagela (Siliča gel 60, Merck Co., 70 - 230 mesh) s pomočjo sistema topil CH2Cl2:CH3OH:NH₄OH (90:9:1.5).

Iz 1.5 g surovega prodkta smo s koncentriranjem in uparjenjem frakcij z Rf 0.943 (TLC.

isti sistem topil) dobili 0.38 g kromatografsko čistega 2’-0,3’-N-bis(benziloksikarbonil)N-demetil-ll-O-metil azitromicin (Ic);

iH NMR (CDCI3): 2.239 (3H, 9a-NCH₃), 2.805, 2.847 (3H, 3’-NCH₃), 3.374 (3H, 3”-OCH₃) in 3.573 ppm (3H, II-OCH3).

Z uparjejem frakcij z Rf 0.816 smo dobili 0.316 g 2’-0,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-Ndemetil-6,ll-di-0-metilazitromicina (Ib);

IR(CHC1₃): 3570, 3490,1740,1690,1455,1380,1330,1295,1260, 1200,

1160,1120,1095,1055,1005, 990, 980 cm’¹.

IH NMR (CDC1₃): 2.292 (3H, 9a-NCH₃), 2.838, 2.795 (3H, 3’-NCH₃), 3.380 (6H, 6-OCH₃ in 3”-OCH₃), 3.488 ppm (3H, 11-OCH₃).

¹³C NMR (CDC1₃): 177.939 (C-l), 69.471 (C-9), 35.271 (9a-NCH₃), 88.994 (C-ll), 52.892 (6-OCH₃), 61.09 (11-OCH₃), 36.851 (3’-NCH₃) in 49.549, 49.154 ppm (3”-OCH₃).

S koncentriranjem in uparjenjem frakcije Rf 0.794 do suhega smo dobili 0.646 g 2’-O,3’N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6-0-metil-azitromicina (la);

EI-MS m/z 1016 (M+)

IR(CHC1₃): 3670, 3500, 2960, 2920, 1740, 1690, 1450, 1380, 1325,

1290, 1255, 1200, 1160, 3120, 1050, 995 cm'¹.

iH NMR (CDC1₃): 2.288 (3H, 9a-NCH₃), 2.805, 2.847 (3H, 3’-NCH₃) in 3.380 ppm (6H, 6-OCH₃ in 3”-OCH₃).

¹³C NMR (CDC1₃): 177.764 (C-l), 68.850 (C-9), 34.851 (9a-NCH₃), 74.661 (C-ll), in 52.822 ppm (6-OCH₃).

Primer 3

6-O-metil-N-demetilazitromicin (Id) - 2.0 g (0.002 mola) 2’-O,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6-O-metil-azitromicina (la) smo raztopili v 30 ml etanola. Raztopini smo dodali 10 ml vode, ki je vsebovala 0.185 ml ocetne kisline in 0.3 g natrijevega acetata in 0.7 g Pd/C 10 %. Reakcijsko zmes smo mešali pod pritiskom vodika 10 bar, 10 ur, katalizator filtrirali in uparili do suhega. Ostanek smo raztopili v CHC1₃ (30 ml), dodali vodo (30 ml), pH reakcijske zmesi naravnali z IN HCl na 5.0, sloje oddvojili in vodni sloj še dvakrat ekstrahirali s 15 ml CHC1₃. Vodni raztopini smo dodali CHC1₃ (30 ml), pH naravnali z mešanjem na 9.0 (2N NaOH), sloje oddvojili in vodni sloj še dvakrat ekstrahirali s 15 ml CHC1₃. Združene organske ekstrakte s pH 9.0 smo sušili nad K2CO3, filtrirali ter uparili, da smo dobili 1.03 g (70%) naslovnega produkta.

TLC, Rf 0.282

IR(CHC1₃): 3670, 3500, 2960, 2920, 1725, 1460, 1375, 1345, 1320, 1280, 1260, 1165, 1120,1085, 1045, 1010, 995, 900 cm’¹.

IH NMR (CDCI3): 2.278 (3H, 9a-NCH₃), 2.406 (3H, 3’-NCH₃), 3.312 (3H, 3”-OCH₃), 3.384 ppm (3H, 6-OCH3).

Primer 4

6.11-Di-O-metil-N-demetilazitromicin (Ie) - Po postopku opisanem v Primeru 3, smo iz 0.165 g (0.16 mmolov) 2’-0,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6,ll-di-0-metil azitromicina (Ib) s hidrogenolizo s Pd/C 10 % v etanolu v prisotnosti pufra natrijev acetat-ocetna kslina (pH 5.0) dobili 0.093 g (76.2 %) kromatografsko homogenega naslovnega produkta, tal. 95 - 98 °C.

M+ 762

TLC, R_f 0.331

Ih NMR(CDC1₃): 2.252 (3H, 9a-CH₃), 2.393 (3H, 3’-NCH₃), 3.308 (3H, 3”-OCH₃), 3.374 (3H, 6-OCH₃) in 3.518 ppm (3H, 11-OCH₃).

Primer 5

11-O-metil-N-demetilazitromicin (If) - Po postopku opisanem v Primeru 3 smo iz 0.250 g (0.246 mmolov) 2’-O,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetil-ll-O-metilazitromicina (Ic) s hidrogenolizo v metanolu ob prisotnosti pufra natrijev acetat-ocetna kislina (pH 5.0) in Pd/C 10 %, dobili 0.168 g (89,5 %) 11-O-metil-Ndemetilazitromicina;

TLC, R_f 0.367

IR(CDC1₃): 3500, 2970, 2940, 1736, 1460, 1380, 1165cnr^]

Primer 6

6-O-Metilazitromicin fig) - Raztopini 0.78 g (0.00104 molov) 6-O-metil-Ndemetilazitromicina (Id) v CHC1₃ (50 ml) smo dodali 0.085 ml (0.00113 molov) formaldehida (37 %) in 0.078 ml (0.00203 molov) mravljinčne kisline (98 - 100 %). Reakcijsko zmes smo mešali ob refluksu 8 ur, ohladili do sobne temperature in izlili v ml vode. pH Reakcijske zmesi smo naravnali z IN HC1 na 5.0, sloje oddvojili in vodni sloj ekstrahirali še dvakrat z 20 ml CHCI3. Vodnemu delu smo dodali 20 ml CHCI3, pH naravnali z 2N NaOH na 9.0, sloje oddvojili in vodni sloj še dvakrat ekstrahirali z 20 ml CHCI3. Združene CHCI3 ekstrakte pri pH 9.0 smo sušili nad K2CO3 ter uparili, da smo dobili 0.495 g (62,74 %) produkta iz naslova, ki smo ga po potrebi očistili s kromatografijo na stolpcu silikagela s pomočjo sistema topil CH2Cl2:CH3OH:NH₄OH (90:9:1.5);

TLC, R_f 0.494

IR (KBr): 3500, 2980, 2940,1740, 1462, 1385, 1330, 1280, 1260, 1170,1112,1059,1018 in 1055 cm'l lH NMR(CDC1₃): 2.292 (9H, 3’-N(CH₃)₂ in 9a-N-CH₃), 3.335 (3H, 3”-OCH₃) in 3.384 ppm (3H, 6-OCH3).

¹³C NMR(CDC1₃): 177.540 (C-l), 68.850 (C-9), 36.851 (9a-NCH₃), 78.106 (C-6), 52.822 (6-OCH3), 61.627 (C-10), 40.350 (3’-N(CH₃)₂) in 49.457 ppm (3”-OCH₃). Biološka aktivnost: 1 mg vsebuje 754 /zg azitromicina.

Primer 7

6.11-Di-O-metilazitromicin (Ih) - Po postopku opisanem v Primeru 6, smo iz 0.181 g (0.237 mmolov) 6,11-di-O-metil-N-demetilazitromicina (le) z redukcijskim Nmetiliranjem s formaldehidom (37 %) ob prisotnosti mravljinčne kisline (98 - 100 %) dobili 0.12 g (65.6 %) naslovnega produkta; EI-MS m/z 776 (M ⁺ )

TLC, Rf 0.575 lH NMR(CDC1₃); 2.292 (3H, 9a-N-CH₃), 2.318 (6H. 3’-N(CH₃)₂), 3.321 (3H, 3OCH₃), 3.38 (3H, 6-OCH3) in 3.524 ppm (3H. II-OCH3).

^]3C NMR(CDC1₃): 177.540 (C-l), 68.237 (C-9), 36.739 (9a-NCH₃), 88.112 (C-ll), 52.653 (6-OCH3) in 61.852 ppm (II-OCH3).

Primer 8

11-O-Metilazitromicin (Ii) - Po postopku opisanem v Primeru 6, smo iz 0.32 g (0.43 mmolov) 11-O-metil-N-demetikizitromicina (If) z redukcijskim N-metiliranjem s formaldehidom (37 %) ob prisotnosti mravljinčne kisline (98 - 100 %) dobili 0.238 g (72.44 %) ll-O-metil-derivata (Ii) iz naslova;

TLC, Rf 0.536

IR (KBr); 3510, 2975, 2940, 1738, 1460, 1350, 1165, 1054 cm’¹ lH NMR (CDCI3): 2.246 (3H, 9a-CH₃), 2.301 (6H, 2’-N(CH₃)2),

3.348 (3H, 3”-OCH3) in 3.590 ppm (3H, 11-OCH₃).

Primer 9

6-0-Metilazitromicin (Ig), 6,11-di-O-metilazitromicin (Ih) in 11-0-metilazitromicin (Ii) (Metoda B) - (1). Raztopini 2.16 g surovega produkta iz Primera 2 v etanolu (30 ml) smo dodali 10 ml vode, ki vsebuje 0.185 ml ocetne kisline in 0.3 g natrijevega acetata in 0.7 g Pd/C 10 % in nato reakcijsko zmes podvrgli (izpostavili?) hidrogenolizi kot smo opisali v Primeru 3. Pri pH 9.0 smo dobili 0.98 g zmesi 6-O-metil- (Id), 6,11-di-O-metil(Ie) in ll-o-metil-N-demetilazitromicina (If). (2) 0.98 g zmesi dobljene pod (19 smo raztopili v CHC13 (50 ml), dodali 0.106 ml formaldehida (37 %) in 0.096 ml mravljinčne kisline (98 -100 %) in podvrgli (izpostavili?) N-metiliranju kot smo opisali v Primeru 6. Pri pH 9.0 smo izolirali 0.537 g zmesi , ki smo jo izpostavili kromatografiji na stolpcu silikagela (Siliča gel 60, Merck Co., 70 - 230 mesh) s pomočjo sistema topil CH2Cl2:CH3OH:NH4OH (90:9:1.5), da smo dobili 0.238 g kromatografsko homogenega (Ig) z Rf 0.494, 0.145 g (Ih) z Rf 0.575 in 0.105 g (Ii) z Rf 0.536.

Claims

PATENTNI ZAHTEVKI

1. Ο-Metil derivati azitromicina s splošno formulo (I), ch₃ kjer je r1 = r2 — CO₂CH₂C₆H₅, R³ = -CH₃, R4 = H (Ia)

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ = r4 = _ch3 (Ib)

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ = H, R4 = -CH3 (lc)

Rl = r2 =r4 ₌ h, R³ = -CH₃ (Id)

Rl = r2 _=H, R³ = R⁴ = -CH₃ (le)

Rl = r2 =r3 _{= H)} r4 = -CH₃ (If)

Rl = R4 =H, R2 = r3 = -CH₃ (Ig)

Rl = H, = R³ = r4 = -CH₃ (Ih)

Rl = r3 ₌h, R² = R⁴ = -CH₃ (Ii) in njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli z anorganskimi ali organskimi kislinami.
2. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da sta Rl in R²medsebojno enaka in predstavljata benziloksikarbonilno skupino, R³ predstavlja -CH₃skupino in R^ je vodik.
3. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da sta Rl in R² medsebojno enaka in predstavljata benziloksikarbonilno skupino, R³ in R^ predstavljata -CH₃ skupino.
4. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da sta R⁴ in R²medsebojno enaka in predstavljata benziloksikarbonilno skupino, R² je vodik in R⁴predstavlja -CH3 skupino.
5. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da so R⁴ in R² in R⁴medsebojno enaki in predstavljajo vodik, in R3 predstavlja -CH3 skupino.
6. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da sta R⁴ in R²medsebojno enaka in predstavljata vodik in R² in R⁴ predstavljata -CH3 skupino.
7. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da so R⁴, R² in R·³medsebojno enaki in predstavljajo vodik, R⁴ pa predstavlja -CH3 skupino.
8. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označen s tem, da sta R⁴ in R⁴medsebojno enaka in predstavljata vodik in R² in R² predstavljata -CH3 skupino.
9. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označena s tem, da R⁴ predstavlja vodik, R², R² in R⁴ so medsebojno enaka in predstavljajo -CH3 skupino.
10. Ο-Metil derivat azitromicina po zahtevku 1, označena s tem, da sta R⁴ in R-³medsebojno enaka in predstavljata vodik ter R² in R⁴ predstavljata -CH3 skupino.
11. Snov s formulo (Ilb) kjer sta Rl in R² medsebojno enaka in predstavljata benziloksikarbonilno skupino.
12. Postopek za pripravo O-metil derivatov azitromicina s splošno formulo I ch₃ kjer je r1 = r2 ₌ CO2CH₂C₆H5, R³ = -CH₃, R⁴ = H (Ia)

Rl = R² = CO2CH2C6H5, R³ = R⁴ = -CH3 (Ib) r1 = r2 — CO₂CH₂C₆H5, R³ = H, R⁴ = -CH₃ (Ic)

R¹ = R² =R⁴ = H, R³ = '^CH3 (^Id)

R¹ = R² =H, R³ = R⁴ = '^CH3 (^Ie)

Rl = r2 =r3 = h, R⁴ = -CH₃ (If) r1 = R⁴=h,R² = R^{3 =} -CH₃ (Ig)

R¹ = H, R² = R³ = R⁴ = -CH₃ (Ih)

R¹ = R³ =H, R² = R⁴ = -CH₃ (Ii) in njihove farmacevtsko sprejemljive adicijske soli z anorganskimi ali organskimi kislinami, z reakcijo azitromicina ali njegovega dihidrata s formulo (Ila)

Ila Rl = H, R² = -CH₃

Ilb Rl = R² = CO₂CH₂C₆H5 kjer Rl predstavlja vodik, R² je -CH₃ skupina, z benzilkloroformatom z viškom ustrezne baze, kot je natrijev hidrogen karbonat, v reakcijskem inertnem topilu, kot je benzen, pri temperaturi od 25 °C do 60 °C, v času od 3 do 24 ur, odvisno od temperature reakcije in nato z = O-metiliranjem hidroksilnih skupin v C-6 in C-ll položaju dobljenega 2’-O,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetilazitromicina s formulo (Ilb), kjer sta Rl in R² medsebojno enaka in pomenita benziloksikarbonilno skupino z 1 - 18 molskim prebitkom ustreznega sredstva za metiliranje, kot je metil jodid, dimetilsulfat, metilmetan sulfonat ali metil p-toluensulfonat, ob prisotnosti ustrezne baze kot je npr. natrijev hidrid, kalijev ali natrijev lug v polarnem topilu kot npr. dimetilsulfoksid ali N,N-dimetilformamid ali zmes z inertnim topilom, kot so npr. tetrahidrofuran, acetonitril, etilacetat, 1,2-demetoksietan pri temperaturi od 0 °C d osobne temperature, v času od 4 do 30 ur, da dobimo zmes 2’-O,3-Nbis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6-0-metil-azitromicina (la), kjer sta RA in R²medsebojno enaka in predstavljata benzioksikarbonilno skupino. R² predstavlja -CH3 skupino, R^ predstavlja vodik, 2’-0,3’-N-bis(benziloksikarbonil)-N-demetil-6,ll-di-0metilazitromicin (Ib), kjer sta Rl in R² enaka in predstavljata benziloksikarbonilni skupini in R² in R^ predstavljata -CH3 skupino in 2’-O,3’-IN-bi_S(be_nziloksikarbonil)-Ndemetil-ll-O-metilazitromicin (Ic), kjer sta Rl in R² medsebojno enaka in predstavljata benziloksikarbonilni skupini, R² predstavlja vodik in R^ predstavlja -CH3 skupino, ki jo po potrebi podvržemo

A) separaciji na stolpcu silikagela (Siliča gel 60, Merck Co., 70 -230 mesh) ob uporabi sistema topil CH2Cl2:CH3OH:NH4OH (90:9:1.5) da dobimo kromatografsko homogeno spojino (la) z Rf 0.794, (Ib) z Rf 0.816 in (Ic) z Rf 0.943, ki jih nato podvržemo eliminaciji zaščitnih benziloksikarbonilnih skupin v 2’- in 3’- položaju s postopkom hidrogenolize v raztopini nižjih alkoholov kot npr. metanola ali etanola, ob prisotnosti katalizatorja kot npr. paladijskega črnila ali paladija na oglju v atmosferi vodika pod tlakom od 1 - 20 bar, ob mešanju reakcijske zmesi v teku 4 do 14 ur pri sobni temperaturi, da dobimo po filtraciji katalizatorja in izolaciji produkta z običajnimi postopki pH gradient ekstrakcije (pH 5.0 in pH 9.0) iz vode z ustreznim hidrofobnim topilom kot so kloroform, diklormetan, etilacetat in podobno, 6-O-metil-Ndemetilazitromicin (Id), kjer Rl , R² in R^ predstavljajo vodik in R² predstavlja -CH3 skupino ali 6,11-di-O-metil-N-demetilazitromicin (le), kjer Rl in R² predstavljata vodik, R^J in R^ predstavljata-CH3 skupino ali ll-O-metil-N-demetilazitromicin (If), kjer Rl, R² in R² predstavljajo vodik, R^ predstavlja -CH3 skupino, ki jih nato podvržemo redukcijskem N-metiliranju 3’-metilamino skupine z 1- 3 ekvivalenti formaldehida (37%) ob prisotnosti enake količine mravljinčne kisline (98 - 100 %) ali nekega drugega vira vodika, v reakcijsko inertnem topilu ko; >0 npr. halogenirani ogljikovodiki, kot. npr. kloroform ali nižji alkoholi, kot npr. metanol ali etanol, nižji ketoni kot npr. aceton pri temperaturi refluksiranja reakcijske zmesi v teku 2 do 8 ur, da dobimo po izolaciji produkta z običajnimi metodami pH gradient ekstrakcije (pH 5.0 in pH 9.0) 6-O-metilazitromicin (Ig), kjer sta Rl in R^ medsebojno enaka in predstavljata vodik in R² in R² predstavljata -CH3 skupino ali 6,1 l-di-O-metilazitromicin (Ih), kjer Rl predstavlja vodik in so R², R² in R^ medsebojno enaki in skupaj predstavljajo -CH3 skupino ali 11-O-metilazitromicin (Ii), kjer sta Rl in R^ medsebojno enaka in predstavljata vodik in R^ in R⁴ predstavljata -CH3 skupino, ali alternativno

B) eliminaciji zaščitnih benziloksikarbonilnih skupin v 2’- in 3’- položajih s postopkom hidrogenolize kot smo navedli v točki A), da dobimo zmes 6-O-metil- (Id), 6,11-di-Ometil- (Ie) in 11-O-metil-N-demetilazitromicina (If),katero podvržemo reduktivnemu N-metiliranju s formaldehidom (37%) ob prisotnosti mravljinčne kisline (98 - 100%) ali nekega drugega vira vodika, kot smo navedli v A), da dobimo zmes 6-O-metil- (Ig), 6,11-di-O-metil- (Ih) in 11-O-metilazitromicina (Ii), kjer imajo Rl, R^ r3 in R⁴ zgoraj navedeni pomen, katero nato podvržemo separaciji na stolpcu silikagela ob uporabi sistema topila ΟΗ^Ο^ΟΗβ-ΟΗιΝΗζίΟΗ (90:9:1.5), da dobimo kromatografsko homogen (TLC, isti sistem topila), (Ig) z Rf 0.494, (Ih) z Rf 0.575 in (Ii) z Rf 0.536, katere po potrebi podvržemo reakciji z najmanj enim ekvivalentom anorganskih ali organskih kislin, da dobimo ustrezne farmacevtsko sprejemljive adicijske soli.
13. Postopek za pripravo farmacevtskega preparata z antibakterijsko aktivnostjo, označen s tem, da obsega antibakterijsko učinkovito količino snovi iz zahtevka 1 in farmacevtsko sprejemljiv nosilec.