SE513496C2 - NASP-berikad äggula samt dess användning - Google Patents

Description

1G 513 496 2 strukturer kända och deras aktiva delar karaktäriserade. Ett syntetiskt ASP, framställt genom rekombinant genteknik eller med fastfas-syntesteknik, med bestämda strukturer har visats ha generell styrande inverkan på kroppsvätskeflö- det över levande cellmembran.

Genom PCT-ansökan PCT/SE97/01918 (WO 98/21978) är det känt att bildningen av ASP kan induceras i kroppen genom förtäring av vissa slags livsmedel med enzymatisk aktivitet. Effekten av induktionen och därmed bildning- en av ASP varierar med individen och dennes symptom och sker med en hittills oförutsägbar styrka och induktionsperiod. I efterhand kan de dock uppmätas och nödiga korrektioner kan, med ledning av dessa mätningar, vidtagas.

Kort beskrivning av uppfinningen Vid uppfinnarnas fortsatta arbete med att sammansätta foder för att stimu- lera bildningen av antisekretoriska proteiner i enlighet med det svenska patentet SE 9000028-2 har det överraskande visat sig att förmågan till syntes och koncent- reríng av de bildade naturliga antisekretoriska proteinerna är fördelad ytterligt ojämnt i organismen. Mycket höga halter av NASP finns i vissa organ, kroppsdelar eller kroppsvätskor och speciellt i gulan hos fågelägg. Föreliggande uppfinning bygger på detta överraskande faktum och avser följaktligen användning av äggula, som har anrikats med avseende på NASP, för framställning av NASP-berikade födoämnesprodukter och farmaceutiska produkter för behandling och profylax av icke normala fysiologiska tillstånd orsakade av extremt kroppsvätskeutflöde.

Uppfinningen öppnar således hittills okända möjligheter att direkt administrera NASP i födan eller fodret genom att förtära äggulan som sådan eller i form av födoämnesprodukter.

Detaljerad beskrivning av uppfinningen Föreliggande uppfinning avser allmänt användning av naturliga antisekre- toriska proteiner för framställning av NASP-berikade funktionella födoämnes- produkter och farmaceutiska produkter för behandling och profylax av icke normala fysiologiska tillstånd orsakade av extremt kroppsvätskeutflöde och avser enligt en aspekt användningen av äggula, som har anrikats med avseende på NASP, för framställning av födoämnesprodukter med hög halt av NASP. Enligt en annan aspekt avser uppfinningen en dylik användning för framställning av livsmedel for särskilda näringsändamål farmaceutiska produkter innehållande 513 496 NASP.

Med "funktionell födoämnesprodukt" avses i föreliggande sammanhang ett födoämne som har en hälsobringande funktion, dvs. har välgörande effekt på en människas eller ett djurs hälsa. g Uttrycket "födoämnesprodukt" avser i föreliggande sammanhang att innefatta såväl födoämne för humant bruk som foder för animalt bruk. Födoämnet kan vara ett alster i form av produkter, vid vars beredning äggula ingår, såsom plättar, pannkaka, omelett, glass och olika former av bröd. Äggulan kan även intagas i form av äggtoddy eller hård- eller löskokta ägg. Födoämnet kan även föreligga i form av bröd, kex, pasta, gryn och flingor, gröt eller välling, eller utblandad i olika dryckeskomposítioner med och utan elektrolyter, eller en matberedning vari ingår kött och köttprodukter, fett och fettprodukter eller mjölk och mjölkprodukter, som har berikats med NASP enligt en nedan beskriven utföringsform av uppfinningen, enligt vilken NASP har inblandats i mer eller mindre renframställd form. Beredningen kan sammansättas med stor frihet med för fackmannen känd kunskap för att uppfylla krav på smaklighet och måltids- variation. Äggulan härrör från fågelägg, som kan utnyttjas för human och animal konsumption och som har anrikats med avseende på NASP. Äggen produceras företrädesvis av värphöns men kan även erhållas från exempelvis vaktel och struts.

Med "NASP-berikad födoämnesprodukt" eller "födoämnesprodukt med hög halt av NASP" avses födoämnesprodukter som innehåller NASP i en koncentration som vid förtäring av födoämnesprodukten ger den önskade värdefulla effekten på hälsan. I ägg kan särskilt höga halter av NASP mätas, såsom framgår av Exempel 1. Vid intag av den NASP-berikade produkten tillses att ASP-halten i blodet överstiger 0,5 FIL-enheter/ml blod. Friska människor synes ha ASP-halter i blodet mellan 0 och 0,5 FIL-enheter/iml blod.

Vid stimulering av NASP-produktionen enligt SE 9000028-2 har det överraskande och oväntat visat sig att extremt höga halter av NASP kan induceras i fågelägg. I blod utgör halteniav/NÅSP efter sådan induktion normalt 0,5-2 FIL- enheter/ml (1 FIL-enhet = den mängd NASP som ger en 50%-ig inhibition av vätskeutträdet vid ett s.k. tarmslynge-test på råtta; se SE 9000028-2 och de däri anförda referenserna 3 och 4). Genom att i fodret tillföra fågeln bestämda kombina- tioner av aminosyror, sockerarter och amider, i enlighet med SE 9000028-2, kan 513 496 4 mycket höga halter av NASP byggas upp, företrädesvis i äggulan. Det rör sig därvid om så höga halter som från ca 1000 till ca 10.000 FIL-enheter per ml. Det skall i detta sammanhang nämnas att NASP-halten i äggula normalt, utan föregående induktion, utgör ca 1 FIL-enhet/ml; se S. Lange m.fl., British Poultry Science (1994) 35: 615-620.

Enligt en utföringsform av användningen enligt uppfinningen kan NASP- berikade födoämnesprodukter framställas genom inblandning i födoämnet av NASP som sådant, som har erhållits i mer eller mindre renframställd form från NASP-berikad äggula.

Man kan således stimulera bildningen av NASP i en fågel, såsom beskrivs i SE 9000028-2, och därsa-.er utvinna eller anrika NASP, också såsom beskrivs i nämnda svenska paten* från digerat av äggula på en agaroskolonn och därefter eluera denna med en lösning av oc-metylglykosid i företrädesvis fosfatbuffrad fysiologisk koksaltlosning. Eluatet kan sedan underkastas ytterligare rening och formulering före administrering, tex. i form av lösning (sol).

I detta fall kan de utvunna eller anrikade NASP därefter administreras till djur eller människor, inblandade i ett foder respektive födoämne eller som mer eller mindre isolerade produkter, beredda och formulerade som farmaceutiska eller andra hälsobringande produkter. Dylika farmaceutiska produkter framställs på för fackmannen känt sätt under användning av sedvanliga excipienter inklusive bärare och utspädningsmedel och bereds till fasta eller flytande former beroende på det avsedda administreringssättet.

Enligt en annan utföringsform av användningen enligt uppfinningen för framställning av NASP-berikade födoämnesproduktei' används äggulan som sådan eller hela ägget, eventuellt i bearbetat skick, för inblandning i födoämnet eller fodret. Den eventuella bearbetningen kan innebära malning, lakning, extraktion, indunstning, ultrafiltrering, torkning och dylika enhetsoperationer för att erhålla en för praktiska ändamål lämplig NASP-rik ägguleprodukt för inblandning i födoämnet eller fodret.

Genom uppfinningen öppnas nya vägar att uppnå de gynnsamma effekter som är förknippade med intag av NASP. Genom den höga koncentration av NASP i äggula som kan induceras kan elïekten av NASP utnyttjas utan att man behöver avvakta den tidsutdräkt den tidigare kända induktionen av NASP medfört.

Föreliggande uppfinning avser således enligt ytterligare en aspekt ett förfarande för tillhandahållande av äggula från fågelägg vilka är anrikade med 513 496 avseende på NASP, vilket förfarande utmärks av att man stimulerar bildningen av NASP genom att utfodra den fågel från vilken äggen skall tillvaratas med ett NASP-inducerande foder enligt SE 9000028-2. Förfarandet enligt uppfinningen är i synnerhet tillämpligt vid utfodring av hönsfåglar, eftersom det, såsom nämnts ovan, överraskande och oväntat visat sig att extremt höga halter av NASP kan induceras i ägg från dessa. Genom att i fodret tillföra hönsen bestämda kombina- tioner av aminosyror, sockerarter och amider kan, såsom även nämnts ovan, mycket höga halter (ca 100-1000 FlL-enheter) av NASP byggas upp, företrädesvis i äggulan. Härigenom öppnas den särskilda möjligheten att framställa äggula, enligt uppfinning :som röjes i rubricerade patent, med extremt hög halt av NASP. Ger-am inblandning i ett födoämne eller foder av sådan äggula eller produk- ter därav, kan NASP tillföras människor eller djur på ett bekvämt, säkert och kostnadseffektivt sätt. Det är således mycket överraskande och inte känt tidigare att så höga halter av NASP kan uppnås i livsmedel. Härigenom kan således, såsom nämnts oxian, effekten av NASP utnyttjas utan att man behöver avvakta den tídsutdräkt den tidigare kända induktionen av NASP medför. Det är också. överraskande att NASP bibehåller sin effekt även då NASP administreras oralt.

Vid vissa tillstånd kan höga doser av NASP erfordas. I sådana fall kan, ur ägg utvur-.iiet NASP tillföras födoämnesprodukten eller kan NASP beredas för intag i form av tabletter eller suspensioner.

En särskilt föredragen utföringsform är att framställa äggulepulver genom spraytorkning. En sådan produkt lämpar sig särskilt väl vid industriell beredning av olika livsmedelsprodukter där den gynnsamma effekten av NASP önskas erhållas vid intag av födoämnesprodukten ifråga. Äggulepulvret låter sig väl inblandas i vitt skilda produkter som korv och glass, varigenom en långtgående variation i fråga om måltidskaraktär blir möjlig. Äggulepulver lämpar sig också utmärkt som mellanprodukt i det fall man önskar framställa en anrikad eller koncentrerad NASP-produkt genom lakning eller extraktion för senare beredning av t.ex. läkemedel.

Genom sin relativt lågammolekylvikt är NASP förhållandevis värmestabilt och kan därför ingå i födan redan innan den bereds för förtäring.

NASP har visat sig ha generellt styrande inverkan på kroppsvätskeflödet över levande cellmembran, varigenom inte endast diarrétillstånd kan lindras, hävas eller förebyggas, utan också obehag till följd av fysiologisk obalans eller sjukdomsliknande tillstånd orsakade av extremt kroppsvätskeutflöde, såsom 513 496 6 inflammationer, ödem, artrit, glaukom och andra förändringar i kroppen, såsom migrän, brännsår och traumatiska skador i och på kroppen. Födoämnesproduk- terna och de farmaceutiska produkterna enligt uppfinningen kan således användas for sådant syfte.

Uppfinningen åskådliggörs närmare medelst följande icke begränsande utfóringsexempel.

Exempel 1 Värphöns (vit .leghorn ca 32 veckor gamla) utfodrades med ett värpfoder som samnzansatts enligt SF- 9000028-2 och kontrollfoder av traditionell typ, 11,4 MJ/kg foder, 370 g råprotein per kg foder. Efter en induktionsperiod på 2 veckor samlades ägg. varje led samlades 10 ägg och gulan och vitan från dessa ägg separerades manuellt. Efter spädning med en lika stor volym av PBS (fosfatbuffrad saltlösning) underkastades gulan affinitetskromatografi i enlighet med en tidigare beskriven metod (I. Lönnroth och S. Lange, Biochimica Biophysica Acta (1986) 883: 138-144). l korthet innebar detta att PBS-utspädd äggula applicerades på en liten kolonn innehållande "Sepharose 6B" (Pharmacia LKB Biotechnology AB, Sollentuna, Svveden), son: hade fórekvilibrerats med PBS. Efter tvättning med PBS, eluerades NASP med metyl-cz-D-glukosid, 1,0 M i PBS. Efter dialys mot PBS fórvarades provet vid -20°C till dess det testades med avseende på NASP enligt den av Lange beskrivna tarmslyngemodellen på råtta (S. Lange, FEMS Microbiology Letters (1982) 15: 239, 242).

Halt NASP i äggula Kontrollgrupp Försöksgrupp FlL-enheterfg 1,20 2,0 (efter spädning 1:100) 1,0 (efter spädning 1:1000) Exempel 2 En stomiopererad 42-årig kvinna med en återstod av ca 0,5 meter led svårt av kraftiga diarréer. I genomsnitt utsöndrades ca 1,5 liter tarminnehåll 4 gånger dagligen. Efter en veckas dalígt intag av glass, beredd av socker, grädde och äggulor från fórsöksledes i Exempel 1, motsvarade ett dagligt intag av 4 g ägguletorrsubstans, minskade defaekationsfrekvensen till en gång per dag och mängden minskade till ca 350 ml. Under tre veckors behandling ökade kvinnans |._A O 513 496 7 vikt med 3,5 kg. Efter ytterligare en vecka intog hon samma mängd glass beredd med vanliga ägg enligt samma recept. Inom tre dagar antog defaekationsfrekven- sen och -mängden samma värden som före försökset. Efter ytterligare en vecka återupptogs försöket och inom två dagar minskade defaekationen till samma värden som under föregående försök.

Exempel 3 Fyra kalvar med en levande vikt av 50 kg indelades i två grupper om vardera två kalvar ivarje grupp. Kalvarna i kontrollgruppen tilldelades kalvnäring i form av komraersiell mjölkersättning. I försöksledet iblandades äggula från försöket i Exempel 1, motsvarande en daglig dos av två äggulor. Utfodringen förtgick under sju dagar. Före och efter försöket mättes ASP-halten i blodet.

ASP-halt, FIL-enheter/ml plasma Kontrollgrupp Försöksgrupp Före försök 0,3 0,1 Efter iörsök 0,1 0,9 Exempel 4 Diarré är en icke ovanlig åkomma hos hund, särskilt hos sådana som har möjlighet att under rastning i terrängen själv välja sitt intag av föda. En sådan hund av schäferras och hankön, vid 1,5 års ålder, vägandes ca 40 kg led en tid av svår diarré och vattnig och tidvis blodig avföring. Hunden kräktes också intermit- tent. Veterinär tillkallades och ordinerade antibiotika att intagas oralt i tablett- form under en vecka. Under perioden förtärde hunden mindre mängder kommersi- ellt torrfoder för hundar. lngen minskning av diarréerna kunde iakttagas. Efter denna antibiotikakur tilldelades hunden uppblött torrfoder vari nedblandats äggulepulver från Exempel 6 i en myckenhet som motsvarade en äggula per dag under fyra dagar. Efter ett dygn hade hunden fast avföring och betraktades efter tre dagar som helt frisk. Inte någon gång tidigare hade hundägaren observerat så snabbt tillfrisknande.

Exempel 5 Ägg från försöksledet i Exempel 1 knäcktes och skirades i en äggskirningsap- parat, Äggula och äggvita uppsamlades var för sig. Äggulan spraytorkades i 515 496 8 Anhydro-spraytork med en tillufttemperatur på 150°C och en frånlufttemperatur på ca 7500. Äggpulvret uppsamlades och efter avslutad torkning uppsamlades det på spraytorkens väggar vidhäflzande pulvret. Dessa väggbeläggningar hade en genomsnittlig uppehållstid i torkkammaren på 4 timmar. Äggpulvret löstes i vatten och ASP uppsamlades på känt sätt på en agaroskolonn. Eluatet späddes och dess ASP innehåll bestämdes.

FlL-enheter efter spädning 11100 Äggpulve-r- genomsnittsprov X Äggpulver från torkkammarvägg Y NASP är således ur livsmedelsteknisk synvinkel tillräckligt värmestabilt.

Tekniska effekter Genom föreliggande uppfinning öppnar sig helt nya och förut okända möjligheter att administreras NASP med helt nya, förut okända frihetsgrader. Den genom FCT-ansökan PCT/SE97/O1918 (WO 98/21978) beskrivna induktionen av NASP kan vara svår att långvarigt upprätthålla genom att dieten lättare uppfattas som enformig. Genom föreliggande upptäckt kan födoämnesprodukter med hög smaklighet och god acceptans beredas med måttliga processkostnader. Vid utdragna sjukdomsförlopp eller svag respons på NASP-inducerande föda, kan NASP administreras i form av livsmedel med en förutbestämd högre eller lägre dos, som avpassas till önskad effekt på livskvalitet eller fysisk prestationsförmåga.

Vid långvarig administration kan leda (avsmak) vid födoämnet undvikas genom att ett stort antal produkter kan beredas med varierad smak och måltidskaraktär.

Födoämnesprodukterna kan beredas industriellt som halvfabrikat eller färdiga måltider eller som alster ägnade för traditionell matlagning i hemmet. Torkat äggulepulver lämpar sig som råvara vid beredning av läkemedel eller vid till- verkning av NASP-koncentrat. Koncentratet kan utvinnas ur äggula eller företrä- desvis ur äggulepulver genom extraktion eller läkning.

Claims (24)

513 496 fi, PATENTKRAV

1. Äggula med foderinducerad hög halt av naturliga antisekretoríska proteiner (NASP).

2. Äggula enligt krav 1 med en halt NASP motsvarande 1000-10.000 FIL- enheter/ml.

3. Äggula enligt krav 1 eller 2 härrörande från ägg av hönsfågel.

4. Användning av äggula enligt något av kraven 1-3 for framställning av NASP-berikade funktionella fódoämnesprodukter.

5. Användning av äggula enligt något av kraven 1-3 fór framställning av farmaceutiska produkter for behandling och profylax av sjukdomsliknande till- stånd orsakade av extremt kroppsvätskeutflöde.

6. Användning enligt krav 4 eller 5 av NASP som sådant, utvunnet från NASP- berikad äggula i ren eller koncentrerad form.

7. Användning enligt krav 4 eller 5, kännetecknad därav, att äggulan används som sådan eller i en form erhållen genom bearbetning såsom malning, lakning, extraktion, indunstning, membranfiltrering, torkning och liknande enhetsoperationer.

8. Användning enligt något av kraven 4-7, kännetecknad därav, att äggulan har tillhandahållits genom utfodring av en äggproducerande fågel med ett NASP- inducerande foder. f i f

9. Användning enligt krav 8, kännetecknad därav, att NASP-induceringen skett genom inblandning i fodret av aminosyror, sockerarter och amider i sådana mängder och proportioner att bildningen av NASP har stimulerats.

10. Användning enligt krav 8, kännetecknad därav, att NASP-inducering skett genom inblandning i fodret av produkter med enzymatisk aktivitet vilka stimulerar bildningen av NASP. 513 496 lb.

11. Användning enligt krav 10, kännetecknad därav, att produkterna med enzymatisk aktivitet är mältade cerealier.

12. Förfarande for tillhandahållande av äggula från en äggproducerande fågel, vilken äggula är anrikad med avseende på naturliga antisekretoriska proteiner (NASP), kännetecknat därav, att man utfodrar fågeln med ett NASP-induce- rande foder.

13. Förfarande enligt krav 12, kännetecknat därav, att fågeln är en hönsfågel.

14. Förfarande enligt krav 12 eller 13, kännetecknat därav, att det NASP- inducerande fodret innehåller aminosyror, sockerarter och amider i en sådan mängd att bildningen av NASP stimuleras.

15. Förfarande enligt krav 12 eller 13, kännetecknat därav, att fodret in- nehåller produkter med enzymatisk aktivitet, vilka stimulerar bildningen av NASP.

16. Förfarande enligt krav 15, kännetecknat därav, att produkterna med enzymatisk aktivitet är mältade cerealier.

17. Födoämnesprodukt med hög halt av naturliga antisekretoriska proteiner (NASP), kännetecknad därav, att den innehåller äggula enligt något av kraven 1-3 eller NASP i från äggula mer eller mindre renframställd form.

18. Födoämnesprodukt enligt krav 17, kännetecknad därav, att den höga halten av NASP har erhållits genom inblandning, vid framställning av födoäm- nesprodukten, av NASP-anrikad äggula enligt något av kraven 1-3 eller bearbetade former därav som NASP-källa.

19. Födoämnesprodukt enligt krav 17, kännetecknad därav, att den höga halten av NASP har erhållits genom tillsats, vid framställning av fódoämnespro- dukten, av NASP som sådant i ren eller koncentrerad form, erhållet från NASP- berikad äggula enligt något av kraven 1-3. .fl 513 496 u ,

20. Födoämnesprodukt enligt krav 17, kännetecknad därav, att den utgörs av äggula som sådan.

21. Födoämnesprodukt enligt något av kraven 17-19, kännetecknad därav, att den utgörs av pannkaka, plättar, omelett, glass, lös- eller hårdkokt ägg och dylikt.

22. Farmaceutisk produkt for behandling och profylax av sjukdomsliknande tillstånd orsakade av extremt kroppsvätskeutflöde, kännetecknad därav, att den innehåller, förutom sedvanliga excipienter och hjälpsubstanser, naturliga antisekretoriska proteiner (NASP) härrörande från NASP-berikad äggula enligt något av kraven 1-3.

23. Förfarande fór framställning av en fódoämnesprodukt med hög halt av naturliga antisekretoriska proteiner (NASP) enligt något av kraven 17-21, kännetecknat därav, att man i ett fódoämne eller foder inblandar NASP-berikad äggula enligt något av kraven 1-3, eller bearbetade former därav eller från nämnda äggula mer eller mindre renframställt NASP.

24. Förfarande enligt krav 23, kännetecknat därav, att de bearbetade for- merna av äggulan har erhållits genom malning, lakning, extraktion, indunstning, membranfiltrering, torkning och liknande enhetsoperationer.