RU2276687C2 - Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина - Google Patents
Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2276687C2 RU2276687C2 RU2003121600/13A RU2003121600A RU2276687C2 RU 2276687 C2 RU2276687 C2 RU 2276687C2 RU 2003121600/13 A RU2003121600/13 A RU 2003121600/13A RU 2003121600 A RU2003121600 A RU 2003121600A RU 2276687 C2 RU2276687 C2 RU 2276687C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacterium
- transaldolase
- histidine
- activity
- gene
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1022—Transferases (2.) transferring aldehyde or ketonic groups (2.2)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. L-гистидин получают выращиванием бактерии рода Escherichia, модифицированной таким образом, что активность трансальдолазы в клетке такой бактерии повышена. Полученный и накопленный L-гистидин выделяют из культуральной жидкости. Заявленное изобретение позволяет получать L-гистидин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Область техники.
Настоящее изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения L-аминокислоты, такой как L-гистидин, методом ферментации и, более конкретно, к гену, полученному из бактерии Escherichia coli. Этот ген является полезным для улучшения продукции L-гистидина.
Предшествующий уровень техники
Традиционно L-аминокислоты в промышленном масштабе могут быть получены методом ферментации с использованием штаммов микроорганизмов, полученных из природных источников, или их мутантов, специально модифицированных для того, чтобы увеличить продукцию L-аминокислот.
Описано множество методов увеличения продукции L-аминокислот, например, путем трансформации микроорганизма рекомбинантной ДНК (см., например, патент США 4278765). Указанные методы основаны на повышении активности ферментов, вовлеченных в биосинтез аминокислот и/или уменьшении чувствительности целевого фермента к ингибированию продуцируемой L-аминокислотой по принципу обратной связи (см., например, выложенную патентную заявку Японии №56-18596 (1981), WO 95/16042 или патенты США 5661012 и 6040160).
Ген talB кодирует трансальдолазу (TAL, D-седогептулозо-7-фосфат: D-глицеральдегид-3-фосфат дигидроксиацетонтрансфераза) [ЕС 2.2.1.2], фермент неокислительной ветви пентозофосфатного цикла (Sprenger G.A. et al, J. Bacteriol., 1995, Oct 177:20, 5930-6). Трансальдолаза является ключевым ферментом биосинтеза рибозо-5-фосфата из продуктов гликолиза. Фермент катализирует обратимый перенос остатка дигидроксиацетона, полученного из фруктозо-6-фосфата на эритрозо-4-фосфат, с образованием седугептулозо-7-фосфата и высвобождением глицеральдегид-3-фосфата. После этого седугептулозо-7-фосфат и глицеральдегид-3-фосфат превращаются в две молекулы пентозо-5-фосфата под действием транскетолазы.
Ранее было показано, что повышенная активность трансальдолазы положительно сказывается на микробной продукции соединений, участвующих в метаболизме ароматических соединений, в частности, аминокислот, таких как L-фенилаланин (патент США 6316232).
Недавно компания "Degussa AG" представила противоречивые данные. Процесс получения L-треонина методом ферментации микроорганизмами семейства Enterobacteriaceae, в которых экспрессия одного или более генов, входящих в состав большой группы, включая ген talB, ослаблена или полностью прекращена, был предложен безо всяких экспериментальных примеров и основывался лишь на теоретических выкладках (заявка РСТ WO 03008600 A2). В то же время был описан процесс получения L-треонина методом ферментации микроорганизмами семейства Enterobacteriaceae, в которых усилена экспрессия как минимум гена talB, в частности произведена суперэкспрессия этого гена (РСТ заявка WO 03008611 А2).
Но в настоящее время нет данных, описывающих влияние амплификации гена talB для улучшения продукции L-гистидина с использованием штаммов семейства Enterobacteriaceae.
Описание изобретения
Целью настоящего изобретения является увеличение продуктивности штаммов, продуцирующих L-гистидин, и предоставление способа получения L-гистидина с использованием указанных штаммов.
Данная цель была достигнута путем обнаружения того факта, что ген talB, кодирующий трансальдолазу (TAL, D-седогепдулозо-7-фосфат: D-глицеральдегид-3-фосфат дигидроксиацетонтрансфераза) [ЕС 2.2.1.2], не вовлеченную в путь биосинтеза целевой L-аминокислоты, увеличивает продукцию L-гистидина в случае, когда дополнительные копии указанного гена введены в клетки соответствующего штамма - продуцента. Таким образом, было совершено настоящее изобретение.
Настоящее изобретение включает в себя следующее:
1. Бактерия - продуцент L-гистидина, принадлежащая к семейству Enterobacteriaceae, модифицированная с целью повышения активности трансальдолазы в клетке упомянутой бактерии.
2. Бактерия в соответствии с п.1, где указанная бактерия принадлежит к роду Escherichia.
3. Бактерия в соответствии с п.1, в которой активность трансальдолазы повышена путем увеличения экспрессии гена, кодирующего трансальдолазу.
4. Бактерия в соответствии с п.3, в которой активность трансальдолазы увеличена путем увеличения количества копий гена, кодирующего трансальдолазу, или путем изменения последовательности для регуляции экспрессии указанного гена таким образом, что происходит повышение экспрессии указанного гена.
5. Бактерия в соответствии с п.4, в которой количество копий указанного гена увеличено путем трансформации вышеупомянутой бактерии многокопийным вектором, содержащим ген, кодирующий трансальдолазу.
6. Бактерия в соответствии с любым из пп. с 2 по 5, в которой ген, кодирующий трансальдолазу, получен из бактерии, принадлежащей роду Escherichia.
7. Бактерия в соответствии с п.6, в которой ген, кодирующий трансальдолазу, кодирует следующий белок (А) или (Б):
(А) белок, который представлен аминокислотной последовательностью, приведенной в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2;
(В) белок, который представлен аминокислотной последовательностью, включающей делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотную последовательность, приведенную в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2, и который обладает активностью трансальдолазы. (Здесь и далее, белки, описанные в вышеупомянутых пунктах (А) или (В), упоминаются как "белки согласно настоящему изобретению".)
8. Бактерия в соответствии с п.6, в которой ген, кодирующий трансальдолазу, представлен следующей последовательностью ДНК (а) или (б):
(а) ДНК, состоящая из последовательности нуклеотидов с 1 по 954 в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1; или
(б) ДНК, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью 1-945 в последовательности SEQ ID NO:1 или пробой, которая может быть приготовлена из указанной нуклеотидной последовательности, в жестких условиях, и кодирует белок, обладающий активностью трансальдолазы.
9. Бактерия в соответствии с п.8, где жесткими условиями являются условия, при которых отмывка производится при 60°С, а концентрация солей соответствует 1×SSC и 0,1% SDS.
10. Способ получения L-гистидина, включающий стадии выращивания бактерии в соответствии с пунктами с 1 по 9, в питательной среде с целью продукции и накопления L-гистидина, и выделения L-гистидина из культуральной жидкости.
11. Способ в соответствии с п.10, в котором у указанной бактерии повышена экспрессия генов биосинтеза L-гистидина.
Настоящее изобретение более детально будет описано ниже.
Бактерией согласно настоящему изобретению является бактерия - продуцент L-гистидина, принадлежащая к семейству Enterobacteriaceae, в которой продукция L-гистидина указанной бактерией увеличена за счет повышения активностей белков согласно настоящему изобретению в клетке бактерии.
Конкретно, бактерией согласно настоящему изобретению является бактерия - продуцент L-гистидина, принадлежащая к роду Escherichia, в которой продукция L-гистидина указанной бактерией увеличена за счет повышения в клетке бактерии активности белка согласно настоящему изобретению, а именно трансальдолазы. Более конкретно, бактерия согласно настоящему изобретению содержит ДНК, в которой повышена экспрессия гена talB на хромосоме или на плазмиде в бактерии, и обладает повышенной способностью к продукции L-гистидина.
Термин «бактерия, обладающая способностью к продукции L-гистидина» означает бактерию, способную накапливать L-гистидин в среде, когда такая бактерия культивируется согласно настоящему изобретению в питательной среде. Способность к продукции L-гистидина может быть придана или усилена селекцией. Используемый здесь термин «бактерия, обладающая способностью к продукции L-гистидина» также означает бактерию, способную производить и накапливать в культуральной среде L-гистидин в количествах, больших, чем природный или родительский штаммы, и прежде всего, означает, что микроорганизм способен производить и накапливать в среде L-гистидин в концентрациях не меньше, чем 0,5 г/л, более предпочтительно не меньше, чем 1,0 г/л.
Семейство Enterobacteriaceae включает в себя бактерии, принадлежащие к родам Escherichia, Erwinia, Providencia и Serratia. Род Escherichia предпочтителен.
Термин «бактерия, принадлежащая к роду Escherichia» означает, что бактерия относится к роду Escherichia в соответствии с классификацией, известной специалисту в области микробиологии. В качестве примера микроорганизма, принадлежащего к роду Escherichia, использованного в настоящем изобретении, может быть упомянута бактерия Escherichia coli (E.coli).
Термин «активность трансальдолазы» означает каталитическую активность реакции обратимого переноса остатка дигидроксиацетона, полученного из фруктозо-6-фосфата на эритрозо-4-фосфат, с образованием седогептулозо-7-фосфата и высвобождением глицеральдегид-3-фосфата. Активность трансальдолазы может быть измерена с помощью метода, описанного, например, у GA.Sprenger, U.Schorken, G.Sprenger & H.Sahm (Transaldolase В of Escherichia coli K-12: cloning of its gene, talB, and characterization of the enzyme from recombinant strains. J. Bacteriol., 1995, 177:20:5930-6).
Термин «бактерия, модифицированная таким образом, что активность трансальдолазы в клетке упомянутой бактерии повышена» означает, что удельная активность трансальдолазы, выше, чем это же значение у неизмененного штамма, например природного. В качестве примера можно привести случай, когда увеличено количество молекул трансальдолазы на клетку, случай, когда повышена специфическая активность трансальдолазы в пересчете на одну молекулу трансальдолазы и так далее. Далее, в качестве природного штамма, служащего объектом для сравнения, может быть упомянута, например, Escherichia coli K-12. Как результат повышения уровня внутриклеточной активности трансальдолазы может рассматриваться эффект увеличения количества накапливаемого в питательной среде L-гистидина.
Повышение уровня активности трансальдолазы в бактериальной клетке может быть достигнуто путем увеличения уровня экспрессии гена, кодирующего трансальдолазу. В качестве гена, кодирующего трансальдолазу, могут быть использованы гены, полученные из бактерий семейства Enterobacteriaceae, и гены, полученные из других бактерий, таких как коринеподобные бактерий. Среди вышеуказанных генов предпочтительны гены, полученные из бактерии, принадлежащей к роду Escherichia.
Нуклеотидная последовательность гена, кодирующего трансальдолазу из Escherichia coli (ЕС номер 2.2.1.2), talB, уже определена (нуклеотиды с 8238 по 9191 в последовательности с инвентарным номером NC_000913.1, gi:16128002 в базе данных GenBank). Таким образом, ген talB может быть получен с помощью ПЦР (полимеразная цепная реакция; по White, T.J. et al., Trends Genet., 5, 185 (1989)) с использованием затравок, синтезированных на основе нуклеотидной последовательности указанного гена. Гены из других микроорганизмов, кодирующие трансальдолазу, могут быть получены таким же образом.
Примером гена talB, полученного из Escherichia coli, является ДНК, кодирующая следующий белок (А) или (В):
(A) белок, который представлен аминокислотной последовательностью, приведенной в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2;
(B) белок, который представлен аминокислотной последовательностью, включающей делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотную последовательность, приведенную в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2, и который обладает активностью трансальдолазы.
ДНК, кодирующая вышеуказанные белки согласно настоящему изобретению включает в себя ДНК, кодирующую белок, который может содержать делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотную последовательность в одной или более позициях белка (А), при условии, что они не вызывают потерю активности указанного белка. Несмотря на то что количество «нескольких» аминокислот различается в зависимости от положения и типа аминокислотного остатка в трехмерной структуре белка, оно может быть от 2 до 30, предпочтительно от 2 до 120 и более предпочтительно от 2 до 10 для белка (А). Это объясняется следующими фактами. Некоторые аминокислоты обладают высокой гомологией друг к другу и различия между такими аминокислотами не оказывает существенного влияния на трехмерную структуру белка и его активность. Таким образом, белком (В) может являться белок, имеющий гомологию не меньшую, чем от 30% до 50%, предпочтительно от 50% до 70% по отношению к общему количеству аминокислотных остатков, входящих в состав трансальдолазы, и обладающий активностью трансальдолазы.
Для оценки степени гомологии между ДНК возможно использование нескольких способов расчета, таких как BLAST search, FASTA search и CrustalW.
BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) - это самообучающийся алгоритм поиска, используемый программами BLASTP, BLASTN, BLASTX, MEGABLAST, TBLASTN, и TBLASTX; эти программы оценивают значимость найденных результатов с использованием статистических методов Karlin, Samuel и Stephen F.Altschul ("Methods for assessing the statistical significance of molecular sequence features by using general scoring schemes". Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, 87:2264-68; "Applications and statistics for multiple high-scoring segments in molecular sequences". Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90:5873-7). Способ поиска FASTA описан W.R.Pearson ("Rapid and Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTA", Methods in Enzymology, 1990 183:63-98). Способ ClustalW описан Thompson J.D., Higgins D.G. и Gibson T.J. ("CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice", Nucleic Acids Res. 1994, 22:4673-4680).
ДНК, кодирующая практически такой же белок, как белок, описанный в пункте (А), может быть получена, например, путем модификации нуклеотидной последовательности, кодирующей белок, описанный в пункте (А), с использованием сайт-направленного мутагенеза таким образом, что один или несколько аминокислотных остатков будут удалены, заменены, введены или добавлены. Модифицированная подобным образом ДНК может быть получена традиционными методами, использующими обработку химическими реагентами и содержание в условиях, вызывающих мутации. К подобного рода обработкам относятся обработка ДНК, кодирующей белки согласно настоящему изобретению, с помощью гидроксиламина или обработка бактерии, содержащей ДНК, с помощью УФ излучения или химического реагента, такого как N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин или азотистая кислота.
К ДНК согласно настоящему изобретению относятся варианты, которые могут быть найдены в различных штаммах или вариантах бактерий, принадлежащих к роду Escherichia, ввиду природного разнообразия. ДНК, кодирующая подобные варианты, может быть получена путем выделения ДНК, которая гибридизуется с геном talB или частью указанного гена в жестких условиях и которая кодирует белок, увеличивающий продукцию L-аминокислот. Термин «жесткие условия», упомянутый здесь, означает условия, при которых образуются так называемые специфические гибриды, а неспецифические - не образуются. Например, к жестким условиям относятся условия, при которых гибридизуются ДНК, обладающие высокой степенью гомологии, к примеру, ДНК, обладающие гомологией не менее 70% друг относительно друга. В качестве варианта, примером жестких условий являются условия соответствующие условиям отмывки при гибридизации по Саузерну, например, 60°С, 1×SSC, 0.1% SDS, предпочтительно 0.1×SSC, 0.1% SDS. В качестве зонда для ДНК, кодирующей варианты и гибридизующейся с геном talB, также может быть использована часть нуклеотидной последовательности под номером SEQ ID NO:1. Зонд подобного рода может быть получен в результате ПЦР с использованием в качестве затравок олигонуклеотидов, полученных на основе нуклеотидной последовательности под номером SEQ ID NO:1, и фрагмента ДНК, содержащего нуклеотидную последовательность под номером SEQ ID NO:1, в качестве матрицы. В случае когда в качестве зонда используется фрагмент ДНК длиной около 300 пар оснований, условия отмывки при гибридизации соответствуют, например, 50°С, 2×SCH 0.1% SDS.
Трансформация бактерии с помощью ДНК, кодирующей белок, означает введение указанной ДНК в клетку бактерию, например, с помощью традиционных методов, для того чтобы усилить экспрессию генов, кодирующих белок согласно настоящему изобретению, и повысить активность белка в клетке бактерии.
К бактерии согласно настоящему изобретению также относятся бактерии, в которой активности белков согласно настоящему изобретению повышены путем трансформации бактерии с помощью ДНК, кодирующей белки, описанные в пунктах (А) или (В), или путем изменения регуляции экспрессии последовательности указанной ДНК в хромосоме упомянутой бактерии.
Упомянутая ДНК, использующаяся для модификации бактерии согласно настоящему изобретению, кодирует, как предполагается, белок, обладающий активностью трансальдолазы. Более конкретно, такой ДНК является ген talB. Ген talB может быть получен, например, с помощью ПЦР с использованием затравок, полученных на основе нуклеотидной последовательности, приведенной под номером SEQ ID NO:1.
К методам увеличения экспрессии генов относятся методы увеличения числа копий гена. Введение гена в вектор, способный к функционированию в бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, увеличивает число копий указанного гена. Для подобных целей могут быть предпочтительно использованы многокопийные векторы. Примерами многокопийных векторов являются pBR322, pUC19, pBluescript KS+, pACYC177, pACYC184, pAYC32, pMW119, pET22b и подобные им. Кроме того, усиление экспрессии гена может быть достигнуто путем введения некоторого числа копий гена в бактериальную хромосому, например, методом гомологичной рекомбинации или подобным.
С другой стороны, усиление экспрессии генов может быть достигнуто помещением ДНК согласно настоящему изобретению под контроль сильного промотора взамен природного. Сила промотера определяется частотой акта инициации синтеза РНК. Методы оценки силы промотера и примеры сильных промоторов описаны у Deuschle, U., Kammerer, W., Gentz, R., Bujard, H. (Promoters in Escherichia coli: a hierarchy of in vivo strength indicates alternate structures. EMBO J. 1986, 5, 2987-2994). Например, PR промотор известен как сильный конститутивный промотор. В качестве сильных промоторов известны PL промотор, lac промотор, trp промотор, trc промотор и подобные им.
Усиление трансляции может быть достигнуто путем введения в ДНК согласно настоящему изобретению более эффективной последовательности Shine-Dalgarno (SD последовательности) вместо природной SD последовательности, где под SD последовательностью подразумевается область, находящейся на цепи ДНК перед старт кодоном мРНК, взаимодействующая с 16SPHK рибосомы (Shine J. and Dalgamo L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, 71, 4, 1342-6).
Использование сильного промотора может быть совмещено с увеличением числа копий гена.
Методы получения хромосомной ДНК, гибридизации, ПЦР, получения ДНК плазмид, расщепления и лигирования ДНК, трансформации, отбора олигонуклеотидов в качестве затравок и другие подобные методы являются обычными методами, хорошо известными для специалиста в указанной области техники. Перечисленные методы описаны в Sambrook, J., and Russell D., "Molecular Cloning A Laboratory Manual, Third Edition", Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001) или подобных изданиях.
Бактерия согласно настоящему изобретению может быть получена путем введения вышеуказанных ДНК в бактерию, уже обладающую способностью к продукции L-гистидина. С другой стороны, бактерия согласно настоящему изобретению может быть получена путем придания бактерии, уже содержащей указанные ДНК, способности к продукции L-гистидина.
В качестве родительских штаммов, в которых активность белка согласно настоящему изобретению будет повышена, могут быть использованы бактерии, принадлежащие к роду Escherichia, - продуценты L-гистидина, такие как штамм Е.coli 24 (VKPM В-5945, патент РФ 2003677); штамм Е.coli 80 (VKPM В-7270, патент РФ 2119536); штаммы Е.coli NRRL В-12116-В12121 (патент США 4388405); штаммы Е.coli Н-9342 (FERM ВР-6675) и Н-9343 (FERM ВР-6676) (патент США 6344347); штамм Е.coli H-9341 (FERM BP-6674) (Европейская патентная заявка 1085087А2); штамм Е.coli AI80/pFM201 (патент США 6258554) и подобные им.
Желательно, чтобы бактерия-продуцент L-гистидина в дальнейшем была модифицирована с целью усиления экспрессии биосинтеза L-гистидина. К ключевым генам биосинтеза L-гистидина относятся ген hisG и гены оперона hisBHAFI, предпочтительно ген hisG, кодирующий АТФ фосфорибозилтрансферазу, устойчивую к ингибированию по принципу обратной связи (патенты РФ 20003677 и 2119536).
К способам согласно настоящему изобретению относится способ продукции L-гистидина, включающий стадии выращивания бактерии согласно настоящему изобретению в питательной среде с целью продукции и накопления L-гистидина в питательной среде и выделения L-гистидина из культуральной жидкости.
Согласно настоящему изобретению выращивание, выделение и очистка L-гистидина из культуральной или подобной ей жидкости может быть осуществлена способом, подобным традиционным способам ферментации, в которых аминокислота продуцируется с использованием микроорганизма. Питательная среда, используемая для выращивания, может быть как синтетической, так и натуральной, при условии, что указанная среда содержит источники углерода, азота, минеральные добавки и, если необходимо, соответствующее количество питательных добавок, которые требуются микроорганизму для роста. К источникам углерода относятся различные углеводы, такие как глюкоза и сахароза, и различные органические кислоты. В зависимости от степени ассимиляции используемого микроорганизма могут использоваться спирты, такие как этанол и глицерин. В качестве источника азота могут использоваться различные соли аммония, такие как аммиак и сульфат аммония, другие соединения азота, такие как амины, природные источники азота, такие как пептон, гидролизат соевых бобов и ферментолизат микроорганизмов. В качестве минеральных добавок используются монофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат железа, сульфат марганца, хлорид кальция и подобные соединения. Некоторые питательные добавки могут быть, при необходимости, добавлены в питательную среду. Например, если микроорганизму для роста необходим пролин (ауксотрофия по пролин), соответствующее количество пролина может быть добавлено в питательную среду для выращивания.
Выращивание осуществляется предпочтительно в аэробных условиях, таких как перемешивание, ферментация с аэрацией, при температуре от 20 до 42°С, предпочтительно от 37 до 40°С. рН питательной среды находится в пределах от 5 до 9, предпочтительно от 6.5 до 7.2. рН среды может регулироваться аммиаком, карбонатом кальция, различными кислотами, основаниями и буферами. Обычно выращивание в течение от 1 до 5 дней приводит к накоплению целевой L-аминокислоты в культуральной жидкости.
После выращивания твердые остатки, такие как клетки, могут быть удалены из культуральной жидкости методом центрифугирования или фильтрацией через мембрану, а затем целевая L-аминокислота может быть собрана и очищена методами ионообменной хроматографии, концентрирования и кристаллизации.
Наилучший способ осуществления изобретения
Настоящее изобретение более детально описано со ссылкой на примеры. В указанных примерах аминокислоты являются аминокислотами L-конфигурации, если не указано иное.
Пример 1. Клонирование гена talB из E.coli.
Полная нуклеотидная последовательность штамма E.coli К-12 определена (Science, 277, 1453-1474, 1997). На основе приведенной нуклеотидной последовательности были синтезированы затравки, приведенные под номерами 3 (затрвка 1) и 4 (затравка 2) в Списке последовательностей. Затравка 1 комплементарна последовательности с 74 по 54 нуклеотид перед старт-кодоном гена talB и содержит на 5'-конце сайт узнавания фермента рестрикции BglII. Затравка 2 комплементарна последовательности с 82 по 104 нуклеотид после стоп-кодона гена talB и содержит на 5'-конце сайт узнавания фермента рестрикции Xbal.
Хромосомная ДНК штамма E.coli К 12, использованная в качестве матрицы для ПЦР, была получена стандартным методом. ПЦР осуществлялась на "Applied Biosystems GeneAmp PCR System 2400" в следующих условиях: начальная денатурация ДНК 5 минут при 95°С, затем 30 циклов денатурации 30 секунд при 95°С, отжиг 60 секунд при 56°С, и наращивание фрагмента 120 секунд при 72°С; и финальная полимеризация в течение 7 минут при 72°С с использованием Taq-полимеразы (Fermentas, Литва). Полученный фрагмент ДНК, содержащий ген talB без промотора, был обработан рестриктазами BglII и Xbal и подставлен под PR промотор в вектор pMW119-РR, предварительно обработанный теми же рестриктазами. Вектор pMW119-РR был сконструирован на основе коммерчески доступного вектора pMW119 путем введения промотора PR из фага λ. Таким образом была получена плазмида pMW119-PR-talB.
Пример 2. Влияние усиления экспрессии гена talB на продукцию гистидина.
Штамм E.coli 80 - продуцент гистидина был использован в качестве исходного штамма для трансформации плазмидой pMW-PR-talB. Штамм 80 был описан в патенте РФ 2119536 и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) (Россия, 113545 Москва, 1-й Дорожный проезд, 1) под инвентарным номером ВКПМ В-7270.
Оба штамма 80 и 80/pMW-PR-talB выращивались при 29°С в течение 6 часов в питательном бульоне, содержащем 1 г/л стрептомицина. Затем 0.1 мл полученной культуры было перенесено в пробирки 20×200 мм с 2 мл питательной среды для ферментации и инкубировалось при 29°С в течение 65 часов на роторной качалке (350 об/мин). После выращивания количество гистидина, накопленное в среде, определялось методом бумажной хроматографии. Бумага экспонировалась с подвижной фазой следующего состава: н-бутанол : уксусная кислота : вода=4:1:1 (v/v). В качестве реагента для визуализации использовался 2% раствор нингидрина в ацетоне.
Состав среды для ферментации (рН 6.0) (г/л):
Глюкоза | 100.0 |
Мамено | 0.2 суммарного азота |
L-пролин | 1.0 |
(NH4)2SO4 | 25.0 |
КН2PO4 | 2.0 |
MgSO4×7H2O | 1.0 |
FeSO4×7H2О | 0.01 |
MnSO4 | 0.01 |
Тиамин | 0.001 |
Бетаин | 2.0 |
СаСО3 | 60.0 |
Стрептомицин | 1.0 |
Полученные данные представлены в Таблице 1.
Таблица 1 | ||
Штамм Е.coli | OD450 | Количество гистидина, g/l |
80 (ВКПМ В-7270) | 27.5 | 16.2 |
80/pMW-PR-talB | 28.2 | 19.1 |
Как видно из Таблицы 1, усиленная экспрессия гена talB увеличивает продукцию гистидина штаммом Е.coli 80.
Claims (8)
1. Бактерия, принадлежащая к роду Escherichia, - продуцент L-гистидина, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что активность трансальдолазы в клетке упомянутой бактерии повышена.
2. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что активность трансальдолазы повышена путем увеличения экспрессии гена, кодирующего трансальдолазу.
3. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что активность трансальдолазы увеличена путем увеличения количества копий гена, кодирующего трансальдолазу, или путем изменения регуляции экспрессии указанного гена.
4. Бактерия по п.3, отличающаяся тем, что количество копий указанного гена увеличено путем трансформации вышеупомянутой бактерии многокопийным вектором, содержащим ген, кодирующий трансальдолазу.
5. Бактерия по п.4, отличающаяся тем, что ген, кодирующий трансальдолазу, кодирует следующий белок (А) или (Б):
(A) белок, который представлен аминокислотной последовательностью, приведенной в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2;
(B) белок, который представлен аминокислотной последовательностью, включающей делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотную последовательность, приведенную в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:2, и который обладает активностью трансальдолазы.
6. Бактерия по п.4, отличающаяся тем, что ген, кодирующий трансальдолазу, представлен следующей последовательностью ДНК (а) или (б):
(а) ДНК, включающая последовательность нуклеотидов с 1 по 954 в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1, или
(б) ДНК, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью 1-945 в последовательности SEQ ID NO:1 или пробой, которая может быть приготовлена из указанной нуклеотидной последовательности, в жестких условиях и кодирует белок, обладающий активностью трансальдолазы, при этом жестким условиями являются условия, при которых отмывка производится при 60°С, а концентрация солей соответствует 1×SSC и 0,1% SDS.
7. Способ получения L-гистидина, включающий стадии выращивания бактерии по любому из пп.1-6, в питательной среде и сбора из культуральной жидкости полученного и накопленного в ней L-гистидина.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что у указанной бактерии повышена экспрессия генов биосинтеза L-гистидина.
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003121600/13A RU2276687C2 (ru) | 2003-07-16 | 2003-07-16 | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина |
US10/892,113 US7300786B2 (en) | 2003-07-16 | 2004-07-16 | Bacteria of the Enterobacteriaceae family having enhanced transaldolase activity |
ES04747680T ES2367782T3 (es) | 2003-07-16 | 2004-07-16 | Procedimiento para producir l-histidina utilizando bacterias de la familia enterobacteriáceas. |
PCT/JP2004/010215 WO2005007848A1 (ja) | 2003-07-16 | 2004-07-16 | 腸内細菌科の細菌を用いたl−ヒスチジンの製造法 |
JP2005511864A JP4821321B2 (ja) | 2003-07-16 | 2004-07-16 | 腸内細菌科の細菌を用いたl−ヒスチジンの製造法 |
EP04747680A EP1647593B1 (en) | 2003-07-16 | 2004-07-16 | Method for producing l-histidine using bacteria of the enterobacteriaceae family |
US11/696,375 US7399618B2 (en) | 2003-07-16 | 2007-04-04 | Method for producing L-histidine using bacteria of Enterobacteriaceae family |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003121600/13A RU2276687C2 (ru) | 2003-07-16 | 2003-07-16 | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003121600A RU2003121600A (ru) | 2005-01-27 |
RU2276687C2 true RU2276687C2 (ru) | 2006-05-20 |
Family
ID=34075220
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003121600/13A RU2276687C2 (ru) | 2003-07-16 | 2003-07-16 | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7300786B2 (ru) |
EP (1) | EP1647593B1 (ru) |
JP (1) | JP4821321B2 (ru) |
ES (1) | ES2367782T3 (ru) |
RU (1) | RU2276687C2 (ru) |
WO (1) | WO2005007848A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2396336C2 (ru) * | 2007-09-27 | 2010-08-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia |
Families Citing this family (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5976843A (en) * | 1992-04-22 | 1999-11-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine |
RU2212447C2 (ru) * | 2000-04-26 | 2003-09-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты) |
RU2273666C2 (ru) * | 2003-02-26 | 2006-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-аминокислот методом ферментации смеси глюкозы и пентоз |
JP2005021154A (ja) * | 2003-06-11 | 2005-01-27 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
RU2276687C2 (ru) * | 2003-07-16 | 2006-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина |
US20050176033A1 (en) | 2003-11-10 | 2005-08-11 | Klyachko Elena V. | Mutant phosphoribosylpyrophosphate synthetase and method for producing L-histidine |
US20050214913A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-29 | Marchenko Aleksey N | Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes |
US8003367B2 (en) * | 2004-03-16 | 2011-08-23 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes |
WO2005095627A2 (en) * | 2004-03-31 | 2005-10-13 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing purine nucleosides and nucleotides by fermentation using bacterium belonging to the genus bacillus or escherichia |
RU2004124226A (ru) | 2004-08-10 | 2006-01-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов |
US7915018B2 (en) * | 2004-10-22 | 2011-03-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family |
RU2004137198A (ru) * | 2004-12-21 | 2006-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН yafA |
RU2004137719A (ru) | 2004-12-23 | 2006-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
US7422880B2 (en) * | 2005-01-19 | 2008-09-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family having a pathway of glycogen biosynthesis disrupted |
US20070212764A1 (en) * | 2005-01-19 | 2007-09-13 | Ptitsyn Leonid R | Method for producing l-amino acids using bacterium of the enterobacteriaceae family |
WO2006088232A1 (en) * | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family having expression of the bola gene attenuated |
ATE438731T1 (de) | 2005-02-18 | 2009-08-15 | Ajinomoto Kk | Verfahren zur herstellung einer l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae |
DE602006004186D1 (de) | 2005-02-18 | 2009-01-22 | Ajinomoto Kk | VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG EINER NICHTAROMATISCHEN L-AMINOSÄURE UNTER VERWENDUNG EINES BAKTERIUMS DERRESSION DES csrA-GENS |
RU2326164C2 (ru) * | 2005-03-15 | 2008-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГИСТИДИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН sanA |
ATE420969T1 (de) * | 2005-08-09 | 2009-01-15 | Ajinomoto Kk | Verfahren zur herstellung einer l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae mit abgeschwächter expression des ybiv-gens |
EP2184348B1 (en) | 2006-03-23 | 2013-11-27 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an L-amino acid using bacterium of the Enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small RNA |
JP2009060791A (ja) * | 2006-03-30 | 2009-03-26 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸生産菌及びl−アミノ酸の製造法 |
WO2008044614A1 (en) | 2006-09-28 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing 4-hydroxy-l-isoleucine |
RU2006145712A (ru) * | 2006-12-22 | 2008-06-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина |
KR101904666B1 (ko) * | 2017-08-02 | 2018-11-29 | 씨제이제일제당 (주) | Atp 포스포리보실기 전이효소 변이체 및 이를 이용한 l-히스티딘 생산방법 |
KR102808403B1 (ko) * | 2020-12-28 | 2025-05-20 | 대상 주식회사 | 히스티딘에 의한 피드백 억제가 감소된 atp-prt 변이체 및 이를 발현하는 히스티딘 생산 균주 |
KR102792504B1 (ko) * | 2020-12-28 | 2025-04-09 | 대상 주식회사 | 히스티딘에 의한 피드백 억제가 감소된 atp-prt 변이체 및 이를 발현하는 히스티딘 생산 균주 |
KR20220094260A (ko) * | 2020-12-28 | 2022-07-06 | 대상 주식회사 | 히스티딘에 의한 피드백 억제가 감소된 atp-prt 변이체 및 이를 발현하는 히스티딘 생산 균주 |
KR102792505B1 (ko) * | 2020-12-28 | 2025-04-09 | 대상 주식회사 | 히스티딘에 의한 피드백 억제가 감소된 atp-prt 변이체 및 이를 발현하는 히스티딘 생산 균주 |
KR102433200B1 (ko) * | 2020-12-28 | 2022-08-19 | 대상 주식회사 | 히스티딘에 의한 피드백 억제가 감소된 atp-prt 변이체 및 이를 발현하는 히스티딘 생산 균주 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2119536C1 (ru) * | 1997-01-21 | 1998-09-27 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм escherichia coli - продуцент l-гистидина |
RU2175351C2 (ru) * | 1998-12-30 | 2001-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот |
US6316232B1 (en) * | 1996-10-26 | 2001-11-13 | Holland Sweetener Company V.O.F. | Microbial preparation of substances from aromatic metabolism/I |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU875663A1 (ru) | 1978-06-30 | 1982-09-15 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени |
JPS5618596A (en) | 1979-07-23 | 1981-02-21 | Ajinomoto Co Inc | Production of l-lysine through fermentation process |
US5976843A (en) | 1992-04-22 | 1999-11-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine |
US5196326A (en) | 1990-02-15 | 1993-03-23 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for concurrent fermentation of basic amino acid and acidic amino acid |
JP3245881B2 (ja) * | 1990-02-15 | 2002-01-15 | 味の素株式会社 | 塩基性アミノ酸と酸性アミノ酸の同時発酵法 |
US5168056A (en) | 1991-02-08 | 1992-12-01 | Purdue Research Foundation | Enhanced production of common aromatic pathway compounds |
DE69330518T2 (de) | 1992-11-10 | 2002-05-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Dna, die aspartokinase iii-mutanten kodiert und ihre verwendung zur herstellung von l-threonin durch fermentation |
JPH07155184A (ja) | 1993-12-08 | 1995-06-20 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
JP4245746B2 (ja) * | 1999-09-20 | 2009-04-02 | 協和発酵バイオ株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
AU7318700A (en) * | 1999-09-21 | 2001-04-24 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Novel transaldolase gene |
RU2212447C2 (ru) * | 2000-04-26 | 2003-09-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты) |
AU2002354853A1 (en) * | 2001-07-18 | 2003-03-03 | Degussa Ag | Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family |
CN1246470C (zh) * | 2001-07-18 | 2006-03-22 | 德古萨股份公司 | 使用含有弱化的aspA基因的肠细菌科菌株制备L-氨基酸的方法 |
RU2244007C2 (ru) | 2002-02-27 | 2005-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-треонина, штамм escherichia coli - продуцент треонина (варианты) |
RU2245919C2 (ru) | 2002-09-06 | 2005-02-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-аминокислоты, штамм escherichia coli tdh7δ mlc::cat/pprt614-продуцент l-треонина |
RU2273666C2 (ru) | 2003-02-26 | 2006-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-аминокислот методом ферментации смеси глюкозы и пентоз |
JP2005021154A (ja) * | 2003-06-11 | 2005-01-27 | Ajinomoto Co Inc | L−アミノ酸の製造法 |
RU2276687C2 (ru) * | 2003-07-16 | 2006-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина |
RU2276688C2 (ru) * | 2003-08-29 | 2006-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | БАКТЕРИЯ, ПРИНАДЛЕЖАЩАЯ К РОДУ Escherichia,- ПРОДУЦЕНТ L-ГИСТИДИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГИСТИДИНА |
US20050176033A1 (en) * | 2003-11-10 | 2005-08-11 | Klyachko Elena V. | Mutant phosphoribosylpyrophosphate synthetase and method for producing L-histidine |
RU2275424C2 (ru) * | 2003-12-05 | 2006-04-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ получения l-треонина с использованием бактерий, принадлежащих к роду escherichia |
US20050214913A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-29 | Marchenko Aleksey N | Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes |
US8003367B2 (en) * | 2004-03-16 | 2011-08-23 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes |
RU2004124226A (ru) * | 2004-08-10 | 2006-01-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов |
US7915018B2 (en) * | 2004-10-22 | 2011-03-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family |
RU2004137198A (ru) * | 2004-12-21 | 2006-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН yafA |
RU2004137719A (ru) * | 2004-12-23 | 2006-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
US7422880B2 (en) * | 2005-01-19 | 2008-09-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family having a pathway of glycogen biosynthesis disrupted |
-
2003
- 2003-07-16 RU RU2003121600/13A patent/RU2276687C2/ru active
-
2004
- 2004-07-16 WO PCT/JP2004/010215 patent/WO2005007848A1/ja active Application Filing
- 2004-07-16 JP JP2005511864A patent/JP4821321B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-07-16 US US10/892,113 patent/US7300786B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-07-16 ES ES04747680T patent/ES2367782T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-07-16 EP EP04747680A patent/EP1647593B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-04-04 US US11/696,375 patent/US7399618B2/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6316232B1 (en) * | 1996-10-26 | 2001-11-13 | Holland Sweetener Company V.O.F. | Microbial preparation of substances from aromatic metabolism/I |
RU2119536C1 (ru) * | 1997-01-21 | 1998-09-27 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм escherichia coli - продуцент l-гистидина |
RU2175351C2 (ru) * | 1998-12-30 | 2001-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2396336C2 (ru) * | 2007-09-27 | 2010-08-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1647593B1 (en) | 2011-07-13 |
EP1647593A1 (en) | 2006-04-19 |
US20050054061A1 (en) | 2005-03-10 |
EP1647593A4 (en) | 2007-05-09 |
US7300786B2 (en) | 2007-11-27 |
ES2367782T3 (es) | 2011-11-08 |
US20070184532A1 (en) | 2007-08-09 |
RU2003121600A (ru) | 2005-01-27 |
JPWO2005007848A1 (ja) | 2006-11-16 |
JP4821321B2 (ja) | 2011-11-24 |
WO2005007848A1 (ja) | 2005-01-27 |
US7399618B2 (en) | 2008-07-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2276687C2 (ru) | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина | |
RU2276688C2 (ru) | БАКТЕРИЯ, ПРИНАДЛЕЖАЩАЯ К РОДУ Escherichia,- ПРОДУЦЕНТ L-ГИСТИДИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГИСТИДИНА | |
US8071339B2 (en) | Mutant phosphoribosylpyrophosphate synthetase and method for producing L-histidine | |
KR101592140B1 (ko) | 자일로즈 이용능이 부여된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-라이신의 생산방법 | |
RU2175351C2 (ru) | Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот | |
EP1650296B1 (en) | Mutant serine acetyltransferase and process for producing l-cysteine | |
EP1942183B1 (en) | A mutant acetolactate synthase and a method for producing branched-chain L-amino acids | |
RU2245919C2 (ru) | Способ получения l-аминокислоты, штамм escherichia coli tdh7δ mlc::cat/pprt614-продуцент l-треонина | |
RU2215782C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ, ШТАММ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ L-АМИНОКИСЛОТЫ (ВАРИАНТЫ) | |
KR102035844B1 (ko) | L-트립토판을 생산하는 재조합 코리네형 미생물 및 이를 이용한 l-트립토판을 생산하는 방법 | |
MXPA04008302A (es) | Procedimiento para producir l-treonina con el uso de bacterias que pertenecen al genero escherichia. | |
KR20160043890A (ko) | L-아르기닌을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-아르기닌의 제조 방법 | |
JP2001046067A (ja) | 好熱性バチルス属細菌由来のl−リジン生合成系遺伝子 | |
EP1801206A1 (en) | Method for producing l-arginine, l-ornithine or l-citrulline | |
EP2225369A2 (en) | Process for producing (2s,3r,4s)-4-hydroxy-l-isoleucine | |
US20050214913A1 (en) | Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes | |
JP4852839B2 (ja) | 変異型ホスホリボシルピロリン酸シンセターゼ及びl−ヒスチジンの製造方法 | |
RU2215784C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ, ШТАММ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ L-АМИНОКИСЛОТЫ (ВАРИАНТЫ) | |
RU2288264C2 (ru) | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia - продуцент l-треонина и способ получения l-треонина | |
RU2268305C2 (ru) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий с оптимизированным уровнем генной экспрессии | |
RU2215785C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ, ШТАММ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ L-АМИНОКИСЛОТЫ (ВАРИАНТЫ) | |
EP2050816A1 (en) | Method for production of amino acid | |
KR20070062778A (ko) | 2-옥소글루타레이트 디히드로게나제를 코딩하는 유전자가불활성화된 미생물, 그를 제조하는 방법 및 상기 미생물을이용하여 l-글루타민을 생산하는 방법 | |
HK1101598A (en) | Method for producing l-arginine, l-ornithine or l-citrulline |